MXPA06007399A

MXPA06007399A - Inhibidores de quinasas dependientes de ciclina, composiciones y usos relacionados con ellos.

Info

Publication number: MXPA06007399A
Application number: MXPA06007399A
Authority: MX
Inventors: Nicholas Bockovich; Arthur F Kluge; Chris Oalmann; Krishna K Murthi; Siya Ram; Zhongguo Wang; Jianxing Huang
Original assignee: Gpc Biotech Inc
Priority date: 2003-12-23
Filing date: 2004-12-21
Publication date: 2007-01-26
Also published as: EA200601216A1; IL176543A0; CA2551640C; JP2007516296A; NO20063186L; AU2004309415A1; AU2004309415B2; US8097619B2; EA013117B1; WO2005063765A1; KR20060130624A; BRPI0418095A; JP4791975B2; HK1101399A1; KR101155883B1; CA2551640A1; EP1709051A1; US20090209530A1

Abstract

La invencion se refiere a novedosos inhibidores de quinasas dependientes de ciclina (cdk) de la formula (I), caracterizados porque los sustituyentes son como se define en las reivindicaciones, y especificamente, pero no exclusivamente, como inhibidores de complejos cdk/ciclina. Tal como se describe aqui, los inhibidores de esta invencion son capaces de inhibir la maquinaria del ciclo celular y en consecuencia pueden ser utiles para modular la progresion del ciclo celular, y finalmente para controlar el crecimiento y diferenciacion celular. Estos compuestos podrian ser utiles para tratar sujetos que tienen trastornos asociados con excesiva proliferacion celular.

Description

INHIBIDORES PE QUINASAS DEPENDIENTES DE CICLINA. COMPOSICION ES Y USOS RELACIONADOS CON ELLOS 1. CAMPO DE LA INVENCIÓN Esta invención se refiere en general a compuestos útiles como inhibidores de quinasa dependiente de ciclina, a composiciones farmacéuticas que los contienen, a métodos para formularlos o para usarlos para el tratamiento de cáncer enfermedades proliferativas u otras enfermedades, y a productos intermedios y a procesos para elaborarlos.

II- ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Uno de los procesos más importantes y fundamentales en la biología, es la división de células mediada por el ciclo celular. Este proceso asegura la producción controlada de las generaciones subsiguientes de células con función biológica definida. Es un fenómeno altamente regulado y responde a un conjunto diverso de señales celulares tanto dentro de la célula como de fuentes externas. Una compleja red de productos genéticos promotores y supresores de tumor es el componente clave de este proceso de señalización celular. La sobre-expresión de los componentes promotores de tumor o la pérdida subsiguiente de los productos supresores de tumor conducirán a proliferación celular no regulada y a la generación de tumores (Pardee, Science 246: 603-608, 1989). Las quinasas dependientes de ciclina juegan un papel clave en la regulación de la maquinaria celular. Estos complejos consisten en dos componentes: una subunidad catalítica (la quinasa) y una subunidad reguladora (la ciclina). Hasta la fecha, nueve subunidades quinasa (quinasa dependiente de ciclina 1-9) han sido identificadas junto con varias subunidades reguladoras (ciclinas A-H, K, N y T). Cada quinasa se asocia con un compañero regulador específico y juntos constituyen la porción catalítica activa. Cada transición del ciclo celular es regulada por un complejo particular quinasa dependiente de ciclina: G1/S por quinasa 2 dependiente de ciclina/ciclina E, quinasa 4 dependiente de ciclina/ciclina D1 y quinasa 6 dependiente de ciclina/ciclina D2; S/G2 por quinasa 2 dependiente de ciclina/ciclina A y quinasa 1 dependiente de ciclina/ciclina A; G2/M por quinasa 1 dependiente de ciclina/ciclina D. La actividad coordinada de estas quinasas guía las células individuales a través del proceso de replicación y asegura la vitalidad de cada generación subsiguiente (Sherr, Cell 73: 1059-1065, 1993; Draetta, Tren s Biochem. Sci. 15: 378-382, 1990). Un cuerpo de evidencias en aumento ha demostrado que existe un enlace entre el desarrollo de tumores y malos funcionamientos relacionados con quinasa dependiente de ciclina. La sobreexpresión de las proteínas reguladoras de ciclina y la subsiguiente hiperactividad de quinasa han estado ligadas a varios tipos de cánceres Jiang, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 90: 9026-9030, 1993; Wang , Nature 343: 555-557, 1990). Más recientemente, se encontró que proteínas endógenas altamente específicas inhibidoras de quinasas dependientes de ciclina tienen un efecto principal en la proliferación celular (Kamb y co-autores, Science 264: 436-440, 1994; Beach, Nature 336: 701 -704, 1993). Estos inhibidores incluyen p 16I N K4 (un inhibidor de quinasa 4 dependiente de ciclina/DI), p21 CI P 1 (un inhibidor general de quinasa dependiente de ciclina), y p27KIP1 (un inhibidor específico de quinasa 2 dependiente de ciclina/E). Una estructura de cristal reciente de p27 unida a la quinasa 2 dependiente de ciclina/A reveló cuánto inhiben efectivamente estas proteínas la actividad de la quinasa mediante múltiples interacciones con el complejo quinasa dependiente de ciclina (Pavletich, Nature 382: 325-331 , 1996). Estas proteínas ayudan a regular el ciclo celular a través de interacciones específicas con sus correspondientes complejos quinasa dependiente de ciclina. Las células deficientes en estos inhibidores están propensas a crecimiento no regulado y a formación de tumores. ESte cuerpo de evidencias ha conducido a una intensa búsqueda de inhibidores de moléculas pequeñas de la familia cdk como agentes terapéuticos.

I I I . BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención describe compuestos que son inhibidores potentes de la clase de enzimas conocidas como quinasas dependientes de ciclina. La presente invención proporciona métodos para tratar el cáncer, u otras enfermedades proliferativas u otras enfermedades, administrando una cantidad efectiva terapéuticamente de al menos uno de los compuestos de la presente invención o una forma isomérica, profármaco, tautomérica, sal aceptable para uso farmacéutico, N-óxido, o forma estereoisomérica de él. La presente invención proporciona además métodos para tratar cáncer, u otras enfermedades proliferativas u otras enfermedades, administrando una combinación efectiva terapéuticamente de al menos uno de los compuestos de la invención y otro agente anti-canceroso o anti-proliferativo. En ciertas modalidades, la presente invención proporciona compuestos, incluyendo formas isoméricas, profármaco, tautomérica, sal aceptable para uso farmacéutico, N-óxido, o formas estereoisoméricas de ellos, que tienen la estructura de la fórmula 1 : en donde R8 representa un heterociclo sustituido o no sustituido, o morfolino sustituido o no sustituido, piperazinilo sustituido o no sustituido, o ciciohexilo sustituido o no sustituido; F representa (CH2)n, en donde n es un entero entre 1 y 6. En ciertas modalidades, n es 1 ; Q representa un sustituyente amino secundario sustituido o no sustituido, sustituyente amino terciario sustituido o no sustituido, o heterociclo que contiene nitrógeno sustituido o no sustituido. En ciertas modalidades, n es 1 . En ciertas modalidades, Q en la Fórmula 1 representa un sustituyente amino terciario, por ejemplo dialq uil amina. En ciertas modalidades, Q en la fórmula I representa un nitrógeno sustituido o no sustituido q ue contiene heterociclo tal como morfolina, piperidina, piperazina o pirrolidina. En ciertas modalidades, Q representa un anillo heteroarilo que contiene nitrógeno, un sustituyente amino terciario, o un heterociclo que contiene nitrógeno sustituido o no sustituido. En ciertas modalidades, R8 representa: en donde Z es O o NR"; y R" representa H o alquilo inferior. En ciertas modalidades, los compuestos que tienen una estructura de la Fórmula I excluyen uno o más de los siguientes compuestos: A51 En ciertas modalidades, los compuestos de la Fórmula I incluyen uno o más de los compuestos q ue se muestran en las tablas. Por ejemplo, los compuestos pueden incluir uno o más de los compuestos B 1 hasta B20 y C2. Como se puede notar, en ciertas modalidades, los sustituyentes apropiados pueden incluir, independientemente para cada caso, alquilo, oxo, acil amino, hidroxilo, carbonilo, sulfonilo, éster, amida , NR", hidroxi alquilo, alcoxi alquilo, arilo, heterociclilo, cicloalq uilo, u oligo(etilenglicol). En ciertas modalidades, en donde Q representa un sustituyente amino secundario, los sustituyentes apropiados incluyen alquilo, alcoxialquilo, hidroxialq uilo, e hidroxialcoxialq uilo. Los conocedores de la materia reconocerán fácilmente que la lista de sustituyentes enumerados no es exhaustiva, y que se puede usar muchos otros sustituyentes apropiados. En ciertas modalidades, la invención contempla un compuesto, o una forma isomérica, profármaco, tautomérica, sal aceptable para uso farmacéutico, N-óxido, o forma estereoisomérica de él, que tiene una estructura con la fórmula I I : en donde B representa MnR8; Ar representa un anillo arilo o heteroarilo; V representa O , S o N-CN; W representa O, S o NR"; R' representa, independientemente para cada caso, H , alquilo inferior, o un ion de carga opuesta; R" representa, independientemente para cada caso, H o alquilo inferior; R5 representa H, P(=O)(OR')2 o MnQ; R6 representa H , OH o MnQ, siempre que solamente uno de R5 y R6 represente H ; R7 representa H, halógeno, hidroxilo, alquilo inferior o alcoxilo inferior; R8 representa alquilo sustituido o no sustituido, alquenilo, alquinilo, alcoxi, arilo, heteroarilo, cicloalquilo, heterociclilo o amina; M, independientemente para cada caso, representa un grupo metileno sustituido o no sustituido (incluyendo C(=O) y C(=S)), NR", O, S , S(O), o S(O)2; n representa un entero de 1 a 4 cuando está presente en B, de 0 a 6 cuando está presente en R5, y de 1 a 3 cuando está presente en R6; y O representa un sustituyente amino terciario o heterociclo que contiene nitrógeno, sustituido o no sustituido. En ciertas modalidades, R8 representa morfolino, piperazinilo o ciciohexilo sustituido o no sustituido.

En ciertas modalidades, R" represente MnQ. En ciertas modalidades, la presencia de M unida a Q representa CH2, S(O2), C(=S) o C(=O). En ciertas modalidades la presencia de M unida a Q representa CH2. En ciertas modalidades, la presencia de M unida a Q es C(=O). En ciertas modalidades, la presencia de M unida a Q representa N R" sustituido. En ciertas modalidades, Q representa un heterociclo que contiene nitrógeno sustituido o no sustituido. En ciertas modalidades, Q representa un grupo amino terciario sustituido o no sustituido. En ciertas modalidades, R8 representa morfolino, piperazinilo o ciciohexilo sustituido o no sustituido. En ciertas modalidades, R" represente H, mientras que en ciertas modalidades al menos una ocurrencia de M representa CH2, NR" sustituido o, cuando está unido a Q, representa CH2, S(O)2, C(=S), o C(=O). En ciertas modalidades, Q representa un anillo heteroarilo que contiene nitrógeno, sustituido o no sustituido. En ciertas otras modalidades, Q represente un heterociclo que contiene nitrógeno sustituido o no sustituido, en ciertas modalidades, Q representa un grupo amino terciario sustituido o no sustituido. En ciertas modalidades, Q representa un grupo amino secundario sustituido o no sustituido.

En ciertas modalidades, la invención contempla un compuesto, o una forma isomérica, profármaco, tautomérica, sal aceptable para uso farmacéutico, N-óxido, o forma estereoisomérica de él, que tiene una estructura de: C 1 En ciertas modalidades, la invención contempla un compuesto, o una forma isomérica, profármaco, tautomérica, sal aceptable para uso farmacéutico, N-óxido, o forma estereoisomérica de él, que tiene una estructura de: C5.

En ciertas modalidades, la invención contempla proporcionar uno o más de los compuestos descritos aquí como una forma purificada o sintética. En ciertas modalidades, la invención contempla un compuesto, o una forma isomérica, profármaco, tautomérica, sal aceptable para uso farmacéutico, N-óxido, o forma estereoisomérica de él, que tiene una estructura de la Fórmula I I : en donde B representa MnR8; Ar representa un anillo arilo o heteroarilo; V representa O, S, o N-CN; W representa O, S, S(O2), C(=O), C(=S), CH2, o N R"; R' representa, independientemente para cada caso, H, alquilo inferior, o un ion metálico de carga contraria; R" representa, independientemente para cada caso, H o alquilo inferior; R'" representa H , o alquilo inferior sustituido opcionalmente; R5 representa MnJK; R6 representa H, OH o MnQ; R7 representa H , halógeno, hidroxilo, alquilo inferior o alcoxilo inferior; R8 representa alq uilo sustituido o no sustituido, alq uenilo, alquinilo, alcoxi, arilo, heteroarilo, cicloalquilo, heterociclilo o amina; J representa C(=O), C(=S), o SO2; K representa OR' N (R")2, o N(R')SO2R"; M, independientemente para cada caso, representa un grupo metileno sustituido o no sustituido (incluyendo C( = S) y C(=O)), N R", O, S, S(O) , o S(O2); n representa un entero de 1 a 7 cuando está presente en B, de 0 a 6 cuando está presente en R5 y de 1 a 3 cuando está presente en R6; y Q representa un anillo heteroarilo que contiene nitrógeno, un sustituyente amino secundario, un sustituyente amino terciario, o un heterociclo que contiene nitrógeno, sustituido o no sustituido. En ciertas modalidades, R8 representa morfolino, piperazinilo o ciciohexilo sustituido o no sustituido. En ciertas modalidades, R" representa H. En ciertas modalidades, la presencia de M unido a Q representa CH2, NR" sustituido, S(O2), C(=S), o C(=0). En ciertas modalidades, R8 representa morfolino, piperazinilo o ciciohexilo sustituido o no sustituido. En ciertas modalidades, R5 representa NnQ. En ciertas modalidades, la presencia de M unido a Q representa CH2, S(O2), C(=S), o C(=O). En ciertas modalidades, la presencia de M unido a Q es C(=O). En ciertas modalidades, la presencia de M unida a Q representa CH2. En ciertas modalidades, la presencia de M unido a Q representa N R" sustituido. En ciertas modalidades, Q representa un sustituyente amino terciario sustituido o no sustituido. En ciertas modalidades, Q representa un heterociclo que contiene nitrógeno sustituido o no sustituido. En ciertas modalidades, los sustituyentes incluyen , independientemente para cada caso, alquilo, oxo, acil amino, hidroxilo, carbonilo, sulfonilo, éster, amida, NR", hidroxi alquilo, alcoxi alquilo, arilo, heterociclilo, cicloalquilo, u oligo(etilenglicol). Ciertas modalidades incluyen un compuesto, o forma isomérica, profármaco, tautomérica, sal aceptable para uso farmacéutico, N-óxido, o formas estereoisoméricas de él, que tienen la estructura de la Fórmula I I en donde B representa MnR8.

Ar representa un anillo arilo o heteroarilo; V representa O, S, o N-CN; W representa O, S, S(O2), C( = O), C(=S), CH2 o NR"; R' representa, independientemente para cada caso, H, alquilo inferior, o un ion metálico de carga contraria; R" representa, independientemente para cada caso, H o alquilo inferior; R'" representa H, o alquilo inferior sustituido opcionalmente; R5 representa H, P(=O)(OR')2, MnJK, o MnQ; R6 representa H, OH o MnQ, siempre que uno y solamente uno de R5 y R6 represente H; R , independientemente para cada caso, representa H, halógeno, hidroxilo, alquilo inferior, o alcoxilo inferior; R8 representa alquilo, alquenilo, alquinilo, alcoxi, arilo, heteroarilo, cicloalquilo, heterociclilo o amina sustituido o no sustituido; J representa OR', N(R")2, o N(R')SO2R"; M, independientemente para cada caso, representa un grupo metileno sustituido o no sustituido (incluyendo C(=O), C(=S)), NR", O, S, S(O), S(O2), o CH2; n representa un entero de 1 a 7 cuando está presente en B, 0 a 6 cuando está presente en R5 y de 1 a 3 cuando está presente en R6; y Q representa un anillo heteroarilo que contiene nitrógeno, sustituyente amino secundario, sustituyente amino terciario, o heterociclo que contiene nitrógeno, sustituido o no sustituido; siempre que los compuestos que tengan una estructura de Fórmula l ia estén excluidos: en donde W y Z, independientemente, representan O o NR"; R' representa, independientemente para cada caso, H, alquilo inferior, o un ion metálico de carga contraria; R" representa, independientemente para cada caso, H o alquilo inferior; R5 representa H, P(=O)(OR')2, o MnQ; R6 representa H, OH, o MnQ, siempre que uno y solamente uno de R5 y R6 represente H; R7, independientemente para cada caso, representa hidrógeno, halógeno, alquilo inferior, o alcoxilo inferior: M, independientemente para cada caso, representa un grupo metileno sustituido o no sustituido (incluyendo C(=S) y C( = O)), NR", O, S, S(O) , S(O2); n representa un entero de 1 a 5; y Q representa un anillo heteroarilo que contiene nitrógeno, un sustituyente amino terciario, o un heterociclo que contiene nitrógeno, sustituido o no sustituido. En ciertas modalidades, Q en la Fórmula lia representa un sustituyente amino terciario, por ejemplo, dialquil amina. En ciertas modalidades, Q en la Fórmula lia representa un heterociclo que contiene nitrógeno sustituido o no sustituido tal como morfolina, piperidina, piperazina, o pirrolidina. En ciertas modalidades, Q representa un anillo heteroarilo que contiene nitrógeno, un sustituyente amino terciario, o un heterociclo que contiene nitrógeno sustituido o no sustituido. En ciertas modalidades, en la Fórmula II, B representa MnR8; Ar representa un anillo arilo o heteroarilo; V representa O, S, o N-CN; W representa C(=O), C(=S), SO2, o CH2; R' representa, independientemente para cada caso, H, alquilo inferior, un ion metálico de carga contraria, o un ion de metal alcalino-térreo de carga contraria; R" representa, independientemente para cada caso, H o alquilo inferior; R'" representa H, o alquilo inferior sustituido opcionalmente; R5 representa H, P(=O)(OR')2, MnJK, o MnQ; R6 representa H, OH, o MnQ, siempre que solamente uno de R5 y R6 represente H; R7 representa H, halógeno, hidroxilo, alquilo inferior o alcoxilo inferior; R8 representa alquilo, alquenilo, alquinilo, alcoxi, arilo, heteroarilo, cicloalquilo, heterociclilo o amina sustituido o no sustituido; J representa C( = O), C(=S), o SO2; K representa OR', N(R")2, o N(R')SO2R"; M, independientemente para cada caso, representa un grupo metileno sustituido o no sustituido (incluyendo C( = S) y C(=O)), NR", O, S, S(O) o S(O2); n representa un entero de 1 a 4 cuando está presente en B, de 0 a 6 cuando está presente en R5 y de 1 a 3 cuando está presente en R6; y Q representa un anillo heteroarilo que contiene nitrógeno, sustituyente amino secundario, sustituyente amino terciario, o heterociclo que contiene nitrógeno, sustituido o no sustituido. En ciertas modalidades, Q representa un sustituyente amino terciario, por ejemplo, dialquilamina, o un heterociclo que contiene nitrógeno sustituido o no sustituido tal como morfolina, piperidina, piperazina o pirrolidina. En ciertas modalidades, en la Fórmula II, B representa MnR8; Ar representa un anillo arilo o heteroarilo; V representa O, S o N-CN; W representa O, S, S(O2), C(=O), C( = S), CH2, o N R"; R' representa, independientemente para cada caso , H , alquilo inferior, un ion metálico de carga contraria, o un ion de metal alcalino-térreo de carga contraria; R" representa , independientemente para cada caso, H o alquilo inferior; R'" representa H, o alquilo inferior sustituido opcionalmente; R5 representa H, O(=O)(OR')2, MnJ K, o MnQ; R6 representa H, OH , o MnQ, siempre que solamente uno de R5 y R8 represente H; R7 representa H, halógeno, hidroxilo, alquilo inferior o alcoxilo inferior; R8 representa alquilo, alquenilo, alq uinilo, alcoxi, arilo, heteroarilo, cicloalq uilo, heterociclilo o amina sustituido o no sustituido; J representa OR', N(R")2, o N(R')SO2R"; M, independientemente para cada caso, representa un grupo metileno sustituido o no sustituido (incluyendo C(=S) y C(=O)), NR", O, S, S(O), o S(O2); n representa un entero de 1 a 4 cuando está presente en B, de 0 a 6 cuando está presente en R5 y de 1 a 3 cuando está presente en R6; y Q representa un sustituyente amino secundario sustituido o no sustituido.

