WO2019039170A1

WO2019039170A1 - 美白剤、美白用皮膚外用剤および皮膚の美白方法

Info

Publication number: WO2019039170A1
Application number: PCT/JP2018/027655
Authority: WO
Inventors: 坪井　誠; 小島　弘之; 晃明桝谷; 剛志喜多
Original assignee: 一丸ファルコス株式会社
Priority date: 2017-08-23
Filing date: 2018-07-24
Publication date: 2019-02-28
Also published as: JP2019038754A; CN111032009B; KR20200043406A; JP6389308B1; CN111032009A

Abstract

【課題】本発明は新規の美白成分を見出し、新規美白成分を含有する美白剤、美白用皮膚外用剤を提供することを目的とする。【解決手段】新規美白成分を見出すため、いまだ美白効果が検討されていない多数の化合物に対して試験を行った結果、ロツンゲン酸に高い美白効果を見出した。よって本発明者らは、ロツンゲン酸を含有した美白剤、美白用皮膚外用剤を提供する。

Description

美白剤、美白用皮膚外用剤および皮膚の美白方法

クロスリファレンス

　本出願は、２０１７年８月２３日に日本国において出願された特願２０１７－１６０１６０号に基づく優先権を主張するものであり、当該出願に記載された内容は全て、参照によりそのまま本明細書に援用される。また、本願において引用した全ての特許、特許出願及び文献に記載された内容は全て、参照によりそのまま本明細書に援用される。

　本発明は、ロツンゲン酸またはその塩を有効成分として含有する美白剤、美白用皮膚外用剤およびこれを用いる皮膚の美白方法に関する。

　美容上、皮膚にできるシミ、ソバカスなどの色素沈着が問題視されており、色素沈着を抑制するアルブチンやアスコルビン酸誘導体、コウジ酸などの成分を皮膚外用剤に配合することが提案されている。しかしながら、大気汚染やオゾン層破壊により表皮に届く紫外線は年々増加傾向にあり、それに対応する色素沈着の予防や改善に効果的な新規成分が必要とされている。（特許文献１～３）

　そこで従来の美白成分に変わる成分として、例えばクルミ由来のポリフェノールなど美白効果を示したことなどが報告されているものの、従来の美白成分よりも優れた効果は確認できなかった（特許文献４）。

特開平９－２０６１０号公報特開平４－１８２４９２号公報特開平２－２００６２２号公報特開２００８－８１４０８号公報

　本発明は新規の美白成分を見出し、新規美白成分を含有する美白剤、美白用皮膚外用剤および皮膚の美白方法を提供することを目的とする。

　新規美白成分を見出すため、いまだ美白効果が検討されていない多数の化合物に対して試験を行った結果、ロツンゲン酸に高い美白効果を見出した。よって本発明者らは、ロツンゲン酸を含有した美白剤、美白用皮膚外用剤を提供する。すなわち、本発明は以下の実施形態を含む。
（１）ロツンゲン酸またはその塩を、美白用有効成分として０．００００４～５重量％含有する美白剤。
（２）ロツンゲン酸またはその塩を、美白用有効成分として０．００００４～５重量％含有する美白用皮膚外用剤。
（３）前記ロツンゲン酸の含有量が、少なくとも０．００９重量％、好ましくは０．０９重量％、より好ましくは０．９重量％である（２）に記載の美白剤または美白用皮膚外用剤。
（４）ロツンゲン酸またはその塩を有効成分として含む組成物の有効量を、その必要のある対象者に投与することを含む、皮膚の美白方法。
（５）ロツンゲン酸またはその塩を、少なくとも０．００９重量％、好ましくは０．０９重量％、より好ましくは０．９重量％含む組成物で皮膚を処理することを含む、皮膚の美白方法。
（６）前記皮膚の処理が、前記皮膚が紫外線に暴露される前またはその直後に行われる（４）または（５）の美白方法。
（７）美白剤または美白用皮膚外用剤の有効成分として使用するための、ロツンゲン酸またはその塩を含む組成物。
（８）ロツンゲン酸またはその塩を有効成分として含む組成物の、皮膚の美白処理のための使用。
（９）美白剤または美白用皮膚外用剤の製造における、ロツンゲン酸またはその塩の使用。

　本発明によれば、安全で優れた美白剤、美白用皮膚外用剤の提供が可能となる。

図１は、ロツンゲン酸のＬＣ／ＭＳチャートである。図２は、ロツンゲン酸のチロシナーゼ遺伝子発現抑制作用を示す図である。図３は、被験サンプル塗布と紫外線照射に対するモルモット皮膚の明度の推移状況を示すものである。縦軸には紫外線照射前のＬ値を０としたとき、紫外線照射前から被験サンプル塗布開始後におけるＬ値の差（ΔＬ）を示し、横軸には、日数を示す。

　本発明で用いる以下の化学構造式で示されるロツンゲン酸（Ｒｏｔｕｎｇｅｎｉｃ　ａｃｉｄ）は、試薬として市販されているか、または公知の文献（例えば、Ｎａｋａｔａｎｉら、Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２８（５）１４７９－１４８２（１９８９））記載の方法に準じて植物、動物、菌体等から抽出、合成等して得ることができ、これらをさらにカラム等を用いて精製してもよい。またロツンゲン酸の塩としては、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムや亜鉛等の一価又は二価以上の無機金属塩、アンモニウム塩、トリエタノールアミン塩、トリエチルアミン塩等の有機アミン塩類、リジン塩、アルギニン塩等の塩基性アミノ酸塩等が好ましく例示できる。また、ロツンゲン酸のエステルであってもよく、炭素数１～３０の脂肪族乃至は芳香族のエステルが好ましく例示できる。例えば、脂肪族のエステルであれば、メチルエステル、エチルエステル、ヘキシルエステル、２－エチルヘキシルエステル、ラウリルエステル、ステアリルエステル、ベヘニルエステル、イソステアリルエステル、オレイルエステルなどが好ましく例示でき、芳香族エステルであれば、ベンジルエステル、フェネチルエステル、シンナミルエステルなどが好適に例示できる。かかるエステルは、エステルを形成するアルコールに塩化チオニルなどのハロゲン化試薬を反応させ、ハライドに変換し、しかる後にアルカリ存在下ロツンゲン酸と縮合することにより製造することができる。

