CN107849132B - 人源化的和亲和力成熟的针对FcRH5的抗体和使用方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及抗FcRH5抗体，包括包含FcRH5结合域和CD3结合域的抗FcRH5抗体(例如抗FcRH5 T细胞依赖性双特异性(TDB)抗体)及其使用方法。

Description

人源化的和亲和力成熟的针对FcRH5的抗体和使用方法
序列表
本申请含有序列表，已经以ASCII格式电子提交且据此通过援引完整收录。2016年6月14日创建的所述ASCII拷贝命名为50474-134WO2_Sequence_Listing_6_14_16_ST25，而且大小为133,004个字节。
发明领域
本发明涉及抗FcRH5抗体及其使用方法。
发明背景
细胞增殖性病症(诸如癌症)的特征在于细胞亚群的生长不受控制。它们是发达世界的首位死亡原因和发展中国家的第二位死亡原因，每年诊断超过1400万例新癌症病例且发生超过800万例癌症死亡。(美国)国家癌症学会估计2016年超过50万美国人会死于癌症，占全国死亡人数的接近四分之一。由于老龄人口增加，因此癌症的发病率伴随升高了，因为发生癌症的概率在70岁后要高超过两倍。如此，癌症护理构成一项重大的且不断变大的社会负担。
Fc受体样5(FcRH5，也称作FcRL5或IRTA2)基因属于六种最近鉴定的免疫球蛋白超家族(IgSF)基因的家族。这个基因家族与具有保守基因组结构，胞外Ig域组成，和免疫受体基于酪氨酸的抑制性(ITIM)和免疫受体基于酪氨酸的激活性(ITAM)样信号传导基序的Fc受体密切相关(Davis et al.Eur.J.Immunol.35：674-80，2005)。FcRH/IRTA受体家族的六个成员已有描述：FcRH1/IRTA5，FcRH2/IRTA4，FcRH3/IRTA3，FcRH4/IRTA1，FcRH5/IRTA2，和FcRH6(Polson et al.Int.Immunol.18(9)：1363-1373，2006)。FcRH cDNA编码I型跨膜糖蛋白，其具有多个Ig样胞外域和含有共有免疫受体基于酪氨酸的激活性和/或抑制性信号传导基序的胞质域。FcRH基因是结构相关的，而且它们的蛋白质产物彼此分享28-60％胞外同一性。它们还与其最近的FcR亲属分享15-31％同一性。不同FcRH之间存在高度同源性。
FcRH5的配体未知，但是已经将FcRH5与抗原引发的B细胞发育期间增强的增殖和下游同种型表达联系起来(Dement-Brown et al.J.Leukoc.Biol.91：59-67，2012)。FcRH5基因座具有三种主要mRNA同等型(FcRH5a，FcRH5b，和FcRH5c)。由这些转录物编码的主要FcRH5蛋白质同等型分享共同的氨基酸序列，直至残基560，其特征在于共同的信号肽和六个胞外Ig样域。FcRH5a代表一种759个氨基酸的分泌型糖蛋白，其具有八个Ig样域，接着是其C端处的13个独特的，主要为极性的氨基酸。FcRH5b在氨基酸残基560处不同于FcRH5a且延伸一小段32个另外的残基，其疏水性与其经GPI锚停泊至质膜相容。FcRH5c是最长的同等型，其序列在氨基酸746处不同于FcRH5a。FcRH5c编码一种977个氨基酸的I型跨膜糖蛋白，其具有包含八个潜在N连接的糖基化位点的九个胞外Ig型域，23个氨基酸的跨膜域，和具有三个共有SH2结合基序(其具有ITIM共有)的104个氨基酸的胞质域。
FcRH基因在染色体1的1q21-23区中的经典FcR基因(FcγRI，FcγRII，FcγRIII，和FcεRI)中部聚簇在一起。这个区含有与造血肿瘤，尤其是多发性骨髓瘤中的恶性表型有关的最频繁的次要染色体异常之一(Hatzivassiliou et al.Immunity.14：277-89，2001)。FcRH5只在B细胞谱系中表达，早至前B细胞开始，但是直至成熟B细胞阶段才获得完全表达。与大多数已知的其它B细胞特异性表面蛋白质(例如CD20，CD19，和CD22)不同，FcRH5在浆细胞中继续表达，而其它B细胞特异性标志物下调(Polson et al.Int.Immunol.18：1363-73，2006)。另外，FcRH5mRNA在具有1q21异常的多发性骨髓瘤细胞系中过表达，如通过寡核苷酸阵列检测的(Inoue Am.J.Pathol.165：71-81，2004)。表达样式指示FcRH5可以成为用于治疗多发性骨髓瘤的基于抗体的疗法的靶物。多发性骨髓瘤是浆细胞的一种恶性，其特征在于骨骼损害，肾衰竭，贫血，和高钙血症，而且它本质上是通过当前疗法不可治愈的。当前用于多发性骨髓瘤的药物治疗包括蛋白酶体抑制剂硼替佐米
Figure BDA0001530253770000021
免疫调控剂来那度胺
Figure BDA0001530253770000022
和类固醇地塞米松的组合。
基于单克隆抗体(单抗)的疗法已经成为癌症的一种重要的治疗模态。基于FcRH5c特异性抗体的疗法和检测方法可能是特别有效的，因为它们特异性识别靶细胞，膜结合FcRH5而非识别FcRH5的可溶性和膜同等型二者的抗体。然而，只有FcRH5的最后一个Ig样域(Ig样域9)是在FcRH5的三种主要同等型(例如FcRH5a，FcRH5b，和FcRH5c)之间有区别的独特胞外区，而且FcRH5内的Ig样域之间存在显著同源性。而且，最后一个Ig样域在FcRH1，FcRH2，FcRH3，和FcRH5之间高度保守。任何特异性靶向FcRH5的基于抗体的疗法应当具有最小限度的与其它FcRH的交叉反应性以避免不利脱靶效应(例如，FcRH3在正常NK细胞上表达)。
鉴于上述，本领域对用于治疗细胞增殖性病症(例如癌症，例如FcRH5阳性癌症，例如多发性骨髓瘤)的安全且有效的药剂存在未满足的需求。
发明概述
本发明提供抗FcRH5抗体(例如双特异性抗体，例如FcRH5T细胞依赖性双特异性(TDB)抗体)，组合物，和使用其治疗细胞增殖性病症(例如癌症，例如FcRH5阳性癌症，例如多发性骨髓瘤)的方法。
在第一个方面，本发明特征在于一种抗Fc受体样5(FcRH5)抗体，其包含包含下述六种高变区(HVR)的结合域：(a)包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ IDNO：2的氨基酸序列的HVR-H2，(c)包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列的HVR-H3，(d)包含SEQ IDNO：4的氨基酸序列的HVR-L1，(e)包含SEQ ID NO：5的氨基酸序列的HVR-L2，和(f)包含SEQID NO：6的氨基酸序列的HVR-L3。
在一些实施方案中，该抗FcRH5抗体包含包含下述六种HVR的结合域：(a)包含SEQID NO：1的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO：8的氨基酸序列的HVR-H2，(c)包含SEQID NO：9的氨基酸序列的HVR-H3，(d)包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列的HVR-L1，(e)包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列的HVR-L2，和(f)包含SEQ ID NO：23的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，该结合域包含(a)包含与SEQ ID NO：104的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的重链可变(VH)域，(b)包含与SEQ ID NO：105的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变(VL)域，或(c)(a)中的VH域和(b)中的VL域。在一些实施方案中，该抗体进一步包含下述重链可变区框架区(FR)：(a)包含SEQ ID NO：52的氨基酸序列的FR-H1，(b)包含SEQ ID NO：54的氨基酸序列的FR-H2，(c)包含SEQ ID NO：46的氨基酸序列的FR-H3，和(d)包含SEQ ID NO：47的氨基酸序列的FR-H4。在一些实施方案中，该VH域包含SEQ ID NO：104的氨基酸序列。在一些实施方案中，该抗体进一步包含下述轻链可变区FR：(a)包含SEQ ID NO：48的氨基酸序列的FR-L1，(b)包含SEQ ID NO：57的氨基酸序列的FR-L2，(c)包含SEQ ID NO：50的氨基酸序列的FR-L3，和(d)包含SEQ ID NO：51的氨基酸序列的FR-L4。在一些实施方案中，该VL域包含SEQ ID NO：105的氨基酸序列。在一些实施方案中，该抗FcRH5抗体包含包含下述各项的结合域：(a)包含SEQ ID NO：104的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQ ID NO：105的氨基酸序列的VL域。
在其它实施方案中，该抗FcRH5抗体包含包含下述六种HVR的结合域：(a)包含SEQID NO：1的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO：8的氨基酸序列的HVR-H2，(c)包含SEQID NO：10的氨基酸序列的HVR-H3，(d)包含SEQ ID NO：14的氨基酸序列的HVR-L1，(e)包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列的HVR-L2，和(f)包含SEQ ID NO：23的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，该结合域包含(a)包含与SEQ ID NO：106的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的VH域，(b)包含与SEQ ID NO：107的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的VL域，或(c)(a)中的VH域和(b)中的VL域。在一些实施方案中，该抗体进一步包含下述重链可变区FR：(a)包含SEQ ID NO：53的氨基酸序列的FR-H1，(b)包含SEQID NO：54的氨基酸序列的FR-H2，(c)包含SEQ ID NO：46的氨基酸序列的FR-H3，和(d)包含SEQ ID NO：47的氨基酸序列的FR-H4。在一些实施方案中，该VH域包含SEQ ID NO：106的氨基酸序列。在一些实施方案中，该抗体进一步包含下述轻链可变区FR：(a)包含SEQ ID NO：48的氨基酸序列的FR-L1，(b)包含SEQ ID NO：57的氨基酸序列的FR-L2，(c)包含SEQ IDNO：50的氨基酸序列的FR-L3，和(d)包含SEQ ID NO：51的氨基酸序列的FR-L4。在一些实施方案中，该VL域包含SEQ ID NO：107的氨基酸序列。在一些实施方案中，该抗FcRH5抗体包含包含下述各项的结合域：(a)包含SEQ ID NO：106的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQ IDNO：107的氨基酸序列的VL域。
在其它实施方案中，该抗FcRH5抗体包含包含下述六种HVR的结合域：(a)包含SEQID NO：1的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列的HVR-H2，(c)包含SEQID NO：9的氨基酸序列的HVR-H3，(d)包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的HVR-L1，(e)包含SEQ ID NO：15的氨基酸序列的HVR-L2，和(f)包含SEQ ID NO：20的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，该结合域包含(a)包含与SEQ ID NO：82的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的VH域，(b)包含与SEQ ID NO：83的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的VL域，或(c)(a)中的VH域和(b)中的VL域。在一些实施方案中，该抗体进一步包含下述重链可变区FR：(a)包含SEQ ID NO：52的氨基酸序列的FR-H1，(b)包含SEQID NO：54的氨基酸序列的FR-H2，(c)包含SEQ ID NO：46的氨基酸序列的FR-H3，和(d)包含SEQ ID NO：47的氨基酸序列的FR-H4。在一些实施方案中，该VH域包含SEQ ID NO：82的氨基酸序列。在一些实施方案中，该抗体进一步包含下述轻链可变区FR：(a)包含SEQ ID NO：48的氨基酸序列的FR-L1，(b)包含SEQ ID NO：56的氨基酸序列的FR-L2，(c)包含SEQ ID NO：50的氨基酸序列的FR-L3，和(d)包含SEQ ID NO：51的氨基酸序列的FR-L4。在一些实施方案中，该VL域包含SEQ ID NO：83的氨基酸序列。在一些实施方案中，该抗FcRH5抗体包含包含下述各项的结合域：(a)包含SEQ ID NO：82的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQ ID NO：83的氨基酸序列的VL域。
在其它实施方案中，该抗FcRH5抗体包含包含下述六种HVR的结合域：(a)包含SEQID NO：1的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列的HVR-H2，(c)包含SEQID NO：9的氨基酸序列的HVR-H3，(d)包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列的HVR-L1，(e)包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列的HVR-L2，和(f)包含SEQ ID NO：21的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，该结合域包含(a)包含与SEQ ID NO：84的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的VH域，(b)包含与SEQ ID NO：85的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的VL域，或(c)(a)中的VH域和(b)中的VL域。在一些实施方案中，该抗体进一步包含下述重链可变区FR：(a)包含SEQ ID NO：52的氨基酸序列的FR-H1，(b)包含SEQID NO：54的氨基酸序列的FR-H2，(c)包含SEQ ID NO：46的氨基酸序列的FR-H3，和(d)包含SEQ ID NO：47的氨基酸序列的FR-H4。在一些实施方案中，该VH域包含SEQ ID NO：84的氨基酸序列。在一些实施方案中，该抗体进一步包含下述轻链可变区FR：(a)包含SEQ ID NO：48的氨基酸序列的FR-L1，(b)包含SEQ ID NO：57的氨基酸序列的FR-L2，(c)包含SEQ ID NO：50的氨基酸序列的FR-L3，和(d)包含SEQ ID NO：51的氨基酸序列的FR-L4。在一些实施方案中，该VL域包含SEQ ID NO：85的氨基酸序列。在一些实施方案中，该抗FcRH5抗体包含包含下述各项的结合域：(a)包含SEQ ID NO：84的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQ ID NO：85的氨基酸序列的VL域。
在其它实施方案中，该抗FcRH5抗体包含包含下述六种HVR的结合域：(a)包含SEQID NO：1的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列的HVR-H2，(c)包含SEQID NO：9的氨基酸序列的HVR-H3，(d)包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列的HVR-L1，(e)包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列的HVR-L2，和(f)包含SEQ ID NO：22的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，该结合域包含(a)包含与SEQ ID NO：86的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的VH域，(b)包含与SEQ ID NO：87的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的VL域，或(c)(a)中的VH域和(b)中的VL域。在一些实施方案中，该抗体进一步包含下述重链可变区FR：(a)包含SEQ ID NO：52的氨基酸序列的FR-H1，(b)包含SEQID NO：54的氨基酸序列的FR-H2，(c)包含SEQ ID NO：46的氨基酸序列的FR-H3，和(d)包含SEQ ID NO：47的氨基酸序列的FR-H4。在一些实施方案中，该VH域包含SEQ ID NO：86的氨基酸序列。在一些实施方案中，该抗体进一步包含下述轻链可变区FR：(a)包含SEQ ID NO：48的氨基酸序列的FR-L1，(b)包含SEQ ID NO：57的氨基酸序列的FR-L2，(c)包含SEQ ID NO：50的氨基酸序列的FR-L3，和(d)包含SEQ ID NO：51的氨基酸序列的FR-L4。在一些实施方案中，该VL域包含SEQ ID NO：87的氨基酸序列。在一些实施方案中，该抗FcRH5抗体包含包含下述各项的结合域：(a)包含SEQ ID NO：86的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQ ID NO：87的氨基酸序列的VL域。
在其它实施方案中，该抗FcRH5抗体包含包含下述六种HVR的结合域：(a)包含SEQID NO：1的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列的HVR-H2，(c)包含SEQID NO：9的氨基酸序列的HVR-H3，(d)包含SEQ ID NO：13的氨基酸序列的HVR-L1，(e)包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列的HVR-L2，和(f)包含SEQ ID NO：21的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，该结合域包含(a)包含与SEQ ID NO：88的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的VH域，(b)包含与SEQ ID NO：89的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的VL域，或(c)(a)中的VH域和(b)中的VL域。在一些实施方案中，该抗体进一步包含下述重链可变区FR：(a)包含SEQ ID NO：52的氨基酸序列的FR-H1，(b)包含SEQID NO：54的氨基酸序列的FR-H2，(c)包含SEQ ID NO：46的氨基酸序列的FR-H3，和(d)包含SEQ ID NO：47的氨基酸序列的FR-H4。在一些实施方案中，该VH域包含SEQ ID NO：88的氨基酸序列。在一些实施方案中，该抗体进一步包含下述轻链可变区FR：(a)包含SEQ ID NO：48的氨基酸序列的FR-L1，(b)包含SEQ ID NO：57的氨基酸序列的FR-L2，(c)包含SEQ ID NO：50的氨基酸序列的FR-L3，和(d)包含SEQ ID NO：51的氨基酸序列的FR-L4。在一些实施方案中，该VL域包含SEQ ID NO：89的氨基酸序列。在一些实施方案中，该抗FcRH5抗体包含包含下述各项的结合域：(a)包含SEQ ID NO：88的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQ ID NO：89的氨基酸序列的VL域。
在其它实施方案中，该抗FcRH5抗体包含包含下述六种HVR的结合域：(a)包含SEQID NO：1的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列的HVR-H2，(c)包含SEQID NO：9的氨基酸序列的HVR-H3，(d)包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列的HVR-L1，(e)包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列的HVR-L2，和(f)包含SEQ ID NO：23的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，该结合域包含(a)包含与SEQ ID NO：90的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的VH域，(b)包含与SEQID NO：91的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的VL域，或(c)(a)中的VH域和(b)中的VL域。在一些实施方案中，该抗体进一步包含下述重链可变区FR：(a)包含SEQ ID NO：52的氨基酸序列的FR-H1，(b)包含SEQ IDNO：54的氨基酸序列的FR-H2，(c)包含SEQ ID NO：46的氨基酸序列的FR-H3，和(d)包含SEQID NO：47的氨基酸序列的FR-H4。在一些实施方案中，该VH域包含SEQ ID NO：90的氨基酸序列。在一些实施方案中，该抗体进一步包含下述轻链可变区FR：(a)包含SEQ ID NO：48的氨基酸序列的FR-L1，(b)包含SEQ ID NO：57的氨基酸序列的FR-L2，(c)包含SEQ ID NO：50的氨基酸序列的FR-L3，和(d)包含SEQ ID NO：51的氨基酸序列的FR-L4。在一些实施方案中，该VL域包含SEQ ID NO：91的氨基酸序列。在一些实施方案中，该抗FcRH5抗体包含包含下述各项的结合域：(a)包含SEQ ID NO：90的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQ ID NO：91的氨基酸序列的VL域。
在其它实施方案中，该抗FcRH5抗体包含包含下述六种HVR的结合域：(a)包含SEQID NO：1的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列的HVR-H2，(c)包含SEQID NO：9的氨基酸序列的HVR-H3，(d)包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的HVR-L1，(e)包含SEQ ID NO：18的氨基酸序列的HVR-L2，和(f)包含SEQ ID NO：22的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，该结合域包含(a)包含与SEQ ID NO：92的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的VH域，(b)包含与SEQ ID NO：93的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的VL域，或(c)(a)中的VH域和(b)中的VL域。在一些实施方案中，该抗体进一步包含下述重链可变区FR：(a)包含SEQ ID NO：52的氨基酸序列的FR-H1，(b)包含SEQID NO：54的氨基酸序列的FR-H2，(c)包含SEQ ID NO：46的氨基酸序列的FR-H3，和(d)包含SEQ ID NO：47的氨基酸序列的FR-H4。在一些实施方案中，该VH域包含SEQ ID NO：92的氨基酸序列。在一些实施方案中，该抗体进一步包含下述轻链可变区FR：(a)包含SEQ ID NO：48的氨基酸序列的FR-L1，(b)包含SEQ ID NO：56的氨基酸序列的FR-L2，(c)包含SEQ ID NO：50的氨基酸序列的FR-L3，和(d)包含SEQ ID NO：51的氨基酸序列的FR-L4。在一些实施方案中，该VL域包含SEQ ID NO：93的氨基酸序列。在一些实施方案中，该抗FcRH5抗体包含包含下述各项的结合域：(a)包含SEQ ID NO：92的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQ ID NO：93的氨基酸序列的VL域。
在其它实施方案中，该抗FcRH5抗体包含包含下述六种HVR的结合域：(a)包含SEQID NO：1的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列的HVR-H2，(c)包含SEQID NO：9的氨基酸序列的HVR-H3，(d)包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的HVR-L1，(e)包含SEQ ID NO：19的氨基酸序列的HVR-L2，和(f)包含SEQ ID NO：24的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，该结合域包含(a)包含与SEQ ID NO：94的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的VH域，(b)包含与SEQ ID NO：95的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的VL域，或(c)(a)中的VH域和(b)中的VL域。在一些实施方案中，该抗体进一步包含下述重链可变区FR：(a)包含SEQ ID NO：52的氨基酸序列的FR-H1，(b)包含SEQID NO：54的氨基酸序列的FR-H2，(c)包含SEQ ID NO：46的氨基酸序列的FR-H3，和(d)包含SEQ ID NO：47的氨基酸序列的FR-H4。在一些实施方案中，该VH域包含SEQ ID NO：94的氨基酸序列。在一些实施方案中，该抗体进一步包含下述轻链可变区FR：(a)包含SEQ ID NO：48的氨基酸序列的FR-L1，(b)包含SEQ ID NO：57的氨基酸序列的FR-L2，(c)包含SEQID NO：50的氨基酸序列的FR-L3，和(d)包含SEQ ID NO：51的氨基酸序列的FR-L4。在一些实施方案中，该VL域包含SEQ ID NO：95的氨基酸序列。在一些实施方案中，该抗FcRH5抗体包含包含下述各项的结合域：(a)包含SEQ ID NO：94的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQ ID NO：95的氨基酸序列的VL域。
在其它实施方案中，该抗FcRH5抗体包含包含下述六种HVR的结合域：(a)包含SEQID NO：1的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列的HVR-H2，(c)包含SEQID NO：9的氨基酸序列的HVR-H3，(d)包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列的HVR-L1，(e)包含SEQ ID NO：18的氨基酸序列的HVR-L2，和(f)包含SEQ ID NO：25的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，该结合域包含(a)包含与SEQ ID NO：96的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的VH域，(b)包含与SEQ ID NO：97的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的VL域，或(c)(a)中的VH域和(b)中的VL域。在一些实施方案中，该抗体进一步包含下述重链可变区FR：(a)包含SEQ ID NO：53的氨基酸序列的FR-H1，(b)包含SEQID NO：54的氨基酸序列的FR-H2，(c)包含SEQ ID NO：46的氨基酸序列的FR-H3，和(d)包含SEQ ID NO：47的氨基酸序列的FR-H4。在一些实施方案中，该VH域包含SEQ ID NO：96的氨基酸序列。在一些实施方案中，该抗体进一步包含下述轻链可变区FR：(a)包含SEQ ID NO：48的氨基酸序列的FR-L1，(b)包含SEQ ID NO：57的氨基酸序列的FR-L2，(c)包含SEQ ID NO：50的氨基酸序列的FR-L3，和(d)包含SEQ ID NO：51的氨基酸序列的FR-L4。在一些实施方案中，该VL域包含SEQ ID NO：97的氨基酸序列。在一些实施方案中，该抗FcRH5抗体包含包含下述各项的结合域：(a)包含SEQ ID NO：96的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQ ID NO：97的氨基酸序列的VL域。
在其它实施方案中，该抗FcRH5抗体包含包含下述六种HVR的结合域：(a)包含SEQID NO：1的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列的HVR-H2，(c)包含SEQID NO：9的氨基酸序列的HVR-H3，(d)包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列的HVR-L1，(e)包含SEQ ID NO：18的氨基酸序列的HVR-L2，和(f)包含SEQ ID NO：25的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，该结合域包含(a)包含与SEQ ID NO：98的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的VH域，(b)包含与SEQ ID NO：99的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的VL域，或(c)(a)中的VH域和(b)中的VL域。在一些实施方案中，该抗体进一步包含下述重链可变区FR：(a)包含SEQ ID NO：52的氨基酸序列的FR-H1，(b)包含SEQID NO：55的氨基酸序列的FR-H2，(c)包含SEQ ID NO：46的氨基酸序列的FR-H3，和(d)包含SEQ ID NO：47的氨基酸序列的FR-H4。在一些实施方案中，该VH域包含SEQ ID NO：98的氨基酸序列。在一些实施方案中，该抗体进一步包含下述轻链可变区FR：(a)包含SEQ ID NO：48的氨基酸序列的FR-L1，(b)包含SEQ ID NO：57的氨基酸序列的FR-L2，(c)包含SEQ ID NO：50的氨基酸序列的FR-L3，和(d)包含SEQ ID NO：51的氨基酸序列的FR-L4。在一些实施方案中，该VL域包含SEQ ID NO：99的氨基酸序列。在一些实施方案中，该抗FcRH5抗体包含包含下述各项的结合域：(a)包含SEQ ID NO：98的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQ ID NO：99的氨基酸序列的VL域。
在其它实施方案中，该抗FcRH5抗体包含包含下述六种HVR的结合域：(a)包含SEQID NO：1的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列的HVR-H2，(c)包含SEQID NO：9的氨基酸序列的HVR-H3，(d)包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列的HVR-L1，(e)包含SEQ ID NO：18的氨基酸序列的HVR-L2，和(f)包含SEQ ID NO：25的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，该结合域包含(a)包含与SEQ ID NO：100的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的VH域，(b)包含与SEQ ID NO：101的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的VL域，或(c)(a)中的VH域和(b)中的VL域。在一些实施方案中，该抗体进一步包含下述重链可变区FR：(a)包含SEQ ID NO：52的氨基酸序列的FR-H1，(b)包含SEQID NO：54的氨基酸序列的FR-H2，(c)包含SEQ ID NO：46的氨基酸序列的FR-H3，和(d)包含SEQ ID NO：47的氨基酸序列的FR-H4。在一些实施方案中，该VH域包含SEQ ID NO：100的氨基酸序列。在一些实施方案中，该抗体进一步包含下述轻链可变区FR：(a)包含SEQ ID NO：48的氨基酸序列的FR-L1，(b)包含SEQ ID NO：57的氨基酸序列的FR-L2，(c)包含SEQ IDNO：50的氨基酸序列的FR-L3，和(d)包含SEQ ID NO：51的氨基酸序列的FR-L4。在一些实施方案中，该VL域包含SEQ ID NO：101的氨基酸序列。在一些实施方案中，该抗FcRH5抗体包含包含下述各项的结合域：(a)包含SEQ ID NO：100的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQ IDNO：101的氨基酸序列的VL域。
在其它实施方案中，该抗FcRH5抗体包含包含下述六种HVR的结合域：(a)包含SEQID NO：1的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO：8的氨基酸序列的HVR-H2，(c)包含SEQID NO：9的氨基酸序列的HVR-H3，(d)包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的HVR-L1，(e)包含SEQ ID NO：15的氨基酸序列的HVR-L2，和(f)包含SEQ ID NO：20的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，该结合域包含(a)包含与SEQ ID NO：102的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的VH域，(b)包含与SEQ ID NO：103的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的VL域，或(c)(a)中的VH域和(b)中的VL域。在一些实施方案中，该抗体进一步包含下述重链可变区FR：(a)包含SEQ ID NO：52的氨基酸序列的FR-H1，(b)包含SEQID NO：54的氨基酸序列的FR-H2，(c)包含SEQ ID NO：46的氨基酸序列的FR-H3，和(d)包含SEQ ID NO：47的氨基酸序列的FR-H4。在一些实施方案中，该VH域包含SEQ ID NO：102的氨基酸序列。在一些实施方案中，该抗体进一步包含下述轻链可变区FR：(a)包含SEQ ID NO：48的氨基酸序列的FR-L1，(b)包含SEQ ID NO：56的氨基酸序列的FR-L2，(c)包含SEQ IDNO：50的氨基酸序列的FR-L3，和(d)包含SEQ ID NO：51的氨基酸序列的FR-L4。在一些实施方案中，该VL域包含SEQ ID NO：103的氨基酸序列。在一些实施方案中，该抗FcRH5抗体包含包含下述各项的结合域：(a)包含SEQ ID NO：102的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQ IDNO：103的氨基酸序列的VL域。
在另一个方面，本发明特征在于一种抗FcRH5抗体，其包含包含下述六种HVR的结合域：(a)包含SEQ ID NO：32的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO：33的氨基酸序列的HVR-H2，(c)包含SEQ ID NO：34的氨基酸序列的HVR-H3，(d)包含SEQ ID NO：35的氨基酸序列的HVR-L1，(e)包含SEQ ID NO：36的氨基酸序列的HVR-L2，和(f)包含SEQ ID NO：37的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，该结合域包含(a)包含与SEQ ID NO：110的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的VH域，(b)包含与SEQ ID NO：111的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的VL域，或(c)(a)中的VH域和(b)中的VL域。在一些实施方案中，该抗体进一步包含下述重链可变区FR：(a)包含SEQ ID NO：66的氨基酸序列的FR-H1，(b)包含SEQ ID NO：67的氨基酸序列的FR-H2，(c)包含SEQ ID NO：68的氨基酸序列的FR-H3，和(d)包含SEQ ID NO：69的氨基酸序列的FR-H4。在一些实施方案中，该VH域包含SEQ ID NO：110的氨基酸序列。在一些实施方案中，该抗体进一步包含下述轻链可变区FR：(a)包含SEQ ID NO：70的氨基酸序列的FR-L1，(b)包含SEQ ID NO：71的氨基酸序列的FR-L2，(c)包含SEQ ID NO：72的氨基酸序列的FR-L3，和(d)包含SEQ ID NO：73的氨基酸序列的FR-L4。在一些实施方案中，该VL域包含SEQ ID NO：111的氨基酸序列。在一些实施方案中，该抗FcRH5抗体包含包含下述各项的结合域：(a)包含SEQ ID NO：110的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQ ID NO：111的氨基酸序列的VL域。
在另一个方面，本发明特征在于一种抗FcRH5抗体，其包含包含下述六种HVR的结合域：(a)包含SEQ ID NO：38的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO：39的氨基酸序列的HVR-H2，(c)包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列的HVR-H3，(d)包含SEQ ID NO：41的氨基酸序列的HVR-L1，(e)包含SEQ ID NO：42的氨基酸序列的HVR-L2，和(f)包含SEQ ID NO：43的氨基酸序列的HVR-L3。在其它实施方案中，该结合域包含(a)包含与SEQ ID NO：112的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的VH域，(b)包含与SEQ ID NO：113的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的VL域，或(c)(a)中的VH域和(b)中的VL域。在其它实施方案中，该抗体进一步包含下述重链可变区FR：(a)包含SEQ ID NO：74的氨基酸序列的FR-H1，(b)包含SEQ ID NO：75的氨基酸序列的FR-H2，(c)包含SEQ ID NO：76的氨基酸序列的FR-H3，和(d)包含SEQ ID NO：77的氨基酸序列的FR-H4。在其它实施方案中，该VH域包含SEQ ID NO：112的氨基酸序列。在其它实施方案中，该抗体进一步包含下述轻链可变区FR：(a)包含SEQ ID NO：78的氨基酸序列的FR-L1，(b)包含SEQ ID NO：79的氨基酸序列的FR-L2，(c)包含SEQ ID NO：80的氨基酸序列的FR-L3，和(d)包含SEQ ID NO：81的氨基酸序列的FR-L4。在其它实施方案中，该VL域包含SEQ ID NO：113的氨基酸序列。在其它实施方案中，该抗FcRH5抗体包含包含下述各项的结合域：(a)包含SEQ ID NO：112的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQ ID NO：113的氨基酸序列的VL域。
在另一个方面，本发明特征在于一种抗FcRH5抗体，其包含包含下述六种HVR的结合域：(a)包含SEQ ID NO：26的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO：27的氨基酸序列的HVR-H2，(c)包含SEQ ID NO：28的氨基酸序列的HVR-H3，(d)包含SEQ ID NO：29的氨基酸序列的HVR-L1，(e)包含SEQ ID NO：30的氨基酸序列的HVR-L2，和(f)包含SEQ ID NO：31的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，该结合域包含(a)包含与SEQ ID NO：108的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的VH域，(b)包含与SEQ ID NO：109的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的VL域，或(c)(a)中的VH域和(b)中的VL域。在一些实施方案中，该抗体进一步包含下述重链可变区FR：(a)包含SEQ ID NO：58的氨基酸序列的FR-H1，(b)包含SEQ ID NO：59的氨基酸序列的FR-H2，(c)包含SEQ ID NO：60的氨基酸序列的FR-H3，和(d)包含SEQ ID NO：61的氨基酸序列的FR-H4。在一些实施方案中，该VH域包含SEQ ID NO：108的氨基酸序列。在一些实施方案中，该抗体进一步包含下述轻链可变区FR：(a)包含SEQ ID NO：62的氨基酸序列的FR-L1，(b)包含SEQ ID NO：63的氨基酸序列的FR-L2，(c)包含SEQ ID NO：64的氨基酸序列的FR-L3，和(d)包含SEQ ID NO：65的氨基酸序列的FR-L4。在一些实施方案中，该VL域包含SEQ ID NO：109的氨基酸序列。在一些实施方案中，该抗FcRH5抗体包含包含下述各项的结合域：(a)包含SEQ ID NO：108的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQ ID NO：109的氨基酸序列的VL域。
在前述方面任一项的一些实施方案中，该抗FcRH5抗体结合FcRH5的Ig样域9中的表位。在一些实施方案中，该表位包含SEQ ID NO：114的氨基酸743-850的一部分。在一些实施方案中，该结合域结合人FcRH5，食蟹猴FcRH5，或二者。在一些实施方案中，该结合域并不特异性结合FcRH1，FcRH2，FcRH3，和/或FcRH4。在一些实施方案中，该抗FcRH5抗体以约100nM或更低的KD结合人FcRH5。在一些实施方案中，该抗FcRH5抗体以介于约10pM和约100nM之间的KD结合人FcRH5。在一些实施方案中，该抗FcRH5抗体以介于约100pM和约100nM之间的KD结合人FcRH5。在一些实施方案中，该抗FcRH5抗体以介于约1nM和约20nM之间的KD结合人FcRH5。在一些实施方案中，该抗FcRH5抗体以介于约1nM和约10nM之间的KD结合人FcRH5。在一些实施方案中，该抗FcRH5抗体以约100nM或更低的KD结合食蟹猴FcRH5。在一些实施方案中，该抗FcRH5抗体以介于约10pM和约100nM之间的KD结合食蟹猴FcRH5。在一些实施方案中，该抗FcRH5抗体以介于约100pM和约100nM之间的KD结合食蟹猴FcRH5。在一些实施方案中，该抗FcRH5抗体以介于约1nM和约50nM之间的KD结合食蟹猴FcRH5。
在其它实施方案中，该抗FcRH5抗体包含无糖基化点突变。在一些实施方案中，该无糖基化点突变是替代突变。在一些实施方案中，该无糖基化点突变降低该抗FcRH5抗体的效应器功能。在一些实施方案中，该替代突变在氨基酸残基N297，L234，L235，D265，和/或P329处(EU编号方式)。在一些实施方案中，该替代突变选自由N297G，N297A，L234A，L235A，D265A，和P329G组成的组。在一些实施方案中，该替代突变是N297G突变。
在其它实施方案中，该抗FcRH5抗体是IgG抗体。
在一些实施方案中，该抗FcRH5抗体是结合FcRH5的抗体片段。在一些实施方案中，该抗体片段选自由bis-Fab，Fab，Fab’-SH，Fv，scFv，和(Fab’)2片段组成的组。在一些实施方案中，该抗体片段是bis-Fab片段。
在其它实施方案中，该抗FcRH5抗体是全长抗体。
在一些实施方案中，该抗FcRH5抗体是单特异性抗体。
在一些实施方案中，该抗FcRH5抗体是多特异性抗体。在一些实施方案中，该多特异性抗体是双特异性抗体。在一些实施方案中，该双特异性抗体包含结合分化簇3(CD3)的第二结合域。在一些实施方案中，该第二结合域结合CD3上包含CD3氨基酸残基Glu6的表位。在一些实施方案中，该表位进一步包含一个或多个选自由CD3的Gln1，Asp2，和Met7组成的组的另外的氨基酸残基。在一些实施方案中，该表位包含CD3的氨基酸残基Gln1，Asp2，和Glu6。在一些实施方案中，该表位包含CD3的氨基酸残基Gln1，Asp2，Glu6，和Met7。在一些实施方案中，该表位并不包含CD3的氨基酸残基Glu5。在一些实施方案中，该表位并不包含CD3的氨基酸残基Gly3和Glu5。在一些实施方案中，该表位由CD3的氨基酸残基Gln1，Asp2，Glu6，和Met7组成。在一些实施方案中，该第二结合域能够结合人CD3多肽或食蟹猴CD3多肽。在一些实施方案中，该人CD3多肽或该食蟹猴CD3多肽分别是人CD3ε多肽或食蟹猴CD3ε多肽。在一些实施方案中，该人CD3多肽或该食蟹猴CD3多肽分别是人CD3γ多肽或食蟹猴CD3γ多肽。在一些实施方案中，该第二结合域以约100nM或更低的KD结合该人CD3ε多肽。在一些实施方案中，该第二结合域以介于约10pM至约100nM之间的KD结合该人CD3ε多肽。在一些实施方案中，该第二结合域以介于约100pM至约50nM之间的KD结合该人CD3ε多肽。在一些实施方案中，该第二结合域以介于约1nM至约10nM之间的KD结合该人CD3ε多肽。
在一些实施方案中，该第二结合域包含下述六种HVR：(a)包含SEQ ID NO：115的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO：116的氨基酸序列的HVR-H2，(c)包含SEQ ID NO：117的氨基酸序列的HVR-H3，(d)包含SEQ ID NO：118的氨基酸序列的HVR-L1，(e)包含SEQID NO：119的氨基酸序列的HVR-L2，和(f)包含SEQ ID NO：120的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，该第二结合域包含下述六种HVR：(a)包含SEQ ID NO：115的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO：116的氨基酸序列的HVR-H2，(c)包含SEQ ID NO：121的氨基酸序列的HVR-H3，(d)包含SEQ ID NO：118的氨基酸序列的HVR-L1，(e)包含SEQ ID NO：119的氨基酸序列的HVR-L2，和(f)包含SEQ ID NO：123的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，该第二结合域包含(a)包含与SEQ ID NO：133的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的VH域，(b)包含与SEQ ID NO：134的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的VL域，或(c)(a)中的VH域和(b)中的VL域。在一些实施方案中，该第二结合域包含下述重链可变区FR：(a)包含SEQ ID NO：125的氨基酸序列的FR-H1，(b)包含SEQ ID NO：126的氨基酸序列的FR-H2，(c)包含SEQ ID NO：127的氨基酸序列的FR-H3，和(d)包含SEQID NO：128的氨基酸序列的FR-H4。在一些实施方案中，该第二结合域包含包含SEQ ID NO：133的氨基酸序列的VH域。在一些实施方案中，该第二结合域进一步包含下述轻链可变区FR：(a)包含SEQ ID NO：129的氨基酸序列的FR-L1，(b)包含SEQ ID NO：130的氨基酸序列的FR-L2，(c)包含SEQ ID NO：131的氨基酸序列的FR-L3，和(d)包含SEQ ID NO：132的氨基酸序列的FR-L4。在一些实施方案中，该第二结合域包含包含SEQ ID NO：134的氨基酸序列的VL域。在一些实施方案中，该第二结合域包含(a)包含SEQ ID NO：133的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQ ID NO：134的氨基酸序列的VL域。
在其它实施方案中，该第二结合域包含下述六种HVR：(a)包含SEQ ID NO：115的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO：116的氨基酸序列的HVR-H2，(c)包含SEQ ID NO：121的氨基酸序列的HVR-H3，(d)包含SEQ ID NO：118的氨基酸序列的HVR-L1，(e)包含SEQID NO：119的氨基酸序列的HVR-L2，和(f)包含SEQ ID NO：124的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，该第二结合域包含(a)包含与SEQ ID NO：137的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的VH域，(b)包含与SEQ ID NO：138的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的VL域，或(c)(a)中的VH域和(b)中的VL域。在一些实施方案中，该第二结合域包含下述重链可变区FR：(a)包含SEQ ID NO：125的氨基酸序列的FR-H1，(b)包含SEQ ID NO：126的氨基酸序列的FR-H2，(c)包含SEQ ID NO：127的氨基酸序列的FR-H3，和(d)包含SEQ ID NO：128的氨基酸序列的FR-H4。在一些实施方案中，该第二结合域包含包含SEQ ID NO：137的氨基酸序列的VH域。在一些实施方案中，该第二结合域进一步包含下述轻链可变区FR：(a)包含SEQ ID NO：129的氨基酸序列的FR-L1，(b)包含SEQ ID NO：130的氨基酸序列的FR-L2，(c)包含SEQ ID NO：131的氨基酸序列的FR-L3，和(d)包含SEQ ID NO：132的氨基酸序列的FR-L4。在一些实施方案中，该第二结合域包含包含SEQ ID NO：138的氨基酸序列的VL域。在一些实施方案中，该第二结合域包含(a)包含SEQ ID NO：137的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQ ID NO：138的氨基酸序列的VL域。
在其它实施方案中，该第二结合域包含下述六种HVR：(a)包含SEQ ID NO：139的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO：140的氨基酸序列的HVR-H2，(c)包含SEQ ID NO：141的氨基酸序列的HVR-H3，(d)包含SEQ ID NO：142的氨基酸序列的HVR-L1，(e)包含SEQID NO：143的氨基酸序列的HVR-L2，和(f)包含SEQ ID NO：144的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，该第二结合域包含(a)包含与SEQ ID NO：153的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的VH域，(b)包含与SEQ ID NO：154的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的VL域，或(c)(a)中的VH域和(b)中的VL域。在一些实施方案中，该第二结合域包含下述重链可变区FR：(a)包含SEQ ID NO：145的氨基酸序列的FR-H1，(b)包含SEQ ID NO：146的氨基酸序列的FR-H2，(c)包含SEQ ID NO：147的氨基酸序列的FR-H3，和(d)包含SEQ ID NO：148的氨基酸序列的FR-H4。在一些实施方案中，该第二结合域包含包含SEQ ID NO：153的氨基酸序列的VH域。在一些实施方案中，该第二结合域进一步包含下述轻链可变区FR：(a)包含SEQ ID NO：149的氨基酸序列的FR-L1，(b)包含SEQ ID NO：150的氨基酸序列的FR-L2，(c)包含SEQ ID NO：151的氨基酸序列的FR-L3，和(d)包含SEQ ID NO：152的氨基酸序列的FR-L4。在一些实施方案中，该第二结合域包含包含SEQ ID NO：154的氨基酸序列的VL域。在一些实施方案中，该第二结合域包含(a)包含SEQ ID NO：153的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQ ID NO：154的氨基酸序列的VL域。
在其它实施方案中，该第二结合域包含下述六种HVR：(a)包含SEQ ID NO：155的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO：156的氨基酸序列的HVR-H2，(c)包含SEQ ID NO：157的氨基酸序列的HVR-H3，(d)包含SEQ ID NO：158的氨基酸序列的HVR-L1，(e)包含SEQID NO：159的氨基酸序列的HVR-L2，和(f)包含SEQ ID NO：160的氨基酸序列的HVR-L3。
在一些实施方案中，该第二结合域包含下述六种HVR：(a)包含SEQ ID NO：155的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO：162的氨基酸序列的HVR-H2，(c)包含SEQ ID NO：157的氨基酸序列的HVR-H3，(d)包含SEQ ID NO：158的氨基酸序列的HVR-L1，(e)包含SEQID NO：159的氨基酸序列的HVR-L2，和(f)包含SEQ ID NO：160的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，该第二结合域包含(a)包含与SEQ ID NO：172的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的VH域，(b)包含与SEQ ID NO：173的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列的VL域，或(c)(a)中的VH域和(b)中的VL域。在一些实施方案中，该第二结合域包含下述重链可变区FR：(a)包含SEQ ID NO：164的氨基酸序列的FR-H1，(b)包含SEQ ID NO：165的氨基酸序列的FR-H2，(c)包含SEQ ID NO：166的氨基酸序列的FR-H3，和(d)包含SEQ ID NO：167的氨基酸序列的FR-H4。在一些实施方案中，该第二结合域包含包含SEQ ID NO：172的氨基酸序列的VH域。在一些实施方案中，该第二结合域进一步包含下述轻链可变区FR：(a)包含SEQ ID NO：168的氨基酸序列的FR-L1，(b)包含SEQ ID NO：169的氨基酸序列的FR-L2，(c)包含SEQ ID NO：170的氨基酸序列的FR-L3，和(d)包含SEQ ID NO：171的氨基酸序列的FR-L4。在一些实施方案中，该第二结合域包含包含SEQ ID NO：173的氨基酸序列的VL域。在一些实施方案中，该第二结合域包含(a)包含SEQ ID NO：172的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQ ID NO：173的氨基酸序列的VL域。
在其它实施方案中，该结合FcRH5的结合域包含包含带电荷区域(CR1)的VH域(VH1)和包含带电荷区域(CR2)的VL域(VL1)，其中该VH1中的CR1与该VL1中的CR2形成电荷对。在一些实施方案中，该CR1包含碱性氨基酸残基且该CR2包含酸性氨基酸残基。在一些实施方案中，该CR1包含Q39K替代突变(EU编号方式)。在一些实施方案中，该CR1由该Q39K替代突变组成。在一些实施方案中，该CR2包含Q38E替代突变(EU编号方式)。在一些实施方案中，该CR2由该Q38E替代突变组成。在一些实施方案中，该结合CD3的第二结合域包含包含带电荷区域(CR3)的VH域(VH2)和包含带电荷区域(CR4)的VL域(VL2)，其中该VL2中的CR4与该VH2中的CR3形成电荷对。在一些实施方案中，该CR4包含碱性氨基酸残基且该CR3包含酸性氨基酸残基。在一些实施方案中，该CR4包含Q38K替代突变(EU编号方式)。在一些实施方案中，该CR4由该Q38K替代突变组成。在一些实施方案中，该CR3包含Q39E替代突变(EU编号方式)。在一些实施方案中，该CR3由该Q39E替代突变组成。在一些实施方案中，该VL1域连接轻链恒定(CL)域(CL1)且该VH1连接第一重链恒定(CH1)域(CH11)，其中该CL1包含带电荷区域(CR5)且该CH11包含带电荷区域(CR6)，且其中该CL1中的CR5与该CH11中的CR6形成电荷对。在一些实施方案中，该CR5包含碱性氨基酸残基且该CR6包含酸性残基。在一些实施方案中，该CR5包含V133K替代突变(EU编号方式)。在一些实施方案中，该CR5由该V133K替代突变组成。在一些实施方案中，该CR6包含S183E替代突变(EU编号方式)。在一些实施方案中，该CR6由该S183E替代突变组成。
在其它实施方案中，该VL2域连接CL域(CL2)且该VH2连接CH1域(CH12)，其中该CL2包含带电荷区域(CR7)且该CH12包含带电荷区域(CR8)，且其中该CH12中的CR8与该CL2中的CR7形成电荷对。在一些实施方案中，该CR8包含碱性氨基酸残基且该CR7包含酸性氨基酸残基。在一些实施方案中，该CR8包含S183K替代突变(EU编号方式)。在一些实施方案中，该CR8由该S183K替代突变组成。在一些实施方案中，该CR7包含V133E替代突变(EU编号方式)。在一些实施方案中，该CR7由该V133E替代突变组成。
在其它实施方案中，该VL2域连接CL域(CL2)且该VH2连接CH1域(CHl2)，其中(a)该CL2包含氨基酸残基F116，L135，S174，S176，和/或T178处的一处或多处突变(EU编号方式)且(b)该CH12包含氨基酸残基A141，F170，S181，S183，和/或V185处的一处或多处突变(EU编号方式)。在一些实施方案中，该CL2包含一处或多处下述替代突变：F116A，L135V，S174A，S176F，和/或T178V。在一些实施方案中，该CL2包含下述替代突变：F116A，L135V，S174A，S176F，和T178V。在一些实施方案中，该CH12包含一处或多处下述替代突变：A141I，F170S，S181M，S183A，和/或V185A。在一些实施方案中，该CH12包含下述替代突变：A141I，F170S，S181M，S183A，和V185A。
在其它实施方案中，该结合FcRH5的结合域包含包含带电荷区域(CR1)的VH域(VH1)和包含带电荷区域(CR2)的VL域(VL1)，其中该VL1中的CR2与该VH1中的CR1形成电荷对。在一些实施方案中，该CR2包含碱性氨基酸残基且该CR1包含酸性氨基酸残基。在一些实施方案中，该CR2包含Q38K替代突变(EU编号方式)。在一些实施方案中，该CR2由该Q38K替代突变组成。在一些实施方案中，该CR1包含Q39E替代突变(EU编号方式)。在一些实施方案中，该CR1由该Q39E替代突变组成。在一些实施方案中，该结合CD3的第二结合域包含包含带电荷区域(CR3)的VH域(VH2)和包含带电荷区域(CR4)的VL域(VL2)，其中该VH2中的CR3与该VL2中的CR4形成电荷对。在一些实施方案中，该CR3包含碱性氨基酸残基且该CR4包含酸性氨基酸残基。在一些实施方案中，该CP3包含Q39K替代突变(EU编号方式)。在一些实施方案中，该CR3由该Q39K替代突变组成。在一些实施方案中，该CR4包含Q38E替代突变(EU编号方式)。在一些实施方案中，该CR4由该Q38E替代突变组成。在一些实施方案中，该VL1域连接轻链恒定(CL)域(CL1)且该VHl连接第一重链恒定(CH1)域(CH11)，其中该CL1包含带电荷区域(CR5)且该CH11包含带电荷区域(CR6)，且其中该CH11中的CR6与该CL1中的CR5形成电荷对。在一些实施方案中，该CR6包含碱性氨基酸残基且该CR5包含酸性氨基酸残基。在一些实施方案中，该CR6包含S183K替代突变(EU编号方式)。在一些实施方案中，该CR6由该S183K替代突变组成。在一些实施方案中，该CR5包含V133E替代突变(EU编号方式)。在一些实施方案中，该CR5由该V133E替代突变组成。
在其它实施方案中，该VL2域连接CL域(CL2)且该VH2连接CH1域(CH12)，其中该CL2包含带电荷区域(CR7)且该CH12包含带电荷区域(CR8)，且其中该CL2中的CR7与该CH12中的CR8形成电荷对。在一些实施方案中，该CR7包含碱性氨基酸残基且该CR8包含酸性残基。在一些实施方案中，该CR7包含V133K替代突变(EU编号方式)。在一些实施方案中，该CR7由该V133K替代突变组成。在一些实施方案中，该CR8包含S183E替代突变(EU编号方式)。在一些实施方案中，该CR8由该S183E替代突变组成。
在其它实施方案中，该VL2域连接CL域(CL2)且该VH2连接CH1域(CH12)，其中(a)该CL2包含氨基酸残基F116，L135，S174，S176，和/或T178处的一处或多处突变(EU编号方式)且(b)该CH12包含氨基酸残基A141，F170，S181，S183，和/或V185处的一处或多处突变(EU编号方式)。在一些实施方案中，该CL2包含一处或多处下述替代突变：F116A，L135V，S174A，S176F，和/或T178V。在一些实施方案中，该CL2包含下述替代突变：F116A，L135V，S174A，S176F，和T178V。在一些实施方案中，该CHl2包含一处或多处下述替代突变：A141I，F170S，S181M，S183A，和/或V185A。在一些实施方案中，该CH12包含下述替代突变：A141I，F170S，S181M，S183A，和V185A。在一些实施方案中，该抗FcRH5抗体包含一个或多个重链恒定域，其中该一个或多个重链恒定域选自第一CH2域(CH21)，第一CH3域(CH31)，第二-CH2域(CH22)，和第二CH3域(CH32)。在一些实施方案中，该一个或多个重链恒定域中至少一个与另一个重链恒定域配对。在一些实施方案中，该CH31和该CH32各自包含隆起(P1)或空腔(C1)，且其中该CH31中的P1或C1分别可位于该CH32中的C1或P1中。在一些实施方案中，该CH31和该CH32在介于该P1和该C1之间的界面处相遇。在一些实施方案中，该CH21和该CH22各自包含隆起(P2)或空腔(C2)，且其中该CH21中的P2或C2分别可位于中该CH22中的C2或P2。在一些实施方案中，该CH21和该CH22在介于该P2和该C2之间的界面处相遇。
在另一个方面，本发明特征在于一种结合FcRH5和CD3的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体包含包含第一结合域的抗FcRH5臂，该第一结合域包含下述六种HVR：(a)包含SEQID NO：1的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO：8的氨基酸序列的HVR-H2，(c)包含SEQID NO：9的氨基酸序列的HVR-H3，(d)包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列的HVR-L1，(e)包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列的HVR-L2，和(f)包含SEQ ID NO：23的氨基酸序列的HVR-L3，和包含第二结合域的抗CD3臂，该第二结合域包含下述六种HVR：(a)包含SEQ ID NO：115的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO：116的氨基酸序列的HVR-H2，(c)包含SEQ ID NO：121的氨基酸序列的HVR-H3，(d)包含SEQ ID NO：118的氨基酸序列的HVR-L1，(e)包含SEQID NO：119的氨基酸序列的HVR-L2，和(f)包含SEQ ID NO：123的氨基酸序列的HVR-L3，且其中该抗FcRH5臂和该抗CD3臂各自包含N297G替代突变(EU编号方式)，且其中该抗FcRH5臂包含T366W替代突变且该抗CD3臂包含T366S，L368A，和Y407V替代突变。
在另一个方面，本发明特征在于一种结合FcRH5和CD3的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体包含包含第一结合域的抗FcRH5臂，该第一结合域包含下述六种HVR：(a)包含SEQID NO：1的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO：8的氨基酸序列的HVR-H2，(c)包含SEQID NO：9的氨基酸序列的HVR-H3，(d)包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列的HVR-L1，(e)包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列的HVR-L2，和(f)包含SEQ ID NO：23的氨基酸序列的HVR-L3，和包含第二结合域的抗CD3臂，该第二结合域包含下述六种HVR：(a)包含SEQ ID NO：115的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO：116的氨基酸序列的HVR-H2，(c)包含SEQ ID NO：121的氨基酸序列的HVR-H3，(d)包含SEQ ID NO：118的氨基酸序列的HVR-L1，(e)包含SEQID NO：119的氨基酸序列的HVR-L2，和(f)包含SEQ ID NO：123的氨基酸序列的HVR-L3，且其中该抗FcRH5臂包含包含Q38E和V133K替代突变的轻链和包含Q39K，S183E，和N297G替代突变的重链，且其中该抗CD3臂包含包含Q38K和V133E替代突变的轻链和包含Q39E，S183K，和N297G替代突变的重链(EU编号方式)。
在另一个方面，本发明特征在于一种结合FcRH5和CD3的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体包含：(a)包含第一结合域的抗FcRH5臂，该第一结合域包含包含SEQ ID NO：104的氨基酸序列的VH域和包含SEQ ID NO：105的氨基酸序列的VL域，其中该抗FcRH5臂包含包含Q38E和V133K替代突变的轻链和包含Q39K，S183E，和N297G替代突变的重链，和(b)包含第二结合域的抗CD3臂，该第二结合域包含包含SEQ ID NO：133的氨基酸序列的VH域和包含SEQ ID NO：134的氨基酸序列的VL域，其中该抗CD3臂包含包含Q38K和V133E替代突变的轻链和包含Q39E，S183K，和N297G替代突变的重链(EU编号方式)。
在另一个方面，本发明特征在于一种结合FcRH5和CD3的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体包含包含第一结合域的抗FcRH5臂，该第一结合域包含下述六种HVR：(a)包含SEQID NO：l的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO：8的氨基酸序列的HVR-H2，(c)包含SEQID NO：9的氨基酸序列的HVR-H3，(d)包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列的HVR-L1，(e)包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列的HVR-L2，和(f)包含SEQ ID NO：23的氨基酸序列的HVR-L3，和包含第二结合域的抗CD3臂，该第二结合域包含下述六种HVR：(a)包含SEQ ID NO：115的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO：116的氨基酸序列的HVR-H2，(c)包含SEQ ID NO：121的氨基酸序列的HVR-H3，(d)包含SEQ ID NO：118的氨基酸序列的HVR-L1，(e)包含SEQID NO：119的氨基酸序列的HVR-L2，和(f)包含SEQ ID NO：123的氨基酸序列的HVR-L3，且其中该抗FcRH5臂包含包含Q38K和V133E替代突变的轻链和包含Q39E，S183K，和N297G替代突变的重链，且其中该抗CD3臂包含包含Q38E和V133K替代突变的轻链和包含Q39K，S183E，和N297G替代突变的重链(EU编号方式)。
在另一个方面，本发明特征在于一种结合FcRH5和CD3的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体包含：(a)包含第一结合域的抗FcRH5臂，该第一结合域包含包含SEQ ID NO：104的氨基酸序列的VH域和包含SEQ ID NO：105的氨基酸序列的VL域，其中该抗FcRH5臂包含包含Q38K和V133E替代突变的轻链和包含Q39E，S183K，和N297G替代突变的重链，和(b)包含第二结合域的抗CD3臂，该第二结合域包含包含SEQ ID NO：133的氨基酸序列的VH域和包含SEQ ID NO：134的氨基酸序列的VL域，其中该抗CD3臂包含包含Q38E和V133K替代突变的轻链和包含Q39K，S183E，和N297G替代突变的重链(EU编号方式)。
在另一个方面，本发明特征在于一种结合FcRH5和CD3的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体包含包含第一结合域的抗FcRH5臂，该第一结合域包含下述六种HVR：(a)包含SEQID NO：1的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO：8的氨基酸序列的HVR-H2，(c)包含SEQID NO：9的氨基酸序列的HVR-H3，(d)包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列的HVR-L1，(e)包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列的HVR-L2，和(f)包含SEQ ID NO：23的氨基酸序列的HVR-L3，和包含第二结合域的抗CD3臂，该第二结合域包含下述六种HVR：(a)包含SEQ ID NO：115的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO：116的氨基酸序列的HVR-H2，(c)包含SEQ ID NO：121的氨基酸序列的HVR-H3，(d)包含SEQ ID NO：118的氨基酸序列的HVR-L1，(e)包含SEQID NO：119的氨基酸序列的HVR-L2，和(f)包含SEQ ID NO：123的氨基酸序列的HVR-L3，且其中该抗FcRH5臂包含包含Q38E和V133K替代突变的轻链和包含Q39K，S183E，和N297G替代突变的重链，且其中该抗CD3臂包含包含Q38K，F116A，L135V，S174A，S176F，和T178V替代突变的轻链和包含Q39E，A141I，F170S，S181M，S183A，V185A，和N297G替代突变的重链(EU编号方式)。
在另一个方面，本发明特征在于一种结合FcRH5和CD3的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体包含：(a)包含第一结合域的抗FcRH5臂，该第一结合域包含包含SEQ ID NO：104的氨基酸序列的VH域和包含SEQ ID NO：105的氨基酸序列的VL域，其中该抗FcRH5臂包含包含Q38E和V133K替代突变的轻链和包含Q39K，S183E，和N297G替代突变的重链，和(b)包含第二结合域的抗CD3臂，该第二结合域包含包含SEQ ID NO：133的氨基酸序列的VH域和包含SEQ ID NO：134的氨基酸序列的VL域，其中该抗CD3臂包含包含Q38K，F116A，L135V，S174A，S176F，和T178V替代突变的轻链和包含Q39E，A141I，F170S，S181M，S183A，V185A，和N297G替代突变的重链(EU编号方式)。
在另一个方面，本发明特征在于一种结合FcRH5和CD3的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体包含包含第一结合域的抗FcRH5臂，该第一结合域包含下述六种HVR：(a)包含SEQID NO：1的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO：8的氨基酸序列的HVR-H2，(c)包含SEQID NO：9的氨基酸序列的HVR-H3，(d)包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列的HVR-L1，(e)包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列的HVR-L2，和(f)包含SEQ ID NO：23的氨基酸序列的HVR-L3，和包含第二结合域的抗CD3臂，该第二结合域包含下述六种HVR：(a)包含SEQ ID NO：115的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQ ID NO：116的氨基酸序列的HVR-H2，(c)包含SEQ ID NO：121的氨基酸序列的HVR-H3，(d)包含SEQ ID NO：118的氨基酸序列的HVR-L1，(e)包含SEQID NO：119的氨基酸序列的HVR-L2，和(f)包含SEQ ID NO：123的氨基酸序列的HVR-L3，且其中该抗FcRH5臂包含包含Q38K和V133E替代突变的轻链和包含Q39E，S183K，和N297G替代突变的重链，且其中该抗CD3臂包含包含Q38E，F116A，L135V，S174A，S176F，和T178V替代突变的轻链和包含Q39K，A141I，F170S，S181M，S183A，V185A，和N297G替代突变的重链(EU编号方式)。
在另一个方面，本发明特征在于一种结合FcRH5和CD3的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体包含：(a)包含第一结合域的抗FcRH5臂，该第一结合域包含包含SEQ ID NO：104的氨基酸序列的VH域和包含SEQ ID NO：105的氨基酸序列的VL域，其中该抗FcRH5臂包含包含Q38K和V133E替代突变的轻链和包含Q39E，S183K，和N297G替代突变的重链，和(b)包含第二结合域的抗CD3臂，该第二结合域包含包含SEQ ID NO：133的氨基酸序列的VH域和包含SEQ ID NO：134的氨基酸序列的VL域，其中该抗CD3臂包含包含Q38E，F116A，L135V，S174A，S176F，和T178V替代突变的轻链和包含Q39K，A141I，F170S，S181M，S183A，V185A，和N297G替代突变的重链(EU编号方式)。
