BRPI0923504A2 - Formas cristalinas de genisteína. - Google Patents

Description

“FORMAS CRISTALINAS DE GENISTEÍNA E SEUS USOS”

Referência a Pedidos Relacionados

Este pedido reivindica prioridade ao pedido provisório US 61/121.778, depositado em 11 de dezembro de 2008, e pedido provisório US 61/121, 787, depositado em 11 de dezembro de 2008, ambos os quais são aqui incorporados por referência.

Fundamentos da Invenção

O câncer é caracterizado pelo crescimento descontrolado de células que ocorre quando a regulação normal da proliferação celular é perdida. Esta perda, muitas vezes parece ser o resultado da desregulação das rotas celulares envolvidas no crescimento e divisão celular, apoptose, angiogênese, invasão tumoral e metástase.

A genisteína, 4’,5,7-triidroxiisoflavona-5 ,7-diidroxi-3-(4-hidroxifenil)-4H-1 - benzopirano-4-H-1-benzopiran-4-ona, (mostrado abaixo), é um composto natural presente em plantas como a soja.

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O papel potencial da genisteína na prevenção e no tratamento de uma série de doenças humanas incluindo o câncer tem sido extensivamente estudado. A genisteína é uma isoflavona BCS classe II que é comercialmente disponível de uma quantidade de fontes incluindo LC Laboratories, Woburn, MA. Os alvos celulares para genisteína e as rotas de sinalização regulamentadas pela genisteína foram identificadas e aquelas relacionados ao câncer incluem alvos e rotas importantes para o crescimento e divisão celular, apoptose, angiogênese, invasão tumoral e metástases. Além dos inerentes efeitos antitumorais da genisteína em si, os estudos mostraram que a genisteína também potencializa, ou acentua os efeitos antitumorais de diversos agentes quimioterápicos utilizados clinicamente tanto in vitro em linhagens de células cancerosas humanas e In vivo em modelos animais do câncer. Do ponto de vista terapêutico, estes dados são interessantes na medida que a quimioterapia é a pedra angular no tratamento da maioria dos tumores sólidos.

A genisteína é praticamente insolúvel em água, mas tem alta permeabilidade da membrana celular. A baixa solubilidade em água e taxa de dissolução lenta geralmente são geralmente fatores limitantes para a baixa biodisponibilidade de compostos farmacêuticos, limitando sua aplicação.

Apesar de ser a muito tempo conhecido o fato de que a genisteína tem determinadas propriedades de drogas anticâncer, não têm sido obtidos regimes de tratamento bem sucedidos com uso de genisteína no tratamento de cânceres. Uma explicação plausível para isso é, provavelmente, as baixas solubilidade e biodisponibilidade, bem como o rápido me tabolismo fase II da genisteína em sua forma conhecida.

Devido ao desenvolvimento da estratégia de descoberta de drogas nos últimos 20 anos, as propriedades físico-químicas de candidatos ao desenvolvimento de drogas tem mudado significativamente. Os candidatos a desenvolvimento são geralmente mais lipofílicos e menos solúveis em água, o que cria enormes problemas para a indústria. A pesquisa mostrou que alguns fármacos candidatos falham na fase clínica, devido à fraca biodisponibilidade humana e problemas com a formulação. Os métodos tradicionais para resolver estes problemas, sem redesenhar completamente a molécula, incluem a seleção do sal, produção do material amorfo, redução de tamanho de partícula, prodrogas, e diferentes abordagens na formulação. Recentemente, formas cristalinas do ingrediente farmacêutico ativo (API) têm sido usadas para alterar as propriedades físico-químicas do API.

Embora a eficácia terapêutica seja a principal preocupação de um agente terapêutico, o sal e a forma em estado sólido (ou seja, a forma cristalina ou amorfa) de um fármaco candidato pode ser crucial para as suas propriedades farmacológicas e de seu desenvolvimento como um API viável. Por exemplo, cada sal ou cada forma cristalina de um fármaco candidato pode ter diferentes propriedades no estado sólido (física e química). As diferenças nas propriedades físicas exibidas por uma nova forma sólida de um API (como um co-cristal, sal ou polimorfo do composto original) afetam os parâmetros farmacêuticos, tais como estabilidade de armazenamento, compressibilidade e densidade (importantes na formulação e fabricação de produtos), e taxas de solubilidade e de dissolução (fatores importantes na determinação da biodisponibilidade). Por essas propriedades físicas práticas serem influenciadas pelas propriedades do estado sólido da forma cristalina do API, elas podem impactar significativamente a seleção de um composto como um API, a forma de dosagem farmacêutica final, a otimização dos processos de produção e absorção no organismo . Além disso, encontrar a forma polimórfica mais adequada para desenvolvimento adicional do fármaco pode reduzir o tempo e o custo desse desenvolvimento.

A obtenção de formas cristalinas de um API é extremamente útil no desenvolvimento de fármacos. Elas permitem melhor caracterização das propriedades físicas e químicas do fármaco candidato. É também possível conseguir as desejadas propriedades de um API em particular mediante a formação de um sal do API e/ou um sal cristalino do API. Formas cristalinas e sais cristalinos, muitas vezes têm melhores propriedades físicas e químicas que a base livre em seu estado amorfo. Esses sais e formas cristalinas podem, com a presente invenção, possuir propriedades farmacêuticas e farmacológicas mais favoráveis ou de serem mais fáceis de processar do que a forma polimórfica amorfa. Eles também podem ter uma melhor estabilidade de armazenamento.

Uma propriedade física tal, que pode influenciar a capacidade de processamento, é a capacidade de fluidez do sólido antes e depois da moagem. A capacidade de fluidez influ encia a facilidade com que o material é manuseado durante o processamento em uma composição farmacêutica. Quando as partículas da substância em pó não fluem facilmente umas sobre as outras, um especialista em formulação deve levar esse fato em conta no desenvolvimento de uma formulação de comprimidos ou cápsulas, que pode exigir a utilização de agentes deslizantes tais como o dióxido de silício coloidal, amido, talco ou fosfato de cálcio tribásico.

Outra propriedade do estado sólido potencialmente importante de um API é sua taxa de dissolução no líquido aquoso. A taxa de dissolução de um ingrediente ativo no fluido estomacal de um paciente pode ter conseqüências terapêuticas, uma vez que afeta a taxa na qual um ingrediente ativo administrado por via oral pode chegar a corrente sangüínea do paciente.

Com a formação e/ou cristalização de sais de um API, uma nova forma de estado sólido do API pode ter propriedades únicas em comparação com as já existentes formas sólidas do API ou o seu sal. Por exemplo, um sal cristalino pode ter diferentes propriedades de dissolução e de solubilidade do que o próprio API e pode ser usado para fornecer APIs de forma terapêutica. Novas formulações de fármacos que compreendem sais cristalinos dos APIs podem ter propriedades superiores sobre formulações de fármacos já existentes.

Um sal cristalino ou outra forma cristalina de um API geralmente possui distintas propriedades cristalográficas e espectroscópicas, quando comparado a outras formas que possuem a mesma composição química. As propriedades cristalográficas e espectroscópicas da forma particular, são normalmente medidas por difração de raios X do pó (XRPD) e cristalografia por raios-X de cristal único, entre outras técnicas. Formas cristalinas particulares geralmente também exibem comportamento térmico distinto. Comportamento térmico é medido em laboratório através de técnicas como ponto de fusão capilar, análise termogravimétrica (TGA) e calorimetria de varredura diferencial (DSC).

Sumário da Invenção

A invenção refere-se a formas cristalinas de genisteína, incluindo sais cristalinos genisteína e um hidrato cristalino de genisteína. Composições terapêuticas contendo as formas cristalinas de genisteína da invenção representam uma outra modalidade da invenção, como assim também os métodos de tratamento ou prevenção de câncer e outras doenças hiperproliferativas através das formas cristalinas da invenção ou composições terapêuticas contendo elas. Composições terapêuticas da genisteína cristalina também podem ser usadas para o tratamento ou prevenção de inflamação crônica, infecção, fibrose cística e amiloidose. Conforme utilizado no presente e como é conhecido na arte, o termo “temperatura ambiente” significa uma temperatura dentro de um espaço confinado na qual os humanos estejam acostumados; isto é, a temperatura do quarto. Por exemplo, a temperatura ambiente pode variar na faixa de, por exemplo, 20 °C a 25 °C.

Como usado aqui e como conhecido na arte, o termo “aproximadamente” significa próximo a, em quantidade ou valor.

Como usado aqui e como conhecido na arte, o termo “polpa” significa uma suspensão de sólidos em um líquido.

Como usado aqui e como conhecido na arte, o termo “°20 °” é intercambiãvel com [Grau dois theta], [° 2Th.], E suas variações.

Breve Descrição dos Desenhos

As figuras a seguir, que são descritas a seguir e que são incorporadas e constituem uma parte da especificação, ilustram modalidades exemplares de acordo com a divulgação e não devem ser considerados limitantes do âmbito de aplicação da invenção, uma vez que a invenção pode admitir outras modalidades igualmente eficazes. As Figuras não estão necessariamente em escala, e certas características e certas vistas das Figuras podem estar mostradas ampliadas em escala ou no aspecto esquemático no interesse da clareza e concisão.

A Figura 1 mostra um padrão de XRPD de sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina.

A Figura 2 mostra um gráfico de DSC de sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina anidra.

A Figura 3 mostra um gráfico da sorção de vapor gravimétrico (GVS) de sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina.

A Figura 4 mostra um gráfico da TGA de uma amostra preparada de sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina, que foi secada na temperatura ambiente por cerca de 24 horas.

A figura 5 representa um gráfico da TGA de uma amostra preparada de sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina, que foi secada a 80 °C durante a noite.

A Figura 6 descreve quatro padrões XRPD de sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina tomada após estudos de estabilidade a 80 °C por 7 dias e a 40 °C/75 umidade relativa (UR)% por 7 dias.

A Figura 7 é uma ressonância nuclear magnética ¹H (RMN) de sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina.

A Figura 8 descreve padrões XRPD após um estudo de hidratação do sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina.

A Figura 9 é um modelo molecular do de sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina, ilustrando o cátion dissódico centrossimétrico na estrutura dimérica do sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina, onde as ligações de hidrogênio intramoleculares são mostradas como linhas tracejadas.

A Figura 10 é um modelo molecular que ilustra uma formação de camada de sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina.

A Figura 11 é um modelo molecular ilustrando uma embalagem de sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina.

A Figura 12 representa um padrão XRPD calculado com base nos dados de cristal único de sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina.

A Figura 13 mostra a concentração de genisteína total após a administração intraduodenal de genisteína e de sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina (média, n = 3).

A Figura 14 mostra um padrão XRPD de sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina na síntese em larga escala.

A Figura 15 mostra um padrão XRPD de sal potássico de genisteína amorfo. Figura [033] 16 mostra um padrão para XRPD sal potássico de genisteína diidratado na forma cristalina.

A Figura 17 mostra um gráfico da TGA de sal potássico de genisteína diidratado na forma cristalina.

A Figura 18 mostra um gráfico DSC de sal potássico de genisteína diidratado na forma cristalina.

A Figura 19 representa um gráfico GVS de sal potássico de genisteína diidratado na forma cristalina.

A Figura 20 ilustra a ¹H RMN do sal potássico de genisteína diidratado na forma cristalina.

A Figura 21 ilustra padrões XRPD do estudo de estabilidade do sal potássico de genisteína diidratado na forma cristalina.

A Figura 22 retrata padrões XRPD de um estudo de hidratação do sal potássico de genisteína diidratado na forma cristalina.

A Figura 23 retrata um padrão XRPD de sal cálcico de genisteína na forma cristalina.

A Figura 24 ilustra um gráfico da TGA de sal cálcico de genisteína na forma cristalina.

A Figura 25 mostra um padrão XRPD de sal magnésio de genisteína na forma cristalina, equivalente 1.

A Figura 26 mostra um gráfico da TGA de sal magnésio de genisteína na forma cristalina, equivalente 1.

A Figura 27 mostra um padrão XRPD de sal magnésio de genisteína na forma cristalina, equivalente 2.

A Figura 28 mostra um gráfico da TGA de sal magnésio de genisteína na forma cristalina, equivalente 2.

A Figura 29 mostra um padrão XRPD para genisteína cristalina.

A Figura 30 mostra um padrão XRPD de sal L-lisina de genisteína na forma cristalina a partir de tolueno.

A Figura 31 mostra um padrão XRPD de sal L-lisina de genisteína na forma cristalina a partir de isopropanol.

A Figura 32 ilustra um gráfico da TGA da mistura genisteína cristalina/genisteína a partir de isopropanol.

A Figura 33 mostra um padrão XRPD de sal N-metilglucamina de genisteína na forma cristalina (Meglumina).

A Figura 34 mostra um padrão XRPD de sal N-etilglucamina de genisteína na forma cristalina (Eglumina), preparado a partir de acetona.

A Figura 35 mostra um padrão XRPD de sal N-etilglucamina de genisteína na forma cristalina (Eglumina), preparado a partir de isopropanol.

A Figura 36 mostra um gráfico da TGA de sal N-etilglucamina de genisteína na forma cristalina a partir de acetona.

A Figura 37 mostra um padrão XRPD de sal dietilamina de genisteína na forma cristalina.

A Figura 38 mostra um padrão XRPD de monoidrato de genisteína na forma cristalina.

A Figura 39 mostra um gráfico da TGA de monoidrato de genisteína na forma cristalina.

Descrição Detalhada da Invenção

A presente invenção está relacionada com melhorias das propriedades físicoquímicas da genisteína, por meio do que esse composto pode ser adequado para o desenvolvimento de fármacos. São revelados aqui diversas novas formas cristalina da genisteína, incluindo, por exemplo, sal de genisteína na forma cristalina, de sódio, de potássio, de magnésio, N-metilglucamina (meglumina), cálcio, L-lisina, N-etilglucamina (eglumina) e dietilamina, bem como um monoidrato cristalino de genisteína. Estas formas cristalinas de genisteína são descritas adiante. Embora as formas cristalinas da genisteína sejam descritas aqui, a invenção também está relacionada a novas composições químicas contendo as formas cristalinas de genisteína aqui reveladas. Os usos terapêuticos dessas formas cristalinas são descritos, bem como as composições terapêuticas que as contêm. Os métodos utilizados para caracterizar as formas cristalinas também são descritos adiante.

Uma modalidade da invenção está relacionada a um sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina. A sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina pode possuir características adequadas para o desenvolvimento farmacêutico. O único aspecto possivelmente negativo pode ser sua morfologia do tipo agulhas que não é necessariamente a ideal para a fluidez ou compressão durante a fabricação. A morfologia na forma agulhas foi observada usando uma Microscopia de Luz Polarizada (MLP). A moagem desse material cristalino na forma de agulhas, ou técnicas similares conhecidas na arte, podem ser usadas para conseguir uma morfologia de partícula mais uniforme, que pode ser usada para preparar o material para a fabricação de sua composição farmacêutica. Aquele usualmente versado na técnica pode determinar os apropriados tamanhos de partícula para uma desejada composição farmacêutica. Tamanhos de partícula de cerca de 5 pm, por exemplo, podem ser usados. Deve ser notado, todavia, que a moagem sustentada pode desidratar o material devido às altas temperaturas envolvidas durante esses processos. Por outro lado, os testes de armazenamento a 80 °C têm indicado que o material pode existir como um hidrato em temperaturas elevadas durante um período de 7 dias com apenas uma ligeira alteração. Isso reduz o risco de desidratação na moagem.

