CN107176975A - 一种固相合成戈那瑞林的方法 - Google Patents

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孙晓宇
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Abstract

一种固相合成戈那瑞林的方法，其属于医药合成领域。该方法采用高效的裂解后能够保留氨基的Rink Amide AM树脂作为固相载体，在HBTU/HOBT/DIPEA的作用下，从C端到N端逐一延伸偶联上带有Fmoc保护基的氨基酸，得到全保护肽树脂，再通过一步法进行裂解与脱保护得到戈那瑞林粗品，经过分离制备得到戈那瑞林精品。该方法选择采用高效的氨基树脂、缩合剂、碱试剂完成整个合成过程，整个方法操作简单，温和可控且效率高，适于规模化制备戈那瑞林。

Description

一种固相合成戈那瑞林的方法
技术领域
本发明属于医药领域，具体涉及一种合成戈那瑞林的方法。
背景技术
戈那瑞林，其化学名称为5’-氧代脯氨酰-L-组氨酰-L-色氨酰-L-丝氨酰-L-酪氨酰-甘氨酰-L-亮氨酰-L-精氨酰-L-脯氨酰-甘氨酰胺，分子式为C55H75N17O13；分子量为1182.33。
戈那瑞林为人工合成的促性腺激素释放素（GnRH），属肽类化合物，和哺乳动物下丘脑分泌的促性腺激素释放激素天然提取物的结果完全相同。戈那瑞林肌注之后可发挥与纯天然激素类似的效果，促性腺激素释放素由丘脑下部以脉冲方式分泌进入垂体门脉系统到垂体前叶，与垂体促性腺激素细胞上的高亲和力受体特异结合，促进动物垂体前叶促卵泡素（FSH）和促黄体素（LH）的合成和分泌。通过提高普通的下丘脑-垂体功能，改善动物总体受精率，从而恢复卵泡的正常生长和成熟，主要用于动物卵泡囊肿的治疗。2010年，农业部批准戈那瑞林原料药及其制剂为国家第三类新兽药
目前有关戈那瑞林合成的报道较少。中国专利CN105646671A公开了SPE柱和反相色谱柱相结合进行梯度洗脱纯化，得到较高纯度的戈那瑞林的纯化方法。本发明的目的在于提供一条适于规模化生产的戈那瑞林合成方法，解决该产品生产过程中粗肽纯度低，产品不易控制、收率不高等问题。
发明内容
本发明的目的是提供一种从全固相法合成戈那瑞林的方法，具体为采用高效的裂解后能够保留氨基的Rink Amide AM树脂作为固相载体，在缩合试剂和碱试剂的作用下，从C端到N端逐一延伸偶联上带有Fmoc保护基的氨基酸，得到全保护肽树脂，再通过一步法进行裂解与脱保护得到戈那瑞林粗品，经过分离制备得到戈那瑞林精品。具体步骤如下：
步骤1、保护的Gly在缩合试剂和碱试剂作用下与高效的Rink Amide Am Resin树脂进行偶联反应，得到肽树脂1；
步骤2、按照戈那瑞林氨基酸序列C端到N端的顺序，从肽树脂1出发，在缩合试剂和碱试剂作用下，将保护的Pro、保护的Arg (Pbf)、保护的Leu、保护的Gly、保护的Tyr (tBu)、保护的Ser (tBu)、保护的Trp (Boc) 、保护的His (Trt)和pGlu进行逐一延伸偶联，得到保护的戈那瑞林树脂；
步骤3、保护的戈那瑞林肽树脂经酸解剂一步法进行裂解与脱保护得到戈那瑞林粗品；
步骤4、戈那瑞林粗品经纯化转盐后得戈那瑞林精品；
