WO1998035546A1 - Methode de culture de sporophores d'agaricus blazei dans un lit artificiel de culture de champignons - Google Patents

Methode de culture de sporophores d'agaricus blazei dans un lit artificiel de culture de champignons Download PDF

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WO1998035546A1
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Makoto Iwata
Kenji Furuya
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Imb Kabushiki Gaisha
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    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
    • A01G18/00—Cultivation of mushrooms
    • A01G18/40—Cultivation of spawn
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    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
    • A01G18/00—Cultivation of mushrooms
    • A01G18/20—Culture media, e.g. compost
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
    • A01G18/00—Cultivation of mushrooms
    • A01G18/50—Inoculation of spawn
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
    • C05F—ORGANIC FERTILISERS NOT COVERED BY SUBCLASSES C05B, C05C, e.g. FERTILISERS FROM WASTE OR REFUSE
    • C05F11/00—Other organic fertilisers

Definitions

  • the present invention relates to a method for cultivating an agaricus mushroom fruit body on an artificial fungal bed and a medium used for culturing the fruit body of agaritas mushroom.
  • Agaricus mushrooms Many mushrooms belonging to the Agaricus genus Agaricus (hereinafter collectively referred to as Agaricus mushrooms) are known in large numbers. Is mentioned.
  • Agaricus blazei Murrill is also known as Himematsutake or Kauriharatake (edited by Taku Mizuno and Masamasa Kawai: Mushroom Chemistry and Biochemistry, Gakkai Shuppan Center, pages 223 to 228 (1992)).
  • the mushrooms grow natively in the mountains of Piedate, at the mouth of Sampa, in southeastern Brazil, and have been consumed by residents for a long time.
  • the fruiting bodies of Agaricus mushrooms are either collected from natural sources or cultivated in a greenhouse such as a greenhouse and a prefabricated house by a “ridge method”.
  • the method of the present invention for cultivating a fruit body of agaricus mushrooms on an artificial fungal bed includes a step of culturing agaricus mushrooms in a medium containing grains.
  • the cereal is at least one of agar, hihi, millet, rice, and wheat.
  • the culture medium is a culture medium consisting of agar, hieh, and millet.
  • the medium comprises 35-45% on dry weight, 35-45% hee, and 10-30% millet.
  • the medium further comprises at least one of a nutrient source and a medium substrate.
  • the nutrient source is contained at a ratio of 0 to 300 parts by weight with respect to 100 parts by weight of the cereal, and the medium base is contained at a ratio of 0 to 300 parts by weight based on 100 parts by weight of the cereal. .
  • the culture medium for artificial fungal bed cultivation of the fruit bodies of Agaricus mushrooms of the present invention contains cereals.
  • the cereal comprises agar, hieh, millet, rice, and It is at least one kind of wheat.
  • the medium is composed of agar, hieh, and millet. In a preferred embodiment, the medium consists of 35-45% on dry weight, 35-45% of heat, and 0-30% of millet.
  • the medium further comprises at least one of a nutrient source and a medium substrate.
  • the nutrient source is contained at a ratio of 0 to 300 parts by weight with respect to 100 parts by weight of the cereal, and the medium base is contained at a ratio of 0 to 300 parts by weight, based on 100 parts by weight of the cereal.
  • FIG. 1 is a photograph of the fruit body of Agaricus mushroom on the 7th day of growth obtained by the cultivation described in Example 1.
  • FIG. 2 is a photograph of the fruiting body of Agaricus mushroom on the 7th day of growth obtained by the cultivation described in Example 2.
  • the culture medium used for artificial bed culture includes cereals.
  • the grain includes all cultivated plants of the family Poaceae, such as aca, hihi, millet, rice, sugarcane, and wheat (for example, wheat, oat, rye).
  • Particularly preferred cereals are agar, hee and millet, and it is preferred that the cereal comprises these components.
  • cereal seeds may be used, or plant matter other than seeds such as straw, bran, rice husk, and sugarcane bagasse may be used.
  • plants other than seeds such as straw It is preferable to use the material cut into pieces having a diameter of 15 mm and a length of 15 or less.
  • the form of the grain is not particularly limited, and it may be in the form of granules such as ground bean paste, and seeds of dehulled aha and hieh, or in the form of flakes such as straw.
  • the powder may be a powder such as rice power, corn power, muginu power, and ground wheat.
  • one kind of cereal may be used, or any kind of cereal may be used in combination.
  • the medium of the present invention may further contain other components other than cereals, such as nutrient sources, medium bases, and additives, if necessary.
  • a nutrient source any of the materials used as a nutrient source in this field such as cow dung compost, chicken dung compost, bark compost, okara, soybean hull, coffee grounds, liquor ground, and food production by-products can be used.
  • the medium substrate includes sawdust, wood chips, cottonseed halblanc, coconut peat, seeds, horticultural soil, and the like.
  • Additives include lime, oyster hulls, molasses, and liquid plant fertilizers.