　本発明の美白剤、美白用皮膚外用剤を製造する上で、使用するロツンゲン酸またはロツンゲン酸の塩の形状としては、液状、固形状、粉末状、ペースト状等いずれの形状でも良く、本発明を実施する上で最適な形状を任意に選択することができる。

　ロツンゲン酸および／または薬学的に許容される塩は、チロシナーゼの発現を抑制することが確認できる範囲であれば特に制限はないが０．００００４～５重量％であることが好ましい。これは、後述する実施例において、ロツンゲン酸を０．０００００５重量％（約０．１μＭ）で添加したときの、Ｂ１６メラノーマ細胞に対するチロシナーゼ遺伝子発現の抑制効果に比べて、０．００００４重量％（約０．８μＭ）添加した場合の抑制効果の方が高かったこと、及びロツンゲン酸を７重量％配合した場合に比べて５重量％配合した場合の方が外用剤の使用感が良かったことに基づく。したがって、本発明の美白剤または美白用皮膚外用剤の好ましい態様では、ロツンゲン酸またはその塩を少なくとも０．００１重量％含んでいればよく（処方例１～３２参照）、より好ましくは少なくとも０．００９重量％、０．０９重量％または０．９重量％である（試験５参照）。

　本発明による美白剤、美白用皮膚外用剤の剤型は任意であり、アンプル状、カプセル状、粉末状、顆粒状、丸剤、錠剤状、固形状、液状、ゲル状、気泡状、乳液状、クリーム状、軟膏状、シート状、ムース状、粉末分散状、多層状、エアゾール状等とすることができる。

　具体的な美白用皮膚外用剤（動物用に使用する製剤も含む）としては、アンプル、カプセル、丸剤、錠剤、粉末、顆粒、固形、液体、ゲル、気泡、エマルジョン、シート、ミスト、スプレー剤等利用上の適当な形態の１）医薬品類、２）医薬部外品類、３）局所用又は全身用の皮膚用化粧品類（例えば、化粧水、乳液、クリーム、軟膏、ローション、オイル、パック等の基礎化粧料、固形石鹸、液体ソープ、ハンドウォッシュ等の洗顔料や皮膚洗浄料、マッサージ用剤、クレンジング用剤、除毛剤、脱毛剤、髭剃り処理料、アフターシェーブローション、プレショーブローション、シェービングクリーム、ファンデーション、口紅、頬紅、アイシャドウ、アイライナー、マスカラ等のメークアップ化粧料、香水類、美爪剤、美爪エナメル、美爪エナメル除去剤、パップ剤、プラスター剤、テープ剤、シート剤、貼付剤、エアゾール剤等）、４）頭皮・頭髪に適用する薬用又は／及び化粧用の製剤類（例えば、シャンプー剤、リンス剤、ヘアートリートメント剤、プレヘアートリートメント剤、パーマネント液、染毛料、整髪料、ヘアートニック剤、育毛・養毛料、パップ剤、プラスター剤、テープ剤、シート剤、エアゾール剤等）、５）浴湯に投じて使用する浴用剤、６）その他、腋臭防止剤や消臭剤、制汗剤、衛生用品、衛生綿類、ウエットティシュ等が挙げられる。

　具体的な美白剤の用途としては主に外用剤への配合であり、前記美白用皮膚外用剤に挙げた形態へ配合することができる。本発明にかかる美白剤の有効成分は、投与を受ける対象の年齢、性別、体重および投与経路または処方者の判断によって変わり得る。こうした因子に基づいた適用量の決定は当業者の水準内にあり、その１日投与量は、たとえば、０．０１ｍｇ／ｋｇ／日～１０ｍｇ／ｋｇ／日、より具体的には０．５ｍｇ／ｋｇ／日～５ｍｇ／ｋｇ／日であってよいが、これに限定されるものではない。

　前記皮膚外用剤、美白剤、美白用皮膚外用剤には、本発明の効果を損なわない範囲内であれば、通常外用剤に使用する成分であれば配合することができ、以下配合できる成分を例示する。

　（１）各種油脂類：アボカド油、アーモンド油、ウイキョウ油、エゴマ油、オリーブ油、ゴマ油、カカオ脂、カミツレ油、サフラワー油、シア脂、大豆油、ツバキ油、トウモロコシ油、ナタネ油、ヒマシ油、綿実油、落花生油、タートル油、ミンク油、卵黄油、パーム油、パーム核油、ヤシ油、牛脂、スクワレン、スクワラン、プリスタン又はこれら油脂類の水素添加物（硬化油等）、アマニ油等。
（２）ロウ類：ミツロウ、鯨ロウ、ラノリン、カンデリラロウ、モンタンロウ、ライスワックス等。
（３）鉱物油：　流動パラフィン、ワセリン、パラフィン等。

　（４）脂肪酸類：ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ベヘン酸、オレイン酸、オレイン酸ナトリウム、リノール酸、リノレン酸、ドコサヘキサエン酸、エイコサペンタエン酸、１２－ヒドロキシステアリン酸、ウンデシレン酸、ラノリン脂肪酸、カプロン酸、２－エチルブタン酸、イソペンタン酸等。
（５）アルコール類：エタノール、イソプロパノール、ラウリルアルコール、セタノール、ステアリルアルコール、オレイルアルコール、ラノリンアルコール、コレステロール、フィトステロール、フェノキシエタノール等。
（６）多価アルコール類：エチレングリコール、エチレングリコールモノエチルエーテル、エチレングリコールモノブチルエーテル、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、ポリプロピレングリコール、１，３－ブチレングリコール、グリセリン、アラビトール、キシリトール、リビトール、ソルビトール、マンニトール、マルチトール等。
（７）エステル類：ミリスチン酸イソセチル、ミリスチン酸イソステアリル、パルミチン酸２－エチルヘキシル、パルミチン酸イソセチル、パルミチン酸イソステアリル、ステアリン酸２－エチルヘキシル、ステアリン酸イソセチル、オレイン酸イソデシル、オレイン酸オクチルドデシル、リシノール酸オクチルドデシル、ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、ステアリン酸ブチル、ラウリン酸ヘキシル、ミリスチン酸ミリスチル、オレイン酸オレイル、オレイン酸デシル、ミリスチン酸オクチルドデシル、ジメチルオクタン酸ヘキシルデシル、乳酸セチル、乳酸ミリスチル、フタル酸ジエチル、フタル酸ジブチル、酢酸ラノリン、モノステアリン酸エチレングリコール、モノステアリン酸プロピレングリコール、ジオレイン酸プロピレングリコール等。

