CN102241746B - 恩夫韦肽的制备方法 - Google Patents
恩夫韦肽的制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102241746B CN102241746B CN201110140173.XA CN201110140173A CN102241746B CN 102241746 B CN102241746 B CN 102241746B CN 201110140173 A CN201110140173 A CN 201110140173A CN 102241746 B CN102241746 B CN 102241746B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- fmoc
- aminoresin
- amino acid
- enfuvirtide
- phe
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明属于多肽药物制备方法技术领域，特别涉及恩夫韦肽的制备方法。本发明所要解决的技术问题是提供恩夫韦肽的制备方法，所述恩夫韦肽为NH2-FWNWLSAWKDLELLEQENKEQQNQSEEILSHILSTY-Ac SEQ ID NO：1。本发明恩夫韦肽的制备方法包括如下步骤：(1)Fmoc-Phe和去Fmoc保护的氨基树脂偶联反应得到Fmoc-Phe-氨基树脂；(2)Fmoc-Phe-氨基树脂依次与恩夫韦肽第2至第36个氨基酸对应的Fmoc-氨基酸偶联反应，最后接入乙酰基，得到恩夫韦肽-氨基树脂；(3)恩夫韦肽-氨基树脂酸解反应得到恩夫韦肽粗品；(4)恩夫韦肽粗品用高效液相色谱法纯化后得到恩夫韦肽纯品。本发明方法步骤简单、产品质量高，能够自动化生产。
Description
技术领域
本发明属于多肽药物制备方法技术领域，特别涉及恩夫韦肽的制备方法。
背景技术
恩夫韦肽，英文名为Enfuvirtide，也称为T-20，恩夫韦肽由罗氏与Trimeris公司共同研制，结构式为：
Ac-Tyr-Thr-Ser-Leu-Ile-His-Ser-Leu-Ile-Glu-Glu-Ser-Gln-Asn-Gln-Gln-Glu-Lys-Asn-Glu-Gln-Glu-Leu-Leu-Glu-Leu-Asp-Lys-Trp-Ala-Ser-Leu-Trp-Asn-Trp-Phe-NH2，或表示为：NH2-FWNWLSAWKDLELLEQENKEQQNQSEEILSHILSTY-Ac(SEQ ID NO：1)；分子量：4492.01，分子式：C204H301N51O64。
恩夫韦肽是2003年3月首次在美国注册并上市的第一个HIV融合抑制剂，用于治疗成人及6岁以上儿童慢性人类免疫缺陷病毒(HIV)感染。恩夫韦肽是合成多肽，由gp41的HR2域中一段自然存在的氨基酸序列衍生而成，通过模拟HR2域的活性并且竞争结合gp41的HR1域，阻止HR1和HR2的相互作用及gp41构型发生改变，进而阻止病毒与宿主细胞融合。与大多数多肽类药物相似，恩夫韦肽发生代谢性药物间相互作用的可能性很小。
专利CN99806431报道的恩夫韦肽制备工艺的为固相和液相结合的片段缩合工艺，先使用羧基型2-Cl-Trt树脂制备每个片段肽树脂，经弱酸酸解、纯化后获得保护肽片段，再通过液相片段缩合、酸解、高效液相色谱纯化得到纯度为93-95％的产品。该方法生产周期长，每个片段中间体都须要经过纯化，使用的溶剂品种多，整个生产过程无法实现连续的自动化生产。该方法中使用的酸解溶剂为三氟醋酸混合溶剂，其具体物料配比为TFA∶水∶二硫苏糖醇(DTT)，其中二硫苏糖醇价格昂贵，每Kg需要2万多元，不适合规模化生产需要，因此没有国产化上市产品。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供恩夫韦肽的制备方法，该制备方法步骤简单、产品质量高。
本发明恩夫韦肽(NH2-FWNWLSAWKDLELLEQENKEQQNQSEEILSHILSTY-Ac，SEQ ID NO：1)的制备方法包括如下步骤：
(1)Fmoc-Phe和去Fmoc保护的氨基树脂偶联反应得到Fmoc-Phe-氨基树脂；
(2)Fmoc-Phe-氨基树脂依次与恩夫韦肽第2至第36个氨基酸对应的Fmoc-氨基酸偶联反应，最后接入乙酰基，得到恩夫韦肽-氨基树脂；
(3)恩夫韦肽-氨基树脂酸解反应得到恩夫韦肽。
