UA46744C2 - Спосіб інгібування станів, пов'язаних з нейропептидом y - Google Patents

Abstract

Запропоновано спосіб інгібування фізіологічних розладів, пов’язаних з надлишком нейропептиду Y, який полягає в застосуванні ефективної кількості речовини формули (І) (а) (b) де R1 і R3 незалежно представляють водень, -CH3, (а) або (b), де Аr – факультативно замішений феніл. R2 обирають з групи, до якої входять піролідин, залишок гексаметиленіміну або піперидину, або ж фармацевтично прийнятні солі або сольвати наведених вище сполук.

Description

Опис винаходу

Нейропептид У является пептидом, присутствующим в центральной и периферической нервньїх системах. 2 Пептид существуєт совместно с норадреналином во многих нейронах и действуєт как нейротрансмиттер сам по себе или синергически вместе с ноадреналином. Волокна, содержащие нейропептид У, окружают в большом количестве артерии в сердце, но найденьі также вокруг артерий в дьїхательньїх путях, желудочно-кишечном тракте и мочеполовьїх путях. Нейропептид МУ присутствует также в головном мозге, оказьвая влияние на кровяное давлениє, пищевое поведение и вьісвобождение различньїх гормонов. Изменения концентраций 70 нейропептида у в головном мозге причастнь к зтиологии психиатрических расстройств.

Нейропептид У бьл открьїт и вьіделен и определеньі его последовательности примерно десять лет тому назад, когда его вьіделили из свиного мозга с определением последовательности в ходе общего скрининга с целью обнаружения амидированньїх пептидов с концевьіми карбоксигруппами, и бьіл назван нейропептидом У из-за его вьіделения из нервной ткани и присутствия тирозина в виде аминокислоть, как с концевьми т аминогруппами, так и с концевьми карбоксигруппами. Нейропептид У является представителем семейства панкреатических пептидов и находится в одном гомологическом ряду с панкреатическим полипептидом и пептидом УУ.

Нейропептид М и другие представители зтого семейства пептидов отличаются третичной структурой, состоящей из М -концевой полипропиленовой спирали и амфифильной и о. - спирали, соединенной с р - витком образованием шпильковидной петли, которую иногда назьвают панкреатической полипептидной (РР) складкой. Спирали удерживаются вместе благодаря гидрофобньім взайимодействиям. От шпильковидной петли вьіступает амидированиая С - концевая часть.

После обнаружения нейропептида У бьло установлено, что он является найболее распространенньм пептидом в центральной нервной системе, включая кору головного мозга, мозговой ствол, гиппокамп, сч гипоталамус, миндалевидноє тело и таламус, а таюке присутствует в нервной периферической системев (3) симпатических нейронах и хромаффинньх клетках надпочечника.

Нейропептид У, по-видимому, полностью удовлетворяет нейротрансмиттерньм критериям, поскольку он хранится в симпатических гранулах, вьісвобождаєется при злектрической стимуляции нерва и действует как специфические рецепторьі. Очевидно, что нейропептид У по праву является важньім переносчиком, вероятно в ч мозге, где нейропептид М, видимо, ингибируєт активность аденилатциклазь! и вьізьваєт повьшение «Ж внутриклеточньїх уровней кальция. Центральная иньекция нейропептида У приводит к изменениям кровяного м давления, увеличению питания, повиішенному накоплению жира, повьиішенному содержанию сахара и инсулина в крови, снижению двигательной активности, пониженной температуре тела и каталепсии. (Се)

Нейропептид М (а также его химические родственники) действует на зависимье от гуаниннуклеотидов « рецепторь! мембран, известнье как бС-протеин - связаннье рецепторь. Протеийньі С являются семейством мембранньх протеинов, которне становятся активированньіми только после связьівания гуанозинтрифосфата.

