CN102083814A - 2-氟-N-甲基-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1,2-b][1,2,4]三嗪-2-基]苯甲酰胺的盐及与其相关的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及c-Met激酶抑制剂2-氟-N-甲基-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苯甲酰胺的二盐酸盐和二苯磺酸盐，以及其在治疗与激酶途径的失调有关的癌症和其他疾病中有用的药物组合物。本发明还涉及用于制备2-氟-N-甲基-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苯甲酰胺及其盐的方法和中间体。

Description

2-氟-N-甲基-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苯甲酰胺的盐及与其相关的制备方法

发明领域

本发明涉及激酶抑制剂2-氟-N-甲基-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苯甲酰胺的二盐酸盐和二苯磺酸盐，该盐用于治疗与激酶途径的失调相关的癌症和其他疾病。本发明还涉及用于制备2-氟-N-甲基-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苯甲酰胺及其盐的方法和中间体。

发明背景

蛋白激酶(PK)是一组调节多种重要的生物过程的酶，所述生物过程其中包括细胞生长、细胞存活和细胞分化，器官形成和形态发生、新血管形成、组织修复和再生。蛋白激酶通过催化蛋白质(或底物)的磷酸化从而调节底物在多种生物学范围(biological context)中的细胞活性来发挥其生理学功能。除在正常组织/器官中的功能之外，许多蛋白激酶还在包括癌症的许多人类疾病中发挥更加特定的作用。蛋白激酶的亚型(还称为致癌蛋白激酶)在失调时，可引起肿瘤形成和生长，且还促进肿瘤维持和恶化(Blume-Jensen P等人，Nature 2001，411(6835)：355-365)。现在为止，致癌蛋白激酶代表用于癌症干预和药物开发的最多和最吸引人的蛋白靶标的组之一。

原癌基因c-Met是异二聚体受体酪氨酸激酶的不同亚家族中的成员，异二聚体受体酪氨酸激酶包括Met、Ron和Sea(Birchmeier，C.等人，Nat.Rev.Mol.Cell Biol.2003，4(12)：915-925；Christensen，J.G.等人，Cancer Lett.2005，225(1)：1-26)。c-Met的唯一高亲和力配体是肝细胞生长因子(HGF)，也称作分散因子(SF)。HGF与c-Met的结合诱导受体通过自磷酸化而活化，这导致受体依赖性信号传导的增加。c-Met和HGF两者在多种器官中被广泛地表达，但其表达通常分别被限制在上皮源细胞和间充质源细胞。c-Met(或c-Met信号传导途径)在正常组织和人类恶性肿瘤(如癌症)中的生物学功能已被充分记载(Christensen，J.G.等人，Cancer Lett.2005，225(1)：1-26；Corso，S.等人，Trends in Mol.Med.2005，11(6)：284-292)。

HGF和c-Met每一种是正常的哺乳动物发育所需要的，且在器官形态发生期间，无HGF的小鼠和无c-Met的小鼠两者中报道的异常与胚胎表达的近似和上皮-间充质转变缺失一致(Christensen，J.G.等人，Cancer Lett.2005，225(1)：1-26)。与这些发现一致，信号转导和随后的HGF/c-Met途径的生物效应已显示出对发育期间的上皮-间充质相互作用，及细胞迁移、侵入、细胞增殖和存活的调节，血管发生，三维管状结构的形态发生和组建(例如肾管状细胞、腺形成)的重要性。c-Met途径在给定的细胞/组织中活化的特定结果是高度邻近依赖性的。

失调的c-Met途径在肿瘤形成、生长、维持和恶化中起着重要且有时是决定性的(在基因改造的情况下)作用(Birchmeier，C.等人，Nat.Rev.Mol.Cell.Biol.2003，4(12)：915-925；Boccaccio，C.等人，Nat.Rev.Cancer 2006，6(8)：637-645；Christensen，J.G.等人，Cancer Lett.2005，225(1)：1-26)。HGF和/或c-Met在大部分人类癌症的重要部分被过度表达，且其通常与较少的临床结果例如更具攻击性的疾病、疾病恶化、肿瘤转移和缩短的患者寿命有关。而且，具有高水平的HGF/c-Met蛋白质的患者更能抵抗化学疗法和放射疗法。除异常的HGF/c-Met表达之外，c-Met受体还可通过基因突变(种系和体细胞两者)和基因扩增在癌症患者中被活化。虽然基因扩增和基因突变是已报道的在患者中最普遍的基因改造，但受体还可通过缺失、平截、基因重排、以及异常的受体加工和有缺陷的负调节机制来活化。

其中牵涉c-Met的各种癌症包括但不限于：癌(例如，膀胱癌、乳腺癌、子宫颈癌、胆管癌、直肠结肠癌、食道癌、胃癌、头颈癌、肾癌、肝癌、肺癌、鼻咽癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、甲状腺癌)；肌肉骨骼肉瘤(例如，骨肉瘤、滑膜肉瘤、横纹肌肉瘤)；软组织肉瘤(例如，MFH/纤维肉瘤、平滑肌肉瘤、卡波西肉瘤)；造血系统恶性肿瘤(hematopoietic malignancies)(例如，多发性骨髓瘤、淋巴瘤、成人T细胞白血病、急性髓细胞性白血病、慢性髓细胞样白血病)；和其他赘生物(例如，成胶质细胞癌、星形细胞瘤、黑素瘤、间皮瘤和维耳姆斯瘤)(www.vai.org/met/；Christensen，J.G.等人，Cancer Lett.2005，225(1)：1-26)。

通过很多临床前研究，以下观念已被进一步固定：活化的c-Met途径促进肿瘤形成和恶化且可以是用于有效的癌症干预的良好靶标(Birchmeier，C.等人，Nat.Rev.Mol.Cell Biol.2003，4(12)：915-925；Christensen，J.G.等人，Cancer Lett.2005，225(1)：1-26；Corso，S.等人，Trends in Mol.Med.2005，11(6)：284-292)。例如，研究表明，tpr-met融合基因、c-met的过度表达和活化的c-met突变都引起各种模型细胞系的致癌转化且导致小鼠中的肿瘤形成和转移。更重要地，在体外和体内已证实特异地损害和/或阻断HGF/c-Met信号传导的药剂具有明显的抗肿瘤(有时肿瘤消退)和抗转移活性。这些药剂包括抗HGF抗体和抗c-Met抗体、HGF肽拮抗物、诱杀剂(decoy)c-Met受体、c-Met肽拮抗物、显性负相c-Met突变、c-Met特异反义寡核苷酸和核酶、以及选择性小分子c-Met激酶抑制剂(Christensen，J.G.等人，Cancer Lett.2005，225(1)：1-26)。

除所确定的对癌症的作用之外，异常HGF/c-Met信号传导还牵涉动脉粥样硬化、肺纤维化、肾纤维化和再生、肝病、变应性紊乱、炎性疾患和自身免疫性疾患、脑血管疾病、心血管疾病、与器官移植有关的病症(Ma，H.等人，Atherosclerosis.2002，164(1)：79-87；Crestani，B.等人，Lab.Invest.2002，82(8)：1015-1022；Sequra-Flores，A.A.等人，Rev.Gastroenterol.Mex.2004，69(4)243-250；Morishita，R.等人，Curr.Gene Ther.2004，4(2)199-206；Morishita，R.等人，Endocr.J.2002，49(3)273-284；Liu，Y.，Curr.Opin.Nephrol.Hypertens.2002，11(1)：23-30；Matsumoto，K.等人，Kidney Int.2001，59(6)：2023-2038；Balkovetz，D.F.等人，Int.Rev.Cytol.1999，186：225-250；Miyazawa，T.等人，J.Cereb.Blood Flow Metab.1998，18(4)345-348；Koch，A.E.等人，Arthritis Rheum.1996，39(9)：1566-1575；Futamatsu，H.等人，Circ.Res.2005，96(8)823-830；Eguchi，S.等人，Clin.Transplant.1999，13(6)536-544)。

在美国专利系列号11/942,130中报道了c-Met和其他激酶的抑制剂，包括具有以下所指出的结构的化合物2-氟-N-甲基-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苯甲酰胺(I)。

为了开发更有效的药物以治疗癌症和其他疾病，不断地需要抑制激酶如c-Met的现有药剂的新的或改进的形式。本文描述的盐、组合物和方法涉及这些需要和其他目标。

发明概述

本发明提供了一种盐，该盐是2-氟-N-甲基-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苯甲酰胺二盐酸盐或其水合物或溶剂合物。

本发明还提供了一种盐，该盐是2-氟-N-甲基-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苯甲酰胺二苯磺酸盐或其水合物或溶剂合物。

本发明还提供了包括本发明的盐或其水合物或溶剂合物以及至少一种药学上可接受的载体的组合物。

本发明还提供了抑制受体或非受体酪氨酸激酶的活性的方法，该方法包括将激酶与本发明的盐或其水合物或溶剂合物接触。

本发明还提供了抑制细胞中HGF/c-Met激酶信号传导途径的方法，该方法包括将细胞与本发明的盐或其水合物或溶剂合物接触。

本发明还提供了抑制细胞的增殖活性的方法，该方法包括将细胞与本发明的盐或其水合物或溶剂合物接触。

本发明还提供了抑制患者的肿瘤生长的方法，该方法包括向患者施用治疗有效量的本发明的盐或其水合物或溶剂合物。

本发明还提供了抑制患者的肿瘤转移的方法，该方法包括向患者施用治疗有效量的本发明的盐或其水合物或溶剂合物。

本发明还提供了治疗患者的疾病的方法，其中所述疾病与HGF/c-MET信号传导途径的失调有关，该方法包括向患者施用治疗有效量的本发明的盐或其水合物或溶剂合物。

本发明还提供了治疗患者的癌症的方法，该方法包括向患者施用治疗有效量的本发明的盐或其水合物或溶剂合物。

本发明还提供了本发明的盐，其用于治疗。

本发明还提供了本发明的盐用于生产用在治疗中的药物的用途。

本发明还提供了制备2-氟-N-甲基-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苯甲酰胺的二盐酸盐的方法，该方法包括：

a)将包括2-氟-N-甲基-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苯甲酰胺和水的第一混合物与至少两当量的盐酸在包括水的溶剂中反应，以形成第二混合物；且

b)将第二混合物与甲基叔丁基醚化合。

本发明还提供了制备2-氟-N-甲基-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苯甲酰胺的二盐酸盐的方法，该方法包括：

a)将包括2-氟-N-甲基-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苯甲酰胺和甲醇的第一混合物与至少两当量的盐酸在包括异丙醇的溶剂中反应，以形成第二混合物；且

b)将第二混合物与丙酮化合。

本发明还提供了制备2-氟-N-甲基-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苯甲酰胺的二苯磺酸盐的方法，该方法包括：

a)将包括2-氟-N-甲基-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苯甲酰胺和甲醇的第一混合物与至少两当量的苯磺酸在包括异丙醇的溶剂中反应，以形成第二混合物；且

b)将第二混合物与甲基叔丁基醚化合。

本发明还提供了制备式I的化合物或其盐的方法：

该方法包括将式II的化合物

与式III的化合物

反应，以形成式I的化合物或其盐；

其中，X₁是氯、溴或碘。

本发明还提供了制备式I的化合物的方法：

该方法包括：

a)将式II的化合物

与式VII的化合物

反应，以形成式VI的化合物：

且

b)在催化剂的存在下，将式VI的化合物与Zn(CN)₂和Zn反应。

其中，X₆是氯、溴或碘。

本发明还提供了式III的化合物或其盐：

本发明还提供了式II的化合物：

其中，X₁是氯、溴或碘。

附图简述

图1示出了根据实施例1的方法制备的本发明的二盐酸盐的X-射线粉末衍射(XRPD)的图像特征。

图2示出了根据实施例1的方法制备的本发明的二盐酸盐的差示扫描量热法(DSC)的微量特征。

图3示出了根据实施例1的方法制备的本发明的二盐酸盐的热解重量分析(TGA)的差示热分析图特征。

图4示出了根据实施例5的方法制备的本发明的二苯磺酸盐的X-射线粉末衍射(XRPD)的图像特征。

图5示出了根据实施例5的方法制备的本发明的二苯磺酸盐的差示扫描量热法(DSC)的微量特征。

详述

本发明尤其提供了c-Met激酶抑制剂2-氟-N-甲基-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苯甲酰胺的二盐酸盐和二苯磺酸盐(见上面的式I)。本发明的盐的优势在于：其可以晶态形式获得，这使得其特别适合用在药物配方中。

二盐酸盐

可通过将2-氟-N-甲基-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苯甲酰胺与摩尔过量的盐酸化合来制备二盐酸盐，如下面的实施例1所描述。可获得二盐酸盐的晶态固体，如图1中示出的XRPD图像所显示(还参见下面的实施例2)。还可获得二盐酸盐的水合物，基于图3中示出的TGA结果(还参见下面的实施例4)。DSC表明，二盐酸盐在约220℃到约224℃熔化，或更特别地在约222℃熔化(见图2和实施例3)。发现二盐酸盐于25℃下的溶解度是：在水中为约4.5mg/mL；在pH 7.4的缓冲液中为0.002mg/mL；在pH 8.0的缓冲液中为0.002mg/mL；以及在0.1N HCl水溶液中为约24mg/mL。发现具有良好的溶解度特性的通过实施例1的方法制备的盐是期望地可重复的。

在一些实施方案中，二盐酸盐的X-射线粉末衍射图像包括在2θ角度约26.0处表达的特征峰。在一些实施方案中，二盐酸盐的X-射线粉末衍射图像包括在2θ角度约24.7处表达的特征峰。在一些实施方案中，二盐酸盐的X-射线粉末衍射图像包括在2θ角度约18.2处表达的特征峰。在一些实施方案中，二盐酸盐的X-射线粉末衍射图像包括在2θ角度约29.3处表达的特征峰。在一些实施方案中，二盐酸盐的X-射线粉末衍射图像包括在2θ角度约26.0和24.7处表达的特征峰。在一些实施方案中，二盐酸盐的X-射线粉末衍射图像包括在2θ角度约7.8处表达的特征峰。在一些实施方案中，二盐酸盐的X-射线粉末衍射图像包括在2θ角度约26.0、24.7、18.2和29.3处表达的特征峰。在一些实施方案中，二盐酸盐的X-射线粉末衍射图像包括在2θ角度约7.8、26.0、24.7、18.2和29.3处表达的特征峰。

二苯磺酸盐

可通过将2-氟-N-甲基-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苯甲酰胺与摩尔过量的苯磺酸化合来制备二苯磺酸盐(dibenzenesulfonic acid salt)(二苯磺酸盐(di-besylate salt))，如下面的实施例5所描述。可获得二苯磺酸盐的晶态固体，如图4中示出的XRPD图像所显示(还参见下面的实施例5)。DSC表明，二苯磺酸盐在约268℃到约272℃熔化，或更特别地在约270℃熔化(见图5和实施例7)。发现二苯磺酸盐于25℃下的溶解度是：在水中为约3.9mg/mL；在pH 7.4的缓冲液中为0.003mg/mL；在pH 8.0的缓冲液中为0.003mg/mL；且在0.1N HCl水溶液中为至少29mg/mL。

在一些实施方案中，本发明提供了二苯磺酸盐的具体形式，该二苯磺酸盐的X-射线粉末衍射图像包括在2θ角度约20.2处表达的特征峰。在一些实施方案中，二苯磺酸盐的X-射线粉末衍射图像包括在2θ角度约15.0处表达的特征峰。在一些实施方案中，二苯磺酸盐的X-射线粉末衍射图像包括在2θ角度约16.3处表达的特征峰。在一些实施方案中，二苯磺酸盐的X-射线粉末衍射图像包括在2θ角度约18.3处表达的特征峰。在一些实施方案中，二苯磺酸盐的X-射线粉末衍射图像包括在2θ角度约23.8处表达的特征峰。在一些实施方案中，二苯磺酸盐的X-射线粉末衍射图像包括在2θ角度约4.9处表达的特征峰。在一些实施方案中，二苯磺酸盐的X-射线粉末衍射图像包括在2θ角度约15.0、16.3、18.3、20.2和23.8处表达的特征峰。在一些实施方案中，二苯磺酸盐的X-射线粉末衍射图像包括在2θ角度约15.0、16.3、18.3、20.2、23.8和4.9处表达的特征峰。

定义和另外的实施方案

本发明包括上述盐的水合物或溶剂合物。溶剂合物是指溶剂包含在晶格内或作为晶格组分的盐。如本文使用的术语“水合物”是特定的溶剂合物，其中溶剂是水，且意图指具有水合作用的水的物质。水合物实例包括半水合物、一水合物、二水合物等等。

在一些实施方案中，本发明的盐是晶态。如本文使用的“晶态”物质是指包含至少一些晶态材料的物质。可通过例如XRPD的方法来检测晶态物质的存在。本发明的盐可以不同的晶态形式结晶，不同的晶态形式具有不同的晶格，且因此具有不同的物理性质。一些晶态形式可具有不同的水含量或溶剂含量。可通过固态表征方法例如通过X-射线粉末衍射(XRPD)来鉴定不同的晶格。其他表征方法例如差示扫描量热法(DSC)、热解重量分析(TGA)、动态蒸气吸收(DVS)及类似方法进一步辅助鉴定晶态形式和辅助测定稳定性和溶剂/水含量。

特定物质如本发明的盐的不同晶态形式可包括该物质的无水形式和该物质的溶剂合物/水合物形式两者，其中无水形式和溶剂合物/水合物形式中的每一种通过不同的XRPD图像且由此表示不同的晶格来互相区分。在一些实例中，单一的晶态形式(例如，通过单独的XRPD图像鉴定)可具有可变的水含量或溶剂含量，其中，除相对于水和/或溶剂的组成变化之外，晶格基本上保持不变(如XRPD图像所表示的)。

反射(峰)的XRPD图像通常被认为是特定的晶态形式的指纹。众所周知，XRPD峰的相对强度可广泛地变化，这尤其取决于样品制备技术、晶体尺寸分布、所使用的各种滤光片、样品测定程序和所使用的特定仪器。在一些实例中，可观察到新的峰，或现有峰可消失，这取决于仪器的类型或设置。如本文使用的术语“峰”是指具有最大峰高度/强度的至少约4％的相对高度/强度的反射。此外，仪器变化和其他因素可影响2θ值。因此，如本文报道的那些的峰排布可变化正或负约0.2°(2θ)，且如本文XRPD的上下文中使用的术语“基本上”是指包括上述变化。

以相同的方式，与DSC、TGA或其他热实验相关的温度读数可变化约±3℃，这取决于仪器、具体设置、样品制备等等。因此，本文报道的具有“基本上”如附图中任一张所显示的DSC差示热分析图的固体形式或晶态形式应被理解为适应这样的变化。

