BR122020020217B1

BR122020020217B1 - Uso de um composto antiviral ou sal do mesmo para o tratamento de uma infecção por arenaviridae

Info

Publication number: BR122020020217B1
Application number: BR122020020217-3A
Authority: BR
Inventors: Michael O'neil Hanrahan Clarke; Joy Yang Feng; Robert Jordan; Richard L. Mackman; Adrian S. Ray; Dustin Siegel
Original assignee: Gilead Sciences, Inc
Priority date: 2015-09-16
Filing date: 2016-09-16
Publication date: 2021-08-17
Also published as: MX2021005087A; JP6742403B2; AU2023200990A1; CN114366745A; US20230027727A1; PL3349758T3; JP2020111587A; CN115887465A; HK1255732A1; LT3349758T; WO2017049060A1; MA52371A; DK3349758T3; BR112018005048B1; HUE058737T2; US20190255085A1; ES2918585T3; HRP20220740T1; JP7254738B2; AU2016323604A1

Abstract

usos de compostos antivirais e kit que os compreende. são fornecidos métodos para o tratamento de infecções pelos vírus arenaviridae e coronaviridae pela administração de nucleosídeos e prófármacos dos mesmos, de fórmula i: em que a posição 1 do açúcar de nucleosídeo é substituído. os compostos, composições e métodos fornecidos são particularmente úteis para o tratamento de infecções pelo vírus lassa e vírus junin.

Description

REFERÊNCIAS CRUZADAS A PEDIDOS RELACIONADOS

[001] Este pedido de patente reivindica o benefício sob 35 U.S.C. §119(e) de Pedido de Patente Provisório dos Estados Unidos N° 62/219.302, depositado em 16 de setembro de 2015 e Pedido Provisório dos Estados Unidos N° 62/239.696, depositado em 9 de outubro de 2015. Os pedidos anteriores são incorporados aqui por referência em suas totalidades.

CAMPO DA INVENÇÃO

[002] A invenção se refere, de modo geral, aos métodos e compostos para o tratamento de infecções por vírus Arenaviridae, particularmente métodos e nucleosídeos e pró-fármacos para o tratamento de vírus Lassa e vírus Junin. A invenção se refere, de modo geral, aos métodos e compostos para o tratamento de infecções pelo vírus Coronaviridae, particularmente métodos e nucleosídeos dos mesmos para o tratamento do vírus SARS e vírus MERS.

ANTECEDENTE DA INVENÇÃO

[003] O vírus Lassa é um vírus de RNA de sentido negativo segmentado que pertence à família Arenaviridae. Arenavírus são também subdivididos nos complexos de vírus do Velho Mundo e Novo Mundo com base na reatividade cruzada serelógica, relações filogenéticas, e distribuição geográfica, (Wulff, 1978; Bowen, 1997). O complexo de arenavírus do Novo Mundo compreende os vírus que circulam na América do Norte (isto é, vírus Whitewater Arroyo (WWAV), Tamiami (TAMV), e Bear Canyon (BCNV)) e América do Sul (isto é, vírus Tacaribe (TACV), Junin (JUNV), Machupo (MACV), Guanarito (GTOV), e Sabia (SABV)). O complexo do Velho Mundo inclui arenavírus que circulam em na África, Europa e Ásia, (isto é, vírus coreomeningite linfocítica (LCMV) e Lassa (LASV)). A faixa de espécies de roedor de reservatório restringe a ocorrência de arenavírus, com a exceção de LCMV que é distribuída devido a sua associação com Mus domesticus e M. musculus, que migraram globalmente (Salazar- Bravo, 2002). Os hospedeiros de reservatório de LASV são roedores do gênero Mastomys que são enzoóticos na África Subsariana (Salazar-Bravo, 2002). Pelo menos sete arenavírus são conhecidos causar febre hemorrágica severa em humanos, entre os quais estão LASV, JUNV, MACV, GTOV, e SABV que são endêmicos na África Ocidental, Argentina, Bolívia, Venezuela, e Brasil, respectivamente, e recentemente descobertos os vírus Lujo (LUJV) e Chapare (CHAPV) que se originaram na Zâmbia e Bolívia, respectivamente (Breise, 2009; Delgado, 2008).

[004] O vírus Lassa (LASV) é endêmico na África Ocidental com uma estimativa de 300.000-500.000 pessoas infectadas anualmente (McCormick, 1987). A transmissão ocorre através do contato com roedores infectados (Mastomys natalensis) ou excreta de roedor contaminado pelo vírus, e transmissão de pessoa para pessoa, especialmente em ambientes hospitalares, foram documentados (McCormick, 1987). A doença causada por LASV varia de infecção subclínica a febre hemorrária branda a severa que está associada com falência de múltiplos órgãos. As taxas de mortalidade associadas com a infecção por LASV variam e alcançam aproximadamente 2% a 15% para casos hospitalizados e podem exceder 50% em certos cenários de surto (McCormick, 1987; Fisher-Hoch, 1995). A despeito da alta incidência e morbidade e mortabilidade associadas, não existe terapia aprovada para tratar infecção por LASV em humanos. Cuidado de suporte e administração precoce de ribavirina são padrões de cuidado atuais.

[005] LASV inicialmente infecta os monócitos, macrófagos, e células dendríticas e se espalha sistemicamente para produzir uma viremia primária que induz à infecção de órgãos internos. A replicação de vírus leva a um aumento nos níveis de citocina inflamatória e desenvolvimento de coagulopatias resultante em vazamento vascular, choque hipovolêmico e falência de múltiplos órgãos (Hensley, 2011).

[006] A replicação de arenavírus é catalisada pela proteína L polimerase que utiliza modelos de RNA virais que consistem em RNA genômico encapsidado pela proteína NP de nucleocapsídeo viral e compreendem ribonucloproteína viral (RNP) (Buchmeier, 2007). A replicação é iniciada na entrada viral na célula hospedeira onda a L polimerase, associada com a RNP viral, inicia a transcrição do promotor de genoma localizado na extremidade 3' de cada segmento RNA genômico, L e S. O evento de transcripção primária resulta na síntese de NP e L polimerase mRNA codificado em orientação antigenômica dos segmentos S e L, respectivamente. A transcrição terminada no lado distal da estrutura tronco-alça (SL) dentro da região intergenômica (IGR). Arenavírus utilizam uma estratégia de captura de tampão para adquirir as estruturas de tampão de mRNAs celulares para facilitar a translação. A captura de tampão é mediada pela atividade de endonuclease da L polimerase que é cofatorada pela atividade de ligação de tampão de NP para produzir mRNAs não poliadenilados tamponados. Subsequentemente, a L polimerase adota um modo replicase e se move através do IGR para gerar um RNA antigenômica complementar de tamanho natural (agRNA). Este agRNA funciona como um modelo para a síntese de GPC e mRNAs de Z codificados na orientação genômica dos segmentos S e L, respectivamente, e para a síntese de RNA genômico de tamanho natural (gRNA) (Buchmeier, 2007; Franze- Fernandez, 1987; Meyer, 1993; Qi, 2010; Lelke, 2010; Morin, 2010).

[007] Coronavírus humano, prmeiro identificado nos meados da década de 1960, são vírus que infectam a maioria das pessoas em algum momento em sua vida, geralmente causando enfermidades do trato gastrointestinal e respiratório superior brandas a moderadas. O novo coronavírus referido como "Síndrome Respiratória do Oriente Médio - Coronavírus " (MERS-CoV ou MERS) foi primeiro reportado na Arábia Saudita em 2012 e se espalhou para diversos outros países. SARS-CoV, o coronavírus responsável pela Síndrome Respiratória Aguda Severa (SARS) foi primeiro reconhecido na China em 2002 e levou a um surto mundial em 2002 e 2003.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[008] São fornecidos métodos e compostos para o tratamento de infecções causadas pela família de vírus Arenaviridae.

[009] É fornecido um método para o tratamento de uma infecção por Arenaviridae em um humano em necessidade do mesmo compreendendo administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula I:

Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável ou éster, do mesmo; em que: cada R1 é H ou halogênio; cada R2, R3, R4 ou R5 é independentemente H, ORa, N(Ra)2, N3, CN, NO2, S(O)nRa, halogênio, (C1-C8)alquila, (C4-C8)carbociclilalquila, (C1-C8)alquila substituída, (C2-C8)alquenila, (C2-C8)alquenila substituída, (C2-C8)alquinila ou (C2-C8)alquinila substituída; ou quaisquer dois R2, R3, R4 ou R5 em átomos de carbono adjacentes quando considerados juntos são -O(CO)O- ou quando considerados juntos com os átomos de carbono de anel aos quais eles são ligados formam uma ligação dupla; R6 é ORa, N(Ra)2, N3, CN, NO2, a 11 11 11 12 11 11 11 S(O)nR , -C(=O)R , -C(=O)OR , -C(=O)NR R , -C(=O)SR , -S(O)R , -S(O)2R , - S(O)(OR11), -S(O)2(OR11), -SO2NR11R12, halogênio, (C1-C8)alquila, (C4-C8)carbociclilalquila, (C1-C8)alquila substituída, (C2-C8)alquenila, (C2-C8)alquenila substituída, (C2-C8)alquinila, (C2-C8)alquinila substituída, ou (C6-C20)aril(C1-C8)alquila; R7 é selecionado a partir de um grupo que consiste em H 11 11 11 12 11 11 11 , -C(=O)R , -C(=O)OR , -C(=O)NR R , -C(=O)SR , -S(O)R , -S(O)2R , -S( O)(OR11), -S(O)2(OR11), ou -SO2NR11R12, em que cada (C1-C8)alquila, (C2-C8)alquenila, (C2-C8)alquinila ou (C6-C20)aril(C1-C8)alquila de cada R11 ou R12 é, independentemente, opcionalmente susbtituído com um ou mais halo, hidróxi, CN, N3, N(Ra)2 ou ORa; e em que um ou mais dos átomos de carbono não terminais de cada referido (C1-C8)alquila podem ser opcionalmente substituídos com -O-, -S- ou -NRa-, b)

em que: Rc é selecionado a partir de fenila, 1-naftila, 2-naftila,

Rd é H ou CH3; Re1 e Re2 são cada qual independentemente H, (C1-C6)alquila ou benzila; Rf é selecionado a partir de H, (C1-C8)alquila, benzila, (C3-C6)cicloalquila, e -CH2-(C3-C6)cicloalquila; Rg é selecionado a partir de (C1-C8)alquila, -O-(C1-C8)alquila, benzila, -O-benzila, -CH2-(C3-C6)cicloalquila, -O-CH2-(C3-C6)cicloalquila, e CF3; n' é selecionado a partir de 1, 2, 3, e 4; e d) um grupo da fórmula:

em que: Q é O, S, NR, +N(O)(R), N(OR), +N(O)(OR), ou N-NR2; Z1 e Z2, quando considerados juntamente, são -Q1(C(Ry)2)3Q1-; em que: cada Q1 é independentemente O, S, ou NR; e cada Ry é independentemente H, F, Cl, Br, I, OH, R, -C(=Q2)R, -C(=Q2)OR, -C(=Q2)N(R)2, -N(R)2, -+N(R)3, -SR, -S(O)R, -S(O)2R, -S(O)( OR), -S(O)2(OR), -OC(=Q1)R, -OC(=Q2)OR, -OC(=Q2)(N(R)2), -SC(=Q2)R, -SC(=Q2)OR , -SC(=Q2)(N(R)2), -N(R)C(=Q2)R, -N(R)C(=Q2)OR, -N(R)C(=Q2)N(R)2, -SO2NR2, -CN, -N3, -NO2, -OR, ou Z3; ou quando considerados juntamente, dois Ry no mesmo átomo de carbono formam um anel carbocíclico de 3 a 7 átomos de carbono; cada Q2 é independentemente, O, S, NR, +N(O)(R), N(OR), +N(O)(OR), ou N-NR2; ou Z1 e Z2 são cada qual, independentemente, um grupo da fórmula Ia:

Fórmula Ia em que: cada Q3 é independentemente uma ligação, O, CR2, NR, +N(O)(R), N(OR), +N(O)(OR), N-NR2, S, S-S, S(O), ou S(O)2; M2 é 0, 1 ou 2; cada Rx é independentemente Ry ou a fórmula:

em que: cada M1a, M1c, e M1d é independentemente 0 ou 1; M12c é 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ou 12; Z3 é Z4 ou Z5; Z4 é R, -C(Q2)Ry, -C(Q2)Z5, -SO2Ry, ou -SO2Z5; e Z5 é um carbociclo ou um heterociclo em que Z5 é independentemente substituído com 0 a 3 grupos Ry; R 8 11 12 11 11 11 11 12 é halogênio, NR R , N(R )OR , NR NR R , N3, NO, NO2, CHO, CN, -CH(=NR11), -CH=NNHR11, -CH=N(OR11), -CH(OR11)2, -C(=O)NR11R12, -C(=S)NR11R12, -C(=O)OR11, (C1-C8)alquila, (C2-C8)alquenila, (C2-C8)alquinila, (C4-C8)carbociclilalquila, (C6-C20)arila opcionalmente substituído, heteroarila opcionalmente substituído, -C(=O)(C1-C8)alquila, - S(O)n(C1-C8)alquila, (C6-C20)aril(C1-C8)alquila, OR11 ou SR11; cada R9 ou R10 é independentemente H, halogênio, NR11R12, N(R11)OR11, NR11NR11R12, N3, NO, NO2, CHO, 11 11 11 11 11 12 1 CN, -CH(=NR ), -CH=NHNR , -CH=N(OR ), -CH(OR )2, -C(=O)NR R , -C(=S)NR 1R12, -C(=O)OR11, R11, OR11 ou SR11; cada R11 ou R12 é independentemente H, (C1-C8)alquila, (C2-C8)alquenila, (C2-C8)alquinila, (C4-C8)carbociclilalquila, (C6-C20)arila opcionalmente substituído, heteroarila opcionalmente substituído, -C(=O)(C1-C8)alquila, - S(O)n(C1-C8)alquila ou (C6-C20)aril(C1-C8)alquila; ou R11 e R12 considerados juntamente com um nitrogênio ao qual eles são ambos ligados formam um anel heterocíclico de 3 a 7 membros em que qualquer um átomo de carbono do referido anel heterocíclico pode opcionalmente ser substituído com -O-, -Sou -NRa-; cada Ra é independentemente H, (C1-C8)alquila, (C2-C8)alquenila, (C2-C8)alquinila, (C6-C20)aril(C1-C8)alquila, (C4-C8)carbociclilalquila, -C(=O)R, -C(=O)OR, -C(=O)NR2, -C(=O)SR, -S(O)R, - S(O)2R, -S(O)(OR), -S(O)2(OR), ou -SO2NR2; em que

[0010] cada R é independentemente H, (C1-C8) alquila, (C1-C8) alquila substituída, (C2-C8)alquenila, (C2-C8) alquenila substituída, (C2-C8) alquinila, (C2-C8) alquinila substituída, (C6-C20)arila, (C6-C20)arila substituída, (C2-C20)heterociclila, (C2-C20)heterociclila substituída, (C6-C20)aril(C1-C8)alquila ou (C6-C20)aril(C1-C8)alquila substituída; cada n é independentemente 0, 1, ou 2; e em que cada (C1-C8)alquila, (C2-C8)alquenila, (C2-C8)alquinila ou (C6-C20)aril(C1-C8)alquila de cada R2, R3, R5, R6, R11 ou R12 é, independentemente, opcionalmente susbtituído com um ou mais halo, hidróxi, CN, N3, N(Ra)2 ou ORa; e em que um ou mais dos átomos de carbono não terminais de cada referido (C1-C8)alquila podem ser opcionalmente substituídos com -O-, -S- ou —NRa-.

[0011] Em outra modalidade, o método compreende administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um racemato, enantiômero, diastereômero, tautômero, forma polimorfa, pseudopolimorfa, amorfa, hidrato ou solvato de um composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável ou éster do mesmo a um mamífero em necessidade do mesmo.

[0012] Em outra modalidade, o método compreende o tratamento de uma infecção por Arenaviridae em um humano em necessidade do mesmo administrando uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável ou éster do mesmo.

[0013] Em outra modalidade, o método compreende o tratamento de uma infecção por vírus Lassa em um humano em necessidade do mesmo administrando uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável ou éster do mesmo.

[0014] Em outra modalidade, o método compreende o tratamento de uma infecção pelo vírus Junin em um humano em necessidade do mesmo administrando uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável ou éster do mesmo.

[0015] Em outra modalidade, o método de tratamento de uma infecção por Arenaviridae em um humano em necessidade do mesmo compreende administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade eficaz de um composto de Fórmula I, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou éster do mesmo, em combinação com um diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável.

[0016] Em outra modalidade, o método de tratamento de uma infecção por Arenaviridae em um humano em necessidade do mesmo compreende administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade eficaz de um composto de Fórmula I, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou éster do mesmo, em combinação com pelo menos um agente terapêutico adicional.

[0017] Em outra modalidade, o método compreende administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um agente farmacêutico de combinação compreendendo:

[0018] uma primeira composição farmacêutica compreendendo um composto de Fórmula I; ou um sal, solvato, ou éster farmaceuticamente aceitável do mesmo; e

[0019] uma segunda composição farmacêutica compreendendo pelo menos um agente terapêutico adicional ativo contra o vírus Arenaviridae infeccioso.

[0020] Em outra modalidade, o presente pedido fornece um método de inibição de um RNA polimerase dependente de Aranaviridae RNA, compreendendo contatar uma célula infectada com um vírus Arenaviridae com uma quantidade eficaz de um composto de Fórmula I; ou um sal, solvato, e/ou éster farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[0021] Em outra modalidade, é fornecido o uso de um composto de Fórmula I ou um sal, solvato, e/ou éster farmaceuticamente aceitável do mesmo para tratar uma infecção viral causada por um vírus Arenaviridae.

[0022] É fornecido um método para o tratamento de uma infecção por Coronaviridae em um humano em necessidade do mesmo compreendendo administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula I:

Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável ou éster, do mesmo; em que: cada R1 é H ou halogênio; cada R2, R3, R4 ou R5 é independentemente H, ORa, N(Ra)2, N3, CN, NO2, S(O)nRa, halogênio, (C1-C8)alquila, (C4-C8)carbociclilalquila, (C1-C8)alquila substituída, (C2-C8)alquenila, (C2-C8)alquenila substituída, (C2-C8)alquinila ou (C2-C8)alquinila substituída; ou quaisquer dois R2, R3, R4 ou R5 em átomos de carbono adjacentes quando considerados juntos são -O(CO)O- ou quando considerados juntos com os átomos de carbono de anel aos quais eles são ligados formam uma ligação dupla; R6 é ORa, N(Ra)2, N3, CN, NO2, a 11 11 11 12 11 11 11 S(O)nR , -C(=O)R , -C(=O)OR , -C(=O)NR R , -C(=O)SR , -S(O)R , -S(O)2R , -S(O) (OR11), -S(O)2(OR11), -SO2NR11R12, halogênio, (C1-C8)alquila, (C4-C8)carbociclilalquila, (C1-C8)alquila substituída, (C2-C8)alquenila, (C2-C8)alquenila substituída, (C2-C8)alquinila, (C2-C8)alquinila substituída, ou (C6-C20)aril(C1-C8)alquila; R7 é selecionado a partir de um grupo que consiste em H 11 11 11 12 11 11 11 , -C(=O)R , -C(=O)OR , -C(=O)NR R , -C(=O)SR , -S(O)R , -S(O)2R , -S(O)(O R11), -S(O)2(OR11), ou -SO2NR11R12, em que cada (C1-C8)alquila, (C2-C8)alquenila, (C2-C8)alquinila ou (C6-C20)aril(C1-C8)alquila de cada R11 ou R12 é, independentemente, opcionalmente susbtituído com um ou mais halo, hidróxi, CN, N3, N(Ra)2 ou ORa; e em que um ou mais dos átomos de carbono não terminais de cada referido (C1-C8)alquila podem ser opcionalmente substituídos com -O-, -S- ou -NRa-,

em que: Rc é selecionado a partir de fenila, 1-naftila, 2-naftila,

Rd é H ou CH3; Re1 e Re2 são cada qual independentemente H, (C1-C6)alquila ou benzila; Rf é selecionado a partir de H, (C1-C8)alquila, benzila, (C3-C6)cicloalquila, e -CH2-(C3-C6)cicloalquila; Rg é selecionado a partir de (C1-C8)alquila, -O-(C1-C8)alquila, benzila, -O-benzila, -CH2-(C3-C6)cicloalquila, -O-CH2-(C3-C6)cicloalquila, e CF3; e n' é selecionado a partir de 1, 2, 3, e 4; e d) um grupo da fórmula:

em que: Q é O, S, NR, +N(O)(R), N(OR), +N(O)(OR), ou N-NR2; Z1 e Z2, quando considerados juntamente, são -Q1(C(Ry)2)3Q1-; em que: cada Q1 é independentemente O, S, ou NR; e cada Ry é independentemente H, F, Cl, Br, I, OH, R, -C(=Q2)R, -C(=Q2)OR, -C(=Q2)N(R)2, -N(R)2, -+N(R)3, -SR, -S(O)R, -S(O)2R, -S(O)( OR), -S(O)2(OR), -OC(=Q1)R, -OC(=Q2)OR, -OC(=Q2)(N(R)2), -SC(=Q2)R, -SC(=Q2)OR , -SC(=Q2)(N(R)2), -N(R)C(=Q2)R, -N(R)C(=Q2)OR, -N(R)C(=Q2)N(R)2, -SO2NR2, -CN, -N3, -NO2, -OR, ou Z3; ou quando considerados juntamente, dois Ry no mesmo átomo de carbono formam um anel carbocíclico de 3 a 7 átomos de carbono; cada Q2 é independentemente, O, S, NR, +N(O)(R), N(OR), +N(O)(OR), ou N-NR2; ou Z e Z2 são cada qual, independentemente, um grupo da fórmula Ia:

em que: cada M1a, M1c, e M1d é independentemente 0 ou 1; M12c é 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ou 12; Z3 é Z4 ou Z5; Z4 é R, -C(Q2)Ry, -C(Q2)Z5, -SO2Ry, ou -SO2Z5; e Z5 é um carbociclo ou um heterociclo em que Z5 é independentemente substituído com 0 a 3 grupos Ry; R 8 11 12 11 11 11 11 12 é halogênio, NR R , N(R )OR , NR NR R , N3, NO, NO2, CHO, 11 11 11 11 11 12 1 CN, -CH(=NR ), -CH=NNHR , -CH=N(OR ), -CH(OR )2, -C(=O)NR R , -C(=S)NR (C4-C8)carbociclilalquila, (C6-C20)arila opcionalmente substituído, heteroarila opcionalmente substituído, -C(=O)(C1-C8)alquila, -S(O)n(C1-C8)alquila, (C6-C20)aril(C1-C8)alquila, OR11 ou SR11; cada R9 ou R10 é independentemente H, halogênio, NR11R12, N(R11)OR11, NR11NR11R12, N3, NO, NO2, CHO, 11 11 11 11 11 12 1 CN, -CH(=NR ), -CH=NHNR , -CH=N(OR ), -CH(OR )2, -C(=O)NR R , -C(=S)NR 1R12, -C(=O)OR11, R11, OR11 ou SR11; cada R11 ou R12 é independentemente H, (C1-C8)alquila, (C2-C8)alquenila, (C2-C8)alquinila, (C4-C8)carbociclilalquila, (C6-C20)arila opcionalmente substituído, heteroarila opcionalmente substituído, -C(=O)(C1-C8)alquila, - S(O)n(C1-C8)alquila ou (C6-C20)aril(C1-C8)alquila; ou R11 e R12 considerados juntamente com um nitrogênio ao qual eles são ambos ligados formam um anel heterocíclico de 3 a 7 membros em que qualquer um átomo de carbono do referido anel heterocíclico pode opcionalmente ser substituído com -O-, -Sou -NRa-; cada Ra é independentemente H, (C1-C8)alquila, (C2-C8)alquenila, (C2-C8)alquinila, (C6-C20)aril(C1-C8)alquila, (C4-C8)carbociclilalquila, -C(=O)R, -C(=O)OR, -C(=O)NR2, -C(=O)SR, -S(O)R, - S(O)2R, -S(O)(OR), -S(O)2(OR), ou -SO2NR2; em que cada R é independentemente H, (C1-C8) alquila, (C1-C8) alquila substituída, (C2-C8)alquenila, (C2-C8) alquenila substituída, (C2-C8) alquinila, (C2-C8) alquinila substituída, (C6-C20)arila, (C6-C20)arila substituída, (C2-C20)heterociclila, (C2-C20)heterociclila substituída, (C6-C20)aril(C1-C8)alquila ou (C6-C20)aril(C1-C8)alquila substituída; cada n é independentemente 0, 1, ou 2; e em que cada (C1-C8)alquila, (C2-C8)alquenila, (C2-C8)alquinila ou (C6-C20)aril(C1-C8)alquila de cada R2, R3, R5, R6, R11 ou R12 é, independentemente, opcionalmente susbtituído com um ou mais halo, hidróxi, CN, N3, N(Ra)2 ou ORa; e em que um ou mais dos átomos de carbono não terminais de cada referido (C1-C8)alquila podem ser opcionalmente substituídos com -O-, -S- ou —NRa-.

[0023] Em outra modalidade, o método compreende administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um racemato, enantiômero, diastereômero, tautômero, forma polimorfa, pseudopolimorfa, amorfa, hidrato ou solvato de um composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável ou éster do mesmo a um mamífero em necessidade do mesmo.

[0024] Em outra modalidade, o método compreende o tratamento de uma infecção por Coronaviridae em um humano em necessidade do mesmo administrando uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável ou éster do mesmo.

[0025] Em outra modalidade, o método compreende o tratamento de uma infecção pelo vírus MERS em um humano em necessidade do mesmo administrando uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável ou éster do mesmo.

[0026] Em outra modalidade, o método compreende o tratamento de uma infecção pelo vírus SARS em um humano em necessidade do mesmo administrando uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável ou éster do mesmo.

[0027] Em outra modalidade, o método de tratamento de uma infecção por Coronaviridae em um humano em necessidade do mesmo compreende administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade eficaz de um composto de Fórmula I, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou éster do mesmo, em combinação com um diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável.

[0028] Em outra modalidade, o método de tratamento de uma infecção por Coronaviridae em um humano em necessidade do mesmo compreende administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade eficaz de um composto de Fórmula I, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou éster do mesmo, em combinação com pelo menos um agente terapêutico adicional.

[0029] Em outra modalidade, o método compreende administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um agente farmacêutico de combinação compreendendo:

[0030] uma primeira composição farmacêutica compreendendo um composto de Fórmula I; ou um sal, solvato, ou éster farmaceuticamente aceitável do mesmo; e

[0031] uma segunda composição farmacêutica compreendendo pelo menos um agente terapêutico adicional ativo contra o vírus Coronaviridae infeccioso.

[0032] Em outra modalidade, o presente pedido fornece um método de inibição de RNA polimerase dependente de Coronaviridae RNA, compreendendo contatar uma célula infectada com um vírus Coronaviridae com uma quantidade eficaz de um composto de Fórmula I; ou um sal, solvato, e/ou éster farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[0033] Em outra modalidade, é fornecido o uso de um composto de Fórmula I ou um sal, solvato, e/ou éster farmaceuticamente aceitável do mesmo para tratar uma infecção viral causada por um vírus Coronaviridae.

DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

[0034] Figura 1: Mudanças no peso corporal após infecção em camundongos tratados com veículo e Composto 32

[0035] Figura 2A e Figura 2B: Carga viral em tecido pulmonar no dia 2 e 5 após infecção em camundongos tratados com veículo e Composto 32

[0036] Figura 3A-F: Pletismografia de corpo inteiro de camundongos infectados com SARS-CoV

[0037] Figura 4A. Mudanças no peso corporal após infecção em macaco tratado com veículo e Composto 32

[0038] Figura 4B. Mudanças na temperatura corporal após infecção em macaco tratado com veículo e Composto 32

[0039] Figura 4C. Mudanças na frequência respiratória após infecção em macaco tratado com veículo e Composto 32

[0040] Figura 5. Concentrações de RNA viral de tecido por grupo de tratamento. A carag viral foi medida qRT-PCR.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO DEFINIÇÕES

[0041] A menos que de outro modo estabelecido, os seguintes termos e frases como usados aqui se destinam a ter os seguintes significados:

[0042] Quando nomes comerciais são usados aqui, os requerentes pretendem independentemente incluir o produto de nome comercial e o ingrediente(s) farmacêutico ativo do produto de nome comercial.

[0043] Como usado aqui, "um composto da invenção" ou "um composto de Fórmula I" significa um composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável, do mesmo. Similarmente, com respeito aos intermediários isoláveis, a frase "um composto de Fórmula (número)" significa um composto de tal fórmula e sais farmaceuticamente aceitáveis, do mesmo.

[0044] "Alquila" é hidrocarboneto contendo átomos de carbono normais, secundários, terciários ou cíclicos. Por exemplo, um grupo alquila pode ter de 1 a 20 átomos de carbono (isto é, C1-C20 alquila), 1 a 8 átomos de carbono (isto é, C1-C8 alquila), ou 1 a 6 átomos de carbono (isto é, C1-C6 alquila). Exemplos de grupos alquila adequados incluem, porém não estão limitados a, metila (Me, - CH3), etila (Et, -CH2CH3), 1-propila (n-Pr, n-propila, -CH2CH2CH3), 2-propila (i-Pr, i-propila, -CH(CH3h), 1-butila (n-Bu, n-butila, -CH2CH2CH2CH3), 2-metil-1-propila (i-Bu, i-butila, -CH2CH(CH3)2), 2-butila (s-Bu, s-butila, -CH(CH3)CH2CH3), 2-metil- 2-propila (t-Bu, t-butila, -C(CH3)3), 1-pentila (n-pentila, -CH2CH2CH2CH2CH3), 2- pentil (-CH(CH3)CH2CH2CH3), 3-pentil (-CH(CH2CH3)2), 2-metil-2-butil (-C(CH3)2CH2CH3), 3-metil-2-butil (-CH(CH3)CH(CH3)2), 3-metil-1-butil (-CH2CH2CH(CH3)2), 2-metil-1-butil (-CH2CH(CH3)CH2CH3), 1-hexil (-CH2CH2CH2CH2CH2CH3), 2-hexil (-CH(CH3)CH2CH2CH2CH3), 3-hexil (-CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3)), 2-metil-2-pentil (-C(CH3)2CH2CH2CH3), 3-metil- 2-pentil (-CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3), 4-metil-2-pentil (-CH(CH3)CH2CH(CH3)2), 3- metil-3-pentil (-C(CH3)(CH2CH3)2), 2-metil-3-pentil (-CH(CH2CH3)CH(CH3)2), 2,3-dimetil-2-butil (-C(CH3)2CH(CH3)2), 3,3-dimetil-2-butil (-CH(CH3)C(CH3)3, e octil (-(CH2)7CH3).

[0045] "Alcóxi" significa um grupo tendo a fórmula -O-alquila, em que um grupo alquila, como definido acima, é ligado à molécula origem por meio de um átomo de oxigênio. A porção alquila de um grupo alcóxi pode ter de 1 a 20 átomos de carbono (isto é, C1-C20 alcóxi), 1 a 12 átomos de carbono (isto é, C1-C12 alcóxi), ou 1 a 6 átomos de carbono (isto é, C1-C6 alcóxi). Exemplos de grupos alcóxi adequados incluem, porém não estão limitados a, metóxi (-O-CH3 ou -OMe), etóxi (-OCH2CH3 ou -OEt), t-butóxi (-O-C(CH3)3 ou -OtBu) e similares.

[0046] "Haloalquila" é um grupo alquila, como definido acima, em que um ou mais átomos de hidrogênio do grupo alquila é substituído com um átomo de halogênio. A porção alquila de um grupo haloalquila pode ter de 1 a 20 átomos de carbono (isto é, C1-C20 haloalquila), 1 a 12 átomos de carbono (isto é, C1-C12 haloalquila), ou 1 a 6 átomos de carbono (isto é, C1-C6 alquila). Exemplos de grupos haloalquila adequados incluem, porém não estão limitados a, -CF3, -CHF2, -CFH2, -CH2CF3, e similares.

[0047] "Alquenila" é um hidrocarboneto contendo átomos de carbono normais, secundários, terciários ou cíclicos com pelo menos um sítio de insaturação, isto é, uma ligação carbono-carbono dupla, sp2. Por exemplo, um grupo alquenila pode ter de 2 a 20 átomos de carbono (isto é, C2-C20 alquenila), 2 a 8 átomos de carbono (isto é, C2-C8 alquenila), ou 2 a 6 átomos de carbono (isto é, C2-C6 alquenila). Exemplos de grupos alquenila adequados incluem, porém não estão limitados a, etileno ou vinila (-CH=CH2), alila (-CH2CH=CH2), ciclopentenila (-C5H7), e 5-hexenila (-CH2CH2CH2CH2CH=CH2).

[0048] "Alquinila" é um hidrocarboneto contendo átomos de carbono normais, secundários, terciários ou cíclicos com pelo menos um sítio de insaturação, isto é, uma ligação carbono-carbono tripla, sp. Por exemplo, um grupo alquinila pode ter de 2 a 20 átomos de carbono (isto é, C2-C20 alquinila), 2 a 8 átomos de carbono (isto é, C2-C8 alquina), ou 2 a 6 átomos de carbono (isto é, C2-C6 alquinila). Exemplos de grupos alquinila adequados incluem, porém não estão limitados a, acetilênico (-C=CH), propargil (-CH2C=CH), e similares.

[0049] "Alquileno" refere-se a um radical hidrocarboneto saturado, de cadeia ramificada ou linear ou cíclico tendo dois centros de radical monovalente derivados pela remoção de dois átomos de hidogênio dos mesmos ou dois diferentes átomos de carbono de alcano origem. Por exemplo, um grupo alquileno pode ter de 1 a 20 átomos de carbono, 1 a 10 átomos de carbono, ou 1 a 6 átomos de carbono. Radicais alquileno típicos incluem, porém não estão limitados a, metileno (-CH2-), 1,1-etila (-CH(CH3)-), 1,2-etila (-CH2CH2-), 1,1-propila (-CH(CH2CH3)-), 1,2-propila (-CH2CH(CH3)-), 1,3-propila (-CH2CH2CH2-), 1,4-butila (-CH2CH2CH2CH2-), e similares.

[0050] "Alquenileno" refere-se a um radical hidrocarboneto insaturado, de cadeia ramificada ou linear ou cíclica tendo dois centros de radical monovalente derivados pela remoção de dois átomos de hidogênio dos mesmos ou dois diferentes átomos de carbono de um alceno origem. Por exemplo, e grupo alquenileno pode ter de 1 a 20 átomos de carbono, 1 a 10 átomos de carbono, ou 1 a 6 átomos de carbono. Radicais del alquenileno típicos incluem, porém não estão limitados a, 1,2-etileno (-CH=CH-).

[0051] "Alquinileno" refere-se a um radical hidrocarboneto insaturado, de cadeia ramificada ou linear ou cíclico tendo dois centros de radical monovalente derivados pela remoção de dois átomos de hidogênio dos mesmos ou dois diferentes átomos de carbono de um alquina origem. Por exemplo, um grupo alquinileno group pode ter de 1 a 20 átomos de carbono, 1 a 10 átomos de carbono, ou 1 a 6 átomos de carbono. Radicais alquinileno típicos incluem, porém não estão limitados a, acetileno (-C=C-), propargila (-CHzCsC-), e 4-pentinila (-CH2CH2CH2C=C-).

[0052] "Amino" refere-se geralmente a um radical nitrogênio que pode ser considerado um derivado de amônio, tendo a fórmula -N(X)2, onde cada "X" é independentemente H, alquila substituída ou não substituída, carbociclila substituída ou não substituída, heterociclila substituída ou não substituída, etc. A hibridização do nitrogênio é aproximadamente sp3. Tipos não limitantes de amino incluem -NH2, -N(alquila)2, -NH(alquila), -N(carbociclila)2, -NH(carbociclila), -N(he terociclila)2, -NH(heterociclila), -N(arila)2, -NH(arila), -N(al- quil)(arila), -N(alquil)(heterociclila), -N(carbociclil)(heterociclila), -N(aril)(hetero arila), -N(alquil)(heteroarila), etc. O termo "alquilamino" refere-se a um grupo amino substituído com pelo menos um grupo alquila. Exemplos não limitantes de grupos amino incluem -NH2, -NH(CH3), -N(CH3)2, -NH(CH2CH3), - N(CH2CH3)2, -NH(fenila), -N(fe nila)2, -NH(benzila), -N(benzila)2, etc. Alquilamino substituído refere-se geralmente a grupos alquilamino, como definido acima, em que pelo menos uma alquila substituída, como definida aqui, é ligada ao átomo de nitrogênio de amino. Exemplos não limitantes de alquilamino substituído incluem - NH(alquileno-C(O)-OH), -NH(alquileno-C(O)-O-alquila), -N(alquileno-C(O)-OH)2, -N(alquileno-C(O)-O-alquila)2, etc.

[0053] "Arila" significa um radical hidrocarboneto aromático derivado pela remoção de um átomo de hidrogênio de um átomo de carbono simples de um sistema de anel aromático origem. Por exemplo, um grupo arila pode ter de 6 a 20 átomos de carbono, 6 a 14 átomos de carbono, ou 6 a 10 átomos de carbono. Grupos arila típicos incluem, porém não estão limitados a, radicais derivados de benzeno (por exemplo, fenila), benzeno substituído, naftaleno, antracene, bifenila, e similares.

[0054] "Arilalquila" refere-se a um radical alquila acíclico em que um dos átomos de hidogênio ligado a um átomo de carbono, tipicamente um átomo de carbono terminal ou sp3, é substituído com um radical arila. Grupos arilalquila típicos incluem, porém não estão limitados a, benzila, 2-feniletan-1-ila, naftilmetila, 2-naftiletan-1-ila, naftobenzila, 2-naftofeniletan-1-ila e similares. O grupo arilalquila pode compreender de 7 a 20 átomos de carbono, por exemplo, a porção alquila é de 1 a 6 átomos de carbono e a porção arila é 6 a 14 átomos de carbono.

[0055] "Arilalquenila" refere-se a um radical alquenila acíclico em que um dos átomos de hidogênio ligado a um átomo de carbono, tipicamente um átomo de carbono terminal ou sp3, porém também um átomo de carbono sp2, é substituído com um radical arila. A porção arila do arilalquenila pode incluir, por exemplo, qualquer um dos grupos arila descritos aqui, e a porção alquenila do arilalquenila pode incluir, por exemplo, qualquer um dos grupos alquenila descritos aqui. O grupo arilalquenila pode compreender de 8 a 20 átomos de carbono, por exemplo, a porção alquenila é 2 a 6 átomos de carbono e a porção arila é de 6 a 14 átomos de carbono.

[0056] "Arilalquinila" refere-se a um radical alquinila acíclico em que um dos átomos de hidogênio ligado a um átomo de carbono, tipicamente um átomo de carbono terminal ou sp3 porém também um átomo de carbono sp, é substituído com um radical arila. A porção arila do arilalquinil pode incluir, por exemplo, qualquer um dos grupos arila descritos aqui, e a porção alquinila do arilalquinil pode incluir, por exemplo, qualquer um dos grupos alquinila descritos aqui. O grupo arilalquinila pode compreender de 8 a 20 átomos de carbono, por exemplo, a porção alquinila é de 2 a 6 átomos de carbono e a porção arila é 6 a 14 átomos de carbono.

[0057] O termo "substituído" em referência a alquila, alquileno, arila, arilalquila, alcóxi, heterociclila, heteroarila, carbociclila, etc. , por exemplo, "alquila substituída", "alquileno substituído", "arila substituída", "arilalquila substituída", "heterociclila substituída", e "carbociclila substituída" significa alquila, alquileno, arila, arilalquila, heterociclila, carbociclila respectivamente, em que um ou mais átomos de hidrogênio são cada qual independentemente substituídos com um substituinte não hidrogênio. Substituintes típicos incluem, b - b b - b +b porém não estão limitados a, -X, -R , -O , =O, -OR , -SR , -S , -NR 2, -N R 3, =NRb, -CX3, -CN, -OCN, -SCN, -N=C=O, -NCS, -NO, -NO2, =N2, -N3, -NHC(=O)Rb, -OC(=O)Rb, -NHC(=O)NRb2, -S(=O)2-, -S(=O)2OH, -S(=O)2Rb, b bb b b - -OS(=O)2OR , -S(=O)2NR 2, -S(=O)R , -OP(=O)(OR )2, -P(=O)(OR )2, -P(=O)(O )2, -P( b- b b b - b =O)(OH)2, -P(O)(OR )(O ), -C(=O)R , -C(=O)X, -C(S)R , -C(O)OR , -C(O)O , -C(S)OR b b b b bb , -C(O)SR , -C(S)SR , -C(O)NR 2, -C(S)NR 2, -C(=NR )NR 2, onde cada X é independentemente a halogen: F, Cl, Br, ou I; e cada Rb é independentemente H, alquila, arila, arilalquila, um heterociclo, ou um grupo de proteção ou porção pró-fármaco. Grupos alquileno, alquenileno, e alquinileno podem também ser similarmente substituídos. A menos que de outro modo indicado, quando o termo "substituído" é usado em conjunção com grupos tal como arilalquila, que tem duas ou mais porções capazes de substituição, os substituintes podem ser ligados à porção arila, a porção alquila, ou ambas.

[0058] Um “pró-fármaco” é definido no campo farmacêutico como um derivado biologicamente inativo de um fármaco que na administração ao corpo humano pe convertido no fármaco origem biologicamente ativo de acordo com alguma série de reação qupimica ou enzimática.

[0059] Alguém versado na técnica reconhecerá que substituintes e outras porções dos compostos de Fórmula I-IV devem ser selecionados a fim de fornecer um composto que é suficientemente estável para fornecer um composto farmaceuticamente útil que pode ser formulado em uma composição farmacêutica aceitvelmente estável. Compostos de Fórmula I-IV que têm tal estabilidade são contemplados como incluindo-se no escopo da presente invenção.

[0060] "Heteroalquila" refere-se a um grupo alquila onde um ou mais átomos de carbono foram substituídos com um heteroátomo, tal como, O, N, ou S. Por exemplo, se o átomo de carbono do grupo alquila que é ligado à molécula origem é substituído com um heteroátomo (por exemplo, O, N ou S) os grupos heteroalquila resultantes são, respectivamente, um grupo alcóxi (por exemplo, -OCH3, etc.), uma amina (por exemplo, -NHCH3, -N(CH3)2, etc.), ou um grupo tioalquila (por exemplo, -SCH3). Se um átomo de carbono não terminal do grupo alquila que não está ligado à molécula origem é substituído com um heteroátomo (por exemplo, O, N, ou S), os grupos heteroalquila resultantes são, respectivamente, um alquil éter (por exemplo, -CH2CH2-O-CH3, etc.), um alquil amina (por exemplo, -CH2NHCH3, -CH2N(CH3)2, etc.), ou um tioalquil (por exemplo,-CH2-S-CH3). Se um átomo de carbono terminal do grupo alquila é substituído com um heteroátomo (por exemplo, O, N, ou S), os grupos heteroalquila resultantes são, respectivamente, um grupo hidroxialquila (por exemplo, -CH2CH2-OH), um grupo aminoalquila (por exemplo, -CH2NH2), ou um grupo alquil tiol (por exemplo, -CH2CH2-SH). Um grupo heteroalquila pode ter, por exemplo, de 1 a 20 átomos de carbono, 1 a 10 átomos de carbono, ou 1 a 6 átomos de carbono. Um grupo C1-C6 heteroalquila significa um grupo heteroalquila tendo de 1 a 6 átomos de carbono.