Активированнье протеийньії С в свою очередь активируют фермент-усилитель на внутренней поверхности мембрань, после чего фермент преобразует молекуль! предшественника во вторье переносчики. « 20 Нейропептид У, по-видимому, взаймодействует с семейством близко родственньх рецепторов. Зти з рецепторьі обьічно классифицируют на несколько подтипов на основе способности различньїх тканей и с рецепторов связьшвать различнье фрагментьії нейропептида У и близко родственного пептида У. Рецептор :з» подтипа ХУ1, видимо, является основньім рецептором сосудистого нейропептида У. Рецепторь! подтипов У2 могут также появляться постсинаптически на гладкой мьішце кровеносного сосуда. Пока еще не вьіделенньім Вецептором подтипа уЗ является, по-видимому, нейропептида специфический, не связьиівающий їз нейропептид уу. Зтот рецептор, вероятно, присутствует в тканях надпочечника, мозгового вещества, сердца и ствола мозга, а также в других местах. |В отношений обзора, касающегося нейропептида у и рецепторов

Ме нейропептида у, смотри. например, С.УУапіезіеді апа О.Кеїз, Аппца! Кеміем/ ої Рпагтасоіоду апа Тохісоіоду, -І 33:309-352 (1993)|.

Ввиду большого количества заболеваний, связанньїх с избьтком нейропептида У, создание антагонистов е рецепторов нейропептида У обеспечит возможность контролирования зтих болезненньїх состояний. Наиболее т» ранними антагонистами таких рецепторов бьіли производнье пептидов. Как бьіло доказано, зти антагонисть имеют ограниченную фармацевтическую полезность из-за их метаболической нестойкости.

В соответствий с настоящим изобретением предлагается, по существу, класс мощньїх непептидньх антагонистов рецепторов нейропептида у. Благодаря их непептидной природе соединения по настоящему о изобретению не имеют недостатков, известньїх пептидньїх антагонистов рецепторов нейропептида У в отношений метаболической нестойкости. їмо) Настоящее изобретение охватьвваєт способьї лечения или предупреждения физиологического расстройства, связанного с избьітком нейропептида У, включающие введение млекопитающему, нуждающемуся в указанном 60 леченийи, зрфективного количества соединения формульі 1 б5 осюісні-в? Щи о Ф й 2 ові 1 кю 5 где БВ' и ВЗ независимо представляют водород, о алкил) или - а где Аг

Й ОА

-СНз-с-(Сесе Ат, представляет необязательно замещенньй фенил;

В?Овьібран из огруппьї, состоящей из пирролидино, гексаметиленимино и опиперидино; и его фармацевтически приемлемьїх солей и сольватов.

Настоящее изобретение касается открьїтия того, что вьібранная группа 2-фенил-З-ароилбензотиофенов, формульі 1, полезна для ингибирования физиологического расстройства, связанного с избьітком нейропептида У.

Терапевтическое и профилактическое лечения по настоящему изобретению осуществляют путем введения с об Нуждающемуся в зтом человеку дозь! соединения формуль! 1 или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата, зффективной для ингибирования физиологического расстройства, связанного с избьтком і) нейропептида У, или его симптомов.

Термин "ингибирование" имеет обьчное принятое значение, включающее исключение возможности, предупреждение, ограничение и замедление, прекращение или обеспечение обратного хода болезни или -(«ф зо вьзванного ею симптома. Как таковой предлагаеємьй способ охватьшаєт по потребности лечение как терапевтическое, так и профилактическое. в

Предпочтительньм соединением настоящего изобретения является ралоксифен, представляющий собой ч- гидрохлорид (соль) соєдинения формуль 1, где Б! и КК? представляют водород и Б 2 представляеєт 1-пиперидинил. о

Как правило, по крайней мере одно соединение формульй 1 смешивают с обьічньми наполнителями, «І разбавителями или носителями и прессуют в таблетки или изготавливают в виде зликсиров или растворов для удобного перорального введения или вводят внутримьшечно или внутривенно. Соединения могут бьть введень чрезкожно или могут бьіть изготовленьі в виде лекарственньїх форм отсроченного действия и тому « подобное.

Соединения, используемье в способах по настоящему изобретению, могут бьіть полученьі в соответствий со Ш- с разработанньми технологическими процессами, такими, как подробно описаннье в патентах США Мо4133814, ц Мо4418068 и Мо4380635, которье включеньі! в данное описание в качестве ссьілки. Обьічно процесс начинают, ,» взяв в качестве исходного соединения бензоло|в|) тиофен, имеющий б-гидроксильную группу и группу 2- (4-гидроксифенпл). Исходное соединение защищают, ацилируют и освобождают от защить, получив в результате соединения формуль! 1. Примерь! получения таких соединений даньі в указанньїх вьіше патентах т» США. Термин "необязательно замещенньій фенил" охватьївает фенил и фенил, замещенньй один или два раза

С1-Св алкилом, С4-Су; алкокси, гидрокси, нитро, хлором, фтором или три (хлор или фтор)метилом.

