RU2681529C2 - Иммуногенные композиции гликопротеина g вирусов hendra и nipah - Google Patents
Иммуногенные композиции гликопротеина g вирусов hendra и nipah Download PDFInfo
- Publication number
- RU2681529C2 RU2681529C2 RU2013155470A RU2013155470A RU2681529C2 RU 2681529 C2 RU2681529 C2 RU 2681529C2 RU 2013155470 A RU2013155470 A RU 2013155470A RU 2013155470 A RU2013155470 A RU 2013155470A RU 2681529 C2 RU2681529 C2 RU 2681529C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- hev
- glycoprotein
- virus
- niv
- vaccine
- Prior art date
Links
- 241000893570 Hendra henipavirus Species 0.000 title claims abstract description 192
- 241000526636 Nipah henipavirus Species 0.000 title claims abstract description 129
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 title claims abstract description 51
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 title claims abstract description 51
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 76
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 title description 49
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims abstract description 93
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 87
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 claims abstract description 44
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 claims abstract description 44
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 38
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 34
- 208000000464 Henipavirus Infections Diseases 0.000 claims abstract description 24
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 21
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims abstract description 10
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 208000025164 Hendra virus infection Diseases 0.000 claims abstract description 5
- 206010064034 Nipah virus infection Diseases 0.000 claims abstract description 3
- 108010046722 Thrombospondin 1 Proteins 0.000 claims description 60
- 102100036034 Thrombospondin-1 Human genes 0.000 claims description 60
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 38
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 37
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 claims description 36
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 34
- UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N [(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2r,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-4-[(2s,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hy Chemical compound O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1CC[C@]2(C)[C@H]3CC=C4[C@@]([C@@]3(CC[C@H]2[C@@]1(C=O)C)C)(C)CC(O)[C@]1(CCC(CC14)(C)C)C(=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O[C@H]4[C@@H]([C@@H](O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N 0.000 claims description 25
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 claims description 19
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 claims description 18
- KILNVBDSWZSGLL-KXQOOQHDSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC KILNVBDSWZSGLL-KXQOOQHDSA-N 0.000 claims description 17
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 claims description 17
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 claims description 15
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 claims description 15
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 15
- -1 phosphate phosphatidylinositol Chemical class 0.000 claims description 13
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 claims description 10
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 9
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 9
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims description 8
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims description 7
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims description 7
- 150000003907 phosphatidylinositol monophosphates Chemical class 0.000 claims description 7
- 150000003908 phosphatidylinositol bisphosphates Chemical class 0.000 claims description 6
- YDNKGFDKKRUKPY-JHOUSYSJSA-N C16 ceramide Natural products CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)N[C@@H](CO)[C@H](O)C=CCCCCCCCCCCCCC YDNKGFDKKRUKPY-JHOUSYSJSA-N 0.000 claims description 5
- JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylethanolamin Natural products NCCOP(O)(=O)OCC(O)CO JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 108060003393 Granulin Proteins 0.000 claims description 5
- 108090001074 Nucleocapsid Proteins Proteins 0.000 claims description 5
- 108010089430 Phosphoproteins Proteins 0.000 claims description 5
- 102000007982 Phosphoproteins Human genes 0.000 claims description 5
- 229940106189 ceramide Drugs 0.000 claims description 5
- ZVEQCJWYRWKARO-UHFFFAOYSA-N ceramide Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)C(=O)NC(CO)C(O)C=CCCC=C(C)CCCCCCCCC ZVEQCJWYRWKARO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- VVGIYYKRAMHVLU-UHFFFAOYSA-N newbouldiamide Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)C(O)C(O)C(CO)NC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC VVGIYYKRAMHVLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 150000008104 phosphatidylethanolamines Chemical class 0.000 claims description 5
- 150000003905 phosphatidylinositols Chemical class 0.000 claims description 5
- CRJGESKKUOMBCT-VQTJNVASSA-N N-acetylsphinganine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCC[C@@H](O)[C@H](CO)NC(C)=O CRJGESKKUOMBCT-VQTJNVASSA-N 0.000 claims description 4
- SUHOOTKUPISOBE-UHFFFAOYSA-N O-phosphoethanolamine Chemical compound NCCOP(O)(O)=O SUHOOTKUPISOBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycerol-3-phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 0.000 claims description 3
- 150000008103 phosphatidic acids Chemical class 0.000 claims description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 3
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 2
- 229950004354 phosphorylcholine Drugs 0.000 claims description 2
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 claims description 2
- 235000011178 triphosphate Nutrition 0.000 claims description 2
- 101900032807 Hendra virus Glycoprotein G Proteins 0.000 claims 1
- SURLGNKAQXKNSP-DBLYXWCISA-N chlorin Chemical compound C\1=C/2\N/C(=C\C3=N/C(=C\C=4NC(/C=C\5/C=CC/1=N/5)=CC=4)/C=C3)/CC\2 SURLGNKAQXKNSP-DBLYXWCISA-N 0.000 claims 1
- YHHSONZFOIEMCP-UHFFFAOYSA-O phosphocholine Chemical compound C[N+](C)(C)CCOP(O)(O)=O YHHSONZFOIEMCP-UHFFFAOYSA-O 0.000 claims 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 10
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 75
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 44
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 44
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 44
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 42
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 35
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 35
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 29
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 25
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 22
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 22
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 22
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 19
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 18
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 17
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 description 17
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 15
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 13
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 13
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 12
- 238000011888 autopsy Methods 0.000 description 12
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 12
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 11
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 11
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 11
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 11
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 11
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 10
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 10
- 102000030782 GTP binding Human genes 0.000 description 9
- 108091000058 GTP-Binding Proteins 0.000 description 9
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 9
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 9
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 9
- WYTZZXDRDKSJID-UHFFFAOYSA-N (3-aminopropyl)triethoxysilane Chemical compound CCO[Si](OCC)(OCC)CCCN WYTZZXDRDKSJID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 8
- 108091006027 G proteins Proteins 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 8
- KDWFDOFTPHDNJL-TUBOTVQJSA-N odn-2006 Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)O[C@H]2[C@H]([C@@H](O[C@@H]2COP(O)(=S)O[C@H]2[C@H]([C@@H](O[C@@H]2COP(O)(=O)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)O[C@H]2[C@H]([C@@H](O[C@@H]2COP(O)(=O)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)O[C@H]2[C@H]([C@@H](O[C@@H]2COP(O)(=S)O[C@H]2[C@H]([C@@H](O[C@@H]2COP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H](C[C@@H](O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H](C[C@@H](O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H](C[C@@H](O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H](C[C@@H](O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H](C[C@@H](O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OP(S)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H](C[C@@H](O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H](C[C@@H](O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)O)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)O)N2C(N=C(N)C=C2)=O)O)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)O)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)O)N2C(N=C(N)C=C2)=O)O)[C@@H](O)C1 KDWFDOFTPHDNJL-TUBOTVQJSA-N 0.000 description 8
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 8
- 229940046168 CpG oligodeoxynucleotide Drugs 0.000 description 7
- 206010015548 Euthanasia Diseases 0.000 description 7
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 7
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 7
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 7
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 7
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 7
- 230000037452 priming Effects 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 6
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 6
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 6
- 238000011161 development Methods 0.000 description 6
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 6
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 6
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 6
- 210000004966 intestinal stem cell Anatomy 0.000 description 6
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 6
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 6
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 6
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 6
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 6
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 5
- 101000740205 Homo sapiens Sal-like protein 1 Proteins 0.000 description 5
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 5
- 102100037204 Sal-like protein 1 Human genes 0.000 description 5
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 5
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 5
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 5
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 5
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 5
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 5
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 5
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 5
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 4
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 4
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 4
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 4
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 4
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 4
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 4
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 4
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 4
- 206010039101 Rhinorrhoea Diseases 0.000 description 4
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 4
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 4
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 4
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 4
- 231100000636 lethal dose Toxicity 0.000 description 4
- UMWKZHPREXJQGR-UHFFFAOYSA-N n-methyl-n-(2,3,4,5,6-pentahydroxyhexyl)decanamide Chemical compound CCCCCCCCCC(=O)N(C)CC(O)C(O)C(O)C(O)CO UMWKZHPREXJQGR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 4
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 4
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 description 3
- WOVKYSAHUYNSMH-RRKCRQDMSA-N 5-bromodeoxyuridine Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(Br)=C1 WOVKYSAHUYNSMH-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 3
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 3
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 3
- 102100038132 Endogenous retrovirus group K member 6 Pro protein Human genes 0.000 description 3
- PWNAWOCHVWERAR-UHFFFAOYSA-N Flumetralin Chemical compound [O-][N+](=O)C=1C=C(C(F)(F)F)C=C([N+]([O-])=O)C=1N(CC)CC1=C(F)C=CC=C1Cl PWNAWOCHVWERAR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 241001092142 Molina Species 0.000 description 3
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 3
- 235000009001 Quillaja saponaria Nutrition 0.000 description 3
- 241001454523 Quillaja saponaria Species 0.000 description 3
- 208000036071 Rhinorrhea Diseases 0.000 description 3
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 3
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 3
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 3
- AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N alumane Chemical class [AlH3] AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000014102 antigen processing and presentation of exogenous peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 3
- 230000034994 death Effects 0.000 description 3
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 3
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 3
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 3
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 210000001280 germinal center Anatomy 0.000 description 3
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 3
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 3
- 210000001365 lymphatic vessel Anatomy 0.000 description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 3
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 3
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 3
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 3
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 3
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- 230000007485 viral shedding Effects 0.000 description 3
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 3
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- WOVKYSAHUYNSMH-UHFFFAOYSA-N BROMODEOXYURIDINE Natural products C1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C(Br)=C1 WOVKYSAHUYNSMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 2
- 241000282552 Chlorocebus aethiops Species 0.000 description 2
- 102100031673 Corneodesmosin Human genes 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 2
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 2
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 2
- 101710121417 Envelope glycoprotein Proteins 0.000 description 2
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 2
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 2
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 2
- 108010027412 Histocompatibility Antigens Class II Proteins 0.000 description 2
- 102000018713 Histocompatibility Antigens Class II Human genes 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 241000282553 Macaca Species 0.000 description 2
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Natural products OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N Progesterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N 0.000 description 2
- 206010037457 Pulmonary vasculitis Diseases 0.000 description 2
- 241000219287 Saponaria Species 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 108010008038 Synthetic Vaccines Proteins 0.000 description 2
- MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N Testostosterone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N 0.000 description 2
- 102000008235 Toll-Like Receptor 9 Human genes 0.000 description 2
- 108010060818 Toll-Like Receptor 9 Proteins 0.000 description 2
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 2
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 2
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 2
- 108070000030 Viral receptors Proteins 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 210000004100 adrenal gland Anatomy 0.000 description 2
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 229940024545 aluminum hydroxide Drugs 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 229940125717 barbiturate Drugs 0.000 description 2
- 238000002869 basic local alignment search tool Methods 0.000 description 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 2
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 2
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 2
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 2
- 210000000133 brain stem Anatomy 0.000 description 2
- 210000000621 bronchi Anatomy 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N catechol Chemical compound OC1=CC=CC=C1O YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 2
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 2
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 2
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N m-cresol Chemical compound CC1=CC=CC(O)=C1 RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N methylparaben Chemical compound COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 2
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 2
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 2
- AQIXEPGDORPWBJ-UHFFFAOYSA-N pentan-3-ol Chemical compound CCC(O)CC AQIXEPGDORPWBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000003906 phosphoinositides Chemical class 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 2
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 229940124551 recombinant vaccine Drugs 0.000 description 2
- GHMLBKRAJCXXBS-UHFFFAOYSA-N resorcinol Chemical compound OC1=CC=CC(O)=C1 GHMLBKRAJCXXBS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000036387 respiratory rate Effects 0.000 description 2
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 2
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 2
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 2
- 210000003932 urinary bladder Anatomy 0.000 description 2
- 230000017613 viral reproduction Effects 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 1
- ZESRJSPZRDMNHY-YFWFAHHUSA-N 11-deoxycorticosterone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 ZESRJSPZRDMNHY-YFWFAHHUSA-N 0.000 description 1
- JERGUCIJOXJXHF-UHFFFAOYSA-N 17alpha-Hydroxypregnenolone Natural products C1C=C2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(=O)C)(O)C1(C)CC2 JERGUCIJOXJXHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DBPWSSGDRRHUNT-UHFFFAOYSA-N 17alpha-hydroxy progesterone Natural products C1CC2=CC(=O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(=O)C)(O)C1(C)CC2 DBPWSSGDRRHUNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JERGUCIJOXJXHF-TVWVXWENSA-N 17alpha-hydroxypregnenolone Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@@](C(=O)C)(O)[C@@]1(C)CC2 JERGUCIJOXJXHF-TVWVXWENSA-N 0.000 description 1
- CFWRDBDJAOHXSH-SECBINFHSA-N 2-azaniumylethyl [(2r)-2,3-diacetyloxypropyl] phosphate Chemical compound CC(=O)OC[C@@H](OC(C)=O)COP(O)(=O)OCCN CFWRDBDJAOHXSH-SECBINFHSA-N 0.000 description 1
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000427159 Achyranthes Species 0.000 description 1
- 206010001889 Alveolitis Diseases 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001061264 Astragalus Species 0.000 description 1
- 208000020007 Autosomal agammaglobulinemia Diseases 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 108020000946 Bacterial DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000212384 Bifora Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 241000756943 Codonopsis Species 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 101710139375 Corneodesmosin Proteins 0.000 description 1
- OMFXVFTZEKFJBZ-UHFFFAOYSA-N Corticosterone Natural products O=C1CCC2(C)C3C(O)CC(C)(C(CC4)C(=O)CO)C4C3CCC2=C1 OMFXVFTZEKFJBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- FMGSKLZLMKYGDP-UHFFFAOYSA-N Dehydroepiandrosterone Natural products C1C(O)CCC2(C)C3CCC(C)(C(CC4)=O)C4C3CC=C21 FMGSKLZLMKYGDP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710091045 Envelope protein Proteins 0.000 description 1
- 206010053172 Fatal outcomes Diseases 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 1
- 108010088652 Histocompatibility Antigens Class I Proteins 0.000 description 1
- 102000008949 Histocompatibility Antigens Class I Human genes 0.000 description 1
- 101000926057 Human herpesvirus 2 (strain G) Envelope glycoprotein C Proteins 0.000 description 1
- DOMWKUIIPQCAJU-LJHIYBGHSA-N Hydroxyprogesterone caproate Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@@](C(C)=O)(OC(=O)CCCCC)[C@@]1(C)CC2 DOMWKUIIPQCAJU-LJHIYBGHSA-N 0.000 description 1
- GRRNUXAQVGOGFE-UHFFFAOYSA-N Hygromycin-B Natural products OC1C(NC)CC(N)C(O)C1OC1C2OC3(C(C(O)C(O)C(C(N)CO)O3)O)OC2C(O)C(CO)O1 GRRNUXAQVGOGFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical class C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 208000029523 Interstitial Lung disease Diseases 0.000 description 1
- 206010022998 Irritability Diseases 0.000 description 1
- YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N Ketamine Chemical compound C=1C=CC=C(Cl)C=1C1(NC)CCCCC1=O YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 240000007472 Leucaena leucocephala Species 0.000 description 1
- 235000010643 Leucaena leucocephala Nutrition 0.000 description 1
- 206010024612 Lipoma Diseases 0.000 description 1
- 206010024774 Localised infection Diseases 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000034819 Mobility Limitation Diseases 0.000 description 1
- 108010085220 Multiprotein Complexes Proteins 0.000 description 1
- 102000007474 Multiprotein Complexes Human genes 0.000 description 1
- 208000005647 Mumps Diseases 0.000 description 1
- 206010028851 Necrosis Diseases 0.000 description 1
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 description 1
- 102000005348 Neuraminidase Human genes 0.000 description 1
- 108010006232 Neuraminidase Proteins 0.000 description 1
- 208000025966 Neurological disease Diseases 0.000 description 1
- 206010060860 Neurological symptom Diseases 0.000 description 1
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 1
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 1
