CZ298556B6

CZ298556B6 - Derivát 4"-substituovaného-9-deoxo-9a-aza-9a-homoerythromycinu, zpusob a meziprodukty pro jeho prípravu a farmaceutické kompozice s jeho obsahem

Info

Publication number: CZ298556B6
Application number: CZ0442199A
Authority: CZ
Inventors: Scott Bronk@Brian; Anthony Letavic@Michael; Kaneko@Takushi; Vera Yang@Bingwei; Alan Glazer@Edward; Cheng@Hengmiao
Original assignee: Pfizer Products Inc.
Priority date: 1997-06-11
Filing date: 1998-05-29
Publication date: 2007-11-07
Also published as: US6777393B2; MY123354A; HUS1200028I1; DE69818665D1; CN1259136A; HUP0002209A2; DK0988310T3; TNSN98082A1; SK284171B6; DE69818665T2; WO1998056802A1; CN101691390A; EG24081A; HU228005B1; JP2000514098A; PA8452201A1; HK1088014A1; HN1998000086A; SI0988310T1; IS1998B

Abstract

Dericáty 4''-substituovaného-9-deoxo-9a-aza-9a-homoerythromycinu podle obecného vzorce I, zpusob a meziprodukty pro jeho prípravu a farmaceutické kompozice s jeho obsahem. Deriváty vzorce I jsou antimikrobiální prostredky, které jsou užitecné jako léciva pro lécbu bakteriálních infekcí nebo protozoálních infekcí u savcu, ryb nebo ptáku.

Description

Derivát 4-substituovaného-9-deoxo-9a-aza-9a-homoerythromycinu, způsob a meziprodukty pro jeho přípravu a farmaceutické kompozice s jeho obsahem

Oblast techniky

Vynález se týká nových C-4 substituovaných derivátů 9-deoxo-9a-aza-9a-homoerythromycinu A, které jsou užitečné jako antibakteriální a antiprotozoické prostředky u savců včetně člověka, stejně jako u ryb a ptáků. Vynález se také týká farmaceutických kompozic obsahujících nové sloučeniny a způsobů léčení bakteriálních infekcí a protozoických infekcí u savců, ryb a ptáků, podáváním nových sloučenin savcům, rybám a ptákům požadujícím takové léčení.

Makrolidová antibiotika jsou známa jako vhodná pro léčení širokého spektra bakteriálních infekcí a protozoických infekcí u savců, ryb a ptáků. Takováto antibiotika zahrnují různé deriváty erythromycinu a jako je azithromycin, který je komerčně dostupný a je uváděn v patentech US 4 474 768 a US 4 517 359, které jsou zde oba začleněny formou odkazu v celé své celistvosti. Jako azithromycin a jiná makrolidová antibiotika, nové makrolidové sloučeniny tohoto vynálezu mají silný účinek vůči různým bakteriálním infekcím a protozoickým infekcím, jak je dále popsáno.

Podstata vynálezu

Předložený vynález se týká sloučenin vzorce 1

a jejich farmaceuticky akceptovatelných solí, kde R¹ je H, hydroxy nebo methoxy,

R² je hydroxy,

R³ je (Ci-Cio)alkyl, (C2-Ci0)alkenyl, (C2-Cio)alkinyl, kyan, -CH2S(O)nR⁸, kde n je celé číslo v rozmezí od 0 do 2, -CH2OR⁸, -CH2N(OR⁹)R⁸, -CH2NR⁸R¹⁵, 4CH₂)_m((C₆-C₁₀)aryl) nebo -(CH₂)_m(5-10členný heteroaryl), kde m je celé číslo v rozmezí od 0 do 4 a kde předcházející

R³ skupiny jsou případně substituovány 1 až 3 R¹⁶ skupinami,

-1 CZ 298556 B6 nebo R² a R³ jsou vzaty dohromady k vytvoření oxazolylového kruhu jak je znázorněno níže

R⁴ je H, -C(O)R⁹, -C(O)OR⁹, -C(O)NR⁹R¹⁰ nebo chránící skupina hydroxy,

R⁵ je -SR⁸, -(CH2)n(O)R⁸, kde n je 0 nebo 1, (C,-C]0)alkyl, (C₂-C₁₀)alkenyl, (C₂-C₁₀)alkinyl, -(CH₂)_m((C₆-Cio)atyl), nebo -(CH₂)_m(5-10členný heteroaiyl), kde m je celé číslo v rozmezí od 0 do 4 a kde předcházející R⁵ skupiny jsou případně substituovány 1 až 3 R¹⁶ skupinami, každý R⁶ a R⁷ je nezávisle H, hydroxy, (Ci-C₆)alkoxy, (Ci-C₆)alkyl, (C₂-C₆)alkenyl, (C₂-C₆)10 alkinyl, ~(CH₂)_m((C6-Cio)aryl) nebo -(CH₂)_m(5-10členný heteroaryl)), kde m je celé číslo v rozmezí od 0 do 4, každý R⁸ je nezávisle H, (Cj-C10)alkyl, (C2-Ci0)alkenyl, (C2-Ci0)alkinyl, -(CH2)qCRⁿR’²(CH2)_rNR¹³R¹⁴, kde q a r jsou každý nezávisle celé číslo v rozmezí od 0 do 3 s výjimkou, že q a r nejsou oba 0, -(CH₂)_m((C₆-Cio)-aiyl) nebo -(CH₂)_m(5-10členný heteroaryl), kde m je celé číslo v rozmezí od 0 do 4 a kde předcházející R⁸ skupiny s výjimkou H jsou případně substituovány 1 až 3 R¹⁶ skupinami,

8·· 81515 8 nebo kde R je jako -CH₂NR R , R a R mohou být vzaty dohromady, čímž se vytvoří

4-10členný nasycený monocyklický nebo polycyklický nasycený kruh nebo 5-10členný heteroarylový kruh, kde uvedené nasycené a heteroarylové kruhy případně zahrnují 1 až 2 heteroatomy vybrané z O, S a -N(R⁸)- navíc k dusíku, ke kterému jsou R¹⁵ a R⁸ připojeny, přičemž nasycený kruh případně zahrnuje 1 až 2 dvojné nebo trojné vazby uhlík-uhlík, a tyto nasycené a heteroaiylové kruhy jsou případně substituovány 1-3 R¹⁶ skupinami, každý R⁹ a R¹⁰ je nezávisle H nebo (Ci-C₆)alkyl, každý R¹¹, R¹², R¹³ a R¹⁴ jsou nezávisle vybrány zH, (Ci-Cio)alkyl, -(CH₂)_m((C₆-Ci₀)aryl), a -(CH₂)_m(5-10členný heteroaryl), kde m je celé číslo v rozmezí od 0 do 4 a kde předcházející

R¹¹, R¹², R¹³ a R¹⁴ skupiny, s výjimkou H, jsou případně substituovány 1-3 R¹⁶ skupinami, nebo R¹¹ a R¹³ jsou vzaty dohromady, čímž se vytvoří -(CH₂)_q-, kde p je celé číslo od 0 do 3, takže se vytvoří 4 až 7členný nasycený kruh, který případně zahrnuje 1 až 2 dvojné nebo trojné vazby uhlík-uhlík, nebo R¹³ a R¹⁴ jsou vzaty dohromady, čímž se vytvoří 4 až lOčlenný monocyklický nebo polycyklický nasycený kruh nebo 5 až 1 Očlenný heteroarylový kruh, přičemž tyto nasycené a heteroaiylové kruhy případně zahrnují 1 až 2 heteroatomy vybrané z O, S a -N(R⁸)- navíc k dusíku, ke kterému jsou připojeny 1 nebo 2 dvojné nebo trojné vazby uhlík-uhlík a tento nasycený a heteroarylový kruh jsou případně substituovány 1 až 3 R¹⁶ skupinami,

R¹⁵ je H, (Ci-C₁₀)alkyl, (C₂-C₁₀)alkenyl, nebo (C₂-Ci₀)alkinyl, kde předcházející R¹⁵ skupiny jsou případně substituovány 1 až 3 substituenty nezávisle vybranými z halogenu a-OR⁹, každý R¹⁶ je nezávisle vybrán z halogen, kyan, nitro, trifluormethyl, azido, -C(O)R¹⁷, -C(O)OR¹⁷, -C(O)OR¹⁷, -OC(O)OR¹⁷, -NR⁶C(O)R⁷, -C(O)NR⁶R⁷, -NR⁶R⁷, hydroxy, (Ci-C₆)alkyl, (Ci-C₆)alkoxy, -(CH₂)_m((C₆-C_]0)aryl) a-(CH₂)_m(5-l Očlenný heteroaryl), kde m je celé číslo v rozmezí od 0 do 4 a kde arylové a heteroarylové substituenty jsou případně

-2CZ 298556 B6 substituovány 1 nebo 2 substituenty nezávisle vybranými z halogen, kyan, nitro, trifluormethyl, azido, -C(O)R¹⁷, -C(O)OR¹⁷, -C(O)OR¹⁷, -OC(O)OR¹⁷, -NR⁶C(O)R⁷, -C(O)NR⁶R⁷, -NR⁶R⁷, hydroxy, (Ci-C₆)alkyl a (Ci-Cójalkoxy, každý R¹⁷ je nezávisle vybrán z H(C]-C6)alkyl, (C2-C10)alkenyl, (C2-C10)alkinyl, -(CH2)m ((C6-Cio)aryl) a -{CH2)m- (5-10členný heteroaryl), kde m je celé číslo v rozmezí od 0 do 4, s podmínkou, že R⁸ není H, když R³ je -CH2S(O)_nR⁸.

io Výhodné sloučeniny vzorce i zahrnují sloučeniny, kde R¹ je hydroxy, R² je hydroxy, R³ je -CH2NR⁸R¹⁵ nebo -CH2SR⁸ a R⁴ je H.

Jiné výhodné sloučeniny vzorce i zahrnují sloučeniny, kde R¹ je hydroxy, R² je hydroxy, R³ je -CH2NR⁸R¹⁵, R⁴ je H, R¹⁵ je R⁸ jsou každý vybrán zH, (Ci-Cio)alkyl, (C2-Cio)alkenyl a (C₂-Cio)alkinyl, kde R¹⁵ a R⁸ skupiny s výjimkou H, jsou případně substituovány 1 nebo 2 substituenty nezávisle vybranými z hydroxy, halogen a (Ci-C₆)alkoxy. Specifické výhodné sloučeniny mající předcházející obecnou strukturu zahrnují ty sloučeniny, kde R¹⁵ je buď H, neboje vybrán z následujících skupin, ze kterých je R⁸ také nezávisle vybrán: methyl, ethyl, allyl, n-butyl, izobutyl, 2-methoxyethyl, cyklopentyl, 3-methoxypropyl, 3-ethoxypropyl, n-propyl, izopropyl,

2-hydroxyethyl, cyklopropyl, 2,2,2-trifluoethyl, 2-propinyl, .seZ:-butyl, fórc-butyl a n-hexyl.

Jiné výhodné sloučeniny vzorce I zahrnují ty, kde R¹ je hydroxy, R² je hydroxy, R³ je -CH2NHR⁸, R⁴ je H a R⁸ je -(CH2)_m((C6-C₁₀)aryl), kde m je celé číslo v rozmezí od 0 do 4. Specifiky výhodné sloučeniny mající přecházející obecnou strukturu zahrnují ty, kde R⁸ je fenyl nebo benzyl.

Jiné výhodné sloučeniny vzorce ljzahmují ty sloučeniny, kde R¹ je hydroxy, R² je hydroxy, R³ je -CH₂NR R , R je H a R a R jsou vzaty dohromady, čímž se vytvoří nasycený kruh. Zvlášť výhodné sloučeniny mající předcházející obecnou strukturu zahrnují ty sloučeniny, kde R¹⁵ a R⁸ jsou vzaty dohromady k vytvoření piperidino, trimethylenimino, nebo morfolinového kruhu.

Jiné výhodné sloučeniny vzorce 1 zahrnují ty, kde R¹ je hydroxy, R² je hydroxy, R³ je -CH₂NR R , R je H a R a R jsou vzaty dohromady k vytvoření heteroarylového kruhu, případně substituovaného 1 nebo 2 (C]-C₆)alkylovými skupinami. Zvlášť výhodné sloučeniny mají35 cí předcházející obecnou strukturu zahrnují ty, kde R¹⁵ a R⁸ jsou vzaty dohromady k vytvoření pyrrolidino, triazolyl nebo imidazolylového kruhu, kde uvedené heteroarylové skupiny jsou případně substituovány 1 nebo 2 methylovými skupinami.

Jiné výhodné sloučeniny vzorce i zahrnují ty, kde R¹ je hydroxy, R² je hydroxy, R³ je -CH₂SR⁸,

R⁴ je H a R⁸ je vybrán z (Ci-Cio)alkyl, (C2-C10)alkenyl a (C2-Cio)alkinyl, kde uvedené R⁸skupiny jsou případně substituovány 1 nebo 2 substituenty nezávisle vybranými z hydroxy, halogen a (Ci-C6)alkoxy.

Zvlášť výhodné sloučeniny mající předcházející obecnou strukturu zahrnující sloučeniny, kde R⁸ je methyl, ethyl nebo 2-hydroxyethyl.

Jiné výhodné sloučeniny vzorce i zahrnují sloučeniny, kde R¹ je hydroxy, R² je hydroxy, R⁴ je H a R³ je vybrán z (Ci-Cio)alkyl, (C₂-C_]0)alkenyl a (C₂-Cio)alkinyl, kde uvedené R³ skupiny jsou případně substituovány 1 nebo 2 substituenty nezávisle vybranými z hydroxy, -C(O)R¹⁷,

-NR⁶R⁷, halogen, kyan, azido, 5 až lOčlenný heteroaryl a (C]-C₆)alkoxy.

Zvlášť výhodné sloučeniny mající předcházející obecnou strukturu zahrnují sloučeniny, kde R³ je methyl, allyl, vinyl, ethinyl, 1-methyl-1-propeny 1, 3-methoxy-l-propinyl, 3-dimethylamino-lpropinyl, 2-pyridylethinyl, 1-propinyl, 3-methoxy-l-propinyl, 3-hydroxy-l-propenyl, 355 hydroxypropyl, 3-methoxy-l-propenyl, 3-methoxypropyl, 1-propinyl, n-butyl, ethyl, propyl, 2-3CZ 298556 B6 hydroxyethyl, formylmethyl, 6-kyan-l-pentinyl, 3-dimethylamino-l-propenyl nebo 3—dimethylaminopropyl.

Jiné výhodné sloučeniny vzorce i zahrnují ty, kde R¹ je hydroxy, R² je hydroxy, R⁴ je H a R³ je 5 -(CH2)m(5-10členný heteroaryl), kde m je celé číslo v rozmezí 0 až 4. Zvlášť výhodné sloučeniny mající předcházející obecnou strukturu zahrnují ty, kde R³ je 2-thienyl, 2-pyridyl l-methyl-2-imidazolyl, 2-furyl nebo l-methyl-2-pyrrolyl.

Jiné výhodné sloučeniny vzorce i zahrnují ty, kde R¹ je hydroxy, R² je hydroxy, R⁴ je H a R³ je ío (CH₂)_m- ((C₆-Cio)aryl), kde m je celé číslo v rozmezí od 0 do 4, Zvlášť výhodné sloučeniny mající předcházející obecnou strukturu zahrnují ty, kde R³ je fenyl.

Specifické sloučeniny vzorce i zahrnují ty, kde R² a R³ jsou vzaty dohromady k vytvoření oxazolylového kruhu jak je uvedeno níže

kde R⁵ má výše uvedený význam.

Specifické sloučeniny vzorce I zahrnují ty, kde R³ je vybrán z následujícího vzorce

kde X³ je O, S nebo -N(R¹⁵)- a kde -OR⁹ skupina může být připojena k jakémukoli dostupnému uhlíku na fenylové skupině.

Vynález se také týká farmaceutické kompozice pro léčení bakteriální infekce nebo protozoické infekce u savců, ryb nebo ptáků, která obsahuje terapeuticky účinné množství sloučeniny vzorce i nebo její farmaceuticky akceptovatelné soli a farmaceuticky akceptovatelný nosič.

Vynález se také týká způsobu léčení bakteriální infekce nebo protozoické infekce u savců, ryb nebo ptáků, které zahrnuje podávání těmto samcům, rybám nebo ptákům, terapeuticky účinného množství sloučeniny vzorce i nebo její farmaceuticky akceptovatelné soli.

Výraz „léčení“ jak je zde použit, pokud není označeno jinak, zahrnuje léčení nebo prevenci bakteriální infekce nebo protozoické infekce, jak je zajištěno ve způsobu tohoto vynálezu.

Jak je zde použito, pokud není stanoveno jinak, výrazy „bakteriální infekce“ a „protozoická 35 infekce“ zahrnují bakteriální infekce a protozoické infekce, které se vyskytují u savců, tyb a ptáků, stejně jako poruchy vztažené k bakteriálním infekcím a protozoickým infekcím, které mohou být léčeny nebo předcházeny podáváním antibiotik jako jsou sloučeniny tohoto vynálezu.

