ES2738705T3 - Linfocitos T de receptor de antígeno quimérico coestimulante que se dirigen a IL13R 2 - Google Patents
Linfocitos T de receptor de antígeno quimérico coestimulante que se dirigen a IL13R 2 Download PDFInfo
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Abstract
Una molécula de ácido nucleico que codifica un receptor de antígeno quimérico, en donde la molécula de ácido nucleico expresa un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos de:**Fórmula**
Description
DESCRIPCIÓN
Linfocitos T de receptor de antígeno quimérico coestimulante que se dirigen a IL13R 2
Antecedentes
Se han investigado inmunoterapias basadas en linfocitos T específicos de tumor, que incluyen terapias que emplean linfocitos T manipulados, para el tratamiento antitumoral. En algunos casos, los linfocitos T usados en dichas terapias no siguen activos in vivo durante un periodo suficiente. En algunos casos, la especificidad de tumor de los linfocitos T es relativamente baja. Por tanto, existe la necesidad en la materia de terapias contra el cáncer específicas de tumor con funcionamiento antitumoral a largo plazo.
Los gliomas malignos (GM), que incluyen astrocitoma anaplásico (AA-grado III) y glioblastoma (GBM-grado IV), tienen una tasa de incidencia de aproximadamente 20.000 nuevos casos diagnosticados anualmente en los Estados Unidos. Según la Asociación Americana de Tumores Cerebrales, la prevalencia total de individuos que viven con un tumor maligno cerebral, basándose en los datos del censo de 2010 de Estados Unidos, es aproximadamente 140.000 personas. Aunque el GM es una enfermedad rara, es altamente agresiva y heterogénea con respecto a su comportamiento maligno y casi uniformemente letal. Las actuales terapias de referencia para GM de gran malignidad solo dan beneficios a corto plazo, y estos tumores cerebrales son prácticamente incurables. De hecho, incluso con las modernas técnicas quirúrgicas y radioterapéuticas, que frecuentemente agravan las morbilidades ya graves impuestas por la localización en el sistema nervioso central (SNC), las tasas de supervivencia de 5 años son bastante bajas. Además, para la mayoría de pacientes que recaen de la enfermedad, existen algunas opciones terapéuticas. Así, existe una significativa necesidad de terapias más eficaces, particularmente para los pacientes que han recaído / progresado siguiendo las terapias de vanguardia, y se garantiza la participación de esta población de pacientes en ensayos clínicos.
La terapia adoptiva de linfocitos T (ACT) utilizando linfocitos T manipulados de receptor de antígeno quimérico (CAR) puede proporcionar una forma segura y eficaz para reducir las tasas de reaparición de GM, puesto que los linfocitos T de CAR se pueden manipular para reconocer específicamente poblaciones de tumores antigénicamente distintas (Cartellieri et al. 2010 J Biomed Biotechnol 2010:956304; Ahmed et al. 2010 Clin Cancer Res 16:474; Sampson et al.
2014 Clin Cancer Res 20:972; Brown et al. 2013 Clin Cancer Res 201218:2199; Chow et al. 2013 Mol Ther 21:629), y los linfocitos T pueden migrar a través del parénquima cerebral para dirigirse a y destruir células malignas infiltrantes (Hong et al. 2010 Clin Cancer Res 16:4892; Brown et al. 2007 J Immunol 179:3332; Hong et al. 2010 Clin Cancer Res 16:4892; Yaghoubi 2009 Nat Clin Pract Oncol 6:53). Estudios preclínicos han demostrado que los linfocitos T de CAR+ que se dirigen a IL13Ra2 presentan potente actividad citolítica específica de IL13Ra2 independiente del complejo mayor de histocompatibilidad (MHC) contra tanto células de tipo células madre como células de glioma diferenciadas, e inducen la regresión de los xenoinjertos in vivo de glioma establecidos (Kahlon et al. 2004 Cancer Res 64:9160; Brown et al. 2012 Clin Cancer Res 18:2199). Kong S et al. describen en Clin Cancer Res, vol. 18, no. 21, de 1 noviembre de 2012 en las páginas 5949-5960, la supresión de xenoinjertos de glioma humano con linfocitos T modificados con receptor de antígeno quimérico específico de IL13R de segunda generación. Jonnalagadda M et al. describen en Journal for Immunotherapy of Canc vol. 1, N° Supl. 1, 7 de noviembre de 2013 en la página P18, que los receptores de antígeno quimérico que incorporan mutaciones en la región Fc de espaciador de IgG4 para eliminar el reconocimiento de receptor de Fc da como resultado la persistencia mejorada de linfocitos T de CAR y eficacia antitumoral. El documento WO 2010/025177 A1 describe que la integración de los dominios de señalización coestimulantes dentro de un receptor de antígeno quimérico que se dirige a tumor, tal como la IL13-zetakina específica de IL13Ra2, potencia las respuestas mediadas por linfocitos T contra tumores incluso en ausencia de ligandos expresados para receptores coestimulantes.
Sumario
La presente invención se define por las reivindicaciones independientes. Las reivindicaciones dependientes representan otras realizaciones de la invención.
En el presente documento se describen inmunorreceptores de transmembrana quiméricos (receptores de antígeno quimérico o "CARs") que comprenden un dominio extracelular, una región transmembrana y un dominio de señalización intracelular. El dominio extracelular está constituido por un ligando de IL-13 que se une a interleucina-13Ra2 (IL13Ra2) y, opcionalmente, un espaciador, que comprende, por ejemplo un dominio Fc de porción huma. La porción transmembrana incluye un dominio transmembrana CD4, un dominio transmembrana CD8, un dominio transmembrana CD28, un dominio transmembrana CD3 o un dominio transmembrana 4-1BB. El dominio de señalización intracelular incluye el dominio de señalización de la cadena zeta del complejo CD3 humano (CD3Z) y uno o más dominios coestimulantes, por ejemplo, un dominio coestimulante 4-1BB. El dominio extracelular permite que CAR, cuando se expresa sobre la superficie de un linfocito T, dirija la actividad de linfocitos T a las células que expresan IL13Ra2, un receptor expresado en la superficie de células tumorales, que incluye glioma. Y, lo que es más importante, la porción de unión de IL13Ra2 del CAR incluye una modificación de aminoácidos, tal como una mutación E13Y, que aumenta la especificidad de unión. La inclusión de un dominio coestimulante, tal como el dominio coestimulante 4-1BB (CD137) en series con CD3Z en la región intracelular permite que el linfocito T reciba señales coestimulantes. Los linfocitos T, por ejemplo, linfocitos T autólogos específicos de paciente, se pueden
manipular para expresar los CARs descritos en el presente documento y se pueden expandir las células manipuladas y usar en ACT. Se pueden usar diversos subconjuntos de linfocitos T. Además, el CAR se puede expresar en otras células inmunitarias tales como linfocitos NK. Si un paciente se trata con una célula inmunitaria que expresa un CAR descrito en el presente documento, la célula puede ser un linfocito T autólogo o alógeno. En algunos casos, las células usadas son linfocitos T de memoria central CD4+ y CD8+ (Tcm), que son CD45RO+CD62L+, y el uso de dichas células puede mejorar la persistencia a largo plazo de las células después de la transferencia adoptiva en comparación con el uso de otros tipos de linfocitos T específicos de paciente.
En el presente documento se describe una molécula de ácido nucleico que codifica un receptor de antígeno quimérico (CAR)r, en donde el receptor de antígeno quimérico comprende: IL-13 humana o una variante de la misma que tiene 1-10 (por ejemplo, 1 o 2) modificaciones de aminoácidos; un dominio transmembrana seleccionado de: un dominio transmembrana CD4 o variante del mismo que tiene 1-10 (por ejemplo, 1 o 2) modificaciones de aminoácidos, un dominio transmembrana CD8 o variante del mismo que tiene 1-10 (por ejemplo, 1 o 2) modificaciones de aminoácidos, un dominio transmembrana CD28 o una variante del mismo que tiene 1-10 (por ejemplo, 1 o 2) modificaciones de aminoácidos, y un dominio transmembrana CD3Z o una variante del mismo que tiene 1 -10 (por ejemplo, 1 o 2) modificaciones de aminoácidos; un dominio coestimulante; y dominio de señalización CD3Z o una variante del mismo que tiene 1 -10 (por ejemplo, 1 o 2) modificaciones de aminoácidos.
En diversos ejemplos, el dominio coestimulante se selecciona del grupo que consiste en: un dominio coestimulante CD28 o una variante del mismo que tiene 1-10 (por ejemplo, 1 o 2) modificaciones de aminoácidos, un dominio coestimulante 4-1BB o una variante del mismo que tiene 1 -10 (por ejemplo, 1 o 2) modificaciones de aminoácidos y un dominio coestimulante OX40 o una variante del mismo que tiene 1-10 (por ejemplo, 1 o 2) modificaciones de aminoácidos. En ciertos ejemplos, un dominio coestimulante 4-1BB o una variante del mismo que tiene 1-10 (por ejemplo, 1 o 2) modificaciones de aminoácidos si está presente.
En algunas realizaciones: la molécula de ácido nucleico expresa un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada de SEQ ID NOs: 10; el receptor de antígeno quimérico comprende una región IL-13/IgG4/CD4t/4-1BB que comprende el aminoácido de SEQ ID NO: 11 y un dominio de señalización CD3Z que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 7; y el receptor de antígeno quimérico comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NOs: 10.
También se desvela una población de linfocitos T humanos transducidos por un vector que comprende un casete de expresión que codifica un receptor de antígeno quimérico, en donde el receptor de antígeno quimérico comprende: IL-13 humana o una variante de la misma que tiene 1-10 modificaciones de aminoácidos; un dominio transmembrana seleccionado de: un dominio transmembrana CD4 o variante del mismo que tiene 1-10 modificaciones de aminoácidos, un dominio transmembrana CD8 o variante del mismo que tiene 1 -10 modificaciones de aminoácidos, un dominio transmembrana CD28 o una variante del mismo que tiene 1-10 modificaciones de aminoácidos, y un dominio transmembrana CD3Z o una variante del mismo que tiene 1-10 modificaciones de aminoácidos; un dominio coestimulante; y dominio de señalización CD3Z de una variante del mismo que tiene 1-10 modificaciones de aminoácidos.
También se describe una composición para su uso en el tratamiento de cáncer en un paciente que comprende administrar una población de linfocitos T humanos autólogos o alógenos (por ejemplo, linfocitos T autólogos o alógenos que comprenden células Tcm, por ejemplo, al menos 20 %, 30 %, 40 %, 50 % 60 %, 70 %, 80 % de las células son células Tcm; al menos 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 35 % de las células Tcm son CD4+ y al menos 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 35 % de las células Tcm son células CD8+) transducidos por un vector que comprende un casete de expresión que codifica un receptor de antígeno quimérico, en donde el receptor de antígeno quimérico comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada de SEQ ID NOs: 10, 31-48 y 52. En diversas realizaciones: la población de linfocitos T humanos comprende linfocitos T de memoria central; el cáncer es glioblastoma; y los linfocitos T humanos transducidos se prepararon por un método que comprende obtener linfocitos T del paciente, tratar los linfocitos T para aislar linfocitos T de memoria central, y transducir al menos una porción de los linfocitos de memoria central con un vector viral que comprende un casete de expresión que codifica un receptor de antígeno quimérico, en donde el receptor de antígeno quimérico comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada de SEQ ID NO: 10.
También se describe: una molécula de ácido nucleico que codifica un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos 95 % idéntica a una secuencia de aminoácidos seleccionada de SEQ ID NO: 10 y SEQ ID NOs: 10, 31-48 y 52; una molécula de ácido nucleico que codifica un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos que es idéntica a una secuencia de aminoácidos seleccionada de s Eq ID NO: 10, 31-48 y 52, excepto por la presencia de no más de 5 sustituciones, deleciones o inserciones de de aminoácidos; una molécula de ácido nucleico que codifica un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos que es idéntica a una secuencia de aminoácidos seleccionada de SEQ ID NO: 10 y SEQ ID NOs: 10, 31-48 y 52, excepto por la presencia de no más de 5 sustituciones de aminoácidos; y una molécula de ácido nucleico que codifica un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos que es idéntica a una secuencia de aminoácidos seleccionada de SEQ ID NO: 10 y SEQ ID NOs: 10, 31-48 y 52, excepto por la presencia de no más de 2 sustituciones de aminoácidos.
Ciertos CAR descritos en el presente documento, por ejemplo, el CAR de IL13(EQ)BBZ y el CAR de IL13(EQ)CD28-BBZ, tienen ciertas características beneficiosas en comparación con ciertos otros CAR dirigidos a IL13. Por ejemplo, tienen selectividad mejorada por IL13Ra, provocan mejor producción de citocinas Th2, particularmente menor producción de IL13.
Los linfocitos T que expresan un CAR que se dirige a IL13Ra2 pueden ser útiles en el tratamiento de cánceres tales como glioblastoma, así como otros cánceres que expresan IL13Ra2 que incluyen, pero no se limitan a, meduloblastoma, cáncer de mama, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de riñón, cáncer de ovario y sarcoma de Kaposi. Así, la presente divulgación incluye composiciones para su uso en el tratamiento de cáncer usando linfocitos T que expresan un CAR descrito en el presente documento.
La presente divulgación también moléculas de ácidos nucleicos que codifican cualquiera de los CARs descritos en el presente documento (por ejemplo, vectores que incluyen una secuencia de ácidos nucleicos que codifica uno de los CARs) y linfocitos T aislados que expresan cualquiera de los CARs descritos en el presente documento.
Los CAR descritos en el presente documento pueden incluir una región de espaciador situada entre el dominio de IL13 y el dominio transmembrana. Se puede usar una variedad de diferentes espaciadores. Algunos de ellos incluyen al menos la porción de una región Fc humana, por ejemplo una porción de bisagra de una región Fc humana o un dominio CH3 o sus variantes. La Tabla 1 a continuación proporciona diversos espaciadores que se pueden usar en los CARs descritos en el presente documento.
