WO2019112053A1 - 新規ビフィドバクテリウム属細菌及び当該細菌を含む組成物 - Google Patents

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WO2019112053A1
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present technology
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俊孝 小田巻
久美子 加藤
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森永乳業株式会社
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Definitions

  • the present invention relates to novel Bifidobacterium bacteria, compositions containing the bacteria, and compositions for promoting the growth of the bacteria.
  • prebiotics such as ingredients are becoming active. While probiotics refer to bacteria that work beneficially in the intestine, prebiotics refer to substances that provide a selective nutrient source for these beneficial bacteria and promote their growth. It is known that prebiotics have a beneficial effect on human health, such as an action to promote the growth of lactic acid bacteria and bifidobacteria, an intestinal adjustment action, and an action to prevent or improve inflammatory bowel disease.
  • Patent Document 1 discloses a lactic acid bacteria growth promoter characterized by containing an agar having a weight average molecular weight of 10,000 to 300,000 and a reducing sugar amount adjusted to 0.12 to 2.0. ing. Thus, intensive research is being conducted on probiotics and prebiotics.
  • the present technology has as its main object to provide a good fungus which can be beneficially used in a wide range of age groups and a composition containing the same.
  • the present inventors firstly studied differences in eating habits of infants and adults when trying to obtain good bacteria that can be used beneficially in a wide range of age groups. Then, as a result of intensive studies, the inventors of the present invention have found that, in Bifidobacterium longum subspecies longum (also referred to as subspecies longum below) collected from human enteric bacteria, It has been found that there are new fungal groups with properties different from those of the species longum gum.
  • this human breast milk oligosaccharide includes a representative sialic acid-containing oligosaccharide (also referred to as sialic acid-linked oligosaccharide), the present bacterial group is capable of assimilating sialic acid.
  • sialic acid-containing oligosaccharide also referred to as sialic acid-linked oligosaccharide
  • the present bacterial group is capable of assimilating sialic acid.
  • Bifidobacterium bacteria which inhabit adults and Bifidobacterium bacteria which are not inhabited in humans can not utilize human milk oligosaccharides.
  • HMO human breast milk oligosaccharide
  • bacteria groups have an assimilative ability to assimilate at least one of "arabinoxylan, debranched arabinan, or pectic galactan". Such a group of bacteria proliferates in the intestines of humans who ate food which was partially digested with stomach acid or the like when eating grasses or solanaceous plants which are the main food of adults. Is easy.
  • Japanese food for example, Japanese food
  • main dishes and side dishes include root dishes (for example, potatoes etc.); beans dishes (for example, tofu, fermented soybean foods (for example, miso, natto etc.) and the like).
  • the present inventors are good bacteria which can be beneficially used in a wide range of age groups for infants and adults, and the good bacteria are called subspecies longum of Bifidobacterium longum types having assimilation ability of sialic acid. It discovered that it was a new microbe group, and it discovered that the composition containing the said good bacteria and the composition for promoting the growth of the said good bacteria could be newly provided. That is, the present invention is as follows.
  • [4] The above-mentioned [2] or [2], wherein the bacteria is Bifidobacterium longum subspecies longum NITE BP-02564 and / or Bifidobacterium longum subspecies longum NITE BP-02565.
  • [5] A composition comprising the bacterium according to any one of the above [2] to [4].
  • [6] The composition according to [5] above, wherein the composition is a probiotic composition.
  • [7] The composition according to the above [5] or [6], wherein the composition is used at least for any of infants, adults and the elderly.
  • the composition according to the above [9] or [10] which further comprises at least a saccharide derived from a gramineous plant or a saccharide derived from a solanaceous plant.
  • a prebiotic composition for use in promoting the growth of bacteria classified as Bifidobacterium longum subspecies longum A prebiotic composition, wherein said composition comprises sialic acid.
  • Prebiotic composition A method for producing a composition comprising a microorganism classified as Bifidobacterium longum subspecies longum having assimilating ability to 2'-fucosyllactose.
  • the present technology it is possible to provide a good fungus which can be advantageously used in a wide range of age groups, a composition containing the same, and a composition for promoting the growth of the good bacteria.
  • the effect described here is not necessarily limited and may be any effect described in the present technology.
  • the present technology is a novel Bifidobacterium bacterium, which is a microorganism classified into Bifidobacterium longum sp. Subspecies longum (Bifidobacterium longum subspecies longum). As described above, it is a novel bacterial group (hereinafter, also referred to as "the subspecies long gum of the present technology") having an extremely unique feature of having an assimilizing ability of "sialic acid", which has not been hitherto available.
  • the subspecies long gum of the present technology can be easily grown on a composition containing sialic acid (eg, human milk, human milk oligosaccharide (HMO), powdered milk, etc.).
  • sialic acid eg, human milk, human milk oligosaccharide (HMO), powdered milk, etc.
  • the subspecies long gum of the present technology also facilitates growth in the intestine by using sialic acid.
  • sialic acid eg, human milk, human milk oligosaccharide (HMO), powdered milk, etc.
  • Bifidobacterium bacteria have been reported to have various physiological functions, and their functions are reported to be due to growth in the intestine and substances produced (for example, acetic acid etc.). Therefore, the subspecies long gum according to the present technology can also be expected to be highly safe and generally effective for Bifidobacterium bacteria in a wide range of age groups. For this reason, the subspecies long gum of the present technology can be used for a wide range of compositions (for food and drink, functional foods, pharmaceuticals, feeds, etc.).
  • the subspecies long gum of this technology can be expected to have a probiotic effect, it can also be used for the purpose of health promotion, diet improvement, intestinal environment improvement, intestinal infection prevention and treatment, etc. is there.
  • probiotics effects it is known to improve constipation and diarrhea, to improve lactose intolerance, to improve immune function, to prevent infection, to suppress allergy, to prevent arteriosclerosis, to have antitumor activity, etc. (Ref. 2: https://bifidus-fund.jp/en/index.shtml).
  • human milk oligosaccharides are known, for example, to prevent allergies, improve lactose intolerance, improve immune function, protect against infection, to form brain nervous system, to activate brain nervous system, etc.
  • the subspecies long gum of the present technology can be expected to have a probiotic effect, and human milk oligosaccharides can also be used effectively.
  • allergic symptoms eg, allergic inflammation, atopic dermatitis, etc.
  • immune function Prevention of diseases, symptoms or conditions such as disorders (eg, impaired immune function etc.), infections (eg, viral gastroenteritis, bacterial infections etc.), nervous system diseases (eg, neurological diseases such as brain, bone marrow etc.)
  • Expect improvement or treatment eg, the subspecies long gum of the present technology is also expected to be expected to prevent and improve allergic symptoms, improve lactose intolerance, improve immune function, protect against infection, develop nervous system, activate nervous system, etc. it can.
  • the subspecies long gum according to the present technology preferably has a feature of assimilating ability of one or more kinds of carbohydrates selected from the group consisting of arabinoxylan, arabinan and pectinic galactan.
  • the arabinan is preferably debranched arabinan.
  • component (b) the detail of the component of said "arabinoxylan, arabinan, and pectic galactan” is demonstrated by the below-mentioned "component (b).”
  • “carbohydrate” is also meant to include “polysaccharide” and “oligosaccharide” which can be used as the subspecies long gum of the present technology unless otherwise mentioned. Oligosaccharides refer to those composed of about 2 to 10 sugar residues.
  • the subspecies long gum according to the present technology is a composition containing at least these saccharides by having an assimilation ability of one or more saccharides selected from the group consisting of "arabinoxylan, arabinan and pectinic galactan”
  • a staple food processed products of rice, wheat, corn, potato etc.
  • saccharides preferably oligosaccharides
  • the aforementioned "pectic galactan” is known as a saccharide contained in a solanaceous plant, and therefore, a saccharide (preferably an oligosaccharide) derived from a solanaceous plant is used. It is preferred to use.
  • arabinoxylan, arabinan or pectinic galactan may be used for those which ate and partially digested gramineous plants (eg, rice, wheat, corn etc.) or solanaceous plants (eg, potato etc.) which are the main food of adults. Contains some sugars. For this reason, in addition to the aforementioned "sialic acid", the subspecies long gum of the present technology capable of assimilating any one or more of the aforementioned "arabinoxylan, arabinan, and pectinic galactan” carbohydrates uses rice or potatoes etc. Because it is easy to grow in the intestine by eating such a Japanese food, it can be said to be a unique subspecies longum bacterial group.
  • the subspecies long gum of the present technology has high assimilation ability to arabinoxylan and / or pectic galactan as the assimilation ability. More preferably, the subspecies long gum according to the present technology is to have high assimilation ability to arabinoxylan and pectinic galactan.
  • Bifidobacterium longum subspecies longum NITE BP-02564 (Accession number: NITE BP-02564), Bifidobacterium longum subspecies longum NITE BP-02565, for example (Accession number: NITE BP-02565) and the like.
  • One or two or more types can be selected from these groups.
  • the long gum NITE BP-02564 (accession number: NITE BP-02564) is also referred to as “subspecies long gum NITE BP-02564”
  • the long gum NITE BP-02565 (accession number: NITE BP-02565) Also known as "subspecies long gum NITE BP-02565".
  • subspecies long gum NITE BP-02564 and the subspecies long gum NITE BP-02565 of the present technology are bacteria having high assimilation ability to sialic acid, arabinoxylan and pestic galactan, the subspecies long gum microbe group of the present technology Among them, particularly preferred.
  • the subspecies long gum NITE BP-02564 has SEQ ID NO: 1
  • the subspecies long gum NITE BP-02565 has SEQ ID NO: 2.
  • These two strains are Bifidobacterium longum MCLONSIAL1 (Accession No .: NITE BP-02564), and Bifidobacterium longum MCLONSIAL 2 (Access No .: NITE BP-02565), and are incorporated into the Patent Microorganisms Depositary Center (NPMD) It is classified as a new subspecies longum cactus group deposited.
  • Subspecies long gum NITE BP-02564 of this technology is a new bacterial strain from the following mycological properties and characteristics as a new strain, National Institute of Technology and Evaluation Patent Microorganisms Depositary Center (NPMD) (Address: 292-0818 Chiba, Japan) We made a request for transfer to an international deposit based on the Budapest Treaty on October 9, 2018 (Kosaza City, 2-5-8), Kisarazu City, prefecture, on October 10, 2017 (the day of deposit in Japan), and Bifidobacterium It has been deposited as a longum MCLONSIAL1 (Accession No .: NITE BP-02564) strain. This strain is generally available from the above storage facility.
  • Subspecies long gum NITE BP-02565 of this technology is a new bacterial strain from the following mycological properties and characteristics as a new strain, National Institute of Technology and Evaluation Patent Microorganisms Depositary Center (NPMD) (Address: 292-0818 Chiba, Japan) We made a request for transfer to an international deposit based on the Budapest Treaty on October 9, 2018 (Kosaza City, 2-5-8), Kisarazu City, prefecture, on October 10, 2017 (the day of deposit in Japan), and Bifidobacterium It has been deposited as a longum MCLONSIAL 2 (Accession No .: NITE BP-02565) strain. This strain is generally available from the above storage facility.
  • the subspecies longum NITE BP-02564 and subspecies longum NITE BP-02565 of the present technology are not limited to the above-mentioned deposited strain, and may be strains substantially identical to the same deposited strain.
  • a substantially homogeneous strain is a strain classified as a subspecies longum of Bifidobacterium longum sp., A strain having at least the assimilatory ability of the above "sialic acid" which is at least as high as that of the deposited strain of the present invention.
  • the substantially homogeneous strain is 100% identical to the sequence of SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 2 (see Tables 2 and 3) possessed by the respective strains, and preferably the nucleotide sequence of the 16S rRNA gene.
  • a subspecies long gum according to the present technology is a strain bred from the deposited strain or a strain substantially equivalent thereto by mutation treatment, genetic recombination, selection of a naturally occurring mutant strain, etc. unless the effect of the present invention is impaired. It may be
  • the strain 1 v / v% is inoculated into 1 mL of MRS (de Man-Rogosa-Sharpe) liquid medium containing a sugar source and cultured at 37 ° C. under anaerobic conditions.
  • MRS de Man-Rogosa-Sharpe
  • the turbidity (OD 600) was measured after 24 hours of culture, and the value obtained by subtracting the turbidity of the control in which the culture medium not inoculated with the strain was similarly cultured was compared with the following criteria to determine the presence or absence of assimilability and assimilability Determine the degree of The difference between the control and OD 600 is 0.3 or more as "good assimilation", 0.5 or more as “better assimilation”, 0.6 or more as “further better assimilation "Possible”, 0.8 or more as "very good assimilation".
  • the subspecies longum of the present technology can be grown, for example, by culturing the same strain.
  • the method for culturing is not particularly limited as long as the subspecies long gum of the present technology can grow, and a method commonly used for culturing Bifidobacterium bacteria can be appropriately modified and used as necessary.
  • the culture temperature may be 30 to 50 ° C., preferably 35 to 45 ° C.
  • the culture is preferably performed under anaerobic conditions, and can be performed, for example, while aerating an anaerobic gas such as carbon dioxide gas.
  • the culture medium for growing the subspecies longum of the present technology is not particularly limited, and a medium that is usually used for the culture of Bifidobacterium bacteria can be appropriately modified and used as necessary. That is, as the carbon source, saccharides such as galactose, glucose, fructose, mannose, cellobiose, maltose, lactose, sucrose, trehalose, starch hydrolyzate, waste molasses other than the components (a) and (b) described later It can be used according to the assimilability.
  • a nitrogen source for example, ammonium salts such as ammonia, ammonium sulfate, ammonium chloride, ammonium nitrate and nitrates can be used.
  • inorganic salts for example, sodium chloride, potassium chloride, potassium sulfate, magnesium sulfate, calcium chloride, calcium nitrate, manganese chloride, ferrous sulfate and the like can be used.
  • organic components such as peptone, soybean powder, defatted soybean meal, meat extract, and yeast extract may be used.
  • a prepared medium for example, an MRS medium can be suitably used.
  • the obtained culture may be used as it is as a subspecies long gum according to the present technology, or may be used after dilution or concentration, or cells collected from the culture may be used.
  • various additional operations such as heating and lyophilization can be performed after the culture, as long as the effects of the present invention are not impaired.
  • the additional operation is preferably one that has high viability of viable bacteria.
  • the microbial cell of the subspecies long gum of this technique used with the pharmaceutical composition of this technique, food-drinks, and feed is a living microbe.
  • the following components (a) and / or components (b), and further the following components (c) are mentioned as a preferred assimilation ingredient of subspecies long gum of this art.
  • the “component (a) sialic acid” used in the present technology has the growth promoting action of the subspecies long gum of the present technology. Furthermore, by combining the “component (a)” with the “component (b)” and / or the “component (c)” described later, the growth promoting action of the subspecies long gum of the present technology is exhibited more stably. It can be done. This facilitates growth of the subspecies long gums of the present technology in the intestines of a wide range of age groups. Furthermore, it is preferable to use lacto-N-tetraose (LNT) as an assimilation component from the viewpoint of the growth promoting action of the subspecies long gum of the present technology.
  • LNT lacto-N-tetraose
  • sialic acid used as an assimilation component of the present technology is known as a representative component contained in sialic acid-containing oligosaccharides in human breast milk oligosaccharides (HMO). Specifically, it is known that sialic acid is contained as part of the sugar chain structure of human milk oligosaccharides (particularly acidic oligosaccharides) (ie, sialic acid-linked oligosaccharides). For example, as sialic acid-linked oligosaccharides, 3'-sialyllactose, 6'-sialyllactose, sialyllacto-N-tetraose and the like can be used.
  • a means for generating sialic acid from sialic acid-linked oligosaccharides for example, bacteria or degrading enzymes that degrade sialic acid-linked oligosaccharides.
  • bacteria such as Bifidobacterium bifidum ATCC 15696, Bifidobacterium bifidum PRL 2010, and other bacteria are used to decompose sialic acid outside the bacteria into sialic acid and oligosaccharides such as lactose and monosaccharides, and then the sialic acid is generated. It can be used.
  • sialic acid may be prepared from milk, and may be obtained by well-known organic synthesis, an enzyme process, etc.
  • milk eg, breast milk, milk powder, milk, dairy products
  • sialic acid or a sialic acid-containing oligosaccharide preferably sialic acid
  • human milk oligosaccharides may be used, or those obtained by blending the human milk oligosaccharides with milk (milk, milk powder, etc.) (ie, milk containing human milk oligosaccharides) may be used.
  • Sialic acid is generally used in a family name that collectively refers to substances in which the amino group or hydroxy group of neuraminic acid is substituted.
  • sialic acid is abundantly contained in, for example, milk (human, cow, sheep, horse etc.), swallow nest, honey, egg and the like.
  • milk-derived sialic acid is preferable because it is easily available.
  • Component (c) human milk oligosaccharide that can be used as an assimilation component of the present technology includes at least sialic acid-linked oligosaccharide and / or lacto-N-tetraose (LNT) Are preferred.