上述方法中，所述保护的Pro、保护的Arg (Pbf)、保护的Leu、保护的Gly、保护的Tyr(tBu)、保护的Ser (tBu)、保护的Trp (Boc) 、保护的His (Trt)和pGlu如下：Fomc-Gly；Fmoc-Pro；Fmoc- Arg (Pbf)；Fmoc-Leu；Fmoc-Gly；Fmoc- Tyr (tBu)；Fmoc-Ser (tBu)；Fmoc- Trp (Boc)；Fmoc- His (Trt) ；pGlu-OH。如：Fmoc- Trp (Boc)的结构为：，Fmoc保护了氨基酸中的氨基，括号中的Boc保护了氨基酸中除羧基外的其他的活性氢；Fmoc- Arg (Pbf)、 Fmoc- Tyr (tBu)、Fmoc-Ser (tBu)、Fmoc- Trp(Boc)、Fmoc- His (Trt)均是如此。
上述方法中，所述缩合试剂为N,N-二异丙基碳二亚胺（DIC）、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷/有机碱(PyBOP)、苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐/有机碱(HBTU)、O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸酯/有机碱(TBTU)中的一种或几种，优选苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐。
上述方法中，所述有机碱为N,N-二异丙基乙胺(DIPEA)、三乙胺(TEA)、2,4,6-三甲基吡啶或N-甲基吗啡啉(NMM)中的一种或几种，优选N,N-二异丙基乙胺。
上述方法中，所述的反应体系选择易溶解原料的非质子性溶剂，包括氯仿、二氯甲烷、四氢呋喃、乙酸乙酯、N,N-二甲基甲酰胺中的任意一种，优选N,N-二甲基甲酰胺或二氯甲烷。
上述方法中，所述缩合试剂的摩尔用量优选为多肽树脂中氨基总摩尔数的1～6倍，更优选为1.5～2.5倍。
上述方法中，所述碱试剂的摩尔用量优选为多肽树脂中氨基总摩尔数的1～6倍，更优选为1.5～2.5倍。
上述方法中，所述保护的氨基酸与树脂的摩尔比为1 : 1 ~3 : 1，优选1.5:1。
上述方法中，所述偶联反应的时间为0.5 ~ 3小时，优选1小时。
上述方法中，所述酸解剂为三氟乙酸。
本发明所述延伸偶联反应是指在第一个氨基酸与氨基树脂偶联后，剩余氨基酸按照戈那瑞林氨基酸的C端到N端的顺序逐个和前一个偶联的氨基酸发生缩合反应(主链氨基和羧基的缩合反应)进行偶联。取Rink Amide AM树脂N,N-二甲基甲酰胺溶胀，加入活化后的N-芴甲氧羰基-甘氨酸溶液，室温搅拌反应0.5-3小时，过滤洗涤，得到Fmoc-Gly-RinkAmide AM树脂；用10-30％哌啶/DMF溶液去Fmoc保护，洗涤过滤得到Gly-Rink Amide AM树脂；
取Gly-Rink Amide AM树脂，加入活化后的N-芴甲氧羰基-脯氨酸，室温搅拌反应0.5-3小时，过滤洗涤，得到Fmoc- Pro -Gly-Rink Amide AM树脂；用10-30％哌啶/DMF溶液去Fmoc保护，洗涤过滤得到Pro -Gly-Rink Amide AM树脂；
取Pro -Gly-Rink Amide AM树脂，加入活化后的N-芴甲氧羰基-亮氨酸，室温搅拌反应0.5-3小时，过滤洗涤，得到Fmoc- Arg (Pbf)- Pro -Gly-Rink Amide AM树脂；用10-30％哌啶/DMF溶液去Fmoc保护，洗涤过滤得到Arg (Pbf)-Pro -Gly-Rink Amide AM树脂；
取Arg (Pbf)-Pro -Gly-Rink Amide AM树脂，加入活化后的N-芴甲氧羰基-精氨酸，室温搅拌反应0.5-3小时，过滤洗涤，得到Fmoc- Leu- Arg (Pbf)- Pro -Gly-Rink Amide AM树脂；用10-30％哌啶/DMF溶液去Fmoc保护，洗涤过滤得到Leu -Arg (Pbf)-Pro -Gly-RinkAmide AM树脂；