Tabla 1: Ejemplos de espaciadores
Algunas regiones de espaciador incluyen toda o parte de una región bisagra de la inmunoglobulina (por ejemplo, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4), es decir, la secuencia que se encuentra entre los dominios CH1 y CH2 de una inmunoglobulina, por ejemplo, una bisagra de Fc de IgG4 o una bisagra de CD8. Algunas regiones de espaciador incluyen un dominio CH3 de inmunoglobulina o tanto un dominio CH3 como un dominio CH2. Las secuencias derivadas de inmunoglobulina pueden incluir una o más modificaciones de aminoácidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4 o 5 sustituciones, por ejemplo, sustituciones que reducen la unión inespecífica.
Una "modificación de aminoácidos" se refiere a una sustitución, inserción y/o deleción de aminoácidos en una secuencia de proteínas o péptidos. Una "sustitución de aminoácidos" o "sustitución" se refiere a la sustitución de un aminoácido en una posición particular en una secuencia de péptidos o proteínas original con otro aminoácido. Se puede hacer una sustitución para cambiar un aminoácido en la proteína resultante en un modo no conservativo (es decir, cambiando el codón de un aminoácido que pertenece a una agrupación de aminoácidos que tiene un tamaño o característica particular a un aminoácido que pertenece a otra agrupación) o en un modo conservativo (es decir, cambiando el codón de un aminoácido que pertenece a una agrupación de aminoácidos que tiene un tamaño o característica particular a un aminoácido que pertenece a la misma agrupación). Dicho cambio conservativo conduce generalmente a menos cambio en la estructura y función de la proteína resultante. Lo siguiente son ejemplos de diversas agrupaciones de aminoácidos: 1) Aminoácidos con grupos R no polares: Alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina, triptófano, metionina; 2) Aminoácidos con grupos R polares sin carga: Glicina, serina, treonina, cisteína, tirosina, asparagina, glutamina; 3) Aminoácidos con grupos R con carga polar (negativamente cargados a pH 6,0): Ácido aspártico, ácido glutámico; 4) Aminoácidos básicos (positivamente cargados a pH 6,0): Lisina, arginina, histidina (a pH 6,0). Otra agrupación puede ser los aminoácidos con grupos fenilo: Fenilalanina, triptófano y tirosina.
El primer aminoácido en el espaciador IgG4(L235E, N297Q) en la Tabla 1 es 219 y el primer aminoácido en el espaciador IgG4(HL-CH3) en la Tabla 1 es 219 ya que es el primer aminoácido en la secuencia de bisagra de IgG y la secuencia del conector de bisagra de IgG4 (HL) en la Tabla 1
Para posiciones de aminoácidos en la inmunoglobulina tratada en el presente documento, la numeración es según el índice EU o el esquema de numeración EU (Kabat et al. 1991 Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5a Ed., United States Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, incorporado por este documento
completamente como referencia). El índice EU o índice EU como en el esquema de numeración de Kabat o EU se refiere a la numeración de EU Antibody (Edelman et al. 1969 Proc Natl Acad Sci USA 63:78-85).
Se puede usar una variedad de dominios transmembrana en CAR dirigidos contra IL13Ra2. La Tabla 2 incluye ejemplos de dominios transmembrana adecuados. Si un dominio de espaciador está presente, el dominio transmembrana se localiza en el extremo carboxi con respecto al dominio de espaciador.
Tabla 2: Ejemplos de dominios transmembrana
Muchas de los CAR descritos en el presente documento incluyen uno o más (por ejemplo, dos) dominios coestimulantes. El (Los) dominio(s) coestimulante(s) se sitúan entre el dominio transmembrana y el dominio de señalización CD3Z. La Tabla 3 incluye ejemplos de dominios coestimulantes adecuados junto con la secuencia del dominio de señalización CD3Z.
Tabla 3: Ejemplos de dominios coestimulantes
Descripción de dibujos
La Figura 1 es una representación esquemática de CAR de IL13(E13Y)-zetakina (izquierda) compuesto de la variante de IL-13 humana específica de IL13Ra2 (huIL-13(E13Y)), espaciador de Fc de IgG4 humana (huY4Fc), transmembrana CD4 humana (huCD4 tm) y porciones citoplásmicas de la cadena CD3Z humana (huCD3Z cit) como se indica. También se representa un CAR de IL13(EQ)BBZ que es el mismo que IL13(E13Y)-zetakina con la excepción de las dos mutaciones puntuales, L235E y N297Q indicadas en rojo, que se sitúan en el dominio CH2 del espaciador de IgG4, y la adición de un dominio citoplásmico coestimulante 4-1BB (4-1BB cit).
Las Figuras 2A-C representan ciertos vectores y marcos de lectura abiertos. A es un diagrama del marco de lectura abierto de ADNc de la construcción IL13(EQ)BBZ-T2ACD19t de 2670 nucleótidos, donde se indican el ligando específico de IL13Ra2 IL13(E13Y), dominios de bisagra de Fc de IgG4(EQ), transmembrana CD4, de señalización citoplásmica de 4-1BB, de conector de tres glicinas y de señalización citoplásmica CD3Z del CAR de IL13(EQ)BBZ, así como las secuencias de salto de ribosoma T2A y de CD19 truncado. También se indican el receptor alfa de GM-CSF humano y las secuencias señal de CD19 que conducen la expresión superficial del CAR de IL13(EQ)BBZ y CD19t. B es un diagrama de las secuencias flanqueadas por repeticiones terminales largas (indicadas por 'R') que se integrarán en el genoma hospedador. C es un mapa del plásmido IL13(EQ)BBZ-T2A-CD19t_epHIV7.
La Figura 3 representa la construcción de pHIV7.
La Figura 4 representa los elementos de pHIV7.
La Figura 5 representa un esquema de producción para Tcm IL13(EQ)BBZ/CD19t+.
Las Figuras 6A-C representan los resultados del análisis de citometría de flujo de la expresión de marcadores de transgenes superficiales y de linfocitos T. Se co-tiñeron Tcm IL13(EQ)BB^/CD19t+ HD006.5 y HD187.1 con anti-IL13-PE y anti-CD8-FITC para detectar células de CAR+ CD8+ y CAR+ CD4+ (es decir, CD8 negativas) (A), o anti-CD19-PE y anti-CD4-FITC para detectar células CAR+ CD4+ CD19t+ y CD8+ (es decir, CD4 negativas) (B). Se tiñeron Tcm IL13(EQ)BBZ/CD19t+ HD006.5 y HD187.1 con anti-CD3, TCR, CD4, CD8, CD62L y CD28 conjugados con fluorocromo (histogramas grises) o controles de isotipo (histogramas negros) (C). En todos los casos los porcentajes basados en linfocitos viables (DAPI negativo) tiñeron el isotipo anterior.
Las Figuras 7A-B representan la caracterización funcional in vitro de la función efectora específica de IL13Ra2 de Tcm IL13(EQ)BBZ+. Se usaron Tcm IL13(EQ)BBZ/CD19t+ HD006.5 y HD187.1 como efectores en un ensayo de liberación de 51Cr de 6 horas usando una relación 10:1 de E:D basada en la expresión de CD19t. Se manipularon con K562 las dianas de tumor IL13Ra2-positivas para expresar IL13Ra2 (K562-IL13Ra2) y la línea de glioma primario PBT030-2, y el control de dianas de tumor IL13Ra2-negativas fue la línea parental K562 (A). Se evaluaron Tcm IL13(EQ)BBZ/CD19t+ HD006.5 y HD187.1 para la producción de citocinas dependientes de antígeno siguiendo el cultivo durante la noche a una relación 10:1 de E:D con dianas IL13Ra2-positivas y negativas. Se midieron los niveles de citocinas usando el kit de ensayo de citocinas humanas TH1/TH2 de Bio-Plex Pro y se informan INF-y (B).
Las Figuras 8A-C representan el resultado de estudios que demuestran la regresión de xenoinjertos de tumor de glioma establecidos después de la transferencia adoptiva de Tcm IL13(EQ)BB^/CD19t+. Se implantaron estereotácticamente células tumorales PBT030-2 EGFP-ffLuc+ (1x105) en el prosencéfalo derecho de ratones NSG. En el día 5, los ratones recibieron o bien 2x106 Tcm IL13(EQ)BB^/CD19t+ (1,1x106 CAR+; n=6), 2x106 Tcm simuladas (sin CAR; n=6) o bien PBS (n=6). Ratones representativos de cada grupo que muestran carga tumoral relativa usando Xenogen Living Imagen (A). La cuantificación de flujo de ffLuc (fotones/s) muestra que Tcm IL13(EQ)BBZ/CD19t+ induce la regresión tumoral en comparación con Tcm transducidas con vector vacío y PBS (#p<0,02, *p<0,001, ANOVA de medidas repetidas) (B). Curva de supervivencia de Kaplan Meier (n=6 por grupo) que demuestra supervivencia significativamente mejorada (p=0,0008; prueba del orden logarítmico) para ratones tratados con Tcm IL13(EQ)BB^/CD19t+ (C)
Las Figuras 9A-C representan los resultados de estudios que comparan la eficacia antitumoral de Tcm IL13(EQ)BBZ y clones de CTL IL13-zetakina. Se implantaron estereotácticamente TSs de PBT030-2 EGFP-ffLuc+ (1x105) en el prosencéfalo derecho de ratones NSG. En el día 8, los ratones recibieron o bien 1,6x106 de Tcm simuladas (sin CAR), 1,0x106 Tcm CAR+ IL13(EQ)BBZ (1,6x106 linfocitos T totales; 63 % CAR), 1,0x106 CTL CD8+ IL13-zetakina cl.
2D7 (CAR+ clonal), o sin tratamiento (n=6 por grupo). Ratones representativos de cada grupo que muestran carga tumoral relativa usando Xenogen Living Imagen (A). Líneas de regresión lineal del logaritmo natural del flujo de ffLuc (fotones/s) con el tiempo, los valores de p son para el grupo por comparaciones de interacción temporal (B). Los análisis de supervivencia de Kaplan Meier (n= 6 por grupo) demuestran supervivencia significativamente mejorada (p=0,02; prueba del orden logarítmico) para ratones tratados con Tcm IL13(EQ)BBZ en comparación con CTL CD8+ IL13-zetakina cl. 2D7 (C).
Las Figuras 10A-C representan los resultados de estudios que comparan la eficacia antitumoral de Tcm IL13(EQ)BBZ y clones de CTL IL13-zetakina. Se implantaron estereotácticamente TSs de PBT030-2 EGFP-ffLuc+ (1x105) en el prosencéfalo derecho de ratones NSG. En el día 8, los ratones recibieron o bien 1,3x106 de TCM simuladas (sin CAR; n=6), 1,0, 0,3 o 0,1x106 Tcm CAR+ IL13(EQ)BBZ (78 % de CAR+; n=6-7), 1,0, 0,3 o 0,1x106 CTL CD8+ IL13-zetakina cl. 2D7 (CAR+ clonal; n=6-7), o sin tratamiento (n=5). Obtención de imágenes xenógenas de ratones representativos de cada grupo que muestran carga tumoral relativa (A). Las líneas de regresión lineal del logaritmo natural del flujo de ffLuc (fotones/s) muestran que Tcm IL13(EQ)BBZ logra regresión tumoral superior en comparación con CTL IL13-zetakina cl. 2D7 de primera generación, Tcm simuladas y tumor solo (B). Flujo promedio por grupo en el día 27 después de la inyección tumoral que demuestra que la dosis de 0,1x106 Tcm IL13(EQ)BBZ supera la dosis de 1,0x106 diez veces mayor de CTL CD8+ IL13-zetakina cl. 2D7 (p = 0,043; prueba de la t de Welch de dos muestras) (C).
La Figura 11 representa los resultados de estudios que demuestran que Tcm IL13(EQ)BBZ muestran persistencia mejorada en comparación con clones de CTL IL13-zetakina. La inmunohistoquímica de CD3 evalúa la persistencia de linfocitos T en el sitio tumoral 7 días después de la infusión de linfocitos T. Se detectan números significativos de linfocitos T para Tcm IL13(EQ)BBZ (panel superior). Por el contrario, se detectan muy pocos linfocitos T CD3+ IL13-zetakina viables (panel inferior).
Las Figuras 12A-D representan los resultados de experimentos que comparan la vía de administración de linfocitos T de CAR+ (i.c. frente a i.v.) para grandes tumores establecidos. Se implantaron TSs de PBT030-2 EGFP-ffLuc+ (1x105) en el prosencéfalo derecho de ratones NSG. En los días 19 y 26, los ratones se inyectaron i.v. a través de la vena de la cola con o bien 5x106 Tcm de CAR+ IL13(EQ)BBZ+ (11,8x106 células totales; n=4), o Tcm simuladas (11,8x106 células; n=4). Alternativamente, en los días 19, 22, 26 y 29, los ratones se inyectaron i.c. con o bien 1x106 Tcm de CAR+ IL13(eQ)BBZ+ (2,4x106 células totales; n=4), o Tcm simuladas (2,4x106 células; n=5). El flujo de ffLuc promedio (fotones/s) con el tiempo muestra que Tcm IL13(EQ)BBZ administrados i.c. median en la regresión tumoral de tumores de día 19. Por comparación, linfocitos T administrados i.v. no muestran reducción en la carga tumoral en comparación con los controles de Tcm no tratados o simuladas (A). La curva de supervivencia de Kaplan Meier demuestra la mejorada supervivencia para ratones tratados con Tcm IL13(EQ)BBZ i.c. en comparación con ratones tratados con Tcm de CAR+ administrados i.v. (p = 0,0003, prueba del rango logarítmico) (B). H&E representativa y IHC de CD3 de ratones tratados i.v. (C) frente a i.c. (D) con Tcm IL13(EQ)BBZ+. Solo se detectaron linfocitos T CD3+ en el grupo tratado i.c., sin detectarse células CD3+ en el tumor o parénquima cerebral circundante para ratones tratados i.v.
