CN1917886B - 核心2GlcNAc-T抑制剂 - Google Patents

核心2GlcNAc-T抑制剂 Download PDF

Info

Publication number
CN1917886B
CN1917886B CN2004800417353A CN200480041735A CN1917886B CN 1917886 B CN1917886 B CN 1917886B CN 2004800417353 A CN2004800417353 A CN 2004800417353A CN 200480041735 A CN200480041735 A CN 200480041735A CN 1917886 B CN1917886 B CN 1917886B
Authority
CN
China
Prior art keywords
core
glcnac
compound
formula
alkyl
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CN2004800417353A
Other languages
English (en)
Other versions
CN1917886A (zh
Inventor
R·奇伯
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
BTG International Ltd
Original Assignee
British Technology Group Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by British Technology Group Ltd filed Critical British Technology Group Ltd
Publication of CN1917886A publication Critical patent/CN1917886A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN1917886B publication Critical patent/CN1917886B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H3/00—Compounds containing only hydrogen atoms and saccharide radicals having only carbon, hydrogen, and oxygen atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/702—Oligosaccharides, i.e. having three to five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/02—Stomatological preparations, e.g. drugs for caries, aphtae, periodontitis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/10—Drugs for disorders of the urinary system of the bladder
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明涉及已知的和新型的化合物作为UDP-GlcNAc：Galβ1，3 GalNAc-R(GlcNAc→GalNAc)β1，6-N-乙酰葡糖胺转移酶(核心2β1，6 N-乙酰氨基转移酶，核心2 GlcNAc-T-EC 2.4.1.102)抑制剂的用途。这种抑制剂可应用于治疗由核心2 GlcNAc-T活性提高引起的疾病，具体的说有炎性疾病、动脉粥样硬化、糖尿病性心肌病、癌症(包括癌症转移的治疗和预防)或糖尿病性视网膜病。

