JPH07508730A

JPH07508730A - フコシルトランスフェラーゼのアクセプター

Info

Publication number: JPH07508730A
Application number: JP6502600A
Authority: JP
Inventors: マータ　クーシー　エル; チャンドラゼカラン　イー　ヴィー; ジャイン　ラケシュ　ケイ
Original assignee: ヘルスリサーチインコーポレイテッド
Priority date: 1992-06-29
Filing date: 1993-06-28
Publication date: 1995-09-28
Also published as: AU675657B2; EP0648279A1; NO306212B1; WO1994000596A1; DE69328097D1; AU4652093A; DK0648279T3; EP0648279B1; CA2137008A1; EP0648279A4; NO945062L; DE69328097T2; US5620864A; NO945062D0

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】フコシルトランスフェラーゼのアクセプター発明の背景本発明の一部は、Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ　ＣＡ３５３２９及びＮａｔｉｏｎａｌ　５ｃｉｅｎｃｅＦｏｕｎｄａｔｉｏｎ、　ＤＭＢ８７−１５９５４からの補助金によりなされた。米国政府は、本発明に成る種の権利を有し得る。

Ｃ１，３ルーフコシルトランスフエラーゼは、充実性腫瘍、例えば、卵巣癌、胃癌、肺癌、肝臓癌、結腸癌、膵臓癌、舌癌、及び喉頭、多くのその他の癌の腫瘍と診断された多くの個人の血清中で増加されることがわかった。′ヒトの癌における血清α（ｌ→３）−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼの増大された活性”、Ｙａｚ−ａｗａら著、Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｔｕｍｏｒ　Ｍａｒｋｅｒ　Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、　１９８９．　４巻、４号、　３５５−３６１頁及び“フコシルトランスフェラーゼ：肝細胞癌腫及び肝硬変における特異な血漿及び組織の変イじ、Ｈｕｔｃｈｉｎｓｏｎら著、Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｌｉｖｅｒ　５ｔｕｄｉｅｓ、　Ｋｉｎｇｓ　Ｃｏｌ−Ｉｅｇｅ　Ｈｏ５ｐｉｔａｌ　ａｎｄ　５ｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　ａｎｄ　Ｄｅｎｔｉｓｔｒｙ、　Ｄｅｎｍａｒｋ　Ｈｉｌ戟{　Ｌｏｎｄｏｎ。

ＵＫ、　１９９０及び“重度の飲酒及び喫煙に関連するフコース代謝の変化：予備報告”、Ｔｈｏｍｐｓｏｎら著、Ｃ１１ｎｉｃａ　Ｃｈｉｍｉｃａ　Ａｃｔａ、　２０１：　５９−６４　（１９９１）　、並びに“胃癌における血清（αｌ →３）−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼ活性の腫瘍に関連する増大”　、Ｙａｚａｗａら著、Ｊ、Ｃａｎｃ、Ｒｅｓ、Ｃｌ１ｎ、０ｎｃｏ１．、　＋１５：４５１−４５５．１９８９が参照され、これらの全てが参考として本明細書に含まれる。こうして、この酵素は癌の診断マーカーとして有益であることが明らかである。

結腸癌の糖脂質中の単量体、二量体及び三量体のＸ決定基の発現は、正常な成人の結腸上皮細胞中に見られない型２鎖前駆体（Ｇａ　Ｉｎ１．４　ＧｌｃＮＡｃ β）のレトロ遺伝子発現によるものであることが示された。これは、前駆体の型がフコースをＧＩｃＮＡｃのＣ−３位に移入するのに関与するフコシルトランスフェラーゼを制限したことを暗示している。更に、更に、ヒト結腸腺癌Ｃｏ１ｏ　２０５細胞は、ヒト小細胞肺癌腫ＮＣｌ−１（６９細胞及び肺癌腫ＰＣ９細胞（９，１０）とは対照的に、フコースをラクト系列型ｌ鎖構造（Ｇａ　Ｉｎ１，３　ＧｌｃＮＡｃβ）へのＣ１，４結合及び型２鎖構造へのＣ１，３結合に移入した。セファクリル（Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ）Ｓ−２００カラムによる人乳のＣ１，３及びＣ１，４フコシルトランスフエラーゼ活性の分離に関する論文は、酵素部分のいずれもが型ｌまたは型２の鎖アクセプターに絶対に特異的であるとは限らないことを示した。こうして、Ｃ１，３及びＣ１，４フコモ種々の基質特異性の程度を示し、かつ細胞及び組織分布を異にするフコシルトランスフェラーゼを伴うことが明らかになる（１４−１６）。型２鎖Ｇａｌβ１．４　ＧｌｃＮＡｃ β及び相当するＮｅｕＡｃ　β２．３Ｇａｌ　β１．４ＧＩｃＮＡｃβ型構造を含む炭水化物が、（Ｚｌ。

３ルーフコシルトランスフエラーゼのアッセイに使用されていた。２゛−フコシルＬａｃＮＡｃはヒト神経芽腫細胞のＣ１，３−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼに好ましい基質であることが示された。既知の硫酸化した糖接合体、例えば、ムチン類及び糖脂質は別として、スルフェート基はごく最近幾つかの糖タンパク質中で同定された。糖脂質中のスルフェート基は、一般に、それ以外にシアリル残基により占められている位置に結合されている。Ｓ０４→３ＧａｌｌＩ！？１．４Ｇ１ｃＮＡｃはブタのチログロブリンのアスパラギン結合炭水化物鎖の末端配列であることがわかった。

炎症中の血管内皮への循環白血球の付着は、付着分子のＬＥＬＡＭファミリーの一員である内皮白血球付着分子ＥＬＡＭ−１とそれらの相互作用により一部媒介され、これらの相互作用が成る種のα（１−３）フコシルトランスフェラーゼにより調節し得るという証拠がある。

“移入されたヒトフコシルトランスフェラーゼｃＤＮＡにより決定される血管内皮への［！ＬＡＭ−］依存性細胞付着”　、Ｌｏｗｅら著、Ｃｅ１１．６３巻、　４７５−４８４．１９９０年１１月２日を参照のこと。

それ故、１．３−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼが研究の目的並びに疾患の診断及び断定の目的の両方のために容易に選択的に検出し得るように充分な特異性を有するＣ１．３−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼに結合する化合物を有することが望ましい。更に、このような結合化合物は、αｌ、　３−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼの活性に影響することができ、こうして望ましいことに、それがかかわる疾患を遅延または停止することができる。更に、このような結合化合物は、少なくとも結合部位に関する限り、Ｃ１，３−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼの構造を模擬する有機構造に結合し得る。

更に、このような結合化合物は、毒素または抗腫瘍性化合物の如き補助化合物構造に付着されて、このような補助構造をα１．３−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼまたはそれらを模擬する有機構造に運ぶことができる。

フコシルトランスフェラーゼの幾つかのアクセプターが知られているが、不運なことに、このようなアクセプターは、α１．３ルーフコシルトランスフエラーゼをその他のフコシルトランスフェラーゼだけでなく所望のフコシルトランスフェラーゼから区別しない。また、このようなアクセプターは所望される程には感受性ではなく、しかも所望される程高い親和性を有しない。

多少の程度に、フコシルトランスフェラーゼのアクセプターとして作用し得る化合物の例は、２°メチルラクトサミン（２゛　メチルＬａｃ　ＮＡｃ）、２゛− フコシルＬａｃ　ＮＡｃ、３−フコシルＬａｃ　ＮＡｃ　、並びにＬａｃ　ＮＡｃ　、２’メチルＬａｃ　ＮＡｃ　、　Ｇａｌβｌ及び３ＧａｌＮＡｃのβ−ベンジルグリコシドである。

発明の詳細な説明それ故、本発明によれば、α１，３ルーフコシルトランスフエラーゼに結合するオリゴ糖化合物が提供される。

更に詳しくは、その化合物は、エーテル酸素原子により一緒に連結された少なくとも二つのしヘキソース環を含む生物活性オリゴ糖化合物を含む。エーテル酸素原子は、ヘキソース環酸素原子の右の第一炭素原子の位置で第一の環に連結されている。その化合物は、環酸素の右の第三の炭素原子位置で第一の環に連結され、または環酸素原子の右の第五の炭素原子の位置のメチル基に連結された少なくとも一つのスルフェート基またはホスフェート基を含む。

更に、本発明は、α１，３ルーフコンルトランスフエラーゼを検出するため、またこのようなα１．３ルーフコンルトランスフエラーゼまたは構造が、例えば、ＨＩＶウィルスの場合のように本発明の化合物に結合するような程度にこのようなフコシルトランスフェラーゼの構造を模擬する構造の活性を阻害するために上記のオリゴ糖化合物を使用する方法を含む。

本発明の特別な実施態様において、オリゴ糖は式二（式中、Ｒ，及びＲ３の少なくとも一つはスルフェートまたはホスフェートであり、Ｒ８及びＲ１の一つは連鎖酸素原子への結合を表し、かつ残りのＲ基は一０Ｈ１−ＯＲ，または−Ｒ１゜から選ばＬＲ＊及びＲ１０は低級アルキル、低級アルケニル、アリル、フェニル、ベンジル、単糖、オリゴ糖、毒素、抗体、酵素、アミノ酸及びアミノ酸鎖からなる群から独立に選ば江更にＲ＋ｅはエステル、エーテル、アミノまたはフルオロであってもよく、但し、残りのＲ基の少なくとも三つが−ＯＨであることを条件とする）により表し得る。