Las Figuras 13A-B representan los resultados de estudios que muestran que el linfocito T de CAR+ inyectado intracranealmente, bien intratumoral (i.c.t.) o intraventricular (i.c.v.), puede circular a tumores en el hemisferio opuesto. Se implantaron estereotácticamente TSs de PBT030-2 EGFP-ffLuc+ (1x105) en los prosencéfalos derecho e izquierdo de ratones NSG. En el día 6, los ratones se inyectaron i.c. en el sitio tumoral derecho con 1,0x106 Tcm IL13(EQ)BBZ+ (1,6x106 células totales; 63 % CAR; n=4). Esquema del modelo experimental de glioma multifocal (A) . IHC de CD3 que muestra la infiltración de linfocitos T tanto en los sitios tumorales derechos como izquierdos (B) .
Las Figuras 14A-C representan los resultados de una serie de estudios que evalúan los dominios coestimulantes de CAR específico de IL13Ra2. Esquema de construcciones de CAR específicas de IL13Ra2 que comparan diversos dominios de endo/señalización intracelular, que incluyen el CAR de CD3z de primera generación que carece de coestimulación, frente a los CARs de segunda generación que incorporan o bien 4-1BB o bien CD28, frente a un CAR de tercera generación que contiene tanto CD28 como 4-1BB. Todos los casetes de CAR también contienen las secuencias de salto de ribosoma T2A y de CD19 truncado (CD19t) como marcador para células transducidas (A). Se transdujeron lentiviralmente Tcm de CD4 y CD8 y se enriquecieron inmunomagnéticamente linfocitos T que expresan CAR mediante anti-CD19. Niveles de expresión de CD19 e IL13 (es decir, CAR) como se miden por citometría de flujo (B). Se determinó la estabilidad de cada construcción de CAR dividiendo la intensidad media de fluorescencia (IMF) de CAR (IL13) entre la del marcador de transducción (CD19t) (C). Los CARs que contienen 4 1 BB demostraron los niveles de expresión más bajos en comparación con el marcador de transducción de CD19t.
Las Figuras 15A-B representan los resultados de estudios que demuestran que CAR específico de IL13Ra2 que contiene el dominio coestimulante 4-1BB produce menos citocinas Th1 y Th2. Se determinó la capacidad de los linfocitos T transducidos con vector vacío o que expresan CAR indicados para destruir dianas de células tumorales PBT030-2 que expresan IL13Ra2 en un ensayo de liberación de 51Cr de 4 horas en las relaciones efectoras:diana indicadas. Se representan el % medio de liberación de cromo D.E. de pocillos triplicados (A). Como era de esperar, los linfocitos T transducidos con vector vacío no lisaron eficientemente las dianas. A diferencia, todos los linfocitos T que expresan CAR lisaron las células tumorales de una manera similar. Los linfocitos T transducidos con vector vacío o que expresan CAR indicados se co-cultivaron durante la noche con células tumorales PBT030-2 que expresan IL13Ra2 a una relación 10:1 y se analizaron los sobrenadantes para niveles de IL-13 y IFN-y por matriz citométrica de perlas (B). Se presentan la media D.E. de pocillos triplicados. De forma interesante, los linfocitos T que expresan los CARs de zeta, 41BB-zeta o CD28-41BB-zeta presentaron menor producción de citocinas estimuladas por antígeno que los linfocitos T que expresan el CAR de CD28-zeta.
Las Figuras 16A-C representan los resultados de una serie de estudios de la eficacia in vivo de CARs específicos de IL13Ra2. Ratones NSG recibieron una inyección intracraneal de células tumorales PBT030-2 ffLuc+ en el día 0, y se aleatorizaron en 6 grupos (n = 9-10 ratones por grupo) para el tratamiento i.c. con o bien PBS (Tumor solo), linfocitos T transducidos con vector vacío o linfocitos T que expresan el CAR específico de IL13Ra2 indicado en el día 8. Entonces se llevó a cabo la obtención de imágenes de bioluminiscencia cuantitativa para monitorizar el crecimiento tumoral con el tiempo. Imágenes de bioluminiscencia para ratones representativos en cada grupo (A). Media E.E. de los niveles de flujo total de actividad de luciferasa con el tiempo en cada grupo (B). Niveles de flujo para cada ratón en el día 27. Todos los grupos tratados con linfocitos T de CAR específicos de IL13Ra2, excepto los tratados con linfocitos T que expresan CD28-CAR, muestran reducción estadísticamente significativa en el volumen del tumor en comparación con los ratones tratados con linfocitos T transducidos con vector vacío (C)
La Figura 17 representa la secuencia de aminoácidos de IL13(EQ)BB /^CD19t+ (SEQ ID NO: 10).
La Figura 18 representa una comparación de secuencias de IL13(EQ)41BBZ[IL13{EQ}41BBZ T2A-CD19t_epHIV7; pF02630] (SEQ ID NO: 12) y CD19Rop_epHIV7 (pJ01683) (SEQ ID NO: 13).
La Figura 19 representa la secuencia de aminoácidos de IL13(EmY)-CD8h3-CD8tm2-41BB Zeta (SEQ ID NO: 31 con péptido señal GMSCFRa; SEQ ID NO: 39 sin péptido señal GMSCFRa).
La Figura 20 representa la secuencia de aminoácidos de IL13(EmY)-CD8h3-CD28tm-CD28gg-41BB-Zeta (SEQ ID NO: 32 con péptido señal GMSCFRa; SEQ ID NO: 40 sin péptido señal GMSCFRa).
La Figura 21 representa la secuencia de aminoácidos de IL13(EmY)-IgG4(HL-CH3)-CD4tm-41BB-Zeta (SEQ ID NO: 33 con péptido señal GMSCFRa; SEQ ID NO: 41 sin péptido señal GMSCFRa).
La Figura 22 representa la secuencia de aminoácidos de IL13(EmY)-IgG4(L235E,N297Q)-CD8tm-41BB-Zeta (SEQ ID NO: 34 con péptido señal GMSCFRa; SEQ ID NO: 42 sin péptido señal GMSCFRa).
La Figura 23 representa la secuencia de aminoácidos de IL13(EmY)-Conector-CD28tm-CD28gg-41BB-Zeta (SEQ ID NO: 35 con péptido señal GMSCFRa; SEQ ID NO: 43 sin péptido señal GMSCFRa).
La Figura 24 representa la secuencia de aminoácidos de IL13(EmY)-HL-CD28m-CD28gg-41BB-Zeta (SEQ ID NO: 36 con péptido señal GMSCFRa; SEQ ID NO: 44 sin péptido señal GMSCFRa).
La Figura 25 representa la secuencia de aminoácidos de IL13(EmY)-IgG4(HL-CH3)-CD28tm-CD28gg-41BB-Zeta (SEQ ID NO: 37 con péptido señal GMSCFRa; SEQ ID NO: 45 sin péptido señal GMSCFRa).
La Figura 26 representa la secuencia de aminoácidos de IL13(EmY) IgG4(L235E,N297Q)-CD28tm-CD28gg-41BB-Zeta (SEQ ID NO: 38 con péptido señal GMSCFRa; SEQ ID NO: 46 sin péptido señal GMSCFRa).
La Figura 27 representa la secuencia de aminoácidos de IL13(EmY)-CD8h3-CD8tm-41BB Zeta (SEQ ID NO: 47 con péptido señal GMSCFRa; SEQ ID NO: 48 sin péptido señal GMSCFRa).
Descripción detallada
A continuación se describe la estructura, construcción y caracterización de diversos receptores de antígeno quimérico específicos de IL13Ra2. Un antígeno quimérico (CAR) es una biomolécula recombinante que contiene, como mínimo, un dominio de reconocimiento extracelular, una región transmembrana y un dominio de señalización intracelular. El término "antígeno", por tanto, no se limita a moléculas que se unen a anticuerpos, sino a cualquier molécula que se puede unir específicamente a una diana. Por ejemplo, un CAR puede incluir un ligando que se une específicamente a un receptor de la superficie celular. El dominio de reconocimiento extracelular (también denominado el dominio extracelular o simplemente por el elemento de reconocimiento que lo contiene) comprende un elemento de reconocimiento que se une específicamente a una molécula presente sobre la superficie celular de una célula diana. La región transmembrana ancla el CAR a la membrana. El dominio de señalización intracelular comprende el dominio de señalización de la cadena zeta del complejo CD3 humano y opcionalmente comprende uno o más dominios de señalización coestimulantes. Los CARs se pueden tanto unir al antígeno como transducir la activación de linfocitos T, independiente de la restricción por MHC. Así, los CARs son inmunorreceptores "universales" que pueden tratar una población de pacientes con tumores de antígeno positivo independientemente de su genotipo de HLA. La inmunoterapia adoptiva usando linfocitos T que expresan un CAR específico de tumor puede ser una poderosa estrategia terapéutica para el tratamiento de cáncer.
Un CAR específico de IL13Ra2 descrito en el presente documento se denomina IL13(EQ)BBZ. Este CAR incluye una variedad de características importantes que incluyen: un ligando de IL13a2 que tiene un cambio de aminoácido que mejora la especificidad de unión a IL13a2; el dominio de CD137 (4-1BB) en serie con CD3Z para proporcionar coestimulación beneficiosa; y una región Fc de IgG4 que está mutada en dos sitios dentro de la región CH2 (L235E; N297Q) de un modo que reduce la unión por receptores de Fc (FcRs). Otros CARs descritos en el presente documento contienen un segundo dominio coestimulante.
En algunos casos, los CAR descritos en el presente documento, que incluyen el CAR IL13(EQ)BBZ, se pueden producir usando un vector en el que el marco de lectura abierto del CAR va seguido por una secuencia de salto de ribosoma T2A y un CD19 truncado (CD19t), que carece de la cola de señalización citoplásmica (truncada en el aminoácido 323). En esta disposición, la co-expresión de CD19t proporciona un marcador superficial inerte no inmunogénico que permite la precisa medición de células modificadas por genes, y permite la selección positiva de células modificadas por genes, así como el eficiente tráfico de células y/u obtención de imágenes de los linfocitos T terapéuticos in vivo siguiendo transferencia adoptiva. La co-expresión de CD19t proporciona un marcador para el direccionamiento inmunológico de las células transducidas in vivo usando anticuerpos y/o reactivos de inmunotoxina clínicamente disponibles para delecionar selectivamente las células terapéuticas, y así funcionar como un cambio suicida.
Los gliomas expresan receptores de IL13, y en particular, receptores de IL13 alta afinidad. Sin embargo, a diferencia del receptor de IL13, las células de glioma expresan en exceso una cadena de IL13Ra2 única capaz de unirse a
IL13 independientemente del requisito para IL4Rp o yc44. Al igual que su IL4 homólogo, IL13 tiene actividad inmunorreguladora pleotrópica fuera del SNC. Tanto IL13 como IL4 estimulan la producción de IgE por linfocitos B y suprimen la producción pro-inflamatoria de citocinas por macrófagos.
Estudios detallados usando autorradiografía con IL13 radiomarcada han demostrado la abundante unión de IL13 en casi todos los tejidos malignos de glioma estudiados. Esta unión es altamente homogénea dentro de secciones tumorales y en el análisis de células individuales. Sin embargo, el análisis con sonda molecular específico para ARNm de IL13Ra2 no detectó la expresión del receptor específico de glioma por elementos cerebrales normales y la autorradiografía con IL13 radiomarcada tampoco pudo detectar la unión de IL13 específica en el SNC normal. Estos estudios sugieren que el receptor de IL13Ra1/IL4p/Yc compartido no se expresa detectablemente en el SNC normal. Por tanto, IL13Ra2 es una diana de la superficie celular muy específica y es una diana adecuada para un CAR diseñado para el tratamiento de un glioma.
La unión de moléculas terapéuticas basadas en IL13 al complejo de receptor IL13Ra 1/IL4p/Yc ampliamente expresado, sin embargo, tiene el potencial de mediar en toxicidades no deseadas a tejidos normales fuera del SNC, y así limita la administración sistémica de estos agentes. Una sustitución de aminoácidos en la hélice A de IL13-alfa en el aminoácido 13 de tirosina por el ácido glutámico nativo reduce selectivamente la afinidad de IL13 en el receptor IL13Ra 1/IL4p/Yc. La unión de este mutante (denominado IL13(E13Y)) a IL13Ra2, sin embargo, aumentó con respecto a IL13 no mutante. Así, este análogo de IL13 mínimamente alterado aumenta simultáneamente la especificidad y afinidad de IL13 por células de glioma. Por tanto, los CAR descritos en el presente documento incluyen una IL13 que contiene una mutación (E a Y o E a algún otro aminoácido tal como K o R o L o V) en el aminoácido 13 (según la numeración de Debinski et al. 1999 Clin Cancer Res 5:3143s). También se puede usar la IL13 que tiene la secuencia natural, sin embargo, y puede ser útil, particularmente en situaciones donde los linfocitos T modificados son locamente administrados, tal como por inyección directamente en una masa tumoral.
Los CAR descritos en el presente documento se pueden producir mediante cualquier medio conocido en la técnica, aunque preferentemente se producen usando técnicas de ADN recombinante. Se pueden preparar y ensamblar los ácidos nucleicos que codifican las diversas regiones del receptor quimérico en una secuencia codificante completa por técnicas convencionales de clonación molecular conocidas en la técnica (cribado de bibliotecas genómicas, PCR, ligación asistida por cebador, mutagénesis dirigida al sitio, etc.), según sea conveniente. La región codificante resultante se inserta preferentemente en un vector de expresión y se usa para transformar una línea de células hospedadoras de expresión adecuada, preferentemente una línea celular de linfocitos T, y lo más preferentemente una línea celular de linfocitos T autólogos.
