JPH11228425A - Ｉｌ−１２産生誘導組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】ラクトバチルス属に属する菌またはその処理物
のＩＬ−１２産生誘導を他の物質の併用により相乗的に
活性化させること。 【解決手段】自体ＩＬ−１２産生誘導活性を示さないニ
ゲロース、ニゲロオリゴ糖などをラクトバチルス属に属
する菌またはその処理物と併用投与することにより、Ｉ
Ｌ−１２の産生誘導を相乗的に促進させることができ
る。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、ラクトバチルス
（Lactobacillus）属に属する菌またはその処理物とた
とえば、ニゲロースまたはニゲロオリゴ糖類などの３−
Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｄ−グルコースを構成
単位として含有する糖類を有効成分として含むインター
ロイキン１２（以下、ＩＬ−１２と略記する。）産生誘
導組成物に関する。

【０００２】

【従来の技術】ＩＬ−１２は、ナチュラルキラー細胞刺
激因子、細胞障害性リンパ球成熟因子などとも呼ばれ、
Ｂ細胞、単球、マクロファージから産生される分子量約
７０,０００の糖蛋白質である。その生物活性として
は、静止期のＴ細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細
胞からのインターロイキンγ産生の誘導、ＮＫ細胞活性
の亢進、リンホカイン活性化キラー（ＬＡＫ）細胞活性
の誘導、静止期Ｔ細胞のレクチン刺激による細胞増殖能
の亢進、ナイーブＴ細胞からＴ_H−１細胞への分化の促
進などが知られており、生体の免疫系に深く関与してい
る物質である。また、アレルギーや自己免疫疾患の発症
機序の１つに、Ｔ_H−１の活性がＴ_H−２の活性に比して
低下した場合が有ると考えられており、ナイーブＴ細胞
からのＴ_H−１細胞への分化促進、Ｔ_H−１細胞の活性化
を促進する作用を有するＩＬ−１２は、アレルギーや自
己免疫疾患の発症を抑制する効果があると期待されてい
る。一方、従来から、３−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシ
ル−Ｄ−グルコースを構成単位として含む糖類がいくつ
か知られている。例えば、３−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラ
ノシル−Ｄ−グルコースを構成単位として含む多糖とし
て、アスペルギルス・ニガー（Aspergillus niger）の
菌糸中に含有されるニゲラン、そのニゲランの部分酸加
水分解等によって得られるα−Ｄ−グルコピラノース
（１→３）−α−Ｄ−グルコピラノース（１→４）−α
−Ｄ−グルコピラノース（１→３）−Ｄ−グルコース
（以下、ニゲランテトラサッカライドと称する）をはじ
めとする様々な３−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｄ
−グルコースを構成単位として含有するオリゴ糖、さら
には、上記のニゲランの加水分解によっても得ることが
可能であり、また、蜂蜜、麹汁、ビール等にも含有され
る、ニゲロースと称される３−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラ
ノシル−Ｄ−グルコース（図解糖質便覧、７０頁）など
である。

【０００３】本発明者らは、これら３−Ｏ−α−Ｄ−グ
ルコピラノシル−Ｄ−グルコースを構成単位として含有
する糖類が、抗原受容体を介する刺激により活性化され
たＴリンパ球およびＢリンパ球の活性をさらに上昇さ
せ、また、菌体成分またはレクチンを認識する受容体を
介する刺激により、抗原非特異的に活性化されたＴリン
パ球およびＢリンパ球の活性をさらに上昇させることを
見出し、３−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｄグルコ
ースを構成単位として含む糖類を有効成分として含有す
る免疫賦活剤の発明を完成し、既に特許出願をした（特
開平９−５２８３４号）。その後本発明者らは、乳酸菌
の１種であるラクトバチルス・プランタラム（Lactobac
illus plantarum）Ｌ−１３７株の菌体がＴリンパ球共
刺激作用を示すこと、また該菌体が抗原受容体を介する
刺激により活性化されたＴリンパ球の活性をさらに上昇
させ、抗原受容体以外の経路により抗原非特異的に活性
化されたＴリンパ球の活性をも上昇させることを突き止
めた。これらＴリンパ球の活性化に伴い、Ｔリンパ球の
インターフェロン−γの産生が増強される一方、Ｂリン
パ球への抗原受容体を介する刺激および抗原受容体以外
の経路による活性化は抑制される事実も判明した。これ
とは別に該菌体がマクロファージのＩＬ−１２の産生を
選択的に促進する作用を有していることも判明した。