Description

核心2GlcNAc-T抑制剂
本发明涉及已知的和新型的化合物作为UDP-GlcNAc：Galβ1，3GalNAc-R(GlcNAc→GalNAc)β1，6-N-乙酰葡糖胺转移酶(核心2 β1，6 N-乙酰氨基转移酶，核心2 GlcNAc-T-EC 2.4.1.102)抑制剂的用途。
这种抑制剂可应用于治疗由核心2 GlcNAc-T活性提高引起的疾病，具体的说有炎性疾病、动脉粥样硬化、糖尿病性心肌病、癌症(包括癌症转移的治疗和预防)或糖尿病性视网膜病。
本发明发明人已确认，如在本文描述的测定中所测量出的，本文描述的化合物可抑制葡萄糖诱导的核心2 GlcNAc-T活性和葡萄糖诱导的人白细胞与培养牛视网膜毛细血管内皮细胞的结合。将这些化合物(下文称核心2 GlcNAc-T抑制剂)给予患者，可通过抑制上述疾病状态中的核心2 GlcNAc-T活性提高，来预防或治疗核心2 O-聚糖和唾液酸化路易斯血型抗原X(sialyl Lewisx)的异常形成。
通过N-乙酰葡萄胺(GalNAc)连接到待糖基化蛋白质的丝氨酸或苏氨酸残基引发糖基化后，接着的O-聚糖加工步骤是延长、分支和末端修饰。
O-聚糖延长和分支的必需步骤由同源糖基转移酶家族的多个糖基转移酶同种型催化。取决于有哪些糖基随后连接到此最初GlcNAc残基，O-聚糖可划分为四种主要亚类(图1)。核心1结构通过添加半乳糖形成Galβ1-3GalNAc-αSer/Thr而形成。核心2结构需要核心1结构作为底物，通过添加GlcNAc形成Galβ1-3(GlcNAcβ1-6)GalNAc-αSer/Thr而形成。核心3结构通过添加GlcNAc形成GlcNAcβ1-3GalNAc-αSer/Thr而形成。核心4结构需要核心3结构作为底物，通过添加GlcNAc形成GlcNAcβ1-3(GlcNAcβ1-6)GalNAc-αSer/Thr而形成。对核心GalNAc结构的其它修饰也有发现，但似乎不常见。所有这些核心结构通过半乳糖基化、唾液酸化、岩藻糖基化、硫酸化或延长进一步修饰，最终形成O-聚糖。
已知有三种形式的核心2 GlcNAc-T。核心2 GlcNAc-T I在白血病细胞中鉴定出，核心2 GlcNAc-T II在黏蛋白分泌组织中鉴定出，第三种形式称核心2 GlcNAc-T III，为胸腺相关类型。
已知细胞表面O-聚糖在介导发育和某些疾病状态中的细胞间相互作用中起到关键作用。蛋白质糖基化模式在很大程度上由糖基转移酶的活性和特异性决定，如高尔基体中表达的核心2 GlcNAc-T(1-2)。核心2 GlcNAc-T在O-连接聚糖的生物合成中起到关键作用(3-4)，代表了带多聚乳糖胺的O-连接糖类(即重复Galβ1-4GlcNAcβ1-3，与恶性转化有关的一种结构)延长的重要调节步骤(5-6)。
已将核心2 GlcNAc-T活性的变化与各种疾病状态，如T细胞激活、癌症、转移、髓母细胞性白血病、心肌机能障碍和炎症联系起来(7-18)。核心2 GlcNAc-T的调节据认为极其重要，因为这种酶将乳糖胺结构添加到基本核心寡糖及随后的岩藻糖和唾液酸修饰，会导致形成Lewisx、sialyl-sialyl Lewisa和Lewisx糖基，它们构成作为细胞黏着蛋白的选凝素的配体。此选凝素-配体相互作用在许多过程中起到重要的作用。
炎症是身体对感染或某些其它形式的创伤作出反应的一般方式。炎症过程中的一个主要事件是免疫系统的细胞从血流迁移到受感染或受损伤区域。一旦到了损伤部位，这些细胞即负责将外来因子隔离、破坏和清除。
急性炎症的特征是持续时间短(几分钟至几天)，其对于健康来说是必需的，但有时炎症过程并没有在适当时候结束，而正是这样造成了问题。慢性炎症的特征有持续时间长(几天、几个星期、几个月甚至几年)、淋巴细胞和巨噬细胞、组织破坏和修复以及血管增殖和纤维样变性。炎症也可由身体的正常成分不适当地触发，其在常见疾病如哮喘、类风湿性关节炎和炎性肠病中起作用。
已知许多细胞黏着分子参与炎症过程。在炎症部位，白细胞首先黏着于血管内皮细胞，然后进行外渗过程。据假定，选凝素在白细胞初始黏着于内皮细胞中起到关键作用。选凝素及其碳水化合物配体介导的细胞黏着导致白细胞在内皮内层(linings)上粘连和滚动。这随后导致继发的牢固黏着。在初始刺激的几小时内，嗜中性粒细胞开始进入组织中，且可继续变移多天。在某些发炎病症中，组织损害由血管的直接损伤而造成，由嗜中性粒细胞随后向组织中的募集而扩大。
O-聚糖的表达减少了细胞间相互作用，这是因为这些加合物体积大的缘故。在所有这些病症中，核心2 O-聚糖的表达均由转录水平的核心2 GlcNAc-T调节。抗原介导的外周T细胞和B细胞激活的特征是核心2 GlcNAc-T活性提高，CD43上出现分支的O-聚糖(白涎蛋白)(19-20)。
白细胞外渗、淋巴细胞运输和其它过程涉及核心2 GlcNAc-T所合成的O-聚糖。具体的说，以sialyl Lewisx终止的细胞表面O-聚糖结构参与白细胞向炎症部位的募集。核心2 GlcNAc-T对T细胞发育并不重要，但据显示这种酶的过量表达完全阻断骨髓谱系的发育。还据报告核心2 O-聚糖的过量表达影响T细胞和B细胞之间的相互作用(TB相互作用)。这种T-B相互作用对于体液免疫应答来说是关键的，其通过T细胞上的CD40配体(CD40L)与B细胞上的CD40的结合(CD40L-CD40相互作用)来介导。这种相互作用诱导B细胞的增殖。据显示核心2 O-聚糖的过量表达造成CD40L-CD40相互作用明显减少。
有可能通过阻断活化白细胞表面上的sialyl Lewisx合成，从而中断白细胞与选凝素的相互作用，来有效地阻断白细胞侵入的初始步骤的发生。因此，可降低核心2 GlcNAc-T活性的核心2 GlcNAc-T抑制剂在炎症调节中具有效用。
动脉粥样硬化是机制未明的进行性炎性疾病。循环白细胞向内皮特别是动脉分支和分叉处的内皮的募集和黏着，是已知在动脉粥样化形成中出现的最早事件之一。然后白细胞上的整联蛋白造成细胞间更强的连接。白细胞变移到内皮下空间中，在这里它们开始累积于血管内膜中。单核细胞在氧化的低密度脂蛋白(LDL-oxLDL)存在下开始转化成活化巨噬细胞，这些活化巨噬细胞通过其清除受体吸收修饰类型的脂蛋白，从而分化成泡沫细胞。对死于急性冠状动脉综合征的患者的动脉粥样硬化冠状动脉进行的组织学分析证明，在不稳定或破裂的动脉粥样斑块中存在泡沫细胞、巨噬细胞、淋巴细胞和肥大细胞(49)。
在人动脉粥样硬化中已鉴定出至少三种白细胞黏着分子——E-选凝素、ICAM-1和VCAM-1(50，51)。此外，与正常血管不同的是，P选凝素由动脉粥样病斑中的上皮细胞过度表达，而已发现动脉内腔中的E-选凝素(52)和ICAM-1(53)表达在有单核白细胞积累的动脉节段中增高。第三种黏着分子VCAM-1已在动脉粥样硬化动物模型中检测出，且已显示其在动脉粥样斑块的内膜中比在人冠状动脉的非动脉粥样硬化节段中更为普遍。
Chibber等(54)评估了核心2 GlcNAc-T在白细胞-内皮细胞黏着提高方面的重要性，发现在糖尿病患者的白细胞中此酶的活性显著提高。但是，迄今为止还没有证据证明，动脉粥样硬化患者的循环白细胞中核心2 GlcNAc-T活性提高。本发明发明人现已证明，动脉粥样硬化患者的循环白细胞中核心2 GlcNAc-T酶活性确实提高，这提示能够降低核心2 GlcNAc-T活性的化合物将可用于治疗或预防动脉粥样硬化，或者可用于防止动脉粥样斑块在接受介入治疗后的患者中重新出现。
虽然糖尿病性心肌病的临床症状已得到鉴定，但其发病机理却未确定。糖尿病性心肌病的定义描述糖尿病患者肌细胞的明确缺陷(例如导致心肌肥大和心舒张机能障碍的纤维样变性)，也描述在糖尿病发病过程中发展的心脏相关变化。
现有强有力的证据提示，核心2 GlcNAc-T活性提高是通常在糖尿病动物和患者心脏组织中观察到的复合糖增多的直接原因。为支持这一论断，最近显示在糖尿病实验动物模型的心脏中，核心2 GlcNAc-T活性提高造成类似于在糖尿病多年患者的心脏中观察到的病理状况。研究是用存在由心脏肌球蛋白启动子驱动的核心2 GlcNAc-T表达的转基因小鼠进行的。在第4个月，观察到左心室明显肥大，心脏全面肥大(16-17)。
核心2分支和核心2 GlcNAc-T活性的明显变化与恶性转化、白血病和癌(21，33-36)有关。转染T24H-ras的大鼠成纤维细胞和乳腺癌细胞在它们变成转移瘤的过程中表达核心2 O-聚糖(33)。
有众多证据说明核心2 GlcNAc-T参与癌症和癌症转移。例如，高度转移性结肠癌细胞既比其低转移性对等物表达更多的sialylLewisx，又比转移性欠佳的细胞更坚固地黏着E-选凝素。肿瘤细胞中的sialyl Lewisx表达与肿瘤进展之间有很强的相关性(34)。此外，sialylLewisx在核心2 O-聚糖中的表达与淋巴和静脉侵入之间也存在很好的相关性。
最新的发现提示，核心2 GlcNAc-T与α1，3-Fuc-T一起导致选凝素介导的口腔癌转移(35)。此外，蛋白质印迹分析揭示了主要约150kDa的糖蛋白的存在，所述糖蛋白携有被sLex阳性pre-B白血病细胞系中的抗sLex单克隆抗体所识别的α-连接寡糖。核心2 GlcNAc-T与CD15表达之间的这种相关性提示，核心2 GlcNAc-T是人pre-B淋巴样细胞中sialyl Lewisx细胞表面表达的调节物。这些结果表明，原位杂交检测出的核心2 GlcNAc-T mRNA反映肺腺癌的恶性潜力，因为淋巴结转移是患者预后的最有影响的因素。
通过转染1，3-岩藻糖基转移酶而在小鼠黑素瘤B16-FI中表达sialylLewisx，也证实了sialyl Lewisx在肿瘤转移中的重要性。将转染细胞静脉注射到小鼠中，形成大量的肺肿瘤节结，而母体B16-FI细胞则几乎没有形成肿瘤。
sialyl Lewisa、sialyl Lewisx(两者均为选凝素配体碳水化合物结构)的表达和核心2 GlcNAc-T活性的提高，均与结肠直肠癌的恶性密切相关(36)。最近，Numahata(37)证明，原发性膀胱癌中的sialyl Lewisx表达是侵入性和转移性后果的预报因素。尚没有其它迄今研究过的碳水化合物表位具有同等的预测价值。最近US 2004/0033521公开说，核心2 GlcNAc-T在肝和胃肿瘤样品及在结肠癌和肝转移样品中均过量表达。另外，WO 04/093662证明，核心2 GlcNAc-T在前列腺癌、睾丸癌和膀胱癌中有提高。随着核心2 GlcNAc-T水平提高，疾病转移或复发的机会也增加。
因此，预期核心2 GlcNAc-T抑制剂将减少O-聚糖(例如携有sialylLewisx的O-聚糖)的产生，从而减少癌症侵入和转移，可用于治疗其中核心2 GlcNAc-T表达超过该组织类型正常水平的癌症。
糖尿病性视网膜病是威胁视力的进行性糖尿病并发症(38)，其特征有毛细血管阻塞、微血管病斑形成和接近视网膜缺血区域的视网膜新血管形成(39-40)。
最近发现，核心2 GlcNAc-T活性提高是糖尿病性视网膜病中白细胞-内皮细胞黏着增加和毛细血管阻塞的直接原因(41)。而且现已证明，葡萄糖升高和糖尿病血清提高了核心2 GlcNAc-T的活性和人白细胞与内皮细胞的黏着。这通过依赖于PKCβ2的核心2 GlcNAc-T磷酸化而发生(42-43)。这种涉及核心2 GlcNAc-T磷酸化的调节机制也存在于从I型和II型糖尿病患者分离的多形核白细胞(PMN)中。
通过特异性抑制剂LY379196抑制PKCβ2激活减弱核心2GlcNAc-T的丝氨酸磷酸化，防止其活性提高，从而防止白细胞-内皮细胞黏着增加。这种抑制剂证实，降低核心2 GlcNAc-T活性提供了防止白细胞-内皮细胞黏着增加和防止糖尿病或高血糖引起的视网膜病中毛细血管阻塞的方法。
胡芦巴千百年来一直被用来治疗糖尿病。这种植物含有许多活性成分，例如香豆素、皂苷和糖苷类。许多研究(44)已证明了胡芦巴在动物和人类中的降血糖特性。这些降血糖特性已被归因于具有有效促胰岛素活性的氨基酸：4-羟基异亮氨酸(45-46)。
本发明发明人现已确定，某些化合物是核心2 GlcNAc-T的抑制剂。这些化合物中有些可从胡芦巴种子和从其它植物来源获得。
本发明的第一个方面提供治疗与核心2 GlcNAc-T酶活性提高有关的疾病的方法，所述方法包括给予有需要的患者有效量的式I化合物。优选所述疾病是炎性疾病、哮喘、类风湿性关节炎、炎性肠病、糖尿病性心肌病、心肌机能障碍、癌症、癌症转移或糖尿病性视网膜病。
癌症包括白血病、口腔癌、肺癌如肺腺癌、结肠直肠癌、膀胱癌、肝癌、胃肿瘤、结肠肿瘤、前列腺癌、睾丸肿瘤、乳腺癌、肺肿瘤、口腔癌和其中核心2 GlcNAc-T表达超过该组织类型正常水平的任何癌症。
优选核心2 GlcNAc-T抑制剂包含糖衍生的取代基。术语糖衍生的取代基指某种糖类，其中任选一个或多个氢和/或一个或多个羟基已被-R、-OR、-SR、-NR(其中R是甲基、乙基或丙基)取代，形成衍生物。
糖类包括但不限于单糖、二糖、三糖、四糖和多糖。
单糖包括但不限于阿拉伯糖、木糖、来苏糖、核糖、葡萄糖、甘露糖、半乳糖、阿洛糖、阿卓糖、古洛糖、艾杜糖、塔罗糖、核酮糖、木酮糖、果糖、山梨糖、塔格糖、阿洛酮糖、景天庚酮糖、脱氧核糖、岩藻糖、鼠李糖、2-脱氧-葡萄糖、异鼠李糖、阿比可糖、葡糖胺、甘露糖胺、半乳糖胺、神经氨酸、胞壁酸、N-乙酰葡萄胺、N-乙酰甘露糖胺、N-乙酰神经氨酸、N-乙酰胞壁酸、O-乙酰神经氨酸、N-羟乙酰神经氨酸、果糖醛酸、塔格糖醛酸、葡糖醛酸、甘露糖醛酸、半乳糖醛酸、艾杜糖醛酸、唾液酸和古洛糖醛酸。
优选核心2 GlcNAc-T抑制剂包含至少一个糖衍生的取代基；更优选核心2 GlcNAc-T抑制剂包含至少两个糖衍生的取代基。
优选各糖衍生的取代基独立是单糖、二糖、三糖或四糖；更优选各糖衍生的取代基独立是单糖或三糖。
优选核心2 GlcNAc-T抑制剂是式I化合物或其药物可接受盐、酯或互变异构体形式或衍生物：
其中R1是-OH、C1-6烷氧基、-NR8R9或式IIa单糖：
Figure S04841735320060829D000082
优选R1是-OH、-NR8R9或式IIa单糖；更优选R1是-NR8R9或式IIa单糖；最优选R1是式IIa单糖；
R2是-OH、C1-6烷氧基或式IIb单糖：
Figure S04841735320060829D000083
优选R2是-OH或式III单糖；更优选R2是-OH或式III单糖；最优选R2是-OH；
R3是-OH、C1-6烷氧基或式IIc单糖：
优选R3是-OH或式IIc单糖；更优选R3是式IIc单糖；最优选R3是葡萄糖；
R4是C1-6烷基、C1-6羟基烷基或C1-6烷氧基-C1-6烷基；优选R4是C1-6烷基或C1-6羟基烷基；更优选R4是-CH2OH或-CH3；最优选R4是-CH2OH；
R5是C1-6烷基、C1-6羟基烷基或C1-6烷氧基-C1-6烷基；优选R5是C1-6烷基或C1-6羟基烷基；更优选R5是-CH3、-C2H5、-CH2OH或-C2H4OH；最优选R5是-CH3；
R6是C1-6烷基、C1-6羟基烷基或C1-6烷氧基-C1-6烷基；优选R6是C1-6烷基或C1-6羟基烷基；更优选R6是-CH2OH或-CH3；最优选R6是-CH2OH；
R7是C2-6烷基、C1-6羟基烷基或C1-6烷氧基-C1-6烷基；优选R7是C1-6羟基烷基或C1-6烷氧基-C1-6烷基；更优选R7是-CH2OH或C1-6烷氧基甲基；最优选R7是-CH2OH；
R8是H、C1-6烷基或C1-6酰基；优选R8是H或C1-6烷基；更优选R8是H或CH3；最优选R8是H；
R9是H、C1-6烷基或C1-6酰基；优选R9是H或C1-6酰基；更优选R9是H或-COCH3；最优选R9是-COCH3；
Z是甾族基团。
优选式I化合物是式III化合物：
Figure S04841735320060829D000091
其中：
R4是C1-6烷基、C1-6羟基烷基或C1-6烷氧基-C1-6烷基；优选C1-6烷基或C1-6羟基烷基；更优选-CH2OH或-CH3；最优选-CH2OH；
R5是C1-6烷基、C1-6羟基烷基或C1-6烷氧基-C1-6烷基；优选R5是C1-6烷基或C1-6羟基烷基；更优选R5是-CH3、-C2H5、-CH2OH或-C2H4OH；最优选R5是-CH3；
R7是C2-6烷基、C1-6羟基烷基或C1-6烷氧基-C1-6烷基；优选R7是C1-6羟基烷基或C1-6烷氧基-C1-6烷基；更优选R7是-CH2OH或C1-6烷氧基甲基；最优选R7是-CH2OH。
更优选的是以下式III化合物，其中：
R4是C1-6羟基烷基或C1-6烷基；
R5是C1-6烷基、C1-6羟基烷基；
R7是C1-6羟基烷基或C1-6烷氧基-C1-6烷基。
更优选的是以下化合物，其中：
R4是-CH2OH或-CH3；
R5是-CH3；和
R7是-CH3OH。
最优选的式III化合物是以下式I化合物，其中：
R1是鼠李糖；
R2是-OH；
R3是葡萄糖；
R4是-CH2OH。
最优选的是以下式I化合物，其为式IV：
本发明还提供以下化合物，其中式I化合物是式V化合物：
Figure S04841735320060829D000111
其中：
R1是-OH、C1-6烷氧基或NR8R9或式IIa单糖：
Figure S04841735320060829D000112
优选R1是-OH或NR8R9；更优选R1是NR8R9；
R4是C1-6烷基、C1-6羟基烷基或C1-6烷氧基-C1-6烷基；优选R4是C1-6烷基或C1-6羟基烷基；更优选R4是C1-6烷基；最优选-CH3；
R5是C1-6烷基、C1-6羟基烷基或C1-6烷氧基-C1-6烷基；优选R5是C1-6烷基或C1-6羟基烷基；更优选R5是-CH3或-CH2OH；最优选R5是-CH3；
R6是C1-6烷基、C1-6羟基烷基或C1-6烷氧基-C1-6烷基；优选R6是C1-6烷基或C1-6羟基烷基；更优选R6是-CH2OH或-CH3；最优选R6是-CH2OH；
R8是H、C1-6烷基或C1-6酰基；优选R8是H或C1-6烷基；更优选R8是H或CH3；最优选R8是H；
R9是H、C1-6烷基或C1-6酰基；优选R9是H或C1-6酰基；更优选R9是H或-COCH3；最优选R9是-COCH3；
Z是甾族基团。
优选的式V化合物是以下化合物，其中
R1是-OH、C1-6烷氧基或-NR8R9；
R4是C1-6烷基或C1-6羟基烷基；
R6是C1-6烷基或C1-6羟基烷基；
R8是H、C1-6烷基或C1-6酰基；
R9是H、C1-6烷基或C1-6酰基。
更优选的式IV化合物是以下化合物，其中：
R1是-NH-C1-6酰基；
R4是C1-6烷基或-CH2OH；
R6是C1-6羟基烷基。
最优选的是以下式IV化合物，其为式：Galβ1→3(6-脱氧)GalNAcα-Z。
式I化合物包含甾族基团。术语“甾族基团”指包含式VI所示四环环状系统的基团：
优选甾族基团通过其3-位连接到分子的其余部分。例如上述式I化合物优选是下式所示化合物：
Figure S04841735320060829D000122
甾族基团可以是胆甾烷、5α-孕甾烷、雄甾烷、雌甾烷、胆甾醇、胆甾烷、黄体酮、糖皮质甾体、盐皮质甾体、雄激素如脱氢表雄酮或其7-酮基类似物、胆汁酸或其它甾体。在一个优选的实施方案中，甾体核心是其本身是有益的或中性的甾体。所谓中性的是指所述甾体本身已被判定适合在人类或动物中使用。所谓有益的是指如果单独给予的话所述甾体对人类或动物具有好处。
甾族基团可以是可从植物来源衍生的甾体皂苷元，或者是本身可通过化学修饰从所述植物甾体皂苷元衍生的甾体皂苷元。
在一个实施方案中，甾族基团是式VII的甾体皂苷元：
Figure S04841735320060829D000131
其中：
R12是H、OH、C1-6烷基或C1-6烷氧基；优选R12是H或-OH；最优选R12是H；
R13是H、-OH、＝O或C1-6烷基；优选R13是H或-OH；最优选R13是H；
R14是H、-OH或C1-6烷基，或者R14和R33一起表示连接相邻碳原子的双键的第二键；优选R14是H，或者R14和R33一起表示连接相邻碳原子的双键的第二键；
R15是H或-OH，或者R15和R33一起是＝O；优选R15是H，或者R15和R33一起是＝O；更优选R15是H；
R16是H、OH或＝O；优选R16是H或＝O；更优选R16是H；
R17是H、OH或＝O；优选R17是H或-OH；更优选R17是H；
R18是H、OH、C1-6烷氧基或C1-6烷基；优选R18是H、OH、C1-6烷氧基；更优选R18是H或OH；最优选R18是H；
R19是H、OH、C1-6烷基或C1-6烷氧基；优选R19是H、OH或C1-6烷基；更优选R19是H、OH或C1-6烷基；最优选R19是C1-6烷基；尤其R19是-CH3；
R20是H、OH、C1-6烷氧基或C1-6烷基；优选R20是H、-OH或C1-6烷氧基；更优选R20是-OH或C1-6烷氧基；最优选R20是-OH；
R21是H、OH、C1-6烷基、C1-6烷氧基或式VIII基团：
Figure S04841735320060829D000141
优选R21是式VIII基团；
R22是H、OH、C1-6烷基或C1-6烷氧基；优选R22是H、OH或C1-6烷氧基；更优选R22是H或OH、-OCH3或-O-C2H5；最优选R22是H；
R23是H、OH、C1-6烷基、C1-6羟基烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷基、＝CH2或＝CH-C1-6烷基；优选R23是C1-6烷基、C1-6羟基烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷基、＝CH2或＝CH-C1-6烷基；更优选R23是C1-6烷基、C1-6羟基烷基或＝CH2；最优选R23是-C2H4OH、-CH2OH、C1-6烷基或＝CH2；甚至更优选R23是-C2H4OH、-CH2OH、-C2H5、-CH3或＝CH2，尤其R23是-CH3或＝CH2；
R24是H、C1-6烷基、C1-6酰基或单糖MS；优选R24是C1-6烷基、C1-6酰基或单糖MS；更优选R24是C1-6酰基或单糖MS；最优选R24是单糖MS；
R28和R29相同或不同，是H或OH；优选R28是H，R29是-OH；更优选R28和R29均是H；
R32是H、OH或＝O；优选R32是H或OH；最优选R32是H；
R33是H，或者R33和R15一起是＝O，或者R33和R14一起表示连接相邻碳原子的双键的第二键；优选R33是H，或者R33和R14一起表示连接相邻碳原子的双键的第二键；
MS选自阿拉伯糖、木糖、来苏糖、核糖、葡萄糖、甘露糖、半乳糖、阿洛糖、阿卓糖、古洛糖、艾杜糖、塔罗糖、核酮糖、木酮糖、果糖、山梨糖、塔格糖、阿洛酮糖、景天庚酮糖、脱氧核糖、岩藻糖、鼠李糖、2-脱氧-葡萄糖、异鼠李糖、阿比可糖、葡糖胺、甘露糖胺、半乳糖胺、神经氨酸、胞壁酸、N-乙酰葡糖胺、N-乙酰甘露糖胺、N-乙酰半乳糖胺、N-乙酰神经氨酸、N-乙酰胞壁酸、O-乙酰神经氨酸、N-羟乙酰神经氨酸、果糖醛酸、塔格糖醛酸、葡糖醛酸、甘露糖醛酸、半乳糖醛酸、艾杜糖醛酸、唾液酸和古洛糖醛酸；优选MS选自葡萄糖、半乳糖、甘露糖、岩藻糖、N-乙酰葡糖胺、N-乙酰-半乳糖胺和唾液酸；最优选MS是葡萄糖；
Y是N或O；优选Y是O。
优选的式VII甾体皂苷元是以下甾体皂苷元，其中R21是式VIII，Y是O。
更优选的式VII甾体皂苷元是以下甾体皂苷元，其中：
R12是H、-OH；
R13是H或-OH；
R14是H或-OH，或者R14和R33一起表示连接相邻碳原子的双键的第二键；
R15是H，或者R15和R33一起是＝O；
R18是H、-OH或C1-6烷氧基；
R19是C1-6烷基；
R20是H、-OH或C1-6烷氧基；
R28是H；
R32是H、-OH或＝O；
R33是H，或者R33和R15一起是＝O，或者R33和R14一起表示连接相邻碳原子的双键的第二键。
最优选的是以下式VII甾体皂苷元，其中：
R12、R13、R15和R28各自表示H；
R14是H，或者R14和R33一起表示连接相邻碳原子的双键的第二键；
R16是H或＝O；
R17是H或-OH；
R18是H或-OH；
R19是H或C1-6烷基；
R21是式VIII；
R22是H、-OH或C1-6烷氧基；
R24是C1-6烷基、C1-6酰基或葡萄糖；
R29是H或-OH；
R32是H或-OH。
最优选的式VII甾体皂苷元是以下甾体皂苷元，其中：
R12、R13、R15、R16、R17、R22、R28各自表示H；
R14是H，或者R14和R33一起表示连接相邻碳原子的双键的第二键；
R20是-OH或C1-6烷氧基；
R21是式VIII；
R23是-CH3或＝CH2；
R24是C1-6酰基或葡萄糖；
R29是H或-OH；
R32是H。
最优选的式VII甾体皂苷元选自以下：
Figure S04841735320060829D000161
其中：
R18是H或OH；
R20是OH或C1-6烷氧基；
R24是葡萄糖或C1-6酰基；
R29是H或OH。
尤其优选的其中甾族基团是式VII的式I化合物是胡芦巴皂苷IVa、糖苷F、shatavarin I、化合物3、pardarinoside C，它们的结构在表1中总结。
表1：胡芦巴皂苷IVa、糖苷F、shatavarin I、化合物3和pardarinosideC的结构细节
在每种情况下，连接到甾族基团3-位的糖基是：
或者甾族基团可以是式VIII的甾体皂苷元：
其中：
R12是H、-OH、C1-6烷基或C1-6烷氧基；优选R12是H或-OH；最优选R12是H；
R13是H、-OH、＝O或C1-6烷基；优选R13是H或-OH；最优选R13是H；
R14是H、-OH或C1-6烷基，或者R14和R33一起表示连接相邻碳原子的双键的第二键；优选R14是H，或者R14和R33一起表示连接相邻碳原子的双键的第二键；
R15是H或-OH，或者R15和R33一起是＝O；优选R15是H，或者R15和R33一起是＝O；更优选R15是H；