En otras modalidades, en la Fórmula II, B representa MnR8; Ar representa un anillo arilo o heteroarilo; V representa O, S o N-CN; W representa O, S, S(O2), C( = O), C(=S), CH2, o NR"; R' representa, independientemente para cada caso, H, alquilo inferior, un ion metálico de carga contraria, o un ion de metal alcalino-térreo de carga contraria; R" representa, independientemente para cada caso, H o alquilo inferior; R'" representa H, o alquilo inferior sustituido opcionalmente; R3 representa MnJK, siempre que R5 no sea CH2COOH; R6 representa H, OH o MnQ; R7 representa H, halógeno, hidroxilo, alquilo inferior o alcoxilo inferior; R8 representa alquilo, alquenilo, alquinilo, alcoxi, arilo, heteroarilo, cicloalquilo, heterociclilo o amina sustituido o no sustituido; J representa C(=O), C(=S), o SO2; K representa OR', N(R")2, o N(R')SO2R"; M, independientemente para cada caso, representa un grupo metileno sustituido o no sustituido (incluyendo C(=S) y C(=O)), NR", O, S, S(O), o S(O2); n representa un entero de 1 a 4 cuando está presente en B, de 0 a 6 cuando está presente en R5 y de 1 a 3 cuando está presente en R6; y Q representa un anillo heteroarilo que contiene nitrógeno, un sustituyente amino secundario, un sustituyente amino terciario, o heterociclo que contiene nitrógeno, sustituido o no sustituido. En ciertas modalidades, en la Fórmula II, Q es un anillo heteroarilo que contiene nitrógeno, sustituido o no sustituido, mientras que R8 puede representar morfolino, piperazinilo, o ciciohexilo sustituido o no sustituido. En la Fórmula II, R" puede representar H. M también puede representar CH2. En ciertas modalidades, en la Fórmula II, W representa CH2 y al menos una presencia de M representa NR" sustituido. En ciertas modalidades, en la Fórmula II, Q representa un grupo amino secundario sustituido o no sustituido. En ciertas modalidades, en la Fórmula II, Q representa un grupo amino terciario sustituido o no sustituido. En ciertas modalidades, en la Fórmula II, Q representa un heterociclo que contiene nitrógeno, sustituido o no sustituido. En ciertas modalidades, en la Fórmula II, Q representa un anillo heteroarilo que contiene nitrógeno, un sustituyente amino terciario, o un heterociclo que contiene nitrógeno sustituido o no sustituido. En ciertas modalidades en la Fórmula II, R5 representa MnQ y Q representa un anillo heteroarilo que contiene nitrógeno, un sustituyente amino terciario, o un heterociclo que contiene nitrógeno, sustituido o no sustituido. En ciertas modalidades, Gen la Fórmula I I , Q representa un grupo amino terciario sustituido o no sustituido. En ciertas modalidades en la Fórmula I I , Q representa un heterociclo que contiene nitrógeno, sustituido o no sustituido. En ciertas modalidades en la Fórmula I I , R5 representa MnQ y Q representa un grupo amino secundario sustituido o no sustituido. En ciertas modalidades en la Fórmula I I , R5 representa MnQ y Q es un anillo heteroarilo que contiene nitrógeno, sustituido o no sustituido. En ciertas modalidades en la Fórmula I I , R8 representa morfolino, piperazinilo o ciciohexilo sustituido o no sustituido. En ciertas modalidades en la Fórmula I I , R" representa H . En ciertas modalidades en la Fórmula I I , W representa CH2. En ciertas modalidades en la Fórmula I I , M cuando está unido a Q es CH2 ) S(O2), C(=S) o C(=O). En ciertas modalidades en la Fórmula I I , M cuando está unido a Q es CH2, S(O2), C(=S), o C(=O). En ciertas modalidades, en la Fórmula I I , V es O, M representa NH , y R8 tiene la estructura: en donde Z representa O o NR". En ciertas modalidades, AR representa un anillo fenilo y R6 y R representan H para todos los casos. Ciertas modalidades incluyen un compuesto, o un profármaco, forma isomérica, tautomérica, sal aceptable para uso farmacéutico, N-óxido, o forma estereoisomérica de él, que tiene una estructura de la Fórmula V: en donde R8 representa un heterociclo sustituido o no sustituido; Q representa un sustituyente amino secundario, un sustituyente amino terciario, o un heterociclo que contiene nitrógeno, sustituido o no sustituido. Tal como se señaló anteriormente, R8 puede representar un anillo morfolino o piperazinilo en ciertas modalidades. En ciertas modalidades, tal como se señaló anteriormente, Q puede representar piperazina, morfolina, piperidina, pirid ina, pirrol, oxazol , isoxazol, imidazol o pirazol. Ciertas modalidades incluyen compuestos seleccionados del grupo de A34, A36, A37, A44, A46 y A76 hasta A82, o profármacos, isómeros, tautómeros, sales aceptables para uso farmacéutico, N-óxidos, o formas estereoisoméricas de ellos. Ciertas modalidades incluyen compuestos seleccionados del grupo de A47, A49, A51 y A82, o profármacos, isómeros, tautómeros, sales aceptables para uso farmacéutico, N-óxidos o formas estereoisoméricas de ellos. En ciertas modalidades, W representa O, S(O2), C( = O), C(=S) , S, CH2, o NR". Tal como se indicó previamente, en ciertas modalidades, Q representa un anillo heteroarilo que contiene nitrógeno, un sustituyente amino terciario, o heterociclo que contiene nitrógeno, sustituido o no sustituido. En ciertas modalidades, los sustituyentes apropiados pueden incluir, independientemente para cada caso, alquilo, oxo, acilamino, hidroxilo, carbonilo, sulfonilo, éster, amida, NR", hidroxi alquilo, alcoxi alquilo, arilo, heterociclilo, cicloalquilo, u oligo(etilenglicol). en ciertas modalidades, en donde Q representa un sustituyente amino secundario, los sustituyentes apropiados incluyen alquilo, alcoxialquilo, hidroxialquilo, e hidroxialcoxialquilo. Los conocedores de la materia reconocerán fácilmente que la lista de sustituyente enumerada no es exhaustiva, y que se puede usar muchos otros sustituyentes apropiados.

Ciertas modalidades pueden incluir composiciones farmacéuticas que contienen un excipiente aceptable para uso farmacéutico y un compuesto de cualquiera del tipo descrito aqu í, m ientras que ciertas modalidades incluyen un método para tratar un trastorno hiperproliferativo, q ue comprende administrar a un animal un compuesto de cualquiera de los tipos descritos aquí. En ciertas modalidades, los compuestos descritos aquí pueden ser aplicados a métodos para inhibir la proliferación de una célula, que com prenden poner en contacto la célula con un compuestos del tipo descrito aquí, o a un método para tratar una i nfección viral (tal como infección ocasionada por el virus de inmunodeficiencia humana (VIH)), que comprende administrar a un mamífero un compuesto del tipo descrito aquí conjuntamente con una o más quimioterapias o terapia con radiación. Los compuestos descritos aquí también pueden usarse para ia fabricación de un medicamento. Los compuestos también se pueden usar para tratar trastornos tales como trastornos hiperproliferativos. Los compuestos se pueden administrar a seres humanos o a animales. Los compuestos se pueden usar para inhibir la proliferación celular, por ejemplo poniendo en contacto las células proliferativas con los compuestos. Los compuestos también se pueden usar para tratar una infección viral administrando un compuesto a un mamífero. Los medicamentos formados usando los compuestos, se pueden usar como productos farmacéuticos para el tratamiento o prevención de un trastorno (por ejemplo, un trastorno hiperproliferativo, una infección viral, alopecia inducida por q uimioterapia, enfermedad asociada con actividad de quinasa dependiente de ciclina, etc.). El uso del med icamento puede ser en el tratamiento de cualq uiera de los trastornos descritos aquí. También están disponibles diversos métodos usando los compuestos. Por ejemplo, se puede adaptar métodos para inhibir una quinasa dependiente de ciclina administrando a un anfitrión que necesita de tal tratamiento, una cantidad efectiva terapéuticamente de cualquiera de los compuestos. Los métodos también se pueden adaptar para tratar trastornos asociados con quinasa dependiente de ciclina, incluyendo administrar a un anfitrión que necesita de dicho tratamiento, una cantidad efectiva terapéuticamente de un compuesto. Los métodos para tratar un ser humano u otro animal también están contemplados aquí. En ciertas modalidades, un ser humano u otro animal puede tratarse usando una composición que contiene una cantidad efectiva terapéuticamente de uno o más de los compuestos de esta invención . En ciertas modalidades, la presente invención proporciona una novedosa composición farmacéutica que comprende un portador aceptable para uso farmacéutico y una cantidad efectiva terapéuticamente de un compuesto de la fórmula (I) o (I I), o cualquier otro compuesto descrito aquí, o una forma isomérica , profármaco, tautomérica, sal aceptable para uso farmacéutico, N-óxido o forma estereoisomérica de él.

En otra modalidad , la presente invención proporciona un método novedoso para tratar el cáncer, u otra enfermedad proliferativa u otras enfermedades, incluyendo administrar a un anfitrión en necesidad de dicho tratamiento, una cantidad efectiva terapéuticamente de un compuesto de la fórmula (I) o (I I), o cualquier otro compuesto descrito aquí, o una forma isomérica, profármaco, tautomérica, sal aceptable para uso farmacéutico, N-óxido, o forma estereoisomérica de él. En otra modalidad, la presente invención proporciona un método novedoso para tratar el cáncer u otras enfermedades proliferativas u otras enfermedades, que comprende administrar a un anfitrión que necesita de dicho tratamiento una cantidad efectiva terapéuticamente de: (a) un compuesto de la fórmula (19 o (I I), o cualquier otro compuesto descrito aquí, o una forma isomérica, profármaco, tautomérica, sal aceptable para uso farmacéutico, N-óxido o forma estereoisomérica de él; y (b) al menos un compuesto seleccionado de agentes anti-cancerosos y agentes anti-proliferativos. ° Tal como se describe aquí, los inhibidores de esta invención son capaces de inhibir la maquinaria del ciclo celular y consecuentemente podrían ser útiles en la modulación de la evolución del ciclo celular, lo cual finalmente controlaría el crecimiento y la diferenciación celulares. Estos compuestos podrían ser útiles para tratar sujetos que tienen trastornos asociados con excesiva proliferación celular, tales como cáncer, psoriasis, trastornos inmunológicos que involucran proliferación de leucocitos no deseada, en el tratamiento de la restenosis y otros trastornos celulares en músculos lisos, y similares. Estos compuestos podrían ser útiles también en la inhibición de la transcripción del virus de inmunodeficiencia humana de tipo I (VIH-1) (Wang y co-autores, J. Virology 75: 7266-7279 (2001)). También descritos aquí, los compuestos de esta invención se pueden usar en la fabricación de un medicamento, el cual puede usarse para tratar enfermedades tales como las descritas aquí.

IV. BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La figura 1 muestra los efectos de la exposición del compuesto A37 sobre: (a) análisis del ciclo celular de células HCT-116 mediante análisis Pl FACS; (b) inducción de escisión PARP. La figura 2 ilustra el efecto irreversible del compuesto A37 en la supervivencia clongénica de células tumorales HCT-116, representada mediante (a) respuesta a la dosis; y (b) transcurso del tiempo. La figura 3 ilustra el efecto irreversible del compuesto B16 en la supervivencia clongénica de células tumorales HCT-116, representada en el transcurso del tiempo. La figura 4 muestra la viabilidad reducida de las células de tumor detenidas (HCT-116) expuestas al compuesto A37, comparadas con las células normales detenidas (IMR90) expuestas al mismo compuesto. La figura 5 presenta los resultados obtenidos del ensayo con tumor xenoinjerto HCT-1 16 con d iversos compuestos de ia i nvención . La figura 6 muestra los resultados obtenidos del ensayo con tumor xenoinjerto A2780 con el compuesto A37, representados mediante (a) tamaño del tumor en el transcurso del tiempo con diversas dosis; y (b) tabla de mediciones obtenidas en el ensayo. La figura 7 muestra los resultados obtenidos del ensayo con tumor xenoinjerto PC3 con el compuesto A37, representados mediante (a) tamaño del tumor en el transcurso del tiempo con diversas dosis; y (b) tabla de mediciones obtenidas en el ensayo. La figura 8 muestra los resultados obtenidos del ensayo con tumor xenoinjerto A2780 con el compuesto B16, representados mediante (a) tamaño del tumor en el transcurso del tiempo con diversas dosis; y (b) tabla de mediciones obtenidas en el ensayo. La figura 9 muestra como un ejemplo los resultados obtenidos para la unión de CDK2/ciclina E al chip cargado con inhibidor CM5. La KD calculada a partir de estos datos tiene un valor de 8, 0 ± 2, 8 nM.

V. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LOS EJEMPLOS DE MODALI DADES La invención concierte a novedosos inhibidores de quinasa dependiente de ciclina (cdk) y específicamente, pero no exclusivamente, a inhibidores de complejos cdk/ciclina. Tal como se describe aquí, los inhibidores de esta invención son capaces de inhibir la maquinaria del ciclo celular y en consecuencia pueden ser útiles para modular la progresión del ciclo celular, controlando finalmente el crecimiento y la diferenciación celular. Estos compuestos podrían ser útiles para tratar sujetos que tienen trastornos asociados con excesiva proliferación celular, como por ejemplo tratamiento de cáncer, psoriasis, trastornos inmunológicos que involucran proliferación de leucocitos no deseada, en el tratamiento de restenosis y otros trastornos de las células de músculos lisos, y similares, tal como se describe en mayor detalle más adelante. En una modalidad, la presente invención proporciona compuestos, incluyendo las formas isomérica, profármacos, tautomérica, sal aceptable para uso farmacéutico, N-óxido, o formas estereoisoméricas de ellos, que tienen una estructura de la Fórmula en donde R8 representa un heterociclo sustituido o no sustituido, o morfolino sustituido o no sustituido, piperazinilo sustituido o no sustituido, o ciciohexilo sustituido o no sustituido; F representa (CH2)n, en donde n es un entero entre 1 y 6. En ciertas modalidades, n es 1; Q representa un sustituyente amino secundario sustituido o no sustituido, un sustituyente amino terciario sustituido o no sustituido, o un heterociclo que contiene nitrógeno, sustituido o no sustituido. En ciertas modalidades, Q en la Fórmula I representa un sustituyente amino terciario, por ejemplo dialquil amina. En ciertas modalidades, Q en la fórmula I representa un nitrógeno sustituido o no sustituido que contiene heterociclo tal como morfolina, piperidina, piperazina o pirrolidina. En ciertas modalidades, Q representa un anillo heteroarilo que contiene nitrógeno, un sustituyente amino terciario, o un heterociclo que contiene nitrógeno, sustituido o no sustituido. En ciertas modalidades, R8 representa: en donde Z es O o NR"; y R" representa H o alquilo inferior. En ciertas modalidades, los compuestos que tienen una estructura de la Fórmula I excluyen uno o más de los siguientes compuestos: En ciertas modalidades, los compuestos de la Fórm ula I incluyen uno o más de los compuestos que se m uestran en las tablas. Por ejemplo, los compuestos pueden incluir uno o más de los compuestos B 1 hasta B20 y C2. Como se puede notar, en ciertas modalidades, los sustituyentes apropiados pueden incluir, independ ientemente para cada caso, alquilo, oxo, acil amino, hidroxilo, carbonilo, sulfonilo, éster, amida, N R" , hidroxi alquilo, alcoxi alquilo, arilo, heterociclilo, cicloalquilo, u oligo(etilenglicol). En ciertas modalidades, en donde Q representa un sustituyente amino secundario, los sustituyentes apropiados incluyen alquilo, alcoxialquilo, hidroxialq uilo, e hidroxialcoxialquilo. Los conocedores de la materia reconocerán fácilmente que la lista de sustituyentes enumerados no es exhaustiva, y q ue se puede usar muchos otros sustituyentes apropiados. En otra modalidad, la presente invención también proporciona compuestos, incluyendo sus formas isomérica, profármaco, tautomérica, sal aceptable para uso farmacéutico, N-óxido, o forma estereoisomérica, con una estructura de la fórmula I I: en donde B representa MnR8; Ar representa un anillo arilo o heteroarilo; V representa O, S o N-CN, preferiblemente O o S; W representa O, S, S(O2), C(=O), C(=S), CH2 o NR"; R' representa, independientemente para cada caso, H, alquilo inferior, o un ion metálico de carga opuesta; tal como un ion de metal alcalino o alcalino terreo de carga opuesta; R" representa, independientemente para cada caso, H o alquilo inferior, preferiblemente H; R'" representa H, o alquilo inferior sustituido opcionalmente, preferiblemente con un sustituyente seleccionado de éster, amida, acilamino o aciloxi; R5 representa H, P(=O)(OR')2, MnJK, o MnQ; R6 representa H, OH o MnQ, siempre que solamente uno de R5 y R6 represente H; R , independientemente para cada caso, representa H, halógeno, hidroxilo, alquilo inferior, tal como metilo, o alcoxilo inferior, tal como metoxi; R8 representa alquilo, alquenilo, alquinilo, alcoxi, arilo, heteroarilo, cicloalquilo, heterociclilo o amina, sustituido o no sustituido J representa C(=O), C(=S) o SO2; K representa OR', N(R")2, o N(R')SO2R"; M, independientemente para cada caso, representa un grupo metileno sustituido o no sustituido (por ejemplo, sustituido con alquilo inferior, oxo, hidroxilo, etc.), NR", O, S, S(O), o S(O)2, preferiblemente NR" o CH2, o, cuando está unido a W o a Q, CH2, S(O2), C(=S) o C( = O); n representa un entero de 0 a 10, preferiblemente de 1 a 7, o aún de 1 a 4 cuando está presente en B, de 0 a 6 cuando está presente en R5, y de 1 a 3 cuando está presente en R6; y Q representa un anillo heteroarilo que contiene nitrógeno, por ejemplo pirrol, tetrazol, oxazol, oxadiazol, isoxazol, imidazol o pirazol; un sustituyente amino secundario, por ejemplo monoalquilamina, arilalquilamina, heteroarilalquilamina, un sustituyente amino terciario, por ejemplo, una dialquilamina; o un heterociclo que contiene nitrógeno, tal como morfolina, piperidina, piperazina, piridina o pirrolidina, sustituido o no sustituido. En ciertas modalidades, cuando K representa N(R')SO2R", R" representa alquilo inferior. En ciertas modalidades en donde R5 es MnJK, R5 no es CH2COOH. En ciertas modalidades, los sustituyentes apropiados incluyen, independientemente para cada caso, alquilo, oxo, hidroxilo, alcoxi, hidroxi-alcoxi, carbonilo, sulfonilo, éster, amida, NR", haluro de alquilo, acil amino, o arilo, heteroarilo, heterociclilo, cicloalquilo, oligo(etilenglicol), etc., sustituido o no sustituido. Será evidente para los conocedores de la materia que el arilo y el heteroarilo pueden emplear cualquier sustituyente apropiado, incluyendo cualquiera de los enumerados anteriormente. En ciertas modalidades, R8 representa cualquiera de los siguientes sustituyentes: alquilo, alq uenilo, alquinilo, alcoxi, hidroxilo-alcoxi, arilo, amina, o heteroarilo. En ciertas modalidades, cualq u iera de los sustituyentes antes mencionados puede, a su vez, estar sustituido opcionalmente por cualquiera de los sustituyentes antes mencionados, o aún por halo, -CN, N3, NO2, o haloalquilo. Otros sustituyentes apropiados también pueden incluir, por ejemplo, ciciohexilo, =O, carbonilo, sulfonilo, carboxilo, sulfoxilo, amida, heterociclo, éster o éter. En ciertas modalidades, al menos una presencia de M es NR" sustituido cuando se une a R8 y cuando está presente en R5. En ciertas modalidades, incluyendo cualquiera de las modalidades anteriores, R8 tiene la siguiente forma: en donde Z representa O o NR". En ciertas modalidades, R8 representa morfolino o ciciohexilo. En ciertas de estas modalidades, Mn es N R", preferiblemente NH. En ciertas modalidades V es O. En ciertas modalidades, W representa CH2. En ciertas de estas modalidades, al menos una aparición de M es NR" sustituido. En ciertas modalidades, en donde R'" está presente y es alquilo inferior sustituido, el alquilo inferior está sustituido con desde 1 hasta 3 (preferiblemente 1 ) sustituyentes seleccionados de alquilo inferior, haloalquilo inferior, NR8R8a, NR"C(O)R8, = O, COR8, CO2R8, NR"CO2R8, C(O)NR8R8a, NR"C(O)NR8R8a, NR"C(S)NR8R8a, C(S)NR8R8a, NR"SO2NR8R8a> SO2NR8R8a, NR"SO2R8a, SO2R8a, NR"SO2R8a, carbociclo de 3 a 10 átomos de carbono sustituido con 0-5 R'", y heterociclo de 5 a 10 miembros que contiene de 1 a 4 heteroátomos seleccionados de O, N y S, sustituido con 0-3 R8, en donde R8 representa H, haloalquilo de 1 a 4 átomos de carbono, NR8aR8a, NR"C(O)OR8a, NR"C(O)R8a, COR8a, CO2R8a, CONR8aR8a, NHC(O)NR8aR8a, NHC(S)NR8aR8a, SO2NR8aR8a, SO2R8a, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, fenilo, bencilo, alquilo de 5 a 10 átomos de carbono sustituido con alquenilo de 2 a 10 átomos de carbono sustituido opcionalmente con 0-3 R'", alquinilo de 2 a 10 átomos de carbono sustituido con 0-3 R'", -(CF2)mCF3, carbociclo de 3 a 10 átomos de carbono sustituido con 0-5 R"', y heterociclo de 5 a 10 miembros que contiene de 1 a 4 heteroátomos seleccionados de O, N, y S, substituido con 0-3 R"'; y R8a, independientemente para cada caso, representa un grupo seleccionado de H, alquilo inferior, fenilo y bencilo. En ciertas modalidades, R'" incluye un residuo aminoácido, tal como un residuo de valina o glicina, por ejemplo, R"' es un residuo de alquilo inferior sustituido con un residuo aminoácido mediante una amida o enlace éster. En modalidades preferidas, R5W y R6 son adyacentes (orto) uno al otro en Ar, y preferiblemente son no adyacentes (orto) con el enlace del núcleo tricíclico.

