BG66481B1 - Използване на еднократна ваксина с mycoplasma hyopneumoniae - Google Patents
Използване на еднократна ваксина с mycoplasma hyopneumoniae Download PDFInfo
- Publication number
- BG66481B1 BG66481B1 BG108546A BG10854604A BG66481B1 BG 66481 B1 BG66481 B1 BG 66481B1 BG 108546 A BG108546 A BG 108546A BG 10854604 A BG10854604 A BG 10854604A BG 66481 B1 BG66481 B1 BG 66481B1
- Authority
- BG
- Bulgaria
- Prior art keywords
- hyo
- vaccine
- mycoplasma hyopneumoniae
- pigs
- infection
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/0241—Mollicutes, e.g. Mycoplasma, Erysipelothrix
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/52—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells
- A61K2039/521—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells inactivated (killed)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
- A61K2039/552—Veterinary vaccine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/87—Mycoplasma
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Изобретението се отнася до използване на Mycoplasma hyopneumoniae бактерин за производството на ваксина за лечение или предотвратяване на заболяване или нарушение при животно, причинено от инфекция с Mycoplasma hyopneumoniae (M. hyo), чрез прилагане към животното на възраст приблизително от 3 до 10 дни на еднократна доза ефективно количество М. hyo ваксина. М. hyo ваксината може да бъде целоклетъчен или частично клетъчен инактивиран или модифициран жив препарат. М. hyo ваксината, приложена съгласно настоящото изобретение може да се получи синтетично или рекомбинантно.
Description
(54) ИЗПОЛЗВАНЕ HA ЕДНОКРАТНА ВАКСИНА С MYCOPLASMA HYOPNEUMONIAE
Област на техниката
Изобретението се отнася до използването на Mycoplasma hyopneumoniae бактерии за производството на ваксина за лечение или предотвратяване на заболяване или нарушение при животно, причинено от инфекция с Mycoplasma hyopneumoniae (М. hyo), чрез прилагане към животното на възраст приблизително три (3) до десет (10) дни на еднократна доза от ефективно количество М. hyo ваксина. М. hyo ваксината е целоклетъчен или частично клетъчен инактивиран или модифициран жив препарат. М. hyo ваксината, приложена съгласно настоящото изобретение може да се получи синтетично или рекомбинантно.
Предшестващо състояние на техниката
М. hyo е бактериален патоген, който причинява ензоотична пневмония при свине. Ензоотичната пневмония е хронично заболяване, което води до слабо преработване на храната, задържан растеж и предразположение към вторични белодробни инфекции. М. hyo лесно се предава посредством секрециите на респираторния тракт и посредством свиня-къмпрасенце, и силно е преобладаващо в свинефермите. Приблизително 99% от стадата от свине в САЩ са инфектирани, което струва на свиневъдната индустрия приблизително 300 милиона $ годишно.
Преобладаващото количество известни ваксини срещу М. hyo са основани върху препарати на М. hyo от инактивирани цели клетки с инертен пълнител. Освен това, ваксините на основата на имуногенни пептиди или протеини могат да се синтезират или да се получат чрез клониране и рекомбинантна експресия на гени на М. hyo. Гени на М. hyo, способни да експресират такива полипептиди или протеини in vivo също могат да се използват като ваксини.
Примери за ваксини с цели инактивирани клетки на М. hyo включват RESPISURE и STELLAMUNE, достъпни в търговската мрежа на Pfizer Inc., USA.
Освен това са описани известен брой рекомбинантно продуцирани полипептиди и протеини на М. hyo, които могат да се използват като субединични ваксини. Публикация на Международен Патент WO 1996/028472 описва шест вида антигенни протеини от М. hyo с молекулни тегла от 46-48, 52-54, 60-64, 72-75, 90-94 и 110-114 килодалтона, и описва частични протеинови последователности от 52-54,60-64 и 72-75 килодалтона антигени и пълна дължина на нуклеотидни и аминокиселинни последователности на 46-48 килодалтона антиген.
Клонирането на гена, кодиращ М. hyo протеин Р46, т.е., р46, също се описва от Futo etal., (1995; J. Bacteriol. 177:1915-1917). Същата група показва, че in vitro експресираният генен продукт се използва за диагностициране на отговорите на антителата на М. hyo инфекции, без да реагират кръстосано с други Mycoplasma species (Futo et al., 1995, J. Clin. Microbiol. 33:680-683). Последователностите и диагностичното използване на р46 гена, описани от Futo et al., са описани също така в Публикация на Европейски патент № 0 475 185 А1.
Wise et al., (1987, J. Bacteriol., 169-55465555) съобщават, че съществуват четири вида интегрални мембранни протеина в М. hyo, наречени р70, р65 (Р65, по-горе), и р50 и р44, и че последните три протеина са модифицирани чрез ковалентно липидно свързване и индуцират силен хуморален отговор. Предпазните ефекти на именния отговор не са изследвани. Генът, кодиращ Р65 протеина е клониран и неговите последователности, и използването им във ваксини и диагностики са описани в патент на САЩ № 5,788,962.
Публикация на Международен патент WO 1991/015593 описва пет протеина на М. hyo с явно молекулно тегло от 105, 90, 85, 70 и 43 килодалтона. Последователността в цялата пълна дължина на гена кодиращ 85 килодалтона протеин (протеин С) се предоставя, както и частичните нуклеотидни последователности, кодиращи другите четири протеина.
Патент на САЩ № 5,252,328 на Faulds описва амино терминални последователности на имунореактивни протеини на М. hyo, молекулните тегла на които са 36, 41, 44, 48, 64, 68, 74,5, 79, 88,5, 96 и 121 килодалтона. Други протеини, идентифицирани на основата на електрофоретичната подвижност, но за които не са описани протеинови последователности, имат
66481 Bl явно молекулно тегло от 22,5, 34 и 52 килодалтона. Докато патент на САЩ № 5,252,328 предлага използването на тези протеини в лекарствени форми на ваксини, не се докладват резултати от изпитания на ваксините.
Публикация на Международен патент WO 1995/009870 описва биохимични методи за пречистване на адхезин от М. hyo, микоплазмени интегрални мембранни протеини, отговорни за адхезията към силите на горния епител на гостоприемниците. WO 1995/009870 предлага, също така, опити и използвания за тези протеини, например при ваксини и диагностика.
Опитен доклад на King et al., (1997; Vaccine 15:25-35) описва Mhpl, адхезин от 124 килодалтона, който е щам на вариант на Р97.
Вариант от Р97 килодалтона на Р97 се идентифицира от Wilton et al., (1998, Microbiology 144:1931-1943). Допълнително, p97 ген е показан като част от оперон, който също кодира втори протеин, наречен Р102, с предсказано молекулно тегло от приблизително 102 килодалтона (Hsu et al., 1998, Gene 214:13-23). Minion and Hsu подсказват използването на Pl 02 във ваксини в публикация на Международен патент WO 1999/026664, но не описват опити с ваксини.
Нито една от известните ваксини на М. hyo не е описана като ефективна при лечение на свине на възраст приблизително 3 до 10 дни с единична (еднократна) доза. Такава ваксина би елиминирала необходимостта от многократно дозиране и следователно, би понижила значително разходите и труда, свързани с масовото ваксиниране на стада от свине в световен мащаб. Ето защо, съществува необходимост от ефективна М. hyo ваксина, която може да бъде приложена към свиня като еднократна ваксинация на възраст от около 3 до около 10 дни, за защита и предотвратяване на заболявания или нарушения, причинени от М. hyo.
Техническа същност на изобретението
Настоящото изобретение се отнася до използването на Mycoplasma hyopneumoniae бактерии за производството на ваксина за лечение или предотвратяване на заболяване или нарушение при животно, причинено от инфекция с Mycoplasma hyopneumoniae, включващо прилагане към животното на възраст от около 3 до около 10 дни на ефективно количество еднократна доза от Mycoplasma hyopneumoniae ваксина.
Използването, съгласно настоящото изобретение, елиминира необходимостта от прилагане на допълнителни дози с цел да се създаде и/или да се поддържа имунитет по отношение на М. hyo. Настоящото използване на ваксиниране с еднократна доза (еднодозово ваксиниране) осигурява защита, както на серонегативни, така и на серопозитивни прасета, срещу провокиране с вирулентен М. hyo. Използването, съгласно настоящото изобретение, е ефективно при лечение или предотвратяване на симптомите, причинени от инфекция от М. hyo, включително например предотвратяване и ограничаване на белодробни лезии при свине.