図面の簡単な説明図１　（ａ＋、ａ、ｓ　ｉＬｓ及びｌ１ｌｓ　ｂｔ、　ｂｘ）　二化合物ｌ、４及び５の高速原子衝撃イオン化スペクトル図２：ヒト卵巣腫瘍の粒状部分及び可溶性部分の調製のためのフローチャート図３：セフアクリルＳ−２００カラムによるαｌ、　３−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼの精製ウシ■−糖ペプチドーセファロース（試料容積：２．Ｏ＋ｎｌ）によるアフィニティークロマトグラフィーから得られた卵巣腫瘍α１，３ルーフコシルトランスフエラーゼ製剤を、低温室中で０．１５１のＮａＣＬ　０．１％のトリトン（Ｔｒｉ　ｔｏｎ）Ｘ−１００を含む５０−のトリス（Ｔｒｔｓ）−ＨＣＩＳｐＨ７，０で平衡にしたセファクリルＳ−２００カラム（２，６ＣＩｌ　！８８、０ｃｍ）に適用した。３．０ｍｌの画分を毎時９．０ｍｌの流量で回収した。フコシルトランスフェラーゼをレセプター、２°−フコシルＬａｃＮＡｃで分析した。

図４＝ヒト卵巣腫瘍の可溶性部分から精製された５Ｏ３−ＰＡＧＥ　（ファスト・ゲル（Ｐｈａｓｔ　Ｇｅ１）８−２５　、ファーマシア・システム（Ｐｈａｒｍｃｉａ　Ｓｙｓｔｅｍ））　：レーンｉ　−５：酵素タンパク質ｌμｇを適用した；レーン６：酵素タンパク質２μｇ、ゲルをクーマシーブルーで染色した。

図５＝血清α１，３ルーフコシルトランスフェラーゼによる３°−スルホＬａｃＮＡｃのインキュベーションにより生じる［＋１（］フコシル化生成物のべ一ノ（−クロマトグラフィー。詳細につき、本明細書を参照のこと。

発明の詳細な説明本明細書で使用される“オリゴ糖”は、通常１個以上のエーテル酸素原子により一緒に連結された複数のヘキソース環及びペントース環を意味する。

本発明の最も好ましいオリゴ糖は、通常ラクトース誘導体であるヘキソース三糖である。

これらの化合物は、オリゴ糖の炭素原子数を参照して命名されてもよく、これらは、例えば、ラクトース誘導体の場合、下記の構造式に示されるように番号を付される。

それ故、本発明の幾つかの好ましい組成物は、■ナトリウム３°−０−スルホー２Ｎ−アセチルラクトサミンβ１→０ベンジル及び２ナトリウム６−０−スルホ −２Ｎ−アセチルラクトサミンβｌ−０ベンジルまた、エーテル酸素が４炭素原子に代えて３炭素原子に連結されている場合、３ナトリウム３゛−０−スルホ− ラクト−２Ｎビオース■β１−〇ベンジル及び４ナトリウム６−０−スルホ−ラクト−２ＮビオースＩβ１−０ベンジルと命名し得る。

高級多糖が本発明により意図されており、例えば、夫々炭素原子１〜６を有する夫々の環が別々に番号を付される場合、上記の化合物１及び３はベンジル４−０ −（ナトリウムβ−ローガラクトピラノシル３−スルフェート）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド及びベンジル３−０−　（ナトリウムβ−ローガラクトピラノシル３−スルフェート）−２−アセトアミド−２ −デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシドと命名し得る。

予期しないことに、３°または６炭素原子におけるスルフェート基またはホスフェート基の存在は、その化合物を１．３−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼにつき選択的にする。

本質的に、あらゆるその他の官能基は、このような基が所望の１．３ルーフコシルトランスフエラーゼへの本発明の化合物の結合特性を著しく化学的または物理的に妨害しないことを条件として糖環に付加し得る。

このような置換は、本発明の詳細な説明に示された式で示されるようにＲ，−Ｒ＠基でなし得る。このような置換は、例えば、アミン基もしくはフッ化物基による置換による全一〇Ｈ基の置換、または、例えば、エステルもしくはエーテル生成または芳香族環への置換によるヒドロキシ基中の水素原子の置換によりなされる。

Ｒ，−Ｒ＠基は−ＯＨ、−ＯＲ＠または−Ｒ５゜であってもよく、式中、Ｒ１及び組。は独立に低級アルキル、低級アルケニル、アリル、フェニル、ベンジル、単糖、オリゴ糖、毒素、抗体、酵素、アミノ酸及びアミノ酸鎖（ペプチド及びタンパク質を含む）であり、更にＲＩＯはフルオロ基もしくはエステル基、エーテル基またはアミノ基であってもよく、これらは単糖、アミノ酸、アミノ酸鎖、酵素、抗体及び毒素を更に結合し得る。

通常、障害を防止するために、ＲｒＲ＊の少なくとも三つ、通常、四つが一〇Ｈ基である。

上記の基のいずれもが、例えば、１個以上の低級アルキル基、−０）１基、エーテル基、エステル基、カルボキン基、アミノ基、フルオロ基、糖、抗体、毒素、酵素、放射性同位元素、及び核酸で更に置換されていてもよいことが理解されるべきである。

抗体は、例えば、Ｆｉ　ｔｚｇｅｒａｌｄら著、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、ＵＳＡ、　８４巻、　４２８８−４２９２頁、　１９８７年６月に記載されているような、当業者に知られている方法により基剤オリゴ糖に結合し得る。結合し得る抗体は、ポリクローナル抗体及びモノクローナル抗体を含む多くの型のものである。

結合し得る毒素として、リシンＡ鎖フラグメントの如き構造が挙げられる。リシンＡ鎖の結合操作は、例えば、共有結合によるように、当業者に公知である。

結合し得るその他の毒素または薬剤として、メトトレキセートの如き細胞毒性剤が挙げられる。

結合し得るその他の酵素（その幾つかがホルモンのような活性を有し得る）として、生物応答変更因子、例えば、インターロイキン、インターフェロン及び成長因子が挙げられ、またホスファターゼ型酵素が挙げられる。

放射性同位元素及び核酸並びに誘導体が既知の方法により結合し得る。

例えば、Ｒ７位における特に望ましいＲ基はベンジル及びニトロフェニルの如き芳香族基である。何となれば、それらは検出を助ける特有の１個共鳴パターンを有するからである。１−３ルフコシルトランスフエラーゼと反応性であると考えられる領域から遠い位置で除去されるＲ６基及びＲ′基が、しばしばエステル結合、エーテル結合またはアミノ結合を介して、更に大きな基、例えば、付加的な糖環及びペプチド鎖に特に好適である。

通常、エーテル結合を介して、Ｒ’基及びＲ７基として結合し得る糖の例は、グルコース、フラクトース、アルドース、マンノース、リボース及びガラクトースである。

本発明の化合物は、αｌ、　３−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼの存在につき検出し、またＣ１，３ルーフコシルトランスフエラーゼを定量化するのに使用し得る。これは、本発明の化合物を特別な実施例に関して後記されるようにＣ１，３ルーフコシルトランスフエラーゼを含む試料でインキュベートすることにより容易に達成し得る。

Ｌａｃ　ＮＡｃの幾つかの誘導体を合成し、卵巣癌を有する患者の血清中、またヒト卵巣腫瘍の粒状部分及び可溶性部分中に存在するαｌ、　３−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼのアクセプターとして作用するそれらの能力につき試験した。これらの化合物は、３゛スルホＬａｃＮΔＣ１６′−スルホＬａｃＮＡｃ、６ −スルホＬａｃＮＡｃ、及び３°スルホＬａｃＮＡｃのβベンジルグリコシドであった。

これらの化合物を、多数のフコシルトランスフェラーゼに対しアクセプター特性を有することが知られている化合物である標準物質としての２″−メチルＬａｃＮＡｃと比較した。

比較において、活性は１００％の基準値でアクセプターとして作用する２゛メチルＬａｃＮＡｃの能力を基準とした。

２゛メチルＬａｃＮＡｃと比較して、３゛スルホＬａｃＮＡｃは血清中のａ　１．３−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼの酵素レベルを測定する際に２°メチルＬａｃＮＡｃよりも約３〜５倍感度が良かった。また、血清酵素は３′スルホＬａｃＮＡｃに対し非常に高いアフィニティー　（Ｋｍ）を有していた。競合分析を使用して、３．０−の２°−メチルＬａｃＮＡｃの存在下の３°スルホＬａｃＮＡｃに関するらは０．１２−であり、０．３−の３°−スルホＬａｃＮＡｃの存在下の２′メチルＬａｃＮＡｃに関するーは６．６７＋ｏｌＪであった。その数が低い程、アフィニティーは高く、こうして３°−スルホＬａｃＮＡｃは２゛ −メチルＬａｃＮＡｃよりも酵素に対する極めて大きなアフィニティーを有する。