  • the nutrient source is 0 to 300 parts by weight, preferably] 0 to 100 parts by weight, more preferably 20 parts by weight, based on 100 parts by weight of the cereal.
  • the culture substrate is used in an amount of 0 to 300 parts by weight, preferably 50 to 200 parts by weight, more preferably 100 to 150 parts by weight, based on 100 parts by weight of the grain. Contained.
  • the additive is contained in an amount of 10 parts by weight or less based on 100 parts by weight of the grain.
  • the cereal is preferably contained in a proportion of 30% by weight or more, more preferably 35% by weight or more, and most preferably 40% by weight or more of the whole medium.
  • the above weight is a dry weight, and specifically refers to a weight after each component is dried at 90 ° C for 5 hours.
  • all references to the weight of the medium composition in this specification are based on the dry weight, specifically, the weight of each component after drying at 90 ° C for 5 hours.
  • the medium of the present invention may be, for example, a medium consisting only of cereals
  • a medium consisting only of cereals
  • Preferable examples of such a medium include a medium comprising 35 to 45% by weight of agar, 35 to 45% by weight of a hair, and 10 to 30% by weight of millet.
  • Preferred examples of the medium containing a medium component other than the grain include a medium containing 30 to 40% by weight of a grain, 10 to '20% by weight of a nutrient source, and 40 to 50% by weight of a medium base material.
  • a medium used for the artificial bed cultivation method of the present invention is prepared.
  • Preferably, about twice the weight of the mixture is added to the mixture of the above medium components, the mixture is boiled until no more water is left, and then cooled.
  • the medium is contained in an appropriate container as necessary.
  • the shape, size, and material of the culture vessel are not limited as long as it can withstand sterilization.
  • the most commonly used mushroom cultivation bottle with a capacity of 850 ml and a diameter of 58 mm may be used, or other containers for cultivation of fungal beds, such as bags for bag cultivation, may be used.
  • the above-mentioned medium for cultivation of artificial bed is sterilized as it is or after being packed in a culture vessel.
  • Sterilization conditions are not particularly limited as long as they are within the range of commonly used sterilization treatment conditions.
  • sterilization methods include high-pressure steam sterilization and normal-pressure steam sterilization. For example, high-pressure steam sterilization at 12 C for 60 minutes is preferable. If large volumes of medium are to be steam sterilized, it is preferable to extend the sterilization time.
  • hyphae or spores may be collected from any of the fruiting bodies of the naturally or artificially grown agaricus mushrooms and grown on a medium for use.
  • the hyphae of the strain preserved in the above may be used by growing it in a medium.
  • Inoculation is carried out by mixing the obtained inoculum with a sterilized artificial culture medium for bed culture.
  • the volume ratio of the inoculum to the medium is not particularly limited, but is 1: 100 to 1:25. Is preferred.
  • the inoculum inoculated in the culture medium is cultivated, the agaricus mushrooms are grown, and the fungus is completed. It is said that the bacteria rotation has been completed).
  • the culture conditions are not particularly limited as long as Agaricus mushrooms can grow.
  • the temperature is 15 ° C or higher and the humidity is 50% or higher and 75% or lower.
  • the concentration is 2500 ppm or lower. More preferably, the temperature is 2ITC or higher and 28 ° C or lower, and the humidity is 60% or higher. 70% or less, C ( ⁇ concentration is 300 ⁇ 20 OOppm.
  • the time required for cell culture varies depending on the volume of the culture medium (the volume of the container used for cultivation).
  • the ripening of the mycelium can promote the development of fruiting bodies.When ripening is performed, the period can be from 5 days to 20 days, preferably from 10 days to 15 days. 4.2 Not sprouting
  • soil covering Before the sprouting operation, soil covering may be performed.
  • the thickness of the c cover soil which include peak one Tomos (a type of moss used in horticulture) is not particularly limited, 1.0Cm ⁇ 3.5Cm are preferred. If soil covering is not performed, culture the culture described in 4.1 above as it is under sprouting conditions. When covering soil, cover the surface of the culture described in 4.1 above, and then culture under sprouting conditions.
  • the conditions for sprouting are not particularly limited, as long as the conditions allow the growth of Agaricus mushrooms.
  • the temperature is 20 ° C. or more and 30 ° C. or less, the humidity is 80% or more and 98% or less, and the CO 2 concentration is 2500 ppm or less. More preferably, the temperature is 22 ° C or more and 28 or less, the humidity is 85% or more and 95% or less, and the CO 2 concentration is 300 ⁇ or more and 2200 ppm or less. Further preferred details, temperature 25, humidity 95% RH, C0 2 concentration is 2000ppm or less than 600 ppm. Light The firing force may or may not be present, preferably in dark conditions. Sprouting conditions is preferably a high humidity and high co z concentration than culture conditions. The number of days of cultivation under sprouting conditions is not particularly limited, and is until the formation of young fruit bodies is visually observed.
  • the growth of the juvenile body obtained in Section 2 is not particularly limited as long as the agaricus mushroom can grow.
