CN110054662A - 一种固相合成Etelcalcetide的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及医药合成领域,公开了一种固相合成Etelcalcetide的方法。本发明先合成Etelcalcetide主链肽序2‑7位的肽树脂,然后采用全保护的D‑半胱氨酸衍生物Ac‑D‑Cys[R1‑Cys‑OR2)]与所述肽树脂偶联,采用适宜的酸解液进行酸解,合成得到Etelcalcetide,最终所获得的Etelcalcetide具有较高的纯度和总收率。
Description
技术领域
本发明涉及医药合成领域,具体涉及一种固相合成Etelcalcetide的方法。
背景技术
Etelcalcetide是一种拟钙剂,这款药物旨在通过激活甲状旁腺上的钙敏感受体来模拟钙的行为,Etelcalcetide以静脉注射使用,它可以与甲状旁腺上的钙敏感受体结合并将其激活,然后降低甲状旁腺素的水平,临床用于慢性肾病透析患者的继发性甲状旁腺机能亢进。
Etelcalcetide具有以下的结构:
Ac-D-Cys(Cys)-D-Ala-D-Arg-D-Arg-D-Arg-D-Ala-D-Arg-NH2
目前,关于Etelcalcetide的报道还较少,中国专利CN201511029990.2报道的制备方法,采用固相合成主链,再进行侧链二硫键修饰;CN201511030047.3报道的制备方法,采用液相法合成主链,再进行侧链二硫键修饰;但是两者在粗肽纯度以及精肽总收率上还存在一定不足。
发明内容
有鉴于此,本发明的目的在于提供一种固相合成Etelcalcetide的方法,使得本发明所述方法具有较高的粗品纯度、成品纯度以及总收率。
为实现上述目的,本发明提供如下技术方案:
一种固相合成Etelcalcetide的方法,包括:
步骤1、固相合成在SEQ ID NO:1所示氨基酸序列D-Arg侧链上偶联有保护基,且在SEQ ID NO:1所示氨基酸序列C端偶联有氨基树脂的肽树脂;
步骤2、步骤1所述肽树脂N端与Ac-D-Cys[R1-Cys-OR2)]的C端偶联,获得Etelcalcetide树脂;其中,所述R1为Boc或Fmoc,R2为All或tBu;
步骤3、所述Etelcalcetide树脂经由TFA、EDT和水组成的混合酸解液酸解,获得Etelcalcetide粗品;
步骤4、所述Etelcalcetide粗品纯化后获得纯品。
其中,Ac-D-Cys[R1-Cys-OR2)]结构式如下:
SEQ ID NO:1所示氨基酸序列为Etelcalcetide主肽链2-7位的氨基酸序列
Ac-D-Cys1(Cys)-D-Ala2-D-Arg3-D-Arg4-D-Arg5-D-Ala6-D-Arg7-NH2
本发明所述方法直接采用全保护的Ac-D-Cys[R1-Cys-OR2)],而后再与其他逐一偶联的肽树脂偶联,最后采用适宜的酸解液一并裂解,使最终所获得的Etelcalcetide具有92%以上的粗品纯度,并在纯化后具有较高的纯度和总收率。
本发明所述保护基是在氨基酸合成领域需要保护氨基酸主链以及侧链上氨基、羧、巯基等干扰合成的基团的保护基团,防止氨基、羧基、巯基等在制备目标产物过程中发生反应,生成杂质,如本发明使用Pbf保护基为Arg侧链的保护基。被保护基保护的氨基酸统称为保护氨基酸。
作为优选,步骤3所述混合酸解液由体积百分比为80-95%的TFA、1-10%的EDT,余量为水组成。更优选地,用由体积百分比为89-91%的TFA、4-6%的EDT,余量为水组成的混合酸解液酸解。最优选地,用由体积百分比为90%的TFA、5%的EDT,余量为水组成的混合酸解液酸解。所述混合酸解液用量优选为每克阿托西班线性肽树脂需要4~15mL,更优选为9~11mL。所述酸解的时间优选为室温条件下1~5小时,更优选为2小时。
作为优选,步骤1为:
