CN102260326A

CN102260326A - 卡贝缩宫素的制备方法

Info

Publication number: CN102260326A
Application number: CN2011101519286A
Authority: CN
Inventors: 文永均; 郭德文; 曾德志; 王晓莉
Original assignee: SHENGNUO SCIENCE AND TECHNOLOGY DEVELOPMENT Co Ltd CHENGDU
Current assignee: SHENGNUO SCIENCE AND TECHNOLOGY DEVELOPMENT Co Ltd CHENGDU
Priority date: 2011-06-08
Filing date: 2011-06-08
Publication date: 2011-11-30

Abstract

本发明属于多肽药物制备方法技术领域，特别涉及卡贝缩宫素的制备方法。本发明的制备方法使用了新型的巯基保护氨基酸Fmoc-Cys((CH₂)₃COOAll)，反应效率高、反应条件温和。制备方法包括固相多肽合成法制备卡贝缩宫素树脂、卡贝缩宫素树脂酸解得到卡贝缩宫素粗品、卡贝缩宫素粗品纯化得到卡贝缩宫素纯品，其中固相多肽合成法制备卡贝缩宫素树脂的方法：(1)以氨基树脂为起始树脂载体，依次接入卡贝缩宫素氨基酸序列中相对应的Fmoc-保护氨基酸，得线形卡贝缩宫素树脂：(2)线形卡贝缩宫素树脂脱去侧链烯丙基；(3)脱去Fmoc保护，(4)环化反应得卡贝缩宫素树脂。本发明采用与接肽链相同的固相偶联反应进行环化，反应条件温和，环化率达到99.5％以上，产品收率高。

Description

卡贝缩宫素的制备方法

技术领域

本发明属于多肽药物制备方法技术领域，特别涉及卡贝缩宫素的制备方法。

背景技术

卡贝缩宫素(Carbetocin)是一种合成的具有激动剂性质的长效催产素8肽类似物，其临床和药理特性与天然产生的催产素类似。像催产素一样，卡贝缩宫素与子宫平滑肌的催产素受体结合，引起子宫的节律性收缩，在原有的收缩基础上，增加其频率和增加子宫张力。在非妊娠状态下，子宫的催产素受体含量很低，在妊娠期间增加，分娩时达高峰。因此卡贝缩宫素对非妊娠的子宫没有作用，但是对妊娠的子宫和刚生产的子宫具有有效的子宫收缩作用。

不论是静脉注射还是肌肉注射卡贝缩宫素后，子宫迅速收缩，可在2分钟内达到一个明确强度。单剂量静脉注射卡贝缩宫素对子宫的活性作用可持续大约1个小时，因此足以预防刚生产后的产后出血。产后给予卡贝缩宫素后，在收缩的频率与幅度方面都比催产素为长。

研究表明，当硬膜外或腰麻下剖腹产术后立即单剂量静脉给予卡贝缩宫素100μg，在预防子宫张力不足和减少产后出血方面，卡贝缩宫素明显优于安慰剂。在产后的早期给予卡贝缩宫素也可以促进子宫的恢复。

卡贝缩宫素具有以下的结构：

国内外关于卡贝缩宫素制备报道不多，欧洲专利ES2115543，采用固液结合合成法，其原理为：先通过常规固相多肽合成法，得到4-Cl-Butyl-Tyr(Me)-Ile-Gln-Asn-Cys(Trt)-Pro-Leu-GIy-Pro-Gly-树脂，酸解后得到线形肽4-Cl-Butyl-Tyr(Me)-Ile-Gln-Asn-Cys-Pro-Leu-Gly-NH2，线性肽用乙睛和水(1∶1)作溶剂，用1M NaOH调pH＝9，环化得到卡贝缩宫素，它所用的碱还包括LiOH，NaHCO₃，DIEA，DMAP。

