JP2002531510A - オリゴ糖及びプロバイオティクスを含有する調合物 - Google Patents

オリゴ糖及びプロバイオティクスを含有する調合物

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Abstract

(57)【要約】 微生物を含有する調合物において、生きたまま腸まで到達する微生物の割合を増大させる。 【解決手段】本発明は、健康増進作用を有する調合物、特に、消化管の疾患の予防及び/又は治療のための調合物であって、単一又は複数のプロバイオティクスと単一又は複数の不可消化性のオリゴ糖とを含有する調合物に関する。プロバイオティクスは乳酸桿菌属又はビフィドバクテリウム属系統などの細菌系統から、又はサッカロミセス属の系統などの酵母菌系統から選択されるのが好ましい。

Description

【発明の詳細な説明】
【0001】 本発明は、健康増進作用を有する調合物、特に、消化管とりわけ腸管の疾患の
予防及び/又は治療のための調合物に関する。 この出願は、特に、プロバイオティクス及び不可消化性のオリゴ糖を含有する
この種の調合物に関する。
【0002】 ある種の微生物は腸感染などの腸疾患に対する予防効果と治療効果の両方を有
していることが知られている。これらの微生物がヒトや動物に投与されると、そ
れらは病原性バクテリアと競争して、栄養分及び/又は腸壁上の付着部位を奪い
合い、その結果として、病原性バクテリアの数が減少し、感染が防止又は低減さ
れる。そのような微生物は一般に「プロバイオティクス(probiotics)」と呼ばれ
ている。
【0003】 これらの微生物が最適作用を有するためには、それらは生きたまま腸まで到達
しなければならない。生きた微生物を腸に投与することのさらに有用な効果は、
たとえば、それらの微生物が腸内に存在するオリゴ糖を発酵させ、それによって
、たとえば、短鎖の脂肪酸が形成されることである。 さらに、可能な限り多数の微生物が生きたまま腸へ到達すれば、経済的見地か
ら有用である。プロバイオティクスを含有する通常の調合物においては、生きた
まま腸まで到達する微生物の割合は低い場合が多い。
【0004】 したがって、本発明の目的はそのようなプロバイオティクスを含有する調合物
であって、投与された微生物が高い割合で生きたまま腸へ到達する調合物を開発
することである。 本発明の別の目的は腸の疾患の治療に使用できる調合物及び/又は腸の予防措
置のために使用できる調合物を開発することである。
【0005】 本発明は健康増進作用を有する調合物、特に、消化管とりわけ腸管の疾患の予
防及び/又は治療のための調合物であって、プロバイオティクス及び不可消化性
のオリゴ糖を含有する調合物に関する。 いかなる理論にも拘束されなければ、次のように仮説を立てることができる。
すなわち、オリゴ糖はプロバイオティクスのための基質を形成し、その結果とし
て、前記の微生物が生きたまま腸まで到達する可能性が高まり、それにより、そ
れら微生物が腸内に存在するオリゴ糖の助けを借りて、それらの有用な作用に寄
与できる可能性が増大するというものである。したがって、オリゴ糖はまた「プ
レバイオティクス(prebiotics)」と呼ぶことができる。
【0006】 プロバイオティクス及び不可消化性のオリゴ糖はプロバイオティクスの細胞1
8から1011個当たり1から5gの割合で調合物中に存在する。 使用されるオリゴ糖はいわゆる「不可消化性のオリゴ糖」、すなわち、ヒトや
動物の体に吸収されないオリゴ糖から選択される。これらのオリゴ糖は、概して
、2から20の重合度を有する。このことは、オリゴ糖が2から20の単糖類単
位から成ることを意味している。重合度が2未満の場合、換言すれば、単糖類の
場合には、その調合物は有効ではない。その理由は、そのような単糖類はヒト又
は動物の体に吸収されるからである。重合度が20を越える場合には、オリゴ糖
はその有効な作用を喪失する。
【0007】 オリゴ糖は、好ましくは、2から10、その中でも、2から6、さらに好まし
くは、3から10、特に、3から6の重合度を有する。 本出願においてオリゴ糖という用語が使用される場合、この用語は単一の特定
の鎖長を有するオリゴ糖及び異なる鎖長を有するオリゴ糖の混合物の両方を指す
のに使用されている。しかしながら、異なる鎖長を有するオリゴ糖の混合物が好