取Leu -Arg (Pbf)-Pro -Gly-Rink Amide AM树脂，加入活化后的N-芴甲氧羰基-甘氨酸，室温搅拌反应0.5-3小时，过滤洗涤，得到Fmoc- Gly- Leu- Arg (Pbf)- Pro -Gly-Rink Amide AM树脂；用10-30％哌啶/DMF溶液去Fmoc保护，洗涤过滤得到Gly-Leu -Arg(Pbf)-Pro -Gly-Rink Amide AM树脂；
取Leu -Arg (Pbf)-Pro -Gly-Rink Amide AM树脂，加入活化后的N-芴甲氧羰基-甘氨酸，室温搅拌反应0.5-3小时，过滤洗涤，得到Fmoc- Gly- Leu- Arg (Pbf)- Pro -Gly-Rink Amide AM树脂；用10-30％哌啶/DMF溶液去Fmoc保护，洗涤过滤得到Gly-Leu -Arg(Pbf)-Pro -Gly-Rink Amide AM树脂；
取Gly-Leu -Arg (Pbf)-Pro -Gly-Rink Amide AM树脂，加入活化后的N-芴甲氧羰基-酪氨酸，室温搅拌反应0.5-3小时，过滤洗涤，得到Fmoc- Tyr (tBu)- Gly- Leu- Arg(Pbf)- Pro -Gly-Rink Amide AM树脂；用10-30％哌啶/DMF溶液去Fmoc保护，洗涤过滤得到Tyr (tBu)-Gly-Leu -Arg (Pbf)-Pro -Gly-Rink Amide AM树脂；
取Tyr (tBu)-Gly-Leu -Arg (Pbf)-Pro -Gly-Rink Amide AM树脂，加入活化后的N-芴甲氧羰基-丝氨酸，室温搅拌反应0.5-3小时，过滤洗涤，得到Fmoc- Ser (tBu)-Tyr(tBu)- Gly- Leu- Arg (Pbf)- Pro -Gly-Rink Amide AM树脂；用10-30％哌啶/DMF溶液去Fmoc保护，洗涤过滤得到Ser (tBu)-Tyr (tBu)-Gly-Leu -Arg (Pbf)-Pro -Gly-RinkAmide AM树脂；
取Ser (tBu)-Tyr (tBu)-Gly-Leu -Arg (Pbf)-Pro -Gly-Rink Amide AM树脂，加入活化后的N-芴甲氧羰基-色氨酸，室温搅拌反应0.5-3小时，过滤洗涤，得到Fmoc- Trp(Boc) - Ser (tBu)-Tyr (tBu)- Gly- Leu- Arg (Pbf)- Pro -Gly-Rink Amide AM树脂；用10-30％哌啶/DMF溶液去Fmoc保护，洗涤过滤得到Trp (Boc) -Ser (tBu)-Tyr (tBu)-Gly-Leu -Arg (Pbf)-Pro -Gly-Rink Amide AM树脂；
取Trp (Boc) -Ser (tBu)-Tyr (tBu)-Gly-Leu -Arg (Pbf)-Pro -Gly-Rink AmideAM树脂，加入活化后的N-芴甲氧羰基-组氨酸，室温搅拌反应0.5-3小时，过滤洗涤，得到Fmoc- His (Trt)- Trp (Boc) - Ser (tBu)-Tyr (tBu)- Gly- Leu- Arg (Pbf)- Pro -Gly-Rink Amide AM树脂；用10-30％哌啶/DMF溶液去Fmoc保护，洗涤过滤得到His (Trt)-Trp (Boc) -Ser (tBu)-Tyr (tBu)-Gly-Leu -Arg (Pbf)-Pro -Gly-Rink Amide AM树脂；