　（８）ガム質、糖類又は水溶性高分子化合物：キサンタンガム、アラビアゴム、キャブロガム、グアーガム、カラヤゴム、クインシード、寒天、カゼイン、乳糖、果糖、ショ糖又はそのエステル、トレハロース又はその誘導体、デキストリン、ゼラチン、ペクチン、デンプン、カラギーナン、カルボキシメチルキチン又はキトサン、エチレンオキサイド等のアルキレン（Ｃ２～Ｃ４）オキサイドが付加されたヒドロキシアルキル（Ｃ２～Ｃ４）キチン又はキトサン、低分子キチン又はキトサン、キトサン塩、硫酸化キチン又はキトサン、リン酸化キチン又はキトサン、アルギン酸又はその塩、ヒアルロン酸又はその塩、コンドロイチン硫酸又はその塩、ヘパリン、エチルセルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシエチルセルロース、カルボキシエチルセルロースナトリウム、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ニトロセルロース、結晶セルロース、ポリビニルアルコール、ポリビニルメチルエーテル、ポリビニルピロリドン、ポリビニルメタアクリレート、ポリアクリル酸塩、ポリエチレンオキサイドやポリプロピレンオキサイド等のポリアルキレンオキサイド又はその架橋重合物、カルボキシビニルポリマー、ポリエチレンイミン等。

　（９）界面活性剤：アニオン界面活性剤（アルキルカルボン酸塩、アルキルスルホン酸塩、アルキル硫酸エステル塩、アルキルリン酸エステル塩、ラウリン酸ナトリウム、ラウリン酸カリウム、パルミチン酸ナトリウム、パルミチン酸カリウム、ヤシ油脂肪酸メチルタウリン塩、Ｎ－カプロイルメチルタウリン塩、Ｎ－ラウロイルメチルタウリン塩、Ｎ－ミリストイルメチルタウリン塩、Ｎ－パルミトイルメチルタウリン塩、Ｎ－ステアロイルメチルタウリン塩、Ｎ－オレオイルメチルタウリン塩、Ｎ－ココイルグルタミン酸塩、Ｎ－ラウロイルグルタミン酸塩、Ｎ－ミリストイルグルタミン酸塩、Ｎ－パルミトイルグルタミン酸塩、Ｎ－ステアロイルグルタミン酸塩、Ｎ－オレオイルグルタミン酸塩等）、カチオン界面活性剤（アルキルアミン塩、アルキル四級アンモニウム塩、塩化ステアリルトリメチルアンモニウム、塩化ラウリルトリメチルアンモニウム、アルキルトリメチルアンモニウム塩、塩化ジステアリルジメチルアンモニウム）、両性界面活性剤（カルボン酸型両性界面活性剤（アミノ型、ベタイン型）、硫酸エステル型両性界面活性剤、スルホン酸型両性界面活性剤、リン酸エステル型両性界面活性剤、２－ウンデシル－Ｎ、Ｎ、Ｎ－（ヒドロキシエチルカルボキシメチル）－２－イミダゾリンナトリウム、２－ココイル－２－イミダゾリニウムヒドロキサイド－１－カルボキシエチロキシ２ナトリウム塩等）、非イオン界面活性剤（エーテル型非イオン界面活性剤、エーテルエステル型非イオン界面活性剤、エステル型非イオン界面活性剤、ブロックポリマー型非イオン界面活性剤、含窒素型非イオン界面活性剤、ステアリン酸グリセリル、ステアリン酸グリセリル（ＳＥ）、ジステアリン酸ポリグリセリル－３メチルグルコース、クエン酸ステアリン酸グリセリル、ラウリン酸ポリグリセリル－１０、ステアリン酸ＰＥＧ－１５グリセリル、ステアリン酸ＰＥＧ－５グリセリル及びジ（クエン酸／ステアリン酸）ポリグリセリル－３、トリイソステアリン酸ＰＥＧ－２０グリセリル）、その他の界面活性剤（天然界面活性剤、タンパク質加水分解物の誘導体、高分子界面活性剤、チタン・ケイ素を含む界面活性剤、フッ化炭素系界面活性剤）等。

　（１０）各種ビタミン類：ビタミンＡ群：レチノール、レチナール（ビタミンＡ１）、デヒドロレチナール（ビタミンＡ２）、カロチン、リコピン（プロビタミンＡ）、ビタミンＢ群：チアミン塩酸塩、チアミン硫酸塩（ビタミンＢ１）、リボフラビン（ビタミンＢ２）、ピリドキシン（ビタミンＢ６）、シアノコバラミン（ビタミンＢ１２）、葉酸類、ニコチン酸類、パントテン酸類、ビオチン類、コリン、イノシトール類、ビタミンＣ群：ビタミンＣ酸又はその誘導体、ビタミンＤ群：エルゴカルシフェロール（ビタミンＤ２）、コレカルシフェロール（ビタミンＤ３）、ジヒドロタキステロール、ビタミンＥ群：ビタミンＥ又はその誘導体、ユビキノン類、ビタミンＫ群：フィトナジオン（ビタミンＫ１）、メナキノン（ビタミンＫ２）、メナジオン（ビタミンＫ３）、メナジオール（ビタミンＫ４）、その他、必須脂肪酸（ビタミンＦ）、カルニチン、フェルラ酸、γ－オリザノール、オロット酸、ビタミンＰ類（ルチン、エリオシトリン、ヘスペリジン）、ビタミンＵ等。
（１１）各種アミノ酸類：バリン、ロイシン、イソロイシン、トレオニン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、リジン、グリシン、アラニン、アスパラギン、グルタミン、セリン、システイン、シスチン、チロシン、プロリン、ヒドロキシプロリン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ヒドロキシリジン、アルギニン、オルニチン、ヒスチジン等や、それらの硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、クエン酸塩、或いはピロリドンカルボン酸のごときアミノ酸誘導体等。
（１２）α－ヒドロキシ酸類：グリコール酸、クエン酸、リンゴ酸、酒石酸、乳酸等、乳酸ナトリウム等。