捷克专利CS8605461，同样是采用固液结合合成法，先用固相多肽合成方法合成Z-Ile-Gln-Asn-Cys(Bzl)-Pro-Leu-Gly-O-树脂，然后裂解得到Z-Ile-GIn-Asn-Cys(Bzl)-Pro-Leu-GIy-NH₂，再氢化，得到Ile-Gln-Asn-Cys-Pro-Leu-Gly-NH2，再跟4-溴丁酸反应，得到Ile-Gln-Asn-Cys((CH₂)₃COOH)-Pro-Leu-Gly-NH₂再跟X-Tyr(Me)-OH反应，脱保护，环化得到卡贝缩宫素。

在上述两个专利方法中，均以液相进行环化环合，反应物浓度低，化合效率差，无法有效第进行规模化生产。

中国专利CN200910106889，采用固相合成法，其原理为：先通过常规固相多肽合成法，得到4-Br-Butyl-Tyr(Me)-Ile-Gln-Asn-Cys(Alloc)-Pro-Leu-GIy-Pro-Gly-树脂，在四三苯基膦钯催化下去Alloc保护，得到4-Br-Butyl-Tyr(Me)-Ile-Gln-Asn-Cys-Pro-Leu-GIy-Pro-Gly-树脂，以氯化锂为环化试剂进行环化，酸解后得到卡贝缩宫素。该方法存在催化剂中毒的问题，Cys(Alloc)在去Alloc保护后-SH裸露，极易使四三苯基膦钯催化剂中毒而失效，从而严重影响去保护反应的效率。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供卡贝缩宫素的制备方法，该制备方法使用了新型的巯基保护氨基酸Fmoc-Cys((CH₂)₃COOAll)，反应效率高、反应条件温和、有利于实现规模化的固相合成工艺。

本发明卡贝缩宫素的制备方法，包括固相多肽合成法制备卡贝缩宫素树脂、卡贝缩宫素树脂酸解得到卡贝缩宫素粗品、卡贝缩宫素粗品纯化得到卡贝缩宫素纯品，其中固相多肽合成法制备卡贝缩宫素树脂的方法包括如下步骤：

(1)以氨基树脂为起始树脂载体，依次接入卡贝缩宫素氨基酸序列中相对应的Fmoc-保护氨基酸，得线形卡贝缩宫素树脂：

Fmoc-Tyr(Me)-Ile-Gln-Asn-Cys((CH₂)₃COOR)-Pro-Leu-Gly-氨基树脂

其中，Cys的Fmoc-保护氨基酸为Fmoc-Cys((CH₂)₃COOR)，结构为：

其中，R₁～R₄独立的为H或C1～C8烷基；

(2)线形卡贝缩宫素树脂脱去侧链R：

得到

Fmoc-Tyr(Me)-Ile-Gln-Asn-Cys((CH₂)₃COOH)-Pro-Leu-Gly-氨基树脂；

(3)脱去Fmoc保护得到：

NH₂-Tyr(Me)-Ile-Gln-Asn-Cys((CH₂)₃COOH)-Pro-Leu-Gly-氨基树脂；

(4)环化反应得卡贝缩宫素树脂：

其中，步骤(1)接入Fmoc-保护氨基酸时采用固相偶联合成法。

固相偶联合成法具体为：氨基树脂上脱Fmoc保护的氨基与Fmoc-Gly-OH偶联反应得到Fmoc-Gly-氨基树脂，然后Fmoc-Gly-氨基树脂脱Fmoc保护后与Fmoc-Leu-OH发生第二次偶联反应，依次类推，按照卡贝缩宫素肽链的顺序，直至与Fmoc-Tyr(Me)-OH偶联反应结束为止，得到

Fmoc-Tyr(Me)-Ile-Gln-Asn-Cys((CH₂)₃COOR)Pro-Leu-Gly-氨基树脂。

脱Fmoc保护的试剂为10～30％(V/V)哌啶(PIP)/N，N-二甲基甲酰胺(DMF)溶液，优选的为20％。使用的脱Fmoc保护试剂用量为所投料树脂重量的5～15倍，优选为10倍。脱Fmoc保护反应时间为10～60分钟，优选为20分钟。

