JP5982376B2 - 口腔内疾患の予防又は治療剤 - Google Patents
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Description
(1)揮発性硫黄化合物(VSC)産生能を有しない
(2)非水溶性グルカン産生能を有しない
(3)歯面及び/又は口腔内細胞への接着性を有する
(4)口臭原因菌及び/又は歯周病原性細菌に対する増殖阻害作用を有する
(5)感染性心内膜炎の起炎性を有しない
(6)う蝕性を有しない
また、本発明は、ラクトバチルス・クリスパータス(Lactobacillus crispatus)、ラクトバチルス・ファーメンタム(Lactobacillus fermentum)、ラクトバチルス・ガッセリ(Lactobacillus gasseri)及びストレプトコッカス・ミティス(Streptococcus mitis)から選ばれ、且つ下記(1)〜(6)の全ての性質を有する1種又は2種以上の乳酸菌を有効成分とする口臭の予防及び/又は改善剤を提供するものである。
(1)揮発性硫黄化合物(VSC)産生能を有しない
(2)非水溶性グルカン産生能を有しない
(3)歯面及び/又は口腔内細胞への接着性を有する
(4)口臭原因菌及び/又は歯周病原性細菌に対する増殖阻害作用を有する
(5)感染性心内膜炎の起炎性を有しない
(6)う蝕性を有しない
また、本発明は、ラクトバチルス・クリスパータス(Lactobacillus crispatus)YIT 12319と命名され、FERM BP−11500として寄託された乳酸菌、ラクトバチルス・ファーメンタム(Lactobacillus fermentum)YIT 12320と命名され、FERM BP−11501として寄託された乳酸菌、ラクトバチルス・ガッセリ(Lactobacillus gasseri)YIT 12321と命名され、FERM BP−11502として寄託された乳酸菌、又はストレプトコッカス・ミティス(Streptococcus mitis)YIT 12322と命名され、FERM BP−11503として寄託された乳酸菌を提供するものである。
また、本発明は、上記乳酸菌を含有する飲食品を提供するものである。
更に、本発明は、上記乳酸菌を含有する口腔用組成物を提供するものである。
(1)揮発性硫黄化合物(VSC)産生能を有しない
(2)非水溶性グルカン産生能を有しない
(3)歯面及び/又は口腔内細胞への接着性を有する
(4)口臭原因菌及び/又は歯周病原性細菌に対する増殖阻害作用を有する
(5)感染性心内膜炎の起炎性を有しない
(6)う蝕性を有しない
また本発明は、ラクトバチルス・クリスパータス(Lactobacillus crispatus)、ラクトバチルス・ファーメンタム(Lactobacillus fermentum)、ラクトバチルス・ガッセリ(Lactobacillus gasseri)及びストレプトコッカス・ミティス(Streptococcus mitis)から選ばれ、且つ下記(1)〜(6)の全ての性質を有する1種又は2種以上の乳酸菌の、口臭の予防及び/又は改善剤製造のための使用を提供するものである。
(1)揮発性硫黄化合物(VSC)産生能を有しない
(2)非水溶性グルカン産生能を有しない
(3)歯面及び/又は口腔内細胞への接着性を有する
(4)口臭原因菌及び/又は歯周病原性細菌に対する増殖阻害作用を有する
(5)感染性心内膜炎の起炎性を有しない
(6)う蝕性を有しない
また、本発明は、ラクトバチルス・クリスパータス(Lactobacillus crispatus)、ラクトバチルス・ファーメンタム(Lactobacillus fermentum)、ラクトバチルス・ガッセリ(Lactobacillus gasseri)及びストレプトコッカス・ミティス(Streptococcus mitis)から選ばれ、且つ下記(1)〜(6)の全ての性質を有する1種又は2種以上の乳酸菌の有効量を投与することを特徴とする口腔内疾患の予防及び/又は治療方法を提供するものである。
(1)揮発性硫黄化合物(VSC)産生能を有しない
(2)非水溶性グルカン産生能を有しない
(3)歯面及び/又は口腔内細胞への接着性を有する
(4)口臭原因菌及び/又は歯周病原性細菌に対する増殖阻害作用を有する
(5)感染性心内膜炎の起炎性を有しない
(6)う蝕性を有しない
また、本発明は、ラクトバチルス・クリスパータス(Lactobacillus crispatus)、ラクトバチルス・ファーメンタム(Lactobacillus fermentum)、ラクトバチルス・ガッセリ(Lactobacillus gasseri)及びストレプトコッカス・ミティス(Streptococcus mitis)から選ばれ、且つ下記(1)〜(6)の全ての性質を有する1種又は2種以上の乳酸菌の有効量を投与することを特徴とする口臭の予防及び/又は改善方法を提供するものである。
(1)揮発性硫黄化合物(VSC)産生能を有しない
(2)非水溶性グルカン産生能を有しない
(3)歯面及び/又は口腔内細胞への接着性を有する
(4)口臭原因菌及び/又は歯周病原性細菌に対する増殖阻害作用を有する
(5)感染性心内膜炎の起炎性を有しない
(6)う蝕性を有しない
また、本発明は、口腔内疾患の予防及び/又は治療のための、ラクトバチルス・クリスパータス(Lactobacillus crispatus)、ラクトバチルス・ファーメンタム(Lactobacillus fermentum)、ラクトバチルス・ガッセリ(Lactobacillus gasseri)及びストレプトコッカス・ミティス(Streptococcus mitis)から選ばれ、且つ下記(1)〜(6)の全ての性質を有する1種又は2種以上の乳酸菌を提供するものである。
(1)揮発性硫黄化合物(VSC)産生能を有しない
(2)非水溶性グルカン産生能を有しない
(3)歯面及び/又は口腔内細胞への接着性を有する
(4)口臭原因菌及び/又は歯周病原性細菌に対する増殖阻害作用を有する
(5)感染性心内膜炎の起炎性を有しない
(6)う蝕性を有しない
さらに本発明は、口臭の予防及び/又は改善のための、ラクトバチルス・クリスパータス(Lactobacillus crispatus)、ラクトバチルス・ファーメンタム(Lactobacillus fermentum)、ラクトバチルス・ガッセリ(Lactobacillus gasseri)及びストレプトコッカス・ミティス(Streptococcus mitis)から選ばれ、且つ下記(1)〜(6)の全ての性質を有する1種又は2種以上の乳酸菌を提供するものである。