- 241000282579 Pan Species 0.000 description 1
- 241000208343 Panax Species 0.000 description 1
- 235000002791 Panax Nutrition 0.000 description 1
- 244000131316 Panax pseudoginseng Species 0.000 description 1
- 235000005035 Panax pseudoginseng ssp. pseudoginseng Nutrition 0.000 description 1
- 235000003140 Panax quinquefolius Nutrition 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- ORNBQBCIOKFOEO-YQUGOWONSA-N Pregnenolone Natural products O=C(C)[C@@H]1[C@@]2(C)[C@H]([C@H]3[C@@H]([C@]4(C)C(=CC3)C[C@@H](O)CC4)CC2)CC1 ORNBQBCIOKFOEO-YQUGOWONSA-N 0.000 description 1
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 1
- 229940096437 Protein S Drugs 0.000 description 1
- 101710188315 Protein X Proteins 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 206010038687 Respiratory distress Diseases 0.000 description 1
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 206010041660 Splenomegaly Diseases 0.000 description 1
- 229930182558 Sterol Natural products 0.000 description 1
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000000447 Th1 cell Anatomy 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 206010044565 Tremor Diseases 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 206010053613 Type IV hypersensitivity reaction Diseases 0.000 description 1
- 206010047115 Vasculitis Diseases 0.000 description 1
- 206010058874 Viraemia Diseases 0.000 description 1
- 108010031318 Vitronectin Proteins 0.000 description 1
- 206010001053 acute respiratory failure Diseases 0.000 description 1
- 210000005006 adaptive immune system Anatomy 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K aluminium phosphate Chemical compound O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940024546 aluminum hydroxide gel Drugs 0.000 description 1
- SMYKVLBUSSNXMV-UHFFFAOYSA-K aluminum;trihydroxide;hydrate Chemical compound O.[OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] SMYKVLBUSSNXMV-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 210000001132 alveolar macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- AEMFNILZOJDQLW-QAGGRKNESA-N androst-4-ene-3,17-dione Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 AEMFNILZOJDQLW-QAGGRKNESA-N 0.000 description 1
- AEMFNILZOJDQLW-UHFFFAOYSA-N androstenedione Natural products O=C1CCC2(C)C3CCC(C)(C(CC4)=O)C4C3CCC2=C1 AEMFNILZOJDQLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005471 androstenedione Drugs 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 244000000054 animal parasite Species 0.000 description 1
- 230000002223 anti-pathogen Effects 0.000 description 1
- 230000001147 anti-toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 1
- 230000004596 appetite loss Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 235000006533 astragalus Nutrition 0.000 description 1
- HNYOPLTXPVRDBG-UHFFFAOYSA-N barbituric acid Chemical compound O=C1CC(=O)NC(=O)N1 HNYOPLTXPVRDBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 229960000686 benzalkonium chloride Drugs 0.000 description 1
- 229960001950 benzethonium chloride Drugs 0.000 description 1
- UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M benzethonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC(C(C)(C)CC(C)(C)C)=CC=C1OCCOCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 description 1
- CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N benzyl(dimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C[NH+](C)CC1=CC=CC=C1 CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- HUTDDBSSHVOYJR-UHFFFAOYSA-H bis[(2-oxo-1,3,2$l^{5},4$l^{2}-dioxaphosphaplumbetan-2-yl)oxy]lead Chemical compound [Pb+2].[Pb+2].[Pb+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O HUTDDBSSHVOYJR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N butyl alcohol Substances CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 210000004413 cardiac myocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000010001 cellular homeostasis Effects 0.000 description 1
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 229920002301 cellulose acetate Polymers 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 210000001638 cerebellum Anatomy 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 238000005056 compaction Methods 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 210000000795 conjunctiva Anatomy 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- OMFXVFTZEKFJBZ-HJTSIMOOSA-N corticosterone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@H](CC4)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 OMFXVFTZEKFJBZ-HJTSIMOOSA-N 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- HPXRVTGHNJAIIH-UHFFFAOYSA-N cyclohexanol Chemical compound OC1CCCCC1 HPXRVTGHNJAIIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZESRJSPZRDMNHY-UHFFFAOYSA-N de-oxy corticosterone Natural products O=C1CCC2(C)C3CCC(C)(C(CC4)C(=O)CO)C4C3CCC2=C1 ZESRJSPZRDMNHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008260 defense mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- FMGSKLZLMKYGDP-USOAJAOKSA-N dehydroepiandrosterone Chemical compound C1[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CC=C21 FMGSKLZLMKYGDP-USOAJAOKSA-N 0.000 description 1
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940119740 deoxycorticosterone Drugs 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 230000000994 depressogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000002497 edematous effect Effects 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 210000003038 endothelium Anatomy 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002388 eustachian tube Anatomy 0.000 description 1
- 230000003631 expected effect Effects 0.000 description 1
- 201000001155 extrinsic allergic alveolitis Diseases 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 238000007499 fusion processing Methods 0.000 description 1
- 230000000799 fusogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 235000008434 ginseng Nutrition 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 229940097043 glucuronic acid Drugs 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 229940093915 gynecological organic acid Drugs 0.000 description 1
- 210000003128 head Anatomy 0.000 description 1
- 230000003862 health status Effects 0.000 description 1
- 230000010247 heart contraction Effects 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 229950000801 hydroxyprogesterone caproate Drugs 0.000 description 1
- GRRNUXAQVGOGFE-NZSRVPFOSA-N hygromycin B Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](NC)C[C@@H](N)[C@H](O)[C@H]1O[C@H]1[C@H]2O[C@@]3([C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](C(N)CO)O3)O)O[C@H]2[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 GRRNUXAQVGOGFE-NZSRVPFOSA-N 0.000 description 1
- 229940097277 hygromycin b Drugs 0.000 description 1
- 208000022098 hypersensitivity pneumonitis Diseases 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000007124 immune defense Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 229940028885 interleukin-4 Drugs 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 210000001630 jejunum Anatomy 0.000 description 1
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 1
- 229960003299 ketamine Drugs 0.000 description 1
- 210000002429 large intestine Anatomy 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 1
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 1
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 1
- 235000021266 loss of appetite Nutrition 0.000 description 1
- 208000019017 loss of appetite Diseases 0.000 description 1
- 210000003563 lymphoid tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000034217 membrane fusion Effects 0.000 description 1
- 229910052753 mercury Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Chemical class 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004292 methyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 229960002216 methylparaben Drugs 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 238000007479 molecular analysis Methods 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 1
- 208000010805 mumps infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 description 1
- UMWKZHPREXJQGR-XOSAIJSUSA-N n-methyl-n-[(2s,3r,4r,5r)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexyl]decanamide Chemical compound CCCCCCCCCC(=O)N(C)C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO UMWKZHPREXJQGR-XOSAIJSUSA-N 0.000 description 1
- 210000003928 nasal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 208000010753 nasal discharge Diseases 0.000 description 1
- 230000002956 necrotizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- SYXUBXTYGFJFEH-UHFFFAOYSA-N oat triterpenoid saponin Chemical compound CNC1=CC=CC=C1C(=O)OC1C(C=O)(C)CC2C3(C(O3)CC3C4(CCC5C(C)(CO)C(OC6C(C(O)C(OC7C(C(O)C(O)C(CO)O7)O)CO6)OC6C(C(O)C(O)C(CO)O6)O)CCC53C)C)C4(C)CC(O)C2(C)C1 SYXUBXTYGFJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940046166 oligodeoxynucleotide Drugs 0.000 description 1
- 208000005963 oophoritis Diseases 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 210000002741 palatine tonsil Anatomy 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 1
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 238000005453 pelletization Methods 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 210000003800 pharynx Anatomy 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- LFGREXWGYUGZLY-UHFFFAOYSA-N phosphoryl Chemical group [P]=O LFGREXWGYUGZLY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PYJNAPOPMIJKJZ-UHFFFAOYSA-N phosphorylcholine chloride Chemical compound [Cl-].C[N+](C)(C)CCOP(O)(O)=O PYJNAPOPMIJKJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000001817 pituitary effect Effects 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 229920006316 polyvinylpyrrolidine Polymers 0.000 description 1
- GRLPQNLYRHEGIJ-UHFFFAOYSA-J potassium aluminium sulfate Chemical compound [Al+3].[K+].[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O GRLPQNLYRHEGIJ-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 229960002847 prasterone Drugs 0.000 description 1
- 229960000249 pregnenolone Drugs 0.000 description 1
- ORNBQBCIOKFOEO-QGVNFLHTSA-N pregnenolone Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 ORNBQBCIOKFOEO-QGVNFLHTSA-N 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 229960003387 progesterone Drugs 0.000 description 1
- 239000000186 progesterone Substances 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 235000010232 propyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004405 propyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 238000002601 radiography Methods 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 201000004193 respiratory failure Diseases 0.000 description 1
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- QSHGUCSTWRSQAF-FJSLEGQWSA-N s-peptide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(OS(O)(=O)=O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(OS(O)(=O)=O)C=C1 QSHGUCSTWRSQAF-FJSLEGQWSA-N 0.000 description 1
- 210000003079 salivary gland Anatomy 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 1
- 239000013605 shuttle vector Substances 0.000 description 1
- SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N sialic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)OC1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 210000001584 soft palate Anatomy 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- SFVFIFLLYFPGHH-UHFFFAOYSA-M stearalkonium chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 SFVFIFLLYFPGHH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 description 1
- 150000003432 sterols Chemical class 0.000 description 1
- 235000003702 sterols Nutrition 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 210000004233 talus Anatomy 0.000 description 1
- 229960003604 testosterone Drugs 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229960004906 thiomersal Drugs 0.000 description 1
- 230000005100 tissue tropism Effects 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 210000003437 trachea Anatomy 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 238000004627 transmission electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 210000003384 transverse colon Anatomy 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 210000000427 trigeminal ganglion Anatomy 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000008130 triterpenoid saponins Chemical class 0.000 description 1
- 210000001944 turbinate Anatomy 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 210000003501 vero cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/155—Paramyxoviridae, e.g. parainfluenza virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56983—Viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
- A61K2039/541—Mucosal route
- A61K2039/544—Mucosal route to the airways
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
- A61K2039/552—Veterinary vaccine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55561—CpG containing adjuvants; Oligonucleotide containing adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55577—Saponins; Quil A; QS21; ISCOMS
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
- A61K2039/575—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2 humoral response
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/24011—Poxviridae
- C12N2710/24111—Orthopoxvirus, e.g. vaccinia virus, variola
- C12N2710/24141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2710/24143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/18011—Paramyxoviridae
- C12N2760/18211—Henipavirus, e.g. hendra virus
- C12N2760/18222—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/18011—Paramyxoviridae
- C12N2760/18211—Henipavirus, e.g. hendra virus
- C12N2760/18234—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
- G01N2333/08—RNA viruses
- G01N2333/115—Paramyxoviridae, e.g. parainfluenza virus
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2469/00—Immunoassays for the detection of microorganisms
- G01N2469/20—Detection of antibodies in sample from host which are directed against antigens from microorganisms
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
Abstract
Группа изобретений относится к медицине, а именно к ветеринарии, и может быть использована для предотвращения инфекции, вызванной вирусом Hendra и/или Nipah, у лошади или свиньи. Для этого вводят вакцину, содержащую 50-100 мкг растворимого фрагмента гликопротеина G вируса Hendra, который состоит из аминокислот 73-604 SEQ ID NO: 2 или последовательности, по меньшей мере на 95% ей идентичной. Также вакцина содержит иммуностимулирующий комплекс и эксципиенты. Кроме того, предложены способ предотвращения инфекции, вызванной вирусом Hendra и/или Nipah, у лошади или свиньи и способ дифференциации субъекта, вакцинированного указанной вакциной, от субъекта, подвергнутого воздействию вируса Hendra и/или Nipah. Группа изобретений позволяет предотвратить инфекцию, вызванную вирусом Hendra и/или Nipah, у лошади или свиньи. 3 н. и 10 з.п. ф-лы, 9 табл., 6 ил., 8 пр.
Description
Область техники, к которой относится изобретение
[0001] Настоящее изобретение относится к иммуногенным и вакцинным композициям, содержащим гликопротеин G вируса Hendra (HeV) и/или вируса Nipah (NiV), и к способам их применения.
Описание известного уровня техники
[0002] Повторяющиеся вспышки NiV, приводящие к значительному числу человеческих смертей, в последнее время стали проблематичными (см., например, Butler (2000) Nature 429, 7). Известно также, что HeV приводит к гибели людей и животных и генетически и иммунологически находится в близком родстве с NiV. В настоящее время отсутствует вакцина или терапевтические средства для предотвращения инфицирования или заболеваний, вызываемых вирусом Nipah или вирусом Hendra. Как вирус Nipah, так и вирус Hendra, Национальным институтом Аллергических и Инфекционных Заболеваний США отнесены к агентам категории С в отношении биозащиты. Кроме того, так как указанные вирусы являются зоонозными агентами 4 уровня биологической безопасности (BSL-4), производство вакцин и/или диагностических средств с указанной безопасностью весьма дорого и затруднительно. Таким образом, существует необходимость в создании вакцин и диагностических средств, относящихся к вирусу Nipah или вирусу Hendra, которые смогут обеспечить высокую производительность вакцин и/или диагностических средств.
[0003] Парамиксовирусы, такие как HeV и NiV, содержат два основных закрепленных на мембране гликопротеина в оболочке вирусной частицы. Один гликопротеин требуется для прикрепления вириона к рецепторам на клетках хозяина и обозначается или как гемагглютинин-нейрамидазный белок (HN), или как гемагглютининовый белок (H), и другой представляет собой гликопротеин (G), который не обладает ни гемагглютиназной, ни нейраминидазной активностями. Гликопротеины присоединения представляют собой мембранные белки II типа, в которых амино (N) конец молекул ориентирован в направлении цитоплазмы, и карбокси (C) конец белков является внеклеточным. Другим основным гликопротеином является слитый гликопротеин (F), который представляет собой трехмерный фьюзогенный оболочечный гликопротеин класса I, содержащий два участка гептадных повторов (HR) и гидрофобный слитый пептид. Инфицированные HeV и NiV клетки за счет pH-независимого процесса мембранного слияния в воспринимающие клетки хозяина за счет согласованного действия их гликопротеина G и гликопротеина F присоединения после рецепторного связывания. Основная функция гликопротеина G присоединения HeV и NiV состоит в ангажировании соответствующих рецепторов на поверхности клеток хозяина, которые для большинства хорошо охарактеризованных парамиксовирусов являются фрагментами сиаловой кислоты. Гликопротеины G HeV и NiV используют рецепторы белков эфрина B2 и/или эфрина B3 клеток хозяина, и были созданы антитела, которые блокируют присоединение вирусов за счет гликопротеина G (WO2006137931, Bishop (2008) J. Virol. 82: 11398-11409). Кроме того, были созданы вакцины, которые также используют гликопротеин G в качестве средства для выработки иммунозащитной реакции против HeV и NiV инфекции (WO2009117035).
[0004] Доза-сайт реакционная способность является основной проблемой как в ветеринарии, так и для использования человеком Quil A в препаратах вакцин. Одним из способов, позволяющих избежать указанной токсичности Quil A, является использование иммуностимулирующих комплексов (Rajput (2007) J. Zhejiang Univ. Sci. B, 8: 53-161). Это происходит, главным образом, потому, что Quil A является менее реакционноспособным при включении в иммуностимулирующие комплексы, так как его связь с холестерином в комплексе снижает его способность извлекать холестерин из клеточных мембран, и, следовательно, его клетколитические эффекты. Кроме того, для создания эффекта, аналогичного уровню адъюванта, требуется меньшее количество Quil A. Иммуномодуляторные свойства Quil A сапонинов и дополнительные преимущества, которые можно извлечь из указанных сапонинов, если они включены в иммуностимулирующий комплекс, были раскрыты в WO2000041720.
[0005] Комбинация гликопротеинов G HeV и/или NiV с иммуностимулирующими комплексами в одной вакцине представляет собой усовершенствование в разработке эффективных HeV и NiV вакцин, создавая потенциал для повышенной иммунореактивности при снижении побочных эффектов адъювантов, если указанные компоненты вводят в комбинации.
Сущность настоящего изобретения
[0006] Настоящее изобретение включает иммуногенную композицию, содержащую белок G вируса Hendra и/или Nipah, иммуностимулирующий комплекс (ISC) и один или более эксципиентов в количестве, эффективном для того, чтобы вызвать продуцирование нейтрализующих антител против вируса Hendra и/или Nipah после введения субъекту. В некоторых вариантах осуществления указанная иммуногенная композиция содержит сапонин, фосфолипид и стероид.
[0007] В некоторых вариантах осуществления растворимый гликопротеин G вируса Hendra состоит из аминокислот 73-604 нативного гликопротеина G Hendra (SEQ ID NO:2). В некоторых вариантах осуществления растворимый гликопротеин G вируса Hendra кодируется нуклеотидной последовательностью, включающей нуклеотиды 64-1662 в последовательности SEQ ID NO:16. В некоторых вариантах осуществления растворимый белок G вируса Hendra присутствует в димерной форме, где каждая растворимая субъединица димера гликопротеина G вируса Hendra соединена одной или более дисульфидными связями. В некоторых вариантах осуществления растворимый белок G вируса Hendra присутствует в форме тетрамера. В некоторых вариантах осуществления тетрамерная форма представлена в виде димера димеров, нековалентно связанных и/или соединенных одной или более дисульфидными связями. Концентрация растворимого G белка вируса Hendra может составлять от 5 до 100 мкг/мл в иммуногенной композиции.
[0008] В некоторых вариантах осуществления указанный сапонин выделяют из Quillaja saponaria Molina, и может быть выбран из QH-A, QH-B, QH-C или QS21. В некоторых вариантах осуществления указанный фосфолипид выбирают из группы, состоящей из фосфатидилхолина (PC), дипальмитоилфосфатидилхолина (DPPC), фосфатидиновной кислоты (фосфатидата) (PA), фосфатидилэтаноламина (PE), фосфатидилсерина (PS), фосфатидилинозита (PI), фосфатидилинозитфосфата (PIP), фосфатидилинозитбисфосфата (PIP2), фосфатидилинозиттрифосфата (PIP3), фосфорилхолина (SPH), церамидфосфорилэтаноламина (Cer-PE) и церамидфосфорилглицерина. В некоторых вариантах осуществления указанный сапонин представляет собой Quil A, указанный фосфолипид представляет собой DPPC, стероид представляет собой холестерин и отношение Quil A:DPPC:холестерин в указанной композиции составляет 5:1:1 по массе.
[0009] Настоящее изобретение также включает способ выработки у субъекта нейтрализующей реакции антител против вирусов Hendra и/или Nipah, включающий введение указанному субъекту раскрываемой в данном описании указанной иммуногенной композиции в количестве и в течение периода времени, эффективных для выработки нейтрализующей реакции антител. В некоторых вариантах осуществления нейтрализующая реакция антител снижает репродуцирование вирусов Hendra и/или Nipah у субъекта и может также уменьшить шеддинг Hendra и/или Nipah вируса у субъекта. В некоторых вариантах осуществления субъект был подвергнут воздействию вируса Hendra и/или Nipah, тогда как в других вариантах осуществления субъект поражен инфекцией вируса Hendra и/или Nipah. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение включает способ выработки у субъекта нейтрализующей реакции антител против вируса Hendra, включающий введение указанному субъекту указанной раскрываемой в данном описании иммуногенной композиции, в количестве и в течение периода времени, эффективных для выработки нейтрализующей реакции антител. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение включает способ выработки у субъекта нейтрализующей реакции антител против вируса Nipah, включающий введение указанному субъекту раскрываемой в данном описании иммуногенной композиции, в количестве и в течение периода времени, эффективных для выработки нейтрализующей реакции антител.
[0010] В некоторых вариантах осуществления указанную иммуногенную композицию вводят внутримышечно. В некоторых вариантах осуществления указанную иммуногенную композицию вводят в виде множества доз, причем после первой дозы вторую дозу вводят по меньшей мере от около двадцати одного дня до около двадцати восьми дней после первой дозы. В некоторых вариантах осуществления каждая доза содержит около 50 или около 100 мкг растворимого белка G вируса Hendra.
