CN102250235A - 奈西立肽的制备方法 - Google Patents

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CN102250235A CN2011101711524A CN201110171152A CN102250235A CN 102250235 A CN102250235 A CN 102250235A CN 2011101711524 A CN2011101711524 A CN 2011101711524A CN 201110171152 A CN201110171152 A CN 201110171152A CN 102250235 A CN102250235 A CN 102250235A
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谢期林
王晓莉
郭德文
曾德志
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Abstract

本发明属于多肽药物制备方法技术领域，特别涉及奈西立肽的制备方法。本发明奈西立肽的制备方法，包括固相多肽合成法制备奈西立肽线性肽树脂、奈西立肽线性肽树脂酸解得到奈西立肽线性肽粗品；奈西立肽线性肽粗品经氧化后得到奈西立肽粗品，奈西立肽粗品纯化得到奈西立肽纯品。其中固相多肽合成法为：在Fmoc-His(trt)-载体树脂上通过固相偶联合成法依次接入下列序列中相对应的Fmoc-保护氨基酸，得到奈西立肽线性肽树脂，接入Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)片段时仅用1或2次固相偶联合成反应。本发明方法产品纯度大于99.0％，单一杂质小于0.5％，显著提高了产品收率。

Description

奈西立肽的制备方法
技术领域
本发明属于多肽药物制备方法技术领域，特别涉及奈西立肽的制备方法。
背景技术
奈西立肽(Nesiritide)是人体B型尿钠排泄肽，奈西立肽与血管平滑肌及内皮细胞的鸟苷酸环化酶受体结合，细胞内的cGMP浓度增加，平滑肌细胞松弛。在静脉、动脉的扩张作用中，cGMP扮演第二信使的角色。奈西立肽能使用内皮缩血管肽或a-肾上腺素能的促效剂去氧肾上腺素制造的离体人动脉和静脉条收缩模型舒张。
在临床试验中，奈西立肽能使心衰病人的肺毛细血管楔嵌压(PCWP)降低，呈剂量依赖性。在动物试验中，奈西立肽对心脏收缩能力或心脏电生理如房室结传导等无影响。给充血性心衰的病人静脉注射奈西立肽后，在血浆中显示出二相性的分布。奈西立肽的半衰期t1/2大约为18分钟，AUC大约为27。平均初始消除相估计大约为2分钟。在这些病人中，奈西立肽中心室的平均分布体积(VC)估计是0.073L/kg，平均稳态分布体积(VSS)是0.19L/kg，平均清除率(CL)大约是9.2mL/min/kg。在稳定状态，注射剂量范围从0.01～0.03ug/kg/min的奈西立肽后，血浆奈西立肽的水平从内源性的基础水平增加大约3～6倍。
奈西立肽具有以下的结构：
有关奈西立肽的制备方法，国内外很少有报道，USA20080287650报道了高纯度奈西立肽的制备，采用固相合成1-31片段，再与第32个氨基酸反应，经酸解后氧化、纯化得到产品；US20090035815报道了一种基因工程的奈西立肽制备方法；US20100317827报道了奈西立肽一种纯化方法。
中国专利CN200910104860.9、CN200910104861.3报道了一种固相制备和纯化方法，采用HMPB-AM树脂为载体树脂，但HMPB-AM树脂在与第一个保护氨基酸Fmoc-His(Trt)-OH酯化的时候，有50％的Fmoc-His(Trt)-OH将会发生消旋化，所以在产品中存在消旋异构体。
本品结构中含有一个Ser-Ser-Ser-Ser片段，在固相偶联时需要分4次接入Fmoc-Ser(tBu)，在接入第2个、第3个和第4个Fmoc-Ser(tBu)时，由于自身结构的特性，无法进行完全反应，所以在生产过程中产生大量的[-Ser]-奈西立肽、[-2Ser]-奈西立肽和[-3Ser]-奈西立肽杂质，同时这些杂质与奈西立肽的极性相近，在纯化过程中很难完全去掉，所以本产品常规固相合成总收率很低，只有2～5％，很难实现规模化生产。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供奈西立肽的制备方法，该制备方法使用了新型的保护氨基酸片段，避免了[-1Ser]-奈西立肽，[-2Ser]-奈西立肽和[-3Ser]-奈西立肽杂质的产生，提高生产效率、实现规模化的固相合成工艺。
