KR100649855B1

KR100649855B1 - β-글루칸 함유 조성물 및 상기 조성물을 이용한 변비개선제, 면역 부활제 및 피부용 보습제

Info

Publication number: KR100649855B1
Application number: KR1020057004241A
Authority: KR
Inventors: 나오유키 모리야; 유키코 모리야; 겐지 스즈키
Original assignee: 가부시키가이샤 아우레오
Priority date: 2003-03-07
Filing date: 2004-03-04
Publication date: 2006-11-28
Also published as: CN1700926A; EP1602377A1; HK1083590A1; TWI282279B; EP1602377B1; WO2004078188A1; US20050272694A1; TW200509947A; CN100341521C; KR20050115854A; EP1602377A4; ATE519490T1

Abstract

본 발명은 아우레오바시디움속(Aureobacidium sp.)에 속하는 균의 배양물에 포함되는 β-1,3-1,6-글루칸의 생리활성 효과를 더욱 높인 β-글루칸 함유 조성물 및 상기 조성물을 이용한 변비 개선제, 면역 부활제 및 피부용 보습제를 제공한다. 아우레오바시디움속(Aureobasidium sp.)에 속하는 균을 배양하여 얻어지는 β-1,3-1,6-글루칸을 포함하는 배양물과, 유산균 균체를 함유하는 β-글루칸 함유 조성물을 얻는다. 이 β-글루칸 함유 조성물을 변비 개선제, 면역 부활제 또는 피부용 보습제의 유효성분으로서 함유시킨다. 상기 아우레오바시디움속(Aureobasidium sp.)에 속하는 균은, 아우레오바시디움 플루란스 M-1(Aureobasidium pullulans M-1)(FERM BP-08615)인 것이 바람직하다. 또한, 상기 유산균은 엔테로코커스 패칼리스(Enterococcus faecalis)인 것이 바람직하고, 상기 유산균은 가열살균된 것인 것이 바람직하다. 더욱이, 고형분 중에 상기 배양물을 β-1,3-1,6-글루칸 환산으로 1~80 질량% 함유하고, 또한 상기 유산균 균체를 4~95 질량% 함유하는 것이 바람직하다.

아우레오바시디움, 유산균, 변비 개선제, 면역 부활제, 피부용 보습제

Description

β-글루칸 함유 조성물 및 상기 조성물을 이용한 변비 개선제, 면역 부활제 및 피부용 보습제{Composition containing β-glucan and constipation-relieving drug, immunopotentiator and skin moistening agent using the composition}

본 발명은 β-1,3-1,6-글루칸을 포함하는 아우레오바시디움속에 속하는 균의 배양물과 유산균의 균체를 유효성분으로서 함유하는 β-글루칸 함유 조성물에 관한 것으로, 더 나아가서는 상기 조성물을 이용한 변비 개선제, 면역 부활제 및 피부용 보습제에 관한 것이다.

아우레오바시디움속(Aureobasidium sp.)에 속하는 균(통칭, 흑효모)이 생산되는 β-1,3-1,6-글루칸은, 면역증강작용, 항종양활성, 암세포증식 억제작용, 항알레르기작용, 항염증작용, 콜레스테롤 저하작용, 항혈전작용, 식물섬유작용, 혈압 강하작용, 혈당 강하작용, 간기능항진 등의 여러 생리활성을 가지고 있는 것이 알려져 있다. 그 때문에, β-1,3-1,6-글루칸을 기능성 소재나 의약품 등으로서 이용하는 시도가 많이 이루어지고 있다.

예를 들면, 일본국 특허공개 제(소)57-149301호 공보에는, 불완전균 흑색균(黑色菌)과 아우레오바시디움(Aureobacidium)속의 균(미생물공업기술연구소 기탁 No.4257호)이 생산하는 다당(多糖)을 주성분으로 하는 정장제(整腸劑) 및 기타 의 약이 개시되어 있다.

일본국 특허공고 제(평)5-4063호 공보에는, 프락토올리고당과 β-1,3-1,6-글루칸을 주성분으로 하는 음식품의 제조방법이 개시되어 있고, 이 음식품은 건강유지음료(장내 비피더스균의 증식, 변비 방지, 면역 증강), 정장제 등으로 이용할 수 있는 내용이 기재되어 있다.

일본국 특허공개 제2002-335926호 공보에는, β-1,3-1,6-글루칸 및 사과 추출물을 함유하는 조성물이 개시되어 있고, 이 조성물이 음료나 피부 도포제로서 유용하다는 내용, 상기 음료에는 각종 알레르기증상의 저감효과, 면역이상 질환의 개선효과, 암억제효과, 혈관장해 질환의 개선효과, 바이러스성 질환의 개선효과, 비뇨기계 질환의 개선효과, 변비, 설사 등의 소화기계 질환의 개선효과를 기대할 수 있다는 내용이 기재되어 있다.

일본국 특허공개 제(평)6-340701호 공보에는, 아우레오바시디움 플루란스(Aureobasidium pullulans) IF04466 균주의 배양상청으로부터 얻어지는, β-1,3 결합 글루코오스 잔기를 주쇄(主鎖)로 하고, 여기에 β-1,6 결합 글루코오스 잔기의 분지쇄를 다수 측쇄(側鎖)로서 갖는 수평균 분자량 1만~500만의 고분지도(高分岐度) β-글루칸이, 경구적으로 높은 항종양활성 및 면역 부활활성을 가져, 의약, 식품첨가물, 사료첨가물 등으로서 유용하다는 내용이 기재되어 있다.

일본국 특허공개 제2002-204687호 공보에는, β-1,3-1,6-글루칸을 주성분으로 하는 아우레오바시디움 배양액을 각종 질병에 대한 의약품으로서 응용할 수 있는 내용이 기재되어 있다.

일본국 특허공개 제(소)62-205008호 공보에는, 결합양식 β-1,3-1,6-글루칸을 함유하는 화장품 등의 첨가제가 개시되어 있다. 그리고, β-1,3-1,6-글루칸을 수용액으로 하여, 그대로 피부나 모발에 도포하면, 종래의 화장료, 정발료(整髮料), 연고 첨가재에 비해 피부나 모발면의 피막 형성성, 보습성이 우수한 것이 기재되어 있다.

