CN111032009A - 美白剂、美白用皮肤外用剂以及皮肤的美白方法 - Google Patents

Abstract

本发明发现一种新型美白成分，其目的在于提供含有新型美白成分的美白剂、美白用皮肤外用剂。为了发现新型美白成分，对尚未研究美白效果的多种化合物进行试验，其结果发现，3β,19α,24‑三羟基乌索‑12‑烯‑28‑酸具有高的美白效果。因此，本发明人等提供含有3β,19α,24‑三羟基乌索‑12‑烯‑28‑酸的美白剂、美白用皮肤外用剂。

Description

美白剂、美白用皮肤外用剂以及皮肤的美白方法

技术领域

本申请基于2017年8月23日在日本提出申请的日本特愿2017-160160号主张优先权，该申请记载的内容全部通过参照而直接援引于本说明书。另外，在本申请中引用的全部的专利、专利申请以及文献中记载的内容全部通过参照而直接援引于本说明书。

本发明涉及含有3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸或其盐作为有效成分的美白剂、美白用皮肤外用剂以及使用其的皮肤的美白方法。

背景技术

在美容上，在皮肤上产生的斑点、雀斑等色素沉淀被视为问题，提出将抑制色素沉淀的熊果苷、抗坏血酸衍生物、曲酸等成分配合于皮肤外用剂中。然而，由于大气污染或臭氧层破坏而存在到达表皮的紫外线逐年增加的趋势，与之对应的色素沉淀的预防、改善需要有效的新型成分(专利文献1～3)。

因此，作为以往的变为美白成分的成分，虽然报道了例如来自胡桃的多酚等显示出美白效果等，但无法确认比以往的美白成分优异的效果(专利文献4)。

【现有技术文献】

【专利文献】

专利文献1：日本特开平9-20610号公报

专利文献2：日本特开平4-182492号公报

专利文献3：日本特开平2-200622号公报

专利文献4：日本特开2008-81408号公报

发明内容

(发明所要解决的课题)

本发明发现一种新型的美白成分，其目的在于提供含有新型美白成分的美白剂、美白用皮肤外用剂以及皮肤的美白方法。

(用于解决课题的技术方案)

为了发现新型美白成分，对尚未研究美白效果的多种化合物进行了试验，其结果发现，3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸具有高的美白效果。因此，本发明人等提供含有3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸的美白剂、美白用皮肤外用剂。即，本发明包括以下的实施方式。

(1)一种美白剂，其含有0.00004～5重量％的3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸或其盐作为美白用有效成分。

(2)一种美白用皮肤外用剂，其含有0.00004～5重量％的3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸或其盐作为美白用有效成分。

(3)根据(2)记载的美白剂或美白用皮肤外用剂，其中，上述3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸的含量至少为0.009重量％，优选为0.09重量％，更优选为0.9重量％。

(4)一种皮肤的美白方法，其包括将含有3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸或其盐作为有效成分的组合物以有效量给与需要上述组合物的对象者的工序。

(5)一种皮肤的美白方法，其包括利用至少含有0.009重量％，优选为0.09重量％，更优选为0.9重量％的3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸或其盐的组合物处理皮肤的工序。

(6)根据(4)或(5)的美白方法，其中，上述皮肤的处理在上述皮肤暴露于紫外线之前进行或暴露于紫外线之后立即进行

(7)一种组合物，其含有作为美白剂或美白用皮肤外用剂的有效成分使用的3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸或其盐。

(8)含有3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸或其盐作为有效成分的组合物在皮肤的美白处理中的用途。

(9)3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸或其盐在美白剂或美白用皮肤外用剂的制造中的用途。

根据本发明，可提供安全且优异的美白剂、美白用皮肤外用剂。

附图说明

图1是3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸的LC/MS图表。

图2是表示3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸的酪氨酸酶基因表达抑制作用的图。

图3是表示对于受试样品涂布和紫外线照射的豚鼠皮肤的亮度的推移状况的图。纵轴表示将紫外线照射前的L值设为0时，从紫外线照射前至开始涂布受试样品后的L值之差(ΔL)，横轴表示天数。

具体实施方式

本发明中使用的由以下化学结构式表示的3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸(Rotungenic acid)可作为试剂而市售，或者按照公知的文献(例如，Nakatani等，Phytochemistry，28(5)1479-1482(1989))记载的方法从植物、动物、菌体等中提取、合成等而得到，也可以进一步使用柱等对其进行精制。此外，作为3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸的盐，可优选例示钠、钾、钙、镁、锌等一价或二价以上的无机金属盐、铵盐、三乙醇胺盐、三乙胺盐等有机胺盐、赖氨酸盐、精氨酸盐等碱性氨基酸盐等。此外，也可以是3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸的酯，可优选例示碳原子数1～30的脂肪族或芳香族的酯。例如，如果为脂肪族的酯，则可优选例示甲基酯、乙基酯、己基酯、2-乙基己基酯、月桂酯、硬脂酯、山萮酯、异硬脂基酯、油基酯等，如果为芳香族酯，则可优选例示苄基酯、苯乙基酯、肉桂基酯等。上述酯可通过使亚硫酰氯等卤化试剂与形成酯的醇反应，转换为卤化物，然后在碱存在下与3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸缩合来制造。

在制造本发明的美白剂、美白用皮肤外用剂的方面，作为使用的3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸或3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸的盐的形状，可以是液状、固体状、粉末状、糊状等任意形状，在实施本发明时可任意选择最佳的形状。