М. hyo ваксината, приложена съгласно настоящото изобретение, може да включва допълнителни компоненти, такива като адювант. Различни адюванти, които могат да бъдат използвани, включват тези, описани тук и такива, известни в тази област.
Подробно описание на изобретението
Настоящото изобретение обхваща използването на Mycoplasma hyopneumoniae бактерии за производството на ваксина за лечение или предотвратяване на заболяване или нарушение при животно, причинено от инфекция с Mycoplasma hyopneumoniae, което включва прилагане към животното на възраст около 3 до около 10 дни на ефективно количество от еднократна доза Mycoplasma hyopneumoniae ваксина.
Използването на еднократна доза ваксина от настоящото изобретение елиминира необходимостта от прилагане на допълнителни дози към свине, с цел да се създаде и/или поддържа имунитет срещу М. hyo.
За яснота на описанието, а не с цел ограничение, подробното описание на изобретението е разделено на следващите подраздели, които описват или илюстрират някои характерни признаци, изпълнения или приложения на изобретението.
В някои изпълнения ваксините, използвани съгласно настоящото изобретение, включват целоклетъчен или частично клетъчен М. hyo инактивиран препарат (бактерии) или модифи
66481 Bl цирана жива ваксина и фармацевтично приемлив носител, или целоклетъчен или частично клетъчен М. hyo инактивиран препарат (бактерии), или модифицирана жива ваксина и адювант.
Дефиниции и съкращения
Терминът лечение или предотвратяване по отношение на М. hyopneumoniae инфекция, както се използва тук, означава да се инхибира репликацията на М. hyopneumoniae бактерии, да се инхибира предаване на М. hyopneumoniae или да се предотврати самонастаняване на М. hyopneumoniae в нейн гостоприемник и да се облекчат симптомите на заболяването или нарушението, причинени от М. hyopneumoniae инфекция. Лечението се приема като терапевтично, ако има редуциране на бактериален товар, намаляване на белодробни инфекции и/или увеличаване на приеманата храна или растеж. Използването съгласно настоящото изобретение е ефективно например при предотвратяване или ограничаване на белодробни лезии.
Терминът М. hyo ваксина, както се използва тук, се отнася до ваксина, полезна за предотвратяване или лечение на нарушение или заболяване, причинено от инфекция с М. hyo. М. hyo ваксината може да включва всяка ваксина, ефективна при предотвратяване или лечение на инфекция с М. hyo при свине. М. hyo ваксината, която може да се използва в настоящото изобретение, може да включва например препарат от цели или частични М. hyo клетки, инактивирани или модифицирани живи ваксини, субединична ваксина, която има един или повече полипептиди и протеини с произход М. hyo, или имуногенни фрагменти на такива протеини или полипептиди, или един или повече М. hyo гена или нуклеинови киселини, кодиращи един или повече полипептида или протеина с произход М. hyo, или техни имуногенни фрагменти и които гени или нуклеинови киселини, могат да бъдат експресирани in vivo в свине. М. hyo полипептидите, протеините, имуногенните фрагменти на такива полипептиди и протеини, или гени или нуклеинови киселини на М. hyo, могат да се синтезират или да се получат рекомбинантно при използване на техники, известни от предшестващото състояние на техниката. За предпочитане М. hyo ваксината, използвана в настоящото изобретение е бактерии.
Терминът животно, както се използва в настоящото изобретение, се отнася до всички животни не-хора, включително бозайници.
Терминът прасе, както се използва в настоящото изобретение, се отнася до прасенца, свине, прасета, свинско, майки прасета, млади женски свине, кастриран шопар, глигани или членове на семейство Suidae.
За предпочитане използването съгласно настоящото изобретение се прилага на животно, бозайник, който не е човек; по-предпочитано прасе.
Терминът бактерии, както се използва в 15 настоящото изобретение, се отнася до препарат от инактивирани цели или частични М. hyo клетки, подходящи за използване като ваксина.
Терминът ефективно количество се отнася до такова количество М. hyo ваксина, 20 достатъчно да предизвика имунен отговор в субект, на който е приложена. Имунният отговор може да включва, без ограничения, индуциране на вроден, клетъчен и/или хуморален имунитет.
Инактивирани (частични или цели клетки) 25 и модифицирани живи ваксини
Използване на конвенционални инактивирани или модифицирани живи ваксини, които се използват в настоящото изобретение, са известни от предшестващото състояние на техниката.
М. hyo бактерини, които могат да се използват в настоящия метод за ваксиниране с еднократна доза могат да се получат от различни, достъпни за обществеността източници. Например М. hyo бактерини могат да се приготвят от М. hyo изолати. Многобройни М. hyo изолати са известни на специалистите в областта и са достъпни от например American Type Culture Collection, 10801 University Boulevard, Manasses, VA 20110-2209. Те включват, например, ATCC № 40 25095, 25934 и 27715.
M. hyo изолати могат да се получат, също така, директно от естествено или експериментално инфектирани лезии на бели дробове на прасенца, при използване на известни техники.
М. hyo изолати могат да се инактивират при използване на разнообразие от известни методи, например, чрез третиране на бактериалния изолат с бенарен етиленамин (BEI), както е описано в патент на САЩ № 5,565,205, или 50 инактивиране с например формалин, топлинно,
66481 Bl
BPL, облъчване или глутардехид.
М. hyo бактерини, подходящи за използване в настоящото изобретение, могат да се получат, също така, посредством различни търговски източници. Такива източници включват, без да се ограничават до: RESPIFEND (Fort Dodge, American Home Products), HYORESP (Merial Ltd), M + PAC (Searching Plough), PROSYSTEM M (Intervet), INGLEVAC M (Boehringer), RESPISURE (Pfizer Inc.), and STELLAMUNE MYCOPLASMA (Pfizer Inc.).
Предпочитан източник на M. hyo бактерии за използване в настоящото изобретение са RESPISURE STELLAMUNE и MYCOPLASMA.
Особено предпочитан източник на М. hyo бактерии за използване в настоящото изобретение е RESPISURE-1 (Pfizer Inc.), съдържащ щам Р-5 722-3 (NL 1042), придобит от Purdue University, САЩ.
За предпочитане щамът Р-5722-3 е инактивиран с BEI и адювантиран с наличен на пазара адювант, за предпочитане AMPHIGEN (Hydronics, САЩ). Предпочитаната доза е около 2.0 ml. Конвенционално използваните консерванти включват мертиолат/EDTA. Може да бъде добавен носител, за предпочитане PBS. От нивото на техниката е известен препарат с модифицирани живи ваксини като например чрез атенюиране на вирулентни щамове посредством пасиране в култура.
Ваксинални формулировки
Могат да бъдат получени също подходящи препарати на ваксините, използвани в настоящото изобретение, които включват инжекционни, както течни разтвори, така и суспензии; твърди форми, подходящи за разтваряне или суспендиране в течност преди инжектиране. Препаратът може да бъде и емулгируем. Активните имуногенни ингредиенти се смесват често с адюванти, които са фармацевтично приемливи и съвместими с активния ингредиент.
Полипептидите могат да бъдат формулирани във ваксината като неутрални или солеви форми.
Фармацевтично приемливи соли включват кисели присъединителни соли (образувани със свободни амино групи на пептида), и които се образуват с неорганични киселини, като например, солна киселина или фосфорна киселина, или органични киселини като оцетна, оксалова, винена, малеинова киселина и други подобни. Солеви форми със свободни 5 хидроксилни групи могат да произлизат, също така, от неорганични бази, като например натриев, калиев, амониев, калциев или фери хидрооксиди, и като органични основи като изопропиламин, триметиланин, 2-етиламино етанол, хистидин, 10 прокаин и други.
Лекарствените препарати на ваксини, които се използват в настоящото изобретение включват едно ефективно имунизиращо количество М. hyo имуноген и фармацевтично приемлив носител. 15 Препаратите на ваксини включват ефективно имунизиращо количество на един или повече антигени и фармацевтично приемлив носител. Фармацевтично приемливи носители са добре известни от предшестващото състояние на 20 техниката и включват, но без да се ограничават до физиологичен разтвор, буфериран физиологичен разтвор, декстроза, вода, глицерол, стерилни изотонични водни разтвори и техни комбинации. Един пример за такъв 25 приемлив носител е физиологично балансирана културална среда, съдържаща едно или повече стабилизиращи средства, като стабилизирани, хидролизирани протеини, лактоза и др. носителят е стерилен за предпочитане. Лекарствената форма 30 трябва да удовлетворява начина на прилагане.
