TWI606066B - FGFR3 Fusion Gene and Its Targeted Medicine - Google Patents

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TWI606066B
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中西義人
秋山貫則
西藤由佳里
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Description

FGFR3融合基因及以其為標靶的醫藥
本發明係關於，在癌細胞等非正常細胞表現之新穎融合多胜肽、編碼為該多胜肽之多核苷酸、含該多核苷酸之載體、含該載體之細胞、對於該多胜肽專一性結合之抗體及其片段、對於該多核苷酸雜交之寡核苷酸引子、將該多核苷酸予以切斷的寡核苷酸、含有該抗體或該寡核苷酸之醫藥組合物、該融合多胜肽或該多核苷酸之檢測方法以及檢測用套組、以是否存在該融合多胜肽或該多核苷酸作為基準之針對罹癌容易性、是否罹癌、或癌有無進展的試驗方法、選擇適用FGFR抑制劑之癌患者之方法、特徵為將具有FGFR抑制活性之化合物或其藥學上可容許鹽對於表現該融合多胜肽或有該多核苷酸之患者投予的方式使用之癌治療用醫藥組合物、包括將具有FGFR抑制活性之化合物或其藥學上可容許鹽之有效量對於表現該融合多胜肽或有該多核苷酸之患者投予之步驟的癌治療或預防方法、將具有FGFR抑制活性之化合物或其藥學上可容許鹽使用在製造對於表現該融合多胜肽或有該多核苷酸之患者投予之癌治療用醫藥組合物之用途、用於治療或預防表現該融合多胜肽或有該多核苷酸之患者時使用的具有FGFR抑制活性之化合物或其藥學上可容許鹽、及鑑定FGFR抑制劑之方法等。
自以往稱為癌的疾病在各種臟器及組織發病，為難治療且致死性即高的棘手疾病，而且依最近的統計數據，2人中有1人在一生當中會被診斷為癌症，且男性4人中有1人、女性6人中有1人會因癌而死亡，由此狀況，癌係極為嚴重的疾病。
到目前為止，已開發出多數抗癌劑且已對許多癌患者處方，使治療效果有一定程度的提升，但抗癌劑副作用大也是周知的事實。又，對於抗癌劑之反應，亦即治療效果及副作用因人而異是自以往已知的，但其原因尚未解明。
由於近年來科學技術的進步，特別是基因體藥理學(Pharmacogenomics：PGx)的急速進步，已可於分子層級瞭解癌等各種疾病(癌、糖尿病、高血壓等)，並且知道在有同樣症狀的患者間所確認到的各種個體差異，亦即被投予的藥物的吸收、分布、代謝及排泄的差異、於作用部位之反應性之差異、病態之差異、及對於疾病之感受性之差異，有時係涉及基因多型性(包括基因變異)。
由此，期待藉由例如對於已罹癌的患者，在投予抗癌劑之前，事前將該患者之基因體資訊進行解析，並以是否有特定之基因多型為基準來選擇應投予的藥劑並決定處方之態樣，能減少副作用並達成治療效果的增大。
又，同樣地，於健康正常人也能使用此基因體藥理學解析各人的基因體資訊，以是否有特定之基因多型為基準，而預測對於藥物之反應性、及疾病感受性(罹患疾病的容 易度)。
並且，將以此方式知道的特定的基因多型或由其而來的的變異多胜肽當作生物標記(bio-marker)的此新治療方法，被稱為訂製醫療(order-made medicine)、裁製醫療(tailor-made medicine)、個人化醫療(personalized medicine)或客製醫療(custom-made medicine)，已開始在各國納入醫藥品的臨床開發及醫療現場。
又，同樣地，將以此方式知道的特定的基因多型或由其而來的的變異多胜肽當作標靶的藥劑被稱為分子標靶治療藥，已開始進行積極的開發。
纖維母細胞增殖因子受體(FGFR)，為屬於受體型酪胺酸激酶家族的激酶，由FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4構成FGFR家族。配體，為纖維母細胞增殖因子(FGF)，由22種構造上類似的蛋白質構成家族。
介由FGFR而傳遞的信號，係走MAPK路徑或PI3K/AKT路徑，此信號傳遞於癌中，係涉及細胞增殖、血管新生、細胞游走、浸潤、轉移等，又，FGFR據報告會因過度表現、基因過放大、變異、易位而活化(非專利文獻1)。例如：FGFR3，已知在多發性骨髓瘤中發生基因易位(非專利文獻2)、於膀胱癌發生基因變異(非專利文獻3)、於卵巢癌、非小細胞性肺癌、肝細胞癌係過度表現。
由於該等報告結果，啟示FGFR與癌間之關連性，已有人嘗試開發有抑制FGFR之活性的化合物作為抗癌劑(非專利文獻4、非專利文獻5)。
又，就是最近，已有人報告在腦腫瘤膠質母細胞瘤(brain tumor glioblastoma multiforme(GBM))的極少症例(97樣本中之3樣本；3.1%)中，發現到據推定為FGFR3與轉形酸性線圈化線圈蛋白質3(transforming acidic coiled-coil；TACC3)之融合多胜肽、及FGFR1與TACC1之融合多胜肽之存在的基因的易位(非專利文獻6)，不過FGFR與其他蛋白質的融合多胜肽與各種癌種類間的關連性仍尚未明朗。
【先前技術文獻】 【非專利文獻】
【非專利文獻1】Cytokine & Growth Factor Reviews, 2005, 16: 139-149
【非專利文獻2】Blood, 2003, 101: 4569-4575
【非專利文獻3】Nature Genetics, 1999 Sep., 23(1): 18-20
【非專利文獻4】Cancer Research, 2012, 72: 2045-2056
【非專利文獻5】J. Med. Chem., 2011, 54: 7066-7083
【非專利文獻6】Science, Vol. 337, Issue 6099, 7 September 2012: 1231-1235
本發明有鑑於如此的狀況，目的在於鑑定、提供可利用於作為進行FGFR抑制劑所為之癌治療中之個人化醫療(personalized medicine)的生物標記的癌細胞專一性分子，及對於開發將FGFR作為標靶之分子標靶治療藥為有用的癌細胞專 一性分子，及提供將此分子作為生物標記或分子標靶使用之個人化醫療、及在分子標靶治療藥之開發使用之各種物質及方法。
如上述，雖已啟示FGFR與癌間的關連性，不過FGFR與其他蛋白質之融合多胜肽與各種癌種類間的關連性尚未明瞭。
本案發明人等為了解決上述課題，針對各種癌細胞中之FGFR編碼基因之表現、過放大、變異及易位等努力研究，結果發現到在多數膀胱癌細胞及肺癌細胞中，FGFR3多胜肽基因與其他多胜肽基因融合而成的新穎融合多胜肽基因，具體而言，發現到FGFR3多胜肽基因與BAIAP2L1多胜肽基因之融合多胜肽基因、及FGFR3多胜肽基因與TACC3多胜肽基因之融合多胜肽基因，乃完成本發明。
亦即本發明具體而言，係關於：在癌細胞等非正常細胞表現之新穎融合多胜肽、編碼為該多胜肽之多核苷酸、含該多核苷酸之載體、含該載體之細胞、對於該多胜肽專一性結合之抗體及其片段、對於該多核苷酸雜交之寡核苷酸引子、將該多核苷酸予以切斷的寡核苷酸、含有該抗體或該寡核苷酸之醫藥組合物、該融合多胜肽或該多核苷酸之檢測方法以及檢測用套組、以是否存在該融合多胜肽或該多核苷酸作為基準之針對罹癌容易性、是否罹癌、或癌有無進展的試驗方法、選擇適用FGFR抑制劑之癌患者之方法、特徵為對於表現該融合多胜肽或有該多核苷酸之患者投予的方式 使用之癌治療用醫藥組合物、及鑑定FGFR抑制劑之方法等。
[1]一種融合多胜肽，包含FGFR3多胜肽、以及BAIAP2L1多胜肽或TACC3多胜肽，其中，該FGFR3多胜肽係序列編號6或7記載之胺基酸序列所構成的野生型多胜肽之部分或全部、或該野生型多胜肽中之一或複數個胺基酸經取代、缺失或插入之變異多胜肽之部分或全部，該BAIAP2L1多胜肽係序列編號8記載之胺基酸序列所構成之野生型多胜肽之部分或全部、或該野生型多胜肽中之一或複數個胺基酸經取代、缺失或插入之變異多胜肽之部分或全部，該TACC3多胜肽係序列編號9記載之胺基酸序列所構成之野生型多胜肽之部分或全部、或該野生型多胜肽中有一或複數個胺基酸經取代、缺失或插入之變異多胜肽之部分或全部。
[2]如[1]之融合多胜肽，其中，該FGFR3多胜肽係序列編號6或7記載之胺基酸序列所構成之野生型多胜肽。
[3]如[1]或[2]之融合多胜肽，其中，該融合多胜肽係包含FGFR3多胜肽與BAIAP2L1多胜肽之融合多胜肽。
[4]如[3]之融合多胜肽，其中，該融合多胜肽係由序列編號32或38記載之胺基酸序列構成之多胜肽。
[5]如[1]或[2]之融合多胜肽，其中，該融合多胜肽係包含FGFR3多胜肽與TACC3多胜肽之融合多胜肽。
[6]如[5]之融合多胜肽，其中，該融合多胜肽係由序列編號28、30、34或36記載之胺基酸序列構成之多胜肽。
[7]如[1]至[5]中任一項之融合多胜肽，其中，該融合多胜肽來自膀胱癌或肺癌。
[8]一種多核苷酸，其編碼為如[1]至[7]中任一項之融合多胜肽。
[9]如[8]之多核苷酸，包含序列編號14、15或16記載之核苷酸序列。
[10]如[9]之多核苷酸，包含序列編號27、29、31、33、35或37記載之核苷酸序列。
[11]一種載體，包含如[8]至[10]中任一項之多核苷酸。
[12]一種重組細胞，包含如[11]之載體。
[13]一種抗體或其抗原結合片段，其中該抗體專一性地結合於如申請專利範圍第1至7項中任一項之融合多胜肽。
[14]一種寡核苷酸引子對，分別與編碼為如申請專利範圍第1至7項中任一項之融合多胜肽之多核苷酸雜交，該寡核苷酸引子對係由正義引子及反義引子構成，用於檢測或放大該多核苷酸。
[15]一種寡核苷酸，其具有與編碼為如[1]至[7]中任一項之融合多胜肽之mRNA多核苷酸結合、抑制該mRNA多核苷酸轉譯為蛋白質的活性。
[16]如[15]之寡核苷酸，其中，該寡核苷酸為切斷mRNA多胜肽之siRNA。
[17]一種醫藥組合物，包含如[13]之抗體或其抗原結合片段。
[18]一種醫藥組合物，包含如[15]或[16]之寡核苷酸。
[19]一種融合多胜肽之檢測方法，其中該融合多胜肽包含FGFR3多胜肽、以及BAIAP2L1多胜肽或TACC3多胜肽，該融合多胜肽之檢測方法包含：使用結合於如[1]至[7]中任一項之融合多胜肽之抗體或其抗原結合片段，檢測從待驗者單離之試樣中之該融合多胜肽。
[20]一種融合多胜肽之檢測方法，其中該融合多胜肽包含FGFR3多胜肽、以及BAIAP2L1多胜肽或TACC3多胜肽，該融合多胜肽之檢測方法包含：使用分別與編碼為如[1]至[7]中任一項之融合多胜肽之多核苷酸雜交、由正義引子及反義引子所構成、用於檢測或放大該多核苷酸之寡核苷酸引子對，檢測從待驗者單離之試樣中編碼為該融合多胜肽之多核苷酸。