【０００４】すなわち、ラクトバチルス・プランタラム
Ｌ−１３７菌体は、抗原受容体を介するＴリンパ球の活
性化を上昇させることにより、生体内で常時起こってい
る微生物および腫瘍細胞に対する排除反応を高め、特に
インターフェロン−γの産生を増強することから、ウイ
ルスや腫瘍に対する防御能を高める。しかし、単独では
リンパ球はほとんど活性化しないことから、生体にとっ
て好ましくない免疫応答を誘導せず、また、Ｂリンパ球
の抗原受容体を介する活性化や抗原非特異的な活性化を
抑制することにより、免疫賦活に伴い予測されるＢリン
パ球のポリクロナールな活性化により誘導される自己免
疫疾患等は増悪させない。またラクトバチルス・プラン
タラムＬ−１３７菌体は、腫瘍細胞障害性を有するナチ
ュラルキラー細胞を活性化するサイトカインであるＩＬ
−１２のマクロファージからの産生を高める結果、腫瘍
に対する防御能を特に高めるとともに、後天性免疫不全
症候群（AIDS）の発症予防にも有用である。しかし腫瘍
壊死因子αの産生は軽度にしか上昇させないため、通常
のマクロファージの活性化剤により上昇する腫瘍壊死因
子αにより引き起こされる、発熱、体重減少などの副作
用を誘導しない。これらの知見を基に、本発明者らは、
ラクトバチルス属に属する菌またはその処理物を含む免
疫賦活剤の発明を成し遂げ、既に特願平８−２８９３３
３号として特許出願した。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】前述のとおり、本発明
者らはラクトバチルス属に属する菌体にＩＬ−１２産生
誘導促進効果の存することを見出したが、その効果は該
菌単独では必ずしも充分なものではなく、より早く、よ
り強力にその効果を発揮させる手段が他にないものかと
鋭意研究を重ねてきた。

【０００６】

【課題を解決するための手段】そして、本発明者らはラ
クトバチルス属に属する菌体と併用することにより相乗
効果を発揮させるような物質がないか種々検討を行った
ところ、３−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｄ−グル
コースを構成単位とする糖類、特にニゲロースが顕著な
相乗効果を示すことを知見し、その知見に基づいて更に
研究を重ねて本発明を完成するに至った。すなわち、本
発明は、（１）ラクトバチルス（Lactobacillus）属に
属する菌またはその処理物と３−Ｏ−α−Ｄグルコピラ
ノシル−Ｄ−グルコースを構成単位として含有する糖類
を有効成分として含むＩＬ−１２産生誘導組成物、
（２）ラクトバチルス属に属する菌がラクトバチルス・
プランタラム（Lactobacillus plantarum）である前記
（１）記載のＩＬ−１２産生誘導組成物、（３）ラクト
バチルス属に属する菌がラクトバチルス・プランタラム
Ｌ−１３７株（Lactobacillus plantarum Ｌ−１３７）
である前記（１）記載のＩＬ−１２産生誘導組成物、お
よび（４）糖類がニゲロースである前記（１）〜（３）
のいずれかに記載のＩＬ−１２産生誘導組成物、であ
る。