R16是H、-OH或＝O；优选R16是H或＝O；更优选R16是H；
R17是H、-OH或＝O；优选R17是H或-OH；更优选R17是H；
R18是H、-OH、C1-6烷氧基或C1-6烷基；优选R18是H、-OH、C1-6烷氧基；更优选R18是H或OH；最优选R18是H；
R19是H、-OH、C1-6烷基或C1-6烷氧基；优选R19是H、OH或C1-6烷基；更优选R19是C1-6烷基；尤其R19是-CH3；
R20是H、-OH、C1-6烷氧基或C1-6烷基；优选R20是H、-OH或C1-6烷氧基；更优选R20是-OH或C1-6烷氧基；最优选R20是-OH；
R27是H、-OH、C1-6烷基、C1-6烷氧基或C1-6羟基烷基；优选R27是H、C1-6烷基或C1-6烷氧基；更优选R27是H或C1-6烷基；最优选R27是甲基、乙基或丙基；
R28和R29相同或不同，是H或-OH；优选R28和R29均是H；
R32是H、-OH或＝O；优选R32是H或-OH；最优选R32是H；
R33是H，或者R33和R15一起是＝O，或者R33和R14一起表示连接相邻碳原子的双键的第二键；优选R33是H，或者R33和R14一起表示连接相邻碳原子的双键的第二键。
优选的式IX甾体皂苷元是以下甾体皂苷元，其中：
R12是H或-OH；
R13是H或-OH；
R14是H或-OH，或者R14和R33一起表示连接相邻碳原子的双键的第二键；
R15是H或-OH；
R16是H、-OH或＝O；
R17是H、-OH或＝O；
R18是H或-OH；
R27是C1-6烷基；
R28和R29相同或不同，各自表示H或-OH；
R32是H、-OH或＝O。
更优选式IX甾体皂苷元是以下甾体皂苷元，其中：
R12是H或-OH；
R13是H或-OH；
R14是H或-OH，或者R14和R33一起表示连接相邻碳原子的双键的第二键；
R15是H或-OH；
R16是H或＝O；
R17是H、-OH；
R18是H或-OH；
R27是C1-6烷基；
R28和R29相同或不同，各自表示H或-OH；
R32是H或-OH。
更优选式IX甾体皂苷元是以下通式IXa所示的甾体皂苷元：
其中甾族基团是式IX的最优选式I化合物是：
其可从希洛依百合(Lilium macklineae)分离(59)。
另外优选的一组甾体皂苷元是式XI的甾体皂苷元：
其中：
R12是H、OH、C1-6烷基或C1-6烷氧基；优选R12是H或-OH；最优选R12是H；
R13是H、-OH、＝O或C1-6烷基；优选R13是H或-OH；最优选R13是H；
R14是H、-OH或C1-6烷基，或者R14和R33一起表示连接相邻碳原子的双键的第二键；优选R14是H，或者R14和R33一起表示连接相邻碳原子的双键的第二键；
R15是H或-OH，或者R15和R33一起是＝O；优选R15是H，或者R15和R33一起是＝O；更优选R15是H；
R16是H、-OH或＝O；优选R16是H或＝O；更优选R16是H；
R17是H、-OH或＝O；优选R17是H或-OH；更优选R17是H；
R18是H、-OH、C1-6烷氧基或C1-6烷基；优选R18是H、OH、C1-6烷氧基；更优选R18是H或-OH；最优选R18是H；
R19是H、-OH、C1-6烷基或C1-6烷氧基；优选R19是H、-OH或C1-6烷基；更优选R19是H、-OH或C1-6烷基；最优选R19是C1-6烷基；尤其R19是-CH3；
R25是H、-OH、C1-6烷基或C1-6烷氧基；优选R25是H或-OH；更优选R25是H；
R26是H、-OH、C1-6烷基、C1-6羟基烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷基、＝CH2或＝CH-C1-6烷基；优选R26是C1-6烷基、C1-6羟基烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷基、＝CH2或＝CH-C1-6烷基；更优选R26是C1-6烷基、C1-6羟基烷基或＝CH2；最优选R26是-C2H4OH、-CH2OH、C1-6烷基或＝CH2；甚至更优选R26是-C2H4OH、-CH2OH、-C2H5、-CH3或＝CH2，尤其R26是-CH3或＝CH2；
R28和R29相同或不同，是H或-OH；优选R28和R29均是H；
R31是H或-OH；优选R31是H；
R32是H、-OH或＝O；优选R32是H或-OH；最优选R32是H；
R33是H，或者R33和R15一起是＝O，或者R33和R14一起表示连接相邻碳原子的双键的第二键；优选R33是H，或者R33和R14一起表示连接相邻碳原子的双键的第二键；
R34是H或-OH；优选R34是H；
X是O、S或NH；优选X是O或NH；更优选X是O。
优选的式XI甾体皂苷元是以下甾体皂苷元，其中：
R12是H或-OH；
R13是H或-OH；
R14是H或-OH，或者R14和R33一起表示连接相邻碳原子的双键的第二键；
R15、R18、R28和R29相同或不同，各自表示H或-OH；
R16是H、OH或＝O；
R17是H、-OH或＝O；
R18是H、-OH或C1-6烷氧基；
R19是H或C1-6烷基；
R26是H、C1-6烷基、C1-6羟基烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷基、＝CH2或＝CH-C1-6烷基；
R29是H或-OH；
R31是H或-OH；
R32是H、-OH或＝O；
R33是H，或者R33和R15一起是＝O，或者R33和R14一起表示连接相邻碳原子的双键的第二键；
R34是H或-OH。
更优选的式XI甾体皂苷元是以下甾体皂苷元，其中：
R12、R13、R15和R28各自表示H；
R14是H，或者R14和R33一起表示连接相邻碳原子的双键的第二键；
R16是H或＝O；
R17是H或-OH；
R18是H或-OH；
R19是H或C1-6烷基；
R26是C1-6烷基、C1-6羟基烷基或＝CH2；
R28是H；
R29是H或-OH；
R32是H或-OH；
R33是H，或者R33和R14一起表示连接相邻碳原子的双键的第二键。
最优选的式XI甾体皂苷元是以下甾体皂苷元，其中：
R12、R13、R15、R16、R17、R25、R28、R31、R32和R34各自表示H；
R14是H，或者R14和R33一起表示连接相邻碳原子的双键的第二键；
R18是H或-OH；
R19是C1-6烷基；
R26是C1-6烷基或＝CH2；
R29是H或-OH；
R32是H；
R33是H，或者R33和R14一起表示连接相邻碳原子的双键的第二键。
最优选的式XI甾体皂苷元选自以下：
尤其优选的式XI甾体皂苷元是薯蓣皂苷元、亚莫皂苷元、提果皂甙元、新提果皂甙元、菝葜皂甙元、异菝葜皂甙元、龙舌兰皂苷元(hecogenin)、澳洲茄胺或番茄苷元。
其中甾族基团是式XI的尤其优选式I化合物是：
Shatavarin IV、(25R)shatavarin IV、deltonin、槲果素(balanitin)VI、Mimaki和Sahida(58)的化合物12。
Shatavarin IV是菝葜皂甙元3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-O-[β-D-吡喃葡糖基-(1→4)]-β-D-吡喃葡糖苷。
化合物12是澳洲茄胺3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-O-[β-D-吡喃葡糖基-(1→4)]-β-D-吡喃葡糖苷。
Deltonin是(3β，25R)-螺甾-5-烯-3-基-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-O-[β-D-吡喃葡糖基-β-D-吡喃葡糖苷。
槲果素VI是(3β，25S)-螺甾-5-烯-3-基-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-O-[β-D-吡喃葡糖基-β-D-吡喃葡糖苷。
尤其优选的式I化合物是结合优选甾族基团和优选糖基的化合物。
本发明的第二个方面提供式I化合物在制备药物中的用途，该药物用于治疗与核心2 GlcNAc-T酶活性提高有关的病症。所述病症的实例在本文中的本发明第一方面中描述。
本发明的第三个方面提供包含式I化合物的药物组合物。
本文所用术语核心2 GlcNAc-T抑制剂指核心2 GlcNAc-T酶的抑制剂，优选指包含本文所述核心2 GlcNAc-T酶活性的制品将UDP-6[′H]-N-乙酰葡糖胺掺入产物中的能力，如本文描述的测定中所测。
本文所用术语糖苷元指其中糖部分不存在的式I化合物。所述化合物可在糖部分所占有的位置具有其它取代基。特别是为呋甾烷醇皂苷的糖苷元当糖基化时可如同对等的螺甾烷醇皂苷处于环闭合状态。
在本文用于结构中的简略记号：
用来表示以下结构：
Figure S04841735320060829D000252
在本文用于结构中的简略记号：
表示以下结构：
Figure S04841735320060829D000254
本文所用的简略记号Glc是葡萄糖，Rha是鼠李糖。为避免产生疑问，术语C1-6酰基是指-CO-C1-6烷基。
附图简述
图1是说明O-聚糖核心结构的生物合成的示意性流程图。
图2a图示说明核心2 GlcNAc-T酶活性可被葡萄糖诱导。将人白细胞(U937)在37℃下暴露于正常(5.8mM)和高葡萄糖(15mM)24小时。然后将细胞裂解，测量核心2 GlcNAc-T的活性。数据以平均值±s.e.m.表示，n＝28，星号表示显著性差异(P＜0.05)。
图2b图示说明从胡芦巴种子制备的粗提取物F1抑制葡萄糖诱导的核心2 GlcNAc-T活性。将人白细胞(U937)在胡芦巴提取物(1∶1000稀释；N-F，G-F)存在下暴露于正常(N，5.8mM；n＝3)和高葡萄糖(G，15mM；n＝3)。温育24小时后，测量白细胞细胞裂解液中的核心2GlcNAc-T活性。核心2 GlcNAc-T的活性以pmole/h/mg蛋白质表示。
图2c图示说明从胡芦巴种子制备的粗提取物F1抑制人白细胞(U937)对培养视网膜毛细血管内皮细胞的黏着。将白细胞暴露于高葡萄糖(15mM)后，通过用羧基荧光素标记白细胞，测量白细胞-内皮细胞黏着水平。数据以平均值±s.e.m.表示，n＝3，星号表示显著性差异(P＜0.05)。
图3图示说明从胡芦巴种子制备的粗提取物F1抑制核心2GlcNAc-T活性。将人白细胞(U937)在37℃下暴露于15mM葡萄糖24小时，测量粗胡芦巴种子提取物(G-F1；1∶1000稀释)存在下白细胞细胞裂解液中的核心2 GlcNAc-T活性。核心2 GlcNAc-T活性水平通过测定核心2寡糖的形成(β1，6-连接的GalNAc连接到Galβ1，3GlcNAc接纳体)来测量。数据以三个单独实验的平均值±s.e.m.表示。
图4是说明胡芦巴种子的提取和胡芦巴种子提取物的后续纯化的示意性流程图。
图5图示说明粗胡芦巴种子提取物F1和从粗提取物F1纯化的次级分(sub-fraction)F2对人白细胞(U937)中葡萄糖诱导的核心2GlcNAc-T活性的抑制作用。将细胞在存在和不存在次级分F1和F2时暴露于高葡萄糖(15mM)。温育24小时后，测定白细胞细胞裂解液中的核心2 GlcNAc-T活性。数据以两个独立实验的平均值表示。
图6a和6b图示说明通过硅胶急骤层析法(Biotage)从粗提取物F1纯化的次级分F8-F15对人白细胞(U937)中葡萄糖诱导的核心2GlcNAc-T活性的抑制作用。将细胞在各次级分存在下暴露于高葡萄糖(G，15mM)。温育24小时后，测定白细胞细胞裂解液中的核心2GlcNAc-T活性。数据以平均值±s.em.表示，n＝3，星号表示显著性差异(P＜0.05)。
图7图示说明次级分F13的水相抑制人白细胞(U937)中葡萄糖诱导的核心2 GlcNAc-T活性。将次级分F9和F13与二氯甲烷彻底混合，将水相过滤除菌，用于基于细胞的核心2 GlcNAc-T活性测定中。将人白细胞在存在和不存在次级分F9和F13的水相下暴露于高D-葡萄糖(15mM)。数据以两个独立实验的平均值表示。
图8图示说明通过HPLC从次级分F13的水相纯化出的保留时间F18.7-F41.1的各次级分对葡萄糖诱导的核心2 GlcNAc-T活性的抑制作用。将人白细胞(U937)在存在和不存在保留时间F18.7-F41.1的各HPLC次级分下暴露于高D-葡萄糖(15mM)。给出的数据来自一个实验。没有检测次级分G20.24、G20.69、G22.2、G39.9和G41.1(图8中没有用柱形表示)对葡萄糖诱导的核心2 GlcNAc-T活性的抑制作用。
图9图示说明保留时间F19.13和F19.37的各HPLC次级分的抑制作用。将人白细胞(U937)在存在和不存在保留时间F19.13和F19.37的各次级分(1∶1000稀释)下暴露于高D-葡萄糖(15mM)24小时。数据以平均值±s.e.m.表示，n＝3，星号表示显著性差异(P＜0.05)。
图10图示说明通过HPLC从次级分F13的水相纯化出的保留时间F20.01、F20.29和F20.55的各次级分对葡萄糖诱导的核心2 GlcNAc-T活性的抑制作用。将人白细胞(U937)在存在和不存在保留时间F20.01、F20.29和F20.55的各次级分下暴露于高D-葡萄糖(15mM)，24小时后测量核心2 GlcNAc-T的活性。数据是两个独立实验的平均值。
图11图示说明在无细胞测定中次级分F20.55抑制核心2GlcNAc-T。将人白细胞(U937)在37℃下暴露于15mM葡萄糖24小时后，将细胞裂解，然后暴露于加热(H，100℃)和非加热(NH)的次级分F20.55(1∶500稀释)。在37℃下暴露30分钟后，测量核心2 GlcNAc-T的活性。核心2 GlcNAc-T活性水平通过测定核心2寡糖的形成(β1，6-连接的GalNAc连接到Gal-1，3-GlcNAc接纳体)来测量。数据以三个单独实验的平均值±s.e.m.表示。
图12a和12b图示说明高葡萄糖提高培养的牛视网膜血管细胞(即毛细血管周细胞(图13a)和毛细血管内皮细胞(图13b))中的核心2GlcNAc-T活性。将近乎铺满的培养物在37℃下暴露于正常葡萄糖(N，5.8mM)和高葡萄糖(G，15mM)24小时。将细胞裂解，测定细胞裂解液中的核心2 GlcNAc-T活性。数据以平均值±s.e.m.表示(n＝3-4)，星号表示显著性差异(P＜0.05)。
图13a和13b图示说明胡芦巴种子的粗提取物F1防止培养的牛视网膜血管细胞(即毛细血管周细胞(图14a)和毛细血管内皮细胞(图14b))中葡萄糖诱导的毒性。将细胞在存在(N-F，G-F)和不存在(N，G)胡芦巴种子提取物下暴露于正常(N，5.8mM)和高葡萄糖(G，25mM)。温育4天后，用血细胞计数器和台盼蓝排斥试验测定活细胞数目。数据以平均值±sem.表示，n＝18个单独实验，星号表示显著性差异(P＜0.05)。
图14图示说明从胡芦巴种子分离出的五种化合物的结构。
图15a和15b图示说明纯化的胡芦巴皂苷IVa、糖苷F和shatavarinIV在无细胞(图15a)和基于细胞(图15b)的试验中对核心2 GlcNAc-T活性的作用。
在无细胞的试验中，将BB大鼠的心脏裂解液在存在和不存在20ng/ml的各化合物下温育。在37℃下温育1小时后，测量核心2GlcNAc-T的活性，以pmole/h/mg蛋白质表示。结果是3-5个单独实验的平均值。
在基于细胞的试验中，将人白细胞(U937细胞)在存在和不存在20ng/ml的试验化合物下暴露于8pg/ml的人重组TNF-α。温育24小时后，测量核心2 GlcNAc-T的活性，以pmole/h/mg蛋白质表示。
本发明现将参照以下非限制性参考实施例和图表进行描述。根据这些描述，本领域技术人员能想到落入本权利要求书范围内的更多实施方案。
发明详述
实验方法
式I化合物可从多种植物提取。这方面参考文献(仅作举例)见Yoshikawa等(55)、Sasheda等(59)、Akhov等(60)、Joshi和Dev(61)、Ravikumar等(56)、Vasil′eva和Paseshnichenko(62)、Shimomura等(57)、Sharma和Sharma(63)、Petit等(64)、Mimaki和Sashida(58)及Hostettman(65)，以及其中的参考文献。这些文献通过引用整体结合到本文中。
或者，所述化合物可通过常规的有机化学方法和技术合成。这方面的参考文献见碳水化合物和甾体化学教科书，如“Essentials ofCarbohydrdate Chemistry and Biochemistry”，Thisbe K.Lindhorst著，(2000)Wiley；“Carbohydrdates in Chemistry and Biology”，Beat Ernst，Gerald W.Hart和Pierre Sinay编辑，(2000)Wiley；“Essentials ofCarbohydrdate Chemistry”，John F.Robyt著，(1998)Springer Verlag；“Carbohydrdate Chemistry”，Hassan S.El Khadem著，(1988)；“Carbohydrdate Building Blocks”，Mikael Bols著，(1996)；“Glycochemistry：Principles，Synthesis，and Applications”，P.G.Wang和C.R.Bertozzi编辑，(2001)Marcel Dekker，N.Y.和“CarbohydrdateChemistry”，the Royal Society of Chemistry Staff著，(1989)CRC Press。
本发明化合物可从市售的糖苷元制备，或者通过从胡芦巴种子或从其它植物来源分离糖苷元或其它前体、随后对前体进行化学修饰来制备。
技术人员例如会知道多种螺甾烷醇和呋甾烷醇糖苷元来源，如薯蓣皂苷元、亚莫皂苷元、提果皂甙元、新提果皂甙元、菝葜皂甙元、异菝葜皂甙元、龙舌兰皂苷元、澳洲茄胺或番茄苷元(例如见Hostettman及其中的参考文献(65))。
具体的说，对于从薯蓣皂苷元合成具有2，4分支寡糖部分的螺甾烷醇皂苷的方法，参见Du等2003(73)。这篇参考文献还进一步提及其它糖基化甾体的合成，例如从胆固醇合成。所公开的方法可用来合成以下化合物，其中甾体被化学法糖基化，形成式I化合物。
对于其它的参考文献，有关三糖取代的螺甾烷醇皂苷的合成见Li等(66)，有关各种三糖和四糖取代的螺甾烷醇皂苷的合成见Deng等(67)，有关呋甾烷醇皂苷的合成及螺甾烷醇皂苷和呋甾烷醇皂苷的互变的方法见Li等(68)、Yu等(69)、Yu等(70)，还有Yu和Tao(71)、Cheng等(72)及Du等(73)。这些参考文献还提供有关单糖羟基烷基的衍生化的信息和更多参考文献。
Paulsen等(48)中给出了合成Galβ1-3(6-脱氧)GalNAcα-缀合物的方法。技术人员可改动这些方法并将其与本文所提及的其它方法组合，以合成其它式I化合物。
细胞培养
如前所述(48)，从刚屠宰牛的眼睛解剖得到的牛视网膜建立牛视网膜毛细血管内皮细胞(BREC)和周细胞(BRP)。简单地说，将分离出的视网膜在无血清极限必需培养基(MEM，Gibco，Paisley，英国)中匀浆，滤过85μm尼龙网，将截留的微血管用胶原酶-分散酶(1mg/ml)在37℃下消化30分钟(BRP)和90分钟(BREC)，滤过53μm尼龙网。对于内皮细胞(BREC)的生长，将消化过的微血管接种于涂布有明胶的组织培养瓶中，并维持于补充有10％混合人血清、2mM谷氨酰胺、100IU/ml青霉素和100μg/ml链霉素的MEM中。对于周细胞(BRP)的生长，将所述微血管接种于含补充有10％胎牛血清的生长培养基的组织培养瓶中。使用传代2-3次的细胞。通过用抗因子VIII相关抗原的抗体和3G5-周细胞标记进行免疫染色，并采用形态学标准，对所述细胞进行鉴定。
人白细胞细胞系(U937)在补充有10％胎牛血清、2mM谷氨酰胺、100IU/ml青霉素和100μg/ml链霉素的RPMI中培养。
基于细胞的核心2 GlcNAc-T活性测定
为研究胡芦巴抑制核心2 GlcNAc-T的药理学潜力，测量在37℃下暴露于正常(5.8mM)和高葡萄糖(15mM)24小时的白细胞中的酶活性。所述细胞温育后进行裂解，并在-20℃下冷冻，以备用于测量核心2 GlcNAc-T。同时还测量培养的牛视网膜毛细血管周细胞(BRP)和内皮细胞(BREC)中的核心2 GlcNAc-T活性。
核心2 GlcNAc-T活性的无细胞测定
本测定使用固定化于Sepharose珠上的核心2 GlcNAc-T。为进行核心2 GlcNAc-T免疫沉淀以及进行蛋白质印迹，使用抗核心2GlcNAc-T的多克隆抗体。在冰上使细胞于以下裂解缓冲液中裂解：20mM Tris-HCL、pH7.4/1％Triton X-100、150mM NaCl、1mM EDTA、1mM EGTA、0.2mM钒酸钠、1mM PMSF、1μg/ml抑蛋白酶肽(aprotinin)、10μg/ml亮抑蛋白酶肽。将裂解液在4℃下温育20分钟，不断搅拌，离心除去不溶物(4℃下14,000g离心5分钟)。将澄清的裂解液在4℃下与葡萄球菌A蛋白-Sepharose CL-4B缀合第一抗体一起温育2小时，不断搅拌。免疫沉淀物用含0.5％Triton X-100的Tris缓冲盐水(10mM Tris-HCL，pH7.4，150mM NaCl)洗涤，并用于在存在和不存在潜在抑制剂下进行的核心2 GlcNAc-T测量。
核心2 GlcNAc-T活性的测量
为测量核心2 GlcNAc-T活性，将白细胞用PES洗涤，冷冻，于0℃下在0.9％Triton X-100中裂解。2 GlcNAc-T的活性如前所述(41)进行测量。简单地说，反应在含有以下成分的反应混合物中进行：50mM 2(N-吗啉代)乙磺酸(MES，Sigma，Dorset，英国)，pH7.0、1mMUDP-6[′H]-N-乙酰葡糖胺(16,000dpm/nmol，NEN Life Science Products，Hounslow，英国)、0.1M GlcNAc(Sigma，Dorset，OK)、1mM Galβ1-3GalNAcα-对硝基苯酚(Sigma，Dorset，英国)作为底物，16μl细胞裂解液(100-200μg蛋白质)，终体积为32μl。将所述混合物在37℃温育1小时后，用1ml用冰预冷的蒸馏水终止反应，然后在C18 Sep-Pak柱(Waters-Millipore，Watford，英国)上处理。用20ml蒸馏水洗涤柱子后，用5ml甲醇洗脱产物。样品的放射性在液体闪烁β-计数器(LKB-Wallac，伦敦，英国)中计数。在不加入接纳体的情况下测量内源核心2GlcNAc-T活性。比活性以pmole/h/mg细胞蛋白质表示。在每种情况下，蛋白质浓度均用BioRad蛋白质测定法(BioRad，Hertfordshire，英国)进行测定。
白细胞-内皮细胞黏着测定
白细胞黏着内皮细胞通过用羧基荧光素(Molecular Probe，英国)标记来检测。这种测定法是既定的(41)。简单地说，使内皮细胞生长至铺满状态，为羧基荧光素标记的白细胞(U937)的黏着提供内皮细胞表面。白细胞经处理后离心(14000g离心1分钟)，用无血清RPML洗涤两次。然后将细胞重悬于含50μg/ml羧基荧光素的1ml无血清RPML中。用血细胞计数器计算白细胞，以将已知数目的白细胞加入到内皮细胞中。在37℃下温育30分钟后，通过用无血清RPML洗涤除去非黏着白细胞，将平皿用3.7％福尔马林(PBS中)固定。采用荧光显微镜检术在10个随机高倍视野(x100)中计数连接的白细胞。结果以黏着白细胞/视野的百分数表示。
葡萄糖毒性
将BRP和BREC接种于3cm组织培养皿中，在生长培养基中37℃下温育24小时。然后将细胞在含正常葡萄糖(5.8mM)或高葡萄糖(25mM)的新鲜生长培养基中，在存在和不存在各胡芦巴次级分下温育。温育4天后，用血细胞计数器和台盼蓝计算活细胞数目，结果以对照(5.8mM葡萄糖)的百分数表示。处理后，保存其中一些细胞，以测量核心2 GlcNAc-T活性。
粗胡芦巴种子提取物的生物活性
如图2a所示，人白细胞(U937)暴露于高D-葡萄糖24小时显著提高了其中的核心2 GlcNAc-T活性。现已发现，从胡芦巴种子制备的粗提取物具有抑制人白细胞中葡萄糖诱导的核心2 GlcNAc-T活性(图2b)和白细胞-内皮细胞黏着(图2c)的潜力。白细胞-内皮细胞黏着通过将已知数目的用羧基荧光素染色的白细胞加入到单层视网膜毛细血管内皮细胞中来测量。连接的白细胞随后在荧光显微镜下选取10个随机视野来计数。
图3所示结果通过将人白细胞(U937)暴露于高D-葡萄糖24小时而获得。暴露后，将细胞裂解，与粗胡芦巴种子提取物F1一起温育，温育30分钟后测量核心2 GlcNAc-T活性。
胡芦巴种子提取物的制备和纯化：实施例1
如下获得胡芦巴种子提取物(见图4)。将胡芦巴种子(印度产胡芦巴种子，作为Methi种子获自FUDCO，184 Ealing Road，Wembley，Middlesex，英国)在锤磨机中磨碎，滤过尼龙网。所得820g深黄色粉末通过在索氏萃取器中用己烷连续洗涤8小时来脱脂。然后将植物物料干燥，用乙醇连续萃取8小时。过滤除去固体残余物，真空浓缩乙醇，得半固体棕色粗提取物，标记为F1(65g)。由于此粗提取物F1似乎含有残油，取其50g与冷己烷(500ml)一起振摇。滤出己烷可溶性物质，除去己烷溶剂，得F3(15.4g)，而不溶性残余物收集于滤纸上，干燥，得F2(27g)。