本发明的盐还可包括存在于盐中的原子的所有同位素。同位素包括具有相同原子序数但具有不同质量数的那些原子。例如，氢的同位素包括氚和氘。

本发明的盐及其固体形式可被发现与其他物质在一起，或可被分离。在一些实施方案中，本发明的盐或其固体形式是基本上分离的。“基本上分离”是指盐至少部分或基本上从其中形成或检测其的环境中分离。部分分离可包括，例如富含本发明的盐的组合物。基本分离可包括包含以下的组合物：按重量计至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约97％、或至少约99％的本发明的盐。用于分离化合物及其盐的方法是本领域的常规方法。

方法

用本发明的盐治疗表达蛋白激酶的细胞(在体内或在体外)可导致抑制配体/激酶信号传导途径和抑制与信号传导途径相关的下游事件，例如细胞增殖和增加的细胞运动性。例如，本发明的盐可阻断和/或损害由c-Met途径活化产生的生物化学过程和生物学过程，c-Met途径活化包括但不限于：c-Met激酶活化(例如，c-Met磷酸化)和信号传导(细胞底物如Gab1、Grb2、Shc和c-Cb1的活化和募集，和随后的包括PI-3激酶、PLC-γ、STAT、ERK1/2和FAK的多种信号转导物的活化)、细胞增殖和存活、细胞运动性、细胞迁移和侵入、转移、血管发生等。因此，本发明还提供了通过使细胞与本发明的盐接触来抑制配体/激酶信号传导途径的方法，所述配体/激酶信号传导途径例如细胞中的HGF/c-Met激酶信号传导途径。本发明还提供了通过使细胞与本发明的盐接触来抑制细胞的增殖活性或抑制细胞运动性的方法。

本发明还提供了治疗个体(例如患者)中与失调的激酶信号传导途径有关的疾病的方法，所述失调的激酶信号传导途径包括蛋白激酶的异常活性和/或过度表达，该方法是通过向需要这样的治疗的个体施用治疗有效量或剂量的本发明的盐或其药物组合物。在一些实施方案中，失调的激酶是Met家族(例如c-Met、Ron或Sea)。在一些实施方案中，失调的激酶在患者的患病组织中被过度表达。在一些实施方案中，失调的激酶在患者的患病组织中是异常活跃的。c-Met和HGF/c-Met信号传导途径的失调意图包括酶通过多种机制的活化，多种机制包括但不限于：HGF-依赖性自分泌和旁分泌活化、c-met基因过度表达和扩增、点突变、缺失、平截、重排、以及异常的c-Met受体加工和有缺陷的负调节机制。

在一些实施方案中，本发明的盐用于治疗以下疾病，例如癌症、动脉粥样硬化、肺纤维化、肾纤维化和再生、肝病、变应性紊乱、炎性疾病、自身免疫性疾患、脑血管疾病、心血管疾病、或与器官移植有关的病症。在另外的实施方案中，本发明的化合物可用于抑制患者的肿瘤生长或肿瘤转移的方法。

通过本文的方法可治疗的癌症的实例包括膀胱癌、乳腺癌、子宫颈癌、胆管癌、直肠结肠癌、食道癌、胃癌、头颈癌、肾癌、肝癌、肺癌、鼻咽癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、甲状腺癌、骨肉瘤、滑膜肉瘤、横纹肌肉瘤、MFH/纤维肉瘤、平滑肌肉瘤、卡波西肉瘤、多发性骨髓瘤、淋巴瘤、成人T细胞白血病、急性髓细胞性白血病、慢性髓细胞样白血病、成胶质细胞癌、星形细胞瘤、黑素瘤、间皮瘤或维耳姆斯瘤及类似疾病。

如本文使用的术语“细胞”意指在体外、离体或体内的细胞。在一些实施方案中，离体细胞可以是从生物体如哺乳动物切除的组织样品的一部分。在一些实施方案中，体外细胞可以是细胞培养物中的细胞。在一些实施方案中，体内细胞是存活在生物体如哺乳动物中的细胞。

如本文使用的术语“接触”是指将所指的部分在体外系统或体内系统中放在一起。例如，将本发明的化合物与蛋白激酶“接触”包括向个体或患者如人类施用本发明的化合物，以及例如，将本发明的化合物导入包含蛋白激酶的细胞制品或纯化制品的样品中。

如本文使用的可互换地使用的术语“个体”或“患者”是指任何动物，包括哺乳动物，优选小鼠、大鼠、其他啮齿类、兔、狗、猫、猪、牛、羊、马或灵长类，且最优选人类。

如本文使用的术语“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”是指以下的一种或多种：(1)预防疾病；例如，预防可能易感染疾病、病症或疾患但还未经历或显示疾病的病理或症状的个体中的疾病、病症或疾患；(2)抑制疾病；例如，抑制经历或显示疾病、病症或疾患的病理或症状的个体中的疾病、病症或疾患；以及(3)改善疾病；例如，改善经历或显示疾病、病症或疾患的病理或症状的个体中疾病、病症或疾患(即，逆转病理和/或症状)，如降低疾病的严重性。

联合治疗

一种或多种另外的药剂或治疗方法可与本发明的盐组合使用，用于治疗本文所述的疾病、疾患或病症，所述药剂或治疗方法诸如例如，化学疗法、抗癌剂、细胞毒素剂或抗癌疗法(例如放射、激素，等等)。药剂或疗法可与本发明的盐一起施用(例如，结合成单一的剂量形式)，或药剂或疗法可通过不同的施用途径同时施用或连续施用。

合适的抗癌剂包括激酶抑制剂，激酶抑制剂包括：曲妥单抗(Herceptin)、伊马替尼(Gleevec)、吉非替尼(Iressa)、盐酸厄洛替尼(Tarceva)、西妥昔单抗(Erbitux)、贝伐单抗(Avastin)、索拉非尼(Nexavar)、舒尼替尼(Sutent)和在以下专利中描述的RTK抑制剂：例如WO 2005/004808、WO 2005/004607、WO 2005/005378、WO 2004/076412、WO 2005/121125、WO 2005/039586、WO 2005/028475、WO 2005/040345、WO 2005/039586、WO 2003/097641、WO 2003/087026、WO 2005/040154、WO 2005/030140、WO 2006/014325、WO 2005/070891、WO 2005/073224、WO 2005/113494和美国专利申请公布第2005/0085473号、第2006/0046991号和第2005/0075340号。

合适的化疗剂或其他抗癌剂还包括：例如烷化剂(包括但不限于氮芥、乙烯亚胺衍生物、烷基磺酸酯、亚硝基脲和三氮烯)，如尿嘧啶芥、氮芥、环磷酰胺(Cytoxan^TM)、异磷酰胺、美法仑、苯丁酸氮芥、哌泊溴烷、三乙烯三聚氰胺、三乙烯硫代磷胺(triethylenethiophosphoramine)、白消安、卡莫司汀、洛莫司汀、链佐星、达卡巴嗪和替莫唑胺。

合适的化疗剂或其他抗癌剂还包括：例如抗代谢物(包括但不限于叶酸拮抗物、嘧啶类似物、嘌呤类似物和腺苷脱氨酶抑制剂)，如甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶、氟尿苷、阿糖胞苷、6-巯嘌呤、6-硫鸟嘌呤、磷酸氟达拉滨、喷司他丁和吉西他滨。

合适的化疗剂或其他抗癌剂还包括：例如某些天然产物及其衍生物(例如长春花生物碱、抗肿瘤抗生素、酶、淋巴因子和表鬼臼毒素)，如长春碱、长春新碱、长春地辛、博来霉素、更生霉素、柔红霉素、多柔比星、表柔比星、伊达比星、胞嘧啶阿拉伯糖苷、紫杉醇(Taxol^TM)、普卡霉素、脱氧柯福霉素、丝裂霉素C、L-天冬酰胺酶、干扰素(特别是IFN-a)、依托泊苷和替尼泊苷。

其他细胞毒素剂包括诺维本、CPT-11、阿那曲唑、来曲唑、卡培他滨、雷洛昔芬、环磷酰胺、异磷酰胺和屈洛昔芬。

同样合适的细胞毒素剂如表叶毒素；抗瘤酶；拓扑异构酶抑制剂；丙卡巴肼；米托蒽醌；铂配位络合物，如顺铂和碳铂；生物反应调节物；生长抑制剂；抗激素治疗剂；甲酰四氢叶酸；替加氟；和造血生长因子。

其他抗癌剂包括抗体治疗剂，例如曲妥单抗(Herceptin)、对共刺激分子的抗体如CTLA-4、4-1BB和PD-1、或对细胞因子的抗体(IL-10、TGF-β，等等)。另外的抗体治疗剂包括对酪氨酸激酶和/或其配体的抗体，例如抗-HGF抗体和/或抗-c-Met抗体。术语“抗体”意指包括全部抗体(例如单克隆抗体、多克隆抗体、嵌合抗体、人化抗体、人类抗体等等)，以及其抗原结合片段。

其他抗癌剂还包括阻断免疫细胞迁移的那些，例如对包括CCR2和CCR4的趋化因子受体的抗体。

其他抗癌剂还包括增进免疫系统的那些，例如佐剂或过继T细胞转移。

其他抗癌剂包括抗癌疫苗，例如树突细胞、合成肽、DNA疫苗和重组体病毒。

用于安全和有效施用的大部分的上述药剂的方法是本领域技术人员已知的。此外，在标准文献中描述了其施用。例如，在“Physicians′Desk Reference (医师案头参考)”(PDR，例如，1996版，Medical Economics Company，Montvale，NJ)中描述了多种化疗剂的施用，其公开内容在此通过引用并入，就如以其整体列出。

中间体和方法

在一些实施方案中，本发明提供了通过包括以下的方法制备特定形式的二盐酸盐的方法：

a)将包括2-氟-N-甲基-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苯甲酰胺和水的第一混合物与至少两当量的盐酸在包括水的溶剂中反应，以形成第二混合物；且

b)使第二混合物与甲基叔丁基醚化合。

在一些实施方案中，步骤a)在约20℃到约30℃的温度下进行。

在一些实施方案中，步骤a)和b)在约室温下进行。

在一些实施方案中，本发明提供了通过包括以下的方法制备特定形式的二盐酸盐的方法：

a)将包括2-氟-N-甲基-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苯甲酰胺和甲醇的第一混合物与至少两当量的盐酸在包括异丙醇的溶剂中反应，以形成第二混合物；且

b)使第二混合物与丙酮化合。

在一些实施方案中，步骤a)和b)在约50℃到约60℃的温度下进行。

在一些实施方案中，步骤a)和b)在约55℃的温度下进行。

在一些实施方案中，本发明提供了制备特定形式的二苯磺酸盐的方法，包括：

a)将包括2-氟-N-甲基-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苯甲酰胺和甲醇的第一混合物与至少两当量的苯磺酸在包括异丙醇的溶剂中反应；且

b)使第二混合物与甲基叔丁基醚化合。

在一些实施方案中，步骤a)和b)在约50℃到约60℃的温度下进行。在一些实施方案中，步骤a)和b)在约55℃的温度下进行。

本发明还提供了尤其是对制备2-氟-N-甲基-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苯甲酰胺及其盐(包括本发明的盐)有用的方法和中间体。

例如，在一些实施方案中，本发明提供了式III的化合物或其盐：

本发明还提供了式II的化合物：

其中，X₁是氯、碘或溴。

在一些实施方案中，X₁是氯。

本发明还提供了制备式I的化合物或其盐的方法：

该方法包括将式II的化合物

与式III的化合物

反应，以形成式I的化合物或其盐；

其中，X₁是氯、溴或碘。

在一些实施方案中，X₁是氯。

在一些实施方案中，反应是在溶剂如乙二醇中进行的。在一些实施方案中，反应在从约120℃到约150℃，或从约130℃到约140℃的温度下进行。在一些实施方案中，反应进行约三小时到约四小时。

在一些实施方案中，该方法还包括将式I的化合物或其盐与强酸反应，以形成式IV的化合物或其盐：

在一些实施方案中，酸是盐酸或氢溴酸。在一些实施方案中，酸是浓盐酸。

在一些实施方案中，式I的化合物与强酸的反应在从约80℃到约120℃、从约90℃到约110℃，或约100℃的温度下进行。在一些实施方案中，反应进行约15小时到约24小时，或约18小时。

在一些实施方案中，该方法还包括将式IV的化合物或其盐与CH₃NH₂在至少一种偶联剂的存在下反应，以形成式V的化合物或其盐：

在一些实施方案中，偶联剂选自1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)碳二亚胺(EDC)、N-羟基苯并三唑(HOBt)、六氟磷酸(苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷磷(PyBOP)及其盐。

在一些实施方案中，式IV的化合物与CH₃NH₂的反应在从约15℃到约40℃、从约15℃到约25℃、约30℃或约室温下的温度下进行。在一些实施方案中，反应在包括但不限于乙腈的溶剂中进行。在一些实施方案中，反应在包括但不限于叔胺如三乙胺的碱存在下进行。在一些实施方案中，CH₃NH₂以约1当量到约10当量、约2当量到约8当量或约3当量到约6当量的量存在。

在一些实施方案中，该方法还包括：

a)将式IV的化合物或其盐

与卤化剂反应，以形成式VI的化合物或其盐

且

b)将式VI的化合物或其盐与CH₃NH₂反应，以形成式V的化合物或其盐

其中，X₂是卤素。

在一些实施方案中，X₂是氯。在一些实施方案中，卤化剂是亚硫酰氯。在一些实施方案中，卤化剂是乙二酰氯。

在一些实施方案中，式IV的化合物与卤化剂的反应在从约50℃到约80℃、从约60℃到约75℃或约72℃的温度下进行。在一些实施方案中，反应在包括但不限于甲苯的溶剂中进行。在一些实施方案中，卤化剂以约1当量到约20当量、约8当量到约12当量或约10当量的量存在。

在一些实施方案中，式VI的化合物与CH₃NH₂的反应在从约0℃到约35℃、从约0℃到约10℃或约室温的温度下进行。在一些实施方案中，反应在包括但不限于四氢呋喃的溶剂中进行。在一些实施方案中，CH₃NH₂以约1当量到约20当量、约8当量到约12当量或约10当量的量存在。

在一些实施方案中，步骤b)在碱(例如叔胺)的存在下进行。

在一些实施方案中，该方法还包括通过包括将式IIa的化合物

与式IIb的化合物

反应的方法制备式II的化合物

II

其中，X₁是氯、溴或碘。

在一些实施方案中，X₁是氯。

在一些实施方案中，反应在脯氨酸的存在下进行。在一些实施方案中，反应在脯氨酸和苯甲酸的存在下进行。在一些实施方案中，式IIa的化合物与式IIb的化合物的反应在从约0℃到约50℃、从约20℃到约40℃或约20℃的温度下进行。在一些实施方案中，反应在包括但不限于二氯甲烷的溶剂中进行。在一些实施方案中，式IIb的化合物以约1当量到约2当量、约1当量到约1.5当量、约1当量到约1.2当量或约1.05当量的量存在。在一些实施方案中，脯氨酸以约0.1当量到约0.5当量或约0.1当量到约0.2当量的量存在。在一些实施方案中，脯氨酸以约0.1当量的量存在，且苯甲酸以约0.1当量的量存在。

在一些实施方案中，该方法还包括通过包括以下的方法制备式IIa的化合物：将式IIc的化合物与丙-2-烯-1-醇在钯催化剂和碱的存在下反应：

其中，X₃是氯、溴或碘。

在一些实施方案中，X₃是溴。

在一些实施方案中，使用了Heck偶联反应的条件，使用钯(0)或钯(II)催化剂，且在本领域已知的条件下进行(见，例如，Melpolder和Heck，J.Org.Chem.1976，41，265-272，或Littke和Fu，J.Am.Chem.Soc.2001，123，6989-7000，以上两篇文献在此以其整体并入)。在一些实施方案中，钯催化剂是Pd₂(dba)₃(三(二亚苄基丙酮)二钯(0))。在一些实施方案中，钯催化剂以约0.01当量到约0.1当量、约0.01当量到约0.05当量、约0.01当量到约0.02当量、或约0.015当量的量存在。在一些实施方案中，反应还包括在膦配体或其盐的存在下反应。在一些实施方案中，膦配体或其盐是三(叔丁基)膦四氟硼酸盐。在一些实施方案中，配体以约0.01当量到约0.05当量或约0.03当量的量存在。

在一些实施方案中，碱是无机碱。在一些实施方案中，碱是有机碱。在一些实施方案中，碱是叔胺，包括但不限于N-甲基-N-环己基环己胺。在一些实施方案中，碱是碱金属碳酸盐。在一些实施方案中，碱以约1当量到约5当量、约1当量到约2当量、约1当量到约1.5当量、或约1.2当量的量存在。

在一些实施方案中，式IIc的化合物与丙-2-烯-1-醇的反应在从约40℃到约80℃、从约50℃到约70℃或从约50℃到约55℃的温度下进行。在一些实施方案中，反应在包括但不限于二噁烷的溶剂中进行。在一些实施方案中，丙-2-烯-1-醇以约1当量到约3当量、或约2当量的量存在。

在一些实施方案中，该方法还包括通过包括以下的方法制备式IIa的化合物：将式IId的化合物与式HX’的酸反应：

其中，X’是氯、溴或碘。

在一些实施方案中，X’是氯。

在一些实施方案中，式IId的化合物与酸的反应在从约0℃到约20℃、从约0℃到约10℃或从约0℃到约5℃的温度下进行。在一些实施方案中，反应在包括但不限于乙酸乙酯的溶剂中进行。

在一些实施方案中，该方法还包括通过包括以下的方法制备式IId的化合物：在氢化催化剂的存在下，用氢气还原式IIe的化合物：

在一些实施方案中，氢化催化剂是钯碳。在一些实施方案中，氢气为约1大气压的压力。在一些实施方案中，式IIe的化合物与氢气的反应在约室温下进行。

在一些实施方案中，该方法还包括通过包括以下的方法制备式IIe的化合物：在偶联催化剂和碱的存在下，将式IIc的化合物与式IIf的化合物反应(Sonogashira偶联使用，例如，Ziesel或Kelly的方法，Suffert和Ziesel，Tetrahedron Lett.1991，32，757；Kelly，Lee和Mears，J Org.Chem.1997，62，2774)：

在一些实施方案中，偶联催化剂是钯催化剂，包括但不限于醋酸钯。在一些实施方案中，催化剂是醋酸钯和CuI的混合物。在一些实施方案中，碱是无机碱。在一些实施方案中，碱是有机碱。在一些实施方案中，碱是叔胺，包括但不限于三乙胺。在一些实施方案中，碱是碱金属碳酸盐。在一些实施方案中，碱以约2当量到约10当量、约4当量到约9当量、约6当量到约8当量、或约7.2当量的量存在。

在一些实施方案中，反应还包括在包括但不限于三苯基膦的膦配体或其盐的存在下反应。在一些实施方案中，醋酸钯以约0.01当量到约0.05当量或约0.03当量的量存在。在一些实施方案中，碘化铜(I)以约0.005当量到约0.2当量或约0.01当量的量存在。在一些实施方案中，膦配体或其盐以约0.005当量到约0.2当量或约0.012当量的量存在。