  • HMO for example, 2'-fucosyllactose, 3-fucosyllactose, 2 ', 3-difucosyllactose, 3-fucosyl-3'-sialyllactose, lacto-N-tetraose, lacto-N-neo Tetraose, Lacto-N-fucopentaose I, Lacto-N-fucopentaose II, Lacto-N-fucopentaose III, Lacto-N-fucopentaose V, Lacto-N-Difucosylhexaose I, Lacto-N-Difucosylhexaose II And lacto-N-sialylpentaose, LSTa, LSTb and LSTc and the like.
  • Each oligosaccharide of the said HMO can be obtained by a well-known manufacturing method. In the present technology, one or more selected from the group
  • Component (b) xylan, arabinoxylan, arabinan, debranched arabinan, pectin, galactan, pectic galactan, and oligosaccharides derived therefrom
  • the "component (b)” is preferably water-soluble, and more preferably water-soluble.
  • component (b) xylan, arabinoxylan, and arabinan, debranched arabinan, and oligosaccharide derived therefrom” (especially arabinoxylan and oligosaccharide derived therefrom) is a saccharide derived from a gramineous plant (polysaccharide Body, known as oligosaccharides).
  • the above-mentioned “arabinoxylan, arabinan and the oligosaccharide derived from the said thing" of the said “component (b)” can use the commercial item which processed and processed the gramineous plant, and also it is obtained by extracting and processing from the said plant it can.
  • a rice genus plant for example, a rice genus plant (rice such as indica rice, japonica rice etc.), a corn genus plant (preferably corn), a wheat genus plant (preferably wheat), a barley genus plant (preferably barley) And the like, and one or more can be selected from the group consisting of these.
  • sugars preferably oligosaccharides
  • rice plants or foods containing the same e.g., rice using rice (specifically, rice, brown rice, rice porridge, It is preferable to select rice flour-containing bread, noodles and the like) as an assimilation ingredient.
  • the “component (b)” “pectin, galactan, pectinic galactan and oligosaccharide derived therefrom” is a saccharide derived from a solanaceous plant or a gramineous plant It is known as quality (polysaccharide, oligosaccharide).
  • quality polysaccharide, oligosaccharide.
  • solanaceous plant solanaceous plant, beans etc. are mentioned, 1 type or 2 types or more from the group which consists of these It can be selected.
  • a saccharide derived from a rice plant preferably an oligosaccharide derived from arabinoxylan
  • a saccharide derived from a solanaceous plant such as potato
  • a solanaceous plant such as potato
  • beans Carbohydrates of origin preferably oligosaccharides derived from arabinogalactan
  • xylan may be a polymer of xylose as a main chain unless otherwise specified, and means one having other constituent sugars in the side chain or main chain. It is.
  • arabinose a polymer of arabinose as a main chain unless particularly mentioned, and means one having other constituent sugars in the side chain or main chain. It is.
  • galactan referred to in the present specification may be a polymer of galactose as a main chain unless particularly mentioned, and means one that may have other constituent sugars in the side chain or main chain. It is.
  • pectin referred to in the present specification may be a polymer of galacturonic acid linked with ⁇ 1-4 bond, and may have other constituent sugars in the side chain or main chain unless otherwise mentioned. It is meant.
  • pectin referred to in this specification deesterifies “pectin in a narrow sense” and “pectin in a narrow sense” which are methyl-esterified regardless of the presence or absence of methyl esterification of the carboxyl group of galacturonic acid.
  • Pectic acid meaning “pectic acid” which is not methyl esterified.
  • arabinoxylan is a carbohydrate having arabinose and xylose as its main constituent saccharides, and is known as a carbohydrate having a polymer of xylose as a main chain.
  • L-arabinofuranose monosaccharide or this arabinooligosaccharide is bonded as a side chain through ⁇ 1-3 bond or ⁇ 1-2 bond to the main chain of ⁇ 1-4 linked xylose polymer Is preferred. More preferably, L-arabinofuranose monosaccharide is attached to the side chain.
  • the constituent sugar ratio of the arabinoxylan of the present technology is preferably xylose pentasaccharide residue: L-arabinose 1-4 saccharide residue.
  • arabinan and / or xylan can also be used as an assimilation component.
  • arabinan is a carbohydrate having arabinose as a main component sugar, and is known as a carbohydrate having a polymer of arabinose as a main chain.
  • Arabinans include pectin arabinan and debranched arabinan and the like.
  • a carbohydrate having a polymer of ⁇ 1-5 linked arabinose as a main chain is preferable, and further, debranched arabinan is preferable.
  • Debranched arabinan is debranched when arabinan has a branched portion.
  • the debranched arabinan for example, one obtained by debranching pectic arabinan (preferably having a sugar residue ratio of Ara of 80% or more for 1,5- ⁇ -L-Arabinan) is mentioned.
  • pectic arabinan is known as a sugar comprising an arabinan main chain and pectin.
  • pectic arabinans include those in which pectin is bound to C-1 of the reducing end of arabinan in the main chain.
  • pectic arabinan can also be used as an assimilation component.
  • pectinic galactan is a carbohydrate consisting of a main chain of galactan and a galacturonic acid polymer, and as a well-known pectinic galactan, pectin is attached to C-1 of the reducing end of galactan of the main chain. It includes bound ones. In the case of subspecies long gum having an assimilating ability of pectinic galactan, it is considered that pectin and / or galactan can also be used as an assimilation component.
  • galactan is known as a saccharide having galactose as a main constituent sugar and a polymer of galactose as a main chain.
  • pectinic galactan it is known as a sugar having a polymer of ⁇ 1-4 linked galactose as a main chain.
  • galactan is contained in soybean as arabinogalactan.
  • saccharides derived from leguminous plants including galactan include saccharides derived from lupine beans and saccharides derived from soybeans.
  • the soybean-derived sugar may be processed soybean products (eg, tofu, soy milk, etc.), fermented soybean products (eg, miso, soy sauce, natto, etc.) or sugars derived therefrom.
  • the "component (a) sialic acid" of the present technology has a growth promoting action on the subspecies long gum of the present technology.
  • the components (c) of the component (a) further include the components (b) “xylan, arabinoxylan, arabinan, debranched arabinan pectin, galactan, pectinic galactan, and oligosaccharides derived therefrom”.
  • component (a) or “the combination of these components” can also be used as a component for promoting the growth of subspecies long gum according to the present technology.
  • Said “component (a)” or said “combination of these components” may also be used as an active ingredient for promoting the growth of the subspecies long gum of the present technology (hereinafter also referred to as "the composition for promoting growth”) And can be used in a wide range of applications such as pharmaceuticals, food and drink, feed and the like. These products can be manufactured by a known manufacturing method adapted to each use, using optional components adapted to various uses as appropriate.
  • the “component (a)” or the “combination of the components” can be used as it is for the purpose of promoting the growth of the present technology, or it is physiologically, pharmaceutically or food-acceptable. They can also be used as a mixture with conventional carriers or diluents.
  • the said "component (a)” or the “combination of these components” can be used for manufacture of these various formulation or various compositions etc.
  • the above-mentioned “component (a)” or “the combination of these components” of the present technology is a method for promoting growth on subspecies long gum of the present technology or a composition for use for promoting growth (preferably It is also possible to use as a biotic composition).
  • the amount or content of the “component (a) sialic acid” in the composition for promoting growth of the present technology is preferably 1 to 1,000,000 parts by mass with respect to 100 parts by mass of bacteria, 10 -10,000 parts by weight are more preferred.
  • the use amount or content of “one or more kinds of carbohydrates selected from the above component (b)” is 1 to 1,000, relative to 100 parts by mass of bacteria. 000 parts by mass is preferable, and 10 to 10,000 parts by mass is more preferable.
  • the composition for promoting growth of the subspecies long gum according to the present technology is a combination of the above-mentioned "component (a)" and "one or more kinds of carbohydrates selected from the above-mentioned component (b)". Or as a separate composition kit.
  • the growth promoting composition of the present technology can be used as a prebiotic composition because the growth promoting composition of the present technology promotes the growth of the subspecies long gum of the present technology.
  • probiotic effects beneficial to human health such as an intestinal adjusting action, a mineral absorption promoting action, and a preventive and ameliorating action on inflammatory bowel disease by the subspecies long gum of the present technology are also possible. I can expect it.
  • the growth promoting composition of the present technology can also be expected to promote growth of lactic acid bacteria and bifidobacteria other than the subspecies long gum of the present technology, it can be used as a prebiotic composition of these lactic acid bacteria and bifidobacteria. It is possible. Growth promoting components of lactic acid bacteria and bifidobacteria other than the subspecies longum of the present technology can be used.
  • Examples of the growth promoting component of the lactic acid bacteria and bifidobacteria are, for example, oligosaccharides (for example, galactooligosaccharides, fructooligosaccharides, soybean oligosaccharides, milk oligosaccharides (preferably human milk oligosaccharide (HMO)), xylooligosaccharides, isomaloligosaccharides Carbohydrates of raffinose, lactulose, coffee bean mannooligosaccharide, gluconic acid, etc., dietary fiber (polydextrose, inulin etc.) are known, and one or more of them can be selected from these. For this reason, it is preferable to include such a lactic acid bacteria and bifidobacteria growth promoting component as an optional component of the prebiotics composition of the present technology.
  • oligosaccharides for example, galactooligosaccharides, fructooligo
  • the prebiotic composition of the present technology the growth of the subspecies long gum of the present technology and other lactic acid bacteria and bifidobacteria can be promoted.
  • probiotic effects such as an intestinal adjusting action, a mineral absorption promoting action, and a preventive and ameliorating action for inflammatory bowel disease can be expected.
  • various actions by human milk oligosaccharide (HMO) such as allergies prevention / improvement action, lactose intolerance improvement action, immune ability improvement action, infection defense action, brain nervous system formation action, brain nervous system activation action etc. It is known (Reference 3: Biological significance of human milk oligosaccharides; Milk Science Vol. 56, No. 4 (2008) p 155-176). From this, the composition for promoting growth according to the present technology can prevent or improve allergic symptoms, improve lactose intolerance, improve immune function, prevent infection, form a nervous system, activate nervous system, etc. Probiotic effects can also be expected.
  • composition can also provide a composition comprising the subspecies long gum of the present technology.
  • the composition of the present technology is meant to include food and drink compositions, pharmaceutical compositions, feed compositions and the like. Also, the composition of the present technology is preferably a probiotic composition.
  • the subspecies long gum according to the present technology has assimilation ability of "sialic acid” as described above.
  • the subspecies long gum of the present technology is further characterized by having an assimilizing ability of "one or more selected from the group consisting of arabinoxylan, arabinan, and pectinic galactan” (preferably oligosaccharide). Is preferred. Therefore, it is preferable to further use an assimilation component capable of promoting the growth of the aforementioned subspecies long gum of the present technology in a composition containing the subspecies long gum of the present technology.
  • the subspecies long gum according to the present technology may be consumed at the same time or separately as the assimilation component of the above-described “(a) component” (preferably “combination of the above components”), or food and drink containing this assimilation component By doing this, it is possible to grow in the intestine more suitably.
  • an assimilable component that is, a component for promoting growth
  • the subspecies long gums of the present technology may be used for humans or non-human animals (suitable mammals) to which the present technology is applied, preferably humans and pets, more preferably humans.
  • the person to whom the present technology is applied is not particularly limited as long as he / she desires a probiotic effect, for example, infants, children, adults, healthy people, middle and old aged people, people with poor intestinal environment, etc. Can be mentioned.
  • the present technology is preferably used for infants, adults, and elderly people.
  • the composition containing the subspecies long gum of the present technology can be expected to probiotic effects at a wide range of ages, since the subcultive long gum of the present technology can be grown in the intestine even in the infant and adult diet. Can. As a result, for example, improvement of intestinal environment, intestinal regulation action, mineral absorption promotion action, prevention / improvement action to inflammatory bowel disease, etc. can also be expected. Since the composition containing the subspecies long gum of the present technology can be expected to have a probiotic effect, for example, the prevention, amelioration or treatment of diseases or symptoms such as the above-mentioned allergic symptoms, immune dysfunction, infections, nervous system diseases, etc. I can expect it.
  • composition containing the subspecies long gum of the present technology also has the above-mentioned preventive effects on allergic symptoms, lactose intolerance ameliorating action, immune ability improving action, infection protective action, brain nervous system forming action, brain nervous system activating action, etc. It can be expected (references 2 and 3).
  • the present technology can also be used or utilized for child care compositions (preferably baby milk) comprising human milk oligosaccharides (HMO).
  • the composition for child care of the present technology can also be expected to have a preventive action on allergic symptoms, a lactose intolerance improving action, an immune ability improving action, an infection protective action, a brain nervous system forming action, a brain nervous system activating action and the like.
  • the subspecies long gum used in the present technology is derived from human and has few side effects and high safety, it can be taken continuously for a long time. And, the present technology can also be effectively used for symptoms or diseases that can be prevented, ameliorated or treated by probiotics.
  • the subspecies long gum according to the present technology can be used as it is, or can be used as a mixture with a physiological, pharmaceutically or food-acceptable ordinary carrier or diluent. Therefore, the subspecies long gum of the present technology can be contained in the probiotic composition as an active ingredient, and because it is highly safe, it can be used for products of a wide range of applications such as medicines, foods and drinks. These products can be manufactured by a known manufacturing method adapted to each use, using optional components adapted to each use as appropriate. Moreover, subspecies long gum of this art can be used for manufacture of these various formulations or various compositions etc. The technology can also be used as a subspecies long gum for probiotics.
  • the composition of the present technology comprises at least the subspecies long gum of the present technology, and further preferably comprises the growth promoting component as described above.
  • the composition of the present technology preferably contains the above-mentioned "component (a) sialic acid".
  • component (a) further selected from the group consisting of “component (b) xylan, arabinoxylan, arabinan, debranched arabinan, pectin, galactan, pectic galactan, and oligosaccharides derived therefrom
  • a composition comprising one or more carbohydrates. Among these, it is preferable to contain at least arabinoxylan and / or pectinic galactan.
  • the composition of the present technology preferably further includes at least a saccharide derived from a gramineous plant and / or a saccharide derived from a solanaceous plant. It is also possible to use the composition comprising the subspecies long gum of the present technology and the composition for promoting the growth of the subspecies long gum of the present technology as a mixed composition or as separate composition kits. It is also possible to use the composition for promoting growth of the present technology described above as a component of a probiotic composition.
  • Administration or ingestion of the subspecies long gum according to the present technology is preferably continued for at least one week, more preferably for at least four weeks, and preferably daily.
  • the use amount of the subspecies long gum according to the present technology is not particularly limited because it is highly safe, but for example, 1 ⁇ 10 6 to 1 ⁇ 10 12 CFU / kg body weight / day is preferable, 1 ⁇ 10 7 to 1 ⁇ 10 11 CFU / kg body weight / day is more preferable, and 1 ⁇ 10 8 to 1 ⁇ 10 10 CFU / kg body weight / day is further preferable.
  • the use amount (dosage amount) per body (body weight) is preferably 10 7 to 10 14 CFU / day, more preferably 10 8 to 10 13 CFU / day, and 10 9 to 10 12 CFU / day Is more preferred.
  • the amount of subspecies long gum used in the present technology is preferably 0.01 to 100 mL / kg body weight / day, and more preferably 0.1 to 10 mL / kg body weight / day.
  • CFU means Colony forming unit and represents a colony forming unit. When the bacteria are killed, CFU can be replaced with cells.
  • Non-therapeutic purpose is a concept that does not include medical practice, that is, treatment of the human body by treatment. For example, health promotion, beauty practice, etc. may be mentioned.
  • “Amelioration” refers to the amelioration of a disease, condition or condition; prevention or delay of deterioration of a disease, condition or condition; reversal, prevention or delay of progression of a disease or condition.
  • “Prevention” refers to preventing or delaying the onset of a disease or condition in a subject of application, or reducing the risk of a disease or condition of interest.
  • compositions of the present technology can be used as pharmaceutical compositions.
  • the pharmaceutical composition of the present technology is not particularly limited as long as it contains the subspecies long gum of the present technology.
  • the pharmaceutical composition can also be used as a composition for intestinal regulation and the like containing the subspecies long gum of the present technology.
  • the subspecies long gum of the present technology may be used as it is, or a physiologically acceptable liquid or solid pharmaceutical carrier may be formulated and used.
  • the pharmaceutical composition of the present technology contains the subspecies long gum of the present technology, which can be obtained from human intestine as an oral composition component, as an active ingredient, and can be safely administered to patients suffering from various diseases. it can.
  • the present technology is also suitable for the prevention, amelioration and / or treatment of a disease or a symptom thereof for infants and children.
  • the dosage form of the pharmaceutical composition of the present technology is not particularly limited, and specifically, tablets, pills, powders, solutions, suspensions, emulsions, granules, capsules, syrups, suppositories, injections, An ointment, a patch, an eye drop, a nasal drop etc. can be illustrated.
  • an excipient, a binder, a disintegrant, a lubricant, a stabilizer, a flavoring agent, a diluent, a surfactant, a solvent for injection, etc. which are usually used as a pharmaceutical carrier, are added. Agents can be used.
  • ingredients such as excipients, pH adjusters, coloring agents, and flavoring agents that are generally used for formulation can be used in the pharmaceutical composition according to the present technology.
  • the pharmaceutical composition according to the present technology is effective for preventing, improving and / or treating known or future muscle diseases, muscle atrophy-related diseases or symptoms thereof. It is also possible to use a component having In addition, formulation can be carried out according to known methods, depending on the dosage form.
