KR20220110338A - 키메라 항원 및 t 세포 수용체 및 사용 방법 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 본원에 개시된 세포외 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체 (CAR) 또는 T 세포 수용체 (TCR)를 제공한다. 본 발명의 일부 측면은 본원에 개시된 세포외 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체 (CAR) 또는 T 세포 수용체 (TCR)를 코딩하는 폴리뉴클레오티드에 관한 것이다. 본 발명의 다른 측면은 CAR 또는 TCR을 포함하는 세포 및 T 세포 요법에서의 그의 용도에 관한 것이다.

Description

키메라 항원 및 T 세포 수용체 및 사용 방법 {CHIMERIC ANTIGEN AND T CELL RECEPTORS AND METHODS OF USE}
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2016년 4월 1일에 출원된 미국 특허 가출원 번호 62/317,258의 이익을 주장하며, 이는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
서열 목록
본 출원은 ASCII 포맷으로 전자 제출된 서열 목록을 포함하고, 이는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 2019년 2월 28일에 작성된 상기 ASCII 카피의 명칭은 K-1031_02US_SL.txt이고, 크기는 450,469 바이트이다.
인간 암은 그의 속성상, 유전적 또는 후성적 전환을 겪어 비정상적인 암 세포가 된 정상 세포로 구성된다. 이로서, 암 세포는 정상 세포에 의해 발현되는 것과 구분되는 단백질 및 다른 항원을 발현하기 시작한다. 이들 이상 종양 항원은 신체의 선천성 면역계에 의해 사용되어 암 세포가 특이적으로 표적화되고 사멸될 수 있다. 그러나, 암 세포는 면역 세포, 예컨대 T 및 B 림프구가 성공적으로 암 세포를 표적화하는 것을 막기 위해 다양한 메카니즘을 사용한다.
현행 요법 T 세포 요법은 환자에서 암 세포를 표적화하고 사멸시키기 위해, 풍부화되거나 변형된 인간 T 세포에 의존한다. T 세포가 특정한 암 세포를 표적화하고 사멸시키는 능력을 증가시키기 위해, T 세포를 특정한 표적 암 세포로 지시하는 구축물을 발현하도록 T 세포를 조작하는 방법이 개발되어 왔다. 특정한 종양 항원과 상호작용할 수 있는 결합 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체 (CAR) 및 조작된 T 세포 수용체 (TCR)는 T 세포가 특정한 종양 항원을 발현하는 암 세포를 표적화하고 사멸시키는 것을 가능하게 한다.
암 세포를 표적화하고 사멸시키기 위한 개선된 CAR 및 TCR에 대한 필요가 존재한다.
본 발명은 암 세포를 특이적으로 표적화하고 사멸시키는 항원 수용체 (CAR) 또는 T 세포 수용체 (TCR)를 발현하는 유전자 조작된 면역 세포를 포함하는 조성물 및 방법을 제공함으로써 이러한 필요를 다룬다.
CAR은, 예를 들어, (i) 항원-특이적 성분 ("항원 결합 분자"), (ii) 1개 이상의 공동자극 도메인 (힌지 도메인을 포함함), 및 (iii) 1개 이상의 활성화 도메인을 포함할 수 있다. 각각의 도메인은 이종일 수 있고, 즉, 상이한 단백질 쇄로부터 유래된 서열로 구성될 수 있다. CAR-발현 면역 세포 (예컨대 T 세포)는 암 요법을 포함한 다양한 요법에서 사용될 수 있다.
실시예 섹션을 포함하여 하기에서 보다 상세하게 기재되는 바와 같이, 말단절단된 힌지 도메인 ("THD")을 포함하는 공동자극 도메인을 포함하는 CAR은 완전한 힌지 도메인 ("CHD")을 포함하는 공동자극 도메인을 포함하는 CAR과 비교할 경우 예상외로 뛰어난 특성을 제공한다. 이러한 CAR을 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 T 세포 내로 형질도입될 수 있고, T 세포, 예를 들어, 환자 자신의 T 세포에서 CAR이 발현된다. 형질도입된 T 세포가 환자에게 역이식되는 경우, CAR은 T 세포가 암 세포의 표면 상에 존재하는 에피토프를 인식하여 이에 결합하도록 지시하고, 따라서 비-암성 세포가 아닌 암 세포에 결합하게 한다. 이러한 결합은 T 세포에서의 세포용해 메카니즘의 활성화로 이어지고, 이는 결합된 암 세포를 특이적으로 사멸시킨다. 본 발명 전에, THD를 포함하는 CAR이 CHD를 포함하는 CAR보다 뛰어나다는 것은 공지되어 있지 않았다. 따라서, 본 발명은 암을 치료하기 위한 신규하고 개선된 요법에 대해 존재하던 미충족 필요를 만족시킨다.
본 발명의 측면은 (i) 항원 결합 분자, (ii) 공동자극 도메인, 및 (iii) 활성화 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체 (CAR) 또는 T 세포 수용체 (TCR)를 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드이다. 공동자극 도메인은 세포외 도메인, 막횡단 도메인, 및 세포내 도메인을 포함할 수 있고, 여기서 세포외 도메인은 (i) 서열식별번호(SEQ ID NO): 1의 아미노산 123 내지 152와 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열 및, 임의로, (ii) 1 내지 6개의 아미노산으로 본질적으로 이루어지거나 또는 그로 이루어진 말단절단된 힌지 도메인을 포함한다.
일부 실시양태에서, 1 내지 6개의 아미노산은 이종 아미노산이다.
일부 실시양태에서, 말단절단된 힌지 도메인은 서열식별번호: 1의 아미노산 123 내지 152와 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열로 본질적으로 이루어지거나 또는 그로 이루어진다.
일부 실시양태에서, 아미노산 서열은 서열식별번호: 2와 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩된다.
일부 실시양태에서, 막횡단 도메인은 4-1BB/CD137, T 세포 수용체의 알파 쇄, T 세포 수용체의 베타 쇄, CD3 엡실론, CD4, CD5, CD8 알파, CD9, CD16, CD19, CD22, CD33, CD37, CD45, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, CD154, 또는 T 세포 수용체의 제타 쇄, 또는 그의 임의의 조합의 막횡단 도메인이다.
일부 실시양태에서, 막횡단 도메인은 서열식별번호: 5와 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함다.
일부 실시양태에서, 막횡단 도메인은 서열식별번호: 4와 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩된다.
일부 실시양태에서, 세포내 도메인은 4-1BB/CD137, 활성화 NK 세포 수용체, B7-H3, BAFFR, BLAME (SLAMF8), BTLA, CD100 (SEMA4D), CD103, CD160 (BY55), CD18, CD19, CD19a, CD2, CD247, CD27, CD276 (B7-H3), CD29, CD3 델타, CD3 엡실론, CD3 감마, CD30, CD4, CD40, CD49a, CD49D, CD49f, CD69, CD7, CD84, CD8알파, CD8베타, CD96 (Tactile), CD11a, CD11b, CD11c, CD11d, CDS, CEACAM1, CRTAM, 시토카인 수용체, DAP-10, DNAM1 (CD226), Fc 감마 수용체, GADS, GITR, HVEM (LIGHTR), IA4, ICAM-1, ICAM-1, Ig 알파 (CD79a), IL2R 베타, IL2R 감마, IL7R 알파, 이뮤노글로불린-유사 단백질, 유도성 T 세포 공동자극자 (ICOS), 인테그린, ITGA4, ITGA4, ITGA6, ITGAD, ITGAE, ITGAL, ITGAM, ITGAX, ITGB2, ITGB7, ITGB1, KIRDS2, LAT, LFA-1, LFA-1, CD83과 특이적으로 결합하는 리간드, LIGHT, LIGHT (종양 괴사 인자 슈퍼패밀리 구성원 14; TNFSF14), LTBR, Ly9 (CD229), 림프구 기능-연관 항원-1 (LFA-1 (CD11a/CD18), MHC 부류 I 분자, NKG2C, NKG2D, NKp30, NKp44, NKp46, NKp80 (KLRF1), OX-40, PAG/Cbp, 프로그램화된 사멸-1 (PD-1), PSGL1, SELPLG (CD162), 신호전달 림프구성 활성화 분자 (SLAM 단백질), SLAM (SLAMF1; CD150; IPO-3), SLAMF4 (CD244; 2B4), SLAMF6 (NTB-A; Ly108), SLAMF7, SLP-76, TNF 수용체 단백질, TNFR2, 톨 리간드 수용체, TRANCE/RANKL, VLA1, 또는 VLA-6, 또는 그의 조합의 신호전달 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 세포내 도메인은 4-1BB/CD137 신호전달 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 세포내 도메인은 서열식별번호: 7과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 세포내 도메인은 서열식별번호: 6과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩된 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항원 결합 분자는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함하고, 여기서 VH는 3개의 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함하고, VL은 3개의 CDR을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항원 결합 분자는 5T4, 알파태아단백질, B 세포 성숙 항원 (BCMA), CA-125, 암배아성 항원, CD19, CD20, CD22, CD23, CD30, CD33, CD56, CD123, CD138, c-Met, CSPG4, C-유형 렉틴-유사 분자 1 (CLL-1), EGFRvIII, 상피 종양 항원, ERBB2, FLT3, 폴레이트 결합 단백질, GD2, GD3, HER1-HER2 조합, HER2-HER3 조합, HER2/Neu, HERV-K, HIV-1 외피 당단백질 gp41, HIV-1 외피 당단백질 gp120, IL-11R알파, 카파 쇄, 람다 쇄, 흑색종-연관 항원, 메소텔린, MUC-1, 돌연변이된 p53, 돌연변이된 ras, 전립선-특이적 항원, ROR1, 또는 VEGFR2, 또는 그의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 항원에 특이적으로 결합한다.
일부 실시양태에서, 항원 결합 분자는 BCMA, CLL-1, 또는 FLT3에 특이적으로 결합한다.
일부 실시양태에서, 활성화 도메인은 서열식별번호: 9 또는 서열식별번호: 251과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 활성화 도메인은 서열식별번호: 8과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩된다.
일부 실시양태에서, CAR 또는 TCR은 리더 펩티드를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 리더 펩티드는 서열식별번호: 11과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 리더 펩티드는 서열식별번호: 10과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩된다.
본 발명의 또 다른 측면은 상기 측면 또는 실시양태의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터이다.
일부 실시양태에서, 벡터는 아데노바이러스 벡터, 아데노바이러스-연관 벡터, DNA 벡터, 렌티바이러스 벡터, 플라스미드, 레트로바이러스 벡터, 또는 RNA 벡터, 또는 그의 임의의 조합이다.
본 발명의 또 다른 측면은 상기 측면 또는 실시양태의 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩된 폴리펩티드 또는 상기 측면 또는 실시양태의 벡터이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 상기 측면 또는 실시양태의 폴리뉴클레오티드, 상기 측면 또는 실시양태의 벡터, 또는 상기 측면 또는 실시양태의 폴리펩티드, 또는 그의 임의의 조합을 포함하는 세포이다.
일부 실시양태에서, 세포는 T 세포이다.
일부 실시양태에서, T 세포는 동종 T 세포, 자가 T 세포, 조작된 자가 T 세포 (eACT™), 또는 종양-침윤 림프구 (TIL)이다.
일부 실시양태에서, T 세포는 CD4+ T 세포이다.
일부 실시양태에서, T 세포는 CD8+ T 세포이다.
일부 실시양태에서, T 세포는 시험관내 세포이다.
일부 실시양태에서, T 세포는 자가 T 세포이다.
본 발명의 측면은 상기 측면 또는 실시양태의 폴리뉴클레오티드를 포함하거나, 상기 측면 또는 실시양태의 벡터를 포함하거나, 상기 측면 또는 실시양태의 폴리펩티드를 포함하거나, 또는 상기 측면 또는 실시양태의 세포를 포함하는 조성물이다.
일부 실시양태에서, 임의로, 적어도 1종의 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 조성물은 대상체에게 전달하기 위해 제제화된다.
본 발명의 또 다른 측면은 세포를 적합한 조건 하에 상기 측면 또는 실시양태의 폴리뉴클레오티드로 형질도입하는 것을 포함하는, CAR 또는 TCR을 발현하는 세포를 제조하는 방법이다.
일부 실시양태에서, 방법은 세포를 단리하는 것을 추가로 포함한다.
본 발명의 또 다른 측면은 상기 측면 또는 실시양태의 폴리뉴클레오티드를 포함하거나, 상기 측면 또는 실시양태의 벡터를 포함하거나, 또는 상기 측면 또는 실시양태의 폴리펩티드를 포함하거나, 또는 그의 임의의 조합을 포함하는 세포의 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 종양에 대한 면역을 유도하는 방법이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 상기 측면 또는 실시양태의 폴리뉴클레오티드, 상기 측면 또는 실시양태의 벡터, 상기 측면 또는 실시양태의 폴리펩티드, 상기 측면 또는 실시양태의 세포, 또는 상기 측면 또는 실시양태의 조성물을 암의 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 암을 치료하는 방법이다.
일부 실시양태에서, 암은 혈액암이다.
일부 실시양태에서, 암은 백혈구 암이다.
일부 실시양태에서, 암은 형질 세포 암이다.
일부 실시양태에서, 암은 백혈병, 림프종 또는 골수종이다.
일부 실시양태에서, 암은 급성 림프모구성 백혈병 (ALL) (비 T 세포 ALL 포함), 급성 골수성 백혈병, B 세포 전림프구성 백혈병, B-세포 급성 림프성 백혈병 ("BALL"), 모구성 형질세포양 수지상 세포 신생물, 버킷 림프종, 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수 백혈병 (CML), 만성 골수성 백혈병, 만성 또는 급성 백혈병, 미만성 대 B 세포 림프종 (DLBCL), 여포성 림프종 (FL), 모발상 세포 백혈병, 호지킨병, 악성 림프증식성 상태, MALT 림프종, 외투 세포 림프종, 변연부 림프종, 의미 불명의 모노클로날 감마글로불린병증 (MGUS), 다발성 골수종, 골수이형성증 및 골수이형성 증후군, 비-호지킨 림프종 (NHL), 형질 세포 증식성 장애 (하기 포함: 무증상 골수종 (증상이 없는 다발성 골수종 또는 무통성 골수종), 형질모구성 림프종, 형질세포양 수지상 세포 신생물, 형질세포종 (형질 세포 이혼화증; 고립 골수종; 고립 형질세포종; 수질외 형질세포종; 및 다발성 형질세포종 포함), POEMS 증후군 (또한 크로우-푸카세 증후군; 다카츠키병; 및 PEP 증후군으로도 알려짐), 원발성 종격 대 B 세포 림프종 (PMBC), 소세포- 또는 대세포-여포성 림프종, 비장 변연부 림프종 (SMZL), 전신 아밀로이드 경쇄 아밀로이드증, T-세포 급성 림프성 백혈병 ("TALL"), T-세포 림프종, 형질전환된 여포성 림프종, 또는 발덴스트롬 마크로글로불린혈증, 또는 그의 조합이다.
일반적으로, 본 발명은 "eACT™"로 약칭되는, 입양 세포 전달로도 공지되어 있는 조작된 자가 세포 요법에 관한 것이다. eACT™은 환자 자신의 T 세포를 수집하고, 이어서 이를 1종 이상의 특정 암 세포의 세포 표면 상에서 발현되는 1개 이상의 항원을 인식하고 표적하도록 유전자 조작하는 방법이다. T 세포는, 예를 들어, CAR 또는 TCR을 발현하도록 조작될 수 있다. CAR 양성 (CAR+) T 세포는 CAR을 발현하도록 조작된다. CAR은, 예를 들어, 특정한 종양 항원에 대해 특이성을 갖는 세포외 단일 쇄 가변 단편 (scFv)을 포함할 수 있고, 이는 적어도 1개의 공동자극 도메인을 포함하는 세포내 신호전달 부분에 직접 또는 간접적으로 연결되고, 이는 적어도 1개의 활성화 도메인에 직접 또는 간접적으로 연결되고; 성분은 임의의 순서로 배열될 수 있다. 공동자극 도메인은 기술분야에 공지된 공동자극 단백질, 예를 들어, 서열식별번호: 1로부터 유래될 수 있고, 활성화 도메인은, 예를 들어, 임의의 유형의 CD3-제타로부터 유래될 수 있다. 일부 실시양태에서, CAR은 2, 3, 4개, 또는 그 초과의 공동자극 도메인을 갖도록 설계된다. 일부 실시양태에서, CAR은 공동자극 도메인이 개별 폴리펩티드 쇄로서 발현되도록 조작된다. CAR T 세포 요법 및 구축물의 예는 미국 특허 공개 번호 2013/0287748, 2014/0227237, 2014/0099309, 및 2014/0050708; 국제 특허 공개 번호 WO2012033885, WO2012079000, WO2014127261, WO2014186469, WO2015080981, WO2015142675, WO2016044745, 및 WO2016090369; 및 문헌 [Sadelain et al., Cancer Discovery, 3: 388-398 (2013)]에 기재되어 있고, 이들 각각은 그 전문이 참조로 포함된다.
본원에 기재된 임의의 측면 또는 실시양태는 본원에 개시된 바와 같은 임의의 다른 측면 또는 실시양태와 조합될 수 있다. 본 발명을 그의 상세한 설명과 함께 기재하였지만, 상기 상세한 설명은 예시를 위해 의도되고 본 발명의 범주를 제한하고자 하는 것이 아니며, 본 발명의 범주는 첨부된 청구범위의 범주에 의해 규정된다. 다른 측면, 이점 및 변형은 하기 청구범위의 범주 내에 있다.
본원에 언급된 특허 및 과학 문헌은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 이용가능한 지식을 확립한다. 본원에 인용된 모든 미국 특허 및 공개되거나 비공개된 미국 특허 출원은 참조로 포함된다. 본원에 인용된 모든 공개된 해외 특허 및 특허 출원은 본원에 참조로 포함된다. 본원에 인용된 모든 다른 공개된 참고문헌, 사전, 문헌, 원고, 및 과학 문헌은 본원에 참조로 포함된다.
본 발명의 다른 특색 및 이점은 도면, 및 실시예를 포함한 하기 상세한 설명, 및 청구범위로부터 명백해질 것이다.
상기 및 추가의 특색은 하기 상세한 설명을 첨부 도면과 함께 참조할 때 보다 분명하게 인지될 것이다. 그러나 도면은 단지 예시를 위한 것이고, 제한을 위한 것이 아니다.
도 1a는 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 갖는 공동자극 단백질을 보여준다. 공동자극 단백질의 힌지 도메인 (실선 밑줄), 막횡단 도메인 (점선 밑줄), 및 신호전달 도메인 (파선 밑줄)이 라벨링된다. 신규 말단절단된 힌지 도메인 ("THD")은 볼드체 표시된다. 도 1b 및 1c는 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 갖는 공동자극 단백질의 세포외 도메인의 리본 다이어그램을 제공한다. 도 1b는 CAR과 관련하여 힌지 영역의 한 실시양태를 유도하는데 사용되는 서열식별번호: 1의 아미노산 서열 내의 영역, 즉, 서열식별번호: 1의 아미노산 114 내지 152 (본원에서 완전한 힌지 도메인 또는 "CHD"로 지칭됨; 이는 흑색 및 암회색으로 표시됨)를 함유하는 영역의 예를 보여준다. 도 1c는 서열식별번호: 1의 아미노산 123 내지 152 (흑색으로 표시됨)를 함유하는 THD를 보여준다. 도 1b에서, 도 1c에서 제외된 힌지 영역 부분은 암회색으로 표시되고, 동그라미 표시된다.
도 2a-2h는 본원에 개시된 8개의 예시적인 결합 분자의 CLUTSTAL W (2.83) 다중 서열 정렬을 보여준다. 도 2a는 VH 도메인을 포함하는 예시적인 항-CLL-1 결합 분자의 서열 정렬을 보여준다. CDR 및 프레임워크 영역 FR은 코티아(Chothia) 넘버링에 의해 결정된 바와 같이 제시된다 (도 2a). 도 2b는 도 2a에 예시된 각각의 VH 및 CDR에 대한 서열식별번호를 제공하는 표이다. 도 2c는 VL 도메인을 포함하는 예시적인 항-CLL-1 결합 분자의 서열 정렬을 보여준다. CDR 및 FR은 코티아 넘버링에 의해 결정된 바와 같이 제시된다 (도 2c). 도 2d는 도 2c에 예시된 각각의 VH 및 CDR 서열에 대한 서열식별번호를 제공하는 표이다. 도 2e는 VH 도메인을 포함하는 예시적인 항-BCMA 결합 분자의 서열 정렬을 보여준다. 상보성 결정 영역 (CDR) 및 프레임워크 영역 (FR)은 코티아 넘버링에 의해 결정된 바와 같이 제시된다 (도 2e). 상단에서 하단 순서로 서열식별번호: 253-260, CDR1, 상단에서 하단 순서로 서열식별번호: 261-268, CDR2, 상단에서 하단 순서로 서열식별번호: 269-276, CDR3. 도 2f는 대안적 방법으로 넘버링된 각각의 VH 및 CDR에 대한 서열식별번호를 제공하는 표이다. 도 2g는 VL 도메인을 포함하는 예시적인 항-BCMA 결합 분자의 서열 정렬을 보여준다. CDR 및 FR은 코티아 넘버링에 의해 결정된 바와 같이 제시된다 (도 2g). 상단에서 하단 순서로 서열식별번호: 37-44, CDR1, 상단에서 하단 순서로 서열식별번호: 45-52, CDR2, 상단에서 하단 순서로 서열식별번호: 277-284, CDR3. 도 2h는 대안적 방법으로 넘버링된 각각의 VH 및 CDR 서열에 대한 서열식별번호를 제공하는 표이다.
도 3은 다양한 CAR을 코딩하는 mRNA로 전기천공된 1차 인간 T 세포에서의 CAR 발현을 도시한다. 완전한 힌지 도메인 ("CHD")을 갖는 CAR로부터 수득된 데이터를 제시하고, 말단절단된 힌지 도메인 ("THD")을 갖는 CAR로부터 수득된 데이터를 제시한다.
도 4a-4x는 표시된 표적 세포주와의 공동-배양 16시간 후 전기천공된 항-FLT3 CAR T 세포에 의한 IFNγ, IL-2, 및 TNFα 생산을 보여준다. 도 4a-4b, 4g-4h, 4m-4n, 및 4s-4t는 각각 나말바(Namalwa), EoL-1, HL60, 및 MV4;11 표적 세포와의 공동-배양 후의 IFNγ 생산을 보여준다. 도 4c-4d, 4i-4j, 4o-4p, 및 4u-4v는 각각 나말바, EoL-1, HL60, 및 MV4;11 표적 세포와의 공동-배양 후의 IL-2 생산을 보여준다. 도 4e-4f, 4k-4l, 4q-4r, 및 4w-4x는 각각 나말바, EoL-1, HL60, 및 MV4;11 표적 세포와의 공동-배양 후의 TNFα 생산을 보여준다.
도 5a-5h는 공동-배양 16시간 후 나말바 (도 5a-5b), EoL1 (도 5c-5d), HL60 (도 5e-5f), 및 MV4;11 (도 5g-5h) 표적 세포주에 대한 전기천공된 항-FLT3 CAR T 세포의 세포용해 활성을 보여준다.
도 6a-6b는 2명의 건강한 공여자로부터의 렌티바이러스 형질도입된 1차 인간 T 세포에서의 CAR 발현을 도시한다.
도 7a-7f는 표시된 표적 세포주와의 공동-배양 16시간 후 2명의 건강한 공여자로부터의 렌티바이러스 형질도입된 CAR T 세포에 의한 IFNγ (도 7a-7b), TNFα (도 7c-7d), 및 IL-2 (도 7e-7f) 생산을 보여준다.
도 8a-8d는 16, 40, 64, 88, 또는 112시간 동안 나말바 (도 8a), EoL1 (도 8b), MV4;11 (도 8c), 및 HL60 (도 8d) 표적 세포주와 공동-배양된, 항-FLT3 CAR 구축물을 발현하는 2명의 건강한 공여자로부터의 시간의 경과에 따른 평균 세포용해 활성을 보여준다.
도 9a-9b는 CD3-CD28 비드 또는 표시된 표적 세포주와의 공동-배양 5일 후 2명의 건강한 공여자로부터의 CFSE-표지된 렌티바이러스 형질도입된 CAR T 세포의 증식을 도시한다.
도 10a-10d는 생체내 연구를 위해 사용된 렌티바이러스 형질도입된 1차 인간 T 세포에서의 CAR 발현을 도시한다. 도 10e-10f는 이중으로 수행된 이종 모델에서의 대조군 (모의) 또는 항-FLT3 CAR T 세포 (10E3-CHD, 10E3-THD, 또는 8B5-THD)의 정맥내 주사 후, 표지된 급성 골수성 백혈병 (AML) 세포의 측정된 생물발광 영상화의 그래프 표현을 보여준다. 도 10g는 도 10e에서의 각각의 데이터 포인트에 대한 p-값을 제공한다. 도 10h-10k는 모의 또는 10E3-CHD (도 10h), 모의 또는 10E3-THD (도 10i), 모의 또는 8B5-THD (도 10j), 또는 10E3-THD 또는 8B5-THD (도 10k) CAR T 세포가 주사된 마우스의 생존 곡선을 보여준다.
도 11a-11b는 mRNA 전기천공 6시간 후 단백질 L에 의해 결정된 CLL-1 CAR 발현을 보여준다.
도 12a-12c는 mRNA 전기천공 24시간 후 상이한 CLL-1 CAR-T 세포 구축물로부터의 시토카인 방출 검정으로부터의 결과를 보여준다. 표시된 바와 같은 나말바, MV4;11, U937, HL60, 및 EoL-1 세포와 공동-배양된 대조군 (표적 단독, 모의, GFP, 및 CD19 CAR T 세포) 및 항-CLL-1 CAR T 세포 (24C1_HL-THD, 24C1_HL_CHD, 24C8_HL-CHD, 및 24C8_HL_THD)에 대한 IL-2 (도 12a), IFNγ (도 12b), 및 TNFα (도 12c) 생산 수준이 제시된다.
도 13a-13e는 mRNA 전기천공 24시간 후 상이한 CLL-1 CAR-T 세포 구축물의 세포용해 활성을 보여준다. 대조군 구축물 (모의, GFP, 및 CD19 CAR) 또는 항-CLL-1 CAR 구축물 (24C8_HL-CHD 및 24C8_HL_THD)로 전기천공된 T 세포를 나말바 (도 13a), MV;411 (도 13b), EoL-1 (도 13c), HL-60 (도 13d), 및 U937 표적 세포와 공동-배양하고, 각각의 표적 세포주의 특이적 용해의 퍼센트를 결정하였다.
도 14a-14c는 상이한 세포주와의 공동-배양 16시간 후 상이한 형질도입된 항-CLL-1 CAR T 세포로부터의 시토카인 방출 검정으로부터의 결과를 보여준다. 표시된 바와 같은 나말바, HL-60, 또는 MV4;11 표적 세포와 공동-배양된 대조군 (표적 단독 및 모의) 및 형질도입된 항-CLL-1 CAR T 세포 (10E3_THD 및 24C1_LH_THD)에 대한 IFNγ (도 14a), IL-2 (도 14b), 및 TNFα (도 14c) 생산 수준이 제시된다.
도 15a-15c는 나말바 (도 15a), MV4;11 (도 15b), 또는 HL-60 (도 15c) 표적 세포와의 공동-배양 16시간 및 40시간 후 항-CLL-1 CAR T 세포 (C1_24C1_LH_THD)로부터의 세포용해 활성을 보여준다.
도 16a-16f는 EoL-1 (흑색), NCI-H929 (담회색), 또는 MM1S (회색) 표적 세포주와의 공동-배양 16시간 후, 2명의 건강한 공여자로부터의 렌티바이러스 형질도입된 CAR T 세포에 의한 IFNγ, TNFα, 및 IL-2 생산을 보여준다. 도 16a 및 16b는 제1 공여자 (도 16a) 및 제2 공여자 (도 16b)로부터의 렌티바이러스 형질도입된 CAR T 세포에서의 IFNγ (pg/ml; y-축) 생산을 보여준다. 도 16c 및 16d는 제1 공여자 (도 16c) 및 제2 공여자 (도 16d)로부터의 렌티바이러스 형질도입된 CAR T 세포에서의 TNFα (pg/ml; y-축) 생산을 보여준다. 도 16e 및 16f는 제1 공여자 (도 16e) 및 제2 공여자 (도 16f)로부터의 렌티바이러스 형질도입된 CAR T 세포에서의 IL-2 생산 (pg/ml; y-축)을 보여준다.
도 17a-17f는 16시간, 40시간, 64시간, 88시간, 또는 112시간 동안 EoL1 (도 17a 및 17b), NCI-H929 (도 17c 및 17d), 또는 MM1S (도 17e 및 17f) 표적 세포와 공동-배양된, 표시된 CAR을 발현하는 2명의 건강한 공여자로부터의 시간의 경과에 따른 평균 세포용해 활성을 (남아있는 생존 표적 세포의 백분율로서; y-축) 보여준다. 도 17a 및 17b는 16시간, 40시간, 64시간, 88시간, 또는 112시간 동안 EoL1 표적 세포와 공동-배양된, 제1 공여자 (도 17a) 및 제2 공여자 (도 17b)로부터의 형질도입된 CAR T 세포의 평균 세포용해 활성을 보여준다. 도 17c 및 17d는 16시간, 40시간, 64시간, 88시간, 또는 112시간 동안 NCI-H929 표적 세포와 공동-배양된 제1 공여자 (도 17c) 및 제2 공여자 (도 17d)로부터의 형질도입된 CAR T 세포의 평균 세포용해 활성을 보여준다. 도 17e 및 17f는 16시간, 40시간, 64시간, 88시간, 또는 112시간 동안 MM1S 표적 세포와 공동-배양된 제1 공여자 (도 17e) 및 제2 공여자 (도 17f)로부터의 형질도입된 CAR T 세포의 평균 세포용해 활성을 보여준다.
도 18a 및 18b는 CD3-CD28 비드 (상단 열), EoL-1 (제2 열), NCI-H929 (제3 열), 또는 MM1S (하단 열) 표적 세포주와의 공동-배양 6일 후 제1 건강한 공여자 (도 18a) 및 제2 건강한 공여자 (도 18b)로부터의 CFSE-표지된 렌티바이러스 형질도입된 CAR T 세포의 증식을 보여준다.
도 19a 및 도 19b는 본 발명의 키메라 항원 수용체 (CAR)의 열안정성을 보여주는 그래프이다. 도 19a: 포스페이트-완충 염수 (PBS) 용액에서, 말단절단된 힌지 도메인 ("THD")을 갖는 세포외 도메인을 포함하는 CAR은 완전한 힌지 도메인 ("CHD")을 갖는 세포외 도메인을 포함하는 CAR에 비해 더 높은 용융 온도를 갖는다. 도 19b: 50 mM NaCl의 존재 하에, THD를 갖는 세포외 도메인을 포함하는 CAR은 CHD를 갖는 세포외 도메인을 포함하는 CAR에 비해 더 높은 용융 온도를 갖는다.
도 20은 pGAR 벡터의 도식 표현이다.
본 발명은 신규 말단절단된 힌지 도메인 ("THD")를 포함하는 신규 폴리펩티드 및 그를 코딩하는 폴리뉴클레오티드에 관한 것이다. 본 발명의 일부 측면은 본원에 개시된 THD를 포함하는 키메라 항원 수용체 (CAR) 또는 T 세포 수용체 (TCR)를 코딩하는 폴리뉴클레오티드에 관한 것이다. 본 발명은 또한 이러한 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터 (예를 들어, 바이러스 벡터) 및 이러한 벡터를 포함하는 조성물을 제공한다. 본 발명은 추가로 이러한 CAR 또는 TCR을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 이러한 폴리뉴클레오티드를 포함하는 조성물을 제공한다. 본 발명은 추가적으로 이러한 폴리뉴클레오티드를 포함하고/거나 이러한 바이러스 벡터로 형질도입된, 조작된 세포 (예를 들어, T 세포) 및 이러한 조작된 세포를 포함하는 조성물을 제공한다. 본 발명은 복수의 조작된 T 세포를 포함하는 조성물 (예를 들어, 제약 조성물)을 제공한다. 본 발명은 이러한 조작된 T 세포 및 조성물을 제조하는 방법 및 이러한 조작된 T 세포 및 조성물의 (예를 들어, 흑색종을 치료하는데 있어서의) 용도를 제공한다. 그리고, 본 발명은 본 발명의 폴리뉴클레오티드, 벡터, 또는 폴리펩티드를 포함하는 세포의 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 종양에 대한 면역을 유도하는 방법을 제공한다. 본 발명의 다른 측면은 CAR 또는 TCR을 포함하는 세포, 및 암을 앓고 있는 환자를 치료하기 위한, T 세포 요법, 예를 들어, 자가 세포 요법 (eACT™)에서의 그의 용도에 관한 것이다.
정의
본 발명이 보다 용이하게 이해되도록, 먼저 특정 용어를 하기에 정의한다. 하기 용어 및 다른 용어에 대한 추가의 정의는 본 명세서 전반에 걸쳐 제시된다.
본 명세서 및 첨부된 청구범위에 사용된 단수 형태는 문맥이 달리 명백하게 지시하지 않는 한 복수 지시대상을 포함한다.
구체적으로 언급되거나 문맥으로부터 명백하지 않는 한, 본원에 사용된 용어 "또는"은 "또는"과 "및" 둘 다를 포함하고 포괄하는 것으로 이해된다.
용어 "및/또는"이 본원에서 사용되는 경우 2개의 명시된 특색 또는 성분 각각을 함께 또는 따로 구체적으로 개시하는 것으로서 받아들여져야 한다. 따라서, 본원에서 "A 및/또는 B"와 같은 어구에서 사용된 용어 "및/또는"은 A 및 B; A 또는 B; A (단독); 및 B (단독)를 포함하는 것으로 의도된다. 마찬가지로, "A, B, 및/또는 C"와 같은 어구에서 사용된 용어 "및/또는"은 하기 측면 각각을 포괄하도록 의도된다: A, B, 및 C; A, B, 또는 C; A 또는 C; A 또는 B; B 또는 C; A 및 C; A 및 B; B 및 C; A (단독); B (단독); 및 C (단독).
본원에 사용된 용어 "예를 들어" 및 "즉"은 단지 예로서 사용되고, 제한하는 것으로 의도되지 않으며, 명세서에서 명시적으로 열거된 항목들 만을 지칭하는 것으로 해석되지 않아야 한다.
용어 "또는 그 초과", "적어도", "보다 더" 등, 예를 들어, "적어도 하나"는 언급된 값보다 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149 또는 150, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 2000, 3000, 4000, 5000 또는 그 초과를 포함하나 이에 제한되지는 않는 것으로 이해된다. 또한 임의의 더 큰 수 또는 그 사이의 분율도 포함된다.
반대로, 용어 "이하"는 언급된 값보다 적은 각각의 값을 포함한다. 예를 들어, "100개 이하의 뉴클레오티드"는 100, 99, 98, 97, 96, 95, 94, 93, 92, 91, 90, 89, 88, 87, 86, 85, 84, 83, 82, 81, 80, 79, 78, 77, 76, 75, 74, 73, 72, 71, 70, 69, 68, 67, 66, 65, 64, 63, 62, 61, 60, 59, 58, 57, 56, 55, 54, 53, 52, 51, 50, 49, 48, 47, 46, 45, 44, 43, 42, 41, 40, 39, 38, 37, 36, 35, 34, 33, 32, 31, 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1, 및 0개의 뉴클레오티드를 포함한다. 또한 임의의 더 적은 수 또는 그 사이의 분율도 포함된다.