Conforme mostrado na Figura 9, o sal sódico de genjsteína diidratado na forma cristalina da invenção tem uma estrutura dimérica de cátion dissódico centrossimétríca em associação com duas moléculas de genisteína e quatro moléculas de água. O sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina pode ser preparado a partir, por exemplo, o IPA (isopropanol ou propan-2-oi), um solvente comum, em temperatura ambiente, sem a necessidade de qualquer tratamento especial, tais como ciclos de temperatura, sonicação ou evaporação rápida. Conforme mostrado no Exemplo 1 abaixo, o sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina da invenção possui uma excelente estabilidade. É mais solúvel em água, sistemas solventes aquosos e solventes orgânicos que a genisteína propriamente. Além disso, o sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina mostra superiores perfis de solubilidades cinéticas intrínsecas iniciais e posteriores como comparado com a genisteína. A genisteína sódica diidratada na forma cristalina da invenção também mostrou possuir maior biodisponibilidade que a genisteína.

Outra modalidade da invenção é sal potássico de genisteína diidratado na forma cristalina. A sal potássico de genisteína diidratado na forma cristalina também pode ser preparado a partir de, por exemplo, o IPA (isopropanol ou propan-2-oi), um solvente comum, em temperatura ambiente, sem a necessidade de qualquer tratamento especial, tais como ciclos de temperatura, sonicação ou evaporação rápida. Sal potássico de genisteína diidratado na forma cristalina prontamente se forma a partir de formas de sal potássico de genisteína sólido. Sal potássico de genisteína parece ser um sal anidro amorfo instável no ponto de recuperação, que, então rapidamente absorve água da atmosfera para se cristalizar na forma do material diidratado. Conforme discutido no Exemplo 2 abaixo, o sal potássico de genisteína diidratado na forma cristalina tem boa estabilidade. O sal potássico de genisteína diidratado é cristalino e tem uma morfologia na forma de agulhas (porém agulhas mais grossas que as do correspondente sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina.

Além dos sais de sódio e de potássio de genisteína cristalinos da invenção, outras modalidades da invenção dizem respeito a sais cristalinos da genisteína com magnésio, Nmetilglucamina (meglumina), cálcio, L-lisina, N-etil Glucamina (eglumina) e dietilamina. Uma modalidade adicional da invenção se refere a uma forma cristalina monoidratada de genisteína, cada uma destas formas cristalinas de genisteína, sua preparação e caracterização, são descritos nos exemplos abaixo.

Usos Terapêuticos das Formas Cristalinas da Genisteína

A invenção está relacionada aos usos terapêuticos de pelo menos uma forma cristalina de genisteína, por exemplo, pelo menos, um sal de genisteína na forma cristalina. O termo “tratamento” ou “tratar” significa qualquer tratamento de uma doença ou distúrbio em um mamífero, incluindo: prevenção ou proteção contra a doença ou distúrbio, ou seja, que induz os sintomas clínicos a não se desenvolverem; inibição da doença ou distúrbio, que é, a paralisação ou supressão do desenvolvimento dos sintomas clínicos e/ou o alívio da doença ou distúrbio, ou seja, que induza a regressão dos sintomas clínicos, será compreendido por aqueles hábeis na arte que, em medicina humana, nem sempre é possível a distinção entre “prevenção” e “supressão”, já que o evento ou eventos finais indutivos podem ser desconhecidos, latentes, ou o paciente não está conscientizado até bem após a ocorrência do evento ou dos eventos. Portanto, como usado aqui, o termo “profilaxia” é concebido como um elemento de “tratamento” para abranger tanto a “prevenção” e “supressão” como aqui definidos. O termo “proteção”, utilizado aqui, significa a inclusão de “profilaxia”.

As formas cristalinas de genisteína acordo com a invenção podem ser úteis como um medicamento, que pode ser usado para tratar doenças hiperproliferativas, tais como, por exemplo, vários tipos de câncer, incluindo, por exemplo, colorretal, estômago, mama, esôfago, pulmão , próstata, bexiga, cérebro, renal, ovários, fígado, pele, tireoide e câncer de pâncreas, bem como leucemias ou linfomas. As leucemias e linfomas aqui mencionados podem ser tumores da linhagem mielóide, tais como, por exemplo, leucemia mielóide aguda ou da linhagem linfóide.

Além disso, as formas cristalinas de genisteína divulgadas aqui podem ser também utilizadas em um método de tratamento de um animal de sangue quente, como, por exemplo, o homem, pela terapia. Por exemplo, um sal de genisteína na forma cristalina acordo com a invenção pode ser útil em um método de tratamento de doenças hiperproliferativas, tais como, por exemplo, vários tipos de câncer, incluindo, por exemplo, colorretal, estômago, mama, esôfago, pulmão, próstata, bexiga, cerebral, renal, ovários, fígado, pele, tireoide e câncer de pâncreas, bem como leucemias ou linfomas. As leucemias e linfomas aqui mencionados podem ser tumores da linhagem mielóide, tais como, por exemplo, leucemia mielóide aguda ou da linhagem linfóide.

Além disso, as formas cristalinas de genisteína acordo com a invenção podem ser usadas no método de tratar um humano que sofre de doenças hiperproliferativas tais como, por exemplo, vários tipos de câncer, incluindo, por exemplo, colorretal, estômago, mama, esôfago, pulmão, próstata, bexiga, cérebro, renal, ovários, fígado, pele, tireóide e câncer de pâncreas, bem como leucemias ou linfomas. Em uma outra modalidade, as formas cristalinas de genisteína de acordo com a revelação podem ser utilizadas para prevenir doenças hiperproliferativas, tais como, por exemplo, vários tipos de câncer, incluindo, por exemplo, colorretal, estômago, esôfago, mama, pulmão, próstata, bexiga, cérebro, renal, ovários, fígado, pele, tireóide e câncer de pâncreas, bem como leucemias ou linfomas. As leucemias e linfomas aqui mencionados podem ser tumores da linhagem mielóide, tais como, por exemplo, leucemia mielóide aguda ou da linhagem linfóide, compreendendo as etapas de administração a uma pessoa que dela necessite uma quantidade terapeuticamente eficaz de pelo menos uma forma cristalina de genisteína . O uso de pelo menos uma forma cristalina de genisteína em qualquer um dos métodos de tratar um ser humano acima descrito também formam aspectos da presente invenção.

O tratamento aqui definido pode ser aplicado como terapia única ou pode envolver, além do pelo menos um composto da invenção, uma cirurgia convencional ou radioterapia ou quimioterapia. Tal quimioterapia, que poderá incluir uma ou mais das seguintes categorias de agentes antitumorais: (i) antiproliferativa/antineoplásicos e suas combinações, como usado em oncologia clínica, tais como agentes alquilantes e agentes tipo alquilantes, como (por exemplo, cis-platina, carboplatina , ciclofosfamida, mostarda nitrogenada, melfalano, clorambucil, busuiphan e nitrosoureias), antimetabólitos (por exemplo, a gemcitabina HCI, 5 fiuorouracil, tegafur, raltítrexed, arabinoside, metotrexato citosina e hidroxiuréia), antitumoral antibióticos (por exemplo, como antraciclinas adramicina, bleomicina , doxorrubicina, daunomicina, epirrubicina, idarubicina, mitomicina-C, e mitamicina dactinomicina), agentes antimitóticos (por exemplo, alcalóides da vinca como vincristina, vindesina, vinblastina e da vinorelbina e Taxóides como taxol e Taxotere), e inibidores da topoisomerase (por exemplo, epipodofilotoxinas como etoposida e teniposida, amsacrina, o topotecano e camptotecina), (ii) agentes citostáticos, como antioestrogênios, por exemplo, o tamoxifeno, toremifeno, o raloxifeno droloxifeno e iodoxifeno), antagonistas do receptor de estrogênio (por exemplo fulvestrant), antiandrogênicos (por exemplo, bicalutamida, nilutamida flutamida e acetato de ciproterona), antagonistas do LHRH ou agonistas LHRH (por exemplo, goserelina leuprorrelina e busereün), progestogenos (por exemplo, acetato de megestrol), inibidores da aromatase (por exemplo exemestano, o anastrozol, ietrozole, vorazole e), e inibidores da 5-alfareductase (por finasterida, por exemplo), (iii) os agentes que inibem a invasão de células de câncer (por exemplo, como inibidores de metaloproteinases marimastat e inibidores da uroquinase função do receptor ativador do plasminogênio), (iv) os inibidores da função do fator de crescimento , por exemplo, esses inibidores do fator de crescimento incluem anticorpos, os anticorpos do receptor do fator de crescimento (por exemplo, o trastuzumab anticorpo antiErbB2 (Herceptin), e o anticorpo antiErbBI (cetuximab)), os inibidores da farnesil transferase, inibidores da tirosina quinase, e inibidores da serina-treonina quinase, por exemplo, os inibidores da família do fator de crescimento epidérmico (por exemplo, a família de inibidores EGFR da tirosina quinase como o N-(3-cloro-4-fluorfenil)-7-metoxi-6-(3 - quinazolin) morfolinopropoxi -4-amina (gefitinib, Azdi 839), N-(3-etinilfenil) -6,7 - bis (2 -metoxietoxi)quinazolin4-amina (erlotinib, OSI-774) e 6-acrilamido-N- (3 - cloro-4-fluorfenil) -7 - (3morfolinopropoxi)quinazolin-4-amina (Cl 1033)), inibidores da família do fator de crescimento plaqueta-derivado e inibidores da família do fator de crescimento de hepatócitos (v) agentes antiangiogênicos, como aqueles que inibem os efeitos do fator de crescimento endotelial vascular (por exemplo, o anticélula endotelial vascular bevacizumab anticorpo fator de crescimento (Avastin) e compostos, como os divulgados em aplicativos Internacional de Patentes WO 97/22596, WO 97/30035 , compostos WO 97/32856 e WO 98/13354) e que o trabalho por outros mecanismos (por exemplo, linomida, inibidores da função de integrinas e angiostatina), (vi) agentes de lesões vasculares, tais como Combretastatina A4 e compostos divulgados Internacional de Patentes Aplicações WO 99/02166, WO 00/40529, WO 00/41669, WO 01/92224, WO 02/04434 e WO 02/08213, (vii) as terapias antisentido, por exemplo, aquelas que são direcionadas para os objetivos acima referidos, tais como ISIS 2503, um anti-ras antisentido, (viii) abordagens de terapia genética, incluindo, por exemplo, as abordagens para substituir genes aberrantes, como abordagens p53 aberrante ou BRCAI aberrante ou BRCA2, GDEPT (gene-terapia prodroga enzima gene-dirigida), tais como aquelas usando ditosina deaminase, timidina quinase ou uma enzima nitroredutase bacteriana e abordagens para aumentar a tolerância do paciente à quimioterapia ou radioterapia, tais como terapias genética de resistência multi-drogas; e (ix) abordagens de imunoterapia, incluindo, por exemplo, abordagens ex-vivo e in-vivo para aumentar a imunogenicidade das células tumorais do paciente, tais como a transfecção com citocinas como a interleucina 2, interleucina 4 ou fator de estimulação de colônias de granulócitos-macrófagos, abordagens usando células imuno transfectadas tais como células dendríticas citocina-transfectadas, abordagens usando linhas de células tumorais citocina-transfectadas, e abordagens usando anticorpos anti-idiotípicos.

No tratamento discutido acima, pelo menos, uma forma cristalina de genisteína de acordo com a invenção também pode ser usada em combinação com um ou mais inibidores do ciclo celular, por exemplo, com inibidores do ciclo celular que inibem as quinases ciclinodependentes (CDK), ou em combinação com mesilato de imatinib (Glivec). Tal tratamento conjunto pode ser conseguido por meio da dosagem simultânea, sequencial ou separada dos componentes individuais do tratamento. Tais produtos da combinação podem empregar pelo menos um composto dessa invenção dentro da faixa de dosagem aqui descrita e outros pelo menos um agente farmaceuticamente ativo dentro de sua faixa aprovada de dosagem. Os produtos da combinação podem ser formulados na forma de uma forma de dosagem única.

A invenção também proporciona uma combinação que pode ser apropriada para uso no tratamento de distúrbios de proliferação celular (como o câncer), que inclui pelo menos uma forma cristalina de genisteína, como pelo menos um sal de genisteína na forma cristalina, como definido anteriormente, e pelo menos um agente antitumoral adicional como definido anteriormente. Essa combinação pode servir como um produto farmacêutico para o tratamento conjunto de distúrbios de proliferação celular (como câncer).

Além de seu uso na medicina terapêutica, pelo menos, uma forma cristalina de genisteína acordo com a invenção podem também ser útil como ferramentas farmacológicas para o desenvolvimento e padronização de ensaios in-vitro e em sistemas de teste in-vivo para a avaliação dos efeitos da inibidores da atividade do ciclo celular em animais de laboratório, tais como cães, gatos, coelhos, macacos, ratos e camundongos, como parte da busca de novos agentes terapêuticos.

Outro aspecto da invenção refere-se a usos terapêuticos de pelo menos uma forma cristalina de genisteína acordo com a invenção para a preparação de um medicamento para o tratamento de uma doença em que a inibição da inflamação é benéfica, como, por exemplo, crônica inflamação, doença inflamatória intestinal, doença de Crohn, doença de Sjõgren, artrite reumatóide, artrite, dermatite atópica, vasculite, psoríase, hiperplasia prostática benigna, a cicatrização de feridas, doença renal, doença renal crônica, doença pulmonar obstrutiva crônica ou asma.

Além disso, pelo menos, uma forma cristalina de genisteína acordo com a invenção pode também ser utilizada na preparação de um medicamento para o tratamento de uma doença em que a inibição da infecção é benéfica, como, por exemplo, infecção local, sistêmica infecção, sepse, infecção fúngica sistêmica, ou infecção fúngica local.

Ainda um outro aspecto da invenção refere-se a utilização de pelo menos uma forma cristalina de genisteína para o tratamento de uma doença em que a restauração da movimentação normal de cloreto e sal (água) em órgãos humanos e glândulas das pessoas é benéfica, como, por exemplo, a estimulação do reguladora condutância transmembrânica da fibrose cística.

Ainda um outro aspecto da invenção está relacionado com a utilização de pelo menos uma forma cristalina de genisteína para o tratamento de uma doença em que a inibição de uma proteína solúvel de formar depósitos de fibrilas insolúveis extracelulares que causam a disfunção orgânica é benéfica, como, por exemplo , a inibição da transtirretina (TTR) amiloidoses provocada pelas alterações na sequência aminoácido do produto genético TTR. Em uma outra modalidade da revelação, pelo menos uma forma cristalina da genisteína aqui descrita pode ser usada para o tratamento da Polineuropatia Amiloidótica Hereditária.

Composições Farmacêuticas Contendo Formas Cristalinas da Genisteína

A invenção também está relacionada com composições farmacêuticas compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de pelo menos uma forma cristalina de genisteína acordo com a invenção e um veículo farmaceuticamente aceitável (também conhecido como um excipiente farmaceuticamente aceitável). Como discutido acima, as formas cristalinas de genisteína acordo com a invenção podem ser terapeuticamente úteis para o tratamento ou prevenção de, por exemplo, os estados de doença discutido acima, incluindo, por exemplo, aquelas associadas com a angiogênese anormal.

