TW201925221A - 胜肽化合物 - Google Patents
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Abstract
本發明係關於一種可用於治療或預防肥胖症、糖尿病等之胜肽化合物。更具體而言,本發明係關於一種式(I):P1-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-α-MePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-RA10)-A11-A12-Aib-Leu-A15-Lys-Gln-A18-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-A35-NH2所示之胜肽化合物、以及利用前述胜肽化合物治療或預防肥胖症、糖尿病等。
Description
本發明係有關依據Y2受體、GLP-1受體及GIP受體活化作用,而在肥胖症、糖尿病等之治療或預防上有用的胜肽化合物。
胜肽YY(PYY)為從豬上部小腸單離之由36個胺基酸殘基所構成的胜肽。PYY與從豬腦單離出之神經胜肽Y(NPY)同屬於胰多胜肽(pancreatic polypeptide;PP)家族(專利文獻1及2)。
已知PYY係伴隨飲食攝取而從消化管內分泌細胞(L細胞)分泌,經由Y2受體而顯示攝食抑制作用。就其作用途徑而言,已報導有經由下丘腦弓狀核NPY/AgRP表現神經細胞之Y2受體所中介的腸管/下丘腦途徑、經由迷走神經末端之Y2受體所中介的迷走神經傳入途徑。
又,已報導飲食行異常之神經性厭食症(AN;Anorexia Nervosa)之患者,腦脊髓中之PYY濃度高,神經性貪食症(BN;Bulimia Nervosa)之患者,與健康者相比,飲食後之血液中PYY濃度的上升極為緩慢。再者,已知與
健康者之PYY濃度相比,肥胖症患者之血液中PYY濃度較低。
昇糖素類似胜肽-1(glucagon-like peptide 1,GLP-1)及葡萄糖依存性胰島素分泌刺激多胜肽(GIP),係被統稱為腸泌素(incretin)的胜肽。GLP-1及GIP分別由小腸之L細胞及K細胞分泌。已知GLP-1經由GLP-1受體中介而作用,具有糖依存性胰島素分泌促進作用及攝食抑制作用。另一方面,已知GIP經由GIP受體中介而具有糖依存性胰島素分泌促進作用,不過對於攝食之影響則不明確。
已報導GLP-1受體/GIP受體共促效性胜肽顯示比單獨的GLP-1受體促效藥更強之血糖降低作用及體重降低作用(專利文獻3)。又,亦嘗試根據天然之昇糖素、GIP或GLP-1之結構,探索具有GLP-1受體/GIP受體共促效劑活性之胜肽、或開發其作為抗肥胖藥、糖尿病治療藥(專利文獻3至6)。
[專利文獻1]WO2006/049681
[專利文獻2]WO2011/002066
[專利文獻3]WO2010/011439
[專利文獻4]WO2013/164483
[專利文獻5]WO2014/192284
[專利文獻6]WO2016/084826
本發明之目的為提供具有Y2受體、GLP-1受體及GIP受體活化作用,在作為肥胖症及糖尿病等之預防/治療劑上有用的胜肽化合物。
發明人等針對依據Y2受體、GLP-1受體及GIP受體活化作用,而在作為肥胖症及糖尿病等之預防/治療劑上有用之胜肽化合物專心檢討的結果,發現具有後述式(I)所示之序列的胜肽化合物,依據Y2受體、GLP-1受體及GIP受體活化作用,在肥胖症或糖尿病之預防/治療上有用,進而完成本發明。
亦即,本發明係關於下述[1]至[17]。
[1]一種胜肽或其鹽,其中該胜肽如式(I)所示(以下,簡稱為化合物(I)):P1-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-α-MePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-RA10)-A11-A12-Aib-Leu-A15-Lys-Gln-A18-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-A35-NH2(序列編號1)[式中,P1表示下述式所示之基:-RA1、-CO-RA1、
-CO-ORA1、-CO-CORA1、-SO-RA1、-SO2-RA1、-SO2-ORA1、-CO-NRA2RA3、-SO2-NRA2RA3、或-C(=NRA1)-NRA2RA3(式中,RA1、RA2及RA3獨立地表示氫原子、可經取代之烴基、或可經取代之雜環基);RA10表示Pal或Oda;A11表示Aib、Ala或Ser(A11較佳為Aib,其他態樣中,較佳為Ala,其他態樣中,較佳為Ser);A12表示Ile或Lys;A15表示Asp或Glu;A18表示Ala或Arg;A35表示Tyr或Phe(2-F)]。
[2]如上述[1]記載之胜肽或其鹽,其中,P1為氫原子或甲基。
[3]如上述[1]記載之胜肽或其鹽,其中,RA10為Pal。
[4]如上述[1]記載之胜肽或其鹽,其中,A12為Ile。
[5]如上述[1]記載之胜肽或其鹽,其中,A15為Glu。
[6]如上述[1]記載之胜肽或其鹽,其中,A18為Arg。
[7]如上述[1]記載之胜肽或其鹽,其中,A35為Tyr。
[8]一種胜肽或其鹽,該胜肽係H-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Aib-Ile-Aib-Leu-Glu-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2。
[9]一種胜肽或其鹽,該胜肽係H-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Ala-Ile-Aib-Leu-Glu-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2。
[10]一種胜肽或其鹽,該胜肽係Me-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Ser-Ile-Aib-Leu-Glu-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2。
[11]一種醫藥,其含有上述[1]記載之胜肽或其鹽。
[12]如上述[11]記載之醫藥,其為Y2受體、GLP-1受體及GIP受體之活化劑。
[13]如上述[11]記載之醫藥,其為肥胖症或糖尿病之預防/治療劑。
[14]一種哺乳動物之肥胖症或糖尿病之預防/治療方法,其係對該哺乳動物投予有效量的上述[1]記載之胜肽或其鹽。
[15]一種將哺乳動物之Y2受體、GLP-1受體及GIP受體活化的方法,其係對該哺乳動物投予有效量的上述[1]記載之胜肽或其鹽。
[16]一種上述[1]記載之胜肽或其鹽之用途,係用於製
造肥胖症或糖尿病之預防/治療劑。
[17]如上述[1]記載之胜肽或其鹽,其係用於肥胖症或糖尿病之預防/治療。
化合物(I)依據Y2受體、GLP-1受體及GIP受體活化作用,於生體內(in vivo)可具有攝食抑制作用及體重減少作用。因此,化合物(I)在作為肥胖症或糖尿病之預防及/或治療劑上有用。
第1圖展示在DIO小鼠中實施例41之化合物(P41)的抗肥胖作用。各化合物係於4週期間以每日1次對小鼠進行皮下投予。(a)體重之逐日變化、(b)累積食餌攝取量之%阻礙率、(c)以EchoMRI測定之體脂肪量、(d)淨體重(body lean mass)、(e)脂肪組織(fat pad)重量、(f)肝臟組織重量、(g)肝臟內TG含量、(h)肝臟切片之Hematoxy-eosin染色、(i)各基因之表現。*p<0.025,**p<0.005,***p<0.0005 vs.載體(Shirley-Williams test),#p<0.025,##p<0.005,###p<0.0005 vs.載體(Williams' test),數據表示平均±SD(N=6)。
第2圖展示ob/ob小鼠中的P41之抗肥胖、抗糖尿病作用。各化合物係於4週期間以每日1次對小鼠進行皮下投予。(a)GHb、(b)血漿葡萄糖、(c)血漿胰島素、(d)體重之逐日變化、(e)累積食餌攝取量之%阻礙率、(f)組織重
量、及(g)肝臟內TG含量。#p<0.025,##p<0.005,###p<0.0005 vs.載體(Shirley-Williams test)),數據係表示平均±SD(N=5-7)。此外,載體投予群為N=5,P41投予群為N=7。
第3圖展示雄性KKAy小鼠中的P41之抗肥胖、抗糖尿病作用。各化合物係於4週期間以每日1次對小鼠進行皮下投予後,(a)體重之逐日變化、(b)累積食餌攝取量之%阻礙率、(c)△GHb、(d)血漿葡萄糖、(e)血漿胰島素、(f)肝臟組織重量、(g)肝臟內TG含量、及(h)白色脂肪重量。
*p<0.025,**p<0.005,***p<0.0005 vs載體(Williams' test),#p<0.025,##p<0.005,### p<0.0005 vs載體(Shirley-Williams test)。數據表示平均±SD(N=7)。
第4圖展示對味覺嫌惡試驗之P41的作用。於1週期間對小鼠進行2次化合物及0.1%糖精投予。在第二次調理後第二日,對小鼠供給0.1%糖精鈉及自來水兩者3小時,測定各液體之攝水量,算出糖精偏好率。***p<0.001 vs.載體(Dunnett's test)。數據表示平均±SD(N=7)。
第5圖展示食蟹猴中之P41之攝食抑制效果。投予後約8小時後,供給通常之食餌。在投予後24小時期間,未觀察到嘔吐。N=2(雄:1、雌:1)。
以下,關於本說明書中所用之各取代基的定義加以詳述。只要未特別限定,各取代基具有下述定義。
本說明書中,就「鹵素原子」而言,可列舉例如:氟、
氯、溴、碘。
在本說明書中,就「C1-6烷基」而言,可列舉例如:甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、第二丁基、第三丁基、戊基、異戊基、新戊基、1-乙基丙基、己基、異己基、1,1-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、3,3-二甲基丁基、2-乙基丁基。
在本說明書中,就「可經鹵化之C1-6烷基」而言,可列舉例如:可具有1至7個,較佳為1至5個鹵素原子之C1-6烷基。就具體例而言,可列舉:甲基、氯甲基、二氟甲基、三氯甲基、三氟甲基、乙基、2-溴乙基、2,2,2-三氟乙基、四氟乙基、五氟乙基、丙基、2,2-二氟丙基、3,3,3-三氟丙基、異丙基、丁基、4,4,4-三氟丁基、異丁基、第二丁基、第三丁基、戊基、異戊基、新戊基、5,5,5-三氟戊基、己基、6,6,6-三氟己基。
在本說明書中,就「C2-6烯基」而言,可列舉例如:乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、2-甲基-1-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、3-甲基-2-丁烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、4-戊烯基、4-甲基-3-戊烯基、1-己烯基、3-己烯基、5-己烯基。
在本說明書中,就「C2-6炔基」而言,可列舉例如:乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、3-丁炔基、1-戊炔基、2-戊炔基、3-戊炔基、4-戊炔基、1-己炔基、2-己炔基、3-己炔基、4-己炔基、5-己炔基、4-甲基-2-戊炔基。
在本說明書中,就「C3-10環烷基」而言,可列舉例如:環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、環辛基、雙環[2.2.1]庚基、雙環[2.2.2]辛基、雙環[3.2.1]辛基、金剛烷基。
在本說明書中,就「可經鹵化之C3-10環烷基」而言,可列舉例如:可具有1至7個,較佳為1至5個鹵素原子之C3-10環烷基。就具體例而言,可列舉環丙基、2,2-二氟環丙基、2,3-二氟環丙基、環丁基、二氟環丁基、環戊基、環己基、環庚基、環辛基。
在本說明書中,就「C3-10環烯基」而言,可列舉例如:環丙烯基、環丁烯基、環戊烯基、環己烯基、環庚烯基、環辛烯基。
在本說明書中,就「C6-14芳基」而言,可列舉例如:苯基、1-萘基、2-萘基、1-蒽基、2-蒽基、9-蒽基。
在本說明書中,就「C7-16芳烷基」而言,可列舉例如:苄基、苯乙基、萘基甲基、苯基丙基。
在本說明書中,就「C1-6烷氧基」而言,可列舉例如:甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、異丁氧基、第二丁氧基、第三丁氧基、戊氧基、己氧基。
在本說明書中,就「可經鹵化之C1-6烷氧基」而言,可列舉例如:可具有1至7個,較佳為1至5個鹵素原子之C1-6烷氧基。就具體例而言,可列舉:甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、乙氧基、2,2,2-三氟乙氧基、
丙氧基、異丙氧基、丁氧基、4,4,4-三氟丁氧基、異丁氧基、第二丁氧基、戊氧基、己氧基。
在本說明書中,就「C3-10環烷氧基」而言,可列舉例如:環丙氧基、環丁氧基、環戊氧基、環己氧基、環庚氧基、環辛氧基。
在本說明書中,就「C1-6烷硫基」而言,可列舉例如:甲硫基、乙硫基、丙硫基、異丙硫基、丁硫基、第二丁硫基、第三丁硫基、戊硫基、己硫基。
在本說明書中,就「可經鹵化之C1-6烷硫基」而言,可列舉例如:可具有1至7個,較佳為1至5個鹵素原子之C1-6烷硫基。就具體例而言,可列舉:甲硫基、二氟甲硫基、三氟甲硫基、乙硫基、丙硫基、異丙硫基、丁硫基、4,4,4-三氟丁硫基、戊硫基、己硫基。
在本說明書中,就「C1-6烷基-羰基」而言,可列舉例如:乙醯基、丙醯基、丁醯基、2-甲基丙醯基、戊醯基、3-甲基丁醯基、2-甲基丁醯基、2,2-二甲基丙醯基、己醯基、庚醯基。
在本說明書中,就「可經鹵化之C1-6烷基-羰基」而言,可列舉例如:可具有1至7個,較佳為1至5個鹵素原子之C1-6烷基-羰基。就具體例而言,可列舉:乙醯基、氯乙醯基、三氟乙醯基、三氯乙醯基、丙醯基、丁醯基、戊醯基、己醯基。
在本說明書中,就「C1-6烷氧基-羰基」而言,可列舉例如:甲氧基羰基、乙氧基羰基、丙氧基羰基、
異丙氧基羰基、丁氧基羰基、異丁氧基羰基、第二丁氧基羰基、第三丁氧基羰基、戊氧基羰基、己氧基羰基。
在本說明書中,就「C6-14芳基-羰基」而言,可列舉例如:苄醯基、1-萘甲醯基、2-萘甲醯基。
在本說明書中,就「C7-16芳烷基-羰基」而言,可列舉例如:苯基乙醯基、苯基丙醯基。
在本說明書中,就「5至14員芳香族雜環羰基」而言,可列舉例如:菸鹼醯基、異菸鹼醯基、噻吩甲醯基、呋喃甲醯基。
在本說明書中,就「3至14員非芳香族雜環羰基」而言,可列舉例如:嗎啉基羰基、哌啶基羰基、吡咯啶基羰基。
在本說明書中,就「單-或二-C1-6烷基-胺甲醯基」而言,可列舉例如:甲基胺甲醯基、乙基胺甲醯基、二甲基胺甲醯基、二乙基胺甲醯基、N-乙基-N-甲基胺甲醯基。
在本說明書中,就「單-或二-C7-16芳烷基-胺甲醯基」而言,可列舉例如:苄基胺甲醯基、苯乙基胺甲醯基。
在本說明書中,就「C1-6烷基磺醯基」而言,可列舉例如:甲基磺醯基、乙基磺醯基、丙基磺醯基、異丙基磺醯基、丁基磺醯基、第二丁基磺醯基、第三丁基磺醯基。
在本說明書中,就「可經鹵化之C1-6烷基
磺醯基」而言,可列舉例如:可具有1至7個,較佳1至5個鹵素原子之C1-6烷基磺醯基。就具體例而言,可列舉甲基磺醯基、二氟甲基磺醯基、三氟甲基磺醯基、乙基磺醯基、丙基磺醯基、異丙基磺醯基、丁基磺醯基、4,4,4-三氟丁基磺醯基、戊基磺醯基、己基磺醯基。
在本說明書中,就「C6-14芳基磺醯基」而言,可列舉例如:苯基磺醯基、1-萘基磺醯基、2-萘基磺醯基。
在本說明書中,就「取代基」而言,可列舉例如:鹵素原子、氰基、硝基、可經取代之烴基、可經取代之雜環基、醯基、可經取代之胺基、可經取代之胺甲醯基、可經取代之硫代胺甲醯基、可經取代之胺磺醯基、可經取代之羥基、可經取代之巰基(SH基)、可經取代之矽基。
在本說明書中,就「烴基」(包含「可經取代之烴基」中之「烴基」)而言,可列舉例如:C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-10環烷基、C3-10環烯基、C6-14芳基、C7-16芳烷基。
在本說明書中,就「可經取代之烴基」而言,可列舉例如:可具有選自下述取代基群A之取代基的烴基。
[取代基群A]
(1)鹵素原子、(2)硝基、
(3)氰基、(4)側氧基、(5)羥基、(6)可經鹵化之C1-6烷氧基、(7)C6-14芳氧基(例如,苯氧基、萘氧基)、(8)C7-16芳烷氧基(例如,苄氧基)、(9)5至14員芳香族雜環氧基(例如,吡啶基氧基)、(10)3至14員非芳香族雜環氧基(例如,嗎啉基氧基、哌啶基氧基)、(11)C1-6烷基-羰基氧基(例如,乙醯基氧基、丙醯基氧基)、(12)C6-14芳基-羰基氧基(例如,苄醯基氧基、1-萘甲醯基氧基、2-萘甲醯基氧基)、(13)C1-6烷氧基-羰基氧基(例如,甲氧基羰基氧基、乙氧基羰基氧基、丙氧基羰基氧基、丁氧基羰基氧基)、(14)單-或二-C1-6烷基-胺甲醯基氧基(例如,甲基胺甲醯基氧基、乙基胺甲醯基氧基、二甲基胺甲醯基氧基、二乙基胺甲醯基氧基)、(15)C6-14芳基-胺甲醯基氧基(例如,苯基胺甲醯基氧基、萘基胺甲醯基氧基)、(16)5至14員芳香族雜環羰基氧基(例如,菸鹼醯基氧基)、(17)3至14員非芳香族雜環羰基氧基(例如,嗎啉基羰基氧基、哌啶基羰基氧基)、
(18)可經鹵化之C1-6烷基磺醯基氧基(例如,甲基磺醯基氧基、三氟甲基磺醯基氧基)、(19)可經C1-6烷基取代之C6-14芳基磺醯基氧基(例如,苯基磺醯基氧基、甲苯磺醯基氧基)、(20)可經鹵化之C1-6烷硫基、(21)5至14員芳香族雜環基、(22)3至14員非芳香族雜環基、(23)甲醯基、(24)羧基、(25)可經鹵化之C1-6烷基-羰基、(26)C6-14芳基-羰基、(27)5至14員芳香族雜環羰基、(28)3至14員非芳香族雜環羰基、(29)C1-6烷氧基-羰基、(30)C6-14芳氧基-羰基(例如,苯氧基羰基、1-萘氧基羰基、2-萘氧基羰基)、(31)C7-16芳烷氧基-羰基(例如,苄氧基羰基、苯乙氧基羰基)、(32)胺甲醯基、(33)硫代胺甲醯基、(34)單-或二-C1-6烷基-胺甲醯基、(35)C6-14芳基-胺甲醯基(例如,苯基胺甲醯基)、(36)5至14員芳香族雜環胺甲醯基(例如,吡啶基胺甲醯基、噻吩基胺甲醯基)、
(37)3至14員非芳香族雜環胺甲醯基(例如,嗎啉基胺甲醯基、哌啶基胺甲醯基)、(38)可經鹵化之C1-6烷基磺醯基、(39)C6-14芳基磺醯基、(40)5至14員芳香族雜環磺醯基(例如,吡啶基磺醯基、噻吩基磺醯基)、(41)可經鹵化之C1-6烷基亞磺醯基、(42)C6-14芳基亞磺醯基(例如,苯基亞磺醯基、1-萘基亞磺醯基、2-萘基亞磺醯基)、(43)5至14員芳香族雜環亞磺醯基(例如,吡啶基亞磺醯基、噻吩基亞磺醯基)、(44)胺基、(45)單-或二-C1-6烷基胺基(例如,甲基胺基、乙基胺基、丙基胺基、異丙基胺基、丁基胺基、二甲基胺基、二乙基胺基、二丙基胺基、二丁基胺基、N-乙基-N-甲基胺基)、(46)單-或二-C6-14芳基胺基(例如,苯基胺基)、(47)5至14員芳香族雜環胺基(例如,吡啶基胺基)、(48)C7-16芳烷基胺基(例如,苄基胺基)、(49)甲醯基胺基、(50)C1-6烷基-羰基胺基(例如,乙醯基胺基、丙醯基胺基、丁醯基胺基)、(51)(C1-6烷基)(C1-6烷基-羰基)胺基(例如,N-乙醯基-N-甲基胺基)、
(52)C6-14芳基-羰基胺基(例如,苯基羰基胺基、萘基羰基胺基)、(53)C1-6烷氧基-羰基胺基(例如,甲氧基羰基胺基、乙氧基羰基胺基、丙氧基羰基胺基、丁氧基羰基胺基、第三丁氧基羰基胺基)、(54)C7-16芳烷氧基-羰基胺基(例如,苄氧基羰基胺基)、(55)C1-6烷基磺醯基胺基(例如,甲基磺醯基胺基、乙基磺醯基胺基)、(56)可經C1-6烷基取代之C6-14芳基磺醯基胺基(例如,苯基磺醯基胺基、甲苯磺醯基胺基)、(57)可經鹵化之C1-6烷基、(58)C2-6烯基、(59)C2-6炔基、(60)C3-10環烷基、(61)C3-10環烯基、及(62)C6-14芳基。
「可經取代之烴基」中之上述取代基的數目,例如為1至5個,較佳為1至3個。在取代基數為2個以上之情況,各取代基可為相同,亦可為相異。
在本說明書中,就「雜環基」(包含「可經取代之雜環基」中的「雜環基」)而言,可列舉例如:就環構成原子而言,除碳原子以外,分別含有選自氮原子、硫原子及氧原子之1至4個雜原子的(i)芳香族雜環基、(ii)
非芳香族雜環基及(iii)7至10員雜交聯環基。
在本說明書中,就「芳香族雜環基」(包含「5至14員芳香族雜環基」)而言,可列舉例如:除碳原子以外,含有選自氮原子、硫原子及氧原子之1至4個雜原子作為環構成原子的5至14員(較佳為5至10員)芳香族雜環基。
就該「芳香族雜環基」之較佳例而言,可列舉:噻吩基、呋喃基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、異噻唑基、唑基、異唑基、吡啶基、吡基、嘧啶基、嗒基、1,2,4-二唑基、1,3,4-二唑基、1,2,4-噻二唑基、1,3,4-噻二唑基、三唑基、四唑基、三基等5至6員單環式芳香族雜環基;
苯并苯硫基、苯并呋喃基、苯并咪唑基、苯并唑基、苯并異唑基、苯并噻唑基、苯并異噻唑基、苯并三唑基、咪唑并吡啶基、噻吩并吡啶基、呋喃并吡啶基、吡咯并吡啶基、吡唑并吡啶基、唑并吡啶基、噻唑并吡啶基、咪唑并吡基、咪唑并嘧啶基、噻吩并嘧啶基、呋喃并嘧啶基、吡咯并嘧啶基、吡唑并嘧啶基、唑并嘧啶基、噻唑并嘧啶基、吡唑并三基、萘并[2,3-b]噻吩基、吩噻基、吲哚基、異吲哚基、1H-吲唑基、嘌呤基、異喹啉基、喹啉基、呔基、萘啶基、喹啉基、喹唑啉基、啉基、咔唑基、β-咔啉基、啡啶基、吖啶基、啡基、啡噻基、啡基等8至14員稠合多環式(較佳為2或3環式)芳香族雜環基。
在本說明書中,就「非芳香族雜環基」(包含「3至14員非芳香族雜環基」)而言,可列舉例如:除含有碳原子以外,含有選自氮原子、硫原子及氧原子之1至4個雜原子作為環構成原子的3至14員(較佳為4至10員)非芳香族雜環基。
就該「非芳香族雜環基」之較佳例而言,可列舉:氮丙啶基、環氧乙基、環硫乙基、氮雜環丁基、氧雜環丁基、硫雜環丁基、四氫噻吩基、四氫呋喃基、吡咯啉基、吡咯啶基、咪唑啉基、咪唑啶基、唑啉基、唑啶基、吡唑啉基、吡唑啶基、噻唑啉基、噻唑啶基、四氫異噻唑基、四氫唑基、四氫異唑基、哌啶基、哌基、四氫吡啶基、二氫吡啶基、二氫噻喃基、四氫嘧啶基、四氫嗒基、二氫哌喃基、四氫哌喃基、四氫噻喃基、嗎啉基、硫代嗎啉基、氮雜環庚基、二氮雜環庚基、氮雜環庚三烯基、氧雜環庚基、氮雜環辛基、二氮雜環辛基等3至8員單環式非芳香族雜環基;
二氫苯并呋喃基、二氫苯并咪唑基、二氫苯并唑基、二氫苯并噻唑基、二氫苯并異噻唑基、二氫萘并[2,3-b]噻吩基、四氫異喹啉基、四氫喹啉基、4H-喹基、吲哚啉基、異吲哚啉基、四氫噻吩并[2,3-c]吡啶基、四氫苯并氮雜環庚三烯基、四氫喹啉基、四氫啡啶基、六氫啡噻基、六氫啡基、四氫呔基、四氫萘啶基、四氫喹唑啉基、四氫啉基、四氫咔唑基、四氫-β-咔啉基、四氫吖啶基、四氫啡基、四氫硫雜蒽基(tetrahydrothioxanthenyl)、
八氫異喹啉基等9至14員稠合多環式(較佳為2或3環式)非芳香族雜環基。
在本說明書中,就「7至10員雜架橋環基」之較佳例而言,可列舉醌啶基(quinuclidinyl)、7-氮雜雙環[2.2.1]庚基。
在本說明書中,就「含氮雜環基」而言,可列舉「雜環基」之中含有至少1個以上氮原子作為環構成原子者。
在本說明書中,就「可經取代之雜環基」而言,可列舉例如:可具有選自前述取代基群A之取代基的雜環基。
「可經取代之雜環基」中的取代基之數,為例如1至3個。在取代基數為2個以上之情況,各取代基可為相同,亦可為相異。
在本說明書中,就「醯基」而言,可列舉例如:可分別具有「選自C1-6烷基、C2-6烯基、C3-10環烷基、C3-10環烯基、C6-14芳基、C7-16芳烷基、5至14員芳香族雜環基及3至14員非芳香族雜環基之1或2個取代基」的甲醯基、羧基、胺甲醯基、硫代胺甲醯基、亞磺酸基、磺酸基、胺磺醯基、膦醯基,其中上述取代基可分別具有選自鹵素原子、可經鹵化之C1-6烷氧基、羥基、硝基、氰基、胺基及胺甲醯基之1至3個取代基。
又,就「醯基」而言,亦可列舉烴-磺醯基、雜環-磺醯基、烴-亞磺醯基、雜環-亞磺醯基。
在此,烴-磺醯基意指與烴基鍵結之磺醯基,雜環-磺醯基意指與雜環基鍵結之磺醯基,烴-亞磺醯基意指與烴基鍵結之亞磺醯基,雜環-亞磺醯基意指與雜環基鍵結之亞磺醯基。
就「醯基」之較佳例而言,可列舉甲醯基、羧基、C1-6烷基-羰基、C2-6烯基-羰基(例如,巴豆醯基)、C3-10環烷基-羰基(例如,環丁烷羰基、環戊烷羰基、環己烷羰基、環庚烷羰基)、C3-10環烯基-羰基(例如,2-環己烯羰基)、C6-14芳基-羰基、C7-16芳烷基-羰基、5至14員芳香族雜環羰基、3至14員非芳香族雜環羰基、C1-6烷氧基-羰基、C6-14芳氧基-羰基(例如,苯氧基羰基、萘氧基羰基)、C7-16芳烷氧基-羰基(例如,苄氧基羰基、苯乙氧基羰基)、胺甲醯基、單-或二-C1-6烷基-胺甲醯基、單-或二-C2-6烯基-胺甲醯基(例如,二烯丙基胺甲醯基)、單-或二-C3-10環烷基-胺甲醯基(例如,環丙基胺甲醯基)、單-或二-C6-14芳基-胺甲醯基(例如,苯基胺甲醯基)、單-或二-C7-16芳烷基-胺甲醯基、5至14員芳香族雜環胺甲醯基(例如,吡啶基胺甲醯基)、硫代胺甲醯基、單-或二-C1-6烷基-硫代胺甲醯基(例如,甲基硫代胺甲醯基、N-乙基-N-甲基硫代胺甲醯基)、單-或二-C2-6烯基-硫代胺甲醯基(例如,二烯丙基硫代胺甲醯基)、單-或二-C3-10環烷基-硫代胺甲醯基(例如,環丙硫代胺甲醯基、環己硫代胺甲醯基)、單-或二-C6-14芳基-硫代胺甲醯基(例如,苯基硫代胺甲醯基)、單-或二-C7-16芳烷基-硫代胺甲醯基(例如,苄基硫代胺甲醯基、苯