  • the temperature is 20 ° C or more and 30 ° C or less
  • the humidity is 75% or more and 95% or less
  • the C ( ⁇ concentration is 2500 ppm or less. More preferably, the temperature is 22 or more and 28 or less, humidity of 90% to 80% or less, C (V concentration is less 300 Rabbit m to 2000 Rabbit m.
  • Light irradiation is required Light irradiation is preferably 50 Lux or more and 500 Lux or less for 1 hour or more and 8 hours or less per day, more preferably lOOLux or more and 500 Lux or less for 2 days / day. Approximately 3 to 5 hours per day at 200 LI or more and 500 Lux or less to obtain the desired form of fruiting body. To control.
  • the number of days for growing may vary depending on the growth conditions of the Agaricus mushroom. Once the fruit body of the agaricus mushroom has grown to the desired size, harvest the fruit body.
  • Example 1 Bottle cultivation of Agaricus mushrooms (Agaricus blazei Murr ill)
  • a medium cooled to 20 ° C or less was filled with a polypropylene vial with a diameter of 58 mm and a capacity of 850 ml. Stuffed with 600g and put a cap on. Next, high-pressure steam sterilization was performed at 121 ° C and latm (gauge pressure) for 60 minutes, and then cooled in a clean room until the medium temperature reached 18 ° C.
  • 15 g of the inoculum was inoculated by mixing with the sterilized medium described in 1 above. In this way, 16 bottles of medium were inoculated (the volume ratio of the inoculum to the medium was 1: 4).
  • Bacteria were not removed and two methods were used: simply removing the cap from the bottle and covering the surface of the bacterial bed with peat moss to a thickness of 1 cm.
  • the growth of the young fruit body obtained in 3.2 was performed at a temperature of 25, a humidity of 90% RH and a CO ⁇ agricultural level of 1500 ppm or less. During the growing process, light irradiation was performed at 200 to 500 Lux for 3 to 5 hours per day.
  • the fruiting body became about 5 cm long on the 7th day of growth (Fig. 1). Yield of fruiting body per bottle averaged 50 g.
  • the shape of the medium is granular, so that the water content in the medium is difficult to be uniform.However, by inoculating a mixture of the medium and the inoculum, the culture proceeds smoothly, and the fruiting body of the Agaricus mushroom is produced. It turned out that it can be obtained more stably.
  • Example 2 Bag cultivation of Agaricus blazei Murrill
  • Rice flour and bran as cereal, beef dung compost as a nutrient source, and sawdust as a base material for the medium (Water content of sawdust is different, but in this example, sawdust with a water content of 63% was used)
  • the kneaded mixture was filled into heat-resistant polypropylene bags at 1500 g per bag, and then subjected to high-pressure steam sterilization at 121 ° C and latm (gauge pressure) for 60 minutes. After sterilization, the medium was cooled in a clean room until the medium temperature reached about 18 ° C.
  • Example 1 An inoculum was obtained in the same manner as in Example 1, section 2.
  • 80 g of this inoculum was mixed with the sterilized medium of the first section of Example 2 above, 20 bags were inoculated (the volume ratio of the inoculum to the medium was 1:25). After inoculation, the mouth of the bag was closed.
  • the bag after inoculation was cultured in the dark, at a temperature of 23 to 25 ° C, a humidity of 60 to 70% RH, and a CO concentration of 1500 m or less.
  • the hyphae were completely circulated in about 40 days, but were aged for 10 days, and the total number of culture days was 50 days.
  • a sprouting operation was performed. About 50 days after the cultivation, the upper end of the bag was cut off at about 5 cm above the bacterial bed surface, and the bacterial bed surface was covered with pit moss or mountain soil used for horticulture. No bacteria removal was performed.
  • Conditions of sprouting is ⁇ under temperature 18-22 (Section 3.1. 3 to 5 ° C lower than the culture conditions of Example 2) was humidity 90-95% RH, C0 2 concentration 800pptn less . Sprouting During this time, when the soil on the surface became dry, water was sprayed to prevent it from drying.
  • the test was performed under the condition of Oppm or less. In the growing process, light irradiation was performed for 2-3 hours per day using lOOLux.
  • the fruiting bodies became about 8 to 12 cm long on the 6th to 7th day of growth, and were harvested before the umbrella opened (Fig. 2).
  • the yield of fruiting bodies harvested per bag averaged about 200 g.
  • the artificial fungal bed cultivation of agaricus mushrooms which has been impossible until now, has become possible.
  • the fruiting body of agaricus mushrooms can be cultivated in a facility irrespective of the place, season, and weather, thus opening up a way to mass cultivation. Cultivation is possible with a total cultivation period of 60 to 65 days, which is not much different from mushrooms so far.
  • the artificial fungal bed cultivation medium is sterilized to kill various bacteria in the culture medium, and then inoculated with the inoculum.After the inoculation, the cultivation is performed in a nearly sterile state. It has the advantage that problems can be avoided.
  • the medium components and the mixing ratio thereof can be selected relatively freely, the first raw material of the biosynthetic pathway of the medicinal component of Agaricus mushrooms is added to the medium. Therefore, there is an advantage that the medicinal component can be increased.