[0061] Heterociclo" ou "heterociclila" como usado aqui inclui por meio de exemplo e não limitação aqueles heterociclos descritos em Paquette, Leo A.; Principles of Modern Heterocyclic Chemistry (W.A. Benjamin, Nova Iorque, 1968), particularmente Capítulos 1, 3, 4, 6, 7, e 9; The Chemistry of Heterocyclic Compostos, A Series of Monographs" (John Wiley & Sons, Nova Iorque, 1950 até o presente), em particular Volumes 13, 14, 16, 19, e 28; e J. Am. Chem. Soc. (1960) 82:5566. Em uma modalidade específica da invenção "heterociclo" inclui um "carbociclo" como definido aqui, em que um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, ou 4) átomos de carbono foram substituídos com um heteroátomo (por exemplo, O, N, ou S). Os termos "heterociclo" ou "heterociclila" inclui anéis saturados, anéis parcialmente insaturados, e anéis aromáticos (isto é, anéis heteroaromáticos). Heterociclilas substituídos incluem, por exemplo, anéis heterocíclicos substituídos com qualquer um dos substituintes descritos aqui incluindo grupos carbonila. Um exemplo não limitante de um heterociclil substituída por carbonil substituído é:

[0062] Exemplos de heterociclos incluem por meio de exemplo e não limitação piridila, di-hidropiridila, tetra-hidropiridila (piperidila), tiazolila, tetra- hidrotiofenila, tetra-hidrotiofenila oxidado por enxofre, pirimidinila, furanila, tienila, pirrolila, pirazolila, imidazolila, tetrazolila, benzofuranila, tianaftalenila, indolila, indolenila, quinolinila, isoquinolinila, benzimidazolila, piperidinila, 4- piperidonila, pirrolidinila, 2-pirrolidonila, pirrolinila, tetra-hidrofuranila, tetra- hidroquinolinila, tetra-hidroisoquinolinila, deca-hidroquinolinila, octa- hidroisoquinolinila, azocinila, triazinila, 6H-1,2,5-tiadiazinila, 2H,6H-1,5,2- ditiazinila, tienila, tiantrenila, piranila, isobenzofuranila, cromenila, xanthenila, fenoxatinila, 2H-pirrolila, isotiazolila, isoxazolila, pirazinila, piridazinila, indolizinila, isoindolila, 3H-indolila, 1H-indazolila, purinila, 4H-quinolizinila, ftalazinila, naftiridinila, quinoxalinila, quinazolinila, cinnolinila, pteridinila, 4aH- carbazolila, carbazolila, β-carbolinila, fenanthridinila, acridinila, pirimidinila, fenanthrolinila, fenazinila, fenotiazinila, furazanila, fenoxazinila, isocromanila, cromanila, imidazolidinila, imidazolinila, pirazolidinila, pirazolinila, piperazinila, indolinila, isoindolinila, quinuclidinila, morfolinila, oxazolidinila, benzotriazolila, benzisoxazolila, oxindolila, benzoxazolinila, isatinoíla, e bis-tetra-hidrofuranila:

[0063] Por meio de exemplo e não limitação, heterociclos ligados a carbono são ligados na posição 2, 3, 4, 5, ou 6 de uma piridina, posição 3, 4, 5, ou 6 de uma piridazina, posição 2, 4, 5, ou 6 de uma pirimidina, posição 2, 3, 5, ou 6 de uma pirazina, posição 2, 3, 4, ou 5 de um furano, tetra-hidrofurano, tiofurano, tiofeno, pirrol ou tetra-hidropirrol, posição 2, 4, ou 5 de um oxazol, imidazol ou tiazol, posição 3, 4, ou 5 de um isoxazol, pirazol, ou isotiazol, posição 2 ou 3 de uma aziridina, posição 2, 3, ou 4 de uma azetidina, posição 2, 3, 4, 5, 6, 7, ou 8 de uma quinolina ou posição 1, 3, 4, 5, 6, 7, ou 8 de uma isoquinolina. Ainda mais tipicamente, heterociclos ligados por carbono incluem 2-piridila, 3-piridila, 4-piridila, 5-piridila, 6-piridila, 3-piridazinila, 4-piridazinila, 5-piridazinila, 6-piridazinila, 2-pirimidinila, 4-pirimidinila, 5-pirimidinila, 6- pirimidinila, 2-pirazinila, 3-pirazinila, 5-pirazinila, 6-pirazinila, 2-tiazolila, 4- tiazolila, ou 5-tiazolila.

[0064] Por meio de exemplo e não limitação, heterociclos ligados por nitrogênio são ligados na posição 1 de uma aziridina, azetidina, pirrol, pirrolidina, 2-pirrolina, 3-pirrolina, imidazol, imidazolidina, 2-imidazolina, 3- imidazolina, pirazol, pirazolina, 2-pirazolina, 3-pirazolina, piperidina, piperazina, indol, indolina, 1H-indazol, posição 2 de um isoindol, ou isoindolina, posição 4 de uma morfolina, e posição 9 de um carbazol, ou β-carbolina. Ainda mais tipicamente, heterociclos ligados por nitrogênio incluem 1-aziridila, 1-azetedila, 1-pirrolila, 1-imidazolila, 1-pirazolila, e 1-piperidinila.

[0065] "Heterociclilalquila" refere-se a um radical alquila acíclico em que um dos átomos de hidogênio ligado a um átomo de carbono, tipicamente um átomo de carbono terminal ou sp3, é substituído com um radical heterociclila (isto é, uma porção heterociclil-alquileno-). Grupos heterociclil alquila típicos incluem, porém não estão limitados um heterociclil-CH2-, 2-(heterociclil)etan-1- ila, e similares, em que a porção "heterociclila" inclui qualquer um dos grupos heterociclila descritos acima, incluindo aqueles descritos em Principles of Modern Heterocyclic Chemistry. Alguém versado na técnica também entenderá que o grupo heterociclila pode ser ligado à porção alquila do heterociclil alquila por meio de uma ligação carbono-carbono ou uma ligação carbono- heteroátomo, com a condição de que o grupo resultante é químicamente estável. O grupo heterociclil alquila compreende de 3 a 20 átomos de carbono, por exemplo, a porção alquila do grupo arilalquila é de 1 a 6 átomos de carbono e a porção heterociclila é de 2 a 14 átomos de carbono. Exemplos de heterociclilalquilas incluem por meio de exemplo e não limitação heterociclos contendo enxofre de 5 membros, oxigênio, e/ou nitrogênio tais como tiazolilmetila, 2-tiazoliletan-1-ila, imidazolilmetila, oxazolilmetila, tiadiazolilmetila, etc., heterociclos contendo enxofre de 6 membros, oxigênio, e/ou nitrogênio tais como piperidinilmetila, piperazinilmetila, morfolinilmetila, piridinilmetila, piridizilmetila, pirimidilmetila, pirazinilmetila, etc.

[0066] "Heterociclilalquenila" refere-se a um radical alquenila acíclico em que um dos átomos de hidogênio ligado a um átomo de carbono, tipicamente um átomo de carbono terminal ou sp3, porém também um átomo de carbono sp2, é substituído com um radical heterociclila (isto é, uma porção heterociclil- alquenileno). A porção heterociclila do grupo heterociclil alquenila inclui qualquer um dos grupos heterociclila descritos aqui, incluindo aqueles descritos em Principles of Modern Heterocyclic Chemistry, e a porção alquenila do grupo heterociclil alquenila inclui qualquer um dos grupos alquenila descritos aqui. Alguém versado na técnica também entenderão que o grupo heterociclila pode ser ligado à porção alquenila do heterociclil alquenila por meio de uma ligação carbono-carbono ou uma ligação de carbono- heteroátomo, com a condição de que o grupo resultante seja quimicamente estável. O grupo heterociclil alquenila compreende de 4 a 20 átomos de carbono, por exemplo, a porção alquenila do grupo heterociclil alquenila é de 2 a 6 átomos de carbono e a porção heterociclila é de 2 a 14 átomos de carbono.

[0067] "Heterociclilalquinila" refere-se a um radical alquinila acíclico em que um dos átomos de hidogênio ligado a um átomo de carbono, tipicamente um átomo de carbono terminal ou sp3, porém também um átomo de carbono sp, é substituído com um radical heterociclila (isto é, uma porção heterociclil- alquinileno). A porção heterociclila do grupo heterociclil alquinila inclui qualquer um dos grupos heterociclila descritos aqui, incluindo aqueles descritos em Principles of Modern Heterocyclic Chemistry, e a porção alquinila do grupo heterociclil alquinila inclui qualquer um dos grupos alquinila descritos aqui. Alguém versado na técnica também entenderá que o grupo heterociclila pode ser ligado à porção alquinila do heterociclil alquinila por meio de uma ligação carbono-carbono ou uma ligação de carbono-heteroátomo, com a condição de que o grupo resultante seja quimicamente estável. O grupo heterociclil alquinila compreende de 4 a 20 átomos de carbono, por exemplo, a porção alquinila do grupo heterociclil alquinila é de 2 a 6 átomos de carbono e a porção heterociclila é de 2 a 14 átomos de carbono.

[0068] "Heteroarila" refere-se a uma heterociclila aromática tendo pelo menos um heteroátomo não anel. Exemplos não limitantes de heteroátomos adequados que podem ser incluídos no anel aromático incluem oxigênio, enxofre, e nitrogênio. Exemplos não limitantes de anéis heteroarila incluem todos os anéis aromáticos listados na definição de "heterociclila", incluindo piridinila, pirrolila, oxazolila, indolila, isoindolila, purinila, furanila, tienila, benzofuranila, benzotiofenila, carbazolila, imidazolila, tiazolila, isoxazolila, pirazolila, isotiazolila, quinolila, isoquinolila, piridazila, pirimidila, pirazila, etc.

[0069] "Carbociclo" ou "carbociclila" refere-se a um anel saturado (isto é, cicloalquila), parcialmente insaturado (por exemplo, cicloaquenila, cicloalcadienila, etc.) ou aromático de 3 a 7 átomos de carbono como um monociclo, 7 a 12 átomos de carbono como um biciclo, e até cerca de 20 átomos de carbono como um policiclo. Carbociclos monocíclicos têm de 3 a 7 átomos de anel, ainda mais tipicamente de 5 ou 6 átomos de anel. Carbociclos bicíclicos têm de 7 a 12 átomos de anel, por exemplo, dispostos como um sistema biciclo [4,5], [5,5], [5,6] ou [6,6], ou 9 ou 10 átomos de anel dispostos como um sistema biciclo [5,6] ou [6,6], ou anéis espiro-fundidos. Exemplos não limitantes de carbociclos monocíclicos incluem ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, 1-ciclopent-1-enila, 1-ciclopent-2-enila, 1-ciclopent-3-enila, ciclo- hexila, 1-ciclo-hex-1-enila, 1-ciclo-hex-2-enila, 1-ciclo-hex-3-enila, e fenila. Exemplos não limitantes de biciclo carbociclos inclui naftila, tetra- hidronaftaleno, e decalina.

[0070] "Carbociclilalquila" refere-se a um radical alquil acíclico em que um dos átomos de hidogênio ligado a um átomo de carbono é substituído com um radical carbociclila como descrito aqui. Típicos, porém não limitantes, exemplos de grupos carbociclilalquila incluem ciclopropilmetila, ciclopropiletila, ciclobutilmetila, ciclopentilmetila e ciclo-hexilmetila.

[0071] "Aril-heteroalquila" refere-se a um heteroalquila como definido aqui, em que um átomo de hidrogênio (que pode ser ligado a um átomo de carbono ou um heteroátomo) foi substituído com um grupo arila como definido aqui. Os grupos arila podem estar ligados a um átomo de carbono do grupo heteroalquila, ou a um heteroátomo do grupo heteroalquila, contanto que o grupo aril-heteroalquila resultante fornece uma porção quimicamente estável. Por exemplo, um grupo aril-heteroalquila pode ter as fórmulas gerais -alquileno- O-arila, -alquileno-O-alquileno-arila, -alquileno-NH-arila, -alquileno-NH-alquilen o-arila, -alquileno-S-arila, -alquileno-S-alquileno-arila, etc. Além disso, quaisquer porções alquileno nas fórmulas gerais acima podem ser também substituídos com qualquer um dos substituintes definidos ou exemplificados aqui.

[0072] "Heteroarilalquila" refere-se a um grupo alquila, como definido aqui, em que um átomo de hidrogênio foi substituído com um grupo heteroarila como definido aqui. Exemplos não limitantes de heteroaril alquila incluem -CH2-piridinila, -CH2-pirrolila, -CH2-oxazolila, -CH2-indolila, -CH2-isoindolila, -CH2-purinila, -CH2-furanila, -CH2-tienila, -CH2-benzofuranila, -CH2-benzotiofenila, -CH2-carbazolila, -CH2-imidazolila, -CH2-tiazolila, -CH2-iso xazolila, -CH2-pirazolila, -CH2-isotiazolila, -CH2-quinolila, -CH2-isoquinolila, -CH2-piri dazila, -CH2-pirimidila, -CH2-pirazila, -CH(CH3)-piridinila, -CH(CH3)-pirrolila, -CH(CH3) -oxazolila, -CH(CH3)-indolila, -CH(CH3)-isoindolila, -CH(CH3)-purinila, -CH(CH3)-fura nila, -CH(CH3)-tienila, -CH(CH3)-benzofuranila, -CH(CH3)-benzotiofenila, -CH(CH3 )-carbazolila, -CH(CH3)-imidazolila, -CH(CH3)-tiazolila, -CH(CH3)-isoxazolila, -CH(C H3)-pirazolila, -CH(CH3)-isotiazolila, -CH(CH3)-quinolila, -CH(CH3)-isoquinolila, -C H(CH3)-piridazila, -CH(CH3)-pirimidila, -CH(CH3)-pirazila, etc.

[0073] O termo "opcionalmente substituído" em referência a uma porção particular do composto de Fórmula I-IV (por exemplo, um grupo arila opcionalmente substituído) refere-se a uma porção em que todos os substituintes são hidrogênio ou em que um ou mais dos hidrogênios da porção podem ser substituídos por substituintes tal como aqueles listados ob a definição de "substituído".

[0074] O termo "opcionalmente substituído" em referência a uma porção particular do composto de Fórmula I-IV (por exemplo, os átomos de carbono do referido (Ci-C8)alquila podem ser opcionalmente substituídos por -O-, -S-, ou - NRa-) significa que um ou mais dos grupos metileno do (C1-C8)alquila podem ser substituídos por 0, 1, 2, ou mais dos grupos especificados (por exemplo, -O-, - S-, ou -NRa-).

[0075] O termo "átomo(s) de carbono não terminal" em referência a uma porção alquila, alquenila, alquinila, alquileno, alquenileno, ou alquinileno refere-se aos átomos de carbono na porção que intervém entre o primeiro patomo de carbono da porção e o último átomo de carbono na porção. Portanto, por meio de exemplo e não limitação, na porção alquila - CH2(C*)H2(C*)H2CH3 ou porção alquileno -CH2(C*)H2(C*)H2CH2- os átomos de C* seriam considerados ser átomos de carbono não terminais.

[0076] Certas alternativas de Q e Q1 são óxidos de nitrogênio tais como +N(O)(R) ou +N(O)(OR). Estes óxidos de nitrogênio, como mostrado aqui ligados a um átomo de carbono, podem também ser representados por grupos separados por carga tais como

[0077] respectivamente, e destinam-se a serem equivalentes às representações anteriormente mencionados para os propósitos de descrição desta invenção.

[0078] "Ligante" ou "ligação" significa uma porção química compreendendo uma ligação covalente ou uma cadeia de átomos. Ligantes incluem unidades de repetição de alquilóxi (por exemplo, polietileno-óxi, PEG, polimetileno-óxi) e alquilamino (por exemplo, polietilenoamino, Jeffamine™); e éster de diácido e amidas incluindo succinato, succinamida, diglicolato, malonato, e caproamida.

[0079] Os termos tais como "ligado a oxigênio", "ligado a nitrogênio", "ligado a carbono", "ligado a enxofre", ou "ligado a fósforo" significa que se uma ligação entre duas porções pode ser formada usando mais do que um tipo de átomo em uma porção, então a ligação formada entre as porções é através do átomos especificado. Por exemplo, um aminoácido ligado a nitrogênio seria ligado a um átomo de nitrogênio do aminoácido em vez de através de um átomo de carbono do aminoácido.

[0080] Em algumas modalidades dos compostos de Fórmula I-IV, um ou mais de Z1 ou Z2 são independentemente um radical de um éster de α- aminoácido de ocorrência natural ligado a nitrogênio. Exemplos de aminoácidos de ocorrência natural incluem isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, treonina, triptofano, valina, alanina, asparagina, ácido aspártico, cisteína, ácido glutâmico, glutamina, glicina, prolina, selenocisteína, serina, tirosina, arginina, histidina, ornitina e taurina. Os ésteres destes aminoácidos compreendem qulquer um destes descritos para o substituinte R, particularmente aqueles em que R é opcionalmente substituído (C1-C8)alquila.

[0081] O termo base de "purina" ou "pirimidina" compreende, porém não está limitado à, adenina, N6-alquilpurinas, N6-acilpurinas (em que acil é C(O)(alquila, arila, alquilarila, ou arilalquila), N6-benzilpurina, N6-halopurina, N6- vinilpurina, purina N6-acetilênica, N6-acil purina, N6-hidroxialquila purina, N6- alilaminopurina, N6-tioalil purina, N2-alquilpurinas, N2-alquil-6-tiopurinas, timina, citosina, 5-fluorocitosina, 5-metilcitosina, 6-azapirimidina, incluindo 6- azacitosina, 2- e/ou 4-mercaptopirmidina, uracila, 5-halouracila, incluindo 5-fluorouracila, C5-alquilpirimidinas, C5-benzilpirimidinas, C5-halopirimidinas, C5-vinilpirimidina, C5-acetilênica pirimidina, C5-acil pirimidina, C5-hidroxialquila purina, C5-amidopirimidina, C5-cianopirimidina, C5-5-iodopirimidina, C6-iodo- pirimidina, C5-Br-vinil pirimidina, C6-Br-vinil piriniidina, C5-nitropirimidina, C5- amino-pirimidina, N2-alquilpurinas, N2-alquil-6-tiopurinas, 5-azacitidinila, 5- azauracilila, triazolopiridinila, imidazolopiridinila, pirrolopirimidinila, e pirazolopirimidinila. Purina bases incluem, porém não estão limitados a, guanina, adenina, hipoxantina, 2,6-diaminopurina, e 6-cloropurina. As bases de purina e pirimidina de Fórmula I-III são ligadas ao açúcar ribose, ou análogo das mesmas, através de um átomo de nitrogênio da base. Grupos oxigênio e nitrogênio funcionais na base podem ser protegidos quando necessário ou desejado. Grupos de proteção adequados são bem conhecido por aqueles versados na técnica, e incluem grupos trimetilsilila, dimetil-hexilsilila, t- butildimetilsilila, e t-butildifenilsilila, tritila, alquila, e acila tais como acetila e propionila, metanossulfonila, e p-toluenossulfonila.

[0082] A menos que de outro modo especificado, os átomos de carbono dos compostos de Fórmula I-IV são destinados a ter uma valência de quatro. Em algumas representações de estrutura química onde os átomos de carbono não têm um número suficiente de variáveis ligadas para produzir uma valência de quatro, os substituintes de carbono restantes necessários para fornecer uma valência de quatro devem ser assumidos ser hidrogênio. Por exemplo,

[0083] tem o mesmo significado como

[0084] "Grupo de proteção" refere-se a uma porção de um composto que mascara ou altera as propriedades de um grupo funcional ou as propriedades do composto como um todo. A estrutura química de um grupo de proteção varia amplamente. Uma função de um grupo de proteção é servir como um intermediário na síntese da substância de fármaco parental. Grupos de proteção químicas e estratégias para a proteção/desproteção são bem conhecidos na técnica. Veja: "Protective Groups in Organic Chemistry", Theodora W. Greene (John Wiley & Sons, Inc., Nova Iorque, 1991. Grupos de proteção são frequentemente utilizados para mascarar a reatividade de certos grupos funcionais, para auxiliar na eficiência de reações químicas desejadas, preparando e quebrando as ligações químicas em um modelo ordenado e planejado. A proteção de grupos funcionais de um composto altera outras propriedades físicas além da reatividade do grupo funcional protegido, tal como a polaridade, lipofilicidade (hidrofobicidade), e outras propriedades que podem ser medidas por ferramentas analíticas comuns, Intermediários quimicamente protegidos por si sós podem ser biologicamente ativos ou inativos. Intermediários quimicamente protegidos podem por si sós ser biologicamente ativos ou inativos. "Grupos de proteção de hidróxi" refere-se àqueles grupos de proteção para proteger os grupos hidróxi (-OH).

[0085] Os compostos protegidos podem também alterar, e em alguns casos, propriedades otimizadas in vitro e in vivo, tal como a passagem através de membranas celulares e resistência à degradação ou sequestro enzimático. Neste papel, compostos protegidos com os efeitos terapêuticos pretendidos podem ser referidos como pró-fármacos. Outra função de um grupo de proteção é converter o fármaco parenteral em um pró-fármaco, pelo qual o fármaco parental é liberado na conversão do pró-fármaco in vivo. Porque os pró-fármacos ativos podem ser absorvidos mais eficazmente do que o fármaco parental, os pró-fármacos podem possuir maio potência in vivo do que o fármaco parental. Os grupos de proteção são removidos in vitro, no caso de intermediários químicos, ou in vivo, no caso de pró-fármacos. Com intermediários químicos, não é particularmente importante que os produtos resultantes após a desproteção, por exemplo, alcoóis, seja fisiologicamente aceitáveis, embora em geral seja mais desejável se os produtos forem farmacologicamente inócuos.

[0086] O termo "quiral" refere-se às moléculas que têm a propriedade de não sobreponibilidade do parceiro de imagem refletida, enquanto o termo "aquiral" refere-se às moléculas que são sobreponíveis em seu parceiro de imagem refletida.

[0087] O termo "estereoisômeros" refere-se um composto que tem constituição química idêntica, porém difere com respeito à disposição dos átomos ou grupos em espaço.

[0088] "Diastereômero" refere-se a um estereoisômero com dois ou mais centros de quiralidade e cujas moléculas não são imagens refletidas uma da outra. Os diastereômeros têm diferentes propriedades físicas, por exemplo, pontos de fusão, propriedades espectrais, reatividades e propriedades biológicas. Por exemplo, os compostos de Fórmula I-IV podem ter um átomo de fósforo quiral quando R7 é

[0089] e Z1 e Z2 são diferentes. Quando pelo menos um de Z1 ou Z2 também tem um centro quiral, por exemplo com Z1 ou Z2 é um éster de α- aminoácido de ocorrência natural, quiral, ligado a nitrogênio, então o composto de Fórmula I-IV existirá como diastereômeros porque existem dois centros de quiralidade na molécula. Todos os tais diastereômeros e seus usos descritos aqui são abrangidos pela presente invenção. Misturas de diastereômeros podem ser separadas sob procedimentos analíticos de alta resolução tais como eletroforese, cristalização e/ou cromatografia. Diastereômeros podem ter diferentes atributos físicos tais como, porém não limitados à solubilidade, estabilidades químicas e cristalinidades e podem também ter diferentes propriedades biológicas tais como, porém não limitadas à estabilidade enzimática, absorção e estabilidade metabólica.

[0090] "Enantiômeros" referem-se a dois estereoisômeros de um composto que são imagens refletidas não sobreponíveis uma da outra.

[0091] O modificador "cerca de" usado em conexão com uma quantidade é inclusiva do valor estabelecido e tem o significado ditado pelo contexto (por exemplo, inclui o grau de erro associado com medição da quantidade particular).

[0092] O termo "tratamento", como usado aqui, a menos que de outro modo indicado, significa reverter, aliviar, inibir o progresso de, ou prevenir o distúrbio ou condição a qual tal termo se aplica, ou um ou mais sintomas de tal distúrbio ou condição. O termo "tratamento", como usado aqui, refere-se à ação de tratamento, como "tratando" é definido imediatamente acima.

[0093] O termo "quantidade terapeuticamente eficaz", como usado aqui, é a quantidade de composto de Fórmula I-IV presente na composição descrita aqui que é necessária para fornecer um nível desejado de fármaco nas secreções e tecidos das vias aéreas e pulmões, ou alternativamente, na corrente sanguínea de um indivíduo a ser tratado para fornecer uma resposta fisiológica antecipada ou efeito biológico desejado quando tal composição é administrada pela rotina escolida de administração. A quantida precisa dependerá dos numerosos fatores, por exemplo, o composto particular de Fórmula I-IV, a atividade específica da composição, o dispositivo de liberação empregado, as características físicas da composição, seu uso pretendido, bem como considerações de paciente tal como gravidade do estado de doença, cooperação do paciente, etc., e pode facilmente ser determinada por alguém versado na técnica com base na informação fornecida aqui.

[0094] O termo "solução salina normal" significa uma solução de água contendo 0,9% (p/v) de NaCl.

[0095] O termo "solução salina hipertônica" significa uma solução de água contendo mais do que 0,9% (p/v) NaCl. Por exemplo, 3% de solução salina hipertônica conteriam 3% (p/v) de NaCl.

[0096] "Formação de uma mistura reacional" refere-se ao processo de introduzir em contato pelo menos duas espécies distintas de modo que elas se misturam entre si e podem reagir. Deve-se ser apreciado, entretanto, o produto de reação resultante pode ser produzido diretamente de uma reação entre os reagentes adicionados ou de um intermediário de um ou mais dos reagentes adicionados que podem ser produzidos na mistura reacional.

[0097] "Agente de acoplamento" refere-se a um agente capaz de acoplar dois compostos diferentes. Agentes de acoplamento podem ser catalíticos ou estequiométricos. Por exemplo, os agentes de acoplamento podem ser um agente de acoplamento com base em lítio ou um agente de acoplamento com base em magnésio tal como um reagente de Grignard. Agentes de acoplamento exemplares incluem, porém não estão limitados a, n-BuLi, MgCl2, iPrMgCl, tBuMgCl, PhMgCl ou combinações dos mesmos.

[0098] "Silano" refere-se a um grupo contendo silício tendo a fórmula SiR4, onde cada grupo R pode ser alquila, alquenila, cicloalquila, fenila, ou outros grupos contendo silício. Quando o silano é ligado a outro composto, o silano é referido como um "silila" e tem a fórmula -SiR3.

[0099] "Halo-silano" refere-se a um silano tendo pelo menos um grupo halogênio ligado ao átomo de silício. Os halo-silanos representativos têm a fórmula Halo-SiR3, onde cada grupo R pode ser alquila, alquenila, cicloalquila, fenila, ou outros grupos contendo silício. Halo-silanos específicos incluem Cl-Si(CH3)3, e Cl-Si(CH3)2CH2CH2Si(CH3)2-Cl.

[00100] "Base não nucleofílica" refere-se a um doador de elétron, uma base de Lewis, tal como bases de nitrogênio incluindo trietilamina, diisopropiletil amina, N,N-dietilanilina, piridina, 2,6-lutidina, 2,4,6-colidina, 4- dimetilaminopiridina, e quinuclidina.

[00101] "Grupo de saída" refere-se a grupos que mantêm o par de elétron de ligação durante a clivagem de ligação heterolítica. Por exemplo, um grupo de saída é facilmente removido durante uma reação de remoção nucleofílica. Grupos de saída adequados incluem, porém não estão limitados a, cloreto, brometo, mesilato, tosilato, triflato, 4-nitrobenzenossulfonato, 4-clorobenzenossulfonato, 4-nitrofenóxi, pentafluorofenóxi, etc. Alguém versado na técnica reconhecerá outros grupos de saída úteis na presente invenção.

[00102] "Agente de desproteção" refere-se a qualquer agente capaz de remover um grupo de proteção. O agente de desproteção dependerá do tipo de grupo de proteção usado. Agentes de desproteção representativos são conhecidos na técnica e podem ser encontrados em Protective Groups in Organic Chemistry, Peter G. M. Wuts e Theodora W. Greene, 4- Ed., 2006.

COMPOSTOS DA PRESENTE INVENÇÃO

[00103] Referência será feita em detalhes a certas modalidades da invenção, exemplos das quais são ilustrados na descrição, estruturas e fórmulas acompanhantes. Enquanto a invenção será descrita em conjunção com as modalidades enumeradas, será entendido que eles não se destinam a limitar a invenção àquelas modalidades. Ao contrário, a invenção destina-se a abranger a todas as alternativas, modificações, equivalentes, que podem estar incluídos no escopo da presente invenção.

[00104] É fornecido um método para o tratamento de uma infecção por Arenaviridae em um humano em necessidade do mesmo compreendendo administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula I:

Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável ou éster, do mesmo; em que: cada R1 é H ou halogênio; cada R2, R3, R4 ou R5 é independentemente H, ORa, N(Ra)2, N3, CN, NO2, S(O)nRa, halogênio, (C1-C8)alquila, (C4-C8)carbociclilalquila, (C1-C8)alquila substituída, (C2-C8)alquenila, (C2-C8)alquenila substituída, (C2-C8)alquinila ou (C2-C8)alquinila substituída; ou quaisquer dois R2, R3, R4 ou R5 em átomos de carbono adjacentes quando considerados juntos são -O(CO)O- ou quando considerados juntos com os átomos de carbono de anel aos quais eles são ligados formam uma ligação dupla; R6 é ORa, N(Ra)2, N3, CN, NO2, a 11 11 11 12 11 11 11 S(O)nRa, -C(=O)R , -C(=O)OR , -C(=O)NR R , -C(=O)SR , -S(O)R , -S(O)2R , - S(O)(OR11), -S(O)2(OR11), -SO2NR11R12, halogênio, (C1-C8)alquila, (C4-C8)carbociclilalquila, (C1-C8)alquila substituída, (C2-C8)alquenila, (C2-C8)alquenila substituída, (C2-C8)alquinila, (C2-C8)alquinila substituída, ou (C6-C20)aril(C1-C8)alquila; R7 é selecionado a partir de um grupo que consiste em 11 11 11 12 11 11 11 H, -C(=O)R , -C(=O)OR , -C(=O)NR R , -C(=O)SR , -S(O)R , -S(O)2R , -S(O)(O R11), -S(O)2(OR11), ou -SO2NR11R12, em que cada (C1-C8)alquila, (C2-C8)alquenila, (C2-C8)alquinila ou (C6-C20)aril(C1-C8)alquila de cada R11 ou R12 é, independentemente, opcionalmente susbtituído com um ou mais halo, hidróxi, CN, N3, N(Ra)2 ou ORa; e em que um ou mais dos átomos de carbono não terminais de cada referido (C1-C8)alquila podem ser opcionalmente substituídos com -O-, -S- ou -NRa-,

em que: Rc é selecionado a partir de fenila, 1-naftila, 2-naftila,

em que: cada M1a, M1c, e M1d é independentemente 0 ou 1; M12c é 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ou 12; Z3 é Z4 ou Z5; Z4 é R, -C(Q2)Ry, -C(Q2)Z5, -SO2Ry, ou -SO2Z5; e Z5 é um carbociclo ou um heterociclo em que Z5 é independentemente substituído com 0 a 3 grupos Ry; R 8 11 12 11 11 11 11 12 é halogênio, NR R , N(R )OR , NR NR R , N3, NO, NO2, CHO, CN, -CH(=NR11), -CH=NNHR11, -CH=N(OR11), -CH(OR11)2, -C(=O)NR11R12, -C(=S)NR11R12, -C(=O)OR11, (C1-C8)alquila, (C2-C8)alquenila, (C2-C8)alquinila, (C4-C8)carbociclilalquila, (C6-C20)arila opcionalmente substituído, heteroarila opcionalmente substituído, -C(=O)(C1-C8)alquila, - S(O)n(C1-C8)alquila, (C6-C20)aril(C1-C8)alquila, OR11 ou SR11; cada R9 ou R10 é independentemente H, halogênio, NR11R12, N(R11)OR11, NR11NR11R12, N3, NO, NO2, CHO, 11 11 11 11 11 12 1 CN, -CH(=NR ), -CH=NHNR , -CH=N(OR ), -CH(OR )2, -C(=O)NR R , -C(=S)NR 1R12, -C(=O)OR11, R11, OR11 ou SR11; cada R11 ou R12 é independentemente H, (C1-C8)alquila, (C2-C8)alquenila, (C2-C8)alquinila, (C4-C8)carbociclilalquila, (C6-C20)arila opcionalmente substituído, heteroarila opcionalmente substituído, -C(=O)(C1-C8)alquila, - S(O)n(C1-C8)alquila ou (C6-C20)aril(C1-C8)alquila; ou R11 e R12 considerados juntamente com um nitrogênio ao qual eles são ambos ligados formam um anel heterocíclico de 3 a 7 membros em que qualquer um átomo de carbono do referido anel heterocíclico pode opcionalmente ser substituído com -O-, -Sou -NRa-; cada Ra é independentemente H, (C1-C8)alquila, (C2-C8)alquenila, (C2-C8)alquinila, (C6-C20)aril(C1-C8)alquila, (C4-C8)carbociclilalquila, -C(=O)R, -C(=O)OR, -C(=O)NR2, -C(=O)SR, -S(O)R, - S(O)2R, -S(O)(OR), -S(O)2(OR), ou -SO2NR2; em que cada R é independentemente H, (C1-C8) alquila, (C1-C8) alquila substituída, (C2-C8)alquenila, (C2-C8) alquenila substituída, (C2-C8) alquinila, (C2-C8) alquinila substituída, (C6-C20)arila, (C6-C20)arila substituída, (C2-C20)heterociclila, (C2-C20)heterociclila substituída, (C6-C20)aril(C1-C8)alquila ou (C6-C20)aril(C1-C8)alquila substituída; cada n é independentemente 0, 1, ou 2; e em que cada (C1-C8)alquila, (C2-C8)alquenila, (C2-C8)alquinila ou (C6-C20)aril(C1-C8)alquila de cada R2, R3, R5, R6, R11 ou R12 é, independentemente, opcionalmente susbtituído com um ou mais halo, hidróxi, CN, N3, N(Ra)2 ou ORa; e em que um ou mais dos átomos de carbono não terminais de cada referido (C1-C8)alquila podem ser opcionalmente substituídos com -O-, -S- ou —NRa-.

[00105] Em outra modalidade, é fornecido um método de tratamento de uma infecção por Arenaviridae em um humano em necessidade do mesmo compreendendo administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula I representado pela Fórmula II:

Fórmula II ou um sal farmaceuticamente aceitável ou éster, do mesmo; em que: R1, R3, R5, R7, R8 e R9 são como definido acima for Fórmula I; cada R2 é ORa ou halogênio; e R6 é ORa, N(Ra)2, N3, CN, S(O)nRa, -C(=O)R11, -C(=O)OR11, 11 12 11 11 11 11 11 -C(=O)NR R , -C(=O)SR , -S(O)R , -S(O)2R , -S(O)(OR ), -S(O)2(OR ), -SO2NR11R12, halogênio, (C1-C8)alquila, (C4-C8)carbociclilalquila, (C1-C8)alquila substituída, (C2-C8)alquenila, (C2-C8)alquenila substituída, (C2-C8)alquinila, ou (C2-C8) alquinila substituída.

[00106] Em uma modalidade do método de tratamento de uma infecção por Arenaviridae administrando um composto de Fórmula II, R1 de Fórmula II é H. Em outro aspecto desta modalidade R6 de Fórmula II é N3, CN, halogênio, (C1-C8)alquila, (C1-C8)alquila substituída, (C2-C8)alquenila, (C2-C8)alquenila substituída, (C2-C8)alquinila, ou (C2-C8)alquinila substituída. Em outro aspecto desta modalidade, R6 de Fórmula II é CN, metila, ethenila, ou etinila. Em outro aspecto desta modalidade, R6 de Fórmula II é CN. Em outro aspecto desta modalidade, R6 de Fórmula II é metila. Em outro aspecto desta modalidade, R5 de Fórmula II é H. Em outro aspecto desta modalidade, R2 de Fórmula II é ORa. Em outro aspecto desta modalidade, R2 de Fórmula II é OH. Em outro aspecto desta modalidade, R2 de Fórmula II é F. Em outro aspecto desta modalidade, R3 de Fórmula II é ORa. Em outro aspecto desta modalidade, R3de Fórmula II é OH, -OC(=O)R11, ou -OC(=O)OR11. Em outro aspecto desta modalidade, R3 de Fórmula II é OH. Em outro aspecto desta modalidade, R8 de Fórmula II é NR11R12. Em outro aspecto desta modalidade, R8 de Fórmula II é NH2. Em outro aspecto desta modalidade, R8 de Fórmula II é OR11. Em outro aspecto desta modalidade, R8 de Fórmula II é OH. Em outro aspecto desta modalidade, R9 de Fórmula II é H. Em outro aspecto desta modalidade, R9 de Fórmula II é NR11R12. Em outro aspecto desta modalidade, R9 de Fórmula II é NH2. Em outro aspecto desta modalidade, R7 de Fórmula II é H, -C(=O)R11, -C(=O)OR11 ou

[00107] Em outro aspecto desta modalidade, R7 de Fórmula II é H. Em outro aspecto desta modalidade, R7 de Fórmula II é

[00108] Em outra modalidade do método de tratamento de uma infecção por Arenaviridae compreendendo administrar um composto de Fórmula II, a infecção por Arenaviridae é causada por um vírus Arenaviridae. Em outro aspecto desta modalidade, o vírus Arenaviridae é um vírus Lassa ou vírus Junin. Em outro aspecto desta modalidade, o vírus Arenaviridae é um vírus Lassa. Em outro aspecto desta modalidade, o vírus Arenaviridae é um vírus Junin. Em outro aspecto desta modalidade, o vírus Arenaviridae é causada por um vírus Lassa causada por uma cepa selecionada a partir de Josiah, NL, z148, Macenta, AV, e CSF.

[00109] Em outro aspecto desta modalidade, a infecção por Arenaviridae é causada por vírus Allpahuayo (ALLV), vírus Amapari (AMAV), vírus Bear Canyon (BCNV), vírus Catarina, vírus Chapare, vírus Cupixi (CPXV), vírus Dandenong, vírus Flexal (FLEV), vírus Guanarito (GTOV), vírus Ippy (IPPYV), vírus Junin (JUNV), vírus Kodoko, vírus Lassa (LASV), vírus Latino (LATV), vírus da coriomeningite linfocítica (LCMV), vírus Lujo, vírus Machupo (MACV), vírus Mobala (MOBV), vírus Morogoro, vírus Mopeia (MOPV), vírus Oliveros (OLVV), vírus Parana (PARV), vírus Pichinde (PICV), vírus Pinhal, vírus Pirital (PIRV), vírus Sabia (SABV), vírus Skinner Tank, vírus Tacaribe (TCRV), vírus Tamiami (TAMV), ou vírus Whiteágua Arroyo (WWAV).

[00110] Em outra modalidade, é fornecido um método de tratamento de uma infecção por Arenaviridae em um humano em necessidade do mesmo compreendendo administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula I representado pela Fórmula III:

Fórmula III ou um sal farmaceuticamente aceitável ou éster, do mesmo; em que R6, R7, R8 e R9 são como definido acima for Fórmula II; cada R2 é ORa ou F; e cada R3 é ORa.

[00111] Em uma modalidade do método de tratamento de uma infecção por Arenaviridae compreendendo administrar um composto de Fórmula III, R6 de Fórmula III é N3, CN, halogênio, (C1-C8)alquila, (C1-C8)alquila substituída, (C2-C8)alquenila, (C2-C8)alquenila substituída, (C2-C8)alquinila, ou (C2-C8)alquinila substituída. Em outro aspecto desta modalidade, R6 de Fórmula III é CN, metila, ethenila, ou etinila. Em outro aspecto desta modalidade, R6 de Fórmula III é CN. Em outro aspecto desta modalidade, R6 de Fórmula III é metila. Em outro aspecto desta modalidade, R2 de Fórmula III é ORa. Em outro aspecto desta modalidade, R2 de Fórmula III é OH. Em outro aspecto desta modalidade, R2 de Fórmula III é F. Em outro aspecto desta modalidade, R3 de Fórmula III é OH, -OC(=O)R11, ou -OC(=O)OR11. Em outro aspecto desta modalidade, R3 de Fórmula III é OH. Em outro aspecto desta modalidade, R8 de Fórmula III é NR11R12. Em outro aspecto desta modalidade, R8 de Fórmula III é NH2. Em outro aspecto desta modalidade, R8 de Fórmula III é OR11. Em outro aspecto desta modalidade, R8 de Fórmula III é OH. Em outro aspecto desta modalidade, R9 de Fórmula III é H. Em outro aspecto desta modalidade, R9 de Fórmula III é NR11R12. Em outro aspecto desta modalidade, R9 de Fórmula III é NH2. Em outro aspecto desta modalidade, R7 de Fórmula III é H, -C(=O)R11, - C(=O)OR11 ou

[00112] Em outro aspecto desta modalidade, R7 de Fórmula III é H. Em outro aspecto desta modalidade, R7 de Fórmula III é

[00113] Em outra modalidade do método de tratamento de uma infecção por Arenaviridae compreendendo administrar um composto de Fórmula III, R6 de Fórmula III é N3, CN, halogênio, (C1-C8)alquila, (C1-C8)alquila substituída, (C2-C8)alquenila, (C2-C8)alquenila substituída, (C2-C8)alquinila, ou (C2-C8)alquinila substituída e R8 é NH2. Em outro aspecto desta modalidade, R6 de Fórmula III é CN, metila, etenila, ou etinila. Em outro aspecto desta modalidade, R6 de Fórmula III é CN. Em outro aspecto desta modalidade, R6 de Fórmula III é metila. Em outro aspecto desta modalidade, R2 de Fórmula III é ORa. Em outro aspecto desta modalidade, R2 de Fórmula III é OH, -OC(=O)R11, ou -OC(=O)OR11. Em outro aspecto desta modalidade, R2 de Fórmula III é OH. Em outro aspecto desta modalidade, R2 de Fórmula III é F. Em outro aspecto desta modalidade, R3 de Fórmula III é OH, -OC(=O)R11, ou -OC(=O)OR11. Em outro aspecto desta modalidade, R3 de Fórmula III é OH. Em outro aspecto desta modalidade, R9 de Fórmula III é H. Em outro aspecto desta modalidade, R9 de Fórmula III é NR11R12. Em outro aspecto desta modalidade, R9 de Fórmula III é NH2. Em outro aspecto desta modalidade, R7 de Fórmula III é H, -C(=O)R11, - C(=O)OR11 ou

[00114] Em outro aspecto desta modalidade, R7 de Fórmula III é H. Em outro aspecto desta modalidade, R7 de Fórmula III é

[00115] Em outra modalidade do método de tratamento de uma infecção por Arenaviridae compreendendo administrar um composto de Fórmula III, R6 de Fórmula III é CN, metila, ethenila, ou etinila, R8 é NH2, e R9 é H. Em outro aspecto desta modalidade, R6 de Fórmula III é CN. Em outro aspecto desta modalidade, R6 de Fórmula III é metila. Em outro aspecto desta modalidade, R2 de Fórmula III é ORa. Em outro aspecto desta modalidade, R2 de Fórmula III é OH, -OC(=O)R11, ou -OC(=O)OR11. Em outro aspecto desta modalidade, R2 de Fórmula III é OH. Em outro aspecto desta modalidade, R2 de Fórmula III é F. Em outro aspecto desta modalidade, R3 de Fórmula III é OH, -OC(=O)R11, ou - OC(=O)OR11. Em outro aspecto desta modalidade, R3 de Fórmula III é OH. Em outro aspecto desta modalidade, R7 de Fórmula III é H, -C(=O)R11, -C(=O)OR11 ou

[00116] Em outro aspecto desta modalidade, R7 de Fórmula III é H. Em outro aspecto desta modalidade, R7 de Fórmula III é

[00117] Em outra modalidade do método de tratamento de uma infecção por Arenaviridae compreendendo administrar um composto de Fórmula III, a infecção por Arenaviridae é causada por um vírus Arenaviridae. Em outro aspecto desta modalidade, o vírus Arenaviridae é um vírus Lassa ou vírus Junin. Em outro aspecto desta modalidade, o vírus Arenaviridae é um vírus Lassa. Em outro aspecto desta modalidade, o vírus Arenaviridae é um vírus Junin. Em outro aspecto desta modalidade, o vírus Arenaviridae é causada por um vírus Lassa causada por uma cepa selecionada a partir de Josiah, NL, z148, Macenta, AV e CSF.

[00118] Em outro aspecto desta modalidade, a infecção por Arenaviridae é causada pelo vírus Allpahuayo (ALLV), vírus Amapari (AMAV), vírus Bear Canyon (BCNV), vírus Catarina, vírus Chapare, vírus Cupixi (CPXV), vírus Dandenong, vírus Flexal (FLEV), vírus Guanarito (GTOV), vírus Ippy (IPPYV), vírus Junin (JUNV), vírus Kodoko, vírus Lassa (LASV), vírus Latino (LATV), vírus da coriomeningite linfocítica (LCMV), vírus Lujo, vírus Machupo (MACV), vírus Mobala (MOBV), vírus Morogoro, vírus Mopeia (MOPV), vírus Oliveros (OLVV), vírus Parana (PARV), vírus Pichinde (PICV), vírus Pinhal, vírus Pirital (PIRV), vírus Sabia (SABV), vírus Skinner Tank, vírus Tacaribe (TCRV), vírus Tamiami (TAMV), ou vírus Whiteágua Arroyo (WWAV).

[00119] Em outra modalidade, é fornecido um método de tratamento de uma infecção por Arenaviridae em um humano em necessidade do mesmo compreendendo administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula I representado pela Fórmula IV:

Fórmula IV ou um sal farmaceuticamente aceitável ou éster, do mesmo; em que R7 é como definido acima for Fórmula I.

[00120] Em outra modalidade do método de tratamento de uma infecção por Arenaviridae compreendendo administrar um composto de Fórmula IV, R7 pode ser H. Em outra modalidade do método de tratamento de uma infecção por Arenaviridae compreendendo administrar um composto de Fórmula IV, R7 é selecionado a partir do grupo de a), b), ou c) como descrito para a Fórmula I.

[00121] Em outra modalidade do método de tratamento de uma infecção por Arenaviridae compreendendo administrar um composto de Fórmula IV, R7

em que Z1 e Z2 são cada qual, independentemente, um grupo tendo a estrutura:

e Z3 é Z5.

[00122] Em outra modalidade do método de tratamento de uma infecção por Arenaviridae compreendendo administrar um composto de Fórmula IV, R7

em que Z1 e Z2 são cada qual, independentemente, um grupo tendo a estrutura:

e Z3 é Z5.

[00123] Em outra modalidade do método de tratamento de uma infecção por Arenaviridae compreendendo administrar um composto de Fórmula IV, R7 é

em que cada Q3b é, independentemente, O ou N(R). Em outra modalidade, cada Q3b é O e cada Rx é independentemente:

em que M12c é 1, 2 ou 3 e cada Q3 é independentemente uma ligação, O, CR2, ou S.

