CN1379772A

CN1379772A - 用于调制NFκB活性的取代的吲哚

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Publication number: CN1379772A
Application number: CN00814472A
Authority: CN
Inventors: O·里特采勒; H·U·斯蒂尔兹; B·奈塞斯; G·珍尼; J·哈伯曼
Original assignee: Aventis Pharma Deutschland GmbH
Current assignee: Sanofi Aventis Deutschland GmbH
Priority date: 1999-10-26
Filing date: 2000-10-17
Publication date: 2002-11-13
Anticipated expiration: 2020-10-17
Also published as: DE50015700D1; ATE437867T1; BR0015026A; ES2329871T3; NO20021808L; US20040209868A1; CY1110521T1; YU21702A; RS50424B; EP1261601A1; NO323952B1; US20050282866A1; AU1272801A; JP2003519101A; MXPA02003998A; IL149272A0; ZA200203204B; NO20021808D0; TR200201144T2; SK5432002A3

Abstract

本发明涉及适合于制备药物的式(I)化合物,该药物用于预防和治疗NFκB活性增加与其过程有关的疾病状态。这些化合物是特异性IκB激酶抑制剂。

Description

用于调制NFκB活性的取代的吲哚

本发明涉及新颖的取代的吲哚、它们的制备方法和它们作为药物的用途。

专利申请WO 94/12478描述了抑制血小板聚集的吲哚衍生物。

NFκB是杂二聚的转录因子，它能够激活大量编码促炎细胞因子的基因，例如IL-1、IL-2、TNFα或IL-6。NFκB存在于细胞的胞液中，与其天然存在的抑制剂IκB复合。细胞例如被细胞因子刺激，引起磷酸化作用和随后的IκB的蛋白分解降解作用。这种蛋白分解降解作用引起NFκB的活化，后者随后移行至细胞核内，在那里激活大量促炎基因。

在诸如类风湿性关节炎(在炎症的情况下)、骨关节炎、哮喘、心肌梗塞、阿尔茨海默氏病或动脉粥样硬化等障碍中，NFκB被超出正常程度地激活。NFκB的抑制在癌症疗法中也是有益的，因为它被用于细胞生长抑制疗法的强化。有可能显示诸如糖皮质激素、水杨酸盐或金盐等用在风湿病疗法中的药物以抑制性方式干涉NFκB-激活信号链的不同点，或者直接干扰基因的转录。

所述信号级联的第一步是IκB的降解。这种磷酸化作用受到特异性IκB激酶的调节。迄今已知没有抑制剂特异性地抑制IκB激酶。

在获得治疗类风湿性关节炎(在炎症的情况下)、骨关节炎、哮喘、心肌梗塞、阿尔茨海默氏病、癌性障碍(细胞毒性疗法的加强)或动脉粥样硬化的活性化合物的努力中，现已发现根据本发明的吲哚衍生物是IκB激酶的有力的和非常特异性抑制剂。

本发明因此涉及式I化合物

和/或式I化合物的立体异构形式和/或式I化合物的生理学上可接受的盐，其中取代基R¹、R²、R³和R⁴之一是式II基团

其中

D是-C(O)-、-S(O)-或-S(O)₂-，

R⁷是氢或-(C₁-C₄)-烷基，

R⁸是R⁹或氨基酸的特性基团，

R⁹是1.芳基，其中的芳基是未取代的或取代的，

2.具有5至14个环成员的杂芳基，其中的杂芳基是未取代或取代的，

3.具有5至12个环成员的杂环，其中的杂环是未取代或取代的，或

4.-(C₁-C₆)-烷基，其中的烷基是直链或支链的，并且是未取代的或者彼此独立地被下列取代基单-、二-或三-取代：

4.1芳基，其中的芳基是未取代或取代的，

4.2具有5至14个环成员的杂芳基，其中的杂芳基是未取代或取代的，

4.3具有5至12个环成员的杂环，其中的杂环是未取代或取代的，

4.4-O-R¹⁰，

4.5＝O，

4.6卤素，

4.7-CN，

4.8-CF₃，

4.9-S(O)_x-R¹⁰，其中的x是整数0、1或2，

4.10-C(O)-O-R¹⁰，

4.11-C(O)-N(R¹⁰)₂，

4.12-N(R¹⁰)₂，

4.13-(C₃-C₆)-环烷基，

4.14下式基团

4.15下式基团

R¹⁰是a)氢，

b)-(C₁-C₆)-烷基，其中的烷基是未取代的或者彼此独立地被下列取代基单-至三-取代：

1.芳基，

2.具有5至14个环成员的杂芳基，

3.具有5至12个环成员的杂环，

4.卤素，

5.-N-(C₁-C₆)_n-烷基，其中的n是整数0、1或2，烷基是未取代的或者彼此独立地被卤素或-C(O)-OH单-、二-或三-取代，或

6.-C(O)-OH，

c)芳基，

d)具有5至14个环成员的杂芳基，或

e)具有5至12个环成员的杂环，并且

在(R¹⁰)₂的情况下，R¹⁰彼此独立地具有a)至e)含义，

Z是1.芳基，其中的芳基是未取代或取代的，

4.-C(O)-R¹¹，其中

R¹¹是1.-O-R¹⁰，或

2.-N(R¹⁰)₂，或

R⁷和R⁸与它们各自键合的氮原子与碳原子一起构成式IIa杂环

其中D、Z和R¹¹是如式II所定义的，

A是氮原子或基团-CH₂-，

B是氧原子、硫原子、氮原子或基团-CH₂-，

X是氧原子、硫原子、氮原子或基团-CH₂-，

Y是不存在的或者是氧原子、硫原子、sulfoatom或基团-CH₂-，或者

X和Y一起构成苯基、1，2-二嗪、1，3-二嗪或1，4-二嗪基团，

其中由N、A、X、Y、B和碳原子所构成的环系含有不超过一个氧原子，若A是氮原子，则X不是氧原子、硫原子或氮原子，含有不超过一个硫原子，含有1、2、3或4个氮原子，氧与硫原子不同时存在，

