CN113789336A - 靶向IL13Rα2的共刺激嵌合抗原受体T细胞 - Google Patents

靶向IL13Rα2的共刺激嵌合抗原受体T细胞 Download PDF

Info

Publication number
CN113789336A
CN113789336A CN202110969587.7A CN202110969587A CN113789336A CN 113789336 A CN113789336 A CN 113789336A CN 202110969587 A CN202110969587 A CN 202110969587A CN 113789336 A CN113789336 A CN 113789336A
Authority
CN
China
Prior art keywords
leu
gly
pro
ser
glu
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202110969587.7A
Other languages
English (en)
Inventor
C.E.布朗
S.J.福曼
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
City of Hope
Original Assignee
City of Hope
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=55533940&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=CN113789336(A) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by City of Hope filed Critical City of Hope
Publication of CN113789336A publication Critical patent/CN113789336A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0636—T lymphocytes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/14—Blood; Artificial blood
    • A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/463—Cellular immunotherapy characterised by recombinant expression
    • A61K39/4631—Chimeric Antigen Receptors [CAR]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
    • A61K39/4643—Vertebrate antigens
    • A61K39/4644—Cancer antigens
    • A61K39/464402—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A61K39/464411—Immunoglobulin superfamily
    • A61K39/464412—CD19 or B4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
    • A61K39/4643—Vertebrate antigens
    • A61K39/4644—Cancer antigens
    • A61K39/464402—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A61K39/464416—Receptors for cytokines
    • A61K39/464419—Receptors for interleukins [IL]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/54—Interleukins [IL]
    • C07K14/5437—IL-13
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/70514—CD4
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/70517—CD8
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/7056—Lectin superfamily, e.g. CD23, CD72
    • C07K14/70564—Selectins, e.g. CD62
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70578—NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/715—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons
    • C07K14/7155—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons for interleukins [IL]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
    • A61K2239/31—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterized by the route of administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
    • A61K2239/38—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
    • A61K2239/46—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the cancer treated
    • A61K2239/47—Brain; Nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/03—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a transmembrane segment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/33—Fusion polypeptide fusions for targeting to specific cell types, e.g. tissue specific targeting, targeting of a bacterial subspecies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/70—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction
    • C07K2319/74—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction containing a fusion for binding to a cell surface receptor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/70—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction
    • C07K2319/74—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction containing a fusion for binding to a cell surface receptor
    • C07K2319/75—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction containing a fusion for binding to a cell surface receptor containing a fusion for activation of a cell surface receptor, e.g. thrombopoeitin, NPY and other peptide hormones
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2510/00—Genetically modified cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
    • C12N2740/16041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2740/16043—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