3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸和/或药学上可接受的盐只要在能够确认抑制酪氨酸酶的表达的范围则没有特别限制，优选为0.00004～5重量％。这是基于以下情况：在后述的实施例中，与以0.000005重量％(约0.1μM)添加3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸时的对于B16黑素瘤细胞的酪氨酸酶基因表达的抑制效果相比，添加0.00004重量％(约0.8μM)时的抑制效果更高，并且与配合7重量％的3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸的情况相比，配合5重量％时的外用剂的使用感较好。因此，在本发明的美白剂或美白用皮肤外用剂的优选方式中，至少含有0.001重量％的3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸或其盐即可(参照处方例1～32)，更优选至少为0.009重量％、0.09重量％或0.9重量％(参照试验5)。

本发明的美白剂、美白用皮肤外用剂的剂型是任意的，可以制成安瓿状、胶囊状、粉末状，颗粒状、丸剂、片剂状、固体状、液状、凝胶状、气泡状、乳液状、乳霜状、软膏状、片状、慕斯状、粉末分散状、多层状、气溶胶状等。

作为具体的美白用皮肤外用剂(也包括用于动物用途的制剂)，可举出安瓿、胶囊，丸剂、片剂、粉末、颗粒、固体、液体、凝胶、气泡、乳液、片材、合剂(mist)、喷雾剂等在利用上适当形态的1)医药品类、2)准医药品类、3)局部用或全身用皮肤用化妆品类(例如化妆水、乳液、乳霜、软膏、洗液(lotion)、油、面膜等基础化妆材料、固体皂、液体皂、洗手液等洗脸材料或皮肤清洁材料、按摩用剂、清洁用剂、除毛剂、脱毛剂、剃须处理材料、须后水、须前水、剃须膏、粉底、口红、腮红、眼影、眼线、睫毛膏等化妆材料(メークアップ化粧料)、香水类、美甲剂、指甲油、指甲油去除剂、巴布剂、膏药剂、胶带剂、片材剂、贴剂、气溶胶剂等)、4)应用于头皮·头发的药用或/和化妆用制剂类(例如，香波剂、漂洗剂、头发护理剂、头发预护理剂、烫发液、染发材料、整发材料、发根营养剂、育发·养发材料、巴布剂、膏药剂、胶带剂、片材剂、气溶胶剂等)、(5)投入到洗澡水而使用的沐浴用剂、6)另外，腋臭防止剂、除臭剂、止汗剂、卫生用品、卫生棉类、湿纸巾等。

作为具体的美白剂的用途主要是配合在外用剂中，可配合于上述美白用皮肤外用剂中举出的形态中。本发明涉及的美白剂的有效成分可根据接受给药的对象的年龄、性别、体重和给药路径或开处方人员的判断而改变。基于这样的因素的适用量的决定在本领域技术人员的水准内，其1天给药量例如可以为0.01mg/kg/天～10mg/kg/天，更具体而言可以为0.5mg/kg/天～5mg/kg/天，但并不限定于此。

作为上述皮肤外用剂、美白剂、美白用皮肤外用剂，只要在不损害本发明的效果的范围内，就可配合在通常外用剂中使用的成分，以下例示可配合的成分。

(1)各种油脂类：牛油果油、杏仁油、茴香油、紫苏油、橄榄油、芝麻油、可可脂、洋甘菊油、红花油、乳木果油、大豆油、山茶油、玉米油、菜籽油、蓖麻油、棉籽油、花生油、海龟油、貂油、蛋黄油、棕榈油、棕榈仁油、椰子油、牛脂、角鲨烯、角鲨烷、姥鲛烷或这些油脂类的氢化物(硬化油等)、亚麻籽油等。

(2)蜡类：蜂蜡、鲸蜡、羊毛脂、小烛树蜡、褐煤蜡、米蜡等。

(3)矿物油：液体石蜡、凡士林、石蜡等。

(4)脂肪酸类：月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、山萮酸、油酸、油酸钠、亚油酸、亚麻酸、二十二碳六烯酸、二十碳五烯酸、12-羟基硬脂酸、十一碳烯酸、羊毛脂脂肪酸、己酸、2-乙基丁酸、异戊酸等。

(5)醇类：乙醇、异丙醇、月桂醇、鲸蜡醇、硬脂醇、油醇、羊毛脂醇、胆固醇、植物甾醇、苯氧基乙醇等。

(6)多元醇类：乙二醇、乙二醇单乙醚、乙二醇单丁醚、聚乙二醇、丙二醇、聚丙二醇、1,3-丁二醇、甘油、阿拉伯糖醇、木糖醇、核糖醇、山梨糖醇、甘露糖醇、麦芽糖醇等。

(7)酯类：肉豆蔻酸异鲸蜡酯、肉豆蔻酸异硬脂酯、棕榈酸2-乙基己酯、棕榈酸异鲸蜡酯、棕榈酸异硬脂酯、硬脂酸2-乙基己酯、硬脂酸异鲸蜡酯、油酸异癸酯、油酸辛基十二烷酯、蓖麻油酸辛基十二烷酯、肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、硬脂酸丁酯、月桂酸己酯、肉豆蔻酸肉豆蔻酯、油酸油酯、油酸癸酯、肉豆蔻酸辛基十二烷酯、二甲基辛酸己基癸酯、乳酸鲸蜡酯、乳酸肉豆蔻酯、邻苯二甲酸二乙酯、邻苯二甲酸二丁酯、乙酸羊毛脂、单硬脂酸乙二醇酯、单硬脂酸丙二醇酯、二油酸丙二醇酯等。