保护氨基酸Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH与氨基树脂偶联,然后依次将保护氨基酸Fmoc-D-Ala-OH、Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH和Fmoc-D-Ala-OH按照SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的C端至N端顺序逐一偶联,获得所述肽树脂。
作为优选,所述氨基树脂为Rink MBHA树脂、Rink Amide树脂或Rink Amide AM树脂。其氨基取代值为0.3~1.5mmol/g树脂,优选的取代值为0.5~1.0mmol/g树脂。
本发明所述逐一偶联是指在前一个保护氨基酸与树脂或肽树脂偶联后,剩余保护氨基酸按照EtelcalcetideC端到N端的多肽顺序逐个和前一个偶联的氨基酸发生缩合反应进行偶联。本发明偶联时,每次偶联时所述保护氨基酸和树脂或对应肽树脂的摩尔比优选为1.2-6:1,更优选为3:1。偶联反应时间为60~300分钟,优选的为100~140分钟。本发明所述肽树脂不仅指按照SEQ ID NO:1所示氨基酸序列形成的肽树脂,也可指任意个数保护氨基酸按照Etelcalcetide主链肽序和树脂相连接形成的肽树脂。
在延伸偶联中,由于每个氨基酸N端都有保护基,因此需要先脱除N端保护基再偶联,这对本领域技术人员来说是公知常识。本发明优选用PIP/DMF(哌啶/N,N-二甲基甲酰胺)混合溶液脱除N端Fomc保护基,混合溶液中含哌啶为10~30%(V),其余为DMF。去N端保护基时间优选为10~60分钟,优选的为15~25分钟。去N端保护基试剂的用量优选为每1000-1500mL/0.05mol肽树脂。
作为优选,所述偶联采用缩合试剂和活化试剂进行偶联。
作为优选,所述缩合试剂优选为N,N-二异丙基碳二亚胺(DIC)、N,N-二环己基碳二亚胺(DCC),六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷/有机碱(PyBOP/有机碱)、2-(7-氮杂-1H-苯并三氮唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯/有机碱(HATU/有机碱)、苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐/有机碱(HBTU/有机碱)、O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸酯/有机碱(TBTU/有机碱)中的一种。所述缩合试剂的摩尔用量优选为树脂或已合成的肽树脂中树脂总摩尔数的1~6倍,更优选为2.5~3.5倍。
需要说明的是,所述PyBOP/有机碱、HATU/有机碱、HBTU/有机碱、TBTU/有机碱,在本发明中属于四种双体系的缩合试剂,即PyBOP、HATU、HBTU在使用时需要分别和有机碱组合在一起成为一种缩合试剂使用,其中所述有机碱和PyBOP、HATU、HBTU、TBTU的摩尔比优选为为1.3-3.0:1,更优选为1.3-2:1。
作为优选,所述缩合试剂中的有机碱优选为N,N-二异丙基乙胺(DIPEA)、三乙胺(TEA)或N-甲基吗啡啉(NMM),更优选为DIPEA。
作为优选,所述活化试剂为1-羟基苯并三唑(HOBt)或N-羟基-7-氮杂苯并三氮唑(HOAt)。所述活化试剂的用量优选为树脂或已合成的肽树脂中树脂总摩尔数的1~6倍,更优选为2.5~3.5倍。
作为优选,所述纯化具体为:
采用高效液相色谱法进行纯化,纯化用色谱填料为10μm的反相C18,流动相系统为0.1%TFA/水溶液-0.1%TFA/乙腈溶液,77mm*250mm的色谱柱流速为90mL/min,采用梯度系统洗脱,循环进样纯化,取粗品溶液上样于色谱柱中,启动流动相洗脱,收集主峰蒸去乙腈后,得Etelcalcetide纯化中间体浓缩液;
采用高效液相色谱法进行换盐,流动相系统为1%醋酸/水溶液-乙腈,纯化用色谱填料为10μm的反相C18,77mm*250mm的色谱柱流速为90mL/min,采用梯度洗脱,循环上样方法,上样于色谱柱中,启动流动相洗脱,采集图谱,观测吸收度的变化,收集换盐主峰并用分析液相检测纯度,合并换盐主峰溶液,减压浓缩,得到Etelcalcetide醋酸水溶液,用盐酸调pH=2,冷冻干燥,得Etelcalcetide纯品。