Se pueden transducir diversos subconjuntos de linfocitos T aislados del paciente, que incluyen CMSP no seleccionadas o linfocitos T CD3 enriquecidos o subconjuntos de linfocito T CD3 o de memoria enriquecidos, con un vector para la expresión de CAR. Los linfocitos T de memoria central son un subconjunto útil de linfocitos T. Los linfocitos T de memoria central se pueden aislar de células mononucleares de sangre periférica (CMSP) seleccionadas para células CD45RO+/CD62L+, usando, por ejemplo, el dispositivo CliniMACS® para seleccionar inmunomagnéticamente células que expresan los receptores deseados. Las células enriquecidas para linfocitos T de memoria central se pueden activar con anti-CD3/CD28, transducir con, por ejemplo, un vector lentiviral SIN que dirige la expresión de un CAR específico de IL13Ra2 (por ejemplo, IL13(EQ)BBZ) así como un CD19 humano truncado (CD19t), un marcador superficial no inmunogénico para tanto detección in vivo como posible selección ex vivo. Los linfocitos T de memoria central activados/genéticamente modificados se pueden expandir in vitro con IL-2/IL-15 y luego criopreservar.
Ejemplo 1: Construcción y estructura de un CAR específico de IL13Ra2
Se describe a continuación la estructura de un CAR específico de IL13Ra2 útil. La secuencia de CAR de codón optimizado contiene un ligando de IL-13 unido a membrana mutado en un único sitio (E13Y) para reducir la posible unión a IL13Ra1, un espaciador de Fc de IgG4 que contiene dos mutaciones (L235E; N297Q) que reducen enormemente los modelos de reconocimiento mediados por receptor de Fc, un dominio transmembrana CD4, un dominio de señalización citoplásmica coestimulante 4-1BB y un dominio de señalización citoplásmica CD3Z Una secuencia de salto de ribosoma T2A separa esta secuencia de CAR de IL13(EQ)BBZ de CD19t, un marcador de detección/selección de la superficie celular inerte no inmunogénico. Este enlace de T2A da como resultado la expresión coordinada de tanto IL13(EQ)BBZ como CD19t a partir de un único transcrito. La Figura 1A es un dibujo esquemático del marco de lectura abierto de 2670 nucleótidos que codifica la construcción IL13(EQ)BBZ-T2ACD19t. En este dibujo, el ligando específico de IL13Ra2 IL13(E13Y), dominios Fc de IgG4(EQ), transmembrana CD4, de señalización citoplásmica 4-1BB, de conector de tres glicinas y de señalización citoplásmica CD3Z de CAR de IL13(EQ)BBZ, así como las secuencias de salto de ribosoma T2A y de CD19 truncado están todos indicados. También se indican el receptor alfa humano de GM-CSF y las secuencias señal de CD19 que conducen la expresión superficial de CAR de IL13(EQ)BBZ y CD19t. Así, la construcción IL13(EQ)BBZ-T2ACD19t incluye una secuencia de inmunorreceptor quimérico coestimulante optimizado en la bisagra específica de IL13Ra2 (designada IL13(EQ)BBZ), una secuencia de salto de ribosoma T2A y un secuencia de CD19t.
Se generó la secuencia de IL13(EQ)BBZ por fusión del péptido conductor alfa del receptor humano de GM-CSF con el ligando 5 de IL13(E13Y) bisagra de Fc de IgG4 modificada con L235E/N297Q (donde la mutación doble interfiere
con el reconocimiento de FcR), transmembrana CD4, dominio de señalización citoplásmica 4-1BB y secuencias del dominio de señalización citoplásmica CD3Z. Esta secuencia se sintetizó de novo después de la optimización de codón. Se obtuvo la secuencia de T2A de la digestión de un plásmido que contiene T2A. Se obtuvo la secuencia de CD19t a partir de la que abarca desde la secuencia de péptidos conductores hasta los componentes transmembrana (es decir, los pares de bases 1-972) de un plásmido que contiene CD19. Se cloraron los tres fragmentos, 1) IL13(EQ)BBZ, 2) T2A, y 3) CD19t, en el sitio de clonación múltiple del vector lentiviral epHIV7. Cuando se transfectaron en células apropiadas, el vector integra la secuencia representada esquemáticamente en la Figura 1B en el genoma de células hospedadoras. La Figura 1C proporciona un dibujo esquemático del propio plásmido IL13(EQ)BBZ-T2A-CD19t_epHIV7 de 9515 pares de bases.
Como se muestra esquemáticamente en la Figura 2, CAR de IL13(EQ)BBZ se diferencia en varios respectos importantes de un CAR específico de IL13Ra2 previamente descrito denominado IL13(E13Y)-zetakina (Brown et al.
2012 Clinical Cancer Research 18:2199). IL13(E13Y)-zetakina está compuesto por la muteína de IL-13 humana específica de IL13Ra2 (huIL-13(E13Y)), espaciador de Fc de IgG4 humana (hug4Fc), las porciones transmembrana CD4 humana (huCD4 tm) y de cadena citoplásmica humana CD3Z (huCD3Z cit) como se indica. A diferencia, IL13(EQ)BBZ) tiene dos mutaciones puntuales, L235E y N297Q, que se sitúan en el dominio de CH2 del espaciador de IgG4, y un dominio citoplásmico coestimulante 4-1BB (4-1BB cit).
Ejemplo 2: Construcción y estructura de epHIV7 usado para la expresión de un CAR específico de IL13Ra2
El plásmido pHIV7 es el plásmido original del que derivó el vector clínico IL13(EQ)BBZ-T2A-CD19t_epHIV7 en el Laboratorio de Investigación Terapéutica de Linfocitos T (TCTRL) en City of Hope (COH). El vector epHIV7 usado para la expresión del CAR se produjo a partir del vector pHIV7. Y, lo que es más importante, este vector usa el promotor EF1 humano para conducir la expresión del CAR. Tanto las secuencias de 5' como de 3' del vector derivaron de pv653RSN, ya que previamente derivaron del provirus HXBc2. Las secuencias de flap de ADN del tramo de polipurina (cPPT) derivaron de la cepa pNL4-3 de HIV-1 del NIH AIDS Reagent Repository. Se describió previamente la secuencia del elemento regulador post-transcripcional (WPRE) de la marmota.
La construcción de pHIV7 se representa esquemáticamente en la Figura 3. Brevemente, se subclonó pv653RSN, que contiene 653 pb de gag-pol más repeticiones terminales largas (LTRs) de 5' y 3' con un gen de SL3-neomicina fosfotransferasa (Neo) intermedio, en pBluescript, del siguiente modo: En la etapa 1, las secuencias de 5' LTR para el elemento sensible a rev (RRE) hicieron p5'HIV-1 51, y luego se modificó 5' LTR retirando secuencias en la dirección 5' de la caja TATA, y se ligó primero a un potenciador de CMV y luego al origen de replicación de SV40 (p5'HIV-2). En la etapa 2, después de la clonación de 3' LTR en pBluescript para producir p3'HIV-1, se hizo una deleción de 400 pb en el potenciador/promotor de 3' LTR para retirar elementos reguladores en cis en HIV U3 y formar p3'HIV-2. En la etapa 3, se ligaron los fragmentos aislados de p5'HIV-3 y p3'HIV-2 para producir pHIV-3. En la etapa 4, p3'HIV-2 se modificó adicionalmente retirando adicionalmente secuencias de HIV en la dirección 5’ para generar p3'HIV-3 y se añadió un fragmento BamHI-SalI de 600 pb que contenía WPRE a p3'HIV-3 para producir p3'HIV-4. En la etapa 5, se redujo en tamaño por PCR pHIV-3 RRE y se ligó a un fragmento de 5' de pHIV-3 (no mostrado) y a p3'HIV-4, para producir pHIV-6. En la etapa 6, se amplificó a partir de pNL4-3 un fragmento de BglII-BamHI de 190 pb que contenía la secuencia de flap de ADN cPPT de HIV-1 pNL4-3 (55) y se situó entre las secuencias de RRE y WPRE en pHIV6 para producir pHIV-7. Este plásmido original pHIV7-GFP (GFP, proteína verde fluorescente) se usó para encapsidar el vector original usando un sistema de cuatro plásmidos.
Se requiere una señal de encapsidación, psi y , para la eficiente encapsidación del genoma viral en el vector. RRE y WPRE potencian el transporte del transcrito de ARN y la expresión del transgén. Se demostrado que la secuencia de flap, en combinación con WPRE, potencia la eficiencia de transducción del vector lentiviral en las células de mamífero.
Las funciones auxiliares, requeridas para la producción del vector viral), se dividen en tres plásmidos separados para reducir la probabilidad de generación de lentivirus competente en la replicación mediante recombinación: 1) pCgp codifica la proteína gag/pol requerida para el ensamblaje de vectores virales; 2) pCMV-Rev2 codifica la proteína Rev, que actúa sobre la secuencia de RRE para ayudar en el transporte del genoma viral para la eficiente encapsidación; y 3) pCMV-G codifica la glucoproteína del virus de la estomatitis vesicular (VSV), que se requiere para la infectividad del vector viral.
Existe una homología de secuencia de ADN mínima entre el genoma de vector codificado por pHIV7 y los plásmidos auxiliares. Las regiones de homología incluyen una región de la señal de encapsidación de aproximadamente 600 nucleótidos, situada en la secuencia de gag/pol del plásmido auxiliar pCgp; una secuencia del promotor del CMV en los tres plásmidos auxiliares; y una secuencia de RRE en el plásmido auxiliar pCgp. Es altamente poco probable que el virus recombinante competente en la replicación se pueda generar debido a la homología en estas regiones, ya que requeriría múltiples eventos de recombinación. Además, cualquier recombinante resultante perdería secuencias funcionales de LTR y tat requeridas para la replicación lentiviral.
Se sustituyó el promotor del CMV por el promotor EF1a-HTLV (EF1p), y el nuevo plásmido se denominó epHIV7 (Figura 4). EF1p tiene 563 pb y se introdujo en epHIV7 usando NruI y NheI, después de escindirse el promotor del CMV.
Se ha retirado de este sistema el genoma lentiviral, excluyendo gag/pol y rev que son necesarios para la patogenicidad del virus no mutante y se requiere para la infección productiva de células diana. Además, la construcción de vector IL13(EQ)BBZ-T2ACD19t_epHIV7 no contiene un promotor intacto de 3'LTR, así el genoma proviral de ADN expresado y transcrito de forma inversa resultante en células dirigidas tendrá LTRs inactivas. Como resultado de este diseño, no se transcribirán secuencias derivadas de HIV-I del provirus y solo se expresarán las secuencias terapéuticas a partir de sus promotores respectivos. Se espera que la retirada de la actividad del promotor de LTR en el vector SIN reduzca significativamente la posibilidad de activación accidental de genes hospedadores (56). La Tabla 4 resume los diversos elementos reguladores presentes en IL13(EQ)BBZ-T2ACD19t_epHIV7.
Ejemplo 3: Producción de vectores para la transducción de linfocitos T de paciente
Para cada plásmido (IL13(EQ)BBZ-T2A-CD19t_epHIV7; pCgp; pCMV-G; y pCMV-Rev2), se genera un banco de semillas, que se usa para inocular el fermentador para producir cantidades suficientes de ADN de plásmido. Se prueba el ADN de plásmido para identidad, esterilidad y endotoxina antes de su uso en la producción de vector lentiviral.
Brevemente, se expandieron las células a partir de las células de trabajo 293T (WCB), que se han probado para confirmar la esterilidad y la ausencia de contaminación viral. Se descongeló un vial de células 293T de WCB 293T. Las células se cultivaron y se expandieron hasta que existieron números suficientes de células para sembrar un número apropiado de 10 fábricas de células en capas (CFs) para la producción de vector y el mantenimiento del tren celular. Se puede usar un único tren de células para la producción.
Se produjo el vector lentiviral en sub-lotes de hasta 10 CFs. Se pueden producir dos sub-lotes en la misma semana que conducen a la producción de aproximadamente 20 L de sobrenadante lentiviral/semana. El material producido a partir de todos los sub-lotes se reunió durante la fase de procesamiento aguas abajo, para producir un lote de producto. Se sembraron células 293T en CFs en medio 293T (DMEM con 10 % de FBS). Las fábricas se pusieron en
una estufa de incubación a 37 °C y se nivelaron horizontalmente para conseguir una distribución uniforme de las células sobre todas las capas de la CF. Dos días después, las células se transfectaron con los cuatro plásmidos lentivirales descritos anteriormente usando el método de CaPO4, que implica una mezcla de Tris:EDTA, CaCl22 M, 2X HBS y los cuatro plásmidos de ADN. El día 3 después de la transfección, se recogió el sobrenadante que contenía vectores lentivirales secretados, se purificó y se concentró. Después de retirar el sobrenadante de las CFs, se recogieron las células del final de la producción de cada CF. Se tripsinaron las células de cada fábrica y se recogieron por centrifugación. Las células se resuspendieron en medio de congelación y se criopreservaron. Estas células se usaron después para la prueba de lentivirus competente en la replicación (RCL).
Para purificar y formular vectores, se clarificó por filtración en membrana el sobrenadante en bruto para retirar el residuo celular. Se degradaron el ADN de células hospedadoras y el ADN de plásmido residual por digestión con endonucleasa (Benzonase®). Se depuró el sobrenadante viral del residuo celular usando un filtro de 0,45 gm. Se recogió el sobrenadante depurado en un recipiente previamente pesado en el que se añadió Benzonase® (concentración final 50 U/mL). Se realiza la digestión con endonucleasa para el ADN de plásmido residual y el ADN genómico hospedador a 37 °C durante 6 h. Se usó la concentración de la ultrafiltración de flujo tangencial inicial (TFF) del sobrenadante tratado con endonucleasa para retirar componentes residuales de bajo peso molecular del sobrenadante en bruto, mientras que se concentró el virus ~20 veces. Se hizo circular el sobrenadante viral tratado con endonucleasa depurada a través de un cartucho de fibra hueca con una NMWCO de 500 kD a un caudal diseñado para mantener la velocidad de cizallamiento a -4.000 s-1 o menos, mientras que se maximice el caudal. Se inició la diafiltración del sobrenadante tratado con nucleasa durante el proceso de concentración para mantener el rendimiento del cartucho. Se estableció una tasa de sustitución de 80 % de permeado usando 4 % de lactosa en PBS como tampón de diafiltración. Se llevó el sobrenadante viral al volumen objetivo, que representa una concentración de 20 veces del sobrenadante en bruto, y la diafiltración continuó durante 4 volúmenes de intercambio adicionales, con la tasa de sustitución de permeado a 100 %.