  • a formulation carrier may be appropriately blended and formulated.
  • the content of the subspecies long gum of the present technology in the pharmaceutical composition of the present technology is appropriately set depending on the dosage form, usage, patient's age, sex, type of disease, degree of disease, other conditions, etc. It is preferably in the range of 1 ⁇ 10 6 to 1 ⁇ 10 12 cfu / g or 1 ⁇ 10 6 to 1 ⁇ 10 12 cfu / mL, and 1 ⁇ 10 7 to 1 ⁇ 10 11 cfu / g or 1 ⁇ More preferably, it is in the range of 10 7 to 1 ⁇ 10 11 cfu / mL. If the subspecies long gum of the present technology is dead cells, cfu / g or cfu / mL can be replaced with individual cells / g or individual cells / mL.
  • the amount of subspecies long gum used in the present technology is appropriately set depending on the dosage form, dosage, patient's age, sex, type of disease, degree of disease, other conditions, etc., but usually 1 ⁇ 10 6 to 1 It is preferably in the range of 10 12 cfu / g or 1 10 6 to 1 10 12 cfu / mL, 1 10 7 to 1 10 11 cfu / g or 1 10 7 to 1 10 11 More preferably, it is in the range of cfu / mL. If the subspecies long gum of the present technology is dead cells, cfu / g or cfu / mL can be replaced with individual cells / g or individual cells / mL.
  • the administration time of the pharmaceutical composition of the present technology is not particularly limited, and it is possible to appropriately select the administration time according to the method of treating a target condition or disease. Also, they may be administered prophylactically and may be used for maintenance therapy. In addition, it is preferable that the administration form is determined according to the form of preparation, age, sex, other conditions of the patient, degree of symptoms of the patient, and the like. In addition, the pharmaceutical composition of the present technology can be administered in one or more times a day in any case, and may be administered once in several days or several weeks.
  • the composition of the present technology can be used as a food and drink composition.
  • the food and drink composition of the present technology may be manufactured by adding the subspecies long gum of the present technology to a known food and drink, or the subspecies long gum of the present technology is mixed into the raw material of the food and drink It can also be manufactured as a food and drink composition.
  • the food and drink composition of the present technology is not particularly limited as long as it contains the subspecies long gum of the present technology, and the food and drink composition includes beverages such as soft drinks, carbonated drinks, nutritional drinks, fruit juice drinks, and lactic acid bacteria drinks Ice cream, sherbet, frozen ice such as shaved ice, etc .; chewing, chewing gum, candy, gum, chocolate, tablets, snacks, biscuits, jellies, jams, creams, baked goods Confectionery products such as processed milk, milk drinks, fermented milk, drink yogurt, and dairy products such as butter; bread; enteral nutrition food, liquid food such as rice porridge, baby food, baby milk (for example, infant milk etc.) , Sports drinks; other functional foods etc. are exemplified.
  • the food and drink may be a supplement, for example, a tablet-like supplement.
  • a supplement the subspecies long gum of the present technology can be taken without the influence of other foods on the amount of food consumed per day and the calorie intake.
  • infant milk e.g. infant formula, etc.
  • infant milk preferably refers to a food product that alone is intended to satisfy the nutritional requirements of infants, intended for the specific nutritional use of infants 4 to 6 months old or 4 to 12 months old.
  • probiotic bifidobacterium bacteria such as human milk oligosaccharides, fructooligosaccharides and galactooligosaccharides; proteins from casein, soya, whey or skimmed milk; lactose, sucrose, maltodextrin, It can contain carbohydrates such as starch or mixtures thereof; lipids (eg palm olein, sunflower oil, sunflower oil); and vitamins and minerals essential to everyday food etc., from one of these groups or Two or more types can be selected.
  • prebiotics such as human milk oligosaccharides, fructooligosaccharides and galactooligosaccharides
  • proteins from casein, soya, whey or skimmed milk lactose, sucrose, maltodextrin
  • lactose sucrose, maltodextrin
  • It can contain carbohydrates such as starch or mixtures thereof; lipids (eg palm olein, sunflower oil, sunflower oil); and vitamins and minerals essential to everyday
  • the food and drink composition in the present technology includes various proteins such as whey protein, casein protein, soy protein, or pea protein (pea protein) or a mixture thereof, decomposition products; amino acids such as leucine, valine, isoleucine or glutamine; Vitamins such as vitamin B6 or vitamin C; creatine; citric acid; or components such as fish oil may be prepared in combination with the subspecies long gum of the present technology.
  • proteins such as whey protein, casein protein, soy protein, or pea protein (pea protein) or a mixture thereof, decomposition products
  • amino acids such as leucine, valine, isoleucine or glutamine
  • Vitamins such as vitamin B6 or vitamin C
  • creatine citric acid
  • components such as fish oil may be prepared in combination with the subspecies long gum of the present technology.
  • the food-drinks composition defined by this technique can be provided and sold as food-drinks in which applications (including health applications), such as probiotics, were displayed.
  • applications including health applications
  • probiotics such as probiotics
  • Display acts include all acts to inform consumers of the application, and if it is an expression that can recall or analogize the application, the purpose of the display, the content of the display, the display Regardless of the target object, medium, etc., they all fall under the "display” action of the present invention.
  • "display” is performed by the expression which a consumer can recognize the said application directly. Specifically, the goods or goods packaging pertaining to food and drink are transferred to those which describe the use, and displayed for delivery, transfer or delivery, and the act of importing, advertisement for goods, price list or transaction documents The above-mentioned use is described and displayed, or it distributes, or the above-mentioned use is described in the information which makes these contents, and the action etc. which are provided by an electromagnetic (the Internet etc.) method etc. are mentioned.
  • the display content is a display approved by the administration or the like (for example, a display etc. which is approved on the basis of various systems defined by the administration and performed in a mode based on such authorization).
  • a display etc. which is approved on the basis of various systems defined by the administration and performed in a mode based on such authorization.
  • Indication as health food, functional food, enteral nutrition food, special purpose food, health functional food, food for specified health, nutritional functional food, functional display food, quasi-drugs etc. There is also a display.
  • the indication approved by the consumer agency for example, the indication approved by the system concerning the food for specified health, the nutritive function food, or the functional indication food, or the system similar thereto is mentioned.
  • labeling as food for specific health labeling as food for conditional health, labeling indicating that the structure or function of the body is affected, disease risk reduction labeling, functionality based on scientific evidence
  • the Cabinet Office Ordinance on the Permitting of Special Use Indications Specified in the Health Promotion Act August 31, 2011 Cabinet Office Ordinance No. 57
  • Indications as food for specified health use are typical examples.
  • the content of the subspecies long gum of the present technology in the food and drink composition of the present technology is appropriately set according to the aspect of the food and drink composition, it is generally 1 ⁇ 10 6 to 1 ⁇ 10 12 cfu / in the food and drink. It is preferably in the range of 1 ⁇ 10 6 to 1 ⁇ 10 12 cfu / mL, and in the range of 1 ⁇ 10 7 to 1 ⁇ 10 11 cfu / g or 1 ⁇ 10 7 to 1 ⁇ 10 11 cfu / mL. It is more preferable that it is inside.
  • the amount of subspecies long gum used in the present technology is appropriately set according to the aspect of the food and drink composition, but in general, 1 ⁇ 10 6 to 1 ⁇ 10 12 cfu / g or 1 ⁇ 10 6 to 1 in food and drink. It is preferably in the range of ⁇ 10 12 cfu / mL, and more preferably in the range of 1 ⁇ 10 7 to 1 ⁇ 10 11 cfu / g or 1 ⁇ 10 7 to 1 ⁇ 10 11 cfu / mL.
  • the food and drink of the present technology can be manufactured by adding the subspecies long gum of the present technology to the raw material of the food and drink composition, and a normal food and drink composition except adding the subspecies long gum of the present technology It can be manufactured in the same way as a product. Furthermore, the above-described growth promoting composition may be appropriately added, or as the growth promoting composition, a food or the like from which the growth promoting composition is derived may be used. As a raw material of a food or a drink, although the raw material used for normal drinks and foodstuffs can be used, the raw material of Japanese-style food is preferable in consideration of the growth promoting component for the subspecies long gum of the present technology.
  • subspecies long gum according to the present technology can also be used in combination with other "Bifidobacterium bacteria and / or lactic acid bacteria" as used for food and drink depending on the purpose.
  • the food and drink composition of the present technology also includes a raw material for producing the food and drink composition, a food additive, and the like, which is added to the food and drink after the production process or production of the food and drink composition.
  • the addition of the subspecies long gum of the present technology may be performed at any stage of the process of producing the food and drink composition.
  • Bifidobacterium bacteria may generally be added in the step of addition.
  • the manufactured food and drink can be taken orally.
  • Examples of food and drink containing subspecies long gum of the present technology include Japanese food such as rice porridge, baby food, liquid food (preferably for elderly people, etc.), infant milk, lactic acid bacteria beverage, fermented milk and the like. If the food and drink of the present technology is a fluid Japanese food such as rice porridge, it can be used as a baby food or a liquid food for the elderly.
  • Sialic acid N-acetylneuraminic acid
  • Sialic acid is known to increase in blood and urine due to malignant tumors, inflammatory diseases, stress and the like. Malignant tumors, leukemia (especially myeloid), pneumonia, nephritis, myocardial infarction, other infections, various collagen diseases, late pregnancy, sialic acid levels become high. Therefore, since the subspecies long gum according to the present technology can assimilate and grow sialic acid, it can also be used as an inspection or diagnostic aid based on the amount of sialic acid in a collected sample (blood, urine, etc.).
  • the subspecies long gum of the present technology it is possible to use the subspecies long gum of the present technology to provide a test kit or a method for aiding in the diagnosis of a condition or disease that is elevated by sialic acid.
  • the sialic acid concentration may be measured according to a known sialic acid test method or the like. An example is shown below. What does not include the collected sample or a normal value of a healthy person may be used as a control. In contrast to this control, those having higher growth of the subspecies long gum of the present technology than this may be judged that the sialic acid level is higher than that of the control.
  • the growth confirmation may be performed by the absorbance (visible light: OD) generally used in bacterial growth confirmation.
  • the present technology can also adopt the following configuration.
  • a bacterium which further has an assimilation ability of one or more kinds of carbohydrates selected from the group consisting of arabinoxylan, arabinan and pectinic galactan. Further suitable bacteria are Bifidobacterium longum subspecies longum NITE BP-02564 and / or Bifidobacterium longum subspecies longum NITE BP-02565.
  • a composition comprising the bacterium according to any one of the above [1] to [3], or the use of the bacterium according to any one of the above [1] to [3] in the composition.
  • the composition is preferably a pharmaceutical composition or a food and drink composition.
  • HMO human milk oligosaccharide
  • the above composition further comprises one or more carbohydrates selected from the group consisting of arabinoxylan, xylan, arabinan, pectinic galactan, pectin, galactan, and oligosaccharides derived therefrom.
  • the composition further comprises lacto-N-tetraose as the carbohydrate.
  • more preferable saccharides include one or more saccharides selected from the group consisting of arabinoxylan, arabinan, pectinic galactan, and oligosaccharides derived therefrom.
  • the arabinan is preferably debranched arabinan.
  • more preferable carbohydrates are at least carbohydrates derived from gramineous plants or carbohydrates derived from solanaceous plants.
  • composition according to any one of the above [1] to [3] for the production of a composition.
  • it is a pharmaceutical composition or a food and drink composition (more preferably, baby milk).
  • composition according to any one of the above [1] to [3] for use in a composition.
  • it is a pharmaceutical composition or a food and drink composition (more preferably, baby milk).
  • a method for preventing, ameliorating or treating a disease, condition or condition caused by a probiotic which comprises administering the bacterium according to any one of the above [1] to [3].
  • it is a method for preventing, ameliorating or treating allergic symptoms, immune dysfunction, infections or nervous system diseases.
  • it is a method of health promotion, improvement of diet, improvement of intestinal environment, prevention or treatment of infection in intestine, or improvement or improvement of immunity.
  • a prebiotic composition for use in promoting the growth of bacteria classified as Bifidobacterium longum subspecies longum A prebiotic composition, wherein said composition comprises sialic acid, or human milk oligosaccharide (HMO).
  • said composition comprises sialic acid, or human milk oligosaccharide (HMO).
  • the bacterium according to any one of the above [1] to [3]. More preferably, it is a combined use of the sialic acid or human milk oligosaccharide (HMO) and the carbohydrate described in the above [9] or [10].
  • Sialic acid, or human milk oligosaccharide to a prebiotic composition for growth promotion of bacteria classified as Bifidobacterium longum, subspecies longam, comprising sialic acid, or human milk oligosaccharide (HMO) Use of (HMO).
  • the bacterium according to any one of the above [1] to [3]. More preferably, it is a combined use of the sialic acid or human milk oligosaccharide (HMO) and the carbohydrate described in the above [9] or [10].
  • the bacterium according to any one of the above [1] to [3]. More preferably, it is a combined use of the sialic acid or human milk oligosaccharide (HMO) and the carbohydrate described in the above [9] or [10].
  • [17] Use of sialic acid, or human milk oligosaccharide (HMO) for producing a prebiotic composition for promoting the growth of bacteria classified as Bifidobacterium longum subspecies longum.
  • the bacterium according to any one of the above [1] to [3]. More preferably, it is a combined use of the sialic acid or human milk oligosaccharide (HMO) and the carbohydrate described in the above [9] or [10].
  • [18] A method for promoting the growth of bacteria classified as Bifidobacterium longum subspecies longum using sialic acid or human milk oligosaccharide (HMO).
  • the bacterium according to any one of the above [1] to [3]. More preferably, it is a combined use of the sialic acid or human milk oligosaccharide (HMO) and the carbohydrate described in the above [9] or [10].
  • a method for producing a composition comprising a bacterium classified as Bifidobacterium longum subspecies longum having assimilating ability of sialic acid or human milk oligosaccharide (HMO).
  • HMO human milk oligosaccharide
  • it is a method of producing a composition comprising sialic acid or human milk oligosaccharide (HMO).
  • it is a pharmaceutical composition or a composition for food and drink.
  • it is a prebiotic composition, liquid food, baby food, composition for infants (preferably baby milk), composition for adults, or composition for elderly people.
  • composition kit composed of a fermented composition, a non-fermented composition, a good bacteria-containing composition and a plurality of food and drink. More preferably, it is a combined use of the sialic acid or human milk oligosaccharide (HMO) and the carbohydrate described in the above [9] or [10]. Also, preferably, the bacterium according to any one of the above [1] to [3].
  • HMO human milk oligosaccharide
  • Test Example 1 Bifidobacterium longum subsp. Diluted with 0.85% saline and sterilized samples were collected from the feces of various ages at Longum strain group acquired Japan, Difco TM Lactobacilli MRS Agar the following composition (Becton Deckinson and Company) and anaerobically cultured at 30 ° C. [Difco TM Lactobacilli MRS Agar] proteose peptone No.
  • bacteria which were gram positive and gonorrhea or adventitious bacilli were picked up by microscopic observation of the coated specimen. These bacteria were streaked on BL agar medium (Eiken Chemical Co., Ltd.), and anaerobic culture was repeated in the same manner as described above to obtain pure isolated strains.
  • a sample DNA solution to be used for PCR according to the protocol is prepared from a pure isolated strain group (base sequence of the genomic DNA of the relevant strain) using Takara Biol's Bacterial 16s RNA DNA PCR kit, and this sample DNA
  • the 16S rRNA gene was amplified by PCR using a solution to obtain a DNA amplification product, and from this, the 16 S rRNA gene sequence of these strains was determined.
  • the base sequence information on the international base sequence database (Genbank) of NCBI (National Center for Biotechnology Information, National Biotechnology Information Center), BLAST (Basic Local Alignment Search Tool, http: //blast.ncbi.nlm.
  • a bacterium that showed the highest homology (98.6% or more) with Bifidobacterium longum subsp. longum JCM 1217 as a result of homology search for the full length of 16S ribosomal RNA (SrRNA) gene sequence by nih.gov/Blast.cgi) Was a Bifidobacterium longum subsp. Longum strain. These strains were gram positive.
  • the turbidity (OD 600) was measured after 24 hours of culture, and the value obtained by subtracting the turbidity of the control in which the culture medium not inoculated with the strain was similarly cultured was compared with the following criteria to determine the presence or absence of assimilability and assimilability The degree of was determined. The difference between the control and OD 600 is judged to be 0.3 or more as "good assimilation", 0.5 or more as “better assimilation”, and 0.8 or more as "very good assimilation” did.
  • Bifidobacterium longum subspecies longum NITE BP-02497 (Accession number: NITE BP-02497) classified into Bifidobacterium longum subsp. Longum was used.
  • Glucose, galactose and mannose ⁇ 1% Megazyme (https://secure.megazyme.com/Arabinoxylan-Wheat-Flour-Low-Viscosity) (4) Debranched arabinan (DA) (water-soluble): sugar beet origin: main chain -5) Ara ⁇ (1-: component sugar 1, 5- ⁇ -L-Arabinan.