由本发明所述方法合成的Etelcalcetide经HPLC检测,粗品纯度大于90%,纯化后产品纯度大于99.5%,最大单一杂质小于0.1%,总收率在70%左右。
由以上技术方案可知,本发明先合成Etelcalcetide主链肽序2-7位的肽树脂,然后采用全保护的D-半胱氨酸衍生物Ac-D-Cys[R1-Cys-OR2)]与所述肽树脂偶联,采用适宜的酸解液进行酸解,合成得到Etelcalcetide,最终所获得的Etelcalcetide具有较高的纯度和总收率。
具体实施方式
本发明公开了一种固相合成Etelcalcetide的方法,本领域技术人员可以借鉴本文内容,适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是,所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的,它们都被视为包括在本发明。本发明的方法已经通过较佳实施例进行了描述,相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述方法进行改动或适当变更与组合,来实现和应用本发明技术。
在本发明具体实施方式中,本发明中的氨基酸购自于成都晖蓉生物科技有限公司,所用树脂购自于上虞普尔树脂有限公司,申请文件中所用英文缩写对应的中文含义见表1。
表1英文缩写释义
下面结合实施例,进一步阐述本发明。
实施例1:肽树脂1的合成
取0.15mol Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH和0.15molHOBt,用适量DMF溶解;另取0.15molDIC,搅拌下慢慢加入,于室温环境中搅拌反应30分钟,得到活化后的氨基酸溶液,备用;
取0.05mol Rink Amide MBHA树脂(取代值约0.5mmol/g),采用1000mL25%PIP/DMF溶液去保护25分钟,洗涤过滤得到去Fmoc的Rink Amide MBHA树脂;
将活化后的氨基酸溶液加入到去Fmoc的Rink Amide MBHA树脂中,偶联反应60~300分钟,反应终点以茚三酮法检测为准,过滤洗涤,得肽树脂1。
实施例2:肽树脂2的合成
取0.15mol Fmoc-D-Ala-OH和0.15mol HOBt,用适量DMF溶解;另取0.15mol DIC,搅拌下慢慢加入,于室温环境中搅拌反应30分钟,得到活化后的氨基酸溶液,备用;
取0.05mol实施例1的肽树脂1,采用1100mL25%PIP/DMF溶液去保护25分钟,洗涤过滤得到去Fmoc的肽树脂1;
将活化后的氨基酸溶液加入到去Fmoc的肽树脂1中,偶联反应60~300分钟,反应终点以茚三酮法检测为准,过滤洗涤,得肽树脂2。
实施例3:肽树脂3的合成
取0.15mol Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH和0.15mol HOBt,用适量DMF溶解;另取0.15molDIC,搅拌下慢慢加入,于室温环境中搅拌反应30分钟,得到活化后的氨基酸溶液,备用;
取0.05mol实施例2的肽树脂2,采用1100mL25%PIP/DMF溶液去保护25分钟,洗涤过滤得到去Fmoc的肽树脂2;
将活化后的氨基酸溶液加入到去Fmoc的肽树脂2中,偶联反应60~300分钟,反应终点以茚三酮法检测为准,过滤洗涤,得肽树脂3。
实施例4:肽树脂4的合成
取0.15mol Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH和0.15mol HOBt,用适量DMF溶解;另取0.15molDIC,搅拌下慢慢加入,于室温环境中搅拌反应30分钟,得到活化后的氨基酸溶液,备用;
取0.05mol实施例3的肽树脂3,采用1200mL25%PIP/DMF溶液去保护25分钟,洗涤过滤得到去Fmoc的肽树脂3;
将活化后的氨基酸溶液加入到去Fmoc的肽树脂3中,偶联反应60~300分钟,反应终点以茚三酮法检测为准,过滤洗涤,得肽树脂4。