As composições farmacêuticas para o tratamento desses estados patológicos podem conter uma quantidade terapeuticamente eficaz de pelo menos uma forma cristalina de genisteína acordo com a invenção para sub-regular a transcrição de genes envolvidos no controle da angiogênese para o tratamento de um paciente com a particular doença. Uma composição farmacêutica da invenção pode ser em qualquer forma farmacêutica que contém pelo menos uma forma cristalina de genisteína acordo com a invenção. A composição farmacêutica pode ser, por exemplo, um comprimido, suspensão, cápsula líquida, injetável, tópica ou transdérmica. As composições farmacêuticas contêm geralmente, por exemplo, cerca de 1 % a cerca de 99% em peso de pelo menos uma forma cristalina de genisteína da invenção e, por exemplo, 99% para 1% em peso de pelo menos um excipiente farmacêutico adequado. Em uma modalidade, a composição pode ser entre 5% e cerca de 75% em peso de pelo menos uma forma cristalina de genisteína da invenção sendo o restante, pelo menos, um excipiente farmacêutico adequado ou, pelo menos um adjuvante de outros, como discutido adiante.

Uma “quantidade terapeuticamente eficaz de pelo menos uma forma cristalina de genisteína acordo com a invenção” está geralmente na faixa de cerca de 0,05 até cerca de 500 mg/kg. A quantidade exata necessária para a profilaxia ou tratamento de qualquer paciente em particular pode depender de uma série de fatores, incluindo, por exemplo, o estado da doença a ser tratada e sua gravidade, a específica composição farmacêutica empregada, a idade, peso corporal, estado geral de saúde, sexo e dieta do paciente, o modo de administração, o tempo de administração, da via de administração, e a taxa de excreção da forma cristalina da genisteína; da duração do tratamento; quaisquer fármacos usados em combinação ou concomitante com o específico composto utilizado e outros fatores conhecidos nas artes médicas. Estes fatores são discutidos em Goodman e Gilman, “The Pharmacological Basis of Therapeutics”, Décima Edição, Gilman, J. Hardman e Limbird L, eds., McGraw-Hill Press, 155-173, 2001, que é aqui incorporado por referência. As formas cristalinas de genisteína acordo com a invenção e composições farmacêuticas contendo as mesmas podem ser utilizadas em combinação com outros agentes antineoplásicos ou que são geralmente ad ministrados a um paciente em tratamento de câncer. Elas também podem ser co-formuladas com um ou mais destes agentes em uma única composição farmacêutica.

Dependendo do tipo de composição farmacêutica, o veículo farmaceuticamente aceitável, pode ser escolhido a partir de qualquer um ou uma combinação de veículos conhecidos na arte. A escolha do veículo farmaceuticamente aceitável depende da forma farmacêutica e do método desejado de administração a ser utilizado. Para uma composição farmacêutica da invenção, que é uma possuindo pelo menos uma forma cristalina de genisteína da invenção, deve ser escolhido um veículo que mantenha a forma cristalina. Em outras palavras, o não deve alterar substancialmente a forma cristalina de genisteína. Nem o veículo deve de outro modo ser incompatível com a forma cristalina do sal utilizado genisteína, tal como através da produção de qualquer efeito biológico indesejável, ou de outro modo interagir de forma prejudicial com qualquer dos demais componentes da composição farmacêutica.

As composições farmacêuticas da invenção podem ser preparadas por métodos conhecidos na arte de formulação farmacêutica, por exemplo, ver o Remington's Pharmaceutical Sciences, Ed 18. (Mack Publishing Company, Easton, Pensilvânia, 1990), que é aqui incorporado por referência. Em uma forma de dosagem sólida, pelo menos, uma forma cristalina de genisteína pode ser misturada com pelo menos um excipiente farmaceuticamente aceitável, al como, por exemplo, citrato de sódio ou de fosfato bicálcico ou (a) cargas ou diluentes, como por exemplo, amidos, lactose, sacarose, glicose, manitol e ácido silícico, (b) aglutinantes, tais como, por exemplo, derivados de celulose, amido, alignatos, gelatina, sacarose, polivinilpirrolidona, e goma acácia, (c) umectantes, tais como por exemplo, glicerol, (d) agentes desintegrantes, tais como por exemplo, agar-agar, carbonato de cálcio, amido de batata ou amido de tapioca, ácido algínico, croscarmelose sódica, silicatos complexos, e carbonato de sódio, (e) retardadores de solução, como por exemplo, parafina, (f) aceleradores de absorção, como, por exemplo, compostos de amônio quaternário, (g) agentes umectantes, como, por exemplo, álcool cetílico, monoestearato de glicerol e, estearato de magnésio e semelhantes, (h) adsorventes, tais como, por exemplo, caulim e bentonita, e (i) lubrificantes, tais como, por exemplo estearato de cálcio, talco, estearato de magnésio, glicóis de polietileno sólido, lauril sulfato de sódio ou suas misturas. No caso de cápsulas, comprimidos, e pílulas, a formas farmacêuticas podem também incluir agentes tamponantes.

Adjuvantes farmaceuticamente aceitáveis conhecidos na arte da formulação farmacêutica também podem ser usados nas composições farmacêuticas da invenção. Estes incluem, mas não estão limitados a, agentes conservantes, umectantes, de suspensão, adoçantes, aromatizantes, perfumantes, emulsificantes e agentes dispersantes. A prevenção da ação de microorganismos, pode ser assegurada através da inclusão de vários agentes antibacterianos e antifúngicos, por exemplo, parabenos, chlorobutanol, fenol, ácido sórbico, e outros. Também pode ser desejável incluir agentes isotônicos, por exemplo, açúcares, sódio, cloro e outros. Se desejar, uma composição farmacêutica da invenção também pode conter pequenas quantidades de substâncias auxiliares, tais como agentes umectantes ou emulsificantes, agentes tampões de pH, antioxidantes, e similares, como, por exemplo, ácido cítrico, monolaurato de sorbitano, oleato trietanolamina, hidroxitoiueno butilado, etc.

Formas sólidas de dosagem como descrito acima podem ser preparadas com revestimentos e cascas, tais como revestimentos entéricos e outros bem conhecidos na arte. Podem conter agentes de pacificação, e também podem ser de uma composição tal liberem o composto ou os compostos ativos numa certa parte do trato intestinal em um modo controlado. Exemplos não limitantes das combinações embutidas que podem ser usadas são substância poliméricas e ceras. Os compostos ativos podem estar também na forma de microencapsulados, se apropriado, com um ou mais dos excipientes acima mencionados.

As suspensões, adicionalmente aos compostos ativos, podem conter agentes de suspensão, como por exemplo, álcoois estearílicos etoxilados, sorbitol e polioxietileno sorbitol e ésteres de sorbitan, celulose microcristalina, meta-hidróxido de alumínio, bentonita, agar-agar e tragacanto, ou misturas dessas substâncias, e semelhantes.

Composições para administração retal são, por exemplo, supositórios que podem ser preparados através da mistura de pelo menos uma forma cristalina de genisteína acordo com a presente invenção com, por exemplo, excipientes ou veículos não irritantes adequados tais como a manteiga de cacau, polietileno glicol ou uma cera de uso em supositórios, que pode estar em estado sólido nas temperaturas usuais, mas pode ser líquida na temperatura corpórea e, portanto, derrete enquanto em uma adequada cavidade corporal e libera ali o componente ativo.

Devido a forma cristalina da genisteína ser mantida durante a preparação, formas de dosagem sólidas são preferíveis para a composição farmacêutica da invenção. Formas farmacêuticas sólidas de administração oral, que incluem cápsulas, comprimidos, pílulas, pós e granulados, podem ser utilizadas. Em tais formas farmacêuticas sólidas, o composto ativo pode ser misturado com pelo menos um excipiente inerte farmaceuticamente aceitável (também conhecido como um veículo farmaceuticamente aceitável). As formas cristalinas de genisteína acordo com a invenção podem também ser utilizadas como precursores na formulação de composições farmacêuticas líquidas. A administração das formas cristalinas de genisteína na forma pura ou em uma composição farmacêutica adequada pode ser realizada por qualquer dos modos aceitos de administração ou por agentes que possam servir de utilitários semelhantes. Assim, a administração pode ser, por exemplo, por via oral, bucal, parenteral (intravenosa, intramuscular ou subcutânea), tópica, transdérmica, intravaginal, intravesical, intrasistêmica ou retal, na forma de dosagem sólida semi-sólida, pó liofilizado, ou líquidas, em formas tais como, por exemplo, comprimidos, supositórios, pastilhas, cápsu15 las de gelatina dura e macias, pós, soluções, suspensões ou aerossóis, ou semelhantes, tais como por exemplo, em formas de dosagem unitária adequadas para administração simples de dosagens precisas. Uma rota de administração pode ser a administração oral, utilizando um regime diário de dosagem conveniente que pode ser ajustado de acordo com o grau de gravidade do estado da doença a ser tratada.

A invenção também refere-se a preparação de um medicamento com pelo menos uma forma cristalina de genisteína para o tratamento de uma variedade de doenças. Estas incluem, mas não estão limitadas a: doenças em que a inibição de uma ou mais proteína tirosina quinase(s) é benéfica, como, por exemplo, quinases que são influenciadas pela genisteína são possíveis alvos, doenças hiperproliferativas, tais como cânceres diversos, tais como, por exemplo, de mama, colo-retal, de pulmão, próstata, bexiga, câncer renal e de pâncreas, ou leucemia ou linfoma ou atrofia inflamatória proliferativa, doenças onde a inibição da inflamação é benéfica, como, por exemplo, inflamação crônica, doença inflamatória intestinal , doença de Crohn, doença de Sjõgren, artrite reumatóide, artrite, dermatite atópica, vasculite, psoríase, hiperplasia prostática benigna, a cicatrização de feridas, doença renal, doença renal crônica, doença pulmonar obstrutiva crônica, asma, doenças onde a inibição da infecção é benéfica , como, por exemplo, infecção local, infecção sistêmica, sepse, infecção fúngica sistêmica, infecção fúngica local; doenças onde a restauração da movimentação normal de cloreto e sal (água) em órgãos humanos e glândulas das pessoas é benéfica, como, por exemplo, a estimulação do reguladora condutância transmembrânica da fibrose cística, bem como doenças e sintomas relacionados a condição pós-menopausa tais como fogachos e osteoporose bem como doenças onde a inibição de uma proteína solúvel de formar depósitos de fibrilas insolúveis extracelulares que causam a disfunção orgânica é benéfica, como, por exemplo, a amiloidose, por exemplo, aquelas onde os depósitos de fibrila são compostos de transtirretina (TTR), tal como Polineuropatia Amiloidótica Hereditária.

Exemplos

Nos exemplos mostrados adiante foram usadas as seguintes técnicas analíticas:

Difracão de raios-X de pó (XRPD) : Estudos da difração de raios-X com pó foram realizados em um difratômetro Discover Bruker D8. Aproximadamente 5 mg de amostra foram levemente compactados no ponto de referência zero de XRPD de uma placa de amostras com 96 cavas. A amostra foi então carregada em um difratômetro Discover Bruker D8 em modo transmissão e analisada usando as condições experimentais apresentadas Tabela 1.

Tabela 1; Condições de Medição de XRPD

Origem dos dados	Bruker-binário V3 (.RAW)
Eixo de varredura	Gônio
Posição de partida [°2Th.]	4,0000

Posição final [°2Th.]	49,9800
Tamanho do passo [°2Th.j	0,0200
Tempo da etapa de varredura [s]	39,1393
Tipo de Varredura	Contínua
Desvio [°2Th.]	0,0000
Tipo da fenda de divergência	Fixa
Dimensão da fenda de divergência [°]	2,0000
Comprimento da amostra [mm]	10,00
Dimensão da fenda receptora [mm]	0,1000
Temperatura de medição [°C]	25,00
Material do anodo	Cu
K-Alfa1 [Â]	1,54060
K-Alfa2 [Â]	1,54443
K-Beta [A]	1,39225
Relação K-A2 / K-A1	0,50000
Ajustes do Gerador	40 mA, 40 kV
Número Difratômetro	0
Raio do Goniômetro [mm]	250,00
Dist. Foco-Diverg. Fenda [mm]	91,00
Monocromador do Feixe Incidente	Não
Giro	Não
Calorimetria de Varredura Diferencia	(DSC) : Aproximadamente 2 mg de amostra

foi pesada em uma bandeja de alumínio para DSC e selado com uma tampa de alumínio (não hermeticamente). A bandeja de amostra foi então carregada em um DSC Pyris 1 Perkin-Elmer (equipado com uma unidade de resfriamento líquido), resfriada e mantida a 25 °C.

Uma vez obtida uma resposta estável de fluxo térmico, a amostra era então aquecida a 300 °C numa taxa de subida de 10 °C/minuto e a resultante resposta do fluxo térmico monitorada. Uma purga de hélio a 20 cm3/minuto foi usada para impedir a oxidação termicamente induzida da amostra durante o aquecimento e assim reduzir o atraso térmico através da amostra para aumentar a sensibilidade do instrumento. Antes da análise, o instrumento foi 10 calibrado quanto à temperatura e o fluxo térmico usando um padrão de referência de índio.

Gravimetria por Absorção de Vapor (GVS): Cerca de 15 mg de amostra foi colocada em uma bandeja de tela de uma balança de absorção de vapor e levada a uma balança de absorção de vapor intrínseco dotada de SMS (Surface Measurement Systems Instruments). A amostra foi então secada mediante manutenção em um ambiente a 0% de umidade até 15 que não fosse mais registrada alteração no peso. Em seguida a amostra foi submetida a um perfil de subida de 0-90% da umidade relativa (UR) em incrementos de 10% da umidade relativa, mantendo a amostra em cada etapa até o equilíbrio ter sido atingido (99,5% da etapa de completação). Quando do atingimento do equilíbrio, a %UR dentro do equipamento foi elevada até a próxima etapa e o procedimento de equilíbrio foi repetido. Após o término do ciclo de absorção, a amostra foi então secada usando o mesmo procedimento. As alterações do peso durante os ciclos de absorção / dessorção foram monitoradas, permitindo que a natureza higroscópica da amostra fosse determinada.

Gravimetria Termoqravimétrica (TGA): Aproximadamente 5 mg de amostra foram pesadas em uma biodegradável de platina para TGA e carregadas em um analisador gravimétrico Perkin Elmer TGA-7 mantido na temperatura ambiente. A amostra foi então aquecida a uma taxa de 10 °C/min a partir de 25 °C até 300 °C, tempo durante o qual a alteração no peso era monitorada. O gás de purga utilizado foi o nitrogênio a uma vazão de 20 cm³/min. Antes da análise, o instrumento foi calibrado a peso usando um peso de referência de 100 mg e a temperatura calibrada usando um padrão de referência Alumel.

Microscopia por Luz Polarizada (PLM): A presença de cristalinidade (birrefringência) foi determinada usando um microscópio ótico polarizado Leica Leitz DMRB equipado com uma câmera de alta resolução Leica e software de captura de imagem (Firecam V.1.0). Todas as imagens foram registradas usando objetivas de 10x a menos que de outro modo estabelecido.

¹H Ressonância Magnética Nuclear (RMN): ¹H RMN foi realizada em um Espectrômetro N AC200 Bruker 200 MHz . A RMN de cada amostra foi realizada em deuterometanol. Cada amostra foi preparada em concentração ca. 5 mg.

Exemplo 1 - Sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina

1.1 Preparação de sal sódico de genisteína diidratado:. ca, 300 mg de genisteína foi colocada em 6 cm³ (20 vols), do IPA. Com a adição de 1M hidróxido de sódio (NaOH) a reação ficou rapidamente evidente (mudança de cor do amarelo pálido ao amarelo vibrante). A mistura foi permitida a agitação a temperatura ambiente por ca. 3 horas e depois repousou durante ca. 2 dias (fim de semana). O sólido foi isolado por filtração e deixado para secar na temperatura ambiente por ca. 24 horas. O sal sódico de genisteína preparado de acordo com este método é sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina, que foi caracterizado pelos métodos seguintes.

