JP3174611B2

JP3174611B2 - 免疫賦活組成物

Info

Publication number: JP3174611B2
Application number: JP07586992A
Authority: JP
Inventors: 橋毅高; 名博和岩; 久保明得米; 田有桑; 本良郎山
Original assignee: Meiji Co Ltd; Meiji Dairies Corp
Current assignee: Meiji Co Ltd; Meiji Dairies Corp
Priority date: 1992-02-28
Filing date: 1992-02-28
Publication date: 2001-06-11
Anticipated expiration: 2016-06-11
Also published as: JPH05252900A

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、免疫賦活組成物に関す
るものであり、更に詳細には、乳酸菌菌体の細胞質画分
及び／又はその含有物を含有してなる、生体内の免疫系
を賦活せしめる能力にすぐれた組成物に関するものであ
る。

【０００２】本発明に係る組成物は、免疫賦活剤として
医薬タイプで使用するほか、免疫賦活用の飲料、食品、
栄養食品、機能性食品、特定保健用食品、ドリンク剤等
飲食品タイプで使用し、食物アレルゲンや常在細菌フロ
ーラ等の抗原性物質、あるいは、ウイルスや病原菌等の
感染性微生物に対する生体防御能を生体に付与するのに
広く利用することができる。

【０００３】

【従来の技術】乳酸菌の生体免疫賦活作用については近
年様々な報告がなされており、免疫賦活の機作や菌種に
よる生理活性の差などが徐々に明らかにされている（廣
田哲二、ＮｅｗＦｏｏｄＩｎｄｕｓｔｒｙ，Ｖｏ
ｌ．３２，Ｎｏ．１０，Ｐ９（１９９０））。しかし、
これらの報告のほとんどはまだ、乳酸菌菌体が生体に与
える影響をｉｎｖｉｔｒｏおよびｉｎｖｉｖｏで解
析しただけのものであり、乳酸菌菌体中の有効成分につ
いて検討した研究は数少ない。さらに、これらの数少な
い研究においても対象とされているのは、菌体の細胞壁
画分や菌体の生産する多糖体である（Ｃ．Ｉ．Ｐａｒｋ
ら，Ｍｉｌｃｈｗｉｓｓｅｎｓｃｈａｆｔ，４６，８７
（１９９１）；Ｈ．Ｙａｓｕｉら、Ｊ．ＤａｉｒｙＳ
ｃｉ．，７４，１１８７（１９９１）；Ｍ．Ｎａｇａｏ
ｋａら，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１０８，５６８（１９
９０）；北澤春樹ら，酪農化学・食品の研究，４０，Ａ
−２６１，（１９９１））。このように、乳酸菌菌体の
細胞質画分については検討がなされておらず、ましてや
細胞質画分に免疫賦活成分が含有されていること、そし
て、その成分を利用して現実に免疫賦活が行われること
については、全く何の知見も得られていないのが現状で
ある。

【０００４】一方母乳は分泌型ＩｇＡ，ラクトフェリ
ン、リゾチーム、補体等の感染防御物質を多数含有して
おり、このことが腸管免疫系の未発達な新生児にとって
母乳が最良の栄養源であるといわれる理由の１つになっ
ている。母乳が不足したり、与えられない場合にその代
用品として使用される育児用調製粉乳についても、生体
防御機能の付与を目的として近年ラクトフェリンなどの
物質が添加されている。

