CN108186583A - 一种兽用戈那瑞林注射剂的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种兽用戈那瑞林注射剂的制备方法，包括戈那瑞林的合成、纯化和注射剂的制备；戈那瑞林的合成包括十个氨基酸的依次偶联及肽树脂的裂解，戈那瑞林粗肽的纯化包括洗脱、转盐、浓缩、冻干，戈那瑞林注射剂的制备包括对注射剂瓶的洗涤干燥、对瓶塞的清洗、灭菌、干燥和配料罐的溶解、压滤、半压塞灌装、冻干、真空压塞及轧盖。本发明的优点为：能耗低，收率高，环境友好，解决了现有工艺成本高、收率低、纯度差的问题。

Description

一种兽用戈那瑞林注射剂的制备方法
技术领域
本发明涉及兽药制造技术领域，具体涉及一种兽用戈那瑞林注射剂的制备方法。
背景技术
戈那瑞林为人工合成的促性腺激素释放素，属肽类化合物，为十肽，和哺乳动物下丘脑分泌的促性腺激素释放激素天然提取物结构完全相同。促性腺激素释放激素，戈那瑞林能够促进垂体促卵泡素（FSH）和促黄体素（LH）的产生和释放。单一注射戈那瑞林后，引起促卵泡素和促黄体素单次脉冲式释放，主要用于治疗奶牛的卵泡囊肿。
国内自2008年开始，就有单位进行兽用戈那瑞林原料药合成及其注射剂制备的研究。然而，现有的戈那瑞林原料药的合成及其注射剂的制备存在诸多缺陷：
1、当前研制生产的戈那瑞林注射剂需要凉暗处保存，不便于贮存流通，提高贮存流通的使用成本，增加产品贮存不当所致的质量风险。
2、戈那瑞林的合成技术采用低替代度的Rink Amide AM Resin树脂。
3、戈那瑞林的合成技术未进行树脂端基封闭，或封闭不彻底。
4、戈那瑞林的合成技术采用三氟乙酸溶液进行树脂与肽链的裂解，裂解过程中副反应较多，降低了合成纯度。
5、采用普通C18填料来纯化戈那瑞林， 纯度欠佳。
发明内容
本发明的目的是提供一种能耗低、收率高、环境友好的兽用戈那瑞林注射剂的制备方法。
为了达到上述目的，本发明通过以下技术方案来实现：
一种兽用戈那瑞林原料药及其注射剂的制备方法，包括戈那瑞林的合成、纯化和注射剂的制备；
戈那瑞林的合成步骤如下：
（1-1）第一个氨基酸的偶联
取1mol Rink AM 树脂放置于室温中复温20min，替代度0.9mmol/g；
将复温好的树脂加入反应柱中，用DMF洗涤两次，每次洗涤2min，加入DCM溶胀30min；
加入哌啶溶液脱保护两次，按DMF、MeOH、DCM、DMF顺序洗涤，每次洗涤1.5min；
在第二次脱保护的同时，取1.6mol Fmoc-Gly-OH、1.6mol偶联试剂B，用DMF溶解，冷却至10℃以下，加入2mol偶联试剂A活化5 min，活化后的偶联液加入反应釜中搅拌，于30℃反应1.5h，茚检；茚检合格，抽掉反应液；
加入DMF和2mol 封闭试剂AC2O溶液，搅拌反应3小时；
（1-2）第二个氨基酸的偶联
重复步骤（1-1）中哌啶溶液脱保护和顺序洗涤，取同量的Fmoc-Pro-OH和偶联试剂进行溶解、搅拌、茚检和抽液；
（1-3）同步骤（1-2）依次偶联第三至第十个氨基酸，分别为Fmoc-Arg(pbf)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-His(trt)-OH、PGlu，得到戈那瑞林肽树脂，置于不锈钢托盘吹干；
（1-4）肽树脂的裂解
裂解液（三异丙基硅烷：三氟乙酸：水：乙二硫醇）按比例配置并加入血清瓶中，冷却；将戈那瑞林肽树脂加入裂解液，磁力搅拌反应2.5h，抽滤，除渣，得滤液；将滤液加入无水乙醚中静置20min，离心洗涤，得粗肽，烘干；
戈那瑞林粗肽的纯化步骤如下：