(8)胶质、糖类或水溶性高分子化合物：黄原胶、阿拉伯胶、刺槐豆胶(キャブロガム)、瓜尔豆胶、卡拉亚胶、榅桲籽、琼脂、酪蛋白、乳糖、果糖、蔗糖或其酯、海藻糖或其衍生物、糊精、明胶、果胶、淀粉、角叉菜胶、羧甲基几丁质或壳聚糖、加成有环氧乙烷等亚烷基(C2～C4)氧化物的羟基烷基(C2～C4)几丁质或壳聚糖、低分子几丁质或壳聚糖、壳聚糖盐、硫酸化几丁质或壳聚糖、磷酸化几丁质或壳聚糖、海藻酸或其盐、透明质酸或其盐、硫酸软骨素或其盐、肝素、乙基纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素、羧乙基纤维素、羧乙基纤维素钠、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、硝基纤维素、结晶纤维素、聚乙烯醇、聚乙烯基甲基醚、聚乙烯基吡咯烷酮、聚乙烯基甲基丙烯酸酯、聚丙烯酸盐、聚环氧乙烷、聚环氧丙烷等聚环氧烷或其交联聚合物、羧基乙烯基聚合物、聚乙烯亚胺等。

(9)表面活性剂：阴离子表面活性剂(烷基羧酸盐、烷基磺酸盐、烷基硫酸酯盐、烷基磷酸酯盐、月桂酸钠、月桂酸钾、棕榈酸钠、棕榈酸钾、椰子油脂肪酸甲基牛磺酸盐、N-己酰基甲基牛磺酸盐、N-月桂酰甲基牛磺酸盐、N-肉豆蔻酰甲基牛磺酸盐、N-棕榈酰甲基牛磺酸盐、N-硬脂酰甲基牛磺酸盐、N-油酰甲基牛磺酸盐、N-椰油酰谷氨酸盐、N-月桂酰谷氨酸盐、N-肉豆蔻酰谷氨酸盐、N-棕榈酰谷氨酸盐、N-硬脂酰谷氨酸盐、N-油酰谷氨酸盐等)、阳离子表面活性剂(烷基胺盐、烷基季铵盐、氯化硬脂基三甲铵、氯化月桂基三甲铵、烷基三甲铵盐、氯化二硬脂基二甲铵)、两性表面活性剂(羧酸型两性表面活性剂(氨基型、甜菜碱型)、硫酸酯型两性表面活性剂、磺酸型两性表面活性剂、磷酸酯型两性表面活性剂、2-十一烷基-N,N,N-(羟乙基羧甲基)-2-咪唑啉钠、2-椰油酰-2-咪唑啉鎓氢氧化物-1-羧乙氧基二钠盐等)、非离子表面活性剂(醚型非离子表面活性剂、醚酯型非离子表面活性剂、酯型非离子表面活性剂、嵌段聚合物型非离子表面活性剂、含氮型非离子表面活性剂、硬脂酸甘油酯、硬脂酸甘油酯(SE)、二硬脂酸聚甘油-3甲基葡萄糖、柠檬酸硬脂酸甘油酯、月桂酸聚甘油-10酯、硬脂酸PEG-15甘油酯、硬脂酸PEG-5甘油酯和二(柠檬酸/硬脂酸)聚甘油-3酯、三异硬脂酸PEG-20甘油酯)、其它的表面活性剂(天然表面活性剂、蛋白质水解物的衍生物、高分子表面活性剂、含钛·硅的表面活性剂、氟化碳系表面活性剂)等。

(10)各种维生素类：维生素A组：视黄醇、视黄醛(维生素A1)、脱氢视黄醛(维生素A2)、胡萝卜素、番茄红素(维生素原A)，维生素B组：硫胺素盐酸盐、硫胺素硫酸盐(维生素B1)、核黄素(维生素B2)、吡哆醇(维生素B6)、氰钴胺(维生素B12)、叶酸类、烟酸类、泛酸类、生物素类、胆碱、肌醇类，维生素C组：维生素C酸或其衍生物，维生素D组：麦角钙化醇(维生素D2)、胆钙化醇(维生素D3)、二氢速甾醇，维生素E组：维生素E或其衍生物、泛醌类，维生素K组：植物甲萘醌(维生素K1)、甲基甲萘醌(维生素K2)(Menaquinone)、2-甲萘醌(维生素K3)(Menadione)、氢化甲萘醌(维生素K4)、此外，必需脂肪酸(维生素F)、肉碱、阿魏酸、γ-谷维素、乳清酸、维生素P类(芦丁、圣草柠檬素、橙皮苷)、维生素U等。

(11)各种氨基酸类：缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、蛋氨酸、苯基丙氨酸、色氨酸、赖氨酸、甘氨酸、丙氨酸、天冬酰胺、谷酰胺、丝氨酸、半胱氨酸、胱氨酸、酪氨酸、脯氨酸、羟基脯氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、羟基赖氨酸、精氨酸、鸟氨酸、组氨酸等、或它们的硫酸盐、磷酸盐、硝酸盐、柠檬酸盐、或者如吡咯烷酮羧酸之类的氨基酸衍生物等。

