CN117426507B - 一种保护线粒体和溶血栓的保健食品及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开一种保护线粒体和溶血栓的保健食品及其制备方法，该保健食品按照重量份计，包括以下原料：吡咯并喹啉醌二钠盐0.5‑2份，纳豆1‑9份，三七1‑9份，丹参2‑10份，沙棘10‑25份，地龙1‑5份，竹叶1‑5份，亚麻籽油2‑10份，人参5‑20份，饮用水950‑1200份，所用吡咯并喹啉醌二钠盐是由微生物发酵方法制备得到。此保健食品绿色健康、环保，无毒副作用；药效吸收快、利用率高；在提高免疫力、抗衰老、抗氧化、促进线粒体生物发生作用和溶血栓方面都有显著效果。

Description

一种保护线粒体和溶血栓的保健食品及其制备方法
技术领域
本发明涉及保健食品技术领域，尤其是涉及一种保护线粒体和溶血栓的保健食品及其制备方法。
背景技术
现代社会的生活方式和工作节奏，会导致一部分人群由于营养缺乏、环境毒素和氧化损伤等因素损害人体的线粒体健康。FAD核黄素、烟酸、铁，镁，锰、B1，B2，B3等营养素的缺乏或者过量都会影响线粒体的功能状态；乙酰氨基酚、抗生素类、阿司匹林、甲基苯丙胺、非甾体抗炎药、他汀类等药物可能会损害ATP的产生，而且它们还会增加ROS的产生并破坏mtDNA；食用垃圾食品，如高脂高糖饮食，不洁净的食物，或者有农药残留的食物以及饮食过度都会伤害线粒体，从而造成线粒体功能障碍。
现代社会的生活作息与饮食习惯也容易引起血栓。血脂异常和血糖过高是引起血栓的的主要因素，过多进食动物性脂肪，会提高血中胆固醇水平，从而为血栓的形成提供了丰富的物质基础。血栓会导致局部堵塞，从而引起器官缺血，缺氧而衰竭。若血栓出现在脑血管的分叉处就会造成脑梗死或脑栓塞，而出现在冠状动脉处就可能引发冠心病。这些疾病均有可能引起猝死。
吡咯并喹啉醌二钠盐是一种脱氢酶的氧化还原辅助因子，参与催化生物体内氧化还原反应。吡咯并喹啉醌二钠盐的生物学功能主要集中在两方面，首先它能够支持线粒体的生长发育，刺激人体细胞快速生长；其次是具有很好的抗氧化性，可以帮助清除自由基，减少细胞的损伤。这两大功能使得它在脑健康、心血管健康、代谢功能健康等方面都具有强大的作用。因为人体自身不能合成吡咯并喹啉醌二钠盐，所以可通过膳食补充剂来进行补充。
目前，市售的保健食品主要功能有提高免疫力或者预防心脑血管堵塞等，但对多功能保健食品的开发较少。因此，针对现代社会人们存在的健康问题，开发一种多功能保健食品非常具有现实意义。
发明内容
针对现代社会人类存在的健康问题，本发明提供了一种保护线粒体和溶血栓的保健食品及其制备方法，此保健食品绿色健康、环保，无毒副作用，药效吸收快，利用率高，在提高免疫力、抗衰老、抗氧化能力、促进线粒体生物发生作用和溶血栓方面都有效果显著。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
本发明第一方面提供了一种保护线粒体和溶血栓的保健食品，按照重量份计，包括以下原料：吡咯并喹啉醌二钠盐0.5-2份，纳豆1-9份，三七1-9份，丹参2-10份，沙棘10-25份，地龙1-5份，竹叶1-5份，亚麻籽油2-10份，人参5-20份，饮用水950-1200份。