描述了嵌合跨膜免疫受体(CAR)，其包含含有IL‑13或其结合白介素‑13Rα2(IL13Rα2)的变体的胞外域、跨膜区、共刺激域和胞内信号传导域。

Description

靶向IL13Rα2的共刺激嵌合抗原受体T细胞
本申请是基于申请日为2015年9月18日，优先权日为2014年9月19日，申请号为201580061133.2，发明名称为：“靶向IL13Rα2的共刺激嵌合抗原受体T细胞”的专利申请的分案申请。
发明背景
已经研究了基于肿瘤特异性T细胞的免疫疗法，包含使用工程化改造的T细胞的疗法用于抗肿瘤治疗。在一些情况下，用于该疗法的T细胞在体内维持不了足够长时间的活性。在一些情况下，T细胞的肿瘤特异性相对低。因而，本领域需要具有较长期抗肿瘤功能发挥的肿瘤特异性癌症疗法。
恶性神经胶质瘤(malignant gliomas，MG)，其包含多形性成胶质细胞瘤(AA-III级)和成胶质细胞瘤(GBM-IV级)，在美国每年具有大概20,000例诊断的新病例的发生率。根据美国脑肿瘤协会(American Brain Tumor Association)，基于美国2010人口普查数据，遭受恶性脑肿瘤的个体的总体患病率粗略地为140,000人。尽管MG是稀有疾病，但是在其恶性行为方面其为高度攻击性并且是异质的，并几乎一律致命。目前用于高级MG的护理标准疗法仅产生短期益处，并且这些脑肿瘤事实上是不能治愈的。的确，即使利用现代手术和放射治疗技术(其经常加剧通过定位于中枢神经系统(CNS)强加的早已严重的发病率)，5年的存活率也是非常低的。此外，对于复发疾病的大多数患者，存在很少的治疗选择。因此，明显需要更有效的疗法，特别用于已经在一线疗法后复发/进展的那些患者，并且保证该患者群体参与临床试验。
利用嵌合抗原受体(CAR)工程化改造的T细胞的过继性T细胞疗法(ACT)可以提供安全且有效的方式来减少MG的复发率，因为CAR T细胞可以被工程化改造以特异识别抗原不同的肿瘤群体(Cartellieri等2010J Biomed Biotechnol 2010:956304；Ahmed等2010Clin Cancer Res 16:474；Sampson等2014Clin Cancer Res 20:972；Brown等2013ClinCancer Res 2012 18:2199；Chow等2013Mol Ther 21:629)，并且T细胞可以通过脑实质迁移以靶向并杀死浸润性恶性细胞(Hong等2010 Clin Cancer Res 16:4892；Brown等2007JImmunol 179:3332；Hong等2010 Clin Cancer Res16:4892；Yaghoubi 2009Nat ClinPRact Oncol 6:53)。临床前研究已经证明靶向IL13Rα2的CAR+T细胞针对干细胞样和分化型神经胶质瘤细胞显示有效的不依赖主要组织相容性复合体(MHC)的IL13Rα2-特异性细胞溶解活性，并且在体内诱导建立的神经胶质瘤异种移植物的消退(Kahlon等2004CancerRes 64:9160；Brown等2012Clin Cancer Res 18:2199)。
发明概述
本文描述的是嵌合跨膜免疫受体(嵌合抗原受体或“CAR”)，其包含胞外域、跨膜区和胞内信号传导域。胞外域由结合白介素-13Rα2(IL13Rα2)的IL-13配体，和任选地，间隔物(包含例如部分人Fc域)构成。跨膜部分包含CD4跨膜域、CD8跨膜域、CD28跨膜域、CD3跨膜域或4IBB跨膜域。胞内信号传导域包含来自人CD3复合体的ζ链(CD3ζ)的信号传导域和一个或多个共刺激域，例如4-1BB共刺激域。当在T细胞表面上表达时，胞外域使得CAR能够指导T细胞活性导向表达IL13Rα2的那些细胞，所述IL13Rα2是在肿瘤细胞，包含神经胶质瘤的表面上表达的受体。重要的是，CAR的IL13Rα2结合部分包含氨基酸修饰，如E13Y突变，其增加结合特异性。胞内区中包含串联CD3ζ的共刺激域，如4-1BB(CD137)共刺激域使得T细胞能够接受共刺激信号。可以工程化改造T细胞，例如患者特异的自体T细胞以表达本文所述的CAR并且可以扩大工程化改造的细胞并将其用于ACT。可以使用各种T细胞亚群。此外，可以在其他免疫细胞，如NK细胞中表达CAR。在利用表达本文所述的CAR的免疫细胞治疗患者时，所述细胞可以是自体或同种异体T细胞。在一些情况中，所用的细胞是CD4+和CD8+中央记忆型T细胞(TCM)，其是CD45RO+CD62L+，并且使用此类细胞相比于使用其他类型的患者特异性T细胞可以提高过继性转移后细胞的长期存活。
本文描述的是编码嵌合抗原受体(CAR)r的核酸分子，其中所述嵌合抗原受体包含：人IL-13或其具有1-10(例如1或2)个氨基酸修饰的变体；跨膜域，其选自：CD4跨膜域或其具有1-10(例如1或2)个氨基酸修饰的变体、CD8跨膜域或其具有1-10(例如1或2)个氨基酸修饰的变体、CD28跨膜域或其具有1-10(例如1或2)个氨基酸修饰的变体，和CD3ζ跨膜域或其具有1-10(例如1或2)个氨基酸修饰的变体；共刺激域；和CD3ζ信号传导域或其具有1-10(例如1或2)个氨基酸修饰的变体(CD3ζsignaling domain of a variant thereofhaving1-10(e.g.,1or 2)amino acid modifications)。
在多个实施方案中，共刺激域选自：CD28共刺激域或其具有1-10(例如1或2)个氨基酸修饰的变体、4-IBB共刺激域或其具有1-10(例如1或2)个氨基酸修饰的变体和OX40共刺激域或其具有1-10(例如1或2)个氨基酸修饰的变体。在某些实施方案中，存在4IBB共刺激域或其具有1-10(例如1或2)个氨基酸修饰的变体。
另外的实施方案，CAR包含：人IL13的变体，其具有增加对IL13Rα2相对于IL13Rα1的结合特异性的1-10个氨基酸修饰；人IL-13或其变体是IL-13变体，其包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列，具有1-5个氨基酸修饰，条件是SEQ ID NO:3的位置11上的氨基酸不是E；两个不同的共刺激域，其选自：CD28共刺激域或其具有1-10(例如1或2)个氨基酸修饰的变体、4IBB共刺激域或其具有1-10(例如1或2)个氨基酸修饰的变体和OX40共刺激域或其具有1-10(例如1或2)个氨基酸修饰的变体；两个不同的共刺激域，其选自：CD28共刺激域或其具有1-2个氨基酸修饰的变体、4IBB共刺激域或其具有1-2个氨基酸修饰的变体和OX40共刺激域或其具有1-2个氨基酸修饰的变体；人IL-13或其具有1-2个氨基酸修饰的变体；跨膜域，其选自：CD4跨膜域或其具有1-2个氨基酸修饰的变体、CD8跨膜域或其具有1-2个氨基酸修饰的变体、CD28跨膜域或其具有1-2个氨基酸修饰的变体，和CD3ζ跨膜域或其具有1-2个氨基酸修饰的变体；共刺激域；和CD3ζ信号传导域或其具有1-2个氨基酸修饰的变体；定位在IL-13或其变体与跨膜域之间的间隔物区(例如，间隔物区包含选自SEQ ID NO:4、14-20、50和52的氨基酸序列)；间隔物包含IgG铰链区；间隔物区包含10-150个氨基酸；4-1BB信号传导域包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列；CD3ζ信号传导域包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列；和定位在共刺激域与CD3ζ信号传导域或其变体之间的3-15氨基酸的接头。在某些实施方案中，在存在两个共刺激域的情况下，一个是4-IBB共刺激域，另一个是选自CD28和CD28gg的共刺激域。
在一些实施方案中：核酸分子表达包含选自SEQ ID NO:10、31-48和52的氨基酸序列的多肽；嵌合抗原受体包含IL-13/IgG4/CD4t/41-BB区(其包含SEQ ID NO:11的氨基酸)和CD3ζ信号传导域(其包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列)；并且嵌合抗原受体包含SEQ IDNO:10、31-48和52的氨基酸序列。
还公开的是通过包含编码嵌合抗原受体的表达盒的载体转导的人T细胞群，其中嵌合抗原受体包含：人IL-13或其具有1-10个氨基酸修饰的变体；跨膜域，其选自：CD4跨膜域或其具有1-10个氨基酸修饰的变体、CD8跨膜域或其具有1-10个氨基酸修饰的变体、CD28跨膜域或其具有1-10个氨基酸修饰的变体，和CD3ζ跨膜域或其具有1-10个氨基酸修饰的变体；共刺激域；和CD3ζ信号传导域或其具有1-10个氨基酸修饰的变体。在多个实施方案中：人T细胞群包含表达嵌合抗原受体的载体，所述嵌合抗原受体包含选自SEQ ID NO:10、31-48和52的氨基酸序列；人T细胞群包含中央记忆型T细胞(Tcm细胞)(例如，至少20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％的细胞是Tcm细胞；至少15％、20％、25％、30％、35％的Tcm细胞是CD4+，并且至少15％、20％、25％、30％、35％的Tcm细胞是CD8+)。
还描述的是在患者中治疗癌症的方法，其包含施用通过包含编码嵌合抗原受体的表达盒的载体转导的自体或同种异型(allogeneic)人T细胞(例如，包含Tcm细胞的自体或同种异型T细胞，例如，至少20％、30％、40％、50％60％、70％、80％的细胞是Tcm细胞；至少15％、20％、25％、30％、35％的Tcm细胞是CD4+并且至少15％、20％、25％、30％、35％的Tcm细胞是CD8+细胞)，其中嵌合抗原受体包含选自SEQ ID NO:10、31-48和52的氨基酸序列。在多个实施方案中：人T细胞群包含中央记忆型T细胞；所述癌症是成胶质细胞瘤；并且转导的人T细胞通过下述方法制备，所述方法包含从患者获得T细胞，处理T细胞以分离中央记忆型T细胞，并利用包含编码嵌合抗原受体的表达盒的病毒载体转导中央记忆型细胞的至少部分，其中嵌合抗原受体包含选自SEQ ID NO:10、31-48和52的氨基酸序列。
还描述的是：核酸分子，其编码包含与选自SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:10、31-48和52的氨基酸序列具有至少95％同一性(at least 95％identical)的氨基酸序列的多肽；核酸分子，其编码包含与选自SEQ ID NO:10、31-48和52的氨基酸序列相同的氨基酸序列的多肽，除了存在不超过5个氨基酸取代、缺失或插入；核酸分子，其编码包含与选自SEQ IDNO:10和SEQ ID NO:10、31-48和52的氨基酸序列相同的氨基酸序列的多肽，除了存在不超过5个氨基酸取代；和核酸分子，其编码包含与选自SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:10、31-48和52的氨基酸序列相同的氨基酸序列的多肽，除了存在不超过2个氨基酸取代。
本文所述的某一CAR，例如IL13(EQ)BBζCAR和IL13(EQ)CD28-BBζCAR相比于某一其他IL13-靶向性CAR具有某些有益的特征。例如，它们具有对IL13Rα的提高选择性，引发较低的Th2细胞因子产生，特别是较低的IL13产生。
表达靶向IL13Rα2的CAR的T细胞可以用于治疗癌症，如成胶质细胞瘤，以及表达IL13Rα2的其他癌症，其包含但不限于成神经管细胞瘤、乳腺癌、头与颈癌、肾癌、卵巢癌和卡波西(Kaposi)肉瘤。因此，该公开内容包含使用表达本文所述的CAR的T细胞治疗癌症的方法。
该公开内容还包含编码本文所述的任何CAR的核酸分子(例如，包含编码CARs之一的核酸序列的载体)和表达本文所述的任何CAR的分离的T淋巴细胞。
本文所述的CAR可以包含定位在IL13域和跨膜域之间的间隔物区。可以使用多种不同的间隔物。它们中的一些包含人Fc区的至少部分，例如人Fc区的铰链部分或CH3域或其变体。下文表1提供了可以用于本文所述的CAR的多个间隔物。
表1：间隔物的实例
Figure BDA0003225443740000051
Figure BDA0003225443740000061
Figure BDA0003225443740000071
一些间隔物区包含整个或部分的免疫球蛋白(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)铰链区，即落在免疫球蛋白的CH1和CH2域之间的序列，例如，IgG4 Fc铰链或CD8铰链。一些间隔物区包含免疫球蛋白CH3域或CH3域和CH2域两者。免疫球蛋白来源的序列可以包含一个或多个氨基酸修饰，例如，1、2、3、4或5个取代，例如，减少脱靶结合的取代。
“氨基酸修饰”指蛋白质或肽序列中的氨基酸取代、插入，和/或缺失。“氨基酸取代”或“取代”指亲本肽或蛋白质序列中特定位置上的氨基酸被另一氨基酸替换。可以进行取代用于以非保守方式(即，通过将密码子从属于具有特定大小或特征的氨基酸分组的氨基酸改变成属于另一分组的氨基酸)或以保守方式(即，通过将密码子从属于具有特定大小或特征的氨基酸分组的氨基酸改变成属于相同分组的氨基酸)来改变所得蛋白质中的氨基酸。该保守改变一般导致所得蛋白质结构和功能的较少改变。以下是氨基酸多个分组的实例：1)具有非极性R基团的氨基酸：丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、甲硫氨酸；2)具有不带电的极性R基团的氨基酸：甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺；3)具有带电的极性R基团的氨基酸(在pH 6.0时带负电)：天冬氨酸、谷氨酸；4)碱性氨基酸(在pH 6.0时带正电)：赖氨酸、精氨酸、组氨酸(在pH 6.0)。另一分组可能是具有苯基的那些氨基酸：苯丙氨酸、色氨酸，和酪氨酸。
在某些实施方案中，间隔物来源于IgG1、IgG2、IgG3或IgG4，其包含用与未修饰间隔物中存在的氨基酸残基不同的氨基酸残基取代的一个或多个氨基酸残基。所述一个或多个取代的氨基酸残基选自，但不限于位置220、226、228、229、230、233、234、235、234、237、238、239、243、247、267、268、280、290、292、297、298、299、300、305、309、218、326、330、331、332、333、334、336、339上的一个或多个氨基酸残基，或其组合。在该编号体系中，在下文更详细地描述，表1中IgG4(L235E、N297Q)间隔物中的第一个氨基酸是219，并且表1中IgG4(HL-CH3)间隔物中的第一个氨基酸是219，其是表1中IgG铰链序列和IgG4铰链接头(HL)序列中的第一个氨基酸。
在一些实施方案中，修饰的间隔物来源于IgG1、IgG2、IgG3或IgG4，其包含，但不限于一个或多个以下氨基酸残基取代：C220S、C226S、S228P、C229S、P230S、E233P、V234A、L234V、L234F、L234A、L235A、L235E、G236A、G237A、P238S、S239D、F243L、P247I、S267E、H268Q、S280H、K290S、K290E、K290N、R292P、N297A、N297Q、S298A、S298G、S298D、S298V、T299A、Y300L、V305I、V309L、E318A、K326A、K326W、K326E、L328F、A330L、A330S、A331S、P331S、I332E、E333A、E333S、E333S、K334A、A339D、A339Q、P396L，或其组合。
在某些实施方案中，修饰的间隔物来源于IgG4区，其包含利用与未修饰区域中存在的氨基酸残基不同的氨基酸残基取代的一个或多个氨基酸残基。一个或多个取代的氨基酸残基选自，但不限于位置220、226、228、229、230、233、234、235、234、237、238、239、243、247、267、268、280、290、292、297、298、299、300、305、309、218、326、330、331、332、333、334、336、339上的一个或多个氨基酸残基或其组合。
在一些实施方案中，修饰的间隔物来源于IgG4区，其包含，但不限于以下氨基酸残基取代的一个或多个：220S、226S、228P、229S、230S、233P、234A、234V、234F、234A、235A、235E、236A、237A、238S、239D、243L、247I、267E、268Q、280H、290S、290E、290N、292P、297A、297Q、298A、298G、298D、298V、299A、300L、305I、309L、318A、326A、326W、326E、328F、330L、330S、331S、331S、332E、333A、333S、333S、334A、339D、339Q、396L或其组合，其中未修饰间隔物中的氨基酸被所指示位置上的上文鉴定的氨基酸取代。
对于本文讨论的免疫球蛋白中的氨基酸位置，根据EU索引或EU编号体系(Kabat等1991Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版,United StatesPublic Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,由此以其整体作为参考并入)进行编号。EU索引或Kabat或EU编号体系中的EU索引指EU抗体的编号(Edelman等1969Proc Natl Acad Sci USA 63:78-85)。
多种跨膜域可以用于针对IL13Ra2的CAR。表2包含合适跨膜域的实例。当存在间隔物域时，跨膜域定位在间隔物域的羧基末端。
表2：跨膜域的实例
Figure BDA0003225443740000091
本文所述的许多CAR包含一个或多个(例如两个)共刺激域。共刺激域定位在跨膜域和CD3ζ信号传导域之间。表3包含与CD3ζ信号传导域的序列一起的合适的共刺激域的实例。
表3：共刺激域的实例
Figure BDA0003225443740000092
Figure BDA0003225443740000101
本发明包括以下内容：
实施方案1.编码嵌合抗原受体的核酸分子，其中所述嵌合抗原受体包含：人IL-13或其具有1-10个氨基酸修饰的变体；跨膜域，其选自：CD4跨膜域或其具有1-10个氨基酸修饰的变体、CD8跨膜域或其具有1-10个氨基酸修饰的变体、CD28跨膜域或其具有1-10个氨基酸修饰的变体，和CD3ζ跨膜域或其具有1-10个氨基酸修饰的变体；共刺激域；和CD3ζ信号传导域或其具有1-10个氨基酸修饰的变体。
实施方案2.实施方案1的核酸分子，其中所述共刺激域选自：CD28共刺激域或其具有1-10个氨基酸修饰的变体、4IBB共刺激域或其具有1-10个氨基酸修饰的变体和OX40共刺激域或其具有1-10个氨基酸修饰的变体。
实施方案3.实施方案1的核酸分子，其包含具有1-10个氨基酸修饰的人IL13的变体，所述修饰增加对IL13Rα2相对于IL13Rα1的结合特异性。
实施方案4.实施方案1的核酸分子，其中所述人IL-13或其变体是包含具有1-5个氨基酸修饰的SEQ ID NO:3氨基酸序列的IL-13变体，条件是SEQ ID NO:3的位置11上的氨基酸不是E。
实施方案5.实施方案2的核酸分子，其中所述嵌合抗原受体包含两个不同的共刺激域，其选自：CD28共刺激域或其具有1-10个氨基酸修饰的变体、4IBB共刺激域或其具有1-10个氨基酸修饰的变体和OX40共刺激域或其具有1-10个氨基酸修饰的变体。
实施方案6.实施方案5的核酸分子，其中所述嵌合抗原受体包含两个不同的共刺激域，其选自：CD28共刺激域或其具有1-2个氨基酸修饰的变体、4IBB共刺激域或其具有1-2个氨基酸修饰的变体和OX40共刺激域或其具有1-2个氨基酸修饰的变体。
实施方案7.实施方案1的核酸分子，其中所述嵌合抗原受体包含：人IL-13或其具有1-2个氨基酸修饰的变体；跨膜域，其选自：CD4跨膜域或其具有1-2个氨基酸修饰的变体、CD8跨膜域或其具有1-2个氨基酸修饰的变体、CD28跨膜域或其具有1-2个氨基酸修饰的变体，和CD3ζ跨膜域或其具有1-2个氨基酸修饰的变体；共刺激域；和CD3ζ信号传导域或其具有1-2个氨基酸修饰的变体。
实施方案8.实施方案1的核酸分子，其包含定位在IL-13或其变体与跨膜域之间的间隔物区。
实施方案9.实施方案6的核酸分子，其中所述间隔物区包含选自SEQ ID NO:4、14-20、50和521的氨基酸序列。
实施方案10.实施方案6的核酸分子，其中所述间隔物包含IgG铰链区。
实施方案11.实施方案6的核酸分子，其中所述间隔物包含10-150个氨基酸。
实施方案12.实施方案2的核酸分子，其中所述4-1BB信号传导域包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列。
实施方案13.实施方案1的核酸分子，其中所述CD3ζ信号传导域包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列。
实施方案14.实施方案1的核酸分子，其中3-15个氨基酸的接头定位在所述共刺激域与所述CD3ζ信号传导域或其变体之间。
实施方案15.实施方案1的核酸分子，其中所述核酸分子表达包含选自SEQ ID NO:10、31-48和52的氨基酸序列的多肽。
实施方案16.实施方案1的核酸分子，其中所述嵌合抗原受体含有包含SEQ ID NO:11的氨基酸的IL-13/IgG4/CD4t/41-BB区和包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的CD3ζ信号传导域。
实施方案17.实施方案14的核酸分子，其中所述嵌合抗原受体包含SEQ ID NO:10、31-48和52的氨基酸序列。
实施方案18.人T细胞群，其通过包含编码嵌合抗原受体的表达盒的载体转导，其中嵌合抗原受体包含：人IL-13或其具有1-10个氨基酸修饰的变体；跨膜域，其选自：CD4跨膜域或其具有1-10个氨基酸修饰的变体、CD8跨膜域或其具有1-10个氨基酸修饰的变体、CD28跨膜域或其具有1-10个氨基酸修饰的变体，和CD3ζ跨膜域或其具有1-10个氨基酸修饰的变体；共刺激域；和CD3ζ信号传导域或其具有1-10个氨基酸修饰的变体。
实施方案19.人T细胞群，其包含表达包含选自SEQ ID NO:10、31-48和52的氨基酸序列的嵌合抗原受体的载体。
实施方案20.实施方案16的人T细胞群，其中所述T细胞包含中央记忆型T细胞群。
实施方案21.在患者中治疗癌症的方法，其包含施用通过载体转导的自体或同种异型人T细胞群，所述载体包含编码嵌合抗原受体的表达盒，其中嵌合抗原受体包含选自SEQ ID NO:10、31-48和52的氨基酸序列。
实施方案22.实施方案19的方法，其中所述人T细胞群包含中央记忆型T细胞。
实施方案23.实施方案19的方法，其中所述癌症是成胶质细胞瘤。
实施方案24.实施方案20的方法，其中所述转导的人T细胞通过下述方法制备，所述方法包含从患者获得T细胞，处理所述T细胞以分离中央记忆型T细胞，并利用包含编码嵌合抗原受体的表达盒的病毒载体转导所述中央记忆型细胞的至少部分，其中嵌合抗原受体包含选自SEQ ID NO:10、31-48和52的氨基酸序列。
实施方案25.核酸分子，其编码包含与选自SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:10、31-48和52的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列的多肽。
实施方案26.核酸分子，其编码包含与选自SEQ ID NO:10、31-48和52的氨基酸序列相同的氨基酸序列的多肽，除了存在不超过5个氨基酸取代、缺失或插入。
实施方案27.核酸分子，其编码包含与选自SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:10、31-48和52的氨基酸序列相同的氨基酸序列的多肽，除了存在不超过5个氨基酸取代。
实施方案28.核酸分子，其编码包含与选自SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:10、31-48和52的氨基酸序列相同的氨基酸序列的多肽，除了存在不超过2个氨基酸取代。
附图简述
图1是IL13(E13Y)-zetakine CAR(左)的示意性描述，所述IL13(E13Y)-zetakineCAR由所指示的IL13Rα2-特异性人IL-13变体(huIL-13(E13Y))、人IgG4 Fc间隔物(huγ4Fc)、人CD4跨膜(huCD4 tm)，和人CD3ζ链胞质(huCD3ζcyt)部分组成。还描述的是IL13(EQ)BBζCAR，其与IL13(E13Y)-zetakine相同，除了定位在IgG4间隔物的CH2域中红色指示的两个点突变L235E和N297Q，并添加了共刺激4-1BB胞质域(4-1BB cyt)。
图2A-C描述了某些载体可读框。A是2670个核苷酸IL13(EQ)BBZ-T2ACD19t构建体的cDNA可读框的图表，其中指示了IL13(EQ)BBZ CAR的IL13Rα2-特异性配体IL13(E13Y)、IgG4(EQ)Fc铰链、CD4跨膜、4-1BB胞质信号传导、三甘氨酸接头，和CD3ζ胞质信号传导域，以及T2A核糖体跳跃(skip)和截短的CD19序列。还指示了人GM-CSF受体α和驱动IL13(EQ)BBζCAR和CD19t表面表达的CD19信号序列。B是侧翼为将整合至宿主基因组中的长末端重复(由‘R’指示)的序列的图表。C是IL13(EQ)BBZ-T2A-CD19t_epHIV7质粒图。
图3描述了pHIV7的构建。
图4描述了pHIV7的元件。
图5描述了IL13(EQ)BBζ/CD19t+TCM的产生图解。
图6A-C描述了表面转基因和T细胞标志物表达的流式细胞检测分析的结果。IL13(EQ)BBζ/CD19t+TCM HD006.5和HD187.1被抗IL13-PE和抗CD8-FITC共染色以检测CD8+CAR+和CD4+(即，CD8阴性)CAR+细胞(A)，或被抗CD19-PE和抗CD4-FITC共染色以检测CD4+CD19t+和CD8+(即，CD4阴性)CAR+细胞(B)。IL13(EQ)BBζ/CD19t+TCM HD006.5和HD187.1被荧光色素缀合的抗CD3、TCR、CD4、CD8、CD62L和CD28(灰色柱状图)或同种型对照(黑色柱状图)染色(C)。在所有情况中，百分比基于高于同种型染色的有活力的淋巴细胞(DAPI阴性)。
图7A-B描述了IL13(EQ)BBZ+TCM的IL13Rα2-特异性效应器功能的体外功能表征。IL13(EQ)BBZ/CD19t+TCMHD006.5和HD187.1在使用10:1E:T比例基于CD19t表达的6-小时51Cr释放测定中用作效应器。将IL13Rα2阳性肿瘤靶标是K562工程化改造的，以表达IL13Rα2(K562-IL13Rα2)和原代神经胶质瘤系PBT030-2，并且IL13Rα2阴性肿瘤靶标对照是K562亲本系(A)。在与IL13Rα2阳性和阴性靶标以10:1E:T比例过夜共培养后评估IL13(EQ)BBZ/CD19t+TCMHD006.5和HD187.1的抗原依赖性细胞因子产生。使用Bio-Plex Pro人细胞因子TH1/TH2测定试剂盒测定细胞因子水平并报道了INF-γ(B)。
图8A-C描述了研究结果，其证明在IL13(EQ)BBζ/CD19t+TCM过继性转移后建立的神经胶质瘤肿瘤异种移植物的消退。将EGFP-ffLuc+PBT030-2肿瘤细胞(1×105)立体定向植入NSG小鼠的右前脑中。在第5天，小鼠接受2x106个IL13(EQ)BBζ/CD19t+TCM(1.1x106 CAR+；n＝6)、2x106个模拟TCM(无CAR；n＝6)或PBS(n＝6)。来自各组的代表性小鼠，其显示使用Xenogen Living Image的相对肿瘤负荷(A)。ffLuc流量(光子/秒)的定量显示IL13(EQ)BBζ/CD19t+TCM与模拟转导的TCM和PBS相比诱导肿瘤消退(#p<0.02,*p<0.001,重复测量ANOVA)(B)。Kaplan Meier存活曲线(n＝6/组)，证明利用IL13(EQ)BBζ/CD19t+TCM处理的小鼠的存活显著提高(p＝0.0008；时序检验)(C)。
图9A-C描述了比较IL13(EQ)BBZ TCM和IL13-zetakine CTL克隆的抗肿瘤效果的研究结果。将EGFP-ffLuc+PBT030-2 TSs(1×105)立体定向植入NSG小鼠的右前脑中。在第8天，小鼠接受1.6x106个模拟TCM(无CAR)、1.0×106CAR+IL13(EQ)BBζTCM(1.6×106全部T细胞；63％CAR)、1.0x106IL13-zetakine CD8+CTL cl.2D7(克隆CAR+)，或没有处理(n＝6/组)。来自各组的代表性小鼠使用Xenogen Living Image显示相对肿瘤负荷(A)。ffLuc流量(光子/秒)的自然对数随时间的线性回归线，P-值通过时间相互的比较用于组(P-valuesare for group by time interaction comparisons)(B)。Kaplan Meier存活分析(n＝6/组)证明与IL13-zetakine CD8+CTL cl.2D7相比，利用IL13(EQ)BBζTCM处理的小鼠的存活显著提高(p＝0.02；时序检验)(C)。
图10A-C描述了比较IL13(EQ)BBζTCM和IL13-zetakine CTL克隆的抗肿瘤效果的研究结果。将EGFP-ffLuc+PBT030-2 TSs(1×105)立体定向植入NSG小鼠的右前脑中。在第8天，小鼠接受1.3x106模拟TCM(无CAR；n＝6)、1.0、0.3或0.1x106 CAR+IL13(EQ)BBζTCM(78％CAR+；n＝6-7)、1.0、0.3或0.1x106个IL13-zetakine CD8+CTL cl.2D7(克隆CAR+；n＝6-7)，或无处理(n＝5)。来自各组的代表性小鼠的Xenogen成像显示相对肿瘤负荷(A)。ffLuc流量(光子/秒)的自然对数的线性回归线显示与第一代IL13-zetakine CTL cl.2D7、模拟TCM和仅肿瘤相比，IL13(EQ)BBζTCM实现卓越的肿瘤消退。肿瘤注射后第27天的平均流量/组证明0.1x106个IL13(EQ)BBζTCM剂量胜过高10倍剂量的1.0x106个IL13-zetakine CD8+CTLcl.2D7(p＝0.043；Welch两样品t-检验)(C)。
图11描述了研究结果，其证明与IL13-zetakine CTL克隆相比IL13(EQ)BBζTcm展示提高的持续性。CD3免疫组织化学在T细胞输注后7天在肿瘤位点上评估T细胞持续性。检测IL13(EQ)BBζTcm的显著数量的T细胞(上图)。相反，检测到极少的有活力的CD3+IL13-zetakine T细胞(下图)。
图12A-D描述了比较用于大的建立肿瘤的CAR+T细胞递送途径(i.c.相对于i.v.)的实验结果。将EGFP-ffLuc+PBT030-2 TSs(1×105)植入NSG小鼠的右前脑中。在第19天和第26天，利用5x106个CAR+IL13(EQ)BBζ+Tcm(11.8x106总细胞；n＝4)，或模拟Tcm(11.8x106细胞；n＝4)通过尾静脉i.v.注射小鼠。或者，在第19、22、26和29天，利用1x106个CAR+IL13(EQ)BBζ+Tcm(2.4x106个总细胞；n＝4)，或模拟Tcm(2.4x106个细胞；n＝5)i.c.注射小鼠。随时间的平均ffLuc流量(光子/秒)显示i.c.递送的IL13(EQ)BBζTcm介导第19天肿瘤的肿瘤消退。通过比较，i.v.递送的T细胞与未处理的或模拟Tcm对照相比不显示肿瘤负荷的减少(A)。Kaplan Meier存活曲线证明与利用i.v.施用的CAR+Tcm处理的小鼠相比利用IL13(EQ)BBZ Tcm i.c.处理的小鼠的存活提高(p＝0.0003时序检验)(B)。利用IL13(EQ)BBZ+Tcmi.v.(C)相对于i.c.(D)处理的小鼠的代表性H&E和CD3 IHC。仅在i.c.处理组中检测到CD3+T细胞，对于i.v.处理的小鼠，在肿瘤或周围脑实质中没有检测到CD3+细胞。
图13A-B描述了研究结果，其显示颅内、瘤内(i.c.t.)或心室内(i.c.v.)注射的CAR+T细胞可以运输到对面半球上的肿瘤中。将EGFP-ffLuc+PBT030-2TSs(1×105)立体定向植入NSG小鼠的右前脑和左前脑中。在第6天，利用1.0x106 IL13(EQ)BBζ+Tcm(1.6x106总细胞；63％CAR；n＝4)在右边肿瘤位点i.c.注射小鼠。多病灶神经胶质瘤实验模型的示意图(A)。CD3 IHC显示T细胞浸润右边和左边肿瘤位点二者(B)。
图14A-C描述了评估IL13Rα2-特异性CAR的共刺激域的一系列研究的结果。IL13Ra2-特异性CAR构建体的示意图，其比较多个胞内内(endo)/信号传导域，包含缺少共刺激的第一代CD3z CAR，相对于掺入4-1BB或CD28的第二代CAR，相对于含有CD28和41BB的第三代CAR。所有CAR盒也含有T2A核糖体跳跃和截短的CD19(CD19t)序列作为用于转导细胞的标志物(A)。通过慢病毒转导CD4和CD8 TCM并且通过抗CD19免疫磁性富集表达CAR的T细胞。如通过流式细胞术所测定的CD19和IL13(即，CAR)表达水平(B)。通过用CAR(IL13)平均荧光强度(MFI)除以转导标志物(CD19t)的平均荧光强度测定各CAR构建体的稳定性(C)。含有4-1BB的CAR证明与CD19t转导标志物相比最低的表达水平。
图15A-B描述了研究结果，其证明含有4-1BB共刺激域的IL13Rα2-特异性CAR产生较少的Th1和Th2细胞因子。在指示的效应器：靶标比例的4小时51Cr释放测定中测定所指示的模拟-转导的或表达CAR的T细胞杀死表达IL13Rα2的PBT030-2肿瘤细胞靶标的能力。描述了一式三份孔的均值％铬释放+S.D.(A)。如预期，模拟转导的T细胞不有效裂解靶标。相反，所有表达CAR的T细胞以相似的方式裂解肿瘤细胞。所指示的模拟转导的或表达CAR的T细胞与表达IL13Rα2的PBT030-2肿瘤细胞以10：1比例共培养过夜并且通过细胞测定珠阵列分析上清液中IL-13和IFN-γ水平(B)。描述了一式三份孔的均值+S.D.。有趣的是，表达ζ、41BB-ζ或CD28-41BB-ζCAR的T细胞比表达CD28-ζCAR的T细胞展示更低的抗原刺激的细胞因子产生。
图16A-C描述了IL13Rα2-特异性CAR的体内效果的一系列研究结果。NSG小鼠在第0天接受ffLuc+PBT030-2肿瘤细胞的颅内注射，并在第8天随机化到6个组中(n＝9-10小鼠/组)用于PBS(仅肿瘤)、模拟转导的T细胞或表达指示的IL13Rα2-特异性CAR的T细胞的i.c.处理。然后进行定量生物发光成像以监测肿瘤随时间的生长。各组中代表性小鼠的生物发光图像(A)。各组中萤光素酶活性随时间的总体流量水平的均值+S.E.(B)。在第27天各小鼠的流量水平。除了利用表达CD28-CAR的T细胞处理的那些组，利用IL13Rα2-特异性CAR T细胞处理的所有组与利用模拟转导的T细胞处理的小鼠相比在肿瘤体积上显示统计学上显著的减少(C)
图17描述了IL13(EQ)BBζ/CD19t+的氨基酸序列(SEQ ID NO:10)。
图18描述了IL13(EQ)41BBζ[IL13{EQ}41BBζT2A-CD19t_epHIV7；pF02630](SEQ IDNO:12)与CD19Rop_epHIV7(pJ01683)(SEQ ID NO:13)的序列比较。
图19描述了IL13(EmY)-CD8h3-CD8tm2-41BBζ的氨基酸序列(具有GMSCFRa信号肽的SEQ ID NO:31；没有GMSCFRa信号肽的SEQ ID NO:39)。
图20描述了IL13(EmY)-CD8h3-CD28tm-CD28gg-41BB-ζ的氨基酸序列(具有GMSCFRa信号肽的SEQ ID NO:32；没有GMSCFRa信号肽的SEQ ID NO:40)。
图21描述了IL13(EmY)-IgG4(HL-CH3)-CD4tm-41BB-ζ的氨基酸序列(具有GMSCFRa信号肽的SEQ ID NO:33；没有GMSCFRa信号肽的SEQ ID NO:41)。
图22描述了IL13(EmY)-IgG4(L235E,N297Q)-CD8tm-41BB-ζ的氨基酸序列(具有GMSCFRa信号肽的SEQ ID NO:34；没有GMSCFRa信号肽的SEQ ID NO:42)。
图23描述了IL13(EmY)-Linker-CD28tm-CD28gg-41BB-ζ的氨基酸序列(具有GMSCFRa信号肽的SEQ ID NO:35；没有GMSCFRa信号肽的SEQ ID NO:43)。
图24描述了IL13(EmY)-HL-CD28m-CD28gg-41BB-ζ的氨基酸序列(具有GMSCFRa信号肽的SEQ ID NO:36；没有GMSCFRa信号肽的SEQ ID NO:44)。
图25描述了IL13(EmY)-IgG4(HL-CH3)-CD28tm-CD28gg-41BB-ζ的氨基酸序列(具有GMSCFRa信号肽的SEQ ID NO:37；没有GMSCFRa信号肽的SEQ ID NO:45)。
图26描述了IL13(EmY)IgG4(L235E,N297Q)-CD28tm-CD28gg-41BB-ζ的氨基酸序列(具有GMSCFRa信号肽的SEQ ID NO:38；没有GMSCFRa信号肽的SEQ ID NO:46)。
图27描述了IL13(EmY)-CD8h3-CD8tm-41BBζ的氨基酸序列(具有GMSCFRa信号肽的SEQ ID NO:47；没有GMSCFRa信号肽的SEQ ID NO:48)。
发明详述
下文描述的是多个IL13Rα2-特异性嵌合抗原受体的结构、构建和表征。嵌合抗原(CAR)是这样的重组生物分子，其最少含有胞外识别域、跨膜区，和胞内信号传导域。因此，术语“抗原”不限于结合抗体的分子，还指可以特异性结合靶标的任何分子。例如，CAR可以包含特异性结合细胞表面受体的配体。胞外识别域(还称作胞外域或简单地由其含有的识别元件所指)包含特异性结合靶细胞的细胞表面上存在的分子的识别元件。跨膜区锚定膜中的CAR。胞内信号传导域包含来自人CD3复合体的ζ链的信号传导域并任选地包含一个或多个共刺激信号传导域。CAR可以既结合抗原又转导T细胞激活，其不依赖于MHC限制。因此，CAR是“通用”免疫受体，其可以治疗具有抗原阳性肿瘤的患者群体，不论其HLA基因型如何。使用表达肿瘤特异性CAR的T淋巴细胞的过继性免疫疗法可以是用于治疗癌症的强大治疗策略。
本文所述的一个IL13Rα2-特异性CAR称作IL13(EQ)BBζ。该CAR包含多个重要特征，包含：具有氨基酸改变的IL13α2配体，所述氨基酸改变提高与IL13α2结合的特异性；CD137(4-1BB)的域与CD3ζ串联以提供有益的共刺激；和IgG4 Fc区，其在CH2区内的两个位点上以减少被Fc受体(FcR)结合的方式被突变(L235E；N297Q)。本文所述的其他CAR含有第二个共刺激域。
在一些情况中，可以使用载体产生本文所述的CAR，包含IL13(EQ)BBζCAR，在所述载体中CAR可读框后接T2A核糖体跳跃序列和截短的CD19(CD19t)，其缺少胞质信号传导尾部(在第323位氨基酸上被截短)。在该排列中，CD19t的共表达提供惰性的非免疫原性表面标志物，其允许精确测定基因修饰的细胞，并使得能够阳性选择基因修饰的细胞，以及有效的细胞运输和/或在过继性转移后体内治疗性T细胞成像。CD19t的共表达提供用于使用临床可得的抗体和/或免疫毒素试剂在体内免疫靶向转导细胞以选择性删除治疗细胞，并由此作为自杀开关起作用的标志物。
神经胶质瘤表达IL13受体，特别是高亲和力IL13受体。然而，不像IL13受体，神经胶质瘤细胞过表达独特的IL13Rα2链，其能够不依赖对IL4Rβ或γc44的需要而结合IL13。与其同系物IL4相似，IL13在CNS外具有多效(pleotropic)的免疫调节活性。IL13和IL4均刺激B淋巴细胞产生IgE并抑制巨噬细胞产生促炎症细胞因子。
使用利用放射标记的IL13的放射自显影技术的详细研究已经证明在所研究的几乎所有恶性神经胶质瘤组织上大量的IL13结合。该结合在肿瘤切片和单细胞分析中是高度同质的。然而，对IL13Rα2mRNA特异的分子探针分析不检测神经胶质瘤特异性受体通过正常脑元件的表达，并且利用放射标记的IL13的放射自显影技术也不能检测正常CNS中的特异性IL13结合。这些研究提示共有的IL13Rα1/IL4β/γc受体在正常的CNS中不可被检测地表达。因而，IL13Rα2是神经胶质瘤非常特异的细胞表面靶标并且是被设计用于治疗神经胶质瘤的CAR的合适靶标。
然而，基于IL13的治疗分子与广泛表达的IL13Rα1/IL4β/γc受体复合体结合具有向CNS外的正常组织介导不想要的毒性的潜力，并因此限制这些试剂的全身施用。IL13α螺旋A第13位氨基酸上酪氨酸对天然谷氨酸的氨基酸取代选择性地降低了IL13对IL13Rα1/IL4β/γc受体的亲和力。然而，该突变体(称为IL13(E13Y))与IL13Rα2的结合相对于野生型IL13是增加的。因此，该最低限度改变的IL13类似物同时增加了IL13对神经胶质瘤细胞的特异性和亲和力。因而，本文所述的CAR包含在第13位氨基酸(根据Debinski等1999ClinCancer Res 5:3143s的编号)上含有突变(E变成Y或E变成一些其他氨基酸如K或R或L或V)的IL13。然而，也可以使用具有天然序列的IL13，并且可以特别可用于下述情况，其中有待如通过直接注射到肿瘤块中局部施用所述修饰的T细胞。
可以通过本领域已知的任何手段产生本文所述的CAR，尽管优选使用重组DNA技术产生它。可以通过本领域已知的便利分子克隆的标准技术(基因组文库筛选、PCR、引物-辅助的连接、定点诱变等)制备编码嵌合受体的几个区域的核酸并将其装配成完整的编码序列。将所得的编码区优选插入表达载体中并用于转化合适的表达宿主细胞系，优选T淋巴细胞细胞系，并最优选自体T淋巴细胞细胞系。
可以利用用于CAR表达的载体转导从患者分离的多个T细胞亚群，包含未选择的PBMC或富集的CD3 T细胞或富集的CD3或记忆型T细胞亚群。中央记忆型T细胞是一种有用的T细胞亚群。可以通过选择CD45RO+/CD62L+细胞，使用例如
Figure BDA0003225443740000191
设备从外周血单核细胞(PBMC)分离中央记忆型T细胞，以免疫磁性选择表达想要的受体的细胞。可以利用抗CD3/CD28激活针对中央记忆型T细胞富集的细胞，利用例如指导IL13Rα2-特异性CAR(例如，IL13(EQ)BBζ)以及截短的人CD19(CD19t)表达的SIN慢病毒载体进行转导，所述截短的人CD19(CD19t)是用于体内检测和可能的离体选择两者的非免疫原性表面标志物。可以利用IL-2/IL-15在体外扩增激活的/遗传修饰的中央记忆型T细胞，然后冷藏保存。
实施例
实施例1：IL13Rα2-特异性CAR的构建和结构
在下文描述了有用的IL13Rα2-特异性CAR的结构。密码子优化的CAR序列含有在单个位点上突变(E13Y)以减少与IL13Rα1的可能结合的膜栓系IL-13配体、含有极大减少Fc受体介导的识别模型的两个突变(L235E；N297Q)的IgG4 Fc间隔物、CD4跨膜域、共刺激4-1BB胞质信号传导域，和CD3ζ胞质信号传导域。T2A核糖体跳跃序列将该IL13(EQ)BBζCAR序列与CD19t分隔开，所述CD19t是惰性的非免疫原性细胞表面检测/选择标志物。该T2A连接导致IL13(EQ)BBζ和CD19t从单个转录本协同表达。图1A是编码IL13(EQ)BBZ-T2ACD19t构建体的2670个核苷酸的可读框的示意图。在该图中，IL13(EQ)BBZ CAR的IL13Rα2-特异性配体IL13(E13Y)、IgG4(EQ)Fc、CD4跨膜、4-1BB胞质信号传导、三甘氨酸接头，和CD3ζ胞质信号传导域，以及T2A核糖体跳跃和截短的CD19序列均被指出。也指出了驱动IL13(EQ)BBZ CAR和CD19t表面表达的人GM-CSF受体α和CD19信号序列。因此，IL13(EQ)BBZ-T2ACD19t构建体包含IL13Rα2特异性的铰链优化的共刺激嵌合免疫受体序列(命名为IL13(EQ)BBZ)、核糖体跳跃T2A序列，和CD19t序列。
通过融合人GM-CSF受体α前导肽与IL13(E13Y)配体5L235E/N297Q-修饰的IgG4 Fc铰链(其中双突变干扰FcR识别)、CD4跨膜、4-1BB胞质信号传导域，和CD3ζ胞质信号传导域序列来产生IL13(EQ)BBZ序列。在密码子优化后从头合成该序列。从消化含T2A的质粒获得T2A序列。从横跨含CD19的质粒的前导肽序列与跨膜组分(即，碱基对1-972)获得CD19t序列。将所有三个片段，1)IL13(EQ)BBZ,2)T2A，和3)CD19t克隆到epHIV7慢病毒载体的多克隆位点中。当转染到适当的细胞中时，载体整合图1B中示意描述的序列到宿主细胞基因组中。图1C提供9515个碱基对的IL13(EQ)BBZ-T2A-CD19t_epHIV7质粒自身的示意图。
如图2中示意所示，IL13(EQ)BBZ CAR与先前描述的IL13Rα2-特异性CAR(称作IL13(E13Y)-zetakine)在几个重要方面不同(Brown等2012Clinical Cancer Research 18:2199)。IL13(E13Y)-zetakine由所示的IL13Rα2-特异性人IL-13突变蛋白(huIL-13(E13Y))、人IgG4 Fc间隔物(huγ4Fc)、人CD4跨膜(huCD4 tm)，和人CD3ζ链胞质(huCD3ζcyt)部分组成。相反，IL13(EQ)BBζ)具有两个点突变L235E和N297Q，其定位在IgG4间隔物的CH2域中，和共刺激4-1BB胞质域(4-1BB cyt)。
实施例2：用于表达IL13Rα2-特异性CAR的epHIV7的构建和结构
pHIV7质粒是这样的亲代质粒，在City of Hope(COH)的T cell TherapeuticsResearch Laboratory(TCTRL)中从所述亲代质粒衍生临床载体IL13(EQ)BBZ-T2A-CD19t_epHIV7。从pHIV7载体产生用于表达CAR的epHIV7载体。重要的是，该载体使用人EF1启动子以驱动CAR的表达。载体的5'和3'序列都来源于如先前来源于HXBc2前病毒的pv653RSN。聚嘌呤区DNA瓣(flap)序列(cPPT)来源于来自NIH AIDS Reagent Repository的HIV-1菌株pNL4-3。先前描述了土拨鼠(woodchuck)转录后调节元件(WPRE)序列。
在图3中示意描述了pHIV7的构建。简言之，如下将pv653RSN亚克隆至pBluescript中，所述pv653RSN含有来自gag-pol的653bp加上5’和3’长末端重复(LTRs)与居间SL3-新霉素磷酸转移酶基因(Neo)：在步骤1中，从5’LTR到rev-响应元件(RRE)的序列构成了p5’HIV-1 51，然后通过去除TATA盒上游的序列修饰5'LTR，并首先连接CMV增强子，然后连接SV40复制起始区(p5'HIV-2)。在步骤2中，将3'LTR克隆到pBluescript中以制备p3’HIV-1，在3'LTR增强子/启动子中进行400-bp缺失以去除HIV U3中的顺式调节元件并形成p3'HIV-2。在步骤3中，连接从p5'HIV-3和p3'HIV-2分离的片段以制备pHIV-3。在步骤4中，通过去除额外的上游HIV序列进一步修饰p3'HIV-2来产生p3’HIV-3，并将含有WPRE的600-bp BamHI-SalI片段添加到p3’HIV-3来制备p3'HIV-4。在步骤5中，通过PCR在大小上减少pHIV-3RRE并将其连接到来自pHIV-3的5’片段(未显示)和p3’HIV-4中，以制备pHIV-6。在步骤6中，从pNL4-3扩增含有来自HIV-1pNL4-3(55)的cPPT DNA瓣序列的190-bp BglII-BamHI片段并置于pHIV6中的RRE与WPRE序列之间来制备pHIV-7。该亲代质粒pHIV7-GFP(GFP，绿色荧光蛋白)用于使用四质粒系统包装亲代载体。
将病毒基因组有效包装到载体中需要包装信号psiψ。RRE和WPRE增强RNA转录本转运和转基因的表达。已经证明瓣序列与WPRE组合增强哺乳动物细胞中慢病毒载体的转导效率。
将产生病毒载体所需的辅助功能分到三个独立质粒中以减少通过重组产生能够复制的慢病毒的可能性：1)pCgp编码病毒载体装配所需的gag/pol蛋白；2)pCMV-Rev2编码Rev蛋白，其作用于RRE序列上以辅助病毒基因组转运用于有效的包装；和3)pCMV-G编码水疱-口炎病毒(vesiculo-stomatitis virus,VSV)的糖蛋白，其为病毒载体的传染性所需。
在pHIV7编码的载体基因组与辅助质粒之间存在最小的DNA序列同源性。同源区域包含大概600个核苷酸的包装信号区，其定位在pCgp辅助质粒的gag/pol序列中；所有三个辅助质粒中的CMV启动子序列；和辅助质粒pCgp中的RRE序列。非常可能的是由于这些区域中的同源性可产生能够复制的重组病毒，因为其需要多个重组事件。此外，任何所得的重组子均可能会丢失功能性LTR和tat序列，其为慢病毒复制所需。
CMV启动子被EF1α-HTLV启动子(EF1p)替换，并将新的质粒命名为epHIV7(图4)。EF1p具有563bp并使用NruI和NheI将其引入到epHIV7中，在切掉CMV启动子后。
已经从该系统去除了慢病毒基因组，不包含gag/pol和rev，其为野生型病毒的病原性所必需并且为靶细胞的有效感染所需。此外，IL13(EQ)BBZ-T2ACD19t_epHIV7载体构建体不含有完整的3’LTR启动子，所以靶定细胞中所得的表达的和反向转录的DNA前病毒基因组将具有无活性的LTR。由于该设计，没有HIV-I来源的序列从前病毒转录并且仅治疗序列将从其各自启动子表达。预期SIN载体中LTR启动子活性的去除显著减少了宿主基因无意激活的可能性(56)。表4概述了IL13(EQ)BBZ-T2ACD19t_epHIV7中存在的多个调节元件。
Figure BDA0003225443740000221
Figure BDA0003225443740000231
Figure BDA0003225443740000241
实施例3：产生用于转导患者T细胞的载体
对于每个质粒(IL13(EQ)BBZ-T2A-CD19t_epHIV7；pCgp；pCMV-G；和pCMV-Rev2)，产生种子库，其用于接种发酵罐以产生足够量的质粒DNA。测试质粒DNA的身份(identity)、无菌性(sterility)和内毒素，之后在生成慢病毒载体中使用它。
简言之，从293T工作细胞(WCB)扩增细胞，所述293T工作细胞已经被测试以验证无菌性和病毒污染的缺乏。融化来自293T WCB的293T细胞的小瓶。培养细胞并扩增直至存在足够数量的细胞以平铺适当数量的10层细胞工厂(cell factories,CF)用于载体产生和细胞培养(cell train)维持。可以使用细胞的单培养(single train)用于生产。
在高达10个CF的分批中产生慢病毒载体。可以在同一周产生两个分批，导致产生大概20L的慢病毒上清液/周。在下游加工期间集中从所有分批产生的材料，以产生一批产物。将293T细胞平铺在293T培养基(具有10％FBS的DMEM)中的CF中。将工厂放置在37℃温育箱中并水平放平以在CF的所有层上获得平均细胞分布。两天后，利用上述四个慢病毒质粒，使用CaPO4方法转染细胞，其包含Tris:EDTA、2M CaCl2、2XHBS和四个DNA质粒的混合物。转染后第3天，收集、纯化并浓缩含有分泌的慢病毒载体的上清液。从CF去除上清液后，从各CF收集生产终末期细胞。从各工厂胰蛋白酶处理(trypsinize)细胞并通过离心收集。将细胞重悬浮在冰冻的培养基中并冷藏保存。这些细胞稍后用于能够复制的慢病毒(RCL)测试。
为了纯化并配制载体，通过膜过滤澄清粗上清液以去除细胞碎片。通过内切核酸酶消化
Figure BDA0003225443740000242
降解宿主细胞DNA和残留的质粒DNA。使用0.45μm过滤器澄清病毒上清液的细胞碎片。将澄清的上清液收集到预先称重的容器中，向所述容器中加入
Figure BDA0003225443740000251
(终浓度50U/mL)。残留的质粒DNA和宿主基因组DNA的内切核酸酶消化在37℃进行6小时。内切核酸酶处理的上清液的初始切向流超滤(TFF)浓缩用于从粗上清液中去除残留的低分子量组分，同时将病毒浓缩约20倍。澄清的内切核酸酶处理的病毒上清液通过具有500kD的NMWCO的中空纤维药筒以这样的流速循环，设计所述流速以维持约4,000/秒或更低的剪切速率，同时使流通率最大。在浓缩过程中开始透析过滤核酸酶处理的上清液以维持药筒性能。在PBS中使用4％的乳糖作为透析过滤缓冲液建立80％的渗透置换率。使病毒上清液达到靶体积，代表20倍浓度的粗上清液，并且透析过滤以100％的渗透置换率持续4份额外的交换体积。
通过使用高速离心技术完成病毒产物的进一步浓缩。使用Sorvall RC-26plus离心机在6℃下以6000 RPM(6,088 RCF)沉淀慢病毒的各分批16-20小时。然后利用PBS中4％的乳糖在50mL体积中重构来自各分批的病毒沉淀。在该缓冲液中重构的沉淀代表用于病毒制备的最终制剂。完整的载体浓缩过程导致大概200倍体积减少。完成所有分批后，接着将材料放置在-80℃中，同时测试来自各分批的样品的无菌性。验证样品无菌性后，将分批在37℃频繁搅拌快速溶解。然后收集材料并手工平分到病毒载体组(suite)中的II类A/B3型生物安全箱中。使用无菌USP六级，外部螺纹的O-环冷冻管中1mL浓缩慢病毒的填充构造。COH的应用技术开发中心(Center for Applied Technology Development)(CATD)的质量系统(Quality Systems)(QS)根据关于CBG的政策和标准操作规程(Policies andStandard Operating Procedures for the CBG)并顺应目前的良好制造实践(GoodManufacturing Practices)(cGMPs)释放所有材料。
为了保证慢病毒载体制剂的纯度，对它测试残留宿主DNA污染物，以及残留的宿主和质粒DNA的转移。在其他测试中，通过RT-PCR评估载体身份以保证存在正确的载体。对于旨在用于该研究的载体，满足所有的释放标准。实施例4：制备适合用于ACT中的T细胞
通过白细胞分离法从患者获得T淋巴细胞，并将适当的同种异型或自体T细胞亚群，例如中央记忆型T细胞(TCM)遗传改变以表达CAR，然后通过任何临床可接受的手段向患者回向施用，以实现抗癌症治疗。
在图8中描述了用于TCM的制造策略的概要(用于IL13(EQ)BBζ/CD19t+TCM的制造方案)。尤其是，将从知情的研究参与者获得的血浆分离置换(apheresis)产物聚蔗糖化(ficoll)、洗涤并温育过夜。然后使用GMP级别的抗CD14、抗CD25和抗CD45RA试剂(MiltenyiBiotec)和CliniMACSTM分离设备消减细胞的单核细胞、调节性T细胞和幼稚T细胞群。消减后，在CliniMACSTM分离设备上使用DREG56-生物素(COH临床级别)和抗生物素微珠(Miltenyi Biotec)为CD62L+TCM细胞富集阴性级分细胞。
富集后，在完整的X-Vivo15加50IU/mL IL-2和0.5ng/mL IL-15中配制TCM细胞并将其转移到Teflon细胞培养袋中，其中利用Dynal ClinExTMVivo CD3/CD28珠刺激它们。刺激后高达5天，利用IL13(EQ)BBZ-T2A-CD19t_epHIV7慢病毒载体以1.0-0.3的多重性感染(MOI)转导细胞。在添加如细胞扩增所需的完整X-Vivo15和IL-2以及IL-15细胞因子的情况下将培养物维持高达42天(保持细胞密度在3x105-2x106个活细胞/mL之间，并且在培养的每周一、周三和周五维持细胞因子补给)。细胞通常在这些条件下在21天内扩增至大概109个细胞。在培养期结束时，收集细胞，洗涤两次并配制在临床级别的冷藏保存培养基(Cryostore CS5,BioLife Solutions)中。
在T细胞输注当天里，将冷藏保存的和释放的产物融化、洗涤并配制用于再次输注。从液氮存储取出含有释放的细胞产物的冷藏保存管、融化、冷却并利用PBS/2％人血清白蛋白(HSA)洗涤缓冲液进行洗涤。离心后，去除上清液并将细胞重悬于无防腐剂的生理盐水(PFNS)/2％HSA输注稀释液中。取出样品用于质量控制测试。
使用上述制造平台在从健康供体获得的细胞上进行两次量化运行。为各临床前量化运行产物分配人供体(HD)编号-HD006.5和HD187.1。重要的是，如表5中所示，这些量化运行在28天内扩大>80倍并且扩增的细胞表达IL13(EQ)BBγ/CD19t转基因。
表5：来自临床前量化运行产物的表达数据的概括
Figure BDA0003225443740000261
实施例5：IL13(EQ)BBγ/CD19t+TCM中表面转基因和T细胞标志物表达的流式细胞术分析
在实施例4中描述的两份临床前量化运行产物用于如下所述的临床前研究。图6A-C描述了表面转基因和T细胞标志物表达的流式细胞术分析结果。IL13(EQ)BBγ/CD19t+TCMHD006.5和HD187.1与抗IL13-PE和抗CD8-FITC共染色以检测CD8+CAR+和CD4+(即，CD8阴性)CAR+细胞(图6A)，或与抗CD19-PE和抗CD4-FITC共染色以检测CD4+CD19t+和CD8+(即，CD4阴性)CAR+细胞(图6B)。利用荧光色素缀合的抗CD3、TCR、CD4、CD8、CD62L和CD28(灰色柱状图)或同种型对照(黑色柱状图)染色IL13(EQ)BBγ/CD19t+TCM HD006.5和HD187.1。(图6C)。在图6A-C的各图中，所指示的百分比基于活的淋巴细胞(DAPI阴性)染色的上述同种型。
实施例6：IL13(EQ)BBγ/CD19t+TCM的效应器活性
评估IL13(EQ)BBζ/CD19t+TCM的效应器活性并在图7A-B中描述该分析结果。简言之，IL13(EQ)BBγ/CD19t+TCM HD006.5和HD187.1在基于CD19t表达的使用10E:1T比例的6小时51Cr-释放测定中用作效应器。将IL13Rα2阳性肿瘤靶标是K562工程化改造的，以表达IL13Rα2(K562-IL13Rα2)和原代神经胶质瘤系PBT030-2，并且IL13Rα2-阴性肿瘤靶标对照是K562亲本系(图7A)。如上所述与相同的IL13Rα2-阳性和阴性靶标以10E:1T比例过夜共培养后评估IL13(EQ)BBγ/CD19t+HD006.5和HD187.1的抗原依赖性细胞因子产生。使用Bio-Plex Pro Human Cytokine TH1/TH2测定试剂盒测定细胞因子水平并描述INF-γ水平(图7B)。
实施例7：IL13(EQ)BBγ/CD19t+TCM的体内抗肿瘤活性
下述研究证明在体内小鼠模型中IL13(EQ)BBγ/CD19t+TCM展示抗肿瘤效果。尤其是，我们已经评估了IL13(EQ)BBγ/CD19t+TCM针对IL13Rα2+原代低传代成胶质细胞瘤肿瘤球系PBT030-2的抗肿瘤潜能，已经改造了所述原代低传代成胶质细胞瘤肿瘤球系PBT030-2以表达EGFP和萤火虫萤光素酶(ffLuc)报告基因二者(PBT030-2 EGFP:ffLuc)(6)。来自患者成胶质细胞瘤样本的一组原代系(PBT)在无血清培养基中生长为肿瘤球(TS)。这些扩增的TS系展示干细胞样特征，包含干细胞标志物的表达、多谱系分化和在免疫受损的小鼠(NSG)中以低细胞数目起始原位肿瘤的能力。PBT030-2EGFP:ffLuc TS起始的异种移植模型(0.1x106细胞；5天移植物移入)先前已经用于评估NSG小鼠中表达IL13Rα2-特异性CAR的T细胞的体内抗肿瘤活性，由此显示2周期间三次注射2x106细胞溶解性T淋巴细胞(CTL)降低肿瘤生长。然而，在那些实验中，大多数PBT030-2肿瘤最终复发。通过比较，单次注射IL13(EQ)BBγ/CD19t+TCM(1.1x106 CAR+TCM；2x106总TCM)展示针对PBT030-2 EGFP:ffLuc TS-起始的肿瘤(0.1x106细胞；5天移植物移入)的强的抗肿瘤活性，如图8A-C中所示。与利用PBS或模拟转导的TCM(无CAR)处理的NSG小鼠相比，IL13(EQ)BBγ/CD19t+TCM显著减少ffLuc流量(>18天，p<0.001)并显著提高存活(p＝0.0008)。
简言之，将EGFP-ffLuc+PBT030-2肿瘤细胞(1×105)立体定向植入NSG小鼠的右前脑中。在第5天，小鼠接受2x106个IL13(EQ)BBγ/CD19t+TCM(1.1x106 CAR+；n＝6)、2x106个模拟TCM(无CAR；n＝6)或PBS(n＝6)。图8A描述了来自各组的代表性小鼠，使用XenogenLiving Image显示相对肿瘤负荷。ffLuc流量(光子/秒)的定量显示与模拟转导的TCM和PBS相比，IL13(EQ)BBζ/CD19t+TCM诱导肿瘤消退(#p<0.02，*p<0.001，重复测量ANOVA)(图8B)。如图8C中所示，Kaplan Meier存活曲线(n＝6/组)证明利用IL13(EQ)BBγ/CD19t+TCM处理的小鼠存活显著提高(p＝0.0008；时序检验)。
实施例8：IL13(EQ)BBζ+Tcm和非Tcm IL13-zetakine CD8+CTL克隆在抗肿瘤效果和T细胞持续性中的比较
下述研究比较了IL13(EQ)BBζ+Tcm与先前产生的IL13Rα2-特异性人CD8+CTL(IL13-zetakine CD8+CTL(描述于Brown等2012Clin Cancer Res18:2199和Kahlon等2004Cancer Res64:9160)。IL13-zetakine使用CD3ζ刺激域，缺少共刺激域并使用与IL13(EQ)BBζ+相同的IL13变体。