용어 "복수의", "적어도 2", "2 이상", "적어도 두번째" 등은 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149 또는 150, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 2000, 3000, 4000, 5000 또는 그 초과를 포함하나 이에 제한되지는 않는 것으로 이해된다. 또한 임의의 더 큰 수 또는 그 사이의 분율도 포함된다.
명세서 전체에 걸쳐 단어 "포함하는" 또는 변형 예컨대 "포함한다" 또는 "포함하는"은 언급된 요소, 정수 또는 단계, 또는 요소들, 정수들 또는 단계들의 군을 포함하지만, 임의의 다른 요소, 정수 또는 단계, 또는 요소들, 정수들 또는 단계들의 군을 배제하지는 않는다는 것을 의미하는 것으로 이해될 것이다. 측면이 언어 "포함하는"을 사용하여 본원에 기재된 경우에, "로 이루어진" 및/또는 "로 본질적으로 이루어진"과 관련하여 기재된 다른 유사한 측면이 또한 제공되는 것으로 이해된다.
구체적으로 언급되거나 문맥으로부터 입증되지 않는 한, 본원에 사용된 용어 "약"은 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 결정된 바와 같은 특정한 값 또는 조성에 대한 허용 오차 범위 내의 값 또는 조성을 지칭하며, 이는 부분적으로 값 또는 조성이 측정 또는 결정되는 방법, 즉 측정 시스템의 한계에 좌우될 것이다. 예를 들어, "약" 또는 "본질적으로 포함하는"은 관련 기술분야에서의 실시에 따라 1 또는 1 초과의 표준 편차 내에 있음을 의미할 수 있다. "약" 또는 "본질적으로 포함하는"은 최대 10%의 범위 (즉, ±10%)를 의미할 수 있다. 따라서, "약"은 언급된 값보다 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5%, 0.1%, 0.05%, 0.01%, 또는 0.001% 초과 또는 미만 내인 것으로 이해될 수 있다. 예를 들어, 약 5 mg은 4.5 mg 및 5.5 mg 사이의 임의의 양을 포함할 수 있다. 또한, 특히 생물학적 시스템 또는 프로세스와 관련하여, 상기 용어는 값의 최대 한 자릿수 또는 최대 5-배를 의미할 수 있다. 특정한 값 또는 조성이 본 개시내용에서 제공되는 경우에, 달리 언급되지 않는 한, "약" 또는 "본질적으로 포함하는"의 의미는 그러한 특정한 값 또는 조성에 대한 허용 오차 범위 내에 있는 것으로 가정되어야 한다.
본원에 기재된 바와 같이, 임의의 농도 범위, 백분율 범위, 비 범위 또는 정수 범위는, 달리 나타내지 않는 한, 언급된 범위 내의 임의의 정수 값, 및 적절한 경우에, 그의 분율 (예컨대 정수의 1/10 및 1/100)을 포함하는 것으로 이해되어야 한다.
본원에 사용된 단위, 접두어, 및 기호는 시스템 인터내셔날 드 유니테스(Systeme International de Unites) (SI) 허용 형태를 사용하여 나타내어진다. 수치 범위는 범위를 규정하는 수를 포함한다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 과학 용어는 본 개시내용이 관련된 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 예를 들어, 문헌 [Juo, "The Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology", 2nd ed., (2001), CRC Press; "The Dictionary of Cell & Molecular Biology", 5th ed., (2013), Academic Press; 및 "The Oxford Dictionary Of Biochemistry And Molecular Biology", Cammack et al. eds., 2nd ed, (2006), Oxford University Press]은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 본 개시내용에 사용된 많은 용어에 대한 일반 사전을 제공한다.
"투여하는"은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 다양한 방법 및 전달 시스템 중 임의의 것을 사용하여 작용제를 대상체에게 물리적으로 도입하는 것을 지칭한다. 본원에 개시된 제제에 대한 예시적인 투여 경로는 예를 들어 주사 또는 주입에 의한 정맥내, 근육내, 피하, 복막내, 척수 또는 다른 비경구 투여 경로를 포함한다. 본원에 사용된 어구 "비경구 투여"는 통상적으로 주사에 의한, 경장 및 국소 투여 이외의 다른 투여 방식을 의미하고, 비제한적으로, 정맥내, 근육내, 동맥내, 척수강내, 림프내, 병변내, 피막내, 안와내, 심장내, 피내, 복강내, 경기관, 피하, 각피하, 관절내, 피막하, 지주막하, 척수내, 경막외 및 흉골내 주사 및 주입, 뿐만 아니라 생체내 전기천공을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제제은 비경구 경로를 통해, 예를 들어, 경구로 투여된다. 다른 비-비경구 경로는 국소, 표피 또는 점막 투여 경로, 예를 들어 비강내, 질, 직장, 설하 또는 국소 투여를 포함한다. 투여는 또한, 예를 들어 1회, 복수회, 및/또는 1회 이상의 연장된 기간에 걸쳐 수행될 수 있다.
용어 "항체" (Ab)는, 비제한적으로, 항원에 특이적으로 결합하는 당단백질 이뮤노글로불린을 포함한다. 일반적으로, 항체는 디술피드 결합에 의해 상호연결된 적어도 2개의 중쇄 (H) 및 2개의 경쇄 (L), 또는 그의 항원-결합 분자를 포함할 수 있다. 각각의 H 쇄는 중쇄 가변 영역 (본원에서 VH로서 약칭됨) 및 중쇄 불변 영역을 포함한다. 중쇄 불변 영역은 3개의 불변 도메인, CH1, CH2 및 CH3을 포함한다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역 (본원에서 VL로서 약칭됨) 및 경쇄 불변 영역을 포함한다. 경쇄 불변 영역은 1개의 불변 도메인, CL을 포함한다. VH 및 VL 영역은 프레임워크 영역 (FR)으로 불리는 보다 보존된 영역 사이에 배치된 상보성 결정 영역 (CDR)으로 불리는 초가변 영역으로 추가로 세분될 수 있다. 각각의 VH 및 VL은 아미노-말단으로부터 카르복시-말단으로 하기 순서로 배열된 3개의 CDR 및 4개의 FR을 포함한다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, 및 FR4. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역은 항원과 상호작용하는 결합 도메인을 함유한다. Ab의 불변 영역은 이뮤노글로불린이 면역계의 다양한 세포 (예를 들어, 이펙터 세포) 및 전형적 보체계의 제1 성분 (C1q)을 포함한 숙주 조직 또는 인자에 결합하는 것을 매개할 수 있다.
항체는 예를 들어 모노클로날 항체, 재조합적으로 생산된 항체, 단일특이적 항체, 다중특이적 항체 (이중특이적 항체 포함), 인간 항체, 조작된 항체, 인간화 항체, 키메라 항체, 이뮤노글로불린, 합성 항체, 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄 분자를 포함하는 사량체 항체, 항체 경쇄 단량체, 항체 중쇄 단량체, 항체 경쇄 이량체, 항체 중쇄 이량체, 항체 경쇄- 항체 중쇄 쌍, 인트라바디, 항체 융합체 (때때로 본원에서 "항체 접합체"로서 지칭됨), 이종접합체 항체, 단일 도메인 항체, 1가 항체, 단일 쇄 항체 또는 단일-쇄 Fv (scFv), 낙타화 항체, 아피바디, Fab 단편, F(ab')2 단편, 디술피드-연결된 Fv (sdFv), 항-이디오타입 (항-Id) 항체 (예를 들어 항-항-Id 항체 포함), 미니바디, 도메인 항체, 합성 항체 (때때로 본원에서 "항체 모방체"로서 지칭됨), 상기 중 임의의 것의 및 항원-결합 단편을 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 항체는 폴리클로날 항체 집단을 지칭한다.
이뮤노글로불린은 IgA, 분비형 IgA, IgG, IgE 및 IgM을 포함하나 이에 제한되지는 않는 통상적으로 공지된 이소형 중 임의의 것으로부터 유래할 수 있다. IgG 하위부류가 또한 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있고, 인간 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. "이소형"은 중쇄 불변 영역 유전자에 의해 코딩된 Ab 부류 또는 하위부류 (예를 들어, IgM 또는 IgG1)를 지칭한다. 용어 "항체"는, 예로서, 자연 발생 및 비-자연 발생 Ab 둘 다; 모노클로날 및 폴리클로날 Ab; 키메라 및 인간화 Ab; 인간 또는 비인간 Ab; 완전 합성 Ab; 및 단일 쇄 Ab를 포함한다. 비인간 Ab는 인간에서의 그의 면역원성을 감소시키기 위해 재조합 방법에 의해 인간화될 수 있다. 분명하게 언급되지 않는 경우에, 문맥상 달리 나타내지 않는 한, 용어 "항체"는 또한 상기 언급된 이뮤노글로불린 중 임의의 것의 항원-결합 단편 또는 항원-결합 부분을 포함하고, 1가 및 2가 단편 또는 부분, 및 단일 쇄 Ab를 포함한다.
"항원 결합 분자", "항원 결합 부분" 또는 "항체 단편"은 분자가 유래된 항체의 항원 결합 부분 (예를 들어, CDR)을 포함하는 임의의 분자를 지칭한다. 항원 결합 분자는 항원 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함할 수 있다. 항체 단편의 예는 Fab, Fab', F(ab')2, 및 Fv 단편, dAb, 선형 항체, scFv 항체, 및 항원 결합 분자로 형성된 다중특이적 항체를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 펩티바디 (즉, 펩티드 결합 도메인을 포함하는 Fc 융합 분자)는 적합한 항원 결합 분자의 또 다른 예이다. 일부 실시양태에서, 항원 결합 분자는 종양 세포 상의 항원에 결합한다. 일부 실시양태에서, 항원 결합 분자는 과다증식성 질환에 수반되는 세포 상의 항원 또는 바이러스 또는 박테리아 항원에 결합한다. 특정 실시양태에서, 항원 결합 분자는 BCMA, CLL-1, 또는 FLT3에 결합한다. 추가 실시양태에서, 항원 결합 분자는 그의 상보성 결정 영역 (CDR) 중 1개 이상을 포함하는, 항원에 특이적으로 결합하는 항체 단편이다. 추가 실시양태에서, 항원 결합 분자는 단일 쇄 가변 단편 (scFv)이다. 일부 실시양태에서, 항원 결합 분자는 아비머를 포함하거나 또는 이로 이루어진다.
본원에 사용된 용어 "가변 영역" 또는 "가변 도메인"은 상호교환가능하게 사용되고 관련 기술분야에서 통상적이다. 가변 영역은 전형적으로, 항체마다 서열상 광범위하게 상이하고 특정한 항체의 그의 특정한 항원에 대한 결합 및 특이성에서 사용되는 항체의 부분, 일반적으로, 경쇄 또는 중쇄의 부분, 전형적으로 성숙 중쇄에서 약 아미노-말단 110 내지 120개의 아미노산 및 성숙 경쇄에서 약 90 내지 115개의 아미노산을 지칭한다. 서열의 가변성은 상보성 결정 영역 (CDR)으로 불리는 영역에서 집중되고, 한편 가변 도메인에서 보다 고도로 보존된 영역은 프레임워크 영역 (FR)으로 불린다. 어떠한 특정한 메카니즘 또는 이론에 얽매이는 것을 원하지는 않지만, 경쇄 및 중쇄의 CDR이 주로 항체의 항원과의 상호작용 및 특이성에 관여하는 것으로 여겨진다. 특정 실시양태에서, 가변 영역은 인간 가변 영역이다. 특정 실시양태에서, 가변 영역은 설치류 또는 뮤린 CDR 및 인간 프레임워크 영역 (FR)을 포함한다. 특정한 실시양태에서, 가변 영역은 영장류 (예를 들어, 비-인간 영장류) 가변 영역이다. 특정 실시양태에서, 가변 영역은 설치류 또는 뮤린 CDR 및 영장류 (예를 들어, 비-인간 영장류) 프레임워크 영역 (FR)을 포함한다.
용어 "VL" 및 "VL 도메인"은 항체 또는 그의 항원-결합 분자의 경쇄 가변 영역을 지칭하는데 상호교환가능하게 사용된다.
용어 "VH" 및 "VH 도메인"은 항체 또는 그의 항원-결합 분자의 중쇄 가변 영역을 지칭하는데 상호교환가능하게 사용된다.
CDR의 수많은 정의가 통상적으로 사용되고 있다: 카바트(Kabat) 넘버링, 코티아 넘버링, AbM 넘버링, 또는 접촉 넘버링. AbM 정의는 옥스포드 몰레큘라(Oxford Molecular)의 AbM 항체 모델링 소프트웨어에 의해 사용되는 2개 사이의 절충안이다. 접촉 정의는 이용가능한 복합체 결정 구조의 분석을 기초로 한다.
표 1. CDR 넘버링
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용어 "카바트 넘버링" 등의 용어는 관련 기술분야에서 인식되고, 항체 또는 그의 항원-결합 분자의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 내의 아미노산 잔기를 넘버링하는 시스템을 지칭한다. 특정 측면에서, 항체의 CDR은 카바트 넘버링 시스템에 따라 결정될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Kabat EA & Wu TT (1971) Ann NY Acad Sci 190: 382-391 및 Kabat EA et al., (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242] 참조). 카바트 넘버링 시스템을 사용하면, 항체 중쇄 분자 내의 CDR은 전형적으로 아미노산 위치 31 내지 35 (이는 임의로 35 다음에 1 또는 2개의 추가의 아미노산 (카바트 넘버링 스킴에서 35A 및 35B로 지칭됨)을 포함할 수 있음) (CDR1), 아미노산 위치 50 내지 65 (CDR2), 및 아미노산 위치 95 내지 102 (CDR3)에 존재한다. 카바트 넘버링 시스템을 사용하면, 항체 경쇄 분자 내의 CDR은 전형적으로 아미노산 위치 24 내지 34 (CDR1), 아미노산 위치 50 내지 56 (CDR2), 및 아미노산 위치 89 내지 97 (CDR3)에 존재한다. 구체적 실시양태에서, 본원에 기재된 항체의 CDR은 카바트 넘버링 스킴에 따라 결정되었다.
특정 측면에서, 항체의 CDR은 코티아 넘버링 스킴에 따라 결정될 수 있고, 이는 이뮤노글로불린 구조적 루프의 위치를 언급한다 (예를 들어, 문헌 [Chothia C & Lesk AM, (1987), J Mol Biol 196: 901-917; Al-Lazikani B et al., (1997) J Mol Biol 273: 927-948; Chothia C et al., (1992) J Mol Biol 227: 799-817; Tramontano A et al., (1990) J Mol Biol 215(1): 175-82]; 및 미국 특허 번호 7,709,226 참조). 전형적으로, 카바트 넘버링 규정을 사용할 때, 코티아 CDR-H1 루프는 중쇄 아미노산 26 내지 32, 33, 또는 34에 존재하고, 코티아 CDR-H2 루프는 중쇄 아미노산 52 내지 56에 존재하고, 및 코티아 CDR-H3 루프는 중쇄 아미노산 95 내지 102에 존재하는 한편, 코티아 CDR-L1 루프는 경쇄 아미노산 24 내지 34에 존재하고, 코티아 CDR-L2 루프는 경쇄 아미노산 50 내지 56에 존재하고, 코티아 CDR-L3 루프는 경쇄 아미노산 89 내지 97에 존재한다. 코티아 CDR-HI 루프의 말단은 카바트 넘버링 규정을 사용하여 넘버링할 경우 루프의 길이에 따라 H32 및 H34 사이에서 달라진다 (이는 카바트 넘버링 스킴이 H35A 및 H35B에 삽입을 두기 때문이고; 35A도 존재하지 않고 35B도 존재하지 않으면, 루프는 32에서 종결되고; 35A만이 존재하면, 루프는 33에서 종결되고; 35A와 35B 둘 다가 존재하면, 루프는 34에서 종결된다). 구체적 실시양태에서, 본원에 기재된 항체의 CDR은 코티아 넘버링 스킴에 따라 결정되었다.
본원에 사용된 용어 "불변 영역" 및 "불변 도메인"은 상호교환가능하고, 관련 기술분야에서의 통상적인 의미를 갖는다. 불변 영역은 항체 부분, 예를 들어, 항체의 항원에 대한 결합에 직접 수반되지는 않지만 다양한 이펙터 기능, 예컨대 Fc 수용체와의 상호작용을 나타낼 수 있는 경쇄 및/또는 중쇄의 카르복실 말단 부분이다. 이뮤노글로불린 분자의 불변 영역은 일반적으로 이뮤노글로불린 가변 도메인에 비해 보다 보존된 아미노산 서열을 갖는다.
본원에 사용된 용어 "중쇄"가 항체와 관련하여 사용될 때, 이는 불변 도메인의 아미노산 서열에 기초하여 임의의 별개의 유형, 예를 들어, 알파 (α), 델타 (δ), 엡실론 (ε), 감마 (γ) 및 뮤 (μ)로 지칭될 수 있고, 이는 IgG의 하위부류, 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4를 포함하여, 각각 항체의 IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM 부류를 생성한다.
본원에 사용된 용어 "경쇄"가 항체와 관련하여 사용될 때, 이는 불변 도메인의 아미노산 서열에 기초하여 임의의 별개의 유형, 예를 들어, 카파 (κ) 또는 람다 (λ)로 지칭될 수 있다. 경쇄 아미노산 서열은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 구체적 실시양태에서, 경쇄는 인간 경쇄이다.
"결합 친화도"는 일반적으로, 분자 (예를 들어, 항체)의 단일 결합 부위와 그의 결합 파트너 (예를 들어, 항원) 사이의 비-공유 상호작용의 총 합계의 강도를 지칭한다. 달리 나타내지 않는 한, 본원에 사용된 "결합 친화도"는 결합 쌍의 구성원들 (예를 들어, 항체 및 항원) 사이의 1:1 상호작용을 반영하는 고유의 결합 친화도를 지칭한다. 분자 X의 그의 파트너 Y에 대한 친화도는 일반적으로 해리 상수 (KD)로 나타내어질 수 있다. 친화도는 평형 해리 상수 (KD) 및 평형 회합 상수 (KA)를 포함하나 이에 제한되지는 않는, 관련 기술분야에 공지된 수많은 방식으로 측정되고/거나 표현될 수 있다. KD는 koff/kon의 비율로부터 계산되고, 반면에 KA는 kon/koff의 비율로부터 계산된다. kon은 예를 들어, 항체의 항원에 대한 회합률 상수를 지칭하고, koff는 예를 들어, 항체의 항원에 대한 해리율 상수를 지칭한다. kon 및 koff는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 기술, 예컨대 비아코어(BIACORE)® 또는 키넥사(KinExA)에 의해 결정될 수 있다.
본원에 사용된 "보존적 아미노산 치환"은 아미노산 잔기가 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 대체된 것이다. 측쇄를 갖는 아미노산 잔기의 패밀리는 관련 기술분야에 정의되어 있다. 이들 패밀리는 염기성 측쇄 (예를 들어, 리신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄 (예를 들어, 아스파르트산, 글루탐산), 비하전된 극성 측쇄 (예를 들어, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인, 트립토판), 비극성 측쇄 (예를 들어, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌), 베타-분지형 측쇄 (예를 들어, 트레오닌, 발린, 이소류신) 및 방향족 측쇄 (예를 들어, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)를 갖는 아미노산을 포함한다. 특정 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 분자의 CDR(들) 내 또는 프레임워크 영역(들) 내의 1개 이상의 아미노산 잔기는 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 대체될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "이종"은 자연 발생 서열 이외의 다른 임의의 공급원으로부터의 것을 의미한다. 예를 들어, 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 갖는 공동자극 단백질의 일부로서 포함된 이종 서열, 예를 들어, 상응하는 인간 공동자극 단백질은 자연 발생한 것이 아닌, 즉 야생형 인간 공동자극 단백질과 정렬되지 않는 아미노산이다. 예를 들어, 이종 뉴클레오티드 서열은 야생형 인간 공동자극 단백질-코딩 서열의 것 이외의 다른 뉴클레오티드 서열을 지칭한다.
본원에 사용된 "에피토프"는 관련 기술분야의 용어로, 항체가 특이적으로 결합할 수 있는 항원의 국부 영역을 지칭한다. 에피토프는 예를 들어 폴리펩티드의 인접 아미노산일 수 있거나 (선형 또는 인접 에피토프), 또는 에피토프는 예를 들어 폴리펩티드 또는 폴리펩티드들의 2개 이상의 비-인접 영역으로부터 함께 모일 수 있다 (입체형태적, 비-선형, 불연속적, 또는 비-인접 에피토프). 특정 실시양태에서, 항체가 결합하는 에피토프는 예를 들어 NMR 분광분석법, X선 회절 결정학 연구, ELISA 검정, 질량 분광측정법과 커플링된 수소/중수소 교환 (예를 들어, 액체 크로마토그래피 전기분무 질량 분광측정법), 어레이-기반 올리고-펩티드 스캐닝 검정, 및/또는 돌연변이유발 맵핑 (예를 들어, 부위-지정 돌연변이유발 맵핑)에 의해 결정될 수 있다. X선 결정학의 경우에, 결정화는 관련 기술분야에 공지된 방법 중 임의의 것을 사용하여 달성될 수 있다 (예를 들어, Giege R et al., (1994) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 50(Pt 4): 339-350; McPherson A (1990) Eur J Biochem 189: 1-23; Chayen NE (1997) Structure 5: 1269-1274; McPherson A (1976) J Biol Chem 251: 6300-6303). 항체:항원 결정은 널리 공지된 X선 회절 기술을 사용하여 연구될 수 있고, 컴퓨터 소프트웨어 예컨대 X-PLOR (예일 대학교, 1992, 몰레큘라 시뮬레이션스, 인크.(Molecular Simulations, Inc.)에 의해 배포됨; 예를 들어 문헌 [Meth Enzymol (1985) volumes 114 & 115, eds Wyckoff HW et al.,]; 미국 2004/0014194 참조), 및 BUSTER (Bricogne G (1993) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 49(Pt 1): 37-60; Bricogne G (1997) Meth Enzymol 276A: 361-423, ed Carter CW; Roversi P et al., (2000) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 56(Pt 10): 1316-1323)을 사용하여 정밀화될 수있다. 돌연변이유발 맵핑 연구는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 임의의 방법을 사용하여 달성될 수 있다. 예를 들어, 알라닌 스캐닝 돌연변이유발 기술을 포함한 돌연변이유발 기술의 설명에 대해 문헌 [Champe M et al., (1995) J Biol Chem 270: 1388-1394 및 Cunningham BC & Wells JA (1989) Science 244: 1081-1085]을 참조한다.
본원에 사용된 항원 결합 분자, 항체, 또는 그의 항원 결합 분자는, 항원 및 제1 결합 분자, 항체, 또는 그의 항원 결합 분자 사이의 상호작용이 참조 결합 분자, 참조 항체, 또는 그의 항원 결합 분자가 항원과 상호작용하는 능력을 차단, 제한, 억제, 또는 달리 감소시키는 경우에, 참조 항체 또는 그의 항원 결합 분자와 "교차-경쟁"한다. 교차 경쟁은 완전할 수 있고, 예를 들어, 결합 분자의 항원에 대한 결합이 참조 결합 분자가 항원에 결합하는 능력을 완전히 차단하거나, 또는 이는 부분적일 수 있고, 예를 들어, 결합 분자의 항원에 대한 결합이 참조 결합 분자가 항원에 결합하는 능력을 감소시킨다. 특정 실시양태에서, 참조 항원 결합 분자와 교차-경쟁하는 항원 결합 분자는 참조 항원 결합 분자와 동일한 또는 중첩되는 에피토프에 결합한다. 다른 실시양태에서, 참조 항원 결합 분자와 교차-경쟁하는 항원 결합 분자는 참조 항원 결합 분자와 상이한 에피토프에 결합한다. 수많은 유형의 경쟁적 결합 검정, 예를 들어: 고체 상 직접 또는 간접 방사선면역검정 (RIA); 고체 상 직접 또는 간접 효소 면역검정 (EIA); 샌드위치 경쟁 검정 (Stahli et al., 1983, Methods in Enzymology 9:242-253); 고체 상 직접 비오틴-아비딘 EIA (Kirkland et al., 1986, J. Immunol. 137:3614-3619); 고체 상 직접 표지된 검정, 고체 상 직접 표지된 샌드위치 검정 (Harlow and Lane, 1988, Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press); 1-125 표지를 사용하는 고체 상 직접 표지 RIA (Morel et al., 1988, Molec. Immunol. 25:7-15); 고체 상 직접 비오틴-아비딘 EIA (Cheung, et al., 1990, Virology 176:546-552); 및 직접 표지된 RIA (Moldenhauer et al., 1990, Scand. J. Immunol. 32:77-82)를 사용하여 하나의 항원 결합 분자가 또 다른 것과 경쟁하는지 여부를 결정할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "면역특이적으로 결합하다," "면역특이적으로 인식하다," "특이적으로 결합하다," 및 "특이적으로 인식하다"는 항체와 관련하여 유사한 용어이고, 항원 (예를 들어, 에피토프 또는 면역 복합체)에 결합하는 분자를 지칭하며, 이러한 결합은 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 이해되는 바와 같다. 예를 들어, 항원에 특이적으로 결합하는 분자는 일반적으로, 예를 들어, 면역검정, 비아코어®, 키넥사 3000 기기 (사피디네 인스트루먼츠(Sapidyne Instruments), 아이다호주 보이시), 또는 관련 기술분야에 공지된 다른 검정에 의해 결정된 바와 같은 보다 낮은 친화도로 다른 펩티드 또는 폴리펩티드에 결합할 수 있다. 구체적 실시양태에서, 항원에 특이적으로 결합하는 분자는, 분자가 또 다른 항원에 결합하는 경우의 KA 보다 적어도 2 log, 2.5 log, 3 log, 4 log 또는 그 초과인 KA로 항원에 결합한다.
또 다른 실시양태에서, 항원에 특이적으로 결합하는 분자는 약 1 x 10-7 M의 해리 상수 (Kd)로 결합한다. 일부 실시양태에서, Kd가 약 1 x 10-9 M 내지 약 5 x 10-9 M인 경우에, 항원 결합 분자는 항원에 "높은 친화도"로 특이적으로 결합한다. 일부 실시양태에서, Kd가 1 x 10-10 M 내지 약 5 x 10-10 M인 경우에, 항원 결합 분자는 항원에 "매우 높은 친화도"로 특이적으로 결합한다. 한 실시양태에서, 항원 결합 분자는 10-9 M의 Kd를 갖는다. 한 실시양태에서, 오프-레이트는 약 1 x 10-5 미만이다. 다른 실시양태에서, 항원 결합 분자는 인간 BCMA에 약 1 x 10-7 M 내지 약 1 x 10-13 M의 Kd로 결합한다. 또 다른 실시양태에서, 항원 결합 분자는 인간 BCMA에 약 l x 10-10 M 내지 약 5 x 10-10 M의 Kd로 결합한다.
구체적 실시양태에서, 표적 인간 항원, 예를 들어, 인간 BCMA 또는 인간 CLL-1에 또 다른 종의 표적 항원, 예를 들어, 비-인간 BCMA 또는 비-인간 CLL-1에 대한 것보다 더 높은 친화도로 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 분자가 본원에 제공된다. 특정 실시양태에서, 표적 인간 항원, 예를 들어, 인간 BCMA 또는 인간 CLL-1에, 예를 들어, 방사선면역검정, 표면 플라즈몬 공명, 또는 동역학적 배제 검정에 의해 측정 시, 또 다른 종의 표적 항원에 대한 것보다 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70% 또는 그 초과의 친화도로 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 분자가 본원에 제공된다. 구체적 실시양태에서, 표적 인간 항원에 결합하는 본원에 기재된 항체 또는 그의 항원 결합 분자는, 예를 들어, 방사선면역검정, 표면 플라즈몬 공명, 또는 동역학적 배제 검정에 의해 측정 시, 항체 또는 그의 항원 결합 분자의 인간 항원에 대한 결합의 10%, 15%, 또는 20% 미만으로 또 다른 종의 표적 항원에 결합할 것이다.
"항원"은 면역 반응을 촉발하거나 또는 항체 또는 항원 결합 분자가 결합할 수 있는 임의의 분자를 지칭한다. 면역 반응은 항체 생산, 또는 특정 면역학적-적격 세포의 활성화, 또는 둘 다를 수반할 수 있다. 관련 분야의 통상의 기술자는 실질적으로 모든 단백질 또는 펩티드를 포함하는 임의의 거대분자가 항원으로서의 역할을 할 수 있다는 것을 용이하게 이해할 것이다. 항원은 내인성으로 발현될 수 있고, 즉 게놈 DNA에 의해 발현될 수 있거나, 또는 재조합적으로 발현될 수 있다. 항원은 특정 조직, 예컨대 암 세포에 특이적일 수 있거나, 또는 광범위하게 발현될 수 있다. 또한, 보다 큰 분자의 단편이 항원으로서 작용할 수 있다. 한 실시양태에서, 항원은 종양 항원이다. 하나의 특정한 실시양태에서, 항원은 BCMA, FLT3, 또는 CLL-1 전체 또는 단편이다.
용어 "중화"는 리간드에 결합하여 그러한 리간드의 생물학적 효과를 막거나 감소시키는 항원 결합 분자, scFv, 항체, 또는 그의 단편을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 항원 결합 분자, scFv, 항체, 또는 그의 단편은 리간드 상의 결합 부위를 직접 차단하거나, 또는 달리 간접적 수단 (리간드의 구조적 또는 에너지적 변경)을 통해 리간드의 결합 능력을 변경한다. 일부 실시양태에서, 항원 결합 분자, scFv, 항체, 또는 그의 단편은 그것이 결합하는 단백질이 생물학적 기능을 수행하는 것을 막는다.
본원에 사용된 용어 "BCMA"는 B 세포 성숙 항원을 지칭하고, 이는 천연 BCMA, BCMA의 이소형, 또는 BCMA의 종간 BCMA 상동체를 포함할 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. BCMA (또한 TNFRSF17, CD269, 및 TNFRSF13A로도 알려짐)는 종양 괴사 인자 (TNF)-수용체 슈퍼패밀리의 구성원이다. BCMA는 다발성 골수종 세포의 표면 상에서 발현되는 한편, 건강한 조직에서는 형질 세포 및 성숙 B 세포의 하위세트로 고도로 제한된다. 인간 BCMA (hBCMA)의 아미노산 서열은 NCBI 수탁번호 Q02223.2 (GI:313104029)로 제공된다. 본원에 사용된 바와 같은 BCMA는 인간 BCMA 및 비-인간 BCMA 상동체, 뿐만 아니라 그의 변이체, 단편, 또는 BCMA의 N- 및 O-연결된 글리코실화된 형태를 포함하나 이에 제한되지는 않는 번역-후 변형된 형태를 포함한다. BCMA 단백질은 BCMA의 세포외 도메인의 모두 또는 일부 (예를 들어, hBCMA의 아미노산 1-54의 모두 또는 일부)를 포함하는 단편을 추가로 포함할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "CLL-1"은 C-유형 렉틴-유사 분자-1을 지칭하고, 이는 천연 CLL-1, CLL-1의 이소형, 또는 CLL-1의 종간 CLL-1 상동체를 포함할 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. CLL-1 (또한 C-유형 렉틴 도메인 패밀리 12 구성원 A, CLEC12A, 수지상 세포-연관 렉틴 2, DCAL-2, 골수성 억제성 C-유형 렉틴-유사 수용체, 및 MICL로도 알려짐)은 신호전달 캐스케이드를 조정하고 표적 MAP 키나제의 티로신 인산화를 매개하는 세포 표면 수용체이다. CLL-1 발현은, 예를 들어, 급성 골수성 백혈병 (AML) 세포에서 관찰된다. 인간 CLL-1 (hCLL-1)의 아미노산 서열은 유니프롯KB(UniProtKB)/스위스-프롯(Swiss-Prot) 수탁 번호 Q5QGZ9.3 (GI:308153619)로 제공된다. 본원에 사용된 바와 같은 CLL-1은 인간 CLL-1 및 비-인간 CLL-1 상동체, 뿐만 아니라 그의 변이체, 단편, 또는 CLL-1의 N- 및 O-연결된 글리코실화된 형태를 포함하나 이에 제한되지는 않는 번역-후 변형된 형태를 포함한다.
본원에 사용된 용어 "FLT3"은 Fms-유사 티로신 키나제 3 (FLT-3)을 지칭하고, 이는 천연 FLT3, FLT3의 이소형, 또는 FLT3의 종간 FLT3 상동체를 포함할 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. FLT3 (또한 분화 클러스터 항원 135 (CD135), 수용체-유형 티로신-단백질 키나제 FLT3, FMS-관련 티로신 키나제 3, 줄기 세포 티로신 키나제 1, FL 시토카인 수용체, 성장 인자 수용체 티로신 키나제 유형 III, STK1, 또는 태아 간 키나제-2 (Flk2)로도 알려짐)은 수용체 수용체 티로신 키나제 부류 III에 속하는 시토카인 수용체이다. CD135는 시토카인 Flt3 리간드 (FLT3L)에 대한 수용체이다. FLT3은 다양한 조혈 전구 세포의 표면 및 급성 골수성 백혈병 (AML) 세포의 표면 상에서 발현된다. 인간 FLT3 (hFLT3)의 아미노산 서열은 유니프롯KB/스위스-프롯 수탁 번호 P36888 (GI:156630887)로 제공된다. 본원에 사용된 바와 같은 FLT3은 인간 FLT3 및 비-인간 FLT3 상동체, 뿐만 아니라 그의 변이체, 단편, 또는 FLT3의 N- 및 O-연결된 글리코실화된 형태를 포함하나 이에 제한되지는 않는 번역-후 변형된 형태를 포함한다.
용어 "자가"는 이후에 재-도입될 동일한 개체로부터 유래된 임의의 물질을 지칭한다. 예를 들어, 본원에 기재된 조작된 자가 세포 요법 (eACT™) 방법은 환자로부터 림프구를 수집한 후, 이를 예를 들어 CAR 구축물을 발현하도록 조작하고, 이어서 이를 다시 동일한 환자에게 투여하는 것을 수반한다.
용어 "동종"은 한 개체로부터 유래되고 이어서 동일한 종의 또 다른 개체에 도입되는 임의의 물질, 예를 들어, 동종 T 세포 이식을 지칭한다.
용어 "형질도입" 및 "형질도입된"은 외래 DNA를 바이러스 벡터를 통해 세포 내로 도입하는 방법을 지칭한다 (문헌 [Jones et al., "Genetics: principles and analysis," Boston: Jones & Bartlett Publ. (1998)] 참조). 일부 실시양태에서, 벡터는 레트로바이러스 벡터, DNA 벡터, RNA 벡터, 아데노바이러스 벡터, 바큘로바이러스 벡터, 엡스타인 바르 바이러스 벡터, 파포바바이러스 벡터, 백시니아 바이러스 벡터, 단순 포진 바이러스 벡터, 아데노바이러스 연관 벡터, 렌티바이러스 벡터, 또는 그의 임의의 조합이다.