ましい。
【0008】 さらに、オリゴ糖は通常は全部が二糖類から成っているわけではない。二糖類
の含有率は通常90%未満であり、場合によっては60%未満である。 平均重合度は概ね2.1よりも大きく、通常は2.5よりも大きい。 本発明において使用されるオリゴ糖は、一般に、さらに次のような基準で選択
される。つまり、高速陰イオン交換クロマトグラフィーによる測定において、そ
れらの少なくとも20%が調合物中に存在するプロバイオティック微生物のため
の基質として使用可能なものが選択される。
【0009】 好ましいオリゴ糖の例はトランスガラクトオリゴ糖(TOS)、フラクトオリゴ糖(
FOS)及びそれらの混合物である。 オリゴ糖が単一又は複数の多糖類の加水分解生成物の形態で調合物に添加され
れば、特に有用である。多糖類は、たとえば、β−(アラビノ)ガラクタン(β
-(arabino)galactans)、β−(アラビノ)キシラン(β-(arabino)xylans)、
β−グルカン(β-glucans)、β−グルコマンナン(β-glucomannans)、β−
ガラクトマンナン(β-galactomannans)、α−アラバン(α-arabans)、イヌ
リン(inulin)及びそれらの組み合わせから選択されるものである。オリゴ糖の
外に、そのような加水分解生成物はさらに別の成分、たとえば、単糖類及び20
を越える重合度を有する糖類を含有することもできる。しかしながら、加水分解
生成物は少なくとも50%、好ましくは、少なくとも70%の不可消化性のオリ
ゴ糖を含有していなくてはならない。
【0010】 良好に加水分解される多糖類はβ−(アラビノ)ガラクタン、β−マンナン及
びキシランである。 また、上記のオリゴ糖を主体として構成されている単一又は複数の繊維の加水
分解生成物を使用することもできる。これらの繊維としては、オート麦、小麦、
じゃがいも、砂糖大根、大豆多糖類などからの繊維がある。 多糖類及び/又は繊維の加水分解自体は周知の方法、たとえば、適当な酵素を
使用した方法で行われる。
【0011】 調合物中のオリゴ糖の濃度は、一日当たり0.5から20gが投与されるよう
に調節される。必要に応じて、この投与は一日を通じて分散させることができる
。ただし、投与されるオリゴ糖の総量が上記の範囲内に維持されることが条件で
ある。一般的には、調合物は一日に2から4回投与される。 一般に、オリゴ糖は調合物総量に対して5重量%から50重量%の割合で調合
される。
【0012】 本発明に適したプロバイオティクスは一般に知られているものである。それら
は、一般に、食品調合物への使用に適した単一又は複数の細菌系統、たとえば、
食品調合物ヘの使用に適した乳酸菌、食品調合物への使用に適した単一又は複数
の酵母菌系統、又はそれらの組み合わせである。これらのプロバイオティクスは
通常GRAS(「一般に安全と認められた」)ステータスを有するものである。 好ましい細菌系統は、たとえば、本願出願人によって出願されたヨーロッパ出
願第97202900.3号に記載されているものから選択される。利用できる他のプロバ
イオティクスはペジオコックス属(Pediococci)、プロピオニバクテリウム属(Pro
pionibacteria)、ロイコノストック属(Leuconostoc species)である。乳酸桿菌
属(Lctobacillus)、ビフィドバクテリウム属(Bifidobacterium genera)及びそれ
らの組み合わせが好ましいと思われる。
【0013】 使用されるビフィドバクテリウム系統は、ヒトや動物への投与に適しているも
の、好ましくは、ヒトや動物への投与が認められているものであれば、どのよう
な系統でもよい。このような系統としては、たとえば、ビフィドバクテリウム、
ビフィダム(bifidum)、ビフィドバクテリウムブリーブ(Bifidobacterium breve)
、ビフィドバクテリウムラクティス(Bifidobacterium lactis)又はビフィドバク
テリウムロンガム(Bifidobacterium longum)又はそれらの組み合わせがある。 乳酸桿菌系統としては、主として、好ましくは独占的に、右旋性(L+)ラク
タートを生成するものを選択することが好ましい。この意味するところは、生成