  • the size and shape of the culture vessel used are not limited, and the culture vessel may be a small-scale culture vessel, so that the three-dimensional space of the cultivation facility can be effectively used, The advantage of good economic efficiency is obtained.
  • the fruiting bodies obtained by the cultivation method of the present invention have the advantage that they do not have a muddy odor and have low resistance even when decocted and taken.

Description

明 細 書 ァガリクス茸の子実体の人工菌床栽培方法 技術分野
本発明は、 ァガリクス茸の子実体の人工菌床栽培方法およびァガリタス茸の子 実体の培養に用いられる培地に関する。 背景技術
ハラタケ科ァガリクス属に属するキノコ （以下、 本明細書では、 これらを総称 してァガリクス茸という） は、 数多く知られており， 例えば、 Agaricus blazei Murr i 11 > Agaricus bisporus、 Agaricus sylvaticus、 Agaricus arvensisなとが 挙げられる。 例えば， Agaricus blazei Murrillは、 別名ヒメマツタケあるいは カヮリハラタケと呼ばれる （水野卓、 川合正允 編著：キノコの化学 ·生化学、 学会出版センター、 223頁〜 228頁 （1992) ) 。 このキノコは、 主にブラジル東南 部サンパゥ口のピエダーテの山地に自生し、 住民が昔から食用にしている。 最近、 このァガリクス茸の子実体抽出液が成人病、 ガンに効果があるとの発表 があり、 薬用キノコとして極めて有望であることが明らかになり、 ァガリクス茸 の子実体の需要が高まると期待されている。 ァガリクス茸の子実体のニーズは、 日本よりもむしろ、 ヨーロッパ、 アメリカに高いが、 日本においても薬用キノコ として、 ますます需要が高まると期待されている。
ところで、 現在、 ァガリクス茸の子実体は、 天然のものを採取するか、 または ビニールハウスおよびプレハブのような暖地のハウス内で 「畝作り法」 によって 栽培されているにすぎない。
天然のものを採取するにしても、 ァガリクス茸の自生地がブラジル東南部であ ることから分かるように、 暖地でしか栽培できないという欠点がある。 「畝作り 法」 は、 ァガリクス茸の唯一の栽培方法である。 この方法では、 稲わら、 サ卜ゥ キビバガスなどを発酵させてつくった堆肥で畝をつくり、 この畝に覆土をするこ とにより、 畝床をつくり、 そして、 堆肥の部分に種菌を接種し、 ァガリクス茸を 発生させる。 しかし、 畝作り法による栽培は、 ハウス内で行われるといっても、 粗放的であるためにァガリクス茸の子実体の収量が少なく、 かつ屋外で栽培され るために天候の影響を受けやすく、 そのため通年的に安定した生産が不可能であ るという欠点がある。
従って、 ァガリクス茸の子実体を気候に左右されず、 安定的に、 集約的かつ大 量に栽培できる人工的栽培方法が望まれている。 発明の開示
本発明のァガリクス茸の子実体の人工菌床栽培方法は、 穀物を含む培地でァガ リクス茸を培養する工程を含む。
好ましい実施態様においては、 上記穀物は、 ァヮ、 ヒェ、 キビ、 イネ、 および コムギの少なくとも 1種である。
好ましい実施態様においては、 上記培地は、 ァヮ、 ヒェ、 およびキビからなる 培地である。
好ましい実施態様においては、 上記培地は、 乾燥重量基準でァヮ 35〜45 %、 ヒ ェ 35〜45 %、 およびキビ 10〜30 %からなる。
好ましい実施態様においては、 上記培地は、 さらに栄養源および培地基材の少 なくとも一方を含む。
好ましい実施態様においては、 上記培地において、 穀物 100重量部に対して前 記栄養源が 0〜300重量部の割合で含有され、 そして前記培地基材が 0〜300重量 部の割合で含有される。
本発明のァガリクス茸の子実体の人工菌床栽培用培地は、 穀物を含む。
好ましい実施態様においては、 上記穀物は、 ァヮ、 ヒェ、 キビ、 イネ、 および コムギの少なくとも 1種である。
好ましい実施態様においては、 上記培地は、 ァヮ、 ヒェ、 およびキビからなる。 好ましい実施態様においては、 上記培地は、 乾燥重量基準でァヮ 35〜45 %、 ヒ ェ 35〜45 %、 およびキビ】 0〜30 %からなる。