取His (Trt)-Trp (Boc) -Ser (tBu)-Tyr (tBu)-Gly-Leu -Arg (Pbf)-Pro -Gly-Rink Amide AM树脂，加入pGlu-OH，室温搅拌反应0.5-3小时，过滤洗涤，得到pGlu -Trp(Boc) - Ser (tBu)-Tyr (tBu)- Gly- Leu- Arg (Pbf)- Pro -Gly-Rink Amide AM树脂；用10-30％哌啶/DMF溶液去Fmoc保护，洗涤过滤得到戈那瑞林肽树脂：pGlu-Trp (Boc) -Ser (tBu)-Tyr (tBu)-Gly-Leu -Arg (Pbf)-Pro -Gly-Rink Amide AM树脂；
还需要说明的是，在延伸偶联中，由于每个氨基酸N端都有保护基，因此需要先脱除N端保护基再偶联，这对本领域技术人员来说是公知常识。本发明优选用PIP/DMF(哌啶/N,N-二甲基甲酰胺)混合溶液脱除N端Fomc保护基，混合溶液中含哌啶为10～30％(V)，优选20%，其余为DMF。去N端保护基时间优选为10～60分钟，优选的为25～40分钟。
本发明针对当前有关戈那瑞林合成的报道不足，产品生产过程中粗肽纯度低，产品不易控制、收率不高等问题。提供一条适于规模化生产的戈那瑞林合成方法，通过采用高效的裂解后能够保留氨基的Rink Amide AM树脂作为固相载体，在HBTU/HOBT/DIPEA的作用下，从C端到N端逐一延伸偶联上带有Fmoc保护基的氨基酸，得到全保护肽树脂，再通过一步法进行裂解与脱保护得到戈那瑞林粗品，经过分离制备得到戈那瑞林精品。该合成工艺，显著地提高了戈那瑞林的纯度，粗品纯度达到86%，且具有较高的总收率（71%）。该方法选择采用高效的氨基树脂、缩合剂、碱试剂完成整个合成过程，整个方法操作简单，温和可控且效率高，适于规模化制备戈那瑞林。
附图说明
图1是戈那瑞林合成工艺流程图。
图2是戈那瑞林粗品1的LC-UV谱图。
图3是戈那瑞林粗品2的LC-UV谱图。
图4是戈那瑞林粗品3的LC-UV谱图。
图5是戈那瑞林精品的LC-UV谱图。
图6是戈那瑞林质谱图。
图7是戈那瑞林合成图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步地说明，但不构成对本发明的限制。在本发明的构思前提下对本发明制备方法的简单改进都属于本发明要求保护的范围。
实施例1：肽树脂1的合成
取0.15mol Fmoc-Gly与0.15mol HOBt 和0.15mol HBTU，用适量DMF溶解；另取0.2 molDIPEA，搅拌下慢慢加入至保护氨基酸DMF溶液中，于室温环境中搅拌反应30分钟，得到活化后的保护氨基酸溶液，备用。
取0.1mol的Rink Amide AM树脂(取代值约0.6mmol/g)，DMF溶胀25分钟，洗涤过滤，加入活化后的Fmoc-Gly溶液，室温搅拌反应3小时，抽掉反应液，DMF洗涤3次后，DCM洗涤3次，每次洗涤时间为5min，得到Fmoc-Gly-Rink Amide AM树脂，即肽树脂1，在进行下一次偶联反应前用20％哌啶/DMF溶液去Fmoc保护25分钟，洗涤过滤得到Gly-Rink Amide AM树脂。
实施例2：戈那瑞林肽树脂的合成
取0.15mol Fmoc-Pro与0.15mol HOBt 和0.15mol HBTU，用适量DMF溶解；另取0.2 molDIPEA，搅拌下慢慢加入至保护氨基酸DMF溶液中，于室温环境中搅拌反应30分钟，得到活化后的保护氨基酸溶液。