本发明奈西立肽的制备方法，包括固相多肽合成法制备奈西立肽线性肽树脂、奈西立肽线性肽树脂酸解得到奈西立肽线性肽粗品；奈西立肽线性肽粗品经氧化后得到奈西立肽粗品，奈西立肽粗品纯化得到奈西立肽纯品。其中固相多肽合成法为：在Fmoc-His(trt)-载体树脂上通过固相偶联合成法依次接入下列序列中相对应的Fmoc-保护氨基酸，得到奈西立肽线性肽树脂：
R1-Ser(tBu)-Pro-Lys(Boc)-Met-Val-Gln(R2)-Gly-Ser(tBu)-
Gly-Cys(R3)-Phe-Gly-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Met-Asp(OtBu)-
Arg(pbf)-Ile-X-Gly-Leu-Gly-Cys(R3)-Lys(Boc)-Val-Leu-
Arg(pbf)-Arg(pbf)-Hi s(trt)-树脂
其中，X为Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)，R1为Fmoc、Boc或H，R2为Trt或H，R3为Trt或Acm。
接入X片段时仅用1或2次固相偶联合成反应，偶联所使用的Fmoc-保护氨基酸为Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-Ser(ΨMe，Mepro)-OH中的至少一种。
优选的，接入X片段时仅用1或2次固相偶联合成反应，具体为：
1)1次偶联直接接入Fmoc-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-OH，
2)分2次偶联依次接入2段肽片段，一段为Fmoc-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-OH、一段为Fmoc-Ser(tBu)-OH；或一段为Fmoc-Ser(tBu)-Ser(tBu)-OH、一段为Fmoc-Ser(tBu)-Ser(ΨMe，Mepro)-OH；或两段同时为Fmoc-Ser(tBu)-Ser(tBu)；或两段同时为Fmoc-Ser(tBu)-Ser(ΨMe，Mepro)。
所述保护氨基酸种类分别为：R1-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Gln(R2)-OH、Fmoc-Cys(R3)-OH、Fmoc-Arg(pbf)-OH、Fmoc-Asp(tBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Val、Fmoc-Ser(TBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-Ser(ΨMe，Mepro)-OH。
其中，R1为Fmoc、Boc，R2为Trt或H，R3为Trt或Acm。
Fmoc为9-芴甲氧羰基，tBu为叔丁基、Trt为三苯基甲烷、OtBu为叔丁氧基、Boc为叔丁氧羰酰基。
所述Fmoc-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-OH结构为：
Figure BDA0000070576320000031
所述Fmoc-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-OH结构为：
Figure BDA0000070576320000032
所述Fmoc-Ser(tBu)-Ser(tBu)-OH结构为：
Figure BDA0000070576320000033
所述Fmoc-Ser(tBu)-Ser(ΨMe，Mepro)-OH结构为：
Figure BDA0000070576320000041
保护氨基酸用量为所投料树脂可取代基团总摩尔数的1.2～6倍，优选2.5～3.5倍。
固相偶联合成法具体为：前一步反应得到的保护氨基酸-树脂脱去保护Fmoc后再与下一个保护氨基酸偶联反应。脱去Fmoc保护的试剂为10～30％(V/V)哌啶(PIP)/N，N-二甲基甲酰胺(DMF)溶液，优选的为20％。使用的去保护试剂用量为每克投料树脂5～15ml，优选为每克投料树脂10ml。去保护反应时间为10～60分钟，优选为15～25分钟。