所述偶联反应需添加缩合试剂和活化试剂，缩合试剂选自N，N-二异丙基碳二亚胺(DIC)和N，N-二环己基碳二亚胺(DCC)，六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(PyBOP)、2-(7-氮杂-1H-苯并三氮唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)、苯并三氮唑-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸盐(HBTU)或O-苯并三氮唑-N，N，N′，N′-四甲基脲四氟硼酸酯(TBTU)，优选为DIC。缩合试剂用量为所投料树脂氨基总摩尔数的1.2～6倍，优选为3倍。

偶联反应的活化试剂选自1-羟基苯并三唑(HOBt)、N-羟基-7-氮杂苯并三氮唑(HOAt)，优选的为1-羟基苯并三唑。偶联反应的活化试剂用量为所投料树脂氨基总摩尔数的1.2～6倍，优选的为3倍。

偶联反应时间为60～300分钟，优选为180分钟。

步骤(1)所述的Fmoc-保护氨基酸分别为：Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Leu-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Cys((CH₂)₃COOR)，Fmoc-Asn-OH，Fmoc-Gln-OH，Fmoc-Ile-OH，Fmoc-Tyr(Me)-OH，其用量为所投料树脂总摩尔数的1.2～6倍，优选3倍。

所述Fmoc-Cys((CH₂)₃COOR)中R为

Fmoc-Cys((CH₂)₃COOR)结构为：

其中，R₁～R₄独立的为H或C1～C8烷基。

优选的，R₁～R₄独立的为H或C1～C4烷基。

最优的，R₁～R₄为H，即如下所示：

使用的氨基树脂，选自Rink Amide AM树脂、Rink MBHA Amide树脂、Rink Amide树脂或Sieber树脂，优选为Rink Amide AM树脂。

所述氨基树脂取代值为0.2～1.2mmol/g树脂，优选的为0.4～0.6mmol/g树脂。

步骤(2)脱去侧链烯丙基的试剂为四三苯基膦钯和苯硅烷，四三苯基膦钯与苯硅烷摩尔比为1∶8～12，优选为1∶10。四三苯基膦钯用量为侧链烯丙基摩尔量的0.2～0.3倍，优选为0.25倍。

步骤(3)脱去Fmoc保护的试剂为10～30％(V/V)哌啶/N，N-二甲基甲酰胺溶液，优选的为20％。使用的脱Fmoc保护试剂用量为所投料树脂重量的5～15倍，优选为10倍。脱Fmoc保护反应时间为10～60分钟，优选为20分钟。

步骤(4)得到的卡贝缩宫素树脂偶联环化反应为固相偶联合成法，所述偶联反应需添加缩合试剂和活化试剂，缩合试剂选自N，N-二异丙基碳二亚胺(DIC)和N，N-二环己基碳二亚胺(DCC)，六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(PyBOP)、2-(7-氮杂-1H-苯并三氮唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)、苯并三氮唑-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸盐(HBTU)或O-苯并三氮唑-N，N，N′，N′-四甲基脲四氟硼酸酯(TBTU)，优选为DIC。缩合试剂用量为所投料树脂总摩尔数的1.2～6倍，优选为3倍。

偶联反应的活化试剂选自1-羟基苯并三唑(HOBt)、N-羟基-7-氮杂苯并三氮唑(HOAt)，优选的为HOBt。偶联反应的活化试剂用量为所投料树脂总摩尔数的1.2～6倍，优选的为3倍。

偶联反应时间为60～300分钟，优选为180分钟。

进一步的，卡贝缩宫素树脂经酸解脱去氨基树脂得到卡贝缩宫素粗品：

酸解试剂为三氟醋酸(TFA)、1，2-乙二硫醇(EDT)和水混合溶剂，其用量为所投肽料树脂重量的4～15倍，优选的为10倍。

酸解试剂混合溶剂的配比为：

TFA的比列为80～95％(V/V)，EDT的比例为1～10％(V/V)，水为余量，优选的配比为90％∶5％∶5％(V/V)。

进一步的，本发明方法的步骤(1)～(4)中Gln、Asn的侧链可以用Trt保护，制备卡贝缩宫素树脂的方法为：

(a)以氨基树脂为起始树脂载体，依次接入卡贝缩宫素氨基酸序列中相对应的Fmoc-保护氨基酸，得线形卡贝缩宫素树脂：

Fmoc-Tyr(Me)-Ile-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys((CH₂)₃COOR)-Pro-Leu-Gly-氨基树脂