Използването на пречистени антигени като препарати за ваксини може да се осъществи по стандартни методи. Например, пречистените протеини трябва да се доведат до подходяща 35 концентрация, да се приведат в лекарствена форма, с който и да е подходящ за ваксина инертен пълнител и да се пакетират за използване. Подходящи инертни пълнители могат да включват, но без да се ограничават до: минерални телове, 40 например, алуминиев хидроксид; повърхностно активни вещества като лизолицетин; гликозиди, например сапонин и производни на сапонини, като Quit А или GPI-0100; катионни повърхностно активни вещества, например DDA (кватернерни 45 въглеводородни амониеви халогениди, плуронови полиоли; полианони и полиатомни йони; полиакрилови киселини, не-йонни блок полимери, например Pluronic F-127 (B.A.S.F., USA); Avridine and Rantidine; пептиди; 50 рекомбинантни мутантни лабилни токсини,
66481 Bl например, левкотоксин (rmLT) или холерен токсин (СТ); химически свързани или молекулни транспортери в близко съседство; минерални масла, например, Montanide ISA-50 (Seppic, Paris, France), карбопол, Amphigen (Hydronics, USA), Omaha, NE. USA, Alhydrogel, (Superfos Biosector, Fredrickssund, Denmark) маслени емулсии, например емулсия на минерално масло, като BayolF/Arlacel А и вода, или емулсия на растително масло, вода и емулгиращо средство, като лецитин; стипца, MDP, N-ацетил-мурамилЬ-треонил-О-изоглутамин (thr-MDP), N-ацетилнор-мурамил-Е-аланил-О-изоглутамин, Nацетилмурамил-Ь-аланил-О-изоглутаминил-Еаланин-2-(1'-2'-дипалмитоил-8п-глицеро-3хидроксифосфорилокси)-етиламин; холистеролни цитокини и комбинация от помощни вещества. Полиатомни йони могат също да действат като диспергиращи, сгъстяващи и антисгъстяващи средства, които позволяват ваксината да бъде ресуспендирана, като монодисперсна суспенсия след удължен период на сгъстяване. Комбинацията от помощни вещества може да се представи под водна, инкапсулирана (контролирано или забавено освобождаване) или микроинкапсулирани форми.
Имуногенът може, също така, да се инкорпорира в липозоми или да се конюгира към полизахариди и/или други полимери за използване при лекарствени форми на ваксини, например, когато рекомбинантния антиген е хаптен, т.е. молекула, която е антигенна по това, че може да реагира селективно с познати антитела, но е неимуногенна, по това, че не може да предизвика имунен отговор, хаптенът може да бъде ковалентно свързан към носител или имуногенна молекула; например голям протеин, като серумен албумин, ще придаде имуногенност на хаптена, присъединен към него. Хаптен-носител може да се приведе в лекарствена форма за използване при ваксини.
Генна ваксина и такава от нуклеинова киселина
Методът съгласно настоящото изобретение, може да се осъществи при използване на М. hyo гени или нуклеинови киселини, кодиращи имуногенни протеини, полипептиди и имуногенни фрагменти на такива протеини и полипептиди. Такива гени и нуклеинови киселини могат да се експресират in vivo и могат да се получат при използване на техники, добре известни от предшестващото състояние на техниката.
При един специфичен вариант на изпълнение на изобретението, използваната ваксина в настоящото изобретение включва наймалкото един ген или нуклеинова киселина, кодиращ протеин на М. hyo, като, но без да се ограничава до, Р46, Р65, Р97, Р102, Р70, Р50 и Р44.
При друг специфичен вариант на изпълнение на изобретението гените или нуклеинови киселини, използвани в настоящото изобретение, кодират за имуногенни фрагменти на М. hyo протеини или полипептиди с последователности, включващи най-малкото 10, най-малкото 20, най-малкото 30, най-малкото 40, най-малкото 50 или най-малкото 100 съседни аминокиселини от имуногенни протеини и полипептиди, използвани при настоящото изобретение, включително, но без да се ограничава до, Р46, Р65, Р97, Р102, Р70, Р50 и Р44.
При един друг вариант за използване на настоящото изобретение, генът или нуклеиновите киселини, които се използват се прилагат чрез методи, добре известни от предшестващото състояние на техниката, като например при използване на генно оръдие.
При други варианти за изпълнение на използването от настоящото изобретение, използваните гени или нуклеинови киселини са ДНК-ови ваксини. Освен това, нуклеиновите киселини или гени могат да присъстват в асоциация с липозоми или други средства, улесняващи трансфектирането, известни от предшестващото състояние на техниката.
Методи за и получаване и доставяне на ДНК-ови ваксини са известни от предшестващото състояние на техниката. Виж например Krishnan, В. R., Current Status of DMA vaccines in veterinary medicine, Advanced Drug Delivery Reviwes, Elsevier Science (2000).
Експресионни системи
Може да се използва голямо разнообразие от експресионни векторни системи на гостоприемници за експресиране на последователностите на антигенните протеини от изобретението. Експресионните системи на гостоприемници представляват носители, чрез които кодиращите последователности,
66481 Bl представляващи интерес могат да бъдат продуцирани и пречистени по същество, но представляват също така клетки, които могат да бъдат трансформирани или трансфектирани с подходящи нуклеотидни кодиращи последо- 5 вателности, които представят М. hyo гениите продукти, използвани в настоящото изобретение in situ. Те включват, но без да се ограничава до, микроорганизми, като бактерии (например Е. coli/B. subtilis), трансформирани с рекомбинантна 10 ДНК от бактериофаг, плазмидна ДНК или космидни ДНК-ови експресионни вектори, съдържащи mhp3 кодиращи последователности; дрожди (например Saccharomyces, Pichia) трансформирани с рекомбинантни дрождеви 15 експресионни вектори, съдържащи кодиращи последователности на М. hyo генния продукт; системи от клетки на насекоми, инфектирани с рекомбинантни вирусни експресионни вектори (например baculovirus), съдържащи М. hyo 20 кодиращи последователности; системи на растителни клетки, инфектирани с рекомбинантни вирусни експресионни вектори (например вируса на мозайката по карфиола, CaMV; вируса на мозайката по тютюна, TMV) или трансформирани 25 с рекомбинантни плазмидни експресионни вектори (например Ti плазмид), съдържащ М. hyo кодиращи последователности; или системи от клетки на бозайници (например COS, CHO, ΒΗΚ, 293, ЗТЗ), съдържащи рекомбинантни 30 експресионни структури, включващи промотори, произлизащи от генома на клетки на бозайници (например металотионен промотор) или от вируси по бозайници (например аденовирусен късен промотор; vaccinia вирус 7.5К промотор). 35 При един предпочитан вариант за изпълнение, експресионната система е бактериална система.
М. hyopneumoniae полипептиди и протеини и техни имуногенни фрагменти могат също да бъдат експресирани и да бъдат доставени и при 40 използване на рекомбинантни вирусни и бактериални вектори, като аденовируси или Salmonella. Настоящите вектори са извести, също така, и са лесно достъпни от предшестващото състояние на техниката или могат да се 45 конструират от специалистите в областта при използване на добре известна методология.
Дозиране и начини на прилагане
Съгласно настоящото изобретение, еднократна доза на ефективно количество М. hyo 5 0 ваксина, приложено на свине на възраст от приблизително 3 до приблизително 10 дни предоставя ефективен имунитет срещу последващо заразяване с М. hyo. За предпочитане М. hyo ваксина се прилага на приблизително седемдневна възраст.
Количеството наМ. hyo бактерии ваксина ефективно при еднократна доза на прилагане съдържа 1x106 до приблизително 5x1010 променящи оцветяването единици (CCU) на доза. За предпочитане М. hyo бактерии ваксина, която предоставя ефективен имунитет при еднократна доза съдържа приблизително 1x108 до 5x1010 CCU/доза и по-предпочитано приблизително 5x108 до 5x1010 CCU/доза.
Съгласно настоящото изобретение, когато се прилага предпочитаният продукт бактерии RESPISURE-1, количеството за прилагане на една доза е приблизително 0,5 до приблизително 3,0 ml, за предпочитане приблизително 1,5 ml до приблизително 2,5 ml и по-предпочитано приблизително 2 ml.