[00124] Em algumas modalidades, Re1 e Re2 podem cada qual independentemente ser H, C1-C6 alquila ou benzila. Em algumas modalidades, Re1 can be H, C1-C6 alquila ou benzila e Re2 pode ser H ou C1-C6 alquila. Em algumas modalidades, Re1 e Re2 podem cada qual independentemente ser H ou C1-C6 alquila. Em algumas modalidades, Re1 e Re2 podem cada qual independentemente ser H ou benzila. Em algumas modalidades, Re1 pode ser H, metila ou benzila e Re2 pode ser H ou metila. Em algumas modalidades, Re1 pode ser H ou metila e Re2 pode ser H ou metila. Em algumas modalidades, Re1 pode ser metila e Re2 pode ser H ou metila. Em algumas modalidades, Re1 pode ser H ou benzila e Re2 pode ser H ou metila.

[00125] Em outra modalidade do método de tratamento de uma infecção por Arenaviridae compreendendo administrar um composto de Fórmula IV, R7

[00126] Em outra modalidade do método de tratamento de uma infecção por Arenaviridae compreendendo administrar um composto de Fórmula IV, R7

[00127] Em outra modalidade do método de tratamento de uma infecção por Arenaviridae compreendendo administrar um composto de Fórmula IV, R7

em que Rf é selecionado a partir do grupo de H, C1-C8 alquila, benzila, C3-C6 cicloalquila e -CH2-C3-C6 cicloalquila. Em outra modalidade de um composto de Fórmula IV, Rf é C1-C8 alquila. Em outra modalidade de um composto de Fórmula IV, Rf é 2-etilbutila.

[00128] Em outra modalidade do método de tratamento de uma infecção por Arenaviridae compreendendo administrar um composto de Fórmula IV, R7 é

em que Rf é selecionado a partir de H, C1-C8 alquila, benzila, C3-C6 cicloalquila e - CH2-C3-C6 cicloalquila; e Rg é selecionado a partir de C1-C8 alquila, -O-C1-C8 alquila, benzila, -O- benzila, -CH2-C3-C6 cicloalquila, -O-CH2-C3-C6 cicloalquila e CF3.

[00129] Em outra modalidade do método de tratamento de uma infecção por Arenaviridae compreendendo administrar um composto de Fórmula IV, R7

em que Rf é selecionado a partir de H, C1-C8 alquila, benzila, C3-C6 cicloalquila e -CH2-C3-C6 cicloalquila. Em outra modalidade de um composto de Fórmula IV, Rf é C1-C8 alquila. Em outra modalidade de um composto de Fórmula IV, Rf é C1-C6 alquila. Em outra modalidade de um composto de Fórmula IV, Rf é 2-etilbutila.

[00130] Em outra modalidade do método de tratamento de uma infecção por Arenaviridae compreendendo administrar um composto de Fórmula IV, R7 é:

em que Rg é selecionado a partir de C1-C8 alquila, -O-C1-C8 alquila, benzila, -O-benzila, -CH2-C3-C6 cicloalquila, -O-CH2-C3-C6 cicloalquila e CF3. Em outra modalidade de um composto de Fórmula IV, Rf é C1-C8 alquila. Em outra modalidade de um composto de Fórmula IV, Rf é C1-C6 alquila.

[00131] Em outra modalidade do método de tratamento de uma infecção por Arenaviridae compreendendo administrar um composto de Fórmula IV, R7 é selecionado a partir do grupo de:

[00132] Em outra modalidade do método de tratamento de uma infecção por Arenaviridae compreendendo administrar um composto de Fórmula IV, R7

[00133] Em outra modalidade do método de tratamento de uma infecção por Arenaviridae compreendendo administrar um composto de Fórmula IV, Z1 e Z2 pode cada qual:

[00134] Em outra modalidade, é fornecido um método de tratamento de uma infecção por Arenaviridae em um humano em necessidade do mesmo compreendendo administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmulas I-IV, em que R11 ou R12 é independentemente H, (C1- C8)alquila, (C2-C8)alquenila, (C2-C8)alquinila, (C4-C8)carbociclilalquila, arila opcionalmente substituído, heteroarila opcionalmente substituído, -C(=O)(C1- C8)alquila, -S(O)n(C1-C8)alquila ou aril(C1-C8)alquila. Em outra modalidade, R11 e R12 considerados juntamente com um nitrogênio ao qual eles são ambos ligados formam um anel heterocíclico de 3 a 7 membros em que qualquer um átomo de carbono do referido anel heterocíclico pode opcionalmente ser substituído com -O-, -S- ou -NRa-. Portanto, por meio de exemplo e não limitação, a porção -NR11R12 pode ser representada pelos heterociclos:

e similares.

[00135] Em outra modalidade, é fornecido um método de tratamento de uma infecção por Arenaviridae em um humano em necessidade do mesmo compreendendo administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula I-IV, em que cada R3, R4, R5, R6, R11 ou R12 é, independentemente, (C1-C8)alquila, (C2-C8)alquenila, (C2-C8)alquinila ou aril(C1- C8)alquila, em que referido (C1-C8)alquila, (C2-C8)alquenila, (C2-C8)alquinila ou aril(C1-C8)alquila are, independentemente, opcionalmente susbtituído com um ou mais halo, hidróxi, CN, N3, N(Ra)2 ou ORa. Portanto, por meio de exemplo e não limitação, R3, R4, R5, R6, R11 ou R12 representariam porções tais como -CH(NH2)CH3, -CH(OH)CH2CH3, -CH(NH2)CH(CH3)2, -CH2CF3,-(CH2)2CH(N3) CH3, -(CH2)6NH2 e similares.

[00136] Em outra modalidade, é fornecido um método de tratamento de uma infecção por Arenaviridae em um humano em necessidade do mesmo compreendendo administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula I-IV, em que R3, R4, R5, R6, R11 ou R12 é (C1-C8)alquila em que um ou mais dos átomos de carbono não terminais de cada referido (C1- C8)alquila podem ser opcionalmente substituídos com -O-, -S- ou -NRa-. Portanto, por meio de exemplo e não limitação, R3, R4, R5, R6, R11 ou R12 representariam porções tais como -CH2OCH3, -CH2OCH2CH3, -CH2OCH(CH3)2, -CH2SCH3, -(CH2)6OCH3, - (CH2)6N(CH3)2 e similares.

[00137] Em outra modalidade do método de tratamento de uma infecção por Arenaviridae compreendendo administrar um composto de Fórmula I, o composto é

ou um sal farmaceuticamente aceitável ou éster do mesmo.

[00138] Em outra modalidade do método de tratamento de uma infecção por Arenaviridae compreendendo administrar um composto de Fórmula I, o composto é

ou um sal farmaceuticamente aceitável ou éster do mesmo.

[00139] Em outra modalidade do método de tratamento de uma infecção por Arenaviridae compreendendo administrar um composto de Fórmula IV, o composto é:

ou um sal farmaceuticamente aceitável ou éster do mesmo.

[00140] Em outra modalidade do método de tratamento de uma infecção por Arenaviridae compreendendo administrar um composto de Fórmula IV, o composto é:

ou um sal farmaceuticamente aceitável ou éster do mesmo.

[00141] Em outra modalidade do método de tratamento de uma infecção por Arenaviridae compreendendo administrar um composto de Fórmula I-IV, o composto é

ou um sal farmaceuticamente aceitável ou éster do mesmo.

[00142] Em outra modalidade do método de tratamento de uma infecção por Arenaviridae compreendendo administrar um composto de Fórmula I-IV, o composto é

ou um sal farmaceuticamente aceitável ou éster do mesmo.

[00143] É fornecido um método para o tratamento de uma infecção por Coronaviridae em um humano em necessidade do mesmo compreendendo administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula I:

Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável ou éster, do mesmo; em que: cada R1 é H ou halogênio; cada R2, R3, R4 ou R5 é independentemente H, ORa, N(Ra)2, N3, CN, NO2, S(O)nRa, halogênio, (C1-C8)alquila, (C4-C8)carbociclilalquila, (C1-C8)alquila substituída, (C2-C8)alquenila, (C2-C8)alquenila substituída, (C2-C8)alquinila ou (C2-C8)alquinila substituída; ou quaisquer dois R2, R3, R4 ou R5 em átomos de carbono adjacentes quando considerados juntos são -O(CO)O- ou quando considerados juntos com os átomos de carbono de anel aos quais eles são ligados formam uma ligação dupla; R6 é ORa, N(Ra)2, N3, CN, NO2, a 11 11 11 12 11 11 11 S(O)nRa, -C(=O)R , -C(=O)OR , -C(=O)NR R , -C(=O)SR , -S(O)R , -S(O)2R , - S(O)(OR11), -S(O)2(OR11), -SO2NR11R12, halogênio, (C1-C8)alquila, (C4-C8)carbociclilalquila, (C1-C8)alquila substituída, (C2-C8)alquenila, (C2-C8)alquenila substituída, (C2-C8)alquinila, (C2-C8)alquinila substituída, ou (C6-C20)aril(C1-C8)alquila; R7 é selecionado a partir de um grupo que consiste em H11 11 11 12 11 11 11 , -C(=O)R , -C(=O)OR , -C(=O)NR R , -C(=O)SR , -S(O)R , -S(O)2R , -S(O)(O R11), -S(O)2(OR11), ou -SO2NR11R12, em que cada (C1-C8)alquila, (C2-C8)alquenila, (C2-C8)alquinila ou (C6-C20)aril(C1-C8)alquila de cada R11 ou R12 é, independentemente, opcionalmente susbtituído com um ou mais halo, hidróxi, CN, N3, N(Ra)2 ou ORa; e em que um ou mais dos átomos de carbono não terminais de cada referido (C1-C8)alquila podem ser opcionalmente substituídos com -O-, -S- ou -NRa-,

em que: Rc é selecionado a partir de fenila, 1-naftila, 2-naftila,

Rd é H ou CH3; Re1 e Re2 são cada qual independentemente H, (C1-C6)alquila ou benzila; Rf é selecionado a partir de H, (C1-C8)alquila, benzila, (C3-C6)cicloalquila e -CH2-(C3-C6)cicloalquila; Rg é selecionado a partir de (C1-C8)alquila, -O-(C1-C8)alquila, benzila, -O-benzila, -CH2-(C3-C6)cicloalquila, -O-CH2-(C3-C6)cicloalquila e CF3; n' é selecionado a partir de 1, 2, 3 e 4; e d) um grupo da fórmula:

em que: Q é O, S, NR, +N(O)(R), N(OR), +N(O)(OR), ou N-NR2; Z1 e Z2, quando considerados juntamente, são -Q1(C(Ry)2)3Q1-; em que cada Q1 é independentemente O, S, ou NR; e cada Ry é independentemente H, F, Cl, Br, I, OH, R, -C(=Q2)R, -C(=Q2)OR, -C(=Q2)N(R)2, -N(R)2, -+N(R)3, -SR, -S(O)R, -S(O)2R, -S(O)( OR), -S(O)2(OR), -OC(=Q1)R, -OC(=Q2)OR, -OC(=Q2)(N(R)2), -SC(=Q2)R, -SC(=Q2)OR , -SC(=Q2)(N(R)2), -N(R)C(=Q2)R, -N(R)C(=Q2)OR, -N(R)C(=Q2)N(R)2, -SO2NR2, -CN, -N3, -NO2, -OR, ou Z3; ou quando considerados juntamente, dois Ry no mesmo átomo de carbono formam um anel carbocíclico de 3 a 7 átomos de carbono; cada Q2 é independentemente, O, S, NR, +N(O)(R), N(OR), +N(O)(OR), ou N-NR2; ou Z1 e Z2 são cada qual, independentemente, um grupo da fórmula Ia:

em que: cada M1a, M1c e M1d é independentemente 0 ou 1; M12c é 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ou 12; Z3 é Z4 ou Z5; Z4 é R, -C(Q2)Ry, -C(Q2)Z5, -SO2Ry, ou -SO2Z5; e Z5 é um carbociclo ou um heterociclo em que Z5 é independentemente substituído com 0 a 3 grupos Ry; R 8 11 12 11 11 11 11 12 é halogênio, NR R , N(R )OR , NR NR R , N3, NO, NO2, CHO, CN, -CH(=NR11), -CH=NNHR11, -CH=N(OR11), -CH(OR11)2, -C(=O)NR11R12, -C(=S)NR11R12, -C(=O)OR11, (C1-C8)alquila, (C2-C8)alquenila, (C2-C8)alquinila, (C4-C8)carbociclilalquila, (C6-C20)arila opcionalmente substituído, heteroarila opcionalmente substituído, -C(=O)(C1-C8)alquila, - S(O)n(C1-C8)alquila, (C6-C20)aril(C1-C8)alquila, OR11 ou SR11; cada R9 ou R10 é independentemente H, halogênio, NR11R12, N(R11)OR11, NR11NR11R12, N3, NO, NO2, CHO, 11 11 11 11 11 12 1 CN, -CH(=NR ), -CH=NHNR , -CH=N(OR ), -CH(OR )2, -C(=O)NR R , -C(=S)NR 1R12, -C(=O)OR11, R11, OR11 ou SR11; cada R11 ou R12 é independentemente H, (C1-C8)alquila, (C2-C8)alquenila, (C2-C8)alquinila, (C4-C8)carbociclilalquila, (C6-C20)arila opcionalmente substituído, heteroarila opcionalmente substituído, -C(=O)(C1-C8)alquila, - S(O)n(C1-C8)alquila ou (C6-C20)aril(C1-C8)alquila; ou R11 e R12 considerados juntamente com um nitrogênio ao qual eles são ambos ligados formam um anel heterocíclico de 3 a 7 membros em que qualquer um átomo de carbono do referido anel heterocíclico pode opcionalmente ser substituído com -O-, -Sou -NRa-; cada Ra é independentemente H, (C1-C8)alquila, (C2-C8)alquenila, (C2-C8)alquinila, (C6-C20)aril(C1-C8)alquila, (C4-C8)carbociclilalquila, -C(=O)R, -C(=O)OR, -C(=O)NR2, -C(=O)SR, -S(O)R, -S(O)2R, -S(O)(OR), -S(O)2(OR), ou -SO2NR2; em que cada R é independentemente H, (C1-C8) alquila, (C1-C8) alquila substituída, (C2-C8)alquenila, (C2-C8) alquenila substituída, (C2-C8) alquinila, (C2-C8) alquinila substituída, (C6-C20)arila, (C6-C20)arila substituída, (C2-C20)heterociclila, (C2-C20)heterociclila substituída, (C6-C20)aril(C1-C8)alquila ou (C6-C20)aril(C1-C8)alquila substituída; cada n é independentemente 0, 1, ou 2; e em que cada (C1-C8)alquila, (C2-C8)alquenila, (C2-C8)alquinila ou (C6-C20)aril(C1-C8)alquila de cada R2, R3, R5, R6, R11 ou R12 é, independentemente, opcionalmente susbtituído com um ou mais halo, hidróxi, CN, N3, N(Ra)2 ou ORa; e em que um ou mais dos átomos de carbono não terminais de cada referida (C1-C8)alquila podem ser opcionalmente substituídos com -O-, -S- ou —NRa-.

[00144] Em outra modalidade, é fornecido um método de tratamento de uma infecção por Coronaviridae em um humano em necessidade do mesmo compreendendo administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula I representado pela Fórmula II:

Fórmula II ou um sal farmaceuticamente aceitável ou éster, do mesmo; em que: R1, R3, R5, R7, R8 e R9 são como definido acima for Fórmula I; cada R2 é ORa ou halogênio; e R 6 a a a 11 11 11 12 é OR , N(R )2, N3, CN, S(O)nR , -C(=O)R , -C(=O)OR , -C(=O)NR R , - 11 11 11 11 11 11 12 C(=O)SR , -S(O)R , -S(O)2R , -S(O)(OR ), -S(O)2(OR ), -SO2NR R , halogênio, (C1-C8)alquila, (C4-C8)carbociclilalquila, (C1-C8)alquila substituída, (C2-C8)alquenila, (C2-C8)alquenila substituída, (C2-C8)alquinila, ou (C2-C8) alquinila substituída.

[00145] Em uma modalidade do método de tratamento de uma infecção por Coronaviridae administrando um composto de Fórmula II, R1 de Fórmula II é H. Em outro aspecto desta modalidade R6 de Fórmula II é N3, CN, halogênio, (C1-C8)alquila, (C1-C8)alquila substituída, (C2-C8)alquenila, (C2-C8)alquenila substituída, (C2-C8)alquinila, ou (C2-C8) alquinila substituída. Em outro aspecto desta modalidade, R6 de Fórmula II é CN, metila, etenila ou etinila. Em outro aspecto desta modalidade, R6 de Fórmula II é CN. Em outro aspecto desta modalidade, R6 de Fórmula II é metila. Em outro aspecto desta modalidade, R5 de Fórmula II é H. Em outro aspecto desta modalidade, R2 de Fórmula II é ORa. Em outro aspecto desta modalidade, R2 de Fórmula II é OH. Em outro aspecto desta modalidade, R2 de Fórmula II é F. Em outro aspecto desta modalidade, R3 de Fórmula II é ORa. Em outro aspecto desta modalidade, R3de Fórmula II é OH, -OC(=O)R11, ou -OC(=O)OR11. Em outro aspecto desta modalidade, R3 de Fórmula II é OH. Em outro aspecto desta modalidade, R8 de Fórmula II é NR11R12. Em outro aspecto desta modalidade, R8 de Fórmula II é NH2. Em outro aspecto desta modalidade, R8 de Fórmula II é OR11. Em outro aspecto desta modalidade, R8 de Fórmula II é OH. Em outro aspecto desta modalidade, R9 de Fórmula II é H. Em outro aspecto desta modalidade, R9 de Fórmula II é NR11R12. Em outro aspecto desta modalidade, R9 de Fórmula II é NH2. Em outro aspecto desta modalidade, R7 de Fórmula II é H, -C(=O)R11, -C(=O)OR11 ou

[00146] Em outro aspecto desta modalidade, R7 de Fórmula II é H. Em outro aspecto desta modalidade, R7 de Fórmula II é

[00147] Em outra modalidade do método de tratamento de uma infecção por Coronaviridae compreendendo administrar um composto de Fórmula II, a infecção por Coronaviridae é causada por um vírus Coronaviridae. Em outro aspecto desta modalidade, o vírus Coronaviridae é um vírus MERS ou SARS virus. Em outro aspecto desta modalidade, o vírus Coronaviridae é um vírus MERS. Em outro aspecto desta modalidade, o vírus Coronaviridae é um vírus SARS. Em outro aspecto desta modalidade, o vírus Coronaviridae é causado por um vírus MERS causada por uma cepa selecionada a partir de cepas conhecidas.

[00148] Em outra modalidade, é fornecido um método de tratamento de uma infecção por Coronaviridae em um humano em necessidade do mesmo compreendendo administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula I representado pela Fórmula III:

Fórmula III ou um sal farmaceuticamente aceitável ou éster, do mesmo; em que: R6, R7, R8 e R9 são como definido acima for Fórmula II; cada R2 é ORa ou F; e cada R3 é ORa.

[00149] Em uma modalidade do método de tratamento de uma infecção por Coronaviridae compreendendo administrar um composto de Fórmula III, R6 de Fórmula III é N3, CN, halogênio, (C1-C8)alquila, (C1-C8)alquila substituída, (C2-C8)alquenila, (C2-C8)alquenila substituída, (C2-C8)alquinila, ou (C2-C8)alquinila substituída. Em outro aspecto desta modalidade, R6 de Fórmula III é CN, metila, etenila, ou etinila. Em outro aspecto desta modalidade, R6 de Fórmula III é CN. Em outro aspecto desta modalidade, R6 de Fórmula III é metila. Em outro aspecto desta modalidade, R2 de Fórmula III é ORa. Em outro aspecto desta modalidade, R2 de Fórmula III é OH. Em outro aspecto desta modalidade, R2 de Fórmula III é F. Em outro aspecto desta modalidade, R3 de Fórmula III é OH, -OC(=O)R11, ou -OC(=O)OR11. Em outro aspecto desta modalidade, R3 de Fórmula III é OH. Em outro aspecto desta modalidade, R8 de Fórmula III é NR11R12. Em outro aspecto desta modalidade, R8 de Fórmula III é NH2. Em outro aspecto desta modalidade, R8 de Fórmula III é OR11. Em outro aspecto desta modalidade, R8 de Fórmula III é OH. Em outro aspecto desta modalidade, R9 de Fórmula III é H. Em outro aspecto desta modalidade, R9 de Fórmula III é NR11R12. Em outro aspecto desta modalidade, R9 de Fórmula III é NH2. Em outro aspecto desta modalidade, R7 de Fórmula III é H, -C(=O)R11, - C(=O)OR11 ou

[00150] Em outro aspecto desta modalidade, R7 de Fórmula III é H. Em outro aspecto desta modalidade, R7 de Fórmula III é

[00151] Em outra modalidade do método de tratamento de uma infecção por Coronaviridae compreendendo administrar um composto de Fórmula III, R6 de Fórmula III é N3, CN, halogênio, (C1-C8)alquila, (C1-C8)alquila substituída, (C2-C8)alquenila, (C2-C8)alquenila substituída, (C2-C8)alquinila, ou (C2-C8)alquinila substituída e R8 é NH2. Em outro aspecto desta modalidade, R6 de Fórmula III é CN, metila, etenila ou etinila. Em outro aspecto desta modalidade, R6 de Fórmula III é CN. Em outro aspecto desta modalidade, R6 de Fórmula III é metila. Em outro aspecto desta modalidade, R2 de Fórmula III é ORa. Em outro aspecto desta modalidade, R2 de Fórmula III é OH, -OC(=O)R11, ou -OC(=O)OR11. Em outro aspecto desta modalidade, R2 de Fórmula III é OH. Em outro aspecto desta modalidade, R2 de Fórmula III é F. Em outro aspecto desta modalidade, R3 de Fórmula III é OH, -OC(=O)R11, ou -OC(=O)OR11. Em outro aspecto desta modalidade, R3 de Fórmula III é OH. Em outro aspecto desta modalidade, R9 de Fórmula III é H. Em outro aspecto desta modalidade, R9 de Fórmula III é NR11R12. Em outro aspecto desta modalidade, R9 de Fórmula III é NH2. Em outro aspecto desta modalidade, R7 de Fórmula III é H, -C(=O)R11, - C(=O)OR11 ou

[00152] Em outro aspecto desta modalidade, R7 de Fórmula III é H. Em outro aspecto desta modalidade, R7 de Fórmula III é

[00153] Em outra modalidade do método de tratamento de uma infecção por Coronaviridae compreendendo administrar um composto de Fórmula III, R6 de Fórmula III é CN, metila, etenila ou etinila, R8 é NH2 e R9 é H. Em outro aspecto desta modalidade, R6 de Fórmula III é CN. Em outro aspecto desta modalidade, R6 de Fórmula III é metila. Em outro aspecto desta modalidade, R2 de Fórmula III é ORa. Em outro aspecto desta modalidade, R2 de Fórmula III é OH, -OC(=O)R11, ou -OC(=O)OR11. Em outro aspecto desta modalidade, R2 de Fórmula III é OH. Em outro aspecto desta modalidade, R2 de Fórmula III é F. Em outro aspecto desta modalidade, R3 de Fórmula III é OH, -OC(=O)R11, ou - OC(=O)OR11. Em outro aspecto desta modalidade, R3 de Fórmula III é OH. Em outro aspecto desta modalidade, R7 de Fórmula III é H, -C(=O)R11, -C(=O)OR11 ou

[00154] Em outro aspecto desta modalidade, R7 de Fórmula III é H. Em outro aspecto desta modalidade, R7 de Fórmula III é

[00155] Em outra modalidade do método de tratamento de uma infecção por Coronaviridae compreendendo administrar um composto de Fórmula III, a infecção por Coronaviridae é causada por um vírus Coronaviridae. Em outro aspecto desta modalidade, o vírus Coronaviridae é um vírus MERS ou SARS. Em outro aspecto desta modalidade, o vírus Coronaviridae é um vírus MERS. Em outro aspecto desta modalidade, o vírus Coronaviridae é um vírus SARS. Em outro aspecto desta modalidade, o vírus Coronaviridae é causado por um vírus MERS causado por uma cepa selecionada a partir de cepas conhecidas.

[00156] Em outra modalidade, é fornecido um método de tratamento de uma infecção por Coronaviridae em um humano em necessidade do mesmo compreendendo administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula I representado pela Fórmula IV:

[00157] Em outra modalidade do método de tratamento de uma infecção por Coronaviridae compreendendo administrar um composto de Fórmula IV, R7 pode ser H. Em outra modalidade do método de tratamento de uma infecção por Coronaviridae compreendendo administrar um composto de Fórmula IV, R7 é selecionado a partir do grupo de a), b), ou c) como descrito para a Fórmula I.

[00158] Em outra modalidade do método de tratamento de uma infecção por Coronaviridae compreendendo administrar um composto de Fórmula IV, R7 é ;

em que Z1 e Z2 são cada qual, independentemente, um grupo tendo a estrutura:

e Z3 é Z5.

[00159] Em outra modalidade do método de tratamento de uma infecção por Coronaviridae compreendendo administrar um composto de Fórmula IV, R7 é

em que Z1 e Z2 são cada qual, independentemente, um grupo tendo a estrutura:

e Z3 é Z5.

[00160] Em outra modalidade do método de tratamento de uma infecção por Coronaviridae compreendendo administrar um composto de Fórmula IV, R7

[00161] Em algumas modalidades, Re1 e Re2 podem cada qual independentemente ser H, C1-C6 alquila ou benzila. Em algumas modalidades, Re1 pode ser H, C1-C6 alquila ou benzila, e Re2 pode ser H ou C1-C6 alquila. Em algumas modalidades, Re1 e Re2 podem cada qual independentemente ser H ou C1-C6 alquila. Em algumas modalidades, Re1 e Re2 podem cada qual independentemente ser H ou benzila. Em algumas modalidades, Re1 pode ser H, metila ou benzila, e Re2 pode ser H ou metila. Em algumas modalidades, Re1 pode ser H ou metila, e Re2 pode ser H ou metila. Em algumas modalidades, Re1 pode ser metila, e Re2 pode ser H ou metila. Em algumas modalidades, Re1 pode ser H ou benzila, e Re2 pode ser H ou metila.

[00162] Em outra modalidade do método de tratamento de uma infecção por Coronaviridae compreendendo administrar um composto de Fórmula IV, R7 é

[00163] Em outra modalidade do método de tratamento de uma infecção por Coronaviridae compreendendo administrar um composto de Fórmula IV, R7

[00164] Em outra modalidade do método de tratamento de uma infecção por Coronaviridae compreendendo administrar um composto de Fórmula IV, R7

[00165] em que Rf é selecionado a partir do grupo de H, C1-C8 alquila, benzila, C3-C6 cicloalquila e -CH2-C3-C6 cicloalquila. Em outra modalidade de um composto de Fórmula IV, Rf é C1-C8 alquila. Em outra modalidade de um composto de Fórmula IV, Rf é 2-etilbutila.

[00166] Em outra modalidade do método de tratamento de uma infecção por Coronaviridae compreendendo administrar um composto de Fórmula IV, R7 é

em que: Rf é selecionado a partir de H, C1-C8 alquila, benzila, C3-C6 cicloalquila e - CH2-C3-C6 cicloalquila; e Rg é selecionado a partir de C1-C8 alquila, -O-C1-C8 alquila, benzila, -O- benzila, -CH2-C3-C6 cicloalquila, -O-CH2-C3-C6 cicloalquila e CF3.

[00167] Em outra modalidade do método de tratamento de uma infecção por Coronaviridae compreendendo administrar um composto de Fórmula IV, R7

[00168] Em outra modalidade do método de tratamento de uma infecção por Coronaviridae compreendendo administrar um composto de Fórmula IV, R7 é: ;

[00169] Em outra modalidade do método de tratamento de uma infecção por Coronaviridae compreendendo administrar um composto de Fórmula IV, R7 é selecionado a partir do grupo de:

[00170] Em outra modalidade do método de tratamento de uma infecção por Coronaviridae compreendendo administrar um composto de Fórmula IV, R7

[00171] Em outra modalidade do método de tratamento de uma infecção por Coronaviridae compreendendo administrar um composto de Fórmula IV, Z1 e Z2 pode cada qual:

[00172] Em outra modalidade, é fornecido um método de tratamento de uma infecção por Coronaviridae em um humano em necessidade do mesmo compreendendo administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmulas I-IV, em que R11 ou R12 é independentemente H, (C1- C8)alquila, (C2-C8)alquenila, (C2-C8)alquinila, (C4-C8)carbociclilalquila, arila opcionalmente substituído, heteroarila opcionalmente substituído, -C(=O)(C1- C8)alquila, -S(O)n(C1-C8)alquila ou aril(C1-C8)alquila. Em outra modalidade, R11 e R12 considerados juntamente com um nitrogênio ao qual eles são ambos ligados formam um anel heterocíclico de 3 a 7 membros em que qualquer um átomo de carbono do referido anel heterocíclico pode opcionalmente ser substituído com -O-, -S- ou -NRa-. Portanto, por meio de exemplo e não limitação, a porção -NR11R12 pode ser representado pela the heterociclos:

e similares.

[00173] Em outra modalidade, é fornecido um método de tratamento de uma infecção por Coronaviridae em um humano em necessidade do mesmo compreendendo administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula I-IV, em que cada R3, R4, R5, R6, R11 ou R12 é, independentemente, (C1-C8)alquila, (C2-C8)alquenila, (C2-C8)alquinila ou aril(C1- C8)alquila, em que referido (C1-C8)alquila, (C2-C8)alquenila, (C2-C8)alquinila ou aril(C1-C8)alquila are, independentemente, opcionalmente susbtituído com um ou mais halo, hidróxi, CN, N3, N(Ra)2 ou ORa. Portanto, por meio de exemplo e não limitação, R3, R4, R5, R6, R11 ou R12 representariam porções tais como -CH(NH2)CH3, -CH(OH)CH2CH3, -CH(NH2)CH(CH3)2, -CH2CF3, - (CH2)2CH(N3) CH3, -(CH2)6NH2 e similares.

[00174] Em outra modalidade, é fornecido um método de tratamento de uma infecção por Coronaviridae em um humano em necessidade do mesmo compreendendo administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula I-IV, em que R3, R4, R5, R6, R11 ou R12 é (C1-C8)alquila em que um ou mais dos átomos de carbono não terminais de cada referido (C1- C8)alquila podem ser opcionalmente substituídos com -O-, -S- ou -NRa-. Portanto, por meio de exemplo e não limitação, R3, R4, R5, R6, R11 ou R12 representariam porções tais como -CH2OCH3, -CH2OCH2CH3, -CH2OCH(CH3)2, -CH2SCH3, -(CH2)6OCH3, - (CH2)6N(CH3)2 e similares.

[00175] Em outra modalidade do método de tratamento de uma infecção por Coronaviridae compreendendo administrar um composto de Fórmula I, o composto é

ou um sal farmaceuticamente aceitável ou éster do mesmo.

[00176] Em outra modalidade do método de tratamento de uma infecção por Coronaviridae compreendendo administrar um composto de Fórmula I, o composto é

ou um sal farmaceuticamente aceitável ou éster do mesmo.

[00177] Em outra modalidade do método de tratamento de uma infecção por Coronaviridae compreendendo administrar um composto de Fórmula IV, o composto é:

ou um sal farmaceuticamente aceitável ou éster do mesmo.

[00178] Em outra modalidade do método de tratamento de uma infecção por Coronaviridae compreendendo administrar um composto de Fórmula IV, o composto é:

[00179] Em outra modalidade do método de tratamento de uma infecção por Coronaviridae compreendendo administrar um composto de Fórmula I-IV, o composto é

ou um sal farmaceuticamente aceitável ou éster do mesmo.

[00180] Em outra modalidade do método de tratamento de uma infecção por Coronaviridae compreendendo administrar um composto de Fórmula I-IV, o composto é

ou um sal farmaceuticamente aceitável ou éster do mesmo.

[00181] Métodos de tratamento aqui incluem aqueles para o tratamento de infecções por coronavirus em um humano, incluindo infections causada por alfa coronavírus 229E (HCoV-229E) e NL63 (HCoV-NL63, New Haven coronavirus), beta coronavírus OC43 (HCoV-OC43), HKU1, SARS-CoV (o coronavírus responsável por Síndrome Respiratória Aguda Severa ou SARS) e MERS-CoV (o coronavírus responsável por Síndrome Respiratória do Oriente Médio), anteriormente conhecido como coronavírus 2012 Novo e HCoV-EMC.

[00182] Nomes de compostos da presente invenção são fornecidos usando software ACD/Name para nomeação de compostos químicos (Advanced Chemistry Development, Inc., Toronto, Canadá). Outros compostos ou radicais podem ser nomeados com nomes comuns ou nomes sistemáticos ou não sistemáticos. A nomeação e a numeração dos compostos da invenção são ilustradas como composto de Fórmula I representativo:

[00183] que é nomeado 2-((((2R,3S,4R,5R)-5-(4-aminopirrolo[1,2- f][1,2,4]triazin-7-il)-5-ciano-3,4-di-hidroxitetra-hidrofuran-2- il)metóxi)(fenóxi)fosforilamino)propanoato de (2S)-2-etilbutila. Outros compostos da presente invenção incluem:

[00184] que é nomeado 2-(((S)-(((2R,3S,4R,5R)-5-(4-aminopirrolo[2,1- f][1,2,4]triazin-7-il)-5-ciano-3,4-di-hidroxitetra-hidrofuran-2- il)metóxi)(fenóxi)fosforil)amino)propanoato de (S)-2-etilbutila e

[00185] que é nomeado 2-(((R)-(((2R,3S,4R,5R)-5-(4-aminopirrolo[2,1- f][1,2,4]triazin-7-il)-5-ciano-3,4-di-hidroxitetra-hidrofuran-2- il)metóxi)(fenóxi)fosforil)amino)propanoato de (S)-2-etilbutila.

[00186] Qualquer referência aos compostos da invenção descritos aqui também inclui uma referência a um sal fisiologicamente aceitável dos mesmos. Exemplos de sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos da invenção incluem sais derivados de uma base apropriada, tal como um metal alcalino terroso ou um alcalino terroso (por exemplo, Na+, Li+, K+, Ca+2 e Mg+2), amônio e NR4+ (em que R é definido aqui). Sais fisiologicamente aceitáveis de um átomo de nitrogênio ou um grupo amino incluem (a) sais de adição de ácido formados com ácidos inorgânicos, por exemplo, ácido hidroclórico, ácido hidrobrômico, ácido sulfúrico, ácido sulfâmico, ácido fosfórico, ácido nítrico e similares; (b) sais formados com ácidos orgânicos tais como, por exemplo, ácido acético, ácido oxálico, ácido tartárico, ácido succínico, ácido maléico, ácido fumárico, ácido glucônico, ácido cítrico, ácido málico, ácido ascórbico, ácido benzoico, ácido isetiônico, ácido lactobiônco, ácido tânico, ácido palmítico, ácido algínico, ácido poliglutâmico, ácido naftalenossulfônico, ácido metanossulfônico, ácido p-toluenossulfônico, ácido benzenossulfônico, ácido naftalenodissulfônico, ácido poligalacturônico, ácidomalônico, ácido sulfossalicílico, ácido glicolico, ácido 2-hidróxi-3-naftoato, pamoato, ácido salicílico, ácido esteárico, ftálico, mandélico, ácido láctico, ácido etanossulfônico, lisina, arginina, ácido glutâmico, glicina, serina, treonina, alanina, isoleucina, leucina e similares; e (c) sais formados de ânions elementares, por exemplo, cloro, bromo e iodo. Sais fisiologicamente aceitáveis de um composto de um grupo hidróxi incluem o ânion do referido composto em combinação com um cátion adequado tal como Na+ e NR4+.

[00187] Um composto de Fórmula I-IV e seus sais farmaceuticamente aceitáveis podem existir como diferentes polimorfos ou pseudopolimorfos. Como usado aqui, polimorfismo cristalino significa a capacidade de um composto cristalino existir em diferentes estruturas cristalinas. O polimorfismo cristalino pode resultar de diferenças em embalagem de cristal (polimorfismo de cristal) ou diferenças na embalagem entre diferentes conformadores da mesma molécula (polimorfismo conformacional). Como usado aqui, pseudopolimorfismo cristalino significa a capacidade de um hidrato ou solvato de um composto existir em diferentes estruturas cristalinas. Os pseudopolimorfos da presente invenção podem existir devido às diferenças na embalagem de cristal (pseudopolimorfismo de embalagem) ou devido às diferenças em embalagem entre diferentes conformadores da mesma molécula (pseudopolimorfismo conformacional). A presente invenção compreende todos os polimorfos e pseudopolimorfos dos compostos de Fórmula I-III e seus sais farmaceuticamente aceitáveis.

[00188] Um composto de Fórmula I-IV e seus sais farmaceuticamente aceitáveis podem também existir como um sólido amorfo. Como usado aqui, um sólido amorfo é um sólido em que não existe uma ordem de longo alcance das posições dos átomos no sólido. Esta definição aplica-se também quando o tamanho do cristal é de dois nanômetros ou menos. Aditivos, incluindo solventes, podem ser usados para criar as formas amorfas da presente invenção. A presente invenção compreende todas as formas amorfas dos compostos de Fórmula I-IV e seus sais farmaceuticamente aceitáveis.

[00189] Para uso terapêutico, os sais de ingredientes ativos dos compostos da invenção serão fisiologicamente aceitáveis, isto é, eles serão derivados de uma base ou ácido fisiologicamente aceitável. Entretanto, sais de ácidos ou bases que não são fisiologicamente aceitáveis podem também encontrar uso, por exemplo, na preparação ou purificação de um composto fisiologicamente aceitável. Todos os sais, sejam ou não derivados formam uma base ou ácido fisiologicamente aceitável, estão no escopo da presente invenção.

[00190] Finalmente, deve-se entender que as composições aqui compreendem os compostos da invenção em sua forma não ionizada, bem como, zwitteriônica e combinações com quantidades estequiométricas de água como em hidratos.

[00191] Deve-se observar que todos os enantiômeros, diastereômeros e misturas racêmicas, tautômeros, polimorfos, pseudopolimorfos de compostos dentro do escopo de Fórmula I-IV e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos são abrangidos pela presente invenção. Todas as misturas de tais enantiômeros e diastereômeros estão dentro do escopo da presente invenção.

[00192] Os compostos da invenção, exemplificados por Fórmula I-IV podem ter centros quirais, por exemplo, átomos de fósforo ou carbono qurais. Os compostos da invenção, desse modo, incluem misturas racêmicas de todos os estereoisômeros, incluindo enantiômeros, diastereômeros e atropisômeros. Além disso, os compostos da invenção incluem isômeros enriquecidos ou óticos resolvidos em qualquer um ou todos os átomos assimétricos, quirais. Em outras palavras, os centros quirais evidentes a partir das descrições são fornecidos como os isômeros quirais ou misturas racêmicas. Tanto as misturas racêmicas quanto diastereoméricas, bem como isômeros óticos individuais isolados ou sintetizados, substancialmente livres de seus parceiros enantioméricos ou diastereoméricos, estão todos dentro do escopo da invenção. As misturas racêmicas são separadas em seus isômeros substancial e oticamente puros, individuais através de técnicas bem conhecidas tal como, por exemplo, a separação de sais diastereoméricos formados com adjuntos oticamente ativos, por exemplo, ácidos ou bases seguidos por conversão de volta para as substâncias oticamente ativas. Na maioria dos casos, o isômero ótico desejado é sintetizado por meio de reações estereoespecíficas, começando com o estereoisômero apropriado do material de partida desejado.

[00193] Convenções e definições estereoquímicas usadas aqui geralmente seguem S. P. Parker, Ed., McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (1984) McGraw-Hill Book Company, Nova Iorque; e Eliel, E. e Wilen, S., Stereochemistry of Organic Compounds (1994) John Wiley & Sons, Inc., Nova Iorque. Muitos compostos orgânicos existem em formas oticamente ativas, isto é, eles têm a capacidade de girar o plano da luz polarizada no plano. Na descrição de um composto oticamente ativo, os prefixos D e L ou R e S são usados para denotar a configuração absoluta da molécula acerca de seu centro(s) quiral. Os prefixos d e l, D e L, ou (+) e (-) são empregados para designer o sinal de rotação de luz polarizada no plano pelo composto, com S, (- ), ou 1 significando que o composto é levogiratório, enquanto um composto prefixado com R, (+), ou d é dextrogiratório. Para uma determinada estrutura química, estes estereoisômeros são idênticos, exceto que eles são imagens refletidas uns dos outros. Um estereoisômero específico pode também ser referido como um enantiômero e uma mistura de tais isômeros é frequentemente chamada de uma mistura enantiomérica. Uma mistura de 50:50 de enantiômeros é referida como uma mistura racêmica ou um racemato, que pode ocorrer onde não houve estereosseleção ou estereoespecificidade em um processo ou reação química. Os termos "mistura racêmica" e "racemato" referem-se a uma mistura equimolar de duas espécies enantioméricas, destituída de atividade ótica.

[00194] Os compostos da invenção podem também existir como isômeros tautoméricos em certos casos. Embora apenas uma estrutura de ressonância deslocalizada possa ser descrita, todas as formas são contempladas dentro do escopo da invenção. Por exemplo, tautômeros de eno-amina podem existir com relação aos sistemas de purina, pirimidina, imidazol, guanidina, amidina e tetrazol e todas as suas possíveis formas tautoméricas estão no escopo da invenção.

[00195] Qualquer fórmula ou estrutura fornecida aqui, incluindo os compostos de Fórmula I, é também destinada representar formas não rotuladas, bem como formas isotopicamente rotuladas dos compostos. Compostos isotopicamente rotulados têm estruturas descirtas pelas fórmulas fornecidas aqui, exceto que um ou mais átomos são substituídos por um átomo tendo uma massa atômica ou número de massa selecionado. Exemplos de isótopos que podem ser incorporados nos compostos da invenção incluem isótopos de hidrogênio, carbono, nitrogênio, oxigênio, fósforo, flúor e cloro, 2 3 11 13 14 15 tas como, por m n o m ta os a ( eut ro, ), (tr c o)18F, 31P, 32P, 35S, 36Cl e 125I. Vários compostos isotopicamente rotulados da presente invenção, por exemplo, aqueles em que isótopos radioativos tais como 3H, 13C e 14C são incorporados. Tais compostos isotopicamente rotulados podem ser úteis em estudos metabólicos, estudos de reação cinética, técnicas de detecção ou imageamento, tais como tomografia de emissão de posítron (PET) ou tomografia computadorizada de emissão de foto simples (SPECT) incluindo ensaios de distribuição de tecido de fármaco ou substrato ou em tratamento radioativo de pacientes. n hidrogênios ligados a um átomo de carbono é/são substituídos por deutério, em que n é o número de hidrogênios na molécula. Tais compostos exibem resistência aumentada ao metabolismo e são, desse modo, úteis para aumentar a meia vida de qualquer composto de Fórmula I quando administrado a um mamífero, particularmente um humano. Veja, por exemplo, Foster, "Deuterium Isotope Effects in Studies of Drug Metabolism", Trends Pharmacol. Sci. 5(12):524-527 (1984). Tais compostos são sintetizados métodos conhecidos na técnica, por exemplo, empregando materiais de partida, em que um ou mais hidrogênios foram substituídos por deutério.

[00196] A descrição também inclui compostos de Fórmula I, em que de 1 a n hidrogênios ligados a um átomo de carbono é/são substituídos por deutério, em que n é o número de hidrogênios na molécula. Tais compostos exibem resistência aumentada ao metabolismo e são, desse modo, úteis para aumentar a meia vida de qualquer composto de Fórmula I quando administrado a um mamífero, particularmente um humano. Veja, por exemplo, Foster, "Deuterium Isotope Effects in Studies of Drug Metabolism", Trends Pharmacol. Sci. 5(12):524-527 (1984). Tais compostos são sintetizados métodos conhecidos na técnica, por exemplo, empregando materiais de partida, em que um ou mais hidrogênios foram substituídos por deutério.

[00197] Deutério rotulado ou compostos terapêuticos substituídos da invenção podem ter propriedades melhoradas de DMPK (farmacocinéticos e metabolismo de fármaco), relacionando-se à distribuição, metabolismo e excreção (ADME). A substituição com isótopos mais pesados tal como deutério podem fornecer certas vantagens terapêuticas resultantes de maior estabilidade metabólica, por exemplo, meia vida in vivo aumentada, requesitos de dosagem reduzidos e/ou uma melhora no índice terapêutico. Um composto rotulado por 18F pode ser útil para estudos de PET ou SPECT. Compostos isotopicamente rotulados desta invenção e pró-fármacos dos mesmos podem geralmente ser preparados realizando os procedimentos descritos nos esquemas ou nos exemplos e preparações descritas abaixo substituindo um reagente isotopicamente rotulado facilmente disponível por um reagente não isotopicamente rotulado. É entendido que o deutério neste contexto é considerado como um substituinte no composto de Fórmula I.

[00198] A concentração de tal isótopo mais pesado, especificamente deutério, pode ser definida como um fator de enriquecimento isotópico. Nos compostos desta invenção, qualquer átomo não especificamente designado como um isótopo particular destina-se representar qualquer isótopo estável daquele átomo. A menos que de outro modo estabelecido, quando a posição é designada especificamente como "H" ou "hidrogênio", a posição é entendida ter hidrogênio em sua composição isotópica de abundância natural. Consequentemente, nos compostos desta invenção qualquer átomo especificamente designado como um deutério (D) destina-se representar deutério.

