CN116018351A - 靶向cd123的抗体、嵌合抗原受体及其用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了抗CD123抗体和抗原结合片段、具有此类抗CD123抗体和抗原结合片段的嵌合抗原受体(“CARs”)和抗原结合片段(“CD123CAR”)，以及具有此类CD123CARs的基因修饰的免疫效应细胞。本发明还提供了编码抗CD123抗体和抗原结合片段以及CD123CARs的多核苷酸。本发明进一步提供了包括CD123抗体和抗原结合片段以及CD123CARs的组合物。本发明还涉及抗CD123抗体和抗原结合片段以及具有此类CD123CARs的基因修饰的免疫效应细胞在癌症治疗中的用途。
Description
1.技术领域
本发明涉及分子生物学、细胞生物学和免疫肿瘤学。特别是，本发明提供抗CD123抗体、包含所述抗CD123抗体的嵌合抗原受体(CARs)("CD123 CARs")、表达所述CD123 CARs的基因工程免疫效应细胞，以及它们在治疗肿瘤或癌症中的用途。
2.背景技术
CD123在各种血液系统恶性肿瘤中广泛表达，包括急性髓系白血病(AML)，母细胞性浆细胞样树突状细胞肿瘤(BPDCN)，B细胞前体急性淋巴性白血病(BCP-ALL)。然而，目前靶向CD123的治疗只取得了有限的成功。因此，开发其他的靶向CD123的治疗选择是当下的需求。本发明提供的组合物和方法满足这些需求并具有其他的优点。
3.发明内容
本发明提供了特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段，包括:(a)轻链可变区(VL)，其包含(1)具有选自由SEQ ID NOs:1-29组成的群组中的氨基酸序列的轻链CDR1(VL CDR1)；(2)具有选自由SEQ ID NOs:30-56组成的群组中的氨基酸序列的轻链CDR2(VL CDR2)；和(3)具有选自由SEQ ID NOs:57-88组成的群组中的氨基酸序列的轻链CDR3(VL CDR3)；或其在VL CDRs中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失的变体；和/或(b)重链可变区(VH)，其包含(1)具有选自由SEQ ID NOs:89-109组成的群组中的氨基酸序列的重链CDR1(VH CDR1)；(2)具有选自由SEQ ID NOs:110-133组成的群组中的氨基酸序列的重链CDR2(VH CDR2)；和(3)具有选自由SEQ ID NOs:134-163组成的群组中的氨基酸序列的重链CDR3(VH CDR3)；或其在VH CDRs中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失的变体。
在一些实施方案中，本发明提供了抗体或抗原结合片段，其中(a)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有(1)SEQ ID NOs:3、33和61的氨基酸序列；(2)SEQ ID NOs:17、45和75的氨基酸序列；(3)SEQ ID NOs:7、37和66的氨基酸序列；(4)SEQ ID Nos:18、32和76的氨基酸序列；(5)SEQ ID NOs:23、50和82的氨基酸序列；(6)SEQ ID NOs:24、51和83的氨基酸序列；(7)SEQ ID NOs:8、38和67的氨基酸序列；(8)SEQ ID NOs:4、34和62的氨基酸序列；(9)SEQID NOs:25、52和84的氨基酸序列；(10)SEQ ID NOs:26、53和85的氨基酸序列；(11)SEQ IDNOs:2、32和60的氨基酸序列；(12)SEQ ID NOs:17、46和77的氨基酸序列；(13)SEQ ID NOs:27、54和86的氨基酸序列；(14)SEQ ID NOs:9、39和68的氨基酸序列；(15)SEQ ID NOs:10、40和69的氨基酸序列；(16)SEQ ID NOs:22、49和81的氨基酸序列；(17)SEQ ID NOs:5、35和63的氨基酸序列；(18)SEQ ID NOs:1、30和64的氨基酸序列；(19)SEQ ID NOs:11、41和70的氨基酸序列；(20)SEQ ID NOs:1、31和59的氨基酸序列；(21)SEQ ID NOs:19、47和78的氨基酸序列；(22)SEQ ID Nos:28、55和87的氨基酸序列；(23)SEQ ID NOs:12、39和71的氨基酸序列；(24)SEQ ID NOs:13、42和72的氨基酸序列；(25)SEQ ID NOs:1、30和57的氨基酸序列；(26)SEQ ID NOs:20、48和79的氨基酸序列；(27)SEQ ID NOs:14、43和67；(28)SEQ IDNOs:1、30和58的氨基酸序列；(29)SEQ ID NOs:2、32和60的氨基酸序列；(30)SEQ ID NOs:15、44和73的氨基酸序列；(31)SEQ ID NOs:29、56和88的氨基酸序列；(32)SEQ ID Nos：22、49和81的氨基酸序列；(33)SEQ ID NOs:16、42和74的氨基酸序列；(34)SEQ ID NOs:6、36和65的氨基酸序列；或(35)SEQ ID NOs:21、45和80的氨基酸序列；或其在VL CDRs中有至多约5个氨基酸的替换、增加和/或缺失的变体；和/或(b)VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有(1)SEQID NOs:91、112和136的氨基酸序列；(2)SEQ ID NOs:89、122和149的氨基酸序列；(3)SEQID NOs:95、116和140的氨基酸序列；(4)SEQ ID NOs：100、123和150的氨基酸序列；(5)SEQID NOs:99、129和157的氨基酸序列；(6)SEQ ID NOs:106、128和158的氨基酸序列；(7)SEQID NOs:96、117和141的氨基酸序列；(8)SEQ ID NOs:89、110和134的氨基酸序列；(9)SEQID NOs：107、130和159的氨基酸序列；(10)SEQ ID NOs:95、116和160的氨基酸序列；(11)SEQ ID NOs:90、111和135的氨基酸序列；(12)SEQ ID NOs:101、124和151的氨基酸序列；(13)SEQ ID NOs：105、131和161的氨基酸序列；(14)SEQ ID NOs:97、118和142的氨基酸序列；(15)SEQ ID NOs:98、119和143的氨基酸序列；(16)SEQ ID NOs:105、128和156的氨基酸序列；(17)SEQ ID NOs:92、113和137的氨基酸序列；(18)SEQ ID Nos：93、114和138的氨基酸序列；(19)SEQ ID NOs:91、120和144的氨基酸序列；(20)SEQ ID NOs:89、110和134的氨基酸序列；(21)SEQ ID NOs:102、125和152的氨基酸序列；(22)SEQ ID NOs:108、132和162的氨基酸序列；(23)SEQ ID NOs:96、117和145的氨基酸序列；(24)SEQ ID NOs:95、116和146的氨基酸序列；(25)SEQ ID NOs:89、110和134的氨基酸序列；(26)SEQ ID NOs:103、126和153的氨基酸序列；(27)SEQ ID NOs:96、117和141的氨基酸序列；(28)SEQ ID NOs:89、110和134的氨基酸序列；(29)SEQ ID NOs:90、111和135的氨基酸序列；(30)SEQ ID NOs:99、121和147的氨基酸序列；(31)SEQ ID NOs:109、133和163的氨基酸序列；(32)SEQ IDNOs：104、127和155的氨基酸序列；(33)SEQ ID NOs:95、116和148的氨基酸序列；(34)SEQID NOs:94、115和139的氨基酸序列；或(35)SEQ ID NOs:89、122和154的氨基酸序列；或其在VH CDRs中有至多约5个氨基酸的替换、增加和/或缺失的变体。
在一些实施方案中，本发明提供了抗体或抗原结合片段，其中(1)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:3、33和61的氨基酸序列；和/或，VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:91、112和136的氨基酸序列；(2)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs:17、45和75的氨基酸序列；和/或，VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:89、122和149的氨基酸序列；(3)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:7、37和66的氨基酸序列；和/或，VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:95、116和140的氨基酸序列；(4)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:18、32和76的氨基酸序列；和/或，VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:100、123和150的氨基酸序列；(5)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ IDNos:23、50和82的氨基酸序列；和/或，VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:99、129和157的氨基酸序列；(6)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:24、51和83的氨基酸序列；和/或，VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:106、128和158的氨基酸序列；(7)VLCDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:8、38和67的氨基酸序列；和/或，VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:96、117和141的氨基酸序列；(8)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:4、34和62的氨基酸序列；和/或，VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:89、110和134的氨基酸序列；(9)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:25、52和84的氨基酸序列；和/或，VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:107、130和159的氨基酸序列；(10)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:26、53和85的氨基酸序列；和/或，VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:95、116和160的氨基酸序列；(11)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:2、32和60的氨基酸序列；和/或，VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ IDNos:90、111和135的氨基酸序列；(12)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:17、46和77的氨基酸序列；和/或，VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:101、124和151的氨基酸序列；(13)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:27、54和86的氨基酸序列；和/或，VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:105、131和161的氨基酸序列；(14)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:9、39和68的氨基酸序列；和/或，VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:97、118和142的氨基酸序列；(15)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ IDNos:10、40和69的氨基酸序列；和/或，VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:98、119和143的氨基酸序列；(16)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:22、49和81的氨基酸序列；和/或，VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:105、128和156的氨基酸序列；(17)VLCDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:5、35和63的氨基酸序列；和/或，VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:92、113和137的氨基酸序列；(18)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:1、30和64的氨基酸序列；和/或，VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:93、114和138的氨基酸序列；(19)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:11、41和70的氨基酸序列；和/或，VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:91、120和144的氨基酸序列；(20)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:1、31和59的氨基酸序列；和/或，VHCDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:89、110和134的氨基酸序列；(21)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:19、47和78的氨基酸序列；和/或，VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:102、125和152的氨基酸序列；(22)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:28、55和87的氨基酸序列；和/或，VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:108、132和162的氨基酸序列；(23)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:12、39和71的氨基酸序列；和/或，VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:96、117和145的氨基酸序列；(24)VLCDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:13、42和72的氨基酸序列；和/或，VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:95、116和146的氨基酸序列；(25)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:1、30和57的氨基酸序列；和/或，VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:89、110和134的氨基酸序列；(26)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:20、48和79的氨基酸序列；和/或，VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:103、126和153的氨基酸序列；(27)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:14、43和67的氨基酸序列；和/或，VHCDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:96、117和141的氨基酸序列；(28)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:1、30和58的氨基酸序列；和/或，VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:89、110和134的氨基酸序列；(29)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:2、32和60的氨基酸序列；和/或，VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:90、111和135的氨基酸序列；(30)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:15、44和73的氨基酸序列；和/或，VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:99、121和147的氨基酸序列；(31)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:29、56和88的氨基酸序列；和/或，VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:109、133和163的氨基酸序列；(32)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQID Nos:22、49和81的氨基酸序列；和/或，VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:104、127和155的氨基酸序列；(33)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:16、42和74的氨基酸序列；和/或，VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:95、116和148的氨基酸序列；(34)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:6、36和65的氨基酸序列；和/或，VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:94、115和139的氨基酸序列；或者，(35)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:21、45和80的氨基酸序列；和/或，VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:89、122和154的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本发明提供的抗体或抗原结合片段包含VL CDR1、VL CDR2、VLCDR3、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，其中(a)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:23、50和82的氨基酸序列；并且，(b)VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:99、129和157的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本发明提供的抗体或抗原结合片段包含VL CDR1、VL CDR2、VLCDR3、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，其中(a)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:8、38和67的氨基酸序列；并且，(b)VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:96、117和141的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本发明提供的抗体或抗原结合片段包含VL CDR1、VL CDR2、VLCDR3、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，其中(a)VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:2、32和60的氨基酸序列；并且，(b)VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos:90、111和135的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123的抗体或其抗原结合片段包含：(a)轻链可变区(VL)，其包含(1)具有选自由SEQ ID NOs:348-352组成的群组中的氨基酸序列的VL CDR1；(2)具有选自由SEQ ID NOs:353-356组成的群组中的氨基酸序列的VLCDR2；和(3)具有选自由SEQ ID NOs:357-359组成的群组中的氨基酸序列的VL CDR3；和/或，(b)重链可变区(VH)，其包含(1)具有选自由SEQ ID NOs:360-361组成的群组中的氨基酸序列的VH CDR1；(2)具有选自由SEQ ID NOs:362-367组成的群组中的氨基酸序列的VHCDR2；和(3)具有选自由SEQ ID NOs:368组成的群组中的氨基酸序列的VH CDR3。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123的抗体或其抗原结合片段包含：(a)轻链可变区(VL)，其与选自由SEQ ID Nos:164-198组成的群组中的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％的序列同一性；和/或，(b)重链可变区(VH)，其与选自由SEQ ID NOs:199-233组成的群组中的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％的序列同一性。
在一些实施方案中，本发明提供的抗体或抗原结合片段包含VL和VH，其中VL和VH分别具有(1)SEQ ID NO:164和SEQ ID NO:199的氨基酸序列；(2)SEQ ID NO:165和SEQ IDNO:200的氨基酸序列，(3)SEQ ID NO:166和SEQ ID NO:201的氨基酸序列；(4)SEQ ID NO:167和SEQ ID NO:202的氨基酸序列；(5)SEQ ID NO:168和SEQ ID NO:203的氨基酸序列；(6)SEQ ID NO:169和SEQ ID NO:204的氨基酸序列；(7)SEQ ID NO:170和SEQ ID NO:205的氨基酸序列；(8)SEQ ID NO:171和SEQ ID NO:206的氨基酸序列；(9)SEQ ID NO:172和SEQID NO:207的氨基酸序列；(10)SEQ ID NO:173和SEQ ID NO:208的氨基酸序列；(11)SEQ IDNO:174和SEQ ID NO:209的氨基酸序列；(12)SEQ ID NO:175和SEQ ID NO:210的氨基酸序列；(13)SEQ ID NO:176和SEQ ID NO:211的氨基酸序列；(14)SEQ ID NO:177和SEQ ID NO:212的氨基酸序列；(15)SEQ ID NO:178和SEQ ID NO:213的氨基酸序列；(16)SEQ ID NO:179和SEQ ID NO:214的氨基酸序列；(17)SEQ ID NO:180和SEQ ID NO:215的氨基酸序列；(18)SEQ ID NO:181和SEQ ID NO:216的氨基酸序列；(19)SEQ ID NO:182和SEQ ID NO:217的氨基酸序列；(20)SEQ ID NO:183和SEQ ID NO:218的氨基酸序列；(21)SEQ ID NO:184和SEQ ID NO:219的氨基酸序列；(22)SEQ ID NO:185和SEQ ID NO:220的氨基酸序列；(23)SEQ ID NO:186和SEQ ID NO:221的氨基酸序列；(24)SEQ ID NO:187和SEQ ID NO:222的氨基酸序列；(25)SEQ ID NO:188和SEQ ID NO:223的氨基酸序列；(26)SEQ ID NO:189和SEQID NO:224的氨基酸序列；(27)SEQ ID NO:190和SEQ ID NO:225的氨基酸序列；(28)SEQ IDNO:191和SEQ ID NO:226的氨基酸序列；(29)SEQ ID NO:192和SEQ ID NO:227的氨基酸序列；(30)SEQ ID NO:193和SEQ ID NO:228的氨基酸序列；(31)SEQ ID NO:194和SEQ ID NO:229的氨基酸序列；(32)SEQ ID NO:195和SEQ ID NO:230的氨基酸序列；(33)SEQ ID NO:196和SEQ ID NO:231的氨基酸序列；(34)SEQ ID NO:197和SEQ ID NO:232的氨基酸序列；或(35)SEQ ID NO:198和SEQ ID NO:233的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本发明提供的抗体或抗原结合片段包含VL和VH，其中VL和VH分别具有SEQ ID NO:168和SEQ ID NO:203的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的抗体或抗原结合片段包含VL和VH，其中VL和VH分别具有SEQ ID NO:170和SEQ ID NO:205的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的抗体或抗原结合片段包含VL和VH，其中VL和VH分别具有SEQ ID NO:174和SEQ ID NO:209的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123的抗体或其抗原结合片段包含：(a)轻链可变区(VL)，其包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有选自由SEQ ID Nos:164-198组成的群组中的氨基酸序列的VL；和/或，(b)重链可变区(VH)，其包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有选自由SEQ ID Nos:199-233组成的群组中的氨基酸序列的VH。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123的抗体或抗原结合片段包含(1)VL，其包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:164的氨基酸序列的VL；和/或，VH，其包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:199的氨基酸序列的VH；(2)VL，其包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:165的氨基酸序列的VL；和/或，VH，其包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:200的氨基酸序列的VH；(3)VL，其包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:166的氨基酸序列的VL；和/或，VH，其包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:201的氨基酸序列的VH；(4)VL，其包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:167的氨基酸序列的VL；和/或，VH，其包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VHCDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:202的氨基酸序列的VH；(5)VL，其包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:168的氨基酸序列的VL；和/或，VH，其包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:203的氨基酸序列的VH；(6)VL，其包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ IDNo:169的氨基酸序列的VL；和/或，VH，其包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:204的氨基酸序列的VH；(7)VL，其包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:170的氨基酸序列的VL；和/或，VH，其包括VHCDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:205的氨基酸序列的VH；(8)VL，其包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:171的氨基酸序列的VL；和/或，VH，其包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:206的氨基酸序列的VH；(9)VL，其包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:172的氨基酸序列的VL；和/或，VH，其包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:207的氨基酸序列的VH；(10)VL，其包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:173的氨基酸序列的VL；和/或，VH，其包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ IDNo:208的氨基酸序列的VH；(11)VL，其包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:174的氨基酸序列的VL；和/或，VH，其包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:209的氨基酸序列的VH；(12)VL，其包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:175的氨基酸序列的VL；和/或，VH，其包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:210的氨基酸序列的VH；(13)VL，其包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQID No:176的氨基酸序列的VL；和/或，VH，其包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:211的氨基酸序列的VH；(14)VL，其包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:177的氨基酸序列的VL；和/或，VH，其包括VHCDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:212的氨基酸序列的VH；(15)VL，其包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:178的氨基酸序列的VL；和/或，VH，其包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:213的氨基酸序列的VH；(16)VL，其包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:179的氨基酸序列的VL；和/或，VH，其包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:214的氨基酸序列的VH；(17)VL，其包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:180的氨基酸序列的VL；和/或，VH，其包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ IDNo:215的氨基酸序列的VH；(18)VL，其包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:181的氨基酸序列的VL；和/或，VH，其包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:216的氨基酸序列的VH；(19)VL，其包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:182的氨基酸序列的VL；和/或，VH，其包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:217的氨基酸序列的VH；(20)VL，其包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQID No:183的氨基酸序列的VL；和/或，VH，其包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:218的氨基酸序列的VH；(21)VL，其包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:184的氨基酸序列的VL；和/或，VH，其包括VHCDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:219的氨基酸序列的VH；(22)VL，其包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:185的氨基酸序列的VL；和/或，VH，其包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:220的氨基酸序列的VH；(23)VL，其包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:186的氨基酸序列的VL；和/或，VH，其包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:221的氨基酸序列的VH；(24)VL，其包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:187的氨基酸序列的VL；和/或，VH，其包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ IDNo:222的氨基酸序列的VH；(25)VL，其包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:188的氨基酸序列的VL；和/或，VH，其包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:223的氨基酸序列的VH；(26)VL，其包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:189的氨基酸序列的VL；和/或，VH，其包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:224的氨基酸序列的VH；(27)VL，其包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQID No:190的氨基酸序列的VL；和/或，VH，其包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:225的氨基酸序列的VH；(28)VL，其包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:191的氨基酸序列的VL；和/或，VH，其包括VHCDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:226的氨基酸序列的VH；(29)VL，其包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:192的氨基酸序列的VL；和/或，VH，其包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:227的氨基酸序列的VH；(30)VL，其包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:193的氨基酸序列的VL；和/或，VH，其包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:228的氨基酸序列的VH；(31)VL，其包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:194的氨基酸序列的VL；和/或，VH，其包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ IDNo:229的氨基酸序列的VH；(32)VL，其包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:195的氨基酸序列的VL；和/或，VH，其包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:230的氨基酸序列的VH；(33)VL，其包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:196的氨基酸序列的VL；和/或，VH，其包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:231的氨基酸序列的VH；(34)VL，其包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQID No:197的氨基酸序列的VL；和/或，VH，其包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:232的氨基酸序列的VH；或者，(35)VL，其包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:198的氨基酸序列的VL；和/或，VH，其包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:233的氨基酸序列的VH。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123的抗体或其抗原结合片段包含：轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，VL包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:168的氨基酸序列的VL；并且，VH包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:203的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123的抗体或其抗原结合片段包含：轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，VL包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:170的氨基酸序列的VL；并且，VH包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQID No:205的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123的抗体或其抗原结合片段包含：轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，VL包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:174的氨基酸序列的VL；并且，VH包括VHCDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:209的氨基酸序列的VH。
本发明还提供与本发明公开的任何抗体或抗原结合片段竞争以结合CD123的抗体或其抗原结合片段。
在一些实施方案中，本发明提供的抗体或抗原结合片段是单克隆抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，本发明提供的抗体或抗原结合片段是双特异性或多特异性抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，本发明提供的抗体或抗原结合片段是双特异性T细胞接合子(BiTE)。
在一些实施方案中，本发明提供的抗体或抗原结合片段选自由IgG1抗体、IgG2抗体、IgG3抗体和IgG4抗体组成的组。在一些实施方案中，本发明提供的抗体或抗原结合片段选自由Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、scFv、(scFv)2、单结构域抗体(sdAb)、和重链抗体(HCAb)组成的组。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段为scFv。
在一些实施方案中，本发明提供的抗体或抗原结合片段是嵌合抗体或抗原结合片段、人源化抗体或抗原结合片段、或者，人抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段为人抗体或抗原结合片段。
本发明还提供编码本发明提供的抗体或抗原结合片段的多核苷酸。在一些实施方案中，所述多核苷酸通过是信使RNA(mRNA)。
本发明还提供包括本发明所述的任何多核苷酸的载体。
本发明还提供包含本发明公开的任何多核苷酸或本发明公开的任何载体的宿主细胞。
本发明还提供了特异性结合CD123的嵌合抗原受体(CAR)，其从N-末端到C-末端包括：(a)CD123结合结构域，所述CD123结合结构域包括本发明披露的抗CD123抗体或抗原结合片段；(b)跨膜结构域；和(C)胞质结构域。
在一些实施方案中，本发明公开的CARs中的跨膜结构域源于CD8,CD28,CD3ζ,CD4,4-1BB,OX40,ICOS,CTLA-4,PD-1,LAG-3,2B4,BTLA,TCRα链,TCRβ链,或者TCRζ链,CD3ε,CD45,CD5,CD8,CD9,CD16,CD22,CD33,CD37,CD64,CD80,CD86,CD134,或者CD154。
在一些实施方案中，本发明公开的CARs中的跨膜结构域包括CD8跨膜区或者CD28跨膜区。
在一些实施方案中，本发明公开的CARs中的胞质结构域包含源于CD3ζ、FcRγ、FcγRIIa、FcRβ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD5、CD22、CD79a、CD79b、DAP10、DAP12或任何其组合的信号传导结构域。
在一些实施方案中，本发明公开的CARs中的胞质结构域进一步包含源于CD28、4-1BB(CD137)、OX40、ICOS、DAP10、2B4、CD27、CD30、CD40、CD2、CD7、LIGHT、GITR、TLR、DR3、CD43或任何其组合的共刺激结构域。
在一些实施方案中，本发明公开的CARs中的胞质结构域包含CD3ζ信号传导结构域和4-1BB共刺激结构域。在一些实施方案中，本发明公开的CARs中的胞质结构域包含CD3ζ信号传导结构域和CD28共刺激结构域。
在一些实施方案中，本发明公开的CARs还包含在抗体或抗原结合片段与跨膜结构域之间的CD8铰链。
在一些实施方案中，本发明公开的特异性结合CD123的CARs包含选自由SEQ IDNOs:370-372组成的群组中的氨基酸序列。
本发明还提供如本发明公开的编码特异性结合CD123的CAR的多核苷酸。
在一些实施方案中，所述多核苷酸是信使RNA(mRNA)。本发明还提供包括本发明所述的任何多核苷酸的载体。
本发明还提供包括本发明公开的任何多核苷酸或本发明公开的任何载体的细胞。
在一些实施方案中，所述细胞是免疫效应细胞。在一些实施方案中，所述细胞来源于从外周血或骨髓分离的细胞。在一些实施方案中，所述细胞来源于由干细胞或祖细胞体外分化而来的细胞，所述干细胞或祖细胞选自由T细胞祖细胞、造血干/祖细胞、造血多能祖细胞、胚胎干细胞和诱导多能细胞组成的组。在一些实施方案中，所述细胞是T细胞或NK细胞。
在一些实施方案中，所述细胞是细胞毒性T细胞、辅助性T细胞，γδ细胞、CD4+/CD8+双阳性T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD4/CD8双阴性T细胞、CD3+T细胞、初始T细胞、效应T细胞、辅助性T细胞、记忆T细胞、调节T细胞、Th0细胞、Th1细胞、Th2细胞、Th3(Treg)细胞、Th9细胞、Th17细胞、Thαβ辅助细胞、Tfh细胞、干细胞记忆TSCM细胞、中枢记忆TCM细胞、效应记忆TEM细胞，或效应记忆TEMRA细胞。在一些实施方案中，所述细胞是细胞毒性T细胞。
本发明还提供包括任何本发明公开的细胞的细胞群，其中，所述细胞群来源于外周血单个核细胞(PBMC)、外周血淋巴细胞(PBL)、肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)、细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)、淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)或骨髓浸润淋巴细胞(MILs)。
本发明提供药物组合物，其包含有效治疗量的本发明公开的任何抗体或抗原结合片段和药学上可接受的载体。
本发明还提供药物组合物，其包含有效治疗量的本发明公开的任何细胞或细胞群和药学上可接受的载体。
本发明提供了本发明提供的任何抗体或抗原结合片段在癌症治疗中的用途。本发明提供了本发明提供的任何抗体或抗原结合片段在制备用于治疗癌症的药物中的用途。
本发明提供了本发明提供的任何细胞或细胞群在癌症治疗中的用途。本发明提供了本发明提供的任何细胞或细胞群在制备用于治疗癌症的药物中的用途。
本发明提供了本发明提供的任何药物组合物在癌症治疗中的用途。本发明提供了本发明提供的任何药物组合物在制备用于治疗癌症的药物中的用途。
在一些本发明公开的用途实施方案中，细胞、细胞群或药物组合物与附加治疗结合使用。
本发明提供了在需要的受试者中治疗癌症的方法，包括向受试者施用治疗有效量的本发明公开的任何抗体或抗原结合片段。本发明提供了在需要的受试者中治疗癌症的方法，包括向受试者施用治疗有效量的本发明公开的任何细胞或细胞群。本发明提供了在需要的受试者中治疗癌症的方法，包括向受试者施用治疗有效量的本发明公开的任何药物组合物。
在一些本发明公开的方法实施方案中，所述细胞群是所述受试者自体的细胞群。在一些实施方案中，本发明公开的方法进一步包括从受试者处获得T细胞。在一些实施方案中，本发明公开的方法进一步包括对受试者施用附加治疗。
在一些本发明公开的方法实施方案中，受试者为人。
在一些本发明公开的方法或用途实施方案中，所述癌症为实体瘤。在一些本发明公开的方法或用途实施方案中，所述癌症为血液系统癌症。在一些实施方案中，所述癌症为白血病。在一些实施方案中，所述癌症是急性髓系白血病(AML)、B急性淋巴性白血病(B-ALL)、T急性淋巴性白血病(T-ALL)、B细胞前体急性淋巴细胞白血病(BCP-ALL)或母细胞性浆细胞样树突状细胞肿瘤(BPDCN)。在一些实施方案中，所述癌症为表达CD123的癌症。在一些实施方案中，所述癌症为表达CD123的AML。
本发明提供了制备编码抗CD123抗体或抗原结合片段的mRNA的方法，其包括体外转录本发明公开的编码本发明公开的抗CD123抗体或抗原结合片段的多核苷酸。本发明还提供了制备编码特异性结合CD123的CAR的mRNA的方法，其包括体外转录本发明公开的编码本发明公开的特异性结合CD123的CAR的多核苷酸。
本发明提供了制备能够表达特异性结合CD123的CAR的细胞的方法，其包括将本发明公开的多核苷酸转移到细胞中，其中所述多核苷酸编码特异性结合CD123的CAR。在一些实施方案中，所述多核苷酸通过电穿孔转移。在一些实施方案中，所述多核苷酸通过病毒转导转移。在一些实施方案中，慢病毒、逆转录病毒、腺病毒或腺相关病毒被用于病毒转导。在一些实施方案中，所述多核苷酸通过转座子系统转移。在一些实施方案中，所述转座子系统为睡美人(Sleeping Beauty)或PiggyBac。在一些实施方案中，所述多核苷酸使用基因编辑进行转移。在一些实施方案中，所述多核苷酸通过CRISPR-Cas系统、ZFN系统或TALEN系统转移。在一些实施方案中，所述细胞选自由T细胞、NK细胞、NKT细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和粒细胞组成的组。
序列表
<110> 上海优替济生生物医药有限公司
<120> 靶向CD123的抗体、嵌合抗原受体及其用途
<130> 613A002WO01
<160> 413
<170> PatentIn 版本 3.5
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<220>
<223> LCDR1序列
<400> 21
Ser Gly Ser Ser Pro Asn Ile Gly Asn Asn Tyr Val Ser
1 5 10
<210> 22
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR1序列
<400> 22
Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Glu Gly Asn Thr Val Ser
1 5 10
<210> 23
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR1序列
<400> 23
Thr Arg Ser Ser Gly Ser Ile Ala Gly Ser Tyr Val Gln
1 5 10
<210> 24
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR1序列
<400> 24
Ser Gly Ala Asp Leu Gly Asp Gln Tyr Val Ser
1 5 10
<210> 25
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR1序列
<400> 25
Ser Gly Ser Asn Ser Asn Ile Glu Asn Asn Tyr Val Tyr
1 5 10
<210> 26
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR1序列
<400> 26
Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val His
1 5 10
<210> 27
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR1序列
<400> 27
Arg Ser Ser Gln Gly Leu Val Phe Ser Asp Gly Val Thr Tyr Leu Asn
1 5 10 15
<210> 28
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR1序列
<400> 28
Gly Ala Asn Asn Ile Glu Thr Lys Ser Val His
1 5 10
<210> 29
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR1序列
<400> 29
Ser Gly Gly Asn Ser Asn Ile Gly Asp Asn Ser Val Ser
1 5 10
<210> 30
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR2序列
<400> 30
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<210> 31
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR2序列
<400> 31
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<210> 32
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR2序列
<400> 32
Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR2序列
<400> 33
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR2序列
<400> 34
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR2序列
<400> 35
Asp Val Thr Tyr Arg Pro Ser
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR2序列
<400> 36
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR2序列
<400> 37
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR2序列
<400> 38
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR2序列
<400> 39
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR2序列
<400> 40
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR2序列
<400> 41
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR2序列
<400> 42
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR2序列
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR2序列
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR2序列
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR2序列
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR2序列
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR2序列
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR2序列
<400> 49
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR2序列
<400> 50
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR2序列
<400> 51
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR2序列
<400> 52
Gln Asn Asn Gln Arg Pro Ser
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR2序列
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR2序列
<400> 54
Lys Val Ser Asn Arg Asp Ser
1 5
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR2序列
<400> 55
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR2序列
<400> 56
Asn Asn Asn Gln Arg Pro Leu
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<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR3序列
<400> 57
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<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR3序列
<400> 58
Ser Ser Tyr Thr Ser Ser Ser Asn Trp Val
1 5 10
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<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR3序列
<400> 59
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1 5 10
<210> 60
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR3序列
<400> 60
Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Tyr Val
1 5 10
<210> 61
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR3序列
<400> 61
Ser Ser Asp Thr Asn Asn Asn Thr Leu Val
1 5 10
<210> 62
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR3序列
<400> 62
Ser Ser Tyr Ala Gly Ser Gly Thr Trp Met
1 5 10
<210> 63
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR3序列
<400> 63
Gln Gln Tyr Asn Asn Trp Pro Pro Arg Tyr Thr
1 5 10
<210> 64
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR3序列
<400> 64
Ser Ser Tyr Thr Ser Ser Ser Thr Leu Phe Val
1 5 10
<210> 65
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR3序列
<400> 65
Ser Ser Tyr Ala Gly Ser Gly Lys Tyr Val
1 5 10
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<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR3序列
<400> 66
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<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR3序列
<400> 67
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<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR3序列
<400> 68
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR3序列
<400> 69
Leu His Tyr Gly Ser Tyr Thr
1 5
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<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR3序列
<400> 70
Leu Gln Asp Gly Asp Tyr Pro Leu Thr
1 5
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR3序列
<400> 71
Gln Gln Tyr Gly Asn Leu Pro Leu Thr
1 5
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<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR3序列
<400> 72
Leu Gln Tyr Lys Thr Tyr Pro Tyr Thr
1 5
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<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR3序列
<400> 73
Gln Gln Asn Asp Asn Leu Pro Leu Thr
1 5
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<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR3序列
<400> 74
Gln Gln Gly Ser Thr Phe Pro Leu Ala
1 5
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR3序列
<400> 75
Val Thr Trp Asp Thr Ser Leu Ser Ala Gly Val
1 5 10
<210> 76
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR3序列
<400> 76
Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly His Gly Val
1 5 10
<210> 77
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR3序列
<400> 77
Ser Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Tyr Val
1 5 10
<210> 78
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR3序列
<400> 78
Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Trp Val
1 5 10
<210> 79
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR3序列
<400> 79
Ala Thr Trp Asp Asp Asp Leu Asn Gly Val
1 5 10
<210> 80
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR3序列
<400> 80
Gly Thr Trp Asp Ser Arg Leu Asn Ile Trp Val
1 5 10
<210> 81
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR3序列
<400> 81
Ser Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Pro Val
1 5 10
<210> 82
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR3序列
<400> 82
Gln Ser Tyr Asp Ser Asn Asn Gln Val
1 5
<210> 83
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR3序列
<400> 83
Gln Ala Trp Asp Gly Asn Ala Ala Ile
1 5
<210> 84
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR3序列
<400> 84
Ser Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Ala Trp Val
1 5 10
<210> 85
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR3序列
<400> 85
Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His Trp Val
1 5 10
<210> 86
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR3序列
<400> 86
Met Gln Gly Thr His Trp Pro His Thr
1 5
<210> 87
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR3序列
<400> 87
Gln Val Trp Asp Ser Thr Ser Asp His Val Val
1 5 10
<210> 88
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR3序列
<400> 88
Ser Ser Trp Asp Asp Ser Leu Glu Gly Ala Gln
1 5 10
<210> 89
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR1序列
<400> 89
Asn Ala Trp Met Ser
1 5
<210> 90
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR1序列
<400> 90
Asp Tyr Ala Met Ser
1 5
<210> 91
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR1序列
<400> 91
Ser Tyr Gly Met His
1 5
<210> 92
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR1序列
<400> 92
Ser Tyr Tyr Met His
1 5
<210> 93
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR1序列
<400> 93
Ser Gly Asp Tyr Tyr Trp Ser
1 5
<210> 94
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR1序列
<400> 94
Asp Thr Trp Met Ser
1 5
<210> 95
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR1序列
<400> 95
Ser Tyr Ala Ile Ser
1 5
<210> 96
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR1序列
<400> 96
Ser Tyr Gly Ile Ser
1 5
<210> 97
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR1序列
<400> 97
Ser Ser Ser His Tyr Trp Gly
1 5
<210> 98
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR1序列
<400> 98
Asp Tyr Tyr Ile Ser
1 5
<210> 99
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR1序列
<400> 99
Asp Tyr Gly Met Ser
1 5
<210> 100
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR1序列
<400> 100
Arg Tyr Tyr Met Asn
1 5
<210> 101
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR1序列
<400> 101
Ser Tyr Asn Ile Asn
1 5
<210> 102
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR1序列
<400> 102
Asp Tyr Ala Met His
1 5
<210> 103
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR1序列
<400> 103
Asn Phe Glu Met Asn
1 5
<210> 104
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR1序列
<400> 104
Ser Tyr Ala Met Asn
1 5
<210> 105
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR1序列
<400> 105
Ser Tyr Ser Met Asn
1 5
<210> 106
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR1序列
<400> 106
Arg Tyr Ser Met Asn
1 5
<210> 107
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR1序列
<400> 107
Asp Tyr Ala Met Asn
1 5
<210> 108
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR1序列
<400> 108
Ser Tyr Trp Ile Gly
1 5
<210> 109
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR1序列
<400> 109
Asp Tyr Tyr Met Ser
1 5
<210> 110
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR2序列
<400> 110
Arg Ile Lys Ser Lys Thr Asp Gly Gly Thr Thr Asp Ser Ala Ala Pro
1 5 10 15
Val Lys Gly
<210> 111
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR2序列
<400> 111
Phe Ile Arg Ser Lys Ala Tyr Gly Gly Thr Thr Glu Tyr Ala Ala Ser
1 5 10 15
Val Lys Gly
<210> 112
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR2序列
<400> 112
Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 113
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR2序列
<400> 113
Leu Ile Asn Pro Thr Asn Gly Arg Thr Thr Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 114
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR2序列
<400> 114
Tyr Ile His Ser Thr Gly Thr Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 115
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR2序列
<400> 115
Arg Ile Lys Ser Lys Thr Asp Gly Gly Thr Thr Asn Tyr Ala Ala Pro
1 5 10 15
Val Lys Gly
<210> 116
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR2序列
<400> 116
Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 117
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR2序列
<400> 117
Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 118
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR2序列
<400> 118
Ser Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 119
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR2序列
<400> 119
Tyr Ile Ser Gly Ser Ser Thr Tyr Thr Asp Phe Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 120
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR2序列
<400> 120
Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 121
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR2序列
<400> 121
Gly Ile Asn Trp Asn Gly Gly Ser Thr Gly Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 122
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR2序列
<400> 122
Arg Ile Lys Ser Lys Thr Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala Pro
1 5 10 15
Val Lys Gly
<210> 123
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR2序列
<400> 123
Ala Ile Asp Pro Ser Asp Gly Asp Thr Thr Tyr Gly Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 124
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR2序列
<400> 124
Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 125
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR2序列
<400> 125
Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 126
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR2序列
<400> 126
Tyr Ile Ser Ala Thr Thr Ser Ala Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 127
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR2序列
<400> 127
Asp Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 128
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR2序列
<400> 128
Tyr Ile Ser Ser Ser Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 129
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR2序列
<400> 129
Gly Ile Asn Trp Asn Gly Gly Arg Thr Gly Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 130
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR2序列
<400> 130
Phe Ile Arg Ser Lys Ala Ser Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala Ser
1 5 10 15
Val Lys Gly
<210> 131
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR2序列
<400> 131
Phe Ile Ser His Asp Ala Ser Lys Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 132
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR2序列
<400> 132
Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 133
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR2序列
<400> 133
Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 134
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR3序列
<400> 134
Tyr Tyr Phe Tyr Ser Ser Gly Asp Met Thr Asp Tyr
1 5 10
<210> 135
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR3序列
<400> 135
Asp Ile Gly Tyr Tyr Gly Ser Gly Ser Tyr Ser Pro Phe Asp Tyr
1 5 10 15
<210> 136
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR3序列
<400> 136
Asp Arg Asp Gly Phe Phe Leu Pro Met Tyr Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 137
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR3序列
<400> 137
Gly Ser Pro Pro His Ile Phe Asp Pro Asp Phe Asp Tyr
1 5 10
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR3序列
<400> 138
Gly Gly Val Gly Thr Ile Phe Asn Tyr
1 5
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR3序列
<400> 139
Gly Asp Tyr Pro Leu Phe Ala Tyr
1 5
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<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR3序列
<400> 140
Asp Ser Gly Trp Phe Gly Pro Arg Tyr Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 141
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR3序列
<400> 141
Asp Pro Tyr Asp Asp Tyr Gly Gly Asn Ser Arg Asp Glu Glu Asp Ala
1 5 10 15
Phe Asp Ile
<210> 142
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR3序列
<400> 142
Arg Val Trp Val Trp Pro Thr Tyr Gly Met Asp Val
1 5 10
<210> 143
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR3序列
<400> 143
Asp Arg Arg Gly Arg Phe Asp Pro
1 5
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<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR3序列
<400> 144
Asp Pro Ser Leu Ile Gln Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
1 5 10
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR3序列
<400> 145
Asp Arg Ile Ala Ala Ala Glu Val Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
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<210> 146
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR3序列
<400> 146
Asp Ser Pro Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Met Asp Val
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<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR3序列
<400> 147
Asp Arg Ala Pro Asp Tyr Gly Asp Tyr Leu Gln Val Gly Thr Thr Asp
1 5 10 15
Tyr
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<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR3序列
<400> 148
Gly Leu Asp Asn Trp Asn Asp Val Gly Trp Phe Asp Pro
1 5 10
<210> 149
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR3序列
<400> 149
Asp Pro His Gly Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
1 5 10
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<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR3序列
<400> 150
Asp Trp Glu Leu Thr Asn Ser Tyr Gly Leu Asp Val
1 5 10
<210> 151
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR3序列
<400> 151
Asp Lys Thr Gly Gly Tyr Gly Thr Ala Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 152
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR3序列
<400> 152
Gly Arg Tyr Val Asp Ile Val Ala Thr Ile Asn Asp Ala Phe Asp Ile
1 5 10 15
<210> 153
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR3序列
<400> 153
Val Arg Asp Gly Tyr Asn Phe Gly Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Met Asp Val
1 5 10 15
<210> 154
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR3序列
<400> 154
Glu Ala Ala Gly Phe Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
1 5 10
<210> 155
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR3序列
<400> 155
Asp Leu Tyr Ser Gly Tyr Asp Tyr Gly Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
1 5 10 15
<210> 156
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR3序列
<400> 156
Asp Ile Tyr Gly Asp Trp Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
1 5 10 15
<210> 157
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR3序列
<400> 157
Ala Arg Gly Ser Gly Ser Tyr Phe Gly Tyr Met Asp Val
1 5 10
<210> 158
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR3序列
<400> 158
Asp Gly Tyr Gly Gly Asn Ser Asp Tyr Tyr Gly Met Asp Val
1 5 10
<210> 159
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR3序列
<400> 159
Ala Leu Arg Gly Tyr Ser Tyr Gly Leu Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 160
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR3序列
<400> 160
Glu Lys Trp Gly Tyr Tyr Gly Asp Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
1 5 10 15
<210> 161
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR3序列
<400> 161
Asp Arg Asn Trp Gly Phe Ser Asp Phe
1 5
<210> 162
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR3序列
<400> 162
Val Val Thr Pro Tyr Tyr Pro Leu Thr Asn
1 5 10
<210> 163
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR3序列
<400> 163
Gly His Gln Tyr Tyr Asp Phe Trp Ser Gly Tyr Ser Asn Trp Phe Asp
1 5 10 15
Pro
<210> 164
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL序列
<400> 164
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Ile Gly Ala Tyr
20 25 30
Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Ile Ile Tyr Asp Val Ser His Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Asp Thr Asn Asn
85 90 95
Asn Thr Leu Val Phe Gly Val Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 165
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL序列
<400> 165
Gln Ser Val Val Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Ala Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Lys Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn
20 25 30
Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Gly Thr Leu Gly Ile Thr Gly Leu Gln
65 70 75 80
Thr Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Val Thr Trp Asp Thr Ser Leu
85 90 95
Ser Ala Gly Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 166
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL序列
<400> 166
Ala Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Gly Thr Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Lys Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Lys Gly Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 167
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL序列
<400> 167
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Tyr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Ser Gly His Gly Val Phe Gly Thr Gly Thr Glu Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 168
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL序列
<400> 168
Asn Phe Met Leu Thr Gln Pro His Ser Val Ser Glu Ser Pro Gly Lys
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Ser Cys Thr Arg Ser Ser Gly Ser Ile Ala Gly Ser
20 25 30
Tyr Val Gln Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Ser Ser Pro Thr Thr Val
35 40 45
Ile Phe Gln Asp Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Ile Asp Lys Ser Ser Asn Ser Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly
65 70 75 80
Leu Lys Thr Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser
85 90 95
Asn Asn Gln Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 169
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL序列
<400> 169
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Pro Cys Ser Gly Ala Asp Leu Gly Asp Gln Tyr Val
20 25 30
Ser Trp Tyr Gln His Gln Pro Gly Gln Ser Pro Leu Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Glu Asp Asp Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Asp Gly Asn Ala Ala Ile
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 170
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL序列
<400> 170
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro
85 90 95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 171
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL序列
<400> 171
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Thr Asp Ile Gly Gly Tyr
20 25 30
Asp Phe Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Ile Met Phe Asp Val Ser Ser Arg Pro Ser Gly Ile Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asp Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Gly Asp Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Ala Gly Ser
85 90 95
Gly Thr Trp Met Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 172
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL序列
<400> 172
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Asn Ser Asn Ile Glu Asn Asn
20 25 30
Tyr Val Tyr Trp Tyr Gln His Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Arg Leu
35 40 45
Ile Tyr Gln Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ala Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Ser Ala Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Glu Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 173
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL序列
<400> 173
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Lys
1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val Tyr
35 40 45
Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Gly
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His
85 90 95
Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 174
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL序列
<400> 174
Gln Ser Val Val Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Tyr Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Ser Gly Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 175
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL序列
<400> 175
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Ala Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Lys Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn
20 25 30
Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Phe Asp Asp Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Leu Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln
65 70 75 80
Ser Glu Asp Asp Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ala Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Ser Gly Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 176
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL序列
<400> 176
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Gly Leu Val Phe Ser
20 25 30
Asp Gly Val Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Ile Tyr Tyr Cys Met Gln Gly
85 90 95
Thr His Trp Pro His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 177
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL序列
<400> 177
Asp Ile Arg Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Thr Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr His Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Gly Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Ile Gly Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Asp Leu Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 178
<211> 105
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL序列
<400> 178
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Thr Ser Ala Leu Glu Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Leu His Tyr Gly Ser Tyr Thr Phe
85 90 95
Gly Gln Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
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1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Glu Gly Asn
20 25 30
Thr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Ala Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
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50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Glu Leu Gln
65 70 75 80
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Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Thr Tyr
20 25 30
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50 55 60
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65 70 75 80
Gln Ala Asp Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Asn Trp
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100 105 110
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<223> VL序列
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Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr
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Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
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Met Ile Tyr Asp Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
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Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Ser
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Asp Ile Arg Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
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Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Arg His Asp
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Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Ala Gly Ser
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Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
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Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu
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Ser Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Glu Leu Thr Val Leu
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Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Ala Asn Asn Ile Glu Thr Lys Ser Val
20 25 30
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Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
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Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Val Ser Leu Ser Pro Gly
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Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
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Gln Pro Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
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<213> 人工序列
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Ala Ile Arg Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
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Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asn Ile Asn Asn Tyr