　（１３）植物エキス類：アシタバ、アスナロ、アセロラ、アセンヤク、アニス、アブラナ、アボカド、アマ、アマチャ、アマチャヅル、アマドコロ、アマランサス（ヒユ、ハゲイトウ、ヒモゲイトウ、センニンコク、スギモリゲイトウ、ホソアオゲイトウ、アオゲイトウ、ハリビユ、アオスズラン、アマラントウス・ヒポコンドリアクス）、アリストロメリア（ユリズイセン）、アルテア、アルニカ、アルピニア、カツマダイ、アロエ、アロエベラ、アンソッコウ、イチゴ、イチジク、イチョウ、イネ、イブキジャコウソウ、イラクサ、ウーロン茶、ウイキョウ、ウグイスカグラ、ウコン、ウスベニアオイ、ウド又はシシウド、ウニャデガト、ウメ、ウンシュウミカン、ウンボク、エストラゴン、エゾウコギ、オウレン、オオバコ、オオミサンザシ又はサンザシ、オオムギ、オクラ、オタネニンジン又はトチバニンジン、オトギリソウ、コゴメバオトギリソウ、セイヨウオトギリソウ、オドリコソウ、オニドコロ、トコロ、ナガドコロ、オランダカラシ、オリーブ、オレガノ、オレンジ、カイケイジオウ、カカオ、カキ、カーネーション、カノコソウ、カバ、カバノキ、シダレカンバ、ガーベラ、カボチャ、カミツレ、ローマカミツレ、カムカム、カラー、ガラナ、カラホオ、カワラヨモギ、カンゾウ、キイチゴ（エゾイチゴ、オランダイチゴ、エビガライチゴ、ナワシロイチゴ、モミジイチゴ、ヨーロッパキイチゴ）、キウイ、キキョウ、キク（シマカンギク、チョウセンノギク）、キダチアロエ、キンカン、グアバ、クズ、クマザサ、クララ、クランベリー、クリ、グレープフルーツ、ヒキオコシ、クローブ、グンバイナズナ（セキメイ、セキメイシ）、ゲッケイジュ、ケナシサルトリイバラ、ゲンチアナ、ゲンノショウコ、コウスイハッカ、コウチャ、コガネバナ、ココヤシ、ゴシュユ、ゴショイチゴ、コショウ、コスモス、コーヒー、ゴボウ、ゴマ、マツブサ、コムギ、米、米糠、コンニャク、コンフリー、ソメイヨシノ、タカネザクラ、カスミザクラ、サクランボ、ザクロ、ササ、サザンカ、サツマイモ、サトウキビ、サトウダイコン、サフラン、ザボン、サボンソウ、サルビア、サンシュユ、サンショウ、シアノキ、シイタケ、シカクマメ、ジキタリス、シソ、アオジソ、チリメンジソ、カタメンジソ、ジャノヒゲ、ジュズダマ、ショウガ、ショウブ、シロツメクサ、シロトウアズキ、シロバナイリス、スイカ、スイカズラ、ステビア、ストロベリー、スモモ、セイヨウカラマツ、セイヨウキズタ、セイヨウグルミ、セイヨウサンザシ、セイヨウタンポポ、セイヨウトチノキ、セイヨウナシ、セイヨウニワトコ、ゼニアオイ、セリ、セロリ、センキュウ、センダン、センブリ、ソラマメ、ダイオウ、大根、大豆、ダイダイ、タイム、タチジャコウソウ、タチドコロ、タマネギ、ダリア、タンジン、タンポポ、チェリー、チューリップ、チョウセンアザミ、ツキミソウ、ツバキ、ツボクサ、ツメクサ、ツユクサ、テングサ、テンチャ、テンダイウヤク、トウガン、トウガラシ、トウキ、トウキンセンカ、トウサイカチ、トウナベナ、トウモロコシ、チョウセンリンドウ、ドクダミ、トマト、トルコキキョウ、トルメンチラ、ナガイモ、ヤマノイモ、ナギイカダ、ナツメ、ニクズク、ニワトコ、ニンニク、ノイバラ、ノコギリソウ、ノバラ、ノモモ、パイナップル、ハイビスカス（ブッソウゲ、フウリンブッソウゲ、ローゼル）、バジル、ハス、パセリ、ハダカムギ、バタタ、ハチク、ハッカ、ハトムギ、バナナ、ハナハッカ、パパイヤ、ハマナス、ハマメリス、バラ、ヒガンバナ、ピスタチオ、ビート、ヒノキ、ヒマシ、ヒマワリ、ビロウドアオイ、ヒロハオキナグサ、ビワ、プーアル茶、フウトウカズラ、フキ、フキタンポポ、ブドウ、ブナ、トウチュウカソウ、ブラックベリー、プラム、ブルーベリー、プルーン、ベニバナ、ベンケイソウ、ホウサイラン、ホウセンカ、ホウノキ、ボウフウ、ホウレンソウ、ホオズキ、ホオノキ、ボダイジュ、ボタン、ボタンピ、ホップ、ホホバ、マオウ、マカ、マカデミアナッツ、マタタビ、マツカサ、松、マルベリー、マルメロ、マレイン、マンゴー、マンダリン、マンネンタケ、ミラクルフルーツ、ムクノキ、ムクロジ、ムラサキ、ムラサキシキブ、メリッサ、メロン、モチノキ、モッコウ、モモ、モロヘイヤ、ヤグルマソウ、ヤーコン、ヤシャブシ、ヤツデ、ヤナギ、ヤマモモ、ユーカリ、ユキノシタ、ユズ、ユリ、ヨロイグサ、ヨモギ、ライム、ライムギ、ラカンカ、ラズベリー、ラタニア、ラッキョウ、エシャロット、ラベンダー、リュウガン、リュウゼツラン、リョクチャ、リンゴ、リンドウ、ルバス、スアビシムス、ルリタマアザミ、レイシ、レタス、レッドカーラント、レッドピタヤ、レモン、レモングラス、レンギョウ、シナレンギョウ、レンゲソウ、ロウバイ、ロウヤシ、ロコン、ローガンベリー、ローズマリー、ローズヒップ、ワサビ、ワタフジウツギ、ワレモコウ等から得た植物エキス、または上記植物の細胞を培養して得たエキス。