1.2 XRPD do sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina

O padrão de XRPD como mostrado na Figura 1 foi obtido utilizando o procedimento descrito acima. Conforme mostrado na Figura 1, a análise XRPD revela uma impureza na forma sólida o que provavelmente é um solvato IPA do sal de sódio. A secagem do material a 80 °C durante a noite elimina a impureza. Os picos no padrão XRPD em um experimental °2θ + 0,2 °2θ apresentados na Tabela 2. A lista completa dos picos, ou um subconjunto destes, poderá ser suficiente para caracterizar o sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina. Um subconjunto de picos que, isoladamente ou em combinação, podem ser utilizados para caracterizar o sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina na Figura 1 inclui 5,9, 11,6, 11,8, 15,2, 24,8, 28,2, 28,9, 28,9 e °2Θ + 0,2 °2Θ.

Tabela 2

Posição [°20 ± 0,2 °20]	Espaçamento-d [Â]	Rei. Int. [%]
5,4	16,5	6,25
5,9	15,0	14,04
7,5	11,8	21,61
8,2	10,8	4,19
11,6	7,6	6,4
11,8	7,5	7,42
14,8	6,0	4,3
15,2	5,8	71,86
16,0	5,5	5,13
16,8	5,3	8,89
17,1	5,2	7,31
23,5	3,8	5,6
24,3	3,7	22,41
24,8	3,6	100
25,5	3,5	7,31
26,7	3,3	4,87
27,0	3,3	5
28,2	3,2	1786,
28,5	3,1	22,31
28,9	3,1	14,37
29,7	3,0	4,35

1.3 DSC do Sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina anidra

Uma amostra foi preparada por secagem do sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina, preparada de acordo com o procedimento descrito no ponto 1.1 supra, a 80 °C durante a noite. A Figura 2 mostra a DSC da amostra de sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina anidra. A DSC indica desidratação ca a 91 °C, seguido por derreti10 mento a ca. 132 °C. Outros picos estão possivelmente associados com a degradação (como também indicado pelos gráficos da TGA mostrados nas Figuras 4 e 5, discutidas adiante).

1.4 GVS do sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina

Como mostrado na Figura 3, o estudo GVS do sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina indicou formação de hidratos (ciclo GVS desidrata o material antes da análise) e um máximo de 45% em peso de água adsorvida. No entanto, entre 20 e 70% UR (típica faixa de trabalho do material) apenas alteração de ca. 2% umidade foi observado.

1.5 TGA do sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina A Figura 4 mostra um gráfico da TGA de uma amostra de sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina que foi seco à temperatura ambiente por cerca de 24 horas, 1.1 acima. Figura 5 é uma TGA de uma amostra do preparado sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina que foi secado a 80 °C durante a noite. A TGA indica que o sal sódico está hidratado e começa a perder água em ca. 75 °C, adequado para mais desenvolvimento. A perda de peso é consistente com um mol de água para um mol de sódio.

1.6 PLM do sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina

A PLM do sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina apresentou uma morfologia do tipo agulhas.

1.7 Medições da Solubilidade do sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina

Solubilidade Aquosa: A solubilidade em água foi medida utilizando o protocolo a seguir.

Polpas de genisteína e do sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina foram feitas em meio aquoso em que o pH foi fixado em 4,5, 6,7 e 7,5, e cada suspensão foi agitada à temperatura ambiente por ca. 24 horas e em seguida filtrada usando um filtro de 0,2 pm para dentro de um tubo limpo. As soluções saturadas foram diluídas e analisadas quanto ao teor de API (genisteína) usando N-Ac-DL-Metionina em uma coluna HPLC Chirobiotic T e detector de UV ajustado a Âmax = 270 nm. A fase móvel foi executada em acetonitrila/água em modo isocrático, durante um período de 30 minutos. Os resultados são apresentados na Tabela 3, (BDL = abaixo dos limites de detecção). Não foram evidentes picos do API a partir dos gráficos das corridas de HPLC com genisteína (deve aparecer em ca min 6-7), indicando que a genisteína é extremamente insolúvel em meios aquosos e que os níveis estão abaixo da sensibilidade da técnica da HPLC empregada (sensibilidade da técnica do nível mg a pg).mg ao nível mg). A genisteína é reportada apresentar uma solubilidade aquosa na faixa de 10-40 nM.

Tabela 3

Solvente	Genisteína mg/mL	sódio sal sódico de genisteína diidratado, mg/mL
Água / polpa pH 4,5	BDL	0,136
Água / polpa pH 6,7	BDL	0,707
Água / polpa pH 7,5	BDL	0,650

Solubilidade em diferentes Solventes: A solubilidade em diferentes solventes orgâ20 nicos foi medida usando o protocolo a seguir. Aproximadamente porções de 25 mg de genisteína e de sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina foram colocados em 48 frascos diferentes, em separado. Cinco alíquotas de volume de cada solvente foram adicionadas exclusivamente a um frasco. Entre cada adição, a mistura era verificada quanto à 5 dissolução e, se nenhuma dissolução fosse evidente, o procedimento era mantido até a dissolução ser observada ou quando 50 volumes tivessem sido adicionados. Os resultados são apresentados na Tabela 4.

Tabela 4

Solvente	Genisteína mg/mL	sódio sal sódico de genisteína diidratado, mg/mL
Metanol (MeOH)	<10,6	<8,8
Etanol (EtOH)	<10.8	98
2-propanol (i PA)		<10.2
Acetona / iPA (50:50)	20Λ	20.2
1-butanol (BuOH)	<10.5	19.3
Acetato de metila (MeOAc)	<10.3	<10.2
ca, 17	<10.2
Acetona
<10.3	<10.6
1,4-dioxano
<10.1	<10.4
Acetonitrila (MeCN)	26J	<10.4
Tetraidrofurano (THF)	<10,3	<10.8
Diclorometano (DCM)	<10.5	<9,2
Éter ter-butilmetílico (TBME)	<10.8	<9.2
Metil etil cetona (MEK)	<10.5 !	<9.9
Heptano	<10.5 :	<11
Octanol	ca. 100	>217.6
Ν,Ν-dimetilformamida (DMF)	ca. 100
Dimetil sulfóxido (DMSO)	<10.1	<9,9
Tolueno	ca. 68	90.4
<10.1	<9.0
N-metil-2-pirrolidinona (NMP)
<10.1	69.6
Metil isobutil cetona (MIBK)	<10.1	<9,7
Acetona/água (50:50)	<10.7 <10.6	<10.9 <9,7
Tolueno/dioxano (50:50)
Cicloexano
Diisopropiléter (Dl PE)

1.8 Estudo de Estabilidade do sódio sal sódico de genisteína diidratado

A estabilidade da amostra foi testada em 80 °C por 7 dias e a 40 °C/75% UR por 7 dias. Observações como mudança de cor foram observados após 7 dias e XRPD das amostras foram realizadas após 7 dias para investigar uma eventual alteração da forma sólida. A Figura 6 mostra os padrões XRPD da amostra original e amostras de sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina a 80 °C por 7 dias e em 40 °C/75% UR por 7 dias. O estudo a 40 °C/75% UR não indicou nenhuma mudança ao longo de um período de 7 dias. O armazenamento do material a 80 °C durante um período de 7 dias indicou uma ligeira perda da cristalinidade sugerindo desidratação lenta. A sete dias os testes de estabilidade a luz não revelou nenhuma mudança na cor ou na forma sólida.

1.9 Espectro ¹H RMN do sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina A Figura 7 ilustra o espectro ¹H RMN do sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina. A Tabela 5 lista os picos do espectro de ¹H RMN. O deslocamento dos desvios químicos para os prótons aromáticos em ca. 5,9 na genisteína para 6,1 ppm na ¹H RMN da figura 8 confirma a formação do sal.

Tabela 5

Desvio químico	Multiplicidade	Faixa (ppm)
7,952	s	7,932-7,919
7,372	m	7,429 - 7,306
6,861	m	6,927 - 6,791
6,101	dd	6,187-6,028
4,936	s	5,256 - 4,723
3,34	q	3,577 - 3,096
1,085	s	1,213-0,934

s = singleto, m = multipleto, dd = dubleto de dubleto, q = quadrupleto

1.10 Estudo de desproporcionalização do Sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina

Uma amostra de 50 mg de sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina foi suspensa em 250 pl_ de água destilada por ca. 48 horas e então verificada por XRPD para desproporcionalização. O pH do sobrenadante também foi medido usando um medidor de pH Corning 240. Não foram observados sinais de desproporcionalização. O pH do sobrenadante após formar polpa foi de 7,1.

1.11 Estudo de Hidratação do Sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina

Cerca de 100 mg de sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina foram colocados em ca. 500 pL de misturas IPA/água (3%, 5% e 10%) no nível da água. Cada mistura foi agitada por ca. 48 horas à temperatura ambiente e, em seguida filtrada para recuperar os sólidos para estudos de XRPD e TGA. Conforme mostrado na Figura 8, foi indicada a hidratação a partir de uma medição do material original no padrão XRPD correspon dente à perda de peso por TGA (dependendo do material). O estudo não revelou mais hidratos; mas removeu impurezas do solvato IPA.

1.12 Difração de raios-X de cristal único de sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina

Preparação do Cristal Único: Os cristais foram crescidos a partir de soluções de sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina (ca. 48 mg) dissolvida em 50:50 IPA/Água (3 cm³). A solução foi então deixada a evaporar lentamente através parafiime perfurado. Os cristais na forma de agulhas foram aparentes após ca. 2 semanas de evaporação.

Difração de raios-X de cristal único: Uma agulha do tipo lâmina da amostra foi selecionada para a coleta de dados. Os dados de difração foram coletados com a radiação MoKa usando um difratômetro Smart Bruker Apex equipado com um CCD de funcionamento do dispositivo de baixa temperatura Oxford Cryosystems operando a 150 K.

Quando da indexação do conjunto de dados, a estrutura cristalina foi determinada ser pseudosimétrica. Dados robustos puderam ser indexados em uma célula metricamente monoclínica de dimensões a = 3,76, b = 30,23, c = 12,12 Â, β = 106,2 °, V = 1324 ³. uma indexação completa dos dados pode apenas ser obtido com uma célula triclínica maior de dimensões a = 7,52, b = 11,65 c = 30,46 Â, α = 89,8 °, β = 82,9 °, y = 88,1 °, V = 2647 A³. Esta célula é propriamente transformável em uma célula pseudo monoclínica C-centrada de dimensões a = 7,52, b - 60,46 c = 11,65 Â, β = 91.9 °, V = 5295 A³.

Os dados de difração foram integrados e reduzidos (SAINT), e corrigidos quanto a erros sistemáticos utilizando o procedimento multiscan SADABS. A estrutura foi resolvida em P-1 por métodos diretos (SHELXS) usando o conjunto de dados integrados na célula triclínica descrita acima. A estrutura foi aperfeiçoada contra |F|² usando todos os dados (SHELXL). A incorporação de uma lei dupla foi necessária para a completação da estrutura. A lei dupla foi usada em uma rotação de duas vezes en torno da direção [-1 0 2], que corresponde à direção do eixo-b das células monoclínicas descritas acima.

Adicionalmente a serem duplicadas, a estrutura é pseudosimétrica. Isso significa que as coordenadas atômicas dentro dos fragmentos orgânicos estão relacionadas entre si, e resulta nas correlações e instabilidades matemáticas no sentido do refinamento dos mínimos quadrados. A fim de superar essas semelhanças, restrições foram aplicadas a todas as distâncias de ligação quimicamente relacionados e ângulos. Pares de moléculas (1 e 2, e 3 e 4) estão relacionados por uma translação de a/2, e assim parâmetros de deslocamento anisotrópicos equivalentes foram obrigados a serem iguais. Algum amortecimento foi necessário para conseguir convergência. A correlação também induz comprimentos de ligação equivalentes a serem artificialmente diferentes, e deve ser tomado cuidado para não atribuir algum significado às diferenças aparentes em distâncias de ligação química equivalente, por exemplo. Um modelo mais de refinamento pode ser necessário para resolver esses efeitos.

Os átomos de hidrogênio ligados ao carbono foram colocados em posições calculadas. Alguns átomos de hidrogênio ligados a oxigênio podem ser localizados em mapas de diferença. Em especial, os átomos de H foram anexados aos átomos de O ligantes aos íons 5 sódio (0141 e 0144). Posições para ligando-água átomos-H foram alocadas em um mapa de Fourier calculado com respeito ao loci de possíveis posições-H e evitando contatos curtos onde inclusos no modelo. Os átomos-H anexados a 08 foral alocados em um mapa de diferença, e a molécula completa então inicialmente refinada como um grupo rotativo rígido, em seguida aos átomos-H foram tratadas com um modelo condutor. Os restantes átomos-H 10 (H7A e H142) foram colocados ao longo de vetores curtos 0 ... 0. Não havia nenhuma evidência em mapas de Fourier para átomos-H em 042 e 043, e as tentativas de colocá-los levou ao desenvolvimento de contatos curtos H...H exageradamente curtos com outros átomos-H.

O final ‘convencional’ fator-R [baseado em dados R e 7355 com F> 4σ (F)J foi de 15 0,0616. Outros cristais e parâmetros de refinamento são listados na Tabela 6.

Tabela 6: Dados de Cristal Único e Refinamento de Estrutura para o sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina A. Dados do Cristal

Fórmula empírica	ΟθοΗ54Ν32θ28> C3oH32Na2016, 2(C15H9O5), 2(H2O)
Peso da fórmula	1269,01
Comprimento de onda	0,71073
Temperatura	150(2) K
Sistema cristal	triclínico
Grupo espaço	P-1
Dimensões da célula unitária	a = 7,524(2)A alfa = 89,762(7) graus b = 11,646(3)A beta = 82,902(10) graus c = 30,464(6)A gama = 88,073(10) graus
Volume	2647,4(12) ΑΛ3
Número de reflexões por célula	7324 (2,5 < theta < 25 graus)
Z	2
Densidade (calculada)	1,592 Mg/mA3
Coeficiente de absorção	0,141 mmA.1
F(000)	1320

B. Coleta de dados

Descrição do cristal	Lâminas tipo agulhas incolor
Tamanho do cristal	0,70 x 0,16 x 0,10 mm
Instrumento	Bruker Smart Apex CCD

Faixa Theta para coleta de dados	0,67 a 24,55 graus
Faixas índices	-8<=h<=8, -13<=k<=13, -35<=1<=35
Reflexões coletadas	33227
Tipo varredura	omega
Correção da absorção	Multiscan (Tmin = 0,804, Tmax = 0,984)

C. Solução e Refinamento

Solução	Direta
Tipo refinamento	Matriz completa mínimos quadrados em FA2
Programa usado para refinamento	SHELXL-97
Colocação do átomo de hidrogênio	Geom/difmap
Tratamento do átomo de hidrogênio	Condição/rotação do grupo
Dados/restrições/parâmetros	8758/1636/580
Grau de adequação FA2	1,088
Convencional R [F>4sigma(F)]	R1 =0,0616 [dado 7355]
R ponderado (FA2 e todos os dados)	wR2 = 0,1489
Delta máximo final / sigma	0,073
Esquema de pesagem	Calç w=1/[\sA2A(FoA2A)+(0,0598P)A2A+2,2931P] onde P=(FoA2A+2FcA2A)/3
Maior diferença pico e vale	0,316 e-0,310 e.AA3

Discussão: A estrutura de cristal único de sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina mostra que o composto tem uma fórmula global de [Na₂(H₂O)₄ (μ-Η₂Ο)₂ (LH)₂]L₂.2H₂O onde LH = o ligando genisteína totalmente protonado C₁₅H₁₀O₅ e μ-Η₂Ο estão 5 ligando por pontes moléculas de água entre os íons Na (isto é, os íons Na estão cada um ligado a duas águas terminais e duas águas que formam pontes (designadas μ-Η₂Ο), mais um ligante LO posicionamento do átomo de hidrogênio usando dados de raios-X é usualmente considerado como uma tentativa, ainda mais aqui por causa dos problemas encontrados durante a análise da estrutura. Dito isto, as posições de átomo-H formam um conjun10 to plausível de ligação-H com todos os átomos-H envolvidos em ligações hidrogênio geometricamente normais.

