JPH04502010A

JPH04502010A - グリコサミノシルトランスフェラーゼｖの阻害剤

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Publication number: JPH04502010A
Application number: JP2501325A
Authority: JP
Inventors: ピアス，ジェームズ　マイケル; ハインズゴール，オレ
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1988-11-21
Filing date: 1989-11-21
Publication date: 1992-04-09
Also published as: WO1990005527A1; ATE148126T1; US5032505A; DE68927718D1; EP0593419A4; AU4741690A; EP0593419A1; CA2003537A1; EP0593419B1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】グリコサミノジルトランスフェラーゼＶの該１υＬ肚本発明は、転移と関連して高いレベルを有するグリコサミノジルトランスフェラーゼ（ＧｎＴ）の阻害剤を用いた転移性代謝状態の療法および診断に関する。特に、本発明は特定のグリコジルトランスフェラーゼＧｎＴ−Ｖの阻害剤を用いて細胞の転移状態の治療および診断を行う方法に関する。

１１艮！正常細胞および腫瘍細胞の細胞表面の特徴は、脂質およびタンパク質のグリコジル化に由来する多くの糖構造による。

一般に、腫瘍細胞および正常細胞のグリコジル化様式が極めて異なることが認められる。Ｌｅ”ｓ　シアリル−Ｌｅ”ｓ　Ｌｅ”ｓ　およびシアリル−Ｌｅ”を含む、１２以上の腫瘍関連のグリコシド構造が文献に記載されている。アスパラギン結合（ｒ”ｉ　−Ｍ　合）オリゴ糖のサイズが著しく増大することは、正常細胞から変化した（ＩＩ瘍）細胞への変化の特徴でもあり、そして、高分子量のフコシル化Ｎ−結合オリゴ糖の発生は悪性への変化と再現性をもって相関がある。

特に、Ｎ−結合オリゴ糖のβ（１−６）分枝の増加の程度と、ネズミおよびヒトの腫瘍細胞に転移する可能性との関連があることが示された（Ｄｅｎｎｉｓ、　Ｊ、　Ｗ、、　Ｃａｎｃｅｒ　５ｕｒｖｅ　ｓ　（１９８Ｂ＞、印刷中：　Ｄｅｎｎｉｓ、　Ｊ、　１１．ら、５ｃｉｅｎｃｅ　（１９８？）　２３６：５８２）。

ＧｎＴ−Ｖ欠損腫瘍細胞変異株、つまり細胞表面に高度に分枝した大きな糖を欠損する株は転移の可能性が著しく減少するこ七も示された（Ｄｅｎｎｊｓ、　Ｊ、　Ｗ、ら、５ｃｉｅｎｃｅ　＜１９８７）　２３６：　５８２゜前出）。ポリオーマＤＮＡパポバウイルス、あるいはＲＮＡレトロウィルスであるラウス肉腫ウィルスによるＢＨｒ細胞の形質転換の研究から、形質転換によって、グリコシドのグリコジル化受容体三糖部分であるβ−ＧｌｃＮＡｅ（１−２）　ａ−Ｍａｎ（１−６）β−Ｍｉｎ、、、の分枝形成が増加することが示された（Ｙｓｖａｓｈｌｄａ、　Ｋ、ら、Ｊ　Ｂｉｏｌ　Ｃｈｅｗ　（１９８４）　２５９：　ｌＧｇ３４；Ｙａｍａｓｈｉｄａ、Ｋ、ら、Ｊ　Ｂｉｏｌ　Ｃｈｅｗ　（１９８５）　２６０：　３９６３；　Ｐｌｅｒｃｅ。

Ｍ、ら、Ｌｌ島上Ｊ加狸（１９８６）基ユニ　１Ｇ７７２）。

この三糖部分の分枝形成の増加は、Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＶ　（ＧｎＴ−Ｖ、　ＥＣ２，４，１，１５Ｓ）の活性の増大と相関がある。このＮ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＶは、反応スキーム１に示されるように、この三糖部分のα−マンノース残基で、１−６結合分技になるように、ＵＤＰ−ＧＩｃＮＡｃからの７セチルグルコサミン残基を転移させることによって、Ｎ−結合糖に含まれる前記三糖部分の分枝形成を触媒する（Ｃｕｎｎｉｎｇ、　Ｒ，Ｄ、ら、Ｊ　Ｂｉｏｌ　Ｃｈｅｙｘ（１９８２）　２５？：　１１２３０）。

ス↑−ム　１どのような理論にも束縛されることを意図しないが、出願人は、膿瘍関連の大きいＮ−結合グリコシル化鎖の形成（反応スキーム２にまとめられている）には、ＧｎＴ−Ｖにより触媒される分枝形成に引き続いて起こる多数の他の酵素により触媒されるグリコジル転位による、ＧｎＴ−Ｖの触媒による分枝形成が必要条件であると信じる。

（以下余白）ス〒−へ２そのうえ、大きい複雑なグリコジル化残基が腫瘍細胞に存在することが、正常細胞表面のトリペプチド（ＲＧＤ）受容体が細胞外マトリックスの糖タンパクと結合する相互作用を妨げると考えられ得る。

本理論と一貫して、グリコジル化を阻害する薬剤は、腫瘍細胞の成長に影響を与えることが示された。例えば、全てのＮ−結合グリコシル化を阻害するツニカマイシン、およびＮ−アセチルグリコサミン分技を含有しない、高マンノースオリゴ糖のみを生成する、グリコジル化様式を阻害するアルカロイドであるカスタノスパミンおよびスワインソニンは、Ｂ１６メラノーマにおける器官集落化を阻害することが示された（Ｉｒｉｗｕｒａ、Ｔ、ら、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ　（１９８１）　４１：　３４１１；　Ｈｕｍｐｈｒｉｅｓ。

Ｍ、Ｊ、ら、５ｃｉｅｎｃｅ　（１９８６）　２３３：　４６７；　Ｄｅｎｎｌｓ、Ｊ、Ｗ、。

Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ　（１９８６）　４６：　５１３１）。スワインソニンがまた転移性ＭＤＡＹ−Ｄ２　！、Ｉンバ腫細胞の集落形成を阻害すること（Ｄｅｎｎｉｓ。

Ｊ、　Ｗ、、Ｃａｎｃｅｒ　５ｕｒｖｅ　ｓ　（１９８ｇ）、印刷中）、軟寒天上の腫瘍細胞の成長率を減少すること、および自然キラー細胞に対する腫瘍細胞の感受性を高めることが示された（Ａｈｒｅｎｓ、　Ｐ、　Ｂ。

ら、　Ｊ　Ｂｉｏｌ　Ｃｈｅｗ　（１９８〕）　２６２：　７５７５）　。

出願人の知る範囲内では、ＧｎＴ族の活性部位に対する周知の阻害剤は、グリコジル基供与体部分の糖ヌクレオチドアナローブに限られ（Ｃａ＋１ａｒａｓａ、　Ｍ、ら、Ｊ　Ｍｅｄ　Ｃｈｅｗ　（１９８５）　２８：　４０；　Ｖａｇｈｅｆｉ、　Ｍ、Ｙ、ら、Ｊ　Ｍｅｄ　Ｃｈｅｗ　（１９８７）　３０：　１３９１；　Ｋｉｊｉｍａ−３ｕｄａ、　１．ら、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ　（１９８６）　４６：　１１５８）　、そしてその一つであるＣＭＰ−シアル酸アナローグは抗腫瘍作用がある（ＩＮｊｊｍｓ−Ｓｕｄａら、同上）　。ＧｎＴ−Ｖの阻害についての本研究のアプローチ、すなわち、ＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃ供与体アナ供与体アナロー色して用いることは、比較的非特異的であって、糖脂質の生合成に関与するＧｎＴを阻害するだけでなく、Ｎ−結合オリゴ糖の合成に関与する９個の周知のＧｌｃＮＡｃ　）ランスフェラーゼをすべて阻害する（Ｓｃｈａｃｔｅｒ、　Ｈ，、Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｃｅ１ｌ　Ｂｉｏｌ　（１９１１６）■：　１６３）ことが期待される。

すなわち、ＧｎＴ−Ｖによる触媒反応での受容体部分に注目する本発明のアプローチは、腫瘍細胞の転移能力に、特に関わる酵素の阻害を提案する。

１艶恋隨丞本発明は、膿瘍細胞、特に活発な転移性の腫瘍細胞に高レベルで存在するＮ−７セチルグルコサミニルトランスフエラーゼーＶ　（ＧｎＴ−Ｖ）の合成受容体および阻害剤を提供する。本合成受容体および阻害剤は、転移性があると思われる細胞サンプルのＧｎＴ−Ｖレベルを測定する簡便な方法の材料を提供する。