　（１４）海藻エキス：海藻［緑藻類：クロレラ・ブルガリス、クロレラ・ピレノイドサ、クロレラ・エリプソイデイア、アオノリ（ウスバアオノリ、スジアオノリ、ヒラアオノリ、ボウアオノリ、ホソエダアオノリ）、アナアオサ（アオサ）］、海藻［褐藻類：コンブ（マコンブ、リシリコンブ、ホソメコンブ、ミツイシコンブ）、ワカメ、ヒロメ、アオワカメ、ジャイアントケルプ（マクロシスティス・ピリフェラ、マクロシスティス・インテグリフォリア、ネオシティス・ルエトケアーナ）、ヒジキ、ヒバマタ、ウミウチワ、ウスバウミウチワ、キレバノウミウチワ、アカバウミウチワ、コナウミウチワ、オキナウチワ、ウスユキウチワ、エツキウミウチワ］、海藻［紅藻類：ヒジリメン、マクサ（テングサ）、ヒラクサ、オニクサ、オバクサ、カタオバクサ、ヤタベグサ、ユイキリ、シマテングサ、トサカノリ、トゲキリンサイ、アマクサキリンサイ、キリンサイ、ビャクシンキリンサイ、ツノマタ、オオバツノマタ、トチャカ（ヤハズツノマタ）、エゾツノマタ、トゲツノマタ、ヒラコトジ、コトジツノマタ、イボツノマタ、マルバツノマタ、ヒラコトジ、スギノリ、シキンノリ、カイノリ、ヤレウスバノリ、カギウスバノリ、スジウスバノリ、ハイウスバノリ、アカモミジノリ、スサビノリ］等から得た海藻エキス、または上記海藻の細胞を培養して得たエキス。

　（１５）動物エキス：鶏冠抽出物、牛又は豚、人の胎盤抽出物、牛又は豚の胃、十二指腸、腸、脾臓の抽出物若しくはその分解物、牛又は豚の脳組織の抽出物、牛・豚又は魚類のコラーゲン加水（酸、アルカリ、酵素等）分解物や水溶性コラーゲン又はアシル化コラーゲン等のコラーゲン誘導体、牛又は豚のエラスチン又はエラスチン加水分解物（酸、アルカリ、酵素等）又は水溶性エラスチン誘導体、ケラチン及びその分解物又はそれらの誘導体、シルク蛋白及びその分解物又はそれらの誘導体、豚又は牛血球蛋白分解物（グロビンペプチド）、牛又は豚へモグロビン分解物（ヘミン、ヘマチン、ヘム、プロトヘム、ヘム鉄等）、牛乳、カゼイン及びその分解物又はそれらの誘導体、脱脂粉乳及びその分解物又はそれらの誘導体、ラクトフェリン又はその分解物、鶏卵成分、魚肉分解物、核酸関連物質（リボ核酸、デオキシリボ核酸）等から得た動物エキス、または上記動物の細胞を培養して得たエキス。

　（１６）微生物培養代謝物：　酵母代謝物、酵母菌抽出エキス、細菌代謝物、細菌抽出エキス、カビ又は放線菌代謝物、カビ又は放線菌抽出エキス、納豆菌代謝物、納豆抽出エキス、米発酵エキス、米糠（赤糠、白糠）発酵エキス、ユーグレナ抽出物又はその分解物又はそれら水溶性誘導体、トレハロース又はその誘導体、生乳又は脱脂粉乳の乳酸発酵物、マメ科植物の乳酸菌発酵物、ココヤシ属植物の乳酸菌発酵物等。

　（１７）無機顔料：無水ケイ酸、ケイ酸マグネシウム、タルク、カオリン、ベントナイト、マイカ、雲母チタン、オキシ塩化ビスマス、酸化ジルコニウム、酸化マグネシウム、酸化亜鉛、酸化チタン、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム、黄酸化鉄、ベンガラ、黒酸化鉄、グンジョウ、酸化クロム、水酸化クロム、カーボンブラック、カラミン等。

　（１８）紫外線吸収／遮断剤：ベンゾフェノン誘導体（２－ヒドロキシ－４－メトキシベンゾフェノン、２－ヒドロキシ－４－メトキシベンゾフェノン－５－スルホン酸、２－ヒドロキシ－４－メトキシベンゾフェノン－５－スルホン酸ナトリウム、ジヒドロキシジメトキシベンゾフェノン、ジヒドロキシジメトキシベンゾフェノン－スルホン酸ナトリウム、２，４－ジヒドロキシベンゾフェノン、テトラヒドロキシベンゾフェノン等）、パラアミノ安息香酸誘導体（パラアミノ安息香酸、パラアミノ安息香酸エチル、パラアミノ安息香酸グリセリル、パラジメチルアミノ安息香酸アミル、パラジメチルアミノ安息香酸オクチル等）、メトキシ桂皮酸誘導体（パラメトキシ桂皮酸エチル、パラメトキシ桂皮酸イソプロピル、パラメトキシ桂皮酸オクチル、パラメトキシ桂皮酸２－エトキシエチル、パラメトキシ桂皮酸ナトリウム、パラメトキシ桂皮酸カリウム、ジパラメトキシ桂皮酸モノ－２－エチルヘキサン酸グリセリル等）、サリチル酸誘導体（サリチル酸オクチル、サリチル酸フェニル、サリチル酸ホモメンチル、サリチル酸ジプロピレングリコール、サリチル酸エチレングリコール、サリチル酸ミリスチル、サリチル酸メチル等）、アントラニル酸誘導体（アントラニル酸メチル等）、ウロカニン酸誘導体（ウロカニン酸、ウロカニン酸エチル等）、クマリン誘導体、アミノ酸系化合物、ベンゾトリアゾール誘導体、テトラゾール誘導体、イミダゾリン誘導体、ピリミジン誘導体、ジオキサン誘導体、カンファー誘導体、フラン誘導体、ピロン誘導体、核酸誘導体、アラントイン誘導体、ニコチン酸誘導体、ビタミンＢ６誘導体、ウンベリフェロン、エスクリン、桂皮酸ベンジル、シノキサート、オキシベンゾン、ジオキシベンゾン、オクタベンゾン、スリソベンゾン、ベンゾレソルシノール、アルブチン、グアイアズレン、シコニン、バイカリン、バイカレイン、ベルベリン、ネオヘリオパン、エスカロール、酸化亜鉛、タルク、カオリン等。