在一些实施方案中，反应在从约70℃到约100℃、从约80℃到约100℃或约90℃的温度下进行。在一些实施方案中，反应在包括但不限于二甲基甲酰胺的溶剂中进行。在一些实施方案中，式IIf的化合物以约1当量到约3当量或约2当量的量存在。

在一些实施方案中，该方法还包括通过包括以下的方法制备式IId的化合物：

将式IIg的化合物

与9-硼双环[3.3.1]壬烷(9-BBN)反应，随后与式IIc的化合物

在偶联催化剂的存在下反应，以形成式IId的化合物，其中X₃是氯、溴或碘。

在一些实施方案中，X₃是氯。

在一些实施方案中，直接加入9-BBN。在一些实施方案中，9-BBN原位生成(Soderquist和Negron，J.Org.Chem.，1987，52，3441-3442)。在一些实施方案中，式IIg的化合物以约1当量到约3当量、或约1.5当量到约2.5当量、或约1.75当量的量存在。

在一些实施方案中，利用偶联反应条件，使用钯(0)或钯(II)催化剂，且在本领域已知的条件下进行(见，例如，Miyaura和Suzuki，Chem.Rev.1995，95，2457-2483，该文献在此以其整体并入)。在一些实施方案中，钯催化剂是醋酸钯(II)。在一些实施方案中，钯催化剂以约0.01当量到约0.1当量、约0.01当量到约0.1当量、约0.02当量到约0.07当量、或约0.05当量的量存在。

在一些实施方案中，反应还包括在膦配体或其盐的存在下反应。在一些实施方案中，膦配体是三环己基膦。在一些实施方案中，膦配体或其盐以约0.05当量到约0.2当量、或约0.1当量的量存在。

在一些实施方案中，第二步骤在包括但不限于四氢呋喃、水或其混合物的溶剂中进行。

在一些实施方案中，第二步骤在回流温度下进行。

在一些实施方案中，该方法还包括通过包括以下的方法制备式III的化合物：在钯催化剂和碱的存在下，将式IIIa的化合物

与式IIIb的化合物反应

其中X₄是氯、溴或碘；且

每一个R_a独立地是C_1-6烷基；或

每一个R_a与两个氧原子和硼原子一起形成5-元杂环或6-元杂环；其中，杂环任选地被1、2、3或4个独立地选择的C_1-4烷基取代。

在一些实施方案中，X₄是溴。

在一些实施方案中，式IIIb的化合物具有式IIIb-1：

在一些实施方案中，X₄是溴。

在一些实施方案中，利用Suzuki偶联反应条件，使用钯(0)或钯(II)催化剂，且在本领域已知的条件下进行(见，例如，Miyaura和Suzuki，Chem.Rev.1995，95，2457-2483，该文献在此以其整体并入)。在一些实施方案中，钯催化剂是1，1’-双(二苯基膦)二茂铁二氯化钯(II)(Pd(dppf)₂Cl₂)。在一些实施方案中，钯催化剂以约0.1当量到约0.5当量、约0.2当量到约0.4当量、或约0.3当量的量存在。

在一些实施方案中，碱是无机碱。在一些实施方案中，碱是有机碱。在一些实施方案中，碱是叔胺。在一些实施方案中，碱是碱金属碳酸盐(例如，碳酸钾或碳酸钠)。

在一些实施方案中，反应在从约60℃到约100℃、从约70℃到约90℃、从约80℃到约90℃、或约86℃的温度下进行。在一些实施方案中，反应在包括但不限于二噁烷的溶剂中进行。在一些实施方案中，式IIIb或IIIb-1的化合物以约1当量到约2当量、或约1.3当量的量存在。

在一些实施方案中，该方法还包括通过将1，2，4-三嗪-3-胺与卤化剂反应制备式IIIa的化合物。

在一些实施方案中，X₄是溴；且卤化剂是N-溴代琥珀酰亚胺。在一些实施方案中，卤化剂以约1当量到约2当量、或约1当量到约1.1当量的量存在。

在一些实施方案中，该方法还包括通过包括将乙二醛与氨基胍或其盐反应的方法制备1，2，4-三嗪-3-胺。

在一些实施方案中，该方法还包括通过包括以下的方法制备式IIIb-1的化合物：

a)将式IIIc的化合物

与式R₁MgY的试剂反应，随后与式B(OR₂)₃的化合物反应，以形成式IIId的化合物：

且

b)在步骤a)的反应之后，将式IIId的化合物与酸反应，随后与频哪醇反应，以形成式IIIb-1的化合物；

其中

R₁是C_1-6烷基；

每一个R₂独立地是C_1-6烷基；且

X₅是氯、溴或碘。

在一些实施方案中，X₅是溴。在一些实施方案中，R₁是异丙基。在一些实施方案中，R₂是甲基。在一些实施方案中，B(OR₂)₃以约1当量到约2当量、或约1.4当量的量存在。在一些实施方案中，步骤a)在从约0℃到约25℃、或从约7℃到约16℃的温度下进行。

在一些实施方案中，频哪醇以约1当量到约3当量、或约2当量的量存在。在一些实施方案中，步骤b)在从约室温到约50℃的温度下进行。在一些实施方案中，步骤b)在包括但不限于环己烷的溶剂中进行。

本发明还提供了制备式I的化合物或其盐的方法：

该方法包括：

a)将式II的化合物

与式VII的化合物

反应，以形成式VIa的化合物：

且

b)在催化剂的存在下，将式VIa的化合物与Zn(CN)₂和Zn反应，以形成式I的化合物或其盐；

其中，X₆是氯、溴或碘。

在一些实施方案中，通过上述的方法步骤，将式I的化合物被转化成式V的化合物。

在一些实施方案中，X₆是溴。

在一些实施方案中，式II的化合物和式VII的化合物分别以约1.1当量到约0.67当量存在。在一些实施方案中，步骤a)在包括但不限于1-丁醇的溶剂中进行。在一些实施方案中，步骤a)在约100℃到约120℃、或约110℃的温度下进行。

在一些实施方案中，催化剂是钯(II)或钯(0)催化剂。在一些实施方案中，催化剂还包括膦配体。在一些实施方案中，催化剂是1，1’-双(二苯基膦)二茂铁二氯化钯(II)(Pd(dppf)₂Cl₂)。在一些实施方案中，Zn以约0.1当量到约0.3当量、或约0.2当量的量存在。在一些实施方案中，Zn(CN)₂以约0.5当量到约1当量、或约0.6当量的量存在。在一些实施方案中，催化剂以约0.03当量到约0.1当量、或约0.06当量的量存在。在一些实施方案中，步骤b)在包括但不限于二甲基乙酰胺、水或其混合物的溶剂中进行。在一些实施方案中，步骤b)在约100℃到约120℃、或约110℃的温度下进行。

在一些实施方案中，方法还包括通过包括以下的方法制备式VII的化合物：将式VIII的化合物与氨基胍或其盐和碱反应：

其中，X₆是氯、溴或碘。

在一些实施方案中，X₆是溴。

在一些实施方案中，碱是碱金属氢氧化物(例如，氢氧化钠或氢氧化钾)。在一些实施方案中，碱是氢氧化钾。在一些实施方案中，氨基胍或其盐以约1当量到约3当量，或约2当量的量存在。在一些实施方案中，碱以约3当量到约5当量，或约4当量的量存在。在一些实施方案中，反应在从约60℃到约80℃、或约75℃的温度下进行。

在一些实施方案中，该方法还包括通过包括以下的方法制备形成式VIII的化合物：在酸的存在下，将式IX的化合物与原甲酸三乙酯反应，以形成式VIII的化合物：

其中，X₆是氯、溴或碘。

在一些实施方案中，X₆是溴。

在一些实施方案中，酸是对甲苯磺酸。在一些实施方案中，反应在从约100℃到约120℃、或约110℃的温度下进行。在一些实施方案中，原甲酸三乙酯以约1当量到约4当量、约2当量到约3当量、或约2.5当量的量存在。在一些实施方案中，酸以约0.1当量到约1当量、约0.2当量到约0.6当量、或约0.4当量的量存在。

在一些实施方案中，该方法还包括通过包括以下的方法制备式IX的化合物：将式X的化合物与强酸反应，以形成式IX的化合物：

其中，X₆是氯、溴或碘。

在一些实施方案中，X₆是溴。在一些实施方案中，酸具有式HX’，其中，X’是氯、溴或碘。在一些实施方案中，X’是溴。在一些实施方案中，反应在包括但不限于二甲基亚砜的溶剂中进行。在一些实施方案中，酸是与DMSO结合的HBr，如Floyd，Du，Fabio，Jacob和Johnson J.Org，Chem.，1985，50，5022-5027中所描述的。在一些实施方案中，强酸的加入在约室温下进行，且然后将反应混合物加热到从约50℃到约70℃，或约60℃的温度。

在一些实施方案中，该方法还包括通过包括以下的方法制备式X的化合物：将式XI的化合物与CH₃MgBr反应，以形成式X的化合物：

其中，X₆是氯、溴或碘。

在一些实施方案中，CH₃MgBr以约1当量到约3当量、或约1.7当量的量存在。在一些实施方案中，反应在约0℃到约15℃、约0℃到约5℃，或约0℃的温度下进行。

在一些实施方案中，该方法还包括通过包括以下的方法制备式XI的化合物：将式XII的化合物与乙二酰氯或亚硫酰氯反应，随后用二甲基羟胺或其盐处理，以形成式XI的化合物：

在一些实施方案中，反应用乙二酰氯进行。在一些实施方案中，乙二酰氯以约1当量到约2当量、或约1.4当量到约1.5当量的量存在。在一些实施方案中，反应在包括但不限于二氯甲烷的溶剂中进行。在一些实施方案中，反应在约室温的温度下进行。

在一些实施方案中，本文的实施方案所描述的中间体中的任一种可以作为自由基存在。在一些实施方案中，本文的实施方案所描述的中间体中的任一种可以作为盐存在。在一些实施方案中，本文所描述的中间体是水合物或溶剂合物的形式。

在一些实施方案中，本发明提供了上述单独的方法步骤或中间体化合物中的任一种。

本说明书中的多个位置，化合物的取代基以组或范围来公布。特别注意，该化合物包括这样的组和范围的成员的各个和每一个单独的子组合(subcombination)。例如，术语“C_1-6烷基”特别意图单独地公开甲基、乙基、C₃烷基、C₄烷基、C₅烷基和C₆烷基。

还应理解，在单独的实施方案的内容中为了清楚所描述的具体特征也可在单一的实施方案中组合地提供。相反，在单一的实施方案的内容中为了简便描述的各种特征也可单独地提供或以任一合适的子组合来提供。

如本文使用的词语“任选地取代的”是指未取代的或取代的。如本文使用的术语“取代的”是指氢原子被去除且被取代基替代。应理解，化合价限制在给定的原子上的取代。

如本文使用的单独使用的或与其他术语组合地使用的术语“C_n-m烷基”是指饱和烃，该饱和烃可以是具有n到m个碳原子的直链或支链。在一些实施方案中，烷基包含1到12、1到8、1到6，或1到4个碳原子。烷基部分的实例包括但不限于化学基团，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基、2-甲基-1-丁基、正戊基、3-戊基、正己基、1，2，2-三甲基丙基、正庚基、正辛基及类似基团。

如本文使用的在式-B(OR_a)₂部分的内容中的术语“5-元杂环或6-元杂环”是指具有5个环成员或6个环成员的饱和单环，包括两个氧原子和一个硼原子，其中，剩余的2个环成员或3个环成员是碳原子。

如本文使用的术语“约”是指值的正10％或负10％。

如本文使用的表达“环境温度”和如本文使用的表达“室温”在本领域是已知的，且通常是指温度例如反应温度，即，反应在约房间的温度下进行，例如从约20℃到约30℃的温度。

本文描述的方法可根据本领域已知的任何适当的方法来监控。例如，产物形成可通过光谱学方法来监控，例如核磁共振光谱(如，¹H或¹³C)、红外光谱或分光光度法(如，UV-可见光)；或通过色谱法，如高效液相色谱(HPLC)或薄层色谱(TLC)。

如本文使用的术语“反应”是如在本领域所已知地使用的，且通常是指化学试剂以这样的方式合在一起，以便使得其在分子水平的相互作用，以获得化学转化或物理转化。在一些实施方案中，反应包括两种试剂，其中，相对于第一试剂，使用一当量或多当量的第二试剂。本文描述的方法的反应步骤可在适合制备所确定的产物的条件下进行一段时间。

化合物还可包括本文描述的化合物和中间体的盐形式。盐(或盐形式)的实例包括但不限于碱性残基例如胺的无机盐或有机酸盐、酸性残基例如羧酸的碱盐或有机盐，及类似物。通常，盐形式可通过以下方式制备：将游离碱或游离酸与化学计算量的或过量的期望的形成盐的无机或有机的酸或碱在合适的溶剂或溶剂的多种组合中反应。

化合物和中间体还包括本文公开的化合物的药学上可接受的盐。如本文使用的术语“药学上可接受的盐”是指通过将药学上可接受的酸或碱加入到本文公开的化合物而形成的盐。如本文使用的词语“药学上可接受的”是指从毒物学角度来说，在药学应用中使用是可接受的且不与活性成分发生不利地相互作用的物质。药学上可接受的盐，包括单盐和双盐，包括但不限于从有机酸和无机酸衍生的那些盐，所述有机酸和无机酸例如但不限于醋酸、乳酸、柠檬酸、肉桂酸、酒石酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、丙二酸、扁桃酸、苹果酸、草酸、丙酸、盐酸、氢溴酸、磷酸、硝酸、硫酸、乙醇酸、丙酮酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、水杨酸、苯甲酸及相似地已知的可接受的酸。合适的盐的列表参见Remington′s Pharmaceutical Sciences(雷明顿的药物科学)，第17版，Mack Publishing Company，Easton，Pa.，1985，第1418页和Journalof Pharmaceutical Science，66，2(1977)，以上两篇文献在此通过引用以其整体并入。

化合物的制备可包括多种化学基团的保护和脱保护。本领域技术人员可容易地确定保护和脱保护的需要和合适的保护基团的选择。保护基团的化学可参见，例如，Greene等人，Protective Groups in Organic Synthesis(有机合成中的保护基)，第四版，Wiley & Sons，2007，此文献在此通过引用以其整体并入。本文描述的对保护基团的调整和形成方法及分裂方法可根据各种取代基的需要来调整。

本文描述的方法的反应可在适当的溶剂中进行，有机合成领域的技术人员可容易地选择该溶剂。适当的溶剂可以是在反应进行的温度下与起始物质(反应物)、中间体或产物基本上不反应的，例如，可以是从溶剂的凝固温度到溶剂的沸腾温度的范围内的温度。给定的反应可在一种溶剂或多于一种溶剂的混合物中进行。依据具体的反应步骤，可选择对于具体的反应步骤适当的溶剂。在一些实施方案中，反应可在没有溶剂的情况下进行，例如，当试剂的至少一种是液体或气体时。

适当的溶剂可包括卤化溶剂，例如四氯化碳、溴二氯甲烷、二溴氯甲烷、溴仿、氯仿、溴氯甲烷、二溴甲烷、氯丁烷、二氯甲烷、四氯乙烯、三氯乙烯、1，1，1-三氯乙烷、1，1，2-三氯乙烷、1，1-二氯乙烷、2-氯丙烷、α，α，α-三氟甲苯、1，2-二氯乙烷、1，2-二溴乙烷、六氟苯、1，2，4-三氯苯、1，2-二氯苯、氯苯、氟苯、其混合物及类似物。

适当的醚溶剂包括：二甲氧基甲烷、四氢呋喃、1，3-二噁烷、1，4-二噁烷、呋喃、乙醚、乙二醇二甲醚、乙二醇二乙醚、二乙二醇二甲醚、二乙二醇二乙醚、三乙二醇二甲醚、苯甲醚、叔丁基甲醚、其混合物及类似物。

适当的质子溶剂可包括，举例来说但不限于：水、甲醇、乙醇、2-硝基乙醇、2-氟乙醇、2，2，2-三氟乙醇、乙二醇、1-丙醇、2-丙醇、2-甲氧基乙醇、1-丁醇、2-丁醇、异丁醇、叔丁醇、2-乙氧基乙醇、二乙二醇、1-戊醇、2-戊醇或3-戊醇、新戊醇、叔戊醇、二乙二醇单甲醚、二乙二醇单乙醚、环己醇、苯甲醇、苯酚或丙三醇。

适当的非质子溶剂可包括，举例来说但不限于：四氢呋喃(THF)、N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、N，N-二甲基乙酰胺(DMA)、1，3-二甲基-3，4，5，6-四氢-2(1H)-嘧啶酮(DMPU)、1，3-二甲基-2-咪唑烷酮(DMI)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、甲酰胺、N-甲基乙酰胺、N-甲基甲酰胺、乙腈、二甲基亚砜、丙腈、甲酸乙酯、乙酸甲酯、六氯丙酮、丙酮、甲乙酮、乙酸乙酯、环丁砜、N，N-二甲基丙酰胺、四甲基脲、硝基甲烷、硝基苯或六甲基磷酰胺。

适当的烃溶剂包括：苯、环己烷、戊烷、己烷、甲苯、环庚烷、甲基环己烷、庚烷、乙苯、间二甲苯、邻二甲苯或对二甲苯、辛烷、茚满、壬烷或萘。

超临界二氧化碳和离子液体也可用作溶剂。

本文描述的方法的反应可在适当的温度下进行，本领域技术人员可容易地确定该适当的温度。反应温度将取决于，例如：试剂和溶剂的熔点和沸点(如果存在的话)；反应的热力学(如，强烈的放热反应可能需要在降低的温度下进行)；和反应的动力学(如，高的活化能垒可能需要提高的温度)。“提高的温度”是指在室温(约22℃)之上的温度。

本文描述的方法的反应可在空气中或在惰性气氛下进行。通常，包含基本上与空气反应的试剂或产物的反应可使用本领域技术人员众所周知的空气-敏感性合成技术来进行。

在一些实施方案中，化合物的制备可包括加入酸或碱以影响例如所期望的反应的催化或盐形式如酸加成盐的形成。

实例酸可以是无机酸或有机酸。无机酸包括盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸和硝酸。有机酸包括甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、苯甲酸、4-硝基苯甲酸、甲基磺酸、对甲苯磺酸、苯磺酸、酒石酸、三氟乙酸、丙炔酸、丁酸、2-丁炔酸、乙烯基乙酸、戊酸、己酸、庚酸、辛酸、壬酸和癸酸。

实例碱包括氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸锂、碳酸钠和碳酸钾。一些实例强碱包括但不限于氢氧化物、醇盐、金属酰胺、金属氢化物、金属二烷基酰胺和芳基胺，其中：醇盐包括甲基、乙基和叔丁基氧化物的锂盐、钠盐和钾盐；金属酰胺包括氨基钠、氨基钾和氨基锂；金属氢化物包括氢化钠、氢化钾和氢化锂；且金属二烷基酰胺包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、三甲基硅烷基和环己基取代的酰胺的钠盐和钾盐。