さらに、阻害剤は、高ＧｎＴ−Ｖレベルを有する、および／あるいは転移性を示す細胞中でのＧｎＴ−１の影響を減少するのに治療上有用である。

すなわち、−面では、本発明は、ＧｎＴ−Ｖの合成受容体である化合物に向けられ、本化合物は次の式を有する。

β−Ｇ１ｃＮＡｃ（１−２）　ａ　−Ｍａｎ（１−６）Ｘ　（１）ここで、Ｘは、β−グリコピラノースあるいはその誘導体であって、Ｘで示されるこのグリフピラノースあるいは誘導体は、式（１）の化合物の有効な受容体としての性質を本質的に変化する構造ではない。

（ここに示される式および名称に特に記入される必要はないが、特に記入していなければ、全ての糖残基はＤ−配置である。）他の一面においては、本発明は、サンプル、特に細胞サンプルニオＩｔ　ルＧｎＴ−Ｖレベルの測定方法に向けられている。この方法は、ＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃからのβ−Ｇ１ｃＮＡｃの式（１）の受容体への転移の測定を含む。

他の一面においては、本発明は次の式を有するＧｎＴ−Ｙの阻害剤に向けられている。

β−Ｇ１ｃＮＡｃ（１−２）　ａ−６−ジオキシ−Ｍａｎ（１−６）Ｘ　（２Ａ）４−フルオロ−β−Ｇ１ｃＮＡｃ（１−２）　ａ−６−ジオキシ−Ｍａｎ（１ −６）Ｘ　（２Ｂ）、あるいはトデオキシーβ−ＧｌｃＮＡｃ（１−２）　ａ−６−ジオキシ−Ｍａｎ（１−６）Ｘ　（２Ｃ）ここでＸは、β−グリコピラノースあるいはその誘導体であって、このグリコピラノースあるいは誘導体は、式（２Ａ）〜（２Ｃ）の化合物のＧｎＴ−Ｖの阻害剤としての作用能力に実質的に影響を及ぼさない。

他の一面においては、本発明は、サンプル、特に細胞サンプルにおけるＧｎＴ− Ｖレベルの測定方法に向けられる。この方法は、ＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃからのβ −ＧＩｃＮＡｃの細胞抽出物中の受容体混合物への転移に関して、式（２Ａ）〜（２Ｃ）のいずれかの化合物の効果を測定することを含む。本阻害剤は、ＧｎＴ −Ｖに特異的なので、本酵素が存在する時だけに阻害が起きる。

さらに、本発明は、被検者における膿瘍細胞の転移活性を阻害する方法に向けられる。その方法は、式（２Ａ）〜（２Ｃ）の阻害剤の一つあるいはそれ以上の、あるいはこのような阻害をもたらす薬剤組成物の治療上必要な量を投与する方法を含む。

本発明はまた、本化合物の一つあるいはそれ以上が、本目的のための活性成分となる薬剤組成物に向けられている。

他の一面においては、本発明は次の式の化合物に向けられている。

２−デオキシ−β−Ｇａｌ（１−４）β−ＧｌｃＮＡｃ−ＯＹ　（３）ここでＹは後述の疎水性置換基である。この化合物は、式（３）の化合物の非デオキシアナローグを含むグリコシドの部分へ、α−Ｌ−７コースヲＧＤＰ−フコースから転移するフコシルトランスフェラーゼの阻害剤である。すなわち、α−Ｌ−フコースの通常の受容体は、グリコシド鎖内にあるような式β−Ｇａｌ（１−４）β −Ｇ１ｃＮＡｃである。フコース残基転移による生成物は、ヒト血液群抗原Ｈｎ型と関連している。

（以下余白）図面の簡単な説明第１図は、式２で示す化合物の合成における様々な中間体の構造を示す。

第２図は、第１図に示される中間体の化合物の合成工程を示す。

第３図は、本発明の受容体および阻害剤の様々な誘導化をｃｒ−Ｍａｎ　（受容体）の、あるいはβ−Ｇ　１ｃＮＡｃ　（１−２）　ａ−６−ジオキシ−Ｍａｎ、４−フＪレオローβ−Ｇ　１ｃＮ八ｃ　（１−２）　ａ−６−ジオキシ−Ｍａｎ、あるいは４−デオキシ−β−Ｇ　ＩｃＮＡｃ　（１−２）　ａ−６−ジオキシ−Ｍａｎ　（阻害剤用）のβ（１−６）グリコシドである。本発明の受容体および阻害剤は、阻害剤ではα−マンノシド残基がデオキシ型であるところだけに相違がある。従って、式（２Ａ）〜（２Ｃ）の化合物を、ＧｎＴ−Ｖの触媒反応で転移したもう一つのβ−Ｇ１ｃＮＡｃ残基の受容体として作用できないようにする。

さらに、阻害剤のβ−ＧＩｃＮＡｃ残基は、４−フルオロあるいは４−デオキシ誘導体、すなわちそれぞれ式（２Ｂ）および（２Ｃ）であり得る。なぜなら、これらの修飾は、上記の第２スキームで示しているように、通常の過程のグリコシド鎖形成の次の段階である、ガラクトース残基を阻害剤の４位に転移するこ２を妨げるからである。ガラクトース残基を阻害剤の４位に転移することは阻害活性を破壊することになる。従って、式（２Ａ）の化合物のＧＩｃＮＡｃ残基を、４ −フルオロあるいは４−デオキシ誘導体で置換することによって、式（２Ｂ）および（２Ｃ）の阻害剤の不活性化を防ぐ。

受容体および阻害剤両者とも、Ｘ″と表す部位に、■−６グリコシル化を必要とする。ここではＸはβ−グリコピラノースあるいはその誘導体である。Ｘがグルコビラノースのあるいはマンノピラノースの誘導体であることが好ましい。グルコビラノース誘導体は容易に合成される点で有利である。なぜなら、必要とする β−グルコピラノシドの調製がβ−マンノピラノシドの調製より容易であるからである。

グリコピラノースの誘導体化は、典型的には、グリコピラノシド残基の２．３および／または４位の水酸基をさらに反応させるか、あるいは還元することによって、あるいは６−ＣＩ、ＯＲ基のメチレン基の水素をメチル基で置換することによってなされる。特に、次の誘導体化が好ましい；　（１）　３−ＯＲ基をさらにグリコジル化して、三糖あるいは多糖を得る。（２）４−ＯＲ基をメチル化あるいは還元して、またはグリコジル化して、三糖あるいは多糖を得る。および（３）６位のＣＨ２０ＨのＲ−あるいはＳ−水素をメチル基で置換、最も好ましくはＲ−位の水素をメチル基で置換する。

β−ピラノシド環は、ヘミアセタールＯＨ基の水素を、Ｙで表す疎水性置換基で置換することによって安定化する。すなわち、Ｘで表すグリコピラノシドは次の一般式を有する。

ここでＹは、置換されない、あるいは、ヒドロキシ、アルコキシ（１−４Ｃ）　、カルボキシ、アルコキシカルボニル＜１−５Ｃ）、アルキルカルボニル（２− ５Ｃ）、アミノおよびその他の置換基の１個あるいは２Ｍ置換基置換され得る、３〜２０個の炭素をもつ疎水性ヒドロカルビル部分である。さらに、ヒドロカルビル残基のメチレンユニットの１個あるいはそれ以上が、Ｎ、　Ｓおよび０からなる群から選択された異なる原子で置換され得る。ＹＷ置換基、化合物の受容体あるいは阻害剤としての性質を妨げないために充分に疎水性でなければならないこと以外、厳密な性質は必要とされない。本発明の化合物を逆相クロマトグラフィーで分離できるように疎水性７トリツクに充分な親和性を付与するために、式Ｙの置換基の疎水性が利用できる。また、アルコキシカルボニルのような置換基を、望むならば、本発明の化合物を個体担体と接合するのに役′立つ官能基に転換し、あるいは組織を認識するのに役立つような他の分子に転換することができる。