[21]一種多核苷酸之檢測用套組，其中該多核苷酸編碼為包含FGFR3多胜肽、以及BAIAP2L1多胜肽或TACC3多胜肽之融合多胜肽，該多核苷酸之檢測用套組包含分別與編碼為如[1]至[7]中任一項之融合多胜肽之多核苷酸雜交、由正義引子及反義引子所構成、用於檢測或放大該多核苷酸之寡核苷酸引子對。
[22]一種融合多胜肽之檢測用套組，其中該融合多胜肽包含FGFR3多胜肽、以及BAIAP2L1多胜肽或TACC3多胜肽之融合多胜肽，該融合多胜肽之檢測用套組包含與於如[1]至[7]中任一項之融合多胜肽結合之抗體或其抗原結合片段。
[23]一種針對待驗者罹癌之容易性、是否罹癌、或癌是否進行予以試驗之方法，該方法係以從待驗者單離之試樣中確認是否存在如[1]至[7]中任一項之融合多胜肽，做為檢測到該 融合多胜肽之情形判定易罹癌、已罹癌、或癌進行之基準。
[24]一種針對待驗者罹癌之容易性、是否罹癌、或癌是否進行予以試驗之方法，該方法係以從待驗者單離之試樣中確認是否存在編碼為如[1]至[7]中任一項之融合多胜肽之多核苷酸，做為檢測到編碼為該融合多胜肽之多核苷酸之情形判定易罹癌、已罹癌、或癌有進行之基準。
[25]如[23]或[24]之方法，其中，該癌係膀胱癌、腦腫瘤、頭頸部扁平上皮癌、肺癌、肺腺癌、肺扁平上皮癌、皮膚黑色瘤、食道癌、胃癌或肝癌。
[26]一種選擇適用抗癌劑之患者之方法，其中該抗癌劑含有具FGFR抑制活性之化合物或其藥學上可容許鹽，該方法包含以下步驟：(a)從待驗者單離之試樣中確認是否存在如[1]至[7]中任一項之融合多胜肽；(b)確認存在該融合多胜肽之患者選擇作為適用該抗癌劑之患者。
[27]一種選擇適用抗癌劑之患者之方法，其中該抗癌劑含有具FGFR抑制活性之化合物或其藥學上可容許鹽，該方法包含以下步驟：a)從待驗者單離之試樣中確認是否存在編碼為如[1]至[7]中任一項之融合多胜肽之多核苷酸；(b)確認存在編碼為該融合多胜肽之多核苷酸之患者選擇作為適用該抗癌劑之患者。
[28]如[26]或[27]之方法，其中，該癌為膀胱癌、腦腫瘤、 頭頸部扁平上皮癌、肺癌、肺腺癌、肺扁平上皮癌、皮膚黑色瘤、食道癌、胃癌或肝癌。
[29]如[26]至[28]中任一項之方法，其中，該具有FGFR抑制活性之化合物或其藥學上可容許鹽係下式表示中任一化合物或其藥學上可容許鹽：
(式中，R1~R4各自獨立地表示以下的基；R1，表示氫、羥基、鹵素、氰基、硝基、C1-4鹵烷基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7環烷基、C6-10芳基C1-4烷基、-OR5、-NR6R7、-(CR8R9)nZ1、-C(O)NR12R13、-SR14、-SOR15、-SO2R16、-NR17SO2R18、COOH、可經獨立選自P群之一或複數基取代之C6-10芳基、可經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基、-COR19、-COOR20、-OC(O)R21、-NR22C(O)R23、-NR24C(S)R25、-C(S)NR26R27、-SO2NR28R29、-OSO2R30、-SO3R31或-Si(R32)3；R2，表示氫、羥基、鹵素、氰基、硝基、C1-4鹵烷基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7環烷基、C6-10芳基C1-4烷基、-OR5、-NR6R7、-(CR8R9)nZ1、-C(O)NR12R13、-SR14、-SOR15、-SO2R16、-NR17SO2R18、COOH、可經獨立選自P群之一或複數基取代之C6-10芳基、可經獨立選自Q群之一或複數基取代 之5~10員雜芳基或3~10員雜環基、-COR19、-COOR20、-OC(O)R21、-NR22C(O)R23、-NR24C(S)R25、-C(S)NR26R27、-SO2NR28R29、-OSO2R30、-SO3R31或-Si(R32)3；或R1及R2與此等所鍵結之原子一起形成3~10員雜環基或5~10員雜芳基，此處該雜環基或該雜芳基也可經鹵素取代；R3，表示氫、C1-5烷基、C6-10芳基C1-6烷基或C1-4鹵烷基；R4，表示氫、鹵素、C1-3烷基、C1-4鹵烷基、羥基、氰基、硝基、C1-4烷氧基、-(CH2)nZ1、-NR6R7、-OR5、-C(O)NR12R13、-SR14、-SOR15、-SO2R16、NR17SO2R18、COOH、-COR19、-COOR20、-OC(O)R21、-NR22C(O)R23、-NR24C(S)R25、-C(S)NR26R27、-SO2NR28R29、-OSO2R30-SO3R31或-Si(R32)3；A，為5~10員雜芳基環或C6-10芳基環；R5，表示C1-5烷基、C3-7環烷基、C3-7環烷基C1-3烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、C1-3烷氧基C1-4烷基、C1-3烷氧基C1-4烷氧基C1-4烷基、C1-4胺基烷基、C1-4烷胺基C1-4烷基、二(C1-4烷基)胺基C1-4烷基、C6-10芳基、C6-10芳基C1-3烷基、可經獨立選自Q群之一或複數基取代之3~10員雜環基C1-3烷基、3~10員雜環基、5~10員雜芳基、5~10員雜芳基C1-3烷基、C1-6單羥基烷基、C1-6二羥基烷基或C1-6三羥基烷基；R6及R7可相同也可不同，分別表示氫、C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、C1-3烷氧基C1-4烷基、C6-10芳基C1-3烷基、3~10員雜環基C1-3烷基、5~10員雜芳基C1-3烷基、C1-6單羥基烷基、C1-6二羥基烷基、C1-6三羥基烷基、3~10員雜環基、C1-4胺基烷基、C1-4烷胺基C1-4烷基、二(C1-4烷基) 胺基C1-4烷基或氰基(C1-3烷基)，或R6及R7與此等所鍵結之氮原子一起形成3~10員雜環基或5~10員雜芳基；n，表示1~3；R8及R9可相同也可不同，各表示氫、C1-4烷基或鹵素，或R8及R9也可與此等所鍵結之碳原子一起形成脂環式環；Z1，表示氫、NR10R11、-OH、或可經獨立選自Q群之一或複數基取代之3~10員雜環基或5~10員雜芳基；R10及R11可相同也可不同，各表示C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、C1-3烷氧基C1-4烷基、氰基(C1-3烷基)或C1-3烷基磺醯基C1-4烷基，或R10及R11也可與此等所鍵結之氮原子一起形成3~10員雜環基或5~10員雜芳基；R12及R13可相同也可不同，各表示氫、C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、C1-3烷氧基C1-4烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基、3~10員雜環基、C6-10芳基C1-4烷基、3~10員雜環基C1-3烷基、5~10員雜芳基C1-3烷基、氰基(C1-3烷基)、C1-3烷基磺醯基C1-4烷基、3~10員脂環式環、5~10員雜芳基或3~10員雜環基，或R12及R13也可與此等所鍵結之氮原子一起形成可經獨立選自Q群之一或複數基取代之3~10員雜環基或5~10員雜芳基；R14，表示C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、可經獨立選自P群之一或複數基取代之C6-10芳基、或可經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R15，表示C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、 可經獨立選自P群之一或複數基取代之C6-10芳基、或可經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R16，表示C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、可經獨立選自P群之一或複數基取代之C6-10芳基、或可經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R17，表示氫或C1-4烷基；R18，表示C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、可經獨立選自P群之一或複數基取代之C6-10芳基、或可經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R19，表示氫、C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、或可經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R20，表示C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R21，表示C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R22，表示氫、C1-4烷基或C1-4鹵烷基；R23，表示氫、C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R24，表示氫、C1-4烷基或C1-4鹵烷基；R25，表示C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、 5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R26及R27可相同也可不同，各表示氫、C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、C1-3烷氧基C1-4烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基、3~10員雜環基、C6-10芳基C1-4烷基、3~10員雜環基C1-3烷基、5~10員雜芳基C1-3烷基、氰基(C1-3烷基)、C1-3烷基磺醯基C1-4烷基、或3~10員脂環式環，或R26及R27也可與此等所鍵結之氮原子一起形成3~10員雜環基或5~10員雜芳基；R28及R29可相同也可不同，各表示氫、C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、C1-3烷氧基C1-4烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基、3~10員雜環基、C6-10芳基C1-4烷基、3~10員雜環基C1-3烷基、5~10員雜芳基C1-3烷基、氰基(C1-3烷基)、C1-3烷基磺醯基C1-4烷基、或3~10員脂環式環，或R28及R29也可與此等所鍵結之氮原子一起形成3~10員雜環基或5~10員雜芳基；R30，表示C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R31，表示C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R32，表示C1-4烷基或C6-10芳基；