【０００７】

【発明の実施の形態】本発明に用いられる菌は、ラクト
バチルス属に属し、Ｂ細胞、単球、マクロファージのＩ
Ｌ−１２の産生を誘導、促進する作用を有するものであ
ればどのような菌でもよい。菌のマクロファージのＩＬ
−１２産生促進作用は、たとえばマウス腹腔マクロファ
ージを組織培養プレートで培養し、ラクトバチルス属に
属する菌を添加し、一定期間培養して培地中のＩＬ−１
２濃度をエンザイムイムノアッセイで測定することによ
り容易に判定することができる。本発明に用いられるラ
クトバチルス属に属する菌の代表的なものとしてラクト
バチルス・プランタラムＬ−１３７を挙げることができ
るが、この菌は工業技術院生命工学工業技術研究所に平
成７年１１月３０日に受託番号ＦＥＲＭ Ｐ−１５３１
７，微工研 菌寄第１５３１７号として寄託されてお
り、その菌学的性質は特開平９−１６３９７７号に詳し
く記載されている。さらにこの菌については、Journal
of Fermentation and Bioengineering, Vol. 73, No.3,
193-197(1992)及び Vol. 80, No.2, 124-130(1995)に
も報告されている。本発明に用いられるラクトバチルス
属に属する菌は、天然培地、合成培地、半合成培地など
の培地に培養することにより大量に得ることができる。

【０００８】培地としては、窒素源および炭素源を含有
するものが用いられる。窒素源としては、たとえば、肉
エキス、ペプトン、グルテン、カゼイン、酵母エキス、
アミノ酸等であり、炭素源としては、たとえば、グルコ
ース、キシロース、フラクトース、イノシトール、水ア
メ、麹汁、澱粉、バカス、フスマ、糖蜜、グリセリン等
が用いられる。このほか、無機質として、たとえば硫酸
アンモニウム、リン酸カリウム、塩化マグネシウム、食
塩、鉄、マンガン、モリブデン更に各種ビタミン類その
他を添加することができる。培養温度は２５〜４０℃、
好ましくは２７〜３５℃であり、培養時間は１２〜４８
時間程度であり、通気振盪してもよい。培地のｐＨは３
〜６、好ましくは４〜６である。培養終了後菌体を採取
し蒸留水を加え、遠心分離などの手段により上清を除
き、必要によりその操作を繰り返し、遠心分離や濾過等
により菌体を採取する。採取された菌体は生菌のまま、
またはたとえば過熱、紫外線照射、ホルマリン処理など
により不活性化して投与に適した剤型にすることもでき
る。分離された生菌体、死菌体はさらに摩砕や破砕処理
をし、得られた処理物を必要により加熱滅菌、無菌濾過
し、濾液を凍結乾燥して製品とすることもできる。菌体
の処理物にはたとえば、上記摩砕物、破砕物、それらか
らの抽出液、凍結乾燥品が含まれる。また、本発明に用
いられる乳酸菌の一種、ラクトバチルス・プランタラム
Ｌ−１３７株は、元々発酵食品であるブロングイスダ
から分離されたものであり、食品、たとえば果菜類、穀
類から選択された少なくとも１種または、果菜類や穀類
を発酵可能な形態に処理したもの、たとえば切断物、粉
砕物、摩砕物、搾汁、搾汁濃縮物を本発明において用い
られる菌により発酵させた菌を含む発酵物をそのまま用
いることができる。