　（１９）美白剤：パラアミノ安息香酸誘導体、サルチル酸誘導体、アントラニル酸誘導体、クマリン誘導体、アミノ酸系化合物、ベンゾトリアゾール誘導体、テトラゾール誘導体、イミダゾリン誘導体、ピリミジン誘導体、ジオキサン誘導体、カンファー誘導体、フラン誘導体、ピロン誘導体、核酸誘導体、アラントイン誘導体、ニコチン酸誘導体、ビタミンＣ又はその誘導体（ビタミンＣリン酸エステルマグネシウム塩、ビタミンＣグルコシド等）、ビタミンＥ又はその誘導体、コウジ酸又はその誘導体、オキシベンゾン、ベンゾフェノン、アルブチン、グアイアズレン、シコニン、バイカリン、バイカレイン、ベルベリン、胎盤エキス、エラグ酸、ルシノール、ハイドロキノン等。
（２０）収斂剤：コハク酸、アラントイン、塩化亜鉛、硫酸亜鉛、酸化亜鉛、カラミン、パラフェノールスルホン酸亜鉛、硫酸アルミニウムカリウム、レゾルシン、塩化第二鉄、タンニン酸（カテキン化合物を含む）等。
（２１）抗酸化剤：ヒドロキシチロソール、パラヒドロキシアニソール、没食子酸プロピル、セサモール、セサモリン、ゴシポール、プロポリス等。
（２２）抗炎症剤：インドメタシン、サリチル酸、サリチル酸ナトリウム、アセチルサリチル酸、塩酸ジフェンヒドラミン、ｄ－カンフル、ｄｌ－カンフル、ヒドロコルチゾン、グアイアズレン、カマズレン、マレイン酸クロルフェニラミン、グリチルリチン酸又は甘草エキス等。

　（２３）香料：ジャコウ、シベット、カストリウム、アンバーグリス、アニス精油、アンゲリカ精油、イランイラン精油、イリス精油、ウイキョウ精油、オレンジ精油、カナンガ精油、カラウェー精油、カルダモン精油、グアヤクウッド精油、クミン精油、黒文字精油、ケイ皮精油、シンナモン精油、ゲラニウム精油、コパイババルサム精油、コリアンデル精油、シソ精油、シダーウッド精油、シトロネラ精油、ジャスミン精油、ジンジャーグラス精油、杉精油、スペアミント精油、西洋ハッカ精油、大茴香精油、チュベローズ精油、丁字精油、橙花精油、冬緑精油、トルーバルサム精油、バチュリー精油、バラ精油、パルマローザ精油、桧精油、ヒバ精油、白檀精油、プチグレン精油、ベイ精油、ベチバ精油、ベルガモット精油、ペルーバルサム精油、ボアドローズ精油、芳樟精油、マンダリン精油、ユーカリ精油、ライム精油、ラベンダー精油、リナロエ精油、レモングラス精油、レモン精油、ローズマリー精油、和種ハッカ精油等。

　（２４）色素・着色剤：赤キャベツ色素、赤米色素、アカネ色素、アナトー色素、イカスミ色素、ウコン色素、エンジュ色素、オキアミ色素、柿色素、カラメル、金、銀、クチナシ色素、コーン色素、タマネギ色素、タマリンド色素、スピルリナ色素、ソバ全草色素、チェリー色素、海苔色素、ハイビスカス色素、ブドウ果汁色素、マリーゴールド色素、紫イモ色素、紫ヤマイモ色素、ラック色素、ルチン等。

　また、ロツンゲン酸またはロツンゲン酸の塩（ロツンゲン酸ナトリウム、ロツンゲン酸カルシウム、ロツンゲン酸マグネシウム等）を前記成分と併用する皮膚外用剤、および前記成分以外の成分と配合した皮膚外用剤による肌、及び皮膚細胞を白くする方法や、ロツンゲン酸またはロツンゲン酸の塩（ロツンゲン酸ナトリウム、ロツンゲン酸カルシウム、ロツンゲン酸マグネシウム等）を有効成分として含む組成物で、対象者の皮膚を処理することによる美白方法が提供される。本明細書において「美白」とは、色素細胞のチロシナーゼ遺伝子発現を抑制すること、およびそれによるメラニン合成を抑制することを含む。また、「対象者」とは、皮膚のメラニン合成を抑制する必要のある者であって、ヒトを含む動物、とりわけ、ヒトが好ましい。「皮膚を処理する」とは、本発明にかかる上述した皮膚外用剤の剤型に合わせて、皮膚に塗布または適用することをいう。一実施形態では、対象者が紫外線に暴露される前またはその直後に投与または処理することが好ましい。

　本発明の他の実施形態では、上述した美白剤の有効成分として使用するための、ロツンゲン酸又はその塩を含む組成物、当該組成物の皮膚の美白処理のための使用、または美白剤の製造におけるロツンゲン酸又はその塩の使用である。以下に実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。なお、本明細書において、組成物または処方中の各成分の含有量の表示は特に明記されていない場合は「重量％」を示すものとする。