所述的Fmoc-保护氨基酸为：Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Leu-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Cys((CH₂)₃COOR)，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Gln(Trt)-OH，Fmoc-Ile-OH，Fmoc-Tyr(Me)-OH；Cys的Fmoc-保护氨基酸为Fmoc-Cys((CH₂)₃COOR)；

(b)线形卡贝缩宫素树脂脱去侧链烯丙基得到：

Fmoc-Tyr(Me)-Ile-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys((CH₂)₃COOH)-Pro-Leu-Gly-氨基树脂；

(c)脱去Fmoc保护得到：

NH₂-Tyr(Me)-Ile-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys((CH₂)₃COOH)-Pro-Leu-Gly-氨基树脂；

(d)环化反应得带有侧链保护基的卡贝缩宫素树脂：

带有侧链保护基时，4个反应步骤的反应条件与上述不带侧链保护基的制备方法相同。

带有侧链保护基的卡贝缩宫素树脂中Gln、Asn的侧链保护基在后续的酸解步骤与氨基树脂同时脱去得到卡贝缩宫素粗品，酸解条件与卡贝缩宫素树脂相同。

本文所述的Fmoc为9-芴甲氧羰基，Trt为三苯基甲烷。

进一步的，卡贝缩宫素粗品经高效液相色谱纯化、冻干得到卡贝缩宫素纯品：

取粗品用20％醋酸溶液溶解，用0.45μm滤膜滤过备用。采用高效液相色谱法进行纯化，纯化用色谱填料为10μm的反相C18，流动相系统为0.05mol/L三乙胺磷酸缓冲液(pH＝2.3)-乙腈，77mm*250mm的色谱柱流速为90ml/min，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集主峰蒸去乙腈后，得卡贝缩宫素纯化中间体浓缩液。

取卡贝缩宫素纯化中间体浓缩液，用0.45μm滤膜滤过备用。采用高效液相色谱法进行换盐，流动相系统为1％醋酸溶液-乙腈，纯化用色谱填料为10μm的反相C18，77mm*250mm的色谱柱流速为90ml/min(可根据不同规格的色谱柱，调整相应的流速)。采用梯度洗脱，循环上样方法，上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，采集图谱，观测吸收度的变化，收集换盐主峰并用分析液相检测纯度，合并换盐主峰溶液，在小于40℃水浴条件下减压浓缩，用旋转蒸发仪蒸去大部分乙腈，得到卡贝缩宫素醋酸盐水溶液。

本发明使用了新型保护氨基酸Fmoc-Cys((CH₂)₃COOR)，克服了现有技术的缺点，同时采用与接肽链相同的固相偶联反应进行环化，反应条件温和，环化率达到99.5％以上，为获得高的产品收率提供了保障。

与已有技术相比，本发明工艺具有反应操作简单、反应条件温和、环化收率高等特点，具有广泛的实用价值和应用前景。

具体实施方式

通过下述实施例将有助于理解本发明，但不能限制本发明的内容：

实施例1 Fmoc-S-(4-(正丁酸丙烯酯))-L-半胱氨酸(Fmoc-Cys((CH₂)₃COOAll))的制备，All为烯丙基

取4-溴代正丁酸丙烯酯1000g，加7.5L DMF，搅拌溶解，氮气保护，加入L-半胱氨酸盐酸盐1044g搅拌溶解完全后，加入三乙胺180ml，室温搅拌反应过夜，TLC反应完全后，JIA减压浓缩蒸去DMF，加入3L水，搅拌溶解，过滤去不溶物，滤液用6mol/L盐酸调pH＝6-7析出固体，过滤得固体，固体用H₂O洗3次，过滤，滤洗，得固体，40℃烘干得S-(4-(正丁酸丙烯酯))-L-半胱氨酸372g(收率29.3％)。