Количеството на М. hyo ваксина, която е субединична ваксина, включваща един или повече протеини или полипептиди или имуногенни фрагменти на такива протеини или полипептиди, ефективно при метода на настоящото изобретение, е от приблизително 0,01 microg до приблизително 200 microg.
Количеството на М. hyo ваксина, което е ваксина, съдържаща един или повече М. hyo гени или нуклеинови киселини (за предпочитане ДНК), кодиращи за имуногенни протеини или полипептиди или имуногенни фрагменти на такива протеини или полипептиди, ефективно при метода от настоящото изобретение е от приблизително 0,1 microg до приблизително 200 microg.
Съгласно настоящото изобретение, прилагането може да се осъществи по известни пътища включително орален, интраназален, мукозен, локален, трансдермален и парентерален (например, интравенозен, интраперитонеален, интрадермален, подкожен или интрамускуларен). Прилагането може да се постигне, също така, при използване на устройства за доставяне без игла. Прилагането може да се осъществи при използване на комбинация от различни пътища, например, първо прилагане чрез използване на парентерален път и последващо прилагане чрез
66481 Bl използване на мукозен път. Предпочитан път на прилагане е интрамускулно прилагане.
Ефективни дози (имунизиращи количества) от ваксините на настоящото изобретение могат да се екстраполират от кривите доза- 5 отговор, произтичащи от моделните тестови системи.
Настоящите методи на ваксиниране предоставят предпазващ имунитет както за серопозитивни прасенца, така и за серонегативни 10 прасенца за М. hyo. Серопозитивните прасенца се отнасят до тези прасенца, които имат в серума антитела срещу М. hyo. Серонегативни прасенца се отнасят до такива прасенца, които нямат в серума откриваеми нива на антитела срещу М. 15 hyo.
Настоящото изобретение се илюстрира подолу, но без да се ограничава от следващите примери за изпълнение.
Примери за осъществяване на изобретението
Пример 1
Приготвяне на М. hyo бактерии
Бинарен етиленимин (BEI) се използва за 25 инактивиране на М. hyo щам NL1042.
Накрая на периода на прорастване pH на културата се увеличава до 7,8 ± 0,2, и pH се поддържа в тези граници поне в продължение на 1 h. В това време воден разтвор, стерилизиран 30 посредством филтър на 2-бромоетиламинхидробромид (ВЕА) се прибавя към крайна концентрация от приблизително 4,0 тМ. При наличието на повишеното pH, ВЕА се променя химически на BEI. Културата се инкубира при 35 37°С ± 2°С при постоянно разбъркване в продължение на поне 24 h.
След инкубиране от 24 h, стерилизиран през филтър воден разтвор на натриев тиосулфат се прибавя до крайна концентрация от 4θ приблизително 4 тМ за неутрализиране на излишъка на ΒΕΙ. Културата се инкубира при 37°С ± 2°С при постоянно разбъркване за допълнителни 24 h.
След инактивиране, но преди неутрализиране е натриев тиосулфат, се взема представителна проба и се тества за завършването на инактивирането. Свежа среда, съдържаща 0,0026% фенол ред се инокулира с 5-20% инокулум при 37°С ± 2°С за най-малко една седмица преди изследването за цветова промяна, което е показателно за несполучливо инактивиране. Голямо количество проби се тестват за стерилност в тиогликолатен бульон при 37°С ± 2°С и триптиказен соев бульон при стайна температура. Инактивираната култура може да се прехвърли в стерилен съд за съхранение и да се съхранява при 2-8°С до съединяването.
Силата се определя чрез in vitro серологично изследване, за да се определи количествено антигена в крайния контейнер. Силата на използваните ваксини при изследванията за ефикасност определя минималната сила, която да присъства във ваксината до датата на изтичане на срока на годност.
Множество проби, или проби от краен контейнер на завършен продукт от всяка серия или първа подсерия, се тестват за М. hyo както следва.
Бактеринът се съхранява при -50°С в 100 ml-ови ампули. Ампулите се размразяват и субаликвотни части от 15 ml се съхраняват при +5/-2°С до използването им.
За да се тества силата на съединената серия, проба от серията се сравнява с контрола, и RP единици се определят за серията. Серия или субсерия трябва за предпочитане да съдържа най-малко 6,33 RP при инициирането на датата и най-малко 5,06 RP за датата.
RP се отнася до относителна сила. RP's може да се определи чрез относително количествено определяне на антиген към контролна ваксина. При този случай, контролата има RP по дефиниция = 10. Продуктът за еднократна доза от настоящото изобретение, за предпочитане има RP от 6,33, което е 6,33 пъти от контролата.
Добавя се мертиолат, като консервант при крайна концентрация, която не превишава 0,01 % (т/об).
10% етилендиамин тетраоцетна киселина (EDTA, динатриева или тетранатриева сол) разтвор се добавя консервант при крайна концентрация от приблизително 0,07% (т/об).
Пример 2
Животни
Прасета на възраст от приблизително една седмица се подбират за ваксиниране.
Серологичният статус към М. hyo се определя при ELISA изследване. Прасета със стойност на ELISA, надвишаваща 0,50 се считат серологично позитивни за М. hyo.
Ваксини
За ваксиниране на прасетата се използва М. hyo бактерии RESPISURE-1 (Pfizer Inc.).
Силата на ваксината се определя преди използването чрез относително антигенно количествено определяне, като се сравнява към контролен М. hyo бактерии. Контролната ваксина (RP=l,0) съдържа приблизително 8000 единици от антигена (приблизително 1 до 2 х 108 CU живи клетки, събрани преди инактивирането) на доза (per dose), определени чрез твърдофазово имуноизследване, което измерва количеството М. hyo антиген във ваксината.
Същата течност инертен пълнител (AMPHIGEN), използвана за получаване на лекарствена форма на RESPISURE-1 се използва като плацебо (т.е. без бактериални клетки).
Инокулум за заразяване
Инокулумът за заразяване се предоставя във вид на 10 ml-ови аликвотни части от белодробен хомогенат, замразен при -70°С и се 25 идентифицира, като производно на М. hyo щам 11 (L1 36). Инокулумът се размразява, след което се разрежда в Friis Mycoplasma Broth до достигане на 1:25 разреждане и се поставя върху лед до прилагането му. Всяко прасе получава 5 ml интраназална доза (2,5 ml на ноздра) от 1:25 суспенсията в дните, посочени във всеки от следващите примери. Всеки ден от заразяването, аликвотна част от белодробния инокулум се култивира, за да се потвърди липсата на бактериално контаминиране. Втора аликвотна част се титрува повторно на всеки три дни, резултатите показват, че инокулумът съдържа приблизително 106-107 променящи оцветяването единици (CCU/ml М. hyo). 40
Експериментална процедура
Прасетата се идентифицират с етикети на ушите, докато те все още сучат ([ден - 1]). Прасетата се разпределят в кочини и на групи на третиране, съгласно общ рандомизиран блок 45 модел. Прасетата се блокират на основата на прасило и кочини след отбиване.
В деня 0, прасетата се ваксинират или с 2 ml интрамускулна доза от М. hyo бактерии RESPISURE-1 (Pfizer Inc.), или с 2 ml
Bl интрамускулна доза плацебо. Всяко прасе получава 5 ml интраназална доза от 1:25 суспензията от инокулума за заразяване в посочения ден при всеки от посочените примери.
Всички прасета ежедневно се следят и се проверяват за признаци на клинично заболяване.
В определеното време, след първия ден на заразяване, всички прасета се подлагат на евтаназия и се аутопсират. Белите дробове се 10 отстраняват и им се прави оценка. Посмъртният преглед включва оценка на разпространението на патология, асоциирана с микоплазмено респираторно залобяване. Всеки белодробен дял се преглежда и лезиите се очертават, за да се 15 определи процента на включване на всеки дял. Записва се степента на наличните големи лезии.
Данни от анализа
Ефикасността се оценява на основата на процента на белодробните лезии, характерни за 20 М. hyo инфекция. Прасетата в групата за третиране (ваксинирани) се определят, като имащи процент от всичките белодробни лезии, които са значително (Р < 0,05) по-малко от прасетата в плацебо групата.