好ましい実施態様においては、 上記培地は、 さらに栄養源および培地基材の少 なくとも一方を含む。
好ましい実施態様においては、 上記培地において、 穀物 100重量部に対して前 記栄養源が 0〜300重量部の割合で含有され、 そして前記培地基材が 0〜300重量 部の割合で含有される。 図面の簡単な説明
図 1は、 実施例 1に記載の栽培によって得られた生育 7日目のァガリクス茸の 子実体の写真である。
図 2は、 実施例 2に記載の栽培によって得られた生育 7日目のァガリクス茸の 子実体の写真である。 発明を実施するための最良の形態
本発明の人工菌床栽培方法および該方法に用いられる培地を、 以下に詳述する。 1 . ァガリクス茸の子実体の人工菌床栽培用培地
人工菌床栽培に用いる培地は、 穀物を含む。
ここで、 本明細書において穀物とは、 ァヮ、 ヒェ、 キビ、 イネ、 サトウキビ、 ムギ （例えば、 コムギ、 ォォムギ、 ライムギ） など、 イネ科の栽培植物を全て包 含する。 特に好ましい穀物は、 ァヮ、 ヒェ、 およびキビであり、 穀物がこれらの 成分でなることが好ましい。 本発明の方法においては、 穀物の種子を用いてもよ いし、 ワラ、 フスマ、 もみがら、 およびサトウキビバガスのような種子以外の植 物体を用いてもよい。 ワラのような種子以外の植物体を用いる場合、 植物体を直 径 1 5mm X長さ 1 5画以下に細断して用いることが好ましい。 穀物の形態は、 特に限 定されず、 コ一ンコブ粉砕物、 ならびに種皮を取り除いたァヮおよびヒェの種子 のような粒状であつてもよいし、 ワラの細断物のような細片状であってもよいし、 米ヌ力、 トウモロコシヌ力、 ムギヌ力、 およびォォムギ粉砕物のような粉末であ つてもよい。 本発明の方法においては、 1種の穀物を用いてもよいし、 任意の種 類の穀物を組み合わせて用いてもよい。
本発明の培地はさらに、 必要に応じて. 栄養源、 培地基材、 添加剤などの穀物 以外の他の成分を含み得る。 栄養源としては、 牛フン堆肥、 鶏フン堆肥、 バーク 堆肥、 オカラ、 豆皮、 コーヒーかす、 酒かす、 食品製造副産物などの当該分野で 栄養源として用いられる材料のいずれもが用いられ得る。
培地基材は、 ォガクズ、 木材チップ、 綿実ハルブラン、 ココナッツピート、 萏 類、 園芸用土などを含む。 添加剤は石灰、 牡蛎殻、 糖蜜、 植物用液体肥料などを 含む。
本発明の培地においては、 上記穀物 1 00重量部に対して、 上記栄養源は、 0重 量部から 300重量部、 好ましくは] 0重量部から 1 00重量部、 さらに好ましくは 20重 量部から 50重量部の割合で含有される。 上記培養基材は、 上記穀物 1 00重量部に 対して、 0重量部から 300重量部、 好ましくは 50重量部から 200重量部、 さらに好 ましくは 100重量部から 1 50重量部の割合で含有される。 添加剤は、 上記穀物 1 00 重量部に対して、 1 0重量部以下の割合で含有される。
上記穀物は、 好ましくは培地全体の 30重量％以上、 さらに好ましくは 35重量％ 以上、 最も好ましくは 40重量％以上の割合で含有される。 上記重量は、 乾燥重量 であり、 具体的には各成分を 90°Cにおいて 5時間乾燥を行った後の重量をいう。 以下本明細書中で培地組成の重量について言及する場合は、 すべて乾燥重量を基 準とし、 具体的には各成分を 90°Cにおいて 5時間乾燥を行った後の重量を基準と する。
本発明の培地は、 上記のように、 例えば、 穀物のみでなる培地であってもよく、 このような培地の好ましい例としては、 ァヮ 35〜45重量％、 ヒェ 35〜45重量％、 およびキビ 1 0〜 30重量％でなる培地が挙げられる。 穀物以外の培地成分を含む培 地の好ましい例としては、 穀物 30〜40重量％、 栄養源 10〜'20重量％、 および培地 基材 40~ 50重量％を含む培地が挙げられる。
上記の培地成分を混合し、 当業者に周知の方法に従って水を加えて練り合わせ ることにより、 本発明の人工菌床栽培方法に用いられる培地が作成される。 好ま しくは、 上記培地成分の混合物に、 混合物の重量の約 2倍量の水を加え、 水分が なくなるまで煮沸を続け、 その後、 冷却する。
上記培地は、 必要に応じて適切な容器に収容される。 培養容器は， 滅菌処理に 耐え得る容器であれば、 その形状、 大きさ、 材料などは制限されない。 キノコ栽 培で最も一般的に用いられる容量 850m l、 直径 58删のビンを使用してもよいし， 他の菌床栽培用容器、 例えば袋栽培用の袋を使用することもできる。
2 . 滅菌