乙基硫代胺甲醯基)、5至14員芳香族雜環硫代胺甲醯基(例如,吡啶基硫代胺甲醯基)、亞磺酸基、C1-6烷基亞磺醯基(例如,甲基亞磺醯基、乙基亞磺醯基)、磺酸基、C1-6烷基磺醯基、C6-14芳基磺醯基、膦醯基、單-或二-C1-6烷基膦醯基(例如,二甲基膦醯基、二乙基膦醯基、二異丙基膦醯基、二丁基膦醯基)。
在本說明書中,就「可經取代之胺基」而言,可列舉例如:可具有「選自C1-6烷基、C2-6烯基、C3-10環烷基、C6-14芳基、C7-16芳烷基、C1-6烷基-羰基、C6-14芳基-羰基、C7-16芳烷基-羰基、5至14員芳香族雜環羰基、3至14員非芳香族雜環羰基、C1-6烷氧基-羰基、5至14員芳香族雜環基、胺甲醯基、單-或二-C1-6烷基-胺甲醯基、單-或二-C7-16芳烷基-胺甲醯基、C1-6烷基磺醯基及C6-14芳基磺醯基中之1或2個取代基,其中該等取代基可分別具有選自取代基群A之1至3個取代基」的胺基。
就可經取代之胺基之較佳例而言,可列舉胺基、單-或二-(可經鹵化之C1-6烷基)胺基(例如,甲基胺基、三氟甲基胺基、二甲基胺基、乙基胺基、二乙基胺基、丙基胺基、二丁基胺基)、單-或二-C2-6烯基胺基(例如,二烯丙基胺基)、單-或二-C3-10環烷基胺基(例如,環丙基胺基、環己基胺基)、單-或二-C6-14芳基胺基(例如,苯基胺基)、單-或二-C7-16芳烷基胺基(例如,苄基胺基、二苄基胺基)、單-或二-(可經鹵化之C1-6烷基)-羰基胺基(例如,乙醯基胺基、丙醯基胺基)、單-或二-C6-14芳基-羰基胺基(例
如,苄醯基胺基)、單-或二-C7-16芳烷基-羰基胺基(例如,苄基羰基胺基)、單-或二-5至14員芳香族雜環羰基胺基(例如,菸鹼醯基胺基、異菸鹼醯基胺基)、單-或二-3至14員非芳香族雜環羰基胺基(例如,哌啶基羰基胺基)、單-或二-C1-6烷氧基-羰基胺基(例如,第三丁氧基羰基胺基)、5至14員芳香族雜環胺基(例如,吡啶基胺基)、胺甲醯基胺基、(單-或二-C1-6烷基-胺甲醯基)胺基(例如,甲基胺甲醯基胺基)、(單-或二-C7-16芳烷基-胺甲醯基)胺基(例如,苄基胺甲醯基胺基)、C1-6烷基磺醯基胺基(例如,甲基磺醯基胺基、乙基磺醯基胺基)、C6-14芳基磺醯基胺基(例如,苯基磺醯基胺基)、(C1-6烷基)(C1-6烷基-羰基)胺基(例如,N-乙醯基-N-甲基胺基)、(C1-6烷基)(C6-14芳基-羰基)胺基(例如,N-苄醯基-N-甲基胺基)。
在本說明書中,就「可經取代之胺甲醯基」而言,可列舉例如:可具有「選自C1-6烷基、C2-6烯基、C3-10環烷基、C6-14芳基、C7-16芳烷基、C1-6烷基-羰基、C6-14芳基-羰基、C7-16芳烷基-羰基、5至14員芳香族雜環羰基、3至14員非芳香族雜環羰基、C1-6烷氧基-羰基、5至14員芳香族雜環基、胺甲醯基、單-或二-C1-6烷基-胺甲醯基及單-或二-C7-16芳烷基-胺甲醯基之1或2個取代基,其中該等取代基可分別具有選自取代基群A之1至3個取代基」的胺甲醯基。
就可經取代之胺甲醯基之較佳例而言,可列舉:胺甲醯基、單-或二-C1-6烷基-胺甲醯基、單-或二-C2-6
烯基-胺甲醯基(例如,二烯丙基胺甲醯基)、單-或二-C3-10環烷基-胺甲醯基(例如,環丙基胺甲醯基、環己基胺甲醯基)、單-或二-C6-14芳基-胺甲醯基(例如,苯基胺甲醯基)、單-或二-C7-16芳烷基-胺甲醯基、單-或二-C1-6烷基-羰基-胺甲醯基(例如,乙醯基胺甲醯基、丙醯基胺甲醯基)、單-或二-C6-14芳基-羰基-胺甲醯基(例如,苄醯基胺甲醯基)、5至14員芳香族雜環胺甲醯基(例如,吡啶基胺甲醯基)。
在本說明書中,就「可經取代之硫代胺甲醯基」而言,可列舉例如:可具有「選自C1-6烷基、C2-6烯基、C3-10環烷基、C6-14芳基、C7-16芳烷基、C1-6烷基-羰基、C6-14芳基-羰基、C7-16芳烷基-羰基、5至14員芳香族雜環羰基、3至14員非芳香族雜環羰基、C1-6烷氧基-羰基、5至14員芳香族雜環基、胺甲醯基、單-或二-C1-6烷基-胺甲醯基及單-或二-C7-16芳烷基-胺甲醯基之1或2個取代基,其中該等取代基可分別具有選自取代基群A之1至3個取代基」的硫代胺甲醯基。
就可經取代之硫代胺甲醯基之較佳例而言,可列舉:硫代胺甲醯基、單-或二-C1-6烷基-硫代胺甲醯基(例如,甲基硫代胺甲醯基、乙基硫代胺甲醯基、二甲基硫代胺甲醯基、二乙基硫代胺甲醯基、N-乙基-N-甲硫代胺甲醯基)、單-或二-C2-6烯基-硫代胺甲醯基(例如,二烯丙基硫代胺甲醯基)、單-或二-C3-10環烷基-硫代胺甲醯基(例如,環丙基硫代胺甲醯基、環己基硫代胺甲醯基)、單-或二-C6-14芳基-硫代胺甲醯基(例如,苯基硫代胺甲醯
基)、單-或二-C7-16芳烷基-硫代胺甲醯基(例如,苄基硫代胺甲醯基、苯乙基硫代胺甲醯基)、單-或二-C1-6烷基-羰基-硫代胺甲醯基(例如,乙醯基硫代胺甲醯基、丙醯基硫代胺甲醯基)、單-或二-C6-14芳基-羰基-硫代胺甲醯基(例如,苄醯基硫代胺甲醯基)、5至14員芳香族雜環硫代胺甲醯基(例如,吡啶基硫代胺甲醯基)。
在本說明書中,就「可經取代之胺磺醯基」而言,可列舉例如:可具有「選自C1-6烷基、C2-6烯基、C3-10環烷基、C6-14芳基、C7-16芳烷基、C1-6烷基-羰基、C6-14芳基-羰基、C7-16芳烷基-羰基、5至14員芳香族雜環羰基、3至14員非芳香族雜環羰基、C1-6烷氧基-羰基、5至14員芳香族雜環基、胺甲醯基、單-或二-C1-6烷基-胺甲醯基及單-或二-C7-16芳烷基-胺甲醯基之1或2個取代基,其中該等取代基可分別具有選自取代基群A之1至3個取代基」的胺磺醯基。
就可經取代之胺磺醯基之較佳例而言,可列舉:胺磺醯基、單-或二-C1-6烷基-胺磺醯基(例如,甲基胺磺醯基、乙基胺磺醯基、二甲基胺磺醯基、二乙基胺磺醯基、N-乙基-N-甲基胺磺醯基)、單-或二-C2-6烯基-胺磺醯基(例如,二烯丙基胺磺醯基)、單-或二-C3-10環烷基-胺磺醯基(例如,環丙基胺磺醯基、環己基胺磺醯基)、單-或二-C6-14芳基-胺磺醯基(例如,苯基胺磺醯基)、單-或二-C7-16芳烷基-胺磺醯基(例如,苄基胺磺醯基、苯乙基胺磺醯基)、單-或二-C1-6烷基-羰基-胺磺醯基(例如,乙醯基胺
磺醯基、丙醯基胺磺醯基)、單-或二-C6-14芳基-羰基-胺磺醯基(例如,苄醯基胺磺醯基)、5至14員芳香族雜環胺磺醯基(例如,吡啶基胺磺醯基)。
在本說明書中,就「可經取代之羥基」而言,可列舉例如:可具有「選自C1-6烷基、C2-6烯基、C3-10環烷基、C6-14芳基、C7-16芳烷基、C1-6烷基-羰基、C6-14芳基-羰基、C7-16芳烷基-羰基、5至14員芳香族雜環羰基、3至14員非芳香族雜環羰基、C1-6烷氧基-羰基、5至14員芳香族雜環基、胺甲醯基、單-或二-C1-6烷基-胺甲醯基、單-或二-C7-16芳烷基-胺甲醯基、C1-6烷基磺醯基及C6-14芳基磺醯基之取代基,其中該等取代基可分別具有選自取代基群A之1至3個取代基」的羥基。
就可經取代之羥基之較佳例而言,可列舉:羥基、C1-6烷氧基、C2-6烯氧基(例如,烯丙基氧基、2-丁烯基氧基、2-戊烯基氧基、3-己烯基氧基)、C3-10環烷氧基(例如,環己氧基)、C6-14芳氧基(例如,苯氧基、萘氧基)、C7-16芳烷氧基(例如,苄氧基、苯乙氧基)、C1-6烷基-羰基氧基(例如,乙醯基氧基、丙醯基氧基、丁醯基氧基、異丁醯基氧基、三甲基乙醯基氧基)、C6-14芳基-羰基氧基(例如,苄醯基氧基)、C7-16芳烷基-羰基氧基(例如,苄基羰基氧基)、5至14員芳香族雜環羰基氧基(例如,菸鹼醯基氧基)、3至14員非芳香族雜環羰基氧基(例如,哌啶基羰基氧基)、C1-6烷氧基-羰基氧基(例如,第三丁氧基羰基氧基)、5至14員芳香族雜環氧基(例如,吡啶基氧基)、胺
甲醯基氧基、C1-6烷基-胺甲醯基氧基(例如,甲基胺甲醯基氧基)、C7-16芳烷基-胺甲醯基氧基(例如,苄基胺甲醯基氧基)、C1-6烷基磺醯基氧基(例如,甲基磺醯基氧基、乙基磺醯基氧基)、C6-14芳基磺醯基氧基(例如,苯基磺醯基氧基)。
在本說明書中,就「可經取代之巰基」而言,可列舉例如:可具有「選自C1-6烷基、C2-6烯基、C3-10環烷基、C6-14芳基、C7-16芳烷基、C1-6烷基-羰基、C6-14芳基-羰基及5至14員芳香族雜環基之取代基,其中該等取代基可分別具有選自取代基群A之1至3個取代基」的巰基、鹵化巰基。
就可經取代之巰基之較佳例而言,可列舉:巰基(-SH)基、C1-6烷硫基、C2-6烯硫基(例如,烯丙基硫基、2-丁烯基硫基、2-戊烯基硫基、3-己烯基硫基)、C3-10環烷硫基(例如,環己硫基)、C6-14芳硫基(例如,苯硫基、萘硫基)、C7-16芳烷硫基(例如,苄硫基、苯乙硫基)、C1-6烷基-羰基硫基(例如,乙醯基硫基、丙醯基硫基、丁醯基硫基、異丁醯基硫基、三甲基乙醯基硫基)、C6-14芳基-羰基硫基(例如,苄醯基硫基)、5至14員芳香族雜環硫基(例如,吡啶基硫基)、鹵化硫基(例如,五氟硫基)。
在本說明書中,就「可經取代之矽基」而言,可列舉例如:可具有「選自C1-6烷基、C2-6烯基、C3-10環烷基、C6-14芳基及C7-16芳烷基之1至3個取代基,其中該等取代基可分別具有選自取代基群A之1至3個取代
基」的矽基。
就可經取代之矽基之較佳例而言,可列舉:三-C1-6烷基矽基(例如,三甲基矽基、第三丁基(二甲基)矽基)。
以下,關於式(I)中各記號之定義加以詳述。
P1表示下述式所示之基:-RA1、-CO-RA1、-CO-ORA1、-CO-CORA1、-SO-RA1、-SO2-RA1、-SO2-ORA1、-CO-NRA2RA3、-SO2-NRA2RA3、或-C(=NRA1)-NRA2RA3(式中,RA1、RA2及RA3獨立地表示氫原子、可經取代之烴基、或可經取代之雜環基)。
P1較佳為氫原子或甲基。
在第10號之Lys中,(-Gly-Gly-Gly-Gly-RA10)所示之連接子/烷基鏈部分係與Lys之ε-胺基鍵結成為下述結構。
藉由此連接子/烷基鏈之存在,可實現化合物(I)之作用的持續性。
RA10表示Pal或Oda。
RA10較佳為Pal。
A11表示Aib、Ala或Ser。
A11較佳為Aib。
在其他態樣中,A11較佳為Ala。
在其他態樣中,A11較佳為Ser。
A12表示Ile或Lys。
A12較佳為Ile。
A15表示Asp或Glu。
A15較佳為Glu。
A18表示Ala或Arg。
A18較佳為Arg。
A35表示Tyr或Phe(2-F)。
A35較佳為Tyr。
就化合物(I)之較佳例而言,可列舉以下之胜肽或其鹽。
[化合物A]為[P1為甲基,RA10表示Pal或Oda;A11表示Aib、Ala或Ser(較佳為Aib,在其他態樣中,較佳為Ala,其他態樣中,較佳為Ser);A12表示Ile;A15表示Glu;A18表示Arg;A35表示Tyr]所示之胜肽或其鹽的化合物(I)。
[化合物B]為實施例31所記載之胜肽(序列編號40)或其鹽的化合物(I)。
實施例35所記載之胜肽(序列編號44)或其鹽的化合物(I)。
實施例41所記載之胜肽(序列編號50)或其鹽的化合物(I)。
化合物(I)可依照本身周知之胜肽合成法而製造。就胜肽合成法而言,可為例如固相合成法、液相合成法之任一種。亦即,可重覆地進行使能構成化合物(I)之
部分胜肽或胺基酸與殘餘部分(可藉由2個以上胺基酸構成)縮合成期望序列之方式,而製造目的之胜肽。在具有期望序列之生成物具有保護基的情況,藉由將保護基脫離,可製造目的之胜肽。就周知之縮合方法或保護基之脫離法而言,例如,可列舉下述(1)至(5)所記載的方法。
(1)M.Bodanszky及M.A.Ondetti,胜肽合成(Peptide Synthesis),Interscience Publishers,New York(1966年)
(2)Schroeder及Luebke,胜肽(The Peptide),Academic Press,New York(1965年)
(3)泉屋信夫著「胜肽合成之基礎及實驗」丸善股份有限公司(1975年)
(4)矢島治明及榊原俊平,生化學實驗講座1,蛋白質之化學IV,205(1977年)
(5)矢島治明監修,續醫藥品之開發,第14卷,胜肽合成,廣川書店
又,反應後,以通常之精製法,例如,可將溶劑萃取、蒸餾、管柱層析、液體層析、再結晶等組合,而將化合物(I)單離精製。在上述方法所得到之胜肽為游離體的情況,可藉由周知之方法轉化為適當之鹽,相反地得到鹽之情況,可藉由周知之方法轉化為游離體。
此外,原料化合物可為鹽,就此種鹽而言,可列舉作為後述化合物(I)之鹽而例示者。
關於所保護之胺基酸或胜肽之縮合,可採用胜肽合成中所能使用之各種活化試藥,尤其可為參鏻鹽
類、四甲基脲鎓鹽類、碳化二亞胺類等。就參鏻鹽類而言,可列舉:六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基參(吡咯啶基)鏻(PyBOP)、六氟磷酸溴化參(吡咯啶基)鏻(PyBroP)、六氟磷酸7-氮雜苯并三唑-1-基氧基參(吡咯啶基)鏻(PyAOP),就四甲基脲鎓鹽類而言,可列舉:六氟磷酸2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓(HBTU)、六氟磷酸2-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓(HATU)、四氟硼酸2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓(TBTU)、四氟硼酸2-(5-降莰烯-2,3-二羧基醯亞胺)-1,1,3,3-四甲基脲鎓(TNTU)、四氟硼酸O-(N-琥珀醯亞胺基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓(TSTU),就碳化二亞胺類而言,可列舉DCC、N,N'-二異丙基碳化二亞胺(DIPCDI)、N-乙基-N'-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(EDCI‧HCl)等。在藉由此等進行縮合時,較佳為添加消旋化抑制劑(例如,HONB、HOBt、HOAt、HOOBt等)。就縮合所用之溶劑而言,可從已知能使用於胜肽縮合反應之溶劑適當地選擇。例如可使用無水或含水之N,N-二甲基甲醯胺、N,N-二甲基乙醯胺、N-甲基吡咯啶酮等醯胺類;二氯甲烷、氯仿等鹵化烴類;三氟乙醇、酚等醇類;二甲基亞碸等亞碸類;吡啶等三級胺類;二烷、四氫呋喃等醚類;乙腈、丙腈等腈類;乙酸甲酯、乙酸乙酯等酯類或此等之適當混合物等。反應溫度係從可使用於形成胜肽鍵之反應之已知範圍適當地選擇,通常可從約-20℃至50℃之範圍適當地選擇。通常使用1.5至6倍過量之經活化之胺基酸衍生物。在固相合成之情況,於
使用茚三酮反應(ninhydrin reaction)測試之結果,縮合不充分的情況,可不進行保護基之脫離,藉由重覆進行縮合反應,而可進行充分之縮合。即使重覆進行反應仍無法得到充分之縮合,可使用乙酸酐或乙醯基咪唑等將未反應之胺基酸醯化,從而避免後續反應被影響。
就原料胺基酸之胺基的保護基而言,可列舉例如:Z、Boc、第三戊氧基羰基、異莰基氧基羰基、4-甲氧基苄氧基羰基、Cl-Z、Br-Z、金剛烷基氧基羰基、三氟乙醯基、酞醯基、甲醯基、2-硝基苯基次磺酸基(2-nitrophenylsulphenyl)、二苯基硫膦基、Fmoc、三苯甲基等。
就原料胺基酸之羧基的保護基而言,除上述C1-6烷基、C3-10環烷基、C7-14芳烷基之外,可列舉例如:芳基、2-金剛烷基、4-硝基苄基、4-甲氧基苄基、4-氯苄基、苄醯甲基及苄氧基羰基醯肼、第三丁氧基羰基醯肼、三苯甲基醯肼等。
絲胺酸及蘇胺酸之羥基,可藉由例如酯化或醚化而進行保護。就適於該酯化之基而言,可列舉例如:乙醯基等低級(C2-4)烷醯基、苄醯基等芳醯基等、及衍生自有機酸之基等。又,就適於醚化之基而言,例如苄基、四氫哌喃基、第三丁基(But)、三苯甲基(Trt)等。
就酪胺酸之酚性羥基的保護基而言,可列舉例如:Bzl、2,6-二氯苄基、2-硝基苄基、Br-Z、第三丁基等。
就組胺酸之咪唑的保護基而言,可列舉例如:Tos、4-甲氧基-2,3,6-三甲基苯磺醯基(Mtr)、DNP、Bom、Bum、Boc、Trt、Fmoc等。
就精胺酸之胍基的保護基而言,可列舉例如:Tos、Z、4-甲氧基-2,3,6-三甲基苯磺醯基(Mtr)、p-甲氧基苯磺醯基(MBS)、2,2,5,7,8-五甲基烷-6-磺醯基(Pmc)、均三甲苯-2-磺醯基(Mts)、2,2,4,6,7-五甲基二氫苯并呋喃-5-磺醯基(Pbf)、Boc、Z、NO2等。
就離胺酸之側鏈胺基的保護基而言,可列舉例如:Z、Cl-Z、三氟乙醯基、Boc、Fmoc、Trt、Mtr、4,4-二甲基-2,6-二側氧基亞環己基乙基(Dde)等。
就色胺酸之吲哚基保護基而言,可列舉例如:甲醯基(For)、Z、Boc、Mts、Mtr等。
就天冬醯胺酸、麩醯胺酸的保護基而言,可列舉例如Trt、呫噸基(Xan)、4,4'-二甲氧基二苯甲基(Mbh)、2,4,6-三甲氧基苄基(Tmob)等。
就原料之羧基經活化者而言,可列舉例如:對應之酸酐、疊氮化物、活性酯[與醇(例如,五氯酚、2,4,5-三氯酚、2,4-二硝基酚、氰基甲醇、對硝基酚、HONB、N-羥基琥珀醯亞胺、1-羥基苯并三唑(HOBt)、1-羥基-7-氮雜苯并三唑(HOAt))之酯]等。就原料之胺基經活化者而言,可列舉例如:對應之亞磷醯胺。
就保護基之除去(脫離)方法而言,例如在Pd黑或Pd碳等觸媒存在下於氫氣流中的接觸還原,又,
亦可列舉藉由無水氟化氫、甲磺酸、三氟甲磺酸、三氟乙酸、溴化三甲基矽烷(TMSBr)、三氟甲磺酸三甲基矽基酯、四氟硼酸、參(三氟)硼、三溴化硼或此等之混合液等的酸處理;或藉由二異丙基乙基胺、三乙基胺、哌啶、哌等之鹼處理;或在氨水中藉由鈉還原等。藉由上述酸處理之脫離反應一般於-20℃至40℃之溫度進行,惟,藉由添加如苯甲醚、酚、苯基甲硫醚、間甲酚、對甲酚之陽離子捕捉劑、或二甲基硫化物、1,4-丁二硫醇、1,2-乙二硫醇等有效地進行酸處理。又,作為組胺酸之咪唑保護基所使用的2,4-二硝基苯基,藉由硫酚處理而除去,作為色胺酸之吲哚保護基所使用的甲醯基,除上述之1,2-乙二硫醇、1,4-丁二硫醇等存在下藉由酸處理之脫保護以外,亦可藉由稀氫氧化鈉、稀釋之氨水等之鹼處理而除去。
不參與原料之反應的官能基之保護及保護基、及該保護基之脫離、參與反應之官能基的活化等,可從周知之保護基或周知之手段適當地選擇。
就得到胜肽之醯胺體的方法而言,使用醯胺體合成用樹脂進行固相合成,或將羧基末端胺基酸之α-羧基醯胺化後,於胺基側將胜肽鏈延長至期望之鏈長後,製造只除去該胜肽鏈之N末端之α-胺基保護基的胜肽,及只除去C末端之羧基保護基的胜肽(或胺基酸),再使該兩胜肽於如上述之混合溶劑中縮合。關於縮合反應之詳情,係與上述相同。將藉由縮合所得到之保護胜肽精製後,可藉由上述方法除去所有保護基得到期望之粗多胜肽。該粗
胜肽使用已知之各種精製手段精製,將主要部分進行凍結乾燥,藉此可得到期望之胜肽的醯胺體。
化合物(I)可藉由例如下述方法製造。首先,藉由本身周知之胜肽合成方法製造化合物(I)之Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-RA10)部分為Lys的化合物(II)。化合物(II)亦可承載於樹脂。其中,構成化合物(II)之胺基酸及P1,較佳為以對化合物(I)之製造不會造成不良影響之方式,藉由適當保護基進行保護。又,就保護基而言,可列舉後述之參考例及實施例中所用的保護基。又,前述化合物(II)之Lys,其側鏈胺基藉由正交保護基(例如ivDde;本說明書中,將(1-(4,4-二甲基-2,6-二側氧基亞環己-1-基)-3-甲基丁基)簡稱為ivDde)進行保護。繼而,將化合物(II)之Lys的正交保護基以選擇性條件除去,藉由將對應(-Gly-Gly-Gly-Gly-H)之胺基酸分別依照其本身周知之方法依序縮合,而得到化合物(III)。化合物(III)亦可承載於樹脂。
P1-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-α-MePhe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Aib-Lys-Aib-Leu-Asp-A16-A17-Ala-A19-Ala-Glu-Phe-Val-A24-Trp-Leu-Leu-A28-Gly(II)(序列編號1)[式中之記號表示與前述相同意義]
P1-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-α-MePhe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Aib-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-H)-Aib-Leu-Asp-A16-A17-Ala-A19-Ala-Glu-Phe-Val-A24-Trp-Leu-Leu-A28-Gly(III)(序列編
號1)[式中之記號表示與前述相同的意義]。
構成化合物(III)之胺基酸及P1,與化合物(II)之情況同樣地,較佳為藉由適當保護基進行保護。
藉由將化合物(IV)依照本身周知之方法與化合物(III)縮合,然後除去全部保護基,並視情況從樹脂切斷,而得到化合物(I)。構成化合物(IV)之RA10,與化合物(II)、(III)之情況同樣地,較佳為藉由適當的保護基(以下,有時簡稱為P)保護。
HO-RA10 (IV)
[式中,RA10表示Oda或Pal]。
就P所示之保護基而言,可列舉例如:前述之羧基的保護基(較佳為第三丁基)。就化合物(IV)而言,可使用例如市售品。
化合物(I)亦可將依照與上述方法相同之方法製造的片段胜肽,藉由本身周知之方法依序縮合而製造。
構成片段胜肽之胺基酸及P1與化合物(II)之情況同樣,可藉由適當的保護基保護。又,亦可承載於樹脂。
在化合物(I)以鏡像異構物、非鏡像異構物等構型異構物(configurational isomers)、構象異構物(conformers)等存在時,此等亦皆包含於化合物(I),並且依據期望,可藉由本身周知之手段、前述之分離、精製手段而分別單離。又,在化合物(I)為消旋體之情況,可藉由通常之光學分割手段分離成S體及R體。
在化合物(I)中存在立體異構物之情況,該異構物為單獨之情況及為彼等之混合物的情況,均包含於化合物(I)中。
化合物(I)可依照本身周知之方法,使用聚乙二醇進行化學修飾。例如,藉由使化合物(I)之Cys殘基、Asp殘基、Glu殘基、Lys殘基等與聚乙二醇共軛鍵結,可製造化合物(I)之化學修飾體。又,化合物(I)與聚乙二醇之間可具有連接子結構。
藉由將化合物(I)以聚乙二醇(PEG)修飾,可得到增強治療上及診斷上重要的胜肽之生物活性、延長血液循環時間、降低免疫性、提高溶解性、提高代謝抵抗性之效果等。
PEG之分子量無特別限定,通常為約1K至約1000K道爾頓(Dalton),較佳為約10K至約100K道爾頓,更佳為約20K至約60K道爾頓。
就將化合物(I)以PEG修飾之方法而言,可使用該領域中周知之方法,例如可利用下述方法。
(1)使化合物(I)之胺基,與具有活性酯之PEG化試藥(例如,SUNBRIGHT MEGC-30TS(商品名),日本油脂)鍵結。
(2)使化合物(I)之胺基,與具有醛之PEG化試藥(例如,SUNBRIGHT ME-300AL(商品名),日本油脂)鍵結。
(3)使化合物(I)與二價交聯試藥(例如,GMBS(同仁化學)、EMCS(同仁化學)、KMUS(同仁化學)、SMCC(Pierce))鍵結,繼而與具有巰基之PEG化試藥(例如,SUNBRIGHT
ME-300-SH(商品名),日本油脂)鍵結。
(4)以SH導入劑(例如,D-半胱胺酸殘基、L-半胱胺酸殘基、Traut’s試藥)在化合物(I)導入巰基,再使該巰基與具有馬來醯亞胺基之PEG化試藥(例如,SUNBRIGHT ME-300MA(商品名),日本油脂)反應。
(5)在化合物(I)中,以SH導入劑(例如,D-半胱胺酸殘基、L-半胱胺酸殘基、Traut’s試藥)導入巰基,使該巰基與具有碘乙醯胺基之PEG化試藥(例如,SUNBRIGHT ME-300IA(商品名),日本油脂)反應。
(6)在化合物(I)之N末端胺基導入ω-胺基羧酸、α-胺基酸等作為連接子,使來自該連接子之胺基與具有活性酯之PEG化試藥(例如,SUNBRIGHT MEGC-30TS(商品名),日本油脂)反應。
(7)在化合物(I)之N末端胺基導入ω-胺基羧酸、α-胺基酸等作為連接子,再使來自該連接子之胺基與具有醛基之PEG化試藥(例如,SUNBRIGHT ME-300AL(商品名),日本油脂)反應。
又,化合物(I)可為溶劑合物(例如,水合物)或無溶劑合物(例如,非水合物)。
化合物(I)可藉由同位素(例如,3H、14C、35S、125I)等標識。
再者,化合物(I)可為將1H變換為2H(D)之重氫變換體。
經同位素標識或置換之化合物(I),可使用
為例如正子發射斷層攝影術(Positron Emission Tomography:PET)中所使用的追蹤劑(PET追蹤劑),適用於醫療診斷等領域。
本說明書中之胜肽,依照胜肽標記之慣例,左端為N末端(胺基末端)、右端為C末端(羧基末端)。胜肽之C末端可為醯胺(-CONH2)、羧基(-COOH)、羧酸根(-COO-)、烷基醯胺(-CONHRa)或酯(-COORa),特佳為醯胺(-CONH2)。
化合物(I)可為鹽之形式。就此鹽而言,可列舉例如:金屬鹽、銨鹽、與有機鹼之鹽、與無機酸之鹽、與有機酸之鹽、與鹼性或酸性胺基酸之鹽等。
就金屬鹽之較佳例而言,可列舉:鈉鹽、鉀鹽等鹼金屬鹽;鈣鹽、鎂鹽、鋇鹽等鹼土金屬鹽;鋁鹽等。
就與有機鹼之鹽之較佳例而言,可列舉:與三甲基胺、三乙基胺、吡啶、甲基吡啶、2,6-二甲基吡啶、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、環己胺、二環己胺、N,N'-二苄基伸乙基二胺等之鹽。
