CN103304655A - 齐考诺肽的制备方法 - Google Patents

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CN103304655A CN2013102020895A CN201310202089A CN103304655A CN 103304655 A CN103304655 A CN 103304655A CN 2013102020895 A CN2013102020895 A CN 2013102020895A CN 201310202089 A CN201310202089 A CN 201310202089A CN 103304655 A CN103304655 A CN 103304655A
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童光彬
文永均
韩玉
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Abstract

本发明属于多肽药物制备方法技术领域，特别涉及齐考诺肽的制备方法。本发明所要解决的技术问题是现有制备方法分离纯化困难、产品的总收率和纯度低。本发明解决上述技术问题的技术方案是提供一种齐考诺肽的制备方法。该方法包括固相多肽法制齐考诺肽线性肽树脂、酸解得到齐考诺肽线性肽粗品、氧化后得到齐考诺肽粗品、纯化得到齐考诺肽纯品，其中固相多肽法为：从氨基树脂开始，通过固相偶联合成法依次接入下列序列中对应的保护氨基酸或保护氨基酸片段，制备齐考诺肽线性肽树脂：R-Cys(Trt)-X(Boc)-X(Boc)-Ala-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Leu-Met-Tyr(tBu)-Asp(OtBu)-Cys(Trt)-Cys(Trt)-Y(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-Arg(Pbf)-Z(tBu)-Lys(Boc)-Cys(Trt)-氨基树脂；其中，R为Fmoc、Boc或H，X为Lys-Gly，Y为Thr-Gly，Z为Ser-Gly。本发明为缩短生产周期、提高产品的纯度和收率提供了一种新方法。

Description

齐考诺肽的制备方法
技术领域
本发明属于多肽药物制备方法技术领域，特别涉及齐考诺肽的制备方法。
背景技术
齐考诺肽具有以下的结构：
Figure BDA00003255777300011
齐考诺肽是人工合成的ω-芋螺毒素MVIIA，是由25个氨基酸组成的聚阳离子多肽,其中包括由3个二硫键连接的6个半胱氨酸残基。分子量为2639.12。它是特异性、选择性的Ｎ型电压敏感性钙通道阻滞剂,对其他离子通道没有明显的亲和力。齐考诺肽的效果比吗啡还要强100到1000倍，是一种高度专一性的止痛药。
本品为含有3个二硫键和25个氨基酸的多肽，是首个应用于临床的具有神经元特异性的N型电压敏感型性钙通道阻滞剂。本品与位于脊髓背角浅层的初级伤害性传入神经上的N-型钙通道结合，抑制初级传人神经末梢兴奋性递质的释放，具有抗伤害感受作用。本品不与阿片受体结合，其药理作用也不被阿片受体拮抗剂所阻断。在动物模型中，本品可改变阿片引起的胃肠动力降低，但不能改善吗啡引起的呼吸抑制。给大鼠鞘内注射本品，同时给予吗啡、巴氯芬或可乐定，镇痛作用增强。本品与吗啡合用，不能防止大鼠对吗啡的耐受性。慢性疼痛患者鞘内滴注本品1～10mg，1h后脑脊液中药代动力学显示，药时曲线下面积(AUC)和峰浓度(Cmax)呈剂量依赖性，表观分布容积为(155±263)ml，清除率(CL)为(0.38±0.56)ml/min，消除半衰期(t1/2)为(4.6±0.9)h。本品血浆蛋白结合率为50%，表观分布容积与脑脊液体积相近(140m1)。本品可被内肽酶和肽链端解酶切开，本品进人体循环后可被存在于多种器官中的肽酶/蛋白酶溶蛋白性裂解，成为肽类片段或游离氨基酸。经尿液排出的原药不足1%。本品用于适合鞘内注射并且对其他治疗(如全身镇痛药、辅助治疗或鞘内注射吗啡)不能耐受或无效的严重慢性疼痛患者。
