CN104744462B - 吡咯并喹啉醌的钠盐结晶、其制法、功能性食品和医药 - Google Patents

吡咯并喹啉醌的钠盐结晶、其制法、功能性食品和医药 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种吡咯并喹啉醌的三钠盐结晶及其制造方法，以及含有上述吡咯并喹啉醌的钠盐结晶的功能性食品、医药。该吡咯并喹啉醌的三钠盐结晶，作为通过X射线粉末衍射使用Cu Kα放射线得到的2θ的峰，显示6.6°、11.4°、13.0°、22.6°、26.9°、27.9°、37.0°、38.9°、43.4°(均为±0.2°)。

Description

吡咯并喹啉醌的钠盐结晶、其制法、功能性食品和医药
本案是申请日为2010年6月9日、申请号为201080031945.X、发明名称为“吡咯并喹啉醌的钠盐结晶”的分案申请
技术领域
本发明涉及吡咯并喹啉醌的钠盐的新型结晶及其制造方法。
背景技术
吡咯并喹啉醌(PQQ)被提出有作为新的维生素的可能性而备受瞩目(例如，参照非专利文献1)。PQQ不仅在细菌中存在，而且在真核生物的霉菌、酵母中也存在，作为辅酶进行着重要作用。另外，对于PQQ，近年来，解明了其细胞增殖促进作用、抗白内障作用、肝脏疾病预防治疗作用、创伤治愈作用、抗过敏作用、逆转录酶抑制作用和乙二醛酶I抑制作用－抗癌作用、神经纤维再生作用等众多生理活性。
PQQ能够通过有机化学的合成法(非专利文献2)和发酵法(专利文献1)等制造。但是，由这些方法得到的PQQ中，水或杂质的含量高，需要得到稳定且纯度高的PQQ的结晶的技术。
到目前为止，通过将PQQ的二钠盐在磷酸缓冲液中蒸发浓缩，可以得到在X射线结晶结构解析中显示为单晶的PQQ的钠盐结晶(非专利文献3)。但是，该方法不适于大量制造。另外，通过盐析的方法由于大量使用的NaCl这样的盐析出而混入固体中，因此有需要将存在的盐除去的操作以及由于该盐而难以进行用于保持稳定的品质的分析的缺点。
作为没有这样的缺点的得到PQQ的结晶的方法，报道了通过添加水溶性有机溶剂进行再结晶的方法(专利文献2)。但是，在该文献中没有结晶形状的信息，另外，本发明的发明人在对使用乙醇的再结晶进行确认实验时发现，PQQ二钠盐的结晶性低，干燥后容易残留作为溶剂使用的乙醇，难以提供稳定品质的结晶。而且，在乙醇再结晶法中，还有为了使固体析出而需要冷却设备，处理费用升高的缺点。
另外，对于PQQ三钠盐，与二钠盐不同，目前为止没有关于结晶的报道。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：日本特许第2751183号
专利文献2：日本特公平7-113024号
非专利文献
非专利文献1：Nature，vol422，24April，3003，p832
非专利文献2：JACS，第103卷，第5599～5600页(1981)
非专利文献3：JACS，第111卷，第6822～6828页(1989)
发明内容
若考虑PQQ的药学价值，能够再现地以高纯度获得即使不严格控制温度、光、湿度或氧水平等的保存条件也能够长时间保存的、稳定且具有明确的结晶形态的结晶是重要的。因此，本发明的课题在于提供PQQ钠盐的稳定的结晶，并且提供其制造法。
本发明的发明人为了解决上述课题进行了深入研究。其结果，通过设计PQQ钠盐的结晶化的条件，成功地以高纯度得到可以解决上述课题的PQQ的钠盐的新结晶，从而完成了本发明。
本发明如下。
(1)一种吡咯并喹啉醌的二钠盐结晶，作为通过X射线粉末衍射使用Cu Kα放射线得到的2θ的峰，显示9.1°、10.3°、13.8°、17.7°、18.3°、24.0°、27.4°、31.2°、39.5°(均为±0.2°)。