일본국 특허공개 제(평)10-310515호 공보에는, 미생물에 의해 생산되는 적어도 1종류의 세포외 호모 다당, 또는 상기 세포외 호모 다당과 적어도 1종류의 아미노산을 포함하는 것을 특징으로 하는 입욕제(入浴劑)가 개시되어 있다. 그리고, 상기 세포외 호모 다당의 구성당이 β-D-글루코오스인 것, 상기 β-D-글루코오스가 아우레오바시디움속에 속하는 미생물에 의해 생산되는 β-1,3-1,6-글루칸인 것이 기재되어 있다.

한편, 유산균을 이용한 면역 부활제로서, 예를 들면 일본국 특허공개 제2001-48796호 공보에는, 엔테로코커스 패칼리스 AD101(Enterococcus faecalis AD101) 균주의 사균체(死菌體)를 주성분으로 하는 면역 조정제가 개시되어 있다.

또한, 일본국 특허공개 제2003-113114호 공보에는, 엔테로코커스속에 속하는 유산균 및 누룩곰팡이균을 액체배양에 의해 배양한 균체를 유효성분으로 하는 것을 특징으로 하는 면역 부활소재가 개시되어 있다.

더욱이, β-글루칸과 유산균을 병용한 것으로서, 예를 들면, 일본국 특허공개 제2003-40785호 공보에는, β-글루칸을 함유하는 소재와, 락트산 생산균의 가열처리 균체를 유효성분으로서 함유하는 것을 특징으로 하는 감염억제 조성물이 개시 되어 있다.

또한, 일본국 특허공개 제2001-323001호 공보에는, 체내에 있어서의 TNF를 비롯한 사이토카인의 생산을 촉진하고, 그 작용을 증강시켜, 항체생산능 또는 면역작용 전체를 증강시킴으로써 각종 감염증이나 종양발생의 예방에 도움이 되는, 저분자량의 수용성 β-글루칸이 개시되어 있고, 이 β-글루칸과 유산균을 병용하는 것이 기재되어 있다.

그러나, 아우레오바시디움속(Aureobasidium sp.)에 속하는 균(통칭, 흑효모)이 생산하는 β-1,3-1,6-글루칸 단독으로는, 상기 각종 생리활성 효과가 아직 충분하다고는 할 수 없어, 더욱 효과가 높은 소재가 요구되고 있었다.

발며의 개시

본 발명의 목적은 아우레오바시디움속(Aureobacidium sp.)에 속하는 균의 배양물에 포함되는 β-1,3-1,6-글루칸의 생리활성 효과를 더욱 높인 β-글루칸 함유 조성물 및 상기 조성물을 이용한 변비 개선제, 면역 부활제 및 피부용 보습제를 제공하는 것에 있다.

상기 목적을 달성하기 위해, 본 발명의 하나는, 아우레오바시디움속(Aureobasidium sp.)에 속하는 균을 배양하여 얻어지는 β-1,3-1,6-글루칸을 포함하는 배양물과, 유산균 균체를 유효성분으로서 함유하는 것을 특징으로 하는 β-글루칸 함유 조성물이다.

본 발명의 β-글루칸 함유 조성물은 아우레오바시디움속(Aureobasidium sp.)에 속하는 균을 배양하여 얻어지는 β-1,3-1,6-글루칸을 포함하는 배양물을 유효성분으로서 함유하기 때문에, β-1,3-1,6-글루칸 뿐 아니라, 배양물에 포함되는 여러 유용성분을 손상시키지 않고 이용할 수 있다. 또한, 유산균 균체를 유효성분으로서 함유하기 때문에, 상기 배양물에 포함되는 유용성분과 유산균 균체와의 상승(相乘)효과에 의해, 여러 생리활성 효과를 기대할 수 있다. 또한, 상기 각 성분은 음식품 등에 이용되고 있는 천연물 유래의 성분이기 때문에 안전성도 높다.

상기 발명에 있어서는 상기 아우레오바시디움속(Aureobasidium sp.)에 속하는 균은, 아우레오바시디움 플루란스 M-1(Aureobasidium pullulans M-1)(FERM BP-08615)인 것이 바람직하다. 이 태양에 의하면, 보다 생리활성이 높은 β-1,3-1,6-글루칸을 간단히 조제할 수 있다.

또한, 고형분 중에 상기 배양물을 β-1,3-1,6-글루칸 환산으로 1~80 질량%를 함유하고, 또한 상기 유산균 균체를 4~95 질량% 함유하는 것이 바람직하다.

더욱이, 상기 유산균은 엔테로코커스 패칼리스(Enterococcus faecalis)인 것이 바람직하다.

이들 태양에 의하면, β-1,3-1,6-글루칸과 유산균 균체에 의한 상승적인 생리활성 효과를 보다 기대할 수 있다.

더욱이 또한, 상기 유산균은 가열살균된 것이 바람직하다. 이 태양에 의하면, 가열처리가 필요한 상품에도 폭넓게 첨가할 수 있다. 또한, 보존안정성이 높아, 음식품이나 의약품 등의 원료로서 사용하는 경우의 안전성도 매우 높다.

본 발명의 다른 하나는, 상기 β-글루칸 함유 조성물을 유효성분으로서 함유하는 변비 개선제이다.

본 발명의 변비 개선제는 상기 β-글루칸 함유 조성물을 유효성분으로서 포함하기 때문에, 아우레오바시디움속(Aureobasidium sp.)에 속하는 균을 배양하여 얻어지는 β-1,3-1,6-글루칸을 포함하는 배양물에 포함되는 여러 유용성분과 유산균 균체와의 상승효과에 의해, 우수한 변비 개선효과를 기대할 수 있다.

본 발명의 다른 하나는, 상기 β-글루칸 함유 조성물을 유효성분으로서 함유하는 면역 부활제이다.