国内外关于齐考诺肽制备报道很少。其中，中国专利201110139661.9、200710301598.8和200910188686.0所报道的制备方法均采用固相合成法，以Rink Amide树脂为起始原料，以单个Fmoc保护的氨基酸为原料，依次逐个接上氨基酸，然后经过裂解、氧化和纯化，获得齐考诺肽，这些专利的侧重点为选择性氧化。
上述制备方法存在以下不足：由于Gly的结构特点，接入Gly时会发生多接入一个Gly或漏接一个Gly的副反应，所以在制备齐考诺肽过程中，在接入Gly时会产生[+1Gly]-齐考诺肽、[-1Gly]-齐考诺肽杂质，从而降低粗品纯度，这些杂质极性与齐考诺肽非常接近，增大粗品纯化难度，降低了产品收率。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是现有方法制备的齐考诺肽杂质多、分离纯化困难、产品的总收率和纯度低。
本发明解决上述技术问题的技术方案是提供一种齐考诺肽的制备方法，该制备方法使用了含Gly的保护氨基酸片段，避免了[+1Gly]-齐考诺肽、[-1Gly]-齐考诺肽杂质的产生；提高粗品纯度，降低粗品纯化难度，缩短生产周期。
齐考诺肽的制备方法，包括：采用固相多肽合成法制备齐考诺肽线性肽树脂，齐考诺肽线性肽树脂再酸解得到齐考诺肽线性肽粗品，齐考诺肽线性肽粗品氧化后得到齐考诺肽粗品，最后齐考诺肽粗品纯化得到齐考诺肽纯品；其中固相多肽合成法制备齐考诺肽线性肽树脂的步骤为：从氨基树脂开始，通过固相偶联合成法依次接入下列序列中对应片段的Fmoc-保护氨基酸，制备齐考诺肽线性肽树脂：
R-Cys(Trt)-X(Boc)-X(Boc)-Ala-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Ser(tBu)-
Arg(Pbf)-Leu-Met-Tyr(tBu)-Asp(OtBu)-Cys(Trt)-Cys(Trt)-
Y(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-Arg(Pbf)-Z(tBu)-Lys(Boc)-Cys(Trt)-氨基树脂；
其中：R为Fmoc、Boc或H，X为Lys-Gly,Y为Thr-Gly,Z为Ser-Gly。
优选的，接入X时，对应的保护氨基酸为Fmoc-Lys(Boc)-Gly-OH。
优选的，接入Y时，对应的保护氨基酸为Fmoc-Thr(tBu)-Gly-OH。
优选的，接入Z时，对应的保护氨基酸为Fmoc-Ser(tBu)-Gly-OH。
优选的，上述齐考诺肽的制备方法中，所述Fmoc-保护氨基酸的用量为所投料树脂总摩尔数的1.2～6倍，优选为2.5～3.5倍。
上述齐考诺肽的制备方法中，所述的氨基树脂选自Rink Amide AM树脂、Rink Amide树脂、Rink MBHA树脂和Sieber树脂中的一种，优选为Rink Amide AM树脂。
进一步地，所述氨基树脂的取代值为0.2～1.2mmol/g树脂。优选的，氨基树脂的取代值为0.4～0.6mmol/g树脂。
作为本发明优选的方案是，所述固相偶联合成法：前一步反应得到的保护氨基酸-树脂脱去保护Fmoc后再与下一个保护氨基酸偶联反应。所述偶联反应时间为60～300分钟；优选的，偶联反应时间为120～240分钟。
进一步的，上述齐考诺肽线性肽树脂经酸解同时脱去树脂及侧链保护基得到齐考诺肽线性肽粗品：
Cys-X-X-Ala-Lys-Cys-Ser-Arg-Leu-Met-Tyr-Asp-Cys-
Cys-Y-Ser-Cys-Arg-Z-Lys-Cys-NH2；
其中，X为Lys-Gly,Y为Thr-Gly,Z为Ser-Gly。
进一步地，所述齐考诺肽树脂酸解时采用的酸解剂为TFA（三氟醋酸）、EDT（1,2-乙二硫醇）和水的混合溶剂，混合溶剂的体积配比为：80～95%的TFA，1～10%的EDT，余量为水。
优选的，混合溶剂的体积配比为89～91%的TFA、4～6%的EDT，余量为水。最优的，混合溶剂的配比为90%的TFA、5%的EDT，余量为水。
所述酸解剂的用量为每克齐考诺肽树脂需要4～15mL酸解剂。优选的，每克齐考诺肽树脂需要9～11mL酸解剂。