(2)一种吡咯并喹啉醌的三钠盐结晶，其作为通过X射线粉末衍射使用Cu Kα放射线得到的2θ的峰，显示6.6°、11.4°、13.0°、22.6°、26.9°、27.9°、37.0°、38.9°、43.4°(均为±0.2°)。
(3)(1)所述的吡咯并喹啉醌二钠盐结晶的制造方法，包括：准备含有水溶性有机溶剂10～90(v/v)％的吡咯并喹啉醌三钠盐的水溶液和/或悬浊液，将该水溶液和/或悬浊液调整至pH2～5的范围，使吡咯并喹啉醌的二钠盐结晶化的步骤。
(4)(3)所述的方法，其特征在于，水溶性有机溶剂为醇。
(5)(4)所述的方法，其特征在于，醇为乙醇。
(6)(3)～(5)中任一项所述的方法，其特征在于，以悬浊状态进行结晶化。
(7)(2)所述的吡咯并喹啉醌三钠盐结晶的制造方法，包括：在吡咯并喹啉醌三钠盐的水溶液和/或悬浊液中添加水溶性有机溶剂使其达到10～90(v/v)％的浓度，将所得到的水溶液和/或悬浊液保持在pH6～10的范围，使吡咯并喹啉醌三钠盐结晶化的步骤。
(8)(7)所述的方法，其特征在于：水溶性有机溶剂为醇。
(9)(8)所述的方法，其特征在于：醇为乙醇。
(10)(2)所述的吡咯并喹啉醌三钠盐结晶的制造方法，包括：通过将吡咯并喹啉醌钠盐的水溶液和/或悬浊液保持在pH6～10的范围进行盐析，使吡咯并喹啉醌三钠盐结晶化的步骤。
(11)一种含有(1)或(2)所述的吡咯并喹啉醌的钠盐结晶的功能性食品。
(12)一种含有(1)或(2)所述的吡咯并喹啉醌的钠盐结晶的医药。
通过本发明，能够提供高纯度且稳定的PQQ钠盐的结晶，还能够提供其稳定的制造方法。
附图说明
图1是表示实施例1中得到的结晶的X射线粉末衍射谱图的图。
图2是表示实施例1中得到的结晶的热分析数据的图。
图3是表示实施例3中得到的结晶的X射线粉末衍射谱图的图。
图4是表示比较例1中由再结晶法得到的固体的X射线粉末衍射谱图的图。
图5是表示比较例2中在甲醇中结晶化得到的固体的X射线粉末衍射谱图的图。
图6是表示比较例3中从单晶数据模拟得到的X射线粉末衍射谱图的图。
具体实施方式
在本发明中，吡咯并喹啉醌(PQQ)是指式1所示的结构的物质。
本申请的第一发明所涉及的结晶(以下，称为结晶1)是作为通过X射线粉末衍射使用Cu Kα放射线的反射角2θ的峰，显示9.1°、10.3°、13.8°、17.7°、18.3°、24.0°、27.4°、31.2°、39.5°(均为±0.2°)的PQQ二钠盐的结晶。
利用X射线粉末衍射的衍射角2θ的测定，例如，能够在以下的测定条件下进行。
装置：株式会社Mac Science制M18XCE
X射线：Cu/管电压40kV/管电流100Ma
发散狭缝：1°
防散射狭缝：1°
接收狭缝：0.3mm
扫描速度：4.000°/min
采样宽度：0.020°
此外，这些峰，也能够用其他安装有单色器的一般的X射线粉末衍射装置观测。此外，由于本发明中规定的结晶形状还包含测定誤差，因此只要有与峰的角度相关的合理的同一性即可。
在由现有的乙醇再结晶法得到的PQQ二钠盐中，没有出现这样多的衍射峰，可以认为现有的PQQ二钠盐是结晶性低的固体。
作为制造结晶1的方法，例如，可以列举如下方法：在水中使PQQ的三钠盐溶解和/或悬浊，在该溶液和/或悬浊液中加入水溶性有机溶剂，使其达到10～90(v/v)％、优选达到20～80(v/v)％的浓度，之后，将pH调整至2～5的范围，使其结晶化。另外，也可以在水溶性有机溶剂中使PQQ三钠盐溶解和/或悬浊后，加水，使水溶性有机溶剂浓度达到10～90(v/v)％、优选达到20～80(v/v)％的浓度，之后，将pH调整至2～5的范围，使其结晶化。或者，也可以在含有10～90(v/v)％、优选20～80(v/v)％的水溶性有机溶剂的水性介质中使PQQ的三钠盐溶解和/或悬浊后，将pH调整至2～5的范围，使其结晶化。