偶联时需添加缩合试剂和活化试剂，缩合试剂选自N，N-二异丙基碳二亚胺(DIC)、N，N-二环己基碳二亚胺(DCC)，六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(PyBOP)、2-(7-氮杂-1H-苯并三氮唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)、苯并三氮唑-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸盐(HBTU)或O-苯并三氮唑-N，N，N′，N′-四甲基脲四氟硼酸酯(TBTU)；优选的为N，N-二异丙基碳二亚胺。
缩合试剂的摩尔用量为氨基树脂中氨基总摩尔数的1.2～6倍，优选为2.5～3.5倍。
活化试剂选自1-羟基苯并三唑(HOBt)、N-羟基-7-氮杂苯并三氮唑(HOAt)，优选的为1-羟基苯并三唑。
活化试剂用量为氨基树脂中氨基总摩尔数的1.2～6倍，优选的为2.5～3.5倍。
偶联反应时间为60～300分钟，优选的为100～140分钟。
优选的，所述载体树脂的取代值为0.2～1.0mmol/g树脂，优选的取代值为0.2～0.5mmol/g树脂时产率较高。
进一步优选的，所述载体树脂为三苯甲基氯树脂：如Trityl-Cl树脂、4-Methyltrityl-Cl树脂、4-Methoxytrityl-Cl树脂或2-Cl-Trityl-Cl树脂。最优选为2-Cl-Trity-Cl树脂。
当载体树脂为三苯甲基氯树脂时，Fmoc-His(trt)-OH与载体树脂的偶联方法为：Fmoc-His(trt)-OH的羧基与树脂中的Cl-代烷在碱作用下发生酯化反应而接入保护氨基酸。
所述的碱选自N.N-二异丙基乙基胺(DIEA)、三乙胺(TEA)、吡啶中的至少一种，优选为DIEA。碱的摩尔用量为保护氨基酸摩尔数的1.5～3倍。
酯化反应时间为1～6小时，优选为3小时。
进一步的，奈西立肽线性肽树脂经酸解同时脱去树脂及侧链保护基得到奈西立肽线性肽粗品：
Ser-Pro-Lys-Met-Val-Gln-Gly-Ser-Gly-Cys-Phe-Gly-Arg-
Lys-Met-Asp-Arg-Ile-Ser-Ser-Ser-Ser-Gly-leu-Gly-Cys-
Lys-Val-Leu-Arg-Arg-His-OH
酸解剂为三氟醋酸(TFA)、1，2-乙二硫醇(EDT)和水混合溶剂，混合溶剂的配比为：TFA的比例为80-95％(V/V)，EDT的比例为1～10％(V/V)，余量为水。优选的配比为89-91％、EDT 4-6％、余量为水。最优的，配比为90％、EDT 5％、余量为水。
酸解剂用量为每克肽树脂需要4～15ml酸解剂，优选的，每克肽树脂需要9～11ml酸解剂。
使用酸解剂裂解的时间为室温条件下1～5小时，优选的为3小时。
进一步的，奈西立肽线性肽粗品经氧化后得到奈西立肽粗品：
取奈西立肽线性肽粗品，用醋酸溶解，过滤后用氧化剂氧化环化，得到奈西立肽粗品溶液。
醋酸的体积百分比浓度为20～40％，优选为30％。
氧化剂选自空气、碘、H2O2或DMSO，优选碘。氧化剂采用滴定方式加入，到氧化终点时停止加入。
进一步的，奈西立肽粗品纯化得到奈西立肽纯品的方法为：高效液相色谱纯化的操作方法为：
奈西立肽粗品溶液用0.45μm混合微孔滤膜过滤，纯化用色谱填料为10μm的反相C18，流动相系统为0.1％TFA/水溶液-0.1％TFA/乙腈溶液，77mm*250mm的色谱柱流速为90ml/min，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，收集主峰蒸去乙腈后，得奈西立肽纯化中间体浓缩液。
奈西立肽纯化中间体浓缩液再用0.45μm滤膜滤过，采用高效液相色谱法进行换盐，流动相系统为1％醋酸/水溶液-乙腈，纯化用色谱填料为10μm的反相C18，77mm*250mm的色谱柱流速为90ml/min。采用梯度洗脱，循环上样方法，上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，采集图谱，观测吸收度的变化，收集换盐主峰并用分析液相检测纯度，合并换盐主峰溶液，在小于40℃水浴条件下减压浓缩，用旋转蒸发仪蒸去大部分乙腈，得到奈西立肽醋酸水溶液，冷冻干燥得奈西立肽醋酸产品。
本发明使用了新型保护氨基酸片段，避免了生产过程中[-Ser]-奈西立肽、[-2Ser]-奈西立肽和[-3Ser]-奈西立肽杂质的产生，克服了现有技术的缺点，为获得高品质的产品提供了保障，产品纯度大于99.0％，单一杂质小于0.5％，显著提高了产品收率，且具有反应操作简单等特点，具有广泛的实用价值和应用前景。