更に詳しくは、卵巣癌血清を酵素源として使用した場合、ＬａｃＮＡｃのＣ−３にあるスルフェート基は１００％の標準の２′メチルＬａｃＮＡｃと較べてアクセプター能力（感度）を３４１％まで増強した。比較により、Ｃ−２°またはＣ −６°にあるスルフェート基は夫々２２％及び３６％の活性を低下した。Ｃ−６にあるスルフェート基は、１００％の２°メチルＬａｃＮＡＣと較べて活性を１７２％まで増大した。

２°メチルＬａｃＮＡｃのＣ−１におけるβベンジル化は、ＬａｃＮＡｃの活性を２〜３倍増大したが、３°−スルホＬａｃＮＡｃの活性を低下した。

可溶性腫瘍部分の酵素をウシＩｇＧ糖ペプチドーセファロースによるアフィニティークロマトグラフィーにより部分精製した（３９％の収率で１６倍）。ナトリウムドデシルスルフェート−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（Ｍｒ＝　＜　６７、０００）により示されるような見掛均一性までの更なる精製を、セファクリルＳ−２００クロマトグラフイーにより得た（６６倍、収率６％）。完全精製時のフコシルトランスフェラーゼ酵素混合物は不安定である。

可溶性部分の酵素混合物は、１００％の２′メチルＬａｃＮＡｃと較べて、６− スルホＬａｃＮＡｃにつき４４７％及び２７２％と、３゛−スルホＬａｃＮＡｃに対し血清部分よりも更に大きな活性を示した。対照的に、２°スルホＬａｃＮＡｃ及び６°スルホＬａｃＮＡｃは夫々３３％及び５％を示すにすぎない。

また、可溶性腫瘍の酵素混合物は、Ｇａｌ　β１．３　ＧＩｃＮＡｃ　（５６６％）　、Ｇａｌβ１．３ＧＩｃＮＡｃのβ−ベンジルグリコシド（１００５％）及び３−スルホＧａｌβ１．３　ＧＩｃＮＡｃ（４１５％）と非常に反応性であり、これはこの混合物中のＣ１，３フコシルトランスフエラーゼとＣ１，４フコシルトランスフエラーゼの共存を示す。

実施例血清を健康な女性及び米国、ニューヨーク、バッファローにあるロスウェル・パーク・キャンサー・インスティテユートに入院した卵巣癌患者から集めた。卵巣腫瘍組織を卵巣癌の患者からの外科手術中に得た。血清及び組織の両方を使用するまで一７０℃で凍結して貯蔵した。

プロナーゼ消化によるウシＩｇＧからの糖ペプチドの単離、ゲル濾過及びコンーＡ−セファロースクロマトグラフィーそして次にセファロース４βへのカップリングを、Ｆｏｓ　ｔｅｒ、　Ｃ，Ｓ、ら、　（１９９１）　Ｊ、Ｂｉｏｌ、ＣｈｅｌＬ　２２６．３５２６−３５３１により記載されたようにして行った。

このアフィニティーマトリックス（床容量３０ｍ１）を洗浄し、３５ｍＭ＋７）ＭｇＣＩ＊　、　１０−のＮａＮ　、及び１ｍＭのＡＴＰを含む２５關のトリス −）ＩＣＬ　ｐＨ７，０で４℃で平衡にした。

３′−スルホＬａｃＮＡｃインキュベーション混合物（１００μｍ）から生じる生成物を含む［”Ｃ］フコースのペーパークロマトグラフィー同定をワットマン３ＭＭクロマトグラフィーペーパーにスポットし、４８時間にわたって酢酸エチル／ピリジン／水：１２１５／４中のクロマトグラフィーにかけた。また、化学合成した生成物３°−スルホ３−フコシルＬａｃＮＡｃを、そのペーパーと平行して実験した。１ｃｍの切片を切断し、それらをバイアル中の水１ｍｌに浸軟し、放射能をシンチレーションカウントにより検出することにより放射能をペーパー上で探索した。非放射性標準物質をアルカリ性銀試薬によりペーパー上で探索した。ＢＳＡを標準物質として用いてタンパク質をバイオラド（ＢｉｏＲａｄ）微量法により分析した。トリトンＸ−１００の存在下のタンパク質を改良ロウリイ（Ｌｏｗｒｙ）操作（Ｔｒｅｖｅｌｙｎら（１９５０）Ｎａｔｕｒｅ　（Ｌｏｎｄ、）　１６６゜４４４−４４５）により測定した。

Ｃ１，３−フコノルトランスフェラーゼのアッセイインキュベーション混合物は、０．１０＋ｎｌの全容積中に５０１１Ｉｌ１１のＨＥＰピ５−ＮａＯＨ％ｐ）１７．５．５−のＭｎＣ１，，７ｄＪのＡＴＰ、３−のＮａＮ　ｓ、アクセプター０．３ｓＭ（血清酵素につき）または３．　ｈＭ（腫瘍酵素につき）　、０．１２５　μＣｉのＧＤＰ−［Ｕ−”Ｃ］　Ｆｕｃ（比活性２１６ｍ＋／ミリモル）及び酵素を含んでいた。対照インキュベーション混合物は、アクセプター以外は全てのものを有していた。３７℃で１８時間のインキュベーションの終了時に、その混合物を水１ｍｌで希釈し、ダウエックス（Ｄｏｗｅｘ）−１−ＣＩカラムに通した（パスツールピペット中１ｍ１）。カラムを水１ｍｌで２回洗浄した。ブレークスルー及び洗浄液（これらは［”ＣＩフコシル化された中性アクセプターを含んでいた）をシンチレーションバイアル中に一緒に集め、シンチレーションカクテル（イリノイ州、マウント・プロスペクツにあるリサーチ・プロダクツ・インターナショナル）及びベックマンＬＳ９０００を使用して放射能につきカウントした。次いでダウエックスカラムを夫々３ｍｌのｏ、　ｉＭＨｔび０，２ＭのＮａＣ１で連続して溶離した。

［１Ｃ］フコシル化された硫酸化したアクセプターを含むこれらの溶離液を前記のように放射能につきカウントした。相当する試験画分からの対照インキュベーション混合物の水及びＮａＣＩ溶離液中の放射能を引くことにより修正を行った。試料の二重の実験は殆ど同じ値を与え、その差は５％未満であった。

化学合成： β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（ｌ→４）−ナトリウム２−アセトアミド−２− デオキシ−〇−グルコピラノースロースルフェート（化合物ｌ）：ベンジルー２ −アセトアミドー３−ローベンジル−２−デオキシ−６−０−（４−メトキシベンジル）−α−Ｄ−グルコピラノシドを２．３．４．６−テトラ−０−アセチルーα−Ｄ−ガラクトシルプロミドでグリコジル化して充分に保護された三糖を得た。ジクロロメタン中で４−メトキシベンジル基をＤＤＱで選択的に除去してアルコール（化合物２）を得た。２をＮ、Ｎ−ジメチルホルムアミド中で５モル当量の二酸化硫黄−ピリジン錯体と反応させてカチオン（Ｎａ　＋）交換後に３をそのナトリウム塩として生成した。

３をメタノール性ナトリウムメトキンド中で〇−説アセチル化し、続いてパラジウム／カーボンの存在下でベンジル基を水素化し、カチオン（Ｎａ　”　）交換樹脂カラムの通過後に化合物ｌを無定形固体として得た。［α］　、　＋２６．５　（Ｃ１，３、水）；”　Ｃ−ｎ、　ＩＬｒ、及びｍ／ｚデータにつき、表■ を参照のこと。

ナトリウムβ−ローガラクトピラノシル３−スルフェート−（ｌ→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−Ｏ−グルコビラノース（化合物４）。

Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミド中のベンジル−２−アセトアミド−２−デオキシ −３，６−ジ−ローベンジル−４−０−（４，６−０−ベンジリデン−２−〇− ベンジルーβ−Ｄ−ガラクトピラノシル）−α−Ｄ−グルコピラノシドを室温で８０３−ピリジン錯体と反応させて相当する３′−０−スルホ誘導体を得、これを水添分解し、続いてダウエックス−１（アセテート形態）カラムで精製し、Ｎａ＋樹脂で処理して化合物４を無定形固体として得た。［ｆｆ］　Ｄ　＋２１．３　（ＣＯ，５、■、０）。’　”Ｃ−ｎ、　ＩＬｒ、及びＩｎ／ｚデータにつき、表■を参照のこと。

０−αルーフコピラノシル−（ｌ→３）−［ナトリウム０−β−Ｄ−ガラクトピラノシル３−スルフェート−（ｌ→４）］−］２−アセトアミドー２−デオキシＤ−グルコビラノース（化合物５）：ペンジル−２−アセトアミド−４−０−（２，３，４，６−テトラ−０−アセチルーβ−〇−ガラクトピラノシル）−６−０−ベンジル−２〜デオキシ−α−Ｄ −グルコピラノシドを臭化第二銅−テトラブチルアンモニウムプロミドの存在下でメチル２．３．４−０−ベンジル−１−チオーβ−Ｌ−フコピラノシドでグリコジル化し、続いてメタノール性ナトリウムメトキシドでロー脱アセチル化して既知のベンジル２−アセトアミド−６−０〜ベンジル−３−０−（２，３，４− トリーローベンジル−α−し一フコピラノシルー４−０−（β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシド（化合物６）を得た。６をＣａｔｅｌａｎｉらの操作によりイソプロピリデン化して３′、４’−０−アセチル誘導体（化合物７）を得た。’Ｈ−ｎ、ｕｒ、　（ＣＤＣＩｓ）：δ７．４２−７．１６　（ａ　２５　Ｈ，芳香族）、　１．５０　（ｓ。