现使用市售试剂盒(Biotage)进行正相硅胶急骤层析。将F2(5g)吸收到硅胶(5g)上并装入样品桶(barrel)中，所述样品桶通过短管与装有硅胶KP-Sil的主层析柱(20cm×4cm)连接。用极性不断增强的一系列溶剂将样品洗脱到层析柱上并通过层析柱，所述溶剂由石油醚(40/60)、氯仿、甲醇和丙酮的不同混合物组成。用TLC检测洗脱出的各次级分，将类似的次级分集中，得到七个主要洗脱次级分F8-F14，分别代表极性不断增强的化合物。除去硅胶，用100％甲醇振摇，过滤，干燥，得残余物，标记为F15。表2给出各次级分的重量和大概的洗脱溶剂。
表2：用急骤层析法将次级分F2分离成次级分F8-F15
纯化的胡芦巴种子提取物的生物活性
对这些纯化的次级分抑制白细胞中葡萄糖诱导的核心2 GlcNAc-T活性的潜力进行了检测。首先证明了次级分F2能抑制白细胞中葡萄糖诱导的核心2 GlcNAc-T活性(图5)。另外的实验证明在次级分F13和F14中存在核心2 GlcNAc-T抑制剂(图6a和6b)。
然后分析次级分F9和F13。用1ml二氯甲烷萃取次级分F9和F13的含水整分试样(0.5ml)，除去水相，通过滤过0.22μm滤器进行过滤除菌，然后用于基于细胞的核心2 GlcNAc-T活性测定中。将人白细胞在存在和不存在次级分F9和F13的水相下暴露于高D-葡萄糖(15mM)。图7中给出的结果显示在次级分F13的水相中存在核心2GlcNAc-T抑制剂。
通过HPLC将次级分F13的水相纯化成次级分F18.7-F41.1(以它们的HPLC保留时间作代号)。将次级分F13的水相直接注射到在反相条件下操作的HPLC(Hewlett Packard 1050^100系列)上。在十八碳键合(octadecyl-bonded)柱上用甲醇/水流动相实现分离。用在22nm固定波长下操作的UV检测器检测从柱中洗脱出的各成分。这些成分在质谱仪检测器出来的层析图上显示为各个峰。将这样获得的各次级分真空浓缩至干，重新溶解于磷酸缓冲盐水(PBS)中，过滤除菌。进行基于细胞的核心2 GlcNAc-T活性测定，结果提示在次级分F19-F20.03中存在核心2 GlcNAc-T抑制剂(见图8和9)。
随后，类似地通过在反相条件下操作的HPLC，在苯基键合(phenyl-bonded)柱上，用甲醇/水流动相将更大量的次级分F13水相纯化成保留时间分别为20,01、20.29和20.55的各次级分，它们分别等于上述次级分F19.13、F19.37和F19.44。基于细胞的核心2 GlcNAc-T活性测定确证在F20,01、F20.29和F20.55这些次级分中存在核心2GlcNAc-T抑制剂(图10a)。用无细胞测定系统，证明了核心2 GlcNAc-T被HPLC纯化出的次级分F20.55所抑制(图11)。将人白细胞(U937)在37℃下暴露于15mM葡萄糖24小时后，将细胞裂解，然后暴露于加热(H，100℃)和非加热(NH)的次级分F20.55(1∶500稀释)。在37℃下暴露30分钟后，测量核心2 GlcNAc-T的活性。如图11所示，在无细胞测定中发现次级分F20.55直接抑制核心2 GlcNAc-T。对次级分F20.55进行加热仅稍微改变对核心2 GlcNAc-T的抑制水平。
核心2 GlcNAc-T抑制剂的结构分析
次级分F20.55中的核心2 GlcNAc-T抑制剂已通过将样品溶于CD3OD中进行NMR分析得到鉴定。进行了以下NMR实验：1D质子，2D DQF-COSY(1H-1H相关)[8小时]，2D编辑的HSQC(1H-13C多重编辑的一键相关(one-bond correlation with multiplicity editing))[22小时]，2D TOCSY(1H-1H接力相关)[2×8小时]。
表3和4给出次级分F20.55中的核心2 GlcNAc-T抑制剂的1H和13C NMR数据。
表3：1H NMR数据(样品于氘吡啶中)
表4：13C NMR数据(样品于氘吡啶中)
Figure 2004800417353A00800041
目的化合物鉴定为胡芦巴皂苷IVa，是已知的胡芦巴种子成分(55)。
胡芦巴皂苷IVa、原薯蓣皂苷、化合物3和糖苷F的批量制备
将粉碎的种子(360g，产自Deep Foods，Inc.，Union，NJ 07083，美国)依次用庚烷(2×700ml)、丙酮(4×600ml)和MeOH(4×600ml)分别回流煮沸2小时进行萃取。将各提出物过滤，真空蒸发至干，通过LC/MS分析是否存在先前所报道的来自这种植物的呋甾烷醇皂苷(55，74，75)。发现甲醇提取物(82g，占种子的22.7％(w/w))含有目标化合物。
用庚烷和丙酮对种子进行初始萃取除去了大部分的低极性物质，使得后续的层析得到改善。可通过使甲醇提取物在丁醇和水之间分配实现进一步的脱脂。但是，由于甲醇提取物含有极性较低的物质，可通过用苯乙烯树脂如Diaion(或SP207、HP20SS、SP207SS，均可获自Sigma-Aldrich)树脂进行固相萃取获得富集的含皂苷级分，而不必使提取物进行进一步的脱脂。
将MeOH提取物(CDXA-13-132-1，81.2 g)溶于水-MeOH(6∶4，400ml)中，加样到Diaion HP20(Supelco Diaion HP 20，350g，5.0×30cm)上，用水-MeOH(4∶6，600ml)、MeOH(2L)和丙酮(2L)洗脱。收集到250ml的各级分。用HPLC分析所述各级分，合并具有类似组成的级分，得到7个集合体(pool)(CDXA-13-133 F1～F7)。发现集合体CDXA-13-133-F5(22.5g，占提取物的27.7％w/w)含有大部分的所需皂苷。
将此集合体(22.0g)在正相硅胶(445g，Merck silica gel 60，70-230目，0.0763-0.200mm，5.0×30cm)上进行层析，用以下组成的二氯甲烷-MeOH-水系统各3L：a)80∶20∶3、b)75∶25∶3、c)70∶30∶3和d)65∶35∶3进行洗脱。收集到250ml的各级分，用HPLC分析，合并成11个集合体(CDXA-13-137-F1～F11)。
将级分F6和F7合并，干燥(10.0g，45％)，在C8硅胶(350g，Phenomenex Luna C8(2)，5μm，100A，5.0×28cm)上层析，用以下组成的MeOH-水系统：a)4∶6(800ml)、b)5∶5(2L)、c)55∶45(5L)6∶4(1L)、d)65∶35(1L)、e)7∶3(1L)、f)8∶2(1L)和MeoH(1L)进行洗脱。用HPLC分析各级分，合并，得到29个集合体(CDXA-13-138-F1～F29)。收集到250ml的各级分。
将级分F13～F16干燥(1.155g，11.6％)，用Gilson半制备型HPLC系统进行反相HPLC纯化，所述HPLC系统由155型紫外光/可见光检测器、321型泵和215型自动样品处理系统(liquid handler)组成。
层析条件：
层析柱：Phenomenex Luna C18(2)，5μm，150×21.2mm
流动相：乙腈-水(28∶72)
上样量：各级分每次注射15mg
检测：UV 205nm
共收集到五个峰P1～P5(图**1～5)，通过将它们的1H、13C NMR和质谱数据与文献报告的胡芦巴皂苷IVa及其25(S)异构体——糖苷F的数据相比较进行鉴定。还检测出另一种类似的化合物-化合物3。这种化合物以前没有被描述过。
NMR谱在D5吡啶中记录。质子谱在Varian Inova VXRs-300仪上于300MHz处记录，碳谱在Varian Inova 400仪上于100MHz处记录。
质谱在Finnigan LCQ Deca仪上以APCI模式记录。
峰1，胡芦巴皂苷Iva：白色固体(90mg，占种子的0.025％w/w)。1HNMR(吡啶-d5，400MHz，δ)：0.90(3H，s，18-H3)，1.04(3H，d，J＝6.8Hz，27-H3)，1.07(3H，s，19-H3)，1.34(3H，d，J＝6.8Hz，21-H3)，1.79(3H，s，J＝6.0Hz，Rha-6″-H3)，3.88(1H，m，3-H)，4.09(2H，m，16-H2)，4.84(1H，d，J＝7.6Hz，Glc-1′-H)，4.97(1H，重叠，Glc-1′-H)，5.16(1H，d，J＝7.6Hz，Glc-1-H)，5.29(1H，d样，6-H)，6.29(1H，br s，Rha-1″-H).
峰2，化合物C/原薯蓣皂苷：白色固体(120mg，0.033％)。
                                                                 1HNMR(吡啶-d5，400MHz，δ)：0.90(3H，s，18-H3)，1.04(3H，d，J＝6.8Hz，27-H3)，1.07(3H，s，19-H3)，1.34(3H，d，J＝6.8Hz，21-H3)，1.66(3H，s，J＝6.0Hz，Rha-6-H3)，1.79(3H，s，J＝6.0Hz， Rha-6″-H3)，3.88(1H，m，3-H)，4.09(2H，m，16-H2)，4.84(1H，d，J＝8.0Hz，Glc-1′-H)，4.97(1H，重叠，Glc-1′-H)，5.90(1H，br s，Rha-1
Figure 048417353_4
-H)，5.32 1H，d样，6-H)，6.45(1H，br s，Rha-1″-H).
峰3，化合物3：白色固体(30mg，0.008％)。
                                                              1H NMR(吡啶-d5，400MHz，δ)：0.89(3H，s，18-H3)，1.06(3H，s，19-H3)，1.34(3H，d，J＝6.4Hz，21-H3)，1.66(3H，s，J＝6.0Hz，Rha-6
Figure 048417353_5
-H3)，1.79(3H，s，J＝6.0Hz，Rha-6″-H3)，3.88(1H，m，3-H)，4.84(1H，d，J＝8.0Hz，Glc-1
Figure 048417353_6
′-H)，4.97(1H，重叠， Glc-1′-H)，5.32 1H，d样，
6-H)，5.90(1H，br s，Rha-1-H)，6.45(1H，br s，Rha-1″H).
峰4，糖苷F：白色固体(120mg，0.033％)。
                                                               1H NMR(吡啶-d5，400MHz，δ)：0.90(3H，s，18-H3)，1.00(3H，d，J＝6.4Hz，27-H3)，1.06(3H，s，19-H3)，1.35(3H，d，J＝6.4Hz，21-H3)，1.79(3H，s，J＝6.0Hz，Rha-6-H3)，3.88(1H，m，3-H)，3.97(2H，m，16-H2)，4.84(1H，d，J＝7.6Hz，Glc-1′-H)，4.97(1H，重叠，Glc-1′-H)，5.16(1H，d，J＝7.6Hz，Glc-1
Figure 048417353_9
H)，5.29(1H，d样，6-H)，6.29(1H，br s，Rha-1″-H).
表5.峰1～5的13C NMR数据(于吡啶-d5中，100MHz)
表六.总结
上表五种化合物的化学结构在图15中给出。
其它化合物
从长刺天门冬(Asparagus racemosus)(56)分离的Shatavarin IV(图15)和从刺蒺藜(Tribulus terrestris)分离的原薯蓣皂苷(也可从胡芦巴分离，为(55)的化合物C)均由Chromadex inc.2952 S.Daimler St.Santa Ana(美国加州)提供。原薯蓣皂苷也可从上述胡芦巴制品分离，为峰2，符合公布的原薯蓣皂苷NMR质谱。
胡芦巴皂苷IVa、糖苷F、原薯蓣皂苷和shatavarin IV的生物活性
无细胞测定
将BB大鼠的心脏裂解液在存在和不存在20ng/ml的每种化合物下温育。在37℃下温育1小时后，测量核心2 GlcNAc-T的活性，以pmole/h/mg蛋白质表示。结果是3-5个单独实验的平均值。结果在图15a中显示。
在无细胞测定中，胡芦巴皂苷IVa及其25(R)异构体糖苷F和shatavarin IV是具有高度活性的核心2 GlcNAc-T抑制剂，而其中4-位的葡萄糖被鼠李糖取代的原薯蓣皂苷没有活性。
基于细胞的测定
将人白细胞(U937细胞)在存在和不存在20ng/ml的试验化合物下暴露于8pg/ml的人重组TNF-α。温育24小时后，测量核心2 GlcNAc-T的活性，以pmole/h/mg蛋白质表示。结果在图15b中显示。
在无细胞的测定中，胡芦巴皂苷IVa和糖苷F是具有高度活性的核心2 GlcNAc-T抑制剂，而原薯蓣皂苷没有活性。
核心2 GlcNAc-T抑制剂胡芦巴皂苷IVa与糖尿病性视网膜病
已发现，葡萄糖水平升高会显著提高培养的牛视网膜血管细胞即毛细血管周细胞(BRP)和毛细血管内皮细胞(BREC)中的核心2GlcNAc-T活性(图13)。将近乎铺满的培养物在37℃下暴露于正常葡萄糖(N，5.8mM)和高葡萄糖(G，15mM)24小时。将细胞裂解，测定细胞裂解液中的核心2 GlcNAc-T活性。
还已进一步证明，胡芦巴种子提取物具有逆转培养的牛视网膜毛细血管周细胞(BRP)和内皮细胞(BREC)中葡萄糖诱导的毒性(图14)的潜力。将细胞在存在(N-F，G-F)和不存在(N，G)胡芦巴种子提取物下暴露于正常(N，5.8mM)和高15葡萄糖(G，25mM)。温育4天后，用血细胞计数器和台盼蓝排斥试验测定活细胞数目。发现胡芦巴种子提取物的确能逆转培养的牛视网膜毛细血管周细胞和内皮细胞中葡萄糖诱导的毒性。但是，尚未确定胡芦巴种子提取物是否通过使核心2 GlcNAc-T活性正常化而逆转葡萄糖诱导的毒性。
胡芦巴种子提取物对视网膜血管细胞的这种保护作用是意义重大的，因为视网膜血管细胞的损害是早期糖尿病性视网膜病的特征。人类的糖尿病性视网膜病大体上是一种血管疾病，主要影响毛细血管。已报告的先期超微结构和显微变化有视网膜毛细血管基膜增厚和周细胞变性，这两方面均损害毛细血管壁的完整性。周细胞变性在基膜鞘中留下染色很淡的区室，称为周细胞“影(ghost)”。周细胞和内皮细胞的损害导致无细胞毛细血管的形成。
治疗
包含本文描述的式I化合物的药物可通过口服或胃肠外途径给药，包括静脉内、肌内、腹膜内、皮下、透皮、呼吸道(气雾剂)、直肠、阴道和局部(包括口腔和舌下)给药。对于口服给药，本发明化合物通常以片剂或胶囊剂的形式、作为散剂或颗粒剂或作为含水溶液剂或混悬剂提供。
供口服使用的片剂包含与药物可接受赋形剂混合的活性成分，所述赋形剂例如惰性稀释剂、崩解剂、粘合剂、润滑剂、甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂。合适的惰性稀释剂包括碳酸钠和碳酸钙、磷酸钠和磷酸钙和乳糖，而玉米淀粉和海藻酸则是合适的崩解剂。粘合剂可包括淀粉和明胶，而润滑剂如果存在的话可以是硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉。如有需要，片剂可用甘油单硬脂酸酯或甘油二硬脂酸酯之类的物质作包衣，以延迟在胃肠道中的吸收。供口服使用的胶囊剂包括硬胶囊(其中活性成分与固体稀释剂混合)和软胶囊(其中活性成分与水或油如花生油、液状石蜡或橄榄油混合)。
供直肠给药的制剂可呈现为具有合适基质的栓剂，所述基质包括例如可可脂或水杨酸酯。
适合阴道给药的制剂可呈现为阴道栓剂、棉塞、霜剂、凝胶剂、糊剂、泡沫剂或喷雾制剂，它们除包含活性成分外，还包含本领域公知适当的载体。
对于肌内、腹膜内、皮下和静脉内使用，本发明化合物通常以缓冲至适当pH和等渗性的无菌含水溶液剂或混悬剂的形式提供。合适的含水介质包括林格溶液和等渗氯化钠。本发明的含水混悬剂可包含悬浮剂如纤维素衍生物、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮和黄芪胶，以及湿润剂如卵磷脂。含水混悬剂的合适防腐剂包括对羟基苯甲酸乙酯和正丙酯。
本发明的胡芦巴种子提取物和核心2 GlcNAc-T抑制剂也可呈现为脂质体制剂。
一般来说，合适的核心2 GlcNAc-T抑制剂剂量在每天每公斤接受者体重0.01-10mg的范围内，优选在每天每公斤体重0.2-1.0mg的范围内。所需剂量优选每天一次给予，但也可以以二、三、四、五、六次或更多次分剂量在一天中以适当间隔时间给予。这些分剂量可以以单位剂型给予，每一单位剂型含有例如10-1500mg，优选20-1000mg，最优选50-700mg的活性成分。
参考文献
1.Colley K.J.，“Golgi localization of glycosyltransferases：morequestion than answers”(糖基转移酶在高尔基体中的定位：疑问多，答案少)，Glycobiology 7，1-13(1997)
2.Varki A.，“Biological roles of oligosaccharides：all of the theoriesare correct”(寡糖的生物学角色：所有的理论都是正确的)，Glycobiology3，97-130(1993)
3.Williams D.et al.，“Mucin synthesis.Detection in caninesubmaxillary glands of an N-acteylglucosaminyltransferase which acts onmucin substrates”(黏蛋白合成。犬颌下腺中作用于黏蛋白底物的N-乙酰葡糖胺转移酶的检测)，J.Biol. Chem.255，11247-11252(1980)
4.Schachter H.et al.，“Composition，Structure and Function”(组成、结构与功能)in Glyconjugates，eds.Allen H.J.and Kisailus E.C.，pages263-332，Marcel Dekker，New York(1992)
5.Leferte S.et al.，“Glycosylation-dependent collagen-bindingactivities of two membrane glycoproteins in MDAY-D2 tumour cells”(MDAY-D2肿瘤细胞中两种膜糖蛋白的依赖于糖基化的胶原结合活性)，Cancer Res.48，4743-4748(1988)
6.Ellies L.G.et al.，“Core 2 oligosaccharide biosynthesisdistinguishes between selectin ligands essential for leukocyte homing andinflammation”(核心2寡糖生物合成区别白细胞归巢和炎症所必需的选凝素配体)，Immunity9，881-890(1998)
7.Brockhausen I.et al.，“Biosynthesis of O-glycans in leukocytesfrom normal donors and from patients with leukemia：increase in O-glycancore 2 UDP-GlcNAc：Gal[β]3GalNAc[α]-R(GalNAc to GalNAc)[β](1，6)-N-acetylglucosaminyltransferase in leukemic cells”(正常供体和白血病患者的白细胞中O-聚糖的生物合成：白血病细胞中O-聚糖核心2 UDP-GlcNAc：Gal[β]3GalNAc[α]-R(GalNAc→GalNAc)[β](1，6)-N-乙酰葡糖胺转移酶增加)，Cancer Res.51，1257-1263(1991)
8.Renkonen J.et al.，“Core 2 betal，6-N-acetylglucosaminyl-transferases and alpha 1，3-fucosyltransferases regulate the synthesis of O-glycans on selectin ligands on oral cavity carcinoma cells”(核心2 β1，6-N-乙酰葡糖胺转移酶和α1，3-岩藻糖基转移酶调节口腔癌细胞选凝素配体上的O-聚糖合成)，APMIS 109，500-506(2001)
9.Machida E.et al.，“Clinicopathological significance of core 2beta 1，6-N-acetylglucosaminyltransferase messenger RNA expressed in thepulmonary adenocarcinoma determined by in situ hybridization”(原位杂交测定的肺腺癌中所表达核心2 β1，6-N-乙酰葡糖胺转移酶信使RNA的临床病理学重要性)，Cancer Res.61，2226-2231(2001)
10.Dalziel M.et al.，“The relative activities of the C2GnT1 andST3Gal-I glycosyltransferases determine O-glycan structure and expressionof a tumor-associated epitope on MUC1”(C2GnT1和ST3 Gal-I糖基转移酶的相对活性决定MUC1上肿瘤相关表位的O-聚糖结构和表达)，Biol.Chem.276，11007-11105(2001)
11.Perandio M.et al.，“Severe impairment of leukocyte rolling invenules of core 2 glucosaminyltransferase-deficient mice”(核心2葡糖胺转移酶缺陷小鼠小静脉中白细胞滚动的严重损害)，blood 97，3812-3819(2001)
12.Yousefi S.et al.，“Increased UDP-GlcNAc：Gal[beta] 1-3GalNAc-R(GalNAc to GalNAc)[beta]-(1，6)-acetylglucosaminyltransferase activityin metastic murine tumour cell lines”(转移鼠肿瘤细胞系增高增强的UDP-GlcNAc：Gal[β]1-3GalNAc-R(GalNAc→GalNAc)[β]-(1，6)-乙酰葡糖胺转移酶活性)，J.Biol.Chem.266，1772-1782(1991)
13.Higgins E.A.et al.，“Aberrant O-linked oligosaccharidebiosynthesis and platelets from patients with the Wiskott-Aldrichsyndrome”(异常O-连接寡糖生物合成与Wiskott-Aldrich综合征患者的血小板)，J.Biol.Chem.266，6280-6290(1991)
14.Piller F.et al.，“Human T-lymphocyte activation is associated withchanges in O-glycans biosynthesis”(人T淋巴细胞激活与O-聚糖生物合成的变化有关)，J.Biol.Chem.263，15146-15150(1988)
15.Koya D.et al.，“Overexpression of core 2 N-acetylglycosaminyl-transferase enhances cytokine actions and induces myocardium intransgenic mice”(核心2 N-乙酰葡糖胺转移酶的过量表达增强细胞因子作用和诱导转基因小鼠的心肌)，FASEB 13，2329-2337(1999)
16.Nishio Y.et al.，“Identification and characterization of a generegulating enzymatic glycosylation which is induced by diabetes andhyperglycemia specifically in rat cardiac tissue”(大鼠心脏组织糖尿病和高血糖特异性诱导的调节酶促糖基化的基因的鉴定和表征)，J.Clin.Invest.96，1759-1767(1995)
17.Tsuboi S.et al.，“Roles of O-linked oligosaccharides in immuneresponses”(O-连接寡糖在免疫反应中的作用)，Bioassays 23，46-53(2001)
18.Tsuboi S.et al.，“Branched O-linked oligosaccharides ectopicallyexpressed in transgenic mice reduce primary T-cell immune responses”(转基因小鼠中异位表达的分支O-连接寡糖减少初次T细胞免疫反应)，EMBO J.16，6364-6373(1997)
19.Tsuboi S.et al.，“Roles of O-linked oligosaccharides in immuneresponses”(O-连接寡糖在免疫反应中的作用)，Bioassays 23，46-53(2001)
20.Piller F.et al.，“Human T-lymphocyte activation is associated withchanges in O-glycans biosynthesis”(人T淋巴细胞激活与O-聚糖生物合成的变化有关)，J.Biol.Chem.263，15146-15150(1998)
