CN102038649B

CN102038649B - 尿促卵泡刺激素冻干粉针剂及其制备方法

Info

Publication number: CN102038649B
Application number: CN200910180568.5A
Authority: CN
Inventors: 陈晓勤; 赵淑媛; 扈会平; 敖卓列; 刘彩霞; 郭国领
Original assignee: LIVZON GROUP LIVZON PHARMACEUTICAL FACTORY; Livzon Pharmaceutical Group Inc
Current assignee: LIVZON GROUP LIVZON PHARMACEUTICAL FACTORY; Livzon Pharmaceutical Group Inc
Priority date: 2009-10-20
Filing date: 2009-10-20
Publication date: 2015-10-14
Anticipated expiration: 2029-10-20
Also published as: CN102038649A

Abstract

本发明提供一种尿促卵泡刺激素冻干粉针剂，该冻干粉针剂包含有57～102单位的尿促卵泡刺激素、7.8～22.4mg的甘露醇、1.9～4.2mg的右旋糖酐、0.07～0.13mg的Na₂HPO₄和0.10～0.20mg的NaH₂PO₄。本发明还提供了这种冻干粉针剂的制备方法，本发明的尿促卵泡刺激素冻干粉针剂具有质量稳定，保存期长的优点。经过多批次的实验发现得到的各个批次的尿促卵泡刺激素冻干粉针剂的操作误差低。

Description

尿促卵泡刺激素冻干粉针剂及其制备方法

技术领域

本发明属于医药领域，涉及尿促卵泡刺激素冻干粉针剂及其制备方法。

背景技术

排卵功能障碍是造成不育的主要原因之一，实验证明，通过补充外源性促性腺激素可以有效诱导排卵。卵泡刺激素也称为促卵泡激素，是一种由垂体嗜碱性细胞合成和分泌的糖蛋白，其分子量为33,000Dal。促卵泡激素由两个非共价α、β亚基组成，α亚基含有92个氨基酸，与黄体生素(Luteinizing hormone，LH)及绒毛膜促性激素(Human Chorionic gonadotropin，HCG)的α亚基极其相似，β亚基由115个氨基酸组成，是决定其特异性的组成部分。排卵功能障碍的不育妇女使用包含从绝经妇女尿液的提取尿促卵泡刺激素的制剂，可以促使并维持卵泡的发育和成熟，使卵泡发育和受孕达到最佳效果。

由于尿促卵泡刺激素是有生物活性的糖蛋白，所以为了保持其生物活性，需要非常严格的工艺制备含有尿促卵泡刺激素的制剂。然而，现有技术中的尿促卵泡刺激素粉针剂中普遍存在产品质量稳定性差，产品保存期短的缺点。

发明内容

除非另外说明，本文中的“尿促卵泡刺激素”又称“尿促卵泡素”，指的是尿源提取的促卵泡刺激素，如可以从尿源的人绝经期促性腺激素HMG中纯化提取。

除非另外说明，本文中的HCG是人绒毛膜促性腺激素(Humanchorionic gonadotropin)的英文简称。

除非另外说明，本文中的HMG是人绝经期促性腺激素(humanmenopausal gonadotropin)的英文简称。

除非另外说明，本文中的FSH是促卵泡刺激素(Follicle-stimulatinghormone)的英文简称。

因此，本发明的一个目的是提供一种尿促卵泡刺激素冻干粉针剂。

本发明的另一目的是提供本发明的尿促卵泡刺激素冻干粉针剂的制备方法。

本发明一方面提供了一种尿促卵泡刺激素冻干粉针剂，该冻干粉针剂包含57～102单位尿促卵泡刺激素、7.8～22.4mg甘露醇、1.9～4.2mg右旋糖酐、0.07～0.13mg Na₂HPO₄和0.10～0.20mg NaH₂PO₄。

优选地，所述冻干粉针剂包含67.5～90.0单位尿促卵泡刺激素。

更优选地，所述冻干粉针剂包含为75单位尿促卵泡刺激素、9.5～17.0mg甘露醇、2.4～3.4mg的右旋糖酐、0.09～0.12mgNa₂HPO₄和0.13～0.17mg NaH₂PO₄。

