WO2004078188A1 - βーグルカン含有組成物及び該組成物を利用した便秘改善剤、免疫賦活剤並びに皮膚用保湿剤 - Google Patents

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glucan
lactic acid
culture
mass
constipation
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Naoyuki Moriya
Yukiko Moriya
Kenji Suzuki
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Definitions

  • the present invention relates to an iS-glucan-containing composition
  • an iS-glucan-containing composition comprising, as active ingredients, a culture of a bacterium belonging to the genus Aleobasidium containing ⁇ -1,3-1,6-glucan and a lactic acid bacterium as active ingredients.
  • the present invention relates to a constipation improving agent, an immunostimulant and a skin moisturizer using the composition.
  • ⁇ -1,3-1,6-glucan produced by bacteria belonging to the genus Aureobasidium sp. (Commonly known as black yeast) has immunopotentiating effects, antitumor activity, and suppression of cancer cell growth. It is known to have various physiological activities such as action, anti-allergic action, anti-inflammatory action, cholesterol lowering action, anti-thrombotic action, dietary fiber action, blood pressure lowering action, hypoglycemic action, liver function enhancement etc. I have. For this reason, many attempts have been made to use] 3-1,3-1,6-glucan as a functional material or pharmaceutical.
  • Japanese Patent Application Laid-Open No. 57-149301 discloses an intestinal preparation containing a polysaccharide as a main component produced by a bacterium belonging to the genus Aureobacidium of the family Aureobacidium (Deposited No. 4257, deposited by the Research Institute of Microorganisms). Are disclosed.
  • Japanese Patent Publication No. 5-4063 discloses a method for producing a food or drink comprising fructooligosaccharides and / 3-1,3-1,6-glucan as main components. It is described that it can be used for the growth of Bifidobacteria, prevention of constipation, and enhancement of immunity) and intestinal medicine.
  • Japanese Patent Application Laid-Open No. 2002-335926 discloses a composition containing ⁇ -1,3-1,6-glucan and an apple extract, and describes that this composition is useful as a beverage or a skin coating agent.
  • the beverage has effects of reducing various allergic symptoms, improving immunity disorders, suppressing cancer, improving vascular disorders, improving viral diseases, improving urinary diseases, constipation, and diarrhea. It is described that an effect of improving digestive system diseases such as the above can be expected.
  • Japanese Patent Application Laid-Open No. Hei 6-340701 discloses that a 1,3-linked glucose residue obtained from the culture supernatant of Aureobasidium pullulans IF04466 strain is used as a main chain.
  • 3-glucan has an orally high antitumor activity and immunostimulatory activity, It is described as being useful as a pharmaceutical, food additive, feed additive, and the like.
  • Japanese Patent Application Laid-Open No. 2002-204687 describes that an aureobasidium culture solution containing ⁇ -1,3-1,6-glucan as a main component can be applied as a drug for various diseases. .
  • Japanese Patent Application Laid-Open No. 62-205008 discloses additives for cosmetics and the like containing a binding mode 3-1 3-1 -1,6-glucan. Then,) 3-1, 3- 1, 6-glucan is converted to an aqueous solution and applied to the skin or hair as it is. Compared with conventional cosmetics, hairdressing products, and ointment additives, film formation on the skin and hair surface is improved. It is described that the moisture retention is excellent.
  • Japanese Unexamined Patent Application Publication No. 10-310515 discloses a bath preparation comprising at least one extracellular homopolysaccharide produced by a microorganism, or the extracellular homopolysaccharide and at least one amino acid. Is disclosed.
  • 3-D-glucose is produced by a microorganism belonging to the genus Aureobasidium / 3 / 1,3- It is described as 1,6-glucan.
  • Japanese Patent Application Laid-Open Publication No. 2001-48796 discloses an immunomodulator mainly composed of dead cells of Enterococcus faecalis AD101.
  • Japanese Patent Application Laid-Open No. 2003-11314 discloses an immunostimulating material characterized in that a lactic acid bacterium and a koji mold belonging to the genus Enterococcus are cultured as liquids by using a cell as an active ingredient. .
  • Japanese Patent Application Laid-Open No. 20''03-40785 discloses an active ingredient comprising a material containing iS-glucan and a heat-treated lactic acid-producing bacterial cell.
  • An infection-controlling composition characterized by containing as the following is disclosed.
  • Japanese Patent Application Laid-Open No. 2001-323001 discloses that the production of TNF and other cytokins in the body is promoted, the action is enhanced, and A low-molecular-weight (water-soluble) 3-glucan that is useful for preventing various infectious diseases and tumors by enhancing it is disclosed, and it is described that this / 3-glucan is used in combination with lactic acid bacteria.
  • An object of the present invention is to further enhance the bioactive effect of 3-1,3-1,6-glucan contained in a culture of a bacterium belonging to the genus Aureobacidium sp.
  • An object of the present invention is to provide a constipation-improving agent, an immunostimulant and a skin moisturizer using the composition and the composition.
  • one aspect of the present invention is to provide a culture containing a bacterium belonging to the genus Aureobasidium (Aureobasidium sp.) / 3-3,3-1,6-glucan And a lactic acid bacterium as active ingredients.] 3-Glucan-containing composition.
  • the 3-glucan-containing composition of the present invention is obtained by culturing a bacterium belonging to the genus Aureobasidium (Aureobasidium sp.). Because it is contained as an active ingredient, it can be used without damaging not only 3-1), 3-1 and 6-glucan, but also various useful ingredients contained in the culture. In addition, since lactic acid bacteria are contained as an active ingredient, various physiological activities can be expected due to the synergistic effect of the useful components contained in the culture and the lactic acid bacteria. In addition, since each of the above components is a component derived from a natural product used in foods and drinks, the safety is high.
  • the bacterium belonging to the genus Aureobasidium Is preferably Aureobasidium pullulans M-1 (Aureobasidium pullulans Ml) (FERM BP-08615).
  • Aureobasidium pullulans M-1 Aureobasidium pullulans Ml
  • i3-1,3-1,6-glucan having higher physiological activity can be easily prepared.
  • the solid content contains 1 to 80% by mass of the culture in terms of i3-1,3-1,6-glucan and 4 to 95% by mass of the lactic acid bacteria cells.
  • the lactic acid bacterium is preferably Enterococcus faecal is.
  • a synergistic bioactive effect of ⁇ -1,3-1,6-glucan and lactic acid bacteria can be expected.
  • the lactic acid bacteria are preferably heat-sterilized. According to this aspect, it can be widely added to products requiring heat treatment. Also, it has high storage stability and very high safety when used as a raw material for foods and drinks and pharmaceuticals.
  • Another aspect of the present invention is a constipation improving agent containing the ⁇ -glucan-containing composition as an active ingredient.
  • the constipation-improving agent of the present invention contains the above-mentioned / 3-glucan-containing composition as an active ingredient, jS _ 1, 311 obtained by culturing a bacterium belonging to the genus Aureobasididium (Aureobasium dium sp.), An excellent constipation-improving effect can be expected due to the synergistic effect of various useful ingredients contained in the culture containing 6-glucan and the lactic acid bacteria cells.
  • Another aspect of the present invention is an immunostimulant containing the above-mentioned / 3-glucan-containing composition as an active ingredient.
  • the immunostimulating agent of the present invention contains the above-mentioned composition containing 3-glucan as an active ingredient, the immunostimulating agent can be obtained by culturing a bacterium belonging to the genus Aureobasididium sp. An excellent immunostimulatory effect can be expected due to the synergistic effect of various useful components contained in the culture containing 6-glucan and the lactic acid bacteria cells.
  • Another aspect of the present invention is a skin moisturizer containing the 0-glucan-containing composition as an active ingredient.
  • the humectant for skin of the present invention contains the i3-glucan-containing composition as an active ingredient, it can be obtained by culturing bacteria belonging to the genus Aureobas idium sp. -The synergistic effect of various useful ingredients contained in the culture containing 1,6-glucan and the lactic acid bacteria can provide a moisturizing agent for skin with excellent moisturizing effect and excellent feeling on use.
  • FIG. 1 shows the relationship between the survival rate after ingestion of Listeria monocytogenes and the number of elapsed days.
  • FIG. 2 is a view showing the effect of a test substance on the survival rate after ingestion of Listeria monocytogenes.
  • FIG. 3 is a graph showing the relationship between the average survival days after ingestion of Listeria monocytogenes and test substances.
  • FIG. 4 is a graph showing the effect of a test substance on the time-dependent change in the number of bacteria in the spleen after ingestion of Listeria monocytogenes.
  • Figure 5 is a diagram (photograph) showing the results of analyzing cell surface molecules using a flow cytometer after ingestion of Listeria monocytogenes.
  • FIG. 6 is a diagram showing the results of measuring the change over time in epidermal stratum corneum water content (skin surface conductance S) in subject 1 (female in their 20s).
  • FIG. 7 is a diagram showing the results of measuring the temporal change in the water content of the stratum corneum (skin conductance S) of the subject 2 (female in their 20s).
  • FIG. 8 is a diagram showing the results of measuring changes over time in the epidermal stratum corneum water content (skin surface conductance S) in subject 3 (female in their thirties).
  • FIG. 9 is a diagram showing the results of measuring the change over time in the water content of the stratum corneum (skin surface conductance S) in subject 4 (female in their 40s).
  • FIG. 10 is a diagram showing the results of measuring the change over time in epidermal stratum corneum water content (skin surface conductance S) in subject 5 (female in their fifties).
  • a culture obtained by culturing bacteria belonging to the genus Aureobasidium (Aureobasidium sp.) (Hereinafter simply referred to as a culture) is a genus Aleobasidium sp.
  • the solid content concentration is preferably 0.5 to 5% by mass, and 1 to 3% by mass. % Is more preferable.
  • Examples of the bacterium belonging to the genus Aureobasidium sp. include, for example, Japanese Patent Publication No. 57-149301, Japanese Patent Publication No. 5-4063, Japanese Patent Application Laid-Open No. 2000.2- Although the strains described in Japanese Patent Application Laid-open No. 335952/26 can be used, in the present invention, Aureobasidium pullulans M-1 (Aureobasidium uUulans M-1; National Institute of Advanced Industrial Science and Technology) The deposit center deposit number FERM BP-08615) is preferably used.
  • the term "/ 3-1,3--1,6-glucan” refers to a substance having a structure in which glucose is branched at the i3_1,6 bond from the main chain at which the glucose is / 3-1,3 bonded.
  • Culturing of the bacterium belonging to the genus Aureobasidium sp. Can be performed according to a known method (see Japanese Patent Application Laid-Open No. 57-149301, etc.). That is, a medium ( ⁇ 5.2 to 6.0.%) Containing a carbon source (sucrose) 0.5 to 5.0% by mass, a mineral source 0.1% by mass, and other trace substances (eg, vitamins and minerals).
  • 0 is inoculated with a bacterium and aerated culture at a temperature of 20 to 30 ° C. for 2 to 7 days, preferably aerated and agitated culture.
  • the culture solution obtained in this manner usually contains 0.6 to 1.8% by mass of solid content, and i3—l, 3-1,6-glucan is contained in the solid content. 880% by mass.
  • ⁇ -1'3-1,6-glucan other useful components such as phosphorus, potassium, magnesium, and vitamin C, which are components that help absorb the glucan, are also contained. The bioactive effects of ⁇ -1,3--1,6-glucan can be efficiently exhibited.
  • / 3-1,3-1,6-glucan in the solid content is at least 1% by mass, preferably at least 5% by mass, more preferably at least 10% by mass, particularly preferably at least 20% by mass. % Is used. If the concentration of / 3--1,3-1,6-glucan in the culture is too low, the bioactive effect of the glucan cannot be sufficiently expected.
  • the quantitative determination of ⁇ -1,3--1,6-glucan can be performed, for example, by the following method. That is, the culture solution is subjected to an enzymatic treatment using amylase, mycotic dalcosidase, protease, etc., and ethanol precipitation is performed except for proteins and glucan such as pullulan. Further, it is filtered through a glass filter to obtain a polymer sample. At this time, wash thoroughly with 80% ethanol to remove low molecular substances including monosaccharides. The washed polymer sample is further washed with acetone, added with sulfuric acid, and hydrolyzed. After hydrolysis, neutralize, collect the filtrate, determine glucose by the glucose oxidase method, and use the value calculated based on the following formula 1 as the amount of glucan.
  • the culture solution is subjected to an enzymatic treatment using amylase, mycotic dalcosidase, protease, etc., and ethanol precipitation is
  • Glucan (gZl 0 g) Glucose (gZl 0 0 g) X 0.9 +
  • iS-1,3-1,6-glucan is quantitatively determined by It can also be carried out according to the method described in the official gazette. That is, after the culture is completed, the culture solution is sterilized and The cells were removed by centrifugation to remove the cells, and the resulting solution was mixed with 10%
  • the culture solution obtained as described above may be used by directly sterilizing it by heating or heating under pressure, or may be used after separating and removing the cells by centrifugation or the like. If necessary, a concentrated one or a dried one can also be used.
  • the culture of bacteria belonging to the genus Aureobasidium (Aureobasidium sp.) Is used as a food additive such as a thickening stabilizer, and is highly safe.
  • any lactic acid bacterium that can be used in food can be used without any particular limitation. Specifically, Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium, Enterococcus faecium, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus casei
  • lactic acid bacteria may be used alone or in combination of two or more.
  • Enterococcus faecalis and Enterococcus faecium are lactic acid bacteria used in lactic acid bacteria preparations and the like.