본 발명의 면역 부활제는 상기 β-글루칸 함유 조성물을 유효성분으로서 포함하기 때문에, 아우레오바시디움속(Aureobasidium sp.)에 속하는 균을 배양하여 얻어지는 β-1,3-1,6-글루칸을 포함하는 배양물에 포함되는 여러 유용성분과 유산균 균체와의 상승효과에 의해, 우수한 면역 부활효과를 기대할 수 있다.

본 발명의 다른 하나는, 상기 β-글루칸 함유 조성물을 유효성분으로서 함유하는 피부용 보습제이다.

본 발명의 피부용 보습제는 상기 β-글루칸 함유 조성물을 유효성분으로서 포함하기 때문에, 아우레오바시디움속(Aureobasidium sp.)에 속하는 균을 배양하여 얻어지는 β-1,3-1,6-글루칸을 포함하는 배양물에 포함되는 여러 유용성분과 유산균 균체와의 상승효과에 의해, 보습효과의 지속성과 사용감이 우수한 피부용 보습제를 제공할 수 있다.

도면의 간단한 설명

도 1은 리스테리아균 섭취 후의 생존율과 경과일수와의 관계를 나타내는 도면이다.

도 2는 리스테리아균 섭취 후의 생존율에 미치는 실험대상 물질의 영향을 나타내는 도면이다.

도 3은 리스테리아균 섭취 후의 평균 생존일수와 실험대상 물질과의 관계를 나타내는 도면이다.

도 4는 리스테리아균 섭취 후의 비장 내 균수의 경시적 변화에 미치는 실험대상 물질의 영향을 나타내는 도면이다.

도 5는 리스테리아균 섭취 후, 플로우 사이토미터(flow cytometer)를 사용하여 세포 표면분자의 해석을 행한 결과를 나타내는 도면(사진)이다.

도 6은 실험대상자 1(20대 여성)에 있어서의 표피 각질층 수분량(피표(皮表) 컨덕턴스(conductance) μS)의 경시적 변화를 측정한 결과를 나타내는 도면이다.

도 7은 실험대상자 2(20대 여성)에 있어서의 표피 각질층 수분량(피표 컨덕턴스 μS)의 경시적 변화를 측정한 결과를 나타내는 도면이다.

도 8은 실험대상자 3(30대 여성)에 있어서의 표피 각질층 수분량(피표 컨덕턴스 μS)의 경시적 변화를 측정한 결과를 나타내는 도면이다.

도 9는 실험대상자 4(40대 여성)에 있어서의 표피 각질층 수분량(피표 컨덕턴스 μS)의 경시적 변화를 측정한 결과를 나타내는 도면이다.

도 10은 실험대상자 5(50대 여성)에 있어서의 표피 각질층 수분량(피표 컨덕턴스 표피)의 경시적 변화를 측정한 결과를 나타내는 도면이다.

발명을 실시하기 위한 최선의 형태

본 발명에 있어서, 아우레오바시디움속(Aureobasidium sp.)에 속하는 균을 배양하여 얻어지는 배양물(이하, 간단히 배양물이라고 한다.)로서는, 아우레오바시디움속(Aureobasidium sp.)에 속하고, β-1,3-1,6-글루칸 생산능을 갖는 균을 배양한 배양액 그 자체, 상기 배양액의 농축액, 또는 상기 배양액으로부터 수분을 제거한 고형물 등을 사용할 수 있지만, 바람직하게는 배양액 그 자체 또는 상기 배양액의 농축액이 사용되고, 그 경우, 고형분농도가 0.5~5 질량%인 것이 바람직하고, 1~3 질량%인 것이 보다 바람직하다.

상기 아우레오바시디움속(Aureobasidium sp.)에 속하는 균으로서는, 예를 들면 일본국 특허공개 제(소)57-149301호 공보, 일본국 특허공고 제(평)5-4063호 공보, 일본국 특허공개 제2002-335926호 공보 등에 기재된 균주를 사용할 수 있지만, 본 발명에 있어서는, 아우레오바시디움 플루란스 M-1(Aureobasidium pullulans M-1, 독립행정법인 산업기술종합연구소 특허생물기탁센터 기탁번호 FERM BP-08615)이 적합하게 사용된다. 또한, 본 발명에 있어서, β-1,3-1,6-글루칸이란, 글루코오스가 β-1,3 결합한 주쇄로부터 β-1,6 결합으로 글루코오스가 분지된 구조를 갖는 것을 의미한다.

상기 아우레오바시디움속(Aureobasidium sp.)에 속하는 균의 배양은, 공지의 방법(일본국 특허공개 제(소)57-149301호 공보 등 참조)에 준하여 행할 수 있다. 즉, 탄소원(수크로오스) 0.5~5.0 질량%, 질소원 0.1 질량%, 기타 미량물질(예를 들면, 비타민류, 무기질)을 가한 배지(pH 5.2~6.0)에 균을 접종하고, 온도 20~30℃에서 2~7일간 통기(通氣) 배양, 바람직하게는 통기 교반 배양하면 된다. β-1,3-1,6-글루칸이 생성됨에 따라 배양액의 점도가 상승하여, 점성이 높은 겔상이 된다. 이와 같이 하여 얻어지는 배양액에는, 통상, 0.6~1.8 질량%의 고형분이 포함되어 있고, 상기 고형분 중에는 β-1,3-1,6-글루칸이 5~80 질량% 포함되어 있다. 또한, β-1,3-1,6-글루칸 이외에도, 예를 들면, 상기 글루칸의 흡수를 돕는 성분인 인, 칼륨, 마그네슘, 비타민 C 등의 다른 유용 성분도 포함되어 있기 때문에, β-1,3-1,6-글루칸이 갖는 생리활성 효과를 효율 좋게 발휘할 수 있다.

본 발명에 있어서는, 고형분 중에 β-1,3-1,6-글루칸을 1 질량% 이상, 바람직하게는 5 질량% 이상, 보다 바람직하게는 10 질량% 이상, 특히 바람직하게는 20 질량% 이상 포함하는 배양물이 사용된다. 배양물 중의 β-1,3-1,6-글루칸 농도가 지나치게 낮으면, 상기 글루칸의 생리활성 효과를 충분히 기대할 수 없다.