【０００９】本発明に用いられる他の有効成分は、３−
Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｄ−グルコースを構成
単位として含有する糖類であり、その具体例としては、
前記したニゲロース、ニゲランテトラサッカライド、ニ
ゲロトリオースなどのニゲロオリゴ糖が挙げられ、これ
らは単独または２種以上を併用して用いてもよい。本発
明の組成物における菌体またはその処理物と糖類の使用
比率は重量比で１：１〜４００、好ましくは１：５〜１
００である。本発明の組成物は、必要に応じて、さらに
種々の添加剤、例えば、医薬の担体、賦形剤、ビタミ
ン、アミノ酸、ミネラル、植物繊維、他の糖類、甘味
料、香料、牛乳、脱脂粉乳などの乳成分を加えてもよ
い。このようにして得られた本発明の組成物は、免疫力
を高めまたは調節する食品や医薬剤としても利用可能で
ある。用いる食品あるいは、食品成分、医薬担体または
賦形剤は特に限定するものではなく、当該組成物の具体
的用途に応じて当業者が適宜選択できる。また本発明の
組成物の形態も特に限定するものではなく、具体的用途
に応じて種々の固体や液体の形態とすることができる。
本発明の組成物は、医薬として用いる場合、錠剤、粉
剤、顆粒剤、カプセル剤、液剤などの経口投与、あるい
は注射剤などの非経口投与が考えられるが、経口投与の
場合、本発明の菌体またはその処理物を１ｍｇ〜５ｇ、
好ましくは４ｍｇ〜４ｇおよび本発明の糖類を４ｍｇ〜
４０ｇ、好ましくは１０ｍｇ〜１０ｇ含む製剤を、また
注射剤の場合は、菌体またはその処理物を０.１ｍｇ〜
１ｇ、好ましくは０.５ｍｇ〜５００ｍｇ、糖類を２ｍ
ｇ〜２０ｇ、好ましくは１０ｍｇ〜１０ｇ含む注射液
を、成人１日当たり１〜数回に分けて投与することによ
り、副作用を伴うことなく所期の目的を達することがで
きる。本発明の組成物を食品として用いる場合、調味
料、畜肉加工品、水産加工品、農産加工品、ステープ
ル、調味食品、調味済食品、デザート類、乳油製品、菓
子、スナック菓子等の形態で提供することも可能であ
る。本発明のＩＬ−１２産生誘導組成物は、たとえば、
ウイルス、バクテリヤ等の微生物による感染症や各種悪
性腫瘍などの予防・治療や免疫力調整に有効である。

【００１０】

【実施例】以下に参考例、実施例および試験例をあげて
本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はそれらに
よって限定されるものではない。 参考例１ ラクトバチルス・プランタラムＬ−１３７乾燥菌体の製
造方法 乳酸菌培養培地であるＧＹＰ培地のグルコースの代わり
にスターチを加えた培地２００ｍｌにラクトバチルス・
プランタラムＬ−１３７をスターターとして１重量％接
種し、３２℃で２４時間前培養を行った。ついで、６Ｌ
のＧＹＰ培地に前述の培養液をスターターとして１重量
％接種し、３２℃にて２４時間静地培養した。培養後、
５０００ｒｐｍで３５分間遠心分離し、上清を除き、菌
体を集めた。さらに、集めた菌体ペーストを生理食塩水
に良く分散し、５０００ｒｐｍで３５分遠心分離したの
ち、上清を除き菌体を集めた。これを３回繰り返したの
ち、蒸留水に分散し、７０℃で１０分間殺菌した。これ
を凍結乾燥し、乾燥菌体を７.０７ｇ得た。

【００１１】 実施例１ 清涼飲料水 処方 ニゲロース 20.0ｇ ラクトバチルス・プランタラムＬ−１３７乾燥菌体 1.0ｇ レモン果汁 9.4ｇ グラニュー糖 15.4ｇ 果糖ブドウ糖液糖 74.0ｇ 精製ハチミツ 22.2ｇ ビタミンＣ 5.0ｇ クエン酸 1.5ｇ レモンフレーバー 1.6ｇ 純水を加えて合計 1000.0ｇ 調製法 水を除く上記各成分に純水５００ｇを加えて撹拌し、１
０分間超音波処理をして懸濁溶解させ、さらに水を加え
て全量を１０００ｇにした後、６５℃で１０分間殺菌し
て清涼飲料水を得た。

【００１２】 実施例２ 顆粒剤 処方 ニゲロース 60.0ｇ ラクトバチルス・プランタラムＬ−１３７乾燥菌体 3.0ｇ 乳糖 148.0ｇ 結晶セルロース 15.0ｇ ブドウ糖 71.0ｇ 調製法 上記各成分の粉末を各配合量均一に混合し、造粒破砕後
乾燥して顆粒剤を得た。