Процент на всичките белодробни лезии
Процентът на включена маса за всеки белодробен дял се претегля при използване на следното съотношение на отделните белодробни дялове: 10% ляв краниален; 10% ляв медиален; 30 25% ляв каудален; ? % десен краниален; десен медиален 10%; десен каудален 25% и допълнително 10%. Стойностите на претеглените белодробни дялове се сумират изцяло, след това, за да се получи процента на всичките белодробни 35 лезии (Pointon et al., 1992).
Пример 3
Предпазването от зараза с вирулентен М. hyo се определя в прасета, серологично позитивни за М. hyo, при използване на М. hyo бактерии RESPISURE-1 (Pfizer Inc.), който се прилага на прасета от 3- до 8-дневна възраст.
Пет повторения на изследване за сила на RESPISURE-1 се провеждат в или около времето на ваксинирането. Относителната сила (RP) се определя чрез относително количествено определяне на антигена при сравнение с контролна ваксина. Контролната ваксина, притежаваща RP=l,0 съдържа приблизително 8000 единици М. hyo антиген. RPs от тези пет 50 изследвания са 5,42, 3,96, 4,71, 5,49 и 4,36,
66481 Bl съответно.
В деня 0, прасетата от Групата на Третиране Т02 (виж таблица 1 по-долу) се ваксинират с 2 ml интрамускулна доза М. hyo бактерии RESPISURE-1 (Pfizer Inc.). Прасетата от група 5 Т01 се ваксинират интрамускулно с 2 ml плацебо. Всяко прасе получава 5 ml интраназална доза от 1:25 суспенсия от инокулум за заразяване в деня 178, 179 и 180. Всеки от трите дни, аликвотно количество от продукта за заразяване се 10 култивира за времето на инокулиране, за да се потвърди липсата на бактериално заразяване. Втора аликвотна част се титрува отново, за да се потвърди, че продуктът за заразяване съдържа приблизително 107 CCU/ml М. hyo. Всички прасета се проследяват и проверяват ежедневно за признаци на клинично заболяване.
Тридесет дни след първия ден от заразяването всички прасета се подлагат на евтаназия и на аутопсия. Белите дробове се отстраняват и се оценяват. Огледът след настъпването на смъртта включва оценка на обхвата на патологията, асоциирана с микоплазмено респираторно заболяване. Всеки дял на белия дроб се разглежда и лезиите се скицират, за да се оцени процента на включване на всеки дял. Степента на налични общи белодробни лезии се записва.
ТАБЛИЦА 1
Група | Съед. за | Номер | Ден 0 на | Ден 1781 на | Ден | Ден |
на трети- | ваксини- | вакс | зара-зяване | 1791 | 1801 | |
ране | ране | иниране | на | на | ||
... - - - | заразя | заразя | ||||
-ване | -ване | |||||
Т01 | плацебо | 26 | 26 | 26 | 26 | 26 |
Т02 | ваксина | 26 | 26 | 242 | 223 | 223 |
намерени мъртви на 179-тия ден поради анестезични усложнения.
Резултатите от белодробните лезии са обобщени в таблица 2. Резултатите показват, че ваксинираните прасета (Т02) имат значително (Р=0,0385) по-малък средно квадратичен процент пневмонийни белодробни лезии, отколкото плацебо прасетата (Т01) (2,0 vs. 4,5%).
ТАБЛИЦА2
Сума на процента на всичките белодробни лезии вирулентен М. hyo инокулум прасета 71 и 73 се отстраняват от изследването преди заразяването, защото и двете животни губят етикетите си за ушите и следователно не би могло да се определи идентичността на всяко от животните.
прасета 36 намират смъртта в деня 178, поради анестезични усложнения. Прасета 31 са
Третиране | Съединение | Номер прасе | на LS средно | Граници |
Т01 | Плацебо | 26 | 4,5а | 0 до 36,75 |
Т02 | Ваксина | 22 | 2,0ь | 0 до 13,75 |
ш
66481 Bl a, b Стойностите c различни степени са статистически значими (Р=О,ОЗ85)
Резултатите показват, че еднократното ваксиниране на прасета на приблизителна възраст от една седмица с М. hyo бактерии 5 RESPISURE-1 индуцират предпазване срещу последващо заразяване с вирулентен М. hyo.
Пример 4
Предпазване от заразяване с вирулентен М. hyo се определя при прасета, серологично 10 негативни за М. hyo, при използване на еднократна доза от М. hyo бактерии RESPISURE1, приложен върху прасета на 3- до 8-дневна възраст.
Пет повторения на изследване на силата 15 на ваксината се провеждат по или около времето на ваксинирането. RP се определя чрез относително определяне на антигена в сравнение с контролна ваксина. Контролната ваксина, притежаваща RP=1,0 съдържа приблизително 20 8000 единици М. hyo аантиген. RP's от тези пет изследвания са 5,42, 3,96, 4,71, 5,49 и 4,36, съответно.
В деня 0, прасетата в групата за третиране Т02 се ваксинират с 2 ml интрамускулна доза от 25 М. hyo бактерии RESPISURE-1. Прасетата от група Т01 се ваксинират интрамускулно с 2 ml плацебо. Всяко прасе получава 5 ml интраназална доза от 1:25 суспенсия от инокулума за заразяване в дните 172, 174 и 175. През всеки от трите дни, една аликвотна част от продукта за заразяване се култивира по времето на инокулирането, за да се потвърди липсата на бактериална контаминация. Втора аликвотна част се титрува отново, за да се потвърди, че материала за заразяване съдържа приблизително 106 CCU/ml М. hyo. Всички прасета се наблюдават и проверяват ежедневно за клинични признаци на заболяване.
Двадесет и девет дни след първия ден на заразяване, всички прасета се подлагат на евтаназия и на аутопсия. Белите дробове се отстраняват и се оценяват. Огледът след настъпването на смъртта включва оценка на обхвата на патологията, асоциирана с микоплазмено респираторно заболяване. Всеки дял на белия дроб се разглежда и лезиите се скицира, за да се оцени процента на консолидиране на всеки дял. Степента на налични тотални белодробни лезии се записва.
Таблица 3 обобщава проекта на експеримента.
Група на третиране | Съед. за ваксиниране | Номер | Ден 0 на вакс иниране | Ден 1731 на зара-зяване | ТАБЛИЦА 3 | |
Ден 1741 на заразя -ване | Ден 1751 на заразя -ване | |||||
Т01 | плацебо | 26 | 26 | 252 | 244 | 24 |
Т02 | ваксина | 26 | 26 | 233 | 20s | 22 |
вирулентен М. hyo прасе 123 се подлага на евтаназия на 19-тия ден, поради хроничен сепсисен 45 полиартрит.
прасе 222 е намерено мъртво на 40-тия ден.
Аутопсията разкрива голямо количество перикардиална течност и хеморагия на 59 епикардиума. Прасе 102 се подлага на евтаназия на 95-тия ден поради ректален пролапс. Прасе 204 е открито мъртво на 145-тия ден. Не прави аутопсия поради напредналото трупно разлагане.
прасе 244 е открито мъртво на 174-тия ден след първия ден на заразяването, поради анестезични усложнения.
66481 Bl
NEEA за отчет на 3 прасета
Резултатите от белодробните лезии са обобщени в таблица 4. Целият анализ показва, че ваксинираните прасета (Т02) имат значително (Р=0,0001) по-малко средно квадратичен процент пневмонийни белодробни лезии, отколкото плацебо прасетата (TOI) (0,3 vs. 5,9%).
ТАБЛИЦА 4
Сума на процента на тотални белодробни лезии
Третиране Съединение | Номер на LS средно Граници прасе |
Т01 Плацебо Т02 Ваксина | 24 5,9а ОдоЗб 20 0,Зь 0 до 6 |
a, b Стойностите с различни степени са статистически различни (Р=0,0001) 20
Резултатите от това изследване показват, че еднократното ваксиниране на прасета с М. hyo бактерии RESPISURE-ONE индуцира предпазване срещу последващо експериментално заразяване с вирулентен М. hyo. 25
Пример 5
Предпазване от заразяване с вирулентен М. hyo се определя при прасета, серологично негативни за М. hyo, при използване на еднократна доза от М. hyo бактерии RESPISURE- зо 1, приложен върху прасета на 3- до 8-дневна възраст.