[00199] Quando um composto descrito aqui é substituído com mais do que um dos mesmos grupos designados, por exemplo, "R" ou "R1", em seguida será entendido que os grupos podem ser iguais ou diferentes, isto é, cada grupo é independentemente selecionado. As linhas onduladas, -www, indicam o sítio de conexões de ligação covalente às estruturas, grupos, porções, ou átomos adjacentes.

[00200] Substituintes selecionados compreendendo os compostos de Fórmula I-IV estão presentes em um grau recursivo. Neste contexto, "substituinte recursivo" significa que um substituinte pode recitar outra instância de si mesmo. Por causa da natureza recursiva de tais substituintes, teoricamente, um grande número de compostos pode estar presente em qualquer modalidade fornecida. Por exemplo, Rx compreende um substituinte de Ry. Ry pode ser R. R pode ser Z3. Z3 pode ser Z4 e Z4 pode ser R ou compreende substituintes que contêm Ry. Alternativamente, Z3 pode ser Z5 que pode compreender substituintes que contêm Ry. Alguém versado na técnica de química medicinal entende que o número total de tais substituintes é razoavelmente limitado pelas propriedades desejadas do composto pretendido. Tais propriedades incluem, por meio de exemplo e não limitação, propriedades físicas tais como peso molecular, solubilidade ou log P, propriedades de aplicação tal como atividade contra o alvo pretendido, e propriedades práticas tal como facilidade de síntese.

[00201] Por meio de exemplo e não limitação, Z3 e Ry são substituintes recursivos em certas modalidades. Tipicamente, cada substituinte recursivo pode independentemente ocorrer 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1, ou 0, vezes em uma determinada modalidade. Mais tipicamente, cada substituinte recursivo pode independentemente ocorrer 12 ou menos vezes em uma determinada modalidade. Ainda mais tipicamente, cada substituinte recursivo pode independentemente ocorrer 3 ou menos vezes em uma determinada modalidade. Por exemplo, Z3 ocorrerá de 0 a 8 vezes, Ry ocorrerá de 0 a 6 vezes em uma determinada modalidade. Ainda mais tipicamente, Z3 ocorrerá de 0 a 6 vezes e Ry ocorrerá de 0 a 4 vezes em uma determinada modalidade.

[00202] Substituintes recursivos são um aspecto pretendido da invenção. Alguém versado na técnica de química médica entende a versatilidade de tais substituintes. Na medida em que os substituintes recursivos estão presentes em uma modalidade da invenção, o número total será determinado como acima mencionado.

[00203] Os compostos da presente invenção podem ser preparados por métodos conhecidos por alguém versado na técnica. Por exemplo, os compostos da presente invenção podem ser preparados de acordo com os métodos descritos na Patente dos Estados Unidos N° 8.008.264 e Publicação de Pedido dos Estados unidos N° US 2012/0027752.

Formas Substituídas dos Compostos

[00204] Os compostos da Fórmula I-IV podem compreender um grupo fosfato como R7, R7 é selecionado a partir do grupo de 11 11 11 12 11 11 H, -C(=O)R , -C(=O)OR , -C(=O)NR R , -C(=O)SR , -S(O)R , - S(O)2R11, -S(O)(OR11), -S(O)2(OR11), -SO2NR11R12 em que: cada R11 ou R12 é independentemente H, (C1-C8)alquila, (C2-C8)alquenila, (C2-C8)alquinila, (C4-C8)carbociclilalquila, arila opcionalmente substituído, heteroarila opcionalmente substituído, -C(=O)(C1-C8)alquila, -S(O)n(C1-C8)alquila ou aril(C1-C8)alquila; ou R11 e R12 considerados juntamente com um nitrogênio ao qual eles são ambos ligados formam um anel heterocíclico de 3 a 7 membros em que qualquer um átomo de carbono do referido anel heterocíclico pode opcionalmente ser substituído com -O-, -S- ou -NRa-; cada Ra é independentemente H, (C1-C8)alquila, (C2-C8)alquenila, (C2- C8)alquinila, aril(C1-C8)alquila, (C4-C8)carbociclilalquila, -C(=O)R, -C(=O)OR, -C(=O)NR2, -C(=O)SR, -S(O)R, - S(O)2R, -S(O)(OR), -S(O)2(OR), ou -SO2NR2; em que cada R é independentemente H, (C1-C8) alquila, (C1-C8) alquila substituído, (C2-C8)alquenila, (C2-C8) alquenila substituído, (C2-C8) alquinila, (C2-C8) alquinila substituído, C6-C20 arila, C6-C20 arila substituído, C2-C20 heterociclila, C2-C20 heterociclila substituído, arilalquila ou arilalquila substituído; e em que cada (C1-C8)alquila, (C2-C8)alquenila, (C2-C8)alquinila ou aril(C1- C8)alquila de cada R11 ou R12 é, independentemente, opcionalmente susbtituído com um ou mais halo, hidróxi, CN, N3, N(Ra)2 ou ORa; e em que um ou mais dos átomos de carbono não terminais de cada referido (C1-C8)alquila podem ser opcionalmente substituídos com -O-, -S- ou -NRa-,

em que: Rc é selecionado a partir de fenila, 1-naftila, 2-naftila,

Rd é H ou CH3; Re1 e Re2 são cada qual independentemente H, C1-C6 alquila ou benzila; Rf é selecionado a partir de H, C1-C8 alquila, benzila, C3-C6 cicloalquila, e - CH2-C3-C6 cicloalquila; Rg é selecionado a partir de C1-C8 alquila, -O-C1-C8 alquila, benzila, -O- benzila, -CH2-C3-C6 cicloalquila, -O-CH2-C3-C6 cicloalquila e CF3; e n' é selecionado a partir de 1, 2, 3 e 4; e d) um grupo da fórmula:

em que Q é O, S, NR, +N(O)(R), N(OR), +N(O)(OR), ou N-NR2; Z1 e Z2, quando considerados juntamente, são -Q1(C(Ry)2)3Q1-; em que: cada Q1 é independentemente O, S, ou NR; e cada Ry é independentemente H, F, Cl, Br, I, OH, R, -C(=Q2)R, -C(=Q2)OR, -C(=Q2)N(R)2, -N(R)2, -+N(R)3, -SR, -S(O)R, -S(O)2R, -S(O)( OR), -S(O)2(OR), -OC(=Q2)R, -OC(=Q2)OR, -OC(=Q2)(N(R)2), -SC(=Q2)R, -SC(=Q2)OR , -SC(=Q2)(N(R)2), -N(R)C(=Q2)R, -N(R)C(=Q2)OR, -N(R)C(=Q2)N(R)2, -SO2NR2, -CN, -N3, -NO2, -OR, ou Z3; ou quando considerados juntamente, dois Ry no mesmo átomo de carbono formam um anel carbocíclico de 3 a 7 átomos de carbono; cada Q2 é independentemente, O, S, NR, +N(O)(R), N(OR), +N(O)(OR), ou N-NR2;ou Z1 e Z2 são cada qual, independentemente, um grupo da Fórmula Ia:

em que: cada M1a, M1c e M1d é independentemente 0 ou 1; M12c é 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ou 12; Z3 é Z4 ou Z5; Z4 é R, -C(Q2)Ry, -C(Q2)Z5, -SO2Ry, ou -SO2Z5; e Z5 é um carbociclo ou um heterociclo em que Z5 é independentemente substituído com 0 a 3 grupos Ry.

[00205] Carbociclos Z5 e heterociclos Z5 podem ser independentemente substituídos com 0 a 3 grupos Ry. Z5 pode ser um anel aromático saturado, saturado ou insaturado compreendendo um carbociclo ou heterociclo mono ou bicíclico. Z5 pode ter de 3 a 10 átomos de anel, por exemplo, 3 a 7 átomos de anel. Os anéis Z5 são saturados quando contendo 3 átomos de anel, saturados ou mono saturados quando contendo 4 átomos de anel, saturados, ou monoou di-insaturados quando contendo 5 átomos de anel, e saturados, mono- ou di-insaturados, ou aromáticos quando contendo 6 átomos de anel.

[00206] Um heterociclo Z5 pode ser um monociclo tendo de 3 a 7 membros de anel (2 a 6 átomos de carbono e 1 a 3 heteroátomos selecionados a partir de N, O, P e S) ou um biciclo tendo de 7 a 10 membros de anel (4 a 9 átomos de carbono e 1 a 3 heteroátomos selecionados a partir de N, O, P e S). Z5 monociclos heterocíclicos podem ter de 3 a 6 átomos de anel (2 a 5 átomos de carbono e 1 a 2 heteroátomos selecionados a partir de N, O e S); ou 5 ou 6 átomos de anel (3 a 5 átomos de carbono e 1 a 2 heteroátomos selecionados a partir de N e S). Biciclos heterocíclicos Z5 têm de 7 a 10 átomos de anel (6 a 9 átomos de carbono e 1 a 2 heteroátomos selecionados a partir de N, O e S) dispostos como um sistema de biciclo [4,5], [5,5], [5,6] ou [6,6]; ou 9 a 10 átomos de anel (8 a 9 átomos de carbono e 1 a 2 heteroátomos selecionado a partir de N e S) dispostos como um sistema biciclo [5,6] ou [6,6]. O heterociclo Z5 pode estar ligado a Q2 através de um carbono, nitrogênio, enxofre ou outro átomo por uma ligação covalente estável.

[00207] Heterociclos Z5 incluem, por exemplo, isômeros de piridila, di- hidropiridila, piperidina, piridazinila, pirimidinila, pirazinila, s-triazinila, oxazolila, imidazolila, tiazolila, isoxazolila, pirazolila, isotiazolila, furanila, tiofuranila, tienila e pirrolila. Z5 também inclui, porém não está limitado a exemplos tais como:

[00208] Carbociclos e heterociclos Z5 podem ser independentemente substituídos com 0 a 3 grupos R, como definido acima. Por exemplo, carbociclos Z5 substituídos incluem:

[00209] Exemplos de carbociclos de fenila substituídos incluem:

[00210] Em outra modalidade, Z5 dos compostos de Fórmula I-IV é um carbociclo ou um heterociclo em que Z5 é independentemente substituído com 0 a 3 grupos Rz, em que cada Rz é independentemente H, F, Cl, Br, I, OH, R, -C(=Q2)R, -C(=Q2)OR, -C(=Q2)N(R)2, -N(R)2, -+N(R)3, -SR, -S(O)R, -S(O)2R, -S(O)(OR), -S(O)2(OR), 1 2 2 22 2 OC(=Q )R, -OC(=Q )OR, -OC(=Q )(N(R)2), -SC(=Q )R, -SC(=Q )OR, -SC(=Q )(N(R)2), -N(R)C(=Q2)R, -N(R)C(=Q2)OR, -N(R)C(=Q2)N(R)2, -SO2NR2, -CN, -N3, -NO2 ou -OR.

[00211] Modalidades de

de compostos de Fórmula I-IV incluem subestruturas tais como:

[00212] em que cada Q3b é, independentemente, O ou N(R). Em outro aspecto desta modalidade, cada Q3b é O e cada Rx é independentemente:

[00213] em que M12c é 1, 2 ou 3 e cada Q3 é independentemente uma ligação, O, CR2, ou S. Em outro aspecto desta modalidade, um Q3b-Rx é NH(R) e o outro Q3b-Rx é O-Rx em que Rx é:

[00214] em que M12c é 2. Em outro aspecto desta modalidade, cada Q3b é O e cada Rx é independentemente:

[00215] em que M12c é 2. Em outro aspecto desta modalidade, cada Q3b é O e cada Rx é independentemente:

em que M12c é 1 e Q3 é uma ligação, O, ou CR2.

[00216] Outras modalidades de

de compostos de Fórmulas I-IV incluem subestruturas tal como:

[00217] em que cada Q3 é, independentemente, O ou N(R). Em outro aspecto desta modalidade, cada Q3 é O. Em outro aspecto desta modalidade, a subestrutura é:

em que Ry é Z5 como definido aqui.

[00218] Outra modalidade de

de Fórmula I-IV inclui as subestruturas:

em que cada Q2c é, independentemente, O, N(Ry) ou S.

[00219] Outra modalidade de

inclui as subestruturas em que um de Z1 ou Z2 juntamente com qualquer um de R3 ou R4 é -Q3- e o outro de Z1 ou Z2 é Fórmula Ia. Tal modalidade é representada por um composto de Fórmula Ib selecionado a partir de:

Fórmula Ib

[00220] Em outro aspecto da modalidade de Fórmula Ib, cada Q e Q3 é O. Em outro aspecto da modalidade de Fórmula Ib, Z1 ou Z2 é Q3b-Rx; cada Q, Q3 e Q3b é O e Rx é:

[00221] em que M12c é 1, 2 ou 3 e cada Q3 é independentemente uma ligação, O, CR2, ou S. Em outro aspecto da modalidade de Fórmula Ib, Z1 ou Z2 é Q3b-Rx; cada Q, Q3 e Q3b é O e Rx é:

[00222] em que M12c é 2. Em outro aspecto da modalidade de Fórmula Ib, Z1 ou Z2 é Q3b-Rx; cada Q, Q3 e Q3b é O e Rx é:

em que M12c é 1 e Q3 é uma ligação, O ou CR2.

[00223] Outra modalidade de

de compostos de Fórmula I-IV inclui uma subestrutura:

[00224] em que Z5 é um carbociclo tal como fenila ou fenila substituído. Em outro aspecto desta modalidade, a subestrutura é:

[00225] em que Q3b é O ou N(R) e o carbociclo de fenila é substituído com 0 a 3 grupos R. Em outro aspecto desta modalidade da subestrutura, Rxé:

em que M12c é 1, 2 ou 3 e cada Q3 é independentemente uma ligação, O, CR2 ou S.

[00226] Outra modalidade de

de Fórmula I-IV inclui substruturas:

[00227] O carbono quiral do aminoácido e porções de lactone podem ser ou a configuração R ou S ou a mistura racêmica.

[00228] Outra modalidade de

de Fórmula I-IV é subestrutura

em que cada Q3 é, independentemente, -O- ou -NH-. Em outro aspecto desta modalidade, Ry é (C1-C8) alquila, (C1-C8) alquila substituído, (C2-C8) alquenila, (C2-C8) alquenila substituído, (C2-C8) alquinila ou (C2-C8) alquinila substituído. Em outro aspecto desta modalidade, Ry é (C1-C8) alquila, (C1-C8) alquila substituído, (C2-C8) alquenila, (C2-C8) alquenila substituído, (C2-C8) alquinila ou (C2-C8) alquinila substituído; e R é CH3. Em outro aspecto desta modalidade, Ry é (C1-C8) alquila, (C1-C8) alquila substituído, (C2-C8) alquenila, (C2-C8) alquenila substituído, (C2-C8) alquinila ou (C2-C8) alquinila substituído; R é CH3; e cada Q3 é -NH-. Em outro aspecto desta modalidade, Z1 e Z2 são, independentemente, aminoácidos de ocorrência natural ligados por nitrogênio ou ésters de aminoácido de ocorrência natural. Em outro aspecto desta modalidade, Z1 e Z2 são, independentemente, ácidos 2-hidróxi carboxílicos de ocorrência natural ou ésteres de ácido 2-hidróxi carboxílico de ocorrência natural, em que o ácido ou éster é ligado ao P através do grupo 2-hidróxi.

[00229] Outra modalidade de

de Fórmula I-IV é subestrutura:

[00230] Em um aspecto desta modalidade, cada Rx é, independentemente, (C1-C8) alquila. Em outro aspecto desta modalidade, cada Rx é, independentemente, C6-C20 arila ou C6-C20 arila substituída.

[00231] Em uma modalidade preferida,

é selecionado a partir de

[00232] Modalidades de Rx incluem grupos ésteres, carbamatos, carbonatos, tioésteres, amidas, tioamidas e ureias:

Metabólitos dos Compostos da Invenção

[00233] Também inclusos no escopo desta invenção estão os produtos metabólicos in vivo dos compostos descritos aqui, na medida em que tais produtos são novos e não óbvios sobre a técnica anterior. Tais produtos podem resultar, por exemplo, da oxidação, reduçõ, hidrólise, amidação, esterificação e similares do composto administrado, primeiramente devido aos processos enzimáticos. Consequentemente, a invenção inclui novos e não óbvios compostos produzidos por um processo compreendendo contatar um composto desta invenção com um mamífero durante um período de tempo suficiente para produzir um produto metabílico do mesmo. Tais produtos tipicamente são identificados por preparação de um composto radiorrotulado (por exemplo, 14C ou 3H) da invenção, administrando-o parenteralmente em uma dose detectável (por exemplo, maior do que cerca de 0,5 mg/kg) a um animal tal como rato, camundongo, cobaia, macaco, ou ao homem, permitindo tempo suficiente para o metabolismo ocorrer (tipicamente cerca de 30 segundos a 30 horas) e isolar seus produtos de conversão da urina, sangue, ou outras amostras biológicas. Estes produtos são facilmente isolados, visto que eles são rotulados (outros são isolados pelo uso de anticorpos capazes de ligar epítopos sque sobrevivem no metabólito). As estruturas de metabólito são determinadas em modelo convencional, por exemplo, por análise de MS ou RMN. Em geral, a análise de metabólitos é feita da mesma forma como estudos de metabolismo de fármaco convencional bem conhecidos por aqueles versados na técnica. Os produtos de conversão, contanto que eles não sejam de outro modo encontrados in vivo, são úteis no ensaio diagnóstico para dosagem terapêutica dos compostos da invenção mesmo se eles não possuirem nenhuma atividade própria anti Arenaviridae.

[00234] Receitas e métodos para determinar a estabilidade de compostos em secreções gastrointestinais substitutas são conhecidos. Os compostos são definidos aqui como estáveis no trato gastrointestinal, onde menos do que cerca de 50 por cento em mole dos grupos protegidos são deprotegidos em suco gástrico ou intestinal substituto sob incubação durante 1 hora a 37°C. Simplesmente porque os compostos são estáveis ao trato gastrointestinal não significa que eles não podem ser hidrolisáveis in vivo. Os pró-fármacos da invenção tipicamente serão estáveis no sistema digestivo, porém podem ser substancialmente hidrolisáveis no fármaco parental no lúmen digestivo, fígado ou outro órgão metabólico, ou dentro das células em geral.

III. FORMULAÇÕES FARMACÊUTICAS

[00235] Os compostos desta invenção são formulados com veículos e excipientes convencionais, que serão selecionados de acordo com a prática usual. Comprimidos conterão excipientes, deslizantes, aglutinantes e similares. Formulações aquosas são preparadas em forma estéril, e quando destinadas para a liberação por administração diferente de oral, geralmente serão isotônicas. Todas as formulações conterão opcionalmente excipientes tal como aqueles mencionados no "Handbook of Pharmaceutical Excipients" (1986). Excipientes incluem ácido ascórbico e outros antioxidants, agentes quelantes tais como EDTA, carboidratos tais como dextrano, hidroxialquilcelulose, hidroxialquilmetilcelulose, ácido esteárico e similares. O pH das formulações varia de cerca de 3 a cerca de 11, porém é de geralmente cerca de 7 a 10. Em algumas modalidades, o pH das formulações varia de cerca de 2 a cerca de 5, porém é de geralmente de cerca de 3 a 4.

[00236] Enquanto é possível que os ingredientes ativos sejam administrados sozinhos, pode ser preferível apresentá-los como formulações farmacêuticas. As fomulações, tanto para uso veterinário quanto humano da invenção compreendem pelo menos um ingrediente ativo, como acima definido, juntamente com um ou mais veículos aceitáveis do mesmo e opcionalmente outros ingredientes terapêuticos, particularmente aqueles ingredientes terapêuticos adicionais como descrito aqui. O veículo(s) deve ser "aceitável" no sentido de ser compatível como outros ingredientes de uma formulação e fisiologicamente inócuo ao receptor do mesmo.

[00237] As formulações incluem aquelas adequadas para as rotinas de admisnitração anteriores. As formulações podem convenientemente ser apresentadas em uma forma de dosagem unitária e podem ser preparadas por qualquer um dos métodos bem conhecidos na técnica de farmácia. Técnicas e formulações geralmente são encontradas em Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Co., Easton, PA). Tais métodos incluem a etapa de introduzir em associação o ingrediente ativo com o veículo que constitui um ou mais ingredientes acessórios. Em geral, as formulações são preparadas uniforme e intimamente introduzindo em associação o ingrediente ativo com veículos líquidos ou veículos sólidos finamente divididos ou ambos, e então, se necessário, moldando o produto.

[00238] Formulações da presente invenção adequadas para administração oral podem ser presentadas como unidades discretas tais como cápsulas, sachês ou comprimidos, cada qual contendo uma quantidade predeterminada do ingrediente ativo; como um pó ou grânulos; como uma solução ou uma suspensão em um líquido aquoso ou não aquoso; como uma emulsão líquida óleo-em-água ou uma emulsão líquida água-em-óleo. O ingrediente ativo pode também ser administrado como um bolus, eletuário ou pasta.

[00239] Um comprimido é preparado por compressão ou moldagem, opcionalmente com um ou mais ingredientes acessórios. Os comprimidos prensados podem ser preparados prensando em uma máquina adequada o ingrediente ativo em uma forma de fluxo livre tal como um pó ou grânulos, opcionalmente misturado com um aglutinante, lubrificante, diluente inerte, conservante, agente tensoativo ou dispersante. Os comprimidos moldados podem ser feitos moldando em uma máquina adequada uma mistura do ingrediente ativo umedecido com um diluente líquido inerte. Os comprimidos podem opcionalmente ser revestidos ou marcados e opcionalmente são formulados de modo a fornecer liberação lenta ou controlada do ingrediente ativo a partir deste.

[00240] Para infecções do olho ou outros tecidos externos, por exemplo, boca e pele, as formulações são Preferivelmente aplicadas como um unguento ou creme tópico contendo o ingrediente(s) ativo em uma quantidade de, por exemplo, 0,075 a 20% em p/p (incluindo ingrediente(s) ativo em uma faixa entre 0,1% e 20% em incrementos de 0,1% em p/p tal como 0,6% em p/p, 0,7% em p/p, etc.), preferivelmente 0,2 a 15% em p/p e mais preferivelmente 0,5 a 10% em p/p. Quando formulados em um unguento, os ingredientes ativos podem ser empregados com uma base de unguento miscível em água ou parafínica. Alternativamente, os ingredientes ativos podem ser formulados em um creme com uma base de crème óleo-em-água.

[00241] Se desejado, a fase aquosa da base de creme pode incluir, por exemplo, pelo menos 30% em p/p de um álcool poli-hídrico, isto é, um álcool tendo dois ou mais grupos hidroxila tais como propileno glicol, butano 1,3-diol, manitol, sorbitol, glicerol e polietileno glicol (incluindo PEG 400) e misturas dos mesmos. As formulações tópicas podem desejavelmente incluir um composto que realça a absorção ou penetração do ingrediente ativo através da pele ou outras áreas afetadas. Exemplos de tais realçadores de penetração dérmica incluem dimetil sulfóxido e análogos relacionados.

[00242] A fase oleosa das emulsões desta invenção pode ser constituída a partir dos ingredientes conhecidos de uma maneira conhecida. Enquanto a fase pode compreender meramente um emulficante (de outro modo conhecido como um emulgente), desejavelmente compreende uma mistura de pelo menos um emulsificante com uma gordura ou um óleo ou tanto com uma gordura quanto um óleo. Preferivelmente, um emulsificante hidrofílico é incluído juntamente com um emulsificante lipofílico que age como um estabilizante. É também preferido incluir tanto um óleo quanto uma gordura. Juntamente, o emulsificante(s) com ou sem estabilizante(s) compõe a assim chamada cera emulsificante, e a cera juntamente com o óleo e a gordura compõem a assim chamada base de unguento emulsificante que forma a fase dispersa oleosa das formulações de creme.

[00243] Emulgentes e estabilizantes de emulsão para uso na formulação da invenção incluem Tween® 60, Span® 80, álcool cetostearílico, álcool benzílico, álcool miristílico, mono-estearato de glicerila e sulfato de laurila de sódio. Outros emulgentes e estabilizantes de emulsão para uso em uma formulação da invenção incluem Tween® 80.

[00244] A escolha de óleos ou gorduras adequadas para a formulação é baseada na obtenção de propriedades cosméticas desejadas. O creme deve preferivelmente ser um produto não gorduroso, não manchável e lavável com consistência adequada para evitar o vazamento de tubos ou outros recipientes. Alquil ésteres mono ou dibásicos, de cadeia linear ou ramificada tais como di- isoadipato, estearato de isocetila, diéster de propileno glicol de ácidos graxos de coco, mirisato de isopropila, oleato de decila, palmitato de isopropila, estearato de butila, palmitato de 2-etil-hexila ou uma mistura de ésteres de cadeia ramificada conhecidos como Crodamol CAP podem ser usados, os três últimos sendo ésteres preferidos. Estes podem ser usados sozinhos ou em combinação dependendo das propriedades requeridas. Alternativamente, lipídios de ponto de fusão elevado tal como parafina suave branca e/ou parafina líquida ou outros óleos minerais são usados.

[00245] Formulações farmacêuticas de acordo com a presente invenção compreendem uma combinação de acordo com a invenção juntamente com um ou mais veículos ou excipientes farmaceuticamente aceitáveis e opcionalmente outros agentes terapêuticoss. Formulações farmacêuticas contendo o ingrediente ativo pode ser em qualquer forma adequada para o método pretendido de administração. Quando usados para uso oral, por exemplo, comprimidos, trociscos, losangos, suspensões aquosas ou oleosas, grânulos ou pós dispersíveis, emulsões, cápsulas duras ou maciais, xaropes ou elixires podem ser preparados. Composições pretendidas para uso oral podem ser preparadas de acordo com qualquer método conhecido na técnica para a fabricação de composições farmacêuticas e tais composições podem conter um ou mais agentes incluindo agentes adoçantes, agentes aromatizantes, agentes corantes e agentes conservantes, a fim de fornecer uma preparação palatável. Os comprimidos contendo o ingrediente ativo em mistura com excipiente não tóxico farmaceuticamente aceitável que são adequados para fabricação de comprimidos são aceitáveis. Estes excipientes podem ser, por exemplo, diluentes inertes, tais como cálcio ou carbonato de sódio, lactose, fosfato de cálcio ou sódio; agentes de granulação e desintegração, tais como amido de milho, ou ácido algínico; agentes de ligação tais como amido, gelatina ou acácia; e agentes de lubrificação, tais como estearato de magnésio, ácido esteárico ou talco. Comprimidos podem ser não revestidos ou podem ser revestidos por técnicas conhecidas incluindo microencapsulação para retardar a desintegração e absorção no trato gastrointestinal e, desse modo, fornecer uma ação prolongada durante um período mais longo. Por exemplo, um material de retardo de tempo tal como monoestearato de glicerila ou diastearato de glicerila sozinho ou como uma cera pode ser empregado.

[00246] Formulações para uso oral podem também apresentadas como cápsulas de gelatina dura onde o ingrediente ativo é misturado como um diluente sólido inerte, por exemplo, fosfato de cálcio ou caulim, ou como cápsulas de gelatina macia, em que o ingrediente ativo é misturado com água ou um meio oleoso, tal como óleo de amendoim, parafina líquida ou azeite de oliva.

[00247] Suspensões aquosas da invenção contêm os materiais ativos em mistura com excipientes adequados para a fabricação de suspensões aquosas. Tais excipientes incluem um agente de suspensão, tal como carboximetilcelulose de sódio, metilcelulose, hidroxipropil metilceluose, alginato de sódio, polivinilpirrolidona, goma de tragacanto e goma de acacia, e agentes de dispersão ou umectantes tais como um fosfatídeo de ocorrência natural (por exemplo, lecitina), um produto de condensação de um óxido de alquileno com um ácido graxo (por exemplo, estearato de polioxietileno), um produto de condensação de óxido de etileno com um álcool alifático de cadeia longa (por exemplo, heptadecaetileno-oxicetanol), um produto de condensação de óxido de etileno com um éster parcial derivado de um ácido graxo e um anidrido de hexitol (por exemplo, mono-oleato de polioxietileno sorbitano). A suspensão aquosa pode também conter um ou mais conservantes tais como p-hidróxi-benzoato de etila ou n-propila, um ou mais agentes corantes, um ou mais agentes aromatizantes e um ou mais agentes adoçantes, tais como sacarose ou sacarina. Outros exemplos não limitantes de agentes de suspensão incluem Ciclodextrina e Captisol (= beta-ciclodextrina de sulfobutil éter; SEB-beta-CD).

[00248] Suspensões oleosas podem ser formuladas suspendendo o ingrediente ativo em um óleo vegetal, tal como óleo de amendoim, azeite de oliva, óleo de gergelim, ou óleo de coco, ou em um óleo mineral tal como parafina líquida. As suspensões orais podem conter um agente de espessamento, tal como cera de abelha, parafina dura ou álcool cetílico. Agentes adoçantes, tal como aqueles mencionados acima, e agentes aromatizantes podem ser adicionados para fornecer uma preparação oral palatável. Estas composições podem ser conservadas pela adição de um antioxidante tal como ácido ascórbico.

[00249] Grânulos e pós dispersíveis da invenção adequados para a preparação de uma supensão aquosa pela adição de água fornecem o ingrediente ativo em mistura com um agente umectante ou dispersível, um agente de suspensão e um ou mais conservantes. Agentes de dispersão ou umectantes adequados são exemplificados por aqueles descritos acima. Excipientes adicionais, por exemplo, agentes adoçantes, aromatizantes e corante, podem também estar presentes.

[00250] As composições farmacêuticas da invenção podem também estar na forma de emulsões óleo-em-água. A fase oleosa pode ser um óleo vegetal, tal como azeite de oliva ou óleo de amendoim, um óleo mineral, tal como parafina líquida, ou uma mistura destes. Agentes emulsificantes adequados incluem gomas de ocorrência natural, tal como goma de acacia e goma de tragacanto, fosfatídeo de ocorrência natural, tais como lecitina de soja, ésteres ou ésteres parciais derivados de ácidos graxos e anidridos de hexitol, tal como mono-oleato de sorbitano, e produtos de condensação destes ésteres parciais com óxido de etileno, tal como mono-oleato de polioxietileno sorbitano. A emulsão pode também conter agentes adoçantes e aromatizantes. Xaropes e elixires podem ser formulados com agentes adoçantes, tais como glicerol, sorbitol ou sacarose. Tais formulações podem também conter um demulcente, um conservante, um aromatizante ou agente corante.

[00251] As composições farmacêuticas da invenção podem estar na forma de uma preparação injetável estéril, tal como uma suspensão aquosa ou olegenosa injetável estéril. Esta suspensão pode ser formulada de acordo com a técnica conhecida usando agentes de dispersão ou umectantes adequados que foram mencionados acima. A preparação injetável estéril pode também ser uma solução ou suspensão injetável estéril em um diluente ou solvente parenteralmente não tóxico, tal como uma solução em 1,3-butano-diol ou preparada como um pó liofilizável. Entre os veículos e solventes aceitáveis que podem ser empregados são água, solução de Ringer e solução de cloreto de sódio isotônica. Além disso, óleos fixos estéreis podem convencionalmente ser empregados como um solvente ou meio de suspensão. Para este propósito qualquer óleo fixo brando pode ser empregado incluindo mono- ou diglicerídeos sintéticos. Além disso, ácidos graxos tal como ácido oleico podem igualmente ser usados na preparação de injetáveis. Entre os veículos e solventes aceitáveis que podem ser empregados são água, solução de Ringer, solução de cloreto de sódio isotônica e solução de cloreto de sódio hipertônica.

[00252] A quantidade de ingediente ativo que pode ser combinada com o material portador para produzir uma forma de dosagem simples variará dependendo do hospedeiro tratado e do modo particular de administração. Por exemplo, uma formulação de liberação com o tempo pretendida para administração oral a humanos pode conter aproximadamente 1 a 1000 mg de material ativo composto com uma quantidade apropriada e conveniente de material por tador que pode variar de cerca de 5 a cerca de 95% das composições totais (peso:peso). A composição farmacêutica pode ser preparada para fornecer quantidades facilmente mensuráveis para administração. Por exemplo, uma solução aquosa pretendida para infusão intravenosa pode conter de cerca de 3 a 500 μg do ingrediente ativo por mililitro de solução de modo que a infusão de um volume adequado em uma taxa de cerca de 30 mL/hr possa ocorrer.

[00253] Formulações adequadas para administração tópica ao olho também incluem colírios, em que o ingrediente ativo é dissolvido ou suspenso em um veículo adequado, especialmente um solvente aquoso para o ingrediente ativo. O ingrediente ativo é preferivelmente presente em tais formulações em uma concentração de 0,5 a 20%, vantajosamente 0,5 a 10%, e particularmente cerca de 1,5% em p/p.

[00254] Formulações adequadas para administração tópica na boca incluem losangos compreendendo o ingrediente ativo em uma base aromatizada, geralmente sacarose e acacia ou tragacanto; pastilhas compreendendo o ingrediente ativo em umabase inerte tal como gelatina e glicerina, ou sacarose e acácia; e antissépticos bucais compreendendo o ingrediente ativo em um veículo líquido adequados.

[00255] Formulações para administração retal podem ser apresentadas como um supositório com uma base adequada compreendendo, por exemplo, manteiga de cacau ou um salicilato.

[00256] Formulações adequadas para administração intrapulmonar ou nasal têm um tamanho de partícula, por exemplo, na faixa de 0,1 a 500 mícrons, tal como 0,5, 1, 30, 35 etc., que é administrada por rápida inalação através da passagem nasal ou por inalação através da boca a fim de alcançar os sacos alveolares. Formulações adequadas incluem soluções aquosas ou oleosas do ingrediente ativo. Formulações adequadas para administração de pó seco ou aerossol podem ser preparadas de acordo com métodos convencionais e podem ser liberados com outros agentes terapêuticos tais como compostos até agora usados no tratamento ou profilaxia de infecções por Arenaviridae como descrito abaixo.

[00257] Formulações adequadas para administração vaginal podem ser apresentadas como pessários, tampões, cremes, géis, pastas, espumas, ou formulações de spray contendo além do ingrediente ativo tais veículos são conhecidas na técnica a serem apropriadas.

[00258] Formulações adequadas para administração parenteral incluem soluções de injeção estéreis aquosas e não aquosas que podem conter antioxidantes, tampões, bacteriostatos e solutos que tornam a formulação isotônica com o sangue do receptor pretendido; e suspensões estéreis aquosas e não aquosas que podem incluir agentes de suspensão e agentes espessantes.

[00259] As formulações são apresentadas em recipientes de dose única ou múltiplas doses, por exemplo, ampolas seladas e frasconetes, e podem ser armazenadas em uma condição secada por congelamento (liofilizado) requerendo apenas adição do veículo líquido estéril, por exemplo, água para injeção, imediatamente antes do uso. Soluções e suspensões de injeção extemporâneas são preparadas de pós estéreis, grânulos e comprimidos da espécie anteriormente descrita. Formulações de dosagem unitária preferidas são aquelas contendo uma dose diária ou uma subdose diária unitária, como aqui acima referido, ou uma fração apropriada da mesma, do ingrediente ativo.

[00260] Deve-se entender que além dos ingredientes particularmente mencionados acima, as formulações desta invenção podem incluir agentes convencionais na técnica tendo considerado o tipo de formulação em questão, por exemplo, aquelas adequadas para administração oral podem incluir agentes aromatizantes.

[00261] A invenção também fornece composições veterinárias compreendendo pelo menos um ingrediente ativo como acima definido juntamente com um veículo veterinário do mesmo.

[00262] Veículos veterinários são materiais úteis para o proprósito de administração da composição e podem ser materiais sólidos, líquidos ou gasosos, que são de outro modo inertes ou aceitáveis na técnica e são compatíveis com o ingrediente ativo. Estas composições veterinárias podem ser administradas oralmente, parenteralmente ou por qualquer outra rotina desejada.

[00263] Os compostos da invenção são usados para fornecer formulações farmacêuticas de liberação controlada contendo como ingrediente ativo um ou mais compostos da invenção ("formulações de liberação controlada") em que a liberação do ingrediente ativo é controlada e regulada para permitir menos frequência de dosagem ou melhorar o perfil farmacocinético ou de toxicidade de um determinado ingrediente ativo.

IV. ROTINAS DE ADMINISTRAÇÃO

[00264] Um ou mais compostos da invenção (referidos aqui como ingredientes ativos) são administrados por qualquer rotina apropriada para a condição a ser tratada. Rotinas adequadas incluem oral, retal, nasal, pulmonar, tópica (incluindo bucal e sublingual), vaginal e parenteral (incluindo subcutânea, intramuscular, intravenosa, intradérmica, intratecal e epidural) e similares. Será apreciado que a rotina preferida pode variar com, por exemplo, a condição do receptor. Uma vantagem dos compostos desta invenção é que eles são oralmente biodisponíveis e podem ser oralmente dosados.

[00265] Nos métodos da presente invenção para o tratamento de infecção por Arenaviridae, os compostos da presente invenção podem ser administrados em qualquer momento a um humano que pode entrar em contato com humanos sofrendo de infecção por Arenaviridae ou é já está sofrendo de infecção por Arenaviridae. Em algumas modalidades, os compostos da presente invenção podem ser administrados profilaticamente a humanos entrando em contato com humanos sofrendo de infecção por Arenaviridae. Em algumas modalidades, a administração dos compostos da presente invenção pode ser a humanos testando positivos quanto à infecção por Arenaviridae, porém que ainda não mostram sintomas de infecção por Arenaviridae. Em algumas modalidades, a administração dos compostos da presente invenção pode ser a humanos no início de sintomas de infecção por Arenaviridae.

[00266] A dose eficaz de ingrediente ativo depende pelo menos da natureza da condição que está sendo tratada, toxicidade, se o composto está sendo usado profilaticamente (doses menores) ou contra uma infecção viral ativa, do método de liberação, e da formulação farmacêutica, e será determinada pelo clínico usando estudos de escalonamento de dose convencionais. Ela pode ser esperada ser de cerca de 0,0001 a cerca de 100 mg/kg de peso corporal por dia; tipicamente, de cerca de 0,01 a cerca de 10 mg/kg de peso corporal por dia; mais tipicamente, de cerca de .01 a cerca de 5 mg/kg de peso corporal por dia; mais tipicamente, de cerca de .05 a cerca de 0,5 mg/kg de peso corporal por dia. Por exemplo, a dose diária candidate para um humano adulto de aproximadamente 70 kg de peso corporal variará de 1 mg a 1000 mg, preferivelmente entre 5 mg e 500 mg, e pode adotar a forma de doses únicas ou múltiplas.

[00267] A dose eficaz de um composto da presente invenção para o tratamento sa infecção por Arenaviridae pode depender de se a dose deve ser usada profilaticamente ou tratar um humano já sofrendo de infecção por Arenaviridae. Além disso, a dose pode depender de se o humano sofrendo de infecção por Arenaviridae ainda não mostra sintomas ou é já está mostrando sintomas de infecção por Arenaviridae. Doses maiores podem necessárias para o tratamento de humanos testando positivos com relação à infecção por Arenaviridae e para humanos mostrando sintomas de infecção por Arenaviridae em comparação com humanos recebendo tratamento profilático.

[00268] Qualquer período de tempo para administração dos compostos da presente invenção é contemplado. Por exemplo, a administração pode ser durante de 1 dia a 100 dias, incluindo 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, ou 90 dias. A administração pode também ser durante 1 semana a 15 semanas, incluindo 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, ou 14 semanas. Períodos mais longos de administração são também contemplados. O tempo para administração pode depender de se o composto está sendo administrado profilaticamente ou para tratar um humano sofrendo de uma infecção por Arenaviridae. Por exemplo, uma administração profilática pode ser durante um período de tempo enquanto o humano está em contato regular com outros humanos sofrendo de uma infecção por Arenaviridae, e durante um período de tempo adequado após o último contato com um umano sofrendo de uma infecção por Arenaviridae. Para humanos já sofrendo de uma infecção por Arenaviridae, o período de administração pode ser durante qualquer duração de tempo necessário para tratar o paciente e um período de tempo adequado após um teste negativo quanto à infecção por Arenaviridae para garantir que a infecção por Arenaviridae não retorne.

V. TERAPIA DE COMBINAÇÃO

[00269] Composições da invenção são também usadas em combinação com outros ingredientes ativos. Para o tratamento de infecções por vírus Arenaviridae, preferivelmente, o outro agente terapêutico ativo é ativo contra infecções por vírus Arenaviridae, particularmente infecções pelo vírus Lassa e vírus Junin. Exemplos não limitantes destes outros agentes terapêuticos ativos são ribavirina, favipiravir (também conhecido como T-705 ou Avigan), monofosfato de T-705, difosfato de T-705, trifosfato de T-705, ST-193 e misturas dos mesmos. Os compostos e composições da presente invenção são também destinados para uso com cuidado geral fornecido aos pacientes com infecções virais por Arenaviridae viral, incluindo fluidos parenterais (incluindo salina de dextrose e lactato de Ringer) e nutrição, antibiótico (incluindo antibióticos de metronidazol e cefalosporina, tais como ceftriaxona e cefuroxima) e/ou profilaxia antifúngica, medicação para dor e febre, antiemético (tal como metoclopramida) e/ou agentes antidiarreicos, vitamina e suplementos minerais (incluindo Vitamina K e sulfato de zinco), agentes anti- inflamatórios (tal como ibuprofeno), medicamentos de dor e medicamentos para outras doenças comuns na população de paciente, tais agentes antimaláricos (incluindo terapia de combinação artemeter e artesunato- lumefantrina), tifoide (incluindo antibióticos de quinolona, tais como ciprofloxacina, antibióticos macrolídeos, tais como azitromicina, antibióticos de cefalosporina, tal como ceftriaxona, ou aminopenicilinas, tal como ampicilina), ou shigellose.

[00270] É também possível combinar qualquer composto da invenção com um ou mais agentes terapêuticos ativos adicionais em uma forma de dosagem unitária para administração simultânea ou sequencial a um paciente. A terapia de combinação pode ser administrada como um regime sequencial ou simultâneo. Quando administrado sequencialmente, a combinação pode ser administrada em duas ou mais adminsitrações.

[00271] A coadministração de um composto da invenção com um ou mais outros agentes terapêuticos ativos geralmente refere-se à administração simultânea ou sequencial de um composto da invenção e um ou mais outros agentes terapêuticos ativos, de modo que as quantidade terapeuticamente eficazes do composto da invenção e um ou mais outros agentes terapêuticos ativos estão ambos presentes no corpo do paciente.

[00272] A coadministração inclui a administração de dosagens unitárias dos compostos da invenção antes ou após a administração de dosagens unitárias de um ou mais outros agentes terapêuticos ativos, por exemplo, administração dos compostos da invenção dentro de um período de segundos, minutos, ou horas da administração de um ou mais outros agentes terapêuticos ativos. Por exemplo, uma dose unitária de um composto da invenção pode ser administrada primeiro, após um período de segundos ou minutos por administração de uma dose unitária de um ou mais outros agentes terapêuticos ativos. Alternativamente, uma dose unitária de um ou mais outros agentes terapêuticos pode ser administrada primeiro, seguida por administração de uma dose unitária de um composto da invenção dentro de um período de segundos ou minutos. Em alguns casos, pode ser desejável administrar uma dose unitária de um composto da invenção primeiro, seguido, após um período de horas (por exemplo, 1-12 horas), por administração de uma dose unitária de um ou mais outros agentes terapêuticos ativos. Em outros casos, pode ser desejável administrar uma dose unitária de um ou mais outros agentes terapêuticos ativos primeiro, seguido, ou após um período de horas (por exemplo, 1-12 horas), por administração de uma dose unitária de um composto da invenção.

[00273] A terapia de combinação pode fornecer "sinergia" e "sinérgico", isto é, o efeito ativado, quando os ingredientes ativos usados juntamente, for maior do que a soma dos efeitos que resultam do uso dos compostos separadamente. Um efeito sinérgico pode ser alcançado quando os ingredientes ativos são: (1) coformulados e administrados ou liberados simultaneamente em uma formulação combinada; (2) liberados por alternância ou em paralelo como formulações separadas; ou (3) por algum outro regime. Quando liberados em terapia de alternância, um efeito sinérgico pode ser alcançado quando os compostos são administrados ou liberados sequencialmente, por exemplo, em pílulas, cápsulas ou comprimidos separados, ou por diferentes injeções em seringas separadas. Em geral, durante terapia de alternância, uma dosagem efetiva de cada ingrediente ativo é administrada sequencialmente, isto é, serialmente, enquanto que em terapia de combinação, dosagens efetivas de dois ou mais ingrediente ativos são administradas juntamente. Um efeito antiviral sinérgico denota um efeito antiviral que é maior do que os efeitos puramente aditivos previstos dos compostos individuais da combinação.

[00274] Ainda em outra modalidade, o presente pedido fornece métodos de inibição de Arenaviridae polimerase em uma célula, compreendendo: contatar uma célula infectada com um arenavírus com uma quantidade eficaz de um composto de Fórmula I-IV, ou um sal, solvato e/ou éster farmaceuticamente aceitável do mesmo, através do qual Arenaviridae polimerase é inibida.

[00275] Ainda em outra modalidade, o presente pedido fornece métodos de inibição de Arenaviridae polimerase em uma célula, compreendendo: contatar uma célula infectada com arenavírus com uma quantidade eficaz de um composto de Fórmula I-IV, ou um sal, solvato e/ou éster farmaceuticamente aceitável do mesmo, e pelo menos um agente terapêutico ativo adicional, através do qual Arenaviridae polimerase é inibida.