Takovéto bakteriální infekce a protozoické infekce a poruchy vztažené k těmto infekcím zahrnují 40 následující, jako je pneumonie, zánět středního ucha, sinusitida, bronchitida, tonsilitida a mastoiditida vztažené k infekci vyvolanou Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae,

Moraxella catarrhalis, Staphylococcus aureus nebo Peptostreptococcus spp., faryngitida,

-4CZ 298556 B6 reumatická horečka a glomerulonefritida vztažené k infekci vyvolané Streptococcus pyegenes, skupiny C a G streptokoků, Clostridium diptheriae, nebo Actinobacillus haemolyticum, infekce respiračního traktu vztažené k infekci vyvolané Mycoplasma pneumoniae, Legionella pneumophila, Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, nebo Chlamydia pneumoniae, nekomplikované kožní infekce a infekce měkkých tkání, abscesy a osteomyelitidy a puerperální horečka, vztažené k infekci vyvolané Staphylococcus aureus, koagulasopozitivními stafylokoky (to je S. epidermidis, S. hemolyticus atd.), Streptococcus pyogenes, Streptococcus agalactiae, streptokokálními skupinami C-F (malobuněčnými streptokoky), viridantními streptokoky, Corynebacterium minutissimum, Clostridium spp. nebo Bartonella haeselae, nekomplikované infekce močového traktu vztažené k infekci vyvolané Staphylococcus saprophyticus nebo Enterococcus spp., uretritida a cervicitida a sexuálně přenášené nemoci vztažené k infekci vyvolané Chlamydia trachomatis, Haemophilus ducreyi, Treponema pallidum, Ureplasma urealyticum nebo Neiserria gonorrheae, toxinové nemoci vztažené k infekci vyvolané S. aureus (otrava potraviny a syndrom toxického šoku) nebo skupinami A, B a C streptokoků, vředy vztažené k infekci vyvolané Helicobacter pylori, systemické febrilní syndromy vztažené k infekci vyvolané Borrelia recurrentis, Lymeská nemoc vztažená k infekci vyvolané Borrelia burgdorferi, konjuktivitida, keratitida a dakrocystitida, vztažené k infekci vyvolané Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae, S. aureus, S. pneumoniae, S. pyogenes, H. influenzae nebo Listeria spp., rozsevná mycobacterium avium komplexní (MAC) nemoc vztažená k infekci vyvolané

Mycobacterium avium nebo Mycobacterium intracellulare, gastroenteritida vztažená k infekci vyvolané Campylobacter jejuni, intestinální protozoa vztažená k infekci Cryptosporidium spp, odontogenická infekce vztažená k infekcí viridantními streptokoky, trvalý kašel vztažený k infekci vyvolané Bordetella pertussis, plynová gangréna vyvolaná infekcí Clostridium perfringens nebo Bacteroides spp., a aterosklerosa vztažená k infekci vyvolané Helicobacter pylori nebo Chlamydia pneumoniae.

Bakteriální infekce a protozoické infekce a poruchy vztažené k těmto infekcím, které mohou být léčeny nebo předcházeny u zvířat zahrnují následující infekce a poruchy: bovinní respirační nemoc vztaženou k infekci vyvolané P. haem., P. multocida, Mycoplasma bovis nebo Bordetella spp., kravská enterická nemoc vztažená k infekci vyvolané E. coli nebo protozoy (to je kokcidii, kryptosporidii atd.), mastitida kravského vemene vztažená k infekci vyvolané Staph. aureus, Střep, uberis, Střep, agalastiae, Střep, dysgalactiae, Klabsiella spp., Corynebacterium nebo enterococcus spp., respirační nemoc vepřů vztažená k infekci vyvolané A. pleuro., P. mutocida nebo Mycoplasma spp., enterická nemoc vepřů vztažená k infekci vyvolané E. coli, Lawsonia intracellularis, Salmonella nebo Serpulina hyodyisintariea, kulhavka krav vztažená k infekci vyvolané Fusobacterium spp., metritida krav vztažená k infekci vyvolané E. coli, kravského bradavice vztažené k infekci vyvolané Fusobacteriumnecrophorum nebo Bacteroides nodosus, zánět spojivek krav vztažený k infekci vyvolané Moraxella bovis, předčasná aborce krav vztažená k infekci protozoy (například neosporium), infekce urinámího traktu u psů a koček vztažené k infekci vyvolané E. coli, infekce kůže a měkkých tkání u psů a koček vztažené k infekci vyvolané Staph. Epidermidis, Staph. intermedius, coagulase neg. Staph. nebo P. multocida, a infekce zubů nebo dutiny ústní u psů a koček, vztažené k infekci vyvolané Alcaligenes spp., Bacteroides spp., Clostridium spp., Enterobacter spp., Eubacterium, Peptostreptococcus, Porphyromonas nebo Prevotella.

Jiné bakteriální infekce a protozoické infekce a poruchy vztažené k těmto infekcím, které mohou být léčeny nebo předcházeny způsobem tohoto vynálezu, jsou odkázány na J.P. Sanford aj., „The Sanford Guide To Antimicrobial Therapy“, 26. vydání, (Antimicrobial Therapy, lne., 1996).

Předložený vynález se také týká způsobu přípravy výše uvedené sloučeniny vzorce i nebo její farmaceuticky akceptovatelné soli, kde R³ je -CH2S(O)nR⁸, -€H2OR⁸ nebo -CH2NR⁸R¹⁵, kde n, R¹⁵ a R⁸ mají výše uvedený význam, za podmínky, že R⁸ není H, když R³ je -CH2S(O)_nR⁸, který zahrnuje zpracování sloučeniny vzorce 5

-5CZ 298556 B6

kde R¹ a R⁴ mají výše uvedený význam se sloučeninou vzorce HSR⁸, HOR⁸ nebo HNR¹⁵R⁸, kde n, R¹⁵ a R⁸ mají výše uvedený význam, načež případně následuje oxidace -SR⁸ substituentu, čímž se vytvoří -S(O)R⁸ nebo -S(O)₂R⁸.

V dalším aspektu výše uvedeného způsobu přípravy sloučeniny vzorce 1 nebo její farmaceuticky akceptovatelné soli, se výše uvedená sloučenina vzorce 5 připraví zpracováním sloučeniny vzorce 4

kde

R¹ a R⁴ mají výše uvedený význam, s (CH₃)₃S(O)_nX², kde n je 0 nebo 1 a X²je halogen, -BF4 nebo -PF₆, výhodně jod nebo -BF₄, v přítomnosti zásady jako je Zerc-butoxid draselný, Zerc-butoxid sodný, ethoxid sodný, hydrid sodný, 1,1,3,3-tetramethylguanid, l,8-diazabicyklo[5,4,0]undec-7-en, l,5-diazabicyklo[4,3,0]non-5-en, hexamethyldisilazid draselný (KHMDS), ethoxid draselný nebo methoxid sodný, výhodně KHDMS nebo zásady obsahující sodík jako je hydrid sodný.

-6CZ 298556 B6

Předložený vynález se také týká výše uvedených sloučenin vzorců 4 a 5 které, jak je označeno výše, jsou užitečné při přípravě výše uvedených sloučenin vzorce 1 a jejich farmaceuticky akceptovatelných solí.

Výraz „chránící skupiny hydroxy“ jak je zde použit, pokud není označeno jinak, zahrnuje acetyl, benzyloxykarbonyl a různé chránící skupiny hydroxy, dobře známé odborníkům v oboru, včetně skupin uvedených v T.W. Greene, P.G.M. Wuts, „Protective Groups in Organic Synthesis“, (J. Wileyand Sons, 1991).

ío Výraz „halogen“ jak je zde použit, pokud není stanoveno jinak, zahrnuje fluor, chlor, brom nebo jodVýraz „alkyl“, jak je zde použit, pokud není označeno jinak, zahrnuje nasycené monovalentní uhlovodíkové skupiny mající nerozvětvenou, cyklickou nebo rozvětvenou část, nebo jejich směsi.

Je třeba rozumět, že když jsou uvažovány cyklické skupiny, alespoň 3 uhlíky v uvedeném alkylu musí být přítomny. Takové cyklické skupiny zahrnují cyklopropyl, cyklobutyl a cyklopentyl. Výraz „alkoxy“ jak je zde použit, pokud není označeno jinak, zahrnuje -O-alkylové skupiny, kde alkyl má výše uvedený význam.

Výraz „aryl“ jak je zde použit, pokud není označeno jinak, zahrnuje organickou skupinu odvozenou do aromatického uhlovodíku odstraněním vodíku, jako je fenyl nebo naftyl.

Výraz „5 až lOčlenný heteroaryl“ jak je zde použit, pokud není označeno jinak, zahrnuje aromatické heterocyklické skupiny obsahující 1 nebo více heteroatomů, z nichž každý je vybrán z O,

S a N, přičemž každá heterocyklická skupina má od 5 do 10 atomů ve svém kruhovém systému. Příklady vhodných 5 až ÍOčlenných heteroarylových skupin zahrnují pyridinyl, imidazolyl, pyrimidinyl, pyrazolyl, (1,2,3)— a (l,2,4)-triazolyl, pyrazinyl, tetrazolyl, furyl, thienyl, izoxazolyl, oxazolyl, pyrrolyl a thiazolyl.

Výraz „farmaceuticky akceptovatelná sůl“ nebo „farmaceuticky akceptovatelné soli“ jak je zde použit, pokud není označeno jinak, zahrnuje soli kyselých nebo zásaditých skupin, které mohou být přítomny ve sloučeninách tohoto vynálezu.

Sloučeniny tohoto vynálezu, které jsou ve své podstatě zásadité, jsou schopny tvořit širokou rozmanitost sloučenin s různými organickými a anorganickými kyselinami. Kyseliny, které mohou být použity k přípravě farmaceuticky akceptovatelných adičních solí s kyselinou těchto zásaditých sloučenin jsou ty, které tvoří netoxické adiční soli s kyselinou, to je soli obsahující farmakologicky akceptovatelné anionty, jako je hydrochlorid, hydrobromid, hydrojodid, nitrát, sulfát, bisulfát, fosfát, kyselý fosfát, izonikotinát, acetát, laktát, salicylat, citrát, kyselý citrát, tartarant, pantothenát, bitartarát, askorbát, sukcinát, malát, gantisinát, fumarát, glukonát, glukoronát, sacharát, formát, benzoát, p-toluensulfonát a pamoatové (to je 1,1'-methylenbis(2-hydroxy3-nafitoatové)) soli. Sloučeniny tohoto vynálezu, které zahrnují aminoskupiny, mohou tvořit farmaceuticky akceptovatelné soli s různými aminokyselinami, navíc k výše uvedeným kyselinám.

Ty sloučeniny tohoto vynálezu, které jsou ve své povaze kyselé, jsou schopny tvořit zásadité soli s různými farmakologicky akceptovatelnými kationty. Příklady takovýchto solí zahrnují soli alkalických kovů nebo kovů alkalických zemin a zejména vápníku, hořčíku, sodíku a draslíku pro sloučeniny tohoto vynálezu.

Určité sloučeniny tohoto vynálezu mohou mít asymetrická centra a tudíž existují v různých enantiomemích a diastereoizomemích formách. Tento vynález se týká použití všech optických izomerů a stereoizomerů sloučenin tohoto vynálezu a jejich směsí a všech farmaceutických kompozic a způsobů léčení, které je mohou využívat a obsahovat.

-7CZ 298556 B6

Předložený vynález zahrnuje sloučeniny tohoto vynálezu a jejich farmaceuticky akceptovatelné soli, kde jeden nebo více vodíků, uhlík nebo jiné atomy jsou nahrazeny jejich izotopy. Takovéto sloučeniny mohou být užitečné jako výzkumné a diagnostické nástroje při farmakokinetických studiích metabolismu a při vazebních zkouškách.

Detailní popis vynálezu

Sloučeniny tohoto vynálezu mohou být připraveny podle schématů 1 až 3 uvedených dále a popilo su, který následuje.

Schéma 1

-8CZ 298556 B6 pokračování schématu 1

-9CZ 298556 B6

Schéma 2

- 10CZ 298556 B6

Schéma 3

pokračování schématu 3

- 12CZ 298556 B6 pokračování schématu 3

Sloučeniny předloženého vynálezu se snadno připraví. Pokud jde o schémata uvedená výše, výchozí sloučenina vzorce 2 může být připravena podle jedné nebo více metod dobře známých odborníkům v oboru včetně syntézních metod popsaných v patentech US 4 474 768 a US 4 517 359, které byly uvedeny výše.

- 13 CZ 298556 B6

Ve stupni 1 schématu 1, C-2' hydroxy skupiny může být selektivně chráněna zpracováním sloučeniny vzorce 2 s jedním ekvivalentem acetanhydridu v dichlormethanu v nepřítomnosti vnější zásady, čímž se vytvoří sloučenina vzorce 3, kde R⁴ je acetyl. Chrániči skupina acetylu může být odstraněna zpracováním sloučeniny vzorce 3 s methanolem při 23 až 65 °C po dobu 10 až 48 hodin. C-2' hydroxyskupina může být také chráněna jinými chránícími skupinami hydroxy dobře známými odborníkům v oboru, jako je benzyloxykarbonylová (Cbz) skupina.

C-9a aminoskupina může také vyžadovat ochranu před provedením dalších syntézních modifikací. Vhodné chránící skupiny pro aminoskupinu jsou Cbz a t-butyloxykarbonylové (Boc) skupiny, ίο K chránění C-9a aminoskupiny může být makrolid zpracován s t-butyldikarbonatem v bezvodém tetrahydrofuranu (THF) nebo benzyloxykarbonyl-N-hydroxysukcinimidesterem nebo benzylchlorformatem k ochraně aminoskupiny jako jejího t-butyl nebo benzylkarbamatu. Jak

C-9a amino, tak C-2' hydroxy skupina mohou být chráněny Cbz skupinou v jednom stupni zpracováním sloučeniny vzorce 2 s benzylchlorformatem v THF a vodě.

Boc skupina může být odstraněna kyselým zpracováním a Cbz skupina může být odstraněna konvenční katalytickou hydrogenací. V následujícím popisu se předpokládá, že C-9a aminoskupina a C-2' hydroxyskupina jsou chráněny a deprotektovány jak by považovali za vhodné odborníci v oboru.

Ve stupni 2 schématu 1 C^l hydroxyskupina sloučeniny vzorce 3 se oxiduje na odpovídající keton způsoby známými odborníkům v oboru včetně jedné nebo více metod popsaných v Journal Of Antibiotics, 1988, str. 1029-1047.

Například keton vzorce 4 může být připraven s DMSO a vhodným aktivačním prostředkem. Typické reakční podmínky pro oxid zahrnují:

(a) Moffattovu oxidaci, která využívá V-ethyl-A^<-(V_>V-dimethylaminopropyl)karbodiimid a DMSO v přítomnosti pyridiniumtrifluoracetatu, nebo (b) Swemovu oxidaci, při které oxylylchlorid a DMSO v CH₂C1₂ je následován přídavkem triethylaminu nebo alternativně anhydrid kyseliny octové a DMSO v CH₂C1₂ je následováno přídavkem triethylaminu.

Ve stupni 3 schématu 1 se sloučenina vzorce 4 zpracuje R³MgX* nebo R³-Li a Mg(X’)₂, kde X¹ je halogenid jako je chlorid nebo bromid v rozpouštědle jako je THFM, ethylenglykoldimethylether (DME), diizopropylether, toluen, diethylether nebo tetramethylethylendiamin (TMEDA), hexany nebo směs dvou nebo více předcházejících rozpouštědel, výhodně etherovém rozpouštědle, při teplotě v rozmezí od asi -78 °C do asi teploty místnosti (20 až 25 °C), čímž se vytvoří sloučenina vzorce i, kde R² je hydroxy a R¹, R³ a R⁴ mají výše uvedený význam.

Schéma 2 znázorňuje přípravu sloučenin vzorce i za použití epoxidového meziproduktu. Ve stupni 1 schématu 2 může být sloučenina vzorce 5 vytvořena dvěma způsoby.

Při jednom způsobu (způsob A) se sloučenina vzorce 4 zpracuje s (CH₃)₃ s (O)X², kde X² je halogen, -BF₄ nebo -PF₆, výhodně jod, v přítomnosti zásady jako je terc-butoxid draselný, ethoxid sodný, terc-butoxid sodný, hydrid sodný, 1,1,3,3-tetramethylguanidin, 1,8-diazabicyklo[5,4,0]unde-7-en, l,5-diazabicyklo[4,3,0]non-5-en, ethoxid draselný, nebo methoxid sodný, výhodně sodík obsahující zásadu, jako je hydroxid sodný, v rozpouštědle jako je THF, etherové rozpouštědlo, dimethylformamid (DMF) nebo methylsulfoxid (DMSO) nebo směs dvou nebo více předcházejících rozpouštědel při teplotě v rozmezí asi 0 až asi 60 °C, čímž se vytvoří sloučenina vzorce 5 ve které převažuje následující konfigurace epoxidové skupiny

-14CZ 298556 B6

Při druhém způsobu (způsobu B), sloučenina vzorce 4 se zpracuje s (CH₃)₃SX², kde X² je halogen, -BF₄ nebo -PF₆, výhodně -BF₄, v přítomnosti zásady, jako je Zerc-butoxid draselný, Zerc-butoxid sodný, ethoxid sodný, hydrid sodný, 1,1,3,3-tetramethylguanidin, 1,8-diazabicyklo5 [5,4,0]undec-7-en, l,5-diazabicyklo[4,3,0]non-5-en, ethoxid draselný, hexamethyldisilazid draselný (KHMDS) nebo methoxid sodný, výhodně KHMDS, v rozpouštědle jako je THF, etherové rozpouštědlo, DMF nebo DMSO nebo směs dvou nebo více předcházejících rozpouštědel, při teplotě v rozmezí -78 °C až asi 60 °C, čímž se vytvoří sloučenina vzorce 5 kde převažuje následující uspořádání epoxidové skupiny

Ve stupni 2 schématu 2 sloučenina vzorce 5 může být převedena na sloučeninu vzorce I, kde R²je hydroxy a R³ je skupina, která je připojena k C-4 uhlíku přes methylenovou skupinu, stejně jako kde R³ je -CH2NR¹⁵R⁸ nebo - CH2S(O)_nR⁸, kde n, R¹⁵ a R⁸ mají výše uvedený význam.