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Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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<223> VL序列
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Gln Pro Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Met Ser Gly Thr Pro Gly Gln
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Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Gly Asn Ser Asn Ile Gly Asp Asn
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Ser Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
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Gln Ser Val Val Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
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Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Glu Gly Asn
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Thr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Ala Ala Pro Lys Leu Leu
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Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Glu Leu Gln
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Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ala Trp Asp Asp Ser Leu
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<213> 人工序列
<220>
<223> VL序列
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Asp Ile Arg Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
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Asp Thr Ile Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Ser Trp
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Ile Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Thr Ala Pro Arg Leu Leu Ile
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Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
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<223> VL序列
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Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Ser Pro Gly Gln
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Ser Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Arg Ser Asp Val Gly Ala Tyr
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Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln His His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
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Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asn Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Ala Gly Ser
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<213> 人工序列
<220>
<223> VL序列
<400> 198
Gln Ser Val Val Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Ala Ala Ser Gly Gln
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Lys Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Pro Asn Ile Gly Asn Asn
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Ile Tyr Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
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Asn Ile Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
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<213> 人工序列
<220>
<223> VH序列
<400> 199
Glu Val His Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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<213> 人工序列
<220>
<223> VH序列
<400> 200
Gln Ile Thr Leu Lys Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala
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<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH序列
<400> 201
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
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<210> 202
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH序列
<400> 202
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Asp Phe Ile Arg Tyr
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH序列
<400> 203
Glu Val His Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Asp Tyr
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<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH序列
<400> 204
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Ser Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Arg Tyr
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100 105 110
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<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH序列
<400> 205
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
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<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH序列
<400> 206
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
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<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH序列
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Glu Val His Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Phe Ile Arg Ser Lys Ala Ser Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ile
65 70 75 80
Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Thr Arg Ala Leu Arg Gly Tyr Ser Tyr Gly Leu Phe Asp Tyr
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Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
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65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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100 105 110
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Asp Tyr
20 25 30
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35 40 45
Gly Phe Ile Arg Ser Lys Ala Tyr Gly Gly Thr Thr Glu Tyr Ala Ala
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65 70 75 80
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Asn Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Val
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Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
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<220>
<223> VH序列
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Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
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Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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<223> VH序列
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<220>
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<213> 人工序列
<220>
<223> VH序列
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Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
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<220>
<223> VH序列
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<220>
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<223> VH序列
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<220>
<223> VH序列
<400> 229
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<400> 230
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<213> 人工序列
<220>
<223> VH序列
<400> 231
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH序列
<400> 232
Glu Val His Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
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100 105 110
Ala Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 233
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH序列
<400> 233
Glu Val His Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Arg Ile Lys Ser Lys Thr Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala
50 55 60
Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Thr Thr Glu Ala Ala Gly Phe Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 234
<211> 330
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VL DNA序列
<400> 234
cagtctgccc tgactcagcc tgcctccgtg tctgggtctc ctggacagtc gatcaccatc 60
tcctgcactg gaaccagcag tgacattggt gcttataact atgtctcctg gtaccaacaa 120
cacccaggca aagcccccaa actcatcatt tatgatgtca gtcatcggcc ctcaggggtt 180
tctaatcgct tctctggctc caagtctggc aacacggcct ccctgaccat ctctgggctc 240
caatctgagg acgaggctga ttattactgc tcttcagata caaacaataa cactctcgtc 300
ttcggagttg ggaccaagct gaccgtccta 330
<210> 235
<211> 330
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VL DNA序列
<400> 235
cagtctgtgg tgactcagcc gccctcagtg tctgcggccc caggacagaa ggtcaccatc 60
tcctgctctg gaagcagctc caacattggg aataattatg tatcctggta ccagcagttc 120
ccaggaacag cccccaaact cctcatttat gacaataata agcgaccctc agggattcct 180
gaccgattct ctggctccaa gtctggcacg tcaggcaccc tgggcatcac cggactccag 240
actggggacg aggccgatta ttactgcgta acatgggata ccagcctgag tgctggggtc 300
ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta 330
<210> 236
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VL DNA序列
<400> 236
gccatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gggcattggt acttatttag cctggtttca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccaatt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aagttcagcg gcagtggatc tggaacagat ttcactctca ccatcagcaa cctgcagcct 240
gaggattttg caacttatta ctgccaacag tataaaggtt accccctcac tttcggcgga 300
gggaccaagc tggagatcaa a 321
<210> 237
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VL DNA序列
<400> 237
cagtctgccc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60
tcttgttctg gaagcagctc caacatcgga agtaattatg taaattggta ccagcagctc 120
ccaggaacgg cccccaaact cctcatctat aggaataatc agcggccctc aggggtccct 180
gaccggttct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccgg 240
tccgaggatg aggctgatta ttactgtgca gcatgggatg acagcctgag tggccacggg 300
gtcttcggaa ctgggaccga gctgaccgtc cta 333
<210> 238
<211> 330
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VL DNA序列
<400> 238
aattttatgc tgactcagcc ccactctgtg tcggagtctc cggggaagac cgtgaccctc 60
tcctgcaccc gcagcagtgg cagcattgcc ggcagctatg tgcagtggta ccagcagcgc 120
ccgggcagtt cccccaccac tgttatcttt caggataacc aaaggccctc tggggtccct 180
gatcggttct ctggctccat cgacaagtcc tccaactctg cctccctcac catctctgga 240
ctgaagactg aggacgaggc tgactactat tgtcagtctt atgatagcaa caatcaggtg 300
ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta 330
<210> 239
<211> 318
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VL DNA序列
<400> 239
tcctatgagc tgactcagcc accctcagtg tccgtgtccc caggacagac agccaggatc 60
ccctgctctg gagctgactt gggggatcag tatgtttcgt ggtatcaaca tcagccaggc 120
cagtcccctt tactggtcat ctatgaagat gacaagcggc cctcagggat acctgagcga 180
ttctctggct ccaactctgg gaacacagcc actctgacca tcagcgggac ccaggctatg 240
gatgaggctg actattactg tcaggcgtgg gacggcaacg ctgcgatatt cggcggaggg 300
accaagctga ccgtccta 318
<210> 240
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VL DNA序列
<400> 240
gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aaaagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcagctact tagcctggta ccagcagaaa 120
cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca 180
gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240
cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggta gctcacctct cactttcggc 300
ggagggacca agctggagat caaa 324
<210> 241
<211> 330
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VL DNA序列
<400> 241
cagtctgccc tgactcagcc tccctccgtg tctgggtctc ctggacagtc gatcaccatc 60
tcctgcactg gaaccagcac tgacattggt ggttatgact ttgtctcctg gtaccaacaa 120
cacccaggcc aagcccccaa actcatcatg tttgatgtca gtagtcgacc ctcagggata 180
tctaatcgct tctctggctc caagtcaggc gacacggcct ccctgaccat ctctgggctc 240
cagggtgacg acgaggctga ttattactgt tcctcatatg caggctctgg cacttggatg 300
ttcggcgggg ggaccaagct gaccgtccta 330
<210> 242
<211> 330
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VL DNA序列
<400> 242
cagtctgtgc tgacgcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60
tcttgttctg gaagcaactc caacatcgaa aataattatg tctactggta ccagcatctc 120
ccaggaacgg cccccaaacg cctcatttat cagaacaatc agcggccctc tggggtccct 180
gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccgg 240
tccgaggatg aggccgatta ttactgttca gcttgggatg acagcctgag tgcttgggtg 300
ttcggcggag ggaccgagct gaccgtccta 330
<210> 243
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VL DNA序列
<400> 243
tcctatgagc tgacgcagcc accctcggtg tcagtggccc caggaaagac ggccaggatt 60
acctgtgggg gaaacaacat tggaagtaaa agtgtgcact ggtaccagca gaagccaggc 120
caggcccctg tactggtcgt ctatgatgat agcgaccggc cctcagggat ccctgagcga 180
ttctctggct ccaactctgg gaacacggcc accctgacca tcagcagggt cgaagccggg 240
gatgaggccg actattactg tcaggtgtgg gatagtagta gtgatcattg ggtgttcggc 300
ggagggacca agctgaccgt ccta 324
<210> 244
<211> 330
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VL DNA序列
<400> 244
cagtctgtgg tgacgcagcc gccctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60
tcttgttctg gaagcagctc caacatcgga agtaattatg tatactggta ccagcagctc 120
ccaggaacgg cccccaaact cctcatctat aggaataatc agcggccctc aggggtccct 180
gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccgg 240
tccgaggatg aggctgatta ttactgtgca gcatgggatg acagcctgag tggttatgtc 300
ttcggaactg ggaccaagct gaccgtccta 330
<210> 245
<211> 330
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VL DNA序列
<400> 245
cagtctgtgc tgactcagcc gccctcagtg tctgcggccc caggacagaa ggtcaccatc 60
tcctgctctg gaagcagctc caacattggg aataattatg tatcctggta ccagcaactc 120
ccaggaacag cccccaaact cctcattttt gacgataata agcgaccctc agggattcct 180
gaccgattct ctggctccct gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccag 240
tctgaggatg acgctgatta ttactgttca gcatgggatg acagcctgag tggttatgtc 300
ttcggaactg ggaccaagct gaccgtccta 330
<210> 246
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VL DNA序列
<400> 246
gatgttgtga tgactcagac tccgctctcc ctgcccgtca cccttggaca gccggcctcc 60
atctcctgca ggtctagtca aggtctcgta ttcagtgatg gagtcactta cttgaactgg 120
tttcagcaga ggccaggcca atctccaagg cgcctaattt ataaggtttc taaccgggac 180
tctggggtcc cagacagatt cagcggcagt gggtcaggca ctgatttcac actgaaaatc 240
agcagggtgg aggctgagga tgttgggatt tattactgta tgcaaggtac acactggcct 300
cacacttttg gccaggggac caagctggag atcaaa 336
<210> 247
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VL DNA序列
<400> 247
gacatccgga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc aggcgagtca ggacattacc aattatttaa attggtatca ccagaaacca 120
gggaaagccc ctaaactcct gatctacgat gcatccaatt tggaaacagg ggtcccatca 180
aggttcagtg gaggtggatc tgggacagat tttactttca ccatcagcag cctgcagtct 240
gaagatattg gcacatatta ctgtcaacag tatgatgatc tcccgctcac tttcggcgga 300
gggaccaagg tggagatcaa a 321
<210> 248
<211> 315
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VL DNA序列
<400> 248
gacatccagt tgacccagtc tccttccacc ctgtctgcat ctgtcggaga cagagtcacc 60
atctcttgcc gggccagtca gagtattagt agctggttgg cctggtatca gcacaaacca 120
gggaaagccc ctaaactcct gatctataag acatctgctt tagaagatgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacggaa ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gatgattttg caacttattt ctgcctacat tatggtagtt acacttttgg ccaggggacc 300
aaagtggata tcaaa 315
<210> 249
<211> 330
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VL DNA序列
<400> 249
cagtctgtgg tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccggacagag ggtcaccatc 60
tcttgttctg gaagcagctc caacatcgag ggtaacactg tcagttggta ccagcagttc 120
ccaggagcgg cccccaaact cctcatatat agtaatagtt accgggcctc aggggtccct 180
gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgaactccag 240
tctgaggatg aggctgatta ttactgttca gcatgggatg acagcctgaa tggtccggtg 300
ttcggcggag ggaccgagct gaccgtccta 330
<210> 250
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VL DNA序列
<400> 250
cagtctgccc tgactcagcc tgcctccgtg tctgggtctc ttggacagtc gatcaccatc 60
tcctgcactg gaaccagcag tgacgttggt acttatgact atgtctcctg gtaccaacaa 120
cacccaggca aagcccccaa actcatgatt tatgatgtca cttatcggcc ctcaggggtt 180
tctcatcgct tctctggctc caagtctggc aacacggcct ccctgaccat ctctgggctc 240
caggctgacg acgaggctga ttattactgt cagcagtata ataactggcc tccgcggtac 300
acttttggcc aagggaccaa ggtggaaatc aaa 333
<210> 251
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VL DNA序列
<400> 251
caatctgccc tgactcagcc tgcctccgtg tctgggtctc ctggacagtc gatcaccatc 60
tcctgcactg gaaccagcag tgacgttggt ggttataact atgtctcctg gtaccaacaa 120
cacccaggca aagcccccaa actcatgatt tatgatgtca gtaatcggcc ctcaggggtt 180
tctaatcgct tctctggctc caagtctggc aacacggcct ccctgaccat ctctgggctc 240
caggctgagg acgaggctga ttattactgc agctcatata caagcagcag cactctgttt 300
gtcttcggaa ctgggaccga gctgaccgtc cta 333
<210> 252
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VL DNA序列
<400> 252
gacatccgga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca ggacattaga catgatttag gctggtatca acagaaacca 120
gggaaagccc ctagtctcct gatgtatgct acatccacgt tacaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tggcacacat ttcactctca ccatcagtag cctgaagcct 240
gaagactctg caacttatta ctgtctacaa gatggcgatt acccgctcac tttcggcgga 300
gggaccaagc tggagatcaa a 321
<210> 253
<211> 330
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VL DNA序列
<400> 253
caatctgccc tgactcagcc tccctccgcg tccgggtctc ctggacagtc agtcaccatc 60
tcctgcactg gaaccagcag tgacgttggt ggttataact atgtctcctg gtaccaacaa 120
cacccaggca aagcccccaa actcataatt tatgaagtca gtgagcggcc ctcaggggtc 180
cctgatcgct tctctggctc caagtctgac aacacggcct ccctgaccgt ctctgggctc 240
caggctgagg atgaggctga ttattactgc agctcatatg caggcagcaa cattttggtg 300
ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta 330
<210> 254
<211> 330
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VL DNA序列
<400> 254
cagtctgtgc tgacgcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60
tcttgttctg gaagcagctc caacgtcgga ggtaatcctg tatattggta ccggcaggtc 120
ccaacagcgg cccccaaact cctcgtctac ggtcataatc agcggccccc acgggaccct 180
gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccgg 240
tccgaggatg aggctgatta ttactgtgca gcatgggatg acagcctgag tggttgggtg 300
ttcggcggcg ggaccgagct gaccgtccta 330
<210> 255
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VL DNA序列
<400> 255
tcctatgagc tgacacagcc accctcagtg tcagtggccc cgggaaagac ggccaggatt 60
acctgtgggg caaataacat tgaaactaaa agtgttcact ggtaccgcca gaggccaggc 120
caggccccta tactggtcat ctattatgat agcgaccgac cctcagggat ccctgaacga 180
ttctctggct ccacctctgg ggacacggcc accctgacca tcagcagggt cgaagccgag 240
gatgaggccg actattactg tcaggtgtgg gatagtacta gtgatcatgt ggtattcggc 300
gaagggacca agctgaccgt ccta 324
<210> 256
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VL DNA序列
<400> 256
gacatcctga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc aggcgagtca ggacattagc aactatttaa attggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctacgat gcatccaatt tggaaacagg ggtcccatca 180
aggttcagtg gaagtggatc tgggacaggt ttttctttca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacatatta ctgtcaacag tatggtaatc tcccgctcac tttcggcgga 300
gggaccaagc tggagatcaa a 321
<210> 257
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VL DNA序列
<400> 257
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc agctatttaa attggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatccacgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aagttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgcctacag tataagactt acccgtacac ttttggcccg 300
gggaccaagg tggaaatcaa a 321
<210> 258
<211> 330
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VL DNA序列
<400> 258
caatctgccc tgactcagcc tgcctccgtg tctgggcctc ctggacagtc gatcaccatc 60
tcctgcactg gaaccagcag tgacgttggt ggttataact atgtctcctg gtaccaacag 120
cacccaggca aagcccccaa actcatgatt tatgatgtca gtaatcggcc ctcaggggtt 180
tctaatcgct tctctggctc caagtctggc aacacggcct ccctgaccat ctctgggctc 240
caggctgagg acgaggctga ttattactgc agctcatata caagcagcag cacttgggtg 300
ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta 330
<210> 259
<211> 327
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VL DNA序列
<400> 259
cagtctgtgc tgacgcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60
tcttgttctg gaagccgctc caacatcgga agtaatactg ttagctggta ccagcaattc 120
ccagggacgg cccccaaact cctcatctat cttaataatc agcggccctc aggggtccct 180
gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccag 240
tctgaggatg aggctgagta ttactgtgca acatgggatg acgacctcaa tggggtgttc 300
ggcggaggga ccaagctgac cgtccta 327
<210> 260
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VL DNA序列
<400> 260
gaaattgtgt tgacacagtc tccaggcacc gtgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagggttagc gccacctatt tagcctggta ccagcagaaa 120
cctggccagg ctcccaggct cctcatgtat ggtggaagta ggagggccac tggcatccca 180
gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag gagactggag 240
cctgaagatt ctgcagtata ttactgtcag cagtatggga gttcacccct cactttcggc 300
ggagggacca agctggagat caaa 324
<210> 261
<211> 330
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VL DNA序列
<400> 261
cagtctgccc tgactcagcc tgcctccgtg tctgggtctc ctggacagtc gatcaccatc 60
tcctgcactg gaaccagcag tgacgttggt ggttataact atgtctcctg gtaccaacaa 120
cacccaggca aagcccccaa actcatgatt tatgatgtca gtaatcggcc ctcaggggtt 180
tctaatcgct tctctggctc caagtctggc aacacggcct ccctgaccat ctctgggctc 240
caggctgagg acgaggctga ttattactgc agctcatata caagcagcag caattgggtg 300
ttcggcggag ggaccgagct gaccgtccta 330
<210> 262
<211> 330
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VL DNA序列
<400> 262
cagcctgtgc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60
tcttgttctg gaagcagctc caacatcgga agtaattatg tatactggta ccagcagctc 120
ccaggaacgg cccccaaact cctcatctat aggaataatc agcggccctc aggggtccct 180
gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccgg 240
tccgaggatg aggctgatta ttactgtgca gcatgggatg acagcctgag tggttatgtc 300
ttcggaactg ggaccaaggt caccgtccta 330
<210> 263
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VL DNA序列
<400> 263
gccatccggt tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgctt ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc aggcgagtca gaacattaac aattatttga attggtatca acagaaatca 120
gggaaggccc ctaaactcct gatctacgat gcgtccaatt tggaagcagg ggtcccatct 180
aggttcagtg gaagtgcatc tgggacagat tttactttca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaggatattg caacatatta ctgtcaacag aatgataatc tccctctaac cttcggccaa 300
gggacacgac tggagattaa a 321
<210> 264
<211> 330
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VL DNA序列
<400> 264
cagccagtgc tgactcagcc accctcaatg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60
tcttgttctg ggggcaactc caatatcgga gataatagtg taagttggta ccagcaactc 120
ccgggaacgg cccccaaact cctcatctat aataataatc aacggccctt aggggtccct 180
gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatccg tggcctccaa 240
tctgaagatg aggctcatta ttattgttca tcttgggatg acagcctgga aggtgcgcag 300
ttcggcggcg ggaccaaggt caccgtccta 330
<210> 265
<211> 330
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VL DNA序列
<400> 265
cagtctgtgg tgacgcagcc accctcagcg tctgggaccc ccggacagag ggtcaccatc 60
tcttgttctg gaagcagctc caacatcgag ggtaacactg tcagttggta ccagcagttc 120
ccaggagcgg cccccaaact cctcatatat agtaatagtt accgggcctc aggggtccct 180
gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgaactccag 240
tctgaggatg aggctgatta ttactgttca gcatgggatg acagcctgaa tggtccggtg 300
ttcggcggag ggaccaaggt gaccgtccta 330
<210> 266
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VL DNA序列
<400> 266
gacatccggt tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cacaatcacc 60
atcacctgtc gggcgagtca agatattagc agttggatag cctggtatca acaaaaaccc 120
gggacagccc ctaggctcct gatctatgct gcatccagtt tacaaagtgg tgtcccatca 180
cgattcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcaacag ccttcaccct 240
gaagattttg caacttacta ctgtcaacag gggagcactt tcccgctcgc tttcggcggg 300
gggaccaagg tggagatcaa a 321
<210> 267
<211> 330
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VL DNA序列
<400> 267
caatctgccc tgactcagcc tccctccgcg tccgggtctc ctggacagtc agtcaccatc 60
tcctgcactg gaaccagaag tgacgttggt gcttataatt atgtctcctg gtatcaacac 120
cacccaggca aagcccccaa actcatgctt tatgacgtca gtaagcggcc ctcaggggtc 180
tctgatcgct tctctggctc caagtctggc aacacggcct ccctgaccgt ctctgggctc 240
cagtctgagg atgaggctaa ttattactgc agctcatatg caggcagcgg caaatatgtc 300
ttcggatctg ggaccgagct gaccgtccta 330
<210> 268
<211> 330
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VL DNA序列
<400> 268
cagtctgtgg tgactcagcc accctcagtg tctgcggcct caggacagaa ggtcaccatc 60
tcctgctctg gaagcagccc caacattggt aataattatg tgtcctggta ccagcacctc 120
ccaggaacag cccccaaact cctcatttat gacaataata agcggccctc agggattcct 180
gaccgattct ctggctccaa gtctggcacg tcagtcaccc tgggcatcac cggactccag 240
actggggacg aggccgatta ttactgcgga acatgggata gcaggctgaa tatttgggtg 300
ttcggcgggg ggaccaagct gaccgtccta 330
<210> 269
<211> 369
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VH DNA序列
<400> 269
gaggtgcatc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg atggaagtaa taaatactat 180
gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagaccga 300
gacgggtttt ttttaccaat gtactacttt gactactggg gccagggaac cctggtcacc 360
gtctcctca 369
<210> 270
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VH DNA序列
<400> 270
cagatcacct tgaaggagtc tgggggaggc ttggtaaagc ctggggggtc ccttagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt aacgcctgga tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggttggccgt attaaaagca aaactgatgg tgggacaaca 180
gactacgctg cacccgtgaa aggcagattc accatctcaa gagatgattc aaaaaacacg 240
ctgtatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacag ccgtgtatta ctgtaccaca 300
gatccccacg gctactacta cggtatggac gtctggggcc aagggaccac ggtcaccgtc 360
tcctca 366
<210> 271
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VH DNA序列
<400> 271
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcccta tctttggtac agcaaactac 180
gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240
atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagagattcc 300
gggtggttcg ggccccggta ctactttgac tactggggcc agggaaccct ggtcaccgtc 360
tcctca 366
<210> 272
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VH DNA序列
<400> 272
caggtccagc tggtgcagtc tgggcctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60
tcctgcaagg catctggata cgacttcatc agatactata tgaattgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag gacctgagtg gatgggagca atcgacccta gtgatggcga cacaacctac 180
ggacagaagt tccagggcag agtcaccctg accagggaca cattcacgag cacagtctac 240
atggaactga gcagcctgag atctgaagac acggccgtat attactgtgc gagagattgg 300
gagttgacga atagttacgg tctggacgtc tggggccaag ggaccacggt caccgtctcc 360
tca 363
<210> 273
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VH DNA序列
<400> 273
gaggtgcatc tggtggagtc tgggggaggt gtggtacggc cgggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttggt gattatggca tgagctgggt ccgccaagct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctctggt attaattgga atggtggtag aacaggttat 180
gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctccctgtat 240
ctgcaaatga acagtctgag agccgaggac acggccttgt attactgtgc gagagcccga 300
ggttcgggga gttacttcgg ctacatggac gtctggggca aagggaccac ggtcactgtc 360
tcctca 366
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<211> 369
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VH DNA序列
<400> 274
caggtccagc tggtacagtc tgggggaggc tcggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggttt caccttcact agatatagca tgaactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtttcatac attagtagta gtagtagtac catatactac 180
gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa ctcactgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agacgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagatggg 300
tacggtggta actccgacta ctacggtatg gacgtctggg gccaagggac cacggtcacc 360
gtctcctca 369
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<211> 384
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VH DNA序列
<400> 275
caggtccagc tggtacagtc tggagctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggtta cacctttacc agctatggta tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcagcgctt acaatggtaa cacaaactat 180
gcacagaagc tccagggcag agtcaccatg accacagaca catccacgag cacagcctac 240
atggagctga ggagcctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagagatccc 300
tacgatgact acggtggtaa ctcgcgagat gaggaagatg cttttgatat ctggggccaa 360
gggacaatgg tcaccgtctc ctca 384
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VH DNA序列
<400> 276
gaggtgcaac tggtggagtc tgggggaggc ttggtaaagc ctggggggtc ccttagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt aacgcctgga tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggttggccgt attaaaagca aaactgatgg tgggacaaca 180
gactccgctg cacccgtgaa aggcagattc accatctcaa gagatgattc aaaaaacacg 240
ctgtatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacag ccgtgtatta ctgtaccaca 300
tattactttt acagtagtgg tgatatgact gactactggg gccagggaac cctggtcacc 360
gtctcctca 369
<210> 277
<211> 369
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VH DNA序列
<400> 277
gaagtgcatc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc cagggcggtc cctgagactc 60
tcctgtacag cttccggatt cacctttggt gattatgcta tgaactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtaggtttc attagaagca aagcttctgg tgggacaaca 180
gattacgccg cgtctgtgaa aggcagattc accatctcaa gagatgattc caaaagcatc 240
gcctatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacag ccgtgtatta ctgtactaga 300
gccttacgtg gatacagcta tggtttgttt gactactggg gccagggaac cctggtcacc 360
gtctcctca 369
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<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VH DNA序列
<400> 278
caggtccagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
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cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcccta tctttggtac agcaaactac 180
gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240
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accgtctcct ca 372
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VH DNA序列
<400> 279
gaagtgcaac tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc cagggcggtc cctgagactc 60
tcctgtacag cttctggatt cacctttggt gattatgcta tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtaggtttc attagaagca aagcttatgg tgggacaaca 180
gaatacgccg cgtctgtgaa aggcagattc accatctcaa gagatgattc caaaagcatc 240
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gatataggtt actatggttc ggggagttat tccccctttg actactgggg ccagggaacc 360
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VH DNA序列
<400> 280
caggtgcagc tggtgcagtc tgggggaggc ctggtcaaac ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agttacaaca taaactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggccggagtg ggtctcatcc attagtagta gtagtagtta cagatactac 180
gcagactcag tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctcactgtat 240
ctgcaaatga acagtctgag agccgaggac acggctgtgt attattgtgt gagagataaa 300
accgggggct acgggaccgc ttttgactac tggggccagg gaaccctggt caccgtctcc 360
tca 363
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VH DNA序列
<400> 281
gaggtgcaac tggtggagtc tgggggaggc ctggtcaagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatagca tgaactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtggcattt atatcacatg atgcaagtaa gaaattctac 180
gcagactccg tgaagggccg tttcaccctc tccagagaca attccaagaa tacgctgtat 240
ctggagatga acagcctggg agctgaggac acggctttgt attactgtgg gagagatcgg 300
aactggggtt tttcagactt ctggggccag ggaaccctgg tcactgtctc ctca 354
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<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VH DNA序列
<400> 282
caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60
acctgcactg tctctggtgg ctccatcagc agtagcagtc actactgggg ctggatccgc 120
cagcccccag ggaaggggct ggagtggatt gggagtatct attatagtgg gagcacctac 180
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tcctca 366
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VH DNA序列
<400> 283
gaagtgcagc tggtggagtc tgggggaggt ttggtcaacc ctggagggtc cctgagactc 60
tcctgtgaag cctctggatt cacattcagt gactattata ttagttggat ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg gatttcatac attagtggaa gtagtactta cacagacttc 180
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VH DNA序列
<400> 284
caggtgcagc tgcaggagtc ggggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatagca tgaactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtttcatac attagtagta gtagtagtac catatactac 180
gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctcactgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagatatc 300
tacggtgact gggactacta ctactacggt atggacgtct ggggccaagg gaccacggtc 360
accgtctcct ca 372
<210> 285
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VH DNA序列
<400> 285
caggtgcagc tggtacagtc tggggctgag gtggagaagc ctggggcctc agtgaagctt 60
tcctgcacgg catctggata caacttcaat tcctactaca tgcactgggt gcgactgacc 120
cctggacagg ggcttgagtg gatggggcta atcaacccta ctaacggcag aacaacctat 180
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cccccccaca ttttcgaccc ggactttgac tactggggcc agggaaccct ggtcaccgtc 360
tcctca 366
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VH DNA序列
<400> 286
caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcacagac cctgtccctc 60
acctgcactg tctctggtgg ctccatcagc agtggtgatt actactggag ttggatccgc 120
cagtccccag ggaagggcct ggagtggatt gggtacatcc attccaccgg gaccacttac 180
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<211> 369
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VH DNA序列
<400> 287
caggtccagc tggtgcagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaagtaa taaatactat 180
gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
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agcctcatcc aatactacta ctacggtatg gacgtctggg gccaagggac aatggtcact 360
gtctcctca 369
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VH DNA序列
<400> 288
gaagtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtaaagc ctggggggtc ccttagactc 60
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ccagggaagg ggctggagtg ggttggccgt attaaaagca aaactgatgg tgggacaaca 180
gactccgctg cacccgtgaa aggcagattc accatctcaa gagatgattc aaaaaacacg 240
ctgtatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacag ccgtgtatta ctgtaccaca 300
tattactttt acagtagtgg tgatatgact gactactggg gccagggaac cctggtcact 360
gtctcctca 369
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VH DNA序列
<400> 289
gaagtgcaac tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggcaggtc cctgagactc 60
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<212> DNA
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<223> VH DNA序列
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gcacagaagt tccagggcag agtcaccatg accagggaca cgtccacgag cacagtctac 240
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<212> DNA
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<212> DNA
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gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240
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ccttctgggt ctacgaacta ctactactac tacatggacg tctggggcaa agggaccacg 360
gtcaccgtct cctca 375
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VH DNA序列
<400> 293
gaagtgcatc tggtggagtc tgggggaggc ttggtaaagc ctggggggtc ccttagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt aacgcctgga tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggttggccgt attaaaagca aaactgatgg tgggacaaca 180
gactccgctg cacccgtgaa aggcagattc accatctcaa gagatgattc aaaaaacacg 240
ctgtatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacag ccgtgtatta ctgtaccaca 300
tattactttt acagtagtgg tgatatgact gactactggg gccagggaac cctggtcacc 360
gtctcctca 369
<210> 294
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VH DNA序列
<400> 294
gaggtgcaac tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggagggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacgttgagt aattttgaaa tgaactgggt ccgccaggct 120
ccagggaggg ggctggagtg ggtttcatac attagtgcta ctactagtgc cacttcctac 180
gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctcactgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagtaagg 300
gatggctaca attttggcta ctactactac tacatggacg tctggggcaa agggaccacg 360
gtcaccgtct cctca 375
<210> 295
<211> 384
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VH DNA序列
<400> 295
caggtgcagc tggtacagtc tgggtctgag ttgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60
tcctgcaagg cttctggtta cacctttacc agctatggta tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcagcgctt acaatggtaa cacaaactat 180
gcacagaagc tccagggcag agtcaccatg accacagaca catccacgag cacagcctac 240
atggagctga ggagcctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagagatccc 300
tacgatgact acggtggtaa ctcgcgagat gaggaagatg cttttgatat ctggggccaa 360
gggaccacgg tcaccgtctc ctca 384
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<211> 369
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VH DNA序列
<400> 296
gaagtgcatc tggtggagtc tgggggaggc ttggtaaagc ctggggggtc ccttagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt aacgcctgga tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggttggccgt attaaaagca aaactgatgg tgggacaaca 180
gactccgctg cacccgtgaa aggcagattc accatctcaa gagatgattc aaaaaacacg 240
ctgtatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacag ccgtgtatta ctgtaccaca 300
tattactttt acagtagtgg tgatatgact gactactggg gccagggaac cctggtcacc 360
gtctcctca 369
<210> 297
<211> 378
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VH DNA序列
<400> 297
gaggtgcatc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc cagggcggtc cctgagactc 60
tcctgtacag cttctggatt cacctttggt gattatgcta tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtaggtttc attagaagca aagcttatgg tgggacaaca 180
gaatacgccg cgtctgtgaa aggcagattc accatctcaa gagatgattc caaaagcatc 240
gcctatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacag ccgtgtatta ctgtactaga 300
gatataggtt actatggttc ggggagttat tccccctttg actactgggg ccagggaacc 360
ctggtcaccg tctcctca 378
<210> 298
<211> 378
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VH DNA序列
<400> 298
gaagtgcaac tggtggagtc tgggggaggt gtggtacggc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttggt gattatggca tgagctgggt ccgccaagct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctctggt attaattgga atggtggtag cacaggttat 180
gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctccctgtat 240
ctgcaaatga acagtctgag agccgaggac acggccttgt attactgtgc gagagatcgg 300
gctcctgact acggtgacta cttacaagtc ggaacgactg actactgggg ccagggaacc 360
ctggtcactg tctcctca 378
<210> 299
<211> 378
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VH DNA序列
<400> 299
gaagtgcaac tggtggagtc tgggggaggc ttggtcaagc ctggagggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt gactactaca tgagctggat ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtttcatac attagtagta gtggtagtac catatactac 180
gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagggaca acgccaagaa ctcactgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaggtcac 300
cagtattacg atttttggag tggttattca aactggttcg acccctgggg ccagggaacc 360
ctggtcactg tctcctca 378
<210> 300
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VH DNA序列
<400> 300
gaagtgcaac tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttacc agctatgcca tgaactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagat attagtagta gtagtagtta catatactac 180
gcagactcag tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctcactgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagatcta 300
tatagtggct acgattacgg ctactactac ggtatggacg tctggggcca agggaccacg 360
gtcactgtct cctca 375
<210> 301
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VH DNA序列
<400> 301
caggtccagc tggtacagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcccta tctttggtac agcaaactac 180
gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240
atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagagggtta 300
gataactgga acgacgttgg ctggttcgac ccctggggcc agggaaccct ggtcaccgtc 360
tcctca 366
<210> 302
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VH DNA序列
<400> 302
gaagtgcatc tggtggagtc tgggggaggc ttggtaaagc ctggggggtc ccttagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt gacacctgga tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggttggccgt attaaaagca aaactgatgg tgggacaaca 180
aactacgctg cacccgtgaa aggcaggttc accatctcaa gagatgattc aaaaaccacg 240
ctgtttctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacag ccgtgtatta ctgtacgggg 300
ggtgactacc cactctttgc ctactggggc cagggagccc tggtcaccgt ctcctca 357
<210> 303
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VH DNA序列
<400> 303
gaggtgcatc tggtggagtc tgggggaggc ttggtaaagc ctggggggtc ccttagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt aacgcctgga tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggttggccgt attaaaagca aaactgatgg tgggacaaca 180
gactacgctg cacccgtgaa aggcagattc accatctcaa gagatgattc aaaaaacacg 240
ctgtatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacag ccgtgtatta ctgtaccaca 300
gaggcagctg gtttttacta ctactactac ggtatggacg tctggggcca agggaccacg 360
gtcaccgtct cctca 375
<210> 304
<211> 41
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人CD28胞内结构域
<400> 304
Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr
1 5 10 15
Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro
20 25 30
Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser
35 40
<210> 305
<211> 27
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人CD28跨膜结构域
<400> 305
Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu
1 5 10 15
Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val
20 25
<210> 306
<211> 42
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人4-1BB胞内结构域
<400> 306
Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met
1 5 10 15
Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe
20 25 30
Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu
35 40
<210> 307
<211> 27
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人4-1BB跨膜结构域
<400> 307
Ile Ile Ser Phe Phe Leu Ala Leu Thr Ser Thr Ala Leu Leu Phe Leu
1 5 10 15
Leu Phe Phe Leu Thr Leu Arg Phe Ser Val Val
20 25
<210> 308
<211> 38
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人ICOS胞内结构域
<400> 308
Cys Trp Leu Thr Lys Lys Lys Tyr Ser Ser Ser Val His Asp Pro Asn
1 5 10 15
Gly Glu Tyr Met Phe Met Arg Ala Val Asn Thr Ala Lys Lys Ser Arg
20 25 30
Leu Thr Asp Val Thr Leu
35
<210> 309
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人ICOS跨膜结构域
<400> 309
Phe Trp Leu Pro Ile Gly Cys Ala Ala Phe Val Val Val Cys Ile Leu
1 5 10 15
Gly Cys Ile Leu Ile
20
<210> 310
<211> 48
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人CD27胞内结构域
<400> 310
Gln Arg Arg Lys Tyr Arg Ser Asn Lys Gly Glu Ser Pro Val Glu Pro
1 5 10 15
Ala Glu Pro Cys His Tyr Ser Cys Pro Arg Glu Glu Glu Gly Ser Thr
20 25 30
Ile Pro Ile Gln Glu Asp Tyr Arg Lys Pro Glu Pro Ala Cys Ser Pro
35 40 45
<210> 311
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人CD27跨膜结构域
<400> 311
Ile Leu Val Ile Phe Ser Gly Met Phe Leu Val Phe Thr Leu Ala Gly
1 5 10 15
Ala Leu Phe Leu His
20
<210> 312
<211> 42
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人OX40胞内结构域
<400> 312
Ala Leu Tyr Leu Leu Arg Arg Asp Gln Arg Leu Pro Pro Asp Ala His
1 5 10 15
Lys Pro Pro Gly Gly Gly Ser Phe Arg Thr Pro Ile Gln Glu Glu Gln
20 25 30
Ala Asp Ala His Ser Thr Leu Ala Lys Ile
35 40
<210> 313
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人OX40跨膜结构域
<400> 313
Val Ala Ala Ile Leu Gly Leu Gly Leu Val Leu Gly Leu Leu Gly Pro
1 5 10 15
Leu Ala Ile Leu Leu
20
<210> 314
<211> 24
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人DAP10胞内结构域
<400> 314
Leu Cys Ala Arg Pro Arg Arg Ser Pro Ala Gln Glu Asp Gly Lys Val
1 5 10 15
Tyr Ile Asn Met Pro Gly Arg Gly
20
<210> 315
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人DAP10跨膜结构域
<400> 315
Leu Leu Ala Gly Leu Val Ala Ala Asp Ala Val Ala Ser Leu Leu Ile
1 5 10 15
Val Gly Ala Val Phe
20
<210> 316
<211> 189
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人CD30胞内结构域
<400> 316
Cys His Arg Arg Ala Cys Arg Lys Arg Ile Arg Gln Lys Leu His Leu
1 5 10 15
Cys Tyr Pro Val Gln Thr Ser Gln Pro Lys Leu Glu Leu Val Asp Ser
20 25 30
Arg Pro Arg Arg Ser Ser Thr Gln Leu Arg Ser Gly Ala Ser Val Thr
35 40 45
Glu Pro Val Ala Glu Glu Arg Gly Leu Met Ser Gln Pro Leu Met Glu
50 55 60
Thr Cys His Ser Val Gly Ala Ala Tyr Leu Glu Ser Leu Pro Leu Gln
65 70 75 80
Asp Ala Ser Pro Ala Gly Gly Pro Ser Ser Pro Arg Asp Leu Pro Glu
85 90 95
Pro Arg Val Ser Thr Glu His Thr Asn Asn Lys Ile Glu Lys Ile Tyr
100 105 110
Ile Met Lys Ala Asp Thr Val Ile Val Gly Thr Val Lys Ala Glu Leu
115 120 125
Pro Glu Gly Arg Gly Leu Ala Gly Pro Ala Glu Pro Glu Leu Glu Glu
130 135 140
Glu Leu Glu Ala Asp His Thr Pro His Tyr Pro Glu Gln Glu Thr Glu
145 150 155 160
Pro Pro Leu Gly Ser Cys Ser Asp Val Met Leu Ser Val Glu Glu Glu
165 170 175
Gly Lys Glu Asp Pro Leu Pro Thr Ala Ala Ser Gly Lys
180 185
<210> 317
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人CD30跨膜结构域
<400> 317
Pro Val Leu Phe Trp Val Ile Leu Val Leu Val Val Val Val Gly Ser
1 5 10 15
Ser Ala Phe Leu Leu
20
<210> 318
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人2B4胞内结构域
<400> 318
Trp Arg Arg Lys Arg Lys Glu Lys Gln Ser Glu Thr Ser Pro Lys Glu
1 5 10 15
Phe Leu Thr Ile Tyr Glu Asp Val Lys Asp Leu Lys Thr Arg Arg Asn
20 25 30
His Glu Gln Glu Gln Thr Phe Pro Gly Gly Gly Ser Thr Ile Tyr Ser
35 40 45
Met Ile Gln Ser Gln Ser Ser Ala Pro Thr Ser Gln Glu Pro Ala Tyr
50 55 60
Thr Leu Tyr Ser Leu Ile Gln Pro Ser Arg Lys Ser Gly Ser Arg Lys
65 70 75 80
Arg Asn His Ser Pro Ser Phe Asn Ser Thr Ile Tyr Glu Val Ile Gly
85 90 95
Lys Ser Gln Pro Lys Ala Gln Asn Pro Ala Arg Leu Ser Arg Lys Glu
100 105 110
Leu Glu Asn Phe Asp Val Tyr Ser
115 120
<210> 319
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人2B4跨膜结构域
<400> 319
Phe Leu Val Ile Ile Val Ile Leu Ser Ala Leu Phe Leu Gly Thr Leu
1 5 10 15
Ala Cys Phe Cys Val
20
<210> 320
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 连接子
<400> 320
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 321
<211> 378
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人CD123
<400> 321
Met Val Leu Leu Trp Leu Thr Leu Leu Leu Ile Ala Leu Pro Cys Leu
1 5 10 15
Leu Gln Thr Lys Glu Asp Pro Asn Pro Pro Ile Thr Asn Leu Arg Met
20 25 30
Lys Ala Lys Ala Gln Gln Leu Thr Trp Asp Leu Asn Arg Asn Val Thr
35 40 45
Asp Ile Glu Cys Val Lys Asp Ala Asp Tyr Ser Met Pro Ala Val Asn
50 55 60
Asn Ser Tyr Cys Gln Phe Gly Ala Ile Ser Leu Cys Glu Val Thr Asn
65 70 75 80
Tyr Thr Val Arg Val Ala Asn Pro Pro Phe Ser Thr Trp Ile Leu Phe
85 90 95
Pro Glu Asn Ser Gly Lys Pro Trp Ala Gly Ala Glu Asn Leu Thr Cys
100 105 110
Trp Ile His Asp Val Asp Phe Leu Ser Cys Ser Trp Ala Val Gly Pro
115 120 125
Gly Ala Pro Ala Asp Val Gln Tyr Asp Leu Tyr Leu Asn Val Ala Asn
130 135 140
Arg Arg Gln Gln Tyr Glu Cys Leu His Tyr Lys Thr Asp Ala Gln Gly
145 150 155 160
Thr Arg Ile Gly Cys Arg Phe Asp Asp Ile Ser Arg Leu Ser Ser Gly
165 170 175
Ser Gln Ser Ser His Ile Leu Val Arg Gly Arg Ser Ala Ala Phe Gly
180 185 190
Ile Pro Cys Thr Asp Lys Phe Val Val Phe Ser Gln Ile Glu Ile Leu
195 200 205
Thr Pro Pro Asn Met Thr Ala Lys Cys Asn Lys Thr His Ser Phe Met
210 215 220
His Trp Lys Met Arg Ser His Phe Asn Arg Lys Phe Arg Tyr Glu Leu
225 230 235 240
Gln Ile Gln Lys Arg Met Gln Pro Val Ile Thr Glu Gln Val Arg Asp
245 250 255
Arg Thr Ser Phe Gln Leu Leu Asn Pro Gly Thr Tyr Thr Val Gln Ile
260 265 270
Arg Ala Arg Glu Arg Val Tyr Glu Phe Leu Ser Ala Trp Ser Thr Pro
275 280 285
Gln Arg Phe Glu Cys Asp Gln Glu Glu Gly Ala Asn Thr Arg Ala Trp
290 295 300
Arg Thr Ser Leu Leu Ile Ala Leu Gly Thr Leu Leu Ala Leu Val Cys
305 310 315 320
Val Phe Val Ile Cys Arg Arg Tyr Leu Val Met Gln Arg Leu Phe Pro
325 330 335
Arg Ile Pro His Met Lys Asp Pro Ile Gly Asp Ser Phe Gln Asn Asp
340 345 350
Lys Leu Val Val Trp Glu Ala Gly Lys Ala Gly Leu Glu Glu Cys Leu
355 360 365
Val Thr Glu Val Gln Val Val Gln Lys Thr
370 375
<210> 322
<211> 164
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人CD3zeta
<400> 322
Met Lys Trp Lys Ala Leu Phe Thr Ala Ala Ile Leu Gln Ala Gln Leu
1 5 10 15
Pro Ile Thr Glu Ala Gln Ser Phe Gly Leu Leu Asp Pro Lys Leu Cys
20 25 30
Tyr Leu Leu Asp Gly Ile Leu Phe Ile Tyr Gly Val Ile Leu Thr Ala
35 40 45
Leu Phe Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr
50 55 60
Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg
65 70 75 80
Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met
85 90 95
Gly Gly Lys Pro Gln Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn
100 105 110
Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met
115 120 125
Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly
130 135 140
Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala
145 150 155 160
Leu Pro Pro Arg
<210> 323
<211> 86
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人FcR gamma
<400> 323
Met Ile Pro Ala Val Val Leu Leu Leu Leu Leu Leu Val Glu Gln Ala
1 5 10 15
Ala Ala Leu Gly Glu Pro Gln Leu Cys Tyr Ile Leu Asp Ala Ile Leu
20 25 30
Phe Leu Tyr Gly Ile Val Leu Thr Leu Leu Tyr Cys Arg Leu Lys Ile
35 40 45
Gln Val Arg Lys Ala Ala Ile Thr Ser Tyr Glu Lys Ser Asp Gly Val
50 55 60
Tyr Thr Gly Leu Ser Thr Arg Asn Gln Glu Thr Tyr Glu Thr Leu Lys
65 70 75 80
His Glu Lys Pro Pro Gln
85
<210> 324
<211> 317
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人Fc gamma RIIa
<400> 324
Met Thr Met Glu Thr Gln Met Ser Gln Asn Val Cys Pro Arg Asn Leu
1 5 10 15
Trp Leu Leu Gln Pro Leu Thr Val Leu Leu Leu Leu Ala Ser Ala Asp
20 25 30
Ser Gln Ala Ala Ala Pro Pro Lys Ala Val Leu Lys Leu Glu Pro Pro
35 40 45
Trp Ile Asn Val Leu Gln Glu Asp Ser Val Thr Leu Thr Cys Gln Gly
50 55 60
Ala Arg Ser Pro Glu Ser Asp Ser Ile Gln Trp Phe His Asn Gly Asn
65 70 75 80
Leu Ile Pro Thr His Thr Gln Pro Ser Tyr Arg Phe Lys Ala Asn Asn
85 90 95
Asn Asp Ser Gly Glu Tyr Thr Cys Gln Thr Gly Gln Thr Ser Leu Ser
100 105 110
Asp Pro Val His Leu Thr Val Leu Ser Glu Trp Leu Val Leu Gln Thr
115 120 125
Pro His Leu Glu Phe Gln Glu Gly Glu Thr Ile Met Leu Arg Cys His
130 135 140
Ser Trp Lys Asp Lys Pro Leu Val Lys Val Thr Phe Phe Gln Asn Gly
145 150 155 160
Lys Ser Gln Lys Phe Ser His Leu Asp Pro Thr Phe Ser Ile Pro Gln
165 170 175
Ala Asn His Ser His Ser Gly Asp Tyr His Cys Thr Gly Asn Ile Gly
180 185 190
Tyr Thr Leu Phe Ser Ser Lys Pro Val Thr Ile Thr Val Gln Val Pro
195 200 205
Ser Met Gly Ser Ser Ser Pro Met Gly Ile Ile Val Ala Val Val Ile
210 215 220
Ala Thr Ala Val Ala Ala Ile Val Ala Ala Val Val Ala Leu Ile Tyr
225 230 235 240
Cys Arg Lys Lys Arg Ile Ser Ala Asn Ser Thr Asp Pro Val Lys Ala
245 250 255
Ala Gln Phe Glu Pro Pro Gly Arg Gln Met Ile Ala Ile Arg Lys Arg