产生了来自患者成胶质细胞瘤样本的一组原代系(PBT)，其在无血清培养基中生长为肿瘤球(TS)(Brown等2012Clin Cancer Res 18:2199；Brown等2009Cancer Res69:8886)。这些扩增的TS系展示干细胞样特征，包含干细胞标志物的表达、多谱系分化和在免疫受损的小鼠(NSG)中以低细胞数目起始原位肿瘤的能力。IL13Rα2+原代低传代成胶质细胞瘤TS系PBT030-2用于下文概括的实验，已经改造所述IL13Rα2+原代低传代成胶质细胞瘤TS系PBT030-2以表达EGFP和萤火虫萤光素酶(ffLuc)报告基因二者(PBT030-2EGFP:ffLuc)(Brown等2012Clin Cancer Res 18:2199)。
首先，单剂量(1x106 CAR T细胞)的IL13(EQ)BBζ+Tcm产物与针对第8天PBT030-2EGFP:ffuc TS-起始的异种移植物(0.1x106细胞)评估的IL13-zetakine CD8+CTL克隆进行比较。尽管两个IL13Rα2-特异性CAR T细胞(IL13-zetakine CTL和IL13(EQ)BBζTcm)与未处理的和模拟Tcm(CAR-阴性)对照相比，证明针对建立的PBT030-2肿瘤的抗肿瘤活性(图9A和9B)，IL13(EQ)BBZ+Tcm与我们的第一代IL13-zetakine CD8+CTL克隆相比介导显著提高的存活和持久的肿瘤消退，小鼠存活大于150天(图9C)。
为了进一步比较这两个IL13Rα2-CAR T细胞产物的治疗效果，进行针对第8天PBT030-2 EGFP:ffuc TS-起始的肿瘤的1.0、0.3和0.1x106 CAR T细胞的剂量滴定(图10A-C)。如在6只动物中的3只中通过Xenogen flux所测定，最高剂量(1x106)的IL13-zetakineCD8+CTL cl.2D7介导抗肿瘤应答(图10C)，但是在较低CAR T细胞剂量没有观察到明显的抗肿瘤应答。通过比较，在大多数小鼠中在所有剂量水平上，包含利用尽可能少的0.1x106CAR T细胞的处理，注射IL13(EQ)BBζ+Tcm产物介导完整的肿瘤消退。这些数据证明IL13(EQ)BBζ+Tcm比IL13-zetakine CD8+CTL克隆在抗肿瘤效果上至少更有效10倍。提高的抗肿瘤效果是由于肿瘤微环境中提高的T细胞持续性。i.c.注射后7天评估CD3+T细胞揭示了肿瘤微环境中显著数量的IL13(EQ)BBζ+Tcm，然而存在非常少的第一代IL13-ζCTL(图11)。
实施例9：用于处理大的TS起始PBT肿瘤的CAR T细胞递送途径的比较
下文描述的是这样的研究，其比较在针对侵入性原代PBT系的抗肿瘤活性上静脉内(i.v.)或颅内(i.c.)的递送途径。在初步研究中(数据未显示)，出乎预料到观察到与用于处理小的(第5天)PBT030-2 EGFP:ffLuc肿瘤的PBS相比，i.v.施用的IL13(EQ)BBζ+Tcm没有提供治疗益处。这与利用i.c.施用的CAR+T细胞观察到的强治疗效果相反。推理第5天的PBT030-2肿瘤可能已经太小了以致于不能从外周募集治疗性T细胞，对在针对较大的第19天的PBT030-2 EGFP:ffLuc肿瘤的i.v.相对于i.c.递送进行比较。对于这些研究，利用两次i.v.输注(5x 106CAR+Tcm；第19天和第26天)或四次i.c.输注(1x 106CAR+Tcm；第19、22、26和29天)IL13(EQ)BBZ+Tcm，或模拟Tcm(无CAR)处理PBT030-2移入的小鼠。此处没有如通过对i.v.施用的CAR+T细胞Xenogen成像或Kaplan-Meier存活分析所监测到的治疗益处(图12A和12B)。相反，对i.c.施用的IL13(EQ)BBζ+Tcm观察到有效的抗肿瘤活性(图12A-B)。然后，收集来自T细胞注射后7天的一组小鼠的脑并通过IHC评估CD3+人T细胞。令人惊讶的是，对于利用模拟Tcm或IL13(EQ)BBζTcm i.v.处理的小鼠，在肿瘤或其中人T细胞通常存在的其他小鼠脑区域(即，柔脑膜)中没有可检测的CD3+人T细胞(图12C)，提示肿瘤向性的缺乏。这与在i.c.处理的小鼠中检测到显著数量的T细胞相反(图12D)。
肿瘤来源的细胞因子，特别是MCP-1/CCL2在将T细胞募集到肿瘤中是重要的。因此，评估PBT030-2肿瘤细胞并发现该系产生与U251T细胞相当的高水平的MCP-1/CCL2(数据未显示)，所述U251T细胞是先前显示吸引静脉内施用的效应器CD8+T细胞到颅内移入的肿瘤的神经胶质瘤系。恶性神经胶质瘤是高度侵入性肿瘤并且在表现上经常是多病灶的。上述研究确定IL13BBZ TCM可以消除浸润的肿瘤如PBT030-2，并且介导长期持久的抗肿瘤活性。也检查了颅内递送的CAR T细胞运输到多病灶疾病的能力。对于该研究，将PBT030-2EGFP:ffLuc TS植入左半球和右半球(图13A)并仅在右边肿瘤位点上注射CAR+T细胞。令人鼓舞的是，对于所评估的所有小鼠(n＝3)，我们通过在注射位点(即，右边肿瘤)，以及左半球的肿瘤内在T细胞输注后7天通过CD3 IHC检测T细胞(图13B)。这些发现提供了这样的证据，即CAR+T细胞能够运输到并浸润远位点上的肿瘤灶。在使用U251T神经胶质瘤细胞系的第二个肿瘤模型中也观察到类似的发现(数据未显示)。
实施例10：共刺激域的比较
进行一系列研究以评估多个共刺激域。在图14A中示意性描述了所评估的多个CAR并且其包含缺少共刺激域的第一代CD3ζCAR，掺入了4-1BB共刺激域或CD28共刺激域的第二代CARs，和含有CD28共刺激域和41BB共刺激域的第三代CAR。所有CAR构建体还含有T2A核糖体跳跃序列和截短的CD19(CD19t)序列作为标志物用于转导的细胞。
经慢病毒转导CD4和CD8 TCM并通过抗CD19免疫磁性富集表达CAR的T细胞。通过流式细胞术测定CD19和IL13(即，CAR)表达水平。在图14B中显示了结果。通过将CAR(IL13)平均荧光强度(MFI)除以转导标志物(CD19t)的平均荧光强度测定各CAR构建体的稳定性(图14C)。包含4-1BB共刺激域的两个CAR与CD19t转导标志物相比展示最低表达水平。
在指示的效应器：靶标比例的4小时51Cr-释放测定中测定指示的模拟转导的或表达CAR的T细胞杀死表达IL13Rα2的PBT030-2肿瘤细胞靶标的能力。在图15A中显示了该研究的结果(描述了一式三份孔的均值％铬释放±S.D.)。如预期，模拟转导的T细胞未有效裂解靶标。相反，所有表达CAR的T细胞以相似的方式裂解肿瘤细胞。图15B描述了这样的研究结果，其中指示模拟转导的或表达CAR的T细胞与表达IL13Rα2的PBT030-2肿瘤细胞以10：1的比例共培养过夜并且通过细胞测定珠阵列分析上清液的IL-13和IFN-γ水平。有趣的是，表达ζ、41BB-ζ或CD28-41BB-ζCAR的T细胞比表达CD28-ζCAR的T细胞展示更低的抗原刺激细胞因子产生。
如下检查多种CAR的体内效率。简言之，NSG小鼠在第0天接受颅内注射ffLuc+PBT030-2肿瘤细胞，并被随机化到6个组中(n＝9-10小鼠/组)用于在第8天利用PBS(仅肿瘤)、模拟转导的T细胞或表达指示的IL13Rα2-特异性CAR的T细胞进行颅内处理。然后进行定量生物发光成像以监测肿瘤随时间的生长。各组中代表性小鼠的生物发光图像(图16A)。第27天各小鼠的流量水平(图16B)。除了利用表达CD28-CAR的T细胞处理的那些组，利用IL13Rα2-特异性CAR T细胞处理的所有组相比于利用模拟转导的T细胞处理的小鼠在肿瘤体积上显示统计学上显著的减小(图16C)。
实施例11：IL13(EQ)BBζ/CD19t的氨基酸序列
在图17中描述了IL13(EQ)BBζ/CD19t的完整氨基酸序列。整条序列(SEQ ID NO:1)包含：22个氨基酸的GMCSF信号肽(SEQ ID NO:2)、112个氨基酸的IL-13序列(SEQ ID NO:3；粗体显示的氨基酸取代E13Y)；229个氨基酸的IgG4序列(SEQ ID NO:4；具有粗体显示的氨基酸取代L235E和N297Q)；22个氨基酸的CD4跨膜序列(SEQ ID NO:5)；42个氨基酸的4-1BB序列(SEQ ID NO:6)；3个氨基酸的Gly接头；112个氨基酸的CD3ζ序列(SEQ ID NO:7)；24个氨基酸的T2A序列(SEQ ID NO:8)；和323个氨基酸的CD19t序列(SEQ ID NO:9)。
成熟的嵌合抗原受体序列(SEQ ID NO:10)包含：112个氨基酸的IL-13序列(SEQID NO:3；粗体显示的氨基酸取代E13Y)；229个氨基酸的IgG4序列(SEQ ID NO:4；具有粗体显示的氨基酸取代L235E和N297Q)；22个氨基酸的CD4序列(SEQ ID NO:5)；42个氨基酸的4-1BB序列(SEQ ID NO:6)；3个氨基酸的Gly接头；和112个氨基酸的CD3ζ序列(SEQ ID NO:7)。在该CAR序列(SEQ ID NO:10)中是IL-13/IgG4/CD4t/41-BB序列(SEQ ID NO:11)，其包含112个氨基酸的IL-13序列(SEQ ID NO:3；粗体显示的氨基酸取代E13Y)；229个氨基酸的IgG4序列(SEQ ID NO:4；具有粗体显示的氨基酸取代L235E和N297Q)；22个氨基酸的CD4序列(SEQ ID NO:5)；和42个氨基酸的4-1BB序列(SEQ ID NO:6)。IL13/IgG4/CD4t/4-1BB序列(SEQ ID NO:11)可以通过接头如Gly Gly Gly接头连接到112个氨基酸的CD3ζ序列(SEQ IDNO:7)中。CAR序列(SEQ ID NO:10)前面可以是22个氨基酸的GMCSF信号肽(SEQ ID NO:2)。
图18描述了IL13(EQ)41BBζ[IL13{EQ}41BBζT2A-CD19t_epHIV7；pF02630](SEQ IDNO:12)与CD19Rop_epHIV7(pJ01683)(SEQ ID NO:13)的序列比较。
实施例12：IL13(EQ)BBζ/CD19t的氨基酸序列
图19-26描述了除了定位在某些胞内域之间的GlyGlyGly间隔物外在多个域被标记的各种情况中针对IL13Rα2的额外CAR的氨基酸序列。每一个包含Glu变成Tyr的人IL13(SEQ ID NO:3；强调突出显示的氨基酸取代E13Y)。在用于表达这些CAR的表达载体中，所表达的氨基酸序列可以包含24个氨基酸的T2A序列(SEQ ID NO:8)；和323个氨基酸的CD19t序列(SEQ ID NO:9)以允许在表达CAR的细胞表面上协同表达截短的CD19序列。
如在72小时共培养测定中评估，测试一组CAR的介导IL13Ra2-特异性杀死的能力，所述CAR包含人IL13(E13Y)域、CD28 tm域、CD28gg共刺激域、4-1BB共刺激域，和CD3ζ域CAR骨架并包含HL(22个氨基酸)间隔物、CD8铰链(48个氨基酸)间隔物、IgG4-HL-CH3(129个氨基酸)间隔物或IgG4(EQ)(229个氨基酸)间隔物。除了在该系统中看起来具有弱CAR表达的HL(22个氨基酸)外，其他均为活性的。
序列表
<110> 希望之城公司
<120> 共刺激嵌合抗原受体T细胞靶向
IL13R-ALPHA-2
<130> 40056-0002WO1
<140> PCT/US2015/051089
<141> 2015-09-18
<150> 62/053,068
<151> 2014-09-19
<160> 54
<170> PatentIn版本3.5
<210> 1
<211> 889
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成
多肽"
<400> 1
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro Gly Pro Val Pro Pro Ser Thr Ala Leu Arg
20 25 30
Tyr Leu Ile Glu Glu Leu Val Asn Ile Thr Gln Asn Gln Lys Ala Pro
35 40 45
Leu Cys Asn Gly Ser Met Val Trp Ser Ile Asn Leu Thr Ala Gly Met
50 55 60
Tyr Cys Ala Ala Leu Glu Ser Leu Ile Asn Val Ser Gly Cys Ser Ala
65 70 75 80
Ile Glu Lys Thr Gln Arg Met Leu Ser Gly Phe Cys Pro His Lys Val
85 90 95
Ser Ala Gly Gln Phe Ser Ser Leu His Val Arg Asp Thr Lys Ile Glu
100 105 110
Val Ala Gln Phe Val Lys Asp Leu Leu Leu His Leu Lys Lys Leu Phe
115 120 125
Arg Glu Gly Arg Phe Asn Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro
130 135 140
Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
145 150 155 160
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
165 170 175
Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn
180 185 190
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
195 200 205
Glu Glu Gln Phe Gln Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
210 215 220
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
225 230 235 240
Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
245 250 255
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu
260 265 270
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
275 280 285
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
290 295 300
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
305 310 315 320
Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly
325 330 335
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
340 345 350
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Met Ala Leu Ile Val
355 360 365
Leu Gly Gly Val Ala Gly Leu Leu Leu Phe Ile Gly Leu Gly Ile Phe
370 375 380
Phe Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe
385 390 395 400
Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg
405 410 415
Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Gly Gly Gly Arg Val
420 425 430
Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn
435 440 445
Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val
450 455 460
Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg
465 470 475 480
Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys
485 490 495
Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg
500 505 510
Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys
515 520 525
Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg Leu Glu
530 535 540
Gly Gly Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu
545 550 555 560
Glu Asn Pro Gly Pro Arg Met Pro Pro Pro Arg Leu Leu Phe Phe Leu
565 570 575
Leu Phe Leu Thr Pro Met Glu Val Arg Pro Glu Glu Pro Leu Val Val
580 585 590
Lys Val Glu Glu Gly Asp Asn Ala Val Leu Gln Cys Leu Lys Gly Thr
595 600 605
Ser Asp Gly Pro Thr Gln Gln Leu Thr Trp Ser Arg Glu Ser Pro Leu
610 615 620
Lys Pro Phe Leu Lys Leu Ser Leu Gly Leu Pro Gly Leu Gly Ile His
625 630 635 640
Met Arg Pro Leu Ala Ile Trp Leu Phe Ile Phe Asn Val Ser Gln Gln
645 650 655
Met Gly Gly Phe Tyr Leu Cys Gln Pro Gly Pro Pro Ser Glu Lys Ala
660 665 670
Trp Gln Pro Gly Trp Thr Val Asn Val Glu Gly Ser Gly Glu Leu Phe
675 680 685
Arg Trp Asn Val Ser Asp Leu Gly Gly Leu Gly Cys Gly Leu Lys Asn
690 695 700
Arg Ser Ser Glu Gly Pro Ser Ser Pro Ser Gly Lys Leu Met Ser Pro
705 710 715 720
Lys Leu Tyr Val Trp Ala Lys Asp Arg Pro Glu Ile Trp Glu Gly Glu
725 730 735
Pro Pro Cys Val Pro Pro Arg Asp Ser Leu Asn Gln Ser Leu Ser Gln
740 745 750
Asp Leu Thr Met Ala Pro Gly Ser Thr Leu Trp Leu Ser Cys Gly Val
755 760 765
Pro Pro Asp Ser Val Ser Arg Gly Pro Leu Ser Trp Thr His Val His
770 775 780
Pro Lys Gly Pro Lys Ser Leu Leu Ser Leu Glu Leu Lys Asp Asp Arg
785 790 795 800
Pro Ala Arg Asp Met Trp Val Met Glu Thr Gly Leu Leu Leu Pro Arg
805 810 815
Ala Thr Ala Gln Asp Ala Gly Lys Tyr Tyr Cys His Arg Gly Asn Leu
820 825 830
Thr Met Ser Phe His Leu Glu Ile Thr Ala Arg Pro Val Leu Trp His
835 840 845
Trp Leu Leu Arg Thr Gly Gly Trp Lys Val Ser Ala Val Thr Leu Ala
850 855 860
Tyr Leu Ile Phe Cys Leu Cys Ser Leu Val Gly Ile Leu His Leu Gln
865 870 875 880
Arg Ala Leu Val Leu Arg Arg Lys Arg
885
<210> 2
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成
肽"
<400> 2
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro
20
<210> 3
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成
多肽"
<400> 3
Gly Pro Val Pro Pro Ser Thr Ala Leu Arg Tyr Leu Ile Glu Glu Leu
1 5 10 15
Val Asn Ile Thr Gln Asn Gln Lys Ala Pro Leu Cys Asn Gly Ser Met
20 25 30
Val Trp Ser Ile Asn Leu Thr Ala Gly Met Tyr Cys Ala Ala Leu Glu
35 40 45
Ser Leu Ile Asn Val Ser Gly Cys Ser Ala Ile Glu Lys Thr Gln Arg
50 55 60
Met Leu Ser Gly Phe Cys Pro His Lys Val Ser Ala Gly Gln Phe Ser
65 70 75 80
Ser Leu His Val Arg Asp Thr Lys Ile Glu Val Ala Gln Phe Val Lys
85 90 95
Asp Leu Leu Leu His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu Gly Arg Phe Asn
100 105 110
<210> 4
<211> 229
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成
多肽"
<400> 4
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe
1 5 10 15
Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
20 25 30
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
35 40 45
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
50 55 60
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Gln Ser
65 70 75 80
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
85 90 95
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
100 105 110
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
115 120 125
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
130 135 140
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
145 150 155 160
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
165 170 175
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
180 185 190
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
195 200 205
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Gly Lys
225
<210> 5
<211> 22
<212> PRT
<213> 智人
<400> 5
Met Ala Leu Ile Val Leu Gly Gly Val Ala Gly Leu Leu Leu Phe Ile
1 5 10 15
Gly Leu Gly Ile Phe Phe
20
<210> 6
<211> 42
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成
多肽"
<400> 6
Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met
1 5 10 15
Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe
20 25 30
Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu
35 40
<210> 7
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成
多肽"
<400> 7
Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly
1 5 10 15
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
20 25 30
Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
35 40 45
Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys
50 55 60
Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg
65 70 75 80
Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala
85 90 95
Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
100 105 110
<210> 8
<211> 24
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成
肽"
<400> 8
Leu Glu Gly Gly Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp
1 5 10 15
Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Arg
20
<210> 9
<211> 323
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成
多肽"
<400> 9
Met Pro Pro Pro Arg Leu Leu Phe Phe Leu Leu Phe Leu Thr Pro Met
1 5 10 15
Glu Val Arg Pro Glu Glu Pro Leu Val Val Lys Val Glu Glu Gly Asp
20 25 30
Asn Ala Val Leu Gln Cys Leu Lys Gly Thr Ser Asp Gly Pro Thr Gln
35 40 45
Gln Leu Thr Trp Ser Arg Glu Ser Pro Leu Lys Pro Phe Leu Lys Leu
50 55 60
Ser Leu Gly Leu Pro Gly Leu Gly Ile His Met Arg Pro Leu Ala Ile
65 70 75 80
Trp Leu Phe Ile Phe Asn Val Ser Gln Gln Met Gly Gly Phe Tyr Leu
85 90 95
Cys Gln Pro Gly Pro Pro Ser Glu Lys Ala Trp Gln Pro Gly Trp Thr
100 105 110
Val Asn Val Glu Gly Ser Gly Glu Leu Phe Arg Trp Asn Val Ser Asp
115 120 125
Leu Gly Gly Leu Gly Cys Gly Leu Lys Asn Arg Ser Ser Glu Gly Pro
130 135 140
Ser Ser Pro Ser Gly Lys Leu Met Ser Pro Lys Leu Tyr Val Trp Ala
145 150 155 160
Lys Asp Arg Pro Glu Ile Trp Glu Gly Glu Pro Pro Cys Val Pro Pro
165 170 175
Arg Asp Ser Leu Asn Gln Ser Leu Ser Gln Asp Leu Thr Met Ala Pro
180 185 190
Gly Ser Thr Leu Trp Leu Ser Cys Gly Val Pro Pro Asp Ser Val Ser
195 200 205
Arg Gly Pro Leu Ser Trp Thr His Val His Pro Lys Gly Pro Lys Ser
210 215 220
Leu Leu Ser Leu Glu Leu Lys Asp Asp Arg Pro Ala Arg Asp Met Trp
225 230 235 240
Val Met Glu Thr Gly Leu Leu Leu Pro Arg Ala Thr Ala Gln Asp Ala
245 250 255
Gly Lys Tyr Tyr Cys His Arg Gly Asn Leu Thr Met Ser Phe His Leu
260 265 270
Glu Ile Thr Ala Arg Pro Val Leu Trp His Trp Leu Leu Arg Thr Gly
275 280 285
Gly Trp Lys Val Ser Ala Val Thr Leu Ala Tyr Leu Ile Phe Cys Leu
290 295 300
Cys Ser Leu Val Gly Ile Leu His Leu Gln Arg Ala Leu Val Leu Arg
305 310 315 320
Arg Lys Arg
<210> 10
<211> 520
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成
多肽"
<400> 10
Gly Pro Val Pro Pro Ser Thr Ala Leu Arg Tyr Leu Ile Glu Glu Leu
1 5 10 15
Val Asn Ile Thr Gln Asn Gln Lys Ala Pro Leu Cys Asn Gly Ser Met
20 25 30
Val Trp Ser Ile Asn Leu Thr Ala Gly Met Tyr Cys Ala Ala Leu Glu
35 40 45
Ser Leu Ile Asn Val Ser Gly Cys Ser Ala Ile Glu Lys Thr Gln Arg
50 55 60
Met Leu Ser Gly Phe Cys Pro His Lys Val Ser Ala Gly Gln Phe Ser
65 70 75 80
Ser Leu His Val Arg Asp Thr Lys Ile Glu Val Ala Gln Phe Val Lys
85 90 95
Asp Leu Leu Leu His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu Gly Arg Phe Asn
100 105 110
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe
115 120 125
Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
130 135 140
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
145 150 155 160
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
165 170 175
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Gln Ser
180 185 190
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
195 200 205
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
210 215 220
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
225 230 235 240
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
245 250 255
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
260 265 270
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
275 280 285
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
290 295 300
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
305 310 315 320
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
325 330 335
Leu Ser Leu Gly Lys Met Ala Leu Ile Val Leu Gly Gly Val Ala Gly
340 345 350
Leu Leu Leu Phe Ile Gly Leu Gly Ile Phe Phe Lys Arg Gly Arg Lys
355 360 365
Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr
370 375 380
Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu
385 390 395 400
Gly Gly Cys Glu Leu Gly Gly Gly Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala
405 410 415
Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu
420 425 430
Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly
435 440 445
Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu
450 455 460
Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser
465 470 475 480
Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly
485 490 495
Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu
500 505 510
His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
515 520
<210> 11
<211> 405
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成
多肽"
<400> 11
Gly Pro Val Pro Pro Ser Thr Ala Leu Arg Tyr Leu Ile Glu Glu Leu
1 5 10 15
Val Asn Ile Thr Gln Asn Gln Lys Ala Pro Leu Cys Asn Gly Ser Met
20 25 30
Val Trp Ser Ile Asn Leu Thr Ala Gly Met Tyr Cys Ala Ala Leu Glu
35 40 45
Ser Leu Ile Asn Val Ser Gly Cys Ser Ala Ile Glu Lys Thr Gln Arg
50 55 60
Met Leu Ser Gly Phe Cys Pro His Lys Val Ser Ala Gly Gln Phe Ser
65 70 75 80
Ser Leu His Val Arg Asp Thr Lys Ile Glu Val Ala Gln Phe Val Lys
85 90 95
Asp Leu Leu Leu His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu Gly Arg Phe Asn
100 105 110
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe
115 120 125
Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
130 135 140
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
145 150 155 160
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
165 170 175
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Gln Ser
180 185 190
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
195 200 205
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
210 215 220
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
225 230 235 240
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
245 250 255
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
260 265 270
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
275 280 285
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
290 295 300
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
305 310 315 320
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
325 330 335
Leu Ser Leu Gly Lys Met Ala Leu Ile Val Leu Gly Gly Val Ala Gly
340 345 350
Leu Leu Leu Phe Ile Gly Leu Gly Ile Phe Phe Lys Arg Gly Arg Lys
355 360 365
Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr
370 375 380
Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu
385 390 395 400
Gly Gly Cys Glu Leu
405
<210> 12
<211> 7754
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成
多核苷酸"
<400> 12
gttagaccag atctgagcct gggagctctc tggctaacta gggaacccac tgcttaagcc 60
tcaataaagc ttgccttgag tgcttcaagt agtgtgtgcc cgtctgttgt gtgactctgg 120
taactagaga tccctcagac ccttttagtc agtgtggaaa atctctagca gtggcgcccg 180
aacagggact tgaaagcgaa agggaaacca gaggagctct ctcgacgcag gactcggctt 240
gctgaagcgc gcacggcaag aggcgagggg cggcgactgg tgagtacgcc aaaaattttg 300
actagcggag gctagaagga gagagatggg tgcgagagcg tcagtattaa gcgggggaga 360
attagatcga tgggaaaaaa ttcggttaag gccaggggga aagaaaaaat ataaattaaa 420
acatatagta tgggcaagca gggagctaga acgattcgca gttaatcctg gcctgttaga 480
aacatcagaa ggctgtagac aaatactggg acagctacaa ccatcccttc agacaggatc 540
agaagaactt agatcattat ataatacagt agcaaccctc tattgtgtgc atcaaaggat 600
agagataaaa gacaccaagg aagctttaga caagatagag gaagagcaaa acaaaagtaa 660
gaaaaaagca cagcaagcag cagctgacac aggacacagc aatcaggtca gccaaaatta 720
ccctatagtg cagaacatcc aggggcaaat ggtacatcag gccatatcac ctagaacttt 780
aaatgcatgg gtaaaagtag tagaagagaa ggctttcagc ccagaagtga tacccatgtt 840
ttcagcatta tcagaaggag ccaccccaca agatttaaac accatgctaa acacagtggg 900
gggacatcaa gcagccatgc aaatgttaaa agagaccatc aatgaggaag ctgcaggcaa 960
agagaagagt ggtgcagaga gaaaaaagag cagtgggaat aggagctttg ttccttgggt 1020
tcttgggagc agcaggaagc actatgggcg cagcgtcaat gacgctgacg gtacaggcca 1080
gacaattatt gtctggtata gtgcagcagc agaacaattt gctgagggct attgaggcgc 1140
aacagcatct gttgcaactc acagtctggg gcatcaagca gctccaggca agaatcctgg 1200
ctgtggaaag atacctaaag gatcaacagc tcctggggat ttggggttgc tctggaaaac 1260
tcatttgcac cactgctgtg ccttggatct acaaatggca gtattcatcc acaattttaa 1320
aagaaaaggg gggattgggg ggtacagtgc aggggaaaga atagtagaca taatagcaac 1380
agacatacaa actaaagaat tacaaaaaca aattacaaaa attcaaaatt ttcgggttta 1440
ttacagggac agcagagatc cagtttgggg atcaattgca tgaagaatct gcttagggtt 1500
aggcgttttg cgctgcttcg cgaggatctg cgatcgctcc ggtgcccgtc agtgggcaga 1560
gcgcacatcg cccacagtcc ccgagaagtt ggggggaggg gtcggcaatt gaaccggtgc 1620
ctagagaagg tggcgcgggg taaactggga aagtgatgtc gtgtactggc tccgcctttt 1680
tcccgagggt gggggagaac cgtatataag tgcagtagtc gccgtgaacg ttctttttcg 1740
caacgggttt gccgccagaa cacagctgaa gcttcgaggg gctcgcatct ctccttcacg 1800
cgcccgccgc cctacctgag gccgccatcc acgccggttg agtcgcgttc tgccgcctcc 1860
cgcctgtggt gcctcctgaa ctgcgtccgc cgtctaggta agtttaaagc tcaggtcgag 1920
accgggcctt tgtccggcgc tcccttggag cctacctaga ctcagccggc tctccacgct 1980
ttgcctgacc ctgcttgctc aactctacgt ctttgtttcg ttttctgttc tgcgccgtta 2040
cagatccaag ctgtgaccgg cgcctacggc tagcgccgcc accatgctgc tgctggtgac 2100
cagcctgctg ctgtgcgagc tgccccaccc cgcctttctg ctgatccctg gccccgtgcc 2160
ccctagcacc gccctgcgct acctgatcga ggaactggtg aacatcaccc agaaccagaa 2220
agcccccctg tgcaacggca gcatggtgtg gagcatcaac ctgaccgccg gcatgtactg 2280
tgccgccctg gaaagcctga tcaacgtgag cggctgcagc gccatcgaga aaacccagcg 2340
gatgctgtcc ggcttctgcc cccacaaggt gtccgccgga cagttcagca gcctgcacgt 2400
gcgggacacc aagatcgagg tggcccagtt cgtgaaggac ctgctgctgc acctgaagaa 2460
gctgttccgg gagggccggt tcaactacaa gaccaccccc cctgtgctgg acagcgacgg 2520
cagcttcttc ctgtacagca ggctgaccgt ggacaagagc cggtggcagg aaggcaacgt 2580
ctttagctgc agcgtgatgc acgaggccct gcacaaccac tacacccaga agagcctgtc 2640
cctgagcctg ggcaagcggg tgaagttcag ccggtccgcc gacgcccctg cctaccagca 2700
gggccagaac cagctgtaca acgagctgaa cctgggcagg cgggaggaat acgacgtgct 2760
ggacaagcgg agaggccggg accctgagat gggcggcaag cctcggcgga agaaccccca 2820
ggaaggcctg tataacgaac tgcagaaaga caagatggcc gaggcctaca gcgagatcgg 2880
catgaagggc gagcggaggc ggggcaaggg ccacgacggc ctgtatcagg gcctgtccac 2940
cgccaccaag gatacctacg acgccctgca catgcaggcc ctgcccccaa ggtctagacc 3000
cgggctgcag gaattcgata tcaagcttat cgataatcaa cctctggatt acaaaatttg 3060
tgaaagattg actggtattc ttaactatgt tgctcctttt acgctatgtg gatacgctgc 3120
tttaatgcct ttgtatcatg ctattgcttc ccgtatggct ttcattttct cctccttgta 3180
taaatcctgg ttgctgtctc tttatgagga gttgtggccc gttgtcaggc aacgtggcgt 3240
ggtgtgcact gtgtttgctg acgcaacccc cactggttgg ggcattgcca ccacctgtca 3300
gctcctttcc gggactttcg ctttccccct ccctattgcc acggcggaac tcatcgccgc 3360
ctgccttgcc cgctgctgga caggggctcg gctgttgggc actgacaatt ccgtggtgtt 3420
gtcggggaaa tcatcgtcct ttccttggct gctcgcctgt gttgccacct ggattctgcg 3480
cgggacgtcc ttctgctacg tcccttcggc cctcaatcca gcggaccttc cttcccgcgg 3540
cctgctgccg gctctgcggc ctcttccgcg tcttcgcctt cgccctcaga cgagtcggat 3600
ctccctttgg gccgcctccc cgcatcgata ccgtcgacta gccgtacctt taagaccaat 3660
gacttacaag gcagctgtag atcttagcca ctttttaaaa gaaaaggggg gactggaagg 3720
gctaattcac tcccaaagaa gacaagatct gctttttgcc tgtactgggt ctctctggtt 3780
agaccagatc tgagcctggg agctctctgg ctaactaggg aacccactgc ttaagcctca 3840
ataaagcttg ccttgagtgc ttcaagtagt gtgtgcccgt ctgttgtgtg actctggtaa 3900
ctagagatcc ctcagaccct tttagtcagt gtggaaaatc tctagcagaa ttcgatatca 3960
agcttatcga taccgtcgac ctcgaggggg ggcccggtac ccaattcgcc ctatagtgag 4020
tcgtattaca attcactggc cgtcgtttta caacgtcgtg actgggaaaa ccctggcgtt 4080
acccaactta atcgccttgc agcacatccc cctttcgcca gctggcgtaa tagcgaagag 4140
gcccgcaccg atcgcccttc ccaacagttg cgcagcctga atggcgaatg gaaattgtaa 4200
gcgttaatat tttgttaaaa ttcgcgttaa atttttgtta aatcagctca ttttttaacc 4260
aataggccga aatcggcaaa atcccttata aatcaaaaga atagaccgag atagggttga 4320
gtgttgttcc agtttggaac aagagtccac tattaaagaa cgtggactcc aacgtcaaag 4380
ggcgaaaaac cgtctatcag ggcgatggcc cactacgtga accatcaccc taatcaagtt 4440
ttttggggtc gaggtgccgt aaagcactaa atcggaaccc taaagggagc ccccgattta 4500
gagcttgacg gggaaagccg gcgaacgtgg cgagaaagga agggaagaaa gcgaaaggag 4560
cgggcgctag ggcgctggca agtgtagcgg tcacgctgcg cgtaaccacc acacccgccg 4620
cgcttaatgc gccgctacag ggcgcgtcag gtggcacttt tcggggaaat gtgcgcggaa 4680
cccctatttg tttatttttc taaatacatt caaatatgta tccgctcatg agacaataac 4740
cctgataaat gcttcaataa tattgaaaaa ggaagagtat gagtattcaa catttccgtg 4800
tcgcccttat tccctttttt gcggcatttt gccttcctgt ttttgctcac ccagaaacgc 4860
tggtgaaagt aaaagatgct gaagatcagt tgggtgcacg agtgggttac atcgaactgg 4920
atctcaacag cggtaagatc cttgagagtt ttcgccccga agaacgtttt ccaatgatga 4980
gcacttttaa agttctgcta tgtggcgcgg tattatcccg tattgacgcc gggcaagagc 5040
aactcggtcg ccgcatacac tattctcaga atgacttggt tgagtactca ccagtcacag 5100
aaaagcatct tacggatggc atgacagtaa gagaattatg cagtgctgcc ataaccatga 5160
gtgataacac tgcggccaac ttacttctga caacgatcgg aggaccgaag gagctaaccg 5220
cttttttgca caacatgggg gatcatgtaa ctcgccttga tcgttgggaa ccggagctga 5280
atgaagccat accaaacgac gagcgtgaca ccacgatgcc tgtagcaatg gcaacaacgt 5340
tgcgcaaact attaactggc gaactactta ctctagcttc ccggcaacaa ttaatagact 5400
ggatggaggc ggataaagtt gcaggaccac ttctgcgctc ggcccttccg gctggctggt 5460
ttattgctga taaatctgga gccggtgagc gtgggtctcg cggtatcatt gcagcactgg 5520
ggccagatgg taagccctcc cgtatcgtag ttatctacac gacggggagt caggcaacta 5580
tggatgaacg aaatagacag atcgctgaga taggtgcctc actgattaag cattggtaac 5640
tgtcagacca agtttactca tatatacttt agattgattt aaaacttcat ttttaattta 5700
aaaggatcta ggtgaagatc ctttttgata atctcatgac caaaatccct taacgtgagt 5760
tttcgttcca ctgagcgtca gaccccgtag aaaagatcaa aggatcttct tgagatcctt 5820
tttttctgcg cgtaatctgc tgcttgcaaa caaaaaaacc accgctacca gcggtggttt 5880
gtttgccgga tcaagagcta ccaactcttt ttccgaaggt aactggcttc agcagagcgc 5940
agataccaaa tactgttctt ctagtgtagc cgtagttagg ccaccacttc aagaactctg 6000
tagcaccgcc tacatacctc gctctgctaa tcctgttacc agtggctgct gccagtggcg 6060
ataagtcgtg tcttaccggg ttggactcaa gacgatagtt accggataag gcgcagcggt 6120
cgggctgaac ggggggttcg tgcacacagc ccagcttgga gcgaacgacc tacaccgaac 6180
tgagatacct acagcgtgag ctatgagaaa gcgccacgct tcccgaaggg agaaaggcgg 6240
acaggtatcc ggtaagcggc agggtcggaa caggagagcg cacgagggag cttccagggg 6300
gaaacgcctg gtatctttat agtcctgtcg ggtttcgcca cctctgactt gagcgtcgat 6360
ttttgtgatg ctcgtcaggg gggcggagcc tatggaaaaa cgccagcaac gcggcctttt 6420
tacggttcct ggccttttgc tggccttttg ctcacatgtt ctttcctgcg ttatcccctg 6480
attctgtgga taaccgtatt accgcctttg agtgagctga taccgctcgc cgcagccgaa 6540
cgaccgagcg cagcgagtca gtgagcgagg aagcggaaga gcgcccaata cgcaaaccgc 6600
ctctccccgc gcgttggccg attcattaat gcagctggca cgacaggttt cccgactgga 6660
aagcgggcag tgagcgcaac gcaattaatg tgagttagct cactcattag gcaccccagg 6720
ctttacactt tatgcttccg gctcgtatgt tgtgtggaat tgtgagcgga taacaatttc 6780
acacaggaaa cagctatgac catgattacg ccaagctcga aattaaccct cactaaaggg 6840
aacaaaagct ggagctccac cgcggtggcg gcctcgaggt cgagatccgg tcgaccagca 6900
accatagtcc cgcccctaac tccgcccatc ccgcccctaa ctccgcccag ttccgcccat 6960
tctccgcccc atggctgact aatttttttt atttatgcag aggccgaggc cgcctcggcc 7020
tctgagctat tccagaagta gtgaggaggc ttttttggag gcctaggctt ttgcaaaaag 7080
cttcgacggt atcgattggc tcatgtccaa cattaccgcc atgttgacat tgattattga 7140
ctagttatta atagtaatca attacggggt cattagttca tagcccatat atggagttcc 7200
gcgttacata acttacggta aatggcccgc ctggctgacc gcccaacgac ccccgcccat 7260
tgacgtcaat aatgacgtat gttcccatag taacgccaat agggactttc cattgacgtc 7320
aatgggtgga gtatttacgg taaactgccc acttggcagt acatcaagtg tatcatatgc 7380
caagtacgcc ccctattgac gtcaatgacg gtaaatggcc cgcctggcat tatgcccagt 7440
acatgacctt atgggacttt cctacttggc agtacatcta cgtattagtc atcgctatta 7500
ccatggtgat gcggttttgg cagtacatca atgggcgtgg atagcggttt gactcacggg 7560
gatttccaag tctccacccc attgacgtca atgggagttt gttttggcac caaaatcaac 7620
gggactttcc aaaatgtcgt aacaactccg ccccattgac gcaaatgggc ggtaggcgtg 7680