  • Bifidobacterium longum subspecies longum NITE BP-02497 is a National Institute of Technology and Evaluation Japan Patent Microorganisms Depositary Center (NPMD) (Address: 292-0818 Kazusa, Kisarazu City, Chiba Prefecture, Japan) No. 5-8), and was internationally deposited as Bifidobacterium longum MCC 0300 (Accession No .: NITE BP-02497) on June 22, 2017. This strain is generally available from the above storage facility.
  • NPMD National Institute of Technology and Evaluation Japan Patent Microorganisms Depositary Center
  • strains having assimilation ability of the above sialic acid are shown in Table 1, and 2 strains were found. Specifically, Bifidobacterium longum subspecies longum NITE BP-02564 and Bifidobacterium longum subspecies longum NITE BP-02565 have particularly high assimilability against sialic acid. Was admitted. These two strains were identified as Bifidobacterium longum subsp. Longum as described above, and were in the same bacterial group. The homology at this time was 99.6% in the long gum NITE BP-02564 and 99.8% in the long gum NITE BP-02565.
  • the 16S rDNA gene sequences of Bifidobacterium longum subspecies longum NITE BP-02564 and Bifidobacterium longum subspecies longum NITE BP-02565 are shown in SEQ ID NO: 1 in Table 2 and Table 3 respectively. In SEQ ID NO: 2.
  • Production Example 1 At least one or two of the subspecies long gum NITE BP-02564 and the subspecies long gum NITE BP-02565 are added to 3 mL of MRS liquid medium, anaerobically cultured at 37 ° C. for 16 hours, concentrated, and lyophilized. To obtain a freeze-dried powder (fungal powder) of the bacteria. The bacterial powder and rice bran are mixed uniformly to obtain a composition. The composition is provided to the elderly as a liquid food for the elderly. The intake of bacteria is adjusted to 1 ⁇ 10 8 to 1 ⁇ 10 10 CFU / kg body weight / day, and provided daily at breakfast for 1 week.
  • the raw material of rice porridge is rice, and since arabinoxylan is contained in rice, it can be expected that the elderly can improve the intestinal environment of the elderly by continuing intake of the liquid food for the elderly according to the present technology. .
  • the composition of manufacture example 1 can be similarly ingested by an adult as a rice porridge product, and the improvement effect of intestinal environment can be expected.
  • the composition of Production Example 1 can also be used as a baby food for infants, and in the same manner, the infants can be continuously ingested to expect a favorable intestinal flora forming effect of infants.
  • brown rice may be used instead of milled rice, and since rice bran products of brown rice contain a large amount of hull components, the improvement effect of the internal environment can be expected better.
  • Production Example 2 The above subspecies long gum NITE BP-02564 and the above subspecies long gum NITE BP-02565 are added to 3 mL of MRS liquid medium, anaerobically cultured at 37 ° C. for 16 hours, the culture fluid is concentrated, and freeze-dried. Granule form (fungal powder) is obtained. The granular bacterial powder is provided daily at 1 ⁇ 10 8 to 1 ⁇ 10 10 CFU / kg body weight / day so that the bacterial intake can be taken. When eating the Japanese food, the granular bacterial powder of Production Example 2 is taken before, during or after a meal. In Japanese food, rice is used as a staple food, and potato and tofu-containing miso soup is used as a side meal.
  • the improvement effect of the intestinal environment of adults can be expected.
  • the granular bacterial powder of Production Example 2 is blended when the powdered milk is ingested.
  • the ability to assimilate sialic acid enables favorable growth in the intestine even in the case of infants and can improve the intestinal environment of infants.
  • it since it has the ability to assimilate sialic acid and the assimilation ability of the above-mentioned components contained in Japanese food such as rice, it can be favorably propagated in the intestine even in the case of an adult or an elderly person, and an adult or an elderly person Improve the intestinal environment.
  • sialic acid or sialic acid-linked oligo is added so as to be 10 to 10,000 parts by mass of sialic acid or sialic acid-linked oligosaccharide with respect to 100 parts by mass of assumed bacteria. It may be possible to obtain a powdered milk for child care (containing bacteria of the present technology) (Production Example 4) containing sugar, and further to provide a powdered milk for child care (containing the bacteria of the present technology) (Production Example 5) blended with the subspecies long gum. May be It is also possible to produce them as liquid milk for infants.
  • means for generating sialic acid from sialic acid-linked oligosaccharides may be used. Since the bacterium of the present technology has assimilation ability of sialic acid, even in the case of infants, it can be favorably propagated in the intestine, and the intestinal environment of infants can be improved.
  • the bacteria of the present technology having the assimilation ability of sialic acid can be favorably propagated, and the advantage of HMO can also be obtained.
  • the present technology can also be expected to have preventive and ameliorating effects on allergic symptoms, lactose intolerance ameliorating effects, immune ability improving actions, infection protective actions, brain nervous system forming actions, or brain nervous system activating actions.
  • the subspecies long gum having assimilation ability of sialic acid, the composition containing the subspecies long gum, and the composition for promoting the growth of this subspecies long gum are provided by the growth of Bifidobacterium bacteria in the intestine. It can also be used effectively for the formation of good intestinal flora, improvement of the intestinal environment, etc.
  • NITE BP-02564 (Accession No .: NITE BP-02564) (accepted date: November 10, 2017 (date of domestic deposit), international deposit based on the Budapest Treaty Transfer request date of: October 9, 2018), trustee: ⁇ 292-0818 Kisarazu City, Chiba Prefecture, Japan 2-4-5, Kazusa Shibata, National Institute of Technology and Evaluation, Patent Microorganisms Depositary Center (NPMD) .
  • NITE BP-02565 (Accession No .: NITE BP-02565) (accepted date: November 10, 2017 (date of domestic deposit), international deposit based on the Budapest Treaty Transfer request date of: October 9, 2018), trustee: ⁇ 292-0818 Kisarazu City, Chiba Prefecture, Japan 2-4-5, Kazusa Shibata, National Institute of Technology and Evaluation, Patent Microorganisms Depositary Center (NPMD) .

Abstract

幅広い年齢層で有益に利用可能な善玉菌及びこれを含む組成物を提供すること。　ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２５６４、及び／又は、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムＮＩＴＥ　ＢＰ－０２５６５；シアル酸の資化能を有するビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムに分類される細菌；前記細菌を含む組成物。さらに好適には、シアル酸を含む組成物。さらに好適には、アラビノキシラン、アラビナン、ペクチックガラクタン、及びこれら由来のオリゴ糖からなる群から選択される１種以上の糖質、又は、少なくともイネ科植物由来の糖質又はナス科植物由来の糖質、を含む組成物。

Description

新規ビフィドバクテリウム属細菌及び当該細菌を含む組成物
　本発明は、新規ビフィドバクテリウム属細菌、当該細菌を含む組成物、当該細菌の増殖促進用組成物に関する。
　近年、動物に良い影響を与える微生物（善玉菌）を積極的に摂取して腸内環境を整えることで、病気の発生抑制、健康増進等を目的とするプロバイオティクス及び善玉菌の増殖を助ける成分等のプレバイオティクスの研究が盛んに行われるようになってきている。プロバイオティクスは、腸内で有益な働きをする細菌をいうのに対して、プレバイオティクスは、これらの有益な細菌の選択的な栄養源となり、それらの増殖を促進する物質をいう。プレバイオティクスにより、乳酸菌・ビフィズス菌増殖促進作用、整腸作用、炎症性腸疾患への予防・改善作用等の人の健康に有益な効果があることが知られている。
　例えば、特許文献１には、重量平均分子量が１００００～３０００００であり、かつ還元糖量が０．１２～２．０に調整された寒天を含有することを特徴とする乳酸菌増殖促進剤が開示されている。
　斯様に、プロバイオティクスやプレバイオティクスについて鋭意研究が進められている。
特開２０１４－９４００１号公報
　乳幼児の腸内細菌叢と大人の腸内細菌叢は異なり、これらの善玉菌の種類及び割合も異なることは一般的に知られている。このため、腸内の善玉菌を投与すること又は腸内の善玉菌の増殖を助ける成分を投与することで、乳幼児であっても大人であっても良好なプロバイオティクス効果が得られることが望ましい。
　しかしながら、乳幼児の腸内に多く存在する種類の善玉菌は、母乳の栄養素に適応しているケースが多く、大人の食事由来成分（食物繊維等）を利用できないので、このように減少する善玉菌を積極的に大人になって摂取しても腸内で増殖させることは難しい。また、大人の食環境で良好に増殖する善玉菌を乳幼児に積極的に摂取させても、乳幼児に対して期待する効果（腸内細菌叢の形成、母乳の消化吸収、感染防御等）があまり得られないことが多い。
　このように、乳幼児でも大人でも幅広い年齢層の腸内で増殖が容易で有益に利用可能な善玉菌及びこれを含む組成物を提供するアプローチには、難しいものがある。
　そこで、本技術は、幅広い年齢層で有益に利用可能な善玉菌及びこれを含む組成物を提供することを主な目的とする。
　本発明者らは、乳幼児でも大人でも幅広い年齢層で有益に利用可能な善玉菌を得ようとしたときに、まずは両者の食生活の違いに着目し検討を行った。
　そして、本発明者らは、鋭意検討を行った結果、ヒト腸内細菌から採取されたビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム（下記亜種ロンガムとも呼ぶ）において、従来知られている亜種ロンガムの性質とは異なる性質を有する新たな菌グループが存在することを発見した。
　具体的には、本発明者らは、全く偶然にも、シアル酸の資化能を有するビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムの新たな菌グループが存在することを見出した。
　参考文献１（Nature Communications, 7:11939, p1-12, (2016) 6, Volume 80 Number 14 (2014)）には、フコシルラクトース利用のためのキー遺伝子因子が乳幼児の腸内細菌叢発展に影響を及ぼすことが記載されている。参考文献１の表１に記載されているように、ビフィドバクテリウム属ロンガム種の亜種ロンガムが、ヒトミルクオリゴ糖で増殖がほとんど認められないことが示されている。また、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムが、シアル酸資化能を有することは知られていない。
　このヒト母乳オリゴ糖には体表的なシアル酸含有オリゴ糖（シアル酸結合オリゴ糖ともいう）があるが、当該菌グループは、シアル酸を資化することが可能である。一般的に成人に生息するビフィドバクテリウム属細菌やヒトに棲息していないビフィドバクテリウム属細菌はヒト母乳オリゴ糖を利用することが出来ない。このため、当該菌グループは、乳幼児が摂取するヒト母乳オリゴ糖（ＨＭＯ）を利用できることから乳幼児の腸内で増殖が容易である。
　さらに、この菌グループのなかには、「アラビノキシラン、脱分岐化アラビナン、又はペクチックガラクタン」の少なくともいずれかの糖質を資化する資化能があることも見出した。このような菌グループは、大人で主食としているイネ科植物又はナス科植物を食したときに胃酸等によって一部消化した糖質を資化することで、これらを食したヒトの腸内でも増殖が容易である。