在临床前研究中，吡咯并喹啉醌二钠盐有助于保护大脑和眼睛的健康、降低血糖和胆固醇、防御肾脏和肝脏损伤、对抗骨质疏松症和骨关节炎等。纳豆可以降低患某些癌症的风险，防止体重增加、优化减肥，还可以改善大脑健康。三七可以降低血糖，调解血脂，治疗高血压，保护肝脏，改善心脑缺氧，三七粉进入身体之后具有双向调节血糖的作用，对于高血脂、高胆固醇的情况都有不错的治疗效果，除此之外还能够抑制动脉硬化，促进身体健康。丹参对于改善心脑血管功能、扩张血管、增加血液流量都有很好的促进作用，经常被用于治疗心脑血管疾病。沙棘可以降低血糖，对心脑血管系统疾病有防治和缓解作用，清除自由基、提升免疫力、调节免疫系统。地龙有降压作用，能防治动脉粥样硬化，活血化瘀、防治心脑血管疾病。竹叶具有良好的抗自由基能力，能有效调节人体血脂，并具有消炎、抗菌、抗病毒、抗氧化、提高免疫力的作用，是理想的纯天然营养品。亚麻籽油可以提高免疫力，减少血脂、降低血压、稳定血糖，抑制脑疾病和血栓等疾病，预防心肌梗塞和脑梗塞。人参可以增强机体免疫功能、预防人体衰老，具有降血脂、血糖的作用。
优选地，所述保健食品制备原料中吡咯并喹啉醌二钠盐采用微生物发酵法制备得到，原始菌种为鲍曼不动杆菌。微生物发酵法制备吡咯并喹啉醌二钠盐，生产过程可控、菌株可以重复利用、对环境的污染少、反应温和、生产过程更安全。
优选地，所述保健食品制备原料中吡咯并喹啉醌二钠盐的制备步骤如下：挑取活化后的鲍曼不动杆菌的单菌落接种到培养基中，加入6-苄氨基嘌呤培养，培养结束后取上清液，分离纯化得到吡咯并喹啉醌二钠盐。
优选地，培养基配方为：(NH4)2SO44 g/L，Na2HPO4·12H2O 3.5g/L，MgSO4·7H2O 1g/L，KH2PO41 g/L，微量元素液1mL/L，维生素液1mL/L；
微量元素液配方(mg/L)：CaCl225，MnCl4·4H2O 5；
维生素液配方(mg/L)：核黄素200，对氨基苯甲酸200，盐酸硫胺素400，烟酸400，盐酸吡哆醇400，泛酸钙400，叶酸2，生物素2，肌醇2000。
优选地，培养基中甲醇的添加量为培养基的2.5wt％-3wt％，6-苄氨基嘌呤添加量为0.003-0.005mg/1000g。申请人发现在鲍曼不动杆菌发酵过程中添加碳源和细胞分裂素可以刺激鲍曼不动杆菌分泌更多的吡咯并喹啉醌二钠盐。由于甲醇具有一定的毒性，作为碳源添加时要严格控制其添加量，避免因浓度过高导致鲍曼不动杆菌细胞的损伤，并且浓度过高也会抑制甲醇脱氢酶的活性，进一步导致菌体OD600和吡咯并喹啉醌二钠盐产量下降。此外，6-苄氨基嘌呤是一种细胞分裂素，在鲍曼不动杆菌发酵过程中添加6-苄氨基嘌呤可以促进鲍曼不动杆菌的分裂、生长，提高吡咯并喹啉醌二钠盐的产量。
优选地，所述培养的条件为30℃-37℃，150r/min-200r/min，培养的时长4～5天，分离纯化得到的吡咯并喹啉醌二钠盐纯度为95％-98％。微生物在适当的培养温度和培养时长能够分泌出更多的吡咯并喹啉醌二钠盐。
本发明第二方面提供了一种上述的保护线粒体和溶血栓的保健食品的制备方法，包括如下步骤：
步骤(1)：将纳豆、三七、丹参、沙棘、地龙、竹叶和人参洗净干燥，混合粉碎过筛，得到原料混合物；
步骤(2)：将步骤(1)得到的原料混合物、亚麻籽油放置于热回流循环提取浓缩机提取罐内，加入乙醇溶液，浸泡，热回流提取后，浓缩、冷藏、过滤、减压，得到浓缩药液备用；
步骤(3)：将吡咯并喹啉醌二钠盐、步骤(2)得到的浓缩药液与饮用水充分混合，制成保护线粒体和溶血栓的保健食品。
优选地，步骤(1)中原料粉碎后过20-30目筛。对原料进行粉碎，可以在后续流程中更好地将原料中的有效物质提取出来。
优选地，步骤(2)中加入与原料混合物的质量比为10-15:1、纯度为50％-75％的乙醇，浸泡时长1-2小时，热回流温度为75-85℃，热回流时间2-3小时。