在本发明任一方面的一些实施方案中，该抗FcRH5抗体在静脉内注射后具有介于约10ml/kg/d至约35ml/kg/d之间的清除率。在一些实施方案中，该抗FcRH5抗体在小鼠中在静脉内注射后具有约10ml/kg/d至约20ml/kg/d的清除率。在一些实施方案中，该抗FcRH5抗体在小鼠中在静脉内注射后具有约12ml/kg/d至约16ml/kg/d的清除率。在一些实施方案中，该抗FcRH5抗体在食蟹猴中在静脉内注射后具有约20ml/kg/d至约40ml/kg/d的清除率。在一些实施方案中，该抗FcRH5抗体在食蟹猴中在静脉内注射后具有约25ml/kg/d至约35ml/kg/d的清除率。在一些实施方案中，该抗FcRH5抗体在食蟹猴中在静脉内注射后具有约30ml/kg/d至约35ml/kg/d的清除率。
在另一个方面，本发明特征在于一种分离的核酸，其编码前述方面任一项的抗FcRH5抗体，或其包含其结合FcRH5的结合域的部分。
在另一个方面，本发明特征在于一种载体，其包含前述方面的分离的核酸。
在另一个方面，本发明特征在于一种宿主细胞，其包含前述方面的载体。在一些实施方案中，该宿主细胞是哺乳动物细胞。在一些实施方案中，该哺乳动物细胞是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。在一些实施方案中，该宿主细胞是原核细胞。在一些实施方案中，该原核细胞是大肠杆菌细胞。
在另一个方面，本发明特征在于一种生成本发明前述方面任一项的抗FcRH5抗体的方法，该方法包括在培养基中培养前述方面的宿主细胞。在一些实施方案中，该方法进一步包括自该宿主细胞或该培养基回收该抗FcRH5抗体。在一些实施方案中，该方法进一步包括培养包含第二核酸的第二宿主细胞，该第二核酸编码包含结合CD3的结合域的抗CD3抗体。在一些实施方案中，共培养该宿主细胞。在一些实施方案中，该方法进一步包括自该宿主细胞或该培养基回收该双特异性抗FcRH5抗体。
在另一个方面，本发明特征在于一种免疫缀合物，其包含前述方面任一项的抗FcRH5抗体和细胞毒剂。
在另一个方面，本发明特征在于一种组合物，其包含本发明任一方面的抗FcRH5抗体。在一些实施方案中，该组合物进一步包含药学可接受赋形剂或稀释剂。在一些实施方案中，该药学可接受赋形剂是缓冲剂，载剂，稳定剂，或防腐剂。在一些实施方案中，该组合物是药物组合物。在一些实施方案中，该组合物进一步包含PD-1轴结合拮抗剂或另外的治疗剂。
在另一个方面，本发明特征在于本发明前述方面任一项的抗FcRH5抗体，其用作药物。
在另一个方面，本发明特征在于本发明前述方面任一项的抗FcRH5抗体，其用于在有所需要的受试者中治疗FcRH5阳性癌症或延迟其进展。
在另一个方面，本发明特征在于本发明前述方面任一项的抗FcRH5抗体，其用于在具有FcRH5阳性癌症的受试者中增强免疫功能。在一些实施方案中，该FcRH5阳性癌症是B细胞癌症。在另一个方面，该B细胞癌症选自由多发性骨髓瘤(MM)，慢性淋巴样白血病(CLL)，套细胞淋巴瘤(MCL)，弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)，和滤泡性淋巴瘤(FL)组成的组。在另一个实施方案中，该B细胞癌症是MM。
在另一个方面，本发明特征在于前述方面任一项的抗FcRH5抗体或组合物在制造用于在受试者中治疗FcRH5阳性癌症或延迟其进展的药物中的用途。在另一个方面，本发明特征在于前述方面任一项的抗FcRH5抗体或组合物在制造用于在具有FcRH5阳性癌症的受试者中增强免疫功能的药物中的用途。在一些实施方案中，该FcRH5阳性癌症是B细胞癌症。在一些实施方案中，该B细胞癌症选自由MM，CLL，MCL，DLBCL，和FL组成的组。在一些实施方案中，该B细胞癌症是MM。
在另一个方面，本发明特征在于一种在有所需要的受试者中治疗FcRH5阳性癌症或延迟其进展的方法，该方法包括对该受试者施用本发明前述方面任一项的抗FcRH5抗体。在另一个方面，本发明特征在于一种在具有FcRH5阳性癌症的受试者中增强免疫功能的方法，该方法包括对该受试者施用有效量的本发明前述方面任一项的抗FcRH5抗体。在一些实施方案中，该FcRH5阳性癌症是B细胞癌症。在一些实施方案中，该B细胞癌症选自由MM，CLL，MCL，DLBCL，和FL组成的组。在一些实施方案中，该B细胞癌症是MM。在一些实施方案中，该抗FcRH5抗体结合(a)位于靶细胞上的FcRH5分子和(b)位于免疫效应细胞上的CD3分子。在一些实施方案中，该抗FcRH5抗体在结合该FcRH5分子和该CD3分子后激活该免疫效应细胞。在一些实施方案中，该激活的免疫效应细胞能够对该靶细胞发挥细胞毒性效应和/或凋亡效应。在一些实施方案中，该靶细胞是浆细胞。在一些实施方案中，该浆细胞是短命浆细胞。在一些实施方案中，该浆细胞是长命浆细胞。在一些实施方案中，该浆细胞是骨髓瘤细胞。在一些实施方案中，该方法包括以约0.01mg/kg/wk至约50mg/kg/wk的剂量对该受试者施用该抗FcRH5抗体。在一些实施方案中，该方法包括以约0.1mg/kg/wk至约10mg/kg/wk的剂量对该受试者施用该抗FcRH5抗体。在一些实施方案中，该方法包括以约1mg/kg/wk的剂量对该受试者施用该抗FcRH5抗体。
在其它实施方案中，该方法进一步包括对该受试者施用PD-1轴结合拮抗剂和/或另外的治疗剂。在一些实施方案中，该PD-1轴结合拮抗剂或另外的治疗剂在该抗FcRH5抗体的施用之前或之后施用。在一些实施方案中，该PD-1轴结合拮抗剂或另外的治疗剂与该抗FcRH5抗体并行施用。在一些实施方案中，该PD-1轴结合拮抗剂选自由PD-L1结合拮抗剂，PD-1结合拮抗剂，和PD-L2结合拮抗剂组成的组。在一些实施方案中，该PD-1轴结合拮抗剂是PD-L1结合拮抗剂。在一些实施方案中，该PD-L1结合拮抗剂选自由MPDL3280A(atezolizumab)，YW243.55.S70，MDX-1105，MEDI4736(durvalumab)，和MSB0010718C(avelumab)组成的组。在一些实施方案中，该PD-L1结合拮抗剂是MPDL3280A(atezolizumab)。在一些实施方案中，该PD-1轴结合拮抗剂是PD-1结合拮抗剂。在一些实施方案中，该PD-1结合拮抗剂选自由MDX 1106(nivolumab)，MK-3475(pembrolizumab)，CT-011(pidilizumab)，MEDI-0680(AMP-514)，PDR001，REGN2810，和BGB-108组成的组。在一些实施方案中，该PD-1轴结合拮抗剂是PD-L2结合拮抗剂。在一些实施方案中，该PD-L2结合拮抗剂是抗体或免疫粘附素。在一些实施方案中，对该受试者施用类固醇，免疫调控剂(IMiD)，蛋白酶体抑制剂(PI)，或其组合。在一些实施方案中，该类固醇是糖皮质激素。在一些实施方案中，该糖皮质激素是地塞米松。在一些实施方案中，该IMiD是来那度胺。在一些实施方案中，该PI是硼替佐米。
在其它实施方案中，该方法包括静脉内，皮下，肌肉内，表面，口服，经皮，腹膜内，眶内，通过植入，通过吸入，鞘内，室内，或鼻内施用前述方面任一项的抗FcRH5抗体，PD-1轴结合拮抗剂，类固醇，IMiD，PI，或其组合。在一些实施方案中，该方法包括静脉内施用该抗FcRH5抗体，PD-1轴结合拮抗剂，类固醇，IMiD，PI，或其组合。在一些实施方案中，该方法包括皮下施用该抗FcRH5抗体，PD-1轴结合拮抗剂，类固醇，IMiD，PI，或其组合。在前述方面任一项的一些实施方案中，该受试者是人。
在另一个方面，本发明特征在于一种用于在来自受试者的生物学样品中检测FcRH5的方法，其中该方法包括：(a)在允许该抗FcRH5抗体结合该生物学样品中的天然发生FcRH5的条件下使该生物学样品与本发明任一方面的抗FcRH5抗体接触，并(b)检测该抗FcRH5抗体和该生物学样品中的天然发生FcRH5之间是否形成复合物。在一些实施方案中，该生物学样品是血液样品。在这个方面的一些实施方案中，该受试者是人。
在另一个方面，本发明特征在于一种试剂盒，其包含本发明前述方面任一项的抗FcRH5抗体和包含关于使用该抗FcRH5抗体在受试者中治疗FcRH5阳性癌症或延迟其进展的说明书的包装插页。在另一个方面，本发明特征在于一种试剂盒，其包含本发明前述方面任一项的抗FcRH5抗体和包含关于使用该抗FcRH5抗体在具有FcRH5阳性癌症的受试者中增强免疫功能的说明书的包装插页。在这些方面的一些实施方案中，该受试者是人。
附图简述
图1A是显示具有包括一个或多个带电荷区域的VL，VH，CL，和CH1域的FcRH5TDB的一种例示性理性设计构造(构造1)的示意图。对于构造1，VH1，CL1，VL2，和CH12域含有碱性带电荷区域，且VL1，CH11，VH2，和CL2域含有酸性带电荷区域。
图1B是显示具有包括一个或多个带电荷区域的VL，VH，CL，和CH1域的FcRH5TDB的一种例示性理性设计构造(构造2)的示意图。对于构造2，VH1，CL1，VL2，和CHl2域含有酸性带电荷区域，且VL1，CH11，VH2，和CL2域含有碱性带电荷区域。
图1C是显示具有包括一个或多个带电荷区域的VL，VH，CL，和CH1域的FcRH5 TDB的一种例示性Rosetta设计构造(构造1)的示意图。对于构造1，VHl，CL1，和VL2域含有碱性带电荷区域，且VL1，CH11，和VH2域含有酸性带电荷区域。另外，CH12域含有空腔，且CL2域含有隆起。该空腔和隆起作为CH12/CL2界面处的黑色框描绘。
图1D是显示具有包括一个或多个带电荷区域的VL，VH，CL，和CH1域的FcRH5 TDB的一种例示性Rosetta设计构造(构造2)的示意图。对于构造2，VH1，CL1，和VL2域含有酸性带电荷区域，且VL1，CH11，和VH2域含有碱性带电荷区域。另外，CH12域含有空腔，且CL2域含有隆起。该空腔和隆起作为CH12/CL2界面处的黑色框描绘。
图1E是显示具有包括一个或多个带电荷区域的VL，VH，CL，和CH1域的FcRH5 TDB的一种例示性备选Rosetta设计构造(备选构造1)的示意图。对于备选构造1，VL1，VH2，和CL2域含有酸性带电荷区域，且VH1，CH12，和VL2域含有碱性带电荷区域。另外，CH11域含有空腔，且CL1域含有隆起。该空腔和隆起作为CH11/CL1界面处的黑色框描绘。
图1F是显示具有包括一个或多个带电荷区域的VL，VH，CL，和CH1域的FcRH5TDB的一种例示性备选Rosetta设计构造(备选构造2)的示意图。对于备选构造2，VL1，VH2，和CL2域含有碱性带电荷区域，且VH1，CH12，和VL2域含有酸性带电荷区域。另外，CH11域含有空腔，且CL1域含有隆起。该空腔和隆起作为CH11/CL1界面处的黑色框描绘。
图2是选定抗FcRH5抗体的轻链可变(VL)域序列的比对。相对于1G7(参见美国公开文本No 2015-0098900，通过援引将其完整收入本文)的变化以黑暗框显示。高变区(HVR)以比对上方和/或下方的线标示。这些VL域序列还作为SEQ ID NO：83，85，87，89，91，93，95，97，99，和101披露。
图3是选定抗FcRH5抗体的重链可变(VH)域序列的比对。相对于克隆1G7(参见美国公开文本No 2015-0098900)的变化以黑暗框显示。高变区(HVR)以比对上方和/或下方的线标示。这些VH域序列还作为SEQ ID NO：82，84，86，88，90，92，94，96，98，和100披露。
图4是显示所示抗FcRH5抗体的位置52处的氨基酸替代对结合亲和力的影响的表。
图5A是hu1G7.v85和hu1G7.v93的重链可变(VH)域序列的比对。相对于人种系序列hIGHV4-59*01的变化以阴影框显示。高变区(HVR)以比对上方的标签标示。这些VH域序列还作为SEQ ID NO：104(hu1G7.v85)和106(hu1G7.v93)披露。
图5B是hu1G7.v85和hu1G7.v93的轻链可变(VL)域序列的比对。相对于人种系序列hIGKV1-16*01的变化以阴影框显示。高变区(HVR)以比对上方的标签标示。这些VL域序列还作为SEQ ID NO：105(hu1G7.v85)和107(hu1G7.v93)披露。
图6A是hu1G7.v85.1G7，和共有H4的重链可变(VH)域序列的比对。相对于人源化，亲和力成熟，且精炼的克隆1G7(参见美国公开文本No.2015-0098900，通过援引将其完整收入本文)的变化以阴影框显示。高变区(HVR)以比对上方的标签标示。hu1G7.v85的VH域序列作为SEQ ID NO：104披露。
图6B是hu1G7.v85，1G7，和共有KI的轻链可变(VL)域序列的比对。相对于人源化，亲和力成熟，且精炼的克隆1G7的变化以阴影框显示。hu1G7.v85的VL域序列作为SEQ IDNO：105披露。
图7A显示抗FcRH5抗体hu1G7.v93的重链可变(VH)域序列(SEQ ID NO：106)。
图7B显示抗FcRH5抗体hu1G7.v93的轻链可变(VL)域序列(SEQ ID NO：107)。
图8是显示1G7.v85和1G7.v87抗体的抗体滴度的一幅图。
图9A是比较具有不同抗FcRH5臂的FcRH5/38E4.v1 TDB(即m1G7(“1G7TDB”)，1G7.v85(“1G7.v85TDB”)，和1G7.v1.4(“1G7.v1.4TDB”))对过表达FcRH3的细胞的结合的柱状图的覆盖图。
图9B是显示1G7.v85TDB在≤20μg/mL的浓度并不消减天然杀伤(NK)细胞；1G7.v85TDB对浆细胞(PC)具有25ng/mL的中值EC50的的一幅图。
图10A是比较FcRH5TDB 1G7.v1.4/38E4.v1(“1G7.v1.4TDB”)结合FcRH3，人FcRH5，和食蟹猴FcRH5的能力的一系列图。
图10B是比较1G7.v85 TDB结合FcRH3，人FcRH5，和食蟹猴FcRH5的能力的一系列图。
图10C是比较FcRH5 TDB 1G7/38E4.v1(“1G7 TDB”)结合FcRH3，人FcRH5，和食蟹猴FcRH5的能力的一系列图。
图10D是比较对照抗体结合FcRH3，人FcRH5，和食蟹猴FcRH5的能力的一系列图。
图11A显示人源化，家兔衍生抗FcRH5抗体hu7D8.L1H2的重链可变(VH)域序列的序列。hu7D8.L1H2的VH域序列作为SEQ ID NO：108披露。
图11B显示人源化，家兔衍生抗FcRH5抗体hu7D8.L1H2的轻链可变(VL)域序列的序列。hu7D8.L1H2的VL域序列作为SEQ ID NO：109披露。
图12A显示小鼠衍生抗FcRH5抗体17B1的重链可变(VH)域序列的序列。17B1的VH域序列作为SEQ ID NO：110披露。
图12B显示小鼠衍生抗FcRH5抗体17B1的轻链可变(VL)域序列的序列。17B1的VL域序列作为SEQ ID NO：111披露。
图13A显示小鼠衍生抗FcRH5抗体15G8的重链可变(VH)域序列的序列。15G8的VH域序列作为SEQ ID NO：112披露。
图13B显示小鼠衍生抗FcRH5抗体15G8的轻链可变(VL)域序列的序列。15G8的VL域序列作为SEQ ID NO：113披露。
图14是显示家兔衍生抗FcRH5抗体7D8.Rb的人源化变体和h7D8.L1H2对人FcRH5和食蟹猴FcRH5的结合亲和力的一系列图。
图15是显示FcRH5 TDB 1G7.v85TDB和hu1G7.v93/38E4.v1(“1G7.v93TDB”)以相当的亲和力结合人FcRH5和食蟹猴FcRH5二者的一系列图。
图16A-16B是显示1G7.v85TDB分别以2.35nM和6.76nM的解离常数(KD)结合人FcRH5和食蟹猴FcRH5的动力学分析的多幅图，如使用单价亲和力的1∶1结合模型以hIgG捕捉格式通过
Figure BDA0001530253770000311
测量的。
图17A-17B是展现升高的FcRH5诱导的对MOLP-2细胞(即内源表达FcRH5的人多发性骨髓瘤细胞)的细胞毒性的多幅图，其使用1G7的定格式成具有38E4.v1(参见PCT公开文本No.WO 2015-095392A1，通过援引将其完整收入本文)的CD3结合臂的T细胞依赖性双特异性(TDB)抗体的人源化和亲和力成熟变体。在图17A中，评估1G7 TDB，hu1G7.v1.1/38E4.v1(“1G7.v1.1 TDB”)，hu1G7.v1.2/38E4.v1(“1G7.v1.2 TDB”)，hu1G7.v1.3/38E4.v1(“1G7.v1.3TDB”)，和1G7.v1.4TDB。在图17B中，评估1G7.v1.4TDB，hu1G7.v1.5/38E4.v1(“1G7.v1.5”TDB)，hu1G7.v1.13/38E4.v1(“1G7.v1.13TDB”)，hu1G7.v1.7/38E4.v1(“1G7.v1.7TDB”)，和hu1G7.v1.13.1/38E4.v1(“1G7.v1.13.1”)。1G7.v.1.4TDB将靶细胞杀伤(EC50)相对于鼠1G7TDB改善5-13倍(n＝10)。
图18A-18D是比较1G7.v1.4TDB和1G7.v85TDB激活T细胞(图18A)，杀伤靶MOLP-2细胞(图18B)，杀伤靶食蟹猴浆细胞(图18C)，和杀伤靶食蟹猴B细胞(图18D)的能力的多幅图。
图19A是比较1G7.v85TDB和hu1G7.v87/38E4.v1 TDB(“1G7.v87TDB”)结合表达人FcRH5(小图1)，食蟹猴FcRH5(小图2)，和人FcRH3(小图3)的小鼠SVT2细胞及与其交叉反应的能力的一系列柱状图。
图19B-19D是比较1G7.v85TDB和1G7.v87TDB杀伤靶MOLP-2细胞(图19B)，人B细胞(图19C)，和食蟹猴B细胞(图19D)的能力的多幅图。
图20A-20D是显示在经历二盐酸2，2’-偶氮二(2-脒基丙烷)(AAPH)应力测试(图20B)或光应力测试(图20D)任一后1G7.v85TDB结合FcRH5的能力降低的多幅图，与未经应力的响应对照(图20A和20C)相比。
图21A是显示1G7.v85TDB的大小分布分析的一幅图。1G7.v85TDB在处于pH 5.5的his-乙酸溶液中经历应力2周后损失0.1％的单体峰。
图21B是显示1G7.v85TDB的电荷异质性的一幅图。1G7.v85TDB在处于pH 5.5的his-乙酸溶液中经历应力2周后损失7.7％的单体峰
图22A是显示1G7.v85TDB在处于pH 5.5的his-乙酸溶液中经历应力2周后没有轻链质量的还原(reduced)质量概况的可观察变化的一幅图。
图22B是显示1G7.v85TDB在处于pH 5.5的his-乙酸溶液中经历应力2周后没有重链质量的还原质量概况的可观察变化的一幅图。
图23A是用1μg/ml 1G7/UCHT1.v9TDB，10A8/UCHT1.v9TDB(“10A8TDB”)，和抗gD/UCHT1.v9TDB(“抗gD TDB”)刺激的健康供体外周CD8细胞，和表达具有N端gD表达标签的人FcRH5的细胞的phospho-SLP76Western印迹。使用指示TCR信号传导的总SLP76的印迹来确认相等样品加载。
图23B是显示1G7/UCHT1.v9TDB或抗gD TDB任一和CD8+T细胞的FcRH5靶细胞杀伤的一幅图。
图23C是具有现在近膜的gD表位的截短型FcRH5构建物的示意图。
图23D是显示使用截短型FcRH5构建物及1G7TDB或抗gD TDB的靶细胞杀伤的一幅图，当ECD引起的干扰去除时，接近的1G7/UCHT1.v9TDB的活性提高25倍(EC50＝20pM)，且抗gD TDB能够有效介导细胞杀伤(EC50＝0.19nM)。在293细胞中表达截短型构建物。
图23E是显示识别近膜表位的5种备选FcRH5TDB(短划线)的靶细胞杀伤与由1G7/UCHT1.v9TDB介导的杀伤等效且比10A8TDB显著更好的一幅图。
图24A是SVT2-亲本，gD-FcRH5全长，和gD-FcRH5-域9细胞的流式细胞术分析的柱状图覆盖图。
图24B是显示1G7/UCHT1.v9TDB，2H7/UCHT1.v9TDB(“2H7TDB”)，3G7/UCHT1.v9TDB(“3G7TDB”)，10A8TDB，和抗gD TDB所致百分比靶细胞杀伤的一幅图。
图25A是6种细胞系(SVT2-载体，SVT2-FcRH1，SVT2-FCRH2，SVT2-FcRH3，SVT2-FcRH4，和SVT2-FcRH5)的覆盖图柱状图，显示1G7.v85TDB结合FcRH5，但不结合其它家族成员。
图25B是3种细胞系(293亲本，293-FcRH5全长，和293-FcRH5-D9-删除)的柱状图覆盖图，显示1G7.v85TDB结合FcRH5的近膜域。
图25C是3种细胞系(SVT2-载体，SVT2-huFcRH5，和SVT2-食蟹猴FcRH5)的覆盖图柱状图，显示1G7.v85TDB结合食蟹猴FcRH5和人FcRH5。
图26A-26D是3种细胞系(SVT2-载体，SVT2-huFcRH5，和SVT2-食蟹猴FcRH5)的覆盖图柱状图，显示1G7/38E4.v1 TDB(“1G7TDB”)对多发性骨髓瘤(MM)细胞系和原代细胞的结合。显示同种型-PE和1G7TDB针对MOLP-2细胞(图26A)，人CD20+B细胞(图26B)，人CD38+CD138+浆细胞(图26C)，和来自MM骨髓吸出物的CD38+CD138+MM肿瘤细胞(图26D)的覆盖图柱状图。
图27A是显示用靶细胞(MOLP-2)和1G7TDB刺激后CD8+细胞的剂量依赖性激活的一幅图，通过流式细胞术分析检测。
图27B是显示1G7TDB所致靶细胞依赖性杀伤的一幅图。插图显示亲本Fox-NY细胞系和经转染表达低或高水平的人FcRH5的克隆的流式细胞术覆盖。误差棒是一式三份的标准偏差。
图27C-27E是显示1G7TDB诱导CD8增殖应答(5天)的多幅图，如通过以流式细胞术测量CSFE荧光强度稀释检测的。仅CFSE标记的人CD8+细胞(图27C)，与MOLP-2的共培养物(图27D)，或与MOLP-2和1000ng/ml 1G7.v85TDB的共培养物(图27E)。
图27F是显示含有不同抗CD3臂(例如UCHT1.v9，38E4.v1，和40G5c)的FcRH5TDB的靶依赖性细胞杀伤的一幅图(参见PCT公开文本No.WO2015/095392A1，通过援引将其完整收入本文)。抗CD3臂38E4.v1(单价KD0.5nM，
Figure BDA0001530253770000331
)，UCHT1.v9(单价KD＝2.5nM，
Figure BDA0001530253770000332
和Scatchard)，和40G5c(单价KD＝51nM，
Figure BDA0001530253770000333
)各自与m1G7的抗FcRH5臂(KD＝11nm，
Figure BDA0001530253770000334
)配对并测试对纯化的人CD8+细胞的结合。
图27G是显示1G7TDB和1G7/38E4.v1 bis-Fab(“1G7bis-Fab”)的靶依赖性细胞杀伤的一幅图。
图28A是显示原代多发性骨髓瘤肿瘤细胞，健康供体外周B细胞，和骨髓浆细胞中的FcRH5表达的一幅图。通过流式细胞术分析FcRH5表达并针对MOLP-2内部和测定法对照中的表达标准化。如下计算FcRH5的相对水平：(“X”的FcRH5的几何均值/“X”的同种型对照的几何均值)/(MOLP-2的FcRH5的几何均值/MOLP-2的同种型对照的几何均值)。
图28B是显示1G7.v85TDB对人浆细胞的细胞毒性活性的一幅图。将人骨髓单个核细胞(BMMC)与1G7.v85TDB一起培养并通过流式细胞术分析活的CD38+CD138+的细胞数。
图28C是显示1G7.v85TDB对不同患者衍生原代骨髓瘤细胞的细胞毒性活性的一幅图。将人骨髓瘤BMMC与自健康供体分离的CD8+T细胞和1G7.v85TBD一起共培养。
图28D是显示靶细胞中很低的FcRH5表达足以实现有力杀伤活性的一幅图。通过Scatchard测定法确定每个细胞的FcRH5拷贝数。
图28E(顶部)是显示来自具有1q21增益的高风险骨髓瘤患者的骨髓活检中FcRH5mRNA水平的qRT-PCR分析的一幅图。通过ΔCt(dCt)方法计算mRNA表达水平。使用Mann-Whitney U检验进行统计分析。(底部)是原代多发性骨髓瘤活检的FISH分析的图像，显示1q21的正常二倍体(左边)和大约3至6个拷贝的1q21的混合物(右边)。当＞20％的打分的肿瘤细胞具有3或更多个拷贝的1q21.3基因座时将肿瘤样品鉴定为1q21增益。
图29A是同种型-PE和抗FcRH5克隆1G7-PE的柱状图覆盖图，描绘食蟹猴CD20+B细胞上的FcRH5表达。
图29B是同种型-PE和抗FcRH5克隆1G7-PE的柱状图覆盖图，描绘食蟹猴CD45-CD20-CD38+PC+浆细胞上的FcRH5表达。
图29C-29D是显示在使用SVT2-cyno-FcRH5(图29C)和MOLP-2(图29D)及人CD8+T细胞或食蟹猴CD8+T细胞的体外杀伤测定法中食蟹猴CD8+T细胞和人CD8+T细胞之间相当的剂量依赖性细胞毒性活性的多幅图。
图29E是显示1G7.v85TDB对食蟹猴CD20+B细胞的体外杀伤活性的一幅图(n＝14)。
图29F是显示1G7.v85TDB对来自食蟹猴骨髓(来自8只不同供体)的CD45-CD20-CD38+PC+浆细胞的体外杀伤活性的一幅图(n＝8)。
图30A是显示自人源化NOD/SCIDγ小鼠(NSG)的脾分离的脾人T细胞具有与来自健康供体的外周人T细胞相当的活性的一幅图。
图30B是显示1G7TDB治疗诱导人源化NSG小鼠中皮下MOLP-2异种移植物肿瘤消退的一幅图。用单剂静脉内媒介或0.5mg/kg 1G7.v85TDB处理小鼠。指出了均值肿瘤体积(黑色粗线系)，个体肿瘤体积(细线)，和对照组均值(短划线)。
图31A是显示对3只动物/组单剂施用1mg/kg，2mg/kg，或4mg/kg1G7.v85TDB后在研究持续期间上绘图的FcRH5TDB的血清浓度的一幅图。下面显示了显示药效学参数的一张表。
图31B是显示对3只动物/组单剂施用3mg/kg抗gD TDB或0.3mg/kg或3mg/kgFcRH5TDB后在研究持续期间上绘图的FcRH5TDB(1G7.v85TDB和1G7.v87/38E4.v1 TDB(“1G7.v87TDB”))的血清浓度的一幅图。下面显示了显示药效学参数的一张表。
图31C-31D是显示将媒介或1G7.v85TDB(1mg/kg，2mg/kg，或4mg/kg)单剂静脉内施用于3只动物/组后食蟹猴外周血中1G7.v85TDB诱导的瞬时T细胞激活的多幅图。
图31E-31H是显示将媒介或1G7.v85TDB(1mg/kg，2mg/kg，或4mg/kg)单剂静脉内施用于3只动物/组后食蟹猴中的外周血(图31E)，脾(图31F)，下颌淋巴结(图31G)，和骨髓(图31H)中CD20+B细胞的绝对计数的多幅图。图31F-31H是以组均值和均值的标准误差(SEM)绘图的。
图31I是显示1G7.v85TDB在食蟹猴中消减骨髓浆细胞的一幅图，以组实测SEM绘图。
图31J是显示食蟹猴IgG水平响应治疗的变化的一幅图，使用公式{(给药前IgG水平)-(研究结束时IgG水平)}/(给药前IgG水平)X 100计算。通过不配对t检验分析给药前和治疗后之间的差异。将数据以组均值和均值的标准误差(SEM)绘图。
图32A-32B是显示单剂静脉内施用媒介，1mg/kg 1G7.v85TDB，2mg/kg1G7.v85TDB，或4mg/kg 1G7.v85TDB后4组动物外周血中CD4+T细胞(图32A)和CD8+T细胞(图32B)的绝对计数的多幅图。
图32C是显示1G7.v85TDB治疗后肠系膜淋巴结中CD20+B细胞的绝对计数的降低的一幅图。该图以个体动物和组均值及SEM绘图。
图32D是显示单剂静脉内施用1mg/kg，2mg/kg，或4mg/kg 1G7.v85TDB后FcRH5占据的一幅图。
图33A-33F是显示单剂静脉内施用媒介，1mg/kg 1G7.v85TDB，2mg/kg1G7.v85TDB，和4mg/kg 1G7.v85TDB后4组动物中细胞因子IL-6(图33A)，IL-2(图33B)，IFN-γ(图33C)，IL-1Rα(图33D)，IL-5(图33E)，和MCP-1(图33F)的浓度变化的多幅图。
图34是显示1G7.v85TDB处理在人T细胞中诱导PD1表达的一系列图。将CD8+T细胞用1G7.v85TDB和MOLP-2靶细胞刺激48小时，然后通过流式细胞术分析。
图35A是显示单剂静脉内施用媒介，1mg/kg，2mg/kg，和4mg/kg1G7.v85TDB之后食蟹猴中的CD8+T细胞中的PD1+的百分比的一幅图。1G7.v85TDB处理导致在体内在食蟹猴T细胞中诱导PD1。
图35B是显示单剂静脉内施用媒介，1mg/kg，2mg/kg，和4mg/kg1G7.v85TDB之后食蟹猴中的CD4+T细胞中的PD1+的百分比的一幅图。
图36A-36D是显示来自血液的CD4+T细胞(图36A)，来自脾的CD8+T细胞(图36B)，来自淋巴结的CD8+T细胞(图36C)，和来自骨髓的CD8+T细胞(图36D)中PD-1表达的多幅图，如1G7.v85TDB或媒介给药后7天通过FACS分析的。
图37A-37B是显示在抗PD-L1或抗PD-1抗体存在或缺失下1G7.v85TDB将经预刺激的CD8+T细胞的活性重定向来杀死表达FcRH5和PD-1的HEK-293T细胞(“293-FcRH5-PD-L1细胞”)的能力的多幅图。图37A中的曲线以一式三份的均值和标准误差(SD)绘图。
图38A是显示在地塞米松(Dex)存在和缺失下1G7.v85TDB所致SVT2-FcRH5靶细胞杀伤的一幅图。
图38B是显示在1μM Dex存在和缺失下1G7.v85TDB处理后的细胞因子(即IL-2，IL-6，TNF-α，和IFN-γ)释放的一系列图。
图39是显示自人IgG1生成bis-Fab的示意图。
图40A是显示bis-Fab A-D和F(ab’)2A的FcRH5的结合的一幅图，如通过ELISA测定法测定的。
图40B是显示bis-Fab A-D和F(ab’)2A对CD3的结合的一幅图，如通过ELISA测定法测定的。
图41是显示bis-Fab A-D和F(ab’)2A所致靶物介导的T细胞激活的量的一幅图。
发明详述
I.定义
如本文中使用的，术语“约”指此技术领域中的技术人员容易知道的相应数值的常规误差范围。本文中提到“约”数值或参数包括(且描述)涉及该数值或参数本身的实施方案。
出于本文中的目的，“受体人框架”指包含自人免疫球蛋白框架或如下文定义的人共有框架衍生的轻链可变域(VL)框架或重链可变域(VH)框架的氨基酸序列的框架。自人免疫球蛋白框架或人共有框架“衍生”的受体人框架可以包含其相同的氨基酸序列，或者它可以含有氨基酸序列变化。在一些实施方案中，氨基酸变化的数目是10或更少，9或更少，8或更少，7或更少，6或更少，5或更少，4或更少，3或更少，或2或更少。在一些实施方案中，VL受体人框架与VL人免疫球蛋白框架序列或人共有框架序列在序列上相同。
“亲和力”指分子(例如抗体)的单一结合位点与其结合配偶体(例如抗原)之间全部非共价相互作用总和的强度。除非另有指示，如本文中使用的，“结合亲和力”指反映结合对的成员(例如抗体和抗原)之间1∶1相互作用的内在结合亲和力。分子X对其配偶体Y的亲和力通常可以用解离常数(KD)来表述。亲和力可以通过本领域知道的常用方法来测量，包括本文中所描述的方法。下文描述了用于测量结合亲和力的具体的说明性和例示性的实施方案。
“亲和力成熟的”抗体指在一个或多个高变区(HVR)中具有一处或多处改变的抗体，与不拥有此类改变的亲本抗体相比，此类改变导致该抗体对抗原的亲和力改善。
术语“抗FcRH5抗体”或“结合FcRH5的抗体”指能够以足够亲和力结合FcRH5，使得该抗体可作为诊断剂和/或治疗剂用于靶向FcRH5的抗体。在一个实施方案中，根据例如通过放射免疫测定法(RIA)的测量，抗FcRH5抗体结合无关的，非FcRH5的蛋白质的程度小于该抗体对FcRH5的结合的约10％。在某些实施方案中，结合FcRH5的抗体具有≤1μM，≤100nM，≤10nM，≤1nM，≤0.1nM，≤0.01nM，或≤0.001nM(例如10-8M或更少，例如10-8M到10-13M，例如10-9M到10-13M)的解离常数(KD)。在某些实施方案中，抗FcRH5抗体结合在来自不同物种的FcRH5中保守的FcRH5表位。
术语“抗CD3抗体”和“结合CD3的抗体”指能够以足够亲和力结合CD3，使得该抗体可作为诊断剂和/或治疗剂用于靶向CD3的抗体。在一个实施方案中，根据例如通过放射免疫测定法(RIA)的测量，抗CD3抗体结合无关的，非CD3的蛋白质的程度小于该抗体对CD3的结合的约10％。在某些实施方案中，结合CD3的抗体具有≤1μM，≤100nM，≤10nM，≤1nM，≤0.1nM，≤0.01nM，或≤0.001nM(例如10-8M或更少，例如10-8M到10-13M，例如10-9M到10-13M)的解离常数(KD)。在某些实施方案中，抗CD3抗体结合在来自不同物种的CD3中保守的CD3表位。
本文中的术语“抗体”以最广义使用，并且涵盖各种抗体结构，包括但不限于单克隆抗体，多克隆抗体，多特异性抗体(例如双特异性抗体)，和抗体片段(例如bis-Fab)，只要它们展现出期望的抗原结合活性。
“抗体片段”指与完整抗体不同的分子，其包含完整抗体中结合完整抗体所结合抗原的部分。抗体片段的例子包括但不限于bis-Fab；Fv；Fab；Fab’；Fab’-SH；F(ab’)2；双抗体；线性抗体；单链抗体分子(例如scFv)；和由抗体片段形成的多特异性抗体。
“结合域”表示特异性结合靶表位，抗原，配体，或受体的化合物或分子的一部分。结合域包括但不限于抗体(例如单克隆，多克隆，重组，人源化，和嵌合抗体)，抗体片段或其部分(例如bis-Fab片段，Fab片段，F(ab’)2，scFv抗体，SMIP，域抗体，双抗体，微型抗体(minibody)，scFv-Fc，亲和体(affibody)，纳米抗体(nanobody)，和抗体的VH和/或VL域)，受体，配体，适体，和具有已鉴定的结合配偶的其它分子。
如本文中使用的，术语“带电荷区域”指多肽(例如抗体)的如下位置，其包括一个或多个(例如1，2，3，4，5，6，7，8，9，或10个)碱性或酸性氨基酸，当该带电荷区域和其关联带电荷区域具有相反总体相对电荷，能够与具有一个或多个(例如1，2，3，4，5，6，7，8，9，或10个)碱性或酸性氨基酸的关联带电荷区域形成电荷对。
如本文中使用的，术语“电荷对”指相反总体电荷的两个带电荷区域之间形成的键。
“化疗剂”是可用于治疗癌症的化学化合物。化疗剂的实例包括烷化剂类(alkylating agents)，诸如塞替派(thiotepa)和环磷酰胺(cyclophosphamide)
Figure BDA0001530253770000381
磺酸烷基酯类(alkyl sulfonates)，诸如白消安(busulfan)，英丙舒凡(improsulfan)和哌泊舒凡(piposulfan)；氮丙啶类(aziridines)，诸如苯佐替派(benzodopa)，卡波醌(carboquone)，美妥替派(meturedopa)和乌瑞替派(uredopa)；乙撑亚胺类(ethylenimines)和甲基蜜胺类(methylamelamines)，包括六甲蜜胺(altretamine)，三乙撑蜜胺(triethylenemelamine)，三乙撑磷酰胺(triethylenephosphoramide)，三乙撑硫代磷酰胺(triethylenethiophosphoramide)和三羟甲蜜胺(trimethylomelamine)；番荔枝内酯类(acetogenin)(尤其是布拉他辛(bullatacin)和布拉他辛酮(bullatacinone))；δ-9-四氢大麻酚(tetrahydrocannabinol)(屈大麻酚(dronabinol)，
Figure BDA0001530253770000391
)；β-拉帕醌(lapachone)；拉帕醇(lapachol)；秋水仙素类(colchicines)；白桦脂酸(betulinicacid)；喜树碱(camptothecin)(包括合成类似物托泊替康(topotecan)
Figure BDA0001530253770000392
CPT-11(伊立替康(irinotecan)，
Figure BDA0001530253770000393
)，乙酰喜树碱，东莨菪亭(scopolectin)和9-氨基喜树碱)；苔藓抑素(bryostatin)；callystatin；CC-1065(包括其阿多来新(adozelesin)，卡折来新(carzelesin)和比折来新(bizelesin)合成类似物)；鬼臼毒素(podophyllotoxin)；鬼臼酸(podophyllinic acid)；替尼泊苷(teniposide)；隐藻素类(cryptophycins)(特别是隐藻素1和隐藻素8)；多拉司他汀(dolastatin)；duocarmycin(包括合成类似物，KW-2189和CB1-TM1)；艾榴塞洛素(eleutherobin)；pancratistatin；sarcodictyin；海绵抑素(spongistatin)；氮芥类(nitrogen mustards)，诸如苯丁酸氮芥(chlorambucil)，萘氮芥(chlornaphazine)，胆磷酰胺(chlorophosphamide)，雌莫司汀(estramustine)，异环磷酰胺(ifosfamide)，双氯乙基甲胺(mechlorethamine)，盐酸氧氮芥(mechlorethamine oxide hydrochloride)，美法仑(melphalan)，新氮芥(novembichin)，苯芥胆甾醇(phenesterine)，泼尼莫司汀(prednimustine)，曲磷胺(trofosfamide)，尿嘧啶氮芥(uracil mustard)；亚硝脲类(nitrosoureas)，诸如卡莫司汀(carmustine)，氯脲菌素(chlorozotocin)，福莫司汀(fotemustine)，洛莫司汀(lomustine)，尼莫司汀(nimustine)和雷莫司汀(ranimnustine)；抗生素类，诸如烯二炔类抗生素(enediyne)(如加利车霉素(calicheamicin)，尤其是加利车霉素γ1I和加利车霉素ωI1(参见例如Nicolaou et al.，Angew.Chem Intl.Ed.Engl.，33：183-186(1994))；CDP323，一种口服α-4整联蛋白抑制剂；蒽环类抗生素(dynemicin)，包括dynemicin A；埃斯波霉素(esperamicin)；以及新制癌素(neocarzinostatin)发色团和相关色蛋白烯二炔类抗生素发色团)，阿克拉霉素(aclacinomysin)，放线菌素(actinomycin)，氨茴霉素(authramycin)，偶氮丝氨酸(azaserine)，博来霉素(bleomycin)，放线菌素C(cactinomycin)，carabicin，洋红霉素(caminomycin)，嗜癌霉素(carzinophilin)，色霉素(chromomycin)，放线菌素D(dactinomycin)，柔红霉素(daunorubicin)，地托比星(detorubicin)，6-二氮-5-氧-L-正亮氨酸，多柔比星(doxorubicin)(包括
Figure BDA0001530253770000401
吗啉代多柔比星，氰基吗啉代多柔比星，2-吡咯代多柔比星，盐酸多柔比星脂质体注射剂
Figure BDA0001530253770000402
脂质体多柔比星TLC D-99
Figure BDA0001530253770000403
PEG化脂质体多柔比星
Figure BDA0001530253770000404
和脱氧多柔比星)，表柔比星(epirubicin)，依索比星(esorubicin)，伊达比星(idarubicin)，麻西罗霉素(marcellomycin)，丝裂霉素类(mitomycins)诸如丝裂霉素C，霉酚酸(mycophenolicacid)，诺拉霉素(nogalamycin)，橄榄霉素(olivomycin)，培洛霉素(peplomycin)，泊非霉素(porfiromycin)，嘌呤霉素(puromycin)，三铁阿霉素(quelamycin)，罗多比星(rodorubicin)，链黑菌素(streptonigrin)，链佐星(streptozocin)，杀结核菌素(tubercidin)，乌苯美司(ubenimex)，净司他丁(zinostatin)，佐柔比星(zorubicin)；抗代谢物类，诸如甲氨蝶呤，吉西他滨(gemcitabine)
Figure BDA0001530253770000405
替加氟(tegafur)
Figure BDA0001530253770000406
卡培他滨(capecitabine)
Figure BDA0001530253770000407
埃坡霉素(epothilone)和5-氟尿嘧啶(5-FU)；考布他汀(combretastatin)；叶酸类似物，诸如二甲叶酸(denopterin)，甲氨蝶呤，蝶酰三谷氨酸(pteropterin)，三甲曲沙(trimetrexate)；嘌呤类似物，诸如氟达拉滨(fludarabine)，6-巯基嘌呤(mercaptopurine)，硫咪嘌呤(thiamiprine)，硫鸟嘌呤(thioguanine)；嘧啶类似物，诸如安西他滨(ancitabine)，阿扎胞苷(azacitidine)，6-氮尿苷，卡莫氟(carmofur)，阿糖胞苷(cytarabine)，双脱氧尿苷(dideoxyuridine)，去氧氟尿苷(doxifluridine)，依诺他滨(enocitabine)，氟尿苷(floxuridine)；雄激素类，诸如卡鲁睾酮(calusterone)，丙酸屈他雄酮(dromostanolonepropionate)，表硫雄醇(epitiostanol)，美雄烷(mepitiostane)，睾内酯(testolactone)；抗肾上腺类，诸如氨鲁米特(aminoglutethimide)，米托坦(mitotane)，曲洛司坦(trilostane)；叶酸补充剂，诸如亚叶酸(frolinic acid)；醋葡醛内酯(aceglatone)；醛磷酰胺糖苷(aldophosphamide glycoside)；氨基乙酰丙酸(aminolevulinic acid)；恩尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶(amsacrine)；bestrabucil；比生群(bisantrene)；依达曲沙(edatraxate)；地磷酰胺(defofamine)；地美可辛(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；elformithine；依利醋铵(elliptinium acetate)；epothilone；依托格鲁(etoglucid)；硝酸镓；羟脲(hydroxyurea)；香菇多糖(lentinan)；氯尼达明(lonidainine)；美登木素生物碱类(maytansinoids)，诸如美登素(maytansine)和安丝菌素(ansamitocin)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫哌达醇(mopidanmol)；二胺硝吖啶(nitraerine)；喷司他丁(pentostatin)；蛋氨氮芥(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；2-乙基酰肼(ethylhydrazide)；丙卡巴肼(procarbazine)；
Figure BDA00015302537700004118
多糖复合物(JHS Natural Products，Eugene，Oreg.)；雷佐生(razoxane)；根霉素(rhizoxin)；西索菲兰(sizofuran)；螺旋锗(spirogermanium)；细交链孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亚胺醌(triaziquone)；2,2’，2”-三氯三乙胺；单端孢菌素类(trichothecenes)(尤其是T-2毒素，疣孢菌素(verracurin)A，杆孢菌素(roridin)A和蛇行菌素(anguidine))；乌拉坦(urethan)；长春地辛(vindesine)
Figure BDA0001530253770000411
Figure BDA0001530253770000412
达卡巴嗪(dacarbazine)；甘露醇氮芥(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴卫矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；gacytosine；阿糖胞苷(arabinoside)(“Ara-C”)；塞替派(thiotepa)；类紫杉醇(taxoid)，例如帕利他塞(paclitaxel)(
Figure BDA0001530253770000413
Bristol-Myers Squibb Oncology，Princeton，N.J.)，清蛋白改造的纳米颗粒剂型帕利他塞(ABRAXANETM)和多西他塞(docetaxel)(
Figure BDA0001530253770000414
Rhome-Poulene Rorer，Antony，France)；苯丁酸氮芥(chloranbucil)；6-硫鸟嘌呤(thioguanine)；巯基嘌呤(mercaptopurine)；甲氨蝶呤(methotrexate)；铂剂，诸如顺铂(cisplatin)，奥沙利铂(oxaliplatin)(例如
Figure BDA0001530253770000415
)和卡铂(carboplatin)；长春药类(vincas)，其阻止微管蛋白聚合形成微管，包括长春碱(vinblastine)
Figure BDA0001530253770000416
长春新碱(vincristine)
Figure BDA0001530253770000417
长春地辛(vindesine)
Figure BDA0001530253770000418
和长春瑞滨(vinorelbine)
Figure BDA0001530253770000419
依托泊苷(etoposide)(VP-16)；异环磷酰胺(ifosfamide)；米托蒽醌(mitoxantrone)；亚叶酸(leucovorin)；能灭瘤(novantrone)；依达曲沙(edatrexate)；道诺霉素(daunomycin)；氨基蝶呤(aminopterin)；伊本膦酸盐(ibandronate)；拓扑异构酶抑制剂RFS 2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；类维A酸(retinoids)，诸如维A酸(retinoic acid)，包括贝沙罗汀(bexarotene)
Figure BDA00015302537700004110
二膦酸盐类(bisphosphonates)，诸如氯膦酸盐(clodronate)(例如
Figure BDA00015302537700004111
或
Figure BDA00015302537700004112
)，依替膦酸钠(etidronate)
Figure BDA00015302537700004113
NE-58095，唑来膦酸/唑来膦酸盐(zoledronic acid/zoledronate)
Figure BDA00015302537700004114
阿伦膦酸盐(alendronate)
Figure BDA00015302537700004115
帕米膦酸盐(pamidronate)
Figure BDA00015302537700004116
替鲁膦酸盐(tiludronate)
Figure BDA00015302537700004117
或利塞膦酸盐(risedronate)
Figure BDA0001530253770000421
以及曲沙他滨(troxacitabine)(1，3-二氧戊环核苷胞嘧啶类似物)；反义寡核苷酸，特别是抑制牵涉异常细胞增殖的信号途经中的基因表达的反义寡核苷酸，诸如例如PKC-α，Raf，H-Ras和表皮生长因子受体(EGF-R)(例如厄洛替尼(erlotinib)(TarcevaTM)；和降低细胞增殖的VEGF-A；疫苗，诸如
Figure BDA0001530253770000422
疫苗和基因疗法疫苗，例如
Figure BDA0001530253770000423
疫苗，
Figure BDA0001530253770000424
疫苗和
Figure BDA0001530253770000425
疫苗；拓扑异构酶1抑制剂(例如
Figure BDA0001530253770000426
)；rmRH(例如
Figure BDA0001530253770000427
)；BAY439006(sorafenib；Bayer)；SU-11248(sunitinib，
Figure BDA0001530253770000428
Pfizer)；哌立福辛(perifosine)，COX-2抑制剂(如塞来考昔(celecoxib)或艾托考昔(etoricoxib))，蛋白体抑制剂(例如PS341)；bortezomib
Figure BDA0001530253770000429
CCI-779；tipifarnib(R11577)；orafenib，ABT510；Bc1-2抑制剂，诸如oblimersen sodium
Figure BDA00015302537700004210
pixantrone；EGFR抑制剂；酪氨酸激酶抑制剂；丝氨酸-苏氨酸激酶抑制剂，诸如雷帕霉素(rapamycin)(sirolimus，
Figure BDA00015302537700004211
)；法尼基转移酶抑制剂，诸如lonafamib(SCH6636，SARASARTM)；及任何上述各项的药学可接受盐，酸或衍生物；以及两种或更多种上述各项的组合，诸如CHOP(环磷酰胺，多柔比星，长春新碱和泼尼松龙联合疗法的缩写)和FOLFOX(奥沙利铂(ELOXATINTM)联合5-FU和亚叶酸的治疗方案的缩写)，及任何上述各项的药学可接受盐，酸或衍生物；以及两种或更多种上述各项的组合。
本文中所定义的化疗剂包括“抗激素剂”或“内分泌治疗剂”，其作用于调节，降低，阻断，或抑制能促进癌症生长的激素的效果。它们自身可以是激素，包括但不限于：抗雌激素类和选择性雌激素受体调控物类(SERM)，包括例如他莫昔芬(tamoxifen)(包括
Figure BDA00015302537700004212
他莫昔芬)，雷洛昔芬(raloxifene)，屈洛昔芬(droloxifene)，4-羟基他莫昔芬，曲沃昔芬(trioxifene)，那洛昔芬(keoxifene)，LY117018，奥那司酮(onapristone)和
Figure BDA00015302537700004213
托瑞米芬(toremifene)；抑制在肾上腺中调节雌激素生成的芳香酶的芳香酶抑制剂，诸如例如4(5)-咪唑，氨鲁米特(aminoglutethimide)，
Figure BDA00015302537700004214
醋酸甲地孕酮(megestrol acetate)，
Figure BDA00015302537700004215
依西美坦(exemestane)，福美坦(formestanie)，法倔唑(fadrozole)，
Figure BDA00015302537700004216
伏罗唑(vorozole)，
Figure BDA00015302537700004217
来曲唑(letrozole)和
Figure BDA00015302537700004218
阿那曲唑(anastrozole)；抗雄激素类，诸如氟他米特(flutamide)，尼鲁米特(nilutamide)，比卡米特(bicalutamide)，亮丙瑞林(leuprolide)，和戈舍瑞林(goserelin)；以及曲沙他滨(troxacitabine)(1，3-二氧戊环核苷胞嘧啶类似物)；反义寡核苷酸，特别是抑制牵涉异常(abherant)细胞增殖的信号途经中的基因表达的反义寡核苷酸，诸如例如PKC-α，Raf和H-Ras；核酶，诸如VEGF表达抑制剂(例如
Figure BDA0001530253770000431
核酶)和HER2表达抑制剂；疫苗，诸如基因疗法疫苗，例如
Figure BDA0001530253770000432
疫苗，
Figure BDA0001530253770000433
疫苗和
Figure BDA0001530253770000434
疫苗；
Figure BDA0001530253770000435
rIL-2：
Figure BDA0001530253770000436
拓扑异构酶1抑制剂；
Figure BDA0001530253770000437
rmRH；长春瑞滨(Vinorelbine)和埃斯波霉素(Esperamicins)(见美国专利No.4,675,187)；及任何上述物质的药剂学可接受的盐，酸或衍生物；以及两种或多种上述物质的组合。
术语“免疫调控药物”或“IMiD”指诸如通过刺激抗体形成和/或抑制外周血细胞活性来修饰免疫系统应答或免疫系统机能的一类药物，包括但不限于沙利度胺(thalidomide)(a-N-邻苯二甲酰亚胺基-戊二酰亚胺)及其类似物，
Figure BDA0001530253770000438
(来那度胺(lenalidomide))，ACTI-MIDTM(泊马度胺(pomalidomide))，
Figure BDA0001530253770000439
(阿普斯特(apremilast))，及其药学可接受盐或酸。
术语“嵌合”抗体指其中的重和/或轻链的一部分自特定的来源或物种衍生，而重和/或轻链的剩余部分自不同来源或物种衍生的抗体。
如本文中使用的，术语“FcRH5”指源自细胞中FcRH5蛋白质生成的任何天然FcRH5。该术语包括来自任何脊椎动物来源(包括哺乳动物，诸如灵长类(例如人和食蟹猴)和啮齿类(例如小鼠和大鼠))的FcRH5，除非另有说明。该术语还包括天然存在的FcRH5变体，例如剪接变体或等位变体。一种例示性人FcRH5蛋白质序列的氨基酸序列显示于SEQ ID NO：114。一种例示性食蟹猴FcRH5蛋白质的氨基酸序列显示于SEQ ID NO：215。
如本文中使用的，术语“分化簇3”或“CD3”指来自任何脊椎动物来源(包括哺乳动物，诸如灵长类(例如人)和啮齿类(例如小鼠和大鼠))的任何天然CD3，除非另有说明，包括例如CD3ε，CD3γ，CD3α，和CD3β链。该术语涵盖“全长”，未加工的CD3(例如未加工的或未修饰的CD3ε或CD3γ)以及自细胞中加工得到的任何形式的CD3。该术语还涵盖天然存在的CD3变体，包括例如剪接变体或等位变体。CD3包括例如长度为207个氨基酸的人CD3ε蛋白(NCBIRefSeq No.NP_000724)和长度为182个氨基酸的人CD3γ蛋白(NCBI RefSeq No.NP_000064)。
抗体的“类”指其重链拥有的恒定域或恒定区的类型。抗体有5大类：IgA，IgD，IgE，IgG，和IgM，并且这些中的几种可以进一步分成亚类(同种型)，例如，IgG1，IgG2，IgG3，IgG4，IgA1，和IgA2。与不同类免疫球蛋白对应的重链恒定域分别称作α，δ，ε，γ，和μ。
应当理解，本文中描述的本发明的方面和实施方案包括“包含......”，“由......组成”，和“基本上由......组成”的方面和实施方案。
如本文中使用的，术语“细胞毒剂”指抑制或阻止细胞功能和/或引起细胞死亡或破坏的物质。细胞毒剂包括但不限于：放射性同位素(例如At211，I131，I125，y90，Re186，Re188，Sm153，Bi212，P32，Pb212和Lu的放射性同位素)；化学治疗剂或药物(例如甲氨蝶呤(methotrexate)，阿霉素(adriamicin)，长春花生物碱类(vinca alkaloids)(长春新碱(vincristine)，长春碱(vinblastine)，依托泊苷(etoposide))，多柔比星(doxorubicin)，美法仑(melphalan)，丝裂霉素(mitomycin)C，苯丁酸氮芥(chlorambucil)，柔红霉素(daunorubicin)或其它嵌入剂)；生长抑制剂；酶及其片段，诸如溶核酶；抗生素；毒素，诸如小分子毒素或者细菌，真菌，植物或动物起源的酶活性毒素，包括其片段和/或变体；及下文公开的各种抗肿瘤或抗癌剂。
“病症”为会受益于处理的任何状况，包括但不限于慢性和急性病症或疾病，包括那些使哺乳动物易患所讨论病症的病理状况。
术语“细胞增殖性病症”和“增殖性病症”指与一定程度的异常细胞增殖有关的病症。在一个实施方案中，细胞增殖性病症指癌症。在一个实施方案中，细胞增殖性病症指肿瘤。
术语“癌症”和“癌性”指向或描述哺乳动物中特征通常为细胞生长/增殖不受调控的生理疾患。癌症的例子包括但不限于骨髓瘤，癌瘤，淋巴瘤(例如何杰金(Hodgkin)氏淋巴瘤和非何杰金氏淋巴瘤)，母细胞瘤，肉瘤和白血病。在一些实施方案中，癌症为FcRH5阳性癌症。此类癌症的更具体例子包括多发性骨髓瘤(MM)，慢性淋巴样白血病(CLL)，套细胞淋巴瘤(MCL)，弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)，滤泡性淋巴瘤(FL)，急性髓样白血病(AML)，骨髓增生异常综合征(MDS)，慢性髓细胞性白血病(CML)，慢性骨髓单核细胞性白血病，急性早幼粒细胞性白血病(APL)，慢性骨髓增生性病症，血小板性白血病，前体B细胞急性成淋巴细胞性白血病(pre-B-ALL)，前体T细胞急性成淋巴细胞性白血病(pre-T-ALL)，肥大细胞病，肥大细胞性白血病，肥大细胞肉瘤，髓样肉瘤，淋巴样白血病，和未分化性白血病。在一些实施方案中，该癌症是B细胞癌症。特别地，癌症可包括牵涉过度生成抗体的状况，诸如单克隆丙种球蛋白病，轻链淀粉样变，单克隆丙种球蛋白病(意义不明的)和孤立性浆细胞瘤，分离的浆细胞瘤和髓外浆细胞瘤。
如本文中使用的，“肿瘤”指所有赘生性(neoplastic)细胞生长和增殖，无论是恶性的还是良性的，及所有癌前(pre-cancerous)和癌性细胞和组织。术语“癌症”，“癌性”，“细胞增殖性病症”，“增殖性病症”和“肿瘤”在本文中提到时并不互相排斥。
“效应器功能”指那些可归于抗体Fc区且随抗体同种型而变化的生物学活性。抗体效应器功能的例子包括：C1q结合和补体依赖性细胞毒性(CDC)；Fc受体结合；抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)；吞噬作用；细胞表面受体(例如B细胞受体)下调；和B细胞活化。
化合物(例如本发明的抗FcRH5抗体)或其组合物(例如药物组合物)的“有效量”是实现期望的治疗或预防结果(诸如特定病症(例如细胞增殖性病症，例如癌症)的可测量改善或预防)所需要的至少最小量。本文中的有效量可以随诸如患者的疾病状态，年龄，性别，和重量，和抗体引发个体中期望的应答的能力等因素而变化。有效量也是治疗有益效果超过治疗的任何毒性或不利效果的量。为了预防性使用，有益或期望的结果包括如下的结果，诸如消除或降低风险，减轻严重性，或者延迟疾病的发作，包括疾病的生物化学，组织学和/或行为症状，其并发症和疾病形成期间呈现的中间病理学表型。为了治疗性使用，有益或期望的结果包括临床结果，诸如减少源自疾病的一种或多种症状，提高那些患有疾病的对象的生命质量，降低治疗疾病需要的其它药物的剂量，增强另一种药物的效果(诸如经由靶向)，延迟疾病的进展，和/或延长存活。在癌症或肿瘤的情况中，药物的有效量在减少癌细胞的数目；降低肿瘤大小；抑制(即在一定程度上减缓或者期望地停止)癌细胞浸润入外周器官中；抑制(即在一定程度上减缓且期望地停止)肿瘤转移；在一定程度上抑制肿瘤生长；和/或在一定程度上减轻一种或多种与病症有关的症状中可以具有效果。可以在一次或多次施用中施用有效量。出于本发明的目的，药物，化合物，或药物组合物的有效量是足以直接或间接实现预防或治疗性处理的量。如在临床背景中理解的，药物，化合物，或药物组合物的有效量可以与或不与另一种药物，化合物，或药物组合物一起实现。如此，可以在施用一种或多种治疗剂的背景中考虑“有效量”，并且若与一种或多种其它药剂一起，可以实现或者实现期望的结果，则可以认为单一药剂以有效量给予。
本文中的术语“Fc区”用于定义免疫球蛋白重链中至少含有恒定区一部分的C端区。该术语包括天然序列Fc区和变体Fc区。在一个实施方案中，人IgG重链Fc区自Cys226，或自Pro230延伸至重链的羧基端。然而，Fc区的C端赖氨酸(Lys447)可以存在或不存在。除非本文中另有规定，Fc区或恒定区中的氨基酸残基的编号方式依照EU编号系统，又称作EU索引，如记载于Kabat等，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda，MD，1991。
“框架”或“FR”指除高变区(HVR)残基外的可变域残基。一般地，可变域的FR由4个FR域组成：FR1，FR2，FR3，和FR4。因而，HVR和FR序列在VH(或VL)中一般以如下的顺序出现：FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4。
术语“FcRH5阳性细胞”指在其表面上表达FcRH5的细胞。在一些实施方案中，FcRH5是FcRH5a，FcRH5b，FcRH5c，UniProt标识符Q96RD9-2，和/或FcRH5d中的一项或多项。在一些实施方案中，该FcRH5是FcRH5c。
术语“FcRH5阳性癌症”指包含在其表面上表达FcRH5的细胞的癌症。为了确定细胞是否在表面上表达FcRH5的目的，认为FcRH5mRNA表达与细胞表面上的FcRH5表达有关。在一些实施方案中，通过选自原位杂交和RT-PCR(包括定量RT-PCR)的方法测定FcRH5mRNA的表达。或者，可以例如使用针对FcRH5的抗体在诸如免疫组织化学，FACS，等方法中测定细胞表面上FcRH5的表达。在一些实施方案中，FcRH5是FcRH5a，FcRH5b，FcRH5c，UniProt标识符Q96RD9-2，和/或FcRH5d中的一项或多项。在一些实施方案中，该FcRH5是FcRH5c。
术语“全长抗体”，“完整抗体”，和“全抗体”在本文中可互换使用，指与天然抗体结构具有基本上类似的结构或者具有含有如本文中所限定的Fc区的重链的抗体。
术语“FcRH5的糖基化形式”指通过添加碳水化合物残基经过翻译后修饰的天然存在形式的FcRH5。
“生长抑制剂”在用于本文时指在体外或在体内抑制细胞生长的化合物或组合物。在一个实施方案中，生长抑制剂是阻止或降低表达抗体所结合的抗原的细胞增殖的生长抑制性抗体。在另一个实施方案中，生长抑制剂可以是显著降低处于S期的细胞百分比的药剂。生长抑制剂的例子包括阻断细胞周期行进(处于S期以外的位置)的药剂，诸如诱导G1停滞和M期停滞的药剂。经典的M期阻断剂包括长春药类(vincas)(长春新碱(vincristine)和长春碱(vinblastine))，紫杉烷类(taxanes)，和拓扑异构酶II抑制剂诸如多柔比星(doxorubicin)，表柔比星(epirubicin)，柔红霉素(daunorubicin)，依托泊苷(etoposide)和博来霉素(bleomycin)。那些阻滞G1的药剂也溢出进入S期停滞，例如DNA烷化剂类诸如他莫昔芬(tamoxifen)，泼尼松(prednisone)，达卡巴嗪(dacarbazine)，双氯乙基甲胺(mechlorethamine)，顺铂(cisplatin)，甲氨蝶呤(methotrexate)，5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)和ara-C。更多信息可参见Mendelsohn和Israel编，《The Molecular Basisof Cancer》，第1章，题为“Cell cycle regulation，oncogenes，and antineoplasticdrugs”，Murakami等人，WB Saunders，Philadelphia，1995，例如第13页。紫杉烷类(帕利他赛(paclitaxel)和多西他赛(docetaxel))是衍生自紫杉树的抗癌药。衍生自欧洲紫杉的多西他赛(
Figure BDA0001530253770000471
Rhone-Poulenc Rorer)是帕利他赛(
Figure BDA0001530253770000472
Bristol-MyersSquibb)的半合成类似物。帕利他赛和多西他赛促进由微管蛋白二聚体装配成微管并通过防止解聚使微管稳定，导致对细胞中有丝分裂的抑制。
术语“宿主细胞”，“宿主细胞系”，和“宿主细胞培养物”可互换使用，并且指已经导入外源核酸的细胞，包括此类细胞的后代。宿主细胞包括“转化体”和“经转化的细胞”，其包括原代的经转化的细胞及自其衍生的后代而不考虑传代的次数。后代在核酸内容物上可以与亲本细胞不完全相同，而是可以含有突变。本文中包括具有与在初始转化细胞中筛选或选择的相同功能或生物学活性的突变体后代。
“人抗体”指拥有与由人或人细胞生成的或利用人抗体全集或其它人抗体编码序列自非人来源衍生的抗体的氨基酸序列对应的氨基酸序列的抗体。人抗体的此定义明确排除包含非人抗原结合残基的人源化抗体。人抗体可使用本领域已知的多种技术来生成，包括噬菌体展示文库(Hoogenboom and Winter,J. Mol.Biol.227：381(1991)；Marks等，J.Mol.Biol.222：581(1991))。还可用于制备人单克隆抗体的是以下文献中记载的方法：Cole等，Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy，Alan R.Liss，p.77(1985)；Boerner等，J.Immunol.147(1)：86-95(1991)。还可参见van Dijk and van de Winkel，Curr..Opin.Pharmacol.，5：368-74(2001)。可通过给已经修饰以应答抗原性攻击而生成人抗体但其内源基因座已经失去能力的转基因动物例如经过免疫的异种小鼠(xenomice)施用抗原来制备人抗体(参见例如美国专利No.6,075,181和6,150,584，关于XENOMOUSETM技术)。还可参见例如Li等，Proc.Natl.Ascad.Sci.USA，103：3557-3562(2006)，关于经人B-细胞杂交瘤技术生成的人抗体。
“人共有框架”指代表人免疫球蛋白VL或VH框架序列选集中最常存在的氨基酸残基的框架。通常，人免疫球蛋白VL或VH序列选集来自可变域序列亚组。通常，序列亚组是如Kabat等，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第五版，NIHPublication 91-3242，Bethesda MD(1991)，第1-3卷中的亚组。在一个实施方案中，对于VL，亚组是如Kabat等，见上文中的亚组κI。在一个实施方案中，对于VH，亚组是如Kabat等，见上文中的亚组III。
“人源化”抗体指包含来自非人HVR的氨基酸残基和来自人FR的氨基酸残基的嵌合抗体。在某些实施方案中，人源化抗体会包含至少一个，通常两个基本上整个可变域，其中所有或基本上所有HVR(例如，CDR)对应于非人抗体的那些，且所有或基本上所有FR对应于人抗体的那些。任选地，人源化抗体可以至少包含自人抗体衍生的抗体恒定区的一部分。抗体，例如非人抗体的“人源化形式”指已经经历人源化的抗体。
如本文中使用的，术语“高变区”或“HVR”指抗体可变域中在序列上高变的(“互补决定区”或“CDR”)和/或形成结构上限定的环(“高变环”)和/或含有抗原接触残基(“抗原接触”)的每个区。一般地，抗体包含6个HVR：三个在VH中(H1，H2，H3)，且三个在VL中(L1，L2，L3)。本文中的例示性HVR包括：
(a)高变环，存在于氨基酸残基26-32(L1)，50-52(L2)，91-96(L3)，26-32(H1)，53-55(H2)，和96-101(H3)(Chothia and Lesk，J.Mol.Biol.196：901-917(1987))；
(b)CDR，存在于氨基酸残基24-34(L1)，50-56(L2)，89-97(L3)，31-35b(H1)，50-65(H2)，和95-102(H3)(Kabat et al.，Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest，5th Ed.Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda，MD(1991))；
(c)抗原接触，存在于氨基酸残基27c-36(L1)，46-55(L2)，89-96(L3)，30-35b(H1)，47-58(H2)，和93-101(H3)(MacCallum et al.，J.Mol.Biol.262：732-745(1996))；和
(d)(a)，(b)，和/或(c)的组合，包括HVR氨基酸残基46-56(L2)，47-56(L2)，48-56(L2)，49-56(L2)，26-35(H1)，26-35b(H1)，49-65(H2)，93-102(H3)，和94-102(H3)。
除非另有说明，HVR残基及可变域中的其它残基(例如FR残基)在本文中是依照Kabat等，见上文编号的。
“免疫缀合物”指与一种或多种异源分子，包括但不限于细胞毒剂缀合的抗体。
“受试者”或“个体”是哺乳动物。哺乳动物包括但不限于驯养的动物(例如，牛，绵羊，猫，犬，和马)，灵长类(例如，人和非人灵长类诸如猴)，家兔，和啮齿类(例如，小鼠和大鼠)。在某些实施方案中，个体或受试者是人。
“分离的”抗体指已经与其天然环境的组分分开的抗体。在一些实施方案中，抗体纯化至大于95％或99％的纯度，如通过例如电泳(例如，SDS-PAGE，等电聚焦(IEF)，毛细管电泳)或层析(例如，离子交换或反相HPLC)测定的。关于用于评估抗体纯度的方法的综述，见例如Flatman等，J.Chromatogr.B 848：79-87(2007)。
“分离的”核酸指已经与其天然环境的组分分开的核酸分子。分离的核酸包括通常含有核酸分子的细胞中含有的核酸分子，但是核酸分子在染色体外或在与其天然染色体位置不同的染色体位置处存在。
“编码抗FcRH5抗体的分离的核酸”指编码抗体重和轻链(或其片段)的一种或多种核酸分子，包括单一载体或不同载体中的此类核酸分子，和存在于宿主细胞中的一个或多个位置的此类核酸分子。
“编码抗CD3抗体的分离的核酸”指编码抗体重和轻链(或其片段)的一种或多种核酸分子，包括单一载体或不同载体中的此类核酸分子，和存在于宿主细胞中的一个或多个位置的此类核酸分子。
如本文中使用的，术语“单克隆抗体”指从一群基本上同质的抗体获得的抗体，即构成群体的各个抗体是相同的和/或结合相同表位，除了例如含有天然存在的突变或在单克隆抗体制备物的生成期间发生的可能的变体抗体外，此类变体一般以极小量存在。与通常包含针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制备物不同，单克隆抗体制备物的每种单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。如此，修饰语“单克隆”指示抗体自一群基本上同质的抗体获得的特性，而不应解释为要求通过任何特定方法来生成抗体。例如，可以通过多种技术来生成要依照本发明使用的单克隆抗体，包括但不限于杂交瘤方法，重组DNA方法，噬菌体展示方法，和利用含有所有或部分人免疫球蛋白基因座的转基因动物的方法，本文中描述了用于生成单克隆抗体的此类方法和其它例示性方法。
“裸抗体”指未与异源模块(例如细胞毒性模块)或放射性标记物缀合的抗体。裸抗体可以存在于药物配制剂中。
“天然抗体”指具有不同结构的天然存在的免疫球蛋白分子。例如，天然IgG抗体是约150,000道尔顿的异四聚糖蛋白，由二硫化物键合的两条相同轻链和两条相同重链构成。从N至C端，每条重链具有一个可变区(VH)，又称作可变重域或重链可变域，接着是三个恒定域(CH1，CH2，和CH3)。类似地，从N至C端，每条轻链具有一个可变区(VL)，又称作可变轻域或轻链可变域，接着是一个恒定羟(CL)域。根据其恒定域氨基酸序列，抗体轻链可归入两种类型中的一种，称作卡帕(K)和拉姆达(λ)。
术语“包装插页”用于指治疗产品的商业包装中通常包含的用法说明书，其含有关于涉及此类治疗产品应用的适应症，用法，剂量，施用，联合疗法，禁忌症和/或警告的信息。
术语“PD-1轴结合拮抗剂”指如下的分子，其抑制PD-1轴结合配偶与一种或多种它的结合配偶相互作用，从而去除源自PD-1信号传导轴上的信号传导的T细胞功能障碍-一项结果是恢复或增强T细胞功能(例如增殖，细胞因子生成，靶细胞杀伤)。如本文中使用的，PD-1轴结合拮抗剂包括PD-1结合拮抗剂，PD-L1结合拮抗剂和PD-L2结合拮抗剂。
术语“PD-1结合拮抗剂”指如下的分子，其降低，阻断，抑制，消除或干扰源自PD-1与一种或多种它的结合配偶(诸如PD-L1，PD-L2)相互作用的信号转导。在一些实施方案中，PD-1结合拮抗剂是抑制PD-1结合一种或多种它的结合配偶的分子。在一个特定实施方案中，PD-1结合拮抗剂抑制PD-1结合PD-L1和/或PD-L2。例如，PD-1结合拮抗剂包括降低，阻断，抑制，消除或干扰源自PD-1与PD-L1和/或PD-L2相互作用的信号转导的抗PD-1抗体，其抗原结合片段，免疫粘附素，融合蛋白，寡肽和其它分子。在一个实施方案中，PD-1结合拮抗剂降低由或经由T淋巴细胞上表达的细胞表面蛋白质介导的负面共刺激信号，诸如经由PD-1介导的信号传导，从而使得功能障碍性T细胞不太功能障碍性(例如增强对抗原识别的效应器应答)。在一些实施方案中，PD-1结合拮抗剂是抗PD-1抗体。在一个特定实施方案中，PD-1结合拮抗剂是MDX-1106(nivolumab)。在另一个特定实施方案中，PD-1结合拮抗剂是MK-3475(pembrolizumab)。在另一个特定实施方案中，PD-1结合拮抗剂是CT-011(pidilizumab)。在另一个特定实施方案中，PD-1结合拮抗剂是AMP-224。在另一个特定实施方案中，PD-1结合拮抗剂是MED1-0680。在另一个特定实施方案中，PD-1结合拮抗剂是PDR001。在另一个特定实施方案中，PD-1结合拮抗剂是REGN2810。在另一个特定实施方案中，PD-1结合拮抗剂是BGB-108。
术语“PD-L1结合拮抗剂”指如下的分子，其降低，阻断，抑制，消除或干扰源自PD-L1与一种或多种它的结合配偶(诸如PD-1，B7-1)相互作用的信号转导。在一些实施方案中，PD-L1结合拮抗剂是抑制PD-L1结合它的结合配偶的分子。在一个特定实施方案中，PD-L1结合拮抗剂抑制PD-L1结合PD-1和/或B7-1。在一些实施方案中，PD-L1结合拮抗剂包括降低，阻断，抑制，消除或干扰源自PD-L1与一种或多种它的结合配偶(诸如PD-1，B7-1)相互作用的信号转导的抗PD-L1抗体，其抗原结合片段，免疫粘附素，融合蛋白，寡肽和其它分子。在一个实施方案中，PD-L1结合拮抗剂降低由或经由T淋巴细胞上表达的细胞表面蛋白质介导的负面共刺激信号，诸如经由PD-L1介导的信号传导，从而使得功能障碍性T细胞不太功能障碍性(例如增强对抗原识别的效应器应答)。在一些实施方案中，PD-L1结合拮抗剂是抗PD-L1抗体。在仍有另一个具体实施方案中，抗PD-L1抗体是MPDL3280A(阿特珠单抗，作为TECENTRIQTM销售，WHO药物信息(药学物质的国际非专有名称)，推荐INN：List 74，Vol.29，No.3，2015(见第387页))。在一个具体实施方案中，抗PD-L1抗体是YW243.55.S70。在另一个具体实施方案中，抗PD-L1抗体是MDX-1105。在另一个具体实施方案中，抗PD-L1抗体是MSB0015718C。在仍有另一个具体实施方案中，抗PD-L1抗体是MEDI4736。
术语“PD-L2结合拮抗剂”指如下的分子，其降低，阻断，抑制，消除或干扰源自PD-L2与一种或多种它的结合配偶(诸如PD-1)相互作用的信号转导。在一些实施方案中，PD-L2结合拮抗剂是抑制PD-L2结合一种或多种它的结合配偶的分子。在一个特定实施方案中，PD-L2结合拮抗剂抑制PD-L2结合PD-1。在一些实施方案中，PD-L2拮抗剂包括降低，阻断，抑制，消除或干扰源自PD-L2与一种或多种它的结合配偶(诸如PD-1)相互作用的信号转导的抗PD-L2抗体，其抗原结合片段，免疫粘附素，融合蛋白，寡肽和其它分子。在一个实施方案中，PD-L2结合拮抗剂降低由或经由T淋巴细胞上表达的细胞表面蛋白质介导的负面共刺激信号，诸如经由PD-L2介导的信号传导，从而使得功能障碍性T细胞不太功能障碍性(例如增强对抗原识别的效应器应答)。在一些实施方案中，PD-L2结合拮抗剂是免疫粘附素。
如本文中使用的，术语“蛋白质”指来自任何脊椎动物来源(包括哺乳动物，诸如灵长类(例如人)和啮齿类(例如小鼠和大鼠))的任何天然蛋白质，除非另有说明。该术语涵盖“全长”，未加工的蛋白质以及自细胞中加工得到的任何形式的蛋白质。该术语还涵盖天然存在的蛋白质变体，例如剪接变体或等位变体。