　このように、本発明者らが発見した新たな菌グループであれば、乳幼児の腸内で増殖が容易であり、さらに必要に応じて大人で食するような食品（例えば和食）でも増殖も容易であるため、幅広い年齢層で利用することができる。この菌グループであれば、幼児又は大人を問わずに幅広い年齢層で良好な腸内フローラ形成にも寄与することができる。
　なお、本件明細書における「和食」とは、コメ（特に米飯、おかゆ）を主食とした食事のことである。さらに、主菜・副菜として、根菜料理（例えば、ジャガイモ等）；豆類料理（例えば、豆腐、大豆発酵食品（例えば、味噌、納豆等）等）があることが望ましい。
　従って、本発明者らは、幼児でも大人でも幅広い年齢層で有益に利用可能な善玉菌であり、当該善玉菌がシアル酸の資化能を有するビフィドバクテリウム属ロンガム種の亜種ロンガムという新たな菌グループであることを見出し、当該善玉菌を含む組成物、及び当該善玉菌の増殖促進用組成物を新たに提供できることを見出した。
　すなわち、本発明は、以下のとおりである。
〔１〕　ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２５６４株、及び／又は、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２５６５。
〔２〕　シアル酸の資化能を有するビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムに分類される細菌。
〔３〕　さらに、アラビノキシラン、アラビナン、ペクチックガラクタン、からなる群より選択される1種以上の糖質の資化能を有する、前記〔２〕に記載の細菌。
〔４〕　前記細菌が、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２５６４、及び／又は、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２５６５である、前記〔２〕又は〔３〕に記載の細菌。
〔５〕　前記〔２〕～〔４〕のいずれか１つに記載の細菌を含む、組成物。
〔６〕　前記組成物が、プロバイオティクス組成物である、前記〔５〕に記載の組成物。
〔７〕　前記組成物が、少なくとも、乳幼児用、成人用、高齢者用のいずれかに用いる、前記〔５〕又は〔６〕に記載の組成物。
〔８〕　前記組成物が、整腸用又は飲食品用に用いられる、前記〔５〕～〔７〕のいずれか１つ記載の組成物。
〔９〕　さらに、シアル酸を含む、前記〔５〕～〔８〕のいずれか１つ記載の組成物。
〔１０〕　さらに、アラビノキシラン、アラビナン、ペクチックガラクタン、及びこれら由来のオリゴ糖からなる群より選択される１種以上の糖質を含む、前記〔９〕に記載の組成物。
〔１１〕　さらに、少なくともイネ科植物由来の糖質又はナス科植物由来の糖質を含む、前記〔９〕又は〔１０〕記載の組成物。
〔１２〕　ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムに分類される細菌の増殖を促進するのに使用するためのプレバイオティクス組成物であり、
　前記組成物が、シアル酸を含むプレバイオティクス組成物。
〔１３〕　前記組成物が、さらに、アラビノキシラン、アラビナン、ペクチックガラクタン、及びこれら由来のオリゴ糖からなる群からなる群より選択される１種以上の糖質を含む、前記〔１２〕に記載のプレバイオティクス組成物。
〔１４〕　２’－フコシルラクトースの資化能を有するビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムに分類される微生物を含む組成物の製造方法。
〔１５〕　前記細菌が、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム
　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２５６４、及び／又は、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２５６５である、前記〔１４〕に記載の製造方法。
〔１６〕　組成物に用いる、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２５６４、及び／又は、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２５６５。
〔１７〕　組成物を製造のための、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２５６４、及び／又は、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２５６５の使用。
〔１８〕　ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２５６４、及び／又は、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２５６５を投与するプロバイオティクスによる、アレルギー症状、免疫機能障害、感染症又は神経系疾患の、予防、改善又は治療方法。
　本技術によれば、幅広い年齢層で有益に利用可能な善玉菌及びこれを含む組成物、当該善玉菌の増殖促進用組成物を提供することができる。なお、ここに記載された効果は必ずしも限定されるものではなく、本技術中に記載されたいずれかの効果であってもよい。
　次に、本発明の好ましい実施形態について説明する。ただし、本発明は以下の好ましい実施形態に限定されず、本発明の範囲内で自由に変更することができるものである。尚、本明細書において百分率は特に断りのない限り質量による表示である。
＜新規なビフィドバクテリウム属細菌＞
　本技術は、新規なビフィドバクテリウム属細菌であり、当該細菌は、ビフィドバクテリウム属ロンガム種の亜種ロンガム（ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム）に分類される微生物であり、上述のように従来にはない「シアル酸」の資化能を有するという極めてユニークな特徴を有する新たな菌グループ（以下、「本技術の亜種ロンガム」ともいう。）である。
　当該資化能により、本技術の亜種ロンガムが、シアル酸を含む組成物（例えば、ヒト母乳、ヒト母乳オリゴ糖（ＨＭＯ）、粉ミルク等）にて、容易に増殖することができる。本技術の亜種ロンガムは、シアル酸を使用することで、腸内において増殖も容易となる。
　なお、前記「シアル酸」の成分の詳細は、後述の「成分（ａ）シアル酸」にて説明する。
　ビフィドバクテリウム属細菌は、様々な生理機能が報告されており、その機能は腸内での増殖や産生する物質（例えば、酢酸等）によるものであると報告されている。
　従って、本技術の亜種ロンガムも、安全性が高く、かつ幅広い年齢層において、一般的に云われているビフィドバクテリウム属細菌による効能を期待することができる。このため、本技術の亜種ロンガムは、幅広い組成物（飲食品用、機能性食品用、医薬品用、飼料用等）に用いることが可能である。
　また、本技術の亜種ロンガムは、プロバイオティクス効果を期待することができるので、健康増進、食生活改善、腸内環境改善、腸内感染予防・治療等の目的に使用することも可能である。
　また、プロバイオティクス効果として、便秘及び下痢症の改善作用、乳糖不耐症の改善作用、免疫機能改善作用、感染防御作用、アレルギー抑制作用、動脈硬化の予防作用、抗腫瘍作用等が知られている（参考文献２：https://bifidus-fund.jp/en/index.shtml）。また、ヒトミルクオリゴ糖により、例えば、アレルギーの予防作用、乳糖不耐症改善作用、免疫能向上作用、感染防御作用、脳神経系形成作用、脳神経系活性化作用等が知られている（参考文献３： Milk Science Vol.56, No.4（ 2008）ｐ155-176）。
　本技術の亜種ロンガムは、プロバイオティクス効果が期待でき、またヒトミルクオリゴ糖も有効に利用することができるので、例えば、アレルギー症状（例えば、アレルギー炎症、アトピー性皮膚炎等）、免疫機能障害（例えば、免疫機能低下等）、感染症（例えば、ウイルス性胃腸炎、細菌感染症等）、神経系疾患（例えば、脳や骨髄等の神経疾患等）等の疾患、症状又は状態の予防、改善又は治療を期待できる。また、本技術の亜種ロンガムは、アレルギー症状の予防・改善作用、乳糖不耐症改善作用、免疫能向上作用、感染防御作用、脳神経系形成作用、脳神経系活性化作用等も期待することができる。
　本技術の亜種ロンガムは、アラビノキシラン、アラビナン、ペクチックガラクタンからなる群より選択される1種以上の糖質の資化能を有するという特徴を有することが好ましい。当該アラビナンは脱分岐化アラビナンが好適である。
　なお、前記「アラビノキシラン、アラビナン、及びペクチックガラクタン」の成分の詳細は、後述の「成分（ｂ）」にて説明する。
　本明細書において、「糖質」とは、特に言及しない場合、本技術の亜種ロンガムが資化可能な「多糖」及び「オリゴ糖」も含む意味である。オリゴ糖は、糖残基２～１０程度から構成されるものを云う。
　本技術の亜種ロンガムは、「アラビノキシラン、アラビナン、及びペクチックガラクタン」からなる群より選択される1種以上の糖質の資化能を有することにより、少なくともこれらの糖質を含む組成物（例えば、主食（米、小麦、トウモロコシ、ジャガイモ等）の加工品等）にて増殖することが容易にできるので、腸内において増殖が容易となる。
　本技術の亜種ロンガムを増殖させる場合、前記「アラビノキシラン、アラビナン」はイネ科植物に含まれる糖質と知られているので、イネ科植物由来の糖質（好適にはオリゴ糖）を使用することが好ましい。
　また、本技術の亜種ロンガムを増殖させる場合、前記「ペクチックガラクタン」はナス科植物に含まれる糖質として知られているので、ナス科植物由来の糖質（好適にはオリゴ糖）を使用することが好ましい。
　また、大人で主食としているイネ科植物（例えば、米、小麦、トウモロコシ等）又はナス科植物（例えば、ジャガイモ等）を食し一部消化したものには、アラビノキシラン、アラビナン、又はペクチックガラクタンのいずれかの糖質が含まれる。このため、前記「シアル酸」に加えてさらに前記「アラビノキシラン、アラビナン、及びペクチックガラクタン」の糖質の何れか１種以上を資化できる本技術の亜種ロンガムは、米又はジャガイモ等を使用するような和食を食することで、腸内において増殖が容易であるので、さらにユニークな亜種ロンガムの菌グループと云える。
　さらに、本技術の亜種ロンガムは、前記資化能として、アラビノキシラン及び／又はペクチックガラクタンに高い資化能を有することが好ましい。より好ましくは、本技術の亜種ロンガムは、アラビノキシラン及びペクチックガラクタンに高い資化能を有することである。
　本技術の亜種ロンガムは、例えば、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２５６４（受託番号：NITE BP-02564）、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２５６５（受託番号：NITE BP-02565）等が挙げられる。これら群から１種又は２種以上を選択することができる。
　なお、以降、前記ロンガム　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２５６４（受託番号：NITE BP-02564）を、「亜種ロンガム　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２５６４」ともいい、前記ロンガム　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２５６５（受託番号：NITE BP-02565）を、「亜種ロンガム　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２５６５」ともいう。
　本技術の亜種ロンガム　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２５６４及び亜種ロンガム　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２５６５は、シアル酸、アラビノキシラン及びペクチックガラクタンに高い資化能を有する細菌であるので、本技術の亜種ロンガムの菌グループのうちで、特に好ましい。
　前記亜種ロンガム　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２５６４は配列番号１を有するものであり、前記亜種ロンガム　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２５６５は配列番号２を有するものである。
　これら２菌株は、Bifidobacterium longum MCLONSIAL1（受託番号：NITE BP-02564）株、Bifidobacterium longum MCLONSIAL2（受託番号：NITE BP-02565）株として、独立行政法人　製品評価技術基盤機構　特許微生物寄託センター（ＮＰＭＤ）に寄託した、新規な亜種ロンガムの菌グループに分類されるものである。
　本技術の亜種ロンガム　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２５６４は、以下の菌学的性質及び特性から新規菌株として、独立行政法人　製品評価技術基盤機構　特許微生物寄託センター（ＮＰＭＤ）（住所：〒２９２－０８１８　日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８）に、２０１７年１１月１０日（国内寄託日）に寄託し、２０１８年１０月９日にブダペスト条約に基づく国際寄託への移管請求を行い、Bifidobacterium longum MCLONSIAL1（受託番号：NITE BP-02564）株として寄託されている。この菌株は、上記保存機関より一般に入手可能である。
　本技術の亜種ロンガム　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２５６５は、以下の菌学的性質及び特性から新規菌株として、独立行政法人　製品評価技術基盤機構　特許微生物寄託センター（ＮＰＭＤ）（住所：〒２９２－０８１８　日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８）に、２０１７年１１月１０日（国内寄託日）に寄託し、２０１８年１０月９日にブダペスト条約に基づく国際寄託への移管請求を行い、Bifidobacterium longum MCLONSIAL2（受託番号：NITE BP-02565）株として寄託されている。この菌株は、上記保存機関より一般に入手可能である。
　本技術の亜種ロンガム　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２５６４及び亜種ロンガム　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２５６５は、上記寄託菌株に制限されず、同寄託菌株と実質的に同質の菌株であってもよい。実質的に同質の菌株とは、ビフィドバクテリウム属ロンガム種の亜種ロンガムに分類される菌株であって、本件寄託菌株と同程度以上の前記「シアル酸」の資化能を少なくとも有する菌株を意味する。
　さらに、前記「アラビノキシラン、アラビナン、ペクチックガラクタンからなる群より選択される1種以上」の糖質の資化能を有するものが好適であり、より好適にはアラビノキシラン及びガラクタンの糖質の資化能を有するものである。
　また、前記シアル酸の資化能に加え、さらにラクト－Ｎ－テトラオースの資化能を有するものが、さらに好適である。
　また、実質的に同質の菌株とは、さらにその１６ＳｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列が、それぞれの株が有する配列番号１、又は配列番号２の配列（表２及び３参照）と１００％一致し、かつ好ましくは上記寄託菌株と同一の菌学的性質を有する。さらに本技術の亜種ロンガムは、本発明の効果が損なわれない限り、本件寄託菌株又はそれと実質的に同質の菌株から、変異処理、遺伝子組換え、自然変異株の選択等によって育種された菌株であってもよい。
　＜糖源の資化性の判定方法＞
　糖源を含むＭＲＳ（de Man-Rogosa-Sharpe）液体培地１ｍＬに、菌株１ｖ／ｖ％ずつ接種し、嫌気条件下で３７℃にて培養する。培養２４時間後に濁度（ＯＤ　６００）を測定し、菌株を接種しなかった培地を同様に培養したコントロールの濁度を差し引いた値を以下の基準に照らし、資化性の有無及び資化能の程度を判定する。コントロールとの差でＯＤ　６００が、０．３以上を「良好な資化性あり」、０．５以上を「より良好な資化性あり」、０．６以上を「よりさらに良好な資化性あり」、０．８以上を「非常に良好な資化性あり」とする。
　本技術の亜種ロンガムは、例えば、同菌株を培養することにより増殖させることができる。
　培養する方法は、本技術の亜種ロンガムが増殖できる限り特に限定されず、ビフィドバクテリウム属細菌の培養に通常用いられる方法を必要により適宜修正して用いることができる。例えば、培養温度は３０～５０℃でよく、３５～４５℃であることが好ましい。また培養は嫌気条件下で行うことが好ましく、例えば、炭酸ガス等の嫌気ガスを通気しながら培養することができる。また、液体静置培養等の微好気条件下で培養してもよい。
　本技術の亜種ロンガムを増殖させるために培養する培地としては、特に限定されず、ビフィドバクテリウム属細菌の培養に通常用いられる培地を必要により適宜修正して用いることができる。すなわち、炭素源としては、後述する成分（ａ）及び（ｂ）以外で、例えば、ガラクトース、グルコース、フルクトース、マンノース、セロビオース、マルトース、ラクトース、スクロース、トレハロース、デンプン加水分解物、廃糖蜜等の糖類を資化性に応じて使用できる。窒素源としては、例えば、アンモニア、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、硝酸アンモニウムなどのアンモニウム塩類や硝酸塩類を使用できる。また、無機塩類としては、例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸カリウム、硫酸マグネシウム、塩化カルシウム、硝酸カルシウム、塩化マンガン、硫酸第一鉄等を用いることができる。また、ペプトン、大豆粉、脱脂大豆粕、肉エキス、酵母エキス等の有機成分を用いてもよい。また、調製済みの培地としては、例えばＭＲＳ培地を好適に用いることができる。
　本技術の亜種ロンガムとして、培養後、得られた培養物をそのまま用いてもよく、希釈又は濃縮して用いてもよく、培養物から回収した菌体を用いてもよい。また、本発明の効果を損なわない限り、培養後に加熱、及び凍結乾燥等の種々の追加操作を行うことができる。追加の操作は、生菌の生残性が高いものであることが好ましい。
　なお、本技術の医薬組成物、飲食品、及び飼料で使用する、本技術の亜種ロンガムの菌体は、生菌であることが好ましい。
　本技術の亜種ロンガムの好ましい資化成分として、以下の成分（ａ）及び／又は成分（ｂ）、さらに以下の成分（ｃ）が挙げられる。
　本技術に用いる「成分（ａ）シアル酸」は、本技術の亜種ロンガムの増殖促進作用を有する。さらに、当該「成分（ａ）」と、後述する「成分（ｂ）」及び／又は「成分（ｃ）」とを組み合わせることで、より安定的に本技術の亜種ロンガムの増殖促進作用を発揮させることができる。これにより、本技術の亜種ロンガムを幅広い年齢層の腸内でも増殖し易くなる。さらに、本技術の亜種ロンガムの増殖促進作用の点から、ラクト－Ｎ－テトラオース（ＬＮＴ）も資化成分とすることが好ましい。
　本技術の資化成分として使用する「成分（ａ）シアル酸」は、ヒト母乳オリゴ糖（ＨＭＯ）において、シアル酸含有オリゴ糖に含まれる代表的な成分として知られている。具体的にはシアル酸は、ヒトミルクオリゴ糖（特に酸性オリゴ糖）の糖鎖構造の一部として含まれていること（すなわち、シアル酸結合オリゴ糖）が知られている。例えば、シアル酸結合オリゴ糖としては、３’－シアリルラクトース、６’－シアリルラクトース、シアリルラクト－Ｎ－テトラオース等が利用できる。