实施例5:肽树脂5的合成
取0.15mol Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH和0.15mol HOBt,用适量DMF溶解;另取0.15molDIC,搅拌下慢慢加入,于室温环境中搅拌反应30分钟,得到活化后的氨基酸溶液,备用;
取0.05mol实施例4的肽树脂4,采用1200mL 25%PIP/DMF溶液去保护25分钟,洗涤过滤得到去Fmoc的肽树脂4;
将活化后的氨基酸溶液加入到去Fmoc的肽树脂4中,偶联反应60~300分钟,反应终点以茚三酮法检测为准,过滤洗涤,得肽树脂5。
实施例6:肽树脂6的合成
取0.15mol Fmoc-D-Ala-OH和0.15mol HOBt,用适量DMF溶解;另取0.15mol DIC,搅拌下慢慢加入,于室温环境中搅拌反应30分钟,得到活化后的氨基酸溶液,备用;
取0.05mol实施例5的肽树脂5,采用1300mL 25%PIP/DMF溶液去保护25分钟,洗涤过滤得到去Fmoc的肽树脂5;
将活化后的氨基酸溶液加入到去Fmoc的肽树脂5中,偶联反应60~300分钟,反应终点以茚三酮法检测为准,过滤洗涤,得肽树脂6。
实施例7:Etelcalcetide肽树脂的合成
取45mmol Ac-D-Cys[Boc-Cys-OtBu)]和45mmolHOBt,用适量DMF溶解;另取45mmolDIC,搅拌下慢慢加入,于室温环境中搅拌反应30分钟,得到活化后的氨基酸溶液,备用;
取0.015mol实施例6的肽树脂6(约占实施例6的0.05mol肽树脂的三分之一),采用500mL 25%PIP/DMF溶液去保护25分钟,洗涤过滤得到去Fmoc的肽树脂6;
将活化后的氨基酸溶液加入到去Fmoc的肽树脂6中,偶联反应60~300分钟,反应终点以茚三酮法检测为准,过滤洗涤,得Etelcalcetide肽树脂。
实施例8:Etelcalcetide肽树脂的合成
取45mmol Ac-D-Cys[Fmoc-Cys-OtBu)]和45mmol HOBt,用适量DMF溶解;另取45mmol DIC,搅拌下慢慢加入,于室温环境中搅拌反应30分钟,得到活化后的氨基酸溶液,备用;
取0.015mol实施例6的肽树脂6(约占实施例6的0.05mol肽树脂的三分之一),采用500mL 25%PIP/DMF溶液去保护25分钟,洗涤过滤得到去Fmoc的肽树脂6;
将活化后的氨基酸溶液加入到去Fmoc的肽树脂6中,偶联反应60~300分钟,反应终点以茚三酮法检测为准,树脂过滤洗涤后再用500mL 25%PIP/DMF溶液去Fmoc保护基,反应时间为25分钟,洗涤过滤,得Etelcalcetide肽树脂。
实施例9:Etelcalcetide肽树脂的合成
取45mmol Ac-D-Cys[Boc-Cys-OAll)]和45mmol HOBt,用适量DMF溶解;另取45mmol DIC,搅拌下慢慢加入,于室温环境中搅拌反应30分钟,得到活化后的氨基酸溶液,备用;
取0.015mol实施例6的肽树脂6(约占实施例6的0.05mol肽树脂的三分之一),采用500mL 25%PIP/DMF溶液去保护25分钟,洗涤过滤得到去Fmoc的肽树脂6;
将活化后的氨基酸溶液加入到去Fmoc的肽树脂6中,偶联反应60~300分钟,反应终点以茚三酮法检测为准,树脂过滤洗涤后再用500ml 2.5mmol四三苯基膦钯和25mmol苯硅烷/二氯甲烷溶液去All保护基,反应时间为4小时,洗涤过滤,得Etelcalcetide肽树脂。
实施例10:Etelcalcetide粗品的制备
取0.015mol实施例7制得的Etelcalcetide肽树脂,加入体积百分比为85%的TFA、体积百分比为7.5%的EDT和体积百分比为7.5%的水组成的混合酸解液酸解(混合酸解液10mL/克Etelcalcetide树脂),搅拌均匀,室温搅拌反应3小时,反应混合物使用砂芯漏斗过滤,收集滤液,树脂再用少量TFA洗涤3次,合并滤液后减压浓缩,加入无水乙醚沉淀,再用无水乙醚洗沉淀3次,过滤收集沉淀,40℃减压干燥,得Etelcalcetide粗品,粗品纯度为92.5%。