En ciertas modalidades, V representa S o N-CN . En algunas modalidades, Ar representa un anillo heteroarilo. En ciertas modalidades de la Fórm ula I I , W representa O, S o N R". En ciertas modalidades, R7 representa, independientemente para cada caso, halógeno, hidroxilo, alquilo inferior, tal como metilo, o alcoxilo inferior, tal como metoxi. En ciertas modalidades n representa un entero de 0 a 5, preferiblemente de 1 a 5, y más preferiblemente de 2 a 4 cuando está presente en R5. En ciertas modalidades de la Fórmula I I , W representa O, CH2, C(=O), C(=S) o SO2. En ciertas modalidades, R5 representa MnJk o MnQ. En ciertas modalidades, R6 y R7 representan H. En ciertas modalidades, M representa C(=O) o CH2. En ciertas modalidades, J es preferiblemente C(=O), y K es OR' o N(R')SO2R". En ciertas modalidades, N(R')SO2R" es N HSO2R". En ciertas modalidades, Q representa un anillo heteroarilo que contiene nitrógeno, sustituido o no sustituido. En ciertas modalidades, Q representa un anillo heteroarilo sustituido o no sustituido, por ejemplo, un anillo de cinco miembros o de seis miembros, q ue contiene al menos dos átomos de nitrógeno. En ciertas modalidades, Q puede ser apariciones de tetrazol u oxidazol sustituido o no sustituido. En ciertas modalidades, Q puede ser apariciones de piridina, piperidina o piperazina sustituida o no sustituida. En ciertas modalidades, Q representa un sustituyente amino secundario. En ciertas de estas modalidades, el sustituyente en el sustituyente amino secundario se selecciona de alquilo, alcoxialquilo, hidroxialquilo, e hidroxialcoxialquilo. En ciertas modalidades de la fórmula I I , W representa C(=O), SO2, o C(=S), R6 y R7 representan H , R5 representa MnQ, en donde n representa 0 y Q representa un anillo heteroarilo que contiene nitrógeno, sustituido o no sustituido. En ciertas modalidades, W representa CH2, R6 y R representan H , y R5 representa MnQ, en donde n representa 0 y Q representa un anillo heteroarilo que contiene nitrógeno, sustituido o no sustituido. En ciertas modalidades, W representa S, O, o N R", R6 y R7 representan H, y R5 representan MnJ K, en donde n es un entero desde 1 hasta 3, J es C(=O) , y K es OR' o N(R')SO2R". En ciertas modalidades, W representa S, O, o NR" , R6 y R7 representan H , y R5 representa MnQ, en donde n es un entero de 1 a 3, y Q es un heterociclo que contiene nitrógeno, de cinco miembros, sustituido o no sustituido. En estas modalidades, n preferiblemente es 1 . En ciertas modalidades, Q contiene al menos dos átomos de nitrógeno. En ciertas modalidades, W representa S, O, o NR", R6 y R7 representan H , y R5 representa MnQ, en donde n representa un entero de 1 a 3, y Q es un heterociclo que contiene nitrógeno, de seis miembros, sustituido o no sustituido. En ciertas de estas modalidades, n es 2, y Mn representa CH2C(=O). En ciertas modalidades, W representa O, S, o NR", R6 y R7 representan H, y R5 representa MnQ, en donde M es CH2, n es un entero desde 1 hasta 3, y Q es un heterociclo que contiene nitrógeno, sustituido o no sustituido. En ciertas modalidades, en donde Q representa un heterociclo que contiene nitrógeno, sustituido, por ejemplo, piperazina, morfolina, piperidina, piridina, tiazol, oxadiazol, tetrazol, pirrol, etc. , los sustituyentes apropiados incluyen casos sustituidos o no sustituidos de alquilo, amino-alquilo, alcoxilo, aralquilo (por ejemplo, bencilo), arilo (por ejemplo, fenilo), y heteroarilo, por ejemplo, oxazilo, piperazilo, piridilo, pirrolilo. En ciertas de estas modalidades, en donde Q contiene un nitrógeno no unido a M, ese nitrógeno está sustituido, por ejemplo, por un sustituyente como este. En ciertas modalidades, la invención contempla un compuesto, o una forma isomérica, profármaco, tautomérica, sal aceptable para uso farmacéutico, N-óxido, o forma estereoisomérica de él, que tiene una estructura de: C 1 .

En ciertas modalidades, la invención contempla un compuesto, o una forma isomérica, profármaco, tautomérica, sal aceptable para uso farmacéutico, N-óxido, o forma estereoisomérica de él , que tiene una estructura de: C5.

En ciertas modalidades, de la Fórmula I I , la presente invención proporciona compuestos, incluyendo sus formas isomérica, profármaco, tautomérica, sal aceptable para uso farmacéutico, N-óxido, o estereoisomérica, con una estructura de la Fórmula l ia: en donde W y Z, independientemente, representan O o NR"; R' representa, independientemente para cada caso, H, alquilo inferior, o un ion metálico de carga contraria, tal como un ion de metal alcalino o alcalino terreo de carga contraria; R" representa, independientemente para cada caso, H o alquilo inferior, preferiblemente H R5 representa H , P(=O)(OR')2, o MnQ; R6 representa H, OH , o MnQ, preferiblemente siempre q ue uno y solamente uno de R5 y R6 represente H ; R7, independientemente para cada caso, representa hidrógeno, halógeno, alquilo inferior, tal como metilo, o alcoxiio inferior, tal como metoxi; M, independientemente para cada caso, representa un grupo metileno sustituido o no sustituido (por ejemplo, sustituido con alquilo inferior, oxo, hidroxilo, etc.), N R", O, S , S(O), o S(O2), preferiblemente CH2, o, cuando está unido a W o a Q, CH2, S(O2), C(=S) o C( = O)), n representa un entero de 1 a 5, preferiblemente de 2 a 4 cuando está presente en R5 y de 1 a 3 cuando está presente en R6; y Q representa un anillo heteroarilo que contiene nitrógeno, por ejemplo, pirrol, oxazol, isoxazol, imidazol, o pirazol, un sustituyente amino terciario, por ejemplo, una dialq uilamina, o un heterociclo que contiene nitrógeno, sustituido o no sustituido, tal como morfolina, piperidina, piperazina o pirrolidina. En ciertas modalidades, Q representa un sustituyente amino terciario, por ejemplo, dialquil amina. En ciertas modalidades, Q representa un heterociclo que contiene nitrógeno, sustituido o no sustituido, tal como morfolipa, piperidina, piperazina, o pirrolidina. En ciertas modalidades, Q representa un anillo heteroarilo que contiene nitrógeno, un sustituyente amino terciario, o un heterociclo que contiene nitrógeno, sustituido o no sustituido. En ciertas modalidades, los compuestos con la estructura de la Fórmula I I , no incluyen compuestos con la estructura de la Fórmula Ha. Los ejemplos de compuestos de la Fórmula I I y de la Fórmula l ia, incluyen los que se muestran en la Tabla B. La invención también proporciona compuestos que tienen una estructura seleccionada de A3, A7 hasta A29, A31 , A33 hasta A37, A40, A41 , A44 hasta A47, A49, A51 , A56, A57, A65, A69 hasta A82, C1 , C2, y C5, incluyendo sus formas isomérica, profármaco, tautomérica, sal aceptable para uso farmacéutico, N-óxido, o estereoisomérica. En ciertas modalidades, la invención proporciona un compuesto que tienen una estructura A37, incluyendo sus formas isomérica, profármaco, tautomérica, sal aceptable para uso farmacéutico, N-óxido, o estereoisomérica. En una modalidad alternativa, la presente invención proporciona un profármaco o sal aceptable para uso farmacéutico aislado de un metabolito del compuesto A37. Una modalidad preferida tal, es un profármaco o una sal aceptable para uso farmacéutico del compuesto A68 o C5. En otra modalidad, la presente invención proporciona compuestos q ue tienen una estructura seleccionada desde B 1 hasta B20, y C1 , C2 y C5, incluyendo sus formas isomérica, profármaco, tautomérica, sal aceptable para uso farmacéutico, N-óxido, o estereoisomérica. En una modalidad preferida, la invención proporciona un compuesto que tiene una estructura B 16 o C5, incluyendo sus formas isomérica, profármaco, tautomérica, sal aceptable para uso farmacéutico, N-óxido, o estereoisomérica. En otra modalidad, la invención proporciona un compuesto que tiene una estructura B3, incluyendo sus formas isomérica, profármaco, tautomérica, sal aceptable para uso farmacéutico, N-óxido, o estereoisomérica. En una modalidad alternativa, la presente invención proporciona un profármaco o sal aceptable para uso farmacéutico aislado de un metabolito del compuesto B16. Una modalidad preferida tal, es un profármaco o una sal aceptable para uso farmacéutico del compuesto B3. En ciertas modalidades, la invención proporciona un compuesto, o una forma isomérica, profármaco, tautomérica, sal aceptable para uso farmacéutico, N-óxido, o forma estereoisomérica de él, que tiene una estructura de la Fórmula V: en donde R8 representa un heterociclo sustituido o no sustituido; Q representa un sustituyente amino secundario, un sustituyente amino terciario, o un heterociclo que contiene nitrógeno, sustituido o no sustituido. En otras modalidades de la invención, los compuestos q ue se m uestran en las Tablas C, D y E son ejemplos, y la invención incluye las formas isomérica, profármaco, tautomérica, sal aceptable para uso farmacéutico, N-óxido, o estereoisomérica de los compuestos ilustrados allí. En otra modalidad, la presente invención proporciona una novedosa composición farmacéutica que contiene un portador aceptable para uso farmacéutico y una cantidad efectiva terapéuticamente de un compuesto de la Fórmula I, I I o l ia, o cualquier compuesto descrito aquí, tal como C5, o una forma isomérica, profármaco, tautomérica, sal aceptable para uso farmacéutico, N-óxido, o forma estereoisomérica de él. En una modalidad preferida, tal composición farmacéutica contiene una cantidad efectiva terapéuticamente de un compuesto seleccionado de A1 hasta A82, de B1 hasta B20 y de C1 hasta C5, o una forma isomérica, profármaco, tautomérica, sal aceptable para uso farmacéutico, N-óxido, o forma estereoisomérica de él, En una modalidad alternativa, esta composición farmacéutica contiene una cantidad defectiva terapéuticamente de un profármaco o de una sal aceptable para uso farmacéutico de un metabolito del compuesto A37 hasta B 16, preferiblemente un metabolito que tiene la estructura A68 o C5. En ciertas modalidades, la invención contempla proporcionar uno o más de los compuestos descritos aquí en una forma purificada o sintética. En otra modalidad, la presente invención proporciona un método novedoso para tratar el cáncer, u otra enfermedad proliferativa u otras enfermedades, incluyendo cualquier enfermedad o condición descrita más adelante, el método comprende administrar a un anfitrión que necesita de dicho tratamiento, una cantidad efectiva terapéuticamente de un compuesto de la Fórmula I, II o lia, o cualquier compuesto descrito aquí, o una forma isomérica, profármaco, tautomérica, sal aceptable para uso farmacéutico, N-óxido, o forma estereoisomérica de él. En una modalidad preferida, estos métodos de tratamiento comprenden la administración apropiada de una cantidad efectiva terapéuticamente de un compuesto seleccionado de A1 hasta A82, de B1 hasta B20 y de C1 hasta C5, o una forma isomérica, profármaco, tautomérica, sal aceptable para uso farmacéutico, N-óxido, o forma estereoisomérica de él. La administración conjunta, tal como se usa aquí el término, comprende terapias en las cuales se combinan dos sustancias terapéuticas en una sola preparación, se administran, por ejemplo simultáneamente o en momentos diferentes, en preparaciones separadas, o si no, se administran a un paciente como parte de un régimen terapéutico. En otra modalidad, la invención proporciona un método para form ular una composición farmacéutica que contiene una cantidad efectiva terapéuticamente de un compuesto de la Fórm ula I , I I , o l ia, o cualquier compuesto descrito aquí, o una forma isomérica, profármaco, tautomérica, sal aceptable para uso farmacéutico, N-óxido, o forma estereoisomérica de él , y opcionalmente, un portador aceptable para uso farmacéutico. En una modalidad preferida, tal composición farmacéutica contiene una cantidad efectiva terapéuticamente de un compuesto seleccionado desde A1 hasta A82, desde B1 hasta B20, y desde C1 hasta C5, o una forma isomérica, profármaco, tautomérica, sal aceptable para uso farmacéutico, N-óxido, o forma estereoisomérica de él. En una modalidad alternativa, esta composición farmacéutica contiene una cantidad efectiva terapéuticamente de un profármaco o una sal aceptable para uso farmacéutico de un metabolito del compuesto A37 o B16, preferiblemente un metabolito q ue tiene la estructura A68 o C5. En modalidades ad icionales, las composiciones farmacéuticas de la invención son para su uso en el tratamiento de una enfermedad, tal como cáncer, y otras enfermedades proliferativas u otras enfermedades, incluyendo cualquier enfermedad o condición descrita más adelante. En ciertas modalidades de la presente invención, en donde se usan grupos sustituyentes, los sustituyentes apropiados pueden incluir, por ejemplo, un halógeno, un hidroxilo, un carbonilo (por ejemplo, cetonas, aldehidos, carboxilos, esteres, acilos), un tiocarbonilo (por ejemplo, tioéster, un tioacetato, un tioformato) , un alcoxilo, un fosforilo (por ejemplo, fosfonato, fosfinato), un fosfato, un fosfonato, un fosfinato, un amino, un amino-alq uilo, un amido, una amidina, una ¡mina, un ciano, un nitro, un azido, un sulfhidrilo, un alquiitio, éteres, -CF3, alq uilos, alquenilos, alquinilo, cicloalq uilo, alcoxilo, sililo, sulfonilo (por ejemplo, sulfato, sulfonamido, sulfamoilo, sulfonato), un heterociclilo, un aralquilo (por ejemplo bencilo), o una porción aromática o heteroaromática (por ejemplo, fenilo, oxazilo, piperazilo, piridilo, pirrilo). Estos sustituyentes también pueden, por sí mismos, estar sustituidos o no sustituidos. ¡i. DEFINICIONES Como se usa aquí, los siguientes términos y expresiones tienen los significados indicados. Los compuestos de la presente invención pueden contener un átomo de carbono sustituido asimétricamente, y pueden estar aislados en formas ópticamente activa o racémica. Es bien conocido en la materia cómo preparar formas ópticamente activas, por ejemplo por resolución de formas racémicas o mediante síntesis a partir de materiales iniciales ópticamente activos. Todas las formas quirales, diaestereoméricas , racémicas, y todas las formas isoméricas geométricas de una estructura están propuestas, a menos que la estereoquímica o forma isomérica específica esté indicada específicamente. Todos los procesos usados para preparar los compuestos de la presente invención y sus producto intermedios elaborados aquí, se consideran parte de la presente invención. La presente invención pretende incluir todos los isótopos de átomos que están en los presentes compuestos. Los isótopos incluyen aquellos átomos que tienen el mismo número atómico, pero diferentes números de masa. A manera de ejemplo general y sin limitación, los isótopos de hidrógeno incluyen tritio y duterio. Los isótopos de carbono incluyen carbono 12 y carbono 14. El término "alquilo" tiene la intención de incluir tanto grupos hidrocarburo alifáticos saturados de cadena recta como ramificada, que tienen la cantidad especificada de átomos de carbono. Los ejemplos de alquilo incluyen, sin limitación a ellos, metilo, entilo, n-propilo, /-propilo, n-butilo, s-butilo, f-butilo, n-pentilo, y s-pentilo. Además, el término pretende incluir tanto los grupos alquilo sustituidos como los no sustituidos, estos últimos con referencia a las porciones alquilo que tienen uno o más sustituyentes hidrógeno reemplazados, sin limitación a ellos, por halógeno, hidroxilo, carbonilo, alcoxi, éster, éter, ciano, fosforilo, amino, imino, amido, sulfhidrilo, alquiltio, tioéster, sulfonilo, nitro, heterociclo, arilo o heteroarilo. Los conocedores de la materia también entenderán que las porciones sustituidas en sí mismas pueden estar sustituidas también cuando sea apropiado. El término "alquilo inferior" se refiere a aquellos grupos alquilo que tienen de 1 a 6 átomos de carbono, preferiblemente de 1 a 4 átomos de carbono, y el término "alcoxi inferior" se refiere a tales grupos alquilo unidos a un átomo de oxígeno. En ciertas modalidades, los sustituyentes alquilo preferiblemente son sustituyentes alquilo inferior. Como se usa aquí, los términos "halo" o "halógeno" se refieren a flúor, cloro, bromo y yodo. El término "arilo" significa una porción aromática tal como fenilo, indanilo o naftilo, pero no limitada a ellos. Los términos "cicloalquilo" y "bicicloalquilo" significan cualquier sistema de anillo estable, el cual puede ser saturado o parcialmente insaturado. Los ejemplos de estos incluyen , sin limitación a ellos, ciclopropilo, ciclopentilo, ciciohexilo, norbornilo, biciclo[2.2] nonano, adamantilo o tetrahidronaftilo (tetralin). Como se usa aquí, "carbociclo" o "residuo carbocíclico" significa cualquier monocíclico o bicíclico de 3 a 7 miembros, o bicíclico o tricíclico de 7 a 13 miembros, cualquiera de los cuales puede ser saturado, parcialmente insaturado, o aromático. Los ejemplos de estos carbociclos incluyen, sin limitación a ellos, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciciohexilo, cicioheptilo, adamantilo, ciclooctilo, [3.0]biciclooctano, [4.0]biciclononano, [4.0]biciclodecano (decalin), [2.2]biciclooctano, fluorenilo, fenilo, naftilo, indanilo, adamantilo o tetrahidronaftilo (tetralin). Como se usa aquí, el término "heterociclo" o "sistema heterocíclico" significa un anillo monocíclico o bicíclico de 5 a 7 miembros o heterocíclico bicíclico de 7 a 10 miembros que es saturado, parcialmente insaturado o insaturado (aromático/heteroarilo) , y el cual está constituido por átomos de carbono y de 1 a 4 heteroátomos seleccionados independientemente del grupo que consiste en N, O y S, e incluye cualq uier grupo bicíclico en el cual cualquiera de los anillos heterocíclicos definidos anteriormente está fusionado con un anillo benceno. Los heteroátomos nitrógeno y azufre pueden ser oxidados opcionalmente. El anillo heterocíclico puede estar unido a su grupo pendiente en cualquier heteroátomo o átomo de carbono que tenga como resultado una estructura estable. Los anillos heterocíclicos descritos aquí, pueden estar sustituidos en un átomo de carbono o en un átomo de nitrógeno, si el compuesto resultante es estable. Si se nota específicamente, un nitrógeno en el heterociclo puede estar cuaternizado opcionalmente. En ciertas modalidades, cuando la cantidad total de átomos de S y de O en el heterociclo excede de 1 , entonces esos heteroátomos no necesitan estar adyacentes uno con respecto al otro. Se prefiere que la cantidad total de átomos de S en el heterociclo no sea de más de 1 . Como se usa aquí, el término "sistema heterocíclico aromático" significa un anillo aromático estable monocíclico o bicíclico de 5 a 7 miembros o heterocíclico bicíclico de 7 a 10 miembros, el cual está constituido por átomos de carbono y de 1 a 4 heteroátomos seleccionados independientemente de N , O y S. Se prefiere que la cantidad total de átomos de S y de O en el heterociclo aromático no sea más de 1. Los ejemplos de heterociclos incluyen, sin limitación a ellos, 1 H-indazol , 2-pirrolidonilo, 2H 16H ditiazinilo, 2H-pirrolilo, 3H indolilo, 4-piperidonilo, 4aH-carbazol, 4H-quinolizinilo, 6H-1 ,2,5-tiadiazinilo, acridinilo, azocinilo, bencimidazolilo, benzofuranilo, benzotiofuranilo, benzotiofenilo, benzoxazolilo, benztiazolilo, benztriazolilo, benztetrazolilo, bencisoxazolilo, bencisotiazolilo, bencimidazalonilo, carbazolilo, 4aH-carbazolilo, P-carbolinilo, cromanilo, cromenilo, cinolinilo, decahidroquinolinilo, 2H,6H ditiazinilo, dihidrofuro[2,3-bjtetrahidrofurano, furanilo, furazanilo, imidazolidinilo, imidazolinilo, imidazolilo, 1 H-indazolilo, indolenilo, indolinilo, indolizinilo, indolilo, isobenzofuranilo, isocromanilo, isoindazolilo, isoindolinilo, isoindolilo, isoquinolinilo, isotiazolilo, isoxazolilo, morfolinilo, naftiridinilo, octahidroisoquinolinilo, oxadiazolilo, 1 ,2,3-oxad iazolilo, 1 ,2,4-oxadiazolilo, 1 ,2,5-oxad iazolilo, 1 ,3,4-oxadiazolilo, oxazolidinilo, oxazolilo, oxazolidinilperimidinilo, fenantridinilo, fenantrolinilo, fenarsazinilo, fenzinilo, fenotiazinilo, fenoxatiinilo, fenoxazinilo, ftalazinilo, piperazinilo, piperidinilo, pteridinilo, piperidinilo, 4-piperidonilo, pteridinilo, purinilo, piranilo, pirazinilo, pirazolidinilo, pirazolinilo, pirazolilo, piridazinilo, piridooxazol , piridoimidazol, piridotiazol, piridinilo, piridilo, pirimídinilo, pirrolidinilo, pirrolinilo, pirrolilo, q uinazolinilo, quinoliniio, 4H-quinolizinilo, quinoxalinilo, quinuclidinilo, carbolinilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidro isoquinilinilo, tetrahidroquinolinilo, 6H-1 ,2,5-tiadiazinilo, 1 ,2,3-tiadiazolilo, 1 ,2,4-tiadiazolilo, 1 ,2,5-tiadiazolilo, 1 ,3,4-tiadiazolilo, tiantrenilo, tiazolilo, tienilo, tienotiazolilo, tienooxazolilo, tienoimidazolilo, tiofenilo, triazinilo, 1 ,2,3-triazolilo, 1 ,2,4-triazolilo, 1 ,2,5-triazolilo, 1 ,3,4-triazolilo, xantenilo. Los heterociclos preferidos incluyen, sin limitación a el los, pridinilo, furanilo, tienilo, pirrolilo, pirazolilo, imidazolilo, indolilo, bencimidazolilo, 1 H-indazolilo, oxazolidinilo, benzotriazolilo, bencisoxazolilo, oxindolilo, benzoxazolinilo, o isatinoilo. También están incluidos los anillos fusionados y los compuestos espiro que contienen, por ejemplo, los heterociclos anteriores. Como se usa aquí, "sales aceptables para uso farmacéutico" se refiere a derivados de los compuestos descritos, en donde el compuesto originario se modifica elaborando sales de ácido o base de ellos. Los ejemplos de sales aceptables para uso farmacéutico incluyen, sin limitación a ellos, sales de ácido orgánico mineral de residuos básicos tales como aminas; sales alcalinas u orgánicas de residuos ácidos tales como ácidos carboxílicos; y sim ilares. Las sales aceptables para uso farmacéutico incluyen las sales no tóxicas convencionales de las sales de amonio cuaternario del compuesto originario formado, por ejemplo, de ácidos inorgánicos u orgánicos no tóxicos. Por ejemplo, estas sales no tóxicas convencionales incluyen las derivadas de ácidos inorgánicos tales como clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico, sulfámico, fosfórico, nítrico y similares; y las sales preparadas de ácidos orgánicos tales como acético, propiónico, succínico, glicólico, esteárico, láctico, málico, tartárico, cítrico, ascórbico, pamoico, maleico, hidroximaleico, fenilacético, g lutámico, benzoico, salicílico, sulfanílico, 2-acetoxibenzoico, fumárico, toluenosulfónico, metanosulfónico, etanodisulfónico, oxálico, isetiónico y similares.