  • Lactobacillus acidophilus Is a lactic acid bacterium used in cheese, fermented milk, yogurt, lactic acid beverages, etc., and is used in Streptococcus cremoris, Streptococcus lactis, Streptococcus lactis, and Streptococcus thermophilus.
  • Bifidobacterium longum, Bifidobacterium breve, and Bifidobacterium bifidum are used in fermented milk, etc. Lactic acid bacteria. Therefore, any of these lactic acid bacteria can be easily obtained by those skilled in the art.
  • Enterococcus faecalis for example, ATCC 19433, ATCC 14508, ATCC 123655, IF0 16803, etc.
  • Enterococcus' Feucharis ATCC 19433, ATCC 14508, ATCC 123655, IF0 16803, etc.
  • the lactic acid bacteria are preferably heat-sterilized.
  • it can be widely added to products that require heat treatment.
  • it has high storage stability and extremely high safety when used as a raw material for foods and drinks and pharmaceuticals, and is particularly suitable for use as a skin moisturizer.
  • the lactic acid bacterium may be cultured according to a conventional method.
  • cells are collected from a culture obtained by culturing the lactic acid bacterium according to a conventional method by filtration, centrifugation, or the like. After washing, it may be suspended in water or the like and heat-treated at 80 to 115 ° C for 30 minutes to 3 seconds.
  • the heat-sterilized lactic acid bacteria may be concentrated and dried if necessary before use.
  • the 3-glucan-containing composition according to the present invention is, for example, a compound of the genus Aleobasidium
  • (Aureobasidium sp.) Can be obtained by mixing and dispersing the heat-sterilized bacterial cells of the lactic acid bacterium into a sterilized culture of a bacterium belonging to (Aureobasidium sp.). Further, if necessary, various forms such as tablets, capsules, powders, granules, liquids, pastes, jellies and the like can be used.
  • the iS-glucan-containing composition of the present invention contains the above culture in a solid content of 1 to 80% by mass in terms of 3-1,3-1,6-glucan, and the lactic acid bacterium cells of 4 to 95%. It is preferable that the content be contained by mass%. Further, in addition to the above basic components, flavors, sweeteners, vitamins, minerals, oligosaccharides, thickening polysaccharides, dextrins, plant extracts, other plant components, and the like can be appropriately contained.
  • the ⁇ -glucan-containing composition of the present invention is used as it is as a constipation improving agent, an immunostimulant, and a skin moisturizer. It can be used as an agent or the like.
  • the solid content contains 1 to 40% by mass of the above culture in terms of iS-1, 3-1, 6-glucan
  • the lactic acid bacteria preferably contain 4 to 95% by mass of the lactic acid bacterium
  • the culture contains 2 to 40% by mass in terms of 1,3,1,6-glucan
  • the lactic acid bacterium 10 to 95% by mass More preferably, the above culture is contained in an amount of 3 to 40% by mass in terms of / 3-1,3-1,6-glucan, and the above lactic acid bacterium is contained in an amount of 30 to 95% by mass. Is particularly preferred.
  • the effective intake of the ameliorating agent is 0.01 to 10 g of the above culture in terms of J3-1,3-1,6-glucan, and 0.01 to 10 g of the above lactic acid bacterium per adult per day.
  • the culture is 0.5 to 5 g in terms of ⁇ -1,3-1,6-glucan, and the lactic acid bacterium is 0.05 to lg.
  • the constipation-improving agent of the present invention can also be incorporated into various foods and drinks such as soft drinks, jelly drinks, fruit juice drinks, vegetable juices, soups, miso soups, frozen foods, and other processed foods.
  • the amount of the constipation-improving agent to be added in each of the above foods and drinks may be set based on the above-mentioned effective daily intake of the adult, and is usually preferably 1 to 50% by mass, more preferably 10 to 20% by mass. .
  • the method of addition is not particularly limited, and it can be added from the beginning together with other raw materials used in each food and drink.
  • the culture is contained in a solid content in an amount of 5 to 80% by mass in terms of / 3-1,3-1,6-glucan. And preferably contains 10 to 80% by mass of the above-mentioned lactic acid bacteria cells, more preferably 25 to 70% by mass of the above culture in terms of ⁇ -1,3-1,6-glucan, and It is more preferable to contain 20 to 70% by mass of cells, 30 to 60% by mass of the culture medium in terms of —1,3-1,6-glucan, and 30 to 60% of lactic acid bacteria. Most preferably, it is contained by mass%.
  • the effective intake of the immunostimulant of the present invention is as follows: 0.03 to 0.50 g of the above culture in terms of 3-1-3,1,6-glucan and 0 10 to 0.90 g, preferably 0.06 to 0.40 g of the above culture in terms of 0-1, 3, 1 and 6-glucan, and 0.15 to 0. 45 g.
  • the immunostimulant of the present invention can also be incorporated into various foods and drinks such as soft drinks, jelly drinks, fruit drinks, vegetable juices, soups, miso soups, frozen foods, and other processed foods.
  • the amount of the immunostimulant to be added in each of the above foods and drinks may be set based on the above-mentioned effective daily intake of adults, but is usually 0.02 in terms of ⁇ -1,3--1,6-glucan. It is preferably from 0.5 to 0.5% by mass, more preferably from 0.06 to 0.40% by mass. Further, with respect to the lactic acid bacterium cells, 0.1 to 0.90% by mass is preferable, and 0.15 to 0.45% by mass is more preferable.
  • the method of addition is not particularly limited, and it can be added from the beginning together with other ingredients used for each food and drink.
  • the composition of the present invention 3-glucan is used as a humectant for the skin
  • the above culture is contained in a solid content in an amount of 1 to 40% by mass in terms of / 3-1,3-1,6-glucan. And preferably contains 4 to 95% by mass of the heat-killed bacterial cells of the lactic acid bacterium, and 2 to 40% by mass of the above culture in terms of ⁇ -1,3-glucan.
  • the heat-killed bacterial cells of the lactic acid bacteria are contained in an amount of 10 to 95% by mass, and the culture is contained in an amount of 3 to 1, 3-1, 6-glucan in an amount of 3 to 40% by mass, and It is particularly preferable to contain 30 to 95% by mass of heat-killed lactic acid bacteria. If the amount of the ⁇ -glucan-containing material is too small, a sufficient moisturizing effect cannot be obtained, and if it is too large, the fluidity (ease of spreading) of the product is reduced, and the usability is reduced. On the other hand, if the amount of the heat-killed lactic acid bacteria is too small, sufficient moisturizing effect cannot be obtained, and if it is too large, the dispersibility in the product is reduced and a uniform product cannot be obtained.
  • the reason why the persistence of the moisturizing effect is improved by using the above culture and the heat-killed cells of the lactic acid bacteria in combination is not clear, but for example, the heat-killed cells of the lactic acid bacteria serve as a carrier. , / 3—It is possible that glucan or water is retained.
  • Enterococcus faecalis has a smaller cell size than other lactic acid bacteria such as Lactobacillus and Bifidobacterium, so the number of cells per added mass increases, and the moisturizing effect is improved. It is thought that it can be raised.
  • the humectant for skin of the present invention may be used as it is as a lotion or a lotion, or may be used by blending it into various skin cosmetics (eg, emulsion, cream, pack, etc.).
  • the compounding amount of the skin moisturizing agent in the skin cosmetic is preferably 0.5 to 50% by mass, more preferably 5 to 20% by mass.
  • a preculture of Aureobasidium pullulans Ml (FERM BP-08615) was added to a liquid medium containing 1% sucrose, 0.2% ascorbic acid and 0.2% rice bran. After inoculating an appropriate amount at pH 5.3), aeration and agitation culture was performed at 25 ° C for 2 days. After completion of the culture, the culture was sterilized at 121 ° (:, 15 minutes. This culture had a solid content of 1%, and 35% of / 3-1,3-1,6-glucan was contained in the solid content. Included.
  • Enterococcus faecalis (IFO 16803) was cultured in Rogosa medium at 37 ° C for 24 hours.A suitable amount of a preculture was added to a liquid medium containing 4% yeast extract, 3% polypeptone, and 10% lactose. Neutralization cultivation was performed at 37 ° C for 22 to 24 hours while adjusting to pH 6.8 to 7.0 using a sodium hydroxide aqueous solution using a pH stat.
  • the cells were separated and collected by a continuous centrifuge, diluted with water to the original volume, and separated and recovered again by a continuous centrifuge. This operation was repeated a total of four times to wash the cells.
  • the washed cells are suspended in an appropriate amount of water, sterilized at 100 ° C. for 30 minutes, and then dried using a spray dryer, followed by heat sterilization cell powder (5 ⁇ 10 12 cfu / g). Was prepared.
  • the test was conducted for 4 weeks, and 10 volunteers with constipation were administered nothing for the first week (the first week), and the lactic acid bacteria cells (200 mg / day) for the next week (the second week). ) For the next week (week 3) and aurorabasidum culture (15 ml / day) for the last week (week 4) Cultures (15 ml / day) and lactic acid bacteria cells (200 mgZ days) were administered. Then, the administration period of each test sample I checked the number of bowel movements. The results are shown in Table 1.
  • Table 1 shows that when only lactic acid bacteria cells were administered, a slight constipation-improving effect was observed, but when only Aureobasidium culture was administered, almost no constipation-improving effect was observed. I understand. On the other hand, when the Aureobasidium culture and the lactic acid bacteria were used in combination, the number of defecations was increased, indicating that constipation was clearly improved.
  • Example 1 To 1 L of the aleobasidium culture obtained in Example 1 (1), 1 Og of the heat-killed bacterial cells of the lactic acid bacterium obtained in Example 1 (2) was added and mixed uniformly. Thus, a 3-glucan-containing composition was obtained. Using this -glucan-containing composition, the protective effect against initial infection was examined by the following method.
  • mice (7-week-old, female) preliminarily bred for 1 week were divided into 4 groups (7 mice in each group) of 8 mice (purchased from Japan SLC, Inc.). Was administered orally once daily during the test period, at a rate of 2 001 per mouse.
  • the average survival time was 12.7 days in the test group, 3.0 days in the control group, 11.5 days in the comparison group 1, and 6.4 days in the comparison group 2. there were.
  • the significant difference between the test group and the other groups was tested using the Mann-German itney U test, and the test group showed a significant difference with a risk factor of less than 1% with respect to the control group and the comparative group 2. .
  • Each test substance was administered in the same manner as described above, using 30 BALB / c mice (7-week-old, female) preliminarily reared for 1 week per group. Then, Listeria monocytogenes (List strain EGD), which is an intracellular parasitic bacterium, was injected into the tail vein of each group of mice to which each of the test substances was orally administered for one week continuously for 2.7 x 10 3 cfuZ 1 / mouse (1Z10 XLD 50 ) Inoculated to be 1 mouse, 1 day, 3 days, 5 days, 7 days and 10 days after bacterial inoculation 5 mice in each group was killed and the spleen was collected.
  • Listeria monocytogenes List strain EGD
  • List strain EGD which is an intracellular parasitic bacterium
  • the collected spleen was ground with a blender and resuspended in 5 ml of PBS to obtain a stock solution.
  • This stock solution was diluted by a 10-fold serial dilution method, 1001 was taken from the stock solution and each dilution series solution, smeared on TSA medium, and cultured in a 37 ° C incubator for 16 hours.
  • the number of bacterial colonies that grew on the TSA medium was measured, and the number of bacteria in the organ was calculated.
  • the average number of cells and the standard error were calculated for each group. The results are shown in Table 3 and FIG.
  • Comparative Group 1 and Comparative Group 2 an increase in bacteria was observed from day 1 after inoculation, a peak in the number of bacteria in the spleen was observed on day 3 after inoculation, and the bacteria gradually decreased thereafter. It was below the detection limit in eyes ( ⁇ 3.33 CFUZ spleen).
  • glucan-containing composition acts on the immune system in the early stage of infection, and that infection resistance is enhanced by immature T cells or phagocytosis rather than by the aggressive immune system by mature T cells. It was presumed that this was performed by a non-specific immune mechanism using cells.
  • Cy_chrome Cy_chrome (Cy) -labeled anti-CD3mAb (T cell-specific recognition marker) / FITC-labeled anti-TCRo; iSmAb (T cell type-specific recognition marker) / ⁇ labeled anti-CD4mAb / biotin-labeled anti-TCRr ⁇ 5 (by T cell type) Recognition
  • the amount of IFN- ⁇ in the test group was measured on the third day of infection, as shown in Table 5, by measuring the amount of cytodynamic force in blood using a commercially available IFN- ⁇ measurement kit (Genzam). Showed a high value. No change in CD4-positive ⁇ / 3 type T cells was observed, indicating that the cells producing IFN-r may be macrophages.
  • Example 1 The culture medium of the aureobasidium culture obtained in Example 1 (1) and the culture obtained in Example 1 (2) Using the heat-sterilized cells of the lactic acid bacteria obtained, the test samples shown below were prepared, and the moisturizing effect of five female volunteers (two in their twenties, one in their thirties, one in their forties, and one in their fifties) was confirmed. The test was performed.
  • Each subject cleans the measurement site (range of 3 cm wide, 10 cm long, 5 cm below the forearm inner bend) with stone ⁇ , and then adjusts the temperature to 18 to 20 ° C and the humidity to 50 to 55%. They were allowed to rest for 20 minutes indoors under constant temperature and humidity conditions.
  • the water content of the stratum corneum was measured using the high-frequency impedance method.
  • Each section was measured over time using a layer moisture content measuring device “SKINCON-200” (trade name, manufactured by Ivy * S Co., Ltd.).
  • the water content of the stratum corneum was measured 5 minutes before application of the test sample (15 minutes), immediately after application (0 minute), and 10, 20, 30, and 60 minutes after application.
  • Figures 6 to 10 show the results.
  • 1 to 4 correspond to test samples 1 to 4, respectively.
  • the 3-glucan-containing composition of the present invention is obtained by culturing a bacterium belonging to the genus Aureobasidium (Aureobasidium sp.). Because it contains a culture containing 3-1 and 6-glucan and lactic acid bacteria, excellent bioactivity can be expected due to the synergistic effect of these components, constipation improver, immunostimulant, moisturizer for skin It can be used as an agent.