关于参照多肽序列的“百分比(％)氨基酸序列同一性”定义为比对序列并在必要时引入缺口以获取最大百分比序列同一性后，且不将任何保守替代视为序列同一性的一部分时，候选序列中与参照多肽序列中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分率。为测定百分比氨基酸序列同一性目的的对比可以以本领域技术范围内的多种方式进行，例如使用公众可得到的计算机软件，诸如BLAST，BLAST-2，ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。本领域技术人员可以决定用于比对序列的合适参数，包括对所比较序列全长获得最大对比所需的任何算法。然而，为了本发明的目的，％氨基酸序列同一性值是使用序列比较计算机程序ALIGN-2产生的。ALIGN-2序列比较计算机程序由Genentech，Inc.编写，并且源代码已经连同用户文档一起提交给美国版权局(US Copyright Office，Washington D.C.，20559)，其中其以美国版权注册号TXU510087注册。公众自Genentech，Inc.，South San Francisco，California可获得ALIGN-2程序，或者可以从源代码编译。ALIGN2程序应当编译成在UNIX操作系统，包括数码UNIX V4.0D上使用。所有序列比较参数由ALIGN-2程序设定且不变。
在采用ALIGN-2来比较氨基酸序列的情况中，给定氨基酸序列A相对于(to)，与(with)，或针对(against)给定氨基酸序列B的％氨基酸序列同一性(或者可表述为具有或包含相对于，与，或针对给定氨基酸序列B的某一％氨基酸序列同一性的给定氨基酸序列A)如下计算：
分数X/Y乘100
其中X是由序列比对程序ALIGN-2在该程序的A和B比对中评分为相同匹配的氨基酸残基数，且其中Y是B中的氨基酸残基总数。应当领会，若氨基酸序列A的长度与氨基酸序列B的长度不相等，则A相对于B的％氨基酸序列同一性将不等于B相对于A的％氨基酸序列同一性。除非另有明确说明，本文中所使用的所有％氨基酸序列同一性值都是依照上一段所述，使用ALIGN-2计算机程序获得的。
术语“药物配制剂”指处于如下的形式，使得容许其中含有的活性成分的生物学活性是有效的，且不含对会接受配制剂施用的受试者具有不可接受的毒性的别的组分的制剂。
“药学可接受载剂”指药物配制剂中与活性成分不同的，且对受试者无毒的成分。药学可接受载剂包括但不限于缓冲剂，赋形剂，稳定剂，或防腐剂。
如本文中使用的，“治疗”(及其语法变化形式，诸如“处理”或“处置”)指试图改变所治疗个体的自然进程的临床干预，可以是为了预防或在临床病理学的进程中进行。治疗的期望效果包括但不限于预防疾病的发生或复发，缓解症状，削弱疾病的任何直接或间接病理学后果，预防转移，减缓疾病进展的速率，改善或减轻疾病状态，及免除或改善预后。在有些实施方案中，本发明的抗体用于延迟疾病的发生/发展，或用于减缓疾病的进展。
如本文中使用的，“延迟病症或疾病的进展”意指推迟，阻碍，减缓，延迟，稳定，和/或延缓疾病或病症(例如细胞增殖性病症，例如癌症)的形成。根据疾病史和/或治疗的个体，此延迟可以是不同时间长度的。如对于本领域技术人员明显的是，充分或显著的延迟实质上可以涵盖预防，因为个体不形成疾病。例如，可以延迟晚期阶段癌症，诸如转移的形成。
术语“表位”指抗原分子上抗体所结合的特定位点。在一些实施方案中，抗原分子上抗体所结合的特定位点是通过羟基自由基足迹法(例如FcRH5结合域)确定的。在一些实施方案中，抗原分子上抗体所结合的特定位点是通过结晶学确定的。
“降低”或“抑制”表示引起例如20％或更多，50％或更多，或75％，85％，90％，95％，或更多总体降低的能力。在某些实施方案中，降低或抑制可以指抗体的由抗体Fc区介导的效应器功能，此类效应器功能具体包括补体依赖性细胞毒性(CDC)，抗体依赖性细胞的细胞毒性(ADCC)，和抗体依赖性细胞的吞噬(ADCP)。
术语“可变区”或“可变域”指抗体重或轻链中牵涉抗体结合抗原的域。天然抗体的重链和轻链可变域(分别为VH和VL)一般具有类似的结构，其中每个域包含4个保守的框架区(FR)和3个高变区(HVR)。(见例如Kindt等，Kuby Immunology,第6版，W.H.Freeman andCo.，第91页(2007))。单个VH或VL域可以足以赋予抗原结合特异性。此外，可以分别使用来自结合抗原的抗体的VH或VL域筛选互补VL或VH域的文库来分离结合特定抗原的抗体。见例如，Portolano等，J.Immunol.150：880-887(1993)；Clarkson等，Nature 352：624-628(1991)。
“变异Fc区”包含由于至少一处氨基酸修饰(优选一处或多处氨基酸替代)而与天然序列Fc区有所不同的氨基酸序列。优选的是，变异Fc区与天然序列Fc区相比或与亲本多肽的Fc区相比具有至少一处氨基酸替代，例如在天然序列Fc区中或在亲本多肽的Fc区中具有约1处至约10处氨基酸替代，优选约1处至约5处氨基酸替代。变异Fc区在本文中优选与天然序列Fc区和/或亲本多肽的Fc区拥有至少约80％的同源性，最优选与它们具有至少约90％的同源性，更优选与它们具有至少约95％的同源性。
如本文中使用的，术语“载体”指能够增殖与其连接的另一种核酸的核酸分子。该术语包括作为自身复制型核酸结构的载体及整合入接受其导入的宿主细胞的基因组中的载体。某些载体能够指导与其可操作连接的核酸的表达。此类载体在本文中称为“表达载体”。
如本文中使用的，“施用”指将一定剂量的化合物(例如本发明的抗FcRH5抗体或编码本发明的抗FcRH5抗体的核酸)或组合物(例如药物组合物，例如包含本发明的抗FcRH5抗体的药物组合物)给予受试者的方法。本文所述方法中利用的组合物可以例如肌肉内，静脉内，皮内，经皮，动脉内，腹膜内，病灶内，颅内，关节内，前列腺内，胸膜内，气管内，鼻内，玻璃体内，阴道内，直肠内，表面，肿瘤内，腹膜内，皮下，结膜下，膀胱内，经粘膜，心包内，脐内，眼内，口服，表面，局部，通过吸入，通过注射，通过输注，通过连续输注，通过直接浸浴靶细胞的局部灌注，通过导管，通过灌洗，以霜剂，或以脂质组合物来施用。施用的方法可以根据多种因素(例如所施用的化合物或组合物和所治疗的疾患，疾病，或病症的严重性)而变化。
II.组合物和方法
一方面，本发明部分基于抗FcRH5抗体。在某些实施方案中，该抗FcRH5抗体是多特异性(例如双特异性)的且在FcRH5或其片段以外结合第二生物学分子(例如细胞表面抗原，例如T细胞标志物，例如CD3(例如CD3ε和/或CD3γ))。本发明的抗体对于例如在受试者中诊断和/或治疗细胞增殖性病症(例如癌症，例如FcRH5阳性癌症，例如多发性骨髓瘤)或延迟其进展是有用的。
A.例示性抗FcRH5抗体
一方面，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其具有包含至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的高变区(HVR)的结合域：(a)包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：4的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：5的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：6的氨基酸序列的HVR-L3。
在一些情况中，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其具有包含至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的高变区(HVR)的结合域：(a)包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：8的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：23的氨基酸序列的HVR-L3。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含与SEQ ID NO：104具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：104的序列的重链可变(VH)域，和/或包含与SEQ ID NO：105具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：105的序列的轻链可变(VL)域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含分别为SEQ ID NO：52，54，46，和47的序列的重链框架区FR-H1，FR-H2，FR-H3，和FR-H4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含SEQ ID NO：104的氨基酸序列的重链可变(VH)域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体进一步包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含分别为SEQ ID NO：48，57，50，和51的序列的轻链框架区FR-L1，FR-L2，FR-L3，和FR-L4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含SEQ ID NO：105的氨基酸序列的VL域。在一种特定情况中，该抗FcRH5抗体可以是1G7.v85，或其衍生物或克隆亲属。在一些情况中，例如，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其具有包含下述各项的结合域：(a)包含SEQ IDNO：104的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQ ID NO：105的氨基酸序列的VL域的。
在一些情况中，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其具有包含至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的高变区(HVR)的结合域：(a)包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：8的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：10的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：14的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：23的氨基酸序列的HVR-L3。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含与SEQ ID NO：106具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：106的序列的VH域和/或包含与SEQ ID NO：107具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ IDNO：107的序列的VL域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含分别为SEQ ID NO：53,54,46，和47的序列的重链框架区FR-H1，FR-H2，FR-H3，和FR-H4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含SEQ ID NO：106的氨基酸序列的VH域。在一些情况中，该抗FcRH5进一步包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含分别为SEQ ID NO：48，57，50，和51的序列的轻链框架区FR-L1，FR-L2，FR-L3，和FR-L4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含SEQ ID NO：107的氨基酸序列的VL域。在一种特定情况中，该抗FcRH5抗体可以是1G7.v93，或其衍生物或克隆亲属。在一些情况中，例如，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其具有包含下述各项的结合域：(a)包含SEQ ID NO：106的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQID NO：107的氨基酸序列的VL域。
在一些情况中，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其具有包含至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的高变区(HVR)的结合域：(a)包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：15的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：20的氨基酸序列的HVR-L3。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含与SEQ ID NO：82具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：82的序列的VH域和/或包含与SEQ ID NO：83具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：83的序列的VL域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含SEQ IDNO：52，54，46，和47的序列的重链框架区FR-H1，FR-H2，FR-H3，和FR-H4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含SEQ ID NO：82的氨基酸序列的VH域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体进一步包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含SEQ ID NO：48，56，50，和51的序列的轻链框架区FR-L1，FR-L2，FR-L3，和FR-L4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含SEQ IDNO：83的氨基酸序列的VL域。在一种特定情况中，该抗FcRH5抗体可以是1G7.v1，或其衍生物或克隆亲属。在一些情况中，例如，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其具有包含下述各项的结合域：(a)包含SEQ ID NO：82的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQ ID NO：83的氨基酸序列的VL域。
在一些情况中，该抗FcRH5抗体包含包含至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的高变区(HVR)的结合域：(a)包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：21的氨基酸序列的HVR-L3。在一些情况中，该抗FcRH5抗体包含包含与SEQ ID NO：84具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：84的序列的VH域和/或包含与SEQ ID NO：85具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：85的序列的VL域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体进一步包含分别为SEQ ID NO：52,54,46，和47的重链框架区FR-H1，FR-H2，FR-H3，和FR-H4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含SEQ ID NO：84的氨基酸序列的VH域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体进一步包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含分别为SEQ ID NO：48,57,50，和51的序列的轻链框架区FR-L1，FR-L2，FR-L3，和FR-L4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含SEQ ID NO：85的氨基酸序列的VL域。在一种特定情况中，该抗FcRH5抗体可以是1G7.v1.1，或其衍生物或克隆亲属。在一些情况中，例如，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其具有包含下述各项的结合域：(a)包含SEQ ID NO：84的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQ ID NO：85的氨基酸序列的VL域。
在一些情况中，该抗FcRH5抗体具有包含下述六种高变区(HVR)的结合域：(a)包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：22的氨基酸序列的HVR-L3。在一些情况中，该抗FcRH5抗体包含包含与SEQ ID NO：86具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：86的序列的VH域和/或包含与SEQ ID NO：87具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：87的序列的VL域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体进一步包含包含SEQ ID NO：52，54，46，和47的氨基酸序列的重链框架区FR-H1，FR-H2，FR-H3，和FR-H4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含SEQ ID NO：86的氨基酸序列的VH域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体进一步包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含分别为SEQ ID NO：48，57，50，和51的序列的轻链框架区FR-L1，FR-L2，FR-L3，和FR-L4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含SEQ ID NO：87的氨基酸序列的VL域。在一种特定情况中，该抗FcRH5抗体可以是1G7.v1.2，或其衍生物或克隆亲属。在一些情况中，例如，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其具有包含下述各项的结合域：(a)包含SEQ ID NO：86的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQID NO：87的氨基酸序列的VL域。
在一些情况中，该抗FcRH5抗体具有包含下述六种高变区(HVR)的结合域：(a)包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：13的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：21的氨基酸序列的HVR-L3。在一些情况中，该抗FcRH5抗体包含包含与SEQ ID NO：88具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：88的序列的VH域和/或包含与SEQ ID NO：89具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：89的序列的VL域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体进一步包含包含分别为SEQ ID NO：52，54，46，和47的氨基酸序列的重链框架区FR-H1，FR-H2，FR-H3，和FR-H4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含SEQ ID NO：88的氨基酸序列的VH域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体进一步包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含分别为SEQ ID NO：48，57，50，和51的序列的轻链框架区FR-L1，FR-L2，FR-L3，和FR-L4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含SEQ ID NO：89的氨基酸序列的VL域。在一种特定情况中，该抗FcRH5抗体可以是1G7.v1.3，或其衍生物或克隆亲属。在一些情况中，例如，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其包含包含下述各项的结合域：(a)包含SEQ ID NO：88的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQ ID NO：89的氨基酸序列的VL域。
在一些情况中，该抗FcRH5抗体包含包含至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的高变区(HVR)的结合域：(a)包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ IDNO：12的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：23的氨基酸序列的HVR-L3。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有如下结合域，其包含包含与SEQ ID NO：90具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：90的序列的VH域和/或包含与SEQ ID NO：91具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：91的序列的VL域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体进一步包含SEQ ID NO：52，54，46，和47的重链框架区FR-H1，FR-H2，FR-H3，和FR-H4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含SEQ IDNO：90的氨基酸序列的VH域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体进一步包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含分别为SEQ ID NO：48，57，50，和51的序列的轻链框架区FR-L1，FR-L2，FR-L3，和FR-L4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含SEQ ID NO：91的氨基酸序列的VL域。在一种特定情况中，该抗FcRH5抗体可以是1G7.v1.4，或其衍生物或克隆亲属。在一些情况中，例如，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其具有包含下述各项的结合域：(a)包含SEQ IDNO：90的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQ ID NO：91的氨基酸序列的VL域。
在一些情况中，该抗FcRH5抗体包含包含至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的高变区(HVR)的结合域：(a)包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：18的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：22的氨基酸序列的HVR-L3。在一些情况中，该抗FcRH5抗体包含包含与SEQ ID NO：92具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：92的序列的VH域和/或包含与SEQ ID NO：93具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：93的序列的VL域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含分别为SEQ ID NO：52，54，46，和47的序列的重链框架区FR-H1，FR-H2，FR-H3，和FR-H4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含SEQ ID NO：92的氨基酸序列的VH域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体进一步包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含分别为SEQ ID NO：48，56，50，和51的序列的轻链框架区FR-L1，FR-L2，FR-L3，和FR-L4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含SEQ ID NO：93的氨基酸序列的VL域。在一种特定情况中，该抗FcRH5抗体可以是1G7.v1.5，或其衍生物或克隆亲属。在一些情况中，例如，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其具有包含下述各项的结合域：(a)包含SEQ ID NO：92的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQ ID NO：93的氨基酸序列的VL域。
在一些情况中，该抗FcRH5抗体包含包含至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的高变区(HVR)的结合域：(a)包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：19的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：24的氨基酸序列的HVR-L3。在一些情况中，该抗FcRH5抗体包含包含与SEQ ID NO：94具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：94的序列的VH域和/或包含与SEQ ID NO：95具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：95的序列的VL域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体包含包含分别为SEQ ID NO：52，54，46，和47的氨基酸序列的重链框架区FR-H1，FR-H2，FR-H3，和FR-H4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含SEQ IDNO：94的氨基酸序列的VH域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体进一步包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含分别为SEQ ID NO：48，57，50，和51的序列的轻链框架区FR-L1，FR-L2，FR-L3，和FR-L4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体包含包含SEQ ID NO：95的氨基酸序列的VL域。在一种特定情况中，该抗FcRH5抗体可以是1G7.v1.6，或其衍生物或克隆亲属。在一些情况中，例如，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其具有结合域包括(a)包含SEQ ID NO：94的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQ ID NO：95的氨基酸序列的VL域。
在一些情况中，该抗FcRH5抗体包含包含至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的高变区(HVR)的结合域：(a)包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：18的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：25的氨基酸序列的HVR-L3。在一些情况中，该抗FcRH5抗体包含包含与SEQ ID NO：96具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：96的序列的VH域和/或包含与SEQ ID NO：97具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：97的序列的VL域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含SEQ ID NO：53，54，46，和47的序列的重链框架区FR-H1，FR-H2，FR-H3，和FR-H4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体包含包含SEQ ID NO：96的氨基酸序列的VH域。在一些情况中，该抗FcRH5包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含SEQ ID NO：48，57，50，和51的序列的轻链框架区FR-L1，FR-L2，FR-L3，和FR-L4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体包含包含SEQ ID NO：97的氨基酸序列的VL域。在一种特定情况中，该抗FcRH5抗体可以是1G7.v1.7，或其衍生物或克隆亲属。在一些情况中，例如，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其具有包含下述各项的结合域：(a)包含SEQ ID NO：96的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQ ID NO：97的氨基酸序列的VL域。
在一些情况中，该抗FcRH5抗体包含包含至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的高变区(HVR)的结合域：(a)包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：18的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：25的氨基酸序列的HVR-L3。在一些情况中，该抗FcRH5抗体包含包含与SEQ ID NO：98具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：98的序列的VH域，和/或包含与SEQ ID NO：99具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：99的序列的VL域。在一些情况中，该抗FcRH5包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含分别为SEQ ID NO：52，55，46，和47的序列的重链框架区FR-H1，FR-H2，FR-H3，和FR-H4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体包含包含SEQ ID NO：98的氨基酸序列的VH域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含SEQ ID NO：48，57，50，和51的序列的轻链框架区FR-L1，FR-L2，FR-L3，和FR-L4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含SEQ ID NO：99的氨基酸序列的VL域。在一种特定情况中，该抗FcRH5抗体可以是1G7.v1.13，或其衍生物或克隆亲属。在一些情况中，例如，抗FcRH5抗体可以包含(a)包含SEQ ID NO：98的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQID NO：99的氨基酸序列的VL域。
在一些情况中，该抗FcRH5抗体包含包含至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的高变区(HVR)的结合域：(a)包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：18的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：25的氨基酸序列的HVR-L3。在一些情况中，该抗FcRH5抗体包含(a)包含与SEQ ID NO：100具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：100的序列的VH域和/或包含与SEQ ID NO：101具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：101的序列的VL域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含SEQ ID NO：52，54，46，和47的序列的重链框架区FR-H1，FR-H2，FR-H3，和FR-H4。在一些情况中，该抗FcRH5可以具有包含SEQ ID NO：100的氨基酸序列的VH域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体进一步包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含SEQ ID NO：48，57，50，和51的序列的轻链框架区FR-L1，FR-L2，FR-L3，和FR-L4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含SEQ ID NO：101的氨基酸序列的VL域。在一种特定情况中，该抗FcRH5抗体可以是1G7.v1.13.1，或其衍生物或克隆亲属。在一些情况中，例如，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其包含(a)包含SEQ ID NO：100的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQ ID NO：101的氨基酸序列的VL域。
在一些情况中，该抗FcRH5抗体包含包含至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的高变区(HVR)的结合域：(a)包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：8的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：15的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：20的氨基酸序列的HVR-L3。在一些情况中，该抗FcRH5抗体包含(a)包含与SEQ ID NO：102具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：102的序列的VH域和/或(b)包含与SEQ ID NO：103具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：103的序列的VL域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体进一步包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含分别为SEQ IDNO：52，54，46，和47的序列的重链框架区FR-H1，FR-H2，FR-H3，和FR-H4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含SEQ ID NO：102的氨基酸序列的VH域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体进一步包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含SEQ ID NO：48，56，50，和51的序列的轻链框架区FR-L1，FR-L2，FR-L3，和FR-L4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含SEQ IDNO：103的氨基酸序列的VL域。在一种特定情况中，该抗FcRH5抗体可以是1G7.v87，或其衍生物或克隆亲属。在一些情况中，例如，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其包含(a)包含SEQ IDNO：102的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQ ID NO：103的氨基酸序列的VL域。
在一些情况中，抗FcRH5抗体可以具有包含至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的高变区(HVR)的结合域：(a)包含SEQ ID NO：32的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：33的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：34的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：35的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：36的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：37的氨基酸序列的HVR-L3。在一些情况中，该抗FcRH5包含包含与SEQ ID NO：110具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：110的序列的VH域和/或包含与SEQ ID NO：111具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：111的序列的VL域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含分别为SEQ ID NO：66，67，68，和69的序列的重链框架区FR-H1，FR-H2，FR-H3，和FR-H4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含SEQ ID NO：110的氨基酸序列的VH域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体进一步包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含SEQ ID NO：70，71，72，和73的序列的轻链框架区FR-L1，FR-L2，FR-L3，和FR-L4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含SEQ ID NO：111的氨基酸序列的VL域。在一种特定情况中，该抗FcRH5抗体可以是17B1，或其衍生物或克隆亲属。在一些情况中，例如，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其包含(a)包含SEQ ID NO：110的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQ ID NO：111的氨基酸序列的VL域。
在一些情况中，抗FcRH5抗体具有包含至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的高变区(HVR)的结合域：(a)包含SEQ ID NO：38的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：39的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：41的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：42的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：43的氨基酸序列的HVR-L3。在一些情况中，该抗FcRH5抗体包含包含与SEQ ID NO：112具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：112的序列的VH域和/或包含与SEQ ID NO：113具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：113的序列的VL域。在一些情况中，该抗FcRH5包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含分别为SEQ ID NO：74，75，76，和77的序列的重链框架区FR-H1，FR-H2，FR-H3，和FR-H4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含SEQ ID NO：112的氨基酸序列的VH域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体进一步包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含SEQ ID NO：78，79，80，和81的序列的轻链框架区FR-L1，FR-L2，FR-L3，和FR-L4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含SEQ ID NO：113的氨基酸序列的VL域。在一种特定情况中，该抗FcRH5抗体可以是15G8，或其衍生物或克隆亲属。在一些情况中，例如，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其包含(a)包含SEQ ID NO：112的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQ ID NO：113的氨基酸序列的VL域。
在一些情况中，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其具有包含至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的高变区(HVR)的结合域：(a)包含SEQ ID NO：26的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：27的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：28的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：29的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：30的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：31的氨基酸序列的HVR-L3。在一些情况中，该抗FcRH5抗体包含包含与SEQ ID NO：108具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：108的序列的VH域和/或包含与SEQ ID NO：109具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：109的序列的VL域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含分别为SEQ ID NO：58，59，60，和61的序列的重链框架区FR-H1，FR-H2，FR-H3，和FR-H4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含SEQ ID NO：108的氨基酸序列的VH域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体进一步包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含SEQ ID NO：62，63，64，和65的序列的轻链框架区FR-L1，FR-L2，FR-L3，和FR-L4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含SEQ ID NO：109的氨基酸序列的VL域。在一种特定情况中，该抗FcRH5抗体可以是7D8，或其衍生物或克隆亲属。在一些情况中，例如，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其包含(a)包含SEQ IDNO：108的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQ ID NO：109的氨基酸序列的VL域。
在一些情况中，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其具有包含至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的高变区(HVR)的结合域：(a)包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：15的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：20的氨基酸序列的HVR-L3。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含与SEQ ID NO：185具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：185的序列的VH域和/或包含与SEQ ID NO：186具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ IDNO：186的序列的VL域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含SEQ ID NO：179，54，46，和47的序列的重链框架区FR-H1，FR-H2，FR-H3，和FR-H4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含SEQ ID NO：185的氨基酸序列的VH域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体进一步包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含SEQ ID NO：48，56，50，和51的序列的轻链框架区FR-L1，FR-L2，FR-L3，和FR-L4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含SEQ ID NO：186的氨基酸序列的VL域。在一种特定情况中，该抗FcRH5抗体可以是1G7.v1A，或其衍生物或克隆亲属。在一些情况中，例如，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其具有包含下述各项的结合域：(a)包含SEQ ID NO：185的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQ IDNO：186的氨基酸序列的VL域。
在一些情况中，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其具有包含至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的高变区(HVR)的结合域：(a)包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：15的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：20的氨基酸序列的HVR-L3。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含与SEQ ID NO：187具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：187的序列的VH域和/或包含与SEQ ID NO：188具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ IDNO：188的序列的VL域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含SEQ ID NO：180，54，46，和47的序列的重链框架区FR-H1，FR-H2，FR-H3，和FR-H4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含SEQ ID NO：187的氨基酸序列的VH域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体进一步包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含SEQ ID NO：48，56，50，和51的序列的轻链框架区FR-L1，FR-L2，FR-L3，和FR-L4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含SEQ ID NO：188的氨基酸序列的VL域。在一种特定情况中，该抗FcRH5抗体可以是1G7.v1B，或其衍生物或克隆亲属。在一些情况中，例如，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其具有包含下述各项的结合域：(a)包含SEQ ID NO：187的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQ IDNO：188的氨基酸序列的VL域。
在一些情况中，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其具有包含至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的高变区(HVR)的结合域：(a)包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：15的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：20的氨基酸序列的HVR-L3。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含与SEQ ID NO：189具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：189的序列的VH域和/或包含与SEQ ID NO：190具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ IDNO：190的序列的VL域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含SEQ ID NO：181，54，46，和47的序列的重链框架区FR-H1，FR-H2，FR-H3，和FR-H4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含SEQ ID NO：189的氨基酸序列的VH域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体进一步包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含SEQ ID NO：48，56，50，和51的序列的轻链框架区FR-L1，FR-L2，FR-L3，和FR-L4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含SEQ ID NO：190的氨基酸序列的VL域。在一种特定情况中，该抗FcRH5抗体可以是1G7.v1C，或其衍生物或克隆亲属。在一些情况中，例如，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其具有包含下述各项的结合域：(a)包含SEQ ID NO：189的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQ IDNO：190的氨基酸序列的VL域。
在一些情况中，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其具有包含至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的高变区(HVR)的结合域：(a)包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：15的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：20的氨基酸序列的HVR-L3。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含与SEQ ID NO：191具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：191的序列的VH域和/或包含与SEQ ID NO：192具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ IDNO：192的序列的VL域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含SEQ ID NO：23，54，46，和47的序列的重链框架区FR-H1，FR-H2，FR-H3，和FR-H4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含SEQ ID NO：191的氨基酸序列的VH域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体进一步包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含SEQ ID NO：48，56，50，和51的序列的轻链框架区FR-L1，FR-L2，FR-L3，和FR-L4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含SEQ ID NO：192的氨基酸序列的VL域。在一种特定情况中，该抗FcRH5抗体可以是1G7.v1D，或其衍生物或克隆亲属。在一些情况中，例如，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其具有包含下述各项的结合域：(a)包含SEQ ID NO：191的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQ IDNO：192的氨基酸序列的VL域。
在一些情况中，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其具有包含至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的高变区(HVR)的结合域：(a)包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：15的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：20的氨基酸序列的HVR-L3。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含与SEQ ID NO：193具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：193的序列的VH域和/或包含与SEQ ID NO：194具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ IDNO：194的序列的VL域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含SEQ ID NO：52，182，46，和47的序列的重链框架区FR-H1，FR-H2，FR-H3，和FR-H4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含SEQ ID NO：193的氨基酸序列的VH域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体进一步包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含SEQ ID NO：48，56，50，和51的序列的轻链框架区FR-L1，FR-L2，FR-L3，和FR-L4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含SEQ ID NO：194的氨基酸序列的VL域。在一种特定情况中，该抗FcRH5抗体可以是1G7.v1E，或其衍生物或克隆亲属。在一些情况中，例如，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其具有包含下述各项的结合域：(a)包含SEQ ID NO：193的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQ IDNO：194的氨基酸序列的VL域。
在一些情况中，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其具有包含至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的高变区(HVR)的结合域：(a)包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：175的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：15的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：20的氨基酸序列的HVR-L3。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含与SEQ ID NO：195具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：195的序列的VH域和/或包含与SEQ ID NO：196具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ IDNO：196的序列的VL域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含SEQ ID NO：52，54，46，和47的序列的重链框架区FR-H1，FR-H2，FR-H3，和FR-H4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含SEQ ID NO：195的氨基酸序列的VH域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体进一步包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含SEQ ID NO：48，56，50，和51的序列的轻链框架区FR-L1，FR-L2，FR-L3，和FR-L4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含SEQ ID NO：196的氨基酸序列的VL域。在一种特定情况中，该抗FcRH5抗体可以是1G7.v1F，或其衍生物或克隆亲属。在一些情况中，例如，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其具有包含下述各项的结合域：(a)包含SEQ ID NO：195的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQ IDNO：196的氨基酸序列的VL域。
在一些情况中，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其具有包含至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的高变区(HVR)的结合域：(a)包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：176的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：15的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：20的氨基酸序列的HVR-L3。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含与SEQ ID NO：197具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：197的序列的VH域和/或包含与SEQ ID NO：198具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ IDNO：198的序列的VL域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含SEQ ID NO：52，54，46，和47的序列的重链框架区FR-H1，FR-H2，FR-H3，和FR-H4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含SEQ ID NO：197的氨基酸序列的VH域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体进一步包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含SEQ ID NO：48，56，50，和51的序列的轻链框架区FR-L1，FR-L2，FR-L3，和FR-L4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含SEQ ID NO：198的氨基酸序列的VL域。在一种特定情况中，该抗FcRH5抗体可以是1G7.v1G，或其衍生物或克隆亲属。在一些情况中，例如，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其具有包含下述各项的结合域：(a)包含SEQ ID NO：197的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQ IDNO：198的氨基酸序列的VL域。
在一些情况中，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其具有包含至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的高变区(HVR)的结合域：(a)包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：177的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：15的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：20的氨基酸序列的HVR-L3。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含与SEQ ID NO：199具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：199的序列的VH域和/或包含与SEQ ID NO：200具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ IDNO：200的序列的VL域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含SEQ ID NO：52，54，46，和47的序列的重链框架区FR-H1，FR-H2，FR-H3，和FR-H4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含SEQ ID NO：199的氨基酸序列的VH域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体进一步包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含SEQ ID NO：48，56，50，和51的序列的轻链框架区FR-L1，FR-L2，FR-L3，和FR-L4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含SEQ ID NO：200的氨基酸序列的VL域。在一种特定情况中，该抗FcRH5抗体可以是1G7.v1H，或其衍生物或克隆亲属。在一些情况中，例如，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其具有包含下述各项的结合域：(a)包含SEQ ID NO：199的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQ IDNO：200的氨基酸序列的VL域。
在一些情况中，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其具有包含至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的高变区(HVR)的结合域：(a)包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：178的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：15的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：20的氨基酸序列的HVR-L3。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含与SEQ ID NO：201具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：201的序列的VH域和/或包含与SEQ ID NO：202具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ IDNO：202的序列的VL域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含SEQ ID NO：52，54，46，和47的序列的重链框架区FR-H1，FR-H2，FR-H3，和FR-H4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含SEQ ID NO：201的氨基酸序列的VH域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体进一步包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含SEQ ID NO：48，56，50，和51的序列的轻链框架区FR-L1，FR-L2，FR-L3，和FR-L4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含SEQ ID NO：202的氨基酸序列的VL域。在一种特定情况中，该抗FcRH5抗体可以是1G7.v1I，或其衍生物或克隆亲属。在一些情况中，例如，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其具有包含下述各项的结合域：(a)包含SEQ ID NO：201的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQ IDNO：202的氨基酸序列的VL域。
在一些情况中，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其具有包含至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的高变区(HVR)的结合域：(a)包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：15的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：20的氨基酸序列的HVR-L3。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含与SEQ ID NO：203具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：203的序列的VH域和/或包含与SEQ ID NO：204具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ IDNO：204的序列的VL域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含SEQ ID NO：52，54，183，和47的序列的重链框架区FR-H1，FR-H2，FR-H3，和FR-H4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含SEQ ID NO：203的氨基酸序列的VH域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体进一步包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含SEQ ID NO：48，56，50，和51的序列的轻链框架区FR-L1，FR-L2，FR-L3，和FR-L4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含SEQ ID NO：204的氨基酸序列的VL域。在一种特定情况中，该抗FcRH5抗体可以是1G7.v1J，或其衍生物或克隆亲属。在一些情况中，例如，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其具有包含下述各项的结合域：(a)包含SEQ ID NO：203的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQ IDNO：204的氨基酸序列的VL域。
在一些情况中，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其具有包含至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的高变区(HVR)的结合域：(a)包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：15的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：20的氨基酸序列的HVR-L3。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含与SEQ ID NO：205具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：205的序列的VH域和/或包含与SEQ ID NO：206具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ IDNO：206的序列的VL域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含SEQ ID NO：52，54，184，和47的序列的重链框架区FR-H1，FR-H2，FR-H3，和FR-H4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含SEQ ID NO：205的氨基酸序列的VH域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体进一步包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含SEQ ID NO：48，56，50，和51的序列的轻链框架区FR-L1，FR-L2，FR-L3，和FR-L4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含SEQ ID NO：206的氨基酸序列的VL域。在一种特定情况中，该抗FcRH5抗体可以是1G7.v1K，或其衍生物或克隆亲属。在一些情况中，例如，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其具有包含下述各项的结合域：(a)包含SEQ ID NO：205的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQ IDNO：206的氨基酸序列的VL域。