Las sales aceptables para uso farmacéutico de la presente invención pueden ser sintetizadas a partir del compuesto originario que contiene una porción básica o acida por métodos químicos convencionales. Generalmente, estas sales se pueden preparar haciendo reaccionar las formas libres acida o básica de estos compuestos con una cantidad estequiométrica de la base o ácido apropiada en agua o en un solvente orgánico, o en una mezcla de los dos; generalmente, se prefiere medios no acuosos como éter, EtOAc, etanol, isopropanol, o acetonitrilo. Se puede encontrar listas de las sales apropiadas en Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a. edición., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1990, p. 1445, cuya descripción está incorporada aquí mediante referencia. La expresión "aceptable para uso farmacéutico" se emplea aquí para referirse a aquellos compuestos, materiales, composiciones y/o formas de dosis que son, dentro del alcance del juicio médico sólido, apropiados para su uso en contacto con los tejidos de seres humanos y animales sin excesiva toxicidad, irritación, respuesta alérgica, u otro problema o complicación proporcional a una tasa de beneficio/riesgo razonable. Como se usa aquí, el término "profármacos" pretende incluir cualesquiera portadores unidos covalentemente, los cuales liberan un fármaco originario activo de la presente invención in vivo cuando este profármaco se administra a un sujeto mamífero. Dado que se sabe que los profármacos potencian numerosas cualidades deseables de las sustancias farmacéuticas (es decir, solubilidad, biodisponibilidad , fabricación , etc.), los compuestos de la presente invención pueden ser suministrados en forma de profármacos. Así, la presente invención pretende cubrir profármacos de los compuestos cuya reivindicación se está solicitando, métodos para sumin istrarlos, y composiciones que los contienen. Los profármacos de la presente invención se preparan modificando los grupos funcionales presentes en el compuesto en tal manera que las mod ificaciones son escindidas, ya sea en manipulación de rutina o in vivo, hacia el compuesto originario. Los profármacos incluyen compuestos de la presente invención en donde un grupo hid roxi, amino, o sulfhidrilo está unido a cualq uier grupo que, cuando el profármaco de la presente invención se administra a un sujeto mam ífero, éste se escinde para formar un grupo hidroxilo libre, amino libre, o sulfhidrilo libre, respectivamente. Los ejemplos de profármacos incluyen, sin limitación a ellos, derivados de acetato, formato y benzoato de grupos funcionales alcohol y amina en los compuestos de la presente invención. El término "puro" o "purificado" significa que la molécula indicada está presente en la ausencia sustancial de otras moléculas orgánicas, especialmente impurezas tales como sub-productos o productos de una vía de degradación. En ciertas modalidades, un compuesto "puro" o "purificado" es al menos 80% por peso seco, más preferiblemente en la escala de 95-99% por peso, y mucho más preferible al menos 99.8% por peso de compuestos orgánicos en la composición (por ejemplo, excluyendo agua, reguladores de pH, excipientes, y moléculas similares que pueden estar presentes en u na preparación farmacéutica de un compuesto) . "Sustituido" quiere indicar que uno o más hidrógenos en el átomo indicado en la expresión que usa "sustituido" está reemplazado con una selección del grupo o grupos indicados, siempre que la valencia normal del átomo no sea excedida, y que la sustitución dé como resultado un compuesto estable. Cuando un sustituyente es un grupo ceto u oxo (es decir, =O), entonces se reemplazan 2 hidrógenos en el átomo. Los sustituyentes ceto/oxo no están presentes en porciones aromáticas. Los ejemplos de sustituyentes incluyen, por ejemplo, un alquilo, un perfluoroalquilo, tal como trifluormetilo), un halógeno, un hidroxilo, un carbonilo (tal como un carboxilo, un alcoxicarbonilo, un formilo o un acilo), un tiocarbonilo (tal como un tioéster, un tioacetato o un tioformato) , un alcoxilo, un fosforilo, un fosfato, un fosfonato, un fosfinato, un amino, un amido, una amidina, una imina, un ciano, un nitro, un azido, un sulfhidrilo, un alquiltio, un sulfato, un sulfonato, un sulfamoilo, un sulfonamido, un sulfonilo, un carbociclilo, un heterociclilo, un aralquilo, un heteroaralquilo, o una porción aromática o heteroaromática. Los conocedores de la materia entenderán que los sustituyentes tales como heterociclico, arilo, alquilo, etc. , pueden estar sustituidos en sí mismos, si es apropiado. El término "cantidad efectiva terapéuticamente" de un compuesto de esta invención significa una cantidad efectiva para inhibir la clase de enzimas conocida como quinasas dependientes de ciclina o tratar los síntomas de cáncer u otras enfermedades proliferativas u otras enfermedades en un anfitrión. Como se usa aquí, el término agente "anti-canceroso" o "anti-proliferativo" incluye, sin limitación a ellos, altretamina, busulfano, clorambucil, ciclofosfamida, ifosfamida, mecloretamina, melfalan, tiotepa, cladribine, fluorouracilo, fluxuridina, gencitabina, tioguanina, pentostatina, metotrexato, 6-mercaptopurina, citarabina, carmustina, lomustina, estreptozotocina, carboplatina, cisplatina, oxaliplatina, iproplatina, tetraplatina, lobaplatina, JM216, JM335, fludarabina, aminoglutetimida, flutamida, goserelina, leuprolide, acetato de megestrol, acetato de ciproterona, tamoxifen, anastrozol, bicalutamida, dexametasona, dietilstilbestrol, prednisona, bleomicina, dactinomicina, daunorubicina, doxirubicina, idarubicina, mitoxantrone, losoxantrone, mitomicina-c, plicamicina, paclitaxel, docetaxel, topotecan, irinotecan, 9-amino campotecan, 9-nitro campotecan, GS-211, JM 118, etoposide, teniposide, vinblastina, vincristina, vinorelbina, procarbazina, asparaginasa, pegaspargasa, octreotide, estramustine, e hidroxiurea. ¡il. DOSIFICACIÓN Y FORMULACIÓN Los inhibidores de quinasa dependiente de ciclina de esta invención se pueden administrar como tratamiento para el cáncer u otras enfermedades proliferativas u otras enfermedades, mediante cualesquiera medios que produzcan contacto del agente activo con el sitio de acción del agente en el cuerpo de un mamífero. Se pueden administrar med iante cualq uier medio convencional disponible para su uso en conjunto con sustancias farmacéuticas, ya sea como agentes terapéuticos individuales o en una combinación de agentes terapéuticos. Las características químicas de los inhibidores descritos aqu í, le otorgan propiedades de solubilidad a los compuestos, haciéndolos apropiados para su administración como formulaciones intravenosas, formulaciones tópicas, formulaciones orales y otras tal como se describe en mayor detalle más adelante. Se pueden administrar solos, pero preferiblemente se administran con un portador farmacéutico seleccionado sobre la base de la vía de administración elegida y la práctica farmacéutica estándar. Los vehículos apropiados y su formulación se describen, por ejem plo, en el libro Remington's Pharmaceutical Sciences (Remington's Pharmaceutical Sciences. Mack Publishing Company, Easton, Pa. , EUA 1 985). En otro aspecto, la presente invención proporciona composiciones aceptables para uso farmacéutico, las cuales contienen una cantidad efectiva terapéuticamente de uno o más compuestos de la invención, tal como se describió anteriormente, formulados junto con uno o más portadores aceptable para uso farmacéutico (aditivos) y/o diluyentes. Tal como se describe en detalle más adelante, las composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden ser formuladas espacialmente para su administración en forma sólida o líquida, incluyendo aquellas adaptadas para lo siguiente: (1 ) administración oral, por ejemplo, brebajes (soluciones o suspensiones acuosas o no acuosas), tabletas, bolos, polvos, granulos, pastas para aplicación a la lengua; (2) administración parenteral, por ejemplo, mediante inyección subcutánea, intramuscular o intravenosa, tal como por ejemplo, una solución o suspensión estéril; (3) aplicación tópica, por ejemplo, como una crema, ungüento o rocío aplicado a la piel; o (4) intravaginalmente o intrarrectalmente, por ejemplo, como un pesario, crema o espuma. En ciertas modalidades, las preparaciones farmacéuticas pueden ser no pirógenas, es decir, no elevan la temperatura corporal de un paciente. Los agentes humectantes, emulsificiantes y lubricantes, tales como laurilsulfato de sodio y estearato de magnesio, así como también agentes colorantes, agentes de liberación, agentes para recubrimiento, endulzantes, saborizantes y agentes perfumantes, conservadores y antioxidantes, también pueden estar presentes en las composiciones. Los ejemplos de antioxidantes aceptable para uso farmacéutico incluyen: (1 ) antioxidantes solubles en agua, tales como ácido ascórbico, clorhidrato de cisteína, bisulfato de sodio, metabisulfito de sodio, sulfito de sodio y similares; (2) antioxidantes solubles en aceite, tales como palmitato de ascorbilo, hidoxianisoi butilado (BHA), hidroxitolueno butilado (BHT), lecitina, galato de propilo, alfa-tocoferol, y similares; y (3) agentes quelatantes de metales, tales como ácido cítrico, ácido etilendiamino tetraacético (EDTA) , sorbitol, ácido tartárico, ácido fosfórico, y sim ilares. La dosis administrada, por supuesto, variará dependiendo de factores conocidos, tales como las características farmacodinámicas del agente particular y su forma o vía de administración, la edad, salud y peso del receptor; la naturaleza y extensión de los síntomas, el tipo de tratam iento concurrente, la frecuencia de tratamiento, y el efecto deseado. Una dosis diaria de ingrediente activo puede esperarse que sea desde aproximadamente 0.001 hasta aproximadamente 1 000 miligramos por kilogramo de peso corporal, siendo la dosis preferida desde aproximadamente?.1 hasta aproximadamente 30 mg/kg . Las formas de dosis de las composiciones apropiadas para su administración contienen desde aproximadamente 1 mg hasta aproximadamente 100 mg de ingrediente activo por unidad. En estas composiciones farmacéuticas, el ingrediente activo ordinariamente estará presente en una cantidad de aproximadamente 0.95% por peso basada en el peso total de la composición. El ingrediente activo puede administrarse oralmente en formas de dosis sólidas, tales como cápsulas, tabletas y polvos, o en formas de dosis líquidas, tales como elíxires, jarabes y suspensiones. También se puede administrar parenteralmente, en formas de dosis líquidas estériles. Las formulaciones de la presente invención incluyen las que son apropiadas para su administración oral, nasal, tópica (incluyendo bucal y sublingual), rectal, vaginal y/o parenteral. Las formulaciones pueden estar presentadas convenientemente en forma de dosis unitaria y peden ser preparadas mediante cualesquiera métodos bien conocidos en la técnica farmacéutica. La cantidad de ingrediente activo que se puede combinar con un material portador para producir una forma de dosis simple variará dependiendo del anfitrión que está siendo tratado y el modo particular de administración. La cantidad de ingrediente activo que se puede combinar con un material portador para producir una forma de dosis simple, generalmente será la cantidad de inhibidor que produzca un efecto terapéutico. Generalmente, fuera de un cien por ciento, esta cantidad variará desde aproximadamente 1 por ciento hasta aproximadamente noventa y nueve por ciento de ingrediente activo, preferiblemente desde aproximadamente 5 por ciento hasta aproximadamente 70 por ciento, más preferiblemente desde aproximadamente 10 por ciento hasta aproximadamente 30 por ciento. Los métodos para preparar estas formulaciones o composiciones incluyen el paso de pone en asociación un compuesto de la presente invención con el portador, y opcionalmente, uno o más ingredientes accesorios. En general, las formulaciones se preparan poniendo en asociación uniforme e íntimamente un inhibidor de la presente invención con portadores líquidos, o portadores sólidos finamente divididos, o ambos, y luego, si es necesario, formando el producto. Las formulaciones de la invención apropiadas para su administración oral pueden estar en la forma de cápsulas, pastillas, pildoras, tabletas, comprimidos (usando una base saborizada, usualmente sacarosa y acacia o tragacanto), polvos, granulos, o como una solución o una suspensión en un l íq uido acuoso o no acuoso, o como una emulsión líquida de aceite en agua o de agua en aceite, o como un elíxir o jarabe, o como pastillas (usando una base inerte, tal como gelatina y glicerina, o sacarosa y acacia) y/o como enjuagues bucales y similares, cada uno con una cantidad predeterminada de un compuesto de la presente invención como un ingrediente activo. Un inhibidor de la presente invención también se puede administrar como un bolo, electuario o pasta. En las formas de dosis sólidas de la invención para su administración oral (cápsulas, tabletas, pildoras, grageas, polvos, granulos y similares), el ingrediente activo se mezcla con uno o más portadores aceptables para uso farmacéutico, tales como citrato de sodio o fosfato dicálcico, y/o cualquiera de los siguientes: (1 ) rellenadores o extendedores, tales como almidones, lactosa, sacarosa, glucosa, manitol y/o ácido silícico; (2) enlazantes, tales como por ejemplo, carboximetilcelulosa, alginatos, gelatina, polivinil pirrolidona, sacarosa y/o acacia; (3) humectantes, tales como glicerol; (4) agentes desintegrantes, tales como agar-agar, carbonato de calcio, almidón de papa o de tapioca, ácido alg ínico, ciertos silicatos, y carbonato de sodio; (5) agentes retardantes de solución, tales como parafina; (6) aceleradores de absorción, tales como compuestos de amonio cuaternario; (7) agentes humectantes, tales como por ejemplo, alcohol cetílico y monoestearato de glicerol; (8) absorbentes, tales como arcilla de caolín y bentonita; (9) lubricantes, tales como talco, estearato de calcio, estearato de magnesio, polietilenglicoles sólidos, lauril sulfato de sodio, y mezclas de ellos; y (10) agentes colorantes. en el caso de cápsulas, tabletas y pildoras, las composiciones farmacéuticas también pueden contener agentes reguladores de pH. Las composiciones sólidas de tipo similar también se pueden emplear como rellenadores en cápsulas de gelatina blandas y duras, usando excipientes tales como lactosa o azúcares de leche, así como también polietilenglicoles de alto peso molecular y similares. Una tableta se puede elaborar mediante compresión o moldeo, opcionalmente con uno o más ingredientes accesorios. Las tabletas comprimidas se pueden preparar usando enlazante (por ejemplo, gelatina o hidroxipropilmetilcelulosa), lubricante, diluyente inerte, conservador, desintegrante (por ejemplo, glicolato de almidón de sodio o carboximetil celulosa de sodio reticulada), agente activo en superficie o dispersante. Se puede elaborar tabletas moldeadas moldeando en una máquina apropiada una mezcla del inhibidor en polvo humedecida con un diluyente líquido inerte. Las tabletas, y otras formas de dosis sólidas de las composiciones farmacéuticas de la presente invención, tales como grageas, cápsulas, pildoras y granulos, pueden ser realizadas o preparadas con recubrimientos y cubiertas, tales como recubrimientos entéricos y otros recubrimientos bien conocidos en la técnica de formulación farmacéutica. Ellas también pueden ser formulaciones tales que proporcionen li beración controlada del ingrediente activo allí, usando, por ejemplo, hidroxipropilmetil celulosa en proporciones variables para proporcionar el perfil de liberación deseado, otras matrices poliméricas, liposomas y/o microesferas. Ellas pueden ser esterilizadas, por ejemplo, mediante filtración a través de un filtro retenedor de bacterias, o incorporando agentes esterilizantes en la forma de composiciones sólidas estériles que se pueden disolver en agua estéril, o algún otro medio estéril inyectable inmediatamente antes de su uso. Estas composiciones también pueden contener opcionalmente agentes opacificantes y pueden ser de una composición que libere el ingrediente o ingredientes activos solamente, o preferiblemente, en cierta parte del tracto gastrointestinal, opcionalmente, de una forma demorada. Los ejemplos de composiciones incluidos que se pueden usar incluyen sustancias poliméricas y ceras. El ingrediente activo también puede estar en forma micro-encapsulada, si es apropiado, con uno o más de los excipientes descritos anteriormente. Las formas de dosis líquidas para la administración oral de los compuestos de la invención incluyen emulsiones, microemulsiones, soluciones, suspensiones, jarabes y elíxires aceptables para uso farmacéutico. Además del ingrediente activo, las formas de dosis líquidas pueden contener diluyentes inertes usados comúnmente en la técnica, tales como por ejemplo, agua u otros solventes, agentes solubilizantes y emulsificadores, tales como alcohol etílico, alcohol isopropílico, carbonato de etilo, acetato de etilo, alcohol bencílico, benzoato de bencilo, propilenglicol, 1 , 3-butilenglicol, aceites (en particular, aceite de semilla de algodón, cacahuate, maíz, germen, oliva, ricino y sésamo) , glicerol , alcohol tetrahidrofurílico, polietilenglicoles y esteres de ácidos grasos de sorbitán, y mezclas de ellos. Junto con los diluyentes inertes, las composiciones orales también pueden incluir adyuvantes tales como agentes humectantes, agentes emulsificantes y suspensores, endulzantes, saborizantes, colorantes, perfumantes y conservadores. Las suspensiones, además del inhibidor o inhibidores activos de la presente invención, pueden contener agentes suspensores tales como por ejemplo, alcoholes isoestearílicos etoxilados, polioxietilen sorbitol y esteres de sorbitán , celulosa microcristalina, metahidróxido de aluminio, bentonita, agar-agar y tragacanto, y mezclas de ellos. Las formulaciones de las composiciones farmacéuticas de la invención para su administración rectal o vaginal pueden ser presentadas como un supositorio, el cual puede ser preparado mezclando uno o más compuestos de la invención con uno o más excipientes o portadores apropiados no irritantes que comprenden , por ejemplo, manteca de cacao, polietilenglicol, una cera para supositorios o un salicilato, y la cual es sólida a temperatura ambiente, pero líquida a temperatura ambiente, y por lo tanto, se fundirá en el recto o en la cavidad vaginal y liberará el inhibidor activo. Las formulaciones de la presente invención que son apropiadas para su administración vaginal incluyen también pesarios, tampones, cremas, geles, pastas, espumas o formulaciones en rocío que contienen estos portadores tal como se conoce en la técnica que son apropiados. La forma de dosis para la administración tópica o transdérmica de un compuesto de esta invención incluyen polvos, rocíos, ungüentos, pastas, cremas, lociones, geles, soluciones, parches e inhalantes. El compuesto activo se puede mezclar bajo condiciones estériles con un portador aceptable para uso farmacéutico, y con cualesquiera conservadores, reguladores o propelentes que puedan ser requeridos. Los ungüentos, pastas, cremas y geles pueden contener, además de un inhibidor activo de preniultransferasa, excipientes, tales como grasas animales y vegetales, aceites, ceras, parafinas, almidón, tragacanto, derivados de celulosa, polietilenglicoles, siliconas, bentonitas, ácido silícico, talco y óxido de zinc, o mezclas de ellos. Los polvos y rocíos pueden contener, además de un compuestos de esta invención, excipientes tales como lactosa, talco, ácido silícico, hidróxido de aluminio, silicatos de calcio y polvo de poliamida, o mezclas de estas sustancias. Los rocíos pueden contener adicionalmente propelentes acostumbrados, tales como clorofluorohidrocarburos e hidrocarburos volátiles no sustituidos, tales como butano y propano. Los parches transdérmicos tienen la ventaja agregada de que proporcionan suministro controlado de un compuesto de la presente invención al cuerpo. Estas formas de dosis pueden elaborarse disolviendo o dispersando un inhibidor de la presente invención en el medio apropiado. También se puede usar mejoradores de absorción para aumentar el flujo del fármaco a través de la piel. La tasa de este flujo puede controlarse ya sea proporcionando una membrana controladora de tasa o dispersando el compuesto de la presente invención en una matriz de polímero o gel. Las formulaciones oftálmicas, ungüentos para los ojos, polvos, soluciones y similares, también están contempladas dentro del alcance de esta invención. Las composiciones farmacéuticas de esta invención apropiadas para su administración parenteral contienen uno o más inhibidores de la invención en combinación con una o más soluciones, dispersiones, suspensiones o emulsiones estériles isotónicas acuosas o no acuosas, aceptables para uso farmacéutico, o polvos estériles que pueden ser reconstituidos en soluciones o dispersiones inyectables estériles justo antes de su uso, las cuales pueden contener antioxidantes, reguladores de pH, bacteriostatos, solutos, los cuales hacen la formulación isotónica con la sangre del receptor deseado o con agentes supensores o espesantes. Los ejemplos de portadores acuosos y no acuosos apropiados que se puede emplear en las composiciones farmacéuticas de la invención incluyen agua, etanol, polioles (tales como glicerol , propileng licol, polietilenglicol, y similares), y mezclas de ellos apropiadas, aceites vegetales, tales como aceite de oliva, y esteres orgánicos inyectables, tales como oleato de etilo. La fluidez apropiada se puede mantener, por ejemplo, mediante el uso de materiales para recubrimiento, tales como lecitina, por el mantenimiento del tamaño de partícula requerido en el caso de dispersiones, y mediante el uso de agentes tensoactivos. Estas composiciones también pueden contener adyuvantes tales como conservadores, agentes humectantes, agentes em ulsificantes y agentes dispersantes. La prevención de la acción de los microorganismos puede asegurarse mediante la inclusión de diversos agentes antibacteriales y antifúngicos, por ejemplo, parabeno, clorobutano, ácido sórbico fenólico, y sim ilares. También puede ser deseable incluir agentes isotónicos, tales como azúcares, cloruro de sodio y sim ilares en las composiciones. Además, la absorción prolongada de la forma farmacéutica inyectable puede lograrse mediante la inclusión de agentes que demoren la absorción, tales como monoestearato de aluminio y gelatina. En algunos casos, con el fin de prolongar el efecto terapéutico de un inhibidor, es deseable ralentizar la absorción del inhibidor a partir de la inyección subcutánea o intramuscular. Esto se puede lograr mediante el uso de una suspensión líq uida de material cristalino o amorfo que tiene baja solubilidad en agua. La tasa de absorción del inhibidor depende entonces de su tasa de disolución, la cual a su vez puede depender del tamaño de cristal y de la forma cristalina. Alternativamente, la absorción demorada de una forma de inhibidor administrada parentaralmente, se logra disolviendo o suspendiendo el inhibidor en un vehículo aceitoso. Las formas con depósito inyectables se elaboran formando matrices microencapsuladas de los inhibidores en cuestión en polímeros biodegradabies tales como poliláctido-poliglicólido. Dependiendo de la proporción de fármaco con respecto al polímero, y de la naturaleza del polímero particular empleado, se puede controlar ia tasa de liberación del fármaco. Los ejemplos de otros polímeros biodegradables incluyen poli(ortoésteres) y poli(anhídridos). Las formulaciones con depósito inyectables tam bién se preparan atrapando el fármaco en liposomas o en microemulsiones que son compatibles con el tejido corporal. Cuando los compuestos de la presente invención se administran como sustancias farmacéuticas, a seres humanos y animales, se pueden suministrar per se o como una composición farmacéutica que contiene, por ejemplo, de 0.1 a 99.5% (más preferiblemente, de 0.5 a 90%) de ingrediente activo en combinación con un portadora aceptable para uso farmacéutico. Las preparaciones de la presente invención se pueden administrar oralmente, parenteralmente, tópicamente, o rectalmente. Ellas por supuesto se administran mediante formas apropiadas para cada vía de administración. Por ejemplo, se administran en forma de tabletas o de cápsulas, mediante inyección, inhalación, loción para los ojos, ungüento, supositorio, etc. , administración mediante inyección, infusión o inhalación ; tópica mediante loción o ungüento; y rectal mediante supositorios. Se prefiere la administración oral. Como se usan aqu í, as expresiones "administración parenteral" y "administrada parenteralmente" significan formad de administración distintas de administración enteral y tópica, usualmente mediante inyección , e incluyen, sin limitación , inyección e infusión intravenosa, intramuscular, intraarterial, intratecal , intracapsular, intraorbital, intracardiaca, intradérmica, intraperitoneal , transtraqueal, subcutánea, subcuticular, intraarticular, subcapsular, subaracnoidea, intraespinal e intraesternal. Como se usan aquí, las expresiones "adm inistración sistémica" , administrado sistémicamente", "administración periférica", y "administrado periféricamente',significan la administración de un compuesto, fármaco u otro material diferente a directamente en el sistema nervioso central, de tal forma que entra al sistema del paciente y, por ello, está sujeto al metabolismo y otros procesos similares, por ejemplo, administración subcutánea. Sin considerar la vía de administración seleccionada, los inhibidores de CDK útiles en el método en cuestión pueden usarse en una forma hidratada apropiada, y/o las composiciones farmacéuticas de la presente invención, están formuladas en formas de dosis aceptables para uso farmacéutico mediante métodos convencionales familiares para los conocedores de la materia. Las cápsulas de gelatina contienen el ingrediente activo y portadores el polvo, tales como lactosa, almidón, derivados de celulosa, estearato de magnesio, ácido esteárico, y sim ilares. Se puede usar d iluyentes similares para elaborar tabletas comprimidas. Tanto las tabletas como las cápsulas pueden elaborarse como productos de liberación prolongada para proporcionar liberación continua de la medicación durante un periodo de horas. Las tabletas comprim idas pueden ser recubiertas con azúcar o recubiertas con película para disimular cualquier sabor desagradable y proteger la tableta de la atmósfera, o recubrirse entéricamente para su desintegración selectiva en el tracto gastrointestinal. También se emplean composiciones sólidas de un tipo similar como rellenadores en cápsulas de gelatina dura; los materiales preferidos en esta conexión también incluyen lactosa o azúcar de leche, así como también polietilenglicoles de alto peso molecular. Una formulación preferida es una solución o suspensión en un aceite, por ejemplo aceite de oliva, Miglyol, o Capmul, en una cápsula de gelatina blanda. Se puede añadir antioxidantes para prevenir la degradación a largo plazo según sea apropiado. Las formas de dosis líquidas para su administración oral pueden contener colorante y saborizante para aumentar la aceptación del paciente. En general, el agua, un aceite apropiado, solución salina, etanol, dextrosa acuosa (glucosa) y soluciones azucaradas relacionadas, glicoles tales como propilenglicol o polietilenglicoles, o mezclas de ellos, son portadores apropiados para soluciones parenterales. Para su administración intravenosa, los compuestos descritos anteriormente pueden ser formulados como una solución estéril del ingrediente activo, ya sea en su forma libre o de sal , en regulador fisiológico o agua estéril. Los líquidos portadores que contienen azúcar (tales como lactato de Ringer u otras soluciones de glucosa o dextrosa) se pueden usar si se desean, siempre que el contenido de azúcar total no ocasione niveles indeseados de acidosis láctica. La administración intravenosa puede ser a través de inyección en bolo (preferiblemente varias veces por día), o a través de infusión continua durante un periodo de tiempo prolongado. Las dosis preferidas totales para inyección en bolo o para infusión pueden variar sustancialmente, dependiendo de la condición física del paciente; en general, usualmente abarcarán desde aproximadamente 25 mg/kg hasta aproximadamente 250 mg/kg. Las soluciones para administración parenteral preferiblemente contienen una sal soluble en agua del ingrediente activo, agentes estabilizantes apropiados, y si es necesario, sustancias reguladoras. Los agentes antioxidantes tales como bisulfito de sodio, sulfito de sodio o ácido ascórbico, ya sea solos o combinados, son agentes estabilizadores apropiados. También se usa ácido cítrico y sus sales, y EDTA sódico. Además, las soluciones parenterales pueden contener conservadores, tales como cloruro de benzalconio, metil o propil parabeno, y clorobutanol. Los portadores farmacéuticos apropiados se describen en Remington's Pharmaceutical Sciences. 18a. edición, Mack Publishing Company, Easton, PA, 1990, un texto de referencia estándar en este campo, cuya descripción está incorporada aquí mediante referencia. Las formulaciones, soluciones y otras preparaciones usando los compuestos de las Tablas A, B y/o C se pueden preparar como se describe en las solicitudes del TCP WO 03/033499 y/o WO 04/092139, cuyas enseñanzas están incorporadas aquí mediante referencia. iv. APLICACIONES TERAPÉUTICAS Debido al papel clave de las cdk en la regulación de la proliferación celular en general, los compuestos descritos aquí pueden actuar como agentes citostáticos reversibles que pueden ser útiles en el tratamiento de cualquier proceso de enfermedad que se caracterice por proliferación celular anormal, tal como enfermedades hiperproliferativas, incluyendo cáncer, hiperplasia prostética benigna, poliposis adenomatosis familiar, neurofibromatosis, psoriasis, infecciones fúngicas, choque endotóxico, formación de escaras hipertróficas, enfermedad inflamatoria intestinal, rechazo de transplante, proliferación de células de músculos lisos vasculares asociada con ateroesclerosis, psoriasis, fibrosis pulmonar, artritis, glomerulonefritis, restenosis después de angioplastia o de cirugía vascular, y otras estenosis y restenosis post-quirúrgicas. Véase, por ejemplo, las patentes estadounidenses números 6, 1 14,365 y 6, 107,305. Se espera q ue los compuestos descritos aqu í sean útiles en la terapia de enfermedades proliferativas o hiperproliferativas tales como cáncer, enfermedades autoinmunológicas, enfermedades virales, enfermedades fúngicas, trastornos neurodegenerativos y enfermedad cardiovascular. Más específicamente, los compuestos descritos aquí son útiles en ei tratamiento de una variedad de cánceres, incluyendo (sin limitación a ellos) los siguientes: carcinoma, incluyendo el de la vej iga, pecho, colon, riñon , hígado, pulmón, incluyendo cáncer pulmonar de células pequeñas, esófago, vesícula biliar, ovario, páncreas, estómago, cérvix, tiroide, próstata, y piel, incluyendo carcinoma de células escamosas; tumores hematopoyéticos de origen linfoide, incluyendo leucemia, leucemia linfocítica aguda, leucemia linfoblástica aguda, linfoma de células B, linfoma de células T, linfoma de Hodgkins, linfoma que no es de Hodgkins, l infoma de células pilosas, y linfoma de Burkett; tumores hematopoyéticos de origen linfoide, incluyendo leucemias mielógenas crónicas, síndrome mielodisplásico, y leucemia promielocítica; tumores del sistema nervioso central y periférico, incluyendo astrocitoma, neuroblastoma, glioma, y schwanomas, y otros tumores, incluyendo melanoma, seminoma, teratocarcinoma, osteosarcoma, xenoderoma pigmentosum , queratoctantoma, cáncer tiroideo folicular, y sarcoma de Kaposi.