されるラクタートはその5%未満、好ましくは、2%未満が左旋性ラクタートで
あるということである。もちろん、微生物はラクタートに加えて他の代謝産物を
生成する可能性があり、微生物の有用な作用は(また)これら付加的な代謝産物
の形成に依存することがあり得る。
【0014】 これらの例は、アシドフィルス菌(Lactobacillus acidophilus)、乳酸短桿菌(
Lactobacillus brevis)、パラカセイ菌(Lactobacillus (para)casei)、発酵乳酸
桿菌(Lactobacillus fermentum)、ラクトバチルスプランタラム(Lactobacillus
plantarum)、ラクトバチルスラムノサス(Lactobacillus rhamnosus)及びそれら
の組み合わせである。 本発明において使用可能な酵母菌系統は、ヒトや動物への投与に適しているも
の、好ましくは、ヒトや動物への投与が認められているものであれば、どのよう
な系統でもよい。このような系統としては、たとえば、サッカロミセス属(genus
Saccharomyces)がある。適したサッカロミセス属(Saccharomyces species)の例
はサッカロミセスセレビシア(Saccharomyces cerevisiae)及びサッカロミセスボ
ーラディ(Saccharomyces boulardii)である。
【0015】 調合物中の酵母菌は生きている場合も死んでいる場合もあり得る。死んだ酵母
菌も生きている酵母菌も高い割合でマンノプロテイン(mannoproteins)を含有し
ている。これらのプロテインは腸壁へのバクテリアの付着を長期にわたって防止
することができる。死んだ酵母菌の投与は炎症性の腸疾患に罹っている人に対し
ては有効である。 酵母菌が死んだ状態で使用される場合、別の少なくとも一つの生きた微生物が
使用されなくてはならない。前記の生きた微生物は、再び、乳酸桿菌属、ビフィ
ドバクテリウム属、ペジオコックス属、プロピオニバクテリウム属、ロイコノス
トック属(Leuconostoc strains)から選択できるが、生きたサッカロミセス属で
もよい。 単一の微生物を使用することも可能であるし、微生物の混合体を使用すること
も可能である。
【0016】 プロバイオティクスの総濃度は、総生成物1g当たりの生きた細胞数換算で、
106から1012個、好ましくは、109から1010個である。微生物の組み合わ
せが使用される場合、それぞれの微生物の最低濃度は、生きた微生物の存在を認
め得る程度、すなわち、生成物1g当たり少なくとも10個程度でなくてはなら
ない。微生物の総濃度は、常に、総生成物1g当たりの生きた細胞数換算で、1
6から1012個という上記の特定範囲内になくてはならない。 死んだサッカロミセスセレビシアがまた使用される場合、これは一日当たり0
.5から5gの量が投与される。
【0017】 ラクトバチルスラムノサスとトランスガラクトオリゴ糖又は(じゃがいも)ガ
ラクタンの加水分解生成物との組み合わせはオリゴ糖とプロバイオティクスとの
組み合わせの中で最適の組み合わせであることがわかっている。 特定のプロバイオティクスに対する特定のオリゴ糖の適合性はそのオリゴ糖又
はそのオリゴ糖フラクションを発酵させることに関する微生物の能力を測定する
ことによって決定することができる。そのための特別な方法は以下の実施例にお
いて示される。
【0018】 本発明による調合物の投与形態は本願出願人によって出願されたヨーロッパ出
願第97202900.3号に記載されている形態と類似しており、その内容は本願におい
て文献援用されている。このため、指摘されなくてはならない点は、本願発明に
よれば、たった一個のプロバイオティック微生物(酵母菌を含む)でも存在可能
であること、及び、単一又は複数のプロバイオティック微生物に加えて、上記特
定の量において、単一又は複数のオリゴ糖を組み合わせることが可能であること
である。 本発明による調合物は、特に、栄養補助物、総合栄養物及び臨床栄養物の形態
で投与可能である。そうした食品に添加される特別な添加物やそのような食品の
調製及び使用については、同様に、ヨーロッパ出願第97202900.3号を参照するこ
とができる。
【0019】 プロバイオティクスは(凍結)乾燥状態で調合物に添加されることが好ましい