(12)α-羟基酸类：乙醇酸、柠檬酸、苹果酸、酒石酸、乳酸等、乳酸钠等。

(13)植物提取物类：由明日叶、罗汉柏、针叶樱桃、阿仙药、大茴香、油菜、牛油果、亚麻、甘茶、绞股蓝、玉竹、苋菜(苋科、雁来红、尾穗苋、千穗谷、繁穗苋、绿穗苋、反枝苋、刺苋、细毛火烧兰、籽粒苋)、六出花属(百合水仙)、蜀葵、山金车花、山姜属、草豆蔻、芦荟、库拉索芦荟、安息香、草莓、无花果、银杏、水稻、伊吹麝香草、荨麻、乌龙茶、茴香、莺神乐(Lonicera gracilipes var.glabra)、姜黄、锦葵(ウスベニアオイ)、土当归或独活、绒毛钩藤(Cat's Claw)、梅子、温州蜜柑(陈皮)、云木香(ウンボク)、龙蒿、刺五加、黄连、车前草、大山楂或山楂、大麦、秋葵、高丽参或竹节参、小连翘、贯叶连翘、西洋小连翘、粉花野芝麻、山萆薢(オニドコロ)、山萆薢(トコロ)、山萆薢(ナガドコロ)、西洋菜、橄榄、牛至、桔子、怀庆地黄(熟地黄)、可可、柿子、康乃馨、缬草、香蒲、桦树、非洲菊、南瓜、洋甘菊、罗马洋甘菊、卡姆果、水芋(Calla)、瓜拉那、厚朴、茵陈蒿、甘草、木莓(库页悬钩子、洋莓、多脉悬钩子、茅莓、黄果悬钩子、覆盆子)、猕猴桃、桔梗、菊花(野菊、朝鲜野菊)、木立芦荟、金橘、番石榴、葛根、维氏熊竹、苦参、蔓越橘、栗子、葡萄柚、蓝萼香茶菜、丁香、菥蓂(遏蓝菜、菥蓂子)、月桂树、土茯苓、龙胆属、老鹳草、香水薄荷、红茶、黄岑、椰子、吴茱萸、覆盆子、胡椒、大波斯菊、咖啡、牛蒡、芝麻、五味子属、小麦、米、米糠、魔芋、聚合草、染井吉野樱、高岭樱、霞樱、樱桃、石榴、赤竹属、山茶花、红薯、甘蔗、甜菜、西红花、朱栾、肥皂草、串红、山茱萸、山椒、乳木果树、香菇、四棱豆、洋地黄、紫苏、青紫苏、皱叶紫苏、单面紫苏、麦冬、薏苡、生姜、菖蒲、白车轴草、相思豆、鸢尾草、西瓜、忍冬、甜叶菊、草莓、李子、西部落叶松、西洋常春藤、西洋胡桃、欧山楂、西洋蒲公英、马栗、西洋梨、欧洲接骨木、锦葵(ゼニアオイ)、芹菜、西芹、川芎、苦楝、当药、蚕豆、大黄、萝卜、大豆、橙(ダイダイ)、百里香、法国百里香、纤细薯蓣、洋葱、大丽花、丹参、蒲公英、樱桃(cherry)、郁金香、朝鲜蓟、月见草、山茶、积雪草、漆姑草、鸭拓草、天草、甜茶、乌药、冬瓜、辣椒、当归、金盏花、皂荚、川续断、玉米、朝鲜龙胆、鱼腥草、番茄、洋桔梗、洋委陵菜、山药、日本薯蓣、假叶树、大枣、肉豆蔻、接骨木、大蒜、野蔷薇(ノイバラ)、蓍草、野蔷薇(ノバラ)、山桃、菠萝、木槿(扶桑花、风铃扶桑花、玫瑰茄)、罗勒、莲、欧芹、青稞、甘薯(バタタ)、淡竹、薄荷、薏苡仁、香蕉、牛至、木瓜、浜梨(Rosa rugosa)、北美金缕梅、玫瑰、石蒜、开心果、甜菜(ビート)、扁柏、蓖麻、向日葵、锦葵(ビロウドアオイ)、白头翁、枇杷、普洱茶、风藤、蜂斗菜、款冬、葡萄、山毛榉、冬虫夏草、黑莓、李子(plum)、蓝莓、西梅、红花、景天、报岁兰、凤仙花、日本厚朴(ホウノキ)、防风、菠菜、酸浆、日本厚朴(ホオノキ)、菩提树、牡丹、牡丹皮、啤酒花、霍霍巴、麻黄、玛咖、澳洲坚果、木天蓼、松果、松、桑椹、榅桲、毛蕊花、芒果、柑橘(Mandarin orange)、灵芝、神秘果(Miracle Fruit)、糙叶树、无患子、紫草、紫珠、香蜂花、甜瓜、全缘冬青、木香、桃、长蒴黄麻、鬼灯檠、菊薯、夜叉五味子、八角金盘、柳树、杨梅、桉树、虎耳草、柚子、百合、白芷、魁蒿(ヨモギ)、青柠、黑麦、罗汉果、覆盆子(Raspberry)、刺球果(Krameria lappacea)、薤白、青葱、薰衣草、龙眼、龙舌兰、绿茶、苹果、龙胆、甜叶悬钩子(ルバス)、甜茶(スアビシムス)、新疆蓝刺头、荔枝、莴苣、红醋栗、红心火龙果、柠檬、柠檬香茅、连翘(レンギョウ)、连翘(シナレンギョウ)、紫云英、腊梅、蜡棕榈(ロウヤシ)、芦根(ロコン)、洛根莓、迷迭香、蔷薇果、辣根、密蒙花、地榆(吾亦红)等得到的植物提取物、或培养上述植物的细胞而得到的提取物。