３　）１．　ＮＡｃ）、　ｉ、　４５及び１．２５（夫々ｓ、　３　Ｈ，ＣＭｅ、）、　１．１３　（ｄ、　Ｊ約６　Ｈｚ、　３８．　ＣＭ■j。

７をピリジン−無水酢酸でアセチル化し、続いて８０％の酢酸水溶液でイソプロピリデン基を開裂してジオールを得た。［α］　ｏ　＋５．７５　（ｃ　Ｏ，８、ＣＥＩ３）；　’Ｈ−ｎ、ｍ、ｒ。

（ＣＤＣ１，）：δ７．４５−７．１０　（Ｉｌｌ、　２５　Ｈ，芳香族）、　２．０３　（ｓ、　３　Ｈ，０Ａｃ）、　１．９８　（ｓ、@３　Ｈ。

０Ａｃ）、　１．５４　（ｓ、　３　Ｈ，ＮＡｃ）、　１．１Ｔ　（ｄ、　Ｊ　６　Ｈｚ、　３　Ｈ，ＣＭｅ）。これをその３°、４′−（エチルオルトアセテート）に変換し、これを８０％の酢酸水溶液で加水分解して３°−ヒドロキシ主要中間体８を得た。［ａ］　、　＋１０．４　（ｃ　Ｏ，５、ＣＨＣ＋＋）；　 ’Ｈ−ｎ、ＩＬｒ。

（ＣＤＣ１１）：δ７．３８−７．０８　（Ｉｌｌ、　２５　Ｈ，芳香族）、　２．０１　（ｓ、　６　Ｈ，２Ｘ　０Ａｃ）、　１．９１　iｓ。

３　Ｈ，０Ａｃ）、１．５１　（ｓ、　３　Ｈ，ＮＡｃ）、　１．１７　（ｄ、　Ｊ　約６１（ｚ、　３　Ｈ，ＣＭｅ）　、　２につき記載された方法（３を得るため）と同様にして８を硫酸化して９をそのナトリウム塩として得た。９をメタノール性ナトリウムメトキシド中で〇−説アセチル化し、続いてベンジルエーテル保護基を除去し、ダウエックス−１（アセテート形態）カラムで精製し、続いてカチオン（ｎａ＋）交換樹脂で処理した後に〇−αルーフコビラノンルー（１→３）−印−β−Ｄ−ガラクトピラノシル３−スルフェート−（ｌ→４）］］〜２−アセトアミドー２−デオキシ〇−グルコビラノースのナトリウム塩（５）を得た。［（Ｚ］　ｏ　−１０，７（初期）　→−８，９（７２時間後Ｘｃ　Ｏ，３、ｔ（＝Ｏ）。’　”Ｃ−ｎ、　ｌＬｒ、及び’ｗＪｚデータにつき、表Ｉを参照のこと。６のベンジル基を水添分解し、続いてシリカゲルによるカラムクロマトグラフィーで精製して既知の遊離三糖ＩＯを得た。

”　Ｃ−ｎ、　ＩＬｒ、及び＋ｎ／ｚデータにつき、表ｒを参照のこと。この研究に使用したその他の化合物の化学合成は、いずれかに知らされている。

合成硫酸化化合物１，４及び５の純度をシリカゲルだけでなく、セルロースプレートによる薄層クロマトグラフィーそしてまたペーパークロマトグラフィーにより調べた。それらの構造上の帰属を”Ｃ−ｎ＋ａ、ｒ、　（表Ｉ）及びｆ、　ａ、　ｂ、質量分析（図１）により確かめた。

ｌのＩＩＣスペクトルにおいて、２−アセトアミド−２−デオキシ−Ｄ−グルコース（ＧＩｃＮＡｃ）残基のＣ−６に関する共鳴は、化合物４のスペクトル中のその対応物のシフトと比較して、６．３ｐ、　ｐ、ｗＬの低磁場シフトを受け、Ｏ−６が硫酸化の部位であることを証明した。しかしながら、４と５の両方のスペクトルにおいて、夫々７．６ｐ、　ｐ、　ｕ及び７．７ｐ、　ｐ、ｒｎ、の同様の低磁場シフトをそれらの相当するＧａｌ残基のＣ−３共鳴につき観察し、硫酸化が両方の化合物の０−３°で起こったことを確認した。

ヒト卵巣腫瘍の可溶性部分からのＣ１，３ルーフコシルトランスフエラーゼの精製図２に示されるように、最初の卵巣腫瘍組織（Ａ）を、０．１％のＮａＮ、を含む５０１！１のリン酸ナトリウムｐＨ５，５Ｃ１：２０　ｗ／ｖ）で均一化することによりプロセス工程１で処理し、１３．０００ｇで０．５時間４０℃で遠心分離した。これが上澄み生成物（Ｂ）及び沈降生成物（のを生じる。

次いで沈降生成物（Ｃ）を再度均一化し、プロセス工程ｌのようにして遠心分離して上澄み生成物（Ｄ）及び沈降生成物（ｔりを生成する。

上澄み生成物（Ｂ）及びＣＤ）をプロセス工程３で合わせ、フコシルアミン−セファロースによるアフィニティークロマトグラフィーにかける。これはαルーフコシダーゼ結合物質（Ｆ）及びブレークスルー十組織のαルーフコシダーゼを含まないエキス（Ｇ）を含む洗浄液を生じる。

次いでエキスＣＧ＞４０ｇをプロセス工程４で（ＰＪＨＩ）！Ｓ０１で沈殿させ、１３．０００ｇで０．５時間遠心分離して沈殿（Ｈ）を生じる。プロセス工程５で、沈殿（Ｈ）をＩＯＩＩＩＭのＮａＮ、、３５−のＭｇＣ１，及び！−のＡＴＰを含む２５１１１Ｍのトリス−ＨＣｌ、　ｐＨ７，０（上記溶液の１／２０Ｖ）に溶解し、４℃で４８時間にわたって４回交換して同緩衝液１リツトルに対し透析して透析（ＮＨ，）、ＳＯ，画分（１）を生じる。プロセス工程６で、両分（１）をウシ！−グリコプレブーセファロースカラムによるアフィニティークロマトグラフィーにかけ、次いで上記の緩衝液中ＩＭのＮａＣｌで溶離してＮａＣｌ溶離液（Ｊ）を生成する。プロセス工程７で、ＮａＣｌ溶離液（Ｊ）を限外濾過により約５ｍｌに濃縮し、４℃で４時間にわたってＡＴＰ　、　ＭｇＣ１ｚ及びＮａＮ３を含むトリス緩衝液１リツトルに対し透析し、４℃で貯蔵してタンパク質陽性画分（Ｋ）を生じる。

プロセス工程８で、沈降物（［りを０．１５ＭのＮａＣ１及び１％のトリトンＸ −１００を含む５０ＩＩＩＭノドリスーＨＣｌ、ｐＨ７，０（ホモジネートノ１／ｌ０Ｖ）テ均一にし、次いで４℃で１８、０００ｇで１時間遠心分離して上澄み（Ｌ）（可溶化された粒状製剤）を生成する。

最後に、画分（Ｋ）　２ａ＋１を、０．１５ＭのＮａＣ１及び０．１％のトリトンＸ−１００を含む５〇−のトリス−ＨＣｌ、　ｐｈ７．ｏで４℃で平衡にしたセファクリルＳ−２００カラム（スーパーファイン：２．６　ｃｍ　Ｋ　８８．０　ｃｍ）に装填し、同緩衝液で溶離した。３．０ｍｌの画分を集めた。フコシルトランスフェラーゼ活性は、最初に５番目の画分毎に分析し、次いでアクセプターとして２゛−フコシルＬａｃＮＡｃを使用して、その範囲の別の画分を分析することにより活性プロフィールを得ることにより流出画分中に探索された。

図３は、ｙ軸のＣ１，３−フコノルトランスフェラーゼ活性（２゛−フコシルＬａｃＮＡｃへの［１１Ｃコフコースのとり込みにより測定される、　［ＣＰＭ　ｘ　１０−’１５０　μｌ　］　）対溶離容積［ｍｌ］により示されるようなカラムからのＣ１，３−フコシルトランスフェラーゼの溶離プロフィールを示す。

その溶離位置（これはＢＳＡよりわずかに遅く、同カラムで別に流出される）は、その分子量を６７、０００ダルトン未満として示す。ＳＯ３〜ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ファストゲル８−２５、ファーマシア装置）にかけた場合、その製剤はＭｒ＝＜６７、０００の単一の拡散バンド（クーマシーブルーにより染色された）を示した（図４）。表Ｉ＋は酵素の精製に関する結果を表す。

酵素を６．２％の回収率で可溶性エキスにつき６６倍に精製した。この段階の酵素は一２０℃で凍結保存され、または１週間より長く４℃で放置されたその活性を損失した。しかしながら、先の工程の終了時の酵素は４℃で少なくとも２ケ月にわたってかなり安定であった。こうして、酵素のこの製剤をアクセプター能力比較研究に使用した。