Ф Соединения, используемье в способах по настоящему изобретению, образуют фармацевтически -І приемлемье кислотно- и основно-аддитивнье о соли с о самьми разнообразньми органическими (и неорганическими кислотами и основаниями и включают физиологически приемлемье соли, которье часто т используют в фармацевтической химии. Такие соли тоже являются частью настоящего изобретения. Типичнье с» неорганические кислотьі, используемье для получения таких солей, включают хлороводородную, бромоводородную, иодоводородную, азотную, серную, фосфорную, гипофосфорную и тому подобнье кислоть.

Могут бьїть также использовань! соли, полученнье из органических кислот, таких, как алифатические моно- и дикарбоновье кКислотьї, фенил-замещеннье алкановье кислоть, гидроксиалкановье кислоть! и гидроксиалкановье дикислотьі, ароматические кислотьі, алифатические и ароматические сульфоновье

ІФ) кислотьі. Таким образом, фармацевтически приемлемье соли включают ацетат, фенилацетат, трифторацетат, ко акрилат, аскорбат, бензоат, хлорбензоат, динитробензоат, гидроксибензоат, метоксибензоат, метилбензоат, о-ацетоксибензаоат, нафталин-2-бензоат, бромид, изобутират, фенилбутират, р-гидроксибутират, 60 бутин-1,4-дисат, гексин-1,4-дисоат, капрат, каприлат, хлорид, циннамат, цитрат, формиат, фумарат, гликоллат, гептаноат, гиппурат, лактат, малат, малеат, гидроксималеат, малонат, манделат, мозилат, никотинат, изоникотинат, нитрат, оксалат, фталат, терафталат, фосфат, моногидрофосфат, дигидрофосфат, метафосфат, пирофосфат, пропиолат, пропионат, фенилпропионат, салицилат, себакат, сукцинат, суберат, сульфат, бисульфат, пиросульфат, сульфит, бисульфит, сульфонат, бензолсульфонат, п-бромфенилсульфонат, 65 хлорбензолсульфонат, зтансульфонат, 2-гидроксизтансульфонат, метансульфонат, нафталин-1-сульфонат, нафталин-2-сульфонат, п-толуолсульфонат, ксилолсульфонат, тартрат и тому подобное. Предпочтительной солью является гидрохлорид.

Фармацевтически приемлемье кислотно-аддитивнье соли обьічно получают взаймодействием соединения формульї! 1 с зквимолярньї!м или избьточньім количеством кислоть!ї. Реагентьї! обьічно смешивают в совместном растворителе, таком, как дизтиловьй зфир или бензол. Соль обьічно вьіпадает из раствора в осадок в пределах примерно от одного часа до 10 дней и может бьть отделена путем фильтрования или путем отгонки растворителя обьічньіїм образом.

Основания, широко используемье для образования солей, включают гидроксид аммония и гидроксидь! и карбонатьь щелочньх и щелочноземельньх металлов, а также алифатические и первичнье, вторичнье и 7/0 третичнье аминь, алифатические диаминь. Основания, особенно пригоднье для получения аддитивньх солей, включают гидроксид аммония, карбонат калия, метиламин, дизтиламин, зтилендиамин и циклогексиламин.

Фармацевтически приемлемье соли обьічно имеют лучшие характеристики растворимости, но сравнению с соединением, из которого их получают, и потому они больше подходят для изготовления лекарственньїх форм в виде жидкостей или змульсий.

Фармацевтические препарать! могут бьіть изготовленьі известньмми в данной области техники способами.