260 265 270
Gln Leu Glu Glu Thr Asn Asn Asp Tyr Glu Thr Ala Asp Gly Gly Tyr
275 280 285
Met Thr Leu Asn Pro Arg Ala Pro Thr Asp Asp Asp Lys Asn Ile Tyr
290 295 300
Leu Thr Leu Pro Pro Asn Asp His Val Asn Ser Asn Asn
305 310 315
<210> 325
<211> 244
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人FcRbeta
<400> 325
Met Asp Thr Glu Ser Asn Arg Arg Ala Asn Leu Ala Leu Pro Gln Glu
1 5 10 15
Pro Ser Ser Val Pro Ala Phe Glu Val Leu Glu Ile Ser Pro Gln Glu
20 25 30
Val Ser Ser Gly Arg Leu Leu Lys Ser Ala Ser Ser Pro Pro Leu His
35 40 45
Thr Trp Leu Thr Val Leu Lys Lys Glu Gln Glu Phe Leu Gly Val Thr
50 55 60
Gln Ile Leu Thr Ala Met Ile Cys Leu Cys Phe Gly Thr Val Val Cys
65 70 75 80
Ser Val Leu Asp Ile Ser His Ile Glu Gly Asp Ile Phe Ser Ser Phe
85 90 95
Lys Ala Gly Tyr Pro Phe Trp Gly Ala Ile Phe Phe Ser Ile Ser Gly
100 105 110
Met Leu Ser Ile Ile Ser Glu Arg Arg Asn Ala Thr Tyr Leu Val Arg
115 120 125
Gly Ser Leu Gly Ala Asn Thr Ala Ser Ser Ile Ala Gly Gly Thr Gly
130 135 140
Ile Thr Ile Leu Ile Ile Asn Leu Lys Lys Ser Leu Ala Tyr Ile His
145 150 155 160
Ile His Ser Cys Gln Lys Phe Phe Glu Thr Lys Cys Phe Met Ala Ser
165 170 175
Phe Ser Thr Glu Ile Val Val Met Met Leu Phe Leu Thr Ile Leu Gly
180 185 190
Leu Gly Ser Ala Val Ser Leu Thr Ile Cys Gly Ala Gly Glu Glu Leu
195 200 205
Lys Gly Asn Lys Val Pro Glu Asp Arg Val Tyr Glu Glu Leu Asn Ile
210 215 220
Tyr Ser Ala Thr Tyr Ser Glu Leu Glu Asp Pro Gly Glu Met Ser Pro
225 230 235 240
Pro Ile Asp Leu
<210> 326
<211> 182
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人CD3gamma
<400> 326
Met Glu Gln Gly Lys Gly Leu Ala Val Leu Ile Leu Ala Ile Ile Leu
1 5 10 15
Leu Gln Gly Thr Leu Ala Gln Ser Ile Lys Gly Asn His Leu Val Lys
20 25 30
Val Tyr Asp Tyr Gln Glu Asp Gly Ser Val Leu Leu Thr Cys Asp Ala
35 40 45
Glu Ala Lys Asn Ile Thr Trp Phe Lys Asp Gly Lys Met Ile Gly Phe
50 55 60
Leu Thr Glu Asp Lys Lys Lys Trp Asn Leu Gly Ser Asn Ala Lys Asp
65 70 75 80
Pro Arg Gly Met Tyr Gln Cys Lys Gly Ser Gln Asn Lys Ser Lys Pro
85 90 95
Leu Gln Val Tyr Tyr Arg Met Cys Gln Asn Cys Ile Glu Leu Asn Ala
100 105 110
Ala Thr Ile Ser Gly Phe Leu Phe Ala Glu Ile Val Ser Ile Phe Val
115 120 125
Leu Ala Val Gly Val Tyr Phe Ile Ala Gly Gln Asp Gly Val Arg Gln
130 135 140
Ser Arg Ala Ser Asp Lys Gln Thr Leu Leu Pro Asn Asp Gln Leu Tyr
145 150 155 160
Gln Pro Leu Lys Asp Arg Glu Asp Asp Gln Tyr Ser His Leu Gln Gly
165 170 175
Asn Gln Leu Arg Arg Asn
180
<210> 327
<211> 171
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人CD3delta
<400> 327
Met Glu His Ser Thr Phe Leu Ser Gly Leu Val Leu Ala Thr Leu Leu
1 5 10 15
Ser Gln Val Ser Pro Phe Lys Ile Pro Ile Glu Glu Leu Glu Asp Arg
20 25 30
Val Phe Val Asn Cys Asn Thr Ser Ile Thr Trp Val Glu Gly Thr Val
35 40 45
Gly Thr Leu Leu Ser Asp Ile Thr Arg Leu Asp Leu Gly Lys Arg Ile
50 55 60
Leu Asp Pro Arg Gly Ile Tyr Arg Cys Asn Gly Thr Asp Ile Tyr Lys
65 70 75 80
Asp Lys Glu Ser Thr Val Gln Val His Tyr Arg Met Cys Gln Ser Cys
85 90 95
Val Glu Leu Asp Pro Ala Thr Val Ala Gly Ile Ile Val Thr Asp Val
100 105 110
Ile Ala Thr Leu Leu Leu Ala Leu Gly Val Phe Cys Phe Ala Gly His
115 120 125
Glu Thr Gly Arg Leu Ser Gly Ala Ala Asp Thr Gln Ala Leu Leu Arg
130 135 140
Asn Asp Gln Val Tyr Gln Pro Leu Arg Asp Arg Asp Asp Ala Gln Tyr
145 150 155 160
Ser His Leu Gly Gly Asn Trp Ala Arg Asn Lys
165 170
<210> 328
<211> 207
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人CD3epsilon
<400> 328
Met Gln Ser Gly Thr His Trp Arg Val Leu Gly Leu Cys Leu Leu Ser
1 5 10 15
Val Gly Val Trp Gly Gln Asp Gly Asn Glu Glu Met Gly Gly Ile Thr
20 25 30
Gln Thr Pro Tyr Lys Val Ser Ile Ser Gly Thr Thr Val Ile Leu Thr
35 40 45
Cys Pro Gln Tyr Pro Gly Ser Glu Ile Leu Trp Gln His Asn Asp Lys
50 55 60
Asn Ile Gly Gly Asp Glu Asp Asp Lys Asn Ile Gly Ser Asp Glu Asp
65 70 75 80
His Leu Ser Leu Lys Glu Phe Ser Glu Leu Glu Gln Ser Gly Tyr Tyr
85 90 95
Val Cys Tyr Pro Arg Gly Ser Lys Pro Glu Asp Ala Asn Phe Tyr Leu
100 105 110
Tyr Leu Arg Ala Arg Val Cys Glu Asn Cys Met Glu Met Asp Val Met
115 120 125
Ser Val Ala Thr Ile Val Ile Val Asp Ile Cys Ile Thr Gly Gly Leu
130 135 140
Leu Leu Leu Val Tyr Tyr Trp Ser Lys Asn Arg Lys Ala Lys Ala Lys
145 150 155 160
Pro Val Thr Arg Gly Ala Gly Ala Gly Gly Arg Gln Arg Gly Gln Asn
165 170 175
Lys Glu Arg Pro Pro Pro Val Pro Asn Pro Asp Tyr Glu Pro Ile Arg
180 185 190
Lys Gly Gln Arg Asp Leu Tyr Ser Gly Leu Asn Gln Arg Arg Ile
195 200 205
<210> 329
<211> 226
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人CD79a
<400> 329
Met Pro Gly Gly Pro Gly Val Leu Gln Ala Leu Pro Ala Thr Ile Phe
1 5 10 15
Leu Leu Phe Leu Leu Ser Ala Val Tyr Leu Gly Pro Gly Cys Gln Ala
20 25 30
Leu Trp Met His Lys Val Pro Ala Ser Leu Met Val Ser Leu Gly Glu
35 40 45
Asp Ala His Phe Gln Cys Pro His Asn Ser Ser Asn Asn Ala Asn Val
50 55 60
Thr Trp Trp Arg Val Leu His Gly Asn Tyr Thr Trp Pro Pro Glu Phe
65 70 75 80
Leu Gly Pro Gly Glu Asp Pro Asn Gly Thr Leu Ile Ile Gln Asn Val
85 90 95
Asn Lys Ser His Gly Gly Ile Tyr Val Cys Arg Val Gln Glu Gly Asn
100 105 110
Glu Ser Tyr Gln Gln Ser Cys Gly Thr Tyr Leu Arg Val Arg Gln Pro
115 120 125
Pro Pro Arg Pro Phe Leu Asp Met Gly Glu Gly Thr Lys Asn Arg Ile
130 135 140
Ile Thr Ala Glu Gly Ile Ile Leu Leu Phe Cys Ala Val Val Pro Gly
145 150 155 160
Thr Leu Leu Leu Phe Arg Lys Arg Trp Gln Asn Glu Lys Leu Gly Leu
165 170 175
Asp Ala Gly Asp Glu Tyr Glu Asp Glu Asn Leu Tyr Glu Gly Leu Asn
180 185 190
Leu Asp Asp Cys Ser Met Tyr Glu Asp Ile Ser Arg Gly Leu Gln Gly
195 200 205
Thr Tyr Gln Asp Val Gly Ser Leu Asn Ile Gly Asp Val Gln Leu Glu
210 215 220
Lys Pro
225
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<211> 229
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人CD79b
<400> 330
Met Ala Arg Leu Ala Leu Ser Pro Val Pro Ser His Trp Met Val Ala
1 5 10 15
Leu Leu Leu Leu Leu Ser Ala Glu Pro Val Pro Ala Ala Arg Ser Glu
20 25 30
Asp Arg Tyr Arg Asn Pro Lys Gly Ser Ala Cys Ser Arg Ile Trp Gln
35 40 45
Ser Pro Arg Phe Ile Ala Arg Lys Arg Gly Phe Thr Val Lys Met His
50 55 60
Cys Tyr Met Asn Ser Ala Ser Gly Asn Val Ser Trp Leu Trp Lys Gln
65 70 75 80
Glu Met Asp Glu Asn Pro Gln Gln Leu Lys Leu Glu Lys Gly Arg Met
85 90 95
Glu Glu Ser Gln Asn Glu Ser Leu Ala Thr Leu Thr Ile Gln Gly Ile
100 105 110
Arg Phe Glu Asp Asn Gly Ile Tyr Phe Cys Gln Gln Lys Cys Asn Asn
115 120 125
Thr Ser Glu Val Tyr Gln Gly Cys Gly Thr Glu Leu Arg Val Met Gly
130 135 140
Phe Ser Thr Leu Ala Gln Leu Lys Gln Arg Asn Thr Leu Lys Asp Gly
145 150 155 160
Ile Ile Met Ile Gln Thr Leu Leu Ile Ile Leu Phe Ile Ile Val Pro
165 170 175
Ile Phe Leu Leu Leu Asp Lys Asp Asp Ser Lys Ala Gly Met Glu Glu
180 185 190
Asp His Thr Tyr Glu Gly Leu Asp Ile Asp Gln Thr Ala Thr Tyr Glu
195 200 205
Asp Ile Val Thr Leu Arg Thr Gly Glu Val Lys Trp Ser Val Gly Glu
210 215 220
His Pro Gly Gln Glu
225
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<211> 93
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人DAP10
<400> 331
Met Ile His Leu Gly His Ile Leu Phe Leu Leu Leu Leu Pro Val Ala
1 5 10 15
Ala Ala Gln Thr Thr Pro Gly Glu Arg Ser Ser Leu Pro Ala Phe Tyr
20 25 30
Pro Gly Thr Ser Gly Ser Cys Ser Gly Cys Gly Ser Leu Ser Leu Pro
35 40 45
Leu Leu Ala Gly Leu Val Ala Ala Asp Ala Val Ala Ser Leu Leu Ile
50 55 60
Val Gly Ala Val Phe Leu Cys Ala Arg Pro Arg Arg Ser Pro Ala Gln
65 70 75 80
Glu Asp Gly Lys Val Tyr Ile Asn Met Pro Gly Arg Gly
85 90
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<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人DAP12
<400> 332
Met Gly Gly Leu Glu Pro Cys Ser Arg Leu Leu Leu Leu Pro Leu Leu
1 5 10 15
Leu Ala Val Ser Gly Leu Arg Pro Val Gln Ala Gln Ala Gln Ser Asp
20 25 30
Cys Ser Cys Ser Thr Val Ser Pro Gly Val Leu Ala Gly Ile Val Met
35 40 45
Gly Asp Leu Val Leu Thr Val Leu Ile Ala Leu Ala Val Tyr Phe Leu
50 55 60
Gly Arg Leu Val Pro Arg Gly Arg Gly Ala Ala Glu Ala Ala Thr Arg
65 70 75 80
Lys Gln Arg Ile Thr Glu Thr Glu Ser Pro Tyr Gln Glu Leu Gln Gly
85 90 95
Gln Arg Ser Asp Val Tyr Ser Asp Leu Asn Thr Gln Arg Pro Tyr Tyr
100 105 110
Lys
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<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人CD28
<400> 333
Met Leu Arg Leu Leu Leu Ala Leu Asn Leu Phe Pro Ser Ile Gln Val
1 5 10 15
Thr Gly Asn Lys Ile Leu Val Lys Gln Ser Pro Met Leu Val Ala Tyr
20 25 30
Asp Asn Ala Val Asn Leu Ser Cys Lys Tyr Ser Tyr Asn Leu Phe Ser
35 40 45
Arg Glu Phe Arg Ala Ser Leu His Lys Gly Leu Asp Ser Ala Val Glu
50 55 60
Val Cys Val Val Tyr Gly Asn Tyr Ser Gln Gln Leu Gln Val Tyr Ser
65 70 75 80
Lys Thr Gly Phe Asn Cys Asp Gly Lys Leu Gly Asn Glu Ser Val Thr
85 90 95
Phe Tyr Leu Gln Asn Leu Tyr Val Asn Gln Thr Asp Ile Tyr Phe Cys
100 105 110
Lys Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser
115 120 125
Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro
130 135 140
Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly
145 150 155 160
Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile
165 170 175
Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met
180 185 190
Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro
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Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser
210 215 220
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人4-1BB
<400> 334
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1 5 10 15
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50 55 60
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65 70 75 80
Thr Ser Asn Ala Glu Cys Asp Cys Thr Pro Gly Phe His Cys Leu Gly
85 90 95
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100 105 110
Thr Lys Lys Gly Cys Lys Asp Cys Cys Phe Gly Thr Phe Asn Asp Gln
115 120 125
Lys Arg Gly Ile Cys Arg Pro Trp Thr Asn Cys Ser Leu Asp Gly Lys
130 135 140
Ser Val Leu Val Asn Gly Thr Lys Glu Arg Asp Val Val Cys Gly Pro
145 150 155 160
Ser Pro Ala Asp Leu Ser Pro Gly Ala Ser Ser Val Thr Pro Pro Ala
165 170 175
Pro Ala Arg Glu Pro Gly His Ser Pro Gln Ile Ile Ser Phe Phe Leu
180 185 190
Ala Leu Thr Ser Thr Ala Leu Leu Phe Leu Leu Phe Phe Leu Thr Leu
195 200 205
Arg Phe Ser Val Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe
210 215 220
Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly
225 230 235 240
Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu
245 250 255
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<211> 277
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人OX40
<400> 335
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1 5 10 15
Leu Leu Leu Gly Leu Gly Leu Ser Thr Val Thr Gly Leu His Cys Val
20 25 30
Gly Asp Thr Tyr Pro Ser Asn Asp Arg Cys Cys His Glu Cys Arg Pro
35 40 45
Gly Asn Gly Met Val Ser Arg Cys Ser Arg Ser Gln Asn Thr Val Cys
50 55 60
Arg Pro Cys Gly Pro Gly Phe Tyr Asn Asp Val Val Ser Ser Lys Pro
65 70 75 80
Cys Lys Pro Cys Thr Trp Cys Asn Leu Arg Ser Gly Ser Glu Arg Lys
85 90 95
Gln Leu Cys Thr Ala Thr Gln Asp Thr Val Cys Arg Cys Arg Ala Gly
100 105 110
Thr Gln Pro Leu Asp Ser Tyr Lys Pro Gly Val Asp Cys Ala Pro Cys
115 120 125
Pro Pro Gly His Phe Ser Pro Gly Asp Asn Gln Ala Cys Lys Pro Trp
130 135 140
Thr Asn Cys Thr Leu Ala Gly Lys His Thr Leu Gln Pro Ala Ser Asn
145 150 155 160
Ser Ser Asp Ala Ile Cys Glu Asp Arg Asp Pro Pro Ala Thr Gln Pro
165 170 175
Gln Glu Thr Gln Gly Pro Pro Ala Arg Pro Ile Thr Val Gln Pro Thr
180 185 190
Glu Ala Trp Pro Arg Thr Ser Gln Gly Pro Ser Thr Arg Pro Val Glu
195 200 205
Val Pro Gly Gly Arg Ala Val Ala Ala Ile Leu Gly Leu Gly Leu Val
210 215 220
Leu Gly Leu Leu Gly Pro Leu Ala Ile Leu Leu Ala Leu Tyr Leu Leu
225 230 235 240
Arg Arg Asp Gln Arg Leu Pro Pro Asp Ala His Lys Pro Pro Gly Gly
245 250 255
Gly Ser Phe Arg Thr Pro Ile Gln Glu Glu Gln Ala Asp Ala His Ser
260 265 270
Thr Leu Ala Lys Ile
275
<210> 336
<211> 199
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人ICOS
<400> 336
Met Lys Ser Gly Leu Trp Tyr Phe Phe Leu Phe Cys Leu Arg Ile Lys
1 5 10 15
Val Leu Thr Gly Glu Ile Asn Gly Ser Ala Asn Tyr Glu Met Phe Ile
20 25 30
Phe His Asn Gly Gly Val Gln Ile Leu Cys Lys Tyr Pro Asp Ile Val
35 40 45
Gln Gln Phe Lys Met Gln Leu Leu Lys Gly Gly Gln Ile Leu Cys Asp
50 55 60
Leu Thr Lys Thr Lys Gly Ser Gly Asn Thr Val Ser Ile Lys Ser Leu
65 70 75 80
Lys Phe Cys His Ser Gln Leu Ser Asn Asn Ser Val Ser Phe Phe Leu
85 90 95
Tyr Asn Leu Asp His Ser His Ala Asn Tyr Tyr Phe Cys Asn Leu Ser
100 105 110
Ile Phe Asp Pro Pro Pro Phe Lys Val Thr Leu Thr Gly Gly Tyr Leu
115 120 125
His Ile Tyr Glu Ser Gln Leu Cys Cys Gln Leu Lys Phe Trp Leu Pro
130 135 140
Ile Gly Cys Ala Ala Phe Val Val Val Cys Ile Leu Gly Cys Ile Leu
145 150 155 160
Ile Cys Trp Leu Thr Lys Lys Lys Tyr Ser Ser Ser Val His Asp Pro
165 170 175
Asn Gly Glu Tyr Met Phe Met Arg Ala Val Asn Thr Ala Lys Lys Ser
180 185 190
Arg Leu Thr Asp Val Thr Leu
195
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<211> 370
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人2B4
<400> 337
Met Leu Gly Gln Val Val Thr Leu Ile Leu Leu Leu Leu Leu Lys Val
1 5 10 15
Tyr Gln Gly Lys Gly Cys Gln Gly Ser Ala Asp His Val Val Ser Ile
20 25 30
Ser Gly Val Pro Leu Gln Leu Gln Pro Asn Ser Ile Gln Thr Lys Val
35 40 45
Asp Ser Ile Ala Trp Lys Lys Leu Leu Pro Ser Gln Asn Gly Phe His
50 55 60
His Ile Leu Lys Trp Glu Asn Gly Ser Leu Pro Ser Asn Thr Ser Asn
65 70 75 80
Asp Arg Phe Ser Phe Ile Val Lys Asn Leu Ser Leu Leu Ile Lys Ala
85 90 95
Ala Gln Gln Gln Asp Ser Gly Leu Tyr Cys Leu Glu Val Thr Ser Ile
100 105 110
Ser Gly Lys Val Gln Thr Ala Thr Phe Gln Val Phe Val Phe Glu Ser
115 120 125
Leu Leu Pro Asp Lys Val Glu Lys Pro Arg Leu Gln Gly Gln Gly Lys
130 135 140
Ile Leu Asp Arg Gly Arg Cys Gln Val Ala Leu Ser Cys Leu Val Ser
145 150 155 160
Arg Asp Gly Asn Val Ser Tyr Ala Trp Tyr Arg Gly Ser Lys Leu Ile
165 170 175
Gln Thr Ala Gly Asn Leu Thr Tyr Leu Asp Glu Glu Val Asp Ile Asn
180 185 190
Gly Thr His Thr Tyr Thr Cys Asn Val Ser Asn Pro Val Ser Trp Glu
195 200 205
Ser His Thr Leu Asn Leu Thr Gln Asp Cys Gln Asn Ala His Gln Glu
210 215 220
Phe Arg Phe Trp Pro Phe Leu Val Ile Ile Val Ile Leu Ser Ala Leu
225 230 235 240
Phe Leu Gly Thr Leu Ala Cys Phe Cys Val Trp Arg Arg Lys Arg Lys
245 250 255
Glu Lys Gln Ser Glu Thr Ser Pro Lys Glu Phe Leu Thr Ile Tyr Glu
260 265 270
Asp Val Lys Asp Leu Lys Thr Arg Arg Asn His Glu Gln Glu Gln Thr
275 280 285
Phe Pro Gly Gly Gly Ser Thr Ile Tyr Ser Met Ile Gln Ser Gln Ser
290 295 300
Ser Ala Pro Thr Ser Gln Glu Pro Ala Tyr Thr Leu Tyr Ser Leu Ile
305 310 315 320
Gln Pro Ser Arg Lys Ser Gly Ser Arg Lys Arg Asn His Ser Pro Ser
325 330 335
Phe Asn Ser Thr Ile Tyr Glu Val Ile Gly Lys Ser Gln Pro Lys Ala
340 345 350
Gln Asn Pro Ala Arg Leu Ser Arg Lys Glu Leu Glu Asn Phe Asp Val
355 360 365
Tyr Ser
370
<210> 338
<211> 260
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人CD27
<400> 338
Met Ala Arg Pro His Pro Trp Trp Leu Cys Val Leu Gly Thr Leu Val
1 5 10 15
Gly Leu Ser Ala Thr Pro Ala Pro Lys Ser Cys Pro Glu Arg His Tyr
20 25 30
Trp Ala Gln Gly Lys Leu Cys Cys Gln Met Cys Glu Pro Gly Thr Phe
35 40 45
Leu Val Lys Asp Cys Asp Gln His Arg Lys Ala Ala Gln Cys Asp Pro
50 55 60
Cys Ile Pro Gly Val Ser Phe Ser Pro Asp His His Thr Arg Pro His
65 70 75 80
Cys Glu Ser Cys Arg His Cys Asn Ser Gly Leu Leu Val Arg Asn Cys
85 90 95
Thr Ile Thr Ala Asn Ala Glu Cys Ala Cys Arg Asn Gly Trp Gln Cys
100 105 110
Arg Asp Lys Glu Cys Thr Glu Cys Asp Pro Leu Pro Asn Pro Ser Leu
115 120 125
Thr Ala Arg Ser Ser Gln Ala Leu Ser Pro His Pro Gln Pro Thr His
130 135 140
Leu Pro Tyr Val Ser Glu Met Leu Glu Ala Arg Thr Ala Gly His Met
145 150 155 160
Gln Thr Leu Ala Asp Phe Arg Gln Leu Pro Ala Arg Thr Leu Ser Thr
165 170 175
His Trp Pro Pro Gln Arg Ser Leu Cys Ser Ser Asp Phe Ile Arg Ile
180 185 190
Leu Val Ile Phe Ser Gly Met Phe Leu Val Phe Thr Leu Ala Gly Ala
195 200 205
Leu Phe Leu His Gln Arg Arg Lys Tyr Arg Ser Asn Lys Gly Glu Ser
210 215 220
Pro Val Glu Pro Ala Glu Pro Cys His Tyr Ser Cys Pro Arg Glu Glu
225 230 235 240
Glu Gly Ser Thr Ile Pro Ile Gln Glu Asp Tyr Arg Lys Pro Glu Pro
245 250 255
Ala Cys Ser Pro
260
<210> 339
<211> 595
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人CD30
<400> 339
Met Arg Val Leu Leu Ala Ala Leu Gly Leu Leu Phe Leu Gly Ala Leu
1 5 10 15
Arg Ala Phe Pro Gln Asp Arg Pro Phe Glu Asp Thr Cys His Gly Asn
20 25 30
Pro Ser His Tyr Tyr Asp Lys Ala Val Arg Arg Cys Cys Tyr Arg Cys
35 40 45
Pro Met Gly Leu Phe Pro Thr Gln Gln Cys Pro Gln Arg Pro Thr Asp
50 55 60
Cys Arg Lys Gln Cys Glu Pro Asp Tyr Tyr Leu Asp Glu Ala Asp Arg
65 70 75 80
Cys Thr Ala Cys Val Thr Cys Ser Arg Asp Asp Leu Val Glu Lys Thr
85 90 95
Pro Cys Ala Trp Asn Ser Ser Arg Val Cys Glu Cys Arg Pro Gly Met
100 105 110
Phe Cys Ser Thr Ser Ala Val Asn Ser Cys Ala Arg Cys Phe Phe His
115 120 125
Ser Val Cys Pro Ala Gly Met Ile Val Lys Phe Pro Gly Thr Ala Gln
130 135 140
Lys Asn Thr Val Cys Glu Pro Ala Ser Pro Gly Val Ser Pro Ala Cys
145 150 155 160
Ala Ser Pro Glu Asn Cys Lys Glu Pro Ser Ser Gly Thr Ile Pro Gln
165 170 175
Ala Lys Pro Thr Pro Val Ser Pro Ala Thr Ser Ser Ala Ser Thr Met
180 185 190
Pro Val Arg Gly Gly Thr Arg Leu Ala Gln Glu Ala Ala Ser Lys Leu
195 200 205
Thr Arg Ala Pro Asp Ser Pro Ser Ser Val Gly Arg Pro Ser Ser Asp
210 215 220
Pro Gly Leu Ser Pro Thr Gln Pro Cys Pro Glu Gly Ser Gly Asp Cys
225 230 235 240
Arg Lys Gln Cys Glu Pro Asp Tyr Tyr Leu Asp Glu Ala Gly Arg Cys
245 250 255
Thr Ala Cys Val Ser Cys Ser Arg Asp Asp Leu Val Glu Lys Thr Pro
260 265 270
Cys Ala Trp Asn Ser Ser Arg Thr Cys Glu Cys Arg Pro Gly Met Ile
275 280 285
Cys Ala Thr Ser Ala Thr Asn Ser Cys Ala Arg Cys Val Pro Tyr Pro
290 295 300
Ile Cys Ala Ala Glu Thr Val Thr Lys Pro Gln Asp Met Ala Glu Lys
305 310 315 320
Asp Thr Thr Phe Glu Ala Pro Pro Leu Gly Thr Gln Pro Asp Cys Asn
325 330 335
Pro Thr Pro Glu Asn Gly Glu Ala Pro Ala Ser Thr Ser Pro Thr Gln
340 345 350
Ser Leu Leu Val Asp Ser Gln Ala Ser Lys Thr Leu Pro Ile Pro Thr
355 360 365
Ser Ala Pro Val Ala Leu Ser Ser Thr Gly Lys Pro Val Leu Asp Ala
370 375 380
Gly Pro Val Leu Phe Trp Val Ile Leu Val Leu Val Val Val Val Gly
385 390 395 400
Ser Ser Ala Phe Leu Leu Cys His Arg Arg Ala Cys Arg Lys Arg Ile
405 410 415
Arg Gln Lys Leu His Leu Cys Tyr Pro Val Gln Thr Ser Gln Pro Lys
420 425 430
Leu Glu Leu Val Asp Ser Arg Pro Arg Arg Ser Ser Thr Gln Leu Arg
435 440 445
Ser Gly Ala Ser Val Thr Glu Pro Val Ala Glu Glu Arg Gly Leu Met
450 455 460
Ser Gln Pro Leu Met Glu Thr Cys His Ser Val Gly Ala Ala Tyr Leu
465 470 475 480
Glu Ser Leu Pro Leu Gln Asp Ala Ser Pro Ala Gly Gly Pro Ser Ser
485 490 495
Pro Arg Asp Leu Pro Glu Pro Arg Val Ser Thr Glu His Thr Asn Asn
500 505 510
Lys Ile Glu Lys Ile Tyr Ile Met Lys Ala Asp Thr Val Ile Val Gly
515 520 525
Thr Val Lys Ala Glu Leu Pro Glu Gly Arg Gly Leu Ala Gly Pro Ala
530 535 540
Glu Pro Glu Leu Glu Glu Glu Leu Glu Ala Asp His Thr Pro His Tyr
545 550 555 560
Pro Glu Gln Glu Thr Glu Pro Pro Leu Gly Ser Cys Ser Asp Val Met
565 570 575
Leu Ser Val Glu Glu Glu Gly Lys Glu Asp Pro Leu Pro Thr Ala Ala
580 585 590
Ser Gly Lys
595
<210> 340
<211> 277
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人CD40
<400> 340
Met Val Arg Leu Pro Leu Gln Cys Val Leu Trp Gly Cys Leu Leu Thr
1 5 10 15
Ala Val His Pro Glu Pro Pro Thr Ala Cys Arg Glu Lys Gln Tyr Leu
20 25 30
Ile Asn Ser Gln Cys Cys Ser Leu Cys Gln Pro Gly Gln Lys Leu Val
35 40 45
Ser Asp Cys Thr Glu Phe Thr Glu Thr Glu Cys Leu Pro Cys Gly Glu
50 55 60
Ser Glu Phe Leu Asp Thr Trp Asn Arg Glu Thr His Cys His Gln His
65 70 75 80
Lys Tyr Cys Asp Pro Asn Leu Gly Leu Arg Val Gln Gln Lys Gly Thr
85 90 95
Ser Glu Thr Asp Thr Ile Cys Thr Cys Glu Glu Gly Trp His Cys Thr
100 105 110
Ser Glu Ala Cys Glu Ser Cys Val Leu His Arg Ser Cys Ser Pro Gly
115 120 125
Phe Gly Val Lys Gln Ile Ala Thr Gly Val Ser Asp Thr Ile Cys Glu
130 135 140
Pro Cys Pro Val Gly Phe Phe Ser Asn Val Ser Ser Ala Phe Glu Lys
145 150 155 160
Cys His Pro Trp Thr Ser Cys Glu Thr Lys Asp Leu Val Val Gln Gln
165 170 175
Ala Gly Thr Asn Lys Thr Asp Val Val Cys Gly Pro Gln Asp Arg Leu
180 185 190
Arg Ala Leu Val Val Ile Pro Ile Ile Phe Gly Ile Leu Phe Ala Ile
195 200 205
Leu Leu Val Leu Val Phe Ile Lys Lys Val Ala Lys Lys Pro Thr Asn
210 215 220
Lys Ala Pro His Pro Lys Gln Glu Pro Gln Glu Ile Asn Phe Pro Asp
225 230 235 240
Asp Leu Pro Gly Ser Asn Thr Ala Ala Pro Val Gln Glu Thr Leu His
245 250 255
Gly Cys Gln Pro Val Thr Gln Glu Asp Gly Lys Glu Ser Arg Ile Ser
260 265 270
Val Gln Glu Arg Gln
275
<210> 341
<211> 351
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人CD2
<400> 341
Met Ser Phe Pro Cys Lys Phe Val Ala Ser Phe Leu Leu Ile Phe Asn
1 5 10 15
Val Ser Ser Lys Gly Ala Val Ser Lys Glu Ile Thr Asn Ala Leu Glu
20 25 30
Thr Trp Gly Ala Leu Gly Gln Asp Ile Asn Leu Asp Ile Pro Ser Phe
35 40 45
Gln Met Ser Asp Asp Ile Asp Asp Ile Lys Trp Glu Lys Thr Ser Asp
50 55 60
Lys Lys Lys Ile Ala Gln Phe Arg Lys Glu Lys Glu Thr Phe Lys Glu
65 70 75 80
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Leu Lys Thr Asp Asp Gln Asp Ile Tyr Lys Val Ser Ile Tyr Asp Thr
100 105 110
Lys Gly Lys Asn Val Leu Glu Lys Ile Phe Asp Leu Lys Ile Gln Glu
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130 135 140
Thr Cys Glu Val Met Asn Gly Thr Asp Pro Glu Leu Asn Leu Tyr Gln
145 150 155 160
Asp Gly Lys His Leu Lys Leu Ser Gln Arg Val Ile Thr His Lys Trp
165 170 175
Thr Thr Ser Leu Ser Ala Lys Phe Lys Cys Thr Ala Gly Asn Lys Val
180 185 190
Ser Lys Glu Ser Ser Val Glu Pro Val Ser Cys Pro Glu Lys Gly Leu
195 200 205
Asp Ile Tyr Leu Ile Ile Gly Ile Cys Gly Gly Gly Ser Leu Leu Met
210 215 220
Val Phe Val Ala Leu Leu Val Phe Tyr Ile Thr Lys Arg Lys Lys Gln
225 230 235 240
Arg Ser Arg Arg Asn Asp Glu Glu Leu Glu Thr Arg Ala His Arg Val
245 250 255
Ala Thr Glu Glu Arg Gly Arg Lys Pro His Gln Ile Pro Ala Ser Thr
260 265 270
Pro Gln Asn Pro Ala Thr Ser Gln His Pro Pro Pro Pro Pro Gly His
275 280 285
Arg Ser Gln Ala Pro Ser His Arg Pro Pro Pro Pro Gly His Arg Val
290 295 300
Gln His Gln Pro Gln Lys Arg Pro Pro Ala Pro Ser Gly Thr Gln Val
305 310 315 320
His Gln Gln Lys Gly Pro Pro Leu Pro Arg Pro Arg Val Gln Pro Lys
325 330 335
Pro Pro His Gly Ala Ala Glu Asn Ser Leu Ser Pro Ser Ser Asn
340 345 350
<210> 342
<211> 240
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人LIGHT
<400> 342
Met Glu Glu Ser Val Val Arg Pro Ser Val Phe Val Val Asp Gly Gln
1 5 10 15
Thr Asp Ile Pro Phe Thr Arg Leu Gly Arg Ser His Arg Arg Gln Ser
20 25 30
Cys Ser Val Ala Arg Val Gly Leu Gly Leu Leu Leu Leu Leu Met Gly
35 40 45
Ala Gly Leu Ala Val Gln Gly Trp Phe Leu Leu Gln Leu His Trp Arg
50 55 60
Leu Gly Glu Met Val Thr Arg Leu Pro Asp Gly Pro Ala Gly Ser Trp
65 70 75 80
Glu Gln Leu Ile Gln Glu Arg Arg Ser His Glu Val Asn Pro Ala Ala
85 90 95
His Leu Thr Gly Ala Asn Ser Ser Leu Thr Gly Ser Gly Gly Pro Leu
100 105 110
Leu Trp Glu Thr Gln Leu Gly Leu Ala Phe Leu Arg Gly Leu Ser Tyr
115 120 125
His Asp Gly Ala Leu Val Val Thr Lys Ala Gly Tyr Tyr Tyr Ile Tyr
130 135 140
Ser Lys Val Gln Leu Gly Gly Val Gly Cys Pro Leu Gly Leu Ala Ser
145 150 155 160
Thr Ile Thr His Gly Leu Tyr Lys Arg Thr Pro Arg Tyr Pro Glu Glu
165 170 175
Leu Glu Leu Leu Val Ser Gln Gln Ser Pro Cys Gly Arg Ala Thr Ser
180 185 190
Ser Ser Arg Val Trp Trp Asp Ser Ser Phe Leu Gly Gly Val Val His
195 200 205
Leu Glu Ala Gly Glu Lys Val Val Val Arg Val Leu Asp Glu Arg Leu
210 215 220
Val Arg Leu Arg Asp Gly Thr Arg Ser Tyr Phe Gly Ala Phe Met Val
225 230 235 240
<210> 343
<211> 241
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人GITR
<400> 343
Met Ala Gln His Gly Ala Met Gly Ala Phe Arg Ala Leu Cys Gly Leu
1 5 10 15
Ala Leu Leu Cys Ala Leu Ser Leu Gly Gln Arg Pro Thr Gly Gly Pro
20 25 30
Gly Cys Gly Pro Gly Arg Leu Leu Leu Gly Thr Gly Thr Asp Ala Arg
35 40 45
Cys Cys Arg Val His Thr Thr Arg Cys Cys Arg Asp Tyr Pro Gly Glu
50 55 60
Glu Cys Cys Ser Glu Trp Asp Cys Met Cys Val Gln Pro Glu Phe His
65 70 75 80
Cys Gly Asp Pro Cys Cys Thr Thr Cys Arg His His Pro Cys Pro Pro
85 90 95
Gly Gln Gly Val Gln Ser Gln Gly Lys Phe Ser Phe Gly Phe Gln Cys
100 105 110
Ile Asp Cys Ala Ser Gly Thr Phe Ser Gly Gly His Glu Gly His Cys
115 120 125
Lys Pro Trp Thr Asp Cys Thr Gln Phe Gly Phe Leu Thr Val Phe Pro
130 135 140
Gly Asn Lys Thr His Asn Ala Val Cys Val Pro Gly Ser Pro Pro Ala
145 150 155 160
Glu Pro Leu Gly Trp Leu Thr Val Val Leu Leu Ala Val Ala Ala Cys
165 170 175
Val Leu Leu Leu Thr Ser Ala Gln Leu Gly Leu His Ile Trp Gln Leu
180 185 190
Arg Ser Gln Cys Met Trp Pro Arg Glu Thr Gln Leu Leu Leu Glu Val
195 200 205
Pro Pro Ser Thr Glu Asp Ala Arg Ser Cys Gln Phe Pro Glu Glu Glu
210 215 220
Arg Gly Glu Arg Ser Ala Glu Glu Lys Gly Arg Leu Gly Asp Leu Trp
225 230 235 240
Val
<210> 344
<211> 417
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人DR3
<400> 344
Met Glu Gln Arg Pro Arg Gly Cys Ala Ala Val Ala Ala Ala Leu Leu
1 5 10 15
Leu Val Leu Leu Gly Ala Arg Ala Gln Gly Gly Thr Arg Ser Pro Arg
20 25 30
Cys Asp Cys Ala Gly Asp Phe His Lys Lys Ile Gly Leu Phe Cys Cys
35 40 45
Arg Gly Cys Pro Ala Gly His Tyr Leu Lys Ala Pro Cys Thr Glu Pro
50 55 60
Cys Gly Asn Ser Thr Cys Leu Val Cys Pro Gln Asp Thr Phe Leu Ala
65 70 75 80
Trp Glu Asn His His Asn Ser Glu Cys Ala Arg Cys Gln Ala Cys Asp
85 90 95
Glu Gln Ala Ser Gln Val Ala Leu Glu Asn Cys Ser Ala Val Ala Asp
100 105 110
Thr Arg Cys Gly Cys Lys Pro Gly Trp Phe Val Glu Cys Gln Val Ser
115 120 125
Gln Cys Val Ser Ser Ser Pro Phe Tyr Cys Gln Pro Cys Leu Asp Cys
130 135 140
Gly Ala Leu His Arg His Thr Arg Leu Leu Cys Ser Arg Arg Asp Thr
145 150 155 160
Asp Cys Gly Thr Cys Leu Pro Gly Phe Tyr Glu His Gly Asp Gly Cys
165 170 175
Val Ser Cys Pro Thr Ser Thr Leu Gly Ser Cys Pro Glu Arg Cys Ala
180 185 190
Ala Val Cys Gly Trp Arg Gln Met Phe Trp Val Gln Val Leu Leu Ala
195 200 205
Gly Leu Val Val Pro Leu Leu Leu Gly Ala Thr Leu Thr Tyr Thr Tyr
210 215 220
Arg His Cys Trp Pro His Lys Pro Leu Val Thr Ala Asp Glu Ala Gly
225 230 235 240
Met Glu Ala Leu Thr Pro Pro Pro Ala Thr His Leu Ser Pro Leu Asp
245 250 255
Ser Ala His Thr Leu Leu Ala Pro Pro Asp Ser Ser Glu Lys Ile Cys
260 265 270
Thr Val Gln Leu Val Gly Asn Ser Trp Thr Pro Gly Tyr Pro Glu Thr
275 280 285
Gln Glu Ala Leu Cys Pro Gln Val Thr Trp Ser Trp Asp Gln Leu Pro
290 295 300
Ser Arg Ala Leu Gly Pro Ala Ala Ala Pro Thr Leu Ser Pro Glu Ser
305 310 315 320
Pro Ala Gly Ser Pro Ala Met Met Leu Gln Pro Gly Pro Gln Leu Tyr
325 330 335
Asp Val Met Asp Ala Val Pro Ala Arg Arg Trp Lys Glu Phe Val Arg
340 345 350
Thr Leu Gly Leu Arg Glu Ala Glu Ile Glu Ala Val Glu Val Glu Ile
355 360 365
Gly Arg Phe Arg Asp Gln Gln Tyr Glu Met Leu Lys Arg Trp Arg Gln
370 375 380
Gln Gln Pro Ala Gly Leu Gly Ala Val Tyr Ala Ala Leu Glu Arg Met
385 390 395 400
Gly Leu Asp Gly Cys Val Glu Asp Leu Arg Ser Arg Leu Gln Arg Gly
405 410 415
Pro
<210> 345
<211> 400
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人CD43
<400> 345
Met Ala Thr Leu Leu Leu Leu Leu Gly Val Leu Val Val Ser Pro Asp
1 5 10 15
Ala Leu Gly Ser Thr Thr Ala Val Gln Thr Pro Thr Ser Gly Glu Pro
20 25 30
Leu Val Ser Thr Ser Glu Pro Leu Ser Ser Lys Met Tyr Thr Thr Ser
35 40 45
Ile Thr Ser Asp Pro Lys Ala Asp Ser Thr Gly Asp Gln Thr Ser Ala
50 55 60
Leu Pro Pro Ser Thr Ser Ile Asn Glu Gly Ser Pro Leu Trp Thr Ser
65 70 75 80
Ile Gly Ala Ser Thr Gly Ser Pro Leu Pro Glu Pro Thr Thr Tyr Gln
85 90 95
Glu Val Ser Ile Lys Met Ser Ser Val Pro Gln Glu Thr Pro His Ala
100 105 110
Thr Ser His Pro Ala Val Pro Ile Thr Ala Asn Ser Leu Gly Ser His
115 120 125
Thr Val Thr Gly Gly Thr Ile Thr Thr Asn Ser Pro Glu Thr Ser Ser
130 135 140
Arg Thr Ser Gly Ala Pro Val Thr Thr Ala Ala Ser Ser Leu Glu Thr
145 150 155 160
Ser Arg Gly Thr Ser Gly Pro Pro Leu Thr Met Ala Thr Val Ser Leu
165 170 175
Glu Thr Ser Lys Gly Thr Ser Gly Pro Pro Val Thr Met Ala Thr Asp
180 185 190
Ser Leu Glu Thr Ser Thr Gly Thr Thr Gly Pro Pro Val Thr Met Thr
195 200 205
Thr Gly Ser Leu Glu Pro Ser Ser Gly Ala Ser Gly Pro Gln Val Ser
210 215 220
Ser Val Lys Leu Ser Thr Met Met Ser Pro Thr Thr Ser Thr Asn Ala
225 230 235 240
Ser Thr Val Pro Phe Arg Asn Pro Asp Glu Asn Ser Arg Gly Met Leu
245 250 255
Pro Val Ala Val Leu Val Ala Leu Leu Ala Val Ile Val Leu Val Ala
260 265 270
Leu Leu Leu Leu Trp Arg Arg Arg Gln Lys Arg Arg Thr Gly Ala Leu
275 280 285
Val Leu Ser Arg Gly Gly Lys Arg Asn Gly Val Val Asp Ala Trp Ala
290 295 300
Gly Pro Ala Gln Val Pro Glu Glu Gly Ala Val Thr Val Thr Val Gly
305 310 315 320
Gly Ser Gly Gly Asp Lys Gly Ser Gly Phe Pro Asp Gly Glu Gly Ser
325 330 335
Ser Arg Arg Pro Thr Leu Thr Thr Phe Phe Gly Arg Arg Lys Ser Arg
340 345 350
Gln Gly Ser Leu Ala Met Glu Glu Leu Lys Ser Gly Ser Gly Pro Ser
355 360 365
Leu Lys Gly Glu Glu Glu Pro Leu Val Ala Ser Glu Asp Gly Ala Val
370 375 380
Asp Ala Pro Ala Pro Asp Glu Pro Glu Gly Gly Asp Gly Ala Ala Pro
385 390 395 400
<210> 346
<211> 458
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人CD4
<400> 346
Met Asn Arg Gly Val Pro Phe Arg His Leu Leu Leu Val Leu Gln Leu
1 5 10 15
Ala Leu Leu Pro Ala Ala Thr Gln Gly Lys Lys Val Val Leu Gly Lys
20 25 30
Lys Gly Asp Thr Val Glu Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gln Lys Lys Ser
35 40 45
Ile Gln Phe His Trp Lys Asn Ser Asn Gln Ile Lys Ile Leu Gly Asn
50 55 60
Gln Gly Ser Phe Leu Thr Lys Gly Pro Ser Lys Leu Asn Asp Arg Ala
65 70 75 80
Asp Ser Arg Arg Ser Leu Trp Asp Gln Gly Asn Phe Pro Leu Ile Ile
85 90 95
Lys Asn Leu Lys Ile Glu Asp Ser Asp Thr Tyr Ile Cys Glu Val Glu
100 105 110
Asp Gln Lys Glu Glu Val Gln Leu Leu Val Phe Gly Leu Thr Ala Asn
115 120 125
Ser Asp Thr His Leu Leu Gln Gly Gln Ser Leu Thr Leu Thr Leu Glu
130 135 140
Ser Pro Pro Gly Ser Ser Pro Ser Val Gln Cys Arg Ser Pro Arg Gly
145 150 155 160
Lys Asn Ile Gln Gly Gly Lys Thr Leu Ser Val Ser Gln Leu Glu Leu
165 170 175
Gln Asp Ser Gly Thr Trp Thr Cys Thr Val Leu Gln Asn Gln Lys Lys
180 185 190
Val Glu Phe Lys Ile Asp Ile Val Val Leu Ala Phe Gln Lys Ala Ser
195 200 205
Ser Ile Val Tyr Lys Lys Glu Gly Glu Gln Val Glu Phe Ser Phe Pro
210 215 220
Leu Ala Phe Thr Val Glu Lys Leu Thr Gly Ser Gly Glu Leu Trp Trp
225 230 235 240
Gln Ala Glu Arg Ala Ser Ser Ser Lys Ser Trp Ile Thr Phe Asp Leu
245 250 255
Lys Asn Lys Glu Val Ser Val Lys Arg Val Thr Gln Asp Pro Lys Leu
260 265 270
Gln Met Gly Lys Lys Leu Pro Leu His Leu Thr Leu Pro Gln Ala Leu
275 280 285
Pro Gln Tyr Ala Gly Ser Gly Asn Leu Thr Leu Ala Leu Glu Ala Lys
290 295 300
Thr Gly Lys Leu His Gln Glu Val Asn Leu Val Val Met Arg Ala Thr
305 310 315 320
Gln Leu Gln Lys Asn Leu Thr Cys Glu Val Trp Gly Pro Thr Ser Pro
325 330 335
Lys Leu Met Leu Ser Leu Lys Leu Glu Asn Lys Glu Ala Lys Val Ser
340 345 350
Lys Arg Glu Lys Ala Val Trp Val Leu Asn Pro Glu Ala Gly Met Trp
355 360 365
Gln Cys Leu Leu Ser Asp Ser Gly Gln Val Leu Leu Glu Ser Asn Ile
370 375 380
Lys Val Leu Pro Thr Trp Ser Thr Pro Val Gln Pro Met Ala Leu Ile
385 390 395 400
Val Leu Gly Gly Val Ala Gly Leu Leu Leu Phe Ile Gly Leu Gly Ile
405 410 415
Phe Phe Cys Val Arg Cys Arg His Arg Arg Arg Gln Ala Glu Arg Met
420 425 430
Ser Gln Ile Lys Arg Leu Leu Ser Glu Lys Lys Thr Cys Gln Cys Pro
435 440 445
His Arg Phe Gln Lys Thr Cys Ser Pro Ile
450 455
<210> 347
<211> 235
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人CD8
<400> 347
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1 5 10 15
His Ala Ala Arg Pro Ser Gln Phe Arg Val Ser Pro Leu Asp Arg Thr
20 25 30
Trp Asn Leu Gly Glu Thr Val Glu Leu Lys Cys Gln Val Leu Leu Ser
35 40 45
Asn Pro Thr Ser Gly Cys Ser Trp Leu Phe Gln Pro Arg Gly Ala Ala
50 55 60
Ala Ser Pro Thr Phe Leu Leu Tyr Leu Ser Gln Asn Lys Pro Lys Ala
65 70 75 80
Ala Glu Gly Leu Asp Thr Gln Arg Phe Ser Gly Lys Arg Leu Gly Asp
85 90 95
Thr Phe Val Leu Thr Leu Ser Asp Phe Arg Arg Glu Asn Glu Gly Tyr
100 105 110
Tyr Phe Cys Ser Ala Leu Ser Asn Ser Ile Met Tyr Phe Ser His Phe
115 120 125
Val Pro Val Phe Leu Pro Ala Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg
130 135 140
Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg
145 150 155 160
Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly
165 170 175
Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr
180 185 190
Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn His
195 200 205
Arg Asn Arg Arg Arg Val Cys Lys Cys Pro Arg Pro Val Val Lys Ser
210 215 220
Gly Asp Lys Pro Ser Leu Ser Ala Arg Tyr Val
225 230 235
<210> 348
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL CDR1 – 共同序列
<220>
<221> MISC_特征
<222> (3)..(3)
<223> X= S 或 G
<220>
<221> MISC_特征
<222> (4)..(4)
<223> X=N, S, 或 R
<220>
<221> MISC_特征
<222> (5)..(5)
<223> X= S 或 P
<220>
<221> MISC_特征
<222> (7)..(7)
<223> X= I 或 V
<220>
<221> MISC_特征
<222> (8)..(8)
<223> X= G 或 E
<220>
<221> MISC_特征
<222> (9)..(9)
<223> X= D, N, G 或 S
<220>
<221> MISC_特征
<222> (11)..(11)
<223> X= S, Y, T, 或 P
<220>
<221> MISC_特征
<222> (13)..(13)
<223> X=S, Y 或 N
<400> 348
Ser Gly Xaa Xaa Xaa Asn Xaa Xaa Xaa Asn Xaa Val Xaa
1 5 10
<210> 349
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL CDR1 - 共同序列
<220>
<221> MISC_特征
<222> (4)..(4)
<223> X= S 或 R
<220>
<221> MISC_特征
<222> (5)..(5)
<223> X= T 或 S
<220>
<221> MISC_特征
<222> (7)..(7)
<223> X=I 或 V
<220>
<221> MISC_特征
<222> (9)..(9)
<223> X= G, T, 或 A
<220>
<221> MISC_特征
<222> (11)..(11)
<223> X= D 或 N
<220>
<221> MISC_特征
<222> (12)..(12)
<223> X=F 或 Y
<400> 349
Thr Gly Thr Xaa Xaa Asp Xaa Gly Xaa Tyr Xaa Xaa Val Ser
1 5 10
<210> 350
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL CDR1 - 共同序列
<220>
<221> MISC_特征
<222> (1)..(1)
<223> X= R 或 Q
<220>
<221> MISC_特征
<222> (5)..(5)
<223> X= S, D, N 或 G
<220>
<221> MISC_特征
<222> (7)..(7)
<223> X= S, R, T, N 或 G
<220>
<221> MISC_特征
<222> (8)..(8)
<223> X= H, N, T, 或 S
<220>
<221> MISC_特征
<222> (9)..(9)
<223> X= D, Y 或 W
<220>
<221> MISC_特征
<222> (10)..(10)
<223> X= L 或 I
<220>
<221> MISC_特征
<222> (11)..(11)
<223> X= G, N 或 A
<400> 350
Xaa Ala Ser Gln Xaa Ile Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
1 5 10
<210> 351
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL CDR1 - 共同序列
<220>
<221> MISC_特征
<222> (5)..(5)
<223> R 或 S
<220>
<221> MISC_特征
<222> (8)..(8)
<223> X= A 或 S
<220>
<221> MISC_特征
<222> (9)..(9)
<223> X= T 或 S
<400> 351
Arg Ala Ser Gln Xaa Val Ser Xaa Xaa Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 352
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL CDR1 - 共同序列
<220>
<221> MISC_特征
<222> (2)..(2)
<223> X= G 或 A
<220>
<221> MISC_特征
<222> (6)..(6)
<223> X= G 或 E
<220>
<221> MISC_特征
<222> (7)..(7)
<223> X= S 或 T
<400> 352
Gly Xaa Asn Asn Ile Xaa Xaa Lys Ser Val His
1 5 10
<210> 353
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL CDR2 - 共同序列
<220>
<221> MISC_特征
<222> (1)..(1)
<223> X= D, Y 或 E
<220>
<221> MISC_特征
<222> (2)..(2)
<223> X= D 或 V
<220>
<221> MISC_特征
<222> (3)..(3)
<223> X= S 或 T
<220>
<221> MISC_特征
<222> (4)..(4)
<223> X= D, N, Y, H, S, K, 或 E
<400> 353
Xaa Xaa Xaa Xaa Arg Pro Ser
1 5
<210> 354
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL CDR2 - 共同序列
<220>
<221> MISC_特征
<222> (1)..(1)
<223> X= E, D, G, N, Q, R, 或 L
<220>
<221> MISC_特征
<222> (2)..(2)
<223> X= D, N, 或 H
<220>
<221> MISC_特征
<222> (3)..(3)
<223> X= D 或 N
<220>
<221> MISC_特征
<222> (4)..(4)
<223> X= K 或 Q
<220>
<221> MISC_特征
<222> (7)..(7)
<223> X= S, P 或 L
<400> 354
Xaa Xaa Xaa Xaa Pro Arg Xaa
1 5
<210> 355
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL CDR2 - 共同序列
<220>
<221> MISC_特征
<222> (1)..(1)
<223> X=D 或 A
<220>
<221> MISC_特征
<222> (2)..(2)
<223> X=A 或 T
<220>
<221> MISC_特征
<222> (4)..(4)
<223> X=N, S 或 T
<220>
<221> MISC_特征
<222> (6)..(6)
<223> X=E 或 Q
<220>
<221> MISC_特征
<222> (7)..(7)
<223> X=T, A 或 S
<400> 355
Xaa Xaa Ser Xaa Leu Xaa Xaa
1 5
<210> 356
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL CDR2 - 共同序列
<220>
<221> MISC_特征
<222> (1)..(1)
<223> X= G 或 S
<220>
<221> MISC_特征
<222> (2)..(2)
<223> X= A, G 或 N
<220>
<221> MISC_特征
<222> (4)..(4)
<223> X=S, R 或 Y
<220>
<221> MISC_特征
<222> (7)..(7)
<223> X=T 或 S
<400> 356
Xaa Xaa Ser Xaa Arg Ala Xaa
1 5
<210> 357
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL CDR3 - 共同序列
<220>
<221> MISC_特征
<222> (4)..(4)
<223> X= T 或 A
<220>
<221> MISC_特征
<222> (5)..(5)
<223> X= S 或 G
<220>
<221> MISC_特征
<222> (7)..(7)
<223> X= S, G 或 N
<220>
<221> MISC_特征
<222> (8)..(8)
<223> X=T, N, I 或 K
<220>
<221> MISC_特征
<222> (9)..(9)
<223> X=L, W 或 Y
<220>
<221> MISC_特征
<222> (10)..(10)
<223> X= F, V 或 M
<400> 357
Ser Ser Tyr Xaa Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Xaa
1 5 10
<210> 358
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL CDR3 - 共同序列
<220>
<221> MISC_特征
<222> (1)..(1)
<223> X= Q, G, V, S, 或 A
<220>
<221> MISC_特征
<222> (2)..(2)
<223> X= V, T 或 A
<220>
<221> MISC_特征
<222> (5)..(5)
<223> X= S, T 或 D
<220>
<221> MISC_特征
<222> (6)..(6)
<223> X= S, T 或 R
<220>
<221> MISC_特征
<222> (7)..(7)
<223> X= S 或 L
<220>
<221> MISC_特征
<222> (8)..(8)
<223> X= D, N 或 S
<220>
<221> MISC_特征
<222> (9)..(9)
<223> X= H, I, A 或 G
<220>
<221> MISC_特征
<222> (10)..(10)
<223> X= W, V, G, P 或 Y
<400> 358
Xaa Xaa Trp Asp Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Val
1 5 10
<210> 359
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL CDR3 - 共同序列
<220>
<221> MISC_特征
<222> (1)..(1)
<223> X= L 或 Q
<220>
<221> MISC_特征
<222> (3)..(3)
<223> X= G, D, Y 或 N
<220>
<221> MISC_特征
<222> (4)..(4)
<223> X= S, G, K 或 D
<220>
<221> MISC_特征
<222> (5)..(5)
<223> X= D, T, G, N 或 S
<220>
<221> MISC_特征
<222> (6)..(6)
<223> X=F, Y, L 或 S
<220>
<221> MISC_特征
<222> (8)..(8)
<223> X=L 或 Y
<220>
<221> MISC_特征
<222> (9)..(9)
<223> X=A 或 T
<400> 359
Xaa Gln Xaa Xaa Xaa Xaa Pro Xaa Xaa
1 5
<210> 360
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH CDR1 - 共同序列
<220>
<221> MISC_特征
<222> (1)..(1)
<223> X= D, S 或 R
<220>
<221> MISC_特征
<222> (3)..(3)
<223> X= G, Y, A, 或 S
<220>
<221> MISC_特征
<222> (5)..(5)
<223> X= S, H 或 N
<400> 360
Xaa Tyr Xaa Met Xaa
1 5
<210> 361
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH CDR1 - 共同序列
<220>
<221> MISC_特征
<222> (1)..(1)
<223> X= D 或 S
<220>
<221> MISC_特征
<222> (3)..(3)
<223> X= W, Y, N, A 或 G
<220>
<221> MISC_特征
<222> (5)..(5)
<223> X= S, N 或 G
<400> 361
Xaa Tyr Xaa Ile Xaa
1 5
<210> 362
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH CDR2 - 共同序列
<220>
<221> MISC_特征
<222> (1)..(1)
<223> X= Y, S 或 D
<220>
<221> MISC_特征
<222> (6)..(6)
<223> X= S 或 G
<220>
<221> MISC_特征
<222> (8)..(8)
<223> X= Y 或 T
<220>
<221> MISC_特征
<222> (9)..(9)
<223> X= I 或 R
<400> 362
Xaa Ile Ser Ser Ser Xaa Ser Xaa Xaa Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 363
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH CDR2 - 共同序列
<220>
<221> MISC_特征
<222> (3)..(3)
<223> X= S 或 N
<220>
<221> MISC_特征
<222> (6)..(6)
<223> X= S 或 G
<220>
<221> MISC_特征
<222> (8)..(8)
<223> X= R 或 S
<220>
<221> MISC_特征
<222> (9)..(9)
<223> X= I 或 T
<400> 363
Gly Ile Xaa Trp Asn Xaa Gly Xaa Xaa Gly Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 364
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH CDR2 - 共同序列
<220>
<221> MISC_特征
<222> (3)..(3)
<223> X= W 或 S
<400> 364
Val Ile Xaa Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 365
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH CDR2 - 共同序列
<220>
<221> MISC_特征
<222> (1)..(1)
<223> X=R 或 F
<220>
<221> MISC_特征
<222> (3)..(3)
<223> X=K 或 R
<220>
<221> MISC_特征
<222> (6)..(6)
<223> X=T 或 A
<220>
<221> MISC_特征
<222> (7)..(7)
<223> X=D, Y 或 S
<220>
<221> MISC_特征
<222> (12)..(12)
<223> X= N, D, E
<220>
<221> MISC_特征
<222> (13)..(13)
<223> X=Y 或 S
<220>
<221> MISC_特征
<222> (16)..(16)
<223> X=P 或 S
<400> 365
Xaa Ile Xaa Ser Lys Xaa Xaa Gly Gly Thr Thr Xaa Xaa Ala Ala Xaa
1 5 10 15
Val Lys Gly
<210> 366
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH CDR2 - 共同序列
<220>
<221> MISC_特征
<222> (1)..(1)
<223> X=Y 或 S
<220>
<221> MISC_特征
<222> (3)..(3)
<223> X=H 或 Y
<220>
<221> MISC_特征
<222> (4)..(4)
<223> X=S 或 Y
<220>
<221> MISC_特征
<222> (5)..(5)
<223> X=T 或 S
<220>
<221> MISC_特征
<222> (7)..(7)
<223> X=T 或 S
<400> 366
Xaa Ile Xaa Xaa Xaa Gly Xaa Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 367
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH CDR2 - 共同序列
<220>
<221> MISC_特征
<222> (1)..(1)
<223> X=G, L, I 或 A
<220>
<221> MISC_特征
<222> (3)..(3)
<223> X= I, N 或 D
<220>
<221> MISC_特征
<222> (5)..(5)
<223> X=I, T 或 S
<220>
<221> MISC_特征
<222> (6)..(6)
<223> X=F, N, G 或 D
<220>
<221> MISC_特征
<222> (8)..(8)
<223> X=T, R, S 或 D
<220>
<221> MISC_特征
<222> (9)..(9)
<223> X=A 或 T
<220>
<221> MISC_特征
<222> (10)..(10)
<223> X=N, S 或 T
<220>
<221> MISC_特征
<222> (12)..(12)
<223> X=A 或 G
<400> 367
Xaa Ile Xaa Pro Xaa Xaa Gly Xaa Xaa Xaa Tyr Xaa Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 368
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH CDR3 - 共同序列
<220>
<221> MISC_特征
<222> (1)..(1)
<223> X= Y, S, D 或 G
<220>
<221> MISC_特征
<222> (2)..(2)
<223> X= Y 或 D
<220>
<221> MISC_特征
<222> (5)..(5)
<223> X= Y 或 G
<400> 368
Xaa Xaa Tyr Tyr Xaa Met Asp Val
1 5
<210> 369
<211> 491
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗-CD123-C5 CAR
<400> 369
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1 5 10 15
His Ala Ala Arg Pro Asn Phe Met Leu Thr Gln Pro His Ser Val Ser
20 25 30
Glu Ser Pro Gly Lys Thr Val Thr Leu Ser Cys Thr Arg Ser Ser Gly
35 40 45
Ser Ile Ala Gly Ser Tyr Val Gln Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Ser
50 55 60
Ser Pro Thr Thr Val Ile Phe Gln Asp Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val
65 70 75 80
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ile Asp Lys Ser Ser Asn Ser Ala Ser
85 90 95
Leu Thr Ile Ser Gly Leu Lys Thr Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys
100 105 110
Gln Ser Tyr Asp Ser Asn Asn Gln Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu
115 120 125
Thr Val Leu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
130 135 140
Gly Ser Glu Val His Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro
145 150 155 160
Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly
165 170 175
Asp Tyr Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu
180 185 190
Trp Val Ser Gly Ile Asn Trp Asn Gly Gly Arg Thr Gly Tyr Ala Asp
195 200 205
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser
210 215 220
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr
225 230 235 240
Tyr Cys Ala Arg Ala Arg Gly Ser Gly Ser Tyr Phe Gly Tyr Met Asp
245 250 255
Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Thr Thr Thr Pro
260 265 270
Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu
275 280 285
Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His
290 295 300
Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu
305 310 315 320
Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr
325 330 335
Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe
340 345 350
Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg
355 360 365
Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser
370 375 380
Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr
385 390 395 400
Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys
405 410 415
Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn
420 425 430
Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu
435 440 445
Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly
450 455 460
His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr
465 470 475 480
Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
485 490
<210> 370
<211> 495
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗-CD123-C7 CAR
<400> 370
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1 5 10 15
His Ala Ala Arg Pro Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu
20 25 30
Ser Leu Ser Pro Gly Glu Lys Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln
35 40 45
Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
50 55 60
Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile
65 70 75 80
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
85 90 95
Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
100 105 110
Tyr Gly Ser Ser Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile
115 120 125
Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
130 135 140
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
145 150 155 160
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
165 170 175
Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
180 185 190
Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu
195 200 205
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
210 215 220
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
225 230 235 240
Ala Arg Asp Pro Tyr Asp Asp Tyr Gly Gly Asn Ser Arg Asp Glu Glu
245 250 255
Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
260 265 270
Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala
275 280 285
Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly
290 295 300
Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile
305 310 315 320
Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val
325 330 335
Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe
340 345 350
Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly
355 360 365
Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg
370 375 380
Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln
385 390 395 400
Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp
405 410 415
Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro
420 425 430
Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp
435 440 445
Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg
450 455 460
Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr
465 470 475 480
Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
485 490 495
<210> 371
<211> 495
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗-CD123-C11 CAR
<400> 371
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1 5 10 15
His Ala Ala Arg Pro Gln Ser Val Val Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser
20 25 30
Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser
35 40 45
Asn Ile Gly Ser Asn Tyr Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr
50 55 60
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val
65 70 75 80
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala
85 90 95
Ile Ser Gly Leu Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala
100 105 110
Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu
115 120 125
Thr Val Leu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
130 135 140
Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro
145 150 155 160
Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly
165 170 175
Asp Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu
180 185 190
Trp Val Gly Phe Ile Arg Ser Lys Ala Tyr Gly Gly Thr Thr Glu Tyr
195 200 205
Ala Ala Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys
210 215 220
Ser Ile Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala
225 230 235 240
Val Tyr Tyr Cys Thr Arg Asp Ile Gly Tyr Tyr Gly Ser Gly Ser Tyr
245 250 255
Ser Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
260 265 270
Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala
275 280 285
Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly
290 295 300
Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile
305 310 315 320
Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val
325 330 335
Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe
340 345 350
Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly
355 360 365
Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg
370 375 380
Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln
385 390 395 400
Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp
405 410 415
Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro
420 425 430
Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp
435 440 445
Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg
450 455 460
Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr
465 470 475 480
Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
485 490 495
<210> 372
<211> 1476
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗-CD123-C5 CAR
<400> 372
atggccttac cagtgaccgc cttgctcctg ccgctggcct tgctgctcca cgccgccagg 60
ccgaatttta tgctgactca gccccactct gtgtcggagt ctccggggaa gaccgtgacc 120
ctctcctgca cccgcagcag tggcagcatt gccggcagct atgtgcagtg gtaccagcag 180
cgcccgggca gttcccccac cactgttatc tttcaggata accaaaggcc ctctggggtc 240
cctgatcggt tctctggctc catcgacaag tcctccaact ctgcctccct caccatctct 300
ggactgaaga ctgaggacga ggctgactac tattgtcagt cttatgatag caacaatcag 360
gtgttcggcg gagggaccaa gctgaccgtc ctaggtggtg gtggttctgg cggcggcggc 420
tccggaggtg gtggatccga ggtgcatctg gtggagtctg ggggaggtgt ggtacggccg 480
ggggggtccc tgagactctc ctgtgcagcc tctggattca cctttggtga ttatggcatg 540
agctgggtcc gccaagctcc agggaagggg ctggagtggg tctctggtat taattggaat 600
ggtggtagaa caggttatgc agactctgtg aagggccgat tcaccatctc cagagacaac 660
gccaagaact ccctgtatct gcaaatgaac agtctgagag ccgaggacac ggccttgtat 720
tactgtgcga gagcccgagg ttcggggagt tacttcggct acatggacgt ctggggcaaa 780
gggaccacgg tcactgtctc ctcaaccacg acgccagcgc cgcgaccacc aacaccggcg 840
cccaccatcg cgtcgcagcc cctgtccctg cgcccagagg cgtgccggcc agcggcgggg 900
ggcgcagtgc acacgagggg gctggacttc gcctgtgata tctacatctg ggcgcccttg 960
gccgggactt gtggggtcct tctcctgtca ctggttatca ccctttactg caaacggggc 1020
agaaagaaac tcctgtatat attcaaacaa ccatttatga gaccagtaca aactactcaa 1080
gaggaagatg gctgtagctg ccgatttcca gaagaagaag aaggaggatg tgaactgaga 1140
gtgaagttca gcaggagcgc agacgccccc gcgtacaagc agggccagaa ccagctctat 1200
aacgagctca atctaggacg aagagaggag tacgacgttt tggacaagag acgtggccgg 1260
gaccctgaga tggggggaaa gccgagaagg aagaaccctc aggaaggcct gtacaatgaa 1320
ctgcagaaag ataagatggc ggaggcctac agtgagattg ggatgaaagg cgagcgccgg 1380
aggggcaagg ggcacgatgg cctttaccag ggtctcagta cagccaccaa ggacacctac 1440
gacgcccttc acatgcaggc cctgccccct cgctaa 1476
<210> 373
<211> 1488
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗-CD123-C7 CAR
<400> 373
atggccttac cagtgaccgc cttgctcctg ccgctggcct tgctgctcca cgccgccagg 60
ccggaaattg tgttgacgca gtctccaggc accctgtctt tgtctccagg ggaaaaagcc 120
accctctcct gcagggccag tcagagtgtt agcagcagct acttagcctg gtaccagcag 180