21.Tsuboi S.et al.，“Overexpression of branched O-linkedoligosaccharides on T cell surface glycoproteins impairs humoral immuneresponses in transgenic mice”(T细胞表面糖蛋白上分支O-连接寡糖的过量表达损害转基因小鼠的体液免疫反应)，J.Biol.Chem.273(46)，30680-30687(1998)
22.Maemura K.et al.，“Poly-N-acetyllactosaminyl O-glycansattached to Leukosialin.The presence of sialyl Le(x)structures in O-glycans”(连接白涎蛋白的聚-N-乙酰半乳糖胺O-聚糖。O-聚糖中sialylLe(x)结构的存在)，J.Biol.Chem.267(34)，24379-24386(1992)
23.Nakamura M.et al.，“Simultaneous core 2 betal→6N-acetylglucosaminyltransferase up-regulation and sialyl-Le(X)expressionduring activation of human tonsillar B lymphocytes”(人扁桃体B淋巴细胞活化过程中的同时核心2 β1→6N-乙酰葡糖胺转移酶正调节和sialyl-Le(X)表达)，FEBS lett.463(1-2)，125-128(1999)
24.Wilkins P.P.et al.，“Structures of the O-glycans on P-selectinglycoprotein ligand-1 from HL-60 cells”(HL-60细胞P-选凝素糖蛋白配体-1上的O-聚糖结构)，J.Biol.Chem.271(31)，18732-18742(1996)
25.Ohmori K.et al.，“A distinct type of sialyl Lewis X antigendefined by a novel monoclonal antibody is selectively expressed on helpermemory T cells”(由新型单克隆抗体所规定的独特类型sialyl Lewis X抗原在辅助记忆T细胞上选择性表达)，Blood 82(9)，2797-805(1993)
26.Kumamoto K.et al.，“Specific detection of sialyl Lewis Xdeterminant carried on the mucin GlcNAcbeta1→6GalNAcalpha corestructure as a tumor-associated antigen”(黏蛋白GlcNAcβ1→6GalNAcα核心结构上携带的作为肿瘤相关抗原的sialyl Lewis X决定簇的特异性检测)，Biochem.Biophys.Res.Commun.247(2)，514-517(1998)
27.Varki A.“Biological roles of oligosaccharides：all of the theoriesare correct”(寡糖的生物学角色：所有的理论都是正确的)，Glycobiology3，97-130(1993)
28.Walz G.et al.，“Recognition by ELAM-1 of the sialyl-Lexdeterminant on myeloid and tumor cells”(ELAM-1对骨髓和肿瘤细胞上的sialyl-Lex决定簇的识别)，Science 250(4984)，1132-1135(1990)
29.Majuri M.L et al.，“Recombinant E-selectin-protein mediatestumor cell adhesion via sialyl-Le(a)and sialyl-Le(x)”(重组E-选凝素-蛋白质通过sialyl-Le(a)和sialyl-Le(x)介导肿瘤细胞黏附)，Biochem.Biophys.Res.Commun.182(3)，1376-82(1992)
30.Takada A.et al.，“Contribution of carbohydrate antigens sialylLewis A and sialyl Lewis X to adhesion of human cancer cells to vascularendothelium”(碳水花合物抗原sialyl Lewis A和sialyl Lewis X对人癌细胞黏附血管内皮的影响)，Cancer Res.53(2)，354-361(1991)
31.Yousefi S.et al.，“Acetylglucosaminyltransferase activity inmetastic murine tumour cell lines”(转移鼠肿瘤细胞系中的乙酰葡糖胺转移酶活性)，J.Biol.Chem.266，1772-1782(1991)
32.Beaum P.V.et al.，“Expression ofcore 2 beta-1，6-N-acetylglucos-aminytransferase in a human pancreatic cancer cell line results in alteredexpression of MUC1 tumour-associated epitopes”(人胰腺癌细胞系中核心2β-1，6-N-乙酰葡糖胺转移酶的表达导致MUCl肿瘤相关表位表达改变)，J.Biol.Chem.274，24641-24648(1999)
33.Saitoh et al.，“Expression of aberrant O-glycans attached to leuko-sialin in differentiation-deficient HL-60 cells”(连接到分化缺陷型HL-60细胞中白涎蛋白的异常O-聚糖的表达)，Cancer Res.51(11)，2854-2862(1991)
34.Brockhausen et al.，al.，“Biosynthesis of O-glycans in leukocytesfrom normal donors and from patients with leukemia：increase in O-glycancore 2 UDP-GlcNAc：Gal[beta]3 GalNAc[alpha]-R(GalNAc to GalNAc)[beta](1，6)-N-acetylglucosaminyltransferase in leukemic cells”(正常供体和白血病患者的白细胞中O-聚糖的生物合成：白血病细胞中O-聚糖核心2 UDP-GlcNAc：Gal[β]3GalNAc[α]-R(GalNAc→GalNAc)[β](1，6)-N-乙酰葡糖胺转移酶增加)，Cancer Res.51，1257-1263(1991)
35.Renkonen J.et al.，“Core 2 betal，6-N-acetylglucosaminyl-transferases and alphal，3-fucosyltransferases regulate the synthesis of O-glycans on selectin ligands on oral cavity carcinoma cells”(核心2β1，6-N-乙酰葡糖胺转移酶和α1，3-岩藻糖基转移酶调节口腔癌细胞选凝素配体上的O-聚糖合成)，APMIS 109，500-506(2001)
36.Shimodaira K.et al.，“Carcinoma-associated expression of core 2beta-1，6-N-acetylglucosaminyltransferase gene in human colorectal cancer：role of O-glycans in tumor progression”(人结肠直肠癌中核心2β-1，6-N-乙酰葡糖胺转移酶基因的癌相关表达：O-聚糖在肿瘤进展中的作用)，Cancer Res.1；57(23)，5201-5216(1997)
37.Numahata K.et al.，“A distinct type of sialyl Lewis X antigendefined by a novel monoclonal antibody is selectively expressed on helpermemory T cells”(由新型单克隆抗体所规定的独特类型sialyl Lewis X抗原在辅助记忆T细胞上选择性表达)，Blood 82(9)，2797-805(2002)
38.Klein R.，et al.，“The Winconsin epidemiology study of diabeticretinopathy X.Four-year incidence and progression of diabetic retinopathywhen age at diagnosis is 30 or more years”(糖尿病性视网膜病X的Winconsin流行病学研究。诊断时年龄在30岁或以上的糖尿病性视网膜病的四年发生和进展)，Arch.Ophthalmol.107，244-250(1989)
39.Davis M.D.，“Diabetic retinopathy-a clinical overview”(糖尿病性视网膜病-临床评述)，Diabetes Care 15，1844-1873(1993)
40.Kohner E.M.et al.，“Diabetic retinopathy”(糖尿病性视网膜病)in Diabetic Angiopathy，ed.Tooke J.E.，pages 233-247，Oxford UniversityPress(1999)
41.Chibber R.et al.，“Activity of core 2 GalNAc-(betal，6)transferase，is higher in polymorphonuclear leukocytes from diabetic patients comparedto age-matched control subjects”(糖尿病患者的多形核白细胞中核心2GalNAc-(β1，6)转移酶活性比年龄相当的对照对象更高)，Diabetes 49，1724-1730(2000)
42.Koya D.et al.，“Protein kinase C activation and the developmentof diabetic complications”(蛋白激酶C激活与糖尿病并发症的发展)，Diabetes 47，859-866(1989)
43.Meier M.et al.，“Protein kinase C activation and itspharmacological inhibition in vascular disease”(血管疾病中蛋白激酶C激活及其药理学抑制)，Vasc.Med.5，173-185(2000)
44.Sharma R.D.et al.，“Effect of fenugreek seeds on blood glucoseand serum lipids in type I diabetes”(胡芦巴种子对I型糖尿病血液葡萄糖和血清脂质的作用)，Eur.J.Clin.Nutr.44，301-306(1990)
45.Broca C.et al.，“4-Hydroxyisoleucine：effects of synthetic andnatural analogues on insulin secretion”(4-羟基异亮氨酸：合成和天然类似物对胰岛素分泌的作用)，Eur.J.Pharmacol.390(3)，339-345(2000)
46.Sauvaire Y.et al.，“4-Hydroxyisoleucine：a novel amino acidpotentiator of insulin secretion”(4-羟基异亮氨酸：胰岛素分泌的新型氨基酸增效剂)，Diabetes47(2)，206-210(1998)
47.Kuhns W.et al.，(1993)Processing O-glycan core 1，Galβ1-3GalNAcα-R.Specificities of core 2 UDP-GlcNAc：Galβ1-3 GalNAc-R(GalNAc to GalNAc)β6-N-acetylaminotransferase and CMP sialic acid：Galβ1-3GalNAc-Rα3sialyltransferase.(O-聚糖核心1，Galβ1-3GalNAca-R的加工。核心2 UDP-GlcNAc：Galβ1-3 GalNAc-R(GalNAc→GalNAc)β6-N-乙酰氨基转移酶和CMP唾液酸：Galβ1-3GalNAc-Rα3唾液酸转移酶的特异性)Glycoconjugate Journal 10 381-394
48.Paulsen H.et al.，Leibigs Ann.Chem.747-758.(1992)
49.Mulvihill N.T.et al.，Inflammation in acute coronary syndromes.(急性冠状动脉综合征中的炎症)Heart.87(3)：201-4.(2002).
50.Guray U.et al.，Poor coronary collateral circulation is associatedwith higher concentrations of soluble adhesion molecules in patients withsingle-vessel disease.(单血管疾病患者冠状动脉侧支循环不良与可溶性黏着分子浓度升高有关)Coron Artery Dis.15(7)：413-7(2004)
51.Guray U.et al.，Levels of soluble adhesion molecules in variousclinical presentations of coronary atherosclerosis.(冠状动脉硬化各种临床表现中的可溶性黏着分子水平)Int J Cardiol.2004 96(2)：235-40.
52.O′Brien KD et al.，Neovascular expression of E-selectin，intercellular adhesion molecule-1，and vascular cell adhesion molecule-1 inhuman atherosclerosis and their relation to intimal leukocyte content.(人动脉硬化症中E-选凝素、细胞间黏着分子-1和血管细胞黏着分子-1的新血管表达及它们与血管内膜白细胞含量的关系)Circulation.15；93(4)：672-82.(1996).
53.Davies MJ et al.，The expression of the adhesion moleculesICAM-1，VCAM-1，PECAM，and E-selectin in human atherosclerosis(人动脉硬化症中黏着分子ICAM-1、VCAM-1、PECAM和E-选凝素的表达).J Pathol.171(3)：223-9(1993).
54.Chibber R et al.，Activity of the glycosylating enzyme，core 2GlcNAc(β1，6)transferase，is higher in leukocytes from diabetic patientscompared with age-matched control subjects：relevance to capillaryocclusion in diabetic retinopathy(糖尿病患者白细胞的糖基化酶核心2GlcNAc(β1，6)转移酶活性比年龄相当的对照对象更高：与糖尿病性视网膜病中毛细血管阻塞的相关性).Diabetes；49(10)：1724-30(2000).
55.Yoshikawa M.et al.，Medicinal Foodstuffs.VIII.Fenugreek seed.(2)：Structures of six new furostanol saponins，trigoneosides Iva，Va，Vb，VI，VIIb，and VIIIb from the seeds of indian Trigonella foenum-graecumL.(药用食物.VIII.胡芦巴种子.(2)：印度Trigonella foenum-graecum L.种子的六种新呋甾烷醇型皂苷——胡芦巴皂苷Iva、Va、Vb、VI、VIIb和VIIIb的结构)Heterocycles 47，397-405(1998)
56.Ravikumar P.R.et al.，Dev.Chemistry of Ayurvedic crude drugspart VI-(Shatavari-1)：Structure of shatavarin-IV(shatavarin-IV的结构).Indian J.Chem.26B，1012-1017(1987).
57.Shimomura H.et al.，Steroidal saponins，Pardarinoside A-G fromthe bulbs of Lilium pardarinum.(Lilium pardarinum鳞茎的甾体皂苷元Pardarinoside A-G)Phytochemistry 28，3163-3170(1989).
58.Mimaki Y et al.，Steroidal saponins and alkaloids from the bulbsof Lilium brownii var.colchesteri(Lilium brownii var.colchesteri鳞茎的甾体皂苷元和生物碱)Chemical&Pharmaceutical Bulletin 38(11)，3055-9(1990).
59.Sashida Y et al.，Studies on the chemical constituents of the bulbsof Lilium mackliniae.(Lilium mackliniae鳞茎化学成分的研究)Chemical&Pharmaceutical Bulletin 39(9)，2362-8(1991)
60.Akhov L.S.et al.，Structure of steroidal saponins fromunderground parts of Allium nutans L.(Allium nutans L.地下部分的甾体皂苷元的结构)Journal of Agricultural and Food Chemistry47(8)，3193-3196(1999)
61.Joshi J.et al.，Chemistry of Ayurvedic crude drugs part VIII-Shatavari-2：Structure elucidation of bioactive shatavarin I and otherglycosides.(生物活性shatavarin I和其他糖苷的结构解析)Indian J.Chem.27B，12-16(1988).
62.Vasil′eva I.S.et al.，Composition and biologiucal activity ofsteroid glycosides from cell suspensions of dioscorea deltoideawall.(dioscorea deltoidea壁细胞悬液的甾族糖苷的组成和生物活性)Appl.Biochem.Microbiol.31，206-209(1995).
63.Sharma et al.，Oligofurostanosides from Asparagus curillusleaves.(Asparagus curillus叶的oligofurostanoside)Phytochemistry.33(3)：683-6.(1993).
64.Petit G.et al.，Isolation and structure of cytostatic steroidalsaponins from the African medicinal plant Balanites aegyptica.(非洲药用植物Balanites aegyptica的细胞静止甾体皂苷元的分离和结构)Journal ofnatural products 54，1491-1502.
65.Hostettman K.Saponins(皂苷).Cambridge University Press UK.(1995).
66.Li C et al.，Synthesis of diosgenyl alpha-L-rhamnopyranosyl-(1--＞2)-[beta-D-glucopyranosyl-(1--＞3)-[beta-D-glucopyranoside(gracillin)and related saponins.(薯蓣皂苷α-L-吡喃鼠李糖基-(1--＞2)-[β-D-吡喃葡糖基-(1--＞3)-[β-D-吡喃葡糖苷(gracillin)和相关皂苷的合成)CarbohydrRes.；306(1-2)：189-95.(1998).
67.Deng S et al.，Synthesis of three diosgenyl saponins：dioscin，polyphyllin D，and balanitin 7.(三种薯蓣皂苷：dioscin、polyphyllin D和balanitin 7的合成)Carbohydr Res.；30；317(1-4)：53-62.(1999)
68.Li B et al.，An improved synthesis of the saponin，polyphyllinD.(polyphyllin D皂苷的改进合成法)Carbohydr Res.；9；331：1-7.(2001).
69.Yu B et al.，al.，A“double random”strategy for the preparation ofsaponin libraries.(制备皂苷文库的“双随机”策略)J Comb Chem.；3(5)：404-6.(2001).
70.Yu B.，et al.，al.，The first synthetic route to furostan saponins.(呋甾烷皂苷的第一合成途径)Tetrahedron letters，42，77-79(2001).
71.Yu B et al.；Glycosyl trifluoroacetimidates.2.Synthesis of dioscinand xiebai saponin I.(薯蓣素和薤白皂苷I的合成)J Org Chem.；13；67(25)：9099-102(2002).
72.Cheng MS et al.，Total synthesis of methyl protodioscin：a potentagent with antitumor activity.(具有抗肿瘤活性的有效药剂——甲基原薯蓣素的总合成)J Org Chem.；2；68(9)：3658-62(2003)
73 Du Y et al.，Synthesis of saponins using partially protected donors.(用部分保护的供体合成皂苷)Org Lett.；2；5(20)：3627-30.(2003).
74.Yoshikawa et al.，Medicinal foodstuffs.IV.Fenugreek seed.(1)：structures of trigoneosides Ia，Ib，IIa，IIb，IIIa and IIIb，new furostanolsaponins from the seeds of Indian Trigonella foenum-graecum L.(药用食物.IV.胡芦巴种子.(1)：印度Trigonella foenum-graecum L.种子的新呋甾烷醇型皂苷——胡芦巴皂苷Ia、Ib、IIa、IIb、IIIa和IIIb的结构)ChemPharm Bull(Tokyo)；45(1)：81-7(1997).
75.Murakami T et al.，Medicinal foodstuffs.XVII.Fenugreek seed.(3)：structures of new furostanol-type steroid saponins，trigoneosides Xa，Xb，XIb，XIIa，XIIb，and XIIIa，from the seeds of EgyptianTrigonellafoenum-graecum L.(药用食物.XVII.胡芦巴种子.(3)：埃及Trigonellafoenum-graecum L.种子的新呋甾烷醇型皂苷——胡芦巴皂苷Xa、Xb、XIb、XIIa、XIIb和XIIIa的结构)Chem Pharm Bull(Tokyo)；48(7)：994-1000(2000).