또한, β-1,3-1,6-글루칸의 정량(定量)은, 예를 들면 다음과 같은 방법으로 행할 수 있다. 즉, 배양액에 아밀라아제, 아밀로글루코시다아제, 프로테아제 등을 사용하여 효소처리를 행하고, 단백질이나 플루란 등의 α-글루칸을 제거하고, 에탄올 침전을 행한다. 더욱이, 유리필터로 여과하여, 고분자 시료를 얻는다. 이때, 단당(單糖)을 포함하는 저분자물질을 제거하기 위해, 80% 에탄올로 충분히 세정한다. 세정한 고분자 시료는 아세톤으로 추가로 세정하고, 황산을 가하여 가수분해를 행한다. 가수분해 후, 중화(中和)하고, 그 여액(濾液)을 채취하여 글루코오스 옥시다아제법에 의해 포도당을 정량하고, 하기 수학식 1을 토대로 계산한 값을 글루칸량으로 한다.

수학식 1: β-글루칸(g/100 g)=포도당(g/100 g)×0.9

또한, β-1,3-1,6-글루칸의 정량은, 일본국 특허공고 제(평)3-48201호 공보에 기재된 방법에 준하여 행하는 것도 가능하다. 즉, 배양종료 후, 배양액을 살균하고 원심분리하여 균체를 제거하고, 얻어진 용액에 클로로포름/부탄올 혼합액을 10%(v/v) 가하여 진탕(Sevage법)한 후, 원심처리하여 클로로포름과 불용물을 제거한다. 이 조작을 2회 반복한 후, 에탄올 침전에 의해 침전물을 회수하여 증류수에 용해하고, 효소처리에 의해 플루란을 분해하고 증류수 중에서 투석을 행하여 투석액을 에탄올 침전하고, 침전물(β-1,3-1,6-글루칸)을 회수하여 수량(收量)을 구하면 된다.

본 발명에 있어서는, 상기와 같이 하여 얻어지는 배양액을 그대로 가열 또는 가압 가열살균해서 사용해도 되고, 원심분리 등에 의해 균체를 분리 제거한 후 살균해서 사용해도 된다. 또한, 필요에 따라 농축한 것, 더 나아가서는 건조한 것을 사용하는 것도 가능하다. 또한, 아우레오바시디움(Aureobasidium sp.)에 속하는 균의 배양물은, 증점(增粘)안정제 등의 식품첨가물로서 사용되고 있어, 안전성은 높다.

한편, 본 발명에서 사용되는 유산균으로서는, 식품에 사용 가능한 유산균이라면 특별히 제한 없이 사용할 수 있고, 구체적으로는, 엔테로코커스 패칼리스(Enterococcus faecalis), 엔테로코커스 패시움(Enterococcus faecium), 락토바실러스 아시도필러스(Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 카제이 (Lactobacillus casei), 스트렙토코커스 크레모리스(Streptococcus cremoris), 스트렙토코커스 락티스(Streptococcus lactis), 스트렙토코커스 서모필러스(Streptococcus thermophilus), 비피도박테리움 론검(Bifidobacterium longum), 비피도박테리움 브레베(Bifidobacterium breve), 비피도박테리움 비피덤(Bifidobacterium bifidum) 등을 예시할 수 있다. 상기 유산균은 단독으로 사용해도 되고, 2종류 이상을 병용해도 된다.

또한, 엔테로코커스 패칼리스(Enterococcus faecalis), 엔테로코커스 패시움(Enterococcus faecium)은 유산균제제 등에 사용되고 있는 유산균이고, 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei), 락토바실러스 아시도필러스(Lactobacillus acidophilus)는 치즈, 발효유, 요구르트, 유산균음료 등에 사용되고 있는 유산균이며, 스트렙토코커스 크레모리스(Streptococcus cremoris), 스트렙토코커스 락티스(Streptococcus lactis), 스트렙토코커스 서모필러스(Streptococcus thermophilus)는 치즈, 요구르트 등에 사용되고 있는 유산균이고, 비피도박테리움 론검(Bifidobacterium longum), 비피도박테리움 브레베(Bifidobacterium breve), 비피도박테리움 비피덤(Bifidobacterium bifidum)은 발효유 등에 사용되고 있는 유산균이다. 따라서, 이들 유산균은 모두 당업자가 용이하게 입수할 수 있는 것이다.

본 발명에 있어서는, 상기 유산균 중에서도 엔테로코커스 패칼리스(Enterococcus faecalis, 예를 들면, ATCC 19433, ATCC 14508, ATCC 123655, IFO 16803 등)가 특히 바람직하게 사용된다. 상기 배양물과 엔테로코커스 패칼리스(Enterococcus faecalis)를 병용함으로써, 이들 성분에 의한 상승적인 생리활성 효 과(예를 들면, 변비 개선효과, 면역 부활효과, 보습효과 등)를 보다 기대할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 유산균은 가열살균된 것인 것이 바람직하다. 이것에 의해, 가열처리가 필요한 상품에도 폭넓게 첨가할 수 있다. 또한, 보존안정성이 높아, 음식품이나 의약품 등의 원료로서 사용하는 경우의 안전성도 매우 높아지고, 특히, 피부용 보습제에 사용하는 경우에 적합하다.

상기 유산균의 배양은 통상적인 방법에 따라 행하면 되고, 예를 들면, 상기 유산균을 통상적인 방법에 따라 배양하여 얻어진 배양물로부터, 여과, 원심분리 등의 방법에 의해 균체를 회수하고, 수세(水洗) 후, 물 등에 현탁하여 80~115℃, 30분~3초간 가열처리하면 된다. 가열살균한 유산균은, 필요에 따라 농축, 건조한 후 사용해도 된다.