在一些情况中，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其具有包含至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的高变区(HVR)的结合域：(a)包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：10的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：15的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：20的氨基酸序列的HVR-L3。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含与SEQ ID NO：207具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：207的序列的VH域和/或包含与SEQ ID NO：208具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ IDNO：208的序列的VL域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含SEQ ID NO：52，54，46，和47的序列的重链框架区FR-H1，FR-H2，FR-H3，和FR-H4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含SEQ ID NO：207的氨基酸序列的VH域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体进一步包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含SEQ ID NO：48，56，50，和51的序列的轻链框架区FR-L1，FR-L2，FR-L3，和FR-L4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含SEQ ID NO：208的氨基酸序列的VL域。在一种特定情况中，该抗FcRH5抗体可以是1G7.v1L，或其衍生物或克隆亲属。在一些情况中，例如，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其具有包含下述各项的结合域：(a)包含SEQ ID NO：207的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQ IDNO：208的氨基酸序列的VL域。
在一些情况中，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其具有包含至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的高变区(HVR)的结合域：(a)包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：8的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：14的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：23的氨基酸序列的HVR-L3。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含与SEQ ID NO：209具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：209的序列的VH域和/或包含与SEQ ID NO：210具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ IDNO：210的序列的VL域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含SEQ ID NO：52，54，46，和47的序列的重链框架区FR-H1，FR-H2，FR-H3，和FR-H4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含SEQ ID NO：209的氨基酸序列的VH域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体进一步包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含SEQ ID NO：48，56，50，和51的序列的轻链框架区FR-L1，FR-L2，FR-L3，和FR-L4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含SEQ ID NO：210的氨基酸序列的VL域。在一种特定情况中，该抗FcRH5抗体可以是1G7.v86，或其衍生物或克隆亲属。在一些情况中，例如，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其具有包含下述各项的结合域：(a)包含SEQ ID NO：209的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQ IDNO：210的氨基酸序列的VL域。
在一些情况中，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其具有包含至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的高变区(HVR)的结合域：(a)包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：8的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：14的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：23的氨基酸序列的HVR-L3。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含与SEQ ID NO：211具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：211的序列的VH域和/或包含与SEQ ID NO：212具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ IDNO：212的序列的VL域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含SEQ ID NO：53，54，46，和47的序列的重链框架区FR-H1，FR-H2，FR-H3，和FR-H4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含SEQ ID NO：211的氨基酸序列的VH域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体进一步包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含SEQ ID NO：48，56，50，和51的序列的轻链框架区FR-L1，FR-L2，FR-L3，和FR-L4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含SEQ ID NO：212的氨基酸序列的VL域。在一种特定情况中，该抗FcRH5抗体可以是1G7.v191，或其衍生物或克隆亲属。在一些情况中，例如，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其具有包含下述各项的结合域：(a)包含SEQ ID NO：211的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQID NO：212的氨基酸序列的VL域。
在一些情况中，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其具有包含至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的高变区(HVR)的结合域：(a)包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：8的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：10的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：14的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：23的氨基酸序列的HVR-L3。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含与SEQ ID NO：213具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：213的序列的VH域和/或包含与SEQ ID NO：214具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ IDNO：214的序列的VL域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含SEQ ID NO：52，54，46，和47的序列的重链框架区FR-H1，FR-H2，FR-H3，和FR-H4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含SEQ ID NO：213的氨基酸序列的VH域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体进一步包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含SEQ ID NO：48，56，50，和51的序列的轻链框架区FR-L1，FR-L2，FR-L3，和FR-L4。在一些情况中，该抗FcRH5抗体可以具有包含SEQ ID NO：214的氨基酸序列的VL域。在一种特定情况中，该抗FcRH5抗体可以是1G7.v92，或其衍生物或克隆亲属。在一些情况中，例如，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其具有包含下述各项的结合域：(a)包含SEQ ID NO：213的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQ IDNO：214的氨基酸序列的VL域。
在某些实施方案中，本文中提供的抗体是单克隆，人，人源化，或嵌合抗体。在一些情况中，该抗FcRH5抗体是IgG抗体。该抗FcRH5可以是全长抗体和/或单特异性抗体。在某些实施方案中，该抗FcRH5抗体可以结合FcRH5的Ig样域9中的表位。例如，该表位可以包含SEQID NO：114的氨基酸743-850的一部分。在一些情况中，该抗FcRH5抗体结合人FcRH5或食蟹猴FcRH5，或二者。在其它情况中，该结合域并不特异性结合FcRH1，FcRH2，FcRH3，和/或FcRH4。
在一些情况中，该抗FcRH5抗体在静脉内注射后具有介于约10ml/kg/d至约45ml/kg/d之间的清除率(例如约1ml/kg/d，5ml/kg/d，10ml/kg/d，11ml/kg/d，12ml/kg/d，13ml/kg/d，14ml/kg/d，15ml/kg/d，16ml/kg/d，17ml/kg/d，18ml/kg/d，19ml/kg/d，20ml/kg/d，21ml/kg/d，22ml/kg/d，23ml/kg/d，24ml/kg/d，25ml/kg/d，26ml/kg/d，27ml/kg/d，28ml/kg/d，29ml/kg/d，30ml/kg/d，31ml/kg/d，32ml/kg/d，33ml/kg/d，34ml/kg/d，35ml/kg/d，36ml/kg/d，37ml/kg/d，38ml/kg/d，39ml/kg/d，40ml/kg/d，41 ml/kg/d，42ml/kg/d，43ml/kg/d，或44ml/kg/d)。
在一些情况中，该抗FcRH5抗体在小鼠中在静脉内注射后具有约1ml/kg/d至约5ml/kg/d，约6ml/kg/d至约10ml/kg/d，约11ml/kg/d至约15ml/kg/d，约16ml/kg/d至约20ml/kg/d，约21ml/kg/d至约25ml/kg/d，约26ml/kg/d至约30ml/kg/d，约31ml/kg/d至约35ml/kg/d，约36ml/kg/d至约40ml/kg/d，约41ml/kg/d至约45ml/kg/d的清除率。在一些情况中，该抗FcRH5抗体在小鼠中在静脉内注射后具有约10ml/kg/d至约35ml/kg/d的清除率。在一些情况中，该抗FcRH5抗体在小鼠中在静脉内注射后具有约10ml/kg/d至约20ml/kg/d的清除率。在一些情况中，该抗FcRH5抗体在小鼠中在静脉内注射后具有约12ml/kg/d至约16ml/kg/d的清除率。
在一些情况中，该抗FcRH5抗体在食蟹猴中在静脉内注射后具有约1ml/kg/d至约5ml/kg/d，约6ml/kg/d至约10ml/kg/d，约11ml/kg/d至约15ml/kg/d，约16ml/kg/d至约20ml/kg/d，约21ml/kg/d至约25ml/kg/d，约26ml/kg/d至约30ml/kg/d，约31ml/kg/d至约35ml/kg/d，约36ml/kg/d至约40ml/kg/d，约41ml/kg/d至约45ml/kg/d的清除率。在一些情况中，该抗FcRH5抗体在食蟹猴中在静脉内注射后具有约20ml/kg/d至约40ml/kg/d的清除率。在一些情况中，该抗FcRH5抗体在食蟹猴中在静脉内注射后具有约25ml/kg/d至约35ml/kg/d的清除率。在一些情况中，该抗FcRH5抗体在食蟹猴中在静脉内注射后具有约30ml/kg/d至约35ml/kg/d的清除率。
又一方面，依照任何上述实施方案的抗FcRH5抗体可单一地或组合地并入下文1-7节中描述的任何特征：
1.抗体亲和力
在特定情况中，该抗FcRH5抗体以≤1μM，≤100nM，≤10nM，≤1nM，≤0.1nM，≤0.01nM，或≤0.001nM(例如10-8M或更少，例如10-8M至10-13M，例如10-9M至10-13M，例如10-10至10-13M，例如10-11至10-13M，例如10-12至10-13M)的解离常数(KD)结合人和/或食蟹猴FcRH5。例如，在一些情况中，该抗FcRH5抗体以≤100nM(例如≤90nM，≤80nM，≤70nM，≤60nM，≤50nM，≤40nM，≤30nM，≤20nM，≤10nM，≤5nM，≤1nM，≤750pM，≤500pM，≤250pM，≤100pM，≤50pM，≤25pM，≤10pM，≤5pM，或≤1pM)或更低的KD结合人FcRH5。
在一些情况中，该抗FcRH5抗体以约1pM至约500nM(例如约1pM至200pM，100pM至300pM，200pM至400pM，300pM至500pM，400pM至600pM，500pM至700pM，600pM至800pM，700pM至900pM，800pM至1nM，900pM至100nM，1nM至200nM，100nM至300nM，200nM至400nM，或300nM至500nM)的KD结合人FcRH5。在一些情况中，该抗FcRH5抗体以约1pM至约1nM(例如约1pM至100pM，50pM至150pM，100pM至200pM，150pM至250pM，200pM至300pM，250pM至350pM，300pM至400pM，350pM至450pM，400pM至500pM，450pM至550pM，500pM至600pM，550pM至650pM，600pM至700pM，650pM至750pM，700pM至800pM，750pM至850pM，800pM至900pM，850pM至950pM，或900pM至1nM)的KD结合人FcRH5。在一些情况中，该抗FcRH5抗体以约100pM至约500pM(例如约100pM，125pM，150pM，175pM，200pM，225pM，250pM，275pM，300pM，325pM，350pM，375pM，400pM，425pM，450pM，475pM，或500pM)的KD结合人FcRH5。在一些情况中，该抗FcRH5抗体以约100pM至约160pM(例如约100pM，105pM，110pM，115pM，120pM，125pM，130pM，135pM，140pM，145pM，150pM，155pM，或160pM)的KD结合人FcRH5。在一些情况中，该抗FcRH5抗体以约1nM至约150nM(例如约1nM，2nM，3nM，4nM，5nM，6nM，7nM，8nM，9nM，10nM，11nM，12，nM，13nM，14nM，15nM，16nM，17nM，18nM，19nM，20nM，21nM，22nM，23nM，24nM，25nM，26nM，27nM，28nM，29nM，30nM，31nM，32nM，33nM，34nM，35nM，36nM，37nM，38nM，39nM，40nM，41nM，42nM，43nM，44nM，45nM，46nM，47nM，48nM，49nM，50nM，55nM，60nM，65nM，70nM，75nM，80nM，85nM，90nM，95nM，100nM，105nM，110nM，115nM，120nM，125nM，130nM，135nM，140nM，145nM，或150nM)的KD结合人FcRH5。
在一些情况中，该抗FcRH5抗体以≤100nM(例如≤90nM，≤80nM，≤70nM，≤60nM，≤50nM，≤40nM，≤30nM，≤20nM，≤10nM，≤5nM，≤1nM，≤750pM，≤500pM，≤250pM，≤100pM，≤50pM，≤25pM，≤10pM，≤5pM，或≤1pM，例如10-8M至10-13M，例如10-9M至10-13M，例如10-10至10-13M，例如10-11至10-13M，例如10-12至10-13M)或更低的KD结合食蟹猴FcRH5。在一些情况中，该抗FcRH5抗体以约1pM至约500nM(例如约1pM至200pM，100pM至300pM，200pM至400pM，300pM至500pM，400pM至600pM，500pM至700pM，600pM至800pM，700pM至900pM，800pM至1nM，900pM至100nM，1nM至200nM，100nM至300nM，200nM至400nM，或300nM至500nM)的KD结合食蟹猴FcRH5。在一些情况中，该抗FcRH5抗体以约1pM至约1nM(例如约1pM至100pM，50pM至150pM，100pM至200pM，150pM至250pM，200pM至300pM，250pM至350pM，300pM至400pM，350pM至450pM，400pM至500pM，450pM至550pM，500pM至600pM，550pM至650pM，600pM至700pM，650pM至750pM，700pM至800pM，750pM至850pM，800pM至900pM，850pM至950pM，或900pM至1nM)的KD结合食蟹猴FcRH5。在一些情况中，该抗FcRH5抗体以约100pM至约500pM(例如约100pM，125pM，150pM，175pM，200pM，225pM，250pM，275pM，300pM，325pM，350pM，375pM，400pM，425pM，450pM，475pM，或500pM)的KD结合食蟹猴FcRH5。在一些情况中，该抗FcRH5抗体以约100pM至约160pM(例如约100pM，105pM，110pM，115pM，120pM，125pM，130pM，135pM，140pM，145pM，150pM，155pM，或160pM)的KD结合食蟹猴FcRH5。在一些情况中，该抗FcRH5抗体以约1nM至约150nM(例如约1nM，2nM，3nM，4nM，5nM，6nM，7nM，8nM，9nM，10nM，11nM，12，nM，13nM，14nM，15nM，16nM，17nM，18nM，19nM，20nM，21nM，22nM，23nM，24nM，25nM，26nM，27nM，28nM，29nM，30nM，31nM，32nM，33nM，34nM，35nM，36nM，37nM，38nM，39nM，40nM，41nM，42nM，43nM，44nM，45nM，46nM，47nM，48nM，49nM，50nM，55nM，60nM，65nM，70nM，75nM，80nM，85nM，90nM，95nM，100nM，105nM，110nM，115nM，120nM，125nM，130nM，135nM，140nM，145nM，或150nM)的KD结合食蟹猴FcRH5。
在一个实施方案中，KD是通过放射性标记抗原结合测定法(RIA)测量的。在一个实施方案中，用Fab型式的感兴趣抗体及其抗原实施RIA。例如，通过在存在未标记抗原的滴定系列的情况中用最小浓度的(125I)标记抗原平衡Fab，然后用抗Fab抗体包被板捕捉结合的抗原来测量Fab对抗原的溶液结合亲和力(参见例如Chen et al.，J.Mol.Biol.293：865-881(1999))。为了建立测定法的条件，将
Figure BDA0001530253770000821
多孔板(Thermo Scientific)用50mM碳酸钠(pH 9.6)中的5μg/ml捕捉用抗Fab抗体(Cappel Labs)包被过夜，随后用PBS中的2％(w/v)牛血清清蛋白于室温(大约23℃)封闭2-5小时。在非吸附板(Nunc#269620)中，将100pM或26pM[125I]-抗原与连续稀释的感兴趣Fab混合(例如与Presta等，CancerRes.57：4593-4599，1997中抗VEGF抗体，Fab-12的评估一致)。然后将感兴趣Fab温育过夜；然而，温育可持续更长时段(例如约65个小时)以确保达到平衡。此后，将混合物转移至捕捉板，于室温温育(例如1小时)。然后除去溶液，并用PBS中的0.1％聚山梨酯20
Figure BDA0001530253770000831
洗板8次。板干燥后，添加150μl/孔闪烁液(MICROSCINT-20TM；Packard)，然后在TOPCOUNTTM伽马计数仪(Packard)上对板计数10分钟。选择各Fab给出小于或等于最大结合之20％的浓度用于竞争性结合测定法。
依照另一个实施方案，KD是使用
Figure BDA0001530253770000832
表面等离振子共振测定法测量的。例如，使用
Figure BDA0001530253770000833
或
Figure BDA0001530253770000834
(BIAcore，Inc.，Piscataway，NJ)于25℃使用固定化抗原CM5芯片在约10个响应单位(RU)实施测定法。在一个实施方案中，依照供应商的用法说明书用盐酸N-乙基-N’-(3-二甲基氨基丙基)-碳二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化羧甲基化右旋糖苷生物传感器芯片(CM5，BIACORE，Inc.)。将抗原用10mM乙酸钠pH4.8稀释至5μg/ml(约0.2μM)，然后以5μl/分钟的流速注射以获得大约10个响应单位(RU)的偶联蛋白质。注入抗原后，注入1M乙醇胺以封闭未反应基团。为了动力学测量，于25℃以大约25μl/分钟的流速注入在含0.05％聚山梨酯20(TWEEN-20TM)表面活性剂的PBS(PBST)中两倍连续稀释的Fab(0.78nM至500nM)。使用简单一对一朗格缪尔(Langmuir)结合模型(
Figure BDA0001530253770000835
Evaluation软件版本3.2)通过同时拟合结合和解离传感图计算结合速率(kon)和解离速率(koff)。平衡解离常数(KD)以比率koff/kon计算。参见例如Chen etal.，J.Mol.Biol.293：865-881(1999)。如果根据上文表面等离振子共振测定法，结合速率超过106M-1s-1，那么可使用荧光淬灭技术来测定结合速率，即根据分光计诸如配备了断流装置的分光光度计(Aviv Instruments)或8000系列SLM-AMINCOTM分光光度计(ThermoSpectronic)中用搅拌比色杯进行的测量，在存在浓度渐增的抗原的情况中，测量PBS pH 7.2中20nM抗抗原抗体(Fab形式)于25℃的荧光发射强度(激发＝295nm；发射＝340nm，16nm带通)的升高或降低。
2.抗体片段
在某些实施方案中，本文中提供的抗体是抗体片段。抗体片段包括但不限于bis-Fab，Fab，Fab’，Fab’-SH，F(ab’)2，Fv，和scFv片段，及下文所描述的其它片段。关于某些抗体片段的综述，见Hudson等，Nat.Med.9：129-134(2003)。关于scFv片段的综述，见例如Pluckthün，于The Pharmacology of Monoclonal Antibodies，第113卷，Rosenburg和Moore编，(Springer-Verlag，New York)，第269-315页(1994)；还可见WO 93/16185；及美国专利No.5,571,894和5,587,458。关于包含补救受体结合表位残基，并且具有延长的体内半衰期的Fab和F(ab’)2片段的讨论，见美国专利No.5,869,046。
两个Fab经由二马来酰亚胺连接的抗体片段在本文中称作二马来酰亚胺基-(thio-Fab)2或bis-Fab。
双抗体是具有两个抗原结合位点的抗体片段，其可以是二价的或双特异性的。见例如EP 404,097；WO 1993/01161；Hudson等，Nat.Med.9：129-134(2003)；及Hollinger等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：6444-6448(1993)。三抗体和四抗体也记载于Hudson等，Nat.Med.9：129-134(2003)。
单域抗体是包含抗体的整个或部分重链可变域或整个或部分轻链可变域的抗体片段。在某些实施方案中，单域抗体是人单域抗体(Domantis，Inc.，Waltham，MA；见例如美国专利No.6,248,516B1)。
可以通过多种技术，包括但不限于对完整抗体的蛋白水解消化及重组宿主细胞(例如大肠杆菌或噬菌体)的生成来生成抗体片段，如本文中所描述的。
3.嵌合抗体和人源化抗体
在某些实施方案中，本文中提供的抗体是嵌合抗体。某些嵌合抗体记载于例如美国专利No.4,816,567；及Morrison等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，81：6851-6855(1984))。在一个例子中，嵌合抗体包含非人可变区(例如，自小鼠，大鼠，仓鼠，家兔，或非人灵长类，诸如猴衍生的可变区)和人恒定区。在又一个例子中，嵌合抗体是“类转换的”抗体，其中类或亚类已经自亲本抗体的类或亚类改变。嵌合抗体包括其抗原结合片段。
在某些实施方案中，嵌合抗体是人源化抗体。通常，将非人抗体人源化以降低对人的免疫原性，同时保留亲本非人抗体的特异性和亲和力。一般地，人源化抗体包含一个或多个可变域，其中HVR，例如CDR(或其部分)自非人抗体衍生，而FR(或其部分)自人抗体序列衍生。任选地，人源化抗体还会至少包含人恒定区的一部分。在一些实施方案中，将人源化抗体中的一些FR残基用来自非人抗体(例如衍生HVR残基的抗体)的相应残基替代，例如以恢复或改善抗体特异性或亲和力。
人源化抗体及其生成方法综述于例如Almagro等，Front.Biosci.13：1619-1633(2008)，并且进一步记载于例如Riechmann等，Nature332：323-329(1988)；Queen等，Proc.Natl Acad.Sci.USA 86：10029-10033(1989)；美国专利No.5,821,337，7,527,791，6,982,321和7,087,409；Kashmiri等，Methods 36：25-34(2005)(描述了特异性决定区(SDR)嫁接)；Padlan，Mol.Immunol.28：489-498(1991)(描述了“重修表面”)；Dall’Acqua等，Methods36：43-60(2005)(描述了“FR改组”)；及Osbourn等，Methods 36：61-68(2005)和Klimka等，Br.J.Cancer，83：252-260(2000)(描述了FR改组的“引导选择”方法)。
可以用于人源化的人框架区包括但不限于：使用“最佳拟合(best-fit)”方法选择的框架区(见例如Sims等，J.Immunol.151：2296(1993))；自轻或重链可变区的特定亚组的人抗体的共有序列衍生的框架区(见例如Carter等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，89：4285(1992)；及Presta等，J.Immunol.，151：2623(1993))；人成熟的(体细胞突变的)框架区或人种系框架区(见例如Almagro等，Front.Biosci.13：1619-1633(2008))；和通过筛选FR文库衍生的框架区(见例如Baca等，J.Biol.Chem.272：10678-10684(1997)及Rosok等，J.Biol.Chem.271：22611-22618(1996))。
4.人抗体
在某些实施方案中，本文中提供的抗体是人抗体。可以使用本领域中已知的多种技术来生成人抗体。一般地，人抗体记载于van Dijk和van de Winkel，Curr.Opin.Pharmacol.5：368-74(2001)及Lonberg，Curr.Opin.Immunol.20：450-459(2008)。
可以通过对转基因动物施用免疫原来制备人抗体，所述转基因动物已经修饰为响应抗原性攻击而生成完整人抗体或具有人可变区的完整抗体。此类动物通常含有所有或部分人免疫球蛋白基因座，其替换内源免疫球蛋白基因座，或者其在染色体外存在或随机整合入动物的染色体中。在此类转基因小鼠中，一般已经将内源免疫球蛋白基因座灭活。关于自转基因动物获得人抗体的方法的综述，见Lonberg，Nat.Biotech.23：1117-1125(2005)。还可见例如美国专利No.6,075,181和6,150,584，其描述了XENOMOUSETM技术；美国专利No.5,770,429，其描述了
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技术；美国专利No.7,041,870，其描述了K-M
Figure BDA0001530253770000861
技术，和美国专利申请公开文本No.US 2007/0061900，其描述了
Figure BDA0001530253770000862
技术)。可以例如通过与不同人恒定区组合进一步修饰来自由此类动物生成的完整抗体的人可变区。
也可以通过基于杂交瘤的方法生成人抗体。已经描述了用于生成人单克隆抗体的人骨髓瘤和小鼠-人异骨髓瘤细胞系(见例如KozborJ.Immunol.，133：3001(1984)；Brodeur等，Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications，第51-63页(Marcel Dekker，Inc.，New York，1987)；及Boerner等，J.Immunol.，147：86(1991))。经由人B细胞杂交瘤技术生成的人抗体也记载于Li等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，103：3557-3562(2006)。其它方法包括那些例如记载于美国专利No.7,189,826(其描述了自杂交瘤细胞系生成单克隆人IgM抗体)和Ni，Xiandai Mianyixue，26(4)：265-268(2006)(其描述了人-人杂交瘤)的。人杂交瘤技术(Trioma技术)也记载于Vollmers和Brandlein，Histologyand Histopathology,20(3)：927-937(2005)及Vollmers和Brandlein，Methods andFindings in Experimental and Clinical Pharmacology,27(3)：185-91(2005)。
也可以通过分离自人衍生的噬菌体展示文库选择的Fv克隆可变域序列生成人抗体。然后，可以将此类可变域序列与期望的人恒定域组合。下文描述了自抗体文库选择人抗体的技术。
5.文库衍生的抗体
可以通过对组合文库筛选具有期望的一种或多种活性的抗体来分离本发明的抗体。例如，用于生成噬菌体展示文库并对此类文库筛选拥有期望结合特征的抗体的多种方法是本领域中已知的。此类方法综述于例如Hoogenboom等，于Methods in MolecularBiology 178：1-37(O’Brien等编，Human Press，Totowa，NJ，2001)，并且进一步记载于例如McCafferty等，Nature 348：552-554；Clackson等，Nature 352：624-628(1991)；Marks等，J.Mol.Biol.222：581-597(1992)；Marks和Bradbury,于Methods in Molecular Biology248：161-175(Lo编，Human Press，Totowa，NJ，2003)；Sidhu等，J.Mol.Biol.338(2)：299-310(2004)；Lee等，J.Mol.Biol.340(5)：1073-1093(2004)；Fellouse，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 101(34)：12467-12472(2004)；及Lee等，J.Immunol.Methods284(1-2)：119-132(2004)。
在某些噬菌体展示方法中，将VH和VL基因的全集分别通过聚合酶链式反应(PCR)克隆，并在噬菌体文库中随机重组，然后可以对所述噬菌体文库筛选抗原结合噬菌体，如记载于Winter等，Ann.Rev.Immunol.，12：433-455(1994)的。噬菌体通常以单链Fv(scFv)片段或以Fab片段展示抗体片段。来自经免疫的来源的文库提供针对免疫原的高亲和力抗体，而不需要构建杂交瘤。或者，可以(例如自人)克隆天然全集以在没有任何免疫的情况中提供针对一大批非自身和还有自身抗原的抗体的单一来源，如由Griffiths等，EMBO J，12：725-734(1993)描述的。最后，也可以通过自干细胞克隆未重排的V基因区段，并使用含有随机序列的PCR引物编码高度可变的CDR3区并在体外实现重排来合成生成未免疫文库，如由Hoogenboom和Winter,J.Mol.Biol.，227：381-388(1992)所描述的。描述人抗体噬菌体文库的专利公开文本包括例如：美国专利No.5,750,373，和美国专利公开文本No.2005/0079574，2005/0119455，2005/0266000，2007/0117126，2007/0160598，2007/0237764，2007/0292936和2009/0002360。
认为自人抗体文库分离的抗体或抗体片段是本文中的人抗体或人抗体片段。
6.多特异性抗体，包括FcRH5T细胞依赖性双特异性(TDB)抗体
在任一上述方面中，本文中提供的抗FcRH5抗体是多特异性抗体，例如双特异性抗体。多特异性抗体是具有针对至少两种不同位点的结合特异性的单克隆抗体。在某些实施方案中，双特异性抗体可以结合FcRH5的两种不同表位。
在某些实施方案中，结合特异性之一针对FcRH5且另一针对CD3(例如CD3g或CD3γ)。此类双特异性抗FcRH5抗体也称作FcRH5T细胞依赖性双特异性(TDB)抗体或FcRH5TDB。在一些情况中，第二结合域结合CD3上包含CD3氨基酸残基Glu6的表位。在一些情况中，该表位进一步包含一个或多个选自由CD3的Gln1，Asp2，和Met7组成的组的另外的氨基酸残基。在一些情况中，该表位包含CD3的氨基酸残基Gln1，Asp2，和Glu6。在一些情况中，该表位包含CD3的氨基酸残基Gln1，Asp2，Glu6，和Met7。在一些情况中，该表位并不包含CD3的氨基酸残基Glu5。在一些情况中，该表位并不包含CD3的氨基酸残基Gly3和Glu5。在一些情况中，该表位由CD3的氨基酸残基Gln1，Asp2，Glu6，和Met7组成。
在其它一些情况中，第二结合域能够结合人CD3多肽或食蟹猴CD3多肽。在一些情况中，该人CD3多肽或该食蟹猴CD3多肽分别是人CD3ε多肽或食蟹猴CD3ε多肽。在一些情况中，该人CD3多肽或该食蟹猴CD3多肽分别是人CD3γ多肽或食蟹猴CD3γ多肽。
在特定情况中，第二结合域以≤1μM，≤100nM，≤10nM，≤1nM，≤0.1nM，≤0.01nM，或≤0.001nM(例如10-8M或更少，例如10-8M至10-13M，例如10-9M至10-13M)的解离常数(KD)结合人CD3ε多肽。例如，在一些情况中，第二结合域以≤100nM(例如≤90nM，≤80nM，≤70nM，≤60nM，≤50nM，≤40nM，≤30nM，≤20nM，≤10nM，≤5nM，≤1nM，≤750pM，≤500pM，≤250pM，≤100pM，≤50pM，≤25pM，≤10pM，≤5pM，或≤1pM)或更低的KD结合人CD3ε多肽。
在一些情况中，例如，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其中第二结合域包含至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的高变区(HVR)：(a)包含SEQ ID NO：115的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：116的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：117的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：118的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ IDNO：119的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：120的氨基酸序列的HVR-L3。
在一些情况中，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其中第二结合域包含至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的高变区(HVR)：(a)包含SEQ ID NO：115的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：116的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：121的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：118的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：119的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：123的氨基酸序列的HVR-L3。在一些情况中，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其中该第二结合域包含包含与SEQ ID NO：133具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：133的序列的VH域和/或包含与SEQ ID NO：134具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：134的序列的VL域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体包含第二结合域，该第二结合域包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含分别为SEQ ID NO：125，126，127，和128的序列的重链框架区FR-H1，FR-H2，FR-H3，和FR-H4。在一些情况中，该第二结合域包含包含SEQ ID NO：133的氨基酸序列的VH域。在一些情况中，该第二结合域进一步包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含分别为SEQ ID NO：129，130，131，和132的序列的轻链框架区FR-L1，FR-L2，FR-L3，和FR-L4。在一些情况中，该第二结合域包含包含SEQ IDNO：134的氨基酸序列的VL域。在一些情况中，该第二结合域包含包含SEQ ID NO：133的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQ ID NO：134的氨基酸序列的VL域。因而，在一些情况中，本发明的抗FcRH5抗体的半抗体变体可以与抗CD3抗体38E4.v1的半抗体变体配对以形成FcRH5TDB(即抗FcRH5/38E4.v1TDB)。
在一些情况中，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其中第二结合域包含至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的高变区(HVR)：(a)包含SEQ ID NO：115的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：116的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：122的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：118的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：119的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：123的氨基酸序列的HVR-L3。在一些情况中，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其中该第二结合域包含包含与SEQ ID NO：135具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：135的序列的VH域和/或包含与SEQ ID NO：136具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：136的序列的VL域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体包含第二结合域，该第二结合域包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含分别为SEQ ID NO：125，126，127，和128的序列的重链框架区FR-H1，FR-H2，FR-H3，和FR-H4。在一些情况中，该第二结合域包含包含SEQ ID NO：135的氨基酸序列的VH域。在一些情况中，该第二结合域进一步包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含分别为SEQ ID NO：129，130，131，和132的序列的轻链框架区FR-L1，FR-L2，FR-L3，和FR-L4。在一些情况中，该第二结合域包含包含SEQ IDNO：136的氨基酸序列的VL域。在一些情况中，该第二结合域包含包含SEQ ID NO：135的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQ ID NO：136的氨基酸序列的VL域。因而，在一些情况中，本发明的抗FcRH5抗体的半抗体变体可以与抗CD3抗体38E4.v1的半抗体变体配对以形成FcRH5TDB(即抗FcRH5/38E4.v1 TDB)。
在一些情况中，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其中第二结合域包含至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的高变区(HVR)：(a)包含SEQ ID NO：115的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：116的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：121的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：118的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：119的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：124的氨基酸序列的HVR-L3。在一些情况中，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其中该第二结合域包含包含与SEQ ID NO：137具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：137的序列的VH域和/或包含与SEQ ID NO：138具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：138的序列的VL域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体包含第二结合域，该第二结合域包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含分别为SEQ ID NO：125，126，127，和128的序列的重链框架区FR-H1，FR-H2，FR-H3，和FR-H4。在一些情况中，该第二结合域包含包含SEQ ID NO：137的氨基酸序列的VH域。在一些情况中，该第二结合域进一步包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含分别为SEQ ID NO：129，130，131，和132的序列的轻链框架区FR-L1，FR-L2，FR-L3，和FR-L4。在一些情况中，该第二结合域包含包含SEQ IDNO：138的氨基酸序列的VL域。在一些情况中，该第二结合域包含包含SEQ ID NO：137的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQ ID NO：138的氨基酸序列的VL域。因而，在一些情况中，本发明的抗FcRH5抗体的半抗体变体可以与抗CD3抗体38E4.v11的半抗体变体配对以形成FcRH5TDB(即抗FcRH5/38E4.v11 TDB)。
在一些情况中，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其中第二结合域包含至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的高变区(HVR)：(a)包含SEQ ID NO：139的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：140的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：141的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：142的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：143的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：144的氨基酸序列的HVR-L3。在一些情况中，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其中该第二结合域包含包含与SEQ ID NO：153具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：153的序列的VH域和/或包含与SEQ ID NO：154具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：154的序列的VL域。在一些情况中，该抗FcRH5抗体包含第二结合域，该第二结合域包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含分别为SEQ ID NO：145，146，147，和148的序列的重链框架区FR-H1，FR-H2，FR-H3，和FR-H4。在一些情况中，该第二结合域包含包含SEQ ID NO：153的氨基酸序列的VH域。在一些情况中，该第二结合域进一步包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含分别为SEQ ID NO：149，150，151，和152的序列的轻链框架区FR-L1，FR-L2，FR-L3，和FR-L4。在一些情况中，该第二结合域包含包含SEQ IDNO：154的氨基酸序列的VL域。在一些情况中，该第二结合域包含包含SEQ ID NO：153的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQ ID NO：154的氨基酸序列的VL域。因而，在一些情况中，本发明的抗FcRH5抗体的半抗体变体可以与抗CD3抗体hu40G5c的半抗体变体配对以形成FcRH5TDB(即抗FcRH5/hu40G5c TDB)。
在一些情况中，例如，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其中第二结合域包含至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的高变区(HVR)：(a)包含SEQ ID NO：155的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：156的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：157的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：158的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ IDNO：159的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：160的氨基酸序列的HVR-L3。
在一些情况中，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其中第二结合域包含至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的高变区(HVR)：(a)包含SEQ ID NO：155的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：162的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：157的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：158的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：159的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：160的氨基酸序列的HVR-L3。在一些情况中，例如，该第二结合域包含包含与SEQ ID NO：172具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：172的序列的VH域和/或包含与SEQID NO：173具有至少80％(例如80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：173的序列的VL域。在一些情况中，例如，该抗FcRH5抗体包含第二结合域，该第二结合域包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含分别为SEQ ID NO：164，165，166，和167的序列的重链框架区FR-H1，FR-H2，FR-H3，和FR-H4。在一些情况中，该第二结合域包含包含SEQ ID NO：172的氨基酸序列的VH域。在一些情况中，该第二结合域进一步包含至少一种(例如1，2，3，或4种)包含分别为SEQ ID NO：168，169，170，和171的序列的轻链框架区FR-L1，FR-L2，FR-L3，和FR-L4。在一些情况中，该第二结合域包含包含SEQ ID NO：173的氨基酸序列的VL域。在一些情况中，该第二结合域包含包含SEQ ID NO：172的氨基酸序列的VH域和(b)包含SEQ ID NO：173的氨基酸序列的VL域。因而，在一些情况中，本发明的抗FcRH5抗体的半抗体变体可以与抗CD3抗体huUCHT1.v9的半抗体变体配对以形成FcRH5TDB(即抗FcRH5/huUCHT1.v9TDB)。
在一些情况中，例如，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其中结合FcRH5的结合域包含包含带电荷区域(CR1)的VH域(VH1)和包含带电荷区域(CR2)的VL域(VL1)，其中该VH1中的CR1与该VL1中的CR2形成电荷对。在一些情况中，该CR1包含碱性氨基酸残基且该CR2包含酸性氨基酸残基。在一些情况中，该CR1包含Q39K替代突变(EU编号方式)。在一些情况中，该CR1由该Q39K替代突变组成。在一些情况中，该CR2包含Q38E替代突变(EU编号方式)。在一些情况中，该CR2由该Q38E替代突变组成。在一些情况中，结合CD3的第二结合域包含包含带电荷区域(CR3)的VH域(VH2)和包含带电荷区域(CR4)的VL域(VL2)，其中该VL2中的CR4与该VH2中的CR3形成电荷对。在一些情况中，该CR4包含碱性氨基酸残基且该CR3包含酸性氨基酸残基。在一些情况中，该CR4包含Q38K替代突变(EU编号方式)。在一些情况中，该CR4由该Q38K替代突变组成。在一些情况中，该CR3包含Q39E替代突变(EU编号方式)。在一些情况中，该CR3由该Q39E替代突变组成。在一些情况中，该VL1域连接轻链恒定(CL)域(CL1)且该VH1连接第一重链恒定(CH1)域(CH11)，其中该CL1包含带电荷区域(CR5)且该CH11包含带电荷区域(CR6)，且其中该CL1中的CR5与该CH11中的CR6形成电荷对。在一些情况中，该CR5包含碱性氨基酸残基且该CR6包含酸性残基。在一些情况中，该CR5包含V133K替代突变(EU编号方式)。在一些情况中，该CR5由该V133K替代突变组成。在一些情况中，该CR6包含S183E替代突变(EU编号方式)。在一些情况中，该CR6由该S183E替代突变组成。
在一些情况中，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其中VL2域连接CL域(CL2)且VH2连接CH1域(CH12)，其中该CL2包含带电荷区域(CR7)且该CH12包含带电荷区域(CR8)，且其中该CH12中的CR8与该CL2中的CR7形成电荷对。在一些情况中，该CR8包含碱性氨基酸残基且该CR7包含酸性氨基酸残基。在一些情况中，该CR8包含S183K替代突变(EU编号方式)。在一些情况中，该CR8由该S183K替代突变组成。在一些情况中，该CR7包含V133E替代突变(EU编号方式)。在一些情况中，该CR7由该V133E替代突变组成。
在一些情况中，例如，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其中VL2域连接CL域(CL2)且VH2连接CH1域(CH12)，其中该CL2包含氨基酸残基F116，L135，S174，S176，和/或T178处的一处或多处突变(EU编号方式)且该CHl2包含氨基酸残基A141，F170，S181，S183，和/或V185处的一处或多处突变(EU编号方式)。在一些情况中，该CL2包含一处或多处下述替代突变：F116A，L135V，S174A，S176F，和/或T178V。在一些情况中，该CL2包含下述替代突变：F116A，L135V，S174A，S176F，和T178V。在一些情况中，该CH12包含一处或多处下述替代突变：A141I，F170S，S181M，S183A，和/或V185A。在一些情况中，该CH12包含下述替代突变：A141I，F170S，S181M，S183A，和V185A。
在一些情况中，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其中结合FcRH5的结合域包含包含带电荷区域(CR1)的VH域(VH1)和包含带电荷区域(CR2)的VL域(VL1)，其中该VL1中的CR2与该VHl中的CR1形成电荷对。在一些情况中，该CR2包含碱性氨基酸残基且该CRl包含酸性氨基酸残基。在一些情况中，该CR2包含Q38K替代突变(EU编号方式)。在一些情况中，该CR2由该Q38K替代突变组成。在一些情况中，该CR1包含Q39E替代突变(EU编号方式)。在一些情况中，该CR1由该Q39E替代突变组成。在一些情况中，结合CD3的第二结合域包含包含带电荷区域(CR3)的VH域(VH2)和包含带电荷区域(CR4)的VL域(VL2)，其中该VH2中的CR3与该VL2中的CR4形成电荷对。在一些情况中，该CR3包含碱性氨基酸残基且该CR4包含酸性氨基酸残基。在一些情况中，该CR3包含Q39K替代突变(EU编号方式)。在一些情况中，该CR3由该Q39K替代突变组成。在一些情况中，该CR4包含Q38E替代突变(EU编号方式)。在一些情况中，该CR4由该Q38E替代突变组成。在一些情况中，该VL1域连接轻链恒定(CL)域(CLl)且该VHl连接第一重链恒定(CH1)域(CH11)，其中该CL1包含带电荷区域(CR5)且该CH11包含带电荷区域(CR6)，且其中该CH1l中的CR6与该CLl中的CR5形成电荷对。在一些情况中，该CR6包含碱性氨基酸残基且该CR5包含酸性氨基酸残基。在一些情况中，该CR6包含S183K替代突变(EU编号方式)。在一些情况中，该CR6由该S183K替代突变组成。在一些情况中，该CR5包含V133E替代突变(EU编号方式)。在一些情况中，该CR5由该V133E替代突变组成。
在一些情况中，例如，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其中VL2域连接CL域(CL2)且VH2连接CH1域(CH12)，其中该CL2包含带电荷区域(CR7)且该CH12包含带电荷区域(CR8)，且其中该CL2中的CR7与该CH12中的CR8形成电荷对。在一些情况中，该CR7包含碱性氨基酸残基且该CR8包含酸性残基。在一些情况中，该CR7包含V133K替代突变(EU编号方式)。在一些情况中，该CR7由该V133K替代突变组成。在一些情况中，该CR8包含S183E替代突变(EU编号方式)。在一些情况中，该CR8由该S183E替代突变组成。
在一些情况中，例如，本发明提供一种抗FcRH5抗体，其中VL2域连接CL域(CL2)且VH2连接CH1域(CH12)，其中该CL2包含氨基酸残基F116，L135，S174，S176，和/或T178处的一处或多处突变(EU编号方式)且该CH12包含氨基酸残基A141，F170，S181，S183，和/或V185处的一处或多处突变(EU编号方式)。在一些情况中，该CL2包含一处或多处下述替代突变：F116A，L135V，S174A，S176F，和/或T178V。在一些情况中，该CL2包含下述替代突变：F116A，L135V，S174A，S176F，和T178V。在一些情况中，该CH12包含一处或多处下述替代突变：A141I，F170S，S181M，S183A，和/或V185A。在一些情况中，该CH12包含下述替代突变：A141I，F170S，S181M，S183A，和V185A。在一些情况中，该抗FcRH5抗体包含一个或多个重链恒定域，其中该一个或多个重链恒定域选自第一CH2域(CH21)，第一CH3域(CH31)，第二CH2域(CH22)，和第二CH3域(CH32)。在一些情况中，该一个或多个重链恒定域中至少一个与另一个重链恒定域配对。在一些情况中，该CH31和该CH32各自包含隆起(P1)或空腔(C1)，且该CH31中的P1或C1分别可位于该CH32中的C1或P1中。在一些情况中，该CH31和该CH32在介于该P1和该C1之间的界面处相遇。在一些情况中，该CH21和该CH22各自包含隆起(P2)或空腔(C2)，且该CH21中的P2或C2分别可位于中该CH22中的C2或P2。在一些情况中，该CH21和该CH22在介于该P2和该C2之间的界面处相遇。
在另一个方面，本发明提供一种结合FcRH5和CD3的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体包含包含第一结合域的抗FcRH5臂，该第一结合域包含至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的高变区(HVR)：(a)包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的HVR-HI；(b)包含SEQ ID NO：8的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：23的氨基酸序列的HVR-L3；和包含第二结合域的抗CD3臂，该第二结合域包含至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的高变区(HVR)：(a)包含SEQ IDNO：115的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：116的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：121的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：118的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：119的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：123的氨基酸序列的HVR-L3；且其中该抗FcRH5臂和该抗CD3臂各自包含N297G替代突变(EU编号方式)；且其中该抗FcRH5臂包含T366W替代突变且该抗CD3臂包含T366S，L368A，和Y407V替代突变。在一些情况中，该抗FcRH5抗体包含包含第一结合域的抗FcRH5臂，该第一结合域包含下述六种高变区(HVR)：(a)包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：8的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：23的氨基酸序列的HVR-L3；和包含第二结合域的抗CD3臂，该第二结合域包含下述六种高变区(HVR)：(a)包含SEQ ID NO：115的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：116的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：121的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：118的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：119的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：123的氨基酸序列的HVR-L3；且其中该抗FcRH5臂和该抗CD3臂各自包含N297G替代突变(EU编号方式)；且其中该抗FcRH5臂包含T366W替代突变且该抗CD3臂包含T366S，L368A，和Y407V替代突变。
在另一个方面，本发明提供一种结合FcRH5和CD3的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体包含包含第一结合域的抗FcRH5臂，该第一结合域包含至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的高变区(HVR)：(a)包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：8的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：23的氨基酸序列的HVR-L3；和包含第二结合域的抗CD3臂，该第二结合域包含至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的高变区(HVR)：(a)包含SEQ IDNO：115的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：116的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：121的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：118的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：119的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：123的氨基酸序列的HVR-L3；且其中该抗FcRH5臂包含包含Q38E和V133K替代突变的轻链和包含Q39K，S183E，和N297G替代突变的重链；且其中该抗CD3臂包含包含Q38K和V133E替代突变的轻链和包含Q39E，S183K，和N297G替代突变的重链(EU编号方式)。在一些情况中，该抗FcRH5抗体包含包含第一结合域的抗FcRH5臂，该第一结合域包含下述六种高变区(HVR)：(a)包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：8的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ IDNO：9的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQID NO：16的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：23的氨基酸序列的HVR-L3；和包含第二结合域的抗CD3臂，该第二结合域包含下述六种高变区(HVR)：(a)包含SEQ ID NO：115的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：116的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ IDNO：121的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：118的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：119的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：123的氨基酸序列的HVR-L3；且其中该抗FcRH5臂包含包含Q38E和V133K替代突变的轻链和包含Q39K，S183E，和N297G替代突变的重链；且其中该抗CD3臂包含包含Q38K和V133E替代突变的轻链和包含Q39E，S183K，和N297G替代突变的重链(EU编号方式)。
在另一个方面，本发明提供一种结合FcRH5和CD3的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体包含：(a)包含第一结合域的抗FcRH5臂，该第一结合域包含包含与SEQ ID NO：104具有至少90％(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：104的序列的VH域和包含与SEQ ID NO：105具有至少90％(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：105的序列的VL域，其中该抗FcRH5臂包含包含Q38E和V133K替代突变的轻链和包含Q39K，S183E，和N297G替代突变的重链；和(b)包含第二结合域的抗CD3臂，该第二结合域包含包含与SEQ ID NO：133具有至少90％(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：133的序列的VH域和包含与SEQID NO：134具有至少90％(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：134的序列的VL域，其中该抗CD3臂包含包含Q38K和V133E替代突变的轻链和包含Q39E，S183K，和N297G替代突变的重链(EU编号方式)。在一些情况中，本发明提供一种结合FcRH5和CD3的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体包含：(a)包含第一结合域的抗FcRH5臂，该第一结合域包含包含SEQ ID NO：104的氨基酸序列的VH域和包含SEQ ID NO：105的氨基酸序列的VL域，其中该抗FcRH5臂包含包含Q38E和V133K替代突变的轻链和包含Q39K，S183E，和N297G替代突变的重链；和(b)包含第二结合域的抗CD3臂，该第二结合域包含包含SEQ ID NO：133的氨基酸序列的VH域和包含SEQ ID NO：134的氨基酸序列的VL域，其中该抗CD3臂包含包含Q38K和V133E替代突变的轻链和包含Q39E，S183K，和N297G替代突变的重链(EU编号方式)。
在另一个方面，本发明提供一种结合FcRH5和CD3的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体包含包含第一结合域的抗FcRH5臂，该第一结合域包含至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的高变区(HVR)：(a)包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：8的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：23的氨基酸序列的HVR-L3；和包含第二结合域的抗CD3臂，该第二结合域包含至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的高变区(HVR)：(a)包含SEQ IDNO：115的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：116的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：121的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：118的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：119的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：123的氨基酸序列的HVR-L3；且其中该抗FcRH5臂包含包含Q38K和V133E替代突变的轻链和包含Q39E，S183K，和N297G替代突变的重链；且其中该抗CD3臂包含包含Q38E和V133K替代突变的轻链和包含Q39K，S183E，和N297G替代突变的重链(EU编号方式)。在一些情况中，该抗FcRH5抗体包含包含第一结合域的抗FcRH5臂，该第一结合域包含下述六种高变区(HVR)：(a)包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：8的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ IDNO：9的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQID NO：16的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：23的氨基酸序列的HVR-L3；和包含第二结合域的抗CD3臂，该第二结合域包含下述六种高变区(HVR)：(a)包含SEQ ID NO：115的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：116的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ IDNO：121的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：118的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：119的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：123的氨基酸序列的HVR-L3；且其中该抗FcRH5臂包含包含Q38K和V133E替代突变的轻链和包含Q39E，S183K，和N297G替代突变的重链；且其中该抗CD3臂包含包含Q38E和V133K替代突变的轻链和包含Q39K，S183E，和N297G替代突变的重链(EU编号方式)。
在另一个方面，本发明提供一种结合FcRH5和CD3的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体包含：(a)包含第一结合域的抗FcRH5臂，该第一结合域包含包含与SEQ ID NO：104具有至少90％(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：104的序列的VH域和包含与SEQ ID NO：105具有至少90％(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：105的序列的VL域，其中该抗FcRH5臂包含包含Q38K和V133E替代突变的轻链和包含Q39E，S183K，和N297G替代突变的重链；和(b)包含第二结合域的抗CD3臂，该第二结合域包含包含SEQ ID NO：133的氨基酸序列的VH域和包含SEQ ID NO：134的氨基酸序列的VL域，其中该抗CD3臂包含包含Q38E和V133K替代突变的轻链和包含Q39K，S183E，和N297G替代突变的重链(EU编号方式)。在一些情况中，本发明提供一种结合FcRH5和CD3的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体包含：(a)包含第一结合域的抗FcRH5臂，该第一结合域包含包含SEQID NO：104的氨基酸序列的VH域和包含SEQ ID NO：105的氨基酸序列的VL域，其中该抗FcRH5臂包含包含Q38K和V133E替代突变的轻链和包含Q39E，S183K，和N297G替代突变的重链；和(b)包含第二结合域的抗CD3臂，该第二结合域包含包含SEQ ID NO：133的氨基酸序列的VH域和包含SEQ ID NO：104的氨基酸序列的VL域，其中该抗CD3臂包含包含Q38E和V133K替代突变的轻链和包含Q39K，S183E，和N297G替代突变的重链(EU编号方式)。