第３図は、一部の受容体／阻害理化合物、およびＸで表すβ−グリコピラノース残基の好ましいＭ換および誘導体化の図式を示す。

特に好ましい阻害剤を下記に示す。

Ｙ　６−０−　［２−Ｏ−（２−アセトアミド−２−デオキシ−β−ローグルコピラノシル）−６−ゾオキシーα−トマンノピラシルコーβ−ローマンノピラノシドＹ　６−０−　［２−Ｏ−（２−アセトアミド−２−デオキシ−β−〇−グルコピラノシル）−６−ジオキシ−α−ローマンノピラノシル］−β−トグルコピラノシド；Ｙ　６−０−　［２−Ｏ−（２−アセトアミド−２−デオキシ−β−〇−グルコピラノシル）−６−ゾオキシーα−〇−マンノピラノシル］−４−デオキシ−β −Ｄ−キシロ−ヘキソピラノシド：Ｙ　６−０−　［２−Ｏ−（２−７セトアミドー２−デオキシ−β−０−グルコピラノシル）−６−ジオキシ−α−ローマンノピラノシル］　−４−０−メチル−β−Ｄ−グルコピラノシド；Ｙ　６−０−　［２−Ｏ−（２−アセトアミド−２−デオキシ〜β−０−グルコピラノシル）−６−ジオキシ−α−０−マンノピラノシル］−７−ゾオキシーα −Ｌ−グリセロートグルコ−へブトピラノシド；Ｙ　６−０−　［２−Ｏ−（２ −アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｏ−グルコピラノシル）−６−ゾオキシー α−Ｏ−マンノピラノシル］−７−ゾオキシーβ−Ω−グリセロー〇−グルコ− へブトピラノシド；Ｙ　６−０−　［２−０−＜２−ア七ドアミドー２−デオキシー４−フルオロ−β−ローグルコピラノシル）−６−ゾオキシーα−〇−フンノピラノシルコーβ−Ｏ−マンノピラノシド；Ｙ　６−０−　［２−〇−（２−アセトアミド−２−デオキシ−４−フルオロ− β−Ｄ−グルコピラノシル）−６−ゾオキシーα−〇−７ンノピラノシル］−β −Ｄ−グルコピラノシド；Ｙ　６−０−　［２−０−＜２−アセトアミド−２−デオキシ−４−フルオロ− β−Ｄ−グルコピラノシル）−６−ゾオキシーα−Ｏ−マンノピラノシル］−４ −デオキシ〜β−Ｏ−キシロ−ヘキソピラノシド；Ｙ　６−（］−［２〜０−（２−アセトアミド−２−デオキシ−４−フルオロ−β−Ｏ−グルコピラノシル） −６−ゾオキシーα−Ｄ−マンノピラノシル］−４−０−メチル−β−Ｄ−グルコピラノシド；Ｙ　６−０−　［２−Ｏ−（２−アセトアミド−２−デオキシ− ４−フルオロ−β−〇−グルコピラノシル）−６−ゾオキシーα−Ｄ−マンノピラノシル〕−７−ゾオキシーα−Ｌ−ダリセローＤ〜グルコ−へブトピラノシド；Ｙ　６−０−　［２−（１−（２−アセトアミド−２−デオキシ−４−フルオロ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−６−デオキシ＝α−〇−マンノピラノシル］ −７−ゾオキシーβ−Ｄ−グリセローＤ−グルコ〜へブトピラノシド；Ｙ　６− ０−　［２−［１−（２−アセトアミド−２，４−ジデオキシ−β〜Ｄ−グルコピラノシル）−６−ゾオキシーα−Ｄ−マンノピラノシル］−β−ローマンノピラノシド：ｙ６−〇−［２−ロー（２−アセトアミド−２，４−ジデオキシ−β−〇−グルコピラノシル）−６−ゾオキシーα−Ｄ−マンノピラノシル］−β−ローグルコピラノシド；Ｙ　６−０−　［２−０−＜２−アセトアミド−２，４−ジデオキシ−β−Ｄ− グルコピラノシル）−６−ゾオキシーα−Ｄ−マンノピラノシル］−４−デオキシ−β−ローキシロ−ヘキソピラノシド；Ｙ　６−０−　［２−Ｏ−（２−アセトアミド−２，４−ジデオキシ〜β−〇−グルフビラノシル）−６−ジオキシ− α−ローマンノピラノシル］　−４−０−メチル−β−Ｄ−グルコピラノシド：Ｙ　６−０−　［２−０−＜２−アセトアミド−２，４−ジデオキシ−β−〇− グルコピラノシル）−６−ジオキシ−α−ローマンノピラノシル］−７−デオキシーα−し一グリセロートグルコーへブトピラノシド；およびＹ　６−０−　［２−Ｏ−（２−アセトアミド−２，４−ジブオキシルβ−ローグルコピラノシル）−６−ゾオキシーα−トマンノビラノシル］−７−ゾオキシーβ−Ｄ−グリセロー〇−グルコ−へブトピラノシドここでＹは、上記の疎水性置換基である。オクチルおよび８−メトキシカルボニルオクチルからなる群から選択されたＹである、前記の化合物が特に好ましい。

好ましい受容体は、６−０−　［２−０−、（２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−α−ローマンノピラノシル］〜β−Ｄ−グルコピラノシド；Ｙ６− 〇−［２−Ｏ−（２−アセトアミド−２−デオキシ−β−０−グルコピラノシル）−α−ローマンノピラノシル］−４−デオキシ−β−Ｄ−キシロ−ヘキソピラノシド；Ｙ６〜０−２−０−　（２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−α−ローマンノピラノシル］　−４−０−メチル−β−トグルコピラノシド；Ｙ　６−０−２　［０−（２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−α−Ｄ−マンノピラノシル］−７−デオキシ〜α−し−グリセロ− ０−グルコ−へブトピラノシド；およびＹ　６−０−　［２−Ｏ−（２−アセトアミド−２−デオキシ−β−０−グルコピラノシル）−α−ローマンノピラノシル］−７−デオキシ〜β−Ｄ−グリセロ−Ｄ−グルコ−へブトピラノシド；である。ここでＹは上記に定義したとおりである。特に、Ｙがオクチルである上記の化合物が好ましい。

受容体および阻害剤の調製本発明の受容体および阻害剤は、６−０−α−Ｄ−マンノピラノシルーβ−ローグリコピラノシド受容体のＮ−アセチルグルコサミンによる（１−２）グリコジル化により調製される。阻害剤の場合、α−ローマンノピラノシル−β−ローグリコピラノシド残基の６−デオキシ型はＭ換され、そのＮ−アセチルグルコサミン供与体は４−フルオロおよび４−デオキシ型を含む。

一般のアプローチσための反応式が第２図に示されている。

番号が付けられた成分の構造が第１図に示されている。第２図の最初の反応（Ｒｘｎｌ）は、β−グリコピラノシル残基”Ｘ”の保護を示す。この場合には、８ −メトキシカルボニルオクチルマンノースが示されている。第２〜第６の反応は、α−６−ジオキシマンノースの保護および調製を示す。受容体の調製では、６位の水酸基を還元する、第２および′Ｍ３の反応が除かれ、そして、第２図の式６の化合物は、ペンタ酢酸塩に置き変えられる。このグループの残りの反応、すなわち′Ｍ４〜第４〜第６により、適切に保護された１−ハロα−マンノシドあるいは１−ハロー６−デオキシ　α−マンノシドが得られる。第７〜第８の反応は、′最小限の（ｍｉｎｉｏ＋ａｌｌｙ）″三糖受容体、ａ　−Ｍａｎ　（１− ６）　Ｘあるいは６−ジオキシ−α−Ｍａｎ　（１−６）　Ｘの生成を示す。第９の反応は最小限の三糖受容体とβ−ＧｌｃＮＡｃとの（１−２）結合形成を示し、そして第１θ〜第１１の反応は得られた”最小の（＋ａ＋旧ｍａｔ）”三糖の脱保護を示す。上記述べたように、Ｘのグリコピラノシル基が次々に誘導化され、三糖あるいはオリゴ糖ができるので、ここで”最小限の°あるいは”最小の ″という単語が使われる。

示されている６つの新規な受容体の調製は、ここで参考文下記の受容体の標準工程を用いての合成について述べられる。

オクチル６−０−　［２−Ｏ−（２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−α−ローマンノピラノシル］−β−トグルコビラノシド；オクチル６−０−　［２−Ｏ−（２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−α−ローマンノピラノシル］−４−デオキシ−β−ローキシロ−へキソビラノシド；オクチル６−０−　［２−Ｏ−（２−アセトアミド−２−デオキシ−β−トグルコピラノシル）−α−Ｄ−マンノピラノシル］　−４−０−メチル−β−Ｄ−グルコピラノシド；オクチル６−０〜［２−０−（２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−α−ローマンノピラノシル］−７−ゾオキシーα−し−グリセロ−〇＝グルコーへブトピラノシド；オクチル６−０−　［２−Ｏ−（２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−α−ローマンノピラノシル］−７−ゾオキシーβ−Ｄ−グリセロ−Ｄ−グルコ−へブトラノシド；およびシクロヘキシルメチル６−０−　［２−Ｏ−（２−アセトアミド−２−デオキシ−β−０−グルコピラノシル）−α−ローマンノピラノシド］最後に述べられた化合物では、シクロヘキシルメチル基が、おそらく第３の糖残基、すなわち、モデルの三糖部分のβ−マンノピラノース残基と入れ替わることが注目されるべきである。この化合物の受容体としての能力は、他の残りの化合物の約２５％しかない。この結果から、本発明の化合物は、広く解釈すると、Ｘがその部位の糖残基が完全に脱酸素化された誘導体である化合物を含み得るが、これらの化合物は化合物群として、少なくとも三糖である化合物より好ましくないことが明らかである。従って、好ましい実施態様は、Ｘで表す残基がβ−ピラノース環を有するものである。

