CN1165212C - 用人工蘑菇栽培床栽培巴西蘑菇(Agaricusblazei)子实体的方法 - Google Patents

Abstract

一种用人工蘑菇栽培床栽培Agaricus blazei子实体的方法和在人工蘑菇栽培床中栽培Agaricus blazei子实体的含谷物的培养基，所述方法包括在含谷物的培养基中接种Agaricus blazei。按照需要，该培养基还包含营养物、培养基基体材料等。

Description

用人工蘑菇栽培床栽培巴西蘑菇 (Agaricus blazei)子实体的方法

技术领域

本发明涉及一种栽培蘑菇子实体的菇床栽培方法，以及该方法所用的培养基。

背景技术

属于蘑菇科蘑菇属的菇类已知有各种品种(以下统称为“蘑菇”)，包括Agaricus blazei Murrill、双孢蘑菇、Agaricus sylvaticus、野生蘑菇等等。例如，Agaricus blazei Murrill也称作“hime-matsutake”或“kawari-haratake”(Takashi MIZUNO和Masamitsu KAWAI编辑，“Kinoko no Kagaku/Seikagaku”，Gakkai Shuppan Center出版，pp.223-228(1992))。Agaricus blazei Murrill天然生长在位于巴西东南部的圣保罗郊区Piedade的山中，且当地居民一直食用其子实体来延年增寿。

近来，有报导蘑菇子实体的提取物对治疗成人的疾病和癌症是有效的，且蘑菇是一种极有价值的药用菇。因此，对蘑菇子实体的需求量越来越多。到目前为止，欧洲和美国对蘑菇子实体的需求已超过日本，而据称在日本蘑菇作为一种药用菇，其需求越来越大。

另外，目前蘑菇子实体仅靠采摘天然蘑菇或在温室如乙烯塑料暖房或预制式温室中栽培获得，在温暖地区通过“垄作法”(ridge culturemethod)栽培获得。

由蘑菇天然生长在巴西东南部地区这个事实可以看出，即使是采摘天然蘑菇，其也有一个缺点，即仅能在温暖地区获得天然蘑菇。“垄作法”是一种可常规使用的栽培蘑菇的唯一方法。该方法是按以下方式进行的。用稻草、甘蔗渣等发酵制备的混合料起垄，然后用土覆盖拢，形成拢床。在垄存在混合料的部分接种蘑菇的菌种砖，然后生长出蘑菇的子实体。这种垄作栽培方法在温室中进行，但是由于其粗糙，蘑菇子实体的产量低，并且因为温室建在室外而易受气候的影响。因此，不能实现全年间蘑菇子实体的稳定生产。

由此，蘑菇子实体可以稳定集中地大量培养且不受任何气候影响的菇床栽培法是人们所期望的。

发明内容

本发明的第1发明是一种用于栽培双孢蘑菇子实体的菇床栽培方法，该方法包括在包含谷物的培养基中培养双孢蘑菇子实体的步骤，其中所说的谷物包括小米、德干谷(Deccan grass)、中华黍、水稻和小麦中的至少一种，并且在培养基中以30-100重量％的比例含有谷物。

本发明的第2发明是在第1发明中，培养基包含小米、德干谷和中华黍。

本发明的第3发明是在第2发明中，以干重量比计，培养基包含35-45％的小米、35-45％的德干谷和10-30％的中华黍。

本发明的第4发明是在第1发明中，培养基还包含营养物和培养基基质中的至少一种，其中，所述营养物含有选自牛粪、家禽粪、树皮、豆腐废料、豆荚、咖啡沉渣、清酒(米酒)酒泥或食品生产的副产品中的至少一种，所述培养基基质含有选自锯木屑、木屑、棉子皮、椰子饼、苔藓泥炭和园艺用土中的至少一种。