就與無機酸之鹽之較佳例而言,可列舉:與鹽酸、氫溴酸、硝酸、硫酸、磷酸等之鹽。
就與有機酸之鹽之較佳例而言,可列舉:與甲酸、乙酸、三氟乙酸、酞酸、富馬酸、草酸、酒石酸、馬來酸、檸檬酸、琥珀酸、蘋果酸、甲磺酸、苯磺酸、對甲苯磺酸等之鹽。
就與鹼性胺基酸之鹽之較佳例而言,可列舉:與精胺酸、離胺酸、鳥胺酸等之鹽,就與酸性胺基酸之鹽之較佳例而言,可列舉:與天冬胺酸、麩胺酸等之鹽。
上述之鹽中,較佳為藥學上可容許之鹽。例如,在化合物內具有酸性官能基時,較佳為鹼金屬鹽(例如,鈉鹽、鉀鹽等)、鹼土金屬鹽(例如,鈣鹽、鎂鹽、鋇鹽等)等無機鹽、銨鹽等,又,在化合物內具有鹼性官能基時,較佳為例如伴隨鹽酸、氫溴酸、硝酸、硫酸、磷酸的無機酸之鹽、或與乙酸、酞酸、富馬酸、草酸、酒石酸、馬來酸、檸檬酸、琥珀酸、甲磺酸、對甲苯磺酸等有機酸之鹽。
化合物(I)亦可為前藥(prodrug)。
前藥意指於活體內之生理條件下,藉由酵素或胃酸等進行反應轉換成化合物(I)之化合物,亦即以酵素方式引起氧化、還原、水解等來轉化成化合物(I)之化合物,或藉由胃酸等引起水解等轉化成化合物(I)之化合物。
就化合物(I)之前藥而言,可列舉:化合物(I)之胺基經醯基化、烷基化或磷酸化的化合物(例如,化合物(I)之胺基經二十烷基化、丙胺醯基化、戊基胺基羰基化、(5-甲基-2-側氧基-1,3-二氧雜環戊烯-4-基)甲氧基羰基化、四氫呋喃基化、吡咯啶基甲基化、三甲基乙醯基氧基甲基化或第三丁基化之化合物);化合物(I)之羥基經醯化、烷基化、磷酸化或硼氧化之化合物(例如,化合物(I)之羥基經乙醯基化、棕櫚醯基化、丙醯基化、三甲基乙醯基化、
琥珀醯基化、富馬醯基化、丙胺醯基化或二甲基胺基甲基羰基化之化合物);化合物(I)之羧基經酯化或醯胺化之化合物(例如,化合物(I)之羧基經C1-6烷基酯化、苯基酯化、羧基甲酯化、二甲基胺基甲酯化、三甲基乙醯基氧基甲酯化、乙氧基羰基氧基乙酯化、酞酯化、(5-甲基-2-側氧基-1,3-二氧雜環戊烯-4-基)甲酯化、環己氧基羰基乙酯化或甲基醯胺化之化合物)等,其中較佳為使用化合物(I)之羧基經甲基、乙基、第三丁基等C1-6烷基酯化的化合物。此等化合物可從化合物(I)依照本身周知之方法製造。
又,化合物(I)之前藥,亦可藉由如廣川書店1990年刊「醫藥品之開發」第7卷分子設計163頁至198頁所記載之生理條件,轉化成化合物(I)者。
在本說明書中,前藥亦可形成鹽,就該鹽而言,可列舉作為化合物(I)之鹽所例示者。
化合物(I)亦可為結晶,結晶形可為單一,亦可為結晶形混合物,均包含於化合物(I)中。結晶可藉由應用本身周知之結晶化法,進行結晶化而製造。
再者,化合物(I)可為藥學上容許之共結晶或共結晶鹽。其中,共結晶或共結晶鹽意指由二種或更多種分別具有各種不同物理特性(例如,結構、熔點、熔解熱、吸濕性、溶解性及安定性等),且於室溫為固體之獨特物質所構成的結晶性物質。共結晶或共結晶鹽可依照本身周知之共結晶化法製造。
化合物(I)之結晶具有優異的物理化學性質
(例如,熔點、溶解度、安定性)及生物性質(例如,藥物動力學(吸收性、分佈性、代謝性、排泄性)、藥效表現),因此極適用為醫藥。
化合物(I)及其前藥(以下,簡稱為本發明化合物)可具有Y2受體、GLP-1受體及GIP受體之活化作用。
本發明化合物特別可於身體中具有高Y2受體、GLP-1受體及GIP受體之活化作用。
Y2受體由於具有攝食抑制作用,具有Y2受體活化作用之胜肽在肥胖症及糖尿病,以及攝食障礙所關連之症狀的預防或治療上有用。又,GLP-1及GIP為被稱為腸泌素(incretin)之消化管荷爾蒙,具有促進胰島素從胰臟分泌之作用。腸泌素由於與糖代謝密切地關連,引此具有GLP-1受體及GIP受體活化作用之化合物,可在糖尿病及肥胖症,以及糖代謝異常所關連的症狀之預防或治療上有用。
因此,本發明化合物可具有攝食抑制作用、體重降低作用等。
本發明化合物在生物學上、化學上之安定性高,且可期待於身體中之效果的持續性。
已知GLP-1受體促效劑於臨床上具有噁心、催吐之副作用,然而相較於GLP-1受體促效劑,本發明化合物可較為減輕此種催吐作用。
本發明化合物可使用為Y2受體、GLP-1受體及GIP受體之活化劑。
在本發明中,Y2受體、GLP-1受體及GIP受體之活化劑,意指具有Y2受體活化作用(Y2受體促效劑作用)、GLP-1受體活化作用(GLP-1受體促效劑作用)及GIP受體活化作用(GIP受體促效劑作用)之藥劑。
本發明化合物毒性(例如,急性毒性、慢性毒性、遺傳毒性、生殖毒性、心毒性、致癌性)低,副作用亦少,可作為後述各種疾病之預防/治療劑等對哺乳動物(例如,人類、牛、馬、狗、貓、猴、小鼠、大鼠)安全地投予。
本發明化合物藉由上述GLP-1受體及GIP受體之活化作用,可使用為糖尿病及肥胖症,以及各種疾病之治療或預防劑。本發明化合物可使用為例如,基於症候性肥胖、單純性肥胖之肥胖症、伴隨肥胖之病症或疾病、攝食障礙、糖尿病(例如,1型糖尿病、2型糖尿病、妊娠糖尿病、肥胖型糖尿病)、高血脂症(例如,高三酸甘油脂血症、高膽固醇血症、高LDL膽固醇血症、低HDL膽固醇血症、餐後高血脂症)、高血壓症、心衰竭、糖尿病併發症[例如,神經病變、腎症、視網膜病變、糖尿病性心肌症、白內障、大血管障礙、骨質減少症、糖尿病性高滲透壓昏迷、感染症(例如,呼吸道感染症、尿道感染症、消化器感染症、皮膚軟組織感染症、下肢感染症)、糖尿病性壞疽、口腔乾燥症、聽覺遲鈍、腦血管病變、末梢血管循環病變]、代謝症候群(具有選自高三酸甘油脂(TG)血症、低HDL膽固醇(HDL-C)血症、高血壓症、腹部肥胖及糖耐量降低之3
個以上的病症)、肌肉減少症等的預防或治療劑。
就症候性肥胖而言,可列舉:內分泌性肥胖(例如,庫辛氏(Cushing)症候群、甲狀腺功能不足症、胰島素瘤、肥胖2型糖尿病、假性副甲狀腺功能不足症、性腺功能不足症)、中樞性肥胖(例如,下視丘型肥胖、額葉症候群、克萊恩-萊文(Kleine-Levin)症候群)、遺傳性肥胖(例如,小胖威利(Prader-Willi)症候群、性幼稚多指畸形(Laurence-Moon-Biedl)症候群)、藥劑性肥胖(例如,經由類固醇劑、吩噻、胰島素、磺醯基脲(SU)劑、β-阻斷劑所造成之肥胖)等。
就伴隨肥胖之病態或疾病而言,可列舉例如:耐糖能障礙、糖尿病(尤其2型糖尿病、肥胖型糖尿病)、脂質代謝異常(與前述高血脂症相同意義)、高血壓症、心衰竭、高尿酸血症/痛風、脂肪肝(包含非酒精性脂肪肝炎(non-alchoholic steato-hepatitis))、冠動脈疾病(心肌梗塞、狹心症)、腦梗塞(腦血栓症、暫時性腦缺血發作)、骨/關節疾病(變形性膝關節症、變形性髖骨關節症、變形性脊椎症、腰痛症)、睡眠呼吸暫停症候群/皮克威克(Pickwick)症候群、月經異常(月經周期之異常、月經量及周期之異常、閉經、伴隨月經症狀之異常)、代謝症候群等。
關於糖尿病之判定基準可參照日本糖尿病學會於1999年報導之新判定基準。
若依照此報告,糖尿病意指符合下列任一項之病症:空腹時血糖值(靜脈血漿中之葡萄糖濃度)為
126mg/dl以上,75g口服葡萄糖負荷試驗(75g OGTT)2小時值(靜脈血漿中之葡萄糖濃度)為200mg/dl以上,隨機血糖值(靜脈血漿中之葡萄糖濃度)為200mg/dl以上。又,將不符合上述糖尿病,但不為「空腹時血糖值(靜脈血漿中之葡萄糖濃度)小於110mg/dl或75g口服葡萄糖負荷試驗(75g OGTT)2小時值(靜脈血漿中之葡萄糖濃度)小於140mg/dl之狀態」(正常型)的狀態者稱為「邊緣型」。
又,關於糖尿病之判定基準,ADA(美國糖尿病學會)於1997年,WHO(世界保健機構)於1998年提出新判定基準。
若依照此等報告,糖尿病意指符合下列症狀之病症:顯示空腹時血糖值(靜脈血漿中之葡萄糖濃度)為126mg/dl以上,且,75g經口葡萄糖負荷試驗2小時值(靜脈血漿中之葡萄糖濃度)為200mg/dl以上的狀態。
又,若依照上述報告,糖耐量降低意指顯示空腹時血糖值(靜脈血漿中之葡萄糖濃度)小於126mg/dl,且,75g經口葡萄糖負荷試驗2小時值(靜脈血漿中之葡萄糖濃度)為140mg/dl以上小於200mg/dl之狀態。再者,若依照ADA之報告,將空腹時血糖值(靜脈血漿中之葡萄糖濃度)為110mg/dl以上小於126mg/dl之狀態稱為空腹葡萄糖耐受不良(IFG(Impaired Fasting Glucose))。另一方面,若依照WHO之報告,該IFG(Impaired Fasting Glucose)之中,將75g經口葡萄糖負荷試驗2小時值(靜脈血漿中之葡萄糖濃度)小於140mg/dl之狀態稱為空腹血糖
異常(IFG(Impaired Fasting Glycemia))。
本發明化合物亦可使用作為依照上述新判定基準所決定之糖尿病、邊緣型、糖耐量降低、空腹葡萄糖耐受不良(IFG(Impaired Fasting Glucose))及空腹血糖異常IFG((Impaired Fasting Glycemia)的預防/治療劑。再者,本發明化合物可防止從邊緣型、糖耐量降低、空腹葡萄糖耐受不良(IFG(Impaired Fasting Glucose))及空腹血糖異常IFG((Impaired Fasting Glycemia)發展成糖尿病。
本發明化合物基於體重降低作用,可使用作為哺乳動物之體重降低劑。適用對象之哺乳動物只要為欲降低體重之哺乳動物即可,可為具有遺傳性體重過重之風險性哺乳動物,亦可為罹患糖尿病、高血壓症及/或高血脂症等生活習慣病的哺乳動物。體重過重可為飲食攝取過量或營養不均衡之起因於飲食生活者,亦可為來自併用藥劑(例如,曲格列酮(troglitazone)、羅格列酮(rosiglitazone)、恩格列酮(englitazone)、環格列酮(ciglitazone)、吡格列酮(pioglitazone)等具有類似PPARγ促效劑作用的胰島素抗性改善劑等)之體重過重。又,體重過重可為達到肥胖症之前的體重過重,亦可為肥胖患者之體重過重。其中,肥胖症定義,在日本人方面為BMI(身體質量指數:體重(kg)÷[身長(m)]2)達25以上(根據日本肥胖學會之基準)、歐美人方面,為BMI達30以上(根據WHO之基準)。
本發明化合物亦適用為代謝症候群
(metabolic syndrome)之預防/治療劑。與發生單一生活習慣病之患者相比,由於代謝症候群之患者發生心血管系統疾病之比率顯著較高,故預防/治療代謝症候群在預防心血管系疾病上極為重要。
代謝症候群之判定基準,已由WHO於1999年發表,由NCEP於2001年發表。若依照WHO之判定基準,以高胰島素血症或耐糖能力異常為基本條件,在具有內臟肥胖、異常脂質血症(高TG或低HDL)、高血壓之中2種以上之情況,被診斷為代謝症候群(World Health Organization:Definition,Diagnosis and Classification of Diabetes Mellitus and Its Complications.Part I:Diagnosis and Classification of Diabetes Mellitus,World Health Organization,Geneva,1999)。若依據為美國缺血性心臟疾病之管理指標,即國家膽固醇教育計劃(National Cholesterol Education Program)之成人治療指引III(Adult Treatment Panel III)的判定基準,在具有內臟肥胖、高中性脂肪血症、低HDL膽固醇血症、高血壓、耐糖能力異常中3個以上之情況,被診斷為代謝症候群(National Cholesterol Education Program:Executive Summary of the Third Report of National Cholesterol Education Program(NCEP)Expert Panel on Detection,Evaluation,and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults(Adults Treatment Panel III).The Journal of the American Medical Association,Vol.285,2486-2497,2001)。
本發明化合物亦可使用為例如骨質疏鬆症、惡病體質(例如,癌性惡病體質、結核性惡病體質、糖尿病性惡病體質、血液疾病性惡病體質、內分泌疾病性惡病體質、感染症性惡病體質或後天性免疫不全症候群造成之惡病體質)、脂肪肝、多囊胞性卵巢症候群、腎臟疾病(例如,慢性腎衰竭、糖尿病性腎病變、血管球性腎炎、血管球硬化症、腎病症候群、高血壓性腎硬化症、末期腎臟疾病)、肌肉萎縮、心肌梗塞、狹心症、腦血管病變(例如,腦梗塞、腦中風)、阿茲海默病、帕金森氏病、焦慮症、失智症、胰島素抗性症候群、X症候群、高胰島素血症、高胰島素血症之知覺障礙、急性或慢性下痢、炎症性疾病(例如,慢性關節風濕症、變形性脊椎炎、變形性關節炎、腰痛、痛風、手術或外傷後之炎症、腫脹、神經痛、咽喉頭炎、膀胱炎、肝炎(包含非酒精性脂肪性肝炎)、肺炎、胰炎、腸炎、炎症性腸疾病(包含炎症性大腸疾病)、潰瘍性大腸炎、胃黏膜損傷(包含由阿斯匹靈引起之胃黏膜損傷))、小腸黏膜損傷、吸收不良、睪丸功能障礙、內臟肥胖症候群、肌肉減少症的預防/治療劑。
再者,本發明化合物亦可使用作為各種癌(其中包含乳癌(例如,浸潤性導管乳癌、非浸潤性導管乳癌、炎症性乳癌等)、前列腺癌(例如,荷爾蒙依存性前列腺癌、非荷爾蒙依存性前列腺癌等)、胰臟癌(例如,胰管癌等)、胃癌(例如,乳頭狀腺癌、黏液性腺癌、腺扁平上皮癌等)、肺癌(例如,非小細胞肺癌、小細胞肺癌、惡性
間皮瘤等)、結腸癌(例如,消化管間質腫瘤等)、直腸癌(例如,消化管間質腫瘤等)、大腸癌(例如,家族性大腸癌、遺傳性非息肉大腸癌、消化管間質腫瘤等)、小腸癌(例如,非霍奇金淋巴瘤、消化管間質腫瘤等)、食道癌、十二指腸癌、舌癌、咽頭癌(例如,上咽頭癌、中咽頭癌、下咽頭癌等)、唾液腺癌、腦腫瘤(例如,松果體星狀細胞腫瘤、毛囊性星狀細胞瘤、擴散性星狀細胞瘤、退行性星狀細胞瘤等)、神經鞘瘤、肝臟癌(例如,原發性肝癌、肝外膽管癌等)、腎臟癌(例如,腎細胞癌、腎盂及尿管移行性上皮癌等)、膽管癌、子宮內膜癌、子宮頸癌、卵巢癌(例如,上皮性卵巢癌、外生殖腺胚細胞腫瘤、卵巢性胚細胞腫瘤、卵巢低惡性度腫瘤等)、膀胱癌、尿道癌、皮膚癌(例如,眼內(眼)黑色瘤、默克爾細胞癌(Merkel cell carcinoma)等)、血管瘤、惡性淋巴瘤、惡性黑色瘤、甲狀腺癌(例如,髓狀甲狀腺癌等)、副甲狀腺癌、鼻腔癌、副鼻腔癌、骨腫瘤(例如,骨肉瘤、尤因氏腫瘤(Ewing tumor)、子宮肉瘤、軟部組織肉瘤等)、血管纖維瘤、網膜肉瘤、陰莖癌、睪丸腫瘤、小兒實體癌(例如,維爾姆斯腫瘤(Wilms’tumor)、小兒腎腫瘤等)、卡波西肉瘤(Kaposi’s sarcoma)、起因於愛滋病(AIDS)之卡波西肉瘤、上顎洞腫瘤、纖維性組織球瘤、平滑肌肉瘤、橫紋肌肉瘤、白血病(例如,急性骨髓性白血病、急性淋巴芽球性白血病等)等)之預防/治療劑。
本發明化合物亦可使用於上述各種疾病(例如,心肌梗塞等心血管病況)之2次預防及發展抑制。又,
本發明化合物亦適用為攝食抑制劑、體重降低劑。本發明化合物可與飲食療法(例如,糖尿病之飲食療法)、運動療法併用。
含有本發明化合物之醫藥毒性低,就醫藥製劑之製造法而言,依照一般所用的本身周知之手段(例如,日本藥典(Japanese Pharmacopoeia)記載之方法),藉由將本發明化合物以其原樣或與藥理學上可容許之載劑混合,形成例如錠劑(包含糖衣錠、膜衣錠、舌下錠、口腔內崩散錠)、散劑、顆粒劑、膠囊劑(包含軟膠囊、微膠囊)、液劑、片劑、糖漿劑、乳劑、懸浮劑、注射劑(例如,皮下注射劑、靜脈內注射劑、肌肉內注射劑、腹腔內注射劑等)、外用劑(例如,經鼻投予製劑、經皮製劑、軟膏劑)栓劑(例如,直腸栓劑、陰道栓劑)、丸粒、經鼻劑、經肺劑(吸入劑)、點滴劑等醫藥製劑,以經口方式或非經口方式(例如,局部、直腸、靜脈投予等)安全地投予。
此等製劑可為速釋性製劑或緩釋性製劑等釋放控制性製劑(例如,緩釋性微膠囊)。
再者,醫藥製劑中之本發明化合物的含量,為製劑全體之約0.01至約100重量%。
就上述之藥理學上可容許之載劑而言,就製劑材料而言,可列舉慣用之各種有機或無機載劑物質,例如可列舉固體製劑中之賦形劑、潤滑劑、黏合劑及崩散劑、或液狀製劑中之溶劑、溶解輔助劑、懸浮化劑、等滲劑、緩衝劑及無痛化劑等。再者,視需要亦可適當、適量
地使用通常之防腐劑、抗氧化劑、著色劑、甜味劑、吸附劑、濕潤劑等添加物。
就賦形劑而言,可列舉例如:乳糖、白糖、D-甘露醇、澱粉、玉米澱粉、結晶纖維素、輕質無水矽酸等。
就潤滑劑而言,可列舉例如:硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、滑石、膠體矽石等。
就黏合劑而言,可列舉例如:結晶纖維素、白糖、D-甘露醇、糊精、羥基丙基纖維素、羥基丙基甲基纖維素、聚乙烯基吡咯啶酮、澱粉、蔗糖、明膠、甲基纖維素、羧基甲基纖維素鈉等。
就崩散劑而言,可列舉例如:澱粉、羧甲基纖維素、羧甲基纖維素鈣、基甲基澱粉鈉、L-羥基丙基纖維素等。
就溶劑而言,可列舉例如:注射用水、醇、丙二醇、聚乙二醇(Macrogol)、麻油、玉米油、橄欖油等。
就溶解輔助劑而言,可列舉例如:聚乙二醇、丙二醇、D-甘露醇、苯甲酸苯甲基酯、乙醇、三胺基甲烷、膽固醇、三乙醇胺、碳酸鈉、檸檬酸鈉等。
就懸浮化劑而言,可列舉例如:硬脂基三乙醇胺、月桂基硫酸鈉、月桂基胺基丙酸、卵磷酯、氯芐烷銨(benzalkonium chloride)、氯化芐乙氧銨(benzethonium chloride)、單硬脂酸甘油酯等界面活性劑;例如聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯啶酮、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥甲
基纖維素、羥乙基纖維素、羥丙基纖維素等親水性高分子等。
就等滲劑而言,可列舉例如:葡萄糖、D-山梨醇、氯化鈉、甘油、D-甘露醇等。
就緩衝劑而言,可列舉例如:磷酸鹽、乙酸鹽、碳酸鹽、檸檬酸鹽等緩衝液等。
就無痛化劑而言,可列舉例如:苄基醇等。
就防腐劑而言,可列舉例如:對羥基苯甲酸酯類、氯丁醇、苄基醇、苯乙基醇、脫氫乙酸、山梨酸等。
就抗氧化劑而言,可列舉例如:亞硫酸鹽、抗壞血酸、α-生育酚等。
就著色劑而言,可列舉例如:水溶性食用焦油色素(例如,食用紅色2號及3號、食用黃色4號及5號、食用藍色1號及2號等食用色素)、水不溶性深紅色色素(lake pigment)(例如,前述水溶性食用焦油色素之鋁鹽)、天然色素(例如,β-胡蘿蔔素、葉綠素、紅色氧化鐵)等。
就甜味劑而言,可列舉例如:糖精鈉、甘草酸二鉀鹽、阿斯巴甜、甜菊精等。
就吸附劑而言,可列舉例如:有孔澱粉、矽酸鈣(商品名:Florite RE)、偏矽酸鋁酸鎂(商品名:Neusilin)、輕質無水矽酸(商品名:Sylysia)。
就濕潤劑而言,可列舉例如:丙二醇單硬
脂酸酯、山梨糖醇酐單油酸酯、二乙二醇單月桂酸酯、聚氧乙烯月桂基醚。
在製造口服劑時,可視需要,就味道之遮蔽、或腸溶性或持續性之目的而進行包覆。
就包覆所用之包覆基劑而言,可列舉例如:糖衣基劑、水溶性膜衣基劑、腸溶性膜衣基劑、緩釋性膜衣基劑。
可使用白糖作為糖衣基劑,再者,亦可併用選自滑石、沉降碳酸鈣、明膠、阿拉伯膠、普魯蘭多糖(pullulan)、巴西棕櫚蠟等之1種或2種以上。
就水溶性薄膜包覆基劑而言,可列舉例如:羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羥乙基纖維素、甲基羥乙基纖維素等纖維素系高分子;聚乙烯基縮醛二乙基胺基乙酸酯、甲基丙烯酸胺基烷基酯共聚物E[Eudragit E(商品名)]、聚乙烯基吡咯啶酮等合成高分子;普魯蘭多糖等多糖類。
就腸溶性膜衣基劑而言,可列舉例如:羥丙基甲基纖維素酞酸酯、羥丙基甲基纖維素乙酸酯琥珀酸酯、羧甲基乙基纖維素、乙酸酞酸纖維素等纖維素系高分子;甲基丙烯酸共聚物L[Eudragit L(商品名)]、甲基丙烯酸共聚物LD[Eudragit L-30D55(商品名)]、甲基丙烯酸共聚物S[Eudragit S(商品名)]等丙烯酸系高分子;蟲膠等天然產物。
就緩釋性薄膜包覆基劑而言,可列舉例
如:乙基纖維素等纖維素系高分子;甲基丙烯酸胺基烷基酯共聚物RS[Eudragit RS(商品名)]、丙烯酸乙酯-甲基丙烯酸甲酯共聚物懸浮液[Eudragit NE(商品名)]等丙烯酸系高分子。
上述之包覆基劑,可將其2種以上以適當之比率混合而使用。又,包覆時,亦可使用例如氧化鈦、三氧化二鐵等遮光劑。
本發明化合物之投予量,可依據投予對象、症狀、投予方法等而適當地選擇。例如,在將本發明化合物經口投予至肥胖症或糖尿病患者(體重60kg)時,本發明化合物之投予量,每一日約0.1至100mg,較佳為約1.0至50mg,更佳為約1.0至20mg。在將本發明化合物以非經口方式投予至肥胖症或糖尿病患者(體重60kg)之情況,本發明化合物之投予量,每一日約0.001至30mg,較佳約0.01至20mg,更佳約0.1至10mg。可將此等量分為1日1至數次投予。
本發明化合物可採取例如每2日1次、每3日1次、每4日1次、每5日1次、每6日1次、每週1次、1週2次、隔週1次、每3週1次、每月1次、每2個月1次、每3個月1次、每4個月1次、每5個月1次或每6個月1次進行投予。
例如以增強本發明化合物之作用(肥胖症、糖尿病等之治療效果)、減低本發明化合物之使用量等為目的,本發明化合物亦可與不會對本發明化合物造成不良影
響之其他藥劑併用。
就可與本發明化合物併用之藥劑(以下,有時簡稱為併用藥劑)而言,可列舉例如:抗肥胖劑、糖尿病治療劑、糖尿病性併發症治療劑、高血脂症治療劑、降血壓劑、利尿劑、化學療法劑、免疫療法劑、抗炎症藥、抗血栓劑、骨質疏鬆症治療劑、維生素藥、抗失智藥、勃起不全改善藥、頻尿/尿失禁治療藥、排尿困難治療劑等。具體而言,可列舉下述者。
就抗肥胖劑而言,可列舉:單胺攝取抑制藥(例如,芬特明(phentermine)、西布曲明(sibutramine)、馬吲哚(mazindol)、呋塞西汀(fluroxetine)、索美芬(tesofensine))、血清素2C受體促效藥(例如,沛麗婷(lorcaserin))、血清素6受體拮抗藥、組織胺H3受體調節藥、GABA調節藥(例如,妥品美(topiramate))、神經胜肽Y拮抗藥(例如,韋利貝特(velneperit)、類大麻素受體拮抗藥(例如,利莫那班(rimonabant)、塔拉那萬(taranavan))、生長素拮抗藥、生長素受體拮抗藥、生長素醯化酵素抑制藥、類鴉片受體拮抗藥(例如,GSK-1521498)、食慾素受體拮抗藥、黑皮質素4受體促效藥、11β-羥基類固醇脫氫酶抑制藥(例如,AZD-4017)、胰脂肪酶抑制藥(例如,奧利司他(orlistat)、西替利司他(cetilistat))、β3促效劑(例如,N-5984)、二醯甘油醯基轉移酶1(DGAT1)抑制藥、乙醯基CoA羧化酶(ACC)抑制藥、硬脂酸CoA脫飽和酵素抑制藥、微粒體三酸甘油脂轉移蛋白抑制藥(例如,R-256918)、
Na-葡萄糖共輸送載劑抑制藥(例如,JNJ-28431754、瑞格列淨(remogliflozin)、NFκ抑制藥(例如,HE-3286)、PPAR促效劑(例如,GFT-505、DRF-11605)、磷酸酪胺酸磷酸酶抑制劑(例如,釩酸鈉、卓德斯奎敏(Trodusquemin))、GPR119促效藥(例如,PSN821、MBX-2982、APD597)、葡萄糖激酶活化藥(例如,AZD-1656)、瘦體素、瘦體素衍生物(例如,美曲普汀(metreleptin))、CNTF(睫狀神經營養因子)、BDNF(來自腦之神經營養因子)、膽囊收縮素促效劑、胰澱粉素製劑(例如,普蘭林肽(prmlintide)、AC-2307)、神經胜肽Y促效劑(例如,PYY3-36、PYY3-36之衍生物、奥尼匹肽(obineptide)、TM-30339、TM-30335)、泌酸調節素製劑:FGF21製劑(例如,萃取自牛、豬之胰臟的動物FGF21製劑;使用大腸菌、酵母之經遺傳工程學所合成的人類FGF21製劑;FGF21之片段或衍生物)、攝食抑制藥(例如,P-57)等。
就糖尿病治療劑而言,可列舉胰島素製劑(例如,從牛、豬之胰臟萃取的動物胰島素製劑;使用大腸菌、酵母經遺傳工程學所合成的人類胰島素製劑;鋅胰島素;魚精蛋白鋅胰島素;胰島素之片段或衍生物(例如,INS-1)、經口胰島素製劑)、胰島素抗性改善劑(例如,吡格列酮或其鹽(較佳為鹽酸鹽)、羅格列酮或其鹽(較佳為馬來酸鹽)、美他格利達先(Metaglidasen)、AMG-131、巴拉格利他頌(Balaglitazone)、MBX-2044、利佛格利他頌(Rivoglitazone)、阿格列札(Aleglitazar)、西格列他
(Chiglitazar)、洛貝格列酮(Lobeglitazone)、PLX-204、PN-2034、GFT-505、THR-0921、WO2007/013694、WO2007/018314、WO2008/093639或WO2008/099794記載之化合物)、α-葡萄糖苷酶抑制劑(例如,伏格列波糖(voglibose)、阿卡波糖(acarbose)、米格列醇(miglitol)、乙格列酯(emiglitate))、雙胍類劑(例如,二甲雙胍(metformin)、丁二胍(buformin)或彼等之鹽(例如,鹽酸鹽、富馬酸鹽、琥珀酸鹽))、胰島素分泌促進劑(例如,磺醯基脲劑(例如,甲苯磺丁脲(tolbutamide)、格列本脲(glibenclamide)、格列齊特(gliclazide)、氯丙醯胺(chlorpropamide)、妥拉磺脲(tolazamide)、乙醯己醯胺(acetohexamide)、格列吡喃(glyclopyramide)、格列美脲(glimepiride)、格列吡(glipizide)、格列丁唑(glybuzole))、瑞格列奈(repaglinide)、那格列奈(nateglinide)、米格列奈(mitiglinide)或其鈣鹽水合物)、二肽基肽酶IV抑制劑(例如,阿格列汀(Alogliptin)或其鹽(較佳為苯甲酸鹽)、維格列汀(Vildagliptin)、西他列汀(Sitagliptin)、沙格列汀(Saxagliptin)、BI1356、GRC8200、MP-513、PF-00734200、PHX1149、SK-0403、ALS2-0426、TA-6666、TS-021、KRP-104、曲格列汀(Trelagliptin)或其鹽(較佳為琥珀酸鹽))、β3促效劑(例如,N-5984)、GPR40促效劑(例如,法西格列泛(Fasiglifam)或其水合物、WO2004/041266、WO2004/106276、WO2005/063729、WO2005/063725、WO2005/087710、WO2005/095338、