【００１３】実施例３ 錠剤の処方ならびに調製法 実施例２で得られた顆粒剤９９ｇにステアリン酸カルシ
ウム１ｇを混合し、打錠機で圧縮整形して９００ｍｇの
錠剤を得た。得られた錠剤は１錠当たり、ニゲロースを
約１８０ｍｇ、ラクトバチルス・プランタラムＬ−１３
７菌体を約９ｍｇ含有する。 実施例４ 注射剤の処方ならびに調製法 ニゲロース５０ｇ、ラクトバチルス・プランタラムＬ−
１３７乾燥菌体０.２ｇを精製水１０００ｍｌに懸濁さ
せ、超音波処理した後、凍結乾燥した。この凍結乾燥物
を５００本のバイアル瓶に分注して注射剤を得た。この
注射剤１バイアルには凍結乾燥物１００.４ｍｇが含ま
れており、２ｍｌの生理食塩水に容易に懸濁溶解した。

【００１４】 実施例５ カプセル剤 処方 ニゲロース 250.0ｇ ラクトバチルス・プランタラムＬ−１３７乾燥菌体 30.0ｇ コーンスターチ 30.0ｇ ステアリン酸マグネシウム 10.0ｇ 調製法 上記各成分の配合量を均一に混合し、ゼラチンカプセル
に充填した。カプセル１個当たり、ニゲロースを２５０
ｍｇ、ラクトバチルス・プランタラムＬ−１３７菌体を
３０ｍｇ含有する。

【００１５】試験例１ マウス腹腔マクロファージのＩＬ−１２産生誘導に対す
るラクトバチルス・プランタラムＬ−１３７乾燥死菌体
とニゲロースの相乗効果 マウス（Ｃ５７ＢＬ／６、雌、１６週齢）の腹腔内に無
菌的にＲＰＭＩ １６４０培地を注入し、腹部をよく揉
んだ後、注入したＲＰＭＩ １６４０培地を回収し腹腔
細胞浮遊液を得た。腹腔細胞浮遊液の細胞数とそれに含
まれるマクロファージの割合を自動血球計測装置で測定
した後、マクロファージとして１×１０⁶／ｍｌの細胞
数にＲＰＭＩ １６４０培地で調製し、９６穴組織培養
プレートに１穴当たり１００μｌを播種した。３７℃の
５％炭酸ガス培養器内に２時間放置し、腹腔マクロファ
ージを各穴に付着させ、２時間後にＲＰＭＩ １６４０
培地で洗浄後、ＲＰＭＩ １６４０培地を１穴当たり１
００μｌ加えた。これにＲＰＭＩ １６４０培地（対
照）あるいはラクトバチルス・プランタラムＬ−１３７
乾燥死菌体を０.４あるいは４μｇ／ｍｌの濃度でＲＰ
ＭＩ １６４０培地に溶解した液をそれぞれ１穴当たり
５０μｌ加えた。さらに、ＲＰＭＩ１６４０培地（対
照）あるいはニゲロースを１２８、６４０あるいは３２
００μｇ／ｍｌの濃度でＲＰＭＩ １６４０培地に溶解
した液を１穴当たり５０μｌ加え、３７℃の５％炭酸ガ
ス培養器内で１５時間培養し、培養後の培養上清のＩＬ
−１２をエンザイムイムノアッセイで測定した。