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Abstract

本発明は、アウレオバシジウム属（Aureobacidium　sp.）に属する菌の培養物に含まれるβ−１，３−１，６−グルカンの生理活性効果を更に高めたβ−グルカン含有組成物及び該組成物を利用した便秘改善剤、免疫賦活剤並びに皮膚用保湿剤を提供する。　アウレオバシジウム属（Aureobasidium　sp.）に属する菌を培養して得られるβ−１，３−１，６−グルカンを含む培養物と、乳酸菌菌体とを含有するβ−グルカン含有組成物を得る。このβ−グルカン含有組成物を、便秘改善剤、免疫賦活剤あるいは皮膚用保湿剤の有効成分として含有させる。前記アウレオバシジウム属（Aureobasidium　sp.）に属する菌は、アウレオバシジウム　プルランス　M-1（Aureobasidium　pullulans　M-1）（FERM　BP-08615）であることが好ましい。また、前記乳酸菌はエンテロコッカス・フェカリス（Enterococcus　faecalis）であることが好ましく、前記乳酸菌は加熱殺菌されたものであることが好ましい。更に、固形分中に、前記培養物をβ−１，３−１，６−グルカン換算で１～８０質量％含有し、かつ前記乳酸菌菌体を４～９５質量％含有することが好ましい。