得到的恩夫韦肽为粗品，可以采用高效液相色谱法纯化后得到恩夫韦肽纯品。
所述氨基树脂选自Rink Amide AM树脂、Rink Amide树脂、Rink MBHA树脂和Sieber树脂中的一种，优选为Rink Amide AM树脂。
Rink Amide AM树脂
Rink Amide树脂
RinkMBHA树脂
Sieber树脂
所述氨基树脂取代值为0.2～1.2mmol/g树脂，优选的为0.4～0.6mmol/g树脂。
步骤(1)Fmoc-Phe的用量为氨基树脂中氨基总摩尔数的1.2～6倍，优选的为2.5～3.5倍。
步骤(1)氨基树脂去Fmoc保护的试剂为哌啶(PIP)/N，N-二甲基甲酰胺(DMF)混合溶液，混合溶液中含哌啶10～30％(V)。去Fmoc保护试剂用量为每克氨基树脂5～15ml，优选的为每克氨基树脂8～12ml。
步骤(1)去Fmoc保护试剂脱保护时间为10～60分钟，优选的为15～25分钟。
所述偶联反应需添加缩合试剂和活化试剂，缩合试剂选自N，N-二异丙基碳二亚胺(DIC)、N，N-二环己基碳二亚胺(DCC)，六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(PyBOP)、2-(7-氮杂-1H-苯并三氮唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)、苯并三氮唑-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸盐(HBTU)或O-苯并三氮唑-N，N，N′，N′-四甲基脲四氟硼酸酯(TBTU)；优选的为N，N-二异丙基碳二亚胺。
缩合试剂的摩尔用量为氨基树脂中氨基总摩尔数的1.2～6倍，优选为2.5～3.5倍。
活化试剂选自1-羟基苯并三唑(HOBt)、N-羟基-7-氮杂苯并三氮唑(HOAt)，优选的为1-羟基苯并三唑。
活化试剂用量为氨基树脂中氨基总摩尔数的1.2～6倍，优选的为2.5～3.5倍。
偶联反应时间为60～300分钟，优选的为100～140分钟。
步骤(2)所述第2至第36个氨基酸是指恩夫韦肽从NH2端开始到Ac端顺序的各个氨基酸。
第2至第36个氨基酸对应的Fmoc-氨基酸根据氨基酸性质的不同，可以带有侧链保护基，侧链保护基为叔丁基、苯基甲烷、叔丁氧基、二碳酸二叔丁酯中的至少一种。
优选的，Fmoc-氨基酸种类分别为：Fmoc-Ala、Fmoc-Asn(Trt)、Fmoc-Asp(OtBu)、Fmoc-Gln(Trt)、Fmoc-Glu(OtBu)、Fmoc-His(Trt)、Fmoc-Ile、Fmoc-Leu、Fmoc-Lys(Boc)、Fmoc-Ser(tBu)、Fmoc-Thr(tBu)、Fmoc-Trp(Boc)或Fmoc-Tyr(tBu)。
步骤(2)Fmoc-Phe-氨基树脂与第2个氨基酸对应的Fmoc-氨基酸偶联前去Fmoc保护得到Phe-氨基树脂。去Fmoc保护试剂可以采用哌啶/N，N-二甲基甲酰胺混合溶液，混合溶液中含哌啶10～30％(V)。去Fmoc保护试剂用量为每克氨基树脂5～15ml，优选的为每克氨基树脂8～12ml。去Fmoc保护试剂脱保护时间为10～60分钟，优选的为15～25分钟。
第2个氨基酸对应的Fmoc-氨基酸的摩尔用量为氨基树脂中氨基总摩尔数的1.2～6倍，优选的为2.5～3.5倍。
Fmoc-Phe-氨基树脂与第2个氨基酸对应的Fmoc-氨基酸偶联反应需添加缩合试剂和活化试剂，缩合试剂选自N，N-二异丙基碳二亚胺、N，N-二环己基碳二亚胺、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯.烷基磷、2-(7-氮杂-1H-苯并三氮唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸酯、苯并三氮唑-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸盐或O-苯并三氮唑-N，N，N′，N′-四甲基脲四氟硼酸酯。
缩合试剂优选的为N，N-二异丙基碳二亚胺。
缩合试剂摩尔用量为氨基树脂总摩尔数的1.2～6倍，优选的为2.5～3.5倍。
活化试剂选自1-羟基苯并三唑、N-羟基-7-氮杂苯并三氮唑，优选的为1-羟基苯并三唑。
活化试剂用量为氨基树脂中氨基总摩尔数的1.2～6倍，优选的为2.5～3.5倍。
偶联反应时间为60～300分钟，优选的为100～140分钟。