¹H NMR(DMSO，ppm))：12.7(S，1H)，5.9(m，1H)，5.2(m，2H)，4.7(d，2H)，3.8(m，2H)，3.0(d，2H)，2.4(t，2H)，2.3(t，2H)，2.1(m，2H)，2.0(s，2H)；

MS m/z：248(100％M+1)。

S-(4-(正丁酸丙烯酯))-L-半胱氨酸330g加水2500ml，搅拌下加Na₂CO₃调反应液PH＝8-9，待固体全部溶解后，用乙酸乙酯提取杂质3次(每次乙酸乙酯用量500ml)，提取后的水溶液加四氢呋喃1L，搅拌下加Fmoc-OSu：450g，室温反应至完全，过滤，滤液用乙酸乙酯提取产品3次(每次乙酸乙酯用量500ml)，合并乙酸乙酯提取液，提取液依次用2％Na₂CO₃溶液、0.5N盐酸溶液、饱和氯化钠溶液各洗3次(每次洗液用量300ml)，得乙酸乙酯溶液，乙酸乙酯溶液加无水MgSO₄：300g干燥，过滤，滤饼MgSO₄乙酸乙酯滤洗，合并乙酸乙酯液，60℃浓缩至干得油状物，油状物加石油醚研磨2次，析出固体，过滤得固体，真空减压干燥得Fmoc-S-(4-(正丁酸丙烯酯))-L-半胱氨酸457g(收率72.5％)。

¹H NMR(DMSO，ppm))：12.9(S，1H)，7.9(d，2H)，7.7(d，2H)，7.6(S，1H)，7.4(t，2H)，7.3(t，2H)，5.9(m，1H)，5.3(dd，1H)，5.2(dd，H)，4.5(d，2H)，4.3(m，2H)，4.2(m，1H)，4.1(m，1H)，2.9(dd，2H)，2.5(t，2H)，2.4(t，2H)，1.8(m，2H)。

MS m/z：470(100％M+1)

实施例2Fmoc-线形卡贝缩宫素树脂的合成

Fmoc-线形卡贝缩宫素树脂为：

Fmoc-Tyr(Me)-Ile-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys((CH₂)₃COOAll)-Pro-Leu-Gly-氨基树脂

制备时以氨基树脂为起始原料，依次与保护氨基酸偶联，制得Fmoc-线形卡贝缩宫素树脂。本实施例使用的保护氨基酸从树脂起算第1至第8个氨基酸相对应的保护氨基酸如表1所示：

表1

接肽顺序n＝	保护氨基酸	分子量
			1	Fmoc-Gly	297
2	Fmoc-Leu	353
			3	Fmoc-Pro	337
4	Fmoc-Cys((CH₂)₃COOAll)	470
			5	Fmoc-Asn(Trt)	597
6	Fmoc-Gln(Trt)	611
			7	Fmoc-Ile	353
8	Fmoc-Tyr(Me)	417

表1其中第4个Fmoc-Cys((CH₂)₃COOAll)为实施例1制得的Fmoc-S-(4-(正丁酸丙烯酯))-L-半胱氨酸。

保护氨基酸的活化方法为：

取1.5mol保护氨基酸和1.5mol HOBt，用适量DMF溶解；另取1.5mol DIC(N，N-二异丙基碳二亚胺)，搅拌下慢慢加入至保护氨基酸DMF溶液中，于室温环境中搅拌反应30分钟，得到活化后的保护氨基酸溶液。

取代值为0.5mmol/g的Fmoc-Rink Amide氨基树脂1Kg，采用5L 20％PIP/DMF溶液去保护20分钟，过滤得到去Fmoc的氨基树脂备用。

去Fmoc的氨基树脂加入第一个活化后的保护氨基酸溶液，偶联反应60～300分钟，过滤即得Fmoc-Gly-氨基树脂。Fmoc-Gly-氨基树脂用5L 20％PIP/DMF溶液去Fmoc保护20分钟，过滤，滤渣与第二个活化后的保护氨基酸溶液偶联反应60～300分钟，过滤即得Fmoc-Leu-Gly-氨基树脂。