【００１６】エンザイムイムノアッセイは、ラット抗マ
ウスＩＬ−１２ IgG2a 抗体（Genzyme 社製）をホウ酸
緩衝液で６μｇ／ｍｌに調製した溶液を、９６穴組織培
養プレート１穴当たり１００μｌ加え３７℃で１日間放
置しラット抗マウスＩＬ−１２ IgG2a 抗体を各穴に付
着させたプレートを用いて行った。培養上清を１穴当た
り５０μｌ加え室温で９０分間放置し、培養上清のＩＬ
−１２をプレートに付着したラット抗マウスＩＬ−１２
IgG2a 抗体と結合させた。洗浄後ラット抗マウスＩＬ
−１２ IgG2a 抗体（Genzyme 社製）を加え、プレート
に結合させたＩＬ−１２に結合させた。洗浄後ペルオキ
シダーゼで標識した抗ラットIgG1抗体を加え、プレート
に結合させたラット抗マウスＩＬ−１２ IgG1 抗体に結
合させた。洗浄後、過酸化水素０.００６％とオルトフ
ェニレンジアミン０.１％を含有するリン酸緩衝液を１
穴当たり１００μｌ加え、室温で２０分間反応させ、反
応を１.５Ｎ硫酸で停止し、マイクロプレートリーダー
で吸光度４９２ｎｍを測定し、リコンビナントマウスＩ
Ｌ−１２で作成した標準曲線から、培養上清中のＩＬ−
１２の濃度を求めた。〔表１〕にその結果を示す。

【００１７】

【表１】 〔表１〕から明らかなごとくラクトバチルス・プランタ
ラムＬ−１３７乾燥死菌体は単独でもマクロファージか
らのＩＬ−１２の産生を誘導したが、ニゲロース単独で
はその作用はなかった。しかし、ラクトバチルス・プラ
ンタラムＬ−１３７乾燥死菌体にニゲロースを添加する
と、ＩＬ−１２の産生がラクトバチルス・プランタラム
Ｌ−１３７乾燥死菌体単独にくらべ大幅に上昇し、ＩＬ
−１２産生誘導におけるラクトバチルス・プランタラム
Ｌ−１３７乾燥死菌体とニゲロースの相乗効果が検証さ
れた。

【００１８】試験例２ 血中ＩＬ−１２の上昇に対するラクトバチルス・プラン
タラムＬ−１３７乾燥死菌体とニゲロースの相乗効果 ２１週齢、雌性のＤＢＡ／２マウス（１群５匹）に連続
して４日間毎日、（１）生理食塩水０.４５ｍｌ、
（２）ニゲロースを１００ｍｇ／ｍｌの濃度に生理食塩
水で調製した溶液０.３ｍｌ、（３）ラクトバチルス・
プランタラムＬ−１３７乾燥死菌体を１ｍｇ／ｍｌの濃
度に生理食塩水で調製した溶液０.１５ｍｌ、および
（４）ニゲロースを１００ｍｇ／ｍｌの濃度に生理食塩
水で調製した溶液０.３ｍｌとラクトバチルス・プラン
タラムＬ−１３７乾燥死菌体を１ｍｇ／ｍｌの濃度に生
理食塩水で調製した溶液０.１５ｍｌをそれぞ腹腔内投
与した。４日目の投与の４時間後にマウスの眼底静脈か
ら採血し、血漿を分離し、ＩＬ−１２をエンザイムイム
ノアッセイで測定した。結果を〔表２〕に示す。

【００１９】

【表２】 〔表２〕から明らかなごとく、ニゲロース単独使用では
有意な血漿ＩＬ−１２の上昇は認められなかったが、ラ
クトバチルス・プランタラムＬ−１３７乾燥死菌体単独
使用では有意な血漿ＩＬ−１２の上昇がみられ、ラクト
バチルス・プランタラムＬ−１３７乾燥死菌体とニゲロ
ースを併用すると、血漿ＩＬ−１２が顕著に上昇し、血
中ＩＬ−１２上昇におけるラクトバチルス・プランタラ
ムＬ−１３７乾燥死菌体とニゲロースの相乗効果が検証
された。

【００２０】

【発明の効果】本発明においては、単独投与では有意な
ＩＬ−１２産生誘導活性を示さない３−Ｏ−α−Ｄ−グ
ルコピラノシル−Ｄ−グルコースを構成単位として含有
する糖類を、ラクトバチルス属に属する菌体またはその
処理物と併用して投与することにより、ＩＬ−１２産生
誘導活性に対する顕著な相乗効果が奏される。