戈那瑞林粗肽通过洗脱、转盐、浓缩、冻干得到纯化；
戈那瑞林注射剂的制备步骤如下：
对注射剂瓶洗涤、干燥，对瓶塞清洗、灭菌、干燥；取戈那瑞林、甘露醇、右旋糖酐20溶解于配料罐中30℃以下的注射用水，搅拌混匀，用净化压缩空气压滤，半压塞灌装；冻干；开液压泵，真空压塞；轧盖，目检，包装。
进一步地，戈那瑞林粗肽的纯化步骤中，戈那瑞林粗肽用重量比各为50%的乙腈和醋酸溶液洗脱，分段收集，起峰时开始收集，纯度大于96%为峰顶；醋酸溶液的浓度为0.18%。
进一步地，戈那瑞林粗肽的纯化步骤中，经洗脱的戈那瑞林用32℃旋蒸，去除乙腈并浓缩至30~70mg/ml。
进一步地，戈那瑞林注射剂的制备步骤中，所述注射剂瓶放置在网带上，经清洗后，在300℃高温烘道干燥、灭菌，放入灌封间；所述瓶塞为胶型材料制作，胶塞经自动进料、纯化水粗洗3min，纯化水漂洗8min，喷淋冲洗5min、注射用水精洗8min、121℃蒸汽灭菌20min后，真空干燥，降温，出料。
进一步地，戈那瑞林注射剂的制备步骤中，按重量组分将70%~80%右旋糖酐20、15%~20%甘露醇和适量戈那瑞林入罐，溶解于配料罐中30℃以下的注射用水。
进一步地，戈那瑞林注射剂的制备步骤中，冻干过程为将灌装后的注射剂瓶移至冻干箱，冷冻至－35±1℃，保持2h，再将冻干箱降温至－45℃以下，开启真空泵，进行干燥。
本发明与现有技术相比，具有以下优点：
本发明一种兽用戈那瑞林注射剂的制备方法，具有能耗低，收率高，环境友好的优点，解决了现有工艺成本高、收率低、纯度差的问题。本发明研制的戈那瑞林符合国家兽用新药标准。
1、本发明筛选右旋糖酐20与甘露醇作为辅料，采用合理的灌装和二次压塞的工艺流程与冻干参数，可保证在室温下贮存两年后仍然符合要求；解决了贮存条件苛刻的问题，降低了贮存流通的使用成本，解决了产品贮存不当可能导致质量风险的隐患。
2、本发明采用高替代度的树脂，提高产品收率。
3、本发明改进封闭液的配方，使封闭彻底，从而减少副反应，提高粗品的纯度。
4、本发明改进裂解液的配方，加入保护剂，优化各工序的反应时间，纯化工序在装备有空气过滤系统的洁净室中进行，采用符合兽药典要求的溶剂，该车间按GMP要求进行管理，从而使所得到的产品符合药用活性成分的要求。
5、本发明采用亲水性反相层析填料，采用直径30cm,长度30-35cm的填料填装方式，提高了柱效，大幅提高了纯化所得溶液的主成分浓度，大幅缩短了后处理所需时间，减少了后处理过程中的产品降解。
6、为了减少后处理过程中产品的降解，后处理旋蒸去除乙腈的温度控制在32℃，效果显著。
附图说明
图1是本发明一种兽用戈那瑞林注射剂的制备方法粗肽纯化工序示意图。
图2是本发明一种兽用戈那瑞林注射剂的制备方法注射剂制备工序示意图。
具体实施方式
下面结合工序附图，对本发明的实施例作进一步详细描述。
本发明一种兽用戈那瑞林注射剂的制备方法，包括戈那瑞林的合成、纯化和注射剂制备三道工序。
兽用戈那瑞林原料药粗品的合成
1.1 第一个氨基酸的偶联：
取1mol Rink AM 树脂，放置于室温中复温20min，替代度0.9mmol/g。
将复温好的树脂加入反应柱中，加入DMF洗涤2min，抽去洗涤液；再加入DMF洗涤2min，抽去洗涤液；然后加入DCM溶胀30min，抽掉。
加入哌啶溶液脱保护2次，第一次5min，第二次为10min。两次脱完保护抽掉后按如下顺序洗涤：DMF，MeOH，DCM，DMF，每次洗涤1.5min。
在第二次脱保护的同时，取1.6mol Fmoc-Gly-OH、1.6mol偶联试剂B至洁净量杯中，用DMF进行溶解，待溶解后，冷却，至溶液温度低于10℃，迅速加入2mol偶联试剂A活化5min左右，将活化后的偶联液加入反应釜中，搅拌30℃反应1.5个小时，茚检。茚检合格，抽掉反应液。