本发明的第5发明是在第4发明中，相对于100重量份谷物，培养基中包含0-300重量份的营养物和0-300重量份的培养基基质。

本发明的第6发明是一种栽培双孢蘑菇子实体所用的菇床栽培培养基，该培养基包含谷物，其中所说的谷物包括小米、德干谷、中华黍、水稻和小麦中的至少一种，并且在该培养基中以30-100重量％的比例含有谷物。

本发明的第7发明是在第6发明中，培养基包含小米、德干谷和中华黍。

本发明的第8发明是在第6发明中，以干重量比计，培养基包含35-45％的小米、35-45％的德干谷和10-30％的中华黍。

本发明的第9发明是在第6发明中，该培养基还包含营养物和培养基基质中的至少一种，其中，所述营养物含有选自牛粪、家禽粪、树皮、豆腐废料、豆荚、咖啡沉渣、清酒(米酒)酒泥或食品生产的副产品中的至少一种，所述培养基基质含有选自锯木屑、木屑、棉子皮、椰子饼、苔藓泥炭和园艺用土中的至少一种。

本发明的第10发明是在第9发明中，相对于100重量份谷物，培养基中包含0-300重量份的营养物和0-300重量份的培养基基质。

本发明的第11发明是在第1发明中，还含有粪肥的培养基在培养双孢蘑菇之前被灭菌。

本发明的第12发明是在第6发明中，该培养基还包含粪肥，且培养基经过灭菌。

本发明的第13发明是一种由第1发明的方法获得的蘑菇子实体。

本发明的第14发明是一种用于栽培双孢蘑菇子实体的菇床栽培方法，该方法包括在含有谷物的培养基中培养蘑菇以形成菇床，其中，所述谷物包括小米、德干谷、中华黍、水稻和小麦中的至少一种，并且蘑菇子实体在菇床上形成。

附图说明

图1是通过实施例1描述的栽培方法第7天获得的蘑菇子实体的照片。

图2是通过实施例2描述的栽培方法第7天获得的蘑菇子实体的照片。

具体实施方式

下面将详细描述本发明的菇床栽培方法和这种方法所用的培养基。

1.栽培蘑菇子实体的菇床栽培培养基：

菇床栽培所用的培养基中包含谷物。

本发明说明书中，术语“谷物”包括谷类的所有培育品种，例如小米、德干谷、中华黍、稻米、甘蔗、小麦、大麦和黑麦。小米、德干谷和中华黍是特别优选的谷物，且培养基中优选包含这三种谷物。根据本发明，可以使用谷物的种子或除去种子的植物体，如麦秆、麦壳、稻壳和甘蔗渣。当使用除去种子的植物体如麦秆时，优选使用直径15mm或更小且长度15mm或更小的小块形式的植物体。谷物可以以任何不受限制的形式包含在培养基中。例如，谷物可以是粒状形式，如磨碎的玉米穗轴或去掉种皮的小麦和德干谷的种子；小块形式，如切碎的麦秆；或粉末形式，如米糠、玉米糠、麦麸或磨碎的大麦。在本发明中可以使用一种类型的谷物或混合使用任意几种谷物。

按照需要，培养基还可以包含除谷物外的其它成分，如营养物、培养基基质，以及添加剂。可用的营养物包括本领域中用作营养物的任何原料。例如，可以使用牛粪、家禽粪、树皮、豆腐废料、豆荚、咖啡沉渣、清酒(米酒)酒泥或食品生产的副产品。

可用的培养基基质包括锯木屑、木屑、棉子皮、椰子饼、苔藓泥炭和园艺用土。可用的添加剂包括石灰、牡蛎壳、糖蜜和植物液体肥料。

本发明培养基中包含营养物，其含量相对于100重量份的谷物，为0-300重量份，优选10-100重量份，更优选20-50重量份。包含在培养基中的培养基基质的量，相对于100重量份的谷物，为0-300重量份，优选50-200重量份，更优选100-150重量份。培养基中包含的添加剂的量，相对于100重量份的谷物，为10重量份或更少。