[00276] Ainda em outra modalidade, o presente pedido fornece métodos de inibição de Arenaviridae polimerase em uma célula, compreendendo: contatar uma célula infectada com Arenaviridae vírus com uma quantidade eficaz de um composto de Fórmula I-IV, ou um sal, solvato e/ou éster farmaceuticamente aceitável do mesmo, e pelo menos um agente terapêutico ativo adicional selecionado.

[00277] Ainda em outra modalidade, o presente pedido fornece métodos de tratamento de infecção por vírus Arenaviridae em um humano, compreendendo: administrar ao paciente uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula I-IV, ou um sal, solvato e/ou éster farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00278] Ainda em outra modalidade, o presente pedido fornece métodos de tratamento de infecção por vírus Arenaviridae em um humano, compreendendo: administrar ao paciente uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula I-IV, ou um sal, solvato, e/ou éster farmaceuticamente aceitável do mesmo, e pelo menos um agente terapêutico ativo adicional, através do qual Arenaviridae polimerase é inibida.

[00279] Ainda em outra modalidade, o presente pedido fornece métodos de tratamento de infecção por vírus Arenaviridae em um humano, compreendendo: administrar ao paciente uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula I-IV, ou um sal, solvato, e/ou éster farmaceuticamente aceitável do mesmo, e pelo menos um agente terapêutico ativo adicional.

[00280] Também é fornecido um kit que inclui um composto de Fórmula I, ou um sal farmaceuticamente aceitável, éster farmaceuticamente aceitável, estereoisômero, mistura de estereoisômeros ou tautômero do mesmo. Em modalidades, kits individuais separados são fornecidos que incluem um composto selecionado a partir do grupo de cada das fórmulas aqui, bem como, cada subgrupo e modalidade do mesmo, incluindo Fórmula II, Fórmula II, Fórmula IV, e Compostos individuais 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, e 32 (Compostos 1-32), ou um sal farmaceuticamente aceitável, éster farmaceuticamente aceitável, estereoisômero, mistura de estereoisômeros ou tautômero do mesmo. Em um aspecto, o kit compreende um composto de Fórmula I, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Cada dos kits individuais descritos aqui pode compreender um rótulo e/ou instruções para uso do composto no tratamento de uma doença ou condição em um indivíduo (por exemplo, humano) em necessidade do mesmo. Em algumas modalidades, a doença ou condição é uma infecção por vírus Arenaviridae humano, incluindo uma infecção por vírus Lassa ou uma infecção por vírus Junin. Em outras modalidades, cada kit separado pode também conter instruções para uso de agentes médicos adicionais em combinação com o composto de Fórmula I no tratamento de uma doença ou condição em um indivíduo (por exemplo, humano) em necessidade dos mesmos. Em certas destas modalidades, a doença ou condição é uma infecção por vírus Arenaviridae humano, incluindo uma infecção por vírus Lassa ou uma infecção por vírus Junin. Em cada dos kits aqui existe uma outra modalidade em que o kit compreende unidades de dose individual de um composto como descrito aqui, ou um sal farmaceuticamente aceitável, racemato, enantiômero, diastereômero, tautômero, polimorfo, pseudopolimorfo, forma amorfa, hidrato ou solvato do mesmo. Exemplos de unidades de dosagem individual podem incluir pílulas, comprimidos, cápsulas, seringas pré-carregadas ou cartuchos de seringa, sacos IV, etc., cada compreendendo uma quantidade terapeuticamente efetiva do composto em questão, ou um sal farmaceuticamente aceitável, racemato, enantiômero, diastereômero, tautômero, polimorfo, pseudopolimorfo, forma amorfa, hidrato ou solvato do mesmo. Em algumas modalidades, o kit pode conter uma unidade de dosagem única e em outras unidades de dosagem múltipla estão presente, tal como, o número de unidades de dosagem requeridas para um específico regime ou período.

[00281] Também fornecido são artigos de fabricação que incluem um composto de Fórmula I, ou um sal farmaceuticamente aceitável, éster farmaceuticamente aceitável, estereoisômero, mistura de estereoisômeros ou tautômero do mesmo; e um recipiente. Em um aspecto, o artigo de fabricação compreende um composto de Fórmula I, Fórmula II, Fórmula II, Fórmula IV, e Compostos individuais 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, e 32 (Compostos 1-32), ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, e um recipiente. Em modalidades separadas, o recipiente do artigo de fabricação pode ser um frasconete, jarra, ampola, seringa pré-carregada, embalagem de bolhas, lata, recipiente, frasco, caixa, ou um saco intravenoso.

[00282] Também fornecidos como modalidades separadas são os usos de um composto selecionado de cada das fórmulas aqui, bem como, cada subgrupo e modalidade do mesmo, incluindo um composto selecionado a partir do grupo de Fórmula (I), Fórmula (II), Fórmula (III), Fórmula (IV), ou um dos específicos compostos dos exemplos aqui, incluindo Compostos 1-32, ou um sal, solvato, e/ou éster farmaceuticamente aceitável do mesmo, na preparação de um medicamento para uso no tratamento de uma infecção por Arenaviridae em um humano.

VI. MÉTODOS DE INIBIÇÃO DE UMA ARENAVIRIDAE POLIMERASE

[00283] Outro aspecto da invenção refere-se aos métodos de inibição da atividade de Arenaviridae polimerase compreendendo a etapa de tratar uma amostra suspeita de conter Arenaviridae com um composto ou composição da invenção.

[00284] Arenaviridae que pode ser tratada usando os métodos da presente invenção são vírus RNA de sentido negativo de filamento simples que tipicamente infectam primatas. Arenavírus são capazes de se multiplicar em praticamente todos os tipos de célula.

[00285] Com base nos estudos em primatas não humanos infectados com vírus Lassa, as primeiras células infectadas parecem ser células dendríticas nos tecidos linfóides. A infecção progride para infecção de células Kupffer no fígado e células parenquimatosas no fígado e glândula adrenal, células endoteliais em uma variedade de tecidos incluindo tecido nervoso, e finalmente para infecção do epitélio. Evidência de infecção hepática em humanos levando à hepatite foi também documentada) (Hensley, L., 2011, Virology Journal; Yun, N.E., 2012 Viruses).

[00286] Existem 30 gêneros identificados de Arenavírus: vírus Allpahuayo (ALLV), vírus Amapari (AMAV), vírus Bear Canyon (BCNV), vírus Catarina, vírus Chapare, vírus Cupixi (CPXV), vírus Dandenong, vírus Flexal (FLEV), vírus Guanarito (GTOV), vírus Ippy (IPPYV), vírus Junin (JUNV), vírus Kodoko, vírus Lassa (LASV; seis cepas - Josiah, NL, z148, Macenta, AV, e CSF), vírus Latino (LATV), vírus da coriomeningite linfocítica (LCMV), vírus Lujo, vírus Machupo (MACV), vírus Mobala (MOBV), vírus Morogoro, vírus Mopeia (MOPV), vírus Oliveros (OLVV), vírus Parana (PARV), vírus Pichinde (PICV), vírus Pinhal, vírus Pirital (PIRV), vírus Sabia (SABV), vírus Skinner Tank, vírus Tacaribe (TCRV), vírus Tamiami (TAMV), ou Whitewater Arroyo vírus (WWAV).

[00287] Os vírions de arenavírus são de tamanho heterogêneo de 40 a mais do que 200 nm em diâmetro que consistem em nucleocapsídeo rodeado por um envelope lipídico. Eletromicrografias do interior de virions mostram uma aparência granular característica devido à incorporação de ribossomos das células hospedeiras em partículas de vírus durante a montagem. O genoma de arenavírus consiste em dois segmentos de RNA de fita simples, pequeno (S) e grande (L). Ambos os segmentos genômicos têm uma organização de gene ambisense e codificam dois genes em orientação oposta. O RNA L (~7 kb) codifica o RNA polimerase dependente de RNA viral (L) e a proteína de ligação de dedo de zinco de RING pequeno (Z). O RNA S (~3,4 kb) codifica a proteína precursora de glicoproteína (GPC) e a nucleoproteína (NP). GPC é clivada após a tradução para produzir duas glicoproteínas do envelope GP1 e GP2 e o peptídeo de sinal estável (SSP) (Yun, N.E., 2012 Viruses).

[00288] As composições da invenção podem agir como inibidores de arenavírus polimerase, como intermediários para tais inibidores ou têm outras utilidades como descrito abaixo. Os inibidores vão se ligar aos locais na superfície ou em uma cavidade de Arenaviridae polimerase tendo uma geometria única para Arenaviridae polimerase. As composições ligando Arenaviridae polimerase podem ligar-se com graus variantes de reversibilidade. Aqueles compostos ligando substancialmente irreversivelmente são candidatos ideais para uso neste método da invenção. Uma vez rotuladas, as composições de ligação substancialmente irreversivelmente são úteis como sondas para a detecção de Arenaviridae polimerase. Consequentemente, a invenção refere-se aos métodos de detectar Arenaviridae polimerase em uma amostra suspeita de conter Arenaviridae polimerase compreendendo as etapas de: tratar uma amostra suspeita de conter Arenaviridae polimerase com a composição compreendendo um composto da invenção ligado a um rótulo; e observar o efeito da amostra sobre a atividade do rótulo. Rótulos adequados são bem conhecidos no campo de diagnósticos e incluem radicais livres estáveis, fluoróforos, radioisótopos, enzimas, grupos quimioluminescentes e cromógenos. Os compostos aqui são rotulados de modo convencional usando grupos funcionais, tais como, hidroxila, carboxila, sulfidrila ou amino.

[00289] Dentro do contexto da invenção, amostras suspeitas de conter Arenaviridae polimerase incluem materiais feitos pelo homem ou naturais, tais como, organismos vivos; culturas de célula ou tecido; amostras biológicas, tais como, amostras de material biológico (sangue, soro, urina, líquido cefalorraquidiano, lágrimas, escarro, saliva, amostras de tecido, e similares); amostras de laboratório; alimento, água, ou amostras de ar; amostras de bioproduto, tais como, extratos de células, particularmente células recombinantes sintetizando uma glicoproteína desejada; e similares. Tipicamente, a amostra será suspeita de conter um organismo que produz Arenaviridae polimerase, frequentemente um organismo patogênico, tal como, um vírus Arenaviridae. As amostras podem ser contidas em qualquer meio incluindo água e misturas de água\solvente orgânicos. As amostras incluem organismos vivos, tais como, humanos, e materiais feitos pelo homem, tais como, culturas celulares.

[00290] A etapa de tratamento da invenção compreende adicionar a composição da invenção à amostra ou compreende adicionar um precursor da composição à amostra. A etapa de adição compreende qualquer método de administração como descrito acima.

[00291] Se desejado, a atividade de Arenaviridae polimerase após aplicação da composição pode ser observada por qualquer método incluindo métodos diretos e indiretos de detectar atividade de Arenaviridae polimerase. Métodos quantitativos, qualitativos e semiquantitativos de determinar atividade de Arenaviridae polimerase são todos contemplados. Tipicamente, um dos métodos de triagem descritos acima é aplicado, contudo, qualquer outro método, tal como, observação das propriedades fisiológicas de um organismo vivo é também aplicável.

[00292] Organismos que contêm Arenaviridae polimerase incluem o vírus Arenaviridae. Os compostos desta invenção são úteis no tratamento ou profilaxia de infecções por Arenaviridae em animais ou em homens.

[00293] Entretanto, na análise de compostos capaz de inibir os vírus Arenaviridae humanos, deve-se manter em mente que os resultados de ensaios de enzima pode não correlacionar-se com os ensaios de cultura celular. Desse modo, um ensaio com base em célula deve ser a principal ferramenta de análise.

[00294] Em outra modalidade, o presente pedido fornece métodos de tratamento de infecção pelo vírus Arenaviridae em um humano, compreendendo: administrar ao paciente uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula I-IV, ou um sal, solvato, e/ou éster farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, a infecção por Arenaviridae é causada por um vírus Arenaviridae. Em algumas modalidades, a infecção por Arenaviridae é causada por um vírus Junin. Em algumas modalidades, a infecção por Arenaviridae é causada por Lassa virus strains Josiah, NL, z148, Macenta, AV, ou CSF. Em algumas modalidades, uma Arenaviridae polimerase é inibida.

[00295] Os compostos da presente invenção podem ser usados no tratamento de um humano que já está sofrendo de uma infecção por Arenaviridae, ou podem ser administrados profilaticamente para reduzir ou impedir a chance de uma infecção por Arenaviridae. Exame físico de pacientes infectados com arenavírus após o início da febre frequentemente revela faringite purulenta, hemorragias conjuntivais bilaterais, edema facial, e sensibilidade abdominal generalizada. Alterações patológicas macroscópicas podem incluir efusões pleurais, edema pulmonar, ascites, e manifestações hemorrágicas na mucosa gastrointestinal. As taxas de mortalidade quanto aos pacientes hospitalizados variam entre 5 a 10%.

VII. ANÁLISES QUANTO AOS INIBIDORES DE ARENAVIRIDAE POLIMERASE.

[00296] Composições da invenção são analisadas quanto à atividade contra Arenaviridae polimerase por qualquer uma das técnicas convencionais para avaliar a atividade enzimática. Dentro do contexto da invenção, tipicamente composições são primeiro analisadas quanto à inibição de Arenaviridae polimerase in vitro e composições mostrando atividade inibitória são em seguida analisadas quanto à atividade in vivo. Composições tendo Ki in vitro (constantes inibitórias) menor do que cerca de 5 X 10-6 M e preferivelmente menor doq eu cerca de 1 X 10-7 M são preferido para uso in vivo.

[00297] Análises in vitro úteis foram descritas em detalhes e não serão elaboradas aqui. Entretanto, os exemplos descrevem os ensaios in vitro adequados.

VIII. PREPARAÇÃO DE COMPOSTOS

[00298] Os compostos da presente invenção podem ser preparados por uma variedade de métodos. Por exemplo, os nucleosídeos protegidos de Fórmula V podem ser preparados por reação de uma lactona protegida com uma base substituída por iodo sob condições de acoplamente adequadas. Os nucleosídeos podem em seguida ser modificados com a porção pró-fármaco por reação de um nucleosídeo parcialmente protegido com a porção pró- fármaco adequada, após a remoção dos grupos de proteção, para fornecer os compostos da presente invenção. Preparação de Nucleosídeos por meio de base de Iodo

[00299] Em algumas modalidades, a presente invenção fornece um método de preparação de um composto de Fórmula V:

[00300] O método de preparação do composto de Fórmula V inclui a formação de uma mistura reacional tendo um agente de acoplamento, um halo-silano, um composto de Fórmula VI:

e um composto de Fórmula VII:

Fórmula (VII) sob condições adequadas para preparar o composto de Fórmula V, em que cada PG é independentemente um agente de proteção de hidróxi, alternativamente, dois grupos PG em carbonos adjacentes podem ser combinados para formar um grupo -C(R19)2-, R10 é H ou um grupo silila, e R19 é H, C1-C8 alquila, fenila ou fenila substituído.

[00301] Qualquer agente de acoplamento adequado pode ser usado no método de preparação do composto de Fórmula V. O agente de acoplamento pode ser um agente de acoplamento de lítio, um agente de acoplamento de sódio, um agente de acoplamento de magnésio, ou outros. Por exemplo, o agente de acoplamento pode ser um agente de desprotonação tal como n-butil lítio (n-BuLi), hidreto de sódio (NaH), hidreto de alumínio de lítio (LAH ou LiAlH4), e outros. O agente de acoplamento pode também ser um agente de acoplamento com base em magnésio tal como, porém não limitado a, MgCl2, iPrMgCl, tBuMgCl, PhMgCl, ou combinações dos mesmos. Em algumas modalidades, o agente de acoplamento pode um agente de acoplamento de lítio ou um agente de acoplamento de magnésio. Em algumas modalidades, o agente de acoplamento pode ser n-BuLi, MgCl2, iPrMgCl, tBuMgCl, PhMgCl, ou combinações dos mesmos. Em algumas modalidades, o agente de acoplamento pode ser n-BuLi. Em algumas modalidades, o agente de acoplamento pode ser PhMgCl e iPrMgCl.

[00302] O agente de acoplamento pode estar presente em qualquer quantidade adequada. Por exemplo, o agente de acoplamento pode estar presente em uma quantidade de pelo menos 1,0 eq. (mol/mol) para o composto de Fórmula V, tal como cerca de 1,0, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou cerca de 10,0 eq. (mol/mol). O agente de acoplamento pode também estar presente em uma quantidade de cerca de 1,0 a cerca de 10,0 eq. (mol/mol) para o composto de Fórmula V, tal como de cerca de 1,0 a cerca de 5,0 eq. (mol/mol), ou de cerca de 1,0 a cerca de 2,0 eq. (mol/mol). Em algumas modalidades, o agente de acoplamento pode estar presente em uma quantidade de cerca de 1,0 a cerca de 5,0 eq. (mol/mol) para o composto de Fórmula V. Em algumas modalidades, o agente de acoplamento pode estar presente em uma quantidade de cerca de 1,0 a cerca de 2,0 eq. (mol/mol) para o composto de Fórmula V.

[00303] Qualquer halo-silano adequado pode ser usado no método de preparação do composto de Fórmula V. Por exemplo, o halo-silano pode ser um fluoro-silano, um cloro-silano, um bromo-silano ou um iodo-silano. A porção silano pode ter quaisquer substituintes adequados, tais como alquila, alquenila, alquinila, cicloalquila, ou fenila. Halo-silanos exemplares incluem, porém não estão limitados a, Cl-Si(CH3)3, ou Cl-Si(CH3)2CH2CH2Si(CH3)2-Cl. Em algumas modalidades, o halo-silano pode ser um cloro-silano. Em algumas modalidades, o halo-silano pode ser Cl-Si(CH3)3, ou Cl-Si(CH3)2CH2CH2Si(CH3)2-Cl. Em algumas modalidades, o halo-silano pode ser TMS-Cl.

[00304] O grupo silila de R10 pode ser qualquer grupo adequado, porém pode depender da escolha do halo-silano. Por exemplo, quando o halo-silano é TMS-Cl, o grupo silila pode ser trimetilsilila.

[00305] O halo-silano pode estar presente em qualquer quantidade. Por exemplo, o halo-silano pode estar presente em uma quantidade de pelo menos 1,0 eq. (mol/mol) para o composto de Fórmula V, tal como cerca de 1,0, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou cerca de 10,0 eq. (mol/mol). O halo-silano pode também estar presente em uma quantidade de cerca de 1,0 a cerca de 10,0 eq. (mol/mol) para o composto de Fórmula V, tal como de cerca de 1,0 a cerca de 5,0 eq. (mol/mol), ou de cerca de 1,0 a cerca de 2,0 eq. (mol/mol). Em algumas modalidades, o halo-silano pode estar presente em uma quantidade de cerca de 1,0 a cerca de 5,0 eq. (mol/mol) para o composto de Fórmula V. Em algumas modalidades, o halo-silano pode estar presente em uma quantidade de cerca de 1,0 a cerca de 2,0 eq. (mol/mol) para o composto de Fórmula V.

[00306] O grupo de proteção de hidróxi pode ser qualquer grupo de proteção adequado para um grupo hidróxi funcional. Grupos de proteção hidróxi representativos incluem, porém não estão limitados a, silanos tais como trimetila silano (TMS), silano de t-butil dimetila (TBDMS), ou silano de t-butil difenila (TBDPS), éteres tais como metil-metóxi (MOM), tetra-hidropirano (THP), t-butila, alila, ou benzila, e ésteres tais como acetila, pivaloíla, ou benzoíla. Em algumas modalidades, o grupo de proteção de hidróxi pode ser silano de trimetila (TMS), silano de t-butil dimetila (TBDMS), silano de t-butil difenila (TBDPS), metil-metóxi (MOM), tetra-hidropirano (THP), t-butila, alila, benzila, acetila, pivaloíla, ou benzoíla. Em algumas modalidades, o grupo de proteção hidróxi pode ser benzila.

[00307] Grupos hidróxi em carbonos adjacentes, referidos como grupos 1,2-hidróxi, podem formar um grupo de proteção cíclico chamado um acetonida por reação com uma cetona de diéter. Acetonidas exemplares incluem, porém não estão limitados a acetonida e benzilideno acetal. Em algumas modalidades, os grupos de proteção hidróxi de grupos hidróxi em carbonos adjacentes podem ser combinados para formar acetonida.

[00308] Quando o grupo R19 é C1-C8 alquila, R19 pode ser metila, etila, propila, isopropila, butila, iso-butila, sec-butila, t-butila, pentila, iso-pentila, neo-pentila, hexila, iso-hexila, neo-hexila, septila ou octila. Em algumas modalidades, o grupo R19 pode ser metila.

[00309] Qualquer solvente adequado pode ser usado no método da presente invenção. Solventes representativos incluem, porém não estão limitados a, pentano, pentanos, hexano, hexanos, heptano, heptanos, éter de petróleo, ciclopentanos, ciclo-hexanos, benzeno, tolueno, xileno, trifluorometilbenzeno, halobenzenos tais como clorobenzeno, fluorobenzeno, diclorobenzeno e difluorobenzeno, cloreto de metileno, clorofórmio, acetono, acetato de etila, dietil éter, tetra-hidrofurano, ou combinações dos mesmos. Em algumas modalidades, o solvente pode ser tetra-hidrofurano. Outros solventes representativos incluem, porém não estão limitados a 2-Metiltetra- hidrofurano, Dibutil éter, terc-butil éter de metila, Dimetoxietano, Dioxanos (1,4 dioxano), N-metil pirrolidinona (NMP), ou combinações dos mesmos.

[00310] A mistura reacional do método pode estar em qualquer temperatura adequada. Por exemplo, a temperatura da mistura reacional pode ser de cerca de -78°C a cerca de 100°C, ou de cerca de -50°C a cerca de 100°C, ou de cerca de -25°C a cerca de 50°C, ou de cerca de -10°C a cerca de 25°C, ou de cerca de 0°C a cerca de 20°C. Em algumas modalidades, a temperatura da mistura reacional pode ser de cerca de 0°C a cerca de 20°C. Em algumas modalidades, a temperatura da mistura reacional pode ser de cerca de -30°C a cerca de -10°C.

[00311] A mistura reacional do método pode ser em qualquer pressão adequada. Por exemplo, a mistura reacional pode ser em pressão atmosférica. A mistura reacional pode ser também ser exposta a qualquer ambiente adequado, tal como gases atmosféricos, ou gases inertes tais como nitrogênio ou argônio.

[00312] O método da presente invenção can provide o composto de Fórmula V em qualquer produção adequada. Por exemplo, o composto de Fórmula V pode ser preparado em uma produção de pelo menos cerca de 50%, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90 ou pelo menos cerca de 95%.

[00313] O método da presente invenção pode fornecer o composto de Fórmula V em qualquer pureza adequada. Por exemplo, o composto de Fórmula V pode ser preparado em uma pureza de pelo menos cerca de 90, 95, 96, 97, 98 ou pelo menos cerca de 99%. Em algumas modalidades, o composto de Fórmula V pode ser preparado em pelo menos 95% de pureza. Em algumas modalidades, o composto de Fórmula V pode ser preparado em pelo menos 98% de pureza. Em algumas modalidades, o composto de Fórmula V pode ser preparado em pelo menos 99% de pureza.

[00314] Em algumas modalidades, o método incluindo a preparação do composto de Fórmula V:

em que o método inclui a formação da mistura reacional tendo TMS-Cl, PhMgCl, iPrMgCl, o composto de Fórmula VI:

e o composto de Fórmula VII:

sob condições adequadas para preparar o composto de Fórmula V.

[00315] Em algumas modalidades, a presente invenção fornece o composto:

Adição de Porção pró-fármaco

[00316] A presente invenção também fornece um método de acoplamento da porção pró-fármaco a um nucleosídeo para fornecer um composto da presente invenção. Em algumas modalidades, a presente invenção fornece um método de preparação de um composto de Fórmula VIII:

em que o método inclui a formação de uma mistura reacional incluindo um agente de acoplamento, uma base não nucleofílica, um composto de Fórmula IX:

Fórmula (IX), e um composto de Fórmula X:

Fórmula (X),

[00317] sob condições adequados para formar o composto de Fórmula VIII, em que cada Ra é H ou PG, cada grupo PG é um agente de proteção de hidróxi, ou ambos os grupos PG são combinados para formar -C(R19)2-, Re1 e Re2 são cada qual independentemente H, C1-C6 alquila ou benzila, Rf é H, C1-C8 alquila, benzila, C3-C6 cicloalquila, ou -CH2-C3-C6 cicloalquila, R19 é H, C1-C8 alquila, fenila ou fenila substituída, e LG é um grupo de saída.

[00318] Qualquer agente de acoplamento adequado pode ser usado no método de preparação do composto de Fórmula VIII, como acima descrito para o método de preparação do composto de Fórmula V. Em algumas modalidades, o agente de acoplamento pode ser um agente de acoplamento de magnésio. Em algumas modalidades, o agente de acoplamento pode ser MgCl2, iPrMgCl, tBuMgCl, PhMgCl, ou combinações dos mesmos. Em algumas modalidades, o agente de acoplamento pode ser MgCl2.

[00319] Qualquer base não nucleofílica adequada pode ser usada no método de preparação do composto de Fórmula VIII. Bases não nucleofílicas representativas incluem, porém não estão limitados a, trietilamina, di- isopropiletila amina, N,N-dietilanilina, piridina, 2,6-lutidina, 2,4,6-collidina, 4- dimetilaminopiridina, e quinuclidina. Em algumas modalidades, a base não nucleofílica pode ser di-isopropil etil amina (DIPEA).

[00320] Os grupos de proteção PG podem ser quaisquer grupos de proteção hidróxi, como acima descrito para o método de preparação do composto de Fórmula V. Grupos de proteção PG exemplares podem ser benzila, ou os grupos PG podem ser combinados para formar um acetonida. Acetonidas exemplares incluem, porém não estão limitados a acetonida e benzilideno acetal. Em algumas modalidades, os grupos de proteção de hidróxi de grupos hidróxi em carbonos adjacentes podem ser combinados para formar acetonida. Em algumas modalidades, os grupos PG são combinados para formar -C(R19)2-. Em algumas modalidades, cada Ra é o grupo de proteção PG onde os grupos PG são combinados para formar -C(Me)2-.

[00321] Quando o grupo Re é C1-C8 alquila, cada Re pode ser metila, etila, propila, isopropila, butila, iso-butila, sec-butila, t-butila, pentila, iso-pentila, neo-pentila, hexila, iso-hexila, neo-hexila, septila ou octila. Em algumas modalidades, cada grupo Re pode ser metila.

[00322] Quando o grupo Rf é C1-C8 alquila, Rf pode ser metila, etila, propila, isopropila, butila, iso-butila, sec-butila, t-butila, pentila, iso-pentila, neo-pentila, hexila, iso-hexila, neo-hexila, septila ou octila. Em algumas modalidades, o grupo Rf pode ser metila, etila, isopropila, t-butila, ou iso-hexila. Quando o grupo Rf é C3-C6 cicloalquila, Rf pode ser ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila ou ciclo-hexila. Em algumas modalidades, Rf pode ser ciclobutila, ciclopentila ou ciclo-hexila.

[00323] Quando o grupo R19 é C1-C8 alquila, R19 pode ser metila, etila, propila, isopropila, butila, iso-butila, sec-butila, t-butila, pentila, iso-pentila, neo-pentila, hexila, iso-hexila, neo-hexila, septila ou octila. Em algumas modalidades, o grupo R19 pode ser metila.

[00324] O grupo de saída pode ser qualquer grupo de saída adequado. Grupos de saída adequados LG incluem, porém não estão limitados a, cloreto, brometo, mesilato, tosilato, triflato, 4-nitrobenzenossulfonato, 4-clorobenzenossulfonato, 4-nitrofenóxi, pentafluorofenóxi, etc. Em algumas modalidades, o grupo de saída LG pode ser 4-nitrofenóxi ou pentafluorofenóxi. Em algumas modalidades, o grupo de saída LG pode ser 4-nitrofenóxi.

[00325] Em algumas modalidades, cada Ra é PG onde os grupos PG são combinados para formar -C(R19)2-, Rf é C1-C8 alquila, R19 é C1-C8 alquila, e o grupo de saída LG é 4-nitrofenóxi ou pentafluorofenóxi.

[00326] Em algumas modalidades, o agente de acoplamento é MgCl2, e a base não nucleofílica é di-isopropil etil amina.

[00327] Em algumas modalidades, o composto de Fórmula VIII pode ser

[00328] Em algumas modalidades, o composto de Fórmula VIII pode ser

[00329] Em algumas modalidades, o composto de Fórmula VIII pode ser

[00330] Em algumas modalidades, o método de preparação do composto mistura reacional incluindo MgCl2, DIPEA, o composto de Fórmula IX:

e o composto de Fórmula X:

sob condições adequadas para formar o composto de Fórmula VIII:

[00331] Quando os grupos Ra do composto de Fórmula VIII são os grupos de proteção de hidróxi PG, o método pode incluir a etapa adicional de remoção dos grupos de proteção para formar o composto de Fórmula VIII onde cada Ra é H. Em algumas modalidades, o método de preparação do composto de Fórmula VIII inclui formação da segunda mistura reacional incluindo um agente de desproteção e o composto Fórmula VIII em que cada grupo Ra é o grupo de proteção PG, sob condições adequadas para formar o composto de Fórmula VIII onde cada Ra é H. O agente de desproteção pode ser qualquer agente adequado para remover os grupos de proteção PG tal como hidrogênio e um catalisador de hidrogenação, ou ácido. Por exemplo, Se o grupo de proteção PG for benzila, o agente de desproteção poderá ser hidrogênio e platina sobre carbono. Alternativamente, quando o grupo de proteção PG for um acetonida, o agente de desproteção poderá ser um ácido. Ácidos representativos incluem, porém não estão limitados a, ácido acético, ácido acético glacial, ácido trifluoroacético (TFA), ácido hidroclórico, ácido hidroclórico concentrado, e outros. Em algumas modalidades, o método de preparação do composto de Fórmula VIII inclui a formação da segunda mistura reacional incluindo um ácido e o composto Fórmula VIII em que os grupos Ra são combinados para formar -C(R19)2-, sob condições adequadas para formar o composto de Fórmula VIII onde cada Ra é H. Em algumas modalidades, o ácido pode ser ácido hidroclórico.

[00332] Qualquer solvente adequado pode ser usado no método da presente invenção. Solventes representativos incluem, porém não estão limitados a, pentano, pentanos, hexano, hexanos, heptano, heptanos, éter de petróleo, ciclopentanos, ciclo-hexanos, benzeno, tolueno, xileno, trifluorometilbenzeno, halobenzenos tais como clorobenzeno, fluorobenzeno, diclorobenzeno e difluorobenzeno, cloreto de metileno, clorofórmio, acetona, acetato de etila, dietil éter, tetra-hidrofurano, acetonitrila, ou combinações dos mesmos. Em algumas modalidades, o solvente pode ser acetonitrila.

[00333] A mistura reacional do método pode estar em qualquer temperatura adequada. Por exemplo, a temperatura da mistura reacional pode ser de cerca de -78°C a cerca de 100°C, ou de cerca de -50°C a cerca de 100°C, ou de cerca de -25°C a cerca de 50°C, ou de cerca de -10°C a cerca de 25°C, ou de cerca de 0°C a cerca de 20°C. Em algumas modalidades, a temperatura da mistura reacional pode ser de cerca de 0°C a cerca de 20°C.

[00334] A mistura reacional do método pode ser em qualquer pressão adequada. Por exemplo, a mistura reacional pode ser em pressão atmosférica. A mistura reacional pode ser também ser exposta a qualquer ambiente adequado, tal como gases atmosféricos, ou gases inertes tais como nitrogênio ou argônio.

[00335] O método da presente invenção pode fornecer o composto de Fórmula VIII em qualquer produção adequada. Por exemplo, o composto de Fórmula VIII pode ser preparado em uma produção de pelo menos cerca de 50%, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90 ou pelo menos cerca de 95%.

[00336] O método da presente invenção pode fornecer o composto de Fórmula VIII em qualquer pureza adequada. Por exemplo, o composto de Fórmula VIII pode ser preparado em uma pureza de pelo menos cerca de 90, 95, 96, 97, 98 ou pelo menos cerca de 99%. Em algumas modalidades, o composto de Fórmula VIII pode ser preparado em pelo menos 95% de pureza. Em algumas modalidades, o composto de Fórmula VIII pode ser preparado em pelo menos 98% de pureza. Em algumas modalidades, o composto de Fórmula VIII pode ser preparado em pelo menos 99% de pureza.

[00337] Em algumas modalidades, a presente invenção fornece o composto

IX. EXEMPLOS

[00338] Certas abreviações e acronimos são usados na descrição dos detalhes experimentais. Embora a maioria destes seja entendida por alguém versado na técnica, a Tabela 1 contém uma lista de muitas destas abreviações e acronimos. Tabela 1. Lista de abreviações e acronimos.

A. Preparação de Compostos Exemplo 1. (2S)-etila 2-(cloro(fenóxi)fosforilamino)propanoato (Cloridrato

[00339] Sal de cloridrato de éster de etil alanina (1,69 g, 11 mmols) foi dissolvido em CH2Cl2 anidroso (10 mL) e a mistura agitada com resfriamento para 0°C sob N2(g). Diclorofosfato de fenila (1,49 mL, 10 mmols) foi adicionado seguido por adição gota a gota de Et3N durante 10 minutos. A mistura reacional foi em seguida lentamente aquecida para temperatura ambiente e agitada durante 12 h. Et2O anidroso (50 mL) foi adicionado e a mistura agitada durante 30 min. O sólido que se formou foi removido por filtragem, e o filtrado concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi submetido à cromatografia de sílica gel eluindo com 0-50% EtOAc em hexanos para fornecer o intermediário A (1,13 g, 39%), 1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 7,39-7,27 (m, 5H), 4,27 (m, 3H), 1,52 (m, 3H), 1,32 (m, 3H), 31P RMN (121,4 MHz, CDCl3) δ 8,2, 7,8. Exemplo 2. (2S)-2-etilbutil 2-(cloro(fenóxi)fosforilamino)propanoato (Cloridrato B)

[00340] O éster de clorofosforamidato de 2-etilbutil alanina B foi preparado usando o mesmo procedimento como o cloridrato A, exceto que substituindo éster de 2-etilbutil alanina por éster de etil alanina. O material é usado cru na próxima reação. O tratamento com metanol ou etanol forma o produto substituído com o sinal de LCMS requerido. Exemplo 3. (2S)-isopropil 2-(cloro(fenóxi)fosforilamino)propanoato (Cloridrato C)

[00341] O éster de clorofosforamidato de isopropil alanina C foi preparado usando o mesmo procedimento como o cloridrato A, exceto que substituindo o éster de isopropil alanina pelo éster de etil alanina. O material é usado cru na próxima reação. O tratamento com metanol ou etanol forma o produto substituído com o sinal de LCMS requerido. Exemplo 4. (2R, 3R, 4S, 5R)-2-(4-aminopirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-7-il)-3,4- di-hidróxi-5-(hidroximetil)tetra-hidrofuran-2-carbonitrila (Composto 1)

[00342] A preparação de (2R, 3R, 4S, 5R)-2-(4-aminopirrolo[1,2- f][1,2,4]triazin-7-il)-3,4-di-hidróxi-5-(hidroximetil)tetra-hidrofuran-2- carbonitrila é descrita abaixo.

[00343] O lactol comercialmente disponível (10 g, 23,8 mmols) foi dissolvido em DMSO anidroso (30 mL) sob N2(g). Ac2O (20 mL) foi adicionado e a mistura reacional resultante agitada em temperatura ambiente durante 48 horas. A mistura reacional foi vertida em H2O gelado (500 mL) e a mistura agitada durante 20 minutos. A mistura foi extraída com EtOAc (3 x 200 mL) e os extratos orgânicos combinados foram em seguida lavados com H2O (3 x 200 mL). O extrato orgânico foi secado sobre MgSO4 anidroso, filtrado e concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em CH2Cl2 e submetido à cromatografia de sílica gel eluindo com 25% de EtOAc em hexanos para fornecer a lactona (9,55 g, 96%). 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 7,30-7,34 (m, 13H), 7,19-7,21 (m, 2H), 4,55-4,72 (m, 6H), 4,47 (s, 2H), 4,28 (d, J = 3,9 Hz,1H), 3,66 (m, 2H). LCMS m/z 436,1 [M+H2O], 435,2 [M+OH]- Tr = 2,82 min, HPLC Tr = 4,59 [2-98% de ACN em H2) durante 5 min de fluxo @ 2 mL / min flow.

[00344] O bromopirazol (preparado de acordo com WO2009/132135) (0,5 g, 2,4 mmols) foi suspenso em THF anidroso (10 mL) sob N2(g). A suspensão foi agitada e TMSCl (0,67 mL, 5,28 mmols) foi adicionado. A mistura foi agitada durante 20 minutos em temperatura ambiente e em seguida resfriada para - 78°C após cujo tempo uma solução de n-BuLi (6 mL, 1,6 N em hexanos, 9,6 mmols) foi adicionado lentamente. A mistura reacional foi agitada durante 10 minutos a -78°C e em seguida a lactona (1 g, 2,4 mmols) foi adicionada por meio de seringa. Quando a reação foi concluída quando medida por LCMS, AcOH foi adicionado para extingir a reação. A mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo dissolvido em uma mistura de CH2Cl2 e H2O (100 mL, 1:1). A camada orgânica foi separada e lavada com H2O (50 mL). A camada orgânica foi em seguida secada sobre MgSO4 anidroso, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi submetido à cromatografia de sílica gel eluindo com 0-50% de EtOAc em hexanos para fornecer o produto como uma mistura de 1:1 de anômeros (345 mg, 26% de produção). LCMS m/z 553 [M+H].

[00345] O nucleosídeo de hidróxi (1,1 g, 2,0 mmols) foi dissolvido em CH2Cl2 anidroso (40 mL) e a solução resfriada com agitação para 0°C sob N2(g). TMSCN (0,931 mL, 7 mmols) foi adicionado e a mistura agitada durante mais 10 minutos. TMSOTf (1,63 mL, 9,0 mmols) foi lentamente adicionado à reação e a mistura agitada durante uma hora. A mistura reacional foi em seguida diluída com CH2Cl2 (120 mL) e NaHCO3 aquoso (120 mL) foi adicionado para extingir a reação. A mistura reacional foi agitada durante mais 10 minutos e a camada orgânica separada. A camada aquoso foi extraída com CH2Cl2 (150 mL) e os extratos orgânicos combinados secados sobre MgSO4 anidroso, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em uma quantidade mínima de CH2Cl2 e submetido à cromatografia de sílica gel eluindo com um gradiente de 0-75% de EtOAc e hexanos para fornecer o nucleosídeo de tribenzil ciano como uma mistura de anômeros. (0,9 g, 80%). 1H RMN (300 MHz, CD3CN) δ 7,94 (s, 0,5H), 7,88 (s, 0,5H), 7,29-7,43 (m, 13H), 7,11-7,19 (m, 1H), 6,82-6,88 (m,1H), 6,70-6,76 (m, 1H), 6,41 (bs, 2H), 5,10 (d, J = 3,9 Hz, 0,5H), 4,96 (d, J = 5,1 Hz, 0,5H), 4,31-4,85 (m, 7H), 4,09-4,18 (m, 2H), 3,61-3,90 (m,

[00346] O tribenzil ciano nucleosídeo (70 mg, 0,124 mmol) foi dissolvido em CH2Cl2 anidroso (2 mL) e resfriada para -78°C sob N2(g). Uma solução de BCl3 (1N em CH2Cl2, 0,506 mL, 0,506 mmol) foi adicionado e a mistura reacional agitada durante 1 hora a -78°C. quando a reação foi concluída por LC/MS, MeOH foi adicionado para extingir a reação. A mistura reacional foi deixada aquecer para temperatura ambiente e o solvente removido sob pressão reduzida. O resíduo foi submetido à HPLC de fase reversa C18, eluindo durante 5 min com H2O (0,1% de TFA), seguido por um gradiente de 0-70% de MeCN em H2O (0,1% de TFA) durante 35 minutos, para eluir o a-anômero (20 mg, 37%), e β-an0mero 1 (20 mg, 37%). (a-anômero) 1H RMN (300 MHz, D2O) δ 7,96 (s, 1H), 7,20 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 6,91 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 4,97 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 4,56-4,62 (m, 1H), 4,08-4,14 (m, 1H), 3,90 (dd, J = 12,9, 2,4 Hz, 1H), 3,70 (dd, J = 13,2, 4,5 Hz, 1H), (e-anômero) 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 7,91 (s, 1H), 7,80-8,00 (br s, 2H), 6,85-6,89 (m, 2H), 6,07 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 5,17 (br s, 1H), 4,90 (br s, 1H), 4,63 (t, J = 3,9 Hz, 1H), 4,02-4,06 (m, 1H), 3,94 (br s, 1H), 3,48-3,64 (m, 2H), LCMS m/z 292,2 [M+H], 290,0 [M-H], Tr= 0,35 min, 13C RMN (400 MHZ, DMSO), 156,0, 148,3, 124,3, 117,8, 117,0, 111,2, 101,3, 85,8, 79,0, 74,7, 70,5, 61,4, HPLC Tr = 1,32 min Exemplo 5. (2R,3R,4R,5R)-2-(4-aminopirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-7-il)-3- fluoro-4-hidróxi-5-(hidroximetil)tetra-hidrofuran-2-carbonitrila (Composto 2)

[00347] A preparação de (2R,3R,4R,5R)-2-(4-aminopirrolo[1,2- f][1,2,4]triazin-7-il)-3-fluoro-4-hidróxi-5-(hidroximetil)tetra-hidrofuran-2- carbonitrila é descrita abaixo.

[00348] 2-Deóxi-2-fluoro-4,5-O,O-dibenzil-D-arabinose. 1'-Metóxi-2-deóxi- 2-fluoro-4,5-O,O-dibenzil-D-arabinose (1,0 g, 2,88 mmols) em TFA (13,5 mL) foi tratado com H2O (1,5 mL) e a mistura resultante agitada durante 5 h. A mistura foi em seguida diluída com EtOAc (100 mL) e tratada com NaHCO3 saturado (50 mL). A camada orgânica foi separada e lavada com NaCl (50 mL), secada sobre MgSO4 anidroso, filtrado e concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi submetido à cromatografia de sílica gel (80 g de Coluna SiO2 Combiflash HP Gold) eluindo com 0 a 100% de EtOAc em hexanos para fornecer 2-deóxi-2- fluoro-4,5-O,O-dibenzil-D-arabinose (695 mg, 72%) como um sólido branco: Rf = 0,52 (25% de EtOAc em hexanos). 1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 7,30 (m, 10H), 5,35 (m, 1H), 4,68-4,29 (m, 7H), 3,70 (d, J = 10,5 Hz, 1H), 3,50 (d, J = 10,5 Hz, 2H), 19F RMN (282,2 MHz, CDCI3) δ -207 (m), -211 (m), LCMS m/z 350 [M+H2O].

[00349] (3R, 4R, 5R)-4-(benzilóxi)-5-(benziloximetil)-3-fluorodi-hidrofuran- 2(3H)-ona. 2-Deóxi-2-fluoro-4, 5-O,O-dibenzil-D-arabinose (4.3 g, 12,8 mmols) foi dissolvido em CH2CI2 (85 mL) foi tratado com 4 Â MS (10 g) e dicromato de piridínio (14,4 g, 38,3 mmols). A mistura resultante foi agitada durante 24 h e em seguida filtrado através de uma almofada de celita. O eluentee foi concentrado sob pressão reduzida e o resíduo submetido à cromatografia de sílica gel (120 g de coluna SiO2 HP Gold Combiflash) eluindo com 0-100% de EtOAc em hexanos para fornecer (3R, 4R, 5R)-4-(benzilóxi)-5-(benziloximetil)-3- fluorodi-hidrofuran-2(3H)-ona como um óleo claro (3,5 g, 83%): Rf = 0,25 (25% de EtOAc em hexanos). 1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 7,37 (m, 10H), 5,45 (dd, J = 49, 5,7, Hz, 1H), 4,85 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 4,52 (m, 4 H), 4,29 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 2,08 (dd, J = 15,3, 10,2 Hz, 2H), 19F RMN (282,2 MHz, CDCl3) δ -216, LCMS m/z 348 [M+H2O], HPLC (6-98% de gradiente de MeCN-H2O, 0,05% de modificador de TFA) tR = 5.29 min. Fenomenex Synergi 4 m Hydro-RP 80 A, 50 x 4.60 mm, 4 micron; taxa de fluxo de 2 mL/min

[00350] (3R, 4R, 5R)-2-(4-aminopirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-7-il)-4- (benzilóxi)-5-(benziloximetil)-3-fluorotetra-hidrofuran-2-ol. 7-Bromopirrolo[1,2- f][1,2,4]-triazin-4-amina (68 mg, 0,319 mmol) em THF (1,4 mL) foi tratado com TMSCl (89 μL, 0,703 mmol) e a mistura agitada durante duas horas. A mistura foi em seguida resfriada para -78 °C e tratada com nBuLi (1,0 M em hexanos, 1,09 mL, 1,09 mmol). A solução foi agitada durante 30 min e em seguida tratada com (3R, 4R, 5R)-4-(benzilóxi)-5-(benziloximetil)-3-fluorodi-hidrofuran- 2(3H)-ona (106 mg, 0,319 mmol) gota a gota em THF (1,4 mL). A mistura resultante foi agitada durante 30 min e em seguida AcOH (83 μL, 1,44 mmol) em THF (1,0 mL) foi adicionado para extingir a reação. A mistura foi aquecida para temperatura ambiente e em seguida concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi diluído com EtOAc (100 mL) e lavado com solução NaCl saturado (50 mL). A camada orgânica foi secada sobre MgSO4 anidroso, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi submetido à cromatografia de sílica gel (40 g de Coluna SiO2 HP Gold Combiflash) eluindo com 0-100% de EtOAc em hexanos seguido por um gradiente de 0 a 100% de (20% MeOH em EtOAc) em EtOAc para fornecer (3R, 4R, 5R)-2-(4-aminopirrolo[1,2- f][1,2,4]triazin-7-il)-4-(benzilóxi)-5-(benziloximetil)-3-fluorotetra-hidrofuran-2- ol como um sólido branco (68 mg, 44%, mistura de 60/40 de isômeros α/β). Rf = 0,32 (EtOAc). 1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 8,05 (s, 1H), 7,86 (s, 1H), 7,81 (s, 1H), 7,64 (s, 1H), 7,26 (m, 10H), 6,95 (m, 1H), 6,71 (m, 1H), 6,08 (m, 1H), 5,34 (m, 1H), 4,65 (m, 6H), 4,71 (m, 2H), 19F RMN (282,2 MHz, CDCl3) δ -211 (m), LCMS m/z 465 [M+H], HPLC (6-98% de gradiente de MeCN-H2O, 0,05% de modificador de TFA) tR = 4,37 min. (a-isômero), 4.54 min. (e-isômero).