采用上述接入第2个氨基酸对应的Fmoc-氨基酸的同样方法，依次接入第3至第36个氨基酸对应的Fmoc-氨基酸，即前一步得到的Fmoc-[包含1～(n-1)个]氨基酸-氨基树脂脱Fmoc保护后与活化的Fmoc-氨基酸(第n个)偶联反应60～300分钟，优选的为100～140分钟，n＝1～36。36个氨基酸接完后接入乙酰基，即得恩夫韦肽-氨基树脂，该树脂的恩夫韦肽肽链实际上是包含侧链保护基的。
Fmoc-(1～36个)氨基酸-氨基树脂脱Fmoc保护后偶联反应接入乙酰基，接入乙酰基的方法与上述接Fmoc-氨基酸方法相同，即原料用量配比，脱Fmoc保护试剂、偶联试剂的种类和用量都是相同的，
乙酰基的摩尔用量为氨基树脂中氨基总摩尔数的1.2～6倍，优选的为2.5～3.5倍。
Fmoc-(1～36个)氨基酸-氨基树脂去Fmoc保护的试剂为哌啶/N，N-二甲基甲酰胺混合溶液，混合溶液中含哌啶10～30％(V)。去Fmoc保护试剂用量为每克氨基树脂5～15ml，优选的为每克氨基树脂8～12ml。
Fmoc-(1～36个)氨基酸-氨基树脂去Fmoc保护试剂脱保护时间为10～60分钟，优选的为15～25分钟。
接入乙酰基时需添加缩合试剂和活化试剂，缩合试剂选自N，N-二异丙基碳二亚胺、N，N-二环己基碳二亚胺，六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷、2-(7-氮杂-1H-苯并三氮唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸酯、苯并三氮唑-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸盐或O-苯并三氮唑-N，N，N′，N′-四甲基脲四氟硼酸酯；优选的为N，N-二异丙基碳二亚胺。缩合试剂的摩尔用量为氨基树脂中氨基总摩尔数的1.2～6倍，优选为2.5～3.5倍。
活化试剂选自1-羟基苯并三唑、N-羟基-7-氮杂苯并三氮唑，优选的为1-羟基苯并三唑。活化试剂用量为氨基树脂中氨基总摩尔数的1.2～6倍，优选的为2.5～3.5倍。
接入乙酰基时反应时间为60～300分钟，优选的为100～140分钟。
具体的，第2至第36个氨基酸对应的Fmoc-氨基酸如表1所示，氨基酸后括号中表示的为侧链保护基。第2至第36个氨基酸对应的Fmoc-氨基酸的用量为起始原料氨基树脂中氨基总摩尔数的1.2～6倍，优选的为2.5～3.5倍。
表1
| 接肽顺序n＝ | Fmoc-氨基酸 | 分子量 |
| 2 | Fmoc-Trp(Boc) | 526 |
| 3 | Fmoc-Asn(Trt) | 597 |
| 4 | Fmoc-Trp(Boc) | 526 |
| 5 | Fmoc-Leu | 353 |
| 6 | Fmoc-Ser(tBu) | 383 |
| 7 | Fmoc-Ala | 311 |
| 8 | Fmoc-Trp(Boc) | 526 |
| 9 | Fmoc-Lys(Boc) | 468 |
| 10 | Fmoc-Asp(OtBu) | 412 |
| 11 | Fmoc-Leu | 353 |
| 12 | Fmoc-Glu(OtBu) | 426 |
| 13 | Fmoc-Leu | 353 |
| 14 | Fmoc-Leu | 353 |
| 15 | Fmoc-Glu(OtBu) | 426 |
| 16 | Fmoc-Gln(Trt) | 610 |
| 17 | Fmoc-Glu(OtBu) | 426 |
| 18 | Fmoc-Asn(Trt) | 597 |
| 19 | Fmoc-Lys(Boc) | 468 |
| 20 | Fmoc-Glu(OtBu) | 426 |
| 21 | Fmoc-Gln(Trt) | 610 |
| 22 | Fmoc-Gln(Trt) | 610 |
| 23 | Fmoc-Asn(Trt) | 597 |
| 24 | Fmoc-Gln(Trt) | 610 |
| 25 | Fmoc-Ser(tBu) | 383 |
| 26 | Fmoc-Glu(OtBu) | 426 |
| 27 | Fmoc-Glu(OtBu) | 426 |
| 28 | Fmoc-Ile | 353 |
| 29 | Fmoc-Leu | 353 |
| 30 | Fmoc-Ser(tBu) | 383 |