其中由N、A、X、Y、B和碳原子所构成的环系是未取代的或者彼此独立地被-(C₁-C₈)-烷基单-至三-取代，是未取代的或者被下列取代基单-至二-取代：

1.1.-OH，

1.2.-(C₁-C₈)-烷氧基，

1.3.卤素，

1.4.-NO₂，

1.5.-NH₂，

1.6.-CF₃，

1.7.亚甲二氧基，

1.8.-C(O)-CH₃，

1.9.-CH(O)，

1.10.-CN，

1.11.-C(O)-OH，

1.12.-C(O)-NH₂，

1.13.(C₁-C₄)-烷氧羰基，

1.14.苯基，

1.15.苯氧基，

1.16.苄基，

1.17.苄氧基，

1.18.四唑基，或

1.19.-OH，

R⁸和Z与它们各自键合的碳原子一起构成式IIc杂环

其中

D、R⁷和R¹⁰是如式II所定义的，

T是氧原子、硫原子、氮原子或基团-CH₂-，

W是氧原子、硫原子、氮原子或基团-CH₂-，

V是不存在的或者是氧原子、硫原子、氮原子或基团-CH₂-，或者

T与V或V与W一起构成苯基、1，2-二嗪、1，3-二嗪或1，4-二嗪基团，

其中由N、T、V、W和两个碳原子所构成的环系含有不超过一个氧原子、不超过一个硫原子和1、2、3或4个氮原子，其中的氧原子和硫原子不同时存在，

其中由N、T、V、W和两个碳原子所构成的环系是未取代的或者彼此独立地被如上1.1.至1.19.下所定义的取代基单-至三-取代，

其他取代基R¹、R²、R³和R⁴彼此独立地是

1.氢，

2.卤素，

3.芳基，其中的芳基是未取代或取代的，

4.具有5至14个环成员的杂芳基，其中的杂芳基是未取代或取代的，

5.具有5至12个环成员的杂环，其中的杂环是未取代或取代的，

6.-(C₁-C₆)-烷基，

7.-CN，

8.-O-R¹⁰，

9.-N(R¹⁰)₂，

10.-S(O)_x-R¹⁰，其中的x是整数0、1或2，或

11.-CF₃，

R⁵是1.氢，

2.-OH，或

3.＝O，

R⁶是1.芳基，其中的芳基是未取代或取代的，

2.具有5至14个环成员的杂芳基，其中的杂芳基是未取代或单-至三-取代的，或

3.具有5至12个环成员的杂环，其中的杂环是未取代或单-至三-取代的。

优选的式I化合物中，

取代基R¹、R²、R³和R⁴之一是式II基团，其中

D是-C(O)-，

R⁷是氢或-(C₁-C₄)-烷基，

R⁸是1.-(C₁-C₄)-烷基，其中的烷基是直链或支链的，彼此独立地被下列取代基单-或二-取代：

1.1具有5至14个环成员的杂芳基，其中的杂芳基是未取代或取代的，

1.2具有5至12个环成员的杂环，其中的杂环是未取代或取代的，

1.3-O-R¹⁰，

1.4-S(O)_x-R¹⁰，其中的x是整数0、1或2，

1.5-N(R¹⁰)₂，

1.6下式基团

1.7下式基团

2.氨基酸的特性基团，

R⁹是1.R⁸，

2.-(C₁-C₄)-烷基，其中的烷基是直链或支链的，彼此独立地被下列取代基单-、二-或三-取代：

2.1芳基，其中的芳基是未取代或取代的，

2.2卤素，

2.3-CN，或

2.4-CF₃，或

3.芳基，其中的芳基是未取代或取代的，

R¹⁰是a)氢，

1.芳基，

2.具有5至14个环成员的杂芳基，

3.具有5至12个环成员的杂环，

4.卤素，

6.-C(O)-OH，

c)芳基，

d)具有5至14个环成员的杂芳基，或

e)具有5至12个环成员的杂环，并且

在(R¹⁰)₂的情况下，R¹⁰彼此独立地具有a)至e)含义，

Z是1.1，3，4-噁二唑，其中的1，3，4-噁二唑是未取代的或者被-NH₂、OH或-(C₁-C₄)-烷基单-至三-取代，或

2.-C(O)-R¹¹，其中

R¹¹是1.-O-R¹⁰，或

2.-N(R¹⁰)₂，或

R⁷和R⁸与它们各自键合的氮原子与碳原子一起构成式IIa环，选自由吡咯、吡咯啉、吲哚、吡咯烷、吡啶、哌啶、戊间二烯、哒嗪、嘧啶、吡嗪、哌嗪、吡唑、咪唑、吡唑啉、咪唑啉、吡唑烷、咪唑烷、噁唑、嘌呤、异噁唑、2-异噁唑烷、异噁唑烷、吗啉、异噻唑、噻唑、噻二唑、苯并咪唑、硫代吗啉、异噻唑烷、吲唑、喹啉、三唑、酞嗪、喹唑啉、喹喔啉、蝶啶、四氢喹啉、异喹啉、1，2，3，5-噁噻二唑2-氧化物、四唑、噁二唑酮、异噁唑酮、三唑酮、噁二唑烷二酮、被F、-CN、-CF₃或-C(O)-O-(C₁-C₄)-烷基取代的三唑、3-羟基吡咯-2，4-二酮、5-氧代-1，2，4-噻二唑和四氢异喹啉组成的组，或者

R⁸和Z与它们各自键合的碳原子一起构成式IIc环，选自由吡咯、吡咯啉、吡咯烷、吡啶、哌啶、戊间二烯、哒嗪、嘧啶、吡嗪、哌嗪、吡唑、咪唑、吡唑啉、1，3，4-噁二唑、咪唑啉、吡唑烷、咪唑烷、噁唑、异噁唑、2-异噁唑烷、异噁唑烷、吗啉、异噻唑、噻唑、异噻唑烷、四唑、硫代吗啉、吲唑、噻二唑、苯并咪唑、喹啉、三唑、酞嗪、喹唑啉、喹喔啉、嘌呤、蝶啶、吲哚、四氢喹啉、三唑酮、四氢异喹啉、1，2，3，5-噁噻二唑2-氧化物、噁二唑酮、异噁唑酮、噁二唑烷二酮、被F、-CN、-CF₃或-C(O)-O-(C₁-C₄)-烷基取代的三唑、3-羟基吡咯-2，4-二酮、5-氧代-1，2，4-噻二唑和异喹啉组成的组，

其他取代基R¹、R²、R³和R⁴彼此独立地是

1.氢，

2.卤素，

3.芳基，其中的芳基是未取代或取代的，

6.-(C₁-C₆)-烷基，

7.-CN，

8.-CF₃，

9.-O-R¹⁰，

10.-N(R¹⁰)₂，或

11.-S(O)_x-R¹⁰，其中的x是整数0、1或2，

R⁵是氢，

R⁶是1.苯基，彼此独立地被下列取代基单-或二-取代：

1.1-CN，

1.2-CF₃，或

1.3卤素，

1.4-O-R¹⁰，

1.5-N(R¹⁰)₂，

1.6-NH-C(O)-R¹¹，

1.7-S(O)_x-R¹⁰，其中的x是整数0、1或2，

1.8-C(O)-R¹¹，或

1.9-(C₁-C₄)-烷基-NH₂，

2.具有5至14个环成员的杂芳基，其中的杂芳基是未取代的或者彼此独立地被如上1.1至1.9下所定义的取代基单-、二-或三-取代，或

3.具有5至12个环成员的杂环，其中的杂环是未取代的或者彼此独立地被如上1.1至1.9下所定义的取代基单-、二-或三-取代。

特别优选的式I化合物中，

取代基R¹、R²、R³和R⁴之一是式II基团，其中

D是-C(O)-，

R⁷是氢，

Z是-C(O)-OH或-C(O)-NH₂，

1.1-S(O)-R¹⁰，其中的R¹⁰是如下所定义的，

1.2-N(R¹⁰)₂，其中的R¹⁰是如下所定义的，或

1.3吡咯，或

2.氨基酸的特性基团，

R¹⁰是a)氢，

b)-(C₁-C₆)-烷基，其中的烷基是未取代的或者彼此独立地被卤素单-至三-取代，

c)苯基，其中的苯基是未取代的或者彼此独立地被卤素或-(C₁-C₄)-烷基单-至三-取代，

在(R¹⁰)₂的情况下，R¹⁰彼此独立地具有a)至c)含义，

其他取代基R¹、R²、R³和R⁴在每种情况下都是氢，

R⁵是氢，

R⁶是苯基或吡啶，

R⁹是1.氢，

2.-(C₁-C₄)-烷基，其中的烷基是直链或支链的，彼此独立地被-C(O)-OH、-OH或-C(O)-NH₂单-、二-或三-取代，或

3.苯基，其中的苯基是未取代的或者彼此独立地被卤素或-(C₁-C₄)-烷基单-至三-取代。

术语“卤素”视为表示氟、氯、溴或碘。术语“(C₁-C₈)-烷基”、“(C₁-C₆)-烷基”或“(C₁-C₄)-烷基”视为表示烃基团，其碳链是直链或支链的，分别含有1至8、1至6和1至4个碳原子。环状烷基基团例如是3至6元单环，例如环丙基、环丁基、环戊基或环己基。

术语“R⁷和R⁸与它们各自键合的氮原子与碳原子一起构成式IIa杂环”视为表示从下列杂环衍生的基团：吡咯、吡咯啉、吡咯烷、咪唑、吡唑、噁唑、异噁唑、四唑、异噁唑啉、异噁唑烷、吗啉、噻唑、异噻唑、异噻唑啉、嘌呤、异噻唑烷、硫代吗啉、吡啶、哌啶、吡嗪、哌嗪、嘧啶、哒嗪、吲哚、异吲哚、吲唑、苯并咪唑、酞嗪、喹啉、异喹啉、喹喔啉、喹唑啉、噌啉、蝶啶、三唑酮、四唑、1，2，3，5-噁噻二唑2-氧化物、噁二唑酮、异噁唑酮、噁二唑烷二酮、被F、-CN、-CF₃或-C(O)-O-(C₁-C₄)-烷基取代的三唑、3-羟基吡咯-2，4-二酮、5-氧代-1，2，4-噻二唑、咪唑烷、咔啉和这些杂环的苯并稠合衍生物。