[0011] Настоящее изобретение кроме того включает способ дифференциации субъекта, вакцинированного раскрываемой в данном описании иммуногенной композицией, от субъекта, который был подвергнут воздействию вируса Hendra и/или Nipah, включающий детектирование присутствия антител в биологическом образце, выделенном из субъекта, против по меньшей мере одного из любых следующих вирусных белков HeV и/или NiV, выбранных из группы, состоящей слитого белка (F), матриксного белка (M), фосфопротеина (P), крупного белка (L) и нуклеокапсидного белка (N).
[0012] Иммуногенную композицию и способы настоящего изобретения можно применять в отношении субъектов, таких как человек, лошадь, корова, овца, свинья, коза, курица, собака или кошка.
[0013] Настоящее изобретение также включает способ выработки у человека нейтрализующей реакции антител против вирусов Hendra и/или Nipah, включающий введение указанному субъекту иммуногенной композиции, содержащей растворимый гликопротеин G вируса Hendra в количестве и в течение периода времени, эффективного для выработки нейтрализующей реакции антител. В некоторых вариантах осуществления указанная иммуногенная композиция дополнительно содержит адъювант.
Описание фигур
[0014] На фиг.1 показана ректальная температура в течение времени для лошадей, которым вводят растворимый рекомбинантный гликопротеин (sG) вируса Hendra в количестве 50 или 100 мкг/доза с добавлением в качестве адъюванта 250 мкг иммуностимулирующего комплекса, с последующим воздействием живого вируса Hendra в день 0.
[0015] На фиг.2 показана частота сокращений сердца с течением времени у лошадей, которым вводят растворимый рекомбинантный гликопротеин (sG) вируса Hendra в количестве 50 или 100 мкг/доза с добавлением в качестве адъюванта 250 мкг иммуностимулирующего комплекса, с последующим воздействием живого вируса Hendra в день 0.
[0016] На фиг.3 схематически показано получение иммуностимулирующего комплекса.
[0017] На фиг.4 схематически показана диаграмма sGHeV вакцинации и схема заражения NiV. Даты sGHeV вакцинации, NiV заражения и эвтаназии указаны стрелками. Образцы крови и мазков отбирают в дни -42, -7, 0, 3, 5, 7, 10, 14, 21 и 28 после заражения, как указано (*). Серый текст соответствует заражению тимелином (верхний ряд); черный текст соответствует вакцинации тимелином (нижний ряд). Показано число африканских зеленых макак (AGM) в качестве субъектов для каждой группы дозирования вакциной и один контрольный субъект.
[0018] На фиг.5 показана кривая выживания инфицированных NiV животных. Результаты для контрольных животных (n=2) и вакцинированных sGHeV животных (n=9) используют для построения кривой выживания Каплан-Мейера. Контроль включает результаты для одного дополнительного ретроспективного контрольного животного. Вакцинированные животные получают 10 мкг, 50 мкг или 100 мкг sGHeV, которые дважды вводят подкожно. Среднее время до конечной стадии заболевания составляет 11 дней для контрольных животных, тогда как все вакцинированные субъекты оставались живыми до эвтаназии в конце исследования.
[0019] На фиг.6 показан NiV- и HeV-специфический иммуноглобулин (Ig) у вакцинированных животных. Сыворотку и назальные мазки отбирают у вакцинированных животных, оценивают реакции IgG, IgA и IgM, используя sGHeV и sGNiV мультиплексный микросферный анализ. Сыворотку или мазки от животных в одной и той же группе вакцинной дозы (n=3) анализируют индивидуально и рассчитывают средние интенсивности флуоресценции микросфер (M.F.I.), которые откладывают на Y-оси. Планки погрешностей представляют собой среднюю стандартную ошибку от среднего. Сывороточный sG-специфический Ig изображен черным (sGHeV (открытые треугольники), sGNiV (затушеванные треугольники)) и мукозальный sG-специфический IgA представлен серыми символами (sGHeV (открытые треугольники), sGNiV (затушеванные треугольники)).
Предпочтительный вариант осуществления настоящего изобретения
Вакцинные и иммуногенные композиции
[0020] Вакцинная и иммуногенная композиция настоящего изобретения вызывает по меньшей мере одну из числа гуморальных и клеточных иммунных реакций у субъекта, которому вводят указанную композицию, или является эффективной для усиления по меньшей мере одной иммунной реакции против по меньшей мере одного штамма HeV и/или NiV, так что их введение пригодно для целей вакцинации и/или предотвращения против HeV и/или NiV инфицирования одним или более штаммами HeV и/или NiV. Указанная композиция настоящего изобретения доставляет нуждающемуся в этом субъекту гликопротеин G, включая растворимые гликопротеины G из HeV и/или NiV и иммуностимулирующий комплекс (ISC), который действует в качестве адъюванта. В некоторых вариантах осуществления количество гликопротеина G включает, но без ограничений, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 75, 100, 150, 200 или 250 мкг/мл, которые также могут содержать 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275 или 300 мкг/мл ISC. В некоторых вариантах осуществления количество гликопротеина G составляет 5, 50 или 100, и количество ISC составляет 250 мкг на мл.
A. Белки G HeV и NiV
[0021] В некоторых вариантах осуществления указанные вакцинные и иммуногенные композиции включают один или более гликопротеинов G HeV и/или NiV, как раскрыто в описании. Термин белок в описании используют в широком смысле, и он включает полипептиды или их фрагменты. В качестве примера, но без ограничения, гликопротеин G HeV может быть в растворимой форме и может включать аминокислоты 73-604 аминокислотной последовательности гликопротеина G HeV по Wang (2000) J. Virol. 74, 9972-9979 (см. также Yu (1998) Virology 251, 227-233). Также в качестве примера, но без ограничения, гликопротеин G NiV может быть в растворимой форме и может включать аминокислоты 71-602 аминокислотной последовательности гликопротеина G NiV по Harcourt (2000) Virology 271: 334-349, 2000 (см. также Chua (2000) Science, 288, 1432-1).
[0022] Обычно растворимые формы гликопротеинов G HeV и NiV включают весь или часть эктодомена (например, внеклеточную) гликопротеина G из HeV или NiV, и обычно их получают делецией всего или части трансмембранного домена гликопротеина G и всего или части цитоплазмического концевого сегмента гликопротеина G. В качестве примера, растворимый гликопротеин G может включать полный эктодомен гликопротеина G HeV или NiV. Также в качестве примера, но без ограничений, растворимый гликопротеин G может включать весь или часть эктодомена и часть трансмембранного домена гликопротеина G HeV или NiV.
[0023] Растворимые гликопротеины G HeV или NiV настоящего изобретения, которые обычно сохраняют одну или более из характеристик соответствующего нативного вирусного гликопротеина, такую как способность взаимодействовать или связываться с вирусным рецептором клеток хозяина, могут быть получены в олигомерной форме или формах, или способность вызывать продуцирование антител (включая, но, не ограничиваясь ими, нейтрализующие вирус антитела), способные распознавать нативный гликопротеин G. Примеры дополнительных характеристик включают, но, не ограничиваясь ими, способность блокировать или предотвращать инфицирование клеток хозяина. Обычную методологию можно использовать для оценки растворимых гликопротеинов G HeV или NiV в отношении одной или более указанных характеристик.
[0024] В качестве примера, но без ограничений, полинуклеотид, кодирующий растворимый гликопротеин G HeV, может включать полинуклеотидную последовательность, кодирующую аминокислоты 73-604 аминокислотной последовательности для гликопротеина G HeV по Wang (2000) J. Virol. 74, 9972-9979 (SEQ ID NO:2). Также в качестве примера, но без ограничения, полинуклеотид, кодирующий растворимый гликопротеин G HeV, может включать нуклеотиды 9129-10727 полинуклеотидной последовательности для гликопротеина G HeV по Wang (2000) J. Virol. 74, 9972-9979. Кроме того, также можно использовать оптимизированную кодоном полинуклеотидную последовательность, кодирующую аминокислоты 73-604 аминокислотной последовательности для гликопротеина G HeV (SEQ ID NO:2). В некоторых вариантах осуществления указанные оптимизированные кодоном последовательности включают или состоят из нуклеотидов 64-1662 из SEQ ID NO:16. В следующих вариантах осуществления оптимизированные кодоном последовательности включают или состоят из SEQ ID NO:16, которая включает нуклеотиды, кодирующие Igk лидерную последовательность.
[0025] В качестве примера, но без ограничения, гликопротеин G NiV может существовать в растворимой форме и включает аминокислоты 71-602 аминокислотной последовательности для гликопротеина G NiV по Harcourt (2000) Virology 271, 334-349. Неограничивающие примеры последовательностей, которые можно использовать для конструирования растворимого гликопротеина G NiV, можно найти у Harcourt (2000) Virology 271, 334-349. Как правило, можно использовать, последовательности гликопротеина G из любого изолята или штамма вируса Nipah для получения полинуклеотидов и полипептидов настоящего изобретения.
[0026] В качестве примера, но без ограничения, полинуклеотид, кодирующий растворимый гликопротеин G NiV, может включать полинуклеотидную последовательность, кодирующую аминокислоты 71-602 аминокислотной последовательности для гликопротеина G NiV по Harcourt (2000) Virology 271, 334-349. Также в качестве примера, но без ограничения, полинуклеотид, кодирующий растворимый гликопротеин G NiV, может включать 234-2042 полинуклеотидной последовательности для гликопротеина G NiV по Harcourt (2000) Virology 271, 334-349 (SEQ ID NO:4). Кроме того, можно также использовать оптимизированную кодоном полинуклеотидную последовательность, кодирующую аминокислоты 71-602 аминокислотной последовательности для гликопротеина G NiV.
[0027] Функциональные эквиваленты указанных гликопротеинов G можно использовать в иммуногенных и вакцинных композициях настоящего изобретения. В качестве примера, но без ограничения, функционально эквивалентные полипептиды обладают одной или более следующими характеристиками: им присуща способность взаимодействовать или связываться с вирусным рецептором клетки хозяина, их можно получать в димерной или тетрамерной форме или формах, им присуща способность вызывать продуцирование антитела (включая, но, не ограничиваясь ими, нейтрализующие вирусы HeV и/или NiV антитела), способность распознавать нативный гликопротеин G и/или способность блокировать или предотвращать инфицирование клетки хозяина.
[0028] В некоторых вариантах осуществления указанный гликопротеин G может быть в димерной и/или тетрамерной форме. Такие димеры зависят от образования дисульфидных связей, образующихся между цистеиновыми остатками в гликопротеине G. Такие дисульфидные связи могут соответствовать таким, которые образуются в нативном гликопротеине G (например, положение цистеинов остается неизменным), когда экспрессированы в поверхности HeV или NiV или могут быть изменены в присутствии или расположении (например, за счет изменения положения цистеина(ов) в аминокислотной последовательности) гликопротеина G, так что образуются отличающиеся димерная и/или тетрамерная формы гликопротеина G, которые повышают антигенность. Кроме того, недимеризованные и нететрамеризованные формы также включены в объем настоящего изобретения, снова принимая во внимание тот факт, что гликопротеин G присутствует в виде многочисленных конформацинно-зависимых эпитопов (т.е. возникающих за счет третичных трехмерных структур) и что сохранение множества таких природных эпитопов является очень предпочтительным, так как обеспечивает реакцию нейтрализации антител.
[0029] HeV иммуногенные и вакцинные композиции настоящего изобретения могут содержать белки различной длины, но включают аминокислотные остатки 73-604 из SEQ ID NO:2. В одном варианте настоящего изобретения оболочечные белки настоящего изобретения по меньшей мере на около 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентичны гликопротеину HeV SEQ ID NO:2 (включая аминокислоты 73-604). Соответственно, гликопротеины G HeV настоящего изобретения включают иммуногенные фрагменты нативного гликопротеина G HeV с достаточным количеством аминокислот, чтобы получить конформационные эпитопы. Неограничивающие примеры иммуногенных фрагментов включают аминокислотные последовательности, которые могут быть длиной по меньшей мере 530, 531, 532, 533, 534 или 535, или более аминокислот. В некоторых вариантах осуществления указанный гликопротеин G HeV включает или состоит из SEQ ID NO:2 или синтетических конструкций, дополнительно включающих Igx лидерную последовательность (SEQ ID NO:15).
[0030] Указанные NiV иммуногенные и вакцинные композиции настоящего изобретения могут содержать белки различной длины, но включают аминокислотные остатки 71-602 из SEQ ID NO:4. В одном варианте настоящего изобретения капсульные белки настоящего изобретения по меньшей мере на около 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентичны белкам гликопротеина NiV SEQ ID NO:4 (включая аминокислоты 71-602). Соответственно, указанные гликопротеины G NiV настоящего изобретения включают иммуногенные фрагменты нативного гликопротеина G NiV с достаточным количеством аминокислот, чтобы обеспечить получение конформационных эпитопов. Неограничивающие примеры иммуногенных фрагментов включают аминокислотные последовательности, которые могут быть длиной по меньшей мере 528, 529, 530, 531, 532 или 533, или более аминокислот. В некоторых вариантах осуществления гликопротеин G NiV включает или состоит из SEQ ID NO:4 или синтетических конструкций, дополнительно включающих лидерную последовательность.
[0031] Иммуногенные фрагменты, как раскрыто в данном описании, содержат по меньшей мере один эпитоп антигена и проявляют HeV и/или NiV антигенность, и способны повышать иммунную реакцию, если представлены в подходящей конструкции, такой как, например, когда они слиты с другими HeV и/или NiV антигенами или представлены на носителе, причем иммунная реакция направлена против нативного антигена. В одном варианте настоящего изобретения, указанные иммуногенные фрагменты содержат по меньшей мере 20 непрерывных аминокислот из HeV и/или NiV антигена, например, по меньшей мере 50, 75 или 100 непрерывных аминокислот из HeV и/или NiV антигена.
[0032] Варианты осуществления гликопротеина G HeV и NiV кроме того включают изолированный полипептид, включающий аминокислотную последовательность, характеризующуюся по меньшей мере 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентичностью нативным гликопротеинам G HeV или NiV, где указанная полипептидная последовательность может быть идентична нативной аминокислотной последовательности гликопротеина G HeV или NiV или может включать вплоть до некоторого целого числа аминокислотных изменений по сравнению с аминокислотной последовательностью нативного HeV или NiV белка G, где указанные изменения выбирают из группы, состоящей из по меньшей мере одной аминокислотной делеции, замещения, включая консервативное и неконсервативное замещение, или вставки, и где указанные изменения могут происходить по амино- или карбокси-концевым положениям сравнительной полипептидной последовательности, или в любом месте между указанными концевыми положениями, рассеянными вкрапленными или рассеянными индивидуально между аминокислотами в сравнительной последовательности, или в одной или более непрерывных группах внутри аминокислотной последовательности нативного гликопротеина G HeV или NiV.
[0033] Уровень идентичности или гомологичности последовательности по аминокислотной последовательности можно определить, используя BLAST (Basic Local Alignment Search Tool) анализ (программа для обнаружения сходства последовательностей белков путем их локального выравнивания), при использовании алгоритма, используемого программами blastp, blastn, blastx, tblastn и tblastx (Altschul (1997) Nucleic Acids Res. 25, 3389-3402 и Karlin (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87, 2264-2268), которые сконструированы для поиска сходства последовательностей. Подход, который используется в указанной BLAST программе, сводится сначала к поиску аналогичных сегментов, с гэпами (не непрерывными) и без гэпов (непрерывных), между изучаемой последовательностью и последовательностью из базы данных, затем оценивают статистическую значимость всех обнаруженных совпадений и, наконец, суммируют только те совпадения, которые удовлетворяют заранее выбранному порогу значимости. Для обсуждения основных проблем поиска сходства с базой данных последовательностей см. Altschul (1994) Nature Genetics 6, 119-129. Параметры поиска для гистограмм, описаний, выравниваний, предположений (т.е. порога статистической значимости для информированных совпадений против последовательностей базы данных), отсечек, матриц и фильтров (низкая комплексность) установлены по умолчанию. Дефолтная матрица замен, используемая blastp, blastx, tblastn и tblastx, представляет собой BLOSUM62 матрицу (Henikoff (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89, 10915-10919), рекомендуется для изучаемых последовательностей длиной более 85 аминокислот.
[0034] Вакцинные и иммуногенные композиции настоящего изобретения могут дополнительно включать дополнительные белки G HeV и/или NiV из различных штаммов, которые могут далее потенцировать способы иммунизации настоящего изобретения.
B. Иммуностимулирующие комплексы
[0035] Как правило, в настоящем изобретении предложены иммуногенные композиции, включая вакцинные композиции, содержащие растворимые формы гликопротеина G HeV и/или NiV оболочечного белка в комбинации с иммуностимулирующим комплексом (ISC) и к способам применения указанных композиций для предотвращения и лечения HeV и/или NiV инфекций у субъекта. В настоящем изобретении вакцинные и/или иммуногенные композиции включат иммуностимулирующий комплекс, который действует в качестве адъюванта. Как используется в данном описании, термин "адъювант" относится к агентам, которые, хотя сами по себе не обладают каким-либо специфическим антигенным эффектом, может стимулировать иммунную систему, повышая реакцию на антиген.
[0036] ISC обладает рядом отличительных признаков, которые делают его идеальным для некоторых применений:
[0037] Экономия антигена: Как отмечено, например, у Wee (2008) Mucosal Immunol. 1, 489-496, в ситуациях, когда доступность антигена ограничена или стоимость антигена высока, было показано, что ISC позволяют осуществлять 10-100 кратную экономию антигена. Вероятнее всего, это связано с комбинацией повышенной эффективности или более подходящим механизмом действия по сравнению с другими адъювантами.