tacggaattc ggagtggcga gccctcagat cctgcatata agcagctgct ttttgcctgt 7740
actgggtctc tctg 7754
<210> 13
<211> 8732
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成
多核苷酸"
<400> 13
gttagaccag atctgagcct gggagctctc tggctaacta gggaacccac tgcttaagcc 60
tcaataaagc ttgccttgag tgcttcaagt agtgtgtgcc cgtctgttgt gtgactctgg 120
taactagaga tccctcagac ccttttagtc agtgtggaaa atctctagca gtggcgcccg 180
aacagggact tgaaagcgaa agggaaacca gaggagctct ctcgacgcag gactcggctt 240
gctgaagcgc gcacggcaag aggcgagggg cggcgactgg tgagtacgcc aaaaattttg 300
actagcggag gctagaagga gagagatggg tgcgagagcg tcagtattaa gcgggggaga 360
attagatcga tgggaaaaaa ttcggttaag gccaggggga aagaaaaaat ataaattaaa 420
acatatagta tgggcaagca gggagctaga acgattcgca gttaatcctg gcctgttaga 480
aacatcagaa ggctgtagac aaatactggg acagctacaa ccatcccttc agacaggatc 540
agaagaactt agatcattat ataatacagt agcaaccctc tattgtgtgc atcaaaggat 600
agagataaaa gacaccaagg aagctttaga caagatagag gaagagcaaa acaaaagtaa 660
gaaaaaagca cagcaagcag cagctgacac aggacacagc aatcaggtca gccaaaatta 720
ccctatagtg cagaacatcc aggggcaaat ggtacatcag gccatatcac ctagaacttt 780
aaatgcatgg gtaaaagtag tagaagagaa ggctttcagc ccagaagtga tacccatgtt 840
ttcagcatta tcagaaggag ccaccccaca agatttaaac accatgctaa acacagtggg 900
gggacatcaa gcagccatgc aaatgttaaa agagaccatc aatgaggaag ctgcaggcaa 960
agagaagagt ggtgcagaga gaaaaaagag cagtgggaat aggagctttg ttccttgggt 1020
tcttgggagc agcaggaagc actatgggcg cagcgtcaat gacgctgacg gtacaggcca 1080
gacaattatt gtctggtata gtgcagcagc agaacaattt gctgagggct attgaggcgc 1140
aacagcatct gttgcaactc acagtctggg gcatcaagca gctccaggca agaatcctgg 1200
ctgtggaaag atacctaaag gatcaacagc tcctggggat ttggggttgc tctggaaaac 1260
tcatttgcac cactgctgtg ccttggatct acaaatggca gtattcatcc acaattttaa 1320
aagaaaaggg gggattgggg ggtacagtgc aggggaaaga atagtagaca taatagcaac 1380
agacatacaa actaaagaat tacaaaaaca aattacaaaa attcaaaatt ttcgggttta 1440
ttacagggac agcagagatc cagtttgggg atcaattgca tgaagaatct gcttagggtt 1500
aggcgttttg cgctgcttcg cgaggatctg cgatcgctcc ggtgcccgtc agtgggcaga 1560
gcgcacatcg cccacagtcc ccgagaagtt ggggggaggg gtcggcaatt gaaccggtgc 1620
ctagagaagg tggcgcgggg taaactggga aagtgatgtc gtgtactggc tccgcctttt 1680
tcccgagggt gggggagaac cgtatataag tgcagtagtc gccgtgaacg ttctttttcg 1740
caacgggttt gccgccagaa cacagctgaa gcttcgaggg gctcgcatct ctccttcacg 1800
cgcccgccgc cctacctgag gccgccatcc acgccggttg agtcgcgttc tgccgcctcc 1860
cgcctgtggt gcctcctgaa ctgcgtccgc cgtctaggta agtttaaagc tcaggtcgag 1920
accgggcctt tgtccggcgc tcccttggag cctacctaga ctcagccggc tctccacgct 1980
ttgcctgacc ctgcttgctc aactctacgt ctttgtttcg ttttctgttc tgcgccgtta 2040
cagatccaag ctgtgaccgg cgcctacggc tagcgccgcc accatgctgc tgctggtgac 2100
cagcctgctg ctgtgcgagc tgccccaccc cgcctttctg ctgatccccg acatccagat 2160
gacccagacc acctccagcc tgagcgccag cctgggcgac cgggtgacca tcagctgccg 2220
ggccagccag gacatcagca agtacctgaa ctggtatcag cagaagcccg acggcaccgt 2280
caagctgctg atctaccaca ccagccggct gcacagcggc gtgcccagcc ggtttagcgg 2340
cagcggctcc ggcaccgact acagcctgac catctccaac ctggaacagg aagatatcgc 2400
cacctacttt tgccagcagg gcaacacact gccctacacc tttggcggcg gaacaaagct 2460
ggaaatcacc ggcagcacct ccggcagcgg caagcctggc agcggcgagg gcagcaccaa 2520
gggcgaggtg aagctgcagg aaagcggccc tggcctggtg gcccccagcc agagcctgag 2580
cgtgacctgc accgtgagcg gcgtgagcct gcccgactac ggcgtgagct ggatccggca 2640
gccccccagg aagggcctgg aatggctggg cgtgatctgg ggcagcgaga ccacctacta 2700
caacagcgcc ctgaagagcc ggctgaccat catcaaggac aacagcaaga gccaggtgtt 2760
cctgaagatg aacagcctgc agaccgacga caccgccatc tactactgcg ccaagcacta 2820
ctactacggc ggcagctacg ccatggacta ctggggccag ggcaccagcg tgaccgtgag 2880
cagcgagagc aagtacggcc ctccctgccc cccttgccct gcccccgagt tcctgggcgg 2940
acccagcgtg ttcctgttcc cccccaagcc caaggacacc ctgatgatca gccggacccc 3000
cgaggtgacc tgcgtggtgg tggacgtgag ccaggaagat cccgaggtcc agttcaattg 3060
gtacgtggac ggcgtggagg tgcacaacgc caagaccaag cccagggaag agcagttcaa 3120
cagcacctac cgggtggtgt ccgtgctgac cgtgctgcac caggactggc tgaacggcaa 3180
agaatacaag tgcaaggtgt ccaacaaggg cctgcccagc agcatcgaga aaaccatcag 3240
caaggccaag ggccagcctc gggagcccca ggtgtacacc ctgccccctt cccaggaaga 3300
gatgaccaag aatcaggtgt ccctgacctg cctggtgaag ggcttctacc ccagcgacat 3360
cgccgtggag tgggagagca acggccagcc cgagaacaac tacaagacca ccccccctgt 3420
gctggacagc gacggcagct tcttcctgta cagcaggctg accgtggaca agagccggtg 3480
gcaggaaggc aacgtcttta gctgcagcgt gatgcacgag gccctgcaca accactacac 3540
ccagaagagc ctgtccctga gcctgggcaa gatggccctg atcgtgctgg gcggcgtggc 3600
cgggctgctg ctgttcatcg gcctgggcat ctttttccgg gtgaagttca gccggtccgc 3660
cgacgcccct gcctaccagc agggccagaa ccagctgtac aacgagctga acctgggcag 3720
gcgggaggaa tacgacgtgc tggacaagcg gagaggccgg gaccctgaga tgggcggcaa 3780
gcccaggcgg aagaaccctc aggaaggcct gtataacgaa ctgcagaaag acaagatggc 3840
cgaggcctac agcgagatcg gcatgaaggg cgagcggcgg aggggcaagg gccacgacgg 3900
cctgtaccag ggcctgagca ccgccaccaa ggatacctac gacgccctgc acatgcaggc 3960
cctgcccccc aggtgacccg ggctgcagga attcgatatc aagcttatcg ataatcaacc 4020
tctggattac aaaatttgtg aaagattgac tggtattctt aactatgttg ctccttttac 4080
gctatgtgga tacgctgctt taatgccttt gtatcatgct attgcttccc gtatggcttt 4140
cattttctcc tccttgtata aatcctggtt gctgtctctt tatgaggagt tgtggcccgt 4200
tgtcaggcaa cgtggcgtgg tgtgcactgt gtttgctgac gcaaccccca ctggttgggg 4260
cattgccacc acctgtcagc tcctttccgg gactttcgct ttccccctcc ctattgccac 4320
ggcggaactc atcgccgcct gccttgcccg ctgctggaca ggggctcggc tgttgggcac 4380
tgacaattcc gtggtgttgt cggggaaatc atcgtccttt ccttggctgc tcgcctgtgt 4440
tgccacctgg attctgcgcg ggacgtcctt ctgctacgtc ccttcggccc tcaatccagc 4500
ggaccttcct tcccgcggcc tgctgccggc tctgcggcct cttccgcgtc ttcgccttcg 4560
ccctcagacg agtcggatct ccctttgggc cgcctccccg catcgatacc gtcgactagc 4620
cgtaccttta agaccaatga cttacaaggc agctgtagat cttagccact ttttaaaaga 4680
aaagggggga ctggaagggc taattcactc ccaaagaaga caagatctgc tttttgcctg 4740
tactgggtct ctctggttag accagatctg agcctgggag ctctctggct aactagggaa 4800
cccactgctt aagcctcaat aaagcttgcc ttgagtgctt caagtagtgt gtgcccgtct 4860
gttgtgtgac tctggtaact agagatccct cagacccttt tagtcagtgt ggaaaatctc 4920
tagcagaatt cgatatcaag cttatcgata ccgtcgacct cgaggggggg cccggtaccc 4980
aattcgccct atagtgagtc gtattacaat tcactggccg tcgttttaca acgtcgtgac 5040
tgggaaaacc ctggcgttac ccaacttaat cgccttgcag cacatccccc tttcgccagc 5100
tggcgtaata gcgaagaggc ccgcaccgat cgcccttccc aacagttgcg cagcctgaat 5160
ggcgaatgga aattgtaagc gttaatattt tgttaaaatt cgcgttaaat ttttgttaaa 5220
tcagctcatt ttttaaccaa taggccgaaa tcggcaaaat cccttataaa tcaaaagaat 5280
agaccgagat agggttgagt gttgttccag tttggaacaa gagtccacta ttaaagaacg 5340
tggactccaa cgtcaaaggg cgaaaaaccg tctatcaggg cgatggccca ctacgtgaac 5400
catcacccta atcaagtttt ttggggtcga ggtgccgtaa agcactaaat cggaacccta 5460
aagggagccc ccgatttaga gcttgacggg gaaagccggc gaacgtggcg agaaaggaag 5520
ggaagaaagc gaaaggagcg ggcgctaggg cgctggcaag tgtagcggtc acgctgcgcg 5580
taaccaccac acccgccgcg cttaatgcgc cgctacaggg cgcgtcaggt ggcacttttc 5640
ggggaaatgt gcgcggaacc cctatttgtt tatttttcta aatacattca aatatgtatc 5700
cgctcatgag acaataaccc tgataaatgc ttcaataata ttgaaaaagg aagagtatga 5760
gtattcaaca tttccgtgtc gcccttattc ccttttttgc ggcattttgc cttcctgttt 5820
ttgctcaccc agaaacgctg gtgaaagtaa aagatgctga agatcagttg ggtgcacgag 5880
tgggttacat cgaactggat ctcaacagcg gtaagatcct tgagagtttt cgccccgaag 5940
aacgttttcc aatgatgagc acttttaaag ttctgctatg tggcgcggta ttatcccgta 6000
ttgacgccgg gcaagagcaa ctcggtcgcc gcatacacta ttctcagaat gacttggttg 6060
agtactcacc agtcacagaa aagcatctta cggatggcat gacagtaaga gaattatgca 6120
gtgctgccat aaccatgagt gataacactg cggccaactt acttctgaca acgatcggag 6180
gaccgaagga gctaaccgct tttttgcaca acatggggga tcatgtaact cgccttgatc 6240
gttgggaacc ggagctgaat gaagccatac caaacgacga gcgtgacacc acgatgcctg 6300
tagcaatggc aacaacgttg cgcaaactat taactggcga actacttact ctagcttccc 6360
ggcaacaatt aatagactgg atggaggcgg ataaagttgc aggaccactt ctgcgctcgg 6420
cccttccggc tggctggttt attgctgata aatctggagc cggtgagcgt gggtctcgcg 6480
gtatcattgc agcactgggg ccagatggta agccctcccg tatcgtagtt atctacacga 6540
cggggagtca ggcaactatg gatgaacgaa atagacagat cgctgagata ggtgcctcac 6600
tgattaagca ttggtaactg tcagaccaag tttactcata tatactttag attgatttaa 6660
aacttcattt ttaatttaaa aggatctagg tgaagatcct ttttgataat ctcatgacca 6720
aaatccctta acgtgagttt tcgttccact gagcgtcaga ccccgtagaa aagatcaaag 6780
gatcttcttg agatcctttt tttctgcgcg taatctgctg cttgcaaaca aaaaaaccac 6840
cgctaccagc ggtggtttgt ttgccggatc aagagctacc aactcttttt ccgaaggtaa 6900
ctggcttcag cagagcgcag ataccaaata ctgttcttct agtgtagccg tagttaggcc 6960
accacttcaa gaactctgta gcaccgccta catacctcgc tctgctaatc ctgttaccag 7020
tggctgctgc cagtggcgat aagtcgtgtc ttaccgggtt ggactcaaga cgatagttac 7080
cggataaggc gcagcggtcg ggctgaacgg ggggttcgtg cacacagccc agcttggagc 7140
gaacgaccta caccgaactg agatacctac agcgtgagct atgagaaagc gccacgcttc 7200
ccgaagggag aaaggcggac aggtatccgg taagcggcag ggtcggaaca ggagagcgca 7260
cgagggagct tccaggggga aacgcctggt atctttatag tcctgtcggg tttcgccacc 7320
tctgacttga gcgtcgattt ttgtgatgct cgtcaggggg gcggagccta tggaaaaacg 7380
ccagcaacgc ggccttttta cggttcctgg ccttttgctg gccttttgct cacatgttct 7440
ttcctgcgtt atcccctgat tctgtggata accgtattac cgcctttgag tgagctgata 7500
ccgctcgccg cagccgaacg accgagcgca gcgagtcagt gagcgaggaa gcggaagagc 7560
gcccaatacg caaaccgcct ctccccgcgc gttggccgat tcattaatgc agctggcacg 7620
acaggtttcc cgactggaaa gcgggcagtg agcgcaacgc aattaatgtg agttagctca 7680
ctcattaggc accccaggct ttacacttta tgcttccggc tcgtatgttg tgtggaattg 7740
tgagcggata acaatttcac acaggaaaca gctatgacca tgattacgcc aagctcgaaa 7800
ttaaccctca ctaaagggaa caaaagctgg agctccaccg cggtggcggc ctcgaggtcg 7860
agatccggtc gaccagcaac catagtcccg cccctaactc cgcccatccc gcccctaact 7920
ccgcccagtt ccgcccattc tccgccccat ggctgactaa ttttttttat ttatgcagag 7980
gccgaggccg cctcggcctc tgagctattc cagaagtagt gaggaggctt ttttggaggc 8040
ctaggctttt gcaaaaagct tcgacggtat cgattggctc atgtccaaca ttaccgccat 8100
gttgacattg attattgact agttattaat agtaatcaat tacggggtca ttagttcata 8160
gcccatatat ggagttccgc gttacataac ttacggtaaa tggcccgcct ggctgaccgc 8220
ccaacgaccc ccgcccattg acgtcaataa tgacgtatgt tcccatagta acgccaatag 8280
ggactttcca ttgacgtcaa tgggtggagt atttacggta aactgcccac ttggcagtac 8340
atcaagtgta tcatatgcca agtacgcccc ctattgacgt caatgacggt aaatggcccg 8400
cctggcatta tgcccagtac atgaccttat gggactttcc tacttggcag tacatctacg 8460
tattagtcat cgctattacc atggtgatgc ggttttggca gtacatcaat gggcgtggat 8520
agcggtttga ctcacgggga tttccaagtc tccaccccat tgacgtcaat gggagtttgt 8580
tttggcacca aaatcaacgg gactttccaa aatgtcgtaa caactccgcc ccattgacgc 8640
aaatgggcgg taggcgtgta cggaattcgg agtggcgagc cctcagatcc tgcatataag 8700
cagctgcttt ttgcctgtac tgggtctctc tg 8732
<210> 14
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成
肽"
<400> 14
Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10
<210> 15
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成
肽"
<400> 15
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10
<210> 16
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成
肽"
<400> 16
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
Ser Gly Gly Gly Ser Gly
20
<210> 17
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成
多肽"
<400> 17
Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn
1 5 10 15
Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu
20 25 30
Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro
35
<210> 18
<211> 48
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成
多肽"
<400> 18
Ala Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro
1 5 10 15
Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro
20 25 30
Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp
35 40 45
<210> 19
<211> 45
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成
多肽"
<400> 19
Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala
1 5 10 15
Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly
20 25 30
Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp
35 40 45
<210> 20
<211> 129
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成
多肽"
<400> 20
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
20 25 30
Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
35 40 45
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
50 55 60
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
65 70 75 80
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys
85 90 95
Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
100 105 110
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly
115 120 125
Lys
<210> 21
<211> 21
<212> PRT
<213> 智人
<400> 21
Leu Cys Tyr Leu Leu Asp Gly Ile Leu Phe Ile Tyr Gly Val Ile Leu
1 5 10 15
Thr Ala Leu Phe Leu
20
<210> 22
<211> 27
<212> PRT
<213> 智人
<400> 22
Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu
1 5 10 15
Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val
20 25
<210> 23
<211> 21
<212> PRT
<213> 智人
<400> 23
Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu
1 5 10 15
Ser Leu Val Ile Thr
20
<210> 24
<211> 23
<212> PRT
<213> 智人
<400> 24
Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu
1 5 10 15
Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr
20
<210> 25
<211> 24
<212> PRT
<213> 智人
<400> 25
Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu
1 5 10 15
Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys
20
<210> 26
<211> 27
<212> PRT
<213> 智人
<400> 26
Ile Ile Ser Phe Phe Leu Ala Leu Thr Ser Thr Ala Leu Leu Phe Leu
1 5 10 15
Leu Phe Phe Leu Thr Leu Arg Phe Ser Val Val
20 25
<210> 27
<211> 41
<212> PRT
<213> 智人
<400> 27
Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr
1 5 10 15
Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro
20 25 30
Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser
35 40
<210> 28
<211> 41
<212> PRT
<213> 智人
<400> 28
Arg Ser Lys Arg Ser Arg Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr
1 5 10 15
Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro
20 25 30
Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser
35 40
<210> 29
<211> 42
<212> PRT
<213> 智人
<400> 29
Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met
1 5 10 15
Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe
20 25 30
Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu
35 40
<210> 30
<211> 42
<212> PRT
<213> 智人
<400> 30
Ala Leu Tyr Leu Leu Arg Arg Asp Gln Arg Leu Pro Pro Asp Ala His
1 5 10 15
Lys Pro Pro Gly Gly Gly Ser Phe Arg Thr Pro Ile Gln Glu Glu Gln
20 25 30
Ala Asp Ala His Ser Thr Leu Ala Lys Ile
35 40
<210> 31
<211> 362
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成
多肽"
<400> 31
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro Gly Pro Val Pro Pro Ser Thr Ala Leu Arg
20 25 30
Tyr Leu Ile Glu Glu Leu Val Asn Ile Thr Gln Asn Gln Lys Ala Pro
35 40 45
Leu Cys Asn Gly Ser Met Val Trp Ser Ile Asn Leu Thr Ala Gly Met
50 55 60
Tyr Cys Ala Ala Leu Glu Ser Leu Ile Asn Val Ser Gly Cys Ser Ala
65 70 75 80
Ile Glu Lys Thr Gln Arg Met Leu Ser Gly Phe Cys Pro His Lys Val
85 90 95
Ser Ala Gly Gln Phe Ser Ser Leu His Val Arg Asp Thr Lys Ile Glu
100 105 110
Val Ala Gln Phe Val Lys Asp Leu Leu Leu His Leu Lys Lys Leu Phe
115 120 125
Arg Glu Gly Arg Phe Asn Ala Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg
130 135 140
Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg
145 150 155 160
Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly
165 170 175
Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr
180 185 190
Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Lys Arg Gly
195 200 205
Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val
210 215 220
Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu
225 230 235 240
Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Gly Gly Gly Arg Val Lys Phe Ser Arg
245 250 255
Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn
260 265 270
Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg
275 280 285
Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro
290 295 300
Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala
305 310 315 320
Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His
325 330 335
Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp
340 345 350
Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
355 360
<210> 32
<211> 410
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成
多肽"
<400> 32
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro Gly Pro Val Pro Pro Ser Thr Ala Leu Arg
20 25 30
Tyr Leu Ile Glu Glu Leu Val Asn Ile Thr Gln Asn Gln Lys Ala Pro
35 40 45
Leu Cys Asn Gly Ser Met Val Trp Ser Ile Asn Leu Thr Ala Gly Met
50 55 60
Tyr Cys Ala Ala Leu Glu Ser Leu Ile Asn Val Ser Gly Cys Ser Ala
65 70 75 80
Ile Glu Lys Thr Gln Arg Met Leu Ser Gly Phe Cys Pro His Lys Val
85 90 95
Ser Ala Gly Gln Phe Ser Ser Leu His Val Arg Asp Thr Lys Ile Glu
100 105 110
Val Ala Gln Phe Val Lys Asp Leu Leu Leu His Leu Lys Lys Leu Phe
115 120 125
Arg Glu Gly Arg Phe Asn Ala Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg
130 135 140
Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg
145 150 155 160
Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly
165 170 175
Leu Asp Phe Ala Cys Asp Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val
180 185 190
Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp
195 200 205
Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn Met
210 215 220
Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala
225 230 235 240
Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Gly Gly Gly Lys Arg Gly
245 250 255
Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val
260 265 270
Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu
275 280 285
Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Gly Gly Gly Arg Val Lys Phe Ser Arg
290 295 300
Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn
305 310 315 320
Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg
325 330 335
Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro
340 345 350
Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala
355 360 365
Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His
370 375 380
Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp
385 390 395 400
Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
405 410
<210> 33
<211> 442
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成
多肽"
<400> 33
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro Gly Pro Val Pro Pro Ser Thr Ala Leu Arg
20 25 30
Tyr Leu Ile Glu Glu Leu Val Asn Ile Thr Gln Asn Gln Lys Ala Pro
35 40 45
Leu Cys Asn Gly Ser Met Val Trp Ser Ile Asn Leu Thr Ala Gly Met
50 55 60
Tyr Cys Ala Ala Leu Glu Ser Leu Ile Asn Val Ser Gly Cys Ser Ala
65 70 75 80
Ile Glu Lys Thr Gln Arg Met Leu Ser Gly Phe Cys Pro His Lys Val
85 90 95
Ser Ala Gly Gln Phe Ser Ser Leu His Val Arg Asp Thr Lys Ile Glu
100 105 110
Val Ala Gln Phe Val Lys Asp Leu Leu Leu His Leu Lys Lys Leu Phe
115 120 125
Arg Glu Gly Arg Phe Asn Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro
130 135 140
Cys Pro Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gln Pro Arg
145 150 155 160
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
165 170 175
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
180 185 190
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
195 200 205
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
210 215 220
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
225 230 235 240
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
245 250 255
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Met Ala Leu Ile Val Leu Gly Gly Val
260 265 270
Ala Gly Leu Leu Leu Phe Ile Gly Leu Gly Ile Phe Phe Lys Arg Gly
275 280 285
Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val
290 295 300
Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu
305 310 315 320
Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Gly Gly Gly Arg Val Lys Phe Ser Arg
325 330 335
Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn
340 345 350
Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg
355 360 365
Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro
370 375 380
Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala
385 390 395 400
Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His
405 410 415
Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp
420 425 430
Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
435 440
<210> 34
<211> 541
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成
多肽"
<400> 34
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro Gly Pro Val Pro Pro Ser Thr Ala Leu Arg
20 25 30
Tyr Leu Ile Glu Glu Leu Val Asn Ile Thr Gln Asn Gln Lys Ala Pro
35 40 45
Leu Cys Asn Gly Ser Met Val Trp Ser Ile Asn Leu Thr Ala Gly Met
50 55 60
Tyr Cys Ala Ala Leu Glu Ser Leu Ile Asn Val Ser Gly Cys Ser Ala
65 70 75 80
Ile Glu Lys Thr Gln Arg Met Leu Ser Gly Phe Cys Pro His Lys Val
85 90 95
Ser Ala Gly Gln Phe Ser Ser Leu His Val Arg Asp Thr Lys Ile Glu
100 105 110
Val Ala Gln Phe Val Lys Asp Leu Leu Leu His Leu Lys Lys Leu Phe
115 120 125
Arg Glu Gly Arg Phe Asn Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro
130 135 140
Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
145 150 155 160
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
165 170 175
Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn
180 185 190
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
195 200 205
Glu Glu Gln Phe Gln Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
210 215 220
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
225 230 235 240
Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
245 250 255
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu
260 265 270
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
275 280 285
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
290 295 300
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
305 310 315 320
Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly
325 330 335
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
340 345 350
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Ile Tyr Ile Trp Ala
355 360 365
Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr
370 375 380
Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met
385 390 395 400
Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe
405 410 415
Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Gly Gly Gly Arg Val Lys
420 425 430
Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln
435 440 445
Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu
450 455 460
Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg
465 470 475 480
Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met
485 490 495
Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly
500 505 510
Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp
515 520 525
Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
530 535 540
<210> 35
<211> 373
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成
多肽"
<400> 35
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro Gly Pro Val Pro Pro Ser Thr Ala Leu Arg
20 25 30
Tyr Leu Ile Glu Glu Leu Val Asn Ile Thr Gln Asn Gln Lys Ala Pro
35 40 45
Leu Cys Asn Gly Ser Met Val Trp Ser Ile Asn Leu Thr Ala Gly Met
50 55 60
Tyr Cys Ala Ala Leu Glu Ser Leu Ile Asn Val Ser Gly Cys Ser Ala
65 70 75 80
Ile Glu Lys Thr Gln Arg Met Leu Ser Gly Phe Cys Pro His Lys Val
85 90 95
Ser Ala Gly Gln Phe Ser Ser Leu His Val Arg Asp Thr Lys Ile Glu
100 105 110
Val Ala Gln Phe Val Lys Asp Leu Leu Leu His Leu Lys Lys Leu Phe
115 120 125
Arg Glu Gly Arg Phe Asn Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly
130 135 140
Met Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser
145 150 155 160
Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg
165 170 175
Ser Arg Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro
180 185 190
Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe
195 200 205
Ala Ala Tyr Arg Ser Gly Gly Gly Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu
210 215 220
Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu
225 230 235 240
Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys
245 250 255
Glu Leu Gly Gly Gly Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro
260 265 270
Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly
275 280 285
Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro
290 295 300
Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr
305 310 315 320
Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly
325 330 335
Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln
340 345 350
Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln
355 360 365
Ala Leu Pro Pro Arg
370
<210> 36
<211> 385
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成
多肽"
<400> 36
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro Gly Pro Val Pro Pro Ser Thr Ala Leu Arg
20 25 30
Tyr Leu Ile Glu Glu Leu Val Asn Ile Thr Gln Asn Gln Lys Ala Pro
35 40 45
Leu Cys Asn Gly Ser Met Val Trp Ser Ile Asn Leu Thr Ala Gly Met
50 55 60
Tyr Cys Ala Ala Leu Glu Ser Leu Ile Asn Val Ser Gly Cys Ser Ala
65 70 75 80
Ile Glu Lys Thr Gln Arg Met Leu Ser Gly Phe Cys Pro His Lys Val
85 90 95
Ser Ala Gly Gln Phe Ser Ser Leu His Val Arg Asp Thr Lys Ile Glu
100 105 110
Val Ala Gln Phe Val Lys Asp Leu Leu Leu His Leu Lys Lys Leu Phe
115 120 125
Arg Glu Gly Arg Phe Asn Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro
130 135 140
Cys Pro Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Met Phe Trp Val
145 150 155 160
Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr
165 170 175
Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Gly Gly
180 185 190
His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg
195 200 205
Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg
210 215 220
Ser Gly Gly Gly Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys
225 230 235 240
Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys
245 250 255
Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Gly Gly
260 265 270
Gly Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln
275 280 285
Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu
290 295 300
Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly
305 310 315 320
Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln
325 330 335
Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu
340 345 350
Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr
355 360 365
Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro
370 375 380
Arg
385
<210> 37
<211> 492
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成
多肽"
<400> 37
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro Gly Pro Val Pro Pro Ser Thr Ala Leu Arg
20 25 30
Tyr Leu Ile Glu Glu Leu Val Asn Ile Thr Gln Asn Gln Lys Ala Pro
35 40 45
Leu Cys Asn Gly Ser Met Val Trp Ser Ile Asn Leu Thr Ala Gly Met
50 55 60
Tyr Cys Ala Ala Leu Glu Ser Leu Ile Asn Val Ser Gly Cys Ser Ala
65 70 75 80
Ile Glu Lys Thr Gln Arg Met Leu Ser Gly Phe Cys Pro His Lys Val
85 90 95
Ser Ala Gly Gln Phe Ser Ser Leu His Val Arg Asp Thr Lys Ile Glu
100 105 110
Val Ala Gln Phe Val Lys Asp Leu Leu Leu His Leu Lys Lys Leu Phe
115 120 125
Arg Glu Gly Arg Phe Asn Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro
130 135 140
Cys Pro Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gln Pro Arg
145 150 155 160
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
165 170 175
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
180 185 190