K přípravě sloučeniny vzorce 1, kde R³ je -CH₂NR¹⁵R⁸ sloučenina vzorce 5 může být zpracována se sloučeninu vzorce HNR¹⁵R⁸, kde R¹⁵ a R⁸ mají výše uvedený význam, v nepřítomnosti nebo přítomnosti polárního rozpouštědla jako je voda, methanol nebo THF nebo směs předcházejících rozpouštědel, při teplotě v rozmezí od asi teploty místnosti do asi 100 °C, výhodně asi 60 °C, případně v přítomnosti halogenidového reagentu, jako je jodid draselný, chloristan lithný, chloristan hořečnatý, tetrafluorborat lithný, pyridiniumhydrochlorid nebo tetraalkyamoniumhalogenidové činidlo jako je tetrabutylamoniumjodid.

K přípravě sloučeniny vzorce 1, kde R³ je -CH2S(O)nR⁸, kde N a R⁸ mají výše uvedený význam, se sloučenina vzorce 5 může zpracovat se sloučeninou vzorce HSR⁸ v přítomnosti K2CO₃, KI nebo methoxidu sodného v aromatickém rozpouštědle jako je methanol, benzen nebo toluen při teplotě v rozmezí asi teploty místnosti do asi 120 °C. Jak je vhodné, sírová skupina může být oxidována na -SO- nebo -SO₂- způsoby známými odborníkům v oboru.

K přípravě sloučeniny vzorce i, kde R³ je -CH2SR⁸ a R⁸ je -(CH2)_qCR”R¹² (CH₂)_rNR¹³R¹⁴, kde substituenty skupiny R⁸ jsou definovány výše, může být sloučenina vzorce 5 zpracována se sloučeninou vzorce HS-(CH2)qCR¹¹R¹²(CH2)_r-NPhth, kde NPhth představuje ftalimido, ajodidem draselným, čímž se vytvoří sloučenina vzorce i, kde R³ je -CH2S(CH2)qCRⁿR¹²(CH2)_rNH₂, po odstranění ftalimidové skupiny, může být dále modifikována jak je potřeba.

Při analogickém způsobu sloučenina vzorce i kde R³ je -CH2NR¹⁵R⁸ a R⁸ je -(CH2)₍₁CR^I1R¹²(CH2)rNR¹³R¹⁴, může být připravena zpracováním sloučeniny vzorce 5 s buď sloučeninou vzorce HNR⁹-(CH2)_qCR¹¹R¹²(CH2)r-NR¹³R¹⁴, nebo se sloučeninou vzorce H2N-(CH2)qCR¹¹R¹²(CH₂)_r-NH₂, načež následuje redukční alkylace atomů dusíku.

-15 CZ 298556 B6

Za použití stejné nebo analogické metody může být připravena sloučenina vzorce 1, kde R³ je -CH₂OR⁸ a R⁸ má výše uvedený význam, zpracování sloučeniny vzorce 5 se sloučeninou vzorce HOR⁸.

Schéma 3 znázorňuje přípravu sloučenin vzorce J_, ve kterém R² a R³ jsou vzaty dohromady k vytvoření oxazolylové skupiny. Ve stupni 1 schématu 3 se sloučenina vzorce 5 zpracuje s azidem sodným v přítomnosti NH4CI v methanolu nebo vodě nebo ve směsi dvou rozpouštědel při teplotě v rozmezí od asi 0 °C do asi 100 °C, výhodně asi 80 °C, čímž se vytvoří sloučenina vzorce 6.

Ve stupni 2 schématu 3 může být sloučenina vzorce 6 převedena na odpovídající amin vzorce 7 pomocí běžné katalytické hydrogenace. Výhodně se tato hydrogenace provede za použití Pd (10% na uhlíku) prášku pod H₂ atmosférou (1 atm). Výsledný amin vzorce 7 může být převeden na různé sloučeniny vzorce i, kde R³ je -CH₂NR¹⁵R⁸ za použití konvenčních syntézních metod jako je redukční aminace.

Ve stupni 3 schématu 3 sloučenina vzorce 7 může být převedena na sloučeninu vzorce I, kde R² a R³ jsou vzaty dohromady, jak je znázorněno při zpracování sloučeniny vzorce 7 se sloučeninou vzorce R⁵-CN, R⁵-C=N(OCH3), R⁵-C=N(OC2H₅), R⁵-C(O)C1, nebo R-COOH, kde R⁵ má výše uvedený význam, s výjimkou, že není NH₂, v přítomnosti nebo nepřítomnosti kyseliny jako je HC1 nebo Lewisova kyselina, jako je ZnCl₂ nebo BF₄Et₃O nebo zásady jako je NaOH nebo TEA v rozpouštědle jako je THF, chlorovaný uhlovodík (jako je CH₂C1₂ nebo chlorbenzen) při teplotě v rozmezí od asi teploty místnosti k refluxu.

Při přípravě odpovídající sloučeniny, kde R⁵ je amino, sloučenina vzorce 5 se zpracuje s BrCN a octanem sodným v methanolu při teplotě v rozmezí od asi teploty místnosti k refluxu.

V alternativním případě se sloučenina vzorce 7 může pracovat jak je označeno ve stupních 4 a 5 schématu 3. V stupni 4 schématu 3 se sloučenina vzorce 7 zpracuje s thiokarbonyldiimidazoolem v methylenchloridu při teplotě v rozmezí od asi 0 °C do teploty místnosti, čímž se vytvoří sloučenina vzorce 13. Ve stupni 5 schématu 3 se sloučenina vzorce 13 zpracuje s R⁵-X’, kde X¹ je halogenid jako je brom nebo jod, a zásadou jako je methoxid sodný v rozpouštědlem jako je methanol nebo aceton nebo jejich směs, při teplotě v rozmezí od 0 °C do teploty místnosti.

Sloučeniny předloženého vynálezu mohou mít asymetrické atomy uhlíku a tudíž existují v různých enantiomemích a diastereoizomemích formách. Diastereoizomemí směsi mohou být odděleny na své jednotlivé diastereoizomery na základě jejich fyzikálně chemických rozdílů způsoby známými odborníkům v oboru, například chromatografií nebo frakční krystalizací. Enantiomeiy mohou být odděleny převedením enantiomemích směsí na diastereoizomemí směs reakcí s vhodnou opticky aktivní sloučeninou, (například alkoholem), čímž se oddělí diastereoizomery a jednotlivé diastereoizomery se převedou (například hydrolýzou) na odpovídající čisté enantiomery.

Využití všech takovýchto izomerů, včetně diastereoizomemích směsí a čistých enantiomerů, se považuje za součást předloženého vynálezu.

Sloučeniny tohoto vynálezu, které jsou sou povahou zásadité, jsou schopné vytvářet rozsáhlé množství rozdílných solí s různými anorganickými a organickými kyselinami. Ačkoli takové soli musí být farmaceuticky akceptovatelné pro podávání savcům, je často žádoucí v praxi zpočátku izolovat sloučeninu tohoto vynálezu z reakční směsi jako farmaceuticky neakceptovatelnou sůl a pak jednoduše převést tuto sůl zpět na sloučeninu ve formě volné báze zpracováním s alkalickým reagentem a následně převést tuto volnou bázi na farmaceuticky akceptovatelnou adiční sůl s kyselinou.

-16CZ 298556 B6

Adiční soli s kyselinou zásaditých sloučenin tohoto vynálezu se snadno připraví zpracováním zásadité sloučeniny s v podstatě ekvivalentním množstvím zvolené minerální nebo organické kyseliny ve vodném rozpouštědlovém médiu nebo ve vhodném organickém rozpouštědle jak oje methanol nebo ethanol. Po pečlivém odpaření rozpouštědla se snadno získá požadovaná tuhá sůl.

Požadovaná sůl může být také vysrážena z volné báze v organickém rozpouštědle přídavkem roztoku ve vhodné minerální nebo organické kyselině.

Ty sloučeniny předloženého vynálezu, které mají kyselou povahu, jsou schopny tvořit zásadité soli s různými kationty. Pro sloučeniny, které mají být podávány savcům, rybám nebo ptákům musí být takovéto soli farmaceuticky akceptovatelné.

Tam, kde se požaduje farmaceuticky akceptovatelná sůl, může být žádoucí zpočátku izolovat sloučeninu tohoto vynálezu z reakční směsi jako farmaceuticky neakceptovatelnou sůl a pak jednoduše převést tuto sůl na farmaceuticky akceptovatelnou sůl v postupu analogickému postu15 pu popsanému výše ve vztahu ke konverzi farmaceuticky neakceptovatelné adiční soli s kyselinou na farmaceuticky akceptovatelnou sůl.

Příklady zásaditých solí zahrnují soli alkalického kovu nebo soli kovu alkalických zemin a zejména sodné, aminové a draselné soli. Tyto soli se však připraví konvenčními postupy. Chemické báze, které se použijí jako reagenty k přípravě farmaceuticky akceptovatelných zásaditých solí tohoto vynálezu jsou ty, které tvoří netoxické zásadité soli s kyselými sloučeninami tohoto vynálezu. Takovéto netoxické zásadité soli zahrnují ty, které jsou odvozeny od farmaceuticky akceptovatelných kationtů, jako jsou sodík, draslík, vápník, hořčík, různé aminové kationty atd.

Tyto soli mohou být snadno připraveny zpracováním odpovídajících kyselých sloučenin s vodným roztokem obsahujícím požadované farmaceuticky akceptovatelné báze s kationty jako je sodík, draslík, vápník, hořčík, různé aminové kationty atd., a pak se výsledný roztok odpaří do sucha, výhodně za sníženého tlaku.

Alternativně mohou být připraveny smícháním nižších alkanolických roztoků kyselých sloučenin a společně požadovaného alkoxidu alkalického kovu a pak odpařením výsledného roztoku do sucha stejným způsobem jako dříve. V každém případě stechiometrická množství reagentů se výhodně použijí, aby se zajistila kompletnost reakce a maximální výtěžky požadovaného finálního produktu.

Antibakteriální a antiprotozoická aktivita sloučenin tohoto vynálezu vůči bakteriálním a protozoálním patogenům je demonstrována schopností sloučenin inhibovat růst definovaných kmenů lidských (zkouška I) nebo živočišných (zkoušky II a III) patogenů.

Zkouška I

Zkouška I popsaná dále, využívá konvenční metodologie a interpretačních kritérií a je určena k zajištění usměrnění pro chemické modifikace, které mohou vést ke sloučeninám, které obcházejí definované mechanizmy makrolidové rezistence.

Ve zkoušce I je ustaven panel bakteriálních kmenů k zajištění různých cílových patogenních druhů včetně reprezentantů mechanizmů makrolidové rezistence, které byly vyznačeny. Použití tohoto panelu umožňuje určení vztahu chemická struktura/aktivita s ohledem na potenci, spektrum aktivity a strukturální elementy nebo modifikace, které mohou být nutné k odstranění rezistenčních mechanizmů.

Bakteriální patogeny, které zahrnují skríningový panel jsou uvedeny v následující tabulce. V mnoha případech jako makrolidové citlivý mateřský kmen a makrolidové rezistentní kmen z něho odvozené jsou dostupné k vytvoření přesnějšího vyzkoušení schopnosti sloučenin obejít rezistenční mechanizmus. Kmeny, které obsahují gen s označením ermA/ermB/ermC jsou rezis- 17CZ 298556 B6 tentní vůči makrolidům, linkosamidům a streptograminu B, jako antibiotikum, vliv modifikací (methylace) 23 S rRNA molekul Erm methylázou, čímž se obecně zabrání vazbě všech tří strukturálních tříd.

Byly pospány dva typy makrolidového efluxu, msrA kóduje komponentu efluxního komponentu efluxního systému u stafylokoků, které brání vstupu makrolidů a streptograminů, zatímco mefA/E kóduje transmembránový protein, který vede jen k efluxu makrolidů. Inaktivace makrolidových antibiotik se může vyskytnout a může být zprostředkována buď fosforylací 2'-hydroxylu (mph), nebo štěpením makrocyklického laktonu (esterasou).

Tyto kmeny mohou být charakterizovány pomocí konvenční polymerázové řetězové reakční (PCR) technologie a/nebo sekvencováním rezistenčního determinantu. Použití PCR technologie v této přihlášce je popsáno v J. Sutcliffe aj., „Detection of Erythromycin-Resistant Determinants by PCR“, Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 40(11), 2562-2566 (1966).

Zkouška se provádí v mikrotitračních miskách a je interpretována podle Performance Standards for Antimicrobial Disk Susceptibility Tests - 6. vydání, Approved Standard, publikované The National Committee for Clinical Laboratoiy Standards (NCCLS) Guidelines, přičemž se používá minimální koncentrace inhibitoru (MIC) pro porovnání kmenů. Sloučeniny se nejdříve rozpustí v dimethylsulfoxidu (DMSO) jako 40 mg/ml zásobní roztoky.

Označení kmene	Mechanizmy makrolidové rezistence
Staphylococcus aureus 1116	citlivý mateřský
Staphylococcus aureus 1117	ermB
Staphylococcus aureus 0052	citlivý mateřský
Staphylococcus aureus 1120	ermC
Staphylococcus aureus 1032	msrA, mph, esterasa
Staphylococcus hernolyticus 1006	msrA, mph
Staphylococcus pyogenes 0203	citlivý mateřský
Staphylococcus pyogenes 1079	ermB
Staphylococcus pyogenes 1062	citlivý mateřský
Staphylococcus pyogenes 1061	ermB
Staphylococcus pyogenes 1064	ermB
Staphylococcus agalactiae 1024	citlivý mateřský
Staphylococcus agalactiae 1023	ermB
Staphylococcus pneumoniae 1016	citlivý
Staphylococcus pneumoniae 1046	ermB
Staphylococcus pneumoniae 1095	ermB
Staphylococcus pneumoniae 1175	mefE
Staphylococcus pneumoniae 0085	citlivý
Haemophylus influenzae 0131	citlivý
Moraxella catarrhalis 0040	citlivý
Moraxella catarrhalis 1055	erythromycinová střední rezistence
Escherichia coli 0266	citlivý

Zkouška II je použita k testování aktivity vůči Pasteurella multocida a zkouška III je využita k testování aktivity vůči Pastourella haemolytica.

Zkouška II

Tato zkouška je založena na kapalinové zřeďovací metodě v mikrolitrovém formátu. Jedna kolonie P. mutocida (kmen 59A067) se inokuluje do 5 ml mozkosrdečního infuzního (BHI) bujó30 nu. Zkoušené sloučeniny se připraví rozpuštěním 1 mg sloučeniny ve 125 mikrolitrech dimethylsulfoxidu (DMSO). Zředění testované sloučeniny se připraví pomocí inokulovaného BHI bujónu. Použitý rozsah koncentrace zkoušené sloučeniny je od 200 mikrogramů/ml do 0,098 mikro-18CZ 298556 B6 gramu/ml dvojnásobný postupný zředěním HBI inokulovaný P. multocida se zředí neinokulovaným HBI bujónem, čímž se získá suspenze 10⁴ buněk na 200 mikrolitrů. HBI buněčné suspenze se smíchají s ohledem na postupná zředění zkoušené sloučeniny a inkubují při 37 °C po dobu 18 hodin. Minimální inhibiční koncentrace (MIC) je rovná koncentraci sloučeniny vykazující

100% inhibici růstu P. multocida, jak je určeno srovnáním s neinokulovanou kontrolou.

Zkouška III

Tato zkouška je založena na agarové zřeďovací metodě za použití Steers Replicatoru. Dvě až pět ío kolonií izolovaných z agarové plotny se inokuluje do HBI bujónu a inkubuje přes noc při 37 °C za třepání (200 otáček/min). Příští ráno se inokuluje 300 mikrolitrů plně narostlé prekultury

P. haemolytica do 3 ml čerstvého BHI bujónu a inkubuje se při 37 °C za třepání (200 otáček za minutu).

Příslušné množství testovaných sloučenin se rozpustí v ethanolu a připraví se série dvojnásobných postupných zředění. Dva ml příslušného postupného zředění se smíchají s 18 ml roztaveného BHI agaru a nechají ztuhnout. Když inokulovaná kultura P. haemolytica dosáhne 0,5 Mc Farlandovy standardní hustoty, asi 5 mikrolitrů kultury P. haemolytica se inokuluje na BHI agarové plotny obsahující různé koncentrace testované sloučeniny za použití Steers

Replicatoru a inkubuje se po dobu 18 hodin při teplotě 37 °C. Počáteční koncentrace testované sloučeniny je v rozmezí od 100 do 200 mikrogramů/ml. MIC odpovídá koncentraci testované sloučeniny vykazující 100% inhibici růstu P. haemolytica jak je určeno srovnáním s neinokulovanou kontrolou.

In vivo aktivita sloučenin vzorce i může být určena konvenčními živočišnými ochrannými studiemi dobře známými odborníkům v oboru, obvykle prováděnými na myších.

Myši se rozdělí do klecí (10 na klec) po jejich dodání a ponechají se aklimatizovat po dobu minimálně 48 hodin předtím, než se použijí. Zvířata se naočkují 0,5 ml 3.10³ CFU/ml bakteriální suspenze (P. multocida kmen 59A006) intraperitoneálně. Každý experiment má alespoň 3 nemedikované kontrolní skupiny včetně jedné infikované 0,1 násobnou podnětnou dávkou a dvou infikovaných 1 násobku podnětnou dávkou, skupina s lOnásobnou podnětnou dávkou může být také použita.

Obecně všechny myši v dané studii mohou být podníceny během 30 až 90 minut, zejména když se použije opětovné injekční stříkačky jako je Comwall^R stříkačka k podávání podnětu.

minut po zahájení podnětu se podává první léčebná sloučenina. Může být nutné, aby druhá osoba začala dávkování této sloučeniny, když všechna zvířata nebyla podnícena na konci

3 0 minut. Cesty podávání jsou subkutánní nebo orální dávky. Subkutánní dávky se podávají do volné kůže vzadu na krku, zatímco orální dávky se podávají krmnou jehlou. V obou případech se použije objem 0,2 ml na myš. Sloučeniny se podávají 30 minut, 4 hodiny a 24 hodin po podnětu. Kontrolní sloučenina známé účinnosti se podává stejnou cestou a je začleněna v každém testu. Zvířata se prohlížejí denně a počet přeživších v každé skupině se zaznamená. P. multocida modelové monitorování pokračuje po dobu 96 hodin (4 dny) po podnětu.