培养基中包含的谷物的量，基于培养基的总重量，优选30wt％或更多，更优选35wt％或更多，最优选40wt％或更多。上述的“重量”是“干重”，具体说是指各成分在90℃下干燥5小时之后测定的重量。在本说明书中，以下有关培养基组成所使用的术语“重量”指干重。

如上所述，本发明的培养基可以仅包含谷物。这种培养基的一个优选实例是包含35-45wt％小米、35-45wt％德干谷和10-30wt％中华黍的培养基。除谷物以外，还包含其它成分的培养基的一个优选实例是包含例如30-40wt％谷物、10-20wt％营养物和40-50wt％培养基基质的培养基。

以本领域技术人员公知的方法将上述培养基成分和水混合并且捏和。由此制备出菇床栽培方法使用的培养基。优选，将培养基成分的混合物和大约两倍于混合物重量的水捏和，然后煮沸直至大部分水蒸发掉。然后，将混合物冷却。

按照需要，将培养基容纳在适宜类型的培养容器中。可以经得起灭菌过程的任何容器均是可用的，而不考虑其形状、尺寸或材料。例如，可以使用蘑菇栽培中最常用的具有850ml容积和58mm直径的瓶子，或者用于菇床栽培的其它类型的容器，如可以使用袋栽培用的袋。

2.灭菌：

在将上述获得的菇床栽培培养基放入培养容器中时或放入之后，对其进行灭菌。可以执行在一般灭菌标准内的任何灭菌条件，对此不作具体的限定。示例性灭菌方法包括高压蒸气灭菌法和常压蒸气灭菌法。例如，优选在121℃下进行的高压蒸气灭菌，灭菌时间60分钟。

为对大量的培养基实行蒸气灭菌，优选进行较长时间的灭菌。

3.蘑菇接种：

收集蘑菇的天然或栽培子实体的菌丝或孢子，并让菌丝增生或让孢子在培养基中生长，或者，将微生物保藏单位或研究所中储藏的菌株的菌丝增生，来制备蘑菇的菌种砖。

将所得的菌种砖和菇床栽培培养基混合进行接种。菌种砖和培养基的体积比优选为1∶100-1∶25，但没有特定的限制。

4.子实体的栽培：

4.1培养：

为栽培蘑菇的子实体，首先培养接种在培养基中的蘑菇的菌种砖，以增生蘑菇的菌丝，由此使菌丝散布完成。本说明书中，“菌丝散布完成”指菌丝扩散到整个培养基。菌种砖可以在允许蘑菇生长的任何条件下培养，不作具体的限定。优选，培养温度为15℃-30℃，湿度为50％-75％，且CO₂浓度为2500ppm或更低。更优选，温度为20℃-28℃，温度为60％-70％，且CO₂浓度为300ppm-2000ppm。更加优选，温度为25℃，湿度为60％RH-70％RH，且CO₂浓度为600ppm-1500ppm。用菌种砖接种的培养基可以用光照射，但优选在黑暗处放置。菌丝散布完成所需的时间根据培养基的体积即培养所用容器的容量而不同。可选择地，在菌丝散布完成至菌丝成熟后，菌丝可以继续培养另外几天，由此促进子实体的形成。成熟在5-20天内完成，优选在10-15天内，但成熟过程不是必需的。

4.2子实体的诱发形成：

在菌种砖得到培养之后，进行子实体的诱发形成。在诱发之前，培养基的表面可以选择性地用土覆盖，例如用园艺常用的苔藓泥炭。土的厚度优选为1.0cm-3.5cm，但没有具体限制。如果不用土覆盖表面，则将前面4.1部分中获得的培养物就在诱发条件下按现状培养。如果表面用土覆盖，则将前面4.1部分中获得的培养物用土覆盖，然后在诱发条件下培养。