| 31 | Fmoc-His(Trt) | 620 |
| 32 | Fmoc-Ile | 353 |
| 33 | Fmoc-Leu | 353 |
| 34 | Fmoc-Ser(tBu) | 383 |
| 35 | Fmoc-Thr(tBu) | 397 |
| 36 | Fmoc-Tyr(tBu) | 459 |
步骤(3)酸解剂为三氟醋酸(TFA)、1，2-乙二硫醇(EDT)和水混合溶剂，混合溶剂的配比为：TFA的比列为80～95％(V/V)，EDT的比例为1～10％(V/V)，余量为水。优选配比为89～91％、EDT 4～6％、余量为水。最优的，配比为90％、EDT 5％、余量为水。
酸解剂用量为每克恩夫韦肽-氨基树脂需要4～15ml酸解剂，优选的，每克恩夫韦肽-氨基树脂需要9～11ml酸解剂。
使用酸解剂裂解的时间为室温条件下1～5小时，优选的为1.5～2.5小时。
恩夫韦肽粗品可以采用高效液相色谱法纯化后得到恩夫韦肽纯品，高效液相色谱纯法的操作方法为：恩夫韦肽粗品用水溶解，用稀氨水调pH7.5～8.0后用0.45μm滤膜滤过，滤液经反相C18柱纯化，纯化流动相系统为0.05mol/L醋酸钠(pH＝7.0)-乙腈，将所需要的组分收集浓缩；再以流动相系统为5％醋酸-乙腈换盐，将需要的组分收集浓缩，冷冻冻干得产品。
本发明方法与现有技术相比有以下优点：
本发明方法以氨基树脂为起始原料，以Fmoc保护的氨基酸为单体，采用全序列全合成生产工艺，使用的溶剂相对单一，每步接肽收率99.％以上，可以实现全自动生产。
本发明方法采用三氟醋酸混合溶剂作为酸解溶剂，避免使用剧毒的氟化氢，无需专用设备，减少了环境污染。三氟醋酸混合溶剂中包含可大规模采购的EDT((0.1万/Kg))代替DTT，其市场价格仅仅只有代替二硫苏糖醇的二十分之一，而且使用效果良好。
本发明采用高效液相色谱法进行纯化，得到纯度大于98％的产品，产品总收率大于30％。
本发明提供的方法生产工艺简单，更适合规模化生产。
表1中Fmoc为9-芴甲氧羰基，tBu为叔丁基、Trt为三苯基甲烷、OtBu为叔丁氧基、Boc为叔丁氧羰酰基。
具体实施方式
通过下述实施例将有助于理解本发明，但不能限制本发明的内容：
实施例1Fmoc-Phe-氨基树脂的制备
取1.5mol Fmoc-Phe和1.5mol HOBt，用适量DMF溶解；另取1.5mol DIC，搅拌下慢慢加入至前述DMF溶液中，于室温环境中搅拌反应30分钟，备用。
另取1000g Rink Amide AM树脂，其取代值为0.5mmol/g树脂，先用5L DMF溶涨5分钟，过滤后树脂用5L 20％哌啶/DMF预洗1次，再用5L 20％哌啶/DMF去保护20分钟，过滤后树脂分别用DMF、二氯甲烷(DCM)各洗3次，加入上述Fmoc-Phe/DMF溶液，偶联反应2小时，过滤后树脂分别用DMF、DCM各洗2次，得Fmoc-Phe-氨基树脂1069g。
实施例3、恩夫韦肽树脂的合成
先将第2至第36个氨基酸对应的Fmoc-保护氨基酸备好待用，结构如表1所示，取实施例1制得的Fmoc-Phe-氨基树脂1069g，采用20％(V)PIP/DMF溶液去Fmoc保护，过滤后分别用DMF、DCM各洗3次，得到Phe-氨基树脂。
第2个氨基酸对应的Fmoc-保护氨基酸的活化方法为：
取1.5mol Fmoc-氨基酸和1.5mol HOBt，用适量DMF溶解；另取1.5mol DIC，搅拌下慢慢加入至Fmoc-氨基酸DMF溶液中，于室温环境中搅拌反应30分钟，备用。
第2个氨基酸对应的Fmoc-保护氨基酸与Phe-氨基树脂偶联反应120分钟，过滤、DMF、DCM各洗2次后即得Fmoc-Trp(Boc)-Phe-氨基树脂。
采用上述同样方法，依次接入第3至第36个氨基酸对应的Fmoc-保护氨基酸，即前一步得到的Fmoc-[1～(n-1)个]氨基酸-氨基树脂脱Fmoc保护后与活化的Fmoc-保护氨基酸(第n个)偶联反应60～300分钟，n＝1～36。接完所有保护氨基酸后，即得Fmoc-恩夫韦肽-氨基树脂。
Fmoc-恩夫韦肽-氨基树脂脱去Fmoc保护，偶联接入乙酰基(Ac)制得Ac-恩夫韦肽-氨基树脂，接入乙酰基的试验方法与上述接Fmoc保护氨基酸方法相同。完成反应后，Ac-恩夫韦肽-氨基树脂用甲醇洗涤3次并抽干，40℃以下减压干燥，干燥剂为五氧化二磷(P2O5)，得到4.3Kg恩夫韦肽树脂，该树脂含侧链保护基团。
实施例4、恩夫韦肽树脂的酸解