PD₅₀ je vypočtená dávka, při které zkoušená sloučenina chrání 50 % skupiny myší od úmrtí vlivem bakteriální infekce, která by byla letální v nepřítomnosti léčení touto drogou.

Sloučeniny vzorce i a jejich farmaceuticky akceptovatelné soli (zde „aktivní sloučeniny“) mohou být podávány orální, parenterální, topickou, nebo rektální cestou při léčení bakteriálních a protozoických infekcí. Obecně tyto sloučeniny se nejlépe podávají v dávkách v rozmezí od asi 0,2 mg na kg tělesné hmotnosti za den (mg/kg/den) do asi 200 mg/kg/den v jedné nebo rozdělených dávkách (to je od 1 do 4 dávek na den), ačkoli se nutné vyskytnou změny v závislosti na druhu, hmotnosti a stavu subjektu, který má být léčen a na příslušném způsobu zvoleného

-19CZ 298556 B6 podávání. Avšak dávkovači úroveň, která je v rozmezí asi 4 mg/kg/den do asi 50 mg/kg/den se využívá nej častěji.

Variace se mohou přesto vyskytnou v závislosti na druhu savce, ryby nebo ptáka, kteří mají být léčeni a na jejich individuální odezvě k uvedenému léčivu, stejně jako na typu farmaceutické formulace, která byla zvolena a časové periodě a intervalu, při kterých se takovéto podávání provádí. V některých případech dávkovači úrovně pod spodní limit výše uvedeného rozmezí mohou být více než odpovídající, zatímco v jiných případech ještě větší dávky mohou být použity bez vyvolání jakýchkoli škodlivých postranních účinků za předpokladu, že takovéto větší io dávky jsou nejdříve rozděleny do několika malých dávek pro podávání během dne.

Aktivní sloučeniny mohou být podávány samotné nebo v kombinaci s farmaceuticky akceptovatelnými nosiči nebo ředidly dříve uvedenými způsoby a takovéto podávání se může provádět v jedné nebo více dávkách. Zejména tyto aktivní sloučeniny mohou být podávány v široké rozma15 nitosti různých dávkovačích forem, to znamená, že mohou být kombinovány s různými farmaceuticky akceptovatelnými inertními nosiči ve formě tablet, tobolek, pastilek, pilulek, tvrdých bonbonů, prášků, postřiků, krémů, balzámů, čípků, želé, gelů, past, roztoků, mastí, vodných suspenzí, injektovatelných roztoků, elixírů, sirupů a podobně. Takovéto nosiče zahrnují tuhá ředidla nebo plniva, sterilní vodná média a různá netoxická organická rozpouštědla a tak dále.

Navíc orální farmaceutické kompozice mohou být vhodné oslazeny a/nebo ochuceny. Obecně aktivní sloučeniny jsou přítomny v takových dávkovačích formách a koncentračních úrovních v rozmezí od asi 5,0 do asi 70 % hmotnostních.

Pro orální podávání se mohou použít tablety obsahující různé excipienty, jak oje mikro25 krystalická celulosa, citran sodný, uhličitan vápenatý, fosforečnan dvojvápenatý a glycin, spolu s různými dezintegranty jako je škrob (a výhodně kukuřičný, bramborový nebo tapiokový škrob), alginová kyselina a různé komplexní silikáty, spolu s granulačními pojivý jako je polyvinylpyrrolidon, sacharosa, želatina a akácie. Navíc jsou užitečné lubrikační prostředky jako je stearan hořečnatý, laurylsíran sodný a talek pro tabletovací účely. Tuhé kompozice podobného typu mohou být také použity jako plniva v želatinových tobolkách, výhodné látky v tomto spojení také zahrnují laktosu nebo mléčný cukr stejně jako vysokomolekulámí polyethylenglykoly.

Když jsou požadovány vodné suspenze a/nebo elixíry pro orální podávání, aktivní sloučenina může být kombinována s různými sladidly nebo vodnými prostředky, barvicími látkami nebo barvivý a když je třeba, emulgačními a/nebo suspendačními prostředky společně s takovými ředidly jako je voda, ethanol, propylenglykol, glycerin a různé jiné kombinace.

Pro parenterální podávání mohou být použity roztoky aktivní sloučeniny v buď sezamovém, nebo arašídovém oleji nebo ve vodném propylenglykolu.

Vodné roztoky by měly být vhodně pufrovány (výhodně pH vyšší než 8), když je to nutné, a kapalné ředidlo by mělo nejdříve být izotonizováno. Tyto vodné roztoky jsou vhodné pro intravenózní injekční účely. Olejové roztoky jsou vhodné pro intraartikulámí, intramuskulámí a subkutánní injekční účely. Příprava všech těchto roztoků za sterilních podmínek se snadno provádí standardními farmaceutickými technikami dobře známými odborníkům v oboru.

Dále je možné podávat aktivní sloučeniny tohoto vynálezu topicky, a to může být prováděno pomocí krémů, rosolů, gelů, past, váčků, mastí a podobně podle standardní farmaceutické praxe.

Pro podávání živočichům jiným než je člověk, jako je dobytek nebo domácí zvířata, aktivní sloučeniny mohou být podávány v krmivu zvířat nebo orálně v picích směsích.

Aktivní sloučeniny mohou být také podávány ve formě liposomních dávkovačích systémů, jako jsou malé unilamelámí vesikuly, velmi unilamelámí vesikuly a multilamelámí vesikuly. Liposo-20CZ 298556 B6 my mohou být vytvořeny z různých fosfolipidů jako je cholesterol, steaiylamin nebo fosfatidylcholiny.

Aktivní sloučeniny mohou být také sdruženy s rozpustnými polymery jako cílenými nosiči léči5 va. Takovéto polymery mohou zahrnovat polyvinylpyrrolidon, pyranový kopolymer, polyhydroxypropylmethakrylamid-fenol, polyhydroxyethylaspartamid-fenol nebo polyethylenoxidpolylysin substituovaný palmitoylovými residui.

Dále mohou být aktivní sloučeniny sdruženy do třídy biodegradovatelných polymerů užitečných 10 při dosahování řízeného uvolňování léčiva, například s polymléčnou kyselinou, polyglykolovou kyselinou, kopolymeiy polymléčné a polyglykolové kyseliny, polyepsylon-kaprolaktonem, polyhydroxybutyrovou kyselinou, polyortoestery, polyacetaly, polydihydroopyrany, polykyanakryláty a zesítěnými a amfipatickými blokovými kopolymery hydrogelů.

Příklady provedení vynálezu

Následující příklady provedení dále ilustruje způsob a meziprodukty tohoto vynálezu. Je třeba vědět, že předložený vynález není omezen na konkrétní detaily příkladů uvedených níže.

Tabulka 1

Sloučeniny z příkladů 1 až 32 mají obecný vzorec 8, který je uveden níže s R substituenty ozna25 čenými v následující tabulce. Sloučeniny byly připraveny níže jak je popsáno v přípravách 1 až 7.

V tabulce jsou výtěžky a hmotnostní spektra („hmot. spektrum“) aplikovány na konečný produkt.

-21 CZ 298556 B6

Příkl.	R substituent	příprava	výtěžek %	hmotn. spektrum
1	n-butylamino	1	48	820
2	2-methoxyethylamino	1	52	822
3	piperidino	1	61	832
4	morfolino	1	39	834
5	t-butylamino	1	23	821
6	benzylamin	1	34	854
7	cyklopentylamino	2	23	832
8	propylamino	2	11	806
9	anilino	1	21	841
10	2-methoxypropylamino	1	46	835
11	azido	3	46	790
12	hexylamino	1	56	847
13	3-ethoxypropylamino	1	52	851
14	diethylamino	2	53	821
15	A-methylbutylamino	1	76	835
16	A-methylpropylamino	2	59	819
17	ethylamino	5	18	792
18	cyklopropylamino	2	50	804
19	ethylamino	2	92	806
20	2,2,2-trifluorethylamino	2	67	846
21	allylamino	1	59	804
22	2-hydroxyethylthio	6	44	826
23	dimethylamino	1	71	793
24	imidazol-l-yl	4	42	815
25	bis(2-hydroxyethyl)amino	7	21	853
26	pyrrolidino	2	40	818
27	2-hydroxyethylmethylamino	2	23	822
28	1,2,3-triazol-l-yl	4	69	817
29	2-propinylamino	2	51	802
30	2-methy limidazol-1 -yl	4	14	829
31	diallylamino	2	29	844
32	1,2,4-triazol-1 -y 1	4	34	816

Způsob přípravy pro tabulku 1

S odkazem na výše uvedené schéma sloučenina vzorce 11, kde R je H a R⁴ je H (25 g (34,01 mmol, 1,0 ekviv.)) byla smíchána v roztoku s fenylovou červení v 250 ml THF a 125 ml vody. Do tohoto růžového roztoku bylo pomalu přidáno 29 ml (204,1 mmol, 6,0 ekviv.) benzylchlorformatu a 2N NaOH, aby se udržel roztok zásaditý. Reakce byla ponechána míchat při teplotě místnosti přes noc. Reakční směs byla koncentrována k odstranění THF a vodná fáze byla io nastavena na pH 9,5 a extrahována 3 x 500 ml EtOAc. Sloučené organické vrstvy byly promyty 500 ml solanky a pak vysušeny nad uhličitanem sodným. Filtrace, koncentrace filtrátu a vysušení poskytly surovou látku.

Další čištění bylo provedeno sloupcovou chromatografií (100% methylenchlorid k odstranění nečistot a pak 5% MeOH/CH₂Cl₂ k získání produktu), čímž se získalo 32,6 g (96 %) žlutavé tuhé látky, která byla sloučeninou vzorce 1T kde R a R⁴ byly oba Cbz (MS (FAB) m/z 1 003). 32,6 g (32,49 mmol, 1,0 ekv.) tohoto produktu bylo rozpouštěno v 216,6 ml methylenchloridu a 27,3 ml DMSO. Do tohoto roztoku bylo přidáno 21,2 g (110,5 mmol, 3,4 ekv.) EDC a 24,1 g (124,8 mmol, 3,8 ekv.) PTFA. Po míchání přes noc byla reakce zchlazena 150 ml vody a pH nastaveno na 9,5 přídavkem 2N NaOH. Organická vrstva byla extrahována 3 x 150 ml CH₂C1₂a vysušena nad síranem sodným. Filtrace, koncentrace filtrátu a vysušení poskytly surový žlutý

-22CZ 298556 B6 olej. Další vyčištění na silikagelovém sloupci (2% MeOH/CHCl₃) poskytlo 25,6 g (79 %) žlutavé tuhé látky, která byla sloučeninou vzorce 12, kde oba R a R⁴ byly Cbz.

g (13,98 mmol, 1,0 ekv.) sloučeniny vzorce 12 připravené jak bylo uvedeno výše, bylo rozpouštěno v 1 1 2-propanolu a do toho bylo přidáno 14 g 10% Pd/C.

Směs byla hydrogenována při 345 kPa po dobu 3 dnů. 14 g 10% Pd/C bylo přidáno do reakce a ponecháno míchat po dobu dalšího dne. To bylo znovu zopakováno a mícháno po další den. Katalyzátor byl odstraněn filtrací přes Celit a minimální promytí 2-propanolem vedlo k výtěžku io 4,8 g (47 %) sloučeniny vzorce 12, kde oba R a R⁴ byly H (MS (APCi) m/z 734).

6,7 g (169,17 mmol, 6,2 ekv.) NaH (60% disperze v oleji) bylo promyto dvakrát 150 ml hexanů k odstranění minerálního oleje. Tuhá látka byla zředěna ve 335 ml DMSO a 38,4 g (174,62 mmol, 6,4 ekv.) Me₃SOI bylo přidáno ve 3 podílech. Roztok byl míchán po dobu

1 hodiny nebo dokud se nestal čirým. 20 g (27,29 mmol, 1,0 ekv.) sloučeniny vzorce 12, kde oba

R a R⁴ byly H, bylo rozpouštěno ve 200 ml THF. Keton byl převeden pomocí kanyly do reakční baňky a ponechán míchat po dobu 20 minut. Reakce byla zchlazena 500 ml nasyceného hydrogenuhličitanu sodného, extrahovaná 4 x 500 ml EtOAc a vysušena nad síranem sodným. Filtrace, koncentrace filtrátu a vysušení poskytly surový olej.

Další čištění na 750 g silikagelu (5% MeOH/CHCl₃, 0,3 % NH₄OH) poskytlo 8,8 g (43 %) bílé tuhé látky, která byla sloučeninou vzorce 13 (MS (TS) m/z 747).

Příprava 1

250 až 500 mg výše uvedené sloučeniny vzorce 13 bylo rozpouštěno v 1 až 2 ml aminu odpovídajícího R substituentu specifikovanému v tabulce 1. Bylo přidáno katalytické množství (20 mg) pyridiniumhydrochloridu a roztok byl zahříván na 50 až 85 °C po dobu 1 až 7 dnů. Reakce byla zpracována zchlazením 50 ml nasyceného hydrogenuhličitanu sodného, extrahována 3 x 50 ml methylenchloridu a vysušena nad síranem sodným. Filtrace, koncentrace filtrátu a vysušení poskytly surový olej nebo tuhou látku. Další čištění na silikagelovém sloupci (2 až 4% MeOH/CHCf, 0,2 % NH4OH), poskytlo konečný produkt.

Příprava 2

250 až 500 mg výše uvedené sloučeniny vzorce 13 bylo rozpouštěno v 1 až 2 ml aminu odpovídajícího R substituentu specifikovanému v tabulce 1 v utěsněné zkumavce. Bylo přidáno katalytické množství pyridiniumhydrochloridu a roztok byl zahřát na 50 až 75 °C po dobu 1 až 5 dnů. Reakce byla zpracována zchlazením 50 ml nasyceného hydrogenuhličitanu sodného, extrahována

3 x 50 ml methylenchloridu a vysušena nad síranem sodným. Filtrace, koncentrace filtrátu a vysušení poskytly surový olej nebo tuhou látku. Další čištění na silikagelovém sloupci (2 až 4% MeOH/CHCf, 0,2 % NH₄OH) poskytlo konečný produkt.

Příprava 3

100 mg výše uvedené sloučeniny vzorce 13 bylo rozpuštěno v MeOH/H₂O (8:1). Byly přidány azid sodný (7 ekv.) a chlorid amonný (5,5 ekv.) a roztok byl zahříván na 60 °C po dobu 2 dnů. Reakce byla zpracována zchlazením 50 ml nasyceného NaHCO₃, extrahována 3 x 50 ml methylenchloridu a vysušena nad síranem sodným. Filtrace, koncentrace filtrátu a sušením poskytly surový olej nebo tuhou látku. Další čištění na silikagelovém sloupci (2% MeOH/CHCl₃, 0,2 % NH4OH) poskytlo konečný produkt.

-23 CZ 298556 B6

Příprava 4

150 až 250 mg výše uvedené sloučeniny vzorce 13 bylo rozpouštěno v 1 až 2 ml MeOH/H₂O nebo MeOH. Do toho byl přidán heteroaromatický reagent odpovídající R substituentu specifikovanému v tabulce 1 (10 až 50 ekv.) a katalytické množství (20 mg) pyridiniumhydrochloridu. Reakční směs byla zahřívána při 45 až 50 °C po dobu 1 až 3 dnů. Reakce pak byla zchlazena 100 ml nasyceného NaHCO₃, extrahována 3 x 25 ml methylenchloridu, vysušena nad síranem sodným, zfiltrována a koncentrována na tuhou látku. Tuhá látka byla znovu rozpuštěna ve 100 ml EtOAc a promyta 3 x 25 ml 2N NaOH k odstranění přebytku reagentů. Další čištění se silikagelovém sloupci (2 až 5% MeOH/CHCl₃, 0,2 % NH₄OH) poskytlo konečný produkt. Příprava 5 mg výše uvedené sloučeniny vzorce 13 bylo rozpouštěno v 1 ml aminu odpovídajícího R substituentu specifikovanému v tabulce 1. Byla přidána malá lžička neutrální aluminy a směs byla míchána při teplotě místnosti po dobu 7 dnů. Reakce byla zpracována filtrací Celitem (rozsivková zemina) a koncentrovaná na surovou tuhou látku. Další čištění na silikagelovém sloupci (5 % MeOH/CHCl₃, 0,2 % NH4OH) poskytlo konečný produkt.

Příprava 6

270 mg výše uvedené sloučeniny vzorce 13 bylo rozpouštěno ve 4 ml benzenu. Ktomu byl přidán přebytek uhličitanu draselného a 0,5 ml thiolu. Směs byla míchána při teplotě místnosti po dobu 16 hodin. Reakce byla zchlazena 100 ml nasyceného NaHCO₃, extrahována 3 x 25 ml methylenchloridu, vysušena nad síranem sodným, zfiltrována a koncentrována na tuhou látku. Další čištění na silikagelovém sloupci (2% MeOH/CHCl₃, 0,2 % NH₄OH) poskytlo konečný produkt.

Příprava 7

250 mg výše uvedené sloučeniny vzorce 13 bylo rozpuštěno v 0,5 ml bis(2-hydroxyethyl)aminu a 2 ml 2-propanolu v utěsněné zkumavce.