Например, соединения можно смешивать с обьічньми наполнителями, разбавителями или носителями и изготавливать в виде таблеток, капсул, суспензий, порошков и тому подобное. Примерами наполнителей, разбавителей и носителей, подходящих для изготовления таких лекарственньїх форм, являются: наполнители и сухие разбавители, такие, как крахмал, сахара, маннит и производнье кремния; связьиівающие вещества, такие, 2о Как карбоксиметилцеллюлоза и другие производнье целлюлозь, альгинать!, желатин и поливинилпирролидон; увлажняющие вещества, такие, как глицерин; разрьіхляющие вещества, такие, как карбонат кальция и бикарбонат натрия; вещества для замедления процесса растворения, такие, как парафин: ускорители всасьюшвания, такие, как четвертичнье соединения аммония; поверхностно-активнье вещества, такие, как цетиловьій спирт, глицеринмоностеарат; адсорбционнье носители, такие, как каолин и бентонит; и с смазьвающие вещества, такие, как тальк, стеарат кальция, стеарат магния и твердне полизтиленгликоли.

Соединения могут бьїіть приготовлень! в виде зликсиров или растворов для удобного перорального введения і) или в виде растворов, подходящих для парентерального введения, например внутримьішечного, подкожного или внутривенного. Кроме того, соединения вполне пригодньії для изготовления лекарственньїх форм отсроченного действия и тому подобное. Состав лекарственньїх форм может бьгть таким, чтобь он обеспечивал «ж зо Ввісвобождение активного компонента только или предпочтительно в конкретной части желудочно-кишечного тракта, возможно в течение некоторого периода времени. Могут бьіть изготовлень! покрьїтия, оболочки и - защитнье матриць, например, из полимерньїхх веществ и восков. ї-

Конкретная доза соединения формуль! 1, необходимая для обеспечения ингибирования физиологического расстройства, связанного с избьтком нейропептида У, или его симптомов в соответствии с настоящим ісе) з5 Мзобретением, зависит от тяжести состояния, способа введения и других подобньїх факторов по усмотрению «г лечащего врача. Приемлемьсе зффективнье суточнье дозьі обьічно составляют от примерно 0,1 до примерно 100Омг в сутки, и более предпочтительно от примерно 50 до примерно 200мг в сутки. Такие дозь! вводят больному один-три раза в сутки или чаще в случае более зффективного лечения или предупреждения состояния или симптома(ов). «

Обьічно является предпочтительньім вводить соединениє формуль! 1 в виде кислотно-аддитивной соли, Как 4 не) с принято при введений лекарственньїх веществ, несущих основную группу, такую, как пиперидиновое кольцо.

Для таких целей годятся следующие пероральнье лекарственнье форми. ;» Препарать

В следующих ниже составах препаратов "Активньій компонент" означаєет соединение формульі 1.

Состав 1: Желатиновье капсуль! ї5» Твердье желатиновье капсуль! изготавливают, используя следующее:

Ф щ

МН ПИ НОЯ) з й

Примерь конкретньїхх капсульньїх препаратов ралоксифена, которне бьіли изготовленьї, представлень! ниже: о ю зо вв

Продолжение

Крахмал в виде сьіпучего порошка Силиконовая жидкость, 350 сантистоксов

Крахмал в виде сьіпучего порошка Силиконовая жидкость, 350 сантистоксов то 715 Крахмал в виде сьіпучего порошка Силиконовая жидкость, 350 сантистоксов

Препарат в форме таблеток изготавливают, используя следующие ингредиенть!: сч й о изготавливают следующим образом: « зо з м щі «

Активньій ингредиент, крахмал и целлюлозу пропускают сквозь сито Мо45 меш по стандарту США и тщательно смешивают. Полученньй порошок смешивают с раствором поливинилпирролидина, после чего смесь пропускают сквозь сито Мо 14 меш (стандарт США). Полученнье при зтом грануль! вьісушивают при « 70 50-607С и пропускают сквозь сито Мо 18 меш. Затем к гранулам добавляют натрий-карбоксиметилцеллюлозу, - с стеарат магния и тальк, ранее пропущеннье сквозь сито Мо 60 (стандарт США), и после перемешивания ц полученную смесь прессуют на таблеточной машине для получения таблеток. и"? Суспензии, содержащие каждая 0,1-1000мг активного ингредиента на 5мл дозу, изготавливают следующим образом: г

Ф

- в»

І»