<P群>
鹵素、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、-OH、C1-3烷氧基、C1-3鹵烷氧基、3~10員雜環基胺基、-SO2R16、-CN、-NO2、及3~10員雜環基。
<Q群>
鹵素、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、-OH、C1-3烷氧基、C1-6單羥基烷基、C1-6二羥基烷基或C1-6三羥基烷基、3~10員雜環基胺、-SO2R16、-CN、-NO2、C3-7環烷基、-COR19、及也可經C1-4烷基取代之3~10員雜環基； 、或 。
[30]如[29]之方法，其中，該具有FGFR抑制活性之化合物或其藥學上可容許鹽為式(I)表示之化合物，式中A為吲哚，R3及R4均為氫之化合物或其藥學上可容許鹽。
[31]一種癌治療用醫藥組合物，含有具有FGFR抑制活性之化合物或其藥學上可容許鹽，該具有FGFR抑制活性之化合物或其藥學上可容許鹽，係用於投予表現如[1]至[7]中任一項之融合多胜肽、或具有編碼為該融合多胜肽之多核苷酸之患者。
[32]如[31]之癌治療用醫藥組合物，其中，該患者係依如[26]至[30]中任一項之方法所選擇之患者。
[33]如[31]或[32]之癌治療用醫藥組合物，其中，該癌為膀胱癌、腦腫瘤、頭頸部扁平上皮癌、肺癌、肺腺癌、肺扁平上皮癌、皮膚黑色瘤、食道癌、胃癌或肝癌。
[34]如[31]或[32]之癌治療用醫藥組合物，其中，該癌為膀胱癌。
[35]如[34]之癌治療用醫藥組合物，其中，該膀胱癌在TNM病期分類中分類為第3期以上之病期。
[36]如[31]至[35]中任一項之癌治療用醫藥組合物，其中，該具有FGFR抑制活性之化合物或其藥學上可容許鹽，係下式表示之任一化合物或其藥學上可容許鹽：
(式中，R1~R4各自獨立地表示以下的基；R1，表示氫、羥基、鹵素、氰基、硝基、C1-4鹵烷基、C1-6 烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7環烷基、C6-10芳基C1-4烷基、-OR5、-NR6R7、-(CR8R9)nZ1、-C(O)NR12R13、-SR14、-SOR15、-SO2R16、-NR17SO2R18、COOH、可經獨立選自P群之一或複數基取代之C6-10芳基、可經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基、-COR19、-COOR20、-OC(O)R21、-NR22C(O)R23、-NR24C(S)R25、-C(S)NR26R27、-SO2NR28R29、-OSO2R30、-SO3R31或-Si(R32)3；R2，表示氫、羥基、鹵素、氰基、硝基、C1-4鹵烷基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7環烷基、C6-10芳基C1-4烷基、-OR5、-NR6R7、-(CR8R9)nZ1、-C(O)NR12R13、-SR14、-SOR15、-SO2R16、-NR17SO2R18、COOH、可經獨立選自P群之一或複數基取代之C6-10芳基、可經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基、-COR19、-COOR20、-OC(O)R21、-NR22C(O)R23、-NR24C(S)R25、-C(S)NR26R27、-SO2NR28R29、-OSO2R30、-SO3R31或-Si(R32)3；或R1及R2與此等所鍵結之原子一起形成3~10員雜環基或5~10員雜芳基，此處該雜環基或該雜芳基也可經鹵素取代；R3，表示氫、C1-5烷基、C6-10芳基C1-6烷基或C1-4鹵烷基；R4，表示氫、鹵素、C1-3烷基、C1-4鹵烷基、羥基、氰基、硝基、C1-4烷氧基、-(CH2)nZ1、-NR6R7、-OR5、-C(O)NR12R13、-SR14、-SOR15、-SO2R16、NR17SO2R18、COOH、-COR19、-COOR20、-OC(O)R21、-NR22C(O)R23、-NR24C(S)R25、-C(S)NR26R27、-SO2NR28R29、-OSO2R30-SO3R31或-Si(R32)3；A，為5~10員雜芳基環或C6-10芳基環； R5，表示C1-5烷基、C3-7環烷基、C3-7環烷基C1-3烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、C1-3烷氧基C1-4烷基、C1-3烷氧基C1-4烷氧基C1-4烷基、C1-4胺基烷基、C1-4烷胺基C1-4烷基、二(C1-4烷基)胺基C1-4烷基、C6-10芳基、C6-10芳基C1-3烷基、可經獨立選自Q群之一或複數基取代之3~10員雜環基C1-3烷基、3~10員雜環基、5~10員雜芳基、5~10員雜芳基C1-3烷基、C1-6單羥基烷基、C1-6二羥基烷基或C1-6三羥基烷基；R6及R7可相同也可不同，各表示氫、C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、C1-3烷氧基C1-4烷基、C6-10芳基C1-3烷基、3~10員雜環基C1-3烷基、5~10員雜芳基C1-3烷基、C1-6單羥基烷基、C1-6二羥基烷基、C1-6三羥基烷基、3~10員雜環基、C1-4胺基烷基、C1-4烷胺基C1-4烷基、二(C1-4烷基)胺基C1-4烷基或氰基(C1-3烷基)，或R6及R7與此等所鍵結之氮原子一起形成3~10員雜環基或5~10員雜芳基；n，表示1~3；R8及R9可相同也可不同，各表示氫、C1-4烷基或鹵素，或R8及R9也可與此等所鍵結之碳原子一起形成脂環式環；Z1，表示氫、NR10R11、-OH、或可經獨立選自Q群之一或複數基取代之3~10員雜環基或5~10員雜芳基；R10及R11可相同也可不同，各表示C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、C1-3烷氧基C1-4烷基、氰基(C1-3烷基)或C1-3烷基磺醯基C1-4烷基，或R10及R11也可與此等所鍵結之氮原子一起形成3~10員雜環基或5~10員雜芳基；R12及R13可相同也可不同，各表示氫、C1-4烷基、C2-6烯 基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、C1-3烷氧基C1-4烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基、3~10員雜環基、C6-10芳基C1-4烷基、3~10員雜環基C1-3烷基、5~10員雜芳基C1-3烷基、氰基(C1-3烷基)、C1-3烷基磺醯基C1-4烷基、3~10員脂環式環、5~10員雜芳基或3~10員雜環基，或R12及R13也可與此等所鍵結之氮原子一起形成、可經獨立選自Q群之一或複數基取代之3~10員雜環基或5~10員雜芳基；R14，表示C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、可經獨立選自P群之一或複數基取代之C6-10芳基、或可經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R15，表示C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、可經獨立選自P群之一或複數基取代之C6-10芳基、或可經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R16，表示C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、可經獨立選自P群之一或複數基取代之C6-10芳基、或可經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R17，表示氫或C1-4烷基；R18，表示C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、可經獨立選自P群之一或複數基取代之C6-10芳基、或可經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基； R19，表示氫、C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、或可經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R20，表示C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R21，表示C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R22，表示氫、C1-4烷基或C1-4鹵烷基；R23，表示氫、C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R24，表示氫、C1-4烷基或C1-4鹵烷基；R25，表示C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R26及R27可相同也可不同，各表示氫、C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、C1-3烷氧基C1-4烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基、3~10員雜環基、C6-10芳基C1-4烷基、3~10員雜環基C1-3烷基、5~10員雜芳基C1-3烷基、氰基(C1-3烷基)、C1-3烷基磺醯基C1-4烷基、或3~10員脂環式環，或R26及R27也可與此等所鍵結之氮原子一起形成3~10員雜環基或5~10員雜芳基；R28及R29可相同也可不同，各表示氫、C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、C1-3烷氧基C1-4烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基、3~10員雜環基、C6-10芳基C1-4烷基、3~10員雜環基C1-3烷基、5~10員雜芳基C1-3烷基、氰基(C1-3烷基)、 C1-3烷基磺醯基C1-4烷基、或3~10員脂環式環，或R28及R29也可與此等所鍵結之氮原子一起形成3~10員雜環基或5~10員雜芳基；R30，表示C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R31，表示C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R32，表示C1-4烷基或C6-10芳基；