所述使用酸解剂裂解的时间为室温条件下1～5小时，优选的为2小时。
进一步的，齐考诺肽线性肽粗品用醋酸溶解，过滤后用氧化剂氧化环化，得到齐考诺肽粗品。
所述醋酸的体积百分比浓度为20～40%，优选为30%。
所述的氧化剂为碘、H2O2或DMSO中的至少一种，优选为碘。氧化剂采用滴定方式加入，到氧化终点时停止加入。
进一步的，齐考诺肽粗品经高效液相色谱纯化、冻干得到齐考诺肽纯品。
本发明方法直接使用含Gly的保护氨基酸片段制备齐考诺肽，在整个制备过程中未使用Fmoc-Gly-OH作为原料，直接避免了[+1Gly]-齐考诺肽和[-1Gly]-齐考诺肽杂质的产生，而这些杂质与齐考诺肽的极性特别相近，当前多肽的纯化方法为反相C18纯化法和离子色谱纯化法，而这两种方法对这类杂质均无法达到有效分离，只能靠反复循环纯化达到降低这类杂质的目的。而采用本发明的方法就避免了上述杂质的产生，使纯化难度降低，提高了产品收率，所得产品纯度大于99.0%，单一杂质小于0.2%。与已有技术相比，本发明工艺更具有广泛的实用价值和应用前景。
附图说明
图1Rink Amide AM树脂的结构式。
图2Rink Amide树脂的结构式。
图3Rink MBHA树脂的结构式。
图4Sieber树脂的结构式。
具体实施方式
本发明中涉及的英文缩写所对应的中文名称见表1所示：
表1
Figure BDA00003255777300041
齐考诺肽的制备方法，包括：采用固相多肽合成法制备齐考诺肽线性肽树脂，齐考诺肽线性肽树脂再酸解得到齐考诺肽线性肽粗品，齐考诺肽线性肽粗品氧化后得到齐考诺肽粗品，最后齐考诺肽粗品纯化得到齐考诺肽纯品；其中固相多肽合成法制备齐考诺肽线性肽树脂的步骤为：从氨基树脂开始，通过固相偶联合成法依次接入下列序列中对应片段的Fmoc-保护氨基酸，制备齐考诺肽线性肽树脂：
R-Cys(Trt)-X(Boc)-X(Boc)-Ala-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Ser(tBu)-
Arg(Pbf)-Leu-Met-Tyr(tBu)-Asp(OtBu)-Cys(Trt)-Cys(Trt)-
Y(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-Arg(Pbf)-Z(tBu)-Lys(Boc)-Cys(Trt)-氨基树脂；
其中，R为Fmoc、Boc或H，X为Lys-Gly,Y为Thr-Gly,Z为Ser-Gly。
优选的，接入X时对应的保护氨基酸为Fmoc-Lys(Boc)-Gly-OH。
优选的，接入Y时对应的保护氨基酸为Fmoc-Thr(tBu)-Gly-OH。
优选的，接入Z时对应的保护氨基酸为Fmoc-Ser(tBu)-Gly-OH。
其中，所述的保护氨基酸片段的用量为所投料树脂总摩尔数的1.2～6倍。优选的，所述保护氨基酸片段的用量所投料树脂总摩尔数的2.5～3.5倍。
上述齐考诺肽的制备方法中，所述的氨基树脂选自Rink Amide AM树脂、Rink Amide树脂、Rink MBHA树脂和Sieber树脂中的一种，优选为Rink Amide AM树脂。
进一步地，所述氨基树脂的取代值为0.2～1.2mmol/g树脂。优选的，氨基树脂的取代值为0.4～0.6mmol/g树脂。
作为本发明优选的方案是，所述固相偶联合成法：前一步反应得到的保护氨基酸-树脂脱去保护Fmoc后再与下一个保护氨基酸偶联反应。所述脱去Fmoc保护试剂的脱保护时间为10～60分钟，优选的为15～25分钟。所述的偶联反应时间为60～300分钟；优选的，为偶联反应时间120～240分钟。
所述的偶联反应需添加缩合试剂，缩合试剂选自N,N-二异丙基碳二亚胺（DIC）、N,N-二环己基碳二亚胺，六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷、2-(7-氮杂-1H-苯并三氮唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯、苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐或O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸酯中的一种；优选的为N,N-二异丙基碳二亚胺。所述缩合试剂的摩尔用量为氨基树脂中氨基总摩尔数的1.2～6倍，优选为2.5～3.5倍。