Bylo přidáno katalytické množství (20 mg) pyridiniumhydrochloridu a roztok byl zahříván na

75 °C po dobu 7 dnů. Reakce byla zpracována zchlazením 50 ml nasyceného NaHCO₃, extrahována 3 x 50 ml methylenchloridu a vysušena nad síranem sodným. Filtrace, koncentrace filtrátu a vysušení poskytly surový olej nebo tuhou látku. Další čištění na silikagelovém sloupci (2% MeOH/CHCl₃, 0,2 % NH4OH) poskytlo konečný produkt.

Následující příklady popisují přípravu sloučenin majících obecnou strukturu vzorce 9, kde R je definováno v jednotlivých příkladech.

-24CZ 298556 B6

Příklad 33

Do roztoku sloučeniny vzorce 4, kde R⁴ je H (0,059 g, 0,08 mmol) v THF (2 ml) při 0 °C byl přidán allylmagneziumbromid v Et₂O (10 M, 0,5 ml). Po 2 hodinách míchání při 0 °C, pokračo5 válo míchání při teplotě místnosti po dobu 12 hodin. Reakce byla zředěna nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (10 ml) a EtOAc (20 ml). Po oddělení vodné vrstvy byla tato promyta EtOAc (2x15 ml). Sloučené organické extrakty byly promyty nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (20 ml) a solankou (25 ml), vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua.

Silikagelová chromatografie pomocí MeOH:CH₂Cl₂:NH4OH (6:93:1 až 10:89:1) poskytla 0,011 g (18% výtěžek) sloučeniny vzorce 9, kde R je allyl. MS: 776 (TS).

Příklad 34

Do roztoku sloučeniny vzorce 4, kde R⁴ je H (0,059 g, 0,08 mmol) v DME (3 ml) při 0 °C byl přidán vinylmagneziumbromid v THF (1,0 M, 0,56 ml), po míchání při 0 °C po dobu 1 hodiny a při teplotě místnosti po dobu 1 hodiny byla reakční směs zředěna nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (10 ml) EtOAc (10 ml). Po separaci byla vodná vrstva promyta EtOAc (3 x 10 ml). Sloučené organické extrakty byly promyty nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (50 ml) a solankou (20 ml), vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua. Silikagelová chromatografie pomocí MeOH: CH₂C1₂:NH4OH (6:93:1) poskytla 0,016 g (26% výtěžek) sloučeniny vzorce 9, kde R je vinyl. MS:762 (FAB).

Příklad 35

Do baňky obsahující MgCl₂ (0,095 g, 1 mmol) v DME (lml) při teplotě 0 °C bylo přidáno

2-thienyllithium (1,0 M, 1,0 Ml). Po 0,5 hodině byl zaveden roztok sloučeniny vzorce 4, kde R⁴je H (0,073 g, 0,1 mmol) v DME (2 ml) a míchání pokračovalo při 0 °C po dobu 1 hodin, pak při teplotě místnosti po dobu 0,5 h. Reakční směs byla zředěna nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (10 ml) a EtOAc (15 ml). Po separaci byla vodná vrstva promyta EtOAc (3x10 ml). Sloučené organické extrakty byly promyty nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (15 ml) a solankou (20 ml), vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua. Silikagelová chromatografie pomocí MeOH:CH₂Cl₂:NH4OH (6:93:1) poskytla 0,012 g (15% výtěžek) sloučeniny vzorce 9, kde Rje 2-thienyl. MS: 817 (TS).

Příklad 36

Do roztoku sloučeniny vzorce 4, kde R⁴ je H (0,147 g, 0,2 mmol) v DME (10 ml) při 0 °C byl přidán ethinylmagneziumbromid v THF (0,5 M, 2,8 ml). Po míchání při 0 °C po dobu 1 hodiny a při teplotě místnosti po dobu 1 hodiny byla reakční směs zředěna vodou (20 ml) a EtOAc (35 ml). PO separaci byla vodní vrstva promyta EtOAc (3 x 25 ml). Sloučené organické extrakty byly promyty nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (30 ml) a solankou (30 ml), vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua. Silikagelová chromatografie pomocí MeOH:CH₂Cl₂:NH4OH (6:93:1 až 10:89:1) poskytla 0,068 g (45% výtěžek) sloučeniny vzorce 9, kde Rje ethinyl. MS: 759 (API).

Příklad 37

Do sloučeniny vzorce 4, kde R⁴ je H (0,220 g, 0,3 mmol) v DME (15 ml) při 0 °C byl přidán

1-methy 1-1 -propenylmagneziumbromid v THF (0,5 M, 4,2 ml). Po míchání při teplotě místnosti

-25CZ 298556 B6 po dobu 3 hodin byla reakční směs zředěna nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (20 ml) a EtOAc (30 ml). Po separaci byla vodná vrstva promyta EtOAc (3x10 ml). Sloučené organické extrakty byly promyty nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (25 ml) a solankou (30 ml) vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua.

Silikagelová chromatografíe pomocí MeOH:CH₂Cl2:NH₄OH (6:93:1 až 10:89:1) poskytla 0,068 g (25% výtěžek) sloučeniny vzorce 9, kde R je 1-methyl-l-propenyI. MS: 790 (API).

Příklad 38

Do roztoku butylmagneziumbromidu v THF (2,0 M, 1,0 ml) při 0 °C byl přidán roztok methylpropargyletheru (0,154 g, 0,2 mmol) v DME (3 ml). Po míchání při 0 °C po dobu 0,5 h, byl přidán roztok sloučeniny vzorce 4, kde R⁴ je H (0,147 g, 0,2 mol) v DME (7 ml). Po míchání při 0 °C po dobu 0,5 hodiny a teplotě místnosti po dobu 4 hodin byla reakční směs zředěna vodou (20 ml) a EtOAc (25 ml). Po separaci byla vodná vrstva promyta EtOAc (3 x 20 ml). Sloučené organické extrakty byly promyty nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (20 ml) a solankou (25 ml), vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua. Silikagelová chromatografíe pomocí MeOřECF^C^NFfíOH (6:93:1 až 10:89:1) poskytla 0,081 g (50% výtěžek) sloučeniny vzorce 9 kde R je 3-methoxy-l-propinyl. MS: 803 (API).

Příklad 39

Do roztoku m ethylmagneziumbromidu v Et₂O (3,0 M, 1,8 ml) při 0 °C byl přidán roztok l-dimethylamino-2-propinu (0,154 g, 0,2 mmol) v THF (5 ml). Po míchání při 0 °C po dobu 6 hodin byl přidán roztok sloučeniny vzorce 4, kde R¹³ je H (0,147 g, 0,2 mmol) v DME (10 ml) při teplotě místnosti. Po míchání při teplotě místnosti po dobu 3 hodin byla reakční směs zředěna vodou (40 ml) a EtOAc (50 ml). Po separaci byla vodná vrstva promyta EtOAc (3x50 ml). Sloučené organické extrakty byly promyty nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (40 ml) a solankou (50 ml), vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua. Silikagelová chromatografíe pomocí MeOH: CH₂C1₂:NH4OH (6:93:1 až 8:91:1) poskytla 0,140 g (57% výtěžek) sloučeniny vzorce 9, kde R je 3-dimethylamino-l-propionyl. MS:817 (API).

Příklad 40

Do roztoku methylmagneziumbromidu v Et₂O (3,0 M, 1,8 ml) a DME (1 ml) při 0 °C byl přidán roztok 2-ethinylpyridinu (0,186 g, 1,8 mmol) v DME (2 ml). Po míchání při 0 °C po dobu 1 hodiny a při teplotě místnosti po dobu 1 hodiny byl přidán roztok sloučeniny vzorce 4 kde R⁴ je

H (0,110 g, 0,15 mmol) v DME (7 ml) při teplotě místnosti. Po míchání při teplotě místnosti po dobu 3 hodiny byla reakční směs zředěna vodou (20 ml) a EtOAc (40 ml). Po separaci byla vodná vrstva promyta EtOAc (3 x 30 ml). Sloučené organické extrakty byly promyty nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (50 ml) a solankou (50 ml), vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua. Silikagelová chromatografíe pomocí

MeOH:CH₂Cl₂:NH4OH (6:93:1 až 10:89:1) poskytla 0,066 g (53% výtěžek) sloučeniny vzorce 9 kde R je 2-pyridylethinyl. MS: 836 (API).

Příklad 41 50

Do baňky s kulatým dnem obsahující MgBr₂ (0,552 g, 3,0 mmol) a propinyllithium (0,069 g, 1,5 mmol) při 0 °C byl přidán THF (5 ml). Po 4 hodinách byl zaveden roztok sloučeniny vzorce 4, kde R⁴ je H (0,110 g, 0,15 mmol) v DME (lOml) při teplotě místnosti a míchání pokračovalo po dobu 3 hodin. Reakční směs byla zředěna vodou (30 ml) a EtOAc (30 ml). Po separaci byla vodná vrstva promyta EtOAc (3 .40 ml). Sloučené organické extrakty byly promyty

-26CZ 298556 B6 nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (50 ml) a solankou (50ml), vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua. Silikagelová chromatografie pomocí MeOHrCřUChNtLtOH (6:93:1 až 7:92:1) poskytla 0,060 g (52% výtěžek) sloučeniny vzorce 9, kde R je 1-propinyl. MS:817 (TS).

Příklad 42

Do roztoku methylmagneziumbromidu v Et₂O (3,0 M, 0,60 ml) při 0 °C byl přidán roztok io propargylalkoholu (0,346 ml, 0,289 g, 2,25 mmol) v THF (5 ml). Po míchání při 0 °C po dobu hodin byl přidán roztok sloučeniny vzorce 4, kde R⁴ je H (0,110 g, 0,15 mmol) v DME (10 ml) při teplotě místnosti. Po míchání při teplotě místnosti po dobu 2 hodin byla reakční směs zředěna vodou (35 ml) a EtOAc (50 ml). Po separaci byla vodná vrstva promyta EtOAc (3 x 40 ml). Sloučené organické extrakty byly promyty nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (50 ml) a solankou (50 ml), vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua. Silikagelová chromatografie s MeOH:CH₂Cl₂:NH₄OH (6:93:1 až 15:84:1) poskytla 0,038 g (32% výtěžek) sloučeniny vzorce 9, kde R je 3-hydroxy-1-propinyl. MS: 790 (API).

Příklad 43

Palladiový katalyzátor (20 mg, 10% Pd/C) byl přidán do roztoku sloučeniny z příkladu 42 v izopropanolu (8 ml). Reakční nádoba byla promyta a naplněna vodíkem (345 kPa) a třepána při teplotě místnosti po dobu 24 hodin. Filtrace alikvotu reakční směsi přes Celit a koncentrace za vakua poskytly sloučeninu vzorce 9, kde R je 3-hydroxy-l-propenyl. MS: 791 (API).

Příklad 44

Palladiový katalyzátor (20 mg, 10% Pd/C) byl přidán ke zbývajícímu roztoku z příkladu 43 a reakční nádoba byla promyta a naplněna vodíkem (345 kPa) a třepána při teplotě místnosti po dobu 48 hodin. Reakční směs byla zfíltrována přes Celit a koncentrována za vakua. Silikagelová chromatografie s MeOH:CH₂Cl₂:NH4OH (5:93:1 až 8:91:1) poskytla 0,018 g (57%ní výtěžek) sloučeniny vzorce 9, kde R je 3-hydroxypropyl. MS: 793 (API).

Příklad 45

Palladiový katalyzátor (15mg, 10% Pd/C) byl přidán do roztoku nadepsané sloučeniny z příkladu 38 v izopropanolu (8 ml). Reakční nádoba byla promyta a naplněna vodíkem (345 kPa) a třepána při teplotě místnosti po dobu 24 hodin.

Filtrace alikvotu reakční směsi přes Celit a koncentrace za vakua poskytly sloučeninu vzorce 9, kde R je 3-methoxy-l-propenyl. MS: 806 (API).

Příklad 46

Palladiový katalyzátor (15 mg, 10% Pd/C) byl přidán do zbývajícího roztoku z příkladu 45 a reakční nádoba byla promyta a naplněna vodíkem (345 kPa) a třepána při teplotě místnosti po dobu 48 hodin. Reakční směs byla zfíltrována přes Celit a koncentrována za vakua. Silikagelová chromatografie za pomoci MeOH:CH₂Cl₂:NH4OH (6:93:1 až 7:92:1) poskytla 0,017 g (73% výtěžek) sloučeniny vzorce 9 kde R je 3-methoxypropyl. MS: 808 (API).

-27CZ 298556 B6

Příklad 47

Do roztoku sloučeniny vzorce 4, kde R⁴ je benzyloxykarbonyl (0,520 g, 0,6 mmol) v DME (6 ml) a TMEDA (2 ml) při -40°C bylo přidáno propinyllithium (0,414 g, 9,0 mmol). Po míchání při

-40 °C po dobu 2,5 hodiny byla reakční směs zředěna nasyceným vodným roztokem chloridu amonného (30 ml) a EtOAc (30 ml). Po separaci byla vodná vrstva promyta EtOAc (3x10 ml). Sloučené organické extrakty byly promyty nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (25 ml) a solankou (30 ml), vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua.

Silikagelová chromatografíe s MeOH:CH₂Cl₂:NH₄OH (4:95,6:0,4 až 6:93,6:0,4) poskytla 0,157 g (29% výtěžek) rychleji eluujícího diastereoizomeru spolu s 0,071 g (13% výtěžek) pomaleji eluujícího diastereoizomeru a 0,070 g (13% výtěžek) směsi diastereoizomerů.

Roztok rychleji eluujícího diastereoizomeru (0,157 g, 0,17 mmol) v MeOH (5 ml) byl ponechán míchat při 30 °C po dobu 6 dnů. Po koncentraci za vakua, silikagelová chromatografíe s MeOH:CH₂Cl₂:NH₄OH (4:95,6:0,4 až 6:93,6:0,4) poskytla 0,102 g (78% výtěžek) sloučeniny vzorce 9, kde R je 1-propinyl s následující konfigurací v C-4 uhlíku. (MS: 774 (API)).

Roztok pomaleji eluujícího diastereoizomeru (0,071g, 0,078 mmol) v MeOH (3 ml) byl ponechán míchat při 30 °C po dobu 6 hodin. Po koncentraci za vakua, silikagelová chromatografíe s MeOH:CH₂Cl₂NH₄OH (4:95,6:0,4 až 6:93,6:0,4) poskytla 0,041 g (68% výtěžek) látky identické látce popsané sloučeninou z příkladu 41, která odpovídá sloučenině vzorce 9, kde R je 1propinyl, s následující konfigurací v C-4 uhlíku. MS: 774 (API)).

A. /°X>*^CH3

LX..&-CH, f^ccf ch₃ ^oh

Příklad 48

Do suspenze trimethylsulfoniumtetrafluorboratu (l,03g, 6,3 mmol) v THF (40 ml) při -10 °C byl přidán KHMDS (1,20 g, 6,0 mmol). Po míchání pod 0 °C po dobu 0,5 hodiny byla reakční nádoba ochlazena na -78 °C a byl přidán roztok sloučeniny vzorce 4, kde R¹³ je benzyloxykarbonyl (2,60g, 3 mmol) v DME (10 ml). Po 0,5 hodině byla reakční směs zředěna nasyceným vodným roztokem chloridu amonného (40 ml) a EtOAc (50 ml). Po separaci byla vodná vrstva promyta EtOAc (3 x 30 ml). Sloučené organické extrakty byly promyty solankou (40 ml) vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua. Silikagelová chromatografíe s MeOHiC^C^NFLjOH (2:97,6:0,4 až 4:95,5:0,4) poskytla 0,834 g (32% výtěžek) sloučeniny vzorce 5, kde R⁴ je benzyloxykarbonyl. MS: 881 (API).

-28CZ 298556 B6

Příklad 49

Roztok sloučeniny z příkladu 48 (0,176 g, 0,2 mmol) v MeOH (5 ml) byl ponechán míchat při 50 °C po dobu 4 dnů. Po koncentraci, silikagelová chromatografie s MeOH:CH₂Cl₂:NH4OH (4:95,6:0,4 až 6:93,5:0,4) poskytla 0,107 g (72% výtěžek) sloučeniny vzorce 5, kde R⁴ je vodík a epoxidová skupina v C-4 má následující uspořádání. MS: 748 (API).

I I., o h₃co'' ch₃

Příklad 50

Roztok sloučeniny z příkladu 48 (0,176 g, 0,2 mmol), jodidu draselného (2,32 g, 14 mmol) a cyklopropylaminu (2,43 ml, 2,00 g, 35 mmol) v MeOH (30 ml) byla ponechána míchat při 50 °C po dobu 2 dnů. Po koncentraci byl zbytek rozpuštěn ve vodě (25 ml) a EtOAc (100 ml). Po separaci byla vodná vrstva promyta EtOAc (3 x 50 ml). Sloučené organické extrakty byly promyty nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (50 ml) a solankou (40 ml), vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua. Silikagelová chromatografie s MeOH:CH₂Cl2:NH4OH (4:95,6:0,4 až 6:93,5:0,4) poskytla 0,377 g (69% výtěžek) sloučeniny vzorce 9, kde R je cyklopropylaminomethyl, následující konfigurace v C-4 uhlíku. MS: 805 (API).

Příklad 51

Roztok sloučeniny z příkladu 48 (0,176 g, 0,2 mmol), tetrabutylamoniumjodidu (0,739 g, 25 2,0 mmol) a butylaminu (0,395 ml, 0,293 g, 4 mmol) v MeOH (5 ml) byl ponechán míchat při °C po dobu 2 dnů. Po koncentraci byl zbytek rozpouštěn ve vodě (20 ml) a EtOAc (20 ml). Po separaci byla vodná vrstvy promyta EtOAc (3 x 20 ml). Sloučené organické extrakty byly promyty solankou (40 ml), vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua. Silikagelová chromatografie s MeOH:CH₂Cl₂:NH4OH (4:95,6:0,4 až 6:93,5:0,4) poskytla 0,088 g (54% výtě30 žek) sloučeniny vzorce 9, kde R je propylaminomethyl, s následující konfigurací v C-4 uhlíku. MS: 821 (API).