aaacctggcc aggctcccag gctcctcatc tatggtgcat ccagcagggc cactggcatc 240
ccagacaggt tcagtggcag tgggtctggg acagacttca ctctcaccat cagcagactg 300
gagcctgaag attttgcagt gtattactgt cagcagtatg gtagctcacc tctcactttc 360
ggcggaggga ccaagctgga gatcaaaggt ggtggtggtt ctggcggcgg cggctccgga 420
ggtggtggat cccaggtcca gctggtacag tctggagctg aggtgaagaa gcctggggcc 480
tcagtgaagg tctcctgcaa ggcttctggt tacaccttta ccagctatgg tatcagctgg 540
gtgcgacagg cccctggaca agggcttgag tggatgggat ggatcagcgc ttacaatggt 600
aacacaaact atgcacagaa gctccagggc agagtcacca tgaccacaga cacatccacg 660
agcacagcct acatggagct gaggagcctg agatctgacg acacggccgt gtattactgt 720
gcgagagatc cctacgatga ctacggtggt aactcgcgag atgaggaaga tgcttttgat 780
atctggggcc aagggacaat ggtcaccgtc tcctcaacca cgacgccagc gccgcgacca 840
ccaacaccgg cgcccaccat cgcgtcgcag cccctgtccc tgcgcccaga ggcgtgccgg 900
ccagcggcgg ggggcgcagt gcacacgagg gggctggact tcgcctgtga tatctacatc 960
tgggcgccct tggccgggac ttgtggggtc cttctcctgt cactggttat caccctttac 1020
tgcaaacggg gcagaaagaa actcctgtat atattcaaac aaccatttat gagaccagta 1080
caaactactc aagaggaaga tggctgtagc tgccgatttc cagaagaaga agaaggagga 1140
tgtgaactga gagtgaagtt cagcaggagc gcagacgccc ccgcgtacaa gcagggccag 1200
aaccagctct ataacgagct caatctagga cgaagagagg agtacgacgt tttggacaag 1260
agacgtggcc gggaccctga gatgggggga aagccgagaa ggaagaaccc tcaggaaggc 1320
ctgtacaatg aactgcagaa agataagatg gcggaggcct acagtgagat tgggatgaaa 1380
ggcgagcgcc ggaggggcaa ggggcacgat ggcctttacc agggtctcag tacagccacc 1440
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Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Ser
85 90 95
Ser Asn Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Glu Leu Thr Val Leu Gly Gly
100 105 110
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val His
115 120 125
Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser Leu Arg
130 135 140
Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala Trp Met Ser
145 150 155 160
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly Arg Ile
165 170 175
Lys Ser Lys Thr Asp Gly Gly Thr Thr Asp Ser Ala Ala Pro Val Lys
180 185 190
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
195 200 205
Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr
210 215 220
Thr Tyr Tyr Phe Tyr Ser Ser Gly Asp Met Thr Asp Tyr Trp Gly Gln
225 230 235 240
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245
<210> 403
<211> 251
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> scFv:C29
<400> 403
Gln Pro Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Tyr Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Ser Gly Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gly
100 105 110
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val His
115 120 125
Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg
130 135 140
Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Asp Tyr Ala Met Ser
145 150 155 160
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly Phe Ile
165 170 175
Arg Ser Lys Ala Tyr Gly Gly Thr Thr Glu Tyr Ala Ala Ser Val Lys
180 185 190
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ile Ala Tyr Leu
195 200 205
Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr
210 215 220
Arg Asp Ile Gly Tyr Tyr Gly Ser Gly Ser Tyr Ser Pro Phe Asp Tyr
225 230 235 240
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245 250
<210> 404
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> scFv:C30
<400> 404
Ala Ile Arg Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asn Ile Asn Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Ala Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Ala Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Asp Asn Leu Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser
100 105 110
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys
130 135 140
Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Asp Tyr Gly Met Ser Trp Val Arg
145 150 155 160
Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Gly Ile Asn Trp Asn
165 170 175
Gly Gly Ser Thr Gly Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile
180 185 190
Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu
195 200 205
Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Arg Ala Pro
210 215 220
Asp Tyr Gly Asp Tyr Leu Gln Val Gly Thr Thr Asp Tyr Trp Gly Gln
225 230 235 240
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245
<210> 405
<211> 251
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> scFv:C31
<400> 405
Gln Pro Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Met Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Gly Asn Ser Asn Ile Gly Asp Asn
20 25 30
Ser Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Asn Asn Asn Gln Arg Pro Leu Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Arg Gly Leu Gln
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala His Tyr Tyr Cys Ser Ser Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Glu Gly Ala Gln Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gly
100 105 110
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln
115 120 125
Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser Leu Arg
130 135 140
Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Tyr Met Ser
145 150 155 160
Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Tyr Ile
165 170 175
Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg
180 185 190
Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met
195 200 205
Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly
210 215 220
His Gln Tyr Tyr Asp Phe Trp Ser Gly Tyr Ser Asn Trp Phe Asp Pro
225 230 235 240
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245 250
<210> 406
<211> 250
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> scFv:C32
<400> 406
Gln Ser Val Val Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Glu Gly Asn
20 25 30
Thr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Ala Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Asn Ser Tyr Arg Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Glu Leu Gln
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ala Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Asn Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gly
100 105 110
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln
115 120 125
Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg
130 135 140
Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr Ala Met Asn
145 150 155 160
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Asp Ile
165 170 175
Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg
180 185 190
Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met
195 200 205
Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp
210 215 220
Leu Tyr Ser Gly Tyr Asp Tyr Gly Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp
225 230 235 240
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
245 250
<210> 407
<211> 244
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> scFv:C33
<400> 407
Asp Ile Arg Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Thr Ile Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Ile Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Thr Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu His Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Ser Thr Phe Pro Leu
85 90 95
Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser
100 105 110
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Gln
115 120 125
Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser Ser Val Lys Val Ser Cys
130 135 140
Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser Trp Val Arg
145 150 155 160
Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Gly Ile Ile Pro Ile
165 170 175
Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Ile
180 185 190
Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu
195 200 205
Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Leu Asp Asn
210 215 220
Trp Asn Asp Val Gly Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
225 230 235 240
Thr Val Ser Ser
<210> 408
<211> 244
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<400> 408
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Arg Ser Asp Val Gly Ala Tyr
20 25 30
Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln His His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met Leu Tyr Asp Val Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Val Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asn Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Ala Gly Ser
85 90 95
Gly Lys Tyr Val Phe Gly Ser Gly Thr Glu Leu Thr Val Leu Gly Gly
100 105 110
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val His
115 120 125
Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser Leu Arg
130 135 140
Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Thr Trp Met Ser
145 150 155 160
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly Arg Ile
165 170 175
Lys Ser Lys Thr Asp Gly Gly Thr Thr Asn Tyr Ala Ala Pro Val Lys
180 185 190
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Thr Thr Leu Phe Leu
195 200 205
Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr
210 215 220
Gly Gly Asp Tyr Pro Leu Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Ala Leu Val
225 230 235 240
Thr Val Ser Ser
<210> 409
<211> 250
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> scFv:C35
<400> 409
Gln Ser Val Val Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Ala Ala Ser Gly Gln
1 5 10 15
Lys Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Pro Asn Ile Gly Asn Asn
20 25 30
Tyr Val Ser Trp Tyr Gln His Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Val Thr Leu Gly Ile Thr Gly Leu Gln
65 70 75 80
Thr Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Asp Ser Arg Leu
85 90 95
Asn Ile Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly
100 105 110
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val His
115 120 125
Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser Leu Arg
130 135 140
Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala Trp Met Ser
145 150 155 160
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly Arg Ile
165 170 175
Lys Ser Lys Thr Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala Pro Val Lys
180 185 190
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
195 200 205
Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr
210 215 220
Thr Glu Ala Ala Gly Phe Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp
225 230 235 240
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
245 250
<210> 410
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 连接子
<220>
<221> 重复
<222> (1)..(5)
<223> (GGGGS)n, n=1, 2, 3, 4, 或 5
<400> 410
Gly Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 411
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 连接子
<220>
<221> 重复
<222> (1)..(5)
<223> (EAAAK)n, n=1, 2, 3, 4, 或 5
<400> 411
Glu Ala Ala Ala Lys
1 5
<210> 412
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 连接子
<220>
<221> 重复
<222> (1)..(2)
<223> (PA)nP, n=1, 2,3, 4,或 5
<400> 412
Pro Ala Pro
1
<210> 413
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 连接子
<400> 413
Gly Gly Gly Gly Ser
1 5
4.附图说明
图1提供了抗人CD123-Fc单克隆噬菌体ELISA的两个96孔板的读数。
图2提供了用于CAR mRNA生成的pDA-CAR载体的示意图。
图3提供了FACS染色结果，显示了在CART细胞中表达的抗CD123 scFv与CD123-Fc蛋白的结合。
图4提供了同种型和抗CD123抗体对用不同量的CD123 mRNA电穿孔的A549细胞的FACS染色结果。
图5提供了不同的基于mRNA的抗CD123 CART细胞在E/T比值＝10:1时，对A549-GFP肿瘤细胞的杀伤曲线。
图6提供了不同的基于mRNA的抗CD123 CART细胞在E/T比值＝3:1时，对A549-GFP肿瘤细胞的杀伤曲线。
图7提供了不同的基于mRNA的抗CD123 CART细胞在E/T比值＝10:1时，对用10μgCD123mRNA电穿孔的A549-GFP肿瘤细胞的杀伤曲线。
图8提供了不同的基于mRNA的抗CD123 CART细胞在E/T比值＝3:1时，对用10μgCD123mRNA电穿孔的A549-GFP肿瘤细胞的杀伤曲线。
图9显示了PE-同种型对照和PE-抗-CD123 mAb对A549、SK-OV3、Jeko-1、Molm-14、SupT-1、293T、Nalm-6和PC-3细胞的FACS染色结果。
图10显示了在与不同肿瘤细胞的共培养和杀伤试验中，抗-CD123-C5、抗-CD123-C7、抗-CD123-C11 CART细胞的CD107a染色。
5.具体实施方式
在进一步描述本发明之前，应当理解的是，本发明不限于本发明所列举的特定实施方案，并且还应当理解的是，本发明使用的术语是为了描述特定实施例，而不是意图限制本发明。
本发明提供了新型抗体，其包括特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗原结合片段。此外，本发明还提供了嵌合抗原受体(CARs)，其包含特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或抗原结合片段，本发明还提供了工程化的免疫效应细胞(例如，T细胞)和重组表达特异性结合CD123(例如，人CD123)的CAR(例如，CARTs)的细胞群。本发明还公开了包含治疗有效量的所述抗体或抗原结合片段的药物组合物，以及包含治疗有效量的细胞或细胞群的药物组合物。本发明还公开了所述药物组合物用于治疗癌症(例如，表达CD123的癌症)的用途和癌症治疗方法。
细胞分裂周期蛋白123同源物，或CD123(其他别名：白细胞介素3受体α亚单位，IL3RA，HT-1080，PZ32)是I型跨膜糖蛋白，分子量(MW)约为70kDa。人CD123的示例性氨基酸序列参见例如，NCBI参考序列：NP_002174.1、XP_005274488.1。编码人CD123和等同物的示例性多核苷酸参见例如，NCBI参考序列：NM_002183.3、XM_005274431.4)。人CD123的示例性氨基酸序列如下所示(SEQ ID NO:321)。CD123的胞外区包括三个可与IL-3结合的纤连蛋白型(FnIII)结构域。CD123的胞外区包括SEQ ID NO:321的氨基酸残基19-305。CD123的跨膜结构域包括SEQ ID NO:321的氨基酸残基306-325。CD123的胞质结构域包括SEQ ID NO:321的氨基酸残基326-378。
1 MVLLWLTLLL IALPCLLQTK EDPNPPITNL RMKAKAQQLT WDLNRNVTDI ECVKDADYSM
61 PAVNNSYCQF GAISLCEVTN YTVRVANPPF STWILFPENS GKPWAGAENL TCWIHDVDFL
121 SCSWAVGPGA PADVQYDLYL NVANRRQQYE CLHYKTDAQG TRIGCRFDDI SRLSSGSQSS
181 HILVRGRSAA FGIPCTDKFV VFSQIEILTP PNMTAKCNKT HSFMHWKMRS HFNRKFRYEL
241 QIQKRMQPVI TEQVRDRTSF QLLNPGTYTV QIRARERVYE FLSAWSTPQR FECDQEEGAN
301 TRAWRTSLLI ALGTLLALVC VFVICRRYLV MQRLFPRIPH MKDPIGDSFQ NDKLVVWEAG
361 KAGLEECLVT EVQVVQKT(SEQ ID NO:321)
CD123单独结合IL-3时亲和力低，当CD123与共同β链形成复合物再结合IL-3时，亲和力高。在功能上，CD123单独结合IL-3后不会转导信号，需要共同β链用于下游信号的转导(Kitamura et al.(1991)Cell 66(6):1165-1174)。
据报道，在正常组织和细胞中，CD123在单核细胞、中性粒细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞、巨核细胞、红血球前期细胞、肥大细胞、巨噬细胞、造血干/祖细胞以及一些CD19+细胞中组成性表达(Testa et al.(2014).Biomark Res 2(1):4)。据报道，造血系统外的CD123在睾丸间质细胞、一些内皮细胞以及胎盘和大脑的细胞中表达。
Testa及其同事系统地研究了CD123在79例AML患者，25例B-急性淋巴白血病(B-ALL)和7例T-急性淋巴白血病(T-ALL)中的表达。结果表明，CD123分别在40％的B-ALL患者和45％的AML患者中过表达，而在大多数T-ALL患者中几乎不表达。他们还报道CD123的表达与细胞增殖增强、循环活性增加、预后不良密切相关(Testa et al(2002)Blood 100(8):2980-2988)。在另一项研究中，通过详细的流式细胞仪分析评估了846例急性白血病患者的CD123表达水平，其中包括139例儿童AML，316例成人AML，193例儿童BCP-ALL，69例成人BCP-ALL，101例儿童T-ALL和28例成人T-ALL患者。结果显示，CD123在大多数AML和BCP-ALL患者中表达，在大多数T-ALL患者中不表达(Bras et al(2019)Cytometry B Clin Cytom 96(2):134-142.)。
Rollins-Raval及其同事报道，根据157例AML骨髓活检的CD123免疫组化(IHC)染色，40％的AML患者异常表达CD123。他们还发现，AML患者中CD123的过表达与FLT3-ITD和NPM1突变相关(Rollins-Raval et al(2013)Appl Immunohistochem Mol Morphol 21(3):212-217)。除了在AML和BCP-ALL中，其他研究也显示CD123在毛细胞白血病和霍奇金淋巴瘤肿瘤细胞中过表达(Munoz et al(2001)Haematologica 86(12):1261-1269,Fromm(2011).Cytometry B Clin Cytom 80(2):91-99.)。
综上所述，CD123在各种血液系统恶性肿瘤中广泛表达，包括急性髓系白血病(AML)、母细胞性浆细胞样树突状细胞肿瘤(BPDCN)、B细胞前体急性淋巴细胞白血病(BCP-ALL)(Liu et al(2015).Life Sci 122:59-64.,Testa et al(2019).Cancers(Basel)11(9))。靶向CD123的各种治疗已进入临床试验，但成功率有限(Frankel et al(2014)Blood124(3)：385-392；Jabbour et al(2017)Blood 130(13)：1514-1522；Frankel et al(2008)Leuk Lymphoma 49(3)：543-553；Xie et al(2017)Blood Cancer J.7,(e567)；Daver etal(2018)Blood 132(abst.27)；Uy et al(2018)Blood 132(abst.764)；Hofmann et al(2019)。J Clin Med 8(2)；Gill et al(2014)Blood 123:2343–2354；Pemmaraju et al(2019)N Engl JMed380(17):1628-1637)。为了解决未满足的需求，本发明提供包括靶向CD123的新型癌症疗法，其功效和安全性均具有改善。
5.1定义
除非本发明另有定义，本发明中使用的科学和技术术语应具有本领域普通技术人员通常理解的含义。此外，除非语境另有要求，单数术语应包括复数，且复数术语应包括单数。通常，本发明所述的细胞和组织培养、分子生物学、免疫学、微生物学、遗传学以及蛋白质和核酸化学和杂交相关的术语使用和技术均为本领域中公知且常用的术语。
本发明使用的术语“抗体”及其语法等同词是指免疫球蛋白分子，所述免疫球蛋白分子通过至少一个抗原结合位点识别并特异性结合靶标，例如蛋白质、多肽、肽、碳水化合物、多核苷酸、脂质或上述任何一种的组合，其中所述抗原结合位点通常在免疫球蛋白分子的可变区内。如本发明所用，该术语包括完整的多克隆抗体、完整的单克隆抗体、单结构域抗体(sdAB，例如骆驼抗体、羊驼抗体)、单链Fv(scFv)抗体、重链抗体(HCAbs)、轻链抗体(LCAbs)、多特异性抗体、双特异性抗体、单特异性抗体、单价抗体，以及任何其他包含抗原结合位点的修饰免疫球蛋白分子(例如，双可变区免疫球蛋白分子)，只要抗体表现出所需的生物活性。所述抗体还包括但不限于小鼠抗体、骆驼抗体、嵌合抗体、人源化抗体和人源抗体。抗体可以为五种主要免疫球蛋白中的任何一种：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM或其亚类(同种型)(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)，基于它们的重链恒定区的同一性被分别称为α、δ、ε、γ和μ。除非另有明确说明，否则本发明使用的术语“抗体”包括完整抗体的“抗原结合片段”。本发明所使用的术语“抗原结合片段”是指完整抗体的一部分或片段，其是完整抗体的抗原决定可变区。抗原结合片段的实例包括但不限于Fab、Fab'、F(ab')2，Fv、线性抗体、单链抗体分子(例如，scFv)、重链抗体(HCAbs)、轻链抗体(LCAbs)、二硫键连接的scFv(dsscFv)、双抗体、三抗体、四抗体、小抗体、双可变区抗体(DVD)、单可变区抗体(sdAb，例如骆驼抗体、羊驼抗体)和重链抗体的单可变区(VHH)，以及由抗体片段形成的双特异性或多特异性抗体。
当涉及抗体时，术语“重链”是指约50-70kDa的多肽链，其中氨基末端部分包括约120-130个或更多个氨基酸的可变区，且羧基末端部分包括恒定区。根据重链恒定区的氨基酸序列，恒定区可以是五种不同类型之一，分别被称为α，δ，ε，γ和μ。不同的重链大小不同:α、δ和γ含有大约450个氨基酸，而μ和ε含有大约550个氨基酸。当与轻链结合时，这些不同类型的重链会产生五种众所周知的抗体，分别是IgA，IgD，IgE，IgG和IgM，还包括IgG的四个亚类，即IgGl，IgG2，IgG3和IgG4。重链可以是人重链。
当涉及抗体时，术语“轻链”是指约25kDa的多肽链，其中氨基末端部分包括约100-110个或更多个氨基酸的可变区，且羧基末端部分包括恒定区。轻链的长度大约是211到217个氨基酸。根据恒定结构域的氨基酸序列，有两种不同的类型，分别称为λ和κ。轻链氨基酸序列在本领域中是众所周知的。轻链可以是人轻链。
术语“可变结构域”或“可变区”是指抗体轻链或重链的一部分，通常位于轻链或重链的氨基末端，其长度在重链中约为120-130个氨基酸，在轻链中约为100-110个氨基酸，并可用于每种特定抗体对其特定抗原的结合和特异性。不同抗体之间的可变结构域在序列上有很大差异。序列的可变性集中在CDRs中，而可变域中变化较少的部分称为框架区(FR)。轻链和重链的CDRs主要负责抗体与抗原的相互作用。本发明使用的氨基酸位置的编号是根据EU索引，例如Kabatet al.(1991)，Sequences of proteins of immunological interest.(U.S.Department of Health and Human Services,Washington,D.C.)5thed。可变区可以是人可变区。
CDR是指免疫球蛋白(Ig或抗体)VH中β-折叠框架的非框架区中的三个高变区(H1、H2或H3)之一，或抗体VL中β-折叠框架的非框架区域内三个高变区(L1、L2或L3)之一。因此，CDRs是散布在框架区序列内的可变区序列。CDR区是本领域技术人员熟知的，并且已经通过多种方法/系统来标注。这些系统和/或标注已经开发和完善了多年，包括Kabat，Chothia，IMGT，AbM和Contact。例如，Kabat标注了抗体可变(V)结构域内大多数高变异性的区(Kabatet al,J.Biol.Chem.252:6609-6616(1977)；Kabat,Adv.Prot.Chem.32:1-75(1978))。Chothia标注是基于结构loop区的位置，将CDR区序列定义为不是保守β-折叠框架一部分的残基，因而能够适应不同的构象(Chothia and Lesk,J.Mol.Biol.196:901-917(1987))。这两个术语在本领域都是公知的。此外，IMGT系统是基于可变区域结构内的序列可变性和位置。AbM标注是Kabat和Chothia之间的折中方案。
Contact标注是基于对可用抗体晶体结构的分析。用于分析抗体序列和确定CDRs的软件程序(例如，abYsis)对本领域技术人员是可用且公知的。通过比较多种结构，确定了CDR在典型抗体可变结构域内的位置(Al-Lazikani et al,J.Mol.Biol.273:927-948(1997)；Morea et al,Methods 20:267-279(2000))。由于不同抗体中高变区内的残基数量不同，在规范可变区编号方案中，相对于标准位置的附加的残基通常残基数量旁边用a、b、c等进行编号(Al-Lazikani et al.,supra(1997))。这种命名法对于本领域的技术人员来说是同样熟知的。
例如，根据Kabat(高变)或Chothia(结构)名称标注的CDRs如下表所示。
| <![CDATA[Kabat<sup>1</sup>]]> | <![CDATA[Chothia<sup>2</sup>]]> | Loop Location | |
| VHCDRl | 31-35 | 26-32 | linking B and C strands |
| VHCDR2 | 50-65 | 53-55 | linking C’and C”strands |
| VHCDR3 | 95-102 | 96-101 | linking F and G strands |
| VLCDRl | 24-34 | 26-32 | linking B and C strands |
| VLCDR2 | 50-56 | 50-52 | linking C’and C”strands |
| VLCDR3 | 89-97 | 91-96 | linking F and G strands |
1上述残基编号遵循Kabat et al.的命名法
2上述残基编号遵循Chothia et al.的命名法
一个或多个CDRs也可以共价或非共价引入分子中以使其成为免疫粘附素。免疫粘附素可引入CDR(s)作为较大多肽链的一部分，可将CDR(s)共价连接至另一多肽链，或者可非共价地引入CDR(s)。CDRs允许免疫粘附素与特定的目标抗原结合。CDR区域以通过例如abysis网站(http://abysis.org/)进行分析。
本发明所使用的术语“人源化抗体”是指非人(例如，鼠)抗体的形式，其为含有最少非人序列的特异性免疫球蛋白链、嵌合免疫球蛋白或其片段。通常，人源化抗体是人免疫球蛋白。在一些情况下，人免疫球蛋白的Fv框架区残基被来自非人物种的抗体中的相应残基替换。在一些情况下，CDRs的残基被来自非人类物种(例如，小鼠、大鼠、仓鼠、骆驼)的CDRs的残基取代，这些非人类物种的CDRs的残基具有期望的特异性、亲和力和/或结合能力。可通过替换Fv框架区和/或替换的非人残基内的附加残基进一步修饰人源化抗体，以完善和优化抗体特异性、亲和力和/或结合能力。本发明使用的术语“人抗体”是指使用本领域已知的任何技术制备的由人产生的抗体或具有对应于由人产生的抗体的氨基酸序列的抗体。
术语“表位”和“抗原决定簇”在本发明中可互换使用，是指抗体或抗原结合片段结合的靶分子表面上的位点，例如，抗原表面上的局部区域。靶分子可以包括蛋白质、肽、核酸、碳水化合物或脂质。具有免疫原性活性的表位是引起动物免疫反应的靶分子的一部分。具有抗原活性的靶分子的表位是抗体结合的靶分子的一部分，可通过本领域公知的任何方法测定，包括免疫分析法。抗原表位不一定是免疫原性的。表位往往由例如氨基酸或糖侧链等分子的化学活性表面基团组成，并具有特定的三维结构特征以及特定的电荷特征。术语“表位”包括线性表位和构象表位。有助于表位的靶分子区(例如多肽)可以是多肽的连续氨基酸，或者表位可以来自靶分子的两个或多个非连续区。表位可能是也可能不是靶分子的三维表面特征。由连续氨基酸形成的表位(也称为线性表位)通常在蛋白质变性时保留，而由三级折叠形成的表位(也称为构象表位)通常在蛋白质变性时丢失。表位在独特空间构象中通常包括至少3个，并且更通常至少5、6、7或8-10个氨基酸。
本发明所使用的术语“特异性结合”是指与替代物质(包括相关和不相关蛋白)相比，多肽或分子与表位、蛋白或靶分子的相互作用可以更频繁、更快速、持续时间更长、亲和力更高或上述效果的一些组合。可以通过免疫测定、ELISAs、SPR(例如，Biacore)或本领域技术人员已知的其他技术，鉴别特异性结合靶分子(例如，抗原)的结合部分(例如，抗体)。通常，特定的反应将至少是背景信号或噪声的两倍，并且可以是背景的10倍以上。参见，例如，关于抗体特异性的讨论，Paul,ed.,1989,Fundamental Immunology Second Edition,Raven Press,New York at pages 332-336。特异性结合靶分子的结合部分可以以比其对不同分子的亲和力更高的亲和力结合靶分子。在一些实施方案中，特异性结合靶分子的结合部分对靶分子的亲和力是对除靶分子外的分子的亲和力的至少20倍、至少30倍、至少40倍、至少50倍、至少60倍、至少70倍，至少80倍，至少90倍或少100倍。在一些实施方案中，特异性结合特定靶分子的结合部分以如此低的亲和力结合除靶分子外的分子，以致于不能使用本发明所述的或本领域已知的测定法检测到该结合。在一些实施方案中，“特异性结合”是指，结合部分以约0.1mM或更低KD结合分子靶标。在一些实施方案中，“特异性结合”是指，多肽或分子以约10μM或更低KD，或以约1μM或更低KD结合靶标。在一些实施方案中，“特异性结合”是指，多肽或分子以约0.1μM或更低KD，或以约0.01μM或更低KD，或以约1nM或更低KD结合靶标。由于不同物种中的同源蛋白之间的序列同一性，特异性结合可以包括识别多个物种中蛋白或靶标的多肽或分子。同样，由于不同蛋白质的多肽序列的某些区域内的同源性，特异性结合可以包括识别多个蛋白质或靶标的多肽或分子。应当理解的是，在一些实施方案中，特异性结合第一靶标的结合部分(例如，抗体)可以或可以不特异性结合第二靶标。因此，“特异性结合”不一定需要(尽管可以包括)排他结合，即结合到单个靶标。因此，在一些实施方案中，结合部分(例如，抗体)可以特异性地结合多个靶标。例如，在某些情况下，抗体可以包含两个相同的抗原结合位点，每个抗原结合位点特异性结合两个或更多个蛋白质上的相同表位。在某些替代实施方案中，抗体可以是双特异性的，并且包含至少两个具有不同特异性的抗原结合位点。
本发明使用的术语“结合亲和力”通常是指结合部分(例如，抗体)与分子靶标(例如，抗原)之间的非共价相互作用的总和的强度。结合部分和分子靶标的结合是可逆过程，结合的亲和力通常表示为平衡解离常数(KD)。KD是解离速率(koff或kd)与结合速率(kon或ka)的比值。结合对的KD越低，亲和力越高。在本领域中已知多种测量结合亲和力的方法，任何一种方法都可用于本发明。具体的说明性实施方案包括以下内容。在一些实施方案中，“KD”或“KD值”可以通过本领域已知的测定方法来测量，例如，结合测定。可采用放射性标记抗原结合试验(RIA)测定KD(Chen,et al.,(1999)J.Mol Biol293:865-881)。KD或KD值也可以通过Biacore使用表面等离子体共振测定法测量，例如，使用BIAcoreTM-2000或BIAcoreTM-3000(Biacore,Inc.,Piscataway,NJ)，或通过生物层干涉测定法测量，例如使用OctetQK384系统(ForteBio,Menlo Park,CA)。
本发明使用的术语“变体”与具有特定序列特征的蛋白质或多肽(“参考蛋白”或“参考多肽”)相关，其是指与参比蛋白或参比多肽相比，包括一种或多种(例如，约1至约25、约1至约20、约1至约15、约1至约10、或约1至约5)氨基酸替换、缺失和/或添加的不同的蛋白或多肽。氨基酸序列的变化可以为氨基酸替换。氨基酸序列的变化可以为保守的氨基酸替换。蛋白质或多肽的功能片段或功能变体保持参比蛋白质或多肽的基本结构和功能特性。
术语“多肽”、“肽”、“蛋白质”及其在本发明可互换使用的语法等同词是指任意长度的氨基酸聚合物，其可以为线性的或支链的。其可包括非天然或修饰的氨基酸，或被非氨基酸打断。多肽、肽或蛋白质也可被修饰，例入通过二硫键形成、糖基化、脂化、乙酰化、磷酸化或任何其他操作或修饰。
术语“多核苷酸”、“核酸”及其在本发明可互换使用的语法等同词是指任何长度的核苷酸聚合物，包括DNA和RNA。所述核苷酸可以为脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、修饰的核苷酸或碱基，和/或它们的类似物，或可以通过DNA或RNA聚合酶结合到聚合物中的任何底物。
在两个或多个多核苷酸或多肽的上下文中，本发明中使用的术语“同一性”、百分比“同一性”及其语法等同词是指当比较和对齐(必要时引入间隙)以获得最大对应时，不考虑任何保守的氨基酸替换作为序列同一性的一部分，相同或具有特定百分比的相同核苷酸或氨基酸残基的两个或多个序列或子序列。所述序列百分比可使用序列比较软件或算法或通过目测来测量。可用于获得氨基酸或核苷酸序列比对的各种算法和软件在本领域众所周知。这些算法或软件包括但不限于BLAST、ALIGN、Megalign、BestFit、GCG WisconsinPackage及其变体。在一些实施方案中，本发明提供的两种多核苷酸或多肽实质相同，这意味着当使用序列比较算法或通过目视检查进行比较和对齐以获得最大对应时，它们具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％，并且在一些实施方案中至少95％、96％、97％、98％、99％的核苷酸或氨基酸残基同一性。在一些实施方案中，在长度为至少约10个残基、至少约20个残基、至少约40-60个残基、至少约60-80个残基或之间的任何整数值的氨基酸序列的区域上存在同一性。在一些实施方案中，同一性存在于比60-80个残基更长的区域，例如至少约80-100个残基，并且在一些实施方案中，这些序列与被比较的序列在全长上基本相同，例如目标蛋白或抗体的编码区域。在一些实施方案中，在长度为至少约10个碱基、至少约20个碱基、至少约40-60个碱基、至少约60-80个碱基或之间的任何整数值的核苷酸序列的区域上存在同一性。在一些实施方案中，同一性存在于比60-80个碱基更长的区域上，例如至少约80-1000个碱基或更多，并且在一些实施方案中，这些序列与被比较的序列在全长上基本相同，例如编码目标蛋白的核苷酸序列。
本发明所用的术语“载体”及其及其语法等同词是指用于携带遗传物质(例如，多核苷酸序列)的载体，所述遗传物质可以被引入宿主细胞，在宿主细胞中可以被复制和/或表达。可应用的载体包括，例如，表达载体、质粒、噬菌体载体、病毒载体、附加体和人工染色体，其可包括可操作用于稳定整合到宿主细胞染色体中的选择序列或标记。此外，所述载体可以包括一个或多个可选择的标记基因和适当的表达控制序列。所述可以包括的可选择的标记基因能够，例如，提供对抗生素或毒素的耐药性、补充营养缺陷症、或提供培养基中不存在的关键营养物质。所述表达控制序列可以包括本领域公知的组成型和诱导型启动子、转录增强子、转录终止子等。当两个或多个多核苷酸要共表达时，两个多核苷酸都可以插入，例如在单个表达载体中或在单独的表达载体中。对于单载体表达，编码的多核苷酸可以操作地连接到一个共同的表达控制序列上，也可以连接到不同的表达控制序列上，如一个诱导启动子和一个组成型启动子。宿主细胞中多核苷酸的引入可以使用本领域公知的方法来确认。本领域技术人员应当理解的是，多核苷酸表达足够的量可以产生所需的产物(例如，本发明所述的抗CD123抗体或抗原结合片段)，并且进一步应当理解的是，可以使用本领域公知的方法优化表达水平以获得足够的表达。
本发明所使用的术语“嵌合抗原受体”或“CAR”是指含有与免疫细胞(例如，T细胞)信号传导或激活结构域连接的结合部分(例如，抗体)的人工构建的杂交蛋白或多肽。在一些实施方案中，CARs是一种合成受体，可使T细胞重新靶向肿瘤表面抗原(Sadelain etal.,Nat.Rev.Cancer 3(l):35-45(2003)；Sadelain et al.,Cancer Discovery 3(4):388-398(2013))。CARs可以在免疫细胞(例如T细胞)上提供抗原结合功能和免疫细胞激活功能。CARs能够利用单克隆抗体的抗原结合特性，以非MHC限制的方式重定向T细胞特异性和对选定靶标的反应性。非MHC限制的抗原识别可以使表达CARs的T细胞能够识别不依赖于抗原加工的抗原，从而绕过肿瘤逃逸的机制。
术语“基因工程”或其语法等同词，当用于指细胞时，意指细胞遗传物质的改变，而这种改变通常在自然发生的细胞中是不存在的。遗传改变包括，例如，引入可表达多核苷酸的修饰，细胞基因的其他添加、突变/改变、缺失和/或其他功能破坏。这种修饰可以在例如基因的编码区及其功能片段中进行。另外的修饰可以在例如非编码调节区域中进行，其中所述修饰改变基因的表达。
本发明使用的术语“转移”、“转导”、“转染”及其语法等同词是指将外源性多核苷酸引入宿主细胞的过程。“转移”、“转染”或“转导”的细胞是指已转移、转导或转染外源性多核苷酸的细胞。所述细胞包括原代受体细胞及其子代。可以使用在本领域已知的任何类型的方法将多核苷酸“转移”到宿主细胞中，包括化学方法、物理方法或生物方法。多核苷酸通常使用病毒“转导”到宿主细胞中。相比之下，多核苷酸通常使用非病毒方法“转染”到宿主细胞中。这些术语有时可以互换使用，当在上下文中使用时，本领域普通技术人员容易理解其含义。
如本发明所使用的术语“编码”及其语法等同词是指多核苷酸或核酸中特定核苷酸序列的固有性质，所述多核苷酸或核酸如基因、cDNA或mRNA，其作为模板，用于在生物过程中合成具有特定核苷酸序列(即rRNA、tRNA和mRNA)或特定氨基酸序列的其他聚合物和大分子，及由此产生的生物特性。因此，如果与该基因相对应的mRNA的转录和翻译产生蛋白质，则该基因编码此蛋白质。除另有说明外，“编码氨基酸序列核苷酸序列”包括相互简并的或编码同一氨基酸序列的所有核苷酸序列。编码蛋白质和RNA的核苷酸序列可以包括内含子。
“分离的”多肽、肽、蛋白质、抗体、多核苷酸、载体、细胞或组合物是自然界中所没有的多肽、肽、蛋白质、抗体、多核苷酸、载体、细胞或组合物的形式。分离的多肽、多肽、蛋白质、抗体、多核苷酸、载体、细胞或组合物包括那些已经纯化到一定程度，不再以自然界中发现的形式存在的多肽、肽、蛋白质、抗体、多核苷酸、载体、细胞或组合物。在一些实施方案中，所分离的多肽、肽、蛋白质、抗体、多核苷酸、载体、细胞或组合物是基本纯化的。
如本发明所用且如本领域所理解，“免疫效应细胞”及其语法等同词是指具有造血起源并在针对靶标(如病原体、癌细胞或外来物质)的免疫应答中发挥直接作用的细胞。免疫效应细胞包括T细胞、B细胞、自然杀伤(NK)细胞、NKT细胞、巨噬细胞、粒细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、肥大细胞和嗜碱性粒细胞。
本发明使用的术语“治疗”及其语法等同词与疾病或病症，或患有疾病或病症的受试者相关，其是指抑制、消除、减轻和/或改善症状、症状严重程度和/或与正在治疗的疾病或障碍相关的症状频率的行为。例如，当提及癌症或肿瘤时，术语“治疗”及其语法等同词是指降低癌症或肿瘤的严重程度，或延缓或减缓癌症或肿瘤进展的行为，包括(a)抑制癌症或肿瘤的生长或阻止其发展，(b)导致癌症或肿瘤消退，或(c)延缓、改善或最小化与癌症或肿瘤存在相关的一种或多种症状。
本发明使用的术语“给药”及其语法等同词是指通过本发明中描述的方法或本领域中的其他已知方法向受试者身体递送或导致递送治疗剂或药物组合物的行为。所述治疗剂可以为化合物、多肽、细胞或细胞群。给药治疗剂或药物组合物包含将一种治疗或药物组合物开处方递送至受试者体内。给药的典型形式包括口服剂型，如片剂、胶囊、糖浆、混悬剂；可注射剂型，如静脉注射(IV)、肌内注射(IM)或腹膜内注射(IP)；透皮剂型，包括乳膏、凝胶、粉末或贴剂；口腔剂型；吸入粉末、喷雾剂、混悬剂，和直肠栓剂。
本发明使用的术语“有效量”、“治疗有效量”和它们的语法等同物是指给受试者单独或作为药物组合物的一部分、以单剂量或作为一系列剂量的一部分给药，能够在给药时对疾病、障碍或病症的任何症状、方面或特征产生任何可检测的积极影响的给药量。治疗有效量可通过测定相关生理效应来确定。所需的确切量因受试者而异，取决于受试者的年龄、体重和一般情况、正在治疗的症状的严重程度、临床医生的判断等。在任何个体情况下，适当的“有效量”可以由本领域普通技术人员使用常规实验来确定。
术语“药学上可接受的载体”或“药学上可接受的辅料”是指适合与活性药物一起对个体给药的材料，不会引起任何不良生物学效应或以有害方式与药物组合物的任何其他组分相互作用。
本发明使用的术语“受试者”是指任何动物(例如，哺乳动物)，包括但不限于人类、非人灵长类动物、犬、猫科动物、啮齿动物等，其是待接受特定治疗的动物。受试者可以为人。受试者可以为患有特定疾病或病症的患者。
本发明所使用的术语“自体”是指源自同一个体，并且随后被重新引入到该个体中的任何材料。
本发明所使用的术语“同种异体”是指来源于同一物种中不同动物的移植物。
范围：在整个发明中，本发明的各个方面可以范围形式呈现。应当理解的是，范围形式的描述仅仅是为了方便和简洁，并且不应当被解释为对本发明范围的不灵活的限制。因此，范围的描述应该被认为已经具体地公开了所有可能的子范围以及该范围内的单个数值。例如，描述从1到6的范围应被认为已经公开了子范围，例如从1到3、1到4、1到5、2到4、2到6、3到6等，以及该范围内的单个数字，例如，1、2、2.7、3、4、5、5.3和6。无论范围的宽度如何，都适用于此。
本发明参照GenBank编号、GI编号和/或SEQ ID NO描述了示例性基因和多肽。应当理解的是，本领域技术人员可以通过参考序列来源容易地识别同源序列，所述序列来源包括但不限于GenBank(ncbi.nlm.nih.gov/GenBank/)和EMBL(EMBL.org/)。
5.2抗CD123抗体和抗原结合片段
本发明提供了特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，本发明提供了抗CD123抗体。在一些实施方案中，所述抗体是IgA、IgD、IgE、IgG或IgM抗体。在一些实施方案中，所述抗体为IgA抗体。在一些实施方案中，所述抗体为IgD抗体。在一些实施方案中，所述抗体为IgE抗体。在一些实施方案中，所述抗体为IgG抗体。在一些实施方案中，所述抗体为IgM抗体。在一些实施方案中，本发明提供的抗体可以是IgG1抗体、IgG2抗体、IgG3抗体或IgG4抗体。在一些实施方案中，所述抗体为IgG1抗体。在一些实施方案中，所述抗体为IgG2抗体。在一些实施方案中，所述抗体为IgG3抗体。在一些实施方案中，所述抗体为IgG4抗体。
在一些实施方案中，本发明提供抗CD123抗体的抗原结合片段。在一些实施方案中，本发明提供的抗原结合片段可以是单结构域抗体(sdAb)、重链抗体(HCAb)、Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、单链可变片段(scFv)、或(scFv)2。在一些实施方案中，抗CD123抗体的抗原结合片段是单结构域抗体(sdAb)。在一些实施方案中，抗CD123抗体的抗原结合片段是重链抗体(HCAb)。在一些实施方案中，抗CD123抗体的抗原结合片段是Fab。在一些实施方案中，抗CD123抗体的抗原结合片段是Fab’。在一些实施方案中，抗CD123抗体的抗原结合片段是F(ab')2。在一些实施方案中，抗CD123抗体的抗原结合片段是Fv。在一些实施方案中，抗CD123抗体的抗原结合片段是scFv。在一些实施方案中，抗CD123抗体的抗原结合片段是二硫键连接的scFv[(scFv)2]。在一些实施方案中，抗CD123抗体的抗原结合片段是双抗(dAb)。
在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段包括重组抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段包括单克隆抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段包括多克隆抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段包括骆驼科(例如骆驼、单峰驼和美洲驼)抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段包括嵌合抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段包括人源化抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段包括人抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，本发明提供抗CD123人scFvs。
在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段是分离得到的。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段是基本纯化的。
在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段包括多特异性抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段包括双特异性抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，本发明提供双特异性T细胞接合子(BiTE)。BiTEs是与T细胞抗原(如CD3)和肿瘤抗原结合的双特异性抗体。BiTEs已被证明能诱导靶向肿瘤细胞的定向裂解，从而为癌症和其他疾病提供巨大的潜在疗法。在一些实施方案中，本发明提供特异性结合CD3和CD123的BiTEs。在一些实施方案中，所述BiTEs包括本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，所述BiTEs包括本发明提供的抗CD123 scFv。
在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段包括单价抗原结合位点。在一些实施方案中，抗CD123抗体或抗原结合片段包括单特异性结合位点。在一些实施方案中，抗CD123抗体或抗原结合片段包括二价结合位点。
在一些实施方案中，抗CD123抗体或抗原结合片段是单克隆抗体或抗原结合片段。单克隆抗体可以通过本技术领域的专业人员已知的各种方法来得到。一种示例性方法是筛选蛋白质表达文库，例如噬菌体或核糖体展示文库。例如，噬菌体展示在Ladner et al.,U.S.Patent No.5,223,409；Smith(1985)Science 228:1315-1317；and WO92/18619中有所描述。在一些实施方案中，从表达所需物种的可变区或CDRs的噬菌体展示文库中分离重组单克隆抗体。噬菌体文库的筛选可以通过本领域已知的各种技术来完成。
在一些实施方案中，使用本领域技术人员已知的杂交瘤方法制备单克隆抗体。例如，使用杂交瘤方法对小鼠、大鼠、兔、仓鼠或其他适当的宿主动物进行免疫。在一些实施方案中，淋巴细胞在体外免疫。在一些实施方案中，所述免疫抗原是人蛋白或其片段。在一些实施方案中，所述免疫抗原是人蛋白或其片段。
免疫接种后，分离淋巴细胞，并使用例如聚乙二醇等进行适当的骨髓瘤细胞系融合。使用本领域已知的专用培养基选择杂交瘤细胞，并且未融合的淋巴细胞和骨髓瘤细胞不能在上述选择过程中存活。可以通过多种方法鉴定能产生针对所选抗原的单克隆抗体的杂交瘤，包括但不限于免疫沉淀、免疫印迹和体外结合测定(例如，流式细胞术、FACS、ELISA、SPR(例如，Biacore)，和放射免疫测定法)。一旦鉴定出能产生所需的特异性、亲和力和/或活性的抗体的杂交瘤细胞，就可以通过限制性稀释或其他技术进行亚克隆。杂交瘤可以使用标准方法在体外培养物中繁殖，也可以在动物体内作为腹水癌细胞繁殖。单克隆抗体可以根据本领域的标准方法从培养基或腹水中纯化，所述标准方法包括但不限于亲和层析、离子交换层析、凝胶电泳和透析。
在一些实施方案中，使用本领域技术人员已知的重组DNA技术制备单克隆抗体。例如，从成熟B细胞或杂交瘤细胞中分离编码抗体的多核苷酸，例如使用寡核苷酸引物通过RT-PCR特异性扩增编码抗体重链和轻链的基因，并使用标准技术测定其序列。然后将分离的编码重链和轻链的多核苷酸克隆到合适的表达载体中，当转染到宿主细胞(如大肠杆菌、猴COS细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或骨髓瘤细胞)中时产生单克隆抗体，这些细胞不产生免疫球蛋白。
在一些实施方案中，通过使用重组DNA技术修饰单克隆抗体以产生替代抗体。在一些实施方案中，小鼠单克隆抗体的轻链和重链的恒定结构域被人抗体的恒定区替换，以产生嵌合抗体。在一些实施方案中，所述恒定区被截短或去除以产生单克隆抗体的所需抗体片段。在一些实施方案中，可变区的定点或高密度诱变用于优化单克隆抗体的特异性和/或亲和力。
在一些实施方案中，抗CD123抗体或抗原结合片段是人源化抗体或抗原结合片段。制备人源化抗体的各种方法是本领域已知的。用于实现与人源化抗体的高亲和力结合的方法是本领域已知的。这种方法的一个非限制性例子是可变区的超突变和表达这种高亲和力抗体的细胞的选择(亲和力成熟)。除了使用展示文库之外，指定的抗原(例如，重组CD123或其表位)可用于免疫非人动物，例如啮齿动物。在某些实施方案中，可以使用本领域已知的和/或本发明公开的方法产生和分离啮齿动物抗原结合片段(例如，小鼠抗原结合片段)。在一些实施方案中，可以用抗原(例如，重组CD123或其表位)免疫小鼠。
在一些实施方案中，抗CD123抗体或抗原结合片段是人抗体或抗原结合片段。制备人抗体的各种技术是本领域已知的。在一些实施方案中，人抗体由体外免疫的永生化人B淋巴细胞产生。在一些实施方案中，人抗体由从免疫个体分离的淋巴细胞生成。在任何情况下，可以生成并分离产生针对靶抗原的抗体的细胞。在一些实施方案中，人抗体选自噬菌体文库，其中该噬菌体文库表达人抗体。或者，噬菌体展示技术可用于在体外从未免疫供体的免疫球蛋白可变区基因库中产生人抗体和抗体片段。用于产生和使用抗体噬菌体文库的技术是本领域公知的。鉴定出抗体后，可采用本领域已知的亲和力成熟策略(包括但不限于链改组和定点诱变)生成亲和力更高的人抗体。在一些实施方案中，在含有人免疫球蛋白基因座的转基因小鼠中产生人抗体。免疫接种后，这些小鼠能够在不产生内源性免疫球蛋白的情况下产生完整的人抗体。
本发明定义的特定CDR序列通常基于Kabat和Chothia定义的组合。然而，应当理解的是，对特异性抗体的一个或多个重链CDR，和/或一个或多个轻链CDR的引用包括本领域技术人员已知的所有CDR定义。
本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段包括以下克隆：C1、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9、C10、C11、C12、C13、C14、C15、C16、C17、C18、C19、C20、C21、C22、C23、C24、C25、C26、C27、C28、C29、C30、C31、C32、C33、C34和C35。序列特征如下所述。
在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段包含本发明所述的任何一种抗体的一个、两个、三个、四个、五个和/或六个CDRs。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段包含VL，所述VL包括来自表1中的一个、两个和/或三个VL CDRs。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段包含VH，所述VH包括来自表2中的一个、两个和/或三个VH CDRs。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段包含自表1中的一个、两个和/或三个VL CDRs，和自表2中的一个、两个和/或三个VH CDRs。
表1抗CD123 Abs轻链可变区CDRs(VL CDRs)的氨基酸序列
表2抗CD123 Abs重链可变区CDRs(VH CDRs)的氨基酸序列
表3抗CD123抗体的VL CDRs和VH CDRs的共有氨基酸序列
在一些实施方案中，抗CD123抗体或其抗原结合片段包括人源化抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，抗CD123抗体或其抗原结合片段包括本发明所述的抗体或抗原结合片段的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2和/或VH CDR3。在一些实施方案中，抗CD123抗体或其抗原结合片段包括本发明所述的抗CD123抗体或抗原结合片段的变体。在一些实施方案中，抗CD123抗体或抗原结合片段的变体包括抗CD123抗体或抗原结合片段中的1-30个氨基酸替换、添加和/或缺失。在一些实施方案中，抗CD123抗体或抗原结合片段的变体包括抗CD123抗体或抗原结合片段中的1-25个氨基酸替换、添加和/或缺失。在一些实施方案中，抗CD123抗体或抗原结合片段的变体包括抗CD123抗体或抗原结合片段中的1-20个氨基酸替换、添加和/或缺失。在一些实施方案中，抗CD123抗体或抗原结合片段的变体包括抗CD123抗体或抗原结合片段中的1-15个氨基酸替换、添加和/或缺失。在一些实施方案中，抗CD123抗体或抗原结合片段的变体包括抗CD123抗体或抗原结合片段中的1-10个氨基酸替换、添加和/或缺失。在一些实施方案中，抗CD123抗体或抗原结合片段的变体包括抗CD123抗体或抗原结合片段中的1-5个保守氨基酸替换、添加和/或缺失。在一些实施方案中，抗CD123抗体或抗原结合片段的变体包括抗CD123抗体或抗原结合片段中的1-3个氨基酸替换、添加和/或缺失。在一些实施方案中，所述氨基酸替换、添加和/或缺失是保守性的氨基酸替换。在一些实施方案中，所述保守性的氨基酸替换位于抗体或抗原结合片段的CDR中。在一些实施方案中，所述保守性的氨基酸替换不在抗体或抗原结合片段的CDR中。在一些实施方案中，所述保守性的氨基酸替换位于抗体或抗原结合片段的框架区中。
在一些实施方案中，本发明提供了特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段，其包含轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含(1)具有选自由SEQ ID NOs:1-29组成的群组中的氨基酸序列的轻链CDR1(VL CDR1)；(2)具有选自由SEQ ID NOs:30-56组成的群组中的氨基酸序列的轻链CDR2(VL CDR2)；或(3)具有选自由SEQ ID NOs:57-88组成的群组中的氨基酸序列的轻链CDR3(VL CDR3)；或在VL CDRs中具有至多约3个、约5个、约8个、约10个、约12个或约15个氨基酸替换、添加和/或缺失的变体。在一些实施方案中，所述变体在VL CDRs中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失。
在一些实施方案中，本发明提供了特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段，其包含轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含(1)具有选自由SEQ ID NOs:1-29组成的群组中的氨基酸序列的VL CDR1；(2)具有选自由SEQ ID NOs:30-56组成的群组中的氨基酸序列的VL CDR2；和(3)具有选自由SEQ ID NOs:57-88组成的群组中的氨基酸序列的VL CDR3；或在VL CDRs中具有至多约3个、约5个、约8个、约10个、约12个或约15个氨基酸替换、添加和/或缺失的变体。在一些实施方案中，所述变体在VL CDRs中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失。
在一些实施方案中，本发明提供了特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区(VH)，所述重链可变区包含(1)具有选自由SEQ ID NOs:89-109组成的群组中的氨基酸序列的重链CDR1(VH CDR1)；(2)具有选自由SEQ ID NOs:110-133组成的群组中的氨基酸序列的重链CDR2(VH CDR2)；或(3)具有选自由SEQ ID NOs:134-163组成的群组中的氨基酸序列的重链CDR3(VH CDR3)；或在VH CDRs中具有至多约3个、约5个、约8个、约10个、约12个或约15个氨基酸替换、添加和/或缺失的变体。在一些实施方案中，所述变体在VH CDRs中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失。
在一些实施方案中，本发明提供了特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区(VH)，所述重链可变区包含(1)具有选自由SEQ ID NOs:89-109组成的群组中的氨基酸序列的VH CDR1；(2)具有选自由SEQ ID NOs:110-133组成的群组中的氨基酸序列的VH CDR2；和(3)具有选自由SEQ ID NOs:134-163组成的群组中的氨基酸序列的VH CDR3；或在VH CDRs中具有至多约3个、约5个、约8个、约10个、约12个或约15个氨基酸替换、添加和/或缺失的变体。在一些实施方案中，所述变体在VH CDRs中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123的抗体或其抗原结合片段包含：(a)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含(1)具有选自由SEQ ID NOs:1-29组成的群组中的氨基酸序列的VL CDR1；(2)具有选自由SEQ ID NOs:30-56组成的群组中的氨基酸序列的VL CDR2；和(3)具有选自由SEQ ID NOs:57-88组成的群组中的氨基酸序列的VL CDR3；或在VL CDRs中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失的变体，和(b)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含(1)具有选自由SEQ ID NOs:89-109组成的群组中的氨基酸序列的VHCDR1；(2)具有选自由SEQ ID NOs:110-133组成的群组中的氨基酸序列的VH CDR2；和(3)具有选自由SEQ ID NOs:134-163组成的群组中的氨基酸序列的VH CDR3；或在VH CDRs中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失的变体。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性地结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段具有VL，其中，所述VL包括VL CDR1、CDR2和CDR3，所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有(1)SEQ ID NOs：3、33和61所示的氨基酸序列；(2)SEQ ID NOs：17、45和75所示的氨基酸序列；(3)SEQ ID NOs：7、37和66所示的氨基酸序列；(4)SEQ ID NOs：18、32和76所示的氨基酸序列；(5)SEQ ID NOs：23、50和82所示的氨基酸序列；(6)SEQ ID NOs：24、51和83所示的氨基酸序列；(7)SEQ ID NOs：8、38和67所示的氨基酸序列；(8)SEQ ID NOs：4、34和62所示的氨基酸序列；(9)SEQ ID NOs：25、52和84所示的氨基酸序列；(10)SEQ ID NOs：26、53和85所示的氨基酸序列；(11)SEQ ID NOs：2、32和60所示的氨基酸序列；(12)SEQ IDNOs：17、46和77所示的氨基酸序列；(13)SEQ ID NOs：27、54和86所示的氨基酸序列；(14)SEQ ID NOs：9、39和68所示的氨基酸序列；(15)SEQ ID NOs：10、40和69所示的氨基酸序列；(16)SEQ ID NOs：22、49和81所示的氨基酸序列；(17)SEQ ID NOs：5、35和63所示的氨基酸序列；(18)SEQ ID NOs：1、30和64所示的氨基酸序列；(19)SEQ ID NOs：11、41和70所示的氨基酸序列；(20)SEQ ID NOs:1、31和59所示的氨基酸序列；(21)SEQ ID NOs:19、47和78所示的氨基酸序列；(22)SEQ ID NOs:28、55和87所示的氨基酸序列；(23)SEQ ID NOs:12、39和71所示的氨基酸序列；(24)SEQ ID NOs：13、42和72所示的氨基酸序列；(25)SEQ ID NOs：1、30和57所示的氨基酸序列；(26)SEQ ID NOs：20、48和79所示的氨基酸序列；(27)SEQ IDNOs：14、43和67所示的氨基酸序列；(28)SEQ ID NOs：1、30和58所示的氨基酸序列；(29)SEQID NOs：2、32和60所示的氨基酸序列；(30)SEQ ID NOs:15、44和73所示的氨基酸序列；(31)SEQ ID NOs:29、56和88所示的氨基酸序列；(32)SEQ ID NOs：22、49和81所示的氨基酸序列；(33)SEQ ID NOs：16、42和74所示的氨基酸序列；(34)SEQ ID NOs:6、36和65所示的氨基酸序列；或(35)SEQ ID NOs:21、45和80所示的氨基酸序列；或在VL CDRs中具有至多约3个、约5个、约8个、约10个、约12个或约15个氨基酸的替换、添加和/或缺失的变体。在一些实施方案中，所述变体在VL CDRs中具有至多约5个氨基酸的替换、添加和/或缺失。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性地结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段具有VH，其中，所述VH包括VH CDR1、CDR2和CDR3，所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有(1)SEQ ID NOs:91、112和136所示的氨基酸序列；(2)SEQ ID NOs:89、122和149所示的氨基酸序列；(3)SEQ ID NOs:95、116和140所示的氨基酸序列；(4)SEQ ID NOs:100、123和150所示的氨基酸序列；(5)SEQ ID NOs：99、129和157所示的氨基酸序列；(6)SEQ IDNOs:106、128和158所示的氨基酸序列；(7)SEQ ID NOs:96、117和141所示的氨基酸序列；(8)SEQ ID NOs:89、110和134所示的氨基酸序列；(9)SEQ ID NOs：107、130和159所示的氨基酸序列；(10)SEQ ID NOs：95、116和160所示的氨基酸序列；(11)SEQ ID NOs：90、111和135所示的氨基酸序列；(12)SEQ ID NOs：101、124和151所示的氨基酸序列；(13)SEQ IDNOs：105、131和161所示的氨基酸序列；(14)SEQ ID NOs:97、118和142所示的氨基酸序列；(15)SEQ ID NOs:98、119和143所示的氨基酸序列；(16)SEQ ID NOs:105、128和156所示的氨基酸序列；(17)SEQ ID NOs:92、113和137所示的氨基酸序列；(18)SEQ ID NOs：93、114和138所示的氨基酸序列；(19)SEQ ID NOs:91、120和144所示的氨基酸序列；(20)SEQ IDNOs:89、110和134所示的氨基酸序列；(21)SEQ ID NOs:102、125和152所示的氨基酸序列；(22)SEQ ID Nos：108、132和162所示的氨基酸序列；(23)SEQ ID NOs：96、117和145所示的氨基酸序列；(24)SEQ ID NOs：95、116和146所示的氨基酸序列；(25)SEQ ID NOs：89、110和134所示的氨基酸序列；(26)SEQ ID NOs：103、126和153所示的氨基酸序列；(27)SEQ IDNOs：96、117和141所示的氨基酸序列；(28)SEQ ID NOs：89、110和134所示的氨基酸序列；(29)SEQ ID NOs：90、111和135所示的氨基酸序列；(30)SEQ ID NOs：99、121和147所示的氨基酸序列；(31)SEQ ID NOs：109、133和163所示的氨基酸序列；(32)SEQ ID NOs:104、127和155所示的氨基酸序列；(33)SEQ ID NOs:95、116和148所示的氨基酸序列；(34)SEQ IDNOs:94、115和139所示的氨基酸序列；或(35)SEQ ID NOs:89、122和154所示的氨基酸序列；或在VH CDRs中具有至多约3个、约5个、约8个、约10个、约12个或约15个氨基酸的替换、添加和/或缺失的变体。在一些实施方案中，所述变体在VH CDRs中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段具有VL和VH。在一些实施例中，VL和VH通过连接子连接。所述连接子可以为柔性连接子或刚性连接子。在一些实施方案中，所述连接子具有(GGGGS)n，n＝1、2、3、4或5(SEQ ID NO:410)的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述连接子具有(EAAAK)n,n＝1,2,3,4,or 5(SEQ ID NO:411)的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述连接子具有(PA)nP，n＝1、2、3、4或5(SEQ ID NO:412)的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述连接子具有GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:320)的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述连接子具有GGGGS(SEQ ID NO:413)的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123的抗体或其抗原结合片段(例如,人CD123)具有VL和VH，其中(a)VL包含VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3分别具有(1)SEQ ID NOs:3、33和61所示的氨基酸序列；(2)SEQ ID NOs:17、45和75所示的氨基酸序列；(3)SEQ ID NOs:7、37和66所示的氨基酸序列；(4)SEQ ID NOs:18、32和76所示的氨基酸序列；(5)SEQ ID NOs:23、50和82所示的氨基酸序列；(6)SEQ ID NOs：24、51和83所示的氨基酸序列；(7)SEQ ID NOs：8、38和67所示的氨基酸序列；(8)SEQ ID NOs：4、34和62所示的氨基酸序列；(9)SEQ ID NOs：25、52和84所示的氨基酸序列；(10)SEQ ID NOs：26、53和85所示的氨基酸序列；(11)SEQ ID NOs：2、32和60所示的氨基酸序列；(12)SEQ IDNOs：17、46和77所示的氨基酸序列；(13)SEQ ID NOs：27、54和86所示的氨基酸序列；(14)SEQ ID NOs：9、39和68所示的氨基酸序列；(15)SEQ ID NOs：10、40和69所示的氨基酸序列；(16)SEQ ID NOs：22、49和81所示的氨基酸序列；(17)SEQ ID NOs：5、35和63所示的氨基酸序列；(18)SEQ ID NOs：1、30和64所示的氨基酸序列；(19)SEQ ID NOs：11、41和70所示的氨基酸序列；(20)SEQ ID NOs:1、31和59所示的氨基酸序列；(21)SEQ ID NOs:19、47和78所示的氨基酸序列；(22)SEQ ID NOs:28、55和87所示的氨基酸序列；(23)SEQ ID NOs:12、39和71所示的氨基酸序列；(24)SEQ ID NOs：13、42和72所示的氨基酸序列；(25)SEQ ID NOs：1、30和57；(26)SEQ ID NOs：20、48和79；(27)SEQ ID NOs：14、43和67所示的氨基酸序列；(28)SEQ ID NOs：1、30和58所示的氨基酸序列；(29)SEQ ID NOs：2、32和60所示的氨基酸序列；(30)SEQ ID NOs:15、44和73所示的氨基酸序列；(31)SEQ ID NOs:29、56和88所示的氨基酸序列；(32)SEQ ID NOs：22、49和81所示的氨基酸序列；(33)SEQ ID NOs：16、42和74所示的氨基酸序列；(34)SEQ ID NOs:6、36和65所示的氨基酸序列；或(35)SEQ ID NOs:21、45和80所示的氨基酸序列；或在VL CDRs中具有至多约5个氨基酸的替换、添加和/或缺失的变体；和(b)VH包含VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3分别具有(1)SEQ ID NOs:91、112和136所示的氨基酸序列；(2)SEQ ID NOs:89、122和149所示的氨基酸序列；(3)SEQ IDNOs:95、116和140所示的氨基酸序列；(4)SEQ ID NOs:100、123和150所示的氨基酸序列；(5)SEQ ID NOs：99、129和157所示的氨基酸序列；(6)SEQ ID NOs:106、128和158所示的氨基酸序列；(7)SEQ ID NOs:96、117和141所示的氨基酸序列；(8)SEQ ID NOs:89、110和134所示的氨基酸序列；(9)SEQ ID NOs：107、130和159所示的氨基酸序列；(10)SEQ ID NOs：95、116和160所示的氨基酸序列；(11)SEQ ID NOs：90、111和135所示的氨基酸序列；(12)SEQ ID NOs：101、124和151所示的氨基酸序列；(13)SEQ ID NOs：105、131和161所示的氨基酸序列；(14)SEQ ID NOs:97、118和142所示的氨基酸序列；(15)SEQ ID NOs:98、119和143所示的氨基酸序列；(16)SEQ ID NOs:105、128和156所示的氨基酸序列；(17)SEQ ID NOs:92、113和137所示的氨基酸序列；(18)SEQ ID NOs：93、114和138所示的氨基酸序列；(19)SEQ ID NOs:91、120和144所示的氨基酸序列；(20)SEQ ID NOs:89、110和134所示的氨基酸序列；(21)SEQ ID NOs:102、125和152所示的氨基酸序列；(22)SEQ ID NOs：108、132和162所示的氨基酸序列；(23)SEQ ID NOs：96、117和145所示的氨基酸序列；(24)SEQ ID NOs：95、116和146所示的氨基酸序列；(25)SEQ ID NOs：89、110和134所示的氨基酸序列；(26)SEQ ID NOs：103、126和153所示的氨基酸序列；(27)SEQ ID NOs：96、117和141所示的氨基酸序列；(28)SEQ ID NOs：89、110和134所示的氨基酸序列；(29)SEQ ID NOs：90、111和135所示的氨基酸序列；(30)SEQ ID NOs：99、121和147所示的氨基酸序列；(31)SEQ ID NOs：109、133和163所示的氨基酸序列；(32)SEQ ID NOs:104、127和155所示的氨基酸序列；(33)SEQ ID NOs:95、116和148所示的氨基酸序列；(34)SEQ ID NOs:94、115和139所示的氨基酸序列；或(35)SEQ ID NOs:89、122和154所示的氨基酸序列；或在VH CDRs中具有至多约5个氨基酸替换、添加和/或缺失的变体。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性地结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段具有VL和VH，其中，所述VL包括VL CDR1、CDR2和CDR3，所述VH包括VH CDR1、CDR2和CDR3，所述VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3分别具有：(1)SEQ ID NOs:3、33、61、91、112和136所示的氨基酸序列；(2)SEQ ID NOs:17、45、75、89、122和149所示的氨基酸序列；(3)SEQ ID NOs:7、37、66、95、116和140所示的氨基酸序列；(4)SEQ ID NOs:18、32、76、100、123和150所示的氨基酸序列；(5)SEQ ID NOs:23、50、82、99、129和157所示的氨基酸序列；(6)SEQ ID NOs：24、51、83、106、128和158所示的氨基酸序列；(7)SEQ ID NOs：8、38、67、96、117和141所示的氨基酸序列；(8)SEQ ID NOs：4、34、62、89、110和134所示的氨基酸序列；(9)SEQ ID NOs：25、52、84、107、130和159所示的氨基酸序列；(10)SEQ ID NOs：26、53、85、95、116和160所示的氨基酸序列；(11)SEQ ID NOs：2、32、60、90、111和135所示的氨基酸序列；(12)SEQ ID NOs：17、46、77、101、124和151所示的氨基酸序列；(13)SEQ ID NOs：27、54、86、105、131和161所示的氨基酸序列；(14)SEQ ID NOs：9、39、68、97、118和142所示的氨基酸序列；(15)SEQ ID NOs:10、40、69、98、119和143所示的氨基酸序列；(16)SEQ ID NOs:22、49、81、105、128和156所示的氨基酸序列；(17)SEQ ID NOs:5、35、63、92、113和137所示的氨基酸序列；(18)SEQ ID NOs:1、30、64、93、114和138所示的氨基酸序列；(19)SEQ ID NOs：11、41、70、91、120和144所示的氨基酸序列；(20)SEQ IDNOs:1、31、59、89、110和134所示的氨基酸序列；(21)SEQ ID NOs:19、47、78、102、125和152所示的氨基酸序列；(22)SEQ ID NOs:28、55、87、108、132和162所示的氨基酸序列；(23)SEQID NOs：12、39、71、96、117和145所示的氨基酸序列；(24)SEQ ID NOs:13、42、72、95、116和146所示的氨基酸序列；(25)SEQ ID NOs:1、30、57、89、110和134所示的氨基酸序列；(26)SEQ ID NOs:20、48、79、103、126和153所示的氨基酸序列；(27)SEQ ID NOs:14、43、67、96、117和141所示的氨基酸序列；(28)SEQ ID NOs：1、30、58、89、110和134所示的氨基酸序列；(29)SEQ ID NOs:2、32、60、90、111和135所示的氨基酸序列；(30)SEQ ID NOs:15、44、73、99、121和147所示的氨基酸序列；(31)SEQ ID NOs:29、56、88、109、133和163所示的氨基酸序列；(32)SEQ ID NOs:22、49、81、104、127和155所示的氨基酸序列；(33)SEQ ID NOs：16、42、74、95、116和148所示的氨基酸序列；(34)SEQ ID NOs:6、36、65、94、115和139所示的氨基酸序列；或(35)SEQ ID NOs:21、45、80、89、122和154所示的氨基酸序列；或在CDRs中有至多约5个氨基酸的替换、添加和/或缺失的变体。
表3为本发明提供的抗体的共有CDR序列分析。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或抗原结合片段包含：(a)轻链可变区(VL)，其包含(1)具有选自由SEQ ID NOs:348-352组成的群组中的氨基酸序列的VL CDR1；(2)具有选自由SEQ ID NOs:353-356组成的群组中的氨基酸序列的VL CDR2；和(3)具有选自由SEQ IDNOs:357-359组成的群组中的氨基酸序列的VL CDR3；和/或，(b)重链可变区(VH)，其包含(1)具有选自由SEQ ID NOs:360-361组成的群组中的氨基酸序列的VH CDR1；(2)具有选自由SEQ ID NOs:362-367组成的群组中的氨基酸序列的VH CDR2；和(3)具有选自由SEQ IDNO:368组成的群组中的氨基酸序列的VH CDR3。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或抗原结合片段包含VL和VH，其中，VL包括VL CDR1、CDR2和CDR3，VH包括VH CDR1、CDR2和CDR3，其中VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3分别具有：(1)SEQ ID NOs:349、353、357、89、110和134所示的氨基酸序列；(2)SEQ ID NOs:348、354、358、(89或360)、365和(135、149、154或159)所示的氨基酸序列；(3)SEQ ID NOs:348、354、358、360、365和(135或159)所示的氨基酸序列；(4)SEQ ID NOs：348、45、358、89、122和(149或154)所示的氨基酸序列；(5)SEQ ID NOs:350、355、359、95、116和(140或148)所示的氨基酸序列；(6)SEQ ID NOs:22、49、81、360、362和367所示的氨基酸序列；(7)SEQ ID NOs:352、353、358、361、367和(160或162)所示的氨基酸序列；(8)SEQ ID NOs：350、355、359、(97或99)、(118或121)和(142或147)所示的氨基酸序列；(8)SEQ ID NOs:350、355、359、(97或99)、(118或121)和(142或147)所示的氨基酸序列；(9)SEQ ID NOs：351、356、67、96、117和141所示的氨基酸序列；(10)SEQ ID NOs：350、355、359、(91、95或96)、(116、117或210)和368所示的氨基酸序列；(11)SEQ ID NOs:348、354、(76、77或358)、(101、103或360)、(123、124、125或126)和(150、151、152或153)所示的氨基酸序列；或(12)SEQ ID NOs：349、353、(61、62、63、64或65)、(89、91、92、93或94)、(110、112、113、114或115)和(134、136、137、138或139)所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区(VL)，所述轻链可变区(VL)包括(1)具有SEQ ID NO:17的氨基酸序列的VL CDR1；(2)具有SEQ ID NO:45的氨基酸序列的VL CDR2；或(3)具有SEQ IDNO:75的氨基酸序列的VL CDR3。VL可以具有VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3,所述VL CDR1、VLCDR2和VL CDR3分别具有SEQ ID NOs:17、45和75的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包含重链可变区(VH)，所述重链可变区(VH)包括(1)具有SEQ ID NO:89的氨基酸序列的VH CDR1；(2)具有SEQ IDNO:122的氨基酸序列的VH CDR2；或(3)具有SEQ ID NO:149的氨基酸序列的VH CDR3。VH可以具有VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，所述VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3分别具有SEQ IDNOs:89、122和149的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的抗体或其抗原结合片段包含(a)VL，所述VL包括分别具有SEQ ID NOs:17、45和75的氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3；和(b)VH，所述VH包括分别具有SEQ ID NOs:89、122和149的氨基酸序列的VHCDR1、VH CDR2和VH CDR3。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段具有轻链可变区(VL)，所述轻链可变区(VL)包括(1)具有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的VL CDR1；(2)具有SEQ ID NO:32的氨基酸序列的VL CDR2；或(3)具有SEQ IDNO:76的氨基酸序列的VL CDR3。VL可以具有VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3,所述VL CDR1、VLCDR2和VL CDR3分别具有SEQ ID NOs:18、32和76的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段具有重链可变区(VH)，所述重链可变区(VH)包括(1)具有SEQ ID NO:100的氨基酸序列的VH CDR1；(2)具有SEQ IDNO:123的氨基酸序列的VH CDR2；或(3)具有SEQ ID NO:150的氨基酸序列的VH CDR3。VH可以具有VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，所述VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3分别具有SEQ IDNOs:100、123和150的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的抗体或其抗原结合片段包含(a)VL，所述VL包括分别具有SEQ ID NOs:18、32和76的氨基酸序列的VL CDR1、VLCDR2和VL CDR3；和(b)VH，所述VH包括分别具有SEQ ID NOs:100、123和150的氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段具有轻链可变区(VL)，所述轻链可变区(VL)包括(1)具有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的VL CDR1；(2)具有SEQ ID NO:50的氨基酸序列的VL CDR2；或(3)具有SEQ IDNO:82的氨基酸序列的VL CDR3。VL可以具有VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3,所述VL CDR1、VLCDR2和VL CDR3分别具有SEQ ID NOs:23、50和82的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段具有重链可变区(VH)，所述重链可变区(VH)包括(1)具有SEQ ID NO:99的氨基酸序列的VH CDR1；(2)具有SEQ IDNO:129的氨基酸序列的VH CDR2；或(3)具有SEQ ID NO:157的氨基酸序列的VH CDR3。VH可以具有VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，所述VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3分别具有SEQ IDNOs:99、129和157的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包含(a)VL，所述VL包括分别具有SEQ ID NOs:23、50和82的氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3；和(b)VH，所述VH包括分别具有SEQ IDNOs:99、129和157的氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段具有轻链可变区(VL)，所述轻链可变区(VL)包括(1)具有SEQ ID NO:24的氨基酸序列的VL CDR1；(2)具有SEQ ID NO:51的氨基酸序列的VL CDR2；或(3)具有SEQ IDNO:83的氨基酸序列的VL CDR3。VL可以具有VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3,所述VL CDR1、VLCDR2和VL CDR3分别具有SEQ ID NOs:24、51和83的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段具有重链可变区(VH)，所述重链可变区(VH)包括(1)具有SEQ ID NO:106的氨基酸序列的VH CDR1；(2)具有SEQ IDNO:128的氨基酸序列的VH CDR2；或(3)具有SEQ ID NO:158的氨基酸序列的VH CDR3。VH可以具有VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，所述VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3分别具有SEQ IDNOs:106、128和158的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包含(a)VL，所述VL包括分别具有SEQ ID NOs:24、51和83的氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3；和(b)VH，所述VH包括分别具有SEQ IDNOs:106、128和158的氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段具有轻链可变区(VL)，所述轻链可变区(VL)包括(1)具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的VL CDR1；(2)具有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的VL CDR2；或(3)具有SEQ ID NO:67的氨基酸序列的VL CDR3。VL可以具有VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3,所述VL CDR1、VLCDR2和VL CDR3分别具有SEQ ID NOs:8、38和67的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段具有重链可变区(VH)，所述重链可变区(VH)包括(1)具有SEQ ID NO:96的氨基酸序列的VH CDR1；(2)具有SEQ IDNO:117的氨基酸序列的VH CDR2；或(3)具有SEQ ID NO:141的氨基酸序列的VH CDR3。VH可以具有VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，所述VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3分别具有SEQ IDNOs:96、117和141的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包含(a)VL，所述VL包括分别具有SEQ ID NOs:8、38和67的氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3；和(b)VH，所述VH包括分别具有SEQ IDNOs:96、117和141的氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段具有轻链可变区(VL)，所述轻链可变区(VL)包括(1)具有SEQ ID NO:25的氨基酸序列的VL CDR1；(2)具有SEQ ID NO:52的氨基酸序列的VL CDR2；或(3)具有SEQ IDNO:84的氨基酸序列的VL CDR3。VL可以具有VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3,所述VL CDR1、VLCDR2和VL CDR3分别具有SEQ ID NOs:25、52和84的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段具有重链可变区(VH)，所述重链可变区(VH)包括(1)具有SEQ ID NO:107的氨基酸序列的VH CDR1；(2)具有SEQ IDNO:130的氨基酸序列的VH CDR2；或(3)具有SEQ ID NO:159的氨基酸序列的VH CDR3。VH可以具有VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，所述VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3分别具有SEQ IDNOs:107、130和159的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包含(a)VL，所述VL包括分别具有SEQ ID NOs:25、52和84的氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3；和(b)VH，所述VH包括分别具有SEQ IDNOs:107、130和159的氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段具有轻链可变区(VL)，所述轻链可变区(VL)包括(1)具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的VL CDR1；(2)具有SEQ ID NO:32的氨基酸序列的VL CDR2；或(3)具有SEQ ID NO:60的氨基酸序列的VL CDR3。VL可以具有VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3,所述VL CDR1、VLCDR2和VL CDR3分别具有SEQ ID NOs:2、32和60的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段具有重链可变区(VH)，所述重链可变区(VH)包括(1)具有SEQ ID NO:90的氨基酸序列的VH CDR1；(2)具有SEQ IDNO:111的氨基酸序列的VH CDR2；或(3)具有SEQ ID NO:135的氨基酸序列的VH CDR3。VH可以具有VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，所述VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3分别具有SEQ IDNOs:90、111和135的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包含(a)VL，所述VL包括分别具有SEQ ID NOs:2、32和60的氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3；和(b)VH，所述VH包括分别具有SEQ IDNOs:90、111和135的氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段具有轻链可变区(VL)，所述轻链可变区(VL)包括(1)具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的VL CDR1；(2)具有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的VL CDR2；或(3)具有SEQ ID NO:68的氨基酸序列的VL CDR3。VL可以具有VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3,所述VL CDR1、VLCDR2和VL CDR3分别具有SEQ ID NOs:9、39和68的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段具有重链可变区(VH)，所述重链可变区(VH)包括(1)具有SEQ ID NO:97的氨基酸序列的VH CDR1；(2)具有SEQ IDNO:118的氨基酸序列的VH CDR2；或(3)具有SEQ ID NO:142的氨基酸序列的VH CDR3。VH可以具有VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，所述VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3分别具有SEQ IDNOs:97、118和142的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包含(a)VL，所述VL包括分别具有SEQ ID NOs:9、39和68的氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3；和(b)VH，所述VH包括分别具有SEQ IDNOs:97、118和142的氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段具有轻链可变区(VL)，所述轻链可变区(VL)包括(1)具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的VL CDR1；(2)具有SEQ ID NO:40的氨基酸序列的VL CDR2；或(3)具有SEQ IDNO:69的氨基酸序列的VL CDR3。VL可以具有VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3,所述VL CDR1、VLCDR2和VL CDR3分别具有SEQ ID NOs:10、40和69的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段具有重链可变区(VH)，所述重链可变区(VH)包括(1)具有SEQ ID NO:98的氨基酸序列的VH CDR1；(2)具有SEQ IDNO:119的氨基酸序列的VH CDR2；或(3)具有SEQ ID NO:143的氨基酸序列的VH CDR3。VH可以具有VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，所述VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3分别具有SEQ IDNOs:98、119和143的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包含(a)VL，所述VL包括分别具有SEQ ID NOs:10、40和69的氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3；和(b)VH，所述VH包括分别具有SEQ IDNOs:98、119和143的氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段具有轻链可变区(VL)，所述轻链可变区(VL)包括(1)具有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的VL CDR1；(2)具有SEQ ID NO:49的氨基酸序列的VL CDR2；或(3)具有SEQ IDNO:81的氨基酸序列的VL CDR3。VL可以具有VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3,所述VL CDR1、VLCDR2和VL CDR3分别具有SEQ ID NOs:22、49和81的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段具有重链可变区(VH)，所述重链可变区(VH)包括(1)具有SEQ ID NO:105的氨基酸序列的VH CDR1；(2)具有SEQ IDNO:128的氨基酸序列的VH CDR2；或(3)具有SEQ ID NO:156的氨基酸序列的VH CDR3。VH可以具有VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，所述VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3分别具有SEQ IDNOs:105、128和156的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包含(a)VL，所述VL包括分别具有SEQ ID NOs:22、49和81的氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3；和(b)VH，所述VH包括分别具有SEQ IDNOs:105、128和156的氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段具有轻链可变区(VL)，所述轻链可变区(VL)包括(1)具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的VL CDR1；(2)具有SEQ ID NO:35的氨基酸序列的VL CDR2；或(3)具有SEQ ID NO:63的氨基酸序列的VL CDR3。VL可以具有VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3,所述VL CDR1、VLCDR2和VL CDR3分别具有SEQ ID NOs:5、35和63的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段具有重链可变区(VH)，所述重链可变区(VH)包括(1)具有SEQ ID NO:92的氨基酸序列的VH CDR1；(2)具有SEQ IDNO:113的氨基酸序列的VH CDR2；或(3)具有SEQ ID NO:137的氨基酸序列的VH CDR3。VH可以具有VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，所述VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3分别具有SEQ IDNOs:92、113和137的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包含(a)VL，所述VL包括分别具有SEQ ID NOs:5、35和63的氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3；和(b)VH，所述VH包括分别具有SEQ IDNOs:92、113和137的氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段具有轻链可变区(VL)，所述轻链可变区(VL)包括(1)具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的VL CDR1；(2)具有SEQ ID NO:30的氨基酸序列的VL CDR2；或(3)具有SEQ ID NO:64的氨基酸序列的VL CDR3。VL可以具有VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3,所述VL CDR1、VLCDR2和VL CDR3分别具有SEQ ID NOs:1、30和64的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段具有重链可变区(VH)，所述重链可变区(VH)包括(1)具有SEQ ID NO:93的氨基酸序列的VH CDR1；(2)具有SEQ IDNO:114的氨基酸序列的VH CDR2；或(3)具有SEQ ID NO:138的氨基酸序列的VH CDR3。VH可以具有VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，所述VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3分别具有SEQ IDNOs:93、114和138的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包含(a)VL，所述VL包括分别具有SEQ ID NOs:1、30和64的氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3；和(b)VH，所述VH包括分别具有SEQ IDNOs:93、114和138的氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段具有轻链可变区(VL)，所述轻链可变区(VL)包括(1)具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的VL CDR1；(2)具有SEQ ID NO:30的氨基酸序列的VL CDR2；或(3)具有SEQ ID NO:57的氨基酸序列的VL CDR3。VL可以具有VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3,所述VL CDR1、VLCDR2和VL CDR3分别具有SEQ ID NOs:1、30和57的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段具有重链可变区(VH)，所述重链可变区(VH)包括(1)具有SEQ ID NO:89的氨基酸序列的VH CDR1；(2)具有SEQ IDNO:110的氨基酸序列的VH CDR2；或(3)具有SEQ ID NO:134的氨基酸序列的VH CDR3。VH可以具有VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，所述VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3分别具有SEQ IDNOs:89、110和134的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包含(a)VL，所述VL包括分别具有SEQ ID NOs:1、30和57的氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3；和(b)VH，所述VH包括分别具有SEQ IDNOs:89、110和134的氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段具有轻链可变区(VL)，所述轻链可变区(VL)包括(1)具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的VL CDR1；(2)具有SEQ ID NO:48的氨基酸序列的VL CDR2；或(3)具有SEQ IDNO:79的氨基酸序列的VL CDR3。VL可以具有VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3,所述VL CDR1、VLCDR2和VL CDR3分别具有SEQ ID NOs:20、48和79的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段具有重链可变区(VH)，所述重链可变区(VH)包括(1)具有SEQ ID NO:103的氨基酸序列的VH CDR1；(2)具有SEQ IDNO:126的氨基酸序列的VH CDR2；或(3)具有SEQ ID NO:153的氨基酸序列的VH CDR3。VH可以具有VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，所述VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3分别具有SEQ IDNOs:103、126和153的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包含(a)VL，所述VL包括分别具有SEQ ID NOs:20、48和79的氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3；和(b)VH，所述VH包括分别具有SEQ IDNOs:103、126和153的氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段具有轻链可变区(VL)，所述轻链可变区(VL)包括(1)具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的VL CDR1；(2)具有SEQ ID NO:30的氨基酸序列的VL CDR2；或(3)具有SEQ ID NO:58的氨基酸序列的VL CDR3。VL可以具有VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3,所述VL CDR1、VLCDR2和VL CDR3分别具有SEQ ID NOs:1、30和58的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段具有重链可变区(VH)，所述重链可变区(VH)包括(1)具有SEQ ID NO:89的氨基酸序列的VH CDR1；(2)具有SEQ IDNO:110的氨基酸序列的VH CDR2；或(3)具有SEQ ID NO:134的氨基酸序列的VH CDR3。VH可以具有VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，所述VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3分别具有SEQ IDNOs:89、110和134的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包含(a)VL，所述VL包括分别具有SEQ ID NOs:1、30和58的氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3；和(b)VH，所述VH包括分别具有SEQ IDNOs:89、110和134的氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段具有轻链可变区(VL)，所述轻链可变区(VL)包括(1)具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的VL CDR1；(2)具有SEQ ID NO:32的氨基酸序列的VL CDR2；或(3)具有SEQ ID NO:60的氨基酸序列的VL CDR3。VL可以具有VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3,所述VL CDR1、VLCDR2和VL CDR3分别具有SEQ ID NOs:2、32和60的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段具有重链可变区(VH)，所述重链可变区(VH)包括(1)具有SEQ ID NO:90的氨基酸序列的VH CDR1；(2)具有SEQ IDNO:111的氨基酸序列的VH CDR2；或(3)具有SEQ ID NO:135的氨基酸序列的VH CDR3。VH可以具有VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，所述VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3分别具有SEQ IDNOs:90、111和135的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包含(a)VL，所述VL包括分别具有SEQ ID NOs:2、32和60的氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3；和(b)VH，所述VH包括分别具有SEQ IDNOs:90、111和135的氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段具有轻链可变区(VL)，所述轻链可变区(VL)包括(1)具有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VL CDR1；(2)具有SEQ ID NO:44的氨基酸序列的VL CDR2；或(3)具有SEQ IDNO:73的氨基酸序列的VL CDR3。VL可以具有VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3,所述VL CDR1、VLCDR2和VL CDR3分别具有SEQ ID NOs:15、44和73的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段具有重链可变区(VH)，所述重链可变区(VH)包括(1)具有SEQ ID NO:99的氨基酸序列的VH CDR1；(2)具有SEQ IDNO:121的氨基酸序列的VH CDR2；或(3)具有SEQ ID NO:147的氨基酸序列的VH CDR3。VH可以具有VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，所述VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3分别具有SEQ IDNOs:99、121和147的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包含(a)VL，所述VL包括分别具有SEQ ID NOs:15、44和73的氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3；和(b)VH，所述VH包括分别具有SEQ IDNOs:99、121和147的氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段具有轻链可变区(VL)，所述轻链可变区(VL)包括(1)具有SEQ ID NO:21的氨基酸序列的VL CDR1；(2)具有SEQ ID NO:45的氨基酸序列的VL CDR2；或(3)具有SEQ IDNO:80的氨基酸序列的VL CDR3。VL可以具有VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3,所述VL CDR1、VLCDR2和VL CDR3分别具有SEQ ID NOs:21、45和80的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段具有重链可变区(VH)，所述重链可变区(VH)包括(1)具有SEQ ID NO:89的氨基酸序列的VH CDR1；(2)具有SEQ IDNO:122的氨基酸序列的VH CDR2；或(3)具有SEQ ID NO:154的氨基酸序列的VH CDR3。VH可以具有VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，所述VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3分别具有SEQ IDNOs:89、122和154的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包含(a)VL，所述VL包括分别具有SEQ ID NOs:21、45和80的氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3；和(b)VH，所述VH包括分别具有SEQ IDNOs:89、122和154的氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括与选自由SEQ ID NOs:164-198组成的群组中的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的VL。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括与选自由SEQ ID NOs:199-233组成的群组中的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的VH。