原料中使用的PQQ的三钠盐能够通过有机化学的合成法(例如，JACS，第103卷，5599～5600页(1981))和发酵法(例如，日本开平1-218597号公报或日本特许2692167号)等制造。原料中使用的PQQ的三钠盐可以是结晶，也可以是非晶质的。另外，也可以含有杂质。
若列举能够使用的水溶性有机溶剂的具体的例子，有甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、乙二醇、丙二醇、甲氧基乙醇、二乙二醇、甲氧基二乙二醇、丙三醇、甲氧基丙醇、丙酮、甲乙酮、乙腈、乳酸乙酯、羟基异丁酸甲酯等。其中更优选醇，特别优选乙醇。
该有机溶剂是用于作为贫溶剂降低PQQ的溶解度而使用的，其浓度可以对应初始的PQQ三钠盐的量在上述范围内适当设定。
在结晶的一般的制造方法中，在溶剂中溶解固体后，加入贫溶剂使结晶析出。
但是，在本发明中，即使在固体存在的悬浊状态也能够进行结晶化。在悬浊状态进行操作，能够降低使用的装置的容积，还能够降低排出的排水，故而优选。
作为用于得到结晶1的具体的操作方法，首先，准备含有原料的PQQ的三钠盐的水溶液和/或悬浊液。此时，优选在每1L水中加入0.5～80g的PQQ的三钠盐。然后，通过在该水溶液和/或悬浊液中添加水溶性有机溶剂，使PQQ的三钠盐的溶解度下降。此时，即使有固体析出也没有问题。接着，边测量pH边添加酸，将pH调整至2～5即可。
另外，也可以在水溶性有机溶剂加入PQQ的三钠盐使其溶解和/或悬浊后，加水，其后将pH调整至2～5的范围，使其结晶化。此时，优选在加入的水溶性有机溶剂和水的合计量的1L中加入0.5～800g的PQQ的三钠盐。
或者，也可以在含有水溶性有机溶剂的水性介质中加入PQQ的三钠盐，使其溶解和/或悬浊后，将pH调整至2～5的范围，使其结晶化。此时，优选在1L水性介质中加入0.5～800g的PQQ的三钠盐。
用于调整pH而加入的酸的种类没有特别限制，可以列举盐酸、氢溴酸、氢碘酸、高氯酸、硝酸、硫酸等无机酸、甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、三氯乙酸、甲烷磺酸、苯磺酸等有机酸等，其中优选盐酸。
在pH稳定、pH2～5之间规定的值达到一定的状态下，通过过滤或离心分离等将析出的结晶分离，能够得到结晶1。
在含有PQQ的三钠盐的水溶液和/或悬浊液中加入水溶性有机溶剂时的两液体的温度，只要不发生液体冻结即可，没有特别制限，但若设为高温则能量效率下降，因此优选-30℃～80℃。在添加水溶性有机溶剂后，添加酸而使pH为2～5时的溶液或悬浊液的温度，只要不发生液体冻结即可，没有特别制限，但若设为高温则能量效率下降，或若设为低温则结晶化的速度下降，因此优选5℃～80℃。优选根据需要进行搅拌，其后进行静置。搅拌时间，例如，能够设为5分钟～7日。静置时间，例如，能够设为5分钟～15日。
在得到的溶液中，生成PQQ二钠盐的结晶(结晶1)。在后述的实施例2中，由高效液相色谱求得的纯度为99.5％，通过该结晶化法，能够得到极高纯度的PQQ结晶。
此外，结晶1可以是含水物，只要具有上述峰即可，没有特别限制。
本申请第二发明所涉及的结晶(结晶2)是作为通过X射线粉末衍射使用Cu Kα放射线得到的2θ的峰，显示6.6°、11.4°、13.0°、22.6°、26.9°、27.9°、37.0°、38.9°、43.4°(均为±0.2°)的PQQ三钠盐的结晶。这些峰由与上述结晶1相同的测定法的X射线粉末衍射所规定。
结晶2，例如，能够通过使用上述那样的含有原料的PQQ三钠盐的水溶液和/或悬浊液，在pH6～10的范围进行结晶化而得到。