(1)揮発性硫黄化合物(VSC)産生能を有しない
(2)非水溶性グルカン産生能を有しない
(3)歯面及び/又は口腔内細胞への接着性を有する
(4)口臭原因菌及び/又は歯周病原性細菌に対する増殖阻害作用を有する
(5)感染性心内膜炎の起炎性を有しない
(6)う蝕性を有しない
また、本発明は、配列番号4〜8から選ばれる塩基配列又は該塩基配列に相補的な配列からなるラクトバチルス・クリスパータス(Lactobacillus crispatus)YIT 12319(FERM BP−11500)に特異的なプライマー又はプローブを提供するものである。
また、本発明は、配列番号4及び8、配列番号5及び8、配列番号6及び8、配列番号7及び8から選ばれる塩基配列又は該塩基配列に相補的な配列からなるラクトバチルス・クリスパータス(Lactobacillus crispatus)YIT 12319(FERM BP−11500)に特異的なプライマーペアを提供するものである。
さらに、本発明は、前記プライマー、プライマーペア又はプローブを使用することを特徴とするラクトバチルス・クリスパータス(Lactobacillus crispatus)YIT 12319(FERM BP−11500)の検出方法を提供するものである。
具体的には、ラクトバチルス・クリスパータス(Lactobacillus crispatus)YIT 12319と命名され、独立行政法人製品評価技術基盤機構 特許生物寄託センター(住所:茨城県つくば市東1−1−1 中央第6)に2011年4月28日付で(以下、同じ)FERM BP−11500として寄託された乳酸菌、ラクトバチルス・ファーメンタム(Lactobacillus fermentum)YIT 12320と命名され、FERM BP−11501として寄託された乳酸菌、ラクトバチルス・ガッセリ(Lactobacillus gasseri)YIT 12321と命名され、FERM BP−11502として寄託された乳酸菌、ストレプトコッカス・ミティス(Streptococcus mitis)YIT 12322と命名され、FERM BP−11503として寄託された乳酸菌が挙げられる。当該乳酸菌には、これらを親株とする子孫株(自然変異株、変異処理による変異株、遺伝子操作による変異株等)も含まれる。
(1)揮発性硫黄化合物(VSC)産生能を有しない
(2)非水溶性グルカン産生能を有しない
(3)歯面及び/又は口腔内細胞への接着性を有する
(4)口臭原因菌及び/又は歯周病原性細菌に対する増殖阻害作用を有する
(5)感染性心内膜炎の起炎性を有しない
(6)う蝕性を有しない
また、ラクトバチルス・ガッセリ(Lactobacillus gasseri)YIT 12321(FERM BP−11502)は次の性質(7)を有することが確認された。
(7)スクロースを資化しない
また、本明細書において、(2)「非水溶性グルカン産生能を有しない」とは、後記実施例に示す試験(試験例3)で、非水溶性グルカン産生能が+/−(菌体が付着する)のものをいい、より好ましくは−(産生しない)のものをいう。当該性質(2)を有する乳酸菌は、う蝕の原因となる非水溶性グルカンを産生しない点で好ましい。
また、本明細書において、(3)「歯面への接着性を有する」とは、後記実施例に示す試験(試験例5)で、S-HAへの接着率が1.0%以上のものをいい、より好ましくは10%以上のものをいう。また、本明細書において、(3)「口腔内細胞への接着性を有する」とは、後記実施例に示す試験(試験例6)で、口腔内細胞への接着性がTotal 30cells/0.16mm2以上のものをいう。当該性質(3)において、歯面又は口腔内細胞への接着性を有する乳酸菌は、経口的に投与された場合等、短い滞留時間であっても口内により定着しやすい点で好ましく、同様の点から、歯面及び口腔内細胞への接着性を有する乳酸菌がより好ましい。
また、本明細書において、(4)「口臭原因菌及び/又は歯周病原性細菌に対する増殖阻害作用を有する」とは、後記実施例に示す試験(試験例7)で阻止円径(直径)の合計が9mm以上のものをいう。当該性質(4)を有する乳酸菌は、口臭及び/又は歯周病等に対する優れた予防・治療効果を奏する点で好ましい。
また、本明細書において、(5)「感染性心内膜炎の起炎性を有しない」とは、後記実施例に示す試験(試験例8)で、ラット心内膜炎起炎性が陰性のものをいう。当該性質(5)を有する乳酸菌は、安全性が極めて高く、飲食品、口腔用組成物等として好適に利用できる。
また、本明細書において、(6)「う蝕性を有しない」とは、後記実施例に示す試験(試験例9)で、人工口腔装置による試験後のウシエナメル質の硬度低下割合が5%未満であるものをいう。当該性質(6)を有する乳酸菌は、う蝕の原因となる非水溶性グルカンを産生せず、エナメル質を脱灰しない点で好ましい。
さらにまた、本明細書において、(7)「スクロースを資化しない」とは、後記実施例に示す試験(試験例9)で、スクロースを菌の増殖基質として利用できないものをいう。当該性質(7)を有する乳酸菌は、乳酸を発生しにくく、う蝕リスクを低減できる点で好ましい。
例えば、グルコース、フラクトース、ガラクトース、スクロース等の炭素源、リン酸一カリウム、リン酸二カリウム、硫酸マグネシウム、亜硫酸ソーダ、チオ硫酸ソーダ、リン酸アンモニウム等の無機塩類、ポリペプトン、酵母エキス、コーンスティープリカー等の有機栄養源の他、必要に応じて各種アミノ酸、ビタミン類が添加されてなる乳酸菌の増殖用として通常用いられる栄養培地の他、乳を含む乳培地を用いることができる。
また、培養温度は、通常、10〜50℃、好ましくは25〜37℃であり、培養期間は、通常6時間〜3日間、好ましくは8時間〜3日間である。
う蝕原性細菌としては、例えば、ストレプトコッカス・ミュータンス(Streptococcus mutans)、ストレプトコッカス・ソブリナス(Streptococcus sobrinus)、歯周病原性細菌としては、例えば、ポルフィロモナス・ジンジバリス(Porphyromonas gingivalis)、プレボテラ・インターメディア(Prevotella intermedia)、トレポネーマ・デンティコーラ(Treponema denticola)、タンネレラ・フォーサイシア(Tannerella forsythia)、アグリゲイティバクター・アクチノミセテムコミタンス(Aggregatibacter actinomycetemcomitans)、フソバクテリウム・ヌクレアタム(Fusobacterium nucleatum)等が挙げられ、口腔カンジダ症原因菌としては、例えば、カンジダ・アルビカンス(Candida albicans)等が挙げられる。