一旦根据本文描述的方法实施制备化合物，通常的分离和纯化操作例如浓缩、过滤、萃取、固相萃取、重结晶、色谱及类似操作可被用来分离期望的产物。

药物制剂和剂型

当被用作药物时，本发明的盐可以药物组合物的形式施用，例如与至少一种药学上可接受的载体组合的本发明的盐。这些组合物可以药物领域众所周知的方式制备，且可通过多种途径施用，这取决于需要局部治疗还是全身治疗和取决于所治疗的面积。施用可以是局部的(包括眼和施用到粘膜，其包括经鼻给药、阴道给药和直肠给药)、肺部(例如，通过粉末的吸入或吹入，或气溶胶，包括通过喷雾器；呼吸管、鼻内的、表皮和透皮)、眼部、口服或肠胃外。眼部给药的方法可包括局部施用(滴眼剂)、结膜下、眼周或玻璃体注射，或通过手术放置在结膜囊中的气囊导管或眼插入物引入。肠胃外施用包括静脉内的、动脉的、皮下的、腹膜内的或肌肉内的注射或灌输；或颅骨内施用，例如鞘内施用或脑室内施用。肠胃外施用可以是快速灌注给药的形式，或可以是例如通过连续灌注泵。用于局部施用的药物组合物和制剂可包括透皮贴片、软膏、洗剂、乳膏、凝胶、滴剂、栓剂、喷雾剂、液体和粉末。常规的药物载体，水基质、粉基质或油状基质，增稠剂及类似物可能是需要的或期望的。

本发明还包括药物组合物，该药物组合物包含作为活性成分的与一种或多种药学上可接受的载体组合的上述本发明的盐。在制造本发明的组合物中，通常将活性成分与赋形剂混合、用赋形剂稀释活性成分或将活性成分装入诸如例如胶囊、囊剂、纸或其他容器的形式的载体内。当赋形剂用作稀释剂时，其可以是固体、半固体或液体物质，其用作活性成分的媒介物、载体或介质。因此，组合物可以是片剂、丸剂、粉末、锭剂、囊剂、配剂、悬浮液、乳剂、溶液、糖浆、气溶胶(作为固体或在液体介质中)、包含例如按重量计高达10％的活性化合物的软膏、软明胶胶囊和硬明胶胶囊、栓剂、无菌可注射溶液和无菌包装粉末。

在制备制剂中，可以碾磨活性化合物，以在与其他成分组合之前提供合适的颗粒尺寸。如果活性化合物基本上是不溶的，那么可以将其碾磨到小于200目的颗粒尺寸。如果活性化合物基本上是水可溶的，那么可通过碾磨调整颗粒尺寸，以提供制剂中基本上均匀的分布，例如，约40目。

可使用已知的碾磨程序例如湿磨，将本发明的盐碾磨，以获得适合用于片剂形成和用于其他制剂类型的颗粒尺寸。可通过本领域已知的方法制备本发明的盐的精细地分开的(纳米粒子)制品，例如，参见国际专利申请第WO2002/000196号。

适当的赋形剂的一些实例包括乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉、阿拉伯树胶、磷酸钙、藻酸盐、黄芪胶、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水、糖浆和甲基纤维素。制剂可另外地包括：润滑剂如滑石、硬脂酸镁和矿物油；润湿剂；乳化剂和悬浮剂；防腐剂如苯甲酸甲酯和羟基苯甲酸丙酯；增甜剂；和调味剂。可以配制本发明的组合物，以便在通过使用本领域已知的程序向患者施用之后提供活性成分快速、持续或延迟的释放。

组合物可被配制成单位剂量形式，每一个剂量包含从约5mg到约100mg的活性成分，更通常为约10mg到约30mg的活性成分。术语“单位剂量形式”是指适合用作人类受治疗者和其他哺乳动物的单一剂量的物理离散单位，每一个单位包含与适当的药物赋形剂结合的计算的预定量的活性物质，以产生期望的治疗效果。

活性化合物可以在宽的剂量范围内有效，且通常以药学上有效的量施用。但是，将理解，化合物实际上施用的量将通常由医师根据有关的情况确定，所述情况包括待治疗的病症、选择的施用途径、施用的实际的化合物、年龄、体重和单个患者的反应、患者症状的严重性及类似情况。

对于制备固体组合物如片剂，将主要的活性成分与药物赋形剂混合，以形成包含本发明的化合物的均质混合物的固体预制剂组合物。当提及这些预制剂组合物为均质的时，活性成分通常均匀地分散在整个组合物中，使得组合物可被容易地被再分成相等地有效的单位剂量形式，如片剂、丸剂和胶囊。然后，这个固体预制剂被再分成上述类型的单位剂量形式，包含从例如0.1mg到约500mg的本发明的活性成分。

本发明的片剂或丸剂可以是包衣的或另外地混合，以提供给予延长作用的优势的剂型。例如，片剂或丸剂可包括内部制剂组分和外部制剂组分，后者是在前体之上的包封形式。可通过肠溶层(enteric layer)分离两种组分，肠溶层用来抵抗胃中的分解并允许内部组分完整通过进入十二指肠或延时释放。多种物质可用于这样的肠溶层或肠溶衣，这样的物质包括多种聚合酸和聚合酸与诸如虫胶、十六烷醇和醋酸纤维素的物质的混合物。

其中本发明的化合物和组合物可掺入的用于口服施用或通过注射的液体形式包括水溶液、适当地增味的糖浆、水悬浮液或油悬浮液、和具有食用油如棉籽油、芝麻油、椰子油或花生油的增味的乳剂、及配剂和相似的药物媒介物。

用于吸入或吹入的组合物包括在药学上可接受的水溶剂或有机溶剂或其混合物中的溶液和悬浮液，以及粉末。液体或固体组合物可包含如上所述的适当的药学上可接受的赋形剂。在一些实施方案中，组合物可通过口服或鼻呼吸途径施用，用于局部或全身效应。可通过使用惰性气体来使组合物雾化。可直接从雾化设备呼吸入雾化的溶液，或可将雾化设备连接到面具帷幕或间歇的正压呼吸机。可从以适当的方式递送制剂的设备口服或经鼻施用溶液、悬浮液或粉末组合物。

向患者施用的化合物或组合物的量将依据以下变化：施用的物质、施用的目的如预防或治疗、患者的状态、施用的方式及类似情况。在治疗应用中，可向已患有疾病的患者施用足以治愈或至少部分地抑制疾病的症状和疾病的并发症的量的组合物。有效的剂量将取决于所治疗的疾病情况，以及通过主治医师根据以下因素的判断：如疾病的严重性，患者的年龄、体重和一般情况，及类似情况。

向患者施用的组合物可以是上述的药物组合物的形式。这些组合物可以通过常规的灭菌技术灭菌，或可以被无菌过滤。为了使用，水溶液可以是被包装或冻干，冻干的制剂在施用之前与无菌水载体结合。化合物制剂的pH通常将在3和11之间，更优选从5到9，且最优选从7到8。应理解，使用特定的前述赋形剂、载体或稳定剂将导致药物盐的形成。

本发明的盐的治疗剂量可根据如下情况来变化，例如，进行治疗的具体用途、化合物的施用方式、患者的健康和情况以及开药医师的判断。药物组合物中本发明的盐的比例或浓度可根据多种因素来变化，包括剂量、化学特征(如疏水性)和施用途径。例如，本发明的盐可提供在包含约0.1％到约10％w/v的化合物的生理缓冲水溶液中，用于肠胃外施用。一些典型的剂量范围为每天从约1μg/kg体重到约1g/kg体重。在一些实施方案中，剂量范围为从每天约0.01mg/kg体重到约100mg/kg体重。剂量可能取决于如下变量，如疾病或疾患的类型和增进程度、具体患者的整体健康状况、所选择的化合物的相应的生物学功效、赋形剂的配制及其施用途径。可从体外或动物模型试验系统得到的剂量-响应曲线推断有效的剂量。

本发明的盐还可与一种或多种另外的活性成分组合配制，另外的活性成分可包括任何药剂，如抗病毒剂、疫苗、抗体、免疫增强剂、免疫阻抑剂、抗炎剂及类似药剂。

标记化合物和测定方法

本发明的另一方面涉及本发明的荧光染料、自旋标记、重金属或放射标记的盐，其用于成像和，在体外和体内两者的测定，以组织样品包括人类中定位和定量蛋白激酶靶，且用于通过抑制标记化合物的结合确定激酶配体。因此，本发明包括含有标记盐的激酶测定。

本发明还包括本发明的化合物的同位素标记的化合物。“同位素地”或“放射标记的”化合物是本发明的化合物，其中一种或多种原子被具有与在自然中通常发现(即，天然存在)的原子量或质量数不相同的原子量或质量数的原子替代或取代。可掺入到本发明的化合物中的适当的放射性核素包括但不限于²H(也写作氘D)、³H(也写作氚T)、¹¹C、¹³C、¹⁴C、¹³N、¹⁵N、¹⁵O、¹⁷O、¹⁸O、¹⁸F、³⁵S、³⁶Cl、⁸²Br、⁷⁵Br、⁷⁶Br、⁷⁷Br、¹²³I、¹²⁴I、¹²⁵I和¹³¹I。被掺入到即时的放射标记化合物中的放射性核素将取决于放射标记化合物的具体应用。例如，对于体外标记和竞争分析，掺入³H、¹⁴C、⁸²Br、¹²⁵I、¹³¹I或³⁵S的化合物通常将是最有用的。对于放射成像应用，¹¹C、¹⁸F、¹²⁵I、¹²³I、¹²⁴I、¹³¹I、⁷⁵Br、⁷⁶Br或⁷⁷Br通常将是最有用的。

应理解，“放射标记”或“标记化合物”是已掺入至少一种放射性核素的化合物。在一些实施方案中，放射性核素选自由³H、¹⁴C、¹²⁵I、³⁵S和⁸²Br组成的组。

用于将放射性同位素掺入到有机化合物中的合成方法可应用到本发明的化合物且在本领域中是众所周知的。

本发明的放射标记盐可被用在筛选测定中，以鉴别/评价化合物。概括地，可评价新合成的或确定的化合物(即，试验化合物)减少本发明的放射标记盐与酶结合的能力。因此，试验化合物与放射标记盐竞争以结合酶的能力直接与其结合亲和力有关。

药盒

本发明还包括药物药盒，其用于例如治疗或预防疾病，如癌症和本文指出的其他疾病，该药物药盒包括包含药物组合物的一个或多个容器，该药物组合物包括治疗有效量的本发明的盐。这样的药盒必要时，可还包括多种常规的药物药盒组件中的一种或多种，诸如例如，具有一种或多种药学上可接受的载体的容器、另外的容器，等等，这对于本领域技术人员来说是显然的。作为插入物或标记的表明待施用的组分的量的说明书、施用指引和/或将组分混合的指引也可包括在药盒中。

将通过具体的实施例来更详细地描述本发明。提供以下实施例用于示例性的目的，且不意图以任何方式限制本发明。本领域技术人员将容易意识到多种非关键参数可以改变或修改以产生基本上相同的结果。

实施例

实施例1

制备2-氟-N-甲基-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苯甲酰胺二盐酸盐

将甲醇(MeOH，6600mL)中的2-氟-N-甲基-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苯甲酰胺(421.2g，1.021mol)(见美国序列号11/942,130的制备，该专利的公开内容在此通过引用以其整体并入)的悬浮液加热到55℃，然后于55℃下滴加浓盐酸水溶液(浓HCl，37wt.％，12M，420mL，5.10mol，5.0当量)在异丙醇(IPA，1510mL)中的预混合溶液。于55℃下搅拌得到的清夜30min，然后在30min内将甲基叔丁基醚(MTBE，6750mL)通过加料漏斗加入。在加入甲基叔丁基醚之后，固体被缓慢地沉淀出来。于55℃下搅拌得到的混合物另外的1h，然后使其逐渐冷却至室温。在室温下搅拌混合物过夜。通过过滤收集固体、用甲基叔丁基醚(MTBE，3×500mL)洗涤和在45-55℃的真空炉中干燥至恒重。获得期望的2-氟-N-甲基-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苯甲酰胺二盐酸盐(470.7g，495.5g理论值，95％产率)，其为灰白到淡黄的晶态固体：熔点(分解)222℃；¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 9.46(s，1H)，9.25(dd，1H，J＝5.4Hz，1.4Hz)，9.12(d，1H，J＝8.3Hz)，8.51(m，1H)，8.47(d，1H，J＝0.9Hz)，8.34(d，1H，J＝1.3Hz)，8.23(s，1H)，8.21(dd，1H，J＝9.0Hz，1.8Hz)，8.09-8.02(m，3H)，7.79(dd，1H，J＝7.5Hz，8.3Hz)，4.77(s，2H)，2.78(s，3H，J＝4.5Hz)；¹³C NMR(100MHz，DMSO-d₆)δppm 163.4，159.4(d，J＝249.9Hz)，145.8，145.4，144.5，143.8，140.4，138.8，136.8，135.9，135.7(J＝8.6Hz)，131.2(J＝3.1Hz)，130.7，128.7，128.2，126.2(J＝14.9Hz)，126.0，123.1(J＝3Hz)，122.5，121.0，114.9(J＝5.6Hz)，28.4，26.3；¹⁹F NMR(376.3MHz，DMSO-d₆)δppm-113.2；C₂₃H₁₇FN₆O(游离碱，分子量412.42)，LCMS(EI)m/e 413.1(M⁺+H)和435.0(M⁺+Na)。

实施例2

二盐酸盐的X-射线粉末衍射

使用Rigaku MiniFlex X-射线粉末衍射仪进行XRPD(X-射线放射来自

的铜(Cu)，Kβ滤光片，起始角-3；终止角-45；取样-0.02；扫描速度-2)。样品粉末分散在零背景样品架上。图1中提供了通过实施例1的方法制备的二盐酸盐的XRPD图像。下面的表1中提供了2θ峰值。

表1

2θ     高度    H％

3.8     58      4

6.0     57      3.9

7.8     403     27.7

9.1     86      5.9

12.0    584     40.1

12.6    371     25.5

14.3    202     13.9

14.9    306     21

15.9    346     23.8

16.3    277     19

17.4    247     17

18.2    1367    93.9

20.0    283     19.5

20.5    212     14.6

21.4    240     16.5

21.8    60      4.1

22.4    314     21.6

23.3    281     19.3

23.9    176     12.1

24.7    1362    93.6

25.4    81      5.6

26.0    1456    100

27.1    226     15.5

27.4    138     9.5

28.0    142     9.8

29.3    962     66.1

30.5    165     11.3

31.0    502     34.5

31.9    76      5.3

33.0    485     33.3

33.4    285     19.6

34.5    166     11.4

35.4    78      5.4

36.2    381     26.1

37.2    449     30.9

38.4    190     13.1

39.8    82      5.7

40.5    79      5.4

42.4    99      6.8

43.7    107     7.4

实施例3

二盐酸盐的差示扫描量热法

通过在图2中示出的DSC微量表征由实施例1的方法制备的二盐酸盐。DSC差示热分析图显示吸热事件，具有峰起始在216.1℃且峰在221.91℃。实验在Mettler Toledo差示扫描量热法(DSC)822仪器上进行，使用铝样品盘(40μL)，使用10℃/min的加热速率从30℃的起始温度到280℃的最终温度。

实施例4

二盐酸盐的热解重量分析

通过在图3中示出的TGA表征由实施例1的方法制备的二盐酸盐。TGA表明，当样品以20℃/min的加热速率从20℃加热到600℃时，显著的重量损失在150℃时开始。随后，通过具有峰在221.9℃的放热事件，该峰被认为是熔化峰。实验在TA仪器Q500上进行。

实施例5

制备2-氟-N-甲基-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苯甲酰胺二苯磺酸盐

将甲醇(MeOH，12mL)中的2-氟-N-甲基-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苯甲酰胺(500mg，1.212mmol)的悬浮液加热到55℃，然后于55℃下滴加苯磺酸(578mg，3.65mmol，3.01当量)在异丙醇(IPA，3.66mL)中的预混合溶液。于55℃下搅拌得到的清夜30min，然后将甲基叔丁基醚(MTBE，12mL)通过加料漏斗逐滴加入。在加入甲基叔丁基醚之后，固体被缓慢地沉淀出来。于55℃下搅拌得到的混合物另外的1小时，然后使其逐渐冷却至室温。在室温下搅拌混合物过夜。通过过滤收集固体、用甲基叔丁基醚(MTBE，2×10mL)洗涤和在45-55℃的真空炉中干燥至恒重。获得期望的二苯磺酸产物(848mg，883.3mg理论值，96％产率)，其为灰白的晶态固体：熔点(分解)270.5℃；¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 9.51(s，1H)，9.30(dd，1H，J＝5.4Hz，1.4Hz)，9.13(d，1H，J＝8.3Hz)，8.45(m，1H)，8.36(d，1H，J＝0.9Hz)，8.30(s，1H)，8.21(dd，2H，J＝9.0Hz，1.8Hz)，8.10-8.04(m，3H)，7.80(dd，1H，J＝7.5Hz，8.3Hz)，7.62-7.56(m，4H)，7.33-7.27(m，6H)，4.79(s，2H)，2.78(d，3H，J＝4.5Hz)；¹⁹F NMR(376.3MHz，DMSO-d₆)δppm-113.2；C₂₃H₁₇FN₆O(游离碱，分子量412.42)，LCMS(EI)m/e 413.0(M⁺+H)和435.0(M⁺+Na)。

实施例6

二苯磺酸盐的X-射线粉末衍射

使用Rigaku MiniFlex X-射线粉末衍射仪进行XRPD(X-射线放射来自

的铜(Cu)，Kβ滤光片，起始角-3；终止角-45；取样-0.02；扫描速度-2)。图4中提供了通过实施例5的方法制备的盐的XRPD图像。下面的表2中提供了2θ峰值。

表2

2θ	高度	H％
			4.9	688	100
9.9	163	23.7
			11.1	169	24.6
13.8	226	32.9
			15.0	441	64.1
16.3	378	54.9
			16.7	262	38.1
17.6	53	7.7
			18.3	430	62.5
19.0	46	6.6
			20.2	661	96.1
22.2	284	41.3
			22.8	93	13.6
23.8	460	66.8
			24.8	244	35.5
25.2	306	44.5
			26.7	237	34.4

27.0	212	30.9
			29.4	95	13.8
30.4	66	9.6
			31.1	47	6.8
31.9	39	5.6
			33.0	54	7.8
34.1	75	10.8
			34.8	42	6.2
35.1	43	6.3
			40.0	48	7
40.5	58	8.4
			42.1	35	5

实施例7

二苯磺酸盐的差示扫描量热法

通过在图5中示出的DSC微量表征由实施例5的方法制备的二苯磺酸盐。DSC差示热分析图显示在269.4℃开始的一个吸热事件，随后是具有峰在270.45℃的放热事件。实验在Mettler Toledo差示扫描量热法(DSC)822仪器上进行，使用10℃/min的加热速率从30℃的起始温度到280℃的最终温度。