取实施例3制得的恩夫韦肽树脂，加入裂解试剂(10ml/克肽树脂)[TFA/水/1，2-乙二硫醇＝90∶5∶5(V/V)]，搅拌均匀，室温搅拌反应2小时，反应混合物使用砂芯漏斗过滤，收集滤液，树脂再用少量TFA洗涤3次，合并滤液后减压浓缩，加入无水乙醚沉淀，再用无水乙醚洗沉淀3次，抽干得白色末即为恩夫韦肽粗品。
实施例6、恩夫韦肽粗品的纯化
取实施例5制得的恩夫韦肽粗品，加水至溶解，搅拌下用稀氨水调pH7.5～8.0，用0.45μm滤膜滤过，备用，采用高效液相色谱法进行纯化，流动相系统为0.05mol/L醋酸钠(pH＝7.0)-乙腈，色谱填料为10μm的反相C18，100mm*250mm的色谱柱流速为120ml/min，采用梯度系统洗脱，自动循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集主峰，蒸去大部分乙腈，得到恩夫韦肽醋酸纯化中间体浓缩液。
取恩夫韦肽醋酸纯化中间体浓缩液，用0.45μm滤膜滤过，采用高效液相色谱法进行换盐，流动相系统为5％醋酸-乙腈，色谱填料为10μm的反相C18，紫外检测波长为280nm，先用流动相平衡色谱柱，100mm*250mm的色谱柱流速为120ml/min，采用梯度洗脱，循环上样方法，取本品钠盐溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集换盐主峰，蒸去大部分乙腈，得到恩夫韦肽纯品水溶液，冷冻冻干得产品，得758g白色块状物成品，工艺总收率为33.7％，产品检验结果如下：
纯度：99.5％，分子量：4493(100％M+H)；比旋度：-55.4°(C＝1，1％NaCO3)；
水分：3.0％；醋酸：2.5％；含量：99.2％(以无水分、无醋酸计)。
含量和纯度测定方法：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以水∶乙腈∶四氢呋喃∶三氟乙酸＝1260∶680∶60∶1.8为A相，以水∶乙腈∶四氢呋喃∶三氟乙酸＝340∶630∶30∶0.18为B相，检测波长为220nm，按表2进行梯度洗脱。
表2
| 时间(分钟) | 流动相A(％) | 流动相B(％) |
| 0 | 80 | 20 |
| 25 | 50 | 50 |
| 30 | 40 | 60 |
| 31 | 80 | 20 |
| 40 | 80 | 20 |
Claims (3)
1.恩夫韦肽的制备方法，所述恩夫韦肽为NH2-FWNWLSAWKDLELLEQENKEQQNQSEEILSHILSTY-Ac，其特征在于：包括如下步骤：
(1)Fmoc-Phe和去Fmoc保护的氨基树脂偶联反应得到Fmoc-Phe-氨基树脂；
(2)Fmoc-Phe-氨基树脂依次与恩夫韦肽第2至第36个氨基酸对应的Fmoc-氨基酸偶联反应，最后接入乙酰基，得到恩夫韦肽-氨基树脂；
(3)恩夫韦肽-氨基树脂酸解反应得到恩夫韦肽；
其中，步骤(1)、(2)的偶联反应需添加缩合试剂和活化试剂；
所述缩合试剂选自N,N-二异丙基碳二亚胺；
所述活化试剂选自1-羟基苯并三唑；
步骤(1)的Fmoc-Phe和步骤(2)的Fmoc-氨基酸的摩尔用量为氨基树脂中氨基总摩尔数的1.2～6倍；
步骤(2)第2至第36个氨基酸对应的Fmoc-氨基酸带有侧链保护基时，侧链保护基为叔丁基、三苯基甲烷、叔丁氧基、叔丁氧羰酰基的至少一种；
Fmoc-氨基酸为Fmoc-Ala、Fmoc-Asn(Trt)、Fmoc-Asp(OtBu)、Fmoc-Gln(Trt)、Fmoc-Glu(OtBu)、Fmoc-His(Trt)、Fmoc-Ile、Fmoc-Leu、Fmoc-Lys(Boc)、Fmoc-Ser(tBu)、Fmoc-Thr(tBu)、Fmoc-Trp(Boc)或Fmoc-Tyr(tBu)；
步骤(1)和步骤(2)偶联反应前去Fmoc保护的试剂为哌啶/N,N-二甲基甲酰胺混合溶液，混合溶液按体积比计含哌啶10～30%；
步骤(3)酸解反应使用的酸解剂为三氟醋酸、1,2-乙二硫醇和水的混合溶剂，混合溶剂按体积比计配比为三氟醋酸80-95%，1,2-乙二硫醇1～10%，余量为水；
酸解剂的用量为每克恩夫韦肽-氨基树脂采用4～15ml酸解剂；
高效液相色谱纯化方法：恩夫韦肽粗品用水溶解，用稀氨水调pH7.5～8.0后用0.45μm滤膜滤过，滤液经反相C18柱纯化，纯化流动相系统为0.05mol/L、pH=7.0醋酸钠-乙腈，将所需要的组分收集浓缩；再以流动相系统为5%醋酸-乙腈换盐，将需要的组分收集浓缩，冷冻冻干得产品。