实施例11:Etelcalcetide粗品的制备
取0.015mol实施例8制得的Etelcalcetide肽树脂,加入体积百分比为90%的TFA、体积百分比为5%的EDT和体积百分比为5%的水组成的混合酸解液酸解(混合酸解液10mL/克Etelcalcetide树脂),搅拌均匀,室温搅拌反应3小时,反应混合物使用砂芯漏斗过滤,收集滤液,树脂再用少量TFA洗涤3次,合并滤液后减压浓缩,加入无水乙醚沉淀,再用无水乙醚洗沉淀3次,过滤收集沉淀,40℃减压干燥,得Etelcalcetide粗品,粗品纯度为93.2%。
实施例12:Etelcalcetide粗品的制备
取0.015mol实施例9制得的Etelcalcetide肽树脂,加入体积百分比为90%的TFA、体积百分比为5%的EDT和体积百分比为5%的水组成的混合酸解液酸解(混合酸解液10mL/克Etelcalcetide树脂),搅拌均匀,室温搅拌反应3小时,反应混合物使用砂芯漏斗过滤,收集滤液,树脂再用少量TFA洗涤3次,合并滤液后减压浓缩,加入无水乙醚沉淀,再用无水乙醚洗沉淀3次,过滤收集沉淀,40℃减压干燥,得Etelcalcetide粗品,粗品纯度为90.3%。
实施例13:Etelcalcetide粗品纯化
取实施例10所得Etelcalcetide粗品,用10%醋酸水溶液溶解,溶液用0.45μm微孔滤膜过滤,纯化备用;
采用高效液相色谱法进行纯化,纯化用色谱填料为10μm的反相C18,流动相系统为0.1%TFA/水溶液-0.1%TFA/乙腈溶液,77mm*250mm的色谱柱流速为90mL/min,采用梯度系统洗脱,循环进样纯化,取粗品溶液上样于色谱柱中,启动流动相洗脱,收集主峰蒸去乙腈后,得Etelcalcetide纯化中间体浓缩液;
采用高效液相色谱法进行换盐,流动相系统为1%醋酸/水溶液-乙腈,纯化用色谱填料为10μm的反相C18,77mm*250mm的色谱柱流速为90mL/min,采用梯度洗脱,循环上样方法,上样于色谱柱中,启动流动相洗脱,采集图谱,观测吸收度的变化,收集换盐主峰并用分析液相检测纯度,合并换盐主峰溶液,减压浓缩,得到Etelcalcetide醋酸水溶液,用盐酸调pH=2,冷冻干燥,得Etelcalcetide纯品10.8g,总收率为68.6%。
分子量:1049.3(100%M+H),纯度:99.65%,最大单一杂质0.06%。
实施例14:Etelcalcetide粗品纯化
取实施例11所得Etelcalcetide粗品,用10%醋酸水溶液溶解,溶液用0.45μm微孔滤膜过滤,纯化备用;
采用高效液相色谱法进行纯化,纯化用色谱填料为10μm的反相C18,流动相系统为0.1%TFA/水溶液-0.1%TFA/乙腈溶液,77mm*250mm的色谱柱流速为90mL/min,采用梯度系统洗脱,循环进样纯化,取粗品溶液上样于色谱柱中,启动流动相洗脱,收集主峰蒸去乙腈后,得Etelcalcetide纯化中间体浓缩液;
采用高效液相色谱法进行换盐,流动相系统为1%醋酸/水溶液-乙腈,纯化用色谱填料为10μm的反相C18,77mm*250mm的色谱柱流速为90mL/min,采用梯度洗脱,循环上样方法,上样于色谱柱中,启动流动相洗脱,采集图谱,观测吸收度的变化,收集换盐主峰并用分析液相检测纯度,合并换盐主峰溶液,减压浓缩,得到Etelcalcetide醋酸水溶液,用盐酸调pH=2,冷冻干燥,得Etelcalcetide纯品11.3g,总收率为71.7%。
分子量:1049.2(100%M+H),纯度:99.55%,最大单一杂质0.12%。
实施例15:Etelcalcetide粗品纯化
取实施例12所得Etelcalcetide粗品,用10%醋酸水溶液溶解,溶液用0.45μm微孔滤膜过滤,纯化备用;
采用高效液相色谱法进行纯化,纯化用色谱填料为10μm的反相C18,流动相系统为0.1%TFA/水溶液-0.1%TFA/乙腈溶液,77mm*250mm的色谱柱流速为90mL/min,采用梯度系统洗脱,循环进样纯化,取粗品溶液上样于色谱柱中,启动流动相洗脱,收集主峰蒸去乙腈后,得Etelcalcetide纯化中间体浓缩液;