采用上述同样方法，依次接入第3至第8个氨基酸对应的Fmoc-保护氨基酸，即前一步得到的Fmoc-[1～(n-1)个]氨基酸-氨基树脂脱Fmoc保护后与活化的Fmoc-保护氨基酸(第n个)偶联反应60～300分钟，n＝1～8。接完所有保护氨基酸后，即得Fmoc-线形卡贝缩宫素-氨基树脂。

实施例3卡贝缩宫素树脂的合成

1、脱Cys上的烯丙基：

将实施例2制得的线形卡贝缩宫素树脂，用二氯甲烷(DCM)洗涤2次，加入烯丙基去保护试剂，反应时间4小时以上，反应完成后，分别用DCM、DMF洗涤3次得到：

Fmoc-Tyr(Me)-Ile-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys((CH₂)₃COOH)-Pro-Leu-Gly-氨基树脂

去保护试剂为四三苯基膦钯和苯硅烷(1∶10，摩尔比)，四三苯基膦钯用量为侧链烯丙基摩尔量的0.25倍。去保护试剂使用时溶于DCM溶液，DCM的用量与线形卡贝缩宫素树脂体积相同。

2、脱Fmoc保护：

步骤1得到的树脂用20％PIP/DMF溶液去Fmoc保护，反应完成后，分别用DCM、DMF洗涤3次，得到的线形卡贝缩宫素树脂的结构为：

NH₂-Tyr(Me)-Ile-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys((CH₂)₃COOH)-Pro-Leu-Gly-氨基树脂

3、环化

取1.5mol活化剂HOBt和1.5mol偶联剂DIC，用适量DMF溶解，DMF的用量与线形卡贝缩宫素树脂体积相同，加入到线形卡贝缩宫素树脂中，搅拌反应3小时，反应完成后，树脂分别用DCM、DMF、甲醇洗涤3次并抽干，40℃以下减压干燥，干燥剂为五氧化二磷(P₂O₅)，得到1.62Kg卡贝缩宫素树脂：

实施例4卡贝缩宫素树脂的酸解

取实施例3制得的卡贝缩宫素树脂，加入裂解试剂[TFA/水/EDT＝95∶5∶5(V/V)(10ml/克树脂)，搅拌均匀，室温搅拌反应3小时，反应混合物使用砂芯漏斗过滤，收集滤液，树脂再用少量TFA洗涤3次，合并滤液后减压浓缩，加入无水乙醚沉淀，再用无水乙醚洗沉淀3次，抽干得白色粉末即为卡贝缩宫素粗品。

实施例5卡贝缩宫素粗品的纯化

取卡贝缩宫素粗品，用20％醋酸溶液溶解，用0.45μm滤膜滤过备用。

采用高效液相色谱法进行纯化，纯化用色谱填料为10μm的反相C18，流动相系统为0.05mol/L三乙胺磷酸缓冲液(pH＝2.3)-乙腈，77mm*250mm的色谱柱流速为90ml/min，采用梯度洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集主峰蒸去乙腈后，得卡贝缩宫素纯化中间体浓缩液。

取卡贝缩宫素纯化中间体浓缩液，用0.45μm滤膜滤过备用。采用高效液相色谱法进行换盐，流动相系统为1％醋酸溶液-乙腈，纯化用色谱填料为10μm的反相C18，77mm*250mm的色谱柱流速为90ml/min(可根据不同规格的色谱柱，调整相应的流速)。采用梯度洗脱，循环上样方法，上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，采集图谱，观测吸收度的变化，收集换盐主峰并用分析液相检测纯度，合并换盐主峰溶液，在小于40℃水浴条件下减压浓缩，用旋转蒸发仪蒸去大部分乙腈，得到卡贝缩宫素醋酸盐水溶液，冻干得卡贝缩宫素醋酸盐335g。

产品纯度为99.4％，单一最大峰为0.2％，总收率为67.8％。

分子量：998(100％M+H)；比旋度：-78.6°；

水分：3.0％；醋酸：2.5％；含量：99.2％(以无水分、无醋酸计)。

Claims

1.卡贝缩宫素的制备方法，包括固相多肽合成法制备卡贝缩宫素树脂、卡贝缩宫素树脂酸解得到卡贝缩宫素粗品、卡贝缩宫素粗品纯化得到卡贝缩宫素纯品，其中固相多肽合成法制备卡贝缩宫素树脂的方法包括如下步骤：