[0038] Кросс-презентация: Как отмечено, например, у Schnurr (2009) J. Immunol. 182, 1253-1259, предоставление антигена представляющими антиген клетками (APC) обычно происходит по одной из двух схем. Чужой антиген обычно захватывается APC, затем процессируется и снова экспрессируется на поверхность APC в контексте молекул II класса главного комплекса гистосовместимости (MHC). Затем они способны к обнаружению лимфоцитами и, если присутствуют правильные ко-стимуляторные факторы/сигналы, реагировать на них соответствующим образом. Собственные или раковые антигены и вирусные антигены обычно процессируются и экспрессируются в контексте молекул класса I, так как они присутствуют в цитоплазме APC. Эффективный иммунитет в отношении раковых и вирусных антигенов требует доступа к схеме класса I. Это происходит естественным путем в процессе инфицирования вирусом или клеточного гомеостаза (клеточная регенерация внутренних антигенов). Антигенам (вирусным или собственным), введенным в виде вакцины, необходимо попасть с внешней стороны клетки в механизм процессинга антигена указанной клетки из схемы класса II в схему класса I. Это может происходить естественным путем в дендритных клетках (DC-специалисты APC) или этого можно достичь путем вакцинации антигенами, смешанными с ISC в качестве адъюванта. Указанный процесс нахождения пути внешне полученным антигеном в схему презентации антигена класса I называют перекрестной презентацией. Точный механизм, за счет которого ISC достигает перекрестной презентации антигена, полностью не был выяснен, но может быть основан на нарушении структуры мембран ISC компонентов.
[0039] Гуморальные и опосредованные клетками реакции: Как отмечено, например, у Марасковского (2009) Immunol. Cell Biol. 87, 371-376), за счет механизма действия ISC задействованы как гуморальные, так и клеточные “плечи” адаптивной иммунной системы. Для некоторых видов это параллельно профилю цитокинов, стимулированных вакцинацией указанным адъювантом. Иммунные реакции типа 1 характеризуются экспрессией интерлейкина-2 и IFN-гамма и защитой от внутриклеточных патогенов (бактерий, простейших и вирусов), и реакции типа 2 характеризуются экспрессией интерлейкина-4 и выработкой нейтрализующих антител для иммунитета, связанного с антитоксинами и антипатогенами. ISC обеспечивает сбалансированный профиль для цитокинов между указанными двумя крайностями, обеспечивая большую степень свободы иммунной реакции. Кроме того, в ряде исследований было показано, что ISC могут быть эффективными, если вакцины вводят интраназально. Такой способ обеспечивает сенсибилизацию поверхностей слизистых оболочек и, таким образом, обеспечивает соответствующий иммунитет в сайте внедрения патогенна, особенно для указанного случая (защитные свойства слизистых оболочек), см. также Sjolander (2001) Vaccine 19, 4072-4080.
[0040] Критерии стерильного фильтрования и стабильного получения: Размеры ISC частиц обычно составляют 40 нм в диаметре, что позволяет им проходить через фильтры, которые используют для дальнейшей стерилизации препаратов в лекарственной форме. Кроме того, естественную тенденцию для тритерпеноидных сапонинов, как обнаружено в Quil A, ассоциироваться с холестерином и фосфолипидами, рассматривают как преимущество при разработке способов получения ISC. Образцы Quil A, которые не образуют ISC частиц, удаляют диализом из конечного продукта. Регулируя отношения компонентов, однородный продукт получают из гетерогенного спектра Quil А сапонинов. Указанное отношение является важным, так как отклонения приводят к структурам, которые не характеризуются размером частиц 40 нм (спирали, листы и т.д.). Свободно пересыпающийся характер ISC коллоида и возможность его измерения с использованием трансмиссионной электронной микроскопии, ВЭЖХ и других методов, делает указанный адъювант пригодным для разработки оценок выходов и других характеристик качества.
[0041] Таким образом, на основании вышеизложенного, в некоторых вариантах осуществления лекарственная форма иммуностимулирующих комплексов с оптимальным количеством гликопротеина G включает молекулы сапонина, фосфолипида и стероида. В некоторых вариантах осуществления молярное отношение молекул сапонина, фосфолипида и стероида составляет 5:1:1. Иммуностимулирующие комплексы могут содержать, например, 5-10% масс. сапонина, 1-5% молекул стероида и фосфолипида и остальное составляет гликопротеин G. Гликопротеин G можно включать в иммуностимулирующие комплексы или непосредственно, или химическим сочетанием с белком носителя (например, в виде гибридного или слитого белка) после включения белка в иммуностимулирующие комплексы. В ссылках на иммуностимулирующие комплексы следует понимать, что они включают ссылки на их производные, химические эквиваленты и аналоги. В некоторых вариантах осуществления ISC смешивают отдельно от гликопротеинов G HeV и/или NiV и затем примешивают гликопротеины G, с полученным ISC. В некоторых вариантах осуществления гликопротеины G смешивают непосредственно с молекулами сапонина, фосфолипида и стероида.
[0042] В некоторых вариантах осуществления указанный сапонин для использования в настоящем изобретении представляет собой Quil A и/или его производные. Quil A представляет собой препарат сапонина, выделенный из Южноамериканского дерева Quillaja saponaria Molina, и был впервые описан как обладающий адъювантной активностью Dalsgaard (1974) Saponine adjuvants, Archiv. Fur die gesamte Virusforschung, Vol. 44, Springer Verlag, pp. 243-254. Очищенные фрагменты Quil A были выделены с помощью ВЭЖХ, причем этот метод сохраняет адъювантную активность, но без токсичности, связанной с Quil A (EP 0362278), например, QS7 и QS21 (также известные как QA7 и QA21). QS21 представляет собой природный сапонин, полученный из коры Quillaja saponaria Molina, который индуцирует CD8+ цитотоксичные T клетки (CTL), Th1 клетки и преимущественно реакцию lgG2a антител, и представляет собой сапонин для использования в контексте настоящего изобретения. Другие сапонины, подходящие для использования в ISC, включают, но, не ограничиваясь ими, QH-A, QH-B и QH-C субфракции Quil A, получаемые из видов, отличающихся от Quillaia saponaria, такие, которые получены из рода Panax (женьшень), Astragalus, Achyranthes, соевых бобов, Acacia и Codonopsis. В некоторых вариантах осуществления указанный сапонин выделяют из видов, отличающихся от Quillaia saponaria.
[0043] Неограничивающие примеры фосфолипидов для использования в иммуногенных и вакцинных композициях настоящего изобретения включают молекулы с диацилглицеридными структурами и фосфоспинголипидами. Неограничивающие примеры фосфолипидов с диацилглицеридными структурами включают фосфатидиновую кислоту (фосфатидат) (PA), фосфатидилэтаноламин (цефалин) (PE), фосфатидилхолин (лецитин) (PC), дипальмитоилфосфатидилхолин (DPPC) или фосфатидилсерин (PS). Другой неограничивающий пример фосфолипидов с диацилглицеридными структурами включает фосфоинозитиды. Примеры фосфоинозитидов включают, но, не ограничиваясь ими, фосфатидилинозит (PI), фосфатидилинозитфосфат (PIP), фосфатидилинозитбисфосфат (PIP2) или фосфатидилинозиттрифосфат (PIP3). Неограничивающие примеры фосфоспинголипидов включают, фосфорилхолинцерамид (сфингомиелин) (SPH), фосфорилэтаноламинцерамид (сфингомиелин) (Cer-PE) или фосфорилглицеринцерамид.
[0044] Стероидные молекулы для использования в иммуногенных и вакцинных композициях настоящего изобретения, включают молекулы, которые содержат стероид как часть своей структуры. Неограничивающие примеры стероидных молекул включают холестерин, прегненолон, 17-альфа-гидроксипрегненолон, дегидроэпиандростерон, адростендиол, прогестерон, 17-альфа-гидроксипрогестерон, андростендион, тестостерон, дигидрокситесторон, деоксикортикостерон, 11-деоксикортикостерон, кортизол, кортикостерон, альдостерон, эстрон, эстрадиол или эстриол.
[0045] В некоторых вариантах осуществления иммуностимулирующие комплексы представляет собой как правило, но, не ограничиваясь ими, мелкие кейдж-структуры диаметром 30-40 нм. В некоторых вариантах осуществления образования иммуностимулирующих комплексов они имеют молярное отношение Quil A:холестерин:фосфатидилхолин и гликопротеин G, соответствующее 5:1:1. Иммуностимулирующие комплексы могут содержать, например, 5-10% масс. Quil A, 1-5% холестерина и фосфолипидов, и остальное составляет гликопротеин G. Гликопротеин G может быть включен в иммуностимулирующие комплексы или непосредственно, или путем сочетания с белком носителя (например, гибридным или слитым белком) после включения белка в иммуностимулирующие комплексы. При ссылке на иммуностимулирующие комплексы следует понимать, что они включают также ссылки на производные, химические эквиваленты и аналоги. Например, ссылка на производное иммуностимулирующего комплекса включает ссылку на иммуностимулирующий комплекс, в котором один или более из Quil A, холестерина, фосфатидилхолина или белка, например, исключен, замещен, или какой-либо компонент кроме Quil A, холестерина, фосфатидилхолина или белка добавлен к комплексу. Функциональный эквивалент иммуностимулирующего комплекса может быть иммуностимулирующим комплексом, в котором один или более из его четырех компонентов заменен функциональным эквивалентом. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения G гликопротеиновый компонент иммуностимулирующего комплекса исключен. Такой тип иммуностимулирующего комплекса в описании называют не содержащим белка (безбелковым) иммуностимулирующим комплексом.
[0046] В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение включает, но без ограничений, иммуногенную композицию, содержащую выделенный белок G HeV или NiV, способный вызвать продуцирование перекрестно-реакционной нейтрализующей антисыворотки против многочисленных штаммов HeV и/или NiV in vitro, и адъювант, включающий Quil A, DPPC и холестерин, например, где композиция содержит: 5, 50 или 100 мкг растворимого G белка HeV или NiV, и соответствующие количества Quil A, DPPC, и холестерина. Дополнительные примеры вариантов осуществления иммуностимулирующих комплексов и способов их получения раскрыты в EP 0242380B1 и EP 0180564B1, а также в WO2000041720 (см., например, стр. 3 и 9, ссылки на: Cox & Coulter (1992) Advances in Adjuvant Technology and Application in Animal Parasite Control Utilizing Biotechnology, Chapter 4, Yong (ed.), CRC Press; Dalsgard (1974) Gesamte Вирус forsch, 44, 243-254; Australian Patent Specification Nos. 558258, 589915, 590904 & 632067. См. также репрезентативные протоколы, раскрытые в патенте США 6506386, и приводимые там ссылки на хорошо известный факт, что иммуностимулирующие комплексы можно использовать, если белковый антиген включен в иммуностимулирующий комплекс при его создании (см. EP 0109942B1), или, альтернативно, предоставлены предварительно полученные иммуностимулирующие комплексы, которые затем смешивают с отдельно добавляемой аликвотой антигена для создания вакцины (см. EP 0436620B1). Как обычно следует понимать, белковый антиген может быть также ковалентно присоединен к иммуностимулирующему комплексу (см. снова EP 0180564B1). Как также должно быть хорошо понятно специалистам в данной области, иммуностимулирующие комплексы можно вводить путем вакцинации через слизистую оболочку (см. Mowat (1991) Immunology 72, 317-322) и иммуностимулирующие комплексы настоящего изобретения можно далее усовершенствовать для вакцинации через слизистую оболочку путем включения в них нацеленные на мембрану белки (WO 9730728).
[0047] В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение включает, но без ограничений, иммуногенную композицию, содержащую выделенный белок G HeV или NiV, способный индуцировать продуцирование перекрестно-реактивной нейтрализующей антисыворотки против многочисленных штаммов HeV и/или NiV in vitro, и адъювант, включающий Quil A, DPPC и холестерин, например, где композиция содержит: 5, 50 или 100 мкг растворимого G белка HeV или NiV, и соответствующие количества Quil A, DPPC и холестерина. Дополнительные примеры вариантов осуществления иммуностимулирующих комплексов раскрыты в WO 200004720.
[0048] В следующем варианте осуществления настоящего изобретения указанные вакцинные и иммуногенные композиции могут составлять часть фармацевтической композиции. Фармацевтические композиции настоящего изобретения могут содержать подходящие фармацевтически приемлемые носители, включающие эксципиенты и вспомогательные вещества, которые облегчают переработку активных соединений в лекарственные препараты, которые можно использовать фармацевтически для доставки их в место действия.
C. Эксципиенты
[0049] Иммуногенные и вакцинные композиции настоящего изобретения могут дополнительно включать фармацевтически приемлемые носители, эксципиенты и/или стабилизаторы (см., например, Remington: The Science and practice of Pharmacy (2005) Lippincott Williams), в форме лиофилизированных лекарственных препаратов или водных растворов. Подходящие носители, эксципиенты или стабилизаторы являются нетоксичными для реципиентов в указанных дозах и концентрациях, и могут включать буферы, такие как фосфат, цитрат и другие органические кислоты; антиоксиданты, включая аскорбиновую кислоту и метионин; консерванты (такие как натриевая соль ртуть(o-карбоксифенил)тио)этила (тиомерсал), октадецилдиметилбензиламмонийхлорид; гексаметонийхлорид; бензалконийхлорид, бензэтонийхлорид; фенол, бутиловый или бензиловый спирт; алкилпарабены, такие как метилпарабен или пропилпарабен; катехол; резорцин; циклогексанол; 3-пентанол и м-крезол); белки, такие как сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины; гидрофильные полимеры, такие как поливинилпирролидин; аминокислоты, такие как глицин, глутамин, аспарагин, гистидин, аргинин или лизин; моносахариды, дисахариды и другие углеводы, включая глюкозу, маннозу или декстраны; хелатирующие агенты, такие как EDTA; сахара, такие как сахароза, манит, трегалоза или сорбит; образующие соли противоионы, такие как натрий; комплексы металлов (например, комплексы Zn-белок); и/или неионные поверхностно-активные вещества, такие как полиэтиленгликоль (PEG), твин или плуроникс.
[0050] Композиции настоящего изобретения могут быть в дозированной форме, суспендированной в любом подходящем фармацевтическом средстве доставки или носителе, в достаточном объеме, для осуществления дозирования. Как правило, конечный объем, включая носители, адъюванты и т.п., составляет по меньшей мере 1,0 мл. Верхний предел определяется практически количеством, которое необходимо ввести, обычно не более чем от около 0,5 мл до около 2,0 мл.
Способы применения
[0051] Настоящее изобретение включает способы предотвращения и/или лечения вирусной инфекции Hendra и/или Nipah, включающие введение иммуногенных и вакцинных композиций настоящего изобретения любому млекопитающему. Активный иммунитет, вырабатываемый путем вакцинации гликопротеином G HeV и/или NiV с адъювантами, раскрытыми в данном описании, может инициировать или повышать клеточный или гуморальный иммунный ответ. Эффективное количество гликопротеинов G HeV и/или NiV или их антигенных фрагментов могут быть получены в смеси с адъювантом для получения вакцины.
[0052] Настоящее изобретение включает способы предотвращения и/или лечения людей, инфицированных вирусом Hendra и/или Nipah, включающие введение иммуногенных и/или вакцинных композиций, содержащих растворимый гликопротеин G HeV и/или NiV или их комбинации, отдельно или в комбинации с по меньшей мере одним адъювантом, пригодным для использования в медицине. Адъюванты, пригодные для использования в медицине, можно использовать отдельно или в комбинации. Примеры адъювантов, пригодных для использования в медицине, включают, но, не ограничиваясь ими, соли алюминия. Примеры солей алюминия включают, но, не ограничиваясь ими, гидроксид алюминия, гель гидроксида алюминия (Alhydrogel™), фосфат алюминия, алюм (калийалюминийсульфат) или смеси солей алюминия. Дополнительные примеры адъювантов, пригодных для использования в медицине, включают, но, не ограничиваясь ими, эмульсии типа вода-в-масле, эмульсии типа масло-в-воде и AS04 (комбинацию гидроксида алюминия и монофосфориллипида A) и CpG олигодезоксинуклеотиды. CpG олигодезоксинуклеотиды представляют собой синтетические олигонуклеотиды, которые содержат неметилированные CpG динуклеотиды в определенной последовательности контекстов (CpG фрагменты). Указанные фрагменты CpG присутствуют в 20-кратном избытке в бактериальных ДНК по сравнению с ДНК млекопитающих. CpG олигодезоксинуклеотиды распознаются Toll-подобным рецептором 9 (TLR9), что приводит к сильным иммуностимулирующим эффектам.
[0053] Введение вакцины или иммуногенной композиции, содержащей гликопротеин G HeV и/или NiV с одним или более раскрытых в описании адъювантов, может осуществляться или с профилактической, или с терапевтической целью. В одном аспекте настоящего изобретения указанную композицию можно использовать с целью профилактики. Если вакцинную композицию вводят профилактически, ее вводят до обнаружения каких-либо признаков или симптомов инфицирования HeV и/или NiV. Профилактическое введение эффективного количества соединения(ий) служит целям предотвращения или ослабления какого-либо последующего инфицирования HeV и/или NiV.
[0054] Если вакцину вводят с терапевтической целью, тогда указанную вакцину вводят в эффективном количестве после определения симптомов реального инфицирования. Считают, что композиция "фармакологически приемлема", если ее введение переносится реципиентом. Такую композицию следует вводить в "терапевтически или профилактически эффективном количестве", если вводимое количество является физиологически значимым. Вакцинная или иммуногенная композиции настоящего изобретения являются физиологически значимыми, если их присутствие приводит к заметным изменениям в физиологии реципиента, например, повышая высокореакционные гуморальные или клеточные реакции в отношении одного или более из штаммов HeV и/или NiV. Предоставляемая защита не должна быть абсолютной (т.е. HeV или NiV инфицирование не должно быть полностью предотвращено или устранено), при условии, что существует статистически значимое улучшение по сравнению с контрольной популяцией. Защита может быть ограничена ослаблением тяжести заболевания или уменьшением скорости возникновения симптомов заболевания.
[0055] Вакцинная или иммуногенная композиция настоящего изобретения может сообщать устойчивость к многочисленным штаммам HeV и/или NiV. Как использовано в настоящем описании, вакцина предназначена для предотвращения или ослабления инфицирования, если ее введение субъекту приводит или к полному, или частичному ослаблению (т.е. подавлению) симптома или состояния инфекции, или к выработке полного или частичного иммунитета индивидуума к инфицированию.
