CN109328074A - 嵌合抗原和t细胞受体及使用的方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了包含本文公开的细胞外结构域的嵌合抗原受体(CAR)或T细胞受体(TCR)。本发明的一些方面涉及多核苷酸，所述多核苷酸编码包含本文公开的细胞外结构域的嵌合抗原受体(CAR)或T细胞受体(TCR)。本发明的其他方面涉及包含所述CAR或所述TCR的细胞及其在T细胞疗法中的用途。

Description

嵌合抗原和T细胞受体及使用的方法

相关申请的交叉引用

本申请要求2016年4月1日提交的美国临时专利申请号62/317,258的权益，该临时专利申请通过引用整体并入本文。

序列表

本申请包含序列表，该序列表已经以ASCII格式电子提交，并且通过引用整体并入本文。2017年3月30日创建的所述ASCII拷贝命名为K-1031_02_SL.txt，大小为414,963字节。

发明背景

人类癌症就其本质而言是由已经经历了遗传或表观遗传转化而变成异常癌细胞的正常细胞组成。此时，癌细胞开始表达与正常细胞表达的蛋白质和其他抗原不同的蛋白质和其他抗原。这些异常的肿瘤抗原可以被身体的先天免疫系统用于特异性靶向和杀死癌细胞。然而，癌细胞采用各种机制来阻止免疫细胞如T和B淋巴细胞成功靶向癌细胞。

目前的疗法T细胞疗法依赖于经富集或经修饰的人T细胞来靶向并杀死患者中的癌细胞。为了增加T细胞靶向和杀死特定癌细胞的能力，已经开发了方法来工程化改造T细胞以表达将T细胞导向特定靶癌细胞的构建体。嵌合抗原受体(CAR)和工程化T细胞受体(TCR)，其包含能够与特定肿瘤抗原相互作用的结合结构域，允许T细胞靶向并杀死表达特定肿瘤抗原的癌细胞。

存在对用于靶向和杀死癌细胞的改进的CAR和TCR的需求。

发明概述

本发明通过提供包含表达特异性靶向并杀死癌细胞的抗原受体(CAR)或T细胞受体(TCR)的经基因工程化改造的免疫细胞的组合物和方法解决了该需求。

CAR可以包含例如，(i)抗原特异性组分(“抗原结合分子”)，(ii)一个或多个共刺激结构域(其包括铰链结构域)，和(iii)一个或多个活化结构域。每个结构域可以是异种的，也就是说，由衍生自不同蛋白质链的序列组成。表达CAR的免疫细胞(例如T细胞)可以用于各种疗法，包括癌症疗法。

如下文(包括实施例部分)更详细描述的，与包含包括完整铰链结构域(“CHD”)的共刺激结构域的CAR相比，包含包括截短铰链结构域(“THD”)的共刺激结构域的CAR提供了出乎意料的优越性质。可以将编码此类CAR的多核苷酸转导到T细胞中，而CAR在T细胞例如患者自身的T细胞中得到表达。当将经转导的T细胞移植回患者时，CAR指导T细胞识别并结合存在于癌细胞表面上的表位，从而允许癌细胞而不是非癌细胞的结合。该结合导致T细胞中细胞溶解机制的活化，其特异性杀死结合的癌细胞。在本发明之前，包含THD的CAR优于包含CHD的CAR不为人所知。因此，本发明满足了对用于治疗癌症的新型和改进疗法存在的未满足的需求。

本发明的一方面是编码嵌合抗原受体(CAR)或T细胞受体(TCR)的分离的多核苷酸，其包含(i)抗原结合分子，(ii)共刺激结构域，和(iii)活化结构域。所述共刺激结构域可以包含细胞外结构域、跨膜结构域和细胞内结构域，其中所述细胞外结构域包含截短铰链结构域，所述截短铰链结构域基本上由以下各项组成或由以下各项组成：(i)与SEQ IDNO：1的氨基酸123至152至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的氨基酸序列，和任选地(ii)一至六个氨基酸。

在一些实施方案中，所述一至六个氨基酸为异源的氨基酸。

在一些实施方案中，所述截短铰链结构域基本上由以下组成或由以下组成：与SEQID NO：1的氨基酸123至152至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。

在一些实施方案中，所述氨基酸序列由以下核苷酸序列编码：与SEQ ID NO：2至少约60％，至少约70％，至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的核苷酸序列。

在一些实施方案中，所述跨膜结构域为以下各项的跨膜结构域：4-1BB/CD137、T细胞受体的alpha链、T细胞受体的beta链、CD3epsilon、CD4、CD5、CD8alpha、CD9、CD16、CD19、CD22、CD33、CD37、CD45、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137、CD154或T细胞受体的zeta链，或它们的任何组合。

在一些实施方案中，所述跨膜结构域包含与SEQ ID NO：5至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。

在一些实施方案中，所述跨膜结构域由以下核苷酸序列编码：与SEQ ID NO：4至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的核苷酸序列。

在一些实施方案中，所述细胞内结构域包含以下各项的信号传导区：4-1BB/CD137、活化性NK细胞受体、B7-H3、BAFFR、BLAME(SLAMF8)、BTLA、CD100(SEMA4D)、CD103、CD160(BY55)、CD18、CD19、CD19a、CD2、CD247、CD27、CD276(B7-H3)、CD29、CD3delta、CD3epsilon、CD3gamma、CD30、CD4、CD40、CD49a、CD49D、CD49f、CD69、CD7、CD84、CD8alpha、CD8beta、CD96(Tactile)、CD1 1a、CD1 1b、CD1 1c、CD1 1d、CDS、CEACAM1、CRT AM、细胞因子受体、DAP-10、DNAM1(CD226)、Fc gamma受体、GADS、GITR、HVEM(LIGHTR)、IA4、ICAM-1、ICAM-1、Ig alpha(CD79a)、IL2R beta、IL2R gamma、IL7R alpha、免疫球蛋白样蛋白质、诱导性T细胞共刺激分子(ICOS)、整合素、ITGA4、ITGA4、ITGA6、ITGAD、ITGAE、ITGAL、ITGAM、ITGAX、ITGB2、ITGB7、ITGBl、KIRDS2、LAT、LFA-1、LFA-1、与CD83特异性结合的配体、LIGHT、LIGHT(肿瘤坏死因子超家族成员14；TNFSF14)、LTBR、Ly9(CD229)、淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1(CD1 la/CD18)、MHC I类分子、NKG2C、NKG2D、NKp30、NKp44、NKp46、NKp80(KLRF1)、OX-40、PAG/Cbp、程序性死亡-1(PD-1)、PSGL1、SELPLG(CD162)、信号传导淋巴细胞活化分子(SLAM蛋白)、SLAM(SLAMF1；CD150；IPO-3)、SLAMF4(CD244；2B4)、SLAMF6(NTB-A；Lyl08)、SLAMF7、SLP-76、TNF受体蛋白、TNFR2、Toll配体受体、TRANCE/RANKL、VLA1或VLA-6，或它们的组合。

在一些实施方案中，所述细胞内结构域包含4-1BB/CD137信号传导区。

在一些实施方案中，所述细胞内结构域包含与SEQ ID NO：7至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。

在一些实施方案中，所述细胞内结构域包含由以下核苷酸序列编码的氨基酸序列：与SEQ ID NO：6至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的核苷酸序列。

在一些实施方案中，所述抗原结合分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中所述VH包含3个互补决定区(CDR)并且所述VL包含3个CDR。

在一些实施方案中，所述抗原结合分子特异性结合选自由以下各项组成的组的抗原：5T4、甲胎蛋白、B细胞成熟抗原(BCMA)、CA-125、癌胚抗原、CD19、CD20、CD22、CD23、CD30、CD33、CD56、CD123、CD138、c-Met、CSPG4、C型凝集素样分子1(CLL-1)、EGFRvIII、上皮肿瘤抗原、ERBB2、FLT3、叶酸结合蛋白、GD2、GD3、结合的HER1-HER2、结合的HER2-HER3、HER2/Neu、HERV-K、HIV-1包膜糖蛋白gp41、HIV-1包膜糖蛋白gpl20、IL-llRalpha、kappa链、lambda链、黑色素瘤相关抗原、间皮素、MUC-1、突变的p53、突变的ras、前列腺特异性抗原、ROR1或VEGFR2，或它们的组合。

在一些实施方案中，所述抗原结合分子特异性结合BCMA、CLL-1或FLT3。

在一些实施方案中，所述活化结构域包含与SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：251至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。

在一些实施方案中，所述活化结构域由以下核苷酸序列编码：与SEQ ID NO：8至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的核苷酸序列。

在一些实施方案中，所述CAR或TCR进一步包含前导肽。

在一些实施方案中，所述前导肽包含与SEQ ID NO：11至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。

在一些实施方案中，所述前导肽由以下核苷酸序列编码：与SEQ ID NO：10至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的核苷酸序列。

本发明的另一方面是包含上述方面或实施方案的多核苷酸的载体。

在一些实施方案中，所述载体为腺病毒载体、腺病毒相关载体、DNA载体、慢病毒载体、质粒、逆转录病毒载体或RNA载体，或它们的任何组合。

而本发明的另一方面是由上述方面或实施方案的多核苷酸或上述方面或实施方案的载体编码的多肽。

在另一方面，本发明是包含上述方面或实施方案的多核苷酸、上述方面或实施方案的载体，或上述方面或实施方案的多肽，或它们的任何组合的细胞。

在一些实施方案中，所述细胞为T细胞。

在一些实施方案中，所述T细胞为同种异体T细胞、自体T细胞、工程化自体T细胞(eACT^TM)或肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)。

在一些实施方案中，所述T细胞为CD4+T细胞。

在一些实施方案中，所述T细胞为CD8+T细胞。

在一些实施方案中，所述T细胞为体外细胞。

在一些实施方案中，所述T细胞为自体T细胞。

本发明的一个方面是包含上述方面或实施方案的多核苷酸、包含上述方面或实施方案的载体、包含上述方面或实施方案的多肽或包含上述方面或实施方案的细胞的组合物。

在一些实施方案中，所述组合物经配制以递送至受试者，任选地，所述组合物包含至少一种药学上可接受的赋形剂。

本发明的另一方面是制备表达CAR或TCR的细胞的方法，所述方法包含在适合的条件下用上述方面或实施方案的多核苷酸转导细胞。

在一些实施方案中，所述方法进一步包含分离所述细胞。

而本发明的另一方面是诱导针对肿瘤的免疫力的方法，所述方法包含向受试者施用有效量的细胞，所述细胞包含上述方面或实施方案的多核苷酸、包含上述方面或实施方案的载体，或上述方面或实施方案的多肽，或它们的任何组合。

在另一方面，本发明是治疗有需要的受试者中癌症的方法，所述方法包含向受试者施用上述方面或实施方案的多核苷酸、上述方面或实施方案的载体、上述方面或实施方案的多肽、上述方面或实施方案的细胞或上述方面或实施方案的组合物。

在一些实施方案中，所述癌症为血液学癌症。

在一些实施方案中，所述癌症为白细胞的癌症。

在一些实施方案中，所述癌症为浆细胞的癌症。

在一些实施方案中，所述癌症为白血病、淋巴瘤或骨髓瘤。

在一些实施方案中，所述癌症为急性淋巴母细胞白血病(ALL)(包括非T细胞ALL)、急性髓样白血病、B细胞幼淋巴细胞白血病、B细胞急性淋巴细胞白血病(“BALL”)、母细胞性浆细胞样树突状细胞肿瘤、伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性髓细胞性白血病(CML)、慢性髓样白血病、慢性或急性白血病、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡性淋巴瘤(FL)、毛细胞白血病、霍奇金病、恶性淋巴细胞增生性疾病、MALT淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、意义不明的单克隆丙种球蛋白病(MGUS)、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常和骨髓增生异常综合征、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、浆细胞增生性疾病(包括无症状性骨髓瘤(郁积型多发性骨髓瘤或惰性骨髓瘤))、浆母细胞性淋巴瘤、浆细胞样树突状细胞肿瘤、浆细胞瘤(包括浆细胞恶液质；单发性骨髓瘤；单发性浆细胞瘤；髓外浆细胞瘤；和多发性浆细胞瘤)、POEMS综合征(也称为Crow-Fukase综合征；Takatsuki病；和PEP综合征)、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBC)、小细胞或大细胞滤泡性淋巴瘤、脾边缘区淋巴瘤(SMZL)、系统性淀粉样蛋白轻链淀粉样变、T细胞急性淋巴细胞白血病(“TALL”)、T细胞淋巴瘤、转化滤泡性淋巴瘤或瓦氏巨球蛋白血症，或它们的组合。

一般而言，本发明涉及工程化自体细胞疗法(Engineered Autologous CellTherapy)，缩写为“eACT^TM”，也称为过继细胞转移。eACT^TM是一种过程，通过该过程收集患者自身的T细胞并随后进行基因工程化改造以识别和靶向在一种或多种特定癌细胞的细胞表面上表达的一种或多种抗原。可以将T细胞工程化改造以表达例如CAR或TCR。将CAR阳性(CAR+)T细胞工程化改造以表达CAR。CAR可以包含，例如对特定肿瘤抗原具有特异性的细胞外单链可变片段(scFv)，其直接或间接地与包含至少一个共刺激结构域的细胞内信号传导部分连接，共刺激结构域直接或间接地与至少一个活化结构域连接；组分可以按任何顺序排列。共刺激结构域可以衍生自本领域已知的共刺激蛋白质例如SEQ ID NO：1，并且活化结构域可以衍生自例如CD3-zeta的任何形式。在一些实施方案中，将CAR设计为具有两个、三个、四个或更多个共刺激结构域。在一些实施方案中，将CAR进行工程化改造使得共刺激结构域以单独的多肽链形式表达。CART细胞疗法和构建体的实例描述于美国专利公开号2013/0287748、2014/0227237、2014/0099309和2014/0050708；国际专利公开号WO2012033885、WO2012079000、WO2014127261、WO2014186469、WO2015080981、W02015142675、WO2016044745和WO2016090369；以及Sadelain et al，Cancer Discovery，3：388-398(2013)，其每一个通过引用整体并入本文。

本文描述的任何方面或实施方案可以与本文公开的任何其他方面或实施方案组合。虽然已经结合本发明的详细描述描述了本发明，但是前面的描述旨在说明而不是限制本发明的范围，本发明的范围由所附权利要求的范围限定。其他方面、优点和修改在以下权利要求的范围内。

本文提及的专利和科学文献建立了本领域技术人员可获得的知识。本文引用的所有美国专利和公开或未公开的美国专利申请通过引用并入本文。本文引用的所有公开的外国专利和专利申请在此通过引用并入本文。本文引用的所有其他公开的参考文献、词典、文件、手稿和科学文献在此通过引用并入本文。

根据附图和以下详细说明，包括实施例和权利要求，本发明的其他特征和优点将显而易见。

附图说明

从以下结合附图的详细描述中将更清楚地领会以上和进一步的特征。然而，附图仅用于说明目的而不是为了限制。

图1A显示了具有SEQ ID NO：1的氨基酸序列的共刺激蛋白质。标记了共刺激蛋白质的铰链结构域(实线下划线)、跨膜结构域(点下划线)和信号传导结构域(短线下划线)。用粗体表示新的截短铰链结构域(“THD”)。图1B和1C提供了具有SEQ ID NO：1的氨基酸序列的共刺激蛋白质的细胞外结构域的带状示意图。图1B显示了SEQ ID NO：1的氨基酸序列内的区域的实例，其用于在CAR的背景中获得铰链区的一个实施方案，即含有SEQ ID NO：1的氨基酸114至152的区域(本文称为完整铰链结构域或“CHD”；用黑色和深灰色标记)。图1C显示了含有SEQ ID NO：1的氨基酸123至152的THD(用黑色标记)。在图1B中，用深灰色标记并圈出从图1C排除的铰链区的部分。

图2A-2H显示了本文公开的八个实例结合分子的CLUTSTAL W(2.83)多序列比对。图2A显示了包含VH结构域的实例抗CLL-1结合分子的序列比对。显示了CDR和框架区FR，如通过Chothia编号所确定的(图2A)。图2B是提供图2A中所示的每个VH和CDR的SEQ ID NO的表格。图2C显示了包含VL结构域的实例抗CLL-1结合分子的序列比对。显示了CDR和FR，如通过Chothia编号所确定的(图2C)。图2D是提供图2C中所示的每个VH和CDR序列的SEQ ID NO的表格。图2E显示了包含VH结构域的实例抗BCMA结合分子的序列比对。显示了互补决定区(CDR)和框架区(FR)，如通过Chothia编号所确定的(图2E)。图2F是提供图2E中所示的每个VH和CDR的SEQ ID NO的表格。图2G显示了包含VL结构域的实例抗BCMA结合分子的序列比对。显示了CDR和FR，如通过Chothia编号所确定的(图2G)。图2H是提供图2G中所示的每个VH和CDR序列的SEQ ID NO的表格。

图3描绘了用编码各种CAR的mRNA电穿孔的原代人T细胞中的CAR表达。显示了从具有完整铰链结构域(“CHD”)的CAR获得的数据并显示了从具有截短铰链结构域(“THD”)的CAR获得的数据。

图4A-4X显示了通过与所示靶细胞系共培养16小时后电穿孔的抗FLT3CAR T细胞的IFNγ、IL-2和TNFα产生。图4A-4B、4G-4H、4M-4N和4S-4T分别显示了与Namalwa、EoL-1、HL60和MV4；11靶细胞共培养后的IFNγ产生。图4C-4D、4I-4J、4O-4P和4U-4V分别显示了与Namalwa、EoL-1、HL60和MV4；11靶细胞共培养后的IL-2产生。图4E-4F、4K-4L、4Q-4R和4W-4X分别显示了与Namalwa、EoL-1、HL60和MV4；11靶细胞共培养后的TNFα产生。

图5A-5H显示了共培养16小时后电穿孔的抗FLT3CART细胞对Namalwa(图5A-5B)、EoL1(图5C-5D)、HL60(图5E-5F)和MV4；11(图5G-5H)靶细胞系的细胞溶解活性。

图6A-6B描绘了来自两个健康供体的慢病毒转导的原代人T细胞中的CAR表达。

图7A-7F显示了在与所示靶细胞系共培养16小时后，来自两个健康供体的慢病毒转导的CAR T细胞的IFNγ(图7A-7B)、TNFα(图7C-7D)和IL-2(图7E-7F)产生。

图8A-8D显示了与Namalwa(图8A)、EoL1(图8B)、MV4；11(图8C)和HL60(图8D)靶细胞系共培养16、40、64、88或112小时的来自表达抗FLT3CAR构建体的两个健康供体随时间的平均细胞溶解活性。

图9A-9B描绘了在与CD3-CD28珠子或所示靶细胞系共培养5天后，来自两个健康供体的CFSE标记的慢病毒转导的CART细胞的增殖。

图10A-10D描绘了用于体内研究的慢病毒转导的原代人T细胞中的CAR表达。图10E-10F显示了一式两份实施的在异种模型中静脉内注射对照(模拟品)或抗FLT3CART细胞(10E3-CHD、10E3-THD或8B5-THD)后，经标记的急性髓样白血病(AML)细胞的测量的生物发光成像的图示。图10G提供了图10E中各个数据点的p值。图10H-10K显示了小鼠的存活曲线，所述小鼠注射了模拟品或10E3-CHD(图10H)、模拟品或10E3-THD(图10I)、模拟品或8B5-THD(图10J)，或10E3-THD或8B5-THD(图10K)CAR T细胞。

图11A-11B显示了在mRNA电穿孔后6小时由蛋白质L测定的CLL-1 CAR表达。

图12A-12C显示了来自mRNA电穿孔后24小时的来自不同CLL-1 CAR-T细胞构建体的细胞因子释放测定的结果。如所示，显示了与Namalwa、MV4；11、U937、HL60和EoL-1细胞共培养的对照(单独的靶物、模拟品、GFP和CD19 CAR T细胞)和抗CLL-1 CAR T细胞(24C1_HL-THD、24C1_HL_CHD、24C8_HL-CHD和24C8_HL_THD)的IL-2(图12A)、IFNγ(图12B)和TNFα(图12C)产生水平。

图13A-13E显示了mRNA电穿孔后24小时的不同的CLL-1 CAR-T细胞构建体的细胞溶解活性。将用对照构建体(模拟品、GFP和CD19 CAR)或抗CLL-1 CAR构建体(24C8_HL-CHD和24C8_HL_THD)电穿孔的T细胞与Namalwa(图13A)、MV；411(图13B)、EoL-1(图13C)、HL-60(图13D)和U937靶细胞共培养，并测定了每个靶细胞系的特异性溶解的百分比。

图14A-14C显示了来自与不同的细胞系共培养16小时后的来自不同的经转导的抗CLL-1 CAR T细胞的细胞因子释放测定的结果。如所示，显示了对于与Namalwa、HL-60或MV4；11靶细胞共培养的对照(单独的靶物和模拟品)和经转导的抗CLL-1 CAR T细胞(10E3_THD和24C1_LH_THD)的IFNγ(图14A)、IL-2(图14B)和TNFα(图14C)产生水平。

图15A-15C显示了来自与Namalwa(图15A)、MV4；11(图15B)或HL-60(图15C)靶细胞共培养16小时和40小时后的抗CLL-1 CAR T细胞(C1_24C1_LH_THD)的细胞溶解活性。

图16A-16F显示了在与EoL-1(黑色)、NCI-H929(浅灰色)或MM1S(灰色)靶细胞系共培养16小时后，来自两个健康供体的慢病毒转导的CART细胞的IFNγ、TNFα和IL-2产生。图16A和16B显示了来自第一供体(图16A)和第二供体(图16B)的慢病毒转导的CART细胞中的IFNγ(pg/ml；y轴)产生。图16C和16D显示了来自第一供体(图16C)和第二供体(图16D)的慢病毒转导的CART细胞中的TNFα(pg/ml；y轴)产生。图16E和16F显示了来自第一供体(图16E)和第二供体(图16F)的慢病毒转导的CART细胞中的IL-2产生(pg/ml；y轴)。

图17A-17F显示了与EoL1(图17A和17B)、NCI-H929(图17C和17D)或MM1S(图17E和17F)靶细胞共培养16小时、40小时、64小时、88小时或112小时的来自表达所示的CAR的两个健康供体随时间的平均细胞溶解活性(作为剩余活的靶细胞的百分比；y轴)。图17A和17B显示了与EoL1靶细胞共培养16小时、40小时、64小时、88小时或112小时的来自第一供体(图17A)和第二供体(图17B)的经转导的CART细胞的平均细胞溶解活性。图17C和17D显示了与NCI-H929靶细胞共培养16小时、40小时、64小时、88小时或112小时的来自第一供体(图17C)和第二供体(图17D)的经转导的CART细胞的平均细胞溶解活性。图17E和17F显示了与MM1S靶细胞共培养16小时、40小时、64小时、88小时或112小时的来自第一供体(图17E)和第二供体(图17F)的经转导的CART细胞的平均细胞溶解活性。

图18A和18B显示了在与CD3-CD28珠子(顶行)、EoL-1(第二行)、NCI-H929(第三行)或MM1S(底行)靶细胞系共培养6天后，来自第一健康供体(图18A)和第二健康供体(图18B)的CFSE标记的慢病毒转导的CAR T细胞的增殖。

图19A和图19B是显示本发明的嵌合抗原受体(CAR)的热稳定性的图。图19A：在磷酸缓冲盐(PBS)溶液中，包含具有截短铰链结构域(“THD”)的细胞外结构域的CAR相对于包含具有完整铰链结构域(“CHD”)的细胞外结构域的CAR，具有更高的解链温度。图19B：在存在50mM NaCl的情况下，包含具有THD的细胞外结构域的CAR相对于包含具有CHD的细胞外结构域的CAR，具有更高的解链温度。

发明详述

本发明涉及包含新的截短铰链结构域(“THD”)的新的多肽和编码其的多核苷酸。本发明的一些方面涉及编码包含本文所公开的THD的嵌合抗原受体(CAR)或T细胞受体(TCR)的多核苷酸。本发明也提供了包含此类多核苷酸的载体(例如病毒载体)和包含此类载体的组合物。本发明进一步提供了编码此类CAR或TCR的多核苷酸和包含此类多核苷酸的组合物。本发明另外提供了包含此类多核苷酸的和/或用此类病毒载体转导的工程化细胞(例如T细胞)以及包含此类工程化细胞的组合物。本发明提供了包括多个工程化T细胞的组合物(例如药物组合物)。本发明提供了用于制备此类工程化T细胞和组合物的方法以及此类工程化T细胞和组合物的用途(例如在治疗黑色素瘤中)。并且，本发明提供了诱导针对肿瘤的免疫力的方法，所述方法包含向受试者施用有效量的包含本发明的多核苷酸、载体或多肽的细胞。本发明的其他方面涉及包含CAR或TCR的细胞及其在T细胞疗法例如自体细胞疗法(eACT^TM))中用于治疗患有癌症的患者的用途。

定义

为了更容易理解本发明，首先在下面定义某些术语。在整个说明书中阐述了对以下术语和其他术语的附加定义。

如在本说明书和所附权利要求中所使用的，单数形式“一个”、“一种”和“所述”包括复数指示物，除非上下文另有明确规定。

除非在上下文中明确说明或显而易见，否则如本文所用，术语“或”应当理解为包含性的并且涵盖“或”和“和”两者。

本文使用的术语“和/或”视为具有或不具有另一个的两个指定特征或组件中的每一个的具体公开。因此，如在短语例如“A和/或B”中所使用的术语“和/或”旨在包括A和B；A或B；A(单独)；和B(单独)。同样地，如在短语例如“A、B和/或C”中所使用的术语“和/或”旨在涵盖以下方面的每一个：A、B和C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A和C；A和B；B和C；A(单独)；B(单独)；和C(单独)。

如本文所使用的术语“例如(e.g.)”和“即(i.e.)”仅作为实例使用，而没有意图限制，并且不应当诠释为仅涉及在说明书中明确列举的那些项目。

术语“或更多”、“至少”、“超过”等，例如“至少一个”应当理解为包括但不限于至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149或150、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、2000、3000、4000、5000或超过所述值。还包括其间任何更大的数字或分数。

相反地，术语“不超过”包括小于所述值的每个值。例如，“不超过100个核苷酸”包括100、99、98、97、96、95、94、93、92、91、90、89、88、87、86、85、84、83、82、81、80、79、78、77、76、75、74、73、72、71、70、69、68、67、66、65、64、63、62、61、60、59、58、57、56、55、54、53、52、51、50、49、48、47、46、45、44、43、42、41、40、39、38、37、36、35、34、33、32、31、30、29、28、27、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1和0个核苷酸。还包括其间任何更小的数字或分数。

术语“多个”、“至少两个”、“两个或更多个”、“至少第二个”等应当理解为包括但不限于至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149或150、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、2000、3000、4000、5000或更多。还包括其间任何更大的数字或分数。

在整个说明书中，词语“包含(comprising)”或变形将理解为暗指包括所述要素、整数或步骤，或要素、整数或步骤的组，但不排除任何其他要素、整数或步骤，或要素、整数或步骤的组。应当理解的是，在本文中无论何处用语言“包含”描述方面，还提供了以“由......组成”和/或“基本上由......组成”描述的其他类似方面。

除非明确说明或从上下文中显而易见，如本文所用，术语“约”是指如本领域普通技术人员测定的特定值或组成的可接受误差范围内的值或组成，其将部分取决于如何测量或测定值或组成，即测量系统的局限性。例如，“约”或“基本上由.......组成”可以表示按本领域实践的1个内或超过1个标准偏差。“约”或“基本上由......组成”可以表示高达10％的范围(即±10％)。因此，“约”可以理解为在10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.1％、0.05％、0.01％或0.001％内大于或小于所述值。例如，约5mg可以包括4.5mg和5.5mg之间的任何量。此外，特别是关于生物系统或过程，该术语可以表示高达一个数量级或高达5倍的值。当在本公开中提供特定值或组成时，除非另有说明，否则应当假定“约”或“基本上由......组成”的含义在该特定值或组成的可接受的误差范围内。

如文本所述，除非另有说明，否则任何浓度范围、百分比范围、比率范围或整数范围应当理解为包括所叙述范围内的任何整数的值，并且在适当时包括其分数(例如整数的十分之一和百分之一)。

使用其国际单位制(SI)接受的形式提供本文所使用的单位、前缀和符号。数字范围包括定义范围的数字。

除非另外定义，否则本文所使用的所有技术和科学术语具有与本公开所涉及领域的普通技术人员通常理解的含义相同的含义。例如，Juo，“The Concise Dictionary ofBiomedicine and Molecular Biology”，2nd ed.，(2001)，CRC Press；“The Dictionaryof Cell&Molecular Biology”，5th ed.，(2013)，Academic Press；和“The OxfordDictionary Of Biochemistry And Molecular Biology”，Cammack et al.eds.，2nd ed，(2006)，Oxford University Press为本领域技术人员提供了用于本公开中使用的许多术语的通用词典。

“施用”是指使用本领域技术人员已知的任何各种方法和递送系统将药剂物理导入受试者。本文公开的制剂的例示性施用途径包括静脉内、肌肉内、皮下、腹膜内、脊柱或其他肠胃外施用途径，例如通过注射或输液。本文所使用的短语“肠胃外施用”表示除肠内和局部施用外的施用方式，通常通过注射以及包括但不限于静脉内、肌肉内、动脉内、鞘内、淋巴管内、病灶内、囊内、眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内、硬膜外和胸骨内注射和输液，以及体内电穿孔。在一些实施方案中，经由非肠胃外途径例如口服施用制剂。其他非肠胃外途径包括局部、表皮或粘膜施用途径，例如鼻内、阴道、直肠、舌下或局部。也可以实施施用，例如，一次，多次，和/或在一个或多个长时期。

术语“抗体”(Ab)包括但不限于，特异性结合抗原的糖蛋白免疫球蛋白。通常，抗体可以包含通过二硫键相互连接的至少两条重(H)链和两条轻(L)链，或其抗原结合分子。每条H链包含重链可变区(本文缩写为VH)和重链恒定区。重链恒定区包含三个恒定结构域，CH1、CH2和CH3。每条轻链包含轻链可变区(本文缩写为VL)和轻链恒定区。轻链恒定区包含一个恒定结构域，CL。VH和VL区域可以进一步细分为高变的区域，称为互补决定区(CDR)，散步着更保守的区域，称为框架区(FR)。每个VH和VL包含三个CDR和四个FR，以下列顺序从氨基末端到羧基末端排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合结构域。Ab的恒定区可以介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，包括免疫系统的各种细胞(例如效应细胞)和经典补体系统的第一组分(C1q)。

抗体可以包括例如，单克隆抗体、重组产生的抗体、单特异性抗体、多特异性抗体(包括双特异性抗体)、人抗体、工程化抗体、人源化抗体、嵌合抗体、免疫球蛋白、合成抗体、包含两个重链和两个轻链分子的四聚体抗体、抗体轻链单体、抗体重链单体、抗体轻链二聚体、抗体重链二聚体、抗体轻链-抗体重链对、胞内抗体、抗体融合物(本文有时称为“抗体缀合物”)、异缀合抗体、单结构域抗体、单价抗体、单链抗体或单链Fv(scFv)、骆驼源化抗体、亲和体、Fab片段、F(ab’)₂片段、二硫键连接的Fv(sdFv)、抗独特型(抗Id)抗体(包括例如，抗-抗Id抗体)、微抗体、结构域抗体、合成抗体(本文有时称为“抗体模拟物”)和以上任何的抗原结合片段。在某些实施方案中，本文所述的抗体是指多克隆抗体群。

免疫球蛋白可以衍生自任何公知的同种型，包括但不限于IgA、分泌型IgA、IgG、IgE和IgM。IgG亚类也是本领域技术人员熟知的并且包括但不限于人IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。“同种型”是指由重链恒定区基因编码的Ab类或亚类(例如，IgM或IgG1)。术语“抗体”包括，举例来说，天然存在的和非天然存在的Ab两者；单克隆和多克隆Ab；嵌合和人源化Ab；人或非人Ab；完全合成的Ab；和单链Ab。非人Ab可通过重组方法人源化以降低其在人体内的免疫原性。在没有明确说明的情况下，除非上下文另有说明，否则术语“抗体”还包括抗原结合片段或任何前述免疫球蛋白的抗原结合部分，并且包括单价和二价片段，以及单链Ab。

“抗原结合分子”、“抗原结合部分”或“抗体片段”是指包含从该分子所源于的抗体的抗原结合部分(例如，CDR)的任何分子。抗原结合分子可以包括抗原互补决定区(CDR)。抗体片段的实例包括但不限于，从抗原结合分子形成的Fab、Fab′、F(ab′)2和Fv片段、dAb、线性抗体、scFv抗体和多特异性抗体。肽体(即，包含肽结合结构域的Fc融合分子)是适合的抗原结合分子的另一个实例。在一些实施方案中，抗原结合分子结合肿瘤细胞上的抗原。在一些实施方案中，抗原结合分子结合参与过度增殖性疾病的细胞上的抗原或结合病毒或细菌抗原。在某些实施方案中，抗原结合分子结合BCMA、CLL-1或FLT3。在进一步的实施方案中，抗原结合分子是特异性结合抗原的抗体片段，包括其一个或多个的互补决定区(CDR)。在进一步的实施方案中，抗原结合分子是单链可变片段(scFv)。在一些实施方案中，抗原结合分子包含高亲和性多聚体(avimer)或由高亲和性多聚体组成。

如本文所用，术语“可变区”或“可变结构域”可互换使用，并且在本领域中常见。可变区通常是指抗体的一部分，通常是轻链或重链的一部分，通常是成熟重链中约氨基末端110至120个氨基酸和成熟轻链中约90至115个氨基酸，其在抗体之间的序列差别很大，并且用于特定抗体对其特定抗原的结合和特异性。序列的可变性集中在称为互补决定区(CDR)的那些区域中，而可变结构域中更高度保守的区域称为框架区(FR)。不希望受任何特定机制或理论的束缚，认为轻链和重链的CDR主要负责抗体与抗原的相互作用和特异性。在某些实施方案中，可变区为人可变区。在某些实施方案中，可变区包含啮齿动物或鼠CDR和人框架区(FR)。在特定实施方案中，可变区为灵长类动物(例如非人灵长类动物)可变区。在某些实施方案中，可变区包含啮齿动物或鼠CDR和灵长类动物(例如非人灵长类动物)框架区(FR)。

术语“VL”和“VL结构域”可互换使用以指抗体或其抗原结合分子的轻链可变区。

术语“VH”和“VH结构域”可互换使用以指抗体或其抗原结合分子的重链可变区。

通常使用CDR的许多定义：Kabat编号、Chothia编号、AbM编号或contact编号。AbM定义是Oxford Molecular的AbM抗体建模软件使用的两者之间的折衷。contact定义基于对可用复杂晶体结构的分析。

表1：CDR编号

术语“Kabat编号”和类似术语在本领域中是公认的，并且是指在抗体的重链和轻链可变区或其抗原结合分子中氨基酸残基的编号系统。在某些方面，抗体的CDR可以根据Kabat编号系统确定(参见例如Kabat EA&Wu TT(1971)Ann NY Acad Sci 190：382-391和Kabat EA et al.，(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest，FifthEdition，U.S.Department of Health and Human Services，NIH Publication No.91-3242)。使用Kabat编号系统，抗体重链分子内的CDR通常存在于氨基酸位置31至35(其在35之后任选地可以包括一个或两个额外的氨基酸(在Kabat编号方案中称为35A和35B))(CDR1)、氨基酸位置50至65(CDR2)和氨基酸位置95至102(CDR3)。使用Kabat编号系统，抗体轻链分子内的CDR通常存在于氨基酸位置24至34(CDR1)、氨基酸位置50至56(CDR2)和氨基酸位置89至97(CDR3)。在具体的实施方案中，本文所述抗体的CDR已根据Kabat编号方案确定。

在某些方面，抗体的CDR可以根据Chothia编号方案确定，其是指免疫球蛋白结构环的位置(参见例如Chothia C&Lesk AM，(1987)，J Mol Biol 196：901-917；Al-LazikaniB et al.，(1997)J Mol Biol 273：927-948；Chothia C et al.，(1992)J Mol Biol 227：799-817；Tramontano A et al.，(1990)J Mol Biol 215(1)：175-82；和美国专利号7,709,226)。通常，当使用Kabat编号惯例时，Chothia CDR-H1环存在于重链氨基酸26至32、33或34，Chothia CDR-H2环存在于重链氨基酸52至56，并且Chothia CDR-H3环存在于重链氨基酸95至102，而Chothia CDR-L1环存在于轻链氨基酸24至34，Chothia CDR-L2环存在于轻链氨基酸50至56，并且Chothia CDR-L3环存在于轻链氨基酸89至97。当使用Kabat编号惯例编号时，Chothia CDR-HI环的末端在H32和H34之间变化，取决于环的长度(这是因为Kabat编号方案将插入放置在H35A和H35B；如果35A和35B都不存在，则环结束于32；如果仅存在35A，则环结束于33；如果35A和35B两者都存在，则环结束于34)。在具体的实施方案中，本文所述抗体的CDR已根据Chothia编号方案确定。

如本文所用，术语“恒定区”和“恒定结构域”是可互换的并且具有本领域常见的含义。恒定区是抗体部分，例如轻链和/或重链的羧基末端部分，其不直接参与抗体与抗原的结合，但可以表现出各种效应器功能，例如与Fc受体的相互作用。免疫球蛋白分子的恒定区通常相对于免疫球蛋白可变结构域具有更保守的氨基酸序列。

如本文所用，当用于提及抗体时，术语“重链”基于恒定结构域的氨基酸序列可以指任何不同类型，例如alpha(α)、delta(δ)、epsilon(ε)、gamma(γ)和mu(μ)，其分别产生IgA、IgD、IgE、IgG和IgM类抗体，包括IgG的亚类，例如IgG₁、IgG₂、IgG₃和IgG₄。

如本文所用，当用于提及抗体时，术语“轻链”基于恒定结构域的氨基酸序列可以指任何不同类型，例如kappa(κ)或lambda(λ)。轻链氨基酸序列是本领域中公知的。在具体的实施方案中，轻链为人轻链。

“结合亲和力”通常是指分子(例如抗体)的单一结合位点与其结合配偶体(例如抗原)之间的非共价相互作用的总和的强度。除非另有说明，如本文所用，“结合亲和力”是指内在结合亲和力，其反映结合对的成员(例如，抗体和抗原)之间的1∶1相互作用。分子X对其配偶体Y的亲和力通常可以由解离常数(K_D)表示。亲和力可以以本领域已知的多种方式测量和/或表达，包括但不限于平衡解离常数(K_D)和平衡缔合常数(K_A)。K_D由k_off/k_on的商计算，而K_A由k_on/k_off的商计算。k_on是指例如抗体与抗原的结合速率常数，而k_off是指例如抗体与抗原的解离。k_on和k_off可以通过本领域普通技术人员已知的技术例如或KinExA测定。

如本文所用，“保守氨基酸取代”是指氨基酸残基被具有相似侧链的氨基酸残基取代的氨基酸取代。本领域已经定义了具有侧链的氨基酸残基家族。这些家族包括具有以下侧链的氨基酸：碱性侧链(例如赖氨酸、精氨酸、组氨酸)，酸性侧链(例如天冬氨酸、谷氨酸)，不带电荷的极性侧链(例如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)，非极性侧链(例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸)，beta分支侧链(例如苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳香族侧链(例如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。在某些实施方案中，可以用具有相似侧链的氨基酸残基取代抗体或其抗原结合分子的CDR内或框架区内的一个或多个氨基酸残基。

如本文所用，术语“异源”表示来自除天然存在的序列之外的任何来源。例如，作为具有SEQ ID NO：1的氨基酸序列的共刺激蛋白质(例如相应的人共刺激蛋白质)的一部分所包括的异源序列是不作为野生型人共刺激蛋白质天然存在(即不与之对齐)的氨基酸。例如，异源核苷酸序列是指野生型人共刺激蛋白质编码序列以外的核苷酸序列。

如本文所用，术语“表位”是本领域的术语并且是指抗体可以特异性结合的抗原的局部区域。表位可以是例如多肽的连续氨基酸(线性或连续表位)或者表位可以例如来自多肽或多个多肽的两个或更多个非连续区域(构象、非线性、不连续的或非连续的表位)。在某些实施方案中，可以通过例如核磁共振波谱法(NMR波谱法)、X射线衍射晶体学研究、ELISA测定、氢/氘交换与质谱联用(例如液相色谱电喷雾质谱法)、基于阵列的寡肽扫描测定和/或诱变作图(例如定点诱变作图)测定抗体结合的表位。对于X射线晶体学，可以使用本领域任何已知方法完成结晶(例如，Giegé R et al.，(1994)Acta Crystallogr D BiolCrystallogr 50(Pt 4)：339-350；McPherson A(1990)Eur J Biochem 189：1-23；ChayenNE(1997)Structure 5：1269-1274；McPherson A(1976)J Biol Chem 251：6300-6303)。抗体：抗原晶体可以使用公知的X射线衍射技术进行研究，并且可以使用计算机软件例如X-PLOR(Yale University，1992，由Molecular Simulations，Inc.行销；参见例如MethEnzymol(1985)volumes 114&115，eds Wyckoff HW et al.，；U.S.2004/0014194)和BUSTER(Bricogne G(1993)Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 49(Pt 1)：37-60；BricogneG(1997)Meth Enzymol 276A：361-423，ed Carter CW；Roversi P et al.，(2000)ActaCrystallogr D Biol Crystallogr 56(Pt 10)：1316-1323)进行精制。可以使用本领域技术人员已知的任何方法完成诱变作图研究。关于诱变技术，包括丙氨酸扫描诱变技术的描述，参见例如Champe M et al.，(1995)J Biol Chem 270：1388-1394和Cunningham BC&Wells JA(1989)Science 244：1081-1085。

如本文所用，如果抗原与第一结合分子、抗体或其抗原结合分子之间的相互作用阻断、限制、抑制或以其他方式降低参考结合分子、参考抗体或其抗原结合分子与抗原相互作用的能力，则抗原结合分子、抗体或其抗原结合分子与参考抗体或其抗原结合分子“交叉竞争”。交叉竞争可以是完全的，例如结合分子与抗原的结合完全阻断了参考结合分子结合抗原的能力，或者其可以是部分的，例如结合分子与抗原的结合降低了参考结合分子结合抗原的能力。在某些实施方案中，与参考抗原结合分子交叉竞争的抗原结合分子结合与参考抗原结合分子相同或重叠的表位。许多类型的竞争性结合测定可以用于确定一种抗原结合分子是否与另一种竞争，例如：固相直接或间接放射免疫测定(RIA)；固相直接或间接酶免疫测定(EIA)；夹心法竞争分析(Stahli et al.，1983，Methods in Enzymology 9：242-253)；固相直接生物素-抗生物素蛋白EIA(Kirkland et al.，1986，J.Immunol.137：3614-3619)；固相直接标记分析、固相直接标记夹心法分析(Harlow and Lane，1988，Antibodies，A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Press)；使用1-125标记的固相直接标记RIA(Morel et al.，1988，Molec.Immunol.25：7-15)；固相直接生物素-抗生物素蛋白EIA(Cheung，et al.，1990，Virology176：546-552)；以及直接标记RIA(Moldenhaueret al.，1990，Scand.J.Immunol.32：77-82)。

如本文所用，术语“免疫特异性结合”、“免疫特异性识别”、“特异性结合”和“特异性识别”在抗体的背景下是类似的术语并且是指结合抗原(例如表位或免疫复合物)的分子，因为本领域技术人员理解此类结合。例如，特异性结合抗原的分子可以与其他肽或多肽结合，通常具有较低的亲和力，如通过例如免疫测定、KinExA 3000仪器(Sapidyne Instruments，Boise，ID)或本领域已知的其他测定法测定的。在具体的实施方案中，特异性结合抗原的分子以比当该分子与另一个抗原结合时的K_A大至少2个对数(log)、2.5个对数、3个对数、4个对数或更大的K_A与抗原结合。

在另一个实施方案中，特异性结合抗原的分子以约1x 10^-7M的解离常数(K_d)结合。在一些实施方案中，当K_d为约1x 10^-9M至约5x 10^-9M时，抗原结合分子以“高亲和力”特异性结合抗原。在一些实施方案中，当K_d为1x 10^-10 M至约5x10^-10 M时，抗原结合分子以“非常高的亲和力”特异性结合抗原。在一个实施方案中，抗原结合分子具有10^-9M的K_d。在一个实施方案中，解离速率小于约1x 10^-5。在其他实施方案中，抗原结合分子以约1x 10^-7M至约1x10^-13M之间的K_d与人BCMA结合。在又一个实施方案中，抗原结合分子以约1x 10^-10M至约5x10^-10M的K_d与人BCMA结合。

在具体的实施方案中，本文提供的是抗体或其抗原结合分子，该抗体或其抗原结合分子以比另一种靶抗原(例如非人BCMA或非人CLL-1)更高的亲和力与靶人抗原(例如人BCMA或人CLL-1)结合。在某些实施方案中，本文提供的是抗体或其抗原结合分子，该抗体或其抗原结合分子以比另一种靶抗原高5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％或更高的亲和力与靶人抗原(例如人BCMA或人CLL-1)结合，如通过例如放射免疫测定、表面等离激元共振或动力学排除测定法测量的。在具体的实施方案中，本文所述的与靶人抗原结合的抗体或其抗原结合分子将以少于10％、15％或20％的抗体或其抗原结合分子与人抗原的结合，与另一种靶抗原结合，如通过例如放射免疫测定、表面等离激元共振或动力学排除测定法测量的。

“抗原”是指引发免疫应答或能够被抗体或抗原结合分子结合的任何分子。免疫应答可以牵涉抗体产生或特异性免疫活性细胞的活化或这两者。本领域技术人员将容易理解任何大分子(包括几乎所有蛋白质或肽)均可以充当抗原。抗原可以内源性表达，即由基因组DNA表达或可以重组表达。抗原可以对某些组织，例如癌细胞是特异性的或者其可以广泛地表达。此外，较大分子的片段可以起抗原作用。在一个实施方案中，抗原为肿瘤抗原。在一个具体的实施方案中，抗原为BCMA、FLT3或CLL-1的全部或片段。

术语“中和”是指结合配体并防止或降低该配体的生物效应的抗原结合分子、scFv、抗体或其片段。在一些实施方案中，抗原结合分子、scFv、抗体或其片段直接阻断配体上的结合位点或者通过间接方式改变配体的结合能力(例如配体的结构或能量改变)。在一些实施方案中，抗原结合分子、scFv、抗体或其片段防止与其结合的蛋白质行使生物学功能。

如本文所用，术语“BCMA”指B细胞成熟抗原，其可以包括但不限于天然BCMA、BCMA的同种型或BCMA的种间BCMA同系物。BCMA(也称为TNFRSF17、CD269及TNFRSF13A)为肿瘤坏死因子(TNF)-受体超家族的成员。BCMA在多发性骨髓瘤细胞的表面上表达，然而在健康组织中则高度局限于浆细胞及成熟B细胞的亚类。人BCMA(hBCMA)的氨基酸序列提供于NCBI登录号Q02223.2(GI：313104029)中。如本文所用，BCMA包括人BCMA和非人BCMA同系物，及其变体、片段或翻译后经修饰的形式，包括但不限于BCMA的N-及O-连接的糖基化形式。BCMA蛋白可以进一步包括包含BCMA的细胞外结构域的全部或一部分(例如hBCMA的氨基酸1-54的全部或一部分)的片段。

如本文所用，术语“CLL-1”是指C型凝集素样分子1，其可以包括但不限于天然CLL-1、CLL-1的同种型或CLL-1的种间CLL-1同系物。CLL-1(也称为C型凝集素结构域家族12成员A、CLEC12A、树突状细胞相关凝集素2、DCAL-2、髓样抑制性C型凝集素样受体和MICL)是调节信号级联反应并介导靶MAP激酶的酪氨酸磷酸化的细胞表面受体。例如在急性髓样白血病(AML)细胞中观察到CLL-1表达。人CLL-1(hCLL-1)的氨基酸序列提供于UniProtKB/Swiss-Prot登录号Q5QGZ9.3(GI：308153619)。如本文所用，CLL-1包括人CLL-1和非人CLL-1同系物，及其变体、片段或翻译后经修饰的形式，包括但不限于CLL-1的N-及O-连接的糖基化形式。

如本文所用，术语“FLT3”是指Fms样酪氨酸激酶3(FLT-3)，其可以包括但不限于天然FLT3、FLT3的同种型或FLT3的种间FLT3同系物。FLT3(也称为分化抗原群135(CD135)、受体型酪氨酸蛋白激酶FLT3、FMS相关酪氨酸激酶3、干细胞酪氨酸激酶1、FL细胞因子受体、生长因子受体酪氨酸激酶III型、STK1或胎肝激酶2(Flk2))是属于受体酪氨酸激酶III类的细胞因子受体。CD135是细胞因子Flt3配体(FLT3L)的受体。FLT3在各种造血祖细胞的表面上和急性髓样白血病(AML)细胞的表面上表达。人FLT3(hFLT3)的氨基酸序列提供于UniProtKB/Swiss-Prot登录号P36888(GI：156630887)。如本文所用，FLT3包括人FLT3和非人FLT3同系物，及其变体、片段或翻译后经修饰的形式，包括但不限于FLT3的N-及O-连接的糖基化形式。

术语“自体”是指源自其稍后重新导入到其中的同一个体的任何物质。例如，本文所述的工程化自体细胞疗法(eACT^TM)的方法牵涉从患者收集淋巴细胞，然后将其工程化改造以表达例如CAR构建体，然后再施用回同一患者。