　また、本技術は、シアル酸結合オリゴ糖からシアル酸を生じさせる手段（例えば、シアル酸結合のオリゴ糖を分解する細菌又は分解酵素等）を用いることが好ましい。例えば、Bifidobacterium bifidum ATCC15696、Bifidobacterium bifidum PRL2010等のビフィドバクテリウム属細菌等の細菌を用いて菌体外でシアル酸と、ラクトース等のオリゴ糖や単糖とに分解することにより生じたシアル酸を用いることができる。その他、市販品のシアル酸を使用してもよいし、乳から調製してもよいし、公知の有機合成や酵素処理等にて得ても良い。また、シアル酸又はシアル酸含有オリゴ糖（好適にはシアル酸）を含む乳（例えば、母乳、粉ミルク、牛乳、乳製品）を使用してもよい。また、ヒトミルクオリゴ糖を使用してもよく、当該ヒトミルクオリゴ糖を乳（牛乳や粉ミルク等）に配合したもの（すなわち、ヒトミルクオリゴ糖を含む乳）を使用してもよい。
　シアル酸とは、ノイラミン酸のアミノ基やヒドロキシ基が置換された物質を総称するファミリー名で一般的に使用されている。また、シアル酸は、例えば、乳（ヒト、ウシ、ヒツジ、ウマ等）、ツバメの巣、ハチミツ、タマゴ等に多く含まれていることが知られている。このうち、乳由来シアル酸が、入手容易であるので、好ましい。
　本技術の資化成分として使用できる「成分（ｃ）ヒトミルクオリゴ糖（以下、「ＨＭＯ」ともいう）」には、少なくともシアル酸結合オリゴ糖及び／又はラクト－Ｎ－テトラオース（ＬＮＴ）が含まれるものが好適である。一般的にＨＭＯとして、例えば、２’－フコシルラクトース、３－フコシルラクトース、２’，３－ジフコシルラクトース、、３－フコシル－３’－シアリルラクトース、ラクト－Ｎ－テトラオース、ラクト－Ｎ－ネオテトラオース、ラクト－Ｎ－フコペンタオースＩ、ラクト－Ｎ－フコペンタオースＩＩ、ラクト－Ｎ－フコペンタオースＩＩＩ、ラクト－Ｎ－フコペンタオースＶ、ラクト－Ｎ－ジフコシルヘキサオースＩ、ラクト－Ｎ－ジフコシルヘキサオースＩＩ、並びに、ラクト－Ｎ－シアリルペンタオース、ＬＳＴａ、ＬＳＴｂ及びＬＳＴｃ等が挙げられる。当該ＨＭＯの各オリゴ糖は公知の製造方法で得ることができる。本技術では、これらからなる群から選択される１種又は２種以上を使用することができる。
　本技術の資化成分として、「成分（ｂ）キシラン、アラビノキシラン、アラビナン、脱分岐化アラビナン、ペクチン、ガラクタン、ペクチックガラクタン、及びこれら由来のオリゴ糖」からなる群から選択される１種以上の糖質を増殖促進のために使用することが、これを資化可能な亜種ロンガムが増殖促進できるため、好ましい。また、前記「成分（ｂ）」は、水溶性のものが好適であり、易水溶性がより好適である。
　前記「成分（ｂ）」の「キシラン、アラビノキシラン、及びアラビナン、脱分岐化アラビナン、及びこれら由来のオリゴ糖」（特に、アラビノキシラン及び当該由来のオリゴ糖）は、イネ科植物由来の糖質（多糖体、オリゴ糖）としてよく知られている。
　前記「成分（ｂ）」の「アラビノキシラン、アラビナン及び当該由来のオリゴ糖」は、イネ科植物を加工処理した市販品を使用することができ、また、当該植物から抽出加工することで得ることができる。また、例えばイネ科植物の可食部分を加工し、食物繊維等の糖質として得たものでもよい。当該「成分（ｂ）」の「アラビノキシラン、アラビナン及び当該由来のオリゴ糖」は、外皮部分（例えば、米ぬか、麦ふすま等）にも含まれる。
　イネ科植物として、例えば、イネ属植物（インディカ米、ジャポニカ米等の米等）、トウモロコシ属植物（好適にはトウモロコシ）、コムギ属植物（好適には小麦）、オオムギ属植物（好適には大麦）等が挙げられ、これらからなる群から１種又は２種以上を選択することができる。
　本技術であれば、個々の通常の食生活に対応して、これらから適宜選択することが可能である。本技術であれば、特に和食の場合、イネ属植物由来の糖質（好適にはオリゴ糖）又はこれを含む食品（例えば、コメを使用した食品（具体的には、米飯、玄米、おかゆ、コメ粉入りのパンや麺類等））を資化成分として選択することが好ましい。
　前記「成分（ｂ）」の「ペクチン、ガラクタン、ペクチックガラクタン、及びこれら由来のオリゴ糖」（特に、ペクチックガラクタン及び当該由来のオリゴ糖）は、ナス科植物由来又はイネ科植物由来の糖質（多糖体、オリゴ糖）として知られている。
　また、本技術の「成分（ｂ）」の「ガラクタン及び当該由来のオリゴ糖」が含まれる植物として、ナス科ナス属植物、豆類等が挙げられ、これらからなる群から１種又は２種以上選択することができる。
　このため、これらを加工処理した市販品を使用することができ、また、当該植物から抽出加工することで得ることができる。例えば、イネ属植物由来の糖質（好適にはアラビノキシラン由来のオリゴ糖）、ナス科ナス属植物（ジャガイモ等）由来の糖質（好適にはアラビナン由来又はペクチックガラクタン由来のオリゴ糖）、豆類由来の糖質（好適にはアラビノガラクタン由来のオリゴ糖）を選択することができる。
　なお、本明細書でいう「キシラン」は、特に言及しなければ、キシロースのポリマーを主鎖とすればよく、側鎖や主鎖に他の構成糖を有しても良いものを意味するものである。
　また、本明細書でいう「アラビナン」は、特に言及しなければ、アラビノースのポリマーを主鎖とすればよく、側鎖や主鎖に他の構成糖を有しても良いものを意味するものである。
　また、本明細書でいう「ガラクタン」は、特に言及しなければ、ガラクトースのポリマーを主鎖とすればよく、側鎖や主鎖に他の構成糖を有しても良いものを意味するものである。
　また、本明細書でいう「ペクチン」は、特に言及しなければ、α１－４結合したガラクツロン酸のポリマーとすればよく、側鎖や主鎖に他の構成糖を有しても良いものを意味するものである。また、本明細書でいう「ペクチン」は、ガラクツロン酸のカルボキシル基のメチルエステル化の有無に関係なく、メチルエステル化されている「狭義のペクチン」と、「狭義のペクチン」を脱エステル化処理したペクチン酸、メチルエステル化されていない「ペクチン酸」を含む意味である。
　一般的に、アラビノキシランは、アラビノースとキシロースとを主な構成糖とする糖質であり、キシロースのポリマーを主鎖とする糖質として知られている。
　本技術で使用するアラビノキシランとして、β１－４結合したキシロースのポリマーの主鎖に対し、α１－３結合又はα１－２結合で側鎖としてＬ－アラビノフラノース単糖又はこのアラビノオリゴ糖が結合しているものが好ましい。さらに好ましくは、側鎖にＬ－アラビノフラノース単糖が結合しているものである。また、本技術のアラビノキシランの構成糖比は、キシロース５糖残基：Ｌ－アラビノース１～４糖残基が好ましい。
　アラビノキシランの資化能を有する亜種ロンガムの場合、アラビナン及び／又はキシランについても資化成分として使用できると考える。
　また、一般的に、アラビナンは、アラビノースを主な構成糖とする糖質であり、アラビノースのポリマーを主鎖とする糖質として知られている。アラビナンには、ペクチックアラビナン及び脱分岐化アラビナン等が挙げられる。
　本技術で使用するアラビナンとして、α１－５結合したアラビノースのポリマーを主鎖とする糖質が好ましく、さらに、脱分岐化アラビナンが好ましい。脱分岐化アラビナンは、アラビナンに分岐部分がある場合に、脱分岐化処理したものである。脱分岐化アラビナンとして、例えば、ペクチックアラビナンを脱分岐化したもの（1,5-α-L-Arabinanで、Araの糖残基割合が８０％以上であるのが好適）が挙げられる。
　また、一般的に、ペクチックアラビナンは、アラビナンの主鎖とペクチンとを構成とする糖質として知られている。ペクチックアラビナンとして、例えば、主鎖のアラビナンの還元末端のＣ－１にペクチンが結合したものが挙げられる。
　脱分岐化アラビナンの資化能を有する亜種ロンガムの場合、ペクチックアラビナンについても資化成分として使用できると考える。
　一般的に、ペクチックガラクタンは、ガラクタンの主鎖とガラクツロン酸ポリマーを構成とする糖質であり、よく知られているペクチックガラクタンとして、主鎖のガラクタンの還元末端のＣ－１にペクチンが結合したものが挙げられる。
　ペクチックガラクタンの資化能を有する亜種ロンガムの場合、ペクチン及び／又はガラクタンについても資化成分として使用できると考える。
　一般的に、ガラクタンは、ガラクトースを主な構成糖とし、ガラクトースのポリマーを主鎖とする糖質として知られている。
　ペクチックガラクタンの場合、β１－４結合したガラクトースのポリマーを主鎖とする糖質として知られている。
　また、ガラクタンは、大豆にはアラビノガラクタンとして含まれていることが知られている。ガラクタンを含むマメ科植物由来の糖質として、ルパン豆由来の糖質、大豆由来の糖質が挙げられる。大豆由来の糖質として、大豆加工製品（例えば、豆腐、豆乳等）、大豆発酵製品（例えば、味噌、醤油、納豆等）又はこれ由来の糖質であってもよい。
＜増殖促進するのに使用するための組成物＞
　斯様に、本技術の前記「成分（ａ）シアル酸」は、本技術の亜種ロンガムに対して増殖促進作用を有する。前記「成分（ａ）」に、さらに前記成分（ｂ）の「キシラン、アラビノキシラン、アラビナン、脱分岐化アラビナンペクチン、ガラクタン、ペクチックガラクタン、及びこれら由来のオリゴ糖」、前記成分（ｃ）の「ＨＭＯ」からなる群より選択される１種以上の糖質を少なくとも組み合わせる（以下、「これら成分の組み合わせ」ともいう）ことで、より好適に本技術の亜種ロンガムに対して増殖促進作用を有する。これら成分は、本技術の亜種ロンガムに対して増殖促進作用の成分として使用できる。
　このため、前記「成分（ａ）」又は前記「これら成分の組み合わせ」は、本技術の亜種ロンガムの増殖促進の成分として使用することも可能である。
　前記「成分（ａ）」又は前記「これら成分組み合わせ」は、有効成分として、本技術の亜種ロンガムの増殖を促進するのに使用するための組成物（以下、「増殖促進用組成物」ともいう。）に含有させることができ、また、医薬品、飲食品、飼料等の幅広く用途の製品に使用することができる。これらの製品は各種用途に適合した任意成分を適宜用い、各用途に適合した公知の製造方法によって、製造することができる。
　また、前記「成分（ａ）」又は前記「これら成分の組み合わせ」は、これ自体をそのまま本技術の増殖促進目的で使用することが可能であり、又は生理的、医薬品的若しくは飲食品的に許容される通常の担体若しくは希釈剤等と共に混合して用いることもできる。
　また、前記「成分（ａ）」又は前記「これら成分の組み合わせ」は、これら各種製剤又は各種組成物等の製造のために使用することができる。また、本技術の前記「成分（ａ）」又は前記「これら成分の組み合わせ」は、本技術の亜種ロンガムに対する増殖促進方法又は増殖を促進させるのに使用するための組成物（好適にはプレバイオティクス組成物）として使用することも可能である。
　また、本技術の増殖促進用組成物における、前記「成分（ａ）シアル酸」の使用量又は含有量は、菌１００質量部に対して、１～１,０００,０００質量部が好ましく、１０～１０,０００質量部がより好ましい。
　また、本技術の増殖促進用組成物における、「前記成分（ｂ）から選ばれる１種以上の糖質」の使用量又は含有量は、菌１００質量部に対して、１～１,０００,０００質量部が好ましく、１０～１０,０００質量部がより好ましい。
　また、本技術の亜種ロンガムの増殖促進用組成物は、前記「成分（ａ）」と「前記成分（ｂ）から選ばれる１種以上の糖質」との組み合わせの場合、これらを混合して又は別々の組成物キットとして使用することができる。
　上述した本技術の増殖促進用組成物によって本技術の亜種ロンガムが増殖促進するため、本技術の増殖促進用組成物は、プレバイオティクス組成物として使用することができる。当該増殖促進用組成物の使用により、本技術の亜種ロンガムによる、整腸作用、ミネラル吸収促進作用、炎症性腸疾患への予防・改善作用等の人の健康に有益なプロバイオティクス効果も期待できる。
　また、本技術の増殖促進用組成物の摂取により、本技術の亜種ロンガム以外の乳酸菌・ビフィズス菌増殖促進作用も期待できるので、これら乳酸菌・ビフィズス菌のプレバイオティクス組成物として使用することが可能である。
　本技術の亜種ロンガム以外の乳酸菌・ビフィズス菌の増殖促進成分を使用することができる。この乳酸菌・ビフィズス菌の増殖促進成分として、例えば、オリゴ糖（例えば、ガラクトオリゴ糖、フラクトオリゴ糖、大豆オリゴ糖、ミルクオリゴ糖（好適にはヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ））、キシロオリゴ糖、イソマルオリゴ糖、ラフィノース、ラクチュロース、コーヒー豆マンノオリゴ糖、グルコン酸等）、食物繊維（ポリデキストロース、イヌリン等）の糖質が知られており、これらから１種又は２種以上選択することができる。
　このため、このような乳酸菌・ビフィズス菌増殖促進成分を、本技術のプレバイオティクス組成物の任意成分として含有させることが好ましい。
　そして、本技術のプレバイオティクス組成物によって、本技術の亜種ロンガム及びこれ以外の乳酸菌・ビフィズス菌増殖促進できる。このことにより、さらに良好に、整腸作用、ミネラル吸収促進作用、炎症性腸疾患への予防・改善作用等のプロバイオティクス効果も期待できる。
　また、ヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ）による各種作用、例えば、アレルギーの予防・改善作用、乳糖不耐症改善作用、免疫能向上作用、感染防御作用、脳神経系形成作用、脳神経系活性化作用等が知られている（参考文献３：Biological significance of human milk oligosaccharides; Milk Science Vol.56, No.4（ 2008）ｐ155-176）。このことより、本技術の増殖促進用組成物によって、アレルギー症状の予防・改善作用、乳糖不耐症改善作用、免疫能向上作用、感染防御作用、脳神経系形成作用、脳神経系活性化作用等のプロバイオティクス効果も期待できる。
＜組成物＞
　本技術はまた、本技術の亜種ロンガムを含む組成物を提供することができる。本技術の組成物は、飲食品組成物、医薬組成物、飼料組成物等を含む意味である。また、本技術の組成物は、プロバイオティクス組成物が好適である。
　本技術の亜種ロンガムは、上述のとおり、「シアル酸」の資化能を有する。本技術の亜種ロンガムは、さらに、「アラビノキシラン、アラビナン、及びペクチックガラクタンからなる群より選択される１種以上」の糖質（好適にはオリゴ糖）の資化能を有するという特徴を有することが好ましい。
　従って、本技術の亜種ロンガムを含む組成物に、上述した本技術の亜種ロンガムが増殖促進できる資化成分をさらに使用することが好ましい。
　本技術の亜種ロンガムは、上述した「（ａ）成分」（好適には前記「これら成分の組み合わせ」）の資化成分、又はこの資化成分を含む飲食品と、同時時期又は別々に摂取することで、より好適に腸内で増殖できる。このように資化成分（すなわち、増殖促進用成分）を含有させることにより、さらに好適に、プロバイオティクス効果も期待することができる。
　本技術の亜種ロンガムは、適用対象であるヒト又は非ヒト動物（好適には哺乳類）に使用してもよく、ヒト及びペットが好ましく、より好ましくはヒトである。
　さらに、本技術の適用対象者は、プロバイオティクス効果を望む者であれば特に限定されず、例えば、乳幼児、小児、成人、健常者、中高年、高齢者、及び腸内環境の優れない者等が挙げられる。このうち、本技術は、乳児用、成人用、高齢者用に使用することが好ましい。
　本技術の亜種ロンガムを含む組成物は、乳幼児用から大人用の範囲の食生活においても腸内で本技術の亜種ロンガムの増殖が可能なので、幅広い年齢でプロバイオティクス効果を期待することができる。これにより、例えば、腸内環境の改善や整腸作用、ミネラル吸収促進作用、炎症性腸疾患への予防・改善作用等も期待できる。
　本技術の亜種ロンガムを含む組成物は、プロバイオティクス効果が期待できるので、例えば、上述したアレルギー症状、免疫機能障害、感染症、神経系疾患等の疾患又は症状の予防、改善又は治療を期待できる。また、本技術の亜種ロンガムを含む組成物は、上述したアレルギー症状の予防作用、乳糖不耐症改善作用、免疫能向上作用、感染防御作用、脳神経系形成作用、脳神経系活性化作用等も期待できる（参考文献２及び参考文献３）。
　また、本技術は、ヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ）を含む育児用組成物（好適には乳児用ミルク）に使用すること又は利用することも可能である。本技術の育児用組成物は、アレルギー症状の予防作用、乳糖不耐症改善作用、免疫能向上作用、感染防御作用、脳神経系形成作用、脳神経系活性化作用等も期待できる。
　また、本技術に用いられる亜種ロンガムは、ヒト由来であるため副作用が少なく安全性が高いので、継続して長期間摂取することも可能である。
　そして、本技術は、プロバイオティクスによって予防、改善又は治療可能な症状又は疾患に有効に使用することもできる。
　本技術の亜種ロンガムは、そのまま用いることが可能であり、又は生理的、医薬品的若しくは飲食品的に許容される通常の担体若しくは希釈剤等と共に混合して用いることもできる。
　従って、本技術の亜種ロンガムは、有効成分としてプロバイオティクス組成物に含有させることもでき、また、安全性が高いので、医薬品、飲食品、飼料等の幅広い用途の製品に使用できる。これらの製品は、各用途に適合した任意成分を適宜用い、各用途に適合した公知の製造方法によって、製造することができる。
　また、本技術の亜種ロンガムは、これら各種製剤又は各種組成物等の製造のために使用することができる。また、本技術は、プロバイオティクス用の亜種ロンガムとして使用することも可能である。
　本技術の組成物は、少なくとも本技術の亜種ロンガムを含むものであり、さらに上述した増殖促進成分を含むものが好ましい。
　本技術の組成物は、前記「成分（ａ）シアル酸」を含むことが好ましい。
　さらに、「前記成分（ａ）」に加えて、さらに「前記成分（ｂ）キシラン、アラビノキシラン、アラビナン、脱分岐化アラビナン、ペクチン、ガラクタン、ペクチックガラクタン、及びこれら由来のオリゴ糖からなる群より選択される１種以上の糖質」を含む、組成物が好ましい。このうち、アラビノキシラン及び／又はペクチックガラクタンを少なくとも含有させることが好ましい。
　また、「前記成分（ａ）」に加えて、さらに「前記成分（ｂ）」の「アラビノキシラン、アラビナン、ペクチックガラクタン、及びこれら由来のオリゴ糖からなる群より選択される１種以上の糖質」を含有させてもよい。
　また、本技術の組成物は、「前記成分（ａ）」に加えて、さらに少なくともイネ科植物由来の糖質及び／又はナス科植物由来の糖質を含むことが好ましい。
　また、本技術の亜種ロンガムを含む組成物と、本技術の亜種ロンガムの増殖促進用組成物とを、混合した組成物として又は別々の組成物キットとして使用することも可能である。また、上述した本技術の増殖促進用組成物を、プロバイオティクス組成物の成分として含有させて使用することも可能である。
　本技術の亜種ロンガムの投与又は摂取は、少なくとも１週間継続することが好ましく、少なくとも４週間継続することがより好ましく、毎日継続することが望ましい。
　本技術の亜種ロンガムの使用量は、安全性が高いので特に制限されないが、例えば、１×１０６～１×１０１２ＣＦＵ／ｋｇ体重／日が好ましく、１×１０７～１×１０１１ＣＦＵ／ｋｇ体重／日がより好ましく、１×１０８～１×１０１０ＣＦＵ／ｋｇ体重／日がさらに好ましい。又は、１個体（Ｂｏｄｙ　ｗｅｉｇｈｔ）あたりの使用量（投与量）としては、１０７～１０１４ＣＦＵ／日が好ましく、１０８～１０１３ＣＦＵ／日がより好ましく、１０９～１０１２ＣＦＵ／日がさらに好ましい。
　また、本技術の亜種ロンガムの使用量は、０．０１～１００ｍＬ／体重ｋｇ／日であることが好ましく、０．１～１０ｍＬ／体重ｋｇ／日であることがより好ましい。
　なお、本技術において、ＣＦＵとは、Colony forming unitの意味であり、コロニー形成単位を表す。前記細菌が死菌の場合、ＣＦＵは、個細胞（cells）と置き換えることができる。
　また、本技術は、治療目的使用であっても、非治療目的使用であってもよい。
　「非治療目的」とは、医療行為、すなわち、治療による人体への処置行為を含まない概念である。例えば、健康増進、美容行為等が挙げられる。
　「改善」とは、疾患、症状又は状態の好転；疾患、症状又は状態の悪化防止、遅延；疾患又は症状の進行の逆転、防止又は遅延をいう。
　「予防」とは、適用対象における疾患若しくは症状の発症の防止や遅延、又は適用対象の疾患若しくは症状の危険性の低下をいう。
＜医薬組成物＞
　さらに、本技術の組成物は、医薬組成物として用いることができる。これにより、プロバイオティクス効果を期待できる。
　本技術の医薬組成物は、本技術の亜種ロンガムを含有する限り特に制限されない。当該医薬組成物は、本技術の亜種ロンガムを含有する、整腸用組成物等としても使用できる。