表4抗CD123抗体的轻链可变区(VLs)和重链可变区(VHs)的氨基酸序列
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括:(a)与选自由SEQ ID Nos:164-198组成的群组中的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的VL；和(b)与选自由SEQ ID Nos:199-233组成的群组中的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的VH。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括VL，其中VL与SEQ ID NO:165的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:165的氨基酸序列具有至少85％同一性的VL。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:165的氨基酸序列具有至少90％同一性的VL。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:165的氨基酸序列具有至少95％同一性的VL。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:165的氨基酸序列具有至少98％同一性的VL。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括具有SEQ ID NO:165的氨基酸序列的VL。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括VH，其中VH与SEQ ID NO:200的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:200的氨基酸序列具有至少85％同一性的VH。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:200的氨基酸序列具有至少90％同一性的VH。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:200的氨基酸序列具有至少95％同一性的VH。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:200的氨基酸序列具有至少98％同一性的VH。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括具有SEQ ID NO:200的氨基酸序列的VH。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括VL，其中VL与SEQ ID NO:167的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:167的氨基酸序列具有至少85％同一性的VL。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:167的氨基酸序列具有至少90％同一性的VL。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:167的氨基酸序列具有至少95％同一性的VL。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:167的氨基酸序列具有至少98％同一性的VL。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括具有SEQ ID NO:167的氨基酸序列的VL。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括VH，其中VH与SEQ ID NO:202的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:202的氨基酸序列具有至少85％同一性的VH。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:202的氨基酸序列具有至少90％同一性的VH。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:202的氨基酸序列具有至少95％同一性的VH。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:202的氨基酸序列具有至少98％同一性的VH。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括具有SEQ ID NO:202的氨基酸序列的VH。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括VL，其中，VL与SEQ ID NO:168的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:168的氨基酸序列具有至少85％同一性的VL。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:168的氨基酸序列具有至少90％同一性的VL。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:168的氨基酸序列具有至少95％同一性的VL。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:168的氨基酸序列具有至少98％同一性的VL。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括具有SEQ ID NO:168的氨基酸序列的VL。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括VH，其中，VH与SEQ ID NO:203的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:203的氨基酸序列具有至少85％同一性的VH。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:203的氨基酸序列具有至少90％同一性的VH。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:203的氨基酸序列具有至少95％同一性的VH。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:203的氨基酸序列具有至少98％同一性的VH。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括具有SEQ ID NO:203的氨基酸序列的VH。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括VL，其中，VL与SEQ ID NO:169的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:169的氨基酸序列具有至少85％同一性的VL。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:169的氨基酸序列具有至少90％同一性的VL。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:169的氨基酸序列具有至少95％同一性的VL。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:169的氨基酸序列具有至少98％同一性的VL。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括具有SEQ ID NO:169的氨基酸序列的VL。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括VH，其中，VH与SEQ ID NO:204的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:204的氨基酸序列具有至少85％同一性的VH。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:204的氨基酸序列具有至少90％同一性的VH。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:204的氨基酸序列具有至少95％同一性的VH。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:204的氨基酸序列具有至少98％同一性的VH。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括具有SEQ ID NO:204的氨基酸序列的VH。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括VL，其中，VL与SEQ ID NO:170的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:170的氨基酸序列具有至少85％同一性的VL。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:170的氨基酸序列具有至少90％同一性的VL。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:170的氨基酸序列具有至少95％同一性的VL。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:170的氨基酸序列具有至少98％同一性的VL。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括具有SEQ ID NO:170的氨基酸序列的VL。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括VH，其中，VH与SEQ ID NO:205的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:205的氨基酸序列具有至少85％同一性的VH。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:205的氨基酸序列具有至少90％同一性的VH。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:205的氨基酸序列具有至少95％同一性的VH。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:205的氨基酸序列具有至少98％同一性的VH。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括具有SEQ ID NO:205的氨基酸序列的VH。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括VL，其中，VL与SEQ ID NO:172的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:172的氨基酸序列具有至少85％同一性的VL。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:172的氨基酸序列具有至少90％同一性的VL。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:172的氨基酸序列具有至少95％同一性的VL。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:172的氨基酸序列具有至少98％同一性的VL。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括具有SEQ ID NO:172的氨基酸序列的VL。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括VH，其中，VH与SEQ ID NO:207的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:207的氨基酸序列具有至少85％同一性的VH。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:207的氨基酸序列具有至少90％同一性的VH。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:207的氨基酸序列具有至少95％同一性的VH。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:207的氨基酸序列具有至少98％同一性的VH。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括具有SEQ ID NO:207的氨基酸序列的VH。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括VL，其中，VL与SEQ ID NO:174的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:174的氨基酸序列具有至少85％同一性的VL。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:174的氨基酸序列具有至少90％同一性的VL。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:174的氨基酸序列具有至少95％同一性的VL。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:174的氨基酸序列具有至少98％同一性的VL。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括具有SEQ ID NO:174的氨基酸序列的VL。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括VH，其中，VH与SEQ ID NO:209的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:209的氨基酸序列具有至少85％同一性的VH。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:209的氨基酸序列具有至少90％同一性的VH。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:209的氨基酸序列具有至少95％同一性的VH。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:209的氨基酸序列具有至少98％同一性的VH。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括具有SEQ ID NO:209的氨基酸序列的VH。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括VL，其中，VL与SEQ ID NO:177的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:177的氨基酸序列具有至少85％同一性的VL。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:177的氨基酸序列具有至少90％同一性的VL。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:177的氨基酸序列具有至少95％同一性的VL。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:177的氨基酸序列具有至少98％同一性的VL。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括具有SEQ ID NO:177的氨基酸序列的VL。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括VH，其中，VH与SEQ ID NO:212的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:212的氨基酸序列具有至少85％同一性的VH。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:212的氨基酸序列具有至少90％同一性的VH。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:212的氨基酸序列具有至少95％同一性的VH。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:212的氨基酸序列具有至少98％同一性的VH。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括具有SEQ ID NO:212的氨基酸序列的VH。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括VL，其中，VL与SEQ ID NO:178的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:178的氨基酸序列具有至少85％同一性的VL。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:178的氨基酸序列具有至少90％同一性的VL。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:178的氨基酸序列具有至少95％同一性的VL。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:178的氨基酸序列具有至少98％同一性的VL。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括具有SEQ ID NO:178的氨基酸序列的VL。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括VH，其中，VH与SEQ ID NO:213的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:213的氨基酸序列具有至少85％同一性的VH。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:213的氨基酸序列具有至少90％同一性的VH。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:213的氨基酸序列具有至少95％同一性的VH。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:213的氨基酸序列具有至少98％同一性的VH。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括具有SEQ ID NO:213的氨基酸序列的VH。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括VL，其中，VL与SEQ ID NO:179的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:179的氨基酸序列具有至少85％同一性的VL。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:179的氨基酸序列具有至少90％同一性的VL。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:179的氨基酸序列具有至少95％同一性的VL。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:179的氨基酸序列具有至少98％同一性的VL。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括具有SEQ ID NO:179的氨基酸序列的VL。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括VH，其中，VH与SEQ ID NO:214的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:214的氨基酸序列具有至少85％同一性的VH。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:214的氨基酸序列具有至少90％同一性的VH。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:214的氨基酸序列具有至少95％同一性的VH。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:214的氨基酸序列具有至少98％同一性的VH。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括具有SEQ ID NO:214的氨基酸序列的VH。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括VL，其中，VL与SEQ ID NO:180的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:180的氨基酸序列具有至少85％同一性的VL。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:180的氨基酸序列具有至少90％同一性的VL。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:180的氨基酸序列具有至少95％同一性的VL。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:180的氨基酸序列具有至少98％同一性的VL。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括具有SEQ ID NO:180的氨基酸序列的VL。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括VH，其中，VH与SEQ ID NO:215的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:215的氨基酸序列具有至少85％同一性的VH。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:215的氨基酸序列具有至少90％同一性的VH。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:215的氨基酸序列具有至少95％同一性的VH。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:215的氨基酸序列具有至少98％同一性的VH。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括具有SEQ ID NO:215的氨基酸序列的VH。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括VL，其中，VL与SEQ ID NO:181的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:181的氨基酸序列具有至少85％同一性的VL。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:181的氨基酸序列具有至少90％同一性的VL。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:181的氨基酸序列具有至少95％同一性的VL。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:181的氨基酸序列具有至少98％同一性的VL。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括具有SEQ ID NO:181的氨基酸序列的VL。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括VH，其中，VH与SEQ ID NO:216的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:216的氨基酸序列具有至少85％同一性的VH。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:216的氨基酸序列具有至少90％同一性的VH。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:216的氨基酸序列具有至少95％同一性的VH。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:216的氨基酸序列具有至少98％同一性的VH。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括具有SEQ ID NO:216的氨基酸序列的VH。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括VL，其中，VL与SEQ ID NO:188的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:188的氨基酸序列具有至少85％同一性的VL。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:188的氨基酸序列具有至少90％同一性的VL。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:188的氨基酸序列具有至少95％同一性的VL。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:188的氨基酸序列具有至少98％同一性的VL。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括具有SEQ ID NO:188的氨基酸序列的VL。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括VH，其中，VH与SEQ ID NO:223的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:223的氨基酸序列具有至少85％同一性的VH。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:223的氨基酸序列具有至少90％同一性的VH。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:223的氨基酸序列具有至少95％同一性的VH。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:223的氨基酸序列具有至少98％同一性的VH。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括具有SEQ ID NO:223的氨基酸序列的VH。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括VL，其中，VL与SEQ ID NO:189的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:189的氨基酸序列具有至少85％同一性的VL。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:189的氨基酸序列具有至少90％同一性的VL。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:189的氨基酸序列具有至少95％同一性的VL。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:189的氨基酸序列具有至少98％同一性的VL。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括具有SEQ ID NO:189的氨基酸序列的VL。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括VH，其中，VH与SEQ ID NO:224的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:224的氨基酸序列具有至少85％同一性的VH。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:224的氨基酸序列具有至少90％同一性的VH。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:224的氨基酸序列具有至少95％同一性的VH。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:224的氨基酸序列具有至少98％同一性的VH。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括具有SEQ ID NO:224的氨基酸序列的VH。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括VL，其中，VL与SEQ ID NO:191的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:191的氨基酸序列具有至少85％同一性的VL。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:191的氨基酸序列具有至少90％同一性的VL。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:191的氨基酸序列具有至少95％同一性的VL。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:191的氨基酸序列具有至少98％同一性的VL。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括具有SEQ ID NO:191的氨基酸序列的VL。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括VH，其中，VH与SEQ ID NO:226的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:226的氨基酸序列具有至少85％同一性的VH。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:226的氨基酸序列具有至少90％同一性的VH。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:226的氨基酸序列具有至少95％同一性的VH。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:226的氨基酸序列具有至少98％同一性的VH。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括具有SEQ ID NO:226的氨基酸序列的VH。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括VL，其中，VL与SEQ ID NO:192的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:192的氨基酸序列具有至少85％同一性的VL。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:192的氨基酸序列具有至少90％同一性的VL。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:192的氨基酸序列具有至少95％同一性的VL。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:192的氨基酸序列具有至少98％同一性的VL。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括具有SEQ ID NO:192的氨基酸序列的VL。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或抗原结合片段包括VH，其中，VH与SEQ ID NO:227的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:227的氨基酸序列具有至少85％同一性的VH。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:227的氨基酸序列具有至少90％同一性的VH。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:227的氨基酸序列具有至少95％同一性的VH。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:227的氨基酸序列具有至少98％同一性的VH。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括具有SEQ ID NO:227的氨基酸序列的VH。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括VL，其中，VL与SEQ ID NO:193的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:193的氨基酸序列具有至少85％同一性的VL。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:193的氨基酸序列具有至少90％同一性的VL。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:193的氨基酸序列具有至少95％同一性的VL。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:193的氨基酸序列具有至少98％同一性的VL。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括具有SEQ ID NO:193的氨基酸序列的VL。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括VH，其中，VH与SEQ ID NO:228的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:228的氨基酸序列具有至少85％同一性的VH。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:228的氨基酸序列具有至少90％同一性的VH。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:228的氨基酸序列具有至少95％同一性的VH。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:228的氨基酸序列具有至少98％同一性的VH。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括具有SEQ ID NO:228的氨基酸序列的VH。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括VL，其中，VL与SEQ ID NO:198的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:198的氨基酸序列具有至少85％同一性的VL。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:198的氨基酸序列具有至少90％同一性的VL。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:198的氨基酸序列具有至少95％同一性的VL。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:198的氨基酸序列具有至少98％同一性的VL。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括具有SEQ ID NO:198的氨基酸序列的VL。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括VH，其中，VH与SEQ ID NO:233的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:233的氨基酸序列具有至少85％同一性的VH。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:233的氨基酸序列具有至少90％同一性的VH。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:233的氨基酸序列具有至少95％同一性的VH。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:233的氨基酸序列具有至少98％同一性的VH。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括具有SEQ ID NO:233的氨基酸序列的VH。
所述抗CD123抗体或其抗原结合片段可包含本发明公开的任何VL和本发明公开的任何VH的组合。在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或抗原结合片段包括轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，其中，所述VL具有SEQ ID NO:164的氨基酸序列，且所述VH具有选自由SEQ ID NOs:199-233组成的群组中的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有SEQ ID NO:165的氨基酸序列，且所述VH具有选自由SEQ IDNOs:199-233组成的群组中的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有SEQ ID NO:166的氨基酸序列，且所述VH具有选自由SEQ ID NOs:199-233组成的群组中的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有SEQ ID NO:167的氨基酸序列，且所述VH具有选自由SEQ IDNOs:199-233组成的群组中的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有SEQ ID NO:168的氨基酸序列，且所述VH具有选自由SEQ ID NOs:199-233组成的群组中的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有SEQ ID NO:169的氨基酸序列，且所述VH具有选自由SEQ IDNOs:199-233组成的群组中的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有SEQ ID NO:170的氨基酸序列，且所述VH具有选自由SEQ ID NOs:199-233组成的群组中的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有SEQ ID NO:171的氨基酸序列，且所述VH具有选自由SEQ IDNOs:199-233组成的群组中的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有SEQ ID NO:172的氨基酸序列，且所述VH具有选自由SEQ ID NOs:199-233组成的群组中的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有SEQ ID NO:173的氨基酸序列，且所述VH具有选自由SEQ IDNOs:199-233组成的群组中的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有SEQ ID NO:174的氨基酸序列，且所述VH具有选自由SEQ ID NOs:199-233组成的群组中的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有SEQ ID NO:175的氨基酸序列，且所述VH具有选自由SEQ IDNOs:199-233组成的群组中的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有SEQ ID NO:176的氨基酸序列，且所述VH具有选自由SEQ ID NOs:199-233组成的群组中的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有SEQ ID NO:177的氨基酸序列，且所述VH具有选自由SEQ IDNOs:199-233组成的群组中的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有SEQ ID NO:178的氨基酸序列，且所述VH具有选自由SEQ ID NOs:199-233组成的群组中的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有SEQ ID NO:179的氨基酸序列，且所述VH具有选自由SEQ IDNOs:199-233组成的群组中的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有SEQ ID NO:180的氨基酸序列，且所述VH具有选自由SEQ ID NOs:199-233组成的群组中的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有SEQ ID NO:181的氨基酸序列，且所述VH具有选自由SEQ IDNOs:199-233组成的群组中的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有SEQ ID NO:182的氨基酸序列，且所述VH具有选自由SEQ ID NOs:199-233组成的群组中的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有SEQ ID NO:183的氨基酸序列，且所述VH具有选自由SEQ IDNOs:199-233组成的群组中的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有SEQ ID NO:184的氨基酸序列，且所述VH具有选自由SEQ ID NOs:199-233组成的群组中的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有SEQ ID NO:185的氨基酸序列，且所述VH具有选自由SEQ IDNOs:199-233组成的群组中的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有SEQ ID NO:186的氨基酸序列，且所述VH具有选自由SEQ ID NOs:199-233组成的群组中的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有SEQ ID NO:187的氨基酸序列，且所述VH具有选自由SEQ IDNOs:199-233组成的群组中的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有SEQ ID NO:188的氨基酸序列，且所述VH具有选自由SEQ ID NOs:199-233组成的群组中的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有SEQ ID NO:189的氨基酸序列，且所述VH具有选自由SEQ IDNOs:199-233组成的群组中的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有SEQ ID NO:190的氨基酸序列，且所述VH具有选自由SEQ ID NOs:199-233组成的群组中的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有SEQ ID NO:191的氨基酸序列，且所述VH具有选自由SEQ IDNOs:199-233组成的群组中的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有SEQ ID NO:192的氨基酸序列，且所述VH具有选自由SEQ ID NOs:199-233组成的群组中的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有SEQ ID NO:193的氨基酸序列，且所述VH具有选自由SEQ IDNOs:199-233组成的群组中的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有SEQ ID NO:194的氨基酸序列，且所述VH具有选自由SEQ ID NOs:199-233组成的群组中的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有SEQ ID NO:195的氨基酸序列，且所述VH具有选自由SEQ IDNOs:199-233组成的群组中的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有SEQ ID NO:196的氨基酸序列，且所述VH具有选自由SEQ ID NOs:199-233组成的群组中的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有SEQ ID NO:197的氨基酸序列，且所述VH具有选自由SEQ IDNOs:199-233组成的群组中的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有SEQ ID NO:198的氨基酸序列，且所述VH具有选自由SEQ ID NOs:199-233组成的群组中的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，其中，所述VL具有选自由SEQ IDNOs:164-198组成的群组中的氨基酸序列，且所述VH具有SEQ ID NO:199的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有选自由SEQ ID NOs:164-198组成的群组中的氨基酸序列，且所述VH具有SEQ ID NO:200的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有选自由SEQ IDNOs:164-198组成的群组中的氨基酸序列，且所述VH具有SEQ ID NO:201的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有选自由SEQ ID NOs:164-198组成的群组中的氨基酸序列，且所述VH具有SEQ ID NO:202的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有选自由SEQ IDNOs:164-198组成的群组中的氨基酸序列，且所述VH具有SEQ ID NO:203的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有选自由SEQ ID NOs:164-198组成的群组中的氨基酸序列，且所述VH具有SEQ ID NO:204的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有选自由SEQ IDNOs:164-198组成的群组中的氨基酸序列，且所述VH具有SEQ ID NO:205的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有选自由SEQ ID NOs:164-198组成的群组中的氨基酸序列，且所述VH具有SEQ ID NO:206的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有选自由SEQ IDNOs:164-198组成的群组中的氨基酸序列，且所述VH具有SEQ ID NO:207的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有选自由SEQ ID NOs:164-198组成的群组中的氨基酸序列，且所述VH具有SEQ ID NO:208的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有选自由SEQ IDNOs:164-198组成的群组中的氨基酸序列，且所述VH具有SEQ ID NO:209的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有选自由SEQ ID NOs:164-198组成的群组中的氨基酸序列，且所述VH具有SEQ ID NO:210的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有选自由SEQ IDNOs:164-198组成的群组中的氨基酸序列，且所述VH具有SEQ ID NO:211的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有选自由SEQ ID NOs:164-198组成的群组中的氨基酸序列，且所述VH具有SEQ ID NO:212的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有选自由SEQ IDNOs:164-198组成的群组中的氨基酸序列，且所述VH具有SEQ ID NO:213的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有选自由SEQ ID NOs:164-198组成的群组中的氨基酸序列，且所述VH具有SEQ ID NO:214的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有选自由SEQ IDNOs:164-198组成的群组中的氨基酸序列，且所述VH具有SEQ ID NO:215的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有选自由SEQ ID NOs:164-198组成的群组中的氨基酸序列，且所述VH具有SEQ ID NO:216的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有选自由SEQ IDNOs:164-198组成的群组中的氨基酸序列，且所述VH具有SEQ ID NO:217的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有选自由SEQ ID NOs:164-198组成的群组中的氨基酸序列，且所述VH具有SEQ ID NO:218的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有选自由SEQ IDNOs:164-198组成的群组中的氨基酸序列，且所述VH具有SEQ ID NO:219的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有选自由SEQ ID NOs:164-198组成的群组中的氨基酸序列，且所述VH具有SEQ ID NO:220的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有选自由SEQ IDNOs:164-198组成的群组中的氨基酸序列，且所述VH具有SEQ ID NO:221的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有选自由SEQ ID NOs:164-198组成的群组中的氨基酸序列，且所述VH具有SEQ ID NO:222的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有选自由SEQ IDNOs:164-198组成的群组中的氨基酸序列，且所述VH具有SEQ ID NO:223的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有选自由SEQ ID NOs:164-198组成的群组中的氨基酸序列，且所述VH具有SEQ ID NO:224的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有选自由SEQ IDNOs:164-198组成的群组中的氨基酸序列，且所述VH具有SEQ ID NO:225的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有选自由SEQ ID NOs:164-198组成的群组中的氨基酸序列，且所述VH具有SEQ ID NO:226的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有选自由SEQ IDNOs:164-198组成的群组中的氨基酸序列，且所述VH具有SEQ ID NO:227的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有选自由SEQ ID NOs:164-198组成的群组中的氨基酸序列，且所述VH具有SEQ ID NO:228的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有选自由SEQ IDNOs:164-198组成的群组中的氨基酸序列，且所述VH具有SEQ ID NO:229的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有选自由SEQ ID NOs:164-198组成的群组中的氨基酸序列，且所述VH具有SEQ ID NO:230的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有选自由SEQ IDNOs:164-198组成的群组中的氨基酸序列，且所述VH具有SEQ ID NO:231的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有选自由SEQ ID NOs:164-198组成的群组中的氨基酸序列，且所述VH具有SEQ ID NO:232的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL具有选自由SEQ IDNOs:164-198组成的群组中的氨基酸序列，且所述VH具有SEQ ID NO:233的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括VL和VH，其中，所述VL和VH分别具有SEQ ID NOs:164和199的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL和VH分别具有SEQ ID NOs:165和200的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL和VH分别具有SEQ ID NOs:166和201的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL和VH分别具有SEQ ID NOs:167和202的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL和VH分别具有SEQ ID NOs:168和203的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL和VH分别具有SEQ ID NOs:169和204的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL和VH分别具有SEQ IDNOs:170和205的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL和VH分别具有SEQ ID NOs:171和206的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL和VH分别具有SEQ ID NOs:172和207的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL和VH分别具有SEQ ID NOs:173和208的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL和VH分别具有SEQ ID NOs:174和209的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL和VH分别具有SEQ ID NOs:175和210的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL和VH分别具有SEQ ID NOs:176和211的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL和VH分别具有SEQ ID NOs:177和212的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL和VH分别具有SEQ IDNOs:178和213的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL和VH分别具有SEQ ID NOs:179和214的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL和VH分别具有SEQ ID NOs:180和215的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL和VH分别具有SEQ ID NOs:181和216的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL和VH分别具有SEQ ID NOs:182和217的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL和VH分别具有SEQ ID NOs:183和218的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL和VH分别具有SEQ ID NOs:184和219的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL和VH分别具有SEQ ID NOs:185和220的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL和VH分别具有SEQ IDNOs:186和221的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL和VH分别具有SEQ ID NOs:187和222的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL和VH分别具有SEQ ID NOs:188和223的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL和VH分别具有SEQ ID NOs:189和224的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL和VH分别具有SEQ ID NOs:190和225的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL和VH分别具有SEQ ID NOs:191和226的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL和VH分别具有SEQ ID NOs:192和227的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL和VH分别具有SEQ ID NOs:193和228的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL和VH分别具有SEQ IDNOs:194和229的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL和VH分别具有SEQ ID NOs:195和230的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL和VH分别具有SEQ ID NOs:196和231的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL和VH分别具有SEQ ID NOs:197和232的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述VL和VH分别具有SEQ ID NOs:198和233的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包含：(a)轻链可变区(VL)，其包括VL CDRs 1,2和3，所述VL CDRs 1,2和3源于具有选自由SEQ ID Nos:164-198组成的群组中的氨基酸序列的VL；和/或，(b)重链可变区(VH)，其包括VH CDRs 1,2和3，所述VH CDRs 1,2和3源于具有选自由SEQ ID Nos:199-233组成的群组中的氨基酸序列的VH。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括VL，其中，VL包括VL CDRs 1,2和3，所述VL CDRs 1,2和3源于具有SEQ IDNO:164的氨基酸序列的VL。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDRs 1,2和3，所述VL CDRs1,2和3源于具有SEQ ID NO:165的氨基酸序列的VL。在一些实施方案中，所述VL包括VLCDRs 1,2和3，所述VL CDRs 1,2和3源于具有SEQ ID NO:166的氨基酸序列的VL。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDRs 1,2和3，所述VL CDRs 1,2和3源于具有SEQ ID NO:167的氨基酸序列的VL。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDRs 1,2和3，所述VL CDRs 1,2和3源于具有SEQ ID NO:168的氨基酸序列的VL。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDRs 1,2和3，所述VL CDRs 1,2和3源于具有SEQ ID NO:169的氨基酸序列的VL。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDRs 1,2和3，所述VL CDRs 1,2和3源于具有SEQ ID NO:170的氨基酸序列的VL。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDRs 1,2和3，所述VL CDRs 1,2和3源于具有SEQ IDNO:171的氨基酸序列的VL。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDRs 1,2和3，所述VL CDRs1,2和3源于具有SEQ ID NO:172的氨基酸序列的VL。在一些实施方案中，所述VL包括VLCDRs 1,2和3，所述VL CDRs 1,2和3源于具有SEQ ID NO:173的氨基酸序列的VL。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDRs 1,2和3，所述VL CDRs 1,2和3源于具有SEQ ID NO:174的氨基酸序列的VL。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDRs 1,2和3，所述VL CDRs 1,2和3源于具有SEQ ID NO:175的氨基酸序列的VL。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDRs 1,2和3，所述VL CDRs 1,2和3源于具有SEQ ID NO:176的氨基酸序列的VL。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDRs 1,2和3，所述VL CDRs 1,2和3源于具有SEQ ID NO:177的氨基酸序列的VL。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDRs 1,2和3，所述VL CDRs 1,2和3源于具有SEQ IDNO:178的氨基酸序列的VL。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDRs 1,2和3，所述VL CDRs1,2和3源于具有SEQ ID NO:179的氨基酸序列的VL。在一些实施方案中，所述VL包括VLCDRs 1,2和3，所述VL CDRs 1,2和3源于具有SEQ ID NO:180的氨基酸序列的VL。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDRs 1,2和3，所述VL CDRs 1,2和3源于具有SEQ ID NO:181的氨基酸序列的VL。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDRs 1,2和3，所述VL CDRs 1,2和3源于具有SEQ ID NO:182的氨基酸序列的VL。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDRs 1,2和3，所述VL CDRs 1,2和3源于具有SEQ ID NO:183的氨基酸序列的VL。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDRs 1,2和3，所述VL CDRs 1,2和3源于具有SEQ ID NO:184的氨基酸序列的VL。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDRs 1,2和3，所述VL CDRs 1,2和3源于具有SEQ IDNO:185的氨基酸序列的VL。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDRs 1,2和3，所述VL CDRs1,2和3源于具有SEQ ID NO:186的氨基酸序列的VL。在一些实施方案中，所述VL包括VLCDRs 1,2和3，所述VL CDRs 1,2和3源于具有SEQ ID NO:187的氨基酸序列的VL。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDRs 1,2和3，所述VL CDRs 1,2和3源于具有SEQ ID NO:188的氨基酸序列的VL。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDRs 1,2和3，所述VL CDRs 1,2和3源于具有SEQ ID NO:189的氨基酸序列的VL。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDRs 1,2和3，所述VL CDRs 1,2和3源于具有SEQ ID NO:190的氨基酸序列的VL。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDRs 1,2和3，所述VL CDRs 1,2和3源于具有SEQ ID NO:191的氨基酸序列的VL。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDRs 1,2和3，所述VL CDRs 1,2和3源于具有SEQ IDNO:192的氨基酸序列的VL。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDRs 1,2和3，所述VL CDRs1,2和3源于具有SEQ ID NO:193的氨基酸序列的VL。在一些实施方案中，所述VL包括VLCDRs 1,2和3，所述VL CDRs 1,2和3源于具有SEQ ID NO:194的氨基酸序列的VL。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDRs 1,2和3，所述VL CDRs 1,2和3源于具有SEQ ID NO:195的氨基酸序列的VL。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDRs 1,2和3，所述VL CDRs 1,2和3源于具有SEQ ID NO:196的氨基酸序列的VL。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDRs 1,2和3，所述VL CDRs 1,2和3源于具有SEQ ID NO:197的氨基酸序列的VL。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDRs 1,2和3，所述VL CDRs 1,2和3源于具有SEQ ID NO:198的氨基酸序列的VL。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123(例如，人CD123)的抗体或其抗原结合片段包括VH，其中，VH包括VH CDRs 1,2和3，所述VH CDRs 1,2和3源于具有SEQ IDNO:199的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VH包括VH CDRs 1,2和3，所述VH CDRs1,2和3源于具有SEQ ID NO:200的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VH包括VHCDRs 1,2和3，所述VH CDRs 1,2和3源于具有SEQ ID NO:201的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VH包括VH CDRs 1,2和3，所述VH CDRs 1,2和3源于具有SEQ ID NO:202的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VH包括VH CDRs 1,2和3，所述VH CDRs 1,2和3源于具有SEQ ID NO:203的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VH包括VH CDRs 1,2和3，所述VH CDRs 1,2和3源于具有SEQ ID NO:204的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VH包括VH CDRs 1,2和3，所述VH CDRs 1,2和3源于具有SEQ ID NO:205的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VH包括VH CDRs 1,2和3，所述VH CDRs 1,2和3源于具有SEQ IDNO:206的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VH包括VH CDRs 1,2和3，所述VH CDRs1,2和3源于具有SEQ ID NO:207的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VH包括VHCDRs 1,2和3，所述VH CDRs 1,2和3源于具有SEQ ID NO:208的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VH包括VH CDRs 1,2和3，所述VH CDRs 1,2和3源于具有SEQ ID NO:209的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VH包括VH CDRs 1,2和3，所述VH CDRs 1,2和3源于具有SEQ ID NO:210的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VH包括VH CDRs 1,2和3，所述VH CDRs 1,2和3源于具有SEQ ID NO:211的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VH包括VH CDRs 1,2和3，所述VH CDRs 1,2和3源于具有SEQ ID NO:212的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VH包括VH CDRs 1,2和3，所述VH CDRs 1,2和3源于具有SEQ IDNO:213的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VH包括VH CDRs 1,2和3，所述VH CDRs1,2和3源于具有SEQ ID NO:214的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VH包括VHCDRs 1,2和3，所述VH CDRs 1,2和3源于具有SEQ ID NO:215的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VH包括VH CDRs 1,2和3，所述VH CDRs 1,2和3源于具有SEQ ID NO:216的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VH包括VH CDRs 1,2和3，所述VH CDRs 1,2和3源于具有SEQ ID NO:217的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VH包括VH CDRs 1,2和3，所述VH CDRs 1,2和3源于具有SEQ ID NO:218的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VH包括VH CDRs 1,2和3，所述VH CDRs 1,2和3源于具有SEQ ID NO:219的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VH包括VH CDRs 1,2和3，所述VH CDRs 1,2和3源于具有SEQ IDNO:220的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VH包括VH CDRs 1,2和3，所述VH CDRs1,2和3源于具有SEQ ID NO:221的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VH包括VHCDRs 1,2和3，所述VH CDRs 1,2和3源于具有SEQ ID NO:222的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VH包括VH CDRs 1,2和3，所述VH CDRs 1,2和3源于具有SEQ ID NO:223的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VH包括VH CDRs 1,2和3，所述VH CDRs 1,2和3源于具有SEQ ID NO:224的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VH包括VH CDRs 1,2和3，所述VH CDRs 1,2和3源于具有SEQ ID NO:225的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VH包括VH CDRs 1,2和3，所述VH CDRs 1,2和3源于具有SEQ ID NO:226的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VH包括VH CDRs 1,2和3，所述VH CDRs 1,2和3源于具有SEQ IDNO:227的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VH包括VH CDRs 1,2和3，所述VH CDRs1,2和3源于具有SEQ ID NO:228的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VH包括VHCDRs 1,2和3，所述VH CDRs 1,2和3源于具有SEQ ID NO:229的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VH包括VH CDRs 1,2和3，所述VH CDRs 1,2和3源于具有SEQ ID NO:230的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VH包括VH CDRs 1,2和3，所述VH CDRs 1,2和3源于具有SEQ ID NO:231的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VH包括VH CDRs 1,2和3，所述VH CDRs 1,2和3源于具有SEQ ID NO:232的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VH包括VH CDRs 1,2和3，所述VH CDRs 1,2和3源于具有SEQ ID NO:233的氨基酸序列的VH。
在一些实施方案中，本发明提供的特异性结合CD123的抗体或其抗原结合片段包含：轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，其中，所述VL包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VLCDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:164的氨基酸序列的VL；并且，所述VH包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:199的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ IDNo:165的氨基酸序列的VL；并且，所述VH包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:200的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:166的氨基酸序列的VL；并且，所述VH包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:201的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:167的氨基酸序列的VL；并且，所述VH包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:202的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:168的氨基酸序列的VL；并且，所述VH包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:203的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:169的氨基酸序列的VL；并且，所述VH包括VHCDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:204的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:170的氨基酸序列的VL；并且，所述VH包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:205的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VL包括VLCDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:171的氨基酸序列的VL；并且，所述VH包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:206的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:172的氨基酸序列的VL；并且，所述VH包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:207的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:173的氨基酸序列的VL；并且，所述VH包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:208的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:174的氨基酸序列的VL；并且，所述VH包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:209的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:175的氨基酸序列的VL；并且，所述VH包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VHCDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:210的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:176的氨基酸序列的VL；并且，所述VH包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ IDNo:211的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VLCDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:177的氨基酸序列的VL；并且，所述VH包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:212的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ IDNo:178的氨基酸序列的VL；并且，所述VH包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:213的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:179的氨基酸序列的VL；并且，所述VH包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:214的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:180的氨基酸序列的VL；并且，所述VH包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:215的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:181的氨基酸序列的VL；并且，所述VH包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:216的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:182的氨基酸序列的VL；并且，所述VH包括VHCDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:217的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:183的氨基酸序列的VL；并且，所述VH包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:218的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VL包括VLCDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:184的氨基酸序列的VL；并且，所述VH包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:219的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:185的氨基酸序列的VL；并且，所述VH包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:220的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:186的氨基酸序列的VL；并且，所述VH包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:221的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:187的氨基酸序列的VL；并且，所述VH包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:222的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:188的氨基酸序列的VL；并且，所述VH包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VHCDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:223的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:189的氨基酸序列的VL；并且，所述VH包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ IDNo:224的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VLCDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:190的氨基酸序列的VL；并且，所述VH包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:225的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ IDNo:191的氨基酸序列的VL；并且，所述VH包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:226的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:192的氨基酸序列的VL；并且，所述VH包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:227的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:193的氨基酸序列的VL；并且，所述VH包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:228的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:194的氨基酸序列的VL；并且，所述VH包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:229的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:195的氨基酸序列的VL；并且，所述VH包括VHCDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:230的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:196的氨基酸序列的VL；并且，所述VH包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:231的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VL包括VLCDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:197的氨基酸序列的VL；并且，所述VH包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:232的氨基酸序列的VH。在一些实施方案中，所述VL包括VL CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:198的氨基酸序列的VL；并且，所述VH包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VH CDR1,CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No:233的氨基酸序列的VH。
在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段是标记为C2(SEQ ID NO:376)的scFv。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段与SEQ ID NO:376的氨基酸序列具有至少约80％、约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、或约99％的同一性。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段具有源于C2的VL(SEQ ID NO:165)。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段具有源于C2的VH(SEQ ID NO:200)。本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段可同时具有源于C2的VL和VH。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段具有包括VL CDRs 1,2和3的VL，所述VLCDRs 1,2和3源于来自C2的VL(SEQ ID NO:165)。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段具有包括VH CDRs 1,2和3的VH，所述VH CDRs 1,2和3源于来自C2的VH(SEQ ID NO:200)。本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段可具有包括VL CDRs 1,2和3的VL和包括VH CDRs 1,2和3的VH，所述VL CDRs 1,2和3和所述VH CDRs 1,2和3分别源于C2的VL和VH。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段为C2的变体。所述C2变体可以具有源自C2的VL的变体，该VL的变体在SEQ ID NO：165中具有约5个氨基酸的替换、添加和/或缺失。所述C2变体可以具有源自C2的VH的变体，该VH的变体在SEQID NO：200中具有约5个氨基酸的替换、添加和/或缺失。氨基酸的替换添加和/或缺失可位于VH CDRs或VL CDRs中。在一些实施方案中，所述氨基酸的替换、添加和/或缺失不在CDRs中。在一些实施方案中，C2的变体具有至多约5个保守性氨基酸的替换。在一些实施方案中，C2的变体具有至多约3个保守性氨基酸的替换。
在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段是标记为C4(SEQID NO:378)的scFv。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段与SEQ ID NO:378的氨基酸序列具有至少约80％、约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、或约99％的同一性。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段具有源于C4的VL(SEQ ID NO:167)。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段具有源于C4的VH(SEQ ID NO:202)。本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段可同时具有源于C4的VL和VH。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段具有包括VL CDRs 1,2和3的VL，所述VL CDRs 1,2和3源于来自C4的VL(SEQ ID NO:167)。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段具有包括VH CDRs 1,2和3的VH，所述VH CDRs 1,2和3源于来自C4的VH(SEQ IDNO:202)。本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段可具有包括VL CDRs 1,2和3的VL和包括VH CDRs 1,2和3的VH，所述VL CDRs 1,2和3和所述VH CDRs 1,2和3分别源于C4的VL和VH。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段为C4的变体。所述C4变体可以具有源于C4的VL的变体，该VLL的变体在SEQ ID NO：167中具有约5个氨基酸的替换、添加和/或缺失。所述C4变体可以具有源于C4的VH的变体，该VH的变体在SEQ ID NO：202中具有约5个氨基酸的替换、添加和/或缺失。氨基酸替换，添加和/或缺失可位于VH CDRs或VLCDRs中。在一些实施方案中，所述氨基酸替换、添加和/或缺失不在CDRs中。在一些实施方案中，C4的变体具有至多约5个保守性氨基酸的替换。在一些实施方案中，C4的变体具有至多约3个保守性氨基酸的替换。