术语“同种异体”是指源自一个个体然后被导入相同物种的另一个个体的任何物质，例如同种异体T细胞移植。

术语“转导”和“经转导的”是指一种过程，通过该过程将外源DNA经由病毒载体导入到细胞中(参见Jones et al.、“Genetics：principles and analysis，”Boston：Jones&Bartlett Publ.(1998))。在一些实施方案中，载体为逆转录病毒载体、DNA载体、RNA载体、腺病毒载体、杆状病毒载体、EB病毒载体、乳多空病毒载体、牛痘病毒载体、单纯疱疹病毒载体、腺病毒相关载体、慢病毒载体或它们的任何组合。

如本文所用，术语“截短的”是指少于整体的任何事物。例如，截短铰链结构域(或者在本文中称为“THD”)氨基酸序列可以包括比全长或完整铰链结构域(“CHD”)短的任何氨基酸序列。在一些实施方案中，THD基本上由以下组成或者由以下组成：SEQ ID NO：1的氨基酸118-152、119-152、120-152、121-152、122-152、123-152、124-152、125-152、126-152、127-152、128-1 52、129-152或130-152。在一个实施方案中，THD基本上由SEQ ID NO：3组成或者由SEQ ID NO：3组成，其由SEQ ID NO：1的氨基酸123至152组成。

“癌症”是指一大组各种疾病，其特征为异常细胞在体内不受控制的生长。不受调节的细胞分裂和生长导致形成入侵相邻组织且也可以通过淋巴系统或血流转移到身体远程部分的恶性肿瘤。“癌症”或“癌症组织”可以包括肿瘤。可以通过本发明的方法治疗的癌症的实例包括但不限于免疫系统的癌症，包括淋巴瘤、白血病、骨髓瘤及其他白细胞恶性肿瘤。在一些实施方案中，本发明的方法可以用于缩小例如源自下组的肿瘤的肿瘤大小：骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头或颈癌、皮肤或眼内恶性黑色素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛门区癌、胃癌、睾丸癌、子宫癌、输卵管癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、阴道癌、外阴癌、多发性骨髓瘤、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBC)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡性淋巴瘤(FL)、转化滤泡性淋巴瘤、脾边缘区淋巴瘤(SMZL)、食道癌、小肠癌、内分泌系统癌症、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、慢性或急性白血病、急性髓样白血病、慢性髓样白血病、急性淋巴母细胞白血病(ALL)(包括非T细胞ALL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、儿童实体瘤、淋巴细胞性淋巴瘤、膀胱癌、肾或输尿管癌、肾盂癌、中枢神经系统(CNS)肿瘤、原发性CNS淋巴瘤、肿瘤血管生成、脊柱轴肿瘤、脑干神经胶质瘤、垂体腺瘤、卡波西氏肉瘤、表皮样癌、鳞状细胞癌、T细胞淋巴瘤、由环境诱发的癌症(包括由石棉诱发的那些)、其他B细胞恶性肿瘤以及所述癌症的组合。在一个具体的实施方案中，癌症为多发性骨髓瘤。特定癌症可以对化学疗法或放射疗法有响应或者癌症可以是难治性的。难治性癌症是指不易于通过外科手术干预的癌症，并且癌症或是最初对化学疗法或放射疗法无响应，或是癌症随时间变成无响应。

如本文所用，“抗肿瘤效应”是指可以呈现为肿瘤体积缩小、肿瘤细胞数目减少、肿瘤细胞增殖减少、转移的数目减少、总体或无进展存活期增加、期望寿命增加或各种与肿瘤相关的生理症状改善的生物效应。抗肿瘤效应也可以指肿瘤发生的预防，例如疫苗。

如本文所用，“细胞因子”是指响应与特定抗原的接触由一种细胞释放的非抗体蛋白质，其中细胞因子与第二细胞相互作用以介导在第二细胞中的应答。细胞因子可以由细胞内源性表达或对受试者施用。细胞因子可以由免疫细胞(包括巨噬细胞、B强胞、T细胞和肥大细胞)释放以传播免疫应答。细胞因子可以诱导受体细胞中的各种应答。细胞因子可以包括稳态细胞因子、趋化因子、促炎细胞因子、效应器和急性期蛋白质。例如，稳态细胞因子(包括白细胞介素(IL)7和IL-15)促进免疫细胞存活和增殖，而促炎细胞因子可以促进炎症应答。稳态细胞因子的实例包括但不限于IL-2、IL-4、IL-5、IL-7、IL-10、IL-12p40、IL-12p70、IL-15及干扰素(IFN)gamma。促炎细胞因子的实例包括但不限于IL-1a、IL-1b、IL-6、IL-13、IL-17a、肿瘤坏死因子(TNF)-alpha、TNF-beta、成纤维细胞生长因子(FGF)2、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、可溶性细胞间黏附分子1(sICAM-1)、可溶性血管黏附分子1(sVCAM-1)、血管内皮生长因子(VEGF)、VEGF-C、VEGF-D以及胎盘生长因子(PLGF)。效应器的实例包括但不限于颗粒酶A、颗粒酶B、可溶性Fas配体(sFasL)以及穿孔蛋白(perforin)。急性期蛋白质的实例包括但不限于C反应蛋白(CRP)及血清淀粉样蛋白A(SAA)。

“趋化因子”是介导细胞趋化作用或定向运动的一类细胞因子。趋化因子的实例包括但不限于IL-8、IL-16、嗜酸性粒细胞趋化因子、嗜酸性粒细胞趋化因子-3、巨噬细胞衍生的趋化因子(MDC或CCL22)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1或CCL2)、MCP-4、巨噬细胞炎症蛋白1α(MIP-1α、MIP-1a)、MIP-1β(MIP-1b)、gamma-诱导蛋白10(IP-10)以及胸腺和活化调节的趋化因子(TARC或CCL17)。

治疗剂(例如工程化CART细胞)的“治疗有效量”、“有效剂量”、“有效量”或“治疗有效剂量”是当单独使用或与另一治疗剂组合使用时保护受试者免于疾病发作或者促进疾病消退的任何量，所述疾病消退的证据为疾病症状的严重性降低、疾病无症状期的频率和持续期间增加或防止由于疾病折磨导致的损伤或残疾。可以使用熟练从业人员已知的各种方法评估治疗剂促进疾病消退的能力，例如在临床试验期间在人受试者中评估、在用于预测在人体中的效力的动物模型系统中评估或通过在体外分析中测定试剂的活性评估。

如本文所用，术语“淋巴细胞”包括自然杀伤(NK)细胞、T细胞或B细胞。NK细胞是代表固有免疫系统的主要组分的一类细胞毒性(cytotoxic)(细胞毒性(cell toxic))淋巴细胞。NK细胞排斥肿瘤以及病毒感染的细胞。其通过细胞凋亡或程序性细胞死亡的过程发挥作用。由于其不需要活化来杀死细胞，因而称为“自然杀伤”。T细胞在细胞介导的免疫(无抗体参与)中发挥主要作用。它的T细胞受体(TCR)将自身与其他淋巴细胞类型区分开来。胸腺(免疫系统的专门器官)主要负责T细胞的成熟。有六种类型的T细胞，即：辅助性T细胞(例如CD4+细胞)、细胞毒性T细胞(也称为TC、细胞毒性T淋巴细胞、CTL、T杀伤细胞、溶细胞性T细胞、CD8+T细胞或杀伤T细胞)、记忆T细胞((i)干细胞样记忆T_SCM细胞(如初始细胞)为CD45RO-、CCR7+、CD45RA+、CD62L+(L选择素)、CD27+、CD28+以及IL-7Rα+，但它们也表达大量的CD95、IL-2Rβ、CXCR3以及LFA-1，并且显示许多记忆细胞独特的功能属性；(ii)中央记忆T_CM细胞表达L-选择素和CCR7，它们分泌IL-2，但不分泌IFNγ或IL-4，以及(iii)效应记忆T_EM细胞，然而，不表达L-选择蛋白或CCR7，但产生效应细胞因子，如IFNγ和IL-4)、调节性T细胞(Treg、抑制性T细胞或CD4+CD25+调节性T细胞)、自然杀伤T细胞(NKT)以及GammaDeltaT细胞。另一方面，B细胞在体液免疫中发挥主要作用(有抗体参与)。其生成抗体和抗原并执行抗原呈递细胞(APC)的作用，并且在通过抗原相互作用的活化后转变成记忆B细胞。在哺乳动物中，未成熟的B细胞在骨髓中形成，该处为B细胞名字的来源。

术语“经基因工程化改造的”或“经工程化改造的”是指修饰细胞的基因组的方法，包括但不限于删除编码或非编码区或其部分，或插入编码区或其部分。在一些实施方案中，经修饰的细胞为淋巴细胞(例如T细胞)，其可以从患者或供体取得。细胞可以经修饰以表达外源构建体，例如掺入到细胞的基因组中的嵌合抗原受体(CAR)或T细胞受体(TCR)。

“免疫应答”是指免疫系统的细胞(例如T淋巴细胞、B淋巴细胞、自然杀伤(NK)细胞、巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、肥大细胞、树突状细胞以及中性粒细胞)和由这些细胞中的任一种或肝脏产生的可溶性大分子(包括Ab、细胞因子和补体)的作用，该作用导致选择性靶向、结合、损害、破坏和/或排除脊椎动物体内的入侵病原体、被病原体感染的细胞或组织、癌细胞或其他异常细胞，或者在自身免疫或病理性炎症的情况下，正常的人细胞或组织。

术语“免疫疗法”是指患有疾病或处于感染疾病或疾病复发的风险的受试者的治疗，该治疗通过包含诱导、增强、抑制或以其他方式修饰免疫应答的方法进行。免疫疗法的实例包括但不限于T细胞疗法。T细胞疗法可以包括过继性T细胞疗法、肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)免疫疗法、自体细胞疗法、工程化自体细胞疗法(eACT^TM)以及同种异体T细胞移植。然而，本领域技术人员将认为本文所公开的调理方法将增强任何移植的T细胞疗法的有效性。T细胞疗法的实例描述于美国专利公开号2014/0154228和2002/0006409、美国专利号5,728,388以及国际公开号WO 2008/081035中。

免疫疗法的T细胞可以来自本领域已知的任何来源。例如，T细胞可以在体外从造血干细胞群分化，或者可以从受试者获得T细胞。T细胞可以从例如外周血单核细胞(PBMC)、骨髓、淋巴结组织、脐带血、胸腺组织、来自感染部位的组织、腹水、胸腔积液、脾组织以及肿瘤获得。此外，T细胞可以源自本领域中可获得的一个或多个T细胞系。T细胞也可以使用本领域技术人员已知的任何数目的技术(例如FICOLL^TM分离和/或单采术(apheresis))从受试者收集的血液单位取得。分离用于T细胞疗法的T细胞的另外的方法公开于美国专利公开号2013/0287748，其通过引用整体并入本文。

术语“工程化自体细胞疗法”(其可缩写为“eACT^TM”，也称为过继细胞转移)是收集患者自身的T细胞，随后将其经遗传改变以识别并靶向一种或多种在一种或多种特定的肿瘤细胞或恶性肿瘤的细胞表面上表达的抗原的过程。T细胞可以经工程化改造以表达例如嵌合抗原受体(CAR)或T细胞受体(TCR)。CAR阳性(+)T细胞经工程化改造以表达对特定肿瘤抗原具有特异性的细胞外单链可变片段(scFv)，其连接到包含至少一个共刺激结构域和至少一个活化结构域的细胞内信号传导部分。共刺激结构域可以源自天然存在的共刺激结构域，例如具有SEQ ID NO：1的氨基酸序列或其变体(例如具有截短铰链结构域(“THD”)的变体)的，而活化结构域可以源自例如CD3-zeta。在某些实施方案中，CAR设计成具有两个、三个、四个或更多个共刺激结构域。CAR scFv可以设计成靶向例如CD19，该CD19是由B细胞谱系(包括所有正常B细胞和B细胞恶性肿瘤，包括但不限于NHL、CLL和非T细胞ALL)的细胞表达的跨膜蛋白。在一些实施方案中，CAR经工程化改造从而使共刺激结构域以单独的多肽链形式表达。实例CART细胞疗法和构建体描述于美国专利公开号2013/0287748、2014/0227237、2014/0099309以及2014/0050708中，这些参考文献通过引用整体并入本文。

如本文所用，“患者”包括任何患有癌症(例如淋巴瘤或白血病)的人。本文中，术语“受试者”和“患者”可互换使用。

如本文所用，术语“体外细胞”是指在体外培养的任何细胞。特别地，体外细胞可以包括T细胞。

术语“肽”、“多肽”和“蛋白质”可互换使用并且是指通过肽键共价连接的由氨基酸残基组成的化合物。蛋白质或肽含有至少两个氨基酸并且可以包含蛋白质或肽的序列的氨基酸的最大数量没有限制。多肽包括任何包含两个或更多个通过肽键彼此连接的氨基酸的肽或蛋白质。如本文所用，该术语是指短链(其在本领域中也通常称为例如肽、寡肽和寡聚体)和较长的链(其在本领域中通常称为蛋白质，其具有许多类型)两者。“多肽”包括例如生物活性片段、基本上同源的多肽、寡肽、同源二聚体、异源二聚体、多肽的变体、经修饰的多肽、衍生物、类似物、融合蛋白等。多肽包括天然的肽、重组的肽、合成的肽或它们的组合。

如本文所用，“刺激”是指由刺激分子与其关联配体的结合所诱发的初级应答，其中结合介导信号转导事件。“刺激分子”是指T细胞上的分子，例如与存在于抗原呈递细胞上的关联刺激配体特异性结合的T细胞受体(TCR)/CD3复合物。“刺激配体”是指当存在于抗原呈递细胞(例如APC、树突状细胞、B细胞等)上时可以与T细胞上的刺激分子特异性结合，从而介导T细胞的初级应答(包括但不限于活化、启动免疫应答、增殖等)的配体。刺激配体包括但不限于抗CD3抗体(例如OKT3)、装载有肽的MHC I类分子、超激动性抗CD2抗体以及超激动性抗CD28抗体。

如本文所用，“共刺激信号”是指与初级信号(例如TCR/CD3连接)组合时导致T细胞应答(例如但不限于增殖和/或关键分子的上调或下调)的信号。

如本文所用，“共刺激配体”包括与T细胞上的关联共刺激分子特异性结合的抗原呈递细胞上的分子。共刺激配体的结合提供介导T细胞应答(包括但不限于增殖、活化、分化等)的信号。共刺激配体诱导除了由刺激分子提供的初级信号(例如由T细胞受体(TCR)/CD3复合物与装载有肽的主要组织相容性复合体(MHC)分子的结合提供)外的信号。共刺激配体可以包括但不限于，3/TR6、4-1BB配体、结合Toll配体受体的激动剂或抗体、B7-1(CD80)、B7-2(CD86)、CD30配体、CD40、CD7、CD70、CD83、疱疹病毒侵入介质(HVEM)，人白细胞抗原G(HLA-G)、ILT4、免疫球蛋白样转录物(ILT)3、诱导性共刺激配体(ICOS-L)、细胞内黏附分子(ICAM)、特异性结合B7-H3的配体、淋巴毒素beta受体、MHC I类链相关蛋白A(MICA)、MHC I类链相关蛋白B(MICB)、OX40配体、PD-L2或程序性死亡(PD)Ll。共刺激配体包括但不限于，与存在于T细胞上的共刺激分子特异性结合的抗体，该存在于T细胞上的共刺激分子例如但不限于4-1BB、B7-H3、CD2、CD27、CD28、CD30、CD40、CD7、ICOS、与CD83特异性结合的配体、淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)、自然杀伤细胞受体C(NKG2C)、OX40、PD-1或肿瘤坏死因子超家族成员14(TNFSF14或LIGHT)。

“共刺激分子”是在T细胞上特异性结合共刺激配体，从而介导T细胞的共刺激反应(例如但不限于增殖)的关联结合配偶体。共刺激分子包括但不限于4-1BB/CD137、B7-H3、BAFFR、BLAME(SLAMF8)、BTLA、CD33、CD 45、CD100(SEMA4D)、CD103、CD134、CD137、CD154、CD16、CD160(BY55)、CD18、CD19、CD19a、CD2、CD22、CD247、CD27、CD276(B7-H3)、CD28、CD29、CD3(alpha；beta；delta；epsilon；gamma；zeta)、CD30、CD37、CD4、CD4、CD40、CD49a、CD49D、CD49f、CD5、CD64、CD69、CD7、CD80、CD83配体、CD84、CD86、CD8alpha、CD8beta、CD9、CD96(Tactile)、CDl-la、CDl-lb、CDl-lc、CDl-ld、CDS、CEACAM1、CRT AM、DAP-10、DNAM1(CD226)、Fc gamma受体、GADS、GITR、HVEM(LIGHTR)、IA4、ICAM-1、ICAM-1、ICOS、Ig alpha(CD79a)、IL2R beta、IL2R gamma、IL7R alpha、整合素、ITGA4、ITGA4、ITGA6、ITGAD、ITGAE、ITGAL、ITGAM、ITGAX、ITGB2、ITGB7、ITGBl、KIRDS2、LAT、LFA-1、LFA-1、LIGHT、LIGHT(肿瘤坏死因子超家族成员14；TNFSF14)、LTBR、Ly9(CD229)、淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1(CDl la/CD18)、MHC I类分子、NKG2C、NKG2D、NKp30、NKp44、NKp46、NKp80(KLRF1)、OX40、PAG/Cbp、PD-1、PSGL1、SELPLG(CD162)、信号传导淋巴细胞活化分子，SLAM(SLAMF1；CD150；IPO-3)、SLAMF4(CD244；2B4)、SLAMF6(NTB-A；Ly108)、SLAMF7、SLP-76、TNF、TNFr、TNFR2、Toll配体受体、TRANCE/RANKL、VLA1或VLA-6，或它们的片段、截短或组合。

本文中，术语“减少”和“降低”可互换使用并且表示小于原来的任何变化。“减少”和“降低”是相对的术语，需要在测量前和测量后间进行比较。“减少”和“降低”包括完全耗竭。

受试者的“治疗”或“处理”是指在受试者上进行任何类型的干预或过程，或对该受试者施用活性剂以达到逆转、减轻、改善、抑制、减缓或预防症状、并发症或病症或与疾病相关的生化指标的发作、进展、发展、严重或复发的目的。在一个实施方案中，“治疗”或“处理”包括部分缓解。在另一个实施方案中，“治疗”或“处理”包括完全缓解。

为了计算同一性百分比，相比较的序列通常以能使该序列间产生最大匹配的方式比对。可以用于测定同一性百分比的计算机程序的一个实例为GCG程序包，其包括GAP(Devereux et al.，1984，Nucl.Acid Res.12：387；Genetics Computer Group，Universityof Wisconsin，Madison，Wis.)。计算机算法GAP用于比对要测定的序列同一性百分比的两个多肽或多核苷酸。比对序列以使其各自的氨基酸或核苷酸最佳匹配(如通过算法测定的“匹配跨距(matched span)”)。在某些实施方案中，算法也使用标准比较矩阵(参见Dayhoffet al.，1978，Atlas of Protein Sequence and Structure 5：345-352，用于PAM250比较矩阵；Henikoff et al.，1992，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.89：10915-10919，用于BLOSUM 62比较矩阵)。

本发明的各种方面进一步详细描述于下列小节中。

I.嵌合抗原受体和T细胞受体

嵌合抗原受体(CAR或CAR-T)和T细胞受体(TCR)是经基因工程化改造的受体。这些工程化受体可以根据本领域已知的技术容易地插入到并且被免疫细胞(包括T细胞)表达。使用CAR，可以设定单一受体以识别特定抗原，并且当与该抗原结合时，活化免疫细胞以攻击并破坏携带该抗原的细胞。当这些抗原存在于肿瘤细胞上，表达CAR的免疫细胞可以靶向并杀死肿瘤细胞。

本发明的一个方面涉及编码包含共刺激结构域的嵌合抗原受体(CAR)或T细胞受体(TCR)的多核苷酸，该共刺激结构域包含含有截短铰链结构域(“THD”)的新的细胞外结构域，以及包含共刺激结构域的工程化T细胞，该共刺激结构域包含新的THD。共刺激结构域可以进一步包含跨膜结构域和/或细胞内结构域。在一些实施方案中，由本发明的多核苷酸编码的CAR或TCR进一步包含与靶抗原特异性结合的抗原结合分子。在一些实施方案中，由该多核苷酸编码的CAR或TCR进一步包含活化结构域。在一个具体的实施方案中，由该多核苷酸编码的CAR或TCR包含(i)与靶抗原特异性结合的抗原结合分子，(ii)包含细胞外结构域、跨膜结构域和细胞内结构域的共刺激结构域，以及(iii)活化结构域，其中细胞外结构域包含本文所述的THD(例如SEQ ID NO：3)、基本上由本文所述的THD(例如SEQ ID NO：3)组成或由本文所述的THD(例如SEQ ID NO：3)组成。

在一些实施方案中，根据本发明的CAR的定向包含与共刺激结构域和活化结构域串联的抗原结合结构域(例如scFv)。共刺激结构域可以包含一个或多个细胞外部分、跨膜部分和细胞内部分。在其他实施方案中，多个共刺激结构域可以串联利用。

I.A.共刺激结构域

嵌合抗原受体整合共刺激(信号传导)结构域以提高其效力。参见美国专利号7,741,465和6,319,494，以及Krause et al.and Finney et al.(supra)，Song et al.，Blood 119：696-706(2012)；Kalos et al.，Sci Transl.Med.3：95(2011)；Porter et al.，N.Engl.J.Med.365：725-33(2011)，和Gross et al.，Annu.Rev.Pharmacol.Toxicol.56：59-83(2016)。具有SEQ ID NO：1的氨基酸序列的共刺激蛋白质是在T细胞上天然存在的共刺激蛋白质。该共刺激蛋白质的完整天然氨基酸序列描述于NCBI参考序列：NP_006130.1。参见图1A。该共刺激蛋白质的完整天然核酸序列描述于NCBI参考序列：NM_006139.1。

新的细胞外结构域：本公开显示共刺激蛋白质的包含截短铰链结构域(“THD”)的新的细胞外结构域可以改善CAR或TCR的一个或多个性质。在一些实施方案中，THD结构域是完整铰链结构域(“CHD”)的截短版本。在某些实施方案中，编码THD的分离的多核苷酸包含(i)与SEQ ID NO：1的氨基酸123至152至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的氨基酸序列，其中THD结构域不含有SEQ ID NO：1的氨基酸1至122。

在其他实施方案中，THD基本上由以下组成或者由以下组成：与SEQ ID NO：1的氨基酸123至152至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。在其他实施方案中，THD基本上由以下核苷酸序列编码的氨基酸序列组成，或者由以下核苷酸序列编码的氨基酸序列组成：与SEQ ID NO：3至少约60％，至少约70％，至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的核苷酸序列。

在一些实施方案中，编码THD的分离的多核苷酸基本上由以下各项组成或者由以下各项组成：(i)与SEQ ID NO：1的氨基酸123至152至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的氨基酸序列，和(ii)任选地±一个氨基酸、±两个氨基酸、±三个氨基酸、±四个氨基酸、±五个氨基酸或±六个氨基酸。在一些实施方案中，编码THD的分离的多核苷酸基本上由以下各项组成或者由以下各项组成：(i)与SEQ ID NO：1的氨基酸123至152至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的氨基酸序列，和(ii)任选地一或两个氨基酸、一至三个氨基酸、一至四个氨基酸、一至五个氨基酸或一至六个氨基酸。可以从THD中的氨基酸序列添加或缺失的一至六个氨基酸可以在N-末端处、C-末端处或N-末端和C-末端两者。

在一些实施方案中，编码THD的分离的多核苷酸基本上由以下各项组成或者由以下各项组成：(i)与SEQ ID NO：1的氨基酸123至152至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的氨基酸序列，和(ii)另外一个N-末端氨基酸，另外两个N-末端氨基酸，另外三个N-末端氨基酸，另外四个N-末端氨基酸，另外五个N-末端氨基酸或另外六个N-末端氨基酸。

在一些实施方案中，另外的氨基酸可以是N-末端氨基酸。在一些实施方案中，另外的氨基酸可以是异源的。在其他实施方案中，另外的氨基酸是天然存在的共刺激蛋白质序列的一部分。

在一些实施方案中，THD基本上由以下组成或者由以下组成：与SEQ ID NO：1的氨基酸123至152、SEQ ID NO：1的氨基酸122至152、SEQ ID NO：1的氨基酸121至152、SEQ IDNO：1的氨基酸120至152、SEQ ID NO：1的氨基酸119至152、SEQ ID NO：1的氨基酸118至152或SEQ ID NO：1的氨基酸117至152至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。

在其他实施方案中，THD基本上由以下组成或者由以下组成：与SEQ ID NO：1的氨基酸124至152、SEQ ID NO：1的氨基酸125至152、SEQ ID NO：1的氨基酸126至152、SEQ IDNO：1的氨基酸127至152、SEQ ID NO：1的氨基酸128至152、SEQ ID NO：1的氨基酸129至152或SEQ ID NO：1的氨基酸130至152至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。

在一些实施方案中，THD不包含SEQ ID NO：1的氨基酸1-116。在一些实施方案中，THD不包含SEQ ID NO：1的氨基酸1-117。在一些实施方案中，THD不包含SEQ ID NO：1的氨基酸1-118。在一些实施方案中，THD不包含SEQ ID NO：1的氨基酸1-119。在一些实施方案中，THD不包含SEQ ID NO：1的氨基酸1-120。在一些实施方案中，THD不包含SEQ ID NO：1的氨基酸1-121。在一些实施方案中，THD不包含SEQ ID NO：1的氨基酸1-122。在一些实施方案中，THD不包含SEQ ID NO：1的氨基酸1-123。在一些实施方案中，THD不包含SEQ ID NO：1的氨基酸1-124。在一些实施方案中，THD不包含SEQ ID NO：1的氨基酸1-125。在一些实施方案中，THD不包含SEQ ID NO：1的氨基酸1-126。在一些实施方案中，THD不包含SEQ ID NO：1的氨基酸1-127。在一些实施方案中，THD不包含SEQ ID NO：1的氨基酸1-128。在一些实施方案中，THD不包含SEQ ID NO：1的氨基酸1-129。

THD的相应氨基酸序列如SEQ ID NO.3LDNEKSNGTI IHVKGKHLCP SPLFPGPSKP中所示。编码THD的细胞外部分的核苷酸序列如 中所示。

在某些实施方案中，编码CAR或TCR中的共刺激结构域的多核苷酸包含与SEQ IDNO：3至少约60％，至少约70％，至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的核苷酸序列，其中该核苷酸序列编码THD并且其中该CAR或TCR不包含SEQ ID NO：1的氨基酸1-122。

在一个具体的实施方案中，THD基本上由以下组成或者由以下组成：与SEQ ID NO：3的氨基酸序列至少约70％，至少约75％，至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。在具体的实施方案中，编码THD的多核苷酸基本上由以下组成或者由以下组成：与SEQ ID NO：2的核苷酸序列至少约60％，至少约65％，至少约70％，至少约75％，至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的核苷酸序列。

在一些实施方案中，THD进一步包含免疫球蛋白家族的成员(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgD、IgE、IgM或它们的片段)的一些或全部。

在一些实施方案中，THD衍生自人完整铰链结构域(“CHD”)，例如衍生自具有SEQID NO：1的氨基酸序列的共刺激蛋白质。在其他实施方案中，THD衍生自啮齿动物、鼠或灵长类动物(例如非人灵长类动物)的共刺激蛋白质的CHD。在一些实施方案中，THD衍生自嵌合共刺激蛋白质的CHD。

跨膜结构域：用于本发明的CAR或TCR的共刺激结构域可以进一步包含跨膜结构域和/或细胞内信号传导结构域。该跨膜结构域可以设计成与CAR的细胞外结构域融合。类似地，其可以与CAR的细胞内结构域融合。在一个实施方案中，使用天然与CAR中的结构域之一相关的跨膜结构域。在一些情况下，跨膜结构域可以经过选择或通过氨基酸取代进行修饰以避免此类结构域与相同或不同的表面膜蛋白的跨膜结构域结合以使其与受体复合物的其他成员的相互作用最小化。跨膜结构域可以源自天然来源或来自合成来源。当来源为天然来源时，结构域可以源自任何膜结合蛋白或跨膜蛋白。本发明中特定用途的跨膜区可以衍生自(即包含)4-1BB/CD137、活化性NK细胞受体、免疫球蛋白蛋白质、B7-H3、BAFFR、BLAME(SLAMF8)、BTLA、CD100(SEMA4D)、CD103、CD160(BY55)、CD18、CD19、CD19a、CD2、CD247、CD27、CD276(B7-H3)、CD28、CD29、CD3delta、CD3epsilon、CD3gamma、CD30、CD4、CD40、CD49a、CD49D、CD49f、CD69、CD7、CD84、CD8alpha、CD8beta、CD96(Tactile)、CD1 1a、CD1 1b、CD11c、CD1 1d、CDS、CEACAM1、CRT AM、细胞因子受体、DAP-10、DNAM1(CD226)、Fc gamma受体、GADS、GITR、HVEM(LIGHTR)、IA4、ICAM-1、ICAM-1、Ig alpha(CD79a)、IL-2R beta、IL-2Rgamma、IL-7R alpha、诱导性T细胞共刺激分子(ICOS)、整合素、ITGA4、ITGA4、ITGA6、ITGAD、ITGAE、ITGAL、ITGAM、ITGAX、ITGB2、ITGB7、ITGB1、KIRDS2、LAT、LFA-1、LFA-1、与CD83特异性结合的配体、LIGHT、LIGHT、LTBR、Ly9(CD229)、淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1；CDl-la/CD18)、MHC class 1molecule、NKG2C、NKG2D、NKp30、NKp44、NKp46、NKp80(KLRF1)、OX-40、PAG/Cbp、程序性死亡-1(PD-1)、PSGL1、SELPLG(CD162)、信号传导淋巴细胞活化分子(SLAM蛋白)、SLAM(SLAMF1；CD150；IPO-3)、SLAMF4(CD244；2B4)、SLAMF6(NTB-A；Lyl08)、SLAMF7、SLP-76、TNF受体蛋白、TNFR2、TNFSF14、Toll配体受体、TRANCE/RANKL、VLA1或VLA-6，或它们的片段、截短或组合。

任选地，短接头可以形成任何或一些CAR的细胞外、跨膜和细胞内结构域之间的连接。

在一个具体的实施方案中，共刺激蛋白质的跨膜结构域的核苷酸序列如 中所示。

在一个实施方案中，编码共刺激结构域内的跨膜结构域的多核苷酸包含与SEQ IDNO：4的核苷酸序列至少约60％，至少约65％，至少约70％，至少约75％，至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的核苷酸序列。

共刺激蛋白质的跨膜结构域的氨基酸序列如SEQ ID NO.5：FWVLVVVGGVLACYSLLVTV AFIIFWV中所示。

在一个具体的实施方案中，共刺激结构域内的跨膜结构域包含与SEQ ID NO：5的氨基酸序列至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。

在另一个实施方案中，跨膜结构域衍生自(即包含)CD8。在一个实施方案中，CD8细胞外结构域和跨膜结构域的核苷酸序列如 中所示。

在一些实施方案中，编码共刺激结构域内的跨膜结构域的多核苷酸包含与CD8跨膜结构域的核苷酸序列至少约60％，至少约65％，至少约70％，至少约75％，至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的核苷酸序列。

CD8细胞外结构域和跨膜结构域的氨基酸序列如 中所示。

在一个具体的实施方案中，共刺激结构域内的跨膜结构域包含与CD8跨膜结构域的氨基酸序列至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。

细胞内(信号传导)结构域：本发明的工程化T细胞的细胞内(信号传导)结构域可以对活化结构域提供信号传导，该活化结构域然后活化免疫细胞的至少一个正常效应器功能。T细胞的效应器功能可以是例如细胞溶解活性或辅助活性，包括分泌细胞因子。

在某些实施方案中，适合的细胞内信号传导结构域包括(即包含)但不限于，4-1BB/CD137、活化性NK细胞受体、免疫球蛋白蛋白质、B7-H3、BAFFR、BLAME(SLAMF8)、BTLA、CD100(SEMA4D)、CD103、CD160(BY55)、CD18、CD19、CD19a、CD2、CD247、CD27、CD276(B7-H3)、CD28、CD29、CD3 delta、CD3 epsilon、CD3 gamma、CD30、CD4、CD40、CD49a、CD49D、CD49f、CD69、CD7、CD84、CD8alpha、CD8beta、CD96(Tactile)、CD1 1a、CD1 1b、CD1 1c、CD1 1d、CDS、CEACAM1、CRT AM、细胞因子受体、DAP-10、DNAM1(CD226)、Fc gamma受体、GADS、GITR、HVEM(LIGHTR)、IA4、ICAM-1、ICAM-1、Ig alpha(CD79a)、IL-2R beta、IL-2R gamma、IL-7Ralpha、诱导性T细胞共刺激分子(ICOS)、整合素、ITGA4、ITGA4、ITGA6、ITGAD、ITGAE、ITGAL、ITGAM、ITGAX、ITGB2、ITGB7、ITGB1、KIRDS2、LAT、LFA-1、LFA-1、与CD83特异性结合的配体、LIGHT、LIGHT、LTBR、Ly9(CD229)，Lyl08)、淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1；CDl-la/CD18)、MHC 1类分子、NKG2C、NKG2D、NKp30、NKp44、NKp46、NKp80(KLRF1)、OX-40、PAG/Cbp、程序性死亡-1(PD-1)、PSGL1、SELPLG(CD162)、信号传导淋巴细胞活化分子(SLAM蛋白)、SLAM(SLAMF1；CD150；IPO-3)、SLAMF4(CD244；2B4)、SLAMF6(NTB-A、SLAMF7、SLP-76、TNF受体蛋白、TNFR2、TNFSF14、Toll配体受体、TRANCE/RANKL、VLA1或VLA-6，或它们的片段、截短或组合。

编码细胞内信号传导结构域的核苷酸序列的实例如 中所示。

在一个实施方案中，编码共刺激结构域内的细胞内信号传导结构域的多核苷酸包含与SEQ ID NO：6的核苷酸序列至少约60％，至少约65％，至少约70％，至少约75％，至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的核苷酸序列。

细胞内信号传导结构域的实例如SEQ ID NO.7：RSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS中所示。

在一个具体的实施方案中，共刺激结构域内的细胞内信号传导结构域包含与SEQID NO：7的氨基酸序列至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。

在一些实施方案中，共刺激结构域包含、基本上由以下各项组成或者由以下各项组成：细胞外THD，以及共刺激蛋白质的跨膜和细胞内结构域。例如，编码共刺激结构域的核苷酸序列如 中所示。

在一些实施方案中，编码共刺激结构域的多核苷酸包含、基本上由以下组成或者由以下组成：与SEQ ID NO：240的核苷酸序列至少约60％，至少约65％，至少约70％，至少约75％，至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的核苷酸序列，其中该共刺激结构域不包含SEQ ID NO：1的氨基酸1至122、SEQ ID NO：1的氨基酸1至121、SEQ ID NO：1的氨基酸1至120、SEQ ID NO：1的氨基酸1至119、SEQ ID NO：1的氨基酸1至118或SEQ ID NO：1的氨基酸1至118。

共刺激结构域的相应氨基酸序列如 中所示。

在一些实施方案中，共刺激结构域包含、基本上由以下组成或者由以下组成：与SEQ ID NO：241的氨基酸序列至少约70％，至少约75％，至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的核苷酸序列，其中该共刺激结构域不包含SEQ ID NO：1的氨基酸1至122、SEQ ID NO：1的氨基酸1至121、SEQ ID NO：1的氨基酸1至120、SEQ ID NO：1的氨基酸1至119、SEQ ID NO：1的氨基酸1至118或SEQ ID NO：1的氨基酸1至118。

I.B.活化结构域

CD3是天然T细胞上的T细胞受体的元件，并且已经显示为CAR中的重要的细胞内活化元件。在一个实施方案中，CD3为CD3zeta，其核苷酸序列如 中所示。

在一些实施方案中，编码活化结构域的多核苷酸包含与SEQ ID NO：8的核苷酸序列至少约60％，至少约65％，至少约70％，至少约75％，至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的核苷酸序列。

细胞内CD3zeta的相应氨基酸如 中所示。

在一些实施方案中，活化结构域包含与SEQ ID NO：9的氨基酸序列至少约70％，至少约75％，至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的核苷酸序列。

在一些实施方案中，活化结构域包含与以下氨基酸序列至少约70％，至少约75％，至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的氨基酸序列：

I.C.抗原结合分子

可以通过掺入与靶抗原相互作周的抗原结合分子来工程化改造CAR以结合抗原(例如细胞表面抗原)。在一些实施方案中，抗原结合分子是其抗体片段，例如一个或多个单链抗体片段(“scFv”)。scFv是具有连接在一起的抗体的重链和轻链的可变区的单链抗体片段。参见美国专利号7,741,465和6,319,494，以及Eshhar et al.，Cancer ImmunolImmunotherapy(1997)45：131-136。scFv保留亲本抗体与靶抗原特异性相互作用的能力。scFv在嵌合抗原受体中有用，因为它们可以经工程化改造以与其他CAR组分一起作为单链的一部分表达。同上。还参见Krause et al.，J.Exp.Med.，Volume 188，No.4，1998(619-626)；Finney et al.，Journal of Immunology，1998，161：2791-2797。应当领会，抗原结合分子通常包含在CAR的细胞外部分中，使得它能够识别并结合感兴趣的抗原。具有对超过一个感兴趣的抗原的特异性的双特异性和多特异性CAR考虑在本发明的范围内。

在一些实施方案中，多核苷酸编码包含本发明的THD和特异性结合靶抗原的抗原结合分子的CAR或TCR。在一些实施方案中，靶抗原为肿瘤抗原。在一些实施方案中，抗原选自肿瘤相关表面抗原，例如5T4、甲胎蛋白(AFP)、B7-1(CD80)、B7-2(CD86)、BCMA、B-人绒毛膜促性腺素、CA-125、癌胚抗原(CEA)、癌胚抗原(CEA)、CD123、CD133、CD138、CD19、CD20、CD22、CD23、CD24、CD25、CD30、CD33、CD34、CD4、CD40、CD44、CD56、CD8、CLL-1、c-Met、CMV特异性抗原、CSPG4、CTLA-4、二涎酸神经节苷脂GD2(disialoganglioside GD2)、导管上皮黏蛋白(ductal-epithelial mucine)、EBV特异性抗原、EGFR变体III(EGFRvIII)、ELF2M、内皮联蛋白、肝配蛋白B2、表皮生长因子受体(EGFR)、上皮细胞黏附分子(EpCAM)、上皮肿瘤抗原、ErbB2(HER2/neu)、成纤维细胞相关蛋白(fap)、FLT3、叶酸结合蛋白、GD2、GD3、神经胶质瘤相关抗原、鞘糖脂、gp36、HBV特异性抗原、HCV特异性抗原、HER1-HER2、结合的HER2-HER3、HERV-K、高分子量-黑色素瘤相关抗原(HMW-MAA)、HIV-1包膜糖蛋白gp41、HPV特异性抗原、人端粒酶逆转录酶、IGFI受体、IGF-II、IL-11Ralpha、IL-13R-a2、流感病毒特异性抗原；CD38、胰岛素生长因子(IGFl)-l、肠羧基酯酶、kappa链、LAGA-la、lambda链、拉沙病毒特异性抗原、凝集素反应性AFP、谱系特异性或组织特异性抗原例如CD3、MAGE、MAGE-A1、主要组织相容性复合体(MHC)分子、呈递肿瘤特异性肽表位的主要组织相容性复合体(MHC)分子、M-CSF、黑色素瘤相关抗原、间皮素、间皮素、MN-CA IX、MUC-1、mut hsp70-2、突变的p53、突变的p53、突变的ras、中性粒细胞弹性蛋白酶、NKG2D、Nkp30、NY-ESO-1、p53、PAP、prostase、prostase特异性抗原(PSA)、前列腺癌肿瘤抗原-1(PCTA-1)、前列腺特异性抗原、prostein、PSMA、RAGE-1、ROR1、RU1、RU2(AS)、表面黏附分子、存活和端粒酶、TAG-72、纤连蛋白的额外结构域(extra domain)A(EDA)和额外结构域B(EDB)和生腱蛋白C的Al结构域(TnC Al)、甲状腺球蛋白、肿瘤基质抗原、血管内皮生长因子受体-2(VEGFR2)、病毒特异性表面抗原例如HIV特异性抗原(例如HIV gpl20)、以及这些表面标志物的任何衍生物或变体。在某些实施方案中，抗原结合分子特异性结合BCMA。在其他实施方案中，抗原结合分子特异性结合CLL-1。在其他实施方案中，抗原结合分子特异性结合FLT3。

在一些实施方案中，抗原结合分子特异性结合BCMA。在某些实施方案中，抗原结合分子包含(a)包含选自SEQ ID NO：13-20的氨基酸序列的VH CDR1；(b)包含选自SEQ ID NO：21-28的氨基酸序列的VH CDR2；(c)包含选自SEQ ID NO：29-36的氨基酸序列的VH CDR3；(d)包含选自SEQ ID NO：37-44的氨基酸序列的VL CDR1；(e)包含选自SEQ ID NO：45-52的氨基酸序列的VL CDR2；和/或(f)包含选自SEQ ID NO：53-60的氨基酸序列的VL CDR3。

在一个实施方案中，抗原结合分子包含(a)包含SEQ ID NO：13的氨基酸的VHCDR1；(b)包含SEQ ID NO：21的氨基酸序列的VH CDR2；(c)包含SEQ ID NO：29的氨基酸序列的VH CDR3；(d)包含SEQ ID NO：37的氨基酸序列的VL CDR1；(e)包含SEQ ID NO：45的氨基酸序列的VL CDR2；和/或(f)包含SEQ ID NO：53的氨基酸序列的VL CDR3。

在另一个实施方案中，抗原结合分子包含(a)包含SEQ ID NO：14的氨基酸的VHCDR1；(b)包含SEQ ID NO：22的氨基酸序列的VH CDR2；(c)包含SEQ ID NO：30的氨基酸序列的VH CDR3；(d)包含SEQ ID NO：38的氨基酸序列的VL CDR1；(e)包含SEQ ID NO：46的氨基酸序列的VL CDR2；和/或(f)包含SEQ ID NO：54的氨基酸序列的VL CDR3。

在另一个实施方案中，抗原结合分子包含(a)包含SEQ ID NO：15的氨基酸的VHCDR1；(b)包含SEQ ID NO：23的氨基酸序列的VH CDR2；(c)包含SEQ ID NO：31的氨基酸序列的VH CDR3；(d)包含SEQ ID NO：39的氨基酸序列的VL CDR1；(e)包含SEQ ID NO：47的氨基酸序列的VL CDR2；和/或(f)包含SEQ ID NO：55的氨基酸序列的VL CDR3。

在另一个实施方案中，抗原结合分子包含(a)包含SEQ ID NO：16的氨基酸的VHCDR1；(b)包含SEQ ID NO：24的氨基酸序列的VH CDR2；(c)包含SEQ ID NO：32的氨基酸序列的VH CDR3；(d)包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列的VL CDR1；(e)包含SEQ ID NO：48的氨基酸序列的VL CDR2；和/或(f)包含SEQ ID NO：56的氨基酸序列的VL CDR3。

在另一个实施方案中，抗原结合分子包含(a)包含SEQ ID NO：17的氨基酸的VHCDR1；(b)包含SEQ ID NO：25的氨基酸序列的VH CDR2；(c)包含SEQ ID NO：33的氨基酸序列的VH CDR3；(d)包含SEQ ID NO：41的氨基酸序列的VL CDR1；(e)包含SEQ ID NO：49的氨基酸序列的VL CDR2；和/或(f)包含SEQ ID NO：57的氨基酸序列的VL CDR3。

在另一个实施方案中，抗原结合分子包含(a)包含SEQ ID NO：18的氨基酸的VHCDR1；(b)包含SEQ ID NO：26的氨基酸序列的VH CDR2；(c)包含SEQ ID NO：34的氨基酸序列的VH CDR3；(d)包含SEQ ID NO：42的氨基酸序列的VL CDR1；(e)包含SEQ ID NO：50的氨基酸序列的VL CDR2；和/或(f)包含SEQ ID NO：58的氨基酸序列的VL CDR3。

在另一个实施方案中，抗原结合分子包含(a)包含SEQ ID NO：19的氨基酸的VHCDR1；(b)包含SEQ ID NO：27的氨基酸序列的VH CDR2；(c)包含SEQ ID NO：35的氨基酸序列的VH CDR3；(d)包含SEQ ID NO：43的氨基酸序列的VL CDR1；(e)包含SEQ ID NO：51的氨基酸序列的VL CDR2；和/或(f)包含SEQ ID NO：59的氨基酸序列的VL CDR3。

在另一个实施方案中，抗原结合分子包含(a)包含SEQ ID NO：20的氨基酸的VHCDR1；(b)包含SEQ ID NO：28的氨基酸序列的VH CDR2；(c)包含SEQ ID NO：36的氨基酸序列的VH CDR3；(d)包含SEQ ID NO：44的氨基酸序列的VL CDR1；(e)包含SEQ ID NO：52的氨基酸序列的VL CDR2；和/或(f)包含SEQ ID NO：60的氨基酸序列的VL CDR3。

在某些实施方案中，抗原结合分子包含VH和VL，所述VH包含选自由SEQ ID NO：77-84组成的组的氨基酸序列，和所述VL包含选自由SEQ ID NO：85-92组成的组的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗原结合分子包含VH和VL，所述VH包含SEQ ID NO：77的氨基酸序列和所述VL包含SEQ ID NO：85的氨基酸序列。在另一个实施方案中，抗原结合分子包含VH和VL，所述VH包含SEQ ID NO：78的氨基酸序列和所述VL包含SEQ ID NO：86的氨基酸序列。在另一个实施方案中，抗原结合分子包含VH和VL，所述VH包含SEQ ID NO：79的氨基酸序列和所述VL包含SEQ ID NO：87的氨基酸序列。在另一个实施方案中，抗原结合分子包含VH和VL，所述VH包含SEQ ID NO：80的氨基酸序列和所述VL包含SEQ ID NO：88的氨基酸序列。在另一个实施方案中，抗原结合分子包含VH和VL，所述VH包含SEQ ID NO：81的氨基酸序列和所述VL包含SEQ ID NO：89的氨基酸序列。在另一个实施方案中，抗原结合分子包含VH和VL，所述VH包含SEQ ID NO：82的氨基酸序列和所述VL包含SEQ ID NO：90的氨基酸序列。在另一个实施方案中，抗原结合分子包含VH和VL，所述VH包含SEQ ID NO：83的氨基酸序列和所述VL包含SEQID NO：91的氨基酸序列。在另一个实施方案中，抗原结合分子包含VH和VL，所述VH包含SEQID NO：84的氨基酸序列和所述VL包含SEQ ID NO：92的氨基酸序列。

在一个具体的实施方案中，本发明的多核苷酸包含与选自由SEQ ID NO：61-68组成的组的核苷酸序列至少约70％，至少约75％，至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的核苷酸序列。在另一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含与选自由SEQ ID NO：69-76组成的组的核苷酸序列至少约70％，至少约75％，至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的核苷酸序列。

其他已知抗BCMA抗体或其抗原结合分子可以用作包含本发明的THD的CAR或TCR的抗原结合分子。此类BCMA抗体或其抗原结合分子的非限制性实例包括描述于2015年10月22日公开的WO2015158671A1和2016年1月28日公开的WO2016014565A2的抗体或抗原结合分子。

在一些实施方案中，抗原结合分子特异性结合CLL-1。在某些实施方案中，抗原结合分子包含(a)包含选自SEQ ID NO：93-96的氨基酸序列的VH CDR1；(b)包含选自SEQ IDNO：97-100的氨基酸序列的VH CDR2；(c)包含选自SEQ ID NO：101-104的氨基酸序列的VHCDR3；(d)包含选自SEQ ID NO：105-108的氨基酸序列的VL CDR1；(e)包含选自SEQ ID NO：109-112的氨基酸序列的VL CDR2；和/或(f)包含选自SEQ ID NO：113-116的氨基酸序列的VL CDR3。

在一个实施方案中，抗原结合分子包含(a)包含SEQ ID NO：93的氨基酸的VHCDR1；(b)包含SEQ ID NO：97的氨基酸序列的VH CDR2；(c)包含SEQ ID NO：101的氨基酸序列的VH CDR3；(d)包含SEQ ID NO：105的氨基酸序列的VL CDR1；(e)包含SEQ ID NO：109的氨基酸序列的VL CDR2；和/或(f)包含SEQ ID NO：113的氨基酸序列的VL CDR3。

在一个实施方案中，抗原结合分子包含(a)包含SEQ ID NO：94的氨基酸的VHCDR1；(b)包含SEQ ID NO：98的氨基酸序列的VH CDR2；(c)包含SEQ ID NO：102的氨基酸序列的VH CDR3；(d)包含SEQ ID NO：106的氨基酸序列的VL CDR1；(e)包含SEQ ID NO：110的氨基酸序列的VL CDR2；和/或(f)包含SEQ ID NO：114的氨基酸序列的VL CDR3。

在一个实施方案中，抗原结合分子包含(a)包含SEQ ID NO：95的氨基酸的VHCDR1；(b)包含SEQ ID NO：99的氨基酸序列的VH CDR2；(c)包含SEQ ID NO：103的氨基酸序列的VH CDR3；(d)包含SEQ ID NO：107的氨基酸序列的VL CDR1；(e)包含SEQ ID NO：111的氨基酸序列的VL CDR2；和/或(f)包含SEQ ID NO：115的氨基酸序列的VL CDR3。

在一个实施方案中，抗原结合分子包含(a)包含SEQ ID NO：96的氨基酸的VHCDR1；(b)包含SEQ ID NO：100的氨基酸序列的VH CDR2；(c)包含SEQ ID NO：104的氨基酸序列的VH CDR3；(d)包含SEQ ID NO：108的氨基酸序列的VL CDR1；(e)包含SEQ ID NO：112的氨基酸序列的VL CDR2；和/或(f)包含SEQ ID NO：116的氨基酸序列的VL CDR3。