[00351] (3R, 4R, 5R)-2-(4-aminopirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-7-il)-4- (benzilóxi)-5-(benziloximetil)-3-fluorotetra-hidrofuran-2-carbonitrila: (3R, 4R, 5R)-2-(4-aminopirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-7-il)-4-(benzilóxi)-5-(benziloximetil)-3- fluorotetra-hidrofuran-2-ol (195 mg, 0,42 mmols) foi dissolvido em MeCN (1,4 mL) foi tratado com TMSCN (336 μL, 2,52 mmols) e In(OTf)s (708 mg, 1,26 mmol). A solução foi agitada a 70°C durante 18 horas e em seguida resfriada para 0°C. A mistura foi tratado com solução de NaHCO3 (20 gotas) em seguida aquecida para temperatura ambiente e diluída com EtOAc (100 mL) e H2O (50 mL). A camada orgânica foi separada e lavada com solução NaCl saturado (50 mL), secada sobre MgSO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi submetido à cromatografia de sílica gel (40 g de Coluna SiO2 HP Gold Combiflash) eluindo com 0-100% de EtOAc em hexanos para fornecer (3R, 4R, 5R)-2-(4-aminopirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-7-il)-4-(benzilóxi)-5- (benziloximetil)-3-fluorotetra-hidrofuran-2-carbonitrila como um sólido branco (110 mg, 55%, 60/40 mixture of α/β isômeros). Dados para ambos isômeros: Rf = 0,53 (EtOAc). 1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 8,01 (s, 1H), 7,94 (s, 1H), 7,30 (m, 10H), 7,00 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 6,93 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 6,87 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 6,70 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 5,85 (dd, J = 52, 3,3 Hz, 1H), 5,55 (dd, J = 53, 4,5 Hz, 1H), 4,71 (m, 7H), 3,87 (m, 2H), 3,72 (m, 2H), 19F RMN (282,2 MHz, CDCl3) δ -196 (m), -203 (m), LCMS m/z 474 [M+H], HPLC (6-98% de gradiente de MeCN-H2O, 0,05% de modificador de TFA) tR = 4,98 min.

[00352] (2R, 3R, 4R, 5R)-2-(4-aminopirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-7-il)-3- fluoro-4-hidróxi-5-(hidroximetil)tetra-hidrofuran-2-carbonitrila (2) (3R, 4R, 5R)- 2-(4-aminopirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-7-il)-4-(benzilóxi)-5-(benziloximetil)-3- fluorotetra-hidrofuran-2-carbonitrila (110 mg, 0,23 mmol) foi dissolvido em CH2Cl2 (1,5 mL) e resfriada para 0°C. A mistura reacional foi tratado com BCl3 (1,0 M em CH2CI2, 766 μL, 0,77 mmol) e agitada durante duas horas. A mistura foi em seguida resfriada para -78°C e tratada com Et3N (340 μL, 2,44 mmols) seguido por MeOH (2 mL) antes de deixar aquecer para temperatura ambiente. A reação foi concentrada sob pressão reduzida e em seguida coevaporada com MeOH (3 x 5 mL). O resíduo foi em seguida suspenso em H2O (5 mL) e tratado com NaHCO3 (1 g). A solução foi agitada durante 10 minutos, e em seguida concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi filtrado e lavado com MeOH (3 x 10 mL) em um funil de vidro fitrado (grosseiro) e o eluentee concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi submetido à HPLC de fase reversa (6-98% de MeCN em gradiente de H2O com 0,05% de modificador de TFA) para fornecer (2R, 3R, 4R, 5R)-2-(4-aminopirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-7-il)-3-fluoro-4-hidróxi-5- (hidroximetil)tetra-hidrofuran-2-carbonitrila 2 como um sólido branco (16,8 mg, 25%) e o a-isômero. Dados para o β-is0mero: Rf = 0,13 (10% de MeOH em EtOAc), 1H RMN (300 MHz, CD3OD) δ 8,09 (s, 1H), 7,28 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 7,17 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 5,42 (dd, J = 53, 3,3 Hz, 1H), 4,20 (m, 2H), 3,99 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 3,77 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 19F RMN (282,2 MHz, CDCl3) δ -197 (m), LCMS m/z 294 [M+H], HPLC (2-98% de gradiente de MeCN-H2O, 0,05% de modificador de TFA) tR = 1,49 min. Exemplo 6. (2R, 3R, 4R, 5S)-5-(4-aminopirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-7-il)-4- fluoro-2-(hidroximetil)-5-metiltetra-hidrofuran-3-ol (Composto 3)

[00353] A preparação de (2R, 3R, 4R, 5S)-5-(4-aminopirrolo[1,2- f][1,2,4]triazin-7-il)-4-fluoro-2-(hidroximetil)-5-metiltetra-hidrofuran-3-ol é descrita abaixo.

[00354] O nucleosídeo de partida (preparado como descrito na síntese de composto 2) (0,355 g, 0,765 mmol) foi dissolvido em THF anidroso (35 mL) e resfriado para 0oC com agitação sob N2(g). Uma solução de cloreto de magnésio de metila (2 mL, 6 mmols) (3N em THF) foi adicionada e a mistura resultante agitada durante a noite. Ácido acético (7 mmols) foi adicionado para extingir a reação e em seguida os solventes foram removidos por rotação sob pressão reduzida. O resíduo foi re-dissolvido em CH2Cl2 e a solução submetida à um tampão de sílica gel para isolar o produto (0,355 g) como uma mistura crua. LC/MS (m/z : 480, M+1). O material cru foi dissolvido em CH2Cl2 anidroso (20 mL) e colocado sob N2(g). A solução foi agitada e tratada com ácido metanossulfônico (0,2 mL, 2,74 mmols). A mistura reacional foi agitada durante 12 horas, em temperatura ambiente e em seguida extinta pela adiação de Et3N (3,5 mmols). A mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo submetido à cromatografia de sílica gel para fornecer o nucleosídeo substituído por metila (0,174 g, 0,377 mmol, 44% de produção) uma mistura de 4:1 de beta- e alfa-anômeros respectivamente. 1H RMN (300 MHz, CD3CN) anômero maior δ 7,87 (s, 1H), 7,27-7,40 (m, 10 H), 6,77 (d, J = 4,5 HZ, 1H), 6,70 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 6,23 (br s, 2H), 5,53 (dd, J = 55, 3,3 Hz, 1H), 4,42-4,75 (m, 4H), 4,19-4,26 (m, 1H), 3,65-4,00 (m, 3H), 1,74 (d, J = 3,9 Hz, 3H), 19F RMN (282,2 MHz, CD3CN) major anômero δ -207 (m, 1F). LCMS m/z 463 [M+H].

[00355] O material de nucleosídeo benzilado (0,134 g, 0,290 mmol), catalisador Degussa (0,268 g) e AcOH (30 mL) foram misturados juntos. A atmosfera da reação foi carregada com H2 (g) e a reação agitada durante duas horas. O catalisador foi removido por filtragem e a mistura concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em uma quantidade mínima de H2O e submetido à HPLC de fase reversa (coluna C18 hydro RP) para isolar o β- anômero 3 (0,086 g, 0,217 mmol, 57% de produção). 1H RMN (300 MHz, D2O) δ 7,87 (s, 1H), 7,22 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 6,87 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 5,35 (dd, J = 54, 3,6 Hz, 1H), 3,97-4,10 (m, 2H), 3,81 (dd, J = 12,6, 2,1 Hz, 1H), 3,64 (dd, J = 12,6, 4,8 Hz, 1H), 1,65 (d, J = 4,2 Hz, 3H), 19F RMN (282,2 MHz, CD3CN) δ -207 (m, 1F).

[00356] Uma pequena quantidade de alfa anômero foi caracterizada como segue. 1H RMN (300 MHz, D2O) δ 7,86 (s, 1H), 7,26 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 6,85 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 5,31 (dd, J = 54, 3,9 Hz, 1H), 4,39 (ddd, J = 26,1, 9,9, 3,6 Hz, 2H), 4,00 - 4,05 (m, 1H), 3,90 (dd, J = 12,3, 2,1 Hz, 1H), 3,66 (dd, J = 12,6, 4,8, 1H), 1,56 (s, 3H), 19F RMN (282,2 MHz, CD3CN) δ -198 (dd, J = 54, 26 Hz, 1F). Exemplo 7. (2R)-isopropil 2-((((2R,3R,4R,5S)-5-(4-aminopirrolo[1,2- f][1,2,4]triazin-7-il)-4-fluoro-3-hidróxi-5-metiltetra-hidrofuran-2-il)metóxi)- (fenóxi)fosforilamino)propanoato (Composto 4)

[00357] O nucleosídeo 3 (0,011 g, 0,04 mmol) foi dissolvido em trimetilfosfato (2 mL) e resfriada para 0oC. A mistura foi agitada sob uma atmosfera de N2(g) e 1-Metilimidazol (0,320 mL, 5 mmols) seguido pela alaninilmonoisopropila, monofenol fosforocloridrato C (0,240 mL, 4,4 mmols) foi adicionado. A mistura reacional foi agitada durante duas horas. at 0oC e em seguida deixada aquecer lentamente para temperatura ambiente. Enquanto monitorando por LC/MS. Quando concluída por LCMS, a mistura reacional foi tratada com H2O (5 mL) e em seguida concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em CH2Cl2 e submetido à cromatografia de sílica gel eluindo com 0-100% de EtOAc em hexanos. As frações de produto foram coletadas e concentradas. O resíduo foi submetido à HPLC preparativa para produzir o pró-fármaco de monoamidato de alanina isopropil 4 como uma mistura de isômeros (4,7 mg, 0,003 mmol, 6%). 1H RMN (300 MHz, CD3CN) δ 7,87 (s, 1H). 7,17-7,44 (m, 5 H), 6,71-6,83 (m, 2H), 6,14 (br, s, 2H), 5,38 (dd, J = 56, 3,3 Hz, 1H), 4,92-5,01 (m, 1H), 3,86-4,46 (m, 6H), 3,58 (m, 1H), 1,73 (m, 3H), 1,18-1,34 (m, 9H), LCMS m/z 552 [M+H]. Exemplo 8. 2-((((2R,3R,4R,5S)-5-(4-aminopirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-7-il)-4- fluoro-3-hidróxi-5-metiltetra-hidrofuran-2- il)metóxi)(fenóxi)fosforilamino)propanoato de (2R)-etila (Composto 5)

[00358] O nucleosídeo 3 (0,026 g, 0,092 mmol) foi dissolvido em trimetilfosfato (2 mL) e resfriada para 0oC. A mistura foi agitada sob N2(g) e 1- metilimidazol (0,062 mL, 0,763 mmol) seguido pelo cloridrato A (0,160 g, 0,552 mmol) foram adicionados. A mistura reacional foi agitada durante duas horas, a 0oC e em seguida deixada aquecer lentamente para temperatura ambiente. H2O (5 mL) foi adicionado para extingir a reação e em seguida a mistura concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em CH2Cl2 e submetido à cromatografia de sílica gel eluindo com 0-100% de EtOAc em hexanos. As frações de produto foram coletadas e concentradas. O produto cru foi eluído usando 0 a 100 por cento de EtOAc em hexanos. O produto cru foi coletado e concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi submetido à HPLC preparativa para produzir 5 (2,0 mg, 4% de produção). LCMS m/z 538 [M+H]. Exemplo 9. Tetra-hidrogênio de trifosfato de ((2R, 3R, 4R, 5S)-5-(4- aminopirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-7-il)-4-fluoro-3-hidróxi-5-metiltetra-

[00359] O nucleosídeo 3 (0,022 g, 0,056 mmol) foi dissolvido em trimetilfosfato (1 mL) e agitada sob N2(g). Oxicloreto de fósforo (0,067 mL, 0,73 mmol) foi adicionado e a mistura agitada durante 2 h. O monitoramento por coluna de permuta de íon analítica determinou o tempo em que > 80 por cento de monofosfato foram formados. Uma solução de tributilamina (0,44 mL, 1,85 mmol) e pirofosfato de trietilamônio (0,327 g, 0,72 mmol) dissolvida em DMF anidroso (1 mL) foi adicionado. A mistura reacional foi agitada durante 20 min e em seguida extinta pela adiação de solução de bicarbonato de trietilamônio a 1N em H2O (5 mL). A mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo re-dissolvido em H2O. A solução foi submetido à cromatografia de permuta de íon para produzir o produto título 6 (1,7 mg, 6% de produção). LCMS m/z 521 [M-H]. Tr = 0,41. TR de permuta de íon de HPLC = 9,40 min Exemplo 10. (2R,3R,5S)-2-(4-aminopirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-7-il)-3- hidróxi-5-(hidroximetil)-tetra-hidrofuran-2-carbonitrila (Composto 7)

[00360] A preparação de (2R,3R,5S)-2-(4-aminopirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin- 7-il)-3-hidróxi-5-(hidroximetil)-tetra-hidrofuran-2-carbonitrila é descrita abaixo.

[00361] ((3αR,5S,6αR)-2,2-dimetil-tetra-hidrofuro[2,3-d][1,3]dioxol-5- il)metanol. O material de acetato (1,2 g, 5,5 mmols) (J. Org. Chem. 1985, 50, 3547, De Bernardo et al) foi dissolvido em uma mistura de 1:1 de MeOH e THF (10 mL). Uma solução a 1N de NaOH(aq) (10 mL) foi adicionado até o pH ser de 13. A mistura reacional foi agitada durante duas horas e em seguida neutralizada por pH 8-9 pela adição de AcOH. A mistura foi extraída com EtOAc (10 x 30 mL) e os extratos orgânicos combinados secados sobre Na2SO4 anidroso, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. O resíduo foi submetido à cromatografia de sílica gel eluindo com 0-70% de EtOAc em hexanos para fornecer o produto desejado (866 mg, 90%). 1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 5,84 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 4,78 (t, J = 4,5 Hz, 1H), 4,38 (m, 1H), 3,93-3,54 (m, 2H), 2,04-1,84 (m, 2H), 1,52 (s, 3H), 1,33 (s, 3H).

[00362] (3αR,5S,6αR)-5-(benziloximetil)-2,2-dimetil-tetra-hidrofuro[2,3- d][1,3]dioxol. Hidreto de sódio (188 mg, 7,46 mmols) foi dissolvido em THF anidroso (5 mL) e agitado sob N2(g) em temperatura ambiente. O álcool (866 mg, 4,97 mmols) foi dissolvido em THF anidroso (3 mL) e em seguida adicionado em porções durante 5 minutos à mistura de hidreto de sódio. A mistura resultante foi agitada durante 20 minutos, e em seguida brometo de benzila (892 μL, 7,46 mmols) foi adicionado. A reação foi agitada durante duas horas, e em seguida vertida em uma mistura de NaHCO3 aquoso gelado e EtOAc (30 mL). A camada orgânica foi separada e em seguida a camada aquosa re-extraída com EtOAc (30 mL). Os extratos orgânicos combinados foram secados sobre Na2SO4 anidroso, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. O resíduo foi submetido à cromatografia de sílica gel eluindo com 0-40% de EtOAc em hexanos para fornecer o produto de benzil éter (912 mg, 69%). 1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 7,35-7,27 (m, 5H), 5,86 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 4,74 (t, J = 4,2 Hz, 1H), 4,60 (s, 2H), 4,42 (m, 1H), 3,69-3,53 (m, 2H), 2,10-2,04 (m, 1H), 1,83-1,77 (m, 1H), 1,52 (s, 3H), 1,33 (s, 3H).

[00363] (3R,5S)-5-(benziloximetil)-tetra-hidrofuran-2,3-diol. O benzil éter (910 mg, 3,44 mmols) foi dissolvido em uma mistura de 1:1 de AcOH e H2O (20 mL) e agitada a 60oC durante 7 horas. A mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo submetido à cromatografia de sílica gel eluindo com 0 a 70% de EtOAc em hexanos para fornecer o produto diol (705 mg, 91%). 1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 7,36-7,27 (m, 5H), 5,40 (d, J = 3,9 Hz, 0,5H), 5,17 (s, 0,5H), 4,67-4,56 (m, 3H), 4,33 (m, 0,5H), 4,24 (d, J = 4,8 Hz, 0,5H), 3,71-3,67 (m, 1H), 3,56-3,42 (m, 2H), 2,31-2,22 (m, 1H), 2,08-1,89 (m, 2H).

[00364] (3R,5S)-5-(benziloximetil)-3-hidróxi-di-hidrofuran-2(3H)-ona. O diol (705 mg, 3,14 mmols) foi dissolvido em benzeno (30 mL) e tratado com uma mistura de celita de carbonato de prata (3,46 g, 6,28 mmols). A mistura resultante foi agitada a 80oC sob N2(g) durante duas horas. A mistura foi em seguida resfriada para temperatura ambiente, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi submetido à cromatografia de sílica gel eluindo com 0-70% de EtOAc em hexanos para fornecer um produto de lactona (600 mg, 86%). 1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 7,39-7,27 (m, 5H), 4,75-4,68 (m, 1H), 4,60-4,49 (m, 2H), 3,74-3,54 (m, 2H), 2,61-2,35 (m, 2H), 2,38-2,28 (m, 1H).

[00365] (3R, 5S)-3-(benzilóxi)-5-(benziloximetil)-di-hidrofuran-2(3H)-ona. A lactona (600 mg, 2,7 mmols) foi dissolvido em EtOAc (30 mL) e tratado com óxido de prata (626 mg, 2,7 mmols) seguido por brometo de benzila (387 μL, 3,24 mmols). A mistura reacional foi em seguida agitada a 50oC sob N2(g) durante 8h. Óxido de prata adicional (300 mg) foi em seguida adicionado e a mistura resultante agitada a 50°C durante 16 horas. Brometo de benzila (50 uL) e óxido de prata (150 mg) adicionais foram adicionados e a mistura agitada durante mais 8 horas. A mistura reacional foi deixada resfriar, filtrada e em seguida concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi submetido à cromatografia de sílica gel eluindo com 0-20% de EtOAc em hexanos para fornecer o produto título (742 mg, 88%). 1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 7,39-7,27 (m, 10H), 4,99 (d, J = 11,4 Hz, 1H), 4,72 (m, 2H), 4,56 (m, 2H), 4,39 (t, J = 8,1 Hz, 1H), 3,72-3,51 (m, 2H), 2,42-2,25 (m, 2H).

[00366] (3R,5S)-2-(4-aminopirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-7-il)-3-(benzilóxi)-5- (benziloximetil)-tetra-hidrofuran-2-ol. O 7-bromopirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-4- amina (607 mg, 2,85 mmols) foi dissolvido em THF anidroso (10 mL) e agitado sob Ar(g) em temperatura ambiente. TMSCl (1,1 mL, 8,55 mmols) foi adicionado gota a gota e a mistura agitada durante duas horas. A reação foi concentrada sob pressão reduzida e em seguida secada sob vácuo elevado. O resíduo foi suspenso em THF (20 mL) e agitada sob Ar(g) a -78oC. Uma solução de n-BuLi a 2,5M em hexano (2,28 mL, 5,7 mmols) foi adicionada gota a gota durante 10 minutos. e a mistura resultante agitada durante 60 min. A lactona (742 mg, 2,37 mmols) dissolvida em THF anidroso (7 mL) foi adicionada à mistura acima durante 20 min. A mistura reacional foi agitada durante duas horas, e em seguida extinta com AcOH até o PH ser de 5-6. A mistura foi deixada aquecer para temperatura ambiente e em seguida diluída com EtOAc. A solução foi lavada com solução de NaHCO3 saturado, NaCl saturado, secada sobre Na2SO4 anidroso e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi submetido à cromatografia de sílica gel eluindo com 0-80% de EtOAc em hexanos para fornecer o produto título (250 mg, 24%). LCMS m/z 447,2 [M+H], 445,1 [M-H].

[00367] 3R,5S)-2-(4-aminopirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-7-il)-3-(benzilóxi)-5- (benziloximetil)-tetra-hidrofuran-2-carbonitrila. O álcool (250 mg, 0,56 mmol) foi dissolvido em CH2Cl2 anidroso (10 mL) e agitado sob Ar(g) a -15oC. TMSCN (448 μL, 3,36 mmols) foi adicionado gota a gota e a mistura agitada durante 10 min. TMSOTf (466 μL, 2,58 mmols) foi adicionado gota a gota durante 10 minutos e a mistura resultante agitada durante 90 minutos a -15oC. TMSCN (224 μL, 3 eq.) e TMSOTf (202 μL, 2 eq.) adicionais foram adicionados e agitação continuou durante 5 horas. Solução de NaHCO3 aquoso saturado foi adicionada para extingir a reação e a mistura agitada durante 10 min. A camada orgânica foi separada e lavada com solução de NaHCO3 aquoso saturado, solução NaCl saturado, secada sobre Na2SO4 anidroso, filtrado e concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi submetido à cromatografia de sílica gel eluindo com 0-70% de EtOAc em hexanos para fornecer o produto título (150 mg, 59%). LCMS m/z 456,3 [M+H], 454,1 [M-H].

[00368] (2R,3R,5S)2-(4-aminopirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-7-il)-3-hidróxi-5- (hidroximetil)-tetra-hidrofuran-2-carbonitrila (7). O benzil éter (150 mg, 0,329 mmol) foi dissolvido em CH2Cl2 anidroso (2 mL) e a mistura agitada sob Ar(g) a - 20oC. Uma solução de BCl3 a 1M em CH2Cl2 (724 μL, 0,724 mmol) foi adicionada gota a gota e a mistura resultante agitada durante duas horas. BCl3 a 1M adicional em CH2Cl2 (724 μL, 0,724 mmol) foi adicionado e agitação continuou durante duas horas. A mistura foi em seguida resfriada para -78oC e lentamente tratado com uma mistura de 2:1 de Et3N e MeOH (3 mL). A mistura foi agitada durante 10 minutos, e em seguida tratada com MeOH (10 mL). A reação foi deixada aquecer para temperatura ambiente e em seguida concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em MeOH e concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em MeOH novamente e tratado com NaHCO3 sólido. A mistura foi agitada durante 5 min e em seguida o sólido removido por filtragem. A solução foi concentrada sob pressão reduzida e submetido à preparative HPLC para fornecer o produto desejado 7 (10 mg, 11%). 1H RMN (300 MHz, D2O) δ 7,71 (s, 1H), 6,75 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 6,65 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 4,91 (t, J = 6,3 Hz, 1H), 4,57 (m, 1H), 3,67-3,47 (m, 2H), 2,18 (m, 2H), LCMS m/z 276,1 [M+H], 274,0 [M-H]. Exemplo 11. 2-((((2R,3S,4R,5R)-5-(4-aminopirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-7-il)- 5-ciano-3,4-di-hidroxitetra-hidrofuran-2-il)metóxi)(fenóxi)- fosforilamino)propanoato de (2S)-isopropila (Composto 8)

[00369] O nucleosídeo 1 (45 mg, 0,15 mmol) foi dissolvido em fosfato de trimetila anidroso (0,5 mL) e a solução agitada sob N2(g) a 0oC. Imidazol de metila (36 μL, 0,45 mmol) foi adicionado à solução. Clorofosforamidato C (69 mg, 0,225 mmol) foi dissolvido em THF anidroso (0,25 mL) e adicionado gota a gota à mistura de nucleosídeo. Quando a reação foi concluída por LCMS, a mistura reacional foi diluída com EtOAc e lavada com solução de NaHCO3 aquoso saturado, NaCl saturado, secada sobre Na2SO4 amidroso, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi submetido à cromatografia de sílica gel eluindo com 0 a 5% de MeOH em CH2Cl2 seguido por HPLC preprativa para fornecer o produto (20,9 mg, 25%). 1H RMN (300 MHz, CD3OD) δ 7,95 (m, 1H), 7,31-6,97 (m, 7H), 4,94 (m, 1H), 4,78 (m, 1H), 4,43 (m, 3H), 4,20 (m, 1H), 3,80 (d, 1H), 1,30-1,18 (m, 9H), 31P RMN (121,4 MHz, CD3OD) δ 3,8, LCMS m/z 561,0 [M+H], 559,0 [M-H]. Exemplo 12. 2-((((2R,3S,4R,5R)-5-(4-aminopirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-7-il)- 5-ciano-3,4-di-hidroxitetra-hidrofuran-2- il)metóxi)(fenóxi)fosforilamino)propanoato de (2S)-2-etilbutila (Composto 9)

[00370] O composto 9 pode ser preparado por diversos métodos descritos abaixo. Procedimento 1

[00371] Preparado a partir do Composto 1 e cloridrato B de acordo com o mesmo método como para a preparação de composto 8. 1H RMN (300 MHz, CD3OD) δ 7,87 (m, 1H), 7,31-7,16 (m, 5H), 6,92-6,89 (m, 2H), 4,78 (m, 1H), 4,503,80 (m, 7H), 1,45-1,24 (m, 8H), 0,95-0,84 (m, 6H), 31P RMN (121,4 MHz, CD3OD) δ 3,7, LCMS m/z 603,1 [M+H], 601,0 [M-H].

[00372] 2-(((((2R,3S,4R,5R)-5-(4-aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-5- ciano-3,4-di-hidroxitetra-hidrofuran-2-il)metóxi)(fenóxi)fosforil)amino) propanoato(2S)-2-de etilbutila. 2-(((4- nitrofenóxi)(fenóxi)fosforil)amino)propanoato de (2S)-2-etilbutila (1,08 g, 2,4 mmols) foi dissolvido em DMF anidroso (9 mL) e agitado sob uma atmosfera de nitrogênio em temperatura ambiente. (2R,3R,4S,5R)-2-(4-aminopirrolo[2,1- f][1,2,4]triazin-7-il)-3,4-di-hidróxi-5-(hidroximetil)tetra-hidrofuran-2- carbonitrila (350 mg, 1,2 mmol) foi adicionado à mistura reacional em uma porção. Uma solução de cloreto de t-butilmagnésio em THF (1M, 1,8 mL, 1,8 mmol) foi em seguida adicionada à reação gota a gota durante 10 minutos. A reação foi agitada durante duas horas, em cujo ponto a mistura reacional foi diluída com acetato de etila (50 mL) e lavada com solução de bicarbonato de sódio aquoso saturado (3 x 15 mL) seguido por solução de cloreto de sódio aquoso saturado (15 mL). A camada orgânica foi secada sobre sulfato de sódio anidroso e concentrada sob pressão reduzida. O óleo resultante foi purificado com cromatografia de coluna de sílica gel (0-10% de MeOH em DCM) para fornecer 2-(((((2R,3S,4R,5R)-5-(4-aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-5-ciano-3,4- di-hidroxitetrahidrofuran-2-il)metóxi)(fenóxi)fosforil)amino)propanoato de (2S)- 2-etilbutila (311 mg, 43%, mistura diastereomérica de 1:0,4 a fósforo) como um sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 7,85 (m, 1H), 7,34 - 7,23 (m, 2H), 7,21 - 7,09 (m, 3H), 6,94 - 6,84 (m, 2H), 4,78 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 4,46 - 4,33 (m, 2H), 4,33 - 4,24 (m, 1H), 4,18 (m, 1H), 4,05 - 3,80 (m, 3H), 1,52 - 1,39 (m, 1H), 1,38 - 1,20 (m, 7H), 0,85 (m, 6H), 31P RMN (162 MHz, CD3OD) δ 3,71, 3,65, LCMS m/z 603,1 [M+H], 600,9 [M-H], HPLC (2-98% de gradiente de MeCN-H2O com 0,1% de modificador de TFA durante 8,5 min, 1,5 mL/min, Coluna: Fenomenex Kinetex C18, 2,6 um 100 Â, 4,6 x 100 mm ) tR = 5,544 min, 5,601 min.

Separação dos Diastereômeros (S) e (R)

[00373] 2-(((((2R,3S,4R,5R)-5-(4-aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-5- ciano-3,4-di-hidroxitetra-hidrofuran-2-il)metóxi)(fenóxi)fosforil)amino) propanoato de (2S)-2-etilbutila foi dissolvido em acetonitrila. A solução resultante foi carregada em coluna quiral Lux Cellulose-2, equilibrada em acetonitrila, e eluído com aceto nitrila isocrática/metanol (95:5 vol/vol). O diastereômero de primeira eluição tinha um tempo de retenção de 17,4 min, e o diastereômero de segunda eluição tinha um tempo de retenção de 25,0 min.

[00374] O diastereômero de primeira eluição é 2-(((R)-(((2R,3S,4R,5R)-5-(4- aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-5-ciano-3,4-di-hidroxitetra-hidrofuran-2- il)metóxi)(fenóxi)fosforil)amino)propanoato de (S)-2-etilbutila:

[00375] 1HRMN (400 MHz, CD3OD) δ 8,05 (s, 1H), 7,36 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 7,29 (br t, J = 7,8 Hz, 2H), 7,19 - 7,13 (m, 3H), 7,11 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 4,73 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 4,48 - 4,38 (m, 2H), 4,37 - 4,28 (m, 1H), 4,17 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 4,08 - 3,94 (m, 2H), 3,94 - 3,80 (m, 1H), 1,48 (sep, J = 12,0, 6,1 Hz, 1H), 1,34 (p, J = 7,3 Hz, 4H), 1,29 (d, J = 7,2 Hz, 3H), 0,87 (t, J = 7,4 Hz, 6H). 31PRMN (162 MHz, CD3OD) δ 3,71 (s), HPLC (2-98% MeCN-H2O gradiente com 0,1% de modificador de TFA durante 8,5 min, 1,5 mL/min, Coluna: Fenomenex Kinetex C18, 2,6 um 100 Â, 4,6 x 100 mm ) tR = 5,585 min.

[00376] Diastereômero de segunda eluição é 2-(((S)-(((2R,3S,4R,5R)-5-(4- aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-5-ciano-3,4-di-hidroxitetra-hidrofuran-2- il)metóxi)(fenóxi)fosforil)amino)propanoato de (S)-2-etilbutila:

[00377] 1HRMN (400 MHz, CD3OD) δ 8,08 (s, 1H), 7,36 - 7,28 (m, 3H), 7,23 - 7,14 (m, 3H), 7,08 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 4,71 (d, J = 5,3 Hz, 1H), 4,45 - 4,34 (m, 2H), 4,32 - 4,24 (m, 1H), 4,14 (t, J = 5,8 Hz, 1H), 4,08 - 3,94 (m, 2H), 3,93 - 3,85 (m, 1H), 1,47 (sep, J = 6,2 Hz, 1H), 1,38 - 1,26 (m, 7H), 0,87 (t, J = 7,5 Hz, 6H), 31PRMN (162 MHz, CD3OD) δ 3,73 (s), HPLC (2-98% de gradiente de MeCN-H2O com 0,1% de modificador de TFA durante 8,5 min, 1,5 mL/min, Coluna: Fenomenex Kinetex C18, 2,6 um 100 Â, 4,6 x 100 mm ) tR = 5,629 min. Exemplo 13. 2-((((2R,3S,4R,5R)-5-(4-aminopirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-7-il)- 5-ciano-3,4-di-hidroxitetra-hidrofuran-2- il)metóxi)(fenóxi)fosforilamino)propanoato de (2S)-etila (Composto 10)

[00378] A preparação de (2S)-etila 2-(((((2R,3S,4R,5R)-5-(4- aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-5-ciano-3,4-di-hidroxitetra-hidrofuran-2- il)metóxi)(fenóxi)fosforil)amino)propanoato é descrita abaixo. Procedimento 1. Preparação por meio de Cloridrato A

[00379] Preparado a partir do Composto 1 e cloridrato A usando o mesmo método como para a preparação de composto 8. 1H RMN (300 MHz, CD3OD) δ 7,95 (m, 1H), 7,32-6,97 (m, 7H), 4,78 (m, 1H), 4,43-4,08 (m, 6H), 3,83 (m, 1H), 1,31-1,18 (m, 6H), 31P RMN (121,4 MHz, CD3OD) δ 3,7, LCMS m/z 547,0 [M+H], 545,0 [M-H]. Procedimento 2. Preparação por meio de Composto de Nitro-Benzeno L

[00380] Composto 1 (50 mg, 0,17 mmol) foi dissolvido em NMP-THF (1:1 mL)) e resfriado com banho de gelo. tBuMgCl (0,257 mL, 0,257 mmol) foi em seguida adicionado durante 5 min. A mistura resultante foi deixada aquecer para temperatura ambiente e foi agitada durante 30 minutos, em seguida uma solução de composto L (Preparado de acordo com US20120009147, 74,6 mg, 0,189 mmol) em THF (2 mL) foi adicionado. Após 30 min, a mistura reacional foi purificada por HPLC (acetonitrila 10 a 80% em água) para fornecer o composto 29 como um sólido amarelo. O sólido foi também purificado com cromatografia de sílica gel (MeOH 0 a 20% de DCM) para fornecer o composto 29 (23 mg, 24% como uma mistura de 2,5:1 de diastereômeros). 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 7,76 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 7,25 - 7,14 (m, 2H), 7,11 - 6,99 (m, 3H), 6,87 - 6,72 (m, 2H), 4,70 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 4,39 - 4,24 (m, 2H), 4,20 (dddd, J = 9,7, 7,9, 5,1, 2,8 Hz, 1H), 4,10 (dt, J = 12,8, 5,5 Hz, 1H), 4,06 - 3,91 (m, 2H), 3,72 (ddq, J = 14,3, 9,3, 7,1 Hz, 1H), 1,17 (dd, J = 7,1, 1,0 Hz, 1H), 1,14 - 1,06 (m, 5H), 31P RMN (162 MHz, CD3OD) δ 3,73 , 3,68, MS m/z = 547 (M+1)+. Exemplo 14. 2-((((2R,3R,4R,5R)-5-(4-aminopirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-7-il)-5- ciano-4-fluoro-3-hidroxitetra-hidrofuran-2- il)metóxi)(fenóxi)fosforilamino)propanoato de (2S)-etila (Composto 11)

[00381] O composto 11 foi preparado a partir do Composto 2 e cloridrato A usando o mesmo método como para a preparação de composto 8. 1H RMN (300 MHz, CD3OD) δ 7,91 (m, 1H), 7,33-7,16 (m, 5H), 6,98-6,90 (m, 2H), 5,59 (m, 1H), 4,50-4,15 (m, 4H), 4,12-3,90 (m, 3H), 1,33-1,18 (m, 6H), 31P RMN (121,4 MHz, CD3OD) δ 3,8, LCMS m/z 549,0 [M+H], 547,1 [M-H]. Exemplo 15. 2,2'-((((2R,3S,4R,5R)-5-(4-aminopirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-7-il)-5- ciano-3,4-di-hidroxitetra-hidrofuran-2-il)metóxi)fosforil)bis(azanodi- il)dipropanoato de (2S,2'S)-dietila (Composto 12)

[00382] O nucleosídeo 1 (14,6 mg, 0,05 mmol) foi dissolvido em fosfato de trimetila anidroso (0,5 mL) e agitado sob N2(g) em temperatura ambiente. POCl3 (9,2 μL, 0,1 mmol) foi adicionado e a mistura agitada durante 60 minutos. Cloridrato de etil éster de alanina (61 mg, 0,4 mmol) e em seguida Et3N (70 μL, 0,5 mmol) foi adicionado. A mistura resultante foi agitada durante 15 minutos, e em seguida Et3N adicional (70 μl, 0,5 mmol) foi adicionado para fornecer uma solução pH de 9-10, A mistura foi agitada durante duas horas, e em seguida diluída com EtOAc, lavada com solução de NaHCO3 de aquoso saturado seguido por solução de NaCl aquoso saturado. A camada orgânica foi secada sobre Na2SO4 anidroso e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi submetido à HPLC preprativa (coluna C18) para produzir o produto 12 (5,5 mg, 16%). 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 8,13 (s, 1H), 7,41 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 7,18 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 4,78 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 4,36 (m, 1H), 4,25-4,08 (m, 7H), 3,83 (m, 2H), 1,33-1,23 (m, 12H), 31P RMN (121,4 MHz, CD3OD) δ 13,8, LCMS m/z 570,0 [M+H], 568,0 [M-H]. Exemplo 16. (2S,3R,4S,5R)-2-(4-aminopirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-7-il)-2- etinil-5-(hidroximetil)tetra-hidrofuran-3,4-diol (Composto 13)

[00383] A preparação de (2S,3R,4S,5R)-2-(4-aminopirrolo[1,2- f][1,2,4]triazin-7-il)-2-etinil-5-(hidroximetil)tetra-hidrofuran-3,4-diol é descrita abaixo.

[00384] O álcool de nucleosídeo (0,6 g, 1,08 mmol) (preparado como descrito na síntese de Composto 1) foi dissolvido em THF anidroso (8 mL) e colocado sob N2(g). A mistura reacional foi agitada e resfriada para 0oC, e em seguida tratada com uma solução a 0,5N de brometo de magnésio de etinila em THF (17,2 mL, 17,2 mmols). A mistura reacional foi agitada durante a noite em temperatura ambiente. AcOH (1,5 mL) foi adicionado para extingir a reação. A mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo redissolvido em CH2Cl2. A solução submetida a um tampão de sílica gel eluindo com 0 a 80% de EtOAc em hexanos para fornecer o produto título como uma mistura crua. LCMS m/z 579 [M+H].

[00385] O álcool etinílico cru (0,624 g, 1,08 mmol) foi dissolvido em CH2Cl2 anidroso (10 mL) e colocado sob N2(g). A mistura foi agitada e ácido sulfônico (0,2 mL, 2,74 mmols) foi adicionada. A mistura reacional foi agitada durante 12 horas, em temperatura ambiente. Quando concluída por LCMS, Et3N (0,56 mL) foi adicionado para extingir a reação. A reação foi concentrado sob pressão reduzida e o resíduo submetido à cromatografia de sílica gel eluindo com 0 a 75% de EtOAc em hexanos para produzir o nucleosídeo de etinila como uma mistura de anômeros (0,200 g, 33% durante 2 etapas). LCMS m/z 561 [M+H].

[00386] O nucleosídeo de tribenzila (0,650 g, 1,16 mmol) foi dissolvido em CH2Cl2 anidroso (30 mL) e resfriado para -78oC sob N2(g). Uma solução de tribrometo de boro (1 N em CH2Cl2, 5,5 mL) foi adicionada e a mistura reacional agitada durante uma hora, a -78oC. Uma solução de MeOH (10 mL) e piridina (2 mL) foi adicionada para extingir a reação e a mistura foi deixada aumentar para temperatura ambiente. A mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida e submetida à HPLC preprativa para fornecer o a-anômero (20 mg) e e-anômero 13 (110 mg). (β -anômero) 1H RMN (300 MHz, DMSO) δ 7,81 (s, 1H), 7,76 (br s, 2H), 6,80-6,85 (m, 2H), 5,11 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 4,90 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 4,82 (dd, J = 7,2, 4,8 Hz, 1H), 4,62 (t, J = 6,3 Hz, 1H), 3,95-3,99 (m, 1H), 3,85-3,91 (dd, J = 11,4, 5,7 Hz, 1H), 3,61-3,67 (m, 1H), 3,47-3,55 (m, 1H), 3,52 (d, J = 0,9 Hz, 1H). (α -anômero) 1H RMN (300 MHz, DMSO) δ 7,80 (s, 1H), 7,59 (bs, 2H), 6,80 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 6,54 (d, J = 4,2 Hz, 1H), 5,00 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 4,89 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 4,74 (t, J = 5,7 Hz, 1H), 4,58 (t, J = 4,5 Hz, 1H), 4,27 (m, 1H), 3,88 (m, 1H), 3,64-3,72 (m, 1H), 3,51-3,59 (m, 1H), 3,48 (d, J = 0,6 Hz, 1H), LCMS m/z 291 [M+H]. Exemplo 17. (2R,3R,4R)-5-(4-aminopirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-7-il)-1,3,4- tris(benzilóxi)hexano-2,5-diol (Composto 14)

[00387] A preparação de (2R,3R,4R)-5-(4-aminopirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin- 7-il)-1,3,4-tris(benzilóxi)hexano-2,5-diol é descrita abaixo.

[00388] O álcool tribenzílica de síntese de Composto 1 (0,250 g, 0,453 mmol) foi dissolvido em THF anidroso (25 mL) e agitado sob N2(g). A mistura reacional foi resfriada para 0oC e em seguida uma solução a 3,0 N de cloreto de magnésio de metila em THF (1,2 mL, 3,62 mmols) foi adicionada. A mistura reacional foi agitada durante a noite em temperatura ambiente. Ácido acético (1,5 mL) foi adicionado para extingir a reação, e em seguida a mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi redissolvido em CH2Cl2 e submetido à um tampão de sílica gel eluindo com 0 a 80% de EtOAc em hexanos. O produto cru (0,452 g) foi em seguida usado na reação seguinte sem outra purificação. LCMS m/z 569 [M+H].

[00389] Nucleosídeo de metila cru (0,452 g, 0,796 mmol) foi dissolvido em CH2Cl2 anidroso (20 mL) e agitado sob N2(g). Ácido metanossulfônico (0,2 mL, 2,78 mmols) foi adicionado e a reação agitada durante 12 hr em temperatura ambiente. Et3N (0,56 mL) foi adicionado para extingir a reação e em seguida a mistura concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi submetido à cromatografia de sílica gel eluindo com 0 a 75% de EtOAc em hexanos para produzir o produto como uma mistura de anômeros (0,20 g, 46% durante 2 etapas). LCMS m/z 551 [M+H].