従って、本発明の乳酸菌は、口腔内細菌叢の健常化を図り、口腔内の病原性細菌によって引き起こされるう蝕症、歯肉炎、歯周炎等の歯周病、口腔カンジダ症、口臭等の様々な口腔内疾患又は不快症状の予防、改善又は治療のための医薬品、飲食品、ペットフード、口腔用組成物等として使用することができる。
発酵製品の製造は常法にしたがって製造することができる。例えば発酵乳は、殺菌した乳培地に乳酸菌を接種培養し、これを均質化処理して発酵乳ベースを得る。次いで別途調製したシロップ溶液を添加混合し、ホモゲナイザー等で均質化し、さらにフレーバーを添加して最終製品とすることができる。このようにして得られる発酵乳は、プレーンタイプ、ソフトタイプ、フルーツフレーバータイプ、固形状、液状等のいずれの形態の製品とすることもできる。
1)被験者と試料の採取
被験者56名(男性34名、女性22名、25〜66歳、平均年齢40.6歳)より歯垢(唾液を含む)と舌苔を別個に採取した。この口腔試料は採取後、使用するまで氷上に静置した。菌の分離に際しては、これらの試料を等量混合後、その300μLを2.7mLの滅菌嫌気輸送培地に添加し、10-1希釈液を作製した(好気・嫌気培養用3.0mL×各1本)。
ブルセラウサギ溶血平板培地(BRU平板培地、トリプトペン 10.0g、ペプタミン 10.0g、酵母エキス 2.0g、グルコース 1.0g、塩化ナトリウム 5.0g、酸性亜硫酸ナトリウム 0.1g、ヘミン 5.0mg、ビタミンK1 1.0mg、発育補助液 10.0mL、兎溶血液 60.0mL、寒天 15.0g、pH7.0)への口腔試料の塗布操作は、嫌気グローブボックス内で行った。ディスポーザブル試験管(FALCON2058)に滅菌嫌気希釈液を1.8mL分注し、10-1希釈液を200μL添加して10-2希釈液を作製した。以下同様にして10-10希釈液まで作製し、各希釈液100μLを平板培地に塗布した後、表1に示す条件で培養した。
一方、5.0%羊血液加TSA平板培地(TSA平板培地、カゼインペプトン 15.0g、ダイズペプトン 5.0g、塩化ナトリウム 5.0g、羊脱繊維血液 50.0mL、寒天 15.0g、DW 1000mL、pH7.3)、MRS平板培地(Proteose Peptone No.3 10.0g、Beef Extract 10.0g、Yeast Extract 5.0g、Dextrose 20.0g、Polysorbate 80 1.0g、Ammonium Citrate 2.0g、Sodium Acetate 5.0g、Magnesium Sulfate 0.1g、Manganese Sulfate 0.05g、Dipotassium Phosphate 2.0g、Agar 15g、DW 1000mL)、LBS平板培地(Pancreatic Digest of Casein 10.0g、Yeast Extract 5.0g、Monopotassium Phosphate 6.0g、Ammonium Citrate 2.0g、Dextrose 20.0g、Polysorbate 80 1.0g、Sodium Acetate Hydrate 25.0g、Magnesium Sulfate 0.575g、Manganese Sulfate 0.12g、Ferrous Sulfate 0.034g、Agar 15.0g、Lab−lemco powder(Oxoid) 8g,Sodium acetate,trihydorate 15g、DW 1000mL Acetate 3.7mL)、及びMitis−Salivarius平板培地(MS平板培地、Bacto Tryptose 10g、Bacto Proteose Peptone No.3 5g、Bacto Proteose Peptone 5g、Bacto Dextrose 1g、Bacto Saccharose 50g、Dipotassium Phosphate 4g、Trypan Blue 0.075g、Bacto Crystal Violet 0.0008g、Bacto Agar 15g DW 1000mL、pH7.0±0.2)については、スパイラルシステム(自動平板塗布装置)を用いて試料を塗布した後、表1に示す条件で培養した。
MRS、MS及びLBS平板培地について、希釈率の高い希釈液を塗布した平板培地から順に、形態の異なるコロニーから釣菌し、MRSあるいはBHI液体培地(子ウシ脳浸出物 12.5g、ウシ心筋浸出物 5.0g、プロテオースペプトン 10.0g、ブドウ糖 2.0g、塩化ナトリウム 5.0g、リン酸水素二ナトリウム 2.5g、DW 1000mL、pH7.4±0.2)で増殖させた後、2×BHI:グリセロール=1:1溶液に懸濁し、−80℃で保存し、以下の試験に供した。
試験例1で分離した凍結保存菌株を用いた。また、陽性対照株としてフソバクテリウム・ヌクレアタム(Fusobacterium nucleatum) YIT 6069を用いた。
上記分離菌株をMRS液体培地に接種し、37℃で24時間嫌気培養した。この菌体の培養液0.04mLを1% D−(+)−グルコース、66mM DL−メチオニン(終濃度500−1,500μM)を含む変法GAM液体培地(ペプトン 5.0g、ダイズペプトン 3.0g、プロテオーゼペプトン 5.0g、消化血清末 10.0g、酵母エキス末 2.5g、肉エキス末 2.2g、肝臓エキス末 1.2g、ブドウ糖 0.5g、溶性デンプン 5.0g、L−トリプトファン 0.2g、L−システイン塩酸塩 0.3g、チオグリコール酸ナトリウム 0.3g、L−アルギニン 1.0g、ビタミンK1 5mg、ヘミン 10mg、リン酸二水素カリウム 2.5g、塩化ナトリウム 3.0g、DW 1000mL、pH7.3)4mLに植え継ぎ、37℃で嫌気的に培養した。培養開始24時間後、培養液に6.0Nの塩酸溶液0.16mLを添加してpHを1以下に低下させ、菌体の物質代謝を停止させた。