进一步优选地，步骤(2)中加入与原料混合物的质量比为10:1、纯度为70％的乙醇，浸泡时长1小时，热回流温度为75℃，热回流提取时长2小时。若热回流温度过高或者提取时间过长，溶剂与溶质间的热效应会导致提取的有效组分发生分解，导致提取率下降。
申请人发现在步骤(2)的提取过程中应严格控制料液比。控制料液比可以使原料、乙醇的有效接触的比表面积保持在最大，促使有效成分扩散并转移至乙醇溶剂中，提取率显著提高。控制乙醇的体积分数也很重要，若乙醇体积分数过低，脂溶性成分不能被充分溶解；若乙醇体积分数过高，水溶性成分溶解性降低。
优选地，步骤(2)中提取得到的浓缩药液与原料混合物的质量比为8-10:1。
优选地，步骤(3)中将吡咯并喹啉醌二钠盐与步骤(2)得到的浓缩药液以质量比为(0.5-2):(25-35)的比例混合。控制保健食品中吡咯并喹啉醌二钠盐与浓缩药液的比例可以让不同的有效成分协同发挥作用。
本发明具备的有益效果：
(1)本发明的保健食品中所用吡咯并喹啉醌二钠盐是由微生物发酵方法制备得到，该生产方法对环境的污染少、反应温和、生产过程安全。
(2)本发明的保健食品通过特殊工艺提取纳豆，三七，丹参，沙棘，地龙，竹叶，亚麻籽油和人参的有效成分，药效吸收快，利用率高，在提高人体免疫力、抗衰老、抗氧化、促进线粒体生物发生作用和溶血栓方面都有效果显著。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
为了更好的说明本发明的具体实施方式，下面通过实施例做进一步的举例说明。
实施例1-8中保健食品的制备过程中所用吡咯并喹啉醌二钠盐的制备步骤如下：挑取活化后的鲍曼不动杆菌的单菌落接种到培养基中，加入2.5％的甲醇和0.005mg 6-苄氨基嘌呤培养，30℃、150r/min培养4天，结束后取上清液，分离纯化得到纯度为98％的吡咯并喹啉醌二钠盐。
培养基配方：(NH4)2SO44 g/L，Na2HPO4·12H2O 3.5g/L，MgSO4·7H2O 1g/L，KH2PO41g/L，微量元素液1mL/L，维生素液1mL/L；
微量元素液配方(mg/L)：CaCl225，MnCl4·4H2O 5；
维生素液配方(mg/L)：核黄素200，对氨基苯甲酸200，盐酸硫胺素400，烟酸400，盐酸吡哆醇400，泛酸钙400，叶酸2，生物素2，肌醇2000。
实施例1
一种保护线粒体和溶血栓的保健食品的制备方法，包括以下步骤：
步骤(1)：将5.0g纳豆、5.0g三七、8.0g丹参、15.0g沙棘、4.0g地龙、4.0g竹叶和10.0g人参洗净干燥，混合粉碎过20目筛，得到原料混合物；
步骤(2)：将步骤(1)得到的原料混合物、8.0g亚麻籽油放置于热回流循环提取浓缩机提取罐内，加入590g 60％的乙醇溶液，浸泡1h时，热回流温度为75℃，热回流2h，浓缩至500g，4℃冷藏48h，过滤、减压回收乙醇，得到浓缩药液备用；
步骤(3)：将1.0g吡咯并喹啉醌二钠盐、25g步骤(2)得到的浓缩药液与950mL饮用水充分混合，制成保护线粒体和溶血栓的保健食品。
实施例2
一种保护线粒体和溶血栓的保健食品的制备方法，包括以下步骤：
步骤(1)：将6.0g纳豆、6.0g三七、8.0g丹参、15.0g沙棘、5.0g地龙、5.0g竹叶和10.0g人参洗净干燥，混合粉碎过30目筛，得到原料混合物；
步骤(2)：将步骤(1)得到的原料混合物、8.0g亚麻籽油放置于热回流循环提取浓缩机提取罐内，加入650g 70％的乙醇溶液，浸泡1.5h时，热回流温度为75℃，热回流2h，浓缩至500g，4℃冷藏48h，过滤、减压回收乙醇，得到浓缩药液备用；