。また、液体調合物を製造することも可能であるけれども、それらは冷蔵する必
要がある。さらに、たとえば、貯蔵寿命を改善するために、単一又は複数の微生
物は被包形態で使用することができる。 本発明による調合物が栄養補助物として使用される場合には、そのまま投与す
ることもできるし、水、ヨーグルト、ミルク、フルーツジュースなどの適当な飲
用液体と混合することもできるし、あるいは、固体又は液体の食品と混合するこ
ともできる。このため、栄養補助物は錠剤、カプセル、粉末、サシェット(sache
t)、パステル、スイート、バーなどの投与形態に合った形態が可能であり、通常
は単位投与の形態である。
【0020】 本発明による補助物は、たとえば、次の様な組成を有している。比率は100
重量%の総重量に対する比率である。 − プロバイオティクス: 10−40重量% − オリゴ糖 : 40−80重量% − 別の添加物 : 0−40重量%
【0021】 調合物は総合栄養物又は臨床栄養物などの直接消費に適した食品調合物の形態
であってもよい。このような形態の調合物は経口投与も可能であるし、チューブ
すなわちカテーテルを通じての投与も可能である。 このような食品は固体状又は液体/飲用形態のいずれでもよく、さらに、栄養
物(総合及び/又は臨床栄養物)のための全ての通常の添加物を含有していても
よい。この添加物としては、プロテイン、ビタミン、ミネラル、微量元素などが
ある。
【0022】 本発明による総合栄養物は、たとえば、次の様な組成を有している。比率は1
00重量%の総重量に対する比率である。 − プロバイオティクス: 0.1−10重量% − オリゴ糖 : 1−20重量% − 別の添加物 : 75−95重量% 特別な実施の形態によれば、本発明による調合物は乳児食(乳児食用の補助物
)又は乳児用の栄養補助物の形態を有する。
【0023】 上記の調合物は本願出願人によって出願されたヨーロッパ出願第97202900.3号
に記載されている用途と同一の用途に使用できる。その用途とは、特に、旅行中
や抗生物質による治療後に発症する下痢、あるいは食中毒に起因する下痢などの
腸の疾患の治療である。その他の用途は潰瘍性大腸炎や限局性回腸炎などの炎症
性腸疾患(IBD)の治療である。本発明による調合物は牛乳又はグルテンに対する
アレルギーのような食物アレルギーを有する患者にも適している。 プロバイオティクス及び不可消化性のオリゴ糖は腸の不具合を防止又は治療す
るための乳児食にも使用可能である。 本発明は限定的ではない実施例に基づいて以下に説明されている。
【0024】 実施例 オリゴ糖とプロバイオティクスの適切な組み合わせを決定するために、以下に
列挙された微生物がテストされ、それら微生物の構造の異なるオリゴ糖フラクシ
ョンを発酵させる能力が測定された。チオグリコレート(Oxoid, Unipath Ltd, B
asingstoke, Hampshire, UK)をベースとする液体培地内で予め培養された菌系統
が0.5%(m/V)のオリゴ糖を添加したチオグリコレート内で二次培養された。
無糖のチオグリコレート培地及びオリゴ糖溶液が121℃で15分間にわたって
別々に殺菌された。
【0025】 37℃で48時間にわたる嫌気インキュベーションの後に、マイクロpHメー
タ(Sentron, Roden, The Netherland)を用いてpHが測定された。残留オリゴ糖
含有率の変化及び反応生成物の形成がHPAEC(高速陽イオン交換クロマトグ
ラフィー)を用いて測定された。HPAEC分析のために、培養液は遠心分離さ
れ、その上澄み液がH2Oで10倍に希釈され、酵素活性を停止させるために5
分間煮沸された。発酵の前後において菌系統の純度がチェックされた。
【0026】 HPAECシステムはCarbopac PA-100のガードカラム(3*25mm)と組み合
わせてDionex Carbopac PA-100のカラム(4*250mm)が設けられたDionex Bi
o-LC GPM-IIの四勾配(quaternary gradient)モジュール(Dionex Corporation, S
unnyval, CA, USA)から成る。サンプル(20μl)がSpectra Physics SP8880自
動サンプラを用いて注入された。オリゴマーが100 mmol.l-1のNaOH中の