본원에 사용된 용어 "말단절단된"은 전체 미만인 임의의 것을 지칭한다. 예를 들어, 말단절단된 힌지 도메인 (대안적으로 본원에서 "THD"로 지칭됨) 아미노산 서열은 전장 또는 완전한 힌지 도메인 ("CHD")보다 짧은 임의의 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, THD는 서열식별번호: 1의 아미노산 118-152, 119-152, 120-152, 121-152, 122-152, 123-152, 124-152, 125-152, 126-152, 127-152, 128-152, 129-152, 또는 130-152로 본질적으로 이루어지거나 또는 그로 이루어진다. 한 실시양태에서, THD는 서열식별번호: 1의 아미노산 123 내지 152로 이루어진 서열식별번호: 3의 아미노산 서열로 본질적으로 이루어지거나 또는 그로 이루어진다.
"암"은 신체 내에서의 비정상 세포의 비제어된 성장을 특징으로 하는 다양한 질환의 광범위한 군을 지칭한다. 조절되지 않는 세포 분열 및 성장은 이웃 조직을 침습하는 악성 종양의 형성을 야기하고, 또한 림프계 또는 혈류를 통해 신체의 원위 부분으로 전이될 수 있다. "암" 또는 "암 조직"은 종양을 포함할 수 있다. 본 발명의 방법에 의해 치료될 수 있는 암의 예는 림프종, 백혈병, 골수종, 및 다른 백혈구 악성종양을 포함한 면역계의 암을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 방법은, 예를 들어, 골암, 췌장암, 피부암, 두경부암, 피부 또는 안내 악성 흑색종, 자궁암, 난소암, 직장암, 항문부암, 위암, 고환암, 자궁암, 난관 암종, 자궁내막 암종, 자궁경부 암종, 질 암종, 외음부 암종, 다발성 골수종, 호지킨병, 비-호지킨 림프종 (NHL), 원발성 종격 대 B 세포 림프종 (PMBC), 미만성 대 B 세포 림프종 (DLBCL), 여포성 림프종 (FL), 형질전환된 여포성 림프종, 비장 변연부 림프종 (SMZL), 식도암, 소장암, 내분비계암, 갑상선암, 부갑상선암, 부신암, 연부 조직 육종, 요도암, 음경암, 만성 또는 급성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 급성 림프모구성 백혈병 (ALL) (비 T 세포 ALL 포함), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 소아기 고형 종양, 림프구성 림프종, 방광암, 신장암 또는 요관암, 신우 암종, 중추 신경계 (CNS)의 신생물, 원발성 CNS 림프종, 종양 혈관신생, 척수축 종양, 뇌간 신경교종, 뇌하수체 선종, 카포시 육종, 표피양암, 편평 세포암, T-세포 림프종, 석면에 의해 유발된 것을 포함한 환경적으로 유발된 암, 다른 B 세포 악성종양, 및 상기 암의 조합으로부터 유래된 종양의 종양 크기를 감소시키는데 사용될 수 있다. 하나의 특정한 실시양태에서, 암은 다발성 골수종이다. 특정한 암은 화학요법 또는 방사선 요법에 대해 반응성일 수 있거나, 또는 암은 불응성일 수 있다. 불응성 암은 수술적 개입으로 수정될 수 없는 암을 지칭하고, 이러한 암은 처음부터 화학요법 또는 방사선 요법에 대해 비반응성이거나 또는 암이 시간의 경과에 따라 비반응성이게 된다.
본원에 사용된 "항종양 효과"는 종양 부피의 감소, 종양 세포 수의 감소, 종양 세포 증식의 감소, 전이 수의 감소, 전체 또는 무진행 생존의 증가, 기대 수명의 증가, 또는 종양과 연관된 다양한 생리학적 증상의 호전으로서 나타날 수 있는 생물학적 효과를 지칭한다. 항종양 효과는 또한 종양 발생의 방지, 예를 들어, 백신을 지칭할 수 있다.
본원에 사용된 "시토카인"은 특정 항원과의 접촉에 반응하여 한 세포가 방출하는 비-항체 단백질을 지칭하고, 여기서 시토카인은 제2 세포와 상호작용하여 제2 세포에서의 반응을 매개한다. 시토카인은 세포에 의해 내인성으로 발현될 수 있거나, 또는 대상체에게 투여될 수 있다. 시토카인은 대식세포, B 세포, T 세포, 및 비만 세포를 포함하는 면역 세포에 의해 방출되어 면역 반응을 전파할 수 있다. 시토카인은 수용자 세포에서 다양한 반응울 유도할 수 있다. 시토카인은 항상성 시토카인, 케모카인, 염증유발성 시토카인, 이펙터, 및 급성기 단백질을 포함할 수 있다. 예를 들어, 인터류킨 (IL) 7 및 IL-15를 포함하는 항상성 시토카인은 면역 세포 생존 및 증식을 촉진하고, 염증유발성 시토카인은 염증성 반응을 촉진할 수 있다. 항상성 시토카인의 예는 IL-2, IL-4, IL-5, IL-7, IL-10, IL-12p40, IL-12p70, IL-15, 및 인터페론 (IFN) 감마를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 염증유발성 시토카인의 예는 IL-1a, IL-1b, IL-6, IL-13, IL-17a, 종양 괴사 인자 (TNF)-알파, TNF-베타, 섬유모세포 성장 인자 (FGF) 2, 과립구 대식세포 콜로니-자극 인자 (GM-CSF), 가용성 세포간 부착 분자 1 (sICAM-1), 가용성 혈관 부착 분자 1 (sVCAM-1), 혈관 내피 성장 인자 (VEGF), VEGF-C, VEGF-D, 및 태반 성장 인자 (PLGF)를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 이펙터의 예는 그랜자임 A, 그랜자임 B, 가용성 Fas 리간드 (sFasL), 및 퍼포린을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 급성기-단백질의 예는 C-반응성 단백질 (CRP) 및 혈청 아밀로이드 A (SAA)를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
"케모카인"은 세포 화학주성 또는 지향성 이동을 매개하는 시토카인 유형이다. 케모카인의 예는 IL-8, IL-16, 에오탁신, 에오탁신-3, 대식세포-유래 케모카인 (MDC 또는 CCL22), 단핵구 화학주성 단백질 1 (MCP-1 또는 CCL2), MCP-4, 대식세포 염증 단백질 1α (MIP-1α, MIP-1a), MIP-1β (MIP-1b), 감마-유도된 단백질 10 (IP-10), 및 흉선 및 활성화 조절 케모카인 (TARC 또는 CCL17)을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
치료제, 예를 들어, 조작된 CAR T 세포의 "치료 유효량", "유효 용량", "유효량", 또는 "치료 유효 투여량"은 단독으로 또는 또 다른 치료제와 조합되어 사용될 때 대상체를 질환 발병으로부터 보호하거나, 또는 질환 증상의 중증도에서의 감소, 질환 무증상 기간의 빈도 또는 지속기간의 증가, 또는 질환 고통으로 인한 손상 또는 장애의 방지에 의해 입증되는 질환 퇴행을 촉진하는 임의의 양이다. 질환 퇴행을 촉진하는 치료제의 능력은 숙련된 진료의에게 공지되어 있는 다양한 방법을 사용하여, 예컨대 임상 시험 동안 인간 대상체에서, 인간에서의 효능을 예측하는 동물 모델 시스템에서, 또는 시험관내 검정에서 작용제의 활성을 검정함으로써 평가될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "림프구"는 자연 킬러 (NK) 세포, T 세포, 또는 B 세포를 포함한다. NK 세포는 선천성 면역계의 주요 성분을 대표하는 세포독성 (세포 독성) 림프구 유형이다. NK 세포는 종양 및 바이러스에 감염된 세포를 거부한다. 이는 아폽토시스 또는 프로그램화된 세포 사멸의 과정을 통해 작용한다. 이들은 세포를 사멸시키기 위해 활성화를 필요로 하지 않기 때문에 "자연 킬러"로 명명된다. T-세포는 세포-매개-면역 (어떠한 항체도 수반되지 않음)에서 주요 역할을 한다. 그의 T-세포 수용체 (TCR)가 이들을 다른 림프구 유형으로부터 구별한다. 면역계의 특수 기관인 흉선은 T 세포의 성숙을 주로 담당한다. 6가지 유형의 T-세포, 즉 헬퍼 T-세포 (예를 들어, CD4+ 세포), 세포독성 T-세포 (또한 TC, 세포독성 T 림프구, CTL, T-킬러 세포, 세포용해 T 세포, CD8+ T-세포 또는 킬러 T 세포로도 알려짐), 기억 T-세포 ((i) 줄기 기억 TSCM 세포, 예컨대 나이브 세포는 CD45RO-, CCR7+, CD45RA+, CD62L+ (L-셀렉틴), CD27+, CD28+ 및 IL-7Rα+이지만, 또한 다량의 CD95, IL-2Rβ, CXCR3, 및 LFA-1을 발현하고, 기억 세포 특유의 수많은 기능 속성을 나타냄; (ii) 중심 기억 TCM 세포는 L-셀렉틴 및 CCR7을 발현하고, IL-2를 분비하지만 IFNγ 또는 IL-4는 분비하지 않음, (iii) 그러나, 이펙터 기억 TEM 세포는 L-셀렉틴 또는 CCR7을 발현하지 않지만, 이펙터 시토카인 예컨대 IFNγ 및 IL-4를 생산함), 조절 T-세포 (Treg, 억제자 T 세포, 또는 CD4+CD25+ 조절 T 세포), 자연 킬러 T-세포 (NKT) 및 감마 델타 T-세포가 존재한다. 다른 한편으로는, B-세포는 체액성 면역 (항체가 수반됨)에서 주요한 역할을 한다. 이는 항체 및 항원을 생성하고, 항원-제시 세포 (APC)의 역할을 수행하고, 항원 상호작용에 의한 활성화 후에 기억 B-세포로 변한다. 포유동물에서, 미성숙 B-세포는 그의 명칭이 유래되는 골수에서 형성된다.
용어 "유전자 조작된" 또는 "조작된"은 코딩 또는 비-코딩 영역 또는 그의 부분을 결실시키거나 또는 코딩 영역 또는 그의 부분을 삽입하는 것을 포함하나 이에 제한되지는 않는, 세포의 게놈을 변형시키는 방법을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 변형되는 세포는 림프구, 예를 들어, T 세포이며, 이는 환자 또는 공여자로부터 수득될 수 있다. 외인성 구축물, 예컨대, 예를 들어, 키메라 항원 수용체 (CAR) 또는 T 세포 수용체 (TCR)를 발현하도록 세포가 변형될 수 있고, 이는 세포의 게놈 내로 혼입된다.
"면역 반응"은 침입 병원체, 병원체로 감염된 세포 또는 조직, 암성 또는 다른 비정상 세포, 또는 자가면역 또는 병리학적 염증의 경우에 정상 인간 세포 또는 조직을 선택적으로 표적화하고/거나, 이에 결합하고/거나, 이에 대해 손상을 입히고/거나, 이를 파괴시키고/거나, 이를 척추동물의 신체로부터 제거하는, 면역계의 세포 (예를 들어, T 림프구, B 림프구, 자연 킬러 (NK) 세포, 대식세포, 호산구, 비만 세포, 수지상 세포 및 호중구), 및 이들 세포 중 임의의 것 또는 간에 의해 생산된 가용성 거대분자 (Ab, 시토카인, 및 보체 포함)의 작용을 지칭한다.
용어 "면역요법"은 면역 반응을 유도하거나, 증진시키거나, 억제하거나 또는 달리 변형시키는 것을 포함하는 방법에 의한, 질환을 앓고 있거나 또는 질환에 걸릴 위험이 있거나 또는 질환의 재발로 인해 고통받을 위험이 있는 대상체의 치료를 지칭한다. 면역요법의 예는 T 세포 요법을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. T 세포 요법은 입양 T 세포 요법, 종양-침윤 림프구 (TIL) 면역요법, 자가 세포 요법, 조작된 자가 세포 요법 (eACT™), 및 동종 T 세포 이식을 포함할 수 있다. 그러나, 관련 분야의 통상의 기술자는 본원에 개시된 조건화 방법이 임의의 이식된 T 세포 요법의 유효성을 증진시킬 것임을 인식할 것이다. T 세포 요법의 예는 미국 특허 공개 번호 2014/0154228 및 2002/0006409, 미국 특허 번호 5,728,388, 및 국제 공개 번호 WO 2008/081035에 기재되어 있다.
면역요법의 T 세포는 관련 기술분야에 공지된 임의의 공급원으로부터 유래될 수 있다. 예를 들어, T 세포는 조혈 줄기 세포 집단으로부터 시험관내 분화될 수 있거나, 또는 T 세포는 대상체로부터 수득될 수 있다. T 세포는 예를 들어, 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC), 골수, 림프절 조직, 제대혈, 흉선 조직, 감염 부위로부터의 조직, 복수, 흉막 삼출, 비장 조직, 및 종양으로부터 수득될 수 있다. 또한, T 세포는 관련 기술분야에서 입수가능한 1종 이상의 T 세포주로부터 유래될 수 있다. T 세포는 또한 통상의 기술자에게 공지된 다수의 기술, 예컨대 피콜(FICOLL)™ 분리 및/또는 분리반출술을 사용하여 대상체로부터 수집된 단위 혈액으로부터 수득될 수 있다. T 세포 요법을 위한 T 세포를 단리하는 추가의 방법은 미국 특허 공개 번호 2013/0287748에 개시되어 있고, 이는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
"eACT™"로 약칭될 수 있고 또한 입양 세포 전달로도 공지되어 있는 용어 "조작된 자가 세포 요법"은 환자 자신의 T 세포를 수집하고, 후속하여 1종 이상의 특정 종양 세포 또는 악성종양의 세포 표면에서 발현된 1종 이상의 항원을 인식하고 표적화하도록 이를 유전자 변경하는 방법이다. T 세포는 예를 들어, 키메라 항원 수용체 (CAR) 또는 T 세포 수용체 (TCR)를 발현하도록 조작될 수 있다. CAR 양성 (+) T 세포는 적어도 1개의 공동자극 도메인 및 적어도 1개의 활성화 도메인을 포함하는 세포내 신호전달 부분에 연결된, 특정한 종양 항원에 대한 특이성을 갖는 세포외 단일 쇄 가변 단편 (scFv)을 발현하도록 조작된다. 공동자극 도메인은 예를 들어 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 갖는 자연-발생 공동자극 도메인, 또는 그의 변이체, 예를 들어, 말단절단된 힌지 도메인 ("THD")을 갖는 변이체로부터 유래될 수 있고, 활성화 도메인은, 예를 들어, CD3-제타로부터 유래될 수 있다. 특정 실시양태에서, CAR은 2, 3, 4개, 또는 그 초과의 공동자극 도메인을 갖도록 설계된다. CAR scFv는 모든 정상 B 세포, 및 NHL, CLL, 및 비-T 세포 ALL을 포함하나 이에 제한되지는 않는 B 세포 악성종양을 포함한 B 세포 계통 내 세포에 의해 발현되는 막횡단 단백질인, 예를 들어, CD19를 표적화하도록 설계될 수 있다. 일부 실시양태에서, CAR은 공동자극 도메인이 개별 폴리펩티드 쇄로서 발현되도록 조작된다. 예시적인 CAR T 세포 요법 및 구축물은 미국 특허 공개 번호 2013/0287748, 2014/0227237, 2014/0099309, 및 2014/0050708에 기재되어 있고, 이들 참고문헌은 그 전문이 참조로 포함된다.
본원에 사용된 "환자"는 암 (예를 들어, 림프종 또는 백혈병)을 앓고 있는 임의의 인간을 포함한다. 용어 "대상체" 및 "환자"는 본원에서 상호교환가능하게 사용된다.
본원에 사용된 용어 "시험관내 세포"는 생체외 배양된 임의의 세포를 지칭한다. 특히, 시험관내 세포는 T 세포를 포함할 수 있다.
용어 "펩티드", "폴리펩티드" 및 "단백질"은 상호교환가능하게 사용되고, 펩티드 결합에 의해 공유 연결된 아미노산 잔기로 구성된 화합물을 지칭한다. 단백질 또는 펩티드는 적어도 2개의 아미노산을 함유하고, 단백질 또는 펩티드 서열을 구성할 수 있는 아미노산의 최대 수에 대한 어떠한 제한도 존재하지 않는다. 폴리펩티드는 펩티드 결합에 의해 서로 연결된 2개 이상의 아미노산을 포함하는 임의의 펩티드 또는 단백질을 포함한다. 본원에 사용된 용어는 통상적으로 관련 기술분야에서 예를 들어 펩티드, 올리고펩티드 및 올리고머로도 지칭되는 단쇄, 및 많은 유형이 존재하는, 일반적으로 관련 기술분야에서 단백질로 지칭되는 보다 장쇄 둘 다를 지칭한다. "폴리펩티드"는 특히, 예를 들어 생물학적 활성 단편, 실질적으로 상동인 폴리펩티드, 올리고펩티드, 동종이량체, 이종이량체, 폴리펩티드의 변이체, 변형된 폴리펩티드, 유도체, 유사체, 융합 단백질을 포함한다. 폴리펩티드는 천연 펩티드, 재조합 펩티드, 합성 펩티드, 또는 그의 조합을 포함한다.
본원에 사용된 "자극"은 자극 분자와 그의 동족 리간드의 결합에 의해 유도되는 1차 반응을 지칭하고, 여기서 결합은 신호 전달 사건을 매개한다. "자극 분자"는 항원 제시 세포 상에 존재하는 동족 자극 리간드와 특이적으로 결합하는 T 세포 상의 분자, 예를 들어, T 세포 수용체 (TCR)/CD3 복합체이다. "자극 리간드"는 항원 제시 세포 (예를 들어, APC, 수지상 세포, B-세포 등) 상에 존재할 때 T 세포 상의 자극 분자와 특이적으로 결합함으로써, 활성화, 면역 반응의 개시, 증식 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는 T 세포에 의한 1차 반응을 매개할 수 있는 리간드이다. 자극 리간드는 항-CD3 항체 (예컨대 OKT3), 펩티드가 로딩된 MHC 부류 I 분자, 초효능제 항-CD2 항체, 및 초효능제 항-CD28 항체를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 "공동자극 신호"는 1차 신호, 예컨대 TCR/CD3 라이게이션과 조합되어, T 세포 반응, 예컨대 비제한적으로, 증식 및/또는 핵심 분자의 상향조절 또는 하향 조절로 이어지는 신호를 지칭한다.
본원에 사용된 "공동자극 리간드"는 T 세포 상의 동족 공동자극 분자에 특이적으로 결합하는 항원 제시 세포 상의 분자를 포함한다. 공동자극 리간드의 결합은 증식, 활성화, 분화 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는 T 세포 반응을 매개하는 신호를 제공한다. 공동자극 리간드는 자극 분자에 의해, 예를 들어, T 세포 수용체 (TCR)/CD3 복합체와 펩티드가 로딩된 주요 조직적합성 복합체 (MHC) 분자의 결합에 의해 제공되는 1차 신호에 더하여 신호를 유도한다. 공동자극 리간드는 3/TR6, 4-1BB 리간드, 톨 리간드 수용체에 결합하는 효능제 또는 항체, B7-1 (CD80), B7-2 (CD86), CD30 리간드, CD40, CD7, CD70, CD83, 포진 바이러스 진입 매개자 (HVEM), 인간 백혈구 항원 G (HLA-G), ILT4, 이뮤노글로불린-유사 전사체 (ILT) 3, 유도성 공동자극 리간드 (ICOS-L), 세포간 부착 분자 (ICAM), B7-H3과 특이적으로 결합하는 리간드, 림프독소 베타 수용체, MHC 부류 I 쇄-관련 단백질 A (MICA), MHC 부류 I 쇄-관련 단백질 B (MICB), OX40 리간드, PD-L2, 또는 프로그램화된 사멸 (PD) L1을 포함할 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 공동-자극 리간드는, 제한 없이, T 세포 상에 존재하는 공동-자극 분자, 예컨대 비제한적으로 4-1BB, B7-H3, CD2, CD27, CD28, CD30, CD40, CD7, ICOS, CD83과 특이적으로 결합하는 리간드, 림프구 기능-연관 항원-1 (LFA-1), 자연 킬러 세포 수용체 C (NKG2C), OX40, PD-1, 또는 종양 괴사 인자 슈퍼패밀리 구성원 14 (TNFSF14 또는 LIGHT)와 특이적으로 결합하는 항체를 포함한다.
"공동자극 분자"는 공동자극 리간드와 특이적으로 결합함으로써 T 세포에 의한 공동자극 반응, 예컨대 비제한적으로 증식을 매개하는 T 세포 상의 동족 결합 파트너이다. "공동자극 분자"는 공동자극 리간드와 특이적으로 결합함으로써 T 세포에 의한 공동자극 반응, 예컨대 비제한적으로 증식을 매개하는 T 세포 상의 동족 결합 파트너이다. 공동자극 분자는 4-1BB/CD137, B7-H3, BAFFR, BLAME (SLAMF8), BTLA, CD33, CD45, CD100 (SEMA4D), CD103, CD134, CD137, CD154, CD16, CD160 (BY55), CD18, CD19, CD19a, CD2, CD22, CD247, CD27, CD276 (B7-H3), CD28, CD29, CD3 (알파; 베타; 델타; 엡실론; 감마; 제타), CD30, CD37, CD4, CD4, CD40, CD49a, CD49D, CD49f, CD5, CD64, CD69, CD7, CD80, CD83 리간드, CD84, CD86, CD8알파, CD8베타, CD9, CD96 (Tactile), CD11a, CD11b, CD11c, CD11d, CDS, CEACAM1, CRTAM, DAP-10, DNAM1 (CD226), Fc 감마 수용체, GADS, GITR, HVEM (LIGHTR), IA4, ICAM-1, ICAM-1, ICOS, Ig 알파 (CD79a), IL2R 베타, IL2R 감마, IL7R 알파, 인테그린, ITGA4, ITGA4, ITGA6, ITGAD, ITGAE, ITGAL, ITGAM, ITGAX, ITGB2, ITGB7, ITGB1, KIRDS2, LAT, LFA-1, LFA-1, LIGHT, LIGHT (종양 괴사 인자 슈퍼패밀리 구성원 14; TNFSF14), LTBR, Ly9 (CD229), 림프구 기능-연관 항원-1 (LFA-1 (CD11a/CD18), MHC 부류 I 분자, NKG2C, NKG2D, NKp30, NKp44, NKp46, NKp80 (KLRF1), OX40, PAG/Cbp, PD-1, PSGL1, SELPLG (CD162), 신호전달 림프구성 활성화 분자, SLAM (SLAMF1; CD150; IPO-3), SLAMF4 (CD244; 2B4), SLAMF6 (NTB-A; Ly108), SLAMF7, SLP-76, TNF, TNFr, TNFR2, 톨 리간드 수용체, TRANCE/RANKL, VLA1, 또는 VLA-6, 또는 그의 단편, 말단절단물, 또는 조합을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
용어 "저하시키는" 및 "감소시키는"은 본원에서 상호교환가능하게 사용되고, 원래의 것보다 낮은 임의의 변화를 나타낸다. "저하시키는" 및 "감소시키는"은 상대적인 용어이며, 이전-측정과 이후-측정 사이의 비교를 필요로 한다. "저하시키는" 및 "감소시키는"은 완전한 고갈을 포함한다.
대상체의 "치료" 또는 "치료하는"은 증상, 합병증 또는 상태의 발병, 진행, 발달, 중증도 또는 재발, 또는 질환과 연관된 생화학적 지표를 역전시키거나, 경감시키거나, 호전시키거나, 억제하거나, 느리게 하거나 또는 방지할 목적으로 대상체에게 수행되는 임의의 유형의 개입 또는 프로세스 또는 대상체에의 활성제의 투여를 지칭한다. 한 실시양태에서, "치료" 또는 "치료하는"은 부분 완화를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, "치료" 또는 "치료하는"은 완전 완화를 포함한다.
퍼센트 동일성을 계산하기 위해, 비교되는 서열은 전형적으로 서열 사이의 최대 매치를 제공하는 방식으로 정렬된다. 퍼센트 동일성을 결정하기 위해 사용될 수 있는 컴퓨터 프로그램의 한 예는 GCG 프로그램 패키지이고, 이는 GAP (Devereux et al., 1984, Nucl. Acid Res. 12:387; 제네틱스 컴퓨터 그룹(Genetics Computer Group), 위스콘신주 매디슨 소재의 위스콘신 대학교)를 포함한다. 컴퓨터 알고리즘 GAP는 퍼센트 서열 동일성을 결정할 2개의 폴리펩티드 또는 폴리뉴클레오티드를 정렬시키는데 사용된다. 서열은 그의 각각의 아미노산 또는 뉴클레오티드의 최적 매칭 (알고리즘에 의한 결정 시 "매칭된 폭")을 위해 정렬된다. 특정 실시양태에서, 표준 비교 행렬 (PAM 250 비교 행렬에 대해 문헌 [Dayhoff et al., 1978, Atlas of Protein Sequence and Structure 5:345-352]; BLOSUM 62 비교 행렬에 대해 문헌 [Henikoff et al., 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89:10915-10919] 참조)이 또한 알고리즘에 의해 사용한다.
본 발명의 다양한 측면이 하기 서브섹션에서 추가로 상세하게 기재된다.
I. 키메라 항원 수용체 및 T 세포 수용체
키메라 항원 수용체 (CAR 또는 CAR-T) 및 T 세포 수용체 (TCR)는 유전자 조작된 수용체이다. 이들 조작된 수용체는 관련 기술분야에 공지된 기술에 따라 T 세포를 포함한 면역 세포 내로 용이하게 삽입될 수 있고, 그에 의해 발현될 수 있다. CAR에 의해, 단일 수용체는 특정 항원을 인식하고, 뿐만 아니라 그러한 항원에 결합되었을 때 면역 세포를 활성화하여 그러한 항원을 보유하는 세포를 공격 및 파괴시키도록 프로그램화될 수 있다. 이들 항원이 종양 세포 상에 존재할 때, CAR을 발현하는 면역 세포는 종양 세포를 표적화하고 사멸시킬 수 있다.
본 발명의 한 측면은 말단절단된 힌지 도메인 ("THD")을 포함하는 신규 세포외 도메인을 포함하는 공동자극 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체 (CAR) 또는 T 세포 수용체 (TCR)를 코딩하는 폴리뉴클레오티드, 및 신규 THD를 포함하는 공동자극 도메인을 포함하는 조작된 T 세포에 관한 것이다. 공동자극 도메인은 막횡단 도메인 및/또는 세포내 도메인을 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩된 CAR 또는 TCR은 표적 항원에 특이적으로 결합하는 항원 결합 분자를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩된 CAR 또는 TCR은 활성화 도메인을 추가로 포함한다. 하나의 특정한 실시양태에서, 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩된 CAR 또는 TCR은 (i) 표적 항원에 특이적으로 결합하는 항원 결합 분자, (ii) 세포외 도메인, 막횡단 도메인, 및 세포내 도메인을 포함하는 공동자극 도메인, 및 (iii) 활성화 도메인을 포함하며, 여기서 세포외 도메인은 본원, 예를 들어, 서열식별번호: 3에 기재된 THD를 포함하거나, 그로 본질적으로 이루어지거나, 또는 그로 이루어진다.
일부 실시양태에서, 본 발명에 따른 CAR의 배향은 항원 결합 도메인 (예컨대 scFv)을 공동자극 도메인 및 활성화 도메인과 탠덤으로 포함한다. 공동자극 도메인은 세포외 부분, 막횡단 부분, 및 세포내 부분 중 1개 이상을 포함할 수 있다. 다른 실시양태에서, 다중 공동자극 도메인은 탠덤으로 사용될 수 있다.
I.A. 공동자극 도메인.
키메라 항원 수용체에는 그의 효력을 증가시키기 위해 공동자극 (신호전달) 도메인이 혼입된다. 미국 특허 번호 7,741,465, 및 6,319,494, 뿐만 아니라 문헌 [Krause et al. and Finney et al. (supra), Song et al., Blood 119:696-706 (2012); Kalos et al., Sci Transl. Med. 3:95 (2011); Porter et al., N. Engl. J. Med. 365:725-33 (2011), 및 Gross et al., Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 56:59-83 (2016)]을 참조한다. 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 갖는 공동자극 단백질은 T-세포 상에서 자연에서 발견되는 공동자극 단백질이다. 이러한 공동자극 단백질의 완전 천연 아미노산 서열은 NCBI 참조 서열: NP_006130.1에 기재되어 있다. 도 1a를 참조한다. 이러한 공동자극 단백질의 완전 천연 핵산 서열은 NCBI 참조 서열: NM_006139.1에 기재되어 있다.
신규 세포외 도메인: 본 개시내용은 말단절단된 힌지 도메인 ("THD")을 포함하는 공동자극 단백질의 신규 세포외 도메인이 CAR 또는 TCR의 1종 이상의 특성을 개선시킬 수 있다는 것을 보여준다. 일부 실시양태에서, THD 도메인은 완전한 힌지 도메인 ("CHD")의 말단절단된 버전이다. 특정 실시양태에서, THD를 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드는 (i) 서열식별번호: 1의 아미노산 123 내지 152와 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 THD 도메인은 서열식별번호: 1의 아미노산 1 내지 122를 함유하지 않는다.
다른 실시양태에서, THD는 서열식별번호: 1의 아미노산 123 내지 152와 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열로 본질적으로 이루어지거나 또는 그로 이루어진다. 다른 실시양태에서, THD는 서열식별번호: 3과 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩된 아미노산 서열로 본질적으로 이루어지거나 또는 그로 이루어진다.
일부 실시양태에서, THD를 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드는 (i) 서열식별번호: 1의 아미노산 123 내지 152와 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열 및 (ii) 임의로 ± 1개의 아미노산, ± 2개의 아미노산, ± 3개의 아미노산, ± 4개의 아미노산, ± 5개의 아미노산, 또는 ± 6개의 아미노산으로 본질적으로 이루어지거나 또는 그로 이루어진다. 일부 실시양태에서, THD를 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드는 (i) 서열식별번호: 1의 아미노산 123 내지 152와 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열 및 (ii) 임의로 1 또는 2개의 아미노산, 1 내지 3개의 아미노산, 1 내지 4개의 아미노산, 1 내지 5개의 아미노산, 또는 1 내지 6개의 아미노산으로 본질적으로 이루어지거나 또는 그로 이루어진다. THD 내의 아미노산 서열에 부가되거나 그로부터 결실될 수 있는 1 내지 6개의 아미노산은 N-말단, C-말단, 또는 N-말단 및 C-말단 둘 다에 존재할 수 있다.
일부 실시양태에서, THD를 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드는 (i) 서열식별번호: 1의 아미노산 123 내지 152와 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열 및 (ii) 1개의 추가의 N-말단 아미노산, 2개의 추가의 N-말단 아미노산, 3개의 추가의 N-말단 아미노산, 4개의 추가의 N-말단 아미노산, 5개의 추가의 N-말단 아미노산, 또는 6개의 추가의 N-말단 아미노산으로 본질적으로 이루어지거나 또는 그로 이루어진다.
일부 실시양태에서, 추가의 아미노산은 N-말단 아미노산일 수 있다. 일부 실시양태에서, 추가의 아미노산은 이종일 수 있다. 다른 실시양태에서, 추가의 아미노산은 자연 발생 공동자극 단백질 서열의 일부이다.
일부 실시양태에서, THD는 서열식별번호: 1의 아미노산 123 내지 152, 서열식별번호: 1의 아미노산 122 내지 152, 서열식별번호: 1의 아미노산 121 내지 152, 서열식별번호: 1의 아미노산 120 내지 152, 서열식별번호: 1의 아미노산 119 내지 152, 서열식별번호: 1의 아미노산 118 내지 152, 또는 서열식별번호: 1의 아미노산 117 내지 152와 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열로 본질적으로 이루어지거나 또는 그로 이루어진다.
다른 실시양태에서, THD는 서열식별번호: 1의 아미노산 124 내지 152, 서열식별번호: 1의 아미노산 125 내지 152, 서열식별번호: 1의 아미노산 126 내지 152, 서열식별번호: 1의 아미노산 127 내지 152, 서열식별번호: 1의 아미노산 128 내지 152, 서열식별번호: 1의 아미노산 129 내지 152, 또는 서열식별번호: 1의 아미노산 130 내지 152와 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열로 본질적으로 이루어지거나 또는 그로 이루어진다.
일부 실시양태에서, THD는 서열식별번호: 1의 아미노산 1-116을 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, THD는 서열식별번호: 1의 아미노산 1-117을 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, THD는 서열식별번호: 1의 아미노산 1-118을 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, THD는 서열식별번호: 1의 아미노산 1-119를 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, THD는 서열식별번호: 1의 아미노산 1-120을 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, THD는 서열식별번호: 1의 아미노산 1-121을 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, THD는 서열식별번호: 1의 아미노산 1-122를 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, THD는 서열식별번호: 1의 아미노산 1-123을 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, THD는 서열식별번호: 1의 아미노산 1-124를 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, THD는 서열식별번호: 1의 아미노산 1-125를 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, THD는 서열식별번호: 1의 아미노산 1-126을 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, THD는 서열식별번호: 1의 아미노산 1-127을 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, THD는 서열식별번호: 1의 아미노산 1-128을 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, THD는 서열식별번호: 1의 아미노산 1-129를 포함하지 않는다.
THD의 상응하는 아미노산 서열은 서열식별번호: 3 LDNEKSNGTI IHVKGKHLCP SPLFPGPSKP에 제시된다. THD의 세포외 부분을 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 서열식별번호: 2 CTTGATAATGAAAAGTCAAACGGAACAATCATTCACGTGAAGGGCAAGCACCTCTGTCCGTCACCCTTGTTCCCTGGTCCATCCAAGCCA에 제시된다.
특정 실시양태에서, CAR 또는 TCR의 공동자극 도메인을 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 서열식별번호: 3과 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 여기서 뉴클레오티드 서열은 THD를 코딩하고, 여기서 CAR 또는 TCR은 서열식별번호: 1의 아미노산 1 내지 122를 포함하지 않는다.
하나의 특정한 실시양태에서, THD는 서열식별번호: 3의 아미노산 서열과 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열로 본질적으로 이루어지거나 또는 그로 이루어진다. 구체적 실시양태에서, THD를 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 서열식별번호: 2의 뉴클레오티드 서열과 적어도 약 60%, 적어도 약 65%, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 뉴클레오티드 서열로 본질적으로 이루어지거나 또는 그로 이루어진다.
일부 실시양태에서, THD는 이뮤노글로불린 패밀리의 구성원의 일부 또는 모두, 예컨대 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgD, IgE, IgM, 또는 그의 단편을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, THD는 인간 완전한 힌지 도메인 ("CHD"), 예를 들어, 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 갖는 공동자극 단백질로부터 유래된다. 다른 실시양태에서, THD는 공동자극 단백질의 설치류, 뮤린, 또는 영장류 (예를 들어, 비-인간 영장류) CHD로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, THD는 공동자극 단백질의 키메라 CHD로부터 유래된다.