术语芳基视为表示环内具有6至14个碳原子的芳烃基团。(C₆-C₁₄)-芳基基团例如是苯基；萘基，例如1-萘基、2-萘基；联苯基，例如2-联苯基、3-联苯基和4-联苯基；蒽基或芴基。联苯基基团、萘基基团、尤其为苯基基团是优选的芳基基团。芳基基团、尤其为苯基基团可以被相同或不同的基团单取代或多取代，优选为单取代、二取代或三取代，取代基优选地选自(C₁-C₈)-烷基、尤其为(C₁-C₄)-烷基，(C₁-C₈)-烷氧基、尤其为(C₁-C₄)-烷氧基，卤素，硝基，氨基，三氟甲基，羟基，羟基-(C₁-C₄)-烷基、例如羟甲基或1-羟基乙基或2-羟基乙基，亚甲二氧基，亚乙二氧基，甲酰基，乙酰基，氰基，羟基羰基，氨基羰基，(C₁-C₄)-烷氧羰基，苯基，苯氧基，苄基，苄氧基，四唑基。这例如同样适用于诸如芳基烷基或芳基羰基等基团。芳基烷基尤其是苄基，以及1-与2-萘甲基和2-、3-与4-联苯甲基和9-芴甲基。取代的芳基烷基例如是在其芳基部分被一个或多个(C₁-C₈)-烷基、尤其为(C₁-C₄)-烷基取代的苄基和萘甲基，例如2-、3-与4-甲基苄基，4-异丁基苄基，4-叔丁基苄基，4-辛基苄基，3，5-二甲基苄基，五甲基苄基，2-、3-、4-、5-、6-、7-与8-甲基-1-萘甲基，1-、3-、4-、5-、6-、7-与8-甲基-2-萘甲基；在其芳基部分被一个或多个(C₁-C₈)-烷氧基、尤其为(C₁-C₄)-烷氧基取代的苄基基团和萘甲基基团，例如4-甲氧基苄基、4-新戊氧基苄基、3，5-二甲氧基苄基、3，4-亚甲二氧基苄基、2，3，4-三甲氧基苄基；硝基苄基基团，例如2-、3-与4-硝基苄基；卤代苄基基团，例如2-、3-与4-氯苄基，2-、3-与4-氟苄基，3，4-二氯苄基，五氟苄基；三氟甲基苄基基团，例如3-与4-三氟甲基苄基或3，5-双(三氟甲基)苄基。

在单取代的苯基基团中，取代基可以位于2-位、3-位或4-位。二取代的苯基可以在2，3-位、2，4-位、2，5-位、2，6-位、3，4-位或3，5-位被取代。在三取代的苯基基团中，取代基可以位于2，3，4-位、2，3，5-位、2，4，5-位、2，4，6-位、2，3，6-位或3，4，5-位。

关于芳基基团的解释相应地适用于二价亚芳基基团，例如亚苯基基团，它例如可以是1，4-亚苯基或1，3-亚苯基。

亚苯基-(C₁-C₆)-烷基尤其是亚苯基甲基(-C₆H₄-CH₂-)和亚苯基乙基，(C₁-C₆)-亚烷基苯基尤其是亚甲基苯基(-CH₂-C₆H₄-)。亚苯基-(C₂-C₆)-烯基尤其是亚苯基亚乙基和亚苯基亚丙基。

措辞“具有5至14个环成员的杂芳基”代表具有5至14个环成员的单环或多环芳系基团，它含有1、2、3、4或5个杂原子作为环成员。杂原子的实例是N、O和S。如果含有许多杂原子，那么它们可以是相同的或不同的。杂芳基基团同样可以被相同或不同基团单取代或多取代，优选为单取代、二取代或三取代，取代基选自(C₁-C₈)-烷基、尤其为(C₁-C₄)-烷基，(C₁-C₈)-烷氧基、尤其为(C₁-C₄)-烷氧基，卤素，硝基，-N(R¹⁰)₂，三氟甲基，羟基，羟基-(C₁-C₄)-烷基、例如羟甲基或1-羟基乙基或2-羟基乙基，亚甲二氧基，甲酰基，乙酰基，氰基，羟基羰基，氨基羰基，(C₁-C₄)-烷氧羰基，苯基，苯氧基，苄基，苄氧基，四唑基。具有5至14个环成员的杂芳基优选地代表单环或二环芳族基团，它含有1、2、3或4个、尤其为1、2或3个相同或不同的选自N、O和S的杂原子，并且可以被1、2、3或4个、尤其为1至3个相同或不同的取代基取代，取代基选自(C₁-C₆)-烷基、(C₁-C₆)-烷氧基、氟、氯、硝基、-N(R¹⁰)₂、三氟甲基、羟基、羟基-(C₁-C₄)-烷基、(C₁-C₄)-烷氧羰基、苯基、苯氧基、苄氧基和苄基。杂芳基特别优选地代表具有5至10个环成员的单环或二环芳族基团，尤其是5-元或6-元单环芳族基团，它含有1、2或3个、尤其为1或2个相同或不同的选自N、O和S的杂原子，并且可以被1或2个相同或不同的取代基取代，取代基选自(C₁-C₄)-烷基、卤素、羟基、-N(R¹⁰)₂、(C₁-C₄)-烷氧基、苯基、苯氧基、苄氧基和苄基。

措辞“具有5至12个环成员的杂环”代表单环或二环的5元至12元杂环，它是部分饱和或完全饱和的。杂原子的实例是N、O和S。杂环是未取代的，或者在一个或多个碳原子或者一个或多个杂原子上被相同或不同的取代基取代。这些取代基是如上述杂芳基基团所定义的。杂环尤其在碳原子上被相同或不同基团单取代或多取代，例如单取代、二取代、三取代或四取代，取代基选自(C₁-C₈)-烷基、例如(C₁-C₄)-烷基，(C₁-C₈)-烷氧基、例如(C₁-C₄)-烷氧基、例如甲氧基，苯基-(C₁-C₄)-烷氧基、例如苄氧基，羟基，氧代，卤素，硝基，氨基或三氟甲基；和/或在杂环中的环氮原子上被下列基团取代：(C₁-C₈)-烷基、例如(C₁-C₄)-烷基、例如甲基或乙基，可选被取代的苯基，或苯基-(C₁-C₄)-烷基、例如苄基取代。氮杂环也可以是N-氧化物或季盐的形式。

措辞具有5至14个环成员的杂芳基或具有5至12个环成员的杂环的实例是从下列杂环衍生的基团：吡咯、呋喃、噻吩、咪唑、吡唑、噁唑、异噁唑、噻唑、异噻唑、四唑、1，2，3，5-噁噻二唑2-氧化物、三唑酮、噁二唑酮、异噁唑酮、噁二唑烷二酮、被F、-CN、-CF₃或-C(O)-O-(C₁-C₄)-烷基取代的三唑、3-羟基吡咯-2，4-二酮、5-氧代-1，2，4-噻二唑、吡啶、吡嗪、嘧啶、吲哚、异吲哚、吲唑、酞嗪、喹啉、异喹啉、喹喔啉、喹唑啉、噌啉、咔啉和这些杂环的苯并稠合、环戊并-、环己并-或芳庚并-稠合的衍生物。特别优选的基团是2-或3-吡咯基，苯基吡咯基、例如4-或5-苯基-2-吡咯基，2-呋喃基，2-噻吩基，4-咪唑基，甲基咪唑基、例如1-甲基-2-、-4-或-5-咪唑基，1，3-噻唑-2-基，2-吡啶基，3-吡啶基，4-吡啶基，2-、3-或4-吡啶基-N-氧化物，2-吡嗪基，2-、4-或5-嘧啶基，2-、3-或5-吲哚基，取代的2-吲哚基、例如1-甲基-、5-甲基-、5-甲氧基-、5-苄氧基-、5-氯-或4，5-二甲基-2-吲哚基，1-苄基-2-或-3-吲哚基，4，5，6，7-四氢-2-吲哚基，芳庚并[b]-5-吡咯基，2-、3-或4-喹啉基，1-、3-或4-异喹啉基，1-氧代-1，2-二氢-3-异喹啉基，2-喹喔啉基，2-苯并呋喃基，2-苯并噻吩基，2-苯并噁唑基或苯并噻唑基或二氢吡啶基，吡咯烷基、例如2-或3-(N-甲基吡咯烷基)，哌嗪基，吗啉基，硫代吗啉基，四氢噻吩基或苯并二氧戊环基。