在另一个方面，本发明提供一种结合FcRH5和CD3的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体包含包含第一结合域的抗FcRH5臂，该第一结合域包含至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的高变区(HVR)：(a)包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：8的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：23的氨基酸序列的HVR-L3；和包含第二结合域的抗CD3臂，该第二结合域包含至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的高变区(HVR)：(a)包含SEQ IDNO：115的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：116的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：121的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：118的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：119的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：123的氨基酸序列的HVR-L3；且其中该抗FcRH5臂包含包含Q38E和V133K替代突变的轻链和包含Q39K，S183E，和N297G替代突变的重链；且其中该抗CD3臂包含包含Q38K，F116A，L135V，S174A，S176F，和T178V替代突变的轻链和包含Q39E，A141I，F170S，S181M，S183A，V185A，和N297G替代突变的重链(EU编号方式)。在一些情况中，该抗FcRH5抗体包含包含第一结合域的抗FcRH5臂，该第一结合域包含下述六种高变区(HVR)：(a)包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：8的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：23的氨基酸序列的HVR-L3；和包含第二结合域的抗CD3臂，该第二结合域包含下述六种高变区(HVR)：(a)包含SEQ ID NO：115的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：116的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：121的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：118的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：119的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：123的氨基酸序列的HVR-L3；且其中该抗FcRH5臂包含包含Q38E和V133K替代突变的轻链和包含Q39K，S183E，和N297G替代突变的重链；且其中该抗CD3臂包含包含Q38K，F116A，L135V，S174A，S176F，和T178V替代突变的轻链和包含Q39E，A141I，F170S，S181M，S183A，V185A，和N297G替代突变的重链(EU编号方式)。
在另一个方面，本发明提供一种结合FcRH5和CD3的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体包含：(a)包含第一结合域的抗FcRH5臂，该第一结合域包含包含与SEQ ID NO：104具有至少90％(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：104的序列的VH域和包含与SEQ ID NO：105具有至少90％(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：105的序列的VL域，其中该抗CD3臂包含包含Q38K，F116A，L135V，S174A，S176F，和T178V替代突变的轻链和包含Q39E，A141I，F170S，S181M，S183A，V185A，和N297G替代突变的重链(EU编号方式)。在一些情况中，本发明提供一种结合FcRH5和CD3的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体包含：(a)包含第一结合域的抗FcRH5臂，该第一结合域包含包含SEQ IDNO：104的氨基酸序列的VH域和包含SEQ ID NO：105的氨基酸序列的VL域，其中该抗FcRH5臂包含包含Q38E和V133K替代突变的轻链和包含Q39K，S183E，和N297G替代突变的重链；和(b)包含第二结合域的抗CD3臂，该第二结合域包含包含SEQ ID NO：133的氨基酸序列的VH域和包含SEQ ID NO：134的氨基酸序列的VL域，其中该抗CD3臂包含包含Q38K，F116A，L135V，S174A，S176F，和T178V替代突变的轻链和包含Q39E，A141I，F170S，S181M，S183A，V185A，和N297G替代突变的重链(EU编号方式)。
在另一个方面，本发明提供一种结合FcRH5和CD3的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体包含包含第一结合域的抗FcRH5臂，该第一结合域包含至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的高变区(HVR)：(a)包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：8的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：23的氨基酸序列的HVR-L3；和包含第二结合域的抗CD3臂，该第二结合域包含至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的高变区(HVR)：(a)包含SEQ IDNO：115的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：116的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：121的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：118的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：119的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：123的氨基酸序列的HVR-L3；且其中该抗FcRH5臂包含包含Q38K和V133E替代突变的轻链和包含Q39E，S183K，和N297G替代突变的重链；且其中该抗CD3臂包含包含Q38E，F116A，L135V，S174A，S176F，和T178V替代突变的轻链和包含Q39K，A141I，F170S，S181M，S183A，V185A，和N297G替代突变的重链(EU编号方式)。在一些情况中，该抗FcRH5抗体包含包含第一结合域的抗FcRH5臂，该第一结合域包含下述六种高变区(HVR)：(a)包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：8的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：23的氨基酸序列的HVR-L3；和包含第二结合域的抗CD3臂，该第二结合域包含下述六种高变区(HVR)：(a)包含SEQ ID NO：115的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO：116的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO：121的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO：118的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO：119的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO：123的氨基酸序列的HVR-L3；且其中该抗FcRH5臂包含包含Q38K和V133E替代突变的轻链和包含Q39E，S183K，和N297G替代突变的重链；且其中该抗CD3臂包含包含Q38E，F116A，L135V，S174A，S176F，和T178V替代突变的轻链和包含Q39K，A141I，F170S，S181M，S183A，V185A，和N297G替代突变的重链(EU编号方式)。
在另一个方面，本发明提供一种结合FcRH5和CD3的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体包含：(a)包含第一结合域的抗FcRH5臂，该第一结合域包含包含与SEQ ID NO：104具有至少90％(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：104的序列的VH域和包含与SEQ ID NO：105具有至少90％(例如90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％)序列同一性的氨基酸序列或SEQ ID NO：105的序列的VL域，其中该抗FcRH5臂包含包含Q38K和V133E替代突变的轻链和包含Q39E，S183K，和N297G替代突变的重链；和(b)包含第二结合域的抗CD3臂，该第二结合域包含包含SEQ ID NO：133的氨基酸序列的VH域和包含SEQ ID NO：134的氨基酸序列的VL域，其中该抗CD3臂包含包含Q38E，F116A，L135V，S174A，S176F，和T178V替代突变的轻链和包含Q39K，A141I，F170S，S181M，S183A，V185A，和N297G替代突变的重链(EU编号方式)。在一些情况中，本发明提供一种结合FcRH5和CD3的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体包含：(a)包含第一结合域的抗FcRH5臂，该第一结合域包含包含SEQ ID NO：104的氨基酸序列的VH域和包含SEQ ID NO：105的氨基酸序列的VL域，其中该抗FcRH5臂包含包含Q38K和V133E替代突变的轻链和包含Q39E，S183K，和N297G替代突变的重链；和(b)包含第二结合域的抗CD3臂，该第二结合域包含包含SEQ ID NO：133的氨基酸序列的VH域和包含SEQ ID NO：134的氨基酸序列的VL域，其中该抗CD3臂包含包含Q38E，F116A，L135V，S174A，S176F，和T178V替代突变的轻链和包含Q39K，A141I，F170S，S181M，S183A，V185A，和N297G替代突变的重链(EU编号方式)。
7.抗体变体
在某些实施方案中，涵盖本发明的抗FcRH5抗体(例如本发明的结合FcRH5和第二生物学分子，例如CD3的双特异性抗FcRH5抗体，诸如本发明的FcRH5TDB抗体或其变体)的氨基酸序列变体。例如，可以期望改善抗体的结合亲和力和/或其它生物学特性。可以通过将合适的修饰引入编码抗体的核苷酸序列中，或者通过肽合成来制备抗体的氨基酸序列变体。此类修饰包括例如对抗体的氨基酸序列内的残基的删除，和/或插入和/或替代。可以进行删除，插入，和替代的任何组合以得到最终的构建体，只要最终的构建体拥有期望的特征，例如，抗原结合。
a.替代，插入，和删除变体
在某些实施方案中，提供了具有一处或多处氨基酸替代的抗体变体。替代诱变感兴趣的位点包括HVR和FR。保守替代在表1中在“优选的替代”的标题下显示。更实质的变化在表1中在“例示性替代”的标题下提供，并且如下文参照氨基酸侧链类别进一步描述的。可以将氨基酸替代引入感兴趣的抗体中，并且对产物筛选期望的活性，例如保留/改善的抗原结合，降低的免疫原性，或改善的ADCC或CDC。
表1：例示性和优选的氨基酸替代
Figure BDA0001530253770001031
Figure BDA0001530253770001041
依照共同的侧链特性，氨基酸可以如下分组：
(1)疏水性的：正亮氨酸，Met，Ala，Val，Leu，Ile；
(2)中性，亲水性的：Cys，Ser,Thr,Asn，Gln；
(3)酸性的：Asp，Glu；
(4)碱性的：His，Lys，Arg；
(5)影响链取向的残基：Gly,Pro；
(6)芳香族的：Trp，Tyr,Phe。
非保守替代会需要用这些类别之一的成员替换另一个类别的。
一类替代变体牵涉替代亲本抗体(例如人源化或人抗体)的一个或多个高变区残基。一般地，为进一步研究选择的所得变体相对于亲本抗体会具有某些生物学特性的改变(例如改善)(例如升高的亲和力，降低的免疫原性)和/或会基本上保留亲本抗体的某些生物学特性。例示性的替代变体是亲和力成熟的抗体，其可以例如使用基于噬菌体展示的亲和力成熟技术诸如本文中所描述的那些技术来方便地生成。简言之，将一个或多个HVR残基突变，并将变体抗体在噬菌体上展示，并对其筛选特定的生物学活性(例如结合亲和力)。
可以对HVR做出变化(例如，替代)，例如以改善抗体亲和力。可以对HVR“热点”，即由在体细胞成熟过程期间以高频率经历突变的密码子编码的残基(见例如Chowdhury,Methods Mol.Biol.207：179-196(2008))，和/或接触抗原的残基做出此类变化，其中对所得的变体VH或VL测试结合亲和力。通过次级文库的构建和再选择进行的亲和力成熟已经记载于例如Hoogenboom等，于Methods in Molecular Biology 178：1-37(O’Brien等编，Human Press，Totowa，NJ，(2001))。在亲和力成熟的一些实施方案中，通过多种方法(例如，易错PCR，链改组，或寡核苷酸指导的诱变)将多样性引入为成熟选择的可变基因。然后，创建次级文库。然后，筛选文库以鉴定具有期望的亲和力的任何抗体变体。另一种引入多样性的方法牵涉HVR指导的方法，其中将几个HVR残基(例如，一次4-6个残基)随机化。可以例如使用丙氨酸扫描诱变或建模来特异性鉴定牵涉抗原结合的HVR残基。特别地，经常靶向CDR-H3和CDR-L3。
在某些实施方案中，可以在一个或多个HVR内发生替代，插入，或删除，只要此类变化不实质性降低抗体结合抗原的能力。例如，可以对HVR做出保守变化(例如，保守替代，如本文中提供的)，其不实质性降低结合亲和力。例如，此类变化可以在HVR中的抗原接触残基以外。在上文提供的变体VH和VL序列的某些实施方案中，每个HVR是未改变的，或者含有不超过1，2或3处氨基酸替代。
一种可用于鉴定抗体中可以作为诱变靶位的残基或区域的方法称作“丙氨酸扫描诱变”，如由Cunningham和Wells(1989)Science，244：1081-1085所描述的。在此方法中，将残基或靶残基的组(例如，带电荷的残基诸如Arg，Asp，His，Lys，和Glu)鉴定，并用中性或带负电荷的氨基酸(例如，丙氨酸或多丙氨酸)替换以测定抗体与抗原的相互作用是否受到影响。可以在对初始替代表明功能敏感性的氨基酸位置引入进一步的替代。或者/另外，利用抗原-抗体复合物的晶体结构来鉴定抗体与抗原间的接触点。作为替代的候选，可以靶向或消除此类接触残基和邻近残基。可以筛选变体以确定它们是否含有期望的特性。
氨基酸序列插入包括长度范围为1个残基至含有100或更多个残基的多肽的氨基和/或羧基端融合，及单个或多个氨基酸残基的序列内插入。末端插入的例子包括具有N端甲硫氨酰基残基的抗体。抗体分子的其它插入变体包括抗体的N或C端与酶(例如对于ADEPT)或延长抗体的血清半衰期的多肽的融合物。
b.糖基化变体
在某些实施方案中，可以改变本发明的抗FcRH5抗体以提高或降低抗体糖基化的程度。可以通过改变氨基酸序列，使得创建或消除一个或多个糖基化位点来方便地实现对本发明的抗FcRH5抗体的糖基化位点的添加或删除。添加或去除糖基化位点可以改变抗体，诸如抗FcRH5抗体(例如FcRH5TDB)的效应器功能。在一些实施方案中，该抗FcRH5抗体(例如FcRH5TDB)可以含有无糖基化点突变。在一些实施方案中，该无糖基化点突变是替代突变。在一些实施方案中，该无糖基化点突变将该抗FcRH5抗体的效应器功能降低至少1％或更多(例如2％，3％，4％，5％，6％，7％，8％，9％，10％，20％，30％，40％，50％，60％，70％，80％，或90％或更多)。在一些实施方案中，该替代突变在氨基酸残基N297，L234，L235，D265，和/或P329处(EU编号方式)。在一些实施方案中，该替代突变选自由N297G，N297A，L234A，L235A，D265A，和P329G组成的组。在一些实施方案中，该替代突变是N297G突变。
在抗体包含Fc区的情况中，可以改变其附着的碳水化合物。由哺乳动物细胞生成的天然抗体通常包含分支的，双触角寡糖，其一般通过N连接附着于Fc区的CH2域的Asn297。见例如Wright等，TIBTECH 15：26-32(1997)。寡糖可以包括各种碳水化合物，例如，甘露糖，N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)，半乳糖，和唾液酸，以及附着于双触角寡糖结构“主干”中的GlcNAc的岩藻糖。在一些实施方案中，可以对本发明抗体中的寡糖进行修饰以创建具有某些改善的特性的抗体变体。
在一个实施方案中，提供了抗FcRH5抗体变体，其具有缺乏附着(直接或间接)于Fc区的岩藻糖的碳水化合物结构。例如，此类抗体中的岩藻糖量可以是1％至80％，1％至65％，5％至65％或20％至40％。通过相对于附着于Asn297的所有糖结构(例如，复合的，杂合的和高甘露糖的结构)的总和，计算Asn297处糖链内岩藻糖的平均量来测定岩藻糖量，如通过MALDI-TOF质谱术测量的，例如如记载于WO 2008/077546的。Asn297指位于Fc区中的约第297位(Fc区残基的EU编号方式)的天冬酰胺残基；然而，Asn297也可以由于抗体中的微小序列变异而位于第297位上游或下游约±3个氨基酸，即在第294位和第300位之间。此类岩藻糖基化变体可以具有改善的ADCC功能。见例如美国专利公开文本No.US 2003/0157108(Presta，L)；US 2004/0093621(Kyowa Hakko Kogyo Co.，Ltd)。涉及“脱岩藻糖基化的”或“岩藻糖缺乏的”抗体变体的出版物的例子包括：US 2003/0157108；WO 2000/61739；WO2001/29246；US 2003/0115614；US 2002/0164328；US 2004/0093621；US 2004/0132140；US2004/0110704；US 2004/0110282；US 2004/0109865；WO 2003/085119；WO 2003/084570；WO2005/035586；WO 2005/035778；WO 2005/053742；WO 2002/031140；Okazaki等，J.Mol.Biol.336：1239-1249(2004)；Yamane-Ohnuki等，Biotech.Bioeng.87：614(2004)。能够生成脱岩藻糖基化抗体的细胞系的例子包括蛋白质岩藻糖基化缺陷的Lec13CHO细胞(Ripka等，Arch.Biochem.Biophys.249：533-545(1986)；美国专利申请No US 2003/0157108A1，Presta，L；及WO 2004/056312A1，Adams等，尤其在实施例11)，和敲除细胞系，诸如α-1，6-岩藻糖基转移酶基因FUT8敲除CHO细胞(见例如Yamane-Ohnuki等，Biotech.Bioeng.87：614(2004)；Kanda，Y.等，Biotechnol.Bioeng.，94(4)：680-688(2006)；及WO2003/085107)。
进一步提供了具有两分型寡糖的抗FcRH5抗体变体，例如其中附着于抗体Fc区的双触角寡糖是通过GlcNAc两分的。此类抗体变体可以具有降低的岩藻糖基化和/或改善的ADCC功能。此类抗体变体的例子记载于例如WO 2003/011878(Jean-Mairet等)；美国专利No.6,602,684(Umana等)；及US 2005/0123546(Umana等)。还提供了在附着于Fc区的寡糖中具有至少一个半乳糖残基的抗体变体。此类抗体变体可以具有改善的CDC功能。此类抗体变体记载于例如WO 1997/30087(Patel等)；WO 1998/58964(Raju，S.)；及WO 1999/22764(Raju，S.)。
c.VH，VL，CH1，和CL域变体
在某些实施方案中，可以将一处或多处氨基酸修饰引入本发明的抗FcRH5抗体(例如本发明的结合FcRH5和第二生物学分子的双特异性抗FcRH5抗体，例如本发明的FcRH5TDB抗体或其变体)的重链可变(VH，例如VH1和/或VH2)域，轻链可变(VL，例如VL1和/或VL2)域，重链恒定(CH1，例如CH11和/或CH12)域，和/或轻链恒定(CL，例如CL1和/或CL2)域中。该VH，VL，CH1，和/或CL域可以在一个或多个(例如1，2，3，4，5，6，7，8，9，或10个)氨基酸位置处具有氨基酸修饰(例如替代)。在特定实施方案中，该氨基酸替代包含酸性和/或碱性氨基酸残基。氨基酸修饰可以在VH，VL，CH1，和/或CL域中形成带电荷区域(例如包含酸性和/或碱性氨基酸残基的区域)。VH，VL，CH1，和/或CL域内的带电荷区域可以与相反总体电荷的第二带电荷区域相互作用以形成电荷对。例如，氨基酸修饰可以介导TDB的FcRH5臂的VL1和VH1域内存在的带电荷区域之间电荷对的形成。在一些情况中，氨基酸修饰可以介导TDB的FcRH5臂的CL1和CH11域内存在的带电荷区域之间电荷对的形成。在一些情况中，氨基酸修饰可以介导TDB的第二臂(例如TDB的CD3臂)的VL2和VH2域内存在的带电荷区域之间电荷对的形成。在一些情况中，氨基酸修饰可以介导TDB的第二臂(例如TDB的CD3臂)的CL2和CH12域内存在的带电荷区域之间电荷对的形成。含有VH，VL，CH1，和/或CL域变体的FcRH5TDB的例示性构造呈现于图1A-1D。
在某些实施方案中，抗FcRH5抗体(例如本发明的结合FcRH5和第二生物学分子，例如CD3的双特异性抗FcRH5抗体，诸如本发明的FcRH5TDB抗体)包含VH，VL，CH1，和/或CL区中的一处或多处不对称修饰以推动正确的重/轻链配对。在其它实施方案中，该抗FcRH5抗体进一步包含Fc区中的一处或多处修饰以推动抗FcRH5抗体(例如FcRH5TDB)的两个臂(例如抗FcRH5臂和抗CD3臂)的异二聚化。
在一些实施方案中，CH1l域包含S183处的氨基酸替代(EU编号方式)且CLl域包含V133处的氨基酸替代(EU编号方式)。在其它实施方案中，抗FcRH5抗体的第一臂(例如FcRH5结合臂)的轻链是卡帕链。在一些实施方案中，抗FcRH5抗体的第二臂(例如抗CD3结合臂)的轻链是卡帕链。在某些实施方案中，抗FcRH5抗体的两个臂(例如FcRH5结合臂和CD3结合臂)二者的轻链是卡帕链。
在一些实施方案中，CH11域包含S183E突变且CL1域包含V133K突变。在其它实施方案中，CH11域包含S183K突变且CL1域包含V133E突变。
在一些实施方案中，CH11域包含S183K突变，CL1域包含V133E突变，CH12域包含S183E突变，且CL2域包含V133K突变。
在一些实施方案中，该抗FcRH5抗体进一步包含VH1域中的Q39E突变，VL1域中的Q38K突变，VH2域中的Q39K突变，和VL2域中的Q38E突变。
在一些实施方案中，该抗FcRH5抗体进一步包含CH31域中的节(例如隆起)突变和CH32域中的穴(例如空腔)突变。在某些实施方案中，该节突变包含T366W突变(EU编号方式)。在某些实施方案中，该穴突变包含T366S，L368A，和Y407V突变中的至少一项，至少两项，或所有三项(EU编号方式)。在某些实施方案中，该抗FcRH5抗体进一步包含第一重链中的T366W突变和第二重链中的T366S，L368A，和Y407V突变。
在一些实施方案中，CH1l域包含A141I，F170S，S181M，S183A，和V185A突变且CL1域包含F116A，L135V，S174A，S176F，和T178V突变。在某些其它实施方案中，CH11域包含A141I，F170S，S181M，S183A，和V185A突变；CL1域包含F116A，L135V，S174A，S176F，和T178V突变；CH12域包含S183E突变；且CL2域包含V133K突变。
d.Fc区变体
在某些实施方案中，可以将一处或多处氨基酸修饰引入本发明的抗FcRH5抗体(例如本发明的结合FcRH5和第二生物学分子，例如CD3的双特异性抗FcRH5抗体，诸如本发明的TDB抗体或其变体)的Fc区中，由此生成Fc区变体(参见例如美国公开文本No.2012/0251531，通过援引将其完整收入本文)。在某些其它实施方案中，抗FcRH5抗体包含Fc区中的一处或多处修饰以推动抗FcRH5抗体(例如FcRH5TDB)的两个臂(例如抗FcRH5臂和抗CD3臂)的异二聚化。在某些实施方案中，具有一处或多处Fc修饰的抗FcRH5抗体(例如FcRH5TDB)还可以具有VH，VL，CH1，和/或CL域中的一处或多处修饰，如上文描述的。在一些实施方案中，含有Fc，VH，VL，CH1，和/或CL修饰的FcRH5抗体(例如FcRH5TDB)可以通过一细胞抗体生成办法来生成，如本文中描述的。Fc区变体可以包含在一个或多个氨基酸位置包含氨基酸修饰(例如替代)的人Fc区序列(例如，人IgG1，IgG2，IgG3或IgG4Fc区)。
在某些实施方案中，本发明涵盖拥有一些但不是所有效应器功能的抗FcRH5抗体变体，所述效应器功能使其成为如下应用的期望候选物，其中抗体的体内半衰期是重要的，而某些效应器功能(诸如补体和ADCC)是不必要的或有害的。可以进行体外和/或体内细胞毒性测定法以确认CDC和/或ADCC活性的降低/消减。例如，可以进行Fc受体(FcR)结合测定法以确保抗体缺乏FcγR结合(因此有可能缺乏ADCC活性)，但是保留FcRn结合能力。介导ADCC的主要细胞NK细胞仅表达FcγRIII，而单核细胞表达FcγRI，FcγRII和FcγRIII。在Ravetch等，Annu.Rev.Immunol.9：457-492(1991)的第464页上的表3中汇总了造血细胞上的FcR表达。评估感兴趣分子的ADCC活性的体外测定法的非限制性例子记载于美国专利No.5,500,362(见例如Hellstrom等，Proc.Natl Acad.Sci.USA 83：7059-7063(1986))和Hellstrom等，Proc.NatlAcad.Sci.USA 82：1499-1502(1985)；5，821，337(见Bruggemann等，J.Exp.Med.166：1351-1361(1987))。或者，可以采用非放射性测定方法(见例如用于流式细胞术的ACTITM非放射性细胞毒性测定法(CellTechnology，Inc.Mountain View，CA；和CYTOTOX
Figure BDA0001530253770001101
非放射性细胞毒性测定法(Promega，Madison，WI))。对于此类测定法有用的效应细胞包括外周血单个核细胞(PBMC)和天然杀伤(NK)细胞。或者/另外，可以在体内评估感兴趣分子的ADCC活性，例如在动物模型中，诸如披露于Clynes等，Proc.NatlAcad.Sci.USA 95：652-656(1998)的。也可以实施C1q结合测定法以确认抗体不能结合C1q，并且因此缺乏CDC活性。见例如WO 2006/029879和WO 2005/100402中的C1q和C3c结合ELISA。为了评估补体激活，可以实施CDC测定法(见例如Gazzano-Santoro等，J.Immunol.Methods 202：163(1996)；Cragg，M.S.等，Blood 101：1045-1052(2003)；及Cragg，M.S.和M.J.Glennie，Blood103：2738-2743(2004))。也可以使用本领域中已知的方法来实施FcRn结合和体内清除/半衰期测定(见例如Petkova，S.B.等，Int’1.Immunol.18(12)：1759-1769(2006))。
具有降低的效应器功能的抗体包括那些具有Fc区残基238，265，269，270，297，327和329中的一个或多个的替代的(美国专利No.6,737,056和8,219,149)。此类Fc突变体包括在氨基酸位置265，269，270，297和327中的两处或更多处具有替代的Fc突变体，包括残基265和297替代成丙氨酸的所谓的“DANA”Fc突变体(美国专利No.7,332,581和8,219,149)。
在某些实施方案中，该抗体中的野生型人Fc区的位置329处的脯氨酸用甘氨酸或精氨酸或大得足以破坏Fc/Fcγ受体界面内在Fc的脯氨酸329和FcgRIII的色氨酸残基Trp87和Trp 110之间形成的脯氨酸三明治的氨基酸残基替代(Sondermann etal.Nature.406：267-273，2000)。在某些实施方案中，该抗体包含至少一处别的氨基酸替代。在一个实施方案中，该别的氨基酸替代是S228P，E233P，L234A，L235A，L235E，N297A，N297D，或P331S，且仍然在另一个实施方案中，该至少一处别的氨基酸替代是人IgG1Fc区的L234A和L235A或人IgG4Fc区的S228P和L235E(参见例如US 2012/0251531)，且仍然在另一个实施方案中，该至少一处别的氨基酸替代是人IgG1 Fc区的L234A和L235A和P329G。
描述了具有改善的或降低的对FcR的结合的某些抗体变体(见例如美国专利No.6,737,056；WO 2004/056312，及Shields等，J.Biol.Chem.9(2)：6591-6604(2001))。
在某些实施方案中，抗体变体包含具有改善ADCC的一处或多处氨基酸替代，例如Fc区的位置298，333，和/或334(残基的EU编号方式)的替代的Fc区。
在一些实施方案中，对Fc区做出改变，其导致改变的(即，改善的或降低的)C1q结合和/或补体依赖性细胞毒性(CDC)，例如，如记载于美国专利No.6,194,551，WO 99/51642，及Idusogie等，J.Immunol.164：4178-4184(2000)的。
具有延长的半衰期和改善的对新生儿Fc受体(FcRn)的结合的抗体记载于US2005/0014934A1(Hinton等)，新生儿Fc受体(FcRn)负责将母体IgG转移至胎儿(Guyer等，J.Immunol.117：587(1976)及Kim等，J.Immunol.24：249(1994))。那些抗体包含其中具有改善Fc区对FcRn结合的一处或多处替代的Fc区。此类Fc变体包括那些在Fc区残基238，256，265，272，286，303，305，307，311，312，317，340，356，360，362，376，378，380，382，413，424或434中的一处或多处具有替代，例如，Fc区残基434的替代的(美国专利No.7,371,826)。
还可见Duncan等，Nature 322：738-40(1988)；美国专利No.5,648,260；美国专利No.5,624,821；及WO94/29351，其关注Fc区变体的其它例子。
在某些实施方案中，该抗FcRH5抗体包含无糖基化点突变。该无糖基化点突变可以是替代突变。该无糖基化点突变可以将该抗FcRH5抗体的效应器功能与未突变型式相比降低至少1％(例如2％，3％，4％，5％，6％，7％，8％，9％，10％，20％，30％，40％，50％，60％，70％，80％，或90％)或更多。在一些实施方案中，该替代突变在氨基酸残基N297，L234，L235，D265，和/或P329处(EU编号方式)。另外，该替代突变可以选自由N297G，N297A，L234A，L235A，D265A，和P329G组成的组。在某些情况中，该替代突变是N297G突变。
e.节和穴变体
也可以生成抗体的节和穴变体，其中一个或多个(例如1，2，3，4，5，6，7，8，9，或10个)氨基酸残基的氨基酸修饰(例如替代)创建隆起(节)或空腔(穴)。在一些情况中，位于抗体的一条多肽上的隆起可定位于位于抗体的第二多肽上的空腔内，使得抗体的两条组成多肽能在隆起和空腔之间的界面处相遇。节可以通过将一个或多个氨基酸残基用更大尺寸的一个或多个氨基酸残基替代来形成。空腔可以通过将一个或多个氨基酸残基用更小尺寸的一个或多个氨基酸残基替代来形成。可以将隆起或空腔引入抗FcRH5抗体(例如FcRH5TDB)的任一臂(例如抗FcRH5臂或抗CD3臂任一)。节和穴修饰(例如Fc域的)在提高双特异性抗体(例如TDB)的总产量，均质性，和稳定性中特别有用。在一些情况中(例如当隆起-空腔对位于LC/HC界面(例如VH和VL或CL和CH1)上时)，引入节和穴修饰的氨基酸修饰能降低轻链交换。在一些实施方案中，隆起通过将T366W突变引入抗FcRH5抗体的一个臂(例如抗FcRH5臂或抗CD3臂任一)来形成。在一些实施方案中，T366W突变在抗FcRH5臂中。在一些实施方案中，T366W突变在抗CD3臂中。在一些实施方案中，空腔通过将T366W，L368A，和/或Y407V突变引入抗FcRH5抗体的一个臂(例如抗FcRH5臂或抗CD3臂任一)来形成。在一些实施方案中，T366W，L368A，和/或Y407V突变在抗FcRH5臂中。在一些实施方案中，T366W，L368A，和/或Y407V突变在抗CD3臂中。
用于生成多特异性抗体的技术包括但不限于具有不同特异性的两对免疫球蛋白重链-轻链对的重组共表达(见Milstein和Cuello，Nature 305：537(1983))，WO 93/08829，和Traunecker等，EMBO J.10：3655(1991))，和“节-入-穴”工程化(见例如美国专利No.5,731,168)。可以利用多特异性抗体的“节-入-穴”工程化改造来生成含有节的第一臂和含有穴的第二臂，第一臂的节可以结合入第二臂的穴。例如，本发明的TDB抗体可以含有位于其抗CD3臂上的节和位于其肿瘤靶向臂上的穴。或者，本发明的TDB抗体可以含有位于其肿瘤靶向臂上的节和位于其抗CD3臂上的穴。也可以使用免疫球蛋白交叉/交换(也称作Fab域交换或CrossMab型式)技术来工程化改造多特异性抗体(参见例如WO2009/080253；Schaefer等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，108：11187-11192(2011))。也可以通过用于生成抗体Fc-异二聚体分子的工程化静电操纵效应(WO 2009/089004A1)；交联两个或更多个抗体或片段(见例如美国专利No.4,676,980，及Brennan等，Science，229：81(1985))；使用亮氨酸拉链来生成双特异性抗体(见例如Kostelny等，J.Immunol.，148(5)：1547-1553(1992))；使用用于生成双特异性抗体片段的“双抗体”技术(见例如Hollinger等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，90：6444-6448(1993))；及使用单链Fv(sFv)二聚体(见例如Gruber等，J.Immunol.，152：5368(1994))；及如例如Tutt等，J.Immunol.147：60(1991)中所描述的，制备三特异性抗体来生成多特异性抗体。
f.经半胱氨酸工程化改造的抗体变体
在某些实施方案中，可以期望创建经半胱氨酸工程化改造的抗体，例如，“thioMAb”，其中抗体的一个或多个残基用半胱氨酸残基替代。在具体的实施方案中，替代的残基存在于抗体的可接近位点。通过用半胱氨酸替代那些残基，反应性硫醇基团由此定位于抗体的可接近位点，并且可以用于将抗体与其它模块，诸如药物模块或接头-药物模块缀合，以创建免疫缀合物，如本文中进一步描述的。在某些实施方案中，可以用半胱氨酸替代下列残基之任一个或多个：轻链的V205(Kabat编号方式)；重链的A118(EU编号方式)；和重链Fc区的S400(EU编号方式)。可以如例如美国专利No.7,521,541(通过援引将其完整收入本文)所述生成经半胱氨酸工程化改造的抗体。
g.其它抗体衍生物
在某些实施方案中，可以进一步修饰本文中提供的本发明的抗FcRH5抗体(例如本发明的结合FcRH5和第二生物学分子，例如CD3的双特异性抗FcRH5抗体，诸如本发明的TDB抗体或其变体)以含有本领域知道的且易于获得的额外非蛋白质性质模块。适合于抗体衍生化的模块包括但不限于水溶性聚合物。水溶性聚合物的非限制性例子包括但不限于聚乙二醇(PEG)，乙二醇/丙二醇共聚物，羧甲基纤维素，右旋糖苷，聚乙烯醇，聚乙烯吡咯烷酮，聚-1，3-二氧戊环，聚-1，3，6-三
Figure BDA0001530253770001131
烷，乙烯/马来酸酐共聚物，聚氨基酸(均聚物或随机共聚物)，和右旋糖苷或聚(n-乙烯吡咯烷酮)聚乙二醇，丙二醇均聚物，环氧丙烷/环氧乙烷共聚物，聚氧乙烯化多元醇(例如甘油)，聚乙烯醇及其混合物。由于其在水中的稳定性，聚乙二醇丙醛在生产中可能具有优势。聚合物可以是任何分子量，而且可以是分支的或不分支的。附着到抗体上的聚合物数目可以变化，而且如果附着了超过一个聚合物，那么它们可以是相同或不同的分子。一般而言，可根据下列考虑来确定用于衍生化的聚合物的数目和/或类型，包括但不限于抗体要改进的具体特性或功能，抗体衍生物是否将用于指定条件下的治疗等。
在另一个实施方案中，提供了抗体和可以通过暴露于辐射选择性加热的非蛋白质性质模块的缀合物。在一个实施方案中，非蛋白质性质模块是碳纳米管(Kam等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 102：11600-11605(2005))。辐射可以是任何波长的，并且包括但不限于对普通细胞没有损害，但是将非蛋白质性质模块加热至抗体-非蛋白质性质模块附近的细胞被杀死的温度的波长。
B.重组方法和组合物
可以使用重组方法和组合物来生成本发明的抗FcRH5抗体(例如本发明的结合FcRH5和第二生物学分子，例如CD3的双特异性抗FcRH5抗体，诸如本发明的TDB抗体或其变体)，例如，如记载于美国专利No.4,816,567的。在一个实施方案中，提供了编码本文中所描述的抗FcRH5抗体的分离的核酸。在一个实施方案中，宿主细胞是真核的，例如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。在一个实施方案中，该宿主细胞是原核的，例如大肠杆菌细胞。在一个实施方案中，提供了生成抗FcRH5抗体的方法，其中该方法包括在适合于表达抗体的条件下培养包含编码抗体的核酸的宿主细胞，如上文提供的，并且任选地，自宿主细胞(或宿主细胞培养液)回收抗体。在另一个实施方案中，该方法进一步包括培养包含第二核酸的第二宿主细胞，该第二核酸编码包含结合CD3的结合域的抗CD3抗体。在一些实施方案中，共培养该宿主细胞。在又一个实施方案中，包括自该宿主细胞或该培养基回收该双特异性抗FcRH5抗体。在一些实施方案中，该抗FcRH5和抗CD3抗体在同一宿主细胞中生成(例如一细胞办法)。在一些实施方案中，该抗FcRH5和抗CD3抗体在分开的宿主细胞中生成(例如两细胞办法)。
在一细胞和两细胞办法中，将编码FcRH5TDB(例如FcRH5半抗体和CD3半抗体)的一种或多种质粒导入一种或多种宿主细胞进行培养和TDB表达。在一种情况中，单一质粒可以编码FcRH5半抗体和CD3半抗体二者。或者，可以由分开的质粒编码半抗体。在另一种情况中，在第一质粒上编码每一种半抗体的重链，而在第二质粒上编码每一种半抗体的轻链。在一细胞办法中，在单一宿主中生成FcRH5TDB。在两细胞办法中，通过在分开的宿主中表达半抗体来生成FcRH5TDB(例如分开培养同一宿主细胞，或分开培养不同宿主细胞)。在两细胞办法中，可以在相同容器中或在不同容器中培养两种宿主。可以在裂解和纯化FcRH5TDB之前组合两种宿主培养物，或者可以分开纯化两种半抗体。
在一些实施方案中，使用一细胞办法生成经过修饰以包括不对称修饰(例如上文所述VH，VL，CH1，CL和/或Fc域突变)的本发明的抗FcRH5抗体(例如本发明的结合FcRH5和第二生物学分子，例如CD3的双特异性抗FcRH5抗体，诸如本发明的FcRH5TDB抗体)，其导致与未经修饰以包括该不对称修饰的抗FcRH5抗体相比改善的正确重链/轻链配对和/或改善的抗FcRH5抗体产量。
适合于克隆或表达抗体编码载体的宿主细胞包括本文中所描述的原核或真核细胞。例如，可以在细菌中生成抗体，特别是在不需要糖基化和Fc效应器功能时。对于抗体片段和多肽在细菌中的表达，见例如美国专利No.5,648,237，5,789,199和5,840,523(见例如Charlton，Methods in Molecular Biology,第248卷(B.K.C.Lo编，Humana Press，Totowa，NJ，2003)，第245-254页，其描述了抗体片段在大肠杆菌(E.coli.)中的表达)。表达后，可以将抗体在可溶性级分中自细菌细胞团糊分离，并可以进一步纯化。
在原核生物外，真核微生物诸如丝状真菌或酵母是适合于抗体编码载体的克隆或表达宿主，包括其糖基化途径已经“人源化”，导致生成具有部分或完全人的糖基化样式的抗体的真菌和酵母菌株。见Gerngross，Nat.Biotech.22：1409-1414(2004)，及Li等，Nat.Biotech.24：210-215(2006)。
适合于表达糖基化抗体的宿主细胞也自多细胞生物体(无脊椎动物和脊椎动物)衍生。无脊椎动物细胞的例子包括植物和昆虫细胞。已经鉴定出许多杆状病毒株，其可以与昆虫细胞一起使用，特别是用于转染草地夜蛾(Spodoptera frugiperda)细胞。
也可以利用植物细胞培养物作为宿主。见例如美国专利No.5,959,177，6,040,498，6,420,548，7,125,978和6,417,429(其描述了用于在转基因植物中生成抗体的PLANTIBODIESTM技术)。
也可以使用脊椎动物细胞作为宿主。例如，适合于在悬浮液中生长的哺乳动物细胞系可以是有用的。有用的哺乳动物宿主细胞系的其它例子是经SV40转化的猴肾CV1系(COS-7)；人胚肾系(293或293细胞，如记载于例如Graham等，J.Gen Virol.36：59(1977)的)；幼年仓鼠肾细胞(BHK)；小鼠塞托利(sertoli)细胞(TM4细胞，如记载于例如Mather,Biol.Reprod.23：243-251(1980)的)；猴肾细胞(CV1)；非洲绿猴肾细胞(VERO-76)；人宫颈癌细胞(HELA)；犬肾细胞(MDCK；牛鼠(buffalo rat)肝细胞(BRL 3A)；人肺细胞(W138)；人肝细胞(Hep G2)；小鼠乳房肿瘤(MMT 060562)；TRI细胞，如记载于例如Mather等，AnnalsN.Y.Acad.Sci.383：44-68(1982)的；MRC 5细胞；和FS4细胞。其它有用的哺乳动物宿主细胞系包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，包括DHFR-CHO细胞(Urlaub等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA77：4216(1980))；和骨髓瘤细胞系诸如Y0，NS0和Sp2/0。关于适合于抗体生成的某些哺乳动物宿主细胞系的综述，见例如Yazaki等，Methods in Molecular Biology，248：255-268(2003)。
C.测定法
可以通过本领域中已知的多种测定法对本发明的抗FcRH5抗体(例如本发明的结合FcRH5和第二生物学分子，例如CD3的双特异性抗FcRH5抗体，诸如本发明的TDB抗体或其变体)鉴定，筛选，或表征其物理/化学特性和/或生物学活性。
1.结合测定法和其它测定法
一方面，对本发明的抗FcRH5抗体测试其抗原结合活性，例如通过已知的方法诸如ELISA，Westem印迹，等来进行。
另一方面，可使用竞争测定法来鉴定与本发明的抗FcRH5抗体竞争对FcRH5的结合的抗体。
在一种例示性竞争测定法中，在包含第一经标记抗体(其结合FcRH5)和第二未标记抗体(其要测试与第一抗体竞争对FcRH5的结合的能力)的溶液中温育固定化FcRH5。第二抗体可存在于杂交瘤上清液中。作为对照，在包含第一经标记抗体但不包含第二未标记抗体的溶液中温育固定化FcRH5。在允许第一抗体结合FcRH5的条件下温育后，除去过量的未结合抗体，并测量与固定化FcRH5联合的标记物的量。如果测试样品中与固定化FcRH5联合的标记物的量与对照样品相比实质性降低，那么这指示第二抗体与第一抗体竞争对FcRH5的结合。参见例如Harlow and Lane(1988)Antibodies：A Laboratory Manual Ch.14(ColdSpring Harbor Laboratory,Cold Spring Harbor,NY)。
2.活性测定法
一方面，提供用于鉴定具有生物学活性的抗FcRH5抗体的测定法。生物学活性可以包括例如在体内，在体外，或离体结合FcRH5，或其肽片段。在本发明的多特异性(例如双特异性)抗FcRH5抗体(例如具有一个抗FcRH5臂和一个识别第二生物学分子，例如CD3的臂的TDB抗体)的情况中，生物学活性还可以包括例如效应细胞激活(例如T细胞(例如CD8+和/或CD4+T细胞)激活)，效应细胞群体扩充(即T细胞计数增多)，靶细胞群体减少(即在其细胞表面上表达第二生物学分子的细胞的群体减少)，和/或靶细胞杀伤。提供了在体内和/或在体外具有此类生物学活性的抗体。在某些实施方案中，对本发明的抗体测试此类生物学活性，如本文中下文实施例中详细描述的。
在一些实施方案中，该抗FcRH5抗体(例如FcRH5TDB)活性包含支持B细胞杀伤和/或细胞毒性T细胞激活的能力。在某些实施方案中，通过本文，特别是实施例中描述的任何方法对本发明的FcRH5TDB抗体测试此类B细胞杀伤和/或T细胞细胞毒性效应激活生物学活性。在这些活性测定法任一的一些实施方案中，可以通过Ficoll分离自健康供体的全血分离PBMC。特别是，可以在肝素化注射器中收集人血液，并使用Leucosep和Ficoll PaquePlus分离PBMC。在需要时可以依照制造商的说明书用Miltenyi试剂盒分离CD4+T和CD8+T细胞。
进一步地，可以在含有10％FBS，补充有GlutaMax，青霉素和链霉素的RPMI培养基中清洗细胞，并将约0.2x106个悬浮细胞添加至96孔U底板。在增湿标准细胞培养温箱中在补充有10％FBS的RPMI1640中于37℃培养细胞。对于BJAB细胞杀伤测定法，可以以遵照测定法的指定比率将20,000个BJAB细胞与效应细胞(huPBMC或经过纯化的T细胞任一)一起在多种浓度的TDB抗体存在下温育24小时。对于内源B细胞杀伤测定法，可以将200,000个huPBMC与多种浓度的TDB抗体一起温育24小时。
培养后，可以用FACS缓冲液(0.5％BSA，0.05％叠氮化钠，PBS中)清洗细胞。然后可以在FACS缓冲液中对细胞染色，用FACS缓冲液清洗，并在100ul含有1ug/ml碘化丙啶的FACS缓冲液中悬浮。可以在FACSCalibur流式细胞仪上收集数据，并使用FlowJo分析。可以通过FACS作为PI阴性CD19+或PI阴性CD20+B细胞设门来选出活的B细胞，并可以用添加至反应混合物的FITC珠获得绝对细胞计数，作为内部计数对照。可以基于非TDB处理对照计算百分比(％)细胞杀伤。可以使用抗CD69-FITC和抗CD25-PE通过CD69和CD25表面表达检测激活的T细胞。
D.免疫缀合物
本发明还提供了包含与一种或多种细胞毒剂，诸如化疗剂或药物，生长抑制剂，毒素(例如蛋白质毒素，细菌，真菌，植物或动物起源的酶活性毒素，或其片段)，或放射性同位素缀合的本文中所描述的抗FcRH5抗体(例如抗FcRH5多特异性抗体，例如FcRH5TDB)的免疫缀合物。
在一个实施方案中，免疫缀合物是抗体-药物缀合物(ADC)，其中抗体与一种或多种药物缀合，包括但不限于美登木素生物碱(见美国专利No.5,208,020，5,416,064和欧洲专利EP 0 425 235 B1)；auristatin诸如单甲基auristatin药物模块DE和DF(MMAE和MMAF)(见美国专利No.5,635,483和5,780,588及7,498,298)；多拉司他汀(dolastatin)；加利车霉素(calicheamicin)或其衍生物(见美国专利No.5,712,374，5,714,586，5,739,116，5,767,285，5,770,701，5,770,710，5,773,001和5,877,296；Hinman等，Cancer Res.53：3336-3342(1993)；及Lode等，Cancer Res.58：2925-2928(1998))；蒽环类抗生素诸如道诺霉素(daunomycin)或多柔比星(doxorubicin)(见Kratz等，Current Med.Chem.13：477-523(2006)；Jeffrey等，Bioorganic&Med.Chem.Letters 16：358-362(2006)；Torgov等，Bioconj.Chem.16：717-721(2005)；Nagy等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 97：829-834(2000)；Dubowchik等，Bioorg.&Med.Chem.Letters 12：1529-1532(2002)；King等，J.Med.Chem.45：4336-4343(2002)；及美国专利No.6,630,579)；甲氨蝶呤；长春地辛(vindesine)；紫杉烷(taxane)诸如多西他赛(docetaxel)，帕利他赛，larotaxel，tesetaxel，和ortataxel；单端孢霉素(trichothecene)；和CC1065。
在另一个实施方案中，免疫缀合物包含与酶活性毒素或其片段缀合的如本文中所描述的抗FcRH5抗体(例如抗FcRH5多特异性抗体，例如FcRH5TDB)，所述酶活性毒素包括但不限于白喉A链，白喉毒素的非结合活性片段，外毒素A链(来自铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa))，蓖麻毒蛋白(ricin)A链，相思豆毒蛋白(abrin)A链，蒴莲根毒蛋白(modeccin)A链，α-帚曲霉素(sarcin)，油桐(Aleurites fordii)毒蛋白，香石竹(dianthin)毒蛋白，美洲商陆(Phytolaca americana)蛋白(PAPI，PAPII和PAP-S)，苦瓜(Momordica charantia)抑制物，麻疯树毒蛋白(curcin)，巴豆毒蛋白(crotin)，肥皂草(sapaonaria officinalis)抑制剂，白树毒蛋白(gelonin)，丝林霉素(mitogellin)，局限曲菌素(restrictocin)，酚霉素(phenomycin)，依诺霉素(enomycin)和单端孢菌素(tricothecenes)。
在另一个实施方案中，免疫缀合物包含与放射性原子缀合以形成放射性缀合物的如本文中所描述的抗FcRH5抗体(例如抗FcRH5多特异性抗体，例如FcRH5TDB)。多种放射性同位素可用于生成放射性缀合物。例子包括At211，I131，I125，Y90，Re186，Re188，Sm153，Bi212，P32，Pb212和Lu的放射性同位素。在使用放射性缀合物进行检测时，它可以包含供闪烁法研究用的放射性原子，例如tc99m或I123，或供核磁共振(NMR)成像(又称为磁共振成像，mri)用的自旋标记物，诸如再一次的碘-123，碘-131，铟-111，氟-19，碳-13，氮-15，氧-17，钆，锰或铁。
可以使用多种双功能蛋白质偶联剂来生成抗体和细胞毒剂的缀合物，诸如N-琥珀酰亚氨基3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯(SPDP)，琥珀酰亚氨基-4-(N-马来酰亚氨基甲基)环己烷-1-羧酸酯(SMCC)，亚氨基硫烷(IT)，亚氨酸酯(诸如盐酸己二酰亚氨酸二甲酯)，活性酯类(诸如辛二酸二琥珀酰亚氨基酯)，醛类(诸如戊二醛)，双叠氮化合物(诸如双(对-叠氮苯甲酰基)己二胺)，双重氮衍生物(诸如双(对-重氮苯甲酰基)-乙二胺)，二异硫氰酸酯(诸如甲苯2，6-二异氰酸酯)，和双活性氟化合物(诸如1，5-二氟-2，4-二硝基苯)的双功能衍生物。例如，可以如Vitetta等，Science238：1098(1987)中所述制备蓖麻毒蛋白免疫毒素。碳-14标记的1-异硫氰酸苄基-3-甲基二亚乙基三胺五乙酸(MX-DTPA)是用于将放射性核苷酸与抗体缀合的例示性螯合剂。参见WO94/11026。接头可以是便于在细胞中释放细胞毒性药物的“可切割接头”。例如，可使用酸不稳定接头，肽酶敏感性接头，光不稳定接头，二甲基接头或含二硫化物接头(Chari等，Cancer Res 52：127-131(1992)；美国专利No.5,208,020)。
本文中的免疫缀合物或ADC明确涵盖，但不限于用交联试剂制备的此类缀合物，所述交联试剂包括但不限于BMPS，EMCS，GMBS，HBVS，LC-SMCC，MBS，MPBH，SBAP，SIA，SIAB，SMCC，SMPB，SMPH，sulfo-EMCS，sulfo-GMBS，sulfo-KMUS，sulfo-MBS，sulfo-SIAB，sulfo-SMCC，和sulfo-SMPB，及SVSB(琥珀酰亚氨基-(4-乙烯基砜)苯甲酸酯)，它们是商品化的(例如，来自Pierce Biotechnology，Inc.，Rockford，IL.，U.S.A)。
E.药物配制剂
通过混合具有期望纯度的此类抗体与一种或多种任选的药学可接受载剂，缓冲剂，稳定剂，和/或防腐剂(Remington’s Pharmaceutical Sciences第16版，Osol，A.编(1980))以冻干配制剂或水性溶液形式制备本发明的抗FcRH5抗体(例如本发明的结合FcRH5和第二生物学分子，例如CD3的双特异性抗FcRH5抗体，例如FcRH5TDB)的药物配制剂。一般地，药学可接受载剂在所采用的剂量和浓度对接受者是无毒的，而且包括但不限于缓冲剂，诸如磷酸盐，柠檬酸盐，和其它有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(诸如氯化十八烷基二甲基苄基铵；氯化己烷双胺；苯扎氯铵，苄索氯铵；酚，丁醇或苯甲醇；对羟基苯甲酸烃基酯，诸如对羟基苯甲酸甲酯或丙酯；邻苯二酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，诸如血清清蛋白，明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，诸如甘氨酸，谷氨酰胺，天冬酰胺，组氨酸，精氨酸或赖氨酸；单糖，二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖，甘露糖或糊精；螯合剂，诸如EDTA；糖类，诸如蔗糖，甘露醇，海藻糖或山梨醇；成盐相反离子，诸如钠；金属复合物(例如Zn-蛋白质复合物)；和/或非离子表面活性剂，诸如聚乙二醇(PEG)。本文中的例示性的药学可接受载剂进一步包含间质药物分散剂诸如可溶性中性活性透明质酸酶糖蛋白(sHASEGP)，例如人可溶性PH-20透明质酸酶糖蛋白，诸如rHuPH20(
Figure BDA0001530253770001201
BaxterInternational，Inc.)。某些例示性的sHASEGP和使用方法，包括rHuPH20记载于美国专利公开文本No.2005/0260186和2006/0104968。在一方面，将sHASEGP与一种或多种别的糖胺聚糖酶诸如软骨素酶组合。
例示性的冻干抗体配制剂记载于美国专利No.6,267,958。水性抗体配制剂包括那些记载于美国专利No.6,171,586和WO2006/044908的，后一种配制剂包含组氨酸-乙酸盐缓冲液。
本文中的配制剂还可含有超过一种所治疗具体适应症所必需的活性组分，优选活性互补且彼此没有不利影响的。例如，可能期望进一步提供另外的治疗剂(例如化疗剂，细胞毒剂，生长抑制剂，和/或抗激素剂，诸如本文中上文描述的那些)。合适的是，此类活性组分以对于预定目的有效的量组合存在。
活性组分可包载于例如通过凝聚技术或通过界面聚合制备的微胶囊中(例如分别是羟甲基纤维素或明胶微胶囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊)，在胶状药物投递系统中(例如脂质体，清蛋白微球体，微乳剂，纳米颗粒和纳米胶囊)，或在粗滴乳状液中。此类技术披露于Remington′s Pharmaceutical Sciences，第16版，Osol，A.编(1980)。
在一些情况中，该组合物可以包含PD-1轴结合拮抗剂和/或另外的治疗剂。例如，该PD-1轴结合拮抗剂可以选自由MPDL3280A(atezolizumab)，YW243.55.S70，MDX-1105，MEDI473(durvalumab)，和MSB0010718C(avelumab)，MDX 1106(nivolumab)，MK-3475(pembrolizumab)，CT-011(pidilizumab)，MEDI-0680(AMP-514)，PDR001，REGN2810，和BGB-108组成的组。另外，包含本发明的抗FcRH5抗体(例如FcRH5TDB)的组合物可以包含类固醇，免疫调控剂(IMiD)，蛋白酶体抑制剂(PI)，或其组合。
可以制备持续释放制剂。持续释放制剂的合适的例子包括含有抗体的固体疏水性聚合物的半透性基质，该基质为成形商品形式，例如膜，或微胶囊。
用于体内施用的配制剂一般是无菌的。无菌性可容易地实现，例如通过穿过无菌滤膜过滤。
F.治疗方法和钮合物
可以在治疗方法中使用本发明的任何抗FcRH5抗体(例如本发明的结合FcRH5和第二生物学分子，例如CD3的双特异性抗FcRH5抗体，例如FcRH5TDB)。
一方面，提供了抗FcRH5抗体，其用于作为药物使用。在又一些方面，提供了抗FcRH5抗体，其用于在个体中治疗细胞增殖性病症(例如癌症，例如FcRH5阳性癌症，例如多发性骨髓瘤(MM))或延迟其进展和/或增强免疫功能中使用。在某些实施方案中，提供了抗FcRH5抗体，其用于在治疗方法中使用。在某些实施方案中，本发明提供抗FcRH5抗体，其用于在治疗具有细胞增殖性病症(例如癌症，例如FcRH5阳性癌症，例如MM)的个体的方法中使用，包括对该个体施用有效量的该抗FcRH5抗体。在一个此类实施方案中，该方法进一步包括对该个体施用有效量的至少一种另外的治疗剂，例如如下文描述的。
在又一个实施方案中，本发明提供抗FcRH5抗体，其用于在在具有细胞增殖性病症，诸如FcRH5阳性癌症(例如MM)的个体中增强免疫功能中使用。在某些实施方案中，本发明提供抗FcRH5抗体，其用于在在具有细胞增殖性病症的个体中增强免疫功能的方法中使用，包括对该个体施用有效量的该抗FcRH5抗体以激活个体中能够对靶细胞(例如表达受到本发明的抗FcRH5抗体，诸如本发明的FcRH5TDB抗体识别的第二生物学分子的细胞)发挥细胞毒性和/或凋亡效应的效应细胞(例如T细胞，例如CD8+和/或CD4+T细胞)。该抗FcRH5抗体可以结合位于靶细胞上的FcRH5分子和位于免疫效应细胞上的CD3分子二者。该靶细胞可以是浆细胞，诸如长或短命浆细胞。另外，该靶细胞可以是骨髓瘤细胞。依照上述实施方案任一的“个体”可以为人。
又一方面，本发明提供抗FcRH5抗体在制造或制备药物中的用途。在一个实施方案中，该药物用于治疗细胞增殖性病症(例如癌症，例如FcRH5阳性癌症，例如MM)。在又一个实施方案中，该药物用于治疗细胞增殖性病症的方法，包括对具有细胞增殖性病症的个体施用有效量的该药物。在一个此类实施方案中，该方法进一步包括对该个体施用有效量的至少一种另外的治疗剂，例如如下文描述的。
在又一个实施方案中，该药物用于在该个体中激活能够对靶细胞(例如表达受到本发明的抗FcRH5抗体，诸如本发明的FcRH5TDB抗体识别的第二生物学分子的细胞)发挥细胞毒性和/或凋亡效应的效应细胞(例如T细胞，例如CD8+和/或CD4+T细胞)。在又一个实施方案中，该药物用于在具有细胞增殖性病症的个体中增强免疫功能的方法，包括对该个体施用有效量的该药物以激活效应细胞(例如T细胞，例如CD8+和/或CD4+T细胞)，扩充(增加)效应细胞群体，减少靶细胞(例如表达受到本发明的抗FcRH5抗体，诸如本发明的FcRH5TDB抗体识别的第二生物学分子的细胞)群体，和/或杀伤靶细胞(例如靶肿瘤细胞)。依照上述实施方案任一的“个体”可以为人。
又一方面，本发明提供一种用于治疗细胞增殖性病症(例如癌症)的方法。该FcRH5阳性癌症可以是B细胞癌症。在一些情况中，该B细胞癌症可以是多发性骨髓瘤(MM)，慢性淋巴样白血病(CLL)，套细胞淋巴瘤(MCL)，弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)，和/或滤泡性淋巴瘤(FL)。在特定情况中，该B细胞癌症是MM。在其它情况中，该FcRH5阳性癌症是B细胞癌症。在一个实施方案中，该方法包括对具有此类细胞增殖性病症(例如癌症，例如FcRH5阳性癌症，例如多发性骨髓瘤(MM))的个体施用有效量的抗FcRH5抗体。在一个此类实施方案中，该方法进一步包括对该个体施用有效量的至少一种另外的治疗剂，例如如下文描述的。依照上述实施方案任一的“个体”可以为人。
可以在疗法中单独或与其它药剂组合使用本发明的抗体。例如，可以与至少一种另外的治疗剂共施用本发明的抗体。在某些实施方案中，另外的治疗剂是PD-1轴结合拮抗剂，诸如MPDL3280A(atezolizumab)，YW243.55.S70，MDX-1105，MEDI473(durvalumab)，和MSB0010718C(avelumab)，MDX 1106(nivolumab)，MK-3475(pembrolizumab)，CT-011(pidilizumab)，MEDI-0680(AMP-514)，PDR001，REGN2810，和/或BGB-108。另外，还可以对受试者施用类固醇，免疫调控剂(IMiD)，蛋白酶体抑制剂(PI)，或其组合。在一个实施方案中，该糖皮质激素是地塞米松。在一些实施方案中，该IMiD是来那度胺。在一些实施方案中，该PI是硼替佐米。
上文记录的此类组合疗法涵盖组合施用(其中两种或更多种治疗剂包含在同一配制剂或分开的配制剂中)，和分开施用，在该情况中，可以在施用一种或多种另外的治疗剂之前，同时，和/或之后发生本发明的抗体的施用。在一个实施方案中，抗FcRH5抗体的施用和另外的治疗剂的施用彼此在约1个月内，或在约1，2或3周内，或在约1，2，3，4，5，或6天内发生。
可以通过任何合适的手段(包括静脉内，皮下，肌肉内，表面，口服，经皮，腹膜内，眶内，通过植入，通过吸入，鞘内，室内，或鼻内)来施用本发明抗体(和/或任何另外的治疗剂)。部分根据施用是短暂的还是长期的，剂量给药可以通过任何合适的路径(例如通过注射，诸如静脉内或皮下注射)来进行。本文中涵盖各种剂量给药日程表，包括但不限于单次施用或在多个时间点里的多次施用，推注施用，和脉冲输注。
本发明抗体会以一种符合优秀的医学实践的方式配制，定剂量和施用。在此背景中考虑的因素包括所治疗的特定病症，所治疗的特定哺乳动物，患者个体的临床状况，病症的起因，药剂投递部位，施用方法，施用日程表及医学从业人员知道的其它因素。抗体无需但任选与一种或多种目前用于预防或治疗所讨论病症的药剂一起配制。此类其它药物的有效量取决于配制剂中存在的抗体的量，病症或治疗的类型，及上文所述其它因素。这些通常以本文所述相同的剂量和施用途径使用，或以约1-99％的本文所述剂量使用，或以凭经验/临床上确定为适宜的任何剂量和任何途径使用。
为了预防或治疗疾病(例如增殖性细胞病症，例如癌症，例如FcRH5阳性癌症，例如MM)，本发明抗体(当单独或与一种或多种其它别的治疗剂组合使用时)的适宜剂量会取决于要治疗的疾病的类型，抗体的类型，疾病的严重性和病程，施用抗体是预防还是治疗目的，之前的疗法，患者的临床史和对抗体的响应，及主治医师的斟酌。抗体适合于在一次或一系列的治疗中施用于患者。
作为一般建议，施用于人的抗FcRH5抗体的治疗有效量会在约0.01至约100mg/kg患者体重的范围中，无论是通过一次或多次施用。在一些实施方案中，所使用的抗体为例如每天施用约0.01至约55mg/kg，约0.01至50mg/kg，约0.01至约45mg/kg，约0.01至约40mg/kg，约0.01至约35mg/kg，约0.01至约30mg/kg，约0.01至约25mg/kg，约0.01至约20mg/kg，约0.01至约15mg/kg，约0.01至约10mg/kg，约0.01至约5mg/kg，或约0.01至约1mg/kg。在一个实施方案中，在21天周期的第1天以约100mg，约200mg，约300mg，约400mg，约500mg，约600mg，约700mg，约800mg，约900mg，约1000mg，约1100mg，约1200mg，约1300mg或约1400mg的剂量将本文中描述的抗FcRH5抗体施用于人。该剂量可以作为单剂或作为多剂(例如2或3剂)施用，诸如输注。对于几天或更长时间上的重复施用，根据状况，治疗通常会持续直至疾病症状发生期望的阻抑。抗体的一种例示性剂量会在约0.05mg/kg至约10mg/kg的范围中。如此，可以将一剂或多剂约0.5mg/kg，2.0mg/kg，4.0mg/kg，或10mg/kg(或其任意组合)施用于患者。在一些实施方案中，以约0.01mg/kg/wk至约10mg/kg/wk的剂量施用该抗FcRH5抗体。在其它实施方案中，以0.1mg/kg/wk至约10mg/kg/wk的剂量施用该抗FcRH5抗体。在其它实施方案中，以约1mg/kg/wk的剂量施用抗FcRH5抗体。
此类剂量可间歇施用，例如每周或每三周(例如使得患者接受约2至约20剂，或例如约6剂抗FcRH5抗体)。可以施用较高的初始加载剂，接着是较低的一或多剂。此疗法的进展易于通过常规技术和测定法来监测。
在一些实施方案中，所述方法可以进一步包括另外的疗法。所述另外的疗法可以为放射疗法，手术，化学疗法，基因疗法，DNA疗法，病毒疗法，RNA疗法，免疫疗法，骨髓移植，纳米疗法(nanotherapy)，单克隆抗体疗法，或前述疗法的组合。所述另外的疗法可以为辅助或新辅助疗法的形式。在一些实施方案中，所述另外的疗法为施用小分子酶抑制剂或抗转移剂。在一些实施方案中，所述另外的疗法为施用副作用限制剂(例如意图减轻治疗副作用的发生和/或严重性的药剂，诸如抗恶心剂等)。在一些实施方案中，所述另外的疗法为放射疗法。在一些实施方案中，所述另外的疗法为手术。在一些实施方案中，所述另外的疗法为放射疗法和手术的组合。在一些实施方案中，所述另外的疗法为γ照射。在一些实施方案中，所述另外的疗法可以为分开施用一种或多种上文所述治疗剂。
G.用于诊断和检测的方法和组合物
在某些实施方案中，本发明的任何抗FcRH5抗体可用于检测生物学样品中FcRH5的存在。如本文中使用的，术语“检测”涵盖定量或定性检测。在某些实施方案中，生物学样品包括细胞或组织。
在一个实施方案中，提供了在诊断或检测方法中使用的抗FcRH5抗体。在又一方面，提供了检测生物学样品中天然发生FcRH5的存在的方法。在某些实施方案中，该方法包括在容许抗FcRH5抗体结合天然发生FcRH5的条件下使生物学样品与本文中描述的抗FcRH5抗体接触，并检测是否在抗FcRH5抗体与天然发生FcRH5间形成复合物。此类方法可以是体外或体内方法。在一些情况中，该生物学样品是血液样品。在一些情况中，该受试者是人。
在某些实施方案中，提供了经标记的抗FcRH5抗体。标记物包括但不限于直接检测的标记物或模块(诸如荧光，发色，电子致密，化学发光，和放射性标记物)，及例如经由酶反应或分子相互作用间接检测的模块，诸如酶或配体。例示性的标记物包括但不限于放射性同位素32P，14C，125I，3H，和131I，荧光团诸如稀土螯合物或荧光素及其衍生物，罗丹明(rhodamine)及其衍生物，丹酰，伞形酮，萤光素酶，例如，萤火虫萤光素酶和细菌萤光素酶(美国专利No.4,737,456)，萤光素，2，3-二氢酞嗪二酮，辣根过氧化物酶(HRP)，碱性磷酸酶，β-半乳糖苷酶，葡糖淀粉酶，溶菌酶，糖类氧化酶，例如，葡萄糖氧化酶，半乳糖氧化酶，和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶，杂环氧化酶诸如尿酸酶和黄嘌呤氧化酶(其与采用过氧化氢氧化染料前体的酶诸如HRP偶联)，乳过氧化物酶，或微过氧化物酶，生物素/亲合素，自旋标记物，噬菌体标记物，稳定的自由基，等等。
H.制品
在另一个方面，本发明特征在于一种制品，其含有可用于在受试者(例如人)中治疗，预防和/或诊断细胞增殖性病症(例如癌症，例如FcRH5阳性癌症，例如多发性骨髓瘤(MM))的材料。制品包含容器和容器上或与容器联合的标签或包装插页。合适的容器包括例如瓶，管形瓶，注射器，IV溶液袋，等。容器可以自多种材料诸如玻璃或塑料形成。容器容纳单独或与另一种组合物组合有效治疗，预防和/或诊断状况的组合物，并且可以具有无菌存取口(例如，容器可以是具有由皮下注射针可刺穿的塞子的管形瓶或静脉内溶液袋)。组合物中的至少一种活性剂是本发明的抗体。标签或包装插页指示使用组合物来治疗选择的状况。此外，制品可以包含(a)其中装有组合物的第一容器，其中组合物包含本发明的抗体；和(b)其中装有组合物的第二容器，其中组合物包含别的细胞毒性或其它方面治疗性的药剂。本发明的此实施方案中的制品可以进一步包含包装插页，其指示可以使用组合物来治疗特定的状况。或者/另外，制品可以进一步包含第二(或第三)容器，其包含药学可接受缓冲液，诸如抑菌性注射用水(BWFI)，磷酸盐缓冲盐水，Ringer氏溶液和右旋糖溶液。它可以进一步包含从商业和用户观点看期望的其它材料，包括其它缓冲剂，稀释剂，滤器，针，和注射器。在一些情况中，该试剂盒包括包含关于使用该抗体在受试者中治疗FcRH5阳性癌症(例如MM)或延迟其进展的说明书的包装插页。在其它情况中，该试剂盒包括包含关于使用该抗体在具有FcRH5阳性癌症(例如MM)的受试者中增强免疫功能的说明书的包装插页。
III.实施例
下面是本发明的方法和组合物的实施例。理解的是，鉴于上文提供的一般性描述，可以实施各种其它实施方案。
实施例1：抗FcRH5抗体的生成
免疫接种和筛选
给BALB/c小鼠(Charles River，Hollister，CA)免疫接种2μg，10μg，或100μg/注射每只小鼠。在单磷酰基脂质A(MPL)/海藻糖二棒分枝菌酸酯(TDM)(Ribi)佐剂或弗氏佐剂中悬浮抗原并注射入每一只免疫接种动物的足垫，腹膜，或尾的基部。小鼠接受总共9-18剂和融合前2-4天经足垫，腹膜内(IP)，和/或后踝路径单独的PBS中的1-2次融合前加强。美国公开文本No.2015/0098900中描述的免疫接种活动A产生亲本抗FcRH5抗体1G7，其在本文中优化和进一步表征。
A.免疫接种活动B
为了生成针对FcRH5的近膜Ig域的同等型特异性抗体，给小鼠免疫接种在CHO细胞中表达的具有N端His表达标签的E11蛋白质(SEQ ID NO：114的氨基酸745-850)。经IP路径给5只小鼠免疫接种Ribi佐剂中的10μg带His标签的E11蛋白质。小鼠接受18剂，接着是融合前7和4天2次经IP路径单独的PBS中的融合前加强。18剂重组E11蛋白质之后，使用FACS和通过使用E11作为抗原的ELISA中的滴定对血清分析FcRH5结合抗体。检测到针对表达全长人FcRH5，全长食蟹猴FcRH5，或E11蛋白质的SVT2细胞，而非载体转染的SVT2细胞的显著反应性，指示所有5只免疫接种小鼠的血清中存在FcRH5结合性抗体。20剂后，来自免疫接种小鼠的淋巴细胞与P3X63Ag8U.1.22小鼠骨髓瘤细胞电融合。
通过ELISA对克隆测试对重组人和食蟹猴E11蛋白质的结合。对在ELISA中对人和食蟹猴FcRH5二者呈交叉反应性的8个克隆通过FACS测试对表达全长人FcRH5，全长食蟹猴FcRH5，或E11蛋白质的SVT2细胞的结合。所有8个克隆结合表达人E11域，跨膜域，和胞质域的SVT2细胞。
为了测试对内源表达FcRH5或经FcRH5转染的癌细胞的结合，使用EDTA/PBS浮起细胞，在100μl中悬浮1x105个细胞并与一抗一起温育(1份体积的非IgG定量亚克隆上清液，4μg/ml IgG定量亚克隆上清液或2μg/μl纯化的单克隆抗体)。将细胞用FACS缓冲液(PBS，1％BSA，2mM EDTA)清洗两次并与1∶1000稀释的PE标记的山羊抗小鼠二抗或1∶100稀释的APC标记的山羊抗小鼠二抗一起温育。将细胞用FACS缓冲液清洗两次并在FACSCalibur上进行流式细胞术分析。在标示时，依照制造商(Invitrogen)的方案进行抗体的直接Xenon标记。然而，克隆中只有3个结合表达全长人FcRH5的细胞且无一结合表达全长食蟹猴FcRH5的细胞(表2)。
表2：在FACS中来自免疫接种活动B的单抗对过表达人FcRH1，2，3，4，和5，人E11域，和食蟹猴FcRH5的细胞的结合
Figure BDA0001530253770001281
*人FcRH5的E11域，跨膜域，和胞质域
B.免疫接种和单抗表征活动C
对于免疫接种活动C，在CHO细胞中生成N端带His标签的E11蛋白质。在尾基中给小鼠免疫接种完全弗氏佐剂中的100μgE11蛋白质的初次注射。小鼠接受总共17剂，接着是融合前2天1次经IP和后踝路径单独的PBS中的融合前加强(表3)。
表3：免疫接种活动C的免疫接种日程表
Figure BDA0001530253770001282
Figure BDA0001530253770001291
15剂重组E11蛋白质继以共注射重组人和食蟹猴E11蛋白质后，使用FACS和通过使用E11蛋白质作为抗原的ELISA中的滴定对血清分析FcRH5结合性抗体。检测到针对表达全长人FcRH5，全长食蟹猴FcRH5，或人E11域，跨膜域，和胞质域的SVT2细胞，而非载体转染的SVT2细胞的显著反应性，指示所有5只免疫接种小鼠的血清中存在FcRH5结合抗体。最后的PBS中的加强后，将来自免疫接种小鼠的淋巴细胞与P3X63Ag8U.1.22小鼠骨髓瘤细胞电融合。
对克隆测试对重组人和食蟹猴E11蛋白质的结合并通过FACS测试对表达全长人FcRH5；全长食蟹猴FcRH5；全长人FcRH1，FcRH2，FcRH3，或FcRH4；或FcRH5的人E11域，跨膜域，和胞质域的SVT2细胞的结合。ELISA中存在44个人E11蛋白质阳性克隆和32个食蟹猴E11蛋白质阳性克隆。在那些中，总共16个克隆鉴定为结合表达人FcRH5的细胞和表达食蟹猴FcRH5的细胞，但是不结合表达FcRH1，FcRH2，FcRH3，或FcRH4的细胞，指示特异性FcRH5跨物种反应性(表4)。
Figure BDA0001530253770001311
Figure BDA0001530253770001321
Figure BDA0001530253770001331
对纯化的来自16个选定单克隆抗体(单抗)克隆的IgG进一步表征对内源表达人FcRH5的细胞(MOLP-2细胞)的结合。总共8个单抗克隆显示出结合MOLP-2骨髓瘤细胞。基于序列分析发现这8个单抗克隆中的2个是冗余的，一个没有进行分子克隆。作为鼠IgG2a重组表达6个分子克隆的MOLP-2阳性单抗克隆并以IgG捕捉格式在
Figure BDA0001530253770001341
T200装置中通过表面等离振子共振测试亲和力。
简言之，在蛋白AS系列CM5芯片(GE Life Sciences，Piscataway，NJ)上的流动室2，3或4上捕捉测试抗体，流动室1作为参照。使用FcRH5蛋白质片段作为分析物，流速30μl/min。在各注射之间，通过以流速10μl/min注射10mM甘氨酸，pH 1.5达30秒来再生捕捉表面。在10mM HEPES pH 7.4，150mM NaCl，0.05％Tween 20(HBSP)中于25℃评估相互作用。在动力学分析之前减去来自参照流动室和来自单独缓冲液注射的参照数据。通过将数据拟合1∶1结合模型来计算动力学信息。使用BIAevaluation软件(GE Life Sciences，Piscataway，NJ)实施参照减除和数据拟合。
这些抗体对人E11域的单价亲和力范围为0.5nM至68nM而对食蟹猴E11域的亲和力范围为9.1nM至338nM(表4)。只有一个克隆具有比抗体1G7要高的对人E11域的亲和力，单抗15G8。然而，人和食蟹猴E11域之间的KD差异为约20倍，使得这个克隆不适合进一步临床开发。另外，尽管这个抗体克隆对分离的人域E11的亲和力较高，然而这个抗体克隆对MOLP-2细胞的结合很弱；它比具有更低的对分离的人E11域的亲和力的克隆要弱，指示这个克隆并不较好地结合天然人FcRH5蛋白质。
实施例2：来自免疫接种活动A和C的抗FcRH5抗体变体的生成和表征
A.来自免疫接种活动A的抗FcRH5单克隆抗体的人源化