Description

明 細 書 β一グルカン含有組成物及び該組成物を利用した便秘改善剤、 免疫賦活剤並びに皮膚 用保湿剤 技術分野
本発明は、 β— 1， 3- 1, 6—グルカンを含むァゥレオバシジゥム属に属する菌の 培養物と乳酸菌の菌体とを有効成分として含有する iS—グルカン含有組成物に関し、 更 には該組成物を利用した便秘改善剤、 免疫賦活剤並びに皮膚用保湿剤に関する。 背景技術
ァゥレオバシジゥム属 (Aureobasidium sp.) に属する菌 （通称、 黒酵母） が産生す る β - 1， 3- 1, 6—グルカンは、 免疫増強作用、 抗腫瘍活性、 ガン細胞増殖抑制作 用、 抗アレルギー作用、 抗炎症作用、 コレステロール低下作用、 抗血栓作用、 食物繊維 作用、 血圧降下作用、 血糖降下作用、 肝機能亢進等の様々な生理活性を有していること が知られている。 そのため、 ]3— 1， 3- 1, 6—グルカンを機能性素材や医薬品等と して利用する試みが数多くなされている。
例えば、 特開昭 57 - 149301号公報には、 不完全菌黒色菌科ァウレォバシジゥ ム (Aureobacidium) 属の菌 （微ェ研寄託 No.4257号） が産生する多糖を主成分とする整 腸剤その他の医薬が開示されている。
特公平 5— 4063号公報には、 フラクトオリゴ糖と/ 3— 1, 3— 1, 6グルカンを 主成分とする飲食品の製造方法が開示されており、 この飲食品は、 健康維持飲料 （腸内 ビフィズス菌の増殖、 便秘防止、 免疫増強） 、 整腸剤等に利用できる旨記載されてい る。
特開 2002— 335926号公報には、 β— 1, 3- 1, 6—グルカン及びリンゴ 抽出物を含有する組成物が開示されており、 この組成物が飲料や皮膚塗布剤として有用 である旨、 該飲料には、 各種アレルギー症状の低減効果、 免疫異常疾患の改善効果、 が ん抑制効果、 血管障害疾患の改善効果、 ウィルス性疾患の改善効果、 泌尿器系疾患の改 善効果、 便秘、 下痢等の消化器系疾患の改善効果が期待できる旨記載されている。 特開平 6— 34070 1号公報には、 ォウレォバシディウム プルランス (Aureobasidium pullulans) IF04466菌株の培養上清から得られる、 — 1， 3結合グ ルコース残基を主鎖として、 とれに /3— 1， 6結合グルコース残基の分岐鎖を多数側鎖 として有する数平均分子量 1万〜 500万の高分岐度 ]3—グルカンが、 経口的に高い抗 腫瘍活性及び免疫賦活活性を有し、 医薬、 食品添加物、 飼料添加物等として有用である 旨が記載されている。
特開 2002— 204687号公報には、 β - 1, 3— 1, 6グルカンを主成分とす るァウレォバシジゥム培養液が、 各種疾病に対する医薬品として応用できる旨が記載さ れている。
特開昭 62— 205008号公報には、 結合様式 3— 1, 3— 1， 6—グルカンを含 有する化粧品等の添加剤が開示されている。 そして、 ）3— 1， 3- 1, 6—グルカンを 水溶液にして、 そのまま皮膚や毛髪に塗布すると、 従来の化粧料、 整髪料、'軟膏添加材 に比べて皮膚や毛髪面の皮膜形成性、 保湿性が優れていることが記載されている。 · 特開平 10— 3105 1 5号公報には、 微生物により生産される少なくとも 1種の細 胞外ホモ多糖、 又は該細胞外ホモ多糖と少なくとも 1種のアミノ酸とを含むことを特徴 とする入浴剤が開示されている。 そして、 前記細胞外ホモ多糖の構成糖が 3—D -ダル コースであること、 前記 |3— D-グルコースが、 オーレォバシジゥム属に属する微生物 により生産される /3— 1, 3— 1， 6—グルカンであることが記載されている。
一方、 乳酸菌を利用した免疫賦活剤として、 例えば、 特開 200 1— 48796号公 報には、 Enterococcus faecalis AD101菌株の死菌体を主成分とする免疫調整剤が開示 されている。
また、 特開 2003— 1 1 3 1 14号公報には、 ェンテロコッカス属に属する乳酸菌 および麹菌を液体培養によって培養された菌体を有効成分とすることを特徴とする免疫 賦活素材が開示されている。
更に、 i3—グルカンと乳酸菌を併用したものとして、 例えば、 特開 20''03— 407 85号公報には、 iS—グルカンを含有する素材と、 乳酸産生菌の加熱処理菌体とを有効 成分として含有することを特徴とする感染抑制組成物が開示されている。
また、 特開 2001— 323001号公報には、 体内における TNFをはじめとする サイト力インの産生を促進し、 その作用を増強させ、 抗体産生能或いは免疫作用全体を 増強することによって各種感染症や腫瘍発生の予防に役立つ、 低分子量の水溶性 )3—グ ルカンが開示されており、 この /3—グルカンと乳酸菌を併用することが記載されてい る。
しかしながら、 ァゥレオバシジゥム属 (Aureobasidium sp.) に属する菌 （通称、 黒 酵母） が産生する β - 1, 3- 1, 6—グルカン単独では、 上記各種の生理活性効果が 未だ十分とは言えず、 更に効果の高い素材が求められていた。 発明の開示
本発明の目的は、 ァゥレオバシジゥム属 (Aureobacidium sp. ) に属する菌の培養物 に含まれる 3— 1, 3— 1， 6—グルカンの生理活性効果を更に高めた |3—グルカン含 有組成物及び該組成物を利用した便秘改善剤、 免疫賦活剤並びに皮膚用保湿剤を提供す ることにある。
上記目的を達成するため、 本発明の一つは、 ァゥレオバシジゥム属 (Aureobasidium sp.) に属する菌を培養して得られる /3— 1, 3- 1, 6—グルカンを含む培養物と、 乳酸菌菌体とを有効成分として含有することを特徴とする ]3—グルカン含有組成物であ る。
本発明の) 3—グルカン含有組成物は、 ァゥレオバシジゥム属 (Aureobasidium sp.) に属する菌を培養して得られる /3— 1, 3- 1, 6—グルカンを含む培養物を有効成分 として含有するので、 ）3— 1， 3— 1， 6—グルカンのみならず、 培養物に含まれる 様々な有用成分を損なうことなく利用できる。 また、 乳酸菌菌体を有効成分として含有 するので、 前記培養物に含まれる有用成分と乳酸菌菌体との相乗効果により、 様々な生 理活性効果が期待できる。 また、 上記各成分は飲食品等に利用されている天然物由来の 成分であるため安全性も高い。
. 上記発明においては、 前記ァゥレオバシジゥム属 (Aureobasidium sp.) に属する菌 は、 ァウレォバシジゥム プルランス M-1 (Aureobasidium pullulans M-l) (FERM BP - 08615) であることが好ましい。 この態様によれば、 より生理活性の高い i3— 1， 3- 1， 6—グルカンを簡単に調製することができる。
また、 固形分中に、 前記培養物を i3— 1, 3— 1， 6—グルカン換算で 1〜80質 量％含有し、 かつ前記乳酸菌菌体を 4〜95質量％含有することが好ましい。 更に、 前記乳酸菌はェンテロコッカス ·フエカリス (Enterococcus f aecal i s) であ ることが好ましい。
これらの態様によれば、 β - 1， 3 - 1 , 6—グルカンと乳酸菌菌体による相乗的な 生理活性効果をより期待することができる。
更にまた、 前記乳酸菌は加熱殺菌されたものであることが好ましい。 この態様によれ ば、 加熱処理が必要な商品にも幅広く添加することができる。 また、 保存安定性が高 く、 飲食品や医薬品等の原料として用いる場合の安全性も非常に高い。
本発明のもう一つは、 前記 β—グルカン含有組成物を有効成分として含有する便秘改 善剤である。
本発明の便秘改善剤は、 上記 /3—グルカン含有組成物を有効成分として含むので、 ァ ウレォバシジゥム属 (Aureobas i dium sp. ) に属する菌を培養して得られる jS _ 1 , 3 一 1， 6—グルカンを含む培養物に含まれる様々な有用成分と乳酸菌菌体との相乗効果 により、 優れた便秘改善効果が期待できる。
本発明のもう一つは、 前記 /3—グルカン含有組成物を有効成分として含有する免疫賦 活剤である。
本発明の免疫陚活剤は、 上記) 3—グルカン含有組成物を有効成分として含むので、 ァ ウレォバシジゥム属 (Aureobas i dium sp. ) に属する菌を培養して得られる _ 1 , 3 一 1， 6—グルカンを含む培養物に含まれる様々な有用成分と乳酸菌菌体との相乗効果 により、 優れた免疫賦活効果が期待できる。
本発明のもう一つは、 前記 0—グルカン含有組成物を有効成分として含有する皮膚用 保湿剤である。
本発明の皮膚用保湿剤は、 上記 i3—グルカン含有組成物を有効成分として含むので、 ァゥレオバシジゥム属 (Aureobas i d i um sp. ) に属する菌を培養して得られる 一 1 , 3 - 1 , 6—グルカンを含む培養物に含まれる様々な有用成分と乳酸菌菌体との相乗効 果により、 保湿効果の持続性や使用感に優れた皮膚用保湿剤を提供できる.。. 図面の簡単な説明
図 1は、 リステリァ菌摂取後の生存率と経過日数との関係を示す図である。
図 2は、 リステリァ菌摂取後の生存率に及ぼす被験物質の影響を示す図である。 図 3は、 リステリア菌摂取後の平均生存日数と被験物質との関係を示す図である。 図 4は、 リステリア菌摂取後の脾臓内菌数の経時的変化に及ぼす被験物質の影響を示 す図である。
図 5は、 リステリア菌摂取後、 フローサイトメータを用いて細胞表面分子の解析を行 つた結果を示す図 （写真） である。
図 6は、 被験者 1 (2 0代女性） における表皮角質層水分量 （皮表コンダクタンス S) の経時的変化を測定した結果を示す図である。
図 7は、 被験者 2 (2 0代女性） における表皮角質層水分量 （皮表コンダクタンス S) の経時的変化を測定した結果を示す図である。
図 8は、 被験者 3 (3 0代女性） における表皮角質層水分量 （皮表コンダクタンス S) の経時的変化を測定した結果を示す図である。
図 9は、 被験者 4 (40代女性） における表皮角質層水分量 （皮表コンダクタンス S) の経時的変化を測定した結果を示す図である。
図 1 0は、 被験者 5 (5 0代女性） における表皮角質層水分量 （皮表コンダクタンス S) の経時的変化を測定した結果を示す図である。 発明を実施するための最良の形態
本発明において、 ァゥレオバシジゥム属 (Aureobasidium sp. ) に属する菌を培養し て得られる培養物 （以下、 単に培養物という。 ） としては、 ァゥレオバシジゥム属
(Aureobasidium sp.) に属し、 J3— 1 , 3 - 1, 6—グルカン； ¾産能を有する菌を培 養した培養液そのもの、 該培養液の濃縮液、 あるいは該培養液から水分を除いた固形物 等を用いることができるが、 好ましくは培養液そのもの又は該培養液の濃縮液が用いら れ、 その場合、 固形分濃度が 0. 5〜 5質量％であることが好ましく、 1〜3質量％で あることがより好ましい。
上記ァゥレオバシジゥム属 (Aureobasidium sp.) に属する菌としては、 例えば、 特 開昭 5 7— 149 3 0 1号公報、 特公平 5— 40 6 3号公報、 特開 2 0 0.2— 3 3 5 9 2 6号公報等に記載された菌株を用いることができるが、 本発明においては、 ァゥレオ バシジゥム プルランス M- 1 (Aureobasidium uUulans M - 1、 独立行政法人産業技術総 合研究所特許生物寄託センター寄託番号 FERM BP- 08615) が好適に用いられる。 なお、 本発明において、 /3— 1, 3 - 1, 6—グルカンとは、 グルコースが /3— 1， 3結合し た主鎖から i3 _ l， 6結合でグルコースが分岐した構造を有するものを意味する。 上記ァゥレオバシジゥム属 (Aureobasidium sp. ) に属する菌の培養は、 公知の方法 (特開昭 5 7 - 1493 0 1号公報等参照） に準じて行うことができる。 すなわち、 炭 素源 （ショ糖） 0. · 5〜5. 0質量％、 Ν源 0. 1質量％、 その他微量物質 （例えば、 ビタミン類、 無機質） を加えた培地 （ρΗ5. 2〜6. 0) に菌を接種し、 温度 2 0〜 3 0°Cで 2〜7日間通気培養、 好ましくは通気撹拌培養すればよい。 ]3— 1， 3 - 1, 6—グルカンが生成されるにしたがって培養液の粘度が上昇し、 粘性の高いジエル状に なる。 このようにして得られる培養液には、 通常、 0. 6〜1. 8質量％の固形分が含 まれており、 該固形分中には i3— l, 3 - 1, 6—グルカンが 5〜 8 0質量％含まれて いる。 また、 β— 1' 3— 1， 6—グルカン以外にも、 例えば、 該グルカンの吸収.を助 ける成分であるリン、 カリウム、 マグネシウム、 ビタミン C等の他の有用成分も含まれ ているので、 β— 1, 3 - 1, 6—グルカンの有する生理活性効果を効率よく発揮でき る。