结晶化能够通过钠离子存在下的盐析或通过加入水溶性有机溶剂的析出进行。三钠盐结晶时，与二钠盐结晶不同，钠离子大量过剩从而分析变得困难的危险性低，因此即使是盐析也没有问题。能够通过将pH调整至6～10，加入食盐、硫酸钠、硝酸钠、磷酸钠等进行盐析而得到。加入的盐的浓度，只要加入的盐溶解即可，没有限制，优选0.2wt％以上、30wt％以下。此外，水溶液和/或悬浊液已经是pH为6～10时不需要pH调整。
在添加水溶性有机溶剂时，可以列举甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、乙二醇、丙二醇、甲氧基乙醇、二乙二醇、甲氧基二乙二醇、丙三醇、甲氧基丙醇、丙酮、甲乙酮、乙腈、乳酸乙酯、羟基异丁酸甲酯等。其中更优选醇，特别优选乙醇。水溶性有机溶剂优选添加至10～90(v/v)％的浓度，更优选添加至20～80(v/v)％的浓度。
此外，结晶2也可以是含水物，只要有上述峰即可，没有特别限制。
PQQ具有细胞的增殖促进作用、抗白内障作用、肝脏疾病预防治疗作用、创伤治愈作用、抗过敏作用、逆转录酶抑制作用和乙二醛酶I阻害作用－抗癌作用、神经纤维再生等众多药理效果。
因此，本发明的PQQ结晶1和2能够作为医药或功能性食品的有效成分。即，能够以皮肤外用剂、注射剂、口服剂、栓剂等形态或者，日常食用的饮料食物、营养强化食品、各种医院饮食等形态提供。此外，作为制备时所使用的添加剂，作为液剂，能够使用水、果糖、葡萄糖等糖类、花生油、大豆油、橄榄油等油类、聚乙二醇、聚丙二醇等二醇类。作为片剂、胶囊剂、颗粒剂等固型剂的赋型剂，能够例示乳糖、蔗糖、甘露醇等糖类，作为润滑剂，能够例示高岭土、滑石、硬脂酸镁等，作为崩解剂，能够例示淀粉、藻酸钠，作为结合剂，能够例示聚乙烯醇、纤维素、明胶等，作为表面活性剂，能够例示脂肪酸酯等，作为增塑剂，能够例示丙三醇等，但并不限定于这些。也可以根据需要加入溶解促进剂、填充剂等。
另外，PQQ能够单独使用也能够与其他材料组合使用。作为能够组合使用的材料，可以例示维生素B群、维生素C和维生素E等维生素类、氨基酸类、虾青素、α-胡萝卜素、β-胡萝卜素等类胡萝卜素类、二十二碳六烯酸、二十碳五烯酸等ω3脂肪酸类、花生四烯酸等ω6脂肪酸类等，但并不限定于这些。
本发明的PQQ结晶(结晶1和结晶2)纯度高、保存稳定性也优异，因此能够长时间储存，能够适合地作为医药或功能性食品的有效成分使用。
列举以下实施例进一步详细地说明本发明，但本发明并不限定于这些。
＜参考例1＞
原料的PQQ三钠盐如下操作而得到。
基于日本特许公报2692167号的实施例1，将嗜甲基生丝微菌DSM1869(Hyphomicrobium methylovorum DSM1869)培养得到的培养液离心分离，除去菌体，得到含有PQQ的培养上清液。此外，该菌株能够从DSM(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen(德国微生物菌种保藏中心，German Collection of Microorganisms and Cell Cultures))获得。
在Sephadex G-10(Pharmacia制)柱中，使该培养上清液通过，使PQQ吸附，在以NaCl水溶液洗脱得到的pH7.5的PQQ水溶液中再加入NaCl，使其达到60g/L浓度，进行冷却，得到PQQ三钠盐。所得到的PQQ三钠盐由高效液相色谱的UV吸收测得的PQQ纯度为99.0％。
PQQ钠盐的分析在以下的分析条件下进行。利用高效液相色谱在以下所示的条件下测定PQQ浓度和纯度。然后，通过阳离子色谱在以下所示的条件下测定相同溶液中所含的Na浓度。另外，从上述的溶液中所含的PQQ和Na的浓度，求出PQQ钠盐所含的PQQ和Na的物质量比。若该物质量比为2.0±0.2，则是PQQ二钠盐，若为3.0±0.2，则是PQQ三钠盐。
(PQQ分析)
装置：岛津制作所，高效液相色谱，LC-20A
柱：YMC-Pack ODS-TMS(5μm)、150x4.6mm I.D.