具体实施方式
通过下述实施例将有助于理解本发明，但不能限制本发明的内容：
实施例1Fmoc-His(Trt)-2-Cl-Trt-Cl树脂的制备
取2-Cl-Trt-Cl树脂1Kg(取代值为0.5mmol/g)，用8L N，N-二甲基酰胺(DMF)溶涨30分钟，加入Fmoc-His(Trt)-OH 620g(1.0mol)，搅拌30分钟后加入260ml DIEA(1.5mol)，室温搅拌反应3小时，过滤后树脂分别用DMF、二氯甲烷(DCM)、甲醇洗涤3次，减压干燥，得Fmoc-His(Trt)-2-Cl-Trt-树脂1576g，酯化收率98.7％。实施例2H-His(Trt)-2-Cl-Trt树脂的制备
取上述Fmoc-His(Trt)-2-Cl-Trt树脂，用8L 20％哌啶(PIP)/NN-二甲基酰胺(DMF)溶液溶涨10分钟，过滤后再加入5L 20％哌啶(PIP)/NN-二甲基酰胺(DMF)溶液，室温搅拌反应25分钟，过滤后树脂分别用DMF、二氯甲烷(DCM)、甲醇洗涤3次，减压干燥即得H-His(Trt)-2-Cl-Trt树脂的制备。
实施例3Fmoc-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-OH的合成
取3.0mol Ser(tBu)和3.0mol HOBt，用适量DMF溶解；另取3.0mol DIC(N，N-二异丙基碳二亚胺)，搅拌下慢慢加入至保护氨基酸DMF溶液中，于室温环境中搅拌反应30分钟，得到活化后的保护氨基酸溶液。
取Fmoc-Ser(tBu)-2-Cl-Trt-树脂1Kg(取代值为1.0mmol/g)；采用6L 20％PIP/DMF溶液去保护25分钟，过滤后树脂分别用MDF、DCM洗涤3次，加入上述活化后的保护氨基酸溶液，室温搅拌反应3小时，反应完成后，过滤后得到二肽树脂分别用MDF、DCM洗涤3次。
重复上述反应，二肽树脂与活化后的保护氨基酸溶液反应接入第3个Ser(tBu)，然后重复上述反应接入第4个Ser(tBu)，制得Fmoc-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-2-Cl-Trt-树脂。
取Fmoc-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-2-Cl-Trt-树脂，加入20L六氟异丙醇/DCM溶液，六氟异丙醇体积浓度为30％，搅拌反应2小时，过滤收集滤液，减压蒸干溶剂，减压干燥，得Fmoc-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-OH 742g，收率为91.3％，纯度为95.7％，MS m/z：814(M+1)。
实施例4奈西立肽线性肽树脂的合成
表1
  接肽顺序n＝   保护氨基酸   分子量
  02   Fmoc-Arg(Pbf)-OH   648
  03   Fmoc-Arg(Pbf)-OH   648
  04   Fmoc-Leu-OH   353
  05   Fmoc-Val-OH   339
  06   Fmoc-Lys(Boc)-OH   468
  07   Fmoc-Cys(Trt)-OH   586
  08   Fmoc-Gly-OH   297
  09   Fmoc-Leu-OH   353
  10   Fmoc-Gly-OH   297
  11   Fmoc-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-OH   813
  12   Fmoc-Ile-OH   353
  13   Fmoc-Arg(Pbf)-OH   648
  14   Fmoc-Asp(TBu)-OH   411
  15   Fmoc-Met-OH   371
  16   Fmoc-Lys(Boc)-OH   468
  17   Fmoc-Arg(Pbf)-OH   648
  18   Fmoc-Gly-OH   297
  19   Fmoc-Phe-OH   387
  20   Fmoc-Cys(Trt)-OH   586
  21   Fmoc-Gly-OH   297
  22   Fmoc-Ser(tBu)-OH   383
  23   Fmoc-Gly-OH   297