本発明においては、 固形分中に /3— 1， 3— 1， 6—グルカンを 1質量％以上、 好ま しくは 5質量％以上、 より好ましくは 1 0質量％以上、 特に好ましくは 2 0質量％以上 含む培養物が用いられる。 培養物中の /3— 1, 3— 1， 6—グルカン濃度が低すぎる と、 該グルカンの生理活性効果が十分に期待できない。
なお、 ιδ— 1, 3 - 1, 6 -グルカンの定量は、 例えば次のような方法で行うことが できる。 すなわち、 培養液にアミラーゼ、 アミ口ダルコシダーゼ、 プロテア一ゼ等を用 いて酵素処理を施し、 蛋白質や、 プルラン等の —グルカンを除き、 エタノール沈殿を 行う。 更に、 ガラスフィルターでろ過し、 高分子試料を得る。 このとき、 単糖を含む低 分子物質を除くため、 8 0%エタノールで充分に洗浄する。 洗浄した高分子試料はァセ トンで更に洗浄し、 硫酸を加え、 加水分解を行う。 加水分解後、 中和し、 そのろ液を採 取して、 グルコースォキシダーゼ法によりブドウ糖を定量し、 下記数式 1に基づいて計 算した値をグルカン量とする。
数式 1 ： ]3—グルカン （gZl 0 0 g) =ブドウ糖 （gZl 0 0 g) X 0. 9 + また、 iS— 1， 3 - 1, 6—グルカンの定量は、 特公平 3— 48 20 1号公報に記載 された方法に準じて行うこともできる。 すなわち、 培養終了後、 培養液を殺菌して、 遠 心分離して菌体を除去し、 得られた溶液にクロ口ホルム Zブタノール混合液を 10%
(vZv)加えて振とう （Sevage法） した後、 遠心処理してクロ口ホルムと不溶物を除 去する。 この操作を 2回繰り返した後、 エタノール沈殿により、 沈殿物を回収して蒸留 水に溶解し、 酵素処理により、 プルランを分解し、 蒸留水中で透析を行い、 透析液をェ タノ一ル沈殿して、 沈殿物 （i3— 1, 3- 1, 6—グルカン） 'を回収して収量を求めれ ばよい。
本発明においては、 上記のようにして得られる培養液をそのまま加熱又は加圧加熱殺 菌して用いてもよく、 遠心分離等により菌体を分離除去した後殺菌して用いてもよい。 また、 必要に応じて濃縮したもの、 更には乾燥したものを用いることもできる。 なお、 ァゥレオバシジゥム属 (Aureobasidium sp.) に属する菌の培養物は、 増粘安定剤等の 食品添加物として使用されており、 安全性は高い。
一方、 本発明で用いられる乳酸菌としては、 食品に使用可能な乳酸菌であれば特に制 限なく用いることができ、 具体的には、 ェンテロコッカス ·フエカリス (Enterococcus faecal is) 、 ェンテロコッカス ·フエシゥム (Enterococcus faecium 、 ラクトノ チレ ス ·ァシドフィルス (Lactobacillus acidophilus) 、 ラクトバチルス ·カゼィ
(Lactobaci 1 lus casei) 、 ·ストレフトコッカス ·クレモリス (Streptococcus cremoris) 、 ス卜レフトコッカス ·ラクテイス (Streptococcus lactis) 、 ス卜レフ卜 コッカス 'サーモフィラス (Streptococcus thermophi lus) 、 ビフイドバクテリウム - ロンガム (Bifidobacterium long腹) 、 ビフィドバクテリゥム ·ブレーべ
(Bifidobacterium breve) 、 ビフィドバクテリゥム ·ビフィダム (Bifidobacterium bifidum) 等が例示できる。 上記乳酸菌は単独で用いてもよく、 2種以上を併用しても よい。
なお、 ェンテロコッカス 'フエカリス (Enterococcus faecalis) 、 ェンテロコッカ ス ·フエシゥム (Enterococcus faecium) は乳酸菌製剤等に用いられている乳酸菌であ り、 ラクトバチルス ·カゼィ (Lactobacillus casei) 、 ラクトバチルス ·ァシドフィ ルス (Lactobacillus acidophilus) は、 チーズ、 発酵乳、 ヨーグルト、 乳酸菌飲料等 に用いられている乳酸菌であり、 ストレプトコッカス 'クレモリス (Streptococcus cremoris) 、 ストレフトコッカス 'ラクテイス (Streptococcus lactis) 、 ストレプト コッカス 'サ一モフィラス （Streptococcus thermophi lus) は、 チーズ、 ヨーグルト等 に用いられている乳酸菌であり、 ビフィドバクテリゥム .ロンガム (Bifidobacterium longum) 、 ビフィドバクテリゥム ·ブレーべ (Bifidobacterium breve) 、 ビフィドバ クテリウム 'ビフィダム (Bifidobacterium bifidum) は発酵乳等に用いられている乳 酸菌である。 したがって、 これらの乳酸菌はいずれも当業者が容易に入手できるもので める。
本発明においては、 上記の乳酸菌の中でも、 ェンテロコッカス .フエカリス
(Enterococcus faecalis, 例えば、 ATCC 19433、 ATCC 14508、 ATCC 123655, IF0 16803等） が特に好ましく用いられる。 上記培養物とェンテロコッカス 'フエカリス
(Enterococcus faecalis) とを併用することにより、 これらの成分による相乗的な生 理活性効果 （例えば、 便秘改善効果、 免疫賦活効果、 保湿効果等） がより期待できる。 本発明において、 上記乳酸菌は加熱殺菌されたものであることが好ましい。 これによ り、 加熱処理が必要な商品にも幅広く添加することができる。 また、 保存安定性が高 く、 飲食品や医薬品等の原料として用いる場合の安全性も非常に高くなり、 特に、 皮膚 用保湿剤に用いる場合に好適である。
上記乳酸菌の培養は常法にしたがって行えばよく、 例えば、 上記乳酸菌を常法にした がって培養して得られた培養物から、 濾過、 遠心分離等の方法により菌体を回収し、 水 洗後、 水等に懸濁して 80〜1 15°C、 30分〜 3秒間加熱処理すればよい。 加熱殺菌 した乳酸菌は、 必要に応じて濃縮、 乾燥してから用いてもよい。
本発明の ]3—グルカン含有組成物は、 例えば、 上記ァゥレオバシジゥム属
(Aureobasidium sp. ) に属する菌の培養液を殺菌したものに、 上記乳酸菌の加熱殺菌 菌体を混合して分散させることにより得ることができる。 また、 必要に応じて、 錠剤、 カプセル剤、 粉末、 顆粒、 液状、 ぺ一スト状、 ゼリー状等の各種形態とすることもでき る。
本発明の iS—グルカン含有組成物は、 固形分中に、 上記培養物を) 3— 1, 3- 1, 6 ーグルカン換算で 1〜80質量％含有し、 かつ上記乳酸菌菌体を 4〜 95質量％含有す ることが好ましい。 また、 上記基本的成分以外に、 香料、 甘味料、 ビタミン類、 ミネラ ル類、 オリゴ糖、 増粘多糖類、 デキストリン、 植物エキス、 その他の植物成分等を適宜 含むことができる。
本発明の^ーグルカン含有組成物は、 そのまま便秘改善剤、 免疫賦活剤、 皮膚用保湿 剤等として用いることができる。
例えば、 本発明の 3—グルカン含有組成物を便秘改善剤として用いる場合は、 固形分 中に、 上記培養物を iS— 1, 3-1, 6—グルカン換算で 1〜40質量％含有し、 かつ 上記乳酸菌菌体を 4〜 95質量％含有することが好ましく、 上記培養物を — 1, 3— 1, 6—グルカン換算で 2〜40質量％含有し、 かつ上記乳酸菌菌体を 10〜 95質 量％含有することがより好ましく、 上記培養物を /3— 1, 3— 1， 6—グルカン換算で 3〜40質量％含有し、 かつ上記乳酸菌菌体を 30〜95質量％含有することが特に好 ましい。
本発明の便！:、改善剤の有効摂取量は、 成人 1日当たり、 上記培養物を J3— 1， 3- 1, 6—グルカン換算で 0. 01〜10 g、 かつ上記乳酸菌菌体を 0. 01〜10 gで あり、 好ましくは、 上記培養物を^— 1， 3-1, 6—グルカン換算で 0. 5〜5 g、 かつ上記乳酸菌菌体を 0. 05~l gである。
本発明の便秘改善剤は、 例えば、 清涼飲料、 ゼリー飲料、 果汁飲料、 野菜ジュース、 スープ、 味噌汁、 冷凍食品、 その他の加工食品等の各種飲食品に配合することもでき る。 上記各飲食品における本便秘改善剤の添加量は、 上記の成人 1日当たりの有効摂取 量に基づいて設定すればよいが、 通常、 1〜50質量％が好ましく、 10〜20質量％ がより好ましい。 なお、 添加方法は、 特に制限はなく、 各飲食品に用いられる他の原料 と一緒に最初から添加することもできる。
また、 本発明の /3—グルカン含有組成物を免疫賦活剤として用いる場合は、 固形分中 に、 上記培養物を /3— 1， 3-1, 6—グルカン換算で 5〜80質量％含有し、 かつ上 記乳酸菌菌体を 10〜 80質量％含有することが好ましく、 更には上記培養物を β― 1, 3— 1, 6—グルカン換算で 25〜 70質量％含有し、 かつ上記乳酸菌菌体を 20 〜70質量％含有することがより好ましく、 上記培饕物を — 1, 3- 1, 6—グルカ ン換算で 30〜60質量％含有し、 かつ上記乳酸菌菌体を 30〜60質量％含有するこ とが最も好ましい。
本発明の免疫賦活剤の有効摂取量は、 成人 1日当たり、 上記培養物を ]3— 1, 3- 1, 6—グルカン換算で 0. 02〜0. 50 g、 かつ上記乳酸菌菌体を 0. 10〜0. 90 gであり、 好ましくは、 上記培養物を 0— 1, 3— 1, 6—グルカン換算で 0. 06〜 0. 40 g、 かつ上記乳酸菌菌体を 0. 15〜0. 45 gである。 また、 本発明の免疫賦活剤は、 例えば、 清涼飲料、 ゼリー飲料、 果汁飲料、 野菜ジュ —ス、 スープ、 味噌汁、 冷凍食品、 その他の加工食品等の各種飲食品に配合することも できる。 上記各飲食品における本免疫賦活剤の添加量は、 上記の成人 1日当たりの有効 摂取量に基づいて設定すればよいが、 通常、 β - 1, 3 - 1, 6グルカン換算で 0. 0 2〜0. 5 0質量％が好ましく、 0. 0 6〜0. 40質量％がより好ましい。 また、 乳 酸菌菌体に関しては、 0. 1 0〜0. 9 0質量％が好ましく、 0. 1 5〜0. 45質 量％がより好ましい。 なお、 添加方法は特に制限はなく、 各飲食品に用いられる他の原 料と一緒に最初から添加することもできる。
また、 本発明の ]3—グルカン含有組成物を皮膚用保湿剤として用いる場合は、 固形分 中に、 上記培養物を /3— 1, 3— 1, 6—グルカン換算で 1〜40質量％含有し、 かつ 上記乳酸菌の加熱殺菌菌体を 4〜 9 5質量％含有することが好ましく、 上記培養物を β — 1, 3 - 1, 6—グルカン換算で 2〜40質量％含有し、 かつ上記乳酸菌の加熱殺菌 菌体を 1 0〜9 5質量％含有することがより好ましく、 上記培養物を ;3— 1， 3 - 1, 6—グルカン換算で 3〜40質量％含有し、 かつ上記乳酸菌の加熱殺菌菌体を 3 0〜9 5質量％含有することが特に好ましい。 β—グルカンを含有する素材の配合量が少なす ぎると十分な保湿効果が得られず、 多すぎると製品の流動性 （のびやすさ） が低下し、 使用感が低下する。 また、 乳酸菌の加熱殺菌菌体の配合量が少なすぎると十分な保湿効 果の持続性が得られず、 多すぎると製品中での分散性が低下し、 均一な製品を得ること ができない。
なお、 上記培養物と上記乳酸菌の加熱殺菌菌体とを併用することにより、 保湿効果の 持続性が向上する理由は明確には分からないが、 例えば、 乳酸菌の加熱殺菌菌体が担体 となって、 /3—グルカンや水分を保持していることが考えられる。 特に、 ェンテロコッ カス ·フエカリス (Enterococcus faecalis) は、 ラクトバチルスやビフィズス菌等の 他の乳酸菌に比べて、 菌体の大きさが小さいため、 添加質量当たりの菌体数が多くな り、 保湿効果を高めることができるものと考えられる。
本発明の皮膚用保湿剤は、 そのまま化粧水や化粧液として用いてもよく、 各種皮膚用 化粧品 （例え.ば、 乳液、 クリーム、 パック等） に配合して用いてもよい。 該皮膚用保湿 剤の皮膚用化粧品への配合量は、 0. 5〜50質量％が好ましく、 5〜2 0質量％がよ り好ましい。 実施例
以下、 実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、 本発明はこれらに限定されるも のではない。 なお、 以下の説明において、 特に断りのない限り、 「％」 は 「質量％」 を 表す。
実施例 1
(1) ァゥレオバシジゥムの培養
ァウレォパシジゥム プルランス M-1 (Aureobasidium pullulans M-l) (FERM BP- 08615) の前培養液を、 ショ糖 1%、 ァスコルビン酸 0. 2%、 米糠 0. 2%を含む液 体培地 （pH5. 3) に適量接種して、 25°C、 2日間、 通気撹拌培養を行った。 培養 終了後、 この培養液を 121° (：、 15分間殺菌した。 この培養液は固形分 1%であり、 該固形分中に 35%の /3— 1, 3- 1, 6—グルカンを含んでいた。