その後、ヘッドスペースに揮発した揮発性硫黄化合物(VSC)をガスクロマトグラフ或いはオーラルクロマにより分析した。なお、37℃で24時間嫌気的にインキュベートした培地を陰性対照とした。
試験例1で分離した凍結保存菌株をBHI又はMRS液体培地に2白金耳接種し、37℃で24時間嫌気培養した。この菌体の培養液0.04mLを1%スクロースを含むHI(ウシ心筋浸出物 5.0g、プロテオースペプトン 10.0g、ブドウ糖 2.0g、塩化ナトリウム 5.0g、リン酸水素二ナトリウム 2.5g、DW 1000mL、pH7.4±0.2)、又はMRS+HIの混合(7:3)液体培地4mLに植え継ぎ、試験管を45度に傾けて37℃で嫌気的に培養した。
非水溶性グルカンの産生能は、試験管壁へ付着するグルカンの量及びその付着強度で評価した。培養24時間後に、試験管から培養液を除去し、PBS 4mLを加えておだやかに3回転させ、管壁を洗浄した。PBSを除いた後、試験管の壁面に付着している非水溶性グルカン量を表3の基準に従って、視覚的に判定した。
なお、陽性対照株であるフソバクテリウム・ヌクレアタム(Fusobacterium nucleatum) YIT 6069は、メチオニンの添加量に依存してVSCを産生した。
DNAをベンジル・クロライド法により抽出した。培養後の菌体を830×g、10分間遠心分離し、菌体を得た。この菌体に200μL DNA Extractionバッファー、400μL 塩化ベンジル、300mgのガラスビーズ(直径0.1mm)を加えた。FastPrepにより振盪した後(スピード6.5、30秒間)、遠心分離(20,000×g、5分間、4℃)して得られた上清に当量のイソプロパノールを添加し良く攪拌した。遠心分離(20,000×g、10分間、4℃)して上清を除去した後、150μLの70%エタノールを添加し、再度遠心分離し得られた沈殿を風乾し、適量のTE(Tris−EDTA)に溶解した。PCR反応液は全量25μL中に3.2μLの10×PCR buffer(1×PCR buffer=10mM Tris−HCl(pH8.3)、50mM KCl、1.5mM MgCl2)、2.5μLの2.5mM dNTP(deoxynucleotide triphosphate)、0.5μLの25pmol/μL primers(Forward primer 63F;配列番号1、Reverse primer 15R;配列番号2)、0.5unitsの DNA Taq polymerase(Takara Ex Taq hotstart)、1μLの10ng/mL template DNAとした。PCR反応は、94℃、20秒、(94℃、20秒、55℃、20秒、72℃、90秒)×30cycles、72℃3分とした。ダイターミネーター法により分離株の16S−rDNA塩基配列を決定した。シーケンス反応用のプライマーは520R(配列番号3)とし、DNA Data Bank of Japanに登録してある菌種の配列とのホモロジーを比較して、98%以上の類似性を有するものを同一種とした。使用したプライマーを表4に示す。真正細菌および古細菌の16S−rDNAには、その両端あるいは内部に10か所程度高度に保存された領域があり、63F、15R及び520Rなどのこれらの配列に基づいてデザインされたプライマーを用いることで、細菌の種類に関わらず遺伝子を増幅したり、配列を解析したりできる。
試験例2及び3の結果より選抜した241株のなかから、同定試験の結果、安全性に問題があると判断された菌株を除外し、以下の試験に使用した。
各分離菌株をMRS液体培地4mLに接種し、24時間培養した。培養後、遠心分離(1,912×g、10分間、4.0℃)し、PBSで2回洗浄した。550nmでの吸光度が1.0となるようにPBSで希釈した菌液をHAへの接着性試験に用いた。
本試験で使用する唾液は、下記のように採取した。蒸留水でうがい後、パラフィンガムを噛み、その刺激により分泌される唾液を遠心管に集めた。タンパク分解酵素を失活させるために、60°Cで30分間加熱した後、遠心分離(10,000×g、10分間、4.0℃)を行い、上清を得た。5名分の唾液を等量ずつ混合した後、フィルター滅菌(0.22μm)し、使用するまで4℃で保存した。
ハイドロキシアパタイトビーズ(Bio−Rad 40μm)5mgをPBSで洗浄した後、加熱調製した唾液を4mL添加し、37℃で30分間振盪した。振盪後、PBSで2回洗浄したビーズを唾液処理HA(S−HA)として使用した。また、唾液の代わりにPBSを添加して同条件で調製したビーズをPBS処理HA(P−HA)として使用した。
菌液2mLをS−HAおよびP−HAに添加し、37℃で1時間振盪させた。また、対照として菌液のみを同条件で振盪した。反応後10分間室温で静置し、上清1mLを新しいチューブに採取した。微細なHAを溶解させるために上清に0.1M EDTAを100μL添加し、攪拌後1時間室温で静置した。その後、550nmでの吸光度を測定し、下式(1)によりHAビーズに接着した菌の割合を接着率(%)として算出した。
試験例2及び3の結果より選抜した241株のなかから、同定試験の結果、安全性に問題があると判断された菌株を除外し、以下の試験に使用した。
HO−1−N−1細胞(JCRB0831:ヒト頬粘膜扁平上皮ガン由来細胞、以下「HO」と略す)及びHSC−3細胞(JCRB0623:ヒト舌扁平上皮ガン由来細胞、以下「HSC」と略す)を5.0%CO22、37℃で培養した。HO細胞には、10%牛胎児血清を含むDMEM培地(GIBCO社 11885)を、HSC培地には10%牛胎児血清を含むDMEM/F12培地(GIBCO社 11320)を用いた。
10%牛胎児血清を含む培地を用いて、細胞を1.0×105個/mLになるように懸濁した。この懸濁液を、Lab−Tek II チャンバースライド(Nalge Nunc)に、1ウェルあたり200μL加え、48〜96時間培養した。その後、スライドガラス表面に付着しなかった細胞をRPMI1640で洗浄・除去した。MRS液体培地で一晩培養後、生菌数をOD660=0.25に調整した分離株を、1ウェルあたり200μL添加した後、37℃で10分間インキュベートした。その後、細胞をRPMI1640で3回洗浄し、細胞に接着していない菌を除去した。スライド上の付着物をグラム染色した後、0.16mm2あたりに含まれる細胞上に接着した菌数を光学顕微鏡を用いて測定した。なお、測定は、任意に選んだ6視野について行った。