본 발명의 β-글루칸 함유 조성물은, 예를 들면, 상기 아우레오바시디움속(Aureobasidium sp.)에 속하는 균의 배양액을 살균한 것에, 상기 유산균의 가열살균 균체를 혼합해서 분산시킴으로써 얻을 수 있다. 또한, 필요에 따라 정제, 캡슐제, 분말, 과립, 액상, 페이스트상, 젤리상 등의 각종 형태로 하는 것도 가능하다.

본 발명의 β-글루칸 함유 조성물은, 고형분 중에 상기 배양물을 β-1,3-1,6-글루칸 환산으로 1~80 질량% 함유하고, 또한 상기 유산균 균체를 4~95 질량% 함유하는 것이 바람직하다. 또한, 상기 기본적 성분 이외에, 향료, 감미료, 비타민류, 미네랄류, 올리고당, 증점다당류, 덱스트린, 식물추출물, 기타 식물성분 등을 적절히 포함할 수 있다.

본 발명의 β-글루칸 함유 조성물은, 그대로 변비 개선제, 면역 부활제, 피부용 보습제 등으로서 사용할 수 있다.

예를 들면, 본 발명의 β-글루칸 함유 조성물을 변비 개선제로서 사용하는 경우는, 고형분 중에 상기 배양물을 β-1,3-1,6-글루칸 환산으로 1~40 질량% 함유하고, 또한 상기 유산균 균체를 4~95 질량% 함유하는 것이 바람직하며, 상기 배양물을 β-1,3-1,6-글루칸 환산으로 2~40 질량% 함유하고, 또한 상기 유산균 균체를 10~95 질량% 함유하는 것이 보다 바람직하며, 상기 배양물을 β-1,3-1,6-글루칸 환산으로 3~40 질량% 함유하고, 또한 상기 유산균 균체를 30~95 질량% 함유하는 것이 특히 바람직하다.

본 발명의 변비 개선제의 유효 섭취량은, 성인 1일당 상기 배양물을 β-1,3-1,6-글루칸 환산으로 0.01~10 g, 또한 상기 유산균 균체를 0.01~10 g, 바람직하게는 상기 배양물을 β-1,3-1,6-글루칸 환산으로 0.5~5 g, 또한 상기 유산균 균체를 0.05~1 g이다.

본 발명의 변비 개선제는 예를 들면, 청량음료, 젤리음료, 과즙음료, 야채쥬스, 스프, 된장국, 냉동식품, 기타 가공식품 등의 각종 음식품에 배합하는 것도 가능하다. 상기 각 음식품에 있어서의 본 변비 개선제의 첨가량은, 상기의 성인 1일당 유효 섭취량을 토대로 설정하면 되지만, 통상, 1~50 질량%가 바람직하고, 10~20 질량%가 보다 바람직하다. 또한, 첨가방법은 특별히 제한은 없고, 각 음식품에 사용되는 다른 원료와 함께 처음부터 첨가하는 것도 가능하다.

또한, 본 발명의 β-글루칸 함유 조성물을 면역 부활제로서 사용하는 경우 는, 고형분 중에 상기 배양물을 β-1,3-1,6-글루칸 환산으로 5~80 질량% 함유하고, 또한 상기 유산균 균체를 10~80 질량% 함유하는 것이 바람직하고, 더 나아가서는 상기 배양물을 β-1,3-1,6-글루칸 환산으로 25~70 질량% 함유하고, 또한 상기 유산균 균체를 20~70 질량% 함유하는 것이 보다 바람직하며, 상기 배양물을 β-1,3-1,6-글루칸 환산으로 30~60 질량% 함유하고, 또한 상기 유산균 균체를 30~60 질량% 함유하는 것이 가장 바람직하다.

본 발명의 면역 부활제의 유효 섭취량은, 성인 1일당 상기 배양물을 β-1,3-1,6-글루칸 환산으로 0.02~0.50 g, 또한 상기 유산균 균체를 0.10~0.90 g, 바람직하게는 상기 배양물을 β-1,3-1,6-글루칸 환산으로 0.06~0.40 g, 또한 상기 유산균 균체를 0.15~0.45 g이다.

또한, 본 발명의 면역 부활제는 예를 들면, 청량음료, 젤리음료, 과즙음료, 야채쥬스, 스프, 된장국, 냉동식품, 기타 가공식품 등의 각종 음식품에 배합하는 것도 가능하다. 상기 각 음식품에 있어서의 본 면역 부활제의 첨가량은, 상기의 성인 1일당 유효 섭취량을 토대로 설정하면 되지만, 통상, β-1,3-1,6-글루칸 환산으로 0.02~0.50 질량%가 바람직하고, 0.06~0.40 질량%가 보다 바람직하다. 또한, 유산균 균체에 관해서는, 0.10~0.90 질량%가 바람직하고, 0.15~0.45 질량%가 보다 바람직하다. 또한, 첨가방법은 특별히 제한은 없고, 각 음식품에 사용되는 다른 원료와 함께 처음부터 첨가하는 것도 가능하다.

또한, 본 발명의 β-글루칸 함유 조성물을 피부용 보습제로서 사용하는 경우는, 고형분 중에 상기 배양물을 β-1,3-1,6-글루칸 환산으로 1~40 질량% 함유하고, 또한 상기 유산균의 가열살균 균체를 4~95 질량% 함유하는 것이 바람직하며, 상기 배양물을 β-1,3-1,6-글루칸 환산으로 2~40 질량% 함유하고, 또한 상기 유산균의 가열살균 균체를 10~95 질량% 함유하는 것이 보다 바람직하며, 상기 배양물을 β-1,3-1,6-글루칸 환산으로 3~40 질량% 함유하고, 또한 상기 유산균의 가열살균 균체를 30~95 질량% 함유하는 것이 특히 바람직하다. β-글루칸을 함유하는 소재의 배합량이 지나치게 적으면 충분한 보습효과가 얻어지지 않고, 지나치게 많으면 제품의 유동성(늘어나기 쉬움)이 저하되어, 사용감이 저하된다. 또한, 유산균의 가열살균 균체의 배합량이 지나치게 적으면 충분한 보습효과의 지속성이 얻어지지 않고, 지나치게 많으면 제품 중에서의 분산성이 저하되어, 균일한 제품을 얻을 수 없다.