在某些实施方案中，抗原结合分子包含VH和VL，所述VH包含选自由SEQ ID NO：125-128组成的组的氨基酸序列和所述VL包含选自由SEQ ID NO：129-132组成的组的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗原结合分子包含VH和VL，所述VH包含SEQ ID NO：125的氨基酸序列和所述VL包含SEQ ID NO：129的氨基酸序列。在另一个实施方案中，抗原结合分子包含VH和VL，所述VH包含SEQ ID NO：126的氨基酸序列和所述VL包含SEQ ID NO：130的氨基酸序列。在另一个实施方案中，抗原结合分子包含VH和VL，所述VH包含SEQ ID NO：127的氨基酸序列和所述VL包含SEQ ID NO：131的氨基酸序列。在另一个实施方案中，抗原结合分子包含VH和VL，所述VH包含SEQ ID NO：128的氨基酸序列和所述VL包含SEQ ID NO：132的氨基酸序列。

在一个具体的实施方案中，本发明的多核苷酸包含与选自由SEQ ID NO：117-120组成的组的核苷酸序列至少约70％，至少约75％，至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的核苷酸序列。在另一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含与选自由SEQ ID NO：121-124组成的组的核苷酸序列至少约70％，至少约75％，至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的核苷酸序列。

抗CLL-1抗体或其抗原结合分子的其他实例包括描述于2016年1月28日公开的WO2016014535和2016年2月25日公开的US 2016/0051651 A1的抗体或抗原结合分子。

由本发明的多核苷酸编码的抗原结合分子可以为单链或双链。在一些实施方案中，抗原结合分子为单链。在某些实施方案中，抗原结合分子选自由以下各项组成的组：scFv、Fab、Fab′、Fv、F(ab′)2、dab或它们的任何组合。在一个具体的实施方案中，抗原结合分子包含scFv。

在某些实施方案中，抗原结合分子包含单链，其中重链可变区和轻链可变区通过接头连接。在一些实施方案中，VH位于接头的N末端而VL位于接头的C末端。在其他实施方案中，VL位于接头的N末端而VH位于接头的C末端。在一些实施方案中，接头包含至少约5个，至少约8个，至少约10个，至少约13个，至少约15个，至少约18个，至少约20个，至少约25个，至少约30个，至少约35个，至少约40个，至少约45个，至少约50个，至少约60个，至少约70个，至少约80个，至少约90个或至少约100个氨基酸。在一些实施方案中，接头包含至少约18个氨基酸。在某些实施方案中，接头包含与氨基酸序列GSTSGSGKPGSGEGSTKG(SEQ ID NO：12)或氨基酸序列GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：237)至少约75％，至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或100％相同的氨基酸序列。在一个实施方案中，接头为Whitlow接头。在某些实施方案中，结合分子包含单链，其中重链可变区和轻链可变区通过接头连接，其中接头包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列。

在一些实施方案中，抗原结合分子以小于1x 10^-6M、小于1x 10^-7M、小于1x 10^-8M或小于1x 10^-9M的K_D结合靶抗原(例如人BCMA、人FLT3或人CLL-1)。在一个具体的实施方案中，抗原结合分子以小于1x 10^-7M的K_D结合靶抗原(例如人BCMA、人FLT3或人CLL-1)。在另一个实施方案中，抗原结合分子以小于1x 10^-8M的K_D结合靶抗原(例如人BCMA、人FLT3或人CLL-1)。在一些实施方案中，抗原结合分子以约1x 10^-7M、约2x 10^-7M、约3x 10^-7M、约4x 10^-7M、约5x 10^-7M、约6x 10^-7M、约7x 10^-7M、约8x 10^-7M、约9x 10^-7M、约1x 10^-8M、约2x 10^-8M、约3x10^-8M、约4x 10^-8M、约5x 10^-8M、约6x 10^-8M、约7x 10^-8M、约8x 10^-8M、约9x 10^-8M、约1x 10^{- 9}M、约2x 10^-9M、约3x 10^-9M、约4x 10^-9M、约5x 10^-9M、约6x 10^-9M、约7x 10^-9M、约8x 10^-9M、约9x 10^-9M、约1x 10^-10M或约5x 10^-10M的K_D结合靶抗原(例如人BCMA、人FLT3或人CLL-1)。在某些实施方案中，K_D计算为k_off/k_on的商，并且如通过例如表面等离激元共振技术所测量的，使用单价抗体例如Fab片段来测定k_on和k_off。在其他实施方案中，K_D计算为k_off/k_on的商，并且如通过例如表面等离激元共振技术所测量的，使用二价抗体例如Fab片段来测定k_on和k_off。

在一些实施方案中，抗原结合分子以小于1x 10^-4M^-1s^-1、小于2x 10^-4M^-1s^-1、小于3x10^-4M^-1s^-1、小于4x 10^-4M^-1s^-1、小于5x 10^-4M^-1s^-1、小于6x 10^-4M^-1s^-1、小于7x 10^-4M^-1s^-1、小于8x 10^-4M^-1s^-1、小于9x 10^-4M^-1s^-1、小于1x 10^-5M^-1s^-1、小于2x 10^-5M^-1s^-1、小于3x 10^-5M^-1s^-1、小于4x 10^-5M^-1s^-1、小于5x 10^-5M^-1s^-1、小于6x 10^-5M^-1s^-1、小于7x 10^-5M^-1s^-1、小于8x 10^-5M^{- 1}s^-1、小于9x 10^-5M^-1s^-1、小于1x 10^-6M^-1s^-1、小于2x 10^-6M^-1s^-1、小于3x 10^-6M^-1s^-1、小于4x10^-6M^-1s^-1、小于5x 10^-6M^-1s^-1、小于6x 10^-6M^-1s^-1、小于7x 10^-6M^-1s^-1、小于8x 10^-6M^-1s^-1、小于9x 10^-6M^-1s^-1或小于1x 10^-7M^-1s^-1的结合速率(k_on)结合靶抗原(例如人BCMA、人FLT3或人CLL-1)。在某些实施方案中，如通过例如表面等离激元共振技术所测量的，使用单价抗体例如Fab片段来测定k_on。在其他实施方案中，如通过例如表面等离激元共振技术所测量的，使用二价抗体来测定k_on。

在一些实施方案中，抗原结合分子以小于1x 10^-2s^-1、小于2x 10^-2s^-1、小于3x 10^{- 2}s^-1、小于4x 10^-2s^-1、小于5x 10^-2s^-1、小于6x 10^-2s^-1、小于7x 10^-2s^-1、小于8x 10^-2s^-1、小于9x 10^-2s^-1、小于1x 10^-3s^-1、小于2x 10^-3s^-1、小于3x 10^-3s^-1、小于4x 10^-3s^-1、小于5x 10^-3s^-1、小于6x 10^-3s^-1、小于7x 10^-3s^-1、小于8x 10^-3s^-1、小于9x 10^-3s^-1、小于1x 10^-4s^-1、小于2x10^-4s^-1、小于3x 10^-4s^-1、小于4x 10^-4s^-1、小于5x 10^-4s^-1、小于6x 10^-4s^-1、小于7x 10^-4s^-1、小于8x 10^-4s^-1、小于9x 10^-4s^-1、小于1x 10^-4s^-1或小于5x 10^-4s^-1的解离速率(k_off)结合靶抗原(例如人BCMA、人FLT3或人CLL-1)。在某些实施方案中，如通过例如表面等离激元共振技术所测量的，使用单价抗体例如Fab片段来测定k_off。在其他实施方案中，如通过例如表面等离激元共振技术所测量的，使用二价抗体来测定k_off。

在一些实施方案中，多核苷酸编码TCR，其中TCR进一步包含第四互补决定区(CD4)。在某些实施方案中，多核苷酸编码TCR，其中TCR进一步包含恒定区。在一些实施方案中，恒定区选自以下各项的恒定区：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgD、IgE和IgM。

I.D.开关结构域(Switch Domain)

应当领会，通过用自杀基因转导免疫细胞(含有一种或多种CAR或TCR)可以使不良事件最小化。也可以需要将诱导性“开(on)”或“加速器”开关掺入到免疫细胞中。适合的技术包括在用本发明的CAR构建体转导细胞之前、之后或同时使用诱导性胱天蛋白酶-9(美国申请2011/0286980)或胸苷激酶。导入自杀基因和/或“开”开关的另外的方法包括TALENS、锌指、RNAi、siRNA、shRNA、反义技术和本领域已知的其他技术。

根据本发明，另外的开-关或其他类型的控制开关技术可以并入本文。这些技术可以采用二聚化结构域和任选此类结构域二聚化的活化剂。这些技术包括例如，Wu et al.，Science 2014 350(6258)描述的在某些细胞中利用FKBP/Rapalog二聚化系统的那些，其内容通过引用整体并入本文。另外的二聚化对可以包括环孢霉素-A/亲环素受体、雌激素/雌激素受体(任选地使用他莫昔芬)、糖皮质激素/糖皮质激素受体、四环素/四环素受体、维生素D/维生素D受体。二聚化技术的其他实例可以在例如WO 2014/127261、WO 2015/090229、US 2014/0286987、US 2015/0266973、US 2016/0046700、美国专利号8,486,693、US 2014/0171649和US 2012/0130076中找到，其内容进一步通过引用整体并入本文。

I.E.前导肽

在一些实施方案中，本发明的多核苷酸编码的CAR或TCR可以进一步包含前导肽(本文中也称为“信号肽”)。在某些实施方案中，前导肽包含与氨基酸序列MALPVTALLLPLALLLHAARP(SEQ ID NO：11)至少约75％，至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，前导肽包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列。

在一些实施方案中，本发明的多核苷酸编码CAR或TCR，其中CAR或TCR包含前导肽(P)、抗原结合分子(B)、共刺激蛋白质的细胞外结构域(E)、跨膜结构域(T)、共刺激区(C)和活化结构域(A)，其中CAR根据如下配置：P-B-E-T-C-A。在一些实施方案中，抗原结合分子包含VH和VL，其中CAR根据如下配置：P-VH-VL-E-T-C-A或P-VL-VH-E-T-C-A。在一些实施方案中，VH和VL通过接头(L)连接，其中CAR根据如下配置(从N-末端至C-末端)：P-VH-L-VL-E-T-C-A或P-VH-L-VL-E-T-C-A。

在一些实施方案中，本发明的多核苷酸编码CAR，其中CAR包含与选自表2的氨基酸序列至少约75％，至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或100％相同的氨基酸序列。在某些实施方案中，本发明的多核苷酸编码CAR，其中CAR包含选自表2的氨基酸序列。

表2实例CAR序列

在一些实施方案中，本发明的多核苷酸编码CAR，其中CAR包含与选自由以下各项组成的组的氨基酸序列至少约75％，至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或100％相同的氨基酸序列：SEQ ID NO：134、136、138、140、142、144、146、148、150、152、154、156、158、160、162、164、166、168、178、180、190、192、202、204、214、216、226和228。在某些实施方案中，CAR包含选自由以下各项组成的组的氨基酸序列：SEQ ID NO：134、136、138、140、142、144、146、148、150、152、154、156、158、160、162、164、166、168、178、180、190、192、202、204、214、216、226和228。

在一些实施方案中，本发明的多核苷酸包含与选自由以下各项组成的组的核苷酸序列至少约50％，至少约60％，至少约65％，至少约70％，至少约75％，至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或100％相同的核苷酸序列：SEQ ID NO：133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161、163、165、167、177、179、189、191、201、203、213、215、225和227。在某些实施方案中，多核苷酸包含选自由以下各项组成的组的核苷酸序列：SEQ ID NO：133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161、163、165、167、177、179、189、191、201、203、213、215、225和227。

II.载体、细胞和药物组合物

在某些方面，本文提供了包含本发明的多核苷酸的载体。在一些实施方案中，本发明涉及载体或一组载体，其如上所述，包含编码CAR或TCR的多核苷酸，该CAR或TCR包含截短铰链结构域(“THD”)。

本领域已知的任何载体可以适于本发明。在一些实施方案中，载体为病毒载体。在一些实施方案中，载体为逆转录病毒载体、DNA载体、鼠白血病病毒载体、SFG载体、质粒、RNA载体、腺病毒载体、杆状病毒载体、EB病毒载体、乳多空病毒载体、牛痘病毒载体、单纯疱疹病毒载体、腺病毒相关载体(AAV)、慢病毒载体或它们的任何组合。

在实施方案中，本发明的内容中可以采用的载体为pGAR并且具有如下编码序列：

pGAR载体图谱如下所示：

适合的另外的例示性载体包括例如，pBABE-puro、pBABE-neo largeTcDNA、pBABE-hygro-hTERT、pMKO.1GFP、MSCV-IRES-GFP、pMSCV PIG(Puro IRES GFP空质粒)、pMSCV-loxp-dsRed-loxp-eGFP-Puro-WPRE、MSCV IRES荧光素酶、pMIG、MDH1-PGK-GFP_2.0、TtRMPVIR、pMSCV-IRES-mCherry FP、pRetroX GFP T2A Cre、pRXTN、pLncEXP和pLXIN-Luc。

在其他方面，本文提供了包含本发明的多核苷酸或载体的细胞。在一些实施方案中，本发明涉及细胞，例如体外细胞，其包含编码包含本文所述的TCD的CAR或TCR的多核苷酸。在其他实施方案中，本发明涉及细胞，例如体外细胞，其包含由包含本文所述的TCD的CAR或TCR编码的多肽。

对于本发明的多核苷酸、载体或多肽，任何细胞可以用作宿主细胞。在一些实施方案中，细胞可以为原核细胞、真菌细胞、酵母细胞或高等真核细胞例如哺乳动物细胞。适合的原核细胞包括但不限于，真细菌，例如革兰氏阴性或革兰氏阳性生物体，例如，肠杆菌科细菌(Enterobactehaceae)例如

埃希氏菌(Escherichia)，例如大肠杆菌(E.coli)；肠杆菌(Enterobacter)；欧文氏菌(Erwinia)；克雷伯氏菌(Klebsiella)；变形杆菌(Proteus)；沙门氏菌(Salmonella)，例如鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)；沙雷氏菌(Serratia)，例如褪色沙雷氏菌(Serratia marcescans)和志贺氏菌(Shigella)；芽孢杆菌(Bacilli)例如枯草芽孢杆菌(B.subtilis)和地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)；假单胞菌(Pseudomonas)例如铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)；和链霉菌(Streptomyces)。在一些实施方案中，细胞为人细胞。在一些实施方案中，细胞为免疫细胞。在一些实施方案中，免疫细胞选自由以下各项组成的组：T细胞、B细胞、肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)、TCR表达细胞、自然杀伤(NK)细胞、树突状细胞、粒细胞、先天淋巴样细胞、巨核细胞、单核细胞、巨噬细胞、血小板、胸腺细胞和髓样细胞。在一个实施方案中，免疫细胞为T细胞。在另一个实施方案中，免疫细胞为NK细胞。在某些实施方案中，T细胞为肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)、自体T细胞、工程化自体T细胞(eACT^TM)、同种异体T细胞、异源T细胞，或它们的任何组合。

可以通过本领域已知的任何来源获得本发明的细胞。例如，T细胞可以在体外从造血干细胞群分化，或者可以从受试者获得T细胞。T细胞可以从例如外周血单核细胞、骨髓、淋巴结组织、脐带血、胸腺组织、来自感染部位的组织、腹水、胸腔积液、脾组织以及肿瘤获得。此外，T细胞可以源自本领域中可获得的一个或多个T细胞系。T细胞也可以使用本领域技术人员已知的任何数目的技术(例如FICOLL^TM分离和/或单采术(apheresis))从受试者收集的血液单位取得。在某些实施方案中，通过单采术收集的细胞经清洗以去除血浆部分，并且放置于适当的缓冲液或介质中以进行后续处理。在一些实施方案中，用PBS清洗细胞。如应当领会的，可以例如通过使用半自动无逆流离心机(例如Cobe^TM 2991细胞处理器，BaxterCytoMate^TM等)来使用清洗步骤。在一些实施方案中，将经清洗的细胞重悬于一种或多种生物相容性缓冲液，或含有或不含有缓冲液的其他盐溶液中。在某些实施方案中，除去单采样品中不需要的成分。分离用于T细胞疗法的T细胞的另外的方法公开于美国专利公开号2013/0287748，其通过引用整体并入本文。

在某些实施方案中，通过溶解红细胞和消耗单核细胞(例如经由PERCOLL^TM梯度，通过使用离心来分离)从PBMC分离T细胞。在一些实施方案中，T细胞的特定亚群，例如CD4⁺、CD8⁺、CD28⁺、CD45RA⁺和CD45RO⁺T细胞可以通过本领域中已知的正或负选择技术进一步分离。例如，通过负选择进行的T细胞群富集可以使用针对经负选择的细胞所特有的表面标志物的抗体组合来完成。在一些实施方案中，可以使用细胞分选和/或经由负磁性免疫黏附或流式细胞术(其使用针对存在于经负选择的细胞上的细胞表面标志物的单克隆抗体混合物)进行选择。例如，为了通过负选择来富集CD4⁺细胞，单克隆抗体混合物通常包括针对CD8、CD11b、CD14、CD16、CD20和HLA-DR的抗体。在某些实施方案中，使用流式细胞术和细胞分选来分离用于本发明中的感兴趣的细胞群。

在一些实施方案中，PBMC直接用于使用如本文所述的方法的免疫细胞的遗传修饰(例如CAR或TCR)。在某些实施方案中，分离PBMC后，可以进一步分离出T淋巴细胞，并在遗传修饰和/或扩增前或后将细胞毒性和辅助性T淋巴细胞两者分选成初始T细胞、记忆T细胞和效应T细胞亚群。

在一些实施方案中，通过鉴别与CD8⁺细胞的初始细胞、中央记忆细胞和效应细胞类型中每种相关联的细胞表面抗原来将CD8⁺细胞进一步分选成初始细胞、中央记忆细胞及效应细胞。在一些实施方案中，中央记忆T细胞的表型标志物的表达包括CCR7、CD3、CD28、CD45RO、CD62L和CD127并且为颗粒酶B阴性。在一些实施方案中，中央记忆T细胞为CD8⁺、CD45RO⁺和CD62L⁺T细胞。在一些实施方案中，效应T细胞为CCR7、CD28、CD62L和CD127阴性并且为颗粒酶B和穿孔蛋白阳性。在某些实施方案中，将CD4⁺T细胞进一步分选成亚群。例如，可以通过鉴别具有细胞表面抗原的细胞群将CD4⁺T辅助性细胞分选为初始细胞、中央记忆细胞和效应细胞。

在一些实施方案中，免疫细胞例如T细胞在分离后使用已知的方法进行遗传修饰，或者免疫细胞在经遗传修饰前在体外活化和扩增(或者，在祖细胞的情况下分化)。在另一个实施方案中，免疫细胞例如T细胞以本文所述的嵌合抗原受体进行遗传修饰(例如用包含一个或多个编码CAR的核苷酸序列的病毒载体转导)，并然后在体外活化和/或扩增。用于活化和扩增T细胞的方法为本领域所已知并描述于例如美国专利号6,905,874；6,867,041；和6,797,514；以及PCT公开号WO 2012/079000，其内容通过引用整体并入本文。一般而言，此类方法包括将PBMC或分离的T细胞在具有适当的细胞因子(例如IL-2)的培养基中与刺激剂和共刺激剂(例如抗CD3和抗CD28抗体，通常黏附在珠或其他表面)接触。黏附在相同珠上的抗CD3和抗CD28抗体充当“替代”抗原呈递细胞(APC)。一种实例为系统，用于生理活化人T细胞的CD3/CD28活化剂/刺激剂系统。在其他实施方案中，使用例如美国专利号6,040,177和5,827,642以及PCT公开号WO 2012/129514(其内容通过引用整体并入本文)中描述的方法，以饲养细胞以及适当的抗体和细胞因子活化并刺激T细胞以进行增殖。

在某些实施方案中，从供体受试者获得T细胞。在一些实施方案中，供体受试者为患有癌症或肿瘤的人类患者。在其他实施方案中，供体受试者为未患有癌症或肿瘤的人类患者。

本发明的其他方面涉及包含本文所述的多核苷酸、本文所述的载体、本文所述的多肽或本文所述的体外细胞的组合物。在一些实施方案中，组合物包含药学上可接受的载体、稀释剂、增溶剂、乳化剂、防腐剂和/或佐剂。在一些实施方案中，组合物包含赋形剂。在一个实施方案中，组合物包含编码包含本文所述的截短铰链结构域(“THD”)的CAR或TCR的多核苷酸。在另一个实施方案中，组合物包含含有由本发明的多核苷酸编码的TCD的CAR或TCR。在另一个实施方案中，组合物包含含有CAR或TCR(其包含本文所述的TCD)的T细胞。

在其他实施方案中，组合物经选择以用于肠胃外递送、用于吸入或用于通过消化道递送，例如口服。制备此类药学上可接受的组合物在本领域技术人员的能力内。在某些实施方案中，缓冲液用于将该组合物维持在生理pH或稍低的pH，通常在约5至约8的pH范围内。在某些实施方案中，当考虑肠胃外施用时，组合物为无热原、肠胃外可接受的水溶液形式，其包含在药学上可接受的媒介物中的具有或不具有另外的治疗剂的本文所述的组合物。在某些实施方案中，用于肠胃外注射的媒介物为无菌蒸馏水，其中将本文所述的组合物(具有或不具有至少一种另外的治疗剂)配制成经适当保存的无菌的等张溶液。在某些实施方案中，制备牵涉具有提供产品受控或持续释放的聚合化合物(例如聚乳酸或聚乙醇酸)、珠或脂质体的所需分子的制剂，然后该制剂经由贮存注射(depot injection)来递送。在某些实施方案中，使用可植入的药物递送装置来导入所需分子。

III.本发明的方法

本发明的另一方面涉及制造表达CAR或TCR的细胞的方法，其包含在适合的条件下用本文所公开的多核苷酸转导细胞。在一些实施方案中，如本文所公开的，方法包含用编码CAR或TCR的多核苷酸转导细胞。在一些实施方案中，方法包含用包含编码CAR或TCR的多核苷酸的载体转导细胞。

本发明的另一方面涉及诱导针对肿瘤的免疫的方法，其包含对受试者施用有效量的细胞，该细胞包含本文所述的多核苷酸、本文所述的载体或本文所述的CAR或TCR。在一个实施方案中，方法包含对受试者施用有效量的细胞，该细胞包含编码本文所公开的CAR或TCR的多核苷酸。在另一个实施方案中，方法包含对受试者施用有效量的包含载体的细胞，该载体包含编码本文所公开的CAR或TCR的多核苷酸。在另一个实施方案中，方法包含对受试者施用有效量的细胞，该细胞包含由本文所公开的多核苷酸编码的CAR或TCR。

本发明的另一方面涉及诱导受试者中免疫应答的方法，其包含施用有效量的本申请的经工程化改造的免疫细胞。在一些实施方案中，免疫应答为T细胞介导的免疫应答。在一些实施方案中，T细胞介导的免疫应答针对一种或多种靶细胞。在一些实施方案中，经工程化改造的免疫细胞包含CAR或TCR，其中CAR或TCR包含本公开中所述的THD。在一些实施方案中，靶细胞为肿瘤细胞。

本发明的另一方面涉及用于治疗或预防恶性肿瘤的方法，所述方法包含对有此需要的受试者施用有效量的至少一种免疫细胞，其中免疫细胞包含至少一种CAR或TCR，并且其中该CAR或TCR包含本文所述的THD。

本发明的另一方面涉及治疗有此需要的受试者中癌症的方法，其包含对受试者施用本文所公开的多核苷酸、载体、CAR或TCR、细胞或组合物。在一个实施方案中，方法包含施用编码CAR或TCR的多核苷酸。在另一个实施方案中，方法包含施用包含编码CAR或TCR的多核苷酸的载体。在另一个实施方案中，方法包含施用由本文所公开的多核苷酸编码的CAR或TCR。在另一个实施方案中，方法包含施用包含编码CAR或TCR的多核苷酸或包含编码CAR或TCR的多核苷酸的载体的细胞。

在一些实施方案中，治疗有此需要的受试者中癌症的方法包含T细胞疗法。在一个实施方案中，本发明的T细胞疗法为工程化自体细胞疗法(eACT^TM)。根据该实施方案，方法可以包括从患者收集血细胞。然后，分离的血细胞(例如T细胞)可以经工程化改造以表达本发明的CAR或TCR。在一个具体的实施方案中，将CART细胞或TCRT细胞施用于患者。在一些实施方案中，CART细胞或TCRT细胞治疗患者中的肿瘤或癌症。在一个实施方案中，CART细胞或TCRT细胞缩小肿瘤或癌症的尺寸。

在一些实施方案中，从患者获得用于T细胞疗法中的供体T细胞(例如用于自体T细胞疗法)。在其他实施方案中，从非患者的受试者获得用于T细胞疗法中的供体T细胞。

T细胞可以以治疗有效量施用。例如，T细胞的治疗有效量可以为至少约10⁴个细胞、至少约10⁵个细胞、至少约10⁶个细胞、至少约10⁷个细胞、至少约10⁸个细胞、至少约10⁹个细胞或至少约10¹⁰个细胞。在另一个实施方案中，T细胞的治疗有效量为约10⁴个细胞、约10⁵个细胞、约10⁶个细胞、约10⁷个细胞或约10⁸个细胞。在一个具体的实施方案中，CART细胞或TCRT细胞的治疗有效量为约2X 10⁶个细胞/kg、约3X 10⁶个细胞/kg、约4X 10⁶个细胞/kg、约5X 10⁶个细胞/kg、约6X 10⁶个细胞/kg、约7X 10⁶个细胞/kg、约8X 10⁶个细胞/kg、约9X 10⁶个细胞/kg、约1X 10⁷个细胞/kg、约2X 10⁷个细胞/kg、约3X 10⁷个细胞/kg、约4X 10⁷个细胞/kg、约5X 10⁷个细胞/kg、约6X 10⁷个细胞/kg、约7X 10⁷个细胞/kg、约8X 10⁷个细胞/kg、或约9X 10⁷个细胞/kg。

IV.癌症治疗

本发明的方法可以用于治疗受试者中的癌症、缩小肿瘤尺寸、杀死肿瘤细胞、防止肿瘤细胞增殖、防止肿瘤生长、从患者消除肿瘤、防止肿瘤复发、防止肿瘤转移、诱导患者缓解或它们的任何组合。在某些实施方案中，方法诱导完整响应。在其他实施方案中，方法引起部分响应。

可以治疗的癌症包括未血管化、基本上尚未血管化或血管化的肿瘤。癌症也可以包括实体瘤或非实体瘤。在一些实施方案中，癌症为血液学癌症。在一些实施方案中，癌症为白细胞的癌症。在其他实施方案中，癌症为浆细胞的癌症。在一些实施方案中，癌症为白血病、淋巴瘤或骨髓瘤。在某些实施方案中，癌症为急性淋巴母细胞白血病(ALL)(包括非T细胞ALL)、急性淋巴细胞白血病(ALL)和噬血细胞性淋巴组织细胞增生症(HLH)、B细胞幼淋巴细胞白血病、B细胞急性淋巴细胞白血病(“BALL”)、母细胞性浆细胞样树突状细胞肿瘤、伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性髓细胞性白血病(CML)、慢性髓样白血病(CML)、慢性或急性肉芽肿病、慢性或急性白血病、弥漫性大B细胞淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡性淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤(FL)、毛细胞白血病、噬血细胞综合征(巨噬细胞活化综合征(MAS)、霍奇金病、大细胞肉芽肿、白细胞黏附缺陷、恶性淋巴细胞增生性疾病、MALT淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、意义不明的单克隆丙种球蛋白病(MGUS)、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常和骨髓增生异常综合征(MDS)、髓样疾病包括但不限于急性髓样白血病(AML)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、浆细胞增生性疾病(例如无症状性骨髓瘤(冒烟型多发性骨髓瘤或惰性骨髓瘤)、浆母细胞性淋巴瘤、浆细胞样树突状细胞肿瘤、浆细胞瘤(例如浆细胞恶液质；单发性骨髓瘤；单发性浆细胞瘤；髓外浆细胞瘤；和多发性浆细胞瘤)、POEMS综合征(克罗-深濑综合征；Takatsuki病；PEP综合征)、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBC)、小细胞或大细胞滤泡性淋巴瘤、脾边缘区淋巴瘤(SMZL)、系统性淀粉样蛋白轻链淀粉样变、T细胞急性淋巴细胞白血病(“TALL”)、T细胞淋巴瘤、转化滤泡性淋巴瘤或瓦氏巨球蛋白血症，或它们的组合。

在一个实施方案中，癌症为骨髓瘤。在一个具体的实施方案中，癌症为多发性骨髓瘤。在另一个实施方案中，癌症为白血病。在一个实施方案中，癌症为急性髓样白血病。

在一些实施方案中，方法进一步包含施用化疗剂。在某些实施方案中，选择的化疗剂是淋巴消减(预调理)化疗剂。有益的预调理治疗方案以及相关的有益生物标志物描述于美国临时专利申请62/262,143和62/167,750，其通过引用整体并入本文。这些描述了例如调理需要T细胞疗法的患者的方法，包含对患者施用规定的有益剂量的环磷酰胺(200mg/m²/天-2000mg/m²/天)和规定剂量的氟达拉滨(20mg/m²/天-900mg/m²/天)。一种此类剂量方案牵涉治疗患者，包含每天对患者施用约500mg/m²/天的环磷酰胺和约60mg/m²/天的氟达拉滨，持续3天，然后对患者施用治疗有效量的工程化T细胞。

在其他实施方案中，抗原结合分子，转导的(或以其他方式工程化的)细胞(例如CAR或TCR)和化疗剂各自以有效治疗受试者的疾病或状况的量施用。

在某些实施方案中，包含本文所公开的表达CAR和/或TCR的免疫效应细胞的组合物可以与任何数目的化疗剂联合施用。化疗剂的实例包括烷化剂类(alkylating agents)，诸如塞替派(thiotepa)和环磷酰胺(cyclophosphamide)(CYTOXAN^TM)；磺酸烷基酯类(alkylsulfonates)，诸如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)和哌泊舒凡(piposulfan)；氮丙啶类(aziridines)，诸如苯佐替派(benzodepa)、卡波醌(carboquone)、美妥替派(meturedepa)和乌瑞替派(uredepa)；乙撑亚胺类(ethylenimines)和甲基蜜胺类(methylamelamines)，包括六甲蜜胺(altretamine)、三乙撑蜜胺(triethylenemelamine)、三乙撑磷酰胺(trietylenephosphoramide)、三乙撑硫代磷酰胺(triethylenethiophosphaoramide)和三羟甲蜜胺(trimethylolomelamine resume)；氮芥类(nitrogen mustards)，诸如苯丁酸氮芥(chlorambucil)、萘氮芥(chlornaphazine)、胆磷酰胺(cholophosphamide)、雌莫司汀(estramustine)、异环磷酰胺(ifosfamide)、双氯乙基甲胺(mechlorethamine)、盐酸氧氮芥(mechlorethamine oxide hydrochloride)、美法仑(melphalan)、新氮芥(novembichin)、苯芥胆甾醇(phenesterine)、泼尼莫司汀(prednimustine)、曲磷胺(trofosfamide)、尿嘧啶氮芥(uracil mustard)；亚硝脲类(nitrosoureas)，诸如卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)、雷莫司汀(ranimustine)；抗生素类，诸如阿克拉霉素(aclacinomycin)、放线菌素(actinomycin)、氨茴霉素(anthramycin)、偶氮丝氨酸(azaserine)、博来霉素(bleomycin)、放线菌素C(cactinomycin)、加利车霉素(calicheamicin)、carabicin、洋红霉素(carminomycin)、嗜癌霉素(carzinophilin)、色霉素(chromomycin)、放线菌素D(dactinomycin)、柔红霉素(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6-二氮-5-氧-L-正亮氨酸、多柔比星(doxorubicin)、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、伊达比星(idarubicin)、麻西罗霉素(marcellomycin)、丝裂霉素类(mitomycins)、霉酚酸(mycophenolic acid)、诺拉霉素(nogalamycin)、橄榄霉素(olivomycin)、培洛霉素(peplomycin)、泊非霉素(potfiromycin)、嘌呤霉素(puromycin)、三铁阿霉素(quelamycin)、罗多比星(rodorubicin)、链黑菌素(streptonigrin)、链佐星(streptozocin)、杀结核菌素(tubercidin)、乌苯美司(ubenimex)、净司他丁(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)；抗代谢物类，诸如甲氨蝶呤、和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物，诸如二甲叶酸(denopterin)、甲氨蝶呤、蝶酰三谷氨酸(pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate)；嘌呤类似物，诸如氟达拉滨(fludarabine)、6-巯基嘌呤(mercaptopurine)、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫鸟嘌呤(thioguanine)；嘧啶类似物，诸如安西他滨(ancitabine)、阿扎胞苷(azacitidine)、6-氮尿苷、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、双脱氧尿苷(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、依诺他滨(enocitabine)、氟尿苷(floxuridine)、5-FU；雄激素类，诸如卡鲁睾酮(calusterone)、丙酸屈他雄酮(dromostanolone propionate)、表硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睾内酯(testolactone)；抗肾上腺类，诸如氨鲁米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)；叶酸补充剂，诸如亚叶酸(folinic acid)；醋葡醛内酯(aceglatone)；醛磷酰胺糖苷(aldophosphamideglycoside)；氨基乙酰丙酸(aminolevulinic acid)；安吖啶(amsacrine)；曲布赛(bestrabucil)；比生群(bisantrene)；依达曲沙(edatraxate)；地磷酰胺(defosfamide)；地美可辛(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；elfornithine；依利醋铵(elliptiniumacetate)；依托格鲁(etoglucid)；硝酸镓；羟脲(hydroxyurea)；香菇多糖(lentinan)；氯尼达明(lonidamine)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫哌达醇(mopidamol)；二胺硝吖啶(nitracrine)；鬼臼酸(podophyllinic acid)；蛋氨氮芥(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；2-乙基酰肼(ethylhydrazide)；丙卡巴肼(procarbazine)；雷佐生(razoxane)；西索菲兰(sizofiran)；螺旋锗(spirogermanium)；细交链孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亚胺醌(triaziquone)；2，2′，2″-三氯三乙胺；乌拉坦(urethan)；长春地辛(vindesine)；达卡巴嗪(dacarbazine)；甘露醇氮芥(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴卫矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；加西托辛(gacytosine)；阿糖胞苷(arabinoside)(“Ara-C”)；环磷酰胺；塞替派(thiotepa)；类紫杉醇(taxoids)，例如帕利他塞(paclitaxel)(TAXOL^TM，Bristol-Myers Squibb)和多西他塞(doxetaxel)(Rhone-Poulenc Rorer)；苯丁酸氮芥(chlorambucil)；吉西他滨；6-硫鸟嘌呤(thioguanine)；巯基嘌呤(mercaptopurine)；甲氨蝶呤(methotrexate)；铂类似物，诸如顺铂(cisplatin)和卡铂(carboplatin)；长春碱(vinblastine)；铂；依托泊苷(etoposide)(VP-16)；异环磷酰胺(ifosfamide)；丝裂霉素C；米托蒽醌(mitoxantrone)；长春新碱；长春瑞滨；诺维本(navelbine)；能灭瘤(novantrone)；替尼泊苷(teniposide)；道诺霉素(daunomycin)；氨基蝶呤(aminopterin)；xeloda；伊本膦酸盐(ibandronate)；CPT-11；拓扑异构酶抑制剂RFS2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；维A酸(retinoic acid)衍生物，如Targretin^TM(贝沙罗汀(bexarotene))、Panretin^TM、(阿利维A酸(alitretinoin))；ONTAK^TM(denileukindiftitox)；埃斯培拉霉素(esperamicin)；卡培他滨(capecitabine)；和上述任何物质的药学上可接受的盐、酸或衍生物。在一些实施方案中，可以与抗激素剂联合施用包含CAR和/或TCR表达性免疫效应细胞的组合物，所述抗激素剂作用为调节或抑制激素对肿瘤的作用，诸如抗雌激素，包括例如他莫昔芬(tamoxifen)、雷洛昔芬(raloxifene)、芳香酶抑制性4(5)-咪唑、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬(trioxifene)、奇沃昔芬(keoxifene)、LY117018、奥那司酮(onapristone)和托瑞米芬(toremifene)(Fareston)；和抗雄激素诸如氟他胺(flutamide)、尼鲁米特(nilutamide)、比卡鲁胺(bicalutamide)、亮丙瑞林(leuprolide)、和戈舍瑞林(goserelin)；和上述任何物质的药学上可接受的盐、酸或衍生物。在适当的情况下也施用化疗剂的组合，包括但不限于CHOP，即环磷酰胺多柔比星(羟基多柔比星)、长春新碱和泼尼松。

在一些实施方案中，在施用工程化细胞或核酸同时或之后一周内施用化疗剂。在其他实施方案中，在施用工程化细胞或核酸后1至4周或1周至1个月，1周至2个月，1周至3个月，1周至6个月，1周至9个月或1周至12个月施用化疗剂。在一些实施方案中，在施用细胞或核酸之前至少1个月施用化疗剂。在一些实施方案中，该方法还包含施用两种或更多种化疗剂。

多种另外的治疗剂可以与本文所述的组合物联合使用。例如，潜在有用的另外的治疗剂包括PD-1抑制剂，例如纳武单抗(nivolumab)派姆单抗(pembrolizumab)派姆单抗、阿巴伏单抗(pidilizumab)(CureTech)和阿特珠单抗(Atezolizumab)(Roche)。

适合于与本发明组合使用的另外的治疗剂包括但不限于伊布替尼(ibrutinib)奥法木单抗(ofatumumab)利妥昔单抗(rituximab)贝伐单抗(bevacizumab)曲妥珠单抗(trastuzumab)trastuzumab emtansine伊马替尼(imatinib)西妥昔单抗(cetuximab)帕尼单抗(panitumumab)卡妥索单抗(Catumaxomab)、替伊莫单抗(ibritumomab)、奥法木单抗、托西莫单抗(tositumomab)、本妥昔单抗(brentuximab)、阿仑单抗(alemtuzumab)、吉妥珠单抗(gemtuzumab)、厄洛替尼(erlotinib)、吉非替尼(gefitinib)、凡德他尼(vandetanib)、阿法替尼afatinib)、拉帕替尼(lapatinib)、来那替尼(neratinib)、阿昔替尼(axitinib)、马赛替尼(masitinib)、帕唑帕尼(pazopanib)、舒尼替尼(sunitinib)、索拉非尼(sorafenib)、toceranib、来他替尼(lestaurtinib)、阿昔替尼(axitinib)、西地尼布(cediranib)、乐伐替尼(lenvatinib)、尼达尼布(nintedanib)、帕唑帕尼(pazopanib)、瑞格非尼(regorafenib)、司马沙尼(semaxanib)、索拉非尼(sorafenib)、舒尼替尼(sunitinib)、替瓦沙尼(tivozanib)、托西雷尼(toceranib)、凡德他尼、恩曲替尼(entrectinib)、卡博替尼(cabozantinib)、伊马替尼(imatinib)、达沙替尼(dasatinib)、尼洛替尼(nilotinib)、帕纳替尼(ponatinib)、雷多替尼(radotinib)、博舒替尼(bosutinib)、来他替尼(lestaurtinib)、鲁索替尼(ruxolitinib)、帕利替尼(pacritinib)、考比替尼(cobimetinib)、司美替尼(selumetinib)、曲美替尼(trametinib)、必尼美替尼(binimetinib)、阿雷替尼(alectinib)、色瑞替尼(ceritinib)、克唑替尼(crizotinib)、阿柏西普(aflibercept)、阿迪波太(adipotide)、地尼白介素(denileukindiftitox)、mTOR抑制剂诸如依维莫司(Everolimus)和西罗莫司(Temsirolimus)、hedgehog抑制剂诸如索尼得吉(sonidegib)和维莫得告(vismodegib)、CDK抑制剂诸如CDK抑制剂(帕博西尼(palbociclib))。

在另外的实施方案中，与消炎剂一起施用包含含有CAR和/或TCR的免疫细胞的组合物。消炎剂或药物可以包括但不限于类固醇和糖皮质激素(包括倍他米松(betamethasone)、布地奈德(budesonide)、地塞米松(dexamethasone)、乙酸氢化可的松、氢化可的松、氢化可的松、甲泼尼龙(methylprednisolone)、泼尼松龙(prednisolone)、泼尼松(prednisone)、曲安西龙(triamcinolone))、非类固醇类消炎药(NSAIDS)，包括阿司匹林(aspirin)、布洛芬(ibuprofen)、萘普生(naproxen)、甲氨蝶呤、柳氮磺胺吡啶、来氟米特(leflunomide)、抗TNF药物、环磷酰胺和麦考酚酯(mycophenolate)。例示性的NSAID包括布洛芬、萘普生、萘普生钠、Cox-2抑制剂和唾液酸化物(sialylate)。例示性镇痛剂包括扑热息痛(acetaminophen)、羟考酮(oxycodone)、曲马多或盐酸丙氧芬(tramadol ofproporxyphene hydrochloride)。例示性糖皮质激素包括可的松、地塞米松、氢化可的松、甲泼尼龙、泼尼松龙或泼尼松。例示性生物反应调节剂包括针对细胞表面标志物(例如CD4，CD5等)的分子、细胞因子抑制剂如TNF拮抗剂，(例如依那西普(etanercept)阿达木单抗(adalimumab)和英夫利昔单抗(infliximab)生物反应调节剂包括单克隆抗体以及重组形式的分子。例示性的DMARD包括硫唑嘌呤(azathioprine)、环磷酰胺、环孢菌素、甲氨蝶呤、青霉胺、来氟米特、柳氮磺胺吡啶、羟氯喹、Gold(口服(金诺芬(auranofin))和肌内)和米诺环素(minocycline)。

在某些实施方案中，与细胞因子联合施用本文所述的组合物。如本文所用，“细胞因子”意指由一种细胞群释放的、作为细胞间介质对另一种细胞起作用的蛋白质。细胞因子的实例是淋巴因子、单核因子和传统的多肽激素。细胞因子中包括生长激素，如人生长激素，N-甲硫氨酰人生长激素和牛生长激素；甲状旁腺激素；甲状腺素；胰岛素；胰岛素原；松弛素；松弛素原；糖蛋白激素，如促卵泡激素(FSH)、促甲状腺激素(TSH)和黄体生成素(LH)；肝生长因子(HGF)；成纤维细胞生长因子(FGF)；催乳素；胎盘催乳激素；缪勒管抑制物质(mullerian-inhibiting substance)；小鼠促性腺激素相关肽；抑制素；激活素；血管内皮生长因子；整合素；血小板生成素(TPO)；神经生长因子(NGF)如NGF-beta；血小板生长因子；转化生长因子(TGF)如TGF-alpha和TGF-beta；胰岛素样生长因子-I和-II；促红细胞生成素(EPO)；骨诱导因子；干扰素如干扰素-alpha，beta和-gamma；集落刺激因子(CSF)，如巨噬细胞-CSF(M-CSF)；粒细胞-巨噬细胞-CSF(GM-CSF)；和粒细胞-CSF(G-CSF)；白细胞介素(IL)，如IL-1、IL-1α、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12；IL-15，肿瘤坏死因子如TNF-alpha或TNF-beta；和其他多肽因子，包括LIF和kit配体(KL)。如本文所用，术语细胞因子包括来自天然来源或来自重组细胞培养物的蛋白质，以及天然序列细胞因子的生物活性等同物。

本说明书中所提及的所有出版物、专利及专利申请以引用方式并入本文，其程度如同个别出版物、专利或专利申请各自被具体且单独地指明以引用方式并入本发明中。然而，本文的参考文献的引用不应被解释为承认该参考文献为本发明的现有技术。任何以引用方式被并入的参考文献中所提供的任何定义或术语与本文所提供的术语和讨论不同时，以本发明的术语和定义为准。

实施例

实施例1

通过用EcoRI和BamHI(NEB)过夜消化10μg DNA，使编码T7启动子、CAR构建体和beta珠蛋白稳定序列的质粒线性化。然后将DNA用蛋白酶K(Thermo Fisher，600U/ml)于50℃消化2小时，用苯酚/氯仿纯化，并通过添加乙酸钠和两倍体积的乙醇沉淀。然后将沉淀干燥，重悬于不含RNA酶/DNA酶的水中并使用NanoDrop定量。然后按照制造商的说明使用mMESSAGE mMACHINE T7Ultra(Thermo Fisher)将1μg的线性DNA用于体外转录。进一步按照制造商的说明使用MEGAClear Kit(Thermo Fisher)纯化RNA并使用NanoDrop定量。使用琼脂糖凝胶上的迁移率评估mRNA完整性。根据制造商的说明书，使用ficoll-paque密度离心从健康的供体leukopak(Hemacare)中分离PBMC。使用在R10培养基中的OKT3(50ng/ml，Miltenyi Biotec)+IL-2(300IU/ml， Therapeutics和Diagnostics)刺激PBMC。刺激后7天，将T细胞在Opti-MEM培养基(Thermo FisherScientific)中清洗两次，并在Opti-MEM培养基中以2.5x10⁷个细胞/ml的终浓度重悬。每次电穿孔使用10μg mRNA。使用Gemini X2系统(Harvard Apparatus BTX)实施细胞的电穿孔，在2mm比色皿(Harvard Apparatus BTX)中递送单个400V脉冲0.5ms。立即将细胞转移到R10+IL-2培养基中并使其恢复6小时。为了检测CAR表达，将T细胞用染色缓冲液(BDPharmingen)中的FLT-＝3-HIS(Sino Biological Inc.)或生物素化的蛋白质L(ThermoScientific)于4℃染色30分钟。然后清洗细胞并用染色缓冲液中的抗HIS-PE(MiltenyiBiotec)或PE链霉抗生物素蛋白(BD Pharmingen)于4℃染色30分钟。然后清洗细胞并在数据采集之前将其重悬于含有碘化丙啶(BD Pharmingen)的染色缓冲液中。在经电穿孔的T细胞中FLT3CAR的表达显示于图3中。

用编码抗FLT3 CAR的质粒电穿孔T细胞，所述FLT3 CAR包含10E3、2E7、8B5、4E9或11F11抗FLT3结合分子以及选自全长铰链结构域(完整铰链结构域或“CHD”)或截短铰链结构域(“THD”)的铰链结构域。然后将经电穿孔的抗FLT3CAR T细胞与Namalwa(FLT3阴性)、EoL1(FLT3阳性)、HL60(FLT3阳性)或MV4；11(FLT3阳性)靶细胞以1∶1 E∶T比率在R10培养基中共培养。共培养后16小时，通过Lumihex(EMD Millipore)分析来自Namalwa(图4A-4F)、EoL1(图4G-4L)、HL60(图4M-4R)和MV4；11(图4S-4X)的上清液的IFNγ(图4A、4B、4G、4H、4M、4N、4S和4T)、IL-2(图4C、4D、4I、4J、4O、4P、4U和4V)和TNFα(图4E、4F、4K、4L、4Q、4R、4W和4X)的产量。

通过CD3阴性细胞的碘化丙啶(PI)摄取的流式细胞术分析来评估靶细胞生存力。共培养后16小时，将经电穿孔的抗FLT3CART细胞与Namalwa(图5A-5B)、EoL1(图5C-5D)、HL60(图5E-5F)和MV4；11(图5G-5H)靶细胞共培养。

实施例2

将含有不同的CAR构建体的第三代慢病毒转移载体连同ViraPower慢病毒包装混合物(Life Technologies)一起使用以生成该慢病毒上清液。简言之，通过将15μg的DNA和22.5μl的聚乙烯亚胺(polyethileneimine)(Polysciences，1mg/ml)在600μl的OptiMEM培养基中混合以生成转染混合物。将混合物于室温温育5分钟。同时，以胰蛋白酶处理293T细胞(ATCC)，计数，并将总计10x10⁶个细胞与转染混合物一起铺在T75烧瓶中。转染三天后，收集上清液并通过0.45μm过滤器过滤，再储存于-80℃直至使用。根据制造商的说明，使用ficoll-paque密度离心从健康的供体leukopak(Hemacare)分离PBMC。使用在R10培养基中的OKT3(50ng/ml，Miltenyi Biotec)+IL-2(300IU/ml， Therapeutics and Diagnostics)刺激PBMC。刺激后48小时，使用慢病毒以MOI＝10转导细胞。在用于活性测定中之前将细胞维持在0.5-2.0x 10⁶个细胞/ml。为了检测CAR表达，将T细胞用染色缓冲液(BD Pharmingen)中的FLT-3-HIS(Sino BiologicalInc.)或生物素化的蛋白质L(Thermo Scientific)于4℃染色30分钟。然后清洗细胞并用染色缓冲液中的抗HIS-PE(Miltenyi Biotec)或PE链霉抗生物素蛋白(BD Pharmingen)于4℃染色30分钟。然后清洗细胞并在数据采集之前将其重悬于含有碘化丙啶(BD Pharmingen)的染色缓冲液中。在来自两个健康供体的T细胞中FLT3CAR的表达显示于图6A-6B中。

用编码抗FLT3CART细胞的慢病毒转导来自两个健康供体的T细胞，所述FLT3CAR包含10E3、8B5或11F11结合分子以及选自完整铰链结构域(“CHD”)、截短铰链结构域(“THD”)和CD8铰链结构域的铰链结构域。将经转导的T细胞与靶细胞以1∶1 E∶T比率在R10培养基中共培养。共培养后16小时，通过Luminex(EMD Millipore)分析上清液的IFNγ(图7A-7B)、TNFα(图7C-7D)和IL-2(图7E-7F)的产生。

通过CD3阴性细胞的碘化丙啶(PI)摄取的流式细胞术分析来评估靶细胞生存力。测量与Namalwa(图8A)、EoL1(图8B)、MV4；11(图8C)和HL60(图8D)靶细胞共培养的经慢病毒转导的CART细胞(来自两个健康供体)的平均细胞溶解活性。