(2) ェンテロコッカス 'フエカリス (Enterococcus faecalis) の培養
ェンテロコッカス ·フエカリス (Enterococcus faecalis, IFO 16803) を、 ロゴサ培 地で 37°C、 24時間培養した前培養液を、 酵母エキス 4%、 ポリペプトン 3%、 乳糖 10%を含む液体培地に適量接種し、 pHスタツトを用いて pH6. 8〜7. 0に苛性 ソーダ水溶液で調整しながら 37°C、 22〜24時間中和培養を行った。
培養終了後、 連続遠心機で菌体を分離、 回収した後、 水を加えて元の液量まで希釈し て再度連続遠心機で菌体を分離、 回収した。 この操作を合計 4回繰り返して菌体を洗浄 した。 次いで、 洗浄した菌体を適量の水に懸濁し、 100°C、 30分間殺菌した後、 ス プレードライヤ一を用いて菌体を乾燥して加熱殺菌菌体粉末 （5X 1012c f u/ g) を調製した。
(3) 便秘改善効果の確認
上記 （1) で得られたァウレォバシジゥム培養物と、 上記 （2) で得られた乳酸菌の 加熱殺菌菌体を用いて、 以下の方法により便秘改善効果の確認試験を行った。
試験期間は 4週間とし、 便秘体質のポランティア 10名に、 最初の 1週間 （第 1週 目） は何も投与せず、 次の 1週間 （第 2週目） は乳酸菌菌体 （200mg/日） を投与 し、 次の 1週間 （第 3週目） はァウレォバシジゥム培養物 （15ml/日） を投与し、 最後の 1週間 （第 4週目） はァウレォパシジゥム培養物 （15ml/日） 及び乳酸菌菌 体 （200mgZ日） を投与した。 そして、 各試験サンプルの投与期間 1週間における 排便回数をチェックしてもらった。 その結果を表 1に示す。
【表 1】
Figure imgf000013_0001
表 1から、 乳酸菌菌体のみを投与した場合には、 若干の便秘改善効果が認められる が、 ァウレォバシジゥム培養物のみを投与した場合は、 便秘改善効果がほとんど認めら れないことが分かる。 一方、 ァウレォバシジゥム培養物と乳酸菌菌体を併用した場合、 排便回数の増加が認められ、 明らかに便秘が改善されていることが分かる。
実施例 2
実施例 1 ( 1 ) で得られたァゥレオバシジゥム培養物 1 Lに、 実施例 1 ( 2 ) で得ら れた乳酸菌の加熱殺菌菌体 1 O gを加えて、 均一に混合して 3—グルカン含有組成物を 得た。 この —グルカン含有組成物を用いて、 以下の方法により初期感染防御効果につ いて調べた。
( 1 ) 生存率の測定
1週間予備飼育を行った BALB/cマウス （7週齢、 雌） 2 8匹 （日本エスエルシー (株） より購入） を 4群 （各群 7匹） に分け、 各群に下記の被験物質をマウス 1匹当り 2 0 0 1ずつ、 1日 1回試験期間中連続経口投与した。
試験群：上記 |3—グルカン含有組成物 比較群 1 ：ァウレォバシジゥム培養液 （実施例 1 (1) で得られたもの） 比較群 2 ：乳酸菌の加熱殺菌菌体 （実施例 1 (2) で得られたもの） を PBSに懸濁し たもの （1 g菌体 Zl 00ml)
対照群： P B S
上記各被験物質を 1週間連続経口投与した各群のマウスの尾静脈内に、 細胞内寄生性 細菌であるリステリア菌 (Listeria monocytogenes, EGD株） を 5. 4X 104 c f uZ200 lZマウス （2XLD5。） となるように接種し、 その後 2週間経過観察 を行い、 各群のマウスの生存率及び平均生存期間を求めた。
その結果を表 2及び図 1〜3に示す。 なお、 試験期間中、 水及び飼料 （商品名 「粉末 飼料 CRF— 1」 、 オリエンタル酵母株式会社製） は自由摂取とした。
【表 2】
Figure imgf000014_0001
表 2及び図 1〜3から分かるように、 試験群においては、 1例が死亡 （菌接種後 6日 目） したのみであり、 試験終了時の生存率は 85. 7%であったが、 対照群において は、 全例が死亡 （細菌接種 4日目） し、 試験終了時の生存率は 0%であった。 また、 比 較群 1においては、 2例が死亡 （菌接種 6日目に 1例、 7日目に 1例） し、 試験終了時 の生存率は 71. 4%であった。 また、 比較群 2においては、 5例が死亡 （菌接種 4日 目に 3例、 5日目に 2例） し、 試験終了時の生存率は 28. 6%であった。 試験群と他 の群間の有意差を Maim - Whitneyの U検定を用いて検定したところ、 試験群は対照群及び 比較群 2に対して危険率 1 %未満で有意差が認められた。
また、 平均生存期間に関しては、 試験群においては 12. 7日であったのに対し、 対 照群が 3. 0日、 比較群 1が 11. 5日、 比較群 2が 6. 4日であった。 試験群と他の 群間の有意差を Mann-独 itneyの U検定を用いて検定したところ、 試験群は対照群及び比 較群 2に対して危険率 1 %未満で有意差が認められた。
この結果から、 本 JS—グルカン含有組成物を経口摂取することにより、 細菌感染に おける宿主の感染抵抗性を宂進させることが示唆された。
(2) 臓器内菌数測定
上記 （1) において、 リステリア菌に対する感染抵抗性に本 /3—グルカン含有組成物 が作用をしていることが示唆されたため、 菌排除の指標となる臓器内菌数の経時的変化 について解析を行った。
1週間予備飼育を行った BALB/cマウス （7週齢、 雌） を 1群当り 30匹使用し、 上記 と同様にして各被験物質を投与した。 そして、 上記各被験物質を 1週間連続経口投与し た各群のマウスの尾静脈内に、 細胞内寄生性細菌であるリステリア菌 (Listeria monocytogenes, EGD株） を 2. 7 X 103 c f uZ 200 1 /マウス （1Z1 0 XLD50) となるように接種し、 細菌接種後 1日目、 3日目、 5日目、 7日目及び 1 0日目に逐日的に 5匹ずつ各群のマウスを屠殺し、 脾臓を回収した。
回収した脾臓をプレンダ一にてすり潰して PB S 5ml中に再懸濁し、 これを原液 とした。 この原液を 10倍階段希釈法にて希釈し、 原液及び各希釈系列液より 1 00 1取り、 TS A培地上に塗抹し 37 °C孵卵器にて 1 6時間培養した。 TSA培地上に発 育した細菌集落数を測定し、 臓器内菌数を算出した。 臓器内菌数は、 各群毎に平均値及 び標準誤差を算出した。 その結果を表 3及び図 4に示す。
【表 3】
Figure imgf000015_0001
表 3から分かるように、 対照群では、 細菌接種 3日目に脾臓内の細菌数がピークと なり、 その後は徐々に減少し菌接種 10日目に検出限界付近 （3. 75± 7. 5 CFU /脾臓） となった。 一方、 試験群においては、 菌接種後 1日目より菌の増加を認めた が、 菌接種 3日目は 1日目とほぼ同等の菌数を示し、 その後減少し菌接種 10日目では 2 7土 2 5 C F UZ脾臓となつた。 比較群 1及び比較群 2では、 菌接種後 1日目より菌 の増加を認め、 菌接種 3日目に脾臓内細菌数のピークを認め、 その後徐々に菌は減少 し、 菌接種 1 0日目には検出限界未満 （く 3. 3 3 CFUZ脾臓） となった。
この結果から、 本 —グルカン含有組成物は感染早期での免疫機構に作用しており、 感染抵抗性の亢進は、 成熟 T細胞による攻撃性の強い免疫機構よりも未熟型 T細胞もし くは貪食細胞による非特異的免疫機構により行われている可能性が推測された。
(3) 細胞表面分子の解析
上記 （1) 、 (2) において、 生存率、 生存期間及び臓器内菌数に差異が認められた ため、 リステリア菌に対する感染抵抗性に関与する生体側の細胞に関してフローサイト メータによる解析を行った。
上記 （2) の臓器内菌数測定と同時に腸間膜リンパ節 （MLN) を回収した。 回収 した MLNをスライドガラスにてすり潰し、 ステンレスメッシュにて余分な組織片を除 去した後、 リンパ球を 1 X 1 06/m 1となるように FAC S用 Ha n k' s液に再懸 濁した。 下記 （a) 〜 （d) に示す 4種類の染色パターンにてリンパ球を染色し、 フロ 一サイトメ一夕 （Epics- XL; Beckman Coulter) を用いて細胞 （T細胞中心） 表面分子の 解析を行った。 その結果を表 4及び図 5に示す。
(a) Cy_chrome(Cy)標識抗 CD3mAb (T細胞固有認識マーカー) /FITC標識抗 TCRo; iSmAb (T細胞型別認識マーカ一） /ΡΕ標識抗 CD4mAb/biotin標識抗 TCRr <5 (T細胞型別認識マ
—カー) mAb
(b) Cy標識抗 CD3mAb/FITC標識抗 TCRa i3mAb/PE標識抗 CD4mAb/biotin標識抗 CD69mAb (早期活性化マーカー）
( c ) Cy標識抗 CD3mAb/F I TC標識抗 TCR β mAb/PE標識抗 CD4mAb/b ioti n標識抗 CD25mAb (IL-2RQ! ；活性化マーカー）
(d) Cy標識抗 CD3mAb/FITC標識抗 TCRo! j3mAb/PE標識抗 CD122mAb (IL-2R/3 ；活性化マ 一力一） /1]10 11標識抗 04111八 【表 4】
Figure imgf000017_0001
表 4及び図 5に示されるように、 試験群、 比較群 1、 2は、 対照群に比べて CD4陽 性 α 型 T細胞の増加が認められた。 特に、 試験群においては、 比較群 1、 2よりも増 加の割合が多かった。 なお、 菌感染 3日後においては、 いずれの群もほぼ同様の割合を 示した。 一方、 CD 4陽性細胞中の活性化マ一カーに関しては、 CD25分子 （I L一 2 R a ) 、 C D 122分子 （ I L一 2 R j3 ) 及び C D 69分子 （早期活性化マーカー） いずれも各群を問わずほぼ同等の発現程度であった。
' この結果から、 試験群では感染前と感染後も CD4陽性 Q! i3型 T細胞の著しい変化 は認められなかったので、 本 i3—グルカン含有組成物による感染抵抗性の亢進は、 分化 の低い細胞集団の機能亢進によるものと推測された。
なお、 血液中のサイト力インに関して、 市販の I FN—ァ測定キット （ゲンザィム 社製） の方法で測定したところ、 表 5に示すように、 試験群では感染 3日目に I FN— ァ量が高値を示した。 CD 4陽性 α/3型 T細胞の変化は認められなかったことより、 I FN-rを産生している細胞はマクロファージの可能性が考えられた。
【表 5】
Figure imgf000017_0002
実施例 3
実施例 1 (1) で得られたァウレォバシジゥム培養培養液と、 実施例 1 (2) で得ら れた乳酸菌の加熱殺菌菌体を用いて、 下記に示す被験サンプルを調製し、 5名の女性ポ ランティア （20代 2名、 30代、 40代、 50代各1名） による保湿効果の確認試験 を行った。
•被験サンプル
1 ：ァゥレオバシジゥム培養液のみ
2 ：乳酸菌加熱殺菌菌体 1 %水懸濁液
3 ：乳酸菌加熱殺菌菌体 1 %含有ァウレォバシジゥム培養液
4 ：水 （対照）
各被験者は、 測定部位 （前腕内側屈曲部より 5 cm下の幅 3 cmX長さ 10 cmの範 囲） を石鹼で洗浄した後、 温度 18〜20°C、 湿度 50〜55%に調整された恒温恒湿 条件下の室内で 20分間安静にしてもらった。 そして、 上記測定部位を 4つに区分け し、 各区に上記被験サンプル 1〜4をそれぞれ 10^ 1塗布した後、 表皮角質層水分量 (皮表コンダクタンス S) を、 高周波インピーダンス法を応用した表皮角質層水分量 測定装置 「SKINCON— 200」 （商品名、 アイ ·ビィ *エス株式会社製） を用い て各区を経時的に測定した。 なお、 表皮角質層水分量の測定は、 被験サンプル塗布 5分 前 （一 5分） 、 塗布直後 （0分） 、 塗布後 10、 20、 30、 60分に行った。 その結 果を図 6〜 10に示す。 なお、 図 6〜 10において、 1〜 4はそれぞれ被験サンプル 1 〜 4に対応する。
図 6〜 10から、 被験サンプル 3を塗布した場合、 被験サンプル 1、 2に比べて、 塗 布後時間が経過しても、 表皮角質層水分量が高く維持されており、 保湿効果が持続して いることが分かる。 また、 被験者に使用感をアンケートしたところ、 ベたつきや油っぽ さもなく、 使用感もよいとのことであった。 産業上の利用可能性 ' 以上説明したように、 本発明の 3—グルカン含有組成物は、 ァゥレオバシジゥム属 (Aureobasidium sp.) に属する菌を培養して得られる] 3—： , 3— 1, 6—グルカン を含む培養物と乳酸菌菌体とを含有するので、 これらの成分の相乗効果によつて優れた 生理活性効果が期待でき、 便秘改善剤、 免疫賦活剤、 皮膚用保湿剤等として利用するこ とができる。