８−メトキシカルボニルオクチル６−０−　［２−Ｏ−（２−アセトアミド−２ −デオキシ−β−トグルコピラノシル）−α−ローマンノピラノシル〕−β−Ｄ −マンノピラノシドの合成は、７ａｈｉｒら、Ｃａｎ　ＪＣｈｅｎ＋　（１９８６）　６４　：１７７１に示されている。

阻害剤の合成をここに説明する。簡単にいえば、第２図に示される通り、β−トグルコピラノシドの８−メトキシカルボニルオクチル誘導体は、標準的な方法によりベンジル誘導体に変換する。他の実施態様としてのＹを有するβ−Ｄ−グルコピラノシドも同様に使用し得る。

第２図の第２の反応では、メチル−α−トマンノピラノシドはトリフェニルホスフィンおよびＮ−ヨードコハク酸イミドと反応し、６−ヨード化合物が得られ、この化合物は第３の反応で、水素／ラネーニッケルによって還元され、そしてα とβのＴツマ−の混合物であるトリアセチル化型に変換される。

第４の反応では、１位のアシロキシ基をブロモに変換し、そして第５〜第６の一連の反応で１位のブロモを、第７の反応で示される通り、保護されたβ−ローグルコビラノース受容体と反応するのに適したクロロ誘導体に変換する。第８の反応でのように、ナトリウムメトキシド処理による、６−ジオキシ−マンノース残基の２位の水酸基の脱保護は、第９の反応によって、１−プロその保護されたグルコサミンとの縮合を可能にし、そしてさらに第１０〜第１２の反応に示される加水分解および還元により脱保護し、第２図の式■で示される、目的の′８−メトキシカルボニルオクチル６−０−　［２−Ｏ−（２−アセトアミド−２−デオキシ−β−０−グルコピラノシル）−α−Ｄ−６−ゾオキシーマンノピラノシル〕−β−Ｄ−グルコピラノシドが得られる。式（２Ｂ）および（２Ｃ）の本発明の化合物を調製するためには、図に示されている式１４の化合物を、式１４の化合物の４−フルオロあるいは４−デオキシ型で置換する。

他の実施態様のＸを有する本発明の同類の化合物は、第２図の式１の化合物を、目的とするグリコピラノシドあるいはその誘導体で置換することによって容易に合成される。

ＧｎＴ−１の測定法受容体および阻害剤は、サンプル中のＧｎＴ−Ｖの存在およびその量を検出するのに有用である。診断薬として用いる場合、細胞内のＧｎＴ−Ｖレベルが測定される。したがって、細胞を音波破砕、浸透圧あるいは適切な機械的な方法によって溶解し、そして細胞抽出物あるいは溶解物を測定に用いる。

測定法の１つは被検抽出物の存在下、ＵＤＰ−βＧＩｃＮＡｃから本発明の受容体によるβ−ＧＩｃＮＡｃの取り込みの測定を行なう。

この取り込みの検出には、例えば固体担体に受容体を結合し、標識β−ＧＩｃＮＡｃの取り込みを測定することを含む、様々な方法が用いられる。三糖である８ −メトキシカルボニルオクチルβ−Ｇ　ＩｃＮＡｃ　（１−２）　ａ　−Ｍａｎ　（１−６）−β−Ｍａｎを受容体として用いた方法は、ここでは参考文献として引用されているＰｉｅｒｃｅ、Ｍ。

ら、Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｂｉｏｐｈｙｓ　ＲｅｓＣｏｍｍｕｎ（１９８７）１４６：６７９−６８４に示されている。この工程は、基質の取り込みを検出する方法を提供するために放射標識ＬＩＤＰ−βＧＩｃＮＡｃを用いる。本発明の受容体を用いた、ＧｎＴ−Ｖの他の測定法が改変され得る。例えば、Ａｂｂｏｔｔ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓのヨーロッパ特許出願公開Ｎａ　１３４．２９２に記載しているＧｎＴ−Ｖの受容体の測定法を用いた工程を改変する。

反応阻害剤を用いた、ＧｎＴ−Ｖ測定を改変するため、受容体混合物を供給するのに、合成アナローブを用いるよりも、細胞サンプルの粗抽出物を用い得る。本測定では、上記の通常のグリコシド供与体である、０叶−β−ＧＩｃＮＡｃの取り込みがまた用いられ得る。しかしこの測定法では、細胞抽出物中に存在するＧｎＴ酵素の混合物は供給される標識供与体を同時に含まれている受容体の混合物に移す。しかしながら、ＧｎＴ−Ｖだ＋ｊが本発明の阻害剤に阻害される。すなわち、本測定で示される阻害レベルは存在するＧｎＴ−νの量を測定することである。

処方および投与本発明の阻害剤はＧｎＴ−Ｖ酵素の阻害、すなわち分枝鎖糖質の合成阻害により、病気の被検者の腫瘍細胞の転移を阻害するのに有用である。本阻害剤は知られている処方、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ′ｓ　Ｐｈａｒｍａｃｅｎｔｉｃａｌ　５ｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｃｋ　Ｐｕｂｌｉｓｈｉｒ＋ｇＣｏｍｐａｎｙ、　Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ、最新版、により従来の薬剤として処方および投与されることがある。適切な組成物は従来の非毒性固体担体、例えば、マンニトール、ラクトース、でん粉、ステアリン酸マグネシウム、炭酸マグネシウム、などの薬品グレード（ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　ｇｒａｄｅｓ）の固体組成物含有する。

液体組成物もまた、緩衝液、リンガ−液、ハンクス液などの液に、本発明の阻害剤を溶解あるいは分散するのに使われる。

座薬処方は例えば、プロピレングリコールのようなポリアルキレングリコール、あるいは他の適切な担体を用いる。組成物は少量非毒性補助剤、例えば、酢酸ナトリウム、モノラウリン酸ソルビタン、オレイン酸トリエタノールアミンなどの加湿剤あるいは乳化剤、ｐＨ緩衝剤液などを含んでもよい。

本発明の阻害剤は注射、例えば皮下の、筋肉内あるいは静脈注射により非経口的に投与され、あるいは全身的投与法を用いて投与される。あるいは座薬により投与、または経口投与される。処方は投与方法によって改変される。

適切な投与量は普通のヒト患者の場合、１日当りミリグラムルブラム範囲、あるいは動物一般の場合■／ｋｇ範囲である。

本化合物は、比較的に非毒性であり、高い排泄率を有するので比較的に多量を必要とする。個人のそれぞれの適切な投与量は、特定条件に従った投与を工夫するのに、当該分野の公知の基本平均値によって最適化される。最適な投与量は、もちろん、患者の状態と、治療される転移性疾患の性質と、担当医の判断とに依存する。何日間か何週間の比較的長期間の投薬も、転移の典型的な状態である一般の自己再生の場合に必要である。従って、無期限反復投薬９例えば、糖尿病のインシュリン投与に類似する投与は、多くの場合において必要である。

（以下余白）以下に本発明を実施例について、説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。

本化合物の合成は第２図に概説されている。下記に引用される構造は第１図に示されている。

−船方法薄層クロマトグラフィ−（ＴＬＣ）をプレコートしたシリカゲル板（６０−Ｆ　２５４．　Ｍｅｒｃｋ社製）で行い、５％硫酸を含むエタノールをスプレーした後、蛍光クエンチングあるいは焼き付けで、もしくは両方法によって検出した。

記述のない場合は、カラムクロマトグラフィーをシリカゲル６０Ｍｅｒｃｋ　（４０−６３μｍ＞で行った。Ｉａｔｒｏｂｅａｄとはビーズ状シリカゲルであって、（Ｉａｔｒｏｎ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、東京、製品Ｎｎ６ＲＳ−８０６０）製である。ゲル濾過にはパイオーゲルＰ−２（２００〜４００メツシュ）　（Ｂ　ｉ　ｏ−Ｒａｄ　Ｌａｂｏｒａ　ｔｏｒ　ｉ　ｅｓ）を用いた。’Ｈ− ｎ、ｍ、ｒスペクトルはテトラメチルシラン（ＣＤＣ１，中、δ＝０）あるいはアセトン（Ｄａ　Ｏ中、δ＝２．２２５＞のいずれかを内部標準で室温にて、３６０ＭＨｚ　（Ｂｒｕｋｅｒ　ＷＭ−３６０）あるいは３００ＭＨｚ　（Ｂｒｕｋｅｒ　ＡＭ−３００）で記録された。一部のｎ、　ｍ、ｒ、結果だけを示した。他のスペクトルは提案された構造と一致した。’）（−ｎ、　ｍ、ｒ。