加入DMF到反应釜中搅拌，然后加入封闭试剂2mol Ac2O溶液，搅拌反应3小时左右。封闭结束后，抽掉封闭液。
1.2第二个氨基酸的偶联
加入哌啶溶液脱保护2次，第一次5min，第二次为10min。两次脱完保护抽掉后按如下顺序洗涤：DMF，MeOH，DCM，DMF，每次洗涤1.5min。
在第二次脱保护的同时，取1.6mol Fmoc-Pro-OH、1.6mol偶联试剂B至洁净量杯中，用DMF进行溶解，待溶解后，冷却，加入2mol偶联试剂A活化5 min左右，立即将活化后的偶联液加入反应釜中， 30℃反应1.5个小时茚检。
反应1.5小时后，茚检合格，抽掉反应液，加入DMF洗涤2次，洗涤1.5min，进入下一个氨基酸的偶联反应。
第三个氨基酸的偶联
加入哌啶溶液脱保护2次，第一次5min，第二次为10min。两次脱完保护抽掉后按如下顺序洗涤：DMF，MeOH，DCM，DMF，每次洗涤1.5min。
在第二次脱保护的同时，取1.6mol Fmoc-Arg(pbf)-OH、1.6mol偶联试剂B至洁净量杯中，用DMF进行溶解，待溶解后，冷却，加入2mol偶联试剂A活化5 min左右，将溶液倒入反应釜中，反应两小时。
反应2小时后，茚检合格，可抽掉反应液，加入DMF洗涤2次，进入复投反应。
第四个氨基酸的偶联
加入哌啶溶液脱保护2次，第一次5min，第二次为10min。两次脱完保护抽掉后按如下顺序洗涤：DMF，MeOH，DCM，DMF，每次洗涤1.5min。
在第二次脱保护的同时，取1.6mol Fmoc-Leu-OH、1.6mol偶联试剂B至洁净量杯中，用DMF进行溶解，待溶解后，冷却，加入2mol偶联试剂A活化5 min左右，将溶液倒入反应釜中，反应1.5小时。
反应1.5小时后，茚检合格，表明反应已经完全，可抽掉反应液，加入DMF洗涤2次，进入下一个氨基酸的偶联反应。
第五个氨基酸的偶联
加入哌啶溶液脱保护2次，第一次5min，第二次为10min。两次脱完保护抽掉后按如下顺序洗涤：DMF，MeOH，DCM，DMF，每次洗涤1.5min。
在第二次脱保护的同时，取1.6mol Fmoc-Gly-OH、1.6mol偶联试剂B至洁净量杯中，用DMF进行溶解，冷却，加入2mol偶联试剂A活化5 min左右，将溶液倒入反应釜中反应1.5小时。
反应1.5小时后，茚检合格，表明反应已经完全，可抽掉反应液，加入DMF洗涤2次，进入下一个氨基酸的偶联反应。
第六个氨基酸的偶联
加入哌啶溶液脱保护2次，第一次5min，第二次为10min。两次脱完保护抽掉后按如下顺序洗涤： DMF，MeOH， DCM，DMF，每次洗涤1.5min。
在第二次脱保护的同时，取1.6mol Fmoc-Tyr(tBu)-OH、1.6mol偶联试剂B至洁净量杯中，用DMF进行溶解，待溶解后，冷却，至溶液温度低于10℃，加入2mol偶联试剂A活化5min左右，将溶液倒入反应釜中，反应1.5小时。
反应1.5小时后，茚检合格，表明反应已经完全，可抽掉反应液，加入DMF洗涤2次，进入下一个氨基酸的偶联反应。
第七个氨基酸的偶联
加入哌啶溶液脱保护2次，第一次5min，第二次为10min。两次脱完保护抽掉后按如下顺序洗涤：DMF，MeOH，DCM，DMF，每次洗涤1.5min。
在第二次脱保护的同时，取1.6mol Fmoc-Ser(tBu)-OH、1.6mol偶联试剂B至洁净量杯中，用DMF进行溶解，待溶解后，冷却，至溶液温度低于10℃，加入2mol偶联试剂A活化5min左右，将溶液倒入反应釜中，反应1.5小时。