  24   Fmoc-Gln(Trt)-OH   610
  25   Fmoc-Val-OH   339
  26   Fmoc-Met-OH   371
  27   Fmoc-Lys(Boc)-OH   468
  28   Fmoc-Pro-OH   337
  29   Fmoc-Ser(tBu)-OH   383
奈西立肽线性肽树脂为：
H-Ser(tBu)-Pro-Lys(Boc)-Met-Val-Gln(Trt)-Gly-Ser(tBu)-
Gly-Cys(Trt)-Phe-Gly-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Met-Asp(OtBu)-
Arg(pbf)-Ile-X-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Lys(Boc)-Val-Leu-
Arg(pbf)-Arg(pbf)-His(trt)-树脂
其中，X为Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)
取Fmoc-His(Trt)-2-Cl-Trt-树脂，经Fmoc去保护后，依次与表1所示的保护氨基酸偶联，制得奈西立肽线性肽树脂。
其中第11个为实施例3制得的Fmoc-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)Ser(tBu)-OH。
固相偶联合成法具体为：
1、保护氨基酸的活化：
取0.9mol保护氨基酸和0.9mol HOBt，用适量DMF溶解；另取0.9mol DIC，搅拌下慢慢加入至保护氨基酸DMF溶液中，于室温环境中搅拌反应30分钟，得到活化后的保护氨基酸溶液。
2、树脂的脱Fmoc保护：
取Fmoc-His(Trt)-2-Cl-Trt-树脂(取代值为0.3mmol/g)1Kg，采用5L 20％PIP/DMF溶液去保护25分钟，过滤得到去Fmoc的树脂备用。
3、偶联：
去Fmoc的树脂加入第2个活化后的保护氨基酸溶液，偶联反应60～300分钟，过滤洗涤得2肽树脂。
采用上述同样方法，依次接入第3至第29个氨基酸对应的Fmoc-保护氨基酸，即前一步得到的Fmoc-[1～(n-1)个]氨基酸-His(Trt)-2-Cl-Trt-树脂，脱Fmoc保护后与活化的Fmoc-保护氨基酸(第n个)偶联反应60～300分钟，n＝2～29。接完所有保护氨基酸后，树脂再用10L 20％PIP/DMF溶液去Fmoc保护25分钟，过滤洗涤后，即得奈西立肽线性肽树脂。
实施例5奈西立肽线性肽粗品的制备
取实施例4制得的奈西立肽线性肽树脂，加入裂解试剂[TFA/水/EDT＝95∶5∶5(V/V)(10ml/克树脂)，搅拌均匀，室温搅拌反应3小时，反应混合物使用砂芯漏斗过滤，收集滤液，树脂再用少量TFA洗涤3次，合并滤液后减压浓缩，加入无水乙醚沉淀，再用无水乙醚洗沉淀3次，抽干得白色粉末即为奈西立肽线性肽粗品。
实施例6奈西立肽粗品的制备
将上述奈西立肽线性肽粗品用30％醋酸溶液溶解并制成1mg/ml的溶液，搅拌下滴加碘/30％醋酸饱和溶液至溶液呈棕红色，搅拌反应30分钟后滴加Vc溶液(中和过量的氧化剂)至棕红色消失，40℃减压浓缩，得奈西立肽粗品浓缩溶液。
实施例7奈西立肽粗品的纯化
取奈西立肽粗品浓缩溶液，溶液用0.45μm混合微孔滤膜过滤，备纯化用。采用高效液相色谱法进行纯化，纯化用色谱填料为10μm的反相C18，流动相系统为0.1％TFA/水溶液-0.1％TFA/乙腈溶液，77mm*250mm的色谱柱流速为90ml/min，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集主峰蒸去乙腈后，得奈西立肽纯化中间体浓缩液。
取奈西立肽纯化中间体浓缩液，用0.45μm滤膜滤过备用。采用高效液相色谱法进行换盐，流动相系统为1％醋酸/水溶液-乙腈，纯化用色谱填料为10μm的反相C18，77mm*250mm的色谱柱流速为90ml/min(可根据不同规格的色谱柱，调整相应的流速)。采用梯度洗脱，循环上样方法，上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，采集图谱，观测吸收度的变化，收集换盐主峰并用分析液相检测纯度，合并换盐主峰溶液，在小于40℃水浴条件下减压浓缩，用旋转蒸发仪蒸去大部分乙腈，得到奈西立肽醋酸水溶液，冷冻干燥，得产品196g，总收率为18.9％。