の化学シフトおよび結合定数は一桁であったが、示されている。記述のない場合は、全ての反応は室温で行われ、そして反応混合物の処理では、有機溶媒液を当量の水溶液で洗浄した。有機溶媒を硫酸ナトリウムで乾燥してから、水流ポンプで吸引減圧しながら、４０℃もしくはそれ以下の水浴中、ロータリーエバポレターで溶媒を除去した。

次の溶媒系をアルファベットで示す。

Ａ、酢酸エチル−ヘキサン　１　：　４（ｖ／ｖ）　；　Ｂ、酢酸エチル−ヘキサン　２：５；　ｃ、酢酸エチル−ヘキサン　１：２；Ｄ、酢酸エチル−ヘキサン　１：１．；Ｅ、酢酸エチル−トルエン　１：５；　Ｆ、ジクロロメタン−メタノール１５：ｌ；　ｃ、ジクロロメタン−メタノール　９：１；Ｈ，ジクロロメタン−メタノール　６：１；　Ｉ、　ジクロロメタン−メタノール　１０：ｌ　Ｊ、ジクロロメタン−メタノール−水　６０：３５：６ように調製した。

メチル−α−Ｄ−マンノピラノシド３をトリフェニルホスフィンおよびＮ−ヨードコハク酸イミドと反応させ、その粗生成物をアセチル化して、６−ヨード−化合物４を得た（６す、６−ジオキシ−糖を得た（９９％）。これを硫酸処理しトリフルオロメタンスルホン酸銀およびＮ、Ｎ、Ｎ′、Ｎ゛より除き、阻害剤Ｈを得た（９０％）。

実施例■：化合物Ｉ４の合成トリフェニルホスフィン（１３，５０ｇ、５１．５ｍｒｎ。

１）を、冷やしたメチルα−Ｄ−マンノピラノシド３（５゜０ｇ、２５．８ｍｍｏｌ）およびＮ−ヨードコノ１り酸イミド（１１，６ｇ、５１．５ｍｍｏ　＋）のＮ、Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液（２００ｍｌ）に攪拌しながらゆっくり添加した。この溶液を５０℃にて２．５時間加熱した後、メタノールを加え、溶液を濃縮しシロップにした。このシロップをピリジン（１０ｍｌ）中の無水酢酸（１０ｍｌ）と室温にて８時間反応させた後、粗生成物をクロマトグラフィー（溶媒Ａ）δ：　５．３２１　（ｄｄ、ＬＨ，Ｊ、、、＝３．５Ｈｚ、　Ｊ、、、＝１０，０ｆｌｚ、　Ｈ−３）、　５．２２４ｄｄ、　ＩＨ，Ｊｌ、２＝２．ＯＨｚ、　ｆｌ−２）、　５．１１８　（ｄｄ、　Ｉｌｌ、　Ｊ４．−＝１０．ＯＨ２゜Ｌ４）、４．７３７　（ｄ、ＩＨ，Ｈ−１）、３．４８４　（ｓ、３Ｈ，− ロＣＨ，）。

媒Ｅ）およびラネーニッケｆｉｖ　（１，２０ｇ、２０．　７２ｍｍｏ＋）のメタノール溶液（４０ｍｌ、酢酸ナトリウム０．８５ｇ、１０．４ｍｍｏ　１を含む）を水素ガス中（１気圧）で、１６時間攪拌した。触媒を濾過で除き、濾液を減圧濃縮した。

残留物をジクロロメタン（１００ｍｌ）で溶かし、水で洗浄して乾燥し、そして蒸発して、５　＜Ｒｒ　Ｏ，２５，溶媒Ｅ）を白色固体（１，５５ｇ、９８％）として得た。’　Ｈ−ｎ、　ｍ、ｒ。

（ＣＤＣＩ、）δ：　５．２８７　（ｄｄ、　ＩＨ，Ｊ、、、＝３．５ｔｌｚ、　Ｊ、、、＝１０．０Ｈｚ、　ｔｌ−３）。

５．２３７　（ｄｄ、　ＩＨ，Ｊ、、２＝１．７Ｈｚ、　Ｈ−２）、　５．０７０　（ｄｄ、　ＩＨ，Ｊ４，５＝１０、Ｏｆ！ｚ、　Ｈ−４）、　４．６３Ｈｄ、　ＩＨ，ｔｌ−１）、　３．８５９（ｍ、　ＩＨ，Ｈ−５）、　３．３９０（ｓ、　３１（、−０ＣＨ３）、　２．１５７．２．０５１．および１．９９０　（ｓ、　３ｔｌ、　−ＣＯＣｔｌ−）濃硫酸（４４μｌ）の無水酢酸溶液（０，８３ｍ１＞をΣ（１，０２ｇ、３．３５ｒｎｍｏｌ）（Ｒｒ　０．３３．溶媒Ｃ）の無水酢酸溶液（４，０ｍ１）に、０℃にて滴加した。次に混合物を室温にて３０分攪拌した。この溶液を、ジクロロメタン（１００ｍｌ）と水冷飽和炭酸水素す）　ＩＪウムの混合液に攪拌しながら注いで、その得られた混合物を室温にて３０分攪拌した。有機相と水相を分離し、水相をジクロロメタン（２５ｍｌｘ２回）で抽出した。ジクロロメタン溶液を集め、飽和炭酸水素す）ＩＪウム溶液および水で洗浄してから濃縮した。残留したシロップをクロマトグラフィー（溶媒Ａ）で精製し、６　（Ｒ，０，２７，溶媒Ｃ）をシロップ（２，２２ｇ。

９０％）として得た。’Ｈ−ｎ、ｍ、ｒ、スペクトルは１０：１に近いα／β比を示した。’Ｈ−ｎ、ｍ、ｒ、（ＣＤＣＩｓ）δ：６，０２０（ｄ、　Ｊ、、２＝２．０Ｈｚ、　Ｈ−１α）、　５．８４１　（ｄ、Ｊ＝１．３ｔｌｚ、　１（ −１β）、　５．３１１（ｄｄ、　Ｊ、、３＝３．５Ｈｚ、　Ｊ、、、＝１０．０Ｈｚ、　Ｌ：ｂｒ）、　５．２５４　（ｄｄ、　Ｈ−２α）。

５．１２７　（ｄｄ、　Ｈ，、、＝１０．ＯＨｚ、　Ｈ−４α）、　２，１７４．２，１６４．２．０７０゜および２．０１１　（ｓ、　３ｔｌ、　ＣＤＣＩ（ｓ）、１．２４１　（ｄ、　３Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ。

ン（２５ｒｎｌ）で溶かした。この溶液に３３％臭化水素の酢酸溶液（４，０ｍｌ、３％無水酢酸を含む）を０℃にて攪拌０、　３８．溶媒Ｃ）に完全に変換するのをＴ、Ｌ、　Ｃで検出するまでさらに３時間、攪拌し続けた。混合物をジクロロメタン（５０ｍｌ）で希釈し、そして氷水、飽和炭酸水素ナトリム溶液、および氷水の順で洗浄し、さらに乾燥および蒸発した。トルエン（２ｍｌＸ３回）を添加してから再び蒸発し、粗生成物７をシロップ（Ｈ−１，δ６．２６０．Ｊ、、、−２．０Ｈｚ）として得た。本シロップをクロロホルム（１０ｍ　ｌ　）およびメタノール（６，１２ｍ１）に溶かしてから、２．６−ルチジン（０，８８ｍ１）を加えた。室温にて２時間放置後、得られた混合液をジクロロメタン（５０ｍｌ）で希釈し、氷水で２回洗浄し、乾燥してシロップまで濃縮した。

して算出６５％）として得た。’ｆｌ−ｎ、ｍ、ｒ、（ＣＤＣＩ３）　δ：５．４２４（ｄ、　］、Ｈ，Ｊ、、２＝２．５Ｈｚ、　ｆｌ−１）、　５．０６７（ｍ、　２Ｈ，Ｈ−３およびＨ−４）　。

４．６００　（ｄｄ、　Ｉｆｔ、　Ｊ、、３＝３．５Ｈｚ、　Ｈ−２）、　３．２７４（ｓ、　３Ｈ，−０ＣＲ−）。

２、１２１および２．０６４　（ｓ、　３Ｈ，−ＣＯＣＨ−）、　１．７３４　（ｓ、　３Ｈ，−ＣＤ５）。

１．２３７　（ｄ、　３Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ、　ｆｌ−６）。

化合物８　（３８５ｍｇ、ｉ、２７ｍｍｏ＋）を、少量のメトキシ化ナトリウムを含む乾燥メタノール（２，０ｍ１）で溶かした。４５分放置後、溶媒を蒸発して、９　（Ｒ，０，５５゜溶媒Ｈ）をシロップ（２６８ｍｇ、９６％）として得た。本シロップを特徴決定は、さらに行わなかった。０℃にて９（２６８ｍｇ、１．２３ｍｍｏｌ＞（Ｒｒ　０．０３．溶媒Ｄ）の乾燥ジメチルホルムアミド（１，０ｍ１）溶液を、攪拌している水素化ナトリウム＜８８ｍｇ、３．６５ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（１，０ｍ１）溶液にゆっくり加えた。