Se llevó a cabo la concentración adicional del producto viral usando una técnica de centrifugación de alta velocidad. Se sedimentó cada sub-lote del lentivirus usando una centrifugadora Sorvall RC-26 plus a 6000 rpm (6.088 RCF) a 6 °C durante 16-20 h. Entonces se reconstituyó el sedimento viral de cada sub-lote en un volumen de 50 mL con 4 % de lactosa en PBS. El sedimento reconstituido en este tampón representa la formulación final para la preparación de virus. Todo el proceso de concentración de vector produjo una reducción de volumen de 200 veces, aproximadamente. Tras completarse todos los sub-lotes, entonces se dispuso el material a -80 °C, mientras que las muestras de cada sub-lote se probaron para esterilidad. Tras la confirmación de la esterilidad de las muestras, se descongelaron rápidamente los sub-lotes a 37 °C con agitación frecuente. Entonces se reunió el material y se añadieron alícuotas manualmente en la cabina de bioseguridad de clase II tipo A/B3 en el grupo de vector viral. Se usó una configuración de llenado de 1 mL del lentivirus concentrado en crioviales con junta tórica externamente roscados, clase 6 USP estériles. Los sistemas de calidad (QS) del Centro de Desarrollo de Tecnología Aplicada (CATD) en COH aprobaron todos los materiales según las políticas y procedimientos de operación estándar para CBG y en cumplimiento con las buenas prácticas de fabricación actuales (cGMPs).
Para garantizar la pureza de la preparación de vector lentiviral, se probó para contaminantes residuales de ADN hospedador, y la transferencia de ADN hospedador y de plásmido residual. Entre otras pruebas, se evaluó la identidad del vector por RT-PCR para garantizar que estuviera presente el vector correcto. Se cumplieron todos los criterios de aprobación para el vector previsto para su uso en este estudio.
Ejemplo 4: Preparación de linfocitos T adecuados para su uso en ACT
Se obtienen linfocitos T de un paciente por leucoféresis, y se altera genéticamente el subconjunto de linfocitos T alógenos o autólogos apropiado, por ejemplo, linfocitos T de memoria central (Tcm), para expresar el CAR, luego se administra de nuevo al paciente por cualquier medio clínicamente aceptable, para la terapia contra el cáncer.
Un resumen de la estrategia de fabricación para Tcm se representa en la Figura 8 (Esquema de fabricación para Tcm IL13(EQ)BBZ/CD19t+). Específicamente, se tratan con Ficoll, se lavan y se incuban durante la noche los productos de aféresis obtenidos de los participantes en la investigación que dieron consentimiento. Entonces se agotaron las células en poblaciones de monocitos, linfocitos T reguladores y linfocitos T intactos usando reactivos anti-CD14, anti-CD25 y anti-CD45RA de calidad Gm P (Miltenyi Biotec) y el dispositivo de separación CliniMACS™. Tras el agotamiento, se enriquecieron las células de fracción negativa en células Tcm CD62L+ usando microperlas de DREG56-biotina (calidad clínica de COH) y anti-biotina (Miltenyi Biotec) en el dispositivo de separación CliniMACS™.
Tras el enriquecimiento, se formulan las células TCM en X-Vivo15 completo más 50 UI/mL de IL-2 y 0,5 ng/mL de IL-15 y se transfirieron a una bolsa de cultivo celular de teflón, donde se estimulan con perlas CD3/CD28 DynalClinEx™ Vivo. Hasta cinco días después de la estimulación, se transducen las células con el vector lentiviral IL13(EQ)BBZ-T2A-CD19t_epHIV7 a una multiplicidad de infección (MOI) de 1,0 a 0,3. Los cultivos se mantienen durante hasta 42 días con adición de X-Vivo15 completo y citocina IL-2 y IL-15 según se requiera para la expansión de células (manteniendo la densidad celular entre 3x105 y 2x106 células viables/mL, y suplementación de citocinas cada lunes, miércoles y viernes de cultivo). Las células se expanden normalmente hasta aproximadamente 109
células en estas condiciones en el plazo de 21 días. Al final del periodo de cultivo se recogen las células, se lavan dos veces y se formulan en medio de criopreservación de calidad clínica (Cryostore CS5, BioLife Solutions).
El (Los) día(s) de infusión de linfocitos T, se descongela, se lava y se formula para re-infusión el producto criopreservado y liberado. Se sacan del almacenamiento en nitrógeno líquido los viales criopreservados que contienen el producto celular liberado, se descongelan, se enfrían y se lavan con un tampón de lavado de PBS/2 % de albúmina de suero humano (HSA). Después de la centrifugación, se retira el sobrenadante y se resuspenden las células en una solución salina normal sin conservante (PFNS)/ 2 % de diluyente de infusión de HSA. Se retiran muestras para la prueba del control de calidad.
Se realizaron dos series de cualificación en células obtenidas de donantes sanos usando la plataforma de fabricación descrita anteriormente. Cada producto de la serie de cualificación preclínica se asignó a un número de donante humano (HD) - HD006.5 y HD187.1. Y, lo que es más importante, como se muestra en la Tabla 5, estas series de cualificación se expandieron >80 veces en el plazo de 28 días y las células expandidas expresaron los transgenes IL13(EQ)BBY/CD19t.
Tabla 5: Resumen de datos de expresión del producto de la serie de cualificación preclínica
Ejemplo 5: Análisis de citometría de flujo de la expresión de marcadores de transgenes superficiales y linfocitos T en Tcm IL13(EQ)BBY/CD19t+
Se usaron los dos productos de la serie de cualificación preclínica descritos en el Ejemplo 4 en estudios preclínicos como se describe a continuación. Las Figuras 6A-C representan los resultados del análisis de citometría de flujo de la expresión de marcadores de transgenes superficiales y linfocitos T. Se co-tiñeron TCM IL13(EQ)BBY/CD19t+ HD006.5 y HD187.1 con anti-IL13-PE y anti-CD8-FITC para detectar células CAR+ CD8+ y CAR+ CD4+ (es decir, CD8 negativas) (Figura 6A), o anti-CD 19-PE y anti-CD4-FITC para detectar células CD19t+ CD4+ y CAR+ CD8+ (es decir, CD4 negativas) (Figura 6B). Se tiñeron Tcm IL13(EQ)BBY/CD19t+ HD006.5 y HD187.1 con anti-CD3, TCR, CD4, CD8, CD62L y CD28 conjugados con fluorocromo (histogramas grises) o controles de isotipo (histogramas negros). (Figura 6C). En cada una de las Figuras 6A-C, los porcentajes indicados basados en linfocitos viables (DAPI negativos) tiñeron el isotipo anterior.
Ejemplo 6: Actividad efectora de TCM IL13(EQ)BBY/CD19t+
Se evaluó la actividad efectora de TCM IL13(EQ)BB /^CD19t+ y los resultados de este análisis se representan en las Figuras 7A-B. Brevemente, se usaron TCM IL13(EQ)BBY/CD19t+ HD006.5 y HD187.1 como efectores en un ensayo de liberación de 51Cr de 6 horas usando una relación 10:1 de E:D basada en la expresión de CD19t. Se manipularon con K562 las dianas de tumor IL13Ra2-positivas para expresar IL13Ra2 (K562-IL13Ra2) y la línea de glioma primario PBT030-2, y el control de dianas de tumor IL13Ra2-negativas fue la línea parental K562 (Figura 7A). Se evaluaron IL13(EQ)BBY/CD19t+ HD006.5 y HD187.1 para la producción de citocinas dependientes de antígeno siguiendo el co-cultivo durante la noche a una relación 10:1 de E:D con las mismas dianas IL13Ra2-positivas y negativas que se describen en anteriormente. Se midieron los niveles de citocinas usando el kit de ensayo de citocinas humanas TH1/TH2 de Bio-Plex Pro y se representan los niveles de INF-y (Figura 7B).
Ejemplo 7: Actividad antitumoral in vivo de TCM IL13(EQ)BBY/CD19t+
Los estudios descritos a continuación demuestran que TCM IL13(EQ)BBY/CD19t+ presentan eficacia antitumoral en modelos de ratón in vivo. Específicamente, los presentes inventores han evaluado la potencia antitumoral de TCM IL13(EQ)BBY/CD19t+ contra la línea PBT030-2 de esferas tumorales de glioblastoma de bajo paso primarias IL13Ra2+, que se ha manipulado para expresar tanto genes indicadores EGFP como de luciferasa de luciérnaga (ffLuc) (PBT030-2 EGFP:ffLuc) (6). Un panel de líneas primarias (PBT) de especímenes de glioblastoma de paciente cultivados como esferas tumorales (TSs) en medio libre de suero. Estas líneas de TS expandidas presentan características de tipo célula madre, que incluyen la expresión de marcadores de célula madre, diferenciación multilinaje y la capacidad para iniciar tumores ortotópicos en ratones inmunodeprimidos (NSG) a bajos números de células. Se ha usado previamente el modelo de xenoinjerto de iniciado por TS de PBT030-2 EGFP:ffLuc TS (0,1x106 células; injerto de 5 días) para evaluar la actividad antitumoral in vivo en ratones NSG de CAR específico de IL13Ra2 que expresan linfocitos T, por lo que se mostró que tres inyecciones de 2x106 linfocitos T citolíticos (CTLs) durante un transcurso de 2 semanas reducían el crecimiento tumoral. Sin embargo, en los experimentos, la mayoría de los tumores de PBT030-2 reaparecieron con el tiempo. Por comparación, una inyección única de Tcm IL13(EQ)BBY/CD19t+ (1,1x106 Tcm de CAR+; 2x106 Tcm totales) presentó una fuerte actividad antitumoral contra tumores de iniciados por TS de PBT030-2 EGFP:ffLuc (0,1x106 células; injerto de 5 días) como se muestra en las
Figuras 8A-C. En comparación con ratones NSG tratados con ya fuera PBS o Tcm transducidas con vector vacío (sin CAR), Tcm IL13(EQ)BBY/CD19t+ reduce significativamente el flujo de ffLuc (p < 0,001 en >18 días) y mejora significativamente la supervivencia (p = 0,0008).
Brevemente, se implantaron estereotácticamente células tumorales PBT030-2 EGFP-ffLuc+ (1x105) en el prosencéfalo derecho de ratones NSG. En el día 5, los ratones recibieron o bien 2x106 Tcm IL13(EQ)BBY/CD19t+ (1,1x106 CAR+; n=6), 2x106 Tcm simuladas (sin cAR; n=6) o bien PBS (n=6). La Figura 8A representa ratones representativos de cada grupo que muestra carga tumoral relativa usando Xenogen Living Imagen. La cuantificación del flujo de ffLuc (fotones/s) muestra que Tcm IL13(EQ)BB^/CD19t+ inducen la regresión tumoral en comparación con Tcm transducidas con vector vacío y PBS (#p<0,02, *p<0,001, ANOVA de medidas repetidas (Figura 8B). Como se muestra en la Figura 8C, una curva de supervivencia de Kaplan Meier (n=6 por grupo) demuestra supervivencia significativamente mejorada (p=0,0008; prueba del orden logarítmico) para ratones tratados con Tcm IL13(EQ)BBY/CD19t+.
Ejemplo 8: Comparación de Tcm IL13(EQ)BBZ+ y clones de CTL CD8+ IL13-zetakina distintos de Tcm en eficacia antitumoral y persistencia de linfocitos T
Los estudios descritos a continuación comparan Tcm IL13(EQ)BBZ+ y CTLs CD8+ humanos específicos de IL13Ra2 previamente creados (CTL CD8+ IL13-zetakina (descritos en Brown et al. 2012 Clin Cancer Res 18:2199 y Kahlon et al. 2004 Cancer Res 64:9160). IL13-zetakina usa un dominio coestimulante CD3Z, carece de un dominio coestimulante y usa la misma variante de IL13 que IL13(EQ)BBZ+.
Se generó un panel de líneas primarias (PBT) de especímenes de glioblastoma de paciente cultivados como esferas tumorales (TSs) en medio libre de suero (Brown et al. 2012 Clin Cancer Res 18:2199; Brown et al. 2009 Cancer Res 69:8886). Estas líneas de TS expandidas presentan características de tipo célula madre, que incluyen marcadores de expresión de células madre, diferenciación multilinaje y capacidad para iniciar tumores ortotópicos en ratones inmunodeprimidos (NSG) a bajos números de células. Se usó la línea de TS PBT030-2 de glioblastoma de bajo paso primario IL13Ra2+, que se ha manipulado para expresar tanto los genes indicadores EGFP como de luciferasa de luciérnaga (ffLuc) (PBT030-2 EGFP:ffLuc) (Brown et al. 2012 Clin Cancer Res 18:2199) para los experimentos expuestos a continuación.
Primero, se comparó una dosis única (1x106 linfocitos T de CAR) de producto de Tcm IL13(EQ)BBZ+ con clones de CTL CD8+ IL13-zetakina evaluados contra xenoinjertos iniciados con TS de PBT030-2 EGFP:ffuc de día 8 (0,1x106 células). Mientras tanto, los linfocitos T de CAR específico de IL13Ra2 (CTL IL13-zetakina y Tcm IL13(EQ)BBZ) demostraron actividad antitumoral contra tumores de PBT030-2 establecidos en comparación con controles de Tcm no tratadas y simuladas (CAR-negativas) (Figuras 9A y 9B), Tcm IL13(EQ)BBZ+ medió significativamente en la supervivencia mejorada y la remisión duradera de tumores con ratones que vivieron >150 días en comparación con los clones de CTL CD8+ IL13-zetakina de primera generación (Figura 9C).