Активньій ингредиент о пропускают сквозь сито Мо 45 меш (стандарт США) и, смешав с (Ф, натрий-карбоксиметилцеллюлозой и сиропом, получают однородную пасту. Раствор бензойной кислоть, ка корригент и красящее вещество разбавляют некоторьім количеством водьі и добавляют в пасту с перемешиванием. Затем для получения требуемого обьема добавляют достаточное количество водь. во Соединения по настоящему изобретению связьншваются с рецепторами, специфическими для нейропептида

У, а также близко родственньїх пептидов. В отношений обзора рецепторов нейропептида у смотри О.Сенпіегі, бе Зсіепсев, 55:551-562 (1994) . Рецепторьі для нейропептида у и пептида уу имеют значительное перекрьітие, а панкреатический полипептид, по-видимому, имеет свой индивидуальньій набор, рецепторов. Многие (но не все) зффекть! нейропептида у можно воспроизвести, используя пептид ту. 65 Первоначально бьіли предложеньі два подтипа рецепторов для нейропептида у на основе сродства 13-36 фрагмента нейропептида при использовании препарата симпатической нервной системь!. Хотя они являются найлучшими обнаруженньми рецепторами для нейропептида у, но имеется много доказательств, что существуют дополнительнье подтипь! рецепторов. Найлучшим из обнаруженньїх является рецептор У -3, которьій восприимчив к нейропептид у, но не к пептиду Ту. Недавно бьіл описан другой рецептор, которьй связьваєется с пептидом ту с вьісоким сродством и нейропептидом у с более низким сродством. Фармакология "пищевой" реакции на нейропептид У, по-видимому, связана с действием рецептора у- 1, но бьіл предложен и отдельньій "пищевой рецептор". Рецептор У -1 является единственньім рецептором, успешно клонированньїм на сегодняшний день. Далее кратко изложена имеющаяся информация об известньїх подтипах рецепторов нейропептида у и их возможной роли в физиологической функции. у - 1 Рецептор

Уу-1 Рецептор является найболее характеризованньм рецептором для нейропептида У. Зтот рецептор обьічно считают постсинаптическим, и он является медиатором многих известньїх действий нейропептида у на периферии. Первоначально зтот рецептор бьл описан как имеющий низкое сродство с С-концевьми т фрагментами нейропептида у, такими, как 13-36 фрагмент, но он с одинаковьм сродством взаймодействуєт с нейропептидом у и пептидом уу, имеющими полную длину. С. УУапіевіведі еї аїЇ., Кедшіаюгу Рерійдез, 13:307-318 (1986); С.УУапіевівді еї аЇ.,, Мейгопа! Меззепдеге іп Маз сцаг Ецпс ї іоп, 231-241 (МобБіп еї аї., изд. 1987).

Замещение аминокислоть! в положений 34 пролином (Рго?7) дает в результате белок, специфический для

У-1 рецептора. Е.К. Ройег еї аб., Епйгореап дЩоцгпа! ої РІагтасоіоду, 19315-19 (1991). Зтот способ использовали для установления роли У-1 рецептора в самьїх разнообразньїх функциях. Думается, что рецептор связьмваєтся с аденилатциклазой с проявлением ингибирующего действия в коре головного мозга, клетках гладких мьішуц кровеносньїх сосудов и 5К - М - М5 . |Смотри В.). МсОегтої еї аї., Сагаіомазсцаг Кезеагса, 27:893-905 (1993)). Зтому действию препятствует применение токсина коклюша, подтверждающего роль с

С-белок-связанного рецептора. У-1 Рецептор является медиатором мобилизации внутриклеточного кальция в клетках гладких мьішц кровеносньїх сосудов свиньи и зритролейкозньїх клетках человека. о

Клонированньй человеческий у - 1 рецептор можно связать либо с гидролизом фосфотидилинозитола, либо с ингибированием аденилатциклазь, в зависимости от типа клетки, в которой осуществляется зкспрессия рецептора. Н. Негг209 еї аї., Ргосеедіпоз ої (пе Майопа! Асадету ої Зсіепсез (ОА), 89:5794-5798 (1992). Как «Кф зо бло сообщено, У -1 рецептор связан либо с системой вторьх переносчиков при исследований с использованием тканевьх препаратов, либо с линиями клеток, естественно зкспрессирующими рецептор. М

Упомянутьй вьіше О.Сепіегі, стр. 553. Таким образом, У-1 рецептор нельзя отличить только на основе связи с ча единственньіїм вторьім переносчиком. у-2 Рецептор ее,