实施例7A

二苯磺酸盐的物理特征

二苯磺酸盐通常对着白色背景目检是灰白到淡黄的粉末。

实施例7B

二苯磺酸盐的溶解度

二苯磺酸盐通常被获得为对着白色背景目检为灰白到淡黄的粉末。发现二苯磺酸盐于25℃下的溶解度：在水中为约3.9mg/mL；在pH 7.4的缓冲液中为0.003mg/mL；在pH 8.0的缓冲液中为0.003mg/mL；且在0.1N的HCl水溶液中为至少29mg/mL。

通过将样品混合在所选择的含水溶剂(0.1N HCl、水、pH 7.4的缓冲液和pH 8.0的缓冲液)中至少12小时来确定平衡溶解度。然后，通过使用单点校准的HPLC来确定样品浓度。

实施例8

4-溴-3-氟-N-甲氧基-N-甲基苯甲酰胺(3)

在室温下，将乙二酰氯((COCl)₂，560mL，6.4mol，1.45当量)在二氯甲烷(520mL)中的溶液缓慢地加入到4-溴-3-氟苯甲酸(1，967.9g，4.4mol)在二氯甲烷(5.9L)中的悬浮液中。在室温下搅拌得到的反应混合物20h，然后通过冰-水浴冷却至0℃。加入N，O-二甲基羟胺盐酸盐(826g，8.4mol，1.9当量)，随后在0℃下，缓慢加入三乙胺(TEA，2.5L，17.7mol，4.0当量)。然后，反应混合物缓慢地升至室温，且在室温下搅拌反应混合物过夜。偶联反应完成后，用饱和碳酸氢钠水溶液(NaHCO₃，2L)洗涤反应混合物。用二氯甲烷(1L)反萃水相。用水(1L)、盐水(1L)洗涤合并的有机相，并在减压下浓缩。将得到的固体残留物溶解到甲基叔丁基醚(MTBE，5L)中，用水(5×1L)、盐水(1L)连续地洗涤，且在无水硫酸钠(Na₂SO₄)上干燥。过滤的溶液在减压下浓缩，且在45℃的真空炉中干燥得到的固体，以提供4-溴-3-氟-N-甲氧基-N-甲基苯甲酰胺(3，1106g，1153g理论值，95.9％产率)，用于后续的反应而不需要进一步纯化。对于3：¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 7.78(t，1H，J＝7.47Hz)，7.56(dd，1H，J＝9.3，1.6Hz)，7.18(d，1H，J＝8.1Hz)，3.53(s，3H)，3.25(s，3H)；C₉H₉BrFNO₂(分子量262.08)，LCMS(EI)m/e 262.0/264.0(M⁺+H)。

方案1(实施例8-14)

实施例9

1-(4-溴-3-氟苯基)乙酮(4)

0℃下，将甲基氯化镁(MeMgCl，2.5L，7.5mol，1.7当量)在THF中的3.0M溶液缓慢地加入到粗制4-溴-3-氟-N-甲氧基-N-甲基苯甲酰胺(3，1106g，4.2mol)在无水四氢呋喃(THF，11L)中的溶液。0℃下，搅拌得到的反应混合物2h，然后非常小心地用饱和氯化铵水溶液(NH4Cl，1.5L)猝灭。在减压下浓缩得到的溶液，以去除大部分的THF。然后，用乙酸乙酯(EtOAc，5L)稀释残留物，且用水(2L)洗涤得到的溶液。用乙酸乙酯(EtOAc，2×2L)萃取水相。用水(2L)、盐水(2L)洗涤合并的有机相，且在无水硫酸钠(Na₂SO₄)上干燥。过滤的溶液在减压下浓缩，且在45℃的真空炉中干燥得到的固体，以提供固体1-(4-溴-3-氟苯基)乙酮(4，890.8g，911.6g理论值，97.7％产率)，其被用在后续的反应中而不需要进一步纯化。对于4：¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 7.89-7.84(m，2H)，7.71(dd，1H，J＝8.30，1.87Hz)，2.57(s，3H)。

实施例10

2-(4-溴-3-氟苯基)-2-氧代乙醛(5)

将48％溴化氢水溶液(HBr，1420mL，12.5mol，3.0当量)缓慢地加入到1-(4-溴-3-氟苯基)乙酮(4，890.8g，4.1mol)在DMSO(4L)中的溶液。在加入的过程中，反应温度逐渐从20℃增加到50℃。反应混合物随后被加热至60℃，且于60℃下搅拌该反应混合物过夜。通过蒸馏去除得到的二甲基硫化物，且将残留物倒入冰水中(28L)。通过过滤(保留滤液)收集得到的黄色沉淀物，并用水(5L)洗涤。将黄色固体溶解在乙酸乙酯(EtOAc，5L)中、用盐水(1L)洗涤且在无水硫酸钠(Na₂SO₄)上干燥。然后，溶液在减压下浓缩，且于45℃时在真空炉中干燥得到的固体，以提供期望的产物2-(4-溴-3-氟苯基)-2-氧代乙醛的水合物(5的水合物，730.6g，1020.9g理论值，71.6％产率)。用乙酸乙酯(3×5L)萃取水相(滤液)，且用水(2×2L)、盐水(2L)洗涤合并的有机相，并在无水硫酸钠(Na₂SO₄)上干燥。溶液在减压下浓缩，且在45℃的真空炉中干燥得到的固体，以提供2-(4-溴-3-氟苯基)-2-氧代乙醛水合物的第二批收集物(5的水合物，289.4g，1020.9g理论值，28.3％产率；总量1020g，1020.9g理论值，99.9％产率)，其被用在随后的反应中而不需要进一步纯化。对于5的水合物：¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 8.00-7.70(m，3H)，6.69(br s，2H)，5.59(s，1H)。

实施例11

1-(4-溴-3-氟苯基)-2，2-二乙氧基乙酮(6)

室温下，向22L的烧瓶装入(4-溴-3-氟苯基)-2-氧代乙醛的水合物(5，1020g，4.41mol)、甲苯(7.5L)、原甲酸三乙酯(1633g，1.8L，11.04mol，2.5当量)、对甲苯磺酸(33.5g，0.176mol，0.4当量)，且将得到的反应混合物加热到110℃且在110℃下搅拌6h。当HPLC表明反应完成时，使反应混合物冷却至室温，然后将其与乙酸乙酯(7.5L)和饱和碳酸氢钠水溶液(NaHCO₃，3L)一起倒入50L的分液漏斗。搅拌混合物并分层。用乙酸乙酯(2L)萃取水层。用盐水(4L)洗涤合并的有机层，用硫酸钠(Na₂SO₄)干燥，且在减压下浓缩，以提供粗制1-(4-溴-3-氟苯基)-2，2-二乙氧基乙酮(6，1240g，1345.7g理论值，92.1％产率)，其被用在随后的反应中而不需要进一步纯化。对于6：¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 7.94-7.94(m，2H)，7.78(dd，1H，J＝8.51，2.08Hz)，5.40(s，1H)，3.77-3.60(m，4H)，1.16-1.14(m，6H)。

实施例12

6-(4-溴-3-氟苯基)-1，2，4-三嗪-3-胺(7)

室温下，向22L的烧瓶装入1-(4-溴-3-氟苯基)-2，2-二乙氧基乙酮(6，1240g，4.07mol)、乙醇(11L)、水(1.4L)、氢氧化钾(KOH，910g，16.3mol，4.0当量)和氨基胍碳酸氢盐(1105g，8.13mol，2.0当量)。然后，将得到反应混合物加热到75℃持续14h。当HPLC表明缩合反应被认为完成时，使反应混合物冷却至室温，然后过滤。然后，在减压下浓缩滤液，以去除大部分的溶剂。用乙酸乙酯(EtOAc，3×6L)萃取残留的水溶液。将有机层合并，且在减压下浓缩，以提供深棕色固体。将该固体溶解在乙醇(4L)中，且用0.2M盐酸水溶液(4L)的溶液处理得到的溶液。随后，将得到的浆状物加热至50℃持续6h，然后允许其冷却至室温。将饱和碳酸氢钠水溶液(NaHCO₃，2L)的溶液缓慢地加入到浆状物中，然后，在减压下浓缩得到的混合物，以去除大部分的溶剂。然后，用乙酸乙酯(20L)处理残留水溶液，以溶解固体。分离两层，且用乙酸乙酯(2×2L)萃取水层。在减压下浓缩合并的有机层。用甲基叔丁基醚(MTBE，4L)处理深棕色固体，且将得到的浆状物加热至30℃，且在30℃下搅拌30min。过滤混合物且收集(保留滤液)固体(绿色到橙色)，用甲基叔丁基醚(MTBE，2L)洗涤固体，以得到粗制期望的产物(7)的第一批收集物。在减压下蒸发滤液，且用甲基叔丁基醚(MTBE，2L)处理得到的深棕色固体。将得到的浆状物加热至30℃，且在30℃下搅拌30min。将混合物过滤，以得到粗制期望的产物(7)的第二批收集物，用MTBE(1L)洗涤该产物(7)。于40-45℃下在真空中干燥合并的固体，以提供6-(4-溴-3-氟苯基)-1，2，4-三嗪-3-胺(7，585g，1095.1g理论值，53.4％产率)，其被用在随后的反应中而不需要进一步纯化。对于7：¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 8.86(s，1H)，7.97(d，1H，J＝10.79Hz)，7.81(m，2H)，7.52(br s，2H)；C₉H₆BrFN₄(分子量269.07)，LCMS(EI)m/e 269.0/271.1(M⁺+H)。

实施例13

6-((2-(4-溴-3-氟苯基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-7-基)甲基)喹啉(12)将1-(2-氯-1-羟基-3-(喹啉-6-基)丙基)吡咯烷-2，5-二酮(11，228g，0.74mol，1.1当量)和6-(4-溴-3-氟苯基)-1，2，4-三嗪-3-胺(7，181g，0.673mol)悬浮在1-丁醇(1800mL)中，且将得到的悬浮液加热至110℃并在110℃下搅拌18h(反应混合物在此时变为均质的)。然后，使反应混合物逐渐冷却至室温，然后进一步在冰浴中冷却至10℃。通过过滤(保留1-丁醇滤液)收集得到的黄色固体，用冷的1-丁醇(3×100mL)洗涤和通过抽吸干燥。然后，将该固体悬浮在饱和碳酸氢钠水溶液(NaHCO₃，500mL)中，且在室温下搅拌得到的悬浮液1h，以中和相应的盐酸盐。然后，将游离碱过滤，用水(500mL)洗涤和于45℃下在真空炉中干燥18h，以提供粗制6-((2-(4-溴-3-氟苯基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-7-基)甲基)喹啉(12，125.1g，292.3g理论值，42.8％产率)的第一批收集物。然后，在减压下浓缩1-丁醇滤液，且将得到的固体溶解在二氯甲烷(CH₂Cl₂，2L)中。用饱和碳酸氢钠水溶液(NaHCO₃，1L)洗涤溶液，在硫酸钠(Na₂SO₄)上干燥，且在减压下浓缩。然后，通过快速柱色谱(SiO₂，0-10％MeOH-CH₂Cl₂梯度洗脱)纯化残留物，以提供黄色固体6-((2-(4-溴-3-氟苯基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-7-基)甲基)喹啉(12，19.7g，292.3g理论值，6.7％产率；总量144.8g，292.3g理论值，49.5％产率)的第二批收集物。对于12：¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 9.23(s，1H)，9.11(dd，1H，J＝4.98，1.55Hz)，8.85(d，1H，J＝8.09Hz)，8.25-8.18(m，2H)，8.12-8.00(m，3H)，7.93-7.86(m，3H)，4.70(s，2H)；C₂₁H₁₃BrFN₅(分子量434.26)，LCMS(EI)m/e 434.00/435.95(M⁺+H)。

实施例14

2-氟-4-(7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基)苯甲氰(13)将6-((2-(4-溴-3-氟苯基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-7-基)甲基)喹啉(12，200g，0.461mol)、氰化锌(ZnCN₂，32.7g，0.277mol，0.6当量)、锌粉末(Zn，6.0g，0.093mol，0.2当量)和Pd(dppf)₂Cl₂(22.6g，0.028mol，0.06当量)悬浮在N，N-二甲基乙酰胺(DMAC，2000mL)和水(H₂O，40mL)的预混合溶液中。然后，用氮气流对得到的悬浮液脱气20min，然后将其加热至110℃且在110℃下搅拌1-2h(观察到均质溶液)。当LC/MS表明反应被认为完成时，首先使反应混合物冷却至室温，然后在冰浴中冷却至5℃。用饱和氯化铵水溶液(NH₄Cl水溶液)、浓氢氧化铵水溶液(NH₄OH水溶液)和水(体积比4∶1∶4，8.1L)的混合物稀释冷却的反应混合物，且在室温下搅拌得到的混合物30min。通过过滤收集得到的固体，且于45℃下在真空炉中将固体干燥过夜，以提供粗制期望的产物(13)。然后，通过快速色谱(SiO₂，用二氯甲烷中的1％三乙胺、二氯甲烷中的2.5％丙酮和1％三乙胺、二氯甲烷中的5.0％丙酮和1％三乙胺和二氯甲烷中的10.0％丙酮和1％三乙胺连续地梯度洗脱)来纯化该粗物质，以提供纯的黄色固体2-氟-4-(7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基)苯甲氰(13，127.4g，175.4g理论值，72.6％产率)。对于13：¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 9.24(s，1H)，8.81(dd，1H，J＝4.15，1.66Hz)，8.26-8.12(m，4H)，8.02(s，1H)，7.95-7.93(m，2H)，7.76(dd，1H，J＝8.71，2.08Hz)，7.47(dd，1H，J＝8，70，4.15Hz)，4.62(s，2H)；C₂₂H₁₃FN₆(分子量380.38)，LCMS(EI)m/e 381.0(M⁺+H)。

实施例15

6-(3，3-二乙氧基丙-1-炔基)喹啉(22)

6-溴喹啉(8，2.63g，12.6mmol)、丙炔醛二乙基乙缩醛(3.73mL，25.2mmol，2.0当量)、三乙胺(TEA，12.7mL，90.8mmol，7.2当量)、碘化亚铜(I)(CuI，24.0mg，0.126mmol，0.01当量)和三苯基膦(PPh₃，0.39716g，1.5142mmol，0.12当量)在N，N-二甲基甲酰胺(DMF，15.6mL，202mmol)中的混合物用氮气鼓泡脱气5min。加入醋酸钯(Pd(OAc)₂，0.08499g，0.3786mmol，0.03当量)，且将混合物用氮气鼓泡脱气5min。在氮气和搅拌下，将反应混合物加热至90℃。在3小时10分钟之后，HPLC表明反应完成。用乙酸乙酯(EtOAc，100mL)稀释反应混合物，且用水(H₂O，2×100mL)洗涤反应混合物。用乙酸乙酯(EtOAc，20mL)萃取水层。然后，在减压下浓缩合并的有机萃取物，以得到黑色油状粗产物。通过快速柱色谱(SiO₂，用在正己烷中的0％-40％EtOAc的洗脱)来纯化粗产物，以提供无色油状6-(3，3-二乙氧基丙-1-炔基)喹啉(22，3.2g，3.22g理论值，99％产率)。对于22：¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 8.92(dd，1H，J＝4.35Hz，1.86Hz)，8.36(d，1H，J＝8.40Hz，1.66Hz)，8.20(d，1H，J＝1.78Hz)，7.99(d，1H，J＝8.71Hz)，7.76(dd，1H，J＝8.71Hz，1.87Hz)，7.57(dd，1H，J＝8.09Hz，4.05Hz)，5.58(s，1H)，3.75-3.55(m，4H)，1.17(t，6H，J＝7.16Hz)；C₁₆H₁₇NO₂(分子量255.31)，LCMS(EI)m/e 256.0(M⁺+H)。

方案2(实施例15-18)

实施例16

6-(3，3-二乙氧基丙基)喹啉(23)

方法A：在室温(内部温度提高到40℃)下，在1h内将3，3-二乙氧基-1-丙烯(548g，4.2mol，1.75当量)加入到装在22L的烧瓶的9-硼二环[3.3.1]壬烷在四氢呋喃中的0.5M溶液(9-BBN在THF中的溶液，8.4L，4.2mol，1.75当量)。在室温下搅拌得到的反应混合物过夜。此时，反应混合物的等分试样的¹H NMR表明所有的3，3-二乙氧基-1-丙烯都被消耗。将6-溴喹啉(8，500g，2.4mol，1.0当量)、碳酸钾(K₂CO₃，662g，4.8mol，2.0当量)、三环己基膦(67.4g，0.24mol，0.1当量)、醋酸钯(Pd(OAc)₂，27g，0.12mol，0.05当量)和水(90mL)按顺序加入到反应混合物中，随后用氮气脱气0.5h。然后，将反应混合物加热至回流4h。TLC和LC/MS表明起始物质已被消耗后，搅拌下使反应混合物冷却至室温，然后用水(7.5L)和乙酸乙酯(EtOAc，7.5L)猝灭。分层，且用乙酸乙酯(EtOAc，4L)萃取水层。用饱和的盐水溶液(NaCl，4L)洗涤合并的有机层，在硫酸镁(MgSO₄)上干燥且在减压下浓缩。通过柱色谱(SiO₂，在庚烷中的10％-60％乙酸乙酯梯度洗脱)来纯化残留物，以提供无色油6-(3，3-二乙氧基丙基)喹啉(23，520g，622.4g理论值，83.5％产率)。对于23：¹H NMR(DMSO-d₆，300MHz)δppm 8.81(dd，1H，J＝4.23Hz，1.73Hz)，8.28(d，1H，J＝8.07Hz)，7.91(d，1H，J＝8.62Hz)，7.75(s，1H)，7.61(dd，1H，J＝8.63Hz，1.92Hz)，7.46(dd，1H，J＝8.25Hz，4.22Hz)，4.46(t，1H，J＝5.60Hz)，3.61-3.38(m，4H)，2.79(t，2H，J＝8.53Hz)，1.95-1.85(m，2H)，1.11(t，6H，J＝6.84Hz)；C₁₆H₂₁NO₂(分子量259.34)，LCMS(EI)m/e 260.2(M⁺+H)。

方法A-可选择的：9-BBN在原位生成且被用来制备化合物23，如下所述：于氮气气氛下，将无水1，2-二乙氧基乙烷(DME，47.0mL)装入安装有蒸馏装置的500mL 3-口烧瓶中。加入硼烷-二甲基硫化物络合物(12.1g，151mmol，2当量)，且使溶液温度从20℃增加到22℃。在通过蒸馏装置收集少量的二甲基硫化物的时段内，将1，5-环辛二烯(16.3g，151mmol，2当量)在30min内滴加入到该溶液中，以维持50℃-60℃的反应温度。然后，于氮气下蒸馏反应混合物直至蒸馏物温度达到84℃。收集的蒸馏物具有～21mL的体积。移出油浴，且加入无水THF(49mL)。将反应混合物的少量样品进行¹H NMR分析，且结果表明石蜡被消耗。将该9-BBN溶液直接用于下一步骤。