Para comparar adicionalmente la eficacia terapéutica de estos dos productos de linfocitos T de IL13Ra2-CAR, se realizó una valoración de dosis de 1,0, 0,3 y 0,1x106 linfocitos T de CAR contra tumores iniciados con TS de PBT030-2 EGFP:ffuc de día 8 (Figuras 10A-C). La dosis más alta (1x106) de CTL CD8+ IL13-zetakina cl. 2D7 medió en las respuestas antitumorales como se mide por flujo de Xenogen en 3 de 6 animales (Figura 10C), pero no se observaron respuestas antitumorales significativas a dosis más bajas de linfocitos T de CAR. Por comparación, la inyección de producto de Tcm IL13(EQ)BBZ+ medió en la regresión tumoral completa en la mayoría de los ratones a todos los niveles de dosis, que incluye tratamiento con tan solo 0,1x106 linfocitos T de CAR. Estos datos demuestran que Tcm IL13(EQ)BBZ+ es al menos 10 veces más potente que los clones de CTL CD8+ IL13-zetakina en la eficacia antitumoral. La eficacia antitumoral mejorada es debida a la persistencia mejorada de linfocitos T en el microentorno tumoral. La evaluación de linfocitos T CD3+ 7 días después de la inyección i.c. reveló números significativos de Tcm IL13(EQ)BBZ+ en el microentorno tumoral, mientras que estuvieron presentes muy pocos CTLs IL13-zeta de primera generación (Figura 11).
Ejemplo 9: Comparación de la vía de administración de linfocitos T de CAR para el tratamiento de grandes tumores de PBT iniciados por TS
A continuación se describen estudios que comparan la vía de administración, intravenosa (i.v.) o intracraneal (i.c.), en la actividad antitumoral contra líneas de PBT primarias invasivas. En estudios piloto (datos no mostrados), se observó inesperadamente que Tcm IL13(EQ)BBZ+ administrados i.v. no proporcionaron beneficio terapéutico en comparación con PBS para el tratamiento de pequeños tumores de de PBT030-2 EGFP:ffLuc (día 5). Esto es a diferencia de la robusta eficacia terapéutica observada con linfocitos T de CAR+ administrados i.c. Razonando que los tumores de PBT030-2 de día 5 pueden haber sido demasiado pequeños para reclutar linfocitos T terapéuticos de la periferia, se hizo una comparación de la administración i.v. frente a i.c. contra mayores tumores de PBT030-2 EGFP:ffLuc de día 19. Para estos estudios, se trataron los ratones injertados con PBT030-2 con ya fuera dos infusiones i.v. (5 x 106 Tcm de CAR+; días 19 y 26) o cuatro infusiones i.c. (1 x 106 Tcm de CAR+; días 19, 22, 26 y 29) de Tcm IL13(EQ)BBZ+, o bien Tcm simuladas (sin CAR). Aquí tampoco hay beneficio terapéutico como se monitoriza por obtención de imágenes de Xenogen o análisis de supervivencia de Kaplan-Meier para linfocitos T de CAR+ administrados i.v. (Figuras 12A y 12B). A diferencia, se observó potente actividad antitumoral para Tcm
IL13(EQ)BBZ+ administrados i.c. (Figuras 12A-B). A continuación, se recogieron cerebros de una cohorte de ratones 7 días después de la inyección de linfocitos T y se evaluaron para linfocitos T humanos CD3+ por IHC. Sorprendentemente, para ratones tratados i.v. con ya fuera Tcm simuladas como Tcm IL13(EQ)BBZ no hubo linfocitos T humanos CD3+ detectables en el tumor o en otras regiones del cerebro del ratón donde normalmente residen los linfocitos T humanos (es decir, las leptomeninges) (Figura 12C), sugiriendo un déficit en el tropismo tumoral. Esto es a diferencia del significativo número de linfocitos T detectados en los ratones tratados i.c. (Figura 12D).
Las citocinas derivadas de tumor, particularmente MCP-1/CCL2, son importantes en reclutar linfocitos al tumor. Así, se evaluaron células tumorales PBT030-2 y se encontró que esta línea produce altos niveles de MCP-1/CCL2 comparable a células U251T (datos no mostrados), una línea de glioma que se mostró previamente que atraía linfocitos T CD8+ efectores i.v. administrados a tumores injertados i.c. Los gliomas malignos son tumores altamente invasivos y son frecuentemente de presentación multifocal. Los estudios descritos anteriormente establecen que Tcm IL13BBZ pueden eliminar tumores infiltrados tales como PBT030-2, y mediar en la actividad antitumoral duradera a largo plazo. También se examinó la capacidad de linfocitos T de CAR administrados por vía intracraneal para llegar a enfermedad multifocal. Para este estudio, se implantaron TSs de PBT030-2 EGFP:ffLuc en tanto los hemisferios izquierdo como derecho (Figura 13A) y se inyectaron linfocitos T de CAR+ solo en el sitio tumoral derecho. De modo alentador, para todos los ratones evaluados (n=3), los presentes inventores detectaron linfocitos T por IHC de CD37 días después de la infusión de linfocitos T tanto en el sitio de inyección (es decir, tumor derecho), como perfectamente dentro del tumor en el hemisferio izquierdo (Figura 13B). Estos hallazgos proporcionan evidencia de que los linfocitos T de CAR+ son capaces de llegar e infiltrar los focos tumorales en sitios remotos. También se observaron hallazgos similares en un segundo modelo tumoral usando la línea celular de glioma U251T (datos no mostrados).
Ejemplo 10: Comparación de dominios coestimulantes
Se realizaron una serie de estudios para evaluar los diversos dominios coestimulantes. Se representan esquemáticamente los diversos CAR evaluados en la Figura 14A e incluyeron un CAR de CD3Z de primera generación que carecía de un dominio coestimulante, incorporando dos CARs de segunda generación tanto un dominio coestimulante 4-1BB como un dominio coestimulante CD28, y conteniendo un CAR de tercera generación tanto un dominio coestimulante CD28 como el dominio coestimulante 41BB. Todas las construcciones de CAR también contienen la secuencia de salto de ribosoma T2A y una secuencia de CD19 truncado (CD19t) como marcador para células transducidas.
Se transdujeron lentiviralmente Tcm CD4 y CD8 y se enriquecieron inmunomagnéticamente linfocitos T que expresan CAR enriquecidos mediante anti-CD19. Niveles de expresión de CD19 e IL13 (es decir, CAR) como se mide por citometría de flujo. Los resultados se muestran en la Figura 14B. Se determinó la estabilidad de cada construcción de CAR dividiendo la intensidad media de fluorescencia (IMF) de CAR (IL13) entre la del marcador de transducción (CD19t) (Figura 14C). Los dos CAR que incluyen un dominio coestimulante 4-1BB presentaron los niveles de expresión más bajos en comparación con el marcador de transducción CD19t.
Se determinó la capacidad de los linfocitos T transducidos con vector vacío y que expresan CAR indicados para destruir dianas de células tumorales PBT030-2 que expresan IL13Ra2 en un ensayo de liberación de 51Cr de 4 horas en las relaciones efectoras:diana indicadas. Los resultados de este estudio están en la Figura 15A (se representan los % medios de liberación de cromo ± D.E. de pocillos triplicados). Como era de esperar, los linfocitos T transducidos con vector vacío no lisaron eficazmente las dianas. A diferencia, todos los linfocitos T que expresan CAR lisaron las células tumorales de una manera similar. La Figura 15B representa los resultados de un estudio en el que los linfocitos T transducidos con vector vacío o que expresan CAR indicados se co-cultivaron durante la noche con células tumorales de PBT030-2 que expresan IL13Ra2 en una relación 10:1 y se analizaron los sobrenadantes para niveles de IL-13 y IFN-y por matriz citométrica de perlas. De forma interesante, los linfocitos T que expresan los CARs zeta, 41BB-zeta o cD28-41BB-zeta presentaron producción más baja de citocinas estimuladas por antígeno que los linfocitos T que expresan los CAR CD28-zeta.
Se examinó la eficacia in vivo de los diversos CAR del siguiente modo. Brevemente, ratones NSG recibieron una inyección intracraneal de células tumorales PBT030-2 ffLuc+ en el día 0, y se aleatorizaron en 6 grupos (n = 9-10 ratones por grupo) para tratamiento i.c. con ya fuera PBS (Tumor solo), linfocitos T transducidos con vector vacío o linfocitos T que expresan el CAR específico de IL13Ra2 indicado en el día 8. Entonces se llevó a cabo la obtención de imágenes de bioluminiscencia cuantitativa para monitorizar el crecimiento tumoral con el tiempo. Imágenes de bioluminiscencia para ratones representativos en cada grupo (Figura 16A). Niveles de flujo para cada ratón en el día 27 (Figura 16B). Todos los grupos tratados con linfocitos T de CAR específico de IL13Ra2, excepto los tratados con linfocitos T que expresan CD28-CAR, muestran reducción estadísticamente significativa en el volumen del tumor en comparación con ratones tratados con linfocitos T transducidos con vector vacío (Figura 16C).
Ejemplo 11: Secuencia de aminoácidos de IL13(EQ)BB£/CD19t
La secuencia de aminoácidos completa de IL13(EQ)BB^/CD19t se representa en la Figura 17. La secuencia entera (SEQ ID NO: 1) incluye: un péptido señal GMc Sf de 22 aminoácidos (SEQ ID NO: 2), una secuencia de IL-13 de
112 aminoácidos (SEQ ID NO: 3; sustitución de aminoácidos E13Y mostrada en negrita); una secuencia de IgG4 de 229 aminoácidos (SEQ ID NO: 4; con sustituciones de aminoácidos L235E y N297Q mostradas en negrita); una secuencia transmembrana CD4 de 22 aminoácidos (SEQ ID NO: 5); una secuencia de 4-1BB de 42 aminoácidos (SEQ ID NO: 6); un conector Gly de 3 aminoácidos; una secuencia de CD3Z de 112 aminoácidos (SEQ ID NO: 7); una secuencia de T2A de 24 aminoácidos (SEQ ID NO: 8); y una secuencia de CD19t de 323 aminoácidos (SEQ ID NO: 9).
La secuencia madura del receptor de antígeno quimérico (SEQ ID NO: 10) incluye: una secuencia de IL-13 de 112 aminoácidos (SEQ ID NO: 3; sustitución de aminoácidos E13Y mostrada en negrita); una secuencia de IgG4 de 229 aminoácidos (SEQ ID NO: 4; con sustituciones de aminoácidos L235E y N297Q mostradas en negrita); una secuencia CD4 de 22 aminoácidos (SEQ ID NO: 5); una secuencia de 4-1BB de 42 aminoácidos (SEQ ID NO: 6); un conector Gly de 3 aminoácidos; y una secuencia de CD3Z de 112 aminoácidos (SEQ ID NO: 7). Dentro de esta secuencia de CAR (SEQ ID NO: 10) está la secuencia de IL-13/IgG4/CD4t/4-1 BB (SEQ ID NO: 11), que incluye: una secuencia de IL-13 de 112 aminoácidos (SEQ ID NO: 3; sustitución de aminoácidos E13Y mostrada en negrita); una secuencia de IgG4 de 229 aminoácidos (SEQ ID NO: 4; con sustituciones de aminoácidos L235E y N297Q mostradas en negrita); una secuencia de CD4 de 22 aminoácidos (SEQ ID NO: 5); y una secuencia de 4-1BB de 42 aminoácidos (SEQ iD NO: 6). La secuencia de IL13/IgG4/CD4t/4-1BB (SEQ ID NO: 11) se pueden unir a la secuencia de CD3Z de 112 aminoácidos (SEQ ID NO: 7) por un conector tal como un conector GlyGlyGly. La secuencia de CAR (SEQ ID NO: 10) puede ir precedida por un péptido señal GMCSF de 22 aminoácidos (SEQ ID NO: 2).
La Figura 18 representa una comparación de las secuencias de IL13(EQ)41BBZ[IL13{EQ}41BBZ T2A-CD19t_epHIV7; pF02630] (SEQ ID NO: 12) y CD19Rop_epHIV7 (pJ01683) (SEQ ID NO: 13).
Ejemplo 12: Secuencia de aminoácidos de IL13(EQ)BB£/CD19t
Las Figuras 19-26 representan las secuencias de aminoácidos de CAR adicionales dirigidos contra IL13Ra2, en cada caso están marcados los diversos dominios, excepto para el espaciador GlyGlyGly localizado entre ciertos dominios intracelulares. Cada uno incluye IL13 humana con y Glu a Tyr (SEQ ID NO: 3; sustitución de aminoácidos E13Y mostrada subrayada). En el vector de expresión usado para expresar estos CAR, la secuencia de aminoácidos expresada puede incluir una secuencia de T2A de 24 aminoácidos (SEQ ID NO: 8); y una secuencia de CD19t de 323 aminoácidos (SEQ ID NO: 9) para permitir la expresión coordinada de una secuencia de CD19 truncado sobre la superficie de células que expresan CAR.
Se probó un panel de CAR que comprendía el dominio humano de IL13(E13Y), un dominio de CD28 tm, un dominio coestimulante CD28gg, un dominio coestimulante 4-1BB y un esqueleto de CAR de dominio CD3Z y que incluye ya sea un espaciador HL (22 aminoácidos), un espaciador de bisagra CD8 (48 aminoácidos), espaciador de IgG4-HL-CH3 (129 aminoácidos) o un espaciador de IgG4(EQ) (229 aminoácidos) para su capacidad para mediar en la destrucción específica de IL13Ra2 como se evalúa en un ensayo de co-cultivo de 72 horas. Con la excepción de HL (22 aminoácidos) que pareció que tenía mala expresión de CAR en este sistema, todos fueron activos.