[00390] O nucleosídeo de tribenzila (0,20 g, 0,364 mmol) foi dissolvido em AcOH (30 mL). e carregado com Pd/C (Degussa) (400 mg). A mistura agitada foi inundada com N2(g) três vezes, e em seguida H2 (g) foi introduzido. A reação foi agitada sob H2 (g) durante duas horas, e em seguida o catalisador removido por filtragem. A solução foi concentrada sob pressão reduzida e sob o resíduo foi redissolvido em H2O. A solução foi submetida à HPLC preprativa sob condições neutras para fornecer o a-anômero e β-an0mero 14 em 81% de produção. (a- anômero) 1H RMN (300 MHz, D2O) δ 7,81 (s, 1H), 7,22 (d, 1H), 6,75 (d, 1H), 4,47 (d, 1H), 4,25-4,31 (m, 1H), 3,88-4,95 (m, 1H), 3,58-3,86 (dd, 2H), 1,50 (s, 3H), (β- anômero) 1H RMN (300 MHz, D2O) δ 7,91 (s, 1H), 7,26 (d, 1H), 6,90 (d, 1H), 4,61 (d, 1H), 4,00-4,09 (m, 2H), 3,63-3,82 (dd, 2H), 1,67 (s, 3H), LCMS m/z 281 [M+H]. Exemplo 18. S,S'-2,2'-((((2R,3S,4R,5R)-5-(4-aminopirrolo[1,2- f][1,2,4]triazin-7-il)-5-ciano-3,4-di-hidroxitetra-hidrofuran-2- il)metóxi)fosforil)bis(óxi)bis(etano-2,1-diyl) bis(2,2-dimetilpropanotioato) (Composto 15)

[00391] O nucleosídeo 1 (0,028 g, 0,096 mmol) foi dissolvido em trimetilfosfato (1 mL). A reação foi agitada sob N2(g) e em seguida tratada com 1H-tetrazol (0,021 g, 0,29 mmol). A mistura reacional foi resfriada para 0oC e o fosfano (Nucleoside Nucleotides, Nucleic acids; 14; 3-5; 1995; 763 - 766. Lefebvre, Isabelle; Pompon, Alain; Perigaud, Christian; Girardet, Jean-Luc; Gosselin, Gilles; et al.) (87 mg, 0,192 mmol) foi adicionado. A reação foi agitada durante duas horas, e em seguida extinta com 30% de peróxido de hidrogênio (0,120 mL). A mistura foi agitada durante 30 minutos em temperatura ambiente e em seguida tratado com trissulfato de sódio aquoso saturado (1 mL). A mistura foi agitada durante 10 minutos, e em seguida concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi submetido à HPLC preprativa para isolar o produto título 15. 1H RMN (300 MHz, CD3CN) δ 7,98 (s, 1H), 6,92 (d, 1H), 6,81 (d, 1H), 6,44 (bs, 2H), 4,82 (m, 2H), 4,47 (m, 1H), 4,24 (m, 2H), 4,00 (m, 4H), 3,80 (bs, 1H), 3,11 (m, 4H), 1,24 (s, 9H), 31P RMN (121,4 MHz, CD3CN) δ -1,85 (s), LCMS m/z 661 [M+H]. Exemplo 19. S,S'-2,2'-((((2R, 3S, 4R, 5S)-5-(4-aminopirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin- 7-il)-5-etinil-3,4-di-hidroxitetra-hidrofuran-2-il)metóxi)fosforil)bis(óxi)bis(etano- 2,1-di-il)bis(2,2-dimetilpropanotioato) (Composto 16)

[00392] Composto 16 foi preparado usando o mesmo método como o composto 15, exceto que substituindo o composto 13 como o nucleosídeo de partida. 1H RMN (300 MHz, CD3CN) δ 7,91 (s, 1H), 6,86 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 6,76 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 6,29 (bs, 2H), 4,69 (t, J = 2,7 Hz, 1H), 4,58 (d, J = 5,7 Hz, 1H), 4,14-4,33 (m, 5H), 3,99-4,07 (m, 4H), 3,53 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 3,11 (q, J = 5,7 Hz, 4H), 1,22 (s, 18H), LCMS m/z 658,9 [M+]. Tr=2.31 Exemplo 20. Trifosfato de tetra-hidrogênio de ((2R, 3S, 4R, 5R)-5-(4- aminopirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-7-il)-5-ciano-3,4-di-hidroxitetra-hidrofuran-2- il)metila (Composto 17)

[00393] O composto 17 foi preparado a partir do composto 1 usando um procedimento similar à preparação de composto 6. O produto foi isolado como o sal de sódio. 1H RMN (400 MHz, D2O) δ 7,76 (s, 1H), 6,88 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 6,73 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 4,86 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 4,43 (m, 1H), 4,39 (m, 1H), 4,05 (m, 1H), 3,94 (m, 1H), 31P RMN (121,4 MHz, D2O) δ -5,4 (d, 1P), -10,8 (d, 1P), - 21,1 (t, 1P), LCMS m/z 530 [M-H], 531,9 [M+H] Tr = 0,22 min. TR de permuta de íon de HPLC=9,95 min. Exemplo 21. Trisfosfato de tetra-hidrogênio de ((2R, 3S, 4R, 5S)-5-(4- aminopirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-7-il)-5-etinil-3,4-di-hidroxitetra-hidrofuran-2- il)metila (Composto 18)

[00394] O composto 18 foi preparado a partir do composto 13, usando um procedimento similar à preparação de composto 6. O produto foi isolado como o sal de TEA. 1H RMN (300 MHz, D2O) δ 7,85 (s, 1H), 7,09 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 6,95 (d, J = 4,7 Hz, 1H), 4,23 (m, 2H), 4,08 (m, 2H), 3,06 (q, J = 7,4 Hz, 20H), 1,14 (t, J = 7,3 Hz, 30H), 31P RMN (121,4 MHz, D2O) δ -10,8 (d, 1P), -11,2 (d, 1P), -23,2 (t, 1P), LCMS m/z 530,8 [M+H], Tr = 0,46, TR de permuta de íon de HPLC = 9,40 min. Exemplo 22. Fosfato de tetra-hidrogênio de ((2R, 3S, 4R, 5S)-5-(4- aminopirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-7-il)-3,4-di-hidróxi-5-metiltetra-hidrofuran-2- il)metila (Composto 19)

[00395] O composto 19 foi preparado a partir do composto 14, usando um procedimento similar à preparação de composto 6. 1H RMN (400 MHz, D2O) δ 7,78 (s, 1H), 6,98 (m, 1H), 6,84 (m, 1H), 4,45 (m, 1H), 4,04 (m, 4H), 1,54 (s, 3H), 31P RMN (161 MHz, D2O) δ -10,6 (m), -23,0 (m), LCMS m/z 521,0 [M+H]. Exemplo 23. Fosfato de tetra-hidrogênio de ((2R,3R,4R,5R)-5-(4- aminopirrolo[1,2-f][1,2,4]triazin-7-il)-5-ciano-4-fluoro-3-hidroxitetra- hidrofuran-2-il)metila (Composto 20)

[00396] O composto 20 foi preparado a partir do composto 2, usando um procedimento similar à preparação de composto 6. 1H RMN (400 MHz, D2O) δ 7,78 (s, 1H), 6,93 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 6,78 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 5,45 (dd, J = 53, 4,4 Hz, 1H), 4,38-4,50 (m, 2H), 4,13-4,20 (m, 2H), 31P RMN (161 MHz, D2O) δ -5,7 (d, 1P), -11,0 (d, 1P), -21,5 (t, 1P), LCMS m/z 533,9,0 [M+H], 532,0 [M-H] Tr = 1,25 min. TR de permuta de íon de HPLC=11.0 min. Exemplo 24. 2-(((((2R,3S,4R,5R)-5-(4-aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)- 5-ciano-3,4-di-hidroxitetra-hidrofuran-2-il)metóxi)(fenóxi)fosforil)amino)-3- fenilpropanoato de (2S)-etila (21)

[00397] A preparação de 2-(((((2R,3S,4R,5R)-5-(4-aminopirrolo[2,1- f][1,2,4]triazin-7-il)-5-ciano-3,4-di-hidroxitetra-hidrofuran-2- il)metóxi)(fenóxi)fosforil)amino)-3-fenilpropanoato de (2S)-etila é descrita abaixo. Preparação de cloridrato de 2-amino-3-fenilpropanoato de (S)-etila.

[00398] L-Fenilalanina (5 g, 30 mmols) foi apreendido em EtOH (30 mL). TMSCl (6,915 mL, 54 mmols) foi adicionado à reação em temperatura ambiente. O vaso de reação foi equipado com um condensador de refluxo e a reação foi colocada em um banho a 80oC. A reação foi agitada durante a noite. No dia seguinte, a reação foi resfriada para temperatura ambiente, concentrada sob pressão reduzida e o resíduo resultante foi apreendido em Et2O. A suspensão resultante foi filtrado e os sólidos isolados foram também lavados com Et2O. Os sólidos lavados foram colocados sob vácuo elevado para produzir o cloridrato 2-amino-3-fenilpropanoato de (S)-etila exemplar (6,86 g, 99%), 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,52 (s, 3H), 7,30 (m, 5H), 4,24 (ABX, JAX = 7,8 Hz, JBX = 6,2 Hz, 1H), 4,11 (m, 2H), 3,17, 3,05 (AB X, JAB = -14 Hz, JBX = 5,8 Hz, JAX = 7,6 Hz, 2H), 1,09 (t, J =6.8 Hz, 3H). Preparação de 2-(((4-nitrofenóxi)(fenóxi)fosforil)amino)-3-fenilpropanoato de (2S)-etila (Composto D)

[00399] Cloridrato de 2-amino-3-fenilpropanoato de (S)-etila (1,01 g, 4,41 mmols) foi dissolvido em DCM (50 mL). Esta solução foi resfriada para 0oC e PhOP(O)Cl2 (0,656 mL, 4,41 mmols) foi adicionado, seguido pela lenta adição de Et3N (1,62 mL, 11,5 mmols) durante 5 minutos. O banho frio foi removido e a reação foi deixado aquecer para temperatura ambiente e agitar durante um período de 80 min. p-NO2PhOH (0,583 g, 4,19 mmols) foi adicionado, seguido por mais Et3N (0,3 mL, 2,1 mmols). O progresso de reação foi monitorado por LC/MS. Na conclusão da reação, ela foi diluída com Et2O, e os sólidos resultantes foram removido por filtragem. O filtrado foi concentrado e composto D (1,25 g, 60%, como uma mistura de diastereômeros) foi isolado por cromatografia de coluna de sílica gel (25 g de cartucho de carga seca, 120 g de coluna; eluente: 100% de hexanos elevando-se para 55% de EtOAc em hexanos). 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 8,17 (m, 2H), 7,33 (m, 2H), 7,09-7,25 (m, 10H), 4,17 (m, 1H), 4,07 (m, 2H), 3,08 (m, 1H), 2,84 (m, 1H), 1,14 (m, 3H), 31P RMN (162 MHz, DMSO-d6) δ -1,479 (s), -1,719 (s), MS m/z = 471.01 [M+1]. Preparação de 2-(((((2R,3S,4R,5R)-5-(4-aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7- il)-5-ciano-3,4-di-hidroxitetra-hidrofuran-2-il)metóxi)(fenóxi)fosforil)amino)-3- fenilpropanoato de (2S)-etila (Composto 21)

[00400] O composto 1 (0,030 g, 0,103 mmol) foi dissolvido em DMF (1 mL) e em seguida THF (0,5 mL) foi adicionado. t-BuMgCl (1M/THF, 154,5 μL, 0,154 μmol) foi adicionado à reação de uma maneira gota a gota com agitação vigorosa. Suspensão branca resultante foi agitada em temperatura ambiente durante 30 minutos. Uma solução de composto D (0,058 g, 0,124 mmol) em THF (1 mL) foi adicionada de uma maneira gota a gota à reação em temperatura ambiente. O progresso da reação foi monitorado por LC/MS. Quando a reação progrediu para 50% de conversão, a reação foi resfriada em um banho de gelo e extinta com ácido acético glacial (70 μL). A reação foi concentrada e o composto 21 (22 mg, 34%, como uma mistura de 2,6:1 de diastereômeros) foi isolado do resíduo por HPLC de fase reversa. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,91 (d, J = 4 Hz, 1H), 7,90 (brs, 2H), 7,09-7,30 (m, 8H), 7,01, (t, J = 8,2 Hz, 2H), 6,89 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 6,82 (t, J = 4,4 Hz, 1H), 6,27 (m, 1H), 6,14 (m, 1H), 5,34 (m, 1H), 4,62 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 4,15 (m, 1H), 3,78-4,01 (m, 6H), 2,92 (m, 1H), 2,78 (m, 1H), 1,04 (m, 3H), 31P RMN (162 MHz, DMSO-d6) δ 3,69 (s), 3,34 (s), MS m/z = 623,0 [M+H]. Exemplo 25. 2-(((((2R,3S,4R,5R)-5-(4-aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)- 5-ciano-3,4-di-hidroxitetra-hidrofuran-2-il)metóxi)(fenóxi)fosforil)amino)-3- metilbutanoato de (2S)-etila (22)

[00401] A preparação de 2-(((((2R,3S,4R,5R)-5-(4-aminopirrolo[2,1- f][1,2,4]triazin-7-il)-5-ciano-3,4-di-hidroxitetra-hidrofuran-2- il)metóxi)(fenóxi)fosforil)amino)-3-metilbutanoato de (2S)-etila é descrita abaixo. Preparação de (2S)-etila 3-metil-2-(((4-nitrofenóxi)(fenóxi)fosforil)amino) butanoate (Composto E)

[00402] O 2-amino-3-metilbutanoato de (S)-etila (0,351 g, 1,932 mmol) foi dissolvido em DCM (17 mL). Esta solução foi resfriada em um banho de gelo e PhOP(O)Cl2 (0,287 mL, 1,932 mmol) foi adicionado, seguido pela lenta adição de Et3N (1,62 mL, 11,4 mmols) durante 5 minutos. O banho frio foi removido e a reação foi deixada aquecer para temperatura ambiente e agitar durante um período de uma hora. p-NO2PhOH (0,255 g, 1,836 mmol) foi adicionado, e o progresso da reação foi monitorado por LC/MS. Na conclusão, a mistura reacional foi diluída com Et2O, e os sólidos resultantes foram removidos por filtragem. O filtrado foi concentrado e composto E (0,642 g, 79% como uma mistura de diastereômeros) foi isolado por cromatografia de coluna de sílica gel (12 g de cartucho de carga seca, 80 g de coluna; eluente: 100% de hexanos elevando-se para 55% de EtOAc em hexanos). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,30 (d, J = 9,2 Hz, 2H), 7,48 (t, J = 9,6 Hz, 2H), 7,40 (t, J = 7,8 Hz, 2H), 7,20-7,27 (m, 3H), 6,60 (quart, J = 11,6 Hz, 1H), 4,01 (m, 2H), 3,61 (m, 1H), 1,93 (m , 1H), 1,11 (m, 3H), 0,79 (m, 6H), 31P RMN (162 MHz, DMSO-d6) δ -0,342 (s), -0,578 (s), MS m/z = 422,9 [M+H]. Preparação de 2-(((((2R,3S,4R,5R)-5-(4-aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7- il)-5-ciano-3,4-di-hidroxitetra-hidrofuran-2-il)metóxi)(fenóxi)fosforil)amino)-3- metilbutanoato de (2S)-etila (Composto 22)

[00403] O composto 1 (0,040 g, 0,137 mmol) foi dissolvido em NMP (1,5 mL) e em seguida THF (0,25 mL) foi adicionado. Esta solução foi resfriada em um banho de gelo e t-BuMgCl (1M/THF, 425,7 μL, 0,426 μmol) foi adicionado de uma maneira gota a gota com agitação vigorosa. O banho de gelo foi removido e a suspensão branca resultante foi agitada em temperatura ambiente durante 15 min. Uma solução de composto E (0,081 g, 0,192 mmol) em THF (0,5 mL) foi adicionada de uma maneira gota a gota à reação em temperatura ambiente. O progresso da reação foi monitorado por LC/MS. Quando a reação progrediu para 50% de conversão, a reação foi resfriada em um banho de gelo e extinta com ácido acético glacial (70 μL). A reação foi concentrada e o composto 22 (22 mg, 34%) foi semipurificado do resíduo por HPLC de fase reversa. O material semipuro foi também purificado por cromatografia de coluna de sílica gel (12 g de cartucho de carga seca, 40 g de coluna; eluente: 100% de EtOAc elevando-se para 10% de MeOH em EtOAc) para produzir o composto 22 (0,034 g, 43% como uma mistura de 1,8:1 de diastereômeros). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,91 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 7,88 (brs, 2H), 7,32 (m, 2H), 7,15 (m, 3H), 6,90 (t, J = 4,2 Hz, 1H), 6,84 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 6,26 (dd, J = 13,4, 6,2 Hz, 1H), 5,87 (quart. J = 11,2 Hz, 1H), 5,35 (m, 1H), 4,64 (m, 1H), 4,25 (m, 2H), 3,93-4,15 (m, 4H), 3,45 (m, 1H), 1,87 (m, 1H), 1,091,16 (m, 3H), 0,70-0,83 (m ,6H), 31P RMN (162 MHz, DMSO-d6) δ 4,59 (s), 4,47 (s), MS m/z = 575,02 [M+H]. Exemplo 26. 2-(((R)-(((2R,3S,4R,5R)-5-(4-aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin- 7-il)-5-ciano-3,4-di-hidroxitetra-hidrofuran-2- il)metóxi)(fenóxi)fosforil)amino)propanoato (S)-de isopropila (23)

[00404] A preparação de 2-(((R)-(((2R,3S,4R,5R)-5-(4-aminopirrolo[2,1- f][1,2,4]triazin-7-il)-5-ciano-3,4-di-hidroxitetra-hidrofuran-2- il)metóxi)(fenóxi)fosforil)amino)propanoato de (S)-isopropila é descrita abaixo.

[00405] O composto 1 (60,0 mg, 206 μmol) foi dissolvido em NMP (0,28 mL). THF (0,2 mL) foi adicionado seguido por cloreto de magnésio de terc-butila (solução a 1,0M em tetra-hidrofurano, 0,309 mL) em temperatura ambiente sob uma atmosfera de argônio. Após 20 min, uma solução de composto F (Preparado de acordo com Cho, A. et al J. Med. Chem. 2014, 57, 1812-1825., 81 mg, 206 μmol) em THF (0,2 mL) foi adicionada, e a mistura resultante foi aquecida para 50 °C. Após 3 h, a mistura reacional foi deixada resfriar para temperatura ambiente e foi purificada diretamente por HPLC preparatória (Coluna Fenominex Synergi 4u Hydro-RR 80Â 150 x 30 mm, 5-100% de gradiente de acetonitrila/água) para fornecer o composto 23 (44 mg, 38% como um diastereômero simples). 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 7,86 (s, 1H), 7,34 - 7,26 (m, 2H), 7,21 - 7,12 (m, 3H), 6,91 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 6,87 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 4,92 (sept, J = 6,3 Hz, 1H), 4,80 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 4,43 - 4,34 (m, 1H), 4,33 - 4,24 (m, 1H), 4,18 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 3,82 (dq, J = 9,7, 7,1 Hz, 2H), 1,27 (dd, J = 7,1, 1,0 Hz, 3H), 1,18 (dd, J = 6,3, 4,8 Hz, 6H), 31P RMN (162 MHz, CD3OD) δ 3,72 (s), LC/MS: tR = 1,39 min, MS m/z = 561,11 [M+H]; Sistema de LC: Thermo Accela 1250 UHPLC; sistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB-C18 100A, 50 x 4,6 mm; Solventes: ACN com ácido acético a 0,1%, água com ácido acético a 0,1%; Gradiente: 0 min-2,0 min 2-100% de ACN, 2,0 min- 3,05 min 100% de ACN, 3,05 min-3,2 min 100%-2% de ACN, 3,2 min-3,5 min 2% de ACN a 2μl/min. HPLC: tR = 2,523 min; sistema HPLC: Agilent 1100 series.; Coluna: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4,6 mm; Solventes: ACN com 0,1% de TFA, água com 0,1% de TFA; Gradiente: 0 min-5,0 min 2-98% de ACN, 5,0 min-6,0 min 98% de ACN a 2 mL/min. Exemplo 27. 2-(((((2R,3S,4R,5R)-5-(4-aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)- 5-ciano-3,4-di-hidroxitetra-hidrofuran-2- il)metóxi)(fenóxi)fosforil)amino)propanoato de (2S)-ciclobutila (24)

[00406] A preparação de 2-(((((2R,3S,4R,5R)-5-(4-aminopirrolo[2,1- f][1,2,4]triazin-7-il)-5-ciano-3,4-di-hidroxitetra-hidrofuran-2- il)metóxi)(fenóxi)fosforil)amino)propanoato de (2S)-ciclobutila é descrita abaixo. Preparação de 2-(((4-nitrofenóxi)(fenóxi)fosforil)amino)propanoato de (2S)-ciclobutila (Composto G)

[00407] Diclorofosfato de fenila (1,49 mL, 10 mmols) foi dissolvido em 10 mL de DCM anidroso e agitado sob atmosfera de nitrogênio em um banho de gelo. Cloridrato de isobutil éster de L-alanina (0,9 g, 5 mmols) foi adicionado em uma porção. Trietilamina (765 μL, 5,5 mmols) foi em seguida adicionado gota a gota. A reação agitada durante uma hora. Mais Trietilamina (765 μL, 5,5 mmols) foi adicionado gota a gota e a reação foi agitada durante 45 min. p- Nitrofenol (1,25g, 9 mmols) foi adicionado em uma porção e agitada durante 30 minutos. Trietilamina (765 μL, 5,5 mmols) foi adicionada e a mistura reacional foi agitada durante duas horas. P-nitrofenol adicional (1,25g, 9 mmols) e trietilamina (765 μL, 5,5 mmols) foram em seguida adicionados, e a reação foi agitada durante mais duas horas. A mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida. O cru resultante foi diluído com EtOAc e lavados duas vezes com solução de ácido cítrico aquoso a 5%, seguido com solução de cloreto de sódio aquoso saturado. A camada orgânica foi em seguida secada sobre sulfato de sódio anidroso e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo cru foi purificado com coluna de sílica gel (0-20-50% de EtOAc em hexanos) para fornecer o composto G (1,48g, 70% de produção como uma mistura de diastereômeros). 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 8,33 - 8,23 (m, 2H), 7,52 - 7,33 (m, 4H), 7,33 - 7,17 (m, 3H), 4,96 - 4,85 (m, 1H), 4,07 - 3,96 (m, 1H), 2,27 (m, 2H), 2,07 - 1,91 (m, 2H), 1,83 - 1,70 (m, 1H), 1,70 - 1,55 (m, 1H), 1,32 (m, 3H), 31P RMN (162 MHz, CD3OD) δ -1,36, -1,59, MS m/z = 420,9 [M+H]. Preparação de 2-(((((2R,3S,4R,5R)-5-(4-aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7- il)-5-ciano-3,4-di-hidroxitetra-hidrofuran-2- il)metóxi)(fenóxi)fosforil)amino)propanoato de (2S)-ciclobutila (Composto 24)

[00408] O composto 1 (58 mg, 0,2 mmol) foi misturado com o composto G (101 mg, 0,24 mmol) em 2 mL de DMF anidroso. Cloreto de magnésio (42 mg, 0,44 mmol) foi adicionado em uma porção. A mistura reacional foi aquecida para 50°C. DIPEA (87 μL, 0,5 mmol) foi adicionado, e a reação foi agitada durante duas horas a 50°C. A mistura reacional foi resfriada para temperatura ambiente, foi diluída com EtOAc e foi lavada com solução de ácido cítrico aquoso a 5% seguido por solução de cloreto de sódio aquoso saturado. A camada orgânica foi em seguida secada sobre sulfato de sódio anidroso e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo cru foi purificado com coluna de sílica gel (0-2-5% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 24 (42 mg, 37% de produção, como uma mistura de diastereômeros). 1H RMN (400 MHz, Metanol-d4) δ 7,85 (m, 1H), 7,34 - 7,22 (m, 2H), 7,22 - 7,08 (m, 3H), 6,94 - 6,84 (m, 2H), 4,95 - 4,85 (m, 1H), 4,79 (m, 1H), 4,46 - 4,34 (m, 2H), 4,34 - 4,24 (m, 1H), 4,19 (m, 1H), 3,81 (m, 1H), 2,27 (m, 2H), 2,01 (m, 2H), 1,84 - 1,68 (m, 1H), 1,62 (m, 1H), 1,30 - 1,16 (m, 3H), 31P RMN (162 MHz, cd3od) δ 3,70, 3,65. MS m/z = 573.0 [M+H]. Exemplo 28. 2-(((((2R,3S,4R,5R)-5-(4-aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)- 5-ciano-3,4-di-hidroxitetra-hidrofuran-2-il)metóxi)(fenóxi)fosforil)amino)-3- fenilpropanoato de (2S)-isopropila (25)

[00409] A preparação de 2-(((((2R,3S,4R,5R)-5-(4-aminopirrolo[2,1- f][1,2,4]triazin-7-il)-5-ciano-3,4-di-hidroxitetra-hidrofuran-2- il)metóxi)(fenóxi)fosforil)amino)-3-fenilpropanoato de (2S)-isopropila é descrita abaixo. Preparação de 2-(((4-nitrofenóxi)(fenóxi)fosforil)amino)-3-fenilpropanoato

[00410] Diclorofosfato de fenila (718 μL, 4,8 mmols) foi dissolvido em 10 mL de DCM anidroso e agitada sob uma atmosfera de nitrogênio em um banho de gelo. Cloridrato de isopropil éster de L-fenilalanina (1g, 4,1 mmols) foi adicionado em uma porção. Mais 10 mL de DCM anidroso foi adicionado. Trietilamina (736 μL, 5,3 mmols) foi adicionado gota a gota e a mistura reacional foi agitada durante 30 min. Mais trietilamina (736 μL, 5,3 mmols) foi em seguida adicionado gota a gota e a mistura reacional foi agitada durante 30 min. Mais trietilamina (736 μL, 5,3 mmols) foi em seguida adicionado gota a gota e a mistura reacional foi agitada durante 15 minutos. p-Nitrofenol (600 mg, 4,32 mmols) foi em seguida adicionado. Obanho de gelo foi em seguida removido e a mistura reacional foi deixada aquecer para temperatura ambiente e agitada durante duas horas. Mais p-nitrofenol (50 mg) e trietilamina (736 μL, 5,3 mmols) foram adicionados e a mistura reacional foi agitada durante uma hora.

[00411] A mistura reacional foi em seguida concentrada sob pressão reduzida, e foi diluída com EtOAc e lavada duas vezes com solução de ácido cítrico aquoso a 5%, seguido com solução de cloreto de sódio aquoso saturado. A camada orgânica foi secada sobre sulfato de sódio anidroso e foi concentrada sob pressão reduzida. O cru foi purificado com coluna de sílica gel (0-15% de EtOAc em hexanos) para fornecer o composto H (1,57 g, 68% de produção como uma mistura de diastereômeros). 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,17 (m, 2H), 7,38 - 7,13 (m, 10H), 7,13 - 7,02 (m, 2H), 4,95 (m, 1H), 4,31 (m, 1H), 3,69 (m, 1H), 3,02 (dd, J = 6,1, 1,8 Hz, 2H), 1,21 - 1,08 (m, 6H), 31P RMN (162 MHz, cdcl3) δ -2,96, -2,98, MS m/z = 485,0 [M+H]. Preparação de 2-(((((2R,3S,4R,5R)-5-(4-aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7- il)-5-ciano-3,4-di-hidroxitetra-hidrofuran-2-il)metóxi)(fenóxi)fosforil)amino)-3- fenilpropanoato de (2S)-isopropila (Composto 25)

[00412] O composto 1 (58 mg, 0,2 mmol) e composto H (116 mg, 0,24 mmol) foram misturados e 2 mL de DMF anidroso foram adicionados. A mistura reacional foi agitada sob uma atmosfera de nitrogênio em temperatura ambiente. tBuMgCl a 1M em THF (300 μL, 0,3 mmol) foi adicionado gota a gota durante 3 minutos e a mistura reacional foi em seguida agitada durante 16 h. A mistura reacional foi diluída com EtOAc e lavada com solução de ácido cítrico aquoso a 5%, solução de bicarbonato de sódio aquoso saturado e em seguida solução de cloreto de sódio aquoso saturado. A camada orgânica foi secada sobre sulfato de sódio anidroso e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo cru foi purificado com coluna de sílica gel (0-5% de MeOH em DCM) para fornecer o composto 25 (40 mg, 32% de produção como uma mistura de diastereômeros), 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 7,84 (m, 1H), 7,27 - 7,08 (m, 8H), 7,08 - 6,97 (m, 2H), 6,88 (m, 2H), 4,91 - 4,84 (m, 1H), 4,74 (m, 1H), 4,26 (m, 1H), 4,19 - 4,04 (m, 2H), 4,04 - 3,91 (m, 2H), 2,97 (m, 1H), 2,82 (m, 1H), 1,14 (m, 3H), 1,06 (m, 3H), 31P RMN (162 MHz, CD3OD) δ 3,63, 3,25, MS m/z = 637,0 [M+H]. Exemplo 29. 2-(((S)-(((2R,3S,4R,5R)-5-(4-aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin- 7-il)-5-ciano-3,4-di-hidroxitetra-hidrofuran-2- il)metóxi)(fenóxi)fosforil)amino)propanoato de (S)-metila (26)

[00413] A preparação de 2-(((S)-(((2R,3S,4R,5R)-5-(4-aminopirrolo[2,1- f][1,2,4]triazin-7-il)-5-ciano-3,4-di-hidroxitetra-hidrofuran-2- il)metóxi)(fenóxi)fosforil)amino)propanoato de (S)-metila é descrita abaixo.

[00414] O composto 1 (100 mg, 0,34 mmol) foi dissolvido em THF (2 mL) e resfriado com um banho de água gelada. Em seguida, t-BuMgCl de 1M (0,52 mL, 0,77 mmol) foi adicionado gota a gota lentamente. A mistura resultante foi agitada durante 30 min a temperatura ambiente. Em seguida, o composto I (Preparado de acordo com WO 2012142085, 219 mg, 0,52 mmol) em THF (2 mL) foi adicionado durante 5 min e a mistura resultante foi agitada durante 24 h em temperatura ambiente. A mistura reacional foi em seguida diluída com EtOAc, resfriada sob banho de água gelada, lavada com NaHCO3 aquoso (2 mL), lavado com salmoura, secado com sulfato de sódio, e concentrado em vácuo. A mistura resultante foi purificada por cromatografia de coluna de sílica gel (MeOH 0 a 20% em DCM) e prep-HPLC (acetonitrila 10 a 80% em água) para fornecer o composto 26 (12 mg, 6,6% como um diastereômero simples). 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 7,86 (s, 1H), 7,29 (dd, J = 8,6, 7,2 Hz, 2H), 7,21 — 7,09 (m, 3H), 6,94 - 6,81 (m, 2H), 4,79 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 4,38 (ddq, J = 10,8, 5,3, 2,7 Hz, 2H), 4,33 - 4,23 (m, 1H), 4,18 (t, J = 5,5 Hz, 1H), 3,86 (dq, J = 9,9, 7,1 Hz, 1H), 3,62 (s, 3H), 1,27 (dd, J = 7,2, 1,1 Hz, 3H), MS m/z = 533 (M+1)+. Exemplo 30. 2-(((S)-(((2R,3S,4R,5R)-5-(4-aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin- 7-il)-5-ciano-3,4-di-hidroxitetra-hidrofuran-2- il)metóxi)(fenóxi)fosforil)amino)propanoato de (S)-neopentila (27)

[00415] A preparação de 2-(((S)-(((2R,3S,4R,5R)-5-(4-aminopirrolo[2,1- f][1,2,4]triazin-7-il)-5-ciano-3,4-di-hidroxitetra-hidrofuran-2- il)metóxi)(fenóxi)fosforil)amino)propanoato de (S)-neopentila é descrita abaixo.

[00416] O composto 1 (100 mg, 0,34 mmol) foi dissolvido em THF (2 mL) e resfriado sob banho de água gelada. Em seguida, t-BuMgCl a 1M (0,52 mL, 0,77 mmol) foi adicionado gota a gota lentamente. A mistura resultante foi agitada durante 30 min em temperatura ambiente. Em seguida, o composto J (Preparado de acordo com WO2012075140, 248 mg, 0,52 mmol) foi adicionado durante 5 minutos e a mistura resultante foi agitada durante 24h em temperatura ambiente, diluída com EtOAc, resfriada sob banho de água gelada, tratada com NaHCO3 aquoso (2 mL), lavada com salmoura, secada com sulfato de sódio, e concentrada em vácuo. A mistura resultante foi purificada por cromatografia de coluna de sílica gel (MeOH 0 a 20% em DCM) e prep-HPLC (acetonitrila 10 a 80% em água) para fornecer o composto 27 (12 mg, 10% como um diastereômero simples). 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 7,86 (s, 1H), 7,36 - 7,24 (m, 2H), 7,23 - 7,10 (m, 3H), 6,96 - 6,85 (m, 2H), 4,78 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 4,38 (tdd, J = 10,0, 4,9, 2,5 Hz, 2H), 4,32 - 4,24 (m, 1H), 4,17 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 3,91 (dq, J = 9,8, 7,1 Hz, 1H), 3,81 (d, J = 10,5 Hz, 1H), 3,69 (d, J = 10,5 Hz, 1H), 1,31 (dd, J = 7,2, 1,1 Hz, 3H), 0,89 (s, 9H), MS m/z = 589 (M+1)+. Exemplo 31. 2-(((((2R,3S,4R,5R)-5-(4-aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)- 5-ciano-3,4-di-hidroxitetra-hidrofuran-2- il)metóxi)(fenóxi)fosforil)amino)propanoato de (2S)-ciclopentila (28)

[00417] A preparação de 2-(((((2R,3S,4R,5R)-5-(4-aminopirrolo[2,1- f][1,2,4]triazin-7-il)-5-ciano-3,4-di-hidroxitetra-hidrofuran-2- il)metóxi)(fenóxi)fosforil)amino)propanoato de (2S)-ciclopentila é descrita abaixo.

[00418] O composto 1 (100 mg, 0,34 mmol) foi dissolvido em THF (2 mL) e resfriado sob banho de água gelada. Em seguida, t-BuMgCl a 1M (0,52 mL, 0,77 mmol) foi adicionado gota a gota lentamente. A mistura resultante foi agitada durante 30 min em temperatura ambiente. Em seguida, o composto K (Preparado de acordo com WO2012075140, 247 mg, 0,52 mmol) em THF (2 mL) foi adicionado durante 5 minutos e a mistura resultante foi agitada durante 24 h em temperatura ambiente, diluída com EtOAc, resfriada sob banho de água gelada, tratada com NaHCO3 aquoso (2 mL), lavada com salmoura, secada com sulfato de sódio, e concentrada em vácuo. A mistura resultante foi purificada por cromatografia de coluna de sílica gel (MeOH 0 a 20% em DCM) e prep-HPLC (acetonitrila 10 a 80% em água) para fornecer exemplo 28 (47 mg, 23% como uma mistura de 27:1 de diastereômeros). 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 7,85 (s, 1H), 7,33 - 7,22 (m, 2H), 7,14 (tdd, J = 7,6, 2,1, 1,1 Hz, 3H), 6,95 - 6,87 (m, 2H), 5,13 - 5,00 (m, 1H), 4,78 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 4,48 - 4,35 (m, 2H), 4,30 (ddd, J = 10,6, 5,7, 3,6 Hz, 1H), 4,19 (t, J = 5,4 Hz, 1H), 3,78 (dq, J = 9,2, 7,1 Hz, 1H), 1,81 (dtd, J = 12,5, 5,9, 2,4 Hz, 2H), 1,74 - 1,49 (m, 6H), 1,21 (dd, J = 7,1, 1,2 Hz, 3H), MS m/z = 587 (M+1)+. Exemplo 32. 2-(((((2R,3S,4R,5R)-5-(4-aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)- 5-ciano-3,4-di-hidroxitetra-hidrofuran-2- il)metóxi)(fenóxi)fosforil)amino)propanoato de (2S)-ciclo-hexila (29)

[00419] A preparação de 2-(((((2R,3S,4R,5R)-5-(4-aminopirrolo[2,1- f][1,2,4]triazin-7-il)-5-ciano-3,4-di-hidroxitetra-hidrofuran-2- il)metóxi)(fenóxi)fosforil)amino)propanoato de (2S)-ciclo-hexila é descrita abaixo.

[00420] A uma mistura de composto 1 (50 mg, 0,343 mmol), o composto M (Preparado de acordo com US20130143835, 93 mg, 0,209 mmol), e MgCl2 (24,5 mg, 0,257 mmol) em DMF (1 mL) foi adicionado di-isopropiletilamina (0,075 mL, 0,43 mmol) gota a gota durante 5 min a 0°C. A mistura resultante foi agitada a 50°C durante 1 hora. A mistura reacional foi em seguida resfriada com um banho de água gelada, tratada com ácido cítrico a 1M (0,5 mL), e foi purificado diretamente por prep-HPLC (ACN 0 a 70% em água) para fornecer o composto 29 (20 mg, 19% como uma mistura de diastereômeros). 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 7,84 (s, 1H), 7,32 - 7,23 (m, 2H), 7,18 - 7,10 (m, 3H), 6,93 - 6,87 (m, 2H), 4,78 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 4,67 (td, J = 8,7, 4,2 Hz, 1H), 4,48 - 4,35 (m, 2H), 4,30 (ddd, J = 10,8, 5,7, 3,7 Hz, 1H), 4,20 (t, J = 5,4 Hz, 1H), 3,88 - 3,71 (m, 1H), 1,83 - 1,63 (m, 4H), 1,58 - 1,46 (m, 1H), 1,46 - 1,24 (m, 5H), 1,24 (s, 3H), 31P RMN (162 MHz, CD3OD) δ 3,75, MS m/z = 601 (M+1)+. Exemplo 33. 2-(((((2R,3S,4R,5R)-5-(4-aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)- 5-ciano-3,4-di-hidroxitetra-hidrofuran-2-il)metóxi)(fenóxi)fosforil)amino)-2- metilpropanoato de etila (30)

[00421] A preparação de 2-(((((2R,3S,4R,5R)-5-(4-aminopirrolo[2,1- f][1,2,4]triazin-7-il)-5-ciano-3,4-di-hidroxitetra-hidrofuran-2- il)metóxi)(fenóxi)fosforil)amino)-2-metilpropanoato de etila é descrita abaixo. Preparação de 2-((terc-butoxicarbonil)amino)-2-metilpropanoato de etila

[00422] Apreender trifenilfosfina (6,18g, 25,00 mmols) em THF (30 mL). A seguir, carregar DIAD (4,92 mL, 25,00 mmols) e agitar em temperatura ambiente durante 10 min. Dissolver ácido 2-((terc-butoxicarbonil)amino)-2- metilpropanoico (5,08 g, 25,00 mmols) em THF (20 mL) e adicionar a mistura reacional seguido por a adição de etanol (2,19 mL, 37,49 mmols). Deixar a reação agitar em temperatura ambiente durante uma hora. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida e o cru foi apreendido em 1:1 Et2O:Hexanos (120 mL). O óxido de trifenilfosfina foi filtrado e o solvente foi removido sob pressão reduzida. O cru foi apreendido em CH2Cl2 mínimo e purificado por cromatografia de sílica gel 0 a 50% de EtOAc/Hex para fornecer 2-((terc- butoxicarbonil)amino)-2-metilpropanoato de etila (2,71g, 47%). 1H RMN (400 MHz, Clorofórmio-d) δ 4,18 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 1,49 (s, 6H), 1,43 (s, 9H), 1,27 (t, J = 7,1 Hz, 3H). Preparação de cloridrato de 2-amino-2-metilpropanoato de etila

[00423] Apreender 2-((terc-butoxicarbonil)amino)-2-metilpropanoato de etila (2,71g, 11,72 mmols) em CH2Cl2 (25 mL) e lentamente adicionar HCl a 4N em dioxano (25 mmols) e agitar à temperatura ambiente. Em uma hora, a reação foi determinada estar concluída por TLC. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida e o cru foi coevaporado com Et2O duas vezes em seguida colocado sob vácuo elevado para fornecer cloridato de 2-amino-2- metilpropanoato de etila (2,02g, 102%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,70 (s, 3H), 4,18 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 1,46 (s, 6H), 1,21 (t, J = 7,1 Hz, 3H). Preparação de 2-metil-2-(((4-nitrofenóxi)(fenóxi)fosforil)amino) propanoato de etila (Composto N)

[00424] Apreender diclorofosfato de fenila (0,97 mL, 6,50 mmols) e cloridrato de 2-amino-2-metilpropanoato de etila (1,09g, 6,50 mmols) em CH2Cl2 (50 mL). Resfriar a mistura reacional a 0oC e lentamente adicionar TEA (1,75 mL, 12,45 mmols). Remover o banho frio e permitir a mistura reacional agitar à temperatura ambiente. Após duas horas, a adição do aminoácido foi determinada estar concluída por 31P RMN. Carregar p-nitrofenol (0,860g, 6,17 mmols) seguido pela adição de TEA (0,87, 7,69 mmols). Permitir a reação agitar à temperatura ambiente. Após duas horas, a reação foi determinada estar concluída por LCMS. A reação foi diluída com Et2O e os sais de TEA*HCl foram filtrados. O cru foi concentrado e purificado por cromatografia de sílica gel (050% de EtOAc/Hex) para fornecer o composto N (1,79g, 68%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,37 - 8,21 (m, 2H), 7,55 - 7,44 (m, 2H), 7,43 - 7,33 (m, 2H), 7,30 - 7,09 (m, 3H), 6,57 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 3,99 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 1,39 (s, 6H), 1,08 (t, J = 7,1 Hz, 3H), 31P RMN (162 MHz, DMSO-d6) δ -2,87, LC/MS: tR = 1,65 min, MS m/z = 408,97 [M+1]; sistema LC: Thermo Accela 1250 UHPLC; sistema MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB-C18 100A, 50 x 3,00 mm; Solventes: Acetonitrila com ácido fórmico a 0,1%, Água com ácido fórmico a 0,1%; Gradiente: 0 min-2,4 min 2-100% de ACN, 2,4 min-2,80 min 100% de ACN, 2,8 min-2,85 min 100%-2% de ACN, 2,85 min-3,0 min 2% de ACN a 1,8 mL/min. Preparação de 2-(((((2R,3S,4R,5R)-5-(4-aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7- il)-5-ciano-3,4-di-hidroxitetra-hidrofuran-2-il)metóxi)(fenóxi)fosforil)amino)-2- metilpropanoato de etila (Composto 30)

[00425] Apreender o composto 1 (66 mg, 0,23 mmol) em NMP (2,0 mL). Resfriar a mistura para 0oC e lentamente adicionar tBuMgCl (1,0M em THF, 0,34 mL, 0,34 mmol). Permitir a reação agitar a 0oC durante 30 min, em seguida adicionar uma solução de composto N (139 mg, 0,34 mmol) dissolvido em THF (1,0 mL). Remover o banho frio e colocar a reação em um banho de óleo preaquecido a 50oC. Após duas horas, a reação foi resfriada para temperatura ambiente e extinta com ácido acético e metanol. O cru foi concentrado e purificado por HPLC de fase reversa sem modificador para fornecer o composto 30 (32 mg, 25% como uma mistura de diastereômeros). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,89 (m, 3H), 7,31 (q, J = 8,1 Hz, 2H), 7,22 - 7,05 (m, 3H), 6,87 (d, J = 4,5, 1H), 6,80 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 6,27 (d, J = 11,7, 1H), 5,81 (d, J = 9,7, 1H), 5,35 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 4,64 (dt, J = 9,0, 5,6 Hz, 1H), 4,24 (m, 2H), 4,11 (m, 1H), 4,04 - 3,90 (m, 3H), 1,39 - 1,23 (m, 6H), 1,10 (t, J = 7,1, 3H), 31P RMN (162 MHz, DMSO-d6) δ 2,45, 2,41, LC/MS: tR = 1,03 min, MS m/z = 561,03 [M+1]; sistema de LC: Thermo Accela 1250 UHPLC; sistema de MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB-C18 100A, 50 x 3,00 mm; Solventes: Acetonitrila com ácido fórmico a 0,1%, Água com ácido fórmico a 0,1%; Gradiente: 0 min-2,4 min 2-100% de ACN, 2,4 min-2,80 min 100% de ACN, 2,8 min-2,85 min 100%-2% decACN, 2,85 min-3,0 min 2% de ACN a 1,8 mL/min. Exemplo 34. 2-(((((2R,3S,4R,5R)-5-(4-aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)- 5-ciano-3,4-di-hidroxitetra-hidrofuran-2-il)metóxi)(fenóxi)fosforil)amino)-2- metilpropanoato de isopropila (31)

[00426] A preparação de 2-(((((2R,3S,4R,5R)-5-(4-aminopirrolo[2,1- f][1,2,4]triazin-7-il)-5-ciano-3,4-di-hidroxitetra-hidrofuran-2- il)metóxi)(fenóxi)fosforil)amino)-2-metilpropanoato de isopropila é descrita abaixo. Preparação de 2-((terc-butoxicarbonil)amino)-2-metilpropanoato de isopropila

[00427] Apreender trifenilfosfina (6,17g, 25,00 mmols) em THF (30 mL). A seguir, carregar DIAD (4,92 mL, 25,00 mmols) e agitar em temperatura ambiente durante 10 min. Dissolver ácido 2-((terc-butoxicarbonil)amino)-2- metilpropanoico (5,07g, 25,00 mmols) em THF (20 mL) e adicionar à mistura reacional seguido pela adição de isopropanol (1,91 mL, 25,00 mmols). Permitir a reação agitar em temperatura ambiente durante 1h. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida e o cru foi apreendido em 1:1 Et2O:Hexanos (120 mL). O óxido de trifenilfosfina sólido foi filtrado e o solvente foi removido sob pressão reduzida. O cru foi apreendido em CH2Cl2 mínimo e purificado por cromatografia de sílica gel (0-50% de EtOAc/Hex) para fornecer 2-((terc- butoxicarbonil)amino)-2-metilpropanoato de isopropila (4.09g, 67%). 1H RMN (400 MHz, Clorofórmio-d) δ 5,03 (p, J = 6,2 Hz, 1H), 1,48 (s, 6H), 1,40 (d, J = 6,2 Hz, 9H), 1,24 (d, J = 6,3 Hz, 6H). Preparação de cloridrato de 2-amino-2-metilpropanoato de isopropila

[00428] Apreender 2-((terc-butoxicarbonil)amino)-2-metilpropanoato de isopropila (4,09 g, 16,67 mmols) em CH2Cl2 (50 mL) e lentamente adicionar HCl a 4N em dioxano (50 mmols) e agitar à temperatura ambiente. Em uma hora, a reação foi determinada estar concluída por TLC. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida e o cru foi coevaporado com Et2O duas vezes em seguida colocado sob vácuo elevado para fornecer cloridrato de 2-amino-2- metilpropanoato de isopropila (3,06g, 101%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,61 (s, 3H), 4,96 (p, J = 6,2 Hz, 1H), 1,44 (s, 6H), 1,22 (d, J = 6,2 Hz, 6H). Preparação de 2-metil-2-(((4-nitrofenóxi)(fenóxi)fosforil)amino) propanoato de isopropila (Composto O)

[00429] Apreender diclorofosfato de fenila (0,83 mL, 5,58 mmols) e cloridrato de 2-amino-2-metilpropanoato de isopropila (1,01g, 5,58 mmols) em CH2Cl2 (50 mL). Resfriar a mistura reacional para 0oC e lentamente adicionar TEA (1,61 mL, 11,45 mmols). Remover o banho frio e permitir a mistura reacional agitar à temperatura ambiente. Após duas horas, a adição do aminoácido foi determinada estar concluída por 31P RMN. Carregar p-nitrofenol (0,74g, 5,30 mmols) seguido pela adição de TEA (0,81, 5,84 mmols). Permitir a reação agitar à temperatura ambiente. Após duas horas, a reação foi determinada estar concluída por LCMS. A reação foi diluída com Et2O e os sais de TEA*HCl foram filtrados. O cru foi concentrado e purificado por cromatografia de sílica gel (0-50% de EtOAc/Hex) para fornecer o composto O (1,45g, 62%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-dβ) δ 8,42 - 8,19 (m, 2H), 7,55 - 7,43 (m, 2H), 7,39 (dd, J = 8,6, 7,2 Hz, 2H), 7,30 - 7,12 (m, 3H), 6,53 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 4,82 (hept, J = 6,3 Hz, 1H), 1,38 (s, 6H), 1,09 (d, J = 6,3, 6H), 31P RMN (162 MHz, DMSO-d6) δ -2,84, LC/MS: tR = 1,73 min, MS m/z = 422,92 [M+1]; sistema de LC: Thermo Accela 1250 UHPLC; sistema de MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB-C18 100A, 50 x 3,00 mm; Solventes: Acetonitrila com ácido fórmico a 0,1%, Água com ácido fórmico a 0,1%; Gradiente: 0 min-2,4 min 2-100% de ACN, 2,4 min-2,80 min 100% de ACN, 2,8 min-2,85 min 100%-2% de ACN, 2,85 min-3,0 min 2% de ACN a 1,8 mL/min. Preparação de 2-(((((2R,3S,4R,5R)-5-(4-aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7- il)-5-ciano-3,4-di-hidroxitetra-hidrofuran-2-il)metóxi)(fenóxi)fosforil)amino)-2- metilpropanoato de isopropila (Composto 31)

[00430] Apreender o composto 1 (66 mg, 0,23 mmol) em NMP (2,0 mL). Resfriar a mistura para 0°C e lentamente adicionar tBuMgCl (1,0M em THF, 0,57 mL, 0,57 mmol). Permitir a reação agitar a 0°C durante 30 minutos, em seguida adicionar uma solução de composto O (143 mg, 0,34 mmol) dissolvida em THF (1,0 mL). Remover o banho frio e colocar a reação em um banho de óleo preaquecido 50°C. Após duas horas, a reação foi resfriada para temperatura ambiente e foi extinta com ácido acético e metanol. O cru foi concentrado e purificado por HPLC de fase reversa sem modificador para fornecer o composto 31 (48 mg, 37% como uma mistura de diastereômeros). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,88 (m, 3H), 7,30 (td, J = 8,5, 7,0 Hz, 2H), 7,20 - 7,04 (m, 3H), 6,87 (d, J = 4,5, 1H), 6,80 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 6,27 (d, 6,1 Hz, 1H), 5,75 (t, J = 9,1 Hz, 1H), 5,34 (d, J = 5,7 Hz, 1H), 4,81 (p, J = 6,3 Hz, 1H), 4,71 — 4,50 (m, 1H), 4,23 (m, 2H), 4,11 (m, 1H), 4,03 - 3,83 (m, 1H), 1,37 - 1,23 (m, 6H), 1,18 - 1,04 (m, 6H). 31P RMN (162 MHz, dmso) δ 2,47, 2,43, LC/MS: tR = 1,08 min, MS m/z = 575,06 [M+1]; sistema de LC: Thermo Accela 1250 UHPLC; sistema de MS: Thermo LCQ Fleet; Coluna: Kinetex 2,6μ XB-C18 100A, 50 x 3,00 mm; Solventes: Acetonitrila com ácido fórmico a 0,1%, Água com ácido fórmico a 0,1%; Gradiente: 0 min-2,4 min 2-100% de ACN, 2,4 min-2,80 min 100% de ACN, 2,8 min-2,85 min 100%-2% de ACN, 2,85 min-3,0 min 2% de ACN a 1,8 mL/min. Exemplo 35. 2-(((S)-(((2R,3S,4R,5R)-5-(4-aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin- 7-il)-5-ciano-3,4-di-hidroxitetra-hidrofuran-2- il)metóxi)(fenóxi)fosforil)amino)propanoato de (S)-2-etilbutila (32)

[00431] A preparação de 2-(((S)-(((2R,3S,4R,5R)-5-(4-aminopirrolo[2,1- f][1,2,4]triazin-7-il)-5-ciano-3,4-di-hidroxitetra-hidrofuran-2- il)metóxi)(fenóxi)fosforil)amino)propanoato de (S)-2-etilbutila é descrita abaixo. Preparação de (3R,4R,5R)-3,4-bis(benzilóxi)-5-((benzilóxi)metil)di- hidrofuran-2(3H)-ona.