将上述活化后的保护氨基酸溶液加入到实施例1制得的Gly-Rink Amide AM树脂，室温搅拌反应1.5小时，抽掉反应液，DMF洗涤3次后，DCM洗涤3次，每次洗涤时间为3min，再用20％哌啶/DMF溶液去Fmoc保护25分钟，洗涤过滤，完成Pro的接入。
同法接入Fmoc- Arg (Pbf)；Fmoc-Leu；Fmoc-Gly；Fmoc-Tyr (tBu)；Fmoc-Ser(tBu)；Fmoc-Trp(Boc) ；Fmoc- His (Trt) 和pGlu-OH。 Fmoc脱除采用20％哌啶/DMF溶液，洗涤过滤得到得保护的戈那瑞林肽树脂，pGlu-His(Ttr)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Rink Amide Am树脂。
实施例3：戈那瑞林肽粗品的合成
取实施例2制得的戈那瑞林肽树脂，加入5％的三氟乙酸/二氯甲烷溶液(酸解液10mL/克戈那瑞林肽树脂)，搅拌反应6小时，过滤收集滤液，树脂再用少量二氯甲烷洗涤3次，合并滤液后减压浓缩，加入无水乙醚沉淀，再用无水乙醚洗沉淀3次，抽干、得类白色粉末即为戈那瑞林粗品1，粗品纯度为85.7％，图2所示。
实施例4：肽树脂1的合成
取0.15mol Fmoc-Gly与0.15mol TBTU，用适量DMF溶解；另取0.2 mol NMM，搅拌下慢慢加入至保护氨基酸DMF溶液中，于室温环境中搅拌反应30分钟，得到活化后的保护氨基酸溶液，备用。
取0.1mol的Rink Amide AM树脂(取代值约0.6mmol/g)，DMF溶胀25分钟，洗涤过滤，加入活化后的Fmoc-Gly溶液，室温搅拌反应3小时，抽掉反应液，DMF洗涤3次后，DCM洗涤3次，每次洗涤时间为5min，得到Fmoc-Gly-Rink Amide AM树脂，即肽树脂1，在进行下一次偶联反应前用20％哌啶/DMF溶液去Fmoc保护25分钟，洗涤过滤得到Gly-Rink Amide AM树脂。
实施例5：戈那瑞林肽树脂的合成
取0.15mol Fmoc-Pro与0.15mol TBTU，用适量DMF溶解；另取0.2 mol NMM，搅拌下慢慢加入至保护氨基酸DMF溶液中，于室温环境中搅拌反应30分钟，得到活化后的保护氨基酸溶液。
将上述活化后的保护氨基酸溶液加入到实施例1制得的Gly-Rink Amide AM树脂，室温搅拌反应1.5小时，抽掉反应液，DMF洗涤3次后，DCM洗涤3次，每次洗涤时间为3min，再用15％哌啶/DMF溶液去Fmoc保护40分钟，洗涤过滤，完成Pro的接入。
同法接入Fmoc- Arg (Pbf)；Fmoc-Leu；Fmoc-Gly；Fmoc-Tyr (tBu)；Fmoc-Ser(tBu)；Fmoc-Trp(Boc) ；Fmoc- His (Trt) 和pGlu-OH。 Fmoc脱除采用15％哌啶/DMF溶液，洗涤过滤得到得保护的戈那瑞林肽树脂，pGlu-His(Ttr)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Rink Amide Am树脂。
实施例6：戈那瑞林肽粗品的合成
取实施例5制得的戈那瑞林肽树脂，加入2％的三氟乙酸/二氯甲烷溶液(酸解液10mL/克戈那瑞林肽树脂)，搅拌反应6小时，过滤收集滤液，树脂再用少量二氯甲烷洗涤3次，合并滤液后减压浓缩，加入无水乙醚沉淀，再用无水乙醚洗沉淀3次，抽干、得类白色粉末即为戈那瑞林粗品2，粗品纯度为84.6％，图3所示。
实施例7：肽树脂1的合成