α-氨基酸的结构式如下：

α-氨基酸区别于彼此之处在于基团R，在本申请的上下文中称之为氨基酸的“特性基团”。在R⁸是氨基酸的特性基团的情况下，特性基团优选地采用下列天然存在的α-氨基酸的那些：甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯基丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、赖氨酸、组氨酸、精氨酸、谷氨酸和天冬氨酸。特别优选的是组氨酸、色氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、赖氨酸、精氨酸、谷氨酸、和天冬氨酸。此外优选用作基团R⁸的氨基酸特性基团也是非天然存在的氨基酸，例如2-氨基己二酸、2-氨基丁酸、2-氨基异丁酸、2，3-二氨基丙酸、2，4-二氨基丁酸、1，2，3，4-四氢异喹啉-1-羧酸、1，2，3，4-四氢异喹啉-3-羧酸、2-氨基庚二酸、苯基甘氨酸、3-(2-噻吩基)丙氨酸、3-(3-噻吩基)丙氨酸、2-(2-噻吩基)甘氨酸、2-氨基庚酸、哌可酸、羟基赖氨酸、肌氨酸、N-甲基异亮氨酸、6-N-甲基赖氨酸、N-甲基缬氨酸、正缬氨酸、正亮氨酸、鸟氨酸、别异亮氨酸、别苏氨酸、别羟基赖氨酸、4-羟基脯氨酸、3-羟基脯氨酸、3-(2-萘基)丙氨酸、3-(1-萘基)丙氨酸、高苯基丙氨酸、高半胱氨酸、2-氨基-3-苯氨基乙基丙酸、高磺基丙氨酸、高色氨酸、磺基丙氨酸、3-(2-吡啶基)丙氨酸、3-(3-吡啶基)丙氨酸、3-(4-吡啶基)丙氨酸、膦丝菌素、4-氟苯基丙氨酸、3-氟苯基丙氨酸、2-氟苯基丙氨酸、4-氯苯基丙氨酸、4-硝基苯基丙氨酸、4-氨基苯基丙氨酸、环己基丙氨酸、瓜氨酸、5-氟色氨酸、5-甲氧基色氨酸、2-氨基-3-苯氨基丙酸、甲硫氨酸砜、甲硫氨酸亚砜或-NH-NR¹⁰-CON(R¹⁰)₂，它们可选地也是取代的。在具有官能团的天然与非天然存在的氨基酸的情况下，该基团也可以是被保护的，例如氨基、羟基、羧基、巯基、胍基、咪唑基或吲哚基。

适合于此的保护基团优选为肽化学惯用的N-保护基团，例如尿烷类型的保护基团，苄氧羰基(Z)、叔丁氧羰基(Boc)、9-芴氧羰基(Fmoc)、烯丙氧羰基(Aloc)，或酰胺类型的保护基团，尤其为甲酰基、乙酰基或三氟乙酰基，和烷基类型的保护基团，例如苄基。例如在R⁸是咪唑基团的情况下，使用用于磺酰胺生成的式IV磺酸衍生物作为咪唑氮的保护基团，它能够又被除去，尤其在碱的存在下，例如氢氧化钠水溶液。化学反应原料是已知的，或者可以按照文献已知方法易于制备。

本发明进一步涉及式I化合物和/或式I化合物的立体异构形式和/或式I化合物的生理学上可耐受的盐的制备方法，该方法包含

a)在碱的存在下，或者如果适当的话，在脱水剂的存在下，在溶液中，使式IV化合物

其中Pg是适合的保护基团(例如甲基酯)、酰胺基或羟基，Z、R⁷和R⁸是如式I所定义的，

与式III化合物的酰基氯或活化酯反应，

其中D1是-COOH或磺酰卤，R⁵、R⁶和R⁹是如式I所定义的，

除去保护基团后，转化为式I化合物，或者

b)在碱的存在下，或者如果适当的话，在脱水剂的存在下，使式IVa化合物

其中R⁷和R⁸是如式I所定义的，E是N-氨基保护基团，

以其羰基经由中间链L与式PS聚合树脂偶联，选择性除去保护基团E后，得到式V化合物

使其与式III化合物反应，其中R⁵、R⁶和R⁹是如式I所定义的，

得到式VI化合物，

从载体裂解后，将式VI化合物转化为式I化合物，或者

c)将式I化合物转化为生理学上可接受的盐。

在方法变体a)中，式IVa化合物的酸官能带有保护基团Pg；按照文献所述方法进行这种选择性羧酸衍生作用，例如Houben-Weyl“Methoden der Org.Chemie”(有机化学方法)第15/1卷。在方法变体b)中，式IVa起始化合物的氨基官能带有保护基团E；按照文献所述方法进行这种选择性氨基衍生作用，例如Houben-Weyl“Methodender Org.Chemie”(有机化学方法)第15/1卷。

优选适用于此的保护基团Pg是肽化学惯用的羧基保护基团，例如烷基酯类型的保护基团，例如甲基、乙基、叔丁基、异丙基、苄基、芴甲基、烯丙基，芳基酯类型的保护基团，例如苯基，酰胺类型的保护基团，例如酰胺或二苯甲胺。适用于此的保护基团E优选为肽化学惯用的N-保护基团，例如尿烷类型的保护基团，例如苄氧羰基(Z)、叔丁氧羰基(Boc)、9-芴基甲氧羰基(Fmoc)和烯丙氧羰基(Aloc)，或酰胺类型的保护基团，尤其为甲酰基、乙酰基或三氟乙酰基，和烷基类型的保护基团，例如苄基。

(三甲基甲硅烷基)乙氧羰基(Teoc)也被证实特别适合于此(P.Kocienski，Protecting Groups，Thieme Verlag 1994)。

吲哚羧酸衍生物是按照Houben-Weyl“Methoden der Org.Chemie”(有机化学方法)第E6-2A和E6-2B卷所述方法制备的。因而，关于制备式III的吲哚羧酸衍生物，优选的是在145℃下，在溶剂多磷酸的存在下，使肼基苯甲酸与芳基酮或杂芳基酮反应。所需肼基苯甲酸是按照本领域技术人员已知的方法制备的，例如从对应的苯甲酸苯胺制备。芳基酮或杂芳基酮同样是按照为本领域技术人员所熟悉的方法制备的，例如从对应的酰氯或腈，例如通过与有机金属化合物反应。

关于式IV化合物与式III化合物的缩合作用，有利地采用本身为本领域技术人员所熟知的偶联方法(例如参见Houben-Weyl“Methodender Organi schen Chemie”(有机化学方法)第15/1和15/2卷，GeorgThieme Verlag，Stuttgart，1974)。适合的缩合剂或偶联剂例如是羰基二咪唑，碳二亚胺、例如二环己基碳二亚胺或二异丙基碳二亚胺(DIC)，O-((氰基(乙氧羰基)亚甲基)氨基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓四氟硼酸盐(TOTU)或丙膦酸酐(PPA)。

缩合作用可以在标准条件下进行。在缩合作用期间，对所存在的不反应氨基来说通常有必要用可逆的保护基团加以保护。这同样适用于不参与反应的羧基，它们在缩合作用期间优选地以(C₁-C₆)-烷基酯、苄基酯或叔丁基酯的形式存在。如果氨基仍然以前体的形式存在，例如硝基或氰基，并且是仅由缩合作用之后的氢化作用生成的，那么氨基保护作用是不必要的。缩合作用之后，以适当方式除去所存在的保护基团。例如，NO₂(氨基酸的胍基保护)、苄氧羰基和苄基酯中的苄基可以通过氢化作用除去。叔丁基类型的保护基团是用酸法除去的，而9-芴基甲氧羰基基团是用仲胺除去的。

在式V和VI中由PS指定的聚合载体是一种交联的聚苯乙烯树脂，具有一个连接基，称之为中间链L。该连接基携带适合的官能团，例如胺，例如已知的Rink酰胺树脂，或者OH基，例如已知的Wang树脂或Kaiser肟树脂。作为替代选择，可以采用其他聚合载体，例如具有各种中间链L的玻璃、棉或纤维素。

由L指定的中间链与聚合载体共价键合，与式IVa化合物形成可逆的酰胺类或酯类键，在进一步对所键合的式IVa化合物的反应期间保持稳定；但是在强酸性反应条件下，例如与三氟乙酸的混合物，则再次释放连接基上的基团。