또한, 상기 배양물과 상기 유산균의 가열살균 균체를 병용함으로써, 보습효과의 지속성이 향상되는 이유는 명확하게는 알 수 없지만, 예를 들면, 유산균의 가열살균 균체가 담체가 되어, β-글루칸이나 수분을 유지하고 있는 것을 생각할 수 있다. 특히, 엔테로코커스 패칼리스(Enterococcus faecalis)는, 락토바실러스나 비피더스균 등의 다른 유산균에 비해 균체의 크기가 작기 때문에, 첨가 질량당 균체수가 많아져, 보습효과를 높일 수 있는 것으로 생각된다.

본 발명의 피부용 보습제는 그대로 화장수나 화장액으로서 사용해도 되고, 각종 피부용 화장품(예를 들면, 유액, 크림, 팩 등)에 배합해서 사용해도 된다. 상기 피부용 보습제의 피부용 화장품으로의 배합량은, 0.5~50 질량%가 바람직하고, 5~20 질량%가 보다 바람직하다.

이하, 실시예를 들어 본 발명을 구체적으로 설명하는데, 본 발명은 이들에 한정되는 것은 아니다. 또한, 이하의 설명에 있어서, 특별히 언급하지 않는 한, 「%」는 「질량%」를 나타낸다.

실시예 1

(1) 아우레오바시디움의 배양

아우레오바시디움 플루란스 M-1(Aureobasidium pullulans M-1)(FERM BP-08615)의 전배양액(前培養液)을, 수크로오스 1%, 아스코르브산 0.2%, 미강(米糠) 0.2%를 포함하는 액체배지(pH 5.3)에 적량 접종하고, 25℃, 2일간, 통기 교반 배양을 행하였다. 배양종료 후, 이 배양액을 121℃, 15분간 살균하였다. 이 배양액은 고형분 1%이고, 상기 고형분 중에 35%의 β-1,3-1,6-글루칸을 포함하고 있었다.

(2) 엔테로코커스 패칼리스(Enterococcus faecalis)의 배양

엔테로코커스 패칼리스(Enterococcus faecalis, IFO 16803)를, 로고사배지에서 37℃, 24시간 배양한 전배양액을, 효모추출물 4%, 폴리펩톤 3%, 락토오스 10%를 포함하는 액체배지에 적량 접종하고, pH 스탯(stat)를 사용하여 pH 6.8~7.0으로 가성(苛性)소다 수용액으로 조정하면서 37℃, 22~24시간 중화배양을 행하였다.

배양종료 후, 연속 원심기로 균체를 분리, 회수한 후, 물을 가하여 원래의 액량까지 희석하여 다시 연속 원심기로 균체를 분리, 회수하였다. 이 조작을 합계 4회 반복하고 균체를 세정하였다. 이어서, 세정한 균체를 적량의 물에 현탁하고, 100℃, 30분간 살균한 후, 스프레이 드라이어를 사용해서 균체를 건조하여 가열살 균 균체분말(5×10¹² cfu/g)을 조제하였다.

(3) 변비 개선효과의 확인

상기 (1)에서 얻어진 아우레오바시디움 배양물과, 상기 (2)에서 얻어진 유산균의 가열살균 균체를 사용하여, 이하의 방법에 의해 변비 개선효과의 확인시험을 행하였다.

시험기간은 4주일로 하고, 변비체질의 지원자 10명에게 처음 1주일(제1주째)은 아무 것도 투여하지 않고, 다음 1주일(제2주째)은 유산균 균체(200 mg/일)를 투여하고, 다음 1주일(제3주째)은 아우레오바시디움 배양물(15 ㎖/일)을 투여하고, 마지막 1주일(제4주째)은 아우레오바시디움 배양물(15 ㎖/일) 및 유산균 균체(200 mg/일)를 투여하였다. 그리고, 각 시험 샘플의 투여기간 1주일에 있어서의 배변횟수를 체크하게 하였다. 그 결과를 표 1에 나타낸다.

표 1로부터, 유산균 균체만을 투여한 경우에는, 약간의 변비 개선효과가 인정되지만, 아우레오바시디움 배양물만을 투여한 경우는, 변비 개선효과가 거의 인정되지 않는 것을 알 수 있다. 한편, 아우레오바시디움 배양물과 유산균 균체를 병용한 경우, 배변횟수의 증가가 인정되어, 명확하게 변비가 개선되어 있는 것을 알 수 있다.

실시예 2

실시예 1(1)에서 얻어진 아우레오바시디움 배양물 1 L에, 실시예 1(2)에서 얻어진 유산균의 가열살균 균체 10 g을 가하고, 균일하게 혼합하여 β-글루칸 함유 조성물을 얻었다. 이 β-글루칸 함유 조성물을 사용하여, 이하의 방법에 의해 초기 감염 제어효과에 대해서 조사하였다.

(1) 생존율의 측정

1주일 예비사육을 행한 BALB/c 마우스(7주령, 암컷) 28마리(일본 에스엘씨(주)로부터 구입)를 4군(각군 7마리)으로 나누고, 각군에 하기의 실험대상 물질을 마우스 1마리당 200 ㎕씩, 1일 1회 시험기간 중 연속 경구투여하였다.

시험군: 상기 β-글루칸 함유 조성물

비교군 1: 아우레오바시디움 배양액(실시예 1(1)에서 얻어진 것)

비교군 2: 유산균의 가열살균 균체(실시예 1(2)에서 얻어진 것)를 PBS에 현탁한 것(1 g 균체/100 ㎖)

대조군: PBS

상기 각 실험대상 물질을 1주일 연속 경구투여한 각군 마우스의 꼬리정맥 내에, 세포내 기생성 세균인 리스테리아균(Listeria monocytogenes, EGD주)을 5.4×10⁴cfu/200 ㎕/마우스(2×LD₅₀)가 되도록 접종한 후, 2주일 경과 관찰을 행하여, 각군 마우스의 생존율 및 평균 생존기간을 구하였다.