막횡단 도메인: 본 발명의 CAR 또는 TCR에 대한 공동자극 도메인은 막횡단 도메인 및/또는 세포내 신호전달 도메인을 추가로 포함할 수 있다. 막횡단 도메인은 CAR의 세포외 도메인에 융합되도록 설계될 수 있다. 이는 CAR의 세포내 도메인에 유사하게 융합될 수 있다. 한 실시양태에서, CAR 내의 도메인 중 하나와 자연적으로 회합되는 막횡단 도메인이 사용된다. 일부 경우에, 막횡단 도메인은 이러한 도메인이 동일한 또는 상이한 표면 막 단백질의 막횡단 도메인에 결합하는 것을 피하게 하여 수용체 복합체의 다른 구성원과의 상호작용을 최소화하기 위해 선택되거나 또는 아미노산 치환에 의해 변형될 수 있다. 막횡단 도메인은 천연 또는 합성 공급원으로부터 유래될 수 있다. 공급원이 천연인 경우에, 도메인은 임의의 막-결합 또는 막횡단 단백질로부터 유래될 수 있다. 본 발명에 특히 유용한 막횡단 영역은 4-1BB/CD137, 활성화 NK 세포 수용체, 이뮤노글로불린 단백질, B7-H3, BAFFR, BLAME (SLAMF8), BTLA, CD100 (SEMA4D), CD103, CD160 (BY55), CD18, CD19, CD19a, CD2, CD247, CD27, CD276 (B7-H3), CD28, CD29, CD3 델타, CD3 엡실론, CD3 감마, CD30, CD4, CD40, CD49a, CD49D, CD49f, CD69, CD7, CD84, CD8알파, CD8베타, CD96 (Tactile), CD11a, CD11b, CD11c, CD11d, CDS, CEACAM1, CRTAM, 시토카인 수용체, DAP-10, DNAM1 (CD226), Fc 감마 수용체, GADS, GITR, HVEM (LIGHTR), IA4, ICAM-1, ICAM-1, Ig 알파 (CD79a), IL-2R 베타, IL-2R 감마, IL-7R 알파, 유도성 T 세포 공동자극자 (ICOS), 인테그린, ITGA4, ITGA4, ITGA6, ITGAD, ITGAE, ITGAL, ITGAM, ITGAX, ITGB2, ITGB7, ITGB1, KIRDS2, LAT, LFA-1, LFA-1, CD83과 특이적으로 결합하는 리간드, LIGHT, LIGHT, LTBR, Ly9 (CD229), 림프구 기능-연관 항원-1 (LFA-1; CD11a/CD18), MHC 부류 1 분자, NKG2C, NKG2D, NKp30, NKp44, NKp46, NKp80 (KLRF1), OX-40, PAG/Cbp, 프로그램화된 사멸-1 (PD-1), PSGL1, SELPLG (CD162), 신호전달 림프구성 활성화 분자 (SLAM 단백질), SLAM (SLAMF1; CD150; IPO-3), SLAMF4 (CD244; 2B4), SLAMF6 (NTB-A; Ly108), SLAMF7, SLP-76, TNF 수용체 단백질, TNFR2, TNFSF14, 톨 리간드 수용체, TRANCE/RANKL, VLA1, 또는 VLA-6, 또는 그의 단편, 말단절단물, 또는 조합으로부터 유래될 수 있다 (즉, 이를 포함한다).
임의로, 짧은 링커는 CAR의 임의의 또는 일부 세포외, 막횡단, 및 세포내 도메인 사이에 연결을 형성할 수 있다.
하나의 구체적 실시양태에서, 공동자극 단백질의 막횡단 도메인의 뉴클레오티드 서열은 서열식별번호: 4: TTCTGGGTGTTGGTCGTAGTGGGTGGAGTCCTCGCTTGTTACTCTCTGCTCGTCACCGTGGCTTTTATAATCTTCTGGGTT에 제시된다.
한 실시양태에서, 공동자극 도메인 내의 막횡단 도메인을 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 서열식별번호: 4의 뉴클레오티드 서열과 적어도 약 60%, 적어도 약 65%, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
공동자극 단백질의 막횡단 도메인의 아미노산 서열은 서열식별번호: 5: FWVLVVVGGV LACYSLLVTV AFIIFWV에 제시된다.
하나의 특정한 실시양태에서, 공동자극 도메인 내의 막횡단 도메인은 서열식별번호: 5의 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 막횡단 도메인은 CD8로부터 유래된다 (즉, 이를 포함한다). 한 실시양태에서, CD8 세포외 도메인 및 막횡단 도메인의 뉴클레오티드 서열은 서열식별번호: 238 GCTGCAGCATTGAGCAACTCAATAATGTATTTTAGTCACTTTGTACCAGTGTTCTTGCCGGCTAAGCCTACTACCACACCCGCTCCACGGCCACCTACCCCAGCTCCTACCATCGCTTCACAGCCTCTGTCCCTGCGCCCAGAGGCTTGCCGACCGGCCGCAGGGGGCGCTGTTCATACCAGAGGACTGGATTTCGCCTGCGATATCTATATCTGGGCACCCCTGGCCGGAACCTGCGGCGTACTCCTGCTGTCCCTGGTCATCACGCTCTATTGTAATCACAGGAAC에 제시된다.
일부 실시양태에서, 공동자극 도메인 내의 막횡단 도메인을 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 CD8 막횡단 도메인의 뉴클레오티드 서열과 적어도 약 60%, 적어도 약 65%, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
CD8 세포외 도메인 및 막횡단 도메인의 아미노산 서열은 서열식별번호: 239 AAALSNSIMYFSHFVPVFLPAKPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRN에 제시된다.
하나의 특정한 실시양태에서, 공동자극 도메인 내의 막횡단 도메인은 CD8 막횡단 도메인의 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
세포내 (신호전달) 도메인: 본 발명의 조작된 T 세포의 세포내 (신호전달) 도메인은 활성화 도메인에게 신호전달을 제공할 수 있고, 이는 이어서 면역 세포의 정상 이펙터 기능 중 적어도 1종을 활성화한다. T 세포의 이펙터 기능은, 예를 들어, 시토카인의 분비를 포함한 세포용해 활성 또는 헬퍼 활성일 수 있다.
특정 실시양태에서, 적합한 세포내 신호전달 도메인은 4-1BB/CD137, 활성화 NK 세포 수용체, 이뮤노글로불린 단백질, B7-H3, BAFFR, BLAME (SLAMF8), BTLA, CD100 (SEMA4D), CD103, CD160 (BY55), CD18, CD19, CD19a, CD2, CD247, CD27, CD276 (B7-H3), CD28, CD29, CD3 델타, CD3 엡실론, CD3 감마, CD30, CD4, CD40, CD49a, CD49D, CD49f, CD69, CD7, CD84, CD8알파, CD8베타, CD96 (Tactile), CD11a, CD11b, CD11c, CD11d, CDS, CEACAM1, CRTAM, 시토카인 수용체, DAP-10, DNAM1 (CD226), Fc 감마 수용체, GADS, GITR, HVEM (LIGHTR), IA4, ICAM-1, ICAM-1, Ig 알파 (CD79a), IL-2R 베타, IL-2R 감마, IL-7R 알파, 유도성 T 세포 공동자극자 (ICOS), 인테그린, ITGA4, ITGA4, ITGA6, ITGAD, ITGAE, ITGAL, ITGAM, ITGAX, ITGB2, ITGB7, ITGB1, KIRDS2, LAT, LFA-1, LFA-1, CD83과 특이적으로 결합하는 리간드, LIGHT, LIGHT, LTBR, Ly9 (CD229), Ly108), 림프구 기능-연관 항원-1 (LFA-1; CD11a/CD18), MHC 부류 1 분자, NKG2C, NKG2D, NKp30, NKp44, NKp46, NKp80 (KLRF1), OX-40, PAG/Cbp, 프로그램화된 사멸-1 (PD-1), PSGL1, SELPLG (CD162), 신호전달 림프구성 활성화 분자 (SLAM 단백질), SLAM (SLAMF1; CD150; IPO-3), SLAMF4 (CD244; 2B4), SLAMF6 (NTB-A, SLAMF7, SLP-76, TNF 수용체 단백질, TNFR2, TNFSF14, 톨 리간드 수용체, TRANCE/RANKL, VLA1, 또는 VLA-6, 또는 그의 단편, 말단절단물, 또는 조합을 포함하나 (즉 함유하나), 이에 제한되지는 않는다.
세포내 신호전달 도메인을 코딩하는 뉴클레오티드 서열의 예는 서열식별번호: 6: AGATCCAAAAGAAGCCGCCTGCTCCATAGCGATTACATGAATATGACTCCACGCCGCCCTGGCCCCACAAGGAAACACTACCAGCCTTACGCACCACCTAGAGATTTCGCTGCCTATCGGAGC에 제시된다.
한 실시양태에서, 공동자극 도메인 내의 세포내 신호전달 도메인을 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 서열식별번호: 6의 뉴클레오티드 서열과 적어도 약 60%, 적어도 약 65%, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
세포내 신호전달 도메인의 예는 서열식별번호: 7: RSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS에 제시된다.
하나의 특정한 실시양태에서, 공동자극 도메인 내의 세포내 신호전달 도메인은 서열식별번호: 7의 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 공동자극 도메인은 세포외 THD, 및 공동자극 단백질의 막횡단 및 세포내 도메인을 포함하거나, 그로 본질적으로 이루어지거나, 또는 그로 이루어진다. 예를 들어, 공동자극 도메인을 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 서열식별번호: 240: CTTGATAATGAAAAGTCAAACGGAACAATCATTCACGTGAAGGGCAAGCACCTCTGTCCGTCACCCTTGTTCCCTGGTCCATCCAAGCCATTCTGGGTGTTGGTCGTAGTGGGTGGAGTCCTCGCTTGTTACTCTCTGCTCGTCACCGTGGCTTTTATAATCTTCTGGGTTAGATCCAAAAGAAGCCGCCTGCTCCATAGCGATTACATGAATATGACTCCACGCCGCCCTGGCCCCACAAGGAAACACTACCAGCCTTACGCACCACCTAGAGATTTCGCTGCCTATCGGAGC에 제시된다.
일부 실시양태에서, 공동자극 도메인을 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 서열식별번호: 240의 뉴클레오티드 서열과 적어도 약 60%, 적어도 약 65%, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함하거나, 그로 본질적으로 이루어지거나, 또는 그로 이루어지며, 여기서 공동자극 도메인은 서열식별번호: 1의 아미노산 1 내지 122, 서열식별번호: 1의 아미노산 1 내지 121, 서열식별번호: 1의 아미노산 1 내지 120, 서열식별번호: 1의 아미노산 1 내지 119, 서열식별번호: 1의 아미노산 1 내지 118, 또는 서열식별번호: 1의 아미노산 1 내지 118을 포함하지 않는다.
공동자극 도메인의 상응하는 아미노산 서열은 서열식별번호: 241: LDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS에 제시된다.
일부 실시양태에서, 공동자극 도메인은 서열식별번호: 241의 아미노산 서열과 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함하거나, 그로 본질적으로 이루어지거나, 또는 그로 이루어지며, 여기서 공동자극 도메인은 서열식별번호: 1의 아미노산 1 내지 122, 서열식별번호: 1의 아미노산 1 내지 121, 서열식별번호: 1의 아미노산 1 내지 120, 서열식별번호: 1의 아미노산 1 내지 119, 서열식별번호: 1의 아미노산 1 내지 118, 또는 서열식별번호: 1의 아미노산 1 내지 118을 포함하지 않는다.
I.B. 활성화 도메인.
CD3은 천연 T 세포 상의 T 세포 수용체의 요소이고, CAR의 중요한 세포내 활성화 요소인 것으로 제시되어 왔다. 한 실시양태에서, CD3은 CD3 제타이고, 그의 뉴클레오티드 서열은 서열식별번호: 8: AGGGTGAAGTTTTCCAGATCTGCAGATGCACCAGCGTATCAGCAGGGCCAGAACCAACTGTATAACGAGCTCAACCTGGGACGCAGGGAAGAGTATGACGTTTTGGACAAGCGCAGAGGACGGGACCCTGAGATGGGTGGCAAACCAAGACGAAAAAACCCCCAGGAGGGTCTCTATAATGAGCTGCAGAAGGATAAGATGGCTGAAGCCTATTCTGAAATAGGCATGAAAGGAGAGCGGAGAAGGGGAAAAGGGCACGACGGTTTGTACCAGGGACTCAGCACTGCTACGAAGGATACTTATGACGCTCTCCACATGCAAGCCCTGCCACCTAGG에 제시된다.
일부 실시양태에서, 활성화 도메인을 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 서열식별번호: 8의 뉴클레오티드 서열과 적어도 약 60%, 적어도 약 65%, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
세포내 CD3 제타의 상응하는 아미노산은 서열식별번호: 9: RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR에 제시된다.
일부 실시양태에서, 활성화 도메인은 서열식별번호: 9의 아미노산 서열과 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 활성화 도메인은 아미노산 서열:
RVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR (서열식별번호: 251)과 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
I.C. 항원 결합 분자
CAR은, 표적화된 항원과 상호작용하는 항원 결합 분자를 혼입시킴으로써 그러한 항원 (예컨대 세포-표면 항원)에 결합하도록 조작될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원 결합 분자는 그의 항체 단편, 예를 들어, 1개 이상의 단일 쇄 항체 단편 ("scFv")이다. scFv는 함께 연결된 항체의 중쇄 및 경쇄의 가변 영역을 갖는 단일 쇄 항체 단편이다. 미국 특허 번호 7,741,465, 및 6,319,494 뿐만 아니라 문헌 [Eshhar et al., Cancer Immunol Immunotherapy (1997) 45: 131-136]을 참조한다. scFv는 표적 항원과 특이적으로 상호작용하는 모 항체의 능력을 보유한다. scFv는 다른 CAR 성분과 함께 단일 쇄의 일부로서 발현되도록 조작될 수 있기 때문에 키메라 항원 수용체에서 유용하다. Id. 또한, 문헌 [Krause et al., J. Exp. Med., Volume 188, number 4, 1998 (619-626); Finney et al., Journal of Immunology, 1998, 161: 2791-2797]을 참조한다. 항원 결합 분자는 전형적으로, 관심 항원을 인식하고 이에 결합할 수 있도록 CAR의 세포외 부분 내에 함유되는 것으로 인지될 것이다. 1종 초과의 관심 표적에 대한 특이성을 갖는 이중특이적 및 다중특이적 CAR이 본 발명의 범주 내에서 고려된다.
일부 실시양태에서, 폴리뉴클레오티드는 본 발명의 THD, 및 표적 항원에 특이적으로 결합하는 항원 결합 분자를 포함하는 CAR 또는 TCR을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 표적 항원은 종양 항원이다. 일부 실시양태에서, 항원은 종양-연관 표면 항원, 예컨대 5T4, 알파태아단백질 (AFP), B7-1 (CD80), B7-2 (CD86), BCMA, B-인간 융모성 고나도트로핀, CA-125, 암배아성 항원 (CEA), 암배아성 항원 (CEA), CD123, CD133, CD138, CD19, CD20, CD22, CD23, CD24, CD25, CD30, CD33, CD34, CD4, CD40, CD44, CD56, CD8, CLL-1, c-Met, CMV-특이적 항원, CSPG4, CTLA-4, 디시알로강글리오시드 GD2, 관-상피 뮤신, EBV-특이적 항원, EGFR 변이체 III (EGFRvIII), ELF2M, 엔도글린, 에프린 B2, 표피 성장 인자 수용체 (EGFR), 상피 세포 부착 분자 (EpCAM), 상피 종양 항원, ErbB2 (HER2/neu), 섬유모세포 연관 단백질 (fap), FLT3, 폴레이트 결합 단백질, GD2, GD3, 신경교종-연관 항원, 글리코스핑고지질, gp36, HBV-특이적 항원, HCV-특이적 항원, HER1-HER2, HER2-HER3 조합, HERV-K, 고분자량-흑색종 연관 항원 (HMW-MAA), HIV-1 외피 당단백질 gp41, HPV-특이적 항원, 인간 텔로머라제 리버스 트랜스크립타제, IGFI 수용체, IGF-II, IL-11R알파, IL-13R-a2, 인플루엔자 바이러스-특이적 항원; CD38, 인슐린 성장 인자 (IGFl)-l, 장 카르복실 에스테라제, 카파 쇄, LAGA-la, 람다 쇄, 라사 바이러스-특이적 항원, 렉틴-반응성 AFP, 계통-특이적 또는 조직 특이적 항원 예컨대 CD3, MAGE, MAGE-A1, 주요 조직적합성 복합체 (MHC) 분자, 종양-특이적 펩티드 에피토프를 제시하는 주요 조직적합성 복합체 (MHC) 분자, M-CSF, 흑색종-연관 항원, 메소텔린, 메소텔린, MN-CA IX, MUC-1, mut hsp70-2, 돌연변이된 p53, 돌연변이된 p53, 돌연변이된 ras, 호중구 엘라스타제, NKG2D, Nkp30, NY-ESO-1, p53, PAP, 프로스타제, 프로스타제 특이적 항원 (PSA), 전립선-암종 종양 항원-1 (PCTA-1), 전립선-특이적 항원, 프로스테인, PSMA, RAGE-1, ROR1, RU1, RU2 (AS), 표면 부착 분자, 서바이빙 및 텔로머라제, TAG-72, 피브로넥틴의 엑스트라 도메인 A (EDA) 및 엑스트라 도메인 B (EDB) 및 테나신-C의 Al 도메인 (TnC Al) , 티로글로불린, 종양 기질 항원, 혈관 내피 성장 인자 수용체-2 (VEGFR2), 바이러스-특이적 표면 항원 예컨대 HIV-특이적 항원 (예컨대 HIV gp120), 뿐만 아니라 이들 표면 마커의 임의의 유도체 또는 변이체로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 항원 결합 분자는 BCMA에 특이적으로 결합한다. 다른 실시양태에서, 항원 결합 분자는 CLL-1에 특이적으로 결합한다. 다른 실시양태에서, 항원 결합 분자는 FLT3에 특이적으로 결합한다.
일부 실시양태에서, 항원 결합 분자는 BCMA에 특이적으로 결합한다. 특정 실시양태에서, 항원 결합 분자는 (a) 서열식별번호: 13-20으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1; (b) 서열식별번호: 21-28으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2; (c) 서열식별번호: 29-36으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3; (d) 서열식별번호: 37-44으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1; (e) 서열식별번호: 45-52으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2; 및/또는 (f) 서열식별번호: 53-60으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3을 포함한다.
한 실시양태에서, 항원 결합 분자는 (a) 서열식별번호: 13의 아미노산을 포함하는 VH CDR1; (b) 서열식별번호: 21의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2; (c) 서열식별번호: 29의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3; (d) 서열식별번호: 37의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1; (e) 서열식별번호: 45의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2; 및/또는 (f) 서열식별번호: 53의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 항원 결합 분자는 (a) 서열식별번호: 14의 아미노산을 포함하는 VH CDR1; (b) 서열식별번호: 22의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2; (c) 서열식별번호: 30의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3; (d) 서열식별번호: 38의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1; (e) 서열식별번호: 46의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2; 및/또는 (f) 서열식별번호: 54의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 항원 결합 분자는 (a) 서열식별번호: 15의 아미노산을 포함하는 VH CDR1; (b) 서열식별번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2; (c) 서열식별번호: 31의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3; (d) 서열식별번호: 39의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1; (e) 서열식별번호: 47의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2; 및/또는 (f) 서열식별번호: 55의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 항원 결합 분자는 (a) 서열식별번호: 16의 아미노산을 포함하는 VH CDR1; (b) 서열식별번호: 24의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2; (c) 서열식별번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3; (d) 서열식별번호: 40의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1; (e) 서열식별번호: 48의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2; 및/또는 (f) 서열식별번호: 56의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 항원 결합 분자는 (a) 서열식별번호: 17의 아미노산을 포함하는 VH CDR1; (b) 서열식별번호: 25의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2; (c) 서열식별번호: 33의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3; (d) 서열식별번호: 41의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1; (e) 서열식별번호: 49의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2; 및/또는 (f) 서열식별번호: 57의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 항원 결합 분자는 (a) 서열식별번호: 18의 아미노산을 포함하는 VH CDR1; (b) 서열식별번호: 26의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2; (c) 서열식별번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3; (d) 서열식별번호: 42의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1; (e) 서열식별번호: 50의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2; 및/또는 (f) 서열식별번호: 58의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 항원 결합 분자는 (a) 서열식별번호: 19의 아미노산을 포함하는 VH CDR1; (b) 서열식별번호: 27의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2; (c) 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3; (d) 서열식별번호: 43의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1; (e) 서열식별번호: 51의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2; 및/또는 (f) 서열식별번호: 59의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 항원 결합 분자는 (a) 서열식별번호: 20의 아미노산을 포함하는 VH CDR1; (b) 서열식별번호: 28의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2; (c) 서열식별번호: 36의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3; (d) 서열식별번호: 44의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1; (e) 서열식별번호: 52의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2; 및/또는 (f) 서열식별번호: 60의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3을 포함한다.
특정 실시양태에서, 항원 결합 분자는 서열식별번호: 77-84로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 85-92로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 한 실시양태에서, 항원 결합 분자는 서열식별번호: 77의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 85의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 항원 결합 분자는 서열식별번호: 78의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 86의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 항원 결합 분자는 서열식별번호: 79의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 87의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 항원 결합 분자는 서열식별번호: 80의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 88의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 항원 결합 분자는 서열식별번호: 81의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 89의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 항원 결합 분자는 서열식별번호: 82의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 90의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 항원 결합 분자는 서열식별번호: 83의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 91의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 항원 결합 분자는 서열식별번호: 84의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 92의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
하나의 특정한 실시양태에서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 서열식별번호: 61-68로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오티드 서열과 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 서열식별번호: 69-76으로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오티드 서열과 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
다른 공지된 항-BCMA 항체 또는 그의 항원 결합 분자가 본 발명의 THD를 포함하는 CAR 또는 TCR의 항원 결합 분자로서 사용될 수 있다. 이러한 BCMA 항체 또는 항원 결합 분자의 비제한적 예는 2015년 10월 22일에 공개된 WO2015158671A1 및 2016년 1월 28일에 공개된 WO2016014565A2에 기재된 항체 또는 항원 결합 분자를 포함한다.
일부 실시양태에서, 항원 결합 분자는 CLL-1에 특이적으로 결합한다. 특정 실시양태에서, 항원 결합 분자는 (a) 서열식별번호: 93-96으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1; (b) 서열식별번호: 97-100으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2; (c) 서열식별번호: 101-104으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3; (d) 서열식별번호: 105-108으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1; (e) 서열식별번호: 109-112으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2; 및/또는 (f) 서열식별번호: 113-116으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3을 포함한다.
한 실시양태에서, 항원 결합 분자는 (a) 서열식별번호: 93의 아미노산을 포함하는 VH CDR1; (b) 서열식별번호: 97의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2; (c) 서열식별번호: 101의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3; (d) 서열식별번호: 105의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1; (e) 서열식별번호: 109의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2; 및/또는 (f) 서열식별번호: 113의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3을 포함한다.
한 실시양태에서, 항원 결합 분자는 (a) 서열식별번호: 94의 아미노산을 포함하는 VH CDR1; (b) 서열식별번호: 98의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2; (c) 서열식별번호: 102의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3; (d) 서열식별번호: 106의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1; (e) 서열식별번호: 110의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2; 및/또는 (f) 서열식별번호: 114의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3을 포함한다.
한 실시양태에서, 항원 결합 분자는 (a) 서열식별번호: 95의 아미노산을 포함하는 VH CDR1; (b) 서열식별번호: 99의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2; (c) 서열식별번호: 103의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3; (d) 서열식별번호: 107의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1; (e) 서열식별번호: 111의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2; 및/또는 (f) 서열식별번호: 115의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3을 포함한다.
한 실시양태에서, 항원 결합 분자는 (a) 서열식별번호: 96의 아미노산을 포함하는 VH CDR1; (b) 서열식별번호: 100의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2; (c) 서열식별번호: 104의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3; (d) 서열식별번호: 108의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1; (e) 서열식별번호: 112의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2; 및/또는 (f) 서열식별번호: 116의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3을 포함한다.
특정 실시양태에서, 항원 결합 분자는 서열식별번호: 125-128로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 129-132로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 한 실시양태에서, 항원 결합 분자는 서열식별번호: 125의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 129의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 항원 결합 분자는 서열식별번호: 126의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 130의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 항원 결합 분자는 서열식별번호: 127의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 131의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 항원 결합 분자는 서열식별번호: 128의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 132의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
하나의 특정한 실시양태에서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 서열식별번호: 117-120으로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오티드 서열과 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 서열식별번호: 121-124로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오티드 서열과 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
항-CLL-1 항체 또는 그의 항원 결합 분자의 다른 예는 2016년 1월 28일에 공개된 WO2016014535, 및 2016년 2월 25일에 공개된 US 2016/0051651 A1에 기재된 항체 또는 항원 결합 분자를 포함한다.
본 발명의 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩된 항원 결합 분자는 단일 쇄 또는 이중 쇄일 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원 결합 분자는 단일 쇄이다. 특정 실시양태에서, 항원 결합 분자는 scFv, Fab, Fab', Fv, F(ab')2, dAb, 및 그의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 하나의 특정한 실시양태에서, 항원 결합 분자는 scFv를 포함한다.
특정 실시양태에서, 항원 결합 분자는 단일 쇄를 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역은 링커에 의해 연결된다. 일부 실시양태에서, VH는 링커의 N 말단에 위치하고, VL은 링커의 C 말단에 위치한다. 다른 실시양태에서, VL은 링커의 N 말단에 위치하고, VH는 링커의 C 말단에 위치한다. 일부 실시양태에서, 링커는 적어도 약 5, 적어도 약 8, 적어도 약 10, 적어도 약 13, 적어도 약 15, 적어도 약 18, 적어도 약 20, 적어도 약 25, 적어도 약 30, 적어도 약 35, 적어도 약 40, 적어도 약 45, 적어도 약 50, 적어도 약 60, 적어도 약 70, 적어도 약 80, 적어도 약 90, 또는 적어도 약 100개의 아미노산을 포함한다. 일부 실시양태에서, 링커는 적어도 약 18개의 아미노산을 포함한다. 특정 실시양태에서, 링커는 아미노산 서열 GSTSGSGKPGSGEGSTKG (서열식별번호: 12) 또는 아미노산 서열 GGGGSGGGGSGGGGS (서열식별번호: 237)와 적어도 약 75%, 적어도 약 85%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 링커는 휘트로우(Whitlow) 링커이다. 특정 실시양태에서, 결합 분자는 단일 쇄를 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역은 링커에 의해 연결되고, 여기서 링커는 서열식별번호: 12의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항원 결합 분자는 표적 항원 (예를 들어, 인간 BCMA, 인간 FLT3, 또는 인간 CLL-1)에 1 x 10-6 M 미만, 1 x 10-7 M 미만, 1 x 10-8 M 미만, 또는 1 x 10-9 M 미만의 KD로 결합한다. 하나의 특정한 실시양태에서, 항원 결합 분자는 표적 항원 (예를 들어, 인간 BCMA, 인간 FLT3, 또는 인간 CLL-1)에 1 x 10-7 M 미만의 KD로 결합한다. 또 다른 실시양태에서, 항원 결합 분자는 표적 항원 (예를 들어, 인간 BCMA, 인간 FLT3, 또는 인간 CLL-1)에 1 x 10-8 M 미만의 KD로 결합한다. 일부 실시양태에서, 항원 결합 분자는 표적 항원 (예를 들어, 인간 BCMA, 인간 FLT3, 또는 인간 CLL-1)에 약 1 x 10-7 M, 약 2 x 10-7 M, 약 3 x 10-7 M, 약 4 x 10-7 M, 약 5 x 10-7 M, 약 6 x 10-7 M, 약 7 x 10-7 M, 약 8 x 10-7 M, 약 9 x 10-7 M, 약 1 x 10-8 M, 약 2 x 10-8 M, 약 3 x 10-8 M, 약 4 x 10-8 M, 약 5 x 10-8 M, 약 6 x 10-8 M, 약 7 x 10-8 M, 약 8 x 10-8 M, 약 9 x 10-8 M, 약 1 x 10-9 M, 약 2 x 10-9 M, 약 3 x 10-9 M, 약 4 x 10-9 M, 약 5 x 10-9 M, 약 6 x 10-9 M, 약 7 x 10-9 M, 약 8 x 10-9 M, 약 9 x 10-9 M, 약 1 x 10-10 M, 또는 약 5 x 10-10 M의 KD로 결합한다. 특정 실시양태에서, KD는 koff/kon의 비율로서 계산되고, kon 및 koff는 1가 항체, 예컨대 Fab 단편을 사용하여, 예를 들어 비아코어® 표면 플라즈몬 공명 기술에 의해 측정되는 바와 같이 결정된다. 다른 실시양태에서, KD는 koff/kon의 비율로서 계산되고, kon 및 koff는 2가 항체, 예컨대 Fab 단편을 사용하여, 예를 들어 비아코어® 표면 플라즈몬 공명 기술에 의해 측정되는 바와 같이 결정된다.
일부 실시양태에서, 항원 결합 분자는 표적 항원 (예를 들어, 인간 BCMA, 인간 FLT3, 또는 인간 CLL-1)에 1 x 10-4 M-1 s-1 미만, 2 x 10-4 M-1 s-1 미만, 3 x 10-4 M-1 s-1 미만, 4 x 10-4 M-1 s-1 미만, 5 x 10-4 M-1 s-1 미만, 6 x 10-4 M-1 s-1 미만, 7 x 10-4 M-1 s-1 미만, 8 x 10-4 M-1 s-1 미만, 9 x 10-4 M-1 s-1 미만, 1 x 10-5 M-1 s-1 미만, 2 x 10-5 M-1 s-1 미만, 3 x 10-5 M-1 s-1 미만, 4 x 10-5 M-1 s-1 미만, 5 x 10-5 M-1 s-1 미만, 6 x 10-5 M-1 s-1 미만, 7 x 10-5 M-1 s-1 미만, 8 x 10-5 M-1 s-1 미만, 9 x 10-5 M-1 s-1 미만, 1 x 10-6 M-1 s-1 미만, 2 x 10-6 M-1 s-1 미만, 3 x 10-6 M-1 s-1 미만, 4 x 10-6 M-1 s-1 미만, 5 x 10-6 M-1 s-1 미만, 6 x 10-6 M-1 s-1 미만, 7 x 10-6 M-1 s-1 미만, 8 x 10-6 M-1 s-1 미만, 9 x 10-6 M-1 s-1 미만, 또는 1 x 10-7 M-1 s-1 미만의 회합률 (kon)로 결합한다. 특정 실시양태에서, kon은 1가 항체, 예컨대 Fab 단편을 사용하여, 예를 들어 비아코어® 표면 플라즈몬 공명 기술에 의해 측정되는 바와 같이 결정된다. 다른 실시양태에서, kon은 2가 항체를 사용하여, 예를 들어 비아코어® 표면 플라즈몬 공명 기술에 의해 측정되는 바와 같이 결정된다.
일부 실시양태에서, 항원 결합 분자는 표적 항원 (예를 들어, 인간 BCMA, 인간 FLT3, 또는 인간 CLL-1)에 1 x 10-2 s-1 미만, 2 x 10-2 s-1 미만, 3 x 10-2 s-1 미만, 4 x 10-2 s-1 미만, 5 x 10-2 s-1 미만, 6 x 10-2 s-1 미만, 7 x 10-2 s-1 미만, 8 x 10-2 s-1 미만, 9 x 10-2 s-1 미만, 1 x 10-3 s-1 미만, 2 x 10-3 s-1 미만, 3 x 10-3 s-1 미만, 4 x 10-3 s-1 미만, 5 x 10-3 s-1 미만, 6 x 10-3 s-1 미만, 7 x 10-3 s-1 미만, 8 x 10-3 s-1 미만, 9 x 10-3 s-1 미만, 1 x 10-4 s-1 미만, 2 x 10-4 s-1 미만, 3 x 10-4 s-1 미만, 4 x 10-4 s-1 미만, 5 x 10-4 s-1 미만, 6 x 10-4 s-1 미만, 7 x 10-4 s-1 미만, 8 x 10-4 s-1 미만, 9 x 10-4 s-1 미만, 1 x 10-4 s-1 미만, 또는 5 x 10-4 s-1 미만의 해리율 (koff)로 결합한다. 특정 실시양태에서, koff는 1가 항체, 예컨대 Fab 단편을 사용하여, 예를 들어 비아코어® 표면 플라즈몬 공명 기술에 의해 측정되는 바와 같이 결정된다. 다른 실시양태에서, koff는 2가 항체를 사용하여, 예를 들어 비아코어® 표면 플라즈몬 공명 기술에 의해 측정되는 바와 같이 결정된다.
일부 실시양태에서, 폴리뉴클레오티드는 TCR을 코딩하며, 여기서 TCR은 제4 상보성 결정 영역 (CDR4)을 추가로 포함한다. 특정 실시양태에서, 폴리뉴클레오티드는 TCR을 코딩하며, 여기서 TCR은 불변 영역을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 불변 영역은 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgD, IgE, 및 IgM의 불변 영역으로부터 선택된다.
I.D. 스위치 도메인
면역 세포 (1개 이상의 CAR 또는 TCR을 함유함)를 자살 유전자로 형질도입하는 것에 의해 유해 사건이 최소화될 수 있다는 것이 인지될 것이다. 또한 유도성 "온" 또는 "가속" 스위치를 면역 세포 내로 혼입시키는 것이 바람직할 수 있다. 적합한 기술은 세포에 본 발명의 CAR 구축물을 형질도입하기 전, 후 또는 그와 동시에 유도성 카스파제-9 (미국 출원 2011/0286980) 또는 티미딘 키나제를 사용하는 것을 포함한다. 자살 유전자 및/또는 "온" 스위치를 도입하기 위한 추가의 방법은 TALENS, 아연 핑거, RNAi, siRNA, shRNA, 안티센스 기술, 및 관련 기술분야에 공지된 다른 기술을 포함한다.
본 발명에 따르면, 추가의 온-오프 또는 다른 유형의 제어 스위치 기술이 본원에 포함될 수 있다. 이들 기술은 이량체화 도메인 및 이러한 도메인 이량체화의 임의적 활성화제의 사용을 활용할 수 있다. 이들 기술은, 예를 들어, 특정 세포에서 FKBP/라파로그 이량체화 시스템을 사용하는, 문헌 [Wu et al., Science 2014 350 (6258)]에 기재된 것을 포함하며, 그의 내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 추가의 이량체화 기술이, 예를 들어, 문헌 [Fegan et al. Chem. Rev. 2010, 110, 3315-3336] 뿐만 아니라 미국 특허 번호 5,830,462; 5,834,266; 5,869,337; 및 6,165,787에 기재되어 있고, 그의 내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 추가의 이량체화 쌍은 시클로스포린-A/시클로필린, 수용체, 에스트로겐/에스트로겐 수용체 (임의로 타목시펜을 사용함), 글루코코르티코이드/글루코코르티코이드 수용체, 테트라시클린/테트라시클린 수용체, 비타민 D/비타민 D 수용체를 포함할 수 있다. 이량체화 기술의 추가의 예는 예를 들어, WO 2014/127261, WO 2015/090229, US 2014/0286987, US 2015/0266973, US 2016/0046700, 미국 특허 번호 8,486,693, US 2014/0171649, 및 US 2012/0130076에서 찾아볼 수 있고, 그의 내용은 그 전문이 본원에 참조로 추가로 포함된다.