将3，3-二乙氧基-1-丙烯(19.3g，142mmol，1.89当量)滴加入到上述9-BBN溶液中，同时维持温度低于30℃。反应是轻微放热的，且白色沉淀缓慢溶解。然后，在室温下搅拌反应混合物18h。

将6-溴喹啉(8，15.7g，75.4mmol，1当量)、三环己基膦(1.27g，4.52mmol，0.06当量)、碳酸钾(20.8g，151mmol，2当量)和水(0.421mL，23.4mmol)加入到上述制备的溶液中。将混合物用氮气鼓泡脱气10-15min。加入醋酸钯(Pd(OAc)₂，0.508g，2.26mmol，0.03当量)，且继续氮气鼓泡另外的10min。将反应混合物加热至75℃，且维持在75℃-78℃，持续2h-3h。当HPLC表明反应完成时，停止加热且使反应混合物冷却至室温。加入乙酸乙酯(EtOAc，162mL)和水(H₂O，162mL)且分离有机层。用乙酸乙酯(EtOAc，2×60mL)萃取水层，且在硫酸钠(Na₂SO₄)上干燥合并的有机萃取物，并在减压下浓缩。通过快速柱色谱(硅胶，在正己烷中的0-40％EtOAc梯度洗脱)来纯化残留物，以提供澄清油状6-(3，3-二乙氧基丙基)喹啉(23，17.6g，19.6g理论值，90％产率)，发现该物质在每一个可对比的方面与从方法A制得的物质相同。

方法B：将6-(3，3-二乙氧基丙-1-炔-1-基)喹啉(22，56mg，0.22mmol)和钯碳(5mg)在THF(5mL)中的混合物在1atm的H2下氢化6h。将反应混合物通过硅藻土床过滤，且用THF(2×2mL)洗涤硅藻土床。在减压下浓缩合并的滤液，以提供澄清油状6-(3，3-二乙氧基丙基)喹啉(23，56mg，57mg理论值，98％产率)，发现该物质足够纯，以用在后续的反应中而不需要进一步纯化，且在每一个可对比的方面与从方法A制得的物质相同。

实施例17

3-(喹啉-6-基)丙醛(9)

方法1：在室温下，向22L的烧瓶装入三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(70.0g，0.076mol，0.015当量)、四氟硼酸三叔丁基膦(44g，0.152mol，0.03当量)和二噁烷(12L)。然后，用稳定的氮气流将得到的溶液脱气20min，然后，在室温下，加入6-溴喹啉(8，1055g，5.07mol，1.0当量)、烯丙醇(588g，10.1mol，2.0当量)和N-甲基-N-环己基环己胺(1186g，6.08mol，1.2当量)。在50℃到55℃下搅拌得到的反应混合物8h-12h。当TLC和LC/MS表明反应被认为完成时，使反应混合物冷却至室温，然后将甲基叔丁基醚(MTBE，10L)加入到反应混合物中。在室温下搅拌得到的混合物10min，然后将其通过硅藻土塞过滤。在减压下浓缩滤液，且通过快速柱色谱(SiO₂，在庚烷中的20％-80％乙酸乙酯梯度洗脱)来纯化残留物，以提供黄色油状3-(喹啉-6-基)丙醛(9，495g，939.1g理论值，52.7％产率)，该物质静置在0℃-5℃下部分凝固。对于9：¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 9.75(t，1H，J＝1.24Hz)，8.83(dd，1H，J＝4.15Hz，1.66Hz)，8.25(dd，1H，J＝8.3，1.03Hz)，7.93(d，1H，J＝8.71Hz)，7.76(d，1H，J＝1.45Hz)，7.64(dd，1H，J＝8.72Hz，2.08Hz)，7.48(dd，1H，J＝8.30Hz，4.36Hz)，3.05(t，2H，J＝7.26Hz)，2.89(t，2H，J＝7.26Hz)；C₁₂H₁₁NO(分子量185.22)，LCMS(EI)m/e 186(M⁺+H)。

方法2：将6-(3，3-二乙氧基丙基)喹啉(23，实施例16的方法A，520g，2.08mol，1.0当量)在乙酸乙酯(EtOAc，2.2L)中的溶液冷却至0℃，然后于1h内加入2N盐酸(HCl)水溶液(2.2L)，同时保持反应温度低于5℃。在0℃-5℃下，搅拌得到的反应混合物另外的2h。当TLC和HPLC/MS表明反应完成时，用0℃的冰冷的3N氢氧化钠(NaOH)水溶液将反应猝灭，直至pH在8到9之间。分层，且用乙酸乙酯(EtOAc，2L)萃取水层。用盐水(2L)洗涤合并的有机层、用硫酸钠(Na₂SO₄)干燥并在减压下浓缩，以提供黄色油状粗制3-(喹啉-6-基)丙醛(9，385.3g，385.3g理论值，100％)，发现该物质在每一个可对比的方面与从方法1获得的物质相同。因为发现该物质是足够纯的，所以其被直接用在后续的反应中，而不需要进一步纯化。

方法3：向22L的烧瓶装入9-硼双环[3.3.1]壬烷在四氢呋喃中的0.5M溶液(9-BBN，5.75L，2.89mol，2.0当量)，且在0℃-5℃下，四氢呋喃(THF，6L)被用3，3-二乙氧基-1-丙烯(393g，3.02mol，2.10当量)处理，且随后，将得到的反应混合物升至室温且在室温下搅拌14h。在室温下，将6-溴喹啉(8，300g，1.44mol，1.0当量)、醋酸钯(Pd(OAc)₂，16.1g，0.072mol，0.05当量)、碳酸钾(K₂CO₃，398g，2.89mol，2.0当量)、三环己基膦(22.3g，0.079mol，0.055当量)和水(52g，2.8mol)加入到反应混合物，然后用氮气将其脱气1h。将得到的反应混合物加热至75℃持续1h。当TLC和LC/MS显示反应被认为完成时，使反应混合物冷却至室温，且加入水(2L)以溶解盐。然后，在减压下将得到的混合物浓缩至约4L的体积，然后将其通过硅藻土塞过滤。用乙酸乙酯(EtOAc，2L)洗涤硅藻土塞。在减压下将滤液浓缩至约2L的体积，且然后，在0℃-5℃下，将该残留物溶液在5min内缓慢地加入包含2.0M盐酸(HCl)水溶液(2L)的烧瓶中。在0℃-5℃下搅拌得到的溶液14h，然后在0℃下，用饱和碳酸氢钠(NaHCO₃)水溶液猝灭，直至pH在8到9之间。分层，且用乙酸乙酯(EtOAc，2L)萃取水层。用盐水(1L)洗涤合并的有机层、用硫酸钠(Na₂SO₄)干燥和在减压下浓缩。通过快速柱色谱(SiO₂，在庚烷中的20-80％乙酸乙酯梯度洗脱)来纯化包含粗制3-(喹啉-6-基)丙醛(9)的残留物，以提供黄色油状3-(喹啉-6-基)丙醛(9，139g，266.7g理论值，52.1％)，发现该物质与从方法1和2获得的物质相同。

实施例18

1-(2-氯-1-羟基-3-(喹啉-6-基)丙基)吡咯烷-2，5-二酮(11)

方法I：使3-(喹啉-6-基)丙醛(9，407g，2.2mol，1.0当量)在氯仿(CHCl₃，1700mL)中的溶液冷却至0℃，然后加入脯氨酸(52g，0.44mol，0.2当量)和N-氯代琥珀酰亚胺(NCS，303g，2.31mol，1.05当量)。允许得到的反应混合物缓慢地升至室温(变为均质的)且在室温下搅拌反应混合物过夜。反应放热至约40℃，其达到室温，且沉淀在此时形成。TLC和LC/MS表明反应为完成后，用乙酸乙酯(EtOAc，1700mL)稀释反应混合物，且使得到的混合物冷却至0℃。通过过滤收集固体，且将收集的湿固体块放置在烧瓶中并用水(750mL)研碎。在室温下搅拌得到的悬浮液30min，然后通过过滤收集固体。用水(250mL)和甲基叔丁基醚(MTBE，500mL)洗涤收集的固体，且于45℃在真空炉中干燥至恒重，以提供灰白色粉末1-(2-氯-1-羟基-3-(喹啉-6-基)丙基)吡咯烷-2，5-二酮(11，378.7g，701.3g理论值，54％产率)。对于11：¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δppm 8.86(dd，1H，J＝4.15Hz，1.66Hz)，8.33(dd，1H，J＝8.51Hz，1.04Hz)，7.98(d，1H，J＝8.72Hz)，7.85(d，1H，J＝1.66Hz)，7.68(dd，1H，J＝8.51Hz，1.87Hz)，7.51(dd，1H，J＝8.29Hz，4.15Hz)，7.36(d，1H，J＝7.05Hz)，5.28(dd，1H，J＝9.54Hz，6.85Hz)，5.07(dt，1H，J＝9.75Hz，2.70Hz)，3.65(dd，1H，J＝14.52Hz，2.49Hz)，3.09(dd，1H，J＝14.52Hz，9.75Hz)，2.64(s，4H)；C₁₆H₁₅ClN₂O₃(分子量318.75)，LCMS(EI)m/e 319.2(M⁺+H)。

方法II：使3-(喹啉-6-基)丙醛(9，74.8g，0.404mol)在乙腈(202mL，3.87mol)中的溶液冷却至0℃，然后在0℃下，加入L-脯氨酸(4.70g，0.0404mol，0.10当量)、苯甲酸(4.96g，0.0404mol，0.10当量)和N-氯代琥珀酰亚胺(NCS，57.8g，0.424mol，1.05当量)。在0℃下搅拌反应混合物3h，且允许得到的澄清溶液升至室温，且在室温下搅拌18h。反应混合物变为稠的悬浮液，且LC/MS表明反应完成。将乙酸乙酯(EtOAc，202mL)加入到反应混合物中，且在室温下搅拌得到的混合物1h。通过过滤收集固体，用乙酸乙酯(EtOAc，100mL)洗涤和于40℃-45℃在真空下干燥固体至恒重，以提供灰白色粉末1-(2-氯-1-羟基-3-(喹啉-6-基)丙基)吡咯烷-2，5-二酮(11，88.8g，128.8g理论值，69％产率)，发现该灰白色粉末在每一个可对比的方面与从方法I制得的物质相同。

方案3(实施例19-21)

实施例19

2-氟-4-(7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基)苯甲酸(14)

将2-氟-4-(7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基)苯甲氰(13，277.5g，0.73mol，1.0当量)在浓盐酸(2500mL)和水(250mL)中的悬浮液加热至100℃(此时为均质的)，且在约100℃搅拌18h。当LC/MS表明反应为完成时，使反应混合物冷却至70℃-80℃，然后用水(2500mL)稀释反应混合物。然后，使得到的稀释的反应混合物冷却至室温(黄色固体在40℃-50℃时形成)且随后冷却至0℃-5℃。然后，通过过滤收集固体，用少量的1N HCl水溶液(100mL)洗涤固体和于45℃下在真空炉中干燥固体至恒重，以提供黄色到亮黄色粉末2-氟-4-(7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基)苯甲酸(14，271g，291.5g理论值，93％产率)。对于14：¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 9.34(s，1H)，9.23(dd，1H，J＝5.19Hz，1.45Hz)，9.08(d，1H，J＝8.29Hz)，8.38(d，1H，J＝8.92Hz)，8.30(d，1H，J＝1.24Hz)，8.18(dd，1H，J＝8.72Hz，1.87Hz)，8.12(s，1H)，8.08-8.00(m，4H)，4.75(s，2H)；C₂₂H₁₆Cl₂FN₅O₂(分子量472.30)，C₂₂H₁₄FN₅O₂(游离碱：分子量399.38)，LCMS(EI)m/e 400.0(M⁺+H)。

实施例20

2-氟-N-甲基-4-(7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基)苯甲酰胺(15)

在室温下，于15min内用2M甲胺在THF中的溶液(1830mL，3.656mol，4.0当量)处理2-氟-N-甲基-4-(7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基)苯甲酸(14，431.4g，0.914mol，1.0当量)和六氟磷酸(苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷基磷(PyBOP，570g，1.1mol，1.2当量)在N，N-二甲基甲酰胺(DMF，3700mL)中的悬浮液。在加入甲胺的过程中，使反应温度增加到30℃，且完成甲胺的加入后，反应混合物就变为均质。然后，将三乙胺(TEA，382mL，2.742mol，3.0当量)加入到反应混合物中，且在室温下搅拌得到的反应混合物2h-4h。当LC/MS表明偶联反应为完成时，用水(950mL)处理反应混合物。使得到的悬浮液在冰浴中冷却至0℃-5℃，且在0℃-5℃下搅拌30min。通过过滤收集固体，且用水(200mL)洗涤。然后，将湿固体块悬浮在水和乙腈(体积比1/1，2000mL)的混合物中，且在室温下搅拌得到的悬浮液1h。通过过滤收集固体，用水和乙腈洗涤固体，且于40℃-45℃下在真空炉中干燥固体至恒重，以提供黄色到亮黄色粉末2-氟-N-甲基-4-(7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基)苯甲酰胺(15，322g，377g理论值，85.4％产率)。对于15：¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 9.20(s，1H)，8.82(dd，1H，J＝4.05，1.56Hz)，8.38(br m，1H)，8.27(dd，1H，J＝8.50Hz，1.25Hz)，8.06-7.93(m，5H)，7.81-7.74(m，2H)，7.49(dd，1H，J＝8.40Hz，4.35Hz)，4.62(s，2H)，2.78(d，3H，J＝4.36Hz)；C₂₃H₁₇FN₆O(分子量412.42)，LCMS(EI)m/e 413.1(M⁺+H)。

实施例21

2-氟-N-甲基-4-(7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基)苯甲酰胺二盐酸盐(21，二盐酸盐)

将2-氟-N-甲基-4-(7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基)苯甲酰胺(15，421.2g，1.021mol)在甲醇(MeOH，6600mL)中的悬浮液加热至55℃，然后，在55℃下滴加入浓盐酸水溶液(浓HCl，37wt.％，12M，420mL，5.10mol，5.0当量)在异丙醇(IPA，1510mL)中的预混合溶液。在55℃下搅拌得到的澄清溶液30min，然后，于30min内通过另外的漏斗加入甲基叔丁基醚(MTBE，6750mL)。在加入甲基叔丁基醚之后，固体缓慢地沉淀出来。在55℃下搅拌得到的混合物另外的1h，然后使得到的混合物逐渐冷却至室温。在室温下搅拌混合物过夜。通过过滤收集固体，用甲基叔丁基醚(MTBE，3×500mL)洗涤，且于45℃-55℃下在真空炉中干燥至恒重。获得期望的2-氟-N-甲基-4-(7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基)苯甲酰胺二盐酸盐(21，二盐酸盐，470.7g，495.5g理论值，95％产率)，其为灰白色到淡黄色的晶态固体。对于21(二盐酸盐)：熔点(分解)222℃；¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 9.46(s，1H)，9.25(dd，1H，J＝5.4Hz，1.4Hz)，9.12(d，1H，J＝8.3Hz)，8.51(m，1H)，8.47(d，1H，J＝0.9Hz)，8.34(d，1H，J＝1.3Hz)，8.23(s，1H)，8.21(dd，1H，J＝9.0Hz，1.8Hz)，8.09-8.02(m，3H)，7.79(dd，1H，J＝7.5Hz，8.3Hz)，4.77(s，2H)，2.78(s，3H，J＝4.5Hz)；¹³C NMR(100MHz，DMSO-d₆)δppm 163.4，159.4(d，J＝249.9Hz)，145.8，145.4，144.5，143.8，140.4，138.8，136.8，135.9，135.7(J＝8.6Hz)，131.2(J＝3.1Hz)，130.7，128.7，128.2，126.2(J＝14.9Hz)，126.0，123.1(J＝3Hz)，122.5，121.0，114.9(J＝5.6Hz)，28.4，26.3；¹⁹F NMR(376.3MHz，DMSO-d₆)δppm-113.2；C₂₃H₁₇FN₆O(游离碱，分子量412.42)，LCMS(EI)m/e 413.1(M⁺+H)和435.0(M⁺+Na)。

方案4(实施例22-25)

实施例22

1，2，4-三嗪-3-胺(16)

在室温下，将乙二醛(57Kg的40wt％水溶液，393mol，0.73当量)的水溶液加入到氨基胍碳酸氢盐(73Kg，536.3mol)在水(400L)中的悬浮液中。几乎立即开始生成二氧化碳(CO₂)。然后，在室温下搅拌反应混合物18h，且在约2h之后，气体的生产实际上已停止。然后，过滤反应混合物，且在减压下将滤液蒸发至干。然后，用冷甲醇(MeOH，3×120L)萃取残留物，且使合并的甲醇溶液冷却至0℃-5℃，然后将其过滤以去除残留的固体。然后，在减压下浓缩滤液，且残留物在乙腈中重结晶，以提供细的白色针状物1，2，4-三嗪-3-胺(16，34Kg，37.76Kg理论值，90％产率)。对于16：¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 8.54(d，1H，J＝2.33Hz)，8.20(d，1H，J＝2.33Hz)，7.15(br s，2H)。

实施例23

6-溴-1，2，4-三嗪-3-胺(17)

在5℃-15℃下，用N-溴琥珀酰亚胺(NBS，66Kg，370mol，1.08当量)处理1，2，4-三嗪-3-胺(16，33Kg，343.4mol)在水(500L)中的溶液，且在10℃-15℃下搅拌得到的反应混合物1h-4h。当TLC和LC/MS表明溴化反应为完成时，用饱和碳酸钠(Na₂CO₃)水溶液处理反应混合物。然后，用乙酸乙酯(EtOAc，3×500L)萃取得到的溶液。用水(2×100L)洗涤合并的有机萃取物、在硫酸镁(MgSO₄)上干燥和在减压下浓缩，以提供黄色到棕色粉末6-溴-1，2，4-三嗪-3-胺(17，10.3Kg，60Kg理论值，17.2％产率)。对于17：¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 8.39(s，1H)，7.47(br，2H)；C₃H₃BrN₄(分子量174.99)，LCMS(EI)m/e 175.0/176.9(M⁺+H)。

实施例24

2-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊环-2-基)苯甲氰(19)

步骤1：在室温下，用由镁(Mg，1.8Kg，150mol，1.2当量)、2-氯丙烷(7.2Kg，92mol，1.47当量)在THF(20L)中生成的异丙基氯化镁和2-(2-(二甲胺)乙氧基)-N，N-二甲基乙胺(11Kg，69mol，1.1当量)的溶液处理2-氟-4-溴苯甲腈(18，12.5Kg，62.5mol)在无水四氢呋喃(THF，30L)中的溶液。然后，在12℃-20℃下搅拌得到的混合物另外的2h，然后在10℃-15℃下，用硼酸三甲酯(9Kg，86.7mol，1.4当量)处理得到的混合物。在7℃-16℃下搅拌反应混合物40min。当TLC和LC/MS表明反应为完成时，在室温下用1N盐酸水溶液(HCl，35Kg)将反应混合物猝灭。然后，用乙酸乙酯(EtOAc，4×35L)萃取所猝灭的含水反应混合物。用水(50L)洗涤合并的有机萃取物、在硫酸镁(MgSO₄)上干燥并在减压下浓缩。然后，使残留的固体从乙腈(20L)和正己烷(45L)中重结晶，以提供相应的粗制3-氟-4-氰基苯基硼酸(5.0Kg，48％产率)。