Ｃ１，３−フコシルトランスフェラーゼの特異な基質である３°−スルホＬａｃＮＡｃ血清α１，３−フコシルトランスフェラーゼを測定するための基質として２゛−メチルＬａｃＮＡｃよりも３゛−スルホＬａｃＮＡｃが優れていることを、三つの異なる方法で試験した。第一に、二重のインキュベーション混合物は０．３ｎＭの３°−スルホＬａｃＮＡｃ及び種々の量の２′〜メチルＬａｃＮＡｃ　（０〜７．５ｍ）を含んでいた。両方の基質への血清酵素による［ｌ″ＣＦＣＦフコース込みを測定した（表ｌ１１）。３°−スルホＬａｃＮＡｃへの［１″ Ｃ］フコースのとり込みは減少し、また２°−メチルＬａｃＮＡｃへのとり込みは後者の濃度の増加につれて増大した。実験に使用された２′−メチルＬａｃＮＡｃの最高濃度（７，５ｎ＋Ｍ）は３′−スルホＬａｃＮＡｃへの［”Ｃ］フコースのとり込みのわずかに４３％の抑制をもたらすことができ、その３°−スルホＬａｃＮＡｃの濃度はわずかに０．３鯛、即ち、２′−メチルＬａｃＮＡｃよりも２５倍低かった。第二に、二重のインキュベーション混合物は３．　ＯｆｆｌＭの２−メチルＬａｃＮＡｃ及び種々の量の３′−スルホＬａｃＮＡｃ　（０〜７．５ｍＭ）を含んでいた。両方の基質への同血清酵素による［”Ｃ］フコースのとり込みを測定した（表ｌ１１）。２′〜メチルＬａｃＮＡｃへの［ｌＩＣ］ＩＣ−スのとり込みは減少し、また３°−スルホＬａｃＮＡｃへのとり込みは後者の濃度を増加することにより増大した。０．７５ｍＭ（実験に使用された最高濃度；この濃度は先の実験に使用した２°−メチルＬａｃＮＡｃの細工濃度の１／１０である）の３′−スルホＬａｃＮＡｃは、２°−メチルＬａｃＮＡｃへの［１″Ｃ］フコースのとり込みの約６８％の抑制をもたらし、その２°−メチルＬａｃＮＡｃの濃度は３．ＯｎＩＭ、即ち、３°−スルホＬａｃＮＡｃの量の４倍であった。第三に、０．３酬の濃度の２°−メチルＬａｃＮＡｃ及び３“− スルホＬａｃＮＡｃの両方を６種の卵巣癌血清及び１種の正常な血清で別々に二重にインキュベートした。これらのアクセブタ−への［”Ｃ］フコースのとり込みを定量化した（表ＩＶ）。　３°−スルホＬａｃＮＡｃへの［”Ｃ］フコースのとり込みは、正常な血清のアッセイを含む、２′−メチルＬａｃＮＡｃへの［＋ＩＣ］ＩＣ−スのとり込みよりも一貫して高かった（４〜５倍）。正常な血清と較べて、癌血清は２゛−メチルＬａｃＮＡｃで測定した場合に１７６％〜４３４％の範囲、また３゛−スルホＬａｃＮＡｃでは２００％〜６３６％の範囲で高いαｌ、３−フコシルトランスフェラーゼ活性を示した。これらのデータは、血清α１，３−フコシルトランスフェラーゼのレベルを測定するための基質としての３′−スルホＬａｃＮＡｃの一貫性及び優秀さを証明する。０．３−の３′− スルホＬａｃＮＡｃの存在下の２゛−メチルＬａｃＮＡｃにつき計算されたｈ値（表ＩＩ＋を参照のこと）は６．６７−であり、また３、０ｍの２°−メチルＬａｃＮＡｃの存在下の３゛−スルホＬａｃＮＡｃにつき計算された一値（表ＩＩＩ）は０．１２ｍ１Ｊであった。これらの値は、３°−スルホＬａｃＮＡｃがａｌ、３−フコシルトランスフェラーゼの非常に高いアフィニティーのアクセプターであることを示す。図５に示されるように、３゛−スルホＬａｃＮＡｃから生じる［＋１ｃ］フコシル化生成物を、ペーパー上のその移動度を合成の真正の標準化合物３−スルホ、３−フコシルＬａｃＮＡｃ　（右のピーク）と厳密に比較することにより３°−スルホ、３−フコシルＬａｃＮＡｃ　（左のピーク）と一時的に同定した。

種々の合成アクセプターとの卵巣癌血清α１，３−フコシルトランスフェラーゼ活性（表■を参照のこと）：血清α１．３−フコシルトランスフェラーゼの活性を特定の基質２°−メチルＬａｃＮＡｃで測定し、フコースのアクセプターとして作用する幾つかのその他の合成基質の能力と比較した。ＬａｃＮＡｃ及びＧａｌβ１．３ＧＩｃＮＡｃは夫々９３．４％及び１３．１％の活性であり、α１，３−フコシルトランスフェラーゼが本発明の卵巣癌血清中の主フコシルトランスフェラーゼ（〉９０％）であることを示唆した。この知見を、２°−メチルＬａｃＮＡｃ及びＬａｃＮＡｃの β−ベンジルグリコシドが同等に活性であり（夫々３０７．９％及び３５８．８％）、一方、Ｇａｌβ１，３ＧＩｃＮＡｃの同グリコシドがわずかに２１．７％の活性を示すというデータにより更に実証した。ＧＩｃＮＡｃのＣ−３へのフコースの移入は、２°−フコシルＬａｃＮＡｃが非常に良好な基質（２５３％の活性）として作用し、一方、３−フコシルＬａｃＮＡｃが殆ど不活性（わずかに４．７％の活性）であったという結果から明らかであった。ＬａｃＮＡｃ及び２′ −メチルＬａｃＮＡｃのβ−ベンジルグリコシドに関する観察と同様に、２−フコシルＬａｃＮＡｃのβ−ベンジルグリコシドは親化合物（２５３，１％）よりも更に有効な基質（４２５，０％）であった。

アクセプター２°−メチルＬａｃＮＡｃの構造を、そのメチル基をＣ−２°、３ ′、６°または６位でスルフェート基で置換することにより修飾し、フコースのアクセプターとして作用するそれらの能力につき試験し、下記の新規な知見を得た。３°−スルホＬａｃＮＡｃはその他の硫酸化した誘導体及び硫酸化されなかったアクセプター、例えば、２°−メチルＬａｃＮＡｃ及び２“−フコシルＬａｃＮＡｃと較べて最も活性なアクセプター（３４０，８％）であった。その他の硫酸化した誘導体の中で、６−スルホＬａｃＮＡｃはかなり活性（１７２，４％）であり、２°−スルホ化合物及び６°−スルホ化合物は活性が低かった（夫々２２．０％及び３６．２％）。３−スルホＬａｃＮＡｃのβ−ベンジルグリコシドは非常に活性であったが（１６８，４％）、親化合物より活性が低かった。こうして、β−ベンジル化は硫酸化されなかったＬａｃＮＡｃ誘導体の活性を２〜３倍増大するが、硫酸化したＬａｃＮＡｃの活性の５０％の減少（即ち、１００％の標準の２°メチルＬａｃＮＡｃと比較して１７０％まで）を生じ、３−スルホＧａｌβ１．３Ｇ１ｃＮＡｃβ−０−Ｂｎは活性を示さず、こうしてこの血清中のα１．４〜フコシルトランスフエラーゼ活性の不在を暗示することは、この研究から明らかである。

卵巣腫瘍可溶性部分α１．３−フコシルトランスフェラーゼ：卵巣腫瘍の可溶性部分からの部分精製酵素製剤のα１，３−フコシルトランスフェーゼ活性を測定し、その他のアクセプターの活性と比較した場合、下記の結果を得た。２°−メチルＬａｃＮＡｃ、　ＬａｃＮＡｃ及びＧａｌβ１．３Ｇ１ｃＮＡｃは夫々１００．０％、６０．６％及び５６５．５％の活性であり、この製剤中のα１，３− フコシルトランスフエーゼ活性及びα１．４−フコシルトランスフエーゼ活性の両方の存在を示した。予測されるように、上記のアクセプターのβ−ベンジルグリコシドは相当する親化合物よりも活性であった。特に、Ｇａｌβｌ、　３ＧＩｃＮＡｃのβ〜ベンジルグリコシドはＧａｌβ１．３ＧｌｃＮＡＣよりも約２倍活性であった（夫々１００４．５％及び５６５．５％）。その血清酵素（これは２゛−メチルＬａｃＮＡｃのβ−ベンジルグリコシドで活性の２倍の増加を示した（３０７．９％活性））とは対照的に、わずかに小さい増加が可溶性腫瘍部分の酵素で見られ（１１３，２％）、２′−フコシルｌ、ａｃＮＡｃ及びそのβ− ベンジルグリコシドは夫々４３６、１％及び３７３．０％の活性であり、一方、３−フコシルＬａｃＮＡｃは殆ど不活性であり（わずかに１．９％の活性）、こうしてＧＩｃＮＡｃのＣ−３へのＦｕｃの移入を示した。