[0056] По меньшей мере одну вакцинную или иммуногенную композицию настоящего изобретения можно вводить любыми способами, которые достигают поставленной цели, используя фармацевтическую композицию, как раскрыто в данном описании. Например, вводить такую композицию можно различными парентеральными способами, такими как подкожное, внутривенное, чрезкожное, внутримышечное, внутрибрюшинное, интраназальное, трансдермальное, буккальное введение. В одном варианте осуществления настоящего изобретения указанную композицию вводят подкожно. Парентеральное введение может быть болюсной инъекцией или может осуществляться введение в виде постоянной перфузии в течение некоторого промежутка времени.
[0057] Обычная схема предотвращения, подавления или лечения заболевания или состояния, которые можно ослабить за счет клеточной иммунной реакции, вызванной активной специфической клеточной иммунотерапией, включает введение эффективного количества вакцинной композиции, как указано выше, осуществляемое как отдельное введение или как повторное введение в виде усиливающих или бустерных доз, в течение промежутка времени вплоть до и включая от одной недели до около двадцати четырех месяцев. Неограничивающие примеры включают первую дозу с последующей второй дозой через около по меньшей мере 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или 24 дня после первой дозы (день 0). Количество иммуногенной или вакцинной композиции в дозе может быть меньше чем, равно или больше чем в первой дозе, введенной в день 0.
[0058] Согласно настоящему изобретению, "эффективное количество" вакцинной или иммуногенной композиции является таким, которое достаточно для достижения необходимого биологического эффекта, причем в этом случае возникает по меньшей мере одна из клеточных или гуморальных реакций на один или более штаммов HeV и/или NiV. Следует понимать, что величина эффективной дозы будет зависеть от возраста, пола, состояния здоровья и массы субъекта, типа сопутствующего лечения, если оно проводится, частоты введения дозы и характера ожидаемого эффекта. Интервалы эффективных доз, которые приводятся ниже, никоим образом не ограничивают настоящее изобретение, и представляют собой примеры интервалов доз, которые могут оказаться подходящими для введения композиций настоящего изобретения. Однако указанные дозы могут быть подобраны в соответствии с конкретным субъектом, как легко может быть понятно специалистам в данной области, без какого-либо экспериментирования.
[0059] Реципиентами вакцинных и иммуногенных композиций настоящего изобретения могут быть любые субъекты, которые могут приобрести специфический иммунитет за счет клеточной или гуморальной иммунной реакции на HeV и/или NiV, где клеточная реакция опосредована белком MHC класса i или класса ii. Среди млекопитающих реципиентами могут быть млекопитающие ранга приматов, включая людей, шимпанзе, приматов и обезьян). В одном варианте осуществления настоящего изобретения предложен способ лечения людей вакцинными или иммуногенными композициями настоящего изобретения. Субъекты могут быть инфицированы HeV и/или NiV, или могут представлять модель HeV или NiV инфицирования в экспериментальных исследованиях. В некоторых вариантах осуществления субъектом является домашнее млекопитающее, включая, но, не ограничиваясь ими, лошадь, корову, быка, буйвола, овцу, свинью (Mingyi (2010) Vet. Res. 41, 33), козу, собаку (Biosecurity Alert-Hendra Virus Update, 27 July 2011, Press Release, Biosecurity Queensland) или кошку. В некоторых вариантах осуществления субъектом является домашняя птица, включая курицу.
[0060] Вакцины настоящего изобретения также обеспечивают перекрестный иммунитет против инфицирования вирусом Nipah, в дозах, которые используют для защиты против инфицирования вирусом Hendra, а также обеспечивают эффективную вакцинацию против вируса Nipah.
[0061] Ссылка на эффективную иммунную реакцию следует понимать как ссылку на иммунный ответ, который непосредственно или косвенно приводит к благоприятному профилактическому или терапевтическому эффекту. В том случае, если иммуноген включает гликопротеин G HeV или NiV, как раскрыто в данном описании, такая реакция включает снижение или прекращение вирусного репродуцирования и/или вирусного шеддинга, и/или ослабления симптомов заболевания у животного. Следует понимать, что эффективность является функциональной мерой и не определяется только ссылкой на титры анти-HeV и/или анти-NiV антител, так как только присутствие циркулирующих антител не является необходимым показателем эффективности указанных циркулирующих антител в отношении прекращения вирусного репродуцирования и шеддинга.
[0062] Также в качестве примера, но без ограничения, если растворимый G белковый полипептид настоящего изобретения вводят для усиления иммунной ответа у субъекта, инфицированного или подозреваемого в инфицировании Hendra или Nipah, и/или если антитела настоящего изобретения вводят в виде пассивной иммунотерапии, указанные композиции могут дополнительно включать, например, другие терапевтические средства (например, противовирусные средства).
[0063] Пример 4 ниже предлагает информацию о некоторых предпочтительных композициях для применения при вакцинации лошадей. Что касается других животных, которые могут быть инфицированы вирусом Hendra, и которым поэтому требуется вакцинация для защиты как животных, так и людей от инфицирования обоими вирусами Hendra и Nipah, обычно применима следующая информация, которая может быть легко адоптирована специалистами в данной области. Вообще говоря, животным-компаньонам (собакам и кошкам) требуется приблизительно 25 микрограмм антигена Hendra, и может быть благоприятным использование ISC адъюванта в интервале 25-150 микрограмм, при соотношении 5:1:1 сапонина, фосфолипида и стерина, входящих в предпочтительные ISC композиции, причем можно использовать любой из типов компонентов, как раскрыто в данном описании. Для животных-компаньонов предпочтительно, чтобы конечная доза составляла около 1 мл. Polygen™ (MVP Technologies), адъювант на базе сополимера, также можно использовать, предпочтительно в количестве около 5-15% (об/об).
[0064] Вообще говоря, для крупных фермерских животных (овец, коров, свиней и т.д.) применимы дозовые количества антигена и адъюванта (и конечный объем доз), которые отличаются от приведенных в описании для лошадей, то есть, можно использовать около 50-100 микрограмм антигена, и обычно около 250 микрограмм ISC, при конечном объеме, например, 1-3 мл. Что касается свиней, то альтернативная и эффективная композиция адъюванта содержит (приблизительно для такого же количества антигена) смесь ISC и ионного полисахарида, конкретно 100 мг DEAE декстрана и 800 микрограмм ISC в 1-3 мл конечного объема дозы (снова 5:1:1 Quil A:фосфатидилхолин:холестерин (см. WO 2000/41720)).
Дифференциация вакцинированных животных
[0065] Настоящее изобретение также включает способы дифференциации здоровых вакцинированных животных от животных, которые были подвергнуты воздействию или инфицированы HeV и/или NiV. За время инфицирования HeV и NiV экспрессируют дополнительные белки, отличные от гликопротеина G (G), включая слитый белок (F), матриксный белок (M), фосфопротеин (P), крупный белок (L) и нуклеокапсидный белок (N). Указанные дополнительные белки обладают способностью индуцировать у животных иммунные ответы в форме антител, которые связываются с указанными белками, или Т клеточный иммунитет. Уровень реакции антител на указанные другие белки обычно можно измерить, используя анализы, такие как иммуноферментный анализ (EIA). Иммуногенные и вакцинные композиции настоящего изобретения в некоторых вариантах осуществления содержат только гликопротеин G в качестве HeV и/или NiV антигена и поэтому индуцируют иммунные реакции антител только с гликопротеинами G HeV и/или NiV. Животные, вакцинированные раскрытыми в данном описании иммуногенными композициями, которых затем инфицируют HeV или NiV, вырабатывают бустерную иммунную реакцию на гликопротеин G, но также демонстрируют презентацию антител на некоторые другие HeV и NiV белки, отличные от гликопротеина G. Таким образом, присутствие антител к любому из слитого белка (F), матриксного белка (M), фосфопротеина (P), крупного белка (L) и нуклеокапсидного белка (N) можно измерить, используя EIA, для определения присутствия или отсутствия антител, специфических к указанным белкам в образцах сыворотки. Если детектируется антитело к любому их указанных других белков (т.е. отличающихся от гликопротеина G), это означает, что животное было подвергнуто воздействию HeV и/или NiV. Альтернативно, если не детектируется антитело к указанным другим белкам, а детектируются только антитела, связывающие белок G, это означает, что животное было только вакцинировано.
[0066] EIA настоящего изобретения одновременно и высокоспецифичны и высокоселективны при детектировании и дифференцировании между животными, инфицированными HeV и/или NiV и здоровыми животными, которые были вакцинированы раскрытыми в данном описании иммуногенными композициями. В настоящем изобретении можно использовать различные способы анализов, включая ELISA, как в гомогенном, так и в гетерогенном окружении. Указанные способы анализов можно проводить на образцах, таких как кровь, сыворотка, молоко или любые другие жидкости организма, содержащие антитела.
[0067] В некоторых вариантах осуществления антитела, используемые для EIA, могут уникально конкурировать с антителами, вырабатываемыми за счет вакцинации гликопротеином G, но не с антителами, вырабатываемыми у животных в результате инфицирования HeV и/или NiV. Это позволяет не только проводить серологическую диагностику HeV и NiV инфицирования, но и дифференциация вакцинированных от инфицированных животных в одном анализе. Процедуру EIA можно проводить на стандартных образцах сыворотки крови или на любых жидкостях организма или секретах организма, содержащих антитела. В процедурах EIA можно использовать моноклональные и/или поликлональные антитела к гликопротеинам G и любым другим HeV и/или NiV вирусным белкам (например, к слитому белку (F), матриксному белку (M), фосфопротеину (P), крупному белку (L) и нуклеокапсидному белку (N), так как такие белки не присутствуют у вакцинированных здоровых животных, которые не были подвергнуты воздействию HeV и/или NiV). Указанные EIA можно осуществлять на любом из коммерчески доступных стационарных или портативных-ручных, полуавтоматических или роботехнических автоматизированных ELISA установках с программным обеспечением и компьютерной обработкой результатов. В некоторых вариантах осуществления указанные способы дифференциации здоровых вакцинированных животных от животных, подвергнутых воздействию или инфицированных HeV и/или NiV, можно проводить на биологических образцах, выделенных из домашних млекопитающих, включая, но, не ограничиваясь ими, лошадей, коров, овец, свиней, коз, собак или кошек. В некоторых вариантах осуществления субъектом является домашняя птица, включая куриц. В некоторых вариантах осуществления субъектом является человек.
Примеры
[0068] Следующие примеры иллюстрируют только некоторые, но отнюдь не все варианты осуществления настоящего изобретения, и поэтому их не следует рассматривать как ограничивающие объем настоящего изобретения.
Пример 1: Конструкции векторов
[0069] Векторы конструируют для экспрессии HeV G или NiV G с удаленным трансмембранным/цитоплазмическим концом. Клонированную кДНК полной длины белка G HeV или NiV амплифицируют, используя ПЦР (полимеразную цепную реакцию) для создания фрагментов из около 2600 нуклеотидов, кодирующих белок G HeV или NiV с удаленным трансмембранный/цитоплазмический домен/цитоплазмическим концом.
[0070] Для амплификации HeV G синтезируют следующие олигонуклеотидные праймеры
sHGS: 5'-GTCGACCACCATGCAAAATTACACCAGAACGACTGATAAT-3' (SEQ ID NO:5).
sHGAS: 5-GTTTAAACGTCGACCAATCAACTCTCTGAACATTGGGCAGGTATC-3'. (SEQ ID NO:6).
[0071] Для амплификации NiV G были синтезированы следующие олигонуклеотидные праймеры.
sNGS: 5'-CTCGAGCACCATGCAAAATTACACAAGATCAACAGACAA-3' (SEQ ID NO:7).
sNGAS: 5-CTCGAGTAGCAGCCGGATCAAGCTTATGTACATTGCTCTGGTATC-3'. (SEQ ID NO:8).
Все ПЦР реакции проводят, используя Accupol ДНК полимеразу (PGS Scientifics Corp) в следующем режиме: сначала 94°C в течение 5 минут и затем 94°C в течение 1 минуты, 56°C в течение 2 минут, 72°C в течение 4 минут; 25 циклов. Указанные праймеры создают продукт ПЦР для sHeV G ORF окруженной Sal 1 сайтами и sNiV G ORF окруженной Xho 1 сайтами. ПЦР продукты очищают на геле (Qiagen). После очистки на геле sHeV G и sNiV G субклонируют в TOPO вектор (Invitrogen).
[0072] PSectag2B (Invitrogen) закупают и модифицируют таким образом, чтобы они содержали S-пептидный маркер или myc-эпитопный маркер. Синтезируют перекрывающиеся олигонуклеотиды, которые кодируют последовательность для S-пептида, и переваривают Kpn 1 и EcoR1 выступающие (“липкие”) концы.
SPEPS: 5'-CAAGGAGACCGCTGCTGCTAAGTTCGAACGCCAGCACATGGATTCT-3' (SEQ ID NO:9).
SPEPAS: 5'-AATTAGAATCCATGTGCTGGCGTTCGAACTTAGCAGCAGCGGTCTCCTTGGTAC-3' (SEQ ID NO:10).
[0073] Синтезируют перекрывающиеся олигонуклеотиды, которые кодируют последовательность для myc-эпитопного маркера и переваривают Kpn 1 и EcoR1 выступающие (“липкие”) концы.
MTS: 5'-CGAACAAAAGCTCATCTCAGAAGAGGATCTG-3' (SEQ ID NO:11).
MTAS: 5 -AATTCAGATCCTCTTCTGAGATGAGCTTTTGTTCGGTAC-3' (SEQ ID NO:12).
[0074] 64 пмоль SPEPS и 64 пмоль SPEPAS смешивают и нагревают до 65°C в течение 5 минут и медленно охлаждают до 50°C. 64 пмоль MTS и 64 пмоль MTAS смешивают и нагревают до 65°C в течение 5 минут и медленно охлаждают до 50°C. Две полученные смеси разбавляют и клонируют в Kpn1-EcoR1 переваренный pSecTag2B с получением модифицированного S-пептидом pSecTag2B или модифицированного myc-эпитопом pSecTag2B. Все конструкции сначала скринируют, используя фрагменты рестрикции, и затем подтверждают секвенированием.
[0075] TOPO sG конструкцию переваривают, используя Sal 1, очищают на геле (Qiagen) и субклонируют в рамке в сайт Xho 1 модифицированного S-пептидом pSecTag2B или модифицированного myc-эпитопом pSecTag2B. Все конструкции сначала скринируют, используя фрагменты рестрикции, и затем подтверждают секвенированием.
[0076] Создают Igk лидер-S-пептид-s HeVG (sGS-tag) и Igk лидер-myc tag-sHeVG (sGmyc-tag) конструкции, которые затем субклонируют в вакцинный шаттл вектор pMCO2. Синтезируют олигонуклеотид SEQS: 5'-TCGACCCACCATGGAGACAGACACACTCCTGCTA-3' (SEQ ID NO:13) и используют в комбинации с олигонуклеотидом sHGAS для амплификации с помощью ПЦР sGs-tag и sGmyc-tag. Все ПЦР реакции осуществляют, используя Accupol ДНК полимеразу (PGS Scientifics Corp.) в следующем режиме: 94°C в течение 5 минут сначала и затем 94°C в течение 1 минуты, 56°C в течение 2 минут, 72°C в течение 4 минут; 25 циклов. Указанные праймеры создают ПЦР продукты, фланкированные Sal 1 сайтами. ПЦР продукты очищают на геле (Qiagen). После очистки на геле sGs-tag и sGmyc-tag субклонируют в TOPO вектор (Invitrogen). sG S-маркер и sG myc-маркер переваривают с помощью Sal 1 и субклонируют в Sal 1 сайт pMCO2. Все конструкции вначале скринируют, используя фрагменты рестрикции, и затем подтверждают секвенированием. Затем создают оптимизированную кодоном нуклеотидную последовательность для облегчения продуцирования в эукариотной клеточной линии, которая представлена в SEQ ID NO:16.
Пример 2: Получение растворимого белка G с использованием вакцин
[0077] Для получения белка генетические конструкции, содержащие оптимизированные кодоном последовательности, используют для создания рекомбинантных поксвирусных векторов (вакцинный вирус, штамм WR). Затем получают рекомбинантный поксвирус, используя стандартные методики, использующие tk-селекцию и окрашивание GUS. Коротко, CV-1 клетки трансфицируют, или используя pMC02 sHeV G слияние или pMC02 sNiV G слияние, используя кальций-фосфатный трансфекционный набор (Promega). Полученные монослои затем инфицируют вакцинным вирусом штаммом дикого типа Western Reserve (WR) при множественности заражения (MOI) 0,05 БОЕ/клетка. Спустя 2 дня клеточный осадок собирают как сырые рекомбинантные вирусные массы. TK клетки инфицируют, используя сырые рекомбинантные вирусные массы в присутствии 25 мкг/мл 5-бром-2'-дезоксиуридина (BrdU) (Calbiochem). Через 2 часа вирус заменяют, нанося верхний слой EMEM-10, содержащий 1% агарозы (Life Technologies) с низкой температурой плавления (LMP) и 25 мкг/мл BrdU. После 2 дней инкубирования добавляют дополнительно верхний слой EMEM-10, содержащий 1% LMP агарозы, 25 мкг/мл BrdU и 0,2 мг/мл 5-бром-4-хлор-3-индолил-P-D-глюкуроновой кислоты (X-GLUC) (Clontech). В течение 24-48 часов становятся видны синие бляшки, которые собирают и осуществляют еще два раунда очистки бляшек за счет двойной селекции. Затем полученные рекомбинантные вакцинные вирусы vKB16 (sHeV G слияние) и vKB22 (sNiV G слияние) амплифицируют и очищают стандартными способами. Коротко, рекомбинантные вакцинные вирусы очищают методом очистки бляшек, амплификации клеточных культур, сахарозного пеллетирования в ультрацентрифуге и титрованием в анализе бляшек. Экспрессию sHeV G проверяют в клеточных лизатах и культуральных супернатантах.