分子量：3465(100％M+H)；比旋度：-82.6°；
水分1.8％；醋酸：10.5％；纯度：99.5％。

Claims (10)

1.奈西立肽的制备方法，包括固相多肽合成法制备奈西立肽线性肽树脂、奈西立肽线性肽树脂酸解得到奈西立肽线性肽粗品；奈西立肽线性肽粗品经氧化后得到奈西立肽粗品，奈西立肽粗品纯化得到奈西立肽纯品；其中固相多肽合成法为：在Fmoc-His(trt)-载体树脂上通过固相偶联合成法依次接入下列序列中相对应的Fmoc-保护氨基酸，得到奈西立肽线性肽树脂：
R1-Ser(tBu)-Pro-Lys(Boc)-Met-Val-Gln(R2)-Gly-Ser(tBu)-
Gly-Cys(R3)-Phe-Gly-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Met-Asp(OtBu)-
Arg(pbf)-Ile-X-Gly-Leu-Gly-Cys(R3)-Lys(Boc)-Val-Leu-
Arg(pbf)-Arg(pbf)-Hi s(trt)-树脂
其中，X为Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)，R1为Fmoc、Boc或H，R2为Trt或H，R3为Trt或Acm，接入X片段时仅用1或2次固相偶联合成反应。
2.根据权利要求1所述的奈西立肽的制备方法，其特征在于：接入X片段时所使用的保护氨基酸为Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-Ser(ΨMe，Mepro)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-Ser(tBu)-OH中的至少一种。
3.根据权利要求1或2所述的奈西立肽的制备方法，其特征在于：所述载体树脂的取代值为0.5～1.5mmol/g。
4.根据权利要求3所述的奈西立肽的制备方法，其特征在于：所述载体树脂为Trityl-Cl类型树脂或羟基类型树脂。
5.根据权利要求4所述的奈西立肽的制备方法，其特征在于：Trityl-Cl类型树脂为Trityl-Cl树脂、4-Methyltrityl-Cl树脂、4-Methoxytrityl-Cl树脂或2-Cl Trity-Cl树脂；羟基类型树脂为Wang树脂或对羟甲基苯氧甲基聚苯乙烯树脂。
6.根据权利要求5所述的奈西立肽的制备方法，其特征在于：当载体树脂为三苯甲基氯树脂时，Fmoc-His(trt)-OH与载体树脂的偶联方法为：Fmoc-His(trt)-OH的羧基与树脂中的Cl-代烷在碱作用下发生酯化反应而接入保护氨基酸。
7.根据权利要求6所述的奈西立肽的制备方法，其特征在于：所述的碱选自N.N-二异丙基乙基胺、三乙胺、吡啶中的至少一种；碱的摩尔用量为保护氨基酸摩尔数的1.5～3倍。
8.根据权利要求6所述的奈西立肽的制备方法，其特征在于：酯化反应时间为1～6小时，优选为3小时。
9.根据权利要求1～8任一项所述的奈西立肽的制备方法，其特征在于：所述保护氨基酸种类分别为：R1-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Gln(R2)-OH、Fmoc-Cys(R3)-OH、Fmoc-Arg(pbf)-OH、Fmoc-Asp(TBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Val、Fmoc-Ser(TBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-Ser(ΨMe，Mepro)-OH；其中，R1为Fmoc、Boc，R2为Trt或H，R3为Trt或Acm。
10.根据权利要求1～8任一项所述的奈西立肽的制备方法，其特征在于：奈西立肽线性肽树脂经酸解同时脱去树脂及侧链保护基得到奈西立肽线性肽粗品：
Ser-Pro-Lys-Met-Val-Gln-Gly-Ser-Gly-Cys-Phe-Gly-Arg-
Lys-Met-Asp-Arg-Ile-Ser-Ser-Ser-Ser-Gly-leu-Gly-Cys-
Lys-Val-Leu-Arg-Arg-His-OH
酸解剂为三氟醋酸、1，2-乙二硫醇水混合溶剂，混合溶剂的配比为：TFA的体积比为80-95％，EDT的体积比为1～10％，余量为水。
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