ラクトバチルス・クリスパータス(Lactobacillus crispatus)YIT 12319、ラクトバチルス・ファーメンタム(Lactobacillus fermentum)YIT 12320、ラクトバチルス・ガッセリ(Lactobacillus gasseri)YIT 12321及びストレプトコッカス・ミティス(Streptococcus mitis)YIT 12322には、いずれも単位面積あたり30個以上の強い接着性が認められた。
上記の試験例の結果より、表10及び11に示す菌株を選抜した。対象菌株として、口臭原因菌且つ歯周病原性細菌であるポルフィロモナス・ジンジバリス(Porphyromonas gingivalis) ATCC 33277、プレボテラ・インターメディア(Prevotella intermedia) ATCC 25611、アグリゲイティバクター・アクチノミセテムコミタンス(Aggregatibacter actinomycetemcomitans) Y4、う蝕原性細菌であるストレプトコッカス・ミュータンス(Streptococcus mutans)ATCC 25175、ストレプトコッカス・ソブリナス(Streptococcus sobrinus)ATCC 33478を用いた。
阻止円径(mm)=試験試料のクリアゾーンの直径(mm)−穴の直径(mm) (2)
ラクトバチルス・クリスパータス(Lactobacillus crispatus)YIT 12319、ラクトバチルス・ファーメンタム(Lactobacillus fermentum)YIT 12320、ラクトバチルス・ガッセリ(Lactobacillus gasseri)YIT 12321及びストレプトコッカス・ミティス(Streptococcus mitis)YIT 12322には、いずれも阻止円径(直径)の合計が9mm以上の強い増殖阻害効果が認められた。
上記試験例の結果より、表12及び13に示す菌株を選抜した。陽性対照として心内膜炎起炎菌であるラクトバチルス・ラムノサス(Lactobacillus rhamnosus) YIT 0227を使用した。
実験的心内膜炎(非細菌性心内膜炎)モデル動物の作出は以下のように行った。麻酔剤としてケタラール(塩酸ケタミン50mg/mL含有)とセラクタール(塩酸キシラジン20mg/mL含有)を18:5の割合で混合した後、2mL/kgの投与量で腹腔内に投与した。その後、麻酔下で頚部皮膚を切開して右頚動脈を露出させ、外径0.61mmのポリエチレンチューブ(夏目製作所、SP10)を用いた約20cmのカテーテルを右頚動脈から左心室に挿入・留置した。非細菌性血栓性心内膜炎動物を作出した翌日に、1mLディスポーザブルシリンジと注射針27Gを用いて菌液を0.5mL/ラットとなるように尾静脈内投与した。
投与菌液は、次のように調製した。先ず、MRS培地4mLに分離株10μLを植菌し、37℃で20時間培養した。この培養液100μLを新鮮なMRS培地10mLに植菌し、さらに37℃で20時間培養した。培養終了後、培養液を遠心分離(1,670×g、 10分間、4.0℃)して上清を除去した。培地と等量の生理食塩水を加え、ボルテックスにより十分に攪拌・洗浄した後、再度遠心分離(1,670×g、10分間、4.0℃)して上清を除去した。この洗浄操作を三度繰り返した後、規格菌数(4.0〜9.0×106CFU/mL)となるように生理食塩水を加えて希釈し、投与用の菌液とした。
被験菌株投与日から4日後に採血した末梢静脈血を生理食塩水で段階希釈し、原液0.5mLおよび10-2希釈液1.0mLを混釈法によりMRS平板培地にプレーティングした。37℃で3日間培養後、平板上に生育したコロニーを計数して、血液1mL中の生菌数を算出した。同様に疣贅を含む心臓のホモジネート液を生理食塩水で段階希釈し、原液、10-2、10-4、10-6希釈液1.0mLを混釈法によりMRS平板培地にプレーティングした。37℃で3日間培養後、平板上に生育したコロニーを計数して、生菌数を算出した。なお、2枚のプレートのどちらにもコロニーを検出しない場合に、どちらか1枚のプレートから1個のコロニーが認められたと仮定して、1を疣贅重量で除した数値を検出限界値とした。
また、ストレプトコッカス・ミティス(Streptococcus mitis)YIT 12322を投与したラットでは、血液からは投与菌が検出されず、疣贅からも1検体のみ菌が検出されるにとどまったことから陰性であると判定された。それ以外の菌株を投与したラットでは、全個体の疣贅から投与菌が検出され、検出菌数も高かった(6.2×104〜9.4×106CFU/heart)ことから、いずれの株も陽性と判定された。
ラクトバチルス・クリスパータス(Lactobacillus crispatus)YIT 12319、ラクトバチルス・ファーメンタム(Lactobacillus fermentum)YIT 12320、ラクトバチルス・ガッセリ(Lactobacillus gasseri)YIT 12321、ストレプトコッカス・ミティス(Streptococcus mitis)YIT 12322、ラクトバチルス・クリスパータス(Lactobacillus crispatus)LBS 17−11及びラクトバチルス・ガッセリ(Lactobacillus gasseri)LBS 46−52を使用した。また、陽性対照としてストレプトコッカス・ソブリナス(Streptococcus sobrinus)6715、ストレプトコッカス・ソブリナス(Streptococcus sobrinus)ATCC 33478を使用した。
この菌液によるウシエナメル質の硬度変化を人工口腔装置により測定した。具体的には、pHの経時変化を人工バイオフィルム下に設置したpHメーターにより測定した。また、ウシエナメル質の硬度変化を実験前と実験後における歯片のVickers硬度の変化から求めた。さらに、各ウシエナメル質切片を0.5N NaOH(2mL)に0℃で10分間浸漬し、人工バイオフィルムを遊離させた後に遠心分離し(4,830×g、20分間)、菌体と上清(非水溶性グルカン分画)に分画した。菌体をPBSに懸濁してOD540 nmの濁度を測定した値から歯片mm2当たりの菌体量を求めた。また、上清中の非水溶性グルカン量をPhenol硫酸法により測定した。