(1)以氨基树脂为起始树脂载体，依次通过偶联反应接入卡贝缩宫素氨基酸序列中相对应的Fmoc-保护氨基酸，得线形卡贝缩宫素树脂：

Fmoc-Tyr(Me)-Ile-Gln-Asn-Cys((CH₂)₃COOR)-Pro-Leu-Gly-氨基树脂

其中，Cys的Fmoc-保护氨基酸为Fmoc-Cys((CH₂)₃COOR)，结构为：

其中，R₁～R₄独立的为H或C1～C8烷基；

(2)线形卡贝缩宫素树脂脱去侧链R：得到

Fmoc-Tyr(Me)-Ile-Gln-Asn-Cys((CH₂)₃COOH)-Pro-Leu-Gly-氨基树脂；

(3)脱去Fmoc保护得到：

NH₂-Tyr(Me)-Ile-Gln-Asn-Cys((CH₂)₃COOH)-Pro-Leu-Gly-氨基树脂；

(4)环化反应得卡贝缩宫素树脂：

2.根据权利要求1所述的卡贝缩宫素的制备方法，其特征在于：步骤(1)、(4)的偶联反应添加缩合试剂和活化试剂；

缩合试剂选自N，N-二异丙基碳二亚胺、N，N-二环己基碳二亚胺，六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷、2-(7-氮杂-1H-苯并三氮唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸酯、苯并三氮唑-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸盐或O-苯并三氮唑-N，N，N′，N′-四甲基脲四氟硼酸酯；

活化试剂选自1-羟基苯并三唑、N-羟基-7-氮杂苯并三氮唑。

3.根据权利要求1所述的卡贝缩宫素的制备方法，其特征在于：步骤(1)Fmoc-保护氨基酸的摩尔用量为氨基树脂中氨基总摩尔数的1.2～6倍。

4.根据权利要求1所述的卡贝缩宫素的制备方法，其特征在于：步骤(1)所述的Fmoc-保护氨基酸分别为：Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Leu-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Cys((CH₂)₃COOR)，Fmoc-Asn-OH，Fmoc-Gln-OH，Fmoc-Ile-OH，Fmoc-Tyr(Me)-OH。

5.根据权利要求1所述的卡贝缩宫素的制备方法，其特征在于：步骤(2)脱去侧链烯丙基的试剂为四三苯基膦钯和苯硅烷，四三苯基膦钯与苯硅烷摩尔比为1∶8～12，四三苯基膦钯用量为侧链烯丙基摩尔量的0.2～0.3倍。

6.根据权利要求1所述的卡贝缩宫素的制备方法，其特征在于：步骤(1)偶联反应前去Fmoc保护的试剂为哌啶/N，N-二甲基甲酰胺混合溶液，混合溶液按体积比计含哌啶10～30％。

7.根据权利要求1所述的卡贝缩宫素的制备方法，其特征在于：步骤(1)、(3)脱去Fmoc保护的试剂为10～30％(V/V)哌啶/N，N-二甲基甲酰胺溶液，使用的脱Fmoc保护试剂用量为所投料树脂重量的5～15倍。

8.根据权利要求1～7任一项所述的卡贝缩宫素的制备方法，其特征在于：步骤(1)～(4)中Gln、Asn的侧链用Trt保护。

9.根据权利要求1～8任一项所述的卡贝缩宫素的制备方法，其特征在于：酸解时酸解剂按体积比计为80～95％三氟醋酸、1～10％1，2-乙二硫醇和水的混合溶剂，酸解剂用量为所投肽料树脂重量的4～15倍。

10.根据权利要求1～9任一项所述的卡贝缩宫素的制备方法，其特征在于：所述氨基树脂为Rink Amide AM树脂、Rink Amide MBHA树脂、Rink Amide树脂或Sieber树脂。