步骤(3)：将1.5g吡咯并喹啉醌二钠盐、30g步骤(2)得到的浓缩药液与1000mL饮用水充分混合，制成保护线粒体和溶血栓的保健食品。
实施例3
一种保护线粒体和溶血栓的保健食品的制备方法，包括以下步骤：
步骤(1)：将8.0g纳豆、8.0g三七、10.0g丹参、20.0g沙棘、5.0g地龙、5.0g竹叶和10.0g人参洗净干燥，混合粉碎过30目筛，得到原料混合物；
步骤(2)：将步骤(1)得到的原料混合物、10.0g亚麻籽油放置于热回流循环提取浓缩机提取罐内，加入800g 70％的乙醇溶液，浸泡2h，热回流温度为75℃，热回流2h，浓缩至650g，4℃冷藏48h，过滤、减压回收乙醇，得到浓缩药液备用；
步骤(3)：将2.5g吡咯并喹啉醌二钠盐、35g步骤(2)得到的浓缩药液与1200mL饮用水充分混合，制成保护线粒体和溶血栓的保健食品。
实施例4
一种保护线粒体和溶血栓的保健食品的制备方法，包括以下步骤：
步骤(1)：将8.0g纳豆、8.0g三七、10.0g丹参、205.0g沙棘、5.0g地龙、5.0g竹叶和10.0g人参洗净干燥，混合粉碎过30目筛，得到原料混合物；
步骤(2)：将步骤(1)得到的原料混合物、10.0g亚麻籽油放置于热回流循环提取浓缩机提取罐内，加入800g 70％的乙醇溶液，浸泡2h，热回流温度为75℃，热回流2h，浓缩至600g，4℃冷藏48h，过滤、减压回收乙醇，得到浓缩药液备用；
步骤(3)：将35g步骤(2)得到的浓缩药液与1200mL饮用水充分混合，制成保护线粒体和溶血栓的保健食品。
实施例5
一种保护线粒体和溶血栓的保健食品的制备方法，具体实施方式与实施例3相同，区别在于，热回流温度为100℃。
实施例6
一种保护线粒体和溶血栓的保健食品的制备方法，具体实施方式与实施例3相同，区别在于，热回流时间为4h。
实施例7
一种保护线粒体和溶血栓的保健食品的制备方法，具体实施方式与实施例3相同，区别在于，加入了1500g 70％的乙醇溶液。
实施例8
一种保护线粒体和溶血栓的保健食品的制备方法，具体实施方式与实施例3相同，区别在于，加入95％的乙醇溶液。
实施例9
一种保护线粒体和溶血栓的保健食品的制备方法，具体实施方式与实施例3相同，区别在于，所用吡咯并喹啉醌二钠盐为市售产品。
实施例10
一种保护线粒体和溶血栓的保健食品的制备方法，具体实施方式与实施例3相同，区别在于，所用吡咯并喹啉醌二钠盐的制备步骤如下：挑取活化后的鲍曼不动杆菌的单菌落接种到培养基中，加入2％的甲醇和0.005mg 6-苄氨基嘌呤培养，30℃、150r/min培养4天，结束后取上清液，分离纯化得到纯度为98％的吡咯并喹啉醌二钠盐。
培养基配方：(NH4)2SO45 g/L，Na2HPO4·12H2O 4g/L，MgSO4·7H2O 1g/L，KH2PO41.5g/L，微量元素液1mL/L，维生素液1mL/L；
微量元素液配方(mg/L)：CaCl225，MnCl4·4H2O 5；
维生素液配方(mg/L)：核黄素200，对氨基苯甲酸200，盐酸硫胺素400，烟酸400，盐酸吡哆醇400，泛酸钙400，叶酸2，生物素2，肌醇2000。
保护线粒体和溶血栓的保健食品效果测试
一、动物功效试验
选用取8周龄健康大鼠，55只雄鼠，55只雌鼠，分为11组(5只雄鼠，五只雌鼠)，分别为：对照组(G1组)和十个实施组(G2组：投喂实施例1的保健食品；G3组：投喂实施例2的保健食品；G4组：投喂实施例3的保健食品；G5组：投喂实施例4的保健食品；G6组：投喂实施例5的保健食品；G7组：投喂实施例6的保健食品；G8组：投喂实施例7的保健食品；G9组：投喂实施例8的保健食品；G10组：投喂实施例9的保健食品；G11组：投喂实施例10的保健食品)，饲养时长均为八周。