　本技術の医薬組成物としては、本技術の亜種ロンガムをそのまま使用してもよく、生理的に許容される液体又は固体の製剤担体を配合し製剤化して使用してもよい。
　また、本技術の医薬組成物は、経口組成物成分としてヒト腸内より得ることができる本技術の亜種ロンガムを有効成分とするため、種々の疾患を罹患した患者に対しても安心して投与できる。また、ビフィドバクテリウム属細菌は、動物の腸内にも存在するため、本技術は、長期間、連続的に投与しても副作用が生じにくいことが期待される。また、ビフィドバクテリウム属細菌は、乳幼児や小児にも安全に投与することができる。したがって、本技術は、乳幼児や小児に対する疾患又はその症状の予防、改善及び／又は治療にも好適である。
　本技術の医薬組成物の剤形は特に制限されず、具体的には、錠剤、丸剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤、カプセル剤、シロップ剤、坐剤、注射剤、軟膏剤、貼付剤、点眼剤、及び点鼻剤等を例示できる。また、製剤化にあたっては、製剤担体として通常使用される賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯味矯臭剤、希釈剤、界面活性剤、又は注射剤用溶剤等の添加剤を使用することができる。
　また、製剤化に際しては、本技術に係る医薬組成物には、通常製剤化に用いられている賦形剤、ｐＨ調整剤、着色剤、矯味剤等の成分を用いることができる。また、本発明の効果を損なわない限り、本技術に係る医薬組成物には、公知の又は将来的に見出される筋疾患、筋萎縮関連疾患又はこれらの症状に対する予防、改善及び／又は治療の効果を有する成分を使用することもできる。
　加えて、製剤化は剤形に応じて適宜公知の方法により実施できる。製剤化に際しては、適宜、製剤担体を配合して製剤化してもよい。
　本技術の医薬組成物における本技術の亜種ロンガムの含有量は、剤形、用法、患者の年齢、性別、疾患の種類、疾患の程度、及びその他の条件等により適宜設定されるが、通常、１×１０6～１×１０12ｃｆｕ／ｇ又は１×１０6～１×１０12ｃｆｕ／ｍＬの範囲内であることが好ましく、１×１０7～１×１０11ｃｆｕ／ｇ又は１×１０7～１×１０11ｃｆｕ／ｍＬの範囲内であることがより好ましい。本技術の亜種ロンガムが死菌の場合、ｃｆｕ／ｇ又はｃｆｕ／ｍＬは、個細胞／ｇ又は個細胞／ｍＬと置き換えることができる。
　本技術の亜種ロンガムの使用量は、剤形、用法、患者の年齢、性別、疾患の種類、疾患の程度、及びその他の条件等により適宜設定されるが、通常、１×１０6～１×１０12ｃｆｕ／ｇ又は１×１０6～１×１０12ｃｆｕ／ｍＬの範囲内であることが好ましく、１×１０7～１×１０11ｃｆｕ／ｇ又は１×１０7～１×１０11ｃｆｕ／ｍＬの範囲内であることがより好ましい。本技術の亜種ロンガムが死菌の場合、ｃｆｕ／ｇ又はｃｆｕ／ｍＬは、個細胞／ｇ又は個細胞／ｍＬと置き換えることができる。
　本技術の医薬組成物の投与時期は特に限定されず、対象となる症状又は疾患の治療方法に従って、適宜投与時期を選択することが可能である。また、予防的に投与してもよく、維持療法に用いてもよい。また、投与形態は製剤形態、患者の年齢、性別、その他の条件、患者の症状の程度等に応じて決定されることが好ましい。なお、本技術の医薬組成物は、いずれの場合も１日１回又は複数回に分けて投与することができ、また、数日又は数週間に１回の投与としてもよい。
＜飲食品組成物＞
　さらに、本技術の組成物は、飲食品組成物として用いることができる。これにより、プロバイオティクス効果を期待できる。
　本技術の飲食品組成物は、本技術の亜種ロンガムを公知の飲食品に添加することによって製造してもよいし、本技術の亜種ロンガムを飲食品の原料中に混合して新たな飲食品組成物として製造することもできる。
　本技術の飲食品組成物は、本技術の亜種ロンガムを含有する限り特に制限されず、飲食品組成物としては、清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、果汁飲料、及び乳酸菌飲料等の飲料（これらの飲料の濃縮原液及び調製用粉末を含む）；アイスクリーム、シャーベット、かき氷等の氷菓；飴、チューインガム、キャンディー、ガム、チョコレート、錠菓、スナック菓子、ビスケット、ゼリー、ジャム、クリーム、及び焼き菓子等の菓子類；加工乳、乳飲料、発酵乳、ドリンクヨーグルト、及びバター等の乳製品；パン；経腸栄養食、おかゆ等の流動食、離乳食、育児用ミルク（例えば、乳児用ミルク等）、スポーツ飲料；その他機能性食品等が例示される。また、飲食品は、サプリメントであってもよく、例えばタブレット状のサプリメントであってもよい。サプリメントである場合には、一日当りの食事量及び摂取カロリーについて他の食品に影響されることなく、本技術の亜種ロンガムを摂取できる。
　本技術のより好ましい実施形態の一例として、乳児用ミルク（例えば、乳児用調製粉乳等）が挙げられる。当該「乳児用ミルク」は、好ましくは、生後４～６ヶ月または生後４～１２ヶ月の乳児の特定の栄養的使用に意図された、それだけで乳幼児の栄養的要求を満たす食品をいう。それは、例えば、１以上のプロバイオティクビフィドバクテリウム属細菌；ヒトミルクオリゴ糖、フルクトオリゴ糖及びガラクトオリゴ糖などのプレバイオティクス；カゼイン、大豆、ホエー又はスキムミルク由来のタンパク質；ラクトース、サッカロース、マルトデキストリン、デンプンまたはそれらの混合物などの炭水化物；脂質（例えば、パームオレイン、ヒマワリ油、ヒマワリ油）；及び、日常の食物に不可欠なビタミン類及びミネラル等を含有することができ、これらの群から１種又は２種以上を選択することができる。
　また、本技術における飲食品組成物には、本発明の効果を損なわない限り、公知の又は将来的に見出されるプロバイオティクス効果を有する成分又はプロバイオティクス効果を補助する成分を使用することができる。例えば、本技術における飲食品組成物は、ホエイタンパク質、カゼインタンパク質、大豆タンパク質、若しくはエンドウ豆タンパク質（ピープロテイン）等の各種タンパク質若しくはその混合物、分解物；ロイシン、バリン、イソロイシン若しくはグルタミン等のアミノ酸；ビタミンＢ６若しくはビタミンＣ等のビタミン類；クレアチン；クエン酸；又はフィッシュオイル等の成分と、本技術の亜種ロンガムとを組合せて調製することができる。
　また、本技術で定義される飲食品組成物は、プロバイオティクス等の用途（保健用途を含む）が表示された飲食品として提供・販売されることが可能である。また、飲食品の摂取対象として、「和食を好む方」、「ビフィズス菌と暮らす生活を望む方」、「腸内環境を改善したい方」、「お腹の調子を整えたい方」、「良好な腸内環境を形成したい方」等と表示して提供・販売されることが可能である。
　「表示」行為には、需要者に対して前記用途を知らしめるための全ての行為が含まれ、前記用途を想起・類推させうるような表現であれば、表示の目的、表示の内容、表示する対象物・媒体等の如何に拘わらず、全て本発明の「表示」行為に該当する。
　また、「表示」は、需要者が上記用途を直接的に認識できるような表現により行われることが好ましい。具体的には、飲食品に係る商品又は商品の包装に前記用途を記載したものを譲渡し、引き渡し、譲渡若しくは引き渡しのために展示し、輸入する行為、商品に関する広告、価格表若しくは取引書類に上記用途を記載して展示し、若しくは頒布し、又はこれらを内容とする情報に上記用途を記載して電磁気的（インターネット等）方法により提供する行為等が挙げられる。
　一方、表示内容としては、行政等によって認可された表示（例えば、行政が定める各種制度に基づいて認可を受け、そのような認可に基づいた態様で行う表示等）であることが好ましい。また、そのような表示内容を、包装、容器、カタログ、パンフレット、ＰＯＰ等の販売現場における宣伝材、その他の書類等へ付することが好ましい。
　また、「表示」には、健康食品、機能性食品、経腸栄養食品、特別用途食品、保健機能食品、特定保健用食品、栄養機能食品、機能性表示食品、医薬用部外品等としての表示も挙げられる。この中でも特に、消費者庁によって認可される表示、例えば、特定保健用食品、栄養機能食品、若しくは機能性表示食品に係る制度、又はこれらに類似する制度にて認可される表示等が挙げられる。具体的には、特定保健用食品としての表示、条件付き特定保健用食品としての表示、身体の構造や機能に影響を与える旨の表示、疾病リスク減少表示、科学的根拠に基づいた機能性の表示等を挙げることができ、より具体的には、健康増進法に規定する特別用途表示の許可等に関する内閣府令（平成二十一年八月三十一日内閣府令第五十七号）に定められた特定保健用食品としての表示（特に保健の用途の表示）及びこれに類する表示が典型的な例である。
　本技術の飲食品組成物における本技術の亜種ロンガムの含有量は、飲食品組成物の態様によって適宜設定されるが、通常、飲食品中に、１×１０6～１×１０12ｃｆｕ／ｇ又は１×１０6～１×１０12ｃｆｕ／ｍＬの範囲内であることが好ましく、１×１０7～１×１０11ｃｆｕ／ｇ又は１×１０7～１×１０11ｃｆｕ／ｍＬの範囲内であることがより好ましい。
　本技術の亜種ロンガムの使用量は、飲食品組成物の態様によって適宜設定されるが、通常、飲食品中に、１×１０6～１×１０12ｃｆｕ／ｇ又は１×１０6～１×１０12ｃｆｕ／ｍＬの範囲内であることが好ましく、１×１０7～１×１０11ｃｆｕ／ｇ又は１×１０7～１×１０11ｃｆｕ／ｍＬの範囲内であることがより好ましい。
　本技術の飲食品は、飲食品組成物の原料に、本技術の亜種ロンガムを添加することにより製造することができ、本技術の亜種ロンガムを添加すること以外は、通常の飲食品組成物と同様にして製造することができる。
　さらに、上述した増殖促進用組成物を適宜添加してもよいし、前記増殖促進用組成物として、増殖促進用組成物の由来となる食品等を使用してもよい。
　食品又は飲料の原料としては、通常の飲料や食品に用いられている原料を使用することができるが、本技術の亜種ロンガムに対する増殖促進成分を考慮すると、和食の原料が好ましい。
　また、本技術の亜種ロンガムは、目的に応じて、飲食品に使用されるような他の「ビフィドバクテリウム属細菌及び／又は乳酸菌」と併用して使用することも可能である。
　本技術の飲食品組成物には、飲食品組成物製造のための原料、及び食品添加物等、飲食品組成物の製造工程又は製造後に飲食品に添加されるものも含まれる。
　本技術の飲食品の製造において、本技術の亜種ロンガムの添加は、飲食品組成物の製造工程のいずれの段階で行ってもよい。例えば、一例として、一般的にビフィドバクテリウム属細菌を添加する工程において添加してもよい。
　製造された飲食品は、経口的に摂取することが可能である。
　本技術の亜種ロンガムを含む飲食品としては、おかゆ等の和食、離乳食、流動食（好適には高齢者用等）、乳児用ミルク、乳酸菌飲料、及び発酵乳等が挙げられる。
　本技術の飲食品が、おかゆ等のような流動性のある和食であれば、離乳食としても高齢者用の流動食としても使用することができる。高齢者において、和食を制限されるようなヒトでも、おかゆ等にて和食を食することも可能であり、食生活の改善に繋げることができる。このように、本技術であれば、食生活の質の改善をしつつ、プロバイオティクス効果を期待しつつ、家族団らんで同じものを食することが可能である。
　また、大豆発酵由来の糖質でも資化の可能性があり、これは味噌汁、納豆等の和食でもよいことを示唆するものである。
＜他の実施形態＞
　本技術の別の実施態様を、以下に示すが、本技術がこれにより限定されるものではない。
　シアル酸（Ｎ－アセチルノイラミン酸）は、悪性腫瘍、炎症性疾患、ストレス、などで血中、尿中に増加してくることが知られている。悪性腫瘍、白血病（とくに骨髄性）、肺炎、腎炎、心筋梗塞、その他の感染症、各種膠原病、妊娠後期に、シアル酸の値が高くなる。
　従って、本技術の亜種ロンガムは、シアル酸を資化して増殖できるため、採取した検体（血液、尿等）中のシアル酸量を指標とした検査又は診断補助等にも使用可能である。
　よって、本技術の別の実施態様として、本技術の亜種ロンガムを使用して、シアル酸により高値になる症状又は疾患の検査キット又は診断を補助する方法を提供することが可能である。
　このとき、シアル酸濃度を測定する方法としては、公知のシアル酸検査方法等に準じて行えばよい。一例として以下に示す。採取した検体を含めないもの又は健常者の正常値を、コントロールとすればよい。このコントロールと対比し、これよりも本技術の亜種ロンガムの増殖が高いものが、シアル酸値がコントロールよりも高いと判断すればよい。増殖確認は細菌増殖確認で一般的に使用される吸光度（可視光：ＯＤ）で行えばよい。
　本技術は、以下の構成を採用することも可能である。
〔１〕
　ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２５６４、及び／又は、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２５６５。
〔２〕
　シアル酸の資化能を有するビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムに分類される細菌。
〔３〕　さらに、アラビノキシラン、アラビナン、ペクチックガラクタン、からなる群より選択される1種以上の糖質の資化能を有する、細菌。
　さらに好適な細菌は、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２５６４、及び／又は、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２５６５である。
〔４〕
　前記〔１〕～〔３〕のいずれか１つ記載の細菌を含む組成物、又は、組成物への前記〔１〕～〔３〕のいずれか１つの細菌の使用。前記組成物は、好適には、医薬品用組成物又は飲食品組成物である。
〔５〕　前記組成物が、プロバイオティクス組成物である、前記〔４〕記載の組成物、又は前記〔４〕記載の組成物への細菌の使用。
〔６〕　前記組成物が、少なくとも、乳幼児用、成人用、高齢者用のいずれかに用いる、前記〔４〕又は〔５〕記載の組成物、又は前記〔４〕又は〔５〕記載の組成物への細菌の使用。
〔７〕　前記組成物が、整腸用又は飲食品用に用いられる組成物である、前記〔４〕～〔６〕のいずれか１つ記載の組成物、又は前記〔４〕～〔６〕のいずれか１つ記載の組成物への細菌の使用。
〔８〕　前記組成物が、さらに、シアル酸、又はヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ）を含む、前記〔４〕～〔７〕のいずれか１つに記載の組成物、又は前記〔４〕～〔７〕のいずれか１つ記載の組成物への細菌の使用。
〔９〕　前記組成物が、さらに、アラビノキシラン、キシラン、アラビナン、ペクチックガラクタン、ペクチン、ガラクタン、及びこれら由来のオリゴ糖からなる群からなる群より選択される１種以上の糖質を含む、前記〔８〕記載の組成物、又は前記〔８〕記載の組成物への細菌の使用。
　前記糖質として、前記組成物にさらに、ラクト－Ｎ－テトラオースを含むことが好適である。
　このうち、より好適な糖質は、アラビノキシラン、アラビナン、ペクチックガラクタン、及びこれら由来のオリゴ糖からなる群からなる群より選択される１種以上の糖質を含むものである。前記アラビナンは、脱分岐化アラビナンが好適である。
〔１０〕　前記組成物が、さらに、少なくとも、イネ科植物由来の糖質、ナス科植物由来の糖質、又は豆類由来の糖質を含む、前記〔８〕又は〔９〕記載の組成物、又は前記〔８〕又は〔９〕記載の組成物への細菌の使用。
　このうち、より好適な糖質は、少なくともイネ科植物由来の糖質、又はナス科植物由来の糖質である。
〔１１〕
　組成物の製造のための前記〔１〕～〔３〕のいずれか１つ記載の細菌の使用。好適には、前記〔４〕～〔１０〕のいずれか１つ記載の組成物である。又は、好適には、医薬品用組成物又は飲食品組成物（より好適には、乳児用ミルク）である。
〔１２〕
　組成物に用いるための前記〔１〕～〔３〕のいずれか１つ記載の細菌。好適には、前記〔４〕～〔１０〕のいずれか１つ記載の組成物である。又は、好適には、医薬品用組成物又は飲食品組成物（より好適には、乳児用ミルク）である。
〔１３〕
　前記〔１〕～〔３〕のいずれか１つ記載の細菌を投与するプロバイオティクスによる疾患、症状又は状態の予防、改善又は治療方法。好適には、アレルギー症状、免疫機能障害、感染症又は神経系疾患の、予防、改善、又は治療方法である。好適には、健康増進方法、食生活の改善、腸内環境の改善、腸内の感染の予防若しくは治療、又は免疫力向上若しくは改善である。
〔１４〕
　ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムに分類される細菌の増殖を促進するのに使用するためのプレバイオティクス組成物であり、
　前記組成物が、シアル酸、又はヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ）を含むプレバイオティクス組成物。
　好適には、前記〔１〕～〔３〕のいずれか１つ記載の細菌である。
　さらに好適には、前記シアル酸、又はヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ）と、前記〔９〕又は前記〔１０〕記載の糖質との併用である。
〔１５〕
　シアル酸、又はヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ）を含む、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムに分類される細菌の増殖促進用のプレバイオティクス組成物へのシアル酸、又はヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ）の使用。
　好適には、前記〔１〕～〔３〕のいずれか１つ記載の細菌である。
　さらに好適には、前記シアル酸、又はヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ）と、前記〔９〕又は前記〔１０〕記載の糖質との併用である。
〔１６〕
　ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムに分類される細菌の増殖促進用の、シアル酸、又はヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ）。
　好適には、前記〔１〕～〔３〕のいずれか１つ記載の細菌である。
　さらに好適には、前記シアル酸、又はヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ）と、前記〔９〕又は前記〔１０〕記載の糖質との併用である。
〔１７〕
　ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムに分類される細菌の増殖促進用プレバイオティクス組成物を製造するためのシアル酸、又はヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ）の使用。
　好適には、前記〔１〕～〔３〕のいずれか１つ記載の細菌である。
　さらに好適には、前記シアル酸、又はヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ）と、前記〔９〕又は前記〔１０〕記載の糖質との併用である。
〔１８〕
　シアル酸、又はヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ）を使用する、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムに分類される細菌の増殖促進方法。
　好適には、前記〔１〕～〔３〕のいずれか１つ記載の細菌である。さらに好適には、前記シアル酸、又はヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ）と、前記〔９〕又は前記〔１０〕記載の糖質との併用である。
〔１９〕
　シアル酸又はヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ）の資化能を有するビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムに分類される細菌を含む、組成物の製造方法。
　好適には、シアル酸又はヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ）を含む組成物の製造方法である。
　また、好適には、医薬品用組成物又は飲食品用組成物である。また、好適には、プレバイオティクス組成物、流動食、離乳食、乳幼児用組成物（好適には乳児用ミルク）、成人用組成物、又は高齢者用組成物である。