Los compuestos descritos aquí también pueden ser útiles en el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer, tal como fue sugerido por el reciente hallazgo de que la cdk5 está involucrada en la fosforilación de la proteína tau (J . Biochem, 1 17, 741 -749 ( 1995)). Los compuestos descritos aquí pueden inducir o inhibir la apoptosis. La respuesta apoptótica es aberrante en una variedad de enfermedades humanas. Los compuestos descritos aquí, como moduladores de apoptosis, serán útiles en el tratamiento del cáncer (incluyendo, pero no limitándose a aquellos tipos mencionados en lo sucesivo), infecciones virales (incluyendo, pero no limitadas a lupus sistémico, eritematoso, glomerulonefritis mediada autoinmunológicamente, artritis reumatoide, psoriasis, enfermedad intestinal inflamatoria, y diabetes mellitus autoinmunológica), trastornos neurodegenerativos (incluyendo, sin limitación a ellos, enfermedad de Alzheimer, demencia relacionada con SI DA, enfermedad de Parkinson, esclerosis lateral amiotrófica, retinitis pigmentosa, atrofia muscular espinal y degeneración cerebelar), síndromes m ielodisplásicos, anemia aplásica, daño isquémico asociado con infartos al miocardio, accidente cerebro-vascular y daño por reperfusión, arritmia, ateroesclerosis, enfermedades del hígado inducidas por toxinas o alcohol, enfermedades hematológicas (incluyendo, sin limitación a ellas, anemia crónica y anemia aplásica) , enfermedades degenerativas del sistema músculo esquelético (incluyendo, sin limitación a ellas, osteoporosis y artritis), rinosinusitis sensible a la aspirina, fibrosis quística, esclerosis múltiple, enfermedades del riñon y dolor canceroso. Los compuestos descritos aquí, como inhibidores de las cdk, pueden modular el nivel de síntesis de ARN y de ADN celular. Estos agentes en consecuencia podrían ser útiles en el tratamiento de infecciones virales (incluyendo, sin limitación a ellos, VI H , virus del papiloma humano, virus de herpes, virus de viruela, virus de Epstein-Barr, virus Sindbis y adenovirus). Los compuestos descritos aquí pueden ser útiles en la quimioprevención del cáncer. La quim ioprevención se define como inhibición del desarrollo de cáncer invasivo ya sea bloqueando el evento mutagénico iniciador o bloqueando la progresión de células premalignas que ya han sufrido un daño o inhibir la reaparición del tumor. Los compuestos descritos aquí pueden ser útiles también para inhibir la angiogénesis y la metástasis tumoral. Los compuestos descritos aquí también se pueden emplear en la prevención de la pérdida de cabello que acompaña ordinariamente a muchos reg ímenes quimioterapéuticos tradicionales. Por ejemplo, se puede usar un inhibidor de CDK de la invención para inhibir la proliferación de células en los folículos pilosos, preservándolos con ello del ataque mediante un agente citotóxico que apunte a las células proliferantes. Los compuestos descritos aquí también pueden actuar como inhibidores de otras proteínas q uinasa, por ejemplo, quinasa de proteína C, her2, raf2, MEK1 , Quinasa MAP, receptor EGF, receptor PDG F, receptor IGF, quinasa PI3, q uinasa wee l , Src, Abl y así ser efectivos en el tratam iento de enfermedades asociadas con otras proteínas quinasa. Los com puestos de esta invención tam bién pueden ser útiles en combinación (administrada junta o secuencialmente) con tratamientos anticancerosos bien conocidos tales como terapia con radiación o con agentes citostáticos o citotóxicos, tales como por ejemplo, pero sin limitación a ellos, agentes interactivos con ADN , tales como cisplatina o doxorubicina; inhibidores de topoisomerasa I I , tales como etoposida; inhibidores de topoisomerasa I , tales como CPT-1 1 o tipotecan; agentes interactuantes con tubu lina, tales como paclitaxel, docetaxel o los epotilones; agentes hormonales, tales como tamoxifen; inhibidores de timid ilato sintasa, tales como 5-fluoracilo; y anti-metabolitos, tales como metotrexato. En estas combinaciones, los compuestos y formulaciones de la presente invención pueden ser útiles para la prevención o reducción de la incidencia de la alopecia, la cual con frecuencia es ind ucida por la terapia con radiación o por la quimioterapia. Si se formula como una dosis fija, estos productos de combinación emplean los compuestos de esta invención dentro del rango de dosis descrita más adelante, y el otro agente activo farmacéuticamente o tratamiento dentro de su rango de dosis aprobado. Por ejemplo, se ha encontrado q ue el inhibidor cdc2 de olomucina actúa sinérgicamente con agentes anticancerosos o citotóxicos conocidos cuando es inapropiada una formulación en combinación. La invención no está limitada en la secuencia de administración ; los compuestos descritos aqu í pueden ser administrados ya sea antes o después de la administración del agente anticanceroso o citotóxico conocido. Por ejemplo, la actividad citotóxica del inhibidor de quinasa dependiente de ciclina flavopiridol es afectada por la secuencia de administración con agentes anticancerosos. Cáncer Research, 57, 3375 (1997). Se contempla que todas las modalidades descritas aqu í sean aplicables a todos los diferentes aspectos de la invención . También se contempla que cualquiera de las modalidades descritas puede ser combinada libremente con una o más de otras modalidades siempre que sea apropiado. En particular, diversas modalidades de los compuestos de la invención, diversas modalidades de los trastornos apropiados para el tratamiento con estos compuestos, y diversas modalidades de usar métodos de tratam iento o usos de los compuestos, pueden ser combinados libremente uno con el otro. Las modalidades específicas de la invención están descritas en más detalle aquí. Sin embargo, estas son modalidades ilustrativas, y no deben ser interpretadas como limitantes en ningún aspecto.