Пет повторения на изследване на силата на ваксината се провеждат по или около времето на ваксинирането. RP се определя чрез относително 35 определяне на антигена в сравнение с контролна ваксина. Контролната ваксина, притежаваща RP=l,0, съдържа приблизително 8000 единици М. hyo антиген. RP's от тези пет изследвания са 5,42, 3,96, 4,71, 5,49 и 4,36, съответно. 40
В деня 0, прасетата в групата за третиране Т02 се ваксинират с 2 ml интрамускулна доза от М. hyo бактерии RESPISURE-1. Прасетата от група TO 1 се ваксинират интрамускулно с 2 ml плацебо. Всяко прасе получава 5 ml интраназална доза (2,5 ml на ноздра) от 1:25 суспенсията от инокулума за заразяване в дните 76, 77 и 78. През всеки от трите дни, една аликвотна част от продукта за заразяване се култивира по времето на инокулирането, за да се потвърди липсата на бактериална контаминация. Втора аликвотна част се титрува повторно, за да се потвърди, че материалът за заразяване съдържа приблизително 106 CCU/ml М. hyo. Всички прасета ежедневно се наблюдават и проверяват за клинични признаци на заболяване.
Двадесет и девет дни след първия ден на заразяване, всички прасета се подлагат на евтаназия и на аутопсия. Белите дробове се отстраняват и се оценяват. Огледът след настъпването на смъртта включва оценка на обхвата на патологията, асоциирана с микоплазмено респираторно заболяване. Всеки дял на белия дроб се разглежда и лезиите се скицират, за да се оцени процента на включване на всеки дял. Степента на налични тотални белодробни лезии се записва.
Таблица 5 обобщава проекта на експеримента.
66481 Bl
ТАБЛИЦА5
Група на третиране | Съед. за ваксиниране | Номер | Ден 0 на вакс иниране | Ден 1731 на зара-зяване | Ден 1741 на заразя -нане | Ден 1751 на заразя -ване |
Т01 | плацебо | 26 | 26 | 23* | 23 | 23 |
Т02 | ваксина | 26 | 26 | 213 | 21 | 21 |
вирулентен M. hyo прасета 237 и 239 дават положителен тест в деня -1 за М. hyo pneumoniae. Тези прасенца се изваждат от изследването на 14-ия ден и се подлагат на евтаназия. Прасе 220 е открито 2θ мъртво на 3-тия ден, поради това, че е било смачкано от свинята. На 19-тия ден, поради хроничен сепсисен полиартрит.
прасета 238, 240 и 277 дават положителна проба в деня -1 за М. hyo pneumoniae. 25 Тези прасенца се изваждат от изследването на
[4-тия ден и се подлагат на евтаназия. Прасе 280 зе подлага на евтаназия на 7-мия ден след като е с анорексия и преяждане. Прасенце 177 се подлага на евтаназия на 40-тия ден поради хроничен синдром на загуба на тегло.
Резултатите от белодробните лезии са обобщени в таблица 5. Целият анализ показва, че ваксинираните прасета (Т02) имат значително (Р=0,0001) средно квадратичен процент пневмонийни белодробни лезии, отколкото плацебо прасетата (Т01) (0,5 vs. 9,9%).
ТАБЛИЦА6
Сума на процента на тотални белодробни лезии Третиране Съединение Номер на LS средно Граници прасе
Т01 Плацебо 23 9,9а 0 до 40,5
Т02 Ваксина 21 0,5ь 0до5 a, b Стойностите с различни степени са статистически различни (Р=0,0001)
Claims (9)
1. Използване на Mycoplasma hyopneumoniae бактерии за производството на ваксина за лечение или предотвратяване на заболяване или нарушение при животно, причинено от инфекция с Mycoplasma hyopneumoniae, за прилагане към животното на възраст от 3 до 10 дни на ефективно количество еднократна доза от Mycoplasma hyopneumoniae ваксината.
2. Използване съгласно претенция 1, при което еднократната доза на М. hyopneumoniae ваксината съдържа от 1x106 до 5x1010 променящи оцветяването единици (CCU) на доза.
66481 Bl
3. Използване съгласно претенция 1, при което приложеното количество от споменатата ваксина е от 0.5 до 3.0 ml.
4. Използване съгласно претенция 1, при което Mycoplasma hyopneumoniae бактеринът 5 съдържа щам Р-5722-3.
5. Използване съгласно претенция 1, при което Mycoplasma hyopneumoniae ваксината допълнително съдържа вирусен или бактериален антиген, различен от Mycoplasma hyopneumoniae.
6. Използване съгласно претенция 5, при което споменатите вирусни или бактериални антигени са избрани от вирус на свински грип -
SIV, вирус на репродуктивно и респираторно заболяване при свинете - PRRS или мистериозно заболяване по свинете, диария след отбиване PWD и пролиферативен ентерит при свине - РРЕ.
7. Използване съгласно претенция 1, при което споменатият препарат на Mycoplasma hyopneumoniae е за интрамускулно приложение.
8. Използване съгласно претенция 1, при което Mycoplasma hyopneumoniae ваксината допълнително съдържа адювант.
9. Използване съгласно претенция 1, при което споменатото животно е свиня и тази свиня е защитена до 25 седмици след ваксиниране.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US30263601P | 2001-07-02 | 2001-07-02 | |
PCT/IB2002/002121 WO2003003941A2 (en) | 2001-07-02 | 2002-06-07 | One dose vaccination with mycoplasma hyopneumoniae |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
BG108546A BG108546A (bg) | 2005-02-28 |
BG66481B1 true BG66481B1 (bg) | 2015-02-27 |
Family
ID=23168589
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
BG108546A BG66481B1 (bg) | 2001-07-02 | 2004-01-26 | Използване на еднократна ваксина с mycoplasma hyopneumoniae |
Country Status (42)
Families Citing this family (52)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
MY129765A (en) | 2000-12-19 | 2007-04-30 | Wyeth Corp | Improved mycoplasma hyopneumoniae bacterin vaccine |
WO2006056841A1 (en) * | 2004-11-24 | 2006-06-01 | Pharmacia & Upjohn Company Llc | Multiple-strain mycoplasma hyopneumoniae vaccines |
US7700285B1 (en) | 2005-12-29 | 2010-04-20 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | PCV2 immunogenic compositions and methods of producing such compositions |
US7833707B2 (en) | 2004-12-30 | 2010-11-16 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Methods of overexpression and recovery of porcine circovirus type 2 ORF2 |
UA95602C2 (ru) | 2004-12-30 | 2011-08-25 | Берингер Ингельхейм Ветмедика, Инк. | Иммуногенная композиция цвс2 и способы приготовления такой композиции |
US8834891B2 (en) | 2005-03-14 | 2014-09-16 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Immunogenic compositions comprising Lawsonia intracellularis |
EP3868400A1 (en) | 2005-12-29 | 2021-08-25 | Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. | Multivalent pcv2 immunogenic compositions and methods of producing such compositions |
PT2371383E (pt) | 2005-12-29 | 2015-11-24 | Boehringer Ingelheim Vetmed | Utilização de uma composição imunogénica de pcv2 para atenuar os sintomas clínicos em porcos |
EP1991262A4 (en) * | 2006-03-03 | 2009-11-04 | Merial Ltd | MYCOPLASMA HYOPNEUMONIAE VACCINE |
WO2008064299A2 (en) * | 2006-11-22 | 2008-05-29 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Methods of reducing porcine circovirus-associated disease outbreaks |