在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段是标记为C5(SEQ ID NO:379)的scFv。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段与SEQ ID NO:379的氨基酸序列具有至少约80％、约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、或约99％的同一性。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段具有源于C5的VL(SEQ ID NO:168)。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段具有源于C5的VH(SEQ ID NO:203)。本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段可同时具有源于C5的VL和VH。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段具有包括VL CDRs 1,2和3的VL，所述VL CDRs1,2和3源于来自C5的VL(SEQ ID NO:168)。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段具有包括VH CDRs 1,2和3的VH，所述VH CDRs 1,2和3源于来自C5的VH(SEQID NO:203)。本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段可具有包括VL CDRs 1,2和3的VL和包括VH CDRs 1,2和3的VH，所述VL CDRs 1,2和3和所述VH CDRs 1,2和3分别源于C5的VL和VH。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段为C5的变体。所述C5变体可以具有源于C5的VL的变体，该VL的变体在SEQ ID NO：168中具有约5个氨基酸的替换、添加和/或缺失。所述C5变体可以具有源于C5的VH的变体，该VH的变体在SEQ ID NO：203中具有约5个氨基酸的替换、添加和/或缺失。氨基酸替换，添加和/或缺失可位于VH CDRs或VL CDRs中。在一些实施方案中，所述氨基酸替换、添加和/或缺失不在CDRs中。在一些实施方案中，C5的变体具有至多约5个保守性氨基酸的替换。在一些实施方案中，C5的变体具有至多约3个保守性氨基酸的替换。
在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段是标记为C6(SEQ ID NO:380)的scFv。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段与SEQ ID NO:380的氨基酸序列具有至少约80％、约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、或约99％的同一性。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段具有源于C6的VL(SEQ ID NO:169)。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段具有源于C6的VH(SEQ ID NO:204)。本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段可同时具有源于C6的VL和VH。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段具有包括VL CDRs 1,2和3的VL，所述VLCDRs 1,2和3源于来自C6的VL(SEQ ID NO:169)。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段具有包括VH CDRs 1,2和3的VH，所述VH CDRs 1,2和3源于来自C6的VH(SEQ ID NO:204)。本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段可具有包括VL CDRs 1,2和3的VL和包括VH CDRs 1,2和3的VH，所述VL CDRs 1,2和3和所述VH CDRs 1,2和3分别源于C6的VL和VH。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段为C6的变体。所述C6变体可以具有源于C6的VL的变体，该VL的变体在SEQ ID NO：169中具有约5个氨基酸的替换、添加和/或缺失。所述C6变体可以具有源于C6的VH的变体，该VH的变体在SEQID NO：204中具有约5个氨基酸的替换、添加和/或缺失。氨基酸替换，添加和/或缺失可位于VH CDRs或VL CDRs中。在一些实施方案中，所述氨基酸替换、添加和/或缺失不在CDRs中。在一些实施方案中，C6的变体具有至多约5个保守性氨基酸的替换。在一些实施方案中，C6的变体具有至多约3个保守性氨基酸的替换。
在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段是标记为C7(SEQ ID NO:381)的scFv。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段与SEQ ID NO:381的氨基酸序列具有至少约80％、约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、或约99％的同一性。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段具有源于C7的VL(SEQ ID NO:170)。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段具有源于C7的VH(SEQ ID NO:205)。本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段可同时具有源于C7的VL和VH。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段具有包括VL CDRs 1,2和3的VL，所述VL CDRs1,2和3源于来自C7的VL(SEQ ID NO:170)。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段具有包括VH CDRs 1,2和3的VH，所述VH CDRs 1,2和3源于来自C7的VH(SEQID NO:205)。本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段可具有包括VL CDRs 1,2和3的VL和包括VH CDRs 1,2和3的VH，所述VL CDRs 1,2和3和所述VH CDRs 1,2和3分别源于C7的VL和VH。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段为C7的变体。所述C7变体可以具有源于C7的VL的变体，该VL的变体在SEQ ID NO：170中具有约5个氨基酸的替换、添加和/或缺失。所述C7变体可以具有源于C7的VH的变体，该VH的变体在SEQ ID NO：205中具有约5个氨基酸的替换、添加和/或缺失。氨基酸替换，添加和/或缺失可位于VH CDRs或VL CDRs中。在一些实施方案中，所述氨基酸替换、添加和/或缺失不在CDRs中。在一些实施方案中，C7的变体具有至多约5个保守性氨基酸的替换。在一些实施方案中，C7的变体具有至多约3个保守性氨基酸的替换。
在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段是标记为C9(SEQ ID NO:383)的scFv。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段与SEQ ID NO:383的氨基酸序列具有至少约80％、约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、或约99％的同一性。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段具有源于C9的VL(SEQ ID NO:172)。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段具有源于C9的VH(SEQ ID NO:207)。本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段可同时具有源于C9的VL和VH。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段具有包括VL CDRs 1,2和3的VL，所述VLCDRs 1,2和3源于来自C9的VL(SEQ ID NO:172)。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段具有包括VH CDRs 1,2和3的VH，所述VH CDRs 1,2和3源于来自C9的VH(SEQ ID NO:207)。本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段可具有包括VL CDRs 1,2和3的VL和包括VH CDRs 1,2和3的VH，所述VL CDRs 1,2和3和所述VH CDRs 1,2和3分别源于C9的VL和VH。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段为C9的变体。所述C9变体可以具有源于C9的VL的变体，该VL的变体在SEQ ID NO：172中具有约5个氨基酸的替换、添加和/或缺失。所述C9变体可以具有源于C9的VH的变体，该VH的变体在SEQID NO：207中具有约5个氨基酸的替换、添加和/或缺失。氨基酸替换，添加和/或缺失可位于VH CDRs或VL CDRs中。在一些实施方案中，所述氨基酸替换、添加和/或缺失不在CDRs中。在一些实施方案中，C9的变体具有至多约5个保守性氨基酸的替换。在一些实施方案中，C9的变体具有至多约3个保守性氨基酸的替换。
在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段是标记为C11(SEQ ID NO:385)的scFv。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段与SEQ ID NO:385的氨基酸序列具有至少约80％、约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、或约99％的同一性。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段具有源于C11的VL(SEQ ID NO:174)。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段具有源于C11的VH(SEQ ID NO:209)。本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段可同时具有源于C11的VL和VH。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段具有包括VL CDRs 1,2和3的VL，所述VLCDRs 1,2和3源于来自C11的VL(SEQ ID NO:174)。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段具有包括VH CDRs 1,2和3的VH，所述VH CDRs 1,2和3源于来自C11的VH(SEQ ID NO:209)。本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段可具有包括VLCDRs 1,2和3的VL和包括VH CDRs 1,2和3的VH，所述VL CDRs 1,2和3和所述VH CDRs 1,2和3分别源于C11的VL和VH。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段为C11的变体。所述C11变体可以具有源于C11的VL的变体，该VL的变体在SEQ ID NO：174中具有约5个氨基酸的替换、添加和/或缺失的VL变体。所述C11变体可以具有源于C11的VH的变体，该VH的变体在SEQ ID NO：209中具有约5个氨基酸的替换、添加和/或缺失。氨基酸替换，添加和/或缺失可位于VH CDRs或VL CDRs中。在一些实施方案中，所述氨基酸替换、添加和/或缺失不在CDRs中。在一些实施方案中，C11的变体具有至多约5个保守性氨基酸的替换。在一些实施方案中，C11的变体具有至多约3个保守性氨基酸的替换。
在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段是标记为C14(SEQ ID NO:388)的scFv。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段与SEQ ID NO:388的氨基酸序列具有至少约80％、约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、或约99％的同一性。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段具有源于C14的VL(SEQ ID NO:177)。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段具有源于C14的VH(SEQ ID NO:212)。本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段可同时具有源于C14的VL和VH。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段具有包括VL CDRs 1,2和3的VL，所述VLCDRs 1,2和3源于来自C14的VL(SEQ ID NO:177)。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段具有包括VH CDRs 1,2和3的VH，所述VH CDRs 1,2和3源于来自C14的VH(SEQ ID NO:212)。本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段可具有包括VLCDRs 1,2和3的VL和包括VH CDRs 1,2和3的VH，所述VL CDRs 1,2和3和所述VH CDRs 1,2和3分别源于C14的VL和VH。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段为C14的变体。所述C14变体可以具有源于C14的VL的变体，该VL的变体在SEQ ID NO：177中具有约5个氨基酸的替换、添加和/或缺失。所述C14变体可以具有源于C14的VH的变体，该VH的变体在SEQ ID NO：212中具有约5个氨基酸的替换、添加和/或缺失。氨基酸替换，添加和/或缺失可位于VH CDRs或VL CDRs中。在一些实施方案中，所述氨基酸替换、添加和/或缺失不在CDRs中。在一些实施方案中，C14的变体具有至多约5个保守性氨基酸的替换。在一些实施方案中，C14的变体具有至多约3个保守性氨基酸的替换。
在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段是标记为C15(SEQ ID NO:389)的scFv。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段与SEQ ID NO:389的氨基酸序列具有至少约80％、约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、或约99％的同一性。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段具有源于C15的VL(SEQ ID NO:178)。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段具有源于C15的VH(SEQ ID NO:213)。本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段可同时具有源于C15的VL和VH。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段具有包括VL CDRs 1,2和3的VL，所述VLCDRs 1,2和3源于来自C15的VL(SEQ ID NO:178)。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段具有包括VH CDRs 1,2和3的VH，所述VH CDRs 1,2和3源于来自C15的VH(SEQ ID NO:213)。本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段可具有包括VLCDRs 1,2和3的VL和包括VH CDRs 1,2和3的VH，所述VL CDRs 1,2和3和所述VH CDRs 1,2和3分别源于C15的VL和VH。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段为C15的变体。所述C15变体可以具有源于C15的VL的变体，该VL的变体在SEQ ID NO：178中具有约5个氨基酸的替换、添加和/或缺失。所述C15变体可以具有源于C15的VH的变体，该VH的变体在SEQ ID NO：213中具有约5个氨基酸的替换、添加和/或缺失。氨基酸替换，添加和/或缺失可位于VH CDRs或VL CDRs中。在一些实施方案中，所述氨基酸替换、添加和/或缺失不在CDRs中。在一些实施方案中，C15的变体具有至多约5个保守性氨基酸的替换。在一些实施方案中，C15的变体具有至多约3个保守性氨基酸的替换。
在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段是标记为C16(SEQ ID NO:390)的scFv。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段与SEQ ID NO:390的氨基酸序列具有至少约80％、约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、或约99％的同一性。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段具有源于C16的VL(SEQ ID NO:179)。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段具有源于C16的VH(SEQ ID NO:214)。本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段可同时具有源于C16的VL和VH。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段具有包括VL CDRs 1,2和3的VL，所述VLCDRs 1,2和3源于来自C16的VL(SEQ ID NO:179)。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段具有包括VH CDRs 1,2和3的VH，所述VH CDRs 1,2和3源于来自C16的VH(SEQ ID NO:214)。本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段可具有包括VLCDRs 1,2和3的VL和包括VH CDRs 1,2和3的VH，所述VL CDRs 1,2和3和所述VH CDRs 1,2和3分别源于C16的VL和VH。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段为C16的变体。所述C16变体可以具有源于C16的VL的变体，该VL的变体在SEQ ID NO：179中具有约5个氨基酸的替换、添加和/或缺失。所述C16变体可以具有源于C16的VH的变体，该VH的变体在SEQ ID NO：214中具有约5个氨基酸的替换、添加和/或缺失。氨基酸替换，添加和/或缺失可位于VH CDRs或VL CDRs中。在一些实施方案中，所述氨基酸替换、添加和/或缺失不在CDRs中。在一些实施方案中，C16的变体具有至多约5个保守性氨基酸的替换。在一些实施方案中，C16的变体具有至多约3个保守性氨基酸的替换。
在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段是标记为C17(SEQ ID NO:391)的scFv。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段与SEQ ID NO:391的氨基酸序列具有至少约80％、约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、或约99％的同一性。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段具有源于C17的VL(SEQ ID NO:180)。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段具有源于C17的VH(SEQ ID NO:215)。本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段可同时具有源于C17的VL和VH。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段具有包括VL CDRs 1,2和3的VL，所述VLCDRs 1,2和3源于来自C17的VL(SEQ ID NO:180)。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段具有包括VH CDRs 1,2和3的VH，所述VH CDRs 1,2和3源于来自C17的VH(SEQ ID NO:215)。本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段可具有包括VLCDRs 1,2和3的VL和包括VH CDRs 1,2和3的VH，所述VL CDRs 1,2和3和所述VH CDRs 1,2和3分别源于C17的VL和VH。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段为C17的变体。所述C17变体可以具有源于C17的VL的变体，该VL的变体在SEQ ID NO：180中具有约5个氨基酸的替换、添加和/或缺失。所述C17变体可以具有源于C17的VH的变体，该VH的变体是在SEQ ID NO：215中具有约5个氨基酸的替换、添加和/或缺失。氨基酸替换，添加和/或缺失可位于VH CDRs或VL CDRs中。在一些实施方案中，所述氨基酸替换、添加和/或缺失不在CDRs中。在一些实施方案中，C17的变体具有至多约5个保守性氨基酸的替换。在一些实施方案中，C17的变体具有至多约3个保守性氨基酸的替换。
在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段是标记为C18(SEQ ID NO:392)的scFv。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段与SEQ ID NO:392的氨基酸序列具有至少约80％、约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、或约99％的同一性。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段具有源于C18的VL(SEQ ID NO:181)。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段具有源于C18的VH(SEQ ID NO:216)。本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段可同时具有源于C18的VL和VH。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段具有包括VL CDRs 1,2和3的VL，所述VL CDRs 1,2和3源于来自C18的VL(SEQ ID NO:181)。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段具有包括VH CDRs 1,2和3的VH，所述VH CDRs 1,2和3源于来自C18的VH(SEQ ID NO:216)。本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段可具有包括VL CDRs 1,2和3的VL和包括VH CDRs 1,2和3的VH，所述VL CDRs 1,2和3和所述VH CDRs1,2和3分别源于C18的VL和VH。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段为C18的变体。所述C18变体可以具有源于C18的VL的变体，该VL的变体在SEQ ID NO：181中具有约5个氨基酸的替换、添加和/或缺失。所述C18变体可以具有源于C18的VH的变体，该VH的变体在SEQ ID NO：216中具有约5个氨基酸的替换、添加和/或缺失。氨基酸替换，添加和/或缺失可位于VH CDRs或VL CDRs中。在一些实施方案中，所述氨基酸替换、添加和/或缺失不在CDRs中。在一些实施方案中，C18的变体具有至多约5个保守性氨基酸的替换。在一些实施方案中，C18的变体具有至多约3个保守性氨基酸的替换。
在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段是标记为C25(SEQ ID NO:399)的scFv。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段与SEQ ID NO:399的氨基酸序列具有至少约80％、约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、或约99％的同一性。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段具有源于C25的VL(SEQ ID NO:188)。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段具有源于C25的VH(SEQ ID NO:223)。本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段可同时具有源于C25的VL和VH。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段具有包括VL CDRs 1,2和3的VL，所述VLCDRs 1,2和3源于来自C25(SEQ ID NO:188)的VL(SEQ ID NO:188)。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段具有包括VH CDRs 1,2和3的VH，所述VH CDRs1,2和3源于来自C25的VH(SEQ ID NO:223)。本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段可具有包括VL CDRs 1,2和3的VL和包括VH CDRs 1,2和3的VH，所述VL CDRs 1,2和3和所述VH CDRs 1,2和3分别源于C25的VL和VH。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段为C25的变体。所述C25变体可以具有源于C25的VL的变体，该VL的变体在SEQID NO：188中具有约5个氨基酸的替换、添加和/或缺失。所述C25变体可以具有源于C25的VH的变体，该VH的变体在SEQ ID NO：223中具有约5个氨基酸的替换、添加和/或缺失。氨基酸替换，添加和/或缺失可位于VH CDRs或VL CDRs中。在一些实施方案中，所述氨基酸替换、添加和/或缺失不在CDRs中。在一些实施方案中，C25的变体具有至多约5个保守性氨基酸的替换。在一些实施方案中，C25的变体具有至多约3个保守性氨基酸的替换。
在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段是标记为C26(SEQ ID NO:400)的scFv。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段与SEQ ID NO:400的氨基酸序列具有至少约80％、约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、或约99％的同一性。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段具有源于C26的VL(SEQ ID NO:189)。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段具有源于C26的VH(SEQ ID NO:224)。本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段可同时具有源于C26的VL和VH。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段具有包括VL CDRs 1,2和3的VL，所述VL CDRs 1,2和3源于来自C26的VL(SEQ ID NO:189)。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段具有包括VH CDRs 1,2和3的VH，所述VH CDRs 1,2和3源于来自C26的VH(SEQ ID NO:224)。本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段可具有包括VL CDRs 1,2和3的VL和包括VH CDRs 1,2和3的VH，所述VL CDRs 1,2和3和所述VH CDRs 1,2和3分别源于C26的VL和VH。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段为C26的变体。所述C26变体可以具有源于C26的VL的变体，该VL的变体在SEQ ID NO：189中具有约5个氨基酸的替换、添加和/或缺失。所述C26变体可以具有源于C26的VH的变体，该VH的变体在SEQ ID NO：224中具有约5个氨基酸的替换、添加和/或缺失。氨基酸替换，添加和/或缺失可位于VH CDRs或VL CDRs中。在一些实施方案中，所述氨基酸替换、添加和/或缺失不在CDRs中。在一些实施方案中，C26的变体具有至多约5个保守性氨基酸的替换。在一些实施方案中，C26的变体具有至多约3个保守性氨基酸的替换。
在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段是标记为C28(SEQ ID NO:402)的scFv。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段与SEQ ID NO:402的氨基酸序列具有至少约80％、约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、或约99％的同一性。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段具有源于C28的VL(SEQ ID NO:191)。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段具有源于C28的VH(SEQ ID NO:226)。本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段可同时具有源于C28的VL和VH。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段具有包括VL CDRs 1,2和3的VL，所述VL CDRs 1,2和3源于来自C28的VL(SEQ ID NO:191)。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段具有包括VH CDRs 1,2和3的VH，所述VH CDRs 1,2和3源于来自C28的VH(SEQ ID NO:226)。本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段可具有包括VL CDRs 1,2和3的VL和包括VH CDRs 1,2和3的VH，所述VL CDRs 1,2和3和所述VH CDRs1,2和3分别源于C28的VL和VH。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段为C28的变体。所述C28变体可以具有源于C28的VL的变体，该VL的变体是在SEQ IDNO：191中具有约5个氨基酸的替换、添加和/或缺失。所述C28变体可以具有源于C28的VH的变体，该VH的变体在SEQ ID NO：226中具有约5个氨基酸的替换、添加和/或缺失。氨基酸替换，添加和/或缺失可位于VH CDRs或VL CDRs中。在一些实施方案中，所述氨基酸替换、添加和/或缺失不在CDRs中。在一些实施方案中，C28的变体具有至多约5个保守性氨基酸的替换。在一些实施方案中，C28的变体具有至多约3个保守性氨基酸的替换。
在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段是标记为C29(SEQ ID NO:403)的scFv。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段与SEQ ID NO:403的氨基酸序列具有至少约80％、约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、或约99％的同一性。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段具有源于C29的VL(SEQ ID NO:192)。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段具有源于C29的VH(SEQ ID NO:227)。本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段可同时具有源于C29的VL和VH。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段具有包括VL CDRs 1,2和3的VL，所述VL CDRs 1,2和3源于来自C29的VL(SEQ ID NO:192)。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段具有包括VH CDRs 1,2和3的VH，所述VH CDRs 1,2和3源于来自C29的VH(SEQ ID NO:227)。本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段可具有包括VL CDRs 1,2和3的VL和包括VH CDRs 1,2和3的VH，所述VL CDRs 1,2和3和所述VH CDRs1,2和3分别源于C29的VL和VH。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段为C29的变体。所述C29变体可以具有源于C29的VL的变体，该VL的变体在SEQ ID NO：192中具有约5个氨基酸的替换、添加和/或缺失。所述C29变体可以具有源于C29的VH，该VH的变体是源于C29且在SEQ ID NO：227中具有约5个氨基酸的替换、添加和/或缺失。氨基酸替换，添加和/或缺失可位于VH CDRs或VL CDRs中。在一些实施方案中，所述氨基酸替换、添加和/或缺失不在CDRs中。在一些实施方案中，C29的变体具有至多约5个保守性氨基酸的替换。在一些实施方案中，C29的变体具有至多约3个保守性氨基酸的替换。
在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段是标记为C30(SEQ ID NO:404)的scFv。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段与SEQ ID NO:404的氨基酸序列具有至少约80％、约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、或约99％的同一性。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段具有源于C30的VL(SEQ ID NO:193)。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段具有源于C30的VH(SEQ ID NO:228)。本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段可同时具有源于C30的VL和VH。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段具有包括VL CDRs 1,2和3的VL，所述VL CDRs 1,2和3源于来自C30的VL(SEQ ID NO:193)。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段具有包括VH CDRs 1,2和3的VH，所述VH CDRs 1,2和3源于来自C30的VH(SEQ ID NO:228)。本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段可具有包括VL CDRs 1,2和3的VL和包括VH CDRs 1,2和3的VH，所述VL CDRs 1,2和3和所述VH CDRs1,2和3分别源于C30的VL和VH。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段为C30的变体。所述C30变体可以具有源于C30的VL的变体，该VL的变体是且在SEQ IDNO：193中具有约5个氨基酸的替换、添加和/或缺失。所述C30变体可以具有源于C30的VH的变体，该VH的变体是源于C30且在SEQ ID NO：228中具有约5个氨基酸的替换、添加和/或缺失。氨基酸替换，添加和/或缺失可位于VH CDRs或VL CDRs中。在一些实施方案中，所述氨基酸替换、添加和/或缺失不在CDRs中。在一些实施方案中，C30的变体具有至多约5个保守性氨基酸的替换。在一些实施方案中，C30的变体具有至多约3个保守性氨基酸的替换。
在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段是标记为C35(SEQ ID NO:409)的scFv。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段与SEQ ID NO:409的氨基酸序列具有至少约80％、约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、或约99％的同一性。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段具有源于C35的VL(SEQ ID NO:198)。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段具有源于C35的VH(SEQ ID NO:233)。本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段可同时具有源于C35的VL和VH。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段具有包括VL CDRs 1,2和3的VL，所述VL CDRs 1,2和3源于来自C35的VL(SEQ ID NO:198)。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段具有包括VH CDRs 1,2和3的VH，所述VH CDRs 1,2和3源于来自C35的VH(SEQ ID NO:233)。本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段可具有包括VL CDRs 1,2和3的VL和包括VH CDRs 1,2和3的VH，所述VL CDRs 1,2和3和所述VH CDRs1,2和3分别源于C35的VL和VH。在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123抗体或其抗原结合片段为C35的变体。所述C35变体可以具有源于C35的VL的变体，该VL的变体在SEQ ID NO：198中具有约5个氨基酸的替换、添加和/或缺失。所述C35变体可以具有源于C35的VH的变体，该VH的变体在SEQ ID NO：233中具有约5个氨基酸的替换、添加和/或缺失。氨基酸替换，添加和/或缺失可位于VH CDRs或VL CDRs中。在一些实施方案中，所述氨基酸替换、添加和/或缺失不在CDRs中。在一些实施方案中，C35的变体具有至多约5个保守性氨基酸的替换。在一些实施方案中，C35的变体具有至多约3个保守性氨基酸的替换。
在一些实施方案中，本发明也提供了与上述抗体或抗原结合片段竞争结合CD123(例如,人CD123)的抗体或抗原结合片段。“与另一种抗体竞争结合靶标”的抗体是指抑制(部分或完全)另一种抗体与靶标结合的抗体。可以使用已知的竞争实验(例如,
表面等离子体共振(SPR)分析)来确定两种抗体是否相互竞争以结合靶标，即一种抗体是否抑制另一种抗体与靶标的结合以及在何种程度上抑制另一种抗体与靶标的结合。在一些实施方案中，抗CD123抗体或抗原结合片段与另一个抗体或抗原结合片段竞争，并以至少50％、60％、70％、80％、90％或100％的比例抑制其与CD123的结合。竞争分析可如所描述的那样进行，例如，Ed Harlow and David Lane,Cold Spring Harb Protoc；2006；doi:l0.H0l/pdb.prot4277或者“Using Antibodies”(Ed Harlow and David Lane,ColdSpring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,NY,USA 1999)的第11章。
在一些实施方案中，本发明提供与C1竞争结合CD123的抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，本发明提供与C2竞争结合CD123的抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，本发明提供与C3竞争结合CD123的抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，本发明提供与C4竞争结合CD123的抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，本发明提供与C5竞争结合CD123的抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，本发明提供与C6竞争结合CD123的抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，本发明提供与C7竞争结合CD123的抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，本发明提供与C8竞争结合CD123的抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，本发明提供与C9竞争结合CD123的抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，本发明提供与C10竞争结合CD123的抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，本发明提供与C11竞争结合CD123的抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，本发明提供与C12竞争结合CD123的抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，本发明提供与C12竞争结合CD123的抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，本发明提供与C13竞争结合CD123的抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，本发明提供与C14竞争结合CD123的抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，本发明提供与C15竞争结合CD123的抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，本发明提供与C16竞争结合CD123的抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，本发明提供与C17竞争结合CD123的抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，本发明提供与C18竞争结合CD123的抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，本发明提供与C19竞争结合CD123的抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，本发明提供与C20竞争结合CD123的抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，本发明提供与C21竞争结合CD123的抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，本发明提供与C22竞争结合CD123的抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，本发明提供与C23竞争结合CD123的抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，本发明提供与C24竞争结合CD123的抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，本发明提供与C25竞争结合CD123的抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，本发明提供与C26竞争结合CD123的抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，本发明提供与C27竞争结合CD123的抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，本发明提供与C28竞争结合CD123的抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，本发明提供与C29竞争结合CD123的抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，本发明提供与C30竞争结合CD123的抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，本发明提供与C31竞争结合CD123的抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，本发明提供与C32竞争结合CD123的抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，本发明提供与C33竞争结合CD123的抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，本发明提供与C34竞争结合CD123的抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，本发明提供与C35竞争结合CD123的抗体或抗原结合片段。
本发明还考虑了与本发明所述的重组、单克隆、嵌合、人源化和人抗体或其抗体片段基本上同源的其他变体和等同物。在一些实施方案中，需要提高抗体的结合亲和力。在一些实施方案中，需要调节抗体的生物学特性，包括但不限于特异性、热稳定性、表达水平、效应子功能、糖基化、免疫原性和/或溶解度。本领域的技术人员应当了解的是，氨基酸变化可能改变抗体的翻译后过程，如改变糖基化位点的数量或位置或改变膜锚定特征。
变异可能是编码抗体或多肽的一个或多个核苷酸的替换、缺失或插入，导致与天然抗体或多肽序列相比，氨基酸序列发生改变。在一些实施方案中，氨基酸替换是用另一具有相似结构和/或化学性质的氨基酸替换一氨基酸的结果，例如用丝氨酸替换亮氨酸，例如，保守性氨基酸替换。插入或缺失可以在大约1至5个氨基酸的范围内。在一些实施方案中，所述替换、缺失或插入包括相对于亲本分子少于25个氨基酸的替换、少于20个氨基酸的替换、少于15个氨基酸的替换、少于10个氨基酸的替换、少于5个氨基酸的替换、少于4个氨基酸的替换、少于3个氨基酸的替换，或少于2个氨基酸的替换。在一些实施方案中，可通过系统地在序列中进行插入、删除或替换，并检测所得变体蛋白与亲本蛋白相比的活性，确定具有生物学用途和/或相关性的氨基酸序列变异。
本领域已知的是，抗体的恒定区介导若干效应子功能，并且这些效应子功能可以根据抗体的同种型而变化。例如，补体的C1区与IgG或IgM抗体的Fc区结合(与抗原结合)可激活补体系统。补体的激活在细胞病原体的调理作用和溶解中很重要。补体的激活也刺激炎症反应，并可能参与自身免疫性超敏反应。此外，抗体的Fc区可以结合表达Fc受体(FcR)的细胞。有许多Fc受体对不同类别的抗体具有特异性，包括IgG(γ受体)，IgE(ε受体)，IgA(α受体)和IgM(μ受体)。抗体与细胞表面Fc受体的结合触发了许多重要和多样的生物学反应，包括吞噬和破坏抗体包被的颗粒，清除免疫复合物，杀伤细胞溶解抗体包被的靶细胞(称为抗体依赖性细胞细胞毒性或ADCC)，炎症介质的释放，胎盘转移和控制免疫球蛋白的产生。在一些实施方案中，本发明所述的抗CD123抗体或抗原结合片段包含人IgA抗体的至少一个恒定区。在一些实施方案中，本发明所述的抗CD123抗体或抗原结合片段包含人IgD抗体的至少一个恒定区。在一些实施方案中，本发明所述的抗CD123抗体或抗原结合片段包含人IgE抗体的至少一个恒定区。在一些实施方案中，本发明所述的抗CD123抗体或抗原结合片段包含人IgG抗体的至少一个恒定区。在一些实施方案中，本发明所述的抗CD123抗体或抗原结合片段包含人IgM抗体的至少一个恒定区。在一些实施方案中，本发明所述的抗CD123抗体或抗原结合片段包含人IgG1抗体的至少一个恒定区。在一些实施方案中，本发明所述的抗CD123抗体或抗原结合片段包含人IgG2抗体的至少一个恒定区。在一些实施方案中，本发明所述的抗CD123抗体或抗原结合片段包含人IgG3抗体的至少一个恒定区。在一些实施方案中，本发明所述的抗CD123抗体或抗原结合片段包含人IgG4抗体的至少一个恒定区。
在一些实施方案中，在本发明所述的抗CD123抗体或抗原结合片段中，至少一个或多个恒定区被修饰或删除。在一些实施方案中，所述抗体包括对三个重链恒定区(CH1、CH2或CH3)中的一个或多个和/或轻链恒定区(CL)的修饰。在一些实施方案中，所述修饰抗体的重链恒定区包含至少一个人恒定区。在一些实施方案中，所述修饰抗体的重链恒定区包含一个以上的人恒定区。在一些实施方案中，对恒定区的修饰包括在一个或多个区域中添加、删除或替换一个或多个氨基酸。在一些实施方案中，一个或多个区域从所述修饰抗体的恒定区部分或完全删除。在一些实施方案中，从抗体(ΔCH2构建体)中去除整个CH2结构域。在一些实施方案中，缺失的恒定区被短氨基酸间隔子替代，所述短氨基酸间隔子提供了通常由缺失的恒定区赋予的一些分子柔韧性。在一些实施方案中，修饰的抗体包含直接与抗体的铰链区融合的CH3结构域。在一些实施方案中，修饰的抗体包含插入在铰链区与，修饰的CH2和/或CH3结构域之间的肽间隔子。
在一些实施方案中，抗CD123抗体或抗原结合片段包括Fc区。在一些实施方案中，所述Fc区通过铰链融合。所述铰链可以是IgG1铰链、IgG2铰链或IgG3铰链。人IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的Fc区的氨基酸序列对本领域普通技术人员而言是已知的。在某些情况下，已在天然抗体中鉴定出具有氨基酸变异的Fc区域。在一些实施方案中，所述修饰的抗体(例如，修饰的Fc区)提供了改变的效应子功能，进而影响所述抗体的生物学特征。例如，在一些实施方案中，恒定区的缺失或失活(通过点突变或其他方式)降低了所述修饰抗体的Fc受体在循环中的结合。在一些实施方案中，所述恒定区修饰降低了抗体的免疫原性。在一些实施方案中，所述恒定区修饰增加了抗体的血清半衰期。在一些实施方案中，所述恒定区修饰降低了抗体的血清半衰期。在一些实施方案中，所述恒定区修饰降低或去除抗体的ADCC和/或补体依赖性细胞毒性(CDC)。在一些实施方案中，具有相应IgG2或IgG4残基的人IgG1 Fc区中特异性氨基酸替换降低了所述修饰抗体中的效应子功能(例如，ADCC和CDC)。在一些实施方案中，抗体不具有一种或多种效应子功能(例如，“无效应子”抗体)。在一些实施方案中，所述抗体不具有ADCC活性和/或不具有CDC活性。在一些实施方案中，所述抗体不结合Fc受体和/或补体因子。在一些实施方案中，所述抗体不具有效应子功能。在一些实施方案中，所述恒定区修饰增加或提升抗体的ADCC和/或CDC。在一些实施方案中，对恒定区进行修饰，以消除二硫键或寡糖部分。在一些实施方案中，对恒定区进行修饰，以添加/替换一种或多种氨基酸以提供一种或多种细胞毒素、寡糖或碳水化合物附着位点。在一些实施方案中，抗CD123抗体或抗原结合片段包含变体Fc区，与天然Fc区相比，所述变体Fc区具有特定氨基酸的替换。在一些实施方案中，本发明所述的抗CD123抗体或抗原结合片段包含IgG1重链恒定区，所述IgG1重链恒定区包含选自由K214R、L234A、L235E、G237A、D356E和L358M(根据EU编号)组成的群组中的一个或多个氨基酸替换。在一些实施方案中，所述IgG1重链恒定区包含选自由K214R、L234A、L235E、G237A、A330S、P331S、D356E和L358M(根据EU编号)组成的群组中的一个或多个氨基酸替换。在一些实施方案中，所述IgG1重链恒定区包含选自由K214R、C226S、C229S和P238S(根据EU编号)组成的群组中的一个或多个氨基酸替换。在一些实施方案中，所述IgG1重链恒定区包含选自由K214R、D356E和L358M(根据EU编号)组成的群组中的一个或多个氨基酸替换。在一些实施方案中，所述IgG1重链恒定区包含选自由S131C、K133R、G137E、G138S、Q196K、I199T、N203D、K214R、C226S、C229S和P238S(根据EU编号)组成的群组中的一个或多个氨基酸替换。
在一些实施方案中，变体可以包括在抗体或多肽的氨基和/或羧基末端添加氨基酸残基。添加的氨基酸残基的长度范围可以为一个残基到一百个或更多的残基。在一些实施方案中，变体包含N-末端甲硫氨酰残基。在一些实施方案中，所述变体包含添加的多肽/蛋白质(例如，Fc区)以产生融合蛋白。在一些实施方案中，将变体设计为可检测的，并且可以包括可检测的标记和/或蛋白质(例如，荧光标签或酶)。
可以使用本领域已知的方法产生本发明所述的变体抗体或抗原结合片段，包括但不限于定点诱变、丙氨酸扫描诱变和PCR诱变。
在一些实施方案中，本发明所公开的抗CD123抗体或抗原结合片段的变体可以保持与亲本抗体或抗原结合片段相似程度、相同程度或更高程度的结合CD123的能力。在一些实施方案中，变体可以与亲本抗体或抗原结合片段在氨基酸序列上有至少约80％、约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％，约99％或更多的同一性。在某些实施方案中，抗CD123抗体或抗原结合片段的变体包含具有一个或多个保守性氨基酸替换的亲本抗CD123抗体或抗原结合片段的氨基酸序列。保守性氨基酸替换是本领域已知的，并且包括将具有某些物理和/或化学性质的一个氨基酸替换为具有相同或相似化学或物理性质的另一个氨基酸。
在某些实施方案中，抗CD123抗体或抗原结合片段的变体包含具有一个或多个非保守性氨基酸替换的亲本抗CD123抗体或抗原结合片段的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗CD123抗体或抗原结合片段的变体包含具有一个或多个非保守性氨基酸替换的亲本结合抗体或抗原结合片段的氨基酸序列，其中，所述一个或多个非保守性氨基酸替换不干扰或抑制所述变体的一种或多种生物活性(例如，CD123结合)。在某些实施方案中，所述一个或多个保守性氨基酸替换和/或所述一个或多个非保守性氨基酸替换可增强所述变体的生物活性，使得所述功能性变体的生物活性与所述亲本结合部分相比有所增加。
在一些实施方案中，所述变体可在结合部分的CDRs(例如，VH CDR1、VH CDR2、VHCDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3)中具有1、2、3、4或5个氨基酸替换。
在一些实施方案中，本发明所述的抗CD123抗体或抗原结合片段具有天然的或通过干预进行的化学修饰。在一些实施方案中，所述抗CD123抗体或抗原结合片段已经通过糖基化、乙酰化、聚乙二醇化、磷酸化、酰胺化、通过已知的保护/封闭基团衍生化、蛋白水解切割和/或与细胞配体或其他蛋白质连接进行化学修饰。多种化学修饰中的任何一种都可以通过已知技术进行。所述抗CD123抗体或抗原结合片段可包含一种氨基酸的一种或多种类似物(包括，例如，非天然氨基酸)，以及本领域已知的其他修饰。
在一些实施方案中，抗CD123抗体或抗原结合片段(例如，抗体)以约1μM或更小、约100nM或更小、约40nM或更小、约20nM或更小、约10nM或更小、约1nM或更小、约0.1nM或更小、50pM或更小、10pM或更小、或1pM或更小的解离常数(KD)结合CD123(例如，人CD123)。在一些实施方案中，抗CD123抗体或抗原结合片段以约20nM或更小的KD结合CD123(例如，人CD123)。在一些实施方案中，抗CD123抗体或抗原结合片段以约10nM或更小的KD结合CD123(例如，人CD123)。在一些实施方案中，抗CD123抗体或抗原结合片段以约1nM或更小的KD结合CD123(例如，人CD123)。在一些实施方案中，抗CD123抗体或抗原结合片段以约0.5nM或更小的KD结合CD123(例如，人CD123)。在一些实施方案中，抗CD123抗体或抗原结合片段以约0.1nM或更小的KD结合CD123(例如，人CD123)。在一些实施方案中，抗CD123抗体或抗原结合片段以约50pM或更小的KD结合CD123(例如，人CD123)。在一些实施方案中，抗CD123抗体或抗原结合片段以约25pM或更小的KD结合CD123(例如，人CD123)。在一些实施方案中，抗CD123抗体或抗原结合片段以约10pM或更小的KD结合CD123(例如，人CD123)。在一些实施方案中，抗CD123抗体或抗原结合片段以约1pM或更小的KD结合CD123(例如，人CD123)。在一些实施方案中，CD123结合剂(例如,抗体)的解离常数是使用固定在Biacore芯片上的CD123蛋白和流过芯片的结合剂测定的解离常数。在一些实施方案中，CD123结合剂(例如,抗体)的解离常数是使用Biacore芯片上抗人IgG抗体捕获的结合剂和流经芯片的可溶性CD123测定的解离常数。
本发明所述的抗CD123抗体或抗原结合片段的物理、化学和/或生物学特性可以通过本领域已知的各种方法进行分析。在一些实施方案中，测试了抗CD123抗体结合CD123(例如，人CD123)的能力。结合分析包括但不限于SPR(例如，Biacore)、ELISA和FACS。此外，可以评估抗体的溶解度、稳定性、热稳定性、粘度、表达水平、表达质量和/或纯化效率。
表位作图是一种识别抗体结合的靶蛋白上的结合位点，区域或表位的方法。用于在靶蛋白上定位表位的多种方法是本领域已知的。这些方法包括诱变(包括但不限于，鸟枪法诱变、定点诱变)和丙氨酸扫描；结构域或片段扫描；肽扫描(例如，Pepscan技术)；展示方法(例如，噬菌体展示、微生物展示、和核糖体/mRNA展示)；涉及蛋白水解和质谱的方法；和结构测定法(例如，X射线晶体学和NMR)。在一些实施方案中，本发明所述的抗CD123抗体或抗原结合片段使用包括但不限于N-末端测序、氨基酸分析、HPLC、质谱、离子交换色谱法和木瓜蛋白酶消化进行表征。
在一些实施方案中，抗CD123抗体或抗原结合片段与细胞毒性药物或细胞毒性部分偶联。在一些实施方案中，抗CD123抗体或抗原结合片段与细胞毒性药物偶联，以形成ADC(抗体-药物偶联物)。在一些实施方案中，所述细胞毒性部分是化学治疗剂，包括但不限于，甲氨蝶呤、阿霉素/亚德里亚霉素、美法仑、丝裂霉素C、苯丁酸氮芥、倍癌霉素、柔红霉素、吡咯并苯二氮卓类(PBDs)或其他嵌入剂。在一些实施方案中，所述细胞毒性部分是微管抑制剂，包括但不限于：澳瑞他汀(auristatins)、美登素类化合物(maytansinoids)(例如，DM1和DM4)和微管菌素(tubulysins)。在一些实施方案中，所述细胞毒性部分是细菌、真菌、植物或动物来源的酶活性毒素或其片段，包括但不限于白喉A链、白喉毒素的非结合活性片段、外毒素A链、蓖麻毒素A链、相思子毒素A链、蒴莲根毒素A链，α-八叠球菌素(sarcin)，油桐(Aleurites fordii)毒蛋白，香石竹(dianthin)毒蛋白，美洲商陆(Phytolacaamericana)毒蛋白(PAPI，PAPII和PAP-S)，苦瓜(Momordica charantia)抑制剂，麻疯树毒蛋白(curcin)，巴豆毒蛋白(crotin)，肥皂草(sapaonaria officinalis)抑制剂，白树毒素(gelonin)，丝林霉素(mitogellin)，局限曲菌素(restrictocin)，酚霉素(phenomycin)，依诺霉素(enomycin)和单端孢菌素(tricothecenes)。在一些实施方案中，抗体与一个或多个小分子毒素偶联，例如卡利奇霉素(calicheamicins)、美登素类化合物(maytansinoids)、Trichothenes和CC1065。
在一些实施方案中，本发明所述的抗CD123抗体或抗原结合片段与可检测物质或分子偶联，使所述试剂用于诊断和/或检测。可检测物质可以包括但不限于酶(例如，辣根过氧化物酶，碱性磷酸酶，β-半乳糖苷酶和乙酰胆碱酯酶)；辅基(例如，生物素和黄素)；荧光材料(例如,伞形酮，荧光素，异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate，FITC)，罗丹明，异硫氰酸四甲基罗丹明(tetramethylrhodamine isothiocyanate，TRITC)，二氯三嗪胺荧光素(dichlorotriazinylamine fluorescein)，丹磺酰氯，花青素(Cy3)和藻红蛋白)；生物发光材料(例如，荧光素酶)；放射性材料(例如，212Bi、14C、57Co、51Cr、67Cu、18F、68Ga、67Ga、153Gd、159Gd、68Ge、3H、166Ho、131I、125I、123I、121I、115In、113In、112In、111In、140La、177Lu、54Mn、99Mo、32P、103Pd、149Pm、142Pr、186Re、188Re、105Rh、97Ru、35S、47Sc、75Se、153Sm、113Sn、117Sn、85Sr、99mTc、201Ti、133XE、90Y、69Yb、175Yb、65Zn)；正电子发射金属；和磁性金属离子正电子发射金属；和磁性金属离子。
本发明所述的抗CD123抗体或抗原结合片段可连接到固体载体上。这种固体载体包括但不限于玻璃、纤维素、聚丙烯酰胺、尼龙、聚苯乙烯、聚氯乙烯或聚丙烯。在一些实施方案中，在免疫分析中使用固定的抗CD123抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，使用固定的抗CD123抗体或抗原结合片段纯化靶抗原(例如，人CD123)。
5.3 CARs,TCRs和基因工程免疫效应细胞
本发明所述的抗CD123抗体或抗原结合片段可用作嵌合抗原受体(CAR)或T细胞受体(TCR)的一部分，所述嵌合抗原受体(CAR)或T细胞受体(TCR)在癌症治疗的免疫效应细胞中表达。因此，本发明还提供了特异性结合CD123(例如，人CD123)的CARs或TCRs、表达所述CARs或TCRs的免疫效应细胞以及所述免疫效应细胞的用途。
5.3.1 TCRs
本发明提供了特异性结合CD123的T细胞受体(TCR)(“CD123 TCR”)。T细胞受体(TCRs)是抗原特异性分子，负责识别在APCs表面或任何有核细胞表面的MHC产物的背景下出现的抗原肽。该系统通过其TCRs赋予T细胞识别由细胞表达的整个细胞内抗原阵列(包括病毒蛋白)的潜在能力，这些抗原被加工成短肽，结合到细胞内MHC分子上，并作为肽-MHC复合物传递到表面。该系统允许外源蛋白(如变异的癌抗原或病毒蛋白)或异常表达的蛋白作为T细胞的靶标(例如,Davis and Bjorkman(1988)Nature,334,395-402；Davis et al.(1998)Annu Rev Immunol,16,523-544)。
TCR和肽-MHC复合物的相互作用可以驱动T细胞进入不同的激活状态，这取决于结合的亲和力(或解离率)。TCR识别过程允许T细胞通过提供多样的TCRs库来区分正常、健康细胞和例如通过病毒或恶性肿瘤转化的细胞，其中很有可能存在一个或多个TCRs，其与结合在MHC分子上的外源肽的结合亲和力高于刺激T细胞活性的阈值(Manning and Kranz(1999)Immunology Today,20,417-422)。
经体外培养鉴定的从人类或小鼠T细胞克隆中分离出的野生型TCR已被证明具有相对较低的结合亲和力(KD＝1-300μΜ)(Davis et al.(1998)Annu Rev Immunol,16,523-544)。这在一定程度上是因为胸腺内发育的T细胞对自身肽-MHC配体进行了阴性选择(耐受性诱导)，因此使亲和力过高的T细胞被清除(Starr et al.(2003)Annu Rev Immunol，21,139-76)。为了补偿这些相对较低的亲和力，T细胞进化出一种共受体系统，其中细胞表面分子CD4和CD8与MHC分子(分别为II类和I类)结合，并与TCR协同介导信号传导活性。CD8在这一过程中特别有效，允许具有非常低亲和力的TCRs(例如，KD＝300μM)介导强大的抗原特异性活性。
定向进化可用于生成对特定肽-MHC复合物具有更高亲和力的TCRs。可以使用的方法包括酵母菌展示(Holler et al.(2003)Nat Immunol,4,55-62；Holler et al.(2000)Proc Natl Acad Sci U S A,97,5387-92)、噬菌体展示(Li et al.(2005)NatBiotechnol,23,349-54)和T细胞展示(Chervin et al.(2008)J Immunol Methods,339,17584)。所有三种方法都涉及改造或修饰表现出野生型TCR的正常、低亲和力的TCR，以增加对同源肽-MHC复合物(T细胞特异性的原始抗原)的亲和力。
因此，在一些实施方案中，本发明提供的是包含本发明所述抗CD123抗体或抗原结合片段的TCRs。所述抗CD123抗体或其抗原结合片段可以是本发明所述的任何抗CD123抗体或抗原结合片段。出于说明的目的，在一些实施方案中，本发明提供的TCRs可以包括具有VL和VH的抗CD123抗体或抗原结合片段，其中，VL包括VL CDR1,CDR2和CDR3，VH包括VH CDR1,CDR2和CDR3，所述VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1,VH CDR2和VH CDR3分别具有的氨基酸序列为(1)SEQ ID Nos:3、33、61、91、112和136；(2)SEQ ID Nos:17、45、75、89、122和149；(3)SEQ ID Nos:7、37、66、95、116和140；(4)SEQ ID Nos:18、32、76、100、123和150；(5)SEQID Nos:23、50、82、99、129和157；(6)SEQ ID Nos:24、51、83、106、128和158；(7)SEQ IDNos:8、38、67、96、117和141；(8)SEQ ID Nos:4、34、62、89、110和134；(9)SEQ ID Nos:25、52、84、107、130和159；(10)SEQ ID Nos:26、53、85、95、116和160；(11)SEQ ID Nos:2、32、60、90、111和135；(12)SEQ ID Nos:17、46、77、101、124和151；(13)SEQ ID Nos:27、54、86、105、131和161；(14)SEQ ID Nos:9、39、68、97、118和142；(15)SEQ ID Nos:10、40、69、98、119和143；(16)SEQ ID Nos:22、49、81、105、128和156；(17)SEQ ID Nos:5、35、63、92、113和137；(18)SEQ ID Nos:1、30、64、93、114和138；(19)SEQ ID Nos:11、41、70、91、120和144；(20)SEQ ID Nos:1、31、59、89、110和134；(21)SEQ ID Nos:19、47、78、102、125和152；(22)SEQ ID Nos:28、55、87、108、132和162；(23)SEQ ID Nos:12、39、71、96、117和145；(24)SEQID Nos:13、42、72、95、116和146；(25)SEQ ID Nos:1、30、57、89、110和134；(26)SEQ IDNos:20、48、79、103、126和153；(27)SEQ ID Nos:14、43、67、96、117和141；(28)SEQ ID Nos:1、30、58、89、110和134；(29)SEQ ID Nos:2、32、60、90、111和135；(30)SEQ ID Nos:15、44、73、99、121和147；(31)SEQ ID Nos:29、56、88、109、133和163；(32)SEQ ID Nos:22、49、81、104、127和155；(33)SEQ ID Nos:16、42、74、95、116和148；(34)SEQ ID Nos:6、36、65、94、115和139；或(35)SEQ ID Nos:21、45、80、89、122和154。在一些实施方案中，本发明提供的TCRs可以包括抗CD123抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段是命名为C1、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9、C10、C11、C12、C13、C14、C15、C16、C17、C18、C19、C20、C21、C22、C23、C24、C25、C26、C27、C28、C29、C30、C31、C32、C33、C34或C35的人scFv。在一些实施方案中，本发明提供的CARs可以包括C5。在一些实施方案中，本发明提供的CARs可以包括C7。在一些实施方案中，本发明提供的CARs可以包括C11。
在一些实施方案中，本发明提供的所述TCRs包括α链和β链。TCRα链和β链的恒定区分别由TRAC和TRBC编码。人TRAC可以具有与UniProtKB/Swiss-Prot No.:P01848.2(登记号:P01848.2 GI:1431906459)对应的氨基酸序列。人TRBC可以具有与GenBank sequenceALC78509.1(登记号:ALC78509.1 GI:924924895)对应的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的TCRs包括TCRα链，所述TCRα链包括本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，本发明提供的TCRs包括TCRβ链，所述TCRβ链包括本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，所述TCR包括γ链和δ链。TCRγ链和δ链的恒定区分别由TRGC和TRDC编码。人TRGC可以具有与UniProtKB/Swiss-Prot:P0CF51.1(登记号:P0CF51.1 GI:294863156)或UniProtKB/Swiss-Prot:P03986.2(登记号:P03986.2 GI:1531253869)对应的氨基酸序列。人TRDC可以具有与UniProtKB/Swiss-Prot:B7Z8K6.2(登记号:B7Z8K6.2 GI:294863191)对应的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的TCRs包括TCRγ链，所述TCRγ链包括本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，本发明提供的TCRs包括TCRδ链，所述TCRδ链包括本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段。
5.3.2 CARs
CARs是提供抗原结合和免疫效应细胞激活功能的工程受体。CARs可用于将抗体(如单克隆抗体)的特异性移植到免疫效应细胞(例如，T细胞、NK细胞或巨噬细胞)上。CAR可以以HLA非依赖性方式将免疫效应细胞(例如，T细胞)重新靶向肿瘤表面抗原(Sadelain etal.,Nat.Rev.Cancer.3(1):35-45(2003)；Sadelain et al.,Cancer Discovery 3(4):388-398(2013)；Rafiq and Brentjens(2016)。Nat Rev Clin Oncol 13(6):370-383)。CAR分子的典型结构包括胞外抗原结合结构域(例如，scFv)、间隔区、跨膜结构域(TM)和胞内信号传导结构域。根据细胞内共刺激信号的存在，表达CAR的T细胞(“CART”s)可分为三代。CAR的胞外抗原结合结构域通常来源于单克隆抗体(mAb)或受体或其配体。CARs的抗原结合触发细胞内域内免疫受体酪氨酸激活基序(ITAMs)的磷酸化，启动细胞溶解诱导、细胞因子分泌和增殖所需的信号级联。
在一些实施方案中，本发明提供的CARs特异性结合CD123(“CD123CAR”)。在一些实施方案中，CAR可以是“第一代”、“第二代”或“第三代”CAR(参见，例如，Sadelain et al.,Cancer Discov.3(4):388-398(2013)；Jensen et al.,Immunol.Rev.257:127-133(2014)；Sharpe et al.,Dis.Model Mech.8(4):337-350(2015)；June et al(2018),Science 359(6382):1361-1365)。
“第一代”CARs通常由胞外抗原结合结构域组成，例如，单链可变区片段(scFv)，胞外抗原结合结构域融合到跨膜结构域，跨膜结构域融合到T细胞受体链的胞质/胞内结构域。“第一代”CARs通常具有来自CD3ζ-链的胞内结构域，D3ζ-链是内源性T细胞受体(TCRs)信号的初级递质。“第一代”CARs可提供de novo抗原识别，并且通过单个融合分子中的CD3ζ链信号传导结构域引起CD4+T细胞和CD8+T细胞的激活，而不依赖于于HLA介导的抗原呈递。“第二代”CARs包括与胞内信号传导结构域和共刺激结构域融合的癌症抗原结合结构域，该胞内信号传导结构域能够激活免疫效应细胞(例如T细胞)，该共刺激结构域旨在增强免疫效应细胞(例如T细胞)效力和持久性(Sadelain et al.,Cancer Discov.3:388-398(2013))。因此，CAR设计可以将抗原识别和信号转导结合起来，这两种功能在生理上由两个独立的复合物(TCR异源二聚体和CD3复合物)承担。“第二代”CARs包括来自各种共刺激受体的胞内结构域，例如CD28、4-1BB、ICOS、OX40等，位于CAR的胞质尾部以向细胞提供额外的信号。“第二代”CARs既提供共刺激(例如，通过CD28或4-1BB结构域)，又提供激活(例如,通过CD3ζ信号传导结构域)。研究表明，“第二代”CARs可提高T细胞的抗肿瘤活性。2017年，FDA批准了两种抗CD19的CAR T细胞产品，用于治疗复发性前体B细胞急性淋巴细胞白血病(B-ALL)和B细胞非霍奇金淋巴瘤。“第三代”CARs提供多种共刺激(例如，通过同时包含CD28和4-1BB的结构域)，以及激活(例如,通过包含CD3δ激活结构域)。
因此，本发明提供了特异性结合CD123的CARs，其从N-末端到C-末端包括：(a)CD123结合结构域，所述CD123结合结构域包括本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段；(b)跨膜结构域；和(C)胞质结构域。
所述抗CD123抗体或其抗原结合片段可以是本发明所述的任何抗CD123抗体或抗原结合片段。出于说明的目的，在一些实施方案中，本发明提供的CARs可以包括具有VL和VH的抗CD123抗体或抗原结合片段，其中，VL包括VL CDR1,CDR2和CDR3，VH包括VH CDR1,CDR2和CDR3，VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1,VH CDR2和VH CDR3分别具有的氨基酸序列为(1)SEQ ID NOs:3、33、61、91、112和136；(2)SEQ ID Nos:17、45、75、89、122和149；(3)SEQID Nos:7、37、66、95、116和140；(4)SEQ ID Nos:18、32、76、100、123和150；(5)SEQ ID Nos:23、50、82、99、129和157；(6)SEQ ID Nos:24、51、83、106、128和158；(7)SEQ ID Nos:8、38、67、96、117和141；(8)SEQ ID Nos:4、34、62、89、110和134；(9)SEQ ID Nos:25、52、84、107、130和159；(10)SEQ ID Nos:26、53、85、95、116和160；(11)SEQ ID Nos:2、32、60、90、111和135；(12)SEQ ID Nos:17、46、77、101、124和151；(13)SEQ ID Nos:27、54、86、105、131和161；(14)SEQ ID Nos:9、39、68、97、118和142；(15)SEQ ID Nos:10、40、69、98、119和143；(16)SEQ ID Nos:22、49、81、105、128和156；(17)SEQ ID Nos:5、35、63、92、113和137；(18)SEQ ID Nos:1、30、64、93、114和138；(19)SEQ ID Nos:11、41、70、91、120和144；(20)SEQ IDNos:1、31、59、89、110和134；(21)SEQ ID Nos:19、47、78、102、125和152；(22)SEQ ID Nos:28、55、87、108、132和162；(23)SEQ ID Nos:12、39、71、96、117和145；(24)SEQ ID Nos:13、42、72、95、116和146；(25)SEQ ID Nos:1、30、57、89、110和134；(26)SEQ ID Nos:20、48、79、103、126和153；(27)SEQ ID Nos:14、43、67、96、117和141；(28)SEQ ID Nos:1、30、58、89、110和134；(29)SEQ ID Nos:2、32、60、90、111和135；(30)SEQ ID Nos:15、44、73、99、121和147；(31)SEQ ID Nos:29、56、88、109、133和163；(32)SEQ ID Nos:22、49、81、104、127和155；(33)SEQ ID Nos:16、42、74、95、116和148；(34)SEQ ID Nos:6、36、65、94、115和139；或(35)SEQ ID Nos:21、45、80、89、122和154。在一些实施方案中，本发明提供的CARs可以包括抗CD123抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段是命名为C1、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9、C10、C11、C12、C13、C14、C15、C16、C17、C18、C19、C20、C21、C22、C23、C24、C25、C26、C27、C28、C29、C30、C31、C32、C33、C34或C35的人scFv。在一些实施方案中，本发明提供的CARs可以包括C5。在一些实施方案中，本发明提供的CARs可以包括C7。在一些实施方案中，本发明提供的CARs可以包括C11。
在一些实施方案中，本发明提供的所述CARs的跨膜结构域包括跨越至少一部分膜的疏水性α螺旋。不同的跨膜结构域导致不同的受体稳定性。抗原识别后，受体聚集并将信号传递到细胞。在一个实施方案中，本发明提供的CAR的跨膜结构域可来源于免疫效应细胞中自然表达的蛋白或多肽。源于蛋白或多肽的跨膜结构域是指所述跨膜结构域包含所述蛋白质或多肽的整个跨膜区域或其片段。在一些实施方案中，本发明提供的所述CAR具有来源于CD8,CD28,CD3ζ,CD4,4-1BB,OX40,ICOS,CTLA-4,PD-1,LAG-3,2B4,BTLA,T细胞受体(TCR)α链,TCRβ链,或TCRζ链,CD3ε,CD45,CD5,CD8,CD9,CD16,CD22,CD33,CD37,CD64,CD80,CD86,CD134,CD154,或免疫效应细胞中表达的其他多肽，的跨膜结构域。在一些实施方案中，本发明提供的所述CARs的跨膜结构域包括CD8,CD28,CD3ζ,CD4,4-1BB,OX40,ICOS,CTLA-4,PD-1,LAG-3,2B4,BTLA,T细胞受体(TCR)α链,TCRβ链,或TCRζ链,CD3ε,CD45,CD5,CD8,CD9,CD16,CD22,CD33,CD37,CD64,CD80,CD86,CD134,CD154,或免疫效应细胞中表达的其他多肽的跨膜区。
在一些实施方案中，本发明提供的CARs的跨膜结构域源于CD8。在一些实施方案中，所述跨膜结构域包括CD8的跨膜区。在一些实施方案中，所述跨膜结构域源于CD28。在一些实施方案中，所述跨膜结构域包括CD8的跨膜区。在一些实施方案中，所述跨膜结构域源于CD3ζ。在一些实施方案中，所述跨膜结构域包括CD3ζ的跨膜区。在一些实施方案中，所述跨膜结构域源于CD4。在一些实施方案中，所述跨膜结构域包括CD4的跨膜区。在一些实施方案中，所述跨膜结构域源于4-1BB。在一些实施方案中，所述跨膜结构域包括4-1BB的跨膜区。在一些实施方案中，所述跨膜结构域源于OX40。在一些实施方案中，所述跨膜结构域包括OX40的跨膜区。在一些实施方案中，所述跨膜结构域源于ICOS。在一些实施方案中，所述跨膜结构域包括ICOS的跨膜区。在一些实施方案中，所述跨膜结构域源于CTLA-4。在一些实施方案中，所述跨膜结构域包括CTLA-4的跨膜区。在一些实施方案中，所述跨膜结构域源于PD-1。在一些实施方案中，所述跨膜结构域包括PD-1的跨膜区。在一些实施方案中，所述跨膜结构域源于LAG-3。在一些实施方案中，所述跨膜结构域包括LAG-3的跨膜区。在一些实施方案中，所述跨膜结构域源于2B4。在一些实施方案中，所述跨膜结构域包括2B4的跨膜区。在一些实施方案中，所述跨膜结构域源于BTLA。在一些实施方案中，所述跨膜结构域包括BTLA的跨膜区。在一些实施方案中，所述跨膜结构域源于TCRα链。在一些实施方案中，所述跨膜结构域包括TCRα链的跨膜区。在一些实施方案中，所述跨膜结构域源于TCRβ链。在一些实施方案中，所述跨膜结构域包括TCRβ链的跨膜区。在一些实施方案中，所述跨膜结构域源于TCRζ链。在一些实施方案中，所述跨膜结构域包括TCRζ链的跨膜区。在一些实施方案中，所述跨膜结构域源于CD3ε。在一些实施方案中，所述跨膜结构域包括CD3ε的跨膜区。在一些实施方案中，所述跨膜结构域源于CD45。在一些实施方案中，所述跨膜结构域包括CD45的跨膜区。在一些实施方案中，所述跨膜结构域源于CD5。在一些实施方案中，所述跨膜结构域包括CD5的跨膜区。在一些实施方案中，所述跨膜结构域源于CD8。在一些实施方案中，所述跨膜结构域包括CD8的跨膜区。在一些实施方案中，所述跨膜结构域源于CD9。在一些实施方案中，所述跨膜结构域包括CD9的跨膜区。在一些实施方案中，所述跨膜结构域源于CD16。在一些实施方案中，所述跨膜结构域包括CD16的跨膜区。在一些实施方案中，所述跨膜结构域源于CD22。在一些实施方案中，所述跨膜结构域包括CD22的跨膜区。在一些实施方案中，所述跨膜结构域源于CD33。在一些实施方案中，所述跨膜结构域包括CD33的跨膜区。在一些实施方案中，所述跨膜结构域源于CD37。在一些实施方案中，所述跨膜结构域包括CD37的跨膜区。在一些实施方案中，所述跨膜结构域源于CD64。在一些实施方案中，所述跨膜结构域包括CD64的跨膜区。在一些实施方案中，所述跨膜结构域源于CD80。在一些实施方案中，所述跨膜结构域包括CD80的跨膜区。在一些实施方案中，所述跨膜结构域源于CD86。在一些实施方案中，所述跨膜结构域包括CD86的跨膜区。在一些实施方案中，所述跨膜结构域源于CD134。在一些实施方案中，所述跨膜结构域包括CD134的跨膜区。在一些实施方案中，所述跨膜结构域源于CD154。在一些实施方案中，所述跨膜结构域包括CD154的跨膜区。下面更详细地描述示例性跨膜结构域。
或者，跨膜结构域可以是人工合成的，在这种情况下，它主要包括疏水性残基，如亮氨酸和缬氨酸。任选地，跨膜结构域可以来源于免疫效应细胞中非自然表达的多肽，只要跨膜结构域能够将信号从结合在CAR的抗原转导到胞内信号传导结构域和/或共刺激结构域。在一些实施方案中，所述跨膜结构域可以在每一端包括苯丙氨酸、色氨酸和缬氨酸的三联体。任选地，短的寡肽或多肽连接子，优选长度在2至10个氨基酸之间，可以在CAR的跨膜结构域和胞质信号传导结构域之间形成连接。甘氨酸-丝氨酸偶联物是特别合适的连接子。
本发明提供的CARs胞质结构域可以包含在表达CAR的免疫效应细胞中发挥作用的信号传导结构域。这样的信号传导结构域可以来源于，例如，CD3ζ、Fc受体γ、FcγRIIa、FcRβ(FcεR1b)、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD79a、CD79b、DAP10或DAP12。信号传导结构域也可以是来源于选自CD3ζ、Fc受体γ、FcγRIIa、FcRβ(FcεR1b)、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD79a、CD79b、DAP10和DAP12的分子的信号传导结构域的组合。源于蛋白或多肽的信号传导结构域是指蛋白质或多肽中负责激活免疫效应细胞(例如，T细胞)的结构域，或其保留激活功能的片段。通常，所述信号传导结构域诱导转导的免疫效应细胞(例如，T细胞)的持久性、转运和/或效应子功能(Sharpe et al.,Dis.Model Mech.8:337-350(2015)；Finney et al.,J.Immunol.161:2791-2797(1998)；Krause et al.,J.Exp.Med.188:619-626(1998))。蛋白或多肽的信号传导结构域可以是蛋白或多肽的胞内结构域。在一些实施方案中，所述信号传导结构域包含CD3ζ、FcRγ、FcγRIIa、FcRβ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD5、CD22、CD79a、CD79b、DAP10、DAP12的胞内结构域，或其组合。
在一些实施方案中，本发明提供的CARs的胞质结构域包括源于CD3ζ的信号传导结构域。在一些实施方案中，所述信号传导结构域包括CD3ζ的胞内结构域。在一些实施方案中，所述胞质结构域包括源于FcRγ的信号传导结构域。在一些实施方案中，所述信号传导结构域包括FcRγ的胞内结构域。在一些实施方案中，所述胞质结构域包括源于FcγRIIa的信号传导结构域。在一些实施方案中，所述信号传导结构域包括FcγRIIa的胞内结构域。在一些实施方案中，所述胞质结构域包括源于FcRβ的信号传导结构域。在一些实施方案中，所述信号传导结构域包括FcRβ的胞内结构域。在一些实施方案中，所述胞质结构域包括源于CD3γ的信号传导结构域。在一些实施方案中，所述信号传导结构域包括CD3γ的胞内结构域。在一些实施方案中，所述胞质结构域包括源于CD3δ的信号传导结构域。在一些实施方案中，所述信号传导结构域包括CD3δ的胞内结构域。在一些实施方案中，所述胞质结构域包括源于CD3ε的信号传导结构域。在一些实施方案中，所述信号传导结构域包括CD3ε的胞内结构域。在一些实施方案中，所述胞质结构域包括源于CD5的信号传导结构域。在一些实施方案中，所述信号传导结构域包括CD5的胞内结构域。在一些实施方案中，所述胞质结构域包括源于CD22的信号传导结构域。在一些实施方案中，所述信号传导结构域包括CD22的胞内结构域。在一些实施方案中，所述胞质结构域包括源于CD79a的信号传导结构域。在一些实施方案中，所述信号传导结构域包括CD79a的胞内结构域。在一些实施方案中，所述胞质结构域包括源于CD79b的信号传导结构域。在一些实施方案中，所述信号传导结构域包括CD79b的胞内结构域。在一些实施方案中，所述胞质结构域包括源于DAP10的信号传导结构域。在一些实施方案中，所述信号传导结构域包括DAP10的胞内结构域。在一些实施方案中，所述胞质结构域包括源于DAP12的信号传导结构域。在一些实施方案中，所述信号传导结构域包括DAP12的胞内结构域。下面更详细地描述示例性信号传导结构域。
在一些实施方案中，本发明提供的CARs的胞质结构域还包括共刺激结构域。在一些实施方案中，本发明提供的CARs的胞质结构域还包括两个共刺激结构域。这种共刺激结构域可以增加免疫效应细胞(例如，T细胞)的活化。共刺激信号传导结构域可以源于，例如，CD28、4-1BB(CD137)、OX40、ICOS、DAP10、2B4、CD27、CD30、CD40、CD2、CD7、LIGHT、GITR、TLR、DR3或CD43。源于蛋白或多肽的共刺激结构域是指蛋白质或多肽中负责增加免疫效应细胞(例如，T细胞)的活化的结构域，或保留其活化功能的片段。在一些实施方案中，本发明提供的CARs的共刺激结构域包含CD28、4-1BB(CD137)、OX40、ICOS、DAP10、2B4、CD27、CD30、CD40、CD2、CD7、LIGHT、TIGIT、GITR、TLR、DR3或CD43的胞内结构域。在一些实施方案中，本发明提供的CARs的胞质结构域包括源于CD28的共刺激结构域。在一些实施方案中，所述共刺激结构域包括CD28的胞内结构域。在一些实施方案中，所述胞质结构域包括源于4-1BB的共刺激结构域。在一些实施方案中，所述共刺激结构域包括4-1BB的胞内结构域。在一些实施方案中，所述胞质结构域包括源于OX40的共刺激结构域。在一些实施方案中，所述共刺激结构域包括OX40的胞内结构域。在一些实施方案中，所述胞质结构域包括源于ICOS的共刺激结构域。在一些实施方案中，所述共刺激结构域包括ICOS的胞内结构域。在一些实施方案中，所述胞质结构域包括源于DAP10的共刺激结构域。在一些实施方案中，所述共刺激结构域包括DAP10的胞内结构域。在一些实施方案中，所述胞质结构域包括源于2B4的共刺激结构域。在一些实施方案中，所述共刺激结构域包括2B4的胞内结构域。在一些实施方案中，所述胞质结构域包括源于CD27的共刺激结构域。在一些实施方案中，所述共刺激结构域包括CD27的胞内结构域。在一些实施方案中，所述胞质结构域包括源于CD30的共刺激结构域。在一些实施方案中，所述共刺激结构域包括CD30的胞内结构域。在一些实施方案中，所述胞质结构域包括源于CD40的共刺激结构域。在一些实施方案中，所述共刺激结构域包括CD40的胞内结构域。在一些实施方案中，所述胞质结构域包括源于CD2的共刺激结构域。在一些实施方案中，所述共刺激结构域包括CD2的胞内结构域。在一些实施方案中，所述胞质结构域包括源于CD7的共刺激结构域。在一些实施方案中，所述共刺激结构域包括CD7的胞内结构域。在一些实施方案中，所述胞质结构域包括源于LIGHT的共刺激结构域。在一些实施方案中，所述共刺激结构域包括LIGHT的胞内结构域。在一些实施方案中，所述胞质结构域包括源于TIGIT的共刺激结构域。在一些实施方案中，所述共刺激结构域包括TIGIT的胞内结构域。在一些实施方案中，所述胞质结构域包括源于GITR的共刺激结构域。在一些实施方案中，所述共刺激结构域包括GITR的胞内结构域。在一些实施方案中，所述胞质结构域包括源于TLR的共刺激结构域。在一些实施方案中，所述共刺激结构域包括TLR的胞内结构域。在一些实施方案中，所述胞质结构域包括源于DR3的共刺激结构域。在一些实施方案中，所述共刺激结构域包括DR3的胞内结构域。在一些实施方案中，所述胞质结构域包括源于CD43的共刺激结构域。在一些实施方案中，所述共刺激结构域包括CD43的胞内结构域。下面更详细地描述示例性共刺激结构域。
先前已经描述了包含胞内结构域的CARs，所述胞内结构域包含源于4-1BB、ICOS或DAP-10的共刺激结构域(参见U.S.7,446,190，通过引用将其并入本发明，其还描述了4-1BB、ICOS和DAP-10的代表性序列)。在一些实施方案中，CAR的胞质结构域可以包括两个共刺激结构域，所述的两个共刺激结构域包括两个共刺激受体，例如，CD28和4-1BB(参见Sadelain et al.,Cancer Discov.3(4):388-398(2013))，或CD28和OX40，或本发明公开的其他共刺激配体的组合。
CAR的胞外结构域可与引导新生蛋白进入内质网并随后转运到细胞表面的先导肽或信号肽融合。应当理解的是，一旦含有信号肽的多肽在细胞表面表达，在内质网中的多肽加工和移位到细胞表面期间，信号肽通常已经被蛋白水解去除。因此，多肽，例如CAR，通常在细胞表面以缺乏信号肽的成熟蛋白形式表达，而多肽的前体形式包括信号肽。如果CAR要糖基化和/或锚定在细胞膜上，信号肽或先导可能是必不可少的。信号序列或先导序列是一种肽序列，通常存在于新合成蛋白质的N端，指导它们进入分泌途径。该信号肽作为融合蛋白共价连接到CAR的胞外抗原结合域的N-端。如本领域所熟知的，任何合适的信号肽都可以应用于CAR，以在免疫细胞中提供细胞表面表达(参见Gierasch Biochem.28:923-930(1989)；von Heijne,J.Mol.Biol.184(1):99–105(1985))。特别有用的信号肽可以来源于在本发明提供的免疫细胞中自然表达的细胞表面蛋白，包括本发明公开的多肽中的任何一种信号肽。因此，任何合适的信号肽可以用于引导CAR在本发明提供的免疫效应细胞的细胞表面表达。
在一些实施方案中，CAR可以包括将CAR的结构域相互连接的间隔子或序列。例如，间隔子可以被包括在信号肽和抗原结合结构域之间、在抗原结合结构域和跨膜结构域之间、在跨膜结构域和胞内结构域之间、和/或在胞内结构域内的结构域之间，例如，在刺激结构域和共刺激结构域之间。间隔子可以足够灵活以允许各种结构域与其他多肽的相互作用，例如，允许抗原结合结构域在方向上具有灵活性以促进抗原识别。间隔子可以是，例如，来自IgG的铰链区、免疫球蛋白的CH2CH3(恒定)区域，和/或CD3的部分(分化簇3)或适合作为间隔子的某些其他序列。在一些实施方案中，本发明公开的CAR包括连接CD123结合结构域和跨膜结构域的铰链结构域。在一些实施方案中，所述铰链结构域包括人CD8铰链结构域。在一些实施方案中，所述铰链结构域包括人CD28铰链结构域。
下面提供了一些示例性分子，本发明提供的CARs的结构域可以从这些分子中获得。
CD3ζCD3ζ包含3个基于免疫受体酪氨酸的激活基序(ITAMs)，并在抗原结合后将激活信号传递给细胞，例如淋巴系的细胞，如T细胞。CD3ζ多肽可以具有与如下提供的序列(GenBank No.NP_932170(NP_932170.1,GI:37595565；见下文))相对应的氨基酸序列或其片段。在一些实施方案中，CD3ζ信号传导结构域具有如下提供的CD3ζ多肽序列的氨基酸52至164的氨基酸序列，或其足以用于信号传导活性片段。参见GenBank NP_932170以参考CD3ζ内的结构域，例如，1-21位氨基酸的信号肽；22-30位氨基酸的胞外结构域；31-51位氨基酸的跨膜结构域；52-164位氨基酸的胞内结构域。在一些实施方案中，CAR可具有源自CD3ζ的跨膜结构域。所述跨膜结构域可包含CD3ζ的跨膜区(例如，以下序列的31至51氨基酸)或其片段。在一些实施方案中，CARs的胞质结构域可以包括源于CD3ζ的信号传导结构域。在一些实施方案中，所述CD3ζ的信号传导结构域可包含CD3ζ的胞内结构域(例如，以下序列的52至164位氨基酸)或其片段。可以理解的是，如果需要，短于或长于特定描述结构域的CD3ζ序列可以包括在CAR中。
1 MKWKALFTAA ILQAQLPITE AQSFGLLDPK LCYLLDGILF IYGVILTALF LRVKFSRSAD
61 APAYQQGQNQ LYNELNLGRR EEYDVLDKRR GRDPEMGGKP QRRKNPQEGL YNELQKDKMA
121 EAYSEIGMKG ERRRGKGHDG LYQGLSTATK DTYDALHMQA LPPR(SEQ ID NO:322)
FCRγ
IgG受体FcγRs的激活类型形成多聚体复合物，该多聚体复合物包括Fc受体γ链(FCRγ)，该链含有细胞内酪氨酸活化基序(ITAM)，其激活触发活性氧迸发、细胞因子释放、吞噬作用、抗体依赖性细胞介导的细胞毒性和脱颗粒。FcRγ多肽可以具有与如下提供的序列(NCBI参考序列：NP_004097.1(GI：4758344)(如下所示))相对应的氨基酸序列或其片段。参见GenBank NP_004097以参考FcRγ内的结构域，例如，1-18位氨基酸的信号肽；19-23位氨基酸的胞外结构域；24-44位氨基酸的跨膜区；45-86位氨基酸的胞内结构域。在一些实施方案中，CAR可以包括源自FcRγ的跨膜结构域。在一些实施方案中，所述CAR的跨膜结构域包含FcRγ的跨膜区(例如，以下序列的24至44位氨基酸)或其片段。在一些实施方案中，CARs的胞质结构域可以包括源于FcRγ的信号传导结构域。在一些实施方案中，所述信号传导结构域包含FcRγ的胞内结构域(例如，以下序列的45至86位氨基酸)或其片段。可以理解的是，如果需要，短于或长于特定描述结构域的FcRγ序列可以包括在CAR中。
1 MIPAVVLLLL LLVEQAAALG EPQLCYILDA ILFLYGIVLT LLYCRLKIQV RKAAITSYEK
61 SDGVYTGLST RNQETYETLK HEKPPQ(SEQ ID NO:323)
FcγRIIa是在例如巨噬细胞和中性粒细胞等吞噬细胞上发现的细胞表面受体，参与吞噬和清除免疫复合物的过程。通过与IgG结合，它可以启动针对病原体和可溶性抗原的细胞反应。FcγRIIa还促进调理抗原的吞噬作用。FcγRIIa多肽可以具有与如下提供的序列(NCBI参考序列：NP_001129691.1)相对应的氨基酸序列或其片段。参见NCBI参考序列NP_001129691.1以参考FcγRIIa内的结构域，例如，1-33位氨基酸的信号肽；34-217位氨基酸的胞外结构域；218-240位氨基酸的跨膜结构域；241-317位氨基酸的胞内结构域。在一些实施方案中，CAR可以包括源自FcγRIIa的跨膜结构域。在一些实施方案中，所述CAR的跨膜结构域包含FcγRIIa的跨膜区(例如，以下序列的218至240位氨基酸)或其片段。在一些实施方案中，CAR的胞质结构域可以包括源于FcγRIIa的信号传导结构域。在一些实施方案中，所述信号传导结构域包含FcγRIIa的胞内结构域(例如，以下序列的241至317位氨基酸)或其片段。可以理解的是，如果需要，短于或长于特定描述结构域的FcγRIIa序列可以包括在CAR中。
MTMETQMSQNVCPRNLWLLQPLTVLLLLASADSQAAAPPKAVLKLEPPWINVLQEDSVTLTCQGARSPESDSIQWFHNGNLIPTHTQPSYRFKANNNDSGEYTCQTGQTSLSDPVHLTVLSEWLVLQTPHLEFQEGETIMLRCHSWKDKPLVKVTFFQNGKSQKFSHLDPTFSIPQANHSHSGDYHCTGNIGYTLFSSKPVTITVQVPSMGSSSPMGIIVAVVIATAVAAIVAAVVALIYCRKKRISANSTDPVKAAQFEPPGRQMIAIRKRQLEETNNDYETADGGYMTLNPRAPTDDDKNIYLTLPPNDHVNSNN(SEQ ID NO:324)
FcRβ(FcεR1b)是一种高亲和力受体，可与免疫球蛋白ε的Fc区结合。完整的肥大细胞反应需要通过多价抗原聚集FcRβ，包括通过脱颗粒释放预先形成的介质(如组胺)和释放de novo产生的脂质介质和细胞因子。FcRβ还介导重要淋巴因子的分泌。变应原与结合受体的IgE的结合导致细胞活化和负责过敏表现的介质释放。FcRβ多肽可以具有与如下提供的序列(NCBI参考序列：NP_000130.1)相对应的氨基酸序列或其片段。参见NCBI参考序列NP_000130.1以参考FcRβ内的结构域，例如，1-59、118-130和201-244位氨基酸的胞内结构域；60-79、98-117、131-150和181-200位氨基酸的跨膜结构域；80-97和151-180位氨基酸的胞外结构域。在一些实施方案中，CARs的胞质结构域可以包括源于FcRβ的信号传导结构域。在一些实施方案中，所述信号传导结构域包含FcRβ的胞内结构域(例如，以下序列的1至59、118至130、或201至244位氨基酸)或其片段。可以理解的是，如果需要，短于或长于特定描述结构域的FcRβ序列可以包括在CAR中。
1 MDTESNRRAN LALPQEPSSV PAFEVLEISP QEVSSGRLLK SASSPPLHTW LTVLKKEQEF
61 LGVTQILTAM ICLCFGTVVC SVLDISHIEG DIFSSFKAGY PFWGAIFFSI SGMLSIISER
121 RNATYLVRGS LGANTASSIA GGTGITILII NLKKSLAYIH IHSCQKFFET KCFMASFSTE
181 IVVMMLFLTI LGLGSAVSLT ICGAGEELKG NKVPEDRVYE ELNIYSATYS ELEDPGEMSP
241 PIDL(SEQ ID NO:325)
CD3γ(T细胞表面糖蛋白CD3γ链)是存在于T淋巴细胞表面的TCR-CD3复合物的一部分，在适应性免疫反应中起着至关重要的作用。CD3γ在其胞质结构域中包含免疫受体酪氨酸激活基序(ITAMs)。除了在T细胞活化中起到信号转导的作用外，CD3γ在细胞表面TCR表达的动态调节中也起着必不可少的作用。CD3γ多肽可以具有与如下提供的序列(NCBI参考序列：NP_004097.1(GI:4758344))相对应的氨基酸序列或其片段。参见NCBI参考序列NP_004097以参考CD3γ内的结构域，例如，1-22位氨基酸的信号肽；23-116位氨基酸的胞外结构域；117-137位氨基酸的跨膜结构域；138-182位氨基酸的胞内结构域。在一些实施方案中，CAR可以包括源自CD3γ的跨膜结构域。在一些实施方案中，所述CAR的跨膜结构域包含CD3γ的跨膜区(例如，以下序列的117至137位氨基酸)或其片段。在一些实施方案中，CARs的胞质结构域可以包括源于CD3γ的信号传导结构域。在一些实施方案中，所述信号传导结构域包含CD3γ的胞内结构域(例如，以下序列的138至182位氨基酸)或其片段。可以理解的是，如果需要，短于或长于特定描述结构域的CD3γ序列可以包括在CAR中。
1 MEQGKGLAVL ILAIILLQGT LAQSIKGNHL VKVYDYQEDG SVLLTCDAEA KNITWFKDGK
61 MIGFLTEDKK KWNLGSNAKD PRGMYQCKGS QNKSKPLQVY YRMCQNCIEL NAATISGFLF
121 AEIVSIFVLA VGVYFIAGQD GVRQSRASDK QTLLPNDQLY QPLKDREDDQ YSHLQGNQLR
181 RN(SEQ ID NO:326)
CD3δ(T细胞表面糖蛋白CD3δ链)是存在于T淋巴细胞表面的TCR-CD3复合物的一部分，在适应性免疫反应中起着至关重要的作用。CD3δ在其胞质结构域中包含免疫受体酪氨酸激活基序(ITAMs)。除了在T细胞活化中起到信号转导的作用外，CD3δ在胸腺细胞分化中起着至关重要的作用，并参与细胞内TCR-CD3复合物的正确组装和表面表达。CD3δ与CD4和CD8相互作用，从而在TCR与辅助受体CD4和CD8之间建立功能联系，这是CD4或CD8 T细胞活化和阳性选择所必需的。CD3δ多肽可以具有与如下提供的序列(NCBI参考序列：NP_000723.1)相对应的氨基酸序列或其片段。参见NCBI参考序列NP_000723.1以参考CD3δ内的结构域，例如，1-21位氨基酸的信号肽；22-105位氨基酸的胞外结构域；106-126位氨基酸的跨膜结构域；127-171位氨基酸的胞内结构域。在一些实施方案中，CAR可以包括源自CD3δ的跨膜结构域。在一些实施方案中，所述CAR的跨膜结构域包含CD3δ的跨膜区(例如，以下序列的106至126位氨基酸)或其片段。在一些实施方案中，CAR的胞质结构域可以包括源于CD3δ的信号传导结构域。在一些实施方案中，所述信号传导结构域包含CD3δ的胞内结构域(例如，以下序列的127至171位氨基酸)或其片段。可以理解的是，如果需要，短于或长于特定描述结构域的CD3δ序列可以包括在CAR中。
1 MEHSTFLSGL VLATLLSQVS PFKIPIEELE DRVFVNCNTS ITWVEGTVGT LLSDITRLDL
61 GKRILDPRGI YRCNGTDIYK DKESTVQVHY RMCQSCVELD PATVAGIIVT DVIATLLLAL
121 GVFCFAGHET GRLSGAADTQ ALLRNDQVYQ PLRDRDDAQY SHLGGNWARN K(SEQ IDNO:327)
CD3ε(T细胞表面糖蛋白CD3ε链)是存在于T淋巴细胞表面的TCR-CD3复合物的一部分，在适应性免疫反应中起着至关重要的作用。CD3ε在其胞质结构域中包含免疫受体酪氨酸激活基序(ITAMs)。除了在T细胞活化中起到信号转导的作用外，CD3ε在T细胞的正确发育中发挥重要作用。CD3ε通过形成两种异二聚体CD3δ/CD3γ和CD3γ/CD3γ引发TCR-CD3复合物组装。CD3ε多肽可以具有与如下提供的序列(NCBI参考序列：NP_000724.1)相对应的氨基酸序列或其片段。参见NCBI参考序列NP_000724.1以参考CD3ε内的结构域，例如，1-22位氨基酸的信号肽；23-126位氨基酸的胞外结构域；127-152位氨基酸的跨膜结构域；153-207位氨基酸的胞内结构域。在一些实施方案中，CAR可以包括源自CD3ε的跨膜结构域。在一些实施方案中，所述CAR的跨膜结构域包含CD3ε的跨膜区(例如，以下序列的127至152位氨基酸)或其片段。在一些实施方案中，CAR的胞质结构域可以包括源于CD3ε的信号传导结构域。在一些实施方案中，所述信号传导结构域包含CD3ε的胞内结构域(例如，以下序列的153至207位氨基酸)或其片段。可以理解的是，如果需要，短于或长于特定描述结构域的CD3ε序列可以包括在CAR中。
1 MQSGTHWRVL GLCLLSVGVW GQDGNEEMGG ITQTPYKVSI SGTTVILTCP QYPGSEILWQ
61 HNDKNIGGDE DDKNIGSDED HLSLKEFSEL EQSGYYVCYP RGSKPEDANF YLYLRARVCE
121 NCMEMDVMSV ATIVIVDICI TGGLLLLVYY WSKNRKAKAK PVTRGAGAGG RQRGQNKERP
181 PPVPNPDYEP IRKGQRDLYS GLNQRRI(SEQ ID NO:328)
CD79a(B细胞抗原受体复合物相关蛋白α链)需要与CD79b合作，以启动由抗原与B细胞抗原受体复合物(BCR)结合激活的信号转导级联反应，从而导致复合物内化、转运至晚期内体和抗原呈递。CD79a刺激SYK自磷酸化和活化。CD79a还与BLNK结合，使BLNK与SYK接近，使SYK磷酸化BLNK，并与某些Src家族酪氨酸激酶相互作用并增加其活性。CD79a多肽可以具有与如下提供的序列(NCBI参考序列：NP_001774.1)相对应的氨基酸序列或其片段。参见NCBI参考序列NP_001774.1以参考CD79a内的结构域，例如，1-32位氨基酸的信号肽；33-143位氨基酸的胞外结构域；144-165位氨基酸的跨膜结构域；166-226位氨基酸的胞内结构域。在一些实施方案中，CAR可以包括源自CD79a的跨膜结构域。在一些实施方案中，所述CAR的跨膜结构域包含CD79a的跨膜区(例如，以下序列的144至165位氨基酸)或其片段。在一些实施方案中，CAR的胞质结构域可以包括源于CD79a的信号传导结构域。在一些实施方案中，所述信号传导结构域包含CD79a的胞内结构域(例如，以下序列的166至226位氨基酸)或其片段。可以理解的是，如果需要，短于或长于特定描述结构域的CD79a序列可以包括在CAR中。
1 MPGGPGVLQA LPATIFLLFL LSAVYLGPGC QALWMHKVPA SLMVSLGEDA HFQCPHNSSN
61 NANVTWWRVL HGNYTWPPEF LGPGEDPNGT LIIQNVNKSH GGIYVCRVQEGNESYQQSCG121TYLRVRQPPP RPFLDMGEGT KNRIITAEGI ILLFCAVVPG TLLLFRKRWQNEKLGLDAGD
181 EYEDENLYEG LNLDDCSMYE DISRGLQGTY QDVGSLNIGD VQLEKP(SEQ ID NO:329)
CD79b(B细胞抗原受体复合物相关蛋白β链)需要与CD79a合作，以启动由抗原与B细胞抗原受体复合物(BCR)激活的信号转导级联反应，从而导致复合物内化、转运至晚期内体和抗原呈递。CD79b增强CD79a的磷酸化。CD79b多肽可以具有与如下提供的序列(NCBI参考序列：NP_000617.1)相对应的氨基酸序列或其片段。参见NCBI参考序列NP_000617.1以参考CD79b内的结构域，例如，1-28位氨基酸的信号肽；29-159位氨基酸的胞外结构域；160-180位氨基酸的跨膜结构域；181-229位氨基酸的胞内结构域。在一些实施方案中，CAR可以包括源自CD79b的跨膜结构域。在一些实施方案中，所述CAR的跨膜结构域包含CD79b的跨膜区(例如，以下序列的160至180位氨基酸)或其片段。在一些实施方案中，CAR的胞质结构域可以包括源于CD79b的信号传导结构域。在一些实施方案中，所述信号传导结构域包含CD79b的胞内结构域(例如，以下序列的181至229位氨基酸)或其片段。可以理解的是，如果需要，短于或长于特定描述结构域的CD79b序列可以包括在CAR中。
1 MARLALSPVP SHWMVALLLL LSAEPVPAAR SEDRYRNPKG SACSRIWQSP RFIARKRGFT
61 VKMHCYMNSA SGNVSWLWKQ EMDENPQQLK LEKGRMEESQ NESLATLTIQ GIRFEDNGIY
121 FCQQKCNNTS EVYQGCGTEL RVMGFSTLAQ LKQRNTLKDG IIMIQTLLII LFIIVPIFLL
181 LDKDDSKAGM EEDHTYEGLD IDQTATYEDI VTLRTGEVKW SVGEHPGQE(SEQ ID NO:330)
DAP10