(14)海藻提取物：由海藻[绿藻类：普通小球藻(Chlorella vulgaris)、蛋白核小球藻(Chlorella pyrenoidosa)、椭圆小球藻(Chlorella ellipsoidea)、浒苔(缘管浒苔、绿潮浒苔、扁浒苔(ヒラアオノリ)、棒青海苔(ボウアオノリ)、多毛浒苔)、孔石莼(石莼)]、海藻[褐藻类：海带(真海带(マコンブ)、利尻海带(リシリコンブ)、细目海带(ホソメコンブ)、三石海带(ミツイシコンブ))、裙带菜、阔叶裙带菜、绿裙带菜、巨藻(Giant kelp)(巨藻(Macrocystis pyrifera)、全缘叶巨藻(Macrocystis integrifolia)、留氏海囊藻(Nereocystis luetkeana))、鹿尾菜、墨角藻、树状团扇藻、南方团扇藻、Padina australisvar.cuneata(キレバノウミウチワ)、包氏团扇藻、大团扇藻、日本团扇藻、小团扇藻、有柄团扇藻(エツキウミウチワ)]、海藻[红藻类：稀毛蜈蚣藻、石花菜(天草(Gelidium elegans Kützing))、日本石花菜、鬼石花菜、鸡毛菜、拟鸡毛菜、Acanthopeltis hirsuta(ヤタベグサ)、鸡脚菜、凝花菜、鸡冠菜、齿状麒麟菜、Eucheuma amakusaense(アマクサキリンサイ)、麒麟菜、珊瑚状麒麟菜、角叉菜、巨角叉菜(Chondrus giganteus)、皱波角叉菜(chondruscrispus)、楔基角叉菜(Chondrus yendoi)、扩大角叉菜(Chondrus armatus)、羽片角叉菜(Chondrus pinnulatus)、长角叉菜(Chondrus elatus Holm.)、异色角叉菜(Chondrusverrucosa)、日本角叉菜(Chondrus nipponicus)、羽片角叉菜(ヒラコトジ，Chondruspinnulatus)、线形软刺藻(Chondracanthus tenellus)、红软刺藻(Chondracanthusteedii)、中间软刺藻(Chondracanthus intermedius)、扇形顶群藻(Acrosoriumflabellatum)、具钩顶群藻(Acrosorium venulosum)、细脉顶群藻(Acrosoriumpolyneurum)、顶群藻(Acrosorium yendoi)、红藻(アカモミジノリ)、条斑紫菜]等得到的海藻提取物、或培养上述海藻的细胞而得到的提取物。

(15)动物提取物：由鸡冠提取物、牛或猪、人的胎盘提取物、牛或猪的胃、十二指肠、肠、脾脏的提取物或者其分解物、牛或猪的脑组织的提取物、牛·猪或鱼类的胶原蛋白水解物(酸、碱、酶等)或水溶性胶原蛋白或酰化胶原蛋白等胶原蛋白衍生物、牛或猪的弹力蛋白或弹力蛋白水解物(酸、碱、酶等)或水溶性弹力蛋白衍生物、角蛋白及其分解物或它们的衍生物、丝蛋白及其分解物或它们的衍生物、猪或牛血球蛋白分解物(球蛋白肽)、牛或猪血红蛋白分解物(氯化血红素、羟高铁血红素、血红素、正铁血红素、血红素铁等)、牛奶、酪蛋白及其分解物或它们的衍生物、脱脂奶粉及其分解物或它们的衍生物、乳铁蛋白或其分解物、鸡蛋成分、鱼肉分解物、核酸相关物质(核糖核酸、脱氧核糖核酸)等得到的动物提取物、或培养上述动物的细胞而得到的提取物。

(16)微生物培养代谢物：酵母代谢物、酵母菌提取物、细菌代谢物、细菌提取物、霉菌或放线菌代谢物、霉菌或放线菌提取物、纳豆菌代谢物、纳豆提取物、米发酵提取物、米糠(红糠、白糠)发酵提取物、眼虫提取物或其分解物或它们的水溶性衍生物、海藻糖或其衍生物、生乳或脱脂奶粉的乳酸发酵物、豆科植物的乳酸菌发酵物、椰子属植物的乳酸菌发酵物等。

(17)无机颜料：硅酸酐、硅酸镁、滑石、高岭土、膨润土、云母、云母钛、氯氧化铋、氧化锆、氧化镁、氧化锌、氧化钛、碳酸钙、碳酸镁、氧化铁黄、氧化铁红、氧化铁黑、群青、氧化铬、氢氧化铬、炭黑、炉甘石等。

(18)紫外线吸收/阻断剂：二苯甲酮衍生物(2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮、2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮-5-磺酸、2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮-5-磺酸钠、二羟基二甲氧基二苯甲酮、二羟基二甲氧基二苯甲酮-磺酸钠、2,4-二羟基二苯甲酮、四羟基二苯甲酮等)、对氨基苯甲酸衍生物(对氨基苯甲酸、对氨基苯甲酸乙酯、对氨基苯甲酸甘油酯、对二甲基氨基苯甲酸戊酯、对二甲基氨基苯甲酸辛酯等)、甲氧基桂皮酸衍生物(对甲氧基桂皮酸乙酯、对甲氧基桂皮酸异丙酯、对甲氧基桂皮酸辛酯、对甲氧基桂皮酸2-乙氧基乙酯、对甲氧基桂皮酸钠、对甲氧基桂皮酸钾、二对甲氧基桂皮酸单-2-乙基己酸甘油酯等)、水杨酸衍生物(水杨酸辛酯、水杨酸苯酯、水杨酸三甲环己酯、水杨酸二丙二醇酯、水杨酸乙二醇酯、水杨酸肉豆蔻酯、水杨酸甲酯等)、邻氨基苯甲酸衍生物(邻氨基苯甲酸甲酯等)、尿刊酸衍生物(尿刊酸、尿刊酸乙酯等)、香豆素衍生物、氨基酸系化合物、苯并三唑衍生物、四唑衍生物、咪唑啉衍生物、嘧啶衍生物、二