Claims (11)
1. Una molécula de ácido nucleico que codifica un receptor de antígeno quimérico, en donde la molécula de ácido nucleico expresa un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos de:
GPVPPSTALRYLIEELVNITQNQKAPLCNGSMVWSINLTAGMYCAALESLINVSGCSAIEKTQR
MLSGFCPHKVSAGQFS SLHVRDTKIEVAQFVKDLLLHLKKLFREGRFNESKYGPPCPPCPAPEF
EGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQS
TYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQ
VSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCS
VMHEALHNHYTQKSLSLSLGKMALIVLGGVAGLLLFIGLGIFFKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQT
IQEEDGCSCRFPEEEEGGCELGGGRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRG
RDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDAL
HMQALPPR (SEQ ID NO:10).
2. La molécula de ácido nucleico de la reivindicación 1, que comprende además una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia señal GMSCFRa que precede a la secuencia de nucleótidos que codifica el receptor de antígeno quimérico, en donde la secuencia señal GMSCFRa comprende la secuencia de aminoácidos de MLLLVTSLLLCELPHPAFLLIP (SEQ ID NO: 2).
3. La molécula de ácido nucleico de la reivindicación 1, que comprende además una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de salto de ribosoma T2A y un CD 19 truncado siguiendo la secuencia de nucleótidos que codifica el receptor de antígeno quimérico.
4. La molécula de ácido nucleico de la reivindicación 3, en donde la secuencia de salto de ribosoma T2A comprende la secuencia de aminoácidos de
LEGGGEGRGSLLTCGDVEENPGPR (SEQ ID NO: 8), y
en donde CD19 truncado comprende la secuencia de aminoácidos de
MPPPRLLFFLLFLTPMEVRPEEPLVVKVEEGDNAVLQCLKGTSDGPTQQLTWSRESPLKP
FLKLSLGLPGLGIHMRPLAIWLFIFNVSQQMGGFYLCQPGPPSEKAWQPGWTVNVEGSG
ELFRWNVSDLGGLGCGLKNRSSEGPSSPSGKLMSPKLYVWAKDRPEIWEGEPPCVPPRD
SLNQSLSQDLTMAPGSTLWLSCGVPPDSVSRGPLSWTHVHPKGPKSLLSLELKDDRPAR
DMWVMETGLLLPRATAQDAGKYYCHRGNLTMSFHLEITARPVLWHWLLRTGGWKVS
AVTLAYLIFCLCSLVGILHLQRALVLRRKR (SEQ ID >10:9).
5. Un vector de expresión que comprende la molécula de ácido nucleico de la reivindicación 1.
6. Una población de linfocitos T humanos que comprende un vector que expresa un receptor de antígeno quimérico que comprende la secuencia de aminoácidos de:
GPVPPSTALRYLIEELVNITQNQKAPLCNGSMVWSINLTAGMYCAALESLINVSGCSAIEKTQR
MLSGFCPHKVSAGQFSSLHVRDTKIEVAQFVKDLLLHLKKLFREGRFNESKYGPPCPPCPAPEF
EGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQS
TYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQ
VSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCS
VMHEALHNHYTQKSLSLSLGKMALIVLGGVAGLLLFIGLGIFFKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQT
IQEEDGCSCRFPEEEEGGCELGGGRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRG
RDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDAL
HMQALPPR (SEQ ID NO: 10).
7. La población de linfocitos T humanos de la reivindicación 6, en donde los linfocitos T comprenden una población de linfocitos T de memoria central.
8. Una composición para su uso en el tratamiento de cáncer en un paciente, comprendiendo la composición una población de linfocitos T humanos autólogos o alógenos transducidos por un vector que comprende un casete de expresión que codifica un receptor de antígeno quimérico, en donde el receptor de antígeno quimérico comprende la secuencia de aminoácidos de:
GPVPPSTALRYLIEELVNITQNQKAPLCNGSMVWSINLTAGMYCAALESLINVSGCSAIEKTQR
MLSGFCPHKVSAGQFSSLHVRDTKIEVAQFVKDLLLHLKKLFREGRFNESKYGPPCPPCPAPEF
EGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQS
TYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQ
VSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCS
VMHEALHNHYTQKSLSLSLGKMALIVLGGVAGLLLFIGLGIFFKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQT
IQEEDGCSCRFPEEEEGGCELGGGRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRG
RDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDAL
HMQALPPR (SEQ ID NO: 10).
9. La composición para su uso según la reivindicación 8, en donde la población de linfocitos T humanos comprende linfocitos T de memoria central.
10. La composición para su uso según la reivindicación 8, en donde el cáncer es glioblastoma.
11. La composición para su uso según la reivindicación 9, en donde los linfocitos T humanos transducidos se prepararon por un método que comprende tratar los linfocitos T obtenidos del paciente para aislar linfocitos T de memoria central, y transducir al menos una porción de los linfocitos de memoria central con un vector viral que comprende un casete de expresión que codifica un receptor de antígeno quimérico, en donde el receptor de antígeno quimérico comprende la secuencia de aminoácidos de:
GPVPPSTALRYLIEELVNITQNQKAPLCNGSMVWSINLTAGMYCAALESLINVSGCSAIEKTQR
MLSGFCPHKVSAGQFS SLHVRDTKIEVAQFVKDLLLHLKKLFREGRFNESKYGPPCPPCPAPEF
EGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQS
TYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQ
VSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCS
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| EP3653212B1 (en) | 2012-12-20 | 2023-04-26 | Purdue Research Foundation | Chimeric antigen receptor-expressing t cells as anti-cancer therapeutics |
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| JP6657195B2 (ja) * | 2014-09-19 | 2020-03-04 | シティ・オブ・ホープＣｉｔｙ ｏｆ Ｈｏｐｅ | Ｌ１３Ｒα２を標的とする共刺激性キメラ抗原レセプターＴ細胞 |
| MX2017014822A (es) | 2015-05-18 | 2018-04-30 | Tcr2 Therapeutics Inc | Composiciones y métodos para la reprogramación del tcr con proteínas de fusión. |
| JP6902018B2 (ja) | 2015-07-21 | 2021-07-14 | シティ・オブ・ホープＣｉｔｙ ｏｆ Ｈｏｐｅ | キメラ抗原受容体及び他の受容体の発現に対するｔ細胞 |
| EP3575403A1 (en) * | 2015-08-05 | 2019-12-04 | Yoo Young Pharm Co., Ltd. | Chimeric antigen receptor, and t cells in which chimeric antigen receptor is expressed |
| PT3436079T (pt) | 2016-04-01 | 2021-10-06 | Kite Pharma Inc | Recetores de antigénios quiméricos e de células t e métodos de uso |
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| WO2017173349A1 (en) | 2016-04-01 | 2017-10-05 | Kite Pharma, Inc. | Bcma binding molecules and methods of use thereof |
| KR102694879B1 (ko) * | 2016-04-01 | 2024-08-16 | 암젠 인크 | Flt3에 대한 키메라 수용체 및 이의 사용 방법 |
| EP3439675A4 (en) | 2016-04-08 | 2019-12-18 | Purdue Research Foundation | METHOD AND COMPOSITIONS FOR CAR-T CELL THERAPY |
| WO2017192536A1 (en) | 2016-05-02 | 2017-11-09 | University Of Kansas | Eliminating mhc restriction from the t cell receptor as a strategy for immunotherapy |
| SG10202012157QA (en) | 2016-06-07 | 2021-01-28 | Max Delbrueck Centrum Fuer Molekulare Medizin Helmholtz Gemeinschaft | Chimeric antigen receptor and car-t cells that bind bcma |
| JP7591342B2 (ja) | 2016-06-08 | 2024-11-28 | プレシゲン，インコーポレイテッド | Ｃｄ３３特異的キメラ抗原受容体 |
| CA3032498A1 (en) | 2016-08-02 | 2018-02-08 | TCR2 Therapeutics Inc. | Compositions and methods for tcr reprogramming using fusion proteins |
| WO2018052947A1 (en) * | 2016-09-16 | 2018-03-22 | Baylor College Of Medicine | Platform for activation and expansion of virus-specific t-cells |
| MX2019003899A (es) | 2016-10-07 | 2019-08-14 | Tcr2 Therapeutics Inc | Composiciones y metodos para reprogramacion de receptores de linfocitos t mediante el uso de proteinas de fusion. |
| EP3544996A2 (en) | 2016-11-22 | 2019-10-02 | TCR2 Therapeutics Inc. | Compositions and methods for tcr reprogramming using fusion proteins |
| US20200095547A1 (en) | 2016-12-02 | 2020-03-26 | Darya ALIZADEH | Methods for manufacturing t cells expressing of chimeric antigen receptors and other receptors |
| WO2018106972A1 (en) * | 2016-12-07 | 2018-06-14 | La Jolla Institute For Allergy And Immunology | Compositions for cancer treatment and methods and uses for cancer treatment and prognosis |
| EP3568466A4 (en) | 2017-01-10 | 2020-07-15 | The General Hospital Corporation | TARGETED T CELLS WITH CYTOTOXICITY TO IMMUNOSUPPRESSIVE CELLS |
| US11649288B2 (en) | 2017-02-07 | 2023-05-16 | Seattle Children's Hospital | Phospholipid ether (PLE) CAR T cell tumor targeting (CTCT) agents |
| CN108395481B (zh) * | 2017-02-08 | 2021-02-05 | 西比曼生物科技（香港）有限公司 | 一种靶向cd20的car的构建及其工程化t细胞的活性鉴定 |
| WO2018156711A1 (en) * | 2017-02-22 | 2018-08-30 | H. Lee Moffitt Cancer Center And Research Institute, Inc. | Il13ra2-binding chimeric antigen receptors |
| ES3010559T3 (en) | 2017-02-28 | 2025-04-03 | Endocyte Inc | Compositions and methods for car t cell therapy |
| CN110461881B (zh) * | 2017-03-27 | 2023-06-23 | 诺伊尓免疫生物科技株式会社 | 嵌合抗原受体 |
| CA3059444A1 (en) | 2017-04-14 | 2018-10-18 | The General Hospital Corporation | Chimeric antigen receptor t cells targeting the tumor microenvironment |
| JP2020517259A (ja) | 2017-04-19 | 2020-06-18 | ボード・オブ・リージエンツ，ザ・ユニバーシテイ・オブ・テキサス・システム | 操作された抗原受容体を発現する免疫細胞 |
| CN107267555B (zh) * | 2017-05-27 | 2020-03-20 | 上海优卡迪生物医药科技有限公司 | 一种基于octs技术的恶性胶质瘤car-t治疗载体及其构建方法和应用 |
| US12364724B2 (en) * | 2017-08-11 | 2025-07-22 | City Of Hope | Oncolytic virus expressing a car T cell target and uses thereof |
| AU2018347796B2 (en) | 2017-10-10 | 2025-07-24 | Medicenna Therapeutics, Inc. | IL-4-fusion formulations for treatment of central nervous system (CNS) tumors |
| EP3704156A1 (en) * | 2017-11-03 | 2020-09-09 | Sorrento Therapeutics, Inc. | Cd38-directed chimeric antigen receptor constructs |
| EP3707246B1 (en) * | 2017-11-07 | 2023-06-07 | City of Hope | Treatment of cns lymphoma and systemic lymphoma with intracerebroventricularly administered cd19 car |
| CN109971721B (zh) * | 2017-12-28 | 2023-10-31 | 上海细胞治疗研究院 | 自表达cd47抗体的间皮素特异性car-t细胞及其用途 |
| CN109971712B (zh) * | 2017-12-28 | 2023-06-20 | 上海细胞治疗研究院 | 特异性靶向cd19抗原且高水平稳定表达pd-1抗体的car-t细胞及用途 |
| AU2019209428B2 (en) | 2018-01-22 | 2025-06-26 | Endocyte, Inc. | Methods of use for CAR T cells |
| EP3743445A1 (en) * | 2018-01-26 | 2020-12-02 | City of Hope | Chimeric antigen receptors and methods for reducing off target toxicity |
| CA3090089A1 (en) | 2018-02-06 | 2019-08-15 | Seattle Children's Hospital (dba Seattle Children's Research Institute) | Fluorescein-specific cars exhibiting optimal t cell function against fl-ple labelled tumors |
| CN111971053A (zh) * | 2018-02-12 | 2020-11-20 | 综合医院公司 | 靶向肿瘤微环境的嵌合抗原受体 |
| JP7273421B2 (ja) | 2018-02-21 | 2023-05-15 | ボード オブ リージェンツ，ザ ユニバーシティ オブ テキサス システム | ナチュラルキラー細胞の活性化および拡大のための方法ならびにその使用 |
| TW202000229A (zh) | 2018-02-23 | 2020-01-01 | 美商安德賽特公司 | Car t細胞療法之順序方法 |
| JP7314161B2 (ja) * | 2018-03-14 | 2023-07-25 | シアトル チルドレンズ ホスピタル （ディービーエイ シアトル チルドレンズ リサーチ インスティテュート） | ゼータカインにより指向性を付与したＩＬ－１３受容体α２標的Ｔ細胞免疫療法 |
| EA202091982A1 (ru) * | 2018-03-14 | 2021-06-10 | Сиэтл Чилдрен'С Хоспитал (Дба Сиэтл Чилдрен'С Ресёрч Инститьют) | Химерный антигенный рецептор к рецептору il-13 альфа 2 (il13r2) для опухолеспецифической т-клеточной иммунотерапии |
| EP3773633A4 (en) | 2018-04-06 | 2022-01-26 | The Regents of The University of California | METHODS OF TREATMENT OF GLIOBLASTOMA |
| AU2019249215B2 (en) | 2018-04-06 | 2026-02-19 | The Regents Of The University Of California | Methods of treating EGFRvIII expressing glioblastomas |