なお、ラクトバチルス・ガッセリ(Lactobacillus gasseri)YIT 12321については、菌体濃度と反応時間をそれぞれ2倍にした条件で人工口腔装置によるう蝕性を評価した。
一方、ラクトバチルス・クリスパータス(Lactobacillus crispatus)YIT 12319、ラクトバチルス・ファーメンタム(Lactobacillus fermentum)YIT 12320、ラクトバチルス・ガッセリ(Lactobacillus gasseri)YIT 12321及びストレプトコッカス・ミティス(Streptococcus mitis)YIT 12322の硬度の低下割合は、いずれの株も5%未満であった(図1、3)。また、いずれの菌株を作用させたエナメル質からも非水溶性グルカンは回収されなかった(図2、4)。
その結果、ラクトバチルス・ガッセリ(Lactobacillus gasseri)YIT 12321はスクロースを増殖基質として利用できないことが明らかとなった(図6)。ラクトバチルス・ガッセリ(Lactobacillus gasseri)の標準菌株(YIT 0192T)はスクロースを資化できることから、この性質は株特異的であると考えられた。
これら、YIT 12319、YIT 12320、YIT 12321及びYIT 12322は、新規な菌株であり、それぞれ独立行政法人製品評価技術基盤機構 特許生物寄託センター(住所:茨城県つくば市東1−1−1 中央第6)に、ラクトバチルス・クリスパータス(Lactobacillus crispatus)YIT 12319(FERM BP−11500)、ラクトバチルス・ファーメンタム(Lactobacillus fermentum)YIT 12320(FERM BP−11501)、ラクトバチルス・ガッセリ(Lactobacillus gasseri)YIT 12321(FERM BP−11502)及びストレプトコッカス・ミティス(Streptococcus mitis)YIT 12322(FERM BP−11503)として寄託された。
口腔内環境に対する本発明に係る乳酸菌ラクトバチルス・クリスパータス(Lactobacillus crispatus)YIT 12319摂取の効果を調べるため、口臭のある被験者17名を対象に1粒当たり3.3×108cfu以上の生菌を含む試験食品を1日1回3粒、4週間連続摂取させた。
歯周病原性細菌量(PCRインベーダー法)、う蝕原性細菌量(培養法)、乳酸菌量(培養法)
評価項目
1)歯肉炎指数(GI:Lee & Sillness、1963変法)
評価基準
0:臨床的に正常な歯肉
1:軽度の炎症、歯肉のわずかな色調変化があるもので、プローブによる歯肉辺縁内縁部の擦過により出血が認められない。
2:中等度の炎症、歯肉に発赤を伴う浮腫と光沢があり、歯肉辺縁内縁部の擦過により出血が認められる。
3:高度の炎症、著しい発赤、浮腫があり、自然出血、潰瘍形成がある。
診査部位
下記6歯の舌側、唇側・頬側、近心側、遠心側の合計24歯面とした。
下式を用い、診査部位の総点数より被験者ごとの平均歯肉炎スコアを算出した。
評価基準
0:出血が認められない
1:出血が認められる
診査部位
下記6歯の舌側、唇側・頬側、近心側、遠心側の合計24歯面とした。
下式を用い、診査部位の総点数より被験者ごとの平均プロービング時の出血スコアを算出した。
口臭に対する本発明に係る乳酸菌ラクトバチルス・クリスパータス(Lactobacillus crispatus)YIT 12319摂取の効果を調べるため、歯周病原性細菌の一つで口臭原因物質を産生するポルフィロモナス・ジンジバリス(Porphyromonas gingivalis)陽性被験者7名を対象に1粒当たり3.3×108cfu以上の生菌を含む試験食品を1日1回3粒、8週間連続摂取させたときの揮発性硫黄化合物(VSC)濃度をガスクロマトグラフィーで測定した。
ラクトバチルス・クリスパータス(Lactobacillus crispatus)YIT 12319と他のラクトバチルス・クリスパータス(Lactobacillus crispatus)17株のゲノムDNAをRAPD法により比較し、目的とする菌株(ラクトバチルス・クリスパータス(Lactobacillus crispatus)YIT 12319)に特異的なDNA配列を三部位見出した。そして、これらの塩基配列を解読して、表20に示すプライマーの候補群を選抜し、これらを適宜組み合わることにより、ラクトバチルス・クリスパータス(Lactobacillus crispatus)YIT 12319に特異的なプライマーペアを35種設計した。
ラクトバチルス・クリスパータス(Lactobacillus crispatus)YIT 12319および他のラクトバチルス・クリスパータス(Lactobacillus crispatus)20株のゲノムDNAに対し、設計した35種のプライマーペアを用いたPCR反応を行った。その結果、表21に示す4種のプライマーペアでは、PCRによるDNAの増幅産物がラクトバチルス・クリスパータス(Lactobacillus crispatus)YIT 12319のみ確認された(表21、図7)。
ここで、Lc(X)2aは配列番号4、Lc(X)2bは配列番号5、Lc(X)2cは配列番号6、Lc(X)2dは配列番号7、Lc(X)7aは配列番号8を示す。
表22に示すラクトバチルス・クリスパータス(Lactobacillus crispatus)YIT 12319およびラクトバチルス・クリスパータス(Lactobacillus crispatus)以外のLactobacillus属65菌株、Lactobacillus属に近縁な7菌株、口腔の優先菌22属71菌株(合計27属143菌株)のゲノムDNAに対し、表21に示す4種のプライマーペアを用いたPCR反応を行った。その結果、すべてのプライマーペアでラクトバチルス・クリスパータス(Lactobacillus crispatus)YIT 12319のみのDNA増幅産物が確認された。
試験例13の結果と合わせて、27属163菌株に対して反応せず、ラクトバチルス・クリスパータス(Lactobacillus crispatus)YIT 12319のみ反応する4種のプライマーペアが得られた。
表23に示す成分(1粒あたり)を混和して、その混合物を打錠した。
Claims (16)