在反应顺序中的各个位置都可以进行所需式I化合物从连接基上的释放。

A.被保护的式IVa氨基羧酸与固体载体偶联的通用操作：

合成是在反应体积各为15ml的反应器内进行的。每只反应器装有0.179gRink酰胺AM树脂(Fmoc-Rink酰胺AM/Nova-Biochem；装载量0.56mmol/g；即0.1mmol/反应器)。关于从树脂中除去Fmoc保护基团，向每只反应器内计量入30％哌啶/DMF溶液，将混合物摇动45分钟(min)。然后过滤，将树脂用二甲基甲酰胺洗涤3次(DMF)。

关于被保护的氨基酸的偶联，向所制备的树脂各加入0.5摩尔相应的Fmoc-氨基酸溶液(0.3mmol在DMF中)、HOBt溶液(0.33mmol在DMF中)和DIC溶液(0.33mmol在DMF中)，将混合物在35℃下摇动16小时(h)。然后将树脂用DMF洗涤多次。为了检查偶联，取出一些树脂珠粒，进行KATSER试验；在所有情况下试验都是阴性的。

如上所述，用30％哌啶/DMF溶液进行Fmoc保护基团的除去。

关于苯并咪唑羧酸的偶联，加入0.1摩尔相应的4-或5-取代酸的溶液(0.4mmol在DMF中)、0.5摩尔偶联剂TOTU的溶液(0.44mmol在DMF中)和0.5摩尔DIPEA的溶液(0.6mmol在DMF中)，将混合物在40℃下摇动16小时。然后用DMF洗涤多次。

为了检查反应，再次取出一些树脂珠粒，进行KAISER试验。

关于从固体载体上除去所需的物质，将树脂用二氯甲烷洗涤多次。然后加入裂解溶液(50％二氯甲烷和50％95％TFA、2％H₂O、3％三异丙基硅烷的混合物)，将混合物在室温下摇动1h。将混合物过滤，将滤液浓缩至干。将残余物用二乙醚沉淀，过滤。

固体残余物通常含有高纯度的所需产物，或者例如利用制备型高压液相色谱法，在反相上分馏(洗脱剂：A：H₂O/0.1％TFA，B：乙腈/0.1％TFA)。冷冻干燥所得部分得到所需产物。

按照本身已知的方式进行能够成盐的式I化合物、包括它们的立体异构形式的生理学上可耐受的盐的制备。利用碱性试剂，例如氢氧化物、碳酸盐、碳酸氢盐、醇化物和氨，或有机碱，例如三甲胺或三乙胺、乙醇胺或三乙醇胺，或者利用碱性氨基酸，例如赖氨酸、鸟氨酸或精氨酸，羧酸与之生成稳定的碱金属盐、碱土金属盐或可选被取代的铵盐。如果式I化合物含有碱性基团，也可以利用强酸制备稳定的酸加成盐。为此，无机酸和有机酸都是适合的，例如盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、苯磺酸、对-甲苯磺酸、4-溴苯磺酸、环己酰氨基磺酸、三氟甲磺酸、乙酸、草酸、酒石酸、琥珀酸或三氟乙酸。

本发明还涉及药物，它包含有效量的至少一种式I化合物和/或式I化合物的生理学上可耐受的盐和/或式I化合物的可选立体异构形式，以及药学上适合的与生理学上可耐受的赋形剂、添加剂和/或其他活性化合物和助剂。

鉴于其药理性质，根据本发明的化合物适合于所有那些其病程涉及IκB激酶活性增加的障碍的预防和治疗。它们例如包括慢性运动器官障碍，例如炎症、免疫性或代谢性急性与慢性关节炎、关节病、类风湿性关节炎，或变性性关节障碍，例如骨关节病、椎关节强硬、半月板或髌骨损伤或韧带破裂之后关节创伤或长期关节固定术继发的软骨损坏，或结缔组织障碍，例如胶原性疾病和牙周病，肌痛和骨代谢失调，或者由肿瘤坏死因子α(TNFα)过度表达或TNFα浓度增加导致的障碍，例如恶病质、多发性硬化、颅-脑创伤、克罗恩氏病和肠肿瘤，或诸如下列障碍：动脉粥样硬化、狭窄、溃疡形成、阿尔茨海默氏病、肌肉消瘦、癌性障碍(细胞毒性化合物疗法的强化)、心肌梗塞、痛风、败血症、败血症性休克、内毒素性休克、病毒感染(例如流感、肝炎、HIV感染、AIDS或由腺病毒或疱疹病毒导致的障碍)、寄生物感染(例如疟疾或麻风)、真菌感染或酵母感染、脑膜炎、慢性炎性肺疾病(例如慢性支气管炎或哮喘)、急性呼吸窘迫综合征、急性滑膜炎、肺结核、牛皮癣、糖尿病、器官受体对被移植器官的急性或慢性排斥反应、移植物-对-宿主障碍和炎性血管障碍。

根据本发明的药物一般是口服或肠胃外给药的。直肠或透皮给药也是可能的。

本发明还涉及药物的制备方法，包括利用药学上适合的与生理学上可耐受的赋形剂、如果适当的话还有适合的活性化合物、添加剂或助剂将至少一种式I化合物制成适合的给药剂型。

适合的固体或药物剂型例如是颗粒剂、粉剂、包衣片、片剂、(微)胶囊剂、栓剂、糖浆剂、液汁、悬液、乳剂、滴剂或注射溶液，和活性化合物的缓释制剂，在这些制剂中使用惯用的助剂，例如赋形剂、崩解剂、粘合剂、包衣剂、膨胀剂、滑动剂或润滑剂、矫味剂、甜味剂和增溶剂。常用助剂可以提到碳酸镁、二氧化钛、乳糖、甘露糖醇与其他糖、滑石、乳蛋白、明胶、淀粉、纤维素及其衍生物、动物与植物油(例如鱼肝油、向日葵油、花生油或芝麻油)、聚乙二醇和溶剂(例如无菌的水和一元醇或多元醇，例如甘油)。药物制剂优选地按剂量单位制备和给药，每单位含有一定剂量根据本发明的式I化合物作为活性成分。在固体剂量单位的情况下，例如片剂、胶囊剂、包衣片或栓剂，这种剂量可以高达约1000mg，优选为约50mg至300mg，在安瓿形式的注射溶液的情况下，可以高达约300mg，优选为约10mg至100mg。关于体重约70kg的成年患者的治疗，根据式I化合物的功效，每日剂量为约20mg至1000mg活性化合物，优选为约100mg至500mg。不过在某些情况下，更高或更低的每日剂量也可能是适合的。在进行每日剂量的给药时，既可以按单一剂量单位或多个小剂量单位的方式单次给药，也可以按细分的剂量以特定间隔多次给药。

通常，用质谱法(FAB-，ESI-MS)测定终产物。温度以摄氏度给出，RT表示室温(22-26℃)。所用缩写已有解释，或者符合惯例。

实施例

取代的吲哚羧酸的制备

方法变体A)2，3-二苯基-1H-吲哚-5-羧酸：

将1.96g(10mmol)脱氧苯偶姻和1.52g 4-肼基苯甲酸在研钵内研磨，然后在160℃下在开口的烧瓶内熔化15分钟。将冷却后的熔化物与100ml乙酸和30ml浓盐酸混合，在回流下加热3小时。将冷却后的溶液与水混合，导致产物2，3-二苯基-1H-吲哚-5-羧酸沉淀出来。吸滤产物，残余物用水洗涤，干燥。关于纯化，将粗产物与热甲苯搅拌，再次吸滤和干燥。得到2，3-二苯基-1H-吲哚-5-羧酸。

方法变体B)2-吡啶-4-基-1H-吲哚-5-羧酸：

将20g P₂O₅与12.5ml H₃PO₄(85％)混合，导致反应混合物的温度剧烈增加。然后将反应混合物冷却至60℃，加入8.90g(65.84mmol)4-丙酰吡啶和4.20g(27.60mmol)4-肼基苯甲酸。然后将混合物在145℃下搅拌45分钟。将反应混合物倒在水中，导致黄色产物2-吡啶-4-基-1H-吲哚-5-羧酸沉淀出来。吸滤该沉淀，用水洗至中性。通过这种方法定量得到的2-吡啶-4-基-1H-吲哚-5-羧酸无需进一步纯化即可用于与氨基酸衍生物偶联。