所述的偶联反应需添加活化试剂，活化试剂选自1-羟基苯并三唑(HOBt)、N-羟基-7-氮杂苯并三氮唑中的一种；优选为1-羟基苯并三唑。所述活化试剂的用量为氨基树脂中氨基总摩尔数的1.2～6倍，优选的为2.5～3.5倍。
作为本发明优选的方案，所述的脱去Fmoc保护的试剂为哌啶/N,N-二甲基甲酰胺混合溶液，混合溶液中含哌啶10～30%(V)。所述脱去Fmoc保护试剂的用量为每克氨基树脂5～15mL，优选的为每克氨基树脂8～12mL。
进一步的，上述齐考诺肽线性肽树脂经酸解同时脱去树脂及侧链保护基得到齐考诺肽线性肽粗品：
Cys-X-X-Ala-Lys-Cys-Ser-Arg-Leu-Met-Tyr-Asp-Cys-
Cys-Y-Ser-Cys-Arg-Z-Lys-Cys-NH2
其中，X为Lys-Gly,Y为Thr-Gly,Z为Ser-Gly。
进一步地，所述齐考诺肽树脂酸解时采用的酸解剂为TFA（三氟醋酸）、EDT（1,2-乙二硫醇）和水的混合溶剂，混合溶剂的体积配比为：80～95%的TFA，1～10%的EDT，余量为水。
优选的，混合溶剂的体积配比为89～91%的TFA、4～6%的EDT，余量为水。最优的，混合溶剂的配比为90%的TFA、5%的EDT，余量为水。
所述酸解剂的用量为每克齐考诺肽树脂需要4～15mL酸解剂。优选的，每克齐考诺肽树脂需要9～11mL酸解剂。
所述使用酸解剂裂解的时间为室温条件下1～5小时，优选的为2小时。
进一步的，齐考诺肽线性肽粗品用醋酸溶解，过滤后用氧化剂氧化环化，得到齐考诺肽粗品。
所述醋酸的体积百分比浓度为20～40%，优选为30%。
所述的氧化剂为碘、H2O2或DMSO中的至少一种，优选为碘。氧化剂采用滴定方式加入，到氧化终点时停止加入。
进一步的，齐考诺肽粗品经高效液相色谱纯化、冻干得到齐考诺肽纯品，具体方法为：
取齐考诺肽粗品浓缩溶液，溶液用0.45μm混合微孔滤膜过滤，备纯化用；
采用高效液相色谱法进行纯化，纯化用色谱填料为10μm的反相C18，流动相系统为0.1%TFA/水溶液-0.1%TFA/乙腈溶液，77mm*250mm的色谱柱流速为90mL/min，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集主峰蒸去乙腈后，得齐考诺肽纯化中间体浓缩液；
取齐考诺肽纯化中间体浓缩液，用0.45μm滤膜滤过备用；
采用高效液相色谱法进行换盐，流动相系统为1%醋酸/水溶液-乙腈，纯化用色谱填料为10μm的反相C18，77mm*250mm的色谱柱流速为90mL/min（可根据不同规格的色谱柱，调整相应的流速）；采用梯度洗脱，循环上样方法，上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，采集图谱，观测吸收度的变化，收集换盐主峰并用分析液相检测纯度，合并换盐主峰溶液，减压浓缩，得到齐考诺肽醋酸水溶液，冷冻干燥，得齐考诺肽纯品。
实施例1齐考诺肽线性肽树脂的合成
齐考诺肽树线性肽脂为：
H-Cys(Trt)-X(Boc)-X(Boc)-Ala-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Ser(tBu)-
Arg(Pbf)-Leu-Met-Tyr(tBu)-Asp(OtBu)-Cys(Trt)-Cys(Trt)-
Y(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-Arg(Pbf)-Z(tBu)-Lys(Boc)-Cys(Trt)-
Amide AM树脂;
其中，R为H，X为Lys-Gly,Y为Thr-Gly,Z为Ser-Gly。
接入X时对应的保护氨基酸为Fmoc-Lys(Boc)-Gly-OH，接入Y时对应的保护氨基酸为Fmoc-Thr(tBu)-Gly-OH，接入Z时对应的保护氨基酸为Fmoc-Ser(tBu)-Gly-OH。