（試験１）ロツンゲン酸のＬＣＭＳ分析
　試薬購入（ｃｈｅｍｓｉｇｍａ社製）したロツンゲン酸０．８９　ｍｇを１ｍｌのメタノールに溶解し、下記条件でＬＣ／ＭＳ分析を行った。
分析機器：ＡＣＱＵＩＴＹ　ＵＰＬＣ　Ｃｌａｓｓ　Ｈ（Ｗａｔｅｒｓ社製）
質量分析計：Ｘｅｖｏ　Ｇ２－Ｓ－ＱＴｏｆ（Ｗａｔｅｒｓ社製）
フォトダイオードアレイ：（２１０～５００ｎｍ）
カラム：ＡＣＱＵＩＴＹ　ＵＰＬＣ　ＢＥＨ　Ｃ１８　（５０×２．１ｍｍ、Ｉ．Ｄ．２．１μｍ）
流速：０．８　ｍＬ／ｍｉｎ
カラム温度：５５℃
溶媒；Ａ液：０．１％ギ酸水溶液、Ｂ液：０．１％ギ酸アセトニトリル溶液
グラジエント；
０ｍｉｎ；％Ａ液／％Ｂ液＝９５／５　→　６ｍｉｎ；％Ａ液／％Ｂ液＝０／１００
６ｍｉｎ；％Ａ液／％Ｂ液＝０／１００　→　７ｍｉｎ；％Ａ液／％Ｂ液＝０／１００

（試験結果）
　結果は図１に示した通り、ポジティブでｍ／ｚ：９７７．７、ネガティブでｍ／ｚ：４８７．２であった。ロツンゲン酸の分子量（文献値）は４８８．７（Ｃ_３０Ｈ_４８Ｏ_５）であることから、ポジティブで検出した質量は［２Ｍ＋Ｈ］^＋、ネガティブで検出した質量は［Ｍ－Ｈ］^－であった。

（試験２）ロツンゲン酸のＮＭＲ分析
　ロツンゲン酸（ｃｈｅｍｓｉｇｍａ社製）１３．０ｍｇをＣ_５Ｄ_５Ｎ（６００　μＬ）に溶かし、^１３Ｃ－ＮＭＲ測定を行った。さらに上記ロツンゲン酸溶液をＣ_５Ｄ_５Ｎで６倍に薄め^１Ｈ－ＮＭＲ測定も行った。

（試験結果）
　結果は表１に示した化学シフトの値を示し、＊既報（Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　２８（５）　１４７９－１４８２（１９８９））に記載された値と一致したことから化合物はロツンゲン酸であることが確認された。

ロツンゲン酸の化学構造と^１３ＣＮＭＲ物性値

（試験３）ロツンゲン酸の塩の調整
　ロツンゲン酸（ｃｈｅｍｓｉｇｍａ社製）を常法により、ロツンゲン酸のナトリウム塩、カルシウム塩、を調製した。

（試験４）チロシナーゼ発現抑制（ロツンゲン酸、ウルソール酸）
　Ｂ１６メラノーマ細胞（ＲＩＫＥＮ　ＢＲＣ）を６０ｍｍのｄｉｓｈにＤ－ＭＥＭ（Ｗａｋｏ社）にて、２４時間培養後、試料（ロツンゲン酸（ｃｈｅｍｓｉｇｍａ社製）、ウルソール酸（ＩＮＤＯＦＩＮＥ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ社製）をそれぞれ終濃度０．８μＭとなるように、コントロール（比較対照）はＤＭＳＯを終濃度１％となるように）を添加して１時間培養を行い、その後α－ＭＳＨ（ＳＩＧＭＡ－ＡＬＤＲＩＣＨ社）を終濃度５０ｎｇ／ｍＬとなるように添加した。α－ＭＳＨの添加後２４時間で細胞からＲＮｅａｓｙ　Ｍｉｎｉ　Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ社）を用いて抽出を行い、得られたＲＮＡを鋳型にＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ　ＲＴ　ｒｅａｇｅｎｔ　Ｋｉｔ（タカラバイオ社）を用いてｃＤＮＡを合成した。このｃＤＮＡを用いて定量ＰＣＲ法によりチロシナーゼ遺伝子の発現量を測定した。

　尚、定量ＰＣＲ法にはＳＹＢＲ　Ｐｒｅｍｉｘ　Ｅｘ　Ｔａｑ（タカラバイオ社）とＴｈｅｒｍａｌ　Ｃｙｃｌｅｒ　Ｄｉｃｅ　Ｒｅａｌ　Ｔｉｍｅ　Ｓｙｓｔｅｍ（タカラバイオ社）を用いた。内部標準としては、ハウスキーピング遺伝子であるＲＰＳ１８遺伝子の発現量を定量し、ＲＰＳ１８に対する相対発現量を算出してＴｙｒｏｓｉｎａｓｅ遺伝子発現量とした。ＰＣＲ用プライマーにはタカラバイオ社のＴｙｒｏｓｉｎａｓｅ、ＲＰＳ１８を用いた。さらにロツンゲン酸については濃度依存性を確認するため、終濃度０．１μＭ、４μＭ、１０μＭの濃度についても同様に行った。

（試験結果）
　結果は、図２に示した通りである。α－ＭＳＨの添加でＴｙｒｏｓｉｎａｓｅ遺伝子の発現が亢進された条件下で、ウルソール酸に遺伝子発現の抑制効果が認められなかった。一方、ロツンゲン酸は、０．８μＭの濃度にてＴｙｒｏｓｉｎａｓｅ遺伝子発現の大きな抑制効果が認められた。なお、ロツンゲン酸が０．１μＭの条件でも、０．８μＭの濃度の場合に比べて若干低いものの当該抑制効果が認められた。また、試験３により得たロツンゲン酸のナトリウム塩、カルシウム塩についても終濃度０．８　μＭで添加し、試験４を行ったところ、同様な効果が得られた。

（試験５）モルモットを使ったメラニン生成抑制の測定
（１）被検動物及び群構成
　ヒトと同様に紫外線照射により色素沈着が生じる動物種である有色モルモットを用いて、株式会社日本バイオリサーチセンターにて紫外線誘発による色素沈着抑制試験を行った。試験サンプル及び紫外線照射方法の異なる以下の６つの群に分けた。
　　群　　　　被験サンプル及び紫外線照射の有無　　　　　　　　動物数
　第１群　　　非塗布部位（照射）、非塗布部位（非照射）　　　　　　６
　第２群　　　非塗布部位（照射）、媒体（照射）　　　　　　　　　　６
　第３群　　　０．９％ロツンゲン酸（照射）、媒体（照射）　　　　　６
　第４群　　　０．０９％ロツンゲン酸（照射）、媒体（照射）　　　　６
　第５群　　　０．００９％ロツンゲン酸（照射）、媒体（照射）　　　６