【０００５】乳酸菌もこのような背景から添加が試みら
れている物質の１つであり、ロシアのＢａｋｈｔｉｙａ
ｒｏｖａらは、ビフィズス菌を添加した調製粉乳を授乳
された新生児は、その糞便中のＩｇＡ抗体量およびリゾ
チーム含有量が菌体を添加しない調製粉乳を授乳された
新生児に比べて２倍以上になったことを報告している
（ＩｚｖｅｓｔｉｙａＶｙｓｓｈｉｋｈＵｃｈｅｂ
ｎｙｋｈＺａｖｅｄｅｎｉｉ，Ｐｉｓｈｃｈｅｖａｙ
ａＴｅｋｈｎｏｌｏｇｉｙａＮｏ．１，Ｐ３５（１
９８８））。しかし、Ｂａｋｈｔｉｙａｒｏｖａらが調
製粉乳に用いたビフィズス菌は耐熱性のビフィズス菌
（すなわち、ビフィズス菌の生菌）と記されているだけ
で、菌体中の有効成分はもちろん、ビフィズス菌の使用
菌株についても何ら明らかにされていない。一方、国内
でもビフィズス菌含有ミルクの使用例は報告されている
が、マクロファージの非特異的貪食細胞に及ぼす影響や
赤血球系造血能に及ぼす影響を検討しているだけであっ
て、投与した菌体の腸管免疫系に与える影響および菌体
中の有効成分は全く不明である（関根ら，治療学，Ｖｏ
ｌ．１４，Ｎｏ．５，Ｐ６９１（１９８５））。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】上記のように乳酸菌の
生理作用の有効成分としては、細胞壁あるいは分泌多糖
のみがこれまで重視されており、それらを分画する過程
で生じる細胞質画分については特に注目されてこなかっ
た。しかし、菌体全体から見ると細胞質の占める割合は
細胞壁より多く、その有効的な活用が問題である。

【０００７】実際上、先に述べたようなビフィズス菌に
代表される乳酸菌を育児用粉乳に応用して新生児に生体
防御能を賦与させようとする試みの中でも、菌体中の何
が実際に腸管免疫系に作用しているのか十分解明されな
いままになっている。これでは乳酸菌の育児用粉乳その
他へのより一層の利用を図ることには自ら限度がある。

【０００８】

【課題を解決するための手段】本発明は、乳酸菌を更に
有効に利用するためになされたものであって、本発明者
らは、各種乳酸菌の菌体を細胞壁と細胞質に分画し、各
画分の免疫担当細胞に与える影響を鋭意研究したとこ
ろ、細胞質画分が細胞壁画分と同等以上の免疫賦活作用
を示すことを見い出し、本発明を完成するに至った。

【０００９】すなわち、本発明者らは、乳酸菌菌体を生
体に経口投与した場合、腸管免疫系の要であるパイエル
板リンパ細胞を賦活化する乳酸菌菌体中の活性画分につ
いて鋭意研究した。その結果、菌体の細胞質画分が特に
高い活性を示すことを見いだすと同時に、菌体を投与さ
れた生体の腸管（小腸内容物および小腸壁）において、
菌体非投与の場合に比べて有意に高いＩｇＡ抗体が産生
されることを見いだし本発明を完成するに至った。

【００１０】本発明は、乳酸菌菌体の細胞質画分につい
て、上記のような免疫賦活に関する有用性をはじめて発
見し、この新知見に基づき更に研究の結果完成されたも
のであって、乳酸菌菌体の細胞質画分を有効成分とする
免疫賦活組成物をその基本的技術思想とするものであ
る。

【００１１】本発明の乳酸菌菌体の細胞質画分を得るに
は、細胞壁分解酵素を菌体に作用させるか、フレンチプ
レスあるいは超音波破砕装置などで菌体を機械的に処理
し、遠心分離後上清を回収すればよい。この場合、細胞
質画分を分画する前の乳酸菌は生菌でも死菌でもよい。
なおさらにトリクロロ酢酸処理や塩析処理により細胞質
画分中の蛋白質、ペプチド、あるいはそれらを構成成分
の１つとして含む化合物（糖蛋白質、リポ蛋白質など）
を精製できれば一層望ましい。本発明において、細胞質
画分としては、上記した乳酸菌菌体の破砕からその分
画、精製に至る各段階における生成物がすべて包含され
るほか、細胞質画分含有物も、本組成物の構成成分のひ
とつとして使用できる。

【００１２】前者においては、乳酸菌菌体を破砕し、こ
れを遠心分離して得られる上清、これを更に遠心分離し
て得られる上清、これを凍結乾燥してなる狭義の細胞質
画分、これを分画、精製、トリクロロ酢酸処理、塩析処
理等して得られる蛋白質複合体（蛋白質、リポ蛋白質、
糖蛋白質等）、同じくペプチド複合体（ペプチド、糖ペ
プチド等）等が、細胞質画分の具体例として挙げられ
る。また、狭義及び広義の細胞質画分を希釈、濃縮、乾
燥処理したものも自由に使用することができる。