WO2007/013689或WO2008/001931記載之化合物)、鈉-葡萄糖協同轉運蛋白(SGLT2(sodium-glucose cotransporter 2))抑制劑(例如,達格列(Dapagliflozin)、AVE2268、TS-033、YM543、TA-7284、瑞格列(remogliflozin)、ASP1941)、SGLT1抑制藥、11β-羥基類固醇脫氫酶抑制藥(例如,BVT-3498、INCB-13739)、脂聯素(adiponectin)或其促效藥、IKK抑制藥(例如,AS-2868)、瘦體素抗性改善藥、生長抑素(somatostatin)受體促效藥、葡萄糖激酶活化藥(例如,皮拉格利他汀(Piragliatin)、AZD1656、AZD6370、TTP-355、WO2006/112549、WO2007/028135、WO2008/047821、WO2008/050821、WO2008/136428或WO2008/156757記載之化合物)、GPR119促效劑(例如,PSN821、MBX-2982、APD597)、FGF21、FGF類似物、ACC2抑制劑等。
就糖尿病性併發症治療劑而言,可列舉:醛糖還原酵素抑制劑(例如,托瑞司他(tolrestat)、依帕司他(epalrestat)、唑泊司他(zopolrestat)、非達司他(fidarestat)、CT-112、雷尼司他(ranirestat)(AS-3201)、利多司他(lidorestat))、神經營養因子及其促進藥(例如,NGF、NT-3、BDNF、WO01/14372所記載之神經營養因子產生/分泌促進劑(例如,4-(4-氯苯基)-2-(2-甲基-1-咪唑基)-5-[3-(2-甲基苯氧基)丙基]唑)、WO2004/039365記載之化合物)、PKC抑制劑(例如,魯伯斯塔甲磺酸鹽(ruboxistaurin mesylate))、AGE抑制劑(例如,ALT946、
N-苄醯甲基噻唑鎓溴化物(ALT766)、EXO-226、吡多胺二鹽酸鹽(Pyridorin)、吡多胺(pyridoxamine))、GABA受體促效藥(例如,加巴噴丁(gabapentin)、普加巴林(pregabalin))、血清素/正腎上腺素再吸收抑制藥(例如,度洛西汀(duloxetine))、鈉通道抑制藥(例如,拉科胺(lacosamide))、活性氧消去藥(例如,硫辛酸)、腦血管擴張劑(例如,泰必利(tiapride)、美西律(mexiletine))、生長抑素(somatostatin)受體促效藥(例如,BIM23190)、細胞凋亡信號調節激酶-1(ASK-1)抑制藥等。
就高血脂症治療劑而言,可列舉HMG-CoA還原酵素抑制劑(例如,普伐他汀(pravastatin)、辛伐他汀(simvastatin)、洛伐他汀(lovastatin)、阿托伐他汀(atorvastatin)、氟伐他汀(fluvastatin)、羅蘇伐他汀(rosuvastatin)、匹伐他汀(pitavastatin)或彼等之鹽(例如,鈉鹽、鈣鹽))、角鯊烯合成酵素抑制劑(例如,WO97/10224號小冊子所記載之化合物,例如,N-[[(3R,5S)-1-(3-乙醯氧基-2,2-二甲基丙基)-7-氯-5-(2,3-二甲氧基苯基)-2-側氧基-1,2,3,5-四氫-4,1-苯并吖呯-3-基]乙醯基]哌啶-4-乙酸)、纖維酸酯(fibrate)系化合物(例如,苯纖維酸酯(bezafibrate)、克洛纖維酸酯(clofibrate)、辛弗纖維酸酯(simfibrate)、克諾纖維酸酯(clinofibrate))、陰離子交換樹脂(例如,消膽鹼(cholestyramine))、普羅布考(probucol)、菸酸系藥劑(例如,尼可莫爾(nicomol)、菸酸戊四醇酯(niceritrol)、菸酸緩釋片(niaspan))、二十碳五烯酸乙酯、
植物固醇(例如,大豆固醇(soysterol)、γ-谷維素(γ-oryzanol))、膽固醇吸收抑制劑(例如,依澤替米貝片(zetia))、CETP抑制劑(例如,達塞曲匹(dalcetrapib)、安塞曲匹(anacetrapib))、ω-3脂肪酸製劑(例如,ω-3-脂肪酸乙酯90(ω-3-acid ethyl esters 90))等。
就降血壓劑而言,可列舉例如:血管緊張素變換酵素抑制劑(例如,卡托普利(captopril)、依那普利(enalapril)、地拉普利(derapril)等)、血管收縮素II拮抗劑(例如,坎地沙坦西酯(candesartan cilexetil),坎地沙坦(candesartan)、氯沙坦(losartan)、氯沙坦鉀、依普沙坦(eprosartan)、纈沙坦(valsartan)、替米沙坦(telmisartan)、厄貝沙坦(irbesartan)、他索沙坦(tasosartan)、奧美沙坦(olmesartan)、奧美沙坦酯(olmesartan medoxomil)、阿齊沙坦(azilsartan)、阿齊沙坦酯(azilsartan medoxomil)等)、鈣拮抗劑(例如,馬尼地平(manidipine)、硝苯地平(nifedipine)、胺氯地平(amlodipine)、依托地平(efonidipine)、尼卡地平(nicardipine)、西尼地平(cilnidipine)等)、β阻斷劑(例如,美托洛爾(metoprolol)、阿替洛爾(atenolol)、普萘洛爾(propranolol)、卡維地洛(carvedilol),吲哚洛爾(pindolol)等)、可樂定(clonidine)等。
利尿劑而言,可列舉例如:黃嘌呤衍生物(例如,水楊酸鈉可可鹼、水楊酸鈣可可鹼等)、噻(thiazide)系製劑(例如,乙噻(ethiazide)、環戊噻、三氯甲噻、氫氯噻、氫氟噻、苄氫氯噻、戊氟噻、聚噻
(polythiazide)、甲氯噻等)、抗醛固酮製劑(例如,螺旋內酯固醇(spironolactone)、三胺蝶啶(triamterene)等)、碳酸脫水酵素抑制劑(例如,乙醯唑胺(acetazolamide)等)、氯苯磺醯胺系製劑(例如,氯噻酮(chlorthalidone)、美呋西特(mefruside)、吲達帕胺(indapamide)等)、唑噻醯胺(azosemide)、異色普(isosorbide)、依他尼酸(ethacrynic acid)、吡咯他尼(piretanide)、布美他尼(bumetanide)、呋塞米(furosemide)等。
就化學療法劑而言,可列舉例如:烷基化劑(例如,環磷醯胺、異環磷醯胺(ifosfamide))、代謝拮抗劑(例如,甲胺蝶呤(methotrexate)、5-氟尿嘧啶)、抗癌性抗生物質(例如,絲裂黴素(mitomycin)、阿黴素(adriamycin))、來自植物之抗癌劑(例如,長春新鹼(vincristine)、長春地辛(vindesine)、紫杉醇)、順鉑(cisplatin)、卡鉑(carboplatin)、依托泊苷(etoposide)等。其中,以5-氟尿嘧啶衍生物之氟鐵龍(flutulon)或新氟鐵龍(neofurtulon)等為較佳。
就免疫療法劑而言,可列舉例如:微生物或細菌成分(例如,胞壁醯二肽(muramyl dipeptide)衍生物、溶血鏈球菌(picibanir))、具有免疫增強活性之多糖類(例如,香菇多糖(lentinan)、裂褶多糖(schizophyllan)、雲芝多糖(krestin))、藉由基因工程技術得到之細胞激素(例如,干擾素、介白素(interleukin)(IL))、菌落刺激因子(例如,顆粒球菌落刺激因子、促紅細胞生成素(erythropoietin))
等,其中以IL-1、IL-2、IL-12等介白素類為較佳。
就抗炎症藥而言,可列舉例如:阿斯匹靈、乙醯胺酚(acetoaminophen)、吲哚美辛(indomethacin)等非類固醇抗炎症藥等。
就抗血栓劑而言,可列舉肝素(例如,肝素鈉、肝素鈣、伊諾甘素鈉(enoxaparin sodium)、達肝素鈉(dalteparin sodium))、丙酮苄羥香豆素(warfarin)(例如,丙酮苄羥香豆素鉀)、抗凝血酶藥(例如,阿加曲班(aragatroban)、達比加群(dabigatran))、FXa抑制藥(例如,利伐沙班(rivaroxaban)、阿哌沙班(apixaban)、依度沙班(edoxaban)、YM150、WO02/06234、WO2004/048363、WO2005/030740、WO2005/058823或WO2005/113504記載之化合物)、溶血栓藥(例如,尿激酶(urokinase)、替來激酶(tisokinase)、阿替普酶(alteplase)、那替普酶(nateplase)、孟替普酶(monteplase)、帕米普酶(pamiteplase))、血小板凝集抑制藥(例如,噻氯匹定鹽酸鹽(ticlopidine hydrochloride)、氯吡格雷(clopidogrel)、普拉格雷(prasugrel)、E5555、SHC530348、西洛他唑(cilostazol)、二十碳五烯酸乙酯、貝前列素鈉(beraprost sodium)、沙格雷鹽酸鹽(sarpogrelate hydrochloride))等。
就骨質疏鬆症治療劑而言,可列舉例如:α-骨化醇(alfacalcidol)、骨化三醇(calcitriol)、依降鈣素(elcatonin)、降鈣素鮭精(calcitonin salmon)、雌三醇(estriol)、依普黃酮(ipriflavone)、帕米膦酸二鈉
(pamidronate disodium)、阿崙膦酸鈉水合物(alendronate sodium hydrate)、依班膦酸二鈉(incadronate disodium)、利塞膦酸二鈉(risedronate disodium)等。
就維生素藥而言,可列舉例如:維生素B1、維生素B12等。
就抗失智藥而言,可列舉例如:他克林(tacrine)、多奈哌齊(donepezil)、憶思能(rivastigmine)、加蘭他敏(galanthamine)等。
就勃起不全改善藥而言,可列舉例如:阿撲嗎啡(apomorphine)、西地那非檸檬酸鹽(sildenafil citrate)等。
就頻尿/尿失禁治療藥而言,可列舉例如:黃酮哌鹽酸鹽(flavoxate hydrochloride)、奧昔布寧鹽酸鹽(oxybutynin hydrochloride)、丙哌維林鹽酸鹽(propiverine hydrochloride)等。
就排尿困難治療劑而言,可列舉乙醯基膽鹼酯酶抑制藥(例如,雙吡己胺(distigmine))等。
再者,於動物模型或臨床已確認具有改善惡病體質作用之藥劑,亦即,環氧化酶抑制劑(例如,吲哚美辛(indomethacin)、黃體激素衍生物(例如,甲地孕酮乙酸鹽(megestrol acetate))、糖質類固醇(例如,地塞米松(dexamethasone))、胃復安(metoclopramide)系藥劑、四氫大麻醇系藥劑、脂肪代謝改善劑(例如,二十碳五烯酸)、成長荷爾蒙、IGF-1、或針對誘導惡病體質之因子之
TNF-α、LIF、IL-6、制瘤素(oncostatin)M的抗體等,亦可與本發明化合物併用。
再者,糖化抑制劑(例如,ALT-711)、神經再生促進藥(例如,Y-128、VX853、普賽肽(prosaptide)、抗抑鬱藥(例如,地昔帕明(desipramine)、阿米替林(amitriptyline)、丙咪(imipramine))、抗癲癇藥(例如,拉莫三(lamotrigine)、除癲達(Trileptal)、優閒錠(Keppra)、佐能安(Zonegran)、普瑞巴林(Pregabalin)、拉考醯胺(Harkoseride)、卡馬西平(carbamazepine))、抗心律不整藥(例如,美西律(mexiletine))、乙醯基膽鹼受體配位子(例如,ABT-594)、內皮素受體拮抗藥(例如,ABT-627)、單胺攝取抑制藥(例如,曲馬多(tramadol))、麻藥性鎮痛藥(例如,嗎啡)、GABA受體促效藥(例如,加巴噴丁(gabapentin)、加巴噴丁MR劑)、α2受體促效藥(例如,可樂定(clonidine))、局部鎮痛藥(例如,辣椒素)、抗焦慮藥(例如,苯并硫氮呯(benzothiazepine))、磷酸二酯酶抑制藥(例如,西地那非(sildenafil))、多巴胺受體促效藥(例如,阿樸嗎啡(apomorphine))、咪達唑侖(midazolam)、酮康唑(ketoconazole)等,亦可與本發明化合物併用。
本發明化合物及併用藥劑之投予時期無限定,可將此等同時投予至投予對象,亦可將時間錯開而投予。
就投予形式而言,可列舉例如:(1)將本發明化合物與併用藥劑同時製劑化所得到之單製劑的投予,
(2)將本發明化合物與併用藥劑分別製劑化所得到之2種製劑以同一投予途徑同時投予,(3)將本發明化合物與併用藥劑分別製劑化所得到之2種製劑以同一投予途徑而時間錯開的投予、(4)將本發明化合物與併用藥劑分別製劑化所得到之2種製劑以不同投予途徑同時投予、(5)將本發明化合物與併用藥劑分別製劑化所得到之2種製劑以不同投予途徑且時間錯開的投予(例如,本發明化合物及併用藥劑依順序之投予,或逆順序之投予)等。
併用藥劑之投予量,可依照臨床上所用之用量作為基準而適當地選擇。又,本發明化合物與併用藥劑之摻配比,可根據投予對象、症狀、投予方法、對象疾病、組合等而適當地選擇。例如,在投予對象為人類之情況,相對於本發明化合物1重量份,可使用併用藥劑0.01至100重量份。
藉由將本發明化合物與併用藥劑組合,則(1)與將本發明化合物或併用藥劑單獨投予之情況相比,可使其投予量減少,(2)可依據患者之症狀(輕症、重症等),選擇可與本發明化合物併用之藥劑,(3)藉由選擇與本發明化合物作用機構不同之併用藥劑,可設定較長的治療期間,(4)藉由選擇與本發明化合物作用機構不同之併用藥劑,可謀求治療效果的持續,(5)藉由將本發明化合物與併用藥劑併用,可得到相
乘效果等效果。
本說明書中所用之簡稱表示下述(表1-1、表1-2、及表1-3)之意義。本說明書中之α-MePhe等所含之連字號可省略,在省略之情況亦表示相同之意義。
本說明書中所用之胺基酸序列,左末端表示N末端,右末端表示C末端。
在本說明書中,將鹼基或胺基酸等以簡稱表示之情況,為依據IUPAC-IUB生化命名學會(Commision on Biochemical Nomenclature)之簡稱或依據該領域中慣用簡稱者,將其例於下述說明。又,關於胺基酸在可有光學異構物之情況,若無特別記載、無明示,則係表示L型(例如,「Ala」為L型之Ala)。又,在以「D-」表示之情況,則表示D型(例如,「D-Ala」為D型之Ala),在以「DL-」表示之情況,係表示D型及L型之消旋體(例如,「DL-Ala」係表示D型之Ala及L型之Ala的消旋體)。
TFA:三氟乙酸
Gly或G:甘胺酸
Ala或A:丙胺酸
Val或V:纈胺酸
Leu或L:白胺酸
Ile或I:異白胺酸
Ser或S:絲胺酸
Thr或T:蘇胺酸
Cys或C:半胱胺酸
Met或M:甲硫胺酸
Glu或E:麩胺酸
Asp或D:天冬胺酸
Lys或K:離胺酸
Arg或R:精胺酸
His或H:組胺酸
Phe或F:苯丙胺酸
Tyr或Y:酪胺酸
Trp或W:色胺酸
Pro或P:脯胺酸
Asn或N:天冬醯胺酸
Gln或Q:麩醯胺酸
pGlu:焦麩胺酸
α-MeTyr:α-甲基酪胺酸
本發明進一步藉由下述參考例、實施例、試驗例及製劑例加以詳細地說明,然而此等例僅為單純的實施,並非用於限定本發明,又,在不逾越本發明之範圍,可有不同之變化。
以下之實施例中之「室溫」,通常表示約10℃至約35℃。%於產率表示莫耳/莫耳%,於層析所用之溶劑表示體積%,其他則表示重量%。
THF:四氫呋喃
DMF:N,N-二甲基甲醯胺
WSC:1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽
HOBt:1-羥基苯并三唑單水合物
參考例1
H-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Phe(2-F)-Sieber醯胺樹脂(序列編號2)之合成
將Sieber醯胺樹脂(0.71meq/g,352mg)加入反應管中,安裝至胜肽合成機。依據Fmoc/DCC/HOBt製程依序將胺基酸縮合。於導入29位之Lys(Boc)時進行雙重偶合。於最後步驟除去N末端之Fmoc基。縮合完成後將樹脂用MeOH洗淨,並減壓乾燥。取得為目的之保護胜肽樹脂1384mg(0.181meq/g)。
參考例2
H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Ala-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Phe(2-F)-Sieber醯胺樹脂(序列編號3)之合成
將參考例1所調製之H-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Phe(2-F)-Sieber醯胺resin(0.181meq/g,276mg)加入反應管中,並安裝至胜肽合成機。藉由Fmoc/DIPCDI/OxymaPure製程依序將胺基酸縮
合。於導入19位之Gln(Trt)、18位之Ala、12位之Ile及5位之Thr(tBu)時進行雙重偶合。於最後步驟除去N末端之Fmoc基。縮合完成後將樹脂用MeOH洗淨,並減壓乾燥。取得為目的之保護胜肽樹脂389mg(0.129meq/g)。
參考例3
H-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Phe(2-F)-Rink醯胺AM樹脂(序列編號4)之合成
將Rink醯胺AM樹脂(0.29meq/g,862mg)加入反應管中,並安裝至胜肽合成機。藉由Fmoc/DCC/HOBt製程,依序將胺基酸縮合。於導入29位之Lys(Mtt)時進行雙重偶合。於最後步驟除去N末端之Fmoc基。縮合完成後將樹脂用MeOH洗淨,並減壓乾燥。取得為目的之保護胜肽樹脂1788mg(0.140meq/g)。
參考例4
H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Phe(2-F)-Rink醯胺AM樹脂(序列編號5)之合成
將參考例3所調製之H-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Phe(2-F)-Rink醯胺AM resin
(0.140meq/g,357mg)加入反應管中,並安裝至胜肽合成機。藉由Fmoc/DIPCDI/OxymaPure製程,依序將胺基酸縮合。於導入19位之Gln(Trt)、18位之Arg(Pbf)、12位之Ile及5位之Thr(tBu)時進行雙重偶合。於最後步驟除去N末端之Fmoc基。縮合完成後將樹脂用MeOH洗淨,並減壓乾燥。取得為目的之保護胜肽樹脂452mg(0.111meq/g)。
參考例5
H-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink醯胺AM樹脂(序列編號6)之合成
將Rink醯胺AM樹脂(0.29meq/g,690mg)加入反應管中,並安裝至胜肽合成機。藉由Fmoc/DCC/HOBt製程,依序將胺基酸縮合。於導入29位之Lys(Mtt)時進行雙重偶合。於最後步驟除去N末端之Fmoc基。縮合完成後將樹脂用MeOH洗淨,並減壓乾燥。取得為目的之保護胜肽樹脂1449mg(0.138meq/g)。
參考例6
H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink醯胺AM樹脂(序列編號7)之合成
將參考例5所調製之H-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg
(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink醯胺AM樹脂(0.138meq/g,290mg)加入反應管中,並安裝至胜肽合成機。藉由Fmoc/DIPCDI/OxymaPure製程依序將胺基酸縮合。於導入19位之Gln(Trt)、18位之Arg(Pbf)、12位之Ile及5位之Thr(tBu)時進行雙重偶合。於最後步驟除去N末端之Fmoc基。縮合完成後將樹脂用MeOH洗淨,並減壓乾燥。取得為目的之保護胜肽樹脂417mg(0.096meq/g)。
參考例7
H-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber醯胺resin(序列編號8)之合成
將Sieber醯胺樹脂(0.71meq/g,352mg)加入反應管中,並安裝至胜肽合成機。藉由Fmoc/DCC/HOBt製程,依序將胺基酸縮合。於導入29位之Lys(Boc)時進行雙重偶合。於最後步驟除去N末端之Fmoc基。縮合完成後將樹脂用MeOH洗淨,並減壓乾燥。取得為目的之保護胜肽樹脂1373mg(0.182meq/g)。
參考例8
H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Ala-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber醯胺resin(序列編號
9)之合成
將參考例7所調製之H-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber醯胺resin(0.182meq/g,275mg)加入反應管中,並安裝至胜肽合成機。藉由Fmoc/DIPCDI/OxymaPure製程,依序將胺基酸縮合。於導入19位之Gln(Trt)、18位之Ala、12位之Ile及5位之Thr(tBu)時進行雙重偶合。於最後步驟除去N末端之Fmoc基。縮合完成後將樹脂用MeOH洗淨,並減壓乾燥。取得為目的之保護胜肽樹脂409mg(0.122meq/g)。
實施例1
H-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Ala-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Phe(2-F)-NH2(序列編號10)
量取參考例2所調製之H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Ala-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Phe(2-F)-Sieber醯胺樹脂(0.129meq/g,97mg)置於反應管中並使用NMP進行膨潤。過濾除去NMP後,對樹脂依序添加Boc-Tyr(tBu)-OH(33.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過
濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測(Kaiser test)為陰性後,在所得到之樹脂中添加2%肼之NMP溶液,並震盪3小時。過濾去除溶液後,再度添加2%肼之NMP溶液,並震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-Gly-Gly-OH(41.1mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。對所得到之樹脂添加Pal-OSu(35.4mg)及DIPEA(17.4μL)之NMP溶液(200μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,將樹脂用MeOH洗淨,並減壓乾燥,得到Boc-Tyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Ala-Gln(Trt
)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Phe(2-F)-Sieber醯胺樹脂101.3mg。
在所得到之樹脂101.3mg中添加TFA:間甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三異丙基矽烷(80:5:5:5:2.5:2.5)1mL,並攪拌1.5小時。在反應溶液中添加乙醚,得到沉澱物,離心後,除去上清液,重覆操作3次,將沉澱物洗淨。將殘餘物用50%乙酸水溶液萃取,並藉由過濾除去樹脂後,藉由使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm管柱(250×20mm I.D.)之分取HPLC進行直線型濃度梯度溶出(60分鐘)(A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1%TFA之乙腈;流量:8mL/分鐘,A/B:56/44-46/54),收集含目的物之部分,並凍結乾燥,得到23.1mg之白色粉末。
經由質量分析之(M+H)+ 4606.1(計算值4605.5)
HPLC溶出時間:17.4分鐘
溶出條件:
管柱YMC Triart C8(100×4.6mm I.D.)