对照组(G1)用高脂肪、高果糖的食物喂养。
实施组(G2-G10)分别将实施例1-10制备的保健食品混合在高脂肪、高果糖的食物中喂养。
大鼠脑堵塞面积的测定
第八周周末试验结束，G1组-G11组各组大鼠，处死、取材前一天，大鼠禁食过夜，大鼠称重，异氟烷气体麻醉。再灌注24h后处死大鼠，取血、取脑。脑组织在视交叉处向后切取厚度为2mm的冠状切片，其余右侧脑组织用于蛋白印迹分析(除去小脑)。将脑片置于用PBS(pH7.4)配制的1％TTC(2，3，5氯化三苯基四氮唑蓝)染液，37℃染色5min。正常脑组织染成深红色，缺血脑组织成苍白色。扫描仪扫描，使用Image-Pro-Plus图像分析软件计算脑梗死面积。
表1表示各组脑堵塞面积比较(％)。
表1
实验组 只数 堵塞面积(％)
G1 10 32.23±1.89
G2 10 18.92±3.04
G3 10 18.44±2.65
G4 10 16.84±2.29
G5 10 23.57±1.78
G6 10 23.03±3.11
G7 10 21.22±1.36
G8 10 21.77±2.61
G9 10 22.92±2.07
G10 10 21.02±1.85
G11 10 20.11±2.30
注：实施组与对照组比较，P<0.01。
由表1结果可知，实验组老鼠被喂食高脂肪、高果糖的饮食以诱发了脑堵塞。与未经治疗的实验组(G1)大鼠组相比，实施例1-3的保健食品显著降低对应实验组(G2-G4)大鼠的脑堵塞面积，表明实施例1-3中制备的保健食品溶血栓效果较好。
实施例4的保健食品中未添加吡咯并喹啉醌二钠盐，导致G5组的大鼠脑堵塞面积比G2-G4组的大鼠脑堵塞面积大。线粒体被称为细胞的能量源。但它们会随着时间的推移而损坏并无法正常工作，线粒体功能障碍与一系列健康问题有关，线粒体功能障碍会导致代谢综合征、肥胖、胰岛素抵抗、II型糖尿病和心血管疾病。增加健康线粒体的数量可以保持年轻的功能和活力，吡咯并喹啉醌二钠盐可以促进有缺陷的线粒体的再循环和健康的新线粒体的产生，表明该实施例中制备的保健食品溶血栓效果较差。
实施例5和实施例6的保健食品的制备过程中热回流温度较高，实施例6的保健食品的制备过程中热回流时间过长，导致G6组和G7组的大鼠脑堵塞面积比G2-G4组的大鼠脑堵塞面积大。由于热回流温度过高或者热回流提取时间过长，溶剂与溶质间的热效应会导致提取的有效组分发生分解，导致有效组分提取率下降，表明该实施例中制备的保健食品溶血栓效果较差。
实施例7的保健食品的制备过程中加入的乙醇溶液过多，实施例8的保健食品的制备过程中加入的乙醇纯度太高，两个实施例中的乙醇体积分数都较高，提取的水溶性有效成分溶解性降低，导致G8组和G9组的大鼠脑堵塞面积比G2-G4组的大鼠脑堵塞面积大，表明该实施例中制备的保健食品溶血栓效果较差。
实施例9中所用吡咯喹啉醌二钠盐为市售产品，是由食葡萄糖食甲基菌发酵而来，微生物发酵过程会受到培养基成分、培养条件、发酵方式等因素的影响，因而本实施例所用的吡咯喹啉醌二钠盐与本发明中所用鲍曼不动杆菌分泌的吡咯喹啉醌二钠盐有所区别，可能造成保健食品中的有效成分降低，从而导致G10组的大鼠脑堵塞面积比G2-G4组的大鼠脑堵塞面积大，表明该实施例中制备的保健食品溶血栓效果较差。