步骤2：在室温下，用频哪醇(13.2Kg，111.6mol，2.0当量)处理粗制3-氟-4-氰基苯基硼酸(9.2Kg，55.8mol)在环己烷(150L)中的悬浮液，且使得到的反应混合物升至40℃持续4h。当TLC和LC/MS表明反应为完成时，使反应混合物冷却至室温，然后用水(2×75L)洗涤反应混合物。然后，在硫酸镁(MgSO₄)上干燥，并在减压下浓缩有机层，以提供淡黄色固体2-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊环-2-基)苯甲氰(19，11.8Kg，13.8Kg理论值，85.6％产率)。对于19：¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δppm 7.92(t，1H，J-7.00Hz)，7.62(m，2H)，1.29(s，12H)。

实施例25

4-(3-氨基-1，2，4-三嗪-6-基)-2-氟苯甲腈(20)

6-溴-1，2，4-三嗪-3-胺(17，100.0g，571.47mmol)和2-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊环-2-基)苯甲氰(19，145.43g，588.61mmol，1.03当量)在1，4-二噁烷(1200mL)中的混合物在室温下搅拌l0min，然后加入在水(600mL)中的碳酸钾(K₂CO₃，355.4g，2572mmol)，以得到深红色溶液。通过氮气鼓泡使混合物脱气10min，然后在室温下加入与二氯甲烷(1∶1)络合的1，1’-双(二苯基膦)二茂铁二氯化钯(II)(Pd(dppf)₂Cl₂，14.14g，17.14mmol，0.03当量)。通过氮气鼓泡使得到的反应混合物脱气10min，且然后将其在氮气下在86℃加热。在2h之后，HPLC表明反应为完成，且使反应混合物冷却至室温，且然后用冰-水浴冷却至0℃-5℃。将1，4-二噁烷(400mL)加入到冷却的反应混合物中，然后，滴加3.3M盐酸水溶液(HCl，1900mL)的溶液并搅拌，以将pH调整至0.40-0.93。在室温下搅拌混合物30min，且将其过滤。收集的固体与1，4-二噁烷(260mL)搅拌在一起，且然后加入1N HCl(400mL)。在室温下搅拌混合物l0min，且将其过滤。将滤液与先前获得的滤液合并，且用乙酸乙酯(EtOAc，2×2L)洗涤。用1N盐酸水溶液(HCl，3×200mL)萃取合并的乙酸乙酯萃取物。然后，用活性炭(20g)处理合并的水溶液，且在室温下搅拌30min。通过硅藻土床过滤混合物，且用冰-水浴将滤液冷却至0℃-5℃。在5℃-12℃下，滴加50％的氢氧化钠在水中的溶液(NaOH，240mL，4500mmol)，以将pH调整至10.6-11.6。在0℃-5℃下搅拌混合物30min，且然后将其过滤。用氢氧化铵水溶液(1到3次的28％的浓NH₄OH对水，1900mL)洗涤收集的固体，且于40℃-45℃下在真空下干燥至恒重，以提供灰白色粉末4-(3-氨基-1，2，4-三嗪-6-基)-2-氟苯甲腈(20，101.2g，122.9g理论值，82.3％产率)。对于20：¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 8.94(s，1H)，8.12(d，1H，J＝11.41Hz)，8.08-8.00(m，2H)，7.71(br s，2H)；C₁₀H₆FN₅(分子量215.19)，LCMS(EI)m/e 215.9(M⁺+H)。

方案5(实施例26)

实施例26

2-氟-4-(7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基)苯甲氰(13)

步骤1：在室温下，用氮气吹扫配置有顶部搅拌器、热电偶、蒸馏装置和氮气入口的22L反应器，然后，将4-(3-氨基-1，2，4-三嗪-6-基)-2-氟苯甲腈(20，300g，1.39mol)、1-(2-氯-1-羟基-3-(喹啉-6-基)丙基)吡咯烷-2，5-二酮(11，635g，1.99mol，1.43当量)和乙二醇(3.0L)装入反应器中。将得到的反应混合物加热至130℃-140℃，且连续地使鼓泡的氮气通过。用蒸馏装置收集蒸馏物。在3-4h之后，HPLC表明反应为完成(存在＜1.5％的起始物质20)。使反应混合物逐渐冷却至室温。于60min内搅拌下，将2.5％碳酸钠水溶液(Na₂CO₃，14.1L)加入到反应器中，且在室温下搅拌混合物1-2h。然后，将混合物过滤，且用水(9.6L)洗涤固体和在真空下干燥固体，以提供期望的粗产物(13，980.4g)，将该粗产物与多个其他的批次合并，用于如下所述的纯化。

步骤2：在室温下，用硅胶(SiO₂，2700g)处理粗产物(13，2754g)在二氯甲烷(CH₂Cl₂，37.8L)和甲醇(0.54L)中的溶液，且在室温下搅拌得到的混合物90min。将混合物过滤且用CH₂Cl₂(18L)和甲醇(0.26L)的混合物洗涤滤饼。用硅胶(SiO₂，1800g)处理合并的滤液，且在室温下搅拌得到的混合物90min，然后将其过滤。用CH₂Cl₂(18L)和甲醇(0.26L)的混合物洗涤滤饼。于20℃-60℃下在减压下浓缩合并的滤液至8-12L。用异丙醇(IPA)和水(1∶1，9L)的混合物分批处理残留物，且在1atm下继续蒸馏直至温度达到68℃-75℃。使混合物冷却至室温，且通过过滤收集固体。用异丙醇(IPA，3.6L)洗涤收集的固体，且于40℃-45℃下在真空下干燥至恒重，以提供纯的亮黄色粉末2-氟-4-(7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基)苯甲氰(13，940.27g)。上述反应和纯化方法提供产物13，产率为59-64％。发现通过该合成方法制得的化合物13的光谱数据与从先前描述的通过氰化化合物12制得的物质获得的光谱数据相同。对于13：¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 9.24(s，1H)，8.81(dd，1H，J＝4.15，1.66Hz)，8.26-8.12(m，4H)，8.02(s，1H)，7.95-7.93(m，2H)，7.76(dd，1H，J＝8.71，2.08Hz)，7.47(dd，1H，J＝8.70，4.15Hz)，4.62(s，2H)；C₂₂H₁₃FN₆(分子量380.38)，LCMS(EI)m/e381.0(M⁺+H)。

方案6(实施例27-29)

实施例27

2-氟-N-甲基-4-(7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基)苯甲酸(14)

在室温下，将化合物13(900g，2.37mol)、水(0.9L)和浓HCl(9.1L)装入配置有顶部搅拌器、热电偶和氮气入口的22L的反应器中。将得到的反应混合物加热至100℃，持续12h。当HPLC表明反应完成时，使反应混合物冷却至90℃，且于15min内加入水(4.9L)，同时维持温度在65-90℃。使反应混合物进一步冷却至室温，且在室温下搅拌反应混合物3h。通过过滤收集固体，用水(1.2L)洗涤，且于40-45℃下在真空中干燥至恒重，以提供淡黄色固体2-氟-4-(7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基)苯甲酸(14，945g，946.5g理论值，99.8％产率)，发现该淡黄色固体与由先前的方法制得的物质相同。对于14：¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 9.34(s，1H)，9.23(dd，1H，J＝5.19Hz，1.45Hz)，9.08(d，1H，J＝8.29Hz)，8.38(d，1H，J＝8.92Hz)，8.30(d，1H，J＝1.24Hz)，8.18(dd，1H，J＝8.72Hz，1.87Hz)，8.12(s，1H)，8.08-8.00(m，4H)，4.75(s，2H)；C₂₂H₁₆Cl₂FN₅O₂(分子量472.30)，C₂₂H₁₄FN₅O₂(游离碱：分子量399.38)，LCMS(EI)m/e 400.0(M⁺+H)。

实施例28

2-氟-N-甲基-4-(7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基)苯甲酰胺(15)

方法A：在室温下，将HOBt(358g，2.65mol，1.25当量)和EDC盐酸盐(508.4g，2.65mol，1.25当量)加入到搅拌的2-氟-4-(7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基)苯甲酸(14，1000g，2.12mol)在乙腈(5L)和CH₂Cl₂(10L)中的溶液中。然后，将CH₂Cl₂(10L)的另一部分加入到反应混合物中，且在室温下搅拌得到的反应混合物20min。搅拌下，加入甲胺(MeNH₂)在THF(3.44L，6.88mol，3.25当量)中的2.0M溶液，同时维持温度在15-30℃。在室温下搅拌反应混合物2h，然后加入另一部分甲胺(MeNH₂)在THF(1.06L，2.12mol，1当量)中的2.0M溶液。在室温下搅拌反应混合物1h，且加入EDC盐酸盐(406g，2.12mol，1当量)的第二部分，且继续搅拌6h。当HPLC表明剩余少于1％的起始物质(14)时，于＜50℃下，在减压下浓缩反应混合物。在蒸馏过程中，加入乙腈(20L)，且继续蒸馏直至剩余体积为约20L。用2.5％碳酸钠(Na₂CO₃，40L)的水溶液处理残留物，且在室温下搅拌得到的混合物30min。通过过滤收集固体，用水(3×4.0L)洗涤固体，通过过滤器上的抽吸真空将固体风干，以提供粗制期望的产物(15)。在室温下，用CH₂Cl₂(17.6L)和MeOH(5.2L)处理粗制固体，且搅拌得到的混合物直至获得澄清溶液。将溶液过滤以去除不可溶的物质。强烈搅拌下，将碳酸钠(Na₂CO₃，17.6L)的2.5％水溶液加入到滤液，且在室温下搅拌混合物60min，以给予悬浮液。加入庚烷(20L)，且搅拌混合物另外的60min。将混合物过滤，且用水(3×4.0L)和庚烷(4.0L)连续地洗涤，且在真空中干燥，以提供亮黄色固体2-氟-N-甲基-4-(7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基)苯甲酰胺(15，1095.3g，874.3g理论值)，发现该亮黄色固体不是完全干燥的，且包含～25％残留的溶剂。该湿固体被直接用于后续的二盐酸盐(21)的形成反应，而不需要进一步干燥。少量的样品被完全地干燥用于光谱分析，且数据与通过先前的方法获得的那些数据一致：对于15：¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 9.20(s，1H)，8.82(dd，1H，J＝4.05，1.56Hz)，8.38(br m，1H)，8.27(dd，1H，J＝8.50Hz，1.25Hz)，8.06-7.93(m，5H)，7.81-7.74(m，2H)，7.49(dd，1H，J＝8.40Hz，4.35Hz)，4.62(s，2H)，2.78(d，3H，J＝4.36Hz)；C₂₃H₁₇FN₆O(分子量412.42)，LCMS(EI)m/e413.1(M⁺+H)。

方法B：在室温下，向2-氟-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苯甲酸二盐酸盐(14，50.00g，0.1059mol)加入甲苯(300mL)且随后加入亚硫酰氯(SOCl₂，77.2mL，1.06mol，10.0当量)。在N₂下，将得到的反应混合物在72℃加热，且在该反应之后进行起始物质苯甲酸(14)的消失的HPLC分析。在48h之后，HPLC表明剩余～4％起始物质，且反应停止。于40-50℃下，通过真空蒸馏将反应混合物浓缩至干。向残留的固体加入甲苯(300mL)，且于40-50℃下，通过真空蒸馏将溶剂去除。加入THF(250mL)且用冰-水浴使混合物冷却。滴加2.0M在THF(529mL，1.06mol，10当量)中的甲胺(MeNH₂)。允许得到的反应混合物升至室温，且在室温下搅拌得到的反应混合物17h。将水(600mL)加入到反应混合物中，且于40℃下，通过真空蒸馏将THF(400-500mL)去除。加入碳酸钠(15.60g，0.147mol)，且在室温下搅拌混合物30min。将混合物过滤，且用水(3×30mL)洗涤固体，并干燥。将固体溶解在预混合的二氯甲烷(CH₂Cl₂，1000mL)和甲醇(MeOH，300mL)中。伴随着强烈的搅拌，滴加0.236M碳酸钠(Na₂CO₃)在水(1000mL)中的溶液。在加入碳酸钠(Na₂CO₃)的水溶液之后，固体缓慢地沉淀出来。然后，搅拌下滴加己烷(1000mL)。在室温下搅拌混合物30-40min，且通过过滤收集固体。用水(3×200mL)洗涤收集的固体，且于40-50℃下，在真空中干燥至恒重，以提供亮黄色固体2-氟-N-甲基-4-(7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基)苯甲酰胺(15，42.2g，43.67g理论值，96.6％产率)，发现该亮黄色固体在每一个可对比的方面与通过方法A制得的物质相同。对于15，¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 9.20(s，1H)，8.82(dd，1H，J＝4.05，1.56Hz)，8.38(br m，1H)，8.27(dd，1H，J＝8.50Hz，1.25Hz)，8.06-7.93(m，5H)，7.81-7.74(m，2H)，7.49(dd，1H，J＝8.40Hz，4.35Hz)，4.62(s，2H)，2.78(d，3H，J＝4.36Hz)；C₂₃H₁₇FN₆O(分子量412.42)，LCMS(EI)m/e 413.1(M⁺+H)。

实施例29

2-氟-N-甲基-4-(7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基)苯甲酰胺二盐酸盐(21，二盐酸盐)

在室温下，将2-氟-N-甲基-4-(7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基)苯甲酰胺(15，2100g，包含～25％残留的溶剂)和过滤的USP水(7.6L)装入50L反应器中。通过加料漏斗，搅拌下加入6M盐酸(HCl，3L)水溶液。在室温下搅拌得到的反应混合物1.5h。在1h的时段内，在搅拌下，将丙酮(30.5L)加入到反应器中，且在室温下搅拌得到的混合物2.5h。通过过滤收集固体，用丙酮(2×4.3L)洗涤，且在真空中干燥至恒重，以提供浅黄色晶态粉末2-氟-N-甲基-4-(7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基)苯甲酰胺二盐酸盐(21，二盐酸盐，1629.2g，1830.6g理论值，89％)，发现该浅黄色晶态粉末在每一个可对比的方面与通过先前的方法制得的物质相同。对于21(二盐酸盐)：¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 9.46(s，1H)，9.25(dd，1H，J＝5.4Hz，1.4Hz)，9.12(d，1H，J＝8.3Hz)，8.51(m，1H)，8.47(d，1H，J＝0.9Hz)，8.34(d，1H，J＝1.3Hz)，8.23(s，1H)，8.21(dd，1H，J＝9.0，1.8Hz)，8.09-8.02(m，3H)，7.79(dd，1H，J＝7.5，8.3Hz)，4.77(s，2H)，2.78(s，3H，J＝4.5Hz)；¹³C NMR(100MHz，DMSO-d₆)δppm 163.4，159.4(d，J＝249.9Hz)，145.8，145.4，144.5，143.8，140.4，138.8，136.8，135.9，135.7(J＝8.6Hz)，131.2(J＝3.1Hz)，130.7，128.7，128.2，126.2(J＝14.9Hz)，126.0，123.1(J＝3Hz)，122.5，121.0，114.9(J＝5.6Hz)，28.4，26.3；¹⁹F NMR(376.3MHz，DMSO-d₆)δppm-113.2；C₂₃H₁₇FN₆O(游离碱，分子量412.42)，LCMS(EI)m/e 413.1(M⁺+H)和435.0(M⁺+Na)。

实施例30

2-氟-N-甲基-4-(7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基)苯甲酰胺二盐酸盐(21)的物理特征

二盐酸盐是通过对着白色背景眼检证实的灰白色到淡黄色的粉末。

实施例31

溶解度研究

发现二盐酸盐(21，见实施例21)于25℃下的溶解度：在水中为约4.9mg/mL；在pH 7.4的缓冲液中为0.002mg/mL；在pH 8.0的缓冲液中为0.002mg/mL；以及在0.1N HCl水溶液中为约24mg/mL。通过将样品混合在选择的含水溶剂(0.1N HCl、水、pH 7.4的缓冲液和pH 8.0的缓冲液)中至少12小时来确定平衡溶解度。然后，通过使用单点校准的HPLC来确定样品浓度。

实施例A

体外c-Met激酶测定

在体外筛选具有抑制c-Met激酶活性的能力的2-氟-N-甲基-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苯甲酰胺。如文献中描述地且进行一些修改来确定用于抑制c-Met激酶的IC₅₀值(Wang，X.等人，MoI.Cancer Ther.2003，2(11)：1085-1092；Calic，M.等人，Croatica Chemical ACTA.2005，78(3)：367-374)。简要来说，组氨酸标记的c-Met催化结构域融合蛋白(Invitrogen，#PV3143)被用于测定。IC₅₀测量基于聚Glu-Tyr(Sigma-Aldrich，# P0275)的磷酸化程度，聚Glu-Tyr被涂布在(0.01mg/每孔)96-孔微量培养板上(R&D Systems，#DY990)。反应在50μL的溶液中进行，溶液包含50mM HEPES(pH 7.5)、10mM MnCl₂、10mM MgCl₂、0.5mM DTT、100μMNa₃VO₄、5μM ATP(Cell Technology Technology，#9804)和测试化合物的连续稀释液。反应在30℃下持续25分钟。在反应完成之后，弃去板的内容物。然后，用TBS-T(250μL/孔，5x)洗涤板，然后用包含1％BSA的TBS-T阻断2小时。弃去板的内容物，然后加入稀释(1∶60,000)在包含1％BSA的TBS-T中的100μL(每孔)的过氧化物酶-标记的抗-磷酸酪氨酸抗体(Sigma，#A5964)，并孵育1h。用TBS-T(250μL/孔，5x)洗涤板，且随后，使用100μL的H₂O₂和四甲基联苯胺(R&D Systems，#DY999)(1∶1混合物)进行显色反应。用100μL的2N H₂SO₄在几分钟内停止反应。使用微量培养板读数器在450nm处且波长校正在540nm来立即测量光密度。用GraphPad Prism软件计算IC₅₀值。确定激酶的线性范围(即，保持与初始速率相等的比率的时间段)，且在该范围内进行IC₅₀测定。

Wang，X.等人，Potent and selective inhibitors of the Met[hepatocyte growth factor/scatter factor(HGF/SF)receptor]tyrosine kinase block HGF/SF-induced tumor cell growth and invasion.(Met[肝细胞生长因子/分散因子(HGF/SF)受体]酪氨酸激酶的强效的和选择性的抑制剂阻断HGF/SF-诱导的肿瘤细胞生长和侵入)Mol.Cancer Ther.2003，2(11)：1085-1092。

Calic，M.，等人，Flavonoids as inhibitors of Lck and Fyn kinases(类黄酮作为Lck和Fyn激酶的抑制剂).Croatica Chemica ACTA.2005，78(3)：367-374.