그 결과를 표 2 및 도 1~3에 나타낸다. 또한, 시험기간 중, 물 및 사료(상품명「분말사료 CRF-1」, 오리엔탈효모주식회사제)는 자유 섭취로 하였다.

표 2 및 도 1~3으로부터 알 수 있는 바와 같이, 시험군에 있어서는 한 예가 사망(균 접종 후 6일째)했을 뿐으로, 시험 종료시의 생존율은 85.7%였지만, 대조군에 있어서는, 전체 예가 사망(세균접종 4일째)하여, 시험 종료시의 생존율은 0%였다. 또한, 비교군 1에 있어서는, 두 예가 사망(균 접종 6일째에 한 예, 7일째에 한 예)하여, 시험 종료시의 생존율은 71.4%였다. 또한, 비교군 2에 있어서는, 다섯 예가 사망(균 접종 4일째에 세 예, 5일째에 두 예)하여, 시험 종료시의 생존율은 28.6%였다. 시험군과 다른 군 사이의 유의차(有意差)를 만위트니 U검정(Mann-Whitney U-test)을 사용하여 검정한 바, 시험군은 대조군 및 비교군 2에 대해 위험률 1% 미만으로 유의차가 인정되었다.

또한, 평균 생존기간에 관해서는, 시험군에 있어서는 12.7일이었던 것에 대해, 대조군이 3.0일, 비교군 1이 11.5일, 비교군 2가 6.4일이었다. 시험군과 다른 군 사이의 유의차를 Mann-Whitney의 U검정을 사용하여 검정한 바, 시험군은 대조군 및 비교군 2에 대해 위험률 1% 미만으로 유의차가 인정되었다.

이 결과로부터, 본 β-글루칸 함유 조성물을 경구 섭취함으로써, 세균 감염에 있어서의 숙주의 감염 저항성을 항진시키는 것이 시사되었다.

(2) 장기 내 균수 측정

상기 (1)에 있어서, 리스테리아균에 대한 감염 저항성에 본 β-글루칸 함유 조성물이 작용을 하고 있는 것이 시사되었기 때문에, 균 배제의 지표가 되는 장기 내 균수의 경시적 변화에 대해서 해석을 행하였다.

1주일 예비사육을 행한 BALB/c 마우스(7주령, 암컷)를 1군당 30마리 사용하고, 상기와 동일하게 하여 각 실험대상 물질을 투여하였다. 그리고, 상기 각 실험대상 물질을 1주일 연속 경구투여한 각군 마우스의 꼬리정맥 내에, 세포내 기생성 세균인 리스테리아균(Listeria monocytogenes, EGD주)을 2.7×10³ cfu/200 ㎕/마우스(1/10×LD₅₀)가 되도록 접종하고, 세균접종 후 1일째, 3일째, 5일째, 7일째 및 10일째에 하루도 거르지 않고 5마리씩 각군의 마우스를 도살하여 비장을 회수하였다.

회수한 비장을 블렌더로 문질러 으깨서 PBS 5 ㎖ 중에 재현탁하여 이것을 원액으로 하였다. 이 원액을 10배 단계희석법으로 희석하고, 원액 및 각 희석계열액으로부터 100 ㎕ 취하여, TSA 배지 위에 도말(塗抹)하고 37℃에서 부란기(孵卵器)에서 16시간 배양하였다. TSA 배지 위에 발육한 세포 집락수를 측정하고, 장기 내 균수를 산출하였다. 장기 내 균수는 각군마다 평균값 및 표준오차를 산출하였다. 그 결과를 표 3 및 도 4에 나타낸다.

표 3으로부터 알 수 있는 바와 같이, 대조군에서는 세균접종 3일째에 비장 내의 세균수가 피크가 되고, 그 후 서서히 감소하여 균 접종 10일째에 검출한계 부근(3.75±7.5 CFU/비장)이 되었다. 한편, 시험군에 있어서는, 균 접종 후 1일째부터 균의 증가를 인정하였지만, 균 접종 3일째는 1일째와 거의 동등한 균수를 나타내고, 그 후 감소하여 균 접종 10일째에서는 27±25 CFU/비장이 되었다. 비교군 1 및 비교군 2에서는, 균 접종 후 1일째부터 균의 증가를 인정하고, 균 접종 3일째에 비장 내 세균수의 피크를 인정하며, 그 후 서서히 균은 감소하여 균 접종 10일째에는 검출한계 미만(＜3.33 CFU/비장)이 되었다.

이 결과로부터, 본 β-글루칸 함유 조성물은 감염 조기에서의 면역기구에 작용하고 있어, 감염 저항성의 항진은 성숙 T세포에 의한 공격성이 강한 면역기구 보다도 미숙형 T세포 또는 탐식세포(貪食細胞)에 의한 비특이적 면역기구에 의해 행하여지고 있을 가능성이 추측되었다.

(3) 세포 표면분자의 해석

상기 (1), (2)에 있어서, 생존율, 생존기간 및 장기 내 균수에 차이가 인정되었기 때문에, 리스테리아균에 대한 감염 저항성에 관여하는 생체측 세포에 관하여 플로우 사이토미터에 의한 해석을 행하였다.

상기 (2)의 장기 내 균수 측정과 동시에 장간막 림프절(mesenteric lymph nodes; MLN)을 회수하였다. 회수한 MLN을 슬라이드글래스로 문질러 으깨고, 스테인리스 메쉬로 여분의 조직편을 제거한 후, 림프구를 1×10⁶/㎖가 되도록 FACS용 Hank's액에 재현탁하였다. 하기 (a)~(d)에 나타내는 4종류의 염색 패턴으로 림프구를 염색하고, 플로우 사이토미터(Epics-XL;Beckman Coulter)를 사용하여 세포(T세포 중심) 표면분자의 해석을 행하였다. 그 결과를 표 4 및 도 5에 나타낸다.