Как и у -1 рецептор, зтот подтип рецептора бьіл первоначально описан с использованием препаратов «фФ кровеносньїх сосудов. Фармакологически у-2 рецептор отличается от У -1 проявлением сродства по отношению к С-концевьім фрагментам нейропептида у. Рецептор чаще всего дифференцируют, используя нейропептид у (13-36), хотя 3-36 фрагмент нейропептида у и пептида Му ообеспечивает улучшеннье сродство и « избирательность. М.Юитопі еї аї., Зосіегу ог Мецгозсіепсе Абрзігасів, 19:726 (1993). Подобно у -1 рецептору, зтот рецептор связьівают с ингибированием аденилатциклазь», хотя в некоторьїх препаратах он может не бьть не) с восприимчивьм к токсину коклюша. Как бьіло обнаружено, у -2 рецептор снижаеєет внутриклеточнье уровни

Із» кальция в синапсе путем избирательного ингибирования кальциевьїх каналов М -типа. Как и У -1 рецептор, рецептор у -2 может проявлять различное связьівание с вторьім переносчиком. у -2 Рецепторьї обнаружень в самьїх разньїх зонах головного мозга, включающих гиппокамп, зиБрзіапіа ї» 15 підгаіа(егаіїйз, таламус, гипоталамус и ствол. На периферийи у-2 обнаружен в периферической нервной системе, такой, как симпатическая, парасимпатическая, и сенсорньїх нейронах. Во всех зтих тканях у -2 рецепторь ме) являются медиаторами уменьшения вьісвобождения нейротрансмиттеров. -І у-3 Рецептор

Зтот рецептор является самьм новьім и найменее изученньм из обнаруженньїх подтипов рецепторов о нейропептида У. Нейропептид у - зто вполне зффективньй агонист в зтом семействе рецепторов, в то время

Та» как пептид уу малозффективен. Зто фармакологическое свойство используют для определения зтого рецептора. Рецептор, имеющий фармакологию, как у МУ -3 рецептора, бьіл идентифицирован в области САЗ гиппокампа с о использованием злектрофизиологических методов. Зтот рецептор может усиливать возбудительную реакцию указанньїх нейронов на М-метил- Ю -аспартат (ММОА) . Р.Р.Моппеї! еї аї!., Еогореап

Щошигпаї ої Рпагтасоіоду, 182:207-208 (1990). і) Наличие зтого рецептора лучше всего устанавливаєтся в стволе головного мозга крьісь!, в частности в ядре ко одиночного пути (писієеиз ігасіиз зоїйагіив). Введение нейропептида у в зту зону обеспечиваеєт зависящее от дозь! снижение кровяного давления и частоть! сердечньїх сокращений. В зту зону головного мозга могут внести бо существенньй вклад также и рецепторь у-1 и У-2. Нейропептид у также ингибирует вьізванное ацетилхолином вьісвобождение катехоламинов из мозгового вещества надпочечника, по-видимому, через у-3 рецептор. С.

Ууапіезіеі еї аї., | бе Зсіепсев, 50:РІ 7-РБІ4 (1992).

Рецептор, предпочитающий пептид У

Бьіл уже описан и четвертьй рецептор, оказьівающий умеренное предпочтение пептиду У по сравнению с б5 нейропептидом у. Зтот рецептор бьіл первоначально вьіявлен в тонкой кишке крьісь! и описан как имеющий в

5-10 раз более вьісокое сродство по отношению к пептиду Му, чем к нейропептиду У. О. Іаригйе еї аї,

Епдосіпоїюсду 118:1910-1917 (1986). Затем озтот рецептор бьл обнаружен в адипоците и линии клеток проксимальньїх почечньїх канальцев. Зтот рецептор связан с возможностью ингибирующего действия с аденилатциклазой и восприймчив к коклюшному токсину.