酢酸ナトリウムの勾配を使用して分析された。
【0027】 これらの実験の結果が、プロバイオティクスと基質との数種類の組み合わせに
ついて、以下の表1に示されている。表中の記号の意味は次の通りである。 ++: 完全発酵 + : 部分発酵 − : 無発酵又は極めて限定的な発酵
【0028】
【表1】
【0029】 本発明による調合物の幾つかの例が以下に記載される。 例1:補助物 ラクトバチルスラムノサス ATCC 7469(Lb)の懸濁液が凍結乾燥され、粉末
が得られた。この粉末はその1g当たり少なくとも109個の生存可能な細胞を含
んでいた。ラクトース(Borculo Whey Products)から得られたトランスガラクト
オリゴ糖(TOS)が40℃の水に溶解された。溶液はその固形分含有率が25%に
調節され、噴霧乾燥された。二つの粉末が4/1のTOS/Lb比で混合され、均一な生
成物が生成されるまで混ぜられた。この混合物の2から5gが投与規制(一日当
たり一つのサシェットの場合は5g、一日当たり二つのサシェットの場合は3g)
に応じてサシェットに充填された。一つのサシェットの内容物は、たとえば、コ
ップに入れたオレンジジュース又はミルクと混合可能である。
【0030】 例2:共微生物バー(Synbiotic bar) 4.0gのオート麦のフレーク、4.0gの小麦のフレーク、3.0gの膨張さ
せた米、1.0gの粉砕したヘーゼルナッツ、0.25gの蜂蜜、3.0gのレー
ズン、1.5gのモルトデキストリン(maltodextrin)、1.0gの凍結乾燥したラ
クトバチルスラムノサス(Lb rhamnosus)、0.5gの製パン用の酵母菌(サッカロ
ミセスセレビシア(Saccharomyces cerevisiae);ギストブロケード(Gist Brocad
es))及び5.0gのトランスガラクトオリゴ糖から23gのバーが調製された。
【0031】 例3:野菜繊維を加水分解する方法 たとえば、小麦、じゃがいも、オート麦、大豆多糖類、いなご豆のガム(carob
gum)又は砂糖大根からの繊維の20%水性懸濁液が調製された。これらの繊維
供給源は市販品として入手可能である。懸濁液は20から50℃(好ましくは、
35−45℃)の間の温度に加熱され、その後、5から500部の基質に対して
1部の割合(m/m)で酵素が添加された。酵素の種類の選択は多糖類の種類に依
存する。適当な酵素の例はNovoferm Pectinex Ultra s.p.-L、Pentopan及びUltr
a.s.p. (NOVO)である。 0.5から4時間後に、加熱によって反応が停止させられた。こうして得られ
た溶液が本発明による調合物中のオリゴ糖フラクションとして使用された。なお
、必要に応じて、溶液は濾過/精製又は濃縮された。
【0032】 例4:完全な腸内臨床栄養物と混合するための共微生物混合物 粉末混合物の親バッチが例1の方法によって調製された。粉末は20%の加水
分解された小麦のアラビノキシラン、20%の加水分解されたじゃがいものアラ
ビノガラクタン、20%の加水分解されたいなご豆のガム、20%の加水分解さ
れた砂糖大根繊維(アラバン)、15%の加水分解されたオート麦繊維(グルカ
ン)及び5%のビフィドバクテリウムロンガムから成る。5gの粉末混合物がサ
シェットへ充填された。このサシェットの内容物は標準的な腸内臨床栄養物に添
加することができる。添加時期は使用前最大30分である。
【0033】 例5:乳児食の栄養強化のための共微生物粉末混合物 共生物混合物が例1の方法によって調製された。この混合物は10%の製パン
用酵母菌(Gist Brocades)、酵母菌から得られた40%のマンノプロテイン、
25%のイヌリン及び25%のラフィノース(raffinose)を含有していた。
【0034】 例6:共微生物混合物を含有するスイート 58%可消化性の糖質(グルコースシロップ)、35%のTOS、4%のラク
トバチルスラムノサス ATCC 4769及び2%の調味料及び着色料を基に2gのスイ
ートが調製された。
【手続補正書】特許協力条約第34条補正の翻訳文提出書
【提出日】平成12年11月27日(2000.11.27)
【手続補正1】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正内容】