Claims

請 求 の 範 囲
1. ァゥレオバシジゥム属 (Aureobasidium sp.) に属する菌を培養して得られる 3 一 1, 3- 1, 6—グルカンを含む培養物と、 乳酸菌菌体とを有効成分として含有する ことを特徴とする |3—グルカン含有組成物。
2. 前記ァゥレオバシジゥム属 (Aureobasidium sp. ) に属する菌は、 ァウレォパシ ジゥム プルランス M- 1 (Aureobasidium pullulans M-l) (FERM BP-08615) である請 求項 1記載の β一グルカン含有組成物。
3. 固形分中に、 前記培養物を 1， 3- 1, 6—グルカン換算で 1〜80質 量％含有し、 かつ前記乳酸菌菌体を 4〜95質量％含有する請求項 1又は 2記載の 13— グルカン含有組成物。
4. 前記乳酸菌はェンテロコッカス ·フエカリス (Enterococcus faecalis) である 請求項 1〜 3のいずれか一つに記載の β―グルカン含有組成物。
5. 前記乳酸菌は加熱殺菌されたものである請求項 1〜 4のいずれか一つに記載の β—グルカン含有組成物。
6. 請求項 1〜 5のいずれか一つに記載の β一グルカン含有組成物を有効成分とし て含有する便秘改善剤。
7. 請求項 1〜 5のいずれか一つに記載の β一グルカン含有組成物を有効成分とし て含有する免疫賦活剤。
8. 請求項 1 ~ 5のいずれか一つに記載の β一ダル力ン含有組成物を有効成分とし て含有する皮膚用保湿剤。
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Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100666055B1 (ko) 2005-01-19 2007-01-09 한국효소 주식회사 수용성 베타글루칸의 제조방법
KR100709289B1 (ko) * 2005-09-23 2007-04-19 주식회사 글루칸 β-글루칸을 포함하는 항암 및 면역 기능 증강용 약학조성물
WO2008018143A1 (fr) * 2006-08-10 2008-02-14 House Wellness Foods Corporation Agent hydratant
WO2009154320A1 (en) * 2008-06-19 2009-12-23 Korea Research Institute Of Bioscience And Biotechnology Aureobasidium pullulans np-1221 kctc 11265bp and a producing method for exo-type beta-glucan using the same
JP2013155203A (ja) * 2006-11-02 2013-08-15 Aureo Co Ltd 生体治癒促進剤