溶離液:使用A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1%TFA之乙腈,以A/B:80/20至30/70進行直線型濃度梯度溶出(25分鐘)。
流速:1.0mL/分鐘
實施例2
H-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly
-Gly-Gly-Oda)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Ala-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Phe(2-F)-NH2(序列編號11)
量取參考例2所調製之H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Ala-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Phe(2-F)-Sieber醯胺樹脂(0.129meq/g,97mg)置於反應管中,並用NMP膨潤。過濾除去NMP後,對樹脂依序添加Boc-Tyr(tBu)-OH(33.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,在所得到之樹脂中添加2%肼之NMP溶液,並震盪3小時。過濾去除溶液後,再度添加2%肼之NMP溶液,並震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。重覆進行此Fmoc胺基酸之縮合-Fmoc脫保護的循環,將Gly-Gly-Gly、
Oda(OtBu)依序縮合。將樹脂用MeOH洗淨,並減壓乾燥,得到Boc-Tyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda(tBu))-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Ala-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Phe(2-F)-Sieber醯胺樹脂94.6mg。
在所得到之樹脂94.6mg中,添加TFA:間甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三異丙基矽烷(80:5:5:5:2.5:2.5)1mL,並攪拌1.5小時。在反應溶液中添加乙醚,得到沉澱物,離心後,除去上清液,重覆操作3次,將沉澱物洗淨。將殘餘物用50%乙酸水溶液萃取,並藉由過濾除去樹脂後,藉由使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm管柱(250×20mm I.D.)之分取HPLC,進行直線型濃度梯度溶出(60分鐘)(A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1% TFA之乙腈,流量:8mL/分鐘,A/B:60/40-50/50),收集含目的物之部分,並凍結乾燥,得到21.4mg之白色粉末。
經由質量分析之(M+H)+ 4664.4(計算值4663.6)
HPLC溶出時間:15.4分鐘
溶出條件:管柱YMC Triart C8(100×4.6mm I.D.)
溶離液:使用A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1%TFA之乙腈,以A/B:80/20至30/70進行直線型濃度梯度溶出
(25分鐘)。
流速:1.0mL/分鐘
實施例3
H-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Phe(2-F)-NH2(序列編號12)
量取參考例4所調製之H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Phe(2-F)-Rink醯胺AM樹脂(0.111meq/g,89.3mg)置於反應管中,並用NMP膨潤。過濾除去NMP後,對樹脂依序添加Boc-Tyr(tBu)-OH(33.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,在所得到之樹脂中添加2%肼之NMP溶液,並震盪3小時。過濾去除溶液後,再度添加2%肼之NMP溶液,並震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%
哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-Gly-Gly-OH(41.1mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。對所得到之樹脂添加Pal-OSu(35.4mg)及DIPEA(17.4μL)之NMP溶液(200μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,將樹脂用MeOH洗淨,並減壓乾燥,得到Boc-Tyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Phe(2-F)-Rink醯胺AM樹脂110.2mg。
在所得到之樹脂110.2mg中加入TFA:間甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三異丙基矽烷(80:5:5:5:2.5:2.5)1mL,並攪拌1.5小時。在反應溶液中添加乙醚,得到沉澱物,離心後,除去上清液,重覆操作3次,將沉澱物洗淨。將殘餘物用50%乙酸水溶液萃取,並
藉由過濾除去樹脂後,藉由使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm管柱(250×20mm I.D.)之分取HPLC進行直線型濃度梯度溶出(60分鐘)(A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1% TFA之乙腈,流量:8mL/分鐘,A/B:58/42-48/52),收集含目的物之部分,並凍結乾燥,得到9.3mg之白色粉末。
經由質量分析之(M+H)+ 4691.1(計算值4690.6)
HPLC溶出時間:16.9分鐘
溶出條件:管柱YMC Triart C8(100×4.6mm I.D.)
溶離液:使用A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1% TFA之乙腈,以A/B:80/20至30/70進行直線型濃度梯度溶出(25分鐘)。
流速:1.0mL/分鐘
實施例4
H-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Phe(2-F)-NH2(序列編號13)
量取參考例4所調製之H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)
-Phe(2-F)-Rink醯胺AM樹脂(0.111meq/g,89.3mg)置於反應管中,並用NMP膨潤。過濾除去NMP後,對樹脂依序添加Boc-Tyr(tBu)-OH(33.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,在所得到之樹脂中添加2%肼之NMP溶液,並震盪3小時。過濾去除溶液後,再度添加2%肼之NMP溶液,並震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。重覆此Fmoc胺基酸之縮合-Fmoc脫保護的循環),將Gly-Gly-Gly、Oda(OtBu)依序縮合。樹脂以MeOH洗淨後,減壓乾燥,得到Boc-Tyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda(OtBu))-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Phe(2-F)-Rink醯胺AM樹脂109.6mg。
在所得到之樹脂109.6mg中,添加TFA:
間甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三異丙基矽烷(80:5:5:5:2.5:2.5)1mL,並攪拌1.5小時。在反應溶液中添加乙醚,得到沉澱物,離心後,除去上清液,重覆操作3次,將沉澱物洗淨。將殘餘物用50%乙酸水溶液萃取,並藉由過濾除去樹脂後,藉由使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm管柱(250×20mm I.D.)之分取HPLC,進行直線型濃度梯度溶出(60分鐘)(A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1% TFA之乙腈,流量:8mL/分鐘,A/B:61/39-51/49),收集含目的物之部分,並凍結乾燥,得到9.5mg之白色粉末。
經由質量分析之(M+H)+ 4749.1(計算值4748.6)
HPLC溶出時間:14.9分鐘
溶出條件:管柱YMC Triart C8(100×4.6mm I.D.)
溶離液:使用A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1% TFA之乙腈,以A/B:80/20至30/70進行直線型濃度梯度溶出(25分鐘)。
流速:1.0mL/分鐘
實施例5
Me-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Phe(2-F)-NH2(序列編號14)
量取參考例4所調製之H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr
(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Phe(2-F)-Rink醯胺AM樹脂(0.111meq/g,89.3mg)置於反應管中,並用NMP膨潤。過濾除去NMP後,對樹脂依序添加Boc-NMeTyr(tBu)-OH(35.1mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,在所得到之樹脂中添加2%肼之NMP溶液,並震盪3小時。過濾去除溶液後,再度添加2%肼之NMP溶液,並震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-Gly-Gly-OH(41.1mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,
並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。對所得到之樹脂添加Pal-OSu(35.4mg)及DIPEA(17.4μL)之NMP溶液(200μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,將樹脂用MeOH洗淨,並減壓乾燥,得到Boc-NMeTyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Phe(2-F)-Rink醯胺AM樹脂135.1mg。
在所得到之樹脂135.1mg中添加TFA:間甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三異丙基矽烷(80:5:5:5:2.5:2.5)1mL,並攪拌1.5小時。在反應溶液中添加乙醚,得到沉澱物,離心後,除去上清液,重覆操作3次,將沉澱物洗淨。將殘餘物用50%乙酸水溶液萃取,並藉由過濾除去樹脂後,藉由使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm管柱(250×20mm I.D.)之分取HPLC,進行A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1% TFA之乙腈形成之流量:8mL/分鐘,A/B:57/43-47/53的直線型濃度梯度溶出(60分鐘),收集含目的物之部分,並凍結乾燥,得到10.8mg之白色粉末。
經由質量分析之(M+H)+ 4705.1(計算值4704.6)
HPLC溶出時間:16.9分鐘
溶出條件:管柱YMC Triart C8(100×4.6mm I.D.)
溶離液:使用A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1% TFA之乙腈,以A/B:80/20至30/70進行直線型濃度梯度溶出(25分鐘)。
流速:1.0mL/分鐘
實施例6
Me-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Phe(2-F)-NH2(序列編號15)
量取參考例4所調製之H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Phe(2-F)-Rink醯胺AM樹脂(0.111meq/g,89.3mg)置於反應管中,並用NMP膨潤。過濾除去NMP後,對樹脂依序添加Boc-NMeTyr(tBu)-OH(35.1mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,在所得到之樹脂中添加2%肼之NMP溶液,並震盪3小時。過濾去除溶液後,再度添加2%肼之NMP溶液,並震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂
以NMP洗淨6次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。藉由重覆此Fmoc胺基酸之縮合-Fmoc脫保護的循環,將Gly-Gly-Gly、Oda(OtBu)依序縮合。將樹脂用MeOH洗淨後,減壓乾燥,得到Boc-NMeTyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda(OtBu))-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Phe(2-F)-Rink醯胺AM樹脂121.2mg。
在所得到之樹脂121.2mg中,添加TFA:間甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三異丙基矽烷(80:5:5:5:2.5:2.5)1mL,並攪拌1.5小時。在反應溶液中添加乙醚,得到沉澱物,離心後,除去上清液,重覆操作3次,將沉澱物洗淨。將殘餘物用50%乙酸水溶液萃取,並藉由過濾除去樹脂後,藉由使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm管柱(250×20mm I.D.)之分取HPLC,進行直線型濃度梯度溶出(60分鐘)(A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1% TFA之乙腈,流量:8mL/分鐘,A/B:61/39-
51/49),收集含目的物之部分,並凍結乾燥,得到9.1mg之白色粉末。
經由質量分析之(M+H)+ 4763.3(計算值4762.6)
HPLC溶出時間:14.9分鐘
溶出條件:管柱YMC Triart C8(100×4.6mm I.D.)
溶離液:使用A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1% TFA之乙腈,以A/B:80/20至30/70進行直線型濃度梯度溶出(25分鐘)。
流速:1.0mL/分鐘
實施例7
H-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(序列編號16)
量取參考例6所調製之H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink醯胺AM樹脂(0.096meq/g,104mg)置於反應管中,並用NMP膨潤。過濾除去NMP後,對樹脂依序添加Boc-Tyr(tBu)-OH(33.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過
濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,在所得到之樹脂中添加2%肼之NMP溶液,並震盪3小時。過濾去除溶液後,再度添加2%肼之NMP溶液,並震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-Gly-Gly-OH(41.1mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。對所得到之樹脂添加Pal-OSu(35.4mg)及DIPEA(17.4μL)之NMP溶液(200μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,將樹脂用MeOH洗淨,並減壓乾燥,得到Boc-Tyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu
(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink醯胺AM樹脂109.1mg。
在所得到之樹脂109.1mg中添加TFA:間甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三異丙基矽烷(80:5:5:5:2.5:2.5)1mL,並攪拌1.5小時。在反應溶液中添加乙醚,得到沉澱物,離心後,除去上清液,重覆操作3次,將沉澱物洗淨。將殘餘物用50%乙酸水溶液萃取,並藉由過濾除去樹脂後,藉由使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm管柱(250×20mm I.D.)之分取HPLC,進行直線型濃度梯度溶出(60分鐘)(A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1% TFA之乙腈,流量:8mL/分鐘,A/B:57/43-47/53),收集含目的物之部分,並凍結乾燥,得到7.9mg之白色粉末。
經由質量分析之(M+H)+ 4689.4(計算值4688.6)
HPLC溶出時間:16.6分鐘
溶出條件:管柱YMC Triart C8(100×4.6mm I.D.)
溶離液:使用A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1% TFA之乙腈,以A/B:80/20至30/70進行直線型濃度梯度溶出(25分鐘)。
流速:1.0mL/分鐘
實施例8
H-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly
-Gly-Gly-Oda)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(序列編號17)
量取參考例6所調製之H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink醯胺AM樹脂(0.096meq/g,104mg)置於反應管中,並用NMP膨潤。過濾除去NMP後,對樹脂依序添加Boc-Tyr(tBu)-OH(33.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,在所得到之樹脂中添加2%肼之NMP溶液,並震盪3小時。過濾去除溶液後,再度添加2%肼之NMP溶液,並震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。藉由重覆此Fmoc胺基酸之縮合-Fmoc脫保護的循環,將Gly-Gly-Gly、
Oda(OtBu)依序縮合。將樹脂用MeOH洗淨後,減壓乾燥,得到Boc-Tyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda(OtBu))-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink醯胺AM樹脂104.1mg。
在所得到之樹脂104.1mg中添加TFA:間甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三異丙基矽烷(80:5:5:5:2.5:2.5)1mL,並攪拌1.5小時。在反應溶液中添加乙醚,得到沉澱物,離心後,除去上清液,重覆操作3次,將沉澱物洗淨。將殘餘物用50%乙酸水溶液萃取,並藉由過濾除去樹脂後,藉由使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm管柱(250×20mm I.D.)之分取HPLC,進行直線型濃度梯度溶出(60分鐘)(A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1% TFA之乙腈,流量:8mL/分鐘,A/B:61/39-51/49),收集含目的物之部分,並凍結乾燥,得到7.7mg之白色粉末。
經由質量分析之(M+H)+ 4747.5(計算值4746.6)
HPLC溶出時間:14.6分鐘
溶出條件:管柱YMC Triart C8(100×4.6mm I.D.)
溶離液:使用A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1%TFA之乙腈,以A/B:80/20至30/70進行直線型濃度梯度溶出
(25分鐘)。
流速:1.0mL/分鐘
實施例9
Me-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(序列編號18)
量取參考例6所調製之H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink醯胺AM樹脂(0.096meq/g,104mg)置於反應管中,並用NMP膨潤。過濾除去NMP後,對樹脂依序添加Boc-NMeTyr(tBu)-OH(35.1mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,在所得到之樹脂中添加2%肼之NMP溶液,並震盪3小時。過濾去除溶液後,再度添加2%肼之NMP溶液,並震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%
哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-Gly-Gly-OH(41.1mg)、0.5M OxymaPure(200μL)之NMP及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。對所得到之樹脂添加Pal-OSu(35.4mg)及DIPEA(17.4μL)之NMP溶液(200μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,將樹脂用MeOH洗淨,並減壓乾燥,得到Boc-NMeTyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink醯胺AM樹脂99.6mg。
在所得到之樹脂99.6mg中添加TFA:間甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三異丙基矽烷(80:5:5:5:2.5:2.5)1mL,並攪拌1.5小時。在反應溶液中添加乙醚,得到沉澱物,離心後,除去上清液,重覆操作3次,將沉澱物洗淨。將殘餘物用50%乙酸水溶液萃取,並藉由
過濾除去樹脂後,藉由使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm管柱(250×20mm I.D.)之分取HPLC,進行直線型濃度梯度溶出(60分鐘)(A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1%TFA之乙腈,流量:8mL/分鐘,A/B:57/43-47/53),收集含目的物之部分,並凍結乾燥,得到8.3mg之白色粉末。
經由質量分析之(M+H)+ 4703.5(計算值4702.6)
HPLC溶出時間:16.6分鐘
溶出條件:管柱YMC Triart C8(100×4.6mm I.D.)
溶離液:使用A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1% TFA之乙腈,以A/B:80/20至30/70進行直線型濃度梯度溶出(25分鐘)。
流速:1.0mL/分鐘
實施例10
Me-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(序列編號19)
量取參考例6所調製之H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)
-Tyr(tBu)-Rink醯胺AM樹脂(0.096meq/g,104mg)置於反應管中,並用NMP膨潤。過濾除去NMP後,對樹脂依序添加Boc-NMeTyr(tBu)-OH(35.1mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,在所得到之樹脂中添加2%肼之NMP溶液,並震盪3小時。過濾去除溶液後,再度添加2%肼之NMP溶液,並震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。藉由重覆此Fmoc胺基酸之縮合-Fmoc脫保護的循環,將Gly-Gly-Gly、Oda(OtBu)依序縮合。將樹脂用MeOH洗淨後,減壓乾燥,得到Boc-NMeTyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda(OtBu))-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink醯胺AM樹脂110.6mg。
在所得到之樹脂110.6mg中添加TFA:間
甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三異丙基矽烷(80:5:5:5:2.5:2.5)1mL,並攪拌1.5小時。在反應溶液中添加乙醚,得到沉澱物,離心後,除去上清液,重覆操作3次,將沉澱物洗淨。將殘餘物用50%乙酸水溶液萃取,並藉由過濾除去樹脂後,藉由使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm管柱(250×20mm I.D.)之分取HPLC,進行直線型濃度梯度溶出(60分鐘)(A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1% TFA之乙腈,流量:8mL/分鐘,A/B:61/39-51/49),收集含目的物之部分,並凍結乾燥,得到7.9mg之白色粉末。
經由質量分析之(M+H)+ 4761.5(計算值4760.6)
HPLC溶出時間:14.6分鐘
溶出條件:管柱YMC Triart C8(100×4.6mm I.D.)
溶離液:使用A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1%TFA之乙腈,以A/B:80/20至30/70進行直線型濃度梯度溶出(25分鐘)。
流速:1.0mL/分鐘
實施例11
H-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Ala-Ile-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(序列編號20)
量取與參考例6同樣之手法所調製之H-Aib-Glu
(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Ala-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink醯胺AM樹脂(0.089meq/g,112mg)置於反應管中,並用NMP膨潤。過濾除去NMP後,對樹脂依序添加Boc-Tyr(tBu)-OH(33.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,在所得到之樹脂中添加2%肼之NMP溶液,並震盪3小時。過濾去除溶液後,再度添加2%肼之NMP溶液,並震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-Gly-Gly-OH(41.1mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌
啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。對所得到之樹脂添加Pal-OSu(35.4mg)及DIPEA(17.4μL)之NMP溶液(200μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,將樹脂用MeOH洗淨,並減壓乾燥,得到Boc-Tyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Ala-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink醯胺AM樹脂103.9mg。
在所得到之樹脂103.9mg中添加TFA:間甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三異丙基矽烷(80:5:5:5:2.5:2.5)1mL,並攪拌1.5小時。在反應溶液中添加乙醚,得到沉澱物,離心後,除去上清液,重覆操作3次,將沉澱物洗淨。將殘餘物用50%乙酸水溶液萃取,並藉由過濾除去樹脂後,藉由使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm管柱(250×20mm I.D.)之分取HPLC,進行直線型濃度梯度溶出(60分鐘)(A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1% TFA之乙腈,流量:8mL/分鐘,A/B:56/44-46/54),收集含目的物之部分,並凍結乾燥,得到8.8mg之白色粉末。
經由質量分析之(M+H)+ 4675.5(計算值4674.6)
HPLC溶出時間:16.6分鐘
溶出條件:管柱YMC Triart C8(100×4.6mm I.D.)
溶離液:使用A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1% TFA之乙腈,以A/B:80/20至30/70進行直線型濃度梯度溶出(25分鐘)。
流速:1.0mL/分鐘
實施例12
H-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)-Ala-Ile-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(序列編號21)
量取與參考例6同樣之手法所調製之H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Ala-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink醯胺AM樹脂(0.089meq/g,112mg)置於反應管中,並用NMP膨潤。過濾除去NMP後,對樹脂依序添加Boc-Tyr(tBu)-OH(33.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,在所得到之樹脂中添加2%肼之NMP溶液,並震盪3小時。過濾去除溶液後,再度添加2%肼之NMP溶液,並震盪整夜。
過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。藉由重覆此Fmoc胺基酸之縮合-Fmoc脫保護的循環,將Gly-Gly-Gly、Oda(OtBu)依序縮合。將樹脂用MeOH洗淨後,減壓乾燥,得到Boc-Tyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda(OtBu))-Ala-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink醯胺AM樹脂103.2mg。
在所得到之樹脂103.2mg中添加TFA:間甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三異丙基矽烷(80:5:5:5:2.5:2.5)1mL,並攪拌1.5小時。在反應溶液中添加乙醚,得到沉澱物,離心後,除去上清液,重覆操作3次,將沉澱物洗淨。將殘餘物用50%乙酸水溶液萃取,並藉由過濾除去樹脂後,藉由使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm管柱(250×20mm I.D.)之分取HPLC,進行直線型濃度梯度溶出(60分鐘)(A液:0.1%TFA-水,B液:
含有0.1% TFA之乙腈,流量:8mL/分鐘,A/B:60/40-50/50),收集含目的物之部分,並凍結乾燥,得到8.5mg之白色粉末。
經由質量分析之(M+H)+ 4732.1(計算值4732.6)
HPLC溶出時間:14.5分鐘
溶出條件:管柱YMC Triart C8(100×4.6mm I.D.)
溶離液:使用A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1% TFA之乙腈,以A/B:80/20至30/70進行直線型濃度梯度溶出(25分鐘)。
流速:1.0mL/分鐘
實施例13
Me-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Ala-Ile-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(序列編號22)
量取與參考例6同樣之手法所調製之H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Ala-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink醯胺AM樹脂(0.089meq/g,112mg)置於反應管中,並用NMP膨潤。過濾除去NMP後,對樹脂依序添加Boc-NMeTyr(tBu)-OH
(35.1mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,在所得到之樹脂中添加2%肼之NMP溶液,並震盪3小時。過濾去除溶液後,再度添加2%肼之NMP溶液,並震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-Gly-Gly-OH(41.1mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。對所得到之樹脂添加Pal-OSu(35.4mg)及DIPEA(17.4μL)之NMP溶液(200μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,將樹脂用MeOH洗淨,並減壓乾燥,得到Boc-NMeTyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-
Gly-Gly-Gly-Pal)-Ala-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink醯胺AM樹脂99.9mg。
在所得到之樹脂99.9mg中添加TFA:間甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三異丙基矽烷(80:5:5:5:2.5:2.5)1mL,並攪拌1.5小時。在反應溶液中添加乙醚,得到沉澱物,離心後,除去上清液,重覆操作3次,將沉澱物洗淨。將殘餘物用50%乙酸水溶液萃取,並藉由過濾除去樹脂後,藉由使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm管柱(250×20mm I.D.)之分取HPLC,進行直線型濃度梯度溶出(60分鐘)(A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1% TFA之乙腈,流量:8mL/分鐘,A/B:56/44-46/54),收集含目的物之部分,並凍結乾燥,得到8.8mg之白色粉末。
經由質量分析之(M+H)+ 4688.4(計算值4688.6)
HPLC溶出時間:16.6分鐘
溶出條件:管柱YMC Triart C8(100×4.6mm I.D.)
溶離液:使用A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1% TFA之乙腈,以A/B:80/20至30/70進行直線型濃度梯度溶出(25分鐘)。
流速:1.0mL/分鐘
實施例14
Me-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)-Ala-Ile-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(序列編號23)
量取與參考例6同樣之手法所調製之H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Ala-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink醯胺AM樹脂(0.089meq/g,112mg)置於反應管中,並用NMP膨潤。過濾除去NMP後,對樹脂依序添加Boc-NMeTyr(tBu)-OH(35.1mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,在所得到之樹脂中添加2%肼之NMP溶液,並震盪3小時。過濾去除溶液後,再度添加2%肼之NMP溶液,並震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10
次。藉由重覆此Fmoc胺基酸之縮合-Fmoc脫保護的循環,將Gly-Gly-Gly、Oda(OtBu)依序縮合。將樹脂用MeOH洗淨後,減壓乾燥,得到Boc-NMeTyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda(OtBu))-Ala-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink醯胺AM樹脂111.4mg。
在所得到之樹脂111.4mg中添加TFA:間甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三異丙基矽烷(80:5:5:5:2.5:2.5)1mL,並攪拌1.5小時。在反應溶液中添加乙醚,得到沉澱物,離心後,除去上清液,重覆操作3次,將沉澱物洗淨。將殘餘物用50%乙酸水溶液萃取,並藉由過濾除去樹脂後,藉由使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm管柱(250×20mm I.D.)之分取HPLC,進行直線型濃度梯度溶出(60分鐘)(A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1% TFA之乙腈所形成之流量:8mL/分鐘,A/B:60/40-50/50),收集含目的物之部分,並凍結乾燥,得到7.0mg之白色粉末。
經由質量分析之(M+H)+ 4746.2(計算值4746.6)
HPLC溶出時間:14.5分鐘
溶出條件:管柱YMC Triart C8(100×4.6mm I.D.)
溶離液:使用A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1% TFA之乙腈,以A/B:80/20至30/70進行直線型濃度梯度溶出(25分鐘)。
流速:1.0mL/分鐘
實施例15
H-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Ser-Ile-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(序列編號24)
量取與參考例6同樣之手法所調製之H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Ser(tBu)-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink醯胺AM樹脂(0.088meq/g,113mg)置於反應管中,並用NMP膨潤。過濾除去NMP後,對樹脂依序添加Boc-Tyr(tBu)-OH(33.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,在所得到之樹脂中添加2%肼之NMP溶液,並震盪3小時。過濾去除溶液後,再度添加2%肼之NMP溶液,並震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M OxymaPure
之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-Gly-Gly-OH(41.1mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。對所得到之樹脂添加Pal-OSu(35.4mg)及DIPEA(17.4μL)之NMP溶液(200μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,將樹脂用MeOH洗淨,並減壓乾燥,得到Boc-Tyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Ser(tBu)-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink醯胺AM樹脂100.5mg。
在所得到之樹脂100.5mg中添加TFA:間甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三異丙基矽烷(80:5:5:5:2.5:2.5)1mL,並攪拌1.5小時。在反應溶液中添
加乙醚,得到沉澱物,離心後,除去上清液,重覆操作3次,將沉澱物洗淨。將殘餘物用50%乙酸水溶液萃取,並藉由過濾除去樹脂後,藉由使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm管柱(250×20mm I.D.)之分取HPLC,進行直線型濃度梯度溶出(60分鐘)(A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1% TFA之乙腈,流量:8mL/分鐘,A/B:56/44-46/54),收集含目的物之部分,並凍結乾燥,得到7.8mg之白色粉末。
經由質量分析之(M+H)+ 4690.3(計算值4690.6)
HPLC溶出時間:16.6分鐘
溶出條件:管柱YMC Triart C8(100×4.6mm I.D.)