Como mostrado na Figura 9, os complexos catiônicos de sódio consistem de unidades diméricas formadas através dos centros de inversão. Os íons de sódio são de coordenação-cinco, a esfera de coordenação consistindo de dois terminais e dois ligantes água formadores de ponte e um 15 dos ligandos LH. Uma ligação hidrogênio é formada entre a fração de ligação álcool e uma das moléculas terminais água (H141... 01 e H141 ... 04). Os ânions L são desprotonadas nos sítios fenólicos 042 e 043. As distâncias C-0 são bastante curtas (em média 1,34 A). Uma ligação hidrogênio interna é formada entre H6 * e 08 * da ligação LH e os ânions L'.

A Figura 9 ilustra o cátion dissódico centrossimétrico na estrutura dimérica do sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina, onde as ligações de hidrogênio intramoleculares são mostradas como linhas tracejadas.

O empacotamento do cristal é dominado pela ligação hidrogênio. Os cátions estão ligados aos anions por meio de moléculas de água para formar camadas em que também apresentam interações de empilhamento entre cátions e anions. A Figura 10 mostra uma tal camada envolvendo cátions baseados em 011 e anions baseados em 012. Moléculas de água são mostradas em turquesa. A vista está ao longo de [010].

Camadas similares compostas de moléculas baseadas em 013 e 014 também são formadas, e os dois tipos de camadas se alternam ao longo do eixo-b, sendo articuladas por ligações-H. A Figura 11 ilustra o quadro geral como uma rede tridimensional. A figura 11 ilustra a o empacotamento do sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina visto ao longo da direção [100].

A análise usando o procedimento PLATON/MISSYM indica que os fragmentos orgânicos por si só podem ser descritos usando a célula pequena (1324 A³) e o grupo espaço P2₁/c, e é apenas os íons de sódio e as moléculas de água que quebram essa simetria, que explica o padrão de um dado robusto e fraco no padrão de difração, e os problemas de pseudosimetria experimentados no refinamento.

O padrão XRPD calculado com base nos dados de cristal único e estrutura para o de sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina está mostrado na Figura 12. A Tabela 7 lista os picos no padrão XRPD calculados. A lista completa dos picos, ou um subconjunto deste, poderá ser suficiente para caracterizar o sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina. Um subconjunto de picos que, isoladamente ou em combinação, podem ser utilizados para caracterizar sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina da Figura 12 inclui 5.8, 11.6, 15.2, 17.6, 25.1,28.4, 28.8, e 29.2 °2θ±0,2°2θ.

Tabela 7

Pos. [°2θ ± 0,2 °2θ]	Espaçamento-d [A]	Rei. Int. [%]
5,8	15,1	23,520
8,1	10,9	5,770
11,6	7,6	12,620
15,2	5,8	69,700
17,6	5,0	5,570
23,7	3,8	4,540
24,6	3,6	35,590
25,0	3,6	32,830
25,1	3,6	97,090

25,1	3,6	98,070
25,1	3,5	100,000
25,2	3,5	73,730
25,3	3,5	14,020
25,3	3,5	9,220
25,7	3,5	7,900
25,8	3,5	10,480
28,4	3,5	23,020
28,5	3,5	15,880
28,8	3,1	10,520
28,8	3,1	27,560
29,2	3,1	23,560
29,2	3,1	22,670
32,3	2,8	7,540

1.13 Biodisponibilidade da Genisteína Sozinha e do sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina, em seguida da administração intraduodenal e intravenosa em ratos machos Sprague-Dawley

Preparação das Soluções de Dosagem para Estudo in-Vivo: Genisteína e sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina foram armazenados em temperatura ambiente sob dessecante e protegido da luz. As soluções foram preparadas novas a partir de pós no dia da administração. A solução de dosagem para administração intravenosa (IV) foi preparada a 1 mg/mL (ácido livre) em 50:50: DMSO:salino. As soluções de dosagem para administração intraduodenal (ID) foram preparadas a 2 mg/mL (genisteína ácido livre) em uma solução 0,2% carboximetil celulose sódica (Na CMC) em água.

Dosagem Animal: A farmacocinética da genisteína foi avaliada em ratos machos Sprague-Dawiey em jejum. Cada animal foi equipado com uma cânula da veia jugular (JVC) para coleta de sangue. Os animais destinados à administração intravenosa foram equipados com um JVC adicional para a administração da dose. Os animais destinados a dosagem intraduodenal foram equipados com uma cânula intraduodenal (IDC) para a administração da dose. Os animais cirurgicamente modificados foram alojados um por gaiola. Todos os animais foram supridos com uma dieta comercial para roedores (LabDiet, Certified Rodent Diet # 5002), ad libitum, antes do início do estudo. O alimento foi então suspenso dos animais por um período mínimo de 12 horas antes do estudo e durante o estudo, até oito horas após a dose quando o alimento foi retornado. Água estava disponível à vontade.

Soluções de dosagem intraduodenais de tratamento foram administradas como dose única em bolus no momento zero no dia da administração, as doses por via intravenosa foram administradas como uma lenta injeção intravenosa durante aproximadamente 1 minuto. Os períodos de coleta de sangue começaram ao final da infusão. Amostras de sangue foram coletadas. O escopo do estudo é mostrado na Tabela 8.

Tabela 8: Escopo do Estudo Farmacocinético Comparativo de Genisteína e sal só5 dico de genisteína diidratado na forma cristalina, em Ratos.

Grupo de tratamento	Composto de teste	Rota de dosagem	Dose (mg/kg)	Concentração da solução de dosagem (mg/mL)	Volume de dosagem (mL/kg)	Veículo	Momentos de amostra do sangue
1	Genisteína	ID	20	10	2	0,2% NaCMC em água	Pré-dose, 15, 30 min, 1,2,3,4,6,8 e 24 h
2	sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina	ID	20	10	2	0,2% NaCMC em água	Pré-dose, 15, 30 min, 1,2,3,4,6,8 e 24 h
3	Genisteína	IV	1	1	1	50% DMSO em salino	Pré-dose, 15, 30 min, 1,2,3,4,6,8 e 24 h
4	sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina	IV	1	1	1	50% DMSO em salino	Pré-dose, 15, 30 min, 1,2,3,4,6,8 e 24 h

Cada amostra de sangue foi coletada de ratos através de uma cânula da veia jugular e colocadas em tubos de polipropileno refrigerados contendo heparina sódica como anticoagulante. As amostras foram centrifugadas a uma temperatura de 4 “C, a uma velocidade de 13.000 rpm por 5 minutos. As amostras foram mantidas refrigeradas durante o proces10 sarnento. Cada amostra de plasma foi dividida em duas alíquotas. A primeira alíquota primeira continha 50 mL de plasma. Todos os volumes restantes do plasma foram usados para a segunda alíquota. As amostras foram então colocadas em gelo seco e armazenadas em um freezer para a manutenção em -60 °C a -80 °C. A concentração total de genisteína em amostras de plasma foram analisadas por LC-MS/MS após uma incubação durante a noite com mistura enzima glucuronidase/arilsulfatase. Os parâmetros farmacocinéticos foram calculados utilizando o software WinNonlin.

Análise de amostras de plasma: Um método analítico LC-MS/MS para a determinação da genisteína no plasma de ratos foi desenvolvido. Antes da análise da amostra, uma curva-padrão foi analisada para determinar a especificidade, intervalo e linearidade do método. O teor de genisteína total nas amostras de plasma foi determinado por pré-tratamento de todas as amostras com enzimas β-glicoronidase/arilsulfatase e incubando antes da análise. A incubação com a mistura enzimática desconjugou quaisquer metabolitos glicuronida ou sulfato da genisteína de volta para a forma original.

Critérios de Aceitação para análise LC-MS/MS: Uma curva padrão foi dispersa ao longo de cada corrida analítica. Pelo menos 5/8 dos padrões devem ter uma precisão de ± 20%, exceto no caso de LLOQ onde ± 25% é aceitável, para a execução ser aprovada.

Análise farmacocinética: As concentrações plasmáticas individuais versus dados temporais para a genisteína foram submetidas à análise não-compartmental usando o programa farmacocinético WinNonlin v. 4.1. As concentrações plasmáticas abaixo do limite de quantificação (10 ng/mL) tiveram um valor atribuído de zero para a análise PK apenas.

Resultados: Conforme mostrado na Figura 13, os perfis da concentração plasmática média e PK da genisteína em comparação com sal cristalino hidratado de sódio genisteína foram notadamente diferentes, em seguida da aplicação da dosagem ID. A concentração plasmática máxima média (Cmáx) de genisteína proveniente do sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina foi 4,2 vezes maior em comparação com o pico de concentração plasmática de genisteína, 8330 ± 2176 ng/mL e 1983 ±1130 ng/mL, respectivamente. Já dentro de 15 minutos após a aplicação da dosagem ID do asmática do sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina, concentração plasmática máxima (Cmax) de genisteína foi observada, enquanto que a Cmax da genisteína foi observada em 2 horas após a dose (Figura 13 e Tabela 10), a biodisponibilidade de genisteína proveniente do sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina foi de 55 ± 16% em comparação com 16 ± 4,4% para a genisteína (Tabela 9).

Tabela 9: Parâmetros Farmacocinéticos após administração intraduodenal de 20 mg/kg da Respectiva Forma (média ± SD, n=3).

Parâmetro PK	Genisteína	sódio sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina
Cmáx (ng/mL)	1983 ±1130	8330 ±2176
Tmax (h)	2,0 + 0	0,83 + 1,0
AUCmínimos (h.kg.ng/mL/mg)	414+111	1161 ±358
Biodisponibilidade (%)	16 ±4,4	55 ±16

Como mostrado na Tabela 10, o perfil farmacocinético da genisteína e sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina após a administração IV não foram significativamente diferentes entre as duas formas.

Tabela 10: Parâmetros farmacocinéticos após a administração intravenosa de 1 mg/kg da respectiva forma (média ± SD, n = 3).¹ Extrapolados para t = 0.

Parâmetro PK	Genisteína	sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina
Co (ng/mL)1	6617 + 1059	6640 ±1223
T1/2 (h)	1,4 ±0,3	1,6 ±0,9
CL (L/h/kg)	0,40 + 0,09	0,47 ± 0,08
Vss (L/kg)	0,40 ± 0,06	0,36 ± 0,09
AUCminimos (h.kg.ng/mL/mg)	2533 ± 638	2129 ±331
AUCoo (h.kg.ng/mL/mg)	2584 ± 639	2189 ±356

1.14 Caracterização Físico-químicas e a comparação da solubilidade cinética e em equilíbrio entre a genisteína e o sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina.

O sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina mostra superiores perfis de solubilidade inicial e cinética intrínseca tardia como comparado com genisteína em soluções de EtOH/dH20. A baixa solubilidade cinética intrínseca tardia do sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina em EtOH 100% tem menos implicações práticas para o desenvolvimento pré-clínico, dada a natureza não-fisiológica do solvente.

Experimental: Genisteína e o sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina foram experimentados em um ensaio de solubilidade SuperSol 1000 (Preventor Gmbh) e a concentração dos compostos foram medidas ao longo do tempo em um sistema fechado, medindo a absorbância em um fluxo através de câmara de medição em um comprimento de onda de 250 nm. Uma vez que ambos formam compostos suspensões em H₂O deionizada pura, as propriedades físico-químicas foram avaliadas a partir de soluções de EtOH 100%, assim como em misturas de dH₂O e EtOH, especificamente, EtOH 50/50 (voi/vol) e EtOH/ dH₂O 75/25 ( voi/vol), de acordo com as diretrizes da Farmacopéia Européia 01/2008, Seção 2.9.3., Tabela 2.9.3.5.

Foram avaliados os seguintes parâmetros:

tíMssi definido como: tempo desde o início da análise de Velocidade Máxima de solubilização (min)

Címssi definida como: Solubilidade cinética inicial como expresso como concentração na Velocidade Máxima de solubilização (mg x I’¹)

CfFoi definido como: Solubilidade cinética tardia como expresso como a concentração, no equilíbrio cinético Solubilidade (mg x I ’¹) t [foi definido como: tempo desde o início da análise de Equilíbrio de solubilidade Cinética (min)

AC [Cri-Cmss! definido como: diferença de concentração entre solubilidade cinética inicial e tardia (mg x Γ¹)

At [Cpn-CMssl definido como: Diferença de tempo entre os pontos terminais da solubilidade cinética inicial e tardia (min)

MSS definido como: Velocidade máxima de solubilidade definida por C _[Mss/t [mss] (mg x I ¹ x min ¹)

ISI definido como: índice de Solubilidade Intrínseca definido por AC [C_Eq-C_Mss]/At [C_Eq - CmSs]

Quanto maior o valor do ISI, mais rápida a solubilização e mais forte a contribuição relativa da contribuição relativa da solubilidade de equilíbrio cinético inicial e tardio C _[eq].

KSR definido como: A relação Solubilidade cinética dada por C _[MSs]/C _[EQ].

A KSR é o indicador relação numérica sobre a contribuição relativa da solubilidade cinética inicial relativamente à solubilidade de equilíbrio cinético tardia total. Quanto maior o valor KSR, mais forte é a contribuição relativa da solubilidade cinética inicial C _[Mss]

Resultados: A cinética e a termodinâmica de dados de equilíbrio de solubilidade de genisteína e de sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina foram avaliados nas condições relatadas nas Tabelas 11, 12 e 13.

Como mostrado na Tabela 11, a genisteína apresentou (a) bom MSS, (b) aceitável KSR e (c) bons perfis de solubilidade tardia, enquanto que o sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina mostrou (a) MSS excelente (b) KSR excelente e ( c) de boa a aceitável ISI. Para EtOH/dH₂O 50/50 (vol/vol) o sal de sódio cristalino genisteína dihidratado apresentou o melhor perfil de solubilidade cinética intrínseca inicial.

Tabela 11. EtOH/dH₂O 50/50 (vol/vol)

	MSS	t[MSS]	C[MSS]	C[Eq]	t[Eq]	AC [CEq-C. mss]	At [CEqCmss]	ISI	KSR
Genisteína	12,08	0:61	7,43	12,87	4:12	5,44	3:51	1,55	0,58
sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina	20,66	0:71	14,67	17,40	5:28	2,73	4:57	0,60	0,84

Para EtOH/dH₂O 75/25 (v/v), conforme demonstrado na Tabela 13, a genisteína a31 presentou (a) MSS bom, (b) KSR bom e (c) boa solubilidade em perfis de solubilidade tardio. O sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina mostrou (a) MSS excelente (b) KSR excelente e (c) ISI excelente, que é o melhor perfil e solubilidade cinética intrínseca inicial e tardio.