В кишке зтот рецептор осуществляет мощное ингибирование секреции жидкости и злектролита. Рецептор локализован в клетках криптьі, где, по-видимому, имеет место кишечная секреция хлорида. Рецептор, предпочитающий пептид МУ в адипоцитах является медиатором уменьшения липолиза посредством циклический аденозинмонофосфат ( ЦАМФ, сАМР) -зависимого механизма. 70 "Пищевой рецептор"

Одним из найболее рано обнаруженньїх основньїх зффектов нейропептида 1 бьіло значительное увеличение приема пищи, которое наблюдалось после введения пептида в гипоталамус крьіс. Реакция бьіла найбольшей при вливаниий пептида в околос водную область гипоталамуса. В. (3. З(апієу ейа), Бгаіп Кезеагсп 604:304-317 (1993). Фармакология зтой реакции подобна таковой у У-1 рецептора, но фрагмент 2-36 нейропептида у бьл 75 значительно более мощньім, чем нейропептид 32. Кроме того, интрацеребровентрикулярньій нейропептид У. (2-36) в полной мере стимулирует питание, но не снижает температуру тела, как зто делает нейропептид У полной длинь. Е.В. доїїсоеицг еї а!., Вгаїп. Кезеагсп ВиПейіп, 26:309-311 (1991)

Биологическую активность соединений по настоящему изобретению оценивали путем первоначального скрининга, при котором бьстро и точно измеряли связьивание испьтуемого соединения с известньіми 2о клеточньми рецепторами нейропептида У. МЙИспьтания, пригоднье для оценки антагонистов рецепторов нейропептида У, хорошо известньі в данной области медициньі. Смотри, например, патент США Мо 5284839, вьіданньій 8 февраля 1994г., которьій включен в данное описание в качестве ссьілки. Смотри также М.М. Ууаїкег еї аІ., Удоигпа! Меипгозсіепсевз, 8:2438-2446 (1988).

Испьітание на связьівание с нейропептидом У Га

Проверяли способность соединений настоящего изобретения связьшваться с нейропептидом У методом, описанньм у М. МУ. УМаї аї аіЇ., см. вьіше. В зтом испьитаниий использовали клеточную линию ЗК-М-МО. Зта і) клеточная линия бьіла получена из лечебного учреждения Зіоапе-Кецегіпд Метогіа! Нозріа!І, Нью-Йорк. Зти клетки культивировали в колбах Т-150, используя незаменимье минимальньсе питательнье средьі Дульбекко (0

МЕМ) с добавлением 595-ной плодной сьворотки теленка. Клетки вручную извлекали из колб путем «Ж Ввіскабливания, таблетировали и хранили при -707С.

Таблетки вновь суспендировали, используя стеклянньій гомогенизатор, в 25ММ буфера НЕРЕЗ (рН 7,4), З содержавшего 2,5мММ хлорида кальция, ТММ хлорида магния и 2мг/л бацитрацина. Инкубацию осуществляли в ч- конечном обьеме 200мкл содержащем 0,1нмМ 12541-пептида У (2200 Сі /ммоль) и 0,2-0,4мг белка, в течение с примерно двух часов при комнатной температуре.

Неспецифическое связьивание определяли в виде величиньі! радисактивности, оставшейся связанной с «І тканью после инкубации в присутствий їмкМ нейропептида У. В нескольких зкспериментах в инкубационную смесь включали различнье концентрации соединений.

Инкубацию заканчивали бьістрьим фильтрованием через стекловолоконнье фильтрьі, предварительно « пропитанньсе 0,395-ньім полизтиленимином, использовав устройство для сбора культивированньїх клеток с 96 ячейками. Фильтрьі промьівали 5 мл 50 мМ Трис (рН 7,4) при 4"С и бьістро вьісушивали при 60"С. Затем - с обрабатьвали фильтрьї наплавляемьми сцинтилляционньіми листами и считали радисактивность, оставшуюся а на фильтрах. Результатьь анализировали, использовав различнье комплектьії программного обеспечения. є» Концентрацию белков измеряли с помощью стандартньїх реактивов для белковогоП анализа, использовав в качестве стандартов бьічий сьівороточньїй альбумин. » СТ заст рою

Ф

З тою ть 29 у, - гидрохлорид (соль)