上記の人工菌床栽培用培地は、 そのままで、 あるいは培養容器に詰められた後 に滅菌処理が行われる。 滅菌条件は、 一般的に用いられる滅菌処理の条件の範囲 内であれば、 特に限定されない。 滅菌方法の例としては， 高圧蒸気滅菌， 常圧蒸 気滅菌などが挙げられる。 例えば、 1 2ド Cにて 60分間の高圧蒸気滅菌が好ましい。 大量の培地の蒸気滅菌を行う場合は、 滅菌処理の時間を延長することが好まし い。
3 . ァガリクス茸の接種
種菌を調製するためには、 天然または人工栽培のァガリクス茸の子実体のいず れから菌糸または胞子を採取して培地で増殖させて用いてもよいし、 あるいは微 生物寄託機関および研究機関などで保存されている菌株の菌糸を培地で増殖させ て用いてもよい。
得られた種菌と滅菌処理後の人工菌床栽培用培地を混合することにより、 接種 を行う。 種菌と培地の容積比は、 特に限定されないが、 1 : 1 00〜1 ： 25である ことが好ましい。
4. 子実体の栽培
4.1 培養
ァガリクス茸の子実体を栽培するためには、 まず、 培地に接種された種菌の培 養を行い、 ァガリクス茸を增殖させ、 菌回りを完了させる （培地全体に菌糸が行 き渡った状態を、 菌回りが完了した、 という） 。 培養条件は、 ァガリクス茸が生 育可能な条件であれば、 特に限定されない。 好ましくは、 温度は、 15°C以上 以下， 湿度は 50%以上 75%以下、 （^濃度は、 2500ppm以下である。 より好ましく は、 温度は、 2ITC以上 28°C以下、 湿度は 60%以上 70%以下， C (^濃度は、 300〜20 OOppmである。 さらに好ましくは， 温度 25°C、 湿度 60〜70%RH、 C02濃度 600〜150 Oppmである。 光照射は、 あってもなくてもよいが、 好ましくは， 暗黒条件である。 菌回りにかかる時間は、 培地の容量 （培養に用いる容器の容量） によって変動す る。 菌回りが完了した後、 さらに数日間培養を続け、 菌糸を熟成させ、 子実体の 発生を促進すことができる。 熟成を行う場合、 その期間は， 5日以上 20日以下、 好ましくは 10日以上 15日以下であり得る。 しかし、 熟成は必ずしも必要ではない。 4.2 芽出し
培養後、 芽出し操作を行う。 芽出し操作の前に、 覆土を行ってもよい。 覆土に 用いられる土の例としては、 ピ一トモス （園芸で用いる苔の一種） が挙げられる c 覆土の厚さは、 特に限定されないが、 1.0cm〜3.5cmが好ましい。 覆土を行わない 場合、 上記 4.1項の培養物を、 そのまま芽出し条件で培養する。 覆土を行う場合 は、 上記 4.1項の培養物の表面に覆土を行った後、 芽出し条件で培養する。
芽出し条件は、 一般にァガリクス茸が生育可能な条件であれば、 特に限定され ない。 好ましくは、 温度は、 20°C以上 30°C以下、 湿度は 80%以上 98%以下、 C02 濃度は、 2500ppm以下である。 より好ましくは、 温度は， 22°C以上 28 以下、 湿 度は 85%以上 95%以下、 C02濃度は， 300ρρΐιι以上 2200ppm以下である。 さらに好ま しくは、 温度 25 、 湿度 95%RH、 C02濃度が 600ppm以上 2000ppm以下である。 光照 射は、 あってもなくてもよい力 好ましくは、 暗黒条件である。 芽出し条件は、 培養条件よりも高湿度および高 coz濃度であることが好ましい。 芽出し条件で培 養される日数は、 特に限定されず、 肉眼で幼子実体の形成が認められるまでであ る。
4. 3 子実体の生育
4. 2項で得られる幼子実体の生育は、 ァガリクス茸が生育可能な条件であれば、 特に限定されない。 好ましくは、 温度は、 20°C以上 30°C以下、 湿度は 75 %以上 9 5 %以下、 C (^濃度は、 2500ppm以下である。 より好ましくは、 温度は、 22で以上 2 8 以下、 湿度は 80 %以上 90 %以下、 C(V農度は、 300卯 m以上 2000卯 m以下である。 さらに好ましくは、 温度 25で、 湿度 90 %RH、 C02濃度 600ppm以上 1500ppm以下であ る。 生育工程では、 光照射が必要である。 光照射は、 好ましくは、 50Lux以上 500 Lux以下で 1日あたり 1時間以上 8時間以下、 さらに好ましくは、 l OOLux以上 500 Lux以下で 1日あたり 2時間以上 6時間以下、 さらにより好ましくは、 200LI 以 上 500Lux以下で 1日あたり 3〜 5時間程度である。 所望の形態の子実体を得るた めには、 光照射および CO.濃度を、 適切にコントロールする。
生育を行う日数は、 ァガリクス茸の生育条件によって変化し得る。 ァガリクス 茸の子実体が所望の大きさに生育したら、 子実体の収穫を行う。 実施例
以下に、 本発明の実施例を説明する。 しかし、 本発明はこれら実施例に限定さ れるものではない。
実施例 1 ： ァガリクス茸 （Agar i cus b l aze i Murr i l l ) のビン栽培