　また、好適には、発酵組成物、非発酵組成物、善玉菌含有組成物と飲食品の複数品から構成される組成物キットである。
　さらに好適には、前記シアル酸又はヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ）と、前記〔９〕又は前記〔１０〕記載の糖質との併用である。
　また、好適には、前記〔１〕～〔３〕のいずれか１つ記載の細菌である。
　以下に、実施例及び比較例等を用いて本発明を説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
〔試験例１〕Bifidobacterium longum subsp. Longum菌株群の取得
　日本国内にて様々な年齢層の糞便から採集したサンプルを滅菌した０．８５％生理食塩水で希釈し、下記組成のDifcoTM Lactobacilli MRS Agar（Becton Deckinson and Company）に塗布し、３０℃で嫌気培養した。
　〔DifcoTMLactobacilli MRS Agar〕　プロテオースペプトンＮｏ．３　１０．０ｇ；牛肉エキス　１０．０ｇ；酵母エキス　５．０ｇ；デキストロース　２０．０ｇ；ポリソルベート８０　１．０ｇ；クエン酸アンモニウム　２．０ｇ；酢酸ナトリウム　５．０ｇ；硫酸マグネシウム　０．１ｇ；硫酸マンガン　０．０５ｇ；リン酸二カリウム　２．０ｇ；寒天　１５．０ｇ；精製水　１０００ｍＬ；ｐＨ６．５±０．２を１２１℃で１５分滅菌後、シャーレに分注して平板とした。
　そして得られたコロニーの中で、塗布標本の顕微鏡観察によりグラム陽性かつ桿菌もしくは不定桿菌である菌を釣菌した。これらの菌を、ＢＬ寒天培地（栄研化学社）に画線塗布し、前記と同様の方法で嫌気培養を反復し、純粋単離された菌株を得た。
〔ＢＬ寒天培地〕　肉エキス　３．０ｇ；肝臓エキス　５．０ｇ；酵母エキス　５．０　ｇ；ペプトン　１５．０ｇ；ソイペプトン　３．０ｇ；可溶性デンプン　０．５ｇ；ブドウ糖　１０．０ｇ；リン酸二カリウム　１．０ｇ；リン酸一カリウム　１．０ｇ；硫酸マグネシウム　０．２ｇ；塩化ナトリウム　０．０１ｇ；硫酸マンガン　０．００６７４ｇ；Ｌ－システイン塩酸塩　０．５ｇ；硫化第一鉄　０．０１ｇ；ポリソルベート８０　１．０ｇ；寒天　１５．０ｇ；精製水　１０００ｍＬ；ｐＨ　７．２±０．２を、１２１℃で１５分滅菌後、５０℃に冷却し、５％（Ｖ／Ｖ）馬無菌脱繊血を加え、シャーレに分注して平板とした。
　さらに、純粋単離された菌株群（当該菌株のゲノムＤＮＡの塩基配列）から、タカラバイオ社製Bacterial 16sRNA DNA PCR kitを用いて、そのプロトコールに従ってＰＣＲに用いるサンプルＤＮＡ液を調製し、このサンプルＤＮＡ液を用いてＰＣＲにて当該１６ＳｒＲＮＡ遺伝子を増幅し、ＤＮＡ増幅産物を得、これよりこれら菌株の１６ＳｒＲＮＡ遺伝子配列を決定した。
　この塩基配列情報に基づき、ＮＣＢＩ（National Center for Biotechnology Information、国立バイオテクノロジー情報センター）の国際塩基配列データベース（Genbank）上で、ＢＬＡＳＴ（Basic Local Alignment Search Tool、http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi）による１６ＳリボソーマルＲＮＡ（ＳｒＲＮＡ）遺伝子配列の全長についての相同性検索を行った結果、Bifidobacterium longum subsp. longum JCM 1217と最も高い相同性（98.6％以上）を示した菌を、Bifidobacterium longum subsp. Longum菌株とした。なお、これら菌株はグラム陽性であった。
〔試験例２〕シアル酸の資化能を有する亜種ロンガムの取得
　得られた複数のBifidobacterium longum subsp. Longum菌株について、糖源を表１に記載の糖のみに変更したMRS(de Man-Rogosa-Sharpe)液体培地1mLに、1v/v%ずつ接種し、嫌気条件下で37℃にて培養した。培養24時間後に濁度(OD 600)を測定し、菌株を接種しなかった培地を同様に培養したコントロールの濁度を差し引いた値を以下の基準に照らし、資化性の有無及び資化能の程度を判定した。コントロールとの差でOD 600が、0.3以上を「良好な資化性あり」、0.5以上を「より良好な資化性あり」、0.8以上を「非常に良好な資化性あり」、と判断した。参考対象として、Bifidobacterium longum subsp.longumに分類されるビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２４９７(受託番号：NITE BP-02497)を用いた。
　（１）ＬＮＴ（ラクト－Ｎ－テトラオース）：フナコシ株式会社
　（２）シアル酸：京化成工業株式会社
　（３）アラビノキシラン（ＡＸ）（易水溶性）：小麦由来：主鎖　-4)Xyl β(1-:構成糖　Ara: Xyl = 38:62. Glucose, galactose and mannose < 1%：Megazyme社　（https://secure.megazyme.com/Arabinoxylan-Wheat-Flour-Low-Viscosity）
　（４）脱分岐化アラビナン（ＤＡ）（易水溶性）：テンサイ由来：主鎖　-5)Ara α(1-:構成糖1,5-α-L-Arabinan. Ara: Gal: Rha: GalUA = 88: 4: 2: 6：Megazyme社　（https://secure.megazyme.com/Debranched-Arabinan-Sugar-Beet）
　（５）ペクチックガラクタン（ＰＧ）（易水溶性）：ジャガイモ由来：主鎖　-4)Gal β(1-:構成糖　Gal: Ara: Rha: Xyl: GalUA = 77: 14: 3: 0.6: 5.4：Megazyme社　（https://secure.megazyme.com/Pectic-Galactan-Lupin）
　なお、Galはガラクトース、Glcはグルコース、Araはアラビノース、 Xylはキシロース、Rhaはラムノース（6-デオキシマンノースとも云う）、 GalUAはガラクツロン酸の略である。
　ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２４９７株は、独立行政法人　製品評価技術基盤機構　特許微生物寄託センター（ＮＰＭＤ）（住所：〒２９２－０８１８　日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８）に、２０１７年６月２２日に、Bifidobacterium longum MCC0300（受託番号：NITE BP-02497）株として国際寄託した。この菌株は、上記保存機関より一般に入手可能である。
　上記資化能の結果、上記シアル酸の資化能を有する菌株を表１に示し、２菌株を見出した。　具体的には、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２５６４及びビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２５６５に、シアル酸に対して特に高い資化能を有することが認められた。
　これら２菌株は、上述のとおりBifidobacterium longum subsp. Longumと同定され、同じ菌群であった。このときの相同性は、前記ロンガム　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２５６４では99.6％であり、前記ロンガム　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２５６５では99.8％であった。
　これら２菌株は、一般的に知られているBifidobacterium longum subsp. Longum（例えば参考文献１参照）とは異なり、シアル酸を資化するため、この結果から、これら２菌株から新たな菌グループ（シアル酸資化能を有する菌グループ）が存在することを見出した。
　さらに、これら２菌株には、アラビノキシラン（ＡＸ）若しくは脱分岐化アラビナン（ＤＡ）、又はＰＧ（ペクチックガラクタン）のいずれかに対して高い資化性を有することが認められた。
　また、これら２菌株は、ＬＮＴ（ラクト－Ｎ－テトラオース）に対して高い資化能を有する。しかし、これら２菌株は、２’－ＦＬ（フクシルラクトース）、及び、デキストリン（ＤＥ３．５）に対して資化能が認められなかった。
　特に、これら２菌株は、シアル酸、アラビノキシラン（ＡＸ）、ＰＧ（ペクチックガラクタン）、の３つに対して高い資化性を有することが認められた。この結果、これら菌株は、母乳オリゴ糖成分でも、イネ科植物由来又はナス科植物由来の糖質でも、増殖可能であることが認められた。そして、これら菌グループであれば、乳幼児や高齢者といった幅広い年齢層に対して、有益に利用可能であり、特にプロバイオティクス効果が期待できると考えた。さらに、これら菌グループを利用した組成物及び、これら菌グループの増殖促進組成物も提供できると考えた。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
　なお、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２５６４及びビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２５６５の１６ＳｒＤＮＡ遺伝子配列は、それぞれ、表２に配列番号１、表３に配列番号２として示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
［製造例１］
　前記亜種ロンガム　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２５６４及び前記亜種ロンガム　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２５６５から少なくとも１種又は２種をＭＲＳ液体培地３ｍＬに添加し、３７℃で１６時間嫌気培養し、培養液を濃縮し、凍結乾燥を行い、該細菌の凍結乾燥粉末（菌末）を得る。該菌末と、おかゆとを均一に混合して組成物を得る。当該組成物を、高齢者用流動食として高齢者に提供する。菌の摂取量が１×１０８～１×１０１０ＣＦＵ／ｋｇ体重／日になるようにし、１週間毎日朝食で提供する。
　おかゆの原料は、米であり、米にアラビノキシランが含まれているため、本技術の高齢者用流動食を、高齢者が継続摂取することで、高齢者の腸内環境の改善効果が期待できる。また、製造例１の組成物をおかゆ製品として、同様にして、成人に継続摂取させて腸内環境の改善効果が期待できる。さらに、製造例１の組成物を乳幼児用の離乳食としても使用することができ、同様にして乳幼児に継続摂取させて乳幼児の良好な腸内フローラ形成効果が期待できる。
　また、おかゆ製品の原料として、精白米に代えて玄米を使用してもよく、玄米のおかゆ製品は、玄米には外皮成分が多く含まれるため、より良好に内環境の改善効果が期待できる。
［製造例２］
　前記亜種ロンガム　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２５６４及び前記亜種ロンガム　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２５６５の両方をＭＲＳ液体培地３ｍＬに添加し、３７℃で１６時間嫌気培養し、培養液を濃縮し、凍結乾燥を行い、該細菌の顆粒状（菌末）を得る。当該顆粒状の菌末を、菌の摂取量が１×１０８～１×１０１０ＣＦＵ／ｋｇ体重／日になるようにし、１週間毎日提供する。
　製造例２の顆粒状の菌末を、和食を食する際に、食前、食中又は食後に摂取する。和食では、米を主食とし、ジャガイモ及び豆腐入りの味噌汁を副食として食する。本技術の乾燥菌末製品を、和食と一緒に摂取することで、大人の腸内環境の改善効果が期待できる。
　また、製造例２の顆粒状の菌末を、粉ミルクを摂取するときに、配合する。シアル酸の資化能を有するため、乳幼児の場合でも良好に腸内での増殖が可能であり、乳幼児の腸内環境を改善することができる。
　また、シアル酸の資化能及び米等の和食に含まれる上述の成分の資化能を有するため、大人又は高齢者の場合でも良好に腸内での増殖が可能であり、大人又は高齢者の腸内環境を改善することができる。
　［製造例３～５］
　脱脂乳（森永乳業製）１１６０ｇ、脱塩ホエイ粉（ドモ社製）５００ｇ、乳糖（ミライ社製）５９ｇ、及びデキストリン（東洋精糖製）５２ｇを、水５４７１ｇに溶解し、予め苛性ソーダで溶解して脱臭した１０％カゼイン溶液１４３ｇに混合する。これに、更に、魚油配合調製油脂（日油製の魚油を油脂１００ｇ当たり１．５ｇ含有）２４０ｇ、及び無塩バター（森永乳業製）３３ｇを混合し、１５ＭＰａの圧力条件で均質化処理し、乾燥して粉ミルクを得る。この粉ミルクに、前記亜種ロンガム　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２５６４及び／又は前記亜種ロンガム　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２５６５を配合し、乾燥して、当該亜種ロンガムを含む育児用粉ミルクを製造する（製造例３）。
　また、均質化処理前に、想定される菌１００質量部に対して、シアル酸又はシアル酸結合オリゴ糖が１０～１０，０００質量部になるように配合して、シアル酸又はシアル酸結合オリゴ糖を含む育児用粉ミルク（本技術の菌含まず）（製造例４）を得てもよいし、さらに前記亜種ロンガムを配合した育児用粉ミルク（本技術の菌含む）（製造例５）にしてもよい。また、これらを乳児用液体ミルクとして製造することも可能である。
　適宜、シアル酸結合オリゴ糖からシアル酸を生じさせる手段（例えば、Bifidobacterium bifidum ATCC15696、Bifidobacterium bifidum PRL2010等）を用いてもよい。
　本技術の菌はシアル酸の資化能を有するため、乳幼児の場合でも良好に腸内での増殖が可能であり、乳幼児の腸内環境を改善することができる。また、資化成分のＨＭＯを含むことで、シアル酸の資化能を有する本技術の菌が良好に増殖でき、またＨＭＯの利点も得ることができる。また、本技術は、アレルギー症状の予防・改善作用、乳糖不耐症改善作用、免疫能向上作用、感染防御作用、脳神経系形成作用、又は脳神経系活性化作用も期待することができる。
　以上のことから、シアル酸の資化能を有する亜種ロンガム、及び当該亜種ロンガムを含む組成物、当該亜種ロンガム増殖促進用組成物は、腸内でのビフィドバクテリウム属細菌の増殖を手助けすることができ、また、良好な腸内フローラ形成、腸内環境の改善等に有効に使用することができる。
　（１）ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２５６４（受託番号：NITE BP-02564）（受託日：２０１７年１１月１０日（国内寄託日）、ブダペスト条約に基づく国際寄託への移管請求日：２０１８年１０月９日）、受託先：〒２９２－０８１８　日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８、独立行政法人　製品評価技術基盤機構　特許微生物寄託センター（ＮＰＭＤ）。
　（２）ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２５６５（受託番号：NITE BP-02565）（受託日：２０１７年１１月１０日（国内寄託日）、ブダペスト条約に基づく国際寄託への移管請求日：２０１８年１０月９日）、受託先：〒２９２－０８１８　日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８、独立行政法人　製品評価技術基盤機構　特許微生物寄託センター（ＮＰＭＤ）。
　（３）ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２４９７（受託番号：NITE BP-02497）（受託日：２０１７年６月２２日）、受託先：〒２９２－０８１８　日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８、独立行政法人　製品評価技術基盤機構　特許微生物寄託センター（ＮＰＭＤ）。

Claims (18)

  1. 　ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２５６４、及び／又は、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２５６５。
  2. 　シアル酸の資化能を有するビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム分類される細菌。
  3. 　さらに、アラビノキシラン、アラビナン、ペクチックガラクタンからなる群より選択される１種以上の糖質の資化能を有する、請求項２記載の細菌。
  4. 　前記細菌が、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２５６４、及び／又は、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２５６５である、請求項２又は３に記載の細菌。
  5. 　請求項２～４のいずれか1項に記載の細菌を含む、組成物。
  6. 　前記組成物が、プロバイオティクス組成物である、請求項５に記載の組成物。
  7. 　前記組成物が、少なくとも、乳幼児用、成人用、高齢者用のいずれかに用いる、請求項５又は６に記載の組成物。
  8. 　前記組成物が、整腸用又は飲食品用に用いられる、請求項５～７のいずれか１項に記載の組成物。
  9. 　さらに、シアル酸を含む、請求項５～８のいずれか１項に記載の組成物。
  10. 　さらに、アラビノキシラン、アラビナン、ペクチックガラクタン、及びこれら由来のオリゴ糖からなる群から選択される１種以上の糖質を含む、請求項９に記載の組成物。
  11. 　さらに、少なくともイネ科植物由来の糖質又はナス科植物由来の糖質を含む、請求項９又は１０に記載の組成物。
  12. 　ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムに分類される細菌の増殖促進に使用するためのプレバイオティクス組成物であり、
    　前記組成物が、シアル酸を含むプレバイオティクス組成物。
  13. 　前記組成物が、さらに、アラビノキシラン、アラビナン、ペクチックガラクタン、デキストリン、及びこれら由来のオリゴ糖からなる群から選択される１種以上の糖質を含む、請求項１２に記載のプレバイオティクス組成物。
  14. 　シアル酸の資化能を有するビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムに分類される微生物を含む組成物の製造方法。
  15. 　前記細菌が、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２５６４、及び／又は、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２５６５である、請求項１４に記載の製造方法。
  16. 　組成物に用いる、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２５６４、及び／又は、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２５６５。
  17. 　組成物を製造のための、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２５６４、及び／又は、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２５６５の使用。
  18. 　ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２５６４、及び／又は、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム　ＮＩＴＥ　ＢＰ－０２５６５を投与するプロバイオティクスによる、アレルギー症状、免疫機能障害、感染症又は神経系疾患の、予防、改善、又は治療方法。
     
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