Tabela 12: 75/25 EtOH/dH₂O (vol/vol)

	MSS	t[MSS]	C[MSS]	C[Eq]	*[Eq]	AC [CEq-C. MSs]	At [CEq- Cmss]	ISI	KSR
Genisteína	19,67	0:44	8,52	14,03	4:15	5,51	3:71	1,49	0,61
sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina	37,33	0:30	11,20	15,86	4:01	4,66	3:71	1,26	0,71

Como relatado na Tabela 13, em EtOH 100%, a genisteína apresentou (a) MSS bom, (b) KSR aceitável e (c) bom final de perfis de solubilidade, enquanto que o sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina, em comparação, mostrou (a) MSS excelente (b) KSR excelente e (c) ISI pobres, sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina apre10 sentou o melhor início de perfil de solubilidade intrínseca cinética, mas pequena contribuição para o perfil global.

Tabela 13: EtOH 100%

	MSS	t[MSS]	C[MSS]	C[Eq]	t[Eq]	AC [CEq-C. MSS]	At [CEqCmss]	ISI	KSR
Genisteína	23,81	0:24	5,81	13,79	4:03	7,98	3:79	2,11	0,42
sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina	36,90	0:29	10,85	11,20	5:14	0,35	4:85	0,07	0,97

1.15 Síntese em Larga Escala do Sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina

Síntese: sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina foi preparada em uma escala kg usando o seguinte procedimento:

1. 5,2 kg de 2-propanol (IPA) e 320 g de genisteína neutro foram acusados em um reator de vidro de 15 litros.

2. A temperatura da mistura foi ajustada para 22 ± 3 °C e 632 g de 2M aq. NaOH foi 5 adicionada gota a gota, durante cerca de 40 minutos a 22 ± 4 °C.

3. A mistura foi agitada a 22 ± 4 °C por aproximadamente 19 horas e resfriado a 15 °C e agitada por 4 horas.

4. A mistura foi agitada em ciclos de temperatura (15 °C ± 3 -> 35 ± 3 °C durante 1 h -> 35 ± 3 °C por 4 h -> 15 ± 3 °C durante 1 h -> 5 ± 3 °C por 4 h) por cerca de 90 horas e, 10 finalmente, aos 15 +3 °C por cerca de 4,5 h.

5. O produto precipitado foi filtrado e lavado com 1,2 kg de 2-propanol pré-resfriado.

6. O produto filtrado foi seco em secador de bandeja a vácuo, sem vácuo, numa temperatura primeiramente ajustada para 30 °C por cerca de 19 h, em seguida, à temperatura ajustada para 40 °C por aproximadamente 20 h, em seguida, à temperatura ajustada a 50 15 °C por cerca de 24 h, em seguida, na temperatura ajustada de 60 °C por aproximadamente 16 horas e, finalmente, na temperatura ajustada a 70 °C por aproximadamente 10 h, até que o teor de água medido por titulação KF atingisse a especificação desejada.

7. Finalmente, o produto (0,24 kg) foi moído e embalado em sacos de PE.

Procedimento Opcional de Recristalização : Sal sódico de genisteína diidratado na 20 forma cristalina foi recristalizado usando o seguinte procedimento:

1. 24 g de sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina preparado como acima foi adicionado a 240 mL de etanol.

2. Esta mistura foi agitada a 250 rpm e aquecida a 45 “C, por cerca de 30 minutos.

3. A solução resultante foi deixa a resfriar até a temperatura ambiente.

4. Heptano, em seguida, foi adicionado em alíquotas (como segue) adicionando uma alíquota por 1 min. A agitação intermitente a 40 rpm foi usada entre cada adição.

• Adicionado 4,151 mL de heptano e agitado de forma intermitente a 40 rpm.

• Adicionado 3,272 mL de heptano e agitado de forma intermitente a 40 rpm.

• Adicionado 5,209 mL de heptano e agitado de forma intermitente a 40 rpm.

· Adicionado 3,505 mL de heptano e agitado de forma intermitente a 40 rpm.

• Adicionado 3,885 mL de heptano e agitado de forma intermitente a 40 rpm.

• Adicionado 5,465 mL de heptano e agitado de forma intermitente a 40 rpm.

• Adicionado 6,314 mL de heptano e agitado de forma intermitente a 40 rpm.

• Adicionado 6,656 mL de heptano e agitado de forma intermitente a 40 rpm.

· Adicionado 8,258 mL de heptano e agitado de forma intermitente a 40 rpm.

• Adicionado 6,969 mL de heptano e agitado de forma intermitente a 40 rpm.

• Adicionado 11,115 mL de heptano e agitado de forma intermitente a 40 rpm.

• Adicionado 10,750 mL de heptano e agitado de forma intermitente a 40 rpm.

• Adicionado 14,219 mL de heptano e agitado de forma intermitente a 40 rpm.

• Adicionado 9,261 mL de heptano e agitado de forma intermitente a 40 rpm.

• Adicionado 14,913 mL de heptano e agitado de forma intermitente a 40 rpm.

· Adicionado 13,471 mL de heptano e agitado de forma intermitente a 40 rpm.

• Adicionado 15,753 mL de heptano e agitado de forma intermitente a 40 rpm.

• Adicionado 19,172 mL de heptano e agitado de forma intermitente a 40 rpm.

• Adicionado 23,441 mL de heptano e agitado de forma intermitente a 40 rpm.

• Adicionado 25,503 mL de heptano e agitado de forma intermitente a 40 rpm.

· Adicionado 26,856 mL de heptano e agitado de forma intermitente a 40 rpm.

• Adicionado 28,126 mL de heptano e agitado de forma intermitente a 40 rpm.

• Adicionado 28,070 mL de heptano e agitado de forma intermitente a 40 rpm.

• Adicionado 36,738 mL de heptano e agitado de forma intermitente a 40 rpm.

• Adicionado 35,989 mL de heptano e agitado de forma intermitente a 40 rpm.

· Adicionado 49,677 mL de heptano e agitado de forma intermitente a 40 rpm.

• Adicionado 50,145 mL de heptano e agitado de forma intermitente a 40 rpm.

• Adicionado 32,579 mL de heptano e agitado de forma intermitente a 40 rpm.

• Adicionado 61,538 mL de heptano e agitado de forma intermitente a 40 rpm.

• Adicionado 57,143 mL de heptano e agitado de forma intermitente a 40 rpm.

· Adicionado 51,948 mL de heptano e agitado de forma intermitente a 40 rpm.

• Adicionado 90,909 mL de heptano e agitado de forma intermitente a 40 rpm.

5. A amostra foi então deixada a cristalizar de um dia para o outro na temperatura ambiente (cerca de 18 horas).

6. O produto cristalino foi coletado por filtração a vácuo.

7. O produto cristalino foi então secado por ca. 21 horas durante o monitoramento do teor de água por titulação Karl Fischer para evitar o risco de desidratação.

A Figura 14 mostra o padrão XRPD do recristalizado sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina. Os picos no padrão XRPD numa Experimental ⁰ 2Θ ± 0,2 °26 ° são listados na Tabela 14. A lista completa dos picos, ou um subconjunto deste, poderá ser suficiente para caracterizar o sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina. Um subconjunto de picos que, isoladamente ou em combinação, podem ser utilizados para caracterizar sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina da Figura 14 inclui 6,0, 7,1, 11,8. 11,9, 15,3, 17,8, 21,3, 25,0, 28,3, 28,6, e 29,1 °2θ ± 0,2 °2θ. Subconjunto dos picos preferidos incluem 6.0, 7.1, 15.3, 25.0 e pelo menos dois dos três picos de 28,3, 28,6, e

29,1 °2θ ± 0,2 °2θ e 6,0, 7,1, 15,3, 25,0, e 28,3 ⁰ 2Θ ± 0,2 °2θ .

Tabela 14

Pos. [°29 ± 0,2 °2Θ]

Espaçamento-d [A]

Rei. Int. [%]

6,0	14,6	33,53
7,1	12,4	21,77
8,3	10,7	5,53
11,8	7,5	15,05
11,9	7,4	12,04
15,3	5,8	90,11
15,6	5,7	5,91
17,8	5,0	17,38
19,3	4,6	7,99
21,3	4,2	10,78
22,1	4,0	4,67
23,4	3,8	5,61
23,7	3,8	9,49
24,5	3,6	35,37
25,0	3,6	100
25,4	3,5	9,09
25,6	3,5	16,02
25,8	3,5	18,24
27,6	3,2	6,76
28,3	3,2	21,60
28,6	3,1	22,15
29,1	3,1	20,45
29,9	3,0	5,12
30,7	2,9	12,80
30,8	2,9	9,80
32,1	2,8	5,32
35,4	2,5	8,63
35,7	2,5	8,78
36,6	2,5	5,38
39,1	2,3	5,66
40,5	2,2	6,66
41,0	2,2	8,72
41,1	2,2	7,29
41,9	2,2	8,62
42,6	2,1	8,97

Exemplo 2 - Sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina.

2.1 Preparação do sal potássico de genisteína:. Ca, 300 mg de genisteína foi colocada em 6 cm³ (20 vols) do IPA. Em adição de 1M hidróxido de potássio (KOH) a reação da suspensão foi evidente (isto é, de polpa a solução clara). A mistura foi deixada agitar na temperatura ambiente por ca. 3 horas tempo durante o qual a precipitação foi evidente. A mistura foi então deixada em repouso na temperatura ambiente por ca. 2 dias (fim de semana). O sólido foi isolado por filtração e deixado para secar à temperatura ambiente por ca. 24 horas.

Sal potássico de genisteína diidratado na forma cristalina se forma a partir do sal potássico amorfo quando em repouso quando aberto ao ar sob condições de temperatura ambiente. Ele também pode ser preparado a partir de sal de potássio amorfo quando o sal de potássio de genisteína é repolpada em uma mistura IPA/água como descrito nos estudos de hidratação para formar sal potássico de genisteína diidratado na forma cristalina pela absorção de água.

O sal potássico de genisteína, assim, aparenta ser um sal amorfo anidro instável no ponto de recuperação, que então rapidamente absorve água da vizinhança para se cristalizar na forma de um material diidratado. Essa descoberta é sustentada pelo teste de estabilidade em luz, pelo estudo de hidratação, a 40 °C/75% UR, o estudo de armazenamento a 80 °C e o teste de TGA - todos descritos abaixo. O estudo do armazenamento a 80 °C é particularmente notável na medida que o material aparenta estar absorvendo água nessa temperatura elevada; sugerindo assim que o hidrato seja estável a 80 °C. Os dados de GVS também indicam que o sal potássico de genisteína diidratado é a versão mais estável e, portanto, possível de desenvolvimento. Embora o processo de síntese descrito acima não produza o material hidratado diretamente, ele pode muito bem ser produzido através de processamento adicional ou alteração do sistema de solventes de modo a incluir um maior teor de água (ou seja, 3% de água/IPA). Como o sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina, o risco de desidratação na moagem é ligeiramente atenuado pelos testes de armazenamento a 80 °C.

2.2 XRPD do Sal potássico de genisteína amorfo

Como mostrado na Figura 15, a análise XRPD revela que o sal de potássio sólido genisteína produzido conforme descrito em 2.1 é amorfo (ou seja, sem picos).

2.3 XRPD sal potássico de genisteína diidratado na forma cristalina

A Figura 16 mostra o padrão XRPD do sal potássico de genisteína diidratado na forma cristalina. Os picos no padrão XRPD num Experimental °2θ ± 0,2 °2θ são listados na Tabela 15. A lista completa dos picos, ou um subconjunto deste, poderá ser suficiente para caracterizar o sal potássico de genisteína diidratado na forma cristalina. Um subconjunto de picos que, isoladamente ou em combinação, podem ser utilizados para caracterizar o sal potássico de genisteína diidratado na forma cristalina a partir da Figura 16 inclui, 11,6, 14,5.

14,8, 24,5, 25,2, 27,6, 28,0 e 28,4 °2θ ± 0,2 °2θ. Um subconjunto inclui preferido dos picos de 11,6, 14,5, 24,5, 25,2 e pelo menos dois dos três picos de 27,6, 28,0 e 28,4 °2θ ± 0,2 °2θ.

Tabela 15

Pos. [°2θ ± 0,2 °2θ]	Espaçamento-d [Â]	Rei. Int. [%]
11,6	7,6	12,95
14,5	6,1	51,58
14,8	6,0	30,96
18,0	4,9	4,42
22,3	4,0	4,25
22,6	3,9	11,47
24,0	3,7	15,84
24,2	3,7	20,16
24,5	3,6	100
25,2	3,5	19,35
25,6	3,5	8,28
27,0	3,3	11,63
27,1	3,3	12,14
27,6	3,2	31,86
28,0	3,2	29
28,4	3,1	23,21
29,3	3,0	4,53
29,5	3,0	4,67
30,0	3,0	5,34
30,5	2,9	5,25
30,9	2,9	4,43
31,3	2,9	6,03
31,7	2,8	5,5
35,0	2,6	4,76

2.4 PLM sal potássico de genisteína diidratado na forma cristalina

A análise de PLM sal potássico de genisteína diidratado na forma cristalina mostrou que o sal de potássio é cristalino e tem uma morfologia tipo agulha. As agulhas são mais grossas que aquelas do sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina.

2.5 TGA do sal potássico de genisteína diidratado na forma cristalina

Como mostrado na Figura 17, TGA indica que o sal de potássio é hidratado e inicia a perda de água em ca. 750C, adequado para mais desenvolvimento. A perda de peso é consistente com 2 moles de água para 1 mol de potássio.

2.6 DSC do sal potássico de genisteína diidratado na forma cristalina

Como mostrado na Figura 18, DSC indica a desidratação a 91 C sem derretimento. Os outros picos estão provavelmente associados com a degradação (como também indicado pelo TGA, figura 16).

2.7 GVS do sal potássico de genisteína diidratado na forma cristalina

Como mostrado na Figura 19, os estudos GVS indicam formação de hidratos (ciclo GVS desidrata o material antes da análise) e um máximo de 16% em peso de água adsorvida. No entanto, entre 20 e 70% UR (intervalo de trabalho típico de material) apenas uma variação de 3% na umidade é observado. Esta é uma propriedade valiosa para o desenvolvimento farmacêutico.

2.8 Estudo de solubilidade Sal potássico de genisteína diidratado na forma cristalina A solubilidade em água de sal cristalino hidratado de potássio genisteína foi medida utilizando o protocolo descrito no Exemplo 1.7. Tabela 16 compara a solubilidade aquosa de sal potássico de genisteína diidratado com aquela da genisteína.

Tabela 16

Solvente	Genisteína, mg/mL	Sal potássico de genisteína diidratado na forma cristalina
Água / polpa pH 4,5	BDL	0,04
Água / polpa pH 6,7	BDL	0,057
Água / polpa pH 7,5	BDL	0,069

2.9 ¹H RMN de sal potássico de genisteína diidratado na forma cristalina

A Figura 20 ilustra o espectro de 1H RMN do sal potássico de genisteína diidratado na forma cristalina. Tabela 17 apresenta os picos do espectro de 1H RMN. Deslocamento dos desvios químicos para os prótons aromáticos em ca. 5,9 em genisteína para 6,1 ppm na ¹H RMN da figura 20 confirma a formação de sais.