实施例10中所用吡咯喹啉醌二钠盐为鲍曼不动杆菌在调整了碳氮磷比例的培养基中发酵获得的，调整了培养基碳氮磷的比例可能造成微生物分泌的吡咯喹啉醌二钠盐有效成分发生改变，保健食品中的有效成分也随之改变，从而导致G11组的大鼠脑堵塞面积比G2-G4组的大鼠脑堵塞面积大，表明该实施例中制备的保健食品溶血栓效果较差。
二、对使用者免疫力改善情况
经过实际使用验证，对于服用实施例1～3保健食品的不同年龄的人群进行统计，结果表明：不同年龄的人群在提高免疫力、抗疲劳、抗自由基、修复受损细胞、抗衰老等方面都有显著的效果。因为实施例1～3的保健食品是由多种药物通过特殊工艺加工制成，因此能够很好地提高人体免疫力，帮助人体维持健康水平。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

Claims (6)

1.一种保护线粒体和溶血栓的保健食品，其特征在于，按照重量份计，包括以下原料：吡咯并喹啉醌二钠盐0.5-2份，纳豆1-9份，三七1-9份，丹参2-10份，沙棘10-25份，地龙1-5份，竹叶1-5份，亚麻籽油2-10份，人参5-20份，饮用水950-1200份；
所述吡咯并喹啉醌二钠盐采用微生物发酵法制备得到，原始菌种为鲍曼不动杆菌；
所述吡咯并喹啉醌二钠盐的制备步骤如下：挑取活化后的鲍曼不动杆菌的单菌落接种到培养基中，加入6-苄氨基嘌呤培养，培养结束后取上清液，分离纯化得到吡咯并喹啉醌二钠盐；
所述培养基中甲醇的添加量为培养基的2.5wt%-3wt%，6-苄氨基嘌呤的添加量为0.003-0.005 mg/1000g；
所述培养的时长为4～5天，分离纯化得到的吡咯并喹啉醌二钠盐纯度为95%-98%。
2.一种权利要求1所述的保护线粒体和溶血栓的保健食品的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤（1）：将纳豆、三七、丹参、沙棘、地龙、竹叶和人参洗净干燥，混合粉碎过筛，得到原料混合物；
步骤（2）：将步骤（1）得到的原料混合物、亚麻籽油放置于热回流循环提取浓缩机提取罐内，加入乙醇溶液，浸泡，热回流提取后，浓缩、冷藏、过滤、减压，得到浓缩药液备用；
步骤（3）：将吡咯并喹啉醌二钠盐与步骤（2）得到的浓缩药液与饮用水充分混合，制成保护线粒体和溶血栓的保健食品。
3.根据权利要求2所述的保护线粒体和溶血栓的保健食品的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中原料粉碎后过20-30目筛。
4.根据权利要求2所述的保护线粒体和溶血栓的保健食品的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中加入与原料混合物的质量比为10-15:1、纯度为50%-75%的乙醇溶液，浸泡时长1-2小时，热回流温度为75-85℃，热回流时间2-3小时。
5.根据权利要求2所述的保护线粒体和溶血栓的保健食品的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中得到的浓缩药液与原料混合物的质量比为8-10:1。
6.根据权利要求2所述的保护线粒体和溶血栓的保健食品的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中将吡咯并喹啉醌二钠盐与步骤（2）得到的浓缩药液以质量比为（0.5-2）:（25-35）的比例混合。
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