诱发一般可以在允许蘑菇生长的任何条件下进行，对此不作具体限制。优选，温度为20℃-30℃，湿度为80％-98％，且CO₂浓度为2500ppm或更低。更优选，温度为22℃-28℃，湿度为85％-95％，且CO₂浓度为300ppm-2000ppm。更加优选，温度为25℃，湿度为95％RH，且CO₂浓度为600ppm-2000ppm。培养基可以有光照射，但优选在黑暗处放置。诱发阶段的温度和CO₂浓度优选高于培养阶段。诱发所需的天数没有具体限制，但当幼小子实体的形成可以被人视觉识别时，诱发完成。

4.3子实体的生长：

4.2部分中获得的幼小子实体可以在允许蘑菇生长的任何条件下生长，对此不作具体限制。优选，温度为20℃-30℃，湿度为75％-95％，且CO₂浓度为2500ppm或更低。更优选，温度为22℃-28℃，湿度为80％-90％，且CO₂浓度为300ppm-2000ppm。更加优选，温度为25℃，湿度为90％RH，且CO₂浓度为600ppm-1500ppm。子实体需要用光照射。子实体优选每天在50Lux-500Lux下照射1-8小时，更优选每天在100Lux-500Lux下照射2-6小时，且更优选每天在200Lux-500Lux下约3-约5小时。适宜控制照射强度和CO₂浓度，以便获得所希望形式的子实体。

根据蘑菇生长的条件，生长所需的天数可以不同。当生长到所希望的大小时，采集蘑菇子实体。

                         实施例

以下将描述本发明的实施例。但本发明不受这些实施例的限制。

实施例1：蘑菇(Agaricus blazei Murrill)的瓶栽培：

1.培养基的制备：

将德干谷、小米和中华黍以2∶2∶1的干重量比混合，并且加入两倍重量于所得混合物的水，并煮沸。当大部分水分被蒸发掉时，停止煮沸并将所得的混合物冷却。

当所得混合物冷却至20℃或更低温度时，往许多聚乙烯瓶的每个瓶中放入600g培养基，所说的瓶具有58mm直径的开口和850ml的容积，并且封上瓶盖。接下来，在1atm(表压)和121℃下进行60分钟的高压蒸气灭菌。然后，将瓶在清洁室中冷却直至培养基温度降至18℃。

2.蘑菇的接种：

从可市售获得的蘑菇(Agaricus blazei Murrill)的子实体中采集孢子，并且在马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基(PDA培养基)上进行菌丝的发芽和繁殖，培养条件为温度25℃、湿度65％RH并在黑暗处培养25天。将通过培养和增生菌丝获得的大小为5mm×5mm的菌丝片新接种在PDA培养基上，并在相同条件下培养菌丝片。重复该过程三次，以便纯化菌丝。将以该方式获得的菌丝片和与前面第1部分所说的培养基具有相同组成的培养基的混合物作为菌种砖使用。

将15g菌种砖和前面第1部分获得的经过灭菌的培养基混合，来进行接种。对每瓶进行这样的接种，共接种16瓶。(菌种砖和培养基的体积比为1∶40)。

3.子实体的栽培：

3.1培养：

在25℃、60-70％RH湿度、1500ppm或更低CO₂浓度和黑暗处的条件下培养菌种砖。20天后菌丝散布完成，但菌丝继续培养另外20天以便使之成熟。总的培养期间为40天。

3.2子实体的诱发形成：

在培养完成之后，按两种方法进行诱发：(1)除去瓶盖而不刮掉所得菇床的表面，(2)用苔藓泥炭覆盖所得菇床的表面至1cm厚，而不刮掉菇床的表面。

在两种情况下，在25℃、95％RH湿度、2000ppm或更低CO₂浓度和在黑暗处的条件下进行诱发。

子实体形成所需的天数基本上不受菇床表面是否覆盖了苔藓泥炭的影响。两种情况下，14-17天后观察到幼小子实体的形成。

从这些结果中发现，无论菇床的表面是否用苔藓泥炭覆盖，均可以形成蘑菇子实体。

3.3子实体的生长：

让3.2部分获得的幼小子实体在25℃、90％RH湿度和1500ppm或更低CO₂浓度的条件下生长。在这个生长阶段，将子实体每天在200Lux-500Lux下照射3-5小时。