EQUIVALENTES Los conocedores de la materia reconocerán, o serán capaces de establecer, usando no más que la experimentación de rutina, muchos equivalentes para las modalidades específicas de la invención descritas aquí. Se pretende que estos equivalentes estén comprend idos en las reivindicaciones. Los conocedores de la técnica también reconocerán que todas las combinaciones de modalidades o características de las reivindicaciones descritas aqu í están dentro del alcance de la invención. v. SÍNTESIS Los compuestos de la presente invención se pueden sintetizar usando los métodos descritos más adelante, junto con métodos sintéticos conocidos en la materia de química orgánica sintética, o variaciones de ellos, tal como se darán cuenta los conocedores de la materia. Los métodos preferidos incluyen, sin limitación a ellos, los métodos que están descritos más adelante. Cada una de las referencias citadas más adelante está incorporada aquí mediante referencia. Los productos intermedios clave para preparar ciertos compuestos descritos aquí, incluyen aminonitrilos de pirazol, aminocarboxam idas, y aminoésteres. La preparación de estos productos intermedios tiene precedencia en la literatura química, y varios métodos están resumidos en los Esquemas A (A. O. Abdelhamid y co-autores, J. Heterocycl. Chem. 1984, 21 , 1049), B (C.C. Cheng y R. K. Robins, J. Org. Chem. 1956, 21 , 1240), C (P. Schmidt y J. Druey, Helv. Chem. Acta 1956, 39, 986). Véase también Tominaga y co-autores, J. Heterocyclo. Chem. 1990, 27, 775 y solicitudes del TCP números 00/21926 y WO 99/54308. Una amplia variedad de hidrazinas y aldehidos iniciales están disponibles comercialmente o pueden prepararse mediante transformaciones orgánicas estándar. El sustituyente Ar, como se usa más adelante, indica un anillo arilo, sustituido para conformar o para ser convertido en un sustituyente arilo correspondiente de ciertos compuestos descritos aquí. También se puede preparar ciertos compuestos tratando PrCOCI con CH2(CN)2 en la presencia de base, tratando el compuesto resultante con PCI5, y haciendo reaccionar el producto con ArHNH2.

ESQUEMA A ESQUEMA B ESQUEMA C Los aminonitrilos I I se pueden convertir en pirazolo[3,4]pirimidinas de la presente invención como se muestra en el Esquema D. En resumen, la aminocarboxamida es acilada, opcionalmente en la presencia de un solvente apropiado, tal como diclorometano, mediante tratamiento con una base apropiada, tal como trietilamina, seguida por un haluro ácido de la fórmula ArCH2COX, preferiblemente un cloruro ácido para dar carboxamidonitrilos V. Alternativamente, los carboxamidonitrilos V se pueden preparar acoplando aminonitrilos I I con ácidos carboxílicos de la fórmula general ArCH2CO2H en la presencia de una base y un reactivo de acoplamiento apropiados en un solvente apropiado. El acoplamiento de aminas y ácidos carboxílicos ha sido revisado (Klausnew y Bodansky, Synthesis 1 972, 453-463), y la variedad de reactivos disponibles para efectuarlo puede ser apreciada por los conocedores de la materia.

ESQUEMA D Formula I La transformación de carboxamidonitrilos V en los compuestos de la presente invención se puede lograr mediante tratamiento con un exceso de peróxido de hidrógeno en la presencia de una base apropiada, preferiblemente un hidróxido metálico o base alcóxida en un solvente, preferiblemente agua, un alcohol, o una mezcla de agua-alcohol a una temperatura en el rango desde aproximadamente 0 °C hasta 100 °C. Alternativamente, los carboxamidonitrilos V se pueden transformar en los compuestos de la presente invención por calentamiento, preferiblemente durante aproximadamente 1 hora en ácido fuerte concentrado, preferiblemente H3PO4 al 85% . El esquema E muestra un medio alternativo para preparar los compuestos de la presente invención. Las aminocarboxidiimidas I I I en un solvente apropiado, preferiblemente un alcanol inferior, se tratan con un exceso de un éster de la fórmula ArCH2CO2R, en donde R es, por ejemplo, alquilo inferior, y un exceso de una base, preferiblemente un alcóxido de metal inferior, preferiblemente en el punto de ebullición del solvente, para dar los compuestos de la presente invención. Muchos esteres arilacéticos están disponibles comercialmente o se pueden preparar en un paso a partir de ácidos arilacéticos disponibles comercialmente mediante esterificación con un exceso de un alcohol, ROH, preferiblemente a reflujo con etilo o alcohol metílico, usado como solvente en la presencia de un catalizador ácido tal como H2SO4 o p-TsOH. Alternativamente, se puede usar un reactivo de acoplamiento tal como DCC preferiblemente en un solvente tal como CH2CI2 con un catalizador tal como DMAP. ormüta I Se puede preparar ácidos fenilacéticos mediante hidrólisis con ácido o base de arilacetonitrilos, los cuales a su vez pueden ser preparados mediante tratamiento de haluros de arilo con CN-, preferiblemente en solventes tales como DMF, MeOH, EtOH, agua, DMSO, o mezclas de ellos. Los ejemplos adicionales de esteres arilacéticos pueden prepararse a partir de ácidos aril carboxílicos bajo condiciones Arndt-Eistert (Meier y Zeller, Angew, Chem. Int. Ed. Engl. 1985, 14, 32) o condiciones de homologación relacionadas. Los aminoésteres de la fórmula IV se pueden convertir en los compuestos de la presente invención mediante reacción con un exceso de un nitrilo de la fórmula ArCH2CN y sodio.

ESQUEMA F Formula I Esta reacción preferiblemente se realiza pura con calentamiento. Las pirazolo[3,4-d]pirimidinonas se pueden elaborar además como se describe más adelante para dar los compuestos adicionales de la presente invención. Las reacciones de sustitución aromática electrofílicas se pueden realizar en el grupo Ar para introducir sustituyentes. Estas reacciones incluyen, sin limitación a ellos, nitración, acilación (Friedel-Crafts), halogenación, alquilación (Friedel-Crafts), clorometilación , sulfonación, y aminometilación (reacción Mannich). Las condiciones para realizar estas reacciones son familiares para los conocedores de ia técnica de síntesis orgánica, generalmente involucrando la reacción del electrófilo con el sustrato arilo o heteroarilo en la presencia de un catalizador. En el caso de nitraciones o reacciones Mannich, el catalizador preferiblemente es un ácido prótico que puede servir como solvente, en donde el electrófilo se genera in situ a partir de sal de Peter, o una amina y un componente carbonilo, respectivamente. Para otras reacciones de sustitución aromática electrofílicas, los catalizadores preferidos son ácidos de Lewis, incluyendo, sin limitación a ellos, FeS3, AIX3, y ZnX2, en donde X es halógeno. Los compuestos preparados anteriormente q ue tienen un grupo amino se pueden derivar mediante reacción con electrófilos incluyendo, sin limitación a ellos, haluros de acilo, anhídridos, isocianatos, cloroformatos, haluros de sulfonilo, haluros de alquilo, lactonas o esteres. Las condiciones para realizar estas reacciones de adición son familiares para los conocedores de la técnica de síntesis orgánica, generalmente involucrando la adición del electrófilo al nucleófilo, preferiblemente en solución a una temperatura ambiente de entre 0 °C y RT. La adición de una base puede ser necesaria. Se debe notar que los productos de estas reacciones pueden reaccionar además con algunos electrófilos en la pirimidinona nitrófeno (N5). Los grupos funcionales resultantes (amidas, carbamatos, etc.) son menos estables con respecto a la hidrólisis básica que ios grupos anilino o alifáticos deseados, y pueden ser escindidos de nuevo hacia la pirimidinona que tiene H o N5. La reacción de los compuestos portadores de un grupo amino con agentes tales como haluros de haloacilo, haluros de ácido a.ß-insaturados, o haluros de halosulfonilo, da productos intermedios que pueden reaccionar con nucleófilos tales como aminas primarias o secundarias, diaminas, alcóxidos, alcoholes de amina, o tioles. Los compuestos preparados anteriormente, los cuales tienen un grupo carboxilo, pueden ser derivados mediante activación y reacción con nucleófilos, incluyendo, sin limitación a ellos, aminas y alcoholes, para dar, respectivamente, amidas y esteres. El acoplamiento de aminas y ácidos carboxílicos con carbodiimidas ha sido revisado (Klausnew y Bodansky, Synthesis 1972, 453-463), y la variedad de reactivos adicionales disponibles para efectuarlo así como también la necesidad potencial de grupos protectores (Green y Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis" Segunda edición, John Wiley & Sons, 1991) para disimular la funcionalidad reactiva, pueden ser apreciados por los conocedores de la materia. La preparación de esteres a partir de ácidos ha sido descrita anteriormente. La reducción de estas amidas y esteres en aminas y alcoholes se puede realizar usando un agente reductor hídrido apropiado. Los compuestos preparados anteriormente que tienen un grupo amino se pueden . derivar mediante conversión a una especie electrofílica por activación con fosgeno o un equivalente de fosgeno ( Tetrehedron: Asymmetry 1995, 61 , 745; J. Org. Chem. 1994, 59, 1937), preferiblemente en la presencia de una base, y reacción con nucleófilos, incluyendo, sin limitación a el los, am inas, alcoholes y sulfonamidas, para dar, respectivamente, ureas, carbamatos y sulfonilureas. Las condiciones para realizar estas reacciones y los peligros asociados con la manipulación del fosgeno y los equivalentes del fosgeno son familiares para los conocedores de la técnica de la síntesis orgánica, y se deben tomar todas las precauciones apropiadas. Las transformaciones adicionales que se puede requerir para preparar los compuestos de la presente invención, incluyen reducciones de cetonas, aldeh idos, esteres, ácidos, amidas o aminaciones reductivas mediante reactivos aluminio y boro-hidruro (J. Seyden-Penne, "Reductions by the Alumino y Borohidrides in Organic Synthesis" VCH Publishers Inc. , 1991 ) y oxidaciones de grupos incluyendo, sin limitación a ellos, alcoholes, aldehidos, olefinas, tioéteres, sulfóxidos, y grupos heteroarilo (Milos Hudlicky, "Oxidations in Organic Chemistry" American Chemical Society, 1990). La reducción de grupos funcionales tales como alquenos, alquinos, nitrógeno, nitro o ciano puede lograrse por hidrogenación catalítica o mediante reducción metálica pro disolución. La elaboración adicional de productos intermedios que contienen sitios electrofílicos a compuestos de la presente invención se puede lograr por desplazamiento con nucleófilos, incluyendo, sin limitación a ellos, CN-, aminas, alcóxidos, mercaptanos o carbaniones. Todavía otros compuestos de la presente invención se pueden preparar med iante acoplamiento de haluros o triflatos de arilo con los ácidos borónicos o estáñanos apropiados (Stille, J. K. , Angew, Chem. I nt. Ed. Engl. 1986, 25, 508; Suzuki, A. , Puré Appl. Chem. 1985, 57, 1749). Los compuestos preparados anteriormente, los cuales tienen un grupo carbonilo, se pueden derivar adicionalmente mediante reacción con nucleófilos para dar alcoholes secundarios. Estos nucleófilos incluyen, sin limitación a ellos, reactivos de Grignard, reactivos alquil-alquenil-y alquinil-litio, y estáñanos de alilo, silanos y similares. Los compuestos preparados como se describió anteriormente, pueden ser elaborados además mediante reacomodos tales como reacomodo Beckmann (Gawley en Org. React. 1988, 35, 1 ) u otros. La elaboración adicional de los compuestos preparados anteriormente se puede lograr mediante generación de una especie organomagnesio u organolitio por metalación dirigida (Beak y Meyers, Acc. Chem. Res. 1986, 19, 356-363; Beak y Snieckus, Acc. Chem. Res. 1982, 15, 306-312; Katritzky, Lam, y Sengupta, Prog. Heterocycl. Chemin. 1989, 11, 1 -29) o a partir de un haluro de alquilo mediante intercambio litio-halógeno (Parham y Bradsher, Acc. Chem. Res. 1982, 15, 300-305). U n enfoque para preparar los compuestos de la Fórmula II, lia y ciertos otros compuestos descritos aquí, se presenta en el Esquema 1 , y se puede usar para preparar los compuestos de la presente invención. Los sustituyentes Z, R5, R6 y R7 representan sustituyentes que se exponen en la Fórmula I I , o sustituyentes que pueden ser convertidos en esos sustituyentes usando transformaciones orgánicas estándar. P representa un grupo protector apropiado. Los ejemplos de grupos protectores incluyen esteres de ácidos carboxílicos, éteres silílicos de alcoholes, y acétales y cetales de aldehidos y cetonas, respectivamente. El campo de química con grupos protectores ha sido revisado (Greene, T. W. ; Wuts, P. G. M. Protective Groups in Organic Synthesis, 2a. ed . ; Wiley: New York, 1991 ). El grupo nitro del nitroftalato de dimetilo se redujo a la amina usando hidrogenación catalítica. La anilina fue acilada usando anhídrido acético y piridina como una base. Una mezcla de la acetamida 2 resultante y una acetofenona, se trató con una base fuerte en un solvente apropiado a temperatura elevada para dar la tricetona 3 deseada. Los medios adicionales para preparar tricetonas son familiares para un conocedor de la materia, tal como se describe en Kilgore y co-autores, Industrial and Engineering Chemistry 34: 494-497, 1946. Se trató la tricetona con hidrazina a temperatura elevada en un solvente apropiado para dar el sistema de anillo indeno[1 ,2-c]pirazolona. Los medios adicionales para preparar indeno[1 ,2-cjpirazolona son familiares para un conocedor de la materia tal como se describen en Lemke y co-autores, J Heterocyclic Chem. 19: 1335-1 340, 1982 ; Mosher y Soeder, J. Heterocyclic Chem. 8: 855-59, 1971 ; Hrnciar y Svanygova, Collect. Czech. Chem. Commun. 59: 2734-40, 1994. La amida fue desacilada por calentamiento con un ácido fuerte en un solvente apropiado para dar la anilina 4. Esta anilina fue acilada bajo condiciones estándar usando un cloruro ácido en un solvente apropiado para dar el producto deseado 5.

ESQUEMA 1 U n método alternativo para elaborar los compuestos de la presente invención se muestra en el Esquema 2. El producto intermedio tricetona 3 puede ser desacilado con ácido fuerte y reacilado con un cloruro ácido apropiado usando métodos familiares para los conocedores de la materia. Subsiguientemente, la tricetona 6 se puede convertir en el sistema de anillo indeno[1 ,2-c]pirazolona usando las mismas condiciones descritas previamente en el Esquema 1.

ESQUEMA 2 Otro método para preparar las tricetonas 6 del Esquema 2 emplea la condensación de una 1 ,3-dicetona 6a con anhídrido 3-nitroftálico tal como se describe en Rotberg y Oshkaya, Zh. Organ Khim. 8:84-87, 1972; Zh. Organ. Khim. 9:2548 2550, 1973. Las 1 ,3-dicetonas, cuando no están disponibles comercialmente, pueden ser preparadas fácilmente por un conocedor de la materia mediante la acetilación o trifluoroacetilación de la metii cetona requerida. La reducción del derivado nitro resultante a la anilina 6b se puede lograr en una variedad de formas, incluyendo hidrogenación catal ítica, tratamiento con zinc o hierro bajo condiciones acidas, o tratamiento con otros agentes reductores tales como ditionita de sodio o cloruro estañoso. Subsiguientemente, la anilina 6c se puede convertir en las indeno[1 ,2-c]pirazolonas de esta invención mediante acilación seguida por tratamiento con hidrazina como se describió previamente en el Esquema 2. Otro método para elaborar el sistema de anillo indeno[1 ,2-c]pirazolona se muestra en el esq uema 3. La dimetil hidrazina se hizo reaccionar con 3-acetilpiridina sin solvente, para dar la hidrazona 7. Esta se trató en una forma similar a la que se describe en el Esquema 1 para dar el producto intermedio 8 deseado.

ESQUEMA 3 Alternativamente, se puede tratar b con un anillo N-amino morfolina o piperazina acilado activado, tal como un carbamato de nitrofenilo. Los medios adicionales para preparar los productos intermedios similares son familiares para un conocedor de la materia, tal como se describe en Rappoport, J . Org. Chem. 49: 2948-2953, 1 984. Este producto intermedio fue llevado a través de la secuencia en una forma similar como la descrita en el Esquema 1 . A pesar de que los esquemas precedentes describen rutas de síntesis generales en donde W es oxígeno, después de tal descripción general , un conocedor de la materia podrá ser capaz de visualizar y practicar la síntesis de otros compuestos de la invención en donde W no es oxígeno. Por ejemplo, en donde W se selecciona de S, S(O2), C(=O), C(=S), CH2, y NR". Otras características de la invención se harán evidentes en el transcurso de las siguientes descripciones de ejemplos de modalidades que se dan para ilustración de la invención y no pretenden ser limitantes de ella. v. EJEM PLIFICAC IÓN Los compuestos de las Tablas A, B y C se pueden sintetizar como se muestra en las solicitudes del TCP WO 03/033499 y/o WO 04/092139, cuyas enseñanzas están incorporadas aquí mediante referencia.

PROCEDIMIENTOS DE ENSAYO Y RESULTADOS La actividad biológica y la utilidad de los compuestos de la invención están demostradas por uno o más ensayos, incluyendo los que se describen en mayor detalle más a continuación: Ensayo 1 Inhibición de la progresión del ciclo celular mediante los compuestos de la invención usando yoduro de propidio y ensayos Brd U (los resultados se muestran en la Figura 1 y en la Tabla 2. Ensayo 2 Viabilidad reducida de una amplia gama de 60 líneas celulares provenientes de diversos tumores humanos, representadas por el panel NCI , con la exposición a los compuestos de la invención (los resultados se muestran en la Tabla 3). Ensayo 3 Efecto irreversible de los com puestos de la invención sobre las células en un ensayo de supervivencia clonogénica (los resultados se muestran en la Tabla 3, en la Figura 2 y en la Figura 3). Ensayo 4 Viabilidad reducida de células HCT-1 16 y I MR90 expuestas a los compuestos de la invención como se estimó usando un ensayo con Calceina AM (los resultados se muestran en las Tablas 3 y 6) Ensayo 5 Inhibición de la viabilidad de las células tumorales detenidas pero no en las células normales detenidas expuestas a los compuestos de la invención (los resultados se muestran en la Tabla 4 y en la Figura 4). Ensayo 6 Actividad inhibidora de los compuestos de la invención en ciertos ensayos bioquímicos con quinasa (los resultados se muestran en las Tablas 5 y 6). Ensayo 7 Actividad de los compuestos en los modelos de tumor con xenoinjerto (los resultados se muestran en las figuras 5, 6, 7 y 8). Ensayo 8 Afinidad de los compuestos a ciertas proteínas objetivo (los resultados se muestran en la figura 9). Ensayo 9 Actividad antiviral de los compuestos de la invención (los resultados se muestran en la Tabla 7).

ENSAYO 1: ANÁLISIS DEL SICLO CELULAR CON YODURO DE PROPIDIO Y BrdU El porcentaje de células en las fases G1, S y G2/M del ciclo celular fue determinado tiñendo ADN con yoduro de propidio y cuantificando la cantidad de células con un complemento de ADN 2N o 4N mediante citometría de flujo. Las alteraciones en la distribución de las células a través del ciclo celular en respuesta a la exposición a los inhibidores de Cdk se evaluó de esta manera.

MÉTODO PARA TEÑIR CÉLULAS CON YODURO DE PROPIDIO 3 conjuntos de células HCT-166 (100,000 células/conjunto) se cultivaron en la presencia de un compuesto de prueba en frascos T-25 de acuerdo con la Tabla 1 siguiente. Se realizó el análisis a 24, 48 y 72 horas. Se recolectaron las células adherentes mediante tripsinización , combinada con células flotantes en tubos para citometría de flujo Falcon de 12 x 75, y se cosecharon mediante centrifugación. Los medios se decantaron del granulo celular, se añadió 100 µL de tinte Pl , y se incubaron las células a 37 °C durante 20-2 minutos. El conteo de células fue preferiblemente no mayor de 2 x 106-4x106/mL. Luego se le añadió un volumen igual (100 µL) de sal Pl a las células, las cuales fueron incubadas luego a 4 °C durante 1 -2 horas. Las células teñidas fueron analizadas en un citómetro de flujo Becton Dickinson FACScan. Las muestras fueron protegidas de la luz. La figura 1 muestra que en la exposición al compuesto A37, las células fueron detenidas terminalmente en G 1 y G2, con evidencia de apoptosis y endo-reduplicación . Se observan resultados análogos para ciertos otros compuestos de la invención, incluyendo el compuesto B16.

DETERMINACIÓN DE LA INCORPORACIÓN DE BrdU EN EL ADN Este método m idió el porcentaje de células que incorporaron el nucleótido análogo, BrdU, en ADN recién sintetizado a medida que las células progresaban a través de la fase S del ciclo celular. La inhibición de la incorporación de BrdU se usó como una medida de un efecto de los inhibidores de Cdk en el progreso de la fase S y la replicación del ADN .

MÉTODO PARA MARCADO CON BrdU 3 conjuntos de células HCT-1 16 (100,000 células/conjunto) se colocaron en placas en frascos T25 y se incubaron con un compuesto de prueba como anteriormente. Se realizó el análisis a las 24, 48 y 72 horas. Se le añadió Brd U a cada frasco T-25 de un a solución madre de 10 mg/mL hasta una concentración final de 10 µM , y se incubaron las células durante 16 a 18 horas adicionales a 37 °C, Luego se prepararon las células para el análisis citométrico de flujo de acuerdo con el procedim iento del fabricante (equipo para flujo Brd U , BD-Pharmingen, número de catálogo 2354KK) como sigue: Se cosecharon las células (adherentes y flotantes) de los frascos T25 directamente en tubos para citometría de flujo Falcon de 12 x 75 tal como se realizó anteriormente, mediante fijación y permeabilización con la adición de 100 µL de regulador Cytofix/Cytoperm (30 minutos, temperatura ambiente). Luego se lavaron las células de nuevo con 1 mL de regulador Perm Wash y se resuspendieron los granulos de células en 100 µL de regulador Cytoperm Plus y se incubaron en hielo durante 10 minutos. Luego se lavaron las células con 1 mL de regulador Perm Wash y se repitió la fijación en 100 µL de regulador Cytofix/Cytoperm durante 10 minutos a temperatura ambiente. Después se lavaron las células con 1 m L de regulador Perm Wash. Las células se trataron después durante una hora a 37 °C con 100 µL de DNasa para exponer el BrdU incorporado, seguido por otro paso de lavado con 1 mL de regulador Perm Wash. La presencia del Brd U incorporado fue revelada con un anticuerpo a-BrdU-FITC (50 µL de una dilución del anticuerpo en regulador Perm Wash). Se protegieron las células de la luz y se incubaron a temperatura ambiente durante 20 a 30 minutos. Después de la incubación , se lavaron las células con 1 mL de regulador Perm Wash, se resuspendieron en 300 µL de FBS al 2% en PBS, y se analizaron en el citómetro de flujo. Los resultados se presentan en la Tabla 2, como la concentración de compuesto (µM) que inhibe la incorporación de BrdU en 50%.

ENSAYO 2: EVALUACIÓN DE INHIBIDORES DE Cdk EN EL PANEL DEL NCI DE LÍNEAS CELULARES TUMORALES HUMANAS La evaluación de los compuestos en el National Cáncer Institute de Estados Unidos en su panel de 60 líneas celulares, proporciona una información saludable con respecto a la eficacia en una amplia gama de tipos de tumores y antecedentes genéticos. Las líneas celulares derivadas de leucemia, melanoma y cánceres de pulmón, colon , cerebro, ovario, mama, próstata y riñon , están incluidas en este panel. El uso de este panel proporciona una medición de la eficacia de la transformación neoplásica incluyendo p53 y Her2/Neu, así como también de las involucradas en el metabolismo, y aquellas que confieren resistencia a múltiples fármacos. Los datos generados en estas líneas celulares con el procedimiento descrito más adelante, se pueden usar para evaluar la actividad de los compuestos. Los resultados de los ensayos en el panel del NCI se presentan en la Tabla 3 (panel NCI), representados por dos medidas informativas: (a) el punto medio del gráfico medio - la IC50 promedio sobre el panel celular completo, excepto porque una IC50 (µM) de menos de 10 nM se calcula como si fuera igual a 10 nM para este estimado; y (b) la IC50 (µM) de la actividad inhibidora del compuesto contra una línea celular resistente a la adriamicina (ADR-res). Los compuestos adicionales de la invención mostraron la siguiente actividad en el ensayo en el NCI: (i) compuesto A37: punto medio del gráfico medio < 50 nM e IC50 de inhibición de crecimiento de las células ADR-res < 100 µM; (¡i) compuesto B16: punto medio del gráfico medio < 50 nM e IC50 de la inhibición de crecimiento de células ADR-res < 10 µM.

METODOLOGÍA PARA LA DETECCIÓN DE CÁNCER IN VITRO Se cultivaron células en RPMI-1640 10% FCS y se colocaron en placas para micro-titulación de 96 receptáculos en densidades que abarcan desde 5,000 hasta 40,000 células/receptáculo. Las placas fueron incubadas durante 24 horas a 37 °C, 5% de CO2 durante 24 horas. Se prepararon med ios que conten ían dos veces la concentración final deseada del compuesto (5 dosis abarcando 4 log), y se añadió 100 µL a cada receptáculo que conten ía 100 µL de medio mas células hasta producir la concentración final deseada. Luego se incubaron las células durante 48 horas adicionales. El efecto del compuesto en la viabilidad celular fue determinado con el ensayo con Sulforodamina B (SRB), el cual mide la proteína total. Se fijaron las células con TCA frío hasta una concentración final de 10%, y se incubaron a 4 °C durante 60 minutos. Se desechó el supernadante y se lavaron las placas cinco veces con agua y se secaron al aire. Se le añadió solución de SRB a 4% (peso/volumen) en ácido acético al 1 % , a cada receptáculo, y se incubaron las placas d urante 10 minutos a temperatura ambiente. Se lavaron las placas cinco veces con ácido acético al 1 % y se secaron al aire. Se solubilizó el tinte unido con 10 m M de base trizma y se leyó la absorbancia en un lector de placa a 151 nM.

ENSAYO 3: PROCEDIMIENTO PARA EL ENSAYO DE SUPERVIVENCIA CLONOGÉNICA CON CÉLULAS HCT-116 Se usó este ensayo para determinar la concentración de un compuesto que da como resultado la pérdida de viabilidad irreversible después de un periodo de exposición especificado. Esencialmente, las células se exponen al compuesto durante un periodo de 1, 2 o 5 días, y luego se transfieren a medio de cultivo libre de compuesto. Después de la incubación continuada en el medio libre de compuesto durante una cantidad de días, se cuenta la cantidad de colonias recuperadas como un estimado de la cantidad de células supervivientes. Los resultados de estos ensayos de supervivencia para diversos compuestos de la invención, se presentan en la Tabla 3 (clonogénicos) como la concentración (µM) de compuesto que inhibe la recuperación de la colonia en un 50% (IC50). La figura 2 muestra la inhibición irreversible de la actividad celular en células HCT-116, y la inhibición por el compuesto A37 en el transcurso del tiempo, con una IC50 de < 50 nM con exposición de 24 horas al compuesto. El compuesto B16 muestra una IC50 de < 100 nM en el mismo ensayo, y la IC50 alcanzada dentro de 30 a 60 minutos a 100 nM (Figura 3).

MÉTODO PARA MEDIR LA SUPERVIVENCIA CELULAR DESPUÉS DE LA EXPOSICIÓN AL COMPUESTO Se precalentaron los medios (RPMI-1640, 10% de FCS, pen/strep a 37 °C en un baño con agua. Se incubaron las células y se cultivaron a 37 °C, 5% de CO2. Se recuperaron las células por tripsinización de las placas sub-confluentes y se contaron usando un hemocitómetro. Se colocó en placas 1 x 104 células en 25 mL de medio en una cápsula para cultivo de tejido. Se prepararon 14 placas para cada compuesto de prueba, y se incubaron durante la noche a 37 °C. Se diluyó el compuesto en medio a 7 concentraciones y se reemplazó el medio en las células con el que contenía el compuesto de prueba. Se prepararon dos placas para cada concentración del com puesto sometido a prueba, así como también dos placas de control sin compuesto. Se incubaron las placas como anteriormente, durante 24, 48 o 74 horas, se eliminó el medio y se reemplazó con medio fresco, y las placas se incubaron durante 7 días adicionales, y se lavaron con PBS. Se tiñeron las colonias con solución violeta cristal (0.4% de violeta cristal, 20% de etanol) durante 5 minutos, se lavaron dos veces con agua destilada, y se contaron.

ENSAYO 4: USO DEL ENSAYO DE VIABILIDAD DE CALCEÍNA AM PARA LA EVALUACIÓN DE INHIBIDORES DE Cdk EN LA PRESENCIA Y AUSENCIA DE PROTEÍNAS DE SUERO La potencia de los inhibidores de Cdk, medida por la pérdida de viabilidad celular, se determinó con el ensayo de Calceína AM (Molecular Probes). La calceína AM es un sustrato de esterasas intracelulares, el cual es escindido solamente en células viables para generar un producto fluorescente que se pueda cuantificar con un lector de placa fluorescente. La señal fluorescente es proporcional a la cantidad de células viables, y con ello la pérdida de señal en respuesta a la exposición de las células a los inhibidores de Cdk se correlaciona con una pérdida de viabilidad.

Este ensayo puede distinguir la detención del ciclo celular, en la cual las células todavía son viables, de la pérdida de viabilidad y por ello es apropiado para la evaluación de los inhibidores de Cdk. Un compuesto que es un potente citotóxico, puede ocasionar pérdida significativa de viabilidad celular en este ensayo. Las IC50 celulares fueron determinadas en la línea celular de carcinoma colorectal, HCT-116, y el fibroblasto humano normal, IMR90. Las IC50 ajustadas de la proteína también se determinaron en HCT-116. Los resultados de estos ensayos de viabilidad se presentan en la Tabla 3 (HCT-116 (viabilidad/ajustada con proteína) y IMR-90). Las IC50 µM, no ajustada con proteína) para el ensayo de viabilidad contra las células HCT-116 se muestran para los compuestos adicionales de la invención en la Tabla 6. Los ensayos de viabilidad celular contra otras líneas celulares se realizaron como anteriormente. Se encontró que la IC50 (µM) para otros compuestos de la invención fue: (i) compuesto A37: HCT-116 (<50 nM), HCT-116 ajustada con proteína (<500 nM), A2780 (<10 nM), IMR90 (<50 nM); (ii) compuesto B16: HCT-116 (<10 nM), HCT-116 ajustada con proteína (<500 nM), A2780 (<10 nM), IMR90 (<100 nM).

PROCEDIMIENTO PARA EL ENSAYO DE VIABILIDAD CON CALCEÍNA AM Las células HCT-1 16 o I MR90 fueron recuperadas de las placas sub-confluentes por tripsinización y 1 , 000 o 4,000 células, respectivamente, fueron colocadas en placas en cápsulas de 24 receptáculos y se incubaron durante la noche a 37 °C, 5% de CO2. Se cultivaron células HCT-1 16 en RPM I-1640, 10% de FCS y se cultivaron células I M R90 en medio esencial m ínimo alfa, 10% FCS. Después de la incubación durante la noche para permitir la adherencia, se aspiró el medio de cada receptáculo y se reemplazó con medio que conten ía un compuesto de prueba en una concentración de 0 a 25 nM, abarcando un total de 7 dosis. Las placas fueron regresadas a la incubadora y cultivadas durante 72 horas adicionales (3 días). El medio usado para la determinación de las IC50 ajustadas con proteína fue RPMI-1640, 10% de FCS, mas 1 mg/mL de glicoproteína alfa acida (Sigma G-9885), y 45 mg/mL de albúmina de suero humana (Sigma A3782). Después de 24 horas de incubación con el compuesto de prueba, se lavaron las células dos veces con PBS 1 X, teniendo cuidado especial de eliminar cualquier residuo de regulador. Se preparó una solución de 5 µM de calceína AM disolviendo una alícuota de 50 µg de calceína (Molecular Probes, n úmero de catálogo C3100) en 50 µL de DMSO. Después de que la calceína estuvo completamente disuelta (10 minutos a temperatura ambiente); se diluyó en 10 mL de PBS. Se le añadió calceína/PBS (0.5 mL) a cada receptáculo. Se incubaron las placas durante 75 minutos a 37 °C (protegidas de la luz) y se leyó la señal fluorescente en un lector de placa fluorescente (excitación 485/20 y emisión 530/25).

ENSAYO 5: ENSAYO CON CÉLULAS DETENIDAS La actividad de la q uinasa dependiente de ciclina (Cdk) se requiere para promover la progresión de células a través de distintas fases del ciclo de división celular. La proliferación de células normales, no transformadas, en cultivo, req uiere de la presencia de factores de crecimiento, cuya eliminación, mediante deprivación de suero, conduce a una pérdida de actividad de Cdk y a la consecuente salida del ciclo celular a medida que las células entran en la fase inactiva, G0. Por lo tanto, desde un punto de vista mecanicista, pero sin estar limitado por la teoría, los inhibidores de Cdk tienen que tener una potencia grandemente reducida en las células normales detenidas con relación a sus contrapartes transformadas. Los resultados de los ensayos de viabilidad realizados en células normales detenidas (IMR90) y células tumorales detenidas (HT-1 16) usando ciertos compuestos de la invención, se presentan en la Tabla 4 siguiente. La figura 4 muestra la actividad mejorada del compuesto A37 sobre la inhibición de la viabilidad de las células normales detenidas (I MR90) y células tumorales (HT-1 16). Se encontró que la I C50 para el compuesto A37 era < 50 nM para las células HCT-1 16 detenidas, y > 10 µM para las células I MR90 detenidas. El compuesto B16 mostró una IC50 de < 50 nM para las células HCT-116 detenidas y > 10 µM para las células IMR90 detenidas.

DETENCIÓN DE CÉLULAS HCT-116 E IMR90 POR INANICIÓN DE SUERO PARA EVALUACIÓN DE LA POTENCIA DEL COMPUESTO Se colocó en placas células HCT-116 por triplicado para cada concentración de compuesto sometido a prueba en medio RPMI 1640 que contenía 10% de suero fetal de ternera a una densidad de 200 o de 2,000 células por receptáculo en cápsulas de 24 receptáculos, y se incubaron durante la noche a 37 °C, 5% de CO2. Se eliminaron los medios de la placa que contenía 2,000 células por receptáculo, se lavaron las células una vez con medio libre de suero y se colocó 1 mL de medio libre de suero en las células. Las placas que contenían células tanto en la presencia como en la ausencia de suero, fueron incubadas durante 6 días adicionales. Se colocó células IMR90 por triplicado para cada concentración de compuesto sometido a prueba en medio MEM-a que contenía 10% de suero fetal de ternera, a una densidad de 2,000 o de 20,000 células por receptáculo en cápsulas de 24 receptáculos y se incubó durante la noche a 37 °C, 5% de CO2. Se eliminaron los medios de la cápsula que tenía 20,000 células por receptáculo, se lavaron las células una vez con medio libre de suero, y se colocó medio libre de suero sobre las células. Las placas que contenían células tanto en la presencia como en la ausencia de suero fueron incubadas durante 3 días adicionales.

EVALUACIÓN DE LA DETENCIÓN DEL CICLO CELULAR DE CÉLULAS HCT-116 E IMR90 POR INANICIÓN DE SUERO para asegurarse de que las células sin duda habían salido del ciclo celular con la privación de suero, el porcentaje de células positivas a BrdU, indicativo de las que progresaban a través de la fase S, fue determinado en cada experimento. Para el propósito de este experimento, la viabilidad celular fue evaluada simultáneamente con el uso de SNARF-1, un sustrato fluorescente de esterasas intracelulares que solamente son activas en células viables. Juntas, la evaluación de la incorporación de BrdU y la escisión de SNARF-1 mediante citometría de flujo proporcionó una evaluación de la viabilidad de las células detenidas en una sola base celular. Para este análisis, se tiñeron las células con SNARF-1 como sigue y luego se prepararon para la determinación de la incorporación de BrdU tal como se describió anteriormente. Se colocaron en placas células HCT-116 e IMR90 en la densidad descrita más adelante en frascos T25 en medio que contenía suero (RPMI-1640 o MEM-a con 10% FCS, respectivamente). Después de 24 horas de crecimiento, se eliminó el medio y después de lavar las células, se reemplazó con medio libre de suero.

HCT-116 + FCS 5,000 células HCT-116 - FCS 100,000 células IMR90 + FCS 100,000 células IMR90 - FCS 200,000 células Las células IMR90 fueron cultivadas durante 3 días adicionales y las células HCT-116 fueron cultivadas durante 6 días adicionales antes de someterlas a impulsos con BrdU. Una alícuota de 50 µg de SNARF-1 (Molecular Probes, número de catálogo C1272), se disolvió en 50 µL de DMSO a temperatura ambiente durante 10 minutos y luego se diluyó en 10 mL de PBS. Se diluyó adicionalmente el SNARF-1 1:64,000 antes de que se añadiera 200 µL a cada tubo de células que habían sido cultivadas en la presencia o en la ausencia de suero y sometidas a impulsos con BrdU durante 20 horas. Las células se incubaron a 37 °C durante 30 minutos y luego se lavaron con 3 mL de PBS. Estas células se fijaron luego y se prepararon para la medición de incorporación de BrdU como se describió anteriormente. El porcentaje de células viables (FL-2) y células positivas a BrdU (FL-1) se determinó en un citómetro de flujo FLACScan.

EVALUACIÓN DE LA VIABILIDAD DE CÉLULAS HCT-116 E IMR90 DETENIDAS DESPUÉS DE EXPOSICIÓN A LOS COMPUESTOS DE LA INVENCIÓN Se incubaron las células en la presencia de los compuestos durante 72 horas (3 días) a 37 °C, 5% de CO2 como sigue, para determinar la potencia de los compuestos en las células que continúan el ciclo y las detenidas. Las células HCT-116 que siguen el ciclo y las detenidas, así como también las células IMR90 que continúan el ciclo, estuvieron expuestas a un panel de 6 dosis que abarca desde 5 hasta 250 nM. Para las células normales detenidas, la gama de dosis se aumentó hasta 50 nM para 25 µM, con el fin de compensar la disminución esperada en la actividad. El efecto de 72 horas de exposición al compuesto sobre la viabilidad celular se evaluó en el ensayo con Calceína AM. La Calceína AM es un sustrato fluorescente de esterasas intracelulares que solamente son activas en las células viables. La escisión del sustrato proporciona así una medida de viabilidad, la cual es proporcional a la cantidad de células. Se preparó una solución madre de Calceína AM disolviendo una alícuota de 50 µg (Molecular Probes, número de catálogo C3100) en 50 µL de DMSO. Se incubó el tubo a temperatura ambiente durante aproximadamente 10 minutos para asegurar que la calceína se había disuelto completamente. Se diluyó la calceína en 10 mL de PBS para preparar la solución final, la cual fue protegida de la luz. Se aspiraron los medios de las células, las cuales se lavaron luego dos veces con 1 mL de PBS para eliminar el PBS completamente de las células por aspiración. Se transfirió 0.5 mL de la solución de Calceína/PBS por medio de una pipeta en cada receptáculo. Se incubaron las placas a 37 °C durante 75 minutos (protegidas de la luz) y se leyeron en un lector de placa fluorescente (excitación 485/20 y emisión 530/25).

ENSAYO 6: IN HI BICIÓN DE ENSAYO QUI NASA BIOQUÍMICO Enzimas: Se obtuvo Cdc2 / ciclina B de fuentes comerciales. Se expresó Cdk2 / ciclina Ecorta his en células Sf9. Se expresó Cdk2 / ciclina A, cdk4 /ciclina D1 , y cdk6 /ciclina D2 en células Sf9. La proteína q uinasa A (subunidad catalítica, de corazón bovino) y la proteína quinasa C (isozimas mezcladas de cerebro de rata) se obtuvieron de fuentes comerciales. Sustratos: La histona 1 fue de fuentes comerciales. GST-Rb es glutatión-S-transferasa fusionada con el terminal N de los residuos 379-928 de la proteína Rb. Ensayos: Se determinó la actividad de Cdc2 / ciclina B midiendo la incorporación de radioactividad de trifosfato de [?-32P]adenosina en histona H 1 usando un ensayo de precipitación con TCA. Se obtuvo la Cdc2 / ciclina B quinasa y la histona H 1 de fuentes comerciales. La solución de ensayo final contenía 50 mM de Tris. HCl, 10 mM de MgCI2 ) 1 mM de ditiotreitol, 50 µM de trifosfato de adenosina, 2 µCi32P, 10% de sulfóxido de dimetilo (de los compuestos), pH 7.5, 20 µg de Histona H 1 , 6 U de enzima en un volumen de 50 µL. Se añadieron los compuestos en diversas concentraciones entre 1 nM y 10 µM . Se inició la reacción con ia adición de enzima, dejándola proseguir durante 20 min a 30 °C, y deteniéndola mediante la adición de 20 µL de solución para detención (237 mM de tetraacetato de etilendiamina disódico, 105 mM de trifosfato de adenosina, pH 8.0). Se precipitó la proteína mediante la adición de 35 µL de ácido tricloroacético al 70% (peso/volumen), y se capturó el precipitado en una placa filtrante con fibra de vidrio de 96 receptáculos (Millipore, I nc.), la cual había sido humedecida con ácido tricloroacético al 25% (peso/volumen). Se lavó el filtro diez veces con ácido tricloroacético al 25% (peso/volumen) y se determinó la cantidad de 32P incorporada por conteo de destello después de añadir 100 µL de destellante (Microscint 20, Packard Instruments). La actividad relativa se determinó dividiendo la cantidad de radiactividad incorporada en la presencia del compuesto por la cantidad de radiactividad incorporada en un experimento de control que contenía DMSO solo, pero no compuesto. La radiactividad de fondo, determinada en un experimento que contenía 50 mM de EDTA en lugar del compuesto, se sustrajo de todos los resultados antes de los cálculos. La concentración del compuesto para la inhibición del 50% (IC50) se determinó ajusfando los datos a la ecuación estándar: P = min + (max - min)(1 /(1 + (IC50 / [I])3)) (1 ) en donde P = 1 - actividad relativa es la inhibición relativa, [I] es la concentración del compuesto, max y min son la inhibición relativa máxima y mínima (1 y 0, respectivamente), y s es la así denominada pendiente de Hill. La actividad de Cdk2 / ciclina E, Cdk2 /ciclina A, Cdk4 / ciclina D 1 y Cdk6 / ciclina D2 se determinó usando un ensayo de captura con glutationa-sefarosa. Las enzimas se expresaron en células de insecto Sf9 como heterodímeros, y el sustrato (GST-Rb) fue glutationa-S-transferasa fusionada con los residuos 379 hasta 928 de la proteína retinoblastoma Rb, expresada en E. coli. La solución del ensayo conten ía 50 mM de Tris. HCl, 10 mM de MgCI2, 1 mM de d itiotreitol, 50 µM de trifosfato de adenosina, 2 µCi de trifosfato de [?-32P]adenosina, 0.01 U de proteína quinasa C en un ensayo de 50 µL. Los ensayos se iniciaron mediante la adición de enzima, que se dejó reaccionar durante 10 minutos a 30 °C, y se detuvieron añadiendo 0.4 volúmenes de 237 mM de tetraacetato de etilendiamina disódica, 105 mM de trifosfato de adenosina, pH 8.0. Se precipitó la proteína de la reacción detenida añadiéndole 0.5 volúmenes de ácido tricloroacético al 75% (peso/volumen) , y se capturó por filtración a través de un aparato para filtración con fibra de vidrio de 96 receptáculos (Millipore). Luego se lavaron los filtros diez veces con ácido tricloroacético al 25% (peso/volumen), y la cantidad de [23P]fosfato se determinó añadiendo 100 µL de Microscint y contando los destellos. La concentración del compuesto para la inhibición del 50% (IC50), se determinó ajusfando los datos a la ecuación (1 ). Los resultados de los ensayos anteriores se presentan en la Tabla 5 y en ia Tabla 6.