再优选地，所述冻干粉针剂包含75单位尿促卵泡刺激素、11.2mg甘露醇、2.8mg右旋糖酐、0.11mg Na₂HPO₄和0.15mg NaH₂PO₄。

优选地，所述的右旋糖酐为右旋糖酐40。

本发明另一方面还提供了一种制备本发明冻干粉针剂的方法，该方法包括以下步骤：

a.将尿促卵泡刺激素、右旋糖酐、甘露醇、Na₂HPO₄和NaH₂PO₄分别用注射用水溶解；

b.将步骤a得到的各种溶液按比例混合；

c.将步骤b得到的混合溶液冻干即可。

在本发明中的尿促卵泡刺激素从合作研发单位上海天伟生物制药有限公司购买，商品名称为：尿促卵泡素(FSH)，纯度为：按照生物检定法以干燥品计算，比活性应大于8500单位/mg蛋白，卵泡刺激素与黄体生成素的效价比应大于100∶1.

优选地，在所述步骤a中，所述右旋糖酐或甘露醇用注射用水溶解后，右旋糖酐或甘露醇的含量为溶液总重量的1％～18％，向溶液中加入溶液重量的0.5％的药用炭，煮沸20～40分钟，过滤、冷却备用。

优选地，在所述步骤a中，所述Na₂HPO₄和NaH₂PO₄用注射用水溶解后，Na₂HPO₄和NaH₂PO₄含量为溶液总重量的10％，备用。

优选地，在所述步骤a中，所述尿促卵泡刺激素在4～10℃下用注射用水溶解后备用。在混合物中加入注射用水的温度控制在4～10℃的原因是：注射用水在4℃～10℃时，可以防止微生物的滋生，且4℃为水密度最大的临界温度，小于4℃则影响产品的均一性和溶解性；高于10℃时，微生物生长活性增强，降低了经过验证的13个小时生产周期内无菌保证度，因此注射用水的温度控制在4～10℃。

优选地，在所述步骤b中，先将右旋糖酐溶液、甘露醇溶液以及Na₂HPO₄和NaH₂PO₄溶液混合，加入4～10℃的注射用水总重量的50％，搅拌后加入尿促卵泡刺激素溶液，补加4～10℃的注射用水的总重量，搅拌。

优选地，在所述步骤b中，还包括将混合溶液的pH值调节到6.5～7.0。

优选地，在所述步骤c中，包括首先将步骤b得到的混合溶液在-35℃下预冻，然后在-35～-45℃下保温1～3小时。

优选地，在所述步骤c中，还包括在将冻干产物在30～40℃下干燥2～4小时的步骤。当冻干产物的干燥温度低于30℃时，易导致产品干燥不彻底，产品水分不合格，或由水蒸汽压力引起的瓶内失真空塌陷，或产品稳定性下降等不良后果；当冻干产物的干燥温度高于40℃，或干燥时间超过4小时，对产品的活性成分效价产生不利影响，这种影响与温度升高的度数及高温度情况下干燥时间成负相关，温度越高且干燥时间越长，则产品效价下降越多。因此，发明人经过多次试验，将冻干去除水分的制品的干燥温度控制在30～40℃，干燥时间为2～4小时。

本发明的有益效果在于：本申请的发明人经过多次试验，确定了本发明中的辅料以及辅料的用量。采用本发明处方得到的本发明的冻干粉针剂具有合适的酸碱度，即溶于水后，pH值为6.0-8.0；干燥失重为：取25mg本发明的冻干粉针剂，置于P₂O₅干燥器中，减压干燥4小时，减失重量低于5.0％；本发明的冻干粉针剂加氯化钠注射液制成每1ml中含100单位的尿促卵泡刺激素溶液，按静脉注射法给药，每只小鼠注射0.5ml，异常毒性符合药典要求；本发明的冻干粉针剂加入灭菌水2ml溶解，无菌；本发明的可见异物和不溶性微粒符合规定。取本发明的冻干粉针剂进行纯度检验，得到的供试品溶液按照高效液相色谱试验，尿促卵泡素主峰与相邻杂质风峰的分离度大于1.0。本发明的尿促卵泡刺激素冻干粉针剂具有质量稳定，保存期长的优点，本发明的冻干粉针剂的保存期可以达到36个月，现有的尿促卵泡刺激素粉针剂的保存期为24个月时间。同时本发明的尿促卵泡刺激素冻干粉针剂的也具有同现有制剂相同的药学效果。