烷衍生物、樟脑衍生物、呋喃衍生物、吡喃酮衍生物、核酸衍生物、尿囊素衍生物、烟酸衍生物、维生素B6衍生物、伞形酮、七叶苷、桂皮酸苄酯、西诺沙酯、羟甲氧苯酮、二羟甲氧苯酮、辛苯甲酮、磺异苯酮(sulisobenzone)、苯酰间苯二酚、熊果苷、愈创薁、紫草素、黄苓苷(baicalin)、黄芩素(baicalein)、小檗碱、Neo Heliopan、Escalol、氧化锌、滑石、高岭土等。

(19)美白剂：对氨基苯甲酸衍生物、水杨酸衍生物、邻氨基苯甲酸衍生物、香豆素衍生物、氨基酸系化合物、苯并三唑衍生物、四唑衍生物、咪唑啉衍生物、嘧啶衍生物、二

烷衍生物、樟脑衍生物、呋喃衍生物、吡喃酮衍生物、核酸衍生物、尿囊素衍生物、烟酸衍生物、维生素C或其衍生物(维生素C磷酸酯镁盐、维生素C葡糖苷等)、维生素E或其衍生物、曲酸或其衍生物、羟甲氧苯酮、二羟甲氧苯酮、熊果苷、愈创薁、紫草素、黄苓苷、黄芩素、小檗碱、胎盘提取物、鞣花酸、Rucinol(4-正丁基间苯二酚)、氢醌等。

(20)收敛剂：琥珀酸、尿囊素、氯化锌、硫酸锌、氧化锌、炉甘石、对苯酚磺酸锌、硫酸铝钾、间苯二酚、氯化铁、单宁酸(包含儿茶素化合物)等。

(21)抗氧化剂：羟基酪醇、对羟基苯甲醚、没食子酸丙酯、芝麻酚、芝麻林素、棉籽酚、蜂胶等。

(22)抗炎症剂：吲哚美辛、水杨酸、水杨酸钠、乙酰水杨酸、盐酸苯海拉明、d-樟脑、dl-樟脑、氢化可的松、愈创薁、母菊薁(Chamazulene)、马来酸氯苯那敏、甘草酸或甘草提取物等。

(23)香料：麝香、灵猫香、海狸香、龙涎香、大茴香精油(アニス精油)、白芷精油、依兰精油、鸢尾精油、茴香精油、橙精油、香水树精油、葛缕子精油、小豆蔻精油、愈创木精油、小茴香精油、钓樟精油、桂皮精油、肉桂精油、天竺葵精油、古巴香脂精油、芫荽精油、紫苏精油、雪松精油、香茅精油、茉莉精油、姜草精油、杉木精油、留兰香精油、西洋薄荷精油、大茴香精油、晚香玉精油、丁香精油、橙花精油、冬青精油、吐鲁香脂精油、广藿香精油、玫瑰精油、玫瑰草精油、桧木精油、罗汉柏精油、白檀精油、酸橙精油、月桂树精油、岩兰草精油、佛手柑精油、秘鲁香脂精油、玫瑰木精油、芳樟精油、柑橘(Mandarin orange)精油、桉树精油、青柠精油、薰衣草精油、沉香精油(リナロエ精油)、柠檬草精油、柠檬精油、迷迭香精油、日本薄荷精油等。

(24)色素·着色剂：红甘蓝色素、红米色素、茜草色素、胭脂树橙色素、乌贼墨色素、姜黄色素、槐树色素、磷虾色素、柿色素、焦糖、金、银、栀子色素、玉米色素、洋葱色素、罗望子色素、螺旋藻色素、荞麦全草色素、樱桃色素、海苔色素、木槿色素、葡萄汁色素、金盏花色素、紫薯色素、紫山药色素、虫胶色素、芦丁等。

此外，本发明提供利用将3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸或3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸的盐(3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸钠、3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸钙、3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸镁等)与上述成分并用的皮肤外用剂、以及与上述成分以外的成分配合的皮肤外用剂而使皮肤和皮肤细胞变白的方法；通过利用含有3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸或3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸的盐(3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸钠、3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸钙、3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸镁等)作为有效成分的组合物，对对象者的皮肤进行处理而进行美白的方法。本说明书中“美白”包括抑制色素细胞的酪氨酸酶基因表达以及抑制由此产生的黑色素合成。此外，“对象者”是指需要抑制皮肤的黑色素合成的对象，优选为包含人的动物，特别优选为人。“对皮肤进行处理”是指根据本发明涉及的上述皮肤外用剂的剂型而涂布或应用于皮肤。在一个实施方式中，优选在对象者暴露于紫外线之前进行给药或处理或在暴露于紫外线之后立即进行给药或处理。

本发明的其它实施方式为含有用作上述美白剂的有效成分的3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸或其盐的组合物、该组合物对皮肤的美白处理的用途、或美白剂的制造中的3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸或其盐的用途。以下，举出实施例进一步具体地说明本发明，但本发明不限定于这些实施例。应予说明，本说明书中，组合物或处方中的各成分的含量的表达在没有特别说明的情况下表示“重量％”。