采用Rink Amide AM树脂为开始树脂，通过去Fmoc保护和偶联反应，依次与表2所示的保护氨基酸偶联，制得齐考诺肽树脂。本实施例使用的保护氨基酸从树脂起算第1至第21个氨基酸相对应的保护氨基酸或片段如下所示：
表2
接肽顺序n= 保护氨基酸或片段 分子量
1 Fmoc-Cys(Trt) 568
2 Fmoc-Lys(Boc) 468
3 Fmoc-Ser(tBu)-Gly-OH 441
4 Fmoc-Arg(Pbf) 648
5 Fmoc-Cys(Trt) 568
6 Fmoc-Ser(tBu) 384
7 Fmoc-Thr(tBu)-Gly-OH 455
8 Fmoc-Cys(Trt) 568
9 Fmoc-Cys(Trt) 568
10 Fmoc-Asp(OtBu) 412
11 Fmoc-Tyr(tBu) 460
12 Fmoc-Met 371
13 Fmoc-Leu 353
14 Fmoc-Arg(Pbf) 648
15 Fmoc-Ser(tBu) 384
16 Fmoc-Cys(Trt) 586
17 Fmoc-Lys(Boc) 468
18 Fmoc-Ala 311
19 Fmoc-Lys(Boc)-Gly-OH 525
20 Fmoc-Lys(Boc)-Gly-OH 525
21 Fmoc-Cys(Trt) 568
1、第1个保护氨基酸的接入
取Rink Amide AM树脂（取代值为0.5mmol/g）100g，采用1000mL20%PIP/DMF（哌啶/N,N-二甲基甲酰胺）溶液去保护25分钟，过滤得到去Fmoc的树脂备用。
取0.15mol第1个保护氨基酸和0.15mol HOBt，用适量DMF溶解；另取0.15mol DIC，搅拌下慢慢加入至保护氨基酸DMF溶液中，于室温环境中搅拌反应30分钟，得到活化后的保护氨基酸溶液。
去Fmoc的树脂加入活化后的第1个保护氨基酸溶液，偶联反应60～300分钟，过滤洗涤得带第1个保护氨基酸的树脂。
2、第2～21个保护氨基酸的接入
采用上述同样方法，依次接入上述对应的第2～21个保护氨基酸或片段，接完所有保护氨基酸后，即得到的Fmoc-齐考诺肽线性肽树脂，再用1000mL20%PIP/DMF溶液去Fmoc保护25分钟，过滤洗涤后，即得齐考诺肽线性肽树脂。
实施例2齐考诺肽线性肽粗品的制备
取实施例1制得的齐考诺肽线性肽树脂，加入体积比为TFA︰水︰EDT=95︰5︰5的裂解试剂（裂解试剂10mL/克树脂），搅拌均匀，室温搅拌反应3小时，反应混合物使用砂芯漏斗过滤，收集滤液，树脂再用少量TFA洗涤3次，合并滤液后减压浓缩，加入无水乙醚沉淀，再用无水乙醚洗沉淀3次，抽干得白色粉末即为齐考诺肽线性肽粗品,纯度为69.7%。
实施例3齐考诺肽粗品的制备
实施例2制得的齐考诺肽线性肽粗品用1%醋酸胺溶液溶解并制成约0.2mg/mL的溶液，用稀氨水调PH7.5，搅拌反应，用高效液相色谱监控反应进程，反应完成后用醋酸调PH为3.5，40℃减压浓缩，得齐考诺肽粗品浓缩溶液,纯度为63.1%。
实施例4齐考诺肽粗品的纯化
取实施例3制得的齐考诺肽粗品浓缩溶液，溶液用0.45μm混合微孔滤膜过滤，备纯化用。采用高效液相色谱法进行纯化，纯化用色谱填料为10μm的反相C18，流动相系统为0.1%TFA/水溶液-0.1%TFA/乙腈溶液，77mm*250mm的色谱柱流速为90mL/min，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集主峰蒸去乙腈后，得齐考诺肽纯化中间体浓缩液。
取齐考诺肽纯化中间体浓缩液，用0.45μm滤膜滤过备用。采用高效液相色谱法进行换盐，流动相系统为1%醋酸/水溶液-乙腈，纯化用色谱填料为10μm的反相C18，77mm*250mm的色谱柱流速为90mL/min(可根据不同规格的色谱柱，调整相应的流速)。采用梯度洗脱，循环上样方法，上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，采集图谱，观测吸收度的变化，收集换盐主峰并用分析液相检测纯度，合并换盐主峰溶液，在小于40℃水浴条件下减压浓缩，用旋转蒸发仪蒸去大部分乙腈，得到齐考诺肽醋酸水溶液，冷冻干燥，得产品92.4g，总收率为35%。