取0.2 mol Fmoc-Gly与0.2 mol PyBOP 和0.2 mol HATU 2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯，用适量THF溶解；另取0.3 mol DIC，搅拌下慢慢加入至保护氨基酸DMF溶液中，于室温环境中搅拌反应30分钟，得到活化后的保护氨基酸溶液，备用。
取0.1mol的Rink Amide AM树脂(取代值约0.6mmol/g)，THF溶胀30分钟，洗涤过滤，加入活化后的Fmoc-Gly溶液，室温搅拌反应3小时，抽掉反应液，THF洗涤3次后，每次洗涤时间为5min，得到Fmoc-Gly-Rink Amide AM树脂，即肽树脂1，在进行下一次偶联反应前用20％哌啶/DMF溶液去Fmoc保护25分钟，洗涤过滤得到Gly-Rink Amide AM树脂。
实施例8：戈那瑞林肽树脂的合成
取0.2 mol Fmoc-Pro与与0.2 mol PyBOP 和0.2 mol HATU，用适量THF溶解；另取0.3mol DIC，搅拌下慢慢加入至保护氨基酸DMF溶液中，于室温环境中搅拌反应30分钟，得到活化后的保护氨基酸溶液。
将上述活化后的保护氨基酸溶液加入到实施例1制得的Gly-Rink Amide AM树脂，室温搅拌反应1.0小时，抽掉反应液，THF洗涤3次后，每次洗涤时间为3 min，再用15％哌啶/DMF溶液去Fmoc保护25分钟，洗涤过滤，完成Pro的接入。
同法接入Fmoc- Arg (Pbf)；Fmoc-Leu；Fmoc-Gly；Fmoc-Tyr (tBu)；Fmoc-Ser(tBu)；Fmoc-Trp(Boc) ；Fmoc- His (Trt) 和pGlu-OH。 Fmoc脱除采用15％哌啶/DMF溶液，洗涤过滤得到得保护的戈那瑞林肽树脂，pGlu-His(Ttr)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Rink Amide Am树脂。
实施例9：戈那瑞林肽粗品的合成
取实施例5制得的戈那瑞林肽树脂，加入2％的三氟乙酸/二氯甲烷溶液(酸解液10mL/克戈那瑞林肽树脂)，搅拌反应6小时，过滤收集滤液，树脂再用少量二氯甲烷洗涤3次，合并滤液后减压浓缩，加入无水乙醚沉淀，再用无水乙醚洗沉淀3次，抽干、得类白色粉末即为戈那瑞林粗品3，粗品纯度为79.5％，图4所示。
实施例10：戈那瑞林肽精品的制备
称量5g戈那瑞林粗品加入体积百分比5%乙腈超声溶解至液体澄清，用孔径为0.45um滤膜过滤后收集滤液备用。
采用高效液相色谱法进行纯化，色谱柱:C18色谱柱，柱子直径和长度为：50cm×25cm。流动相：流动相A为体积百分比0.01-0.5%磷酸水溶液，流动相B为色谱纯乙腈，梯度洗脱为B%：15%-55%。流速：80-100ml/min。检测波长：220nm。纯化过程：用体积百分比90%乙腈冲洗色谱柱干净后，15%B平衡10min上样，上样量为40-60mL样品溶液。线性梯度洗脱60min，收集目标产物。把收集的目标产物合格部分合并后减压旋蒸浓缩至约60-80mg/mL备用。
转盐过程：用体积百分比90%乙腈冲洗色谱柱干净后，梯度5%B的恒梯度冲洗10-25分钟，上样后用醋酸水溶液和乙腈体系洗脱，上样量为60-80mL,洗脱梯度为10%-70%，收集戈那瑞林溶液。将转盐后所得的所有肽溶液，进行减压浓缩至80-100mg/mL，浓缩温度不超过35℃,然后冷冻干燥得纯度大于99.0%的戈那瑞林精品，纯化收率87%。产品色谱图见图5，质谱图见图6。

Claims (2)