为了评估响应表达FLT3的靶细胞的CART细胞增殖，在与靶细胞以1∶1 E∶T比率在R10培养基中共培养前用CFSE标记T细胞。五天后，通过CFSE稀释的流式细胞术分析来评估T细胞增殖。FLT3 CAR T细胞的增殖显示于图9A-9B中。

实施例3

为了检测体内抗白血病活性，生成FLT3 CART细胞以用于人AML的异种模型。用于人AML的异种模型的各种效应系的CAR表达显示于图10A-10D中。将荧光素酶标记的MV4；11细胞(2x 10⁶个细胞/动物)静脉内注射到5至6周龄的雌性NSG小鼠中。6天后，静脉内注射200μl PBS中的6x 10⁶个T细胞(～50％CAR+)，使用生物发光成像每周测量动物的肿瘤负荷(图10E-10G)。通过注射对照(模拟品)或表达10E3-CHD(图10H)、10E3-THD(图10I)或8B5-THD(图10J)的CART细胞实施存活分析。

实施例4

用编码抗CLL-1 CAR构建体24C8_HL-CHD CAR(包含共刺激蛋白质的完整铰链结构域)和24C8_HL-THD CAR(包含共刺激蛋白质的截短铰链结构域)的质粒电穿孔T细胞。经电穿孔的T细胞的抗CLL-1表达显示于图11A-11D。然后在mRNA电穿孔6小时后将抗CLL-1 CART细胞与靶Namalwa(ATCC；CLL-1阴性)、U937(ATCC；CLL-1阳性)、HL-60(ATCC；CLL-1阳性)、EoL-1(Sigma；CLL-1阳性)、KG1a(ATCC；CLL-1阳性)和MV4；11(ATCC；CLL-1阳性)细胞以1∶1E∶T比率在R10培养基中培养。共培养后16小时，根据制造商的说明，通过Luminex(EMDMillipore)分析上清液的IL-2(图12A)、IFNγ(图12B)和TNFα(图12C)的产量。

通过碘化丙啶(PI)摄取的流式细胞术分析来评估靶细胞生存力。将经电穿孔的抗CLL-1 CAR T细胞与Namalwa(图13A)、MV4；11(图13B)、EoL-1(图13C)、HL-60(图13D)或U937(图13E)靶细胞共培养16小时。正如所料，相对于对照，与抗CLL-1 CART细胞共培养的Namalwa细胞显示靶细胞生存力几乎没有变化(图13A)。然而，相对于对照，在与24C8_HL-CHD和24C8_HL-THDT细胞共培养的MV；411细胞中观察到增加的细胞溶解活性，其中在24C8_HL-THDT细胞共培养中观察到更大的靶细胞细胞溶解活性(图13B)。此外，相对于对照，在与24C8_HL-CHD和24C8_HL-THDT细胞共培养的EoL-1细胞中观察到增加的细胞溶解活性(图13C)。相对于对照，在与24C8_HL-CHD和24C8_HL-THDT细胞共培养的HL-60细胞中观察到增加的细胞溶解活性(图13D)。相对于对照，在与24C8_HL-CHD和24C8_HL-THD T细胞共培养的U937细胞中观察到增加的细胞溶解活性，其中在24C8_HL-THDT细胞共培养中观察到更大的靶细胞细胞溶解活性(图13E)。

实施例5

在T细胞刺激12天后，将用包含抗CLL-1 CAR构建体(具有共刺激蛋白质的截短铰链结构域(“THD”)，10E3_THD或24C1_LH_THD)的慢病毒载体转导的T细胞与Namalwa、U937、HL-60、EoL-1、KG1a和MV4；11靶细胞以1∶1 E∶T比率在R10培养基中共培养。共培养后16小时，根据制造商的说明，如图所示，通过Luminex(EMD Millipore)分析上清液的效应10E3_THD CAR T细胞和24C1_LH_THD CART细胞与靶Namalwa、HL-60或MVA；11细胞的共培养物中细胞因子IFNγ(图14A)、IL-2(图14B)和TNFα(图14C)的产生。

通过碘化丙啶(PI)摄取的流式细胞术分析来评估靶细胞生存力。将经转导的效应24C1_LH_THD CART细胞与Namalwa、U937、HL-60、EoL-1、KG1a或MV4；11靶细胞共培养16小时或40小时。与模拟品对照相比，Namalwa靶细胞与经转导的C1_24C1_LH_THD CART细胞的共培养物在16小时和40小时对活的Namalwa靶细胞的百分比没有影响(图15A)。然而，与模拟品对照相比，与MV4；11(图15B)或HL-60(图15C)靶细胞共培养的C1_24C1_LH_THD CART细胞在16小时和40小时两者都导致较低百分比的活的靶细胞。

实施例6

在T细胞刺激12天后，将用包含共刺激蛋白质的截短铰链结构域(“THD”)的抗BCMACAR构建体转导的CART细胞与靶细胞以1∶1效应细胞比靶细胞(E∶T)的比率在R10培养基中培养。经测试的细胞系包括EoL-1(Sigma；BCMA阴性)、NCI-H929(Molecular Imaging；BCMA阳性)和MM1S(Molecular Imaging；BCMA阳性)。共培养后16小时，根据制造商的说明，通过Luminex(EMD Millipore)分析上清液的细胞因子IFNγ(图16A-16B)、TNFα(图16C-16D)和IL-2(图16E-16F)的产生。对于在两个供体(图16A-16B)中测试的每种抗BCMA CART细胞，在NCI-H929和MM1S靶细胞共培养物的上清液中观察到IFNγ(图16A-16B)、TNFα(图16C-16D)和IL-2(图16E-16F)；然而，对于IR阴性对照T细胞(图16A)，仅在EoL-1靶细胞共培养物的上清液中观察到高于背景的IFNγ(图16A-16B)、TNFα(图16C-16D)和IL-2(图16E-16F)。

通过CD3阴性细胞的碘化丙啶(PI)摄取的流式细胞术分析来评估靶细胞生存力。将抗BCMA CART细胞与EoL1(图17A-17B)、NCI-H929(图17C-17D)或MM1S(图17E-17F)靶细胞共培养16小时、40小时、64小时、88小时或112小时。在抗BCMA CART细胞的任何时间段，在EoL-1共培养物中观察到很少的细胞溶解活性(图17A-17B)。然而，抗BCMA CART细胞与NCI-H929或MM1S靶细胞的共培养导致对于每种抗BCMA CART细胞测量的每个时间点的活的靶细胞的百分比降低。

为了检测增殖，在与EoL-1、NCI-H929或MM1S靶细胞以1∶1 E∶T比率在R10培养基中共培养之前，用羧基荧光素琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记抗BCMA CART细胞。五天后，通过CFSE稀释的流式细胞术分析来评估T细胞增殖(图18A-18B)。

实施例7

增强的稳定性是蛋白质的期望性质。这通常通过在各种条件下测定蛋白质的解链温度来评估。具有较高解链温度的蛋白质通常稳定较长时间。当CAR具有更高的热稳定性时，其可以在细胞的表面上较长时间地具有功能活性。

使用Bio-Rad C1000热循环仪，CFx96实时系统测量具有较长铰链结构域，即完整铰链结构域(“CHD”)的CAR细胞外结构域(ECD)的热稳定性和具有截短铰链结构域(“THD”)的CAR ECD的热稳定性。使用荧光染料SYPRO Orange(Invitrogen)监测蛋白质的解折叠，该荧光染料与疏水氨基酸结合，随着蛋白质解折叠，疏水氨基酸变为溶剂暴露。设定温度梯度为25℃至95℃，增量为1℃/1分钟。每个样品含有10μM重组CAR ECD蛋白质和5X SYPROOrange(Molecular Probes^TM SYPRO^TM Orange蛋白质凝胶染色(DMSO中5,000X浓缩液))。在含有或不含有50mM NaCl的PBS中实施测定。

如图19A和图19B中所示，具有THD的CAR的ECD与具有CHD(例如包括IEVMYPPPY(SEQID NO：250)基序)的CAR的ECD相比，显示增强的热稳定性。在该实施例中描述的这些方法是用于测试编码CAR的mRNA和CAR本身的稳定性的有用方法，因为一旦用编码CAR的mRNA转导T细胞，经转导的T细胞将表达CAR而单个mRNA或蛋白质的稳定性将不易评估。

序列表

<110> 凯德药业股份有限公司

<120> 嵌合抗原和T细胞受体及使用的方法

<130> K-1031.02

<150> US 62/317,258

<151> 2016-04-01

<160> 251

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 220

<212> PRT

<213> 人

<400> 1

Met Leu Arg Leu Leu Leu Ala Leu Asn Leu Phe Pro Ser Ile Gln Val

1 5 10 15

Thr Gly Asn Lys Ile Leu Val Lys Gln Ser Pro Met Leu Val Ala Tyr

20 25 30

Asp Asn Ala Val Asn Leu Ser Cys Lys Tyr Ser Tyr Asn Leu Phe Ser

35 40 45

Arg Glu Phe Arg Ala Ser Leu His Lys Gly Leu Asp Ser Ala Val Glu

50 55 60

Val Cys Val Val Tyr Gly Asn Tyr Ser Gln Gln Leu Gln Val Tyr Ser

65 70 75 80

Lys Thr Gly Phe Asn Cys Asp Gly Lys Leu Gly Asn Glu Ser Val Thr

85 90 95

Phe Tyr Leu Gln Asn Leu Tyr Val Asn Gln Thr Asp Ile Tyr Phe Cys

100 105 110

Lys Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser

115 120 125

Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro

130 135 140

Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly

145 150 155 160

Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile

165 170 175

Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met

180 185 190

Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro

195 200 205

Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser

210 215 220

<210> 2

<211> 90

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 铰链结构域

<400> 2

cttgataatg aaaagtcaaa cggaacaatc attcacgtga agggcaagca cctctgtccg 60

tcacccttgt tccctggtcc atccaagcca 90

<210> 3

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 铰链结构域

<400> 3

Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys

1 5 10 15

His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro

20 25 30

<210> 4

<211> 81

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> TM结构域

<400> 4

ttctgggtgt tggtcgtagt gggtggagtc ctcgcttgtt actctctgct cgtcaccgtg 60

gcttttataa tcttctgggt t 81

<210> 5

<211> 27

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> TM结构域

<400> 5

Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu

1 5 10 15

Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val

20 25

<210> 6

<211> 123

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 信号传导/共刺激结构域

<400> 6

agatccaaaa gaagccgcct gctccatagc gattacatga atatgactcc acgccgccct 60

ggccccacaa ggaaacacta ccagccttac gcaccaccta gagatttcgc tgcctatcgg 120

agc 123

<210> 7

<211> 41

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 信号传导/共刺激结构域

<400> 7

Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr

1 5 10 15

Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro

20 25 30

Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser

35 40

<210> 8

<211> 336

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CD3z活化结构域

<400> 8

agggtgaagt tttccagatc tgcagatgca ccagcgtatc agcagggcca gaaccaactg 60

tataacgagc tcaacctggg acgcagggaa gagtatgacg ttttggacaa gcgcagagga 120

cgggaccctg agatgggtgg caaaccaaga cgaaaaaacc cccaggaggg tctctataat 180

gagctgcaga aggataagat ggctgaagcc tattctgaaa taggcatgaa aggagagcgg 240

agaaggggaa aagggcacga cggtttgtac cagggactca gcactgctac gaaggatact 300

tatgacgctc tccacatgca agccctgcca cctagg 336

<210> 9

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD3z活化结构域

<400> 9

Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly

1 5 10 15

Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr

20 25 30

Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys

35 40 45

Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys

50 55 60

Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg

65 70 75 80

Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala

85 90 95

Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

100 105 110

<210> 10

<211> 63

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 信号（前导）肽

<400> 10

atggcactcc ccgtaactgc tctgctgctg ccgttggcat tgctcctgca cgccgcacgc 60

ccg 63

<210> 11

<211> 21

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 信号（前导）肽

<400> 11

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro

20

<210> 12

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 接头

<400> 12

Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 13

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH CDR1

<400> 13

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

1 5

<210> 14

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH CDR1

<400> 14

Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

1 5

<210> 15

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH CDR1

<400> 15

Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

1 5

<210> 16

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH CDR1

<400> 16

Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser Ser Tyr

1 5

<210> 17

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH CDR1

<400> 17

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

1 5

<210> 18

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH CDR1

<400> 18

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met His

1 5 10

<210> 19

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH CDR1

<400> 19

Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr

1 5

<210> 20

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH CDR1

<400> 20

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

1 5

<210> 21

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH CDR2

<400> 21

Ser Gly Ser Gly Gly Ser

1 5

<210> 22

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH CDR2

<400> 22

Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly

1 5 10 15

<210> 23

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH CDR2

<400> 23

Asn Pro Gly Gly Gly Ser

1 5

<210> 24

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH CDR2

<400> 24

Ser Tyr Ser Gly Ser

1 5

<210> 25

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH CDR2

<400> 25

Ser Ser Ser Ser Ser Thr

1 5

<210> 26

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH CDR2

<400> 26

Ser Tyr Asp Gly Ser Asn

1 5

<210> 27

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH CDR2

<400> 27

Ile Pro Ile Phe Gly Thr

1 5

<210> 28

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH CDR2

<400> 28

Ser Tyr Asp Gly Ser Asn

1 5

<210> 29

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH CDR3

<400> 29

Ala Glu Met Gly Ala Val Phe Asp Ile

1 5

<210> 30

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH CDR3

<400> 30

Asp Gly Thr Tyr Leu Gly Gly Leu Trp Tyr Phe Asp Leu

1 5 10

<210> 31

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH CDR3

<400> 31

Glu Ser Trp Pro Met Asp Val

1 5

<210> 32

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH CDR3

<400> 32

Gly Arg Gly Tyr Ala Thr Ser Leu Ala Phe Asp Ile

1 5 10

<210> 33

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH CDR3

<400> 33

Gly Ser Gln Glu His Leu Ile Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 34

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH CDR3

<400> 34

Thr Asp Phe Trp Ser Gly Ser Pro Pro Gly Leu Asp Tyr

1 5 10

<210> 35

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH CDR3

<400> 35

Thr Pro Glu Tyr Ser Ser Ser Ile Trp His Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp

1 5 10 15

Val

<210> 36

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH CDR3

<400> 36

Gly Pro Leu Gln Glu Pro Pro Tyr Asp Tyr Gly Met Asp Val

1 5 10

<210> 37

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL CDR1

<400> 37

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Arg Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 38

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL CDR1

<400> 38

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp

1 5 10 15

<210> 39

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL CDR1

<400> 39

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn Leu Ala

1 5 10

<210> 40

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL CDR1

<400> 40

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 41

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL CDR1

<400> 41

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Arg Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 42

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL CDR1

<400> 42

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala

1 5 10

<210> 43

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL CDR1

<400> 43

Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu

1 5 10 15

Ala

<210> 44

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL CDR1

<400> 44

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn Leu Ala

1 5 10

<210> 45

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL CDR2

<400> 45

Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr

1 5

<210> 46

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL CDR2

<400> 46

Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser

1 5

<210> 47

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL CDR2

<400> 47

Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr

1 5

<210> 48

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL CDR2

<400> 48

Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr

1 5

<210> 49

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL CDR2

<400> 49

Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr

1 5

<210> 50

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL CDR2

<400> 50

Gly Ala Ser Ser Leu Gln Ser

1 5

<210> 51

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL CDR2

<400> 51

Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser

1 5

<210> 52

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL CDR2

<400> 52

Ser Ala Ser Thr Arg Ala Thr

1 5

<210> 53

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL CDR3

<400> 53

Gln Gln Arg Ile Ser Trp Pro Phe Thr

1 5

<210> 54

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL CDR3

<400> 54

Met Gln Gly Leu Gly Leu Pro Leu Thr

1 5

<210> 55

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL CDR3

<400> 55

Gln Gln Tyr Ala Ala Tyr Pro Thr

1 5

<210> 56

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL CDR3

<400> 56

Gln Gln Arg His Val Trp Pro Pro Thr

1 5

<210> 57

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL CDR3

<400> 57

Gln Gln Arg Phe Tyr Tyr Pro Trp Thr

1 5

<210> 58

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL CDR3

<400> 58

Gln Gln Ile Tyr Thr Phe Pro Phe Thr

1 5

<210> 59

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL CDR3

<400> 59

Gln Gln Phe Ala His Thr Pro Phe Thr

1 5

<210> 60

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL CDR3

<400> 60

Gln Gln His His Val Trp Pro Leu Thr

1 5

<210> 61

<211> 354

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> VH DNA

<400> 61

gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120

ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtggtag cacatactac 180

gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240

ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggcggtgt actactgcgc aagagccgag 300

atgggagccg tattcgacat atggggtcag ggtacaatgg tcaccgtctc ctca 354

<210> 62

<211> 366

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> VH DNA

<400> 62

caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct 120

ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatcgtatg atggaagtaa taaatactat 180

gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240

ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggcggtgt actactgcgc cagagacggt 300

acttatctag gtggtctctg gtacttcgac ttatggggga gaggtacctt ggtcaccgtc 360

tcctca 366

<210> 63

<211> 348

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> VH DNA

<400> 63

caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60

tcctgcaagg catctggata caccttcacc agctactata tgcactgggt gcgacaggcc 120

cctggacaag ggcttgagtg gatgggaata atcaaccctg gtggtggtag cacaagctac 180

gcacagaagt tccagggcag agtcaccatg accagggaca cgtccacgag cacagtctac 240

atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggcggtgt actactgcgc cagagagagt 300

tggccaatgg acgtatgggg ccagggaaca actgtcaccg tctcctca 348

<210> 64

<211> 366

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> VH DNA

<400> 64

cagctgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60

acctgcactg tctctggtgg ctccatcagc agtagtagtt actactgggg ctggatccgc 120

cagcccccag ggaaggggct ggagtggatt gggagtatct cctatagtgg gagcacctac 180

tacaacccgt ccctcaagag tcgagtcacc atatccgtag acacgtccaa gaaccagttc 240

tccctgaagc tgagttctgt gaccgccgca gacacggcgg tgtactactg cgccagaggc 300

aggggatatg caaccagctt agccttcgat atctggggtc agggtacaat ggtcaccgtc 360

tcctca 366

<210> 65

<211> 357

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> VH DNA

<400> 65

gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatagca tgaactgggt ccgccaggct 120

ccagggaagg ggctggagtg ggtttcaacc attagtagta gtagtagtac catatactac 180

gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa ctcactgtat 240

ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac acggcggtgt actactgcgc cagaggttct 300

caggagcacc tgattttcga ttattgggga cagggtacat tggtcaccgt ctcctca 357

<210> 66

<211> 366

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> VH DNA

<400> 66

caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct 120

ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatcgtatg atggaagtaa taaatactat 180

gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240

ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggcggtgt actactgcgc cagaactgac 300

ttctggagcg gatcccctcc aggcttagat tactggggac agggtacatt ggtcaccgtc 360

tcctca 366

<210> 67

<211> 378

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> VH DNA

<400> 67

caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60

tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120

cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcccta tctttggtac agcaaactac 180

gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240

atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggcggtgt actactgcgc cagaactcct 300

gaatactcct ccagcatatg gcactattac tacggcatgg acgtatgggg ccagggaaca 360

actgtcaccg tctcctca 378

<210> 68

<211> 369

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> VH DNA

<400> 68

caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct 120

ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatcgtatg atggaagtaa taaatactat 180

gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240

ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggcggtgt actactgcgt caaggggccg 300

ttgcaggagc cgccatacga ttatggaatg gacgtatggg gccagggaac aactgtcacc 360

gtctcctca 369

<210> 69

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> VL DNA

<400> 69

gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60

ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc aggtacttag cctggtacca acagaaacct 120

ggccaggctc ccaggctcct catctatgat gcatccaaca gggccactgg catcccagcc 180

aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctagagcct 240

gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag agaatctcct ggcctttcac ttttggcgga 300

gggaccaagg ttgagatcaa a 321

<210> 70

<211> 336

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> VL DNA

<400> 70

gatattgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60

atctcctgca ggtctagtca gagcctcctg catagtaatg gatacaacta tttggattgg 120

tacctgcaga agccagggca gtctccacag ctcctgatct atttgggttc taatcgggcc 180

tccggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggca cagattttac actgaaaatc 240

agcagagtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgca tgcagggact cggcctccct 300

ctcacttttg gcggagggac caaggttgag atcaaa 336

<210> 71

<211> 318

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> VL DNA

<400> 71

gaaatagtga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga aagagccacc 60

ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcaacttag cctggtacca gcagaaacct 120

ggccaggctc ccaggctcct catctatggt gcatccacca gggccactgg tatcccagcc 180

aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagag ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 240

gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag tacgccgcct accctacttt tggcggaggg 300

accaaggttg agatcaaa 318

<210> 72

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> VL DNA

<400> 72

gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60

ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agctacttag cctggtacca acagaaacct 120

ggccaggctc ccaggctcct catctatgat gcatccaaca gggccactgg catcccagcc 180

aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctagagcct 240

gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag agacacgtct ggcctcctac ttttggcgga 300

gggaccaagg ttgagatcaa a 321

<210> 73

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> VL DNA

<400> 73

gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60

ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc aggtacttag cctggtacca acagaaacct 120

ggccaggctc ccaggctcct catctatgat gcatccaaca gggccactgg catcccagcc 180

aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctagagcct 240

gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag agattctact acccttggac ttttggcgga 300

gggaccaagg ttgagatcaa a 321

<210> 74

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> VL DNA

<400> 74

gacatccagt tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60

atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120

gggaaagccc ctaagctcct gatctatggt gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180

aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240

gaagattttg caacttatta ctgtcagcag atatacacct tccctttcac ttttggcgga 300

gggaccaagg ttgagatcaa a 321

<210> 75

<211> 339

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> VL DNA

<400> 75

gacatcgtga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60

atcaactgca agtccagcca gagtgtttta tacagctcca acaataagaa ctacttagct 120

tggtaccagc agaaaccagg acagcctcct aagctgctca tttactgggc atctacccgg 180

gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240

atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcagcagtt cgcccacact 300

cctttcactt ttggcggagg gaccaaggtt gagatcaaa 339

<210> 76

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> VL DNA

<400> 76

gaaatagtga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga aagagccacc 60

ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcaacttag cctggtacca gcagaaacct 120

ggccaggctc ccaggctcct catctatagc gcatccacca gggccactgg tatcccagcc 180

aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagag ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 240

gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag caccacgtct ggcctctcac ttttggcgga 300

gggaccaagg ttgagatcaa a 321

<210> 77

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH蛋白质

<400> 77

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ala Glu Met Gly Ala Val Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Met Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 78

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH蛋白质

<400> 78

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Gly Thr Tyr Leu Gly Gly Leu Trp Tyr Phe Asp Leu Trp

100 105 110

Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 79

<211> 116

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH蛋白质

<400> 79

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Gly Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Ser Trp Pro Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 80

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH蛋白质

<400> 80

Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser

20 25 30

Ser Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu

35 40 45

Trp Ile Gly Ser Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser

50 55 60

Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe

65 70 75 80

Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

85 90 95

Cys Ala Arg Gly Arg Gly Tyr Ala Thr Ser Leu Ala Phe Asp Ile Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 81

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH蛋白质

<400> 81

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Thr Ile Ser Ser Ser Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Ser Gln Glu His Leu Ile Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 82

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH蛋白质

<400> 82

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Thr Asp Phe Trp Ser Gly Ser Pro Pro Gly Leu Asp Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 83

<211> 126

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH蛋白质

<400> 83

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Thr Pro Glu Tyr Ser Ser Ser Ile Trp His Tyr Tyr Tyr Gly

100 105 110

Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 84

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH蛋白质

<400> 84

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Val Lys Gly Pro Leu Gln Glu Pro Pro Tyr Asp Tyr Gly Met Asp Val

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 85

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL蛋白质

<400> 85

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Arg Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ile Ser Trp Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 86

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL蛋白质

<400> 86

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser

20 25 30

Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Gly

85 90 95

Leu Gly Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 87

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL蛋白质

<400> 87

Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ala Ala Tyr Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 88

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL蛋白质

<400> 88

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg His Val Trp Pro Pro

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 89

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL蛋白质

<400> 89

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Arg Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Phe Tyr Tyr Pro Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 90

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL蛋白质

<400> 90

Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ile Tyr Thr Phe Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 91

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL蛋白质

<400> 91

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser

20 25 30

Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln

85 90 95

Phe Ala His Thr Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile

100 105 110

Lys

<210> 92

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL蛋白质

<400> 92

Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His His Val Trp Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 93

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH CDR1

<400> 93

Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr

1 5

<210> 94

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH CDR1

<400> 94

Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly Gly Phe

1 5

<210> 95

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH CDR1

<400> 95

Gly Tyr Thr Leu Thr Glu Leu

1 5

<210> 96

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH CDR1

<400> 96

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

1 5

<210> 97

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH CDR2

<400> 97

Tyr Tyr Ser Gly Ser

1 5

<210> 98

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH CDR2

<400> 98

His His Ser Gly Ser

1 5

<210> 99

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH CDR2

<400> 99

Asp Pro Glu Asp Gly Glu

1 5

<210> 100

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH CDR2

<400> 100

Ser Tyr Asp Gly Ser Asp

1 5

<210> 101

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH CDR3

<400> 101

Leu Val Tyr Cys Gly Gly Asp Cys Tyr Ser Gly Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 102

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH CDR3

<400> 102

Leu Val Tyr Cys Gly Gly Asp Cys Tyr Ser Gly Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 103

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH CDR3

<400> 103

Glu Ser Arg Gly Ile Gly Trp Pro Tyr Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 104

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH CDR3

<400> 104

Glu Arg Tyr Ser Gly Arg Asp Tyr

1 5

<210> 105

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL CDR1

<400> 105

Gln Ala Ser Gln Asp Ile Asn Asn Phe Leu Asn

1 5 10

<210> 106

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL CDR1

<400> 106

Gln Ala Ser Gln Asp Ile Asn Asn Phe Leu Asn

1 5 10

<210> 107

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL CDR1

<400> 107

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn

1 5 10

<210> 108

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL CDR1

<400> 108

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Leu Leu Thr

1 5 10

<210> 109

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL CDR2

<400> 109

Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr

1 5

<210> 110

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL CDR2

<400> 110

Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr

1 5

<210> 111

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL CDR2

<400> 111

Gly Ala Ser Ser Leu Lys Ser

1 5

<210> 112

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL CDR2

<400> 112

Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr

1 5

<210> 113

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL CDR3

<400> 113

Gln Gln Tyr Gly Asn Leu Pro Phe Thr

1 5

<210> 114

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL CDR3

<400> 114

Gln Gln Tyr Gly Asn Leu Pro Phe Thr

1 5

<210> 115

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL CDR3

<400> 115

Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Ile Thr

1 5

<210> 116

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL CDR3

<400> 116

Gln Gln Tyr Asp Thr Trp Pro Phe Thr

1 5

<210> 117

<211> 366

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> VH DNA

<400> 117

caggtgcagc tgcaggaatc cggaccgggg ctggtgaagc ccagcgagac tctgagtctc 60

acgtgtacag tttctggagg tagcattagc tcctactatt ggtcatggat aaggcagccc 120

cccgggaagg gattggaatg gatcggctat atttactaca gtgggagcac caattacaac 180

ccctcactga agtctagagt tacaatcagc gttgacacct caaagaatca gttcagtttg 240

aaattgtcta gcgtcacagc agctgataca gccgtctatt attgtgtttc tctggtctat 300

tgcggtgggg attgttacag tggctttgac tattgggggc agggtactct ggttacagtt 360

tcttcc 366

<210> 118

<211> 372

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> VH DNA

<400> 118

caggtacagc tgcaggaatc tgggcccgga cttgtcaagc caagtcagac actttctctt 60

acatgtaccg tgagcggcgg aagtataagc agtggaggct tttactggtc ttggatacgg 120

cagcacccag gcaaaggctt ggagtggatt ggatacattc atcattcagg atctacacac 180

tataatccat cccttaagtc ccgggtcacc attagcattg atacgtctaa gaatctgttc 240

agtctcaggc tgtcctccgt cactgctgcc gacacagccg tgtactactg cgcctccttg 300

gtttactgcg gaggcgactg ttatagcggc tttgattatt gggggcaggg gaccctcgta 360

accgtgagct ct 372

<210> 119

<211> 363

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> VH DNA

<400> 119

caggtccaac tggtgcagtc cggagccgaa gtcaagaaac caggtgcctc cgttaaagtg 60

agttgcaaag tctctggata cactctgacc gagctctcta tgcactgggt ccggcaggcc 120

cccggcaagg gattggaatg gatgggcggg ttcgatcctg aggacggaga gactatctac 180

gctcaaaaat tccagggacg agtgactgtg accgaagaca ctagtaccga cactgcctac 240

atggaacttt cctctctgcg atcagaagat accgcagtgt actactgtgc tactgaatct 300

aggggcattg gatggcccta cttcgattac tggggtcagg gaactctggt gactgtctcc 360

agc 363

<210> 120

<211> 351

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> VH DNA

<400> 120

caggtccagt tggtcgaaag tggcggtggt gtagtgcagc cgggccgcag tttgaggctt 60

tcctgtgcgg cttcaggctt tactttttcc agctatggaa tgcactgggt gcggcaggcc 120

cccggcaaag gacttgagtg ggtggccgtc atttcttatg acggatcaga taagtactac 180

gtggacagcg tcaagggcag attcaccatc tctagggaca acagtaaaaa tagactctac 240

ctccagatga atagcctcag agctgaagac acggccgtct actattgtgc tcgggagcgg 300

tatagtggca gagactactg ggggcagggc acactcgtta cagtgagtag c 351

<210> 121

<211> 324

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> VL DNA

<400> 121

gacatccagt tgacacagag cccgagttcc ttgtccgcct ccgtcgggga tagagtgtca 60

tttacctgtc aggcctctca ggatattaat aactttctga attggtatca gcaaaagccc 120

ggaaaggcac ccaagctgtt gatttacgac gccagtaacc tggagacagg cgtgccctcc 180

cggtttagtg gtagcggaag cggtacggat tttaccttta ctatcagctc tctccaaccc 240

gaagacattg caacctacta ttgtcaacaa tatggaaacc tgccttttac atttggcggc 300

ggcaccaagg tggagattaa gcgg 324

<210> 122

<211> 324

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> VL DNA

<400> 122

gatatccagc tcactcaaag cccctctagt ctctctgcct cagtggggga tcgggtcagt 60

tttacttgtc aagcttcaca ggatatcaac aacttcctta attggtatca gcagaagcca 120

ggaaaagcac ccaagctgct catctatgat gcctcaaatt tggagacggg tgttcccagt 180

cgattctctg ggtcagggtc cgggaccgac tttacgttta cgatctcctc tctgcagccc 240

gaagacatcg ccacatacta ttgtcaacag tacggcaact tgcctttcac atttgggggc 300

gggactaagg ttgaaatcaa gagg 324

<210> 123

<211> 324

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> VL DNA

<400> 123

gatattcaga tgactcaatc tccttcttct ctgtccgctt ccgtgggcga tagagtgacc 60

attacttgta gggcgtccca gtcaatctcc agttatttga attggtatca gcagaagccc 120

gggaaagcac ctaagctgtt gatcagcggg gcttctagcc tgaagagtgg ggtaccttca 180

cggttcagcg gaagcggaag cggaaccgat ttcaccctga ctatcagcag cctgccacct 240

gaggactttg caacttacta ctgccaacag tcatacagca ctccgatcac tttcggccag 300

ggcacccggc tcgaaatcaa gcgc 324

<210> 124

<211> 324

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> VL DNA

<400> 124

gagattgtta tgacccagag tcctgcgacc ctctcagtca gccccgggga gcgcgcaact 60

ttgtcttgca gagctagtca gtccgtgtcc tctcttctga catggtacca gcaaaagccc 120

gggcaggctc cgcgcctttt gatctttggg gcttcaacaa gagccactgg gattcccgca 180

cgattctctg gctccgggag cggtactggt ttcaccctga cgattagcag tctccagagc 240

gaggacttcg ccgtatacta ctgccagcag tacgatacgt ggccattcac ttttggacca 300

gggactaaag tggattttaa gcgc 324

<210> 125

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH AA

<400> 125

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val

85 90 95

Ser Leu Val Tyr Cys Gly Gly Asp Cys Tyr Ser Gly Phe Asp Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 126

<211> 124

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH AA

<400> 126

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly

20 25 30

Gly Phe Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu

35 40 45

Trp Ile Gly Tyr Ile His His Ser Gly Ser Thr His Tyr Asn Pro Ser

50 55 60

Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Ile Asp Thr Ser Lys Asn Leu Phe

65 70 75 80

Ser Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

85 90 95

Cys Ala Ser Leu Val Tyr Cys Gly Gly Asp Cys Tyr Ser Gly Phe Asp

100 105 110

Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 127

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH AA

<400> 127

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Glu Leu

20 25 30

Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Phe Asp Pro Glu Asp Gly Glu Thr Ile Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Val Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Thr Glu Ser Arg Gly Ile Gly Trp Pro Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 128

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH AA

<400> 128

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asp Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Arg Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Arg Tyr Ser Gly Arg Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 129

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL AA

<400> 129

Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Ser Phe Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Asn Asn Phe

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Asn Leu Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg

100 105

<210> 130

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL AA

<400> 130

Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Ser Phe Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Asn Asn Phe

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Asn Leu Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg

100 105

<210> 131

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL AA

<400> 131

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Ser Gly Ala Ser Ser Leu Lys Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Pro Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Ile

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg

100 105

<210> 132

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL AA

<400> 132

Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Leu

20 25 30

Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Phe Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Gly Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Thr Trp Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Phe Lys Arg

100 105

<210> 133

<211> 1437

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> FS-21495CARDNAHxL

<400> 133

atggcactcc ccgtaactgc tctgctgctg ccgttggcat tgctcctgca cgccgcacgc 60

ccggaggtgc agctgttgga gtctggggga ggcttggtac agcctggggg gtccctgaga 120

ctctcctgtg cagcctctgg attcaccttt agcagctatg ccatgagctg ggtccgccag 180

gctccaggga aggggctgga gtgggtctca gctattagtg gtagtggtgg tagcacatac 240

tacgcagact ccgtgaaggg ccggttcacc atctccagag acaattccaa gaacacgctg 300

tatctgcaaa tgaacagcct gagagccgag gacacggcgg tgtactactg cgcaagagcc 360

gagatgggag ccgtattcga catatggggt cagggtacaa tggtcaccgt ctcctcaggg 420

tctacatccg gctccgggaa gcccggaagt ggcgaaggta gtacaaaggg ggaaattgtg 480

ttgacacagt ctccagccac cctgtctttg tctccagggg aaagagccac cctctcctgc 540

agggccagtc agagtgttag caggtactta gcctggtacc aacagaaacc tggccaggct 600

cccaggctcc tcatctatga tgcatccaac agggccactg gcatcccagc caggttcagt 660

ggcagtgggt ctgggacaga cttcactctc accatcagca gcctagagcc tgaagatttt 720

gcagtttatt actgtcagca gagaatctcc tggcctttca cttttggcgg agggaccaag 780

gttgagatca aacgggccgc tgcccttgat aatgaaaagt caaacggaac aatcattcac 840

gtgaagggca agcacctctg tccgtcaccc ttgttccctg gtccatccaa gccattctgg 900

gtgttggtcg tagtgggtgg agtcctcgct tgttactctc tgctcgtcac cgtggctttt 960

ataatcttct gggttagatc caaaagaagc cgcctgctcc atagcgatta catgaatatg 1020

actccacgcc gccctggccc cacaaggaaa cactaccagc cttacgcacc acctagagat 1080

ttcgctgcct atcggagcag ggtgaagttt tccagatctg cagatgcacc agcgtatcag 1140

cagggccaga accaactgta taacgagctc aacctgggac gcagggaaga gtatgacgtt 1200

ttggacaagc gcagaggacg ggaccctgag atgggtggca aaccaagacg aaaaaacccc 1260

caggagggtc tctataatga gctgcagaag gataagatgg ctgaagccta ttctgaaata 1320

ggcatgaaag gagagcggag aaggggaaaa gggcacgacg gtttgtacca gggactcagc 1380

actgctacga aggatactta tgacgctctc cacatgcaag ccctgccacc taggtaa 1437

<210> 134

<211> 478

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> FS-21495CARHxL

<400> 134

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu

20 25 30

Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe

35 40 45

Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys

50 55 60

Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr

65 70 75 80

Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser

85 90 95

Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr

100 105 110

Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ala Glu Met Gly Ala Val Phe Asp Ile

115 120 125

Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr Ser Gly

130 135 140

Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Ile Val

145 150 155 160

Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala

165 170 175

Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Arg Tyr Leu Ala Trp

180 185 190

Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Ala

195 200 205

Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser

210 215 220

Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe

225 230 235 240

Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ile Ser Trp Pro Phe Thr Phe Gly

245 250 255

Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ala Ala Ala Leu Asp Asn Glu

260 265 270

Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro

275 280 285

Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val

290 295 300

Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe

305 310 315 320

Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp

325 330 335

Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr

340 345 350

Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val

355 360 365

Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn

370 375 380

Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val

385 390 395 400

Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg

405 410 415

Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys

420 425 430

Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg

435 440 445

Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys

450 455 460

Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

465 470 475

<210> 135

<211> 1437

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> FS-21495CARDNALxH

<400> 135

atggcactcc ccgtaactgc tctgctgctg ccgttggcat tgctcctgca cgccgcacgc 60

ccggaaattg tgttgacaca gtctccagcc accctgtctt tgtctccagg ggaaagagcc 120

accctctcct gcagggccag tcagagtgtt agcaggtact tagcctggta ccaacagaaa 180

cctggccagg ctcccaggct cctcatctat gatgcatcca acagggccac tggcatccca 240

gccaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagcctagag 300

cctgaagatt ttgcagttta ttactgtcag cagagaatct cctggccttt cacttttggc 360

ggagggacca aggttgagat caaacggggg tctacatccg gctccgggaa gcccggaagt 420

ggcgaaggta gtacaaaggg ggaggtgcag ctgttggagt ctgggggagg cttggtacag 480

cctggggggt ccctgagact ctcctgtgca gcctctggat tcacctttag cagctatgcc 540

atgagctggg tccgccaggc tccagggaag gggctggagt gggtctcagc tattagtggt 600

agtggtggta gcacatacta cgcagactcc gtgaagggcc ggttcaccat ctccagagac 660

aattccaaga acacgctgta tctgcaaatg aacagcctga gagccgagga cacggcggtg 720

tactactgcg caagagccga gatgggagcc gtattcgaca tatggggtca gggtacaatg 780

gtcaccgtct cctcagccgc tgcccttgat aatgaaaagt caaacggaac aatcattcac 840

gtgaagggca agcacctctg tccgtcaccc ttgttccctg gtccatccaa gccattctgg 900

gtgttggtcg tagtgggtgg agtcctcgct tgttactctc tgctcgtcac cgtggctttt 960

ataatcttct gggttagatc caaaagaagc cgcctgctcc atagcgatta catgaatatg 1020

actccacgcc gccctggccc cacaaggaaa cactaccagc cttacgcacc acctagagat 1080

ttcgctgcct atcggagcag ggtgaagttt tccagatctg cagatgcacc agcgtatcag 1140

cagggccaga accaactgta taacgagctc aacctgggac gcagggaaga gtatgacgtt 1200

ttggacaagc gcagaggacg ggaccctgag atgggtggca aaccaagacg aaaaaacccc 1260

caggagggtc tctataatga gctgcagaag gataagatgg ctgaagccta ttctgaaata 1320

ggcatgaaag gagagcggag aaggggaaaa gggcacgacg gtttgtacca gggactcagc 1380

actgctacga aggatactta tgacgctctc cacatgcaag ccctgccacc taggtaa 1437

<210> 136

<211> 478

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> FS-21495CARLxH

<400> 136

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu

20 25 30

Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln

35 40 45

Ser Val Ser Arg Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala

50 55 60

Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro

65 70 75 80

Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile

85 90 95

Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg

100 105 110

Ile Ser Trp Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

115 120 125

Arg Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser

130 135 140

Thr Lys Gly Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln

145 150 155 160

Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe

165 170 175

Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu

180 185 190

Glu Trp Val Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala

195 200 205

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn

210 215 220

Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val

225 230 235 240

Tyr Tyr Cys Ala Arg Ala Glu Met Gly Ala Val Phe Asp Ile Trp Gly

245 250 255

Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Leu Asp Asn Glu

260 265 270

Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro

275 280 285

Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val

290 295 300

Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe

305 310 315 320

Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp

325 330 335

Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr

340 345 350

Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val

355 360 365

Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn

370 375 380

Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val

385 390 395 400

Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg

405 410 415

Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys

420 425 430

Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg

435 440 445

Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys

450 455 460

Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

465 470 475

<210> 137

<211> 1464

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> PC-21497CARDNAHxL

<400> 137

atggcactcc ccgtaactgc tctgctgctg ccgttggcat tgctcctgca cgccgcacgc 60

ccgcaggtgc agctggtgga gtctggggga ggcgtggtcc agcctgggag gtccctgaga 120

ctctcctgtg cagcgtctgg attcaccttc agtagctatg gcatgcactg ggtccgccag 180

gctccaggca aggggctgga gtgggtggca gttatatcgt atgatggaag taataaatac 240

tatgcagact ccgtgaaggg ccgattcacc atctccagag acaattccaa gaacacgctg 300

tatctgcaaa tgaacagcct gagagccgag gacacggcgg tgtactactg cgccagagac 360

ggtacttatc taggtggtct ctggtacttc gacttatggg ggagaggtac cttggtcacc 420

gtctcctcag ggtctacatc cggctccggg aagcccggaa gtggcgaagg tagtacaaag 480

ggggatattg tgatgactca gtctccactc tccctgcccg tcacccctgg agagccggcc 540

tccatctcct gcaggtctag tcagagcctc ctgcatagta atggatacaa ctatttggat 600

tggtacctgc agaagccagg gcagtctcca cagctcctga tctatttggg ttctaatcgg 660

gcctccgggg tccctgacag gttcagtggc agtggatcag gcacagattt tacactgaaa 720

atcagcagag tggaggctga ggatgttggg gtttattact gcatgcaggg actcggcctc 780

cctctcactt ttggcggagg gaccaaggtt gagatcaaac gggccgctgc ccttgataat 840

gaaaagtcaa acggaacaat cattcacgtg aagggcaagc acctctgtcc gtcacccttg 900

ttccctggtc catccaagcc attctgggtg ttggtcgtag tgggtggagt cctcgcttgt 960

tactctctgc tcgtcaccgt ggcttttata atcttctggg ttagatccaa aagaagccgc 1020

ctgctccata gcgattacat gaatatgact ccacgccgcc ctggccccac aaggaaacac 1080

taccagcctt acgcaccacc tagagatttc gctgcctatc ggagcagggt gaagttttcc 1140

agatctgcag atgcaccagc gtatcagcag ggccagaacc aactgtataa cgagctcaac 1200

ctgggacgca gggaagagta tgacgttttg gacaagcgca gaggacggga ccctgagatg 1260

ggtggcaaac caagacgaaa aaacccccag gagggtctct ataatgagct gcagaaggat 1320

aagatggctg aagcctattc tgaaataggc atgaaaggag agcggagaag gggaaaaggg 1380

cacgacggtt tgtaccaggg actcagcact gctacgaagg atacttatga cgctctccac 1440

atgcaagccc tgccacctag gtaa 1464

<210> 138

<211> 487

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PC-21497CARHxL

<400> 138

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val

20 25 30

Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe

35 40 45

Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys

50 55 60

Gly Leu Glu Trp Val Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr

65 70 75 80

Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser

85 90 95

Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr

100 105 110

Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Gly Thr Tyr Leu Gly Gly Leu Trp

115 120 125

Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly

130 135 140

Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys

145 150 155 160

Gly Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro

165 170 175

Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His

180 185 190

Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln

195 200 205

Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val

210 215 220

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys

225 230 235 240

Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln

245 250 255

Gly Leu Gly Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile

260 265 270

Lys Arg Ala Ala Ala Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile

275 280 285

His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro

290 295 300

Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys

305 310 315 320

Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser

325 330 335

Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg

340 345 350

Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg

355 360 365

Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp

370 375 380

Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn

385 390 395 400

Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg

405 410 415

Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly

420 425 430

Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu

435 440 445

Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu

450 455 460

Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His

465 470 475 480

Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

485

<210> 139

<211> 1464

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> PC-21497CARDNALxH

<400> 139

atggcactcc ccgtaactgc tctgctgctg ccgttggcat tgctcctgca cgccgcacgc 60

ccggatattg tgatgactca gtctccactc tccctgcccg tcacccctgg agagccggcc 120

tccatctcct gcaggtctag tcagagcctc ctgcatagta atggatacaa ctatttggat 180

tggtacctgc agaagccagg gcagtctcca cagctcctga tctatttggg ttctaatcgg 240

gcctccgggg tccctgacag gttcagtggc agtggatcag gcacagattt tacactgaaa 300

atcagcagag tggaggctga ggatgttggg gtttattact gcatgcaggg actcggcctc 360

cctctcactt ttggcggagg gaccaaggtt gagatcaaac gggggtctac atccggctcc 420

gggaagcccg gaagtggcga aggtagtaca aaggggcagg tgcagctggt ggagtctggg 480

ggaggcgtgg tccagcctgg gaggtccctg agactctcct gtgcagcgtc tggattcacc 540

ttcagtagct atggcatgca ctgggtccgc caggctccag gcaaggggct ggagtgggtg 600

gcagttatat cgtatgatgg aagtaataaa tactatgcag actccgtgaa gggccgattc 660

accatctcca gagacaattc caagaacacg ctgtatctgc aaatgaacag cctgagagcc 720

gaggacacgg cggtgtacta ctgcgccaga gacggtactt atctaggtgg tctctggtac 780

ttcgacttat gggggagagg taccttggtc accgtctcct cagccgctgc ccttgataat 840

gaaaagtcaa acggaacaat cattcacgtg aagggcaagc acctctgtcc gtcacccttg 900

ttccctggtc catccaagcc attctgggtg ttggtcgtag tgggtggagt cctcgcttgt 960

tactctctgc tcgtcaccgt ggcttttata atcttctggg ttagatccaa aagaagccgc 1020

ctgctccata gcgattacat gaatatgact ccacgccgcc ctggccccac aaggaaacac 1080

taccagcctt acgcaccacc tagagatttc gctgcctatc ggagcagggt gaagttttcc 1140

agatctgcag atgcaccagc gtatcagcag ggccagaacc aactgtataa cgagctcaac 1200

ctgggacgca gggaagagta tgacgttttg gacaagcgca gaggacggga ccctgagatg 1260

ggtggcaaac caagacgaaa aaacccccag gagggtctct ataatgagct gcagaaggat 1320

aagatggctg aagcctattc tgaaataggc atgaaaggag agcggagaag gggaaaaggg 1380

cacgacggtt tgtaccaggg actcagcact gctacgaagg atacttatga cgctctccac 1440

atgcaagccc tgccacctag gtaa 1464

<210> 140

<211> 487

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PC-21497CARHxL

<400> 140

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu

20 25 30

Pro Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln

35 40 45

Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln

50 55 60

Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg

65 70 75 80

Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp

85 90 95

Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr

100 105 110

Tyr Cys Met Gln Gly Leu Gly Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr

115 120 125

Lys Val Glu Ile Lys Arg Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly

130 135 140

Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly

145 150 155 160

Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala

165 170 175

Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala

180 185 190

Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser

195 200 205

Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg

210 215 220

Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala

225 230 235 240

Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Gly Thr Tyr Leu Gly

245 250 255

Gly Leu Trp Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val

260 265 270

Ser Ser Ala Ala Ala Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile

275 280 285

His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro

290 295 300

Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys

305 310 315 320

Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser

325 330 335

Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg

340 345 350

Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg

355 360 365

Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp

370 375 380

Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn

385 390 395 400

Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg

405 410 415

Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly

420 425 430

Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu

435 440 445

Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu

450 455 460

Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His

465 470 475 480

Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

485

<210> 141

<211> 1428

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> AJ-21508CARDNAHxL

<400> 141

atggcactcc ccgtaactgc tctgctgctg ccgttggcat tgctcctgca cgccgcacgc 60

ccgcaggtgc agctggtgca gtctggggct gaggtgaaga agcctggggc ctcagtgaag 120

gtttcctgca aggcatctgg atacaccttc accagctact atatgcactg ggtgcgacag 180

gcccctggac aagggcttga gtggatggga ataatcaacc ctggtggtgg tagcacaagc 240

tacgcacaga agttccaggg cagagtcacc atgaccaggg acacgtccac gagcacagtc 300

tacatggagc tgagcagcct gagatctgag gacacggcgg tgtactactg cgccagagag 360

agttggccaa tggacgtatg gggccaggga acaactgtca ccgtctcctc agggtctaca 420

tccggctccg ggaagcccgg aagtggcgaa ggtagtacaa agggggaaat agtgatgacg 480

cagtctccag ccaccctgtc tgtgtctcca ggggaaagag ccaccctctc ctgcagggcc 540

agtcagagtg ttagcagcaa cttagcctgg taccagcaga aacctggcca ggctcccagg 600

ctcctcatct atggtgcatc caccagggcc actggtatcc cagccaggtt cagtggcagt 660

gggtctggga cagagttcac tctcaccatc agcagcctgc agtctgaaga ttttgcagtt 720

tattactgtc agcagtacgc cgcctaccct acttttggcg gagggaccaa ggttgagatc 780

aaacgggccg ctgcccttga taatgaaaag tcaaacggaa caatcattca cgtgaagggc 840

aagcacctct gtccgtcacc cttgttccct ggtccatcca agccattctg ggtgttggtc 900

gtagtgggtg gagtcctcgc ttgttactct ctgctcgtca ccgtggcttt tataatcttc 960

tgggttagat ccaaaagaag ccgcctgctc catagcgatt acatgaatat gactccacgc 1020

cgccctggcc ccacaaggaa acactaccag ccttacgcac cacctagaga tttcgctgcc 1080

tatcggagca gggtgaagtt ttccagatct gcagatgcac cagcgtatca gcagggccag 1140

aaccaactgt ataacgagct caacctggga cgcagggaag agtatgacgt tttggacaag 1200

cgcagaggac gggaccctga gatgggtggc aaaccaagac gaaaaaaccc ccaggagggt 1260

ctctataatg agctgcagaa ggataagatg gctgaagcct attctgaaat aggcatgaaa 1320

ggagagcgga gaaggggaaa agggcacgac ggtttgtacc agggactcag cactgctacg 1380

aaggatactt atgacgctct ccacatgcaa gccctgccac ctaggtaa 1428

<210> 142

<211> 475

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> AJ-21508CARHxL

<400> 142

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val

20 25 30

Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr

35 40 45

Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln

50 55 60

Gly Leu Glu Trp Met Gly Ile Ile Asn Pro Gly Gly Gly Ser Thr Ser

65 70 75 80

Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser

85 90 95

Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr

100 105 110

Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Ser Trp Pro Met Asp Val Trp Gly