I.E. 리더 펩티드
일부 실시양태에서, CAR 또는 TCR을 코딩하는 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 추가로 리더 펩티드 (또한 본원에서 "신호 펩티드"로도 지칭됨)를 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 리더 펩티드는 아미노산 서열 MALPVTALLLPLALLLHAARP (서열식별번호: 11)과 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 리더 펩티드는 서열식별번호: 11의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 CAR 또는 TCR을 코딩하고, 여기서 CAR 또는 TCR은 리더 펩티드 (P), 항원 결합 분자 (B), 공동자극 단백질의 세포외 도메인 (E), 막횡단 도메인 (T), 공동자극 영역 (C), 및 활성화 도메인 (A)을 포함하고, 여기서 CAR은 하기: P-B-E-T-C-A에 따라 구성된다. 일부 실시양태에서, 항원 결합 분자는 VH 및 VL을 포함하고, 여기서 CAR은 하기: P-VH-VL-E-T-C-A 또는 P-VL-VH-E-T-C-A에 따라 구성된다. 일부 실시양태에서, VH 및 VL은 링커 (L)에 의해 연결되고, 여기서 CAR은 N-말단에서 C-말단으로 하기: P-VH-L-VL-E-T-C-A 또는 P-VH-L-VL-E-T-C-A에 따라 구성된다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 CAR을 코딩하고, 여기서 CAR은 표 2로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 약 75%, 적어도 약 85%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 CAR을 코딩하고, 여기서 CAR은 표 2로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
표 2. 예시적인 CAR 서열
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일부 실시양태에서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 CAR을 코딩하고, 여기서 CAR은 서열식별번호: 134, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154, 156, 158, 160, 162, 164, 166, 168, 178, 180, 190, 192, 202, 204, 214, 216, 226, 및 228로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 약 75%, 적어도 약 85%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, CAR은 서열식별번호: 134, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154, 156, 158, 160, 162, 164, 166, 168, 178, 180, 190, 192, 202, 204, 214, 216, 226, 및 228로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 서열식별번호: 133, 135, 137, 139, 141, 143, 145, 147, 149, 151, 153, 155, 157, 159, 161, 163, 165, 167, 177, 179, 189, 191, 201, 203, 213, 215, 225, 및 227로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 65%, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 85%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 100% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 폴리뉴클레오티드는 서열식별번호: 133, 135, 137, 139, 141, 143, 145, 147, 149, 151, 153, 155, 157, 159, 161, 163, 165, 167, 177, 179, 189, 191, 201, 203, 213, 215, 225, 및 227로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
II. 벡터, 세포, 및 제약 조성물
특정 측면에서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 상기 기재된 바와 같은 말단절단된 힌지 도메인 ("THD") 도메인을 포함하는 CAR 또는 TCR을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터 또는 벡터의 세트에 관한 것이다.
관련 기술분야에 공지되어 있는 임의의 벡터가 본 발명에 적합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 벡터는 바이러스 벡터이다. 일부 실시양태에서, 벡터는 레트로바이러스 벡터, DNA 벡터, 뮤린 백혈병 바이러스 벡터, SFG 벡터, 플라스미드, RNA 벡터, 아데노바이러스 벡터, 바큘로바이러스 벡터, 엡스타인 바르 바이러스 벡터, 파포바바이러스 벡터, 백시니아 바이러스 벡터, 단순 포진 바이러스 벡터, 아데노바이러스 연관 벡터 (AAV), 렌티바이러스 벡터, 또는 그의 임의의 조합이다.
한 실시양태에서, 본 발명과 관련하여 사용될 수 있는 벡터는 pGAR이고, 하기 코딩 서열을 갖는다:
Figure pat00050
Figure pat00051
Figure pat00052
Figure pat00053
pGAR 벡터 지도가 도 20에 제시된다.
적합한 추가의 예시적인 벡터는 예를 들어 pBABE-퓨로, pBABE-네오 대형 TcDNA, pBABE-히그로-hTERT, pMKO.1 GFP, MSCV-IRES-GFP, pMSCV PIG (퓨로 IRES GFP 공 플라스미드), pMSCV-loxp-dsRed-loxp-eGFP-퓨로-WPRE, MSCV IRES 루시페라제, pMIG, MDH1-PGK-GFP_2.0, TtRMPVIR, pMSCV-IRES-mCherry FP, pRetroX GFP T2A Cre, pRXTN, pLncEXP, 및 pLXIN-Luc를 포함한다.
다른 측면에서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 포함하는 세포가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 본원에 기재된 TCD를 포함하는 CAR 또는 TCR을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 세포, 예를 들어, 시험관내 세포에 관한 것이다. 다른 실시양태에서, 본 발명은 본원에 기재된 TCD를 포함하는 CAR 또는 TCR에 의해 코딩된 폴리펩티드를 포함하는 세포, 예를 들어, 시험관내 세포에 관한 것이다.
임의의 세포가 본 발명의 폴리뉴클레오티드, 벡터 또는 폴리펩티드를 위한 숙주 세포로서 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 세포는 원핵 세포, 진균 세포, 효모 세포 또는 보다 고등의 진핵 세포 예컨대 포유동물 세포일 수 있다. 적합한 원핵 세포는, 비제한적으로, 유박테리움, 예컨대 그람-음성 또는 그람-양성 유기체, 예를 들어, 엔테로박테리아세아에(Enterobacteriaceae) 예컨대 에스케리키아(Escherichia), 예를 들어, 이. 콜라이(E. coli); 엔테로박터(Enterobacter); 에르위니아(Erwinia); 클레브시엘라(Klebsiella); 프로테우스(Proteus); 살모넬라(Salmonella), 예를 들어, 살모넬라 티피무리움(Salmonella typhimurium); 세라티아(Serratia), 예를 들어, 세라티아 마르세스칸스(Serratia marcescans) 및 시겔라(Shigella); 바실루스(Bacilli) 예컨대 비. 서브틸리스(B. subtilis) 및 비. 리케니포르미스(B. licheniformis); 슈도모나스(Pseudomonas) 예컨대 피. 아에루기노사(P. aeruginosa); 및 스트렙토미세스(Streptomyces)를 포함한다. 일부 실시양태에서, 세포는 인간 세포이다. 일부 실시양태에서, 세포는 면역 세포이다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 T 세포, B 세포, 종양 침윤 림프구 (TIL), TCR 발현 세포, 자연 킬러 (NK) 세포, 수지상 세포, 과립구, 선천성 림프성 세포, 거핵구, 단핵구, 대식세포, 혈소판, 흉선세포, 및 골수 세포로 이루어진 군으로부터 선택된다. 한 실시양태에서, 면역 세포는 T 세포이다. 또 다른 실시양태에서, 면역 세포는 NK 세포이다. 특정 실시양태에서, T 세포는 종양-침윤 림프구 (TIL), 자가 T 세포, 조작된 자가 T 세포 (eACT™), 동종 T 세포, 이종 T 세포 또는 그의 임의의 조합이다.
본 발명의 세포는 관련 기술분야에 공지된 임의의 공급원을 통해 수득될 수 있다. 예를 들어, T 세포는 조혈 줄기 세포 집단으로부터 시험관내 분화될 수 있거나, 또는 T 세포는 대상체로부터 수득될 수 있다. T 세포는 예를 들어, 말초 혈액 단핵 세포, 골수, 림프절 조직, 제대혈, 흉선 조직, 감염 부위로부터의 조직, 복수, 흉막 삼출, 비장 조직, 및 종양으로부터 수득될 수 있다. 또한, T 세포는 관련 기술분야에서 입수가능한 1종 이상의 T 세포주로부터 유래될 수 있다. T 세포는 또한 통상의 기술자에게 공지된 다수의 기술, 예컨대 피콜™ 분리 및/또는 분리반출술을 사용하여 대상체로부터 수집된 단위 혈액으로부터 수득될 수 있다. 특정 실시양태에서, 분리반출술에 의해 수집된 세포를 세척하여 혈장 분획을 제거하고, 후속 프로세싱을 위해 적절한 완충제 또는 배지 중에 둔다. 일부 실시양태에서, 세포는 PBS로 세척된다. 인지될 바와 같이, 예컨대 반자동화된 관통 원심분리, 예를 들어, 코브(Cobe)™ 2991 세포 프로세서, 백스터 시토메이트(Baxter CytoMate)™ 등을 사용함으로써 세척 단계가 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 세척된 세포는 1종 이상의 생체적합성 완충제, 또는 완충제의 존재 또는 부재 하의 다른 염수 용액 중에 재현탁된다. 특정 실시양태에서, 분리반출술 샘플의 바람직하지 않은 성분은 제거된다. T 세포 요법을 위한 T 세포를 단리하는 추가의 방법은 미국 특허 공개 번호 2013/0287748에 개시되어 있고, 이는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
특정 실시양태에서, T 세포는 적혈구를 용해시키고 단핵구를 고갈시킴으로써, 예를 들어, 퍼콜(PERCOLL)™ 구배를 통해 원심분리를 사용함으로써 PBMC로부터 단리된다. 일부 실시양태에서, T 세포의 특정 하위집단, 예컨대 CD4+, CD8+, CD28+, CD45RA+, 및 CD45RO+ T 세포는 관련 기술분야에 공지된 양성 또는 음성 선택 기술에 의해 추가로 단리된다. 예를 들어, 음성 선택에 의한 T 세포 집단의 풍부화는 음성 선택된 세포에 고유한 표면 마커로 지시된 항체의 조합에 의해 달성될 수 있다. 일부 실시양태에서, 음성 선택된 세포 상에 존재하는 세포 표면 마커로 지시된 모노클로날 항체의 칵테일을 사용하는 음성 자기 면역부착 또는 유동 세포측정법을 통한 세포 분류 및/또는 선택이 사용될 수 있다. 예를 들어, 음성 선택에 의해 CD4+ 세포를 풍부화하기 위해, 모노클로날 항체 칵테일은 전형적으로 CD8, CD11b, CD14, CD16, CD20, 및 HLA-DR에 대한 항체를 포함한다. 특정 실시양태에서, 유동 세포측정법 및 세포 분류는 본 발명에 사용하기 위한 관심 세포 집단을 단리하는데 사용된다.
일부 실시양태에서, PBMC는 본원에 기재된 바와 같은 방법을 사용한 면역 세포 (예컨대 CAR 또는 TCR)에 의한 유전자 변형을 위해 직접 사용된다. 특정 실시양태에서, PBMC의 단리 후, T 림프구가 추가로 단리되고, 둘 다의 세포독성 및 헬퍼 T 림프구가 유전자 변형 및/또는 확장 전 또는 그 후에 나이브, 기억, 및 이펙터 T 세포 하위집단으로 분류된다.
일부 실시양태에서, CD8+ 세포는 이들 CD8+ 세포 유형 각각과 연관된 세포 표면 항원을 확인함으로써 나이브, 중심 기억, 및 이펙터 세포로 추가로 분류된다. 일부 실시양태에서, 중심 기억 T 세포의 표현형 마커의 발현은 CCR7, CD3, CD28, CD45RO, CD62L, 및 CD127을 포함하고, 이는 그랜자임 B에 대해 음성이다. 일부 실시양태에서, 중심 기억 T 세포는 CD8+, CD45RO+, 및 CD62L+ T 세포이다. 일부 실시양태에서, 이펙터 T 세포는 CCR7, CD28, CD62L, 및 CD127에 대해 음성이고, 그랜자임 B 및 퍼포린에 대해 양성이다. 특정 실시양태에서, CD4+ T 세포는 하위집단으로 추가로 분류된다. 예를 들어, CD4+ T 헬퍼 세포는 세포 표면 항원을 갖는 세포 집단을 확인함으로써 나이브, 중심 기억, 및 이펙터 세포로 분류될 수 있다.
일부 실시양태에서, 면역 세포, 예를 들어, T 세포는 공지된 방법을 사용하여 단리 후 유전자 변형되거나, 또는 면역 세포는 유전자 변형 전에 시험관내 활성화 및 확장된다 (또는 전구세포의 경우에 분화됨). 또 다른 실시양태에서, 면역 세포, 예를 들어, T 세포는 본원에 기재된 키메라 항원 수용체에 의해 유전자 변형되고 (예를 들어, CAR을 코딩하는 1개 이상의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 바이러스 벡터에 의해 형질도입되고), 시험관내 활성화 및/또는 확장된다. T 세포를 활성화 및 확장하는 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있고, 예를 들어, 미국 특허 번호 6,905,874; 6,867,041; 및 6,797,514; 및 PCT 공개 번호 WO 2012/079000에 기재되어 있고, 그의 내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 일반적으로, 이러한 방법은 적절한 시토카인, 예컨대 IL-2를 함유하는 배양 배지 중에서 PBMC 또는 단리된 T 세포를, 일반적으로 비드 또는 다른 표면에 부착된 자극제 및 공동자극제, 예컨대 항-CD3 및 항-CD28 항체와 접촉시키는 것을 포함한다. 동일한 비드에 부착된 항-CD3 및 항-CD28 항체는 "대용물" 항원 제시 세포 (APC)로서의 역할을 한다. 하나의 예는 인간 T 세포의 생리학적 활성화를 위한 CD3/CD28 활성화제/자극제 시스템인 더 디나비즈(The Dynabeads)® 시스템이다. 다른 실시양태에서, T 세포는 미국 특허 번호 6,040,177 및 5,827,642 및 PCT 공개 번호 WO 2012/129514에 기재된 것과 같은 방법을 사용하여, 피더 세포 및 적절한 항체 및 시토카인에 의해 활성화되고 증식하도록 자극되며, 상기 문헌의 내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
특정 실시양태에서, T 세포는 공여자 대상체로부터 수득된다. 일부 실시양태에서, 공여자 대상체는 암 또는 종양을 앓고 있는 인간 환자이다. 다른 실시양태에서, 공여자 대상체는 암 또는 종양을 앓고 있지 않는 인간 환자이다.
본 발명의 다른 측면은 본원에 기재된 폴리뉴클레오티드, 본원에 기재된 벡터, 본원에 기재된 폴리펩티드, 또는 본원에 기재된 시험관내 세포를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 조성물은 제약상 허용되는 담체, 희석제, 가용화제, 유화제, 보존제 및/또는 아주반트를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 부형제를 포함한다. 한 실시양태에서, 조성물은 본원에 기재된 말단절단된 힌지 도메인 ("THD")을 포함하는 CAR 또는 TCR을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 조성물은 본 발명의 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩된 TCD를 포함하는 CAR 또는 TCR을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 조성물은 본원에 기재된 TCD를 포함하는 CAR 또는 TCR을 포함하는 T 세포를 포함한다.
다른 실시양태에서, 조성물은 비경구 전달을 위해, 흡입을 위해, 또는 소화관를 통한, 예컨대 경구로의 전달을 위해 선택된다. 이러한 제약상 허용되는 조성물의 제조는 관련 기술분야의 통상의 기술자의 능력 내에 있다. 특정 실시양태에서, 조성물을 생리학적 pH 또는 약간 더 낮은 pH, 전형적으로 약 5 내지 약 8의 pH 범위 내로 유지시키기 위해 완충제가 사용된다. 특정 실시양태에서, 비경구 투여가 고려되는 경우에, 조성물은 제약상 허용되는 비히클 중, 추가의 치료제의 존재 또는 부재 하에, 본원에 기재된 조성물을 포함하는 발열원 무함유, 비경구로 허용되는 수용액의 형태로 존재한다. 특정 실시양태에서, 비경구 주사를 위한 비히클은 멸균 증류수이고, 여기서 본원에 기재된 조성물은, 적어도 1종의 추가의 치료제의 존재 또는 부재 하에, 적절하게 보존된 멸균, 등장성 용액으로서 제제화된다. 특정 실시양태에서, 제제는 생성물의 제어 또는 지속 방출을 제공하는 중합체 화합물 (예컨대 폴리락트산 또는 폴리글리콜산), 비드 또는 리포솜을 사용하여 목적하는 분자를 제제화하는 것을 수반하고, 이어서 이는 데포 주사를 통해 전달된다. 특정 실시양태에서, 이식형 약물 전달 장치는 목적하는 분자를 도입하는데 사용된다.
III. 본 발명의 방법
본 발명의 또 다른 측면은 세포를 본원에 개시된 폴리뉴클레오티드로 적합한 조건 하에 형질도입하는 것을 포함하는, CAR 또는 TCR을 발현하는 세포를 제조하는 방법에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 방법은 세포를 본원에 개시된 바와 같은 CAR 또는 TCR을 코딩하는 폴리뉴클레오티드로 형질도입하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 세포를 CAR 또는 TCR을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터로 형질도입하는 것을 포함한다.
본 발명의 또 다른 측면은 본원에 기재된 폴리뉴클레오티드, 본원에 기재된 벡터, 또는 본원에 기재된 CAR 또는 TCR을 포함하는 세포의 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 종양에 대한 면역을 유도하는 방법에 관한 것이다. 한 실시양태에서, 방법은 본원에 개시된 CAR 또는 TCR을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 세포의 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 방법은 본원에 개시된 CAR 또는 TCR을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 포함하는 세포의 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 방법은 본원에 개시된 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩된 CAR 또는 TCR을 포함하는 세포의 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함한다.
본 발명의 또 다른 측면은 본 출원의 조작된 면역 세포의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 면역 반응을 유도하는 방법에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 면역 반응은 T 세포-매개된 면역 반응이다. 일부 실시양태에서, T 세포-매개된 면역 반응은 1개 이상의 표적 세포에 대해 지시된다. 일부 실시양태에서, 조작된 면역 세포는 CAR 또는 TCR을 포함하며, 여기서 CAR 또는 TCR은 본 개시내용에 기재된 THD를 포함한다. 일부 실시양태에서, 표적 세포는 종양 세포이다.
본 발명의 또 다른 측면은 유효량의 적어도 1종의 면역 세포를 악성종양의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 악성종양을 치료 또는 예방하는 방법에 관한 것이며, 여기서 면역 세포는 적어도 1종의 CAR 또는 TCR을 포함하고, 여기서 CAR 또는 TCR은 본원에 기재된 THD를 포함한다.
본 발명의 또 다른 측면은 본원에 개시된 폴리뉴클레오티드, 벡터, CAR 또는 TCR, 세포, 또는 조성물을 암의 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 암을 치료하는 방법에 관한 것이다. 한 실시양태에서, 방법은 CAR 또는 TCR을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 방법은 CAR 또는 TCR을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 방법은 본원에 개시된 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩된 CAR 또는 TCR을 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 방법은 CAR 또는 TCR을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 세포, 또는 CAR 또는 TCR을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 투여하는 것을 포함한다.
일부 실시양태에서, 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법은 T 세포 요법을 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 T 세포 요법은 조작된 자가 세포 요법 (eACT™)이다. 이러한 실시양태에 따르면, 방법은 환자로부터 혈액 세포를 수집하는 것을 포함할 수 있다. 단리된 혈액 세포 (예를 들어, T 세포)는 이어서 본 발명의 CAR 또는 TCR을 발현하도록 조작될 수 있다. 특정한 실시양태에서, CAR T 세포 또는 TCR T 세포는 환자에게 투여된다. 일부 실시양태에서, CAR T 세포 또는 TCR T 세포는 환자에서 종양 또는 암을 치료한다. 한 실시양태에서 CAR T 세포 또는 TCR T 세포는 종양 또는 암의 크기를 감소시킨다.
일부 실시양태에서, T 세포 요법에 사용하기 위한 공여자 T 세포는 (예를 들어, 자가 T 세포 요법을 위해) 환자로부터 수득된다. 다른 실시양태에서, T 세포 요법에 사용하기 위한 공여자 T 세포는 환자가 아닌 대상체로부터 수득된다.
T 세포는 치료 유효량으로 투여될 수 있다. 예를 들어, T 세포의 치료 유효량은 적어도 약 104개 세포, 적어도 약 105개 세포, 적어도 약 106개 세포, 적어도 약 107개 세포, 적어도 약 108개 세포, 적어도 약 109개, 또는 적어도 약 1010개일 수 있다. 또 다른 실시양태에서, T 세포의 치료 유효량은 약 104개 세포, 약 105개 세포, 약 106개 세포, 약 107개 세포, 또는 약 108개 세포이다. 하나의 특정한 실시양태에서, CAR T 세포 또는 TCR T 세포의 치료 유효량은 약 2 X 106 세포/kg, 약 3 X 106 세포/kg, 약 4 X 106 세포/kg, 약 5 X 106 세포/kg, 약 6 X 106 세포/kg, 약 7 X 106 세포/kg, 약 8 X 106 세포/kg, 약 9 X 106 세포/kg, 약 1 X 107 세포/kg, 약 2 X 107 세포/kg, 약 3 X 107 세포/kg, 약 4 X 107 세포/kg, 약 5 X 107 세포/kg, 약 6 X 107 세포/kg, 약 7 X 107 세포/kg, 약 8 X 107 세포/kg, 또는 약 9 X 107 세포/kg이다.
IV. 암 치료
본 발명의 방법은 대상체에서 암을 치료하거나, 종양의 크기를 감소시키거나, 종양 세포를 사멸시키거나, 종양 세포 증식을 방지하거나, 종양의 성장을 방지하거나, 환자로부터 종양을 제거하거나, 종양의 재발을 방지하거나, 종양 전이를 방지하거나, 환자에서 완화를 유도하거나, 또는 그의 임의의 조합을 위해 사용될 수 있다. 특정 실시양태에서, 방법은 완전 반응을 유도한다. 다른 실시양태에서, 방법은 부분 반응을 유도한다.
치료될 수 있는 암은 혈관화되지 않거나, 실질적으로 혈관화되지 않거나, 또는 혈관화되는 종양을 포함한다. 암은 또한 고형 또는 비-고형 종양을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 암은 혈액암이다. 일부 실시양태에서, 암은 백혈구 암이다. 다른 실시양태에서, 암은 형질 세포 암이다. 일부 실시양태에서, 암은 백혈병, 림프종, 또는 골수종이다. 특정 실시양태에서, 암은 급성 림프모구성 백혈병 (ALL) (비 T 세포 ALL 포함), 급성 림프성 백혈병 (ALL), 및 혈구포식성 림프조직구증식증 (HLH)), B 세포 전림프구성 백혈병, B-세포 급성 림프성 백혈병 ("BALL"), 모구성 형질세포양 수지상 세포 신생물, 버킷 림프종, 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수 백혈병 (CML), 만성 골수성 백혈병 (CML), 만성 또는 급성 육아종성 질환, 만성 또는 급성 백혈병, 미만성 대 B 세포 림프종, 미만성 대 B 세포 림프종 (DLBCL), 여포성 림프종, 여포성 림프종 (FL), 모발상 세포 백혈병, 혈구포식성 증후군 (대식세포 활성화 증후군 (MAS), 호지킨병, 대세포 육아종, 백혈구 부착 결핍, 악성 림프증식성 상태, MALT 림프종, 외투 세포 림프종, 변연부 림프종, 의미 불명의 모노클로날 감마글로불린병증 (MGUS), 다발성 골수종, 골수이형성증 및 골수이형성 증후군 (MDS), 급성 골수성 백혈병 (AML)을 포함하나 이에 제한되지는 않는 골수성 질환, 비-호지킨 림프종 (NHL), 형질 세포 증식성 장애 (예를 들어, 무증상 골수종 (증상이 없는 다발성 골수종 또는 무통성 골수종), 형질모구성 림프종, 형질세포양 수지상 세포 신생물, 형질세포종 (예를 들어, 형질 세포 이혼화증; 고립 골수종; 고립 형질세포종; 수질외 형질세포종; 및 다발성 형질세포종), POEMS 증후군 (크로우-푸카세 증후군; 다카츠키병; PEP 증후군), 원발성 종격 대 B 세포 림프종 (PMBC), 소세포- 또는 대세포-여포성 림프종, 비장 변연부 림프종 (SMZL), 전신 아밀로이드 경쇄 아밀로이드증, T-세포 급성 림프성 백혈병 ("TALL"), T-세포 림프종, 형질전환된 여포성 림프종, 발덴스트롬 마크로글로불린혈증, 또는 그의 조합이다.
한 실시양태에서, 암은 골수종이다. 하나의 특정한 실시양태에서, 암은 다발성 골수종이다. 또 다른 실시양태에서, 암은 백혈병이다. 한 실시양태에서, 암은 급성 골수성 백혈병이다.
일부 실시양태에서, 방법은 화학요법제를 투여하는 것을 추가로 포함한다. 특정 실시양태에서, 선택된 화학요법제는 림프구고갈 (사전조건화) 화학요법제이다. 유익한 사전조건화 치료 요법은, 상관되는 유익한 바이오마커와 함께, 미국 특허 가출원 번호 62/262,143 및 62/167,750에 기재되어 있고, 이는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 이는, 예를 들어, T 세포 요법을 필요로 하는 환자에게 명시된 유익한 용량의 시클로포스파미드 (200 mg/m2/일 내지 2000 mg/m2/일) 및 명시된 유익한 용량의 플루다라빈 (20 mg/m2/일 내지 900 mg/m2/일)을 투여하는 것을 포함하는, 상기 환자를 조건화하는 방법을 기재한다. 하나의 이러한 용량 요법은 환자에게 치료 유효량의 조작된 T 세포를 투여하기 전 3일 동안 환자에게 약 500 mg/m2/일의 시클로포스파미드 및 약 60 mg/m2/일의 플루다라빈을 매일 투여하는 것을 포함하는, 환자를 치료하는 것을 수반한다.
다른 실시양태에서, 항원 결합 분자, 형질도입된 (또는 달리 조작된) 세포 (예컨대 CAR 또는 TCR), 및 화학요법제는 각각 대상체에서 질환 또는 상태를 치료하는데 효과적인 양으로 투여된다.
특정 실시양태에서, 본원에 개시된 CAR- 및/또는 TCR-발현 면역 이펙터 세포를 포함하는 조성물은 임의의 수의 화학요법제와 함께 투여될 수 있다. 화학요법제의 예는 알킬화제 예컨대 티오테파 및 시클로포스파미드 (시톡산(CYTOXAN)™); 알킬 술포네이트 예컨대 부술판, 임프로술판 및 피포술판; 아지리딘 예컨대 벤조도파, 카르보쿠온, 메투레도파, 및 우레도파; 에틸렌이민 및 메틸라멜라민 예컨대 알트레타민, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포르아미드, 트리에틸렌티오포스포르아미드 및 트리메틸올로멜라민 레주메; 질소 머스타드 예컨대 클로람부실, 클로르나파진, 콜로포스파미드, 에스트라무스틴, 이포스파미드, 메클로레타민, 메클로레타민 옥시드 히드로클로라이드, 멜팔란, 노벰비킨, 페네스테린, 프레드니무스틴, 트로포스파미드, 우라실 머스타드; 니트로스우레아 예컨대 카르무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴, 라니무스틴; 항생제 예컨대 아클라시노마이신, 악티노마이신, 아우트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 칼리케아미신, 카라비신, 카르미노마이신, 카르지노필린, 크로모마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-디아조-5-옥소-L-노르류신, 독소루비신, 에피루비신, 에소루비신, 이다루비신, 마르셀로마이신, 미토마이신, 미코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 포트피로마이신, 퓨로마이신, 쿠엘라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투베르시딘, 우베니멕스, 지노스타틴, 조루비신; 항대사물 예컨대 메토트렉세이트 및 5-플루오로우라실 (5-FU); 폴산 유사체 예컨대 데노프테린, 메토트렉세이트, 프테로프테린, 트리메트렉세이트; 퓨린 유사체 예컨대 플루다라빈, 6-메르캅토퓨린, 티아미프린, 티오구아닌; 피리미딘 유사체 예컨대 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카르모푸르, 시타라빈, 디데옥시우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 플록수리딘, 5-FU; 안드로겐 예컨대 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스타놀, 메피티오스탄, 테스토락톤; 항부신제 예컨대 아미노글루테티미드, 미토탄, 트릴로스탄; 폴산 보충제 예컨대 프롤린산; 아세글라톤; 알도포스파미드 글리코시드; 아미노레불린산; 암사크린; 베스트라부실; 비산트렌; 에다트락세이트; 데포파민; 데메콜신; 디아지쿠온; 엘포르미틴; 엘립티늄 아세테이트; 에토글루시드; 질산갈륨; 히드록시우레아; 렌티난; 로니다민; 미토구아존; 미톡산트론; 모피다몰; 니트라크린; 펜토스타틴; 페나메트; 피라루비신; 포도필린산; 2-에틸히드라지드; 프로카르바진; PSK®; 라족산; 시조피란; 스피로게르마늄; 테누아존산; 트리아지쿠온; 2,2',2"-트리클로로트리에틸아민; 우레탄; 빈데신; 다카르바진; 만노무스틴; 미토브로니톨; 미토락톨; 피포브로만; 가시토신; 아라비노시드 ("Ara-C"); 시클로포스파미드; 티오테파; 탁소이드, 예를 들어 파클리탁셀 (탁솔(TAXOL)™, 브리스톨-마이어스 스큅(Bristol-Myers Squibb)) 및 도세탁셀 (탁소테레(TAXOTERE)®, 롱-프랑 로러(Rhone-Poulenc Rorer)); 클로람부실; 겜시타빈; 6-티오구아닌; 메르캅토퓨린; 메토트렉세이트; 백금 유사체 예컨대 시스플라틴 및 카르보플라틴; 빈블라스틴; 백금; 에토포시드 (VP-16); 이포스파미드; 미토마이신 C; 미톡산트론; 빈크리스틴; 비노렐빈; 나벨빈; 노반트론; 테니포시드; 다우노마이신; 아미노프테린; 젤로다; 이반드로네이트; CPT-11; 토포이소머라제 억제제 RFS2000; 디플루오로메틸로미틴 (DMFO); 레티노산 유도체 예컨대 탈그레틴(Targretin)™ (벡사로텐), 판레틴(Panretin)™, (알리트레티노인); 온탁(ONTAK)™ (데니류킨 디프티톡스); 에스페라미신; 카페시타빈; 및 상기 중 임의의 것의 제약상 허용되는 염, 산 또는 유도체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 CAR- 및/또는 TCR-발현 면역 이펙터 세포를 포함하는 조성물은 종양에 대한 호르몬 작용을 조절하거나 억제하는 작용을 하는 항호르몬제, 예컨대 항에스트로겐 예컨대 예를 들어 타목시펜, 랄록시펜, 아로마타제 억제 4(5)-이미다졸, 4-히드록시타목시펜, 트리옥시펜, 케옥시펜, LY117018, 오나프리스톤, 및 토레미펜 (파레스톤); 및 항안드로겐 예컨대 플루타미드, 닐루타미드, 비칼루타미드, 류프롤리드, 및 고세렐린; 및 상기 중 임의의 것의 제약상 허용되는 염, 산 또는 유도체와 함께 투여될 수 있다. 또한, CHOP, 즉, 시클로포스파미드 (시톡산(Cytoxan)®), 독소루비신 (히드록시독소루비신), 빈크리스틴 (온코빈(Oncovin)®), 및 프레드니손을 포함하나 이에 제한되지는 않는 화학요법제의 조합이 적절한 경우에 투여된다.
일부 실시양태에서, 화학요법제는 조작된 세포 또는 핵산의 투여와 동시에 또는 투여 후 1주 내에 투여된다. 다른 실시양태에서, 화학요법제는 조작된 세포 또는 핵산을 투여하고 1 내지 4주 또는 1주 내지 1개월, 1주 내지 2개월, 1주 내지 3개월, 1주 내지 6개월, 1주 내지 9개월, 또는 1주 내지 12개월 후에 투여된다. 일부 실시양태에서, 화학요법제는 세포 또는 핵산을 투여하기 적어도 1개월 전에 투여된다. 일부 실시양태에서, 방법은 2종 이상의 화학요법제를 투여하는 것을 추가로 포함한다.
다양한 추가의 치료제가 본원에 기재된 조성물과 함께 사용될 수 있다. 예를 들어, 잠재적으로 유용한 추가의 치료제는 PD-1 억제제 예컨대 니볼루맙 (옵디보(OPDIVO)®), 펨브롤리주맙 (키트루다(KEYTRUDA)®), 펨브롤리주맙, 피딜리주맙 (큐어테크(CureTech))및 아테졸리주맙 (로슈(Roche))를 포함한다.
본 발명과 조합하여 사용하기에 적합한 추가의 치료제는 이브루티닙 (임브루비카(IMBRUVICA)®), 오파투무맙 (아르제라(ARZERRA)®), 리툭시맙 (리툭산(RITUXAN)®), 베바시주맙 (아바스틴(AVASTIN)®), 트라스투주맙 (헤르셉틴(HERCEPTIN)®), 트라스투주맙 엠탄신 (카드실라(KADCYLA)®), 이마티닙 (글리벡(GLEEVEC)®), 세툭시맙 (에르비툭스(ERBITUX)®), 파니투무맙 (벡티빅스(VECTIBIX)®), 카투막소맙, 이브리투모맙, 오파투무맙, 토시투모맙, 브렌툭시맙, 알렘투주맙, 겜투주맙, 에를로티닙, 게피티닙, 반데타닙, 아파티닙, 라파티닙, 네라티닙, 악시티닙, 마시티닙, 파조파닙, 수니티닙, 소라페닙, 토세라닙, 레스타우르티닙, 악시티닙, 세디라닙, 렌바티닙, 닌테다닙, 파조파닙, 레고라페닙, 세막사닙, 소라페닙, 수니티닙, 티보자닙, 토세라닙, 반데타닙, 엔트렉티닙, 카보잔티닙, 이마티닙, 다사티닙, 닐로티닙, 포나티닙, 라도티닙, 보수티닙, 레스타우르티닙, 룩솔리티닙, 파크리티닙, 코비메티닙, 셀루메티닙, 트라메티닙, 비니메티닙, 알렉티닙, 세리티닙, 크리조티닙, 아플리베르셉트, 아디포티드, 데니류킨 디프티톡스, mTOR 억제제 예컨대 에베롤리무스 및 템시롤리무스, 헷지호그 억제제 예컨대 소니데깁 및 비스모데깁, CDK 억제제 예컨대 CDK 억제제 (팔보시클립)를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
추가의 실시양태에서, CAR- 및/또는 TCR-함유 면역을 포함하는 조성물은 항염증제와 함께 투여된다. 항염증제 또는 약물은 스테로이드 및 글루코코르티코이드 (베타메타손, 부데소니드, 덱사메타손, 히드로코르티손 아세테이트, 히드로코르티손, 히드로코르티손, 메틸프레드니솔론, 프레드니솔론, 프레드니손, 트리암시놀론 포함), 비스테로이드성 항염증 약물 (NSAID) 예컨대 아스피린, 이부프로펜, 나프록센, 메토트렉세이트, 술파살라진, 레플루노미드, 항-TNF 의약, 시클로포스파미드 및 미코페놀레이트를 포함할 수 있으나 이에 제한되지는 않는다. 예시적인 NSAID는 이부프로펜, 나프록센, 나프록센 소듐, Cox-2 억제제 및 시알릴에이트를 포함한다. 예시적인 진통제는 아세트아미노펜, 옥시코돈, 프로폭시펜 히드로클로라이드의 트라마돌을 포함한다. 예시적인 글루코코르티코이드는 코르티손, 덱사메타손, 히드로코르티손, 메틸프레드니솔론, 프레드니솔론 또는 프레드니손을 포함한다. 예시적인 생물학적 반응 조절제는 세포 표면 마커 (예를 들어, CD4, CD5 등)에 대해 지시된 분자, 시토카인 억제제, 예컨대 TNF 길항제 (예를 들어, 에타네르셉트 (엔브렐(ENBREL)®), 아달리무맙 (휴미라(HUMIRA)®) 및 인플릭시맙 (레미케이드(REMICADE)®), 케모카인 억제제 및 부착 분자 억제제를 포함한다. 생물학적 반응 조절제는 모노클로날 항체 뿐만 아니라 분자의 재조합 형태를 포함한다. 예시적인 DMARD는 아자티오프린, 시클로포스파미드, 시클로스포린, 메토트렉세이트, 페니실라민, 레플루노미드, 술파살라진, 히드록시클로로퀸, 금 (경구 (아우라노핀) 및 근육내), 및 미노시클린을 포함한다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 조성물은 시토카인과 함께 투여된다. 본원에 사용된 "시토카인"은 세포간 매개체로서 또 다른 세포에 대해 작용하는, 하나의 세포 집단에 의해 방출되는 단백질을 지칭하는 것으로 의도된다. 시토카인의 예는 림포카인, 모노카인, 및 전통적인 폴리펩티드 호르몬이다. 시토카인에는 성장 호르몬 예컨대 인간 성장 호르몬, N-메티오닐 인간 성장 호르몬, 및 소 성장 호르몬; 부갑상선 호르몬; 티록신; 인슐린; 프로인슐린; 렐락신; 프로렐락신; 당단백질 호르몬 예컨대 여포 자극 호르몬 (FSH), 갑상선 자극 호르몬 (TSH), 및 황체형성 호르몬 (LH); 간 성장 인자 (HGF); 섬유모세포 성장 인자 (FGF); 프로락틴; 태반 락토겐; 뮬러-억제 물질; 마우스 고나도트로핀-연관 펩티드; 인히빈; 액티빈; 혈관 내피 성장 인자; 인테그린; 트롬보포이에틴 (TPO); 신경 성장 인자 (NGF) 예컨대 NGF-베타; 혈소판-성장 인자; 형질전환 성장 인자 (TGF) 예컨대 TGF-알파 및 TGF-베타; 인슐린-유사 성장 인자-I 및 -II; 에리트로포이에틴 (EPO); 골유도 인자; 인터페론 예컨대 인터페론-알파, 베타, 및 -감마; 콜로니 자극 인자 (CSF) 예컨대 대식세포-CSF (M-CSF); 과립구-대식세포-CSF (GM-CSF); 및 과립구-CSF (G-CSF); 인터류킨 (IL) 예컨대 IL-1, IL-1알파, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12; IL-15, 종양 괴사 인자 예컨대 TNF-알파 또는 TNF-베타; 및 LIF 및 kit 리간드 (KL)를 포함한 다른 폴리펩티드 인자가 포함된다. 본원에 사용된 용어 시토카인은 천연 공급원으로부터의 또는 재조합 세포 배양으로부터의 단백질, 및 천연 서열 시토카인의 생물학적 활성 등가물을 포함한다.