反応混合物の温度を０℃〜５℃範囲内に保ちながら、臭化ベンジル（０，４３ｍ１．３．６５ｍｍｏｌ）をゆっくり添加した。この混合物を室温にて１７時間放置後、メタノールの添加により過剰の水素化ナトリウムを分解した。反応混合物をジクロロメタンで希釈し、水で洗浄、乾燥して濃縮した。

残留シロップをクロマトグラフィー（溶媒Ａ）で精製し、１０（Ｒｒ　ｏ、５２．溶媒Ｄ）を白色粉体（３３１ｍｇ、６８％）として得た。１Ｈ−ｎ、ａ＋、ｒ、（ＣＤＣＩ−）δ：　７．４２０−７．２６０　（ａ＋、　１０■、芳香族性）、　５．２８７　（ｄ、　ＩＩＩ、　Ｊ、、、＝２．０）１ｚ、　Ｉ（−１）、　４．３８４　（ｄｄ。

ＩＨ，Ｊｚ、ｓ＝４．０Ｈｚ、　Ｈ２）、　３．６８９　（ｄｄ、　ｌｔｌ、　Ｊ−，４・９．０Ｈｚ、　Ｈ３）。

３．４８９　（ｄｄ、　ＩＨ，Ｊ４．ｓ＝９．０Ｈｚ、　Ｈ−４）、　３．３２７　（ｍ、　ＬＨ，Ｈ−５）。

３．２８９（ｓ、　３Ｈ，ＱＣ）Ｉ−）、　１．７４０（ｓ、　３Ｈ，−ＣＨ− ）、　１．３２　（ｄ、　３Ｈ，Ｊ＝６、ＯＨｚ、　Ｈ−６）。

１０　（２１３ｍｇ、０．５．３ｍｍｏｌ＞（Ｒｒ　Ｏ，３８゜溶媒Ｃ）の乾燥ジクロロメタン（１，０ｍ１）溶液に、クロロトリメチルシラン（０，１２２ｍ１．０．９６ｍｒｎｏ＋＞を窒素雰囲気下で滴加した。１５分後、Ｔ、Ｌ、　Ｃ，により出発基質が完全に消費されたことが示された時、溶媒を蒸発してからトルエン（２ｍｌＸ３回）と共に蒸発して、１１　（Ｒ，０，５０，溶媒Ｃ）を得た。これをさらに特徴づけしな０．４５．溶媒Ｃ）およびトリフルオロメタンスルホン酸銀（０，１３４ｇ、０．５２ｍｍｏｌ）の混合物を五酸化リン上で、減圧乾燥した。乾燥ジクロロメタン（１，０ｍ１）を加え、次にＮ、　Ｎ、　Ｎ’ 、　Ｎ’テトラメチルウレア（８０μｌ。

０．６９ｍｍｏ　Ｉ　）を加えて、混合物を０℃にて攪拌した。

１１　（０，２１ｇ、　０．６９ｍｍｏｌ＞　（Ｒｒ　０．５２．溶媒Ｃ）の乾燥ジクロロメタン（１，０ｍ　ｌ　）溶液を前記の混合物に加えた。１．５時間後、混合物を室温まであたためてからジクロロメタン（１０ｍｌ）で希釈した。

ｓｙｍ−コリジン（６０μｌ）、次にトリフルオロメタンスルホン酸銀（０，１３０ｇ）を加えて、過剰の１１を分解した。０．５時間後、臭化テトラエチルアンモニウム（１００ｍｇ）を加えて、過剰の銀を沈澱させた。銀を濾過で除き、ジクロロメタン（２５ｍｌ）で洗浄した。蒸発およびクロマトグラフィー（溶媒Ａ）による精製の前に、濾液を飽和重炭酸す）　ＩＪウム（５０ｍｌ）で２回および水（５０ｍｌ）で２回洗浄した。

三糖１２　（Ｒ，０，５７，溶媒Ｃ）を白色固体（０，２６７ｇ、６３％）として得た。’Ｈ−ｎ、ｍ、ｒ、（ＣＤＣＩｓ）δ：　７．３６０−７゜２００　（ｍ、　２５Ｈ，芳香族性）、　５．４３９　（ｄｄ、　ＬＨ，Ｊｌ、ｚ・＝２．０１’ｌｚ。

Ｊ２−、、・−３，５ｆｌｚ、　１１−２’）　、　４．７８７　（ｄ　、　Ｈ −１’）、　４．３６０　（ｄ、　ＬＨ，Ｊ＋、ｚ＝７．８Ｈｚ、　）Ｉ−１）、　２．１４７（ｓ、　３Ｈ，−ＣＯＣＨｓ）、　１．２５０ｄ、　Ｊ＝６．０Ｈｚ、　Ｈ−６°＞、　０．８６７　＜ｔ、　３Ｈ，Ｊ＝６．８１（ｚ、　−Ｃ）１．）。

化合物１２　（２６７ｍｇ、０．２８７ｍｏｌ）（Ｒ，０゜５７、溶媒Ｃ）を、少量のメトキシ化す）　ＩＪウムを含む乾燥メタノール（５ｍｌ）で溶かした。

５時間後、反応液をＡｍｂｅｒｌｉｔｅ　ＩＲ−１２０（Ｈ’）樹脂により中性化させ、濾過し、蒸発した。残留物を、３：１ヘキサン−酢酸エチルを溶離液として用いて、クロマトグラフィーを行い、１３（Ｒ，０，３４，溶媒Ｃ）を白色固体（０，２４０ｇ、９４％）として得た。’Ｈ−ｎ、ｍ、ｒ、（ＣＤＣＩ３）　δ：　７．３７−７．２０　（ａ＋。

２５Ｈ９芳香族性＞、　４．８５４　（ｄ、　ＩＨ，Ｊ＝２．０Ｈｚ、　Ｈ−１＞、　４．３６０　（ｄ。

ＬＨ，Ｊ＝７．８Ｈｚ、　Ｈ−１）、　３．８０４　（ｄｄ、　ＩＨ，Ｊ、１．、、＝３．５Ｈｚ。

Ｊ、・、、−＝９．５Ｈｚ、　）Ｉ−３’）、　２．４２７　（ｄ、　ＩＨ，ＪｏＮ＋２’　＝２．０Ｈｚ、　ＯＨ）。

１．２４４　（ｄ、　３０．　、Ｉ＝６．０Ｈｚ、　Ｈ−６’）、　０．８６７　（ｔ、　３Ｈ，Ｊ＝７Ｈ２，ＣＨ３）。

１３　（２０５ｍｇ、０．２３１ｍｍｏ＋＞（Ｒ−０，５３゜溶媒Ｄ）の乾燥ジクロロメタン（４，０ｍ１）溶液に、トリフルオロメタンスルホン酸銀（５８４ｍｇ、２．３１ｍｍ。

１）と、ｓｙｍ−コリジン（０，３１ｍ１．２．３１ｍｍ。

ｌ）と、４°Ａ分子ふるい（１，０ｇ）とを加え、得られた混合物を一５０℃まで冷やした。さらに、ブロモ化合物１４（１１５ｍｇ、０．　２３１ｍｍｏ　！＞　（Ｒ＝　０．　３１．溶媒Ｄ）の乾燥ジクロロメタン溶液（４，０ｍ１）を加え、−５０℃にて１５分放置した後、反応混合物を室温まで１時間かけてあたためた。Ｔ、Ｌ、　Ｃ，は約２５％の未反応の１３が存在することを示した。反応混合物をさらに一５０℃まで冷や０、　２３１ｍｍｏ　Ｉ＞をさらに加えた。

１５分後、混合物を室温まであたため、室温にて１時間さらに放置した。反応混合物をジクロロメタン（５０ｍｌ）で希釈し、セライトに通して濾過した。濾液を氷水と、冷ＩＮ塩酸と、飽和炭酸水素ナトリウムと、最後に水の順で洗浄した（各５０ｍ１＞。溶媒を蒸発し、残留物を１ａｔｒｏｂｅａｄｓのクロマトグラフィー（溶媒Ｂ）を用いて精製し、三糖１５　（Ｒ，０，４８゜溶媒Ｄ）をシロップ（１２０ｍｇ、５８％）として得た。′Ｈ−ｎ、ｓ、ｒ、（ＣＤＣＩｓ）δ ：　７．３９−７．１２　（ｍ、　２９Ｂ、芳香族性）、　５−８８７（ｄｄ、　ＩＨ，Ｊｉ・、ｓ、＝９．５Ｈｚ、　Ｊｌ９，４・＝１０．５Ｈｚ、　Ｈ−３ ′’）、　５．４５１（ｄ、　ＩＨ，Ｊｌ・・、　ｘ、、＝８．５Ｈｚ、　ト１ °’）、　２．０８７．２−０５４．および１．９００　（各々、　ｓ、　３Ｈ，ＣＤＣＩ−）、　０．８７４　（ｔ、　３Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ、　Ｃｌ５）、０．５２４　（ｄ、　３Ｈ，ｊ＝６．０Ｈｚ、　Ｈ−６′）。