2.根据权利要求1所述的恩夫韦肽的制备方法，其特征在于：所述氨基树脂选自Rink Amide树脂、Rink Amide AM树脂、Rink MBHA树脂和Sieber树脂中的一种。
3.根据权利要求2所述的恩夫韦肽的制备方法，其特征在于：氨基树脂取代值为0.2～1.2mmol/g树脂。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201110140173.XA CN102241746B (zh) | 2011-05-27 | 2011-05-27 | 恩夫韦肽的制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201110140173.XA CN102241746B (zh) | 2011-05-27 | 2011-05-27 | 恩夫韦肽的制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN102241746A CN102241746A (zh) | 2011-11-16 |
| CN102241746B true CN102241746B (zh) | 2014-02-12 |
Family
ID=44960011
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201110140173.XA Active CN102241746B (zh) | 2011-05-27 | 2011-05-27 | 恩夫韦肽的制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN102241746B (zh) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108107103B (zh) * | 2017-12-14 | 2020-10-16 | 华中师范大学 | 谷氨酸受体的质谱探针及其在脑组织中的空间分布规律检测方法 |
| CN110372781B (zh) * | 2019-07-29 | 2021-11-16 | 深圳佳肽生物科技有限公司 | 恩夫韦肽的制备方法和应用 |
| CN114478686B (zh) * | 2021-12-30 | 2023-07-21 | 江苏诺泰澳赛诺生物制药股份有限公司 | 一种纯化恩夫韦肽的方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1524873A (zh) * | 2003-02-25 | 2004-09-01 | 罗姆和哈斯公司 | 以商业规模制造t-20和t-1249肽的方法，和与其相关的t-20和t-1249组合物 |
| CN101437838A (zh) * | 2006-05-03 | 2009-05-20 | 马林克罗特公司 | 用于从树脂上释放保护的肽的组合物和方法 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DK1869066T3 (da) * | 2005-04-08 | 2010-03-29 | Lonza Ag | Peptidsyntese af alfa-spiraler på PEG-harpiks |
-
2011
- 2011-05-27 CN CN201110140173.XA patent/CN102241746B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1524873A (zh) * | 2003-02-25 | 2004-09-01 | 罗姆和哈斯公司 | 以商业规模制造t-20和t-1249肽的方法，和与其相关的t-20和t-1249组合物 |
| CN101437838A (zh) * | 2006-05-03 | 2009-05-20 | 马林克罗特公司 | 用于从树脂上释放保护的肽的组合物和方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN102241746A (zh) | 2011-11-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102286076B (zh) | 比伐卢定的制备方法 | |