115 120 125

Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly

130 135 140

Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Ile Val Met Thr

145 150 155 160

Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu

165 170 175

Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn Leu Ala Trp Tyr Gln

180 185 190

Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Thr

195 200 205

Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr

210 215 220

Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser Glu Asp Phe Ala Val

225 230 235 240

Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ala Ala Tyr Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr

245 250 255

Lys Val Glu Ile Lys Arg Ala Ala Ala Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn

260 265 270

Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu

275 280 285

Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly

290 295 300

Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe

305 310 315 320

Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn

325 330 335

Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr

340 345 350

Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser

355 360 365

Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr

370 375 380

Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys

385 390 395 400

Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn

405 410 415

Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu

420 425 430

Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly

435 440 445

His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr

450 455 460

Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

465 470 475

<210> 143

<211> 1428

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> AJ-21508CARDNALxH

<400> 143

atggcactcc ccgtaactgc tctgctgctg ccgttggcat tgctcctgca cgccgcacgc 60

ccggaaatag tgatgacgca gtctccagcc accctgtctg tgtctccagg ggaaagagcc 120

accctctcct gcagggccag tcagagtgtt agcagcaact tagcctggta ccagcagaaa 180

cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca ccagggccac tggtatccca 240

gccaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gagttcactc tcaccatcag cagcctgcag 300

tctgaagatt ttgcagttta ttactgtcag cagtacgccg cctaccctac ttttggcgga 360

gggaccaagg ttgagatcaa acgggggtct acatccggct ccgggaagcc cggaagtggc 420

gaaggtagta caaaggggca ggtgcagctg gtgcagtctg gggctgaggt gaagaagcct 480

ggggcctcag tgaaggtttc ctgcaaggca tctggataca ccttcaccag ctactatatg 540

cactgggtgc gacaggcccc tggacaaggg cttgagtgga tgggaataat caaccctggt 600

ggtggtagca caagctacgc acagaagttc cagggcagag tcaccatgac cagggacacg 660

tccacgagca cagtctacat ggagctgagc agcctgagat ctgaggacac ggcggtgtac 720

tactgcgcca gagagagttg gccaatggac gtatggggcc agggaacaac tgtcaccgtc 780

tcctcagccg ctgcccttga taatgaaaag tcaaacggaa caatcattca cgtgaagggc 840

aagcacctct gtccgtcacc cttgttccct ggtccatcca agccattctg ggtgttggtc 900

gtagtgggtg gagtcctcgc ttgttactct ctgctcgtca ccgtggcttt tataatcttc 960

tgggttagat ccaaaagaag ccgcctgctc catagcgatt acatgaatat gactccacgc 1020

cgccctggcc ccacaaggaa acactaccag ccttacgcac cacctagaga tttcgctgcc 1080

tatcggagca gggtgaagtt ttccagatct gcagatgcac cagcgtatca gcagggccag 1140

aaccaactgt ataacgagct caacctggga cgcagggaag agtatgacgt tttggacaag 1200

cgcagaggac gggaccctga gatgggtggc aaaccaagac gaaaaaaccc ccaggagggt 1260

ctctataatg agctgcagaa ggataagatg gctgaagcct attctgaaat aggcatgaaa 1320

ggagagcgga gaaggggaaa agggcacgac ggtttgtacc agggactcag cactgctacg 1380

aaggatactt atgacgctct ccacatgcaa gccctgccac ctaggtaa 1428

<210> 144

<211> 475

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> AJ-21508CARLxH

<400> 144

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu

20 25 30

Ser Val Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln

35 40 45

Ser Val Ser Ser Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala

50 55 60

Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro

65 70 75 80

Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile

85 90 95

Ser Ser Leu Gln Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr

100 105 110

Ala Ala Tyr Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg

115 120 125

Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr

130 135 140

Lys Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro

145 150 155 160

Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr

165 170 175

Ser Tyr Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu

180 185 190

Trp Met Gly Ile Ile Asn Pro Gly Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln

195 200 205

Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr

210 215 220

Val Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr

225 230 235 240

Tyr Cys Ala Arg Glu Ser Trp Pro Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr

245 250 255

Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn

260 265 270

Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu

275 280 285

Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly

290 295 300

Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe

305 310 315 320

Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn

325 330 335

Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr

340 345 350

Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser

355 360 365

Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr

370 375 380

Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys

385 390 395 400

Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn

405 410 415

Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu

420 425 430

Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly

435 440 445

His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr

450 455 460

Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

465 470 475

<210> 145

<211> 1449

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> NM-21517CARDNAHxL

<400> 145

atggcactcc ccgtaactgc tctgctgctg ccgttggcat tgctcctgca cgccgcacgc 60

ccgcagctgc agctgcagga gtcgggccca ggactggtga agccttcgga gaccctgtcc 120

ctcacctgca ctgtctctgg tggctccatc agcagtagta gttactactg gggctggatc 180

cgccagcccc cagggaaggg gctggagtgg attgggagta tctcctatag tgggagcacc 240

tactacaacc cgtccctcaa gagtcgagtc accatatccg tagacacgtc caagaaccag 300

ttctccctga agctgagttc tgtgaccgcc gcagacacgg cggtgtacta ctgcgccaga 360

ggcaggggat atgcaaccag cttagccttc gatatctggg gtcagggtac aatggtcacc 420

gtctcctcag ggtctacatc cggctccggg aagcccggaa gtggcgaagg tagtacaaag 480

ggggaaattg tgttgacaca gtctccagcc accctgtctt tgtctccagg ggaaagagcc 540

accctctcct gcagggccag tcagagtgtt agcagctact tagcctggta ccaacagaaa 600

cctggccagg ctcccaggct cctcatctat gatgcatcca acagggccac tggcatccca 660

gccaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagcctagag 720

cctgaagatt ttgcagttta ttactgtcag cagagacacg tctggcctcc tacttttggc 780

ggagggacca aggttgagat caaacgggcc gctgcccttg ataatgaaaa gtcaaacgga 840

acaatcattc acgtgaaggg caagcacctc tgtccgtcac ccttgttccc tggtccatcc 900

aagccattct gggtgttggt cgtagtgggt ggagtcctcg cttgttactc tctgctcgtc 960

accgtggctt ttataatctt ctgggttaga tccaaaagaa gccgcctgct ccatagcgat 1020

tacatgaata tgactccacg ccgccctggc cccacaagga aacactacca gccttacgca 1080

ccacctagag atttcgctgc ctatcggagc agggtgaagt tttccagatc tgcagatgca 1140

ccagcgtatc agcagggcca gaaccaactg tataacgagc tcaacctggg acgcagggaa 1200

gagtatgacg ttttggacaa gcgcagagga cgggaccctg agatgggtgg caaaccaaga 1260

cgaaaaaacc cccaggaggg tctctataat gagctgcaga aggataagat ggctgaagcc 1320

tattctgaaa taggcatgaa aggagagcgg agaaggggaa aagggcacga cggtttgtac 1380

cagggactca gcactgctac gaaggatact tatgacgctc tccacatgca agccctgcca 1440

cctaggtaa 1449

<210> 146

<211> 482

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> NM-21517CARHxL

<400> 146

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu

20 25 30

Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly

35 40 45

Ser Ile Ser Ser Ser Ser Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro

50 55 60

Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Ser Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr

65 70 75 80

Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr

85 90 95

Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp

100 105 110

Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Arg Gly Tyr Ala Thr Ser Leu

115 120 125

Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Gly

130 135 140

Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys

145 150 155 160

Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro

165 170 175

Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser

180 185 190

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

195 200 205

Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser

210 215 220

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu

225 230 235 240

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg His Val Trp Pro

245 250 255

Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ala Ala Ala

260 265 270

Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys

275 280 285

His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp

290 295 300

Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val

305 310 315 320

Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu

325 330 335

Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr

340 345 350

Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr

355 360 365

Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln

370 375 380

Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu

385 390 395 400

Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly

405 410 415

Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu

420 425 430

Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly

435 440 445

Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser

450 455 460

Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro

465 470 475 480

Pro Arg

<210> 147

<211> 1449

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> NM-21517CARDNALxH

<400> 147

atggcactcc ccgtaactgc tctgctgctg ccgttggcat tgctcctgca cgccgcacgc 60

ccggaaattg tgttgacaca gtctccagcc accctgtctt tgtctccagg ggaaagagcc 120

accctctcct gcagggccag tcagagtgtt agcagctact tagcctggta ccaacagaaa 180

cctggccagg ctcccaggct cctcatctat gatgcatcca acagggccac tggcatccca 240

gccaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagcctagag 300

cctgaagatt ttgcagttta ttactgtcag cagagacacg tctggcctcc tacttttggc 360

ggagggacca aggttgagat caaacggggg tctacatccg gctccgggaa gcccggaagt 420

ggcgaaggta gtacaaaggg gcagctgcag ctgcaggagt cgggcccagg actggtgaag 480

ccttcggaga ccctgtccct cacctgcact gtctctggtg gctccatcag cagtagtagt 540

tactactggg gctggatccg ccagccccca gggaaggggc tggagtggat tgggagtatc 600

tcctatagtg ggagcaccta ctacaacccg tccctcaaga gtcgagtcac catatccgta 660

gacacgtcca agaaccagtt ctccctgaag ctgagttctg tgaccgccgc agacacggcg 720

gtgtactact gcgccagagg caggggatat gcaaccagct tagccttcga tatctggggt 780

cagggtacaa tggtcaccgt ctcctcagcc gctgcccttg ataatgaaaa gtcaaacgga 840

acaatcattc acgtgaaggg caagcacctc tgtccgtcac ccttgttccc tggtccatcc 900

aagccattct gggtgttggt cgtagtgggt ggagtcctcg cttgttactc tctgctcgtc 960

accgtggctt ttataatctt ctgggttaga tccaaaagaa gccgcctgct ccatagcgat 1020

tacatgaata tgactccacg ccgccctggc cccacaagga aacactacca gccttacgca 1080

ccacctagag atttcgctgc ctatcggagc agggtgaagt tttccagatc tgcagatgca 1140

ccagcgtatc agcagggcca gaaccaactg tataacgagc tcaacctggg acgcagggaa 1200

gagtatgacg ttttggacaa gcgcagagga cgggaccctg agatgggtgg caaaccaaga 1260

cgaaaaaacc cccaggaggg tctctataat gagctgcaga aggataagat ggctgaagcc 1320

tattctgaaa taggcatgaa aggagagcgg agaaggggaa aagggcacga cggtttgtac 1380

cagggactca gcactgctac gaaggatact tatgacgctc tccacatgca agccctgcca 1440

cctaggtaa 1449

<210> 148

<211> 482

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> NM-21517CARLxH

<400> 148

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu

20 25 30

Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln

35 40 45

Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala

50 55 60

Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro

65 70 75 80

Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile

85 90 95

Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg

100 105 110

His Val Trp Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

115 120 125

Arg Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser

130 135 140

Thr Lys Gly Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys

145 150 155 160

Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile

165 170 175

Ser Ser Ser Ser Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys

180 185 190

Gly Leu Glu Trp Ile Gly Ser Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr

195 200 205

Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys

210 215 220

Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala

225 230 235 240

Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Arg Gly Tyr Ala Thr Ser Leu Ala Phe

245 250 255

Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala

260 265 270

Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys

275 280 285

His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp

290 295 300

Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val

305 310 315 320

Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu

325 330 335

Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr

340 345 350

Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr

355 360 365

Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln

370 375 380

Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu

385 390 395 400

Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly

405 410 415

Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu

420 425 430

Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly

435 440 445

Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser

450 455 460

Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro

465 470 475 480

Pro Arg

<210> 149

<211> 1440

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> TS-21522CARDNAHxL

<400> 149

atggcactcc ccgtaactgc tctgctgctg ccgttggcat tgctcctgca cgccgcacgc 60

ccggaggtgc agctggtgga gtctggggga ggcttggtac agcctggggg gtccctgaga 120

ctctcctgtg cagcctctgg attcaccttc agtagctata gcatgaactg ggtccgccag 180

gctccaggga aggggctgga gtgggtttca accattagta gtagtagtag taccatatac 240

tacgcagact ctgtgaaggg ccgattcacc atctccagag acaatgccaa gaactcactg 300

tatctgcaaa tgaacagcct gagagctgag gacacggcgg tgtactactg cgccagaggt 360

tctcaggagc acctgatttt cgattattgg ggacagggta cattggtcac cgtctcctca 420

gggtctacat ccggctccgg gaagcccgga agtggcgaag gtagtacaaa gggggaaatt 480

gtgttgacac agtctccagc caccctgtct ttgtctccag gggaaagagc caccctctcc 540

tgcagggcca gtcagagtgt tagcaggtac ttagcctggt accaacagaa acctggccag 600

gctcccaggc tcctcatcta tgatgcatcc aacagggcca ctggcatccc agccaggttc 660

agtggcagtg ggtctgggac agacttcact ctcaccatca gcagcctaga gcctgaagat 720

tttgcagttt attactgtca gcagagattc tactaccctt ggacttttgg cggagggacc 780

aaggttgaga tcaaacgggc cgctgccctt gataatgaaa agtcaaacgg aacaatcatt 840

cacgtgaagg gcaagcacct ctgtccgtca cccttgttcc ctggtccatc caagccattc 900

tgggtgttgg tcgtagtggg tggagtcctc gcttgttact ctctgctcgt caccgtggct 960

tttataatct tctgggttag atccaaaaga agccgcctgc tccatagcga ttacatgaat 1020

atgactccac gccgccctgg ccccacaagg aaacactacc agccttacgc accacctaga 1080

gatttcgctg cctatcggag cagggtgaag ttttccagat ctgcagatgc accagcgtat 1140

cagcagggcc agaaccaact gtataacgag ctcaacctgg gacgcaggga agagtatgac 1200

gttttggaca agcgcagagg acgggaccct gagatgggtg gcaaaccaag acgaaaaaac 1260

ccccaggagg gtctctataa tgagctgcag aaggataaga tggctgaagc ctattctgaa 1320

ataggcatga aaggagagcg gagaagggga aaagggcacg acggtttgta ccagggactc 1380

agcactgcta cgaaggatac ttatgacgct ctccacatgc aagccctgcc acctaggtaa 1440

<210> 150

<211> 479

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> TS-21522CARHxL

<400> 150

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu

20 25 30

Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe

35 40 45

Thr Phe Ser Ser Tyr Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys

50 55 60

Gly Leu Glu Trp Val Ser Thr Ile Ser Ser Ser Ser Ser Thr Ile Tyr

65 70 75 80

Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala

85 90 95

Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr

100 105 110

Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Ser Gln Glu His Leu Ile Phe Asp

115 120 125

Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr Ser

130 135 140

Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Ile

145 150 155 160

Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg

165 170 175

Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Arg Tyr Leu Ala

180 185 190

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Asp

195 200 205

Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly

210 215 220

Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp

225 230 235 240

Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Phe Tyr Tyr Pro Trp Thr Phe

245 250 255

Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ala Ala Ala Leu Asp Asn

260 265 270

Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys

275 280 285

Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val

290 295 300

Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala

305 310 315 320

Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser

325 330 335

Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His

340 345 350

Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg

355 360 365

Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln

370 375 380

Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp

385 390 395 400

Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro

405 410 415

Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp

420 425 430

Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg

435 440 445

Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr

450 455 460

Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

465 470 475

<210> 151

<211> 1440

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> TS-21522CARDNALxH

<400> 151

atggcactcc ccgtaactgc tctgctgctg ccgttggcat tgctcctgca cgccgcacgc 60

ccggaaattg tgttgacaca gtctccagcc accctgtctt tgtctccagg ggaaagagcc 120

accctctcct gcagggccag tcagagtgtt agcaggtact tagcctggta ccaacagaaa 180

cctggccagg ctcccaggct cctcatctat gatgcatcca acagggccac tggcatccca 240

gccaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagcctagag 300

cctgaagatt ttgcagttta ttactgtcag cagagattct actacccttg gacttttggc 360

ggagggacca aggttgagat caaacggggg tctacatccg gctccgggaa gcccggaagt 420

ggcgaaggta gtacaaaggg ggaggtgcag ctggtggagt ctgggggagg cttggtacag 480

cctggggggt ccctgagact ctcctgtgca gcctctggat tcaccttcag tagctatagc 540

atgaactggg tccgccaggc tccagggaag gggctggagt gggtttcaac cattagtagt 600

agtagtagta ccatatacta cgcagactct gtgaagggcc gattcaccat ctccagagac 660

aatgccaaga actcactgta tctgcaaatg aacagcctga gagctgagga cacggcggtg 720

tactactgcg ccagaggttc tcaggagcac ctgattttcg attattgggg acagggtaca 780

ttggtcaccg tctcctcagc cgctgccctt gataatgaaa agtcaaacgg aacaatcatt 840

cacgtgaagg gcaagcacct ctgtccgtca cccttgttcc ctggtccatc caagccattc 900

tgggtgttgg tcgtagtggg tggagtcctc gcttgttact ctctgctcgt caccgtggct 960

tttataatct tctgggttag atccaaaaga agccgcctgc tccatagcga ttacatgaat 1020

atgactccac gccgccctgg ccccacaagg aaacactacc agccttacgc accacctaga 1080

gatttcgctg cctatcggag cagggtgaag ttttccagat ctgcagatgc accagcgtat 1140

cagcagggcc agaaccaact gtataacgag ctcaacctgg gacgcaggga agagtatgac 1200

gttttggaca agcgcagagg acgggaccct gagatgggtg gcaaaccaag acgaaaaaac 1260

ccccaggagg gtctctataa tgagctgcag aaggataaga tggctgaagc ctattctgaa 1320

ataggcatga aaggagagcg gagaagggga aaagggcacg acggtttgta ccagggactc 1380

agcactgcta cgaaggatac ttatgacgct ctccacatgc aagccctgcc acctaggtaa 1440

<210> 152

<211> 479

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> TS-21522CARLxH

<400> 152

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu

20 25 30

Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln

35 40 45

Ser Val Ser Arg Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala

50 55 60

Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro

65 70 75 80

Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile

85 90 95

Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg

100 105 110

Phe Tyr Tyr Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

115 120 125

Arg Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser

130 135 140

Thr Lys Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln

145 150 155 160

Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe

165 170 175

Ser Ser Tyr Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu

180 185 190

Glu Trp Val Ser Thr Ile Ser Ser Ser Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala

195 200 205

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn

210 215 220

Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val

225 230 235 240

Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Ser Gln Glu His Leu Ile Phe Asp Tyr Trp

245 250 255

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Leu Asp Asn

260 265 270

Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys

275 280 285

Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val

290 295 300

Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala

305 310 315 320

Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser

325 330 335

Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His

340 345 350

Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg

355 360 365

Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln

370 375 380

Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp

385 390 395 400

Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro

405 410 415

Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp

420 425 430

Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg

435 440 445

Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr

450 455 460

Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

465 470 475

<210> 153

<211> 1449

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> RY-21527CARDNAHxL

<400> 153

atggcactcc ccgtaactgc tctgctgctg ccgttggcat tgctcctgca cgccgcacgc 60

ccgcaggtgc agctggtgga gtctggggga ggcgtggtcc agcctgggag gtccctgaga 120

ctctcctgtg cagcgtctgg attcaccttc agtagctatg gcatgcactg ggtccgccag 180

gctccaggca aggggctgga gtgggtggca gttatatcgt atgatggaag taataaatac 240

tatgcagact ccgtgaaggg ccgattcacc atctccagag acaattccaa gaacacgctg 300

tatctgcaaa tgaacagcct gagagccgag gacacggcgg tgtactactg cgccagaact 360

gacttctgga gcggatcccc tccaggctta gattactggg gacagggtac attggtcacc 420

gtctcctcag ggtctacatc cggctccggg aagcccggaa gtggcgaagg tagtacaaag 480

ggggacatcc agttgaccca gtctccatct tccgtgtctg catctgtagg agacagagtc 540

accatcactt gtcgggcgag tcagggtatt agcagctggt tagcctggta tcagcagaaa 600

ccagggaaag cccctaagct cctgatctat ggtgcatcca gtttgcaaag tggggtccca 660

tcaaggttca gcggcagtgg atctgggaca gatttcactc tcaccatcag cagcctgcag 720

cctgaagatt ttgcaactta ttactgtcag cagatataca ccttcccttt cacttttggc 780

ggagggacca aggttgagat caaacgggcc gctgcccttg ataatgaaaa gtcaaacgga 840

acaatcattc acgtgaaggg caagcacctc tgtccgtcac ccttgttccc tggtccatcc 900

aagccattct gggtgttggt cgtagtgggt ggagtcctcg cttgttactc tctgctcgtc 960

accgtggctt ttataatctt ctgggttaga tccaaaagaa gccgcctgct ccatagcgat 1020

tacatgaata tgactccacg ccgccctggc cccacaagga aacactacca gccttacgca 1080

ccacctagag atttcgctgc ctatcggagc agggtgaagt tttccagatc tgcagatgca 1140

ccagcgtatc agcagggcca gaaccaactg tataacgagc tcaacctggg acgcagggaa 1200

gagtatgacg ttttggacaa gcgcagagga cgggaccctg agatgggtgg caaaccaaga 1260

cgaaaaaacc cccaggaggg tctctataat gagctgcaga aggataagat ggctgaagcc 1320

tattctgaaa taggcatgaa aggagagcgg agaaggggaa aagggcacga cggtttgtac 1380

cagggactca gcactgctac gaaggatact tatgacgctc tccacatgca agccctgcca 1440

cctaggtaa 1449

<210> 154

<211> 482

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> RY-21527CARHxL

<400> 154

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val

20 25 30

Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe

35 40 45

Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys

50 55 60

Gly Leu Glu Trp Val Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr

65 70 75 80

Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser

85 90 95

Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr

100 105 110

Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Thr Asp Phe Trp Ser Gly Ser Pro Pro

115 120 125

Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly

130 135 140

Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys

145 150 155 160

Gly Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val

165 170 175

Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser

180 185 190

Trp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu

195 200 205

Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser

210 215 220

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln

225 230 235 240

Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ile Tyr Thr Phe Pro

245 250 255

Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ala Ala Ala

260 265 270

Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys

275 280 285

His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp

290 295 300

Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val

305 310 315 320

Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu

325 330 335

Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr

340 345 350

Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr

355 360 365

Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln

370 375 380

Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu

385 390 395 400

Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly

405 410 415

Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu

420 425 430

Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly

435 440 445

Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser

450 455 460

Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro

465 470 475 480

Pro Arg

<210> 155

<211> 1449

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> RY-21527CARDNALxH

<400> 155

atggcactcc ccgtaactgc tctgctgctg ccgttggcat tgctcctgca cgccgcacgc 60

ccggacatcc agttgaccca gtctccatct tccgtgtctg catctgtagg agacagagtc 120

accatcactt gtcgggcgag tcagggtatt agcagctggt tagcctggta tcagcagaaa 180

ccagggaaag cccctaagct cctgatctat ggtgcatcca gtttgcaaag tggggtccca 240

tcaaggttca gcggcagtgg atctgggaca gatttcactc tcaccatcag cagcctgcag 300

cctgaagatt ttgcaactta ttactgtcag cagatataca ccttcccttt cacttttggc 360

ggagggacca aggttgagat caaacggggg tctacatccg gctccgggaa gcccggaagt 420

ggcgaaggta gtacaaaggg gcaggtgcag ctggtggagt ctgggggagg cgtggtccag 480

cctgggaggt ccctgagact ctcctgtgca gcgtctggat tcaccttcag tagctatggc 540

atgcactggg tccgccaggc tccaggcaag gggctggagt gggtggcagt tatatcgtat 600

gatggaagta ataaatacta tgcagactcc gtgaagggcc gattcaccat ctccagagac 660

aattccaaga acacgctgta tctgcaaatg aacagcctga gagccgagga cacggcggtg 720

tactactgcg ccagaactga cttctggagc ggatcccctc caggcttaga ttactgggga 780

cagggtacat tggtcaccgt ctcctcagcc gctgcccttg ataatgaaaa gtcaaacgga 840

acaatcattc acgtgaaggg caagcacctc tgtccgtcac ccttgttccc tggtccatcc 900

aagccattct gggtgttggt cgtagtgggt ggagtcctcg cttgttactc tctgctcgtc 960

accgtggctt ttataatctt ctgggttaga tccaaaagaa gccgcctgct ccatagcgat 1020

tacatgaata tgactccacg ccgccctggc cccacaagga aacactacca gccttacgca 1080

ccacctagag atttcgctgc ctatcggagc agggtgaagt tttccagatc tgcagatgca 1140

ccagcgtatc agcagggcca gaaccaactg tataacgagc tcaacctggg acgcagggaa 1200

gagtatgacg ttttggacaa gcgcagagga cgggaccctg agatgggtgg caaaccaaga 1260

cgaaaaaacc cccaggaggg tctctataat gagctgcaga aggataagat ggctgaagcc 1320

tattctgaaa taggcatgaa aggagagcgg agaaggggaa aagggcacga cggtttgtac 1380

cagggactca gcactgctac gaaggatact tatgacgctc tccacatgca agccctgcca 1440

cctaggtaa 1449

<210> 156

<211> 482

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> RY-21527CARLxH

<400> 156

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val

20 25 30

Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln

35 40 45

Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala

50 55 60

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro

65 70 75 80

Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile

85 90 95

Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ile

100 105 110

Tyr Thr Phe Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

115 120 125

Arg Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser

130 135 140

Thr Lys Gly Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln

145 150 155 160

Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe

165 170 175

Ser Ser Tyr Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu

180 185 190

Glu Trp Val Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala

195 200 205

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn

210 215 220

Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val

225 230 235 240

Tyr Tyr Cys Ala Arg Thr Asp Phe Trp Ser Gly Ser Pro Pro Gly Leu

245 250 255

Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala

260 265 270

Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys

275 280 285

His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp

290 295 300

Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val

305 310 315 320

Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu

325 330 335

Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr

340 345 350

Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr

355 360 365

Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln

370 375 380

Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu

385 390 395 400

Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly

405 410 415

Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu

420 425 430

Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly

435 440 445

Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser

450 455 460

Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro

465 470 475 480

Pro Arg

<210> 157

<211> 1479

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> PP-21528CARDNAHxL

<400> 157

atggcactcc ccgtaactgc tctgctgctg ccgttggcat tgctcctgca cgccgcacgc 60

ccgcaggtgc agctggtgca gtctggggct gaggtgaaga agcctgggtc ctcggtgaag 120

gtctcctgca aggcttctgg aggcaccttc agcagctatg ctatcagctg ggtgcgacag 180

gcccctggac aagggcttga gtggatggga gggatcatcc ctatctttgg tacagcaaac 240

tacgcacaga agttccaggg cagagtcacg attaccgcgg acgaatccac gagcacagcc 300

tacatggagc tgagcagcct gagatctgag gacacggcgg tgtactactg cgccagaact 360

cctgaatact cctccagcat atggcactat tactacggca tggacgtatg gggccaggga 420

acaactgtca ccgtctcctc agggtctaca tccggctccg ggaagcccgg aagtggcgaa 480

ggtagtacaa agggggacat cgtgatgacc cagtctccag actccctggc tgtgtctctg 540

ggcgagaggg ccaccatcaa ctgcaagtcc agccagagtg ttttatacag ctccaacaat 600

aagaactact tagcttggta ccagcagaaa ccaggacagc ctcctaagct gctcatttac 660

tgggcatcta cccgggaatc cggggtccct gaccgattca gtggcagcgg gtctgggaca 720

gatttcactc tcaccatcag cagcctgcag gctgaagatg tggcagttta ttactgtcag 780

cagttcgccc acactccttt cacttttggc ggagggacca aggttgagat caaacgggcc 840

gctgcccttg ataatgaaaa gtcaaacgga acaatcattc acgtgaaggg caagcacctc 900

tgtccgtcac ccttgttccc tggtccatcc aagccattct gggtgttggt cgtagtgggt 960

ggagtcctcg cttgttactc tctgctcgtc accgtggctt ttataatctt ctgggttaga 1020

tccaaaagaa gccgcctgct ccatagcgat tacatgaata tgactccacg ccgccctggc 1080

cccacaagga aacactacca gccttacgca ccacctagag atttcgctgc ctatcggagc 1140

agggtgaagt tttccagatc tgcagatgca ccagcgtatc agcagggcca gaaccaactg 1200

tataacgagc tcaacctggg acgcagggaa gagtatgacg ttttggacaa gcgcagagga 1260

cgggaccctg agatgggtgg caaaccaaga cgaaaaaacc cccaggaggg tctctataat 1320

gagctgcaga aggataagat ggctgaagcc tattctgaaa taggcatgaa aggagagcgg 1380

agaaggggaa aagggcacga cggtttgtac cagggactca gcactgctac gaaggatact 1440

tatgacgctc tccacatgca agccctgcca cctaggtaa 1479

<210> 158

<211> 492

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PP-21528CARHxL

<400> 158

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val

20 25 30

Lys Lys Pro Gly Ser Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly

35 40 45

Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln

50 55 60

Gly Leu Glu Trp Met Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn

65 70 75 80

Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser

85 90 95

Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr

100 105 110

Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Thr Pro Glu Tyr Ser Ser Ser Ile Trp

115 120 125

His Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr

130 135 140

Val Ser Ser Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu

145 150 155 160

Gly Ser Thr Lys Gly Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu

165 170 175

Ala Val Ser Leu Gly Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln

180 185 190

Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln

195 200 205

Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr

210 215 220

Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr

225 230 235 240

Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val

245 250 255

Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Ala His Thr Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly

260 265 270

Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ala Ala Ala Leu Asp Asn Glu Lys Ser

275 280 285

Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro

290 295 300

Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly

305 310 315 320

Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile

325 330 335

Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met

340 345 350

Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro

355 360 365

Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe

370 375 380

Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu

385 390 395 400

Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp

405 410 415

Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys

420 425 430

Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala

435 440 445

Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys

450 455 460

Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr

465 470 475 480

Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

485 490

<210> 159

<211> 1479

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> PP-21528CARDNALxH

<400> 159

atggcactcc ccgtaactgc tctgctgctg ccgttggcat tgctcctgca cgccgcacgc 60

ccggacatcg tgatgaccca gtctccagac tccctggctg tgtctctggg cgagagggcc 120

accatcaact gcaagtccag ccagagtgtt ttatacagct ccaacaataa gaactactta 180

gcttggtacc agcagaaacc aggacagcct cctaagctgc tcatttactg ggcatctacc 240

cgggaatccg gggtccctga ccgattcagt ggcagcgggt ctgggacaga tttcactctc 300

accatcagca gcctgcaggc tgaagatgtg gcagtttatt actgtcagca gttcgcccac 360

actcctttca cttttggcgg agggaccaag gttgagatca aacgggggtc tacatccggc 420

tccgggaagc ccggaagtgg cgaaggtagt acaaaggggc aggtgcagct ggtgcagtct 480

ggggctgagg tgaagaagcc tgggtcctcg gtgaaggtct cctgcaaggc ttctggaggc 540

accttcagca gctatgctat cagctgggtg cgacaggccc ctggacaagg gcttgagtgg 600

atgggaggga tcatccctat ctttggtaca gcaaactacg cacagaagtt ccagggcaga 660

gtcacgatta ccgcggacga atccacgagc acagcctaca tggagctgag cagcctgaga 720

tctgaggaca cggcggtgta ctactgcgcc agaactcctg aatactcctc cagcatatgg 780

cactattact acggcatgga cgtatggggc cagggaacaa ctgtcaccgt ctcctcagcc 840

gctgcccttg ataatgaaaa gtcaaacgga acaatcattc acgtgaaggg caagcacctc 900

tgtccgtcac ccttgttccc tggtccatcc aagccattct gggtgttggt cgtagtgggt 960

ggagtcctcg cttgttactc tctgctcgtc accgtggctt ttataatctt ctgggttaga 1020

tccaaaagaa gccgcctgct ccatagcgat tacatgaata tgactccacg ccgccctggc 1080

cccacaagga aacactacca gccttacgca ccacctagag atttcgctgc ctatcggagc 1140

agggtgaagt tttccagatc tgcagatgca ccagcgtatc agcagggcca gaaccaactg 1200

tataacgagc tcaacctggg acgcagggaa gagtatgacg ttttggacaa gcgcagagga 1260

cgggaccctg agatgggtgg caaaccaaga cgaaaaaacc cccaggaggg tctctataat 1320

gagctgcaga aggataagat ggctgaagcc tattctgaaa taggcatgaa aggagagcgg 1380

agaaggggaa aagggcacga cggtttgtac cagggactca gcactgctac gaaggatact 1440

tatgacgctc tccacatgca agccctgcca cctaggtaa 1479

<210> 160

<211> 492

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PP-21528CARLxH

<400> 160

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu

20 25 30

Ala Val Ser Leu Gly Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln

35 40 45

Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln

50 55 60

Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr

65 70 75 80

Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr

85 90 95

Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val

100 105 110

Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Ala His Thr Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly

115 120 125

Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro

130 135 140

Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser

145 150 155 160

Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser Ser Val Lys Val Ser Cys Lys

165 170 175

Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln

180 185 190

Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe

195 200 205

Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr

210 215 220

Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg

225 230 235 240

Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Thr Pro Glu Tyr Ser

245 250 255

Ser Ser Ile Trp His Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly

260 265 270

Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Leu Asp Asn Glu Lys Ser

275 280 285

Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro

290 295 300

Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly

305 310 315 320

Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile

325 330 335

Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met

340 345 350

Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro

355 360 365

Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe

370 375 380

Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu

385 390 395 400

Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp

405 410 415

Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys

420 425 430

Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala

435 440 445

Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys

450 455 460

Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr

465 470 475 480

Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

485 490

<210> 161

<211> 1452

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> RD-21530CARDNAHxL

<400> 161

atggcactcc ccgtaactgc tctgctgctg ccgttggcat tgctcctgca cgccgcacgc 60

ccgcaggtgc agctggtgga gtctggggga ggcgtggtcc agcctgggag gtccctgaga 120

ctctcctgtg cagcgtctgg attcaccttc agtagctatg gcatgcactg ggtccgccag 180

gctccaggca aggggctgga gtgggtggca gttatatcgt atgatggaag taataaatac 240

tatgcagact ccgtgaaggg ccgattcacc atctccagag acaattccaa gaacacgctg 300

tatctgcaaa tgaacagcct gagagccgag gacacggcgg tgtactactg cgtcaagggg 360

ccgttgcagg agccgccata cgattatgga atggacgtat ggggccaggg aacaactgtc 420

accgtctcct cagggtctac atccggctcc gggaagcccg gaagtggcga aggtagtaca 480

aagggggaaa tagtgatgac gcagtctcca gccaccctgt ctgtgtctcc aggggaaaga 540

gccaccctct cctgcagggc cagtcagagt gttagcagca acttagcctg gtaccagcag 600

aaacctggcc aggctcccag gctcctcatc tatagcgcat ccaccagggc cactggtatc 660

ccagccaggt tcagtggcag tgggtctggg acagagttca ctctcaccat cagcagcctg 720

cagtctgaag attttgcagt ttattactgt cagcagcacc acgtctggcc tctcactttt 780

ggcggaggga ccaaggttga gatcaaacgg gccgctgccc ttgataatga aaagtcaaac 840

ggaacaatca ttcacgtgaa gggcaagcac ctctgtccgt cacccttgtt ccctggtcca 900

tccaagccat tctgggtgtt ggtcgtagtg ggtggagtcc tcgcttgtta ctctctgctc 960

gtcaccgtgg cttttataat cttctgggtt agatccaaaa gaagccgcct gctccatagc 1020

gattacatga atatgactcc acgccgccct ggccccacaa ggaaacacta ccagccttac 1080

gcaccaccta gagatttcgc tgcctatcgg agcagggtga agttttccag atctgcagat 1140

gcaccagcgt atcagcaggg ccagaaccaa ctgtataacg agctcaacct gggacgcagg 1200

gaagagtatg acgttttgga caagcgcaga ggacgggacc ctgagatggg tggcaaacca 1260

agacgaaaaa acccccagga gggtctctat aatgagctgc agaaggataa gatggctgaa 1320

gcctattctg aaataggcat gaaaggagag cggagaaggg gaaaagggca cgacggtttg 1380

taccagggac tcagcactgc tacgaaggat acttatgacg ctctccacat gcaagccctg 1440

ccacctaggt aa 1452

<210> 162

<211> 483

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> RD-21530CARHxL

<400> 162

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val

20 25 30

Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe

35 40 45

Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys

50 55 60

Gly Leu Glu Trp Val Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr

65 70 75 80

Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser

85 90 95

Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr

100 105 110

Ala Val Tyr Tyr Cys Val Lys Gly Pro Leu Gln Glu Pro Pro Tyr Asp

115 120 125

Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

130 135 140

Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr

145 150 155 160

Lys Gly Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser

165 170 175

Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser

180 185 190

Ser Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu

195 200 205

Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe

210 215 220

Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu

225 230 235 240

Gln Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His His Val Trp

245 250 255

Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ala Ala

260 265 270

Ala Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly

275 280 285

Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe

290 295 300

Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu

305 310 315 320

Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg

325 330 335

Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro

340 345 350

Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala

355 360 365

Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr

370 375 380

Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg

385 390 395 400

Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met

405 410 415

Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu

420 425 430

Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys

435 440 445

Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu

450 455 460

Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu

465 470 475 480

Pro Pro Arg

<210> 163

<211> 1452

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> RD-21530CARDNALxH

<400> 163

atggcactcc ccgtaactgc tctgctgctg ccgttggcat tgctcctgca cgccgcacgc 60

ccggaaatag tgatgacgca gtctccagcc accctgtctg tgtctccagg ggaaagagcc 120

accctctcct gcagggccag tcagagtgtt agcagcaact tagcctggta ccagcagaaa 180

cctggccagg ctcccaggct cctcatctat agcgcatcca ccagggccac tggtatccca 240

gccaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gagttcactc tcaccatcag cagcctgcag 300

tctgaagatt ttgcagttta ttactgtcag cagcaccacg tctggcctct cacttttggc 360

ggagggacca aggttgagat caaacggggg tctacatccg gctccgggaa gcccggaagt 420

ggcgaaggta gtacaaaggg gcaggtgcag ctggtggagt ctgggggagg cgtggtccag 480

cctgggaggt ccctgagact ctcctgtgca gcgtctggat tcaccttcag tagctatggc 540

atgcactggg tccgccaggc tccaggcaag gggctggagt gggtggcagt tatatcgtat 600

gatggaagta ataaatacta tgcagactcc gtgaagggcc gattcaccat ctccagagac 660

aattccaaga acacgctgta tctgcaaatg aacagcctga gagccgagga cacggcggtg 720

tactactgcg tcaaggggcc gttgcaggag ccgccatacg attatggaat ggacgtatgg 780

ggccagggaa caactgtcac cgtctcctca gccgctgccc ttgataatga aaagtcaaac 840

ggaacaatca ttcacgtgaa gggcaagcac ctctgtccgt cacccttgtt ccctggtcca 900

tccaagccat tctgggtgtt ggtcgtagtg ggtggagtcc tcgcttgtta ctctctgctc 960

gtcaccgtgg cttttataat cttctgggtt agatccaaaa gaagccgcct gctccatagc 1020

gattacatga atatgactcc acgccgccct ggccccacaa ggaaacacta ccagccttac 1080

gcaccaccta gagatttcgc tgcctatcgg agcagggtga agttttccag atctgcagat 1140

gcaccagcgt atcagcaggg ccagaaccaa ctgtataacg agctcaacct gggacgcagg 1200

gaagagtatg acgttttgga caagcgcaga ggacgggacc ctgagatggg tggcaaacca 1260

agacgaaaaa acccccagga gggtctctat aatgagctgc agaaggataa gatggctgaa 1320

gcctattctg aaataggcat gaaaggagag cggagaaggg gaaaagggca cgacggtttg 1380

taccagggac tcagcactgc tacgaaggat acttatgacg ctctccacat gcaagccctg 1440

ccacctaggt aa 1452

<210> 164

<211> 483

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> RD-21530CARLxH

<400> 164

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu

20 25 30

Ser Val Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln

35 40 45

Ser Val Ser Ser Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala

50 55 60

Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro

65 70 75 80

Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile

85 90 95

Ser Ser Leu Gln Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His

100 105 110

His Val Trp Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

115 120 125

Arg Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser

130 135 140

Thr Lys Gly Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln

145 150 155 160

Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe

165 170 175

Ser Ser Tyr Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu

180 185 190

Glu Trp Val Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala

195 200 205

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn

210 215 220

Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val

225 230 235 240

Tyr Tyr Cys Val Lys Gly Pro Leu Gln Glu Pro Pro Tyr Asp Tyr Gly

245 250 255

Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ala

260 265 270

Ala Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly

275 280 285

Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe

290 295 300

Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu

305 310 315 320

Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg

325 330 335

Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro

340 345 350

Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala

355 360 365

Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr

370 375 380

Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg

385 390 395 400

Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met

405 410 415

Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu

420 425 430

Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys

435 440 445

Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu

450 455 460

Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu

465 470 475 480

Pro Pro Arg

<210> 165

<211> 1440

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 165

atggcactcc ccgtaactgc tctgctgctg ccgttggcat tgctcctgca cgccgcacgc 60

ccgcaggtcc aactgcaaga aagcggaccc ggactggtga agccttctga gacacttagt 120

ctgacgtgca cggtcagtgg cggctccatc tcctcctatt attggtcatg gatacgacaa 180

cccccaggta agggcctgga atggattggc tatatctact attcaggaag cacgaactac 240

aatcccagcc tgaagtcccg agtgacaatt tcagtagata ccagtaaaaa ccagttcagt 300

cttaaactgt caagcgtgac agctgccgac accgctgtgt attactgcgt ctcactggtg 360

tattgtggag gggattgtta tagcgggttc gattattggg gacagggaac cctggtgact 420

gtatcttccg gcggcggcgg ctcagggggt ggcggtagtg gcggtggggg ttccgatatt 480

caactgacac aatcccccag ctcactcagc gccagcgtgg gggacagggt tagctttacc 540

tgtcaagcct ctcaggatat aaataacttt ctgaactggt atcaacagaa gcctgggaag 600

gcgcccaaac tcctgatcta tgatgcgtcc aacctggaaa ctggcgtgcc ttcacgcttt 660

agcggctctg gcagtggtac agacttcact tttaccatct cttcacttca gccggaggac 720

atcgccacat attactgtca acagtacgga aacttgccct ttacttttgg aggcggcacc 780

aaagttgaaa tcaaaagggc cgctgccctg gataacgaaa agagcaatgg gactataata 840

catgttaaag gaaaacacct gtgtccatct cccctgttcc ctggaccgtc aaagccattt 900

tgggtgctcg tggttgtcgg tggcgttctc gcctgttata gcttgctggt gacagtagcc 960

ttcattatct tttgggtgag atccaaaaga agccgcctgc tccatagcga ttacatgaat 1020

atgactccac gccgccctgg ccccacaagg aaacactacc agccttacgc accacctaga 1080

gatttcgctg cctatcggag cagggtgaag ttttccagat ctgcagatgc accagcgtat 1140

cagcagggcc agaaccaact gtataacgag ctcaacctgg gacgcaggga agagtatgac 1200

gttttggaca agcgcagagg acgggaccct gagatgggtg gcaaaccaag acgaaaaaac 1260

ccccaggagg gtctctataa tgagctgcag aaggataaga tggctgaagc ctattctgaa 1320

ataggcatga aaggagagcg gagaagggga aaagggcacg acggtttgta ccagggactc 1380

agcactgcta cgaaggatac ttatgacgct ctccacatgc aagccctgcc acctaggtaa 1440

<210> 166

<211> 479

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 166

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu

20 25 30

Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly

35 40 45

Ser Ile Ser Ser Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys

50 55 60

Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr

65 70 75 80

Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys

85 90 95

Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala

100 105 110

Val Tyr Tyr Cys Val Ser Leu Val Tyr Cys Gly Gly Asp Cys Tyr Ser

115 120 125

Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly

130 135 140

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile

145 150 155 160

Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg

165 170 175

Val Ser Phe Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Asn Asn Phe Leu Asn

180 185 190

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp

195 200 205

Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly

210 215 220

Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp

225 230 235 240

Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Asn Leu Pro Phe Thr Phe

245 250 255

Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ala Ala Ala Leu Asp Asn

260 265 270

Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys

275 280 285

Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val

290 295 300

Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala

305 310 315 320

Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser

325 330 335

Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His

340 345 350

Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg

355 360 365

Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln

370 375 380

Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp

385 390 395 400

Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro

405 410 415

Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp

420 425 430

Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg

435 440 445

Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr

450 455 460

Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

465 470 475

<210> 167

<211> 1374

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 167

caggtccaac tgcaagaaag cggacccgga ctggtgaagc cttctgagac acttagtctg 60

acgtgcacgg tcagtggcgg ctccatctcc tcctattatt ggtcatggat acgacaaccc 120

ccaggtaagg gcctggaatg gattggctat atctactatt caggaagcac gaactacaat 180

cccagcctga agtcccgagt gacaatttca gtagatacca gtaaaaacca gttcagtctt 240

aaactgtcaa gcgtgacagc tgccgacacc gctgtgtatt actgcgtctc actggtgtat 300

tgtggagggg attgttatag cgggttcgat tattggggac agggaaccct ggtgactgta 360

tcttccggcg gcggcggctc agggggtggc ggtagtggcg gtgggggttc cgatattcaa 420

ctgacacaat cccccagctc actcagcgcc agcgtggggg acagggttag ctttacctgt 480

caagcctctc aggatataaa taactttctg aactggtatc aacagaagcc tgggaaggcg 540

cccaaactcc tgatctatga tgcgtccaac ctggaaactg gcgtgccttc acgctttagc 600

ggctctggca gtggtacaga cttcactttt accatctctt cacttcagcc ggaggacatc 660

gccacatatt actgtcaaca gtacggaaac ttgcccttta cttttggagg cggcaccaaa 720

gttgaaatca aaagggccgc tgccctggat aacgaaaaga gcaatgggac tataatacat 780

gttaaaggaa aacacctgtg tccatctccc ctgttccctg gaccgtcaaa gccattttgg 840

gtgctcgtgg ttgtcggtgg cgttctcgcc tgttatagct tgctggtgac agtagccttc 900

attatctttt gggtgagatc caaaagaagc cgcctgctcc atagcgatta catgaatatg 960

actccacgcc gccctggccc cacaaggaaa cactaccagc cttacgcacc acctagagat 1020

ttcgctgcct atcggagcag ggtgaagttt tccagatctg cagatgcacc agcgtatcag 1080

cagggccaga accaactgta taacgagctc aacctgggac gcagggaaga gtatgacgtt 1140

ttggacaagc gcagaggacg ggaccctgag atgggtggca aaccaagacg aaaaaacccc 1200

caggagggtc tctataatga gctgcagaag gataagatgg ctgaagccta ttctgaaata 1260

ggcatgaaag gagagcggag aaggggaaaa gggcacgacg gtttgtacca gggactcagc 1320

actgctacga aggatactta tgacgctctc cacatgcaag ccctgccacc tagg 1374

<210> 168

<211> 458

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 168

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val

85 90 95

Ser Leu Val Tyr Cys Gly Gly Asp Cys Tyr Ser Gly Phe Asp Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

115 120 125

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser

130 135 140

Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Ser Phe Thr Cys

145 150 155 160

Gln Ala Ser Gln Asp Ile Asn Asn Phe Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys

165 170 175

Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu

180 185 190

Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe

195 200 205

Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr

210 215 220

Cys Gln Gln Tyr Gly Asn Leu Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys

225 230 235 240

Val Glu Ile Lys Arg Ala Ala Ala Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly

245 250 255

Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe

260 265 270

Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val

275 280 285

Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp

290 295 300

Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met

305 310 315 320

Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala

325 330 335

Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg

340 345 350

Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn

355 360 365

Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg

370 375 380

Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro

385 390 395 400

Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala

405 410 415

Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His

420 425 430

Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp

435 440 445

Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

450 455

<210> 169

<211> 1467

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 169

atggcactcc ccgtaactgc tctgctgctg ccgttggcat tgctcctgca cgccgcacgc 60

ccgcaggtgc agctgcagga atccggaccg gggctggtga agcccagcga gactctgagt 120

ctcacgtgta cagtttctgg aggtagcatt agctcctact attggtcatg gataaggcag 180

ccccccggga agggattgga atggatcggc tatatttact acagtgggag caccaattac 240

aacccctcac tgaagtctag agttacaatc agcgttgaca cctcaaagaa tcagttcagt 300

ttgaaattgt ctagcgtcac agcagctgat acagccgtct attattgtgt ttctctggtc 360

tattgcggtg gggattgtta cagtggcttt gactattggg ggcagggtac tctggttaca 420

gtttcttccg gggggggagg ctctgggggc ggaggctcag gtggtggagg cagcgacatc 480

cagttgacac agagcccgag ttccttgtcc gcctccgtcg gggatagagt gtcatttacc 540

tgtcaggcct ctcaggatat taataacttt ctgaattggt atcagcaaaa gcccggaaag 600

gcacccaagc tgttgattta cgacgccagt aacctggaga caggcgtgcc ctcccggttt 660

agtggtagcg gaagcggtac ggattttacc tttactatca gctctctcca acccgaagac 720

attgcaacct actattgtca acaatatgga aacctgcctt ttacatttgg cggcggcacc 780

aaggtggaga ttaagcgggc ggcagctatt gaggtgatgt atccaccgcc ttacctggat 840

aacgaaaaga gtaacggtac catcattcac gtgaaaggta aacacctgtg tccttctccc 900

ctcttccccg ggccatcaaa gcccttctgg gttcttgtgg tcgtgggagg cgtgcttgct 960

tgttattctc tgctcgttac cgtggcgttt atcatttttt gggttagatc caaaagaagc 1020

cgcctgctcc atagcgatta catgaatatg actccacgcc gccctggccc cacaaggaaa 1080

cactaccagc cttacgcacc acctagagat ttcgctgcct atcggagcag ggtgaagttt 1140

tccagatctg cagatgcacc agcgtatcag cagggccaga accaactgta taacgagctc 1200

aacctgggac gcagggaaga gtatgacgtt ttggacaagc gcagaggacg ggaccctgag 1260

atgggtggca aaccaagacg aaaaaacccc caggagggtc tctataatga gctgcagaag 1320

gataagatgg ctgaagccta ttctgaaata ggcatgaaag gagagcggag aaggggaaaa 1380

gggcacgacg gtttgtacca gggactcagc actgctacga aggatactta tgacgctctc 1440

cacatgcaag ccctgccacc taggtaa 1467

<210> 170

<211> 488

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 170

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu

20 25 30

Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly

35 40 45

Ser Ile Ser Ser Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys

50 55 60

Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr

65 70 75 80

Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys

85 90 95

Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala

100 105 110

Val Tyr Tyr Cys Val Ser Leu Val Tyr Cys Gly Gly Asp Cys Tyr Ser

115 120 125

Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly

130 135 140

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile

145 150 155 160

Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg

165 170 175

Val Ser Phe Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Asn Asn Phe Leu Asn