본 명세서에 언급된 모든 공개, 특허 및 특허 출원은, 각각의 개별 공개, 특허 또는 특허 출원이 참조로 포함되는 것으로 구체적이고 개별적으로 명시된 바와 동일한 정도로 본원에 참조로 포함된다. 그러나, 본원의 참고문헌의 인용은 이러한 참고문헌이 본 발명에 대한 선행 기술이라는 것을 인정하는 것으로서 해석되어서는 안된다. 참조로 포함된 참고문헌에 제공된 임의의 정의 또는 용어가 본원에서 제공되는 용어 및 논의와 상이한 경우에는, 본원의 용어 및 정의가 적용된다.
본 발명은 하기 실시예에 의해 추가로 예시되며, 이는 추가의 제한으로 해석되어서는 안된다. 본 출원 전반에 걸쳐 인용된 모든 참고문헌의 내용은 명백히 본원에 참조로 포함된다.
실시예
실시예 1
T7 프로모터, CAR 구축물 및 베타 글로빈 안정화 서열을 코딩하는 플라스미드를, 10 μg DNA를 EcoRI 및 BamHI (NEB)로 밤새 소화시켜 선형화하였다. 이어서 DNA를 프로테이나제 K (써모 피셔(Thermo Fisher), 600 U/ml)로 50℃에서 2시간 동안 소화시키고, 페놀/클로로포름으로 정제하고, 아세트산나트륨 및 2 부피의 에탄올을 첨가하여 침전시켰다. 이어서 펠릿을 건조시키고, RNAse/DNAse-무함유 물 중에 재현탁시키고, 나노드롭(NanoDrop)을 사용하여 정량화하였다. 이어서 선형 DNA 1 μg을 제조업체의 지침에 따라 m메세지 m머신 T7 울트라(mMESSAGE mMACHINE T7 Ultra) (써모 피셔)를 사용한 시험관내 전사에 사용하였다. RNA를 제조업체의 지침에 따라 메가클리어(MEGAClear) 키트 (써모 피셔)를 사용하여 추가로 정제하고, 나노드롭을 사용하여 정량화하였다. 아가로스 겔 상에서의 이동성을 사용하여 mRNA 완전성을 평가하였다. 건강한 공여자 류코팩 (헤마케어(Hemacare))으로부터 피콜-파크 밀도 원심분리를 제조업체의 지침에 따라 사용하여 PBMC를 단리하였다. R10 배지 + IL-2 (300 IU/ml, 프로류킨(Proleukin)®, 프로메테우스(Prometheus)® 테라퓨틱스 앤드 다이아그노스틱스(Therapeutics and Diagnostics)) 중의 OKT3 (50 ng/ml, 밀테니 바이오텍(Miltenyi Biotec))을 사용하여 PBMC를 자극하였다. 자극 7일 후, T 세포를 Opti-MEM 배지 (써모 피셔 사이언티픽) 중에서 2회 세척하고, Opti-MEM 배지 중 2.5x107개 세포/ml의 최종 농도로 재현탁시켰다. 전기천공당 mRNA 10 μg을 사용하였다. 세포의 전기천공을 제미니(Gemini) X2 시스템 (하버드 어패러투스 비티엑스(Harvard Apparatus BTX))을 사용하여 수행하여 2 mm 큐벳 (하버드 어패러투스 비티엑스)에 0.5 ms 동안 단일 400 V 펄스를 전달하였다. 세포를 즉시 R10 + IL-2 배지로 옮기고, 6시간 동안 회복되게 하였다. CAR 발현을 검사하기 위해, T 세포를 염색 완충제 (비디 파밍겐) 중 FLT-=3-HIS (시노 바이올로지칼 인크.(Sino Biological Inc.)) 또는 비오티닐화된 단백질 L (써모 사이언티픽)로 4℃에서 30분 동안 염색하였다. 이어서 세포를 세척하고, 염색 완충제 중 항-HIS-PE (밀테니 바이오텍) 또는 PE 스트렙타비딘 (비디 파밍겐)으로 4℃에서 30분 동안 염색하였다. 이어서 세포를 세척하고, 데이터 획득 전 아이오딘화프로피듐 (비디 파밍겐)을 함유하는 염색 완충제 중에 재현탁시켰다. 전기천공된 T 세포에서의 FLT3 CAR의 발현을 도 3에 제시한다.
T 세포를 10E3, 2E7, 8B5, 4E9, 또는 11F11 항-FLT3 결합 분자, 및 전장 힌지 도메인 (완전한 힌지 도메인 또는 "CHD") 또는 말단절단된 힌지 도메인 ("THD")으로부터 선택된 힌지 영역을 포함하는 항-FLT3 CAR을 코딩하는 플라스미드로 전기천공하였다. 이어서 전기천공된 항-FLT3 CAR T 세포를 R10 배지에서 나말바 (FLT3 음성), EoL1 (FLT3 양성), HL60 (FLT3 양성), 또는 MV4;11 (FLT3 양성) 표적 세포와 1:1 E:T 비로 공동-배양하였다. 공동-배양 16시간 후, 나말바 (도 4a-4f), EoL1 (도 4g-4l), HL60 (도 4m-4r), 및 MV4;11 (4s-4x)으로부터의 상청액을 IFNγ (도 4a, 4b, 4g, 4h, 4m, 4n, 4s, 및 4t), IL-2 (도 4c, 4d, 4i, 4j, 4o, 4p, 4u, 및 4v), 및 TNFα (도 4e, 4f, 4k, 4l, 4q, 4r, 4w, 및 4x)의 생산에 대해 루미넥스 (이엠디 밀리포어(EMD Millipore))에 의해 분석하였다.
표적 세포 생존율을 CD3-음성 세포에 의한 아이오딘화프로피듐 (PI) 흡수의 유동 세포측정 분석에 의해 평가하였다. 전기천공된 항-FLT3 CAR T 세포를 나말바 (도 5a-5b), EoL1 (도 5c-5d), HL60 (도 5e-5f, 및 MV4;11 (5g-5h) 표적 세포와 공동-배양 16시간 후에 공동-배양하였다.
실시예 2
상이한 CAR 구축물을 함유하는 제3 세대 렌티바이러스 전달 벡터를 비라파워(ViraPower) 렌티바이러스 패키징 믹스 (라이프 테크놀로지스)와 함께 사용하여 렌티바이러스 상청액을 생성하였다. 간략하게, DNA 15 μg 및 폴리에틸렌이민 (폴리사이언시스, 1 mg/ml) 22.5 μl를 OptiMEM 배지 600 μl 중에서 혼합하여 형질감염 믹스를 생성하였다. 믹스를 실온에서 5분 동안 인큐베이션하였다. 동시에, 293T 세포 (ATCC)를 트립신처리하고, 카운팅하고, 총 10x106개의 총 세포를 형질감염 믹스와 함께 T75 플라스크에 플레이팅하였다. 형질감염 3일 후, 상청액을 수집하고, 0.45 μm 필터를 통해 여과하고, 사용시까지 -80℃에서 저장하였다. 건강한 공여자 류코팩 (헤마케어)으로부터 피콜-파크 밀도 원심분리를 제조업체의 지침에 따라 사용하여 PBMC를 단리하였다. R10 배지 + IL-2 (300 IU/ml, 프로류킨®, 프로메테우스® 테라퓨틱스 앤드 다이아그노스틱스) 중의 OKT3 (50 ng/ml, 밀테니 바이오텍)을 사용하여 PBMC를 자극하였다. 자극 48시간 후, 렌티바이러스를 MOI = 10으로 사용하여 세포를 형질도입시켰다. 세포를 활성 검정에서 사용하기 전에 0.5-2.0 x 106개 세포/ml로 유지시켰다. CAR 발현을 검사하기 위해, T 세포를 염색 완충제 (비디 파밍겐) 중 FLT-3-HIS (시노 바이올로지칼 인크.) 또는 비오티닐화된 단백질 L (써모 사이언티픽)로 4℃에서 30분 동안 염색하였다. 이어서 세포를 세척하고, 염색 완충제 중 항-HIS-PE (밀테니 바이오텍) 또는 PE 스트렙타비딘 (비디 파밍겐)으로 4℃에서 30분 동안 염색하였다. 이어서 세포를 세척하고, 데이터 획득 전 아이오딘화프로피듐 (비디 파밍겐)을 함유하는 염색 완충제 중에 재현탁시켰다. 2명의 건강한 공여자로부터의 T 세포에서의 FLT3 CAR의 발현을 도 6a-6b에 제시한다.
2명의 건강한 공여자로부터의 T 세포를 10E3, 8B5, 또는 11F11 결합 분자, 및 완전한 힌지 도메인 ("CHD"), 말단절단된 힌지 도메인 ("THD"), 및 CD8 힌지 영역으로부터 선택된 힌지 영역을 포함하는 항-FLT3 CAR T 세포를 코딩하는 렌티바이러스 벡터로 형질도입시켰다. 형질도입된 T 세포를 R10 배지에서 표적 세포와 1:1 E:T 비로 공동-배양하였다. 공동-배양 16시간 후, 상청액을 IFNγ (도 7a-7b), TNFα (도 7c-7d), 및 IL-2 (도 7e-7f)의 생산에 대해 루미넥스 (이엠디 밀리포어)에 의해 분석하였다.
표적 세포 생존율을 CD3-음성 세포에 의한 아이오딘화프로피듐 (PI) 흡수의 유동 세포측정 분석에 의해 평가하였다. 나말바 (도 8a), EoL1 (도 8b), MV4;11 (도 8c), 및 HL60 (도 8d) 표적 세포와 함께 공동-배양된 렌티바이러스-형질도입된 CAR T 세포 (2명의 건강한 공여자로부터의 것)의 평균 세포용해 활성을 측정하였다.
FLT3 발현 표적 세포에 반응한 CAR T 세포 증식을 평가하기 위해, R10 배지에서 표적 세포와 1:1 E:T 비로 공동-배양하기 전에 T 세포를 CFSE로 표지하였다. 5일 후, T 세포 증식을 CFSE 희석의 유동 세포측정 분석에 의해 평가하였다. FLT3 CAR T 세포의 증식을 도 9a-9b에 제시한다.
실시예 3
생체내 항백혈병 활성을 검사하기 위해, 인간 AML의 이종 모델에 사용하기 위한 FLT3 CAR T 세포를 생성하였다. 인간 AML의 이종 모델에 사용된 다양한 이펙터 라인의 CAR 발현을 도 10a-10d에 제시한다. 루시페라제-표지된 MV4;11 세포 (2 x 106개 세포/동물)를 5 내지 6주령의 암컷 NSG 마우스에게 정맥내로 주사하였다. 6일 후, 200 μl PBS 중 6 x 106개 T 세포 (~50% CAR+)를 정맥내로 주사하고, 동물의 종양 부담을 생물발광 영상화 (도 10e-10g)를 사용하여 매주 측정하였다. 대조군 (모의) 또는 10E3-CHD (도 10h), 10E3-THD (도 10i), 또는 8B5-THD (도 10j) 발현 CAR T 세포의 주사에 의해 생존 분석을 수행하였다.
실시예 4
T 세포를 항-CLL-1 CAR 구축물 24C8_HL-CHD CAR (공동자극 단백질의 완전한 힌지 도메인 포함) 및 24C8_HL-THD CAR (공동자극 단백질의 말단절단된 힌지 도메인 포함)을 코딩하는 플라스미드로 전기천공시켰다. 전기천공된 T 세포에 의한 항-CLL-1 발현을 도 11a-11d에 제시한다. 이어서 mRNA 전기천공 6시간 후 항-CLL-1 CAR T 세포를 R10 배지에서 표적 나말바 (ATCC; CLL-1 음성), U937 (ATCC; CLL-1 양성), HL-60 (ATCC; CLL-1 양성), EoL-1 (시그마; CLL-1 양성), KG1a (ATCC; CLL-1 양성) 및 MV4;11 (ATCC; CLL-1 양성) 세포와 1:1 E:T 비로 배양하였다. 공동-배양 16시간 후, 상청액을 IL-2 (도 12a), IFNγ (도 12b), 및 TNFα (도 12c)의 생산에 대해 루미넥스 (이엠디 밀리포어)에 의해 제조업체의 지침에 따라 분석하였다.
표적 세포 생존율을 아이오딘화프로피듐 (PI) 흡수의 유동 세포측정 분석에 의해 평가하였다. 전기천공된 항-CLL-1 CAR T 세포를 나말바 (도 13a), MV4;11 (도 13b), EoL-1 (도 13c), HL-60 (도 13d), 또는 U937 (도 13e) 표적 세포와 16시간 동안 공동-배양하였다. 예상된 바와 같이, 항-CLL-1 CAR T 세포와 공동-배양된 나말바 세포는 대조군에 비해 표적 세포 생존율에서 거의 변화를 나타내지 않았다 (도 13a). 그러나, 24C8_HL-CHD 및 24C8_HL-THD T 세포와 공동-배양된 MV;411 세포에서 대조군에 비해 증가된 세포용해 활성이 관찰되었고, 24C8_HL-THD T 세포 공동-배양에서 보다 큰 표적 세포 세포용해 활성이 관찰되었다 (도 13b). 또한, 24C8_HL-CHD 및 24C8_HL-THD T 세포와 공동-배양된 EoL-1 세포에서 대조군에 비해 증가된 세포용해 활성이 관찰되었다 (도 13c). 24C8_HL-CHD 및 24C8_HL-THD T 세포와 공동-배양된 HL-60 세포에서 대조군에 비해 증가된 세포용해 활성이 관찰되었다 (도 13d). 24C8_HL-CHD 및 24C8_HL-THD T 세포와 공동-배양된 U937 세포에서 대조군에 비해 증가된 세포용해 활성이 관찰되었고, 24C8_HL-THD T 세포 공동-배양에서 보다 큰 표적 세포 세포용해 활성이 관찰되었다 (도 13e).
실시예 5
공동자극 단백질의 말단절단된 힌지 도메인 ("THD"), 10E3_THD 또는 24C1_LH_THD를 갖는 항-CLL-1 CAR 구축물을 포함하는 렌티바이러스 벡터로 형질도입된 T 세포를, T 세포 자극 12일 후에 R10 배지에서 나말바, U937, HL-60, EoL-1, KG1a 및 MV4;11 표적 세포와 1:1 E:T 비로 공동-배양하였다. 공동-배양 16시간 후, 상청액을 표시된 바와 같은 이펙터 10E3_THD CAR T 세포 및 24C1_LH_THD CAR T 세포와 표적 나말바, HL-60, 또는 MVA;11 세포의 공동-배양 중 시토카인 IFNγ (도 14a), IL-2 (도 14b), 및 TNFα (도 14c)의 생산에 대해 루미넥스 (이엠디 밀리포어)에 의해 제조업체의 지침에 따라 분석하였다.
표적 세포 생존율을 아이오딘화프로피듐 (PI) 흡수의 유동 세포측정 분석에 의해 평가하였다. 형질도입된 이펙터 24C1_LH_THD CAR T 세포를 나말바, U937, HL-60, EoL-1, KG1a, 또는 MV4;11 표적 세포와 16시간 또는 40시간 동안 공동-배양하였다. 나말바 표적 세포와 형질도입된 C1_24C1_LH_THD CAR T 세포의 공동-배양은 모의 대조군과 비교하여 16시간 및 40시간에서 생존 나말바 표적 세포의 퍼센트에 대해 어떠한 영향도 미치지 않았다 (도 15a). 그러나, MV4;11 (도 15b) 또는 HL-60 (도 15c) 표적 세포와 공동-배양된 C1_24C1_LH_THD CAR T 세포는 모의 대조군과 비교하여 16시간 및 40시간 둘 다에서 보다 낮은 퍼센트의 생존 표적 세포를 야기하였다.
실시예 6
공동자극 단백질의 말단절단된 힌지 도메인 ("THD")을 포함하는 항-BCMA CAR 구축물로 형질도입된 CAR T 세포를 T 세포 자극 12일 후 R10 배지에서 표적 세포와 1:1 이펙터 세포 대 표적 세포 (E:T) 비로 배양하였다. 시험된 세포주는 EoL-1 (시그마; BCMA 음성), NCI-H929 (몰레큘라 이미징; BCMA 양성), 및 MM1S (몰레큘라 이미징; BCMA 양성)를 포함하였다. 공동-배양 16시간 후, 상청액을 시토카인 IFNγ (도 16a-16b), TNFα (도 16c-16d), 및 IL-2 (도 16e-16f)의 생산에 대해 루미넥스 (이엠디 밀리포어)에 의해 제조업체의 지침에 따라 분석하였다. IFNγ (도 16a-16b), TNFα (도 16c-16d), 및 IL-2 (도 16e-16f)는 둘 다의 공여자에서 시험된 각각의 항-BCMA CAR T 세포의 경우에 NCI-H929 및 MM1S 표적 세포 공동-배양의 상청액에서 관찰되었지만 (도 16a-16b); IFNγ (도 16a-16b), TNFα (도 16c-16d), 및 IL-2 (도 16e-16f)는 IR 음성 대조군 T 세포의 경우에 오직 EoL-1 표적 세포 공동-배양의 상청액에서만 배경을 초과하여 관찰되었다 (도 16a).
표적 세포 생존율을 CD3 음성 세포의 아이오딘화프로피듐 (PI) 흡수의 유동 세포측정 분석에 의해 평가하였다. 항-BCMA CAR T 세포를 EoL1 (도 17a-17b), NCI-H929 (도 17c-17d), 또는 MM1S (도 17e-17f) 표적 세포와 16시간, 40시간, 64시간, 88시간, 또는 112시간 동안 공동-배양하였다. 항-BCMA CAR T 세포의 경우에 EoL-1 공동-배양에서는 어떠한 시간에서도 세포용해 활성이 거의 관찰되지 않았다 (도 17a-17b). 그러나, 항-BCMA CAR T 세포 및 NCI-H929 또는 MM1S 표적 세포의 공동-배양은 각각의 항-BCMA CAR T 세포에 대해 측정한 각각의 시점에서 생존 표적 세포의 백분율에서의 감소를 야기하였다.
증식을 검사하기 위해, 항-BCMA CAR T 세포를 카르복시플루오레세인 숙신이미딜 에스테르 (CFSE)로 표지한 후, R10 배지에서 EoL-1, NCI-H929, 또는 MM1S 표적 세포와 1:1 E:T 비로 공동-배양하였다. 5일 후, CFSE 희석의 유동 세포측정 분석에 의해 T 세포 증식을 평가하였다 (도 18a-18b).
실시예 7
증진된 안정성은 단백질의 목적하는 특성이다. 이는 종종 단백질의 용융 온도를 다양한 조건 하에서 결정함으로써 평가된다. 보다 높은 용융 온도를 갖는 단백질은 일반적으로 보다 긴 시간 동안 안정하다. CAR이 보다 열안정성이면, 이는 세포의 표면 상에서 보다 긴 기간 동안 기능적으로 활성일 수 있다.
보다 긴 힌지 도메인, 즉, 완전한 힌지 도메인 ("CHD")을 갖는 CAR 세포외 도메인 (ECD)의 열적 안정성 및 말단절단된 힌지 도메인 ("THD")을 갖는 CAR ECD의 열적 안정성을 바이오-래드(Bio-Rad) C1000 써멀 사이클러, CFx96 실시간 시스템을 사용하여 측정하였다. 단백질이 언폴딩됨에 따라 용매 노출되게 되는 소수성 아미노산에 결합하는 형광 염료 SYPRO 오렌지 (인비트로젠(Invitrogen))를 사용하여 단백질의 언폴딩을 모니터링하였다. 온도 구배는 25℃에서 95℃로 1℃ / 1분 증분으로 설정하였다. 각각의 샘플은 10 μM 재조합 CAR ECD 단백질 및 5X SYPRO 오렌지 (몰레큘라 프로브스(Molecular Probes)™ 사이프로(SYPRO)™ 오렌지 단백질 겔 염색 (DMSO 중 5,000X 농축))를 함유하였다. 검정은 PBS 중에서 50 mM NaCl의 존재 또는 부재 하에 수행하였다.
도 19a 및 도 19b에 제시된 바와 같이, THD를 갖는 CAR의 ECD는, 예를 들어 IEVMYPPPY (서열식별번호: 250) 모티프를 포함하는 CHD를 갖는 CAR의 ECD와 비교하여 증진된 열안정성을 나타내었다. 본 실시예에 기재된 이들 방법은 CAR을 코딩하는 mRNA 및 CAR 그 자체의 안정성을 시험하기 위한 유용한 방법이며, 이는 T 세포가 CAR을 코딩하는 mRNA로 형질도입되면, 형질도입된 T 세포는 CAR을 발현할 것이고, 개별 mRNA 또는 단백질의 안정성은 용이하게 평가될 수 없기 때문이다.
SEQUENCE LISTING <110> KITE PHARMA, INC. <120> CHIMERIC ANTIGEN AND T CELL RECEPTORS AND METHODS OF USE <130> K-1031.02US <140> 15/475,681 <141> 2017-03-31 <150> 62/317,258 <151> 2016-04-01 <160> 284 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 220 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Leu Arg Leu Leu Leu Ala Leu Asn Leu Phe Pro Ser Ile Gln Val 1 5 10 15 Thr Gly Asn Lys Ile Leu Val Lys Gln Ser Pro Met Leu Val Ala Tyr 20 25 30 Asp Asn Ala Val Asn Leu Ser Cys Lys Tyr Ser Tyr Asn Leu Phe Ser 35 40 45 Arg Glu Phe Arg Ala Ser Leu His Lys Gly Leu Asp Ser Ala Val Glu 50 55 60 Val Cys Val Val Tyr Gly Asn Tyr Ser Gln Gln Leu Gln Val Tyr Ser 65 70 75 80 Lys Thr Gly Phe Asn Cys Asp Gly Lys Leu Gly Asn Glu Ser Val Thr 85 90 95 Phe Tyr Leu Gln Asn Leu Tyr Val Asn Gln Thr Asp Ile Tyr Phe Cys 100 105 110 Lys Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser 115 120 125 Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro 130 135 140 Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu 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Sequence: Synthetic peptide <220> <223> VL CDR3 <400> 54 Met Gln Gly Leu Gly Leu Pro Leu Thr 1 5 <210> 55 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <223> VL CDR3 <400> 55 Gln Gln Tyr Ala Ala Tyr Pro Thr 1 5 <210> 56 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <223> VL CDR3 <400> 56 Gln Gln Arg His Val Trp Pro Pro Thr 1 5 <210> 57 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <223> VL CDR3 <400> 57 Gln Gln Arg Phe Tyr Tyr Pro Trp Thr 1 5 <210> 58 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <223> VL CDR3 <400> 58 Gln Gln Ile Tyr Thr Phe Pro Phe Thr 1 5 <210> 59 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <223> VL CDR3 <400> 59 Gln Gln 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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <220> <223> VH DNA <400> 64 cagctgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcactg tctctggtgg ctccatcagc agtagtagtt actactgggg ctggatccgc 120 cagcccccag ggaaggggct ggagtggatt gggagtatct cctatagtgg gagcacctac 180 tacaacccgt ccctcaagag tcgagtcacc atatccgtag acacgtccaa gaaccagttc 240 tccctgaagc tgagttctgt gaccgccgca gacacggcgg tgtactactg cgccagaggc 300 aggggatatg caaccagctt agccttcgat atctggggtc agggtacaat ggtcaccgtc 360 tcctca 366 <210> 65 <211> 357 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <220> <223> VH DNA <400> 65 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatagca tgaactgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtttcaacc attagtagta gtagtagtac catatactac 180 gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa ctcactgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac 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polynucleotide <220> <223> VL DNA <400> 69 gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc aggtacttag cctggtacca acagaaacct 120 ggccaggctc ccaggctcct catctatgat gcatccaaca gggccactgg catcccagcc 180 aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctagagcct 240 gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag agaatctcct ggcctttcac ttttggcgga 300 gggaccaagg ttgagatcaa a 321 <210> 70 <211> 336 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <220> <223> VL DNA <400> 70 gatattgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60 atctcctgca ggtctagtca gagcctcctg catagtaatg gatacaacta tttggattgg 120 tacctgcaga agccagggca gtctccacag ctcctgatct atttgggttc taatcgggcc 180 tccggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggca cagattttac actgaaaatc 240 agcagagtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgca tgcagggact cggcctccct 300 ctcacttttg gcggagggac caaggttgag atcaaa 336 <210> 71 <211> 318 <212> DNA 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Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <223> VL Protein <400> 85 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Arg Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ile Ser Trp Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 86 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <223> VL Protein <400> 86 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn 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Sequence: Synthetic polypeptide <220> <223> VL Protein <400> 88 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg His Val Trp Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 89 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <223> VL Protein <400> 89 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Arg Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 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Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <223> VH CDR2 <400> 97 Tyr Tyr Ser Gly Ser 1 5 <210> 98 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <223> VH CDR2 <400> 98 His His Ser Gly Ser 1 5 <210> 99 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <223> VH CDR2 <400> 99 Asp Pro Glu Asp Gly Glu 1 5 <210> 100 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <223> VH CDR2 <400> 100 Ser Tyr Asp Gly Ser Asp 1 5 <210> 101 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <223> VH CDR3 <400> 101 Leu Val Tyr Cys Gly Gly Asp Cys Tyr Ser Gly Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 102 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <223> VH CDR3 <400> 102 Leu Val Tyr Cys 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Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <220> <223> VH DNA <400> 119 caggtccaac tggtgcagtc cggagccgaa gtcaagaaac caggtgcctc cgttaaagtg 60 agttgcaaag tctctggata cactctgacc gagctctcta tgcactgggt ccggcaggcc 120 cccggcaagg gattggaatg gatgggcggg ttcgatcctg aggacggaga gactatctac 180 gctcaaaaat tccagggacg agtgactgtg accgaagaca ctagtaccga cactgcctac 240 atggaacttt cctctctgcg atcagaagat accgcagtgt actactgtgc tactgaatct 300 aggggcattg gatggcccta cttcgattac tggggtcagg gaactctggt gactgtctcc 360 agc 363 <210> 120 <211> 351 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <220> <223> VH DNA <400> 120 caggtccagt tggtcgaaag tggcggtggt gtagtgcagc cgggccgcag tttgaggctt 60 tcctgtgcgg cttcaggctt tactttttcc agctatggaa tgcactgggt gcggcaggcc 120 cccggcaaag gacttgagtg ggtggccgtc atttcttatg acggatcaga taagtactac 180 gtggacagcg tcaagggcag attcaccatc tctagggaca acagtaaaaa tagactctac 240 ctccagatga atagcctcag agctgaagac acggccgtct actattgtgc tcgggagcgg 300 tatagtggca gagactactg ggggcagggc acactcgtta cagtgagtag c 351 <210> 121 <211> 324 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <220> <223> VL DNA <400> 121 gacatccagt tgacacagag cccgagttcc ttgtccgcct ccgtcgggga tagagtgtca 60 tttacctgtc aggcctctca ggatattaat aactttctga attggtatca gcaaaagccc 120 ggaaaggcac ccaagctgtt gatttacgac gccagtaacc tggagacagg cgtgccctcc 180 cggtttagtg gtagcggaag cggtacggat tttaccttta ctatcagctc tctccaaccc 240 gaagacattg caacctacta ttgtcaacaa tatggaaacc tgccttttac atttggcggc 300 ggcaccaagg tggagattaa gcgg 324 <210> 122 <211> 324 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <220> <223> VL DNA <400> 122 gatatccagc tcactcaaag cccctctagt ctctctgcct cagtggggga tcgggtcagt 60 tttacttgtc aagcttcaca ggatatcaac aacttcctta attggtatca gcagaagcca 120 ggaaaagcac ccaagctgct catctatgat gcctcaaatt tggagacggg tgttcccagt 180 cgattctctg ggtcagggtc cgggaccgac tttacgttta cgatctcctc tctgcagccc 240 gaagacatcg ccacatacta ttgtcaacag tacggcaact tgcctttcac atttgggggc 300 gggactaagg ttgaaatcaa gagg 324 <210> 123 <211> 324 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <220> <223> VL DNA <400> 123 gatattcaga tgactcaatc tccttcttct ctgtccgctt ccgtgggcga tagagtgacc 60 attacttgta gggcgtccca gtcaatctcc agttatttga attggtatca gcagaagccc 120 gggaaagcac ctaagctgtt gatcagcggg gcttctagcc tgaagagtgg ggtaccttca 180 cggttcagcg gaagcggaag cggaaccgat ttcaccctga ctatcagcag cctgccacct 240 gaggactttg caacttacta ctgccaacag tcatacagca ctccgatcac tttcggccag 300 ggcacccggc tcgaaatcaa gcgc 324 <210> 124 <211> 324 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <220> <223> VL DNA <400> 124 gagattgtta tgacccagag tcctgcgacc ctctcagtca gccccgggga gcgcgcaact 60 ttgtcttgca gagctagtca gtccgtgtcc tctcttctga catggtacca gcaaaagccc 120 gggcaggctc cgcgcctttt gatctttggg gcttcaacaa gagccactgg gattcccgca 180 cgattctctg gctccgggag cggtactggt ttcaccctga cgattagcag tctccagagc 240 gaggacttcg ccgtatacta ctgccagcag tacgatacgt ggccattcac ttttggacca 300 gggactaaag tggattttaa gcgc 324 <210> 125 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <223> VH AA <400> 125 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val 85 90 95 Ser Leu Val Tyr Cys Gly Gly Asp Cys Tyr Ser Gly Phe Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 126 <211> 124 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Synthetic polypeptide <220> <223> FS-21495CARLxH <400> 136 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu 20 25 30 Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln 35 40 45 Ser Val Ser Arg Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala 50 55 60 Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro 65 70 75 80 Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile 85 90 95 Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg 100 105 110 Ile Ser Trp Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 115 120 125 Arg Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser 130 135 140 Thr Lys Gly Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln 145 150 155 160 Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 165 170 175 Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 180 185 190 Glu Trp Val Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly 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Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <223> AJ-21508CARHxL <400> 142 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val 20 25 30 Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45 Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Met Gly Ile Ile Asn Pro Gly Gly Gly Ser Thr Ser 65 70 75 80 Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser 85 90 95 Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Ser Trp Pro Met Asp Val Trp Gly 115 120 125 Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly 130 135 140 Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Ile Val Met Thr 145 150 155 160 Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu 165 170 175 Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn Leu Ala Trp 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atcagcaggg ccagaaccaa ctgtataacg agctcaacct gggacgcagg 1200 gaagagtatg acgttttgga caagcgcaga ggacgggacc ctgagatggg tggcaaacca 1260 agacgaaaaa acccccagga gggtctctat aatgagctgc agaaggataa gatggctgaa 1320 gcctattctg aaataggcat gaaaggagag cggagaaggg gaaaagggca cgacggtttg 1380 taccagggac tcagcactgc tacgaaggat acttatgacg ctctccacat gcaagccctg 1440 ccacctaggt aa 1452 <210> 162 <211> 483 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <223> RD-21530CARHxL <400> 162 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val 20 25 30 Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe 35 40 45 Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Val Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr 65 70 75 80 Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser 85 90 95 Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met 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aaataacttt ctgaactggt atcaacagaa gcctgggaag 600 gcgcccaaac tcctgatcta tgatgcgtcc aacctggaaa ctggcgtgcc ttcacgcttt 660 agcggctctg gcagtggtac agacttcact tttaccatct cttcacttca gccggaggac 720 atcgccacat attactgtca acagtacgga aacttgccct ttacttttgg aggcggcacc 780 aaagttgaaa tcaaaagggc cgctgccctg gataacgaaa agagcaatgg gactataata 840 catgttaaag gaaaacacct gtgtccatct cccctgttcc ctggaccgtc aaagccattt 900 tgggtgctcg tggttgtcgg tggcgttctc gcctgttata gcttgctggt gacagtagcc 960 ttcattatct tttgggtgag atccaaaaga agccgcctgc tccatagcga ttacatgaat 1020 atgactccac gccgccctgg ccccacaagg aaacactacc agccttacgc accacctaga 1080 gatttcgctg cctatcggag cagggtgaag ttttccagat ctgcagatgc accagcgtat 1140 cagcagggcc agaaccaact gtataacgag ctcaacctgg gacgcaggga agagtatgac 1200 gttttggaca agcgcagagg acgggaccct gagatgggtg gcaaaccaag acgaaaaaac 1260 ccccaggagg gtctctataa tgagctgcag aaggataaga tggctgaagc ctattctgaa 1320 ataggcatga aaggagagcg gagaagggga aaagggcacg acggtttgta ccagggactc 1380 agcactgcta cgaaggatac ttatgacgct ctccacatgc aagccctgcc acctaggtaa 1440 <210> 166 <211> 479 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <223> anti-CLL-1 CAR construct <400> 166 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu 20 25 30 Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly 35 40 45 Ser Ile Ser Ser Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr 65 70 75 80 Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys 85 90 95 Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala 100 105 110 Val Tyr Tyr Cys Val Ser Leu Val Tyr Cys Gly Gly Asp Cys Tyr Ser 115 120 125 Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly 130 135 140 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile 145 150 155 160 Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser 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actggtgtat 300 tgtggagggg attgttatag cgggttcgat tattggggac agggaaccct ggtgactgta 360 tcttccggcg gcggcggctc agggggtggc ggtagtggcg gtgggggttc cgatattcaa 420 ctgacacaat cccccagctc actcagcgcc agcgtggggg acagggttag ctttacctgt 480 caagcctctc aggatataaa taactttctg aactggtatc aacagaagcc tgggaaggcg 540 cccaaactcc tgatctatga tgcgtccaac ctggaaactg gcgtgccttc acgctttagc 600 ggctctggca gtggtacaga cttcactttt accatctctt cacttcagcc ggaggacatc 660 gccacatatt actgtcaaca gtacggaaac ttgcccttta cttttggagg cggcaccaaa 720 gttgaaatca aaagggccgc tgccctggat aacgaaaaga gcaatgggac tataatacat 780 gttaaaggaa aacacctgtg tccatctccc ctgttccctg gaccgtcaaa gccattttgg 840 gtgctcgtgg ttgtcggtgg cgttctcgcc tgttatagct tgctggtgac agtagccttc 900 attatctttt gggtgagatc caaaagaagc cgcctgctcc atagcgatta catgaatatg 960 actccacgcc gccctggccc cacaaggaaa cactaccagc cttacgcacc acctagagat 1020 ttcgctgcct atcggagcag ggtgaagttt tccagatctg cagatgcacc agcgtatcag 1080 cagggccaga accaactgta taacgagctc aacctgggac gcagggaaga gtatgacgtt 1140 ttggacaagc gcagaggacg ggaccctgag atgggtggca aaccaagacg aaaaaacccc 1200 caggagggtc tctataatga gctgcagaag gataagatgg ctgaagccta ttctgaaata 1260 ggcatgaaag gagagcggag aaggggaaaa gggcacgacg gtttgtacca gggactcagc 1320 actgctacga aggatactta tgacgctctc cacatgcaag ccctgccacc tagg 1374 <210> 168 <211> 458 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <223> anti-CLL-1 CAR construct <400> 168 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val 85 90 95 Ser Leu Val Tyr Cys Gly Gly Asp Cys Tyr Ser Gly Phe Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val 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gataaggcag 180 ccccccggga agggattgga atggatcggc tatatttact acagtgggag caccaattac 240 aacccctcac tgaagtctag agttacaatc agcgttgaca cctcaaagaa tcagttcagt 300 ttgaaattgt ctagcgtcac agcagctgat acagccgtct attattgtgt ttctctggtc 360 tattgcggtg gggattgtta cagtggcttt gactattggg ggcagggtac tctggttaca 420 gtttcttccg gggggggagg ctctgggggc ggaggctcag gtggtggagg cagcgacatc 480 cagttgacac agagcccgag ttccttgtcc gcctccgtcg gggatagagt gtcatttacc 540 tgtcaggcct ctcaggatat taataacttt ctgaattggt atcagcaaaa gcccggaaag 600 gcacccaagc tgttgattta cgacgccagt aacctggaga caggcgtgcc ctcccggttt 660 agtggtagcg gaagcggtac ggattttacc tttactatca gctctctcca acccgaagac 720 attgcaacct actattgtca acaatatgga aacctgcctt ttacatttgg cggcggcacc 780 aaggtggaga ttaagcgggc ggcagctatt gaggtgatgt atccaccgcc ttacctggat 840 aacgaaaaga gtaacggtac catcattcac gtgaaaggta aacacctgtg tccttctccc 900 ctcttccccg ggccatcaaa gcccttctgg gttcttgtgg tcgtgggagg cgtgcttgct 960 tgttattctc tgctcgttac cgtggcgttt atcatttttt gggttagatc caaaagaagc 1020 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atatggaaac ctgcctttta catttggcgg cggcaccaag 720 gtggagatta agcgggcggc agctattgag gtgatgtatc caccgcctta cctggataac 780 gaaaagagta acggtaccat cattcacgtg aaaggtaaac acctgtgtcc ttctcccctc 840 ttccccgggc catcaaagcc cttctgggtt cttgtggtcg tgggaggcgt gcttgcttgt 900 tattctctgc tcgttaccgt ggcgtttatc attttttggg ttagatccaa aagaagccgc 960 ctgctccata gcgattacat gaatatgact ccacgccgcc ctggccccac aaggaaacac 1020 taccagcctt acgcaccacc tagagatttc gctgcctatc ggagcagggt gaagttttcc 1080 agatctgcag atgcaccagc gtatcagcag ggccagaacc aactgtataa cgagctcaac 1140 ctgggacgca gggaagagta tgacgttttg gacaagcgca gaggacggga ccctgagatg 1200 ggtggcaaac caagacgaaa aaacccccag gagggtctct