Desvio químico	Multiplicidade	Faixa
7,959	s	8,009 - 7,941
7,375	m	7,437 - 7,322
6,861	m	6,932 - 6,800
6,154	dd	6,246 - 6,068
4,949	s	5,148-4,714
3,34	q	3,444-3,137
1,182	d	1,228- 1,149

s = singleto, m = multipleto, d = dubleto, dd = dubleto dubleto, q = quadrupleto

2.10 Estudo de Estabilidade de Sal potássico de genisteína diidratado na forma cristalina

A estabilidade da amostra foi testada em 80 °C por 7 dias e a 40 °C/75% UR por 7 dias. Observações como mudança de cor foram observados apos 7 dias e XRPD das amostras foram realizadas após 7 dias para investigar uma eventual alteração forma sólida. A Figura 21 mostra os padrões XRPD de amostras de sal potássico de genisteína diidratado na forma cristalina a 80 °C por 7 dias e em 40 °C/75% UR por 7 dias. O estudo a 40 °C/75% UR indica que o sal potássico de genisteína cristaliza para formar o sal potássico de genisteína diidratado. Armazenando cristalino sal potássico de genisteína diidratado a 80 °C durante um período de 7 dias indicou cristalização para o sal potássico de genisteína diidratado.

2.11 Estudo de hidratação do sal potássico de genisteína diidratado na forma cristalina

Cerca de 100 mg de sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina foi colocado em ca. 500 p.L de mistura IPA/água (3%, 5% e 10%) no nível da água. Cada mistura foi agitada por ca. 48 horas à temperatura ambiente e, em seguida filtrada para recuperar o sólido para estudos de XRPD e TGA. Conforme mostrado na Figura 22, o estudo revelou uma hidratação hidrato cristalino hidratado de acordo com sal potássico de genisteína.

2.12 Estudo de desproporcionalização do sal potássico de genisteína diidratado na forma cristalina

Uma amostra do sal potássico de genisteína diidratado na forma cristalina foi repolpada em água destilada por 48 horas e em seguida verificada por XRPD quanto à desproporcionalização. O pH do sobrenadante foi também medido usando um medidor de pH Corning 240. Não forma observados sinais de desproporcionalização. O pH do líquido sobrenadante foi de 7,3 indicando que não houve desproporcionalização.

Exemplo 3 - sal cálcico de genisteína na forma cristalina

Aproximadamente 25 mg de genisteína foi colocado no mesmo recipiente 7 mg de hidróxido de cálcio sólido. À mistura sólida, 500 pL de IPA/água (50:50) foi adicionada e a mistura agitada à temperatura ambiente por ca. 24 horas. Após a agitação, a polpa foi então ciclada sob temperatura (40 °C à temperatura ambiente, em períodos de 4 horas), com agitação por ca. 72 horas. O sólido foi então isolado por filtração e deixado para secar à temperatura ambiente por ca. 24 horas.

3.2 Caracterização do sal cálcico de genisteína na forma cristalina

A Figura 23 mostra o padrão XRPD do sal cálcico de genisteína na forma cristalina. Os picos no padrão XRPD numa Experimental °2θ ± 0,2 °2θ são listados na Tabela 18. A lista completa dos picos, ou um subconjunto deste, poderá ser suficiente para caracterizar o sal cálcico de genisteína na forma cristalina. Um subconjunto de picos que, isoladamente ou em combinação, pode ser utilizados para caracterizar sal cálcico de genisteína na forma cristalina da Figura 23 inclui 8,0. 15,3, 25,1, e 25,6 °2Θ ± 0,2 °2Θ. A TGA de sal cálcico de genisteína na forma cristalina é mostrado na Figura 24. A imagem PLM do sal cálcico de genisteína na forma cristalina apresentou cristais em forma de agulha. Tabela 18

Pos. [°20 ± 0,2 °2θ]	Espaçamento-d [Â]	Rei. Int. [%]
5,4	16,2	21,82
8,0	11,0	98,01
9,3	9,2	17,32
15,3	5,8	100,00
15,5	5,7	17,27
16,0	5,6	31,04
16,3	5,5	24,40
16,8	5,3	6,33
18,5	4,8	17,43
19,0	4,7	6,23
20,3	4,4	16,69
21,5	4,1	5,44
22,5	3,9	7,30
22,7	3,9	14,06
23,0	3,9	7,86
24,1	3,7	6,61
25,1	3,5	37,75
25,6	3,5	72,44
26,1	3,4	15,90
27,8	3,2	20,14
29,2	3,1	23,14
29,5	3,0	34,31
30,0	3,0	15,01
33,5	2,7	19,69

Exemplo 4 - Sal magnésio de genisteína na forma cristalina, preparação equivalente 1

4.1 Preparação de Sal magnésio de genisteína na forma cristalina, equivalente 1

Aproximadamente 25 mg de genisteína foi colocado no mesmo recipiente ca. 5,5 mg de hidróxido de magnésio sólido. À mistura sólida, 500 pL do IPA/água (50:50) foi adicionada e a mistura agitada à temperatura ambiente por ca. 24 horas. Após a agitação, a suspensão foi então ciclada sob temperatura (40 °C à temperatura ambiente, em períodos de 4 horas), com agitação por ca. 72 horas. O sólido foi então isolado por filtração e deixado a secar na temperatura ambiente por ca. 24 horas.

4.2 Caracterização do Sal magnésio de genisteína na forma cristalina, equivalente 1 A Figura 25 mostra o padrão XRPD do sal magnésio de genisteína na forma cristalina proveniente da preparação do equivalente 1. Os picos no padrão XRPD numa Experimental °2θ ± 0,2 °2Θ são listados na Tabela 19. A lista completa dos picos, ou um subconjunto deste, poderá ser suficiente para caracterizar sal magnésio de genisteína na forma cristalina. Um subconjunto de picos que, isoladamente ou em combinação, podem ser utilizados para caracterizar sal magnésio de genisteína na forma cristalina da Figura 25 inclui 9,0, 18,6, 23,7, 25,7, e 38,0 °2θ ± 0,2 °2Θ. A TGA de sal magnésio de genisteína na forma cristalina, preparação equivalente 1, é mostrado na Figura 26. A imagem PLM de sal magnésio de genisteína na forma cristalina, preparação equivalente 1, mostrou que o sal magnésio genisteína é cristalino.

Tabela 19

Pos. [°2θ ± 0,2 °2θ]	Espaçamento-d [A]	Rei. Int. [%]
5,8	15,2	10,51
9,0	9,8	65,09
13,9	6,4	49,78
18,6	4,8	84,23
20,8	4,3	17,43
23,7	3,8	81,78
25,7	3,5	57,42
27,3	3,3	15,20
29,8	3,0	15,46
34,9	2,6	4,44
38,0	2,4	100

Exemplo 5 - sal magnésio de genisteína na forma cristalina, Preparação Equivalente 2

5.1 Preparação do sal magnésio de genisteína na forma cristalina, Equivalente 2

Aproximadamente 25 mg de genisteína foi colocado no mesmo recipiente como ca. 11 mg de hidróxido de magnésio sólido. À mistura sólida, 500 μΐ_ do IPA/água (50:50) foi adicionada e a mistura agitada à temperatura ambiente por ca. 24 horas. Após a agitação, a suspensão foi então a temperatura alternada (40 °C à temperatura ambiente, em 4 períodos de horas), com agitação por ca. 72 horas. O sólido foi então isolado por filtração e deixada para secar à temperatura ambiente por ca. 24 horas.

5.2 Caracterização do sal magnésio de genisteína na forma cristalina, 2 Preparação Equivalente

A Figura 27 mostra o padrão XRPD do sal magnésio de genisteína na forma crista lina, preparação equivalente 2. Os picos no padrão XRPD numa Experimental °2θ ± 0,2 °2θ são listados na Tabela 20. A lista completa dos picos, ou um subconjunto deste, poderá ser suficiente para caracterizar sal magnésio de genisteína na forma cristalina. O gráfico da TGA do sal magnésio de genisteína na forma cristalina, equivalente 2, é mostrado na Figura 28.

Tabela 20

Pos. [°2θ ± 0,2 °26]	Espaçamento-d [A]	Rei. Int. [%]
9,0	9,8	30,28
13,9	6,4	20,73
18,6	4,8	81,86
20,8	4,3	12,63
23,7	3,8	38,11
25,7	3,5	28,52
27,3	3,3	8,99
29,7	3,0	9,05
38,0	2,4	100

Os padrões XRPD similar e gráficos de TGA para o sal magnésio de genisteína na forma cristalina, proveniente de ambos a preparação do equivalente 1 e preparação do equivalente 2 sugere que o mesmo sal magnésio de genisteína na forma cristalina seja obtido a partir de ambas a preparações. Um subconjunto de picos de XRPD que, individualmente ou em combinação, podem ser utilizados para caracterizar sal magnésio de genisteína na forma cristalina inclui 9,0, 18,6, 23,7, 25,7, e 38,0 °2Θ ± 0,2 °2θ.

Exemplo 6 - Sal L-lisina de genisteína na forma cristalina

6.1 Preparação do Sal L-lisina de genisteína na forma cristalina

Aproximadamente 25 mg de genisteína foi colocado no mesmo recipiente ca. 15 mg de sólidos mono-L-lisina. À mistura sólida, 500 pL de um ou outro de IPA ou de tolueno foi acrescentado e a mistura agitada à temperatura ambiente por ca. 24 horas. Após a agitação, a polpa foi então ciclada sob temperatura (40 °C até a temperatura ambiente, em períodos de 4 horas), com agitação por ca. 72 horas. O sólido foi então isolado por filtração e deixado a secar na temperatura ambiente por ca. 24 horas.

6.2 Caracterização de misturas Sal L-lisina de genisteína na forma crístalina/genisteína

Amostras do sal L-lisina de genisteína na forma cristalina a partir de tolueno e IPA foram analisadas por XRPD e os padrões XRPD mostrado nas Figuras 30 e 31 foram gerados. O padrão XRPD para genisteína cristalina também é mostrado abaixo. Como indicado pelo XRPD, ambos os métodos produziram misturas de genisteína e sal genisteína L-lisina.

Figura 29 mostra o padrão XRPD da genisteína cristalina. Os picos no padrão XRPD da Figura 29 em uma exoerimental 2Θ ± 0,2 °20 são listados na Tabela 21.

Tabela 21

Pos. [°2θ ± 0,2 °26]	Espaçamento-d [A]	Rei. Int. [%]
7,5	11,7	81,81
12,2	7,3	15,94
12,8	6,9	52,19
14,3	6,2	27,23
14,6	6,1	28,38
14,8	6,0	30,72
15,0	5,9	11,15
16,0	5,5	52,69
16,6	5,3	15,61
18,1	4,9	100
19,2	4,6	21,11
21,0	4,2	47,41
22,4	4,0	12,28
22,6	3,9	10,2
23,2	3,8	23,76
23,6	3,8	9,17
24,8	3,6	51,75
25,1	3,6	33,66
25,6	3,5	24,89
26,3	3,4	81,12
26,7	3,3	23,35
27,0	3,3	10,41
27,4	3,3	56,24
28,7	3,1	56,15
29,4	3,0	30,44
33,6	2,7	14,28
35,9	2,5	7,63
39,5	2,3	13,43
40,1	2,3	7,68

6.3 Caracterização do Sal L-lisina de genisteína na forma cristalina a partir do Tolu5 eno

A Figura 30 mostra o padrão XRPD do sal L-lisina de genisteína na forma cristalina de tolueno. Os picos no padrão XRPD numa Experimental °26 ± 0,2 °2θ são listados na Tabela 22.

Tabela 22

Pos. [°2θ ± 0,2 °2θ]	Espaçamento-d [Â]	Rei. Int. [%]
5,2	17,1	73,48
7,5	11,7	94,46
10,2	8,7	12,47
12,2	7,2	23,99
12,8	6,9	57,82
14,3	6,2	28,25
14,6	6,1	27,59
14,8	6,0	32,21
15,0	5,9	17,49
16,0	5,5	45,20
16,6	5,3	19,53
18,1	4,9	77,67
18,6	4,8	46,56
19,2	4,6	28,29
19,7	4,5	34,98
20,6	4,3	20,97
21,0	4,2	17,82
21,2	4,2	11,09
22,4	4,0	17,25
22,6	3,9	12,61
23,2	3,8	21,80
23,6	3,8	12,36
24,8	3,6	25,82
25,1	3,6	27,26
25,6	3,5	30,47
26,3	3,4	100
26,7	3,3	23,56
27,0	3,3	14,34
27,4	3,3	50,01
27,9	3,2	6,19
28,7	3,1	46,23
29,4	3,0	40,47

32,9	2,7	9,67
33,6	2,7	12,33
36,0	2,5	7,24
36,3	2,5	7,15
39,5	2,3	5,12
40,0	2,3	6,87

6.4 Caracterização do Sal L-lisina de genisteína na forma cristalina do IPA

A Figura 31 mostra o padrão XRPD do sal L-lisina de genisteína na forma cristalina a partir do IPA. Os picos no padrão XRPD numa Experimental °2θ ± 0,2 °20 são listados na Tabela 23. A TGA da mistura L-lisina de genisteína na forma cristalina/genisteína é mostra5 da na Figura 32. A imagem de PLM da mistura genisteína L-lisina/genisteína do IPA apresentaram material cristalino como fez a imagem de PLM da mistura cristalina a partir de tolueno.

Tabela 23

Pos. [°28 ± 0,2 °28]	Espaçamento-d [A]	Rei. Int. [%]
5,2	17,1	31,93
7,5	11,7	73,22
12,2	7,2	16,11
12,8	6,99	50,35
14,3	6,2	19,60
14,6	6,1	24,47
14,8	6,0	30,13
16,0	5,5	43,55
16,6	5,3	12,52
18,1	4,9	100
18,6	4,8	28,99
19,2	4,6	20,18
19,7	4,5	24,98
20,6	4,3	18,10
21,0	4,2	14,36
22,4	4,0	9,60
23,2	3,8	22,54
23,6	3,8	9,93
24,8	3,6	16,59
25,1	3,6	22,50

25,6	3,5	25,73
26,3	3,4	70,86
26,7	3,3	17,84
27,0	3,3	12,67
27,4	3,3	43,34
28,7	3,1	38,70
29,4	3,0	28,39
32,9	3,7	6,17
33,4	2,7	6,94
36,3	2,5	7
40,0	2,3	7,50

Os padrões XRPD semelhantes para o sal L-lisina de genisteína na forma cristalina de ambas isopropanol e tolueno sugere que o mesmo sal L-lisina de genisteína na forma cristalina é obtido de ambas as preparações. A lista completa dos picos da Tabela 21 ou 22, ou um subconjunto deste, poderá ser suficiente para caracterizar o sal L-lisina de genisteína na forma cristalina. Ao comparar os padrões XRPD do sal L-lisina de genisteína na forma cristalina nas Figuras 30 e 31 com os da genisteína cristalina na Figura 29, um subconjunto de picos que, isoladamente ou em combinação, podem ser utilizados para caracterizar o sal L-lisina de genisteína na forma cristalina inclui 5,2,18,6, 19,7, 20,6, e 21,0 °2θ ± 0,2 °2θ.

Exemplo 7 - sal N-metil genisteína (meglumina) na forma cristalina

Aproximadamente 25 mg de genisteína foi colocado no mesmo recipiente ca. 20 mg de N-metilglucamina sólida. À mistura sólida, 500 pL de acetona foi adicionada e a mistura agitada à temperatura ambiente por ca. 24 horas. Após a agitação, a polpa foi então ciclada sob temperatura (40 °C até a temperatura ambiente, em períodos de 4 horas), com agitação por ca. 72 horas. O sólido foi então isolado por filtração e deixado a secar na temperatura ambiente por ca. 24 horas.

7.2 Caracterização do sal N-metilglucamina de genisteína na forma cristalina

A Figura 33 mostra o padrão XRPD do sal N-metilglucamina de genisteína na forma cristalina. Os picos no padrão XRPD numa Experimental °26 ± 0,2 °26 são listados na Tabela 24.