180 185 190

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp

195 200 205

Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly

210 215 220

Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp

225 230 235 240

Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Asn Leu Pro Phe Thr Phe

245 250 255

Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ala Ala Ala Ile Glu Val

260 265 270

Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile

275 280 285

Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly

290 295 300

Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala

305 310 315 320

Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg

325 330 335

Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro

340 345 350

Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro

355 360 365

Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala

370 375 380

Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu

385 390 395 400

Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly

405 410 415

Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu

420 425 430

Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser

435 440 445

Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly

450 455 460

Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu

465 470 475 480

His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

485

<210> 171

<211> 1401

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 171

caggtgcagc tgcaggaatc cggaccgggg ctggtgaagc ccagcgagac tctgagtctc 60

acgtgtacag tttctggagg tagcattagc tcctactatt ggtcatggat aaggcagccc 120

cccgggaagg gattggaatg gatcggctat atttactaca gtgggagcac caattacaac 180

ccctcactga agtctagagt tacaatcagc gttgacacct caaagaatca gttcagtttg 240

aaattgtcta gcgtcacagc agctgataca gccgtctatt attgtgtttc tctggtctat 300

tgcggtgggg attgttacag tggctttgac tattgggggc agggtactct ggttacagtt 360

tcttccgggg ggggaggctc tgggggcgga ggctcaggtg gtggaggcag cgacatccag 420

ttgacacaga gcccgagttc cttgtccgcc tccgtcgggg atagagtgtc atttacctgt 480

caggcctctc aggatattaa taactttctg aattggtatc agcaaaagcc cggaaaggca 540

cccaagctgt tgatttacga cgccagtaac ctggagacag gcgtgccctc ccggtttagt 600

ggtagcggaa gcggtacgga ttttaccttt actatcagct ctctccaacc cgaagacatt 660

gcaacctact attgtcaaca atatggaaac ctgcctttta catttggcgg cggcaccaag 720

gtggagatta agcgggcggc agctattgag gtgatgtatc caccgcctta cctggataac 780

gaaaagagta acggtaccat cattcacgtg aaaggtaaac acctgtgtcc ttctcccctc 840

ttccccgggc catcaaagcc cttctgggtt cttgtggtcg tgggaggcgt gcttgcttgt 900

tattctctgc tcgttaccgt ggcgtttatc attttttggg ttagatccaa aagaagccgc 960

ctgctccata gcgattacat gaatatgact ccacgccgcc ctggccccac aaggaaacac 1020

taccagcctt acgcaccacc tagagatttc gctgcctatc ggagcagggt gaagttttcc 1080

agatctgcag atgcaccagc gtatcagcag ggccagaacc aactgtataa cgagctcaac 1140

ctgggacgca gggaagagta tgacgttttg gacaagcgca gaggacggga ccctgagatg 1200

ggtggcaaac caagacgaaa aaacccccag gagggtctct ataatgagct gcagaaggat 1260

aagatggctg aagcctattc tgaaataggc atgaaaggag agcggagaag gggaaaaggg 1320

cacgacggtt tgtaccaggg actcagcact gctacgaagg atacttatga cgctctccac 1380

atgcaagccc tgccacctag g 1401

<210> 172

<211> 467

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 172

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val

85 90 95

Ser Leu Val Tyr Cys Gly Gly Asp Cys Tyr Ser Gly Phe Asp Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

115 120 125

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser

130 135 140

Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Ser Phe Thr Cys

145 150 155 160

Gln Ala Ser Gln Asp Ile Asn Asn Phe Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys

165 170 175

Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu

180 185 190

Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe

195 200 205

Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr

210 215 220

Cys Gln Gln Tyr Gly Asn Leu Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys

225 230 235 240

Val Glu Ile Lys Arg Ala Ala Ala Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro

245 250 255

Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly

260 265 270

Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe

275 280 285

Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu

290 295 300

Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg

305 310 315 320

Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro

325 330 335

Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala

340 345 350

Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr

355 360 365

Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg

370 375 380

Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met

385 390 395 400

Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu

405 410 415

Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys

420 425 430

Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu

435 440 445

Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu

450 455 460

Pro Pro Arg

465

<210> 173

<211> 1548

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 173

atggcactcc ccgtaactgc tctgctgctg ccgttggcat tgctcctgca cgccgcacgc 60

ccgcaggtgc aattgcaaga gtccggcccc ggactcgtta aacccagtga gacgcttagc 120

ctgacctgta ccgtctcagg gggcagcatc tcctcttatt actggagctg gatcaggcag 180

cctccaggaa aaggccttga atggattggg tacatctact actctggctc aacaaattat 240

aatccatccc tgaagtcccg cgtgactatc tctgtggaca ccagcaagaa tcagttttca 300

ctgaagttgt ctagtgttac cgcggccgac accgccgtat actactgtgt gtctcttgtg 360

tactgtggcg gcgactgcta ttccgggttc gactactggg gccaagggac tctggtaacc 420

gtgtcctcag gcggcggcgg gtcaggagga ggcggcagtg gaggtggcgg ctccgacatc 480

cagctgacac aatcaccatc ttccctttca gcttcagtcg gggacagagt gtccttcaca 540

tgccaggcca gccaggatat caataacttc ctgaactggt accaacagaa acccggaaag 600

gctccaaagc tcctgatcta tgatgcttcc aacctggaga ccggcgtgcc ctccaggttc 660

agtggttcag gatcaggcac tgactttacg ttcaccatat ccagtcttca gcccgaagac 720

attgcaacct attactgcca acaatacggg aaccttccct ttacattcgg aggcggcacc 780

aaggtggaaa tcaaaagggc tgcagcattg agcaactcaa taatgtattt tagtcacttt 840

gtaccagtgt tcttgccggc taagcctact accacacccg ctccacggcc acctacccca 900

gctcctacca tcgcttcaca gcctctgtcc ctgcgcccag aggcttgccg accggccgca 960

gggggcgctg ttcataccag aggactggat ttcgcctgcg atatctatat ctgggcaccc 1020

ctggccggaa cctgcggcgt actcctgctg tccctggtca tcacgctcta ttgtaatcac 1080

aggaacagat ccaaaagaag ccgcctgctc catagcgatt acatgaatat gactccacgc 1140

cgccctggcc ccacaaggaa acactaccag ccttacgcac cacctagaga tttcgctgcc 1200

tatcggagca gggtgaagtt ttccagatct gcagatgcac cagcgtatca gcagggccag 1260

aaccaactgt ataacgagct caacctggga cgcagggaag agtatgacgt tttggacaag 1320

cgcagaggac gggaccctga gatgggtggc aaaccaagac gaaaaaaccc ccaggagggt 1380

ctctataatg agctgcagaa ggataagatg gctgaagcct attctgaaat aggcatgaaa 1440

ggagagcgga gaaggggaaa agggcacgac ggtttgtacc agggactcag cactgctacg 1500

aaggatactt atgacgctct ccacatgcaa gccctgccac ctaggtaa 1548

<210> 174

<211> 515

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 174

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu

20 25 30

Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly

35 40 45

Ser Ile Ser Ser Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys

50 55 60

Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr

65 70 75 80

Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys

85 90 95

Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala

100 105 110

Val Tyr Tyr Cys Val Ser Leu Val Tyr Cys Gly Gly Asp Cys Tyr Ser

115 120 125

Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly

130 135 140

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile

145 150 155 160

Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg

165 170 175

Val Ser Phe Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Asn Asn Phe Leu Asn

180 185 190

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp

195 200 205

Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly

210 215 220

Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp

225 230 235 240

Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Asn Leu Pro Phe Thr Phe

245 250 255

Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ala Ala Ala Leu Ser Asn

260 265 270

Ser Ile Met Tyr Phe Ser His Phe Val Pro Val Phe Leu Pro Ala Lys

275 280 285

Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile

290 295 300

Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala

305 310 315 320

Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr

325 330 335

Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu

340 345 350

Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn His Arg Asn Arg Ser Lys Arg Ser Arg

355 360 365

Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro

370 375 380

Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala

385 390 395 400

Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr

405 410 415

Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg

420 425 430

Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met

435 440 445

Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu

450 455 460

Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys

465 470 475 480

Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu

485 490 495

Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu

500 505 510

Pro Pro Arg

515

<210> 175

<211> 1482

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 175

caggtgcaat tgcaagagtc cggccccgga ctcgttaaac ccagtgagac gcttagcctg 60

acctgtaccg tctcaggggg cagcatctcc tcttattact ggagctggat caggcagcct 120

ccaggaaaag gccttgaatg gattgggtac atctactact ctggctcaac aaattataat 180

ccatccctga agtcccgcgt gactatctct gtggacacca gcaagaatca gttttcactg 240

aagttgtcta gtgttaccgc ggccgacacc gccgtatact actgtgtgtc tcttgtgtac 300

tgtggcggcg actgctattc cgggttcgac tactggggcc aagggactct ggtaaccgtg 360

tcctcaggcg gcggcgggtc aggaggaggc ggcagtggag gtggcggctc cgacatccag 420

ctgacacaat caccatcttc cctttcagct tcagtcgggg acagagtgtc cttcacatgc 480

caggccagcc aggatatcaa taacttcctg aactggtacc aacagaaacc cggaaaggct 540

ccaaagctcc tgatctatga tgcttccaac ctggagaccg gcgtgccctc caggttcagt 600

ggttcaggat caggcactga ctttacgttc accatatcca gtcttcagcc cgaagacatt 660

gcaacctatt actgccaaca atacgggaac cttcccttta cattcggagg cggcaccaag 720

gtggaaatca aaagggctgc agcattgagc aactcaataa tgtattttag tcactttgta 780

ccagtgttct tgccggctaa gcctactacc acacccgctc cacggccacc taccccagct 840

cctaccatcg cttcacagcc tctgtccctg cgcccagagg cttgccgacc ggccgcaggg 900

ggcgctgttc ataccagagg actggatttc gcctgcgata tctatatctg ggcacccctg 960

gccggaacct gcggcgtact cctgctgtcc ctggtcatca cgctctattg taatcacagg 1020

aacagatcca aaagaagccg cctgctccat agcgattaca tgaatatgac tccacgccgc 1080

cctggcccca caaggaaaca ctaccagcct tacgcaccac ctagagattt cgctgcctat 1140

cggagcaggg tgaagttttc cagatctgca gatgcaccag cgtatcagca gggccagaac 1200

caactgtata acgagctcaa cctgggacgc agggaagagt atgacgtttt ggacaagcgc 1260

agaggacggg accctgagat gggtggcaaa ccaagacgaa aaaaccccca ggagggtctc 1320

tataatgagc tgcagaagga taagatggct gaagcctatt ctgaaatagg catgaaagga 1380

gagcggagaa ggggaaaagg gcacgacggt ttgtaccagg gactcagcac tgctacgaag 1440

gatacttatg acgctctcca catgcaagcc ctgccaccta gg 1482

<210> 176

<211> 494

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 176

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val

85 90 95

Ser Leu Val Tyr Cys Gly Gly Asp Cys Tyr Ser Gly Phe Asp Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

115 120 125

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser

130 135 140

Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Ser Phe Thr Cys

145 150 155 160

Gln Ala Ser Gln Asp Ile Asn Asn Phe Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys

165 170 175

Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu

180 185 190

Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe

195 200 205

Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr

210 215 220

Cys Gln Gln Tyr Gly Asn Leu Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys

225 230 235 240

Val Glu Ile Lys Arg Ala Ala Ala Leu Ser Asn Ser Ile Met Tyr Phe

245 250 255

Ser His Phe Val Pro Val Phe Leu Pro Ala Lys Pro Thr Thr Thr Pro

260 265 270

Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu

275 280 285

Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His

290 295 300

Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu

305 310 315 320

Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr

325 330 335

Cys Asn His Arg Asn Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp

340 345 350

Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr

355 360 365

Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val

370 375 380

Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn

385 390 395 400

Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val

405 410 415

Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg

420 425 430

Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys

435 440 445

Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg

450 455 460

Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys

465 470 475 480

Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

485 490

<210> 177

<211> 1440

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 177

atggcactcc ccgtaactgc tctgctgctg ccgttggcat tgctcctgca cgccgcacgc 60

ccggatatcc agctcacgca atccccctca agcttgagtg cctccgtggg cgaccgggtg 120

tccttcacat gtcaggcaag ccaagacata aataatttcc tgaattggta ccaacaaaaa 180

cccggcaagg ctcccaaact cctgatttat gatgcctcca atctggagac cggggtccct 240

tctagattca gcggaagtgg cagcggcaca gactttacat ttactatctc ttctctgcaa 300

ccagaggaca tcgccacata ctattgccag caatacggca atctgccctt caccttcgga 360

ggcggaacca aggtagaaat taaaaggggc ggtggaggct ccggaggggg gggctctggc 420

ggagggggct cccaagtaca attgcaggag tcagggcctg gactcgtgaa gccttcagaa 480

actttgtcac tgacatgtac agtgtccggc ggaagcattt ccagttacta ttggtcctgg 540

attagacagc cacccggcaa aggactggaa tggattggat atatctacta ctctggatct 600

acaaactata atcccagcct caaatccagg gtcactatta gtgtggatac atcaaagaat 660

cagttctcct tgaagctgag ctcagtcact gctgccgaca ccgcagtgta ctattgtgtg 720

agcctggtct actgcggcgg agattgctac agcggtttcg attactgggg ccagggcacc 780

ctggttaccg ttagttccgc ggctgctctt gataacgaga agtccaacgg tacgattatc 840

cacgttaagg gtaagcacct ttgccctagc ccgctgttcc caggccccag taagcccttt 900

tgggtcctcg ttgtggtagg tggggtactc gcctgctact ccctgctcgt cactgtcgca 960

ttcatcatct tctgggtcag atccaaaaga agccgcctgc tccatagcga ttacatgaat 1020

atgactccac gccgccctgg ccccacaagg aaacactacc agccttacgc accacctaga 1080

gatttcgctg cctatcggag cagggtgaag ttttccagat ctgcagatgc accagcgtat 1140

cagcagggcc agaaccaact gtataacgag ctcaacctgg gacgcaggga agagtatgac 1200

gttttggaca agcgcagagg acgggaccct gagatgggtg gcaaaccaag acgaaaaaac 1260

ccccaggagg gtctctataa tgagctgcag aaggataaga tggctgaagc ctattctgaa 1320

ataggcatga aaggagagcg gagaagggga aaagggcacg acggtttgta ccagggactc 1380

agcactgcta cgaaggatac ttatgacgct ctccacatgc aagccctgcc acctaggtaa 1440

<210> 178

<211> 479

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 178

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu

20 25 30

Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Ser Phe Thr Cys Gln Ala Ser Gln

35 40 45

Asp Ile Asn Asn Phe Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala

50 55 60

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro

65 70 75 80

Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile

85 90 95

Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr

100 105 110

Gly Asn Leu Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

115 120 125

Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

130 135 140

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

145 150 155 160

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr

165 170 175

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

180 185 190

Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

195 200 205

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

210 215 220

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val

225 230 235 240

Ser Leu Val Tyr Cys Gly Gly Asp Cys Tyr Ser Gly Phe Asp Tyr Trp

245 250 255

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Leu Asp Asn

260 265 270

Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys

275 280 285

Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val

290 295 300

Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala

305 310 315 320

Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser

325 330 335

Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His

340 345 350

Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg

355 360 365

Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln

370 375 380

Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp

385 390 395 400

Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro

405 410 415

Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp

420 425 430

Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg

435 440 445

Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr

450 455 460

Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

465 470 475

<210> 179

<211> 1374

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 179

gatatccagc tcacgcaatc cccctcaagc ttgagtgcct ccgtgggcga ccgggtgtcc 60

ttcacatgtc aggcaagcca agacataaat aatttcctga attggtacca acaaaaaccc 120

ggcaaggctc ccaaactcct gatttatgat gcctccaatc tggagaccgg ggtcccttct 180

agattcagcg gaagtggcag cggcacagac tttacattta ctatctcttc tctgcaacca 240

gaggacatcg ccacatacta ttgccagcaa tacggcaatc tgcccttcac cttcggaggc 300

ggaaccaagg tagaaattaa aaggggcggt ggaggctccg gagggggggg ctctggcgga 360

gggggctccc aagtacaatt gcaggagtca gggcctggac tcgtgaagcc ttcagaaact 420

ttgtcactga catgtacagt gtccggcgga agcatttcca gttactattg gtcctggatt 480

agacagccac ccggcaaagg actggaatgg attggatata tctactactc tggatctaca 540

aactataatc ccagcctcaa atccagggtc actattagtg tggatacatc aaagaatcag 600

ttctccttga agctgagctc agtcactgct gccgacaccg cagtgtacta ttgtgtgagc 660

ctggtctact gcggcggaga ttgctacagc ggtttcgatt actggggcca gggcaccctg 720

gttaccgtta gttccgcggc tgctcttgat aacgagaagt ccaacggtac gattatccac 780

gttaagggta agcacctttg ccctagcccg ctgttcccag gccccagtaa gcccttttgg 840

gtcctcgttg tggtaggtgg ggtactcgcc tgctactccc tgctcgtcac tgtcgcattc 900

atcatcttct gggtcagatc caaaagaagc cgcctgctcc atagcgatta catgaatatg 960

actccacgcc gccctggccc cacaaggaaa cactaccagc cttacgcacc acctagagat 1020

ttcgctgcct atcggagcag ggtgaagttt tccagatctg cagatgcacc agcgtatcag 1080

cagggccaga accaactgta taacgagctc aacctgggac gcagggaaga gtatgacgtt 1140

ttggacaagc gcagaggacg ggaccctgag atgggtggca aaccaagacg aaaaaacccc 1200

caggagggtc tctataatga gctgcagaag gataagatgg ctgaagccta ttctgaaata 1260

ggcatgaaag gagagcggag aaggggaaaa gggcacgacg gtttgtacca gggactcagc 1320

actgctacga aggatactta tgacgctctc cacatgcaag ccctgccacc tagg 1374

<210> 180

<211> 458

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 180

Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Ser Phe Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Asn Asn Phe

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Asn Leu Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Gly Gly Gly Gly

100 105 110

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln

115 120 125

Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr

130 135 140

Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile

145 150 155 160

Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr

165 170 175

Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile

180 185 190

Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val

195 200 205

Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Ser Leu Val Tyr Cys

210 215 220

Gly Gly Asp Cys Tyr Ser Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

225 230 235 240

Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly

245 250 255

Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe

260 265 270

Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val

275 280 285

Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp

290 295 300

Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met

305 310 315 320

Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala

325 330 335

Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg

340 345 350

Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn

355 360 365

Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg

370 375 380

Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro

385 390 395 400

Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala

405 410 415

Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His

420 425 430

Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp

435 440 445

Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

450 455

<210> 181

<211> 1467

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 181

atggcactcc ccgtaactgc tctgctgctg ccgttggcat tgctcctgca cgccgcacgc 60

ccggatatcc agctgaccca gtctccatcc tctttgagtg cctccgtggg tgaccgcgtc 120

tctttcactt gccaagccag ccaagacatc aacaactttc tgaattggta ccagcagaaa 180

ccaggcaaag caccaaagct cctcatctac gacgcctcca acctggaaac cggggtgccc 240

agcaggttta gcgggagcgg ttctggcacg gattttacgt tcaccatctc ctctctgcag 300

cccgaggata tagctactta ttactgtcag cagtacggga atctgccatt tacttttggg 360

ggtggaacta aggtggaaat caaaaggggc ggcgggggaa gcgggggcgg gggctcaggt 420

ggcggaggga gccaggtgca actccaggaa agtggcccag gattggtgaa gcccagcgag 480

accctttccc ttacttgtac tgttagcgga ggcagcataa gcagctacta ttggtcctgg 540

atcagacagc caccagggaa agggcttgaa tggattggct acatttacta ttccgggtcc 600

accaactaca acccatccct caagtcccgc gtgacaattt ccgtcgacac aagcaagaac 660

cagttctccc tgaaacttag tagcgtcact gctgcagata cagcagtgta ctattgtgtc 720

agccttgtct actgtggcgg cgactgctac agtggctttg attactgggg acagggcacg 780

ctcgtgacag tgtccagcgc tgcggctatc gaggtaatgt atccgccacc gtatctggac 840

aacgagaagt ctaatgggac aatcattcac gtgaagggga agcacctgtg tccatccccc 900

ctgtttccgg gtcccagtaa acccttctgg gtgcttgttg tcgttggcgg ggtgctggcc 960

tgctattccc tgctggtgac cgtcgcgttt attattttct gggttagatc caaaagaagc 1020

cgcctgctcc atagcgatta catgaatatg actccacgcc gccctggccc cacaaggaaa 1080

cactaccagc cttacgcacc acctagagat ttcgctgcct atcggagcag ggtgaagttt 1140

tccagatctg cagatgcacc agcgtatcag cagggccaga accaactgta taacgagctc 1200

aacctgggac gcagggaaga gtatgacgtt ttggacaagc gcagaggacg ggaccctgag 1260

atgggtggca aaccaagacg aaaaaacccc caggagggtc tctataatga gctgcagaag 1320

gataagatgg ctgaagccta ttctgaaata ggcatgaaag gagagcggag aaggggaaaa 1380

gggcacgacg gtttgtacca gggactcagc actgctacga aggatactta tgacgctctc 1440

cacatgcaag ccctgccacc taggtaa 1467

<210> 182

<211> 488

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 182

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu

20 25 30

Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Ser Phe Thr Cys Gln Ala Ser Gln

35 40 45

Asp Ile Asn Asn Phe Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala

50 55 60

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro

65 70 75 80

Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile

85 90 95

Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr

100 105 110

Gly Asn Leu Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

115 120 125

Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

130 135 140

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

145 150 155 160

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr

165 170 175

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

180 185 190

Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

195 200 205

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

210 215 220

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val

225 230 235 240

Ser Leu Val Tyr Cys Gly Gly Asp Cys Tyr Ser Gly Phe Asp Tyr Trp

245 250 255

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Ile Glu Val

260 265 270

Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile

275 280 285

Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly

290 295 300

Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala

305 310 315 320

Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg

325 330 335

Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro

340 345 350

Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro

355 360 365

Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala

370 375 380

Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu

385 390 395 400

Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly

405 410 415

Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu

420 425 430

Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser

435 440 445

Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly

450 455 460

Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu

465 470 475 480

His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

485

<210> 183

<211> 1401

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 183

gatatccagc tgacccagtc tccatcctct ttgagtgcct ccgtgggtga ccgcgtctct 60

ttcacttgcc aagccagcca agacatcaac aactttctga attggtacca gcagaaacca 120

ggcaaagcac caaagctcct catctacgac gcctccaacc tggaaaccgg ggtgcccagc 180

aggtttagcg ggagcggttc tggcacggat tttacgttca ccatctcctc tctgcagccc 240

gaggatatag ctacttatta ctgtcagcag tacgggaatc tgccatttac ttttgggggt 300

ggaactaagg tggaaatcaa aaggggcggc gggggaagcg ggggcggggg ctcaggtggc 360

ggagggagcc aggtgcaact ccaggaaagt ggcccaggat tggtgaagcc cagcgagacc 420

ctttccctta cttgtactgt tagcggaggc agcataagca gctactattg gtcctggatc 480

agacagccac cagggaaagg gcttgaatgg attggctaca tttactattc cgggtccacc 540

aactacaacc catccctcaa gtcccgcgtg acaatttccg tcgacacaag caagaaccag 600

ttctccctga aacttagtag cgtcactgct gcagatacag cagtgtacta ttgtgtcagc 660

cttgtctact gtggcggcga ctgctacagt ggctttgatt actggggaca gggcacgctc 720

gtgacagtgt ccagcgctgc ggctatcgag gtaatgtatc cgccaccgta tctggacaac 780

gagaagtcta atgggacaat cattcacgtg aaggggaagc acctgtgtcc atcccccctg 840

tttccgggtc ccagtaaacc cttctgggtg cttgttgtcg ttggcggggt gctggcctgc 900

tattccctgc tggtgaccgt cgcgtttatt attttctggg ttagatccaa aagaagccgc 960

ctgctccata gcgattacat gaatatgact ccacgccgcc ctggccccac aaggaaacac 1020

taccagcctt acgcaccacc tagagatttc gctgcctatc ggagcagggt gaagttttcc 1080

agatctgcag atgcaccagc gtatcagcag ggccagaacc aactgtataa cgagctcaac 1140

ctgggacgca gggaagagta tgacgttttg gacaagcgca gaggacggga ccctgagatg 1200

ggtggcaaac caagacgaaa aaacccccag gagggtctct ataatgagct gcagaaggat 1260

aagatggctg aagcctattc tgaaataggc atgaaaggag agcggagaag gggaaaaggg 1320

cacgacggtt tgtaccaggg actcagcact gctacgaagg atacttatga cgctctccac 1380

atgcaagccc tgccacctag g 1401

<210> 184

<211> 467

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 184

Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Ser Phe Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Asn Asn Phe

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Asn Leu Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Gly Gly Gly Gly

100 105 110

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln

115 120 125

Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr

130 135 140

Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile

145 150 155 160

Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr

165 170 175

Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile

180 185 190

Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val

195 200 205

Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Ser Leu Val Tyr Cys

210 215 220

Gly Gly Asp Cys Tyr Ser Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

225 230 235 240

Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro

245 250 255

Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly

260 265 270

Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe

275 280 285

Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu

290 295 300

Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg

305 310 315 320

Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro

325 330 335

Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala

340 345 350

Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr

355 360 365

Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg

370 375 380

Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met

385 390 395 400

Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu

405 410 415

Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys

420 425 430

Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu

435 440 445

Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu

450 455 460

Pro Pro Arg

465

<210> 185

<211> 1548

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 185

atggcactcc ccgtaactgc tctgctgctg ccgttggcat tgctcctgca cgccgcacgc 60

ccggacattc aattgaccca gtcccctagc agtctctcag caagtgtggg agatagggtg 120

tcattcacct gtcaggcttc acaggacatc aacaacttcc tcaattggta tcagcagaag 180

ccagggaagg caccaaagct gctcatatat gacgcttcaa accttgaaac cggagtacct 240

agccgcttca gcggaagcgg atcagggact gacttcactt ttaccatctc ttcactgcag 300

cccgaagaca tcgccacata ctactgccag cagtacggaa acttgccttt tacatttggg 360

ggcggcacca aagtggagat taagcgaggg ggaggcggct caggaggcgg tggctccgga 420

ggcgggggtt cccaggtcca gctccaggaa tccggcccag gtctggttaa gcccagtgaa 480

actttgtccc tcacgtgtac tgtgagcggt ggttcaatct cctcatacta ttggtcttgg 540

atacggcaac ctcctggaaa gggcctcgag tggatcggct atatctacta tagtggctcc 600

actaattaca acccttccct caagtccaga gtcaccattt ccgtggacac atctaagaac 660

cagttcagtc tgaagttgtc cagcgttaca gccgcagaca cagccgttta ttactgtgtg 720

tctcttgttt actgcggggg agactgttat agcggcttcg attactgggg ccagggcacc 780

ttggtcacag tctcttccgc ggccgccctc tctaacagta ttatgtactt ttctcatttt 840

gtacccgtgt tccttcccgc taagccaact actaccccgg ccccacggcc gcctacccct 900

gcacccacaa tagccagtca gcctttgagc ctgagacctg aggcttgtcg gccggctgct 960

gggggtgcag tgcacacacg aggtcttgat tttgcttgcg acatatacat ctgggcccct 1020

ctggccggga cctgtggggt gctgcttctg agcttggtca tcacgctcta ttgcaaccat 1080

cgcaacagat ccaaaagaag ccgcctgctc catagcgatt acatgaatat gactccacgc 1140

cgccctggcc ccacaaggaa acactaccag ccttacgcac cacctagaga tttcgctgcc 1200

tatcggagca gggtgaagtt ttccagatct gcagatgcac cagcgtatca gcagggccag 1260

aaccaactgt ataacgagct caacctggga cgcagggaag agtatgacgt tttggacaag 1320

cgcagaggac gggaccctga gatgggtggc aaaccaagac gaaaaaaccc ccaggagggt 1380

ctctataatg agctgcagaa ggataagatg gctgaagcct attctgaaat aggcatgaaa 1440

ggagagcgga gaaggggaaa agggcacgac ggtttgtacc agggactcag cactgctacg 1500

aaggatactt atgacgctct ccacatgcaa gccctgccac ctaggtaa 1548

<210> 186

<211> 515

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 186

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu

20 25 30

Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Ser Phe Thr Cys Gln Ala Ser Gln

35 40 45

Asp Ile Asn Asn Phe Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala

50 55 60

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro

65 70 75 80

Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile

85 90 95

Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr

100 105 110

Gly Asn Leu Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

115 120 125

Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

130 135 140

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

145 150 155 160

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr

165 170 175

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

180 185 190

Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

195 200 205

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

210 215 220

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val

225 230 235 240

Ser Leu Val Tyr Cys Gly Gly Asp Cys Tyr Ser Gly Phe Asp Tyr Trp

245 250 255

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Leu Ser Asn

260 265 270

Ser Ile Met Tyr Phe Ser His Phe Val Pro Val Phe Leu Pro Ala Lys

275 280 285

Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile

290 295 300

Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala

305 310 315 320

Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr

325 330 335

Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu

340 345 350

Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn His Arg Asn Arg Ser Lys Arg Ser Arg

355 360 365

Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro

370 375 380

Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala

385 390 395 400

Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr

405 410 415

Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg

420 425 430

Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met

435 440 445

Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu

450 455 460

Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys

465 470 475 480

Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu

485 490 495

Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu

500 505 510

Pro Pro Arg

515

<210> 187

<211> 1482

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 187

gacattcaat tgacccagtc ccctagcagt ctctcagcaa gtgtgggaga tagggtgtca 60

ttcacctgtc aggcttcaca ggacatcaac aacttcctca attggtatca gcagaagcca 120

gggaaggcac caaagctgct catatatgac gcttcaaacc ttgaaaccgg agtacctagc 180

cgcttcagcg gaagcggatc agggactgac ttcactttta ccatctcttc actgcagccc 240

gaagacatcg ccacatacta ctgccagcag tacggaaact tgccttttac atttgggggc 300

ggcaccaaag tggagattaa gcgaggggga ggcggctcag gaggcggtgg ctccggaggc 360

gggggttccc aggtccagct ccaggaatcc ggcccaggtc tggttaagcc cagtgaaact 420

ttgtccctca cgtgtactgt gagcggtggt tcaatctcct catactattg gtcttggata 480

cggcaacctc ctggaaaggg cctcgagtgg atcggctata tctactatag tggctccact 540

aattacaacc cttccctcaa gtccagagtc accatttccg tggacacatc taagaaccag 600

ttcagtctga agttgtccag cgttacagcc gcagacacag ccgtttatta ctgtgtgtct 660

cttgtttact gcgggggaga ctgttatagc ggcttcgatt actggggcca gggcaccttg 720

gtcacagtct cttccgcggc cgccctctct aacagtatta tgtacttttc tcattttgta 780

cccgtgttcc ttcccgctaa gccaactact accccggccc cacggccgcc tacccctgca 840

cccacaatag ccagtcagcc tttgagcctg agacctgagg cttgtcggcc ggctgctggg 900

ggtgcagtgc acacacgagg tcttgatttt gcttgcgaca tatacatctg ggcccctctg 960

gccgggacct gtggggtgct gcttctgagc ttggtcatca cgctctattg caaccatcgc 1020

aacagatcca aaagaagccg cctgctccat agcgattaca tgaatatgac tccacgccgc 1080

cctggcccca caaggaaaca ctaccagcct tacgcaccac ctagagattt cgctgcctat 1140

cggagcaggg tgaagttttc cagatctgca gatgcaccag cgtatcagca gggccagaac 1200

caactgtata acgagctcaa cctgggacgc agggaagagt atgacgtttt ggacaagcgc 1260

agaggacggg accctgagat gggtggcaaa ccaagacgaa aaaaccccca ggagggtctc 1320

tataatgagc tgcagaagga taagatggct gaagcctatt ctgaaatagg catgaaagga 1380

gagcggagaa ggggaaaagg gcacgacggt ttgtaccagg gactcagcac tgctacgaag 1440

gatacttatg acgctctcca catgcaagcc ctgccaccta gg 1482

<210> 188

<211> 494

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 188

Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Ser Phe Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Asn Asn Phe

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Asn Leu Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Gly Gly Gly Gly

100 105 110

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln

115 120 125

Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr

130 135 140

Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile

145 150 155 160

Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr

165 170 175

Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile

180 185 190

Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val

195 200 205

Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Ser Leu Val Tyr Cys

210 215 220

Gly Gly Asp Cys Tyr Ser Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

225 230 235 240

Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Leu Ser Asn Ser Ile Met Tyr Phe

245 250 255

Ser His Phe Val Pro Val Phe Leu Pro Ala Lys Pro Thr Thr Thr Pro

260 265 270

Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu

275 280 285

Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His

290 295 300

Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu

305 310 315 320

Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr

325 330 335

Cys Asn His Arg Asn Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp

340 345 350

Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr

355 360 365

Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val

370 375 380

Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn

385 390 395 400

Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val

405 410 415

Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg

420 425 430

Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys

435 440 445

Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg

450 455 460

Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys

465 470 475 480

Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

485 490

<210> 189

<211> 1446

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 189

atggcactcc ccgtaactgc tctgctgctg ccgttggcat tgctcctgca cgccgcacgc 60

ccgcaggtac agctgcagga atctgggccc ggacttgtca agccaagtca gacactttct 120

cttacatgta ccgtgagcgg cggaagtata agcagtggag gcttttactg gtcttggata 180

cggcagcacc caggcaaagg cttggagtgg attggataca ttcatcattc aggatctaca 240

cactataatc catcccttaa gtcccgggtc accattagca ttgatacgtc taagaatctg 300

ttcagtctca ggctgtcctc cgtcactgct gccgacacag ccgtgtacta ctgcgcctcc 360

ttggtttact gcggaggcga ctgttatagc ggctttgatt attgggggca ggggaccctc 420

gtaaccgtga gctctggagg gggtgggagc gggggaggag gttcaggggg gggcggctcc 480

gatatccagc tcactcaaag cccctctagt ctctctgcct cagtggggga tcgggtcagt 540

tttacttgtc aagcttcaca ggatatcaac aacttcctta attggtatca gcagaagcca 600

ggaaaagcac ccaagctgct catctatgat gcctcaaatt tggagacggg tgttcccagt 660

cgattctctg ggtcagggtc cgggaccgac tttacgttta cgatctcctc tctgcagccc 720

gaagacatcg ccacatacta ttgtcaacag tacggcaact tgcctttcac atttgggggc 780

gggactaagg ttgaaatcaa gagggccgct gcactggaca atgagaagtc caacggcacc 840

atcatccacg tgaagggcaa gcacctgtgc cctagtcctc tgttcccagg cccatccaaa 900

cctttttggg ttcttgttgt ggtcgggggg gtgctggcct gctattctct gctggtcacg 960

gtggccttca taattttctg ggttagatcc aaaagaagcc gcctgctcca tagcgattac 1020

atgaatatga ctccacgccg ccctggcccc acaaggaaac actaccagcc ttacgcacca 1080

cctagagatt tcgctgccta tcggagcagg gtgaagtttt ccagatctgc agatgcacca 1140

gcgtatcagc agggccagaa ccaactgtat aacgagctca acctgggacg cagggaagag 1200

tatgacgttt tggacaagcg cagaggacgg gaccctgaga tgggtggcaa accaagacga 1260

aaaaaccccc aggagggtct ctataatgag ctgcagaagg ataagatggc tgaagcctat 1320

tctgaaatag gcatgaaagg agagcggaga aggggaaaag ggcacgacgg tttgtaccag 1380

ggactcagca ctgctacgaa ggatacttat gacgctctcc acatgcaagc cctgccacct 1440

aggtaa 1446

<210> 190

<211> 481

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 190

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu

20 25 30

Val Lys Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly

35 40 45

Ser Ile Ser Ser Gly Gly Phe Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro

50 55 60

Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile His His Ser Gly Ser Thr

65 70 75 80

His Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Ile Asp Thr

85 90 95

Ser Lys Asn Leu Phe Ser Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp

100 105 110

Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ser Leu Val Tyr Cys Gly Gly Asp Cys

115 120 125

Tyr Ser Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser

130 135 140

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

145 150 155 160

Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

165 170 175

Asp Arg Val Ser Phe Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Asn Asn Phe

180 185 190

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

195 200 205

Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

210 215 220

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

225 230 235 240

Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Asn Leu Pro Phe

245 250 255

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ala Ala Ala Leu

260 265 270

Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His

275 280 285

Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val

290 295 300

Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr

305 310 315 320

Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu

325 330 335

His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg

340 345 350

Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg

355 360 365

Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln

370 375 380

Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu

385 390 395 400

Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly

405 410 415

Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln

420 425 430

Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu

435 440 445

Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr

450 455 460

Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro

465 470 475 480

Arg

<210> 191

<211> 1380

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 191

caggtacagc tgcaggaatc tgggcccgga cttgtcaagc caagtcagac actttctctt 60

acatgtaccg tgagcggcgg aagtataagc agtggaggct tttactggtc ttggatacgg 120

cagcacccag gcaaaggctt ggagtggatt ggatacattc atcattcagg atctacacac 180

tataatccat cccttaagtc ccgggtcacc attagcattg atacgtctaa gaatctgttc 240

agtctcaggc tgtcctccgt cactgctgcc gacacagccg tgtactactg cgcctccttg 300

gtttactgcg gaggcgactg ttatagcggc tttgattatt gggggcaggg gaccctcgta 360

accgtgagct ctggaggggg tgggagcggg ggaggaggtt cagggggggg cggctccgat 420

atccagctca ctcaaagccc ctctagtctc tctgcctcag tgggggatcg ggtcagtttt 480

acttgtcaag cttcacagga tatcaacaac ttccttaatt ggtatcagca gaagccagga 540

aaagcaccca agctgctcat ctatgatgcc tcaaatttgg agacgggtgt tcccagtcga 600

ttctctgggt cagggtccgg gaccgacttt acgtttacga tctcctctct gcagcccgaa 660

gacatcgcca catactattg tcaacagtac ggcaacttgc ctttcacatt tgggggcggg 720

actaaggttg aaatcaagag ggccgctgca ctggacaatg agaagtccaa cggcaccatc 780

atccacgtga agggcaagca cctgtgccct agtcctctgt tcccaggccc atccaaacct 840

ttttgggttc ttgttgtggt cgggggggtg ctggcctgct attctctgct ggtcacggtg 900

gccttcataa ttttctgggt tagatccaaa agaagccgcc tgctccatag cgattacatg 960

aatatgactc cacgccgccc tggccccaca aggaaacact accagcctta cgcaccacct 1020

agagatttcg ctgcctatcg gagcagggtg aagttttcca gatctgcaga tgcaccagcg 1080

tatcagcagg gccagaacca actgtataac gagctcaacc tgggacgcag ggaagagtat 1140

gacgttttgg acaagcgcag aggacgggac cctgagatgg gtggcaaacc aagacgaaaa 1200

aacccccagg agggtctcta taatgagctg cagaaggata agatggctga agcctattct 1260

gaaataggca tgaaaggaga gcggagaagg ggaaaagggc acgacggttt gtaccaggga 1320

ctcagcactg ctacgaagga tacttatgac gctctccaca tgcaagccct gccacctagg 1380

<210> 192

<211> 460

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 192

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly

20 25 30

Gly Phe Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu

35 40 45

Trp Ile Gly Tyr Ile His His Ser Gly Ser Thr His Tyr Asn Pro Ser

50 55 60

Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Ile Asp Thr Ser Lys Asn Leu Phe

65 70 75 80

Ser Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

85 90 95

Cys Ala Ser Leu Val Tyr Cys Gly Gly Asp Cys Tyr Ser Gly Phe Asp

100 105 110

Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Leu Thr

130 135 140

Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Ser Phe

145 150 155 160

Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Asn Asn Phe Leu Asn Trp Tyr Gln

165 170 175

Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn

180 185 190

Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr

195 200 205

Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr

210 215 220

Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Asn Leu Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly

225 230 235 240

Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ala Ala Ala Leu Asp Asn Glu Lys Ser

245 250 255

Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro

260 265 270

Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly

275 280 285

Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile

290 295 300

Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met

305 310 315 320

Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro

325 330 335

Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe

340 345 350

Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu

355 360 365

Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp

370 375 380

Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys

385 390 395 400

Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala

405 410 415

Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys

420 425 430

Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr

435 440 445

Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

450 455 460

<210> 193

<211> 1473

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 193

atggcactcc ccgtaactgc tctgctgctg ccgttggcat tgctcctgca cgccgcacgc 60

ccgcaggtgc agctgcagga aagcggtccg ggacttgtca agccgtccca aacgctgagt 120

ctgacgtgta ctgtctctgg tggctctatt tcttccgggg gcttttattg gtcttggatc 180

agacaacacc ctggcaaagg gctggagtgg atagggtata ttcaccactc tgggtccact 240

cactacaacc catcattgaa atccagagtg actatctcaa tcgacacatc caagaacctt 300

ttcagcctga ggttgtcatc agttaccgcc gctgacaccg cggtgtatta ttgcgcctct 360

ctcgtgtact gcggtggcga ttgttatagt ggctttgact actgggggca ggggacattg 420

gttaccgttt caagtggagg cggtgggtct ggcgggggcg gtagcggagg tggggggagc 480

gacatacagc ttacgcagag cccctccagc ctttcagcct ccgtggggga tagggtgtcc 540

tttacctgcc aggcttccca ggacataaac aacttcctca attggtatca gcaaaagccc 600

gggaaagcac caaagctgct catctacgat gccagcaacc tggaaaccgg agtgccgtct 660

cgcttctctg gaagtggcag tgggaccgat ttcactttta caatctcaag tttgcagcca 720

gaagacattg caacatacta ctgtcaacag tacggcaatc tcccctttac atttgggggg 780

ggaactaaag tggagattaa gcgcgctgca gccattgaag ttatgtatcc gcccccgtat 840

ctggataacg agaaatctaa tggtaccata atacatgtga aggggaagca cctctgtcca 900

tcaccgctgt tccccggccc ttcaaaacct ttctgggtac tcgttgtcgt gggtggagtt 960

ctggcctgct atagtctgct ggtgaccgtg gcgtttatca tcttctgggt aagatccaaa 1020

agaagccgcc tgctccatag cgattacatg aatatgactc cacgccgccc tggccccaca 1080

aggaaacact accagcctta cgcaccacct agagatttcg ctgcctatcg gagcagggtg 1140

aagttttcca gatctgcaga tgcaccagcg tatcagcagg gccagaacca actgtataac 1200

gagctcaacc tgggacgcag ggaagagtat gacgttttgg acaagcgcag aggacgggac 1260

cctgagatgg gtggcaaacc aagacgaaaa aacccccagg agggtctcta taatgagctg 1320

cagaaggata agatggctga agcctattct gaaataggca tgaaaggaga gcggagaagg 1380

ggaaaagggc acgacggttt gtaccaggga ctcagcactg ctacgaagga tacttatgac 1440

gctctccaca tgcaagccct gccacctagg taa 1473

<210> 194

<211> 490

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 194

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu

20 25 30

Val Lys Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly

35 40 45

Ser Ile Ser Ser Gly Gly Phe Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro

50 55 60

Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile His His Ser Gly Ser Thr

65 70 75 80

His Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Ile Asp Thr

85 90 95

Ser Lys Asn Leu Phe Ser Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp

100 105 110

Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ser Leu Val Tyr Cys Gly Gly Asp Cys

115 120 125

Tyr Ser Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser

130 135 140

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

145 150 155 160

Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

165 170 175

Asp Arg Val Ser Phe Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Asn Asn Phe

180 185 190

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

195 200 205

Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

210 215 220

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

225 230 235 240

Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Asn Leu Pro Phe

245 250 255

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ala Ala Ala Ile

260 265 270

Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly

275 280 285

Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe

290 295 300

Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val

305 310 315 320

Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp

325 330 335

Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met

340 345 350

Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala

355 360 365

Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg

370 375 380

Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn

385 390 395 400

Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg

405 410 415

Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro

420 425 430

Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala

435 440 445

Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His

450 455 460

Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp

465 470 475 480

Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

485 490

<210> 195

<211> 1407

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 195

caggtgcagc tgcaggaaag cggtccggga cttgtcaagc cgtcccaaac gctgagtctg 60

acgtgtactg tctctggtgg ctctatttct tccgggggct tttattggtc ttggatcaga 120

caacaccctg gcaaagggct ggagtggata gggtatattc accactctgg gtccactcac 180

tacaacccat cattgaaatc cagagtgact atctcaatcg acacatccaa gaaccttttc 240

agcctgaggt tgtcatcagt taccgccgct gacaccgcgg tgtattattg cgcctctctc 300

gtgtactgcg gtggcgattg ttatagtggc tttgactact gggggcaggg gacattggtt 360

accgtttcaa gtggaggcgg tgggtctggc gggggcggta gcggaggtgg ggggagcgac 420

atacagctta cgcagagccc ctccagcctt tcagcctccg tgggggatag ggtgtccttt 480

acctgccagg cttcccagga cataaacaac ttcctcaatt ggtatcagca aaagcccggg 540

aaagcaccaa agctgctcat ctacgatgcc agcaacctgg aaaccggagt gccgtctcgc 600

ttctctggaa gtggcagtgg gaccgatttc acttttacaa tctcaagttt gcagccagaa 660

gacattgcaa catactactg tcaacagtac ggcaatctcc cctttacatt tgggggggga 720

actaaagtgg agattaagcg cgctgcagcc attgaagtta tgtatccgcc cccgtatctg 780

gataacgaga aatctaatgg taccataata catgtgaagg ggaagcacct ctgtccatca 840

ccgctgttcc ccggcccttc aaaacctttc tgggtactcg ttgtcgtggg tggagttctg 900

gcctgctata gtctgctggt gaccgtggcg tttatcatct tctgggtaag atccaaaaga 960

agccgcctgc tccatagcga ttacatgaat atgactccac gccgccctgg ccccacaagg 1020

aaacactacc agccttacgc accacctaga gatttcgctg cctatcggag cagggtgaag 1080

ttttccagat ctgcagatgc accagcgtat cagcagggcc agaaccaact gtataacgag 1140

ctcaacctgg gacgcaggga agagtatgac gttttggaca agcgcagagg acgggaccct 1200

gagatgggtg gcaaaccaag acgaaaaaac ccccaggagg gtctctataa tgagctgcag 1260

aaggataaga tggctgaagc ctattctgaa ataggcatga aaggagagcg gagaagggga 1320

aaagggcacg acggtttgta ccagggactc agcactgcta cgaaggatac ttatgacgct 1380

ctccacatgc aagccctgcc acctagg 1407

<210> 196

<211> 469

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 196

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly

20 25 30

Gly Phe Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu

35 40 45

Trp Ile Gly Tyr Ile His His Ser Gly Ser Thr His Tyr Asn Pro Ser

50 55 60

Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Ile Asp Thr Ser Lys Asn Leu Phe

65 70 75 80

Ser Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

85 90 95

Cys Ala Ser Leu Val Tyr Cys Gly Gly Asp Cys Tyr Ser Gly Phe Asp

100 105 110

Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Leu Thr

130 135 140

Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Ser Phe

145 150 155 160

Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Asn Asn Phe Leu Asn Trp Tyr Gln

165 170 175

Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn

180 185 190

Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr

195 200 205

Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr

210 215 220

Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Asn Leu Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly

225 230 235 240

Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ala Ala Ala Ile Glu Val Met Tyr Pro