<P群>
鹵素、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、-OH、C1-3烷氧基、C1-3鹵烷氧基、3~10員雜環基胺基、-SO2R16、-CN、-NO2、及3~10員雜環基。
<Q群>
鹵素、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、-OH、C1-3烷氧基、C1-6單羥基烷基、C1-6二羥基烷基或C1-6三羥基烷基、3~10員雜環基胺、-SO2R16、-CN、-NO2、C3-7環烷基、-COR19、及也可經C1-4烷基取代之3~10員雜環基。
、或 。
[37]如[36]之癌治療用醫藥組合物，其中，該具有FGFR抑制活性之化合物或其藥學上可容許鹽係式(I)表示之化合物，式中A為吲哚，R3及R4均為氫之化合物或其藥學上可容許鹽。
[38]一種治療或預防癌之方法，該方法包含：將具有FGFR抑制活性之化合物或其藥學上可容許鹽之有效量，投予表現如[1]至[7]中任一項之融合多胜肽、或具有編碼為該融合多胜肽之多核苷酸之癌患者。
[39]如[38]之方法，其中，該患者係由如[26]至[30]中任一項之方法選出之患者。
[40]如[38]或[39]之治療或預防癌之方法，其中，該癌為膀胱癌、腦腫瘤、頭頸部扁平上皮癌、肺癌、肺腺癌、肺扁平 上皮癌、皮膚黑色瘤、食道癌、胃癌或肝癌。
[41]如[38]或[39]之治療或預防癌之方法，其中，該癌為膀胱癌。
[42]如[41]之治療或預防癌之方法，其中，該膀胱癌在TNM病期分類中分類為第3期以上之病期。
[43]如[38]至[42]中任一項之治療或預防癌之方法，其中，該具有FGFR抑制活性之化合物或其藥學上可容許鹽，係下式表示中任一化合物或其藥學上可容許鹽：
(式中，R1~R4各自獨立地表示以下的基；R1，表示氫、羥基、鹵素、氰基、硝基、C1-4鹵烷基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7環烷基、C6-10芳基C1-4烷基、-OR5、-NR6R7、-(CR8R9)nZ1、-C(O)NR12R13、-SR14、-SOR15、-SO2R16、-NR17SO2R18、COOH、可經獨立選自P群之一或複數基取代之C6-10芳基、可經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基、-COR19、-COOR20、-OC(O)R21、-NR22C(O)R23、-NR24C(S)R25、-C(S)NR26R27、-SO2NR28R29、-OSO2R30、-SO3R31或-Si(R32)3；R2，表示氫、羥基、鹵素、氰基、硝基、C1-4鹵烷基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7環烷基、C6-10芳基C1-4烷基、 -OR5、-NR6R7、-(CR8R9)nZ1、-C(O)NR12R13、-SR14、-SOR15、-SO2R16、-NR17SO2R18、COOH、可經獨立選自P群之一或複數基取代之C6-10芳基、可經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基、-COR19、-COOR20、-OC(O)R21、-NR22C(O)R23、-NR24C(S)R25、-C(S)NR26R27、-SO2NR28R29、-OSO2R30、-SO3R31或-Si(R32)3；或R1及R2與此等所鍵結之原子一起形成3~10員雜環基或5~10員雜芳基，此處該雜環基或該雜芳基也可經鹵素取代；R3，表示氫、C1-5烷基、C6-10芳基C1-6烷基或C1-4鹵烷基；R4，表示氫、鹵素、C1-3烷基、C1-4鹵烷基、羥基、氰基、硝基、C1-4烷氧基、-(CH2)nZ1、-NR6R7、-OR5、-C(O)NR12R13、-SR14、-SOR15、-SO2R16、NR17SO2R18、COOH、-COR19、-COOR20、-OC(O)R21、-NR22C(O)R23、-NR24C(S)R25、-C(S)NR26R27、-SO2NR28R29、-OSO2R30-SO3R31或-Si(R32)3；A，為5~10員雜芳基環或C6-10芳基環；R5，表示C1-5烷基、C3-7環烷基、C3-7環烷基C1-3烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、C1-3烷氧基C1-4烷基、C1-3烷氧基C1-4烷氧基C1-4烷基、C1-4胺基烷基、C1-4烷胺基C1-4烷基、二(C1-4烷基)胺基C1-4烷基、C6-10芳基、C6-10芳基C1-3烷基、可經獨立選自Q群之一或複數基取代之3~10員雜環基C1-3烷基、3~10員雜環基、5~10員雜芳基、5~10員雜芳基C1-3烷基、C1-6單羥基烷基、C1-6二羥基烷基或C1-6三羥基烷基；R6及R7可相同也可不同，各表示氫、C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、C1-3烷氧基C1-4烷基、C6-10芳基C1-3 烷基、3~10員雜環基C1-3烷基、5~10員雜芳基C1-3烷基、C1-6單羥基烷基、C1-6二羥基烷基、C1-6三羥基烷基、3~10員雜環基、C1-4胺基烷基、C1-4烷胺基C1-4烷基、二(C1-4烷基)胺基C1-4烷基或氰基(C1-3烷基)，或R6及R7與此等所鍵結之氮原子一起形成3~10員雜環基或5~10員雜芳基；n，表示1~3；R8及R9可相同也可不同，各表示氫、C1-4烷基或鹵素，或R8及R9也可與此等所鍵結之碳原子一起形成脂環式環；Z1，表示氫、NR10R11、-OH、或可經獨立選自Q群之一或複數基取代之3~10員雜環基或5~10員雜芳基；R10及R11可相同也可不同，各表示C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、C1-3烷氧基C1-4烷基、氰基(C1-3烷基)或C1-3烷基磺醯基C1-4烷基，或R10及R11也可與此等所鍵結之氮原子一起形成3~10員雜環基或5~10員雜芳基；R12及R13可相同也可不同，各表示氫、C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、C1-3烷氧基C1-4烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基、3~10員雜環基、C6-10芳基C1-4烷基、3~10員雜環基C1-3烷基、5~10員雜芳基C1-3烷基、氰基(C1-3烷基)、C1-3烷基磺醯基C1-4烷基、3~10員脂環式環、5~10員雜芳基或3~10員雜環基，或R12及R13也可與此等所鍵結之氮原子一起形成、可經獨立選自Q群之一或複數基取代之3~10員雜環基或5~10員雜芳基；R14，表示C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、可經獨立選自P群之一或複數基取代之C6-10芳基、或可經獨 立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R15，表示C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、可經獨立選自P群之一或複數基取代之C6-10芳基、或可經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R16，表示C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、可經獨立選自P群之一或複數基取代之C6-10芳基、或可經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R17，表示氫或C1-4烷基；R18，表示C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、可經獨立選自P群之一或複數基取代之C6-10芳基、或可經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R19，表示氫、C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、或可經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R20，表示C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R21，表示C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R22，表示氫、C1-4烷基或C1-4鹵烷基；R23，表示氫、C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10 