ataatgagct gcagaaggat 1260 aagatggctg aagcctattc tgaaataggc atgaaaggag agcggagaag gggaaaaggg 1320 cacgacggtt tgtaccaggg actcagcact gctacgaagg atacttatga cgctctccac 1380 atgcaagccc tgccacctag g 1401 <210> 172 <211> 467 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <223> 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cagctgacac aatcaccatc ttccctttca gcttcagtcg gggacagagt gtccttcaca 540 tgccaggcca gccaggatat caataacttc ctgaactggt accaacagaa acccggaaag 600 gctccaaagc tcctgatcta tgatgcttcc aacctggaga ccggcgtgcc ctccaggttc 660 agtggttcag gatcaggcac tgactttacg ttcaccatat ccagtcttca gcccgaagac 720 attgcaacct attactgcca acaatacggg aaccttccct ttacattcgg aggcggcacc 780 aaggtggaaa tcaaaagggc tgcagcattg agcaactcaa taatgtattt tagtcacttt 840 gtaccagtgt tcttgccggc taagcctact accacacccg ctccacggcc acctacccca 900 gctcctacca tcgcttcaca gcctctgtcc ctgcgcccag aggcttgccg accggccgca 960 gggggcgctg ttcataccag aggactggat ttcgcctgcg atatctatat ctgggcaccc 1020 ctggccggaa cctgcggcgt actcctgctg tccctggtca tcacgctcta ttgtaatcac 1080 aggaacagat ccaaaagaag ccgcctgctc catagcgatt acatgaatat gactccacgc 1140 cgccctggcc ccacaaggaa acactaccag ccttacgcac cacctagaga tttcgctgcc 1200 tatcggagca gggtgaagtt ttccagatct gcagatgcac cagcgtatca gcagggccag 1260 aaccaactgt ataacgagct caacctggga cgcagggaag agtatgacgt tttggacaag 1320 cgcagaggac gggaccctga gatgggtggc aaaccaagac gaaaaaaccc ccaggagggt 1380 ctctataatg agctgcagaa ggataagatg gctgaagcct attctgaaat aggcatgaaa 1440 ggagagcgga gaaggggaaa agggcacgac ggtttgtacc agggactcag cactgctacg 1500 aaggatactt atgacgctct ccacatgcaa gccctgccac ctaggtaa 1548 <210> 174 <211> 515 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <223> anti-CLL-1 CAR construct <400> 174 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu 20 25 30 Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly 35 40 45 Ser Ile Ser Ser Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr 65 70 75 80 Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys 85 90 95 Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala 100 105 110 Val Tyr Tyr Cys Val Ser Leu Val Tyr Cys Gly Gly 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Synthetic polynucleotide <220> <223> anti-CLL-1 CAR construct <400> 175 caggtgcaat tgcaagagtc cggccccgga ctcgttaaac ccagtgagac gcttagcctg 60 acctgtaccg tctcaggggg cagcatctcc tcttattact ggagctggat caggcagcct 120 ccaggaaaag gccttgaatg gattgggtac atctactact ctggctcaac aaattataat 180 ccatccctga agtcccgcgt gactatctct gtggacacca gcaagaatca gttttcactg 240 aagttgtcta gtgttaccgc ggccgacacc gccgtatact actgtgtgtc tcttgtgtac 300 tgtggcggcg actgctattc cgggttcgac tactggggcc aagggactct ggtaaccgtg 360 tcctcaggcg gcggcgggtc aggaggaggc ggcagtggag gtggcggctc cgacatccag 420 ctgacacaat caccatcttc cctttcagct tcagtcgggg acagagtgtc cttcacatgc 480 caggccagcc aggatatcaa taacttcctg aactggtacc aacagaaacc cggaaaggct 540 ccaaagctcc tgatctatga tgcttccaac ctggagaccg gcgtgccctc caggttcagt 600 ggttcaggat caggcactga ctttacgttc accatatcca gtcttcagcc cgaagacatt 660 gcaacctatt actgccaaca atacgggaac cttcccttta cattcggagg cggcaccaag 720 gtggaaatca aaagggctgc agcattgagc aactcaataa tgtattttag tcactttgta 780 ccagtgttct tgccggctaa gcctactacc acacccgctc cacggccacc taccccagct 840 cctaccatcg cttcacagcc tctgtccctg cgcccagagg cttgccgacc ggccgcaggg 900 ggcgctgttc ataccagagg actggatttc gcctgcgata tctatatctg ggcacccctg 960 gccggaacct gcggcgtact cctgctgtcc ctggtcatca cgctctattg taatcacagg 1020 aacagatcca aaagaagccg cctgctccat agcgattaca tgaatatgac tccacgccgc 1080 cctggcccca caaggaaaca ctaccagcct tacgcaccac ctagagattt cgctgcctat 1140 cggagcaggg tgaagttttc cagatctgca gatgcaccag cgtatcagca gggccagaac 1200 caactgtata acgagctcaa cctgggacgc agggaagagt atgacgtttt ggacaagcgc 1260 agaggacggg accctgagat gggtggcaaa ccaagacgaa aaaaccccca ggagggtctc 1320 tataatgagc tgcagaagga taagatggct gaagcctatt ctgaaatagg catgaaagga 1380 gagcggagaa ggggaaaagg gcacgacggt ttgtaccagg gactcagcac tgctacgaag 1440 gatacttatg acgctctcca catgcaagcc ctgccaccta gg 1482 <210> 176 <211> 494 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <223> anti-CLL-1 CAR construct <400> 176 Gln Val 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ccaaactcct gatttatgat gcctccaatc tggagaccgg ggtcccttct 180 agattcagcg gaagtggcag cggcacagac tttacattta ctatctcttc tctgcaacca 240 gaggacatcg ccacatacta ttgccagcaa tacggcaatc tgcccttcac cttcggaggc 300 ggaaccaagg tagaaattaa aaggggcggt ggaggctccg gagggggggg ctctggcgga 360 gggggctccc aagtacaatt gcaggagtca gggcctggac tcgtgaagcc ttcagaaact 420 ttgtcactga catgtacagt gtccggcgga agcatttcca gttactattg gtcctggatt 480 agacagccac ccggcaaagg actggaatgg attggatata tctactactc tggatctaca 540 aactataatc ccagcctcaa atccagggtc actattagtg tggatacatc aaagaatcag 600 ttctccttga agctgagctc agtcactgct gccgacaccg cagtgtacta ttgtgtgagc 660 ctggtctact gcggcggaga ttgctacagc ggtttcgatt actggggcca gggcaccctg 720 gttaccgtta gttccgcggc tgctcttgat aacgagaagt ccaacggtac gattatccac 780 gttaagggta agcacctttg ccctagcccg ctgttcccag gccccagtaa gcccttttgg 840 gtcctcgttg tggtaggtgg ggtactcgcc tgctactccc tgctcgtcac tgtcgcattc 900 atcatcttct gggtcagatc caaaagaagc cgcctgctcc atagcgatta catgaatatg 960 actccacgcc gccctggccc cacaaggaaa cactaccagc cttacgcacc acctagagat 1020 ttcgctgcct atcggagcag ggtgaagttt tccagatctg cagatgcacc agcgtatcag 1080 cagggccaga accaactgta taacgagctc aacctgggac gcagggaaga gtatgacgtt 1140 ttggacaagc gcagaggacg ggaccctgag atgggtggca aaccaagacg aaaaaacccc 1200 caggagggtc tctataatga gctgcagaag gataagatgg ctgaagccta ttctgaaata 1260 ggcatgaaag gagagcggag aaggggaaaa gggcacgacg gtttgtacca gggactcagc 1320 actgctacga aggatactta tgacgctctc cacatgcaag ccctgccacc tagg 1374 <210> 180 <211> 458 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <223> anti-CLL-1 CAR construct <400> 180 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Phe Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Asn Asn Phe 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 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atggcactcc ccgtaactgc tctgctgctg ccgttggcat tgctcctgca cgccgcacgc 60 ccggatatcc agctgaccca gtctccatcc tctttgagtg cctccgtggg tgaccgcgtc 120 tctttcactt gccaagccag ccaagacatc aacaactttc tgaattggta ccagcagaaa 180 ccaggcaaag caccaaagct cctcatctac gacgcctcca acctggaaac cggggtgccc 240 agcaggttta gcgggagcgg ttctggcacg gattttacgt tcaccatctc ctctctgcag 300 cccgaggata tagctactta ttactgtcag cagtacggga atctgccatt tacttttggg 360 ggtggaacta aggtggaaat caaaaggggc ggcgggggaa gcgggggcgg gggctcaggt 420 ggcggaggga gccaggtgca actccaggaa agtggcccag gattggtgaa gcccagcgag 480 accctttccc ttacttgtac tgttagcgga ggcagcataa gcagctacta ttggtcctgg 540 atcagacagc caccagggaa agggcttgaa tggattggct acatttacta ttccgggtcc 600 accaactaca acccatccct caagtcccgc gtgacaattt ccgtcgacac aagcaagaac 660 cagttctccc tgaaacttag tagcgtcact gctgcagata cagcagtgta ctattgtgtc 720 agccttgtct actgtggcgg cgactgctac agtggctttg attactgggg acagggcacg 780 ctcgtgacag tgtccagcgc tgcggctatc gaggtaatgt atccgccacc gtatctggac 840 aacgagaagt ctaatgggac aatcattcac gtgaagggga agcacctgtg tccatccccc 900 ctgtttccgg gtcccagtaa acccttctgg gtgcttgttg tcgttggcgg ggtgctggcc 960 tgctattccc tgctggtgac cgtcgcgttt attattttct gggttagatc caaaagaagc 1020 cgcctgctcc atagcgatta catgaatatg actccacgcc gccctggccc cacaaggaaa 1080 cactaccagc cttacgcacc acctagagat ttcgctgcct atcggagcag ggtgaagttt 1140 tccagatctg cagatgcacc agcgtatcag cagggccaga accaactgta taacgagctc 1200 aacctgggac gcagggaaga gtatgacgtt ttggacaagc gcagaggacg ggaccctgag 1260 atgggtggca aaccaagacg aaaaaacccc caggagggtc tctataatga gctgcagaag 1320 gataagatgg ctgaagccta ttctgaaata ggcatgaaag gagagcggag aaggggaaaa 1380 gggcacgacg gtttgtacca gggactcagc actgctacga aggatactta tgacgctctc 1440 cacatgcaag ccctgccacc taggtaa 1467 <210> 182 <211> 488 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <223> anti-CLL-1 CAR construct <400> 182 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Asp Ile Gln 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tttactattc cgggtccacc 540 aactacaacc catccctcaa gtcccgcgtg acaatttccg tcgacacaag caagaaccag 600 ttctccctga aacttagtag cgtcactgct gcagatacag cagtgtacta ttgtgtcagc 660 cttgtctact gtggcggcga ctgctacagt ggctttgatt actggggaca gggcacgctc 720 gtgacagtgt ccagcgctgc ggctatcgag gtaatgtatc cgccaccgta tctggacaac 780 gagaagtcta atgggacaat cattcacgtg aaggggaagc acctgtgtcc atcccccctg 840 tttccgggtc ccagtaaacc cttctgggtg cttgttgtcg ttggcggggt gctggcctgc 900 tattccctgc tggtgaccgt cgcgtttatt attttctggg ttagatccaa aagaagccgc 960 ctgctccata gcgattacat gaatatgact ccacgccgcc ctggccccac aaggaaacac 1020 taccagcctt acgcaccacc tagagatttc gctgcctatc ggagcagggt gaagttttcc 1080 agatctgcag atgcaccagc gtatcagcag ggccagaacc aactgtataa cgagctcaac 1140 ctgggacgca gggaagagta tgacgttttg gacaagcgca gaggacggga ccctgagatg 1200 ggtggcaaac caagacgaaa aaacccccag gagggtctct ataatgagct gcagaaggat 1260 aagatggctg aagcctattc tgaaataggc atgaaaggag agcggagaag gggaaaaggg 1320 cacgacggtt tgtaccaggg actcagcact gctacgaagg atacttatga cgctctccac 1380 atgcaagccc tgccacctag g 1401 <210> 184 <211> 467 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <223> anti-CLL-1 CAR construct <400> 184 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Phe Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Asn Asn Phe 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Asn Leu Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Gly Gly Gly Gly 100 105 110 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln 115 120 125 Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr 130 135 140 Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile 145 150 155 160 Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu 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cacctagaga tttcgctgcc 1200 tatcggagca gggtgaagtt ttccagatct gcagatgcac cagcgtatca gcagggccag 1260 aaccaactgt ataacgagct caacctggga cgcagggaag agtatgacgt tttggacaag 1320 cgcagaggac gggaccctga gatgggtggc aaaccaagac gaaaaaaccc ccaggagggt 1380 ctctataatg agctgcagaa ggataagatg gctgaagcct attctgaaat aggcatgaaa 1440 ggagagcgga gaaggggaaa agggcacgac ggtttgtacc agggactcag cactgctacg 1500 aaggatactt atgacgctct ccacatgcaa gccctgccac ctaggtaa 1548 <210> 186 <211> 515 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <223> anti-CLL-1 CAR construct <400> 186 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu 20 25 30 Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Ser Phe Thr Cys Gln Ala Ser Gln 35 40 45 Asp Ile Asn Asn Phe Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala 50 55 60 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro 65 70 75 80 Ser Arg Phe Ser 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accattagca ttgatacgtc taagaatctg 300 ttcagtctca ggctgtcctc cgtcactgct gccgacacag ccgtgtacta ctgcgcctcc 360 ttggtttact gcggaggcga ctgttatagc ggctttgatt attgggggca ggggaccctc 420 gtaaccgtga gctctggagg gggtgggagc gggggaggag gttcaggggg gggcggctcc 480 gatatccagc tcactcaaag cccctctagt ctctctgcct cagtggggga tcgggtcagt 540 tttacttgtc aagcttcaca ggatatcaac aacttcctta attggtatca gcagaagcca 600 ggaaaagcac ccaagctgct catctatgat gcctcaaatt tggagacggg tgttcccagt 660 cgattctctg ggtcagggtc cgggaccgac tttacgttta cgatctcctc tctgcagccc 720 gaagacatcg ccacatacta ttgtcaacag tacggcaact tgcctttcac atttgggggc 780 gggactaagg ttgaaatcaa gagggccgct gcactggaca atgagaagtc caacggcacc 840 atcatccacg tgaagggcaa gcacctgtgc cctagtcctc tgttcccagg cccatccaaa 900 cctttttggg ttcttgttgt ggtcgggggg gtgctggcct gctattctct gctggtcacg 960 gtggccttca taattttctg ggttagatcc aaaagaagcc gcctgctcca tagcgattac 1020 atgaatatga ctccacgccg ccctggcccc acaaggaaac actaccagcc ttacgcacca 1080 cctagagatt tcgctgccta tcggagcagg gtgaagtttt ccagatctgc agatgcacca 1140 gcgtatcagc agggccagaa ccaactgtat aacgagctca acctgggacg cagggaagag 1200 tatgacgttt tggacaagcg cagaggacgg gaccctgaga tgggtggcaa accaagacga 1260 aaaaaccccc aggagggtct ctataatgag ctgcagaagg ataagatggc tgaagcctat 1320 tctgaaatag gcatgaaagg agagcggaga aggggaaaag ggcacgacgg tttgtaccag 1380 ggactcagca ctgctacgaa ggatacttat gacgctctcc acatgcaagc cctgccacct 1440 aggtaa 1446 <210> 190 <211> 481 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <223> anti-CLL-1 CAR construct <400> 190 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu 20 25 30 Val Lys Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly 35 40 45 Ser Ile Ser Ser Gly Gly Phe Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro 50 55 60 Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile His His Ser Gly Ser Thr 65 70 75 80 His Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Ile Asp Thr 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atccaaacct 840 ttttgggttc ttgttgtggt cgggggggtg ctggcctgct attctctgct ggtcacggtg 900 gccttcataa ttttctgggt tagatccaaa agaagccgcc tgctccatag cgattacatg 960 aatatgactc cacgccgccc tggccccaca aggaaacact accagcctta cgcaccacct 1020 agagatttcg ctgcctatcg gagcagggtg aagttttcca gatctgcaga tgcaccagcg 1080 tatcagcagg gccagaacca actgtataac gagctcaacc tgggacgcag ggaagagtat 1140 gacgttttgg acaagcgcag aggacgggac cctgagatgg gtggcaaacc aagacgaaaa 1200 aacccccagg agggtctcta taatgagctg cagaaggata agatggctga agcctattct 1260 gaaataggca tgaaaggaga gcggagaagg ggaaaagggc acgacggttt gtaccaggga 1320 ctcagcactg ctacgaagga tacttatgac gctctccaca tgcaagccct gccacctagg 1380 <210> 192 <211> 460 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <223> anti-CLL-1 CAR construct <400> 192 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly 20 25 30 Gly Phe Tyr Trp Ser Trp Ile 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Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <223> anti-CLL-1 CAR construct <400> 194 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu 20 25 30 Val Lys Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly 35 40 45 Ser Ile Ser Ser Gly Gly Phe Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro 50 55 60 Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile His His Ser Gly Ser Thr 65 70 75 80 His Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Ile Asp Thr 85 90 95 Ser Lys Asn Leu Phe Ser Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp 100 105 110 Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ser Leu Val Tyr Cys Gly Gly Asp Cys 115 120 125 Tyr Ser Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 130 135 140 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 145 150 155 160 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 165 170 175 Asp Arg Val Ser Phe Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Asn Asn Phe 180 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gcgctgtcca taccagagga ctcgacttcg cctgcgatat ttatatatgg 1020 gcccccctcg ccggcacctg cggagtcttg ctcctgagcc ttgtgatcac gctttattgt 1080 aaccatcgga atagatccaa aagaagccgc ctgctccata gcgattacat gaatatgact 1140 ccacgccgcc ctggccccac aaggaaacac taccagcctt acgcaccacc tagagatttc 1200 gctgcctatc ggagcagggt gaagttttcc agatctgcag atgcaccagc gtatcagcag 1260 ggccagaacc aactgtataa cgagctcaac ctgggacgca gggaagagta tgacgttttg 1320 gacaagcgca gaggacggga ccctgagatg ggtggcaaac caagacgaaa aaacccccag 1380 gagggtctct ataatgagct gcagaaggat aagatggctg aagcctattc tgaaataggc 1440 atgaaaggag agcggagaag gggaaaaggg cacgacggtt tgtaccaggg actcagcact 1500 gctacgaagg atacttatga cgctctccac atgcaagccc tgccacctag gtaa 1554 <210> 198 <211> 517 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <223> anti-CLL-1 CAR construct <400> 198 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly 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attcagctta cgcagtcccc atcttcactt agcgccagcg ttggcgatcg ggtcagcttc 480 acgtgtcaag caagtcagga tatcaacaac tttcttaact ggtaccagca gaagccaggc 540 aaggcaccca agttgctgat ttacgatgct tctaacctcg agacgggagt gcctagccgc 600 ttctccggga gcggcagcgg cacagacttt acctttacga tttccagtct gcagccagag 660 gatatagcaa cttattactg tcagcagtat ggcaacctcc cttttacctt cggtggtggc 720 acaaaggtcg agattaaaag agccgcagcg ttgtccaact ccataatgta tttttctcat 780 tttgtgcccg tctttctgcc tgccaaacct accaccaccc ccgccccacg accacctact 840 ccagccccca ccatcgcctc ccagcccctc agcctgaggc cagaggcttg tcgccctgct 900 gcggggggcg ctgtccatac cagaggactc gacttcgcct gcgatattta tatatgggcc 960 cccctcgccg gcacctgcgg agtcttgctc ctgagccttg tgatcacgct ttattgtaac 1020 catcggaata gatccaaaag aagccgcctg ctccatagcg attacatgaa tatgactcca 1080 cgccgccctg gccccacaag gaaacactac cagccttacg caccacctag agatttcgct 1140 gcctatcgga gcagggtgaa gttttccaga tctgcagatg caccagcgta tcagcagggc 1200 cagaaccaac tgtataacga gctcaacctg ggacgcaggg aagagtatga cgttttggac 1260 aagcgcagag 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tttgatccag aagatggaga gactatctac 180 gcccagaagt tccagggccg ggtcaccgta acagaagaca cctcaactga caccgcttac 240 atggagctga gttcactgcg gtccgaggac acggccgtgt attattgtgc caccgagagc 300 cgcggaatcg gatggcctta cttcgactac tggggacagg gtacacttgt tacagtatca 360 tccgggggtg gcggctctgg tgggggcggc tccggagggg gtggatcaga tatccaaatg 420 actcaaagtc caagttccct gtctgcctca gtcggagata gagtcaccat aacctgcagg 480 gcaagtcagt ccatctcctc ctatctgaac tggtaccaac agaaacctgg aaaggcgcct 540 aagctcctga tctccggagc ctcatctttg aaatccggtg tcccatctcg cttcagtggc 600 tctggaagcg gtacagattt tactttgacc attagcagcc tcccaccgga agactttgct 660 acatattact gccagcagtc ttactcaacc ccaatcacct tcgggcaagg caccagactc 720 gaaataaaaa gagcagctgc tatcgaggtt atgtacccac cgccgtactt ggataacgaa 780 aaaagcaatg ggaccatcat tcatgtgaag ggtaagcacc tttgccctag cccactgttt 840 cctggcccga gtaaaccctt ttgggtactt gtggtcgtcg gcggcgtgct ggcctgctac 900 tcactcctgg ttaccgtcgc attcatcatc ttttgggtga gatccaaaag aagccgcctg 960 ctccatagcg attacatgaa tatgactcca cgccgccctg 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<220> <223> anti-CLL-1 CAR construct <400> 209 atggcactcc ccgtaactgc tctgctgctg ccgttggcat tgctcctgca cgccgcacgc 60 ccgcaggtgc agttggtgca aagcggcgca gaagttaaga aacctggggc gtcagttaag 120 gtgtcttgca aagtatctgg ctataccctc actgagctgt ccatgcattg ggtaaggcag 180 gctcctggaa aggggctcga atggatggga ggatttgacc ctgaagacgg agagaccatc 240 tacgcccaga aattccaggg tagagtaaca gtgactgagg acactagcac tgacacagcg 300 tacatggagc tgagttctct gagaagtgag gacacagccg tttactactg cgctaccgag 360 tccagaggta ttggctggcc atacttcgac tattggggtc agggcaccct ggttacagtg 420 agttcaggag gcgggggctc tggggggggc ggttccggag gggggggctc agatatacag 480 atgacgcaga gtccatcaag tctctcagcc agcgtgggag atcgcgtgac tattacttgc 540 cgcgccagcc agagtattag ctcctatctg aattggtacc agcaaaagcc cgggaaggcc 600 cctaagcttc tgatttctgg cgcctcctct ttgaagtcag gtgtgccaag cagatttagc 660 gggtctggaa gtggcactga ctttacactt actatctcca gcctgccccc agaggatttt 720 gccacatatt actgtcagca aagctactct actccaatca ctttcggcca gggcacaaga 780 ttggagatta agagggctgc cgcactttca aattccatca 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agcagggtga agttttccag atctgcagat gcaccagcgt atcagcaggg ccagaaccaa 1200 ctgtataacg agctcaacct gggacgcagg gaagagtatg acgttttgga caagcgcaga 1260 ggacgggacc ctgagatggg tggcaaacca agacgaaaaa acccccagga gggtctctat 1320 aatgagctgc agaaggataa gatggctgaa gcctattctg aaataggcat gaaaggagag 1380 cggagaaggg gaaaagggca cgacggtttg taccagggac tcagcactgc tacgaaggat 1440 acttatgacg ctctccacat gcaagccctg ccacctagg 1479 <210> 212 <211> 493 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <223> anti-CLL-1 CAR construct <400> 212 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Glu Leu 20 25 30 Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Phe Asp Pro Glu Asp Gly Glu Thr Ile Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Val Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr 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of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <220> <223> anti-CLL-1 CAR construct <400> 213 atggcactcc ccgtaactgc tctgctgctg ccgttggcat tgctcctgca cgccgcacgc 60 ccgcaggtcc agttggtcga aagtggcggt ggtgtagtgc agccgggccg cagtttgagg 120 ctttcctgtg cggcttcagg ctttactttt tccagctatg gaatgcactg ggtgcggcag 180 gcccccggca aaggacttga gtgggtggcc gtcatttctt atgacggatc agataagtac 240 tacgtggaca gcgtcaaggg cagattcacc atctctaggg acaacagtaa aaatagactc 300 tacctccaga tgaatagcct cagagctgaa gacacggccg tctactattg tgctcgggag 360 cggtatagtg gcagagacta ctgggggcag ggcacactcg ttacagtgag tagcggcgga 420 ggagggagtg ggggcggtgg ctccggtgga ggaggttctg agattgttat gacccagagt 480 cctgcgaccc tctcagtcag ccccggggag cgcgcaactt tgtcttgcag agctagtcag 540 tccgtgtcct ctcttctgac atggtaccag caaaagcccg ggcaggctcc gcgccttttg 600 atctttgggg cttcaacaag agccactggg attcccgcac gattctctgg ctccgggagc 660 ggtactggtt tcaccctgac gattagcagt ctccagagcg aggacttcgc cgtatactac 720 tgccagcagt acgatacgtg gccattcact tttggaccag ggactaaagt ggattttaag 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<213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <223> anti-CLL-1 CAR construct <400> 216 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asp Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Arg Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Arg Tyr Ser Gly Arg Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 115 120 125 Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser 130 135 140 Val Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser 145 150 155 160 Val Ser Ser Leu Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro 165 170 175 Arg Leu Leu Ile Phe Gly Ala Ser 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agaaggataa gatggctgaa 1320 gcctattctg aaataggcat gaaaggagag cggagaaggg gaaaagggca cgacggtttg 1380 taccagggac tcagcactgc tacgaaggat acttatgacg ctctccacat gcaagccctg 1440 ccacctaggt aa 1452 <210> 218 <211> 483 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <223> anti-CLL-1 CAR construct <400> 218 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val 20 25 30 Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe 35 40 45 Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Val Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asp Lys Tyr 65 70 75 80 Tyr Val Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser 85 90 95 Lys Asn Arg Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Arg Tyr Ser Gly Arg Asp Tyr Trp 115 120 125 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly 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cccacaagga aacactacca gccttacgca 1020 ccacctagag atttcgctgc ctatcggagc agggtgaagt tttccagatc tgcagatgca 1080 ccagcgtatc agcagggcca gaaccaactg tataacgagc tcaacctggg acgcagggaa 1140 gagtatgacg ttttggacaa gcgcagagga cgggaccctg agatgggtgg caaaccaaga 1200 cgaaaaaacc cccaggaggg tctctataat gagctgcaga aggataagat ggctgaagcc 1260 tattctgaaa taggcatgaa aggagagcgg agaaggggaa aagggcacga cggtttgtac 1320 cagggactca gcactgctac gaaggatact tatgacgctc tccacatgca agccctgcca 1380 cctagg 1386 <210> 220 <211> 462 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <223> anti-CLL-1 CAR construct <400> 220 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asp Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Arg 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840 cctgcgaagc ctacgacaac cccagcccct aggccgccca caccggcccc aactattgcc 900 tcccagccat tgtctctgag acccgaagct tgcagacctg ctgctggagg cgccgttcac 960 acccgaggat tggatttcgc atgtgacatt tacatctggg cccctttggc cggaacctgc 1020 ggtgtgctgc tgctgtcact cgtgattaca ctttactgca accaccgaaa cagatccaaa 1080 agaagccgcc tgctccatag cgattacatg aatatgactc cacgccgccc tggccccaca 1140 aggaaacact accagcctta cgcaccacct agagatttcg ctgcctatcg gagcagggtg 1200 aagttttcca gatctgcaga tgcaccagcg tatcagcagg gccagaacca actgtataac 1260 gagctcaacc tgggacgcag ggaagagtat gacgttttgg acaagcgcag aggacgggac 1320 cctgagatgg gtggcaaacc aagacgaaaa aacccccagg agggtctcta taatgagctg 1380 cagaaggata agatggctga agcctattct gaaataggca tgaaaggaga gcggagaagg 1440 ggaaaagggc acgacggttt gtaccaggga ctcagcactg ctacgaagga tacttatgac 1500 gctctccaca tgcaagccct gccacctagg taa 1533 <210> 222 <211> 510 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <223> anti-CLL-1 CAR construct <400> 222 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val 20 25 30 Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe 35 40 45 Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys 50 55 60 Gly Leu Glu Trp Val Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asp Lys Tyr 65 70 75 80 Tyr Val Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser 85 90 95 Lys Asn Arg Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr 100 105 110 Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Arg Tyr Ser Gly Arg Asp Tyr Trp 115 120 125 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 130 135 140 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Met Thr Gln Ser 145 150 155 160 Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys 165 170 175 Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Leu Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys 180 185 190 Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Phe Gly Ala Ser Thr Arg Ala 195 200 205 Thr Gly Ile Pro Ala 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actcttgtca cagtctcatc tggcggcggc 360 ggcagcggtg ggggcggatc tggcgggggc ggcagcgaaa tcgttatgac tcagagtcct 420 gccacactga gcgttagccc tggtgagaga gcaacactta gctgcagagc tagtcagagt 480 gtttccagtc ttttgacatg gtaccaacag aagcccggtc aagctccacg actgctcatc 540 ttcggtgcat ccacccgcgc aaccgggata cccgcccggt tttccggttc tggaagtggc 600 acaggattca cgctcaccat ttcttctctg cagtctgaag actttgccgt gtattactgc 660 cagcagtacg atacctggcc ctttaccttt ggcccaggta ctaaagtgga ttttaaacga 720 gctgctgcac tttccaatag tattatgtac ttttcacatt ttgtgcccgt gttcctgcct 780 gcgaagccta cgacaacccc agcccctagg ccgcccacac cggccccaac tattgcctcc 840 cagccattgt ctctgagacc cgaagcttgc