１５　（１０７ｍｇ、０．０８１ｍｍｏ＋）（Ｒｆｏ、４８゜溶媒Ｄ）およびヒドラジン水和物（０−４０ｍ１．８．１ｍｍｏ＋）の混合物を乾燥メタノール（５，０ｍ１）中、５時間還流した。反応混合物を乾燥し、残留物をピリジン（２，Ｏｍ＋）で溶かして、無水酢酸（２，０ｍ１）を加えた。１６時間攪拌した後、０℃にて反応混合物にエタノール（１０ｍｌ）を滴加して過剰の無水酢酸を分解した。溶媒を蒸発し、残留物をジクロロメタン（５０ｍｌ）で溶かした。５％塩酸と、飽和重炭酸す）　ＩＪウムと、水とで洗浄したく各５０ｍ１）。溶媒を蒸発し、化合物をクロマトグラフィー（溶媒Ｄ）により精製し、１６　（Ｒｒ　ｏ、２８．溶媒Ｄ）をシＯ−７ブ（８９ｍｇ、８９％）として得た。’Ｈ−ｎ、ｍ、ｒ、（ＣＤＣｌａ）δ：　７．３ｇ　−７゜１４　（ｍ、　２５Ｈ，芳香族性）、　５．０６４（ｄｄ、　ＩＨ，Ｊ＝９．５．１０．５Ｈｚ、Ｈ−４”）、　４．７６０　（ｄ、　ｌｔｌ、　Ｊｌｌ、２・＝２．０Ｈｚ、　ト１’）、４．３８４　（ｄ、　ＩＨ。

Ｊ、９，２−＝８．０Ｈｚ、　ト１）、　２．０３７　（ｓ、　６Ｈ，２ｘＣＯＣＨ，）、　２．０３１　（ｓ。

３Ｈ，ＣＤＣＩｓ）、１．９１１　（ｓ、３Ｈ，ＮＣ口ＣＨｓ）、　１．１５７　（ｄ、３Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ、Ｈ−６°）、０．８７０　（ｔ、３Ｈ，Ｊ＝７．ＯＨｚ、ＣＨ−）。

溶媒Ｇ）をシロップ（２８ｍｇ、７０％）として得た。シロップの特徴付はしなかった。

化合物１７　（２８ｍｇ、０．０２６ｍｍｏｌ）（Ｒ。

０．７３．溶媒Ｊ）を９８％エタノール（４，０ｍ１）で溶かし、５％パラジウム−活性炭（２８ｍｇ）を加えた。混合物を一気圧の水素ガス雰囲気下で１７時間攪拌した。触媒を濾過して除き、溶媒を蒸発した後、残留物をバイオ−ゲルＰ２カラム（２，５ｃｍＸ４７　ｃｍ）にかけて、１０％エタノール水溶液を溶離液として用いた。糖質を含む両分を集め、濃縮し、凍結乾燥して、Ｈ（Ｒｔ　Ｏ，２７，溶媒Ｊ）を白色粉体（１４ｍｇ、８５％）として得た。’Ｈ−ｎ、ｍ、ｒ、（Ｄ＊０）δ：　４．７９　（Ｈ−１°、　１１０ロシグナルで不明瞭である）、　４．４９７および４．３９９　（各々ｄ、　ＩＨ，Ｊ＝８．２および７．８Ｈｚ、　Ｈ−１およびＨ−１”）。

４．０７２　（ｄｄ、　ＩＨ，Ｊ、・、２−＝１．７．　Ｊｓ−、ａ・”３．５Ｈｚ、　Ｈ−２°、δ４．７９の照射でデカップルした）、　１．９９４　（ｓ、　３Ｈ，ＮＣ０ＣＨ−）、　１．２０４（ｄ、　Ｊｓ＋、５−＝６．１Ｈｚ、　Ｈ−６’）　０．８０６　（ｔ、　３Ｂ、　Ｊ＝７．０１ｌｚオクチルＣＨｓ）。

ＧｎＴ−Ｖ活性に対する阻害剤の効果ＧｎＴ−Ｖ活性の測定方法は、上記のＴａｈｉｒ、　Ｓ、　Ｈ，ら、Ｃａｎ　Ｊ　Ｃｈｅｍ　（１９８６）　６４：１７７１に記載されていて、ここに参考文献として加えている。

本方法はＰａ１ｃｉｃ、　Ｍ、Ｍ、ら（Ｐａｌｃｉｃ、　Ｍ、Ｍ、ら、Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ　Ｊ両者はここで参考文献として引用される。後者の２報の引用文献は種々の合成受容体を用いた測定の結果を記述している。

Ｐａ１ｃｉｃの報文は合成三糖β−ＧｌｃＮＡｃ　（１−２）−ａ−Ｍａｎ　（１−６）−β−Ｍａｎ（ヘミアセタール水酸基によって８−メトキシカルボニルオクチルと結合している）がすぐれたＧｎＴ−Ｖの受容体であり、見かけＫｍ値が８０ＨＭであることを示している。受容体と供与体β−ＧＩｃＮＡｃとの生成物の構造は、供与体のβ−ＧｌｃＮＡｃと受容体のα−マンノースとの間が１− ６分枝であるとの確認が後者の引用文献に示された。

上記のＰｉｅｒｃｅの報文に発表された測定方法を用いた測定により、三糖のβ −Ｇ１ｃＮＡｃ　（１−２＞−６−ジオキシ−ａ−Ｍａｎ　（１−６）−β−Ｇｌｕの配置的に制限されたアナローブ、つまりグルコピラノシド残基の６−メチレン基のｐｒｏＲ位にある水素原子の一原子が６−Ｃ−メチル基で置換されたアナローブはＫｍ値が７５μＭであり、そして、Ｖｍａｘがメチル化されていないＴナローグの３倍であることが示された。ＰｒｏＳがメチル化された該当化合物は受容体としての効果がより小さかった。

測定に対する本発明の種々の阻害剤の効果が５ｒｉｖａｓｔａｖａ。

０、Ｐ、ら、Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ　Ｒｅｓ　（１９８ｇ）　１７９：１３７−１６１の方法に従って調べられた。本測定方法は３７℃にて４時間反応を行うこと以外、基本的に上記の測定方法と同様である。ＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃの濃度は２μＭであり、総量の２０μｍ中での比活性が３．　１　ｘ　１０’　ｃ　ｐｍ／ｐｍｏ　ｌ　ｅであった０インキユベ一シヨン混合物の総タンパク質濃度は、ＢＳＡをスタンダードとして用いたＢｒａｄｆｏｒｄ測定により、８２μｇ７２０μｌとめられた。

本測定の受容体として、オクチル−β−ＧＩｃＮＡｃ　（１−２）−ａ　−Ｍａｎ　（１−６）−β−Ｇｌｕを８０ＨＭ用いた。

実施例１で調製された化合物、オクチル−β−ＧｌｃＮＡｃ（１−２）−６−ジオキシ−ａ−Ｍａｎ　（１−６＞−β−Ｇｌｕを用いた場合、その結果は下記に示される。

（以下余白）表１阻害剤（μＭ）　比活性［ＧＩｃＮＡｃ　（ｐｍｏｌ）／ｍｇタンパク〕表１に示されるように、受容体に対する当モル濃度の阻害剤は酵素を７５％阻害する。これらの結果に基いて計算されたＫｉ値は約１０μＭである。

本阻害剤はＧｎＴ−Ｖに特異的であった。ウサギ肝臓のアセトン粉末のトリトンｘ−ｉｏｏの抽出物のＧｎＴ−１活性を、ａ−Ｍａｎ　（１−３）　−Ｃａ−Ｍａｎ　（１−６））−β−Ｍａｎの８−メトキシカルボニルオクチル誘導体を用いて測定した場合、５０００μＭの濃度でも阻害が得られなかった。８−メトキシカルボニルオクチルβ−ＧｌｃＮＡｃ（１−２）−ｃｒ−Ｍａｎ　（１−３）Ｃａ−Ｍａｎ　（１−６）　〕−β−Ｍａｎを受容体として用いたＧｎＴ−ｎの活性測定から同様の結果が得られた。

の主な障害は、薬剤が影響を及ぼす代謝を有する細胞へ透過できないことである。多くの場合、細胞膜の透過は、特定の受容体機構に介される。他の場合、例えば本発明の化合物の場合、化合物の性質は細胞膜を非特異的に透過できるような性質である。下記の実施例は、本発明の化合物の性質を有する化合物が細胞膜を透過することを証明する。モデル化合物は、ＧｎＴ−１の基質である８−メト本ジカルボニルオクチル三糖である。