芳基、5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R24，表示氫、C1-4烷基或C1-4鹵烷基；R25，表示C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R26及R27可相同也可不同，各表示氫、C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、C1-3烷氧基C1-4烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基、3~10員雜環基、C6-10芳基C1-4烷基、3~10員雜環基C1-3烷基、5~10員雜芳基C1-3烷基、氰基(C1-3烷基)、C1-3烷基磺醯基C1-4烷基、或3~10員脂環式環，或R26及R27也可與此等所鍵結之氮原子一起形成3~10員雜環基或5~10員雜芳基；R28及R29可相同也可不同，各表示氫、C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、C1-3烷氧基C1-4烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基、3~10員雜環基、C6-10芳基C1-4烷基、3~10員雜環基C1-3烷基、5~10員雜芳基C1-3烷基、氰基(C1-3烷基)、C1-3烷基磺醯基C1-4烷基、或3~10員脂環式環，或R28及R29也可與此等所鍵結之氮原子一起形成3~10員雜環基或5~10員雜芳基；R30表示C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R31，表示C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R32，表示C1-4烷基或C6-10芳基；
<P群>
鹵素、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、-OH、C1-3烷氧基、C1-3鹵烷氧基、3~10員雜環基胺基、-SO2R16、-CN、-NO2、及3~10員雜環基。
<Q群>
鹵素、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、-OH、C1-3烷氧基、C1-6單羥基烷基、C1-6二羥基烷基或C1-6三羥基烷基、3~10員雜環基胺、-SO2R16、-CN、-NO2、C3-7環烷基、-COR19、及也可經C1-4烷基取代之3~10員雜環基； 、或 。
[44]如[43]之治療或預防癌之方法，其中，該具有FGFR抑制活性之化合物或其藥學上可容許鹽係式(I)表示之化合物，式中A為吲哚，R3及R4均為氫之化合物或其藥學上可容許鹽。
[45]一種具有FGFR抑制活性之化合物或其藥學上可容許鹽用於製造投予表現如[1]至[7]中任一項之融合多胜肽或具有編碼為該融合多胜肽之多核苷酸的患者投予的癌治療用醫藥組合物之用途。
[46]如[45]之用途，其中，該患者係利用如[26]至[30]中任一項之方法選出之患者。
[47]如[45]或[46]之用途，其中，該癌係膀胱癌、腦腫瘤、頭頸部扁平上皮癌、肺癌、肺腺癌、肺扁平上皮癌、皮膚黑色瘤、食道癌、胃癌或肝癌。
[48]如[45]或[46]之用途，其中，該癌係膀胱癌。
[49]如[48]之用途，其中，該膀胱癌在TNM病期分類中分類為第3期以上之病期。
[50]如[45]至[49]中任一項之用途，其中，具有該FGFR抑制活性之化合物或其藥學上可容許鹽，係下式表示之任一化合物或其藥學上可容許鹽：
(式中，R1~R4各自獨立地表示以下的基；R1，表示氫、羥基、鹵素、氰基、硝基、C1-4鹵烷基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7環烷基、C6-10芳基C1-4烷基、-OR5、-NR6R7、-(CR8R9)nZ1、-C(O)NR12R13、-SR14、-SOR15、-SO2R16、-NR17SO2R18、COOH、可經獨立選自P群之一或複數基取代之C6-10芳基、可經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基、-COR19、-COOR20、-OC(O)R21、-NR22C(O)R23、-NR24C(S)R25、-C(S)NR26R27、-SO2NR28R29、-OSO2R30、-SO3R31或-Si(R32)3；R2，表示氫、羥基、鹵素、氰基、硝基、C1-4鹵烷基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7環烷基、C6-10芳基C1-4烷基、-OR5、-NR6R7、-(CR8R9)nZ1、-C(O)NR12R13、-SR14、-SOR15、-SO2R16、-NR17SO2R18、COOH、可經獨立選自P群之一或複數基取代之C6-10芳基、可經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基、-COR19、-COOR20、-OC(O)R21、-NR22C(O)R23、-NR24C(S)R25、-C(S)NR26R27、-SO2NR28R29、-OSO2R30、-SO3R31或-Si(R32)3；或R1及R2與此等所鍵結之原子一起形成3~10員雜環基或5~10員雜芳基，此處該雜環基或該雜芳基也可經鹵素取代； R3，表示氫、C1-5烷基、C6-10芳基C1-6烷基或C1-4鹵烷基；R4，表示氫、鹵素、C1-3烷基、C1-4鹵烷基、羥基、氰基、硝基、C1-4烷氧基、-(CH2)nZ1、-NR6R7、-OR5、-C(O)NR12R13、-SR14、-SOR15、-SO2R16、NR17SO2R18、COOH、-COR19、-COOR20、-OC(O)R21、-NR22C(O)R23、-NR24C(S)R25、-C(S)NR26R27、-SO2NR28R29、-OSO2R30-SO3R31或-Si(R32)3；A，為5~10員雜芳基環或C6-10芳基環；R5，表示C1-5烷基、C3-7環烷基、C3-7環烷基C1-3烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、C1-3烷氧基C1-4烷基、C1-3烷氧基C1-4烷氧基C1-4烷基、C1-4胺基烷基、C1-4烷胺基C1-4烷基、二(C1-4烷基)胺基C1-4烷基、C6-10芳基、C6-10芳基C1-3烷基、可經獨立選自Q群之一或複數基取代之3~10員雜環基C1-3烷基、3~10員雜環基、5~10員雜芳基、5~10員雜芳基C1-3烷基、C1-6單羥基烷基、C1-6二羥基烷基或C1-6三羥基烷基；R6及R7可相同也可不同，各表示氫、C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、C1-3烷氧基C1-4烷基、C6-10芳基C1-3烷基、3~10員雜環基C1-3烷基、5~10員雜芳基C1-3烷基、C1-6單羥基烷基、C1-6二羥基烷基、C1-6三羥基烷基、3~10員雜環基、C1-4胺基烷基、C1-4烷胺基C1-4烷基、二(C1-4烷基)胺基C1-4烷基或氰基(C1-3烷基)，或R6及R7與此等所鍵結之氮原子一起形成3~10員雜環基或5~10員雜芳基；n，表示1~3；R8及R9可相同也可不同，各表示氫、C1-4烷基或鹵素，或R8及R9也可與此等所鍵結之碳原子一起形成脂環式環； Z1，表示氫、NR10R11、-OH、或可經獨立選自Q群之一或複數基取代之3~10員雜環基或5~10員雜芳基；R10及R11可相同也可不同，各表示C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、C1-3烷氧基C1-4烷基、氰基(C1-3烷基)或C1-3烷基磺醯基C1-4烷基，或R10及R11也可與此等所鍵結之氮原子一起形成3~10員雜環基或5~10員雜芳基；R12及R13可相同也可不同，各表示氫、C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、C1-3烷氧基C1-4烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基、3~10員雜環基、C6-10芳基C1-4烷基、3~10員雜環基C1-3烷基、5~10員雜芳基C1-3烷基、氰基(C1-3烷基)、C1-3烷基磺醯基C1-4烷基、3~10員脂環式環、5~10員雜芳基或3~10員雜環基，或R12及R13也可與此等所鍵結之氮原子一起形成、可經獨立選自Q群之一或複數基取代之3~10員雜環基或5~10員雜芳基；R14，表示C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、可經獨立選自P群之一或複數基取代之C6-10芳基、或可經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R15，表示C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、可經獨立選自P群之一或複數基取代之C6-10芳基、或可經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R16，表示C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、可經獨立選自P群之一或複數基取代之C6-10芳基、或可經獨 立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R17，表示氫或C1-4烷基；R18，表示C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、可經獨立選自P群之一或複數基取代之C6-10芳基、或可經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R19，表示氫、C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、或可經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R20，表示C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R21，表示C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R22，表示氫、C1-4烷基或C1-4鹵烷基；R23，表示氫、C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R24，表示氫、C1-4烷基或C1-4鹵烷基；R25，表示C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R26及R27可相同也可不同，各表示氫、C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、C1-3烷氧基C1-4烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基、3~10員雜環基、C6-10芳基C1-4烷基、3~10員雜環基C1-3烷基、5~10員雜芳基C1-3烷基、氰基(C1-3烷基)、 