溶離液:使用A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1%TFA之乙腈,以A/B:80/20至30/70進行直線型濃度梯度溶出(25分鐘)。
流速:1.0mL/分鐘
實施例16
H-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)-Ser-Ile-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(序列編號25)
量取與參考例6同樣之手法所調製之H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Ser(tBu)-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-L
ys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink醯胺AM樹脂(0.088meq/g,113mg)置於反應管中,並用NMP膨潤。過濾除去NMP後,對樹脂依序添加Boc-Tyr(tBu)-OH(33.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,在所得到之樹脂中添加2%肼之NMP溶液,並震盪3小時。過濾去除溶液後,再度添加2%肼之NMP溶液,並震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。藉由重覆此Fmoc胺基酸之縮合-Fmoc脫保護的循環,將Gly-Gly-Gly、Oda(OtBu)依序縮合。將樹脂用MeOH洗淨後,減壓乾燥,得到Boc-Tyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda(OtBu))-Ser(tBu)-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(t
Bu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink醯胺AM樹脂96.8mg。
在所得到之樹脂96.8mg中添加TFA:間甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三異丙基矽烷(80:5:5:5:2.5:2.5)1mL,並攪拌1.5小時。在反應溶液中添加乙醚,得到沉澱物,離心後,除去上清液,重覆操作3次,將沉澱物洗淨。將殘餘物用50%乙酸水溶液萃取,並藉由過濾除去樹脂後,藉由使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm管柱(250×20mm I.D.)之分取HPLC,進行直線型濃度梯度溶出(60分鐘)(A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1% TFA之乙腈,流量:8mL/分鐘,A/B:60/40-50/50),收集含目的物之部分,並凍結乾燥,得到7.5mg之白色粉末。
經由質量分析之(M+H)+ 4748.5(計算值4748.6)
HPLC溶出時間:14.5分鐘
溶出條件:管柱YMC Triart C8(100×4.6mm I.D.)
溶離液:使用A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1%TFA之乙腈,以A/B:80/20至30/70進行直線型濃度梯度溶出(25分鐘)。
流速:1.0mL/分鐘
實施例17
Me-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Ser-Ile-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva
-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(序列編號26)
量取與參考例6同樣之手法所調製之H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Ser(tBu)-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink醯胺AM樹脂(0.088meq/g,113mg)置於反應管中,並用NMP膨潤。過濾除去NMP後,對樹脂依序添加Boc-NMeTyr(tBu)-OH(35.1mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,在所得到之樹脂中添加2%肼之NMP溶液,並震盪3小時。過濾去除溶液後,再度添加2%肼之NMP溶液,並震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-Gly-Gly-OH(41.1mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳
化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。對所得到之樹脂添加Pal-OSu(35.4mg)及DIPEA(17.4μL)之NMP溶液(200μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,將樹脂用MeOH洗淨,並減壓乾燥,得到Boc-NMeTyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Ser(tBu)-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink醯胺AM樹脂96.4mg。
在所得到之樹脂96.4mg中添加TFA:間甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三異丙基矽烷(80:5:5:5:2.5:2.5)1mL,並攪拌1.5小時。在反應溶液中添加乙醚,得到沉澱物,離心後,除去上清液,重覆操作3次,將沉澱物洗淨。將殘餘物用50%乙酸水溶液萃取,並藉由過濾除去樹脂後,藉由使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm管柱(250×20mm I.D.)之分取HPLC,進行直線型濃度梯度溶出(60分鐘)(A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1% TFA之乙腈,流量:8mL/分鐘,A/B:56/44-
46/54),收集含目的物之部分,並凍結乾燥,得到7.9mg之白色粉末。
經由質量分析之(M+H)+ 4704.3(計算值4704.6)
HPLC溶出時間:16.6分鐘
溶出條件:管柱YMC Triart C8(100×4.6mm I.D.)
溶離液:使用A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1% TFA之乙腈,以A/B:80/20至30/70進行直線型濃度梯度溶出(25分鐘)。
流速:1.0mL/分鐘
實施例18
Me-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)-Ser-Ile-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(序列編號27)
量取與參考例6同樣之手法所調製之H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Ser(tBu)-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink醯胺AM樹脂(0.088meq/g,113mg)置於反應管中,並用NMP膨潤。過濾除去NMP後,對樹脂依序添加Boc-NMeTyr(tBu)-OH(35.1mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳
化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,在所得到之樹脂中添加2%肼之NMP溶液,並震盪3小時。過濾去除溶液後,再度添加2%肼之NMP溶液,並震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。藉由重覆此Fmoc胺基酸之縮合-Fmoc脫保護的循環,將Gly-Gly-Gly、Oda(OtBu)依序縮合。將樹脂用MeOH洗淨後,減壓乾燥,得到Boc-NMeTyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda(OtBu))-Ser(tBu)-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink醯胺AM樹脂115.1mg。
在所得到之樹脂115.1mg中添加TFA:間甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三異丙基矽烷(80:5:5:5:2.5:2.5)1mL,並攪拌1.5小時。在反應溶液中添加乙醚,得到沉澱物,離心後,除去上清液,重覆操作3次,
將沉澱物洗淨。將殘餘物用50%乙酸水溶液萃取,並藉由過濾除去樹脂後,藉由使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm管柱(250×20mm I.D.)之分取HPLC,進行直線型濃度梯度溶出(60分鐘)(A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1% TFA之乙腈所形成之流量:8mL/分鐘,A/B:60/40-50/50),收集含目的物之部分,並凍結乾燥,得到7.0mg之白色粉末。
經由質量分析之(M+H)+ 4762.7(計算值4762.6)
HPLC溶出時間:14.5分鐘
溶出條件:管柱YMC Triart C8(100×4.6mm I.D.)
溶離液:使用A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1% TFA之乙腈,以A/B:80/20至30/70進行直線型濃度梯度溶出(25分鐘)。
流速:1.0mL/分鐘
實施例19
H-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Aib-Lys-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(序列編號28)
量取與參考例6同樣之手法所調製之H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Aib-Lys(Boc)-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-V
al-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink醯胺AM樹脂(0.093meq/g,108mg)置於反應管中,並用NMP膨潤。過濾除去NMP後,對樹脂依序添加Boc-Tyr(tBu)-OH(33.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,在所得到之樹脂中添加2%肼之NMP溶液,並震盪3小時。過濾去除溶液後,再度添加2%肼之NMP溶液,並震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-Gly-Gly-OH(41.1mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。對所得到之樹脂添加Pal-OSu(35.4mg)及DIPEA(17.4μL)之NMP溶液(200μL)
後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,將樹脂用MeOH洗淨,並減壓乾燥,得到Boc-Tyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Aib-Lys(Boc)-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink醯胺AM樹脂105.4mg。
在所得到之樹脂105.4mg中添加TFA:間甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三異丙基矽烷(80:5:5:5:2.5:2.5)1mL,並攪拌1.5小時。在反應溶液中添加乙醚,得到沉澱物,離心後,除去上清液,重覆操作3次,將沉澱物洗淨。將殘餘物用50%乙酸水溶液萃取,並藉由過濾除去樹脂後,藉由使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm管柱(250×20mm I.D.)之分取HPLC,進行直線型濃度梯度溶出(60分鐘)(A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1% TFA之乙腈,流量:8mL/分鐘,A/B:57/43-47/53),收集含目的物之部分,並凍結乾燥,得到10.0mg之白色粉末。
經由質量分析之(M+H)+ 4703.5(計算值4703.6)
HPLC溶出時間:16.0分鐘
溶出條件:管柱YMC Triart C8(100×4.6mm I.D.)
溶離液:使用A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1% TFA
之乙腈,以A/B:80/20至30/70進行直線型濃度梯度溶出(25分鐘)。
流速:1.0mL/分鐘
實施例20
H-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)-Aib-Lys-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(序列編號29)
量取與參考例6同樣之手法所調製之H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Aib-Lys(Boc)-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink醯胺AM樹脂(0.093meq/g,108mg)置於反應管中,並用NMP膨潤。過濾除去NMP後,對樹脂依序添加Boc-Tyr(tBu)-OH(33.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,在所得到之樹脂中添加2%肼之NMP溶液,並震盪3小時。過濾去除溶液後,再度添加2%肼之NMP溶液,並震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整
夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。藉由重覆此Fmoc胺基酸之縮合-Fmoc脫保護的循環,將Gly-Gly-Gly、Oda(OtBu)依序縮合。將樹脂用MeOH洗淨後,減壓乾燥,得到Boc-Tyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda(OtBu))-Aib-Lys(Boc)-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink醯胺AM樹脂101.6mg。
在所得到之樹脂101.6mg中添加TFA:間甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三異丙基矽烷(80:5:5:5:2.5:2.5)1mL,並攪拌1.5小時。在反應溶液中添加乙醚,得到沉澱物,離心後,除去上清液,重覆操作3次,將沉澱物洗淨。將殘餘物用50%乙酸水溶液萃取,並藉由過濾除去樹脂後,藉由使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm管柱(250×20mm I.D.)之分取HPLC,進行直線型濃度梯度溶出(60分鐘)(A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1% TFA之乙腈,流量:8mL/分鐘,A/B:61/39-51/49),收集含目的物之部分,並凍結乾燥,得到8.9mg之白色粉末。
經由質量分析之(M+H)+ 4761.3(計算值4761.6)
HPLC溶出時間:13.9分鐘
溶出條件:管柱YMC Triart C8(100×4.6mm I.D.)
溶離液:使用A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1%TFA之乙腈,以A/B:80/20至30/70進行直線型濃度梯度溶出(25分鐘)。
流速:1.0mL/分鐘
實施例21
Me-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Aib-Lys-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(序列編號30)
量取與參考例6同樣之手法所調製之H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Aib-Lys(Boc)-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink醯胺AM樹脂(0.093meq/g,108mg)置於反應管中,並用NMP膨潤。過濾除去NMP後,對樹脂依序添加Boc-NMeTyr(tBu)-OH(35.1mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,在所得
到之樹脂中添加2%肼之NMP溶液,並震盪3小時。過濾去除溶液後,再度添加2%肼之NMP溶液,並震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-Gly-Gly-OH(41.1mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。對所得到之樹脂添加Pal-OSu(35.4mg)及DIPEA(17.4μL)之NMP溶液(200μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,將樹脂用MeOH洗淨,並減壓乾燥,得到Boc-NMeTyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Aib-Lys(Boc)-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-
Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink醯胺AM樹脂106mg。
在所得到之樹脂106mg中添加TFA:間甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三異丙基矽烷(80:5:5:5:2.5:2.5)1mL,並攪拌1.5小時。在反應溶液中添加乙醚,得到沉澱物,離心後,除去上清液,重覆操作3次,將沉澱物洗淨。將殘餘物用50%乙酸水溶液萃取,並藉由過濾除去樹脂後,藉由使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm管柱(250×20mm I.D.)之分取HPLC,進行直線型濃度梯度溶出(60分鐘)(A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1% TFA之乙腈,流量:8mL/分鐘,A/B:57/43-47/53),收集含目的物之部分,並凍結乾燥,得到9.9mg之白色粉末。
經由質量分析之(M+H)+ 4717.2(計算值4717.6)
HPLC溶出時間:16.0分鐘
溶出條件:管柱YMC Triart C8(100×4.6mm I.D.)
溶離液:使用A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1% TFA之乙腈,以A/B:80/20至30/70進行直線型濃度梯度溶出(25分鐘)。
流速:1.0mL/分鐘
實施例22
Me-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)-Aib-Lys-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Arg-Gln-I
va-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(序列編號31)
量取與參考例6同樣之手法所調製之H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Aib-Lys(Boc)-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink醯胺AM樹脂(0.093meq/g,108mg)置於反應管中,並用NMP膨潤。過濾除去NMP後,對樹脂依序添加Boc-NMeTyr(tBu)-OH(35.1mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,在所得到之樹脂中添加2%肼之NMP溶液,並震盪3小時。過濾去除溶液後,再度添加2%肼之NMP溶液,並震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。藉由重覆此Fmoc胺基酸之縮合-Fmoc脫保護的循環,將Gly-Gly-Gly、Oda(OtBu)依序縮合。將樹脂用MeOH洗
淨後,減壓乾燥,得到Boc-NMeTyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda(OtBu))-Aib-Lys(Boc)-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink醯胺AM樹脂98.4mg。
在所得到之樹脂98.4mg中添加TFA:間甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三異丙基矽烷(80:5:5:5:2.5:2.5)1mL,並攪拌1.5小時。在反應溶液中添加乙醚,得到沉澱物,離心後,除去上清液,重覆操作3次,將沉澱物洗淨。將殘餘物用50%乙酸水溶液萃取,並藉由過濾除去樹脂後,藉由使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm管柱(250×20mm I.D.)之分取HPLC,進行直線型濃度梯度溶出(60分鐘)(A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1% TFA之乙腈,流量:8mL/分鐘,A/B:61/39-51/49),收集含目的物之部分,並凍結乾燥,得到8.8mg之白色粉末。
經由質量分析之(M+H)+ 4775.5(計算值4775.6)
HPLC溶出時間:13.9分鐘
溶出條件:管柱YMC Triart C8(100×4.6mm I.D.)
溶離液:使用A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1% TFA之乙腈,以A/B:80/20至30/70進行直線型濃度梯度溶出
(25分鐘)。
流速:1.0mL/分鐘
實施例23
H-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Ser-Lys-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(序列編號32)
量取與參考例6同樣之手法所調製之H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink醯胺AM樹脂(0.084meq/g,119mg)置於反應管中,並用NMP膨潤。過濾除去NMP後,對樹脂依序添加Boc-Tyr(tBu)-OH(33.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,在所得到之樹脂中添加2%肼之NMP溶液,並震盪3小時。過濾去除溶液後,再度添加2%肼之NMP溶液,並震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6
次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-Gly-Gly-OH(41.1mg)、NMP中之0.5M OxymaPure(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。對所得到之樹脂添加Pal-OSu(35.4mg)及DIPEA(17.4μL)之NMP溶液(200μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,將樹脂用MeOH洗淨,並減壓乾燥,得到Boc-Tyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink醯胺AM樹脂111.3mg。
在所得到之樹脂111.3mg中添加TFA:間甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三異丙基矽烷(80:5:5:5:2.5:2.5)1mL,並攪拌1.5小時。在反應溶液中添加乙醚,得到沉澱物,離心後,除去上清液,重覆操作3次,將沉澱物洗淨。將殘餘物用50%乙酸水溶液萃取,並藉由
過濾除去樹脂後,藉由使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm管柱(250×20mm I.D.)之分取HPLC,進行直線型濃度梯度溶出(60分鐘)(A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1% TFA之乙腈,流量:8mL/分鐘,A/B:57/43-47/53),收集含目的物之部分,並凍結乾燥,得到9.3mg之白色粉末。
經由質量分析之(M+H)+ 4705.3(計算值4705.6)
HPLC溶出時間:16.0分鐘
溶出條件:管柱YMC Triart C8(100×4.6mm I.D.)
溶離液:使用A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1% TFA之乙腈,以A/B:80/20至30/70進行直線型濃度梯度溶出(25分鐘)。
流速:1.0mL/分鐘
實施例24
H-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)-Ser-Lys-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(序列編號33)
量取與參考例6同樣之手法所調製之H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib
-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink醯胺AM樹脂(0.084meq/g,119mg)置於反應管中,並用NMP膨潤。過濾除去NMP後,對樹脂依序添加Boc-Tyr(tBu)-OH(33.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,在所得到之樹脂中添加2%肼之NMP溶液,並震盪3小時。過濾去除溶液後,再度添加2%肼之NMP溶液,並震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。藉由重覆此Fmoc胺基酸之縮合-Fmoc脫保護的循環,將Gly-Gly-Gly、Oda(OtBu)依序縮合。將樹脂用MeOH洗淨後,減壓乾燥,得到Boc-Tyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda(OtBu))-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink醯胺AM樹脂101.8mg。
在所得到之樹脂101.8mg中添加TFA:間甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三異丙基矽烷(80:5:5:5:2.5:2.5)1mL,並攪拌1.5小時。在反應溶液中添加乙醚,得到沉澱物,離心後,除去上清液,重覆操作3次,將沉澱物洗淨。將殘餘物用50%乙酸水溶液萃取,並藉由過濾除去樹脂後,藉由使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm管柱(250×20mm I.D.)之分取HPLC,進行直線型濃度梯度溶出(60分鐘)(A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1%TFA之乙腈,流量:8mL/分鐘,A/B:61/39-51/49),收集含目的物之部分,並凍結乾燥,得到8.5mg之白色粉末。
經由質量分析之(M+H)+ 4763.4(計算值4763.6)
HPLC溶出時間:13.9分鐘
溶出條件:管柱YMC Triart C8(100×4.6mm I.D.)
溶離液:使用A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1% TFA之乙腈,以A/B:80/20至30/70進行直線型濃度梯度溶出(25分鐘)。
流速:1.0mL/分鐘
實施例25
Me-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Ser-Lys-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(序列編號34)
量取與參考例6同樣之手法所調製之H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink醯胺AM樹脂(0.084meq/g,119mg)置於反應管中,並用NMP膨潤。過濾除去NMP後,對樹脂依序添加Boc-NMeTyr(tBu)-OH(35.1mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,在所得到之樹脂中添加2%肼之NMP溶液,並震盪3小時。過濾去除溶液後,再度添加2%肼之NMP溶液,並震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-Gly-Gly-OH(41.1mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,
添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。對所得到之樹脂添加Pal-OSu(35.4mg)及DIPEA(17.4μL)之NMP溶液(200μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,將樹脂用MeOH洗淨,並減壓乾燥,得到Boc-NMeTyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink醯胺AM樹脂104.3mg。
在所得到之樹脂104.3mg中添加TFA:間甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三異丙基矽烷(80:5:5:5:2.5:2.5)1mL,並攪拌1.5小時。在反應溶液中添加乙醚,得到沉澱物,離心後,除去上清液,重覆操作3次,將沉澱物洗淨。將殘餘物用50%乙酸水溶液萃取,並藉由過濾除去樹脂後,藉由使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm管柱(250×20mm I.D.)之分取HPLC,進行直線型濃度梯度溶出(60分鐘)(A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1% TFA之乙腈,流量:8mL/分鐘,A/B:57/43-47/53),收集含目的物之部分,並凍結乾燥,得到8.2mg之白色粉末。
經由質量分析之(M+H)+ 4719.7(計算值4719.6)
HPLC溶出時間:16.0分鐘
溶出條件:管柱YMC Triart C8(100×4.6mm I.D.)
溶離液:使用A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1% TFA之乙腈,以A/B:80/20至30/70進行直線型濃度梯度溶出(25分鐘)。
流速:1.0mL/分鐘
實施例26
Me-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)-Ser-Lys-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(序列編號35)
量取與參考例6同樣之手法所調製之H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink醯胺AM樹脂(0.084meq/g,119mg)置於反應管中,並用NMP膨潤。過濾除去NMP後,對樹脂依序添加Boc-NMeTyr(tBu)-OH(35.1mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,
在所得到之樹脂中添加2%肼之NMP溶液,並震盪3小時。過濾去除溶液後,再度添加2%肼之NMP溶液,並震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。藉由重覆此Fmoc胺基酸之縮合-Fmoc脫保護的循環,將Gly-Gly-Gly、Oda(OtBu)依序縮合。將樹脂用MeOH洗淨後,減壓乾燥,得到Boc-NMeTyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda(OtBu))-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Mtt)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Rink醯胺AM樹脂125.9mg。
在所得到之樹脂125.9mg中添加TFA:間甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三異丙基矽烷(80:5:5:5:2.5:2.5)1mL,並攪拌1.5小時。在反應溶液中添加乙醚,得到沉澱物,離心後,除去上清液,重覆操作3次,將沉澱物洗淨。將殘餘物用50%乙酸水溶液萃取,並藉由過濾除去樹脂後,藉由使用YMC-Actus Triart Prep C8
S-10μm 20nm管柱(250×20mm I.D.)之分取HPLC,進行直線型濃度梯度溶出(60分鐘)(A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1% TFA之乙腈,流量:8mL/分鐘,A/B:61/39-51/49),收集含目的物之部分,並凍結乾燥,得到10.6mg之白色粉末。
經由質量分析之(M+H)+ 4777.5(計算值4777.6)
HPLC溶出時間:13.9分鐘
溶出條件:管柱YMC Triart C8(100×4.6mm I.D.)
溶離液:使用A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1% TFA之乙腈,以A/B:80/20至30/70進行直線型濃度梯度溶出(25分鐘)。
流速:1.0mL/分鐘
實施例27
H-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Ala-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(序列編號36)
量取參考例8所調製之H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Ala-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber醯胺樹脂(0.122meq/g,102.3mg)置於反應管
中,並用NMP膨潤。過濾除去NMP後,對樹脂依序添加Boc-Tyr(tBu)-OH(33.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,在所得到之樹脂中添加2%肼之NMP溶液,並震盪3小時。過濾去除溶液後,再度添加2%肼之NMP溶液,並震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-Gly-Gly-OH(41.1mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。對所得到之樹脂添加Pal-OSu(35.4mg)及DIPEA(17.4μL)之NMP溶液(200μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,將樹脂用MeOH洗淨,並減壓乾燥,得到
Boc-Tyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Ala-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber醯胺樹脂104.5mg。
在所得到之樹脂104.5mg中添加TFA:間甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三異丙基矽烷(80:5:5:5:2.5:2.5)1mL,並攪拌1.5小時。在反應溶液中添加乙醚,得到沉澱物,離心後,除去上清液,重覆操作3次,將沉澱物洗淨。將殘餘物用50%乙酸水溶液萃取,並藉由過濾除去樹脂後,藉由使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm管柱(250×20mm I.D.)之分取HPLC,進行直線型濃度梯度溶出(60分鐘)(A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1% TFA之乙腈,流量:8mL/分鐘,A/B:57/43-47/53),收集含目的物之部分,並凍結乾燥,得到13.3mg之白色粉末。
經由質量分析之(M+H)+ 4604.3(計算值4603.6)
HPLC溶出時間:17.1分鐘
溶出條件:管柱YMC Triart C8(100×4.6mm I.D.)
溶離液:使用A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1% TFA之乙腈,以A/B:80/20至30/70進行直線型濃度梯度溶出(25分鐘)。
流速:1.0mL/分鐘
實施例28
H-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Ala-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(序列編號37)
量取參考例8所調製之H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Ala-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber醯胺樹脂(0.122meq/g,102.3mg)置於反應管中,並用NMP膨潤。過濾除去NMP後,對樹脂依序添加Boc-Tyr(tBu)-OH(33.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,在所得到之樹脂中添加2%肼之NMP溶液,並震盪3小時。過濾去除溶液後,再度添加2%肼之NMP溶液,並震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再
度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。藉由重覆此Fmoc胺基酸之縮合-Fmoc脫保護的循環,將Gly-Gly-Gly、Oda(OtBu)依序縮合。將樹脂用MeOH洗淨後,減壓乾燥,得到Boc-Tyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda(OtBu))-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Ala-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber醯胺樹脂109.1mg。
在所得到之樹脂109.1mg中添加TFA:間甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三異丙基矽烷(80:5:5:5:2.5:2.5)1mL,並攪拌1.5小時。在反應溶液中添加乙醚,得到沉澱物,離心後,除去上清液,重覆操作3次,將沉澱物洗淨。將殘餘物用50%乙酸水溶液萃取,並藉由過濾除去樹脂後,藉由使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm管柱(250×20mm I.D.)之分取HPLC,進行直線型濃度梯度溶出(60分鐘)(A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1% TFA之乙腈,流量:8mL/分鐘,A/B:60/40-50/50),收集含目的物之部分,並凍結乾燥,得到12.4mg之白色粉末。
經由質量分析之(M+H)+ 4662.3(計算值4661.6)
HPLC溶出時間:15.1分鐘
溶出條件:
管柱YMC Triart C8(100×4.6mm I.D.)
溶離液:使用A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1%TFA之乙腈,以A/B:80/20至30/70進行直線型濃度梯度溶出(25分鐘)。
流速:1.0mL/分鐘
實施例29
Me-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Ala-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(序列編號38)
量取參考例8所調製之H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Ala-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber醯胺樹脂(0.122meq/g,102.3mg)置於反應管中,並用NMP膨潤。過濾除去NMP後,對樹脂依序添加Boc-NMeTyr(tBu)-OH(35.1mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,在所得到之樹脂中添加2%肼之NMP溶液,並震盪3小時。過濾去除溶液後,再度添加2%肼之NMP溶液,並震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-OH
(29.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-Gly-Gly-OH(41.1mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。對所得到之樹脂添加Pal-OSu(35.4mg)及DIPEA(17.4μL)之NMP溶液(200μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,將樹脂用MeOH洗淨,並減壓乾燥,得到Boc-NMeTyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Ala-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber醯胺樹脂105.8mg。
在所得到之樹脂105.8mg中添加TFA:間甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三異丙基矽烷(80:5:
5:5:2.5:2.5)1mL,並攪拌1.5小時。在反應溶液中添加乙醚,得到沉澱物,離心後,除去上清液,重覆操作3次,將沉澱物洗淨。將殘餘物用50%乙酸水溶液萃取,並藉由過濾除去樹脂後,藉由使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm管柱(250×20mm I.D.)之分取HPLC,進行直線型濃度梯度溶出(60分鐘)(A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1% TFA之乙腈,流量:8mL/分鐘,A/B:56/44-46/54),收集含目的物之部分,並凍結乾燥,得到14.3mg之白色粉末。
經由質量分析之(M+H)+ 4618.2(計算值4617.6)
HPLC溶出時間:17.1分鐘
溶出條件:管柱YMC Triart C8(100×4.6mm I.D.)
溶離液:使用A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1% TFA之乙腈,以A/B:80/20至30/70進行直線型濃度梯度溶出(25分鐘)。
流速:1.0mL/分鐘
實施例30
Me-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-0da)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp-Lys-Gln-Ala-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(序列編號39)
量取參考例8所調製之H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde
)-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Ala-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber醯胺樹脂(0.122meq/g,102.3mg)置於反應管中,並用NMP膨潤。過濾除去NMP後,對樹脂依序添加Boc-NMeTyr(tBu)-OH(35.1mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,在所得到之樹脂中添加2%肼之NMP溶液,並震盪3小時。過濾去除溶液後,再度添加2%肼之NMP溶液,並震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。藉由重覆此Fmoc胺基酸之縮合-Fmoc脫保護的循環,將Gly-Gly-Gly、Oda(OtBu)依序縮合。將樹脂用MeOH洗淨後,減壓乾燥,得到Boc-NMeTyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda(OtBu))-Aib-Ile-Aib-Leu-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Ala-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt
)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber醯胺樹脂118mg。
在所得到之樹脂118mg中添加TFA:間甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三異丙基矽烷(80:5:5:5:2.5:2.5)1mL,並攪拌1.5小時。在反應溶液中添加乙醚,得到沉澱物,離心後,除去上清液,重覆操作3次,將沉澱物洗淨。將殘餘物用50%乙酸水溶液萃取,並藉由過濾除去樹脂後,藉由使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm管柱(250×20mm I.D.)之分取HPLC,進行直線型濃度梯度溶出(60分鐘)(A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1% TFA之乙腈,流量:8mL/分鐘,A/B:60/40-50/50),收集含目的物之部分,並凍結乾燥,得到12.1mg之白色粉末。
經由質量分析之(M+H)+ 4676.2(計算值4675.6)
HPLC溶出時間:15.1分鐘
溶出條件:管柱YMC Triart C8(100×4.6mm I.D.)