Пример 3: Получение растворимого G белка с использованием 293F клеток
[0078] Генетические конструкции, содержащие оптимизированные кодоном последовательности, используют для трансформации 293F клеток (Invitrogen) для получения стабильной клеточной линии, которая экспрессирует растворимый гликопротеин G HeV. CHO-S клетки (Invitrogen) также можно использовать для трансформации и экспрессии растворимого гликопротеина G HeV. Трансформированные клетки высевают в 162 см2 колбы для культуры тканей, содержащие 35 мл DMEM-10. Клеткам дают возможность прикрепиться и расти при 37°C и 5-8% CO2 в течение нескольких дней. Когда клетки достигают конфлюэнтности, их разделяют на несколько колб с DMEM-10 со 150 мкг/мл гигромицина B (по 30 мл в колбе). Когда клетки достигают 70-80% конфлюэнтности, их дважды промывают 30 мл PBS, затем добавляют 20 мл 293 SFM II (Invitrogen) и клетки инкубируют при 37°C и 5-8% CO2 в течение ночи. На следующий день клетки переносят в колбы Эрленмейера, содержащие 200 мл SFM II среды. Клеткам дают расти при 37°C и 5-8% CO2 при 125 об/мин в течение 5-6 дней до тех пор, пока они не начинают погибать. В это время собирают полученный супернатант.
[0079] Среду из каждой колбы Эрленмейера центрифугируют со скоростью 3500 об/мин в течение 30 минут. Полученный супернатант затем переносят в 250 мл центрифужные колбы и вращают со скоростью 10000 об/мин в течение одного часа. Полученный супернатант собирают, и добавляют ингибитор протеазы в соответствии с рекомендациями изготовителей вместе с Triton X-100 до конечной концентрации 0,1%. Полученный супернатант затем фильтруют через 0,2 мкм мембранный фильтр с низким связыванием белка.
[0080] HeVsG очищают, используя S-белковую агарозную аффинную колонку. 20 мл объема слоя S-протеинагарозы (Novagen) загружают в колонку XK 26 (GE Healthcare). Колонку промывают 10× объемами слоя связывающего/промывочного буфера (0,15M NaCl, 20 мМ Tris-HCl, pH 7,5 и 0,1% Triton X-100). Полученный супернатант HeV sG вводят в колонку, поддерживая скорость потока 3 мл/мин. Колонку промывают 10× объемами слоя (200 мл) связывающего/промывочного буфера I, затем 6× объемами слоя (120 мл) промывочного буфера, 1× промывочного буфера (0,15M NaCl, и 20 мМ Tris-HCl, pH 7,5).
[0081] Затем насос выключают, и промывочный буфер сливают до тех пор, пока он не достигает поверхности шариков, и тогда добавляют 30 мл элюирующего буфера (0,2M лимонная кислота, pH 2). Собирают первые 10 мл проходящего потока (это все еще должен быть промывочный буфер) и затем элюирующий буфер инкубируют с шариками в течение 10 минут. Затем 15 мл элюата собирают в 50 мл стерильную коническую центрифужную ампулу, содержащую 25 мл нейтрализующего буфера (1M Tris, pH 8). pH доводят до нейтрального значения, и элюирование и инкубирование повторяют трижды. Весь нейтрализующий элюат объединяют и концентрируют до около 4 мл. Собранные HeV sG (4 мл) очищают, используя 0,2 мкм мембранный фильтр с низким связыванием белка (Acrodisc 13 мМ шприцевой фильтр с 0,2 мкм HT Tuffryn мембраной).
[0082] Гельфильтрацию можно использовать для дальнейшей очистки HeV sG. После качественного контрольного анализа и подтверждения чистоты олигомерного статуса, аликвоты HeV sG собранных фракций тетрамер+димер, димера и мономера хранят при -80°C.
Пример 4: Получение вакцинного препарата
[0083] Схема получения препарата ISC представлена далее на фиг.3 и описана ниже.
[0084] Стадия 1: Раствор 90 г/л деканоил-н-метилглюкамида (Mega-10 детергент) получают в воде для инъекций (WFI). Полученный раствор нагревают для обеспечения полного растворения Mega-10, затем его используют или немедленно на стадии 2, или стерилизуют на фильтре.
[0085] Стадия 2: Получают раствор, содержащий 25 г/л холестерина и 25 г/л дипальмитоилфосфатидилхолина (DPPC), растворяя указанные компоненты в исходном растворе Mega 10 детергента. Полученный раствор нагревают до растворения всех компонентов, затем или используют немедленно на стадии 3, или стерилизуют на фильтре.
[0086] Стадия 3: Получают буферированный изотонический солевой раствор, 10 мМ фосфатный буфер, pH 6,2±1 (BIS) с WFI и используют стерилизующую фильтрацию, если не используют немедленно.
[0087] Стадия 4: Quil A получают в BIS до конечной концентрации 100 г/л и используют стерилизующую фильтрацию, если не используют немедленно.
[0088] Стадия 5: ISC получают в реакторе с регулируемой температурой при перемешивании (22-37°C) путем последовательного добавления предварительно нагретых BIS, холестерин/DPPC в растворе Mega-10 (160 мл/л), и Quil раствора (200 мл/л). Реакционную смесь доводят до нужного объема, добавляя BIS.
[0089] Стадия 6: Всю композицию доводят до состояния равновесия при нужной температуре (целевая 27°C с приемлемым рабочим интервалом 22-37°C), затем инкубируют в течение 15 минут при перемешивании для облегчения образования ISC. Раствор ISC или обрабатывают дополнительно на стадии 7, или используют стерилизующую фильтрацию для промежуточного хранения.
[0090] Стадия 7: ISC реакционную смесь промывают, используя диализ (мембрана: Hydrosart 30 кДа (Sartorius AG Goettingen)) минимум в 20 объемах обменов против BIS при контроле температуры (целевая 27°C с приемлемым рабочим интервалом 22-37°C) для удаления не вошедших в образовавшиеся комплексы компонентов.
[0091] Стадия 8: Диализованные ISC концентрируют приблизительно в два раза путем ультрафильтрации, используя ту же мембрану, которую использовали для диализа. В фильтрационную систему добавляют BIS для восстановления исходного объема ISC.
[0092] Стадия 9: ISC переносят в стерильные контейнеры для хранения, используя стерилизующую фильтрацию через 0,22 мкм целлюлозоацетатный фильтр.
[0093] Стадия 10: ISC адъювант хранят при 2-8°C до реализации для применения в вакцинных композициях.
[0094] Иммуностимулирующую композицию (250 мкг/мл) затем комбинируют с соответствующими количествами растворимого гликопротеина G HeV (например, 5, 50, 100 мкг/мл) и доводят до объема, используя BIS.
Пример 5: Первый клинический эксперимент на лошадях
[0095] Тестируемая вакцина 1: Растворимый рекомбинантный гликопротеин вируса Hendra (sG) в количестве 100 мкг/доза, дополненный адъювантом 250 мкг иммуностимулирующего комплекса; объем доводят до 1 мл/доза при использовании солевого раствора.
[0096] Тестируемая вакцина 2: Растворимый рекомбинантный гликопротеин вируса Hendra (sG) в количестве 50 мкг/доза, дополненный адъювантом 250 мкг иммуностимулирующего комплекса; объем доводят до 1 мл/доза при использовании солевого раствора.
[0097] Тестируемая вакцина 3: Растворимый рекомбинантный гликопротеин вируса Hendra (sG) в количестве 5 мкг/доза, дополненный адъювантом 250 мкг иммуностимулирующего комплекса; объем доводят до 1 мл/доза при использовании солевого раствора.
[0098] Серологические данные и результаты защиты от заражения лошадей собирают для двух групп лошадей, которым вводят вакцины, содержащие более высокие уровни антигена (50 мкг/доза и 100 мкг/доза).
[0099] Серология: Каждую из двух лошадей иммунизируют двумя дозами вакцины (100 мкг sG с ISC) с промежутком в 21 день. Серологические исследования образцов, полученных после примирования и до заражения, подтверждают индуцированную вакциной серологическую конверсию в HeV (таблица 1). До заражения уровни нейтрализующих вирус антител были сравнимы с уровнями, которые, как было обнаружено, являются защитными для кошек, подвергнутых воздействию в противном случае летальной дозы близко родственного вируса Nipah. У лошади, которой вводили только адъювант (негативный контроль), не вырабатывались антитела к HeV до заражения вирусом.
Таблица 1 | |||
Лошадь No. | Базовая линия | Титр после примирования | Титр после заражения |
V1 | <2 | 32 | 1024 |
V2 | <2 | 32 | 512 |
V3 (Контроль) | <2 | <2 | <2 |
[00100] Соответственно, каждую лошадь подвергают воздействию живого HeV в BSL4, содержащего вспомогательные вещества, через 27 дней после проведения бустерной иммунизации. Вирус вводят интраназально (1×106 TCID50) и перорально (1×106 TCID50). В момент заражения и в течение последующего периода наблюдения, тождественность контрольной лошади не была известна штату, который участвовал в указанной части работы.
[00101] Клинические наблюдения за V1: Указанная лошадь оставалась клинически здоровой на протяжении периода наблюдения после воздействия HeV, если не принимать во внимание, что локализованное инфицирование сайта введения постоянного шейного катетера отмечалось на 8 день после заражения. Это не было связано ни с какими-либо конституциональными признаками заболевания. На 9 день после вирусного заражения осуществляют произвольную эвтаназию лошади. Ненормальности при исследованиях при вскрытии подтверждают наличие 10 см брыжеечной липомы (случайно обнаружена) и умеренное расширение лимфатических сосудов у вентрального конца левой доли застойного легкого, что приписывают действие барбитурата. Первоначальное скринирование тканей не обнаружило каких-либо свидетельств ни о патологических повреждениях, ни о наличии HeV антигена у лошадей.
[00102] Клинические наблюдения за V2: У этой лошади появился слабый кратковременный насморк на 2 день, на 3 день, но затем лошадь остается в остальном здоровой до того как на 6 день наблюдается повышение температуры, связанное с локализацией воспалительной реакции в месте постоянного шейного катетера. Катетер удаляют, но поражение продолжает увеличиваться, и лошадь становится очень возбудимой, так что на следующий день (7 день) кобыле вводят пенициллин длительного действия. Как температура лошади, так и ее темперамент возвращаются к нормальным значениям на 8 день и ее произвольно подвергают эвтаназии. Нарушения при тщательном исследовании при вскрытии ограничиваются небольшим расширением лимфатических сосудов у вентрального конца правой доли застойного легкого, что приписывают барбитуратам. В результате первичного скринирования тканей не было обнаружено каких-либо доказательств ни поражений, ни присутствия HeV антигена у этой лошади; подробное исследование в настоящее время завершается.
[00103] Клинические наблюдения за V3: У этой лошади развились умеренные кратковременные выделения из носа на 4 день, но затем во всем остальном она оставалась здоровой до тех пор, пока на 6 день не повысилась температура без признаков локализации. Частота сердечных сокращений также повысилась, и наблюдалось легкое покраснение кожи, сопровождающееся небольшим обезвоживанием и угнетенным видом. Такая комбинация признаков является типичной для активного HeV инфицирования в лабораторных условиях исследователей. Температура лошади и частота сердечных сокращений продолжали повышаться в течение следующих 12 часов (фиг.1 и 2), и она была в несколько угнетенном состоянии, и затем ее гуманно подвергают эвтаназии на 7 день. При исследовании при вскрытии обнаружено умеренное расширение лимфатических сосудов в долях застойного легкого, затрагивающее вентральные 8-10 см, сопровождающееся плевральным уплотнением и отеком.
[00104] При гистологическом исследовании обнаружен легочный васкулит с фибриноидным некрозом стенок сосудов, отек интерлобулярной перегородки и фокальный некротизирующий альвеолит. Наблюдается интенсивное отложение HeV антигена в эндотелии и в кровеносных сосудах легкого; в оболочках головного мозга; в паренхиме головного мозга; в тригеминальном ганглии; в подчелюстных, бронхиальных, паховых и почечных лимфатических узлах; в селезенке; печени; сердце; мягком небе; надпочечниках; почечных клубочках; тонком и толстом кишечнике; яичках; в глотке и носовых раковинах, а также в зародышевых центрах в селезенке и в случайных сердечных миоцитах. Спинной мозг, карманы евстахиевой трубы, мочевой пузырь и обонятельный центр мозга дали отрицательный результат. Результаты гистологических и иммуногистологических исследований соответствуют острому HeV инфицированию.
[00105] Молекулярный анализ клинических образцов. Не наблюдается признаков шеддинга HeV ни в одном из биологических образцов, полученных от иммунизированных лошадей V1 и V2 на протяжении периода клинических наблюдений. Более определенно, из глубоких носовых мазков или из крови ни в один из дней после воздействия не был выделен какой-либо геном.
[00106] Напротив, у неиммунизированной лошади V3 вирусный геном был обнаружен в мазках из носа, начиная с 3 дня после заражения. Снижение значений Ct в последующие дни отбора проб предполагает вирусную репликацию в верхней части дыхательного пути и согласуется с более ранними лабораторными наблюдениями авторов после воздействия на здоровых лошадей HeV Redlands 2008. Обнаружение вирусного генома в крови непосредственно перед наступлением лихорадки и во всех секретах после, совпадающее с ранним распознаванием других клинических симптомов, таких как депрессия, также согласуется с более ранними наблюдениями.
[00107] Образцы при вскрытии. TaqMan ПЦР (HeV N-ген) подтверждают репликацию инфицирующего вируса у V3 (контроль), сопровождающуюся распространением инфицирования в многочисленные ткани (таблица 3). Наивысшие уровни репликации, по-видимому, наблюдаются в тканях легких, селезенки, почек, миокарда и лимфоидных тканях, связанных с верхними и нижними дыхательными путями, как сообщалось ранее. Не наблюдалось репликации вируса в тканях иммунизированных лошадей (V1 и V2).
[00108] Серологические исследования после заражения. У иммунизированных лошадей V1 и V2 отсутствует рост в титрах после HeV заражения (таблица 4). Это свидетельствует об отсутствии значительной репликации инфицирующего вируса у указанных животных. У контрольной лошади V3 в момент эвтаназии на 7 день после заражения не детектируются какие-либо антитела. Предполагают, что прошло недостаточно времени между воздействием вируса и смертью животного для выработки детектируемого количества антител, и это совпадает с более ранними наблюдениями в лаборатории авторов для HeV Redlands инфицирования лошадей.
Таблица 4 | ||||
Лошадь # | Базовая линия титра | Титр после примирования | Титр до заражения | Конечный титр |
V1 | <2 | 32 | 1024 | 128, 128 (день 9) |
V2 | <2 | 32 | 512 | 128,256 (день 8) |
V3 (контроль) | <2 | <2 | <2 | <2, <2 (день 7) |
[00109] Две лошади (V1 и V2), которые были вакцинированы 100 мкг sG+ISC адъювантом в режиме “прайм-буст” были сероконвертированы к HeV перед воздействием HeV. Одна лошадь (V3), которой ввели только ISC, оставалась серонегативной к инфицирующему вирусу.
[00110] После заражения летальной в других случаях дозой HeV, иммунизированные лошади оставались клинически здоровыми на протяжении периода наблюдений, что превышало время наступления всех экспериментально вызванных случаев HeV у лошадей. Лошадей с отсутствием серологических проявлений иммунитета (V3) подвергали эвтаназии после развития клинических симптомов, соответствующих острому HeV. Какого-либо увеличения титра антител не наблюдалось после заражения у иммунизированных лошадей, что соответствовало отсутствию репликации инфицирующего вируса у указанных животных.
[00111] Отсутствуют свидетельства о наличии шеддинга у иммунизированных лошадей, что отражено в результатах ПЦР негативного теста во всех ежедневных клинических образцах. У неиммунизированных контрольных животных вирусный геном детектировался в мазках из носа, начиная с 3 дня после воздействия вируса, в крови непосредственно перед появления насморка, и во всех клинических образцах с момента появления насморка. Такая схема шеддинга совпадает со схемой, наблюдаемой у здоровых лошадей, подвергнутых воздействию HeV в ранних исследованиях по указанной схеме.
[00112] Не обнаружено какой-либо HeV вирусной репликации ни в каких-либо тканях иммунизированных лошадей, полученных при исследовании при вскрытии, после эвтаназии спустя время, которое, как ожидалось, должно было быть периодом острого инфицирования. Напротив, HeV геном и антиген были распространены во всех тканях контрольной лошади таким образом, что соответствует острому HeV инфицированию, а также была идентифицирована васкулопатия, типичная для HeV инфицирования.
Пример 6: Вторые клинические испытания для лошадей
[00113] Каждую из трех лошадей иммунизируют двумя дозами вакцины (50 мкг sG с ISC) с промежутком в 21 день. Серологические исследования после примирования и до заражения подтверждают индуцированную вакциной сероконверсию в HeV (таблица 5). Уровни нейтрализующих антител до заражения вирусом были сравнимы с уровнями, которые, как считают, являются защитными для кошек, подвергнутых воздействию смертельных в других случаях доз близко родственного вируса Nipah, для лошадей, подвергнутых воздействию HeV в раскрытом в данном описании первом клиническом исследовании. У лошади, которой ввели только адъювант, не вырабатывались антитела к HeV до вирусного заражения иммунизированных лошадей (результаты не представлены).
Таблица 5 | |||
Лошадь # | Базовая линия титра | Титр после примирования | Титр до заражения |
V4 | <2 | 4 | 256/128 |
V5 | <2 | 32 | 2048/>8192 |
V6 | <2 | 4 | 512/1024 |
[00114] Соответственно, каждую из иммунизированных лошадей подвергали воздействию живого HeV в BSL4, содержащем вспомогательные вещества, через 27 дней после проведения бустерной иммунизации. Вирус вводят интраназально (1×106 TCID50) и перорально (1×106 TCID50). В этом исследовании используют четыре морские свинки для контроля патогеничности, с ожиданием, что по меньшей мере одна из них погибнет от HeV заболевания. Морских свинок подвергают воздействию 50000 TCID50 HeV внутрибрюшинной инъекцией.