─────────────────────────────────────────────────────

【手続補正書】

【提出日】平成１０年３月１０日

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０００２

【補正方法】変更

【補正内容】

【０００２】

【従来の技術】ＩＬ−１２は、ナチュラルキラー細胞刺
激因子、細胞障害性リンパ球成熟因子などとも呼ばれ、
Ｂ細胞、単球、マクロファージから産生される分子量約
７０，０００の糖蛋白質である。その生物活性として
は、静止期のＴ細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細
胞からのインターフェロンγ産生の誘導、ＮＫ細胞活性
の亢進、リンホカイン活性化キラー（ＬＡＫ）細胞活性
の誘導、静止期Ｔ細胞のレクチン刺激による細胞増殖能
の充進、ナイーブＴ細胞からＴ_Ｈ−１細胞への分化の促
進などが知られており、生体の免疫系に深く関与してい
る物質である。また、アレルギーや自己免疫疾患の発症
機序の１つに、Ｔ_Ｈ−１の活性がＴ_Ｈ−２の活性に比し
て低下した場合が有ると考えられており、ナイーブＴ細
胞からのＴ_Ｈ−１細胞への分化促進、Ｔ_Ｈ−１細胞の活
性化を促進する作用を有するＩＬ−１２は、アレルギー
や自己免疫疾患の発症を抑制する効果があると期待され
ている。一方、従来から、３−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラ
ノシル−Ｄ−グルコースを構成単位として含む糖類がい
くつか知られている。例えば、３−Ｏ−α−Ｄ−グルコ
ピラノシル−Ｄ−グルコースを構成単位として含む多糖
として、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌ
ｕｓ ｎｉｇｅｒ）の菌糸中に含有されるニゲラン、そ
のニゲランの部分酸加水分解等によって得られるα−Ｄ
−グルコピラノース（１→３）−α−Ｄ−グルコピラノ
ース（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノース（１→３）
−Ｄ−グルコース（以下、ニゲランテトラサッカライド
と称する）をはじめとする様々な３−Ｏ−α−Ｄ−グル
コピラノシル−Ｄ−グルコースを構成単位として含有す
るオリゴ糖、さらには、上記のニゲランの加水分解によ
っても得ることが可能であり、また、蜂蜜、麹汁、ビー
ル等にも含有される、ニゲロースと称される３−Ｏ−α
−Ｄ−グルコピラノシル−Ｄ−グルコース（図解糖質便
覧、７０頁）などである。

【手続補正２】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０００８

【補正方法】変更

【補正内容】

【０００８】培地としては、窒素源および炭素源を含有
するものが用いられる。窒素源としては、たとえば、肉
エキス、ペプトン、グルテン、カゼイン、酵母エキス、
アミノ酸等であり、炭素源としては、たとえば、グルコ
ース、キシロース、フラクトース、イノシトール、水ア
メ、麹汁、澱粉、バカス、フスマ、糖蜜、グリセリン等
が用いられる。このほか、無機質として、たとえば硫酸
アンモニウム、リン酸カリウム、塩化マグネシウム、食
塩、鉄、マンガン、モリブデン更に各種ビタミン類その
他を添加することができる。培養温度は２５〜４０℃、
好ましくは２７〜３５℃であり、培養時間は１２〜４８
時間程度であり、通気振盪してもよい。培地のｐＨは３
〜６、好ましくは４〜６である。培養終了後菌体を採取
し蒸留水を加え、遠心分離などの手段により上清を除
き、必要によりその操作を繰り返し、遠心分離や濾過等
により菌体を採取する。採取された菌体は生菌のまま、
またはたとえば加熱、紫外線照射、ホルマリン処理など
により不活性化して投与に適した剤型にすることもでき
る。分離された生菌体、死菌体はさらに摩砕や破砕処理
をし、得られた処理物を必要により加熱滅菌、無菌濾過
し、濾液を凍結乾燥して製品とすることもできる。菌体
の処理物にはたとえば、上記摩砕物、破砕物、それらか
らの抽出液、凍結乾燥品が含まれる。また、本発明に用
いられる乳酸菌の一種、ラクトバチルス・プランタラム
Ｌ−１３７株は、元々発酵食品であるブロングイスダ
から分離されたものであり、食品、たとえば果菜類、穀
類から選択された少なくとも１種または、果菜類や穀類
を発酵可能な形態に処理したもの、たとえば切断物、粉
砕物、摩砕物、搾汁、搾汁濃縮物を本発明において用い
られる菌により発酵させた菌を含む発酵物をそのまま用
いることができる。