EP2101815A4 (en) * | 2006-12-11 | 2010-10-06 | Boehringer Ingelheim Vetmed | EFFICIENT PROCESS FOR THE TREATMENT OF PORCINE CIRCOVIRUS AND LAWSONIA INTRACELLULARIS INFECTIONS |
US8865183B2 (en) | 2006-12-15 | 2014-10-21 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Treatment of pigs with PCV2 antigent |
EP1941903A1 (en) | 2007-01-03 | 2008-07-09 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Prophylaxis and treatment of PRDC |
EP1958644A1 (en) | 2007-02-13 | 2008-08-20 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Prevention and treatment of sub-clinical pcvd |
US7829274B2 (en) | 2007-09-04 | 2010-11-09 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Reduction of concomitant infections in pigs by the use of PCV2 antigen |
RU2489164C9 (ru) * | 2007-11-06 | 2014-01-20 | ВАЙЕТ ЭлЭлСи | АВИРУЛЕНТНАЯ АДЪЮВАНТНАЯ ЖИВАЯ ВАКЦИНА ПРОТИВ Mycoplasma hyopneumoniae |
BRPI0821456A2 (pt) * | 2007-12-31 | 2015-06-16 | Boehring Ingelheim Vetmedica Inc | Partícula similar à pcv2 orf2 com inserção de aminoácido estranho |
CN101236206B (zh) * | 2008-01-17 | 2014-10-15 | 中国兽医药品监察所 | 一种猪肺炎支原体重组抗原elisa检测试剂盒 |
EP2242511A4 (en) | 2008-01-23 | 2012-10-24 | Boehringer Ingelheim Vetmed | IMMUNOGENIC COMPOSITIONS OF MYCOPLASMA HYOPNEUMONIAE PCV2, AND METHODS FOR PRODUCING SUCH COMPOSITIONS |
US8444989B1 (en) * | 2008-04-18 | 2013-05-21 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | One dose vaccination against mycoplasma infections of pigs |
ES2728949T3 (es) * | 2008-06-27 | 2019-10-29 | Zoetis Services Llc | Composiciones adyuvantes novedosas |
TWI583403B (zh) | 2009-06-04 | 2017-05-21 | 國立感染症研究所 | 黴漿菌感染症用疫苗 |
AR078253A1 (es) | 2009-09-02 | 2011-10-26 | Boehringer Ingelheim Vetmed | Metodos para reducir la actividad antivirica en composiciones pcv-2 y composiciones pcv-2 con mejor inmunogenicidad |
CA2793959C (en) | 2010-03-25 | 2019-06-04 | Oregon Health & Science University | Cmv glycoproteins and recombinant vectors |
DK2569007T3 (en) | 2010-05-11 | 2016-01-25 | Intervet Int Bv | VACCINE AGAINST Mycoplasma hyopneumoniae SUITABLE FOR ADMINISTRATION IN PRESENCE OF maternally derived antibodies |
RU2722357C2 (ru) * | 2010-07-26 | 2020-05-29 | Кью Байолоджикс Инк. | Иммуногенные противовоспалительные композиции |
US8546149B2 (en) | 2010-08-27 | 2013-10-01 | Intervet Inc. | Potency test for vaccine formulations |
BR112013004594B1 (pt) * | 2010-08-27 | 2020-07-28 | Intervet International B. V. | método para a determinação de um conteúdo de antígeno |
CA2832109C (en) | 2011-06-10 | 2021-07-06 | Oregon Health & Science University | Cmv glycoproteins and recombinant vectors |
UA115053C2 (uk) | 2012-03-07 | 2017-09-11 | Сева Санте Анімаль | Композиція, що містить антиген і ліпополісахарид у формі масло-в-воді, та спосіб її використання (варіанти) |
UA114504C2 (uk) | 2012-04-04 | 2017-06-26 | Зоетіс Сервісіз Ллс | Комбінована вакцина pcv, mycoplasma hyopneumoniae та prrs |
US9120859B2 (en) | 2012-04-04 | 2015-09-01 | Zoetis Services Llc | Mycoplasma hyopneumoniae vaccine |
UA114503C2 (uk) | 2012-04-04 | 2017-06-26 | Зоетіс Сервісіз Ллс | Комбінована вакцина pcv та mycoplasma hyopneumoniae |
CN104968365B (zh) | 2012-12-28 | 2018-04-03 | 勃林格殷格翰动物保健有限公司 | 支原体疫苗的制备方法 |
KR102355614B1 (ko) | 2012-12-28 | 2022-01-27 | 베링거잉겔하임베트메디카게엠베하 | 마이코플라스마 항원을 포함하는 면역원성 조성물 |
ES2812552T3 (es) * | 2013-02-05 | 2021-03-17 | Agricultural Tech Res Inst | Vacuna subunitaria contra Mycoplasma spp. |
CN104338125A (zh) * | 2013-07-29 | 2015-02-11 | 普莱柯生物工程股份有限公司 | 一种猪肺炎支原体抗原在预防和治疗猪呼吸道疾病综合征方面的应用 |
AU2014321369B2 (en) | 2013-09-19 | 2020-04-16 | Zoetis Services Llc | Oil-based adjuvants |
KR20220083861A (ko) | 2013-10-02 | 2022-06-20 | 베링거 인겔하임 애니멀 헬스 유에스에이 인크. | Pcv2 orf2 단백질 변이체 및 이로 이루어진 바이러스 유사 입자 |
ES2714000T3 (es) * | 2013-11-21 | 2019-05-24 | Agricultural Tech Res Inst | Composición para prevenir y curar una infección por micoplasma |
CN105012948B (zh) * | 2014-04-18 | 2019-07-30 | 普莱柯生物工程股份有限公司 | 一种疫苗组合物及其应用 |
CN104248753B (zh) * | 2014-05-15 | 2017-07-28 | 普莱柯生物工程股份有限公司 | 一种疫苗组合物及其应用 |
BR102014014727B1 (pt) * | 2014-06-16 | 2018-04-03 | Ouro Fino Saúde Animal Ltda | COMPLEXO DE POLIPROTEÍNAS IMUNOGÊNICAS DE M. hyopneumoniae, GENE SINTÉTICO CODIFICANTE DO COMPLEXO DE POLIPROTEÍNAS IMUNOGÊNICAS DE M. hyopneumoniae, COMPOSIÇÃO ANTIGÊNICA, PROCESSO DE OBTENÇÃO DE UM COMPLEXO DE POLIPROTEÍNAS IMUNOGÊNICAS DE M. hyopneumoniae |
US9814769B2 (en) | 2014-09-30 | 2017-11-14 | Qatar University | Vaccines against pathogenic Escherichia coli and methods of using the same |
WO2016115456A1 (en) | 2015-01-16 | 2016-07-21 | Zoetis Services Llc | Foot-and-mouth disease vaccine |
KR20160099223A (ko) * | 2015-02-12 | 2016-08-22 | 강원대학교산학협력단 | 마이코플라스마 하이오뉴모니애 박테린 백신 및 이의 제조방법 |
US10519199B2 (en) * | 2016-08-12 | 2019-12-31 | Innovac | Vaccine composition comprising recombinant protein for preventing swine Mycoplasma infection |
RU2668799C1 (ru) * | 2017-09-08 | 2018-10-02 | Эгрикалчурал Текнолоджи Рисерч Инститьют | Субъединичная вакцина против mycoplasma spp. |
CN108101969A (zh) * | 2017-11-13 | 2018-06-01 | 南京大爻网络科技有限公司 | 一种与猪支原体肺炎相关的抗原及其应用 |
RU2695679C1 (ru) * | 2018-09-11 | 2019-07-25 | Эгрикалчурал Текнолоджи Рисерч Инститьют | Субъединичная вакцина против mycoplasma spp. |
RU2759427C2 (ru) * | 2019-07-08 | 2021-11-12 | Эгрикалчурал Текнолоджи Рисерч Инститьют | Субъединичная вакцина против mycoplasma spp |
CN117305192A (zh) * | 2023-12-01 | 2023-12-29 | 北京瑞阳瑞泰生物科技有限公司 | 一种猪肺炎支原体rt02株、疫苗组合物及其应用 |
Family Cites Families (21)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0283840A3 (en) * | 1987-03-26 | 1989-08-09 | Ml Technology Ventures, L.P. | Mycoplasma hyopneumoniae antigen and uses therefor |
US5252328A (en) | 1987-03-26 | 1993-10-12 | Martin Marietta Energy Systems, Inc. | Mycoplasma hyopneumoniae antigen and uses therefor |
DE3881993T2 (de) | 1987-09-18 | 1993-09-30 | Akzo Nv | Mycoplasma-Impfstoff. |
AU7682091A (en) | 1990-04-02 | 1991-10-30 | Synergen, Inc. | Polypeptides useful in diagnosis of and treatment against mycoplasma infections in animals |
CA2082155C (en) | 1990-05-29 | 2008-04-15 | Krishnaswamy I. Dayalu | Swine pneumonia vaccine and method of preparation |
US6113916A (en) * | 1990-05-29 | 2000-09-05 | American Cyanamid Company | Method of enhancing cell mediated immune responses |
US5565205A (en) | 1990-08-16 | 1996-10-15 | Solvay Animal Health, Inc. | Inactivated Mycoplasma hypopneumoniae bacterin and method of use thereof |
EP0475185A1 (en) | 1990-08-27 | 1992-03-18 | Nippon Flour Mills Co., Ltd. | DNA's encoding surface antigen of mycoplasma hyopneumoniae, DNA fragments for primer, recombinant antigenic peptides and diagnostic method of mycoplasmal pneumoniae of swine using same |