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
195 200 205
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
210 215 220
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
225 230 235 240
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
245 250 255
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Met Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly
260 265 270
Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile
275 280 285
Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Gly Gly His Ser Asp Tyr Met
290 295 300
Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro
305 310 315 320
Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Gly Gly Gly Lys
325 330 335
Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg
340 345 350
Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro
355 360 365
Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Gly Gly Gly Arg Val Lys Phe
370 375 380
Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu
385 390 395 400
Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp
405 410 415
Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys
420 425 430
Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala
435 440 445
Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys
450 455 460
Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr
465 470 475 480
Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
485 490
<210> 38
<211> 592
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成
多肽"
<400> 38
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro Gly Pro Val Pro Pro Ser Thr Ala Leu Arg
20 25 30
Tyr Leu Ile Glu Glu Leu Val Asn Ile Thr Gln Asn Gln Lys Ala Pro
35 40 45
Leu Cys Asn Gly Ser Met Val Trp Ser Ile Asn Leu Thr Ala Gly Met
50 55 60
Tyr Cys Ala Ala Leu Glu Ser Leu Ile Asn Val Ser Gly Cys Ser Ala
65 70 75 80
Ile Glu Lys Thr Gln Arg Met Leu Ser Gly Phe Cys Pro His Lys Val
85 90 95
Ser Ala Gly Gln Phe Ser Ser Leu His Val Arg Asp Thr Lys Ile Glu
100 105 110
Val Ala Gln Phe Val Lys Asp Leu Leu Leu His Leu Lys Lys Leu Phe
115 120 125
Arg Glu Gly Arg Phe Asn Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro
130 135 140
Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
145 150 155 160
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
165 170 175
Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn
180 185 190
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
195 200 205
Glu Glu Gln Phe Gln Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
210 215 220
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
225 230 235 240
Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
245 250 255
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu
260 265 270
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
275 280 285
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
290 295 300
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
305 310 315 320
Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly
325 330 335
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
340 345 350
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Met Phe Trp Val Leu
355 360 365
Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val
370 375 380
Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Gly Gly His
385 390 395 400
Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys
405 410 415
His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser
420 425 430
Gly Gly Gly Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln
435 440 445
Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser
450 455 460
Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Gly Gly Gly
465 470 475 480
Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly
485 490 495
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
500 505 510
Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
515 520 525
Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys
530 535 540
Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg
545 550 555 560
Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala
565 570 575
Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
580 585 590
<210> 39
<211> 340
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成
多肽"
<400> 39
Gly Pro Val Pro Pro Ser Thr Ala Leu Arg Tyr Leu Ile Glu Glu Leu
1 5 10 15
Val Asn Ile Thr Gln Asn Gln Lys Ala Pro Leu Cys Asn Gly Ser Met
20 25 30
Val Trp Ser Ile Asn Leu Thr Ala Gly Met Tyr Cys Ala Ala Leu Glu
35 40 45
Ser Leu Ile Asn Val Ser Gly Cys Ser Ala Ile Glu Lys Thr Gln Arg
50 55 60
Met Leu Ser Gly Phe Cys Pro His Lys Val Ser Ala Gly Gln Phe Ser
65 70 75 80
Ser Leu His Val Arg Asp Thr Lys Ile Glu Val Ala Gln Phe Val Lys
85 90 95
Asp Leu Leu Leu His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu Gly Arg Phe Asn
100 105 110
Ala Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro
115 120 125
Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro
130 135 140
Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp
145 150 155 160
Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu
165 170 175
Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr
180 185 190
Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu
195 200 205
Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu
210 215 220
Leu Gly Gly Gly Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala
225 230 235 240
Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg
245 250 255
Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu
260 265 270
Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn
275 280 285
Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met
290 295 300
Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly
305 310 315 320
Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala
325 330 335
Leu Pro Pro Arg
340
<210> 40
<211> 388
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成
多肽"
<400> 40
Gly Pro Val Pro Pro Ser Thr Ala Leu Arg Tyr Leu Ile Glu Glu Leu
1 5 10 15
Val Asn Ile Thr Gln Asn Gln Lys Ala Pro Leu Cys Asn Gly Ser Met
20 25 30
Val Trp Ser Ile Asn Leu Thr Ala Gly Met Tyr Cys Ala Ala Leu Glu
35 40 45
Ser Leu Ile Asn Val Ser Gly Cys Ser Ala Ile Glu Lys Thr Gln Arg
50 55 60
Met Leu Ser Gly Phe Cys Pro His Lys Val Ser Ala Gly Gln Phe Ser
65 70 75 80
Ser Leu His Val Arg Asp Thr Lys Ile Glu Val Ala Gln Phe Val Lys
85 90 95
Asp Leu Leu Leu His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu Gly Arg Phe Asn
100 105 110
Ala Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro
115 120 125
Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro
130 135 140
Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp
145 150 155 160
Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu
165 170 175
Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser
180 185 190
Arg Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly
195 200 205
Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala
210 215 220
Ala Tyr Arg Ser Gly Gly Gly Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr
225 230 235 240
Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu
245 250 255
Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu
260 265 270
Leu Gly Gly Gly Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala
275 280 285
Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg
290 295 300
Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu
305 310 315 320
Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn
325 330 335
Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met
340 345 350
Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly
355 360 365
Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala
370 375 380
Leu Pro Pro Arg
385
<210> 41
<211> 420
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成
多肽"
<400> 41
Gly Pro Val Pro Pro Ser Thr Ala Leu Arg Tyr Leu Ile Glu Glu Leu
1 5 10 15
Val Asn Ile Thr Gln Asn Gln Lys Ala Pro Leu Cys Asn Gly Ser Met
20 25 30
Val Trp Ser Ile Asn Leu Thr Ala Gly Met Tyr Cys Ala Ala Leu Glu
35 40 45
Ser Leu Ile Asn Val Ser Gly Cys Ser Ala Ile Glu Lys Thr Gln Arg
50 55 60
Met Leu Ser Gly Phe Cys Pro His Lys Val Ser Ala Gly Gln Phe Ser
65 70 75 80
Ser Leu His Val Arg Asp Thr Lys Ile Glu Val Ala Gln Phe Val Lys
85 90 95
Asp Leu Leu Leu His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu Gly Arg Phe Asn
100 105 110
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
130 135 140
Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
145 150 155 160
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
165 170 175
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
180 185 190
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys
195 200 205
Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
210 215 220
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly
225 230 235 240
Lys Met Ala Leu Ile Val Leu Gly Gly Val Ala Gly Leu Leu Leu Phe
245 250 255
Ile Gly Leu Gly Ile Phe Phe Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr
260 265 270
Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu
275 280 285
Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu
290 295 300
Leu Gly Gly Gly Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala
305 310 315 320
Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg
325 330 335
Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu
340 345 350
Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn
355 360 365
Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met
370 375 380
Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly
385 390 395 400
Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala
405 410 415
Leu Pro Pro Arg
420
<210> 42
<211> 519
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成
多肽"
<400> 42
Gly Pro Val Pro Pro Ser Thr Ala Leu Arg Tyr Leu Ile Glu Glu Leu
1 5 10 15
Val Asn Ile Thr Gln Asn Gln Lys Ala Pro Leu Cys Asn Gly Ser Met
20 25 30
Val Trp Ser Ile Asn Leu Thr Ala Gly Met Tyr Cys Ala Ala Leu Glu
35 40 45
Ser Leu Ile Asn Val Ser Gly Cys Ser Ala Ile Glu Lys Thr Gln Arg
50 55 60
Met Leu Ser Gly Phe Cys Pro His Lys Val Ser Ala Gly Gln Phe Ser
65 70 75 80
Ser Leu His Val Arg Asp Thr Lys Ile Glu Val Ala Gln Phe Val Lys
85 90 95
Asp Leu Leu Leu His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu Gly Arg Phe Asn
100 105 110
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe
115 120 125
Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
130 135 140
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
145 150 155 160
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
165 170 175
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Gln Ser
180 185 190
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
195 200 205
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
210 215 220
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
225 230 235 240
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
245 250 255
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
260 265 270
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
275 280 285
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
290 295 300
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
305 310 315 320
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
325 330 335
Leu Ser Leu Gly Lys Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys
340 345 350
Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Lys Arg Gly Arg Lys Lys
355 360 365
Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr
370 375 380
Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly
385 390 395 400
Gly Cys Glu Leu Gly Gly Gly Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp
405 410 415
Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn
420 425 430
Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg
435 440 445
Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly
450 455 460
Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu
465 470 475 480
Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu
485 490 495
Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His
500 505 510
Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
515
<210> 43
<211> 351
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成
多肽"
<400> 43
Gly Pro Val Pro Pro Ser Thr Ala Leu Arg Tyr Leu Ile Glu Glu Leu
1 5 10 15
Val Asn Ile Thr Gln Asn Gln Lys Ala Pro Leu Cys Asn Gly Ser Met
20 25 30
Val Trp Ser Ile Asn Leu Thr Ala Gly Met Tyr Cys Ala Ala Leu Glu
35 40 45
Ser Leu Ile Asn Val Ser Gly Cys Ser Ala Ile Glu Lys Thr Gln Arg
50 55 60
Met Leu Ser Gly Phe Cys Pro His Lys Val Ser Ala Gly Gln Phe Ser
65 70 75 80
Ser Leu His Val Arg Asp Thr Lys Ile Glu Val Ala Gln Phe Val Lys
85 90 95
Asp Leu Leu Leu His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu Gly Arg Phe Asn
100 105 110
Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Met Phe Trp Val Leu Val
115 120 125
Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala
130 135 140
Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Gly Gly His Ser
145 150 155 160
Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His
165 170 175
Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Gly
180 185 190
Gly Gly Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro
195 200 205
Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys
210 215 220
Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Gly Gly Gly Arg
225 230 235 240
Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln
245 250 255
Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp
260 265 270
Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro
275 280 285
Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp
290 295 300
Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg
305 310 315 320
Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr
325 330 335
Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
340 345 350
<210> 44
<211> 363
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成
多肽"
<400> 44
Gly Pro Val Pro Pro Ser Thr Ala Leu Arg Tyr Leu Ile Glu Glu Leu
1 5 10 15
Val Asn Ile Thr Gln Asn Gln Lys Ala Pro Leu Cys Asn Gly Ser Met
20 25 30
Val Trp Ser Ile Asn Leu Thr Ala Gly Met Tyr Cys Ala Ala Leu Glu
35 40 45
Ser Leu Ile Asn Val Ser Gly Cys Ser Ala Ile Glu Lys Thr Gln Arg
50 55 60
Met Leu Ser Gly Phe Cys Pro His Lys Val Ser Ala Gly Gln Phe Ser
65 70 75 80
Ser Leu His Val Arg Asp Thr Lys Ile Glu Val Ala Gln Phe Val Lys
85 90 95
Asp Leu Leu Leu His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu Gly Arg Phe Asn
100 105 110
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Ser Gly Met Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly
130 135 140
Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe
145 150 155 160
Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn
165 170 175
Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr
180 185 190
Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Gly Gly Gly Lys Arg
195 200 205
Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro
210 215 220
Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu
225 230 235 240
Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Gly Gly Gly Arg Val Lys Phe Ser
245 250 255
Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr
260 265 270
Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys
275 280 285
Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn
290 295 300
Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu
305 310 315 320
Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly
325 330 335
His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr
340 345 350
Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
355 360
<210> 45
<211> 470
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成
多肽"
<400> 45
Gly Pro Val Pro Pro Ser Thr Ala Leu Arg Tyr Leu Ile Glu Glu Leu
1 5 10 15
Val Asn Ile Thr Gln Asn Gln Lys Ala Pro Leu Cys Asn Gly Ser Met
20 25 30
Val Trp Ser Ile Asn Leu Thr Ala Gly Met Tyr Cys Ala Ala Leu Glu
35 40 45
Ser Leu Ile Asn Val Ser Gly Cys Ser Ala Ile Glu Lys Thr Gln Arg
50 55 60
Met Leu Ser Gly Phe Cys Pro His Lys Val Ser Ala Gly Gln Phe Ser
65 70 75 80
Ser Leu His Val Arg Asp Thr Lys Ile Glu Val Ala Gln Phe Val Lys
85 90 95
Asp Leu Leu Leu His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu Gly Arg Phe Asn
100 105 110
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
130 135 140
Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
145 150 155 160
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
165 170 175
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
180 185 190
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys
195 200 205
Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
210 215 220
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly
225 230 235 240
Lys Met Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr
245 250 255
Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys
260 265 270
Arg Ser Arg Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg
275 280 285
Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp
290 295 300
Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Gly Gly Gly Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu
305 310 315 320
Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln
325 330 335
Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly
340 345 350
Cys Glu Leu Gly Gly Gly Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala
355 360 365
Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu
370 375 380
Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp
385 390 395 400
Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu
405 410 415
Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile
420 425 430
Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr
435 440 445
Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met
450 455 460
Gln Ala Leu Pro Pro Arg
465 470
<210> 46
<211> 570
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成
多肽"
<400> 46
Gly Pro Val Pro Pro Ser Thr Ala Leu Arg Tyr Leu Ile Glu Glu Leu
1 5 10 15
Val Asn Ile Thr Gln Asn Gln Lys Ala Pro Leu Cys Asn Gly Ser Met
20 25 30
Val Trp Ser Ile Asn Leu Thr Ala Gly Met Tyr Cys Ala Ala Leu Glu
35 40 45
Ser Leu Ile Asn Val Ser Gly Cys Ser Ala Ile Glu Lys Thr Gln Arg
50 55 60
Met Leu Ser Gly Phe Cys Pro His Lys Val Ser Ala Gly Gln Phe Ser
65 70 75 80
Ser Leu His Val Arg Asp Thr Lys Ile Glu Val Ala Gln Phe Val Lys
85 90 95
Asp Leu Leu Leu His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu Gly Arg Phe Asn
100 105 110
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe
115 120 125
Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
130 135 140
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
145 150 155 160
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
165 170 175
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Gln Ser
180 185 190
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
195 200 205
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
210 215 220
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
225 230 235 240
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
245 250 255
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
260 265 270
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
275 280 285
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
290 295 300
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
305 310 315 320
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
325 330 335
Leu Ser Leu Gly Lys Met Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val
340 345 350
Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp
355 360 365
Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn Met
370 375 380
Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala
385 390 395 400
Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Gly Gly Gly Lys Arg Gly
405 410 415
Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val
420 425 430
Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu
435 440 445
Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Gly Gly Gly Arg Val Lys Phe Ser Arg
450 455 460
Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn
465 470 475 480
Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg
485 490 495
Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro
500 505 510
Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala
515 520 525
Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His
530 535 540
Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp
545 550 555 560
Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
565 570
<210> 47
<211> 363
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成
多肽"
<400> 47
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro Gly Pro Val Pro Pro Ser Thr Ala Leu Arg
20 25 30
Tyr Leu Ile Glu Glu Leu Val Asn Ile Thr Gln Asn Gln Lys Ala Pro
35 40 45
Leu Cys Asn Gly Ser Met Val Trp Ser Ile Asn Leu Thr Ala Gly Met
50 55 60
Tyr Cys Ala Ala Leu Glu Ser Leu Ile Asn Val Ser Gly Cys Ser Ala
65 70 75 80
Ile Glu Lys Thr Gln Arg Met Leu Ser Gly Phe Cys Pro His Lys Val
85 90 95
Ser Ala Gly Gln Phe Ser Ser Leu His Val Arg Asp Thr Lys Ile Glu
100 105 110
Val Ala Gln Phe Val Lys Asp Leu Leu Leu His Leu Lys Lys Leu Phe
115 120 125
Arg Glu Gly Arg Phe Asn Ala Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg
130 135 140
Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg
145 150 155 160
Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly
165 170 175
Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr
180 185 190
Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Gly Gly Gly Lys Arg
195 200 205
Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro
210 215 220
Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu
225 230 235 240
Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Gly Gly Gly Arg Val Lys Phe Ser
245 250 255
Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr
260 265 270
Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys
275 280 285
Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn
290 295 300
Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu
305 310 315 320
Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly
325 330 335
His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr
340 345 350
Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
355 360
<210> 48
<211> 341
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成
多肽"
<400> 48
Gly Pro Val Pro Pro Ser Thr Ala Leu Arg Tyr Leu Ile Glu Glu Leu
1 5 10 15
Val Asn Ile Thr Gln Asn Gln Lys Ala Pro Leu Cys Asn Gly Ser Met
20 25 30
Val Trp Ser Ile Asn Leu Thr Ala Gly Met Tyr Cys Ala Ala Leu Glu
35 40 45
Ser Leu Ile Asn Val Ser Gly Cys Ser Ala Ile Glu Lys Thr Gln Arg
50 55 60
Met Leu Ser Gly Phe Cys Pro His Lys Val Ser Ala Gly Gln Phe Ser
65 70 75 80
Ser Leu His Val Arg Asp Thr Lys Ile Glu Val Ala Gln Phe Val Lys
85 90 95
Asp Leu Leu Leu His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu Gly Arg Phe Asn
100 105 110
Ala Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro
115 120 125
Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro
130 135 140
Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp
145 150 155 160
Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu
165 170 175
Ser Leu Val Ile Thr Gly Gly Gly Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu
180 185 190
Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu
195 200 205
Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys
210 215 220
Glu Leu Gly Gly Gly Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro
225 230 235 240
Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly
245 250 255
Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro
260 265 270
Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr
275 280 285
Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly
290 295 300
Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln
305 310 315 320
Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln
325 330 335
Ala Leu Pro Pro Arg
340
<210> 49
<211> 112
<212> PRT
<213> 智人
<400> 49
Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly
1 5 10 15
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
20 25 30
Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
35 40 45
Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys
50 55 60
Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg
65 70 75 80
Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala
85 90 95
Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
100 105 110
<210> 50
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成
多肽"
<400> 50
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu
1 5 10 15
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
20 25 30
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
35 40 45
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
50 55 60
Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly
65 70 75 80
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
85 90 95
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
100 105
<210> 51
<211> 229
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成
多肽"
<400> 51
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe
1 5 10 15
Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
20 25 30
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
35 40 45
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
50 55 60
Glu Val His Gln Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
65 70 75 80
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
85 90 95
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
100 105 110
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
115 120 125
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
130 135 140
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
145 150 155 160
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
165 170 175
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
180 185 190
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
195 200 205
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Gly Lys
225
<210> 52
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成
肽"
<400> 52
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro
1 5 10
<210> 53
<211> 229
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成
多肽"
<400> 53
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe
1 5 10 15
Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
20 25 30
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
35 40 45
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
50 55 60
Glu Val His Gln Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
65 70 75 80
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
85 90 95
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
100 105 110
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
115 120 125
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
130 135 140
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
145 150 155 160
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
165 170 175
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
180 185 190
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
195 200 205
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Gly Lys
225
<210> 54
<211> 28
<212> PRT
<213> 智人
<400> 54
Met Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser
1 5 10 15
Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val
20 25