如图1所示，子实体在第7天生长到具有5cm长的菌柄。子实体的产量每瓶平均为约50g。

本实施例所用的培养基的组合物是颗粒的形式，因此培养基中的水分难以均匀分布。但是，发现通过将培养基和菌种砖混合进行的接种具有使培养发展得更顺利的优点，并由此更稳定形成蘑菇的子实体。

实施例2：蘑菇(Agaricus blazei Murrill)的袋栽培

1.培养基的制备：

将米糠和麦麸作为谷物、牛粪作为营养物和锯木屑作为培养基基质，按以下表1所示的重量比混合，然后用水捏和。不同类型的锯木屑具有不同的水分含量。在该实施例中，使用水分含量63％的锯木屑。耐热聚乙烯袋的每个袋中装填1500g的所得混合物。接下来，在1atm(表压)和121℃下进行60分钟的高压蒸气灭菌。然后，将袋在清洁室中冷却直至培养基温度降至18℃。

                          表1

                 培养基的组成(每袋)

原  料	重  量	水分含量
			米糠	220g	12％
麦麸	150g	12％
			牛粪	150g	56％
锯木屑	480g	63％
			水	500g	100％
总计	1500g	61％

2.蘑菇的接种：

按实施例1第2部分描述的相同方式获得菌种砖。将80g菌种砖和以上实施例2第1部分获得的装在每袋中的经过灭菌的培养基混合，总共接种20袋(菌种砖和培养基的体积比为1∶25)。接种后，将袋密封。

3.子实体的栽培：

3.1培养：

在23-25℃、60-70％RH湿度、1500ppm或更低CO₂浓度和黑暗处的条件下培养菌种砖。约40天后菌丝散布完成，但菌丝继续培养另外10天以便使之成熟。总的培养期间为50天。

3.2子实体的诱发形成：

在培养完成之后，如下进行诱发。在培养约50天时，在离所得的菇床的上表面约5cm处，将袋的顶部切掉，并且用园艺用的苔藓泥炭或山土将表面覆盖。不刮掉菇床的表面。

在18-22℃(比以上实施例2第3.1部分的温度低3-5℃)、90-95％RH湿度、800ppm或更低CO₂浓度和在黑暗处的条件下进行诱发。在诱发期间进行喷水，以防止覆盖在菇床表面的苔藓泥炭或山土变干。

从开始诱发之后的大约20天起，在菇床表面观察到幼小子实体的形成。将这个点设定为“生长”的开始。

3.3子实体的生长：

让3.2部分获得的幼小子实体在18-22℃、90-95％RH湿度和800ppm或更低CO₂浓度的条件下生长。在这个生长阶段，将子实体每天在100Lux下照射2-3小时。

如图2所示，子实体在第6或7天时生长到具有约8-12cm长的菌柄。在菌盖打开之前采集子实体。子实体的产量每袋平均为约200g。

发现，根据这些实施例的方法实现了蘑菇子实体的更稳定栽培。

根据本发明，实现了被认为是不可能的在菇床中的蘑菇栽培。本发明的栽培方法实现了不管地点、季节或气候的蘑菇子实体的简易栽培，开启了批量生产的途径。在约60-65天之内(对总的栽培而言)的栽培是可能的，这与常规的蘑菇栽培非常不同。

根据常规的“垄作法”，栽培在户外进行。因此，垄床受腐生生物污染的危险和蘑菇菌丝受苍蝇和土壤害虫侵害的危险高，因而蘑菇的稳定生产是困难的。

在本发明的栽培方法中，菇床栽培培养基经过培养基灭菌之后用菌种砖接种，因而培养基中的腐生生物被杀死，且接种后的培养基在基本上无菌状态下培养。因此，本发明的栽培方法的优点是可以克服常规方法的问题。