本发明尿促卵泡刺激素冻干粉针剂的制备方法不同于现有技术的制备方法。在该制备方法中，严格控制了冻干温度、冻干时间和冻干中各个操作步骤持续的时间，这是为了不破坏尿促卵泡刺激素这种糖蛋白的生物活性，同时保证尿促卵泡刺激素和辅料相结合后，并冻干得到的冻干粉针剂的产品外观均一，性质稳定，保存期长，每1单位的尿促卵泡刺激素冻干粉针剂中的细菌内毒素的量小于0.01EU。除此之外，经过多批次的实验发现得到的各个批次的尿促卵泡刺激素冻干粉针剂的操作误差低。

附图说明

以下，结合附图来详细说明本发明的实施例，其中：

图1表示注射用尿促卵泡刺激素冻干粉针剂的冻干曲线。

图2表示060402批注射用尿促卵泡刺激素阴凉条件下贮存36个月的高效液相色谱图。

图3表示051101批注射用尿促卵泡刺激素贮存0个月的高效液相色谱图。

图4表示051101批注射用尿促卵泡刺激素贮存3个月的高效液相色谱图。

具体实施方式

实施例1

1.注射用尿促卵泡刺激素的制备

1.冻干

1.1原料的预处理

处方(以10000瓶计)

首先，称取以上处方的原料，将处方量的甘露醇倒入不锈钢桶中，加入注射用水适量使之溶解，甘露醇水溶液的重量浓度为1％到18％之间。于除尘器下加入0.5％(g/g)药用炭，煮沸30min，得到甘露醇水溶液。

按照甘露醇处理方法对右旋糖酐40进行处理，得到右旋糖酐40水溶液。

将煮沸后的甘露醇水溶液和右旋糖酐水溶液粗滤除炭，冷却，送样检测细菌内毒素，合格后备用。

配磷酸盐溶液，取处方量的磷酸盐，用适量的注射用水溶解，所成浓度约为10％(g/g)，取样做细菌内毒素检测，放于4-10℃冷柜贮存，合格后备用。

1.2尿促卵泡刺激素冻干粉针剂的制备

1.2.1配料

于HCG、HMG、FSH前工序生产区浓配间称取处方量的尿促卵泡刺激素原料于不锈钢杯中，并加入适量4-10℃注射用水使之溶解。溶解后，盖好杯盖，传至配料间。用具的清洗、灭菌除热原等操作见冻干粉针剂工艺规程通则。

于配料操作间里，将预处理后的右旋糖酐40溶液、甘露醇溶液以及磷酸盐溶液进行混合并加入4-10℃注射用水约至配制总量的50％，搅拌均匀后，加入原料溶液，补加4-10℃注射用水至配制总重量，搅拌至少8分钟。

测中间产品pH值，应为6.5-7.0，若不在该范围内，则用1mol/L NaOH溶液或1mol/L HCl溶液调节。

配好的药液经两道0.2μm孔径的微孔滤膜除菌过滤后进入灌装间。称取原料的电子天平感量应为0.001g，称取辅料的电子台秤感量应不低于1g，配置用电子台秤感量应不低于0.02kg。过滤器采用圆盘式过滤器，滤膜孔径：0.2μm，滤膜材质：聚醚砜。过滤前，过滤系统在0.05MPa-0.08MPa压力条件下做过滤器完整性检查应合格。若不合格应更换新组装的过滤器，并作完整性检查，直至过滤器的完整性检查合格后方可开始过滤。过滤后，过滤系统在0.05MPa-0.08MPa压力条件下做完整性检查应合格。若不合格按偏差处理管理制度处理。配料尽量使用不锈钢器具。药液从配制到过滤结束的时间应控制在10小时内。