反应1.5小时后，茚检合格，表明反应已经完全，可抽掉反应液，加入DMF洗涤2次，进入下一个氨基酸的偶联反应。
第八个氨基酸的偶联
加入哌啶溶液脱保护2次，第一次5min，第二次为10min，两次脱完保护抽掉后按如下顺序洗涤：DMF，MeOH，DCM，DMF，每次洗涤1.5min。
在第二次脱保护的同时，称取1.6mol Fmoc-Trp(Boc)-OH、1.6mol偶联试剂B至洁净量杯中，用DMF进行溶解，待溶解后，冷却，加入2mol偶联试剂A活化5 min左右，将溶液倒入反应釜中，反应1.5小时。
反应1.5小时后，茚检合格，表明反应已经完全，可抽掉反应液，加入DMF洗涤2次，进入下一个氨基酸的偶联反应。
第九个氨基酸的偶联
加入哌啶溶液脱保护2次，第一次5min，第二次为10min。两次脱完保护抽掉后按如下顺序洗涤：DMF，MeOH，DCM，DMF，每次洗涤1.5min。
在第二次脱保护的同时，称取 1.6mol Fmoc-His(trt)-OH、1.6mol偶联试剂B至洁净量杯中，用DMF进行溶解，待溶解后，冷却，加入2mol偶联试剂A活化5 min左右，将溶液倒入反应釜中，反应1.5h小时。
反应1.5小时后，茚检合格，表明反应已经完全，可抽掉反应液，加入DMF洗涤2次，进入复投偶联反应。
第十个氨基酸的偶联
加入哌啶溶液脱保护2次，第一次5min，第二次为10min。两次脱完保护抽掉后按如下顺序洗涤：DMF，MeOH，DCM，DMF，每次洗涤1.5min。
在第二次脱保护的同时，称取1.6mol PGlu、1.6mol偶联试剂B至洁净量杯中，用DMF进行溶解，待溶解后，冷却，加入2mol偶联试剂A活化5 min左右，将溶液倒入反应釜中，反应1.5小时。
反应1.5小时后，茚检合格，表明反应已经完全，可抽掉反应液，加入DMF洗涤2次，抽干。
从反应釜中取出肽树脂，放在不锈钢托盘中吹干。
肽树脂的裂解
将先前按比例配制好的裂解液（三异丙基硅烷：三氟乙酸：水：乙二硫醇）加入血清瓶中, 冰箱冷却过夜。将肽树脂慢慢加入裂解液中。磁力搅拌反应2.5小时，砂芯漏斗抽滤，除去树脂及残渣，得滤液。
将上面所得的滤液中加入无水乙醚中，静置20min，离心洗涤，得粗肽。烘干。
将粗肽常温真空干燥过夜到恒重。粗肽纯度达90%以上。
2. 兽用戈那瑞林原料药粗品的纯化
2.1制备色谱条件：
色谱柱：DAC300
制备填料：亲水反相填料
洗脱流速：1600ml/min
检测波长：230nm
流动相：
A相：0.01~0.2mol/L磷酸-三乙胺缓冲液
B相：乙腈
2.2 制备过程：
样品溶解：取100g戈那瑞林粗肽溶于10L到20L的纯化水，少量有机酸调溶，用0.45μm微孔滤膜过滤。
洗脱：洗脱梯度见下表
洗脱梯度表
T（分钟） V（流速）ml/分钟 B% A%
0 1600 5 95
3 1600 5 95
4 1600 10 90
64 1600 20 80
分段收集：第一个大主峰为目标峰，主峰分段收集；分段检测HPLC纯度大于96%并到一起标记为峰顶。
2.3转盐
色谱柱：DAC300 色谱柱直径30cm,长度30cm。
制备填料：亲水反相填料
洗脱流速：1600ml/min
检测波长：230nm
流动相：
A相：0.18% 醋酸
B相：乙腈
洗脱收集：50%A+50%B洗脱，起峰时开始收集，直到峰收集完毕。
2.4浓缩：将转盐后合格产品32℃旋蒸去除乙腈并浓缩至戈那瑞林浓度30~70mg/ml，将产品平铺于不锈钢冻干盘中，放入冻干箱，关好箱门。