- ラクトバチルス・クリスパータス(Lactobacillus crispatus)YIT 12319(FERM BP−11500)、ラクトバチルス・ファーメンタム(Lactobacillus fermentum)YIT 12320(FERM BP−11501)、ラクトバチルス・ガッセリ(Lactobacillus gasseri)YIT 12321(FERM BP−11502)及びストレプトコッカス・ミティス(Streptococcus mitis)YIT 12322(FERM BP−11503)から選ばれる1種又は2種以上の乳酸菌を有効成分とする口腔内疾患の予防及び/又は治療剤。
- 口腔内疾患が、歯周病である請求項1記載の口腔内疾患の予防及び/又は治療剤。
- ラクトバチルス・クリスパータス(Lactobacillus crispatus)YIT 12319(FERM BP−11500)、ラクトバチルス・ファーメンタム(Lactobacillus fermentum)YIT 12320(FERM BP−11501)、ラクトバチルス・ガッセリ(Lactobacillus gasseri)YIT 12321(FERM BP−11502)及びストレプトコッカス・ミティス(Streptococcus mitis)YIT 12322(FERM BP−11503)から選ばれる1種又は2種以上の乳酸菌を有効成分とする口臭の予防及び/又は改善剤。
- ラクトバチルス・クリスパータス(Lactobacillus crispatus)YIT 12319と命名され、FERM BP−11500として寄託された乳酸菌、ラクトバチルス・ファーメンタム(Lactobacillus fermentum)YIT 12320と命名され、FERM BP−11501として寄託された乳酸菌、ラクトバチルス・ガッセリ(Lactobacillus gasseri)YIT 12321と命名され、FERM BP−11502として寄託された乳酸菌、又はストレプトコッカス・ミティス(Streptococcus mitis)YIT 12322と命名され、FERM BP−11503として寄託された乳酸菌。
- 請求項4記載の乳酸菌を含有することを特徴とする飲食品。
- 発酵製品である請求項5記載の飲食品。
- 請求項4記載の乳酸菌を含有することを特徴とする口腔用組成物。
- ラクトバチルス・クリスパータス(Lactobacillus crispatus)YIT 12319(FERM BP−11500)、ラクトバチルス・ファーメンタム(Lactobacillus fermentum)YIT 12320(FERM BP−11501)、ラクトバチルス・ガッセリ(Lactobacillus gasseri)YIT 12321(FERM BP−11502)及びストレプトコッカス・ミティス(Streptococcus mitis)YIT 12322(FERM BP−11503)から選ばれる1種又は2種以上の乳酸菌の、口腔内疾患の予防及び/又は治療剤製造のための使用。
- 口腔内疾患が、歯周病である請求項8記載の使用。
- ラクトバチルス・クリスパータス(Lactobacillus crispatus)YIT 12319(FERM BP−11500)、ラクトバチルス・ファーメンタム(Lactobacillus fermentum)YIT 12320(FERM BP−11501)、ラクトバチルス・ガッセリ(Lactobacillus gasseri)YIT 12321(FERM BP−11502)及びストレプトコッカス・ミティス(Streptococcus mitis)YIT 12322(FERM BP−11503)から選ばれる1種又は2種以上の乳酸菌の、口臭の予防及び/又は改善剤製造のための使用。
- 口腔内疾患の予防及び/又は治療のための、ラクトバチルス・クリスパータス(Lactobacillus crispatus)YIT 12319(FERM BP−11500)、ラクトバチルス・ファーメンタム(Lactobacillus fermentum)YIT 12320(FERM BP−11501)、ラクトバチルス・ガッセリ(Lactobacillus gasseri)YIT 12321(FERM BP−11502)及びストレプトコッカス・ミティス(Streptococcus mitis)YIT 12322(FERM BP−11503)から選ばれる1種又は2種以上の乳酸菌。
- 口腔内疾患が、歯周病である請求項11記載の乳酸菌。
- 口臭の予防及び/又は改善のための、ラクトバチルス・クリスパータス(Lactobacillus crispatus)YIT 12319(FERM BP−11500)、ラクトバチルス・ファーメンタム(Lactobacillus fermentum)YIT 12320(FERM BP−11501)、ラクトバチルス・ガッセリ(Lactobacillus gasseri)YIT 12321(FERM BP−11502)及びストレプトコッカス・ミティス(Streptococcus mitis)YIT 12322(FERM BP−11503)から選ばれる1種又は2種以上の乳酸菌。
- 配列番号4〜8から選ばれる塩基配列又は該塩基配列に相補的な配列からなるラクトバチルス・クリスパータス(Lactobacillus crispatus)YIT 12319(FERM BP−11500)に特異的なプライマー又はプローブ。
- 配列番号4及び8、配列番号5及び8、配列番号6及び8、配列番号7及び8から選ばれる塩基配列又は該塩基配列に相補的な配列からなるラクトバチルス・クリスパータス(Lactobacillus crispatus)YIT 12319(FERM BP−11500)に特異的なプライマーペア。
- 請求項14又は15記載のプライマー、プライマーペア又はプローブを使用することを特徴とするラクトバチルス・クリスパータス(Lactobacillus crispatus)YIT 12319(FERM BP−11500)の検出方法。
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US10398733B2 (en) | 2013-03-15 | 2019-09-03 | Cda Research Group, Inc. | Topical copper ion treatments and methods of treatment using topical copper ion treatments in the dermatological areas of the body |