测定温度：40℃
检测：260nm处的吸光度
洗脱液：100mM CH3COOH/100mM CH3COONH4(30/70，pH5.1)
洗脱速度：1.5mL/min
(Na分析)
泵：岛津制作所，LC-6A
柱箱：岛津制作所，HIC-6A
测定温度：40℃
检测器：东曹株式会社，电导率计CM-8000
柱：昭和电工株式会社，Shodex，IC Y-521
洗脱液：4mM HNO3
洗脱速度：1.0mL/min
实施例1
(结晶化)PQQ二钠盐的结晶
将参考例1中制备的PQQ三钠盐完全溶解在去离子水中，准备含有PQQ 12g/L的溶液500g。在其中添加500mL乙醇。此时，析出红色固体。一边由pH计进行测定，一边滴加盐酸，使pH为3.6后，在室温下搅拌1小时。通过抽滤回收结晶，在室温下进行16小时的减压干燥。其结果，以收率95mol％得到PQQ二钠盐的结晶。在以下所示的条件下测定所得到的结晶的X射线粉末衍射谱图。在图1中表示结果。通过X射线粉末衍射使用Cu Kα放射线得到的2θ的峰出现9.1°、10.3°、13.8°、17.7°、18.3°、24.0°、27.4°、31.2°、39.5°的±0.2°。
装置：株式会社Mac Science制M18XCE
X射线：Cu/管电压40kV/管电流100mA
发散狭缝：1°
防散射狭缝：1°
接收狭缝：0.3mm
扫描速度：4.000°/min
采样宽度：0.02
得到的固体为结晶性的。
实施例2
PQQ二钠盐的结晶的制造
在500mL去离子水和500mL乙醇的混合液中加入参考例1中制备的含有20g PQQ的PQQ三钠盐的固体60g。此时，固体没有溶解。在其中在室温下加入盐酸，使pH为3.5。盐酸的添加用时约2小时，缓慢滴下。pH稳定后，进行过滤，以收率99mol％得到PQQ二钠盐结晶。另外，原料的PQQ三钠盐中所含的PQQ由液相色谱得到的纯度为99.0％，相对于此，得到的PQQ二钠盐所含的PQQ的纯度为99.5％，上升了0.5％。
将这里得到的结晶减压干燥后，与实施例1同样地进行X射线粉末衍射，结果得到与实施例1同样的结果。
(热分析)
对所得到的固体使用理学公司制Thermo plus EVO TG8120进行热重分析(TG)、差热分析(DSC)。在空气气流下以10℃/分钟的速度从室温升温。
在图2中表示该结果。除了水分的蒸发在100℃附近发生以外，直到270℃都没有变化，是非常稳定的物质。
另外，在以下所示的条件下进行气相色谱分析，没有确认到乙醇的残留。
(固体中的残留乙醇分析)
将得到的固体50mg悬浊于0.5mL的蒸留水中，对离心上清中所含的乙醇使用气相色谱在以下的条件下进行分析，求出固体中所含的乙醇含量。
装置：岛津制作所，气相色谱，GC-2014
检测：FID，210℃
载体：高纯度氮，40mL/min
实施例3
PQQ三钠盐的结晶
将参考例1中制备的PQQ三钠盐完全溶解在去离子水中，准备含有PQQ 12g/L的溶液500g。由pH计进行测定，结果液体pH为7.0。在其中添加25g食盐。此时，析出红色固体。在室温下搅拌1小时后，通过抽滤回收结晶，在室温下进行16小时的减压干燥。其结果，以收率98mol％得到PQQ三钠盐的结晶。在以下所示的条件下测定所得到的结晶的X射线粉末衍射谱图。在图3中表示结果。通过X射线粉末衍射使用Cu Kα放射线得到的2θ的峰中有6.6°、11.4°、13.0°、22.6°、26.9°，27.9°、37.0°、38.9°，43.4°的±0.2°。
装置：株式会社Mac Science制M18XCE
X射线：Cu/管电压40kV/管电流100mA
发散狭缝：1°
防散射狭缝：1°
接收狭缝：0.3mm
扫描速度：4.000°/min
采样宽度：0.02
得到的固体为结晶性的。
实施例4
PQQ三钠盐的结晶