氨基酸衍生物与取代的吲哚羧酸衍生物的偶联

方法变体C)

实施例1

N-(1-氨基甲酰基-3-苯基丙基)-2，3-二苯基-1H-吲哚-5-甲酰胺：

将0.16g(0.5mmol)2，3-二苯基-1H-吲哚-5-羧酸(见方法变体A)在RT下溶于10ml无水二甲基甲酰胺(DMF)，依次与0.11g(0.5mmol)L-高苯丙氨酰胺盐酸盐、0.16g TOTU(O-[(氰基(乙氧羰基)亚甲基)氨基-1，1，3，3-四甲基]脲鎓四氟硼酸盐)和0.14ml(1mmol)二异丙胺混合。将反应混合物在RT下搅拌6小时，然后在减压下浓缩，将残余物溶于乙酸乙酯。有机相依次用水、饱和碳酸钠溶液、水和饱和氯化钠溶液洗涤，经硫酸镁干燥，过滤，在减压下浓缩。得到N-(1-氨基甲酰基-3-苯基丙基)-2，3-二苯基-1H-吲哚-5-甲酰胺，熔点为120℃至125℃。

实施例7

N-(1-氨基甲酰基-3-吡咯-1-基丙基)-3-甲基-2-吡啶-4-基-1H-吲哚-5-甲酰胺：

将0.13g(0.5mmol)3-甲基-2-吡啶-4-基-1H-吲哚-5-羧酸(见方法变体A)在RT下溶于10ml无水二甲基甲酰胺(DMF)，依次与0.083g(0.5mmol)4-(1-吡咯基)-L-2-苄氧羰基氨基丁酰胺、0.16g(0.5mmol)TOTU(O-[(氰基(乙氧羰基)亚甲基)氨基-1，1，3，3-四甲基]脲鎓四氟硼酸盐)和0.14ml(1mmol)乙基二异丙胺混合。将反应混合物在RT下搅拌6小时，然后在减压下浓缩，将残余物溶于乙酸乙酯。有机相依次用水、饱和碳酸钠溶液、水和饱和氯化钠溶液洗涤，经硫酸镁干燥，过滤，在减压下浓缩。通过制备型HPLC进行纯化。

a：4-(1-吡咯基)-L-2-苄氧羰基氨基丁酸

将用氩冲洗的1.25g(5.0mmol)N_α-Z-L-2，4-二氨基丁酸的60ml水溶液与0.66g(5.0mmol)2，5-二甲氧基四氢呋喃混合，然后加入1.7ml冰乙酸，将混合物在20℃下搅拌12小时。反应混合物反复用乙酸乙酯萃取，合并有机相，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩滤液。粗产物经过硅胶快速色谱纯化(CH₂Cl₂/CH₃OH/CH₃COOH：100/5/1)。除去移动相，得到1.3g(87％)4-(1-吡咯基)-L-2-苄氧羰基氨基丁酸。

b：4-(1-吡咯基)-L-2-苄氧羰基氨基丁酰胺

将1.2g(4.0mmol)4-(1-吡咯基)-L-2-苄氧羰基氨基丁酸和0.61g(4.0mmol)N-羟基苯并三唑铵盐一起溶于10ml DMF，在0℃下与0.82g(4.0mmol)N，N’-二环己基碳二亚胺和0.68ml(4.0mmol)N-乙基二异丙胺混合，将混合物在0℃下搅拌30分钟，在20℃下搅拌3小时。吸滤所沉淀的脲，在减压下浓缩滤液至干。粗产物经过硅胶色谱纯化(CH₂Cl₂/CH₃OH/CH₃COOH：100/5/1)。收率：0.89g(74％)。

c：4-(1-吡咯基)-L-2-氨基丁酰胺

在惰性气体下，将0.80g(2.65mmol)4-(1-吡咯基)-L-2-苄氧羰基氨基丁酰胺的20ml甲醇中的溶液与80mg催化剂(10％Pd-C)混合，然后引入氢，直至Z保护基团完全裂解。滤出催化剂，浓缩滤液，得到0.4g(90.5％)4-(1-吡咯基)-L-2-氨基丁酰胺。

2.方法变体D)

实施例3

N-(1-氨基甲酰基-2-苯硫基乙基)-2-吡啶-4-基-1H-吲哚-5-甲酰胺

将0.20g(0.84mmol)2-吡啶-4-基-1H-吲哚-5-羧酸与0.21g(1.07mmol)2-氨基-3-苯硫基丙酸混合在40ml DMF中，在0℃下加入0.66g(1.27mmol)苯并三唑-1-基氧基三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐和0.37ml(2.12mmol)N-乙基-N，N-二异丙胺，将溶液在20℃下搅拌2小时。在减压下浓缩溶液，经过中压柱色谱纯化(CH₂Cl₂/CH₃OH：9/1)。得到0.19g(54％)N-(1-氨基甲酰基-2-苯硫基乙基)-2-吡啶-4-基-1H-吲哚-5-甲酰胺。

实施例9

3-苯氨基乙基-2-[(2-吡啶-4-基-1H-吲哚-5-羰基)氨基]丙酰胺

a)L-2-氨基-3-苯氨基乙基丙酸

将54.8g(0.209mol)三苯膦悬浮在600ml乙腈中，排除湿气，冷却至-35℃至-45℃。然后在该温度下，历经50分钟滴加36.4g(0.209mol)偶氮二羧酸二乙酯。将混合物在-35℃下搅拌另外15分钟。向该混合物中滴加50g(0.209mol)N-苄氧羰基-L-丝氨酸的500ml乙腈溶液，温度保持在-35℃以下。然后使混合物在5℃下反应另外12小时，加温至RT。在减压下除去反应溶液中的溶剂，粗产物经过中压硅胶色谱纯化(DCM/AcCN：25/1)。除去溶剂，得到20.8g(收率45％)纯的N-苄氧羰基-L-丝氨酸-β-内酯(另见Org.Synth.(有机合成)1991(70)1ff.)，为微细针晶。经验式C₁₁H₁₁NO₄；M.W.＝221.2；MS(M+H)222.1

在保护性氩气氛下，向7.3ml(57.36mmol)N-乙基苯胺的250ml乙腈溶液中加入15.5ml(63.51mmol)N，O-双(三甲基甲硅烷基)乙酰胺，将混合物在50℃下搅拌3小时。然后在20℃下加入上述内酯(10.7g，48.37mmol)的250ml乙腈溶液，将混合物在回流下加热17小时。除去溶剂，然后将残余物与饱和碳酸钠溶液混合，溶液的pH保持在9以下。水悬液用少量二乙醚洗涤，然后用浓盐酸酸化使pH从6至7，再用NaHPO₄缓冲液调节pH为5。水溶液然后反复用乙酸乙酯萃取。蒸发溶剂，得到所需产物，收率为45％(7.4g)。经验式C₁₉H₂₂N₂O₄；M.W.＝342.4；MS(M+H)343.2。在-10℃下，向75ml甲醇中滴加6.5ml(89.1mmol)亚硫酰氯，将混合物搅拌30分钟。然后加入8.6g(25.12mmol)L-2-氨基乙基-3-苯氨基丙酸的75ml甲醇溶液，将混合物在-10℃下搅拌30分钟，在室温下搅拌另外3小时。蒸发溶剂，然后将残余物溶于乙酸乙酯，用碳酸钠溶液洗涤。蒸发溶剂，经过快速色谱纯化(正庚烷/乙酸乙酯7∶3)，得到4.43g(收率50％)L-2-氨基乙基-3-苯氨基丙酸甲酯。经验式C₂₀H₂₄N₂O₄；M.W.＝356.4；MS(M+H)357.3

为了除去保护基团，将4.4g(12.35mmol)Z-保护的衍生物溶于500ml甲醇，在惰性气体下加入100mg催化剂(10％Pd(OH)₂-C)，引入氢，直至Z保护基团完全裂解。滤出催化剂，浓缩滤液，得到2.8gL-2-氨基乙基-3-苯氨基丙酸(定量)。经验式C₁₂H₁₈N₂O₂；M.W.＝223.3；MS(M+H)223.1

方法步骤b)