1. 一种固相合成戈那瑞林的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
（1）活化保护氨基酸溶液
按保护氨基酸：缩合剂摩尔比为1:1-6溶解于N，N-二甲基甲酰胺；搅拌下慢慢加入有机碱，于室温环境中搅拌反应，得到活化后的保护氨基酸溶液，备用；有机碱：保护氨基酸的摩尔比为1-6:1；
所述保护氨基酸为N-芴甲氧羰基-甘氨酸、N-芴甲氧羰基-脯氨酸、N-芴甲氧羰基-精氨酸、N-芴甲氧羰基-亮氨酸、N-芴甲氧羰基-酪氨酸、N-芴甲氧羰基-丝氨酸、N-芴甲氧羰基-色氨酸、N-芴甲氧羰基-组氨酸或N-芴甲氧羰基-谷氨酸；所述缩合剂为N,N-二异丙基碳二亚胺、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷、苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐、O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸酯中的一种或几种；所述有机碱为N,N-二异丙基乙胺、三乙胺、2,4,6-三甲基吡啶或N-甲基吗啡啉中的一种或几种；
（2）氨酸的接入
取Rink Amide AM树脂N,N-二甲基甲酰胺溶胀，加入活化后的N-芴甲氧羰基-甘氨酸溶液，室温搅拌反应0.5-3小时，过滤洗涤，得到Fmoc-Gly-Rink Amide AM树脂；用10-30％哌啶/DMF溶液去Fmoc保护，洗涤过滤得到Gly-Rink Amide AM树脂；
取Gly-Rink Amide AM树脂，加入活化后的N-芴甲氧羰基-脯氨酸，室温搅拌反应0.5-3小时，过滤洗涤，得到Fmoc- Pro -Gly-Rink Amide AM树脂；用10-30％哌啶/DMF溶液去Fmoc保护，洗涤过滤得到Pro -Gly-Rink Amide AM树脂；
取Pro -Gly-Rink Amide AM树脂，加入活化后的N-芴甲氧羰基-亮氨酸，室温搅拌反应0.5-3小时，过滤洗涤，得到Fmoc- Arg (Pbf)- Pro -Gly-Rink Amide AM树脂；用10-30％哌啶/DMF溶液去Fmoc保护，洗涤过滤得到Arg (Pbf)-Pro -Gly-Rink Amide AM树脂；
取Arg (Pbf)-Pro -Gly-Rink Amide AM树脂，加入活化后的N-芴甲氧羰基-精氨酸，室温搅拌反应0.5-3小时，过滤洗涤，得到Fmoc- Leu- Arg (Pbf)- Pro -Gly-Rink Amide AM树脂；用10-30％哌啶/DMF溶液去Fmoc保护，洗涤过滤得到Leu -Arg (Pbf)-Pro -Gly-RinkAmide AM树脂；
取Leu -Arg (Pbf)-Pro -Gly-Rink Amide AM树脂，加入活化后的N-芴甲氧羰基-甘氨酸，室温搅拌反应0.5-3小时，过滤洗涤，得到Fmoc- Gly- Leu- Arg (Pbf)- Pro -Gly-Rink Amide AM树脂；用10-30％哌啶/DMF溶液去Fmoc保护，洗涤过滤得到Gly-Leu -Arg(Pbf)-Pro -Gly-Rink Amide AM树脂；
取Gly-Leu -Arg (Pbf)-Pro -Gly-Rink Amide AM树脂，加入活化后的N-芴甲氧羰基-酪氨酸，室温搅拌反应0.5-3小时，过滤洗涤，得到Fmoc- Tyr (tBu)- Gly- Leu- Arg(Pbf)- Pro -Gly-Rink Amide AM树脂；用10-30％哌啶/DMF溶液去Fmoc保护，洗涤过滤得到Tyr (tBu)-Gly-Leu -Arg (Pbf)-Pro -Gly-Rink Amide AM树脂；