Claims (15)

1.治疗有效量的式IV化合物在制备药物中的用途，所述药物用于治疗与核心2GlcNAc-T酶活性提高有关的疾病：
其中：
Z是选自下式的甾族基团：
其中：
R18是H；
R20是-OH；
R24是葡萄糖；
R29是H；
其中所述病症选自炎性疾病、糖尿病性视网膜病、糖尿病性心肌病和癌症转移，所述癌症选自结肠癌、结肠直肠癌、口腔癌、肺癌、肺腺癌、黑素瘤、膀胱癌、肝肿瘤和胃肿瘤、前列腺癌和睾丸癌。
2.权利要求1的用途，其中所述待治疗的炎性疾病选自类风湿性关节炎、炎性肠病和动脉粥样硬化。
3.权利要求1的用途，其中所述式IV化合物选自：
胡芦巴皂苷IVa，其为(3β，25S)-26-(β-D-吡喃葡糖基氧基)-22-羟基呋甾-5-烯-3-基-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-O-[β-D-吡喃葡糖基-(1→4)]-β-D-吡喃葡糖苷，
糖苷F，其为(3β)-26-(β-D-吡喃葡糖基氧基)-22-羟基呋甾-5-烯-3-基-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-O-[β-D-吡喃葡糖基-(1→4)]-β-D-吡喃葡糖苷，和
Shatavarin I。
4.式IV化合物为唯一活性物质的组合物的权利要求1的用途。
5.分离的式IV化合物的权利要求1的用途。
6.权利要求1的用途，其中所述药物用于胃肠外给药。
7.权利要求1的用途，其中所述药物用于透皮给药。
8.权利要求1的用途，其中所述药物用于气道、阴道、直肠或局部给药。
9.权利要求1的用途，其中所述药物作为10-1500mg式IV化合物的单位剂量递送。
10.权利要求1的用途，其中所述药物作为20-1000mg式IV化合物的单位剂量递送。
11.权利要求1的用途，其中所述药物作为50-700mg式IV化合物的单位剂量递送。
12.权利要求1的用途，其中如果式IV化合物由胡芦巴提取，则所述制剂基本没有归因于4-羟基异亮氨酸的降血糖特性。
13.权利要求1的用途，其中如果式IV化合物由胡芦巴提取，用于治疗糖尿病性视网膜病或糖尿病性心肌病，则所述制剂基本没有归因于4-羟基异亮氨酸的降血糖特性。
14.权利要求1的用途，其中式IV化合物是具有胡芦巴皂苷IVa或糖苷F的质谱特征的化合物：
1H NMR(吡啶-d5，400MHz，δ)：在Varian Inova VXRs-300仪上于300MHz处记录
胡芦巴皂苷IVa
0.90(3H，s，18-H3)，1.04(3H，d，J＝6.8 Hz，27-H3)，1.07(3H，s，19-H3)，1.34(3H，d，J＝6.8Hz，21-H3)，1.79(3H，s，J＝6.0Hz，Rha-6″-H3)，3.88(1H，m，3-H)，4.09(2H，m，16-H2)，4.84(1H，d，J＝7.6Hz，Glc-1″″-H)，4.97(1H，overlapped，Glc-1′-H)，5.16(1H，d，J＝7.6Hz，Glc-1″′-H)，5.29(1H，d like，6-H)，6.29(1H，br s，Rha-1″-H)
糖苷F
0.90(3H，s，18-H3)，1.00(3H，d，J＝6.4Hz，27-H3)，1.06(3H，s，19-H3)，1.35(3H，d，J＝6.4Hz，21-H3)，1.79(3H，s，J＝6.0Hz，Rha-6-H3)，3.88(1H，m，3-H)，3.97(2H，m，16-H2)，4.84(1H，d，J＝7.6Hz，Glc-1″″-H)，4.97(1H，overlapped，Glc-1′-H)，5.16(1H，d，J＝7.6Hz，Glc-1″′-H)，5.29(1H，d like，6-H)，6.29(1H，br s，Rha-1″-H)
13碳质谱(吡啶-d5，100MHz)：在Varian Inova 400仪上记录
Figure FFW00000066225200041
15.权利要求1的用途，其中所述式IV化合物是合成化合物。
CN2004800417353A 2003-12-22 2004-12-22 核心2GlcNAc-T抑制剂 Expired - Fee Related CN1917886B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GBGB0329667.0A GB0329667D0 (en) 2003-12-22 2003-12-22 Core 2 GlcNAc-T inhibitor
GB0329667.0 2003-12-22
PCT/GB2004/005398 WO2005060977A1 (en) 2003-12-22 2004-12-22 Core 2 glcnac-t inhibitors