[00115] Клинические наблюдения за V4: Указанная лошадь остается клинически здоровой на протяжении периода наблюдения после воздействия HeV, и температура и частота сердечных сокращений остаются в нормальных пределах. Лошадь подвергают эвтаназии на 8 день после вирусного заражения. При тщательном исследовании при вскрытии каких-либо нарушений вообще не было отмечено. Первичное скринирование тканей не обнаружило каких-либо признаков ни поражений, ни HeV антигена у указанной лошади; подробное исследование в настоящее время завершается.
[00116] Клинические наблюдения за V5: Эта лошадь оставалась клинически здоровой на протяжении периода наблюдений после воздействия HeV, и температура и частота сердечных сокращений оставались в нормальных пределах (фиг.2). Указанную лошадь подвергают эвтаназии на 7 день после заражения вирусом. Каких-либо нарушений не было обнаружено при подробном исследовании при вскрытии. Первичное скринирование тканей не обнаружило каких-либо признаков ни поражений, ни HeV антигена у этой лошади; подробное исследование в настоящее время завершается.
[00117] Клинические наблюдения для V6: Эта лошадь оставалась клинически здоровой на протяжении периода наблюдений после воздействия HeV, и температура и частота сердечных сокращений оставались в нормальных пределах (фиг.2). Указанную лошадь подвергают эвтаназии на 9 день после вирусного заражения. Каких-либо нарушений не было обнаружено при подробном исследовании при вскрытии. Первичное скринирование тканей не обнаружило каких-либо признаков ни поражений, ни HeV антигена у этой лошади; подробное исследование в настоящее время завершается.
[00118] Морские свинки: Одна из 4 морских свинок (№ 3) начинает терять массу на 3 день после HeV заражения. Потеря массы прогрессирует до 5 дня, когда у животного проявляются неврологические симптомы (патологический наклон головы, тремор) и свинку подвергают эвтаназии. Нарушения при исследовании при вскрытии ограничивались отеком ретроперитонеальных соединительных тканей.
[00119] При гистологическом исследовании обнаружен пульмонарный васкулит, васкулит периферических кровеносных сосудов, оофорит и негнойный энцефалит, связанные с отложениями HeV антигенов. Гистологические и иммунологические исследования согласуются с острым HeV инфицированием и подтверждают патогенность указанного инфицирующего вируса.
[00120] Не существует доказательств шеддинга HeV ни в одном из биологических образцов, полученных от лошадей V4, V5 или V6, на протяжении периода клинических наблюдений, не считая результата для ректального мазка у лошади V6 на 3 день, в котором наблюдалось Ct значение (HeV N ген) равное 36,2, полученное в TaqMan ПЦР, в одной из двух лунок, причем во второй лунке амплификация не наблюдалась (таблица 6). Более определенно, ни в одном из глубоких назальных мазков или в образцах крови не наблюдался геном ни в один из дней после воздействия.
[00121] Образцы, отобранные при вскрытии. В тканях иммунизированных лошадей V4, V5 или V6 отсутствуют свидетельства вирусной репликации. У одной морской свинки (№ 3) был обнаружен вирусный геном в крови (Ct 34,2), мозге, легких и селезенке на 5 день после заражения, что согласуется с клиническими, гистологическими и иммунологическими данными для острого HeV инфицирования у указанного животного (таблица 7).
[00122] Серологические исследования после заражения. У иммунизированных лошадей V4, V5 и V6 не наблюдается увеличения титра после HeV заражения (таблица 8). Это свидетельствует об отсутствии репликации инфицирующего вируса у указанных животных.
Таблица 8 | ||||
Лошадь # | Базовая линия титра | Титр после примирования | Титр до заражения | Конечный титр |
V4 | <2 | 4 | 256/128 | 256/32 (день 8) |
V5 | <2 | 32 | 2048/>8192 | 1024/512 (день 7) |
V6 | <2 | 4 | 512/1024 | 128/256 (день 9) |
[00123] Трех лошадей (V4, V5 и V6), которые были вакцинированы 50 мкг sG+ISC адъювант в “прайм-буст” режиме, подвергают сероконвертированию к HeV до HeV воздействия. Одна лошадь, которой вводили только ISC, остается серонегативной по отношению к инфицирующему вирусу.
[00124] После заражения в других случаях летальной дозой HeV, иммунизированные лошади оставались клинически здоровыми на протяжении всего периода наблюдений, которое превышало время наступления всех экспериментально индуцированных случаев заражения лошадей HeV. Одну морскую свинку, использованную для контроля патогеничности, подвергают эвтаназии после развития клинических симптомов, соответствующих острой инфекции HeV. У иммунизированных лошадей не обнаруживается какого-либо увеличения титров антител после заражения, что свидетельствует об отсутствии репликации инфицирующего вируса у указанных животных.
[00125] Отсутствуют свидетельства о проявлении вирусного шеддинга у иммунизированных лошадей, что отражается отрицательными результатами ПЦР теста во всех клинических образцах, отбираемых ежедневно, за исключением результатов для ректального мазка, взятого на 3 день у лошади V6. Указанный тест повторяют; если бы аналогичные результаты повторились, единственным объяснением было то, что это вызвано низким уровнем остаточного инокулюма. У одной неиммунизированной морской свинки вирусный геном детектировался в основных органах и в крови на 5 день после воздействия вируса.
[00126] Отсутствуют свидетельства HeV вирусной репликации во всех тканях иммунизированных лошадей, полученных при вскрытии исследованиях после эвтаназии, на протяжении промежутка времени, который, как ожидалось, должен был быть периодом инфицирования. Напротив, HeV геном и антиген были распространены во всех тканях восприимчивой морской свинки таким образом, что соответствует острому HeV инфицированию, и у указанного животного была также идентифицирована васкулопатия, типичная для HeV инфицирования.
Пример 7: Клинические исследования на приматах для Nipah вируса
[00127] Статистика. При проведении исследований на животных, в частности исследований на нечеловеческих приматах, на биобезопасном уровне 4 (BSL-4) встречаются серьезные ограничения по числу подопытных животных, объему биологических образцов, которые можно получить, и по способности проведения независимых повторных анализов, что ограничивает статистический анализ. Соответственно, результаты, представленные как средние или средние, рассчитанные из данных для повторяющихся образцов, неповторяющихся образцов, и планки погрешностей представляют собой стандартные отклонения для повторов.
[00128] Вирусы. NiV-Малазия (код доступа в GenBank No. AF212302) получают из специальной линии патогенов Центров контроля и профилактики заболеваний Атланты, Джорджии. NiV размножают и титруют на Vero клетках, как описано для HeV у Rockx et al. (2010) J. Virol. 84, 9831.
[00129] Композиция вакцины. Используют три вакцинные композиции sGHeV (10 мкг, 50 мкг или 100 мкг). Получение и очистку sGHeV осуществляют, как описано ранее у Pallister (2011) Vaccine 29, 5623. Каждая вакцинная композиция также содержит Allhydrogel™ (Accurate Chemical & Scientific Corporation) и CpG олигодезоксинуклеотид (ODN) 2006 (Invivogen), содержащий полностью фосфоротиолатную основную цепь. Вакцинные дозы, содержащие фиксированное количество ODN 2006, варьируемые количества sGHeV и ионы алюминия (в массовом отношении 1:25) получают следующим образом: для дозы 100 мкг: 100 мкг sGHeV, 2,5 мг ионов алюминия и 150 мкг ODN 2006; для дозы 50 мкг: 50 мкг sGHeV, 1,25 мг ионов алюминия и 150 мкг ODN 2006; и для дозы 10 мкг: 5 мкг sGHeV, 250 мкг ионов алюминия и 150 мкг ODN 2006. Для всех доз, Alhydrogel™ и sGHeV сначала смешивают перед тем, как добавляют ODN 2006. Каждую вакцинную дозу доводят до 1 мл добавлением PBS, и смеси инкубируют на карусельной качалке при комнатной температуре в течение по меньшей мере двух-трех часов перед инъекциями. Каждый субъект получает одинаковую дозу 1 мл для примирования и усиления, и все вакцинные дозы вводят путем внутримышечных инъекций.
[00130] Животные. Десять молодых взрослых Африканских зеленых макак (African Green Monkeys (AGM)) (Chlorocebus aethiops), массой 4-6 кг (Three Springs Scientific Inc.) содержат в клетках индивидуально. Макак анестезируют путем внутримышечных инъекций кетамина (10-15 мг/кг) и вакцинируют, используя sGHeV в день -42 (прайм) и день -21 (буст). Трем животным вводят две дозы по 10 мкг (AGM 16, AGM 17, AGM 18), трем животным вводят две дозы по 50 мкг (AGM 13, AGM 14, AGM 15), трем животным вводят две дозы по 100 мкг (AGM 10, AGM 11, AGM 12) и одному животному (AGM 9) вводят только один адъювант. В день 0 животных анестезируют и им инокулируют интратрахеально 1×105 TCID50 (средняя инфекционная доза для тканевых культур) NiV в 4 мл минимальной поддерживающей среды Дюльбекко (DMEM) (Sigma-Aldrich). Животных анестезируют для клинических исследований, включающих температуру, частоту дыхания, радиографию груди, образцы крови и мазки назальной, оральной и ректальной слизистой в дни 0, 3, 5, 7, 10, 14, 21 и 28 после инфицирования (p.i.). Контрольное животное (AGM 9) необходимо гуманно подвергнуть эвтаназии на 10 день после инфицирования. Все остальные животные выживают до конца исследований, и их подвергают эвтаназии на 28 день после инфицирования. После вскрытия различные ткани отбирают для вирологических и гистологических исследований. Образцы тканей включают: конъюнктиву, миндалины, носоглоточную полость, назальную слизь, трахею, правый бронх, левый бронх, верхнюю долю левого легкого, середину правого легкого, нижнюю долю правого легкого, верхнюю долю левого легкого, среднюю долю левого легкого, нижнюю долю левого легкого, бронхиальный лимфатический узел (LN), сердце, печень, селезенка, почки, надпочечники, поджелудочная железа, тощая кишка, поперечная ободочная кишка, мозг (фронтальный), мозг (церебеллум), ствол головного мозга, затылочный спинной мозг, гипофиз, мандибулярные LN, LN слюнных желез, паховые LN, подмышечные LN, брыжжеечные LN, мочевой пузырь, яички или яичники, феморальный костный мозг. Вакцинацию проводят с BSL-2. Временная схема вакцинации, заражение и отбор биологических образцов в определенные дни представлены на фиг.4.
[00131] Вакцинация и заражение NiV. Ранее авторы продемонстрировали, что интратрахеальная инокуляция, AGM с использованием 105 TCID50 (средняя инфекционная доза для тканевых культур) NiV вызывает одинаковый летальный исход (Rockx et al. (2010) J. Virol. 84, 9831). В указанных исследованиях отмечалось быстрое развитие клинического заболевания; клинические симптомы включают тяжелую депрессию, респираторные заболевания, приводящие к острой респираторной недостаточности, тяжелые неврологические заболевания и серьезные ограничения подвижности; и время до достижения критерия доказанной гуманной конечной точки для эвтаназии составляет интервал от 7 до 12 дней. Дальнейшая задача состоит в определении того, может ли вакцинация с использованием sGHeV предотвратить NiV инфицирование и заболевание у AGM. Дозы 10, 50 или 100 мкг sGHeV смешивают с квасцами и CpG фрагментами, как описано в разделе Способы. Каждую вакцинную композицию вводят подкожно трем субъектам в день 0 (прайм) и снова в день 21 (буст) и один контрольный субъект (AGM 9) получает только один адъювант как прайм и буст в те же дни. На 42 день всем животным инокулируют интратрахеально 105 TCID50 NiV. Контрольное животное (AGM 9) демонстрирует потерю аппетита, серьезные длительные изменения поведения (депрессию, пониженную активность, сутулость), снижение количества тромбоцитов и постепенное повышение частоты дыхания на конечной стадии заболевания. Соответственно, у AGM 9 развивается острый респираторный дистресс, и животное приходится гуманно подвергнуть эвтаназии на 10 день после инфицирования. Напротив, ни у одного из вакцинированных животных не появились признаки клинического заболевания, и все они выжили к концу исследований. График выживания Каплан-Мейра представлен на фиг.5.
[00132] NiV-опосредованное заболевание у контрольного животного. Значительные патологические изменения у контрольного животного согласуются с теми изменениями, которые были обнаружены ранее у NiV-инфицированных AGM (Geisbert et al. (2010) PLoS one 5, e10690). Наблюдаются спленомегалия и закупорка кровеносных сосудов на поверхности мозга, и все доли легких были влажными и тяжелыми. РНК NiV и инфекционный вирус не были выделены из образцов крови AGM 9, и не было обнаружено виремии. AGM 9 содержала значительные уровни NiV-специфических IgM и детектируемых NiV-специфических IgG и IgA. Дальнейший анализ образцов тканей выявил повсеместный NiV тропизм к ткани, сходный с широко распространенным NiV инфицированием, наблюдавшимся ранее у AGM (Geisbert et al. (2010) PLoS One 5, e10690). AGM 9, как показано, содержит РНК NiV в большинстве тканей, и инфекционный вирус был выделен из многочисленных тканей. Значительные патологические подтверждения включают интерстициальную пневмонию, подострый энцефалит и некроз и кровоизлияния белой пульпы селезенки. Альвеолярные пространства заполнены отечной жидкостью, фибрином, кариоректичными и клеточными осколками и альвеолярными макрофагами. Многоочаговый энцефалит характеризуется увеличением пространства Вирхова-Робинса за счет умеренного числа лимфоцитов и меньшего числа нейтрофилов. Меньшее число указанных воспалительных клеток простирается в прилегающую паренхиму. Многочисленные нейроны были набухшими и вакуолезированными (дегенерация) или были фрагментированы за счет кариолиза (некроза). Мультифокальные герминальные центры фолликул в белой пульпе селезенки были уничтожены за счет кровотечения и фибрина, а также небольшим числом нейтрофилов и клеточных и кариорексичных осколков. Полученные результаты соответствуют некрозу и утрате герминальных центров в селезенке. Большие количества вирусных антигенов, присутствующих в стволовой области мозга, подчеркивает значительные повреждения, которые NiV вызывает в центральной нервной системе.
[00133] Защита sGHeV-вакцинированных животных. Все биологические образцы, включая все образцы крови, собранные после заражения, и все ткани, полученные после аутопсии, были отрицательными в отношении РНК NiV, и инфекционный вирус не был выделен ни из одного образца. После более тщательного исследования срезов тканей от вакцинированных животных, строение тканей казалась нормальным, и NiV антиген не был детектирован ни в одной из тканей при исследовании с помощью иммуногистохимических методов. Для дальнейшего раскрытия вызываемых вакциной механизмов защиты, сывороточные и мукозальные и sGNiV- и sGHeV-специфические IgM, IgG и IgA, а также NiV и HeV титры нейтрализации сыворотки, измеряют у вакцинированных животных. Как продемонстрировано на фиг.6, за семь дней до заражения субъекты, которым ввели наименьшую дозу sGHeV, имели детектируемый антиген-специфический сывороточный IgM и наивысший уровень sGHeV-специфического сывороточного IgG. Субъекты, которым вводили 50 мкг sGHeV, также имели детектируемые уровни сывороточного IgM и наивысшие уровни сывороточного IgG за семь дней до заражения. Субъекты с высокой дозой не имели детектируемых уровней сывороточного IgM, и уровни сывороточного IgG были значительно ниже на 7 день по сравнению с другими двумя группами. Ко дню NiV заражения уровни сывороточного IgG у животных, которым вводили высокие дозы, имели повышенные уровни, и все вакцинированные субъекты имели аналогичные уровни IgG. Уровни сывороточных IgM не изменились ни у одного из животных после NiV заражения. Уровни сывороточного IgG понижены у животных со средней дозой в день NiV заражения, и уровни IgG понижены у животных, которым вводили низкие дозы после NiV заражения. Интересно, что уровни IgG повышены у обеих указанных групп ко дню 3 и дню 5 после инфицирования, но никогда не подавлены уровни IgG, присутствующие за семь дней до заражения, и у обеих групп титр заметно понижается к 28 дню после инфицирования.
[00134] Напротив, уровни сывороточного IgG у группы с высокой дозой остаются высокими и были наивысшими на 28 день после инфицирования. Антиген-специфические сывороточные IgA детектировали у всех животных после вакцинации; однако, уровни были очень низкими, и уровни до и после заражения, по-видимому, заметно не отличались (фиг.6). Минимальное повышение мукозальных антиген-специфических IgA детектировали в назальных мазках у животных с низкой дозой на 14 день после заражения. Однако указанные уровни оказались столь низкими, что указанные мукозальные антитела, по-видимому, не играют какой-либо роли в предотвращении распространения NiV после заражения. Результаты тестов по нейтрализации сыворотки (SNT) представлены в таблице 9. Для всех вакцинированных субъектов титры HeV-специфической нейтрализации остаются теми же или снижаются к 28 дню после заражения, и титры NiV-специфической нейтрализации заметно не изменяются к 7 дню после заражения, даже у животных, которые имели самые низкие титры до заражения. Один субъект с низкой дозой и один субъект с высокой дозой имели логарифмическое повышение NiV SNT титра к 14 дню после заражения, и один субъект со средней дозой имеет логарифмическое повышение NiV SNT к 21 дню после заражения. Для всех остальных вакцинированных животных изменения в титрах SNT были или неопределенными (титр повышается и затем снижается), или незначительными (титр повышается в 3-4 раза, но не более чем log). И наконец, у вакцинированных животных сероконверсию в оболочечный гликопротеин NiV слияния (F) измеряют у вакцинированных животных после NiV заражения. Минимальные уровни сывороточного анти-NiV F IgM детектируют у животных с низкой и средней дозами в день 10 и день 21 после заражения, соответственно, и указанные низкие M.F.I, значения предполагают слабую первичную реакцию антител после NiV заражения. Сывороточный анти-NiV-F IgM не детектируется у животных с высокой дозой, что предполагает, что у указанных животных мало или вообще нет циркулирующих вирусов после заражения.