【００１３】後者においては、上記した細胞質画分を含
有するものがすべて細胞質画分含有物として使用できる
ほか、細胞質画分含有物としては、乳酸菌菌体、その処
理物も使用できる。乳酸菌菌体処理物としては、菌体含
有物質（乳酸菌菌体、培地及び培養上清を含有する乳酸
菌培養物；同培養物から培地成分を除去してなる同培養
液；同培養物から菌体と培地成分とを除去してなる同上
清等）、菌体壁を機械的、化学的、及び／又は（微）生
物学的に破砕して得られる菌体破砕物が広く使用するこ
とができる。また、菌体含有物質、菌体破砕物の沈澱画
分、希釈、濃縮、及び／又は乾燥物も使用可能である。
なお、分散性等に問題が生じない限り、上記した細胞質
画分を単離して使用することなく細胞質画分含有物を食
品や医薬品等へ使用してもさしつかえないし、むしろそ
のほうが経口投与時の消化酵素による上記免疫賦活剤の
分解を防ぐことができ、免疫賦活成分が活性の高い状態
で腸管免疫系に作用できる場合も多い。なお、乳酸菌は
生菌、死菌のいずれも使用可能である。

【００１４】本発明において、乳酸菌としては乳酸菌に
属する微生物であれば特に限定されることなくすべての
微生物が使用可能であって、市販菌や乳酸菌使用飲食品
ないし医薬に使用されている乳酸菌も適宜使用できる。
本発明において使用可能な乳酸菌の非限定例としては、
次のものが挙げられる：ラクトバチルス属（Ｌａｃｔｏ
ｂａｃｉｌｌｕｓａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓＡＴＣＣ
１１５０６，Ｌ．ｌａｃｔｉｓＩＦＯ１２５２２
等）；ビフィドバクテリウム属（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔ
ｅｒｉｕｍｌｏｎｇｕｍＡＴＣＣ１５７０８
等）；ペディオコッカス属（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ
ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅＡＴＣＣ８０４２等）；スト
レプトコッカス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｆａ
ｅｃｉｕｍＡＴＣＣ８０４３等）；ロイコノストック
属（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄ
ｅｓＩＦＯ３４２６等）その他。

【００１５】本発明に係る免疫賦活組成物は、上記した
細胞質画分及び／又はその含有物を一種又は二種以上有
効成分としてなるものであって、飲食品または医薬とし
て用いるものである。これらの有効成分を食品として使
用する場合には、それ（ら）をそのまま添加したり、他
の食品ないしは食品成分と併用したりして適宜常法にし
たがって使用できる。また、医薬として使用する場合に
は、経口又は非経口投与することができる。経口投与の
場合には、例えば常法にしたがい、錠剤、顆粒剤、粉末
剤、カプセル剤、散剤とすることができ、又、非経口投
与の場合には、例えば注射薬製剤、点滴剤、坐剤等とし
て使用することができる。

【００１６】本発明に係る有効成分は、天然起源である
ために毒性が全くないか又は極めて低く、きわめて安全
である（ＬＤ₅₀＞３０００ｍｇ／ｋｇ皮下、＞５０００
ｍｇ／ｋｇ経口：いずれもラット）。

【００１７】以下、本発明を実施例により更に詳しく説
明する。

【００１８】

【実施例１】ビフィドバクテリウム・ロンガムＡＴＣＣ
１５７０８をＥＧ液体培地（光岡知足著“腸内菌の世
界”（叢文社１９８０））に接種し、嫌気条件下、３７
℃で１８時間培養した。培養終了後、遠心分離により菌
体を回収し、冷却した生理食塩水で３回洗浄し、蒸留水
に懸濁した。この懸濁液を出力１００Ｗの超音波破砕機
で２０分間処理し、処理液を１，０００Ｇの遠心分離に
かけ、未破壊の菌体を沈澱として除去した。次に上清を
３０，０００Ｇの遠心分離にかけ、上清（細胞質画分）
と沈澱（細胞壁画分）に再度かけた。上清はそのまま凍
結乾燥して細胞質画分とし、沈澱はトリプシンおよびＤ
ＮＡ，ＲＮＡ分解酵素で処理した後、遠心洗浄し、凍結
乾燥して、細胞壁画分とした。