分子量：2640(100%M+H)；纯度：99.3%，最大单一杂质：0.10%。
上述的实施例表明，本发明提供的方法直接避免了[+1Gly]-齐考诺肽和[-1Gly]-齐考诺肽杂质的产生，使纯化难度大大降低，提高了产品收率，所得产品纯度大于99.0%，单一杂质小于0.2%，具有广泛的实用价值和应用前景。

Claims (11)

1.齐考诺肽的制备方法，包括：采用固相多肽合成法制备齐考诺肽线性肽树脂，齐考诺肽线性肽树脂再酸解得到齐考诺肽线性肽粗品，齐考诺肽线性肽粗品氧化后得到齐考诺肽粗品，最后齐考诺肽粗品纯化得到齐考诺肽纯品；其中固相多肽合成法制备齐考诺肽线性肽树脂的步骤为：从氨基树脂开始，通过固相偶联合成法依次接入下列序列中对应片段的Fmoc-保护氨基酸，制备齐考诺肽线性肽树脂：
R-Cys(Trt)-X(Boc)-X(Boc)-Ala-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Ser(tBu)-
Arg(Pbf)-Leu-Met-Tyr(tBu)-Asp(OtBu)-Cys(Trt)-Cys(Trt)-
Y(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-Arg(Pbf)-Z(tBu)-Lys(Boc)-Cys(Trt)-氨基树脂；
其中，R为Fmoc、Boc或H，X为Lys-Gly,Y为Thr-Gly,Z为Ser-Gly。
2.根据权利要求1所述的齐考诺肽的制备方法，其特征在于：接入X时，对应的保护氨基酸为Fmoc-Lys(Boc)-Gly-OH。
3.根据权利要求1或2所述的齐考诺肽的制备方法，其特征在于：接入Y时，对应的保护氨基酸为Fmoc-Thr(tBu)-Gly-OH。
4.根据权利要求1～3任一项所述的齐考诺肽的制备方法，其特征在于：接入Z时，对应的保护氨基酸为Fmoc-Ser(tBu)-Gly-OH。
5.根据权利要求1～4任一项所述的齐考诺肽的制备方法，其特征在于：所述Fmoc-保护氨基酸的用量为所投料树脂总摩尔数的1.2～6倍，优选为2.5～3.5倍。
6.根据权利要求1所述的齐考诺肽的制备方法，其特征在于：所述的氨基树脂选自RinkAmide AM树脂、Rink Amide树脂、Rink MBHA树脂和Sieber树脂中的一种；所述的氨基树脂优选为Rink Amide AM树脂。
7.根据权利要求6所述的齐考诺肽的制备方法，其特征在于：所述氨基树脂的取代值为0.2～1.2mmol/g树脂；优选的，氨基树脂的取代值为0.4～0.6mmol/g树脂。
8.根据权利要求1所述的齐考诺肽的制备方法，其特征在于：所述的固相偶联合成法包括：前一步反应得到的保护氨基酸-树脂脱去保护Fmoc后再与下一个保护氨基酸偶联反应。
9.根据权利要求1～8任一项所述的齐考诺肽的制备方法，其特征在于：齐考诺肽线性肽树脂经酸解同时脱去树脂及侧链保护基得到齐考诺肽线性肽粗品：
Cys-X-X-Ala-Lys-Cys-Ser-Arg-Leu-Met-Tyr-Asp-Cys-
Cys-Y-Ser-Cys-Arg-Z-Lys-Cys-NH2；
其中，X为Lys-Gly,Y为Thr-Gly,Z为Ser-Gly。
10.根据权利要求9所述的齐考诺肽的制备方法，其特征在于：所述齐考诺肽树脂酸解时采用的酸解剂为TFA、EDT和水的混合溶剂；所述混合溶剂的体积配比为：80～95%的TFA，1～10%的EDT，余量为水；优选的，混合溶剂的体积配比为89～91%的TFA、4～6%的EDT，余量为水；最优的，混合溶剂的配比为90%的TFA、5%的EDT，余量为水。
11.根据权利要求1～8所述的齐考诺肽的制备方法，其特征在于：齐考诺肽线性肽粗品用醋酸溶解，过滤后用氧化剂氧化环化，得到齐考诺肽粗品；所述的氧化剂为碘、H2O2或DMSO中的至少一种。
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