将0.63g(2.64mmol)如方法变体B)制备的2-吡啶-4-基-1H-吲哚-5-羧酸悬浮在150ml DMF中，依次与1.01g(3.08mmol)TOTU和0.63ml(3.71mmol)乙基二异丙胺混合。将混合物在RT下搅拌20分钟，向所得澄清溶液中加入0.73g(3.28mmol)根据a)制备的(S)-2-氨基-3-苯氨基乙基丙酸甲酯。将混合物在减压下搅拌15小时，然后通过硅胶快速色谱(DCM∶MeOH＝19∶1)分离标题化合物的甲基酯。收率：0.44g，经验式C₂₆H₂₆N₄O₃；M.W.＝442.2；MS(M+H)443.3

将0.22g(0.497mmol)所得甲基酯溶于100ml甲醇，冷却至0℃，然后引入1.5小时氨。将溶液在室温下放置过夜，然后蒸发甲醇。粗产物经过硅胶快速色谱纯化(DCM∶MeOH＝19∶1)。收率：0.096g(45.2％)，经验式C₂₅H₂₅N₅O₂；M.W.＝427.2；MS(M+H)428.3

类似于方法A)至D)制备下表1化合物。表1

pr.v.＝方法变体

药理学实施例IκB激酶ELISA：

利用包含生物素基化底物肽的ELISA测定IκB激酶活性，该肽在IκB蛋白中含有丝氨酸32至36的氨基酸序列和特异性多-或单-克隆抗体(例如来自New England Biolabs，Beverly，MA，USA，cat.：9240)，该抗体仅与IκB肽的磷酸化形式结合。将这种复合物固定在抗体-结合平板(涂有A蛋白)上，使用生物素-结合蛋白与HRP(例如链霉抗生物素HRP)的缀合物进行检测。利用底物磷肽的标准曲线可以量化活性。

操作：

为了获得激酶复合物，将10ml HeLa S3细胞提取物S100用40ml50mM HEPES，pH7.5稀释，调至40％硫酸铵，在冰上培养30分钟。将沉淀物溶于5ml SEC缓冲液(50mM HEPES，pH7.5、1mM DTT、0.5mMEDTA、10mM 2-甘油磷酸酯)，在20,000xg下离心15分钟，通过0.22μm滤器过滤。将样本加于320ml Superose-6 FPLC柱(AmershamPharmacia Biotech AB，Uppsala，Sweden)，柱子已经用SEC缓冲液平衡过，在4℃下按2ml/min流速操作。合并对应于670kDa分子量标准的洗脱时间的部分，进行活化。活化是在37℃下用100nMM EKK1Δ、250μM MgATP、10mM MgCl₂、5mM二硫苏糖醇(DTT)、10mM 2-甘油磷酸酯、2.5μM微囊藻素LR培养45分钟。将活化后的酶贮存在-80℃下。

将供试物质溶于DMSO(2μl)，在25℃下用43μl活化酶(按1∶25稀释在反应缓冲液中：50mM HEPES，pH7.5、10mM MgCl₂、5mM DTT、10mMβ-甘油磷酸酯、2.5μM微囊藻素LR)预培养30分钟。加入5μl底物肽(生物素-(CH₂)₆-DRHDSGLDSMKD-CONH₂)(200μM)，将混合物培养一小时，用150μl 50mM HEPES，pH7.5、0.1％BSA、50mM EDTA、抗体[1∶200]猝灭反应。然后将100μl猝灭后的反应混合物或标准磷肽系列稀释液(生物素-(CH₂)₆-DRHDS[PO₃]GLDSMKD-CONH₂)转移至A蛋白平板(Pierce Chemical Co.，Rockford，IL，USA)，摇动培养2小时。

用PBS洗涤3次后，用30分钟加入100μl 0.5μg/ml链霉抗生物素HRP(辣根过氧化酶)(稀释在50mM HEPES/0.1％BSA中)。用PBS洗涤5次后，加入100μl TMB底物(Kirkegaard & Perry Laboratories，Gaithersburg，MD，USA)，加入100μl 0.18M硫酸终止显色。测量在450nm下的吸收。根据4-参数剂量-活性关系通过线性回归生成标准曲线。利用该标准曲线，量化酶活性或供试物质对它们的抑制作用。

PKA、PKC、CKII法

在50μM的ATP浓度下，按照厂商的指导，利用UpstateBiotechnologie的相应试剂盒测定cAMP-依赖性蛋白激酶(PKA)、蛋白激酶C(PKC)和酪蛋白激酶II(CKII)。不过，使用多筛平板(Millipore；Phosphocellulose MS-PH，cat.MAPHNOB10)和相应的吸引系统代替磷酸纤维素滤器。然后在Wallac MicroBeta闪烁计数器内测量平板。在每种情况下均使用100μM供试物质。

每种物质重复试验两次。从平均值(含有和没有物质的酶)中减去空白(没有酶)平均值，计算％抑制作用。使用GraFit 3.0软件包进行IC₅₀计算。结果如下表2所示。

表2：100μM底物浓度下的激酶抑制作用或IC₅₀的μM值

实施例编号	IκB激酶IC₅₀	PKA％抑制作用	PKC％抑制作用	CK II％抑制作用
实施例编号	IκB激酶IC₅₀	PKA％抑制作用	PKC％抑制作用	CK II％抑制作用	1	32	n.d.	n.d.	n.d.
2	0.61	24	15	35	1	32	n.d.	n.d.	n.d.
2	0.61	24	15	35	3	0.55	35	39	37
4	0.50	42	33	47	3	0.55	35	39	37
4	0.50	42	33	47	5	1.8	55	8	27
6	4.9	60	58	39	5	1.8	55	8	27
6	4.9	60	58	39	7	3.0	n.d.	n.d.	18
9	1.0	0	23	0	7	3.0	n.d.	n.d.	18