将参考例1中制备的PQQ三钠盐完全溶解在去离子水中，准备含有PQQ 12g/L的溶液500g。由pH计进行测定，结果液体pH为7.0。在其中添加500mL乙醇。此时，红色固体析出。在室温下搅拌1小时后，通过抽滤回收结晶，在室温下进行16小时的减压干燥。其结果，以收率89mol％得到PQQ三钠盐的结晶。对所得到的结晶的粉末在与实施例3相同的条件下测定X射线衍射谱图。
其结果，在与实施例3相同的位置观测到峰。
另外，与实施例2同样操作，进行热分析和固体中的残留乙醇分析，发现热稳定性非常高，也没有确认到乙醇的残留。
[比较例1]
利用乙醇再结晶法的PQQ二钠盐的固体析出
将参考例1中制备的PQQ三钠盐完全溶解在去离子水中，准备含有PQQ 10g/L的溶液800g。加入盐酸使pH为3.5后，在其中添加200mL乙醇。此时，红色固体析出。在室温下搅拌5小时后，在5℃静置24小时，使固体析出。通过连续离心分离回收固体，在50℃进行减压干燥。
在与实施例1相同的条件下测定所得到的固体的X射线粉末衍射谱图。在图4中表示结果。除了在得到的固体中在小角度侧观察到峰以外，几乎没有观察到峰，结晶性低。
在与实施例2相同的条件下进行利用气相色谱的分析，可知乙醇0.02％残留在固体内。
另外，在与实施例2相同的条件下进行热分析，发现在30℃附近观察到重量减少，不稳定。
[比较例2]
在甲醇中利用结晶化的PQQ二钠盐的固体析出
将在专利文献2中记载的PQQ二钠盐固体的结晶化实验再现，进行与本申请发明的结晶的比较。
将实施例1中得到的PQQ的二钠盐结晶0.21g溶解于约60℃的水30mL。在其中加入50g甲醇。混合后时为均匀的溶液。将其在4℃放置过夜，固体析出。对其进行离心分离并减压干燥后，在与实施例1相同的条件测定所得到的固体的X射线粉末衍射谱图。在图5中表示结果。在本申请实施例1、2出现的峰的不同的位置有峰。
另外，与实施例2同样操作进行热分析和固体中的残留乙醇分析，结果热稳定性低，还确认到了乙醇的残留。
[比较例3]
单晶数据向X射线粉末数据的转换
对在JACS，第111卷，第6822～6828页(1989)中报道的PQQ二钠盐，使用该文献中记载的单晶的X射线结晶结构解析的数据，对由该结晶引起的X射线粉末衍射的峰如何变化进行模拟。
解析软件使用RIETAN2000，由WINDOWS(注册商标)XP，1GHz以上的CPU的电脑进行计算，在图6中表示结果。
这样，在与本发明的结晶不同的位置有峰。
以下，在表1中总结实施例1、3、比较例1、2、3的结果。
[表1]
2θ的值各自明显不同，表示为不同的结晶形状。表示本发明的结晶形状是新型的。
工业上的可利用性
本发明的PQQ结晶在医药、功能性食品等领域有用。

Claims (7)

1.一种吡咯并喹啉醌的三钠盐结晶，其特征在于：
作为通过X射线粉末衍射使用Cu Kα放射线得到的2θ的峰，显示6.6°、11.4°、13.0°、22.6°、26.9°、27.9°、37.0°、38.9°、43.4°(均为±0.2°)。
2.一种吡咯并喹啉醌的三钠盐结晶的制造方法，用于制造权利要求1所述的吡咯并喹啉醌的三钠盐结晶，该方法的特征在于，包括：
在吡咯并喹啉醌的三钠盐的水溶液和/或悬浊液中添加水溶性有机溶剂使其达到10～90(v/v)％的浓度，将所得到的水溶液和/或悬浊液保持在pH6～10的范围，使吡咯并喹啉醌的三钠盐结晶化的步骤。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于：
水溶性有机溶剂为醇。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于：
醇为乙醇。
5.权利要求1所述的吡咯并喹啉醌的三钠盐结晶的制造方法，其特征在于，包括：
通过将吡咯并喹啉醌的三钠盐的水溶液和/或悬浊液保持在pH6～10的范围进行盐析，使吡咯并喹啉醌的三钠盐结晶化的步骤。
6.一种含有权利要求1所述的吡咯并喹啉醌的钠盐结晶的功能性食品。
7.一种含有权利要求1所述的吡咯并喹啉醌的钠盐结晶的医药。
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