配料班人员填写装量通知书交灌装班，产品装量为0.700g。

1.2.2灌装

1.2.2.1灌装用具的清洗、灭菌、除热原；灌装过程的具体操作等采用本领域常规的方法。

灌装前，使用适量的药液循环灌装系统。按配料班下达的装量通知书校准装量，灌装后中间产品放入无菌小车中暂存，并关闭车门。回收药液的处理：灌装过程产生的回收药液需盛装于不锈钢杯中退回至配料班，重新经过一道0.2μm聚醚砜膜过滤至灌装班进行灌装。灌装过程中接触药液的西林瓶、胶塞不得回收使用，作废弃处理。从过滤开始至罐装完成至进箱结束间隔时间应控制在13.5小时内。

1.2.3冻干

待搁板预冻至-35℃时，开始进箱，进箱结束后关上箱门并通知冻干班值班人员。胶塞振荡斗中，胶塞量约为振荡斗容积三分之一，振荡斗幅度调至150-200mV之间。检测装量使用的天平感量应为0.001g。

1.2.3.1冻干工序的具体操作过程见冻干粉针剂工艺规程通则。

1.2.3.2冻干曲线见附图。

1.2.3.3冻干过程关键阶段工艺控制点：

关键阶段	工艺控制点
		搁板预冻温度	-35℃
制品低温保温温度	-35～-45℃
		低温保温时间	2hr
冻干水线消失时制品温度	≤-12℃
		干燥后期保温温度	35-40℃
干燥后期保温时间	3.5hr

1.2.4轧盖工序

1.2.4.1操作过程

1.2.4.2轧盖工序具体操作见冻干粉针剂工艺规程通则。

1.2.4.3轧盖班操作人员接冻干班通知可以出箱后，打开箱门，逐盘将冻干盘底盘插回，将产品经传递窗传至轧盖间，调节轧盖机，开始轧盖。

1.2.4.4轧盖速度：应不超过270瓶/分。

1.2.4.5包装工序

产品经目检后，贴签、装盒、装箱。具体操作过程见冻干粉针剂工艺规程通则。

包装完成后，将产品置于2-8℃贮存。

1.2.4.6水处理、中央空调、工作服的洗涤及消毒剂的配制等操作过程见冻干粉针剂工艺规程通则。

2.冻干产品的质量

2.物料平衡及计算方法

2.1各规格产品物料平衡指标

2.2尿促卵泡刺激素冻干粉针剂的质量

2.2.1本品为尿促卵泡刺激素加适宜的赋形剂经冷冻干燥制得的无菌制剂，含尿促卵泡刺激素效价应为标示量的76.0％-135.0％。

2.2.2性状本品为白色或类白色冻干块状物或粉末。

2.2.3鉴别在效价测定项下，测定结果应能使未成年雌性大鼠卵巢增大。

3质量检查

3.1酸碱度

取本品3支，分别加水3ml溶解后，合并溶液，依法测定(中国药典2005年版附录VI H)，pH值应为6.0-8.0。

3.2干燥失重取本品25mg，置五氧化二磷干燥器中，减压干燥4小时，减失重量不得过5.0％(中国药典2005版二部附录VIII L)。

3.3细菌内毒素取本品，依法检查(中国药典2005版二部附录XIE)，每1单位FSH中含内毒素的量应小于0.01EU。

3.4异常毒性取本品，加氯化钠注射液制成每1ml中含100单位FSH的溶液，依法检查(中国药典2005版二部附录XI C)，按静脉注射法给药，每只小鼠注射0.5ml，应符合规定。