JP6285687B2 (ja) * | 2013-10-25 | 2018-02-28 | 雪印メグミルク株式会社 | 口腔内疾患予防剤 |
JPWO2016043103A1 (ja) | 2014-09-17 | 2017-07-06 | ライオン株式会社 | 非病原性口腔内常在菌の生育促進剤又は口腔内の菌叢改善剤並びに口腔用組成物 |
CN104546947B (zh) * | 2014-09-30 | 2019-01-08 | 深圳华大基因科技有限公司 | 卷曲乳杆菌在治疗或预防类风湿性关节炎中的应用 |
JP6658265B2 (ja) * | 2016-04-26 | 2020-03-04 | ライオン株式会社 | インビトロバイオフィルムモデルの製造方法、ならびに評価方法及び口腔用組成物を選定する方法 |
EP3483266A4 (en) * | 2016-07-11 | 2019-11-13 | Mitsubishi Chemical Corporation | METHOD FOR EXAMINING THE INTERIOR OF THE ORAL CAVITY |
CN106834414A (zh) * | 2017-03-03 | 2017-06-13 | 广州薇美姿实业有限公司 | 一种口腔中硫化氢产生菌的定量检测方法和应用 |
CA3101173A1 (en) * | 2018-05-23 | 2019-11-28 | Ko Biolabs, Inc. | Lactobacillus crispatus kbl693 strain and use thereof |
JP7160652B2 (ja) * | 2018-11-29 | 2022-10-25 | 雪印メグミルク株式会社 | 歯周病予防用組成物 |
US11193184B2 (en) | 2019-02-22 | 2021-12-07 | Cda Research Group, Inc. | System for use in producing a metal ion suspension and process of using same |
EP3941578A4 (en) * | 2019-03-18 | 2023-01-25 | Trustees Of Tufts College | THE INVENTION RELATES TO COMPOSITIONS AND METHODS OF TREATING PERIODONTAL DISEASE |
CN110122576B (zh) * | 2019-05-23 | 2022-08-12 | 光明乳业股份有限公司 | 一种由发酵乳杆菌制备发酵豆浆的方法及制备出的发酵豆浆与应用 |
CN110100899B (zh) * | 2019-05-23 | 2022-08-12 | 光明乳业股份有限公司 | 一种由发酵乳杆菌制备发酵豆乳粉的方法及制备出的发酵豆乳粉与应用 |
CN110699468B (zh) * | 2019-10-29 | 2023-05-02 | 圣湘生物科技股份有限公司 | 检测人肠道细菌的组合物、试剂盒及方法 |
KR102167387B1 (ko) * | 2020-05-14 | 2020-10-19 | 코스맥스 주식회사 | 피부 장벽 강화, 피부 보습 또는 항노화를 위한 조성물 |
KR102198552B1 (ko) * | 2020-06-09 | 2021-01-05 | 주식회사 비피도 | 인체 구강유래 락토바실러스 퍼멘텀 ok 균주를 포함하는 구취 또는 충치 개선, 예방 또는 치료용 조성물 |
KR102198553B1 (ko) * | 2020-06-09 | 2021-01-05 | 주식회사 비피도 | 인체 구강유래 락토바실러스 가세리 HHuMIN D를 포함하는 구취 또는 충치 개선, 예방 또는 치료용 조성물 |
KR102191527B1 (ko) * | 2020-06-24 | 2020-12-16 | 재단법인 전남바이오산업진흥원 | 홍어콜라겐 펩타이드를 이용한 근손실 예방, 개선 또는 치료용 조성물 |
KR102360233B1 (ko) * | 2021-03-26 | 2022-02-09 | (주)바이오일레븐 | 구강질환 예방 또는 개선 효과를 가지는 락토바실러스 퍼멘텀 균주 및 이의 용도 |
CN115606805A (zh) * | 2022-09-29 | 2023-01-17 | 广州能靓生物技术有限公司 | 一种后生元组合物及其在口腔健康中的应用 |
Family Cites Families (5)
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KR19990024297A (ko) | 1997-08-07 | 1999-04-06 | 오종석 | 인체 구강내 치태형성을 억제하는 신규한 유산균 |
KR100266752B1 (ko) | 1997-08-07 | 2001-03-02 | 오종석 | 인체 구강내 치태형성을 억제하는 신규한 유산균 |
IT1306716B1 (it) | 1999-06-21 | 2001-10-02 | Mendes S U R L | Associazione di batteri lattici e suo uso per la prevenzione e/o iltrattamento terapeutico di infezioni e di stati infiammatori. |
WO2003082027A1 (fr) | 2002-03-29 | 2003-10-09 | Frente International Co., Ltd. | Preparations cellulaires vitales et aliments contenant une bacterie lactique comme principe actif |
KR101432336B1 (ko) * | 2006-12-19 | 2014-08-20 | 바스프 에스이 | 뮤탄스 연쇄상구균에 의해 유발된 우식증의 예방 및/또는 치료를 위한 용도 및 방법 |
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