Ｌｅｃ５細胞（２Ｘ１０’細胞１０．２５ｍ１）をシクロへキサミドと２時間ブレインキュベートした。ＧｎＴ−Ｉ反応の受容体である８−メトキシカルボニルオクチル三糖を３００ｍＭ加えて、反応混合物を３７℃にてゆるやかに振盪しながらインキュベートした。指定時間に、各チューブ内にある細胞を遠心分離し、上清を取って５ｅｐ−Ｐａｋ　Ｃ１８カラムにかけた。カラムを水で洗浄し、メタノールで溶離した。

メタノール溶離物を乾燥した。その残留物に、１０ｍＭのＭ　ｎ　”　”および５ミリユニツトのガラクトシルトランスフェラーゼと一緒に５００ｍＭの１０００　ｃ　ｐｍ／ｐｍｏ　１の重水素ラベルＵＤＰ−Ｇａ　Ｉを加えた。３７℃にて６時間、ガラクトシルトランスフェラーゼによる触媒のあらゆる反応が完全に反応するのに十分な時間インキュベートした後、インキコベーション混合物をＣＩ８カラムにもう一度かけ、洗浄し、そしてメタノールで溶離した。メタノール溶離物をンンチレンヨンカウンティングした。その結果が表２に示される。

ゑ　２本測定は、三糖受容体がＧｎＴ−１の作用によって先ず細胞内で延長されなければ、三糖受容体が（ＩＤＰ−Ｇａ　Ｉからのガラクトース残基を受容する能力がないということに基づいた測定法である。この結果により、３時間インキュベーシ冒ン後には、三糖受容体がある程度細胞内に入り、そして６時間後には大部分が細胞内に入って、そしてこの三糖受容体が細胞内酵素のＧｎＴ−１および細胞内のＧ１ｃＮＡｃ供与体によって、ガラクトシルトランスフェラーゼの四糖受容体に変換されたことが示される。

（以下余白）１：　Ｒ，＝Ｈ，Ｒよ＝８　３：　Ｒ，＝ＯＭｅ、　Ｒ２＝＝Ｈ，Ｒ，＝Ｈ，Ｒ４＝ＯＨ２：　Ｒ，＝Ｂｎ、　Ｒ，＝Ｈ４：　Ｒ，＝ＯＭｅ、　Ｒ２＝Ｈ，Ｒ３＝Ａｃ、　Ｒ４＝１５：　Ｒ，＝ＯＭｅ、　Ｒ２＝Ｈ，Ｒ３＝Ａｃ、　Ｒ４＝Ｈ６：　Ｒ，、Ｒ２＝Ａｃ、　ＲＪ＝Ａｃ、　Ｒ４＝Ｈ７：　Ｒ，＝Ｂｒ、　Ｒ２＝Ｈ，Ｒ３＝Ａｃ、　Ｒ４＝Ｈ８：　Ｒ＝Ａｃ　ｌ” ９・Ｒ＝Ｈ１０’　””’　ＦＩＧ、　ＩＡ１２：　Ｒ＝Ａｃ１３：　Ｒ＝Ｈ１５：　Ｒ１＝Ｂｎ、　Ｒ，＝Ｐｈｔｈ、　Ｒ，＝Ａｃ１６：　Ｒ，＝Ｂｎ、　Ｒ２＝Ｈ，Ａｃ、　Ｒ３＝Ａｃ１７：　Ｒ，＝Ｂｎ、　Ｒ２＝Ｈ，Ａｃ、　Ｒ３＝ＨＨ：　Ｒ，＝Ｈ，Ｒ２＝Ｈ，Ａｃ、　Ｒ３＝ＨＦＩＧ、　ＩＢ用ＷＸｗ１１審謡失一呻一−ａ−ｍ紳１．　ＰＣｒ１０５８９１０５３４９””−−−−”ｍ０’− ””、ＰＣｒ／ＵＳ８９１０５３４９

Claims

【特許請求の範囲】

１．ＧｎＴ−Ｖの触媒反応における、ＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃからのβ−ＧｌｃＮＡｃの受容体として有用な化合物であって、次式（１）を有する化合物： β−ＧｌｃＮＡｃ（１−２）α−Ｍａｎ（１−６）Ｘ（１）ここでｘは、８−メトキシカルボニルオクチルβ−Ｍａｎであり得ないという条件下において、グリコピラノースあるいはその誘導体である。
２．ｘがβ−グルコピラノースあるいはその誘導体である、請求項１に記載の化合物。
３．下記式でなる群から選択される、請求項１に記載の化合物：Ｙ６−Ｏ−［２−Ｏ−（２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−α−Ｄ−マンノピラノシル］−β−Ｄ−グルコピラノシド；Ｙ６−Ｏ −［２−Ｏ−（２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル） −α−Ｄ−マンノピラノシル］−４−デオキシ−β−Ｄ−キシローヘキソピラノシド；Ｙ６−Ｏ−［２−Ｏ−（２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−α−Ｄ−マンノピラノシル］−４−Ｏ−メチル−β−Ｄ−グルコピラノシド；Ｙ６−Ｏ−［２−Ｏ−（２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−α−Ｄ−マンノピラノシル］−７−デオキシ−α−Ｌ−グリセロ−Ｄ −グルコーヘプトピラノシド；Ｙ５−Ｏ−［２−Ｏ−（２−アセトアミド−２−デオネシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−α−Ｄ−マンノピラノシル］−７−デオキシ−β−Ｄ−グリセローＤ −グルコーヘプトピラノシド；およびシクロヘキシルメチル６−Ｏ−［２−Ｏ− （２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−α−Ｄ−マンノピラノシド］；ここでＹは、環水性置換基を示す。
４．サンプルのＧｎＴ−Ｖレベルを測定する方法であって、サンプルに、測定された量の請求項１に記載の化合物を添加すること、およびＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃから、請求項１に記載の化合物である受容体に転移された β−ＧｌｃＮＡｃの量を測定すること、を包含する、方法。
５．ＧｎＴ−Ｖの阻害剤であって、下記式を有する化合物；β−ＧｌｃＮＡｃ（１−２）α−６−デオキシ−Ｍａｎ（１−６）Ｘ（２Ａ）４−フルオロ−β−ＧｌｏＮＡｃ（１−２）α−６−デオキシ−Ｍａｎ（１−６）Ｘ（２Ｂ）、あるいは、４−デオキシ−β−ＧｌｃＮＡｃ（１−２）α−６−デオキシ−Ｍａｎ（１−６）Ｘ（２Ｃ）；ここでＸは、β−グリコピラノースあるいはその導導体であって、該Ｘは式（２Ａ）〜（２Ｃ）で示される化合物のＧｎＴ−Ｖの阻害剤としての能力に実貧的に影響を与えない。
６．Ｘが下記式でなる群から選択される、請求項５に記載の化合物；Ｙβ−Ｄ−グルコピラノシド；Ｙβ−Ｄ−マンノピラノシド；Ｙ４−デオキシ−β−Ｄ−キシロ−ヘキソピラノシド；Ｙ４−Ｏ−メチル−β− Ｄ−グルコピラノシド；Ｙ７−デオキシ−α−レグリセロ−Ｄ−グルコーヘプトピラノシド；およびＹ７−デオキシ−β−Ｄ−グリセロ−Ｄ−グルコーヘプトピラノシド；ここでＹは、疎水性置換基であって、３〜２０Ｃのヒドロカルピルでなる群から選択され、該ヒドロカルピルは置換されていないか、もしくは１から２個のアルコキシ（１−４Ｃ）あるいはアルコキシカルボニル（２−５Ｃ）置換基で置換きれている。
７．多種のＧｎＴ酸素および多種のＧｎＴ受容体を含有するサンプルにおけるＧｎＴ−Ｖのレベルを測定する方法であって、該サンプルを、糖質供与体ＵＤＰ− ＧｌｃＮＡｃの存在下で、インキュベートすること、および請求項５に記載の化合物の存在下および不在下において受容体へ転移されたＧｌｃＮＡｃの量を比較すること、を包含する、方法。
８．転移性細胞を有する被検者における転移を阻害する方法であって、そのような処置を必要とする被検者に、有効量の請求項５に記載の化合物あるいはその薬剤組成物を投与することを包含する、方法。
９．転移を阻害する薬剤組成物であって、活性成分として１種あるいはそれ以上の請求項５に記載の化合物を適切な薬剤担体とともに含有する、組成物。
１０．α−Ｌ−レフコシルトランスフェラーゼの活性を阻害するのに有用な化合物であって、次式（３）で示される化合物：２−デオキシ−β−Ｇａｌ（１−４）β−ＧｌｃＮＡｃ−ＯＹ（３）ここでＹは、請求項６で定義したとおりである。