溶離液:使用A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1%TFA之乙腈,以A/B:80/20至30/70進行直線型濃度梯度溶出(25分鐘)。
流速:1.0mL/分鐘
實施例31
H-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Aib-Ile-Aib-Leu-Glu-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-
Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(序列編號40)
量取與參考例8同樣之手法所調製之H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Aib-Ile-Aib-Leu-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber醯胺樹脂(0.115meq/g,108.3mg)置於反應管中,並用NMP膨潤。過濾除去NMP後,對樹脂依序添加Boc-Tyr(tBu)-OH(33.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,在所得到之樹脂中添加2%肼之NMP溶液,並震盪3小時。過濾去除溶液後,再度添加2%肼之NMP溶液,並震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-Gly-Gly-OH(41.1mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳
化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。對所得到之樹脂添加Pal-OSu(35.4mg)及DIPEA(17.4μL)之NMP溶液(200μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,將樹脂用MeOH洗淨,並減壓乾燥,得到Boc-Tyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Aib-Ile-Aib-Leu-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber醯胺樹脂131.4mg。
在所得到之樹脂131.4mg中添加TFA:間甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三異丙基矽烷(80:5:5:5:2.5:2.5)1mL,並攪拌1.5小時。在反應溶液中添加乙醚,得到沉澱物,離心後,除去上清液,重覆操作3次,將沉澱物洗淨。將殘餘物用50%乙酸水溶液萃取,並藉由過濾除去樹脂後,藉由使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm管柱(250×20mm I.D.)之分取HPLC,進行直線型濃度梯度溶出(60分鐘)(A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1% TFA之乙腈所形成之流量:8mL/分鐘,A/B:57/43-47/53),收集含目的物之部分,並凍結乾燥,得到
12.4mg之白色粉末。
經由質量分析之(M+H)+ 4703.2(計算值4702.6)
HPLC溶出時間:16.5分鐘
溶出條件:管柱YMC Triart C8(100×4.6mm I.D.)
溶離液:使用A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1% TFA之乙腈,以A/B:80/20至30/70進行直線型濃度梯度溶出(25分鐘)。
流速:1.0mL/分鐘
實施例32
H-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-oda)-Aib-Ile-Aib-Leu-Glu-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(序列編號41)
量取與參考例8同樣之手法所調製之H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Aib-Ile-Aib-Leu-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber醯胺樹脂(0.115meq/g,108.3mg)置於反應管中,並用NMP膨潤。過濾除去NMP後,對樹脂依序添加Boc-Tyr(tBu)-OH(33.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將
樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,在所得到之樹脂中添加2%肼之NMP溶液,並震盪3小時。過濾去除溶液後,再度添加2%肼之NMP溶液,並震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。藉由重覆此Fmoc胺基酸之縮合-Fmoc脫保護的循環,將Gly-Gly-Gly、Oda(OtBu)依序縮合。將樹脂用MeOH洗淨後,減壓乾燥,得到Boc-Tyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda(OtBu))-Aib-Ile-Aib-Leu-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber醯胺樹脂104.3mg。
在所得到之樹脂104.3mg中添加TFA:間甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三異丙基矽烷(80:5:5:5:2.5:2.5)1mL,並攪拌1.5小時。在反應溶液中添加乙醚,得到沉澱物,離心後,除去上清液,重覆操作3次,將沉澱物洗淨。將殘餘物用50%乙酸水溶液萃取,並
藉由過濾除去樹脂後,藉由使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm管柱(250×20mm I.D.)之分取HPLC,進行直線型濃度梯度溶出(60分鐘)(A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1% TFA之乙腈,流量:8mL/分鐘,A/B:61/39-51/49),收集含目的物之部分,並凍結乾燥,得到12.0mg之白色粉末。
經由質量分析之(M+H)+ 4761.3(計算值4760.6)
HPLC溶出時間:14.5分鐘
溶出條件:管柱YMC Triart C8(100×4.6mm I.D.)
溶離液:使用A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1% TFA之乙腈,以A/B:80/20至30/70進行直線型濃度梯度溶出(25分鐘)。
流速:1.0mL/分鐘
實施例33
Me-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Aib-Ile-Aib-Leu-Glu-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(序列編號42)
量取與參考例8同樣之手法所調製之H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Aib-Ile-Aib-Leu-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-
Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber醯胺樹脂(0.115meq/g,108.3mg)置於反應管中,並用NMP膨潤。過濾除去NMP後,對樹脂依序添加Boc-NMeTyr(tBu)-OH(35.1mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,在所得到之樹脂中添加2%肼之NMP溶液,並震盪3小時。過濾去除溶液後,再度添加2%肼之NMP溶液,並震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-Gly-Gly-OH(41.1mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。對所得到之樹脂添加Pal-OSu(35.4mg)及DIPEA(17.4μL)之NMP溶液(200μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6
次。確認卡瑟檢測為陰性後,將樹脂用MeOH洗淨,並減壓乾燥,得到Boc-NMeTyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Aib-Ile-Aib-Leu-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber醯胺樹脂108.5mg。
在所得到之樹脂108.5mg中添加TFA:間甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三異丙基矽烷(80:5:5:5:2.5:2.5)1mL,並攪拌1.5小時。在反應溶液中添加乙醚,得到沉澱物,離心後,除去上清液,重覆操作3次,將沉澱物洗淨。將殘餘物用50%乙酸水溶液萃取,並藉由過濾除去樹脂後,藉由使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm管柱(250×20mm I.D.)之分取HPLC,進行A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1% TFA之乙腈所形成之流量:8mL/分鐘,A/B:57/43-47/53的直線型濃度梯度溶出(60分鐘),收集含目的物之部分,並凍結乾燥,得到12.0mg之白色粉末。
經由質量分析之(M+H)+ 4717.4(計算值4716.6)
HPLC溶出時間:16.6分鐘
溶出條件:管柱YMC Triart C8(100×4.6mm I.D.)
溶離液:使用A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1%TFA之乙腈,以A/B:80/20至30/70進行直線型濃度梯度溶出
(25分鐘)。
流速:1.0mL/分鐘
實施例34
Me-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)-Aib-Ile-Aib-Leu-Glu-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(序列編號43)
量取與參考例8同樣之手法所調製之H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Aib-Ile-Aib-Leu-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber醯胺樹脂(0.115meq/g,108.3mg)置於反應管中,並用NMP膨潤。過濾除去NMP後,對樹脂依序添加Boc-NMeTyr(tBu)-OH(35.1mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,在所得到之樹脂中添加2%肼之NMP溶液,並震盪3小時。過濾去除溶液後,再度添加2%肼之NMP溶液,並震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認
卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。藉由重覆此Fmoc胺基酸之縮合-Fmoc脫保護的循環,將Gly-Gly-Gly、Oda(OtBu)依序縮合。將樹脂用MeOH洗淨後,減壓乾燥,得到Boc-NMeTyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda(OtBu))-Aib-Ile-Aib-Leu-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber醯胺樹脂117.9mg。
在所得到之樹脂117.9mg中添加TFA:間甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三異丙基矽烷(80:5:5:5:2.5:2.5)1mL,並攪拌1.5小時。在反應溶液中添加乙醚,得到沉澱物,離心後,除去上清液,重覆操作3次,將沉澱物洗淨。將殘餘物用50%乙酸水溶液萃取,並藉由過濾除去樹脂後,藉由使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm管柱(250×20mm I.D.)之分取HPLC,進行直線型濃度梯度溶出(60分鐘)(A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1%TFA之乙腈,流量:8mL/分鐘,A/B:61/39-51/49),收集含目的物之部分,並凍結乾燥,得到8.6mg之白色粉末。
經由質量分析之(M+H)+ 4775.3(計算值4774.7)
HPLC溶出時間:14.5分鐘
溶出條件:管柱YMC Triart C8(100×4.6mm I.D.)
溶離液:使用A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1%TFA之乙腈,以A/B:80/20至30/70進行直線型濃度梯度溶出(25分鐘)。
流速:1.0mL/分鐘
實施例35
H-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Ala-Ile-Aib-Leu-Glu-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(序列編號44)
量取與參考例8同樣之手法所調製之H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Ala-Ile-Aib-Leu-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber醯胺樹脂(0.116meq/g,108.1mg)置於反應管中,並用NMP膨潤。過濾除去NMP後,對樹脂依序添加Boc-Tyr(tBu)-OH(33.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,在所得到之樹脂中添加2%肼之NMP溶液,並震盪3小時。過濾
去除溶液後,再度添加2%肼之NMP溶液,並震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-Gly-Gly-OH(41.1mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。對所得到之樹脂添加Pal-OSu(35.4mg)及DIPEA(17.4μL)之NMP溶液(200μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,將樹脂用MeOH洗淨,並減壓乾燥,得到Boc-Tyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Ala-Ile-Aib-Leu-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber醯胺樹脂120.1mg。
在所得到之樹脂120.1mg中添加TFA:間甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三異丙基矽烷(80:5:5:5:2.5:2.5)1mL,並攪拌1.5小時。在反應溶液中添加乙醚,得到沉澱物,離心後,除去上清液,重覆操作3次,將沉澱物洗淨。將殘餘物用50%乙酸水溶液萃取,並藉由過濾除去樹脂後,藉由使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm管柱(250×20mm I.D.)之分取HPLC,進行直線型濃度梯度溶出(60分鐘)(A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1%TFA之乙腈,流量:8mL/分鐘,A/B:57/43-47/53),收集含目的物之部分,並凍結乾燥,得到10.9mg之白色粉末。
經由質量分析之(M+H)+ 4689.1(計算值4688.6)
HPLC溶出時間:16.5分鐘
溶出條件:管柱YMC Triart C8(100×4.6mm I.D.)
溶離液:使用A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1%TFA之乙腈,以A/B:80/20至30/70進行直線型濃度梯度溶出(25分鐘)。
流速:1.0mL/分鐘
實施例36
H-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)-Ala-Ile-Aib-Leu-Glu-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(序列編號45)
量取與參考例8同樣之手法所調製之H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Ala-Ile-Aib-Leu-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber醯胺樹脂(0.116meq/g,108.1mg)置於反應管中,並用NMP膨潤。過濾除去NMP後,對樹脂依序添加Boc-Tyr(tBu)-OH(33.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,在所得到之樹脂中添加2%肼之NMP溶液,並震盪3小時。過濾去除溶液後,再度添加2%肼之NMP溶液,並震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。藉由重覆此Fmoc胺基酸之縮合-Fmoc脫保護的循環,將Gly-Gly-Gly、Oda(OtBu)依序縮合。將樹脂用MeOH洗淨後,減壓乾燥,得到Boc-Tyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-
Gly-Gly-Gly-Oda(OtBu))-Ala-Ile-Aib-Leu-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber醯胺樹脂107.9mg。
在所得到之樹脂107.9mg中添加TFA:間甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三異丙基矽烷(80:5:5:5:2.5:2.5)1mL,並攪拌1.5小時。在反應溶液中添加乙醚,得到沉澱物,離心後,除去上清液,重覆操作3次,將沉澱物洗淨。將殘餘物用50%乙酸水溶液萃取,並藉由過濾除去樹脂後,藉由使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm管柱(250×20mm I.D.)之分取HPLC,進行直線型濃度梯度溶出(60分鐘)(A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1%TFA之乙腈,流量:8mL/分鐘,A/B:61/39-51/49),收集含目的物之部分,並凍結乾燥,得到9.2mg之白色粉末。
經由質量分析之(M+H)+ 4747.3(計算值4746.6)
HPLC溶出時間:14.5分鐘
溶出條件:管柱YMC Triart C8(100×4.6mm I.D.)
溶離液:使用A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1%TFA之乙腈,以A/B:80/20至30/70進行直線型濃度梯度溶出(25分鐘)。
流速:1.0mL/分鐘
實施例37
Me-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Ala-Ile-Aib-Leu-Glu-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(序列編號46)
量取與參考例8同樣之手法所調製之H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Ala-Ile-Aib-Leu-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber醯胺樹脂(0.116meq/g,108.1mg)置於反應管中,並用NMP膨潤。過濾除去NMP後,對樹脂依序添加Boc-NMeTyr(tBu)-OH(35.1mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,在所得到之樹脂中添加2%肼之NMP溶液,並震盪3小時。過濾去除溶液後,再度添加2%肼之NMP溶液,並震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,
並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-Gly-Gly-OH(41.1mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。對所得到之樹脂添加Pal-OSu(35.4mg)及DIPEA(17.4μL)之NMP溶液(200μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,將樹脂用MeOH洗淨,並減壓乾燥,得到Boc-NMeTyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Ala-Ile-Aib-Leu-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber醯胺樹脂117.8mg。
在所得到之樹脂117.8mg中添加TFA:間甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三異丙基矽烷(80:5:5:5:2.5:2.5)1mL,並攪拌1.5小時。在反應溶液中添加乙醚,得到沉澱物,離心後,除去上清液,重覆操作3次,將沉澱物洗淨。將殘餘物用50%乙酸水溶液萃取,並藉由過濾除去樹脂後,藉由使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm管柱(250×20mm I.D.)之分取HPLC,進行直
線型濃度梯度溶出(60分鐘)(A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1%TFA之乙腈,流量:8mL/分鐘,A/B:57/43-47/53),收集含目的物之部分,並凍結乾燥,得到11.4mg之白色粉末。
經由質量分析之(M+H)+ 4703.3(計算值4702.6)
HPLC溶出時間:16.5分鐘
溶出條件:管柱YMC Triart C8(100×4.6mm I.D.)
溶離液:使用A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1%TFA之乙腈,以A/B:80/20至30/70進行直線型濃度梯度溶出(25分鐘)。
流速:1.0mL/分鐘
實施例38
Me-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)-Ala-Ile-Aib-Leu-Glu-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(序列編號47)
量取與參考例8同樣之手法所調製之H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Ala-Ile-Aib-Leu-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber醯胺樹脂(0.116meq/g,108.1mg)置於反應管中,並用NMP膨潤。
過濾除去NMP後,對樹脂依序添加Boc-NMeTyr(tBu)-OH(35.1mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,在所得到之樹脂中添加2%肼之NMP溶液,並震盪3小時。過濾去除溶液後,再度添加2%肼之NMP溶液,並震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。藉由重覆此Fmoc胺基酸之縮合-Fmoc脫保護的循環,將Gly-Gly-Gly、Oda(OtBu)依序縮合。將樹脂用MeOH洗淨後,減壓乾燥,得到Boc-NMeTyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda(OtBu))-Ala-Ile-Aib-Leu-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber醯胺樹脂116mg。
在所得到之樹脂116mg中添加TFA:間甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三異丙基矽烷(80:5:5:
5:2.5:2.5)1mL,並攪拌1.5小時。在反應溶液中添加乙醚,得到沉澱物,離心後,除去上清液,重覆操作3次,將沉澱物洗淨。將殘餘物用50%乙酸水溶液萃取,並藉由過濾除去樹脂後,藉由使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm管柱(250×20mm I.D.)之分取HPLC,進行直線型濃度梯度溶出(60分鐘)(A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1%TFA之乙腈,流量:8mL/分鐘,A/B:61/39-51/49),收集含目的物之部分,並凍結乾燥,得到11.0mg之白色粉末。
經由質量分析之(M+H)+ 4761.2(計算值4760.6)
HPLC溶出時間:14.5分鐘
溶出條件:管柱YMC Triart C8(100×4.6mm I.D.)
溶離液:使用A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1%TFA之乙腈,以A/B:80/20至30/70進行直線型濃度梯度溶出(25分鐘)。
流速:1.0mL/分鐘
實施例39
H-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Ser-Ile-Aib-Leu-Glu-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(序列編號48)
量取與參考例8同樣之手法所調製之H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)
-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Ser(tBu)-Ile-Aib-Leu-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber醯胺樹脂(0.116meq/g,107.5mg)置於反應管中,並用NMP膨潤。過濾除去NMP後,對樹脂依序添加Boc-Tyr(tBu)-OH(33.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,在所得到之樹脂中添加2%肼之NMP溶液,並震盪3小時。過濾去除溶液後,再度添加2%肼之NMP溶液,並震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-Gly-Gly-OH(41.1mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除
溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。對所得到之樹脂添加Pal-OSu(35.4mg)及DIPEA(17.4μL)之NMP溶液(200μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,將樹脂用MeOH洗淨,並減壓乾燥,得到Boc-Tyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Ser(tBu)-Ile-Aib-Leu-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber醯胺樹脂124mg。
在所得到之樹脂124mg中添加TFA:間甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三異丙基矽烷(80:5:5:5:2.5:2.5)1mL,並攪拌1.5小時。在反應溶液中添加乙醚,得到沉澱物,離心後,除去上清液,重覆操作3次,將沉澱物洗淨。將殘餘物用50%乙酸水溶液萃取,並藉由過濾除去樹脂後,藉由使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm管柱(250×20mm I.D.)之分取HPLC,進行直線型濃度梯度溶出(60分鐘)(A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1%TFA之乙腈,流量:8mL/分鐘,A/B:57/43-47/53),收集含目的物之部分,並凍結乾燥,得到8.9mg之白色粉末。
經由質量分析之(M+H)+ 4705.1(計算值4704.6)
HPLC溶出時間:16.6分鐘
溶出條件:
管柱YMC Triart C8(100×4.6mm I.D.)
溶離液:使用A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1%TFA之乙腈,以A/B:80/20至30/70進行直線型濃度梯度溶出(25分鐘)。
流速:1.0mL/分鐘
實施例40
H-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)-Ser-Ile-Aib-Leu-Glu-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(序列編號49)
量取與參考例8同樣之手法所調製之H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Ser(tBu)-Ile-Aib-Leu-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber醯胺樹脂(0.116meq/g,107.5mg)置於反應管中,並用NMP膨潤。過濾除去NMP後,對樹脂依序添加Boc-Tyr(tBu)-OH(33.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,在所得到之樹脂中添加2%肼之NMP溶液,並震盪3小時。過濾去除溶液後,再度添加2%肼之NMP溶液,並震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。對所得到
之樹脂依序添加Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。藉由重覆此Fmoc胺基酸之縮合-Fmoc脫保護的循環,將Gly-Gly-Gly、Oda(OtBu)依序縮合。將樹脂用MeOH洗淨後,減壓乾燥,得到Boc-Tyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda(OtBu))-Ser(tBu)-Ile-Aib-Leu-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber醯胺樹脂116.8mg。
在所得到之樹脂116.8mg中添加TFA:間甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三異丙基矽烷(80:5:5:5:2.5:2.5)1mL,並攪拌1.5小時。在反應溶液中添加乙醚,得到沉澱物,離心後,除去上清液,重覆操作3次,將沉澱物洗淨。將殘餘物用50%乙酸水溶液萃取,並藉由過濾除去樹脂後,藉由使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm管柱(250×20mm I.D.)之分取HPLC,進行直線型濃度梯度溶出(60分鐘)(A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1%TFA之乙腈,流量:8mL/分鐘,A/B:61/39-51/49),
收集含目的物之部分,並凍結乾燥,得到13.1mg之白色粉末。
經由質量分析之(M+H)+ 4763.0(計算值4762.6)
HPLC溶出時間:14.5分鐘
溶出條件:管柱YMC Triart C8(100×4.6mm I.D.)
溶離液:使用A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1%TFA之乙腈,以A/B:80/20至30/70進行直線型濃度梯度溶出(25分鐘)。
流速:1.0mL/分鐘
實施例41
Me-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Ser-Ile-Aib-Leu-Glu-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(序列編號50)
量取與參考例8同樣之手法所調製之H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Ser(tBu)-Ile-Aib-Leu-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber醯胺樹脂(0.116meq/g,107.5mg)置於反應管中,並用NMP膨潤。過濾除去NMP後,對樹脂依序添加Boc-NMeTyr(tBu)-OH(35.1mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳
化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,在所得到之樹脂中添加2%肼之NMP溶液,並震盪3小時。過濾去除溶液後,再度添加2%肼之NMP溶液,並震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-Gly-Gly-OH(41.1mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10次。對所得到之樹脂添加Pal-OSu(35.4mg)及DIPEA(17.4μL)之NMP溶液(200μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,將樹脂用MeOH洗淨,並減壓乾燥,得到Boc-NMeTyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Ser(tBu)-Ile-Aib-Leu-Glu(OtBu)-Lys(Bo
c)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber醯胺樹脂104.3mg。
在所得到之樹脂104.3mg中添加TFA:間甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三異丙基矽烷(80:5:5:5:2.5:2.5)1mL,並攪拌1.5小時。在反應溶液中添加乙醚,得到沉澱物,離心後,除去上清液,重覆操作3次,將沉澱物洗淨。將殘餘物用50%乙酸水溶液萃取,並藉由過濾除去樹脂後,藉由使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm管柱(250×20mm I.D.)之分取HPLC,進行直線型濃度梯度溶出(60分鐘)(A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1%TFA之乙腈,流量:8mL/分鐘,A/B:57/43-47/53),收集含目的物之部分,並凍結乾燥,得到11.3mg之白色粉末。
經由質量分析之(M+H)+ 4719.3(計算值4718.6)
HPLC溶出時間:16.6分鐘
溶出條件:管柱YMC Triart C8(100×4.6mm I.D.)
溶離液:使用A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1%TFA之乙腈,以A/B:80/20至30/70進行直線型濃度梯度溶出(25分鐘)。
流速:1.0mL/分鐘
實施例42
Me-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)-Ser-Ile-Aib-Leu-Glu-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(序列編號51)
量取與參考例8同樣之手法所調製之H-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(ivDde)-Ser(tBu)-Ile-Aib-Leu-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber醯胺樹脂(0.116meq/g,107.5mg)置於反應管中,並用NMP膨潤。過濾除去NMP後,對樹脂依序添加Boc-NMeTyr(tBu)-OH(35.1mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,在所得到之樹脂中添加2%肼之NMP溶液,並震盪3小時。過濾去除溶液後,再度添加2%肼之NMP溶液,並震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。對所得到之樹脂依序添加Fmoc-Gly-OH(29.7mg)、0.5M OxymaPure之NMP(200μL)及二異丙基碳化二亞胺(15.9μL)後,震盪整夜。過濾去除反應液後,將樹脂以NMP洗淨6次。確認卡瑟檢測為陰性後,添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪1分鐘。過濾去除溶液後,再度添加20%哌啶之NMP溶液,並震盪20分鐘。過濾去除溶液後,將樹脂用NMP洗淨10
次。藉由重覆此Fmoc胺基酸之縮合-Fmoc脫保護的循環,將Gly-Gly-Gly、Oda(OtBu)依序縮合。將樹脂用MeOH洗淨後,減壓乾燥,得到Boc-NMeTyr(tBu)-Aib-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-αMePhe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Oda(OtBu))-Ser(tBu)-Ile-Aib-Leu-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Iva-Glu(OtBu)-Phe-Val-Arg(Pbf)-His(Trt)-Leu-Leu-Asn(Trt)-Lys(Boc)-Aib-Thr(tBu)-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-Sieber醯胺樹脂109.1mg。
在所得到之樹脂109.1mg中添加TFA:間甲酚:苯甲硫醚:乙二硫醇:H2O:三異丙基矽烷(80:5:5:5:2.5:2.5)1mL,並攪拌1.5小時。在反應溶液中添加乙醚,得到沉澱物,離心後,除去上清液,重覆操作3次,將沉澱物洗淨。將殘餘物用50%乙酸水溶液萃取,並藉由過濾除去樹脂後,藉由使用YMC-Actus Triart Prep C8 S-10μm 20nm管柱(250×20mm I.D.)之分取HPLC,進行直線型濃度梯度溶出(60分鐘)(A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1%TFA之乙腈,流量:8mL/分鐘,A/B:61/39-51/49),收集含目的物之部分,並凍結乾燥,得到10.5mg之白色粉末。
經由質量分析之(M+H)+ 4777.2(計算值4776.6)
HPLC溶出時間:14.5分鐘
溶出條件:管柱YMC Triart C8(100×4.6mm I.D.)