2.5：将产品冷冻至－35±1℃保温2小时。保温结束后，将冷凝器（捕温）降温至－45℃以下，开启真空泵，打开小蝶阀、大蝶阀，箱体真空度达35Pa后开始升温，进行真空冷冻干燥。开启循环油泵，将搁板升温至共晶点-12±1℃，并一直保持在此范围内，从冻干箱视镜观察产品无冰层。将搁板温度缓慢上升。制品温度升至30℃时保温2小时。
2.6产品分装
将已干燥的戈那瑞林成品，分装于玻璃瓶中，盖上胶塞。纯化收率95%，产品符合欧洲药典标准及中国农业部标准。
3. 兽用戈那瑞林注射剂（注射用戈那瑞林）的制备
3.1洗烘瓶
打开隧道烘箱电源开关，使烘箱高温区温度控制在300±10℃。待高温区温度达到后，将管制瓶放在网带上，通过网带输送到洗烘瓶间，洗瓶机开始洗瓶，洗好的瓶子通过隧道式烘箱干燥灭菌后进入灌封间。
3.2胶塞清洗灭菌
将胶塞放入全自动湿法气冲式胶塞清洗机，进行清洗灭菌。胶塞经过自动进料，纯化水粗洗3分钟，纯化水漂洗8分钟，再喷淋冲洗5分钟，注射用水精洗8分钟。蒸汽灭菌121℃20分钟，然后真空干燥，降温，出料。
3.3配料
配料罐中加入生产所需的注射用水冷却至30℃以下，根据生产指令的原辅料用量，取用戈那瑞林原料药，甘露醇，右旋糖酐20，从配料罐中取少量冷却射用水溶解，然后吸入配料罐中，搅拌至药液混匀。再用净化压缩空气将药液进行压滤后灌装。
3.4灌装、半压塞
调整装量至1.17~1.23ml之间，然后开始正式灌装、半压塞。
灌装结束，转移至冻干箱，关好冻干箱门。
3.5冻干
将产品冷冻至－35±1℃保温2小时。保温结束后，将冷凝器（捕温）降温至－45℃以下，开启真空泵，打开小蝶阀、大蝶阀，箱体真空度达35Pa后开始升温，进行真空冷冻干燥。冻干过程结束，关大蝶阀、小蝶阀、真空泵组，关冷凝器阀1、冷凝器阀2，关压缩机1、压缩机2，关循环泵。进行真空压塞，开液压泵，按下降按钮进行压塞，产品压塞完毕，放气出箱。轧盖、目检、包装，即得成品。
以上所述仅是本发明优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明保护范围内。

Claims (6)

1.一种兽用戈那瑞林注射剂的制备方法，包括戈那瑞林的合成、纯化和注射剂的制备，其特征在于：
戈那瑞林的合成步骤如下：
（1-1）第一个氨基酸的偶联
取1mol Rink AM 树脂放置于室温中复温20min，替代度0.9mmol/g；
将复温好的树脂加入反应柱中，用DMF洗涤两次，每次洗涤2min，加入DCM溶胀30min；
加入哌啶溶液脱保护两次，按DMF、MeOH、DCM、DMF顺序洗涤，每次洗涤1.5min；
在第二次脱保护的同时，取1.6mol Fmoc-Gly-OH、1.6mol偶联试剂B，用DMF溶解，冷却至10℃以下，加入2mol偶联试剂A活化5 min，活化后的偶联液加入反应釜中搅拌，于30℃反应1.5h，茚检；茚检合格，抽掉反应液；
加入DMF和2mol 封闭试剂AC2O溶液，搅拌反应3小时；
（1-2）第二个氨基酸的偶联
重复步骤（1-1）中哌啶溶液脱保护和顺序洗涤，取同量的Fmoc-Pro-OH和偶联试剂进行溶解、搅拌、茚检和抽液；
（1-3）同步骤（1-2）依次偶联第三至第十个氨基酸，分别为Fmoc-Arg(pbf)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-His(trt)-OH、PGlu，得到戈那瑞林肽树脂，置于不锈钢托盘吹干；
（1-4）肽树脂的裂解
裂解液（三异丙基硅烷：三氟乙酸：水：乙二硫醇）按比例配置并加入血清瓶中，冷却；将戈那瑞林肽树脂加入裂解液，磁力搅拌反应2.5h，抽滤，除渣，得滤液；将滤液加入无水乙醚中静置20min，离心洗涤，得粗肽，烘干；