【实施例】

(试验1)3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸的LCMS分析

将作为试剂购买的(chemsigma公司制)3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸0.89mg溶解于1ml的甲醇，在以下条件下进行LC/MS分析。

分析仪器：ACQUITY UPLC Class H(Waters公司制)

质谱仪：Xevo G2-S-QTof(Waters公司制)

光电二极管阵列：(210～500nm)

柱：ACQUITY UPLC BEH C18(50×2.1mm、I.D.2.1μm)

流速：0.8mL/分钟

柱温：55℃

溶剂；A液：0.1％甲酸水溶液、B液：0.1％甲酸乙腈溶液

梯度；

0分钟；％A液/％B液＝95/5→6分钟；％A液/％B液＝0/100

6分钟；％A液/％B液＝0/100→7分钟；％A液/％B液＝0/100

(试验结果)

结果如图1所示，在正离子模式下为m/z：977.7，在负离子模式下为m/z：487.2。3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸的分子量(文献值)为488.7(C₃₀H₄₈O₅)，在正离子模式下检测出的质量为[2M+H]⁺、在负离子模式下检测出的质量为[M-H]^-。

(试验2)3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸的NMR分析

将3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸(chemsigma公司制)13.0mg溶解于C₅D₅N(600μL)，进行¹³C-NMR测定。进而，利用C₅D₅N将上述3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸溶液稀释6倍，也进行¹H-NMR测定。

(试验结果)

结果显示表1所示的化学位移的值，与＊现有技术(Phytochemistry 28(5)1479-1482(1989))记载的值一致，因此可确认化合物为3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸。

3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸的化学结构和¹³C NMR物性值

【化学式2】

【表1】

	测定值(150MHz，C5D5N)	文献值(C5D5N)*
			碳原子编号	δ[ppm]	δ[ppm]
1	39.1	38.8
			2	28.8	28.5
3	80.6	80.3
			4	43.5	43.2
5	56.8	56.5
			6	19.6	19.3
7	34.2	34
			8	40.7	40.4
9	48.1	47.9
			10	37.4	37.2
11	24.6	24.3
			12	128.3	127.9
13	140.3	140
			14	42.4	42.1
15	29.6	29.1
			16	26.7	26.5
17	48.6	48.4
			18	55	54.7
19	73	72.8
			20	42.7	42.4
21	27.5	27
			22	38.8	38.6
23	24	23.7
			24	64.9	64.6
25	17.4	17.2
			26	17.1	16.8
27	25	24.7
			28	181	180.8
29	27.3	27.2
			30	16.4	16.1

(试验3)3β，19α，24-三羟基乌索-12-烯-28-酸的盐的制备

通过常规方法将3β，19α，24-三羟基乌索-12-烯-28-酸(chemsigma公司制)制备为3β，19α，24-三羟基乌索-12-烯-28-酸的钠盐、钙盐。

(试验4)酪氨酸酶表达抑制(3β，19α，24-三羟基乌索-12-烯-28-酸、熊果酸)

利用D-MEM(Wako公司)将B16黑素瘤细胞(RIKEN BRC)在60mm的培养皿中培养24小时后，添加试样(使3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸(chemsigma公司制)、熊果酸(INDOFINE Chemical公司制)的最终浓度分别为0.8μM，使对照(比较对照)即DMSO的最终浓度为1％)进行1小时培养，然后添加α-MSH(SIGMA-ALDRICH公司)使最终浓度为50ng/mL。在添加α-MSH后24小时使用RNeasy Mini Kit(QIAGEN公司)从细胞进行提取，将得到的RNA作为模板，使用Prime Script RT reagent Kit(TAKARA BIO公司)合成cDNA。使用该cDNA通过定量PCR法测定酪氨酸酶基因的表达量。

应予说明，定量PCR法使用SYBR Premix Ex Taq(TAKARA BIO公司)和ThermalCycler Dice Real Time System(TAKARA BIO公司)。作为内部标准，将作为管家基因的RPS18基因的表达量进行定量，算出相对于RPS18的相对表达量，作为酪氨酸酶基因表达量。PCR用引物使用TAKARA BIO公司的酪氨酸酶、RPS18。进而，对于3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸，为了确认浓度依赖性，对最终浓度0.1μM、4μM、10μM的浓度也同样地进行。

(试验结果)

结果如图2所示。在通过α-MSH的添加而使酪氨酸酶基因的表达亢进的条件下，没有观察到熊果酸具有抑制基因表达的效果。另一方面，可确认3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸在0.8μM的浓度下具有大幅抑制酪氨酸酶基因表达的效果。应予说明，即使在3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸为0.1μM的条件下，虽然与0.8μM的浓度的情况相比稍低，但仍可观察到该抑制效果。此外，对于通过试验3得到的3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸的钠盐、钙盐，也以最终浓度0.8μM进行添加，进行试验4，其结果可得到相同的效果。

(试验5)使用豚鼠的抑制黑色素生成的测定

(1)受试动物和组结构

使用与人相同通过紫外线照射而产生色素沉淀的动物种类即有色豚鼠，在株式会社日本生物研究中心进行抑制紫外线诱发的色素沉淀的试验。分成试验样品和紫外线照射方法不同的以下6个组。