Claims (10)

1.编码嵌合抗原受体的核酸分子，其中所述嵌合抗原受体包含：人IL-13或其具有1-10个氨基酸修饰的变体；跨膜域，其选自：CD4跨膜域或其具有1-10个氨基酸修饰的变体、CD8跨膜域或其具有1-10个氨基酸修饰的变体、CD28跨膜域或其具有1-10个氨基酸修饰的变体，和CD3ζ跨膜域或其具有1-10个氨基酸修饰的变体；共刺激域；和CD3ζ信号传导域或其具有1-10个氨基酸修饰的变体。
2.权利要求1的核酸分子，其中所述共刺激域选自：CD28共刺激域或其具有1-10个氨基酸修饰的变体、4IBB共刺激域或其具有1-10个氨基酸修饰的变体和OX40共刺激域或其具有1-10个氨基酸修饰的变体。
3.权利要求1的核酸分子，其包含具有1-10个氨基酸修饰的人IL13的变体，所述修饰增加对IL13Rα2相对于IL13Rα1的结合特异性。
4.权利要求1的核酸分子，其中所述人IL-13或其变体是包含具有1-5个氨基酸修饰的SEQ ID NO:3氨基酸序列的IL-13变体，条件是SEQ ID NO:3的位置11上的氨基酸不是E。
5.权利要求2的核酸分子，其中所述嵌合抗原受体包含两个不同的共刺激域，其选自：CD28共刺激域或其具有1-10个氨基酸修饰的变体、4IBB共刺激域或其具有1-10个氨基酸修饰的变体和OX40共刺激域或其具有1-10个氨基酸修饰的变体。
6.权利要求5的核酸分子，其中所述嵌合抗原受体包含两个不同的共刺激域，其选自：CD28共刺激域或其具有1-2个氨基酸修饰的变体、4IBB共刺激域或其具有1-2个氨基酸修饰的变体和OX40共刺激域或其具有1-2个氨基酸修饰的变体。
7.权利要求1的核酸分子，其中所述嵌合抗原受体包含：人IL-13或其具有1-2个氨基酸修饰的变体；跨膜域，其选自：CD4跨膜域或其具有1-2个氨基酸修饰的变体、CD8跨膜域或其具有1-2个氨基酸修饰的变体、CD28跨膜域或其具有1-2个氨基酸修饰的变体，和CD3ζ跨膜域或其具有1-2个氨基酸修饰的变体；共刺激域；和CD3ζ信号传导域或其具有1-2个氨基酸修饰的变体。
8.权利要求1的核酸分子，其包含定位在IL-13或其变体与跨膜域之间的间隔物区。
9.权利要求6的核酸分子，其中所述间隔物区包含选自SEQ ID NO:4、14-20、50和521的氨基酸序列。
10.权利要求6的核酸分子，其中所述间隔物包含IgG铰链区。
CN202110969587.7A 2014-09-19 2015-09-18 靶向IL13Rα2的共刺激嵌合抗原受体T细胞 Pending CN113789336A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201462053068P 2014-09-19 2014-09-19
US62/053,068 2014-09-19
CN201580061133.2A CN107002084B (zh) 2014-09-19 2015-09-18 靶向IL13Rα2的共刺激嵌合抗原受体T细胞