C1-3烷基磺醯基C1-4烷基、或3~10員脂環式環，或R26及R27也可與此等所鍵結之氮原子一起形成3~10員雜環基或5~10員雜芳基；R28及R29可相同也可不同，各表示氫、C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、C1-3烷氧基C1-4烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基、3~10員雜環基、C6-10芳基C1-4烷基、3~10員雜環基C1-3烷基、5~10員雜芳基C1-3烷基、氰基(C1-3烷基)、C1-3烷基磺醯基C1-4烷基、或3~10員脂環式環，或R28及R29也可與此等所鍵結之氮原子一起形成3~10員雜環基或5~10員雜芳基；R30，表示C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R31，表示C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R32，表示C1-4烷基或C6-10芳基；
<P群>
鹵素、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、-OH、C1-3烷氧基、C1-3鹵烷氧基、3~10員雜環基胺基、-SO2R16、-CN、-NO2、及3~10員雜環基。
<Q群>
鹵素、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、-OH、C1-3烷氧基、C1-6單羥基烷基、C1-6二羥基烷基或C1-6三羥基烷基、3~10員雜環基胺、-SO2R16、-CN、-NO2、C3-7環烷基、-COR19、及也可經C1-4烷基取代之3~10員雜環基。
[化5] 、或 。
[51]如[50]之用途，其中，該具有FGFR抑制活性之化合物或其藥學上可容許鹽係式(I)表示之化合物，式中A為吲哚， R3及R4均為氫之化合物或其藥學上可容許鹽。
[52]一種具有FGFR抑制活性之化合物或其藥學上可容許鹽，係使用在表現如[1]至[7]中任一項之融合多胜肽或具有編碼為該融合多胜肽之多核苷酸之癌患者之治療或預防。
[53]如[52]之化合物或其藥學上可容許鹽，其中，該患者係利用如[26]至[30]中任一項之選擇適用含有具有FGFR抑制活性之化合物或其藥學上可容許鹽之抗癌劑之患者之方法選出之患者。
[54]如[52]或[53]之化合物或其藥學上可容許鹽，其中，該癌為膀胱癌、腦腫瘤、頭頸部扁平上皮癌、肺癌、肺腺癌、肺扁平上皮癌、皮膚黑色瘤、食道癌、胃癌或肝癌。
[55]如[52]或[53]之化合物或其藥學上可容許鹽，其中，該癌為膀胱癌。
[56]如[55]之化合物或其藥學上可容許鹽，其中，該膀胱癌在TNM病期分類分類為第3期以上之病期。
[57]如[52]至[56]中任一項之化合物或其藥學上可容許鹽，其中，該具有FGFR抑制活性之化合物或其藥學上可容許鹽係下式表示之任一化合物或其藥學上可容許鹽：
(式中，R1~R4各自獨立地表示以下的基； R1，表示氫、羥基、鹵素、氰基、硝基、C1-4鹵烷基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7環烷基、C6-10芳基C1-4烷基、-OR5、-NR6R7、-(CR8R9)nZ1、-C(O)NR12R13、-SR14、-SOR15、-SO2R16、-NR17SO2R18、COOH、可經獨立選自P群之一或複數基取代之C6-10芳基、可經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基、-COR19、-COOR20、-OC(O)R21、-NR22C(O)R23、-NR24C(S)R25、-C(S)NR26R27、-SO2NR28R29、-OSO2R30、-SO3R31或-Si(R32)3；R2，表示氫、羥基、鹵素、氰基、硝基、C1-4鹵烷基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7環烷基、C6-10芳基C1-4烷基、-OR5、-NR6R7、-(CR8R9)nZ1、-C(O)NR12R13、-SR14、-SOR15、-SO2R16、-NR17SO2R18、COOH、可經獨立選自P群之一或複數基取代之C6-10芳基、可經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基、-COR19、-COOR20、-OC(O)R21、-NR22C(O)R23、-NR24C(S)R25、-C(S)NR26R27、-SO2NR28R29、-OSO2R30、-SO3R31或-Si(R32)3；或R1及R2與此等所鍵結之原子一起形成3~10員雜環基或5~10員雜芳基，此處該雜環基或該雜芳基也可經鹵素取代；R3，表示氫、C1-5烷基、C6-10芳基C1-6烷基或C1-4鹵烷基；R4，表示氫、鹵素、C1-3烷基、C1-4鹵烷基、羥基、氰基、硝基、C1-4烷氧基、-(CH2)nZ1、-NR6R7、-OR5、-C(O)NR12R13、-SR14、-SOR15、-SO2R16、NR17SO2R18、COOH、-COR19、-COOR20、-OC(O)R21、-NR22C(O)R23、-NR24C(S)R25、-C(S)NR26R27、-SO2NR28R29、-OSO2R30-SO3R31或-Si(R32)3； A，為5~10員雜芳基環或C6-10芳基環；R5，表示C1-5烷基、C3-7環烷基、C3-7環烷基C1-3烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、C1-3烷氧基C1-4烷基、C1-3烷氧基C1-4烷氧基C1-4烷基、C1-4胺基烷基、C1-4烷胺基C1-4烷基、二(C1-4烷基)胺基C1-4烷基、C6-10芳基、C6-10芳基C1-3烷基、可經獨立選自Q群之一或複數基取代之3~10員雜環基C1-3烷基、3~10員雜環基、5~10員雜芳基、5~10員雜芳基C1-3烷基、C1-6單羥基烷基、C1-6二羥基烷基或C1-6三羥基烷基；R6及R7可相同也可不同，各表示氫、C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、C1-3烷氧基C1-4烷基、C6-10芳基C1-3烷基、3~10員雜環基C1-3烷基、5~10員雜芳基C1-3烷基、C1-6單羥基烷基、C1-6二羥基烷基、C1-6三羥基烷基、3~10員雜環基、C1-4胺基烷基、C1-4烷胺基C1-4烷基、二(C1-4烷基)胺基C1-4烷基或氰基(C1-3烷基)，或R6及R7與此等所鍵結之氮原子一起形成3~10員雜環基或5~10員雜芳基；n，表示1~3；R8及R9可相同也可不同，各表示氫、C1-4烷基或鹵素，或R8及R9也可與此等所鍵結之碳原子一起形成脂環式環；Z1，表示氫、NR10R11、-OH、或可經獨立選自Q群之一或複數基取代之3~10員雜環基或5~10員雜芳基；R10及R11可相同也可不同，各表示C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、C1-3烷氧基C1-4烷基、氰基(C1-3烷基)或C1-3烷基磺醯基C1-4烷基，或R10及R11也可與此等所鍵結之氮原子一起形成3~10員雜環基或5~10員雜芳基； R12及R13可相同也可不同，各表示氫、C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、C1-3烷氧基C1-4烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基、3~10員雜環基、C6-10芳基C1-4烷基、3~10員雜環基C1-3烷基、5~10員雜芳基C1-3烷基、氰基(C1-3烷基)、C1-3烷基磺醯基C1-4烷基、3~10員脂環式環、5~10員雜芳基或3~10員雜環基，或R12及R13也可與此等所鍵結之氮原子一起形成、可經獨立選自Q群之一或複數基取代之3~10員雜環基或5~10員雜芳基；R14，表示C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、可經獨立選自P群之一或複數基取代之C6-10芳基、或可經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R15，表示C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、可經獨立選自P群之一或複數基取代之C6-10芳基、或可經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R16，表示C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、可經獨立選自P群之一或複數基取代之C6-10芳基、或可經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R17，表示氫或C1-4烷基；R18，表示C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、可經獨立選自P群之一或複數基取代之C6-10芳基、或可經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環 