采用高效液相色谱法进行换盐,流动相系统为1%醋酸/水溶液-乙腈,纯化用色谱填料为10μm的反相C18,77mm*250mm的色谱柱流速为90mL/min,采用梯度洗脱,循环上样方法,上样于色谱柱中,启动流动相洗脱,采集图谱,观测吸收度的变化,收集换盐主峰并用分析液相检测纯度,合并换盐主峰溶液,减压浓缩,得到Etelcalcetide醋酸水溶液,用盐酸调pH=2,冷冻干燥,得Etelcalcetide纯品11.0g,总收率为69.8%。
分子量:1049.6(100%M+H),纯度:99.15%,最大单一杂质0.10%。
以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
序列表
<110> 成都圣诺生物制药有限公司
<120> 一种固相合成Etelcalcetide的方法
<130> MP1725184
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> UNSURE
<222> (1)..(6)
<223> Xaa(1,5)=D-Ala;Xaa(2-4,6)=D-Arg;
<400> 1
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
1 5
Claims (8)
1.一种固相合成Etelcalcetide的方法,其特征在于,包括:
步骤1、固相合成在SEQ ID NO:1所示氨基酸序列D-Arg侧链上偶联有保护基,且在SEQID NO:1所示氨基酸序列C端偶联有氨基树脂的肽树脂;
步骤2、步骤1所述肽树脂N端与Ac-D-Cys[R1-Cys-OR2)]的C端偶联,获得Etelcalcetide树脂;其中,所述R1为Boc或Fmoc,R2为All或tBu;
步骤3、所述Etelcalcetide树脂经由TFA、EDT和水组成的混合酸解液酸解,获得Etelcalcetide粗品;
步骤4、所述Etelcalcetide粗品纯化后获得纯品。
2.根据权利要求1所述方法,其特征在于,步骤3所述混合酸解液由体积百分比为80-95%的TFA、1-10%的EDT,余量为水组成。
3.根据权利要求1所述方法,其特征在于,步骤1为:
保护氨基酸Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH与氨基树脂偶联,然后依次将保护氨基酸Fmoc-D-Ala-OH、Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH和Fmoc-D-Ala-OH按照SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的C端至N端顺序逐一偶联,获得所述肽树脂。
4.根据权利要求3所述方法,其特征在于,所述氨基树脂为Rink MBHA树脂、Rink Amide树脂或Rink Amide AM树脂。
5.根据权利要求1或3所述方法,其特征在于,所述偶联采用缩合试剂和活化试剂进行偶联。
6.根据权利要求5所述方法,其特征在于,所述缩合试剂为N,N-二异丙基碳二亚胺、N,N-二环己基碳二亚胺,六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷/有机碱、2-(7-氮杂-1H-苯并三氮唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯/有机碱、苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐/有机碱、O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸酯/有机碱中的一种。
7.根据权利要求6所述方法,其特征在于,所述有机碱为N,N-二异丙基乙胺、三乙胺或N-甲基吗啡啉。
8.根据权利要求5所述方法,其特征在于,所述活化试剂为1-羟基苯并三唑或N-羟基-7-氮杂苯并三氮唑。
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