A lista completa dos picos, ou um subconjunto deste, poderá ser suficiente para caracterizar sal N-metilglucamina de genisteína na forma cristalina. Um subconjunto de picos que, isoladamente ou em combinação, podem ser utilizados para caracterizar o sal Nmetilglucamina de genisteína na forma cristalina a partir da Figura 33 inclui 7,5, 7,8, 12,3, 14,8, 16,5, 17,1, 17,6, 18,8, 19,4, 20,0, 20,8, e 29,1 e °2θ ± 0,2 °2Θ. Um subconjunto preferido inclui picos de 12,3, 14,8, 17,6, e 19,4 °2θ ± 0,2 °2Θ.

Tabela 24

Pos. [°2θ ± 0,2 °2θ]	Espaçamento-d [A]	Rei. Int. [%]
7,5	11,7	8,64
7,8	11,4	8,13
12,3	4,2	13,7
12,8	6,9	3,35
14,0	6,3	17,93
14,8	6,0	4,11
16,0	5,5	4,38
16,5	5,4	8,33
17,1	5,2	7,93
17,6	5,0	47,95
18,1	4,9	5,50
18,8	4,7	21,35
19,4	4,6	100
20,0	4,4	7,27
20,8	4,3	12,40
26,1	3,4	6,87
26,9	3,3	8,11
27,4	3,3	7,60
29,1	3,1	11,01
36,6	2,5	9,51

Exemplo 8 - Sal N-etilglucamina (eglumina) de genisteína na forma cristalina

8.1 Preparação do sal N-etilglucamina (eglumina) de genisteína na forma cristalina Aproximadamente 25 mg de genisteína foi colocado no mesmo recipiente ca. 19 mg de N-etilglucamina sólida. À mistura sólida, 500 μΙ_ de acetona ou do IPA foi adicionada e a mistura agitada à temperatura ambiente por ca. 24 horas. Após a agitação, a polpa foi então ciclada sob temperatura (40 °C até a temperatura ambiente, em períodos de 4 horas), com agitação por ca. 72 horas. O sólido foi então isolado por filtração e deixado a secar na temperatura ambiente por ca. 24 horas.

Caracterização 8.2 do sal etil-glucamina (eglumina) de genisteína na forma cristalina

A amostra do sal N-etilglucamina (eglumina) de genisteína na forma cristalina, sal preparado anteriormente, foi analisado por XRPD e os padrões apresentados nas Figuras 34 e 35 gerado. Um sal instável cristalina foi identificada tanto a partir de acetona e do IPA.

A Figura 34 mostra o padrão XRPD do sal N-etilglucamina (eglumina) de genisteína na for47 ma cristalina a partir de acetona. Os picos no padrão XRPD numa Experimental °2Θ ± 0,2 °2θ são listados na Tabela 25. Figura 35 mostra o padrão XRPD da sal N-etilglucamina (eglumina) de genisteína na forma cristalina IPA. Os picos no padrão XRPD numa Experimental °2θ ± 0,2 °2Θ são listados na Tabela 26 A lista completa dos picos de uma tabela, ou um subconjunto deste, poderá ser suficiente para caracterizar sal N-etilglucamina (eglumina) de genisteína na forma cristalina. Um subconjunto de picos que, isoladamente ou em combinação, pode ser utilizado para caracterizar sal N-etilglucamina (eglumina) de genisteína na forma cristalina, com base nas Figuras 34 e 35, inclui 7,4, 12,7, 14,7, 16,0, 18,1, 19,0, 19,2, 21,7, 22,1, e 26,3 °2θ ± 0,2 °2θ. Um subconjunto inclui preferido dos picos de 7,4, 12,7, 10 14,7, 16,0, 18, e 26,3 °2θ ± 0,2 °2θ. O gráfico TGA do sal N-etilglucamina de genisteína na forma cristalina da acetona é mostrado na Figura 36. A imagem PLM do sal N-etilglucamina de genisteína a partir de acetona mostrou um material cristalino.

Tabela 25

Pos. [°2θ ± 0,2 °2θ]	Espaçamento-d [A]	Rei. Int. [%]
7,4	12,0	100
7,5	11,7	14,48
12,7	6,9	25,42
14,7	6,0	34,98
16,0	5,5	8,49
18,1	4,9	9,32
19,0	4,7	26,42
19,5	4,6	43,35
21,7	4,1	72,24
22,1	4,1	22,61
24,1	3,7	6,38
25,2	3,5	10,46
26,3	3,4	19,16
26,6	3,3	7,45
27,4	3,3	7,06
28,3	3,2	6,07
28,7	3,1	8,56
29,3	3,1	9,52
30,2	3,0	11,72
32,0	2,8	7,13
32,1	2,8	6,66
33,7	2,7	4,59

35,3	2,5	7
42,0	2,1	4,96

Tabela 26

Pos. [°2θ ± 0,2 °2θ]	Espaçamento-d [A]	Rei. Int. [%]
7,4	12,0	100
7,5	11,7	49,75
12,8	6,9	37,57
14,7	6,0	42,98
16,0	5,5	19,76
16,6	5,3	8,05
18,1	4,9	27,66
19,0	4,7	32,79
19,2	4,6	12,86
19,4	4,6	48,27 ,
21,7	4,1	80,33
22,1	4,0	24,33
23,2	4,8	8,12
24,8	3,6	7,52
25,0	3,6	14,01
25,2	3,5	15,58
25,6	3,5	14,97
26,3	3,4	84,13
26,7	3,3	27,05
27,4	3,3	24,39
28,6	3,1	33,81
29,3	3,0	11,44
29,4	3,0	16,47
30,2	3,0	14,82
32,0	2,8	10,04
33,7	2,7	6,79
35,3	2,5	8,64
47,1	2,5	8,64

Exemplo 9 - Sal dietilamina de genisteína na forma cristalina

9.1 Preparação de Sal dietilamina de genisteína na forma cristalina

Uma solução estoque de genisteína em THF (520,2 mg em 19,25 ml. de THF) e di etilamina em THF: EtOH (1:1) foi preparada. As soluções estoque de genisteína e dietilamina foram adicionadas em quantidades estequiométricas e a solução foi filtrada através de filtros de náilon de 0,2 pm em frascos limpos e deixados evaporar sob condições ambientes.

9.2 Caracterização do Sal dietilamina de genisteína na forma cristalina

O material sólido isolado acima foi submetido a análise através de um XRPD utilizando um difratômetro XRG-3000 equipado com um detector CPS (Curved Position Sensitive) com uma faixa 2Θ de 120 °; um difratômetro de raios-X de pó Shimadzu XRD-6000 usando radiação Cu Ka e um difratômetro Bruker D-8 Bruker Discover equipado com Bruke’s General Area Diffraction Detection System (GADDS, v. 4.1.19). Os parâmetros específicos 10 de aquisição estão listados no padrão de cada amostra na seção de dados. A Figura 37 mostra o padrão XRPD do sal dietilamina de genisteína na forma cristalina. Os picos no padrão XRPD numa Experimental °2θ ± 0,2 °2θ são listados na Tabela 27. A lista completa dos picos, ou um subconjunto deste, poderá ser suficiente para caracterizar o sal de dietilamina cristalina genisteína. Um subconjunto de picos que, isoladamente ou em combinação, 15 pode ser utilizado para caracterizar o sal de dietilamina cristalina genisteína da Figura 37 inclui 7,4, 8,2, 15,3, 25,3, e 28,4 °2Θ ± 0,1 °2θ.

Tabela 27

°2θ	espaçamento-d (Â)	Intensidade (%)
6.7 ±0.1	13.215 ±0.200	30
7.4 ±0.1	11.922 ±0.163	SO
8.2 ±0.1	10.76810.133	41
Ü ± 0.1	9.671 ± 0.107	21
10.0 ±0.1	8.837 ±0.089	29
11.2 ± 0.1	7.910 ± 0.071	2S
13.4 ± 0.1	6.608 + 0.049	22
14.9 ± 0.1	5.93710.040	36
15.3 ± 0.1	5.803 ±0.038	73
17.1 ±0.1	5.18510.030	20
18.0 ±0.1	4.937 ± 0.027	19

18.3 ± 0.1	4.844 10.026 |	18
20.1 ±0.1	4.43010.022 |	18
21.1 ±0.1	4.207 ±0.020 |	16
22.4 ±0.1	3.969 1 0.018 |	20
23.4 ±0.1	3.79610.016 |	15
24.7 ± 0.1	3.60710,014 |	33
25.3 ±0.1	3.524 ±0.014 |	100
26.5 ±0.1	3.37010.013	22
27.0 ±0.1	3.29710.012 1	18
27.8 ±0.1	3.213 + 0,011 1	23
28.4 ±0.1	3.14310.011 |	43
28.7 ±0.1	3.110 + 0,011 |	30
29.3 ±0.1	3.049 + 0,010 |	18

Exemplo 10 - Monoidrato de genisteína na forma cristalina

10.1 Preparação de Monoidrato de genisteína na forma cristalina

Uma solução estoque de genisteína foi preparada em THF (472 mg em 17,47 mL de THF). A solução estoque de genisteína (1 ml_) foi adicionada a um frasco de vidro, seguido de 1 mL de solução de ácido D-glicurônico (84,1 mg em 4,33 mL de água). A solução foi deixada evaporar sob as condições ambientes. Os sólidos foram isolados após um dia por decantação da solução restante e depois foram secados com papel de filtro absorvente.

10.2 Caracterização de Monoidrato de genisteína na forma cristalina A análise XRPD da amostra de monoidrato de genisteína na forma cristalina foi realizada utilizando um difratômetro XRG-3000 equipado com um detector CPS (Curved Position Sensitive) com uma faixa 2Θ de 120 °; um difratômetro de raios-X de pó Shimadzu XRD-6000 usando radiação Cu Ka e um difratômetro Bruker D-8 Bruker Discover equipado com Bruke’s General Area Diffraction Detection System (GADDS, v. 4.1.19). A Figura 38 mostra o padrão XRPD do monoidrato de genisteína na forma cristalina, os picos no padrão XRPD numa Experimental °2θ ± 0,2 °2θ são listados na Tabela 28. A lista completa dos picos, ou um subconjunto deste, poderá ser suficiente para caracterizar o monoidrato de genisteína na forma cristalina. Um subconjunto de picos que, isoladamente ou em combinação, pode ser utilizado para caracterizar a monoidrato de genisteína na forma cristalina da Figura 38 inclui 9,0, 11,3, 13,4, 14,8, 23,1, 25,0, 26,8, 28,5, e 28 °20±0,1 °20.

Tabela 28

°2Θ	espaçamento-d (Â)	Intensidade (%)
9.0 10.1	9.81910.110	65
11.3 ±0.1	7.862 + 0.070
13.0 ±0.1	6.80010.052	36
13.4 ±0.1	6.59110.049	100
14.1 + 0.1	6.26910.044	31
14.8 ±0.1	5.992 + 0.041	50
18.3 ±0.1	4.844 1 0.026	36
22.1 + 04	4.024 1 0.018	40
22.5 + 04	3.95110.017	32
23.1 ±0.1	3.857 ±0.017	70
23.8 ±0.1	3.741 + 0.016	36
24.0 + 04	3.709 + 0.015	34
24.7 ±0.1	3.61210.014	34
25.0 ±0.1	3.56210.014	55
25.9 ±0.1	3.43610.013	45
26.8 ±0.1	3.33110.012	61
27.8 ±0.1	3.20910.011	25
28.5 ±0.1	3.13610.011	54
29.0 ±0.1	3,08110.010	26

A análise termogravimétrica (TGA) do monoidrato de genisteína na forma cristalina foi realizada por meio de um instrumento analisador termogravimétrico TA 2950. Figura 39 5 mostra um gráfico da TGA da amostra monoidrato de genisteína na forma cristalina. A análise termogravimétrica indicou que a amostra continha 6% do peso de componente volátil, o que equivale a um monoidrato.

Claims (19)

1. Composto, CARACTERIZADO pelo fato de ser o sal sódico de genisteína diidratado.

2. Sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina, CARACTERIZADO pelo 5 fato de que apresenta um padrão de XRPD possuindo picos a 6,0, 7,1, 15,3 e 25,0 °29 ± 0,2 °29, e pelo menos dois dos três picos a 28,3, 28,6 e 29,1 °29 ± 0,2 °29.

3. Sal sódico de genisteína diidratado na forma cristalina, CARACTERIZADO pelo fato de que apresenta um padrão de XRPD possuindo picos a 6,0, 7,1, 15,3 e 25,0 e 28,3 °29 ± 0,2 °29.

10

4. Composto, CARACTERIZADO pelo fato de ser o sal potássico de genisteína diidratado.

5. Sal potássico de genisteína diidratado na forma cristalina, CARACTERIZADO pelo fato de que apresenta um padrão de XRPD possuindo picos a 11,

6, 14,5, 24,5, 25,2 e pelo menos dois dos três picos a 27,6, 28,0 e 28,4 °29 ± 0,2 °29.

15 6. Sal de genisteína, CARACTERIZADO pelo fato de que é selecionado de um sal cálcico de genisteína, um sal de magnésio de genisteína, um sal de L-lisina de genisteína, um sal de N-metilglucamina de genisteína, um sal de N-etilglucamina de genisteína, ou um salde dietilamina de genisteína.

7. Sal de genisteína na forma cristalina, CARACTERIZADO pelo fato de que é se20 lecionado a de um sal cálcico de genisteína na forma cristalina, um sal de magnésio de genisteína na forma cristalina, um sal de L-lisina de genisteína na forma cristalina, um sal de N-metilglucamina de genisteína na forma cristalina, um sal N-etilglucamina de genisteína na forma cristalina, ou um sal de dietilamina de genisteína na forma cristalina.

8. Composto, CARACTERIZADO pelo fato de ser o monoidrato de genisteína na 25 forma cristalina.

9. Composição terapêutica, CARACTERIZADA pelo fato de que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de pelo menos um composto de genisteína conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 8 e pelo menos um veículo farmaceuticamente aceitável.

30

10. Uso de uma composição conforme definida na reivindicação 9,

CARACTERIZADO pelo fato de ser para a preparação de um medicamento para tratar ou prevenir câncer em um paciente.

11. Uso de pelo menos um composto de genisteína conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 8, CARACTERIZADO pelo fato de ser para a preparação de um 35 medicamento para tratar câncer em um paciente.

12. Uso de uma composição farmacêutica conforme definida na reivindicação 9, CARACTERIZADO pelo fato de ser para a preparação de um medicamento para tratar in- flamação crônica (doenças inflamatórias) em um paciente.

13. Uso de pelo menos um composto de genisteína conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 8, CARACTERIZADO pelo fato de ser para a preparação de um medicamento para tratar inflamação crônica (doenças inflamatórias) em um paciente.

14. Uso de uma composição terapêutica conforme definida na reivindicação 9, CARACTERIZADO pelo fato de ser para a preparação de um medicamento para tratar amiloidose transtiretina em um paciente.

15. Uso de pelo menos um composto de genisteína conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 8, CARACTERIZADO pelo fato de ser para a preparação de um medicamento para tratar amiloidose transtiretina em um paciente.

16. Uso de uma composição terapêutica conforme definida na reivindicação 9, CARACTERIZADO pelo fato de ser para a preparação de um medicamento para tratar fibrose cística em um paciente.

17. Uso de pelo menos um composto de genisteína conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 8, CARACTERIZADO pelo fato de ser para a preparação de um medicamento para tratar fibrose cística em um paciente.

18. Uso de uma composição terapêutica conforme definida na reivindicação 9, CARACTERIZADO pelo fato de ser para a preparação de um medicamento para tratar infecção em um paciente.

19. Uso de pelo menos um composto de genisteína conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 8, CARACTERIZADO pelo fato de ser para a preparação de um medicamento para tratar infecção em um paciente.