| WO2019222796A1 (en) * | 2018-05-21 | 2019-11-28 | Carina Biotech Pty Ltd | Chimeric antigen receptors with modified linker domains and uses thereof |
| WO2019239213A2 (en) | 2018-06-01 | 2019-12-19 | Medicenna Therapeutics Inc. | Uses and methods for oncolytic virus targeting of il-4/il-13 and fusions thereof |
| EP3802579A1 (en) * | 2018-06-01 | 2021-04-14 | The Board of Trustees of the Leland Stanford Junior University | Il-13/il-4 superkines: immune cell targeting constructs and methods of use thereof |
| AU2019295855A1 (en) | 2018-06-29 | 2021-01-28 | City Of Hope | CD6 targeted chimeric antigen receptors for treatent of certain autoimmune disorders |
| CN113260369B (zh) * | 2018-08-10 | 2024-08-23 | 优特力克斯有限公司 | 癌抗原特异性细胞毒性t细胞 |
| EP3876961A4 (en) * | 2018-11-06 | 2023-01-25 | Washington University | CHIMERIC ANTIGEN RECEPTOR MEMORY-LIKE (CARML) NK CELLS AND METHODS FOR THEIR PRODUCTION AND USE |
| US20230065784A1 (en) | 2019-03-21 | 2023-03-02 | City Of Hope | Composition and method for reducing expression of checkpoint inhibitors in t cells expressing a car or ctl |
| US20220145252A1 (en) | 2019-03-29 | 2022-05-12 | City Of Hope | Methods for manufacturing t cells expressing of chimeric antigen receptors and other receptors |
| EP4549555A3 (en) * | 2019-05-24 | 2025-07-30 | City of Hope | Ccr4 targeted chimeric antigen receptor modified t cells for treatment of ccr4 positive malignancies |
| WO2021004400A1 (zh) * | 2019-07-06 | 2021-01-14 | 苏州克睿基因生物科技有限公司 | 一种表达cd3抗体受体复合物的免疫细胞及其用途 |
| CN112204135B (zh) * | 2019-07-06 | 2026-03-06 | 苏州克睿基因生物科技有限公司 | 一种表达cd3抗体受体复合物的免疫细胞及其用途 |
| JP7721500B2 (ja) * | 2019-07-24 | 2025-08-12 | リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド | Ｍａｇｅ－ａ４特異性を有するキメラ抗原受容体およびそれらの使用 |
| EP3769816A1 (en) * | 2019-07-25 | 2021-01-27 | Ospedale Pediatrico Bambino Gesù | Car-cd123 vector and uses thereof |
| WO2021138454A1 (en) | 2019-12-30 | 2021-07-08 | City Of Hope | Methods of making and using regulatory t cells and effector t cells having chimeric antigen receptors targeted to cd6, cd19, and/or an il-13r for treatment of autoimmune disorders and cancers |
| US12419954B2 (en) | 2020-01-31 | 2025-09-23 | City Of Hope | Targeted chimeric antigen receptor modified T cells for treatment of IL13Rα2 positive malignancies |
| EP4100428A4 (en) | 2020-02-04 | 2024-03-06 | Seattle Children's Hospital (DBA Seattle Children's Research Institute) | CHIMERIC ANTI-DINITROPHENOL ANTIGEN RECEPTORS |
| US20230374085A1 (en) * | 2020-03-11 | 2023-11-23 | City Of Hope | Dual-targeting chimeric antigen receptor modified t cells comprising il-13 and chlorotoxin for cancer treatment |
| US12551557B2 (en) | 2020-03-12 | 2026-02-17 | City Of Hope | Targeted chimeric antigen receptor modified T cells for treatment of IL13RALPHA2 positive malignancies |
| EP4143300A1 (en) | 2020-04-28 | 2023-03-08 | Lyell Immunopharma, Inc. | Methods for culturing cells |
| EP4158030A4 (en) * | 2020-05-27 | 2024-06-26 | The Medical College of Wisconsin, Inc. | IMPROVED LENTIVIRAL VECTOR TRANSFER PLASMID AND METHODS OF USE |
| GB202011993D0 (en) | 2020-07-31 | 2020-09-16 | Adc Therapeutics Sa | ANTI-IL 13Ra2 antibodies |
| CN116322717A (zh) * | 2020-08-11 | 2023-06-23 | 耶达研究及发展有限公司 | 否决car-t细胞 |
| WO2022056085A2 (en) * | 2020-09-10 | 2022-03-17 | Mustang Bio, Inc. | Combination therapy comprising cancer-targeted car-t cells and a method of using same for a treatment for cancer |
| WO2022098797A1 (en) * | 2020-11-04 | 2022-05-12 | Fred Hutchinson Cancer Research Center | Therapeutic targeting of mesothelin in acute myeloid leukemia with chimeric antigen receptor t cell therapy |
| WO2022109498A1 (en) | 2020-11-23 | 2022-05-27 | City Of Hope | Engineered t cells for expression of chimeric anitgen receptors |
| US11661459B2 (en) | 2020-12-03 | 2023-05-30 | Century Therapeutics, Inc. | Artificial cell death polypeptide for chimeric antigen receptor and uses thereof |
| TW202237827A (zh) | 2020-12-03 | 2022-10-01 | 美商世紀治療股份有限公司 | 經基因工程改造之細胞及其用途 |
| CN116635064A (zh) | 2020-12-18 | 2023-08-22 | 世纪治疗股份有限公司 | 具有适应性受体特异性的嵌合抗原受体系统 |
| CN114907485B (zh) * | 2021-02-08 | 2024-04-26 | 浙江大学 | 一种以内源性蛋白质分子替代单结构域抗体的嵌合抗原受体 |
| CA3172530A1 (en) | 2021-02-25 | 2022-09-01 | Spencer PARK | Ror1 targeting chimeric antigen receptor |
| KR20230175198A (ko) * | 2021-03-18 | 2023-12-29 | 더 위스타 인스티튜트 오브 아나토미 앤드 바이올로지 | IL13Rα2를 표적으로 하는 DNA 암호화 이중특이적 항체 및 이를 암 치료에 사용하는 방법 |
| US20240366662A1 (en) | 2021-03-30 | 2024-11-07 | City Of Hope | Car t cell therapy and ifn gamma |
| US20230190799A1 (en) * | 2021-07-21 | 2023-06-22 | City Of Hope | Chimeric antigen receptor t cells targeting cea and anti-cea-il2 immunocytokines for cancer therapy |
| CN113621077B (zh) * | 2021-09-02 | 2023-01-31 | 山东大学 | 一种tim-3/cd28融合蛋白及所述融合蛋白修饰的car-t细胞 |
| EP4176895A1 (en) * | 2021-11-08 | 2023-05-10 | AvenCell Europe GmbH | Targeting modules against il13ra2 or her2 for use in combination with a chimeric antigen receptor |
| WO2023130462A1 (zh) * | 2022-01-10 | 2023-07-13 | 卡瑞济(北京)生命科技有限公司 | 靶向IL13Rα2的嵌合抗原受体及其用途 |
| CN115960257B (zh) * | 2022-09-29 | 2023-10-27 | 卡瑞济(北京)生命科技有限公司 | 靶向IL13Rα2的经优化的嵌合抗原受体及其用途 |
| EP4588939A1 (en) | 2024-01-16 | 2025-07-23 | Universitat de Barcelona | Interleukin-13 receptor subunit alpha-2 (il13ralpha2) targeting moieties for the treatment and prevention of il13ralpha2-positive cancer |
Family Cites Families (38)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE69123241T2 (de) | 1990-12-14 | 1997-04-17 | Cell Genesys Inc | Chimärische ketten zur transduktion von rezeptorverbundenen signalwegen |
| US5712149A (en) | 1995-02-03 | 1998-01-27 | Cell Genesys, Inc. | Chimeric receptor molecules for delivery of co-stimulatory signals |
| ATE297986T1 (de) * | 1995-02-24 | 2005-07-15 | Gen Hospital Corp | Neuorientierung der zellulären immunität durch rezeptorchimären |
| GB9526131D0 (en) | 1995-12-21 | 1996-02-21 | Celltech Therapeutics Ltd | Recombinant chimeric receptors |
| US6576232B1 (en) | 1998-04-03 | 2003-06-10 | The Penn State Research Foundation | IL13 mutants |
| ES2239846T5 (es) | 1998-07-30 | 2011-03-04 | The Government Of The United States Of America, As Repres. By The Secretary Of Health And Human Services, Nat. Inst. Of Health | Mejora de la curación de heridas mediante la timosina beta-4. |
| WO2000023573A2 (en) | 1998-10-20 | 2000-04-27 | City Of Hope | Cd20-specific redirected t cells and their use in cellular immunotherapy of cd20+ malignancies |
| AU1599301A (en) * | 1999-11-11 | 2001-06-06 | Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services, The | Modulating IL-13 activity using mutated IL-13 molecules that are antagonists or agonists of IL-13 |
| US7560280B2 (en) | 2000-11-03 | 2009-07-14 | Kourion Therapeutics Gmbh | Human cord blood derived unrestricted somatic stem cells (USSC) |
| US7070995B2 (en) | 2001-04-11 | 2006-07-04 | City Of Hope | CE7-specific redirected immune cells |
| US20090257994A1 (en) | 2001-04-30 | 2009-10-15 | City Of Hope | Chimeric immunoreceptor useful in treating human cancers |
| WO2002088334A1 (en) | 2001-04-30 | 2002-11-07 | City Of Hope | Chimeric immunoreceptor useful in treating human cancers |
| US7514537B2 (en) | 2001-04-30 | 2009-04-07 | City Of Hope | Chimeric immunoreceptor useful in treating human gliomas |
| US11278594B2 (en) * | 2001-04-30 | 2022-03-22 | City Of Hope | Chimeric immunoreceptor useful in treating human cancers |
| US7317091B2 (en) | 2002-03-01 | 2008-01-08 | Xencor, Inc. | Optimized Fc variants |
| US7446190B2 (en) | 2002-05-28 | 2008-11-04 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Nucleic acids encoding chimeric T cell receptors |
| ATE373904T1 (de) | 2003-07-24 | 2007-10-15 | Matsushita Electric Industrial Co Ltd | Verfahren, kodierer und kommunikationsvorrichtung zur kodierung von parallel verketteten daten |
| US20050113564A1 (en) | 2003-11-05 | 2005-05-26 | St. Jude Children's Research Hospital | Chimeric receptors with 4-1BB stimulatory signaling domain |
| US7754441B2 (en) * | 2003-11-17 | 2010-07-13 | Genentech, Inc. | Compositions and methods for the treatment of tumor of hematopoietic origin |
| DE102004043271A1 (de) * | 2004-09-07 | 2006-03-09 | Linde Ag | Verfahren zur Synthese von Zirkoniumcarboxylaten |
| PT1814580T (pt) * | 2004-11-24 | 2016-11-11 | Hutchinson Fred Cancer Res | Métodos de utilização de il-21 para imunoterapia adotiva e identificação de antigénios tumorais |
| CA2634072A1 (en) | 2005-12-21 | 2007-06-28 | Universite De Montreal | Markers for memory t cells and uses thereof |
| BRPI0620187A2 (pt) * | 2005-12-21 | 2011-11-01 | Sentoclone Ab | método para a expansão de linfócitos t auxiliares cd4+ e/ou linfócitos t cd8+ reativos a tumor, linfócito-t reativo a tumor, composição farmacêutica, métodos para tratar um indivìduo sofrendo de uma doença de origem neoplástica e para realizar a regressão de tumor em um indivìduo, uso de linfócitos-t reativos a tumor, e, kit |
| ES2926805T3 (es) | 2007-01-31 | 2022-10-28 | Yeda Res & Dev | Linfocitos T reguladores redirigidos y modificados por ingeniería genética y su uso en la supresión de enfermedades autoinmunitarias e inflamatorias |
| JP5592792B2 (ja) * | 2007-09-26 | 2014-09-17 | ユセベ ファルマ ソシエテ アノニム | 二重特異性抗体の融合体 |
| EP4032552B1 (en) * | 2008-08-26 | 2023-10-04 | City of Hope | Method and compositions for enhanced anti-tumor effector functioning of t cells |
| JP2013514795A (ja) * | 2009-12-22 | 2013-05-02 | ノバルティス アーゲー | 治療における使用のための四価ｃｄ４７抗体定常領域融合タンパク質 |
| GB2481983A (en) * | 2010-07-12 | 2012-01-18 | Hart Fenton & Co Ltd | A ship including a gas tank room |
| US20130164272A1 (en) | 2010-08-18 | 2013-06-27 | Udai S. Kammula | Methods of identifying central memory t cells and obtaining antigen-specific t cell populations |
| PH12013501201A1 (en) * | 2010-12-09 | 2013-07-29 | Univ Pennsylvania | Use of chimeric antigen receptor-modified t cells to treat cancer |
| RU2688185C2 (ru) * | 2011-03-23 | 2019-05-21 | Фред Хатчинсон Кэнсер Рисерч Сентер | Способ и композиции для клеточной иммунотерапии |
| BR112013024574B1 (pt) * | 2011-03-29 | 2022-08-09 | Roche Glycart Ag | Anticorpo e uso do anticorpo |
| EP2532740A1 (en) | 2011-06-11 | 2012-12-12 | Michael Schmück | Antigen-specific CD4+ and CD8+ central-memory T cell preparations for adoptive T cell therapy |
| EP2814846B1 (en) * | 2012-02-13 | 2020-01-08 | Seattle Children's Hospital d/b/a Seattle Children's Research Institute | Bispecific chimeric antigen receptors and therapeutic uses thereof |
| KR102264290B1 (ko) * | 2012-08-20 | 2021-06-10 | 프레드 헛친슨 켄서 리서치 센터 | 세포 면역요법을 위한 방법 및 조성물 |
| US9657105B2 (en) * | 2013-03-15 | 2017-05-23 | City Of Hope | CD123-specific chimeric antigen receptor redirected T cells and methods of their use |
| CN107074957B (zh) * | 2014-01-13 | 2021-05-07 | 希望之城公司 | 在Fc间隔物区中具有突变的嵌合抗原受体(CAR)及其使用方法 |
| JP6657195B2 (ja) * | 2014-09-19 | 2020-03-04 | シティ・オブ・ホープＣｉｔｙ ｏｆ Ｈｏｐｅ | Ｌ１３Ｒα２を標的とする共刺激性キメラ抗原レセプターＴ細胞 |
-
2015
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