【００１９】このようにして得られた双方の画分につい
て、マイトジェン活性を次のようにして測定した。Ｃ３
Ｈ／ＨｅＪマウス脾細胞を採取、洗浄した後、同系マウ
ス血清１％を含むＲＰＭＩ１６４０培地に浮遊させた。
これらの細胞を９６穴平底プレートを用い、上記細胞質
および細胞壁画分の存在下（１〜１００μｇ／ｗｅｌ
ｌ）、１％同系マウス血清を含むＲＰＭＩ１６４０培地
で５％ＣＯ₂／Ａｉｒ条件下、３７℃７２時間それぞれ
培養した（５×１０⁵個／ｗｅｌｌ）。次に１．０μＣ
ｉ³Ｈ−チミジンを添加し、２０時間後 ³Ｈ−チミジン
の細胞への取り込みをシンチレーションカウンターで測
定した。コントロールは培地に何も物質を添加しなかっ
た場合の細胞の³Ｈ−チミジン取り込みカウント数（ｃ
ｐｍ）とし、これを各サンプルのｗｅｌｌのカウント数
（ｃｐｍ）から引いた値（Δｃｐｍ）で結果（図１）を
表わした。

【００２０】本発明によれば図１に示すように、Ｂ．ｌ
ｏｎｇｕｍの細胞質にも細胞壁と同等以上のマイトジェ
ン活性が見られた。なお、卵白アルブミン（ＯＶＡ）は
ネガティブコントロールである。

【００２１】

【実施例２】実施例１と同様の方法で、ビフィドバクテ
リウム・ロンガムＡＴＣＣ１５７０７、ラクトバチル
スアシドフィラスＩＦＯ３９５３、ラクトバチルス・
デルブリッキ・サブスピーシズ・ラクティスＡＴＣＣ
１２３１５の菌体を培養し、超音波破砕、遠心処理を施
して各菌株の細胞質画分を得た。

【００２２】これらの菌株の細胞質画分の卵白アルブミ
ン感作Ｔ細胞に対する細胞増殖活性を次のように測定し
た。ＢＡＬＢ／ｃマウスにＫｕｒｉｓａｋｉらの方法
（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｖｏｌ．１６，Ｐ２３
６，１９８６）で卵白アルブミン（ＯＶＡ）を皮下免疫
し、ＯＶＡ感作Ｔ細胞を得た。これらの細胞を、実施例
１と同様の方法で各菌株の細胞質画分の存在下（２〜１
００μｇ／ｍｌ）培養し、細胞増殖を³Ｈ−チミジンの
取り込みにより調べた。結果は、培地に何も物質を添加
しなかったｗｅｌｌのカウント数（コントロールのカウ
ント数）を１とした場合の各サンプルのｗｅｌｌのカウ
ント数（刺激係数：ＳＩ）で表わした。

【００２３】本発明によれば、図２に示すように、各菌
株の細胞質はネガティブコントロールとして用いたβ−
ラクトグロブリン（β−ＬＧ）に比べて有意に高い細胞
増殖活性を示した。特にビフィドバクテリウム・ロンガ
ムの２菌株はポジティブコントロールとして用いたグラ
ム陰性菌由来の免疫賦活物質であるリポ多糖類（ＬＰ
Ｓ）にほぼ匹敵する活性を示した。

【００２４】

【実施例３】ビフィドバクテリウム・ロンガムＡＴＣＣ
１５７０８を２．０×１０¹¹個／ｇ含有する菌体粉末
を５％含有する乳清蛋白質（ＷＰＩ）固型飼料を作製
し、マウス（ＢＡＬＢ／ｃ，５Ｗ，雌）８匹を飼育した
（ＷＰＩ固型飼料の組成はＡＩＮ−７６に準拠）。２週
間後にパイエル板をマウスの小腸から無菌的に取り出
し、スライドガラスで緩やかにティースしてｓｉｎｇｌ
ｅｃｅｌｌとした。これらの細胞を９６穴平底プレー
トを用い実施例１で調製したビフィドバクテリウム・ロ
ンガムＡＴＣＣ１５７０８の細胞質および細胞壁画分
の存在下（１〜１００μｇ／ｍｌ）、３７℃４８時間培
養した（その他の条件は実施例１と同じ）。次に１．０
μＣｉ³Ｈ−チミジンを添加し、２０時間後 ³Ｈ−チミ
ジンの細胞への取り込みをシンチレーションカウンター
で測定した。その結果を図３に示した。結果の表示は図
１と同じ形式によった。

【００２５】本発明によれば、図３に示すように菌体の
細胞質画分はパイエル板リンパ細胞に対して強い細胞増
殖活性を有した。これに対し、菌体の細胞壁画分は細胞
増殖活性を示さず、ネガティブコントロールの卵白アル
ブミンによる応答（Δｃｐｍ）とほぼ同じ応答であっ
た。このことから菌体が経口投与された場合その細胞質
が腸管免疫系を強く刺激することが明らかとなった。

【００２６】

【実施例４】実施例３と同様にして、ビフィドバクテリ
ウム・ロンガムＡＴＣＣ１５７０８を２週間経口投与
したＢＡＬＢ／ｃマウスよりパイエル板リンパ細胞を得
た。これらの細胞をビフィドバクテリウム・ロンガムＡ
ＴＣＣ１５７０８の細胞質のトリプシン分解物（０，
１，５，２４時間分解）の存在下、実施例３と同様の条
件で培養し、細胞増殖を³Ｈ−チミジンの取り込みによ
り調べた。細胞質のトリプシン分解物は、ｐＨ８．５の
緩衝液中で所定の時間（０〜２４時間）トリプシン（Ｓ
ｉｇｍａ）をＥ／Ｓ比１：１００で作用させ、トリプシ
ンを加熱失活後、脱塩、凍結乾燥することにより調製し
た。細胞質のトリプシン処理に伴う活性の変化を図４に
示した。結果の表示は図１と同じ形式によった。

【００２７】本発明によれば、図４に示すように、細胞
質の細胞増殖活性は、トリプシン処理時間の延長ととも
に低下した。このことより、細胞質中の蛋白質およびペ
プチド、あるいはそれらの各種複合体（糖蛋白質、リポ
蛋白質など）が本免疫賦活剤の活性の主体であることが
明らかとなった。

【００２８】

【実施例５】実施例４で使用したトリプシンの代わりに
キモトリプシン（Ｓｉｇｍａ）を用い、細胞質のキモト
リプシン処理に伴う活性の変化を調べた。ただし、酵素
処理時間は、０，５，２４時間とした。その結果を図５
に示した。

【００２９】本発明によれば、図５に示すように、細胞
質の細胞増殖活性はキモトリプシン処理時間の延長とと
もに低下した。このことにより、実施例４と同様に、細
胞質中の蛋白質およびペプチド、あるいはそれらの各種
複合体（糖蛋白質、リポ蛋白質など）が本免疫賦活剤の
活性の主体であることが明らかとなった。

【００３０】

【実施例６】高濃度培養法によりビフィドバクテリウム
・ロンガムＡＴＣＣ１５７０８を増殖させた培養液を
４０００Ｇで２．０×１０ ¹¹ 個／ｍｌにまで遠心濃縮
し、得られた沈澱画分に遠心前と同量の脱イオン水を加
え、均一に沈澱を分散させた後、ＨＴＳＴ殺菌を行っ
た。その後再び遠心分離を行い、沈澱画分を回収し、凍
結乾燥菌体粉末を得た。粉末中のＢ．ｌｏｎｇｕｍ菌体
数は約８．０×１０¹¹個／ｇ相当であった。この粉末を
市販の育児用調製粉乳（明治乳業（株）製）に０．１％
配合した。

【００３１】

【実施例７】高濃度培養法によりラクトバチルス・アシ
ドフィルスＩＦＯ３９５３を増殖させた培養液を３０
００Ｇで１．５×１０ ¹¹ 個／ｍｌにまで遠心濃縮し得ら
れた沈澱画分をＨＴＳＴ殺菌後、凍結乾燥した。この凍
結乾燥菌体粉末中のＬ．ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ菌体数
は約４．０×１０¹¹個／ｇ相当であった。この粉末を市
販の育児用調製粉乳（明治乳業（株）製）に０．０５％
配合した。

【００３２】なお、本発明に係る免疫賦活育児用粉乳を
製造するに当り、乳酸菌菌体由来の細胞質画分は、上記
した使用量を１例として使用することができるが、本発
明においては、粉乳１ｇ当り、１．０×１０⁴個以上、
好ましくは１．０×１０⁶〜１．０×１０¹²個の乳酸菌
菌体由来の細胞質画分を使用すればよい。しかしなが
ら、該細胞質画分は天然物由来のものであるので安全で
あり、したがって上記範囲よりも多量に使用しても何ら
差し支えはないし、また、予防ないし保健を目的とする
場合は、上記範囲よりも少量使用してもよい。また、育
児用粉乳以外の飲食品を調製する場合も、上記範囲を参
考にして細胞質画分の使用量を定めればよい。

【００３３】

【実施例８】ラクトバチルス・アシドフィラスＩＦＯ
３９５３の加熱死菌体を５×１０¹⁰個／飼料１ｇ含有す
る乳清蛋白質（ＷＰＩ）固型飼料を作製し、実施例３と
同様にして菌体投与マウスのパイエル板リンパ細胞に対
するＬ．ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓＩＦＯ３９５３の細
胞壁および細胞質画分の細胞増殖活性を菌体経口投与開
始後２週間目に調べた。

【００３４】その結果が図６である。本発明のとおり、
Ｌ．ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓＩＦＯ３９５３の細胞質画
分はパイエル板リンパ細胞に対し強い増殖活性を示した
一方、細胞壁画分はｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌ
として用いたＯＶＡより若干強い活性しか示さなかっ
た。

【００３５】

【実施例９】実施例３で調製したＢ．ｌｏｎｇｕｍＡＴ
ＣＣ１５７０８を含有する乳清蛋白質（ＷＰＩ）固型
飼料でマウス７匹（ＢＡＬＢ／ｃ，５Ｗ，雌）を飼育し
た。４週間後にマウスから小腸部分を取り出し、露木ら
の方法（光岡知足編，“腸内フローラの研究方法論”，
Ｐ．１５７（学会出版センター１９８９））に従って小
腸内容物および小腸壁抽出液を得た。これらの試料中の
ＩｇＡ抗体価を抗マウスＩｇＡモノクローナル抗体（関
東化学）を用いてＥＬＩＳＡ法で測定した。また対照と
してＢ．ｌｏｎｇｕｍＡＴＣＣ１５７０８を含まない
だけで他は同一組成のＷＰＩ固型飼料で上記と同様に飼
育したマウスより得た小腸内容物および小腸壁抽出液中
のＩｇＡ抗体価を同様に調べた。

【００３６】その結果が図７である。本発明により、乳
酸菌菌体の細胞質画分によるパイエル板リンパ細胞の活
性化の結果、腸管でのＩｇＡ抗体価が対照に比べ高まっ
ていることが明らかになった。

【００３７】

【実施例１０】マウス（ＢＡＬＢ／ｃ，５Ｗ，雌）２１
匹を７匹ずつ３群に分け、実施例３および実施例８で使
用したＢ．ｌｏｎｇｕｍ菌体入りＷＰＩ固型飼料および
Ｌ．ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ菌体入りＷＰＩ固型飼料を
そのうちの２群にそれぞれ与えて飼育した。残りの一群
は同一組成でこれらの菌体を含まないＷＰＩ固型飼料で
飼育した。１年後、各群のマウスから小腸部分を取り出
し、実施例９と同様の方法で小腸壁抽出液を得た。これ
らの試料中の抗β−ラクトグロブリンＩｇＡ抗体価およ
び抗ＬＰＳＩｇＡ抗体価をＥＬＩＳＡ法で測定した。

【００３８】その結果が、図８である。本発明の通り、
乳酸菌菌体の細胞質画分によるパイエル板リンパ細胞の
活性化の結果、ＷＰＩ中の食物アレルゲンと言われるβ
−ラクトグロブリン、および大腸菌などのグラム陰性菌
のＬＰＳに対する腸管でのＩｇＡ抗体価が対照に比べて
高まっていることが明らかになった。

【００３９】

【実施例１１】ビタミンＣ２０ｇ、グラニュー糖５０
ｇ、コーンスターチと乳糖の当量混合物３０ｇに、実施
例１で得た細胞質画分を５０ｇ加えて充分に混合した。
混合物を１００等分して袋に詰め、１袋１．５ｇのステ
ィック状免疫賦活用栄養健康食品を１００袋製造した。

【００４０】

【実施例１２】実施例１において微生物としてビフィド
バクテリウム属菌にかえてペディオコッカス・セレビシ
エーＡＴＣＣ８０４２を用いて得た細胞質画分を用い、
またビタミンＣ２０ｇにかえてビタミンＣとクエン酸の
当量混合物２０ｇを用いたほかは、実施例１１と同様の
処理をくり返し、充分に乾燥せしめた後、免疫賦活用栄
養健康食品を製造した。

【００４１】

【実施例１３】次の配合により免疫賦活剤を製造した。
（１）実施例１においてビフィドバクテリウム属菌にか
えてストレプトコッカス・ファエシウムＡＴＣＣ８０４
３を用いて得た細胞質画分の硫安塩析処理物の凍結乾燥
物５０ｇ、（２）ラクトース９０ｇ、（３）コーンスタ
ーチ２９ｇ、（４）ステアリン酸マグネシウム１ｇ。

【００４２】先ず、（１）、（２）、及び（３）（但し
１７ｇ）を混合し、（３）（但し７ｇ）から調製したペ
ーストとともに顆粒化した。得られた顆粒に（３）（但
し５ｇ）と（４）を加えてよく混合し、この混合物を圧
縮錠剤機により圧縮して、１錠あたり細胞質画分を１０
ｍｇ含有する錠剤１０００個を製造した。

【００４３】投与量は、患者の症状、年令によっても異
なるが、０．１〜１５００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙで１日１
〜４回投与する。本発明において用いる細胞質画分は本
来食品由来のものであるので、既述のように安全性には
ほとんど問題はなく、したがって上記容量をこえて投与
しても差し支えはない。また、健康の維持、増進、保
健、栄養剤等としてこれを利用する場合は、上記容量よ
りも少ない量を長期間に亘って服用すればよい。また、
既述のように本発明に係る錠剤は、経口投与以外の方法
でも投与することができるが、静脈投与および筋肉投与
の場合は０．０１〜１２００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙであ
る。

【００４４】

【実施例１４】次の配合を用意した。（１）実施例１で
得た細胞質画分１０ｇ、（２）塩化ナトリウム８ｇ、
（３）クロロブタノール４ｇ、（４）炭酸水素ナトリウ
ム１ｇ。

【００４５】全成分を蒸留水１０００ｍｌに溶解し、こ
れを５００ｍｌの点滴ビン２本に分注し、免疫賦活輸液
を製造した。

【００４６】

【発明の効果】本発明の免疫賦活組成物は、乳酸菌菌体
の免疫賦活作用の活性主体として従来から研究されてき
た細胞壁画分や菌体の分泌する多糖体と異なり、細胞質
画分を有効成分とする。したがって、各種免疫担当細胞
への作用メカニズムも従来から研究されてきた上記各物
質とは異なる可能性が大であり、乳酸菌由来の安全性の
高い免疫賦活剤として食品および医薬品へ広く応用でき
る。

【００４７】また、本発明によって、食物アレルゲンや
常在細菌フローラなどの抗原性物質、あるいはウィルス
や病原菌などの感染性微生物に対して生体防御能を高め
る乳酸菌菌体の細胞質画分を有効成分として飲食品とし
て直接用いたり、あるいは飲食品に配合することによ
り、これらの抗原性物質あるいは感染性微生物によって
引き起こされる各種疾病の予防ないし治療に役立つ飲食
品を供給することができる。例えば細胞質画分を育児用
粉乳に配合することによって、これらの抗原性物質ある
いは感染性微生物によって引き起こされる人工栄養児等
の各種疾病の予防にきわめて有効な育児用粉乳を製造す
ることができる。

【図面の簡単な説明】

【図１】Ｂ．ｌｏｎｇｕｍ菌体の細胞質および細胞壁画
分のマイトジェン活性を比較した図である。

【図２】各種乳酸菌菌体の細胞質画分による卵白アルブ
ミン感作Ｔ細胞の細胞増殖の促進を示した図である。

【図３】Ｂ．ｌｏｎｇｕｍ菌体経口投与時の細胞増殖の
促進（実施例３）を示した図である。

【図４】Ｂ．ｌｏｎｇｕｍ菌体経口投与時の細胞増殖の
促進に与える細胞質画分のトリプシン処理の影響を示し
た図である。

【図５】Ｂ．ｌｏｎｇｕｍ菌体経口投与時の細胞増殖の
促進に与える細胞質画分のキモトリプシン処理の影響を
示した図である。

【図６】Ｌ．ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ菌体経口投与時の
細胞増殖の促進（実施例８）を示した図である。

【図７】Ｂ．ｌｏｎｇｕｍ菌体経口投与による腸管Ｉｇ
Ａ産生の誘導を示した図である。

【図８】菌体経口投与による抗原性物質に対する腸管Ｉ
ｇＡ産生の誘導を示した図である。

【符号の説明】

Ｂ：Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｌｏｎｇｕｍ菌
体投与群Ｌ：Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓａｃｉｄｏｐｈｉｌ
ｕｓ菌体投与群Ｃ：対照群

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者桑田有東京都東村山市栄町１−21−３明治乳業株式会社中央研究所内 (72)発明者山本良郎東京都東村山市栄町１−21−３明治乳業株式会社中央研究所内 (56)参考文献特開平３−244367（ＪＰ，Ａ) 特開平２−265458（ＪＰ，Ａ) 特開昭62−40262（ＪＰ，Ａ) 特開昭63−238095（ＪＰ，Ａ) 特開平５−132425（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) A23L 1/28 - 1/30 A23C 9/13 - 9/152 A61K 35/74 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ)

Claims

(57)【特許請求の範囲】

【請求項１】乳酸菌の菌体の破砕後、遠心分離によっ
て細胞壁画分を除去して得られた上清もしくはその処理
物を含有することを特徴とする免疫賦活剤。
【請求項２】上清の処理物が、上清を希釈、濃縮、分
画、精製、及び／又は乾燥してなるものであることを特
徴とする請求項１に記載の免疫賦活剤。
【請求項３】乳酸菌が、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏ
ｂａｃｉｌｌｕｓ）、ビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉ
ｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ペディオコッカス（Ｐｅｄ
ｉｏｃｏｃｃｕｓ）、ストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐ
ｔｏｃｏｃｃｕｓ）、ロイコノストック（Ｌｅｕｃｏｎ
ｏｓｔｏｃ）の各属に属する１種または２種以上である
ことを特徴とする請求項１〜請求項２のいずれか１項に
記載の免疫賦活剤。
【請求項４】乳酸菌の菌体の破砕後、遠心分離によっ
て細胞壁画分を除去して得られた上清もしくはその処理
物を含有することを特徴とする免疫賦活用飲食品。
【請求項５】上清の処理物が、上清を希釈、濃縮、分
画、精製、及び／又は乾燥してなるものであることを特
徴とする請求項４に記載の免疫賦活用飲食品。
【請求項６】乳酸菌が、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏ
ｂａｃｉｌｌｕｓ）、ビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉ
ｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ペディオコッカス（Ｐｅｄ
ｉｏｃｏｃｃｕｓ）、ストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐ
ｔｏｃｏｃｃｕｓ）、ロイコノストック（Ｌｅｕｃｏｎ
ｏｓｔｏｃ）の各属に属する１種または２種以上である
ことを特徴とする請求項４〜請求項５のいずれか１項に
記載の免疫賦活用飲食品。
【請求項７】免疫賦活用飲食品が乳製品であることを
特徴とする請求項４〜請求項６のいずれか１項に記載の
免疫賦活用飲食品。
【請求項８】乳製品が育児用乳及び／又は育児用粉乳
であることを特徴とする請求項７に記載の免疫賦活用飲
食品。
【請求項９】上清もしくはその処理物の含有におい
て、１．０×１０⁶〜１．０×１０¹²個の乳酸菌菌体由
来の細胞質画分を粉乳１ｇ当たりに含有せしめることを
特徴とする請求項８に記載の免疫賦活用飲食品。