【手続補正３】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０００９

【補正方法】変更

【補正内容】

【０００９】本発明に用いられる他の有効成分は、３−
Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｄ−グルコースを構成
単位として含有する糖類であり、その具体例としては、
前記したニゲロース、ニゲランテトラサッカライド、ニ
ゲロトリオースなどのニゲロオリゴ糖が挙げられ、これ
らは単独または２種以上を併用して用いてもよい。本発
明の組成物における菌体またはその処理物と糖類の使用
比率は重量比で１：１〜４００、好ましくは１：５〜１
００である。本発明の組成物は、必要に応じて、さらに
種々の添加剤、例えば、医薬の担体、賦形剤、ビタミ
ン、アミノ酸、ミネラル、食物繊維、他の糖類、甘味
料、香料、牛乳、脱脂粉乳などの乳成分を加えてもよ
い。このようにして得られた本発明の組成物は、免疫力
を高めまたは調節する食品や医薬剤としても利用可能で
ある。用いる食品あるいは、食品成分、医薬担体または
賦形剤は特に限定するものではなく、当該組成物の具体
的用途に応じて当業者が適宜選択できる。また本発明の
組成物の形態も特に限定するものではなく、具体的用途
に応じて種々の固体や液体の形態とすることができる。
本発明の組成物は、医薬として用いる場合、錠剤、粉
剤、顆粒剤、カプセル剤、液剤などの経口投与、あるい
は注射剤などの非経口投与が考えられるが、経口投与の
場合、本発明の菌体またはその処理物を１ｍｇ〜５ｇ、
好ましくは４ｍｇ〜４ｇおよび本発明の糖類を４ｍｇ〜
４０ｇ、好ましくは１０ｍｇ〜１０ｇ含む製剤を、また
注射剤の場合は、菌体またはその処理物を０．１ｍｇ〜
１ｇ、好ましくは０．５ｍｇ〜５００ｍｇ、糖類を２ｍ
ｇ〜２０ｇ、好ましくは１０ｍｇ〜１０ｇ含む注射液
を、成人１日当たり１〜数回に分けて投与することによ
り、副作用を伴うことなく所期の目的を達することがで
きる。本発明の組成物を食品として用いる場合、調味
料、畜肉加工品、水産加工品、農産加工品、ステープ
ル、調味食品、調味済食品、デザート類、乳油製品、菓
子、スナック菓子等の形態で提供することも可能であ
る。本発明のＩＬ−１２産生誘導組成物は、たとえば、
ウイルス、バクテリヤ等の微生物による感染症や各種悪
性腫瘍などの予防・治療や免疫力調整に有効である。

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】ラクトバチルス（Lactobacillus）属に属
   する菌またはその処理物と３−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラ
   ノシル−Ｄ−グルコースを構成単位として含有する糖類
   を有効成分として含むＩＬ−１２産生誘導組成物。
2. 【請求項２】ラクトバチルス属に属する菌がラクトバチ
   ルス・プランタラム（Lactobacillus plantarum）であ
   る請求項１記載のＩＬ−１２産生誘導組成物。
3. 【請求項３】ラクトバチルス属に属する菌がラクトバチ
   ルス・プランタラムＬ−１３７株（Lactobacillus plan
   tarum Ｌ−１３７）である請求項１記載のＩＬ−１２産
   生誘導組成物。
4. 【請求項４】糖類がニゲロースである請求項１〜３のい
   ずれかに記載のＩＬ−１２産生誘導組成物。