（２）被験サンプル
　富有柿の蔕を粉末化し、有機溶媒にて抽出、分画及び精製して真空乾燥粉末を取得した。上記試験１及び２と同様の方法でＨＰＬＣピーク及びＮＭＲ分析を行った結果、純粋なロツンゲン酸であることを確認した。エタノール：プロピレングリコール：精製水＝６：２：２の媒体にそれぞれ、重量比で０．９％、０．０９％及び０．００９％となるように溶解し、ロツンゲン酸を含む被験サンプルとして試験に供した。また、コントロールには、６０％（Ｗ／Ｗ）エタノール、２０％（Ｗ／Ｗ）プロピレングリコール水溶液を被験サンプルとして使用した。

（３）紫外線照射方法
　各群６匹のモルモットを使用し、それぞれの背部を電気バリカン及び電気シェバーで除毛し、正中を挟んで左右の、２×２ｃｍの正方形２か所を測定部位とした。紫外線照射には紫外線照射装置にて、ＵＶ－Ｂ（波長２５０～３５０ｎｍ）を最小紅斑量照射した。紫外線照射は、初回投与日（この日を０日とする。）と、それ以降は初回投与後２日及び４日の計３回行った。

（４）被験サンプルの投与条件
　投与濃度は０．１ｍＬ／部位とした。投与回数は、いずれも１日１回、投与期間は２８日間連続とした。なお、紫外線照射日は紫外線照射後に、色素沈着の測定部は測定後に投与を行った。

（５）測定法
　初回投与日の投与前（照射前）、投与１４日、２１日、２８日に、色彩色差計を用いて、照射部位についてＬａｂ表色系で表示し、Ｌ値（明度）を評価に用いた。ΔＬ値（観察日のＬ値－照射前のＬ値）を求めた。また、各群のＬ値を用いて、群ごとで対応のあるｔ検定により有意差検定を行った

（６）Ｌ値の評価結果
　被験モルモットの紫外線（ＵＶ－Ｂ）照射時の皮膚色（ΔＬ値）の推移を図３に示した。紫外線照射開始後、色素沈着によるＬ値の低下が認められた。紫外線照射量の変動による測定を避けるため、各群において媒体のみを塗布したコントロールとの比較を行った。本発明に係るロツンゲン酸を０．９重量％含む被験サンプルを塗布した第３群は、コントロールの媒体に比べて有意にメラニン色素沈着抑制の効果を示した（ｐ＜０．０５）。また、ロツンゲニン酸を０．０９重量％又は０．００９重量％含む被験サンプルを塗布した第４群及び第５群は、ｔ検定では有意差が認められなかったものの、濃度依存的にＬ値の低下が改善されていること、及び上述した試験４の結果から０．００００４重量％（約０．８μＭ）でもチロシナーゼ発現抑制作用を示したことから、０．００９～０．９重量％の範囲内でメラニン生成抑制作用を有すると判断した。

（処方例）
　ロツンゲン酸又はその塩を用いた処方例を以下に記載するが、本発明の配合に限定したものではない。

（試験６）使用感試験
　ロツンゲン酸（ｃｈｅｍｓｉｇｍａ社製）、ラウリル硫酸Ｎａ、精製水を３０：３：６７の重量比で分散させ、高圧ホモジナイザーによって湿式粉砕した。粉砕条件は処理圧力：２００ＭＰａ、処理回数：８０回で行い、得られた懸濁液を処方例６をもとに、下記表２に示した処方ａ～ｃ３種の美白クリームを作製し、専門パネラーによる使用感の評価を行った。なお、使用感の評価項目は塗布時ののび、塗布後のなめらかさである。

（試験結果）
　結果は下記表３の通り、ロツンゲン酸の質量濃度が１％、５％では平均スコアが３以上であるが、７％では平均スコアが２以下となり、外用剤中のロツンゲン酸の質量濃度が５％以下であれば、使用感のよい外用剤が得られるものと予測する。
（スコア基準）
　５：非常に良い使用感だった
　４：良好な使用感だった
　３：普通な使用感だった
　２：あまり良好な使用感ではかった
　１：良好な使用感はなかった

（試験７）使用効果試験
　本発明の処方例６をもとに、下記表４に示した処方Ａ～Ｄ４種の美白クリームを作製した。成人男女２０名に対して、作製した美白クリームを顔に１日２回塗布、１ヶ月間の使用試験を行った。なお、被験者は５人ずつにわけ、シミや色素沈着について使用前に比べて評価した。

（試験結果）
　結果は下記表５の通り、ロツンゲン酸を配合した処方が対照品よりも高く、特に０．１％配合した処方Ｂが他の処方よりも高いことが認められた。
　有　　効　：使用前よりもシミや色素沈着が改善された。
　やや有効　：使用前よりもシミや色素沈着がやや改善された。
　無　　効　：使用前と変化なし。

Claims

　ロツンゲン酸またはその塩を、美白用有効成分として０．００００４～５重量％含有する美白剤。
　ロツンゲン酸またはその塩を、美白用有効成分として０．００００４～５重量％含有する美白用皮膚外用剤。
　前記ロツンゲン酸またはその塩の含有量が、少なくとも０．００９重量％である請求項１に記載の美白剤。
　前記ロツンゲン酸またはその塩の含有量が、少なくとも０．００９重量％である請求項２に記載の美白用皮膚外用剤。
　ロツンゲン酸またはその塩を有効成分として含む組成物の有効量を、その必要のある対象者に投与することを含む皮膚の美白方法。
　ロツンゲン酸またはその塩を少なくとも０．００９重量％含む組成物で皮膚を処理することを含む皮膚の美白方法。
　前記皮膚の処理が、前記皮膚が紫外線に暴露される前またはその直後に行われる請求項６に記載の美白方法。
　美白剤または美白用皮膚外用剤の有効成分として使用するための、ロツンゲン酸またはその塩を含む組成物。
　ロツンゲン酸またはその塩を有効成分として含む組成物の、皮膚の美白処理のための使用。
　美白剤または美白用皮膚外用剤の製造における、ロツンゲン酸またはその塩の使用。