3.5无菌取本品，分别加灭菌水2ml使溶解，依法检查(中国药典2005年版二部附录XI H)，应符合规定。

3.6装量差异取本品5瓶，依法检测(中国药典2005年版二部附录IB)，应符合规定。

3.7可见异物取5份供试品，依法检查(中国药典2005年版二部附录IXH及可见异物检查法的补充规定)，应符合规定。

3.8不溶性微粒取本品，依法检测(中国药典2005年版二部附录IX C)，应符合规定。

3.9纯度取本品适量，加水制成每1ml中约含500单位的溶液作为供试品溶液。照高效液相色谱法试验。采用凝胶色谱柱Superdex 75；以磷酸盐缓冲液(取85％H₃PO₄6.74ml，加水800ml，再加Na₂SO₄ 14.2g，用50％NaOH调pH至6.7，用水定容为1000ml)；柱温30℃；流速0.5ml/min；检测波长214nm；进样量100μl。理论板数按尿促卵泡素峰计算应不低于1000，尿促卵泡素主峰与相邻杂质峰的分离度不得低于1.0。在供试品溶液色谱图中，按面积归一化法计算，主峰面积不得低于95％。

4.0尿促卵泡刺激素按卵泡刺激素生物检定法(中国药典2005年版附录XII M)测定，应符合规定，测定的结果应为标示量的76％-135％。

4.1有效期36个月。通过贵方提供的实施例2的保存期，修改了该有效期的数值。

4.2批量的确定

根据生产组织及冻干箱生产能力，每批最大投料量为8.1万瓶，最低投料量1.0万瓶。

5.冻干粉针剂产品包装的处理操作过程及工艺条件

5.1洗瓶工序

5.1.1低硼硅玻璃管制注射剂瓶清洗、灭菌及除热原；卤化丁基橡胶塞的清洗、灭菌；易开铝塑组合瓶盖的灭菌等具体操作过程见冻干粉针剂工艺规程通则。

5.2卤化丁基橡胶塞的干燥工艺

5.2.1真空气相干燥

在卤化丁基橡胶塞完成灭菌后，开始真空气相干燥，真空气相干燥时间为10分钟。

5.2.2热风气相干燥

真空气相干燥完成后，启动热风风机及加热器，将箱体内温度达到123℃，保持50分钟，关闭加热器、热风风机，开启真空泵，抽吸真空10分钟。

热风气相干燥应连续进行两次。

5.2.3内包装材料

6.制备过程的操作要求

6.1称取原料的电子天平感量应为0.001g；称取辅料的电子台秤感量应不低于1g；配制用电子台秤感量应不低于0.02kg。

6.1.2药液从配制到过滤结束的时间应控制在10小时内。

6.1.3滤膜材质为：聚醚砜膜

滤膜孔径为：0.2μm

6.1.4过滤器：圆盘式过滤器

6.1.5过滤前，过滤系统在0.05MPa-0.08MPa压力条件下做过滤器完整性检查应合格。若不合格应更换滤膜至过滤器的完整性检查合格后方可开始过滤。

6.1.6过滤后，过滤系统在0.05MPa-0.08MPa压力条件下做完整性检查应合格。

6.1.7配料过程中尽量使用不锈钢材质器具。

6.1.8称料、配制、过滤等过程中直接接触原料、中间产品的生产用具均应使用HCG、HMG、FSH专用用具。

过滤开始至灌装完成至进箱结束间隔时间应控制在13.5小时内。

实施例2

根据实施例1，制备注射用尿促卵泡刺激素，产品的稳定性好的实验

1.产品的生产

按照实施例1的方法，按照下表组分，生产三批，性状为白色或类白色冻干块状物或粉末，质量均一，各项指标均混粉标准规定。

处方(以10000瓶计)

2.长期稳定性考察

将按照实施例1制备的060201、060401、060402三批产品，按照市售包装，在阴凉贮存条件下放置，分别于放置3个月、6个月、9个月、12个月、18个月、24个月、36个月取样，按照实施例1的方法检查性状、酸碱度pH、可见异物、干燥失重、生物效价，在36月后仍符合标准规定，有效期定为30个月可以确保效期内产品质量。见附表。