DAP10又称造血细胞信号转导子，是与造血细胞中受体家族密切相关的信号传导亚基。DAP10多肽可以具有与如下提供的序列(GenBank No.NP055081.1(GI:15826850))相对应的氨基酸序列或其片段。参见NCBI参考序列NP_055081以参考DAP10内的结构域，例如，1至18位氨基酸的信号肽；19-48位氨基酸的胞外结构域；49-69位氨基酸的跨膜结构域；70-93位氨基酸的胞内结构域。在一些实施方案中，CAR的胞质结构域可以包括源于DAP10的信号传导结构域。在一些实施方案中，所述信号传导结构域包含DAP10的胞内结构域(例如，以下序列的70至93位氨基酸)或其片段。在一些实施方案中，所述胞质结构域包括源于DAP10的共刺激结构域。在一些实施方案中，所述共刺激结构域包含DAP10的胞内结构域(例如，以下序列的70至93位氨基酸)或其片段。可以理解的是，如果需要，短于或长于特定描述结构域的DAP10序列可以包括在CAR中。
1 MIHLGHILFL LLLPVAAAQT TPGERSSLPA FYPGTSGSCS GCGSLSLPLL AGLVAADAVA
61 SLLIVGAVFL CARPRRSPAQ EDGKVYINMP GRG(SEQ ID NO:331)
DAP12
DAP12存在于髓系细胞中，例如巨噬细胞和粒细胞，在这些细胞中，例如，DAP12与髓系细胞成员(TREM)上表达的触发受体和MDL1(髓系DAP12-相关凝集素1/CLEC5A)相关，两者都参与对抗病原体(如病毒和细菌)的炎症反应。在淋巴系细胞中，DAP12在NK细胞中表达，并分别与激活受体(如C型凝集素受体NKG2C)、自然细胞毒性受体NKp44、短尾型KIR3DS1和KIR2DS1/2/5相关。特别是，NGK2C是用于控制人和小鼠CMV感染的主要的激活NK细胞受体。研究发现，含DAP12的CAR与其Ag交联后，在NK细胞中产生足够的活化信号。
etal.,J Immunol 194:3201-12(2015)。DAP12多肽可以具有与如下提供的序列(GenBankNo.AAD09437.1(GI:2905996))相对应的氨基酸序列或其片段。参见GenBankNo.AAD09437.1以参考DAP12内的结构域，例如，1-21位氨基酸的信号肽；22-40位氨基酸的胞外结构域；41-61位氨基酸的跨膜结构域；62-113位氨基酸的胞内结构域。在一些实施方案中，CAR的胞质结构域可以包括源于DAP12的信号传导结构域。在一些实施方案中，所述信号传导结构域包含DAP12的胞内结构域(例如，以下序列的62至113位氨基酸)或其片段。在一些实施方案中，所述胞质结构域包括源于DAP12的共刺激结构域。在一些实施方案中，所述共刺激结构域包含DAP12的胞内结构域(例如，以下序列的62至113位氨基酸)或其片段。可以理解的是，如果需要，短于或长于特定描述结构域的DAP12序列可以包括在CAR中。
1 MGGLEPCSRL LLLPLLLAVS GLRPVQAQAQ SDCSCSTVSP GVLAGIVMGD LVLTVLIALA
61 VYFLGRLVPR GRGAAEAATR KQRITETESP YQELQGQRSD VYSDLNTQRP YYK(SEQ IDNO:332)
CD28
分化簇28(CD28)是在T细胞上表达的蛋白，为T细胞的活化和存活提供共刺激信号。CD28是CD80(B7.1)和CD86(B7.2)蛋白的受体。CD28多肽可以具有与如下提供的序列(GenBank No.P10747(P10747.1，GI:115973)或NP_006130(NP_006130.1，GI:5453611))相对应的氨基酸序列或其片段。参见GenBank NP_006130以参考CD28内的结构域，例如，1-18位氨基酸的信号肽；19-152位氨基酸的胞外结构域；153-179位氨基酸的跨膜结构域；180-220位氨基酸的胞内结构域。在一些实施方案中，CAR可以包含源于CD28的铰链结构域(例如，以下序列的114至152位氨基酸)或其片段。在一些实施方案中，CAR可以包括源自CD28的跨膜结构域。在一些实施方案中，所述CAR的跨膜结构域包含CD28的跨膜区(例如，以下序列的153至179位氨基酸)或其片段。在一些实施方案中，CAR的胞质结构域可以包括源于CD28的共刺激结构域。在一些实施方案中，所述共刺激结构域包含CD28的胞内结构域(例如，以下序列的180至220位氨基酸)或其片段。在一些实施方案中，CAR可以包括两种源于CD28的结构域，分别为共刺激信号传导结构域和跨膜结构域。在一些实施方案中，CAR具有包括CD28的跨膜结构域和胞内结构域的氨基酸序列，并且CAR包括CD28的氨基酸153至220。在一些实施方案中，CAR可以包括三种源于CD28的结构域，分别为跨膜结构域、铰链结构域和共刺激信号传导结构域。在另一个实施方案中，CAR包含CD28的氨基酸114至220。可以理解的是，如果需要，短于或长于特定描述结构域的CD28序列可以包括在CAR中。
1 MLRLLLALNL FPSIQVTGNK ILVKQSPMLV AYDNAVNLSC KYSYNLFSRE FRASLHKGLD
61 SAVEVCVVYG NYSQQLQVYS KTGFNCDGKL GNESVTFYLQ NLYVNQTDIY FCKIEVMYPP
121 PYLDNEKSNG TIIHVKGKHL CPSPLFPGPS KPFWVLVVVG GVLACYSLLV TVAFIIFWVR
181 SKRSRLLHSD YMNMTPRRPG PTRKHYQPYA PPRDFAAYRS(SEQ ID NO:333)
4-1BB
4-1BB又称肿瘤坏死因子受体超家族成员9，可作为肿瘤坏死因子(TNF)配体，具有刺激活性。4-1BB多肽可以具有与如下提供的序列(GenBank No.P41273(P41273.1，GI:728739)或NP_001552(NP_001552.2，GI:5730095))相对应的氨基酸序列或其片段。参见GenBank NP_001552以参考4-1BB内的结构域，例如，1-17位氨基酸的信号肽；18-186位氨基酸的胞外结构域；187-213位氨基酸的跨膜结构域；214-255位氨基酸的胞内结构域。在一些实施方案中，CAR可以包括源自4-1BB的跨膜结构域。在一些实施方案中，所述CAR的跨膜结构域包含4-1BB的跨膜区(例如，以下序列的187至213位氨基酸)或其片段。在一些实施方案中，CAR的胞质结构域可以包括源于4-1BB的共刺激结构域。在一些实施方案中，所述共刺激结构域包含4-1BB的胞内结构域(例如，以下序列的214至255位氨基酸)或其片段。在一些实施方案中，CAR可以包括两种源于4-1BB的结构域，分别为共刺激信号传导结构域和跨膜结构域。在一些实施方案中，CAR具有包括4-1BB的跨膜结构域和胞内结构域的氨基酸序列，并且CAR包括4-1BB的氨基酸187至255。可以理解的是，如果需要，短于或长于特定描述结构域的4-1BB序列可以包括在CAR中。
1 MGNSCYNIVA TLLLVLNFER TRSLQDPCSN CPAGTFCDNN RNQICSPCPP NSFSSAGGQR
61 TCDICRQCKG VFRTRKECSS TSNAECDCTP GFHCLGAGCS MCEQDCKQGQ ELTKKGCKDC
121 CFGTFNDQKR GICRPWTNCS LDGKSVLVNG TKERDVVCGP SPADLSPGAS SVTPPAPARE
181 PGHSPQIISF FLALTSTALL FLLFFLTLRF SVVKRGRKKL LYIFKQPFMR PVQTTQEEDG
241 CSCRFPEEEE GGCEL(SEQ ID NO:334)
OX40
OX40，也称为肿瘤坏死因子受体超家族成员4前体或CD134，是TNFR-受体超家族的一员。OX40多肽可以具有与如下提供的序列(GenBank No.P43489(P43489.1，GI:1171933)或NP_003318(NP_003318.1，GI:4507579))相对应的氨基酸序列或其片段。参见GenBankNP_003318以参考OX40内的结构域，例如，1-28位氨基酸的信号肽；29-214位氨基酸的胞外结构域；215-235位氨基酸的跨膜结构域；236-277位氨基酸的胞内结构域。可以理解的是，如果需要，短于或长于特定描述结构域的OX40序列可以包括在CAR中。在一些实施方案中，CAR可以包括源自OX40的跨膜结构域。在一些实施方案中，所述CAR的跨膜结构域包含OX40的跨膜区(例如，以下序列的215至235位氨基酸)或其片段。在一些实施方案中，CAR的胞质结构域可以包括源于OX40的共刺激结构域。在一些实施方案中，所述共刺激结构域包含OX40的胞内结构域(例如，以下序列的236至277位氨基酸)或其片段。在一些实施方案中，CAR可以包括两种源于OX40的结构域，分别为共刺激信号传导结构域和跨膜结构域。在一些实施方案中，CAR具有包括OX40的跨膜结构域和胞内结构域的氨基酸序列，并且CAR包括OX40的氨基酸215至277。
1 MCVGARRLGR GPCAALLLLG LGLSTVTGLH CVGDTYPSND RCCHECRPGN GMVSRCSRSQ
61 NTVCRPCGPG FYNDVVSSKP CKPCTWCNLR SGSERKQLCT ATQDTVCRCR AGTQPLDSYK
121 PGVDCAPCPP GHFSPGDNQA CKPWTNCTLA GKHTLQPASN SSDAICEDRD PPATQPQETQ
181 GPPARPITVQ PTEAWPRTSQ GPSTRPVEVP GGRAVAAILG LGLVLGLLGP LAILLALYLL
241 RRDQRLPPDA HKPPGGGSFR TPIQEEQADA HSTLAKI(SEQ ID NO:335)
ICOS
ICOS可诱导T细胞共刺激分子前体(ICOS)又称CD278，是在活化的T细胞上表达的CD28超家族共刺激受体。ICOS多肽可以具有与如下提供的序列(GenBank No.NP036224(NP036224.1，GI:15029518))相对应的氨基酸序列或其片段。参见GenBank NP_036224以参考ICOS内的结构域，例如，1至20位氨基酸的信号肽；21-140位氨基酸的胞外结构域；141-161位氨基酸的跨膜结构域；162-199位氨基酸的胞内结构域。在一些实施方案中，CAR可以包括源自ICOS的跨膜结构域。在一些实施方案中，所述CAR的跨膜结构域包含ICOS的跨膜区(例如，以下序列的141至161位氨基酸)或其片段。在一些实施方案中，CAR的胞质结构域可以包括源于ICOS的共刺激结构域。在一些实施方案中，所述共刺激结构域包含ICOS的胞内结构域(例如，以下序列的162至199位氨基酸)或其片段。在一些实施方案中，CAR可以包括两种源于ICOS的结构域，分别为共刺激信号传导结构域和跨膜结构域。在一些实施方案中，CAR具有包括ICOS的跨膜结构域和胞内结构域的氨基酸序列，并且CAR包括ICOS的氨基酸141至199。可以理解的是，如果需要，短于或长于特定描述结构域的ICOS序列可以包括在CAR中。
1 MKSGLWYFFL FCLRIKVLTG EINGSANYEM FIFHNGGVQI LCKYPDIVQQ FKMQLLKGGQ
61 ILCDLTKTKG SGNTVSIKSL KFCHSQLSNN SVSFFLYNLD HSHANYYFCN LSIFDPPPFK
121 VTLTGGYLHI YESQLCCQLK FWLPIGCAAF VVVCILGCIL ICWLTKKKYS SSVHDPNGEY
181 MFMRAVNTAK KSRLTDVTL(SEQ ID NO:336)
2B4
2B4(CD244)是一种在NK细胞和CD8+T细胞上均表达的共刺激受体。其靶点为造血细胞(包括B细胞和T细胞)以及活化单核细胞和粒细胞上表达的非MHC样分子(CD48)。2B4通过其配体与靶细胞结合而激活，导致NK(或T细胞)激活，并杀伤靶细胞。2B4多肽可以具有与如下提供的序列(登记号:Q9BZW8.2(NP_001160135.1；GI:47605541))相对应的氨基酸序列或其片段。参见GenBank NP_001160135.1以参考2B4内的结构域，例如，1-21位氨基酸的信号肽；22-229位氨基酸的胞外结构域；230-250位氨基酸的跨膜结构域；251-370位氨基酸的胞内结构域。在一些实施方案中，CAR可以包括源自2B4的跨膜结构域。在一些实施方案中，所述CAR的跨膜结构域包含2B4的跨膜区(例如，以下序列的230至250位氨基酸)或其片段。在一些实施方案中，CAR的胞质结构域可以包括源于2B4的共刺激结构域。在一些实施方案中，所述共刺激结构域包含2B4的胞内结构域(例如，以下序列的251至370位氨基酸)或其片段。在一些实施方案中，CAR可以包括两种源于2B4的结构域，分别为共刺激信号传导结构域和跨膜结构域。在一些实施方案中，CAR具有包括2B4的跨膜结构域和胞内结构域的氨基酸序列，并且CAR包括2B4的氨基酸230至370。可以理解的是，如果需要，短于或长于特定描述结构域的2B4序列可以包括在CAR中。
MLGQVVTLILLLLLKVYQGKGCQGSADHVVSISGVPLQLQPNSIQTKVDSIAWKKLLPSQNGFHHILKWENGSLPSNTSNDRFSFIVKNLSLLIKAAQQQDSGLYCLEVTSISGKVQTATFQVFVFESLLPDKVEKPRLQGQGKILDRGRCQVALSCLVSRDGNVSYAWYRGSKLIQTAGNLTYLDEEVDINGTHTYTCNVSNPVSWESHTLNLTQDCQNAHQEFRFWPFLVIIVILSALFLGTLACFCVWRRKRKEKQSETSPKEFLTIYEDVKDLKTRRNHEQEQTFPGGGSTIYSMIQSQSSAPTSQEPAYTLYSLIQPSRKSGSRKRNHSPSFNSTIYEVIGKSQPKAQNPARLSRKELENFDVYS(SEQ ID NO:337)
CD27：CD27(TNFRSF7)是一种跨膜受体，在人CD8+和CD4+T细胞亚群、NKT细胞、NK细胞亚群和造血祖细胞上表达，并在FOXP3+CD4T细胞和B细胞亚群中诱导。以前的研究发现，CD27可以在体内主动提供共刺激信号，提高人T细胞存活率和抗肿瘤活性。(参见Song andPowell；Oncoimmunology 1,no.4(2012):547-549)。CD27多肽可以具有与如下提供的序列(UniProtKB/Swiss-Prot No.:P26842.2(GenBank NP_001233.1；GI:269849546))相对应的氨基酸序列或其片段。参见GenBank NP_001233以参考CD27内的结构域，例如，1-19位氨基酸的信号肽；20-191位氨基酸的胞外结构域；192-212位氨基酸的跨膜结构域；213-260位氨基酸的胞内结构域。在一些实施方案中，CAR可以包括源自CD27的跨膜结构域。在一些实施方案中，所述CAR的跨膜结构域包含CD27的跨膜区(例如，以下序列的192至212位氨基酸)或其片段。在一些实施方案中，CAR的胞质结构域可以包括源于CD27的共刺激结构域。在一些实施方案中，所述共刺激结构域包含CD27的胞内结构域(例如，以下序列的213至260位氨基酸)或其片段。在一些实施方案中，CAR可以包括两种源于CD27的结构域，分别为共刺激信号传导结构域和跨膜结构域。在一些实施方案中，CAR具有包括CD27的跨膜结构域和胞内结构域的氨基酸序列，并且CAR包括CD27的氨基酸192至260。可以理解的是，如果需要，短于或长于特定描述结构域的CD27序列可以包括在CAR中。
1 MARPHPWWLC VLGTLVGLSA TPAPKSCPER HYWAQGKLCC QMCEPGTFLV KDCDQHRKAA
61 QCDPCIPGVS FSPDHHTRPH CESCRHCNSG LLVRNCTITA NAECACRNGW QCRDKECTEC
121 DPLPNPSLTA RSSQALSPHP QPTHLPYVSE MLEARTAGHM QTLADFRQLP ARTLSTHWPP
181 QRSLCSSDFI RILVIFSGMF LVFTLAGALF LHQRRKYRSN KGESPVEPAE PCHYSCPREE
241 EGSTIPIQED YRKPEPACSP(SEQ ID NO:338)
CD30：CD30及其配体(CD30L)分别属于肿瘤坏死因子受体(TNFR)和肿瘤坏死因子(TNF)超家族的成员。CD30在许多方面的行为与OX40相似，并能增强由TCR刺激诱导的增殖和细胞因子的产生(Goronzy和Weyand，Arthritis research&therapy 10,no.S1(2008):S3)。CD30多肽可以具有与如下提供的序列(GenBank No.:AAA51947.1(GenBank NP_001234.3；GI:180096))相对应的氨基酸序列或其片段。参见GenBank NP_001234.3以参考CD30内的结构域，例如1-18位氨基酸的信号肽；19-385位氨基酸的胞外结构域；386-406位氨基酸的跨膜结构域；407-595位氨基酸的胞内结构域。在一些实施方案中，CAR可包括来源于CD30的跨膜结构域。在一些实施方案中，所述CAR跨膜结构域包括CD30的跨膜区(例如，以下序列的386至406位氨基酸)或其片段。在一些实施方案中，所述CAR胞质结构域可包括源自于CD30的共刺激结构域。在一些实施方案中，所述共刺激结构域包括CD30的胞内结构域(例如，以下序列的407至595位氨基酸)或其片段。在一些实施方案中，CAR可以包括来源于CD30的两种结构域，共刺激信号传导结构域和跨膜结构域。在一些实施方案中，CAR具有包括CD30的跨膜结构域和胞内结构域的氨基酸序列，并且CAR包括CD30的386至595位氨基酸。应理解，如果需要，短于或长于特定描述结构域的CD30序列可以包括在CAR中。
1 MRVLLAALGL LFLGALRAFP QDRPFEDTCH GNPSHYYDKA VRRCCYRCPM GLFPTQQCPQ
61 RPTDCRKQCE PDYYLDEADR CTACVTCSRD DLVEKTPCAW NSSRVCECRP GMFCSTSAVN
121 SCARCFFHSV CPAGMIVKFP GTAQKNTVCE PASPGVSPAC ASPENCKEPS SGTIPQAKPT
181 PVSPATSSAS TMPVRGGTRL AQEAASKLTR APDSPSSVGR PSSDPGLSPT QPCPEGSGDC
241 RKQCEPDYYL DEAGRCTACV SCSRDDLVEK TPCAWNSSRT CECRPGMICA TSATNSCARC
301 VPYPICAAET VTKPQDMAEK DTTFEAPPLG TQPDCNPTPE NGEAPASTSP TQSLLVDSQA
361 SKTLPIPTSA PVALSSTGKP VLDAGPVLFW VILVLVVVVG SSAFLLCHRR ACRKRIRQKL
421 HLCYPVQTSQ PKLELVDSRP RRSSTQLRSG ASVTEPVAEE RGLMSQPLME TCHSVGAAYL
481 ESLPLQDASP AGGPSSPRDL PEPRVSTEHT NNKIEKIYIM KADTVIVGTV KAELPEGRGL
541 AGPAEPELEE ELEADHTPHY PEQETEPPLG SCSDVMLSVE EEGKEDPLPT AASGK(SEQID NO:339)
CD40：CD40是48kD的跨膜糖蛋白表面受体，是肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)的成员之一。以下描述了人CD40的示例性氨基酸序列(参见，例如，登录号：ALQ33424.1,GenBank NP_001241.1,GI:957949089)，CD40最初被认为是表达在APC上的共刺激受体，在B细胞和T细胞活化中发挥核心作用。CD40的配体CD154(也称为TRAP、T-BAM、CD40配体或CD40L)是一种II型整合膜蛋白。参见GenBank NP_001241.1以参考CD40内的结构域，例如1-20位氨基酸的信号肽；21-193位氨基酸的胞外结构域；194-215位氨基酸的跨膜结构域；216-277位氨基酸的胞内结构域。在一些实施方案中，CAR可包括来源于CD40的跨膜结构域。在一些实施方案中，所述CAR跨膜结构域包括CD40的跨膜区(例如，以下序列的194至215位氨基酸)或其片段。在一些实施方案中，所述CAR胞质结构域可包括源自于CD40的共刺激结构域。在一些实施方案中，所述共刺激结构域包括CD40的胞内结构域(例如，以下序列的216至277位氨基酸)或其片段。在一些实施方案中，CAR可以包括来源于CD40的两种结构域，共刺激信号传导结构域和跨膜结构域。在一些实施方案中，CAR具有包括CD40的跨膜结构域和胞内结构域的氨基酸序列，并且CAR包括CD40的194至277位氨基酸。应理解，如果需要，短于或长于特定描述结构域的CD40序列可以包括在CAR中。
MVRLPLQCVLWGCLLTAVHPEPPTACREKQYLINSQCCSLCQPGQKLVSDCTEFTETECLPCGESEFLDTWNRETHCHQHKYCDPNLGLRVQQKGTSETDTICTCEEGWHCTSEACESCVLHRSCSPGFGVKQIATGVSDTICEPCPVGFFSNVSSAFEKCHPWTSCETKDLVVQQAGTNKTDVVCGPQDRLRALVVIPIIFGILFAILLVLVFIKKVAKKPTNKAPHPKQEPQEINFPDDLPGSNTAAPVQETLHGCQPVTQEDGKESRISVQERQ(SEQ ID NO:340)
CD2
CD2分子与其配体CD58的结合共同刺激该T细胞(尤其是CD28缺陷T细胞亚群)的增殖、细胞因子生成和效应功能。CD58广泛表达于包括树突状细胞在内的APC上。CD2的结合在CD28-CD8+T细胞中放大了TCR信号，表明CD2-CD58相互作用具有真正的共刺激作用。CD2信号可促进CD28-CD8+T细胞对病毒感染的控制，但也可促进CD28-CD8+T细胞在持续Ag慢性刺激下的持续扩增(Judith Leitner Jet al.，Immunol，2015年，195(2)477-487)。CD2多肽可以具有与如下提供的序列(序列号：NP_001758.2GI:156071472)相对应的氨基酸序列或其片段。参见GenBank NP_001758.2以参考CD2内的结构域，例如1-24位氨基酸的信号肽；25-209位氨基酸的胞外结构域；210-235位氨基酸的跨膜结构域；236-351位氨基酸的胞内结构域。在一些实施方案中，CAR可包括来源于CD2的跨膜结构域。在一些实施方案中，所述CAR跨膜结构域包括CD2的跨膜区(例如，以下序列的210至235位氨基酸)或其片段。在一些实施方案中，所述CAR胞质结构域可包括来源于CD2的共刺激结构域。在一些实施方案中，所述共刺激结构域包括CD2的胞内结构域(例如，以下序列的236至351位氨基酸)或其片段。在一些实施方案中，CAR可以包括来源于CD2的两种结构域，共刺激传导结构域和跨膜结构域。在一些实施方案中，CAR具有包括CD2的跨膜结构域和胞内结构域的氨基酸序列，并且CAR包括CD2的210至351位氨基酸。应理解，如果需要，短于或长于特定描述结构域的CD2序列可以包括在CAR中。
MSFPCKFVASFLLIFNVSSKGAVSKEITNALETWGALGQDINLDIPSFQMSDDIDDIKWEKTSDKKKIAQFRKEKETFKEKDTYKLFKNGTLKIKHLKTDDQDIYKVSIYDTKGKNVLEKIFDLKIQERVSKPKISWTCINTTLTCEVMNGTDPELNLYQDGKHLKLSQRVITHKWTTSLSAKFKCTAGNKVSKESSVEPVSCPEKGLDIYLIIGICGGGSLLMVFVALLVFYITKRKKQRSRRNDEELETRAHRVATEERGRKPHQIPASTPQNPATSQHPPPPPGHRSQAPSHRPPPPGHRVQHQPQKRPPAPSGTQVHQQKGPPLPRPRVQPKPPHGAAENSLSPSSN(SEQ ID NO:341)
LIGHT
TNF超家族成员14(又称LTg、CD258、HVEML和LIGHT)是参与细胞免疫应答的共刺激受体。LIGHT可以作为共刺激因子起到活化淋巴样细胞和作为疱疹病毒感染阻断的作用。LIGHT已被证实能够刺激T细胞的增殖，引发多种肿瘤细胞的凋亡。LIGHT存在于T细胞和基质细胞中。LIGHT在人PBMC产生的未成熟树突状细胞(DCs)上表达。LIGHT参与共刺激人T细胞增殖、扩增NF-κB信号通路，并在一种抗原信号存在的情况下，优先诱导IFN-γ(而不是IL-4)的产生。(Tamada Ket al.,J Immunol，2000,164(8)4105-4110)。LIGHT多肽可以具有与如下提供的序列(登录号：NP_001363816.1GI：1777376047)相对应的氨基酸序列或其片段。参见GenBank NP_001363816.1以参考LIGHT内的结构域，如1-37位氨基酸的胞内结构域；38-58位氨基酸的跨膜结构域；59-240位氨基酸的胞外结构域。在一些实施方案中，所述CAR胞质结构域可以包括来源于LIGHT的共刺激结构域。在一些实施方案中，所述共刺激结构域包括LIGHT的胞内结构域(例如，以下序列的1至37位氨基酸)或其片段。应理解，如果需要，短于或长于特定描述结构域的LIGHT序列可以包括在CAR中。
MEESVVRPSVFVVDGQTDIPFTRLGRSHRRQSCSVARVGLGLLLLLMGAGLAVQGWFLLQLHWRLGEMVTRLPDGPAGSWEQLIQERRSHEVNPAAHLTGANSSLTGSGGPLLWETQLGLAFLRGLSYHDGALVVTKAGYYYIYSKVQLGGVGCPLGLASTITHGLYKRTPRYPEELELLVSQQSPCGRATSSSRVWWDSSFLGGVVHLEAGEKVVVRVLDERLVRLRDGTRSYFGAFMV(SEQ ID NO:342)
GITR
TNF受体超家族成员18(也称为TNFRSF18、AITR、GITR；CD357；GITR-D；ENERGEN)在T细胞激活时表达增加。通过GITR刺激T细胞可以增强对肿瘤和病毒病原体的免疫力，并加剧自身免疫性疾病。通过GITR刺激的效应通常被认为是由于免疫抑制性CD4+CD25+调节性T(TReg)细胞的效应活性减弱所致。(Shevach,E.and Stephens,G.Nat Rev Immunol 6,613–618(2006))。GITR多肽可以具有与如下提供的序列(登录号：AAI52382.1，GenBank NP_004186.1，GI：158931986)相对应的氨基酸序列或其片段。参见GenBank NP_004186.1以参考GITR内的结构域，例如1-25位氨基酸的信号肽；26-162位氨基酸的胞外结构域；163-183位氨基酸的跨膜结构域；184-241位氨基酸的胞内结构域。在一些实施方案中，CAR可包括源自GITR的跨膜结构域。在一些实施方案中，所述CAR跨膜结构域包括GITR的跨膜区(例如，以下序列的163至183位氨基酸)或其片段。在一些实施方案中，所述CAR胞质结构域可以包括来源于GITR的共刺激结构域。在一些实施方案中，所述共刺激结构域包括GITR的胞内结构域(例如，以下序列的184至241位氨基酸)或其片段。在一些实施方案中，CAR可以包括来源于GITR的两种结构域，共刺激信号传导结构域和跨膜结构域。在一些实施方案中，CAR具有包括GITR的跨膜结构域和胞内结构域的氨基酸序列，并且CAR包括GITR的163至241位氨基酸。应理解，如果需要，短于或长于特定描述结构域的GITR序列可以包括在CAR中。
MAQHGAMGAFRALCGLALLCALSLGQRPTGGPGCGPGRLLLGTGTDARCCRVHTTRCCRDYPGEECCSEWDCMCVQPEFHCGDPCCTTCRHHPCPPGQGVQSQGKFSFGFQCIDCASGTFSGGHEGHCKPWTDCTQFGFLTVFPGNKTHNAVCVPGSPPAEPLGWLTVVLLAVAACVLLLTSAQLGLHIWQLRSQCMWPRETQLLLEVPPSTEDARSCQFPEEERGERSAEEKGRLGDLWV(SEQ ID NO:343)
DR3
TNF受体超家族成员25(又称DR3、TR3、DDR3、LARD、APO-3、TRAMP、WSL-1、GEF720、WSL-LR、PLEKHG5或TNFRSF12)在富含淋巴细胞的组织中优先表达，并在调节淋巴细胞稳态中发挥作用。此受体可刺激NF-κB激活并调节细胞凋亡。此受体的信号转导是由各种含有转接蛋白的死亡结构域介导的。已有报道该基因编码不同亚型的多个选择性剪接转录变体，其中大部分是潜在的分泌分子。该基因在B细胞和T细胞中的选择性剪切在T细胞激活时遇到程序性变化，所述选择性剪切主要产生全长膜结合亚型，并参与控制T细胞激活诱导的淋巴细胞增殖。DR3多肽可以具有与如下提供的序列(登录号：AAI17190.1、GenBank NP_003781.1GI:109658976)相对应的氨基酸序列或其片段。参见GenBank NP_003781.1以参考DR3内的结构域，例如1-24位氨基酸的信号肽；25-199位氨基酸的胞外结构域；200-220位氨基酸的跨膜结构域；221-417位氨基酸的胞内结构域。在一些实施方案中，CAR可包括来源于DR3的跨膜结构域。在一些实施方案中，所述CAR跨膜结构域包括DR3的跨膜区(例如，以下序列的200至220位氨基酸)或其片段。在一些实施方案中，所述CAR胞质结构域可包括源自于DR3的共刺激结构域。在一些实施方案中，所述共刺激结构域包括DR3的胞内结构域(例如，以下序列的221至417位氨基酸)或其片段。在一些实施方案中，CAR可以包括来源于DR3的两种结构域，共刺激信号传导结构域和跨膜结构域。在一个实施方案中，CAR具有包括DR3的跨膜结构域和胞内结构域的氨基酸序列，并且CAR包括DR3的200至417位氨基酸。应理解，如果需要，短于或长于特定描述结构域的DR3序列可以包括在CAR中。
MEQRPRGCAAVAAALLLVLLGARAQGGTRSPRCDCAGDFHKKIGLFCCRGCPAGHYLKAPCTEPCGNSTCLVCPQDTFLAWENHHNSECARCQACDEQASQVALENCSAVADTRCGCKPGWFVECQVSQCVSSSPFYCQPCLDCGALHRHTRLLCSRRDTDCGTCLPGFYEHGDGCVSCPTSTLGSCPERCAAVCGWRQMFWVQVLLAGLVVPLLLGATLTYTYRHCWPHKPLVTADEAGMEALTPPPATHLSPLDSAHTLLAPPDSSEKICTVQLVGNSWTPGYPETQEALCPQVTWSWDQLPSRALGPAAAPTLSPESPAGSPAMMLQPGPQLYDVMDAVPARRWKEFVRTLGLREAEIEAVEVEIGRFRDQQYEMLKRWRQQQPAGLGAVYAALERMGLDGCVEDLRSRLQRGP(SEQ ID NO:344)
CD43
CD43(又称SPN载唾液酸蛋白、LSN、GALGP、GPL115)是一种高度唾液酸化的糖蛋白，在T细胞的抗原特异性活化中起作用，并存在于胸腺细胞、T淋巴细胞、单核细胞、粒细胞和一些B淋巴细胞表面。CD43包含粘蛋白样胞外结构域、跨膜区和羧基末端胞内区。在受刺激的免疫效应细胞中，某些细胞类型的胞外结构域发生蛋白水解裂解，释放可溶性胞外片段。CD43多肽可以具有与如下提供的序列(GenBank NP_003114.1，登录号：EAW80016.1 GI：119600422)相对应的氨基酸序列或其片段。参见GenBank NP_003114.1以参考CD43内的结构域，如1-19位氨基酸的信号肽；20-253位氨基酸的胞外结构域；254-276位氨基酸的跨膜结构域；277-400位氨基酸的胞内结构域。在一些实施方案中，CAR可包括来源于CD43的跨膜结构域。在一些实施方案中，所述CAR跨膜结构域包括CD43的跨膜区(例如，以下序列的254至276位氨基酸)或其片段。在一些实施方案中，所述CAR胞质结构域可包括源自于CD43的共刺激结构域。在一些实施方案中，所述共刺激结构域包括CD43的胞内结构域(例如，以下序列的277至400位氨基酸)或其片段。在一些实施方案中，CAR可以包括来源于CD43的两种结构域，共刺激信号传导结构域和跨膜结构域。在一些实施方案中，CAR具有包括CD43的跨膜结构域和胞内结构域的氨基酸序列，并且CAR包括CD43的254至400位氨基酸。应理解，如果需要，短于或长于特定描述结构域的CD43序列可以包括在CAR中。
MATLLLLLGVLVVSPDALGSTTAVQTPTSGEPLVSTSEPLSSKMYTTSITSDPKADSTGDQTSALPPSTSINEGSPLWTSIGASTGSPLPEPTTYQEVSIKMSSVPQETPHATSHPAVPITANSLGSHTVTGGTITTNSPETSSRTSGAPVTTAASSLETSRGTSGPPLTMATVSLETSKGTSGPPVTMATDSLETSTGTTGPPVTMTTGSLEPSSGASGPQVSSVKLSTMMSPTTSTNASTVPFRNPDENSRGMLPVAVLVALLAVIVLVALLLLWRRRQKRRTGALVLSRGGKRNGVVDAWAGPAQVPEEGAVTVTVGGSGGDKGSGFPDGEGSSRRPTLTTFFGRRKSRQGSLAMEELKSGSGPSLKGEEEPLVASEDGAVDAPAPDEPEGGDGAAP(SEQ ID NO:345)
CD4
分化簇4(CD4)又称T细胞表面糖蛋白CD4，是存在于辅助性T细胞、单核细胞、巨噬细胞和树突状细胞等免疫细胞表面的糖蛋白。在一些实施方案中，CAR可包括来源于CD4的跨膜结构域。CD4存在多种异构体。可以理解的是，可以选择任何异构体来实现所需的功能。示例性的异构体包括异构体1(NP_000607.1，GI:10835167)、异构体2(NP_001181943.1，GI:303522479)、异构体3(NP_001181944.1，GI:303522485；或NP_001181945.1，GI:303522491；或NP_001181946.1，GI:303522569)等。下面提供了示例性异构体，即异构体1的序列。参见GenBank NP_000607.1以参考CD4内的结构域，例如如1-25位氨基酸的信号肽；26-396位氨基酸的胞外结构域；397-418位氨基酸的跨膜结构域；419-458位氨基酸的胞内结构域。在一些实施方案中，CAR可包括来源于CD4的跨膜结构域。在一些实施方案中，所述CAR跨膜结构域包括CD4的跨膜区(例如，以下序列的397至418位氨基酸)或其片段。应理解，如果需要，397至418位氨基酸的跨膜结构域之外的CD4附加序列可以包括在CAR中。进一步可以理解的是，如果需要，短于或长于特定描述结构域的CD4序列可以包括在CAR中。
1 MNRGVPFRHL LLVLQLALLP AATQGKKVVL GKKGDTVELT CTASQKKSIQ FHWKNSNQIK
61 ILGNQGSFLT KGPSKLNDRA DSRRSLWDQG NFPLIIKNLK IEDSDTYICE VEDQKEEVQL
121LVFGLTANSD THLLQGQSLT LTLESPPGSS PSVQCRSPRG KNIQGGKTLS VSQLELQDSG
181 TWTCTVLQNQ KKVEFKIDIV VLAFQKASSI VYKKEGEQVE FSFPLAFTVE KLTGSGELWW
241 QAERASSSKS WITFDLKNKE VSVKRVTQDP KLQMGKKLPL HLTLPQALPQ YAGSGNLTLA
301 LEAKTGKLHQ EVNLVVMRAT QLQKNLTCEV WGPTSPKLML SLKLENKEAK VSKREKAVWV
361 LNPEAGMWQC LLSDSGQVLL ESNIKVLPTW STPVQPMALI VLGGVAGLLL FIGLGIFFCV
421 RCRHRRRQAE RMSQIKRLLS EKKTCQCPHR FQKTCSPI(SEQ ID NO:346)
CD8
分化簇8(CD8)是跨膜糖蛋白，其作为T细胞受体(TCR)的共受体。CD8与主要组织相容性复合物(MHC)分子结合，并且对I类MHC蛋白具有特异性。在一些实施方案中，CAR可包括来源于CD8的跨膜结构域。CD8多肽可以具有与如下提供的序列(GenBank No.:NP_001139345.1(GI:225007536))相对应的氨基酸序列或其片段。参见GenBank NP_001139345.1以参考CD8内的结构域，例如1-21位氨基酸的信号肽；22-182位氨基酸的胞外结构域；183-203位氨基酸的跨膜结构域；204-235位氨基酸的胞内结构域。在一些实施方案中，CAR可以包括源自CD8的铰链结构域。在一些实施方案中，所述铰链结构域可以包括下面提供的所述CD8多肽的氨基酸137-182。在一些实施方案中，CAR可以包含源于CD8(例如，如下所述的序列的1至21位氨基酸)的信号肽。在一些实施方案中，CAR可以包括源自CD8的跨膜结构域。在一些实施方案中，所述CAR的跨膜结构域包含CD8(例如，如下所述的序列的183至203位氨基酸)的跨膜区，或其片段。在另一个实施方案中，CAR可以包括下面提供的CD8多肽的137-203位氨基酸。在另一个实施方案中，CAR可以包含以下提供的CD8多肽的137至209位氨基酸。应理解，如果需要，除了第137至182位氨基酸的铰链结构域和第183至203位氨基酸的跨膜结构域之外的额外的CD8序列可以包括在CAR中。进一步可以理解的是，如果需要，短于或长于特定描述结构域的CD8序列可以包括在CAR中。
1 MALPVTALLL PLALLLHAAR PSQFRVSPLD RTWNLGETVE LKCQVLLSNP TSGCSWLFQP
61 RGAAASPTFL LYLSQNKPKA AEGLDTQRFS GKRLGDTFVL TLSDFRRENE GYYFCSALSN
121 SIMYFSHFVP VFLPAKPTTT PAPRPPTPAP TIASQPLSLR PEACRPAAGG AVHTRGLDFA
181 CDIYIWAPLA GTCGVLLLSL VITLYCNHRN RRRVCKCPRP VVKSGDKPSL SARYV(SEQID NO:347)
如此，出于示例性目的，本发明公开的CAR从N-末端到C-末端可以包括，抗CD123抗体或抗原结合片段(例如，本发明公开的scFvs)、铰链(例如，CD8铰链或CD28铰链)、跨膜区(例如，CD8跨膜区或CD28跨膜区)，共刺激结构域(例如，4-1BB，CD28或两者的胞内信号传导结构域)和信号传导结构域(例如，CD3ζ的T细胞信号传导结构域)。
在一些实施方案中，本发明提供的抗CD123 CAR具有SEQ ID NO:369的氨基酸序列，所述氨基酸序列可由例如SEQ ID NO:372的核苷酸序列编码。在一些实施方案中，本发明提供的CAR具有与SEQ ID NO:369有至少85％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的CAR具有与SEQ ID NO:369有至少88％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的CAR具有与SEQ ID NO:369有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的CAR具有与SEQ ID NO:369有至少95％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的CAR具有与SEQ ID NO:369有至少97％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的CAR具有与SEQ ID NO:369有至少99％同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本发明提供的CAR具有SEQ ID NO:370的氨基酸序列，所述氨基酸序列可由例如SEQ ID NO:373的核苷酸序列编码。在一些实施方案中，本发明提供的CAR具有与SEQ ID NO:370有至少85％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的CAR具有与SEQ ID NO:370有至少88％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的CAR具有与SEQ ID NO:370有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的CAR具有与SEQ ID NO:370有至少95％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的CAR具有与SEQ ID NO:370有至少97％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的CAR具有与SEQ ID NO:370有至少99％同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本发明提供的CAR具有SEQ ID NO:371的氨基酸序列，所述氨基酸序列可由例如SEQ ID NO:374的核苷酸序列编码。在一些实施方案中，本发明提供的CAR具有与SEQ ID NO:371有至少85％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的CAR具有与SEQ ID NO:371有至少88％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的CAR具有与SEQ ID NO:371有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的CAR具有与SEQ ID NO:371有至少95％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的CAR具有与SEQ ID NO:371有至少97％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的CAR具有与SEQ ID NO:371有至少99％同一性的氨基酸序列。
5.4多核苷酸与载体
本发明还提供了编码本发明所述多肽(例如，抗CD123抗体或抗原结合片段或特异性结合CD123的CAR)的多核苷酸。术语“编码多肽的多核苷酸”涵盖：只包括所述多肽的编码序列的多核苷酸；以及包括附加编码和/或非编码序列的多核苷酸。本发明的多核苷酸可以为RNA的形式或DNA的形式。DNA可以是cDNA、基因组DNA或合成DNA，也可以是双链或单链。单链DNA可以是编码链或非编码(反义)链。本发明公开的多核苷酸可以是mRNA。
本发明明确预期了编码本发明公开的任何抗CD123抗体或抗原结合片段的多核苷酸。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸编码本发明公开的抗CD123抗体或抗原结合片段，所述抗CD123抗体或抗原结合片段包含：(a)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含(1)具有选自由SEQ ID NOs:1-29组成的群组中的氨基酸序列的VL CDR1；(2)具有选自由SEQ ID NOs:30-56组成的群组中的氨基酸序列的VL CDR2；和(3)具有选自由SEQ ID NOs:57-88组成的群组中的氨基酸序列的VL CDR3；或其变体，所述变体在VL CDR中具有至多约5个氨基酸的替换、添加和/或缺失，和/或，(b)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含(1)具有选自由SEQ ID NOs:89-109组成的群组中的氨基酸序列的VH CDR1；(2)具有选自由SEQID NOs:110-133组成的群组中的氨基酸序列的VH CDR2；和(3)具有选自由SEQ ID NOs:134-163组成的群组中的氨基酸序列的VH CDR3；或其变体，所述变体在VH CDR中具有至多约5个氨基酸的替换、添加和/或缺失。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸编码本发明公开的抗CD123抗体或抗原结合片段，所述CD123抗体或抗原结合片段包含：(a)轻链可变区(VL)，其与选自由SEQ ID Nos:164-198组成的群组中的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％的序列同一性；和/或，(b)重链可变区(VH)，其与选自由SEQ ID NOs:199-233组成的群组中的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％的序列同一性。所述多核苷酸可以是DNA的形式。所述多核苷酸可以是mRNA的形式。
在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸编码本发明公开的包含VL和VH的抗CD123抗体或抗原结合片段，其中VL包含VL CDR1、CDR2和CDR3，并且VH包含VH CDR1、CDR2和CDR3，其中VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3，VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3分别具有(1)SEQ IDNOs:3,33,61,91,112和136；(2)SEQ ID NOs:17,45,75,89,122和149；(3)SEQ ID NOs:7,37,66,95,116和140；(4)SEQ ID NOs:18,32,76,100,123和150；(5)SEQ ID NOs:23、50、82、99、129和157；(6)SEQ ID NOs：24、51、83、106、128和158；(7)SEQ ID NOs：8、38、67、96、117和141；(8)SEQ ID NOs：4、34、62、89、110和134；(9)SEQ ID NOs：25、52、84、107、130和159；(10)SEQ ID NOs：26、53、85、95、116和160；(11)SEQ ID NOs：2、32、60、90、111和135；(12)SEQ ID NOs：17、46、77、101、124和151；(13)SEQ ID NOs：27、54、86、105、131和161；(14)SEQID NOs:9、39、68、97、118和142；(15)SEQ ID NOs:10、40、69、98、119和143；(16)SEQ IDNOs:22、49、81、105、128和156；(17)SEQ ID NOs:5、35、63、92、113和137；(18)SEQ ID NOs：1，30，64，93，114和138；(19)SEQ ID NOs:11，41，70，91，120和144；(20)SEQ ID NOs:1，31，59，89，110和134；(21)SEQ ID NOs:19，47，78，102，125和152；(22)SEQ ID NOs:28，55，87，108，132和162；(23)SEQ ID NOs：12、39、71、96、117和145；(24)SEQ ID NOs:13、42、72、95、116和146；(25)SEQ ID NOs:1、30、57、89、110和134；(26)SEQ ID NOs：20、48、79、103、126和153；(27)SEQ ID NOs：14、43、67、96、117和141；(28)SEQ ID NOs:1、30、58、89、110和134；(29)SEQ ID NOs:2、32、60、90、111和135；(30)SEQ ID NOs:15、44、73、99、121和147；(31)SEQ ID NOs：29、56、88、109、133和163；(32)SEQ ID NOs:22、49、81、104、127和155；(33)SEQID NOs:16、42、74、95、116和148；(34)SEQ ID NOs:6、36、65、94、115和139；或(35)SEQ IDNos:21、45、80、89、122和154的氨基酸序列；或其变体，所述变体在所述CDR中具有至多约5个氨基酸的替换、添加和/或缺失。所述多核苷酸可以是DNA的形式。所述多核苷酸可以是mRNA的形式。
在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸编码本发明公开的包含VL和VH的抗CD123抗体或抗原结合片段，其中，所述VL和VH分别具有(1)SEQ ID NOs:164和199；(2)SEQID NOs:165和200；(3)SEQ ID NOs:166和201；(4)SEQ ID NOs:167和202；(5)SEQ ID NOs:168和203；(6)SEQ ID NOs:169和204；(7)SEQ ID NOs:170和205；(8)SEQ ID NOs:171和206；(9)SEQ ID NOs：172和207；(10)SEQ ID NOs:173和208；(11)SEQ ID NOs:174和209；(12)SEQ ID NOs:175和210；(13)SEQ ID NOs：176和211；(14)SEQ ID NOs:177和212；(15)SEQ ID NOs:178和213；(16)SEQ ID NOs:179和214；(17)SEQ ID NOs:180和215；(18)SEQID NOs：181和216；(19)SEQ ID NOs:182和217；(20)SEQ ID NOs:183和218；(21)SEQ IDNOs:184和219；(22)SEQ ID NOs:185和220；(23)SEQ ID NOs:186和221；(24)SEQ ID NOs:187和222；(25)SEQ ID NOs:188和223；(26)SEQ ID NOs:189和224；(27)SEQ ID NOs：190和225；(28)SEQ ID NOs:191和226；(29)SEQ ID NOs:192和227；(30)SEQ ID NOs:193和228；(31)SEQ ID NOs:194和229；(32)SEQ ID NOs:195和230；(33)SEQ ID NOs:196和231；(34)SEQ ID NOs:197和232；或(35)SEQ ID NOs:198和233的氨基酸序列。所述多核苷酸可以是DNA的形式。所述多核苷酸可以是mRNA的形式。
在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸编码本发明公开的抗CD123抗体或抗原结合片段，所述抗CD123抗体或抗原结合片段包含与选自由SEQ ID NOs:164-198组成的群组中的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的VL。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与选自由SEQ ID NOs:234-268组成的群组中的核苷酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:234具有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:235有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:236有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:237有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:238有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:239有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:240有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:241有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:242有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:243有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:244有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:245有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ IDNO:246有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:247有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:248有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:249有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:250有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:251有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:252有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:253有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:254有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ IDNO:255有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:256有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:257有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:258有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:259有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:260有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:261有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:262有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:263有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ IDNO:264有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:265有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:266有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:267有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:268有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。本发明还提供一种多核苷酸，其与具有选自由SEQ ID NOs:234-268组成的群组中的核苷酸序列的多核苷酸杂交。在一些实施方案中，所述杂交是在本领域技术人员已知的高度严格的条件下进行的。所述多核苷酸可以是DNA的形式。所述多核苷酸可以是mRNA的形式。
在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸编码本发明公开的抗CD123抗体或抗原结合片段，所述抗CD123抗体或抗原结合片段包括VH，所述VH与选自由SEQ ID NOs:199-233组成的群组中的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与选自由SEQ ID NOs:269-303组成的群组中的核苷酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:269有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:270有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:271有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:272有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:273有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:274有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:275有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:276有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:277有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:278有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:279有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:280有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ IDNO:281有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:282有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:283有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:284有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:285有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:286有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:287有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:288有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:289有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ IDNO:290有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:291有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:292有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:293有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:294有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:295有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:296有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:297有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:298有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ IDNO:299有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:300有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:301有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:302有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸具有与SEQ ID NO:303有至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的核苷酸序列。本发明还提供一种多核苷酸，其与具有选自由SEQ ID NOs:269-303所示序列组成的群组的核苷酸序列的多核苷酸杂交。在一些实施方案中，所述杂交是在本领域技术人员已知的高度严格的条件下进行的。所述多核苷酸可以是DNA的形式。所述多核苷酸可以是mRNA的形式。
在一些实施方案中，VL和VH通过连接子连接。所述连接子可以为柔性连接子或刚性连接子。在一些实施方案中，所述连接子具有(GGGGS)n，n＝1、2、3、4或5(SEQ ID NO:410)的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述连接子具有(EAAAK)n,n＝1,2,3,4,或5(SEQ IDNO:411)的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述连接子具有(PA)nP，n＝1、2、3、4或5(SEQID NO:412)的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述连接子具有GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ IDNO:320)的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述连接子具有GGGGS(SEQ ID NO:413)的氨基酸序列。
本发明还提供了本发明所述的多核苷酸的变体，其中，所述变体编码，例如，本发明所述的抗CD123抗体或抗原结合片段的片段、类似物和/或衍生物。在一些实施方案中，本发明提供了一种多核苷酸，其核苷酸序列与编码本发明所述抗CD123抗体或抗原结合片段的多核苷酸序列有至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，或至少约99％的同一性。在一些实施方案中，本发明提供了一种多核苷酸，其核苷酸序列与编码本发明所述抗CD123抗体或抗原结合片段的多核苷酸序列有至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，或至少约99％的同一性。
在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸编码抗CD123抗体或抗原结合片段，所述抗CD123抗体或抗原结合片段是命名为C1、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9、C10、C11、C12、C13、C14、C15、C16、C17、C18、C19、C20、C21、C22、C23、C24、C25、C26、C27、C28、C29、C30、C31、C32、C33、C34或C35的人scFv。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸编码抗CD123抗体或抗原结合片段，所述抗CD123抗体或抗原结合片段具有选自由SEQ ID NOs:375-409组成的群组中的氨基酸序列。
本发明还提供了编码本发明所述的TCRs的多核苷酸。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸编码TCRα链，所述TCRα链包括本发明所述的抗CD123抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸编码TCRβ链，所述TCRβ链包括本发明所述的抗CD123抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸编码TCRγ链，所述TCRγ链包括本发明所述的抗CD123抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，本发明提供的多核苷酸编码TCRδ链，所述TCRδ链包括本发明所述的抗CD123抗体或抗原结合片段。所述多核苷酸可以是DNA的形式。所述多核苷酸可以是mRNA的形式。
本发明还提供了编码本发明所述的CAR的多核苷酸。在一些实施方案中，本发明提供了编码特异性结合CD123的CAR的多核苷酸，所述CAR包括：从N-末端到C-末端的(a)CD123结合结构域，所述CD123结合结构域包括本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段；(b)跨膜结构域；和(C)胞质结构域。所述跨膜结构域和胞质结构域可以是本发明公开的任何跨膜结构域和胞质结构域。出于说明性目的，本发明提供了例如，特异性结合CD123的CAR,所述CAR从N-末端到C-末端包括：(a)CD123结合结构域，所述CD123结合结构域包括本发明提供的抗CD123 scFv；(b)跨膜结构域，所述跨膜结构域包括CD28跨膜区；和(C)胞质结构域，所述胞质结构域包括CD3ζ信号传导结构域和4-1BB共刺激结构域。所述多核苷酸可以是DNA的形式。所述多核苷酸可以是mRNA的形式。
如本发明所用，短语“具有与多核苷酸序列至少约95％同一性的核苷酸序列的多核苷酸”是指，除了参考序列的每100个核苷酸中最多可以包括5个点突变，该多核苷酸的核苷酸序列与参考序列相同。换言之，要获得序列与参考核苷酸序列有至少95％同一性的多核苷酸，参考序列中最多5％的核苷酸可以被删除或用其他核苷酸替换，或者可以将参考序列中占总核苷酸数量最多5％的核苷酸插入到参考序列中。参考序列的这些突变可以发生在参考核苷酸序列的5'或3'末端位点或这些末端位点之间的任何地方，个别地穿插在参考序列中的核苷酸之间或在参考序列中的一个或多个连续基团中。
所述多核苷酸变体可以在编码区、非编码区或两者处包含改变。在一些实施方案中，多核苷酸变体包含产生沉默替换、添加或缺失的改变，但不改变编码多肽的性质或活性。在一些实施方案中，多核苷酸变体包括导致多肽的氨基酸序列不改变的沉默替换(由于遗传密码子的简并)。多核苷酸变体的产生有多种原因，例如，优化特定宿主(例如，将人mRNA中的密码子变为细菌(如大肠杆菌)优选的密码子)的密码子表达。在一些实施方案中，多核苷酸变体在序列的非编码区或编码区中包括至少一个沉默突变。
在一些实施方案中，制备多核苷酸变体以调节或改变编码多肽的表达(或表达水平)。在一些实施方案中，制备多核苷酸变体以增加编码多肽的表达。在一些实施方案中，制备多核苷酸变体以减少编码多肽的表达。在一些实施方案中，与亲本多核苷酸序列相比，多核苷酸变体增加了编码多肽的表达。在一些实施方案中，与亲本多核苷酸序列相比，多核苷酸变体降低了编码多肽的表达。
在一些实施方案中，多核苷酸具有的核苷酸序列与编码选自SEQ ID NOS:164-233的氨基酸序列的多核苷酸具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性。本发明还提供了一种多核苷酸，所述多核苷酸与编码选自SEQ ID NOs:164-233的氨基酸序列的多核苷酸杂交。在一些实施方案中，所述杂交是在本领域技术人员已知的高度严格的条件下进行的。
在一些实施方案中，多核苷酸包括一种多肽(例如，CAR或抗体)的编码序列，该编码序列在同一阅读框中与有助于来自宿主细胞的多肽的表达和分泌的多核苷酸(例如，作为控制多肽转运的分泌序列的前导序列)融合。所述多肽可以具有被宿主细胞切割的先导序列，以形成“成熟的”多肽形式。
在一些实施方案中，多核苷酸包括一种多肽(例如，CAR或抗体)的编码序列，该编码序列在同一阅读框中与标记或标签序列融合。例如，在一些实施方案中，所述标记序列为六-组氨酸标签(HIS-tag)，其使与标记融合的多肽高效纯化。在一些实施方案中，当使用哺乳动物宿主(例如，COS-7细胞)时，所述标记序列为源自流感血凝素蛋白的血凝素(HA)标签。在一些实施方案中，所述标记序列为FLAGTM标签。在一些实施方案中，标记可与其他标记或标签结合使用。
在一些实施方案中，多核苷酸为分离的。在一些实施方案中，多核苷酸为基本纯化的。
本发明还提供了包含本发明所述多核苷酸的载体和细胞。在一些实施方案中，提供了包含本发明所提供的多核苷酸的载体。所述载体可以为表达载体。在一些实施方案中，本发明提供的载体包括编码本发明所述抗CD123抗体或抗原结合片段的多核苷酸。在一些实施方案中，本发明提供的载体包括编码一种多肽的多核苷酸，所述多肽是本发明所述抗CD123抗体或抗原结合片段的一部分。在一些实施方案中，本发明提供包括编码本发明所述CAR或TCR的多核苷酸的载体。在一些实施方案中，本发明提供包括编码一种多肽的多核苷酸的载体，所述多肽为本发明所述CAR或TCR的一部分。
在一些实施方案中，本发明提供重组表达载体，其可用于扩增和表达编码本发明所述CAR/TCR或所述抗CD123抗体或抗原结合片段的多核苷酸，所述CAR/TCR特异性结合CD123。例如重组表达载体可以是可复制的DNA构建体，其包括合成的或来源于cDNA的DNA片段，所述DNA片段编码CAR/TCR或抗CD123抗体的多肽链，并与源自哺乳动物、微生物、病毒或昆虫基因的合适转录和/或翻译调控元件可操作连接。在一些实施方案中，使用病毒载体。当DNA区域在功能上相互联系时，它们即为“可操作连接”。例如，如果启动子控制序列的转录，则其与编码序列可操作连接；或者如果核糖体结合位点的位置允许翻译，则其与编码序列可操作连接。在一些实施方案中，拟用于某些表达系统的结构元件包括先导序列，该先导序列可以使宿主细胞能够在细胞外分泌翻译的蛋白。在一些实施方案中，在重组蛋白的表达没有先导或转运序列的情况下，多肽可以包括N-末端蛋氨酸残基。
可以使用多种表达宿主/载体的组合。对真核宿主有用的表达载体包括，例如，包含来自SV40、牛乳头瘤病毒、腺病毒和巨细胞病毒的表达控制序列的载体。对细菌宿主有用的表达载体包括已知的细菌质粒，例如来自大肠杆菌的质粒，包括pCR1、pBR322、pMB9及其衍生物，以及更广泛宿主范围的质粒，如M13和其他丝状单链DNA噬菌体。
在一些实施方案中，本发明所述的CAR/TCR或所述的抗CD123抗体或抗原结合片段在一个或多个载体中表达。适合表达的宿主细胞包括原核生物、酵母细胞、昆虫细胞或在适当启动子控制下的高等真核细胞。用于细菌、真菌、酵母和哺乳动物细胞宿主的合适的克隆和表达载体，以及蛋白质制备方法，包括抗体制备方法在本领域是众所周知的。
合适的哺乳动物宿主细胞系的例子包括但不限于COS-7(来源于猴肾)、L-929(来源于鼠成纤维细胞)、C127(来源于鼠乳腺肿瘤)、3T3(来源于鼠成纤维细胞)、CHO(来源于中国仓鼠卵巢)、HeLa(来源于人宫颈癌)、BHK(来源于仓鼠肾成纤维细胞)、HEK-293(来源于人胚肾)细胞系及其变体。哺乳动物表达载体可以包括非转录元件(例如,复制起点)，与待表达基因连接的合适启动子和增强子，以及其他5'或3'侧翼的非转录序列和5'或3'非翻译序列(例如，必要的核糖体结合位点、多聚腺苷酸化位点、剪接供体和受体位点，以及转录终止序列)。重组蛋白在昆虫细胞培养系统(如杆状病毒)中的表达也为生产正确折叠和生物功能的蛋白提供了强有力的方法。用于在昆虫细胞中生产异源蛋白的杆状病毒系统是本领域技术人员所熟知的。
本发明还提供了包含本发明所述多肽的宿主细胞、编码本发明所述多肽的多核苷酸或包含此类多核苷酸的载体。在一些实施方案中，本发明提供了包含载体的宿主细胞，所述载体包含本发明所述的多核苷酸。在一些实施方案中，本发明提供了包含载体的宿主细胞，所述载体包括编码本发明所述的抗CD123抗体或抗原结合片段的多核苷酸。在一些实施方案中，本发明提供了包含载体的宿主细胞，所述载体包括编码多肽的多核苷酸，所述多肽为本发明所述的抗CD123抗体或抗原结合片段的一部分。在一些实施方案中，本发明提供了包含多核苷酸的宿主细胞，所述多核苷酸编码本发明所述的抗CD123抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，所述细胞产生本发明所述的抗CD123抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，本发明提供了包含载体的宿主细胞，所述载体包括编码本发明所述的CAR或TCR的多核苷酸。在一些实施方案中，本发明提供了包含载体的宿主细胞，所述载体包括编码多肽的多核苷酸分子，所述多肽为本发明所述的CAR或TCR的一部分。在一些实施方案中，本发明提供了包含多核苷酸的宿主细胞，所述多核苷酸编码本发明所述的CAR或TCR。在一些实施方案中，所述宿主细胞产生本发明所述的CD123 CARs或TCRs。
5.5细胞
本发明还提供了包括本发明所述的多核苷酸的细胞。在一些实施方案中，本发明提供了包含多核苷酸的细胞，所述多核苷酸编码本发明所述的多肽。在一些实施方案中，本发明提供了包含载体的细胞，所述载体包含本发明所述的多核苷酸。在一些实施方案中，本发明提供了能够重组表达本发明所述的多肽的细胞。所述多肽可以是抗CD123抗体或抗原结合片段。所述多肽可以是CD123 CAR。所述多肽可以是CD123 TCR。
在一些实施方案中，本发明提供的细胞是免疫效应细胞。在一些实施方案中，所述免疫效应细胞选自由T细胞、B细胞、自然杀伤(NK)细胞、NKT细胞、巨噬细胞、粒细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、肥大细胞和嗜碱性粒细胞组成的组。在一些实施方案中，本发明提供的免疫效应细胞选自由T细胞、NK细胞、NKT细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和粒细胞组成的组。在一些实施方案中，本发明提供的免疫效应细胞是T细胞。在一些实施方案中，本发明提供的免疫效应细胞是NK细胞。在一些实施方案中，本发明提供的免疫效应细胞是NKT细胞。在一些实施方案中，本发明提供的免疫效应细胞是巨噬细胞。在一些实施方案中，本发明提供的免疫效应细胞是中性粒细胞。在一些实施方案中，本发明提供的免疫效应细胞是粒细胞。
在一些实施方案中，本发明提供的免疫效应细胞可以被基因工程化改造。在一些实施方案中，本发明提供的经基因工程改造免疫效应细胞是分离的。在一些实施方案中，本发明提供的经基因工程改造的免疫效应细胞是基本纯化的。
如此，在一些实施方案中，本发明提供了重组表达本发明所述的多肽(例如，抗体或CAR)的免疫效应细胞。本发明还提供了包含多核苷酸或载体的免疫效应细胞(例如，T细胞)，所述多核苷酸编码本发明所公开的多肽(例如，抗体或CAR)，所述载体包含本发明所公开的多核苷酸。在一些实施方案中，本发明提供了免疫效应细胞(例如，T细胞)，其包含编码本发明所述的抗CD123抗体或抗原结合片段的多核苷酸。在一些实施方案中，本发明提供了重组表达本发明所述的抗CD123抗体或抗原结合片段的免疫效应细胞(例如，T细胞)。在一些实施方案中，本发明提供了免疫效应细胞，其包含编码本发明所述的CD123 CAR的多核苷酸。在一些实施方案中，本发明提供了能够重组表达本发明所公开CD123 CAR的免疫效应细胞(所述免疫效应细胞例如T细胞；所述能重组表达CD123 CAR的免疫效应细胞例如CD123CART细胞)。
在一些实施方案中，本发明提供的免疫效应细胞是T细胞。所述T细胞可以是细胞毒性T细胞，辅助T细胞，或者γδT,CD4+/CD8+双阳性T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD4/CD8双阴性T细胞、CD3+T细胞、初始T细胞、效应T细胞、细胞毒性T细胞、辅助T细胞、记忆性T细胞、调节T细胞、Th0细胞、Th1细胞、Th2细胞、Th3(Treg)细胞、Th9细胞、Th17细胞、Thαβ辅助细胞、Tfh细胞、干细胞样中心记忆性TSCM细胞、中枢记忆TCM细胞、效应记忆TEM细胞、效应记忆TEMRA细胞或者γδT细胞。在一些实施方案中，所述T细胞是细胞毒性T细胞。在一些实施方案中，所述T细胞是基因工程改造的细胞。在一些实施方案中，本发明提供的T细胞是分离的。在一些实施方案中，本发明提供的T细胞是基本纯化的。
在一些实施方案中，本发明提供的基因工程改造细胞来源于从受试者分离的细胞。如本发明所用，来源于源细胞的基因工程改造细胞是指通过获取源细胞并对源细胞进行基因操作而获得的基因工程细胞。源细胞可以来自自然源。例如，源细胞可以是从受试者中分离出来的初级细胞。所述受试者可以是动物或人。源细胞也可以是在体外经过传代或基因操作的细胞。
在一些实施方案中，本发明提供的基因工程改造细胞来源于从人体分离的细胞。免疫效应细胞(例如，T细胞)可以从许多来源获得，包括外周血单核细胞、骨髓、淋巴结组织、脐带血、胸腺组织、感染部位的组织、腹水、胸腔积液、脾脏组织和肿瘤。在某些实施方案中，可以使用本领域中可用的T细胞系。在一些实施方案中，本发明提供的基因工程改造细胞来源于从外周血分离的细胞。在一些实施方案中，本发明提供的基因工程改造细胞来源于从骨髓分离的细胞。在一些实施方案中，本发明提供的基因工程改造细胞来源于从外周血单核细胞(PBMC)分离的细胞。
在一些实施方案中，本发明提供的基因工程改造细胞来源于干细胞或祖细胞体外分化的细胞。在一些实施方案中，干细胞或祖细胞选自由T细胞祖细胞、造血干/祖细胞、造血多能祖细胞、胚胎干细胞和诱导多能细胞组成的组。在一些实施方案中，本发明提供的基因工程改造细胞来源于T细胞祖细胞体外分化的细胞。在一些实施方案中，本发明提供的基因工程改造细胞来源于造血干/祖细胞体外分化的细胞。在一些实施方案中，本发明提供的基因工程改造细胞来源于造血多能祖细胞体外分化的细胞。在一些实施方案中，本发明提供的基因工程改造细胞来源于胚胎干细胞体外分化的细胞。在一些实施方案中，本发明提供的基因工程改造细胞来源于诱导多能细胞体外分化的细胞。
在一些实施方案中，本发明提供了包含本发明所公开细胞的细胞群。本发明所述的细胞可以包含编码本发明所述的多肽的多核苷酸，或重组表达本发明所述的多肽。所述多肽可以是抗CD123抗体或抗原结合片段，或CD123 CAR或TCR。所述细胞群可以是同源性细胞群。所述细胞群可以是异质化细胞群。在一些实施方案中，细胞群可以是包括本发明公开的细胞的任何组合的异质化细胞群。在一些实施方案中，本发明提供的细胞群源于从外周血单个核细胞(PBMC)、外周血淋巴细胞(PBL)、肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)、细胞因子诱导杀伤细胞(CIK)、淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)或骨髓浸润淋巴细胞(MILs)。在一些实施方案中，本发明提供的细胞群源于PBMC。在一些实施方案中，本发明提供的细胞群源于PBL。在一些实施方案中，本发明提供的细胞群源于TIL。在一些实施方案中，本发明提供的细胞群源于CIK。在一些实施方案中，本发明提供的细胞群源于LAK。在一些实施方案中，本发明提供的细胞群源于MILs。可以对细胞群体进行基因工程改造以使其重组表达本发明所述的多肽(例如，抗体或CAR)。在一些实施方案中，本发明提供了包含多核苷酸或载体的细胞群，所述多核苷酸编码本发明所公开的多肽(例如，抗体或CAR)，所述载体具有本发明所公开的多核苷酸。在一些实施方案中，本发明提供了包含多核苷酸的细胞群，所述多核苷酸编码本发明所公开的抗CD123抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，本发明提供了重组表达本发明公开的抗CD123抗体或抗原结合片段的细胞群。在一些实施方案中，本发明提供了包含多核苷酸的细胞群，所述多核苷酸编码本发明所公开的CD123 CAR/TCR。在一些实施方案中，本发明提供了能重组表达本发明所公开的CD123 CAR的细胞(例如，CD123 CART细胞)群。
5.6药物组合物
本发明还提供包括本发明所公开的抗CD123抗体或抗原结合片段的药物组合物。本发明还提供了包括本发明所公开的基因工程免疫效应细胞的药物组合物。在一些实施方案中，所述药物组合物包括治疗有效量的本发明所公开的抗CD123抗体或其抗原结合片段，还包括药学上可接受的载体。在一些实施方案中，所述药物组合物包含药学有效量的本发明公开的基因工程细胞和药学上可接受的载体。在一些实施方案中，所述药物组合物在免疫治疗中是有用的。在一些实施方案中，所述药物组合物在免疫肿瘤学(immuno-oncology)中是有用的。在一些实施方案中，所述药物组合物在抑制受试者(例如，人类患者)的肿瘤生长中是有用的。在一些实施方案中，所述药物组合物在治疗受试者(例如，人类患者)的癌症中是有用的。
在一些实施方案中，本发明提供的药物组合物包含本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段。所述抗CD123抗体或抗原结合片段可以不同浓度存在。在一些实施方案中，本发明提供的药物组合物包含1-1000mg/ml的本发明提供的可溶性抗CD123抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，所述药物组合物包含本发明提供的可溶性抗CD123抗体或抗原结合片段，其含量为10-500mg/ml、10-400mg/ml、10-300mg/ml、10-200mg/ml、10-100mg/ml、20-100mg/ml或50-100mg/ml。在一些实施方案中，本发明提供的药物组合物包含本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段，其含量为约10mg/ml、约20mg/ml、约30mg/ml、约40mg/ml、约50mg/ml、约60mg/ml、约70mg/ml、约80mg/ml、约90mg/ml、约100mg/ml、约120mg/ml、约150mg/ml、约180mg/ml、约200mg/ml、约300mg/ml、约500mg/ml、约800mg/ml或约1000mg/ml。
包含基因工程改造细胞(例如，T细胞)的所述药物组合物可以包含纯化的细胞群。如本发明所述，本领域技术人员可以使用各种公知的方法确定细胞群中的细胞百分比。本发明提供的包含基因工程改造细胞的细胞群的纯度范围可以是约20％至约25％，约25％至约30％，约30％至约35％，约35％至约40％，约40％至约45％，约45％至约50％，约55％至约60％，约65％至约70％，约70％至约75％，约75％至约80％，约80％至约85％；约85％至约90％，约90％至约95％，或者，约95％至约100％。在一些实施方案中，本发明提供的包含基因工程改造细胞的细胞群的纯度范围可以是约20％至约30％、约20％至约50％、约20％至约80％、约20％至约100％、约50％至约80％、或者，约50％至约100％。本领域技术人员可以调整剂量；例如，纯度的降低可能需要剂量的增加。
本发明还提供了一种试剂盒，其用于制备含有本发明公开的抗CD123抗体或抗原结合片段的药物组合物。在一些实施方案中，所述试剂盒包括存在于一个或多个容器中的，本发明公开的抗CD123抗体或抗原结合片段，和药学上可接受的载体。在另一个实施方案中，所述试剂盒可以包括本发明公开的用于给受试者给药的抗CD123抗体或抗原结合片段。在特定的实施方案中，该试剂盒包括关于抗CD123抗体或抗原结合片段的制备和/或给药的说明。
本发明还提供了用于制备本发明公开的细胞的试剂盒。在一些实施方案中，所述试剂盒包括用于产生表达本发明公开的抗CD123抗体或抗原结合片段的基因工程改造细胞(例如，T细胞)的一种或多种载体。所述试剂盒可用于从自体或非自体细胞产生基因工程细胞，以给药给相容的受试者。在另一个实施方案中，所述试剂盒可以包括本发明公开的用于给受试者给药的细胞。在特定的实施方案中，所述试剂盒包括在一个或多个容器中的本发明所公开的细胞。在特定的实施方案中，所述试剂盒包括关于基因工程细胞的制备和/或给药的说明。
在一些实施方案中，本发明提供了含有本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段或细胞的药物组合物，其中，该药物组合物适合于局部给药。在一些实施方案中，局部给药包括瘤内注射、瘤周注射、瘤旁注射(juxtatumoral injection)、病灶内注射和/或注射到肿瘤引流淋巴结中，或基本上任何肿瘤靶向注射，其中抗肿瘤剂预期会泄漏到邻近靶向实体瘤的原发性淋巴结中。
可用于本发明提供的组合物中的药学上可接受的载体包括任何和所有的溶剂、分散介质、包被层、抗菌和抗真菌剂、等渗和吸收延迟剂等具有生理相容性的物质。在一些实施方案中，载体适用于静脉、肌内、皮下、胃肠外、脊椎或表皮给药(例如，通过注射或输注)。根据给药途径，活性成分(即，本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段或免疫效应细胞)可以被包被在材料中以保护活性成分免受酸和其他可以使活性成分失活的自然条件的作用。
本发明还提供了改善抗CD123抗体或抗原结合片段的稳定性以允许其长期储存的药物组合物或制剂。在一些实施方案中，本发明公开的药物组合物或制剂包括：(a)本发明公开的抗CD123抗体或抗原结合片段；(b)缓冲剂；(c)稳定剂；(d)盐；(e)填充剂；和/或(f)表面活性剂。在一些实施方案中，药物组合物或制剂稳定至少1个月、至少2个月、至少3个月、至少6个月、至少1年、至少2年、至少3年、至少5年或更长时间。在一些实施方案中，药物组合物或制剂在4℃、25℃或40℃下储存时是稳定的。
本发明公开的药物组合物可进一步包括缓冲体系、防腐剂、张度剂、螯合剂、稳定剂和/或表面活性剂中的一种或多种，以及它们的各种组合。在药物组合物中使用防腐剂、等渗剂、螯合剂、稳定剂和表面活性剂是本领域技术人员所熟知的。可参考Remington:The Science andPractice of Pharmacy,19thedition,1995。本发明公开的药物组合物还可以包括药学上可接受的抗氧化剂。这些组合物还可以含有防腐剂、润湿剂、乳化剂和分散剂等助剂。
在一些实施方案中，所述药物组合物是水性制剂。这种制剂通常是溶液或悬浮液，但也可以包括胶体、分散体、乳液和多相材料。所述术语“水性制剂”被定义为含有至少50％w/w水的制剂。同样，术语“水溶液”被定义为包含至少50％w/w水的溶液，术语“水悬浮液”被定义为包含至少50％w/w水的悬浮液。
在一些实施方案中，本发明公开的药物组合物被冷冻干燥，医生或患者在使用之前向其中添加溶剂和/或稀释剂。
可用于本发明所述药物组合物或制剂中的合适的水性和非水性载体的示例包括水、乙醇、多元醇(如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)及其合适的混合物、植物油(如橄榄油)和可注射有机酯(如油酸乙酯)。通过使用包被材料(如卵磷脂)，通过在分散体的情况下保持所需的粒径，以及通过使用表面活性剂来保持适当的流动性。
药学上可接受的载体包括无菌水溶液或分散体以及用于即时制备无菌可注射溶液或分散体的无菌粉末。这种介质和药剂用于药物活性物质在本领域中是已知的。除了任何常规介质或试剂与活性化合物不相容之外，其在本发明所述药物组合物中的用途是可预期的。药物组合物或制剂可以包含防腐剂，也可以不包含防腐剂。所述组合物中可以掺入补充的活性化合物。
药物组合物或制剂在生产和储存条件下通常必须是无菌和稳定的。该组合物可以配制为溶液、微乳剂、脂质体、或适合高药物浓度的其它有序结构。所述载体可以是溶剂或分散介质，所述溶剂或分散介质包含例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)及其合适的混合物。适当的流动性可以得到保持，例如，通过使用如卵磷脂的包覆层，通过在分散体情况下保持所需的粒径，以及通过使用表面活性剂。在许多情况下，所述组合物可以包括等渗剂，例如，组合物中的糖类、多元醇(如甘露醇、山梨醇或组合物)或氯化钠。通过在组合物中加入延迟吸收的药物，例如单硬脂酸盐和明胶，可以延长可注射组合物的吸收。
根据需要，可在适当溶剂中所需量的活性化合物中加入上述一种或多种成分，然后进行灭菌微滤，制备得到无菌注射液。通常，分散体是通过将活性化合物加入无菌载体中来制备的，所述无菌载体包含基本分散介质和本发明列举的所需的其他成分。在用于制备无菌注射液的无菌粉末的情况下，一些制备方法是真空干燥和冷冻干燥(冻干)，可从其先前无菌过滤的溶液中获得活性成分的粉末加上任何其他的所需成分。
本发明公开的药物组合物或制剂中可与载体材料结合的活性成分的含量可以改变。在一些实施方案中，可与载体材料结合的活性成分的含量是产生治疗效果的量。通常，在100％的范围中，活性成分的该含量范围为约0.01％至约99％、活性成分与药学上可接受的载体组合的含量约0.1％至约70％、或约1％至约30％。
本发明公开的药物组合物可以用保护活性成分免受快速释放的载体制备，例如控释制剂，包括植入剂、透皮贴剂和微囊递送系统。可以使用可生物降解、生物相容的聚合物，如乙烯醋酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、胶原蛋白、聚原酸酯和聚乳酸。用于制备这种制剂的许多方法已获得专利或是本领域技术人员普遍已知的。参见，例如，Sustainedand Controlled ReleaseDrug Delivery Systems,J.R.Robinson,ed.,Marcel Dekker,Inc.,New York,1978。
在一些实施方案中，本发明描述的抗CD123抗体或抗原结合片段或细胞可以被配制以确保在体内适当分布。例如，血脑屏障(BBB)排除了许多高度亲水性化合物。为了确保本发明所述的活化成分穿过BBB(如果需要，例如，对于脑癌)，例如，它们可以被配制在脂质体中。对于制造脂质体的方法，参见，U.S.Patents 4,522,811；5,374,548；and 5,399,331。脂质体可以包括选择性转运至特定细胞或器官的一个或多个基团，从而增强靶向药物递送(参见，例如，V.V.Ranade(1989)J.Clin.Pharmacol.29:685)。靶向基团的示例包括叶酸或生物素(参见，例如，U.S.Patent 5,416,016to Low et al)，甘露糖苷类(Umezawa et al,(1988)Biochem.Biophys.Res.Commun.153:1038)，抗体(P.G.Bloeman et al.(1995)FEBSLett.357:140；M.Owais et al.(1995)Antimicrob.Agents Chemother.39:180)，表面活性蛋白A受体(Briscoe et al.(1995)Am.J.Physiol.1233:134)，pl20(Schreier et al.(1994)J.Biol.Chem.269:9090)，也可参见K.Keinanen；M.L.Laukkanen(1994)FEBSLett.346:123；J.J.Killion；I.J.Fidler(1994)Immunomethods 4:273。
5.7方法和用途
本发明还提供了抗CD123抗体或抗原结合片段、CD123 CARs、编码此类抗CD123抗体或抗原结合片段和CD123 CARs的多核苷酸、包含此类多核苷酸的载体、表达CD123 CAR的细胞、或具有本发明公开的此类细胞的药物组合物在治疗癌症中的使用方法。并非理论约束，本发明公开的抗CD123抗体或抗原结合片段和表达CD123 CAR的细胞可以在体内特异性靶向表达CD123的癌细胞，从而达到其消除、裂解和/或杀死癌细胞的治疗效果。在一些实施方案中，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的本发明所述的抗CD123抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的本发明所述的表达CD123 CAR的免疫效应细胞。在一些实施方案中，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的本发明所述的CD123 CART。
在一些实施方案中，本发明提供了在需要的受试者中治疗肿瘤或癌症的方法，包括向受试者施用治疗有效量的本发明公开的抗CD123抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，本发明提供了本发明公开的抗CD123抗体或抗原结合片段在治疗肿瘤或癌症中的用途。在一些实施方案中，本发明提供了本发明公开的抗CD123抗体或抗原结合片段在制备用于治疗肿瘤或癌症的药物中的用途。
在一些实施方案中，本发明提供了在需要的受试者中治疗肿瘤或癌症的方法，包括向受试者施用治疗有效量的本发明公开的免疫效应细胞(例如，CD123 CARTs)。在一些实施方案中，本发明提供了本发明公开的免疫效应细胞(例如，CD123 CARTs)在肿瘤或癌症治疗中的用途。在一些实施方案中，本发明提供了本发明公开的免疫效应细胞(例如，CD123CARTs)在制备用于治疗肿瘤或癌症的药物中的用途。在一些实施方案中，在治疗中使用本发明公开的包括免疫效应细胞的细胞群。所述细胞群可以是同源的。所述细胞群可以是异源的。
在一些实施方案中，本发明提供了在需要的受试者中治疗肿瘤或癌症的方法，包括向受试者施用治疗有效量的本发明公开的药物组合物。在一些实施方案中，本发明提供了本发明公开的药物组合物在治疗肿瘤或癌症中的用途。在一些实施方案中，本发明提供了本发明公开的药物组合物在制备用于治疗肿瘤或癌症的药物中的用途。
本发明所述药物组合物中活性成分(即本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段，或免疫效应细胞)的实际剂量水平可以改变，以获得有效地实现特定患者所需治疗反应的活性成分的含量、组合物和给药方式，而不会对患者产生毒性。所选的剂量水平将取决于多种药代动力学因素，包括本发明所述特定组合物的活性、给药途径、给药时间、排泄率、治疗持续时间、与所用特定组合物结合使用的其他药物、化合物和/或材料、被治疗患者的年龄、性别、体重、状况、一般健康状况和既往病史，以及医学领域中公知的类似因素。
所述抗CD123抗体或抗原结合片段可以作为缓释制剂给药，在这种情况下不需要频繁给药。剂量和频率取决于所述抗CD123抗体或抗原结合片段在患者体内的半衰期而有所不同。在治疗应用中，有时需要在相对短的时间间隔内施用相对高的剂量，直到疾病的进展减轻或终止，并直到患者表现出的疾病症状部分改善或完全改善。
在一些实施方案中，重组表达本发明公开的CD123 CARs的免疫效应细胞可用于本发明公开的治疗方法。当采用细胞疗法时，本发明提供的细胞可以基于施用细胞的对象的体重以每千克细胞(细胞/kg)的剂量给药。细胞剂量在约104到1010cell/kg体重，例如，约105到约109，约105到约108，约105到约107，或约105到约106cells/kg体重，取决于给药的方式和位置。一般来说，在全身给药的情况下，使用比区域给药(在肿瘤区域给药所述免疫效应细胞)更高的剂量。如上所述，精确确定什么是有效剂量可以基于每个受试者的个人因素，包括他们的体型、年龄、性别、体重和特定受试者的状况。本领域技术人员可以根据本发明的公开和本领域现有知识容易地确定剂量。
本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段、免疫效应细胞和药物组合物可通过本领域已知的任何方法给药给受试者，包括但不限于胸腔给药、静脉给药、皮下给药、结内给药(intranodal administration)、瘤内给药、肌内给药、皮内给药、鞘内给药、胸膜内给药、腹膜内给药、颅内给药、脊髓或其他肠外给药途径，例如通过注射或输注，或胸腺直接给药。本发明所用的短语"肠外给药"是指除肠内和局部给药以外的给药方式，通常是通过注射给药，包括但不限于静脉内、肌肉内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、椎管内、硬膜外和腹膜内注射和输注。在一些实施方案中，采用皮下给药。在一些实施方案中，采用静脉给药。在一些实施例中，采用口服给药。在一个实施方案中，本发明提供的细胞可以使用众所周知的方法局部递送到肿瘤，包括但不限于肝泵或主动脉泵；肢体、肺或肝灌注；在门静脉；通过静脉分流；在肿瘤附近的腔内或静脉等。在另一个实施方案中，本发明提供的细胞可以全身给药。在一个优选实施方案中，细胞在肿瘤部位局部给药。所述细胞也可以在瘤内给药，例如，通过在肿瘤部位和/或进入肿瘤血管系统直接注射细胞。例如，在恶性胸膜疾病、间皮瘤或肺癌的情况下，最好通过胸膜内给药(参见，Adusumilli et al.,Science Translational Medicine 6(261):261ra151(2014))。本领域技术人员可以基于要治疗的肿瘤的类型和/或位置来选择合适的给药方式。所述细胞可通过注射或导管导入。在一个实施方案中，对有需要的受试者进行胸膜内给药，例如，使用胸膜内导管。任选地，可选择在细胞给药前、给药期间或给药后施用受试者扩增/或分化剂，以增加本发明提供的体内细胞生成。
本发明提供的细胞的增殖通常是在对受试者施用前在体外进行的，并且在给药给受试者后在体内进行也是可取的(参见Kaiser et al.,Cancer Gene Therapy 22:72-78(2015))。细胞的增殖应伴随着细胞的存活，以允许细胞(如T细胞)的扩增和持续存在。
在一些实施方案中，可以用本发明公开的抗CD123抗体或抗原结合片段、细胞或药物组合物治疗的癌症或肿瘤是血液系统癌症。所述血液系统癌症可以是表达CD123的血液系统癌症。在一些实施方案中，血液系统癌症可以是白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤(MM)或骨髓增生异常综合征(MDS)。在一些实施方案中，血液系统癌症可以是急性白血病、急性髓性白血病(AML)、B急性淋巴性白血病(B-ALL)、T急性淋巴性白血病(T-ALL)、B细胞前体急性淋巴细胞白血病(BCP-ALL)、母细胞性浆细胞样树突细胞肿瘤(BPDCN)、急性淋巴细胞白血病、急性成髓细胞白血病、急性早幼粒细胞白血病，急性粒单核细胞白血病、急性单核细胞白血病、急性红白血病、慢性白血病、慢性髓性白血病(CML)、慢性粒细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、慢性粒单核细胞白血病(CMML)、自然杀伤细胞白血病(NK白血病)、霍奇金病、非霍奇金病、华氏巨球蛋白血症、淋巴细胞性淋巴瘤、原发性CNS淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、自然杀伤细胞淋巴瘤(NK淋巴瘤)、皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)或外周T细胞淋巴瘤(PTCL)。在一些实施方案中，可以用本发明公开的抗CD123抗体或抗原结合片段、细胞或药物组合物治疗的癌症或肿瘤是白血病。在一些实施方案中，所述白血病为AML。在一些实施方案中，所述白血病为B-ALL。在一些实施方案中，所述白血病为T-ALL。在一些实施方案中，所述白血病为BCP-ALL。在一些实施方案中，所述白血病为BPDCN。
在一些实施方案中，本发明提供了在需要的受试者中治疗表达CD123白血病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的本发明公开的抗CD123抗体或抗原结合片段、CD123CARTs或药物组合物。
在一些实施方案中，可以用本发明公开的抗CD123抗体或抗原结合片段、细胞或药物组合物治疗的癌症或肿瘤是实体瘤。在一些实施方案中，癌症或肿瘤可以是癌、肉瘤、黑色素瘤(例如，皮肤或眼内恶性黑色素瘤)、胶质瘤(glioma)、胶质母细胞瘤、脑和脊髓肿瘤、生殖细胞肿瘤、神经内分泌肿瘤、类癌肿瘤、胃癌(gastric cancer)、食管癌、肝癌(livercancer)、肺癌(例如，小细胞肺癌或非小细胞肺癌)、头颈癌、皮肤癌、鼻咽癌、肾癌(kidneycancer)、结直肠癌、乳腺癌、胰腺癌、睾丸癌、宫颈癌、卵巢癌、子宫癌、前列腺癌(如激素难治性前列腺癌)、膀胱癌、结肠癌、内分泌癌、基底细胞癌、鳞状细胞癌、隆突性皮肤纤维肉瘤、间皮瘤、默克尔细胞癌、骨癌、肠癌、肾癌(如透明细胞癌)(renal cancer)、咽喉癌、直肠癌、肛门区癌，脑癌，胃癌(stomach cancer)，输卵管癌，子宫内膜癌，宫颈癌，阴道癌，外阴癌，小肠癌，甲状腺癌，甲状旁腺癌，肾上腺癌，软组织肉瘤，尿道癌，阴茎癌、儿童实体瘤、输尿管癌、肾盂癌、中枢神经系统(CNS)肿瘤、脊髓轴突肿瘤、脑干胶质瘤、垂体腺瘤、卡波西肉瘤、表皮样癌、纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、成骨肉瘤、滑膜肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管内皮肉瘤、滑膜肉瘤、尤文肉瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、鳞状细胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊腺癌、髓样癌、支气管肺癌、肝癌(hepatoma)、胆管癌、绒毛膜癌、精原细胞瘤、胚胎癌、肾母细胞瘤、上皮癌、胶质瘤(glioma)、星形细胞瘤、髓母细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、血管母细胞瘤、听神经瘤、少突胶质细胞瘤、神经鞘瘤、脑膜瘤、神经母细胞瘤或视网膜母细胞瘤。
在癌症治疗中，可以消除受试者的癌症或肿瘤细胞，但任何临床改善都是有益的。抗肿瘤作用可以通过肿瘤体积的减少、肿瘤细胞数量的减少、转移数量的减少、预期寿命的增加或与癌症状况相关的各种生理症状的改善来表现。抗肿瘤作用也可以通过本发明提供的细胞或药物组合物在第一时间预防肿瘤发生的能力来表现。在一些实施方案中，“抗肿瘤效应”可以通过减少癌症诱发的免疫抑制来表现。临床改善包括癌症或肿瘤的风险或进展速度降低或病理后果减轻。还应理解的是，治疗癌症的方法可以包括改善与癌症相关的体征或症状的任何效果。这种体征或症状包括但不限于减少肿瘤负荷，包括抑制肿瘤生长、减缓肿瘤生长速度、减小肿瘤大小、减少肿瘤数量、消除肿瘤，所有这些都可以使用本领域公知的常规肿瘤成像技术来测量。与癌症相关的其他体征或症状包括但不限于疲劳、疼痛、体重减轻以及与各种癌症相关的其他体征或症状。
在一些实施方案中，本发明提供的方法或用途可减少肿瘤负荷。因此，本发明公开的抗CD123抗体或抗原结合片段、细胞或药物组合物的给药可以减少肿瘤细胞的数量，减小肿瘤大小，和/或根除受试者体内的肿瘤。用于监测患者对本发明公开的药物组合物的给药反应的方法是本领域中已知的，并且可以根据本发明公开的方法使用。
在本发明公开的方法中，向需要癌症治疗的受试者施用治疗有效量的本发明公开的抗CD123抗体或抗原结合片段、细胞或药物组合物。受试者可以是哺乳动物。在一些实施方案中，受试者是人。在一些实施方案中，这些个体没有临床上可测量的肿瘤。然而，他们被怀疑有疾病进展的风险，要么是靠近原始肿瘤部位，要么是通过转移。这个群体可以进一步细分为高风险和低风险的个体。细分是根据在最初处理之前或之后观察到的特征进行的。这些特征在临床中是已知的，并且这些特征被适当地定义用于不同类型的癌症。高风险亚组的典型特征是肿瘤侵犯邻近组织，或显示淋巴结受累。
本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段、细胞或药物组合物可以与本领域已知的医疗设备结合一起给药。例如，在一些实施方案中，可以使用无针皮下注射装置，例如U.S.Patent Nos.5,399,163；5,383,851；5,312,335；5,064,413；4,941,880；4,790,824；or4,596,556中公开的装置。本发明所述的众所周知的使用的植入物和模块的例子包括：U.S.Patent No.4,487,603,其公开了一种植入式微型输液泵，用于以可控的速度分配药物；U.S.Patent No.4,486,194,其公开了一种用于通过皮肤给药的治疗装置；U.S.PatentNo.4,447,233,其公开了一种药物输液泵，用于以精确的输液速度输送药物；U.S.PatentNo.4,447,224,其公开了一种用于连续给药的可变流量植入式输液装置；U.S.PatentNo.4,439,196,其公开了一种具有多腔室的渗透性药物输送系统；并且U.S.Patent No.4,475,196,其公开了一种渗透性药物输送系统。这些专利通过引用引入于本发明。本领域技术人员已知许多其他此类植入物、输送系统和模块。
使用不同作用机制的药剂进行联合治疗可以产生相加或协同效应。联合治疗可以允许每种药剂的剂量低于单一治疗中使用的剂量，从而减少毒副作用和/或增加本发明公开的药剂的治疗指数。联合治疗可以降低耐药癌细胞产生的可能性。在一些实施方案中，附加治疗导致本发明所述的细胞或药物组合物的治疗指数的提高。在一些实施方案中，附加治疗导致本发明所述的细胞或药物组合物的毒性和/或副作用的减少。在一些实施方案中，本发明所述的抗CD123抗体或抗原结合片段、细胞或药物组合物可与附加治疗联合给药。在一些实施方案中，附加治疗可以是外科切除、放疗或化疗。
所述附加治疗可在施用本发明所述的抗CD123抗体或抗原结合片段、细胞或药物组合物之前、同时或之后给药。联合给药可以包括共同给药，可以是单一药物制剂，也可以是使用单独的制剂，或以任一顺序连续给药，但通常在一段时间内，以便所有活性剂可以同时发挥其生物活性。本领域技术人员可以基于被治疗受试者的需要很容易地确定适当方案，该方案用于本发明所述药物组合物和联合附加治疗的给药，包括在联合治疗中使用的附加药剂的时机和剂量。
5.8制备方法
5.8.1多核苷酸、多肽和抗体
本发明提供的多核苷酸可以使用本领域已知和可用的各种成熟技术中的任何一种来制备、操作和/或表达。可以使用许多载体。载体的例子有质粒、自主复制序列和转座元件。可以使用典型的转座子系统，如睡美人(Sleeping Beauty)和PiggyBac，它们可以被稳定地整合到基因组中(例如,Ivics et al.,Cell,91(4):501–-510(1997)；
etal.,(2007)Nucleic Acids Research.35(12):e87)。其他的示例性载体包括但不限于质粒、噬菌体、粘粒、人工染色体(如酵母人工染色体(YAC)、细菌人工染色体(BAC)或P1衍生的人工染色体(PAC))、噬菌体(如λ噬菌体或M13噬菌体)和动物病毒。可用作载体的动物病毒种类的例子包括但不限于逆转录病毒(包括慢病毒)、腺病毒、腺相关病毒、疱疹病毒(例如单纯疱疹病毒)、痘病毒、杆状病毒、乳头瘤病毒和乳多空病毒(例如SV40)。表达载体的例子有用于在哺乳动物细胞中表达的pClneo载体(Promega)；用于慢病毒介导的基因转导和在哺乳动物细胞中的表达的Plenti4/V5-DestTM、Plenti6/V5-DestTM和Plenti6.2/V5-GW/Lacz(Invitrogen)。
在一些实施方案中，载体是游离载体(episomal vector)或维持在染色体外的载体。如本发明所使用的，术语“游离”是指能够在不整合到宿主的染色体DNA中且不会从分裂的宿主细胞中逐渐丢失的情况下进行复制的载体，也意味着该载体在染色体外复制或以游离形式进行复制。该载体被工程改造以包含编码来自淋巴营养性疱疹病毒或伽马疱疹病毒、腺病毒、SV40、牛乳头状瘤病毒或酵母的DNA复制起点或“ori”的序列，特别是与EBV的oriP相对应的淋巴疱疹病毒或γ疱疹病毒的复制起点。在一些实施方案中，淋巴营养性疱疹病毒可以是爱泼斯坦巴尔二氏病毒(EBV)、卡波西肉瘤疱疹病毒(KSHV)、松鼠猴疱疹病毒(HS)或马立克氏病病毒(MDV)。爱泼斯坦巴尔二氏病毒(EBV)和卡波西肉瘤疱疹病毒(KSHV)也是γ疱疹病毒的例子。通常，宿主细胞包括激活复制的病毒复制反式激活蛋白。
表达载体中存在的“表达控制序列”、“控制元件”或“调节序列”是指载体的非翻译区(如复制起点、选择试剂、启动子、增强子、翻译起始信号(Shine Dalgarno序列或Kozak序列)内含子、多聚腺苷酸序列、5'和3'非翻译区)，它们与宿主细胞蛋白质相互作用以进行转录和翻译。这些元件的强度和特异性各不相同。根据使用的载体系统和宿主，可以使用任意数量的合适的转录和翻译元件，包括普遍存在的启动子和诱导型启动子。
可用于本发明的说明性的普遍的表达控制序列包括但不限于巨细胞病毒(CMV)即刻早期启动子，病毒性猴病毒(SV40)启动子(例如，早期或晚期)，莫洛尼鼠白血病病毒(MoMLV)LTR启动子，劳氏肉瘤病毒(RSV)LTR，单纯疱疹病毒(HSV)(胸苷激酶)启动子，来自痘苗病毒的H5、P7.5和P11启动子，延伸因子1-α(EF1a)启动子，早期生长反应因子1(EGR1)，铁蛋白H(FerH)，铁蛋白L(FerL)，3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)，真核细胞翻译起始因子4A1(EIF4A1)，热休克70kDa蛋白5(HSPA5)，热休克蛋白90kDaβ-成员1(HSP90B1)，热休克蛋白70kDa(HSP70)，β-驱动蛋白(β-KIN)，人ROSA 26基因位点(Irions et al.,NatureBiotechnology 25,14771482(2007))，泛素C启动子(UBC)，磷酸甘油酸激酶-1(PGK)启动子，巨细胞病毒增强子/鸡β-肌动蛋白(CAG)启动子和β-肌动蛋白启动子。
说明性的诱导型启动子/系统例子包括但不限于类固醇诱导型启动子(例如编码糖皮质激素或雌激素受体的基因启动子(通过相应激素的处理进行诱导))、金属硫蛋白启动子(通过各种重金属的处理进行诱导)、MX-1启动子(通过干扰素进行诱导)、“基因开关”米非司酮-调控系统(Sirin et al.,2003,Gene,323:67)，cumate诱导基因开关(WO 2002/088346)，四环素依赖的调控系统，等等。
本发明所述的抗CD123抗体或抗原结合片段可以通过本领域已知的任何方法制备，包括化学合成、重组表达、常规单克隆抗体方法，例如，标准体细胞杂交技术(参见，例如，Kohler and Milstein,Nature 256:495(1975))，B淋巴细胞的病毒或致癌转化。除非另有说明，本发明的实践采用了分子生物学、微生物学、遗传分析、重组DNA、有机化学、生物化学、PCR、寡核苷酸合成和修饰、核酸杂交以及本技术领域内的相关常规技术。这些技术在本发明引用的参考文献中有所描述，并在文献中进行了充分解释。参见，例如，Maniatis etal.(1982)MOLECULAR CLONING:A LABORATORY MANUAL,Cold Spring Harbor LaboratoryPress；Sambrook et al.(1989),MOLECULAR CLONING:A LABORATORY MANUAL,SecondEdition,Cold Spring Harbor Laboratory Press；Sambrook et al.(2001)MOLECULARCLONING:A LABORATORY MANUAL,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold SpringHarbor,NY；Ausubel et al.,CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY,John Wiley&Sons(1987and annual updates)；CURRENT PROTOCOLS IN IMMUNOLOGY,John Wiley&Sons(1987and annual updates)Gait(ed.)(1984)OLIGONUCLEOTIDE SYNTHESIS:A PRACTICALAPPROACH,IRL Press；Eckstein(ed.)(1991)OLIGONUCLEOTIDES AND ANALOGUES:APRACTICAL APPROACH,IRL Press；Birren et al.(eds.)(1999)GENOME ANALYSIS:ALABORATORY MANUAL,Cold Spring Harbor Laboratory Press；Borrebaeck(ed.)(1995)ANTIBODY ENGINEERING,Second Edition,Oxford University Press；Lo(ed.)(2006)ANTIBODY ENGINEERING:METHODS AND PROTOCOLS(METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY)；Vol.248,Humana Press,Inc；其中的每一项通过引用将其全部并入本发明。