245 250 255

Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val

260 265 270

Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys

275 280 285

Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser

290 295 300

Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg

305 310 315 320

Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro

325 330 335

Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe

340 345 350

Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro

355 360 365

Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly

370 375 380

Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro

385 390 395 400

Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr

405 410 415

Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly

420 425 430

Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln

435 440 445

Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln

450 455 460

Ala Leu Pro Pro Arg

465

<210> 197

<211> 1554

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 197

atggcactcc ccgtaactgc tctgctgctg ccgttggcat tgctcctgca cgccgcacgc 60

ccgcaggtgc agttgcagga aagcgggcct ggccttgtga aaccaagcca gacactgagc 120

ctgacatgca ctgtgtccgg cgggtccata tcttccgggg gtttttattg gtcctggata 180

cgccagcatc ccgggaaagg acttgaatgg attggatata tccaccattc cggaagcacc 240

cactacaatc caagccttaa atcccgggtg acaatctcca tcgacacctc aaagaatctt 300

ttttccctgc ggttgtcttc agtaactgcc gccgataccg ctgtgtacta ctgtgccagc 360

ctcgtctatt gcggcggaga ttgttattct gggttcgatt attggggtca aggcacactg 420

gtaactgtca gcagcggagg cggcggttcc gggggcgggg gcagtggagg gggcggatct 480

gacattcagc ttacgcagtc cccatcttca cttagcgcca gcgttggcga tcgggtcagc 540

ttcacgtgtc aagcaagtca ggatatcaac aactttctta actggtacca gcagaagcca 600

ggcaaggcac ccaagttgct gatttacgat gcttctaacc tcgagacggg agtgcctagc 660

cgcttctccg ggagcggcag cggcacagac tttaccttta cgatttccag tctgcagcca 720

gaggatatag caacttatta ctgtcagcag tatggcaacc tcccttttac cttcggtggt 780

ggcacaaagg tcgagattaa aagagccgca gcgttgtcca actccataat gtatttttct 840

cattttgtgc ccgtctttct gcctgccaaa cctaccacca cccccgcccc acgaccacct 900

actccagccc ccaccatcgc ctcccagccc ctcagcctga ggccagaggc ttgtcgccct 960

gctgcggggg gcgctgtcca taccagagga ctcgacttcg cctgcgatat ttatatatgg 1020

gcccccctcg ccggcacctg cggagtcttg ctcctgagcc ttgtgatcac gctttattgt 1080

aaccatcgga atagatccaa aagaagccgc ctgctccata gcgattacat gaatatgact 1140

ccacgccgcc ctggccccac aaggaaacac taccagcctt acgcaccacc tagagatttc 1200

gctgcctatc ggagcagggt gaagttttcc agatctgcag atgcaccagc gtatcagcag 1260

ggccagaacc aactgtataa cgagctcaac ctgggacgca gggaagagta tgacgttttg 1320

gacaagcgca gaggacggga ccctgagatg ggtggcaaac caagacgaaa aaacccccag 1380

gagggtctct ataatgagct gcagaaggat aagatggctg aagcctattc tgaaataggc 1440

atgaaaggag agcggagaag gggaaaaggg cacgacggtt tgtaccaggg actcagcact 1500

gctacgaagg atacttatga cgctctccac atgcaagccc tgccacctag gtaa 1554

<210> 198

<211> 517

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 198

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu

20 25 30

Val Lys Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly

35 40 45

Ser Ile Ser Ser Gly Gly Phe Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro

50 55 60

Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile His His Ser Gly Ser Thr

65 70 75 80

His Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Ile Asp Thr

85 90 95

Ser Lys Asn Leu Phe Ser Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp

100 105 110

Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ser Leu Val Tyr Cys Gly Gly Asp Cys

115 120 125

Tyr Ser Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser

130 135 140

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

145 150 155 160

Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

165 170 175

Asp Arg Val Ser Phe Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Asn Asn Phe

180 185 190

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

195 200 205

Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

210 215 220

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

225 230 235 240

Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Asn Leu Pro Phe

245 250 255

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ala Ala Ala Leu

260 265 270

Ser Asn Ser Ile Met Tyr Phe Ser His Phe Val Pro Val Phe Leu Pro

275 280 285

Ala Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro

290 295 300

Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro

305 310 315 320

Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp

325 330 335

Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu

340 345 350

Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn His Arg Asn Arg Ser Lys Arg

355 360 365

Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro

370 375 380

Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe

385 390 395 400

Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro

405 410 415

Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly

420 425 430

Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro

435 440 445

Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr

450 455 460

Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly

465 470 475 480

Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln

485 490 495

Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln

500 505 510

Ala Leu Pro Pro Arg

515

<210> 199

<211> 1488

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 199

caggtgcagt tgcaggaaag cgggcctggc cttgtgaaac caagccagac actgagcctg 60

acatgcactg tgtccggcgg gtccatatct tccgggggtt tttattggtc ctggatacgc 120

cagcatcccg ggaaaggact tgaatggatt ggatatatcc accattccgg aagcacccac 180

tacaatccaa gccttaaatc ccgggtgaca atctccatcg acacctcaaa gaatcttttt 240

tccctgcggt tgtcttcagt aactgccgcc gataccgctg tgtactactg tgccagcctc 300

gtctattgcg gcggagattg ttattctggg ttcgattatt ggggtcaagg cacactggta 360

actgtcagca gcggaggcgg cggttccggg ggcgggggca gtggaggggg cggatctgac 420

attcagctta cgcagtcccc atcttcactt agcgccagcg ttggcgatcg ggtcagcttc 480

acgtgtcaag caagtcagga tatcaacaac tttcttaact ggtaccagca gaagccaggc 540

aaggcaccca agttgctgat ttacgatgct tctaacctcg agacgggagt gcctagccgc 600

ttctccggga gcggcagcgg cacagacttt acctttacga tttccagtct gcagccagag 660

gatatagcaa cttattactg tcagcagtat ggcaacctcc cttttacctt cggtggtggc 720

acaaaggtcg agattaaaag agccgcagcg ttgtccaact ccataatgta tttttctcat 780

tttgtgcccg tctttctgcc tgccaaacct accaccaccc ccgccccacg accacctact 840

ccagccccca ccatcgcctc ccagcccctc agcctgaggc cagaggcttg tcgccctgct 900

gcggggggcg ctgtccatac cagaggactc gacttcgcct gcgatattta tatatgggcc 960

cccctcgccg gcacctgcgg agtcttgctc ctgagccttg tgatcacgct ttattgtaac 1020

catcggaata gatccaaaag aagccgcctg ctccatagcg attacatgaa tatgactcca 1080

cgccgccctg gccccacaag gaaacactac cagccttacg caccacctag agatttcgct 1140

gcctatcgga gcagggtgaa gttttccaga tctgcagatg caccagcgta tcagcagggc 1200

cagaaccaac tgtataacga gctcaacctg ggacgcaggg aagagtatga cgttttggac 1260

aagcgcagag gacgggaccc tgagatgggt ggcaaaccaa gacgaaaaaa cccccaggag 1320

ggtctctata atgagctgca gaaggataag atggctgaag cctattctga aataggcatg 1380

aaaggagagc ggagaagggg aaaagggcac gacggtttgt accagggact cagcactgct 1440

acgaaggata cttatgacgc tctccacatg caagccctgc cacctagg 1488

<210> 200

<211> 496

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 200

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly

20 25 30

Gly Phe Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu

35 40 45

Trp Ile Gly Tyr Ile His His Ser Gly Ser Thr His Tyr Asn Pro Ser

50 55 60

Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Ile Asp Thr Ser Lys Asn Leu Phe

65 70 75 80

Ser Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

85 90 95

Cys Ala Ser Leu Val Tyr Cys Gly Gly Asp Cys Tyr Ser Gly Phe Asp

100 105 110

Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Leu Thr

130 135 140

Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Ser Phe

145 150 155 160

Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Asn Asn Phe Leu Asn Trp Tyr Gln

165 170 175

Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn

180 185 190

Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr

195 200 205

Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr

210 215 220

Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Asn Leu Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly

225 230 235 240

Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ala Ala Ala Leu Ser Asn Ser Ile Met

245 250 255

Tyr Phe Ser His Phe Val Pro Val Phe Leu Pro Ala Lys Pro Thr Thr

260 265 270

Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln

275 280 285

Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala

290 295 300

Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala

305 310 315 320

Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr

325 330 335

Leu Tyr Cys Asn His Arg Asn Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His

340 345 350

Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys

355 360 365

His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser

370 375 380

Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly

385 390 395 400

Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr

405 410 415

Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys

420 425 430

Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys

435 440 445

Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg

450 455 460

Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala

465 470 475 480

Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

485 490 495

<210> 201

<211> 1437

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 201

atggcactcc ccgtaactgc tctgctgctg ccgttggcat tgctcctgca cgccgcacgc 60

ccgcaggtcc aactggtgca gtccggagcc gaagtcaaga aaccaggtgc ctccgttaaa 120

gtgagttgca aagtctctgg atacactctg accgagctct ctatgcactg ggtccggcag 180

gcccccggca agggattgga atggatgggc gggttcgatc ctgaggacgg agagactatc 240

tacgctcaaa aattccaggg acgagtgact gtgaccgaag acactagtac cgacactgcc 300

tacatggaac tttcctctct gcgatcagaa gataccgcag tgtactactg tgctactgaa 360

tctaggggca ttggatggcc ctacttcgat tactggggtc agggaactct ggtgactgtc 420

tccagcggtg gaggtggcag cggtggtggc ggaagcgggg ggggcggctc tgatattcag 480

atgactcaat ctccttcttc tctgtccgct tccgtgggcg atagagtgac cattacttgt 540

agggcgtccc agtcaatctc cagttatttg aattggtatc agcagaagcc cgggaaagca 600

cctaagctgt tgatcagcgg ggcttctagc ctgaagagtg gggtaccttc acggttcagc 660

ggaagcggaa gcggaaccga tttcaccctg actatcagca gcctgccacc tgaggacttt 720

gcaacttact actgccaaca gtcatacagc actccgatca ctttcggcca gggcacccgg 780

ctcgaaatca agcgcgctgc tgctttggac aatgagaagt caaacggcac catcatacat 840

gttaaaggta aacatctgtg tccctccccg ctgttccccg gcccttccaa accgttctgg 900

gttctggtgg tggtcggagg cgtactcgct tgctatagtc tgctggtaac tgtcgccttc 960

atcatctttt gggtgagatc caaaagaagc cgcctgctcc atagcgatta catgaatatg 1020

actccacgcc gccctggccc cacaaggaaa cactaccagc cttacgcacc acctagagat 1080

ttcgctgcct atcggagcag ggtgaagttt tccagatctg cagatgcacc agcgtatcag 1140

cagggccaga accaactgta taacgagctc aacctgggac gcagggaaga gtatgacgtt 1200

ttggacaagc gcagaggacg ggaccctgag atgggtggca aaccaagacg aaaaaacccc 1260

caggagggtc tctataatga gctgcagaag gataagatgg ctgaagccta ttctgaaata 1320

ggcatgaaag gagagcggag aaggggaaaa gggcacgacg gtttgtacca gggactcagc 1380

actgctacga aggatactta tgacgctctc cacatgcaag ccctgccacc taggtaa 1437

<210> 202

<211> 478

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 202

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val

20 25 30

Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr

35 40 45

Thr Leu Thr Glu Leu Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys

50 55 60

Gly Leu Glu Trp Met Gly Gly Phe Asp Pro Glu Asp Gly Glu Thr Ile

65 70 75 80

Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Val Thr Glu Asp Thr Ser

85 90 95

Thr Asp Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr

100 105 110

Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr Glu Ser Arg Gly Ile Gly Trp Pro Tyr

115 120 125

Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly

130 135 140

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln

145 150 155 160

Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val

165 170 175

Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp

180 185 190

Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Ser Gly Ala

195 200 205

Ser Ser Leu Lys Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser

210 215 220

Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Pro Pro Glu Asp Phe

225 230 235 240

Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Ile Thr Phe Gly

245 250 255

Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg Ala Ala Ala Leu Asp Asn Glu

260 265 270

Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro

275 280 285

Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val

290 295 300

Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe

305 310 315 320

Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp

325 330 335

Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr

340 345 350

Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val

355 360 365

Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn

370 375 380

Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val

385 390 395 400

Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg

405 410 415

Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys

420 425 430

Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg

435 440 445

Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys

450 455 460

Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

465 470 475

<210> 203

<211> 1371

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 203

caggtccaac tggtgcagtc cggagccgaa gtcaagaaac caggtgcctc cgttaaagtg 60

agttgcaaag tctctggata cactctgacc gagctctcta tgcactgggt ccggcaggcc 120

cccggcaagg gattggaatg gatgggcggg ttcgatcctg aggacggaga gactatctac 180

gctcaaaaat tccagggacg agtgactgtg accgaagaca ctagtaccga cactgcctac 240

atggaacttt cctctctgcg atcagaagat accgcagtgt actactgtgc tactgaatct 300

aggggcattg gatggcccta cttcgattac tggggtcagg gaactctggt gactgtctcc 360

agcggtggag gtggcagcgg tggtggcgga agcggggggg gcggctctga tattcagatg 420

actcaatctc cttcttctct gtccgcttcc gtgggcgata gagtgaccat tacttgtagg 480

gcgtcccagt caatctccag ttatttgaat tggtatcagc agaagcccgg gaaagcacct 540

aagctgttga tcagcggggc ttctagcctg aagagtgggg taccttcacg gttcagcgga 600

agcggaagcg gaaccgattt caccctgact atcagcagcc tgccacctga ggactttgca 660

acttactact gccaacagtc atacagcact ccgatcactt tcggccaggg cacccggctc 720

gaaatcaagc gcgctgctgc tttggacaat gagaagtcaa acggcaccat catacatgtt 780

aaaggtaaac atctgtgtcc ctccccgctg ttccccggcc cttccaaacc gttctgggtt 840

ctggtggtgg tcggaggcgt actcgcttgc tatagtctgc tggtaactgt cgccttcatc 900

atcttttggg tgagatccaa aagaagccgc ctgctccata gcgattacat gaatatgact 960

ccacgccgcc ctggccccac aaggaaacac taccagcctt acgcaccacc tagagatttc 1020

gctgcctatc ggagcagggt gaagttttcc agatctgcag atgcaccagc gtatcagcag 1080

ggccagaacc aactgtataa cgagctcaac ctgggacgca gggaagagta tgacgttttg 1140

gacaagcgca gaggacggga ccctgagatg ggtggcaaac caagacgaaa aaacccccag 1200

gagggtctct ataatgagct gcagaaggat aagatggctg aagcctattc tgaaataggc 1260

atgaaaggag agcggagaag gggaaaaggg cacgacggtt tgtaccaggg actcagcact 1320

gctacgaagg atacttatga cgctctccac atgcaagccc tgccacctag g 1371

<210> 204

<211> 457

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 204

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Glu Leu

20 25 30

Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Phe Asp Pro Glu Asp Gly Glu Thr Ile Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Val Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Thr Glu Ser Arg Gly Ile Gly Trp Pro Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

115 120 125

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro

130 135 140

Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg

145 150 155 160

Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro

165 170 175

Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Ser Gly Ala Ser Ser Leu Lys Ser

180 185 190

Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr

195 200 205

Leu Thr Ile Ser Ser Leu Pro Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys

210 215 220

Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu

225 230 235 240

Glu Ile Lys Arg Ala Ala Ala Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr

245 250 255

Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro

260 265 270

Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu

275 280 285

Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val

290 295 300

Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr

305 310 315 320

Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro

325 330 335

Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser

340 345 350

Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu

355 360 365

Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg

370 375 380

Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln

385 390 395 400

Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr

405 410 415

Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp

420 425 430

Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala

435 440 445

Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

450 455

<210> 205

<211> 1464

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 205

atggcactcc ccgtaactgc tctgctgctg ccgttggcat tgctcctgca cgccgcacgc 60

ccgcaggtgc agcttgtgca gagcggggcc gaggtgaaga agcccggggc cagcgtcaaa 120

gtgtcctgta aggtcagcgg ttacaccctc accgagctga gcatgcactg ggtacggcag 180

gctcccggca aaggtcttga gtggatgggt ggatttgatc cagaagatgg agagactatc 240

tacgcccaga agttccaggg ccgggtcacc gtaacagaag acacctcaac tgacaccgct 300

tacatggagc tgagttcact gcggtccgag gacacggccg tgtattattg tgccaccgag 360

agccgcggaa tcggatggcc ttacttcgac tactggggac agggtacact tgttacagta 420

tcatccgggg gtggcggctc tggtgggggc ggctccggag ggggtggatc agatatccaa 480

atgactcaaa gtccaagttc cctgtctgcc tcagtcggag atagagtcac cataacctgc 540

agggcaagtc agtccatctc ctcctatctg aactggtacc aacagaaacc tggaaaggcg 600

cctaagctcc tgatctccgg agcctcatct ttgaaatccg gtgtcccatc tcgcttcagt 660

ggctctggaa gcggtacaga ttttactttg accattagca gcctcccacc ggaagacttt 720

gctacatatt actgccagca gtcttactca accccaatca ccttcgggca aggcaccaga 780

ctcgaaataa aaagagcagc tgctatcgag gttatgtacc caccgccgta cttggataac 840

gaaaaaagca atgggaccat cattcatgtg aagggtaagc acctttgccc tagcccactg 900

tttcctggcc cgagtaaacc cttttgggta cttgtggtcg tcggcggcgt gctggcctgc 960

tactcactcc tggttaccgt cgcattcatc atcttttggg tgagatccaa aagaagccgc 1020

ctgctccata gcgattacat gaatatgact ccacgccgcc ctggccccac aaggaaacac 1080

taccagcctt acgcaccacc tagagatttc gctgcctatc ggagcagggt gaagttttcc 1140

agatctgcag atgcaccagc gtatcagcag ggccagaacc aactgtataa cgagctcaac 1200

ctgggacgca gggaagagta tgacgttttg gacaagcgca gaggacggga ccctgagatg 1260

ggtggcaaac caagacgaaa aaacccccag gagggtctct ataatgagct gcagaaggat 1320

aagatggctg aagcctattc tgaaataggc atgaaaggag agcggagaag gggaaaaggg 1380

cacgacggtt tgtaccaggg actcagcact gctacgaagg atacttatga cgctctccac 1440

atgcaagccc tgccacctag gtaa 1464

<210> 206

<211> 487

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 206

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val

20 25 30

Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr

35 40 45

Thr Leu Thr Glu Leu Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys

50 55 60

Gly Leu Glu Trp Met Gly Gly Phe Asp Pro Glu Asp Gly Glu Thr Ile

65 70 75 80

Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Val Thr Glu Asp Thr Ser

85 90 95

Thr Asp Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr

100 105 110

Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr Glu Ser Arg Gly Ile Gly Trp Pro Tyr

115 120 125

Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly

130 135 140

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln

145 150 155 160

Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val

165 170 175

Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp

180 185 190

Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Ser Gly Ala

195 200 205

Ser Ser Leu Lys Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser

210 215 220

Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Pro Pro Glu Asp Phe

225 230 235 240

Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Ile Thr Phe Gly

245 250 255

Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg Ala Ala Ala Ile Glu Val Met

260 265 270

Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile

275 280 285

His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro

290 295 300

Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys

305 310 315 320

Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser

325 330 335

Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg

340 345 350

Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg

355 360 365

Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp

370 375 380

Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn

385 390 395 400

Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg

405 410 415

Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly

420 425 430

Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu

435 440 445

Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu

450 455 460

Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His

465 470 475 480

Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

485

<210> 207

<211> 1398

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 207

caggtgcagc ttgtgcagag cggggccgag gtgaagaagc ccggggccag cgtcaaagtg 60

tcctgtaagg tcagcggtta caccctcacc gagctgagca tgcactgggt acggcaggct 120

cccggcaaag gtcttgagtg gatgggtgga tttgatccag aagatggaga gactatctac 180

gcccagaagt tccagggccg ggtcaccgta acagaagaca cctcaactga caccgcttac 240

atggagctga gttcactgcg gtccgaggac acggccgtgt attattgtgc caccgagagc 300

cgcggaatcg gatggcctta cttcgactac tggggacagg gtacacttgt tacagtatca 360

tccgggggtg gcggctctgg tgggggcggc tccggagggg gtggatcaga tatccaaatg 420

actcaaagtc caagttccct gtctgcctca gtcggagata gagtcaccat aacctgcagg 480

gcaagtcagt ccatctcctc ctatctgaac tggtaccaac agaaacctgg aaaggcgcct 540

aagctcctga tctccggagc ctcatctttg aaatccggtg tcccatctcg cttcagtggc 600

tctggaagcg gtacagattt tactttgacc attagcagcc tcccaccgga agactttgct 660

acatattact gccagcagtc ttactcaacc ccaatcacct tcgggcaagg caccagactc 720

gaaataaaaa gagcagctgc tatcgaggtt atgtacccac cgccgtactt ggataacgaa 780

aaaagcaatg ggaccatcat tcatgtgaag ggtaagcacc tttgccctag cccactgttt 840

cctggcccga gtaaaccctt ttgggtactt gtggtcgtcg gcggcgtgct ggcctgctac 900

tcactcctgg ttaccgtcgc attcatcatc ttttgggtga gatccaaaag aagccgcctg 960

ctccatagcg attacatgaa tatgactcca cgccgccctg gccccacaag gaaacactac 1020

cagccttacg caccacctag agatttcgct gcctatcgga gcagggtgaa gttttccaga 1080

tctgcagatg caccagcgta tcagcagggc cagaaccaac tgtataacga gctcaacctg 1140

ggacgcaggg aagagtatga cgttttggac aagcgcagag gacgggaccc tgagatgggt 1200

ggcaaaccaa gacgaaaaaa cccccaggag ggtctctata atgagctgca gaaggataag 1260

atggctgaag cctattctga aataggcatg aaaggagagc ggagaagggg aaaagggcac 1320

gacggtttgt accagggact cagcactgct acgaaggata cttatgacgc tctccacatg 1380

caagccctgc cacctagg 1398

<210> 208

<211> 466

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 208

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Glu Leu

20 25 30

Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Phe Asp Pro Glu Asp Gly Glu Thr Ile Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Val Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Thr Glu Ser Arg Gly Ile Gly Trp Pro Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

115 120 125

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro

130 135 140

Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg

145 150 155 160

Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro

165 170 175

Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Ser Gly Ala Ser Ser Leu Lys Ser

180 185 190

Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr

195 200 205

Leu Thr Ile Ser Ser Leu Pro Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys

210 215 220

Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu

225 230 235 240

Glu Ile Lys Arg Ala Ala Ala Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr

245 250 255

Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys

260 265 270

His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp

275 280 285

Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val

290 295 300

Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu

305 310 315 320

Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr

325 330 335

Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr

340 345 350

Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln

355 360 365

Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu

370 375 380

Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly

385 390 395 400

Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu

405 410 415

Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly

420 425 430

Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser

435 440 445

Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro

450 455 460

Pro Arg

465

<210> 209

<211> 1545

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 209

atggcactcc ccgtaactgc tctgctgctg ccgttggcat tgctcctgca cgccgcacgc 60

ccgcaggtgc agttggtgca aagcggcgca gaagttaaga aacctggggc gtcagttaag 120

gtgtcttgca aagtatctgg ctataccctc actgagctgt ccatgcattg ggtaaggcag 180

gctcctggaa aggggctcga atggatggga ggatttgacc ctgaagacgg agagaccatc 240

tacgcccaga aattccaggg tagagtaaca gtgactgagg acactagcac tgacacagcg 300

tacatggagc tgagttctct gagaagtgag gacacagccg tttactactg cgctaccgag 360

tccagaggta ttggctggcc atacttcgac tattggggtc agggcaccct ggttacagtg 420

agttcaggag gcgggggctc tggggggggc ggttccggag gggggggctc agatatacag 480

atgacgcaga gtccatcaag tctctcagcc agcgtgggag atcgcgtgac tattacttgc 540

cgcgccagcc agagtattag ctcctatctg aattggtacc agcaaaagcc cgggaaggcc 600

cctaagcttc tgatttctgg cgcctcctct ttgaagtcag gtgtgccaag cagatttagc 660

gggtctggaa gtggcactga ctttacactt actatctcca gcctgccccc agaggatttt 720

gccacatatt actgtcagca aagctactct actccaatca ctttcggcca gggcacaaga 780

ttggagatta agagggctgc cgcactttca aattccatca tgtatttcag ccattttgtg 840

cctgtttttc ttccggccaa acctacaacc actcccgccc cacgcccacc tactcccgcc 900

cctaccattg cctcccagcc tctgtctctt agacctgagg cttgtagacc tgctgccggc 960

ggagccgtgc acactcgcgg tctggacttc gcctgcgaca tctatatctg ggcccctctg 1020

gccggcacct gcggcgttct ccttctctca ctcgtaatca cactctattg caatcacagg 1080

aacagatcca aaagaagccg cctgctccat agcgattaca tgaatatgac tccacgccgc 1140

cctggcccca caaggaaaca ctaccagcct tacgcaccac ctagagattt cgctgcctat 1200

cggagcaggg tgaagttttc cagatctgca gatgcaccag cgtatcagca gggccagaac 1260

caactgtata acgagctcaa cctgggacgc agggaagagt atgacgtttt ggacaagcgc 1320

agaggacggg accctgagat gggtggcaaa ccaagacgaa aaaaccccca ggagggtctc 1380

tataatgagc tgcagaagga taagatggct gaagcctatt ctgaaatagg catgaaagga 1440

gagcggagaa ggggaaaagg gcacgacggt ttgtaccagg gactcagcac tgctacgaag 1500

gatacttatg acgctctcca catgcaagcc ctgccaccta ggtaa 1545

<210> 210

<211> 514

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 210

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val

20 25 30

Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr

35 40 45

Thr Leu Thr Glu Leu Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys

50 55 60

Gly Leu Glu Trp Met Gly Gly Phe Asp Pro Glu Asp Gly Glu Thr Ile

65 70 75 80

Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Val Thr Glu Asp Thr Ser

85 90 95

Thr Asp Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr

100 105 110

Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr Glu Ser Arg Gly Ile Gly Trp Pro Tyr

115 120 125

Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly

130 135 140

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln

145 150 155 160

Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val

165 170 175

Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp

180 185 190

Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Ser Gly Ala

195 200 205

Ser Ser Leu Lys Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser

210 215 220

Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Pro Pro Glu Asp Phe

225 230 235 240

Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Ile Thr Phe Gly

245 250 255

Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg Ala Ala Ala Leu Ser Asn Ser

260 265 270

Ile Met Tyr Phe Ser His Phe Val Pro Val Phe Leu Pro Ala Lys Pro

275 280 285

Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala

290 295 300

Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly

305 310 315 320

Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile

325 330 335

Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val

340 345 350

Ile Thr Leu Tyr Cys Asn His Arg Asn Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu

355 360 365

Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr

370 375 380

Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr

385 390 395 400

Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln

405 410 415

Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu

420 425 430

Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly

435 440 445

Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu

450 455 460

Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly

465 470 475 480

Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser

485 490 495

Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro

500 505 510

Pro Arg

<210> 211

<211> 1479

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 211

caggtgcagt tggtgcaaag cggcgcagaa gttaagaaac ctggggcgtc agttaaggtg 60

tcttgcaaag tatctggcta taccctcact gagctgtcca tgcattgggt aaggcaggct 120

cctggaaagg ggctcgaatg gatgggagga tttgaccctg aagacggaga gaccatctac 180

gcccagaaat tccagggtag agtaacagtg actgaggaca ctagcactga cacagcgtac 240

atggagctga gttctctgag aagtgaggac acagccgttt actactgcgc taccgagtcc 300

agaggtattg gctggccata cttcgactat tggggtcagg gcaccctggt tacagtgagt 360

tcaggaggcg ggggctctgg ggggggcggt tccggagggg ggggctcaga tatacagatg 420

acgcagagtc catcaagtct ctcagccagc gtgggagatc gcgtgactat tacttgccgc 480

gccagccaga gtattagctc ctatctgaat tggtaccagc aaaagcccgg gaaggcccct 540

aagcttctga tttctggcgc ctcctctttg aagtcaggtg tgccaagcag atttagcggg 600

tctggaagtg gcactgactt tacacttact atctccagcc tgcccccaga ggattttgcc 660

acatattact gtcagcaaag ctactctact ccaatcactt tcggccaggg cacaagattg 720

gagattaaga gggctgccgc actttcaaat tccatcatgt atttcagcca ttttgtgcct 780

gtttttcttc cggccaaacc tacaaccact cccgccccac gcccacctac tcccgcccct 840

accattgcct cccagcctct gtctcttaga cctgaggctt gtagacctgc tgccggcgga 900

gccgtgcaca ctcgcggtct ggacttcgcc tgcgacatct atatctgggc ccctctggcc 960

ggcacctgcg gcgttctcct tctctcactc gtaatcacac tctattgcaa tcacaggaac 1020

agatccaaaa gaagccgcct gctccatagc gattacatga atatgactcc acgccgccct 1080

ggccccacaa ggaaacacta ccagccttac gcaccaccta gagatttcgc tgcctatcgg 1140

agcagggtga agttttccag atctgcagat gcaccagcgt atcagcaggg ccagaaccaa 1200

ctgtataacg agctcaacct gggacgcagg gaagagtatg acgttttgga caagcgcaga 1260

ggacgggacc ctgagatggg tggcaaacca agacgaaaaa acccccagga gggtctctat 1320

aatgagctgc agaaggataa gatggctgaa gcctattctg aaataggcat gaaaggagag 1380

cggagaaggg gaaaagggca cgacggtttg taccagggac tcagcactgc tacgaaggat 1440

acttatgacg ctctccacat gcaagccctg ccacctagg 1479

<210> 212

<211> 493

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 212

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Glu Leu

20 25 30

Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Phe Asp Pro Glu Asp Gly Glu Thr Ile Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Val Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Thr Glu Ser Arg Gly Ile Gly Trp Pro Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

115 120 125

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro

130 135 140

Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg

145 150 155 160

Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro

165 170 175

Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Ser Gly Ala Ser Ser Leu Lys Ser

180 185 190

Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr

195 200 205

Leu Thr Ile Ser Ser Leu Pro Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys

210 215 220

Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu

225 230 235 240

Glu Ile Lys Arg Ala Ala Ala Leu Ser Asn Ser Ile Met Tyr Phe Ser

245 250 255

His Phe Val Pro Val Phe Leu Pro Ala Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala

260 265 270

Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser

275 280 285

Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr

290 295 300

Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala

305 310 315 320

Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys

325 330 335

Asn His Arg Asn Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr

340 345 350

Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln

355 360 365

Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys

370 375 380

Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln

385 390 395 400

Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu

405 410 415

Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg

420 425 430

Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met

435 440 445

Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly

450 455 460

Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp

465 470 475 480

Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

485 490

<210> 213

<211> 1425

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 213

atggcactcc ccgtaactgc tctgctgctg ccgttggcat tgctcctgca cgccgcacgc 60

ccgcaggtcc agttggtcga aagtggcggt ggtgtagtgc agccgggccg cagtttgagg 120

ctttcctgtg cggcttcagg ctttactttt tccagctatg gaatgcactg ggtgcggcag 180

gcccccggca aaggacttga gtgggtggcc gtcatttctt atgacggatc agataagtac 240

tacgtggaca gcgtcaaggg cagattcacc atctctaggg acaacagtaa aaatagactc 300

tacctccaga tgaatagcct cagagctgaa gacacggccg tctactattg tgctcgggag 360

cggtatagtg gcagagacta ctgggggcag ggcacactcg ttacagtgag tagcggcgga 420

ggagggagtg ggggcggtgg ctccggtgga ggaggttctg agattgttat gacccagagt 480

cctgcgaccc tctcagtcag ccccggggag cgcgcaactt tgtcttgcag agctagtcag 540

tccgtgtcct ctcttctgac atggtaccag caaaagcccg ggcaggctcc gcgccttttg 600

atctttgggg cttcaacaag agccactggg attcccgcac gattctctgg ctccgggagc 660

ggtactggtt tcaccctgac gattagcagt ctccagagcg aggacttcgc cgtatactac 720

tgccagcagt acgatacgtg gccattcact tttggaccag ggactaaagt ggattttaag 780

cgcgccgccg ctctcgataa cgaaaagtca aatggcacca taatccacgt caaaggcaag 840

cacctgtgcc cttccccgct cttccccgga cccagtaaac cattttgggt gctggttgtt 900

gtggggggcg tgctggcctg ctatagcctt ttggtcactg tagccttcat tattttttgg 960

gtcagatcca aaagaagccg cctgctccat agcgattaca tgaatatgac tccacgccgc 1020

cctggcccca caaggaaaca ctaccagcct tacgcaccac ctagagattt cgctgcctat 1080

cggagcaggg tgaagttttc cagatctgca gatgcaccag cgtatcagca gggccagaac 1140

caactgtata acgagctcaa cctgggacgc agggaagagt atgacgtttt ggacaagcgc 1200

agaggacggg accctgagat gggtggcaaa ccaagacgaa aaaaccccca ggagggtctc 1260

tataatgagc tgcagaagga taagatggct gaagcctatt ctgaaatagg catgaaagga 1320

gagcggagaa ggggaaaagg gcacgacggt ttgtaccagg gactcagcac tgctacgaag 1380

gatacttatg acgctctcca catgcaagcc ctgccaccta ggtaa 1425

<210> 214

<211> 474

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 214

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val

20 25 30

Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe

35 40 45

Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys

50 55 60

Gly Leu Glu Trp Val Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asp Lys Tyr

65 70 75 80

Tyr Val Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser

85 90 95

Lys Asn Arg Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr

100 105 110

Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Arg Tyr Ser Gly Arg Asp Tyr Trp

115 120 125

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

130 135 140

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Met Thr Gln Ser

145 150 155 160

Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys

165 170 175

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Leu Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys

180 185 190

Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Phe Gly Ala Ser Thr Arg Ala

195 200 205

Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gly Phe

210 215 220

Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr

225 230 235 240

Cys Gln Gln Tyr Asp Thr Trp Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys

245 250 255

Val Asp Phe Lys Arg Ala Ala Ala Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly

260 265 270

Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe

275 280 285

Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val

290 295 300

Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp

305 310 315 320

Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met

325 330 335

Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala

340 345 350

Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg

355 360 365

Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn

370 375 380

Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg

385 390 395 400

Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro

405 410 415

Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala

420 425 430

Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His

435 440 445

Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp

450 455 460

Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

465 470

<210> 215

<211> 1359

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 215

caggtccagt tggtcgaaag tggcggtggt gtagtgcagc cgggccgcag tttgaggctt 60

tcctgtgcgg cttcaggctt tactttttcc agctatggaa tgcactgggt gcggcaggcc 120

cccggcaaag gacttgagtg ggtggccgtc atttcttatg acggatcaga taagtactac 180

gtggacagcg tcaagggcag attcaccatc tctagggaca acagtaaaaa tagactctac 240

ctccagatga atagcctcag agctgaagac acggccgtct actattgtgc tcgggagcgg 300

tatagtggca gagactactg ggggcagggc acactcgtta cagtgagtag cggcggagga 360

gggagtgggg gcggtggctc cggtggagga ggttctgaga ttgttatgac ccagagtcct 420

gcgaccctct cagtcagccc cggggagcgc gcaactttgt cttgcagagc tagtcagtcc 480

gtgtcctctc ttctgacatg gtaccagcaa aagcccgggc aggctccgcg ccttttgatc 540

tttggggctt caacaagagc cactgggatt cccgcacgat tctctggctc cgggagcggt 600

actggtttca ccctgacgat tagcagtctc cagagcgagg acttcgccgt atactactgc 660

cagcagtacg atacgtggcc attcactttt ggaccaggga ctaaagtgga ttttaagcgc 720

gccgccgctc tcgataacga aaagtcaaat ggcaccataa tccacgtcaa aggcaagcac 780

ctgtgccctt ccccgctctt ccccggaccc agtaaaccat tttgggtgct ggttgttgtg 840

gggggcgtgc tggcctgcta tagccttttg gtcactgtag ccttcattat tttttgggtc 900

agatccaaaa gaagccgcct gctccatagc gattacatga atatgactcc acgccgccct 960

ggccccacaa ggaaacacta ccagccttac gcaccaccta gagatttcgc tgcctatcgg 1020

agcagggtga agttttccag atctgcagat gcaccagcgt atcagcaggg ccagaaccaa 1080

ctgtataacg agctcaacct gggacgcagg gaagagtatg acgttttgga caagcgcaga 1140

ggacgggacc ctgagatggg tggcaaacca agacgaaaaa acccccagga gggtctctat 1200

aatgagctgc agaaggataa gatggctgaa gcctattctg aaataggcat gaaaggagag 1260

cggagaaggg gaaaagggca cgacggtttg taccagggac tcagcactgc tacgaaggat 1320

acttatgacg ctctccacat gcaagccctg ccacctagg 1359

<210> 216

<211> 453

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 216

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asp Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Arg Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Arg Tyr Ser Gly Arg Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

115 120 125

Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser

130 135 140

Val Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser

145 150 155 160

Val Ser Ser Leu Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro

165 170 175

Arg Leu Leu Ile Phe Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala

180 185 190

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gly Phe Thr Leu Thr Ile Ser

195 200 205

Ser Leu Gln Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp

210 215 220

Thr Trp Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Phe Lys Arg

225 230 235 240

Ala Ala Ala Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val

245 250 255

Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys

260 265 270

Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser

275 280 285

Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg

290 295 300

Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro

305 310 315 320

Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe

325 330 335

Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro

340 345 350

Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly

355 360 365

Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro

370 375 380

Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr

385 390 395 400

Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly

405 410 415

Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln

420 425 430

Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln

435 440 445

Ala Leu Pro Pro Arg

450

<210> 217

<211> 1452

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 217

atggcactcc ccgtaactgc tctgctgctg ccgttggcat tgctcctgca cgccgcacgc 60

ccgcaggtgc agctcgtgga gtctggcggc ggcgtggtcc agcccggccg gtccctgcgc 120

ctgtcctgcg ccgccagcgg gtttactttt tcctcctacg gcatgcactg ggtgcgccag 180

gctcccggca agggcctcga gtgggtcgcc gtgatctcat acgatgggtc agacaaatac 240

tatgtcgatt ctgttaaagg gcggtttacc atttcaagag ataactctaa gaataggctg 300

tatttgcaga tgaacagcct gagggctgaa gataccgcag tgtactattg cgctagggag 360

cggtatagtg gccgcgatta ctggggacag ggtacactgg tgaccgtgag ctctgggggt 420

ggcggaagcg ggggtggcgg aagcggcgga gggggtagtg aaattgtgat gacccagtct 480

ccggctacac tttcagtctc ccctggggag agagctacac tgtcatgcag agcgtcccag 540

tccgtctctt ctctccttac ctggtatcag cagaagcccg gccaggctcc tcgactgctg 600

atcttcggtg cctccacaag ggcgaccggg attccagccc gcttctcagg ttctgggagc 660

ggaactggtt tcactttgac aatcagttca ctgcagtcag aggatttcgc cgtgtactac 720

tgccagcaat acgacacatg gccattcact ttcggacccg gtaccaaagt cgatttcaag 780

agagccgcgg ccatcgaggt tatgtaccca ccaccatatc tggacaatga aaaaagcaat 840

ggaaccatta tccatgtgaa gggtaaacac ctctgcccta gcccactttt ccctggccca 900

tcaaagccct tctgggtctt ggtggtcgtg gggggtgtgc tggcctgtta cagccttctg 960

gtgacggttg ctttcattat cttctgggtt agatccaaaa gaagccgcct gctccatagc 1020

gattacatga atatgactcc acgccgccct ggccccacaa ggaaacacta ccagccttac 1080

gcaccaccta gagatttcgc tgcctatcgg agcagggtga agttttccag atctgcagat 1140

gcaccagcgt atcagcaggg ccagaaccaa ctgtataacg agctcaacct gggacgcagg 1200

gaagagtatg acgttttgga caagcgcaga ggacgggacc ctgagatggg tggcaaacca 1260

agacgaaaaa acccccagga gggtctctat aatgagctgc agaaggataa gatggctgaa 1320

gcctattctg aaataggcat gaaaggagag cggagaaggg gaaaagggca cgacggtttg 1380

taccagggac tcagcactgc tacgaaggat acttatgacg ctctccacat gcaagccctg 1440

ccacctaggt aa 1452

<210> 218

<211> 483

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 218

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val

20 25 30

Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe

35 40 45

Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys

50 55 60

Gly Leu Glu Trp Val Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asp Lys Tyr

65 70 75 80

Tyr Val Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser

85 90 95

Lys Asn Arg Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr

100 105 110

Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Arg Tyr Ser Gly Arg Asp Tyr Trp

115 120 125

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

130 135 140

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Met Thr Gln Ser

145 150 155 160

Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys

165 170 175

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Leu Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys

180 185 190

Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Phe Gly Ala Ser Thr Arg Ala

195 200 205

Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gly Phe

210 215 220

Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr

225 230 235 240

Cys Gln Gln Tyr Asp Thr Trp Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys

245 250 255

Val Asp Phe Lys Arg Ala Ala Ala Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro

260 265 270

Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly

275 280 285

Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe

290 295 300

Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu

305 310 315 320

Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg

325 330 335

Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro

340 345 350

Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala

355 360 365

Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr

370 375 380

Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg

385 390 395 400

Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met

405 410 415

Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu

420 425 430

Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys

435 440 445

Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu

450 455 460

Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu

465 470 475 480

Pro Pro Arg

<210> 219

<211> 1386

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 219

caggtgcagc tcgtggagtc tggcggcggc gtggtccagc ccggccggtc cctgcgcctg 60

tcctgcgccg ccagcgggtt tactttttcc tcctacggca tgcactgggt gcgccaggct 120

cccggcaagg gcctcgagtg ggtcgccgtg atctcatacg atgggtcaga caaatactat 180

gtcgattctg ttaaagggcg gtttaccatt tcaagagata actctaagaa taggctgtat 240

ttgcagatga acagcctgag ggctgaagat accgcagtgt actattgcgc tagggagcgg 300

tatagtggcc gcgattactg gggacagggt acactggtga ccgtgagctc tgggggtggc 360

ggaagcgggg gtggcggaag cggcggaggg ggtagtgaaa ttgtgatgac ccagtctccg 420

gctacacttt cagtctcccc tggggagaga gctacactgt catgcagagc gtcccagtcc 480

gtctcttctc tccttacctg gtatcagcag aagcccggcc aggctcctcg actgctgatc 540

ttcggtgcct ccacaagggc gaccgggatt ccagcccgct tctcaggttc tgggagcgga 600

actggtttca ctttgacaat cagttcactg cagtcagagg atttcgccgt gtactactgc 660

cagcaatacg acacatggcc attcactttc ggacccggta ccaaagtcga tttcaagaga 720

gccgcggcca tcgaggttat gtacccacca ccatatctgg acaatgaaaa aagcaatgga 780

accattatcc atgtgaaggg taaacacctc tgccctagcc cacttttccc tggcccatca 840

aagcccttct gggtcttggt ggtcgtgggg ggtgtgctgg cctgttacag ccttctggtg 900

acggttgctt tcattatctt ctgggttaga tccaaaagaa gccgcctgct ccatagcgat 960

tacatgaata tgactccacg ccgccctggc cccacaagga aacactacca gccttacgca 1020

ccacctagag atttcgctgc ctatcggagc agggtgaagt tttccagatc tgcagatgca 1080

ccagcgtatc agcagggcca gaaccaactg tataacgagc tcaacctggg acgcagggaa 1140

gagtatgacg ttttggacaa gcgcagagga cgggaccctg agatgggtgg caaaccaaga 1200

cgaaaaaacc cccaggaggg tctctataat gagctgcaga aggataagat ggctgaagcc 1260

tattctgaaa taggcatgaa aggagagcgg agaaggggaa aagggcacga cggtttgtac 1320

cagggactca gcactgctac gaaggatact tatgacgctc tccacatgca agccctgcca 1380

cctagg 1386

<210> 220

<211> 462

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 220

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asp Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Arg Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Arg Tyr Ser Gly Arg Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

115 120 125

Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser

130 135 140

Val Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser

145 150 155 160

Val Ser Ser Leu Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro

165 170 175

Arg Leu Leu Ile Phe Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala

180 185 190

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gly Phe Thr Leu Thr Ile Ser

195 200 205

Ser Leu Gln Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp

210 215 220

Thr Trp Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Phe Lys Arg

225 230 235 240

Ala Ala Ala Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu

245 250 255

Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro

260 265 270

Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val

275 280 285

Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe

290 295 300

Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp

305 310 315 320

Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr

325 330 335

Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val

340 345 350

Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn

355 360 365

Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val

370 375 380

Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg

385 390 395 400

Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys

405 410 415

Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg

420 425 430

Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys

435 440 445

Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

450 455 460

<210> 221

<211> 1533

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 221

atggcactcc ccgtaactgc tctgctgctg ccgttggcat tgctcctgca cgccgcacgc 60

ccgcaggtgc agttggttga atcaggaggg ggtgtggtgc aacccggtcg gtcactgcgc 120

ctcagttgtg ctgcttccgg gtttactttc agctcatatg ggatgcactg ggtacggcag 180

gctccaggta aaggcttgga atgggtggcg gtgatcagct atgacggctc tgacaaatat 240

tatgtggact ccgtgaaagg cagattcacc atcagtcgag acaactcaaa gaatagactc 300

tacttgcaga tgaatagcct ccgggccgaa gatactgcag tctattattg cgcccgggag 360

cgctacagtg gaagagacta ttgggggcaa ggaactcttg tcacagtctc atctggcggc 420

ggcggcagcg gtgggggcgg atctggcggg ggcggcagcg aaatcgttat gactcagagt 480

cctgccacac tgagcgttag ccctggtgag agagcaacac ttagctgcag agctagtcag 540

agtgtttcca gtcttttgac atggtaccaa cagaagcccg gtcaagctcc acgactgctc 600

atcttcggtg catccacccg cgcaaccggg atacccgccc ggttttccgg ttctggaagt 660

ggcacaggat tcacgctcac catttcttct ctgcagtctg aagactttgc cgtgtattac 720

tgccagcagt acgatacctg gccctttacc tttggcccag gtactaaagt ggattttaaa 780

cgagctgctg cactttccaa tagtattatg tacttttcac attttgtgcc cgtgttcctg 840

cctgcgaagc ctacgacaac cccagcccct aggccgccca caccggcccc aactattgcc 900

tcccagccat tgtctctgag acccgaagct tgcagacctg ctgctggagg cgccgttcac 960

acccgaggat tggatttcgc atgtgacatt tacatctggg cccctttggc cggaacctgc 1020

ggtgtgctgc tgctgtcact cgtgattaca ctttactgca accaccgaaa cagatccaaa 1080

agaagccgcc tgctccatag cgattacatg aatatgactc cacgccgccc tggccccaca 1140

aggaaacact accagcctta cgcaccacct agagatttcg ctgcctatcg gagcagggtg 1200

aagttttcca gatctgcaga tgcaccagcg tatcagcagg gccagaacca actgtataac 1260

gagctcaacc tgggacgcag ggaagagtat gacgttttgg acaagcgcag aggacgggac 1320

cctgagatgg gtggcaaacc aagacgaaaa aacccccagg agggtctcta taatgagctg 1380

cagaaggata agatggctga agcctattct gaaataggca tgaaaggaga gcggagaagg 1440

ggaaaagggc acgacggttt gtaccaggga ctcagcactg ctacgaagga tacttatgac 1500

gctctccaca tgcaagccct gccacctagg taa 1533

<210> 222

<211> 510

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 222

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val

20 25 30

Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe

35 40 45

Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys

50 55 60

Gly Leu Glu Trp Val Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asp Lys Tyr

65 70 75 80

Tyr Val Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser

85 90 95

Lys Asn Arg Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr

100 105 110

Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Arg Tyr Ser Gly Arg Asp Tyr Trp

115 120 125

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

130 135 140

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Met Thr Gln Ser

145 150 155 160

Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys

165 170 175

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Leu Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys

180 185 190

Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Phe Gly Ala Ser Thr Arg Ala

195 200 205

Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gly Phe

210 215 220

Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr

225 230 235 240

Cys Gln Gln Tyr Asp Thr Trp Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys

245 250 255

Val Asp Phe Lys Arg Ala Ala Ala Leu Ser Asn Ser Ile Met Tyr Phe

260 265 270

Ser His Phe Val Pro Val Phe Leu Pro Ala Lys Pro Thr Thr Thr Pro

275 280 285

Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu

290 295 300

Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His

305 310 315 320

Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu

325 330 335

Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr

340 345 350

Cys Asn His Arg Asn Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp

355 360 365

Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr

370 375 380

Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val

385 390 395 400

Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn

405 410 415

Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val

420 425 430

Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg

435 440 445

Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys

450 455 460

Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg

465 470 475 480

Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys

485 490 495

Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

500 505 510

<210> 223

<211> 1467

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 223

caggtgcagt tggttgaatc aggagggggt gtggtgcaac ccggtcggtc actgcgcctc 60

agttgtgctg cttccgggtt tactttcagc tcatatggga tgcactgggt acggcaggct 120

ccaggtaaag gcttggaatg ggtggcggtg atcagctatg acggctctga caaatattat 180

gtggactccg tgaaaggcag attcaccatc agtcgagaca actcaaagaa tagactctac 240

ttgcagatga atagcctccg ggccgaagat actgcagtct attattgcgc ccgggagcgc 300

tacagtggaa gagactattg ggggcaagga actcttgtca cagtctcatc tggcggcggc 360

ggcagcggtg ggggcggatc tggcgggggc ggcagcgaaa tcgttatgac tcagagtcct 420

gccacactga gcgttagccc tggtgagaga gcaacactta gctgcagagc tagtcagagt 480

gtttccagtc ttttgacatg gtaccaacag aagcccggtc aagctccacg actgctcatc 540

ttcggtgcat ccacccgcgc aaccgggata cccgcccggt tttccggttc tggaagtggc 600

acaggattca cgctcaccat ttcttctctg cagtctgaag actttgccgt gtattactgc 660

cagcagtacg atacctggcc ctttaccttt ggcccaggta ctaaagtgga ttttaaacga 720

gctgctgcac tttccaatag tattatgtac ttttcacatt ttgtgcccgt gttcctgcct 780

gcgaagccta cgacaacccc agcccctagg ccgcccacac cggccccaac tattgcctcc 840

cagccattgt ctctgagacc cgaagcttgc agacctgctg ctggaggcgc cgttcacacc 900

cgaggattgg atttcgcatg tgacatttac atctgggccc ctttggccgg aacctgcggt 960

gtgctgctgc tgtcactcgt gattacactt tactgcaacc accgaaacag atccaaaaga 1020

agccgcctgc tccatagcga ttacatgaat atgactccac gccgccctgg ccccacaagg 1080

aaacactacc agccttacgc accacctaga gatttcgctg cctatcggag cagggtgaag 1140

ttttccagat ctgcagatgc accagcgtat cagcagggcc agaaccaact gtataacgag 1200

ctcaacctgg gacgcaggga agagtatgac gttttggaca agcgcagagg acgggaccct 1260

gagatgggtg gcaaaccaag acgaaaaaac ccccaggagg gtctctataa tgagctgcag 1320

aaggataaga tggctgaagc ctattctgaa ataggcatga aaggagagcg gagaagggga 1380

aaagggcacg acggtttgta ccagggactc agcactgcta cgaaggatac ttatgacgct 1440

ctccacatgc aagccctgcc acctagg 1467

<210> 224

<211> 489

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 224

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asp Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Arg Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Arg Tyr Ser Gly Arg Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