ＬａｃＮＡｃの硫酸化した誘導体の中で、３°−スルホＬａｃＮＡｃが最も活性なアクセプター（４４７，１％）であり、続いて６−スルホＬａｃＮＡｃ（２７２，６％）そして２°−スルホＬａｃＮＡｃ（３２，７％）であった。６°−スルホＬａｃＮＡｃが最低の活性のアクセプターであった（５．３％）。３°−スルホＬａｃＮＡｃ及び６−スルホＬａｃＭｃの両方が血清酵素と較べて腫瘍酵素との更に大きな活性を示した（夫々、３４０．８％及び１７２．４％と比較して４４７．１％及び２７２．６％）。血清酵素で観察されたように、３°−スルホＬａｃＮＡｃのβ−ベンジルグリコシドは可溶性腫瘍酵素に対して親化合物よりも活性が低かった。アクセプター３−スルホＧａｌβ１．３ＧｌｃＮＡｃβ−０ −Ｂｎは予測されたように高活性であった（４１５．４％）。何となれば、この製剤は、アクセプターＧａｌβ１．３ＧＩｃＮＡｃ及びそのβ−ベンジルグリコシドが使用された場合に先に注目されたように、α１，４−フコシルトランスフエーゼ活性を含んでいたからである。

卵巣腫瘍の特別な部分と関連するα１．３−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼ（表Ｖを参照のこと）：粒状酵素はＬａｃＮＡｃ（６１，８％）及びＧａｌβ１．３にＩｃＮＡｃ（３４，２％）と活性が低く、この部分中のα１．３（＞６０％）としての主フコシルトランスフェラーゼを示した。

この知見は、本発明者らが可溶性部分で見出したものとは全く異なり、この場合、α１．４−フコシルトランスフェラーゼ活性はα１．３−フコシルトランスフェラーゼ活性より大きいようである。可溶性部分の酵素（これは２°−フコシルＬａｃＮＡｃで４３６．１％の活性を示した）とは対照的に、粒状酵素はわずかに１４４．７％の活性であり、こうして上記の酵素の触媒能の差を説明した。上記の酵素の異なる性質は、ＬａｃＮＡｃの硫酸化した誘導体をアクセプターとして試験した場合に、更に明らかにされた。３°−スルホＬａｃＮＡｃが可溶性部分（４４７，１％）だけでなく血清（３４０，８％）の酵素との高度に活性なアクセプターであることがわかった時、粒状酵素はわずかに３９％の活性を示した。その他の酵素源として、３°−スルホＬａｃＮＡｃのβ−ベンジルグリコシドは粒状酵素と親化合物よりも活性が低かった（３３．３％）。その他の硫酸化した誘導体でさえもが、腫瘍からのこれらの酵素に対するそれらのアフィニティーの差を示した。３′−スルホＬａｃＮＡｃが可溶性部分の酵素と最も活性な硫酸化したアクセプターであった場合、６“−スルホＬａｃＮＡｃ及び６−スルホＬａｃＮＡｃは３′−スルホＬａｃＮＡｃ（３９゜０％）よりも活性であり（４２，６％及び５３．３Ｎ）、２’−スルホＬａｃＮＡｃは粒状酵素と最小の活性であった（９．８％）。粒状酵素は可溶性部分とは対照的に３−スルホＧａｌ　β ｌ、　３ＧｌｃＮＡｃβ−０−Ｂｎと非常に低い活性（２，９％）を示し、ａ　１．４−フコシルトランスフェラーゼ活性が粒状エキス中に殆ど不在であることを示した。

以上の実施例は、３°−スルホＬａｃＮＡｃが可溶性部分のαｌ、　３−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼから卵巣腫瘍粒状部分のα１．３−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼを区別し得ることを実証する。これらの酵素は、２°−メチルＬａｃＮＡｃと比較してこの基質に対する活性の著しい相違を示す。３°−スルホＬａｃＮＡｃは卵巣腫瘍の可溶性部分及び粒状部分と夫々４４７％及び３９％の活性であった。これに関して、血清酵素は可溶性腫瘍部分に似ていた（３°−スルホＬａｃＮＡｃと３４０％の活性）。

また、本発明の化合物は、少なくとも本発明のこのような化合物が両方に結合する限り、α１．３−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼを模擬するタンパク質に対し生物活性を有する。

このような活性を示すため、ナトリウム３°−〇−スルホーＮ−アセチルラクトサミンβ１−ＯＨ（ＳＥ−３Ｇａｌ　β１−４０ＩＣＮＡＣβｌ）をＨＩＶウィルスの抑制につぎ試験した。

組織培養中の）ｌｔＶの複製を抑制するその化合物の能力をＰａｕｗｅｌｓら（ＪＪｉｒｏｌ。

１６：１７１−１８５．１９８７）の方法により測定した。その化合物を培地中に希釈し、）ＩＩＶ−１の刷株の約ｌＯの感染投与量と一緒にｌ１ｒｒ′−４細胞に添加した。組織培養液のアリコートをその反応から除去し、培養中に生じるＨＩＶ複製の量をエンザイム・イムノアッセイ（コウルター）によるＰ２４抗原の測定により監視した。抑制率（％）を、化合物を添加しなかったＨＩＶ感染細胞中で測定したＰ２４抗原の濃度との比較により計算した。最小阻止濃度（ＭＩＣ，。）は、細胞の感染後の８日目及びｌＯ０日目５０％の抑制を生じる化合物の内挿濃度を表す。

６−Ｏ−５ＯｓＮａ−ａ−Ｄ−ＧｌｃＮＡｃ　９３．４７　５６．４１　？２．１１　８０．７６６−０−３Ｏ＊Ｎｉ−β−Ｄ−ＧＩｃＮＡｃ　１　９７．７８　５８．９８　７５．１８　Ｂｏ、４５β−Ｄ−Ｇａｌ（１→４）　１０５．４１　？１．４７　７５．３Ｂ　７１．１４α−Ｄ−ＧＩｃＮＡｃ　９３．４８　５６．６６　７２．０６　８１．４８β−Ｄ−ＧｌｃＮＡｃ　４　９７．８１　５９．２０　７５．３６　８１．８７３−０−５ＯｓＮａβ−Ｄ−Ｇａｌｌ−４ β　１０５．４９　７１．３１　８２．９８　６９．８１３−０−３Ｏ＋Ｎａβ −Ｄ−Ｇａｌ　１−４　ａ　１０５．４５　−　−　−α−Ｄ−ＧｌｃＮＡｃ　９３．９２　５６．９４　７４．０３　７７．６４β−Ｄ−ＧＩｃＮＡｃ　９７．５３　５９．７７　７７．４１　７８．１６αルーＦｕｃ　（１→３）　５　１０１．３７　７０．５２　７１．９５　７４．７４Ｓ−０−３Ｏ＋Ｎａ−β− Ｄ−Ｇａｌ（１−ｅ４）　１０４．３０　７２．１１　Ｂ３．０２　６９．５２ α−Ｇｌｃ？ＪＡｃ　９３．８８　５６．８９　７４．０１　７７、７８β−ＧＩｃＮＡｃ　９７．５２　５９．７？　７７．７２　７８．２６αルーＦｕｃ　（１−＝３）　１０　１０１．３９　７０．５４　７１．１６　７４．７３β− Ｄ−Ｇａｌ（１−ｅ４）　１０４．６３　７２．１０　７５．２９　７０．５２１全ての化合物は満足な元素分析を示した。