| CN102532274B (zh) | 一种比伐卢定的制备方法 | |
| CN104004083B (zh) | 一种合成利拉鲁肽的方法 | |
| CN101357936B (zh) | 固相多肽合成曲普瑞林的制备方法 | |
| CN102584944B (zh) | 一种依非巴特的制备方法 | |
| CN102260326A (zh) | 卡贝缩宫素的制备方法 | |
| CN102408471A (zh) | 特利加压素的制备方法 | |
| KR20120030385A (ko) | 데가렐릭스의 제조 방법 | |
| CN103588863B (zh) | Rgd环肽合成制备工艺 | |
| CN1865280B (zh) | 固相多肽合成亮丙瑞林的制备方法 | |
| CN107176975A (zh) | 一种固相合成戈那瑞林的方法 | |
| CN102250235A (zh) | 奈西立肽的制备方法 | |
| CN103880945B (zh) | 制备高纯度胸腺法新的方法 | |
| CN106589111A (zh) | 一种布雷默浪丹的合成方法 | |
| CN101747426A (zh) | 一种合成普兰林肽的方法 | |
| CN105418736A (zh) | 一种固液结合制备特利加压素的方法 | |
| CN104861042A (zh) | 特异性微波合成制备醋酸西曲瑞克的方法 | |
| CN107501408A (zh) | 一种特立帕肽的制备方法 | |
| CN102241746B (zh) | 恩夫韦肽的制备方法 | |
| CN101857629A (zh) | 布雷默浪丹的固相合成方法 | |
| CN106478805A (zh) | 一种glp-1衍生物的制备方法 | |
| CN104844706A (zh) | 一种合成利西拉来的方法 | |
| CN110204611A (zh) | 一种固相片段法合成比伐卢定 | |
| CN102286078A (zh) | 一种多肽hm-3的制备方法 | |
| CN112062835B (zh) | 一种比伐芦定的制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C56 | Change in the name or address of the patentee |
Owner name: CHENGDU SHENGNUO BIOTEC CO., LTD. Free format text: FORMER NAME: SHENGNUO SCIENCE AND TECHNOLOGY DEVELOPMENT CO LTD, CHENGDU |
|
| CP01 | Change in the name or title of a patent holder |
Address after: 611330 No. 258, industrial road, Dayi County, Sichuan, Chengdu Patentee after: Chengdu Shengnuo Biotec Co., Ltd. Address before: 611330 No. 258, industrial road, Dayi County, Sichuan, Chengdu Patentee before: Shengnuo Science and Technology Development Co., Ltd., Chengdu |
|
| C41 | Transfer of patent application or patent right or utility model | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20160307 Address after: 611330 section, Industrial Avenue, Dayi County, Sichuan, Chengdu Patentee after: Chengdu Shengnuo Biopharm Co., Ltd. Address before: 611330 No. 258, industrial road, Dayi County, Sichuan, Chengdu Patentee before: Chengdu Shengnuo Biotec Co., Ltd. |