戈那瑞林粗肽的纯化步骤如下：
戈那瑞林粗肽通过洗脱、转盐、浓缩、冻干得到纯化；
戈那瑞林注射剂的制备步骤如下：
对注射剂瓶洗涤、干燥，对瓶塞清洗、灭菌、干燥；取戈那瑞林、甘露醇、右旋糖酐20溶解于配料罐中30℃以下的注射用水，搅拌混匀，用净化压缩空气压滤，半压塞灌装；冻干；开液压泵，真空压塞；轧盖，目检，包装。
2.根据权利要求1所述的一种兽用戈那瑞林注射剂的制备方法，其特征在于：
戈那瑞林粗肽的纯化步骤中，戈那瑞林粗肽用重量比各为50%的乙腈和醋酸溶液洗脱，分段收集，起峰时开始收集，纯度大于96%为峰顶；醋酸溶液的浓度为0.18%。
3.根据权利要求2所述的一种兽用戈那瑞林注射剂的制备方法，其特征在于：
戈那瑞林粗肽的纯化步骤中，经洗脱的戈那瑞林用32℃旋蒸，去除乙腈并浓缩至30~70mg/ml。
4.根据权利要求1所述的一种兽用戈那瑞林注射剂的制备方法，其特征在于：
戈那瑞林注射剂的制备步骤中，所述注射剂瓶放置在网带上，经清洗后，在300℃高温烘道干燥、灭菌，放入灌封间；所述瓶塞为胶型材料制作，胶塞经自动进料、纯化水粗洗3min，纯化水漂洗8min，喷淋冲洗5min、注射用水精洗8min、121℃蒸汽灭菌20min后，真空干燥，降温，出料。
5.根据权利要求1或4所述的一种兽用戈那瑞林注射剂的制备方法，其特征在于：
戈那瑞林注射剂的制备步骤中，按重量组分将70%~80%右旋糖酐20、15%~20%甘露醇和适量戈那瑞林入罐，溶解于配料罐中30℃以下的注射用水。
6.根据权利要求1或4所述的一种兽用戈那瑞林注射剂的制备方法，其特征在于：
戈那瑞林注射剂的制备步骤中，冻干过程为将灌装后的注射剂瓶移至冻干箱，冷冻至－35±1℃，保持2h，再将冻干箱降温至－45℃以下，开启真空泵，进行干燥。
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Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101700233A (zh) * 2009-12-04 2010-05-05 蚌埠丰原涂山制药有限公司 一种戈那瑞林冻干粉针剂的制备方法
US8349805B2 (en) * 2007-09-11 2013-01-08 Mondobiotech Laboratories Ag Use of Gonadorelin as a therapeutic agent
CN107176975A (zh) * 2017-06-12 2017-09-19 丹东中科润华生物科技有限公司 一种固相合成戈那瑞林的方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8349805B2 (en) * 2007-09-11 2013-01-08 Mondobiotech Laboratories Ag Use of Gonadorelin as a therapeutic agent
CN101700233A (zh) * 2009-12-04 2010-05-05 蚌埠丰原涂山制药有限公司 一种戈那瑞林冻干粉针剂的制备方法
CN107176975A (zh) * 2017-06-12 2017-09-19 丹东中科润华生物科技有限公司 一种固相合成戈那瑞林的方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
卢云博: "国家三类新兽药——戈那瑞林制剂", 《北方牧业》 *

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