表Ｉ（続き）８−０−５Ｏ，Ｎａ−ａ−Ｄ−ＧｌｃＮＡｃ　７３．８５　６９．３６　２４．７６　４８５．９　［Ｍ＋１　］　”］６−Ｏ−３ＯｓＮａ−β−Ｄ−ＧｌｃＮＡｃ　７５．４８　６９．３０　２５．０４　５０？、９　［Ｍ＋Ｎａ］　”β −Ｄ−Ｇａｌ（１−４）　７８．１７　６３．８６　−　４６２．２　［Ｍ−Ｎａ］　−ａ−Ｄ−ＧｌｅＮＡｃ　７２，２０　６２．９７　２４．８７　５０７．９　［Ｍ＋Ｎａ］　＋β−Ｄ−ＧＩｃＮＡｃ　７７．８４　６３．０９　２５．１４　４６２．１　［Ｍ−Ｎａ］　−３−０−３ＯｓＮａβ−Ｄ−Ｇａｌｌ− ４β　７７．７４　６３．８２　−３−０−５ＯｓＮａβ−Ｄ−Ｇａｌ　１→４　ａ　−−α−Ｄ−ＧＩｃＮＡｃ　７２．０５　６２．４８　２４．８５　６５４．２　［Ｍ＋Ｎａ］　”β−Ｄ−ＧＩｃＮＡｃ　７５．５１　６２．５７　２５．１０　６０８．３　［Ｍ−Ｎａ］　−α−Ｌ−Ｆｕｃ　（１−３）　６９．４３　１８．０９　−５−０−３Ｏ＋Ｎａ−β−Ｄ−Ｇａｌ（１→４）　７６．２７　６４．１５　−ａ−ＧｌｃＮＡｃ　７２．０５　６２．５３　２４．８１ β−ＧＩｃＮＡｃ　７５．６４　６２．６２　２５．０６　５３０．１　［Ｍ＋１　］　”］α−Ｌ−Ｆｕｃ１−３）　６９．４７　１８．０９　−　５５２．０［Ｍ＋Ｎａ］”表１１ヒト卵巣腫瘍の可溶性部分からのα１．３−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼの部分積部分　α１．３−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼ活性２°−フコシルＮ −アセチルラクトサミンにとり込まれた（”Ｃ）フコース（ＣＰＭ）活性ゾ■　全　精製　回収率タンパク質　活性　（倍）　（％）ＣＰＭ　ｘ　１０”　ＣＰＭ　ｘ　１０−’卵巣腫瘍 αルーフコシダーゼの減少された可溶性部分　０．５００　４０．００　１．０　１００．０８０％の硫酸アンモニウムによる沈殿　０．７１９　３５．９５　１．４　８９．９ウシＩｇＧ糖ペプチドーセファ０スカラムによるセファクリルＳ−２００カラムによるクロマト表ＩＩ＋ α１．３−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼの源として卵巣癌血清を使用して、競合基質２°−メチルＬａｃＮＡｃの存在下の３゛−スルホＬａｃＮＡｃ及びその逆のアクセプター能力競合基質の濃度（ｍ）　［”Ｃ］フコースのとり込み２゛−メチルＬａｃＮＡｃ　３°−スルホＬａｃＮＡｃ＄　２’−メチルｌ！ＬｃＮＡｃ（０゜３−）１、５　２１３２　１１４３３、０　１８７２　１６１４４、５　１７４８　１９７３６、０　１７１２　２６９８７、５　１４２８　２７８８３゛−スルホＬａｃＮＡｃ　２’−メチルＬａｃＮＡｃ　３°−スルホ−ｃＮＡｃｏ　３６６４　１４００、１５　２５８１　１２９４０、３０　２１９１　２１８１０、４５　１７３７　２４１７０、６５　１１８４　２３７３０、７５　１１８７　２５６０＊３°−スルホＬａｃＮＡｃが３．　ＯｆｆｌＭの濃度で存在した場合、２゛− メチルＬａｃＮＡｃによる抑制はなかった。０．３−の３°−スルホＬａｃＮＡｃの存在下の２°−メチルＬａｃＮＡｃにつき計算された藤値は６．６７−であり、３．０ｍ１Ｊの２′−メチルＬａｃＮＡｃの存在下の３′−スルホＬａｃＮＡｃにつき計算された脂値は０．１２−であった。

表１ｖ血清α１．３−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼの検出のための高感度のアクセプターとしての３−スルホＬａｃＮＡｃの実用性アクセプター（０，３０ｍＭ）ヘノ［”Ｃ］　７コース（Ｄとり込ミ（ｃＰＭ）２°−メチルＬａｃＮＡｃ　３ ’−スルホＩａｃＮＡｃ　比Ａ　Ｂ　Ｂ／Ａ卵巣癌血清：１　”　１３２５　（３３４）　７３１０　（４７４）　５．５２２　１７２４　（４３４）　９８１６　（６３６）　６．６９３　１３５９　（３４２）　５２６１　（３４１）　３．８７４　１３４７　（３３９）　５４８０　（３５５）　４．０６５　６９９　（１７６）　３０８Ｂ　（２００）　４．４２６　９７５　（２４６）　５４８３　（３５５）　５．６２正常な血清　３９７　１５４３　３．８９括弧中の値は癌血清と正常な血清につき得られたＣＰＭの比の％である。

青ｙ合成基質を使用することによる粒状部分及び可溶性部分中に存在する卵巣癌ａ１．３ルーフコシルトランスフェラーゼの明らかな特異性の区Ｓす１．３ルーフコシルトランスフエラーゼの原炭水化物　卵巣癌血清　卵巣腫瘍アクセプター　可溶性部分　粒状部分とり込まれた　相対　とり込まれた　相対　とり込まれた　相対［＋４ｃｌフコース　％　［Ｉ４ｃ　］フコース　％　［ＩＩＣ］フコース　％（ＣＰＭ）　（ＣＰ＋ｌＤ　（ＣＰＭ）７−メチルＬａｃＮＡｅ　１７３０　１００　７３９２　１００　４８２５２　１００２゛−メチノｌ／ＩＪＣＮＡＣβ−０−Ｂｎ５３２６　３０７．９　８３６７　１１＆２　７１９８９　１４９．２ＬａｃＮＡｃ　１６１５　９１４　４ａ　６０．６　２９Ｂ４２　６１．８ＬａｃｌｌＡｃβ ＋Ｂｎ　６２０７　３５８．８　８２４９　１１１．６　６４Ｚ！３　１３２．９Ｌａｃ１１Ａｃβ１．３Ｇａｌβ−０−ＰＮＰ２８８６　１６６．８　６４３２　８７．０　３３７５９　７０．０２゛−スルホＬａｃＮＡｃ　３８０　２２．０　２４１４　３１７　４７１Ｂ　９．８６−スルホＬａｃＮＡｃ　６２６　３６．２　３９５　５．３　２０５４３　４λ６ロースルホーｃＮＡｃ　２９８３　１Ｔ２．４　加１４８　２７２．６　２５７４０　５１３３−フコジノＬｈｃＮＡｃ　８２　４．７　１４４　１．９　１８０１　３．７２°−フコジノＩ／ｌ、１ｃＮＡｃ　４３７９　２５３．１　３２２３５４３６．１　ｅＭＱ４　１４４．７２゛−フコシＭａｃＲＡ、ｃβ（ｌ−Ｂｎ７３５２　４２５．０　２７５７１　３７１０　＆１９７５　１７４０３゛−スルホＬａｃＮＡｃ　５８９４　３４０．８　３３ｆ）４９　４４７．１　１８７９３　３９．０Ｊ−スルホＬｉｃＮＡｃ、１ｌｌ−０−Ｂｎ２９１３　１６１Ｌ４　１３５８５　１８１８　１６０６２　３１３３−スルホＧａｌ　β１．３ＧＩｃＮＡｃβ−（］−Ｂｎ　０　０　３０Ｍ４　４１５．４　１３８２　１９ＧＩｃＮＡｃβ１，６ＧａｌＮＡｃ　ａ÷ＯＮｐ　１６４　９．５　０　０Ｇａｌβ１．３ＧＩｃＮＡｃ　２２７　１３．１　４１８０２　５６５．５　１６５１１　３４．２Ｇａｌ　β１．３ＧＩｃＮＡｃβ−０−Ｂｎ３７６　２１．７　７４２６０　１００４．５　１８Ｚ２１　３７．８Ｇａｌ　β１．３ｃｌＩｃＮＡｃβ１．３Ｇａｌβ−０−Ｍｅ　７３９　４２．７　２０５５９　４１６溶離容量［、ｍＬ］Ｆ工Ｇ、３フロントページの続き（５１）　Ｉｎｔ、　Ｃ１，６識別記号　庁内整理番号Ｃ０７Ｈ１１１０４８６１５−４ＣＣＯ７Ｋ　１／１１３　８３１８−４ＨＣ１２Ｑ　１／４８　Ｚ　６８０７−４８ＧＯＩＮ　３３１５７３　７０５５−２Ｊ（７２）発明者　シャイン　ラケシュ　ケイインド　パルビクラ　アジマール　３０５００１スクデヴ　バワン　４５４−３４Ｉ