n.d.表示未测定。

Claims

1、式I化合物

其中

D是-C(O)-、-S(O)-或-S(O)₂-，

R⁷是氢或-(C₁-C₄)-烷基，

R⁸是R⁹或氨基酸的特性基团，

R⁹是1.芳基，其中的芳基是未取代的或取代的，

4.1芳基，其中的芳基是未取代或取代的，

4.4-O-R¹⁰，

4.5＝O，

4.6卤素，

4.7-CN，

4.8-CF₃，

4.9-S(O)_x-R¹⁰，其中的x是整数0、1或2，

4.10-C(O)-O-R¹⁰，

4.11-C(O)-N(R¹⁰)₂，

4.12-N(R¹⁰)₂，

4.13-(C₃-C₆)-环烷基，

4.14下式基团

4.15下式基团

R¹⁰是a)氢，

1.芳基，

2.具有5至14个环成员的杂芳基，

3.具有5至12个环成员的杂环，

4.卤素，

5.-N-(C₁-C₆)_n-烷基，其中的n是整数0、1或2，烷基是未取代的或者彼此独立地被卤素或-COOH单-、二-或三-取代，或

6.-COOH，

c)芳基，

d)具有5至14个环成员的杂芳基，或

e)具有5至12个环成员的杂环，并且

在(R¹⁰)₂的情况下，R¹⁰彼此独立地具有a)至e)含义，

Z是1.芳基，其中的芳基是未取代或取代的，

4.-C(O)-R¹¹，其中

R¹¹是1.-O-R¹⁰，或

2.-N(R¹⁰)₂，或

其中D、Z和R¹¹是如式II所定义的，

A是氮原子或基团-CH₂-，

B是氧原子、硫原子、氮原子或基团-CH₂-，

X是氧原子、硫原子、氮原子或基团-CH₂-，

Y是不存在的或者是氧原子、硫原子、氮原子或基团-CH₂-，或者

X和Y一起构成苯基、1，2-二嗪、1，3-二嗪或1，4-二嗪基团，

1.1.-OH，

1.2.-(C₁-C₈)-烷氧基，

1.3.卤素，

1.4.-NO₂，

1.5.-NH₂，

1.6.-CF₃，

1.7.亚甲二氧基，

1.8.-C(O)-CH₃，

1.9.-CH(O)，

1.10.-CN，

1.11.-C(O)-OH，

1.12.-C(O)-NH₂，

1.13.(C₁-C₄)-烷氧羰基，

1.14.苯基，

1.15.苯氧基，

1.16.苄基，

1.17.苄氧基，

1.18.四唑基，或

1.19.-OH，

R⁸和Z与它们各自键合的碳原子一起构成式IIc杂环

其中

D、R⁷和R¹⁰是如式II所定义的，

T是氧原子、硫原子、氮原子或基团-CH₂-，

W是氧原子、硫原子、氮原子或基团-CH₂-，

其他取代基R¹、R²、R³和R⁴彼此独立地是

1.氢，

2.卤素，

3.芳基，其中的芳基是未取代或取代的，

6.-(C₁-C₆)-烷基，

7.-CN，

8.-O-R¹⁰，

9.-N(R¹⁰)₂，

10.-S(O)_x-R¹⁰，其中的x是整数0、1或2，或

11.-CF₃，

R⁵是1.氢，

2.-OH，或

3.＝O，

R⁶是1.芳基，其中的芳基是未取代或取代的，

3.具有5至12个环成员的杂环，其中的杂环是未取代或单-、二-或三-取代的。

2、如权利要求1所要求保护的式I化合物，其中

取代基R¹、R²、R³和R⁴之一是式II基团，其中

D是-C(O)-，

R⁷是氢或-(C₁-C₄)-烷基，

1.3-O-R¹⁰，

1.4-S(O)_x-R¹⁰，其中的x是整数0、1或2，

1.5-N(R¹⁰)₂，

1.6下式基团

1.7下式基团

2.氨基酸的特性基团，

R⁹是1.R⁸，

2.1芳基，其中的芳基是未取代或取代的，

2.2卤素，

2.3-CN，或

2.4-CF₃，或

3.芳基，其中的芳基是未取代或取代的，

R¹⁰是a)氢，

1.芳基，

2.具有5至14个环成员的杂芳基，

3.具有5至12个环成员的杂环，

4.卤素，

6.-C(O)-OH，

c)芳基，

d)具有5至14个环成员的杂芳基，或

e)具有5至12个环成员的杂环，并且

在(R¹⁰)₂的情况下，R¹⁰彼此独立地具有a)至e)含义，

2.-C(O)-R¹¹，其中

R¹¹是1.-O-R¹⁰，或

2.-N(R¹⁰)₂，或

R⁷和R⁸与它们各自键合的氮原子与碳原子一起构成式IIa环，选自由吡咯、吡咯啉、吲哚、吡咯烷、吡啶、哌啶、戊间二烯、哒嗪、嘧啶、吡嗪、哌嗪、吡唑、咪唑、吡唑啉、咪唑啉、吡唑烷、咪唑烷、噁唑、四唑、1，2，3，5-噁噻二唑2-氧化物、三唑酮、噁二唑酮、异噁唑酮、噁二唑烷二酮、未取代或被F、-CN、-CF₃或-C(O)-O-(C₁-C₄)-烷基取代的三唑、3-羟基吡咯-2，4-二酮、5-氧代-1，2，4-噻二唑、异噁唑、2-异噁唑烷、异噁唑烷、吗啉、异噻唑、噻唑、硫代吗啉、异噻唑烷、吲唑、噻二唑、苯并咪唑、喹啉、三唑、酞嗪、喹唑啉、喹喔啉、嘌呤、蝶啶、吲哚、异喹啉、四氢喹啉和四氢异喹啉组成的组，或者

R⁸和Z与它们各自键合的碳原子一起构成式IIc环，选自由吡咯、吡咯啉、吡咯烷、吡啶、哌啶、吡唑啉、酞嗪、戊间二烯、哒嗪、嘧啶、吡嗪、哌嗪、吡唑、咪唑、1，3，4-噁二唑、咪唑啉、吡唑烷、咪唑烷、噁唑、异噁唑、2-异噁唑烷、异噁唑烷、吗啉、异噻唑、噻唑、异噻唑烷、四唑、硫代吗啉、吲唑、噻二唑、苯并咪唑、喹啉、三唑、喹唑啉、喹喔啉、嘌呤、蝶啶、吲哚、四氢喹啉、四氢异喹啉、1，2，3，5-噁噻二唑2-氧化物、噁二唑酮、异噁唑酮、三唑酮、噁二唑烷二酮、未取代或被F、-CN、-CF₃或-C(O)-O-(C₁-C₄)-烷基取代的三唑、3-羟基吡咯-2，4-二酮、5-氧代-1，2，4-噻二唑和异喹啉组成的组，

其他取代基R¹、R²、R³和R⁴彼此独立地是

1.氢，

2.卤素，

3.芳基，其中的芳基是未取代或取代的，

5.具有5至12个环成员的杂环，其中的杂环是未取代或取代的，或

6.-(C₁-C₆)-烷基，

7.-CN，

8.-CF₃，

9.-O-R¹⁰，

10.-N(R¹⁰)₂，或

11.-S(O)_x-R¹⁰，其中的x是整数0、1或2，

R⁵是氢，

R⁶是1.苯基，彼此独立地被下列取代基单-或二-取代：

1.1-CN，

1.2-CF₃，或

1.3卤素，

1.4-O-R¹⁰，

1.5-N(R¹⁰)₂，

1.6-NH-C(O)-R¹¹，

1.7-S(O)_x-R¹⁰，其中的x是整数0、1或2，

1.8-C(O)-R¹¹，或

1.9-(C₁-C₄)-烷基-NH₂，

3、如权利要求1或2所要求保护的式I化合物，其中

取代基R¹、R²、R³和R⁴之一是式II基团，其中

D是-C(O)-，

R⁷是氢，

Z是-C(O)-OH或-C(O)-NH₂，

1.1-S(O)-R¹⁰，其中的R¹⁰是如下所定义的，

1.2-N(R¹⁰)₂，其中的R¹⁰是如下所定义的，或

1.3吡咯，或

2.氨基酸的特性基团，

R¹⁰是a)氢，

其他取代基R¹、R²、R³和R⁴在每种情况下都是氢，

R⁵是氢，

R⁶是苯基或吡啶，

R⁹是1.氢，

4、用于制备如权利要求1至3一项或多项所要求保护的式I化合物的方法，该方法包含

与式III化合物的酰基氯或活化酯反应，

其中D1是-COOH或磺酰卤，R⁵、R⁶和R⁹是如式I所定义的，

除去保护基团后，转化为式I化合物，或者

其中R⁷和R⁸是如式I所定义的，E是N-氨基保护基团，

得到式VI化合物，

从载体裂解后，将式VI化合物转化为式I化合物，或者

c)将式I化合物转化为生理学上可接受的盐。

5、药物，包含有效量的至少一种如权利要求1至3一项或多项所要求保护的式I化合物以及药学上适合的与生理学上可耐受的赋形剂、添加剂和/或其他活性化合物和助剂。

6、至少一种如权利要求1至3一项或多项所要求保护的式I化合物用于制备药物的用途，该药物用于预防和治疗NFκB活性增加与其过程有关的疾病。

7、如权利要求6所要求保护的用途，用于治疗慢性运动器官障碍，例如炎症、免疫性或代谢性急性与慢性关节炎、关节病、类风湿性关节炎，或变性性关节障碍，例如骨关节病、椎关节强硬、半月板或髌骨损伤或韧带破裂之后关节创伤或长期关节固定术继发的软骨损坏，或结缔组织障碍，例如胶原性疾病和牙周病，肌痛和骨代谢失调，或者由肿瘤坏死因子α(TNFα)过度表达或TNFα浓度增加导致的障碍，例如恶病质、多发性硬化、颅-脑创伤、克罗恩氏病和肠肿瘤，或诸如下列障碍：动脉粥样硬化、狭窄、溃疡形成、阿尔茨海默氏病、肌肉消瘦、癌性障碍(细胞毒性化合物疗法的强化)、心肌梗塞、痛风、败血症、败血症性休克、内毒素性休克、病毒感染(例如流感、肝炎、HIV感染、AIDS或由腺病毒或疱疹病毒导致的障碍)、寄生物感染(例如疟疾或麻风)、真菌感染或酵母感染、脑膜炎、慢性炎性肺疾病(例如慢性支气管炎或哮喘)、急性呼吸窘迫综合征、急性滑膜炎、肺结核、牛皮癣、糖尿病、器官受体对被移植器官的急性或慢性排斥反应、移植物-对-宿主障碍和炎性血管障碍。

8、制备药物的方法，该方法包含利用药学上适合的与生理学上可耐受的赋形剂、如果适当的话还有适合的活性化合物、添加剂或助剂将至少一种如权利要求1至3一项或多项所要求保护的式I化合物制成适合的给药剂型。