1 . 培地の作製
ヒェ：ァヮ ：キビの種子を 2 ： 2 ： 1の乾燥重量比で混合し、 この混合物の 2 倍量 （重量比） の水を加え煮沸し、 水分がほぼなくなったら火を止めて冷却した。
20°C以下に冷却された培地を、 口径 58mm、 容量 850mlのポリプロピレン製のビ ンに 600g詰め、 キャップをはめた。 次いで、 121°C、 latm (ゲージ圧） で、 60 分間の高圧蒸気滅菌を行い、 その後、 清浄な室内で培地温度が 18でとなるまで冷 却した。
2. ァガリクス茸の接種
市販のァガリクス茸 （Agaricus blazei urrill) の子実体から胞子を採取し， ポテトデキストロース寒天培地 （PDA培地） 上で発芽および菌糸の増殖を行った。 発芽および菌糸の増殖の条件は、 温度 25°C、 湿度 65%RH、 喑条件下で 25日間培養 した。 培養菌糸片 5 mm角を新たに PDA培地に接種し、 同条件下で培養を行った。 この操作を計 3回繰り返して菌を純化した。 このようにして得られた菌糸と、 上 記 1項の培地と同じ組成の培地との混合物を種菌として用いた。
種菌 15 gを、 上記 1項の滅菌した培地と混合することにより接種した。 このよ うにして、 16本のビンの培地に接種を行なった （種菌と培地の容積比は， 1 : 4
0) o
3. 子実体の栽培
3.1 培養
接種した種菌を， 喑黒下、 温度 25t：、 湿度 60〜70%RH、 C02濃度 1500ppm以下の 条件で培養した。 菌糸は 20日間で菌回りが完了したが、 その後 20日間熟成させ、 総培養日数は 40日間とした。
3.2 芽出し
培養終了後、 芽出し操作を行った。 菌搔きは行わず、 ビンのキャップを外すの みの方法と、 菌床表面にピートモスで 1 cmの厚さで覆土をする方法の二種で行つ た。
いずれの場合も芽出しの条件は、 暗黒下、 温度 25°C、 湿度 95%RH、 C02濃度' 200 Oppm以下であった。
覆土を行うか否かは、 子実体の形成日数にほとんど影響を及ぼさず、 いずれの 方法においても、 U〜 17日間で幼子実体の形成が認められた。 これらの結果から、 覆土を行うか否かにかかわらず、 ァガリクス茸が子実体を 形成することが分かった。
3. 子実体の生育
3.2で得られた幼子実体の生育を、 温度 25で、 湿度 90%RH、 CO^農度 1500ppm以 下の条件で行った。 生育工程では、 200〜500Luxで 1 日あたり 3〜 5時間の光照 射を行った。
子実体は、 生育 7日目で茎長 5 cm程度となった （図 1 ) 。 1ビンあたりで収穫 された子実体の収量は平均 50gであった。
本実施例に用いた培地組成は形体が粒状であるため培地中の水分が均一になり にくいが、 培地と種菌を混合して接種することにより、 培養がスムーズに進み、 ァガリクス茸の子実体がより安定的に得られることが分かった。 実施例 2 ： ァガリクス茸 （Agaricus blazei Murrill) の袋栽培
1. 培地の作製
穀物としての米ヌ力およびフスマ、 栄養源としての牛フン堆肥、 ならびに培地 基材としてのォガクズ （ォガクズの含水率は種々異なるが， この実施例では、 含 水率 63%のォガクズを用いた） を、 以下の表 1の重量比で混合し、 水を加えて練 り合わせた。 練り合わせた混合物を、 耐熱性のポリプロピレン袋に 1袋当たり 15 00 gづっ充填し、 次いで、 121°C、 latm (ゲージ圧） で、 60分間の高圧蒸気滅菌 を行なった。 滅菌後、 清浄な室内で培地温度が 18°C程度になるまで冷却した。
表 1
培地配合 （1袋あたり）
Figure imgf000012_0001
2. ァガリクス茸の接種
実施例 1の第 2節と同様にして種菌を得た。 この種菌 80gを、 上記実施例 2の 第 1節の滅菌した培地と混合することにより、 20袋に接種した （種菌と培地の容 積比は、 1 ： 25) 。 接種後、 袋の口を閉じた。
3. 子実体の栽培
3.1 培養
接種後の袋を、 暗黒下、 温度 23〜25°C、 湿度 60〜70%RH、 CO濃度 1500卯 m以下 の条件で培養した。 菌糸は約 40日間で菌回りが完了したが、 その後 10日間熟成さ せ、 総培養日数は 50日間とした。
3.2 芽出し
培養終了後、 芽出し操作を行った。 培養 50日目くらいで袋の上端部分を菌床面 から 5cm程度上のところで切り取り、 園芸に用いるピ一卜モスまたは山土で菌床 面を覆土した。 菌搔きは行わなかった。
芽出しの条件は、 喑黒下、 温度 18〜22 （上記実施例 2の第 3.1節の培養条件 よりも 3〜 5°C低め） 、 湿度 90〜95%RH、 C02濃度 800pptn以下であった。 芽出し の間、 表面の覆土が乾燥してきたら水を噴霧し、 乾燥を防いだ。