取Tyr (tBu)-Gly-Leu -Arg (Pbf)-Pro -Gly-Rink Amide AM树脂，加入活化后的N-芴甲氧羰基-丝氨酸，室温搅拌反应0.5-3小时，过滤洗涤，得到Fmoc- Ser (tBu)-Tyr(tBu)- Gly- Leu- Arg (Pbf)- Pro -Gly-Rink Amide AM树脂；用10-30％哌啶/DMF溶液去Fmoc保护，洗涤过滤得到Ser (tBu)-Tyr (tBu)-Gly-Leu -Arg (Pbf)-Pro -Gly-RinkAmide AM树脂；
取Ser (tBu)-Tyr (tBu)-Gly-Leu -Arg (Pbf)-Pro -Gly-Rink Amide AM树脂，加入活化后的N-芴甲氧羰基-色氨酸，室温搅拌反应0.5-3小时，过滤洗涤，得到Fmoc- Trp(Boc) - Ser (tBu)-Tyr (tBu)- Gly- Leu- Arg (Pbf)- Pro -Gly-Rink Amide AM树脂；用10-30％哌啶/DMF溶液去Fmoc保护，洗涤过滤得到Trp (Boc) -Ser (tBu)-Tyr (tBu)-Gly-Leu -Arg (Pbf)-Pro -Gly-Rink Amide AM树脂；
取Trp (Boc) -Ser (tBu)-Tyr (tBu)-Gly-Leu -Arg (Pbf)-Pro -Gly-Rink AmideAM树脂，加入活化后的N-芴甲氧羰基-组氨酸，室温搅拌反应0.5-3小时，过滤洗涤，得到Fmoc- His (Trt)- Trp (Boc) - Ser (tBu)-Tyr (tBu)- Gly- Leu- Arg (Pbf)- Pro -Gly-Rink Amide AM树脂；用10-30％哌啶/DMF溶液去Fmoc保护，洗涤过滤得到His (Trt)-Trp (Boc) -Ser (tBu)-Tyr (tBu)-Gly-Leu -Arg (Pbf)-Pro -Gly-Rink Amide AM树脂；
取His (Trt)-Trp (Boc) -Ser (tBu)-Tyr (tBu)-Gly-Leu -Arg (Pbf)-Pro -Gly-Rink Amide AM树脂，加入pGlu-OH，室温搅拌反应0.5-3小时，过滤洗涤，得到pGlu -Trp(Boc) - Ser (tBu)-Tyr (tBu)- Gly- Leu- Arg (Pbf)- Pro -Gly-Rink Amide AM树脂；用10-30％哌啶/DMF溶液去Fmoc保护，洗涤过滤得到戈那瑞林肽树脂：pGlu-Trp (Boc) -Ser (tBu)-Tyr (tBu)-Gly-Leu -Arg (Pbf)-Pro -Gly-Rink Amide AM树脂；
（3）酸解、纯化
向戈那瑞林肽树脂中加入酸解液，搅拌反应6小时，过滤洗涤，合并滤液后减压浓缩；加入无水乙醚沉淀，洗涤、抽干，得类白色粉末为戈那瑞林粗品；酸解液：戈那瑞林肽树脂为10-12mL：1g；所述酸解液为体积分数为5％的三氟乙酸的二氯甲烷溶液；再采用高效液相色谱法进行纯化、转盐后，得到戈那瑞林精品。
2. 根据权利要求1所述的一种固相合成戈那瑞林的方法，其特征在：所述活化后的保护的氨基酸与树脂的摩尔比为1-3 : 1。
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