115 120 125

Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser

130 135 140

Val Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser

145 150 155 160

Val Ser Ser Leu Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro

165 170 175

Arg Leu Leu Ile Phe Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala

180 185 190

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gly Phe Thr Leu Thr Ile Ser

195 200 205

Ser Leu Gln Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp

210 215 220

Thr Trp Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Phe Lys Arg

225 230 235 240

Ala Ala Ala Leu Ser Asn Ser Ile Met Tyr Phe Ser His Phe Val Pro

245 250 255

Val Phe Leu Pro Ala Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro

260 265 270

Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu

275 280 285

Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp

290 295 300

Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly

305 310 315 320

Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn His Arg Asn

325 330 335

Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr

340 345 350

Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro

355 360 365

Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser

370 375 380

Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu

385 390 395 400

Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg

405 410 415

Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln

420 425 430

Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr

435 440 445

Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp

450 455 460

Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala

465 470 475 480

Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

485

<210> 225

<211> 1425

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 225

atggcactcc ccgtaactgc tctgctgctg ccgttggcat tgctcctgca cgccgcacgc 60

ccggagattg tgatgaccca gtcccctgct accctgtccg tcagtccggg cgagagagcc 120

accttgtcat gccgggccag ccagtccgtc agcagtctcc tgacttggta tcagcaaaaa 180

ccagggcagg caccgcggct tttgattttt ggtgcaagca cacgcgccac tggcattcca 240

gctaggtttt ctggaagtgg atctgggaca ggcttcactc tgacaatcag tagcctgcag 300

agtgaggact ttgctgttta ctactgtcaa cagtacgaca cctggccatt cacattcggg 360

cccggcacca aggtcgactt caagaggggc ggtggaggtt caggtggtgg cgggtcaggc 420

ggcggtgggt ctcaggttca actggtggaa tcaggtggcg gcgttgtcca accggggcga 480

tcacttcgac tttcctgtgc tgcctcaggc tttacttttt catcctatgg gatgcactgg 540

gttcggcagg ctcccggaaa aggactcgag tgggttgcag tgatctctta cgatggctca 600

gacaagtatt atgtggactc agtcaagggg agattcacaa taagccgaga caactccaaa 660

aaccggcttt atctccagat gaacagcctt agagcggaag ataccgcggt atactactgt 720

gcccgcgaga ggtattccgg cagagactac tggggacagg gcacactggt caccgtgagt 780

tctgccgcag cgctcgataa cgaaaagagc aacggaacca ttatccacgt taagggcaag 840

cacctgtgcc ccagtcccct cttcccagga ccatctaaac ccttctgggt tctggtagta 900

gttggagggg tccttgcatg ttactccctt ttggtcaccg tcgccttcat tattttctgg 960

gtgagatcca aaagaagccg cctgctccat agcgattaca tgaatatgac tccacgccgc 1020

cctggcccca caaggaaaca ctaccagcct tacgcaccac ctagagattt cgctgcctat 1080

cggagcaggg tgaagttttc cagatctgca gatgcaccag cgtatcagca gggccagaac 1140

caactgtata acgagctcaa cctgggacgc agggaagagt atgacgtttt ggacaagcgc 1200

agaggacggg accctgagat gggtggcaaa ccaagacgaa aaaaccccca ggagggtctc 1260

tataatgagc tgcagaagga taagatggct gaagcctatt ctgaaatagg catgaaagga 1320

gagcggagaa ggggaaaagg gcacgacggt ttgtaccagg gactcagcac tgctacgaag 1380

gatacttatg acgctctcca catgcaagcc ctgccaccta ggtaa 1425

<210> 226

<211> 474

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 226

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu

20 25 30

Ser Val Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln

35 40 45

Ser Val Ser Ser Leu Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala

50 55 60

Pro Arg Leu Leu Ile Phe Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro

65 70 75 80

Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gly Phe Thr Leu Thr Ile

85 90 95

Ser Ser Leu Gln Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr

100 105 110

Asp Thr Trp Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Phe Lys

115 120 125

Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

130 135 140

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

145 150 155 160

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

165 170 175

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

180 185 190

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asp Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val

195 200 205

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Arg Leu Tyr

210 215 220

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

225 230 235 240

Ala Arg Glu Arg Tyr Ser Gly Arg Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

245 250 255

Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly

260 265 270

Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe

275 280 285

Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val

290 295 300

Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp

305 310 315 320

Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met

325 330 335

Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala

340 345 350

Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg

355 360 365

Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn

370 375 380

Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg

385 390 395 400

Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro

405 410 415

Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala

420 425 430

Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His

435 440 445

Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp

450 455 460

Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

465 470

<210> 227

<211> 1359

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 227

gagattgtga tgacccagtc ccctgctacc ctgtccgtca gtccgggcga gagagccacc 60

ttgtcatgcc gggccagcca gtccgtcagc agtctcctga cttggtatca gcaaaaacca 120

gggcaggcac cgcggctttt gatttttggt gcaagcacac gcgccactgg cattccagct 180

aggttttctg gaagtggatc tgggacaggc ttcactctga caatcagtag cctgcagagt 240

gaggactttg ctgtttacta ctgtcaacag tacgacacct ggccattcac attcgggccc 300

ggcaccaagg tcgacttcaa gaggggcggt ggaggttcag gtggtggcgg gtcaggcggc 360

ggtgggtctc aggttcaact ggtggaatca ggtggcggcg ttgtccaacc ggggcgatca 420

cttcgacttt cctgtgctgc ctcaggcttt actttttcat cctatgggat gcactgggtt 480

cggcaggctc ccggaaaagg actcgagtgg gttgcagtga tctcttacga tggctcagac 540

aagtattatg tggactcagt caaggggaga ttcacaataa gccgagacaa ctccaaaaac 600

cggctttatc tccagatgaa cagccttaga gcggaagata ccgcggtata ctactgtgcc 660

cgcgagaggt attccggcag agactactgg ggacagggca cactggtcac cgtgagttct 720

gccgcagcgc tcgataacga aaagagcaac ggaaccatta tccacgttaa gggcaagcac 780

ctgtgcccca gtcccctctt cccaggacca tctaaaccct tctgggttct ggtagtagtt 840

ggaggggtcc ttgcatgtta ctcccttttg gtcaccgtcg ccttcattat tttctgggtg 900

agatccaaaa gaagccgcct gctccatagc gattacatga atatgactcc acgccgccct 960

ggccccacaa ggaaacacta ccagccttac gcaccaccta gagatttcgc tgcctatcgg 1020

agcagggtga agttttccag atctgcagat gcaccagcgt atcagcaggg ccagaaccaa 1080

ctgtataacg agctcaacct gggacgcagg gaagagtatg acgttttgga caagcgcaga 1140

ggacgggacc ctgagatggg tggcaaacca agacgaaaaa acccccagga gggtctctat 1200

aatgagctgc agaaggataa gatggctgaa gcctattctg aaataggcat gaaaggagag 1260

cggagaaggg gaaaagggca cgacggtttg taccagggac tcagcactgc tacgaaggat 1320

acttatgacg ctctccacat gcaagccctg ccacctagg 1359

<210> 228

<211> 453

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 228

Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Leu

20 25 30

Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Phe Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Gly Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Thr Trp Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Phe Lys Arg Gly Gly Gly Gly

100 105 110

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val

115 120 125

Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser

130 135 140

Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met His Trp Val

145 150 155 160

Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Val Ile Ser Tyr

165 170 175

Asp Gly Ser Asp Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr

180 185 190

Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Arg Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser

195 200 205

Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Arg Tyr

210 215 220

Ser Gly Arg Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

225 230 235 240

Ala Ala Ala Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val

245 250 255

Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys

260 265 270

Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser

275 280 285

Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg

290 295 300

Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro

305 310 315 320

Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe

325 330 335

Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro

340 345 350

Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly

355 360 365

Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro

370 375 380

Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr

385 390 395 400

Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly

405 410 415

Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln

420 425 430

Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln

435 440 445

Ala Leu Pro Pro Arg

450

<210> 229

<211> 1452

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 229

atggcactcc ccgtaactgc tctgctgctg ccgttggcat tgctcctgca cgccgcacgc 60

ccggagatcg tcatgacaca gagtccagct accctgagcg tgtcccctgg agagagagcc 120

accctgtcct gtagggctag tcagagtgtg tccagcctcc tcacctggta tcaacagaag 180

cctggtcaag ctccccggct gcttatcttc ggggccagca cgcgagccac aggcatcccg 240

gccagattct ctggctctgg cagtggcacc gggttcactc tcacgatctc atccctgcag 300

tcagaggatt tcgctgtgta ttactgtcag cagtacgata catggccctt caccttcggc 360

ccgggcacaa aagtagattt caagcgcggc ggcgggggta gtgggggcgg gggatcagga 420

ggagggggct cccaagtaca gctggttgag agcggcggcg gggtggttca gcccgggcgc 480

agcctcaggc tgagttgcgc agcatcagga ttcacattca gttcttatgg aatgcattgg 540

gtcagacagg ctcccgggaa gggccttgaa tgggtggcag tcattagcta cgacggaagc 600

gataagtact atgtggactc agttaaaggg agatttacta tcagccgcga caattccaaa 660

aacagattgt atttgcagat gaactccctc agggcggagg acactgctgt atattactgc 720

gcacgagaga gatactccgg ccgagactat tggggccaag gaacattggt aactgtgagc 780

tccgccgcag ctattgaggt catgtacccc ccaccttatc tcgataatga gaagagtaat 840

gggactataa ttcacgtaaa gggcaaacac ctgtgccctt ccccgctgtt tccaggtcca 900

agtaagccgt tctgggtcct ggttgtggtg ggaggggtgc tggcctgcta ttctctgttg 960

gttaccgtgg cctttatcat tttctgggtg agatccaaaa gaagccgcct gctccatagc 1020

gattacatga atatgactcc acgccgccct ggccccacaa ggaaacacta ccagccttac 1080

gcaccaccta gagatttcgc tgcctatcgg agcagggtga agttttccag atctgcagat 1140

gcaccagcgt atcagcaggg ccagaaccaa ctgtataacg agctcaacct gggacgcagg 1200

gaagagtatg acgttttgga caagcgcaga ggacgggacc ctgagatggg tggcaaacca 1260

agacgaaaaa acccccagga gggtctctat aatgagctgc agaaggataa gatggctgaa 1320

gcctattctg aaataggcat gaaaggagag cggagaaggg gaaaagggca cgacggtttg 1380

taccagggac tcagcactgc tacgaaggat acttatgacg ctctccacat gcaagccctg 1440

ccacctaggt aa 1452

<210> 230

<211> 483

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 230

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu

20 25 30

Ser Val Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln

35 40 45

Ser Val Ser Ser Leu Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala

50 55 60

Pro Arg Leu Leu Ile Phe Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro

65 70 75 80

Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gly Phe Thr Leu Thr Ile

85 90 95

Ser Ser Leu Gln Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr

100 105 110

Asp Thr Trp Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Phe Lys

115 120 125

Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

130 135 140

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

145 150 155 160

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

165 170 175

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

180 185 190

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asp Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val

195 200 205

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Arg Leu Tyr

210 215 220

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

225 230 235 240

Ala Arg Glu Arg Tyr Ser Gly Arg Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

245 250 255

Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro

260 265 270

Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly

275 280 285

Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe

290 295 300

Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu

305 310 315 320

Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg

325 330 335

Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro

340 345 350

Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala

355 360 365

Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr

370 375 380

Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg

385 390 395 400

Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met

405 410 415

Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu

420 425 430

Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys

435 440 445

Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu

450 455 460

Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu

465 470 475 480

Pro Pro Arg

<210> 231

<211> 1386

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 231

gagatcgtca tgacacagag tccagctacc ctgagcgtgt cccctggaga gagagccacc 60

ctgtcctgta gggctagtca gagtgtgtcc agcctcctca cctggtatca acagaagcct 120

ggtcaagctc cccggctgct tatcttcggg gccagcacgc gagccacagg catcccggcc 180

agattctctg gctctggcag tggcaccggg ttcactctca cgatctcatc cctgcagtca 240

gaggatttcg ctgtgtatta ctgtcagcag tacgatacat ggcccttcac cttcggcccg 300

ggcacaaaag tagatttcaa gcgcggcggc gggggtagtg ggggcggggg atcaggagga 360

gggggctccc aagtacagct ggttgagagc ggcggcgggg tggttcagcc cgggcgcagc 420

ctcaggctga gttgcgcagc atcaggattc acattcagtt cttatggaat gcattgggtc 480

agacaggctc ccgggaaggg ccttgaatgg gtggcagtca ttagctacga cggaagcgat 540

aagtactatg tggactcagt taaagggaga tttactatca gccgcgacaa ttccaaaaac 600

agattgtatt tgcagatgaa ctccctcagg gcggaggaca ctgctgtata ttactgcgca 660

cgagagagat actccggccg agactattgg ggccaaggaa cattggtaac tgtgagctcc 720

gccgcagcta ttgaggtcat gtacccccca ccttatctcg ataatgagaa gagtaatggg 780

actataattc acgtaaaggg caaacacctg tgcccttccc cgctgtttcc aggtccaagt 840

aagccgttct gggtcctggt tgtggtggga ggggtgctgg cctgctattc tctgttggtt 900

accgtggcct ttatcatttt ctgggtgaga tccaaaagaa gccgcctgct ccatagcgat 960

tacatgaata tgactccacg ccgccctggc cccacaagga aacactacca gccttacgca 1020

ccacctagag atttcgctgc ctatcggagc agggtgaagt tttccagatc tgcagatgca 1080

ccagcgtatc agcagggcca gaaccaactg tataacgagc tcaacctggg acgcagggaa 1140

gagtatgacg ttttggacaa gcgcagagga cgggaccctg agatgggtgg caaaccaaga 1200

cgaaaaaacc cccaggaggg tctctataat gagctgcaga aggataagat ggctgaagcc 1260

tattctgaaa taggcatgaa aggagagcgg agaaggggaa aagggcacga cggtttgtac 1320

cagggactca gcactgctac gaaggatact tatgacgctc tccacatgca agccctgcca 1380

cctagg 1386

<210> 232

<211> 462

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 232

Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Leu

20 25 30

Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Phe Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Gly Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Thr Trp Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Phe Lys Arg Gly Gly Gly Gly

100 105 110

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val

115 120 125

Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser

130 135 140

Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met His Trp Val

145 150 155 160

Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Val Ile Ser Tyr

165 170 175

Asp Gly Ser Asp Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr

180 185 190

Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Arg Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser

195 200 205

Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Arg Tyr

210 215 220

Ser Gly Arg Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

225 230 235 240

Ala Ala Ala Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu

245 250 255

Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro

260 265 270

Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val

275 280 285

Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe

290 295 300

Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp

305 310 315 320

Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr

325 330 335

Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val

340 345 350

Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn

355 360 365

Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val

370 375 380

Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg

385 390 395 400

Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys

405 410 415

Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg

420 425 430

Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys

435 440 445

Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

450 455 460

<210> 233

<211> 1533

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 233

atggcactcc ccgtaactgc tctgctgctg ccgttggcat tgctcctgca cgccgcacgc 60

ccggaaatag tgatgactca gtccccggcc accctcagcg tgtcccccgg ggagcgagcg 120

accctgtcat gcagggcttc ccagagtgtc agctccctgc tcacttggta tcagcaaaag 180

ccggggcagg ctccccgcct cctcatcttc ggggcatcaa ctagggccac cggcattcct 240

gcaagatttt ccgggtctgg cagcggcacc ggcttcaccc ttaccattag ctctctgcag 300

tctgaggact tcgccgttta ctattgtcag cagtatgata cttggccctt taccttcggt 360

cccggaacta aggtggactt caagcgcggg gggggtggat ctggaggtgg tggctccggg 420

ggcggtggaa gccaggtcca gttggttgag agcggcggcg gagtggtgca gcccgggagg 480

tccttgcggc tgagctgtgc agcctccggt tttacttttt ctagctatgg aatgcattgg 540

gtaagacagg ctcccggaaa aggcctcgag tgggtggcgg tcattagcta tgatggatct 600

gataaatact atgtggactc agttaagggg cgcttcacaa tctcaagaga caatagcaaa 660

aatagactgt acctgcagat gaatagtctg cgcgccgagg acactgccgt gtactactgc 720

gcccgcgaga gatacagcgg acgggattac tggggccagg gtaccctcgt aacggtgtcc 780

tccgctgccg cccttagcaa cagcattatg tacttttctc atttcgtgcc agtctttctc 840

ccagcaaagc ccaccactac cccggccccc aggccgccta ctcctgcccc cactatcgcg 900

tctcagcctc tctccttgcg gcccgaggcc tgccggccag ccgcaggggg cgccgtacat 960

actcggggtt tggatttcgc ttgcgacata tatatttggg cccccctcgc cggcacatgt 1020

ggagtgctgc tcctgagtct cgttataacc ctctattgca accatagaaa cagatccaaa 1080

agaagccgcc tgctccatag cgattacatg aatatgactc cacgccgccc tggccccaca 1140

aggaaacact accagcctta cgcaccacct agagatttcg ctgcctatcg gagcagggtg 1200

aagttttcca gatctgcaga tgcaccagcg tatcagcagg gccagaacca actgtataac 1260

gagctcaacc tgggacgcag ggaagagtat gacgttttgg acaagcgcag aggacgggac 1320

cctgagatgg gtggcaaacc aagacgaaaa aacccccagg agggtctcta taatgagctg 1380

cagaaggata agatggctga agcctattct gaaataggca tgaaaggaga gcggagaagg 1440

ggaaaagggc acgacggttt gtaccaggga ctcagcactg ctacgaagga tacttatgac 1500

gctctccaca tgcaagccct gccacctagg taa 1533

<210> 234

<211> 510

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 234

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu

20 25 30

Ser Val Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln

35 40 45

Ser Val Ser Ser Leu Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala

50 55 60

Pro Arg Leu Leu Ile Phe Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro

65 70 75 80

Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gly Phe Thr Leu Thr Ile

85 90 95

Ser Ser Leu Gln Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr

100 105 110

Asp Thr Trp Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Phe Lys

115 120 125

Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

130 135 140

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

145 150 155 160

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

165 170 175

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

180 185 190

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asp Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val

195 200 205

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Arg Leu Tyr

210 215 220

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

225 230 235 240

Ala Arg Glu Arg Tyr Ser Gly Arg Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

245 250 255

Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Leu Ser Asn Ser Ile Met Tyr Phe

260 265 270

Ser His Phe Val Pro Val Phe Leu Pro Ala Lys Pro Thr Thr Thr Pro

275 280 285

Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu

290 295 300

Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His

305 310 315 320

Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu

325 330 335

Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr

340 345 350

Cys Asn His Arg Asn Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp

355 360 365

Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr

370 375 380

Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val

385 390 395 400

Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn

405 410 415

Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val

420 425 430

Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg

435 440 445

Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys

450 455 460

Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg

465 470 475 480

Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys

485 490 495

Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

500 505 510

<210> 235

<211> 1467

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 235

gaaatagtga tgactcagtc cccggccacc ctcagcgtgt cccccgggga gcgagcgacc 60

ctgtcatgca gggcttccca gagtgtcagc tccctgctca cttggtatca gcaaaagccg 120

gggcaggctc cccgcctcct catcttcggg gcatcaacta gggccaccgg cattcctgca 180

agattttccg ggtctggcag cggcaccggc ttcaccctta ccattagctc tctgcagtct 240

gaggacttcg ccgtttacta ttgtcagcag tatgatactt ggccctttac cttcggtccc 300

ggaactaagg tggacttcaa gcgcgggggg ggtggatctg gaggtggtgg ctccgggggc 360

ggtggaagcc aggtccagtt ggttgagagc ggcggcggag tggtgcagcc cgggaggtcc 420

ttgcggctga gctgtgcagc ctccggtttt actttttcta gctatggaat gcattgggta 480

agacaggctc ccggaaaagg cctcgagtgg gtggcggtca ttagctatga tggatctgat 540

aaatactatg tggactcagt taaggggcgc ttcacaatct caagagacaa tagcaaaaat 600

agactgtacc tgcagatgaa tagtctgcgc gccgaggaca ctgccgtgta ctactgcgcc 660

cgcgagagat acagcggacg ggattactgg ggccagggta ccctcgtaac ggtgtcctcc 720

gctgccgccc ttagcaacag cattatgtac ttttctcatt tcgtgccagt ctttctccca 780

gcaaagccca ccactacccc ggcccccagg ccgcctactc ctgcccccac tatcgcgtct 840

cagcctctct ccttgcggcc cgaggcctgc cggccagccg cagggggcgc cgtacatact 900

cggggtttgg atttcgcttg cgacatatat atttgggccc ccctcgccgg cacatgtgga 960

gtgctgctcc tgagtctcgt tataaccctc tattgcaacc atagaaacag atccaaaaga 1020

agccgcctgc tccatagcga ttacatgaat atgactccac gccgccctgg ccccacaagg 1080

aaacactacc agccttacgc accacctaga gatttcgctg cctatcggag cagggtgaag 1140

ttttccagat ctgcagatgc accagcgtat cagcagggcc agaaccaact gtataacgag 1200

ctcaacctgg gacgcaggga agagtatgac gttttggaca agcgcagagg acgggaccct 1260

gagatgggtg gcaaaccaag acgaaaaaac ccccaggagg gtctctataa tgagctgcag 1320

aaggataaga tggctgaagc ctattctgaa ataggcatga aaggagagcg gagaagggga 1380

aaagggcacg acggtttgta ccagggactc agcactgcta cgaaggatac ttatgacgct 1440

ctccacatgc aagccctgcc acctagg 1467

<210> 236

<211> 489

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CLL-1 CAR构建体

<400> 236

Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Leu

20 25 30

Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Phe Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Gly Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Thr Trp Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Phe Lys Arg Gly Gly Gly Gly

100 105 110

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val

115 120 125

Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser

130 135 140

Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met His Trp Val

145 150 155 160

Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Val Ile Ser Tyr

165 170 175

Asp Gly Ser Asp Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr

180 185 190

Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Arg Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser

195 200 205

Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Arg Tyr

210 215 220

Ser Gly Arg Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

225 230 235 240

Ala Ala Ala Leu Ser Asn Ser Ile Met Tyr Phe Ser His Phe Val Pro

245 250 255

Val Phe Leu Pro Ala Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro

260 265 270

Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu

275 280 285

Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp

290 295 300

Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly

305 310 315 320

Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn His Arg Asn

325 330 335

Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr

340 345 350

Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro

355 360 365

Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser

370 375 380

Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu

385 390 395 400

Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg

405 410 415

Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln

420 425 430

Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr

435 440 445

Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp

450 455 460

Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala

465 470 475 480

Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

485

<210> 237

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> scFv G4s接头

<400> 237

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

1 5 10 15

<210> 238

<211> 288

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CD8细胞外和跨膜结构域

<400> 238

gctgcagcat tgagcaactc aataatgtat tttagtcact ttgtaccagt gttcttgccg 60

gctaagccta ctaccacacc cgctccacgg ccacctaccc cagctcctac catcgcttca 120

cagcctctgt ccctgcgccc agaggcttgc cgaccggccg cagggggcgc tgttcatacc 180

agaggactgg atttcgcctg cgatatctat atctgggcac ccctggccgg aacctgcggc 240

gtactcctgc tgtccctggt catcacgctc tattgtaatc acaggaac 288

<210> 239

<211> 96

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD8细胞外和跨膜结构域

<400> 239

Ala Ala Ala Leu Ser Asn Ser Ile Met Tyr Phe Ser His Phe Val Pro

1 5 10 15

Val Phe Leu Pro Ala Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro

20 25 30

Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu

35 40 45

Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp

50 55 60

Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly

65 70 75 80

Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn His Arg Asn

85 90 95

<210> 240

<211> 294

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 细胞外和细胞内结构域

<400> 240

cttgataatg aaaagtcaaa cggaacaatc attcacgtga agggcaagca cctctgtccg 60

tcacccttgt tccctggtcc atccaagcca ttctgggtgt tggtcgtagt gggtggagtc 120

ctcgcttgtt actctctgct cgtcaccgtg gcttttataa tcttctgggt tagatccaaa 180

agaagccgcc tgctccatag cgattacatg aatatgactc cacgccgccc tggccccaca 240

aggaaacact accagcctta cgcaccacct agagatttcg ctgcctatcg gagc 294

<210> 241

<211> 98

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 细胞外和细胞内结构域

<400> 241

Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys

1 5 10 15

His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp

20 25 30

Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val

35 40 45

Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu

50 55 60

Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr

65 70 75 80

Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr

85 90 95

Arg Ser

<210> 242

<211> 1482

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 10E3_CHD_DNA

<400> 242

atggcactcc ccgtaactgc tctgctgctg ccgttggcat tgctcctgca cgccgcacgc 60

ccgcaggtga ccctcaaaga gtctggaccc gtgctcgtaa aacctacgga gaccctgaca 120

ctcacctgca cagtctccgg cttcagcctc atcaatgcca ggatgggagt ttcctggatc 180

aggcaaccgc ccggaaaggc cctggaatgg ctcgcacata ttttcagtaa cgctgaaaaa 240

agctatcgga cttctctgaa aagtcggctc acgattagta aggacacatc caagagccaa 300

gtggtgctta cgatgactaa catggaccct gtggatactg caacctatta ctgtgctcga 360

atccctggtt atggcggaaa tggggactac cactactacg gtatggatgt ctggggccaa 420

gggaccacgg ttactgtttc aagcggaggg ggagggagtg ggggtggcgg atctggcgga 480

ggaggcagcg atatccagat gacgcagtcc cctagttcac tttccgcatc cctgggggat 540

cgggttacca ttacatgccg cgcgtcacag ggtatccgga atgatctggg atggtaccag 600

cagaagccgg gaaaggctcc taagcgcctc atctacgcca gctccaccct gcagagtgga 660

gtgccctccc ggttttcagg cagtggctcc ggtacggagt ttactcttac aattagcagc 720

ctgcagccag aagattttgc aacttactac tgtttgcagc ataataattt cccctggacc 780

tttggtcagg gcaccaaggt ggagatcaaa agagcagccg ccatcgaagt aatgtatccc 840

cccccgtacc ttgacaatga gaagtcaaat ggaaccatta tccatgttaa gggcaaacac 900

ctctgccctt ctccactgtt ccctggccct agtaagccgt tttgggtgct ggtggtagtc 960

ggtggggtgc tggcttgtta ctctcttctc gtgaccgtcg cctttataat cttttgggtc 1020

agatccaaaa gaagccgcct gctccatagc gattacatga atatgactcc acgccgccct 1080

ggccccacaa ggaaacacta ccagccttac gcaccaccta gagatttcgc tgcctatcgg 1140

agccgagtga aattttctag atcagctgat gctcccgcct atcagcaggg acagaatcaa 1200

ctttacaatg agctgaacct gggtcgcaga gaagagtacg acgttttgga caaacgccgg 1260

ggccgagatc ctgagatggg ggggaagccg agaaggaaga atcctcaaga aggcctgtac 1320

aacgagcttc aaaaagacaa aatggctgag gcgtactctg agatcggcat gaagggcgag 1380

cggagacgag gcaagggtca cgatggcttg tatcagggcc tgagtacagc cacaaaggac 1440

acctatgacg ccctccacat gcaggcactg cccccacgct ag 1482

<210> 243

<211> 493

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 10E3_CHD_AA

<400> 243

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu

20 25 30

Val Lys Pro Thr Glu Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe

35 40 45

Ser Leu Ile Asn Ala Arg Met Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro

50 55 60

Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu Ala His Ile Phe Ser Asn Ala Glu Lys

65 70 75 80

Ser Tyr Arg Thr Ser Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr

85 90 95

Ser Lys Ser Gln Val Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp

100 105 110

Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Ile Pro Gly Tyr Gly Gly Asn Gly

115 120 125

Asp Tyr His Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val

130 135 140

Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

145 150 155 160

Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala

165 170 175

Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile

180 185 190

Arg Asn Asp Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys

195 200 205

Arg Leu Ile Tyr Ala Ser Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg

210 215 220

Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser

225 230 235 240

Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Asn

245 250 255

Phe Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ala

260 265 270

Ala Ala Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys

275 280 285

Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser

290 295 300

Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val

305 310 315 320

Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile

325 330 335

Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr

340 345 350

Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln

355 360 365

Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys

370 375 380

Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln

385 390 395 400

Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu

405 410 415

Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg

420 425 430

Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met

435 440 445

Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly

450 455 460

Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp

465 470 475 480

Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

485 490

<210> 244

<211> 1455

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 10E3_THD_DNA

<400> 244

atggcactcc ccgtaactgc tctgctgctg ccgttggcat tgctcctgca cgccgcacgc 60

ccgcaagtta ctttgaagga gtctggacct gtactggtga agccaaccga gacactgaca 120

ctcacgtgta cagtgagtgg tttttccttg atcaacgcaa ggatgggcgt cagctggatc 180

aggcaacccc ctggcaaggc tctggaatgg ctcgctcaca tattcagcaa tgccgaaaaa 240

agctaccgga caagcctgaa atcccgcctg actatttcca aggacacttc taagtctcag 300

gtggtgctga ccatgaccaa catggacccg gtggacaccg ccacctatta ctgcgcaaga 360

atccctgggt atggtgggaa tggtgactac cattattatg ggatggatgt gtgggggcaa 420

ggcacaaccg taacggtctc aagcggtggg ggaggctcag ggggcggagg ctccggaggt 480

ggcggctccg acattcagat gacccaaagc ccgtccagcc tgtccgccag cctgggagat 540

agagtgacaa tcacgtgtag agcttcccaa gggataagaa atgatctcgg gtggtatcag 600

cagaagcccg gcaaagcccc caaaaggctt atatatgcta gtagtacact gcagtctgga 660

gttccttccc gattttcagg tagcggctcc ggtacagagt tcaccctcac gataagctca 720

ctccagcctg aggatttcgc aacgtactac tgcctccagc acaacaattt tccctggact 780

ttcggccagg gcaccaaggt ggagatcaag agggccgctg cccttgataa tgaaaagtca 840

aacggaacaa tcattcacgt gaagggcaag cacctctgtc cgtcaccctt gttccctggt 900

ccatccaagc cattctgggt gttggtcgta gtgggtggag tcctcgcttg ttactctctg 960

ctcgtcaccg tggcttttat aatcttctgg gttagatcca aaagaagccg cctgctccat 1020

agcgattaca tgaatatgac tccacgccgc cctggcccca caaggaaaca ctaccagcct 1080

tacgcaccac ctagagattt cgctgcctat cggagccgag tgaaattttc tagatcagct 1140

gatgctcccg cctatcagca gggacagaat caactttaca atgagctgaa cctgggtcgc 1200

agagaagagt acgacgtttt ggacaaacgc cggggccgag atcctgagat gggggggaag 1260

ccgagaagga agaatcctca agaaggcctg tacaacgagc ttcaaaaaga caaaatggct 1320

gaggcgtact ctgagatcgg catgaagggc gagcggagac gaggcaaggg tcacgatggc 1380

ttgtatcagg gcctgagtac agccacaaag gacacctatg acgccctcca catgcaggca 1440

ctgcccccac gctag 1455

<210> 245

<211> 484

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 10E3_THD_AA

<400> 245

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu

20 25 30

Val Lys Pro Thr Glu Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe

35 40 45

Ser Leu Ile Asn Ala Arg Met Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro

50 55 60

Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu Ala His Ile Phe Ser Asn Ala Glu Lys

65 70 75 80

Ser Tyr Arg Thr Ser Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr

85 90 95

Ser Lys Ser Gln Val Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp

100 105 110

Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Ile Pro Gly Tyr Gly Gly Asn Gly

115 120 125

Asp Tyr His Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val

130 135 140

Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

145 150 155 160

Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala

165 170 175

Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile

180 185 190

Arg Asn Asp Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys

195 200 205

Arg Leu Ile Tyr Ala Ser Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg

210 215 220

Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser

225 230 235 240

Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Asn

245 250 255

Phe Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ala

260 265 270

Ala Ala Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys

275 280 285

Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro

290 295 300

Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu

305 310 315 320

Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser

325 330 335

Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly

340 345 350

Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala

355 360 365

Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala

370 375 380

Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg

385 390 395 400

Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu

405 410 415

Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn

420 425 430

Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met

435 440 445

Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly

450 455 460

Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala

465 470 475 480

Leu Pro Pro Arg

<210> 246

<211> 1464

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 8B5_CHD_DNA

<400> 246

atggcactcc ccgtaactgc tctgctgctg ccgttggcat tgctcctgca cgccgcacgc 60

ccgcagatcc agttggtgga atcagggggc ggtgtggtgc agccgggtag gagcctgaga 120

ctgtcatgcg tggcgtctgg cttcacattc aagaactacg gcatgcactg ggtgcgacag 180

gcccccggaa agggtttgga gtgggtcgcc gtgatctggt acgacggatc taatgagtat 240

tacggagatc ctgtgaaggg aaggttcacc atctcccgcg acaatagcaa aaatatgctc 300

tacctgcaaa tgaactcact cagggcggat gatacggcgg tctactattg cgctcgctca 360

gggattgctg tggccggcgc attcgattac tggggacagg gtaccctggt gacagtatca 420

agcggaggcg gcggctctgg cggcggcgga tctggcgggg ggggaagtga gattgtgttg 480

acacagtctc ccgataccct gtcactgtca cccggcgaga aggcaacgct gagttgcaga 540

gcaagccagt cagtctcctc ttcttttctg gcctggtatc agcaaaaacc aggtcaggca 600

ccatctctcc tgatttacgt tgccagcaga cgggcggctg gcattcccga caggttctct 660

ggaagcggat ctgggaccga ttttaccctg acaattagcc gcttggagcc cgaagacttt 720

ggtatgtttt actgccagca ctacggaagg acacctttca catttggccc gggcacgaaa 780

gtcgatataa aacgcgcagc cgccattgaa gtaatgtacc caccacctta tttggacaat 840

gaaaagtcca atggtaccat tattcacgtc aagggaaagc atctctgtcc aagccctctg 900

ttccccggcc cctccaaacc attctgggtg ctggtggtcg tcggcggagt tctggcctgc 960

tattctctgc tcgtgactgt tgcattcatc attttctggg tgagatccaa aagaagccgc 1020

ctgctccata gcgattacat gaatatgact ccacgccgcc ctggccccac aaggaaacac 1080

taccagcctt acgcaccacc tagagatttc gctgcctatc ggagccgagt gaaattttct 1140

agatcagctg atgctcccgc ctatcagcag ggacagaatc aactttacaa tgagctgaac 1200

ctgggtcgca gagaagagta cgacgttttg gacaaacgcc ggggccgaga tcctgagatg 1260

ggggggaagc cgagaaggaa gaatcctcaa gaaggcctgt acaacgagct tcaaaaagac 1320

aaaatggctg aggcgtactc tgagatcggc atgaagggcg agcggagacg aggcaagggt 1380

cacgatggct tgtatcaggg cctgagtaca gccacaaagg acacctatga cgccctccac 1440

atgcaggcac tgcccccacg ctag 1464

<210> 247

<211> 487

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 8B5_CHD_AA

<400> 247

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Gln Ile Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val

20 25 30

Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe

35 40 45

Thr Phe Lys Asn Tyr Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys

50 55 60

Gly Leu Glu Trp Val Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Glu Tyr

65 70 75 80

Tyr Gly Asp Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser

85 90 95

Lys Asn Met Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Asp Asp Thr

100 105 110

Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Gly Ile Ala Val Ala Gly Ala Phe

115 120 125

Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly

130 135 140

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu

145 150 155 160

Thr Gln Ser Pro Asp Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Lys Ala Thr

165 170 175

Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Phe Leu Ala Trp

180 185 190

Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Ser Leu Leu Ile Tyr Val Ala

195 200 205

Ser Arg Arg Ala Ala Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser

210 215 220

Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe

225 230 235 240

Gly Met Phe Tyr Cys Gln His Tyr Gly Arg Thr Pro Phe Thr Phe Gly

245 250 255

Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Arg Ala Ala Ala Ile Glu Val Met

260 265 270

Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile

275 280 285

His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro

290 295 300

Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys

305 310 315 320

Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser

325 330 335

Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg

340 345 350

Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg

355 360 365

Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp

370 375 380

Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn

385 390 395 400

Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg

405 410 415

Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly

420 425 430

Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu

435 440 445

Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu

450 455 460

Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His

465 470 475 480

Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

485

<210> 248

<211> 1437

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 8B5_THD_DNA

<400> 248

atggcactcc ccgtaactgc tctgctgctg ccgttggcat tgctcctgca cgccgcacgc 60

ccgcagattc agctcgtgga gtcaggtggt ggcgtggttc agcccggacg gtccctgcga 120

ctctcttgtg tggcaagcgg atttaccttt aagaactatg gcatgcactg ggtgaggcag 180

gcccctggaa aaggactgga gtgggttgct gtgatctggt acgacgggtc caacgaatat 240

tatggcgatc ctgtgaaggg acggtttaca atctcacgcg ataactcaaa gaacatgctg 300

tacctgcaaa tgaactctct gcgcgctgat gacactgccg tgtattattg cgctcggagt 360

ggtatcgccg tcgcaggagc atttgattat tgggggcaag ggaccctcgt gacagtgagt 420

tccggagggg gaggttctgg tggaggcggc tctggtgggg gaggcagcga gatcgttctg 480

acccagtctc ctgacacact gtcactgtcc cctggtgaaa aggccacact gtcttgtaga 540

gcgtcccaga gcgtttccag ttccttcctt gcatggtatc aacaaaaacc cgggcaggct 600

ccaagcttgc tgatctacgt ggccagccgc cgggccgcag gcatccctga taggtttagc 660

ggttctggga gcgggacgga cttcaccttg acaatatcac ggctggaacc cgaagacttc 720

ggaatgtttt attgccagca ctacggaaga actccattca cctttggccc gggaacgaag 780

gtagacatca agagagcagc agccctcgac aacgagaaat ccaatggaac cattatccat 840

gtgaagggga aacatctctg cccttcacca ttgttccctg gacccagcaa gcctttttgg 900

gttctggtcg tggtgggggg cgtcctggct tgttactccc tcctcgttac agtcgccttc 960

ataatctttt gggttagatc caaaagaagc cgcctgctcc atagcgatta catgaatatg 1020

actccacgcc gccctggccc cacaaggaaa cactaccagc cttacgcacc acctagagat 1080

ttcgctgcct atcggagccg agtgaaattt tctagatcag ctgatgctcc cgcctatcag 1140

cagggacaga atcaacttta caatgagctg aacctgggtc gcagagaaga gtacgacgtt 1200

ttggacaaac gccggggccg agatcctgag atggggggga agccgagaag gaagaatcct 1260

caagaaggcc tgtacaacga gcttcaaaaa gacaaaatgg ctgaggcgta ctctgagatc 1320

ggcatgaagg gcgagcggag acgaggcaag ggtcacgatg gcttgtatca gggcctgagt 1380

acagccacaa aggacaccta tgacgccctc cacatgcagg cactgccccc acgctag 1437

<210> 249

<211> 478

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 8B5_THD_AA

<400> 249

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Gln Ile Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val

20 25 30

Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe

35 40 45

Thr Phe Lys Asn Tyr Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys

50 55 60

Gly Leu Glu Trp Val Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Glu Tyr

65 70 75 80

Tyr Gly Asp Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser

85 90 95

Lys Asn Met Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Asp Asp Thr

100 105 110

Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Gly Ile Ala Val Ala Gly Ala Phe

115 120 125

Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly

130 135 140

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu

145 150 155 160

Thr Gln Ser Pro Asp Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Lys Ala Thr

165 170 175

Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Phe Leu Ala Trp

180 185 190

Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Ser Leu Leu Ile Tyr Val Ala

195 200 205

Ser Arg Arg Ala Ala Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser

210 215 220

Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe

225 230 235 240

Gly Met Phe Tyr Cys Gln His Tyr Gly Arg Thr Pro Phe Thr Phe Gly

245 250 255

Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Arg Ala Ala Ala Leu Asp Asn Glu

260 265 270

Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro

275 280 285

Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val

290 295 300

Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe

305 310 315 320

Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp

325 330 335

Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr

340 345 350

Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val

355 360 365

Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn

370 375 380

Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val

385 390 395 400

Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg

405 410 415

Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys

420 425 430

Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg

435 440 445

Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys

450 455 460

Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

465 470 475

<210> 250

<211> 9

<212> PRT

<213> 人

<400> 250

Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr

1 5

<210> 251

<211> 112

<212> PRT

<213> 人

<400> 251

Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly

1 5 10 15

Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr

20 25 30

Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys

35 40 45

Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys

50 55 60

Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg

65 70 75 80

Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala

85 90 95

Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

100 105 110

Claims (40)

1.分离的多核苷酸，所述分离的多核苷酸编码嵌合抗原受体(CAR)或T细胞受体(TCR)，其包含(i)抗原结合分子，(ii)共刺激结构域，和(iii)活化结构域，其中所述共刺激结构域包含细胞外结构域、跨膜结构域和细胞内结构域，其中所述细胞外结构域包含截短铰链结构域，所述截短铰链结构域基本上由以下各项组成或由以下各项组成：(i)与SEQ ID NO:1的氨基酸123至152至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的氨基酸序列，和任选地(ii)一至六个氨基酸。

2.权利要求1的多核苷酸，其中所述一至六个氨基酸为异源的氨基酸。

3.权利要求1或2的多核苷酸，其中所述截短铰链结构域基本上由以下组成或由以下组成：与SEQ ID NO:1的氨基酸123至152至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。

4.权利要求1或2的多核苷酸，其中所述氨基酸序列由以下核苷酸序列编码：与SEQ IDNO:2至少约60％，至少约70％，至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的核苷酸序列。

5.权利要求1或2的多核苷酸，其中所述跨膜结构域为以下各项的跨膜结构域：4-1BB/CD137、T细胞受体的alpha链、T细胞受体的beta链、CD3epsilon、CD4、CD5、CD8alpha、CD9、CD16、CD19、CD22、CD33、CD37、CD45、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137、CD154或T细胞受体的zeta链，或它们的任何组合。

6.权利要求1或2的多核苷酸，其中所述跨膜结构域包含与SEQ ID NO:5至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。

7.权利要求6的多核苷酸，其中所述跨膜结构域由以下核苷酸序列编码：与SEQ ID NO:4至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的核苷酸序列。

8.权利要求1或2的多核苷酸，其中所述细胞内结构域包含以下各项的信号传导区：4-1BB/CD137、活化性NK细胞受体、B7-H3、BAFFR、BLAME(SLAMF8)、BTLA、CD100(SEMA4D)、CD103、CD160(BY55)、CD18、CD19、CD19a、CD2、CD247、CD27、CD276(B7-H3)、CD29、CD3delta、CD3epsilon、CD3gamma、CD30、CD4、CD40、CD49a、CD49D、CD49f、CD69、CD7、CD84、CD8alpha、CD8beta、CD96(Tactile)、CDl la、CDl lb、CDl lc、CDl ld、CDS、CEACAM1、CRT AM、细胞因子受体、DAP-10、DNAM1(CD226)、Fc gamma受体、GADS、GITR、HVEM(LIGHTR)、IA4、ICAM-1、ICAM-1、Ig alpha(CD79a)、IL2R beta、IL2R gamma、IL7R alpha、免疫球蛋白样蛋白质、诱导性T细胞共刺激分子(ICOS)、整合素、ITGA4、ITGA4、ITGA6、ITGAD、ITGAE、ITGAL、ITGAM、ITGAX、ITGB2、ITGB7、ITGBl、KIRDS2、LAT、LFA-1、LFA-1、与CD83特异性结合的配体、LIGHT、LIGHT(肿瘤坏死因子超家族成员14；TNFSF14)、LTBR、Ly9(CD229)、淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1(CDl la/CD18)、MHC I类分子、NKG2C、NKG2D、NKp30、NKp44、NKp46、NKp80(KLRF1)、OX-40、PAG/Cbp、程序性死亡-1(PD-1)、PSGL1、SELPLG(CD162)、信号传导淋巴细胞活化分子(SLAM蛋白)、SLAM(SLAMF1；CD150；IPO-3)、SLAMF4(CD244；2B4)、SLAMF6(NTB-A；Lyl08)、SLAMF7、SLP-76、TNF受体蛋白、TNFR2、Toll配体受体、TRANCE/RANKL、VLA1或VLA-6，或它们的组合。

9.权利要求1或2的多核苷酸，其中所述细胞内结构域包含4-1BB/CD137信号传导区。

10.权利要求1或2的多核苷酸，其中所述细胞内结构域包含与SEQ ID NO:7至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。

11.权利要求1或2的多核苷酸，其中所述细胞内结构域包含由以下核苷酸序列编码的氨基酸序列：与SEQ ID NO:6至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的核苷酸序列。

12.权利要求1或2的多核苷酸，其中所述抗原结合分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中所述VH包含3个互补决定区(CDR)并且所述VL包含3个CDR。

13.权利要求1或2的多核苷酸，其中所述抗原结合分子特异性结合选自由以下各项组成的组的抗原：5T4、甲胎蛋白、B细胞成熟抗原(BCMA)、CA-125、癌胚抗原、CD19、CD20、CD22、CD23、CD30、CD33、CD56、CD123、CD138、c-Met、CSPG4、C型凝集素样分子1(CLL-1)、EGFRvIII、上皮肿瘤抗原、ERBB2、FLT3、叶酸结合蛋白、GD2、GD3、结合的HER1-HER2、结合的HER2-HER3、HER2/Neu、HERV-K、HIV-1包膜糖蛋白gp41、HIV-1包膜糖蛋白gpl20、IL-llRalpha、kappa链、lambda链、黑色素瘤相关抗原、间皮素、MUC-1、突变的p53、突变的ras、前列腺特异性抗原、ROR1或VEGFR2，或它们的组合。

14.权利要求1或2的多核苷酸，其中所述抗原结合分子特异性结合BCMA、CLL-1或FLT3。

15.权利要求1或2的多核苷酸，其中所述活化结构域包含与SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:251至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。

16.权利要求1或2的多核苷酸，其中所述活化结构域由以下核苷酸序列编码：与SEQ IDNO:8至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的核苷酸序列。

17.权利要求1至16中任一项的多核苷酸，其中所述CAR或TCR进一步包含前导肽。

18.权利要求17的多核苷酸，其中所述前导肽包含与SEQ ID NO:11至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。

19.权利要求17的多核苷酸，其中所述前导肽由以下核苷酸序列编码：与SEQ ID NO:10至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，至少约99％或约100％相同的核苷酸序列。

20.包含权利要求1至19中任一项的多核苷酸的载体。

21.权利要求20的载体，其中所述载体为腺病毒载体、腺病毒相关载体、DNA载体、慢病毒载体、质粒、逆转录病毒载体或RNA载体，或它们的任何组合。

22.由权利要求1至19中任一项的多核苷酸或权利要求20或21的载体编码的多肽。

23.包含权利要求1至19中任一项的多核苷酸、权利要求20或21的载体、权利要求22的多肽或它们的任何组合的细胞。

24.权利要求23的细胞，其中所述细胞为T细胞。

25.权利要求24的细胞，其中所述T细胞为同种异体T细胞、自体T细胞、工程化自体T细胞(eACT)或肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)。

26.权利要求24或25的细胞，其中所述T细胞为CD4+T细胞。

27.权利要求24或25的细胞，其中所述T细胞为CD8+T细胞。

28.权利要求24或25的细胞，其中所述T细胞为体外细胞。

29.权利要求24或25的细胞，其中所述T细胞为自体T细胞。

30.包含权利要求1至19中任一项的多核苷酸、权利要求20或21的载体、权利要求22的多肽或权利要求23至29中任一项的细胞的组合物。

31.权利要求30的组合物，所述组合物经配制以递送至受试者，任选地，所述组合物包含至少一种药学上可接受的赋形剂。

32.制备表达CAR或TCR的细胞的方法，所述方法包含在适合的条件下用权利要求1至19中任一项的多核苷酸转导细胞。

33.权利要求32的方法，所述方法进一步包含分离所述细胞。

34.诱导针对肿瘤的免疫力的方法，所述方法包含向受试者施用有效量的细胞，所述细胞包含权利要求1至19中任一项的多核苷酸、权利要求20或21的载体、权利要求22的多肽或它们的任何组合。

35.权利要求1至19中任一项的多核苷酸、权利要求20或21的载体、权利要求22的多肽、权利要求23至29中任一项的细胞或权利要求30或31的组合物在制备用于治疗有需要的受试者中癌症的药物中的用途。

36.权利要求35的用途，其中所述癌症为血液学癌症。

37.权利要求35的用途，其中所述癌症为白细胞的癌症。

38.权利要求35的用途，其中所述癌症为浆细胞的癌症。

39.权利要求35至38中任一项的用途，其中所述癌症为白血病、淋巴瘤或骨髓瘤。

40.权利要求35至38中任一项的用途，其中所述癌症为急性淋巴母细胞白血病(ALL)(包括非T细胞ALL)、急性髓样白血病、B细胞幼淋巴细胞白血病、B细胞急性淋巴细胞白血病(“BALL”)、母细胞性浆细胞样树突状细胞肿瘤、伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性髓细胞性白血病(CML)、慢性髓样白血病、慢性或急性白血病、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡性淋巴瘤(FL)、毛细胞白血病、霍奇金病、恶性淋巴细胞增生性疾病、MALT淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、意义不明的单克隆丙种球蛋白病(MGUS)、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常和骨髓增生异常综合征、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、浆细胞增生性疾病(包括无症状性骨髓瘤(郁积型多发性骨髓瘤或惰性骨髓瘤))、浆母细胞性淋巴瘤、浆细胞样树突状细胞肿瘤、浆细胞瘤(包括浆细胞恶液质；单发性骨髓瘤；单发性浆细胞瘤；髓外浆细胞瘤；和多发性浆细胞瘤)、POEMS综合征(也称为Crow-Fukase综合征；Takatsuki病；和PEP综合征)、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBC)、小细胞或大细胞滤泡性淋巴瘤、脾边缘区淋巴瘤(SMZL)、系统性淀粉样蛋白轻链淀粉样变、T细胞急性淋巴细胞白血病(“TALL”)、T细胞淋巴瘤、转化滤泡性淋巴瘤或瓦氏巨球蛋白血症，或它们的组合。