芽出し 20日目くらいから菌床面で幼子実体の形成が認められた。 この頃を 「生 育」 開始とした。
3. 3 子実体の生育
3. 2で得られた幼子実体の生育を、 温度 1 8〜22°C、 湿度 90〜95 % RH、 C02濃度 80
Oppm以下の条件で行った。 生育工程では、 l OOLuxで 1日あたり 2〜3時間の光照 射を行った。
子実体は、 生育 6〜7日目で茎長 8〜1 2cm程度となり、 傘が開く前に収穫した (図 2 ) 。 1袋あたりで収穫された子実体の収量は平均約 200 gであった。
本実施例の方法により、 ァガリクス茸の子実体が安定的に得られることが分か つ†：。 産業上の利用可能性
本発明によって、 これまで不可能とされてきたァガリクス茸の人工菌床栽培が 可能となった。 本発明の栽培方法は、 場所、 季節、 天候にかかわらず、 ァガリク ス茸の子実体を施設栽培することが可能であるため、 大量栽培に道が拓けた。 こ れまでのキノコと比較しても大差のない、 総栽培日数 60〜65日間での栽培も可能 である。
従来の畝作り法では、 野外の開放系で戟培が行われるため、 畝床が雑菌に汚染 される危険性、 ならびにハエおよび土壌中の害虫によってァガリクス茸の菌糸が 侵される危険性が高く、 ァガリタス茸の安定的な生産は難しかった。
本発明の栽培方法では、 人工菌床栽培用培地を滅菌処理して培地中の雑菌を死 滅させてから種菌を接種し、 接種後も無菌に近い状態で栽培が行われるために、 これらの問題点を回避し得るという利点がある。
また、 本発明の栽培方法では、 培地成分およびその混合割合を比較的自由に選 択できるため、 ァガリクス茸の薬効成分の生合成経路の初発原料を培地に添加し て、 薬効成分を増加させることが可能であるという利点がある。
現在、 ァガリクス茸に含有される抗腫瘍活性物質としては、 3— D—グルカン を中心とした多糖類が最も有望であり、 その他、 核酸、 レクチン、 ステロイド、 脂質なども抗腫瘍活性が認められている。 そのため、 グルコース、 スクロース、 またはデンプン質の培地への添加は、 ァガリクス茸の有する抗腫瘍活性物質 （薬 効成分） を増加するために有効であると考えられる。 従来法では、 将来、 ァガリ クス茸の薬効成分の生合成経路が明確になった場合に、 その初発原料を添加して も、 培地中に混在する他の微生物によつて初発原料が分解されてその添加効果が 減少するか、 あるいは反対に他の微生物の増殖を促進して、 目的のァガリクス茸 菌糸の増殖を阻害するおそれがある。
さらに、 本発明の栽培方法によれば， 用いられる培養容器の大きさおよび形が 限定されず、 小単位の培養容器であってもよいために、 栽培施設の立体空間を有 効に利用でき、 経済効率も良いという利点が得られる。
上記に加えて、 本発明の栽培方法によって得られた子実体は、 泥臭い臭気がな く、 煎じて服用する際においても抵抗が少ないという利点がある。

Claims

請求の範囲
1. 穀物を含む培地でァガリクス茸を培養する工程を含む、 ァガリクス茸の子実 体の人工菌床栽培方法。
2. 前記穀物が、 ァヮ、 ヒェ、 キビ、 イネ、 およびコムギの少なくとも 1種であ る、 請求項 1に記載の方法。
3. 前記培地が、 ァヮ、 ヒェ、 およびキビからなる培地である、 請求項 2に記載 の方法。
4. 前記培地が、 乾燥重量基準でァヮ 35〜45%、 ヒェ 35〜45%、 およびキビ 10〜 30%からなる培地である、 請求項 1〜 3のいずれかに記載の方法。
5. 前記培地が、 さらに栄養源および培地基材の少なくとも一方を含む、 請求項
1または 2に記載の方法。
6. 前記培地において、 穀物 100重量部に対して前記栄養源が 0〜300重量部の割 合で含有され、 そして前記培地基材が、 0〜300重量部の割合で含有される、 請 求項 5に記載の方法。
7. 穀物を含む、 ァガリクス茸の子実体の人工菌床栽培用培地。
8. 前記穀物が、 ァヮ、 ヒェ、 キビ、 イネ、 およびコムギの少なくとも 1種であ る、 請求項 7に記載の培地。
9. 前記培地が、 ァヮ、 ヒェ、 およびキビからなる培地である、 請求項 8に記載, の培地。
1 0. 乾燥重量基準でァヮ 35〜45%、 ヒェ 35〜45%、 およびキビ 10〜30%からな る培地である、 請求項？〜 9のいずれかに記載の培地。
1 1. さらに栄養源および培地基材の少なくとも一方を含む培地である、 請求項 7または 8に記載の培地。
1 2. 穀物 100重量部に対して前記栄養源が 0〜300重量部の割合で含有され、 そ して前記培地基材が、 0〜300重量部の割合で含有される、 請求項 1 1に記載の 培地。
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