品名：注射用尿促卵泡素规格：75单位贮存条件：阴凉处

3.将贮藏期为36个月的产品，按照实施例1中3.9纯度检查法检查，产品纯度可达96％，见图2。

比较例1提供现有的尿促卵泡刺激素保存期短，稳定性差的实施例

按照实施例1方法制备样品，甘露醇、右旋糖酐比例则影响产品成型和稳定性，Na₂HPO₄、NaH₂PO₄用量不当，则影响FSH的稳定性，导致贮藏期产品发生结构变化及断链，图3表示051101批注射用尿促卵泡刺激素阴凉条件下贮存0个月后的高效液相色谱图。由于产品不稳定，所以阴凉条件下贮存3个月后产品的纯度发生了显著降低，如图4表示。通过图3和图4的比较，可以看出051101批注射用尿促卵泡刺激素阴凉条件下贮存3个月后的纯度显著降低。本实施例中的051101批注射用尿促卵泡刺激素购自上海第一生化药业有限公司，包装规格为1瓶/盒，批准文号：国药准字H10930135，英文名：MENOTROPHIN FOR INJECTION，商品名：普格纳，喜美康，绝经后促性腺激素，高孕乐。

Claims

1.一种尿促卵泡刺激素冻干粉针剂，该冻干粉针剂包含57～102单位尿促卵泡刺激素、7.8～22.4mg甘露醇、1.9～4.2mg右旋糖酐、0.07～0.13mgNa₂HPO₄和0.10～0.20mg NaH₂PO₄；其中所述的冻干粉针剂通过包括以下步骤的方法制备：

b.将步骤a得到的各种溶液按比例混合；

c.将步骤b得到的混合溶液在-35℃下预冻，然后在-35～-45℃下保温1～3小时，再将冻干产物在30～40℃下干燥2～4小时即得。

2.根据权利要求1所述的冻干粉针剂，其特征在于，所述冻干粉针剂包含67.5～90单位尿促卵泡刺激素、9.5～17.0mg甘露醇、2.4～3.4mg的右旋糖酐、0.09～0.12mg Na₂HPO₄和0.13～0.17mg NaH₂PO₄。

3.根据权利要求2所述的冻干粉针剂，其特征在于，所述冻干粉针剂包含75单位尿促卵泡刺激素。

4.根据权利要求1所述的冻干粉针剂，其特征在于，所述冻干粉针剂包含75单位尿促卵泡刺激素、11.2mg甘露醇、2.8mg右旋糖酐、0.11mgNa₂HPO₄和0.15mg NaH₂PO₄。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的冻干粉针剂，其特征在于，所述右旋糖酐为右旋糖酐40。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的冻干粉针剂的制备方法，该制备方法包括以下步骤：

b.将步骤a得到的各种溶液按比例混合；

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，在所述步骤a中，所述右旋糖酐或甘露醇用注射用水溶解后，右旋糖酐或甘露醇的含量为溶液总重量的1％～18％，向溶液中加入溶液重量0.5％的药用炭，煮沸20～40分钟，过滤、冷却备用。

8.根据权利要求6或7所述的制备方法，其特征在于，在所述步骤a中，所述Na₂HPO₄和NaH₂PO₄用注射用水溶解后，Na₂HPO₄和NaH₂PO₄含量为溶液总重量的10％，备用。

9.根据权利要求6或7所述的制备方法，其特征在于，在所述步骤a中，所述尿促卵泡刺激素在4～10℃下用注射用水溶解后备用。

10.根据权利要求6或7所述的制备方法，其特征在于，在所述步骤b中，先将右旋糖酐溶液、甘露醇溶液以及Na₂HPO₄和NaH₂PO₄溶液混合，加入4～10℃的注射用水总重量的50％，搅拌后加入尿促卵泡刺激素溶液，补加4～10℃的注射用水至总重量，搅拌。

11.根据权利要求6或7所述的制备方法，其特征在于，在所述步骤b中，还包括将混合溶液的pH值调节到6.5～7.0。