Пример 8: Клинические исследования вируса Hendra в опытах на приматах
[00135] Вторые клинические исследования проводят с AGM для оценки вакцинации и заражения вирусом Hendra. В качестве вакцины используют те же самые композиции, как описано выше в примере 7, но результаты также сравнивают с другой группой, которой вводят sGHeV только с Alhydrogel™ в качестве адъюванта (ODN 2006 отсутствует). Животных вакцинируют в день -21, бустерную инъекцию вводят в день 0, и заражение осуществляют в день 21. Если не указано иное, все условия соответствуют условиям, описанным в примере 7. Экспериментальные результаты суммированы ниже:
Группа | Обработка | N | Режим дозирования |
A | 100 мкг/доза вакцины Hendra sG+адъюванты (150 мкг CpG ODN 2006+119 мкл алгидрогеля) | 4 | Прайм+1 буст через 3 недели |
B | 100 мкг/доза вакцины Hendra sG+адъювант (250 мкл алгидрогеля) | 4 | Прайм+1 буст через 3 недели |
C | Адъювант только (150 мкг CpG ODN 2006) | 1 | Прайм+1 буст через 3 недели |
D | Адъюванты только (250 мкл алгидрогеля) | 1 | Та же схема, что и для групп А-B |
Всего | 10 |
[00136] Результат: Все животные (n=4) в обеих группах (A и B) пережили заражение вирусом Hendra после того, как им интратрахеально было инокулировано 105 TCID50 вируса Hendra. Контрольные животные погибли на 8 день. Ни у одного из вакцинированных животных не наблюдались признаки заболевания, и они оставались здоровыми до конца испытаний.
[00137] Другие варианты и применения настоящего изобретения будут очевидны специалистам в данной области после изучения представленного описания и практической части настоящего изобретения. Все цитированные ссылки, включая все публикации, патенты и патентные описания США и других стран, конкретно и полностью включены в настоящее описание посредством ссылки. Важно понимать, что описание и примеры следует рассматривать только как приведенные в качестве примеров, и объем и суть настоящего изобретения определяются только приведенной ниже следующей формулой изобретения.
Claims (16)
1. Вакцина для предотвращения инфекции, вызванной вирусом Hendra и/или Nipah, у лошади или свиньи, содержащая
а) 50-100 мкг растворимого фрагмента гликопротеина G вируса Hendra, при этом указанный фрагмент состоит из аминокислот 73-604 SEQ ID NO: 2 или последовательности, по меньшей мере на 95% ей идентичной,
b) иммуностимулирующий комплекс (ISC), при этом ISC содержит сапонин, фосфолипид, выбранный из группы, состоящей из фосфатидилхолина (PC), дипальмитоилфосфатидилхолина (DPPC), фосфатидиновой кислоты (фосфатидат) (PA), фосфатидилэтаноламина (PE), фосфатидилсерина (PS), фосфатидилинозита (PI), фосфатидилинозитфосфата (PIP), фосфатидилинозитбисфосфата (PIP2), фосфатидилинозиттрифосфата (PIP3), фосфорилхолина (SPH), церамидфосфорилэтаноламина (Cer-PE) и церамидфосфорилглицерина, и холестерин, и
с) один или более эксципиентов.
2. Вакцина по п. 1, где вакцина содержит 100 мкг указанного растворимого фрагмента гликопротеина G вируса Hendra.
3. Вакцина по п.1 или 2, где указанный растворимый фрагмент гликопротеина G вируса Hendra кодируется нуклеотидной последовательностью, включающей нуклеотиды 64-1662 из SEQ ID NO:16.
4. Вакцина по п.1 или 2, где растворимый гликопротеин G вируса Hendra присутствует в димерной форме.
5. Вакцина по п.1 или 2, где растворимый гликопротеин G вируса Hendra присутствует в форме тетрамера.
6. Вакцина по п. 1 или 2, где вакцина содержит 250 мкг ISC.
7. Вакцина по п.1 или 2, где указанный сапонин представляет собой Quil A и указанный фосфолипид представляет собой DPPC.
8. Вакцина по п.7, где соотношение Quil A:DPPC:холестерин в композиции составляет 5:1:1 по массе.
9. Способ предотвращения инфекции, вызванной вирусом Hendra и/или Nipah, у лошади или свиньи, включающий введение первой дозы и второй дозы вакцины по любому из пп. 1-8.
10. Способ по п.9, где вторую дозу вводят через около 21-28 дней после первой дозы.
11. Способ дифференциации субъекта, вакцинированного вакциной по любому из пп.1-8, от субъекта, подвергнутого воздействию вируса Hendra и/или Nipah, включающий детектирование присутствия антитела в биологическом образце, выделенном из субъекта, против по меньшей мере любого одного из следующих вирусных белков HeV и/или NiV, выбранных из группы, состоящей из слитого белка (F), матриксного белка (M), фосфопротеина (P), крупного белка (L) и нуклеокапсидного белка (N), где субъектом является лошадь или свинья.
12. Способ по п.11, где указанный вирус представляет собой вирус Hendra и субъект представляет собой лошадь.
13. Способ по п.11, где указанный вирус представляет собой вирус Nipah и субъект представляет собой свинью.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201161485992P | 2011-05-13 | 2011-05-13 | |
US61/485,992 | 2011-05-13 | ||
PCT/US2012/037839 WO2012158643A1 (en) | 2011-05-13 | 2012-05-14 | Hendra and nipah virus g glycoprotein immunogenic compositions |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2019104307A Division RU2787820C2 (ru) | 2011-05-13 | 2012-05-14 | Иммуногенные композиции гликопротеина g вирусов hendra и nipah |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2013155470A RU2013155470A (ru) | 2015-06-20 |
RU2681529C2 true RU2681529C2 (ru) | 2019-03-07 |
Family
ID=47177303
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2013155470A RU2681529C2 (ru) | 2011-05-13 | 2012-05-14 | Иммуногенные композиции гликопротеина g вирусов hendra и nipah |
Country Status (18)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20150050305A1 (ru) |
EP (2) | EP3251692B1 (ru) |
JP (4) | JP2014516955A (ru) |
KR (2) | KR20140053906A (ru) |
CN (2) | CN110680913A (ru) |
AU (2) | AU2012256000B2 (ru) |
BR (1) | BR112013029309A8 (ru) |
CA (1) | CA2836098C (ru) |
CL (1) | CL2013003248A1 (ru) |
CO (1) | CO6940373A2 (ru) |
ES (2) | ES2639122T3 (ru) |
HK (1) | HK1247833A1 (ru) |
MX (1) | MX352604B (ru) |
PT (1) | PT2707025T (ru) |
RU (1) | RU2681529C2 (ru) |
UA (1) | UA114086C2 (ru) |
WO (1) | WO2012158643A1 (ru) |
ZA (1) | ZA201308701B (ru) |
Families Citing this family (25)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
SI2480559T1 (sl) | 2009-09-21 | 2013-10-30 | Gilead Sciences, Inc. | Postopki in intermediati za pripravo 1'-ciano-karbanukleozidnih analogov |
ES2524356T3 (es) | 2010-07-22 | 2014-12-05 | Gilead Sciences, Inc. | Métodos y compuestos para tratar infecciones provocadas por virus Paramyxoviridae |
MX361804B (es) * | 2011-05-27 | 2018-12-17 | Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc | Vacunas genéticas contra el virus hendra y el virus nipah. |
CN109078179A (zh) * | 2013-09-05 | 2018-12-25 | 硕腾服务有限责任公司 | Hendra和Nipah病毒G糖蛋白免疫原性组合物 |
EP3046580A2 (en) * | 2013-09-19 | 2016-07-27 | Zoetis Services LLC | Oil-based adjuvants |
CN105828836A (zh) * | 2013-12-16 | 2016-08-03 | 硕腾服务有限责任公司 | 亨德拉病毒和尼帕病毒g糖蛋白免疫原性组合物 |
TWI687432B (zh) | 2014-10-29 | 2020-03-11 | 美商基利科學股份有限公司 | 絲狀病毒科病毒感染之治療 |
HUE058737T2 (hu) | 2015-09-16 | 2022-09-28 | Gilead Sciences Inc | Eljárások arenaviridae vírusok okozta fertõzések kezelésére |
AR109621A1 (es) * | 2016-10-24 | 2018-12-26 | Janssen Pharmaceuticals Inc | Formulaciones de vacunas contra glucoconjugados de expec |
CN116036112A (zh) | 2017-03-14 | 2023-05-02 | 吉利德科学公司 | 治疗猫冠状病毒感染的方法 |
CN108624602B (zh) * | 2017-03-24 | 2020-10-16 | 华中农业大学 | 一株具有阻断活性的抗尼帕病毒g蛋白的单克隆抗体及其应用 |
ES2938859T3 (es) | 2017-05-01 | 2023-04-17 | Gilead Sciences Inc | Una forma cristalina de (S)-2-etilbutilo 2-(((S)-(((2R,3S,4R,5R)-5-(4-aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-5-ciano-3,4-dihidroxitetrahidrofuran-2-il)metoxi)(fenoxi)fosforil)amino)propanoato |
CN117982682A (zh) | 2017-07-11 | 2024-05-07 | 吉利德科学公司 | 用于治疗病毒感染的包含rna聚合酶抑制剂和环糊精的组合物 |
US20210008195A1 (en) * | 2017-12-20 | 2021-01-14 | Zoetis Services Llc | Vaccines against hendra and nipah virus infection |
CN110951922A (zh) * | 2019-12-25 | 2020-04-03 | 中国动物卫生与流行病学中心 | 一种检测亨德拉病毒的raa引物探针及检测方法 |
JP2023512656A (ja) | 2020-01-27 | 2023-03-28 | ギリアード サイエンシーズ, インコーポレイテッド | SARS CoV-2感染を治療するための方法 |
CA3169340A1 (en) | 2020-03-12 | 2021-09-16 | Pavel R. Badalov | Methods of preparing 1'-cyano nucleosides |
CA3172483A1 (en) | 2020-04-06 | 2021-10-14 | Scott Ellis | Inhalation formulations of 1'-cyano substituted carbanucleoside analogs |
US11975012B2 (en) | 2020-05-29 | 2024-05-07 | Gilead Sciences, Inc. | Remdesivir treatment methods |
AU2021296841A1 (en) | 2020-06-24 | 2023-02-16 | Gilead Sciences, Inc. | 1'-cyano nucleoside analogs and uses thereof |
PT4204421T (pt) | 2020-08-27 | 2024-06-25 | Gilead Sciences Inc | Compostos e métodos para o tratamento de infeções virais |
US20220193225A1 (en) * | 2020-08-31 | 2022-06-23 | Bruce Lyday | Compositions and methods for sars-2 vaccine with virus replicative particles and recombinant glycoproteins |
WO2022270656A1 (ko) * | 2021-06-24 | 2022-12-29 | 진철 | 금 나노입자를 유효성분으로 포함하는 니파 바이러스의 예방 또는 치료용 조성물 |
EP4320128A1 (en) | 2022-03-02 | 2024-02-14 | Gilead Sciences, Inc. | Compounds and methods for treatment of viral infections |
CN116751266B (zh) * | 2023-06-29 | 2024-08-20 | 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 | 一种亨尼帕病毒保护性抗原及其应用 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20020081329A1 (en) * | 1997-02-19 | 2002-06-27 | Macfarlan Roderick Ian | Chelating immunostimulating complexes |
US20090041772A1 (en) * | 2004-07-09 | 2009-02-12 | The Henry M. Jackson Foundation For The Advancemen | Soluble Forms of Hendra and Nipah Virus G Glycoprotein |
Family Cites Families (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
SE8205892D0 (sv) | 1982-10-18 | 1982-10-18 | Bror Morein | Immunogent membranproteinkomplex, sett for framstellning och anvendning derav som immunstimulerande medel och sasom vaccin |
SE8405493D0 (sv) | 1984-11-01 | 1984-11-01 | Bror Morein | Immunogent komplex samt sett for framstellning derav och anvendning derav som immunstimulerande medel |
JP2851288B2 (ja) | 1987-06-05 | 1999-01-27 | アメリカ合衆国 | 癌診断および管理における自己分泌運動性因子 |
NZ230747A (en) | 1988-09-30 | 1992-05-26 | Bror Morein | Immunomodulating matrix comprising a complex of at least one lipid and at least one saponin; certain glycosylated triterpenoid saponins derived from quillaja saponaria molina |
SE9600647D0 (sv) | 1996-02-21 | 1996-02-21 | Bror Morein | Ny användning |
GB9817052D0 (en) | 1998-08-05 | 1998-09-30 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine |
AUPP807399A0 (en) * | 1999-01-08 | 1999-02-04 | Csl Limited | Improved immunogenic lhrh composition and methods relating thereto |
US20050287170A1 (en) * | 2002-12-11 | 2005-12-29 | Hawaii Biotech, Inc. | Subunit vaccine against West Nile viral infection |
CN1882704A (zh) * | 2003-09-22 | 2006-12-20 | 巴斯德研究院 | 尼帕病毒检测方法和提供抗汉尼巴病毒的免疫保护的方法 |
WO2005028673A1 (en) * | 2003-09-22 | 2005-03-31 | Institut Pasteur | A method for detecting nipah virus and method for providing immunoprotection against henipaviruses |
DE602005027258D1 (de) | 2005-03-14 | 2011-05-12 | Us Gov Health & Human Serv | Humane monoklonale antikörper gegen hendra- und nipah-viren |
DK1881845T3 (da) * | 2005-04-25 | 2010-06-07 | Merial Ltd | Nipah-virusvacciner |
ES2626634T3 (es) | 2007-12-19 | 2017-07-25 | The Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine, Inc. | Formas solubles de la glucoproteína F del virus de Hendra y Nipah y usos de la misma |
-
2012
- 2012-05-14 CN CN201910445312.6A patent/CN110680913A/zh active Pending
- 2012-05-14 US US14/117,516 patent/US20150050305A1/en not_active Abandoned
- 2012-05-14 WO PCT/US2012/037839 patent/WO2012158643A1/en active Application Filing
- 2012-05-14 EP EP17180615.1A patent/EP3251692B1/en active Active
- 2012-05-14 PT PT127850097T patent/PT2707025T/pt unknown
- 2012-05-14 AU AU2012256000A patent/AU2012256000B2/en active Active
- 2012-05-14 CA CA2836098A patent/CA2836098C/en active Active
- 2012-05-14 MX MX2013013277A patent/MX352604B/es active IP Right Grant
- 2012-05-14 BR BR112013029309A patent/BR112013029309A8/pt not_active Application Discontinuation
- 2012-05-14 KR KR1020137033274A patent/KR20140053906A/ko active Application Filing
- 2012-05-14 ES ES12785009.7T patent/ES2639122T3/es active Active
- 2012-05-14 CN CN201280033736.8A patent/CN104244974A/zh active Pending
- 2012-05-14 KR KR1020207010055A patent/KR20200040899A/ko not_active IP Right Cessation
- 2012-05-14 JP JP2014510547A patent/JP2014516955A/ja active Pending
- 2012-05-14 UA UAA201314534A patent/UA114086C2/uk unknown
- 2012-05-14 ES ES17180615T patent/ES2963147T3/es active Active
- 2012-05-14 RU RU2013155470A patent/RU2681529C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2012-05-14 EP EP12785009.7A patent/EP2707025B8/en active Active
-
2013
- 2013-11-13 CL CL2013003248A patent/CL2013003248A1/es unknown
- 2013-11-13 CO CO13267208A patent/CO6940373A2/es unknown
- 2013-11-20 ZA ZA2013/08701A patent/ZA201308701B/en unknown
-
2014
- 2014-09-18 HK HK18107349.3A patent/HK1247833A1/zh unknown
-
2017
- 2017-04-06 JP JP2017076265A patent/JP6898024B2/ja active Active
- 2017-08-10 AU AU2017213501A patent/AU2017213501A1/en not_active Abandoned
- 2017-09-22 JP JP2017182552A patent/JP2018030862A/ja active Pending
-
2019
- 2019-04-11 JP JP2019075881A patent/JP2019142909A/ja active Pending
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20020081329A1 (en) * | 1997-02-19 | 2002-06-27 | Macfarlan Roderick Ian | Chelating immunostimulating complexes |
US20090041772A1 (en) * | 2004-07-09 | 2009-02-12 | The Henry M. Jackson Foundation For The Advancemen | Soluble Forms of Hendra and Nipah Virus G Glycoprotein |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
MUNGALL B. A.et al., Feline model of acute nipah virus infection and protection with a soluble glycoprotein-based subunit vaccine, J Virol. 2006 Dec; 80(24): 12293-12302. * |
MUNGALL B. A.et al., Feline model of acute nipah virus infection and protection with a soluble glycoprotein-based subunit vaccine, J Virol. 2006 Dec; 80(24): 12293-12302. WANG CY et al., Synthetic peptide-based vaccine and diagnostic system for effective control of FMD, Biologicals. 2001 Sep-Dec; 29(3-4): 221-8 - реферат. * |
WANG CY et al., Synthetic peptide-based vaccine and diagnostic system for effective control of FMD, Biologicals. 2001 Sep-Dec; 29(3-4): 221-8 - . * |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2681529C2 (ru) | Иммуногенные композиции гликопротеина g вирусов hendra и nipah | |
US20190083604A1 (en) | Hendra and nipah virus g glycoprotein immunogenic compositions | |
CN113164586A (zh) | 免疫组合物及其制备方法与应用 | |
US20160331829A1 (en) | Hendra and nipah virus g glycoprotein immunogenic compositions | |
KR20090064412A (ko) | 면역 반응을 유발 또는 유도하는 방법 | |
RU2787820C2 (ru) | Иммуногенные композиции гликопротеина g вирусов hendra и nipah | |
NZ617722B2 (en) | Hendra and nipah virus g glycoprotein immunogenic compositions | |
JP7370983B2 (ja) | ヘンドラウイルス感染症及びニパウイルス感染症に対するワクチン |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
HZ9A | Changing address for correspondence with an applicant | ||
FA92 | Acknowledgement of application withdrawn (lack of supplementary materials submitted) |
Effective date: 20180110 |
|
FZ9A | Application not withdrawn (correction of the notice of withdrawal) |
Effective date: 20181225 |
|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20200515 |