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201580061133.2A Division CN107002084B (zh) 2014-09-19 2015-09-18 靶向IL13Rα2的共刺激嵌合抗原受体T细胞

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN113789336A true CN113789336A (zh) 2021-12-14

Family

ID=55533940

Family Applications (4)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110969587.7A Pending CN113789336A (zh) 2014-09-19 2015-09-18 靶向IL13Rα2的共刺激嵌合抗原受体T细胞
CN201580061133.2A Active CN107002084B (zh) 2014-09-19 2015-09-18 靶向IL13Rα2的共刺激嵌合抗原受体T细胞
CN201580062281.6A Active CN107404881B (zh) 2014-09-19 2015-09-21 用于过继性t细胞疗法的中央记忆t细胞
CN202110690954.XA Pending CN113637640A (zh) 2014-09-19 2015-09-21 用于过继性t细胞疗法的中央记忆t细胞

Family Applications After (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201580061133.2A Active CN107002084B (zh) 2014-09-19 2015-09-18 靶向IL13Rα2的共刺激嵌合抗原受体T细胞
CN201580062281.6A Active CN107404881B (zh) 2014-09-19 2015-09-21 用于过继性t细胞疗法的中央记忆t细胞
CN202110690954.XA Pending CN113637640A (zh) 2014-09-19 2015-09-21 用于过继性t细胞疗法的中央记忆t细胞

Country Status (16)