-29CZ 298556 B6

Příklad 52

Do roztoku sloučeniny vzorce 4, kde R⁴ je benzyloxykarbonyl a vodík připojený k C-9a dusíku je nahrazen benzyloxykarbonylem (0,500 g, 0,499 mmol) v THF (15 ml) při 0 °C byl přidán methylmagneziumbromid v Et₂O (3,0 M, 1,2 ml). Po 20 minutách byla reakční směs zředěna EtOAc (30 ml) a vodou (50 ml). Po separaci byla vodná vrstva promyta EtOAc (3 x 35 ml). Sloučené organické extrakty byly promyty 10% vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (100 ml) a solankou (120 ml), vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua, čímž se ío získalo 0,500 g (98% výtěžek) našedlé pěny. MS: 1 017, 845 (API).

Do roztoku sloučeniny výše popsané (0,500 g, 0,491 mmol) v izopropanolu (50 ml) byl přidán palladiový katalyzátor (0,250 g, 10% Pd/C). Reakční nádoba byla vymyta a naplněna vodíkem (345 kPa) a třepána při teplotě místnosti po dobu 48 hodin. Další palladiový katalyzátor (0,250 g,

10% Pd/C) byl přidán a hydrogenace pokračovala při 345kPa po dobu 24 hodin. Reakční směs byla zfiltrována přes Celit a koncentrována za vakua. Výsledný olej byl rozpuštěn v izopropanolu (50 ml), byl přidán palladiový katalyzátor (0,312 g, 10% Pd/C) a hydrogenace pokračovala při 345 kPa o dobu 24 hodin. Byl přidán další palladiový katalyzátor (0,170 g, 10% Pd/C) a hydrogenace pokračovala při 345 kPa o dobu 24 hodin. Reakční směs byla zfiltrována přes Celit a koncentrována za vakua.

Silikagelová chromatografie s MeOH:CH₂Cl₂:NH₄OH (8:91:1 až 10:89:1) poskytla 0,120g (33% výtěžek) sloučeniny vzorce 9 kde R je methyl, s následujícím uspořádáním v C-4 uhlíku. MS: 749 (API).

Příklad 53

Do roztoku sloučeniny vzorce 4, kde R⁴ je benzyloxykarbonyl a vodík připojený k C-9a dusíku je nahražen benzyloxykarbonylem (0,101 g, 0,101 mmol) v THF (2 ml) při -78 °C byl přidán fenylmagneziumbromid v THF (1,01 M, 1,0 ml). Po 15 minutách míchání pokračovalo při 0 °C po dobu 1 hodin, pak při teplotě místnosti po dobu 12 hodin. Reakce byla zředěna 10% vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (lOml) a EtOAc (20 ml). Po separaci byla vodná vrstva promyta EtOAc (3x15 ml). Sloučené organické extrakty byly promyty 10% vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (20 ml) a solankou (25 ml), vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua. Silikagelová chromatografie s MeOH:CH₂Cl₂:NH₄OH (5:94:1 až 25:74:1) poskytla 0,048 g (45% výtěžek) bílé pěny: MS: 1080 (LSIMS).

Palladiový katalyzátor (0,024g 10% Pd/C) byl přidán do roztoku sloučeniny popsané výše (0,024 g, 0,022 mmol) v methanolu (15 ml). Reakční nádoba byla vymyta a naplněna vodíkem (345 kPa) a třepána při teplotě místnosti po dobu 24 hodin. Reakční směs byla zfiltrována přes Celit a koncentrována za vakua. Silikagelová chromatografie s MeOH:CH₂Cl₂:NH₄OH (5:94,5:1 až 10:89:1) poskytla 0,010 g (28% výtěžek) sloučeniny vzorce 9, kde R je fenyl. MS: 811 (LSIMS).

-30CZ 298556 B6

Příklad 54

Do roztoku výchozí sloučeniny použité v příkladu 53 (0,300 g, 0,30 mmol) v THF (3 ml) při 0 °C byl přidán n-butylmagneziumchlorid v THF (2,0 M, 1,5 ml). Po 20 minutách byla reakční směs zředěna vodou a EtOAc (20 ml). Po separaci byla vodná vrstva promyta EtOAc (3 x 50 ml). Sloučené organické extrakty byly promyty 10% vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (50 ml) a solankou (55 ml), vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua, čímž se získalo 0,295 g (93% výtěžek) našedlé pěny. MS: 1060 (FAB).

ío Palladiový katalyzátor (0,087 g, 10% Pd/C) byl přidán do roztoku sloučeniny popsané výše (0,087 g, 0,082 mmol) v izopropanolu (15 ml). Reakční nádoba byla promyta a naplněna vodíkem (345 kPa) a třepána při teplotě místnosti po dobu 24 hodin.

Další palladiový katalyzátor (0,087 g, 10% Pd/C) byl přidán a hydrogenace pokračovala při

345 kPa po dobu 60 hodin. Reakční směs byla zfíltrována přes Celit a koncentrována za vakua.

Silikagelová chromatografie s MeOH:CH₂Cl₂:NH4OH (5:94,5:0,5 až 10:89:1) poskytla 0,010 g (28% výtěžek) sloučeniny vzorce 9, kde R je n-butyl, MS: 792 (API).

Příklad 55

Do roztoku výchozí sloučeniny použité v příkladu 53 (0,200 g, 0,20 mmol) v THF (2 ml) při 0 °C byl přidán ethylmagneziumbromid v THF (1,0 M, 2,0 ml). Po 20 minutách byla reakční směs zředěna vodou a EtOAc (20 ml). Po separaci byla vodná vrstva promyta EtOAc (3 x 30 ml).

Sloučené organické extrakty byly promyty 10% vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (50 ml) a solankou (55 ml), vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua. Silikagelová chromatografie s MeOH:CH₂Cl₂:NH4OH (5:94,5:0,5 až 20:79:1) poskytla 0,079 g (38% výtěžek) bílé pěny. MS: 1033 (LSIMS).

Palladiový katalyzátor (0,035 g, 10% Pd/C) byl přidán do roztoku sloučeniny výše popsané (0,079 g, 0,77 mmol) v ethanolu (20 ml). Reakční nádoba byla promyta a naplněna vodíkem (345 kPa) a třepána při teplotě místnosti po dobu 24 hodin. Další palladiový katalyzátor (0,036 g, 10% Pd/C) byl přidán a hydrogenace pokračovala při 345 kPa po dobu 24 hodin. Reakční směs byla zfíltrována přes Celit a koncentrována za vakua, čímž se získalo 0,056 g (96% výtěžek) sloučeniny vzorce 9, kde R je ethyl. MS: 763 (TS).

Příklad 56

Do roztoku výchozí sloučeniny použité v příkladu 53 (0,300 g, 0,30 mmol) v THF (3 ml) při 0 °C byl přidán izopropenylmagneziumchlorid v THF (0,5 M, 6,0 ml). Po 20 minutách byla reakce zředěna vodou a EtOAc (20 ml).

Po separaci byla vodná vrstva promyta EtOAc (3 x 30 ml). Sloučené organické extrakty byly promyty 10% vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (50 ml) a solankou (50 ml), vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua. Silikagelová chromatografie s MeOH:CH₂Cl₂:NH₄OH (3:96,9:0,1 až 20:79:0,1) poskytla 0,063 (20% výtěžek) bílé pěny. MS: 1045 (LSIMS).

Palladiový katalyzátor (0,075 g, 10% Pd/C) byl přidán do roztoku sloučeniny výše popsané (0,150 g, 0,165 mmol) v ethanolu (30 ml). Reakční nádoba byla promyta a naplněna vodíkem (345 kPa) a třepána při teplotě místnosti po dobu 24 hodin. Další palladiový katalyzátor (0,075 g, 10% Pd/C) byl přidán a hydrogenace pokračovala při 345 kPa po dobu 24 hodin. Reakční směs byla zfíltrována přes Celit a koncentrována za vakua. Silikagelová chromatografie

-31 CZ 298556 B6 s MeOH:CH₂Cl2:NH4OH (6:93:1 až 10:89:1) poskytla 0,024 g (19% výtěžek) sloučeniny vzorce 9, kde R je izopropenyl. MS: 775 (TS).

Příklad 57

Do roztoku výchozí sloučeniny použití v příkladu 53 (0,750 g, 0,75 mmol) v THF (12 ml) při 0 °C byl přidán allylmagneziumchlorid v THF (2,0 M, 3,0 ml). Po 15 minutách byla reakce zředěna vodou a EtOAc (40 ml). Po separaci byla vodná vrstva promyta EtOAc (3 x 50 ml). Sloučené organické extrakty byly promyty 10% vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (100 ml) a solankou (100 ml), vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua. Silikagelová chromatografie s MeOH:CH₂Cl₂:NH4OH (6:93:1 až 15:84:1) poskytla 0,530 (68% výtěžek) našedlé pěny. MS: 1044, 910 (API).

Palladiový katalyzátor (0,075 g, 10% Pd/C) byl přidán do roztoku sloučeniny výše popsané (0,350 g, 0,335 mmol) v izopropanolu (10 ml). Reakční nádoby byla promyta a naplněna vodíkem (345 kPa) a třepána při teplotě místnosti po dobu 24 hodin. Další palladiový katalyzátor (0,150 g, 10% Pd/C) byl přidán a hydrogenace pokračovala při 345 kPa po dobu 24 hodin. Reakční směs byla zfiltrována přes Celit a koncentrována za vakua. Silikagelová chromatografie s MeOH:CH₂Cl₂:NH4OH (6:93:1 až 10:89:1) poskytla 0,148 g (57% výtěžek) sloučeniny vzorce 9, kde R je propyl. MS: 778 (API).

Příklad 58

Do roztoku sloučeniny použité jako výchozí látky v příkladu 53 (0,750 g, 0,75 mmol) v THF (12 ml) při 0 °C byl přidán allylmagneziumchlorid v THF (2,0 M, 3,0 ml). Po 15 minutách byla reakce zředěna vodou a EtOAc (40 ml).Po separaci byla vodná vrstva promyta EtOAc (3 x 50 ml). Sloučené organické extrakty byly promyty 10% vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (10 ml) a solankou (100 ml), vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua. Silikagelová chromatografie s MeOH:CH₂Cl₂:NH4OH (6:93:1 až 15:84:1) poskytla 0,530 g (68% výtěžek) našedlé pěny. MS: 1044 (API).

Roztok výše popsané sloučeniny (0,104 g, 0,100 mmol) a (15)-(+)-10-kamforsulfonové kyseliny (0,046 g, 0,200 mol) v MeOH (4 ml) byl ochlazen na -78 C a zpracován s ozonem až zůstávala sytě modrá barva. Reakce byla pročištěna kyslíkem, byl přidám dimethylsulfid (0,13 ml, 1,76 mmol) a pyridin (0,20 ml, 2,42 mmol) a míchání pokračovalo po dobu 12 hodin. Byl přidán methylenchlorid (30 ml) a 10% vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného, vrstvy byly odděleny a vodná vrstva byla extrahována methylenchloridem (3 x 30 ml). Sloučené organické extrakty byly promyty 10% vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (50 ml) a solankou (50 ml), vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua. Silikagelová chromatografie s MeOH:CH₂Cl₂:NH4OH (6:93:1 až 10:89:1) poskytla 0,024 g (23% výtěžek) našedlé pěny. MS:912(API).

Do roztoku sloučeniny výše opsané (0,22 g, 0,024 mmol) v MeOH (1 ml) byl přidán tatrahydroborat sodný (0,001 g, 0,024 mmol). Další tetrahydroborat sodný (0,004 g, 1,0 mmol) byl přidán během periody 3 hodin. Reakční směs byla zředěna methylenchloridem (30 ml) a 10% roztokem hydrogenuhličitanu sodného (20 ml). Po separaci byla vodná vrstva extrahována methylenchloridem (3 x 30 ml). Sloučené organické extrakty byly promyty 10% vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (50 ml) a solankou (50 ml), vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua, čímž se získalo 0,022 g (100% výtěžek) žluté pěny. MS: 914 (API).

Palladiový katalyzátor 0,012g, 10% Pd/C) byl přidán do roztoku sloučeniny výše popsané (0,022 g, 0,24 mmol) v izopropanolu (10 ml). Reakční nádoba byla promyta a naplněna vodíkem (345 kPa) a třepána při teplotě místnosti po dobu 24 hodin. Byl přidán další palladiový kataly-32CZ 298556 B6 zátor (0,20 g, 10% Pd/C) a hydrogenace pokračovala pří 345 kPa po dobu 24 hodin. Reakční směs byla zfíltrována přes celit a koncentrována za vakua. Silikagelová chromatografie s MeOH:CH₂Cl₂:NH4OH (8:91:1 až 10:89:1) poskytla 0,005 mg (23% výtěžek) sloučeniny vzorce 9, kde R je 2-hydroxyethyl. MS: 779 (API).

Příklad 59

Do roztoku výchozí sloučeniny použité v příkladu 53 (0,750 g, 0,75 mmol) v THF (12 ml) při

0 °C byl přidán allylmagneziumchlorid v THF (2,0 M, 3,0 ml). Po 15 minutách byla reakce zředěna vodou a EtOAc (40 ml). Po separaci byla vodná vrstva promyta EtOAc (3 x 50 ml). Sloučené organické extrakty byly promyty 10% vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (10 ml) a solankou (10 ml), vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua. Silikagelová chromatografie s MeOH:CH₂Cl₂:NH4OH (6:93:1 až 15:84:1) poskytla 0,530 g (68% výtěžek) našedlé pěny. MS: 1044 (API).

Roztok výše popsané sloučeniny (0,104 g, 0,100 mmol) a (15)-(+)-10-kamforsulfonové kyseliny (0,046g, 0,200 mmol) v MeOH (4 ml) byl ochlazen na -78 °C a zpracován s ozonem, dokud nevytrvávala sytě modrá barva. Reakce byla přečištěna kyslíkem, byl přidán dimethylsulfid (0,13 ml, 1,76 mmol) a pyridin (0,20 ml, 2,42 mmol) a míchání pokračovalo po dobu 12 hodin.

Byl přidán methylenchlorid (30 ml) a 10% vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného (10 ml), vrstvy byly odděleny a vodná vrstva byla extrahována methylenchloridem (3 x 30 ml). Sloučené organické extrakty byly promyty 10% vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (50 ml) a solankou (50 ml), vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua. Silikagelová chromatografie s MeOH:CH₂Cl₂:NFLtOH (6:93:1 až 10:89:1) poskytla 0,024 g (23% výtěžek) našedlé pěny. MS: 912 (API).

Palladiový katalyzátor (0,040 g, 10% Pd/C) byl přidán do roztoku sloučeniny výše popsané (0,057 g, 0,063 mmol) v izopropanolu (15 ml). Reakční nádoba byla promyta a naplněna vodíkem (345 kPa) a třepána při teplotě místnosti po dobu 24 hodin. Byl přidán další palladiový katalyzátor (0,040 g, 10% Pd/C) a hydrogenace pokračovala při 345kPa po dobu 24 hodin. Reakční směs byla zfíltrována přes Celit a koncentrována za vakua. Silikagelová chromatografie s MeOH:CH₂Cl₂:NH4OH (6:93:1 až 10:89:1) poskytla 0,010 g (15% výtěžek) sloučeniny vzorce 9, kde R je formylmethyl. MS: 777 (API).

Příklad 60

Do roztoku 2-brompyridinu (0,474 g, 3,0 mmol) v THF (5 ml) při -78 °C bylo přidáno n-butyl40 lithium (3,0 M, 1,20 ml) při -78 °C. Po 40 minutách byl roztok převeden pomocí kanyly chlazené pláštěm suchého ledu do baňky obsahující MgCl₂ (0,428 g, 4,5 mmol) a ether (4 ml) při -78 °C. Po 15 minutách byl zaveden roztok sloučeniny vzorce 4, kde R¹ je benzyloxykarbonyl (0,260 g, 0,3 mmol) v THF (3 ml) při -78 °C a míchání pokračovalo, přičemž bylo dovoleno, aby se reakce ohřála na teplotu místností během několika hodin. Po 3,5 hodinách byla reakční směs zředěna nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (20 ml) a EtOAc (30 ml). Po separaci byla vodná vrstva promyta EtOAc (3x50 ml).

Sloučené organické extrakty byly promyty nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (50 ml) a solankou (60 ml), vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua.

Silikagelové chromatografie s MeOH:CH₂Cl₂NHtOH (6:93, 3:0,7 až 10:89:1) poskytla 0,023 g (9,5%ní výtěžek) sloučeniny vzorce 9, kde Rje 2-pyridyl. MS: 812 (API).

-33 CZ 298556 B6

Příklad 61

Do baňky s kulatým dnem obsahující n-butyllithium (3,0 M, 1,62 ml) v diethyletheru (15 ml) při -78 C byl přidán zchlazený (-78 °C) 3-brompyridin (0,790 g, 5 mmol) pomocí kanyly chlazené pláštěm suchého ledu. Míchání pokračovalo při -78 °C po dobu 35 minut. Byla přidána suspenze MgBr₂ diethyletheratu (0,114 g, 0,440 mmol) v diethyletheru (3 ml) při -78 °C pomocí kanyly chlazené pláštěm suchého ledu, do roztoku 3-pyridyllithia. Roztok sloučeniny vzorce 4, kde R⁴ je benzyloxykarbonyl (0,347 g, 0,400 mmol) v diethyletheru (3 ml) při -78 °C byl zaveden pomocí kanyly. Míchání pokračovalo při -78 °C po dobu 2 hodin a pomalu docházelo k oteplování na

0 °C během 3 hodin. Reakční směs byla zředěna nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (20 ml) a EtOAc (30 ml). Po separaci byla vodná vrstva promyta EOAc (3 x 50 ml).

Silikagelová chromatografie s MeOH:CH₂Cl₂:NH4OH (4:95,4:0,6 až 20:79:1) poskytla 0,075 g (26% výtěžek) bílé pěny. MS: 947, 812 (API).

Palladiový katalyzátor (0,073 g, 10%ní Pd/C) byl přidán do roztoku sloučeniny výše popsané (0,073 g, 0,077 mmol) v izopropanolu (30 ml). Reakční nádoba byla promyta a naplněna vodíkem (345kPa) a třepána při teplotě místnosti po dobu 48 hodin. Reakční směs byla zfiltrována přes Celit a koncentrována za vakua. Silikagelová chromatografie s MeOH:CH₂Cl₂: NH4OH (6:93:1 až 8:91:1) poskytla 0,032 g (51% výtěžek) sloučeniny vzorce 9, kde R je 3-pyridyl.

MS: 812 (API).

Příklad 62

Do roztoku methylmagneziumbromidu v diethyletheru (3,0 M, 1,8 ml) při 0 °C byl přidán roztok 5-hexylennitrilu (0,063 ml, 6,00 mmol) v THF (5 ml). Po míchání při teplotě 0 °C po dobu 6 hodin byl přidán roztok sloučeniny vzorce 4 kde R⁴ je H (0,220, 0,300 mmol) v DME (10 ml) a míchání pokračovalo při 0 °C po dobu 0,5 hodiny, pak při teplotě místnosti po dobu 4 hodin. Reakční směs byla zředěna vodu, (20 ml) a EtOAc (25 ml), vrstvy byly odděleny a vodná vrstva byla promyta EtOAc (3 x 20 ml).

Sloučené organické extrakty byly promyty nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (20 ml) a solankou (25 ml), vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua. Silikagelová chromatografie s MeOH:CH₂Cl₂:NFLtOH (6:93:1 až 10:89:1) poskytla 0,035 g (14% výtěžek) sloučeniny vzorce 9, kde R je 6-kyan-l-pentinyl. MS: 827 (API).

Příklad 63

Do roztoku sloučeniny z příkladu 49 s výjimkou, že R⁴ je benzyloxykarbonyl (0,101 g, 0,115 mmol) v DME (3 ml) byl přidán LiAlFfi (1,0 M, 2,1 ml) po kapkách. Po 10 minutách byla reakční směs postupně zpracována vodou (0,04 ml), 15% roztokem NaOH (0,044 ml) a vodou (0,132 ml), pak míchána při teplotě místnosti po dobu 0,5 hodiny. Směs byla zředěna EtOAc (20 ml) a vodou (20 ml). Po separaci byla vodná vrstva extrahována EtOAc (3 x 30 ml).

Sloučené organické extrakty byly promyty nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (50 ml) a solankou (60 ml), vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua. Silikagelová chromatografie s MeOH:CH₂Cl₂:NH4:OH (3:96,5:0,5 až 3,5:95:0,5) poskytla 0,042 g (49% výtěžek) sloučeniny vzorce 9, kde R je methyl, s následující konfigurací v C-4 uhlíku. MS: 749 (API).

-34CZ 298556 B6

Příklad 64

Do roztoku 1-methylimidazolu (0,41 g, 4,99 mmol) v THF (5 ml) při -78 °C bylo přidáno n-butyllithium (2,5 M, 2,02ml) Po 45 minutách při -78 °C byl přidán roztok pomocí kanyly do baňky obsahující MgCl₂ (0,71 g, 7,49 mmol) v THF (5 ml) pří 0 °C. Po 1,5 hodině při 0 °C byl zaveden roztok vychází sloučeniny použité v příkladu 53 (0,500 g, 0,499 mmol) v DME (2 ml) a míchání pokračovalo při 0 °C po dobu 1 hodiny. Reakční směs byla zředěna nasyceným io vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (100 ml) a EtOAc (100 ml). Po separaci byla vodná vrstva promyta EtOAc (3 x 100 ml).

Sloučené organické extrakty byly promyty nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (100 ml) a solankou (100 ml), vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua, čímž se získalo 0,660 g žluté pěny. MS:499 (API).

Palladiový katalyzátor (0,700 g, 10% Pd/C) byl přidán do roztoku sloučenin výše popsané v izopropanolu (60 ml). Reakční nádoba byla propláchnuta a naplněna vodíkem (345kPa) a třepána při teplotě místnosti po dobu 24 hodin. Další palladiový katalyzátor (0,500 g, 10%

Pd/C) byl přidán a hydrogenace pokračovala při 345 kPa po dobu 24 hodin. Reakční směs byla zfiltrována přes Celit a koncentrována za vakua. Silikagelová chromatografie s MeOH:CH₂Cl₂:NH4OH (1:98:1 až 8:91:1) poskytla 0,052 g (13% výtěžek) sloučeniny vzorce 9, kde R je l-methylimidazol-2-yl. MS: 816 (API).

Příklad 65

Do roztoku furanu (0,34 g, 4,99 mmol) v THF (5 ml) při -78 °C bylo přidáno n-butyllithium (2,5 M, 1,98 ml). Po 0,5 hodiny při -78 °C byl přidán roztok do baňky obsahující MgCl₂ (0,71 g,

7?49mmol) v THF (5 ml) při 0 °C. Po 1,5 hodině při 0 °C byl zaveden roztok výchozí sloučeniny použité v příkladu 53 (0,500 g, 0,499 mmol) v DME (2 ml) a míchání pokračovalo při 0 °C po dobu 1 hodiny, pak při teplotě místnosti po dobu 1 hodiny. Reakční směs byla zředěna nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (100 ml) a EtOAc (100 ml). Po separaci byla vodná vrstva promyta EtOAc (3xl00ml).

Sloučené organické extrakty byly promyty nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (100 ml) a solankou (100 ml), vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua. Silikagelová chromatografie s MeOH:CH₂Cl₂:NH₄OH (1:98:1 až 8:91:1) poskytla 0,096 g (24% výtěžek) bílé pěny. MS: 935 (API).

Palladiový katalyzátor (0,100 g, 10% Pd/C) byl přidán do roztoku sloučeniny popsané výše v izopropanolu (15 ml). Reakční nádoba byla propláchnuta a naplněna vodíkem (345 kPa) a třepána při teplotě místnosti po dobu 72 hodin.

Reakční směs byla zfiltrována přes Celit a koncentrována za vakua. Silikagelová chromatografie s MeOH:CH₂Cl₂:NH₄OH (1:98:1 až 8:91:1) poskytla 0,053 g (13% výtěžek) sloučeniny vzorce 9, kde R je 2-furyl. MS: 802 (API).

-35 CZ 298556 B6

Příklad 66

Do roztoku N-methylpyrrolu (0,184 g, 2,31 mmol) v THF (4 ml) při -78 °C bylo přidáno n-butyllithium (2,5 M, 0,93 ml). Roztok byl ohřát na teplotu místnosti během 1 hodiny a pak byl přidán pomocí kanyly do baňky roztoku obsahující MgCl₂ (0,329 g, 8,46 mmol) v Et₂O (4 ml) při teplotě místnosti. Po 1 hodině byl zaveden roztok sloučeniny vzorce 4, kde R⁴ je benzyloxykarbonyl (0,200 g, 0,231 mmol) v THF (2 ml) a míchání pokračovalo při teplotě místnosti po dobu 45 minut. Reakční směs byla zředěna nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (50 ml) a EtOAc (50 ml). Po separaci byla vodná vrstva promyta EtOAc (3 x 50 ml). Sloučené organické extrakty byly promyty nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (50 ml) a solankou (50 ml), vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua, čímž se získalo 0,293 g žluté pěny. MS: 949 (API).

Palladiový katalyzátor (0,324 g, 10% Pd/C) byl přidán do roztoku sloučeniny výše popsané v izopropanolu (30 ml). Reakční nádoby byla propláchnuta a naplněna vodíkem (345 kPa) a třepána při teplotě místnosti po dobu 24 hodin. Byl přidán další palladiový katalyzátor (0,300 g,

10% Pd/C) a hydrogenace pokračovala při 345 kPa po dobu 24 hodin. Reakční směs byla zfiltrována přes Celit a koncentrována za vakua. Silikagelová chromatografie s MeOH:CH₂Cl₂:NH₄OH (6:93:1 až 8:91:1) poskytla 0,033 g (18% výtěžek) sloučeniny vzorce 9, kde R je l-methyl-2pyrrolyl. MS: 814 (API).

Příklad 67

Do roztoku nečištěné sloučeniny připravené jak je popsáno v příkladu 39 (0,480 g) v izopropanolu (40 ml) byl přidán oxid platiny (0,115 g, 0,505 mmol). Reakční nádoby byla propláchnuta a naplněna vodíkem (345 kPa) a třepána při teplotě místnosti po dobu 24 hodin. Filtrace alikvotu reakční směsi přes Celit a koncentrace za vakua poskytla sloučeninu vzorce 9, kde R je 325 dimethylamino-l-propenyl. MS: 819 (API).

Příklad 68

Oxid platiny (0,076 g, 0,335 mmol) byl přidán do zbývajícího roztoku z příkladu 67 a reakční nádoby byla propláchnuta a naplněna vodíkem (345 kPa) a třepána při teplotě místnosti po dobu

96 hodin. Reakční směs byla zfíltrována přes Celit a koncentrována za vakua. Silikagelová chromatografie s MeOH:CH₂Cl₂:NH4OH (4:95:1 až 6:93:1) poskytla 0,069 g (15% výtěžek) sloučeniny vzorce 9, kde Rje 3-dimethylpropyl. MS: 821 (API).

Tabulka 2

Sloučeniny z příkladu 69-81 mají obecnou strukturu vzorce 10 uvedenému níže, sR substituenty označenými v této tabulce. Sloučeniny z příkladů 69 - 82 byly připraveny podle postupů z příkladů 50 a 51 uvedených výše, s reakční periodou specifikovanou v níže uvedené tabulce. V tabulce jsou výtěžek a hmotnostní spektr („hmotn.spektra“), pokud jde o jejich údaje, aplikovány k finálnímu produktu.

-36CZ 298556 B6

Příklad	R	reakční doba(h)	výtěžek (%)	hmotn. spektrum
69	1-imidazolyl	72	60	816
70	n-propylamino	48	55	807
71	dimethylamino	24	42	793
72	methylamino	120	55	779
73	ethylamino	120	58	793
74	izopropylamino	48	44	806
75	izobutylamino	48	27	821
76	trimethylenimino	24	31	804
77	allylamino	24	22	804
78	cyklopropylmethylamino	24	34	818
79	ÝV-ethylamino	48	16	820
80	t-butylamino	96	30	821
81	diethylamino	168	25	820
81(a)		48	75	818,5
81(b)		96	95	832,6
82	4-methoxybenzylamino	48	21,7	884,6
83	4-nitrobenzylamino	48	8	899,7
84	4-ch lorbenzy lamino	48	25,5	888,6
85	3,4-difluorbenzy lamino	48	14,5	890,6
85	3-pyridylmethylamino	48	21,0	855,6
86	4-trifluormethylbenzylamino	48	16,5	922,6
87	2,6-difluorbenzylamino	48	11,0	890,6
88	benzylamino	96	62	854,7
89	4-fluorbenzylamino	48	50,9	872,7
90	3-fluorbenzylamino	48	32,7	872,7
91	2-fluorbenzylamino	48	39,6	872,7
92	2,4-difluorbenzylamino	48	24,6	890,1
93	2,5-difluorbenzylamino	48	28,1	890,1
94	3,5-difluorbenzylamino	48	35,6	890,1
95	l-(4-fluorfenyl)piperazin	48	44,7	927,6
96	2-trifluormethylbenzylamino	48	32,7	922,5
97	4-trifluormethylbenzylamino	48	28,6	938,1
98	3-trifluormethylbenzylamino	48	26,2	922,6
99	2-fluorfenylethylamino	48	33,5	886,2
100	3-fluorfenylethylamino	48	28,7	886,1
101	4-pyridylmethylamino	48	46	855,2
102	methyl-3-pyridylmethylamino	72	28,8	869,6
103	4-hydroxy-3-methoxybenzylamino	48	12,0	900,1
104	piperonylamino	48	14,0	898,1
105	3-methoxybenzylamino	48	33,0	884,1
106	2-methoxybenzylamino	48	24,0	884,5
107	2-pyridylmethylamino	48	28,9	855,1

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Derivát 4-substituovaného 9-deoxo-9a-aza-9a-homoerythromycinu A obecného vzorce 1 kde ío R¹ je H, hydroxy nebo methoxy,

R² je hydroxy,

R³ je (Ci-Cio)alkyl, (C2-Cio)alkenyl, (C2-Ci0)alkinyl, kyan, -CH2S(O)nR⁸, kde n je celé číslo 15 v rozmezí od 0 do 2, -CH2OR⁸, -CH2N(OR⁹)R⁸, -CH2NR⁸R¹⁵, -(CH₂)_m((C₆-Ci₀)aryl) nebo

-(CH₂)_m( 5-1 Očlenný heteroaryl), kde m je celé číslo v rozmezí od 0 do 4 a kde předcházející R³ skupiny jsou případně substituovány 1 až 3 R¹⁶ skupinami, nebo R² a R³ jsou vzaty dohromady k vytvoření oxazolylového kruhu jak je znázorněno níže

R⁴ je H, -C(O)R⁹, -C(O)OR⁹, -C(O)NR⁹R¹⁰ nebo chránící skupina hydroxy,

R⁵ je -SR⁸, -(CH2)n(O)R⁸, kde n je 0 nebo 1, (C,-C10)alkyl, (C₂-C₁₀)alkenyl, (C₂-C₁₀)alkinyl, -(CH₂)_m((C₆-Cio)aryl), nebo -(CH₂)_m(5-l Očlenný heteroaiyl), kde m je celé číslo v rozmezí od

25 0 do 4 a kde předcházející R⁵ skupiny jsou případně substituovány 1 až 3 R¹⁶ skupinami, každý R⁶ a R⁷ je nezávisle H, hydroxy, (Ci-C₆)alkoxy, (Ci-C₆)alkyl, (C₂-C₆)alkenyl, (C₂-C₆)alkinyl, -(CH₂)_m((C6-Cio)aryl) nebo -(CH₂)_m(5-l Očlenný heteroaiyl)), kde m je celé číslo v rozmezí od 0 do 4, každý R⁸ je nezávisle H, (Ci-Cw)alkyl, (C2-Cj0)alkenyl, (C2-C)0)alkinyl, -(CH2)qCR¹¹R¹²(CH2)_rNR R , kde q a r jsou každý nezávisle celé číslo v rozmezí od 0 do 3 s výjimkou, že q a r nejsou oba 0, -(CH₂)_m((C₆-Cio)-aryl) nebo —<CH₂)_m(5—1 Očlenný heteroaryl), kde m je celé číslo

-38CZ 298556 B6 v rozmezí od 0 do 4 a kde předcházející R⁸ skupiny s výjimkou H jsou případně substituovány 1 až 3 R¹⁶ skupinami, nebo kde R⁸ je jako -CH₂NR⁸R¹⁵, R¹⁵ a R⁸ mohou být vzaty dohromady, čímž se vytvoří

5 4-10členný nasycený monocyklický nebo polycyklický nasycený kruh nebo 5-10členný heteroarylový kruh, kde uvedené nasycené a heteroarylové kruhy případně zahrnují 1 až 2 heteroatomy vybrané z O, S a -N(R⁸)- navíc k dusíku, ke kterému jsou R¹⁵ a R⁸ připojeny, přičemž nasycený kruh případně zahrnuje 1 až 2 dvojné nebo trojné vazby uhlík-uhlík, a tyto nasycené a heteroarylové kruhy jsou případně substituovány 1-3 R¹⁶ skupinami, každý R⁹ a R¹⁰ je nezávisle H nebo (Ci-Ce)alkyl, každý R¹¹, R¹², R¹³ a R¹⁴ jsou nezávisle vybrány zH, (Ci-Cio)alkyl, -(CH₂)_m((C₆-Ci₀)aryl), a -(CH₂)_m(5-10členný heteroaryl), kde m je celé číslo v rozmezí od 0 do 4 a kde předcházející

15 R¹¹, R¹², R¹³ a R¹⁴ skupiny, s výjimkou H, jsou případně substituovány 1-3 R¹⁶ skupinami, nebo R¹¹ a R¹³ jsou vzaty dohromady, čímž se vytvoří -(CH₂)_q-, kde p je celé číslo od 0 do 3, takže se vytvoří 4 až 7členný nasycený kruh, který případně zahrnuje 1 až 2 dvojné nebo trojné vazby uhlík-uhlík, nebo R¹³ a R¹⁴ jsou vzaty dohromady, čímž se vytvoří 4 až lOčlenný monocyklický nebo polycyklický nasycený kruh nebo 5 až lOčlenný heteroarylový kruh, přičemž tyto nasycené a heteroarylové kruhy případně zahrnují 1 až 2 heteroatomy vybrané z O, S a -N(R⁸)- navíc k dusíku, ke kterému jsou připojeny 1 nebo 2 dvojné nebo trojné vazby uhlík-uhlík a tento nasycený a hetero25 arylový kruh jsou případně substituovány 1 až 3 R¹⁶ skupinami,

R¹⁵ je H, (Cj-Cio)alkyl, (C₂-Cio)alkenyl, nebo (C₂-Ci₀)alkinyl, kde předcházející R¹⁵ skupiny jsou případně substituovány 1 až 3 substituenty nezávisle vybranými z halogenu a -OR⁹,

30 každý R¹⁶ je nezávisle vybrán z halogen, kyan, nitro, trifluormethyl, azido, -C(O)R¹⁷, -C(O)OR¹⁷, -OC(O)OR¹⁷, -NR⁶C(O)R⁷, -C(O)NR⁶R⁷, -NR⁶R⁷, hydroxy, (C,-C₆)alkyl, (C,-C₆)alkoxy, -(CH₂)_m((C₆-Ci₀)aryl) a -(CH₂)_m(5-10členný heteroaryl), kde m je celé číslo v rozmezí od 0 do 4 a kde arylové a heteroarylové substituenty jsou případně substituovány 1 nebo 2 substituenty nezávisle vybranými z halogen, kyan, nitro, trifluormethyl, azido, -C(O)R¹⁷,

35 -C(O)OR¹⁷, -OC(O)OR¹⁷, -NR⁶C(O)R⁷, -C(O)NR⁶R⁷, -NR⁶R⁷, hydroxy, (Ci-C₆)alkyl a (C]-C₆)alkoxy, každý R¹⁷ je nezávisle vybrán z H(C]-C₆)alkyl, (C₂-Ci₀)alkenyl, (C₂-Ci₀)alkinyl, -(CH₂)_m((C₆-Ci₀)aryl) a -(CH₂)_m- (5-10členný heteroaryl), kde m je celé číslo v rozmezí od

40 0 do 4, s podmínkou, že R⁸ není H, když R³ je -CH₂S(O)_nR⁸, nebo jeho farmaceuticky akceptovatelná sůl.
2. Derivát podle nároku 1, kde R⁴ je H, acetyl nebo benzyloxykarbonyl.
3. Derivát podle nároku 2, kde R¹ je hydroxy, R² je hydroxy, R³ je -CH2NR¹⁵R⁸ nebo -CH2SR⁸.
4. Derivát podle nároku 3, kde R^{3 4} je -CH2NR¹⁵R⁸ a R¹⁵ a R⁸ jsou nezávisle vybrány z H, (Ci-Cio)alkyl, (C2-Ci₀)alkenyl a (C₂-Ci₀)alkinyl, přičemž předcházející R¹⁵ a R⁸ skupiny s výjimkou H jsou případně substituovány 1 nebo 2 substituenty nezávisle vybranými z hydroxy, halogen a (Ci-C₆)alkoxy.