Ф! Так как соединения формуль 1 являются зффективньіми антагонистами рецепторов нейропептида У, то зти соединения полезньі для лечения самьїх разньїх клинических состояний, которне характеризуются наличием о избьітка нейропептида У. Позтому, в соответствии с настоящим изобретением, предлагаєется способ лечения или предупреждения физиологического расстройства, связанного с избьітком нейропептида у, включающий в 60 себя введениє млекопитающему, нуждающемуся в таком лечении, зффективного количества соєдинения формульй 1 или его фармацевтически приемлемой (ого) соли, сольвата или пролекарства. Термин "физиологическое расстройство, связанное с избьтком нейропептида " охватьвает те расстройства, которне связаньії с несоответствующей стимуляцией рецепторов нейропептида У независимо от действительного количества нейропептида у, присутствующего в месте действия. бо Зти физиологические расстройства могут включать:

расстройства или заболевания сердца, кровеносньїх сосудов или почечной системь!, такие, как вазоспазм, сердечная недостаточность, шок, гипертрофия сердца, повьішенное кровяное давление, стенокардия, инфаркт миокарда, внезапная остановка сердца, аритмия, заболевание периферических кровеносньїх сосудов и анормальнье почечнье состояния, такие, как нарушенньій ток жидкости, анормальньій массоперенос или почечная недостаточность;

состояния, связаннье с повьішенной активностью симпатических нервов, например, во время или после хирургической операции на коронарньїх ососудах и манипуляций и хирургической ооперации в желудочно-кишечном тракте;

70 болезни головного мозга и заболевания, связаннье с центральной нервной системой, такие, как инфаркт головного мозга, нейродегенерация, зпилепсия, удар и состояния, связаннье с ударом, церебральньй вазоспазм и кровоизлияние, депрессия, тревога, шизофрения и слабоумие;

состояния, связаннье с болью или восприятием повреждающих воздействий нервньіми центрами; заболевания, связаннье с аномальной моторикой желудочнокишечного тракта и аномальнь!м вьіделением,

/5 такими, как различнье формь! илеуса, недержание мочи и болезнь Крона;

аномальное питье и расстройства приема пищи, такие, как ожирение, анорексия, булемия, и метаболические расстройства;

заболевания, связаннье с сексуальной дисфункцией, и репродуктивнье расстройства;

состояния или расстройства, связаннье с воспалением;

респираторнье заболевания, такие, как астма и состояния, связаннье с астмой, и сужение просвета бронхов; и заболевания, связаннье с анормальнь/м вьіделением гормонов, таких, как лютеинизирующий гормон, гормон роста, инсулин и пролактин.

Claims (8)

Формула винаходу с що о

1. Способ ингибирования физиологического расстройства, связанного с избьтком нейропептида У, заключающийся в том, что вводят нуждающемуся в зтом человеку, зффективное количество соединения формули (І) «т 7 2 ОоСНоСН.-В. ч . М ! (Се) 1 (8; ! «І | Щх пе, 2 ок . "» 1 же 5

45 . т» () Ме, где В и 23 независимо представляют водород, -СН»У, -і о или о , где Аг представляєт їз» і -с-дм -с- (С3-Сд'алкил) необязательно замещенньій фенил; о В2 вьібран из группьї, состоящей из пирролидино, гексаметиленимино и пиперидино; или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата. іме)

2. Способ по п. 71, отличающийся тем, что указанное соединение представляет собой его хлористоводородную соль. 60

3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что указанное введение является профилактическим.

4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что указанное соединение представляет собой б5 осн.,сно-М

, .

й . І щх 2 он

15 . 1 или его хлористоводородную соль.

5. Способ по п. 1, отличающийся тем, что состоянием, связанньмм с избьтком нейропептида У, является тревога.

6. Способ по п. 1, отличающийся тем, что состоянием, связанньмм с избьтком нейропептида У, является ожирение. сч

7. Способ по п. 1, отличающийся тем, что состоянием, связанньмм с избьтком нейропептида У, является депрессия. о

8. Способ по п. 1, отличающийся тем, что состоянием, связанньїм с избьітком нейропептида У, является боль или восприятие повреждающих воздействий нервньїми центрами. тріїгя я " : " " : : пов в зо Офіційний бюлетень "Промислоава власність". Книга 1 "Винаходи, корисні моделі, топографії інтегральних мікросхем", 2002, М 6, 15.06.2002. Державний департамент інтелектуальної власності Міністерства освіти і « науки України. їм- (Се) «

- . и? щ» (о) -і щ» с» іме) 60 б5