基；R19，表示氫、C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、或可經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R20，表示C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R21，表示C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R22，表示氫、C1-4烷基或C1-4鹵烷基；R23，表示氫、C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R24，表示氫、C1-4烷基或C1-4鹵烷基；R25，表示C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R26及R27可相同也可不同，各表示氫、C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、C1-3烷氧基C1-4烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基、3~10員雜環基、C6-10芳基C1-4烷基、3~10員雜環基C1-3烷基、5~10員雜芳基C1-3烷基、氰基(C1-3烷基)、C1-3烷基磺醯基C1-4烷基、或3~10員脂環式環，或R26及R27也可與此等所鍵結之氮原子一起形成3~10員雜環基或5~10員雜芳基；R28及R29可相同也可不同，各表示氫、C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、C1-3烷氧基C1-4烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基、3~10員雜環基、C6-10芳基C1-4烷基、3~10員 雜環基C1-3烷基、5~10員雜芳基C1-3烷基、氰基(C1-3烷基)、C1-3烷基磺醯基C1-4烷基、或3~10員脂環式環，或R28及R29也可與此等所鍵結之氮原子一起形成3~10員雜環基或5~10員雜芳基；R30，表示C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R31，表示C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R32，表示C1-4烷基或C6-10芳基；
<P群>
鹵素、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、-OH、C1-3烷氧基、C1-3鹵烷氧基、3~10員雜環基胺基、-SO2R16、-CN、-NO2、及3~10員雜環基。
<Q群>
鹵素、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、-OH、C1-3烷氧基、C1-6單羥基烷基、C1-6二羥基烷基或C1-6三羥基烷基、3~10員雜環基胺、-SO2R16、-CN、-NO2、C3-7環烷基、-COR19、及也可經C1-4烷基取代之3~10員雜環基。
、或 。
[58]如[57]之化合物或其藥學上可容許鹽，其中該具有FGFR抑制活性之化合物或其藥學上可容許鹽係式(I)表示之化合物，式中A為吲哚，R3及R4均為氫之化合物或其藥學上可 容許鹽。
[59]一種鑑定具有FGFR抑制活性之化合物之方法，包含以下步驟：(a)於待驗化合物存在下及不存在下，分別培養表現如[1]至[7]中任一項之融合多胜肽之細胞，確定細胞增殖之水平；(b)比較於待驗化合物存在下培養該細胞時之細胞增殖之水平與在待驗化合物不存在下培養該細胞時之細胞增殖之水平；及(c)當於待驗化合物存在下培養該細胞時之細胞增殖之水平低於在待驗化合物不存在下培養該細胞時之細胞增殖之水平，則判定該待驗化合物具有FGFR抑制活性。
[60]一種鑑定具有FGFR抑制活性之化合物之方法，包含以下步驟：(a)對於已移植表現如[1]至[7]中任一項之融合多胜肽之細胞的非人類哺乳動物，投予待驗化合物，確定該細胞之增殖水平；(b)比較在步驟(a)決定之細胞增殖之水平、與未接受該待驗化合物投予之已移植該細胞之非人類哺乳動物中確定之該細胞之細胞增殖之水平；及(c)當於步驟(a)確定之細胞增殖之水平，比起在未接受該待驗化合物投予之已移植該細胞之非人類哺乳動物中確定之該細胞之細胞增殖之水平時，判定該待驗化合物具有FGFR抑制活性。
[61]如[59]或[60]之方法，其中，該細胞為癌細胞。
[62]如[61]之方法，其中，該癌細胞為膀胱癌細胞、腦腫瘤細胞、頭頸部扁平上皮癌細胞、肺癌細胞、肺腺癌細胞、肺扁平上皮癌細胞皮膚黑色瘤細胞、食道癌細胞、胃癌細胞或肝癌細胞。
本發明之由FGFR3多胜肽與其他另一多胜肽構成的融合多胜肽，在膀胱癌細胞等各種癌細胞中被觀測到係專一性的表現，且表現該融合多胜肽之細胞會因具有FGFR抑制活性之化合物而使增殖顯著受抑制，所以藉由將本發明之融合多胜肽利用於作為FGFR抑制劑所為之癌治療中之生物標記，能對於個別患者決定該是否FGFR抑制劑適用及適用之態樣，能防止該藥劑所為之治療中副作用之表現，且能控制為達成最佳治療效果的治療態樣，可實施個人化醫療(personalized medicine)。
又，藉由將本發明之融合多胜肽利用於作為將FGFR當成標靶之癌治療藥、亦即分子標靶治療藥之開發中的標靶，可提供具備對標靶癌細胞有高專一性及高抗腫瘤活性之FGFR抑制劑及包含該抑制劑之癌治療劑。
如此獲得之FGFR抑制劑對於標靶癌細胞有高專一性，故能提供副作用少、且有高抗腫瘤活性之癌治療藥。
又，本發明之融合多胜肽，與各種癌症有密切關連性，故藉由決定在不限於癌患者也包括健康正常人在內的待驗者之試樣中之該融合多胜肽或編碼為該融合多胜肽之多核苷酸是否存在，能針對該待驗者罹癌之容易性(對癌之感受 性)、是否罹癌、或癌是否進行進行試驗。
再者，本發明之融合多胜肽與各種癌有密切關連性，故藉由比較使待驗化合物作用於表現本發明之融合多胜肽之細胞(癌細胞等)的情形、及未使其作用的情形下之該細胞的增殖水平，並鑑別誘導該細胞之增殖抑制之待驗化合物，可提供對於FGFR有高專一性之FGFR抑制劑。
圖1顯示針對從由罹患膀胱癌之患者(20人)收集的各膀胱癌試樣而來的cDNA及從RT112/84之RNA合成之cDNA，使用PCR(聚合酶連鎖反應)進行試驗時，編碼為FGFR3-TACC3融合多胜肽之多核苷酸v1之放大結果。
圖2顯示針對從由罹患膀胱癌之患者(20人)收集的各膀胱癌試樣而來的cDNA及從RT4之RNA合成之cDNA，使用PCR(聚合酶連鎖反應)進行試驗時，編碼為FGFR3-TACC3融合多胜肽之多核苷酸v2之放大結果。
圖3顯示針對從由罹患膀胱癌之患者(20人)收集的各膀胱癌試樣而來的cDNA及從SW780之RNA合成之cDNA，使用PCR(聚合酶連鎖反應)進行試驗時，編碼為FGFR3-BAIAP2L1融合多胜肽之多核苷酸之放大結果。
圖4顯示針對從由罹患肺癌之患者(40人)收集的各膀胱癌試樣而來的cDNA及從SW780之RNA合成之cDNA，使用PCR(聚合酶連鎖反應)進行試驗時，編碼為FGFR3-BAIAP2L1融合多胜肽之多核苷酸之放大結果。分圖A顯示使用寡核苷酸 引子對(序列編號3及序列編號4)試驗之結果。上段及下段之各凝膠之左端線道係針對分子量標記之結果。分圖B顯示使用寡核苷酸引子對(序列編號17及序列編號18)之試驗之結果。上段及下段之各凝膠之左端線道係針對分子量標記之結果。
圖5顯示使用FISH分析進行試驗之各種膀胱癌細胞株中之編碼為FGFR3-BAIAP2L1多胜肽之多核苷酸之檢測結果。
分圖A1顯示使用Split signal probe對於細胞株RT112/84進行試驗之結果。
分圖A2顯示使用Split signal probe對於細胞株SW780進行試驗之結果。
分圖B1顯示使用Fusion signal probe對於細胞株RT112/84進行試驗之結果。
分圖B2顯示使用Fusion signal probe對於細胞株SW780進行試驗之結果。
圖6顯示對於FGFR3及BAIAP2L1分別使用siRNA試驗而得之各種膀胱癌細胞株增殖是否有FGFR3依存性之結果。分圖A顯示對於細胞株BFTC-905之試驗之結果。分圖B顯示對於細胞株UM-UC-14之試驗之結果。分圖C顯示對於細胞株RT4之試驗之結果。分圖D顯示對於細胞株SW780之試驗之結果。
圖7顯示對於表現FGFR3-BAIAP2L1融合多胜肽之各種癌細胞針對FGFR抑制劑所致之細胞凋亡(apoptosis)誘導之效果的試驗結果。
圖8顯示利用細胞之單層培養試驗而得之 FGFR3-BAIAP2L1融合多胜肽對正常細胞之轉形能力的探討結果。上段圖顯示表現野生型FGFR3之細胞之單層培養結果。下段圖顯示表現FGFR3-BAIAP2L1融合多胜肽之細胞之單層培養結果。
圖9顯示以細胞之球體(spheroid)培養試驗而得之FGFR3-BAIAP2L1融合多胜肽對正常細胞之轉形能力及腫瘤形成能力之探討結果。上段圖顯示未處置之母細胞之培養結果。中段圖顯示表現野生型FGFR3之細胞之培養結果。下段圖顯示表現FGFR3-BAIAP2L1融合多胜肽之細胞之培養結果。
圖10顯示以FGFR3之自磷酸化能力作為指標進行試驗而得之FGFR3-BAIAP2L1融合多胜肽之正常細胞之轉形能力及BAIAP2L1對於該轉形能力之貢獻之探討結果。
圖11顯示以細胞之支架(scaffold)非依存性細胞增殖作為指標進行試驗而得之FGFR3-BAIAP2L1融合多胜肽之正常細胞之轉形能力及BAIAP2L1對於該轉形能力之貢獻之探討結果。
圖12顯示使用無毛小鼠進行試驗而得之FGFR3-BAIAP2L1融合多胜肽於體內之腫瘤形成能力的探討結果。自左側依序為將表現野生型FGFR3之細胞、表現野生型BAIAP2L1之細胞、表現FGFR3-BAIAP2L1融合多胜肽之細胞、及表現FGFR3與缺少BAR分域之BAIAP2L1的融合多胜肽之細胞，分別接種到無毛小鼠之鼠蹊部皮下15日後之狀態。
圖13顯示使用無毛小鼠進行試驗而得之FGFR抑制劑對於FGFR3-BAIAP2L1融合多胜肽在體內形成腫瘤之腫瘤增殖 抑制效果之探討結果。
本發明係如上述[1]~[62]例示記載之發明，提供：於癌細胞等非正常細胞中表現之新穎的融合多胜肽、編碼為該多胜肽之多核苷酸、含該多核苷酸之載體、含該載體之細胞、專一性地與該多胜肽結合之抗體及其片段、與該多核苷酸雜交之寡核苷酸引子、將該多核苷酸切斷之寡核苷酸、包含該抗體或該寡核苷酸之醫藥組合物、該融合多胜肽或該多核苷酸之檢測方法、及檢測用套組、針對以該融合多胜肽或該多核苷酸是否存在為基準之罹癌容易性、是否有罹癌、或癌是否進行之試驗方法、選擇適用FGFR抑制劑之癌患者之方法、及特徵為用在對於表現該融合多胜肽表現或具有該多核苷酸之患者投予之癌治療用醫藥組合物、包含將具有FGFR抑制活性之化合物或其藥學上可容許鹽之有效量對於有表現該融合多胜肽之或有該多核苷酸之患者投予之步驟的癌治療或預防方法、用以製造對於表現該融合多胜肽或具有該多核苷酸之患者投予之癌治療用醫藥組合物的具有FGFR抑制活性之化合物或其藥學上可容許鹽之用途、用以治療或預防表現該融合多胜肽或具有該多核苷酸之患者之具有FGFR抑制活性之化合物或其藥學上可容許鹽等。