Country Link
US (3) US9914909B2 (zh)
EP (4) EP3194433B1 (zh)
JP (7) JP6657195B2 (zh)
KR (2) KR20230169455A (zh)
CN (4) CN113789336A (zh)
AU (4) AU2015317351B2 (zh)
BR (3) BR112017005631A2 (zh)
CA (2) CA2961654A1 (zh)
DK (1) DK3200591T3 (zh)
ES (2) ES2738705T3 (zh)
HK (1) HK1247046A1 (zh)
IL (6) IL308324A (zh)
MX (4) MX2017003596A (zh)
NZ (1) NZ730208A (zh)
RU (2) RU2749922C2 (zh)
WO (2) WO2016044811A1 (zh)

Families Citing this family (59)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9657105B2 (en) 2013-03-15 2017-05-23 City Of Hope CD123-specific chimeric antigen receptor redirected T cells and methods of their use
IL308324A (en) * 2014-09-19 2024-01-01 Hope City IL13RA2-targeted chimeric antigen receptor T cells
CA2986254A1 (en) 2015-05-18 2016-11-24 TCR2 Therapeutics Inc. Compositions and methods for tcr reprogramming using fusion proteins
ES2877090T3 (es) * 2015-08-05 2021-11-16 Cellabmed Inc Receptor de antígenos quiméricos y células T en las que se expresa el receptor de antígenos quiméricos
CN109328074A (zh) 2016-04-01 2019-02-12 凯德药业股份有限公司 嵌合抗原和t细胞受体及使用的方法
CN117903307A (zh) * 2016-04-01 2024-04-19 凯德药业股份有限公司 Bcma结合分子及其使用方法
MY201207A (en) * 2016-04-01 2024-02-09 Amgen Inc Chimeric receptors to flt3 and methods of use thereof
CR20210084A (es) 2016-04-01 2021-03-26 Amgen Inc Receptores quiméricos y métodos de uso de los mismos (divisional 2018-0480)
WO2017192536A1 (en) 2016-05-02 2017-11-09 University Of Kansas Eliminating mhc restriction from the t cell receptor as a strategy for immunotherapy
US20190307797A1 (en) * 2016-06-07 2019-10-10 Maax-Delbrück-Centrum für Molekulare Medizin in der Helmholtz-Gemeinschaft Chimeric antigen receptor and car-t cells that bind bcma
CA3025667A1 (en) * 2016-06-08 2017-12-14 Intrexon Corporation Cd33 specific chimeric antigen receptors
JP7109789B2 (ja) 2016-08-02 2022-08-01 ティーシーアール２ セラピューティクス インク． 融合タンパク質を使用したｔｃｒの再プログラム化のための組成物及び方法
EP3512531A4 (en) * 2016-09-16 2020-03-11 Baylor College of Medicine VIRUS-SPECIFIC T-CELL ACTIVATION AND EXPANSION PLATFORM
JP7217970B2 (ja) 2016-10-07 2023-02-06 ティーシーアール２ セラピューティクス インク． 融合タンパク質を用いてｔ細胞受容体をリプログラミングするための組成物及び方法
WO2018098365A2 (en) 2016-11-22 2018-05-31 TCR2 Therapeutics Inc. Compositions and methods for tcr reprogramming using fusion proteins
US20200095547A1 (en) 2016-12-02 2020-03-26 Darya ALIZADEH Methods for manufacturing t cells expressing of chimeric antigen receptors and other receptors
WO2018106972A1 (en) * 2016-12-07 2018-06-14 La Jolla Institute For Allergy And Immunology Compositions for cancer treatment and methods and uses for cancer treatment and prognosis
CN110612119A (zh) 2017-02-07 2019-12-24 西雅图儿童医院（Dba西雅图儿童研究所） 磷脂醚(ple)car t细胞肿瘤靶向(ctct)剂
CN108395481B (zh) * 2017-02-08 2021-02-05 西比曼生物科技（香港）有限公司 一种靶向cd20的car的构建及其工程化t细胞的活性鉴定
WO2018156711A1 (en) * 2017-02-22 2018-08-30 H. Lee Moffitt Cancer Center And Research Institute, Inc. Il13ra2-binding chimeric antigen receptors
JP7178355B2 (ja) 2017-02-28 2022-11-25 エンドサイト・インコーポレイテッド Ｃａｒ ｔ細胞療法のための組成物および方法
EP3604344A4 (en) * 2017-03-27 2021-01-06 Noile-Immune Biotech, Inc. CHIMERIC ANTIGEN RECEPTOR
JP2020517259A (ja) 2017-04-19 2020-06-18 ボード・オブ・リージエンツ，ザ・ユニバーシテイ・オブ・テキサス・システム 操作された抗原受容体を発現する免疫細胞
CN107267555B (zh) * 2017-05-27 2020-03-20 上海优卡迪生物医药科技有限公司 一种基于octs技术的恶性胶质瘤car-t治疗载体及其构建方法和应用
JP7391831B2 (ja) * 2017-08-11 2023-12-05 シティ・オブ・ホープ Ｃａｒ ｔ細胞標的を発現する腫瘍溶解性ウイルス、及びその使用
CN111542545A (zh) * 2017-11-03 2020-08-14 索伦托治疗有限公司 Cd38定向嵌合抗原受体构建体
CN109971721B (zh) * 2017-12-28 2023-10-31 上海细胞治疗研究院 自表达cd47抗体的间皮素特异性car-t细胞及其用途
CN109971712B (zh) * 2017-12-28 2023-06-20 上海细胞治疗研究院 特异性靶向cd19抗原且高水平稳定表达pd-1抗体的car-t细胞及用途
JP2021512147A (ja) 2018-01-22 2021-05-13 エンドサイト・インコーポレイテッドＥｎｄｏｃｙｔｅ， Ｉｎｃ． Ｃａｒ ｔ細胞の使用方法
JP2021512622A (ja) * 2018-02-06 2021-05-20 シアトル チルドレンズ ホスピタル ディー／ビー／エー シアトル チルドレンズ リサーチ インスティテュート フルオレセイン結合エーテルリン脂質（ｆｌ−ｐｌｅ）で標識された腫瘍に対して最適なｔ細胞機能を示すフルオレセイン特異的ｃａｒ
CN111971053A (zh) * 2018-02-12 2020-11-20 综合医院公司 靶向肿瘤微环境的嵌合抗原受体
SG11202008795SA (en) * 2018-03-14 2020-10-29 Seattle Childrens Hospital Dba Seattle Childrens Res Inst Il-13 receptor alpha 2 (il13ra2) chimeric antigen receptor for tumor specific t cell immunotherapy
BR112020018534A2 (pt) * 2018-03-14 2020-12-29 Seattle Children's Hospital (dba Seattle Children's Research Institute) Imunoterapia com células t direcionadas por zetacina alvejada por receptor alfa 2 da il-13
EP3797164A4 (en) * 2018-05-21 2022-03-02 Biosceptre (Aust) Pty Ltd CHEMERA ANTIGEN RECEPTORS WITH MODIFIED BINDING DOMAINS AND USES THEREOF
CA3102097A1 (en) * 2018-06-01 2019-12-05 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior Unversity Il-13/il-4 superkines: immune cell targeting constructs and methods of use thereof
AU2019295855A1 (en) 2018-06-29 2021-01-28 City Of Hope CD6 targeted chimeric antigen receptors for treatent of certain autoimmune disorders
CN113260369A (zh) * 2018-08-10 2021-08-13 优特力克斯有限公司 癌抗原特异性细胞毒性t细胞
US20230065784A1 (en) 2019-03-21 2023-03-02 City Of Hope Composition and method for reducing expression of checkpoint inhibitors in t cells expressing a car or ctl
US20220145252A1 (en) 2019-03-29 2022-05-12 City Of Hope Methods for manufacturing t cells expressing of chimeric antigen receptors and other receptors
WO2021004400A1 (zh) * 2019-07-06 2021-01-14 苏州克睿基因生物科技有限公司 一种表达cd3抗体受体复合物的免疫细胞及其用途
CN112204135A (zh) * 2019-07-06 2021-01-08 苏州克睿基因生物科技有限公司 一种表达cd3抗体受体复合物的免疫细胞及其用途
EP3769816A1 (en) * 2019-07-25 2021-01-27 Ospedale Pediatrico Bambino Gesù Car-cd123 vector and uses thereof
US20230076643A1 (en) 2019-12-30 2023-03-09 City Of Hope Methods of making and using regulatory t cells and effector t cells having chimeric antigen receptors targeted to cd6, cd19, and/or an il-13r for treatment of autoimmune disorders and cancers
US20230374085A1 (en) * 2020-03-11 2023-11-23 City Of Hope Dual-targeting chimeric antigen receptor modified t cells comprising il-13 and chlorotoxin for cancer treatment
WO2021183960A1 (en) * 2020-03-12 2021-09-16 City Of Hope TARGETED CHIMERIC ANTIGEN RECEPTOR MODIFIED T CELLS FOR TREATMENT OF IL13RαA2 POSITIVE MALIGNANCIES
CA3184784A1 (en) * 2020-05-27 2021-12-02 The Medical College Of Wisconsin, Inc. Improved lentiviral vector transfer plasmid and methods of use
GB202011993D0 (en) 2020-07-31 2020-09-16 Adc Therapeutics Sa ANTI-IL 13Ra2 antibodies
AU2021342126A1 (en) * 2020-09-10 2023-05-18 City Of Hope Combination therapy comprising cancer-targeted car-t cells and a method of using same for a treatment for cancer
WO2022109498A1 (en) 2020-11-23 2022-05-27 City Of Hope Engineered t cells for expression of chimeric anitgen receptors
US11661459B2 (en) 2020-12-03 2023-05-30 Century Therapeutics, Inc. Artificial cell death polypeptide for chimeric antigen receptor and uses thereof
AR124414A1 (es) 2020-12-18 2023-03-22 Century Therapeutics Inc Sistema de receptor de antígeno quimérico con especificidad de receptor adaptable
CN118146395A (zh) * 2021-02-08 2024-06-07 浙江大学 一种以内源性蛋白质分子替代单结构域抗体的嵌合抗原受体
JP2024510508A (ja) * 2021-03-18 2024-03-07 ザ ウィスター インスティテュート オブ アナトミー アンド バイオロジー ＩＬ１３Ｒα２を標的とするＤＮＡコード化二重特異性抗体と癌治療における使用方法
CN117242090A (zh) 2021-03-30 2023-12-15 希望之城公司 CAR T细胞疗法和IFNγ
US20230190799A1 (en) * 2021-07-21 2023-06-22 City Of Hope Chimeric antigen receptor t cells targeting cea and anti-cea-il2 immunocytokines for cancer therapy
CN113621077B (zh) * 2021-09-02 2023-01-31 山东大学 一种tim-3/cd28融合蛋白及所述融合蛋白修饰的car-t细胞
EP4176895A1 (en) * 2021-11-08 2023-05-10 AvenCell Europe GmbH Targeting modules against il13ra2 or her2 for use in combination with a chimeric antigen receptor
WO2023130462A1 (zh) * 2022-01-10 2023-07-13 卡瑞济(北京)生命科技有限公司 靶向IL13Rα2的嵌合抗原受体及其用途
CN115960257B (zh) * 2022-09-29 2023-10-27 卡瑞济(北京)生命科技有限公司 靶向IL13Rα2的经优化的嵌合抗原受体及其用途

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103492406A (zh) * 2010-12-09 2014-01-01 宾夕法尼亚大学董事会 嵌合抗原受体-修饰的t细胞治疗癌症的用途
CN103502438A (zh) * 2011-03-23 2014-01-08 弗雷德哈钦森癌症研究中心 用于细胞免疫治疗的方法和组合物

Family Cites Families (33)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE69123241T2 (de) 1990-12-14 1997-04-17 Cell Genesys Inc Chimärische ketten zur transduktion von rezeptorverbundenen signalwegen
US5712149A (en) 1995-02-03 1998-01-27 Cell Genesys, Inc. Chimeric receptor molecules for delivery of co-stimulatory signals
DE69634855T2 (de) * 1995-02-24 2006-05-18 The General Hospital Corp., Boston Neuorientierung der zellulären immunität durch rezeptorchimären
GB9526131D0 (en) 1995-12-21 1996-02-21 Celltech Therapeutics Ltd Recombinant chimeric receptors
US6576232B1 (en) 1998-04-03 2003-06-10 The Penn State Research Foundation IL13 mutants
AU766826B2 (en) 1998-07-30 2003-10-23 Government of The United States of America, as represented by The Secretary Department of Health & Human Services, The National Institutes of Health, The Thymosin beta4 promotes wound repair
WO2000023573A2 (en) 1998-10-20 2000-04-27 City Of Hope Cd20-specific redirected t cells and their use in cellular immunotherapy of cd20+ malignancies
US7560280B2 (en) 2000-11-03 2009-07-14 Kourion Therapeutics Gmbh Human cord blood derived unrestricted somatic stem cells (USSC)
US7070995B2 (en) 2001-04-11 2006-07-04 City Of Hope CE7-specific redirected immune cells
US20030171546A1 (en) 2001-04-30 2003-09-11 City Of Hope Chimeric immunoreceptor useful in treating human cancers
US7514537B2 (en) 2001-04-30 2009-04-07 City Of Hope Chimeric immunoreceptor useful in treating human gliomas
US20090257994A1 (en) * 2001-04-30 2009-10-15 City Of Hope Chimeric immunoreceptor useful in treating human cancers
US11278594B2 (en) * 2001-04-30 2022-03-22 City Of Hope Chimeric immunoreceptor useful in treating human cancers
US7317091B2 (en) 2002-03-01 2008-01-08 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
US7446190B2 (en) 2002-05-28 2008-11-04 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Nucleic acids encoding chimeric T cell receptors
ATE373904T1 (de) 2003-07-24 2007-10-15 Matsushita Electric Ind Co Ltd Verfahren, kodierer und kommunikationsvorrichtung zur kodierung von parallel verketteten daten
US20050113564A1 (en) 2003-11-05 2005-05-26 St. Jude Children's Research Hospital Chimeric receptors with 4-1BB stimulatory signaling domain
US7754441B2 (en) * 2003-11-17 2010-07-13 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of tumor of hematopoietic origin
DE102004043271A1 (de) * 2004-09-07 2006-03-09 Linde Ag Verfahren zur Synthese von Zirkoniumcarboxylaten
ES2601896T3 (es) 2004-11-24 2017-02-16 Fred Hutchinson Cancer Research Center Procedimientos de uso de la IL-21 en la inmunoterapia adoptiva y la identificación de antígenos tumorales
CA2634072A1 (en) * 2005-12-21 2007-06-28 Universite De Montreal Markers for memory t cells and uses thereof
ATE483470T1 (de) * 2005-12-21 2010-10-15 Sentoclone Ab Verfahren zur expansion tumorreaktiver t- lymphozyten zur immuntherapie von patienten mit krebs
WO2008095141A2 (en) 2007-01-31 2008-08-07 Yeda Research And Development Co. Ltd. Redirected, genetically-engineered t regulatory cells and their use in suppression of autoimmune and inflammatory disease
ES2622460T3 (es) * 2007-09-26 2017-07-06 Ucb Biopharma Sprl Fusiones de anticuerpos con doble especificidad
EP2331566B1 (en) * 2008-08-26 2015-10-07 City of Hope Method and compositions for enhanced anti-tumor effector functioning of t cells
WO2011076781A1 (en) * 2009-12-22 2011-06-30 Novartis Ag Tetravalent cd47-antibody constant region fusion protein for use in therapy
GB2481983A (en) * 2010-07-12 2012-01-18 Hart Fenton & Co Ltd A ship including a gas tank room
EP2606124A1 (en) * 2010-08-18 2013-06-26 The U.S.A. as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services Methods of identifying central memory t cells and obtaining antigen-specific t cell populations
EP2532740A1 (en) * 2011-06-11 2012-12-12 Michael Schmück Antigen-specific CD4+ and CD8+ central-memory T cell preparations for adoptive T cell therapy
EP2814846B1 (en) * 2012-02-13 2020-01-08 Seattle Children's Hospital d/b/a Seattle Children's Research Institute Bispecific chimeric antigen receptors and therapeutic uses thereof
RS61345B1 (sr) * 2012-08-20 2021-02-26 Hutchinson Fred Cancer Res Postupak i kompozicije za ćelijsku imunoterapiju
US9657105B2 (en) * 2013-03-15 2017-05-23 City Of Hope CD123-specific chimeric antigen receptor redirected T cells and methods of their use
IL308324A (en) * 2014-09-19 2024-01-01 Hope City IL13RA2-targeted chimeric antigen receptor T cells

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103492406A (zh) * 2010-12-09 2014-01-01 宾夕法尼亚大学董事会 嵌合抗原受体-修饰的t细胞治疗癌症的用途
CN103502438A (zh) * 2011-03-23 2014-01-08 弗雷德哈钦森癌症研究中心 用于细胞免疫治疗的方法和组合物

Also Published As

Publication number Publication date
JP6986190B2 (ja) 2021-12-22
IL251196A0 (en) 2017-05-29
US10676717B2 (en) 2020-06-09
US20160340649A1 (en) 2016-11-24
KR20230169455A (ko) 2023-12-15
IL251188A0 (en) 2017-05-29
NZ730208A (en) 2024-03-22
US20200318069A1 (en) 2020-10-08
CN113637640A (zh) 2021-11-12
IL251188B (en) 2022-07-01
MX2021012720A (es) 2022-01-06
JP6711819B2 (ja) 2020-06-17
RU2749922C2 (ru) 2021-06-21
JP7171871B2 (ja) 2022-11-15
AU2021277651A1 (en) 2021-12-23
BR112017005630B1 (pt) 2023-12-12
JP2020156494A (ja) 2020-10-01
WO2016044811A1 (en) 2016-03-24
JP2023052506A (ja) 2023-04-11
EP3194433A1 (en) 2017-07-26
BR112017005631A2 (pt) 2018-06-26
IL308324A (en) 2024-01-01
BR122024000360A2 (pt) 2024-02-27
EP3916084A1 (en) 2021-12-01
WO2016044853A8 (en) 2017-04-06
CN107404881B (zh) 2021-07-09
JP7216045B2 (ja) 2023-01-31
JP2022017333A (ja) 2022-01-25
CN107404881A (zh) 2017-11-28
IL280576A (en) 2021-03-25
EP3200591A1 (en) 2017-08-09
KR102610715B1 (ko) 2023-12-08
RU2017111300A (ru) 2018-10-19
ES2738705T3 (es) 2020-01-24
JP2023014100A (ja) 2023-01-26
IL251196B (en) 2021-02-28
DK3200591T3 (da) 2021-06-21
JP2017529081A (ja) 2017-10-05
CN107002084B (zh) 2021-09-10
IL292650A (en) 2022-07-01
JP2017534262A (ja) 2017-11-24
IL280576B (en) 2022-06-01
AU2024201326A1 (en) 2024-04-11
BR112017005630A2 (pt) 2018-06-26
EP3200591B1 (en) 2021-03-31
CN107002084A (zh) 2017-08-01
RU2017111300A3 (zh) 2019-09-04
IL292828A (en) 2022-07-01
JP2020100626A (ja) 2020-07-02
CA2961654A1 (en) 2016-03-24
IL292650B1 (en) 2023-12-01
AU2015317351B2 (en) 2020-07-02
KR20170054509A (ko) 2017-05-17
KR20170057351A (ko) 2017-05-24
RU2017111298A3 (zh) 2019-03-13
MX2017003596A (es) 2017-10-20
RU2017111298A (ru) 2018-10-19
IL292650B2 (en) 2024-04-01
US9914909B2 (en) 2018-03-13
MX2021006400A (es) 2021-07-15
AU2020203651A1 (en) 2020-06-25
AU2015317351A1 (en) 2017-04-06
WO2016044853A1 (en) 2016-03-24
EP3194433B1 (en) 2019-05-22
EP3200591A4 (en) 2018-04-04
MX2017003557A (es) 2017-10-12
RU2763523C2 (ru) 2021-12-30
HK1247046A1 (zh) 2018-09-21
EP3587446A1 (en) 2020-01-01
ES2876235T3 (es) 2021-11-12
US20180265844A1 (en) 2018-09-20
CA2961676A1 (en) 2016-03-24
JP6657195B2 (ja) 2020-03-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2749922C2 (ru) Т-КЛЕТКИ С КОСТИМУЛИРУЮЩИМ ХИМЕРНЫМ АНТИГЕННЫМ РЕЦЕПТОРОМ, НАЦЕЛЕННЫЕ НА IL13Rα2
AU2021202866B2 (en) Muscle-specific nucleic acid regulatory elements and methods and use thereof
AU2017248259A1 (en) Chimeric antigen receptor T cell compositions
CN110770348B (zh) 嵌合抗原受体细胞的制备及其用途
KR100999316B1 (ko) ｃＤＮＡ로부터의 비분절 네가티브 쇄 ＲＮＡ 바이러스의회수를 위한 개선된 방법
CN110856724B (zh) 包含核酸及car修饰的免疫细胞的治疗剂及其应用
CN111004330A (zh) 一种制备非洲猪瘟病毒p30、p54酵母疫苗的方法
US9458226B2 (en) Recombinant antibodies against H1N1 influenza
CN106755036A (zh) 一种细菌和抗体结合双靶向抑杀实体瘤药物的制备方法
CN106687592B (zh) 一种重组质粒、其构建的重组疟原虫及其应用
AU2022246473A1 (en) Expression vector and method
KR20200130292A (ko) Car-t 세포 및 자가면역 질환
KR20180113990A (ko) 가족성 고콜레스테롤혈증을 치료하기 위한 유전자 요법
KR101961667B1 (ko) 돼지유행성설사병 바이러스에 내성을 가지는 형질전환 복제돼지 및 이의 제조방법
CN106591208A (zh) 表达DNase I、AIF或整合有该毒素的重组单链抗体的载体菌株及该菌株的应用
AU2023202826A1 (en) Central Memory T Cells For Adoptive T Cell Therapy
CN115380112B (zh) 两个或多个靶点嵌合抗原受体基因工程载体及其应用
KR20200123459A (ko) 범용 항원 제시 세포 및 이의 용도
KR102683584B1 (ko) ＩＬ13Ｒα2를 표적화하는 공자극 키메라 항원 수용체 Ｔ 세포
CN114846141B (zh) 一种分离的核酸分子及其应用
CN108949690B (zh) 一种制备可实时检测间充质干细胞骨分化的细胞模型的方法
CN111172088B (zh) 表达her2单链抗体的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌及其功能验证方法
RU2809113C2 (ru) Универсальные антигенпрезентирующие клетки и их применения
CN112272565A (zh) 使用慢病毒基因构建体的递送的体内基因疗法
CN109082443A (zh) 一种制备可实时检测间充质干细胞向成熟肝样细胞分化的细胞模型的方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination