JP2003040785A - 感染抑制組成物及びそれを含有する飲食品 - Google Patents
感染抑制組成物及びそれを含有する飲食品Info
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Abstract
感染抑制効果を示す感染抑制組成物及びそれを含有する
飲食品を提供する。 【解決手段】 感染抑制組成物の有効成分として、β−
グルカンを含有する素材と乳酸産生菌の加熱処理菌体と
を有効成分として含有させる。前記β−グルカンを含有
する素材を0.5〜99.5質量%、前記乳酸産生菌の
加熱処理菌体を99.5〜0.5質量%含有することが
好ましい。また、前記β−グルカンを含有する素材は、
例えば、アガリクス・ブラゼイ・ムリル等の担子菌の子
実体、担子菌の菌糸体、酵母、細菌、藻類、地衣類から
選ばれた少なくとも1種より調製されたものであること
が好ましい。更に、前記乳酸産生菌は、乳酸菌及び/又
はビフィズス菌であることが好ましい。更にまた、前記
乳酸菌は乳酸球菌であることが好ましく、特に、エンテ
ロコッカス・フェカリス(Enterococcus faecalis)で
あることがより好ましい。
Description
有する素材と乳酸産生菌の加熱処理菌体とを有効成分と
して含有する感染抑制組成物及びそれを含有する飲食品
に関する。
リクス・ブラゼイ・ムリル(Agaricusblazei Murill、
日本名「カワリハラタケ」)は、ガン、アレルギー、糖
尿、高血圧等の予防・改善効果を有することが知られて
おり、例えば、抗腫瘍活性成分として、その子実体から
酸性多糖体(特開昭64−67194号公報)、中性多
糖体(特開昭64−67195号公報)及び蛋白多糖体
(特開平2−78630号公報)が、菌糸体から蛋白多
糖体(特開昭61−47518号公報)が、更に菌糸体
の培養濾液から蛋白多糖体(特開昭61−47519号
公報)がそれぞれ分画されている。
品素材として広く利用されており、例えば、特開200
1−103927号公報には、アガリクス茸を加圧下、
水性溶媒を用いて抽出し、該抽出物を50%エタノール
で分別して得られるアガリクス茸エキスを配合した食用
組成物が開示されている。
ガリクス茸煎じ液に酢と蜂蜜を混合したことを特徴とす
るアガリクス含有健康飲料食品が開示されている。
リクスブラゼイの菌糸体、子実体及びその混合物、又は
これらの培養残液をヘミセルラーゼが主体の酵素剤で分
解処理し、そのときに得られるβ−グルカン類が多量に
含まれる生理活性物質を主材とする健康食品が開示され
ている。
菌も従来から健康食品として広く摂取されており、腸内
フローラのバランスを改善し、腸内腐敗産物の低減、糞
便性状の改善効果のほか、免疫賦活効果を有することが
知られている。例えば、特開2001−48796号公
報には、Enterococcus faecalis AD101菌株の死菌体を
主成分とする免疫調整剤が開示されている。
菌又はその処理物を有効成分とする、薬剤によって低下
した液性免疫機能を回復する作用を有する液性免疫回復
剤が開示されている。
菌体及び/又は菌体含有物を有効成分として含有するこ
とを特徴とする経口免疫賦活剤が開示されている。
菌菌体の細胞質画分及び/又は細胞質画分含有物を含有
することを特徴とする免疫賦活組成物が開示されてい
る。
クス・ブラゼイ・ムリルや乳酸菌等は、健康食品として
広く利用されているものの、それぞれを単独で摂取した
場合の生理効果は充分満足できるものではなかった。
ることにより、優れた病原菌等の感染抑制効果を示す感
染抑制組成物及びそれを含有する飲食品を提供すること
にある。
を達成するために鋭意研究した結果、β−グルカンを含
有する素材と乳酸産生菌の加熱処理菌体とを併用するこ
とにより、それらを単独で用いた場合に比べて非常に強
く病原菌等の感染を抑制できることを見出し、本発明を
完成するに至った。
−グルカンを含有する素材と、乳酸産生菌の加熱処理菌
体とを有効成分として含有することを特徴とする。
ことにより、β−グルカンによる免疫賦活活性効果と乳
酸産生菌の加熱処理菌体による免疫賦活活性との相乗効
果により、病原菌等の感染を強く抑制することができ
る。
カンを含有する素材を0.5〜99.5質量%、前記乳
酸産生菌の加熱処理菌体を99.5〜0.5質量%含有
することが好ましい。この態様によれば、より効果的に
病原菌等の感染を抑制できる感染抑制組成物を提供でき
る。
は、前記β−グルカンを含有する素材は、担子菌の子実
体、担子菌の菌糸体、酵母、細菌、藻類、地衣類から選
ばれた少なくとも1種より調製されたものであることが
好ましい。この態様によれば、β−グルカンを簡便に調
製することができる。
は、前記担子菌は、アガリクス・ブラゼイ・ムリル(Ag
aricus blazei Murill)、メシマコブ、マイタケ、エノ
キタケ、ハナビラタケ、シイタケ、霊芝、ヤマブシタ
ケ、アワビタケ、オオヒラタケ、カワラタケ、白樺タ
ケ、白キクラゲ、梅寄生茸、タモギタケ、マツタケ、シ
メジ、エリンギ、ナメコタケ、フクロタケ、マンネンタ
ケから選ばれたものであることが好ましい。この態様に
よれば、β−グルカンを含有する素材として、従来より
食品として摂取されている担子菌から調製されたものを
用いることにより、より安全な感染抑制組成物を提供で
きる。
ては、前記乳酸産生菌は、乳酸菌及び/又はビフィズス
菌であることが好ましい。この態様によれば、乳酸産生
菌として、従来より食品として摂取されている乳酸菌や
ビフィズス菌の加熱処理菌体を用いることにより、より
安全な感染抑制組成物を提供できる。
ては、前記乳酸菌は乳酸球菌であることが好ましく、前
記乳酸球菌はエンテロコッカス・フェカリス(Enteroco
ccusfaecalis)であることが好ましい。これらの態様に
よれば、特に優れた感染抑制効果を有する感染抑制組成
物を提供できる。
成物を含有することを特徴とする。本発明の飲食品は、
β−グルカンを含有する素材と、乳酸産生菌の加熱処理
菌体とを有効成分として含有する感染抑制組成物を含有
するので、該飲食品を摂取することにより、安全かつ効
果的に病原菌等の感染を抑制することができる。
1食分当たり0.01〜10g含有することが好まし
い。この態様によれば、1食分の飲食品で充分な量の感
染抑制組成物を摂取することができる。
果の作用機序は、現在のところ明らかではないが、β−
グルカンと乳酸菌の加熱処理菌体とを併用して摂取する
ことにより、マクロファージ、NK細胞及びT細胞を中
心とした細胞性免疫機構が活性化され、病原菌等の排除
が効率よく行なわれるためであると考えられる。
は、グルコースから構成される多糖類のうち、グルコー
スがβ型の構造で結合したものをいい、具体的にはβ−
1,4グルカン(セルロース)、β−1,3グルカン、
β−1,6グルカン等が挙げられる。
含有する素材としては、上記のようなβ−グルカンを含
有し、飲食品に用いることのできる素材であれば特に制
限なく用いることができる。例えば、担子菌の子実体、
担子菌の菌糸体、酵母、細菌、藻類、地衣類等の細胞壁
等にはβ−グルカンが多く含まれており、これらから調
製されたものが好ましく用いられる。
あれば特に制限なく用いることができるが、例えば、ア
ガリクス・ブラゼイ・ムリル(Agaricus blazei Muril
l)、メシマコブ、マイタケ、エノキタケ、ハナビラタ
ケ、シイタケ、霊芝、ヤマブシタケ、アワビタケ、オオ
ヒラタケ、カワラタケ、白樺タケ、白キクラゲ、梅寄生
茸、タモギタケ、マツタケ、シメジ、エリンギ、ナメコ
タケ、フクロタケ、マンネンタケ等が好ましく挙げら
れ、中でもアガリクス・ブラゼイ・ムリルが好ましい。
これらの担子菌は、従来より食品として摂取されている
ものであり、容易に入手でき、安全性も非常に高い。
母、細菌、藻類、地衣類等からβ−グルカンを調製する
方法は、特に制限はなく、熱水抽出、アルコール等の有
機溶媒抽出、酵素分解等の公知の方法で行なうことがで
きる。例えば、生あるいは乾燥したアガリクス・ブラゼ
イ・ムリルの子実体やアガリクス・ブラゼイ・ムリルの
種菌を炭素源及び窒素源を含む培地で培養して得られる
菌糸体培養物を、水、アルコール等の溶媒で抽出するこ
とにより調製することができる。具体的には、例えば、
乾燥したアガリクス・ブラゼイ・ムリルの子実体の質量
の約20倍量の水を加え、120℃で30分間抽出し、
得られた抽出液を適宜濃縮、乾燥することにより得るこ
とができる。
子実体、担子菌の菌糸体、酵母、細菌、藻類、地衣類等
からの抽出物は、通常、β−グルカンを1〜50質量%
含んでおり、そのまま用いてもよく、必要に応じて更に
精製してから用いてもよい。また、上記担子菌の子実
体、担子菌の菌糸体、酵母等からの抽出物は市販されて
おり、これらを用いることもできる。
理菌体とは、乳酸菌、ビフィズス菌等の乳酸産生菌を加
熱処理して得られる死菌体であり、例えば、以下のよう
にして得ることができる。
℃、12〜72時間培養した後、遠心分離等の適当な手
段で菌体を回収する。回収した菌体を、水洗、濃縮し、
この濃縮菌体懸濁液を80〜115℃、30分〜3秒間
加熱処理した後、噴霧乾燥、凍結乾燥等の適当な手段に
より乾燥して得ることができる。
us faecalis、Enterococcus faecium、Lactobacillus a
cidophilus、Lactobacillus casei、Lactobacillus lac
tis、Lactobacillus herveticus、Streptococcus therm
ophilus等が挙げられる。また、上記ビフィズス菌とし
ては、例えば、Bifidobacterium Longum、Bifidobacter
ium breve等が挙げられる。
を有するエンテロコッカス・フェカリスEnterococcus f
aecalis(ATCC 19433、ATCC 14508、ATCC 23655等)が
特に好ましく用いられる。Enterococcus faecalisの加
熱処理菌体は、例えば「EFパワー」、「EF−200
1」(いずれも商品名、コンビ株式会社製)、「FK−
23」(商品名、ニチニチ製薬製)等として市販されて
おり、これらを用いてもよい。
カンを含有する素材を0.5〜99.5質量%(β−グ
ルカン換算で0.5〜50質量%)、上記乳酸産生菌の
加熱処理菌体を99.5〜0.5質量%含むことが好ま
しく、β−グルカンを含有する素材を10〜90質量%
(β−グルカン換算で5〜50質量%)、乳酸産生菌の
加熱処理菌体を90〜10質量%含むことがより好まし
い。各有効成分が上記範囲外であると相乗的な感染抑制
効果が得られないため好ましくない。
成分の他に、賦形剤、甘味料、酸味料、ビタミン類、ミ
ネラル類等を含むことができる。また、その形態は特に
制限はなく、粉末、顆粒、錠剤、カプセル剤、液体等、
その使用目的に合わせて適宜選択できる。
成人1日当たり0.01〜10gが好ましく、0.05
〜2gがより好ましい。
例えば、飲料、ゼリー、キャンディー、ガム、レトルト
食品、インスタント食品等に添加することができる。上
記感染抑制組成物の添加量は、1食分当たり0.01〜
10gが好ましく、0.05〜2gがより好ましい。感
染抑制組成物の添加量が0.01g未満であると摂取し
ても充分な感染抑制効果が得られず、10g超であると
コスト的に高くなりすぎるため好ましくない。
する。なお、以下の例においては、アガリクス・ブラゼ
イ・ムリルの子実体の抽出物として商品名「仙生露」
(協和エンジニアリング社製)、乳酸球菌(Enterococc
us faecalis)の加熱処理菌体として商品名「EF−2
001」(コンビ株式会社製)を用いた。
口毒性試験) OECD Guidelines for the Chemicals 401(1981)に準拠
し、マウスを用いた急性経口毒性試験を行った。
製水に懸濁して、試験液(250mg/mL)を調製し
た。
つ、日本エスエルシー株式会社より購入)を約1週間の
予備飼育を行なった後、試験群(雌雄各10匹ずつ)と
コントロール群(雌雄各10匹ずつ)に分け、試験群に
は、上記試験液を乳酸球菌の加熱処理菌体換算で5,0
00mg/kg体重となるように胃ゾンデを用いて強制
単回経口投与した。また、コントロール群には精製水
(雄:0.7mL、雌:0.6mL)を同様にして投与
し、室温23±2℃、照明時間12時間/日に設定した
飼育室で飼育した。なお、試験期間中、水と飼料(商品
名「マウス、ラット用固形飼料;ラボMRストック」、
日本農産工業株式会社製)は自由に摂取させた。
間)を行なったが、いずれの群においても死亡例は見ら
れなかった。そして、観察期間終了時に全てのマウスを
剖検したところ、主要臓器に異常は見られなかった。ま
た、投与後7、14日に体重を測定し、t−検定により
有意水準5%で群間の比較を行なった。その結果を表1
に示す。
差は見られなかった。以上の結果から、乳酸球菌の加熱
処理菌体のマウスにおける単回経口投与によるLD50値
は5,000mg/kg体重以上であると考えられた。
より購入)を4群(各群10匹)に分け、試験群にはア
ガリクス・ブラゼイ・ムリルの子実体抽出エキス(乾燥
子実体として0.3mg/匹)と乳酸球菌の加熱処理菌
体(10μg/匹)との混合物、比較群1には乳酸球菌
加熱処理菌体(20μg/匹)、比較群2にはアガリク
ス・ブラゼイ・ムリルの子実体抽出エキス(乾燥子実体
として0.6mg/匹)、コントロール群にはPBS
(0.2mL/匹)をそれぞれ胃ゾンデで1週間毎日1
回強制経口投与した。
ogenes)を2×105CFU/匹となるようにマウスの
腹腔内に注射し、その後の各群のマウスの生存率を観察
した。なお、試験期間中、水及び飼料(商品名「粉末飼
料CE−2」、日本クレア製)は自由摂取とした。
群、比較群1、2はコントロール群に比べて非常に高い
生存率を示すことが分かる。特に、試験群のマウスは1
匹も死亡しておらず、リステリア菌の感染・増殖を抑制
していることが分かる。
回、各群のマウスに試験サンプルを強制経口投与した
後、リステリア菌を感染させた。その後、マウスの脾臓
を採取し、脾臓に感染したリステリア菌数の変化を測定
した。具体的には、感染後、1、3、5、7日目に脾臓
を採取し、この脾臓をすりつぶしてPBS中に懸濁し、
この懸濁液を段階希釈して「リステリア増菌培地」(商
品名、MERCK社製)に移して培養(25℃、48時間)
し、出現したコロニーの数を測定した。その結果を図2
に示す。
ール群ではリステリア菌数が増えているのに対して、試
験群、比較群1、2では減少していることが分かる。特
に、試験群ではその減少の割合が大きいことが分かる。
・ムリルの子実体抽出エキスと乳酸球菌の加熱処理菌体
とを併用して経口摂取することにより、それぞれを単独
で摂取した場合に比べてより優れた感染抑制効果を示す
ことが分かる。
酸球菌の加熱処理菌体とを併用して経口摂取することに
よる感染抑制効果の作用機序について、以下の方法によ
り調べた。
析 検疫・検収の終了後、1週間予備飼育を行ったBALB/cマ
ウス(雌、7週齢、日本チャールズリバー(株)より購
入)を2群(1群3匹)に分け、試験群にはアガリクス
・ブラゼイ・ムリルの子実体抽出エキス(乾燥子実体と
して0.2mg/匹)と乳酸球菌の加熱処理菌体(20
μg/匹)との混合物(0.2mL/匹)、コントロー
ル群にはPBS(0.2mL/匹)を、それぞれ胃ゾン
デで1日1回1週間連続経口投与した後、リステリア菌
(Listeria monocytogenes)を1.4×104CFU/
匹となるようにマウスの尾静脈内に注射した。なお、飼
育期間中、水及び飼料(商品名「粉末飼料CE−2」、
日本クレア製)は自由摂取とした。
を屠殺して腸管膜リンパ節を採取した。この腸管膜リン
パ節をすりガラスで挟んで、10%FBS含有RPMI
−1640培養液(商品名、Invitrogen製)に懸濁させ
て洗浄し、ステンレスメッシュにて余分な組織片を除去
して試験群及びコントロール群の腸管膜リンパ節細胞
(以下、MLNという)をそれぞれ調製した。
1640培養液中に5×105個/mLとなるように懸
濁して、6穴プレート(Corning Costar Co. 製)に1
ウエル当たり1mLずつまいた。そして、Stimulatorと
して、1ウエル当たりに、マイトマイシンC(協和醗酵
工業製)処理した、未処理BALB/cマウス由来の脾細胞
(5×105個)及びリステリア菌加熱死菌体(1.0
×106CFU)を加えて混合し、37℃、5%CO2存
在下で48時間培養した。なお、上記未処理マウスと
は、被験物質の投与及び菌接種を行なっていないマウス
を意味する。
体(抗体は全てBecton Dickinson PharMingen社より購
入)を用いて染色し、細胞表面抗原の解析を行なった。
抗TCRαβmAb/PE標識抗CD4mAb/biotin標識抗CD8mAb Cy標識抗CD3εmAb/FITC標識抗TCRαβmAb/PE標識抗CD
69mAb/biotin標識抗CD8mAb Cy標識抗CD3εmAb/FITC標識抗TCRαβmAb/PE標識抗CD
122mAb/biotin標識抗CD8mAb すなわち、1.0×105個に調製したMLN浮遊液
に、上記に示す標識抗体を5μL添加し、4℃で45
分間インキュベートした。その後、5%FBS含有Han
k's緩衝液で2回洗浄し、SA-RED613(商品名、Invitrog
en社製)を5μL添加し、4℃で45分間インキュベー
トして、5%FBS含有Hank's緩衝液で3回洗浄した。
そして、フローサイトメータ(型式「Epics XL」、Beck
man Coulter Inc.製)によりMLNの表面抗原を解析
し、CD4+CD8-細胞に対するCD4-CD8+細胞の割合を求め、
CD8陽性率を比較した。その結果を表2に示す。
ール群に比べて約2倍高く、アガリクス・ブラゼイ・ム
リルの子実体抽出エキスと乳酸球菌の加熱処理菌体とを
摂取することにより、CD8陽性率が高くなることが分か
る。
9(初期活性マーカー)及びCD122(IL−2受容体β
鎖)を指標に検討した。すなわち、上記、に示す標
識抗体を用いて、上記と同様の方法で細胞の表面抗原を
解析した。その結果を表3に示す。
はコントロール群に比べて高く、アガリクス・ブラゼイ
・ムリルの子実体抽出エキスと乳酸球菌の加熱処理菌体
とを摂取することにより、CD8陽性T細胞の活性化が促
進されることが示唆された。
を調製し、Stimulatorを加えて37℃、5%CO2存在
下で48時間培養した。
清中のサイトカイン量(IL−2、IL−10、IL−
12、IFN−γ)をELISA法で測定した。なお、
IL−2、IL−12、IFN−γの測定はEndogen In
c.より購入した測定キットを用い、IL−10の測定は
AN'ALYZA TECHNE Co.より購入した測定キットを用い
た。その結果を図3に示す。