[00432] (3R,4R,5R)-3,4-bis(benzilóxi)-5-((benzilóxi)metil)tetra-hidrofuran- 2-ol (15,0g) foi combinado com MTBE (60,0 mL), KBr (424,5 mg), solução de K2HPO4 aquoso (2,5M, 14,3 mL), e TEMPO (56 mg). Esta mistura foi resfriada a cerca de 1°C. Solução Aalvejante aquosa (7,9% em peso) foi lentamente carregada em porções até consumo concluído de material de partida como indicado através de um teste deamido/iodeto. As camadas foram separadas, e a camada aquosa foi extraída com MTBE. A fase orgânica combinada foi secada sobre MgSO4 e concentrada sob pressão reduzida para produzir o produto como um sólido. Preparação de (4-amino-7-iodopirrolo[2,1-f] [1,2,4]triazina)

[00433] A uma solução fria de 4-aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]-triazina (10,03 g; 74,8 mmols) em N,N-dimetilformamida (70,27 g), N-iodossuccinimida (17,01g; 75,6 mmols) foi carregada em porções, enquanto mantendo os teores a cerca de 0°C. Na conclusão da reação (cerca de 3 horas a cerca de 0°C), a mistura reacional foi transferida em uma solução aquosa de hidróxido de sódio a 1 M (11 g de NaOH e 276 mL de água), enquanto mantendo os teores a cerca de 20-30°C. A suspensão resultante foi agitada a cerca de 22°C durante 1,5 h e em seguida filtrada. Os sólidos são enxaguados com água (50 mL) e secados a cerca de 50°C sob vácuo para produzir 4-amino-7-iodopirrolo[2,1-f] [1,2,4]triazina como um sólido. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,90 (s, 1H), 7,78 (br s, 2H), 6,98 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 6,82 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 13C RMN (101 MHz, DMSO-d6) δ 155,7, 149,1, 118,8, 118,1, 104,4, 71,9, MS m/z = 260,97 [M+H]. Preparação de (3R,4R,5R)-2-(4-aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-3,4- bis(benzilóxi)-5-((benzilóxi)metil)tetra-hidrofuran-2-ol por meio de (4-amino-7- iodopirrolo[2,1-f] [1,2,4]triazina)

[00434] A um reator sob uma atmosfera de nitrogênio foi carregada base de iodo 2 (81 g) e THF (1,6 LV). A solução resultante foi resfriada a cerca de 5°C, e TMSCl (68 g) foi carregada. PhMgCl (345 mL, 1,8 M em THF) foi em seguida carregado lentamente enquanto mantendo uma temperatura interna a cerca de < 5°C. A mistura reacional foi agitada a cerca de 0°C durante 30 min, e em seguida resfriada a cerca de -15°C. iPrMgCl-LiCl (311 mL, 1,1 M em THF) foi carregado lentamente enquanto mantendo uma temperatura interna abaixo cerca de -12°C. Após cerca de 10 minutos de agitação a cerca de -15°C, a mistura reacional foi resfriada a cerca de -20°C, e uma solução de lactona 1 (130 g) em THF (400 mL) foi carregada. A mistura reacional foi em seguida agitada a cerca de -20°C durante cerca de uma hora e extinta com AcOH (57 mL). A mistura reacional foi aquecida para cerca de 0°C e adjustada para pH 7-8 com NaHCO3 aquoso (5 % em peso, 1300 mL). A mistura reacional foi em seguida diluída com EtOAc (1300 mL), e as camadas orgânicas e aquosas foram separadas. A camada orgânica foi lavada com HCl a 1N (1300 mL), NaHCO3 aquoso (5% em peso, 1300 mL), e salmoura (1300 mL), e em seguida secada sobre Na2SO4 anidroso e concentrada até a secura. A purificação por cromatografia de coluna de sílica gel usando um gradiente que consiste em uma mistura de MeOH e EtOAc forneceu o produto. Preparação de 2-(((perfluorofenóxi)(fenóxi)fosforil)amino)propanoato) de ((2S)-2-etilbutila (mistura de Sp e Rp):

[00435] Cloridrato de 2-etilbutil éster de L-alanina (5,0 g, 23,84 mmols) foi combinado com cloreto de metileno (40 mL), resfriado a cerca de -78°C, e diclorofosfato de fenila (3,65 mL, 23,84 mmols) foi adicionado. Trietilamina (6,6 mL, 47,68 mmols) foi adicionada durante cerca de 60 minutos a cerca de -78°C e a mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente durante 3h. A mistura reacional foi resfriada a cerca de 0°C e pentafluorofenol (4,4 g, 23,84 mmols) foi adicionado. Trietilamina (3,3 mL, 23,84 mmols) foi adicionada durante cerca de 60 min. A mistura foi agitada durante cerca de 3h em temperatura ambiente e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em EtOAc, lavado com uma solução de carbonato de sódio aquoso diversas vezes, e concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna de sílica gel usando um gradiente de EtOAc e hexanos (0 a 30%). As frações contendo o produto concentradas sob pressão reduzida para fornecer (2S)- 2-(((perfluorofenóxi)(fenóxi)fosforil)amino)propanoato de 2-etilbutila como um sólido. 1H RMN (400 MHz, Clorofórmio-d) δ 7,41 - 7,32 (m, 4H), 7,30 - 7,17 (m, 6H), 4,24 - 4,16 (m, 1H), 4,13 - 4,03 (m, 4H), 4,01 - 3,89 (m, 1H), 1,59 - 1,42 (m, 8H), 1,40 - 1,31 (m, 8H), 0,88 (t, J = 7,5 Hz, 12H). 31P RMN (162 MHz, Cloroform-d) δ -1,52, 19F RMN (377 MHz, Cloroform-d) δ -153,63, -153,93 (m), -160,05 (td, J = 21,9, 3,6 Hz), -162,65 (qd, J = 22,4, 20,5, 4,5 Hz), MS m/z = 496 [M+H]. Preparação de Composto Título (mistura de Sp e Rp):

[00436] O nucleosídeo (29 mg, 0,1 mmol) e a fosfonamida (60 mg, 0,12 mmol) e N,N-dimetilformamida (2 mL) foram combinados em temperatura ambiente. Magnésio cloreto de terc-butila (1M em THF, 0,15 mL) foi lentamente adicionado. Após cerca de uma hora, a reação foi diluída com acetato de etila, lavada com solução de ácido cítrico aquoso (5% em peso), solução de NaHCO3 aquoso saturado e solução de salmoura saturada. A fase orgânica foi secada sobre Na2SO4 e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna de sílica gel usando um gradiente de metanol e CH2Cl2 (0 a 5%). As frações contendo foram concentradas sob pressão reduzida para fornecer o produto . Preparação de (3aR,4R,6R,6aR)-4-(4-aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)- 6-(hidroximetil)-2,2-dimetiltetra-hidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-carbonitrila:

[00437] A uma mistura de (2R,3R,4S,5R)-2-(4-aminopirrolo[2,1- f][1,2,4]triazin-7-il)-3,4-di-hidróxi-5-(hidroximetil)tetra-hidrofuran-2- carbonitrila (5,8g, 0,02 mol), 2,2-dimetoxipropano (11,59 mL, 0,09 mol) e acetona (145 mL) em temperatura ambiente foi adicionado ácido sulfúrico (18M, 1,44 mL). A mistura foi aquecida para cerca de 45°C. Após cerca de 30 min, a mistura foi resfriada para temperatura ambiente e bicarbonato de sódio (5,8 g) e água 5,8 mL) foram adicionados. Após 15 min, a mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi apreendido em acetato de etila (150 mL) e água (50 mL). A camada aquosa foi extraída com acetato de etila (2 x 50 mL). A fase orgânica combinada foi secada sobre sulfato de sódio e concentrada sob pressão reduzida para fornecer (2R,3R,4S,5R)-2-(4- aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-3,4-di-hidróxi-5-(hidroximetil)tetra- hidrofuran-2-carbonitrila cru. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 7,84 (s, 1H), 6,93 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 6,89 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 5,40 (d, J = 6,7 Hz, 1H), 5,00 (dd, J = 6,7, 3,3 Hz, 1H), 4,48 - 4,40 (m, 1H), 3,81 - 3,72 (m, 2H), 1,71 (s, 3H), 1,40 (s, 3H), MS m/z = 332,23 [M+1]. Preparação de 2-(((((2R,3S,4R,5R)-5-(4-aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7- il)-5-ciano-3,4-di-hidroxitetra-hidrofuran-2- il)metóxi)(fenóxi)fosforil)amino)propanoato de (2S)-2-etilbutila:

[00438] Acetonitrila (100 mL) foi combinada com 2-(((4- nitrofenóxi)(fenóxi)fosforil)-amino)propanoato de (2S)-2-etilbutila (9,6 g, 21,31 mmols), o álcool de substrato (6,6 g, 0,02 mol), cloreto de magnésio (1,9 g, 19,91 mmols) em temperatura ambiente. A mistura foi agitada durante cerca de 15 min e N,N-di-isopropiletilamina (8,67 mL, 49,78 mmols) foi adicionada. Após cerca de 4h, a reação foi diluída com acetato de etila (100 mL), resfriada a cerca de 0°C e combinada com solução de ácido cítrico aquoso (5% em peso, 100 mL). A fase orgânica foi lavada com solução de ácido cítrico aquoso (5% em peso, 100 mL) e soluçõ de cloreto de amônio saturado aquoso (40 mL), solução de carbonato de potássio aquoso (10% em peso, 2 x 100 mL), e solução de salmoura aquosa saturada (100 mL). A fase orgânica foi secada com sulfato de sódio e concentrada sob pressão reduzida para fornecer o produto cru. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 7,86 (s, 1H), 7,31 - 7,22 (m, 2H), 7,17 - 7,09 (m, 3H), 6,93 - 6,84 (m, 2H), 5,34 (d, J = 6,7 Hz, 1H), 4,98 (dd, J = 6,6, 3,5 Hz, 1H), 4,59 - 4,50 (m, 1H), 4,36 - 4,22 (m, 2H), 4,02 (dd, J = 10,9, 5,7 Hz, 1H), 3,91 (dd, J = 10,9, 5,7 Hz, 1H), 3,83 (dq, J = 9,7, 7,1 Hz, 1H), 1,70 (s, 3H), 1,50 - 1,41 (m, 1H), 1,39 (s, 3H), 1,36 - 1,21 (m, 7H), 0,86 (t, J = 7,4 Hz, 6H), MS m/z = 643,21 [M+1]. Preparação de 2-(((S)-(((2R,3S,4R,5R)-5-(4-aminopirrolo[2,1-f][1,2,4] triazin-7-il)-5-ciano-3,4-di-hidroxitetra-hidrofuran-2- il)metóxi)(fenóxi)fosforil)amino)propanoato de (S)-2-etilbutila (Composto 32)

Composto 32

[00439] O acetonida cru (12,85 g) foi combinado com tetra-hidrofurano (50 mL) e concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi apreendido em tetra-hidrofurano (100 mL), resfriado a cerca de 0°C e HCl concentrado (20 mL) foi lentamente adicionado. A mistura foi deixada aquecer para temperatura ambiente. Após o consumo do acetonida de partida como indicado por análise de HPLC, água (100 mL) foi adicionada seguido por solução de bicarbonato de sódio aquoso saturado (200 mL). A mistura foi extraída com acetato de etila (100 mL), a fase orgânica lavada com solução de salmoura aqusa saturada (50 mL), secada sobre sulfato de sódio e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna de sílica gel usando um gradiente de metanol e acetato de etila (0 a 20%). As frações contendo o produto foram concentradas sob pressão reduzida para fornecer o produto. Atividade Antiviral

[00440] Outro aspecto da invenção refere-se aos métodos de inibição de infecções virais, compreendendo a etapa de tratamento de uma amostra ou um suspeito de necessitar de tal inibição com a composição da invenção.

[00441] Dentro do contexto da invenção, as amostras suspeitas de conter um vírus incluem materiais naturais ou artificiais tais como organismos vivos; culturas de tecido ou célula; amostras biológicas tal como amostras de material biológico (sangue, soro, urina, fluido cerebroespinal, lágrimas, escarro, saliva, amostras de tecido e similares); amostras de laboratório; amostras de comida, água ou ar; amostras de bioprodutos tal como extratos de células, particularmente células recombinantes que sintetizam uma glicoproteína desejada; e similares. Tipicamente, a amostra será suspeita de conter um organism que induz uma infecção viral, frequentemente um organismo tal como um vírus de tumor. As amostras podem estar contidas em qualquer meio incluindo água e misturas de solvente orgânico/água. As amostras incluem organismos vivos tais como humanos, e materiais artificiais tais como culturas celulares.

[00442] Se desejado, a atividade antivírus de um composto da invenção após aplicação da composição pode ser observada por um método incluindo métodos diretos e indiretos de detectar tal atividade. Métodos quantitativos, qualitativos, e semiquantitativos de determinar tal atividade são todos contemplados. Tipicamente, um dos métodos de análise descritos acima são aplicados, entretanto, quaisquer outros métodos tal como observação das propriedades fisiológicas de um organismo vivo são também aplicáveis.

[00443] A atividade antiviral de um composto da invenção pode ser medida usando protocolos de análise padrão que são conhecidos. Por exemplo, a atividade antiviral de um composto pode ser medida usando os seguintes protocolos gerais:

Exemplo 36. Ensaio de citotoxicidade e atividade antiviral de Vírus Lassa e vírus Junin

[00444] A atividade antiviral de Composto 1, Composto 9, e Composto 32 foi medida contra o vírus Lassa (LASV) e vírus Junin (JUNV). Todos os estudos conduzidos com vírus do tipo selvagem oram realizados em contenção de biossegurança de nível 4 (BSL-4) no US Army Medical Research Institute for Infectious Diseases (USAMRIID). Ensaios antivirais conduzidos com linhagem atenuada de JUNV foram conduzidos na Utah State University em um laboratório BSL-2. Ensaios antivirais de vírus Lassa foram conduzidos em células HeLa. Ensaios antivirais de vírus Junin foram conduzidos em células Vero e HeLa.

[00445] Ensaios antivirais foram conduzidos em placas de 384 ou 96 em contenção BSL-4 usando um sistema de imageamento de alto teor para quantificar a produção de antígeno de vírus como uma medida de replicação de vírus. Um controle “sem vírus” (Coluna 2) e um controle de "1% de DMSO" (Coluna 3) foram incluídos em cada placa para determinar o sinal de replicação de vírus de 0% e 100%, respectivamente. Os anticorpos primários usados para detecção de antígenos virais foram mm L52-161-6 anti-GP; LASV e mm Y- GQC03_BF11 anti-GP; JUNV e anticamundongo-IgG DyLight 488 foi usado como o anticorpo de detecção secundário. O anticorpo primário foi diluído 1000 vezes em tampão de bloqueio (1xPBS com 3% de BSA) e adicionado a cada cavidade da placa de ensaio. As placas de ensaio foram incubadas durante 60 minutos em temperatura ambiente. O anticorpo primário foi removido e as células foram lavadas 3 vezes com 1xPBS. O anticorpo secundário foi diluído 1000 vezes em tampão de bloqueio e foi adicionado a cada cavidade na placa de ensaio. As placas de ensaio foram incubadas durante 60 minutos em temperatura ambiente. Os núcelso foram manchados usando Draq5 (Biostatus, Shepshed Leicestershire, UK, Cat# DR05500) diluído em 1xPBS. As imagens de células foram adquiridas usando Perkin Elmer Opera microscópio confocal (Perkin Elmer, Waltham, MA) usando 10x objetivo aéreo para coletar cinco imagens por cavidade. O antígeno específico de vírus foi quantificado medindo a emissão de fluorescência em um comprimento de onda de 488nm e os núcleos foram quantificados medindo a emissão de fluorescência em um comprimento de onda de 640 nm. Os valores de Z' para todos os ensaios antivirais foram de > 0,3.

[00446] A porcentagem de inibição foi calculada para cada concentração testesda com relação aos controles de inibição de 0% e 100% e o valor EC50 para cada composto foi determinado por regressão não linear como a concentração eficaz do composto que inibiu a replicação de vírus em 50%. Exemplo 37. Ensaio de vírus Junin - Vero

[00447] Células Vero ou Vero E6 foram semeadas em placas de 96 cavidades em 20.000 células por cavidade em 100 uL de MEM+2% de FBS. Compostos diluídos em DMSO foram misturados com 120 uL de MEM+2% FBS. 100 uL de cada composto teste são transferidos para duas cavidades de uma placa de 96 cavidades. 20 uL de solução de vírus em MEM+20% de FBS são adicionados de modo que as concentrações teste finais sejam de 47, 4.7, 0,47, 0,047 uM e a multiplicidade de infecção fosse de 0,003 pfu/célula. As placas teste foram incubadas até que os controles de vírus não tratdos se aproximassem dos efeitos citopáticos máximos (CPE) (5 a 7 dias). As placas são em seguida mancadas com tintura vermelha neutra durante duas horas, em seguida eluídas em tampão de Citrato/Etanol e lidas em um espectrofostômetro a 540 nm. O valor EC50 é calculado por análise de regressão como a concentração de composto teste requerido para CPE induzido viral por 50% medido por manchamento vermelho neutro. Exemplo 38. Ensaio de vírus Junin - HeLa

[00448] Células HeLa foram semeadas em 2000 células por cavidade em uma placa de 384 cavidades e os compostos foram adicionados às placas de ensaio como descrito na seção 3.2.1. As placas de ensaio foram transferidas para o conjunto BSL-4 e infectadas com 0,3 pfu poe célula JUNV que resultou em ~50% das células expressando o antígeno viral em um perído de 48h. As placas de ensaio foram incubadas durante 48h e a replicação viral foi quantificada por imunomanchamento usando anticorpos que reconheceram as glicoproteínas virais. Exemplo 39. Ensaio de vírus Lassa

[00449] As células HeLa foram semeadas em 2000 células por cavidade em uma placa de 384 cavidades e os compostos foram adicionados às placas de ensaio como descrito na seção 3.2.1. As placas de ensaio foram transferidas para o conjunto e BSL-4 e infectadas com 0,1 pfu por célula LASV que resultou em > 60% das células expressando o antígeno viral em um período de 48h. As placas de ensaio foram incubadas durante 48h e a replicação de vírus foi quantificada por imunomanchamento usando anticorpos que reconheceram as glicoproteínas virais. Tabela 2: Ensaios antivirais de Vírus Lassa e vírus

[00450] Tabela 2: Atividade Antiviral In vitro de Compostos 1, 9, e 32 contra arenavírus

Exemplo 40. Ensaios de Citotoxicidade e atividade antiviral de MERS-CoV e SARS-CoV

[00451] Atividade antiviral de Composto 9 e Composto 32 foi medida contra o vírus MERS (MERS-CoV) e vírus SARS (SARS-CoV).

[00452] Os ensaios antivirais foram conduzidos em USAMRIID e na University of North Carolina at Chapel Hill. Exemplo 41. Ensaio antiviral de MERS-CoV (USAMRIID)

[00453] Células Vero E6 semeadas em placas de 384 cavidades e diluições seriais de Composto 32 ou Composto 9 foram adicionadas às placas de ensaio por titulação direta usando um Dispensador HP D300 Digital (Hewlett-Packard, Palo Alto, CA). As placas foram transferidas para o conjunto BSL-4 e infectadas com MERS-CoV (Linhagens Jordan N3) em uma multiplicidade de infecção de 0,5 de unidade de formação de placa (pfu) por célula. As cultutas infectadas foram incubadas durante 48 horas. O nível de replicação de vírus em culturas tratadas com composto e tratadas com veículo foi determinado quantificando o nível específico de vírus após imunomanchamento com anticorpo contra a proteína MERS-CoV spike (S). O anticorpo primário (40069-RP02 rb - HCoV-EMC /proteína 2012 spike(S)) foi diluída 1000 vezes em tampão de bloqueio (1x solução salina tamponade por fosfato (PBS) com 3% de BSA) e adicionado a cada cavidade da placa de cavidade. As placas de ensaio foram incubados durante 60 minutos em temperatura ambiente. O anticorpo primário foi removido e as células foram lavadas 3 vezes com 1x PBS. O anticorpo de detecção secundário foi um anticoelho IgG conjugado com Dylight488 (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, Cat# 405310). O anticorpo secundário foi diluída 1000 vezes em tampão de bloqueio e foi adicionado a cada cavidade na placa de ensaio. As placas de ensaio foram incubadas durante 60 minutos em temperatura ambiente. Os núcleos foram manchados usando Draq5 (Biostatus, Shepshed Leicestershire, Reino Unido, Cat# DR05500) diluído em 1x PBS. As células foram contramanchadas com CellMask Deep Red (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, Cat# C10046) para realçar a detecção do compartimento de citoplasma. Imagens de célula foram adquiridas usando microscópio confocal Perkin Elmer Opera (Perkin Elmer, Waltham, MA) usando objetiva aérea 10x para coletar 5 imagens por cavidade. Antígeno específico de vírus foi quantificado medindo a emissão de fluorescência em um comprimento de onda de 488nm e os núcleos foram quantificados medindo a emissão de fluorescência em um um comprimento de onda de 640nm. Análise de imagem de alto teor foi realizada para quantificar o percentual de células infectadas e viabilidade celular. A análise de resposta à dose para determinar os valores EC50 foi realizada usando software GeneData Screener aplicando algoritmo Levenberg-Marquardt para estratégia de ajuste de curva. Exemplo 42. Ensaio antiviral de MERS-CoV e SARS-CoV

[00454] Culturas de célula HAE isaoladas de tecido de pulmão foram cultivadas durante 6 semanas na interface do ar líquido para promover a diferenciação. As superficies apicais das culturas de HAE foram lavadas a 24 horas e uma hora antes da infecção com 1x PBS durante >uma hora a 3°C. Proteína fluorescente vermelha expressando MERS-CoV recombinante (MERS- CoV RFP) e proteína fluorescente verde expressando SARS-CoV (SARS-CoV GFP) foram usadas para infectar apicamente as culturas de HAE diferenciadas em uma multiplicidade de infecção de 0,1 pfu por célula. Para infectar as culturas de HAE, as lavagens apicais foram removidas, inóculo viral foi adicionado, e as culturas inoculadas foram incubadas a 37°C durante 2,5 horas. O inóculo foi removido, e as superfícies apicais das culturas de HAE foram lavadas 3 vezes com 500μL de 1x PBS para remover o vírus residual. Cinco diluições seriais de 3 vezes de Composto 9 iniciando a 10 μM foram preparadas em triplicata e adicionadas aos meios de ALI de HAE no lado basolateral da cultura aproximadamente 30 minutos antes da infecção. A replicação viral foi avaliada por imageamento por fluorescência de culturas celulares após uma incubação de 48 horas. Além disso, a replicação viral foi quantificada medindo a produção de vírus infeccioso em lavagens aplicais de HAE por ensaio de placa em monocamadas de célula Vero e quantificando a produção de RNA viral de RNA celular total por ensaio de PCR em tempo real. Tabela 3: Ensaios antivirais MERS Tabela 3: Atividade Antiviral in vitro de Composto 32 contra coronavírus

Exemplo 43. Ensaio de PCR em tempo real de MERS-CoV e SARS-CoV

[00455] Em 48 horas após infecção, culturas de HAE primarias do ensaio antiviral descrito acima foram colhidas em 500 μL de TRIzol. RNA foi purificado usando um kit Direct-zol RNA MiniPrep (Zymo Research Corporation, Irvine, CA, USA). O cDNA de primeiro filamento foi gerado para cada amostra usando SuperScript III (Life Technologies, Grand Island, NY, USA) com incubação a 55°C. Após a geração de cDNA de primeiro filamento, ORF1 (RNA de genoma) e ORF8 ou ORF9 (RNA subgenômico de MERS-CoV e SARS-CoV, respectivamente) foram quantificados por PCR em tempo real usando os seguintes iniciadores: MERS- CoV: Líder dianteiro (5'- GAA TAG CTT GGC TAT CTC AC -3'), ORF1 Reverso (5'- CAC AAT CCC ACC AGA CAA -3'), ORF8 Reverso (5'- TTG TTA TCG GCA AAG GAA AC -3'); e SARS-CoV: Dianteiro líder (5'- AGC CAA CCA ACC TCG ATC TCT TGT - 3'), ORF1 Reverso (5'- TGA CAC CAA GAA CAA GGC TCT CCA -3'), ORF9 Reverso (5'- ATT GGT GTT GAT TGG AAC GCC CTG -3'). As leituras foram normalizadas para GAPDH usando os seguintes iniciadores: GAPDH dianteiro (5'- TGC ACC ACC AAC TGC TTA GC -3') e GAPDH Reverso (5'- GGC ATG GAC TGT GGT CAT GAG -3'). Os resultados são expressos como alterações de log10 vezes em ORF1 viral e RNA codificando ORF8 (MERS-CoV) / e número de cópia de RNA codificando ORF9 (SARS-CoV) em células tratadas versus não tratadas usando o método {10431}. Exemplo 44. Eficácia In vitro em células Calu-3 2B4

[00456] Em 48 horas antes da infecção, as células Calu-3 2B4 foram semeadas em uma placa de base transparente de paredes pretas de 96 cavidades a 5 x104 células/cavidades. 24 horas antes da infecção, o meio de cultura foi substituído. Uma matéria-prima a 20 mM de Composto 32 foi serialmente diluída em 100% de DMSO em incrementos de 3 vezes para obter uma série de diluição de dez pontos. MERS-nLUC foi diluído em DMEM 10% de FBS, e antibióticos/antimicina 1% para obter uma multiplicidade de infecção (MOI) de 0,08. As células foram infectadas em triplicate por diluição de fármaco durante 1 hora, após a qual o vírus foi aspirado, as culturas foram enxaguadas uma vez e o meio fresco contendo o fármaco ou veículo foi adicionado. Em 48 horas após infecção, a replicação viral foi quantificada em uma leitora de placa Spectramax (Molecular Devices) por meio de ensaio de nanoluciferase (Promega) de acordo com o protocol do fabricante. Para o nosso controle de inibição de 100%, MERS-nLUC diluído foi exposto à luz UV de onda curta (LLC, Upland, CA) durante 6 minutos para inibir a capacidade do vírus em replicar-se. Para nosso controle de inibição de 0%, as células foram infectadas na presença de veículo. DMSO foi mantido constante em todas as condições a 0,05% por volume (v/v). Os valores de cavidades em triplicata por condição foram medidos e em comparação com os controles para gerar um percentual de valor de inibição para cada diluição de fármaco. O valor EC50 foi definido como a concentração em que houve um decréscimo de 50% em replicação viral. Os dados foram analisados usando GraphPad Prism 6.0 (La Jolla, CA). Os valores EC50 e CC50 foram calculados por análise de regressão não linear usando a equação de resposta à dose (declividade variável) (equação logística de quatro parâmetros): Y = Base + (Topo-Base)/(1+10A((LogEC50- X)*HillSlope)). Os valores de "Base" e "Topo" são definidos pelos valores Y mínimo e máximo. Declividade Hill é uma parâmetro usado para definir declividade de uma curva de resposta à dose. Valores EC50 e CC50 foram calculados como uma média de dois a quatro experimentos independentes. Tabela 4: Atividade antiviral de Composto 1 e Composto 32 contra MERS- CoV e SARS-CoV e citotoxicidade.

1Todos os valores são médias de > 3 experimentos independentes. HAE = célula epitelial de via aérea humana. Calu-3 = linhagem celular epitelial de pulmão humano Calu-3 (Calu3-2B4). Estudos de HAE foram feitos de três doadores. Exemplo 45. Avaliação de Composto 32 subcutâneo contra Síndrome Respiratória Aguda Severa por Coronavírus (SARS-CoV) em Camundongos Deficientes de Esterase (Ces1c-/- )

[00457] Camundongos machos e fêmeas (25-28 semanas) geneticamente deletados quanto à carboxilesterase 1C (Ces1c-/- ) (Jackson Laboratories stock 014096). Os camundongos (Ces1c-/- ) foram usados visto que os roedores expressam níveis elevados de atividade de carboxilesterase em plasma com relação à outras espécies de animal reduzindo a meia vida plasmática de Composto 32. A deleção genética de carboxilesterase 1C melhorou a estabilidade de plasma de Composto 32 gerando perfis farmacocinéticos similares àqueles observados em humanos e outras espécies de animal.

[00458] O projeto de estudo é capturado na Tabela 4. Estudos de eficácia foram realizados em uma instalação de biossegurança de animal de nível 3 (ABSL3). Todo o trabalho foi conduzido sob protocolos aprovados pelo Institutional Animal Care and Use Committee at UNC Chapel Hill de acordo com as diretrizes estabelecidas pela Association for the Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care (AAALAC) e the United States Department of Agriculture (USDA). Tabela 4: Projeto Experimental (Injeção Subcutânea)

[00459] Grupos 1 (veículo), Grupo 2 (Composto 32 BID 25 mg/kg), e Grupo 3 (Composto 32 QD 50 mg/kg) foram anestesiados com cetamina/xilazina expostos a 104 pfu de SARS-CoV/50ul por meio da rotina intranasal. O grupo 4 (Veículo) e grupo 5 (Composto 32 BID 25 mg/kg) permaneceram não infectados e foram usados como controles para avaliações de pletismografia do corpo inteiro. O veículo compreendia 12% de sulfobutiléter-e-ciclodextina em água (com HCl/NaOH) em pH 5,0). No dia 0, os animais foram expostos ao vírus. Nos dias 2 e 5 após infecção, os grupos de animais foram eutanizados com superdose de isofluorano e o lobo esquerdo grande do pulmão foi colocado em um tubo de tampa de rosca de 2 mL com 1 mL de DPBS com contas de vidro e congelado a -80°C até ser analisado por ensaio de placa. O lobo direito inferior foi colocado em formalina tamponade a 10% e armazenado a 4°C até análise histológica.

[00460] Alterações na função pulmonar foram determinada por pletismografia do corpo inteiro (WBP, sistema de teste de função pulmonar Buxco, Data Sciences International). Após uma aclimação de 30 minutos na câmara de pletismografia, 11 respostas respiratórias e diversas métricas de controle de qualidade continuamente medidas a cada 2 segundos durante 5 minutos para um total de 150 pontos de dados. Valores médios para cada parâmetro foram determinados no software DSI Finepoint.

[00461] Análise histológica foi realizada em amostras fixas de formalina e tecidos embebidos em parafina com 5μm. Para avaliar a patologia pulmonar, as secções foram manchadas com hematoxilina e eosina. Antígeno viral no pulmão foi manchado usando anticorpo antinucleocapsídeo policlonal (Imgenex). As lâminas foram ocultadas para o avaliador e avaliadas quanto à patologia de pulmão associada ao vírus bem como localização especial e prevalência de antígeno viral. As imagens foram capturadas usando um microscópio Olympus BX41 equipado com uma câmera Olympus DP71.

[00462] Ensaio de placa viral foi usado para quantificar o vírus infeccioso de tecido de pulmão congelado. Células Vero E6 foram semeadas em placas de 6 cavidades em 5 x 105 células/cavidade. O tecido pulmonar foi descongelado, homogeneizado por meio de Roche Magnalyzer, e a suspensão de tecido foi serialmente diluída e as diluições usadas para infectar as células Vero E6. Em 72 h após infecção, as palcas foram fixadas e manchadas e o número de placas quantificado por inspeção visual.

[00463] A meta primária para estudo foi a carga viral em tecido pulmonar no dia 5 após infecção. Metas adicionais incluíam alterações na função pulmonar e peso corporal do animal. O peso corporal do animal foi registrado diariamente durante a duração da fase em vida. No Dia -1, 1, 2, 3, e 5 após inoculação, pletismografia do corpo inteiro foi realizada para avaliar a função pulmonar. No Dia 5, uma necropsia programada foi realizada em todos os animais restantes; patologia de pulmão bruta foi avaliada por um patologista veterinário certificado. O tecido pulmonar foi coletado para análise histopatológica e virológica.

[00464] Peso Corporal e Carga Viral: Mudanças no peso corporal e carga viral de tecido para cada grupo de estudo no Dia 5 são mostradas nas figuras 1, 2A e 2B. Como mostrado na figura 1, os animais tratados com Composto 32 não exibiram nenhuma evidência de perdade peso associada com a infecção por SARS-CoV em comparação com animais tratados com veículo. O vírus infeccioso foi medido em tecido pulmonar coletado na necropsia por ensaio de placa. Como motrado nas figuras 2A e 2B, o vírus infeccioso foi significantemente diminuído em animais tratados com o composto 32 no Dia 2 e Dia 5 pós infecção com relação aos animais tratados com o veículo. Estes dados sugerem que o Composto 32 reduz a replicação de SARS-CoV no pulmão.

[00465] Avaliações de Função Pulmonar: O efeito do tratamento com o Composto 32 sobre a função pulmonar em camundongos infectados por SARS- CoV foi avaliado por pletismografia do corpo inteiro (WBP) (figuras 3A, 3B, 3C, 3D, 3E, e 3F). WBP mostrou um aumento nos valores Penh em camundongos tratados com veículo sugerindo que a replicação de vírus no pulmão aumentou a resistência da via aérea. Em animais tratados com 25 mg/kg de Composto 32 duas vezes por dia ou 50 mg/kg de Composto 32 uma vez por dia, os valores Penh foram menores em comparação com os animais tratados com o veículo e foram mais similares aos animais infectados por simulação.

[00466] Em camundongos tratados com veículo infectados com SARS-CoV, a duração de tempo para liberar uma respiração (Tempo de Expiração) ou tempo entre as respirações (Pausa Expiratória Final) medida por WBP aumentou indicando respiração difícil. Como mostrado nas figuras 3A, 3B, 3C, 3D, 3E, e 3F, estes parâmetros de respiração foram reduzidos em animais tratados com o Composto 32, aproximando-se dos valores obtidos de animais infectados por simulação. Exemplo 46. Uma avaliação Cega, Randomizada, Controlada por Veículo de Composto 32 Intravenoso contra a Síndrome Respiratória por Coronavírus do Oriente Médio (MERS-CoV) em Macacos Rhesus

[00467] HCoV-EMC/2012 isolado por MERS-CoV foi usado para desafiar o vírus na Instalação de Teste. HCoV-EMC/2012 isolado por MERS-CoV foi fornecido pelo Viroscience Laboratory, Erasmus Medical Center, Rotterdam, The Netherlands, e propagado em células VeroE6 em DMEM (Sigma) suplementado com 2% (vol/vol) de FCS (Logan), 1 mM de L-glutamina (Lonza), 50 U/ mL de penicilina, e 50 μg/ mL desetreptomicina (Gibco). Macacos reshus masculinos experimentalmente naive foram randomicamente desigandos para os grupos de tratamento e equilibrados por peso corporal.

[00468] O projeto de estudo é capturado na Tabela 5. Tabela 5: Projeto Experimental (Intravenoso) Grupo #Machos/

[00469] Todos os animais foram expostos a uma dose alvo de 7 x106 unidades de formação de placa de vírus MERS-CoV diluída em 0,9% de cloreto de sódio durante inoculação. Os aniamis foram inoculados por múltiplas rotinas que incluiam administração intranasal, ocular, e intratraquial. O dia em que os animais foram desafiados foi designado como o Dia 0.

[00470] Métodos para controlar a polarização incluiam o cego experimental. Especificamente, o pessoal de estudo que administrou os tratamentos com o Composto 32 ou veículo ou rotineiramente avaliou a saúde do animal foi experimentalmente ocultado para a designação de grupo de todos os animais durante a duração da fase em vida. O pessoal não ocultado, que não foi responsável pela avaliação da saúde do animal, preparou doses individuais de formulações volumosas pronta para uso fornecidas pelo Patrocinador. As formulações de veículo e Composto 32 foram idênticas em aparência física.

[00471] Nos grupos 1 e 2, tratamento com veículo uma vez diariamente foi administrado durante 7 dias, começando no Dia -1 (um dia antes da exposição ao vírus). Cada dose de Composto 32 ou veículo foi administrada como uma injeção IV lenta em bolus simples na veia de safena em um volume de 2,0 mL/kg por peso corporal durante o curso de 1 a 2 min. As doses foram administradas aos animais anestesiados usando injeção IM de uma solução contendo cetamina (100 mg/ mL) e acepromazina (10 mg/ mL) em um volume de 0,1 mL/kg por peso corporal. O peso de cada animal foi obtido no Dia -7, e estes pesos foram usados para determinação de volume de dose para todas as doses administradas de Composto 32 ou veículo.

[00472] A meta primária para este estudo foi a carga viral em tecido pulmonar no dia 6 após infecção. A saúde do animal foi monitorada pelo menos duas vezes diariamente durante a duração da fase em vida e sinais clínicos de doença foram registrados. No dia -7, 0, 1, 3, 5 e 6 após inoculação, exames clínicos foram realizados em todos os animais para determinar o peso corporal, temperatura corporal, respirações/minuto (sob anestesia), e para coletar o raio X, esfregaços de nariz e garganta. Sangue completo e soro foram coletados para ematologia, análise bioquímica e citocina. No dia 6, uma necropsia programada foi realizada em todos os animais; patologia de pulmão bruta foi avaliada (como % do lobo do pulmão afetado por lesões brutas) por um patologista veterinário certificado e o peso do pulmão foi registrado para determinar a relação de peso de pulmão/peso corporal. Dezenove tecidos foram coletados para análise histopatológica e virológica.

[00473] Sinais de doença em animais tratados com veículo foram atribuídos à infecção por MERS-COV. Escores clínicos cumulativos foram notavelmente maiores em animais tratados com veículo em comparação com animais tratados com o Composto 32. Estes sintomas da doença foram menos pronunciados nos animais tratados com o Composto 32.

[00474] Peso Corporal e Carga Viral: Alterações no peso corporal, temperatura e respisração são mostradas nas figuras 4A, 4B e 4C. O peso corporal e a temperatura corporal não mudaram apreciadamente durante o curso da infecção na presença e ausência de tratamento com o Composto 32. As frequências respiratórias aumentaram durante o cursi da infecção e tenderam a ser maiores no Dia 6 em animais tratados com veículo em comparação com os animais tratados com o Composto 32.

[00475] Carga viral de Tecido: RNA viral foi medido em tecido pulmonar e outros órgãos coletados na necropsia. Alterações em concentrações de RNA viral de tecido para cada grupo de estudo no Dia 6 são mostradas na figura 5. O vírus foi detectado em todos os tecidos do trato respiratório em animais tratados com veículo. RNA viral no trato respiratório foi significantemente reduzido nos animais tratados com o Composto 32. RNA viral foi abaixo do limite de detecção de animais tratados e não tratados no tecido de fígado, baço, rim e bexiga. RNA viral foi detectado em todos os animais no linfonodo mediastinal, porém em apenas um animal tratado com o veículo no linfonodo mandibular.

[00476] O vírus foi detectado em esfregaços de nariz e esfregaços de garganta no Dia 1, 3, 5 e 6 após infecção. Não houve diferença entre os animais tratados com o veículo e tratados com o composto. RNA viral foi detectado em um animal tratado com veículo na urina coletada no dia 6. As alterações nas contagens de glóbulos brancos, neutrófilos e linfócitos são mostradas na Figura 5.

[00477] Todas as publicações, patentes, e documentos de parente citados aqui acima são incorporados por referência aqui, como se fossem individualmente incorporados por referência.

[00478] A invenção foi descrita com referência à várias técnicas e modalidades específicas e preferidas. Entretanto, alguém versado na técnica entenderá que muitas variações e modificações podem ser feitas, enquanto mantendo-se no espírito e escopo da invenção.

Claims

1. Uso de um composto de fórmula:

ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de ser para a preparação de uma composição farmacêutica ou medicamento para o tratamento de uma infecção por Arenaviridae em um ser humano em necessidade do mesmo.

2. Uso de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o composto é:

ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

3. Uso de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o composto é:

ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

4. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica ou medicamento compreende ainda um veículo ou excipiente farmaceuticamente aceitável.

5. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica ou medicamento compreende ainda outro agente selecionado a partir do grupo que consiste em um corticosteroide, um modulador de transdução de sinal anti-inflamatório, um broncodilatador de agonista de β-adrenorreceptor, um anticolinérgico, um agente mucolítico, solução salina hipertônica e outros fármacos para o tratamento de infecções por vírus Arenaviridae, ou misturas dos mesmos.

6. Uso de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que o outro agente é ribavirina, favipiravir (também conhecido como T-705 ou Avigan), T-705 monofosfato, T-705 difosfato, T-705 trifosfato, ST-193, ou misturas dos mesmos.

7. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que a infecção por Arenaviridae é causada por um vírus Arenaviridae.

8. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que a infecção por Arenaviridae é causada por um vírus Lassa.

9. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que a infecção por Arenaviridae é causada por um vírus Junin.

10. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que a infecção por Arenaviridae é causada por um vírus Lassa causado por uma linhagem selecionada a partir de Josiah, NL, z148, Macenta, AV e CSF.

11. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que uma polimerase de Arenaviridae é inibida.