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN1917886A CN1917886A (zh) 2007-02-21
CN1917886B true CN1917886B (zh) 2013-06-12

Family

ID=30776256

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2004800417353A Expired - Fee Related CN1917886B (zh) 2003-12-22 2004-12-22 核心2GlcNAc-T抑制剂

Country Status (9)

Country Link
US (2) US7906493B2 (zh)
EP (1) EP1708720A1 (zh)
JP (1) JP5085136B2 (zh)
CN (1) CN1917886B (zh)
AU (1) AU2004305302B2 (zh)
CA (1) CA2549118C (zh)
GB (1) GB0329667D0 (zh)
MX (1) MXPA06007087A (zh)
WO (1) WO2005060977A1 (zh)

Families Citing this family (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB0329667D0 (en) 2003-12-22 2004-01-28 King S College London Core 2 GlcNAc-T inhibitor
GB0513881D0 (en) * 2005-07-06 2005-08-10 Btg Int Ltd Core 2 GLCNAC-T Inhibitors III
US20080182801A1 (en) 2003-12-22 2008-07-31 Btg International Limited Core 2 glcnac-t inhibitors
GB0513888D0 (en) * 2005-07-06 2005-08-10 Btg Int Ltd Core 2 GLCNAC-T Inhibitors II
GB0513883D0 (en) * 2005-07-06 2005-08-10 Btg Int Ltd Diagnosis of Atherosclerosis
PT1919290E (pt) * 2005-07-12 2014-03-20 Ampio Pharmaceuticals Inc Métodos e produtos para tratamento de doenças
EP2049122B1 (en) * 2006-08-03 2014-10-08 Oncology Research International Limited Compositions for inhibiting angiogenesis
BRPI0715071A2 (pt) * 2006-08-03 2013-05-28 Oncology Res Int Ltd mÉtodos e composiÇÕes para promoÇço de atrividade de terapias anticancerÍgenas
US20090012014A1 (en) * 2007-07-02 2009-01-08 Indus Biotech Pvt. Ltd Compound, Composition and a Process Thereof
WO2009086952A2 (en) * 2008-01-07 2009-07-16 Projech Science To Technology, S.L. Compositions for the treatment of degenerative articular diseases
KR20110018886A (ko) * 2008-04-30 2011-02-24 인스티튜트 오브 레디에이션 메디신, 아카데미 오브 밀리터리 메디칼 사이언티시즈 오브 더 피엘에이 티모사포닌 ｂｉｉ의 합성
BRPI0822169B1 (pt) * 2008-05-08 2021-11-30 Indus Biotech Private Limited Composto de galactomanano, uma composição que compreende o mesmo, processo para sua preparação e aplicações do mesmo
US8217165B2 (en) * 2008-06-17 2012-07-10 Pawan Kumar Goel Process for the extraction of furostanolic saponins from fenugreek seeds
BRPI0914393A2 (pt) * 2008-10-28 2015-10-20 Avesthagen Ltd "método para caracterização de fitoquímicos"
DE202010017530U1 (de) * 2009-06-22 2012-03-28 Dmi Acquisition Corp. Danazolverbindung zur Behandlung von Krankheiten
WO2010151531A1 (en) * 2009-06-22 2010-12-29 Dmi Acquistion Corp. Methods and products for treatment of diseases
CN102532248B (zh) * 2011-12-19 2013-09-04 四川省中医药科学院 制备胡芦巴皂苷b的方法
CN102875635B (zh) * 2012-09-04 2015-07-01 陕西嘉禾植物化工有限责任公司 一种从穿地龙中综合提取原薯蓣皂苷和薯蓣皂苷的方法
SG10201705044YA (en) 2012-12-19 2017-07-28 Ampio Pharmaceuticals Inc Method for treatment of diseases
WO2016098120A2 (en) * 2014-12-16 2016-06-23 Goel, Pawan Kumar Single herb extract for the treatment of pcos (poly cystic ovarian syndrome)
CN105601685B (zh) * 2016-01-08 2017-12-26 鲁东大学 含喹唑啉环壳寡糖衍生物及制备方法和生物活性
US20190388548A1 (en) * 2018-06-26 2019-12-26 Tzu Chi University Method for providing ocular neuroprotection or for preventing, treating or alleviating the effects of, an ocular disease associated with retinal ganglion cell death
CN112300242B (zh) * 2020-10-26 2021-10-26 吉林大学 一种呋甾皂苷类化合物单体的制备方法