ENSAYO 7: MODELOS TUMORALES DE XENOINJ ERTO Fármacos. Los compuestos de la invención fueron sintetizados y preparados para su administración i.v. en un vehículo biocompatible. Se obtuvo CPT-1 1 (Camptosar®, Pharmacia) como sustancia farmacéutica y se preparó en 5% de dextrosa-agua (D5W). Todas las preparaciones se hicieron nuevas semanalmente y los volúmenes de inyección se ajustaron al peso corporal (0.2 mL/ 20 g de ratón). Ratones/gestión. Se obtuvieron ratones hembras nu/nu de Charles River, alojados en microaisladores estáticos, y se les proveyó ad libitum con agua y dieta irradiada estándar para roedores (Purina Pico-Lab Rodent Diet 20). Determinación de dosis máxima tolerada (MTD). Se hicieron coincidir por pares ratones de 8 semanas de edad en grupos de 5 a 8 animales y se realizaron estudios preliminares de toxicidad con compuestos de prueba desconocidos. Los animales se trataron i.v. diariamente durante 10 días consecutivos con el compuesto de prueba, y se pesaron dos veces cada semana. Se examinaron los ratones frecuentemente para identificar síntomas clínicos de cualesquiera efectos adversos relacionados con el fármaco. La toxicidad aceptable para los fármacos anti-cancerosos está definida por el NCI de Estados Unidos, como la pérdida media de peso del grupo no mayor de 20% y de no más de 10% de muerte tóxica en los animales tratados. Procedimiento estándar. Se implantó a ratones desnudos atím icos (machos o hembras, de 6 a 7 semanas) , fragmentos de tumor de 1 mm3 (tumor Brie) o alternativamente, 5 - 10 x 106 células derivadas de cultivo de tejido en el flanco. Los animales se vigilaron dos veces semanalmente para determinar el crecimiento del tumor y luego diariamente a medida que los implantes se aproximaban al tamaño deseado de aproximadamente 100 m3. Cuando los tumores crecieron hasta entre 62 y 221 mg en el peso del tumor calculado, los animales fueron apareados por pares en grupos de tratamiento experimental apropiados (8-10 animales/grupo) y se inició el tratamiento con los compuestos de prueba. Un control positivo fue dosificado de acuerdo con controles históricos. Se calcularon los pesos de los tumores y se tomaron los pesos corporales dos veces semanalmente, y se observaron los animales frecuentemente para identificar efectos adversos del fármaco. El procedimiento se detuvo para cualquier animal cuya masa tumoral alcanzara 1000 mg, para ser sometido a eutanasia inmediatamente. Se midieron los tumores determinando la longitud y el ancho del tumor con un calibre digital. El peso del tumor se estimó usando la siguiente fórmula: Peso del tumor (mg) = (w2 x I) / 2 en donde w = ancho y I = longitud en mm del tumor.

Estos valores también se pueden expresar en unidades volumétricas (mm3). El tratamiento experimental puede ocasionar regresión parcial (PR) o regresión completa (CR) de los tumores. La PR es cuando el tamaño del tumor es 50% o menos del tamaño inicial (d ía 1 ) , pero mayor que 0.0 mg durante tres días consecutivos durante el transcurso del estudio, mientras que una CR ocurre cuando no hay masa tumoral medible durante tres días consecutivos. Las curas se definen como animales cuyos tumores encogen hasta 0 mg y permanecen de esa forma hasta la terminación del experimento. La eliminación celular logarítmica es un cálculo que determina el porcentaje de células tumorales que son eliminadas después del inicio del tratamiento, y que pueden ser usadas como una med ición cuantitativa de eficacia: Elim inación celular logarítmica (LCK) = (T-C) / (3.32)(Td) En donde T = es el tiempo medio requerido para el grupo de tratamiento de ratones hasta alcanzar 1000 mg de tamaño, C = el tiempo medio para los tumores del grupo de control hasta alcanzar 1 000 mg en tamaño, Td es el tiempo estimado para duplicar el tumor a partir del análisis de regresión lineal desde un punto de crecimiento semi-logarítmico de los tumores del grupo de control durante el crecimiento exponencial y 3.32 = la cantidad de duplicaciones requeridas para que una población aumente 1 -log 10 unidades. Cada unidad LCK representa 1 -log 10 unidades. Cada unidad LCK representa 1 -log 10 unidades de eliminación celular (por ejemplo, 1 LCK = 90% de eliminación, 2 LCK = 99% de eliminación , etc.). Consideramos compuestos que sean significativamente activos cuando tienen valores de LCK > 1 , los cuales corresponden a > 90% de eliminación celular. La inhibición de crecimiento tumoral (TGI) es un cálculo que describe la cantidad de crecimiento tumoral que es inhibida mediante el tratamiento con un compuesto durante un periodo de tiempo definido. Se expresa como: % TGI = 100 (1 -T/C) en donde T es el tamaño medio del tumor de un grupo tratado con el compuesto en un día dado, y C es el tamaño medio del tumor del grupo de control con vehículo en el mismo día. Las muertes tóxicas se definen como muertes ocasionadas por el tratamiento con el compuesto y no por el estado avanzado de la enfermedad. Una muerte es considerada tóxica si el animal muere dentro de 1 semana después del tratamiento con el compuesto final y el tamaño del tumor no ha alcanzado 1000 mg. Las muertes no relacionadas con el tumor después de este punto se registran, pero no se consideran muertes tóxicas. La regresión tumoral se define de acuerdo con las siguientes convenciones; una regresión se define como parcial (PR) si el peso del tumor disminuye hasta < 50% del peso inicial (< 50 mg) . U na regresión se define como completa (CR) si el peso del tumor disminuye por debajo del peso medible durante el periodo experimental. Una cura se define como un animal sin tumor al final del periodo de observación. Resultados. La figura 6 muestra los resultados logrados para varios compuestos de la invención en un modelo de tumor con xenoinjerto HCT1 16. La figura 6 muestra los resultados de un modelo de tumor con xenoinjerto A2780 logrados con el compuesto A37. La figura 7 muestra los resultados de un modelo de tumor con xenoinjerto PC3 logrados con el compuesto A37. La figura 8 muestra los resultados de un modelo de tumor con xenoinjerto A2780 logrados con el compuesto B16.

ENSAYO 8 : MEDICIÓN DE AFINI DADES ENTRE MOLÉCULAS OBJETIVO Y COMPUESTOS Con el fin de confirmar si un compuesto químico dado es apropiado para los usos propuestos aquí, puede ser útil caracterizar las propiedades de unión de este compuesto con sus compañeros de unión, si los hay. Esto, sin embargo, no debe ser interpretado como limitante del alcance de la invención. La afinidad de los compuestos quím icos con sus compañeros de unión correspondientes puede determinarse, por ejemplo, usando un sistema de ensayo BIACORE™ (Biacore AB, U ppsala, SE). Otros sistemas que producen un resultado cualitativamente similar, tales como por ejemplo, los desarrollados por Affinity Sensors (Cambridge, Reino Unido), serán evidentes fácilmente para los conocedores de la materia. En un procedimiento representativo, se analizó la unión del compuesto R a sus compañeros de unión CDK2/ciclina E. Se realizó el análisis en un biosensor BIACORE 2000 SPR a 22 °C en un regulador de pH corriente que contenía 20 mM de H EPES (pH 7.4), 150 mM de NaCI, 1 mM de DTT y 0.005% de Tween 20 (clasificación proteína, Calbiochem). U na solución de 10 µM del compuesto R se acopló en el pH 8.0 con la superficie dextrano de un chip sensor CM5 (clasificación investigación) por medio de química de acoplamiento amida. Con el fin de caracterizar la unión del compuesto R con las proteínas, por ejemplo CDK2/ciclina E, se diluyó una fracción de proteína en regulador corriente para obtener nueve concentraciones de proteína distintas, las cuales luego se dejaron pasar sobre la superficie del sensor consecutivamente durante 5 minutos cada una, seguidas por 5 min de regulador de pH corriente en la misma tasa de flujo. La asociación y disociación del complejo CDK2/ciclina E en la superficie del chip cargado con CM5-compuesto R se m idió a una tasa de flujo de 30 µL/m in . Después de cada experimento, se regeneró el chip mediante dos inyecciones consecutivas de 3 M de clorhidrato de guanidinio (20 seg, 30 µL/min) antes de cargar la siguiente muestra. Se analizaron los datos usando el software Bioevaluation versión 3.1 (Biacore AB, Uppsala, SE). Las curvas se normalizaron al inicio de la inyección, y el fondo se obtuvo con una superficie de control. Las tasas de asociación y disociación fueron determinadas por separado o globalmente, usando un modelo de unión Langmuir 1:1. Las afinidades (KD) se calcularon usando la ecuación: KD = kdiss/kass El procedimiento anterior puede ser realizado análogamente con otras proteínas objetivo, por ejemplo Cdk9, Cdk4, etc. Un inhibidor de Cdk9, por ejemplo, puede ser útil en el tratamiento o profilaxis de VIH y/o de SIDA. La figura 9 muestra como un ejemplo los resultados obtenidos para la unión de CDK2/ciclina E con el chip cargado de CM5-compuesto R. La KD calculada a partir de estos datos alcanza hasta 8,0 +/- 2,8 nM.

ENSAYO 9: ACTIVIDAD ANTIVIRAL La actividad de ciertos compuestos de la invención fue evaluada en células mononucleares de sangre periférica (PBMC) infectada con el VIH-1ROJO aislado clínicamente para generar una medición de la eficacia de estos compuestos en células con infección aguda. El uso de estas células humanas normales permite hacer un estimado del índice terapéutico de estos compuestos. Se agruparon células PBMC frescas de dos donantes y se estimularon con PHA-P durante 48 a 72 horas. Luego se cultivaron las células en la presencia de I L-2 para mantener la división celular iniciada por la señal mitógena. El virus se añadió a una multiplicidad de infección de 0.1 . Las células se cultivaron durante 7 días después de la infección, antes de la evaluación de eficacia. La replicación viral se midió mediante el nivel de actividad de transcriptasa inversa en el supernadante, y se midió la citotoxicidad con el ensayo MTS. Los resultados de las determinaciones duplicadas de la eficacia anti-VIH y de la citotoxicidad de estos compuestos se presentan en la Tabla 7. Todas las referencias, patentes y publicaciones citadas aquí están incorporadas al presente documento mediante referencia en su totalidad.

TABLA 1 Rango de concentraciones de compuesto usadas en el ensayo 1 TABLA 2 Resultados para ciertos compuestos de la invención en el ensayo de incorporación con BrdU descrito anteriormente.

TABLA 3 Resultados para ciertos compuestos de la invención para los siguientes ensayos de actividad celular in-vitro descritos anteriormente: ensayos de viabilidad y supervivencia clonogénica con células HCT-116, ensayos de viabilidad con células IMR90, y dos mediciones de actividad contra el panel celular del NCI (Punto medio del gráfico medio e IC50 contra una línea celular resistente a adriamicina).

TAB LA 4 Resu ltados para ciertos com puestos de la invención (IC50 como nM) para el ensayo de detención del ciclo celular descrito anteriormente.

TABLA 5 Resultados para ciertos compuestos de la invención (IC50 como µM) para los ensayos de inhibición bioquímica descritos anteriormente.

TABLA 6 Resultados para los compuestos adicionales en los ensayos de inhibición bioquímica y de viabilidad de HCT-1 16 (no ajustados con proteína) descritos anteriormente.

TABLA 7 Resultados para la actividad antiviral de ciertos compuestos de la invención. IC50: 50% de inhibición de replicación del virus medida por los niveles de transcriptasa inversa en el supernadante; TC50: 50% de citotoxicidad (MTS); TI : TC50/IC50.

TABLA A TABLA B TABLA D Otros compuestos de la invención resultan de seleccionar las características apropiadas de la tabla de posibles atributos siguiente. Por ejemplo, el compuesto A77 es el resultado de las siguientes selecciones: ninguno-morfolino-arilo-OCH2(CO)-piperazina-CH3.

Sustituyente a Anillo a Arilo o Anillo Atributo Sustituyente a mano izquierda mano izq heteroarilo sustituyente Nitrógeno mano derecha CH3 morfolino arilo OCH2 NHM alquilo isopropilo piperazina tiofeno OCH2(CO) NMM alcoxi CH3CH20(CO)CH2 S02 morfolino alcohol ninguno OCH2(CO)OCH2 piperazina amina sustituida piperidina ácido pirazol éster pirrolidina CH2CH2OCH3 CH2CH2OH CH2NH2 CH2NHCH3 CH2NHCHCH3CH3 CH3 CHCH3CH3 COOCH2CH3 ninguno TABLA E Otros compuestos de la invención son el resultado de seleccionar las características apropiadas de la tabla de posibles atributos siguiente. Por ejemplo, el compuesto B3 es el resultado de las siguientes selecciones: ninguno-morfolino-arilo-CH2-piperazina-CH2CH2OH.

Sustituyente a Anillo a Arilo o Anillo Atributo Sustituyente a mano izquierda mano izq heteroarilo sustituyente Nitrógeno mano derecha CH3 morfolino arilo CH2 NHM alquilo isopropilo piperazina tiofeno CH2CH2 NMM alcoxi CH3CH20(CO)CH2 CHCHCH2 morfolino alcohol ninguno Crl2CHCp2Cri2 piperazina amina sustituida piperidina ácido pirazol éster pirrolidina CH2CH2OCH3 CH2CH2OH CH2NH2 CH2NHCH2CH2CH3 CH2NHCH3 CH2NHCHCH3CH3 CH3 CHCH3CH3 COOCH2CH3 Carbociclo aromático sustituido o no sustituido Heterociclo aromático sustituido o no sustituido Ninguno 10

Claims

REIVI N DICACION ES

1 . Un compuesto que tiene la estructura de la Fórmula I, o una forma isomérica, profármaco, tautomérica, sal aceptable para uso farmacéutico, N-óxido, o forma estereoisomérica de él: estructura de la fórmula 1 : en donde R8 representa un heterociclo sustituido o no sustituido, F representa (CH2)n, en donde n es un entero entre 1 y 6; Q representa un sustituyente amino secundario sustituido o no sustituido, un sustituyente amino terciario sustituido o no sustituido, o un heterociclo que contiene nitrógeno, sustituido o no sustituido. siempre que los siguientes com puestos estén excluidos: A51

2. El compuesto de la reivindicación 1 , caracterizado además porque n es 1 .

3. El compuesto de la reivindicación 1 o 2, caracterizado además porque R8 representa un anillo morfolino o piperazino.

4. El compuesto de cualq uiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado además porque Q representa pirrolidina sustituida o no sustituida, piperazina sustituida o no sustituida, o piperidina sustituida o no sustituida.

5. El compuesto de la reivindicación 1 , caracterizado además porque el compuesto se selecciona de los siguientes:

6. El compuesto de cualquiera de las fórmulas 1 a 4, en donde Q representa un sustituyente amino secundario sustituido, un sustituyente amino terciario sustituido, o un heterociclo q ue contiene nitrógeno, sustituido.

7. El compuesto de la reivindicación 6, caracterizado además porque uno o más sustituyentes, independientemente para cada caso, se selecciona de alquilo, oxo, acil amino, hidroxilo, carbonilo, sulfonilo, éster, amida, NR", hidroxi alquilo, alcoxi alquilo, arilo, heterociclilo, cicloalquilo y oligo(etilenglicol).

8. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado además porque R8 tiene la estructura: en donde Z es O o NR"; y R" representa H o alquilo inferior.

9. Un compuesto, o una forma isomérica, profármaco, tautomérica, sal aceptable para uso farmacéutico, N-óxido, o forma estereoisomérica de él, que tiene la estructura:

10. Un compuesto, o una forma isomérica, profármaco, tautomérica, sal aceptable para uso farmacéutico, N-óxido, o forma estereoisomérica de éi, q ue tiene la estructura:

1 1 . Un com puesto purificado o sintético, o una forma isomérica, profármaco, tautomérica, sal aceptable para uso farmacéutico, N-óxido, o forma estereoisomérica de él, que tiene la estructura:

12. Una composición farmacéutica que contiene un excipiente aceptable para uso farmacéutico y un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 hasta 1 1 .

13. Un método para tratar un trastorno hiperproliferativo, que comprende administrar a un animal un compuesto de cualq uiera de las reivindicaciones 1 hasta 1 1 .

14. Un método para inhibir la proliferación de una célula, que comprende poner en contacto la células con un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 hasta 11.

15. Un método para tratar una infección viral, que comprende administrar a un mamífero un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 hasta 11.

16. El método de la reivindicación 15, caracterizado además porque la infección viral es ocasionada por un virus de inmunodeficiencia humana (VIH).

17. Un método para el tratamiento o prevención de la alopecia inducida por quimioterapia o por terapia con radiación, que comprende administrar a un mamífero un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 hasta 11 conjuntamente con una o más sustancias quimioterapéuticas o terapia con radiación.

18. Un método para tratar un trastorno hiperproliferativo, que comprende administrar a un animal un compuesto de la reivindicación 11.

19. Un método para inhibir la proliferación de una célula, que comprende poner en contacto la célula con un compuesto de la reivindicación 11.

20. Un método para tratar una infección viral, que comprende administrar a un mamífero un compuesto de la reivindicación 11 o una composición que contiene una cantidad efectiva terapéuticamente de este compuesto.

21. El método de la reivindicación 20, caracterizado además porq ue la infección viral es ocasionada por un virus de inmunodeficiencia humana (VI H).

22. El uso de un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 hasta 1 1 para la fabricación de un medicamento.

23. El uso de la reivindicación 22, caracterizado además porque el med icamento es una sustancia farmacéutica para el tratamiento o prevención de un trastorno seleccionado de un trastorno hiperproliferativo, una infección viral, alopecia inducida por quimioterapia, y una enfermedad asociada con actividad de quinasa depend iente de ciclina.

24. Un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 hasta 1 1 , para su uso en el tratamiento de un trastorno.

25. El compuesto de la reivindicación 24, caracterizado además porque el trastorno se selecciona de un trastorno hiperproliferativo, una infección viral, alopecia inducida por quimioterapia, y una enfermedad asociada con actividad de quinasa dependiente de ciclina.

26. Un método para inhibir la quinasa dependiente de ciclina, que comprende administrar a un anfitrión que necesita de tal tratamiento, una cantidad efectiva de un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 hasta 1 1 , o una composición que contiene una cantidad efectiva terapéuticamente de dicho compuesto.

27. Un método para tratar trastornos asociados con q uinasa dependiente de ciclina, que comprende administrar a un anfitrión que necesita de tal tratam iento, una cantidad efectiva terapéuticamente de un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 hasta 1 1 o una composición que contiene una cantidad efectiva terapéuticamente de dicho compuesto.