US5338543A (en) * | 1992-02-27 | 1994-08-16 | Ambico, Inc. | Thimerosal inactivated mycoplasma hyopneumoniae vaccine |
DK0839050T3 (da) | 1992-09-28 | 2004-10-25 | Wyeth Corp | Fremgangsmåde til at forstærke celleformidlede immunreaktioner |
US5530874A (en) | 1993-02-02 | 1996-06-25 | 3Com Corporation | Network adapter with an indication signal mask and an interrupt signal mask |
WO1995009870A1 (en) | 1993-10-07 | 1995-04-13 | Iowa State University Research Foundation, Inc. | Characterization of mycoplasma hyopneumoniae adhesins |
ZA953703B (en) | 1994-05-10 | 1996-01-10 | American Home Prod | Modified live BRSV vaccine |
US5788962A (en) | 1995-01-17 | 1998-08-04 | The Curators Of The University Of Missouri | DNA sequences coding for mycoplasma hyopneumoniae surface antigens, corresponding proteins and use in vaccines and diagnostic procedures |
AUPN178995A0 (en) | 1995-03-16 | 1995-04-13 | University Of Melbourne, The | Antigen composition |
ES2224273T3 (es) | 1996-09-30 | 2005-03-01 | University Of Arkansas | Metodo para producir inmunidad activa por medio de un conjugado de vacuna. |
EP0846468B1 (en) | 1996-12-05 | 2004-06-09 | Akzo Nobel N.V. | Non-virulent mycoplasma synoviae and vaccine thereof |
BR9815321A (pt) | 1997-11-26 | 2002-01-02 | Univ Iowa State Res Found Inc | Vacina de mycoplasma hyopneumoniae recombinante |
AU6128900A (en) * | 1999-09-29 | 2001-04-05 | Pfizer Products Inc. | Nucleic acids and proteins of the mycoplasma hyopneumoniae mph3 gene and uses thereof |
US6585981B1 (en) * | 2000-07-27 | 2003-07-01 | Regents Of The University Of Minnesota | Temperature-sensitive live vaccine for Mycoplasma hyopneumoniae |
UA114504C2 (uk) | 2012-04-04 | 2017-06-26 | Зоетіс Сервісіз Ллс | Комбінована вакцина pcv, mycoplasma hyopneumoniae та prrs |
-
2002
- 2002-06-07 IL IL15934902A patent/IL159349A0/xx unknown
- 2002-06-07 MX MXPA03011599A patent/MXPA03011599A/es active IP Right Grant
- 2002-06-07 ES ES02735755.7T patent/ES2312580T5/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-06-07 PT PT02735755T patent/PT1474067E/pt unknown
- 2002-06-07 PT PT14182639T patent/PT2842569T/pt unknown
- 2002-06-07 EP EP02735755.7A patent/EP1474067B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-06-07 ES ES08167761.9T patent/ES2550458T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-06-07 AT AT02735755T patent/ATE412426T2/de active
- 2002-06-07 CZ CZ2003-3466A patent/CZ305781B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2002-06-07 PL PL373367A patent/PL209773B1/pl unknown
- 2002-06-07 OA OA1200300344A patent/OA12638A/en unknown
- 2002-06-07 JP JP2003509957A patent/JP2005515162A/ja active Pending
- 2002-06-07 BR BR0210804-6A patent/BR0210804A/pt not_active Application Discontinuation
- 2002-06-07 CN CN200810186079.6A patent/CN101524532B/zh not_active Expired - Lifetime
- 2002-06-07 ES ES14182639T patent/ES2729579T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-06-07 DK DK14182639.6T patent/DK2842569T3/da active
- 2002-06-07 PT PT81677619T patent/PT2027873E/pt unknown
- 2002-06-07 DE DE60229666T patent/DE60229666D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2002-06-07 EA EA200301323A patent/EA009901B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2002-06-07 EP EP08167761.9A patent/EP2027873B8/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-06-07 CN CN028133447A patent/CN1551781B/zh not_active Expired - Lifetime
- 2002-06-07 SK SK1579-2003A patent/SK288010B6/sk unknown
- 2002-06-07 NZ NZ530106A patent/NZ530106A/en not_active IP Right Cessation
- 2002-06-07 WO PCT/IB2002/002121 patent/WO2003003941A2/en active Application Filing
- 2002-06-07 AP APAP/P/2003/002937A patent/AP2003002937A0/en unknown
- 2002-06-07 TN TNPCT/IB2002/002121A patent/TNSN03155A1/fr unknown
- 2002-06-07 KR KR10-2004-7000044A patent/KR20040030785A/ko not_active Application Discontinuation
- 2002-06-07 CN CN201210389058.0A patent/CN102872456B/zh not_active Expired - Lifetime
- 2002-06-07 DK DK02735755.7T patent/DK1474067T4/en active
- 2002-06-07 CA CA2451626A patent/CA2451626C/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-06-07 EP EP14182639.6A patent/EP2842569B1/en not_active Revoked
- 2002-06-07 AU AU2002309109A patent/AU2002309109B2/en not_active Expired
- 2002-06-07 YU YU102203A patent/YU102203A/sh unknown
- 2002-06-07 HU HU0400434A patent/HU230246B1/hu unknown
- 2002-06-07 DK DK08167761.9T patent/DK2027873T3/en active
- 2002-06-19 US US10/174,701 patent/US6846477B2/en not_active Ceased
- 2002-06-26 DO DO2002000431A patent/DOP2002000431A/es unknown
- 2002-06-26 TW TW091114057A patent/TWI329514B/zh not_active IP Right Cessation
- 2002-07-01 UY UY27366A patent/UY27366A1/es not_active Application Discontinuation
- 2002-07-01 AR ARP020102479A patent/AR034678A1/es not_active Application Discontinuation
- 2002-07-01 PE PE2002000593A patent/PE20030285A1/es not_active Application Discontinuation
- 2002-07-02 PA PA20028549701A patent/PA8549701A1/es unknown
- 2002-07-02 GT GT200200138A patent/GT200200138A/es unknown
- 2002-07-06 UA UA20031213200A patent/UA78707C2/uk unknown
-
2003
- 2003-12-12 ZA ZA2003/09698A patent/ZA200309698B/en unknown
- 2003-12-15 IS IS7076A patent/IS7076A/is unknown
- 2003-12-22 NO NO20035762A patent/NO342654B1/no not_active IP Right Cessation
- 2003-12-23 HR HR20031079A patent/HRP20031079A2/hr not_active Application Discontinuation
- 2003-12-31 MA MA27468A patent/MA27047A1/fr unknown
-
2004
- 2004-01-26 BG BG108546A patent/BG66481B1/bg unknown
- 2004-08-12 US US10/917,130 patent/US20050013823A1/en not_active Abandoned
-
2005
- 2005-01-13 HK HK05100335.9A patent/HK1068250A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2009
- 2009-01-16 CY CY20091100059T patent/CY1108749T1/el unknown
- 2009-12-18 HK HK09111932.9A patent/HK1134900A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2012
- 2012-03-02 US US13/411,232 patent/USRE44399E1/en not_active Expired - Lifetime
-
2013
- 2013-06-26 HK HK13107527.2A patent/HK1180224A1/zh not_active IP Right Cessation
-
2015
- 2015-08-27 HK HK15108334.1A patent/HK1207584A1/xx unknown
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
AU2002309109B2 (en) | One dose vaccination with mycoplasma hyopneumoniae | |
AU2002309109A1 (en) | One dose vaccination with mycoplasma hyopneumoniae | |
US20030147914A1 (en) | Mycoplasma bovis vaccine and methods of reducing pneumonia in animals | |
US20060251674A1 (en) | Formulations and process for production of Bordetella bronchiseptica P68 antigen and vaccines | |
JP2005500845A (ja) | マイコプラズマ・ボビスチャレンジモデル並びにマイコプラズマ・ボビスの投与方法及び肺炎性肺病変の誘発方法 | |
AU2002311568A1 (en) | Mycoplasma bovis vaccine and methods of reducing pneumonia in animals | |
JP2008546637A (ja) | ルデテラ・ブロンキセプチカp68抗原及びワクチン製造のための製剤及び製法プロセス |