本发明所述的多肽(例如，所述抗CD123抗体或抗原结合片段)可以使用本领域公知的方法生产和分离。肽可以全部或部分地使用化学方法合成(参见，例如，Caruthers(1980).Nucleic Acids Res.Symp.Ser.215；Horn(1980)；and Banga,A.K.,TherapeuticPeptides and Proteins,Formulation,Processing and Delivery Systems(1995)Technomic Publishing Co.,Lancaster,PA)。肽的合成可以使用各种固相技术进行(参见，例如，Roberge Science 269:202(1995)；Merrifield,Methods.Enzymol.289:3(1997))并且可以实现自动合成，例如，按照制造商的说明使用ABI 431A肽合成仪(Perkin Elmer)。肽也可以使用组合方法合成。人工合成的残基和多肽可以使用本领域已知的各种程序和方法合成(参见，例如，Organic Syntheses Collective Volumes,Gilman,et al.(Eds)JohnWiley&Sons,Inc.,NY)。修饰过的多肽可以通过化学修饰方法产生(参见，例如，Belousov,Nucleic Acids Res.25:3440(1997)；Frenkel,Free Radic.Biol.Med.19:373(1995)；andBlommers,Biochemistry 33:7886(1994))。肽序列变异、衍生物、替换和修饰也可以使用寡核苷酸介导(定点)突变、丙氨酸扫描和基于PCR的诱变等方法进行。定点诱变(Carter etal.,Nucl.Acids Res.,13:4331(1986)；Zoller et al.,Nucl.Acids Res.10:6487(1987))、盒式诱变(Wells et al.,Gene 34:315(1985))、限制性选择诱变(Wells et al.,Philos.Trans.R.Soc.London SerA 317:415(1986))以及其他技术可以在克隆的DNA上进行，以产生本发明的肽序列、变体、融合和嵌合体以及其变异体、衍生物、替换和修饰。
本发明所述的多肽可以使用本领域已知的多种技术制备，包括使用杂交瘤和重组技术，或其组合。在一些实施方案中，重组表达载体用于表达编码本发明所述的多肽的多核苷酸。例如，重组表达载体可以是可复制的DNA构建体，其包括合成的或cDNA衍生的DNA片段，所述DNA片段编码与源自哺乳动物、微生物、病毒或昆虫基因的合适转录和/或翻译调控元件可操作相接的多肽。在一些实施方案中，本发明公开的多肽的编码序列可以连接到这些表达载体中以在哺乳动物细胞中表达。在一些实施方案中，使用病毒载体。当DNA区域在功能上相互联系时，它们就可操作相连起来。例如，如果启动子控制序列的转录，则其与编码序列可操作相连；或者如果核糖体结合位点的位置允许翻译，则其与编码序列可操作相连。在一些实施方案中，拟用于酵母表达系统的结构元件包括使宿主细胞能够在细胞外分泌翻译蛋白的先导序列。在一些实施方案中，在重组蛋白的表达没有先导或转运序列的情况下，多肽可以包括N-末端蛋氨酸残基。
可以使用多种表达宿主/载体的组合。适合表达的宿主细胞包括原核生物、酵母细胞、昆虫细胞或在适当启动子控制下的高等真核细胞。用于细菌、真菌、酵母和哺乳动物细胞宿主的合适的克隆和表达载体，以及蛋白质制备方法，包括抗体制备方法在本领域是众所周知的。对细菌宿主有用的表达载体包括已知的细菌质粒，例如来自大肠杆菌的质粒，包括pCR1、pBR322、pMB9及其衍生物，以及更广泛宿主范围的质粒，如M13和其他丝状单链DNA噬菌体。
对真核宿主有用的表达载体包括，例如，包含来自SV40、牛乳头瘤病毒、腺病毒和巨细胞病毒的表达控制序列的载体。合适的哺乳动物宿主细胞系的例子包括但不限于COS-7(来源于猴肾)、L-929(来源于鼠成纤维细胞)、C127(来源于鼠乳腺肿瘤)、3T3(来源于鼠成纤维细胞)、CHO(来源于中国仓鼠卵巢)、HeLa(来源于人宫颈癌)、BHK(来源于仓鼠肾成纤维细胞)、HEK-293(来源于人胚肾)细胞系及其变体。哺乳动物表达载体可以包括非转录元件(例如,复制起点)，与待表达基因连接的合适启动子和增强子，以及其他5'或3'侧翼的非转录序列和5'或3'非翻译序列(例如，必要的核糖体结合位点、多聚腺苷酸化位点、剪接供体和受体位点，以及转录终止序列)。重组蛋白在昆虫细胞培养系统(如杆状病毒)中的表达也为生产正确折叠和生物功能的蛋白提供了强有力的方法。用于在昆虫细胞中生产异源蛋白的杆状病毒系统是本领域技术人员所熟知的。
本发明提供的抗CD123抗体和抗原结合片段包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、合成抗体、人抗体、人源化抗体及其抗原结合片段。
抗体制备方法是本领域众所周知的。参见，例如，Harlow et al.,Antibodies:ALaboratory Manual,(Cold Spring Harbor Laboratory Press,2nd ed.1988)；Hammerling et al.,in:Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563 681(Elsevier,N.Y.,1981),其中的每一项通过引用将其全部并入本发明。对于在人体体内使用的抗体，使用人抗体可能更可取。完全地人抗体对于人类受试者的治疗性治疗是特别需要的。人抗体可以通过本领域已知的各种方法制备，包括使用来源于人免疫球蛋白序列的抗体库的噬菌体展示方法，包括对这些技术的改进。同样，参见，U.S.Pat.Nos.4,444,887and 4,716,111；and PCT publications WO 98/46645,WO 98/50433,WO 98/24893,WO98/16654,WO 96/34096,WO 96/33735,and WO 91/10741；其中的每一项通过引用将其全部并入本发明。人抗体也可以是一种抗体，其中重链和轻链由源自一种或多种人DNA来源的核苷酸序列编码。
人抗体也可以用转基因小鼠生产，这些小鼠不能表达功能性内源性免疫球蛋白，但能表达人免疫球蛋白基因。例如，人重链和轻链免疫球蛋白基因复合物可以随机或通过同源重组导入小鼠胚胎干细胞。另外，除了人的重链和轻链基因外，还可以将人可变区、恒定区和多样性区可被导入小鼠胚胎干细胞。小鼠重链和轻链免疫球蛋白基因可通过同源重组的方式导入人免疫球蛋白基因位点，使小鼠的重链和轻链免疫球蛋白基因单独或同时失去功能。例如，据描述，嵌合体和种系突变小鼠中抗体重链连接区(JH)基因的纯合性缺失导致内源性抗体产生的完全抑制。将修饰后的胚胎干细胞扩增并微量注射到囊胚中以产生嵌合体小鼠。然后培育嵌合体小鼠以产生表达人抗体的纯合子后代。用选定的抗原(例如，本发明全部或部分的多肽)以正常方式免疫转基因小鼠。例如，使用常规杂交瘤技术，可以从免疫的转基因小鼠中获得针对人CD123抗原的抗CD123抗体。转基因小鼠携带的人免疫球蛋白转基因在B细胞分化过程中发生重排，随后发生类别转换和体细胞突变。因此，使用这样的技术，可以生产治疗上有用的IgG、IgA、IgM和IgE抗体，包括但不限于IgG1(γ1)和IgG3。关于生产人抗体的技术的概述，参见Lonberg and Huszar(Int.Rev.Immunol.,13:65-93(1995))。关于生产人抗体和人单克隆抗体的技术的详细讨论，以及生产这些抗体的方案,参见，例如，PCT Publication Nos.WO 98/24893,WO 96/34096,和WO 96/33735；和U.S.Pat.Nos.5,413,923；5,625,126；5,633,425；5,569,825；5,661,016；5,545,806；5,814,318；和5,939,598,其中的每一项通过引用将其全部并入本发明。此外，Abgenix,Inc.(Freemont,Calif.)和Genpharm(Jose,Calif.)可以使用上述技术相似的方法提供针对选定抗原的人抗体。关于在种系突变小鼠中转导人种系免疫球蛋白基因阵列的具体讨论，参见，例如Jakobovits et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:2551(1993)；Jakobovits etal.,Nature,362:255-258(1993)；Bruggermann et al.,Year in Immunol.,7:33(1993)；and Duchosal et al.,Nature,355:258(1992)，该基因阵列将导致在抗原攻击时产生人抗体。
人抗体也可以从噬菌体展示库中获得(Hoogenboom et al.,J.Mol.Biol.,227:381(1991)；Marks et al.,J.Mol.Biol.,222:581-597(1991)；Vaughan et al.,NatureBiotech.,14:309(1996))。噬菌体展示技术(McCafferty et al.,Nature,348:552-553(1990))可用于在体外从未免疫供体的免疫球蛋白可变(V)区基因库中生产人抗体和抗体片段。根据这项技术，抗体V区基因被克隆到丝状噬菌体的主或次要外壳蛋白基因的框架中，如M13或fd，并在噬菌体颗粒表面显示为功能抗体片段。由于丝状颗粒含有噬菌体基因组的单链DNA的拷贝，基于抗体功能性的选择也会导致对编码具有这些特性的抗体的基因的选择。因此，噬菌体模拟了B细胞的某些特性。噬菌体展示可以以多种形式进行；有关他们的综述参见，例如，Johnson and Chiswell,Current Opinion in Structural Biology 3:564-571(1993)。几种来源的V基因片段可用于噬菌体展示。Clackson et al.,Nature,352:624628(1991)从未免疫小鼠的脾衍生的V基因小型随机组合文库中分离了一批不同的抗噁唑酮抗体。可以构建来自未免疫人供体的V基因库，并且可以通过Marks et al.,J.Mol.Biol.,222:581-597(1991),或Griffith et al.,EMBO J.,12:725-734(1993)中描述的方法来分离出针对多种抗原(包括自身抗原)的抗体。也可参照，U.S.Pat.Nos.5,565,332and 5,573,905,其中的每一项通过引用将其全部并入本发明。
人抗体也可以由体外激活的B细胞产生(参见，U.S.Pat.Nos.5,567,610and5,229,275,其中的每一项通过引用将其全部并入本发明)。人抗体也可以使用杂交瘤技术在体外生成，例如但不限于Roder et al.(Methods Enzymol.,121:140-167(1986))描述的技术。
或者，在一些实施方案中，非人抗体被人源化，其中抗体的特定序列或区域被修饰以增加与在人体内自然产生的抗体的相似性。在一些实施方案中，抗原结合结构域部分是人源化的。
人源化抗体可以使用本领域已知的各种技术生产，包括但不限于CDR-移植(参见，例如，European Patent No.EP 239,400；International Publication No.WO 91/09967；and U.S.Pat.Nos.5,225,539,5,530,101,and 5,585,089,其中的每一项通过引用将其全部并入本发明)、镶饰法(veneering)或表面重塑法(resurfacing)(参见，例如，EuropeanPatent Nos.EP 592,106and EP 519,596；Padlan,1991,Molecular Immunology,28(4/5):489-498；Studnicka et al.,1994,Protein Engineering,7(6):805-814；and Roguska etal.,1994,PNAS,91:969-973,其中的每一项通过引用将其全部并入本发明)、链改组(参见，例如，U.S.Pat.No.5,565,332,其中的每一项通过引用将其全部并入本发明)和例如U.S.Patent Application Publication No.US2005/0042664,U.S.Patent ApplicationPublication No.US2005/0048617,U.S.Pat.No.6,407,213,U.S.Pat.No.5,766,886,International Publication No.WO 9317105,Tan et al.,J.Immunol.,169:1119-25(2002),Caldas et al.,Protein Eng.,13(5):353-60(2000),Morea et al.,Methods,20(3):267-79(2000),Baca et al.,J.Biol.Chem.,272(16):10678-84(1997),Roguska etal.,Protein Eng.,9(10):895-904(1996),Couto et al.,Cancer Res.,55(23Supp):5973s-5977s(1995),Couto et al.,Cancer Res.,55(8):171722(1995),Sandhu J S,Gene,150(2):409-10(1994),and Pedersen et al.,J.Mol.Biol.,235(3):959-73(1994)中披露的技术,其中的每一项通过引用将其全部并入本发明。通常，框架区中的框架残基可以被来自CDR供体抗体的相应残基取代，以改变，优选地以改善抗原结合。通过本领域公知的方法来识别这些框架替换，例如，通过模拟CDR与框架残基的相互作用来识别对抗原结合重要的框架残基，并通过序列比较来识别特定位置上异常的框架残基。(参见，例如，Queenet al.,U.S.Pat.No.5,585,089；和Riechmann et al.,1988,Nature,332:323,其中的每一项通过引用将其全部并入本发明。)
人源化抗体具有一个或多个从非人源性来源引入的氨基酸残基。这些非人源性氨基酸残基通常被称为”输入”残基，该”输入”残基通常取自”输入”可变区。因此，人源化抗体包括一个或多个来自非人免疫球蛋白分子的CDR和来自人的框架区。抗体的人源化在本领域是众所周知的，基本上可以按照Winter和其同事的方法进行(Jones et al.,Nature,321:522-525(1986)；Riechmann et al.,Nature,332:323-327(1988)；Verhoeyen et al.,Science,239:1534-1536(1988))，用啮齿动物的CDRs或CDR序列替代人抗体的相应序列，即CDR-移植(EP 239,400；PCT Publication No.WO 91/09967；和U.S.Pat.Nos.4,816,567；6,331,415；5,225,539；5,530,101；5,585,089；6,548,640,其内容在此通过引用全部并入本发明)。在这种人源化嵌合抗体中，明显少于完整的人可变结构域被来自非人物种的相应序列所取代。在实践中，人源化抗体是典型的人抗体，其中一些CDR残基和可能的一些FR残基被啮齿类动物的抗体中类似位点的残基取代。抗体的人源化也可通过镶饰法(veneering)或表面重塑法(resurfacing)(EP 592,106；EP 519,596；Padlan,1991,MolecularImmunology,28(4/5):489-498；Studnicka et al.,Protein Engineering,7(6):805-814(1994)和Roguska et al.,PNAS,91:969-973(1994))或者链改组(U.S.Pat.No.5,565,332)实现，其内容在此通过引用全部并入本发明。
在制备人源化抗体时，选择人可变结构域(包括轻链和重链)是为了降低抗原性。根据所谓的“最佳匹配”方法，针对整个已知的人可变区序列库筛选啮齿动物抗体的可变结构域序列。然后将最接近啮齿类动物序列的人的序列作为人源化抗体的人框架(FR)(Simset al.,J.Immunol.,151:2296(1993)；Chothia et al.,J.Mol.Biol.,196:901(1987),其内容在此通过引用全部并入本发明)。另一种方法使用来源于特定轻链或重链亚组的全部人抗体共有序列的特定框架。相同的框架可用于几种不同的人源化抗体(Carter et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:4285(1992)；Presta et al.,J.Immunol.,151:2623(1993),其内容在此通过引用全部并入本发明)。
抗体可以人源化，并保留对目标抗原的高亲和力和其他有利的生物学特性。例如，人源化抗体可以通过分析亲本序列以及使用亲本序列和人源化序列的三维模型的各种概念性人源化产品来制备。三维免疫球蛋白模型通常是可用的，并且为本领域技术人员所熟悉。计算机程序可以说明和显示选定的候选免疫球蛋白序列的可能的三维构象结构。检查这些展示物允许分析残基在候选免疫球蛋白序列的功能中的可能作用，即，分析影响候选免疫球蛋白结合其抗原的能力的残基。以这种方法，能够选择并且从受体和输入序列组合FR残基使得实现所需要的抗体特征，例如对靶抗原的增强的亲和力。通常而言，CDR残基直接并且最基本地涉及对抗原结合的影响。
“人源化”抗体保留了与原始抗体相似的抗原特异性，例如结合人CD123抗原的能力。然而，使用某些人源化方法，可以使用“定向进化”方法来提高抗体与特定抗原结合的亲和力和/或特异性，该方法描述于Wu et al.,J.Mol.Biol.,294:151(1999)，其内容在此通过引用全部并入本发明。
5.8.2基因工程免疫效应细胞
在一些实施方案中，本发明提供了重组表达本发明公开的CD123 CAR的基因工程免疫效应细胞。在一些实施方案中，本发明提供了包含编码本发明公开的CD123CAR的多核苷酸的基因工程免疫效应细胞。在一些实施方案中，本发明提供了包含载体的基因工程免疫效应细胞，该载体包含编码本发明公开的CD123 CAR的多核苷酸。在一些实施方案中，所述免疫效应细胞为T细胞。
5.8.2.1基因工程方法
关于产生重组表达本发明公开的CD123 CAR的细胞，使用合适的表达载体将编码CD123 CAR的一个或多个多核苷酸引入靶细胞。将一个或多个编码CD123 CAR的多核苷酸转移至靶标免疫效应细胞(例如T细胞)。所述基因工程细胞还可以表达本发明公开的抗CD123抗体或抗原结合片段。
在一些实施方案中，本发明提供了对免疫效应细胞进行基因工程改造的方法，通过使用非病毒递送系统将本发明提供的多核苷酸转移到免疫效应细胞。所述编码CD123CAR的多核苷酸可以是mRNA，这允许对表达这种CD123 CAR的免疫效应细胞进行瞬时表达和自消除。将多核苷酸引入宿主细胞的物理方法包括磷酸钙沉淀法、脂质体转染法、粒子轰击法、显微注射法、电穿孔法等。在一些实施方案中，可以使用RNA电穿孔(Van Driessche etal.Folia histochemica et cytobiologica 43:4 213-216(2005))。所述方法还可包括通过体外转录本发明所述多核苷酸来制备mRNA。在一些实施方案中，本发明提供了对免疫效应细胞进行基因工程改造的方法，通过使用电穿孔将编码本发明提供的抗CD123抗体或抗原结合片段的多核苷酸转移到所述细胞中。在一些实施方案中，本发明提供了对免疫效应细胞进行基因工程改造的方法，通过使用电穿孔将编码CD123 CARs的多核苷酸转移到所述细胞中。
在一些实施方案中，可以使用DNA转染和转座子。在一些实施方案中，使用了Sleeping Beauty系统或PiggyBac系统(例如，Ivics et al.,Cell,91(4):501-510(1997)；
et al.(2007)Nucleic Acids Research.35(12):e87)。将多核苷酸引入宿主细胞的化学方法包括胶体分散系统，例如大分子配合物、纳米胶囊、微球、微珠和脂质系统，包括水包油乳液、胶束、混合胶束和脂质体。用作体外和体内递送载体的示例性胶体系统是脂质体(例如，人工膜囊泡)。
例如，本发明公开的编码CD123 CAR的多核苷酸可以克隆到合适的载体中，并使用众所周知的分子生物学技术导入靶细胞(参见Ausubel et al.,Current Protocols inMolecular Biology,John Wiley and Sons,Baltimore,MD(1999))。任何适合于在细胞中表达的载体，特别是在人细胞中表达的载体都可以使用。所述载体含有合适的表达元件，例如在靶细胞中提供编码核酸表达的启动子。
用于表达本发明公开的CAR或抗体的特别有用的载体包括已用于人类基因治疗的载体。在一些实施方案中，所述载体为逆转录病毒载体。使用逆转录病毒载体在T细胞或其他免疫效应细胞(包括工程改造的T细胞)中表达已被描述(参见，Scholler et al.,Sci.Transl.Med.4:132-153(2012；Parente-Pereira et al.,J.Biol.Methods 1(2):e7(1-9)(2014)；Lamers et al.,Blood 117(1):72-82(2011)；Reviere et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA92:6733-6737(1995))。在一些实施方案中，所述载体为γ逆转录病毒。在一个实施方案中，该载体是SGF逆转录病毒载体，例如SGFγ-逆转录病毒载体，其是基于Moloney鼠白血病的逆转录病毒载体。SGF载体在前面已经描述过(参见，例如，Wang etal.,Gene Therapy 15:1454-1459(2008))。选择性地将细胞激活可提高转导效率(参见，Parente-Pereira et al.,J.Biol.Methods 1(2)e7(doi 10.14440/jbm.2014.30)(2014)；Movassagh et al.,Hum.Gene Ther.11:1189-1200(2000)；Rettig et al.,Mol.Ther.8:29-41(2003)；Agarwal et al.,J.Virol.72:3720-3728(1998)；Pollok et al.,Hum.GeneTher.10:2221-2236(1998)；Quinn et al.,Hum.Gene Ther.9:1457-1467(1998)；也可参见市售的方法，如DynabeadsTM人T细胞激活剂产品，Thermo Fisher Scientific,Waltham,MA)。
应当理解的是，任何合适的病毒载体或非病毒递送系统均可以使用。逆转录病毒载体和适当的包装细胞系的组合也是合适的，其中衣壳蛋白将对感染人细胞起作用。已知各种产生双鳍性病毒(amphotropic virus)的细胞系，包括但不限于PA12(Miller et al.,Mol.Cell.Biol.5:431-437(1985))；PA317(Miller et al.,Mol.Cell.Biol.6:2895-2902(1986))；和CRIP(Danos et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:6460-6464(1988))。非双鳍性颗粒也适用，例如，用VSVG、RD114或GALV包膜和本领域已知的任何其他假型颗粒(Relander et al.,Mol.Therap.11:452-459(2005))。可能的转导方法还包括细胞与生产细胞直接共培养(例如,Bregni et al.,Blood 80:1418-1422(1992))或单独与病毒上清液或浓缩载体原液(在有或者没有合适的生长因子或者聚阳离子下)培养(参见，例如，Xu etal.,Exp.Hemat.22:223-230(1994)；Hughes,et al.J.Clin.Invest.89:1817-1824(1992))。
可使用的其他病毒载体包括，例如腺病毒、慢病毒和腺相关病毒载体、痘苗病毒、牛乳头瘤病毒衍生载体或疱疹病毒，如爱泼斯坦-巴尔二氏病毒(参见，例如，Miller,Hum.Gene Ther.1(1):5-14(1990)；Friedman,Science 244:1275-1281(1989)；Eglitis etal.,BioTechniques 6:608-614(1988)；Tolstoshev et al.,CurrentOpin.Biotechnol.1:55-61(1990)；Sharp,Lancet 337:1277-1278(1991)；Cornetta etal.,Prog.Nucleic Acid Res.Mol.Biol.36:311-322(1989)；Anderson,Science 226:401-409(1984)；Moen,Blood Cells 17:407-416(1991)；Miller et al.,Biotechnology 7:980-990(1989)；Le Gal La Salle et al.,Science 259:988-990(1993)；and Johnson,Chest 107:83S(1995))。逆转录病毒载体发展得很好，并已被用于临床(Rosenberg etal.,N.Engl.J.Med.323:370(1990)；Anderson et al.,U.S.Pat.No.5,399,346)。通常，选择的载体表现出高效率的感染以及稳定的整合和表达(参见，例如，Cayouette et al.,Human Gene Therapy 8:423-430(1997)；Kido et al.,Current Eye Research15:833-844(1996)；Bloomer et al.,J.Virol.71:6641-6649(1997)；Naldini et al.,Science272:263-267(1996)；和Miyoshi et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.94:10319-10323(1997))。
本发明所用的载体采用合适的启动子在特定宿主细胞中表达。该启动子可以是诱导型启动子或组成型启动子。在一些实施方案中，表达载体的启动子在干细胞(例如造血干细胞)中提供表达。在一些实施方案中，表达载体的启动子在免疫效应细胞(例如T细胞)中提供表达。非病毒载体也可以使用，只要载体含有适合在靶细胞中表达的表达元件。有些载体，如逆转录病毒载体，可以整合到宿主基因组中。
在一些实施方案中，本发明提供了通过使用基因编辑将本发明提供的多核苷酸转移到免疫效应细胞中以对免疫效应细胞进行基因工程改造的方法。如果需要，可以使用诸如核酸酶、转录激活因子样效应物核酸酶(TALENs)、锌指核酸酶(ZFNs)、规律成簇间隔短回文重复序列(CRISPRs)、同源重组、非同源末端连接、微同源介导的末端连接、同源介导的末端连接等技术来实现定点整合(Gersbach et al.,Nucl.Acids Res.39:7868-7878(2011)；Vasileva,et al.Cell Death Dis.6:e1831.(Jul 23 2015)；Sontheimer,Hum.GeneTher.26(7):413-424(2015)；Yao et al.Cell Research volume 27,801-814(2017))。在一些实施方案中，本发明提供的方法使用ZFN系统。锌指核酸酶包括DNA识别结构域和非特异性核酸内切酶。DNA识别结构域包括一系列串联的Cys2-His2锌指蛋白，每个锌指单元包含约30个氨基酸用于与DNA特异性结合。非特异性核酸内切酶是FokI内切酶，其形成二聚体来切割DNA。在一些实施方案中，本发明提供的方法使用TALEN系统。TALEN是转录激活因子样效应物核酸酶。TALE蛋白是DNA结合域的核心成分，通常包括多个串联的基本重复单元。所设计和组合的系列单元可以特异性识别DNA序列，并通过耦合FokI核酸内切酶来切割特定的DNA序列。
在一些实施方案中，本发明提供的方法使用CRISPR-Cas系统。所述CRISPR-Cas系统可以是CRISPR-Cas9系统。CRISPR/Cas系统是核酸酶系统，其包括规律成簇间隔的短回文重复序列(CRISPR)和CRISPR结合蛋白(即Cas蛋白)，它可以切割真核生物细胞中几乎所有与原型间隔区相邻基序(PAM)相邻的基因组序列(Cong et al.Science 2013.339:819-823)。“CRISPR/Cas系统”被用于统称涉及CRISPR相关(“Cas”)基因的转录本，以及涉及其表达或指导其活性的其他元件，包括编码Cas基因的序列、tracr(反式激活的CRISPR)序列(例如，tracrRNA或活性部分tracrRNA)、tracr配对序列(在内源性CRISPR系统的背景中，覆盖“直接重复序列”和加工的部分直接重复序列)、引导序列或来自CRISPR位点和转录本的其他序列。一般来说，CRISPR系统的特征是在靶序列的位点促进CRISPR复合物的形成的元件(在内源性CRISPR系统中也称为前间隔区)。Cas蛋白的不受限制的例子包括Cas1、Cas1B、Cas2、Cas3、Cas4、Cas5、Cas6、Cas7、Cas8、Cas9(也称为Csn1和Csx12)、Cas10、Csy1、Csy2、Csy3、Cse1、Cse2、Csc1、Csc2、Csa5、Csn2、Csm2、Csm3、Csm4、Csm5、Csm6、Cmr1、Cmr3、Cmr4、Cmr5、Cmr6、Csb1、Csb2、Csb3、Csx17、Csx14、Csx10、Csx16、CsaX、Csx3、Csx1、Csx15、Csf1、Csf2、Csf3、Csf4同系物，或其修饰形式。在一些实施方案中，Cas蛋白是Cas9蛋白(Gasiunas,Barrangou et al.2012；Jinek,Chylinski et al.2012；Deltcheva,Chylinskiet al.2011；Makarova,Grishin et al.(2006))。Cas9蛋白的氨基酸序列是本领域已知的。示例序列可以被找到，例如，在SwissProt数据库中，登录号为Q99ZW2，在UniProt数据库中，登录号为A1IQ68、Q03LF7或J7RUA5。
载体和构建体可以选择地设计为包括报告子。例如，所述载体可被设计为表达报告蛋白，该报告蛋白可用于识别包含载体或载体上提供的多核苷酸(例如，已整合到宿主染色体中的多核苷酸)的细胞。在一个实施方案中，报告子可以表达为具有抗CD123抗体或抗原结合片段或CD123 CAR的双顺反子或多顺反子表达构建体。示例性报告蛋白包括但不限于荧光蛋白，例如mCherry、绿色荧光蛋白(GFP)、蓝色荧光蛋白(例如EBFP、EBFP2、Azurite和mKalama1)、青色荧光蛋白(例如ECFP、Cerulean和CyPet)以及黄色荧光蛋白(例如YFP、Citrine、Venus和YPet)。
使用常规的分子生物学技术的实验可用于确定转导效率。如果在构建体中包含了标记物(例如荧光蛋白)，则可以通过FACS分析来监测基因转移效率，以量化转导的(例如GFP+)免疫效应细胞(如T细胞)的比例，和/或通过定量PCR监测基因转移效率。使用成熟的共培养系统(Gade et al.,Cancer Res.65:9080-9088(2005)；Gong et al.,Neoplasia 1:123-127(1999)；Latouche et al.,Nat.Biotechnol.18:405-409(2000))，可以确定表达癌抗原的成纤维细胞AAPCs(与对照相比)是否引导从转导的免疫效应细胞(如表达CAR的T细胞(IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ、TNF-α和GM-CSF的细胞上清液LUMINEX(Austin TX)试验))释放细胞因子，T细胞增殖(通过羧基荧光素琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记)和T细胞存活(通过Annexin V染色)。可以评价CD80和/或4-1BBL对T细胞存活、增殖和功效的影响。T细胞可暴露于癌抗原阳性靶细胞的重复刺激，并可确定T细胞增殖和细胞因子反应是随重复刺激保持相似还是减弱。癌抗原CAR构建体可以在等效试验条件下进行并排比较。可以使用铬释放试验进行多种E：T比值的细胞毒性试验。
本发明描述的或本领域其他已知的各种方法的组合和排列被明确地考虑以制备本发明所公开的基因工程细胞。
5.8.2.2对免疫效应细胞的操作
本发明提供的免疫效应细胞可从受试者获得。本发明提供的免疫效应细胞来源包括但不限于外周血、脐带血、骨髓或其他来源的造血细胞。免疫效应细胞(例如，T细胞)可以从许多来源获得，包括外周血单核细胞、骨髓、淋巴结组织、脐带血、胸腺组织、感染部位的组织、腹水、胸腔积液、脾脏组织和肿瘤。在某些实施方案中，可以使用本领域中可用的细胞系。本发明提供的免疫效应细胞可以通过本领域众所周知的方法分离，包括市售的分离方法(参见，例如，Rowland Jones et al.,LYMPHOCYTES:A PRACTICAL APPROACH,OxfordUniversity Press,New York(1999))。先前已经描述了用于分离免疫效应细胞的各种方法，并且可以使用包括但不限于，使用外周供体淋巴细胞(Sadelain et al.,Nat.Rev.Cancer 3:35-45(2003)；Morgan et al.,Science 314:126-129(2006))和选择性使用在体外扩增的抗原特异性外周血淋巴细胞，所述外周血淋巴细胞使用人工抗原提呈细胞(AAPCs)或树突细胞(Dupont et al.,Cancer Res.65:5417-5427(2005)；Papanicolaouet al.,Blood 102:2498-2505(2003))。
在某些实施方案中，本发明公开的免疫效应细胞(例如，T细胞)可以使用本领域技术人员已知的任何技术(例如FicollTM分离)从受试者处采集的血液单位中获得。在一些实施方案中，通过单采获得来自个体循环血液的细胞。单采产物通常含有淋巴细胞，包括T细胞、单核细胞、粒细胞、B细胞、其他有核白细胞、红细胞和血小板。在一些实施方案中，通过单采收集的细胞可以被洗涤以除去血浆部分并将细胞放置在适当的缓冲液或介质中用于后续处理步骤。在一些实施方案中，细胞用磷酸盐缓冲盐溶液(PBS)洗涤。在另一个实施方案中，洗涤溶液缺乏钙，并且可能缺乏镁，或者可能缺乏许多(如果不是全部的话)二价阳离子。在不存在钙的情况下，初始激活步骤导致放大激活。如本领域的普通技术人员容易理解的，可以通过本领域技术人员已知的方法来完成洗涤步骤，例如根据制造商的说明使用半自动“流通式”离心机(例如，Cobe 2991细胞处理器、Baxter CytoMate或自体血液回收机5)。洗涤后，细胞可在各种生物相容性缓冲液中重新悬浮，例如无Ca2+，无Mg2+的PBS、勃脉力A(PlasmaLyte A)或其他含或不含缓冲液的生理盐水溶液。或者，可以去除单采样品中不希望的成分，并将细胞在培养基中直接重新悬浮。
在另一个实施方案中，通过裂解红细胞和耗尽单核细胞(例如通过PercollTM梯度离心或逆流离心洗脱)，从外周血淋巴细胞中分离T细胞。一种T细胞的特定亚群，如CD3+,CD28+,CD4+,CD8+，CD45RA+和CD45RO+T细胞，可以通过阳性或阴性选择技术进一步分离。例如，在一个实施方案中，通过与抗CD3/抗CD28(即3×28)偶联微珠(如
M-450CD3/CD28T)孵育足够的时间段以用于对需要的T细胞进行阳性选择。在一个实施方案中，时间段约为30分钟。在另一个实施方案中，时间段范围为30分钟到36小时或更长，以及包括在此之间的所有整数值。在另一实施例中，时间段至少为1、2、3、4、5或6小时。在又一优选实施方案中，时间段为10至24小时。在一个优选实施方案中，孵育时间段为24小时。对于白血病患者的T细胞分离，使用更长的孵育时间(如24小时)，可以增加细胞产量。与其他细胞类型相比，在T细胞较少的任何情况下，可以使用更长的孵育时间来分离T细胞，例如从肿瘤组织或免疫受损的个体中分离肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)。此外，使用更长的孵育时间可以提高捕获CD8+T细胞的效率。因此，通过简单地缩短或延长T细胞与CD3/CD28微珠结合的时间和/或通过增加或减少微珠与T细胞的比例(如本发明进一步描述的)，可以在培养开始时或在过程中的其他时间点优先选择出或淘汰T细胞亚群。此外，通过增加或减少微珠或其他表面上的抗CD3和/或抗CD28抗体的比例，可以在培养开始时或在其他所需时间点优先选择出或淘汰T细胞亚群。本领域技术人员将认识到，在本发明的背景下也可以使用多轮选择。
可以采用各种技术来分离细胞以富集所需的免疫效应细胞。例如，可以使用阴性选择方法来去除不是所需免疫效应细胞的细胞。此外，可以使用阳性选择方法来分离或富集所需的免疫效应细胞或其前体细胞，或者可以使用阳性选择方法和阴性选择方法的组合。单克隆抗体(MAbs)对于识别与用于阳性和阴性选择的特定细胞谱系和/或分化阶段相关的标记都特别有用。如果要分离特定类型的细胞，例如特定类型的T细胞，可以使用各种细胞表面标记或标记组合以分离细胞，包括但不限于CD3、CD4、CD8、CD34(用于造血干/祖细胞)等，这在本领域是众所周知的(参见，Kearse,T CELL PROTOCOLS:DEVELOPMENT ANDACTIVATION,Humana Press,Totowa NJ(2000)；De Libero,T CELL PROTOCOLS,Vol.514ofMethods in Molecular Biology,Humana Press,Totowa NJ(2009))。在一些实施方案中，通过阴性选择来富集T细胞群可以用针对阴性选择细胞特有的表面标记的抗体结合来完成。一种方法是通过负磁性免疫粘附或流式细胞术进行细胞分选和/或选择，所述流式细胞术使用针对阴性选择细胞上存在的细胞表面标记的单克隆抗体混合物。例如，为了通过阴性选择富集CD4+细胞，单克隆抗体混合物通常包括CD14、CD20、CD11b、CD16、HLA-DR和CD8抗体。在某些实施方案中，可能需要富集或阳性选择调节性T细胞，其通常表达CD4+，CD25+，CD62Lhi，GITR+和FoxP3+。或者，在某些实施方案中，T调节性细胞通过抗C25偶联微珠或其他类似的选择方法被消除。
免疫效应细胞的分离程序包括但不限于密度梯度离心、偶联修饰细胞密度的颗粒、用抗体包被的磁珠磁性分离、亲和层析；与单克隆抗体(mAb)结合或偶联使用的细胞毒剂，包括但不限于补体和细胞毒素，以及附着在固体基质上的抗体淘筛，例如平板或芯片，洗脱，流式细胞术，或任何其他方便的技术(参见，例如，Recktenwald et al.,CELLSEPARATION METHODS AND APPLICATIONS,Marcel Dekker,Inc.,New York(1998))。可以理解的是，本发明提供的方法中使用的免疫效应细胞可以是提纯的细胞，也可以是多克隆群体。在一些实施方案中，多克隆群体可以富集为所需的免疫效应细胞。根据需要，这种富集可以在对细胞进行基因工程改造以表达本发明提供的CD123 CAR之前或之后进行。
所述免疫效应细胞对于受试者可以是自体的或非自体的，这些受试者按照本发明公开的治疗方法给药。自体细胞是从施用工程改造细胞的受试者体内分离出来。任选地，可以通过白细胞单采获得细胞，其中白细胞选择性地从提取的血液中取出，制成重组体，然后再输注到供体的体内。或者，可以使用来自非受试者的非自体供体的同种异体细胞。在非自体供体的情况下，对细胞进行分型并与人类白细胞抗原(HLA)匹配，以确定合适的相容性水平，这在本领域是众所周知的。细胞可任选地在分离和/或基因工程和/或基因工程细胞扩增后冷藏保存(参见Kaiser et al.,supra,2015))。冷冻保存细胞的方法在本领域众所周知(参见，例如，Freshney,CULTURE OF ANIMAL CELLS:A MANUAL OF BASIC TECHNIQUES,4th ed.,Wiley-Liss,New York(2000)；Harrison and Rae,GENERAL TECHNIQUES OF CELLCULTURE,Cambridge University Press(1997))。
在一些实施方案中，分离的免疫效应细胞在体外进行基因工程改造，用于重组表达多肽(例如，CAR)。在一些实施方案中，分离的免疫效应细胞在体外进行基因工程改造，用于重组表达CD123 CAR。在一些实施方案中，本发明提供的免疫效应细胞是通过体外致敏(sensitization)获得的，其中，致敏反应可以在免疫效应细胞被基因工程改造以重组表达本发明公开的多肽之前或之后发生。在一个实施方案中，从体内来源分离致敏免疫效应细胞(如T细胞)，已经致敏的免疫效应细胞发生基因工程改造将是不言而喻的。
在本发明中还考虑了，在可能需要如本发明所述的基因工程细胞之前的一段时间内从受试者采集血液样本或单采制品。因此，可以在任何必要的时间点收集待扩增的细胞来源，并分离和冷冻所需的细胞(如T细胞)，以供以后用于任何数量的疾病或病症的T细胞治疗，这些疾病或病症(例如本发明所述的那些)将受益于T细胞治疗。在一个实施方案中，血液样本或单采取自一般健康的受试者。在某些实施方案中，血液样本或单采取自有发病风险但尚未发病的一般健康的受试者，并分离和冷冻需要的细胞以供以后使用。在某些实施方案中，所述T细胞可以扩增、冷冻并在以后的时间使用。在某些实施方案中，在诊断出如本发明所述的特定疾病后不久但在任何治疗之前，从患者体内收集样本。在另一个实施方案中，在采用任何数量的相关治疗方式之前，从受试者的血液样本或单采样中分离细胞，所述治疗方式包括但不限于用药物治疗(如那他珠单抗、依法利珠单抗、抗病毒剂)、化疗、放疗、免疫抑制剂(如环孢素、硫唑嘌呤、甲氨蝶呤、霉酚酸和FK506)、抗体或其他免疫抑制剂(如CAMPATH、抗CD3抗体、环磷酰胺、氟达拉滨、环孢素、FK506、雷帕霉素、霉酚酸、类固醇、FR901228)和照射。这些药物抑制钙依赖性磷酸酶钙调磷酸酶(环孢霉素和FK506)或抑制对生长因子诱导信号传导很重要的p70S6激酶(雷帕霉素)(Liu et al.,Cell 66:807-815,1991；Henderson et al.,Immun73:316-321,1991；Bierer et al.,Curr.Opin.Immun.5:763-773,1993)。在进一步的实施方案中，为患者分离并冷冻细胞以备后续与骨髓移植或干细胞移植(例如，在移植之前、同时或之后)，使用化疗剂(如氟达拉滨)、外部电子束辐射治疗(XRT)、环磷酰胺或抗体(如OKT3或CAMPATH)的T细胞消融治疗联合使用。在另一个实施方案中，细胞在B细胞消融治疗之前被分离，并且可以被冷冻，以便以后用于之后的治疗，例如与CD20反应的药物(例如Rituxan)。
在进一步的实施方案中，T细胞直接从治疗后的患者处获得。在这方面，已经观察到在某些癌症治疗后，特别是使用损害免疫系统的药物的治疗后，治疗后不久的时期内，患者通常从治疗中恢复，所获得的T细胞的质量因其体外扩增能力可以达到最佳或改善。同样地，使用本发明描述的方法进行体外操作后，这些细胞可以处于增强移植和体内扩增的优选状态。因此，考虑在该恢复阶段收集血细胞，包括T细胞、NK细胞或造血谱系的其他免疫效应细胞。此外，在某些实施方案中，动员(mobilization)(例如，用GM-CSF动员)和调理方案可用于在受试者中创造有利于特定细胞类型再增殖、再循环、再生和/或扩增的条件，特别是在治疗后的限定时间窗期间。举例说明的细胞类型包括T细胞、B细胞、树突状细胞和免疫系统的其他细胞。
本发明所公开的免疫效应细胞可以经受本领域公知的有利于细胞维持或扩增的条件。(De Libero,T Cell Protocols,Vol.514of Methods in Molecular Biology,Humana Press,Totowa NJ(2009)；Parente-Pereira et al.,J.Biol.Methods 1(2)e7(doi10.14440/jbm.2014.30)(2014)；Movassagh et al.,Hum.Gene Ther.11:11891200(2000)；Rettig et al.,Mol.Ther.8:29-41(2003)；Agarwal et al.,J.Virol.72:3720-3728(1998)；Pollok et al.,Hum.Gene Ther.10:2221-2236(1999)；Quinn et al.,Hum.GeneTher.9:1457-1467(1998)；另可参考商业上可用的方法，如DynabeadsTM人T细胞活化剂产品,Thermo Fisher Scientific,Waltham,MA))。本发明公开的免疫效应细胞(例如，T细胞)可以任选地在体外基因工程改造之前或之后扩增。细胞的扩增对于增加用于给药的受试者的细胞数量特别有用。这样的用于细胞扩增方法在本领域是众所周知的(参见，例如，Kaiser et al.,Cancer Gene Therapy 22:72-78(2015)；Wolfl et al.,Nat.Protocols9:950-966(2014))。此外，细胞可任选地在分离和/或基因工程和/或基因工程细胞扩增后冷藏保存(参见Kaiser et al.,supra,2015))。用于冷藏保存细胞的方法在本领域是众所周知的(参见，例如，Freshney,Culture of Animal Cells:A Manual of BasicTechniques,4th ed.,Wiley-Liss,New York(2000)；Harrison and Rae,GeneralTechniques of Cell Culture,Cambridge University Press(1997))。
通常，本发明提供的T细胞可以通过与表面接触而扩增，该表面上附着有刺激CD3/TCR复合物相关信号的试剂和刺激T细胞表面上的共刺激受体的配体。特别地，可以如本发明所述刺激T细胞群，例如通过与抗CD3抗体或其抗原结合片段，或固定在表面上的抗CD2抗体接触，或通过与结合钙离子载体的蛋白激酶C激活剂(例如苔藓抑素)进行接触。为了共刺激T细胞表面上的辅助分子，使用结合该辅助分子的配体。例如，在适合刺激T细胞增殖的条件下，使抗CD3抗体和抗CD28抗体接触T细胞群。为了刺激CD4+T细胞或CD8+T细胞的增殖，抗CD3抗体和抗CD28抗体可用于刺激CD4+T细胞或CD8+T细胞的增殖。抗CD28抗体的示例包括9.3、B-T3、XR-CD28(Diaclone,Besancon,France)，也可使用本领域常见的其他方法(Berget al.,Transplant Proc.30(8):3975-3977,1998；Haanen et al.,J.Exp.Med.190(9):13191328,1999；Garland et al.,J.Immunol Meth.227(1-2):53-63,1999)。
本发明在此使用确定的语言来描述众多实施例。本发明还具体包括完全或部分排除特定主题的实施方案，例如物质或材料、方法步骤和条件、方案、程序、测定或分析。因此，即使本发明一般不以本发明不包括的内容来表达，但在本发明中没有明确包含的方面仍然在本发明中披露。
此处描述了本发明的特定实施例，包括发明人已知的用于实施本发明的最佳实施方式。在阅读了上述描述后，于从事本领域工作的人来说，所公开的实施例的变化将变得显而易见，并且可以预期本领域技术人员可以适当地采用这种变化。因此，本发明旨在以不同于本发明具体描述的方式实施，并且本发明包括在适用法律允许的情况下对所附权利要求书中提到的主题的所有修改和等同物。此外，除非本发明另有说明或与上下文明显矛盾，否则本发明涵盖上述要素的所有可能变化形式的任何组合。
在本说明书中引用的所有出版物、专利申请、登录号和其他参考文献都以全文引用的方式并入本说明书中，其程度相当于每个单独的出版物或专利申请通过引用的方式被具体和单独引入本发明。提供本发明讨论的出版物仅用于它们在本申请的申请日之前的公开。本发明的任何内容都不应被解释为承认本发明无权凭借先前的发明而提前于该公开发表。此外，所提供的出版日期可能与实际出版日期不同，需要独立确认。
已经描述了多个本发明的实施例。然而，应当理解，在不脱离本发明的精神和范围的情况下可以进行各种修改。因此，实验中的描述旨在说明但不限制权利要求中描述的本发明的范围。
6.实验
6.1背景
白细胞介素3(IL-3)主要由活化的T淋巴细胞产生，是广泛的原始造血祖细胞和谱系定向细胞(包括粒细胞、巨噬细胞、巨核细胞、红系细胞和肥大细胞)增殖和分化所需的多能细胞因子，促进多谱系的形成(Ihle 1992,Broughton,Nero et al.2015)。IL-3属于β链共同(βc)细胞因子家族，它通过激活异二聚体细胞表面受体发出信号，所述异二聚体由白细胞介素-3受体α链(IL-3Rα，也称为CD123)和共享βc亚基组成。IL-3受体异源二聚体复合物激活JAK2/STAT5和MAP激酶通路，并促进细胞增殖和分化(Hercus,Dhagat et al.2013,Broughton,Nero et al.2015)。
6.2人抗CD123抗体的制备
采取以下步骤制备全人抗CD123抗体:
1)噬菌体展示文库的表达和纯化：用新鲜解冻的M13K07辅助噬菌体感染对数期TG1文库培养物，多重感染率为20：1(噬菌体与细胞之比)，并用IPTG诱导过夜；用PEG/NaCl沉淀法纯化噬菌体文库，然后测定噬菌体效价。
2)CD123特异性scFv-噬菌体的选择：在第一轮选择中，在Maxisorp平板上在4℃下用20μg/ml的CD123-6His蛋白包被过夜，用PBS洗涤，用5％牛奶+1％BSA在1×PBS中封闭，在噬菌体溶液中孵育2小时，用PBST清洗10次。使用酸洗脱缓冲液(pH2.2)洗脱与抗原结合的scFv噬菌体，中和，接种于15毫升的对数期的TG1培养(OD600＝0.5)中，在37℃下静置30分钟并摇动30分钟培养，接种到2xYT-GA琼脂平板上，并在30℃下培养过夜以供后续选择。在随后的几轮选择中，使用了更严格的选择条件，包括降低包被的蛋白质浓度(第二轮为2μg/ml，第三轮为0.5μg/ml)和增加洗涤周期(第二轮为20次，第三轮为30次)。
3)mpELISA筛选。经过三轮筛选后，选出292个阳性菌落进行单克隆噬菌体ELISA(mpELISA)筛选。将单个菌落克隆生成的噬菌体上清液与包被有2μg/mLCD123-6His蛋白的预封闭Maxisorp板共同孵育。洗涤三次后，加入100μl/孔的HRP缀合抗M13抗体，所述HRP缀合抗M13抗体在封闭缓冲液(5％牛奶+1％BSA，1×PBS)中经1:5000的比例稀释，然后在常温下孵育60分钟。用PBST洗板5次后，添加100μl/孔的TMB底物溶液，并孵育10-30min，直至出现蓝色。通过添加50μl/孔的终止溶液(2N H2SO4)来终止反应。在微孔板读取器中读取450nm处的吸光度。图1显示了mpELISA筛选所得的吸光度读数。如图所示，一些阳性菌落(450nm吸光度≥0.5)被鉴定为产生了能够结合CD123-6His蛋白的抗CD123抗体(图1)。
4)克隆和序列分析：根据ELISA结果筛选阳性克隆，并作为scFv序列的PCR克隆的模板(正向引物序列：tgcagctggcacgacaggtttc，反向引物序列：cgtcagactgtagcacgtt)。然后通过sanger测序方法对PCR产物进行测序(正向引物序列：aacaattgaattcaggagga，反向引物序列：cctcctaagaagcgtagtc)。通过abysis网站(http://abysis.org/)分析scFv的CDR区域，见上文的表1和表2。
6.3 CD123 CAR的制备
构建了用于产生抗CD123 CAR的mRNA的载体。首先，通过PCR扩增scFv序列和CAR片段(从铰链结构域到CD3-zeta结构域)并克隆到pDA载体(Xba1/Sal1)。图2提供了用于生成CAR mRNA的pDA-CAR载体的示意图。其次，通过体外转录(IVT)制备CD123 CAR mRNA。pDA-CAR质粒通过Spe1酶切线性化，并通过PCR Cleanup试剂盒进行纯化。用nanodrop测量DNA浓度并通过运行琼脂糖DNA凝胶检查后，按照制造商的操作指南(Thermofisher,Cat No:AM13455)进行IVT。通过nanodrop测定RNA产物的浓度，并运行PAGE凝胶进行检查。
6.4 CD123 CARTs的制备和表征
通过以下步骤使用电穿孔将CD123 CAR mRNA引入T细胞:收集T细胞，用Opti-MEM培养基清洗，并用Opti-MEM培养基以1×10e7/ml重悬；将10μg RNA与100μl T细胞等分，混合均匀进行电穿孔，参数如下(BTX机)：500V，0.7ms；然后将细胞转移到预热的培养基上，在37℃下培养。
通过FACS染色测量CD123 CART细胞与CD123-Fc重组蛋白的结合。如图3所示，表达具有抗CD123 scFv-C1,-C2，-C3，-C4，-C5，-C6，-C7，-C9，-C10，-C11，-C13，-C14，-C15，-C16，-C17，-C18，-C19、-C21、-C23、-C24、-C25、-C26、-C27、-C28、-C29、-C30、-C32、-C33、-C34和-C35的CAR的T细胞能够结合CD123-Fc重组蛋白。空载体(Mock)是没有CAR分子的对照T细胞。
用不同量的CD123 mRNA电穿孔A549肿瘤细胞。电穿孔过程与上述过程相同，仅改变了参数，使用的参数为300V，0.5ms。通过对同种型或抗CD123抗体、不同量CD123 mRNA电穿孔的A549细胞进行FACS染色，以测量A549肿瘤细胞中CD123的表达。如图4所示，A549细胞弱表达内源性CD123，并且CD123的异位表达水平与电穿孔到A549细胞中的CD123 mRNA的量相关。
在体外细胞毒性试验中测量了CD123 CART细胞对肿瘤细胞的细胞毒性。将表达EGFP的肿瘤细胞或用不同量肿瘤抗原电穿孔的EGFP-A549细胞以3000细胞/100ul/孔接种在平底96孔板上；将CART细胞稀释至适当浓度，并以不同的E/T比值(例如，10:1，3:1，1:1)接种于100μl/孔肿瘤细胞，然后将共培养板放入IncuCyte S3机器中，并设置扫描参数。扫描3天后，分析总绿色物体积分强度(GCU xμm2/孔)以计算杀灭效率。
图5和图6显示了不同的基于mRNA的抗CD123 CART细胞在E/T比值为10:1(图5)或3:1(图6)时对A549-GFP肿瘤细胞的杀伤曲线。如图所示，表达抗CD123 scFv-C2，-C3，-C4，-C6，-C9，-C11，-C13，-C14，-C15，-C16，-C17，-C19，-C21，-C23，-C24和-C32的CART细胞有效地阻止了A549细胞生长，甚至消除了A549细胞，尽管A549细胞表达低水平的内源性CD123，这表明这些基于scFv的CART细胞对肿瘤细胞具有较高的细胞毒性。
图7和图8显示了不同的基于mRNA的抗CD123 CART细胞在对E/T比值为10:1(图7)或3:1(图8)时对表达外源性CD123(用10μg CD123 mRNA电穿孔)的A549-GFP肿瘤细胞的杀伤曲线。如图所示，表达抗CD123 scFv-C1，-C2，-C3，-C4，-C5，-C6，-C7，-C9，-C11，-C13，-C14，-C15，-C16，-C17，-C18，-C19，-C21，-C23，-C24，-C25，-C26，-C27，-C28，-C29，-C30，-C32，-C33，-C34和-C35的CART细胞有效地阻止了表达CD123的A549肿瘤细胞的生长，甚至减少了表达CD123的A549肿瘤细胞的数量，证实了它们杀死表达CD123的肿瘤细胞的能力。
6.5 CART细胞CD107a染色
通过FACS染色测量不同肿瘤细胞系的CD123表达。图9显示了A549、SK-OV3、Jeko-1、Molm-14、SupT-1、293T、Nalm-6和PC-3细胞与PE-同种型对照和PE-抗-CD123 mAb的FACS染色结果。如图所示，大多数测试的肿瘤细胞系不表达CD123，仅Molm-14表达相对高水平的CD123。
CD107a是T细胞的早期活化标记。通过以下步骤使用CD107a染色测量表达CD123的肿瘤细胞对CD123 CARTs的活化：将20μl PE-CD107a mAb添加到96孔板的每个孔中；将肿瘤细胞稀释至2×10e6/ml，并接种在96孔圆板上(100μl/孔)；将CART细胞稀释至1×10e6/ml，接种于96孔圆板(100μl/孔)中；将平板以500rpm×5分钟离心，使细胞附着良好，并在37℃下培养1小时；将Golgi stop用培养基稀释1500倍后，添加到每个孔(20μl/孔)中；细胞在37℃下再培养2.5小时，用抗CD3-APC和抗CD8-FITC抗体在37℃下染色30分钟，洗净后用流式细胞仪进行分析。
在我们的研究中，通过CD107a染色测量了表达CD123的肿瘤细胞对CARTs(表达抗CD123-C5，抗CD123-C7，抗CD123-C11)的激活。测试的细胞包括用10μg，0.1μg和0μg CD123mRNA电穿孔的A549，SK-OV3，PC-3，脐带血来源的CD34造血干细胞(CD34+cord)，骨髓来源的造血干细胞(CD34+M)，Molm-14，Nalm6，Jeko-1肿瘤细胞系和新鲜分离的患者AML肿瘤细胞(CD123+)。如图10所示，表达抗CD123-C5、-C7和-C11的CART细胞被具有相对高CD123表达的肿瘤细胞，尤其是CD123+AML肿瘤细胞特异性活化，但不被具有低CD123表达的肿瘤细胞系特异性活化。这些结果表明，表达CD123的肿瘤细胞可以活化CD123 CARTs。
7.以电子方式提交的序列表参考
该应用程序通过引用将序列列表与该应用程序合并为ASCII文本文件，名为“613A002WO01_ST25.TXT”，创建于2021年8月14日，大小为335,661字节。
Claims (81)
1.一种特异性结合CD123的抗体或其抗原结合片段，其包括：
(a)轻链可变区(VL)，其包括
(1)轻链CDR1(VL CDR1)，具有选自由SEQ ID NOs:1-29组成的群组中的氨基酸序列；
(2)轻链CDR2(VL CDR2)，具有选自由SEQ ID NOs:30-56组成的群组中的氨基酸序列；和
(3)轻链CDR3(VL CDR3)，具有选自由SEQ ID NOs:57-88组成的群组中的氨基酸序列；
或其变体，所述变体在VL CDRs中具有至多约5个氨基酸的替换、添加和/或缺失；和/或
(b)重链可变区(VH)，其包括
(1)重链CDR1(VH CDR1)，具有选自由SEQ ID NOs:89-109组成的群组中的氨基酸序列；
(2)重链CDR2(VH CDR2)，具有选自由SEQ ID NOs:110-133组成的群组中的氨基酸序列；和
(3)重链CDR3(VH CDR3)，具有选自由SEQ ID NOs:134-163组成的群组中的氨基酸序列；
或其变体，所述变体在VH CDRs中具有至多约5个氨基酸的替换、添加和/或缺失。
2.如权利要求1所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，
(a)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有
(1)SEQ ID NOs：3、33和61的氨基酸序列；
(2)SEQ ID NOs：17、45和75的氨基酸序列；
(3)SEQ ID NOs：7、37和66的氨基酸序列；
(4)SEQ ID NOs：18、32和76的氨基酸序列；
(5)SEQ ID NOs：23、50和82的氨基酸序列；
(6)SEQ ID NOs：24、51和83的氨基酸序列；
(7)SEQ ID NOs：8、38和67的氨基酸序列；
(8)SEQ ID NOs：4、34和62的氨基酸序列；
(9)SEQ ID NOs：25、52和84的氨基酸序列；
(10)SEQ ID NOs：26、53和85的氨基酸序列；
(11)SEQ ID NOs：2、32和60的氨基酸序列；
(12)SEQ ID NOs：17、46和77的氨基酸序列；
(13)SEQ ID NOs：27、54和86的氨基酸序列；
(14)SEQ ID NOs：9、39和68的氨基酸序列；
(15)SEQ ID NOs：10、40和69的氨基酸序列；
(16)SEQ ID NOs：22、49和81的氨基酸序列；
(17)SEQ ID NOs：5、35和63的氨基酸序列；
(18)SEQ ID NOs：1、30和64的氨基酸序列；
(19)SEQ ID NOs：11、41和70的氨基酸序列；
(20)SEQ ID NOs：1、31和59的氨基酸序列；
(21)SEQ ID NOs：19、47和78的氨基酸序列；
(22)SEQ ID NOs：28、55和87的氨基酸序列；
(23)SEQ ID NOs：12、39和71的氨基酸序列；
(24)SEQ ID NOs：13、42和72的氨基酸序列；
(25)SEQ ID NOs：1、30和57的氨基酸序列；
(26)SEQ ID NOs：20、48和79的氨基酸序列；
(27)SEQ ID NOs：14、43和67的氨基酸序列；
(28)SEQ ID NOs：1、30和58的氨基酸序列；
(29)SEQ ID NOs：2、32和60的氨基酸序列；
(30)SEQ ID NOs：15、44和73的氨基酸序列；
(31)SEQ ID NOs：29、56和88的氨基酸序列；
(32)SEQ ID NOs：22、49和81的氨基酸序列；
(33)SEQ ID NOs：16、42和74的氨基酸序列；
(34)SEQ ID NOs：6、36和65的氨基酸序列；或
(35)SEQ ID NOs：21、45和80的氨基酸序列；
或其变体，所述变体在VL CDRs中具有至多约5个氨基酸的替换，添加和/或缺失；和/或
(b)所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有
(1)SEQ ID NOs：91、112和136的氨基酸序列；
(2)SEQ ID NOs：89、122和149的氨基酸序列；
(3)SEQ ID NOs：95、116和140的氨基酸序列；
(4)SEQ ID NOs：100、123和150的氨基酸序列；
(5)SEQ ID NOs：99、129和157的氨基酸序列；
(6)SEQ ID NOs：106、128和158的氨基酸序列；
(7)SEQ ID NOs：96、117和141的氨基酸序列；
(8)SEQ ID NOs：89、110和134的氨基酸序列；
(9)SEQ ID NOs：107、130和159的氨基酸序列；
(10)SEQ ID NOs：95、116和160的氨基酸序列；
(11)SEQ ID NOs：90、111和135的氨基酸序列；
(12)SEQ ID NOs：101、124和151的氨基酸序列；
(13)SEQ ID NOs：105、131和161的氨基酸序列；
(14)SEQ ID NOs：97、118和142的氨基酸序列；
(15)SEQ ID NOs：98、119和143的氨基酸序列；
(16)SEQ ID NOs：105、128和156的氨基酸序列；
(17)SEQ ID NOs：92、113和137的氨基酸序列；
(18)SEQ ID NOs：93、114和138的氨基酸序列；
(19)SEQ ID NOs：91、120和144的氨基酸序列；
(20)SEQ ID NOs：89、110和134的氨基酸序列；
(21)SEQ ID NOs：102、125和152的氨基酸序列；
(22)SEQ ID NOs：108、132和162的氨基酸序列；
(23)SEQ ID NOs：96、117和145的氨基酸序列；
(24)SEQ ID NOs：95、116和146的氨基酸序列；
(25)SEQ ID NOs：89、110和134的氨基酸序列；
(26)SEQ ID NOs：103、126和153的氨基酸序列；
(27)SEQ ID NOs：96、117和141的氨基酸序列；
(28)SEQ ID NOs：89、110和134的氨基酸序列；
(29)SEQ ID NOs：90、111和135的氨基酸序列；
(30)SEQ ID NOs：99、121和147的氨基酸序列；
(31)SEQ ID NOs：109、133和163的氨基酸序列；
(32)SEQ ID NOs：104、127和155的氨基酸序列；
(33)SEQ ID NOs：95、116和148的氨基酸序列；
(34)SEQ ID NOs：94、115和139的氨基酸序列；或
(35)SEQ ID NOs：89、122和154的氨基酸序列；
或其变体，所述变体在VH CDRs中具有至多约5个氨基酸的替换，添加和/或缺失。
3.如权利要求1所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，
(1)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：3、33和61的氨基酸序列；和/或，所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：91、112和136的氨基酸序列；
(2)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：17、45和75的氨基酸序列；和/或，所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：89、122和149的氨基酸序列；
(3)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别为SEQ ID NOs：7、37和66的氨基酸序列；和/或，所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：95、116和140的氨基酸序列；
(4)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：18、32和76的氨基酸序列；和/或，所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：100、123和150的氨基酸序列；
(5)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：23、50和82的氨基酸序列；和/或，所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：99、129和157的氨基酸序列；
(6)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：24、51和83的氨基酸序列；和/或，所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：106、128和158的氨基酸序列；
(7)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：8、38和67的氨基酸序列；和/或，所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：96、117和141的氨基酸序列；
(8)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：4、34和62的氨基酸序列；和/或，所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：89、110和134的氨基酸序列；(9)所述VLCDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：25、52和84的氨基酸序列；和/或，所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：107、130和159的氨基酸序列；
(10)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：26、53和85的氨基酸序列；和/或，所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：95、116和160的氨基酸序列；
(11)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：2、32和60的氨基酸序列；和/或，所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：90、111和135的氨基酸序列；
(12)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：17、46和77的氨基酸序列；和/或，所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：101、124和151的氨基酸序列；
(13)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：27、54和86的氨基酸序列；和/或，所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：105、131和161的氨基酸序列；
(14)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：9、39和68的氨基酸序列；和/或，所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：97、118和142的氨基酸序列；
(15)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：10、40和69的氨基酸序列；和/或，所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos：98、119和143的氨基酸序列；(16)所述VLCDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：22、49和81的氨基酸序列；和/或，所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：105、128和156的氨基酸序列；
(17)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：5、35和63的氨基酸序列；和/或，所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：92、113和137的氨基酸序列；
(18)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：1、30和64的氨基酸序列；和/或，所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：93、114和138的氨基酸序列；
(19)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：11、41和70的氨基酸序列；和/或，所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：91、120和144的氨基酸序列；
(20)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：1、31和59的氨基酸序列；和/或，所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：89、110和134的氨基酸序列；
(21)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：19、47和78的氨基酸序列；和/或，所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：102、125和152的氨基酸序列；
(22)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：28、55和87的氨基酸序列；和/或，所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：108、132和162的氨基酸序列；
(23)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：12、39和71的氨基酸序列；和/或，所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：96、117和145的氨基酸序列；
(24)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：13、42和72的氨基酸序列；和/或，所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：95、116和146的氨基酸序列；
(25)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：1、30和57的氨基酸序列；和/或，所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：89、110和134的氨基酸序列；
(26)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs:20、48和79的氨基酸序列；和/或，所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：103、126和153的氨基酸序列；
(27)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：14、43和67的氨基酸序列；和/或，所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：96、117和141的氨基酸序列；
(28)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：1、30和58的氨基酸序列；和/或，所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：89、110和134的氨基酸序列；
(29)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：2、32和60的氨基酸序列；和/或，所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：90、111和135的氨基酸序列；
(30)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：15、44和73的氨基酸序列；和/或，所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：99、121和147的氨基酸序列；
(31)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别SEQ ID NOs：29、56和88的氨基酸序列；和/或，所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：109、133和163的氨基酸序列；
(32)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：22、49和81的氨基酸序列；和/或，所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：104、127和155的氨基酸序列；
(33)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：16、42和74的氨基酸序列；和/或，所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：95、116和148的氨基酸序列；
(34)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：6、36和65的氨基酸序列；和/或，所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：94、115和139的氨基酸序列；或
(35)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NOs：21、45和80的氨基酸序列；和/或，所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos：89、122和154的氨基酸序列。
4.根据权利要求1所述的抗体或抗原结合片段，其包括VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VHCDR1、VH CDR2和VH CDR3，其中，
(a)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos：23、50和82的氨基酸序列；和
(b)所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos：99、129和157的氨基酸序列。
5.根据权利要求1所述的抗体或抗原结合片段，其包括VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VHCDR1、VH CDR2和VH CDR3，其中，
(a)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos：8、38和67的氨基酸序列；和
(b)所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos：96、117和141的氨基酸序列。
6.根据权利要求1所述的抗体或抗原结合片段，其包括VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3、VHCDR1、VH CDR2和VH CDR3，其中，
(a)所述VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos：2、32和60的氨基酸序列；和
(b)所述VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID Nos：90、111和135的氨基酸序列。
7.一种特异性结合CD123的抗体或抗原结合片段，其包括：
(a)轻链可变区(VL)，其包含
(1)VL CDR1，其具有选自由SEQ ID NOs：348-352组成的群组中的氨基酸序列；
(2)VL CDR2，其具有选自由SEQ ID NOs：353-356组成的群组中的氨基酸序列；和
(3)VL CDR3，其具有选自由SEQ ID NOs：357-359组成的群组中的氨基酸序列；和/或，
(b)重链可变区(VH)，其包含
(1)VH CDR1，其具有选自由SEQ ID NOs：360-361组成的群组中的氨基酸序列；
(2)VH CDR2，其具有选自由SEQ ID NOs：362-367组成的群组中的氨基酸序列；和
(3)VH CDR3，其具有选自由SEQ ID NO：368组成的群组中的氨基酸序列。
8.一种特异性结合CD123的抗体或抗原结合片段，其包含：
(a)轻链可变区(VL)，其与选自由SEQ ID Nos：164-198组成的群组中的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％的序列同一性；和/或
(b)重链可变区(VH)，其与选自由SEQ ID NOs：199-233组成的群组中的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％的序列同一性。
9.根据权利要求8所述的抗体或抗原结合片段，其包含VL和VH，其中，所述VL和VH分别具有
(1)SEQ ID NO：164和SEQ ID NO：199的氨基酸序列；
(2)SEQ ID NO：165和SEQ ID NO：200的氨基酸序列；
(3)SEQ ID NO：166和SEQ ID NO：201的氨基酸序列；
(4)SEQ ID NO：167和SEQ ID NO：202的氨基酸序列；
(5)SEQ ID NO：168和SEQ ID NO：203的氨基酸序列；
(6)SEQ ID NO：169和SEQ ID NO：204的氨基酸序列；
(7)SEQ ID NO：170和SEQ ID NO：205的氨基酸序列；
(8)SEQ ID NO：171和SEQ ID NO：206的氨基酸序列；
(9)SEQ ID NO：172和SEQ ID NO：207的氨基酸序列；
(10)SEQ ID NO：173和SEQ ID NO：208的氨基酸序列；
(11)SEQ ID NO：174和SEQ ID NO：209的氨基酸序列；
(12)SEQ ID NO：175和SEQ ID NO：210的氨基酸序列；
(13)SEQ ID NO：176和SEQ ID NO：211的氨基酸序列；
(14)SEQ ID NO：177和SEQ ID NO：212的氨基酸序列；
(15)SEQ ID NO：178和SEQ ID NO：213的氨基酸序列；
(16)SEQ ID NO：179和SEQ ID NO：214的氨基酸序列；
(17)SEQ ID NO：180和SEQ ID NO：215的氨基酸序列；
(18)SEQ ID NO：181和SEQ ID NO：216的氨基酸序列；
(19)SEQ ID NO：182和SEQ ID NO：217的氨基酸序列；
(20)SEQ ID NO：183和SEQ ID NO：218的氨基酸序列；
(21)SEQ ID NO：184和SEQ ID NO：219的氨基酸序列；
(22)SEQ ID NO：185和SEQ ID NO：220的氨基酸序列；
(23)SEQ ID NO：186和SEQ ID NO：221的氨基酸序列；
(24)SEQ ID NO：187和SEQ ID NO：222的氨基酸序列；
(25)SEQ ID NO：188和SEQ ID NO：223的氨基酸序列；
(26)SEQ ID NO：189和SEQ ID NO：224的氨基酸序列；
(27)SEQ ID NO：190和SEQ ID NO：225的氨基酸序列；
(28)SEQ ID NO：191和SEQ ID NO：226的氨基酸序列；
(29)SEQ ID NO：192和SEQ ID NO：227的氨基酸序列；
(30)SEQ ID NO：193和SEQ ID NO：228的氨基酸序列；
(31)SEQ ID NO：194和SEQ ID NO：229的氨基酸序列；
(32)SEQ ID NO：195和SEQ ID NO：230的氨基酸序列；
(33)SEQ ID NO：196和SEQ ID NO：231的氨基酸序列；
(34)SEQ ID NO：197和SEQ ID NO：232的氨基酸序列；或
(35)SEQ ID NO：198和SEQ ID NO：233的氨基酸序列。
10.根据权利要求8所述的抗体或抗原结合片段，其包含VL和VH，其中，所述VL和VH分别具有SEQ ID NO：168和SEQ ID NO：203所示的氨基酸序列。
11.根据权利要求8所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，其包含VL和VH，其中，所述VL和VH分别具有SEQ ID NO：170和SEQ ID NO：205所示的氨基酸序列。
12.根据权利要求8所述的抗体或抗原结合片段，其包含VL和VH，其中，所述VL和VH分别具有SEQ ID NO：174和SEQ ID NO：209所示的氨基酸序列。
13.一种特异性结合CD123的抗体或抗原结合片段，其包含：
(a)轻链可变区(VL)，其包括VL CDR1、CDR2和CDR3，所述VL CDR1、CDR2和CDR3源于具有选自由SEQ ID Nos：164-198组成的群组中的氨基酸序列的VL；和/或，(b)重链可变区(VH)，其包括VH CDR1、CDR2和CDR3，所述VH CDR1、CDR2和CDR3源于具有选自由SEQ ID Nos：199-233组成的群组中的氨基酸序列的VH。
14.根据权利要求13所述的抗体或其抗原结合片段，其包括：
(1)VL和/或VH；且所述VL包括VL CDR1、CDR2和CDR3，所述VL CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：164的氨基酸序列的VL；所述VH包括VH CDR1、CDR2和CDR3，所述VH CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：199的氨基酸序列的VH；
(2)VL和/或VH；且所述VL包括VL CDR1、CDR2和CDR3，所述VL CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：165的氨基酸序列的VL；所述VH包括VH CDR1、CDR2和CDR3，所述VH CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：200的氨基酸序列的VH；
(3)VL和/或VH；且所述VL包括VL CDR1、CDR2和CDR3，所述VL CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：166的氨基酸序列的VL；所述VH包括VH CDR1、CDR2和CDR3，所述VH CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：201的氨基酸序列的VH；
(4)VL和/或VH；且所述VL包括VL CDR1、CDR2和CDR3，所述VL CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：167的氨基酸序列的VL；所述VH包括VH CDR1、CDR2和CDR3，所述VH CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：202的氨基酸序列的VH；
(5)VL和/或VH；且所述VL包括VL CDR1、CDR2和CDR3，所述VL CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：168的氨基酸序列的VL；所述VH包括VH CDR1、CDR2和CDR3，所述VH CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：203的氨基酸序列的VH；
(6)VL和/或VH；且所述VL包括VL CDR1、CDR2和CDR3，所述VL CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：169的氨基酸序列的VL；所述VH包括VH CDR1、CDR2和CDR3，所述VH CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：204的氨基酸序列的VH；
(7)VL和/或VH；且所述VL包括VL CDR1、CDR2和CDR3，所述VL CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：170的氨基酸序列的VL；所述VH包括VH CDR1、CDR2和CDR3，所述VH CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：205的氨基酸序列的VH；
(8)VL和/或VH；且所述VL包括VL CDR1、CDR2和CDR3，所述VL CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：171的氨基酸序列的VL；所述VH包括VH CDR1、CDR2和CDR3，所述VH CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：206的氨基酸序列的VH；
(9)VL和/或VH；且所述VL包括VL CDR1、CDR2和CDR3，所述VL CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：172的氨基酸序列的VL；所述VH包括VH CDR1、CDR2和CDR3，所述VH CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：207的氨基酸序列的VH；
(10)VL和/或VH；且所述VL包括VL CDR1、CDR2和CDR3，所述VL CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：173的氨基酸序列的VL；所述VH包括VH CDR1、CDR2和CDR3，所述VH CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：208的氨基酸序列的VH；
(11)VL和/或VH；且所述VL包括VL CDR1、CDR2和CDR3，所述VL CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：174的氨基酸序列的VL；所述VH包括VH CDR1、CDR2和CDR3，所述VH CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：209的氨基酸序列的VH；
(12)VL和/或VH；且所述VL包括VL CDR1、CDR2和CDR3，所述VL CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：175的氨基酸序列的VL；所述VH包括VH CDR1、CDR2和CDR3，所述VH CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：210的氨基酸序列的VH；
(13)VL和/或VH；且所述VL包括VL CDR1、CDR2和CDR3，所述VL CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：176的氨基酸序列的VL；所述VH包括VH CDR1、CDR2和CDR3，所述VH CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：211的氨基酸序列的VH；
(14)VL和/或VH；且所述VL包括VL CDR1、CDR2和CDR3，所述VL CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：177的氨基酸序列的VL；所述VH包括VH CDR1、CDR2和CDR3，所述VH CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：212的氨基酸序列的VH；
(15)VL和/或VH；且所述VL包括VL CDR1、CDR2和CDR3，所述VL CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：178的氨基酸序列的VL；所述VH包括VH CDR1、CDR2和CDR3，所述VH CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：213的氨基酸序列的VH；
(16)VL和/或VH；且所述VL包括VL CDR1、CDR2和CDR3，所述VL CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：179的氨基酸序列的VL；所述VH包括VH CDR1、CDR2和CDR3，所述VH CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：214的氨基酸序列的VH；
(17)VL和/或VH；且所述VL包括VL CDR1、CDR2和CDR3，所述VL CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：180的氨基酸序列的VL；所述VH包括VH CDR1、CDR2和CDR3，所述VH CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：215的氨基酸序列的VH；
(18)VL和/或VH；且所述VL包括VL CDR1、CDR2和CDR3，所述VL CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：181的氨基酸序列的VL；所述VH包括VH CDR1、CDR2和CDR3，所述VH CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：216的氨基酸序列的VH；
(19)VL和/或VH；且所述VL包括VL CDR1、CDR2和CDR3，所述VL CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：182的氨基酸序列的VL；所述VH包括VH CDR1、CDR2和CDR3，所述VH CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：217的氨基酸序列的VH；
(20)VL和/或VH；且所述VL包括VL CDR1、CDR2和CDR3，所述VL CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：183的氨基酸序列的VL；所述VH包括VH CDR1、CDR2和CDR3，所述VH CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：218的氨基酸序列的VH；
(21)VL和/或VH；且所述VL包括VL CDR1、CDR2和CDR3，所述VL CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：184的氨基酸序列的VL；所述VH包括VH CDR1、CDR2和CDR3，所述VH CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：219的氨基酸序列的VH；
(22)VL和/或VH；且所述VL包括VL CDR1、CDR2和CDR3，所述VL CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：185的氨基酸序列的VL；所述VH包括VH CDR1、CDR2和CDR3，所述VH CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：220的氨基酸序列的VH；
(23)VL和/或VH；且所述VL包括VL CDR1、CDR2和CDR3，所述VL CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：186的氨基酸序列的VL；所述VH包括VH CDR1、CDR2和CDR3，所述VH CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：221的氨基酸序列的VH；
(24)VL和/或VH；且所述VL包括VL CDR1、CDR2和CDR3，所述VL CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：187的氨基酸序列的VL；所述VH包括VH CDR1、CDR2和CDR3，所述VH CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：222的氨基酸序列的VH；
(25)VL和/或VH；且所述VL包括VL CDR1、CDR2和CDR3，所述VL CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：188的氨基酸序列的VL；所述VH包括VH CDR1、CDR2和CDR3，所述VH CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：223的氨基酸序列的VH；
(26)VL和/或VH；且所述VL包括VL CDR1、CDR2和CDR3，所述VL CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：189的氨基酸序列的VL；所述VH包括VH CDR1、CDR2和CDR3，所述VH CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：224的氨基酸序列的VH；
(27)VL和/或VH；且所述VL包括VL CDR1、CDR2和CDR3，所述VL CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：190的氨基酸序列的VL；所述VH包括VH CDR1、CDR2和CDR3，所述VH CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：225的氨基酸序列的VH；
(28)VL和/或VH；且所述VL包括VL CDR1、CDR2和CDR3，所述VL CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：191的氨基酸序列的VL；所述VH包括VH CDR1、CDR2和CDR3，所述VH CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：226的氨基酸序列的VH；
(29)VL和/或VH；且所述VL包括VL CDR1、CDR2和CDR3，所述VL CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：192的氨基酸序列的VL；所述VH包括VH CDR1、CDR2和CDR3，所述VH CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：227的氨基酸序列的VH；
(30)VL和/或VH；且所述VL包括VL CDR1、CDR2和CDR3，所述VL CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：193的氨基酸序列的VL；所述VH包括VH CDR1、CDR2和CDR3，所述VH CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：228的氨基酸序列的VH；
(31)VL和/或VH；且所述VL包括VL CDR1、CDR2和CDR3，所述VL CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：194的氨基酸序列的VL；所述VH包括VH CDR1、CDR2和CDR3，所述VH CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：229的氨基酸序列的VH；
(32)VL和/或VH；且所述VL包括VL CDR1、CDR2和CDR3，所述VL CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：195的氨基酸序列的VL；所述VH包括VH CDR1、CDR2和CDR3，所述VH CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：230的氨基酸序列的VH；
(33)VL和/或VH；且所述VL包括VL CDR1、CDR2和CDR3，所述VL CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：196的氨基酸序列的VL；所述VH包括VH CDR1、CDR2和CDR3，所述VH CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：231的氨基酸序列的VH；
(34)VL和/或VH；且所述VL包括VL CDR1、CDR2和CDR3，所述VL CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：197的氨基酸序列的VL；所述VH包括VH CDR1、CDR2和CDR3，所述VH CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：232的氨基酸序列的VH；或
(35)VL和/或VH；且所述VL包括VL CDR1、CDR2和CDR3，所述VL CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：198的氨基酸序列的VL；所述VH包括VH CDR1、CDR2和CDR3，所述VH CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：233的氨基酸序列的VH。
15.根据权利要求13所述的抗体或其抗原结合片段，其包含：轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，其中，VL包括VL CDR1、CDR2和CDR3，所述VL CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ IDNo：168的氨基酸序列的VL；和，VH包括VH CDR1、CDR2和CDR3，所述VH CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：203的氨基酸序列的VH。
16.根据权利要求13所述的抗体或其抗原结合片段，其包含：轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，其中，VL包括VL CDR1、CDR2和CDR3，所述VL CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ IDNo：170的氨基酸序列的VL；和，VH包括VH CDR1、CDR2和CDR3，所述VH CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：205的氨基酸序列的VH。
17.一种特异性结合CD123的抗体或其抗原结合片段，其包含：轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，其中，VL包括VL CDR1、CDR2和CDR3，所述VL CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ IDNo：174的氨基酸序列的VL；和，VH包括VH CDR1、CDR2和CDR3，所述VH CDR1、CDR2和CDR3源于具有SEQ ID No：209的氨基酸序列的VH。
18.一种抗体或其抗原结合片段，其与权利要求1-17中任一项所述的抗体或抗原结合片段竞争结合CD123。
19.根据权利要求1-18中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其为单克隆抗体或抗原结合片段。
20.根据权利要求1-19中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其为双特异性抗体或多特异性抗体。
21.根据权利要求20所述的抗体或抗原结合片段，其为双特异性T细胞接合子(BiTE)。
22.根据权利要求1-21中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其选自由IgG1抗体、IgG2抗体、IgG3抗体和IgG4抗体所组成的群组。
23.根据权利要求1-21中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其选自由Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、scFv、(scFv)2、单结构域抗体(sdAb)和重链抗体(HCAb)组成的群组。
24.根据权利要求23所述的抗体或抗原结合片段，其为scFv。
25.根据权利要求1-24中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其为嵌合抗体或抗原结合片段、人源化抗体或抗原结合片段，或，人抗体或抗原结合片段。
26.根据权利要求25所述的抗体或抗原结合片段，其为人抗体或抗原结合片段。
27.一种多核苷酸，其编码如权利要求1-26中任一项所述的抗体或抗原结合片段。
28.根据权利要求27所述的多核苷酸，其为信使RNA(mRNA)。
29.一种载体，其包含如权利要求27所述的多核苷酸。
30.一种宿主细胞，其包含如权利要求27或28的多核苷酸或如权利要求29所述的载体。
31.一种特异性结合CD123的嵌合抗原受体(CAR)，其从N-末端到C-末端包含：
(a)CD123结合结构域，其包含如权利要求1-26中任一项所述的抗体或抗原结合片段；
(b)跨膜结构域；和
(c)胞质结构域。
32.根据权利要求31所述的CAR，其中所述跨膜结构域源于CD8、CD28、CD3ζ、CD4、4-1BB、OX40、ICOS、CTLA-4、PD-1、LAG-3、2B4、BTLA、TCRα链、TCRβ链、或者TCRζ链、CD3ε、CD45、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134或CD154。
33.根据权利要求31所述的CAR，所述跨膜结构域包含CD8跨膜区或者CD28跨膜区。
34.根据权利要求31-33中任一项所述的CAR，其中所述胞质结构域包含信号传导结构域，所述信号传导结构域来源于CD3ζ、FcRγ、FcγRIIa、FcRβ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD5、CD22、CD79a、CD79b、DAP10、DAP12或其任何组合。
35.根据权利要求34所述的CAR，其中所述胞质结构域进一步包含共刺激结构域，所述共刺激结构域来源于CD28、4-1BB(CD137)、OX40、ICOS、DAP10、2B4、CD27、CD30、CD40、CD2、CD7、LIGHT、GITR、TLR、DR3、CD43或其任何组合。
36.根据权利要求31-35中任一项所述的CAR，其中所述胞质结构域包含CD3信号传导结构域和4-1BB共刺激结构域。
37.根据权利要求31-35中任一项所述的CAR，其中所述胞质结构域包含CD3信号传导结构域和CD28共刺激结构域。
38.根据权利要求31-37中任一项所述的CAR，其进一步包含CD8铰链，所述CD8铰链位于所述抗体或抗原结合片段与所述跨膜结构域之间。
39.一种特异性结合CD123的CAR，其包括选自由SEQ ID NOs：370-372组成的群组中的氨基酸序列。
40.一种多核苷酸，其编码如权利要求31-39中任一项所述的CAR。
41.根据权利要求40所述的多核苷酸，其为信使RNA(mRNA)。
42.一种载体，其包含如权利要求40所述的多核苷酸。
43.一种细胞，其包含如权利要求40或41所述的多核苷酸或如权利要求42所述的载体。
44.根据权利要求43所述的细胞，其为免疫效应细胞。
45.根据权利要求44所述的细胞，其来源于从外周血或骨髓中分离的细胞。
46.根据权利要求44所述的细胞，其来源于由干细胞或祖细胞体外分化而来的细胞，所示干细胞或祖细胞选自由T细胞祖细胞、造血干/祖细胞、造血多能祖细胞、胚胎干细胞和诱导多能细胞的组成的群组。
47.根据权利要求43-46中任一项所述的细胞，其为T细胞或NK细胞。
48.根据权利要求47所述的细胞，其为细胞毒性T细胞、辅助性T细胞、γδ细胞、CD4+/CD8+双阳性T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD4/CD8双阴性T细胞、CD3+T细胞、初始T细胞、效应T细胞、辅助性T细胞、记忆T细胞、调节T细胞、Th0细胞、Th1细胞、Th2细胞、Th3(Treg)细胞、Th9细胞、Th17细胞、Thαβ辅助细胞、Tfh细胞、干细胞记忆TSCM细胞、中枢记忆TCM细胞、效应记忆TEM细胞，或效应记忆TEMRA细胞。
49.根据权利要求47所述的细胞，其为细胞毒性T细胞。
50.一种细胞群，其包含如权利要求43所述的细胞，其中所述细胞群来源于外周血单个核细胞(PBMC)、外周血淋巴细胞(PBL)、肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)、细胞因子诱导杀伤细胞(CIK)、淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)或骨髓浸润淋巴细胞(MILs)。
51.一种药物组合物，其包含治疗有效量的如权利要求1-26中任一项所述的抗体或抗原结合片段，和药学上可接受的载体。
52.一种药物组合物，其包含有效治疗量的如权利要求43-50中任一项所述的细胞或细胞群，和药学上可接受的载体。
53.如权利要求1-26中任一项所述的抗体或抗原结合片段在癌症治疗中的用途。
54.如权利要求1-26中任一项所述的抗体或抗原结合片段在制备用于治疗癌症的药物中的用途。
55.如权利要求44-50中任一项所述的细胞或其细胞群在癌症治疗中的用途。
56.如权利要求44-50中任一项所述的细胞或其细胞群在制备用于治疗癌症的药物中的用途。
57.如权利要求51或52所述的药物组合物在癌症治疗中的用途。
58.如权利要求51或52所述的药物组合物在制备用于治疗癌症的药物中的用途。
59.如权利要求53-58中任一项所述的用途，其中所述细胞、细胞群、或药物组合物与附加疗法结合使用。
60.一种治疗需要治疗的受试者的癌症的方法，包括对受试者施用治疗有效量的如权利要求1-26中任一项所述的抗体或抗原结合片段。
61.一种治疗需要治疗的受试者的癌症的方法，包括对受试者施用治疗有效量的如权利要求44-50中任一项所述的细胞或细胞群。
62.一种治疗需要治疗的受试者的癌症的方法，包括对受试者施用给治疗有效量的如权利要求51或52所述的药物组合物。
63.根据权利要求61或62所述的方法，其中所述细胞或细胞群对所述受试者是自体的。
64.根据权利要求63所述的方法，其进一步包括：从所述受试者中获得细胞。
65.根据权利要求60-64中任一项所述的方法，其进一步包括：向所述受试者施用附加疗法。
66.根据权利要求60-65中任一项所述的方法，所述受试者为人。
67.根据权利要求53-66中任一项所述的用途或方法，所述癌症为实体瘤。
68.根据权利要求53-66中任一项所述的用途或方法，所述癌症为血液系统癌症。
69.根据权利要求68所述的用途或方法，所述癌症为白血病。
70.根据权利要求68所述的用途或方法，所述癌症是急性髓系白血病(AML)、B急性淋巴性白血病(B-ALL)、T急性淋巴性白血病(T-ALL)、B细胞前体急性淋巴细胞白血病(BCP-ALL)或母细胞性浆细胞样树突细胞肿瘤(BPDCN)。
71.根据权利要求53-70中任一项所述的用途或方法，所述癌症为表达CD123的癌症。
72.根据权利要求71所述的用途或方法，所述癌症为表达CD123的AML。
73.一种制备能够表达特异性结合CD123的CAR的细胞的方法，其包括将权利要求40或41所述的多核苷酸转移至所述细胞。
74.根据权利要求73所述的方法，所述多核苷酸通过电穿孔进行转移。
75.根据权利要求73所述的方法，所述多核苷酸通过病毒转导进行转移。
76.根据权利要求75所述的方法，其包括使用慢病毒、逆转录病毒、腺病毒或腺相关病毒进行病毒转导。
77.根据权利要求73所述的方法，所述多核苷酸使用转座子系统进行转移。
78.根据权利要求77所述的方法，所述转座子系统为睡美人(Sleeping Beauty)或PiggyBAC。
79.根据权利要求73所述的方法，所述多核苷酸通过基因编辑进行转移。
80.根据权利要求79所述的方法，所述多核苷酸通过CRISPR-Cas系统、ZFN系统或TALEN系统进行转移。
81.根据权利要求73-80中任一项所述的方法，所述细胞选自由T细胞、NK细胞、NKT细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和粒细胞组成的群组。
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