(a) Cy-chrome(Cy) 표지 항CD3mAb(T세포 고유 인식 마커)/FITC 표지 항TCRαβmAb(T세포형별 인식 마커)/PE 표지 항CD4mAb/biotin 표지 항TCRγδ(T세포형별 인식 마커)mAb

(b) Cy 표지 항CD3mAb/FITC 표지 항TCRαβmAb/PE 표지 항CD4mAb/biotin 표지 항CD69mAb(조기활성화 마커)

(c) Cy 표지 항CD3mAb/FITC 표지 항TCRαβmAb/PE 표지 항CD4mAb/biotin 표지 항CD25mAb(IL-2Rα;활성화 마커)

(d) Cy 표지 항CD3mAb/FITC 표지 항TCRαβmAb/PE 표지 항CD122mAb(IL-2Rβ;활성화 마커)/biotin 표지 항CD4mAb

표 4 및 도 5에 나타내어지는 바와 같이, 시험군, 비교군 1, 2는, 대조군에 비해 CD4 양성 αβ형 T세포의 증가가 인정되었다. 특히, 시험군에 있어서는 비교군 1, 2보다도 증가의 비율이 컸다. 또한, 균 감염 3일 후에 있어서는, 어느 군도 거의 동일한 비율을 나타내었다. 한편, CD4 양성 세포 중의 활성화 마커에 관해서는, CD25 분자(IL-2Rα), CD122 분자(IL-2Rβ) 및 CD69 분자(조기활성화 마커) 모두 각군에 상관 없이 거의 동등한 발현정도였다.

이 결과로부터, 시험군에서는 감염 전과 감염 후도 CD4 양성 αβ형 T세포의 현저한 변화는 인정되지 않았기 때문에, 본 β-글루칸 함유 조성물에 의한 감염 저항성의 항진은, 분화(分化)가 낮은 세포집단의 기능항진에 의한 것으로 추측되었다.

또한, 혈액 중의 사이토카인에 관하여, 시판의 IFN-γ 측정 키트(겐자임사제)의 방법으로 측정한 바, 표 5에 나타내는 바와 같이, 시험군에서는 감염 3일째에 IFN-γ량이 높은 값을 나타내었다. CD4 양성 αβ형 T세포의 변화는 인정되지 않았던 것으로부터, IFN-γ를 생산하고 있는 세포는 마크로파지일 가능성이 생각되었다.

실시예 3

실시예 1(1)에서 얻어진 아우레오바시디움 배양액과, 실시예 1(2)에서 얻어진 유산균의 가열살균 균체를 사용하여, 하기에 나타내는 실험대상 샘플을 조제하고, 5명의 여성 지원자(20대 2명, 30대, 40대, 50대 1명)에 의한 보습효과의 확인시험을 행하였다.

·실험대상 샘플

1 : 아우레오바시디움 배양액만

2 : 유산균 가열살균 균체 1% 수현탁액

3 : 유산균 가열살균 균체 1% 함유 아우레오바시디움 배양액

4 : 물(대조)

각 실험대상자는 측정부위(전완(前腕) 내측 굴곡부로부터 5 cm 아래의 폭 3 cm×길이 10 cm의 범위)를 비누로 세정한 후, 온도 18~20℃, 습도 50~55%로 조정된 항온항습 조건하의 실내에서 20분간 안정(安靜)하게 하였다. 그리고, 상기 측정부위를 4개로 구분하여, 각구에 상기 실험대상 샘플 1~4를 각각 10 ㎕ 도포한 후, 표피 각질층 수분량(피표 컨덕턴스 μS)을 고주파 임피던스법을 응용한 표피 각질층 수분량 측정장치「SKINCON-200」(상품명, 아이·비·에스 주식회사제)을 사용하여 각구를 경시적으로 측정하였다. 또한, 표피 각질층 수분량의 측정은, 실험대상 샘플 도포 5분 전(-5분), 도포 직후(0분), 도포 후 10, 20, 30, 60분에 행하였다. 그 결과를 도 6~10에 나타낸다. 또한, 도 6~10에 있어서, 1~4는 각각 실험대상 샘플 1~4에 대응한다.

도 6~10으로부터, 실험대상 샘플 3을 도포한 경우, 실험대상 샘플 1, 2에 비해, 도포 후 시간이 경과해도 표피 각질층 수분량이 높게 유지되고 있어, 보습효과가 지속되고 있는 것을 알 수 있다. 또한, 실험대상자에게 사용감을 설문한 바, 끈적거림이나 기름기도 없고, 사용감도 좋다고 하였다.

이상 설명한 바와 같이, 본 발명의 β-글루칸 함유 조성물은 아우레오바시디움속(Aureobasidium sp.)에 속하는 균을 배양하여 얻어지는 β-1,3-1,6-글루칸을 포함하는 배양물과 유산균 균체를 함유하기 때문에, 이들 성분의 상승효과에 의해 우수한 생리활성 효과를 기대할 수 있어, 변비 개선제, 면역 부활제, 피부용 보습제 등으로서 이용할 수 있다.

Claims

아우레오바시디움속(Aureobasidium sp.)에 속하는 균을 배양하여 얻어지는 β-1,3-1,6-글루칸을 포함하는 배양물과, 가열살균된 유산구균 엔테로코커스 패칼리스(Enterococcus faecalis)를 유효성분으로서 함유하는 것을 특징으로 하는 β-글루칸 함유 조성물.
제1항에 있어서, 상기 아우레오바시디움속(Aureobasidium sp.)에 속하는 균은, 아우레오바시디움 플루란스 M-1(Aureobasidium pullulans M-1)(FERM BP-08615)인 β-글루칸 함유 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서, 고형분 중에 상기 배양물을 β-1,3-1,6-글루칸 환산으로 1~80 질량% 함유하고, 또한 상기 유산균 균체를 4~95 질량% 함유하는 β-글루칸 함유 조성물.
삭제
삭제
제1항의 β-글루칸 함유 조성물을 유효성분으로서 함유하는 변비 개선제.
제1항의 β-글루칸 함유 조성물을 유효성분으로서 함유하는 면역 부활제.
제1항의 β-글루칸 함유 조성물을 유효성분으로서 함유하는 피부용 보습제.