此外，在本发明的栽培方法中，可以相对自由地选择培养基中包含的成分及其混合比。因此，本发明的栽培方法具有可以提高药用成分含量的优点，即通过将起始原料物质添加到培养基中，从这些物质中通过蘑菇药用成分的生物合成途径形成药用成分。

到目前为止，蘑菇中包含的最具抗肿瘤活性的物质是多糖，包括β-D-葡聚糖。核酸、卵磷脂、甾族化合物、类脂化合物等等也已知具有抗肿瘤活性。因此，将葡萄糖、蔗糖或淀粉添加到培养基中可有效提高蘑菇中的抗肿瘤活性物质(即药用成分)。即使当将来清楚地了解了生物合成的途径时，加入蘑菇药用成分生物合成途径的起始原料，常规方法也不会很好地起作用。原因在于起始原料受到培养基中存在的其它微生物的降解，造成起始原料效果降低或促进了其它微生物的增生而抑制了所想要的蘑菇菌丝的增生。

此外，在本发明的栽培方法中，所用的培养容器不受尺寸或形状的限制，可以使用许多小的培养容器。因此，本发明方法提供的一项优点是可以有效利用培养设备的三维空间来改进成本有效果。

另外，根据本发明栽培方法获得的子实体具有无泥土味的优点，由此在煎煮后作为药物是更令人可以接受的。

Claims (14)

1.一种用于栽培双孢蘑菇子实体的菇床栽培方法，该方法包括在包含谷物的培养基中培养双孢蘑菇子实体的步骤，其中所说的谷物包括小米、德干谷、中华黍、水稻和小麦中的至少一种，并且在培养基中以30-100重量％的比例含有谷物。

2.根据权利要求1的方法，其中培养基包含小米、德干谷和中华黍。

3.根据权利要求2的方法，其中以干重量比计，培养基包含35-45％的小米、35-45％的德干谷和10-30％的中华黍。

4.根据权利要求1的方法，其中培养基还包含营养物和培养基基质中的至少一种，其中，所述营养物含有选自牛粪、家禽粪、树皮、豆腐废料、豆荚、咖啡沉渣、清酒酒泥、米酒酒泥或食品生产的副产品中的至少一种，所述培养基基质含有选自锯木屑、木屑、棉子皮、椰子饼、苔藓泥炭和园艺用土中的至少一种。

5.根据权利要求4的方法，其中相对于100重量份谷物，培养基中包含0-300重量份的营养物和0-300重量份的培养基基质。

6.一种栽培双孢蘑菇子实体所用的菇床栽培培养基，该培养基包含谷物，其中所说的谷物包括小米、德干谷、中华黍、水稻和小麦中的至少一种，并且在该培养基中以30-100重量％的比例含有谷物。

7.根据权利要求6的培养基，其中培养基包含小米、德干谷和中华黍。

8.根据权利要求6的培养基，其中以干重量比计，培养基包含35-45％的小米、35-45％的德干谷和10-30％的中华黍。

9.根据权利要求6的培养基，该培养基还包含营养物和培养基基质中的至少一种，其中，所述营养物含有选自牛粪、家禽粪、树皮、豆腐废料、豆荚、咖啡沉渣、清酒酒泥、米酒酒泥或食品生产的副产品中的至少一种，所述培养基基质含有选自锯木屑、木屑、棉子皮、椰子饼、苔藓泥炭和园艺用土中的至少一种。

10.根据权利要求9的培养基，其中相对于100重量份谷物，培养基中包含0-300重量份的营养物和0-300重量份的培养基基质。

11.根据权利要求1的方法，还含有粪肥的培养基在培养双孢蘑菇之前被灭菌。

12.根据权利要求6的培养基，该培养基还包含粪肥，且培养基经过灭菌。

13.一种由权利要求1的方法获得的蘑菇子实体。

14.一种用于栽培双孢蘑菇子实体的菇床栽培方法，该方法包括在含有谷物的培养基中培养蘑菇以形成菇床，其中，所述谷物包括小米、德干谷、中华黍、水稻和小麦中的至少一种，并且蘑菇子实体在菇床上形成。