サイトカインであるIFN−γ及びIL−12の産生量
が非常に高く、T helper 2(Th-2)型サイトカインであ
るIL−10の産生量は非常に低いことが分かる。
量をRT−PCR法により調べたところ、試験群におい
てTh-1型サイトカインであるIL−12、IFN−γ及
びTNF−αのmRNAの発現量が増強されていること
が分かった。一方、Th-2型サイトカインであるIL−1
0のmRNAの発現量に差異は認められなかった。
菌に感染した生体内ではマクロファージやNK細胞が活
性化され、それぞれIL−12及びIFN−γを産生す
ることが知られている。これらのサイトカインはさらに
細菌抗原特異的CD8陽性T細胞を活性化し、その結果と
して細胞障害活性(CTL)を有するCD8陽性T細胞に
よる菌排除が行なわれる。また、T細胞によって産生さ
れるTNF−αは、好中球やマクロファージ等の食細胞
を感染局所に集合させる作用を有する。
・ブラゼイ・ムリルの子実体エキスと乳酸球菌とを併用
して投与することにより、マクロファージやNK細胞の
活性化がより促進されてIL−12及びIFN−γ等の
産生量が増大した結果、リステリア菌特異的CD8陽性細
胞の活性化も促進され、コントロール群よりも菌排除が
早まったものと考えられる。
β−グルカンを含有する素材と、乳酸産生菌の加熱処理
菌体とを有効成分として含有させることにより、優れた
感染抑制効果を有する組成物を提供できる。また、本発
明の感染抑制組成物を飲食品に添加することにより、病
原菌等の感染を予防する飲食品を提供できる。
由来であるので安全性が高く、この感染抑制組成物を摂
取することにより、細胞性免疫を中心とした生体防御機
構の活性化が促進され、病原菌等の感染予防効果が期待
される。
図表である。
るリステリア菌数の測定結果を示す図表である。
のサイトカイン量(IL−2、IL−10、IL−1
2、IFN−γ)をELISA法で測定した結果を示す
図表である。
Claims (9)
- 【請求項1】 β−グルカンを含有する素材と、乳酸産
生菌の加熱処理菌体とを有効成分として含有することを
特徴とする感染抑制組成物。 - 【請求項2】 前記β−グルカンを含有する素材を0.
5〜99.5質量%、前記乳酸産生菌の加熱処理菌体を
99.5〜0.5質量%含有する、請求項1に記載の感
染抑制組成物。 - 【請求項3】 前記β−グルカンを含有する素材は、担
子菌の子実体、担子菌の菌糸体、酵母、細菌、藻類、地
衣類から選ばれた少なくとも1種より調製されたもので
ある、請求項1又は2に記載の感染抑制組成物。 - 【請求項4】 前記担子菌は、アガリクス・ブラゼイ・
ムリル(Agaricus blazei Murill)、メシマコブ、マイ
タケ、エノキタケ、ハナビラタケ、シイタケ、霊芝、ヤ
マブシタケ、アワビタケ、オオヒラタケ、カワラタケ、
白樺タケ、白キクラゲ、梅寄生茸、タモギタケ、マツタ
ケ、シメジ、エリンギ、ナメコタケ、フクロタケ、マン
ネンタケから選ばれたものである、請求項3に記載の感
染抑制組成物。 - 【請求項5】 前記乳酸産生菌は、乳酸菌及び/又はビ
フィズス菌である、請求項1〜4のいずれか一つに記載
の感染抑制組成物。 - 【請求項6】 前記乳酸菌は、乳酸球菌である、請求項
5に記載の感染抑制組成物。 - 【請求項7】 前記乳酸球菌は、エンテロコッカス・フ
ェカリス(Enterococcusfaecalis)である、請求項6に
記載の感染抑制組成物。 - 【請求項8】 請求項1〜7のいずれか一つに記載の感
染抑制組成物を含有することを特徴とする飲食品。 - 【請求項9】 前記感染抑制組成物を1食分当たり0.
01〜10g含有する、請求項8に記載の飲食品。
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