Families Citing this family (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN100341521C (zh) * 2003-03-07 2007-10-10 奥力有限公司 含β－葡聚糖的组合物
JP4268105B2 (ja) * 2004-09-09 2009-05-27 株式会社アウレオ β−グルカン含有組成物、その製造方法及び該組成物を含む飲食品若しくは皮膚用保湿剤
JP4777365B2 (ja) * 2005-02-15 2011-09-21 シャーウッド エル． ゴルバック プロバイオティクスおよび単離されたβ−グルカンを含有する食物ならびにその使用方法
WO2009063221A2 (en) * 2007-11-13 2009-05-22 Biotec Pharmacon Asa Methods of treating or preventing inflammatory diseases of the intestinal tract
US20100233128A1 (en) * 2009-03-13 2010-09-16 Mci Media Capital Inc. Natural Skin Products Containing Dairy and Processes
CN101953855A (zh) * 2009-07-21 2011-01-26 明博医药技术开发（上海）有限公司 一种乳酸菌细胞壁裂解物的制备方法和用途
TWI496578B (zh) * 2009-10-08 2015-08-21 Aureo Co Ltd 流感病毒感染症的治療劑
CN102732468B (zh) * 2012-07-06 2014-04-23 北京农学院 一株粪肠球菌及其广谱抑菌作用
KR102189084B1 (ko) * 2013-08-30 2020-12-10 주식회사 아리바이오 흑효모 배양액을 포함하는 피부상태 개선용 화장료 조성물
JP6146676B2 (ja) * 2013-10-09 2017-06-14 東レ株式会社 免疫賦活化剤
US8937791B1 (en) 2013-11-27 2015-01-20 Seagate Technology Llc Slider having heater with adjacent high thermal conductivity layer
KR101693574B1 (ko) * 2014-09-23 2017-01-06 한국 한의학 연구원 틴달화 유산균 사균체를 유효성분으로 포함하는 피부 보습 또는 주름개선용 조성물
JP6185041B2 (ja) * 2015-12-04 2017-08-23 一丸ファルコス株式会社 表皮ブドウ球菌由来のグリセロール産生促進剤、皮膚表皮角化細胞由来の抗菌ペプチド産生促進剤、およびそれらの皮膚保護用外用剤への利用
JP2019510037A (ja) 2016-03-31 2019-04-11 ゴジョ・インダストリーズ・インコーポレイテッド 抗菌ペプチド刺激性洗浄組成物
WO2017173241A1 (en) 2016-03-31 2017-10-05 Gojo Industries, Inc. Sanitizer composition with probiotic/prebiotic active ingredient
CN106509918A (zh) * 2016-11-15 2017-03-22 金建文 一种以食品级β‑葡聚糖为主要原料，促进排毒通便、提高免疫力的组合物及其制备方法
CA3043748A1 (en) 2016-11-23 2018-05-31 Gojo Industries, Inc. Sanitizer composition with probiotic/prebiotic active ingredient
TWI623616B (zh) * 2016-11-30 2018-05-11 財團法人食品工業發展研究所 黑酵母菌、生產β－葡聚糖之培養基與方法、黑酵母菌培養物與含其組成物
US10260080B2 (en) 2016-11-30 2019-04-16 Food Industry Research And Development Institute Aureobasidium pullulans, culturing medium and method for producing B-glucan, a culture of aureobasidium pullulans and a composition comprising the same
CN111491644A (zh) 2017-11-20 2020-08-04 株式会社爱茉莉太平洋 包含出芽短梗霉菌株的培养物或者提取物的用于改善微细粉尘引起的皮肤损伤的组合物
KR102096545B1 (ko) * 2019-08-27 2020-04-03 주식회사 아리바이오 멜라닌색소를 생산하지 않는 베타-글루칸 고생산성 오레오바시디움 풀루란스 균주를 이용한 피부 보습, 주름개선 및 미백용 화장료 조성물

Citations (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS61146192A (ja) * 1984-12-17 1986-07-03 Satoshi Shinohara フラクトオリゴ糖とβ―１．３―１．６グルカンを主成分とする飲食物の製造方法
JPS62205008A (ja) * 1986-03-05 1987-09-09 Bio Bai Daimaru:Kk 化粧品等の添加剤
JPH01137990A (ja) * 1987-11-20 1989-05-30 Daiichi Togyo Kk ビフィズス菌の増殖活性を有する多糖
WO1998026787A1 (en) * 1996-12-19 1998-06-25 The University Of New South Wales Prebiotics and probiotics
JPH10310515A (ja) * 1997-05-10 1998-11-24 Tomoko Saegusa 入浴剤
JP2001048796A (ja) * 1999-08-10 2001-02-20 Advance Co Ltd 感染症予防機能及び免疫関連疾患の軽減機能を有する腸内細菌由来乳酸菌エキス及び死菌体粉末とその食品応用
JP2001231589A (ja) * 2000-02-18 2001-08-28 Sofi:Kk 乳酸の発酵方法
JP2001323001A (ja) 2000-05-16 2001-11-20 Asahi Denka Kogyo Kk 免疫増強作用を有する低分子化βグルカン
JP2001354570A (ja) * 2000-06-15 2001-12-25 Ichimaru Pharcos Co Ltd 免疫賦活剤及びそれを利用した香粧品
JP2002238494A (ja) * 2000-12-15 2002-08-27 Sunstar Inc 乳酸菌発酵液の製造方法及び該発酵液を原料とする食品
JP2002531510A (ja) * 1998-12-09 2002-09-24 エヌ・ヴイ・ヌートリシア オリゴ糖及びプロバイオティクスを含有する調合物
JP2003040785A (ja) * 2001-05-21 2003-02-13 Combi Corp 感染抑制組成物及びそれを含有する飲食品
JP2004121192A (ja) * 2002-10-01 2004-04-22 Katsunori Kodama アウレオバシジウム培養液を添加することによる乳酸菌強化乳発酵食品の製造方法及び乳酸菌強化乳発酵食品

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2001190231A (ja) * 1999-10-29 2001-07-17 Oriental Yeast Co Ltd 養魚用の抗病性組成物およびその使用方法
JP2002239494A (ja) * 2001-02-15 2002-08-27 Kawasaki Heavy Ind Ltd 屎尿等処理方法及びその装置
JP3523220B2 (ja) * 2001-05-14 2004-04-26 一光化学株式会社 皮膚塗布剤
DE20202562U1 (de) * 2002-02-19 2002-05-23 Orthomol pharmazeutische Vertriebs GmbH, 40764 Langenfeld Mikronährstoffkombinationsprodukt mit Pro- und Prebiotika
CN100341521C (zh) * 2003-03-07 2007-10-10 奥力有限公司 含β－葡聚糖的组合物

Patent Citations (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS61146192A (ja) * 1984-12-17 1986-07-03 Satoshi Shinohara フラクトオリゴ糖とβ―１．３―１．６グルカンを主成分とする飲食物の製造方法
JPS62205008A (ja) * 1986-03-05 1987-09-09 Bio Bai Daimaru:Kk 化粧品等の添加剤
JPH01137990A (ja) * 1987-11-20 1989-05-30 Daiichi Togyo Kk ビフィズス菌の増殖活性を有する多糖
WO1998026787A1 (en) * 1996-12-19 1998-06-25 The University Of New South Wales Prebiotics and probiotics
JPH10310515A (ja) * 1997-05-10 1998-11-24 Tomoko Saegusa 入浴剤
JP2002531510A (ja) * 1998-12-09 2002-09-24 エヌ・ヴイ・ヌートリシア オリゴ糖及びプロバイオティクスを含有する調合物
JP2001048796A (ja) * 1999-08-10 2001-02-20 Advance Co Ltd 感染症予防機能及び免疫関連疾患の軽減機能を有する腸内細菌由来乳酸菌エキス及び死菌体粉末とその食品応用
JP2001231589A (ja) * 2000-02-18 2001-08-28 Sofi:Kk 乳酸の発酵方法
JP2001323001A (ja) 2000-05-16 2001-11-20 Asahi Denka Kogyo Kk 免疫増強作用を有する低分子化βグルカン
JP2001354570A (ja) * 2000-06-15 2001-12-25 Ichimaru Pharcos Co Ltd 免疫賦活剤及びそれを利用した香粧品
JP2002238494A (ja) * 2000-12-15 2002-08-27 Sunstar Inc 乳酸菌発酵液の製造方法及び該発酵液を原料とする食品
JP2003040785A (ja) * 2001-05-21 2003-02-13 Combi Corp 感染抑制組成物及びそれを含有する飲食品
JP2004121192A (ja) * 2002-10-01 2004-04-22 Katsunori Kodama アウレオバシジウム培養液を添加することによる乳酸菌強化乳発酵食品の製造方法及び乳酸菌強化乳発酵食品

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
See also references of EP1602377A4

Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100666055B1 (ko) 2005-01-19 2007-01-09 한국효소 주식회사 수용성 베타글루칸의 제조방법
KR100709289B1 (ko) * 2005-09-23 2007-04-19 주식회사 글루칸 β-글루칸을 포함하는 항암 및 면역 기능 증강용 약학조성물
WO2008018143A1 (fr) * 2006-08-10 2008-02-14 House Wellness Foods Corporation Agent hydratant
JPWO2008018143A1 (ja) * 2006-08-10 2009-12-24 ハウスウェルネスフーズ株式会社 保湿剤
US8114658B2 (en) 2006-08-10 2012-02-14 House Wellness Foods Corporation Method of moisturizing skin
JP5121715B2 (ja) * 2006-08-10 2013-01-16 ハウスウェルネスフーズ株式会社 保湿剤
JP2013155203A (ja) * 2006-11-02 2013-08-15 Aureo Co Ltd 生体治癒促進剤
JP5331482B2 (ja) * 2006-11-02 2013-10-30 株式会社アウレオ 生体治癒促進剤
WO2009154320A1 (en) * 2008-06-19 2009-12-23 Korea Research Institute Of Bioscience And Biotechnology Aureobasidium pullulans np-1221 kctc 11265bp and a producing method for exo-type beta-glucan using the same

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