-39CZ 298556 B6
5. Derivát podle nároku 4, kde R¹⁵ a R⁸ jsou každý nezávisle vybrán z H, methyl, ethyl, allyl, n-butyl, izobutyl, 2-methoxyethyl, cyklopentyl, 3-methoxypropyl, 3-ethoxypropyl, n-propyl, izopropyl, 2-hydroxyethyl, cyklopropyl, 2,2,2-trifluorethyl, 2-propinyl, sek.butyl, Zerc-butyl a n-hexyl.
6. Derivát podle nároku 2, kde R¹ je hydroxy, R² je hydroxy, R³ je -CH2NHR⁸ a R⁸ je -CCH2)m((Ci-C₆)aryl), kde m je celé číslo v rozmezí od 0 do 4.
7. Derivát podole nároku 6, kde R⁸ je fenyl nebo benzyl.
8. Derivát podle nároku 2, kde R¹ je hydroxy, R² je hydroxy, R³ je -CH₂NR¹⁵R⁸ a R¹⁵ a R⁸ jsou vzaty dohromady k vytvoření 4 až 1 Očlenného nasyceného kruhu.
9. Derivát podle nároku 8, kde R¹⁵ jsou vzaty dohromady k vytvoření piperidino, trimethylen15 imino nebo morfolinového kruhu.
10. Derivát podle nároku 2, kde R¹ je hydroxy, R² je hydroxy, R³ je -CH2NR^!5R⁸ a R¹⁵ a R⁸ jsou vzaty dohromady k vytvoření 5 až 1 Očlenného heteroarylového kruhu případně substituovaného 1 nebo 2 (Ci-C6)alkylovými skupinami.
11. Derivát podle nároku 10, kde R¹⁵ a R⁸ jsou vzaty dohromady k vytvoření pyrrolidino, triazolyl nebo imidazolylového kruhu, kde uvedené heteroarylové skupiny jsou případně substituovány 1 nebo 2 methylovými skupinami.

25
12. Derivát podle nároku 2, kde R¹ je hydroxy, R² je hydroxy, R³ je -CH₂SR⁸ je R⁸ je vybrán z (Ci-Cio)alkyl, (C₂-Ci₀)alkenyl a (C₂-Cio)alkinyl, kde uvedené R⁸ skupiny jsou případně substituovány 1 nebo 2 substituenty nezávisle vybranými z hydroxy, halogen a (Ci-C₆)alkoxy.
13. Derivát podle nároku 12, kde R⁸ je methyl, ethyl, nebo 2-hydroxyethyl.
14. Derivát podle nároku 2, kde R¹ je hydroxy, R² je hydroxy a R³ je vybrán z (Ci-C_]0)alkyl, (C₂-Cio)alkenyl a (C₂-Ci₀)alkinyl, kde R³ skupiny jsou případně substituovány 1 nebo 2 substituenty nezávisle vybranými z hydroxy, -C(O)R¹⁷, -NR⁶R⁷, halogen, kyan, azido, 5 až 1 Očlenný heteroaryl a (Ci-C6)alkoxy.
15. Derivát podle nároku 14, kde R³ je methyl, allyl, vinyl, ethinyl, 1-methyl-l-propenyl, 3methoxy-l-propinyl, 3-dimethylamino-l-propinyl, 2-pyridylethinyl, 1-propinyl, 3-hydroxy1-propinyl, 3-hydroxy-l-propenyl, 3-hydroxypropyl, 3-methoxy-l-propenyl, 3-methoxypropyl, 1-propenyl, n-butyl, ethyl, propyl, 2-hydroxyethyl, azidomethyl, formylmethyl, 6-kyan40 1-pentinyl, 3-dimethylamino-l-propenyl nebo 3-dimethylaminopropyl.
16. Derivát podle nároku 2, kde R¹ je hydroxy, R² je hydroxy a R³ je -(CH₂)_m(5 až 1 Očlenný heteroaryl), kde m je celé číslo v rozmezí od 0 do 4.

45
17. Derivát podle nároku 16, kde R³ je 2-thienyl, 2-pyridyl, l-methyl-2-imidazolyl, 2-fuiyl nebo l-methyl-2-pyrrolyl.
18. Derivát podle nároku 2, kde R¹ je hydroxy, R² je hydroxy a R³ je -(CH₂)_m((C₆-Ci₀)aryl), kde m je celé číslo v rozmezí od 0 do 4.
19. Derivát podle nároku 18, kde R³ je fenyl.
20. Derivát podle nároku 2, kde R² a R³ jsou vzaty dohromady k vytvoření oxazolylového kruhu níže uvedeného vzorce

-40CZ 298556 B6
21. Derivát podle nároku 2, kde R³ je vybrán z následujícího vzorce kde X³ je O, S nebo -N(R¹⁵)-, R⁹ a R¹⁵ mají význam uvedený v nároku 1 a -OR⁹ skupina může 5 být připojena ke kterémukoli dostupnému uhlíku na fenylové skupině.
22. Derivát podle některého z nároků 1 až 21 pro použití jako léčivo.
23. Použití derivátu podle některého z nároků 1 až 21 pro výrobu léčiva pro léčbu bakteriálních 10 infekcí nebo protozoálních infekcí u savců, ryb nebo ptáků.
24. Farmaceutická kompozice, vyznačující se tím, že obsahuje terapeuticky účinné množství derivátu podle některého z nároků 1 až 21 nebo jeho farmaceuticky akceptovatelné soli a farmaceuticky akceptovatelný nosič.
25. Farmaceutická kompozice podle nároku 24, v y z n a č u j í c í se tím, že je určena pro léčbu bakteriálních infekcí nebo protozoálních infekcí u savců ryb nebo ptáků.

20
26. Způsob přípravy derivátů vzorce 1 kde

R¹ je H, hydroxy nebo methoxy, R² je hydroxy,

-41 CZ 298556 B6

R³ je (Ci-Cio)alkyl, (C2Cio)alkenyl, (C2-Ci0)alkinyl, kyan, -CH2S(O)nR⁸, kde n je celé číslo v rozmezí od 0 do 2, -CH2OR⁸, -CH2N(OR⁹)R⁸, -CH2NR⁸R¹⁵, -(CH₂)_m((C₆-C₁₀)aryl) nebo -(CH₂)_m(5-10členný heteroaryl), kde m je celé číslo v rozmezí od 0 do 4 a kde předcházející R³ skupiny jsou případně substituovány 1 až 3 R¹⁶ skupinami, nebo R² a R³ jsou vzaty dohromady k vytvoření oxazolylového kruhu jak je znázorněno níže

R⁴ je H, -C(O)R⁹, -C(O)OR⁹, -C(O)NR⁹R¹⁰ nebo chránící skupina hydroxy, to R⁵ je -SR⁸, -(CH2)n(O)R⁸, kde n je 0 nebo 1, (Ci-Cio)alkyl, (C2-Ci₀)alkenyl, (C₂-Cjo)alkinyl, -(CH₂)_m((C6-Cio)aryl), nebo -(CH₂)_m(5-10členný heteroaryl), kde m je celé číslo v rozmezí od 0 o 4 a kde předcházející R⁵ skupiny jsou případně substituovány 1 až 3 R¹⁶ skupinami, každý R⁶ a R⁷ je nezávisle H, hydroxy, (C]-C₆)alkoxy, (Ci-C6)alkyl, (C₂-C₆)alkenyl, (C₂-C₆)15 alkinyl, -{CH₂)_m((C₆-C₁₀)aryl) nebo -(CH₂)_m(5-10členný heteroaryl)), kde m je celé číslo v rozmezí od 0 do 4, každý R⁸ je nezávisle H, (Ci-Cio)alkyl, (C2-Ci0)alkenyl, (C2-Ci0)alkinyl, -(CH2)qCR'’R¹²(CH2)_rNR¹³R¹⁴, kde q a r jsou každý nezávisle celé číslo v rozmezí od 0 do 3 s výjimkou, že q a r

20 nejsou oba 0, -(CH₂)_m((C6-Ci₀)-aiyl) nebo -(CH₂)_m(5-10členný heteroaryl), kde m je celé číslo v rozmezí od 0 do 4 a kde předcházející R⁸ skupiny s výjimkou H jsou případně substituovány 1 až 3 R¹⁶ skupinami, nebo kde R⁸ je jako -CH₂NR⁸R¹⁵, R¹⁵ a R⁸ mohou být vzaty dohromady, čímž se vytvoří

25 4-10členný nasycený monocyklický nebo polycyklický nasycený kruh nebo 5-10členný heteroarylový kruh, kde uvedené nasycené a heteroaiylové kruhy případně zahrnují 1 až 2 heteroatomy vybrané z O, S a -N(R⁸)- navíc k dusíku, ke kterému jsou R¹⁵ a R⁸ připojeny, přičemž nasycený kruh případně zahrnuje 1 až 2 dvojné nebo trojné vazby uhlík-uhlík, a tyto nasycené a heteroarylové kruhy jsou případně substituovány 1-3 R¹⁶ skupinami, každý R⁹ a R¹⁰ je nezávisle H nebo (Ci-C₆)alkyl, každý R¹¹, R¹², R¹³ a R¹⁴ jsou nezávisle vybrány zH, (Ci-Cio)alkyl, -(CH₂)_m((C₆-Ci₀)aryl), a -(CH₂)_m(5-10členný heteroaryl), kde m je celé číslo v rozmezí od 0 do 4 a kde předcházející

35 R¹¹, R¹², R¹³ a R¹⁴ skupiny, s výjimkou H, jsou případně substituovány 1-3 R¹⁶ skupinami, nebo R¹¹ a R¹³ jsou vzaty dohromady, čímž se vytvoří -(CH₂)_q-, kde p je celé číslo od 0 do 3, takže se vytvoří 4 až 7členný nasycený kruh, který případně zahrnuje 1 až 2 dvojné nebo trojné vazby uhlík-uhlík, nebo R¹³ a R¹⁴ jsou vzaty dohromady, čímž se vytvoří 4 až lOčlenný monocyklický nebo polycyklický nasycený kruh nebo 5 až lOčlenný heteroarylový kruh, přičemž tyto nasycené a heteroarylové kruhy případně zahrnují 1 až 2 heteroatomy vybrané z O, S a -N(R⁸)- navíc k dusíku, ke kterému jsou připojeny 1 nebo 2 dvojné nebo trojné vazby uhlík-uhlík a tento nasycený a hetero45 arylový kruh jsou případně substituovány 1 až 3 R¹⁶ skupinami,

R¹⁵ J^e H, (Ci-Cio)alkyl, (C₂-Ci₀)alkenyl, nebo (C₂-Cio)alkinyl, kde předcházející R¹⁵ skupiny jsou případně substituovány 1 až 3 substituenty nezávisle vybranými z halogenu a -OR⁹,

-42CZ 298556 B6 každý R¹⁶ je nezávisle vybrán z halogen, kyan, nitro, trifluormethyl, azido, -C(O)R¹⁷, -C(O)OR¹⁷, -OC(O)OR¹⁷, -NR⁶C(O)R⁷, -C(O)NR⁶R⁷, -NR⁶R⁷, hydroxy, (C,-C₆)alkyl, (Ci-C₆)alkoxy, -(CH2)_m((C₆-Cio)aryl) a -(CH2)_m(5-10členný heteroaryl), kde m je celé číslo

5 v rozmezí od 0 do 4 a kde arylové a heteroarylové substituenty jsou případně substituovány 1 nebo 2 substituenty nezávisle vybranými z halogen, kyan, nitro, trifluormethyl, azido, -C(O)R¹⁷, -C(O)OR¹⁷, -OC(O)OR¹⁷, -NR⁶C(O)R⁷, -C(O)NR⁶R⁷, -NR⁶R⁷, hydroxy, (C,-C₆)alkyl a (Ci-C₆)alkoxy, to každý R¹⁷ je nezávisle vybrán z H(Ci-C₆)alkyl, (C₂-C_]0)alkenyl, (C₂-Cio)alkinyl, -(CH₂)_m((C₆-Cio)aryl) a -(CH₂)_m- (5-10členný heteroaiyl), kde m je celé číslo v rozmezí od 0 do 4, s podmínkou, že R⁸ není H, když R³ je -CH2S(O)_nR⁸, nebo jeho farmaceuticky akceptovatelné soli, vyznačený tím, že se zpracuje sloučenina vzorce 5.

20 kde R¹ a R⁴ mají výše uvedený význam, se sloučeninou vzorce HOR⁸, HSR⁸ nebo NHR¹⁵R⁸, kde n, R¹⁵ a R⁸ mají výše uvedený význam, přičemž když se použije sloučenina vzorce HSR⁸, výsledná R³ skupina vzorce -CH2SR⁸ se případně oxiduje na -CH2S(O)R⁸ nebo -CH₂S(O)₂R⁸.
27. Způsob podle nároku 26, vyznačený tím, že sloučenina vzorce 5 se připraví zpracováním sloučeniny vzorce 4 (4),

-43 CZ 298556 B6 kde R¹ a R⁴ mají význam uvedený v nároku 26, se sloučeninou vzorce (CH₃)₃S(O)_nX², kde n je 0 nebo 1 a X² je halogen, -BF₄ nebo -PF₆, v přítomnosti zásady.
28. Způsob podle nároku 27, v y z n a č e n ý tím, že X² je jod, nebo BF₄ a uvedená zásada se vybere z Zerc-butoxidu draselného, fórc-butoxidu sodného, ethoxidu sodného, hydridu sodného, 1,1,3,3-tetramethylguanidinu, l,8-diazabicyklo[5,4,0]undec-7-enu, 1,5-diazabicyklo[4,3,0]on-5-enu, hexamethyldisilazidu draselného (KHMDS), ethoxidu draselného a methoxidu

10 sodného.
29. Sloučenina vzorce 5 nebo její farmaceuticky akceptovatelná sůl, kde 15

R¹ je H, hydroxy nebo methoxy, a

R⁴ je H, -C(O)R⁹, -C(O)OR⁹, -C(O)NR⁹R¹⁰ nebo skupina chránící hydroxy, a 20 každý R⁹ a R¹⁰ je nezávisle H nebo (C,-C₆)alkyl.
30. Sloučenina vzorce 4 nebo její farmaceuticky akceptovatelná sůl, kde R¹ je H, hydroxy nebo methoxy, a

-44CZ 298556 B6

R⁴ je H, -C(O)R⁹, -C(O)OR⁹, -C(O)NR⁹R¹⁰ nebo skupina chránící hydroxy, a každý R⁹ a R¹⁰ je nezávisle H nebo (Ci-C₆)alkyl.

5
31. Derivát podle nároku 1, kteiým je (2Λ,35,45,5/?,8Λ,10Λ,117?,125,135,14Λ)-13-[[2,6-ύίdeoxy-3-C-methyl-3-0-methyl-4-C-[(propylamino)methyl]-a-L-ribohexopyranosyl]oxy]2-ethyl-3,4,10-trihydroxy-3,5,8,10,12,14-hexamethyl-l l-[[(3,4,6-trideoxy-3-(dimethylamino)-p-D-xylohexopyranosyl]oxy]-l-oxa-6-azacyklopentadekan-15-on vzorce

10 a jeho farmaceuticky akceptovatelná sůl.
32. Farmaceutická kompozice užitečná pro léčbu bakteriálních infekcí nebo protozoálních infekcí u savců, ryb nebo ptáků, vyznačující se tím, že obsahuje terapeuticky účinné množství derivátu podle nároku 29 nebo jeho farmaceuticky akceptovatelné soli a farmaceuticky

15 akceptovatelný nosič.
33. Derivát podle nároku 31 nebo jeho farmaceuticky akceptovatelná sůl pro použití pro léčbu bakteriálních infekcí nebo protozoálních infekcí u savců, ryb a ptáků.