(2)受试样品

将富有柿的蒂粉末化，利用有机溶剂进行提取、分离和精制，获得真空干燥粉末。利用与上述试验1和2同样的方法进行HPLC峰和NMR分析，结果确认为纯的3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸。在乙醇：丙二醇：精制水＝6：2：2的介质中分别以重量比计成为0.9％、0.09％和0.009％的方式进行溶解，制成含有3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸的受试样品而供于试验。此外，对照使用60％(W/W)乙醇、20％(W/W)丙二醇水溶液作为受试样品。

(3)紫外线照射方法

使用各组6只的豚鼠，利用电动推剪和电动推子对各自的背部进行除毛，将夹着正中央的左右的2×2cm的正方形2处作为测定部位。紫外线照射利用紫外线照射装置照射最小红斑量的UV-B(波长250～350nm)。紫外线照射在初次给药日(将该日设为0天)、在此之后的初次给药后2天和4天进行共计3次。

(4)受试样品的给药条件

给药浓度为0.1mL/部位。给药次数均为1天1次，给药时间为连续28天。应予说明，紫外线照射日期为紫外线照射后，色素沉淀的测定部在测定后进行给药。

(5)测定方法

在初次给药日的给药前(照射前)、给药14天、21天、28天，使用色彩色差计，针对照射部位利用Lab表色系统显示，将L值(亮度)用于评价。求出ΔL值(观察日的L值-照射前的L值)。另外，使用各组的L值，每组通过具有对应的t检验进行显著性差异检验。

(6)L值的评价结果

将受试豚鼠的紫外线(UV-B)照射时的肤色(ΔL值)的推移示于图3。在开始紫外线照射后，观察到色素沉淀引起的L值降低。为了避免基于紫外线照射量的变动的测定，在各组中进行与仅涂布有介质的对照的比较。涂布有含有0.9重量％的本发明涉及的3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸的受试样品的第3组与对照的介质相比，显著显示出黑色素色素沉淀抑制效果(p＜0.05)。此外，涂布有含有0.09重量％或0.009重量％的3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸的受试样品的第4组和第5组，虽然在t检验中未观察到显著差异，但可浓度依赖地改善L值的降低，以及根据上述试验4的结果，即使为0.00004重量％(约0.8μM)也显示出酪氨酸酶表达抑制作用，因此判断在0.009～0.9重量％的范围内具有抑制黑色素生成的作用。

(处方例)

以下记载使用3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸或其盐的处方例，但并不限定这些处方。

(试验6)使用感试验

使3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸(chemsigma公司制)、月桂硫酸钠、精制水以30：3：67的重量比分散，利用高压均化器进行湿式粉碎。粉碎条件在处理压力：200MPa、处理次数：80次下进行，将得到的悬浮液与处方例6一同制作下述表2所示的处方a～c这3种美白乳霜，由专家组(専門パネラー)进行使用感的评价。应予说明，使用感的评价项目为涂布时的延伸、涂布后的平滑度。

【表2】

(试验结果)

结果如下述表3所示，在3β，19α，24-三羟基乌索-12-烯-28-酸的质量浓度为1％、5％的情况下，平均评分为3以上，在7％的情况下，平均评分为2以下，预测如果外用剂中的3β，19α，24-三羟基乌索-12-烯-28-酸的质量浓度为5％以下，则可得到使用感良好的外用剂。

(评分基准)

5：非常良好的使用感

4：良好的使用感

3：普通的使用感

2：不怎么良好的使用感

1：没有良好的使用感

【表3】

评价项目	处方a	处方b	处方c
				涂布时的延伸	4	3	2
涂布后的皮肤的光滑度	4	4	1
				平均评分	4	3.5	1.5

(试验7)使用效果试验

在本发明的处方例6的基础上，制作下述表4所示的处方A～D这4种美白乳霜。对成年男女20名，将制作的美白乳霜在脸上1天涂布2次，进行一个月的使用试验。应予说明，受试者分成每5人一组，对于斑点、色素沉淀，与使用前相比进行评价。

【表4】

(试验结果)

结果如下述表5所示，观察到配合有3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸的处方比对照品高，特别是配合0.1％的处方B比其它处方高。

有效：与使用前相比，斑点、色素沉淀得到改善。

稍微有效：与使用前相比，斑点、色素沉淀稍微得到改善。

无效：与使用前无变化。

【表5】

Claims (10)

1.一种美白剂，其特征在于，含有0.00004～5重量％的3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸或其盐作为美白用有效成分。

2.一种美白用皮肤外用剂，其特征在于，含有0.00004～5重量％的3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸或其盐作为美白用有效成分。

3.根据权利要求1所述的美白剂，其中，所述3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸或其盐的含量至少为0.009重量％。

4.根据权利要求2所述的美白用皮肤外用剂，其中，所述3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸或其盐的含量至少为0.009重量％。

5.一种皮肤的美白方法，其特征在于，包括将含有3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸或其盐作为有效成分的组合物以有效量给与需要所述组合物的对象者的工序。

6.一种皮肤的美白方法，其特征在于，包括利用至少含有0.009重量％的3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸或其盐的组合物处理皮肤的工序。

7.根据权利要求6所述的美白方法，其中，所述皮肤的处理在所述皮肤暴露于紫外线之前进行或暴露于紫外线之后立即进行。

8.一种组合物，其特征在于，含有作为美白剂或美白用皮肤外用剂的有效成分使用的3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸或其盐。

9.含有3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸或其盐作为有效成分的组合物在皮肤的美白处理中的用途。

10.3β,19α,24-三羟基乌索-12-烯-28-酸或其盐在美白剂或美白用皮肤外用剂的制造中的用途。

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