如先前所述(Presta et al.，Cancer Res.57：4593-4599，1997)，只是使用共有VH4和Vκ1框架(Dennis，Current Trends in Monoclonal Ant.Develop.and Manufac.9-28，2010)作为受体框架，通过HVR嫁接物方法将来自美国公开文本No.2015/0098900中描述的免疫接种活动A的抗FcRH5抗体1G7人源化。为了正确的HVR呈现和VH/VL域接触，重链嫁接物还在框架Kabat位置37，48，67，71，73，78，93，和94处包括鼠残基，而轻链嫁接物还在框架位置36和43处包括鼠残基。残基编号依照Kabat et al.，Sequences of proteins ofimmunological interest，5th Ed.，Public Health Service，National Institutes ofHealth，Bethesda，Md.，1991。在本文中称作hu1G7.v1或1G7.v1的人源化1G7的序列显示于图2和3。
B.hu1G7.v1变体的亲和力成熟和表征
为了增强效力，使用噬菌体展示将人源化抗体hu1G7.v1亲和力成熟。简言之，展示Fab抗体片段在M13噬菌体表面上的随机化文库并淘选对生物素化FcRH5蛋白质片段的结合物。通过个体克隆的DNA测序鉴定有利的突变。这些有利的突变假定产生亲和力改善的变体(Li et al.，MAbs.6：437-445，2014)。通过表面等离振子共振对具有选定突变的抗体克隆测试亲和力(表5A和5B)。
简言之，使用胺偶联和人IgG捕捉试剂盒(GE Life Sciences，Piscataway，NJ)在S系列CM5芯片上生成人IgG捕捉表面。然后在流动室2，3，或4上捕捉测试抗体，使用流动室1作为参照。使用FcRH5蛋白质片段作为分析物，流速＞30μl/min。在各注射之间，通过注射3M氯化镁或10mM甘氨酸，pH 1.5达30秒来再生捕捉表面。在10mM HEPES pH 7.4，150mM NaCl，和0.05％Tween 20(HBSP)中于25℃评估相互作用。在动力学分析之前减去来自参照流动室和来自单独缓冲液注射的参照数据。通过将数据拟合1∶1结合模型来计算动力学信息。使用BlAevaluation软件(GE Life Sciences，Piscataway，NJ)实施参照减除和数据拟合。
对于初始亲和力筛选实验，直接自在瞬时转染Expi293细胞(Invitrogen)后收集的澄清的培养液捕捉抗体(表5A-5B)。以100nM和500nM(实验1，表5A-5B)或0nM，20nM，100nM，和500nM(实验2，表5A-5B)评估每一种抗体结合FcRH5蛋白质片段的能力。以流速30μl/min监测结合和解离分别达180秒和600秒。表5A内存在的所有序列披露在SEQ ID NO：4-6内(即FcRH5L1，L2，L3宽共有)。表5B内存在的所有序列披露在SEQ ID NO：1-3内(即FcRH5H1，H2，H3宽共有)。观察到高至5.2倍的亲和力改善(表5A)。由于每一种个体突变没有提供所寻求的改善，因此决定组合各种突变，聚焦于VL突变S30R，I32L，A51G，S52Y，Y53N，T56S，H91Q，Y92F，S93Q，和S94P和VH突变S28K，L29T，和S56T。
表5A：选定抗体的亲和力筛选
Figure BDA0001530253770001361
表5B：选定抗体的亲和力筛选
Figure BDA0001530253770001371
使用硬和软定点诱变二者设计抗体噬菌体展示文库。文库L188和L189使用软诱变来突变VL残基27-34，50-56，91-94，和96(L188)或VH残基28-35，50-58，和95-100d(L189)。在诱变位置处，软诱变寡核苷酸利用91％亲本编码核苷酸和3％每一种其它核苷酸。文库L190和L191使用硬诱变(NNK密码子)来突变VL残基27-34，50-56，和89-96(L190)或VH残基28-35，50-58和95-100d(L191)，一次一个密码子，直至同时突变三种HVR(Li et al.，MAbs.6：437-445，2014)。
实施多至4轮对结合FcRH5蛋白质片段的选择。以固相(靶蛋白质直接吸附到微量板上)和以溶液二者实施选择。对于溶液选择，使用生物素化的靶蛋白质来得以捕捉噬菌体-抗体-靶复合物。在Expi293细胞(Thermo Fisher Scientific，Waltham，MA)中表达具有选定突变的克隆，并通过表面等离振子共振筛选上清液。
使用CJ236细菌中生成且使用Qiagen QIAprep旋转M13试剂盒(QIAGEN，Inc.，Valencia，CA)纯化的单链DNA作为模板，通过Kunkel诱变(Kunkel et al.，Methods inEnzymology，154：367-382，1987)生成抗体噬菌体展示文库。用于初始亲和力成熟文库的模板DNA在那些为诱变选择的HVR中含有终止密码子；用于下文所述后续“聚焦”噬菌体文库的模板DNA并不利用模板HVR终止密码子。除非另有说明，抗体可变区中的残基依照Kabat系统编号。酶购自New England Biolabs(Ipswich，MA)。使用QIAprep迷你旋转柱(QIAGEN，Inc.，Valencia，CA)清洁Kunkel诱变反应并通过电穿孔转化入XLI Blue大肠杆菌(AgilentTechnologies，Santa Clara，CA)。于37℃在SOC培养基中回收后，用辅助噬菌体感染培养物并于37℃另外温育0.5-2小时，之后添加抗生素羧苄青霉素和卡那霉素。然后将培养物于37℃另外温育4-5小时，接着于30℃进一步温育过夜。通过用大约1/6体积的沉淀试剂(20％PEG，2.5M氯化钠)沉淀自澄清的培养基纯化噬菌体。通过离心使沉淀的噬菌体形成团粒并在磷酸盐缓冲盐水(PBS)中溶解。通过以14,000g离心使溶液进一步澄清。纯化的噬菌体在50％甘油中保存在-20℃冰箱中并在使用前在PBS中重溶解。
在理性设计办法中，将自噬菌体实验鉴定的6处VL突变(S30R，I32L，A51G，T56S，H91Q，和S94P)与另外的VL人源化突变S43A组合并成对评估以评价相容性(表6)。对于选定VL突变的相容性评估(表6)，直接自瞬时转染Expi293细胞后收集的澄清培养液捕捉抗体。以流速30μl/min于6nM，19nM，56nM，167nM，和500nM评估FcRH5蛋白质片段的结合。监测结合和解离分别达300秒和600秒。表6中披露的序列为个体氨基酸(即栏顶端处的编号为抗体序列内的氨基酸编号)。结果指示VL突变I32L和H91Q，虽然作为个体改善亲和力，但是在组合时并不有益于亲和力。然而，所测试的其它序列给出与hu1G7.v1对照相比高至4倍的增量亲和力改善。基于这些结果，设计了抗体hu1G7.v1.1，hu1G7.v1.2，hu1G7.v1.3和hu1G7.v1.4(图2和3)。设计抗体hu1G7.v1.1来掺入六处VL突变S30R，I32L，A51G，T56S，H91Q，和S94P。设计抗体hu1G7.v1.2来掺入十处VL突变S30R，I32L，A51G，S52Y，Y53N，T56S，H91Q，Y92F，S93Q，和S94P。抗体hu1G7.v1.3和hu1G7.v1.4基于hu1G7.v1.1并设计成省略I32L(hu1G7.v1.3)或H91Q(hu1G7.v1.4)任一。
表6：经抗体噬菌体展示鉴定的突变的组合分析
Figure BDA0001530253770001391
还设计了聚焦噬菌体文库来以许多不同组合调查感兴趣突变(VL突变S30R，132L，A51G，S52Y，Y53N，T56S，H91Q，Y92F，S93Q，S94P；VH突变S28K，L29T，S56T)。在进一步提高与人抗体序列的相似性的努力中，聚焦噬菌体文库还容许如下框架位置处的有限变异：LC中的S43A，HC中的L48I，和/或HC中的N73T。获得了大约108个转化体。使用FcRH5蛋白质片段作为“饵”实施选择。最初用固相固定化的靶蛋白质实施这些选择，而在稍后的轮次中使用溶液相选择。抗体hu1G7.v1.5，hu1G7.v1.7，hu1G7.v1.13，和hu1G7.v1.13.1(图2和3)衍生自这个文库。
来自聚焦噬菌体文库的实验的测序数据也支持I32L和H91Q VL突变之间负面相互作用的概念(表5A-5B)。5轮噬菌体上的选择和163个VL序列的后续分析后，发现谷氨酰胺在VL位置91处的频率在Ile32存在下(49/70个克隆)比在Leu32存在下(5/93个克隆)高得多。在未选择的文库中没有观察到这种效应，其中在50％(9/18)的在位置32处含有亮氨酸的所分析克隆中观察到Gln91。这些结果提示含有I32L和H91Q二者的克隆的负选择，尽管每一项这些突变在其它背景中正富集。
通过将抗体与1mM二盐酸2，2′-偶氮二(2-甲基丙脒)(AAPH)一起温育16小时，接着用胰蛋白酶消化以产生能使用液体层析(LC)-质谱术(MS)分析来分析的肽来调查对氧化的易感性。对于样品中的每一种肽，获取来自LC的保留时间，和MS中的高分辨率，精确质量和肽离子片段化信息(氨基酸序列信息)。以±10ppm的窗口自数据集采集感兴趣肽(天然和修饰肽离子)的提取离子层析图(XIC)，并对峰积分以确定面积。为每一份样品如下计算修饰的相对百分比：(修饰肽的面积)/(修饰肽的面积+天然肽的面积)x100。然后在对照和AAPH处理样品之间比较这些相对百分比。
在1mM AAPH存在下于40℃温育16小时后，观察到HVR-H2Trp52和Met64(分别为44.5％和52.7％)的氧化升高。另外，Trp52氧化在光应力后自2％升高至62％，而Trp-52HC的突变导致1G7.v1.4变体的亲和力损失，如通过
Figure BDA0001530253770001401
测量的(图4)。在来自抗体hu1G7.v1，hu1G7.v1.3，hu1G7.v1.4，hu1G7.v1.5，hu1G7.v1.6，和hu1G7.v1.7的轻链的背景中调查用苯丙氨酸，酪氨酸，亮氨酸，或组氨酸替换Trp52和用苯丙氨酸，异亮氨酸，缬氨酸，或亮氨酸替换Met64(图2和3)。特别地，W52突变成F，Y，L，或H分别导致119nM，131nM，92nM，和60.4nM的KD值。而在1G7.v85中M64突变成V导致2.5nM的KD。对于HVR-H2Trp52和Met64变体的亲和力筛选(表7)，通过瞬时转染Expi293细胞表达抗体并使用定制装填亲和树脂单抗Select SuRe(Glygen Corp.，Columbia，MD&GE Life Sciences，Piscataway，NJ)的尖端柱纯化。通过瞬时转染293T细胞表达对照抗体hu1G7.v1和hu1G7.v1.5并用单抗Select SuRe纯化。以100nM和500nM监测FcRH5蛋白质片段对所捕捉的抗体的结合。以流速40μl/min监测结合和解离分别达180秒和300秒。表7中所示结果证明HVR-H2Met64可以突变成缬氨酸同时维持对FcRH5的高亲和力。
基于胜过其它FcRH家族成员的对FcRH5的亲和力和选择性选择抗体hu1G7.v1.4。为了改善这种抗体对氧化的抗性，还将表7中描述的M64V突变掺入VH区。所得抗体hu1G7.v1.4.M64V命名为hu1G7.v85(图5A-5B)并作为二价IgG和作为T细胞依赖性双特异性抗体(TDB)生成。hu1G7.v85的序列呈现于图6A-6B和图5A-5B。hu1G7.v85的动力学分析显示于表8。显示hu1G7.v1.4的分析用于比较。在hu1G7.v1.4的KD中观察到的差异(表7和8)在为这些分子预期的实验变异内。
还生成了非亲和力成熟型式的hu1G7.v.1，hu1G7.v87，其在上文所述人源化框架中拥有小鼠1G7HVR，具有M64V突变以改善氧化抗性。
表7：hu1G7.v1的HVR-H2位置52和54变体的亲和力筛选
Figure BDA0001530253770001411
表8：处于hIgG1和TDB格式的hu1G7.v1.4和hu1G7.v85的动力学分析
Figure BDA0001530253770001412
另一种的亲和力成熟方法利用Sanger测序来随机化重链HVR位置；然而，通过这种方法没有鉴定出期望突变。因此，扩展为变体测试的位置的数目和使用下一代测序(Illumina测序)的筛选的深度。设计一个文库，其中用编码任何氨基酸或琥珀终止密码子的NNK密码子随机化重链可变区中的选定位置。该设计容许每个克隆有抗体可变区中的仅仅一处氨基酸变化。位置选自HVR和与HVR直接接触或接近的框架位置。随机化Kabat位置1，2，24至40，43，45至78，80至83，85，86，91，和93至102。通过DNA合成(GeneWiz)创建文库，生成每一个片段中的一个位置用NNK密码子随机化的75个独立线性DNA片段。合并线性DNA片段并克隆入含有无亲和力成熟突变的轻链可变区的单价Fab片段噬菌体展示载体(Lee etal.，J.Immunol.Methods 284：119-132，2004)。如所述将连接产物电穿孔入大肠杆菌XL-1，用M13KO7辅助噬菌体(New England Biolabs)超感染并生长。以平行的轨迹在三轮用人或食蟹猴FcRH5进行的分选中选择结合物。对于这些选择，使用用中性亲合素(Pierce)包被的ELISA板捕捉PBS中的50ng/ml生物素化人或食蟹猴FcRH5域8。于室温将噬菌体(1OD268/ml)与固定化FcRH5一起温育2小时并通过用PBS清洗10次去除未结合的噬菌体。使用文库和选定噬菌体感染大肠杆菌XL-1，提取质粒DNA并使用Phusion DNA聚合酶(New EnglandBiolabs)通过15个循环的PCR扩增来扩增插入物，接着是扩增子的琼脂糖凝胶纯化。用M13DNA纯化试剂盒(Qiagen)自来自原始文库(2OD268)的噬菌体提取DNA并使用与上文相同的条件使用200ng DNA作为模板扩增插入物。如先前所述(Koenig et al.，J.Biol.Chem.290∶21773-21786，2015)通过Illumina测序对扩增子测序。如先前所述(Koenig et al.，J.Biol.Chem.290：21773-21786，2015)过滤并分析序列，去除所有具有超过一处可变区突变的序列，具有并不遵守NNK简并密码子用法的突变的序列和具有终止密码子的序列。如先前所述(Fowler et al.，Nat.Methods 7：741-746，2010)，通过分选样品中给定位置处的给定突变的频率除以未分选(初始文库)样品中非常相同突变的频率，使用下述方程计算富集：Ev＝log2((Rv，s/∑Rx，s)/(Rv，i/∑Rx，i))，其中Ev为突变体的富集，Rv，s为分选群体中在位置s中具有突变v的读数的数目，Rx，s为分选群体中在与变体Rv，s相同的位置中具有突变的读数的数目，Rv，i为输入，未分选群体中与Rv，s相同的突变体的读数的数目且Rx，i为输入，未分选群体中在与变体Rv，i相同的位置中具有突变的所有变体之和。用人和食蟹猴FcRH5进行的选择的Ev得分分别显示于表9和10，而且灰色框代表在选定样品中或文库中未鉴定到的突变。
表11显示在用人FcRH5进行的选择中得分为至少0.5且在用食蟹猴FcRH5进行的选择中得分为至少0的突变。在表11中，以黑色或灰色突显为进一步分析选择的突变(即对于结合人FcRH5至少温和有利的及对于食蟹猴FcRH5结合中性更好的突变)，并且以灰色突显通过Sanger测序鉴定的L29T突变。总共11个位置具有达到这些标准的突变，一些位置中有多种变体。一个位置具有引入糖基化位点的突变(G54N)且没有为进一步表征而选择。通过用Sanger测序进行的筛选鉴定另一个变体，L29T，但是只在具有S56T突变的克隆中鉴定到。该变体显示仅仅1.2倍的平均亲和力改善。S56T突变体具有强负富集得分-2.1(表9)，提示L29T突变可能具有被双重突变体中第二S56T突变的存在掩蔽的有益效应。在其它9个位置中，选择具有最高得分的突变，除了位置1和65，在那里选择两种突变。通过DNA合成(GenWiz)生成这些变体并在1ml培养物中在Expi293细胞中与hu1G7.v1的轻链(没有亲和力成熟突变)组合作为人IgG1表达。通过蛋白A层析纯化人IgG1变体并在
Figure BDA0001530253770001431
中测试亲和力。在所测试的两种突变中，仅仅两种，L29T和S100P，在用可溶性人FcRH5进行的
Figure BDA0001530253770001432
中测试时对亲和力具有显著影响。单独的L29T突变在该背景中将亲和力改善2.2倍，而S100P突变将亲和力改善3倍。在具有hu1G7.v86中存在的I32L，A51G，T56S，和S94P突变的亲和力成熟轻链的背景中组合地和分离地测试这些突变。重链L29T将hu1G7.v86的亲和力改善约2倍，与在没有突变的轻链的背景中的效果相似。相反，在没有突变的轻链的背景中将亲和力改善3倍的S100P将hu1G7.v86的亲和力改善1.5倍。组合的L29T和S100P突变将hu1G7.v86的亲和力改善2.5倍。因此，即使使用下一代测序深入探矿和在重链中在CDR位置以外对许多框架位置测试有利的突变，只能实现2.5倍的亲和力改善。结果指示在单独测试时对亲和力有显著贡献的突变在早就具有其它突变的分子中具有小得多的影响。重链中的S100P突变尤其如此，它单独将hu1G7.v1的亲和力改善约3倍但在具有轻链突变I32L，A51G，T56S，和S94P和重链突变L29T的分子的背景中对亲和力具有很少的额外影响(表12，比较hu1G7.v91和hu1G7.v93；hu1G7.v93序列呈现于图7A-7B)。因此，虽然通过对轻链添加数项突变能实现显著亲和力改善，但是通过将突变引入重链能实现相当较少的改善。
表9：用人FcRH5选择的hu1G7.v1中的突变的富集得分
Figure BDA0001530253770001441
表10：用食蟹猴FcRH5选择的hu1G7.v1中的突变的富集得分
Figure BDA0001530253770001451
表11：在用人FcRH5进行的选择中富集得分为至少0.5(表9)和在用食蟹猴FcRH5进行的选择中富集得分为至少0(表10)的突变
Figure BDA0001530253770001461
Figure BDA0001530253770001471
Figure BDA0001530253770001481
实施例3：例示性FcRH5TDB的生成和体外表征
使用本文所述抗FcRH5抗体生成包含一条臂上的抗人FcRH5结合决定簇和另一条臂上的抗人CD3ε结合决定簇的T细胞依赖性双特异性(TDB)抗体。FcRH5结合决定簇包括人源化和亲和力成熟单克隆抗体克隆1G7，1G7.v85，和1G7.v87。抗CD3ε人源化结合决定簇包括高亲和力抗体克隆38E4.v1，高亲和力克隆38E4.v11，，和低亲和力克隆40G5(针对hCD3ε的EC50分别为1.0nM，50pM，和13nM)。抗CD3克隆38E4.v1，38E4.v11，和40G5c结合人CD3ε多肽(人CD3ε多肽的由氨基酸1-26或1-27组成的片段(SEQ ID NO：174))且CD3ε的氨基酸残基Glu5并非结合所需要的(还可参见PCT公开号WO 2015/095392和美国公开文本No.2015-0166661，通过援引将其每一篇完整收入本文)。
表征例示性FcRH5TDB以评估它们的治疗潜力。发现人源化全长FcRH5TDB分子在极其低(pM)的剂量杀死人浆细胞和患者衍生原代骨髓瘤肿瘤细胞且触发有力的T细胞增殖。FcRH5TDB在体内有效遏制骨髓瘤异种移植物生长且在灵长类动物中在预期饱和靶物的得到较好耐受的剂量水平导致B细胞和浆细胞完全消减。完全浆细胞消减提供在骨髓微环境中的功效的强有力证据。FcRH5TDB的活性与靶物表达(例如FcRH5表达)水平有关，提示具有染色体1q拷贝增益的高风险骨髓瘤患者可能对这种免疫疗法唯一敏感。
材料和方法
A.抗体
a.TDB的生成
1.理性设计办法
为了优化TDB的表达和提高TDB的产量，将突变工程化改造入抗FcRH5抗体(例如FcRH5TDB)的Fc，VH，VL，CH1，和CL域以驱动适宜抗体单体形成。特别地，将带电荷区域引入VH，VL，CH1，和/或CL域的氨基酸修饰提供降低重链和轻链错配的机制。具有相反总体电荷的关联带电荷区域驱赶到一起并帮助适宜重链和轻链配对，提高抗FcRH5抗体(例如FcRH5TDB)的总体生成产量。例示性理性设计构造，包括Fc，VH，VL，CH1，和CL域的氨基酸修饰，呈现于图1A-1B。
2.Rosetta设计办法
另外/或者，为了优化TDB的表达和提高TDB的产量，将突变工程化改造入抗FcRH5抗体(例如FcRH5TDB)的Fc，VH，VL，CH1，和CL域以驱动适宜抗体单体形成。在带电荷区域突变以外，Rosetta设计办法提供另一种驱动适宜重链和轻链配对的机制，在于在CH1和CL域中形成节和穴突变。例示性Rosetta设计构造，包括Fc，VH，VL，CH1，和CL域的氨基酸修饰，呈现于图1C-1F。
3.用于FcRH5TDB生成的一细胞办法
在一种办法中，可以通过培养经两种质粒共转染的宿主细胞来生成FcRH5TDB，每一种质粒编码FcRH5TDB的两种臂之一(例如第一质粒编码抗FcRH5半抗体且第二质粒编码抗CD3半抗体)。以96孔板格式实施宿主细胞(例如细菌，哺乳动物，或昆虫细胞)的转染。为了筛选FcRH5TDB生成，可以挑取大约2,000至3,000个克隆并通过ELISA和完整IgG均质时间解析荧光(HTRF)评估它们结合靶抗原FcRH5的能力。选择生成能够结合FcRH5或其片段的FcRH5TDB的克隆用于扩充和进一步筛选(例如对CD3的结合)。然后可以基于所生成百分比双特异性抗体(bsAb)，滴度，和性能量化(PQ)选择顶级克隆用于进一步分析。
可以用于生成本发明的FcRH5TBD的一种例示性一细胞办法记载于国际专利申请No.PCT/US16/28850，通过援引将其完整收入本文。
4.用于FcRH5TDB生成的两细胞办法
或者，可以通过使用高细胞密度发酵分开(即在两种不同细胞系中)培养抗体半体(例如半抗体)，然后通过蛋白A层析独立分离每一种半抗体来生成FcRH5TDB。然后可以组合纯化的半抗体，例如以1∶1摩尔比，并在2mM DTT存在下在50mM Tris，pH 8.5中温育4小时以容许退火和铰链区中的二硫化物还原。针对没有DTT的相同缓冲液透析24-48小时导致链间二硫键形成。
或者可以通过将各自编码TDB的独特臂的两种质粒转染入分开的宿主细胞来生成TDB。可以共培养或分开培养宿主细胞。可以以96孔板格式实施宿主细胞的转染。为了筛选TDB生成，挑取2,000至3,000个克隆并通过ELISA和完整IgG均质时间解析荧光(HTRF)评估它们结合选定抗原(例如FcRH5)的能力。选择生成能够结合FcRH5或其片段的TDB的克隆用于扩充和进一步筛选。基于所生成的百分比双特异性抗体(bsAb)，滴度，和PQ选择顶级克隆用于进一步分析。
5.例示性生成方法
在一个例子中，使用这种策略，通过共培养策略生成FcRH5TDB，使表达一种半抗体(穴)的大肠杆菌细胞和表达第二种半抗体(节)的大肠杆菌细胞一起以预定比率在摇瓶中生长，使得它生成相似量的每一种半抗体(参见Spiess et al.，Nat.Biotechnol.31(8)：753-8，2013；PCT公开文本No.WO 2011/069104，通过援引将其完整收入本文)。然后收获共培养的细菌培养液，在微型流化仪中破坏细胞并通过蛋白A亲和纯化抗体。观察到在微量流化和蛋白A捕捉期间两种臂退火并形成铰链链间二硫桥。
在另一个例子中，如先前所述(Junttila et al.，Cancer Res.74：5561-5571，2014；Sun et al.，Science Trans.Med.7：287ra270，2015)生成全长双特异性抗体。简言之，通过瞬时转染CHO细胞表达在它们的CH3域中含有“节”或“穴”突变的两种半抗体(例如抗FcRH5(例如1G7的优化变体)和抗CD3(例如38E4.v1))，然后用蛋白A亲和纯化。将等量的两种半抗体与200倍摩尔过量的处于pH 8.5的还原型谷胱甘肽一起于32℃温育过夜以驱动节-穴二硫键形成。经由疏水相互作用层析自污染物纯化组装的双特异性抗体(例如FcRH5TDB)。通过质谱术，大小排阻层析(SEC)，和凝胶电泳对纯化的FcRH5TDB表征纯度。
b.FcRH5TDB的纯化
通过疏水相互作用层析(HIC)自污染物纯化FcRH5TDB。使用Endosafe便携式测试系统对所得材料分析内毒素水平，并在需要时通过用0.1％Triton X-114清洗蛋白质来降低内毒素含量。如之前所述(Jackman et al.，The Journal of BiologicalChemistry.285：20850-9，2010)通过质谱术(LC-ESI/TCF)分析TDB的分子量。还使用Agilent 1∶100HPLC系统在Zenix SEC-300柱(Sepax Technologies USA)上通过分析性大小排阻层析分析FcRH5TDB。使用2100Bioanalyzer和蛋白质230芯片通过电泳对残余抗体片段的存在定量。
c.标记的抗体
除了另外提到的那些，所有用于流式细胞术的直接标记的抗体均购自BDBioscience。抗人PD-1购自Affymetrix。山羊抗人IgG和山羊抗小鼠IgG购自JacksonImmunoresearch。抗PC-FITC(克隆Vs38c)购自DAKO。用于Western印迹的SLP-76抗体购自Cell Signaling Technology。p-SLP76(Ser376)是在Genentech公司生成的。
对于通过FACS检测来自多发性骨髓瘤(MM)样品和健康供体浆和B细胞的FcRH5，由Southern Biotec用PE标记抗FcRH5抗体1G7。对于显微术，使用适宜的蛋白质标记试剂盒(ThermoFisher)依照制造商的说明书用Alexa Fluor647标记TDB。在标记之前将TDB针对PBS，pH 7.2透析，而且例行地实现～4的染料/蛋白质比率。
B.分子稳定性测定法
为了评估FcRH5TDB的分子稳定性，于30℃至40℃进行热应力测试超过4周。将FcRH5TDB以1mg/mL在20mM his-乙酸，240mM蔗糖，pH 5.5中温育，并在2周后评估。对TDB评估2周时＜5％的N脱酰胺/D异构化变化，＜2.5％的单体损失变化(通过SEC)，和＜16％的主峰损失(通过IEC)。所使用的SEC缓冲液为0.25M KCl，0.2M K3PO4，pH6.3。使用TCEP在还原条件中于60℃进行LC-MS达10分钟。通过RCM胰蛋白酶消化肽作图及DTT还原，IAA加帽，和pH8.2消化进行LC-MS/MS分析。
进行AAPH氧化测定法以评估＜35％的Trp氧化和＜1.1的Met Ox/Met256。将FcRH5TDB以1.0mg/mL的浓度温育并在1mM AAPH中施加应力达16小时。还进行光氧化测定法评估Trp OX/TrpOX_ApoMabW53＞0.5。对于光氧化测定法，将TDB以1.0mg/mL的浓度温育48小时并暴露于光达2.4x106个勒克斯小时。通过LC-MS/MS分析及RCM胰蛋白酶消化肽作图及DTT还原，IAA加帽，和pH 8.2消化评估氧化。
C细胞培养和稳定细胞系生成
在DMEM(Sigma Aldrich)中培养表达1G4TCR复合物和关键TCR信号传导成分(James et al.，Nature 487：64-69，2012)的HEK-293T和HEKT细胞。在RPMI中培养所有其它细胞系。所有培养基补充有10％热灭活的FBS(Life Technologies)，1mM HEPES(Lonza)，2mM谷氨酰胺，100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素(Sigma Aldrich)。
为了评估免疫学突触形成，用编码具有N端gD标签的全长FcRH5的逆转录病毒或编码具有N端gD标签的截短型FcRH5(即包括氨基酸1-744删除的FcRH5)的病毒任一感染SVT2细胞。为了评估FcRH5TDB杀伤的靶物依赖性，用编码全长FcRH5的慢病毒感染FOX-NY细胞。然后用2μg/ml嘌呤霉素选择具有差异FcRH5表达水平的单细胞衍生克隆。
为了评估PD-1/PD-L1信号传导对FcRH5TDB活性的影响，用编码FcRH5的慢病毒感染293细胞，接着使用Lipofectamine(Invitrogen)转染编码人PD-L1的质粒。
D.放射性配体细胞结合测定法
使用Iodogen方法将抗FcRH51G7.v85抗体碘化至20μCi/μg的比活性。将含有固定浓度的碘化抗体和递减浓度的系列稀释的未标记抗体的竞争反应混合物分配入96孔板。用由含2％胎牛血清(FBS)，50mM HEPES(pH7.2)，和0.1％叠氮化钠的Dulbecco氏改良Eagle培养基(DMEM)组成的结合缓冲液清洗表达内源人FcRH5的细胞系(例如MOLP-2，R1-1，KARPAS620，和KMS21-BM)，然后添加至96孔板。对于每一种浓度的未标记抗体一式三份测定带有细胞的竞争反应并于室温温育2小时。温育2小时后，将竞争反应转移至Millipore多筛选滤板(Billerica，MA)并用结合缓冲液清洗4次以分开游离的与结合的碘化抗体。在Wallac Wizard 2470伽马计数器(PerkinElmer Life and Analytical Sciences Inc.；Wellesley，MA)上对风干的滤器计数并使用NewLigand软件(Genentech)评估结合数据，其使用Munson和Robard的拟合算法来确定抗体的结合亲和力(Munson et al.，Anal.Biochem.107：22-39，1980)。
E.用于显微术的载体和瞬时转染
如下将具有N端gD标签的FcRH5与荧光蛋白mRuby2融合，即首先将FcRH5插入pHR-SIN慢病毒载体，之后将mRuby2DNA序列连接入这种载体，由此产生pHR-FcRH5-mRuby2。随后用mHSP启动子替换这种载体中的SFFV启动子，产生pHRI-FcRH5-mRuby2，其利用比pHR要弱的启动子，容许更加生理学的FcRH5-Ruby表达水平。表达LCK，ZAP70，CSK/CBP，和CD45的载体先前已有描述(James et al.，Nature.487：64-69，2012)。所使用的CD45构建物为RO同等型或含有CD45胞质域及CD43跨膜和胞外域的构建物(已知其模拟CD45的功能)任一。在转染构建物之前，在6孔板中接种HEK细胞至大约60％汇合。然后使用GeneJuice(Novagen)遵循制造商的说明书以适宜比率瞬时转染载体。转染后24-48小时在实验中使用细胞。
F.显微术成像和分析
为了对细胞缀合物成像，自培养物收获要成像的每一种细胞类型的3x105个细胞并在100μl含20nM TDB的RPMI-1640(无酚红)中重悬浮。温育20-30分钟以容许细胞缀合后，用PBS清洗细胞，在DMEMgfp2成像培养基(Evrogen)中重悬浮并添加至35mm成像皿(Mattek)。于37℃使用Andor旋转盘共焦显微镜系统来对细胞成像。分析所有图像并使用ImageJ以等同方式操作所有呈现的图像。对所呈现的图像减去背景，然后修剪以聚焦于成对细胞并优化对比度。通过使用质膜中荧光标记的蛋白质的强度来确定蛋白质聚簇和隔离的程度。通过手工画线来选择质膜并将细胞-细胞界面内的质膜的平均荧光强度除以细胞-细胞界面外的质膜的平均荧光强度以计算聚簇或隔离的程度。为了自z-堆叠生成通过TDB缀合的一对细胞的界面的图像，首先将图像堆叠解卷积，然后修剪以突显界面区，这使用Huygens软件进行。
G.体外细胞毒性和T细胞激活测定法
用羧基荧光素琥珀酰亚胺基酯(CFSE)依照制造商的方案(Life Technology，#C34554)标记靶细胞。将CFSE标记的靶细胞和纯化的CD8+细胞以3∶1效应细胞对靶细胞(E∶T)比混合并与TDB一起温育48小时。温育结束时，以自动化格式在FACSCalibur上用流式细胞术分析细胞。通过在CFSE+/PI阴性细胞上设门对活的靶细胞的数目计数。如下计算细胞毒性百分比：％细胞毒性(无TDB时活的靶细胞数目-有TDB时活的靶细胞数目)/(无TDB时活的靶细胞数目)X 100。
a.体外细胞毒性测定法细胞系
如Junttila et al.，Cancer Res.74：5561-5571，2014中先前所述进行外周血液单个核细胞(PBMC)和CD8+分离，Cell Titer Glo(Promega)，和基于流式细胞术的存活力测定法(48小时)。以3∶1效应细胞：靶细胞比使用CD8+细胞作为效应细胞。
b.人浆细胞和原代多发性骨髓瘤样品
在PBS中稀释健康供体的人骨髓吸出物(ALLCELLS)并通过常规梯度分离(Lymphoprep，STEMCELL)分离骨髓单个核细胞(BMMC)。使用流式细胞术存活力测定法来测试72小时FcRH5TDB处理对BMMC浆细胞的影响。来自MM患者的冷冻人BMMC购自ConversantBio。将骨髓瘤BMMC与新鲜分离的健康供体CD8+T细胞混合并将共培养物用FcRH5TDB处理72小时。通过流式细胞术对PI阴性CD38+CD138+细胞计数。
H.T细胞激活和增殖测定法
T细胞激活测定法先前描述于Junttila et al.，Cancer Res.74：5561-5571，2014。用CFSE标记新鲜分离的CD8+T细胞并以1∶1比率与靶细胞(例如MOLP-2细胞)混合并与1μg/ml TDB一起共培养48小时或5天。将细胞用抗CD8-APC(BD Bioscience，#555634)，抗CD69-PE(BD Bioscience，#555531)，和/或抗CD25-APC(BD Bioscience，#555434)染色并通过流式细胞术分析CFSE的荧光强度的稀释。
I.食蟹猴浆细胞的流式细胞术分析
将食蟹猴骨髓吸出物在ACK裂解缓冲液(Life Technology，#A1 0492)中稀释(1∶10)两次。将食蟹猴骨髓细胞用抗CD45，抗CD20，和抗CD38染色。清洗后，固定细胞并用IntraStain试剂盒(DAKO)透化。然后将细胞用抗PC(克隆Vs38c)染色。通过流式细胞术将食蟹猴浆细胞归类为CD45-CD20-CD38+PC+。
J.食蟹猴IgG水平的ELISA分析
使用标准的基于比色的三明治式ELISA对总食蟹猴血清IgG定量。分别使用山羊抗猴IgG(Bethyl A140-202A)和辣根过氧化物酶(HRP)缀合的山羊抗猴IgG(Bethyl A140-202P)作为捕捉和检测抗体。使用食蟹猴IgG(Cell Sciences CSI20163A)作为蛋白质定量标准。
K.Western印迹分析
用1μg/ml 1G7.v85/38E4.v1(“1G7.v85TDB”)，10A8/38E4.v1(“10A8TDB”)，或抗gD/38E4.v1(“抗gD TDB”)TDB处理新鲜分离的人CD8+T细胞和293T-FcRH5细胞(2∶1比例)并于4℃在磷酸盐缓冲盐水(PBS)中清洗并用RIPA裂解缓冲液(Cell Signaling Technology)裂解。使用标准Western印迹方法和抗体检测pSLP76(Ser376)和SLP76。
结果
A.FcRH5TDB的结合亲和力
在所生成的FcRH5TDB中有包含克隆1G7作为FcRH5结合域和选定克隆作为CD3结合域(包括38E4.v1，40G5c，和38.E4.v11)的分子。作为具有抗CD338E4.v1臂的FcRH5TDB生成抗体hu1G7.v1.1(“1G7.v1.1TDB”)，hu1G7.v1.2(“1G7.v1.2TDB”)，hu1G7.v1.3(1G7.v1.3TDB”)，hu1G7.v1.4(“1G7.v1.4TDB”)，hu1G7.v1.5(“1G7.v1.5TDB”)，hu1G7.v1.7(“1G7.v1.7TDB”)，hu1G7.v1.13(“1G7.v1.13TDB”)，和hu1G7.v1.13.1(“1G7.v1.13.1TDB”)并一般地如本文所述通过
Figure BDA0001530253770001551
确定为具有针对可溶性FcRH5蛋白质片段的高亲和力(表13)。包括“节”突变体的半抗体格式的1G7.v85和1G7.v87的表达测试给出灾害棒以上的滴度(图8)。
表13：8种选定亲和力成熟变体的处于TDB格式的亲和力评估
Figure BDA0001530253770001561
B.FcRH5TDB的结合和交叉反应性
使用人FcRH5，食蟹猴FcRH5，人FcRH1，FcRH2，FcRH3，和FcRH4转染的小鼠SVT2细胞来测试FcRH5TDB的结合和交叉反应性。如下进行该方法。使用非酶细胞解离缓冲液(Sigma，#C5914)浮起培养的SVT2细胞。在100μL中悬浮1x105个细胞并与3μg/ml FcRH5TDB一起温育。然后用FACS缓冲液(PBS，1％BSA，2mM EDTA)清洗细胞并与1∶100稀释的山羊抗人Fc PE(Jackson Immunoresearch，#109-116-170)一起温育。将细胞用FACS缓冲液清洗两次，之后在FACSCalibur上进行流式细胞术分析。
在鼠1G7的人源化和亲和力成熟之后，以TDB格式生成8种亲和力成熟变体。以38E4.v1作为抗CD3臂的“节-入-穴”格式生成优化的1G7TDB。所有8种变体以TDB格式通过
Figure BDA0001530253770001563
显示比鼠1G7TDB升高5-15倍的亲和力(表13)。所有变体展现对FcRH1或FcRH4的阴性结合，及不同程度的对FcRH2或FcRH3的阳性结合。1G7.v1.4TDB显示最少的对FcRH2和FcRH3的交叉反应性(表14)。还通过FACS评估含有不同抗FcRH5臂的FcRH5TDB(即1G7，1G7.v85，或1G7.v1.4)对FcRH3的结合(图9A)。
表14：FcRH5TDB结合和交叉反应性
Figure BDA0001530253770001562
Figure BDA0001530253770001571
通过
Figure BDA0001530253770001572
分析评估1G7.v1.4，1G7.v85，和1G7TDB结合huFcRH5和huFcRH3的能力(图10A-10D)。1G7.v85TDB和1G7.v1.4TDB的亲和力相当。1G7.v1.4TDB分别以2.4nM和～80nM的KD结合人FcRH5和人FcRH3，而1G7.v85TDB分别以2.4nM和～90nM的KD结合人FcRH5和人FcRH3(图10A-10D)。还以具有抗CD3臂38E4.v1的TDB格式生成另外的抗FcRH5变体hu7D8.L1H2，17B1-VH66，17B1，和15G8(序列呈现于图11A-13B)。对hu7D8.L1H2，17B1，和15G8TDB测试对人和食蟹猴FcRH5的结合。结果呈现于图14和表4。
通过
Figure BDA0001530253770001573
分析进行结合人FcRH5和食蟹猴FcRH5的1G7.v85TDB和1G7.v93TDB的比较(图15)。1G7.v85TDB展现2.1nM的结合人FcRH5的KD和7.8nm的结合食蟹猴FcRH5的KD。1G7.v93TDB展现1.1nM的针对人FcRH5的KD和8.1nm的针对食蟹猴FcRH5的KD。
进行动力学表征实验(见表8)。在这些实验中，以6种不同的非零浓度(1∶3稀释系列，一种浓度注射两次作为复制品)分析可溶性FcRH5蛋白质片段对纯化的人TDB抗体格式的抗体的结合。流速设置于40μl/min并监测结合和解离达600秒。单价1G7.v85TDB亲和力的使用hIgG捕捉格式和1∶1结合模型的动力学分析产生分别为2.4nM和6.8nM的针对人FcRH5和食蟹猴FcRH5的KD(图16A-16B)。1G7.v85TDB中Met-64HC变成Val的氧化倾向性突变并不影响结合亲和力。
C体外细胞毒性测定法
为了评估人源化FcRH5TDB变体的功能，在内源表达FcRH5的FcRH5MOLP-2细胞上测试细胞细胞毒性。所有变体显示与鼠1G7相比相似的靶细胞杀伤活性但显著升高的活性(图17A-17B)。在变体1G7.v1.4TDB的情况中，EC50相对于鼠1G7TDB改善5-13倍(n＝10)。
基于它的高细胞毒性活性和针对其它家族成员的低交叉反应性，选择1G7.v1.4TDB用于进一步分析。为了提高TDB分子的稳定性，在潜在氧化位点处突变1G7.v1.4臂，由此生成精炼型式1G7.v85。在多种测定法中以TDB格式评估两种型式，1G7.v1.4和1G7.v85，包括T细胞激活，MOLP-2靶细胞杀伤活性，食蟹猴B细胞体外消减，和食蟹猴浆细胞消减(图18A-18D)。在所有所测试的测定法中，1G7.v85TDB的表现与1G7.v1.4TDB无法区分。
还比较人源化和精炼的1G7.v87TDB与1G7.v85TDB。与其更低的亲和力一致，1G7.v87TDB展现相对于1G7.v85TDB降低的对人FcRH5的结合，如通过流式细胞术分析所示(图19A)。1G7.v87还显示针对FcRH3的阴性交叉反应性。
在MOLP-2CD8+细胞上(图19B)和在来自4名健康供体的PBMC上(图19C)评估1G7.v87TDB和1G7.v85TDB的靶细胞细胞毒性。在所有供体中，1G7.v87TDB对于人B细胞杀伤呈阴性，而1G7.v85TDB显示一些程度的阳性杀伤活性。还测试来自4名健康供体的食蟹猴PBMC(图19D)。3种型式的1G7TDB的EC50的排序在所有3名供体中是一致的。1G7.v87TDB与鼠1G7TDB相当但具有比1G7.v85TDB显著更小的活性。1G7.v87TDB在体外显示比1G7.v85TDB显著更弱的在食蟹猴B细胞上的杀伤活性。还对1G7.v85TDB评估在人NK细胞上的活性且发现在≤20μg/mL时没有杀伤活性(图9B)。1G7.v85TDB的EC50比1G7.v87TDB的要好5-8倍。
D.FcRH5TDB的稳定性的分子评估
hu1G7.v1在亲和力成熟之前的化学稳定性指示Met-64HC和Trp-52Hc处的氧化易感性。经AAPH和光应力测试对1G7.v85TDB样品施加应力并通过
Figure BDA0001530253770001581
评估FcRH5结合。1G7.v85TDB在AAPH和光应力测试二者后展现与未受应力的对照相比降低的对FcRH5的结合(图20A-20D)。在低pH缓冲液(his-乙酸，pH 5.5)中施加应力2周之后，分别通过大小排阻层析(SEC)和成像毛细管等电聚焦(icIEF)评估1G7.v85TDB的单体稳定性和电荷异质性(图21A-21B)。单体峰损失的可观察变化对于单体稳定性(0.1％)和电荷异质性(7.7％)二者均较小(图21A-21B)。而且，在低pH应力2周后1G7.v85TDB的轻链或重链任一的质量不存在可观察变化(图22A-22B)。于30℃热应力2周后，单体峰损失为通过SEC测得的0.1％和通过icIEF测定的8％。
E.近膜表位是FcRH5TDB的有效TCR信号传-导和杀伤活性所需要的
为了表征FcRH5TDB所致刺激后引起触发T细胞受体(TCR)的分子事件，利用容许以受控方式调查引起受体激活的初始事件的重建系统(James et al.，Nature.487：64-69，2012)。使用健康供体CD8细胞，1G7/UCHT1.v9TDB导致非常强健的SLP76磷酸化(指示TCR信号传导)，并介导有效的靶细胞杀伤(图23A-23B；EC50＝0.5nM)。相反，靶向远膜表位的抗gDTDB并不导致可检测的TCR信号传导且不能介导T细胞杀伤(图23A-23B)。通过靶向表达保留1G7和gD表位的重度截短的靶物的细胞，还确认了TDB活性由表位的定位和胞外域的大小规定(图23C)。当由ECD引起的干扰去除时，接近的1G7/UCHT1.v9TDB的活性升高25倍(图23D；EC50＝20pM)且gD TDB能够有效介导细胞杀伤(EC50＝0.19nM)。通过FACS分析排除了差异靶物表达水平是细胞系之间活性差异的原因的可能性(图24A)。
为了证明杀伤活性的差异与表位有关而非特定抗体克隆的特性，以TDB格式测试总共5个靶向FcRH5近膜域的独特抗体克隆并证明每一种克隆的活性与10A8相比要高～20倍(图23E)。多发性骨髓瘤中FcRH5的内源表达水平较低(例如～100至～2000个拷贝/细胞)且与MOLP-2骨髓瘤细胞系(例如～2200个拷贝/细胞)相当。当将T细胞重新靶向以杀伤MOLP-2细胞时，只有近膜TDB诱导杀伤MOLP-2细胞。使用10A8TDB靶向FcRH5中区并不引起杀伤骨髓瘤细胞所需要的足够高的TCR触发(图24B)。
F.FcRH5TDB诱导靶物依赖性细胞杀伤和T细胞增殖
在图18A中，发现1G7.v1.4TDB和1G7.v85TDB具有不可区分的T细胞激活能力。对1G7.v85TDB评估1G7表位特异性和食蟹猴交叉反应性(图25A-25C)。如预期的，1G7/38E4.v1TDB(“1G7TDB”)结合MOLP-2细胞，健康供体B细胞，骨髓浆细胞，和原代骨髓瘤肿瘤细胞(图26A-26D)。通过使用健康供体CD8细胞表征作用机制来启动1G7TDB活性的临床前分析。用1G7TDB处理表达靶物的细胞导致剂量依赖性T细胞激活(图27A)。1G7TDB的细胞毒性活性对于靶物阳性细胞是排他的且与FcRH5表达水平有关(图27B)。用1G7TDB和靶细胞刺激所致T细胞激活引起强健的T细胞增殖。在5天中95％的CD8细胞经历多至6次细胞分裂，如通过荧光染料CSFE的稀释证明的(图27C-27E)。进一步调查抗CD3臂和Fc域对TDB的细胞毒性活性的贡献，而且发现实现细胞毒性活性需要高亲和力抗CD3臂而并不需要Fc域(图27F-27G)。
G.FcRH5TDB介导有力的正常浆细胞和患者衍生原代骨髓瘤细胞杀伤
使用1G7.v85TDB和FACS研究CD138+CD38+多发性骨髓瘤细胞和正常骨髓浆细胞中的FcRH5表达。所有患者衍生肿瘤细胞和所有正常浆细胞在所有样品中表达FcRH5，提示骨髓瘤中的100％流行度(图28A)。在骨髓瘤中检测到表达水平中可观的患者间变异。一般地，肿瘤细胞中的表达水平与正常浆细胞相比并未显著升高，提示开发肿瘤细胞特异性，正常浆细胞豁免性FcRH5TDB很可能并不可行。正常B细胞中的表达水平与正常浆细胞和多发性骨髓瘤肿瘤细胞相比一致且显著更低。
FcRH5基因位于1q21的染色体断点中(Hatzivassiliou et al.，Immunity.14：277-289，2001)。～20份原代多发性骨髓瘤活检的分析展现FcRH5RNA表达和1q21增益之间的显著关联(图28E)，证明染色体易位在高风险骨髓瘤患者中可引起FcRH5过表达。
通过靶向自健康供体的骨髓吸出物分离的骨髓单个核细胞(BMMC)来分析1G7.v85TDB杀伤浆细胞的能力(图28B)。1G7.v85TDB诱导剂量依赖性的，高度有效的，且有力的(EC50＝85-180pM)浆细胞杀伤。当来自多发性骨髓瘤患者的BMMC经受1G7.v85TDB处理时检测到类似的强健的活性(图28C)。以高效力(EC50＝60-1200pM)检测到接近100％的骨髓瘤细胞杀伤，不管一生中的治疗历史。
由于FcRH5表达在骨髓瘤中可变(图28A)且1G7.v85TDB活性与表达水平有关(图28D)，因此还调查表达谱的低端的患者是否会预测响应FcRH5TDB。将MOLP-2骨髓瘤细胞系鉴定为基准细胞系，其具有与浆细胞和原代MM细胞中的平均表达相似的FcRH5表达水平(图28A)。我们还鉴定了数种表达极其低水平的靶物的癌细胞系并使用Scatchard分析测定每个细胞的FcRH5数目。这些细胞系中FcRH5结合位点的范围自2200至低至160每个细胞而变化。尽管靶物拷贝数很低，1G7.v85TDB对所有测试细胞系诱导强健的杀伤(EC50＝2-230pM)。占据计算指示少至～50个TDB分子(MOLP-2上的2％占据；EC50＝58pM)足以诱导T细胞激活和靶细胞凋亡。
总之，FcRH5在所有骨髓瘤患者中表达。FcRH5TDB能以pM剂量杀伤人浆细胞和患者衍生原代骨髓瘤肿瘤细胞。由于将T细胞活性重新定向需要很少的TDB，因此该分子有力地杀伤具有很低的靶物表达的细胞。结果提示FcRH5TDB具有在骨髓瘤患者中广泛有活性的潜力且并不支持基于FcRH5表达水平自疗法排除患者。
H.食蟹猴是FcRH5TDB的适宜的安全性和功效模型
外周B细胞和骨髓浆细胞的FACS分析确认与人相似，FcRH5在食蟹猴中遍及B细胞谱系表达(图29A-29B；Polson et al.，Int.Immunol.18：1363-1373，2006)。人和食蟹猴FcRH5的氨基酸序列89％同一，而且1G7.v85TDB以相当的亲和力结合食蟹猴FcRH5和CD3。使用来自人或食蟹猴任一的外周T细胞，表达食蟹猴FcRH5的靶细胞或表达人FcRH5的MOLP-2细胞的体外处理以相当的效率导致强健的杀伤(图29C-29D)。将1G7.v85TDB添加至来自食蟹猴的PBMC/BMMC样品导致剂量依赖性且强健的食蟹猴B细胞(图29E)和骨髓浆细胞(图29F)杀伤。在图18C中，发现1G7.v1.4TDB和1G7.v85TDB具有不可区分的食蟹猴浆细胞杀伤能力。这些结果验证了食蟹猴作为抗FcRH5/CD3的适宜的安全性和功效模型。
实施例4：例示性FcRH5TDB的体内表征
材料和方法
A.鼠模型中的体内功效研究
a.huNSG/MOLP-2小鼠异种移植物模型
自Jackson Laboratory获得雌性人源化NOD.Cg Prkdcscid Il2rgtm1Wj1/SzJ(NOD/scidγ；NSG)小鼠。在细胞接种那天，在右体侧皮下在HBSS/matrigel中以100x106个细胞/mL的浓度给5只动物接种0.2mL MOLP-2肿瘤细胞。一旦肿瘤体积达到100-250mm3的体积范围，就将动物随机化分入两组，媒介和治疗组，而且在那天(第0天)施用第一次治疗。通过静脉内(i.v.)尾静脉注射一周一次施用所有治疗，总共4剂。用0.1ml20mM组氨酸乙酸酯，pH5.5，240mM蔗糖，0.02％TW-20缓冲剂处理媒介组。以0.5mg/kg的浓度用0.1ml1G7.v85TDB处理治疗组。研究持续期间用测径器每周1-2次测量肿瘤，并至少一周一次获取动物体重。对于这项研究持续期间，每周两次实施临床观察以监测动物的健康。
B.食蟹猴中的毒理学研究
在Charles River Laboratories(CRL)在未实验的，雄性食蟹猴中评估抗FcRH5TDB的耐受性，毒性概况，药动学(PK)，和药效学(PD)。用单剂，静脉内输注(1h)媒介，1，2，或4mg/kg 1G7.v85TDB处理食蟹猴并在处理后7天尸检。在头5个小时期间和终止时对动物密切监测详细的临床观察，呼吸速率，和体温。每天收集笼侧临床观察和体重。研究前和在贯穿研究的选定时间点经股静脉通过静脉穿刺收集血液样品用于分析血液学，血清化学，凝血，和PK总抗体水平)和PD终点。PD由测量细胞因子(IL-1β，IL-1RA，IL-2，IL-4，IL-5，IL-6，IL-12/23，IL-13，IL-17，G-CSF，GM-CSF，IFN-γ，TNF-a，和MCP-1)，T-淋巴细胞，B-淋巴细胞，NK细胞，激活的T-淋巴细胞的流式细胞术，PD-1，和循环食蟹猴IgG组成。研究前和在第8天尸检前通过自肱骨抽吸在麻醉的动物中收集骨髓，用于通过流式细胞术评估B-淋巴细胞和浆细胞。在尸检时，测量器官重量并通过肉眼和显微镜检查彻底检查选定器官和组织。对脾，肠系膜，和下颌淋巴结评估T-淋巴细胞，B-淋巴细胞，和NK细胞。依照动物福利法案，实验室动物护理和使用指导方针，和实验室动物福利办公室实施所有规程。
C.食蟹猴和小鼠中的PKPD研究
通过种属ELISA测定血清中FcRH5TDB的浓度。使用绵羊抗人IgG抗体作为捕捉试剂，并使用缀合有辣根过氧化物酶(HRP)的绵羊抗人IgG作为检测试剂。通过非隔室及IV推注输入模型(PhoenixTM
Figure BDA0001530253770001621
Version6.3；Pharsight Corporation；MountainView，CA)分析可得样品随时间的血清浓度的分析。在数据分析中使用名义样品收集时间和名义剂量浓度。所有TK分析基于个体动物数据。
结果
A.FcRH5TDB遏制用人免疫细胞重建的小鼠中已建立的MOLP-2肿瘤的生长
在小鼠中模拟FcRH5TDB的抗骨髓瘤活性是具有挑战性的，因为抗CD3抗体并不与小鼠CD3交叉反应且小鼠中并不存在FcRH5直向同系物。因此，通过将CD34+选择的人造血干细胞移植入经照射的小鼠(huNSG小鼠)来建立具有重建的人免疫系统的小鼠模型。自huNSG小鼠的脾收获的人CD8+细胞能够在体外以与来自健康供体的人外周CD8+细胞相当的效率杀死MOLP2细胞(图30A)。移植后20周，给huNSG小鼠皮下接种5x106个MOLP-2细胞。用单剂IV媒介或0.5mg/kg FcRH5TDB处理具有已建立的100-200mm3肿瘤的小鼠。FcRH5TDB治疗在所有动物中导致肿瘤消退(图30B)，指示FcRH5TDB治疗在体内遏制肿瘤生长。
B.FcRH5TDB具有长血清半衰期
设计单剂研究来在非人灵长类动物中评估1G7.v85TDB的安全性，功效，药动学(PK)，和药效学(PD)特性。用单剂缓慢输注静脉内媒介或1-4mg/kg 1G7.v85TDB处理食蟹猴。对动物密切监测不良作用。在0，2，6，和24小时时收集血液样品，用于细胞因子分析，临床病理学分析，和PK/PD应答。施用处理后7天终止研究。FcRH5TDB在1-4mg/kg之间展现剂量比例性暴露(Cmax和AUC)且在所有队列中以29-33ml/天/kg清除(图31A)且在4mg/kg剂量水平时的Cmax是129μg/ml。这比达到人浆细胞和MOLP-2的体外杀伤EC50的需求要高～2000倍。还在非结合的SCID.bg小鼠中进行PK研究，而且发现1G7.v85TDB具有与抗gD TDB相当的清除速率(图31B)。受体占据计算提示在所有剂量水平在Cmax时外周血B细胞上接近饱和的FcRH5啮合(图32D)。这些结果证明1G7.v85TDB具有长体内半衰期且支持一周一次或更低频率的给药日程表。
C.FcRH5TDB在食蟹猴中消减B细胞和骨髓浆细胞
外周血的FACS分析展示所有剂量水平上有力的药理学效果。1G7.v85TDB治疗在24小时内导致T细胞激活和瞬时淋巴细胞减少(边际响应)(图31C-31D)。在给药后7天在血液中仍然检测不到B细胞，提示它们被1G7.v85TDB消减(图31E)。相反，CD4+和CD8+细胞到研究结束时恢复(图32A-32B)。所有剂量水平导致脾和骨髓中B细胞完全消减(图31F和31H)。FcRH5治疗还自淋巴结诱导有力的，剂量依赖性B细胞消减(图31G和32C)。
体内食蟹猴骨髓浆细胞消减是抗FcRH5/CD3的临床前开发的关键功效终点。在用2-4mg/kg剂量处理的动物中检测到浆细胞的完全消减(图31I)。1G7.v85TDB治疗还导致食蟹猴IgG的剂量依赖性降低，一项源自浆细胞消减的预期次要结局。在理论上，浆细胞的完全消减应当到第7天将IgG水平降低～30-40％。食蟹猴IgG的实测降低在2mg/kg组中是37％而在4mg/kg组中是44％(图31J)。总之，1G7.v85TDB在食蟹猴中诱导有力的PD应答，与它的作用机制一致。完全浆细胞消减提供在骨髓微环境中的功效的强有力证据。
D.FcRH5TDB在食蟹猴中得到较好耐受
1G7.v85TDB以≤4mg/kg剂量水平在食蟹猴中得到较好耐受。检测到的温和/适度不良作用在所有剂量水平是相似的，而且我们没有看见清楚的剂量响应。临床观察限于给药后4小时内范围为0.4-1.6℃的可逆体温升高。对血液学的影响由归于边际的预期急性和可逆淋巴细胞减少组成。正如预期的，检测到急性和可逆促炎症状态的证据(升高的CRP，纤维蛋白原，凝血酶原时间，和活化部分凝血活酶时间)。治疗引起ALT，AST，和总胆红素的可逆升高。
与作用机制一致，1G7.v85TDB诱导快速的，一般是温和/适度的细胞因子释放(图33A-33F)。所有剂量水平诱导促炎症应答(包括IL-6，IL-5，IFN-g，IL-2，IL-13，G-CSF和MCP-1)和反抗它的抗炎症应答(IL1R)，在2-6小时时达到峰值。所有细胞因子在24小时内逆转至正常。没有看见广泛或延长的细胞因子释放的迹象。包括中枢神经系统(CNS)的详细分析的广泛组织病理学分析没有揭示显著器官毒性。总之，在该研究中没有达到最大耐受剂量。1G7.v85TDB在预期饱和靶物且足以完全消减B细胞和浆细胞的剂量水平得到较好耐受。在不良作用中没有检测到剂量响应。
实施例5：FcRH5组合疗法
为了检查可能的FcRH5组合疗法，与两种例示性PD-1轴结合拮抗剂中的每一种组合测试FcRH5TDB。这些实验证明，虽然PD-1/PD-L1反馈信号传导能降低FcRH5TDB介导的杀伤，但是PD-L1阻断克服这种抑制，导致改善的治疗功效。
材料和方法
A.抗体
除了另外提到的以外，所有用于流式细胞术的经标记抗体购自BD Bioscience。所使用的抗PD-1抗体是
Figure BDA0001530253770001641
(pembrolizumab)，而且抗PD-L1抗体是在Genentech公司生成的。山羊抗人IgG和山羊抗小鼠IgG购自Jackson Immunoresearch。抗PC-FITC(克隆Vs38c)购自DAKO。
B.抗PD-L1的PD-1诱导和细胞毒性测定法
将新鲜的分离的人CD8+T细胞与MOLP-2细胞以1∶1比率混合并在1000ng/ml1G7.v85TDB存在下共培养48小时。将细胞用异硫氰酸荧光素(FITC)标记的抗CD8抗体(“抗CD8-FITC”)，藻红蛋白(PE)缀合的抗CD69抗体(“抗CD69-PE”)，和别藻蓝蛋白(APC)缀合的抗PD-1抗体(“抗PD-1-APC”)染色，并通过流式细胞术分析。一般如本文中描述的，在有或无10mg/ml抗PD-L1或抗PD-1抗体的情况下设立表达FcRH5和PD-L1的HEK-293T细胞(“293-FcRH5-PD-L1细胞”)的细胞毒性测定法，并通过流式细胞术分析。
C.细胞培养和稳定细胞系生成
通过用编码FcRH5的慢病毒感染HEK-293T细胞，接着使用Lipofectamine(Invitrogen)转染人PD-L1编码质粒来评估PD-1/PD-L1信号传导对1G7.v85TDB活性的影响。
D.体外细胞毒性和T细胞激活测定法
依照制造商的方案(Life Technology，#C34554)用羧基荧光素琥珀酰亚胺基酯(CFSE)标记靶细胞。以3∶1效应细胞对靶细胞(E∶T)比率混合CFSE标记的靶细胞和纯化的CD8+细胞并与1G7.v85TDB一起温育24-48小时。在温育结束时，以自动格式在FACSCalibur上用流式细胞术分析细胞。通过对CFSE+/PI阴性细胞设门来对活的靶细胞的数目计数。如下计算细胞毒性百分比：％细胞毒性(无TDB时活的靶细胞数目-有TDB时活的靶细胞数目)/(无TDB时活的靶细胞数目)X 100。
结果
A.PD-1/PD-L1阻断增强FcRH5TDB的活性
强TCR刺激信号能引起限制T细胞活性的免疫遏制性反馈。PD-1/PD-L1途径是这种反馈的和数种肿瘤适应症中经过治疗验证的免疫逃逸机制的一种关键成分。PD-L1由骨髓瘤肿瘤细胞频繁表达(Gorgun et al.，Amer.Assoc.for Cancer Res.21：4607-4618，2015)，而且它的信号传导可能限制骨髓瘤患者中的T细胞活性。PD-1在静息T细胞中缺失，在T细胞激活时诱导且在慢性感染中限制T细胞活性(Zou et al.，Science Tran.Med.8：328rv324，2016)。在表达FcRH5的细胞存在下用1G7.v85TDB刺激(48小时)人健康供体CD8+细胞在T细胞中导致显著的PD-1诱导(图34)。反馈信号也在体内激活。在所有剂量水平在食蟹猴T细胞中看到PD-1阳性T细胞的显著增多。在血液，脾，淋巴结，和骨髓中的CD8+和CD4+细胞二者中检测到PD-1诱导(图35A-35B和36A-36D)。
在PD-1/PD-L1拮抗剂存在和缺失下评估经引发的CD8+细胞的1G7.v85TDB介导的靶细胞杀伤。1G7.v85TDB引发CD8+T细胞来杀死表达PD-L1的靶细胞的效率是适度的(图37A)。使用抗PD-L1抗体阻断PD-1/PD-L1信号传导显著提高1G7.v85TDB介导的杀伤的效率(图37A)。在一项特定实验中，将经引发的CD8+细胞与293-FcRH5-PD-L1细胞混合并用单独的或与抗PD-L1抗体或抗PD-1抗体(pembrolizumab)任一组合的1G7.v85TDB治疗(图37B)。与抗PD-L1抗体或抗PD-1抗体(pembrolizumab)的组合治疗显著增强1G7.v85TDB的功效。两种组合治疗方法的EC50均为0.4ng/mL，而单独的1G7.v85TDB的治疗的EC50为0.63ng/mL(图37B)。
这些结果证明在体外和在体内1G7.v85TDB介导的T细胞激活引起T细胞中PD-1的诱导。这些结果进一步证明PD-1/PD-L1信号传导能限制FcRH5TDB介导的杀伤，而且PD-L1阻断能克服这种抑制并导致改善的功效。这些数据支持FcRH5TDB与PD-1轴结合拮抗剂，诸如抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体组合的用途。
B.地塞米松在不影响FcRH5TDB活性的情况下降低第一剂细胞因子应答
还在地塞米松(Dex)(骨髓瘤中的标准护理的成分，具有抗炎性和免疫遏制剂效果)存在和缺失下评估靶细胞杀伤(图38A)。1G7.v85TDB在缓冲液中或在DMSO中的IC50分别为7pM和6pM。在0.1μM或1μM Dex存在下，1G7.v85TDB的IC50分别为16pM和25pM。Dex组合治疗对1G7.v85TDB功效只有适度影响且显著降低IL-2，IL-6，TNF-α，和IFN-γ水平。这些结果证明地塞米松可以与FcRH5TDB疗法组合使用以减轻患者中的第一剂细胞因子应答(图38B)。
实施例6：FcRH5bis-Fab的生成和测试
A.thio-Fab和铰链-cys-Fab的制备和蛋白质生成
为了制备具有游离硫氢基的抗体片段，如Junutula et al.，J.Immunol Methods332(1-2)：41-52，2008中先前描述的，通过定点诱变在轻链或重链的可变或恒定域任一的各个位置将半胱氨酸(Cys)替代引入抗体构建物中以创建thio-mAb。如下自thio-mAb酶促生成thio-Fab，即将thio-mAb在25mM Tris，pH8.0中稀释至1mg/mL，接着以1∶1000(wt∶wt)酶对抗体比率使用Lys-C(Wako Chemicals USA，Inc.，Richmond，VA)于37℃酶促消化1小时。用5μM蛋白酶抑制剂甲苯磺酰基-L-赖氨酸氯甲基酮(TLCK)(Bachem，Torrence，CA)停止Lys-C消化并使用50mM乙酸钠缓冲液和0-300mM NaCl 10个柱体积(CV)梯度在5mL Hi-TrapSP FF柱(GE Healthcare，Piscataway，NJ)上通过阳离子交换层析纯化。通过这种方法生成的thio-Fab在本文中有时称作“酶促thio-Fab”。在另一种办法中，将编码具有改造的Cys残基的Fab的DNA构建物或编码含有铰链区中的一个天然Cys残基的重链片段的DNA构建物亚克隆入质粒表达载体中并直接在CHO细胞中表达。通过这种方法生成的thio-Fab在本文中有时称作“重组thio-Fab”。第三种办法用于缺乏工程化改造的Cys残基且依赖于IgG的铰链区中存在的天然Cys残基的抗体。这种方法用于生成“铰链-cys-Fab”且在下文中进一步详细描述。
为了自并不含有工程化改造的半胱氨酸的天然抗体制备铰链-cys-Fab用于合成反应，使用图39小图1中描绘的下述酶促规程。用处于pH 4.5的乙酸钠缓冲液中的胃蛋白酶(1％w/w)处理消化FcRH5和CD3亲本抗体二者。消化1小时后，通过在SP-HP阳离子交换树脂上捕捉自消化混合物分离F(ab’)2并通过0-1M NaCl的10个CV的盐梯度纯化。然后在含有25mm MES，pH5.8，2mM EDTA，和300mM NaCl的缓冲液中还原F(ab’)2。用1mM TCEP还原后，如图39小图2中描绘的，通过添加5mM DHAA氧化Fab以在重链和轻链之间重新形成二硫化物。例行地观察到在这些反应条件下，仅仅重新形成重链和轻链之间的二硫化物；铰链区中的两个半胱氨酸残基保持未氧化。
如图39小图2中描绘的，然后将铰链处的两个游离硫醇(Cys残基)与1M当量的N-乙基马来酰亚胺(NEM)(Sigma Aldrich，St.Louis，MO)反应。如图39小图3中描述的，然后将含有单一修饰的，双重修饰的，和未修饰的Fab的所得混合物与过量的二马来酰亚胺交联剂反应。
这些反应条件产生三种产物：具有一个交联剂和一个NEM的Fab，具有两个NEM的Fab，和含有仅仅一个交联剂的Fab。发现含有仅仅一个交联剂的Fab并不具有游离半胱氨酸。因此，在这些反应条件下，单一交联剂与两个半胱氨酸非常有效地反应，产生其中的半胱氨酸已经通过交联剂环化的分子。通过凝胶过滤自反应混合物纯化包含上述三种反应产物的材料(以去除不想要的反应成分)并用于偶联至如图39小图4中描绘的，以相似方式制备的其它铰链-cys-Fab或thio-Fab。只有如所述那样制备且含有一个交联剂，一个游离马来酰亚胺，和一个游离硫氢基的thio-Fab或铰链cys-Fabs能够在下文详细描述的bis-Fab合成反应中反应。
B.蛋白质表达和纯化
为了便于纯化，与Flag或His标签任一一起表达Fab。通过标准规程进行CHO细胞中的表达。使用抗Flag单抗树脂或镍珠树脂进行细胞培养后的亲和纯化。通过SDS-PAGE和质谱术表征纯化的thio-Fab。这些表征常常显示275Da和306Da的质量增加。发现这些质量增加是未配对半胱氨酸上的二硫化物加合物，其通过还原和氧化去除以制备用于用二马来酰亚胺交联的thio-Fab。如下进行thio-Fab的还原和氧化。第一，通过添加含有25mM MES，pH5.8，300mL NaCl，和5mM EDTA的缓冲液中的2mM三(2-羧乙基)膦HCl(TCEP-HCl；也称作TCEP)(Pierce[Thermo Fisher Scientific]，Rockford，IL)将thio-Fab还原24小时。还原后，通过添加5mM脱氢抗坏血酸(DHAA)(Sigma-Aldrich，St.Louis，MO)氧化蛋白质。通过SDS-PAGE和质谱术分析分离的thio-Fab以确保蛋白质正确还原和氧化。
C.Bis-Fab合成
可以使用两种不同类型的交联剂来共价连接两个Fab：二马来酰亚胺和衔接头对DBCO-PEG-马来酰亚胺/溴乙酰胺-PEG-叠氮化物。
使用二马来酰亚胺交联剂的缀合
在bis-Fab合成的第一阶段，使用thio-Fab或具有未配对半胱氨酸的铰链-cys-Fab。一般地，thio-Fab或铰链-cys-Fab在相同的缓冲液中，在其中以1mg/mL的蛋白质浓度进行还原(图39，小图1)和氧化(图39，小图2)(MES，pH 5.8，2mM EDTA，和300mM NaCl)。在这个阶段存在两种潜在的不想要的反应产物：二硫化物二聚体和交联二聚体。在合成的这个阶段具有1mg/mL的蛋白质浓度是反应的一项重要特征，因为二聚化在该蛋白质浓度最小化。另外，通过使用具有EDTA的低pH缓冲液控制反应有助于最小化二聚化。
将5倍过量的二马来酰亚胺交联剂(Quanta BioDesign，Powell，OH)添加至反应混合物，如图39小图3中描绘的。这一5倍过量的交联剂在最小化不想要的二聚化中也是有用的。将反应于室温(RT)或37℃温育4小时直至完全。然后将混合物浓缩至适合于凝胶过滤的体积。对μg至mg数量合成使用22mL S-200Tricom柱(GE Healthcare，Piscataway，NJ)。这第一个凝胶过滤步骤容许去除未使用的交联剂，产生纯化的缀合至交联剂的thio-Fab或铰链-cys-Fab。上文描述的条件通常产生至少90％或更多的期望产物。没有thio-Fab或铰链-cys-Fab保持为游离硫醇，因为都缀合至交联剂或经由未配对半胱氨酸通过二硫化物结合至另一个thio-Fab或铰链-cys-Fab。然后将分离的和纯化的thio-Fab(或铰链-cys-Fab)加交联剂种类添加至第二种thio-Fab(或铰链-cys-Fab)并浓缩至5mg/mL或更高，通常浓缩至适合于凝胶过滤的体积，如图39小图4中描绘的。合成的这个阶段期间至少5mg/mL的蛋白质浓度对于驱动反应完全是重要的。更低的蛋白质浓度导致只形成少量的交联bis-Fab二聚体。不受理论束缚，假设通过提高反应物的浓度克服了阻碍交联bis-Fab二聚体形成的位阻效应或粘度相关变量。另外，测试了高至且包括65mg/mL的蛋白质浓度范围。发现了蛋白质浓度和反应时间之间的关联，蛋白质浓度越高，反应越快达到完全。于室温或37℃达2-24小时后，反应完全，如通过质谱术测定的。一般地，一种试剂过量且在最终混合物中保持未偶联。
使用DBCO-PEG-马来酰亚胺/溴乙酰胺-PEG-叠氮化物的缀合
在50mM HEPES pH 8中的5倍摩尔过量(5molar excess)的DBCO-PEG-马来酰亚胺(#760676，Sigma)中使纯化的且去封闭的Fab之一反应，而使另一种Fab与50mM HEPES pH8中的5倍摩尔过量的叠氮化物-PEG-马来酰亚胺(#21097BroadPharm)反应。于37℃温育1小时后，通过质谱术检查反应以验证反应完全。通过SEC自过量的交联剂纯化缀合的Fab并随后以1∶1比率混合并调节至5mg/ml以上的浓度并于室温温育过夜。
不管所使用的交联剂，再次通过凝胶过滤纯化完成的反应；这次收集二聚体峰，其经由游离半胱氨酸氨基酸(在thio-Fab的情况中)或经由位于铰链区中的未配对半胱氨酸(在未工程化改造的铰链-cys-Fab的情况中)含有不可逆交联的100kD bis-Fab。常常通过质谱术监测两个步骤期间的反应进展，其清除地显示两种反应物的存在和bis-Fab产物的形成。通过质谱术和SDS-PAGE测定第二次凝胶过滤后期望产物的纯度。在还原和SDS-PAGE分析后，通过代表不可还原交联链的50kD条带的存在观察到不可逆交联。以小规模使用上文描述的工艺，典型地以微克数量的起始材料实现微克产量。另外，在更大规模，通常自毫克数量的起始材料实现毫克产量。
D.靶向CD3和FcRH5的bis-Fab的合成
生成了自靶向CD3和FcRH5的两种不同抗体获得的双特异性bis-Fab。所使用的抗CD3亲本抗体可以是任何抗CD3抗体，诸如38E4v.1，38E4.v11，或40G5。在一个实施方案中，bis-Fab利用38E4.v1作为抗CD3构件，其具有SEQ ID NO：134的轻链序列和SEQ ID NO：133的重链序列。所使用的抗FcRH5抗体亲本抗体也可以是任何抗FcRH5，例如本文中描述的那些抗体，诸如hu1G7.v85和hulG7.v87。具体而言，一种例示性bis-Fab包含SEQ ID NO：105的可变轻链序列和SEQ ID NO：104的可变重链序列。
对应每一种这些抗体，如上文所述在CHO细胞中生成重组thio-Fab。然后使用合成基质以组合格式自thio-Fab合成bis-Fab，以大约2mg每一种thio-Fab开始。组合不同thio-Fab以合成四种独特bis-Fab分子。对于所显示例子自合成回收大约1mg每一种bis-Fab，但是产量预期随不同thio-Fab而变化。每一种bis-Fab给予独特标识符。使用本领域公知的标准方法通过SDS-PAGE和质谱术分析每一种bis-Fab的纯度。
使用上文所述基质重组办法，合成了一系列CD3和FcRH5衍生bis-Fab结构变体。选择4个不同硫附着点来合成bis-Fab；位置之一在抗CD3thio-Fab臂的重链中(例如在位置76处(Cys76HC))，一个位置在抗CD3thio-Fab臂的轻链中(例如在位置22处(Cys22LC))，位置之一在抗FcRH5thio-Fab臂的重链中(例如在位置114处(Cys114HC))，而一个位置在抗FcRH5thio-Fab臂的轻链中(例如在位置149处(Cys149LC))。可以利用其它位置来插入需要的半胱氨酸。含有硫附着点的Fab衍生自三个不同来源；(1)用赖氨酸-C消化具有半胱氨酸替代的thio-mAb以自该抗体释放thio-Fab，(2)在CHO细胞中直接表达并自其纯化具有半胱氨酸替代的thio-Fab，和(3)通过上文所述酶促方法生成铰链-cys-Fab，用于在用胃蛋白酶消化后用单一交联剂附着至非工程化改造的抗体的铰链区。这种办法在thio-Fab中产生不同替代点，用于与其它thio-Fab重组，由此产生结构变体(见表15)。
表15：每一种Fab中的工程化改造的Cys的位置和相应bis-Fab编号
Figure BDA0001530253770001701
E.FcRH5Bis-Fab的生物学活性
接下来，通过ELISA对每一种bis-Fab结构变体测试它们对每一种抗原(即CD3和FcRH5)的结合能力。通过交联铰链区中的Cys生成的bis-Fab类似天然抗体的构造且充当对照。虽然所有bis-Fab构建物具有相似的对FcRH5的结合能力(图40A)，但是大多数bis-Fab显示与参照bis-Fab相比降低的对CD3的结合(图40B)。在充当T细胞杀伤活性替代物的体外T细胞激活测定法中评估生物学活性(图41)。这种测定法使用经在转录因子NF-kB控制下萤光素酶报告物稳定转染的Jurkat细胞系(Jurkat-Dual，Invivogen)，而且使用这种测定法胜过T细胞杀伤测定法的优势在于能利用的细胞的数目是无限的。在PBMC细胞杀伤测定法中，测试的数目受到能自单一供体获得的细胞的数目限制。如下进行该测定法。选择适宜的细胞系(诸如MOLP-2)作为靶细胞并与Jurkat细胞一起共培养。在有或无bis-Fab存在下，每个孔添加10,000个细胞系靶细胞和50,000个效应细胞(Jurkat)(10,000个靶细胞每孔，200μL总体积，靶∶效应比率＝1∶5)。温育过夜后，使用50μL QUANTI-LUC(Invivogen)对不同孔的10μl上清液测定萤光素酶活性，并在Envision(Perkin Elmer)发光计仪器中对发光定量。
有趣的是，虽然为抗CD3或抗FcRH5生成的每一种bis-Fab变体的HVR序列在生成bis-Fab自身时没有改变，但是对每一种bis-Fab观察到的最大量的T-细胞刺激在bis-Fab之间显示变化，仅仅基于半胱氨酸工程化改造交联的位置。不受理论束缚，这可能暗示如何可以调控bis-Fab的毒性和/或效力以适合特定治疗或诊断需求。另一项观察结果在于一些bis-Fab(例如bis-Fab C)具有显著降低的针对CD3的亲和力，但是具有与参照F(ab’)2A相当的T细胞激活活性(图40B和41，表15)。
F.FcRH5Bis-Fab使用内源人B细胞的生物学活性
如下在用于外周内源B细胞杀伤的T细胞依赖性bis-Fab杀伤测定法中对每一种bis-Fab变体测试其生物学功效：在有或无bis-Fab的情况下每个孔添加200,000个自3名健康供体每一个分离的hPBMC。温育48小时后，将细胞用靶细胞系的适宜细胞表面抗原(B细胞＝CD20)(5μl/孔)和用于细胞存活力评估的碘化丙啶染色，然后通过FACS分析。依照下述方程计算bis-Fab依赖性杀伤活性：％杀伤＝(1-有bis-Fab时的活细胞数目/无bis-Fab时的活细胞数目)x 100。作为阳性对照，使用衍生自“节入穴”FcRH5TDB抗体的F(ab’)2，其中每一种Fab的抗CD3和抗FcRH5臂具有与用于所测试的bis-Fab的那些相同的序列(除了没有半胱氨酸工程化改造的点突变)(参见例如Ridgway et al.，Protein Eng.，9：617-621，1996)。一般地，结果证明可再现性，尽管使用不同供体细胞。
为上文测试的每一种bis-Fab计算在本文中测试的FcRH5bis-Fab实现外周内源人B细胞半最大裂解所需的量，或以ng/ml表述的EC50效力值。总之，预期在内源人B细胞测定法中测试的每一种bis-Fab的效力的趋势会追踪在上文所述ELISA测定法中测定的结果(图40A-40B)。
序列表
<110> 基因泰克公司（Genentech, Inc.）
豪夫迈·罗氏有限公司（F. Hoffmann-La Roche AG）
<120> 人源化的和亲和力成熟的针对FcRH5的抗体和使用方法
<130> 50474-134WO2
<150> US 62/180,459
<151> 2015-06-16
<160> 215
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 5
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<220>
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<220>
<223> 合成构建物
<400> 28
Ala Arg Asp Met Tyr Thr Gly Ser Ile Tyr Tyr Asp Met
1 5 10
<210> 29
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 29
Gln Ser Ser Gln Ser Val Phe Asn Asn Ala Gln Leu Ser
1 5 10
<210> 30
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 30
Asp Thr Ser Asn Leu Ala Ser
1 5
<210> 31
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 31