发现2-氟-N-甲基-4-(7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基)苯甲酰胺具有小于500nM的IC₅₀值。见，例如，美国序列号11/942,130。

实施例B

细胞增殖/存活测定

代表多种人类癌症(SNU-1和SUN-5胃癌、A549和NCI-H441肺癌、U-87成胶质细胞瘤、HT-29结肠癌、786-O肾癌、PC-3胰腺癌)的细胞系可从美国典型菌种收藏所(American Type Culture Collection)获得，且通常被保存在培养基中和ATCC推荐的条件下。可以预定个别的细胞系在增殖/存活测定中使用的最优的细胞密度。筛选具有抑制细胞增殖/存活的能力的化合物，且确定IC₅₀值。下面是用于SNU-5和SNU-1细胞增殖/存活测定的样品方案。SNU-5和SNU-1细胞分别以4000个细胞/孔和2000个细胞/孔被播种到具有合适的培养基的96孔细胞培养板中，培养基包含2％FBS且补充单个化合物的连续稀释，最终体积为100μL/孔。在孵育72小时之后，将24μL的CellTiter

AQueous One溶液试剂(Promega，#G3581)加入到每一个孔中(最终浓度＝333μg/mL)，且板在37℃的培养箱中再孵育2小时。使用微量培养板读数器在450nm处和波长校正在650nm来测量线性范围中的光密度。用GraphPad Prism软件计算IC₅₀值。使用A549、NCI-H441、U-87、HT-29、786-0和PC-3细胞进行增殖测定，首先，使细胞在低血清条件(在合适的培养基中的0.1-0.5％FBS)中饥饿48小时，然后用不同浓度的化合物处理2小时。在用HGF(50ng/mL)(R&D，#294-HGN)处理细胞24小时之后，加入CellTiter

AQueous One溶液试剂，且将板孵育2小时。结果由板读数记录。

实施例C

基于细胞的c-Met磷酸化测定

使用免疫印迹测定和基于ELISA的c-Met磷酸化分析，可估计化合物在相关的细胞系中(SUN-5胃癌细胞系、A549和NCI-H441肺癌细胞系、U-87成胶质细胞瘤细胞系、HT-29结肠癌细胞系、786-O肾癌细胞系、PC-3胰腺癌细胞系和HUVEC细胞系)对c-Met磷酸化的抑制效应。细胞在合适的培养基中生长，且用不同浓度的单个化合物处理细胞。对于SNU-5、HT-29、786-0细胞，细胞生长在补充有0.2％或2％FBS的合适的培养基中并用化合物处理3-4小时。使用从Biosource International获得并稍微修改的试剂和方案(#FNN0011)制备全细胞蛋白质提取物。简要来说，在4℃下，通过在具有蛋白酶和磷酸酶抑制剂的裂解液[50mM HEPES(pH 7.5)、100mM NaCl、1.5mMMgCl₂、10％甘油、1％Triton X-100、1mM原钒酸钠、1mM氟化钠、抑肽酶(2μg/mL)、亮抑酶肽(2μg/mL)、抑肽素A(2μg/mL)和苯甲基磺酰氟化物(1mM)]中孵育来制得蛋白质提取物。通过14000×g离心20分钟，从蛋白质提取物清除细胞碎片。对于A549、H441、U-87和PC-3细胞，使细胞血清(0.2％FBS)饥饿至少24小时，然后，用不同浓度的化合物预处理1小时。在用HGF(50ng/mL)处理细胞10分钟之后，制备全细胞提取物。

免疫印迹测定

从商业来源获得相关的抗体：兔多克隆抗体，包括抗人c-Met(Santa Cruz Biotechnology，# sc-161)和抗-磷酸化-c-Met(Biosource International，pY1230/4/5和pY1003)。对于免疫印迹，通过在10％SDS-PAGE凝胶上的电泳溶解来自单个处理条件的10-20μg的蛋白质提取物，且将其电转移至硝化纤维(或PVDF)膜。将膜阻断在包含3％牛奶和0.1％Tween-20的PBS中1小时，然后，将一级抗-c-Met抗体在阻断溶液中培养1小时。在3次洗涤之后，使膜用合适的辣根轭合的二级抗体孵育1小时。在最终的洗涤之后，印迹用化学发光检测试剂孵育5分钟且将印迹暴露于X-射线胶片。扫描图像、定量和用总c-Met校正，且计算IC₅₀值。具有10μM或更少的IC₅₀的化合物被认为是有活性的。

ELISA

根据生产商的说明书(R&D Systems，#DYC2480)使用人体磷酸-c-Met ELISA试剂盒分析细胞蛋白质提取物。预定单独的细胞系的蛋白质提取物的最佳量。简便来说，对于测定，用捕获抗-人体c-Met抗体在96孔微量培养板中捕获适当量的蛋白质提取物2小时。在洗涤之后，加入检测抗体(HRP-轭合的抗磷酸酪氨酸抗体)且孵育2小时。在另外的洗涤之后，将100μL底物溶液(H₂O₂和四甲基联苯胺的1∶1的混合物)加入到每一个孔中，且在显色过程中的适当量的时间之内用2N H₂SO₄使反应停止。使用微量培养板读取器在450nm处且波长校正在540nm来测量线性范围中的光密度。用GraphPad Prism软件计算IC₅₀值。

除本文所描述的那些之外，由上述描述，本发明的各种改良对于本领域技术人员来说将是明显的。这样的改良也落在所附权利要求的范围之内。本申请所引用的每一篇参考文献，包括所有的专利、专利申请和出版物在此通过引用以其整体并入。

Claims (83)

1.一种盐，所述盐是2-氟-N-甲基-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苯甲酰胺二盐酸盐或其水合物或溶剂合物。

2.一种权利要求1所述的盐的水合物。

3.如权利要求2所述的水合物，其特征在于熔点为约220℃到约224℃。

4.如权利要求2所述的水合物，其特征在于熔点为约222℃。

5.如权利要求2所述的水合物，其为晶体。

6.如权利要求2所述的水合物，其具有特征为吸热峰在约222℃的DSC差示热分析图。

7.如权利要求2所述的水合物，其具有基本上如图2所示的DSC差示热分析图。

8.如权利要求2所述的水合物，其具有基本上如图3所示的TGA。

9.如权利要求2所述的水合物，其具有包括在2θ角度约26.0处表达的特征峰的X-射线粉末衍射图像。

10.如权利要求2所述的水合物，其具有包括在2θ角度约24.7处表达的特征峰的X-射线粉末衍射图像。

11.如权利要求2所述的水合物，其具有包括在2θ角度约18.2处表达的特征峰的X-射线粉末衍射图像。

12.如权利要求2所述的水合物，其具有包括在2θ角度约29.3处表达的特征峰的X-射线粉末衍射图像。

13.如权利要求2所述的水合物，其具有包括在2θ角度约7.8处表达的特征峰的X-射线粉末衍射图像。

14.如权利要求2所述的水合物，其具有包括在2θ角度约26.0和24.7处表达的特征峰的X-射线粉末衍射图像。

15.如权利要求2所述的水合物，其具有包括在2θ角度约26.0、24.7、18.2、29.3和7.8处表达的特征峰的X-射线粉末衍射图像。

16.一种盐，所述盐是2-氟-N-甲基-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苯甲酰胺二苯磺酸盐或其水合物或溶剂合物。

17.如权利要求16所述的盐，其中所述盐是无水的。

18.如权利要求16所述的盐，其特征在于熔点为约268℃到约272℃。

19.如权利要求16所述的盐，其特征在于熔点为约270℃。

20.如权利要求16所述的盐，其为晶体。

21.如权利要求16所述的盐，其具有特征为吸热峰在约270℃的DSC差示热分析图。

22.如权利要求16所述的盐，其具有基本上如图5所示的DSC差示热分析图。

23.如权利要求16所述的盐，其具有包括在2θ角度约20.2处表达的特征峰的X-射线粉末衍射图像。

24.如权利要求16所述的盐，其具有包括在2θ角度约15.0处表达的特征峰的X-射线粉末衍射图像。

25.如权利要求16所述的盐，其具有包括在2θ角度约16.3处表达的特征峰的X-射线粉末衍射图像。

26.如权利要求16所述的盐，其具有包括在2θ角度约18.3处表达的特征峰的X-射线粉末衍射图像。

27.如权利要求16所述的盐，其具有包括在2θ角度约23.8处表达的特征峰的X-射线粉末衍射图像。

28.如权利要求16所述的盐，其具有包括在2θ角度约4.9处表达的特征峰的X-射线粉末衍射图像。

29.如权利要求16所述的盐，其具有包括在2θ角度约15.0、16.3、18.3、20.2、23.8和4.9处表达的特征峰的X-射线粉末衍射图像。

30.一种组合物，其包括权利要求1-29中任一项所述的盐或其水合物或溶剂合物和至少一种药学上可接受的载体。

31.一种抑制受体或非受体酪氨酸激酶的活性的方法，所述方法包括将所述激酶与权利要求1-29中任一项所述的盐或其水合物或溶剂合物接触。

32.如权利要求31所述的方法，其中所述激酶是c-Met。

33.一种抑制细胞中的HGF/c-Met激酶信号传导途径的方法，所述方法包括将所述细胞与权利要求1-29中任一项所述的盐或其水合物或溶剂合物接触。

34.一种抑制细胞的增殖活性的方法，所述方法包括将所述细胞与权利要求1-29中任一项所述的盐或其水合物或溶剂合物接触。

35.一种抑制患者的肿瘤生长的方法，所述方法包括向所述患者施用治疗有效量的权利要求1-29中任一项所述的盐或其水合物或溶剂合物。

36.一种抑制患者的肿瘤转移的方法，所述方法包括向所述患者施用治疗有效量的权利要求1-29中任一项所述的盐或其水合物或溶剂合物。

37.一种治疗患者的疾病的方法，其中所述疾病与HGF/c-MET信号传导途径的失调有关，所述方法包括向所述患者施用治疗有效量的权利要求1-29中任一项所述的盐或其水合物或溶剂合物。

38.如权利要求37所述的方法，其中所述疾病是癌症、动脉粥样硬化、肺纤维化、肾纤维化和再生、肝病、变应性紊乱、炎性疾病、自身免疫性疾患、脑血管疾病、心血管疾病或与器官移植有关的症状。

39.一种治疗患者的癌症的方法，所述方法包括向所述患者施用治疗有效量的权利要求1-29中任一项所述的盐或其水合物或溶剂合物。

40.如权利要求39所述的方法，其中所述癌症是癌、肌肉骨骼肉瘤、软组织肉瘤或造血系统恶性肿瘤。

41.如权利要求39所述的方法，其中所述癌症是膀胱癌、乳腺癌、子宫颈癌、胆管癌、直肠结肠癌、食道癌、胃癌、头颈癌、肾癌、肝癌、肺癌、鼻咽癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、甲状腺癌、骨肉瘤、滑膜肉瘤、横纹肌肉瘤、MFH/纤维肉瘤、平滑肌肉瘤、卡波西肉瘤、多发性骨髓瘤、淋巴瘤、成人T细胞白血病、急性髓细胞性白血病、慢性髓细胞样白血病、成胶质细胞癌、星形细胞瘤、黑素瘤、间皮瘤或维耳姆斯瘤。

42.一种制备权利要求2所述的水合物的方法，所述方法包括：

a)将包括2-氟-N-甲基-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苯甲酰胺和水的第一混合物与至少两当量的盐酸在包括水的溶剂中反应，以形成第二混合物；且

b)将所述第二混合物与甲基叔丁基醚化合。

43.如权利要求42所述的方法，其中步骤a)在约20℃到约30℃的温度下进行。

44.如权利要求42所述的方法，其中步骤a)和步骤b)在约室温下进行。

45.一种制备权利要求2所述的水合物的方法，所述方法包括：

a)将包括2-氟-N-甲基-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苯甲酰胺和甲醇的第一混合物与至少两当量的盐酸在包括异丙醇的溶剂中反应，以形成第二混合物；且

b)将所述第二混合物与丙酮化合。

46.如权利要求45所述的方法，其中步骤a)和b)在约50℃到约60℃的温度下进行。

47.如权利要求45所述的方法，其中步骤a)和b)在约55℃的温度下进行。

48.一种制备权利要求16所述的盐的方法，所述方法包括：

a)将包括2-氟-N-甲基-4-[7-(喹啉-6-基甲基)咪唑并[1，2-b][1，2，4]三嗪-2-基]苯甲酰胺和甲醇的第一混合物与至少两当量的苯磺酸在包括异丙醇的溶剂中反应，以形成第二混合物；且

b)将所述第二混合物与甲基叔丁基醚化合。

49.如权利要求48所述的方法，其中步骤a)和b)在约50℃到约60℃的温度下进行。

50.如权利要求48所述的方法，其中步骤a)和b)在约55℃的温度下进行。

51.一种制备式I的化合物或其盐的方法：

所述方法包括将式II的化合物

与式III的化合物

反应，以形成式I的化合物或其盐：

其中，X₁是氯、溴或碘。

52.如权利要求51所述的方法，其还包括将所述式I的化合物或其盐与强酸反应，以形成式IV的化合物或其盐：

53.如权利要求52所述的方法，其中所述酸是浓盐酸。

54.如权利要求52或53所述的方法，其还包括在至少一种偶联剂的存在下，将所述式IV的化合物或其盐与CH₃NH₂反应，以形成式V的化合物或其盐：

55.如权利要求54所述的方法，其中所述偶联剂选自1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)碳二亚胺、N-羟基苯并三唑、六氟磷酸(苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷基磷及其盐。

56.如权利要求52或53所述的方法，其还包括：

a)将所述式IV的化合物或其盐

与卤化剂反应，以形成式VI的化合物或其盐：

且

b)将所述式VI的化合物或其盐与CH₃NH₂反应，以形成式V的化合物或其盐：

其中，X₂是卤素。

57.如权利要求56所述的方法，其中所述卤化剂是亚硫酰氯。

58.如权利要求51-57中任一项所述的方法，其还包括通过包括将式IIa的化合物

与式IIb的化合物

反应的方法制备式II的化合物：

其中，X₁是氯、溴或碘。

59.如权利要求58所述的方法，其中所述式IIa的化合物与所述式IIb的化合物的反应在脯氨酸的存在下进行。

60.如权利要求58-59中任一项所述的方法，其中X₁是氯。

61.如权利要求58或59所述的方法，其还包括通过包括在钯催化剂和碱的存在下，将式IIc的化合物

与丙-2-烯-1-醇反应的方法制备式IIa的化合物：

其中，X₃是氯、溴或碘。

62.如权利要求61所述的方法，其还包括通过包括将式IId的化合物

与式HX’的酸反应的方法制备式IIa的化合物：

其中，X’是氯、溴或碘。

63.如权利要求62所述的方法，其还包括通过包括在氢化催化剂的存在下用氢气还原式IIe的化合物：

的方法制备式IId的化合物：

64.如权利要求63所述的方法，其中所述氢化催化剂是钯碳。

65.如权利要求63或64所述的方法，其还包括通过包括在偶联催化剂和碱的存在下，将式IIc的化合物与式IIf的化合物

反应的方法制备式IIe的化合物。

66.如权利要求65所述的方法，其中所述催化剂是醋酸钯和CuI的混合物。

67.如权利要求63所述的方法，其还包括通过包括将式IIg的化合物

与9-硼双环[3.3.1]壬烷反应，随后在偶联催化剂的存在下与式IIc的化合物

反应，以形成式IId的化合物的方法制备所述式IId的化合物

其中，X₃是氯、溴或碘。

68.如权利要求67所述的方法，其中所述偶联催化剂是二乙酸钯(II)。

69.如权利要求51到68中任一项所述的方法，其还包括通过包括在钯催化剂和碱的存在下，将式IIIa的化合物

与式IIIb的化合物

反应的方法制备所述式III的化合物；其中：

X₄是氯、溴或碘；且

每一个R_a独立地是C_1-6烷基；或

每一个R_a与两个氧原子和硼原子一起形成5-元杂环或6-元杂环；其中所述杂环任选地被1、2、3或4个独立地选择的C_1-4烷基取代。

70.如权利要求69所述的方法，其中所述式IIIb的化合物具有式IIIb-1：

71.如权利要求69或70所述的方法，其还包括通过将1，2，4-三嗪-3-胺与卤化剂反应来制备所述式IIIa的化合物。

72.如权利要求70所述的方法，其还包括通过包括以下的方法制备所述式IIIb-1的化合物：

a)将式IIIc的化合物

与式R₁MgY的试剂反应，随后与式B(OR₂)₃的化合物反应，以形成式IIId的化合物：

且

b)在步骤a)的反应之后，将所述式IIId的化合物与酸反应，随后与频哪醇反应，以形成式IIIb-1的化合物；

其中：

R₁是C_1-6烷基；

每一个R₂独立地是C_1-6烷基；且

X₅是氯、溴或碘。

73.一种制备式I的化合物的方法：

所述方法包括：

a)将式II的化合物

与式VII的化合物

反应，以形成式VIa的化合物：

且

b)在催化剂的存在下，将所述式VIa的化合物与Zn(CN)₂和Zn反应；

其中X₆是氯、溴或碘。

74.如权利要求73所述的方法，其中所述催化剂是1，1’-双(二苯基膦)二茂铁二氯化钯(II)(Pd(dppf)₂Cl₂)。

75.如权利要求73或74所述的方法，其还包括通过包括将式VIII的化合物

与氨基胍或其盐和碱反应的方法制备所述式VII的化合物；

其中，X₆是氯、溴或碘。

76.如权利要求75所述的方法，其中所述碱是氢氧化钾。

77.如权利要求75或76所述的方法，其还包括通过包括在酸的存在下，将式IX的化合物

与原甲酸三乙酯反应，以形成所述式VIII的化合物的方法制备所述式VIII的化合物；

其中，X₆是氯、溴或碘。

78.如权利要求77所述的方法，其中所述酸是对甲苯磺酸。

79.如权利要求77或78所述的方法，其还包括通过包括将式X的化合物

与强酸反应，以形成所述式IX的化合物的方法制备所述式IX的化合物：

其中，X₆是氯、溴或碘。

80.如权利要求79所述的方法，其还包括通过包括将所述式XI的化合物

与CH₃MgBr反应，以形成式X的化合物的方法制备所述式X的化合物

其中，X₆是氯、溴或碘。

81.如权利要求80所述的方法，其还包括通过包括将式XII的化合物

与乙二酰氯或亚硫酰氯反应，随后用二甲基羟胺或其盐处理，以形成式XI的化合物的方法制备所述式XI的化合物；

其中，X₆是氯、溴或碘。

82.一种式III的化合物或其盐：

83.一种式II的化合物：

其中，X¹是氯、碘或溴。

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