agacctgctg ctggaggcgc cgttcacacc 900 cgaggattgg atttcgcatg tgacatttac atctgggccc ctttggccgg aacctgcggt 960 gtgctgctgc tgtcactcgt gattacactt tactgcaacc accgaaacag atccaaaaga 1020 agccgcctgc tccatagcga ttacatgaat atgactccac gccgccctgg ccccacaagg 1080 aaacactacc agccttacgc accacctaga gatttcgctg cctatcggag cagggtgaag 1140 ttttccagat ctgcagatgc accagcgtat cagcagggcc agaaccaact gtataacgag 1200 ctcaacctgg gacgcaggga agagtatgac gttttggaca agcgcagagg acgggaccct 1260 gagatgggtg gcaaaccaag acgaaaaaac ccccaggagg gtctctataa tgagctgcag 1320 aaggataaga tggctgaagc ctattctgaa ataggcatga aaggagagcg gagaagggga 1380 aaagggcacg acggtttgta ccagggactc agcactgcta cgaaggatac ttatgacgct 1440 ctccacatgc aagccctgcc acctagg 1467 <210> 224 <211> 489 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <223> anti-CLL-1 CAR construct <400> 224 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asp Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Arg Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Arg Tyr Ser Gly Arg Asp Tyr 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ttcacattca gttcttatgg aatgcattgg 540 gtcagacagg ctcccgggaa gggccttgaa tgggtggcag tcattagcta cgacggaagc 600 gataagtact atgtggactc agttaaaggg agatttacta tcagccgcga caattccaaa 660 aacagattgt atttgcagat gaactccctc agggcggagg acactgctgt atattactgc 720 gcacgagaga gatactccgg ccgagactat tggggccaag gaacattggt aactgtgagc 780 tccgccgcag ctattgaggt catgtacccc ccaccttatc tcgataatga gaagagtaat 840 gggactataa ttcacgtaaa gggcaaacac ctgtgccctt ccccgctgtt tccaggtcca 900 agtaagccgt tctgggtcct ggttgtggtg ggaggggtgc tggcctgcta ttctctgttg 960 gttaccgtgg cctttatcat tttctgggtg agatccaaaa gaagccgcct gctccatagc 1020 gattacatga atatgactcc acgccgccct ggccccacaa ggaaacacta ccagccttac 1080 gcaccaccta gagatttcgc tgcctatcgg agcagggtga agttttccag atctgcagat 1140 gcaccagcgt atcagcaggg ccagaaccaa ctgtataacg agctcaacct gggacgcagg 1200 gaagagtatg acgttttgga caagcgcaga ggacgggacc ctgagatggg tggcaaacca 1260 agacgaaaaa acccccagga gggtctctat aatgagctgc agaaggataa gatggctgaa 1320 gcctattctg aaataggcat gaaaggagag cggagaaggg 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tggcaccggg ttcactctca cgatctcatc cctgcagtca 240 gaggatttcg ctgtgtatta ctgtcagcag tacgatacat ggcccttcac cttcggcccg 300 ggcacaaaag tagatttcaa gcgcggcggc gggggtagtg ggggcggggg atcaggagga 360 gggggctccc aagtacagct ggttgagagc ggcggcgggg tggttcagcc cgggcgcagc 420 ctcaggctga gttgcgcagc atcaggattc acattcagtt cttatggaat gcattgggtc 480 agacaggctc ccgggaaggg ccttgaatgg gtggcagtca ttagctacga cggaagcgat 540 aagtactatg tggactcagt taaagggaga tttactatca gccgcgacaa ttccaaaaac 600 agattgtatt tgcagatgaa ctccctcagg gcggaggaca ctgctgtata ttactgcgca 660 cgagagagat actccggccg agactattgg ggccaaggaa cattggtaac tgtgagctcc 720 gccgcagcta ttgaggtcat gtacccccca ccttatctcg ataatgagaa gagtaatggg 780 actataattc acgtaaaggg caaacacctg tgcccttccc cgctgtttcc aggtccaagt 840 aagccgttct gggtcctggt tgtggtggga ggggtgctgg cctgctattc tctgttggtt 900 accgtggcct ttatcatttt ctgggtgaga tccaaaagaa gccgcctgct ccatagcgat 960 tacatgaata tgactccacg ccgccctggc cccacaagga aacactacca gccttacgca 1020 ccacctagag atttcgctgc ctatcggagc agggtgaagt tttccagatc tgcagatgca 1080 ccagcgtatc agcagggcca gaaccaactg tataacgagc tcaacctggg acgcagggaa 1140 gagtatgacg ttttggacaa gcgcagagga cgggaccctg agatgggtgg caaaccaaga 1200 cgaaaaaacc cccaggaggg tctctataat gagctgcaga aggataagat ggctgaagcc 1260 tattctgaaa taggcatgaa aggagagcgg agaaggggaa aagggcacga cggtttgtac 1320 cagggactca gcactgctac gaaggatact tatgacgctc tccacatgca agccctgcca 1380 cctagg 1386 <210> 232 <211> 462 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <223> anti-CLL-1 CAR construct <400> 232 Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Leu 20 25 30 Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Phe Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Gly Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Thr 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900 tctcagcctc tctccttgcg gcccgaggcc tgccggccag ccgcaggggg cgccgtacat 960 actcggggtt tggatttcgc ttgcgacata tatatttggg cccccctcgc cggcacatgt 1020 ggagtgctgc tcctgagtct cgttataacc ctctattgca accatagaaa cagatccaaa 1080 agaagccgcc tgctccatag cgattacatg aatatgactc cacgccgccc tggccccaca 1140 aggaaacact accagcctta cgcaccacct agagatttcg ctgcctatcg gagcagggtg 1200 aagttttcca gatctgcaga tgcaccagcg tatcagcagg gccagaacca actgtataac 1260 gagctcaacc tgggacgcag ggaagagtat gacgttttgg acaagcgcag aggacgggac 1320 cctgagatgg gtggcaaacc aagacgaaaa aacccccagg agggtctcta taatgagctg 1380 cagaaggata agatggctga agcctattct gaaataggca tgaaaggaga gcggagaagg 1440 ggaaaagggc acgacggttt gtaccaggga ctcagcactg ctacgaagga tacttatgac 1500 gctctccaca tgcaagccct gccacctagg taa 1533 <210> 234 <211> 510 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <223> anti-CLL-1 CAR construct <400> 234 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 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tggtgcagcc cgggaggtcc 420 ttgcggctga gctgtgcagc ctccggtttt actttttcta gctatggaat gcattgggta 480 agacaggctc ccggaaaagg cctcgagtgg gtggcggtca ttagctatga tggatctgat 540 aaatactatg tggactcagt taaggggcgc ttcacaatct caagagacaa tagcaaaaat 600 agactgtacc tgcagatgaa tagtctgcgc gccgaggaca ctgccgtgta ctactgcgcc 660 cgcgagagat acagcggacg ggattactgg ggccagggta ccctcgtaac ggtgtcctcc 720 gctgccgccc ttagcaacag cattatgtac ttttctcatt tcgtgccagt ctttctccca 780 gcaaagccca ccactacccc ggcccccagg ccgcctactc ctgcccccac tatcgcgtct 840 cagcctctct ccttgcggcc cgaggcctgc cggccagccg cagggggcgc cgtacatact 900 cggggtttgg atttcgcttg cgacatatat atttgggccc ccctcgccgg cacatgtgga 960 gtgctgctcc tgagtctcgt tataaccctc tattgcaacc atagaaacag atccaaaaga 1020 agccgcctgc tccatagcga ttacatgaat atgactccac gccgccctgg ccccacaagg 1080 aaacactacc agccttacgc accacctaga gatttcgctg cctatcggag cagggtgaag 1140 ttttccagat ctgcagatgc accagcgtat cagcagggcc agaaccaact gtataacgag 1200 ctcaacctgg gacgcaggga agagtatgac gttttggaca agcgcagagg 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acagaatcaa 1200 ctttacaatg agctgaacct gggtcgcaga gaagagtacg acgttttgga caaacgccgg 1260 ggccgagatc ctgagatggg ggggaagccg agaaggaaga atcctcaaga aggcctgtac 1320 aacgagcttc aaaaagacaa aatggctgag gcgtactctg agatcggcat gaagggcgag 1380 cggagacgag gcaagggtca cgatggcttg tatcagggcc tgagtacagc cacaaaggac 1440 acctatgacg ccctccacat gcaggcactg cccccacgct ag 1482 <210> 243 <211> 493 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <223> 10E3_CHD_AA <400> 243 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu 20 25 30 Val Lys Pro Thr Glu Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe 35 40 45 Ser Leu Ile Asn Ala Arg Met Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro 50 55 60 Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu Ala His Ile Phe Ser Asn Ala Glu Lys 65 70 75 80 Ser Tyr Arg Thr Ser Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr 85 90 95 Ser Lys Ser Gln Val Val Leu Thr Met Thr Asn 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<223> 10E3_THD_DNA <400> 244 atggcactcc ccgtaactgc tctgctgctg ccgttggcat tgctcctgca cgccgcacgc 60 ccgcaagtta ctttgaagga gtctggacct gtactggtga agccaaccga gacactgaca 120 ctcacgtgta cagtgagtgg tttttccttg atcaacgcaa ggatgggcgt cagctggatc 180 aggcaacccc ctggcaaggc tctggaatgg ctcgctcaca tattcagcaa tgccgaaaaa 240 agctaccgga caagcctgaa atcccgcctg actatttcca aggacacttc taagtctcag 300 gtggtgctga ccatgaccaa catggacccg gtggacaccg ccacctatta ctgcgcaaga 360 atccctgggt atggtgggaa tggtgactac cattattatg ggatggatgt gtgggggcaa 420 ggcacaaccg taacggtctc aagcggtggg ggaggctcag ggggcggagg ctccggaggt 480 ggcggctccg acattcagat gacccaaagc ccgtccagcc tgtccgccag cctgggagat 540 agagtgacaa tcacgtgtag agcttcccaa gggataagaa atgatctcgg gtggtatcag 600 cagaagcccg gcaaagcccc caaaaggctt atatatgcta gtagtacact gcagtctgga 660 gttccttccc gattttcagg tagcggctcc ggtacagagt tcaccctcac gataagctca 720 ctccagcctg aggatttcgc aacgtactac tgcctccagc acaacaattt tccctggact 780 ttcggccagg gcaccaaggt ggagatcaag agggccgctg cccttgataa 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ggagtccacg ttctttaata 300 gtggactctt gttccaaact ggaacaacac tcaaccctat ctcggtctat tcttttgatt 360 tataagggat tttgccgatt tcggcctatt ggttaaaaaa tgagctgatt taacaaaaat 420 ttaacgcgaa ttttaacaaa atattaacgc ttacaatttg ccattcgcca ttcaggctgc 480 gcaactgttg ggaagggcga tcggtgcggg cctcttcgct attacgccag ctggcgaaag 540 ggggatgtgc tgcaaggcga ttaagttggg taacgccagg gttttcccag tcacgacgtt 600 gtaaaacgac ggccagtgaa ttgtaatacg actcactata gggcgacccg gggatggcgc 660 gccagtaatc aattacgggg tcattagttc atagcccata tatggagttc cgcgttacat 720 aacttacggt aaatggcccg cctggctgac cgcccaacga cccccgccca ttgacgtcaa 780 taatgacgta tgttcccata gtaacgccaa tagggacttt ccattgacgt caatgggtgg 840 agtatttacg gtaaactgcc cacttggcag tacatcaagt gtatcatatg ccaagtacgc 900 cccctattga cgtcaatgac ggtaaatggc ccgcctggca ttatgcccag tacatgacct 960 tatgggactt tcctacttgg cagtacatct acgtattagt catcgctatt accatgctga 1020 tgcggttttg gcagtacatc aatgggcgtg gatagcggtt tgactcacgg ggatttccaa 1080 gtctccaccc cattgacgtc aatgggagtt tgttttggca ccaaaatcaa cgggactttc 1140 caaaatgtcg taacaactcc gccccattga cgcaaatggg cggtaggcgt gtacggtggg 1200 aggtctatat aagcagagct ggtttagtga accggggtct ctctggttag accagatctg 1260 agcctgggag ctctctggct aactagggaa cccactgctt aagcctcaat aaagcttgcc 1320 ttgagtgctt caagtagtgt gtgcccgtct gttgtgtgac tctggtaact agagatccct 1380 cagacccttt tagtcagtgt ggaaaatctc tagcagtggc gcccgaacag ggacttgaaa 1440 gcgaaaggga aaccagagga gctctctcga cgcaggactc ggcttgctga agcgcgcacg 1500 gcaagaggcg aggggcggcg actggtgagt acgccaaaaa ttttgactag cggaggctag 1560 aaggagagag atgggtgcga gagcgtcagt attaagcggg ggagaattag atcgcgatgg 1620 gaaaaaattc ggttaaggcc agggggaaag aaaaaatata aattaaaaca tatagtatgg 1680 gcaagcaggg agctagaacg attcgcagtt aatcctggcc tgttagaaac atcagaaggc 1740 tgtagacaaa tactgggaca gctacaacca tcccttcaga caggatcaga agaacttaga 1800 tcattatata atacagtagc aaccctctat tgtgtgcatc aaaggataga gataaaagac 1860 accaaggaag ctttagacaa gatagaggaa gagcaaaaca aaagtaagac caccgcacag 1920 caagccgccg ctgatcttca gacctggagg aggagatatg agggacaatt ggagaagtga 1980 attatataaa tataaagtag taaaaattga accattagga gtagcaccca ccaaggcaaa 2040 gagaagagtg gtgcagagag aaaaaagagc agtgggaata ggagctttgt tccttgggtt 2100 cttgggagca gcaggaagca ctatgggcgc agcgtcaatg acgctgacgg tacaggccag 2160 acaattattg tctggtatag tgcagcagca gaacaatttg ctgagggcta ttgaggcgca 2220 acagcatctg ttgcaactca cagtctgggg catcaagcag ctccaggcaa gaatcctggc 2280 tgtggaaaga tacctaaagg atcaacagct cctggggatt tggggttgct ctggaaaact 2340 catttgcacc actgctgtgc cttggaatgc tagttggagt aataaatctc tggaacagat 2400 ttggaatcac acgacctgga tggagtggga cagagaaatt aacaattaca caagcttaat 2460 acactcctta attgaagaat cgcaaaacca gcaagaaaag aatgaacaag aattattgga 2520 attagataaa tgggcaagtt tgtggaattg gtttaacata acaaattggc tgtggtatat 2580 aaaattattc ataatgatag taggaggctt ggtaggttta agaatagttt ttgctgtact 2640 ttctatagtg aatagagtta ggcagggata ttcaccatta tcgtttcaga cccacctccc 2700 aaccccgagg ggacccgaca ggcccgaagg aatagaagaa gaaggtggag agagagacag 2760 agacagatcc attcgattag tgaacggatc tcgacggtat cggttaactt ttaaaagaaa 2820 aggggggatt ggggggtaca gtgcagggga aagaatagta gacataatag caacagacat 2880 acaaactaaa gaattacaaa aacaaattac aaaattcaaa attttatcgc gatcgcggaa 2940 tgaaagaccc cacctgtagg tttggcaagc tagcttaagt aacgccattt tgcaaggcat 3000 ggaaaataca taactgagaa tagagaagtt cagatcaagg ttaggaacag agagacagca 3060 gaatatgggc caaacaggat atctgtggta agcagttcct gccccggctc agggccaaga 3120 acagatggtc cccagatgcg gtcccgccct cagcagtttc tagagaacca tcagatgttt 3180 ccagggtgcc ccaaggacct gaaaatgacc ctgtgcctta tttgaactaa ccaatcagtt 3240 cgcttctcgc ttctgttcgc gcgcttctgc tccccgagct caataaaaga gcccacaacc 3300 cctcactcgg cgcgccagtc cttcgaagta gatctttgtc gatcctacca tccactcgac 3360 acacccgcca gcggccgctg ccaagcttcc gagctctcga attaattcac ggtacccacc 3420 atggcctagg gagactagtc gaatcgatat caacctctgg attacaaaat ttgtgaaaga 3480 ttgactggta ttcttaacta tgttgctcct tttacgctat gtggatacgc tgctttaatg 3540 cctttgtatc atgctattgc ttcccgtatg gctttcattt tctcctcctt gtataaatcc 3600 tggttgctgt ctctttatga ggagttgtgg cccgttgtca ggcaacgtgg cgtggtgtgc 3660 actgtgtttg ctgacgcaac ccccactggt tggggcattg ccaccacctg tcagctcctt 3720 tccgggactt tcgctttccc cctccctatt gccacggcgg aactcatcgc cgcctgcctt 3780 gcccgctgct ggacaggggc tcggctgttg ggcactgaca attccgtggt gttgtcgggg 3840 aagctgacgt ccttttcatg gctgctcgcc tgtgttgcca cctggattct gcgcgggacg 3900 tccttctgct acgtcccttc ggccctcaat ccagcggacc ttccttcccg cggcctgctg 3960 ccggctctgc ggcctcttcc gcgtcttcgc cttcgccctc agacgagtcg gatctccctt 4020 tgggccgcct ccccgcctgg ttaattaaag tacctttaag accaatgact tacaaggcag 4080 ctgtagatct tagccacttt ttaaaagaaa aggggggact ggaagggcga attcactccc 4140 aacgaagaca agatctgctt tttgcttgta ctgggtctct ctggttagac cagatctgag 4200 cctgggagct ctctggctaa ctagggaacc cactgcttaa gcctcaataa agcttgcctt 4260 gagtgcttca agtagtgtgt gcccgtctgt tgtgtgactc tggtaactag agatccctca 4320 gaccctttta gtcagtgtgg aaaatctcta gcaggcatgc cagacatgat aagatacatt 4380 gatgagtttg gacaaaccac aactagaatg cagtgaaaaa aatgctttat ttgtgaaatt 4440 tgtgatgcta ttgctttatt tgtaaccatt ataagctgca ataaacaagt taacaacaac 4500 aattgcattc attttatgtt tcaggttcag ggggaggtgt gggaggtttt ttggcgcgcc 4560 atcgtcgagg ttccctttag tgagggttaa ttgcgagctt ggcgtaatca tggtcatagc 4620 tgtttcctgt gtgaaattgt tatccgctca caattccaca caacatacga gccggaagca 4680 taaagtgtaa agcctggggt gcctaatgag tgagctaact cacattaatt gcgttgcgct 4740 cactgcccgc tttccagtcg ggaaacctgt cgtgccagct gcattaatga atcggccaac 4800 gcgcggggag aggcggtttg cgtattgggc gctcttccgc ttcctcgctc actgactcgc 4860 tgcgctcggt cgttcggctg cggcgagcgg tatcagctca ctcaaaggcg gtaatacggt 4920 tatccacaga atcaggggat aacgcaggaa agaacatgtg agcaaaaggc cagcaaaagg 4980 ccaggaaccg taaaaaggcc gcgttgctgg cgtttttcca taggctccgc ccccctgacg 5040 agcatcacaa aaatcgacgc tcaagtcaga ggtggcgaaa cccgacagga ctataaagat 5100 accaggcgtt tccccctgga agctccctcg tgcgctctcc tgttccgacc ctgccgctta 5160 ccggatacct gtccgccttt ctcccttcgg gaagcgtggc gctttctcat agctcacgct 5220 gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc gctccaagct gggctgtgtg cacgaacccc 5280 ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg gtaactatcg tcttgagtcc aacccggtaa 5340 gacacgactt atcgccactg gcagcagcca ctggtaacag gattagcaga gcgaggtatg 5400 taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt ggcctaacta cggctacact agaagaacag 5460 tatttggtat ctgcgctctg ctgaagccag ttaccttcgg aaaaagagtt ggtagctctt 5520 gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg gtggtttttt tgtttgcaag cagcagatta 5580 cgcgcagaaa aaaaggatct caagaagatc ctttgatctt ttctacgggg tctgacgctc 5640 agtggaacga aaactcacgt taagggattt tggtcatgag attatcaaaa aggatcttca 5700 cctagatcct tttaaattaa aaatgaagtt ttaaatcaat ctaaagtata tatgagtaaa 5760 cttggtctga cagttaccaa tgcttaatca gtgaggcacc tatctcagcg atctgtctat 5820 ttcgttcatc catagttgcc tgactccccg tcgtgtagat aactacgata cgggagggct 5880 taccatctgg ccccagtgct gcaatgatac cgcgagaccc acgctcaccg gctccagatt 5940 tatcagcaat aaaccagcca gccggaaggg ccgagcgcag aagtggtcct gcaactttat 6000 ccgcctccat ccagtctatt aattgttgcc gggaagctag agtaagtagt tcgccagtta 6060 atagtttgcg caacgttgtt gccattgcta caggcatcgt ggtgtcacgc tcgtcgtttg 6120 gtatggcttc attcagctcc ggttcccaac gatcaaggcg agttacatga tcccccatgt 6180 tgtgcaaaaa agcggttagc tccttcggtc ctccgatcgt tgtcagaagt aagttggccg 6240 cagtgttatc actcatggtt atggcagcac tgcataattc tcttactgtc atgccatccg 6300 taagatgctt ttctgtgact ggtgagtact caaccaagtc attctgagaa tagtgtatgc 6360 ggcgaccgag ttgctcttgc ccggcgtcaa tacgggataa taccgcgcca catagcagaa 6420 ctttaaaagt gctcatcatt ggaaaacgtt cttcggggcg aaaactctca aggatcttac 6480 cgctgttgag atccagttcg atgtaaccca ctcgtgcacc caactgatct tcagcatctt 6540 ttactttcac cagcgtttct gggtgagcaa aaacaggaag gcaaaatgcc gcaaaaaagg 6600 gaataagggc gacacggaaa tgttgaatac tcatactctt cctttttcaa tattattgaa 6660 gcatttatca gggttattgt ctcatgagcg gatacatatt tgaatgtatt tagaaaaata 6720 aacaaatagg ggttccgcgc acatttcccc gaaaagtgcc ac 6762 <210> 253 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic VH CDR1 <400> 253 Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 1 5 <210> 254 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic VH CDR1 <400> 254 Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 1 5 <210> 255 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic VH CDR1 <400> 255 Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 1 5 <210> 256 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic VH CDR1 <400> 256 Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser Ser Tyr 1 5 <210> 257 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic VH CDR1 <400> 257 Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 1 5 <210> 258 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic VH CDR1 <400> 258 Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 1 5 <210> 259 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic VH CDR1 <400> 259 Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr 1 5 <210> 260 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic VH CDR1 <400> 260 Gly Phe Thr Phe Ser 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Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 266 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic VH CDR2 <400> 266 Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 267 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic VH CDR2 <400> 267 Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 268 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic VH CDR2 <400> 268 Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 269 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic VH CDR3 <400> 269 Ala Arg Ala Glu Met Gly Ala Val Phe Asp Ile 1 5 10 <210> 270 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic VH CDR3 <400> 270 Ala Arg Asp Gly Thr Tyr Leu Gly Gly Leu Trp Tyr Phe Asp Leu 1 5 10 15 <210> 271 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic VH CDR3 <400> 271 Ala Arg Glu Ser Trp Pro Met Asp Val 1 5 <210> 272 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic VH CDR3 <400> 272 Ala Arg Gly Arg Gly Tyr Ala Thr Ser Leu Ala Phe Asp Ile 1 5 10 <210> 273 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic VH CDR3 <400> 273 Ala Arg Gly Ser Gln Glu His Leu Ile Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 274 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic VH CDR3 <400> 274 Ala Arg Thr Asp Phe Trp Ser Gly Ser Pro Pro Gly Leu Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 275 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic VH CDR3 <400> 275 Ala Arg Thr Pro Glu Tyr Ser Ser Ser Ile Trp His Tyr Tyr Tyr Gly 1 5 10 15 Met Asp Val <210> 276 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic VH CDR3 <400> 276 Val Lys Gly Pro Leu Gln Glu Pro Pro Tyr Asp Tyr Gly Met Asp Val 1 5 10 15 <210> 277 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic VL CDR3 <400> 277 Gln Gln Arg Ile Ser Trp Pro Phe Thr Phe 1 5 10 <210> 278 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic VL CDR3 <400> 278 Met Gln Gly Leu Gly Leu Pro Leu Thr Phe 1 5 10 <210> 279 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic VL CDR3 <400> 279 Gln Gln Tyr Ala Ala Tyr Pro Thr Phe 1 5 <210> 280 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic VL CDR3 <400> 280 Gln Gln Arg His Val Trp Pro Pro Thr Phe 1 5 10 <210> 281 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic VL CDR3 <400> 281 Gln Gln Arg Phe Tyr Tyr Pro Trp Thr Phe 1 5 10 <210> 282 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic VL CDR3 <400> 282 Gln Gln Ile Tyr Thr Phe Pro Phe Thr Phe 1 5 10 <210> 283 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic VL CDR3 <400> 283 Gln Gln Phe Ala His Thr Pro Phe Thr Phe 1 5 10 <210> 284 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic VL CDR3 <400> 284 Gln Gln His His Val Trp Pro Leu Thr Phe 1 5 10

Claims (37)

  1. (i) 항원 결합 분자, (ii) 막횡단 도메인, (iii) 세포내 공동자극 도메인, 및 (iv) 활성화 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체 (CAR) 또는 T 세포 수용체 (TCR)이며,
    여기서 항원 결합 분자 및 막횡단 도메인은 (a) 39개 아미노산 잔기 길이보다 짧고, (b) (b1) 서열식별번호: 1의 아미노산 123 내지 152로 이루어지거나, (b2) (b1)의 N-말단 또는 C-말단에 1 내지 6개의 아미노산 잔기가 부가되거나 이로부터 결실되거나, 또는 (b3) (b1) 또는 (b2)에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 말단절단된 힌지 도메인(THD)을 포함하는 펩티드를 통해 연결된 것인 CAR 또는 TCR.
  2. 제1항에 있어서, 펩티드가 서열식별번호: 1의 아미노산 잔기 123 내지 152로 이루어지거나, 또는 서열식별번호: 1의 아미노산 잔기 123 내지 152로 이루어지며 그의 N-말단에 1 내지 6개의 아미노산 잔기가 부가된 것인, CAR 또는 TCR.
  3. 제2항에 있어서, 1 내지 6개의 아미노산이 이종 아미노산(들)인, CAR 또는 TCR.
  4. 제1항에 있어서, 펩티드가 서열식별번호: 1의 아미노산 잔기 123 내지 152로 이루어지며 그의 N-말단에 1 내지 6개의 아미노산 잔기가 결실된 것인, CAR 또는 TCR.
  5. 제4항에 있어서, 펩티드가 서열식별번호: 1의 아미노산 잔기 123 내지 152에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 것인, CAR 또는 TCR.
  6. 제4항에 있어서, 펩티드가 서열식별번호: 1의 아미노산 잔기 123 내지 152에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 것인, CAR 또는 TCR.
  7. 제1항에 있어서, 펩티드가 서열식별번호: 1의 아미노산 123 내지 152로 이루어지는 것인, CAR 또는 TCR.
  8. 제1항에 있어서, 막횡단 도메인이 4-1BB/CD137, T 세포 수용체의 알파 쇄, T 세포 수용체의 베타 쇄, CD3 엡실론, CD4, CD5, CD8 알파, CD9, CD16, CD19, CD22, CD33, CD37, CD45, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, CD154, 또는 T 세포 수용체의 제타 쇄, 또는 그의 임의의 조합인, CAR 또는 TCR.
  9. 제1항에 있어서, 막횡단 도메인이 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하는 것인, CAR 또는 TCR.
  10. 제1항에 있어서, 세포내 도메인이 4-1BB/CD137, 활성화 NK 세포 수용체, B7-H3, BAFFR, BLAME (SLAMF8), BTLA, CD100 (SEMA4D), CD103, CD160 (BY55), CD18, CD19, CD19a, CD2, CD247, CD27, CD276 (B7-H3), CD29, CD3 델타, CD3 엡실론, CD3 감마, CD30, CD4, CD40, CD49a, CD49D, CD49f, CD69, CD7, CD84, CD8알파, CD8베타, CD96 (Tactile), CD11a, CD11b, CD11c, CD11d, CDS, CEACAM1, CRTAM, 시토카인 수용체, DAP-10, DNAM1 (CD226), Fc 감마 수용체, GADS, GITR, HVEM (LIGHTR), IA4, ICAM-1, ICAM-1, Ig 알파 (CD79a), IL2R 베타, IL2R 감마, IL7R 알파, 이뮤노글로불린-유사 단백질, 유도성 T 세포 공동자극자 (ICOS), 인테그린, ITGA4, ITGA4, ITGA6, ITGAD, ITGAE, ITGAL, ITGAM, ITGAX, ITGB2, ITGB7, ITGB1, KIRDS2, LAT, LFA-1, LFA-1, CD83과 특이적으로 결합하는 리간드, LIGHT, LIGHT (종양 괴사 인자 슈퍼패밀리 구성원 14; TNFSF14), LTBR, Ly9 (CD229), 림프구 기능-연관 항원-1 (LFA-1 (CD11a/CD18), MHC 부류 I 분자, NKG2C, NKG2D, NKp30, NKp44, NKp46, NKp80 (KLRF1), OX-40, PAG/Cbp, 프로그램화된 사멸-1 (PD-1), PSGL1, SELPLG (CD162), 신호전달 림프구성 활성화 분자 (SLAM 단백질), SLAM (SLAMF1; CD150; IPO-3), SLAMF4 (CD244; 2B4), SLAMF6 (NTB-A; Ly108), SLAMF7, SLP-76, TNF 수용체 단백질, TNFR2, 톨 리간드 수용체, TRANCE/RANKL, VLA1, 또는 VLA-6, 또는 그의 조합의 신호전달 영역을 포함하는 것인, CAR 또는 TCR.
  11. 제1항에 있어서, 세포내 도메인이 4-1BB/CD137 신호전달 영역을 포함하는 것인, CAR 또는 TCR.
  12. 제1항에 있어서, 세포내 도메인이 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 것인, CAR 또는 TCR.
  13. 제1항에 있어서, 항원 결합 분자가 중쇄 가변 영역 (VH) 및 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함하고, 여기서 VH는 3개의 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함하고, VL은 3개의 CDR을 포함하는 것인, CAR 또는 TCR.
  14. 제1항에 있어서, 항원 결합 분자가 5T4, 알파태아단백질, B 세포 성숙 항원 (BCMA), CA-125, 암배아성 항원, CD19, CD20, CD22, CD23, CD30, CD33, CD56, CD123, CD138, c-Met, CSPG4, C-유형 렉틴-유사 분자 1 (CLL-1), EGFRvIII, 상피 종양 항원, ERBB2, FLT3, 폴레이트 결합 단백질, GD2, GD3, HER1-HER2 조합, HER2-HER3 조합, HER2/Neu, HERV-K, HIV-1 외피 당단백질 gp41, HIV-1 외피 당단백질 gp120, IL-11R알파, 카파 쇄, 람다 쇄, 흑색종-연관 항원, 메소텔린, MUC-1, 돌연변이된 p53, 돌연변이된 ras, 전립선-특이적 항원, ROR1, 또는 VEGFR2, 또는 그의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 항원에 특이적으로 결합하는 것인, CAR 또는 TCR.
  15. 제1항에 있어서, 활성화 도메인이 서열식별번호: 251의 아미노산 서열을 포함하는 것인, CAR 또는 TCR.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항의 키메라 항원 수용체 (CAR) 또는 T 세포 수용체 (TCR)를 코딩하는 폴리뉴클레오티드.
  17. 제16항의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터.
  18. 제17항에 있어서, 벡터가 아데노바이러스 벡터, 아데노바이러스-연관 벡터, DNA 벡터, 렌티바이러스 벡터, 플라스미드, 레트로바이러스 벡터, 또는 RNA 벡터, 또는 그의 임의의 조합인 것인, 벡터.
  19. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항의 키메라 항원 수용체 (CAR) 또는 T 세포 수용체 (TCR), 상기 CAR 또는 TCR을 코딩하는 폴리펩티드를 포함하는 벡터, 또는 그의 임의의 조합을 포함하는 세포,
  20. 제19항에 있어서, 세포가 T 세포인, 세포.
  21. 제20항에 있어서, T 세포가 동종 T 세포, 자가 T 세포, 조작된 자가 T 세포 (eACT), 또는 종양-침윤 림프구 (TIL)인, 세포.
  22. 제19항에 있어서, T 세포가 CD4+ T 세포인, 세포.
  23. 제19항에 있어서, T 세포가 CD8+ T 세포인, 세포.
  24. 제19항에 있어서, T 세포가 시험관내 세포인, 세포.
  25. 제19항에 있어서, T 세포가 자가 T 세포인, 세포.
  26. 세포를 적합한 조건 하에 제16항의 폴리뉴클레오티드 또는 상기 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터로 형질도입하는 것을 포함하는, 키메라 항원 수용체 (CAR) 또는 T 세포 수용체 (TCR)를 발현하는 세포를 제조하는 방법.
  27. 제26항에 있어서, 세포를 단리하는 추가적인 단계를 포함하는, 방법.
  28. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항의 키메라 항원 수용체 (CAR) 또는 T 세포 수용체 (TCR); 상기 CAR 또는 TCR을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터; 또는 상기 CAR 또는 TCR, 상기 벡터, 또는 그의 임의의 조합을 포함하는 세포, 및 적어도 1종의 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 암 치료용 조성물.
  29. 제28항에 있어서, 암이 혈액암인, 조성물.
  30. 제28항에 있어서, 암이 백혈구 암인, 조성물.
  31. 제28항에 있어서, 암이 형질 세포 암인, 조성물.
  32. 제28항에 있어서, 암이 백혈병, 림프종 또는 골수종인, 조성물.
  33. 제28항에 있어서, 암이 급성 림프모구성 백혈병 (ALL), 급성 골수성 백혈병, B 세포 전림프구성 백혈병, B-세포 급성 림프성 백혈병 ("BALL"), 모구성 형질세포양 수지상 세포 신생물, 버킷 림프종, 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수 백혈병 (CML), 만성 골수성 백혈병, 만성 또는 급성 백혈병, 미만성 대 B 세포 림프종 (DLBCL), 여포성 림프종 (FL), 모발상 세포 백혈병, 호지킨병, 악성 림프증식성 상태, MALT 림프종, 외투 세포 림프종, 변연부 림프종, 의미 불명의 모노클로날 감마글로불린병증 (MGUS), 다발성 골수종, 골수이형성증 및 골수이형성 증후군, 비-호지킨 림프종 (NHL), 형질 세포 증식성 장애, 형질모구성 림프종, 형질세포양 수지상 세포 신생물, 형질세포종, POEMS 증후군, 원발성 종격 대 B 세포 림프종 (PMBC), 소세포- 또는 대세포-여포성 림프종, 비장 변연부 림프종 (SMZL), 전신 아밀로이드 경쇄 아밀로이드증, T-세포 급성 림프성 백혈병 ("TALL"), T-세포 림프종, 형질전환된 여포성 림프종, 또는 발덴스트롬 마크로글로불린혈증, 또는 그의 조합인, 조성물.
  34. 제33항에 있어서, ALL이 비-T 세포 ALL인, 조성물.
  35. 제33항에 있어서, 형질 세포 증식성 장애가 무증상 골수종인, 조성물.
  36. 제35항에 있어서, 무증상 골수종이 무증상 다발성 골수종 또는 무통성 골수종인, 조성물.
  37. 제33항에 있어서, 형질세포종이 형질 세포 이혼화증, 고립 골수종, 고립 형질세포종, 수질외 형질세포종 또는 다발성 형질세포종인, 조성물.
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