Claims

【特許請求の範囲】

１．２′−メチルＮ−アセチルラクトサミンがα１，３−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼ酵素に結合するよりも高い親和性で前記酵素に結合する少なくとも１個のホスフェート基またはスルフェート基を含むオリゴ糖。
２．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ１及びＲ２の少なくとも一つはスルフェートまたはホスフェートであり、Ｒ１及びＲ４の一つは連鎖酸素原子への結合を表し、かつ残りのＲ基は−ＯＨ、−ＯＲ９または−Ｒ１０から選ばれ、Ｒ９及びＲ１０は低級アルキル、低級アルケニル、アリル、フェニル、ベンジル、単糖、オリゴ糖、毒素、抗体、酵素、アミノ酸及びアミノ酸鎖からなる群から独立に選ばれ、更にＲ１０はエステル、エーテル、アミノまたはフルオロであってもよく、但し、残りのＲ基の少なくとも三つが−ＯＨであることを条件とする）により表される請求の範囲第１項に記載のオリゴ糖。
３．Ｒ５またはＲ７がグルコース、フラクトース、アルドース、マンノース、リボース及びガラクトースからなる群から選ばれた糖である請求の範囲第２項に記載のオリゴ糖。
４．Ｒ１がＮａ＋−Ｏ２ＳＯ−であり、Ｒ２が−ＯＨであり、Ｒ３が−ＯＨであり、Ｒ４がエーテル酸素への結合であり、Ｒ５がＮ−アセチルアミノであり、Ｒ６が−ＯＨであり、Ｒ７が−ＯＨ、ニトロフェニルまたはベンジルであり、Ｒ６が−ＯＨであり、かつＲ９が−ＯＨである請求の範囲第２項に記載のオリゴ糖。
５．Ｒ１がＮａ＋−Ｏ３ＳＯ−であり、Ｒ２が−ＯＨであり、Ｒ２がエーテル酸素への結合であり、Ｒ４が−ＯＨであり、Ｒ５がＮ−アセチルアミノであり、Ｒ６が−ＯＨであり、Ｒ７が−ＯＨ、ニトロフェニルまたはベンジルであり、Ｒ６が−ＯＨであり、かつＲ９が−ＯＨである請求の範囲第２項に記載のオリゴ糖。
６．Ｒ１が−ＯＨであり、Ｒ２がＮａ＋−Ｏ２ＳＯ−であり、Ｒ３が−ＯＨであり、Ｒ４がエーテル酸素への結合であり、Ｒ５がＮ−アセチルアミノであり、Ｒ６が−ＯＨであり、Ｒ７が−ＯＨ、ニトロフェニルまたはベンジルであり、Ｒ８が−ＯＨであり、かつＲ■が−ＯＨである請求の範囲第２項に記載のオリゴ糖。
７．Ｒ１が−ＯＨであり、Ｒ２がＮａ＋−Ｏ２ＳＯ−であり、Ｒ２がエーテル酸素への結合であり、Ｒ４が−ＯＨであり、Ｒ５がＮ−アセチルアミノであり、Ｒ６が−ＯＨであり、Ｒ７が−ＯＨ、ニトロフェニルまたはベンジルであり、Ｒ■ 、が−ＯＨであり、かつＲ９が−ＯＨである請求の範囲第２項に記載のオリゴ糖。
８．Ｒ１がスルフェート基である請求の範囲第２項に記載のオリゴ糖。
９．Ｒ２がスルフェート基である請求の範囲第２項に記載のオリゴ糖。
１０．Ｒ６がＮ−アセチルアミノである請求の範囲第２項に記載のオリゴ糖。
１１．Ｒ７が−ＯＲ９（式中、Ｒ９はパラニトロフェニルである）である請求の範囲第２項に記載のオリゴ糖。
１２．Ｒ７が−ＯＲ９（式中９Ｒはベンジルである）である請求の範囲第２項に記載のオリゴ糖。
１３．Ｒ７が−ＯＲ９（式中、Ｒ９はパラニトロベンジルである）である請求の範囲第２項に記載のオリゴ糖。
１４．フコシルトランスフェラーゼを含む試料を請求の範囲第１項に記載の化合物と接触させてフコシルトランスフェラーゼと前記化合物の複合体を生成し、前記化合物と合わされたフコシルトランスフェラーゼを検出することを特徴とする１，３−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼ酵素の存在の分析方法。
１５．フコシルトランスフェラーゼを含む試料を請求の範囲第１項に記載の化合物と接触させてフコシルトランスフェラーゼと前記化合物の複合体を生成し、前記化合物と合わされたフコシルトランスフェラーゼを検出することを特徴とする１，３−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼ酵素の存在の分析のための請求の範囲第２項に記載の方法。
１６．フコシルトランスフェラーゼを含む試料を請求の範囲第１項に記載の化合物と接触させてフコシルトランスフェラーゼと前記化合物の複合体を生成し、前記化合物と合わされたフコシルトランスフェラーゼを検出することを特徴とする１，３−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼ酵素の存在の分析のための請求の範囲第３項に記載の方法。
１７．フコシルトランスフェラーゼを含む試料を請求の範囲第１項に記載の化合物と接触させてフコシルトランスフェラーゼと前記化合物の複合体を生成し、前記化合物と合わされたフコシルトランスフェラーゼを検出することを特徴とする１，３−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼ酵素の存在の分析のための請求の範囲第４項に記載の方法。
１８．フコシルトランスフェラーゼを含む試料を請求の範囲第１項に記載の化合物と接触させてフコシルトランスフェラーゼと前記化合物の複合体を生成し、前記化合物と合わされたフコシルトランスフェラーゼを検出することを特徴とする１，３−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼ酵素の存在の分析のための請求の範囲第５項に記載の方法。
１９．フコシルトランスフェラーゼを含む試料を請求の範囲第１項に記載の化合物と接触させてフコシルトランスフェラーゼと前記化合物の複合体を生成し、前記化合物と合わされたフコシルトランスフェラーゼを検出することを特徴とする１，３−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼ酵素の存在の分析のための請求の範囲第６項に記載の方法。
２０．フコシルトランスフェラーゼを含む試料を請求の範囲第１項に記載の化合物と接触させてフコシルトランスフェラーゼと前記化合物の複合体を生成し、前記化合物と合わされたフコシルトランスフェラーゼを検出することを特徴とする１，３−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼ酵素の存在の分析のための請求の範囲第７項に記載の方法。
２１．フコシルトランスフェラーゼを含む試料を請求の範囲第１項に記載の化合物と接触させてフコシルトランスフェラーゼと前記化合物の複合体を生成し、前記化合物と合わされたフコシルトランスフェラーゼを検出することを特徴とするＬ３−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼ酵素の存在の分析のための請求の範囲第８項に記載の方法。
２２．フコシルトランスフェラーゼを含む試料を請求の範囲第１項に記載の化合物と接触させてフコシルトランスフェラーゼと前記化合物の複合体を生成し、前記化合物と合わされたフコシルトランスフェラーゼを検出することを特徴とする１，３−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼ酵素の存在の分析のための請求の範囲第９項に記載の方法。
２３．フコシルトランスフェラーゼを含む試料を請求の範囲第１項に記載の化合物と接触させてフコシルトランスフェラーゼと前記化合物の複合体を生成し、前記化合物と合わされたフコシルトランスフェラーゼを検出することを特徴とする１，３−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼ酵素の存在の分析のための請求の範囲第１０項に記載の方法。
２４．フコシルトランスフェラーゼを含む試料を請求の範囲第１項に記載の化合物と接触させてフコシルトランスフェラーゼと前記化合物の複合体を生成し、前記化合物と合わされたフコシルトランスフェラーゼを検出することを特徴とする１，３−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼ酵素の存在の分析のための請求の範囲第１１項に記載の方法。
２５．フコシルトランスフェラーゼを含む試料を請求の範囲第１項に記載の化合物と接触させてフコシルトランスフェラーゼと前記化合物の複合体を生成し、前記化合物と合わされたフコシルトランスフェラーゼを検出することを特徴とする１，３−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼ酵素の存在の分析のための請求の範囲第１２項に記載の方法。
２６．フコシルトランスフェラｒゼを含む試料を請求の範囲第１項に記載の化合物と接触させてフコシルトランスフェラーゼと前記化合物の複合体を生成し、前記化合物と合わされたフコシルトランスフェラーゼを検出することを特徴とする１，３−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼ酵素の存在の分析のための請求の範囲第１３項に記載の方法。
２７．１，３−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼを請求の範囲第１項に記載の化合物に結合することを特徴とするＬ１，３−Ｌ−レフコシルトランスフェラーゼの生物活性の抑制方法。
２８．１，３−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼを請求の範囲第１項に記載の化合物に結合することを特徴とする１，３−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼの生物活性を抑制するための請求の範囲第２項に記載の方法。
２９．１，３−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼを請求の範囲第１項に記載の化合物に結合することを特徴とする１，３−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼの生物活性を抑制するための請求の範囲第３項に記載の方法。
３０．１，３−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼを請求の範囲第１項に記載の化合物に結合することを特徴とする１，３−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼの生物活性を抑制するための請求の範囲第４項に記載の方法。
３１．１，３−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼを請求の範囲第１項に記載の化合物に結合することを特徴とする１，３−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼの生物活性を抑制するための請求の範囲第５項に記載の方法。
３２．１，３−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼを請求の範囲第１項に記載の化合物に結合することを特徴とする１，３−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼの生物活性を抑制するための請求の範囲第６項に記載の方法。
３３．１，３−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼを請求の範囲第１項に記載の化合物に結合することを特徴とする１，３−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼの生物活性を抑制するための請求の範囲第７項に記載の方法。
３４．１，３−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼを請求の範囲第１項に記載の化合物に結合することを特徴とする１，３−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼの生物活性を抑制するための請求の範囲第８項に記載の方法。
３５．１，３−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼを請求の範囲第１項に記載の化合物に結合することを特徴とする１，３−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼの生物活性を抑制するための請求の範囲第９項に記載の方法。
３６．１，３−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼを請求の範囲第１項に記載の化合物に結合することを特徴とする１，３−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼの生物活性を抑制するための請求の範囲第１０項に記載の方法。
３７．１，３−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼを請求の範囲第１項に記載の化合物に結合することを特徴とする１，３−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼの生物活性を抑制するための請求の範囲第１１項に記載の方法。
３８．１，３−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼを請求の範囲第１項に記載の化合物に結合することを特徴とする１，３−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼの生物活性を抑制するための請求の範囲第１２項に記載の方法。
３９．１，３−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼを請求の範囲第１項に記載の化合物に結合することを特徴とする１，３−Ｌ−フコシルトランスフェラーゼの生物活性を抑制するための請求の範囲第１３項に記載の方法。
４０．ＨＩＶウイルスを請求の範囲第１項に記載の化合物に露出することを特徴とするＨＩＶウイルスの複製の抑制方法。
４１．ＨＩＶウイルスを請求の範囲第１項に記載の化合物に露出することを特徴とするＨＩＶウイルスの複製を抑制するための請求の範囲第４項に記載の方法。