Leu Gly Ala Tyr Thr Asp Asp Ala Asp Asn Ala
1 5 10
<210> 32
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 32
Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr Ala Met His
1 5 10
<210> 33
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 33
Met Ile Ser Ser Ser Ser Gly Asn Thr Asn Phe Asn Gln Lys Phe Met
1 5 10 15
Asp
<210> 34
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 34
Ala Arg Trp Ser Tyr Tyr Ala Leu Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 35
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 35
Ser Ala Asp Ser Ser Val Asp Tyr Ile His
1 5 10
<210> 36
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 36
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser
1 5
<210> 37
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 37
Phe Gln Gly Ser Gly Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 38
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 38
Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Val Ile His
1 5 10
<210> 39
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 39
Tyr Ile Ser Pro Tyr Asn Asp Tyr Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Glu
1 5 10 15
Gly
<210> 40
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 40
Ala Arg Arg Asp Tyr Tyr Gly Ser Ser Asp Tyr
1 5 10
<210> 41
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 41
Ser Ala Ser Ser Ser Val Asp Tyr Met His
1 5 10
<210> 42
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 42
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser
1 5
<210> 43
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 43
Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Pro Thr
1 5
<210> 44
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<220>
<221> 混杂特征
<222> (1)..(1)
<223> Xaa 是 Glu, Ser, 或 Phe
<220>
<221> 混杂特征
<222> (28)..(28)
<223> Xaa 是 Ser 或 Pro
<220>
<221> 混杂特征
<222> (29)..(29)
<223> Xaa 是 Leu 或 Thr
<400> 44
Xaa Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Xaa Xaa Thr
20 25 30
<210> 45
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<220>
<221> 混杂特征
<222> (2)..(2)
<223> Xaa 是 Val 或 Tyr
<220>
<221> 混杂特征
<222> (13)..(13)
<223> Xaa 是 Leu 或 Ile
<400> 45
Trp Xaa Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Xaa Gly
1 5 10
<210> 46
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 46
Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu Lys
1 5 10 15
Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser Asn
20 25 30
<210> 47
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 47
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 48
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 48
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 49
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<220>
<221> 混杂特征
<222> (9)..(9)
<223> Xaa 是 Ala 或 Ser
<400> 49
Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Xaa Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 50
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 50
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 51
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 51
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 52
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 52
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr
20 25 30
<210> 53
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 53
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Thr Thr
20 25 30
<210> 54
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 54
Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly
1 5 10
<210> 55
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 55
Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 56
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 56
Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 57
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 57
Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 58
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 58
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser
20 25
<210> 59
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 59
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 60
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Ser Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
20 25 30
<210> 61
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 61
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 62
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 62
Asp Ala Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr
20
<210> 63
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 63
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 64
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 64
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 65
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 65
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 66
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 66
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Arg Pro Gly Val
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser
20 25
<210> 67
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 67
Trp Val Lys Gln Ser His Thr Lys Ser Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 68
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 68
Lys Ala Thr Met Thr Val Asp Lys Ser Ser Thr Thr Ala Tyr Leu Glu
1 5 10 15
Leu Ala Arg Leu Thr Phe Gly Asp Ser Ala Ile Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 69
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 69
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 70
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 70
Glu Asn Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys
20
<210> 71
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 71
Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Asn Thr Ser Pro Lys Leu Trp Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 72
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 72
Gly Val Pro Gly Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Asn Ser Tyr Ser
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 73
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 73
Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
1 5 10
<210> 74
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 74
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser
20 25
<210> 75
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 75
Trp Met Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 76
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 76
Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 77
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 77
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 78
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 78
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys
20
<210> 79
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 79
Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Lys Trp Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 80
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 80
Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser
1 5 10 15
Leu Thr Ile Gly Ser Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 81
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 81
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 82
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 82
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Arg Phe
20 25 30
Gly Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Arg Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ala Ala Phe Met
50 55 60
Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser
85 90 95
Asn His Tyr Tyr Gly Ser Ser Asp Tyr Ala Leu Asp Asn Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 83
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 83
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Asn Ile
20 25 30
Val Val Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Ser Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 84
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 84
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Arg Phe
20 25 30
Gly Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Arg Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ala Ala Phe Met
50 55 60
Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser
85 90 95
Asn His Tyr Tyr Gly Ser Ser Asp Tyr Ala Leu Asp Asn Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 85
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 85
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Arg Asn Leu
20 25 30
Val Val Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Gly Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gln Tyr Ser Pro Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 86
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 86
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Arg Phe
20 25 30
Gly Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Arg Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ala Ala Phe Met
50 55 60
Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser
85 90 95
Asn His Tyr Tyr Gly Ser Ser Asp Tyr Ala Leu Asp Asn Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 87
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 87
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Arg Asn Leu
20 25 30
Val Val Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Gly Tyr Asn Arg Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gln Phe Gln Pro Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 88
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 88
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Arg Phe
20 25 30
Gly Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Arg Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ala Ala Phe Met
50 55 60
Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser
85 90 95
Asn His Tyr Tyr Gly Ser Ser Asp Tyr Ala Leu Asp Asn Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 89
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 89
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Arg Asn Ile
20 25 30
Val Val Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Gly Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gln Tyr Ser Pro Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 90
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 90
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Arg Phe
20 25 30
Gly Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Arg Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ala Ala Phe Met
50 55 60
Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser
85 90 95
Asn His Tyr Tyr Gly Ser Ser Asp Tyr Ala Leu Asp Asn Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 91
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 91
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Arg Asn Leu
20 25 30
Val Val Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Gly Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Pro Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 92
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 92
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Arg Phe
20 25 30
Gly Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Arg Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ala Ala Phe Met
50 55 60
Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser
85 90 95
Asn His Tyr Tyr Gly Ser Ser Asp Tyr Ala Leu Asp Asn Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 93
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 93
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Asn Ile
20 25 30
Val Val Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Gly Tyr Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gln Phe Gln Pro Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 94
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 94
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Arg Phe
20 25 30
Gly Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Arg Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ala Ala Phe Met
50 55 60
Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser
85 90 95
Asn His Tyr Tyr Gly Ser Ser Asp Tyr Ala Leu Asp Asn Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 95
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 95
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Asn Ile
20 25 30
Val Val Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Gly Tyr Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
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<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 96
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Thr Thr Arg Phe
20 25 30
Gly Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
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65 70 75 80
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Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 97
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 97
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Arg Asn Leu
20 25 30
Val Val Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Gly Tyr Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
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65 70 75 80
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<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 98
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Arg Phe
20 25 30
Gly Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Val Ile Trp Arg Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ala Ala Phe Met
50 55 60
Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser
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<210> 99
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 99
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Arg Asn Leu
20 25 30
Val Val Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Gly Tyr Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
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<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 100
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Arg Phe
20 25 30
Gly Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Arg Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ala Ala Phe Met
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Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu
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<210> 101
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 101
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Arg Asn Leu
20 25 30
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Tyr Ser Gly Tyr Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
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100 105
<210> 102
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 102
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Arg Phe
20 25 30
Gly Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Arg Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ala Ala Phe Val
50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
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115 120
<210> 103
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 103
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Asn Ile
20 25 30
Val Val Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
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65 70 75 80
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100 105
<210> 104
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 104
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Arg Phe
20 25 30
Gly Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Arg Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ala Ala Phe Val
50 55 60
Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser
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100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 105
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 105
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Arg Asn Leu
20 25 30
Val Val Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Gly Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
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Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Pro Pro Tyr
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Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 106
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 106
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Thr Thr Arg Phe
20 25 30
Gly Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
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Gly Val Ile Trp Arg Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ala Ala Phe Val
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Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu
65 70 75 80
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Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 107
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 107
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Asn Leu
20 25 30
Val Val Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Gly Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Pro Pro Tyr
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Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 108
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 108
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Thr Ile Gly Thr Gly Gly Thr Pro Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Ser Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Met Tyr Thr Gly Ser Ile Tyr Tyr Asp Met Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 109
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 109
Asp Ala Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Ser Gln Ser Val Phe Asn Asn
20 25 30
Ala Gln Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Asp Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu
65 70 75 80
Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ala Tyr Thr Asp
85 90 95
Asp Ala Asp Asn Ala Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 110
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 110
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Arg Pro Gly Val
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Lys Gln Ser His Thr Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Met Ile Ser Ser Ser Ser Gly Asn Thr Asn Phe Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Met Asp Lys Ala Thr Met Thr Val Asp Lys Ser Ser Thr Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Leu Ala Arg Leu Thr Phe Gly Asp Ser Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Ser Tyr Tyr Ala Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 111
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 111
Glu Asn Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Asp Ser Ser Val Asp Tyr Ile
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Asn Thr Ser Pro Lys Leu Trp Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Gly Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Asn Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly Ser Gly Tyr Pro Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 112
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 112
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Val Ile His Trp Met Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Ser Pro Tyr Asn Asp Tyr Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Glu Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Asp Tyr Tyr Gly Ser Ser Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 113
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 113
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Asp Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Lys Trp Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Gly Ser Met Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 114
<211> 977
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 114
Met Leu Leu Trp Val Ile Leu Leu Val Leu Ala Pro Val Ser Gly Gln
1 5 10 15
Phe Ala Arg Thr Pro Arg Pro Ile Ile Phe Leu Gln Pro Pro Trp Thr
20 25 30
Thr Val Phe Gln Gly Glu Arg Val Thr Leu Thr Cys Lys Gly Phe Arg
35 40 45
Phe Tyr Ser Pro Gln Lys Thr Lys Trp Tyr His Arg Tyr Leu Gly Lys
50 55 60
Glu Ile Leu Arg Glu Thr Pro Asp Asn Ile Leu Glu Val Gln Glu Ser
65 70 75 80
Gly Glu Tyr Arg Cys Gln Ala Gln Gly Ser Pro Leu Ser Ser Pro Val
85 90 95
His Leu Asp Phe Ser Ser Ala Ser Leu Ile Leu Gln Ala Pro Leu Ser
100 105 110
Val Phe Glu Gly Asp Ser Val Val Leu Arg Cys Arg Ala Lys Ala Glu
115 120 125
Val Thr Leu Asn Asn Thr Ile Tyr Lys Asn Asp Asn Val Leu Ala Phe
130 135 140
Leu Asn Lys Arg Thr Asp Phe His Ile Pro His Ala Cys Leu Lys Asp
145 150 155 160
Asn Gly Ala Tyr Arg Cys Thr Gly Tyr Lys Glu Ser Cys Cys Pro Val
165 170 175
Ser Ser Asn Thr Val Lys Ile Gln Val Gln Glu Pro Phe Thr Arg Pro
180 185 190
Val Leu Arg Ala Ser Ser Phe Gln Pro Ile Ser Gly Asn Pro Val Thr
195 200 205
Leu Thr Cys Glu Thr Gln Leu Ser Leu Glu Arg Ser Asp Val Pro Leu
210 215 220
Arg Phe Arg Phe Phe Arg Asp Asp Gln Thr Leu Gly Leu Gly Trp Ser
225 230 235 240
Leu Ser Pro Asn Phe Gln Ile Thr Ala Met Trp Ser Lys Asp Ser Gly
245 250 255
Phe Tyr Trp Cys Lys Ala Ala Thr Met Pro Tyr Ser Val Ile Ser Asp
260 265 270
Ser Pro Arg Ser Trp Ile Gln Val Gln Ile Pro Ala Ser His Pro Val
275 280 285
Leu Thr Leu Ser Pro Glu Lys Ala Leu Asn Phe Glu Gly Thr Lys Val
290 295 300
Thr Leu His Cys Glu Thr Gln Glu Asp Ser Leu Arg Thr Leu Tyr Arg
305 310 315 320
Phe Tyr His Glu Gly Val Pro Leu Arg His Lys Ser Val Arg Cys Glu
325 330 335
Arg Gly Ala Ser Ile Ser Phe Ser Leu Thr Thr Glu Asn Ser Gly Asn
340 345 350
Tyr Tyr Cys Thr Ala Asp Asn Gly Leu Gly Ala Lys Pro Ser Lys Ala
355 360 365
Val Ser Leu Ser Val Thr Val Pro Val Ser His Pro Val Leu Asn Leu
370 375 380
Ser Ser Pro Glu Asp Leu Ile Phe Glu Gly Ala Lys Val Thr Leu His
385 390 395 400
Cys Glu Ala Gln Arg Gly Ser Leu Pro Ile Leu Tyr Gln Phe His His
405 410 415
Glu Gly Ala Ala Leu Glu Arg Arg Ser Ala Asn Ser Ala Gly Gly Val
420 425 430
Ala Ile Ser Phe Ser Leu Thr Ala Glu His Ser Gly Asn Tyr Tyr Cys
435 440 445
Thr Ala Asp Asn Gly Phe Gly Pro Gln Arg Ser Lys Ala Val Ser Leu
450 455 460
Ser Val Thr Val Pro Val Ser His Pro Val Leu Thr Leu Ser Ser Ala
465 470 475 480
Glu Ala Leu Thr Phe Glu Gly Ala Thr Val Thr Leu His Cys Glu Val
485 490 495
Gln Arg Gly Ser Pro Gln Ile Leu Tyr Gln Phe Tyr His Glu Asp Met
500 505 510
Pro Leu Trp Ser Ser Ser Thr Pro Ser Val Gly Arg Val Ser Phe Ser
515 520 525
Phe Ser Leu Thr Glu Gly His Ser Gly Asn Tyr Tyr Cys Thr Ala Asp
530 535 540
Asn Gly Phe Gly Pro Gln Arg Ser Glu Val Val Ser Leu Phe Val Thr
545 550 555 560
Val Pro Val Ser Arg Pro Ile Leu Thr Leu Arg Val Pro Arg Ala Gln
565 570 575
Ala Val Val Gly Asp Leu Leu Glu Leu His Cys Glu Ala Pro Arg Gly
580 585 590
Ser Pro Pro Ile Leu Tyr Trp Phe Tyr His Glu Asp Val Thr Leu Gly
595 600 605
Ser Ser Ser Ala Pro Ser Gly Gly Glu Ala Ser Phe Asn Leu Ser Leu
610 615 620
Thr Ala Glu His Ser Gly Asn Tyr Ser Cys Glu Ala Asn Asn Gly Leu
625 630 635 640
Val Ala Gln His Ser Asp Thr Ile Ser Leu Ser Val Ile Val Pro Val
645 650 655
Ser Arg Pro Ile Leu Thr Phe Arg Ala Pro Arg Ala Gln Ala Val Val
660 665 670
Gly Asp Leu Leu Glu Leu His Cys Glu Ala Leu Arg Gly Ser Ser Pro
675 680 685
Ile Leu Tyr Trp Phe Tyr His Glu Asp Val Thr Leu Gly Lys Ile Ser
690 695 700
Ala Pro Ser Gly Gly Gly Ala Ser Phe Asn Leu Ser Leu Thr Thr Glu
705 710 715 720
His Ser Gly Ile Tyr Ser Cys Glu Ala Asp Asn Gly Leu Glu Ala Gln
725 730 735
Arg Ser Glu Met Val Thr Leu Lys Val Ala Val Pro Val Ser Arg Pro
740 745 750
Val Leu Thr Leu Arg Ala Pro Gly Thr His Ala Ala Val Gly Asp Leu
755 760 765
Leu Glu Leu His Cys Glu Ala Leu Arg Gly Ser Pro Leu Ile Leu Tyr
770 775 780
Arg Phe Phe His Glu Asp Val Thr Leu Gly Asn Arg Ser Ser Pro Ser
785 790 795 800
Gly Gly Ala Ser Leu Asn Leu Ser Leu Thr Ala Glu His Ser Gly Asn
805 810 815
Tyr Ser Cys Glu Ala Asp Asn Gly Leu Gly Ala Gln Arg Ser Glu Thr
820 825 830
Val Thr Leu Tyr Ile Thr Gly Leu Thr Ala Asn Arg Ser Gly Pro Phe
835 840 845
Ala Thr Gly Val Ala Gly Gly Leu Leu Ser Ile Ala Gly Leu Ala Ala
850 855 860
Gly Ala Leu Leu Leu Tyr Cys Trp Leu Ser Arg Lys Ala Gly Arg Lys
865 870 875 880
Pro Ala Ser Asp Pro Ala Arg Ser Pro Ser Asp Ser Asp Ser Gln Glu
885 890 895
Pro Thr Tyr His Asn Val Pro Ala Trp Glu Glu Leu Gln Pro Val Tyr
900 905 910
Thr Asn Ala Asn Pro Arg Gly Glu Asn Val Val Tyr Ser Glu Val Arg
915 920 925
Ile Ile Gln Glu Lys Lys Lys His Ala Val Ala Ser Asp Pro Arg His
930 935 940
Leu Arg Asn Lys Gly Ser Pro Ile Ile Tyr Ser Glu Val Lys Val Ala
945 950 955 960
Ser Thr Pro Val Ser Gly Ser Leu Phe Leu Ala Ser Ser Ala Pro His
965 970 975
Arg
<210> 115
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 115
Ser Tyr Tyr Ile His
1 5
<210> 116
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 116
Trp Ile Tyr Pro Glu Asn Asp Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 117
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<220>
<221> 混杂特征
<222> (6)..(6)
<223> Xaa 是 Tyr 或 Ala
<400> 117
Asp Gly Tyr Ser Arg Xaa Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 118
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 118
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Arg Thr Arg Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 119
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 119
Trp Thr Ser Thr Arg Lys Ser
1 5
<210> 120
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<220>
<221> 混杂特征
<222> (1)..(1)
<223> Xaa 是 Lys 或 Thr
<400> 120
Xaa Gln Ser Phe Ile Leu Arg Thr
1 5
<210> 121
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 121
Asp Gly Tyr Ser Arg Tyr Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 122
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 122
Asp Gly Tyr Ser Arg Ala Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 123
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 123
Lys Gln Ser Phe Ile Leu Arg Thr
1 5
<210> 124
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 124
Thr Gln Ser Phe Ile Leu Arg Thr
1 5
<210> 125
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 125
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr
20 25 30
<210> 126
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 126
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 127
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 127
Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Leu Glu
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 128
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 128
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 129
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 129
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys
20
<210> 130
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 130
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 131
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 131
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 132
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 132
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 133
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 133
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Glu Asn Asp Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Tyr Ser Arg Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 134
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 134
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Arg Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Thr Ser Thr Arg Lys Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln
85 90 95
Ser Phe Ile Leu Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 135
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 135
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Glu Asn Asp Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Tyr Ser Arg Ala Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 136
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 136
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Arg Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Thr Ser Thr Arg Lys Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln
85 90 95
Ser Phe Ile Leu Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 137
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 137
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Glu Asn Asp Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Tyr Ser Arg Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 138
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 138
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Arg Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Thr Ser Thr Arg Lys Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Gln
85 90 95
Ser Phe Ile Leu Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 139
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 139
Asn Tyr Tyr Ile His
1 5
<210> 140
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 140
Trp Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 141
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 141
Asp Ser Tyr Ser Asn Tyr Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 142
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 142
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Arg Thr Arg Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 143
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 143
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 144
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 144
Thr Gln Ser Phe Ile Leu Arg Thr
1 5
<210> 145
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 145
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr
20 25 30
<210> 146
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 146
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 147
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 147
Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Leu Glu
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 148
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 148
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 149
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 149
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys
20
<210> 150
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 150
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 151
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 151
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 152
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 152
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 153
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 153
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Ser Tyr Ser Asn Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 154
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 154
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Arg Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Gln
85 90 95
Ser Phe Ile Leu Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 155
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 155
Gly Tyr Thr Met Asn
1 5
<210> 156
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<220>
<221> 混杂特征
<222> (9)..(9)
<223> Xaa 是 Ser 或 Thr
<220>
<221> 混杂特征
<222> (12)..(12)
<223> Xaa 是 Asn 或 Ala
<220>
<221> 混杂特征
<222> (13)..(13)
<223> Xaa 是 Gln 或 Asp
<220>
<221> 混杂特征
<222> (14)..(14)
<223> Xaa 是 Lys 或 Ser
<220>
<221> 混杂特征
<222> (15)..(15)
<223> Xaa 是 Val 或 Phe
<220>
<221> 混杂特征
<222> (17)..(17)
<223> Xaa 是 Gly 或 Asp
<400> 156
Leu Ile Asn Pro Tyr Lys Gly Val Xaa Thr Tyr Xaa Xaa Xaa Xaa Lys
1 5 10 15
Xaa
<210> 157
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 157
Ser Gly Tyr Tyr Gly Asp Ser Asp Trp Tyr Phe Asp Val
1 5 10
<210> 158
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 158
Arg Ala Ser Gln Asp Ile Arg Asn Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 159
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 159
Tyr Thr Ser Arg Leu Glu Ser
1 5
<210> 160
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 160
Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Trp Thr
1 5
<210> 161
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 161
Leu Ile Asn Pro Tyr Lys Gly Val Thr Thr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 162
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 162
Leu Ile Asn Pro Tyr Lys Gly Val Ser Thr Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 163
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 163
Leu Ile Asn Pro Tyr Lys Gly Val Ser Thr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 164
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 164
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr
20 25 30
<210> 165
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 165
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Asp Leu Glu Trp Val Ala
1 5 10
<210> 166
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 166
Arg Phe Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 167
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 167
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 168
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 168
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 169
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 169
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 170
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 170
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 171
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 171
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
1 5 10
<210> 172
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 172
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Asp Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Leu Ile Asn Pro Tyr Lys Gly Val Ser Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Gly Tyr Tyr Gly Asp Ser Asp Trp Tyr Phe Asp Val Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 173