溶離液:使用A液:0.1%TFA-水,B液:含有0.1%TFA之乙腈,以A/B:80/20至30/70進行直線型濃度梯度溶出(25分鐘)。
流速:1.0mL/分鐘
試驗例1
以細胞內cAMP濃度變動作為指標之對人類NPY2R、人類GIPR、及人類GLP-1R之促效劑活性的評估
(1)人類NPY2R基因之表現細胞之構築
將具有與Genbank之登錄號AC104407之序列相同之人類NPY2R基因選殖至pAKKO1114載體中,製作hNPY2R/pAKKO1114。繼而,將pGL4.29(Promega)導入CHO-K1細胞中,以潮黴素(hygromycin)進行篩選,構築出Cre-luc報導子細胞。於該細胞將hNPY2R/pAKKO1114及pcDNA3.1(Life technologies)進行共轉染,並以遺傳黴素(geneticin)篩選細胞。繼而,藉由人類PYY(3-36)之添加,從所得到之轉形體中選擇經誘導而表現螢光素酶之細胞株,亦即pAKKO1114/hNPY2R#481No.88細胞。
(2)人類GIPR基因之表現細胞之構築
將具有與Genbank之登錄號U39231之序列相同之人類GIPR基因選殖至pMSRα-neo載體,製作hGIPR/pMSRα-neo。藉由將此載體導入(1)至所得到之Cre-luc報導子細胞,而得到轉形體。繼而,藉由GIP之添加,從所得到之轉形體選擇經誘導而表現螢光素酶之細胞株,亦即hGIPR/CHO-K1細胞。
(3)人類GLP-1R基因之表現細胞之構築
將具有與Genbank之登錄號NM_002062相同序列之人類GLP-1R基因選殖至pIRESneo3載體(Clontech),製作出hGLP-1R/pIRESneo3。藉由將此載體導入(1)至所得到之Cre-luc報導子細胞,而得到轉形體。繼而,藉由人類GLP-1(7-37)胜肽之添加,從所得到之轉形體選擇經誘導而表現螢光素酶之細胞株,亦即hGLP-1R/Crel細胞。
(4)人類NPY2R基因之報導子檢定
將pAKKO1114/hNPY2R#481No.88細胞,以成為5,000細胞/孔之方式,各播種25μL至384孔白色培養盤(Corning,3570)中,在含10%牛胎兒血清、100U/mL青黴素、100μg/mL鏈黴素之HamF12培養基中,於37℃之CO2培養箱內培養一晚。次日,除去培養基,以使毛喉素(forskolin)最終成為1.2μM之方式,各添加25μL之檢定培養基(含0.1%BSA、100U/mL青黴素、100μg/mL鏈黴素之HamF12培養基)。繼而添加5μL之含受檢化合物的檢定培養基,以最終為1μM之濃度於37℃之CO2培養箱內培養4小時。各添加30μL之Steady glow(Promega),於遮光下靜置20分鐘。使用培養盤讀板器Envision(Perkin-Elmer)測定螢光素酶活性。以添加DMSO之情況的螢光素酶活性當作100%,以添加1μM人類PYY(3-36)代替受檢化合物之情況的螢光素酶活性當作0%,以細胞內cAMP濃度下降當作指標,算出NPY2R促效劑活性。將結果示於表2。
(5)人類GIPR及GLP-1R基因之報導子檢
定
將hGIPR/CHO-K1細胞或hGLP-1R/Crel細胞,以成為5,000細胞/孔之方式,各播種25μL至384孔白色培養盤(Corning,3570)中,並於含10%牛胎兒血清、100U/mL青黴素、100μg/mL鏈黴素之HamF12培養基中,於37℃之CO2培養箱內培養一晚。次日,對細胞添加含受檢化合物之培養基5μL,以最終為1μM之濃度於37℃之CO2培養箱內培養4小時。各添加30μL之Steady glow(Promega),於遮光下振盪。30分鐘後、使用培養盤讀板器Envision(Perkin-Elmer)測定螢光素酶活性。在GIPR促效劑活性之情況,將於10μM之GIP存在下的螢光素酶活性當作100%,將添加DMSO代替受檢化合物之情況的螢光素酶活性當作0%,以細胞內cAMP濃度上升為指標,算出GIPR促效劑活性。將結果示於表2。
在GLP-1R促效劑活性之情況,使用hGLP-1R/Crel細胞,進行與上述同樣之檢定。將於10μM之GLP-1存在下的螢光素酶活性當作100%,將添加DMSO代替受檢化合物之情況的螢光素酶活性當作0%,以細胞內cAMP濃度上升為指標,算出GLP-1R促效劑活性。將結果示於表2。
試驗例2
單次投予後之攝食抑制作用評估
依照下述方法調查受檢化合物之攝食抑制活性。
將受檢化合物以使濃度成為30或100nmol/2mL之方式溶解於溶劑(含有10% DMSO之生理食鹽水)中。將受檢化合物溶液以2mL/kg之容量經皮下投予至8到9週齡之雄性C57BL/6J小鼠(20-26℃,餌及水自由攝取,以12小時光期-12小時暗期之方式飼養)之背部。投予以1日1次進行3日。投予後以飼養籠進行個別飼養,給予預先秤量之餌,從投予開始測定3日之攝餌量。攝餌量係從投予開始日所給予之餌之重量,減去餌殘量而算出。各受檢化合物之攝食抑制活性,係以將只投予溶劑之對照群的攝餌量當作抑制率0%,評估從投予開始至3日間之累積攝餌量。將受檢化合物之攝食抑制率(%)定義為(對照群之攝餌量-受檢化合物投予群之攝餌量)/對照群之攝餌量×100。
如表3所示,本發明化合物具有攝食抑制作用。
試驗例3
DIO(飲食誘導肥胖,diet-induced obese)小鼠之反覆投予試驗
反覆投予試驗
將雄性DIO C57BL/6J小鼠(40週齡)根據體重、攝食、
及血漿指標進行分群。將載體、或實施例41之化合物(P41)以1日1次進行4週皮下投予。試驗中,測定體重、食餌攝取量。使化合物溶解於10% DMSO/食鹽水中。試驗後,採取血液,測定血漿指標。在第29日,藉由EchoMRI(Hitachi Aloka Medical,Ltd.,Japan)測定身體組成。將動物宰殺後,從投予4週藥物後之DIO小鼠將肝臟單離,實施蘇木精-曙紅(HE)染色。將肝臟以4%多聚甲醛固定,用石蠟包埋,進行切片化,並以HE染色。處置後,藉由光學顯微鏡(NanoZoomer,Hamamatsu Photonics)檢視切片。
即時定量PCR
將全部RNA使用QIAzol試藥(Quiagen,Tokyo,Japan)從肝臟單離,cDNA係使用高容量cDNA逆轉錄套組(High-Capacity cDNA Reverse Transcription Kit)(Applied Biosystems,CA,USA)合成。定量RT-PCR係使用具有EXPRESS qPCR Super Mix之ABI Prism 7900序列檢測系統(Thermo Fisher Scientific Inc.MA.USA)來實施。使用引子混合物及探針(Applied Biosystems)進行mRNA定量(表4)。表現量(expression level)係以β肌動蛋白及肽基異構酶之表現量進行標準化。
測定方法
血漿葡萄糖、三酸甘油脂(TG)、總膽固醇(TC)、天冬胺酸胺基轉移酶(AST)、丙胺酸胺基轉移酶(ALT)係以Autoanalyzer 7180(Hitachi High-Technologies Corporation,Japan)分析。血中糖化血紅素(GHb)係以自動GHb分析計(HLC-723G8,Tosoh,Tokyo,Japan)測定。肝臟三酸甘油脂含量以下述方式測定。將組織片於生理食鹽水中均質化,添加己烷:異丙醇(3:2)溶液,萃取脂質。回收脂質層,乾燥後溶解於異丙醇。三酸甘油脂之濃度係藉由三酸甘油脂E-試驗(Triglyceride E-test(Wako Pure Chemical Industries,Ltd,Japan))測定,算出每1g的三酸甘油脂之量。血漿胰島素係以ELISA檢測套組(Shibayagi Co.Ltd.,
Japan)測定。
DIO小鼠中之P41之抗肥胖作用
實施DIO小鼠之4週反覆投予,評估P41之抗肥胖作用。藉由以3、10及30nmol/kg之用量將P41進行每日投予,體重分別減少14.6%、30.0%及37.1%(第1圖(a))。於P41處置群中,可觀察到累積食餌攝取量皆降低且降低程度依存於用量(第1圖(b))。在使用EchoMRI之身體組成分析方面,就P41投予群而言,相對於無脂肪之量僅稍微減少,可觀察到依存於用量脂肪量大幅地減少(第1圖(c)、(d))。與此結果相關地,P41以依存於用量之方式使鼠蹊部、腸系膜及附睾脂肪體重顯著地減少(第1圖(e))。在生化學之指標測定方面,血漿TC及胰島素濃度,在全部P41處置群中,顯著地且以依存於用量之方式改善。關於對脂肪肝之影響,肝臟重量(第1圖(f))、肝臟內TG含量(第1圖(g))、血漿AST及ALT(表5)藉由P41而顯著地減少且減少程度依存於用量。藉由肝臟切片之HE染色,可觀察到肝臟之脂質滴減少(第1h圖)。藉由肝臟之基因表現解析,如基質金屬蛋白酶組織抑制劑I(Timpl)、第I型膠原蛋白α1(Colla)之纖維症相關基因、及如CC趨化素配體2(CCl2)之炎症相關基因有減少的傾向,如基質金屬蛋白酶2(MMP2)之纖維阻礙因子有增加的傾向(第1圖(i))。總結,藉由P41對DIO小鼠4週的處置,可確認到強力之抗肥胖作用以及脂肪肝之改善作用。
試驗例4
ob/ob小鼠之反覆投予試驗
將雄性ob/ob小鼠(9週齡)根據體重、食物攝取量、及血漿指標之值進行分群。將載體或P41以1日1次,進行皮下投予4週。試驗中,測定體重及食餌攝取量。將化合物溶解於10% DMSO/食鹽水。試驗後,採取血液,測定血漿指標。在第29日,將動物宰殺。
測定方法
將血漿葡萄糖、三酸甘油脂(TG)、總膽固醇(TC)、天冬胺酸胺基轉移酶(AST)、丙胺酸胺基轉移酶(ALT),以Autoanalyzer 7180(Hitachi High-Technologies Corporation,Japan)分析。血中糖化血紅素(GHb)係藉由自動GHb分析計(HLC-723G8,Tosoh,Tokyo,Japan)測定。肝臟三酸甘油脂含量係以如下之方法測定。將組織片於生理食鹽水中均質化,添加己烷:異丙醇(3:2)溶液,萃取脂質。回收脂質層,乾燥後溶解於異丙醇。三酸甘油脂之濃度係藉由三酸甘油脂E-試驗(Triglyceride E-test(Wako Pure Chemical Industries,Ltd,Japan))測定,並算出每1g之
三酸甘油脂之量。血漿胰島素係以ELISA檢測套組(Shibayagi Co.Ltd.,Japan)測定。
ob/ob小鼠之P41之抗肥胖及抗糖尿病作用接著,評估ob/ob小鼠的P41之抗肥胖及抗糖尿病作用。將P41以10、30及100nmol/kg之用量投予4週,結果顯示GHb(第2圖(a))及血漿葡萄糖濃度顯著地降低(第2圖(b))。於P41處置群中亦可觀察到血漿胰島素濃度用量依存性地減少(第2圖(c))。關於抗肥胖作用,相對於載體,P41顯示強力且以用量依存性之方式減少體重及累積食餌攝取量(第2圖(d)、(e))。與體重減少同樣地,P41使肝臟及腸間膜、睪丸上體及鼠蹊部之各脂肪組織重量、及肝臟內TG含量用量依存性地減少(第2圖(f)、(g))。在生化學指標方面,血漿TC、TG、AST及ALT,於P41處置群中顯著且用量依存地改善(表6)。
試驗例5
KKAy小鼠之P41之反覆投予
將雄性KKAy小鼠(10週齡)根據體重、攝食量、糖化
血紅素(GHb)、及血漿指標之值進行分群。P41係以1日1次,進行皮下投予4週。化合物係溶解於10%DMSO/食鹽水。試驗中,測定體重、及食餌攝取量。試驗後,採取血液,測定GHb及血漿指標。宰殺動物,將肝臟及脂肪組織單離,測定重量。從肝組織片萃取脂質,測定肝臟內三酸甘油脂(TG)含量。
測定方法
血漿葡萄糖及TG係以Autoanalyzer 7180(Hitachi High-Technologies Corporation,Japan)測定。血中GHb係使用自動GHb分析計(HLC-723G8,Tosoh,Tokyo,Japan)測定。血漿胰島素係使用ELISA檢測套組(Shibayagi Co.,Ltd.,Japan)測定。肝臟內TG含量以下述方式測定。將組織片於生理食鹽水中均質化,添加己烷:異丙醇(3:2)溶液,萃取脂質。回收脂質相,乾燥,繼而溶解於異丙醇。TG濃度係以三酸甘油脂E-試驗(E-test(Wako Pure Chemical Industries))測定,算出肝臟每1g之TG含量。
雄性KKAy小鼠之P41之4W反覆投予試驗
為了評估P41之抗肥胖及抗糖尿病作用,實施KKAy小鼠之4週反覆投予試驗。若以10、30、及100nmol/kg之用量,每日皮下注射P41,相對於載體群,體重分別減少4.2、9.8、及30.1%(第3圖(a))。於P41處置群中可觀察到以用量依存性之方式減少累積食餌攝取量(第3圖(b))。關於抗糖尿病效果,P41顯示GHb、血漿葡萄糖、及血漿胰島素濃度顯著且用量依存性地減少(第3圖(c)至
(e))。與體重減少一致地,P41處置群中可觀察到肝臟組織重量之減少(第3圖(f))。
試驗例6
味覺嫌惡(Conditioned taste aversion:CTA)試驗
將雄性C57BL/6J(9週齡)小鼠以時間限制瓶給水(2-3小時/日)及皮下注射之生理食鹽水,馴化1週。將該小鼠根據體重及攝水量之值進行分群。CTA試驗係依照下述製程進行。用於最初之調教,在第1日,給與小鼠0.1%糖精鈉溶液3小時。供給糖精溶液10分鐘後,皮下投予載體、利拉魯肽(liraglutide)或P41。此外,利拉魯肽具有GLP-1受體活化作用。第2日供給小鼠自來水3小時,給水後皮下注射生理食鹽水。第3日,以與第1日相同之順序進行第二度之調教。第4日,不對小鼠進行皮下注射,而供給3小時自來水。第5日,不對小鼠進行皮下注射,而供給
自來水及糖精溶液兩者3小時,測定各液體之攝取量。糖精偏好率(%)係以{(糖精攝取量)/(糖精攝取量+自來水攝取量)}×100算出。
小鼠之味覺嫌惡試驗
為了評估在小鼠中之嘔吐作用,實施CTA試驗。相對於10nmol/kg之用量之利拉魯肽,可使糖精偏好率顯著地降低,顯示出CTA誘導,P41即使以3nmol/kg之用量亦未誘導出CTA。此投予量為顯示出在DIO小鼠中比利拉魯肽更強力之抗肥胖效果的投予量(第4圖)。
試驗例7
食蟹猴之試驗
使用1隻雄食蟹猴及1隻雌食蟹猴(4歳,體重:雄性3.9kg,雌性2.7kg)。將猴分別於22至27℃,按照12小時亮:12小時暗之時間表在籠中飼養,並1日1次給予100g之丸粒食餌(Oriental Yeast Co.Ltd)。食餌,於投藥日,係在投予8小時後之臨床觀察完成後給予。實驗期間之其他
日子,每日於檢査完成後供給食餌,次日早晨,撤去殘餘之食餌。P41係溶解於0.5w/v%甘露醇溶液。於第1日皮下投予0.05mg/kg之化合物,繼而於第4日皮下投予0.15mg/kg之化合物。於投藥前期間及第1日、第4日、第8日、第11日、及第15日各測定1次體重。於實驗期間每日測定食餌攝取量。
P41在食蟹猴中未顯示嘔吐且使攝餌量降低。
調查在食蟹猴中P41對食物攝取量之影響,確認對靈長類之有效性及嘔吐抑制效果。以漸增用量(0.05及0.15mg/kg;約10及30nmol/kg)皮下投予P41。P41於兩種用量下,使投藥後雄食蟹猴及雌食蟹猴之食餌消耗幾乎完全消失。食餌消耗之抑制效果至少持續2日(第5圖)。P41在實驗期間未誘發嘔吐,顯示在小鼠中所觀察到之P41之強力攝食抑制作用及對CTA之作用亦可延伸至非人類靈長類。
製劑例1
將實施例1之化合物10.0mg及硬脂酸鎂3.0mg,藉由可溶性澱粉之水溶液0.07mL(就可溶性澱粉而言,為7.0mg)
進行顆粒化後並乾燥,並與乳糖70.0mg及玉米澱粉50.0mg混合。將混合物壓縮,得到錠劑。
製劑例2
使實施例1之化合物5.0mg及食鹽20.0mg溶解於蒸餾水,加水使總量成為2.0mL。過濾溶液,在無菌條件下充填於2mL之安瓿。將安瓿滅菌後密封,得到注射用溶液。
本發明化合物具有Y2受體、GLP-1受體及GIP受體活化作用,適用為Y2受體、GLP-1受體及GIP受體相關之各種疾病,例如,肥胖症或糖尿病等之預防/治療藥。
本說明書中所引用之全部刊物、專利及專利申請案,係以其原樣作為參考,採納並加入本說明書中。
序列編號1:人工序列(合成胜肽(式(I)、式(II)或式(III)))
序列編號2:人工序列(合成胜肽(參考例1))
序列編號3:人工序列(合成胜肽(參考例2))
序列編號4:人工序列(合成胜肽(參考例3))
序列編號5:人工序列(合成胜肽(參考例4))
序列編號6:人工序列(合成胜肽(參考例5))
序列編號7:人工序列(合成胜肽(參考例6))
序列編號8:人工序列(合成胜肽(參考例7))
序列編號9:人工序列(合成胜肽(參考例8))
序列編號10:人工序列(合成胜肽(實施例1))
序列編號11:人工序列(合成胜肽(實施例2))
序列編號12:人工序列(合成胜肽(實施例3))
序列編號13:人工序列(合成胜肽(實施例4))
序列編號14:人工序列(合成胜肽(實施例5))
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序列編號17:人工序列(合成胜肽(實施例8))
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序列編號21:人工序列(合成胜肽(實施例12))
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序列編號28:人工序列(合成胜肽(實施例19))
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序列編號30:人工序列(合成胜肽(實施例21))
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序列編號33:人工序列(合成胜肽(實施例24))
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序列編號37:人工序列(合成胜肽(實施例28))
序列編號38:人工序列(合成胜肽(實施例29))
序列編號39:人工序列(合成胜肽(實施例30))
序列編號40:人工序列(合成胜肽(實施例31))
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序列編號42:人工序列(合成胜肽(實施例33))
序列編號43:人工序列(合成胜肽(實施例34))
序列編號44:人工序列(合成胜肽(實施例35))
序列編號45:人工序列(合成胜肽(實施例36))
序列編號46:人工序列(合成胜肽(實施例37))
序列編號47:人工序列(合成胜肽(實施例38))
序列編號48:人工序列(合成胜肽(實施例39))
序列編號49:人工序列(合成胜肽(實施例40))
序列編號50:人工序列(合成胜肽(實施例41))
序列編號51:人工序列(合成胜肽(實施例42))
<110> 武田藥品工業股份有限公司
<120> 胜肽化合物
<130> PT38-5015
<160> 51
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成胜肽(式(I)/(II)/(III))
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> N末端經P1修飾
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> 在式(I)和(III)的情況下,如(Gly-Gly-Gly-Gly-X)所示的鏈接烷基鏈與離胺酸殘基的ε胺基鍵結;式(I)中X=Oda或Pal,式(III)中X=H
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> Xaa代表Aib,Ala or Ser
<220>
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<220>
<221> MISC_FEATURE
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<221> MISC_FEATURE
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<220>
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<220>
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<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (35)..(35)
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<212> PRT
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<220>
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<220>
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<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> Xaa代表Aib
<220>
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成胜肽(參考例2)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(33)
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<220>
<221> MISC_FEATURE
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<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> 合成胜肽(參考例3)
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<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> 2-氟苯丙胺酸
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成胜肽(參考例4)
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> 胺基在第2,4,6,7,8,9,14,15,16,17,18,20,23,24,27,28,30,31,32和33位被保護
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> 2-氟苯丙胺酸
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<212> PRT
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<220>
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<221> MISC_FEATURE
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<221> MISC_FEATURE
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<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> Xaa代表Aib
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<220>
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<221> MISC_FEATURE
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<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(34)
<223> 胺基在第2,4,6,7,8,9,14,15,16,17,18,20,23,24,27,28,30,31,32,33和34位被保護
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> Xaa代表Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> Xaa代表Aib
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成胜肽(參考例7)
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> 胺基在第2,5,6,9,10,12,13,14,15和16位被保護
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> Xaa代表Aib
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<220>
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<221> MISC_FEATURE
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<223> Xaa代表Aib
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<221> MISC_FEATURE
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<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<221> MISC_FEATURE
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<223> Xaa代表Aib
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<221> MISC_FEATURE
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<212> PRT
<213> 人工序列
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<223> 合成胜肽(實旇例1)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)所示的鏈接烷基鏈與離胺酸的ε胺基鍵結
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> Xaa代表Aib
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<221> MISC_FEATURE
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<220>
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<221> MISC_FEATURE
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<223> 2-氟苯丙胺酸
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<212> PRT
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<223> 合成胜肽(實旇例2)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
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<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> Xaa代表Aib
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<221> MISC_FEATURE
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<221> MISC_FEATURE
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<223> 2-氟苯丙胺酸
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成胜肽(實旇例3)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
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<220>
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<223> α-甲基化
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<221> MISC_FEATURE
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<220>
<221> MISC_FEATURE
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<220>
<223> 合成胜肽(實旇例4)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> α-甲基化
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<221> MISC_FEATURE
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<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> Xaa代表Aib
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<222> (13)..(13)
<223> Xaa代表Aib
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<223> 2-氟苯丙胺酸
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<222> (1)..(1)
<223> N末端甲基化
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<222> (2)..(2)
<223> Xaa代表Aib
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<223> α-甲基化
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<223> 2-氟苯丙胺酸
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<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> N末端甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)所示的鏈接烷基鏈與離胺酸的ε胺基鍵結
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa代表Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (35)..(35)
<223> 2-氟苯丙胺酸
<400> 15
<210> 16
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成胜肽(實旇例7)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)所示的鏈接烷基鏈與離胺酸的ε胺基鍵結
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> Xaa代表Aib
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成胜肽(實旇例8)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)所示的鏈接烷基鏈與離胺酸的ε胺基鍵結
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
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<220>
<221> MISC_FEATURE
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<220>
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<221> MISC_FEATURE
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<223> Xaa代表Aib
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<220>
<221> MISC_FEATURE
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<220>
<221> MISC_FEATURE
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<220>
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<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)所示的鏈接烷基鏈與離胺酸的ε胺基鍵結
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
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<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> Xaa代表Aib
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<212> PRT
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<220>
<223> 合成胜肽(實旇例10)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> N末端甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)所示的鏈接烷基鏈與離胺酸的ε胺基鍵結
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> Xaa代表Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa代表Aib
<400> 19
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<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成胜肽(實旇例11)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)所示的鏈接烷基鏈與離胺酸的ε胺基鍵結
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa代表Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa代表Aib
<400> 20
<210> 21
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成胜肽(實旇例12)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)所示的鏈接烷基鏈與離胺酸的ε胺基鍵結
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
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<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> Xaa代表Aib
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成胜肽(實旇例13)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> N末端甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)所示的鏈接烷基鏈與離胺酸的ε胺基鍵結
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa代表Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa代表Aib
<400> 22
<210> 23
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成胜肽(實旇例14)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> N末端甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)所示的鏈接烷基鏈與離胺酸的ε胺基鍵結
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa代表Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa代表Aib
<400> 23
<210> 24
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成胜肽(實旇例15)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)所示的鏈接烷基鏈與離胺酸的ε胺基鍵結
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa代表Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa代表Aib
<400> 24
<210> 25
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成胜肽(實旇例16)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)所示的鏈接烷基鏈與離胺酸的ε胺基鍵結
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa代表Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa代表Aib
<400> 25
<210> 26
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成胜肽(實旇例17)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> N末端甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)所示的鏈接烷基鏈與離胺酸的ε胺基鍵結
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa代表Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa代表Aib
<400> 26
<210> 27
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成胜肽(實旇例18)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> N末端甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)所示的鏈接烷基鏈與離胺酸的ε胺基鍵結
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa代表Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa代表Aib
<400> 27
<210> 28
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成胜肽(實旇例19)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)所示的鏈接烷基鏈與離胺酸的ε胺基鍵結
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa代表Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa代表Aib
<400> 28
<210> 29
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成胜肽(實旇例20)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)所示的鏈接烷基鏈與離胺酸的ε胺基鍵結
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa代表Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa代表Aib
<400> 29
<210> 30
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成胜肽(實旇例21)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> N末端甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)所示的鏈接烷基鏈與離胺酸的ε胺基鍵結
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa代表Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa代表Aib
<400> 30
<210> 31
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成胜肽(實旇例22)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> N末端甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)所示的鏈接烷基鏈與離胺酸的ε胺基鍵結
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa代表Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa代表Aib
<400> 31
<210> 32
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成胜肽(實旇例23)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)所示的鏈接烷基鏈與離胺酸的ε胺基鍵結
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa代表Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa代表Aib
<400> 32
<210> 33
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成胜肽(實旇例24)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)所示的鏈接烷基鏈與離胺酸的ε胺基鍵結
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa代表Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa代表Aib
<400> 33
<210> 34
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成胜肽(實旇例25)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> N末端甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)所示的鏈接烷基鏈與離胺酸的ε胺基鍵結
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa代表Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa代表Aib
<400> 34
<210> 35
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成胜肽(實旇例26)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> N末端甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)所示的鏈接烷基鏈與離胺酸的ε胺基鍵結
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa代表Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa代表Aib
<400> 35
<210> 36
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成胜肽(實旇例27)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)所示的鏈接烷基鏈與離胺酸的ε胺基鍵結
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa代表Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> Xaa代表Aib
<400> 36
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<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成胜肽(實旇例28)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)所示的鏈接烷基鏈與離胺酸的ε胺基鍵結
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa代表Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa代表Aib
<400> 37
<210> 38
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成胜肽(實旇例29)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> N末端甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)所示的鏈接烷基鏈與離胺酸的ε胺基鍵結
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa代表Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa代表Aib
<400> 38
<210> 39
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成胜肽(實旇例30)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> N末端甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)所示的鏈接烷基鏈與離胺酸的ε胺基鍵結
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa代表Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa代表Aib
<400> 39
<210> 40
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成胜肽(實旇例31)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)所示的鏈接烷基鏈與離胺酸的ε胺基鍵結
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa代表Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa代表Aib
<400> 40
<210> 41
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成胜肽(實旇例32)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)所示的鏈接烷基鏈與離胺酸的ε胺基鍵結
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa代表Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa代表Aib
<400> 41
<210> 42
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成胜肽(實旇例33)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> N末端甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)所示的鏈接烷基鏈與離胺酸的ε胺基鍵結
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa代表Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa代表Aib
<400> 42
<210> 43
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成胜肽(實旇例34)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> N末端甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)所示的鏈接烷基鏈與離胺酸的ε胺基鍵結
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa代表Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa代表Aib
<400> 43
<210> 44
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成胜肽(實旇例35)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)所示的鏈接烷基鏈與離胺酸的ε胺基鍵結
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa代表Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa代表Aib
<400> 44
<210> 45
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成胜肽(實旇例36)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)所示的鏈接烷基鏈與離胺酸的ε胺基鍵結
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa代表Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa代表Aib
<400> 45
<210> 46
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成胜肽(實旇例37)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> N末端甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)所示的鏈接烷基鏈與離胺酸的ε胺基鍵結
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa代表Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa代表Aib
<400> 46
<210> 47
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成胜肽(實施例38)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> N末端甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)所示的鏈接烷基鏈與離胺酸的ε胺基鍵結
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa代表Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa代表Aib
<400> 47
<210> 48
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成胜肽(實旇例39)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)所示的鏈接烷基鏈與離胺酸的ε胺基鍵結
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa代表Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa代表Aib
<400> 48
<210> 49
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成胜肽(實旇例40)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)所示的鏈接烷基鏈與離胺酸的ε胺基鍵結
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa代表Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa代表Aib
<400> 49
<210> 50
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成胜肽(實旇例41)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> N末端甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)所示的鏈接烷基鏈與離胺酸的ε胺基鍵結
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa代表Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa代表Aib
<400> 50
<210> 51
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成胜肽(實旇例42)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> N末端甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> α-甲基化
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> (Gly-Gly-Gly-Gly-Oda)所示的鏈接烷基鏈與離胺酸的ε胺基鍵結
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa代表Aib
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Xaa代表Iva
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa代表Aib
<400> 51
Claims (17)
- 一種式(I)所示之胜肽或其鹽,該式(I)為:P1-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-α-MePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-RA10)-A11-A12-Aib-Leu-A15-Lys-Gln-A18-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-A35-NH2式中,P1表示下列式所示之基:-RA1、-CO-RA1、-CO-ORA1、-CO-CORA1、-SO-RA1、-SO2-RA1、-SO2-ORA1、-CO-NRA2RA3、-SO2-NRA2RA3、或-C(=NRA1)-NRA2RA3式中,RA1、RA2及RA3獨立地表示氫原子、可經取代之烴基、或可經取代之雜環基;RA10表示Pal或Oda;A11表示Aib、Ala或Ser;A12表示Ile或Lys;A15表示Asp或Glu; A18表示Ala或Arg;A35表示Tyr或Phe(2-F)。
- 如申請專利範圍第1項所述之胜肽或其鹽,其中,P1為氫原子或甲基。
- 如申請專利範圍第1項所述之胜肽或其鹽,其中,RA10為Pal。
- 如申請專利範圍第1項所述之胜肽或其鹽,其中,A12為Ile。
- 如申請專利範圍第1項所述之胜肽或其鹽,其中,A15為Glu。
- 如申請專利範圍第1項所述之胜肽或其鹽,其中,A18為Arg。
- 如申請專利範圍第1項所述之胜肽或其鹽,其中,A35為Tyr。
- 一種胜肽或其鹽,該胜肽係H-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Aib-Ile-Aib-Leu-Glu-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2。
- 一種胜肽或其鹽,該胜肽係H-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Ala-Ile-Aib-Leu-Glu-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2。
- 一種胜肽或其鹽,該胜肽係Me-Tyr-Aib-Glu-Gly-Thr-αMePhe-Thr-Ser-Asp-Lys(-Gly-Gly-Gly-Gly-Pal)-Ser-Il e-Aib-Leu-Glu-Lys-Gln-Arg-Gln-Iva-Glu-Phe-Val-Arg-His-Leu-Leu-Asn-Lys-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2。
- 一種醫藥,其含有申請專利範圍第1項所述之胜肽或其鹽。
- 如申請專利範圍第11項所述之醫藥,其係Y2受體、GLP-1受體及GIP受體之活化劑。
- 如申請專利範圍第11項所述之醫藥,其係肥胖症或糖尿病之預防/治療劑。
- 一種哺乳動物之肥胖症或糖尿病之預防/治療方法,其係對該哺乳動物投予有效量的申請專利範圍第1項所述之胜肽或其鹽。
- 一種活化哺乳動物之Y2受體、GLP-1受體及GIP受體之方法,其係對該哺乳動物投予有效量的申請專利範圍第1項所述之胜肽或其鹽。
- 一種申請專利範圍第1項所述之胜肽或其鹽之用途,係用於製造肥胖症或糖尿病之預防/治療劑。
- 如申請專利範圍第1項所述之胜肽或其鹽,係用於肥胖症或糖尿病之預防/治療。
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2017
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