Family Cites Families (105)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU833254A1 (ru) 1979-03-15 1981-05-30 Ордена Ленина Институт Биохимииим. A.H.Баха Ah Cccp Способ получени дельтонина
US4602005A (en) * 1982-05-17 1986-07-22 Medical Research Foundation Of Oregon Tigogenin cellobioside for treating hypercholesterolemia and atherosclerosis
US4602003A (en) 1982-05-17 1986-07-22 Medical Research Foundation Of Oregon Synthetic compounds to inhibit intestinal absorption of cholesterol in the treatment of hypercholesterolemia
IT1195849B (it) 1986-07-01 1988-10-27 Sigma Tau Ind Farmaceuti Saponine triterpeniche ad attivita' antiinfiammatoria,mucolitica ed antiedemigena,procedimento per il loro ottenimento e composizioni farmaceutiche che li comprendono
RU2027434C1 (ru) 1988-08-16 1995-01-27 Научно-Исследовательский Институт Трансплантологии И Искусственных Органов Иммуномодулирующее средство
US5464778A (en) 1989-03-08 1995-11-07 Board Of Regents Of The University Of Oklahoma Glycoprotein ligand for P-selectin and methods of use thereof
BR9105952A (pt) 1990-01-18 1992-11-17 Cura Nominees Pty Ltd Metodo para identificar composto e para controlar autofagia celular,aglutinacao ou imobilizacao celulares de celulas moveis,metodo para tratamento de cancer,contracepcao,termino de gravidez,remocao de organismos patogenicos e de desenvolvimento celular anormal,metodo de induzir autofagia celular,aglutinacao ou imobilizacao celulares em um corpo animal,metodo de marcar e identificar celula-alvo,composto e composicao contendo pelo menos um composto para controlar autofagia celular,aglutinacao ou imobilizacao celuares de celulas moveis
JP3123745B2 (ja) 1990-03-16 2001-01-15 三和生薬株式会社 制癌剤
US5104856A (en) 1990-11-09 1992-04-14 Uab Research Foundation Heparan sulfate biosynthesis primers
US5461143A (en) 1991-03-18 1995-10-24 The Scripps Research Institute Oligosaccharide enzyme substrates and inhibitors: methods and compositions
DE69213804T2 (de) 1991-03-28 1997-03-27 Rooperol Na Nv Zusammensetzungen von Phytosterolen mit Phytosterolinen als Immunmodulatoren
FR2695317B1 (fr) 1992-09-07 1995-03-10 Monal Lab Composition apte à stimuler la sécrétion d'insuline destinée au traitement du diabète non insulino-dépendant.
US5360733A (en) 1992-10-01 1994-11-01 La Jolla Cancer Research Foundation Human β1-6 n-acetylglucosaminyl transferase
US5843707A (en) 1992-10-23 1998-12-01 Genetics Institute, Inc. Nucleic acid encoding a novel P-selectin ligand protein
DE4303214A1 (de) 1993-02-04 1994-08-11 Wolfgang Marks Behandlung von Erkrankungen viraler, viroidaler oder onkogener Genese durch Steroid-Saponine oder deren Aglykone
US5589182A (en) 1993-12-06 1996-12-31 Tashiro; Renki Compositions and method of treating cardio-, cerebro-vascular and alzheimer's diseases and depression
US5723456A (en) 1993-12-07 1998-03-03 Eli Lilly & Company Therapeutic treatment for cardiovascular diseases
ES2236702T3 (es) 1993-12-23 2005-07-16 Eli Lilly And Company Inhibidores de la proteina quinasa c.
IL108583A (en) 1994-02-07 1997-06-10 Yissum Res Dev Co Galactomannan emulsions and comestible products containing the same
US5491242A (en) 1994-06-22 1996-02-13 Eli Lilly And Company Protein kinase C inhibitors
CN1138984A (zh) 1995-06-26 1997-01-01 军事医学科学院放射医学研究所 新型甙类抗血栓药物
ES2208759T3 (es) 1995-08-03 2004-06-16 Board Of Regents Of The University Of Oklahoma O-glicanos inhibidores de la inflamacion mediada por selectina.
US5827884A (en) 1995-09-15 1998-10-27 Omp Acquisition Corporation Skin peel maintenance composition and method
US5965449A (en) 1996-07-03 1999-10-12 Forbes Medi-Tech, Inc. Method of assessing risk for cardiovascular disease and other disorders and phytosterol-based compositions useful in preventing and treating cardiovascular disease and other disorders
FI107015B (fi) 1996-08-09 2001-05-31 Raisio Benecol Oy Kasvistanolirasvahappoestereiden seos ja sen käyttö sekä elintarvike
CA2267328A1 (en) 1996-09-30 1998-04-09 Bayer Aktiengesellschaft Glycoconjugates from modified camptothecin derivates (20-o-linkage)
CA2186987A1 (en) * 1996-10-02 1998-04-02 George L. King Inhibitors of core 2 glcnac-t and use of the inhibitors to prevent or treat cardiomyopathy associated with diabetes
US6131578A (en) 1996-10-02 2000-10-17 King; George L. Inhibitors of UDP-G1cNAc:Ga1β1-3Ga1NAcαR β1-6 N-acetylglucosaminyltransferase (core 2 G1cNAc-T) and use of the inhibitors to prevent or treat cardiomyopathy associated with diabetes
WO1998023275A1 (de) 1996-11-28 1998-06-04 Henkel Kommanditgesellschaft Auf Aktien Verwendung von wirkstoffmischungen zur herstellung von hypocholesterinämischen mitteln
DE19701264A1 (de) 1997-01-16 1998-07-23 Kief Lizenz Verwertungsgesells Heilmittel, enthaltend Betasitosterin und/oder Phytosterol/Betasitosteringemische
US6042834A (en) 1997-01-29 2000-03-28 Baraka; Mohamed Wasif Herbal composition for diabetes and method of treatment
WO1998033494A1 (en) * 1997-02-04 1998-08-06 Kosbab John V Compositions and methods for prevention and treatment of vascular degenerative diseases
CA2206157C (en) 1997-05-26 2000-06-13 Cheng, Peter Method of extraction of commercially valuable fractions of fenugreek
US5886029A (en) 1997-09-05 1999-03-23 Dhaliwal; Kirpal S. Method and composition for treatment of diabetes
CN1131237C (zh) 1997-09-26 2003-12-17 中国人民解放军军事医学科学院放射医学研究所 甾体皂甙防治老年性痴呆的用途及新的甾体皂甙
WO1999025197A1 (en) * 1997-11-18 1999-05-27 Nutricept, Inc. Fenugreek compositions having reduced taste and odor and methods of use
US5985936A (en) 1997-12-18 1999-11-16 Forbes Medi-Tech, Inc. Method of preventing and delaying onset of Alzheimer's disease and composition therefor
WO1999039715A1 (en) 1998-02-06 1999-08-12 Medical Isotopes Inc. Readily absorbable phytosterols to treat hypercholesterrolemia
US5952393A (en) 1998-02-12 1999-09-14 Sorkin, Jr.; Harlan Lee Composition for reducing serum cholesterol levels
GB9923076D0 (en) 1999-09-29 1999-12-01 Phytopharm Plc Sapogenin derivatives and their use
HUP0101693A3 (en) 1998-03-26 2002-08-28 Phytopharm Plc Godmanchester Use of steroidal sapogenins and their derivatives for producing pharmaceutical compositions for the treatment of alzheimeirs disease
AU3567299A (en) 1998-04-17 1999-11-08 Medical Isotopes Inc. Phytosterol formulations to lower cholesterol absorption
US6087353A (en) 1998-05-15 2000-07-11 Forbes Medi-Tech Inc. Phytosterol compositions and use thereof in foods, beverages, pharmaceuticals, nutraceuticals and the like
CN1237583A (zh) * 1998-06-01 1999-12-08 沈阳药科大学 一种治疗癌症的甾体皂甙类化合物及其制备方法
CN1092203C (zh) 1998-07-22 2002-10-09 北京鑫利恒医药科技发展有限公司 人参皂甙Re的提取工艺及其新的药物用途
JP2002530425A (ja) * 1998-11-21 2002-09-17 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア 炎症を処置する際のコア２ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼインヒビターの使用
US20020098563A1 (en) 1999-02-03 2002-07-25 Bozena Korczak Novel core 2 beta-1,6-N-acetylglycosaminyltransferase gene
AU2946600A (en) 1999-03-04 2000-09-21 Eugene Science Inc. Water-soluble sterol derivative for inhibiting cholesterol absorption and process for preparing the same
AUPP968699A0 (en) 1999-04-09 1999-05-06 Cura Nominees Pty Ltd Therapeutic compositions and method for their preparation
US20040220115A1 (en) 1999-04-09 2004-11-04 Cham Bill E Medicinal compositions and their method of preparation
ATE286064T1 (de) 1999-06-21 2005-01-15 Forbes Medi Tech Inc Aromatische und heterozyklische derivate von phytosterolen und/oder phytostanolen zur behandlung von gefässkrankheiten
CA2377492A1 (en) 1999-06-23 2001-01-04 Honming Chen Conjugates of phytosterol or phytostanol with ascorbic acid and use thereof in treating or preventing cardiovascular disease
CN1243129A (zh) 1999-07-20 2000-02-02 沈阳药科大学 一种治疗癌症的甾体皂甙类化合物及其制备方法
CA2384978C (en) 1999-08-24 2012-10-23 Glycozym Aps Udp-n-acetylglucosamine: galactose-.beta.1,3-n-acetylgalactosamine-.alpha.-r/(glcnac to galnac) .beta.1,6-n-acetylglucosaminyltransferase, c2gnt3
US6998501B1 (en) 1999-08-30 2006-02-14 Ocean Nutrition Canada Limited Nutritional supplement for lowering serum triglyceride and cholesterol levels
JP2001072597A (ja) * 1999-09-03 2001-03-21 Mercian Corp 抗ヘルペスウイルス剤
US6197832B1 (en) 1999-09-14 2001-03-06 Harlan Lee Sorkin, Jr. Composition for reducing serum cholesterol levels
GB9923077D0 (en) 1999-09-29 1999-12-01 Phytopharm Plc Sapogenin derivatives and their use
FR2799759B1 (fr) 1999-10-14 2001-11-30 Oreal Composition, notamment cosmetique, comprenant une sapogenine
CA2389670A1 (en) 1999-11-01 2001-05-10 Forbes Medi-Tech Inc. Novel glycosides comprising pentose mono-, di-, tri-, or oligosaccharides and phytosterols and/or phytostanols
CN1302811A (zh) 2000-01-03 2001-07-11 广东泰禾生物药业有限公司 化合物(i)、提取方法及在制备治疗急性缺血性脑血管病药中的应用
ATE384518T1 (de) 2000-01-31 2008-02-15 Haerting S A Zusammensetzungen enthaltend phytosterol- und policosanolester von fettsäuren zur herabsetzung des cholesterol- und triglyceridspiegels
DE10005275A1 (de) 2000-02-07 2001-08-09 Bayer Ag Neuartige Glycokonjugate
US6593119B2 (en) 2000-02-29 2003-07-15 Glycodesign, Inc. Core 2 β-1,6-N-acetylglycosaminyltransferase gene
AU2001256030A1 (en) 2000-05-03 2001-11-12 Glycodesign Inc. Designing modulators for alpha-1, 3 galactosyltransferases based on a structural model
AU2001258107A1 (en) 2000-05-10 2001-11-20 Glycodesign Inc. Designing modulators for glycosyltransferases
BR0001794A (pt) 2000-05-15 2001-12-26 Laboratorios Biosintetica Ltda Aplicação de fitosteróides (e seus isÈmeros), ácidofólico, cianocobalamina e piridoxina em fibrasdietéticas (alimentares)
JP3634238B2 (ja) 2000-05-19 2005-03-30 本田技研工業株式会社 脚式移動ロボットの床形状推定装置
CA2380451C (fr) 2000-05-30 2010-03-30 Societe Des Produits Nestle S.A. Composition primaire contenant un compose bioactif lipophile
US7598055B2 (en) 2000-06-28 2009-10-06 Glycofi, Inc. N-acetylglucosaminyltransferase III expression in lower eukaryotes
US6346267B1 (en) 2000-07-07 2002-02-12 Wakunaga Of America Co., Ltd. Composition and method for treatment of symptoms associated with insufficient estrogen production
WO2002003996A1 (en) 2000-07-12 2002-01-17 RAJKUMAR, Sujatha Use of dammarane-type tritepenoid saporins
US6451355B1 (en) * 2000-07-17 2002-09-17 Howard M. Reisner Composition to treat diabetes
GB0105613D0 (en) 2001-03-07 2001-04-25 Univ Cambridge Tech Pharmaceutically effective compounds and their use
AU8441801A (en) 2000-09-01 2002-03-13 Kyowa Hakko Kogyo Kk Novel polypeptide
WO2002024212A1 (en) 2000-09-25 2002-03-28 Ultimate Life Technology Co., Ltd. Cholesterol in blood-lowering composition and its complex, and method for preparing them
WO2002028391A1 (en) 2000-10-06 2002-04-11 The Regents Of The University Of California Blocking inflammation by inhibiting sialylation
CN1351907A (zh) 2000-11-05 2002-06-05 李爱萍 城市垃圾无害化处理利用固化工艺
US6933291B2 (en) 2000-12-01 2005-08-23 N.V. Nutricia Cholesterol lowering supplement
CN1184229C (zh) 2000-12-27 2005-01-12 中国科学院上海药物研究所 呋甾皂甙的类似物、分离方法和用途
PL367262A1 (en) 2001-04-26 2005-02-21 Bristol-Myers Squibb Company A pharmaceutical tablet having a high api content
US6787151B2 (en) 2001-08-10 2004-09-07 Lipton, Division Of Conopco, Inc. Composition for lowering blood cholesterol
DE60207878T2 (de) 2001-09-28 2006-08-17 Glycomed Sciences Ltd., Turramurra Lösungsmittelextraktionsverfahren
ATE446013T1 (de) 2001-11-16 2009-11-15 Univ Brandeis Fertignahrung, die aus triglyceriden umkristallisierte nichtveresterte phytosterole enthalten
US20030096316A1 (en) 2001-11-21 2003-05-22 Ingmar Wester Use of apolipoprotein B as a single marker for evaluation of the risk or cardiovascular disease
BG106434A (en) 2002-02-25 2003-09-30 Благой АЛЕКСИЕВ Pharmacological subtance
JP2005528353A (ja) 2002-03-14 2005-09-22 フォーブス メディ−テック インコーポレーテッド 糖尿病に関連する症状及び糖尿病の合併症を包含する糖尿病の治療方法
CN1187055C (zh) 2002-06-21 2005-02-02 成都地奥制药集团有限公司 薯蓣皂甙元在制备治疗心肌缺血、心绞痛和心肌梗死的药物中的用途
AUPS329002A0 (en) 2002-07-01 2002-07-18 Solbec Pharmaceuticals Limited Glycoalkaloid compositions and various uses thereof
EP1556062B1 (en) 2002-08-28 2009-12-23 Lupin Limited Herbal extract comprising a mixture of saponins obtained from sapindus trifoliatus for anticonvulsant activity
CA2499817A1 (en) 2002-09-25 2004-04-08 Forbes Medi-Tech Inc. Derivatives comprising sterols and/or stanols and specific classes of anti-inflammatory agents and use thereof in treating or preventing cardiovascular disease
CN1228344C (zh) 2002-10-21 2005-11-23 吉林天药科技股份有限公司 薯蓣皂苷的制备方法、药物制剂及其医药新用途
JP4222810B2 (ja) 2002-10-28 2009-02-12 株式会社 タカマ 胃粘膜保護剤
AU2003298786A1 (en) 2002-11-26 2004-06-18 Protein Design Labs, Inc. Methods of detecting soft tissue sarcoma, compositions and methods of screening for soft tissue sarcoma modulators
AU2003900194A0 (en) 2003-01-15 2003-01-30 Solbec Pharmaceuticals Limited Methods of modulating il-6
BG65737B1 (bg) 2003-01-24 2009-09-30 "Софарма" Ад Стандартизирана смес от стероидни сапонини, метод за нейното получаване и приложението й
IL155136A0 (en) 2003-02-10 2003-10-31 Enzymotec Ltd A composition for reducing blood cholesterol and triglycerides
JP2006520912A (ja) 2003-03-19 2006-09-14 生化学工業株式会社 癌の予後の検知方法
EP1639084A2 (en) 2003-06-10 2006-03-29 Seikagaku Kogyo Kabushiki Kaisha Mutants of core 2 b-1,6-n-acetylglycosaminyltransferase
CN1615896A (zh) 2003-11-12 2005-05-18 云南省药物研究所 调血脂及治疗心脑血管疾病药物及制备方法
GB0329667D0 (en) 2003-12-22 2004-01-28 King S College London Core 2 GlcNAc-T inhibitor
US20050233013A1 (en) 2004-03-02 2005-10-20 Lee Steve S Methods for enhancing the transport of glucose for balancing blood sugar levels
KR100740609B1 (ko) 2004-06-11 2007-07-18 주식회사 유니젠 진세노사이드를 포함하는 혈관 협착 및 재협착 예방 또는치료용 조성물
CN1247202C (zh) 2004-07-05 2006-03-29 北京科信必成医药科技发展有限公司 薯蓣皂苷口腔崩解片及其制备方法
CN1754541A (zh) 2004-09-30 2006-04-05 成都地奥制药集团有限公司 甾体皂苷药物组合物及其制备方法和用途

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
刘锡葵等.薯蓣属植物中甾体化合物及其生物活性.《2001"全国药用植物与中药院士论坛及学术研讨会论文集》.2001,第25-32页. *

Also Published As

Publication number Publication date
CN1917886A (zh) 2007-02-21
CA2549118C (en) 2015-05-05
WO2005060977A1 (en) 2005-07-07
JP2007515466A (ja) 2007-06-14
US20110152209A1 (en) 2011-06-23
MXPA06007087A (es) 2006-09-04
US7906493B2 (en) 2011-03-15
AU2004305302A1 (en) 2005-07-07
GB0329667D0 (en) 2004-01-28
US20080318875A1 (en) 2008-12-25
JP5085136B2 (ja) 2012-11-28
CA2549118A1 (en) 2005-07-07
EP1708720A1 (en) 2006-10-11
AU2004305302B2 (en) 2010-11-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN1917886B (zh) 核心2GlcNAc-T抑制剂
US7772192B2 (en) Compositions and methods for treatment of disease with acetylated disaccharides
US8609633B2 (en) Core 2 GlcNAc-T inhibitors
US20100048495A1 (en) Core 2 GlcNAc-T inhibitors III
US8197794B2 (en) Core 2 GlcNAc-T inhibitors
JPH04502010A (ja) グリコサミノシルトランスフェラーゼｖの阻害剤
JPH07508730A (ja) フコシルトランスフェラーゼのアクセプター
US8853387B2 (en) Mimetics of sulfated oligosaccharides
AU2006264635B2 (en) Core 2 GlcNAc-T inhibitors

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20130612

Termination date: 20161222