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 173
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Arg Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 174
Gln Asp Gly Asn Glu Glu Met Gly Gly Ile Thr Gln Thr Pro Tyr Lys
1 5 10 15
Val Ser Ile Ser Gly Thr Thr Val Ile Leu Thr Cys
20 25
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
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1 5 10 15
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<220>
<223> 合成构建物
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1 5 10 15
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<220>
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<220>
<223> 合成构建物
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<220>
<223> 合成构建物
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Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr
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<220>
<223> 合成构建物
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<223> 合成构建物
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<223> 合成构建物
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<220>
<223> 合成构建物
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<220>
<223> 合成构建物
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Ser Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 186
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 187
Phe Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
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Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Arg Phe
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Gly Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
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Gly Val Ile Trp Arg Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ala Ala Phe Met
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Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu
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<400> 188
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<400> 189
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 191
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Gly Val Ile Trp Arg Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ala Ala Phe Met
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 192
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Val Val Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Ile
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 193
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<211> 107
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 194
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 195
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
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<223> 合成构建物
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<223> 合成构建物
<400> 197
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<223> 合成构建物
<400> 198
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<220>
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<400> 199
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<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
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<223> 合成构建物
<400> 200
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<223> 合成构建物
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<223> 合成构建物
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 203
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<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 204
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
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<210> 205
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 205
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<210> 206
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 206
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 207
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1 5 10 15
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<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 208
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
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20 25 30
Val Val Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Ser Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 209
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 209
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Arg Phe
20 25 30
Gly Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Arg Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ala Ala Phe Val
50 55 60
Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser
85 90 95
Asn His Tyr Tyr Gly Ser Ser Asp Tyr Ala Leu Asp Asn Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 210
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 210
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Asn Leu
20 25 30
Val Val Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Gly Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Pro Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 211
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 211
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Thr Thr Arg Phe
20 25 30
Gly Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Arg Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ala Ala Phe Val
50 55 60
Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser
85 90 95
Asn His Tyr Tyr Gly Ser Ser Asp Tyr Ala Leu Asp Asn Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 212
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 212
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Asn Leu
20 25 30
Val Val Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Gly Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Pro Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 213
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 213
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Arg Phe
20 25 30
Gly Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Arg Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ala Ala Phe Val
50 55 60
Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser
85 90 95
Asn His Tyr Tyr Gly Ser Pro Asp Tyr Ala Leu Asp Asn Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 214
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建物
<400> 214
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Asn Leu
20 25 30
Val Val Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Gly Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Pro Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 215
<211> 975
<212> PRT
<213> 食蟹猴（Macaca fascicularis）
<400> 215
Met Leu Leu Trp Val Ile Leu Leu Val Leu Ala Pro Val Ser Gly Gln
1 5 10 15
Phe Val Arg Thr Tyr Lys Ser His Phe Leu Gln Pro Pro Trp Thr Thr
20 25 30
Val Phe Arg Gly Glu Arg Val Asn Leu Thr Cys Lys Gly Phe Gly Phe
35 40 45
Tyr Ser Ser Gln Lys Thr Lys Trp Tyr Tyr Arg His Leu Gly Lys Glu
50 55 60
Ile Ser Arg Glu Thr Gln Lys Asn Thr Leu Glu Val Gln Glu Ser Gly
65 70 75 80
Glu Tyr Arg Cys Gln Ala Gln Gly Ser Pro Leu Ser Ser Pro Val Ser
85 90 95
Leu Asp Phe Ser Ser Ala Ser Leu Ile Leu Gln Ala Pro Leu Ser Val
100 105 110
Phe Glu Gly Asp Ser Val Val Leu Arg Cys Arg Ala Lys Ala Glu Val
115 120 125
Thr Leu Lys Thr Thr Ile Tyr Lys Asn Glu Asn Val Leu Ala Phe Leu
130 135 140
Asn Lys Ser Thr Asp Phe His Ile Ser His Ala Ser Leu Lys Asp Asn
145 150 155 160
Gly Ala Tyr Arg Cys Thr Gly Tyr Lys Glu Thr Cys Cys Leu Val Ser
165 170 175
Ser Asn Thr Val Lys Ile Gln Val Gln Glu Ser Phe Thr Arg Pro Val
180 185 190
Leu Arg Val Ser Ser Phe Gln Pro Ile Ser Gly Ser Pro Val Thr Leu
195 200 205
Thr Cys Glu Thr Gln Leu Ser Leu Glu Arg Ser Asp Val Pro Leu Gln
210 215 220
Phe Cys Phe Phe Arg Asn Asp Gln Met Leu Gly Ser Gly Cys Ser Leu
225 230 235 240
Ser Pro Lys Phe Arg Ile Thr Ala Met Trp Ser Lys Asp Ser Gly Ser
245 250 255
Tyr Trp Cys Lys Ala Ala Thr Met Cys Tyr Asp Thr Thr Ser Asn Ser
260 265 270
Leu Arg Ser Trp Ile Gln Val Leu Ile Pro Ala Ser His Pro Val Leu
275 280 285
Thr Leu Ser Pro Glu Lys Ala Leu Asn Phe Glu Gly Thr Lys Val Lys
290 295 300
Leu His Cys Glu Thr Gln Glu Asp Ser Leu Arg Thr Leu Tyr Lys Phe
305 310 315 320
Tyr His Asp Gly Val Pro Leu Arg Tyr Lys Ser Val Arg Cys Glu Lys
325 330 335
Gly Ala Ser Ile Ser Phe Ser Leu Thr Thr Glu His Ser Gly Asn Tyr
340 345 350
Tyr Cys Thr Ala Asp Asn Gly His Gly Ala Lys Pro Ser Glu Ala Val
355 360 365
Ser Leu Ser Val Thr Val Pro Val Ser Arg Pro Val Leu Thr Leu Ser
370 375 380
Ser Ala Glu Asp Leu Ile Ser Glu Gly Ala Lys Leu Thr Leu His Cys
385 390 395 400
Glu Ala Gln Arg Gly Ser Leu Pro Ile Val Tyr Gln Phe His His Glu
405 410 415
Asn Ala Ser Leu Gly Asn Arg Ser Ala His Ser Ala Gly Gly Val Ala
420 425 430
Ile Ser Phe Ser Leu Thr Ala Asp His Ser Gly Asn Tyr Tyr Cys Thr
435 440 445
Ala Asn Asn Gly Phe Gly Pro Gln Arg Ser Glu Ala Val Ser Leu Ser
450 455 460
Ile Thr Val Pro Val Ser Arg Pro Val Leu Thr Leu Ser Ser Ala Glu
465 470 475 480
Ala Leu Thr Phe Glu Gly Ala Thr Val Thr Leu Tyr Cys Glu Val Gln
485 490 495
Arg Gly Ser Pro Arg Ile Leu Tyr Gln Phe Tyr His Glu Asp Val Pro
500 505 510
Leu Gly Ser Asn Ser Thr Pro Ser Val Gly Lys Val Ser Phe Ser Phe
515 520 525
Ser Leu Thr Ala Ala His Ser Gly Asn Tyr Tyr Cys Thr Ala Asp Asn
530 535 540
Gly Phe Gly Pro Gln Arg Ser Glu Ala Val Ser Leu Phe Val Thr Val
545 550 555 560
Pro Val Ser Arg Pro Ile Leu Thr Leu Arg Val Pro Arg Ala Gln Ala
565 570 575
Val Val Gly Asp Leu Leu Glu Leu Arg Cys Glu Ala Leu Arg Gly Ser
580 585 590
Pro Pro Ile Met Tyr Trp Phe Tyr His Glu Asp Val Thr Leu Gly Ser
595 600 605
Ser Ser Val Pro Ser Gly Gly Glu Ala Ser Phe Asn Leu Ser Leu Thr
610 615 620
Ala Glu His Ser Gly Asn Tyr Ser Cys Glu Ala Asn Asn Gly Leu Val
625 630 635 640
Ala Gln His Ser Asp Thr Ile Ser Leu Ser Val Ile Val Pro Val Ser
645 650 655
Arg Pro Ile Leu Thr Phe Arg Ala Pro Arg Ala Gln Ala Val Val Gly
660 665 670
Asp Leu Leu Glu Leu His Cys Glu Ala Leu Arg Gly Ser Ser Pro Ile
675 680 685
Leu Tyr Trp Phe Tyr His Glu Asp Val Thr Leu Gly Lys Ile Ser Ala
690 695 700
Pro Ser Gly Gly Gly Ala Tyr Phe Asn Leu Ser Leu Thr Thr Glu His
705 710 715 720
Ser Gly Ile Tyr Ser Cys Glu Ala Asp Asn Gly Leu Glu Ala Gln Arg
725 730 735
Ser Glu Met Val Thr Leu Lys Val Ala Val Pro Val Ser Arg Pro Val
740 745 750
Leu Thr Leu Arg Ala Pro Arg Ala Gln Val Ala Val Gly Asp Leu Leu
755 760 765
Glu Leu His Cys Glu Ala Leu Arg Gly Ser Pro Leu Ile Leu Tyr Gln
770 775 780
Phe Tyr His Glu Asp Val Thr Leu Gly Asn Ser Ser Ala Leu Ser Gly
785 790 795 800
Gly Ala Phe Phe Asn Leu Ser Leu Thr Ala Glu His Gly Asn Tyr Ser
805 810 815
Cys Glu Ala Asp Asn Gly Leu Gly Ala Gln Arg Ser Glu Thr Val Thr
820 825 830
Leu Tyr Leu Thr Gly Leu Thr Glu Asn Arg Ser Gly Pro Val Ala Thr
835 840 845
Gly Val Thr Gly Gly Leu Leu Ser Leu Ala Gly Leu Ala Ala Val Ala
850 855 860
Leu Leu Leu Tyr Cys Trp Leu Ser Arg Lys Ala Gly Arg Glu Pro Ala
865 870 875 880
Ser Asp Pro Cys Arg Ser Pro Ser Asp Leu Asp Ser Gln Glu Pro Thr
885 890 895
Tyr His Asn Val Pro Ala Trp Glu Glu Leu Gln Pro Val Tyr Ser Asn
900 905 910
Val Asn Pro Arg Gly Glu Asn Val Val Tyr Ser Glu Val Arg Ile Ile
915 920 925
Arg Glu Lys Lys Lys His Ala Val Ala Ser Asn Pro Arg His Leu Arg
930 935 940
Asn Lys Gly Ser Cys Ile Ile Tyr Ser Glu Val Lys Val Ala Ser Thr
945 950 955 960
Pro Ala Ser Arg Cys Leu Phe Leu Ala Ser Ser Ala Pro His Arg
965 970 975

Claims (221)

1.一种抗Fc受体样5 (FcRH5)抗体，其中该抗FcRH5抗体包含包含下述六种高变区(HVR)的结合域：
(a) 如SEQ ID NO: 1的氨基酸序列所示的HVR-H1；
(b) 如SEQ ID NO: 8的氨基酸序列所示的HVR-H2；
(c) 如SEQ ID NO: 9的氨基酸序列所示的HVR-H3；
(d) 如SEQ ID NO: 12的氨基酸序列所示的HVR-L1；
(e) 如SEQ ID NO: 16的氨基酸序列所示的HVR-L2；和
(f) 如SEQ ID NO: 23的氨基酸序列所示的HVR-L3。
2.权利要求1的抗FcRH5抗体，其中该结合域包含(a) 与SEQ ID NO: 104的氨基酸序列具有至少95%序列同一性的重链可变(VH)域；(b) 与SEQ ID NO: 105的氨基酸序列具有至少95%序列同一性的轻链可变(VL)域；或(c) (a)中的VH域和(b)中的VL域。
3.权利要求1的抗FcRH5抗体，其中该抗体进一步包含下述重链可变区框架区(FR)：
(a) 如SEQ ID NO: 52的氨基酸序列所示的FR-H1；
(b) 如SEQ ID NO: 54的氨基酸序列所示的FR-H2；
(c) 如SEQ ID NO: 46的氨基酸序列所示的FR-H3；和
(d) 如SEQ ID NO: 47的氨基酸序列所示的FR-H4。
4.权利要求3的抗FcRH5抗体，其中该VH域如SEQ ID NO: 104的氨基酸序列所示。
5.权利要求1的抗FcRH5抗体，其中该抗体进一步包含下述轻链可变区FR：
(a) 如SEQ ID NO: 48的氨基酸序列所示的FR-L1；
(b) 如SEQ ID NO: 57的氨基酸序列所示的FR-L2；
(c) 如SEQ ID NO: 50的氨基酸序列所示的FR-L3；和
(d) 如SEQ ID NO: 51的氨基酸序列所示的FR-L4。
6.权利要求5的抗FcRH5抗体，其中该VL域如SEQ ID NO: 105的氨基酸序列所示。
7.一种抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体包含： 包含下述各项的结合域：(a) 如SEQID NO: 104的氨基酸序列所示的VH域和(b) 如SEQ ID NO: 105的氨基酸序列所示的VL域。
8.权利要求1-7任一项的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体结合FcRH5的Ig样域9中的表位。
9.权利要求8的抗FcRH5抗体，其中该表位包含SEQ ID NO: 114的氨基酸743-850的一部分。
10.权利要求8的抗FcRH5抗体，其中该结合域结合人FcRH5或食蟹猴FcRH5或二者。
11.权利要求10的抗FcRH5抗体，其中该结合域并不特异性结合FcRH1，FcRH2，FcRH3，和/或FcRH4。
12.权利要求10的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体以100 nM或更低的KD结合人FcRH5。
13.权利要求12的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体以介于10 pM和100 nM之间的KD结合人FcRH5。
14.权利要求13的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体以介于100 pM和100 nM之间的KD结合人FcRH5。
15.权利要求14的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体以介于1 nM和20 nM之间的KD结合人FcRH5。
16.权利要求15的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体以介于1 nM和10 nM之间的KD结合人FcRH5。
17.权利要求10的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体以100 nM或更低的KD结合食蟹猴FcRH5。
18.权利要求17的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体以介于10 pM和100 nM之间的KD结合食蟹猴FcRH5。
19.权利要求18的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体以介于100 pM和100 nM之间的KD结合食蟹猴FcRH5。
20.权利要求19的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体以介于1 nM和50 nM之间的KD结合食蟹猴FcRH5。
21.权利要求1-7任一项的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体包含无糖基化点突变。
22.权利要求21的抗FcRH5抗体，其中该无糖基化点突变是替代突变。
23.权利要求21的抗FcRH5抗体，其中该无糖基化点突变降低该抗FcRH5抗体的效应器功能。
24.权利要求22的抗FcRH5抗体，其中该替代突变在氨基酸残基N297，L234，L235，D265，和/或P329处，依照EU编号方式。
25.权利要求24的抗FcRH5抗体，其中该替代突变选自由N297G，N297A，L234A，L235A，D265A，和P329G组成的组。
26.权利要求25的抗FcRH5抗体，其中该替代突变是N297G突变。
27.权利要求1-7任一项的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体是单克隆，人，人源化，或嵌合抗体。
28.权利要求1-7任一项的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体是IgG抗体。
29.权利要求1-7任一项的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体是结合FcRH5的抗体片段。
30.权利要求29的抗FcRH5抗体，其中该抗体片段选自由bis-Fab，Fab，Fab’-SH，Fv，scFv，和(Fab’)2片段组成的组。
31.权利要求30的抗FcRH5抗体，其中该抗体片段是bis-Fab片段。
32.权利要求1-7任一项的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体是全长抗体。
33.权利要求1-7任一项的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体是单特异性抗体。
34.权利要求1-7任一项的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体是多特异性抗体。
35.权利要求34的抗FcRH5抗体，其中该多特异性抗体是双特异性抗体。
36.权利要求35的抗FcRH5抗体，其中该双特异性抗体包含结合分化簇3 (CD3)的第二结合域。
37.权利要求36的抗FcRH5抗体，其中该第二结合域结合CD3上包含CD3氨基酸残基Glu6的表位。
38.权利要求37的抗FcRH5抗体，其中该表位进一步包含一个或多个选自由CD3的Gln1，Asp2，和Met7组成的组的另外的氨基酸残基。
39.权利要求37的抗FcRH5抗体，其中该表位包含CD3的氨基酸残基Gln1，Asp2，和Glu6。
40.权利要求37的抗FcRH5抗体，其中该表位包含CD3的氨基酸残基Gln1，Asp2，Glu6，和Met7。
41.权利要求37的抗FcRH5抗体，其中该表位并不包含CD3的氨基酸残基Glu5。
42.权利要求37的抗FcRH5抗体，其中该表位并不包含CD3的氨基酸残基Gly3和Glu5。
43.权利要求37的抗FcRH5抗体，其中该表位由CD3的氨基酸残基Gln1，Asp2，Glu6，和Met7组成。
44.权利要求37的抗FcRH5抗体，其中该第二结合域能够结合人CD3多肽或食蟹猴CD3多肽。
45.权利要求44的抗FcRH5抗体，其中该人CD3多肽或该食蟹猴CD3多肽分别是人CD3ε多肽或食蟹猴CD3ε多肽。
46.权利要求44的抗FcRH5抗体，其中该人CD3多肽或该食蟹猴CD3多肽分别是人CD3γ多肽或食蟹猴CD3γ多肽。
47.权利要求45的抗FcRH5抗体，其中该第二结合域以100 nM或更低的KD结合该人CD3ε多肽。
48.权利要求47的抗FcRH5抗体，其中该第二结合域以介于10 pM至100 nM之间的KD结合该人CD3ε多肽。
49.权利要求48的抗FcRH5抗体，其中该第二结合域以介于100 pM至50 nM之间的KD结合该人CD3ε多肽。
50.权利要求49的抗FcRH5抗体，其中该第二结合域以介于1 nM至10 nM之间的KD结合该人CD3ε多肽。
51.权利要求36的抗FcRH5抗体，其中该第二结合域包含下述六种HVR：
(a) 如SEQ ID NO: 115的氨基酸序列所示的HVR-H1；
(b) 如SEQ ID NO: 116的氨基酸序列所示的HVR-H2；
(c) 如SEQ ID NO: 117的氨基酸序列所示的HVR-H3；
(d) 如SEQ ID NO: 118的氨基酸序列所示的HVR-L1；
(e) 如SEQ ID NO: 119的氨基酸序列所示的HVR-L2；和
(f) 如SEQ ID NO: 120的氨基酸序列所示的HVR-L3。
52.权利要求51的抗FcRH5抗体，其中该第二结合域包含下述六种HVR：
(a) 如SEQ ID NO: 115的氨基酸序列所示的HVR-H1；
(b) 如SEQ ID NO: 116的氨基酸序列所示的HVR-H2；
(c) 如SEQ ID NO: 121的氨基酸序列所示的HVR-H3；
(d) 如SEQ ID NO: 118的氨基酸序列所示的HVR-L1；
(e) 如SEQ ID NO: 119的氨基酸序列所示的HVR-L2；和
(f) 如SEQ ID NO: 123的氨基酸序列所示的HVR-L3。
53.权利要求52的抗FcRH5抗体，其中该第二结合域包含(a) 与SEQ ID NO: 133的氨基酸序列具有至少95%序列同一性的VH域；(b) 与SEQ ID NO: 134的氨基酸序列具有至少95%序列同一性的VL域；或(c) (a)中的VH域和(b)中的VL域。
54.权利要求52的抗FcRH5抗体，其中该第二结合域包含下述重链可变区FR：
(a) 如SEQ ID NO: 125的氨基酸序列所示的FR-H1；
(b) 如SEQ ID NO: 126的氨基酸序列所示的FR-H2；
(c) 如SEQ ID NO: 127的氨基酸序列所示的FR-H3；和
(d) 如SEQ ID NO: 128的氨基酸序列所示的FR-H4。
55.权利要求54的抗FcRH5抗体，其中该第二结合域包含如SEQ ID NO: 133的氨基酸序列所示的VH域。
56.权利要求52的抗FcRH5抗体，其中该第二结合域进一步包含下述轻链可变区FR：
(a) 如SEQ ID NO: 129的氨基酸序列所示的FR-L1；
(b) 如SEQ ID NO: 130的氨基酸序列所示的FR-L2；
(c) 如SEQ ID NO: 131的氨基酸序列所示的FR-L3；和
(d) 如SEQ ID NO: 132的氨基酸序列所示的FR-L4。
57.权利要求56的抗FcRH5抗体，其中该第二结合域包含如SEQ ID NO: 134的氨基酸序列所示的VL域。
58.权利要求52的抗FcRH5抗体，其中该第二结合域包含(a) 如SEQ ID NO: 133的氨基酸序列所示的VH域和(b) 如SEQ ID NO: 134的氨基酸序列所示的VL域。
59.权利要求51的抗FcRH5抗体，其中该第二结合域包含下述六种HVR：
(a) 如SEQ ID NO: 115的氨基酸序列所示的HVR-H1；
(b) 如SEQ ID NO: 116的氨基酸序列所示的HVR-H2；
(c) 如SEQ ID NO: 121的氨基酸序列所示的HVR-H3；
(d) 如SEQ ID NO: 118的氨基酸序列所示的HVR-L1；
(e) 如SEQ ID NO: 119的氨基酸序列所示的HVR-L2；和
(f) 如SEQ ID NO: 124的氨基酸序列所示的HVR-L3。
60.权利要求59的抗FcRH5抗体，其中该第二结合域包含(a) 与SEQ ID NO: 137的氨基酸序列具有至少95%序列同一性的VH域；(b) 与SEQ ID NO: 138的氨基酸序列具有至少95%序列同一性的VL域；或(c) (a)中的VH域和(b)中的VL域。
61.权利要求59的抗FcRH5抗体，其中该第二结合域包含下述重链可变区FR：
(a) 如SEQ ID NO: 125的氨基酸序列所示的FR-H1；
(b) 如SEQ ID NO: 126的氨基酸序列所示的FR-H2；
(c) 如SEQ ID NO: 127的氨基酸序列所示的FR-H3；和
(d) 如SEQ ID NO: 128的氨基酸序列所示的FR-H4。
62.权利要求61的抗FcRH5抗体，其中该第二结合域包含如SEQ ID NO: 137的氨基酸序列所示的VH域。
63.权利要求59的抗FcRH5抗体，其中该第二结合域进一步包含下述轻链可变区FR：
(a) 如SEQ ID NO: 129的氨基酸序列所示的FR-L1；
(b) 如SEQ ID NO: 130的氨基酸序列所示的FR-L2；
(c) 如SEQ ID NO: 131的氨基酸序列所示的FR-L3；和
(d) 如SEQ ID NO: 132的氨基酸序列所示的FR-L4。
64.权利要求63的抗FcRH5抗体，其中该第二结合域包含如SEQ ID NO: 138的氨基酸序列所示的VL域。
65.权利要求59的抗FcRH5抗体，其中该第二结合域包含(a) 如SEQ ID NO: 137的氨基酸序列所示的VH域和(b) 如SEQ ID NO: 138的氨基酸序列所示的VL域。
66.权利要求36的抗FcRH5抗体，其中该第二结合域包含下述六种HVR：
(a) 如SEQ ID NO: 139的氨基酸序列所示的HVR-H1；
(b) 如SEQ ID NO: 140的氨基酸序列所示的HVR-H2；
(c) 如SEQ ID NO: 141的氨基酸序列所示的HVR-H3；
(d) 如SEQ ID NO: 142的氨基酸序列所示的HVR-L1；
(e) 如SEQ ID NO: 143的氨基酸序列所示的HVR-L2；和
(f) 如SEQ ID NO: 144的氨基酸序列所示的HVR-L3。
67.权利要求66的抗FcRH5抗体，其中该第二结合域包含(a) 与SEQ ID NO: 153的氨基酸序列具有至少95%序列同一性的VH域；(b) 与SEQ ID NO: 154的氨基酸序列具有至少95%序列同一性的VL域；或(c) (a)中的VH域和(b)中的VL域。
68.权利要求66的抗FcRH5抗体，其中该第二结合域包含下述重链可变区FR：
(a) 如SEQ ID NO: 145的氨基酸序列所示的FR-H1；
(b) 如SEQ ID NO: 146的氨基酸序列所示的FR-H2；
(c) 如SEQ ID NO: 147的氨基酸序列所示的FR-H3；和
(d) 如SEQ ID NO: 148的氨基酸序列所示的FR-H4。
69.权利要求68的抗FcRH5抗体，其中该第二结合域包含如SEQ ID NO: 153的氨基酸序列所示的VH域。
70.权利要求66的抗FcRH5抗体，其中该第二结合域进一步包含下述轻链可变区FR：
(a) 如SEQ ID NO: 149的氨基酸序列所示的FR-L1；
(b) 如SEQ ID NO: 150的氨基酸序列所示的FR-L2；
(c) 如SEQ ID NO: 151的氨基酸序列所示的FR-L3；和
(d) 如SEQ ID NO: 152的氨基酸序列所示的FR-L4。
71.权利要求70的抗FcRH5抗体，其中该第二结合域包含如SEQ ID NO: 154的氨基酸序列所示的VL域。
72.权利要求66的抗FcRH5抗体，其中该第二结合域包含(a) 如SEQ ID NO: 153的氨基酸序列所示的VH域和(b) 如SEQ ID NO: 154的氨基酸序列所示的VL域。
73.权利要求36的抗FcRH5抗体，其中该第二结合域包含下述六种HVR：
(a) 如SEQ ID NO: 155的氨基酸序列所示的HVR-H1；
(b) 如SEQ ID NO: 156的氨基酸序列所示的HVR-H2；
(c) 如SEQ ID NO: 157的氨基酸序列所示的HVR-H3；
(d) 如SEQ ID NO: 158的氨基酸序列所示的HVR-L1；
(e) 如SEQ ID NO: 159的氨基酸序列所示的HVR-L2；和
(f) 如SEQ ID NO: 160的氨基酸序列所示的HVR-L3。
74.权利要求73的抗FcRH5抗体，其中该第二结合域包含下述六种HVR：
(a) 如SEQ ID NO: 155的氨基酸序列所示的HVR-H1；
(b) 如SEQ ID NO: 162的氨基酸序列所示的HVR-H2；
(c) 如SEQ ID NO: 157的氨基酸序列所示的HVR-H3；
(d) 如SEQ ID NO: 158的氨基酸序列所示的HVR-L1；
(e) 如SEQ ID NO: 159的氨基酸序列所示的HVR-L2；和
(f) 如SEQ ID NO: 160的氨基酸序列所示的HVR-L3。
75.权利要求74的抗FcRH5抗体，其中该第二结合域包含(a) 与SEQ ID NO: 172的氨基酸序列具有至少95%序列同一性的VH域；(b) 与SEQ ID NO: 173的氨基酸序列具有至少95%序列同一性的VL域；或(c) (a)中的VH域和(b)中的VL域。
76.权利要求74的抗FcRH5抗体，其中该第二结合域包含下述重链可变区FR：
(a) 如SEQ ID NO: 164的氨基酸序列所示的FR-H1；
(b) 如SEQ ID NO: 165的氨基酸序列所示的FR-H2；
(c) 如SEQ ID NO: 166的氨基酸序列所示的FR-H3；和
(d) 如SEQ ID NO: 167的氨基酸序列所示的FR-H4。
77.权利要求76的抗FcRH5抗体，其中该第二结合域包含如SEQ ID NO: 172的氨基酸序列所示的VH域。
78.权利要求74的抗FcRH5抗体，其中该第二结合域进一步包含下述轻链可变区FR：
(a) 如SEQ ID NO: 168的氨基酸序列所示的FR-L1；
(b) 如SEQ ID NO: 169的氨基酸序列所示的FR-L2；
(c) 如SEQ ID NO: 170的氨基酸序列所示的FR-L3；和
(d) 如SEQ ID NO: 171的氨基酸序列所示的FR-L4。
79.权利要求78的抗FcRH5抗体，其中该第二结合域包含如SEQ ID NO: 173的氨基酸序列所示的VL域。
80.权利要求74的抗FcRH5抗体，其中该第二结合域包含(a) 如SEQ ID NO: 172的氨基酸序列所示的VH域和(b) 如SEQ ID NO: 173的氨基酸序列所示的VL域。
81.权利要求36-80任一项的抗FcRH5抗体，其中该结合FcRH5的结合域包含： 包含带电荷区域CR 1 的VH域VH 1 和包含带电荷区域CR 2 的VL域VL 1 ，其中该VH 1 中的CR 1 与该VL 1 中的CR 2 形成电荷对。
82.权利要求81的抗FcRH5抗体，其中该CR 1 包含碱性氨基酸残基且该CR 2 包含酸性氨基酸残基。
83.权利要求82的抗FcRH5抗体，其中该CR 1 包含Q39K替代突变，依照EU编号方式。
84.权利要求83的抗FcRH5抗体，其中该CR 1 由该Q39K替代突变组成。
85.权利要求82的抗FcRH5抗体，其中该CR 2 包含Q38E替代突变，依照EU编号方式。
86.权利要求85的抗FcRH5抗体，其中该CR 2 由该Q38E替代突变组成。
87.权利要求81的抗FcRH5抗体，其中该结合CD3的第二结合域包含： 包含带电荷区域CR 3 的VH域VH 2 和包含带电荷区域CR 4 的VL域VL 2 ，其中该VL 2 中的CR 4 与该VH 2 中的CR 3 形成电荷对。
88.权利要求87的抗FcRH5抗体，其中该CR 4 包含碱性氨基酸残基且该CR 3 包含酸性氨基酸残基。
89.权利要求88的抗FcRH5抗体，其中该CR 4 包含Q38K替代突变，依照EU编号方式。
90.权利要求89的抗FcRH5抗体，其中该CR 4 由该Q38K替代突变组成。
91.权利要求88的抗FcRH5抗体，其中该CR 3 包含Q39E替代突变，依照EU编号方式。
92.权利要求91的抗FcRH5抗体，其中该CR 3 由该Q39E替代突变组成。
93.权利要求81的抗FcRH5抗体，其中该VL 1 域连接轻链恒定CL域CL 1 且该VH 1 连接第一重链恒定CH1域CH1 1 ，其中该CL 1 包含带电荷区域CR 5 且该CH1 1 包含带电荷区域CR 6 ，且其中该CL 1 中的CR 5 与该CH1 1 中的CR 6 形成电荷对。
94.权利要求93的抗FcRH5抗体，其中该CR 5 包含碱性氨基酸残基且该CR 6 包含酸性残基。
95.权利要求94的抗FcRH5抗体，其中该CR 5 包含V133K替代突变，依照EU编号方式。
96.权利要求95的抗FcRH5抗体，其中该CR 5 由该V133K替代突变组成。
97.权利要求94的抗FcRH5抗体，其中该CR 6 包含S183E替代突变，依照EU编号方式。
98.权利要求97的抗FcRH5抗体，其中该CR 6 由该S183E替代突变组成。
99.权利要求87的抗FcRH5抗体，其中该VL 2 域连接CL域CL 2 且该VH 2 连接CH1域CH1 2 ，其中该CL 2 包含带电荷区域CR 7 且该CH1 2 包含带电荷区域CR 8 ，且其中该CH1 2 中的CR 8 与该CL 2 中的CR 7 形成电荷对。
100.权利要求99的抗FcRH5抗体，其中该CR 8 包含碱性氨基酸残基且该CR 7 包含酸性氨基酸残基。
101.权利要求100的抗FcRH5抗体，其中该CR 8 包含S183K替代突变，依照EU编号方式。
102.权利要求101的抗FcRH5抗体，其中该CR 8 由该S183K替代突变组成。
103.权利要求100的抗FcRH5抗体，其中该CR 7 包含V133E替代突变，依照EU编号方式。
104.权利要求103的抗FcRH5抗体，其中该CR 7 由该V133E替代突变组成。
105.权利要求87的抗FcRH5抗体，其中该VL 2 域连接CL域CL 2 且该VH 2 连接CH1域CH1 2 ，其中(a)该CL 2 包含氨基酸残基F116，L135，S174，S176，和/或T178处的一处或多处突变，依照EU编号方式，且(b)该CH1 2 包含氨基酸残基A141，F170，S181，S183，和/或V185处的一处或多处突变，依照EU编号方式。
106.权利要求105的抗FcRH5抗体，其中该CL 2 包含一处或多处下述替代突变：F116A，L135V，S174A，S176F，和/或T178V。
107.权利要求106的抗FcRH5抗体，其中该CL 2 包含下述替代突变：F116A，L135V，S174A，S176F，和T178V。
108.权利要求105抗FcRH5抗体，其中该CH1 2 包含一处或多处下述替代突变：A141I，F170S，S181M，S183A，和/或V185A。
109.权利要求108的抗FcRH5抗体，其中该CH1 2 包含下述替代突变：A141I，F170S，S181M，S183A，和V185A。
110.权利要求36-80任一项的抗FcRH5抗体，其中该结合FcRH5的结合域包含： 包含带电荷区域CR 1 的VH域VH 1 和包含带电荷区域CR 2 的VL域VL 1 ，其中该VL 1 中的CR 2 与该VH 1 中的CR 1 形成电荷对。
111.权利要求110的抗FcRH5抗体，其中该CR 2 包含碱性氨基酸残基且该CR 1 包含酸性氨基酸残基。
112.权利要求111的抗FcRH5抗体，其中该CR 2 包含Q38K替代突变，依照EU编号方式。
113.权利要求112的抗FcRH5抗体，其中该CR 2 由该Q38K替代突变组成。
114.权利要求111的抗FcRH5抗体，其中该CR 1 包含Q39E替代突变，依照EU编号方式。
115.权利要求114的抗FcRH5抗体，其中该CR 1 由该Q39E替代突变组成。
116.权利要求110的抗FcRH5抗体，其中该结合CD3的第二结合域包含： 包含带电荷区域CR 3 的VH域VH 2 和包含带电荷区域CR 4 的VL域VL 2 ，其中该VH 2 中的CR 3 与该VL 2 中的CR 4 形成电荷对。
117.权利要求116的抗FcRH5抗体，其中该CR 3 包含碱性氨基酸残基且该CR 4 包含酸性氨基酸残基。
118.权利要求117的抗FcRH5抗体，其中该CR 3 包含Q39K替代突变，依照EU编号方式。
119.权利要求118的抗FcRH5抗体，其中该CR 3 由该Q39K替代突变组成。
120.权利要求117的抗FcRH5抗体，其中该CR 4 包含Q38E替代突变，依照EU编号方式。
121.权利要求120的抗FcRH5抗体，其中该CR 4 由该Q38E替代突变组成。
122.权利要求110的抗FcRH5抗体，其中该VL 1 域连接轻链恒定CL域CL 1 且该VH 1 连接第一重链恒定CH1域CH1 1 ，其中该CL 1 包含带电荷区域CR 5 且该CH1 1 包含带电荷区域CR 6 ，且其中该CH1 1 中的CR 6 与该CL 1 中的CR 5 形成电荷对。
123.权利要求122的抗FcRH5抗体，其中该CR 6 包含碱性氨基酸残基且该CR 5 包含酸性氨基酸残基。
124.权利要求123的抗FcRH5抗体，其中该CR 6 包含S183K替代突变，依照EU编号方式。
125.权利要求124的抗FcRH5抗体，其中该CR 6 由该S183K替代突变组成。
126.权利要求123的抗FcRH5抗体，其中该CR 5 包含V133E替代突变，依照EU编号方式。
127.权利要求126的抗FcRH5抗体，其中该CR 5 由该V133E替代突变组成。
128.权利要求116的抗FcRH5抗体，其中该VL 2 域连接CL域CL 2 且该VH 2 连接CH1域CH1 2 ，其中该CL 2 包含带电荷区域CR 7 且该CH1 2 包含带电荷区域CR 8 ，且其中该CL 2 中的CR 7 与该CH1 2 中的CR 8 形成电荷对。
129.权利要求128的抗FcRH5抗体，其中该CR 7 包含碱性氨基酸残基且该CR 8 包含酸性残基。
130.权利要求129的抗FcRH5抗体，其中该CR 7 包含V133K替代突变，依照EU编号方式。
131.权利要求130的抗FcRH5抗体，其中该CR 7 由该V133K替代突变组成。
132.权利要求129的抗FcRH5抗体，其中该CR 8 包含S183E替代突变，依照EU编号方式。
133.权利要求132的抗FcRH5抗体，其中该CR 8 由该S183E替代突变组成。
134.权利要求116的抗FcRH5抗体，其中该VL 2 域连接CL域CL 2 且该VH 2 连接CH1域CH1 2 ，其中(a)该CL 2 包含氨基酸残基F116，L135，S174，S176，和/或T178处的一处或多处突变，依照EU编号方式，且(b)该CH1 2 包含氨基酸残基A141，F170，S181，S183，和/或V185处的一处或多处突变，依照EU编号方式。
135.权利要求134的抗FcRH5抗体，其中该CL 2 包含一处或多处下述替代突变：F116A，L135V，S174A，S176F，和/或T178V。
136.权利要求135的抗FcRH5抗体，其中该CL 2 包含下述替代突变：F116A，L135V，S174A，S176F，和T178V。
137.权利要求134的抗FcRH5抗体，其中该CH1 2 包含一处或多处下述替代突变：A141I，F170S，S181M，S183A，和/或V185A。
138.权利要求137的抗FcRH5抗体，其中该CH1 2 包含下述替代突变：A141I，F170S，S181M，S183A，和V185A。
139.权利要求81的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体包含一个或多个重链恒定域，其中该一个或多个重链恒定域选自第一CH2域CH2 1 ，第一CH3域CH3 1 ，第二CH2域CH2 2 ，和第二CH3域CH3 2 。
140.权利要求139的抗FcRH5抗体，其中该一个或多个重链恒定域中至少一个与另一个重链恒定域配对。
141.权利要求140的抗FcRH5抗体，其中该CH3 1 和该CH3 2 各自包含隆起P 1 或空腔C 1 ，且其中该CH3 1 中的P 1 或C 1 分别可位于该CH3 2 中的C 1 或P 1 中。
142.权利要求141的抗FcRH5抗体，其中该CH3 1 和该CH3 2 在介于该P 1 和该C 1 之间的界面处相遇。
143.权利要求139的抗FcRH5抗体，其中该CH2 1 和该CH2 2 各自包含隆起P 2 或空腔C 2 ，且其中该CH2 1 中的P 2 或C 2 分别可位于该CH2 2 中的C 2 或P 2 中。
144.权利要求143的抗FcRH5抗体，其中该CH2 1 和该CH2 2 在介于该P 2 和该C 2 之间的界面处相遇。
145.一种结合FcRH5和CD3的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体包含： 包含第一结合域的抗FcRH5臂，该第一结合域包含下述六种HVR：
(a) 如SEQ ID NO: 1的氨基酸序列所示的HVR-H1；
(b) 如SEQ ID NO: 8的氨基酸序列所示的HVR-H2；
(c) 如SEQ ID NO: 9的氨基酸序列所示的HVR-H3；
(d) 如SEQ ID NO: 12的氨基酸序列所示的HVR-L1；
(e) 如SEQ ID NO: 16的氨基酸序列所示的HVR-L2；和
(f) 如SEQ ID NO: 23的氨基酸序列所示的HVR-L3；和
包含第二结合域的抗CD3臂，该第二结合域包含下述六种HVR：
(a) 如SEQ ID NO: 115的氨基酸序列所示的HVR-H1；
(b) 如SEQ ID NO: 116的氨基酸序列所示的HVR-H2；
(c) 如SEQ ID NO: 121的氨基酸序列所示的HVR-H3；
(d) 如SEQ ID NO: 118的氨基酸序列所示的HVR-L1；
(e) 如SEQ ID NO: 119的氨基酸序列所示的HVR-L2；和
(f) 如SEQ ID NO: 123的氨基酸序列所示的HVR-L3；且
其中在该抗FcRH5臂和该抗CD3臂中各自N297用G替代突变，依照EU编号方式；且
其中在该抗FcRH5臂中T366用W替代且在该抗CD3臂中T366用S替代，L368用A替代，且Y407替代V替代。
146.一种结合FcRH5和CD3的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体包含： 包含第一结合域的抗FcRH5臂，该第一结合域包含下述六种HVR：
(a) 如SEQ ID NO: 1的氨基酸序列所示的HVR-H1；
(b) 如SEQ ID NO: 8的氨基酸序列所示的HVR-H2；
(c) 如SEQ ID NO: 9的氨基酸序列所示的HVR-H3；
(d) 如SEQ ID NO: 12的氨基酸序列所示的HVR-L1；
(e) 如SEQ ID NO: 16的氨基酸序列所示的HVR-L2；和
(f) 如SEQ ID NO: 23的氨基酸序列所示的HVR-L3；和
包含第二结合域的抗CD3臂，该第二结合域包含下述六种HVR：
(a) 如SEQ ID NO: 115的氨基酸序列所示的HVR-H1；
(b) 如SEQ ID NO: 116的氨基酸序列所示的HVR-H2；
(c) 如SEQ ID NO: 121的氨基酸序列所示的HVR-H3；
(d) 如SEQ ID NO: 118的氨基酸序列所示的HVR-L1；
(e) 如SEQ ID NO: 119的氨基酸序列所示的HVR-L2；和
(f) 如SEQ ID NO: 123的氨基酸序列所示的HVR-L3；且
其中在该抗FcRH5臂中在轻链中Q38用E替代且V133用K替代且在重链中Q39用K替代，S183用E替代，且N297用G替代；且
其中在该抗CD3臂中在轻链中Q38用K替代且V133用E替代且在重链中Q39用E替代，S183用K替代，且N297用G替代，依照EU编号方式。
147.一种结合FcRH5和CD3的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体包含：
(a) 包含第一结合域的抗FcRH5臂，该第一结合域包含如SEQ ID NO: 104的氨基酸序列所示的VH域和如SEQ ID NO: 105的氨基酸序列所示的VL域，其中在该抗FcRH5臂中在轻链中Q38用E替代且V133用K替代且在重链中Q39用K替代，S183用E替代，且N297用G替代；和
(b) 包含第二结合域的抗CD3臂，该第二结合域包含如SEQ ID NO: 133的氨基酸序列所示的VH域和如SEQ ID NO: 134的氨基酸序列所示的VL域，其中在该抗CD3臂中在轻链中Q38用K替代且V133用E替代且在重链中Q39用E替代，S183用K替代，且N297用G替代，依照EU编号方式。
148.一种结合FcRH5和CD3的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体包含： 包含第一结合域的抗FcRH5臂，该第一结合域包含下述六种HVR：
(a) 如SEQ ID NO: 1的氨基酸序列所示的HVR-H1；
(b) 如SEQ ID NO: 8的氨基酸序列所示的HVR-H2；
(c) 如SEQ ID NO: 9的氨基酸序列所示的HVR-H3；
(d) 如SEQ ID NO: 12的氨基酸序列所示的HVR-L1；
(e) 如SEQ ID NO: 16的氨基酸序列所示的HVR-L2；和
(f) 如SEQ ID NO: 23的氨基酸序列所示的HVR-L3；和
包含第二结合域的抗CD3臂，该第二结合域包含下述六种HVR：
(a) 如SEQ ID NO: 115的氨基酸序列所示的HVR-H1；
(b) 如SEQ ID NO: 116的氨基酸序列所示的HVR-H2；
(c) 如SEQ ID NO: 121的氨基酸序列所示的HVR-H3；
(d) 如SEQ ID NO: 118的氨基酸序列所示的HVR-L1；
(e) 如SEQ ID NO: 119的氨基酸序列所示的HVR-L2；和
(f) 如SEQ ID NO: 123的氨基酸序列所示的HVR-L3；且
其中在该抗FcRH5臂中在轻链中Q38用K替代且V133用E替代且在重链中Q39用E替代，S183用K替代，且N297用G替代；且
其中在该抗CD3臂中在轻链中Q38用E替代且V133用K替代且在重链中Q39用K替代，S183用E替代，且N297用G替代，依照EU编号方式。
149.一种结合FcRH5和CD3的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体包含：
(a) 包含第一结合域的抗FcRH5臂，该第一结合域包含如SEQ ID NO: 104的氨基酸序列所示的VH域和如SEQ ID NO: 105的氨基酸序列所示的VL域，其中在该抗FcRH5臂中在轻链中Q38用K替代且V133用E替代且在重链中Q39用E替代，S183用K替代，且N297用G替代；和
(b) 包含第二结合域的抗CD3臂，该第二结合域包含如SEQ ID NO: 133的氨基酸序列所示的VH域和如SEQ ID NO: 134的氨基酸序列所示的VL域，其中在该抗CD3臂中在轻链中Q38用E替代且V133用K替代且在重链中Q39用K替代，S183用E替代，且N297用G替代，依照EU编号方式。
150.一种结合FcRH5和CD3的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体包含： 包含第一结合域的抗FcRH5臂，该第一结合域包含下述六种HVR：
(a) 如SEQ ID NO: 1的氨基酸序列所示的HVR-H1；
(b) 如SEQ ID NO: 8的氨基酸序列所示的HVR-H2；
(c) 如SEQ ID NO: 9的氨基酸序列所示的HVR-H3；
(d) 如SEQ ID NO: 12的氨基酸序列所示的HVR-L1；
(e) 如SEQ ID NO: 16的氨基酸序列所示的HVR-L2；和
(f) 如SEQ ID NO: 23的氨基酸序列所示的HVR-L3；和
包含第二结合域的抗CD3臂，该第二结合域包含下述六种HVR：
(a) 如SEQ ID NO: 115的氨基酸序列所示的HVR-H1；
(b) 如SEQ ID NO: 116的氨基酸序列所示的HVR-H2；
(c) 如SEQ ID NO: 121的氨基酸序列所示的HVR-H3；
(d) 如SEQ ID NO: 118的氨基酸序列所示的HVR-L1；
(e) 如SEQ ID NO: 119的氨基酸序列所示的HVR-L2；和
(f) 如SEQ ID NO: 123的氨基酸序列所示的HVR-L3；且
其中在该抗FcRH5臂中在轻链中Q38用E替代且V133用K替代且在重链中Q39用K替代，S183用E替代，且N297用G替代；且
其中在该抗CD3臂中在轻链中Q38用K替代，F116用A替代，L135用V替代，S174用A替代，S176用F替代，且T178用V替代且在重链中Q39用E替代，A141用I替代，F170用S替代，S181用M替代，S183用A替代，V185用A替代，且N297用G替代，依照EU编号方式。
151.一种结合FcRH5和CD3的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体包含：
(a) 包含第一结合域的抗FcRH5臂，该第一结合域包含如SEQ ID NO: 104的氨基酸序列所示的VH域和如SEQ ID NO: 105的氨基酸序列所示的VL域，其中在该抗FcRH5臂中在轻链中Q38用E替代且V133用K替代且在重链中Q39用K替代，S183用E替代，且N297用G替代；和
(b) 包含第二结合域的抗CD3臂，该第二结合域包含如SEQ ID NO: 133的氨基酸序列所示的VH域和如SEQ ID NO: 134的氨基酸序列所示的VL域，其中在该抗CD3臂中在轻链中Q38用K替代，F116用A替代，L135用V替代，S174用A替代，S176用F替代，且T178用V替代且在重链中Q39用E替代，A141用I替代，F170用S替代，S181用M替代，S183用A替代，V185用A替代，且N297用G替代，依照EU编号方式。
152.一种结合FcRH5和CD3的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体包含： 包含第一结合域的抗FcRH5臂，该第一结合域包含下述六种HVR：
(a) 如SEQ ID NO: 1的氨基酸序列所示的HVR-H1；
(b) 如SEQ ID NO: 8的氨基酸序列所示的HVR-H2；
(c) 如SEQ ID NO: 9的氨基酸序列所示的HVR-H3；
(d) 如SEQ ID NO: 12的氨基酸序列所示的HVR-L1；
(e) 如SEQ ID NO: 16的氨基酸序列所示的HVR-L2；和
(f) 如SEQ ID NO: 23的氨基酸序列所示的HVR-L3；和
包含第二结合域的抗CD3臂，该第二结合域包含下述六种HVR：
(a) 如SEQ ID NO: 115的氨基酸序列所示的HVR-H1；
(b) 如SEQ ID NO: 116的氨基酸序列所示的HVR-H2；
(c) 如SEQ ID NO: 121的氨基酸序列所示的HVR-H3；
(d) 如SEQ ID NO: 118的氨基酸序列所示的HVR-L1；
(e) 如SEQ ID NO: 119的氨基酸序列所示的HVR-L2；和
(f) 如SEQ ID NO: 123的氨基酸序列所示的HVR-L3；且
其中在该抗FcRH5臂中在轻链中Q38用K替代且V133用E替代且在重链中Q39用E替代，S183用K替代，且N297用G替代；且
其中在该抗CD3臂中在轻链中Q38用E替代，F116用A替代，L135用V替代，S174用A替代，S176用F替代，且T178用V替代且在重链中Q39用K替代，A141用I替代，F170用S替代，S181用M替代，S183用A替代，V185用A替代，且N297用G替代，依照EU编号方式。
153.一种结合FcRH5和CD3的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体包含：
(a) 包含第一结合域的抗FcRH5臂，该第一结合域包含如SEQ ID NO: 104的氨基酸序列所示的VH域和如SEQ ID NO: 105的氨基酸序列所示的VL域，其中在该抗FcRH5臂中在轻链中Q38用K替代且V133用E替代且在重链中Q39用E替代，S183用K替代，且N297用G替代；和
(b) 包含第二结合域的抗CD3臂，该第二结合域包含如SEQ ID NO: 133的氨基酸序列所示的VH域和如SEQ ID NO: 134的氨基酸序列所示的VL域，其中在该抗CD3臂中在轻链中Q38用E替代，F116用A替代，L135用V替代，S174用A替代，S176用F替代，且T178用V替代且在重链中Q39用K替代，A141用I替代，F170用S替代，S181用M替代，S183用A替代，V185用A替代，且N297用G替代，依照EU编号方式。
154.权利要求1-7，51-80和145-153任一项的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体在静脉内注射后具有介于10 ml/kg/d至35 ml/kg/d之间的清除率。
155.权利要求154的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体在小鼠中在静脉内注射后具有10 ml/kg/d至20 ml/kg/d的清除率。
156.权利要求155的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体在小鼠中在静脉内注射后具有12 ml/kg/d至16 ml/kg/d的清除率。
157.权利要求154的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体在食蟹猴中在静脉内注射后具有20 ml/kg/d至40 ml/kg/d的清除率。
158.权利要求157的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体在食蟹猴中在静脉内注射后具有25 ml/kg/d至35 ml/kg/d的清除率。
159.权利要求158的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体在食蟹猴中在静脉内注射后具有30 ml/kg/d至35 ml/kg/d的清除率。
160.编码权利要求1-159任一项的抗FcRH5抗体的分离的核酸。
161.包含权利要求160的分离的核酸的载体。
162.包含权利要求161的载体的宿主细胞。
163.权利要求162的宿主细胞，其中该宿主细胞是哺乳动物细胞。
164.权利要求163的宿主细胞，其中该哺乳动物细胞是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。
165.权利要求162的宿主细胞，其中该宿主细胞是原核细胞。
166.权利要求165的宿主细胞，其中该原核细胞是大肠杆菌细胞。
167.一种生成权利要求1-159任一项的抗FcRH5抗体的方法，该方法包括在培养基中培养权利要求162的宿主细胞。
168.权利要求167的方法，其中该方法进一步包括自该宿主细胞或该培养基回收该抗FcRH5抗体。
169.一种免疫缀合物，其包含权利要求1-159任一项的抗FcRH5抗体和细胞毒剂。
170.一种组合物，其包含权利要求1-159任一项的抗FcRH5抗体。
171.权利要求170的组合物，其进一步包含药学可接受赋形剂或稀释剂。
172.权利要求171的组合物，其中该药学可接受赋形剂是缓冲剂，载剂，稳定剂，或防腐剂。
173.权利要求172的组合物，其中该组合物是药物组合物。
174.权利要求170-173任一项的组合物，其中该组合物进一步包含PD-1轴结合拮抗剂或另外的治疗剂。
175.权利要求1-159任一项的抗FcRH5抗体或权利要求170-174任一项的组合物在制造供一种在有所需要的受试者中治疗FcRH5阳性癌症或延迟其进展的方法使用的药物中的用途，该方法包括对该受试者施用权利要求1-159任一项的抗FcRH5抗体或权利要求170-174任一项的组合物。
176.权利要求1-159任一项的抗FcRH5抗体或权利要求170-174任一项的组合物在制造供一种在具有FcRH5阳性癌症的受试者中增强免疫功能的方法使用的药物中的用途，该方法包括对该受试者施用有效量的权利要求1-159任一项的抗FcRH5抗体或权利要求170-174任一项的组合物。
177.权利要求175或176的用途，其中该FcRH5阳性癌症是B细胞癌症。
178.权利要求177的用途，其中该B细胞癌症选自由多发性骨髓瘤(MM)，慢性淋巴样白血病(CLL)，套细胞淋巴瘤(MCL)，弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)，和滤泡性淋巴瘤(FL)组成的组。
179.权利要求178的用途，其中该B细胞癌症是MM。
180.权利要求175或176的用途，其中该抗FcRH5抗体结合(a)位于靶细胞上的FcRH5分子和(b)位于免疫效应细胞上的CD3分子。
181.权利要求180的用途，其中该抗FcRH5抗体在结合该FcRH5分子和该CD3分子后激活该免疫效应细胞。
182.权利要求181的用途，其中该激活的免疫效应细胞能够对该靶细胞发挥细胞毒性效应和/或凋亡效应。
183.权利要求180的用途，其中该靶细胞是浆细胞。
184.权利要求183的用途，其中该浆细胞是短命浆细胞。
185.权利要求183的用途，其中该浆细胞是长命浆细胞。
186.权利要求183的用途，其中该浆细胞是骨髓瘤细胞。
187.权利要求175或176的用途，其中该方法包括以0.01 mg/kg/wk至50 mg/kg/wk的剂量对该受试者施用该抗FcRH5抗体。
188.权利要求187的用途，其中该方法包括以0.1 mg/kg/wk至10 mg/kg/wk的剂量对该受试者施用该抗FcRH5抗体。
189.权利要求188的用途，其中该方法包括以1 mg/kg/wk的剂量对该受试者施用该抗FcRH5抗体。
190.权利要求175或176的用途，其中该方法进一步包括对该受试者施用PD-1轴结合拮抗剂和/或另外的治疗剂。
191.权利要求190的用途，其中该PD-1轴结合拮抗剂或另外的治疗剂在该抗FcRH5抗体的施用之前或之后施用。
192.权利要求190的用途，其中该PD-1轴结合拮抗剂或另外的治疗剂与该抗FcRH5抗体并行施用。
193.权利要求190的用途，其中该PD-1轴结合拮抗剂选自由PD-L1结合拮抗剂，PD-1结合拮抗剂，和PD-L2结合拮抗剂组成的组。
194.权利要求193的用途，其中该PD-1轴结合拮抗剂是PD-L1结合拮抗剂。
195.权利要求194的用途，其中该PD-L1结合拮抗剂选自由MPDL3280A(atezolizumab)，YW243.55.S70，MDX-1105，MEDI4736 (durvalumab)，和MSB0010718C(avelumab)组成的组。
196.权利要求195的用途，其中该PD-L1结合拮抗剂是MPDL3280A (atezolizumab)。
197.权利要求193的用途，其中该PD-1轴结合拮抗剂是PD-1结合拮抗剂。
198.权利要求197的用途，其中该PD-1结合拮抗剂选自由MDX 1106 (nivolumab)，MK-3475 (pembrolizumab)，CT-011 (pidilizumab)，MEDI-0680 (AMP-514)，PDR001，REGN2810，和BGB-108组成的组。
199.权利要求193的用途，其中该PD-1轴结合拮抗剂是PD-L2结合拮抗剂。
200.权利要求199的用途，其中该PD-L2结合拮抗剂是抗体或免疫粘附素。
201.权利要求175或176的用途，其中该方法进一步包括对该受试者施用类固醇，免疫调控剂(IMiD)，蛋白酶体抑制剂(PI)，或其组合。
202.权利要求201的用途，其中该类固醇是糖皮质激素。
203.权利要求202的用途，其中该糖皮质激素是地塞米松。
204.权利要求201的用途，其中该IMiD是来那度胺。
205.权利要求201的用途，其中该PI是硼替佐米。
206.权利要求175或176的用途，其中该方法包括静脉内，皮下，肌肉内，表面，口服，经皮，腹膜内，眶内，通过植入，通过吸入，鞘内，室内，或鼻内施用该抗FcRH5抗体。
207.权利要求206的用途，其中该方法包括静脉内施用该抗FcRH5抗体。
208.权利要求206的用途，其中该方法包括皮下施用该抗FcRH5抗体。
209.权利要求190的用途，其中该方法包括静脉内，皮下，肌肉内，表面，口服，经皮，腹膜内，眶内，通过植入，通过吸入，鞘内，室内，或鼻内施用该PD-1轴结合拮抗剂。
210.权利要求209的用途，其中该方法包括静脉内施用该PD-1轴结合拮抗剂。
211.权利要求209的用途，其中该方法包括皮下施用该PD-1轴结合拮抗剂。
212.权利要求201的用途，其中该方法包括静脉内，皮下，肌肉内，表面，口服，经皮，腹膜内，眶内，通过植入，通过吸入，鞘内，室内，或鼻内施用该类固醇，IMiD，PI，或其组合。
213.权利要求212的用途，其中该方法包括静脉内施用该类固醇，IMiD，PI，或其组合。
214.权利要求212的用途，其中该方法包括皮下施用该类固醇，IMiD，PI，或其组合。
215.权利要求175或176的用途，其中该受试者是人。
216.权利要求1-159任一项的抗FcRH5抗体制备用于在来自受试者的生物学样品中检测FcRH5的试剂盒的用途，其中该检测包括：
(a) 在允许该抗FcRH5抗体结合该生物学样品中的天然发生FcRH5的条件下使该生物学样品与权利要求1-159任一项的抗FcRH5抗体接触，并
(b) 检测该抗FcRH5抗体和该生物学样品中的天然发生FcRH5之间是否形成复合物。
217.权利要求216的用途，其中该生物学样品是血液样品。
218.权利要求216或217的用途，其中该受试者是人。
219.一种试剂盒，其包含权利要求1-159任一项的抗体和包含关于使用该抗体在受试者中治疗FcRH5阳性癌症或延迟其进展的说明书的包装插页。
220.一种试剂盒，其包含权利要求1-159任一项的抗体和包含关于使用该抗体在具有FcRH5阳性癌症的受试者中增强免疫功能的说明书的包装插页。
221.权利要求219或220的试剂盒，其中该受试者是人。
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