【特許請求の範囲】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 FI テーマコート゛(参考) A61K 31/715 A61K 31/715 35/72 35/72 A61P 1/00 A61P 1/00 (81)指定国 EP(AT,BE,CH,CY, DE,DK,ES,FI,FR,GB,GR,IE,I T,LU,MC,NL,PT,SE),OA(BF,BJ ,CF,CG,CI,CM,GA,GN,GW,ML, MR,NE,SN,TD,TG),AP(GH,GM,K E,LS,MW,SD,SL,SZ,TZ,UG,ZW ),EA(AM,AZ,BY,KG,KZ,MD,RU, TJ,TM),AE,AL,AM,AT,AU,AZ, BA,BB,BG,BR,BY,CA,CH,CN,C R,CU,CZ,DE,DK,DM,EE,ES,FI ,GB,GD,GE,GH,GM,HR,HU,ID, IL,IN,IS,JP,KE,KG,KP,KR,K Z,LC,LK,LR,LS,LT,LU,LV,MA ,MD,MG,MK,MN,MW,MX,NO,NZ, PL,PT,RO,RU,SD,SE,SG,SI,S K,SL,TJ,TM,TR,TT,TZ,UA,UG ,US,UZ,VN,YU,ZA,ZW Fターム(参考) 4B018 LB01 LB08 MD31 ME11 MF02 4B041 LC10 LD08 LE01 LH01 LH08 LK42 LP07 LP25 4C086 AA01 AA02 EA01 EA20 MA02 MA04 MA52 NA05 NA14 ZA66 4C087 AA01 AA02 BC59 BC90 CA09 MA02 MA52 NA05 NA14 ZA66

Claims (10)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項1】 健康増進作用を有する調合物、特に、消化管の疾患の予防及び
    /又は治療のための調合物であって、単一又は複数のプロバイオティクスと単一
    又は複数の不可消化性のオリゴ糖とを含有する調合物。
  2. 【請求項2】 オリゴ糖が2から20、好ましくは、2から10、さらに好ま
    しくは、2から6の重合度を有している請求項1に記載の調合物。
  3. 【請求項3】 オリゴ糖がβ−(アラビノ)ガラクタン、β−(アラビノ)キ
    シラン、β−グルカン、β−グルコマンナン、β−ガラクトマンナン、α−アラ
    バン、イヌリン及びそれらの組み合わせから選択される単一又は複数の多糖類の
    加水分解によって得られるものである請求項1又は2に記載の調合物。
  4. 【請求項4】 多糖類がβ−(アラビノ)ガラクタン、β−マンナン、キシラ
    ン及びそれらの組み合わせから選択される請求項3に記載の調合物。
  5. 【請求項5】 オリゴ糖がオート麦、小麦、じゃがいも、砂糖大根、大豆多糖
    類などに由来する繊維などの単一又は複数の繊維の加水分解に由来するものであ
    る請求項1又は2に記載の調合物。
  6. 【請求項6】 プロバイオティクスが少なくとも一つの細菌系統又は少なくと
    も一つの酵母菌系統、又は少なくとも一つの細菌系統と少なくとも一つの酵母菌
    系統との組み合わせである前記請求項のいずれか一項に記載の調合物。
  7. 【請求項7】 少なくとも一つの細菌系統が乳酸桿菌属又はビフィドバクテリ
    ウム属の単一又は複数の系統から選択され、酵母菌系統がサッカロミセス属の系
    統である前記請求項のいずれか一項に記載の調合物。
  8. 【請求項8】 死んだ酵母菌細胞を含有している前記請求項のいずれか一項に
    記載の調合物。
  9. 【請求項9】 単一又は複数のプロバイオティクスと単一又は複数の不可消化
    性のオリゴ糖の比率がプロバイオティクスの細胞108から1011個当たりオリ
    ゴ糖1から5gの範囲である前記請求項のいずれか一項に記載の調合物。
  10. 【請求項10】 総生成物1g当たり107から1011の生きた細胞濃度でプロ
    バイオティクスを含有している前記請求項のいずれか一項に記載の調合物。
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