本發明中之「FGFR」，係指屬於受體型酪胺酸激酶家族之激酶纖維母細胞增殖因子受體(fibroblast growth factor receptor；FGFR)，意指包括FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4且屬於FGFR家族的任意FGFR(Cytokine & Growth Factor Reviews,2005,16：139-149)。又，本發明之FGFR，意指任意來源的FGFR，較佳為哺乳動物(人類、小鼠、大鼠、天竺鼠、兔、羊、猴、羊、驢、牛、馬、豬等)之FGFR，更佳為人類之FGFR，尤佳為由序列編號6或7記載之胺基酸序列構成之人類FGFR3(cDNA序列：各為序列編號10、11/基因庫存取編號：各為NM_001163213.1、NM_000142.4)。人類FGFR3基因之基因座為4p16.3。
本發明中之「人類FGFR3」，係由序列編號6或7記載之胺基酸序列構成之人類FGFR3之野生型多胜肽，或該野生型多胜肽中有1或多數(較佳為1至10個胺基酸，尤佳為1至5個胺基酸)之胺基酸取代、缺失或插入之變異多胜肽。
該變異多胜肽中，也包括與該野生型多胜肽之胺基酸序列有70%以上之相同性之多胜肽，較佳為有80%以上之相同性之多胜肽，更佳為有90%以上之相同性之多胜肽，又更佳為有95%以上之相同性之多胜肽。
本發明中之「BAIAP2L1」，意指(腦專一性血管生成抑制因子1-關聯蛋白2-類似蛋白1(brain-specific angiogenesis inhibitor 1-associated protein 2-like protein 1)；BAIAP2L1/別稱：insulin receptor tyrosine kinase substrate(IRTKS))(Journal of cell science,2007,120：1663-1672)。又，本發明之BAIAP2L1意指任意來源的BAIAP2L1，較佳為哺乳動物之BAIAP2L1，更佳為人類之BAIAP2L1，尤佳為由序列編號8記載之胺基酸序列構成之人類BAIAP2L1(cDNA序列：序列編號12/基因庫存取編號NM_018842.4)。人類 BAIAP2L1基因之基因座為7q22.1，與FGFR3基因存在於不同的染色體。
本發明中之「人類BAIAP2L1」，係由序列編號8記載之胺基酸序列構成的人類BAIAP2L1之野生型多胜肽、或該野生型多胜肽中有1或多數(較佳為1至10個胺基酸，尤佳為1至5個胺基酸)之胺基酸取代、缺失或插入之變異多胜肽。
該變異多胜肽，也包括與該野生型多胜肽之胺基酸序列有70%以上之相同性的多胜肽，較佳為有80%以上之相同性的多胜肽，更佳為有90%以上之相同性的多胜肽，又更佳為有95%以上之相同性之多胜肽。
本發明中之「TACC3」，意指轉形酸性線圈化線圈蛋白質3(transforming acidic coiled-coil；TACC3)(Genomics.1999 Jun 1；58(2)：165-70)。又，本發明之TACC3係指任意來源的TACC3，較佳為哺乳動物之TACC3，更佳為人類之TACC3，尤佳為由序列編號9記載之胺基酸序列構成的人類TACC3(cDNA序列：序列編號13/基因庫存取編號NM_006342.2)。人類TACC3基因之基因座為4p16.3，且存在於和FGFR3基因所存在之染色體為相同染色體之上游。
本發明中之「人類TACC3」，係由序列編號9記載之胺基酸序列構成之人類TACC3之野生型多胜肽，或該野生型多胜肽中有1或多數(較佳為1至10個胺基酸，尤佳為1至5個胺基酸)之胺基酸取代、缺失或插入之變異多胜肽。
該變異多胜肽，也包括與該野生型多胜肽之胺基酸序列有70%以上之相同性的多胜肽，較佳為有80%以上之相 同性的多胜肽，更佳為有90%以上之相同性的多胜肽，又更佳為有95%以上之相同性的多胜肽。
胺基酸序列(或鹼基序列)之相同性，可利用Karlin and Altschul創出之演算法BLAST(Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1993)90：5873-7)決定。基於此演算法已開發出稱為BLASTN或BLASTX之程式(Altschul et al.,J.Mol.Biol.(1990)215：403-10)。依據BLAST，利用BLASTN來解析鹼基序列時，參數設定為例如score=100、wordlength=12。又，依據BLAST，利用BLASTX解析胺基酸序列時，參數設定為例如score=50、wordlength=3。使用BLAST與Gapped BLAST程式時，使用各程式的預設參數。該等解析方法之具體方法可以參照公知(NCBI(National Center for Biotechnology Information)之BLAST(Basic Local Alignment Search Tool)之網站的資訊。
本發明中之「融合多胜肽」，係上述FGFR3野生型多胜肽之部分或全部或FGFR3變異多胜肽之部分或全部和上述TACC3野生型多胜肽之部分或全部或TACC3變異多胜肽之部分或全部融合而得之多胜肽，或上述FGFR3野生型多胜肽之部分或全部或FGFR3變異多胜肽之部分或全部和上述BAIA2P2L1野生型多胜肽之部分或全部或BAIAP2L1變異多胜肽之部分或全部融合而得之多胜肽。
又，本發明之融合多胜肽，也包括在與2種分別的多胜肽全部或一部之融合部位含有編碼為FGFR3野生型多胜肽或FGFR3變異多胜肽之基因體DNA(genomic DNA)(包括外顯子 及內含子)中之一部分內含子序列所編碼的胺基酸序列的融合多胜肽。
如此的融合多胜肽，例如：具有序列編號30及36所示之胺基酸序列之多胜肽，且第761~793位之胺基酸序列及第759~791位之胺基酸序列分別由FGFR3基因之一部分內含子序列(各為序列編號29之第2,281~2,379位之鹼基序列、及序列編號35之第2,275~2,373位之鹼基序列)所編碼。
此處，「多胜肽之一部分」，係指由野生型多胜肽或變異多胜肽之全長胺基酸序列中之任意部分序列構成之多胜肽。
作為具體的態樣，可列舉包含序列編號28所示之胺基酸序列之FGFR3與TACC3之融合多胜肽、包含序列編號30所示之胺基酸序列之FGFR3與TACC3之融合多胜肽、包含序列編號32所示之胺基酸序列之FGFR3與BAIAP2L1之融合多胜肽、包含序列編號34所示之胺基酸序列之FGFR3與TACC3之融合多胜肽、包含序列編號36所示之胺基酸序列之FGFR3與TACC3之融合多胜肽、或包含序列編號38所示之胺基酸序列之FGFR3與BAIAP2L1之融合多胜肽。
如上述，具有序列編號30及36所示之胺基酸序列之融合多胜肽，分別包括在其融合部位由FGFR3基因之部分內含子序列所編碼的胺基酸序列。
本發明之多核苷酸，係編碼為前述本發明之融合多胜肽之多核苷酸，也包括能編碼為本發明之融合多胜肽之任意多核苷酸，也包含基因體DNA或cDNA中任一者。基因體DNA，包含外顯子及內含子。又，cDNA，也包括為來自部分 內含子序列之核酸序列且為編碼為胺基酸序列之核酸序列。
又，該多核苷酸，只要是編碼為相同胺基酸之密碼子即可，包括任意密碼子構成之縮重多核苷酸。
又，本發明中之多核苷酸，包含編碼為哺乳動物來源之融合多胜肽的多核苷酸，作為理想的態樣可列舉編碼為人類來源之融合多胜肽的多核苷酸。
作為具體的態樣，有：編碼為FGFR3野生型多胜肽(序列編號6或序列編號7)之部分或全部或FGFR3變異多胜肽之部分或全部和上述TACC3野生型多胜肽(序列編號9)之部分或全部或TACC3變異多胜肽之部分或全部融合而得之多胜肽之多核苷酸，或編碼為FGFR3野生型多胜肽之部分或全部或FGFR3變異多胜肽之部分或全部和BAIA2P2L1野生型多胜肽(序列編號8)之部分或全部或BAIAP2L1變異多胜肽之部分或全部融合而得之多胜肽中之任一融合多胜肽之多核苷酸。
作為更具體的態樣，可列舉包含與序列編號14、15或16記載之該融合多胜肽中之2個多胜肽之接合部位對應之核苷酸序列的多核苷酸。
更進一步，作為具體的態樣，可列舉：編碼為包含序列編號28所示之胺基酸序列之FGFR3與TACC3之融合多胜肽的包含序列編號27所示之核酸序列的多核苷酸、編碼為包含序列編號30所示之胺基酸序列之FGFR3與TACC3之融合多胜肽的包含序列編號29所示之核酸序列的多核苷酸、編碼為包含序列編號32所示之胺基酸序列之FGFR3與BAIAP2L1之融合多胜肽之包含序列編號31所示之核酸序列之多核苷酸、編 碼為包含序列編號34所示之胺基酸序列之FGFR3與TACC3之融合多胜肽的包含序列編號33所示之核酸序列之多核苷酸、編碼為包含序列編號36所示之胺基酸序列之FGFR3與TACC3之融合多胜肽的包含序列編號35所示之核酸序列之多核苷酸、或編碼為包含序列編號38所示之胺基酸序列之FGFR3與BAIAP2L1之融合多胜肽的包含序列編號37所示之核酸序列的多核苷酸。
此處，如上述，序列編號29之第2,281~2,379位之鹼基序列，係來自FGFR3基因之內含子之核酸序列，且編碼為具有序列編號30之胺基酸序列之多胜肽中的第761~793位之胺基酸序列。
同樣地，序列編號35之第2,275~2,373位之鹼基序列，係來自FGFR3基因之內含子的核酸序列，且編碼為具有序列編號36之胺基酸序列之多胜肽中的第759~791位之胺基酸序列。
本發明之多核苷酸，可為由任意方法獲得者。例如由mRNA製備之互補DNA(cDNA)、由基因體DNA製備之DNA、利用化學合成獲得之DNA、以RNA或DNA作為模板以PCR法放大而獲得之DNA及將該等方法適當組合而建構之DNA，全部都包括在內。
編碼為本發明之融合多胜肽之多核苷酸，可利用依常法從編碼為本發明之融合多胜肽之mRNA將cDNA予以選殖(cloning)之方法、將基因體DNA予以單離並進行剪接(splicing)處理之方法、化學合成之方法等取得。
例如：作為從編碼為本發明之融合多胜肽之mRNA 將cDNA選殖之方法，首先，從表現、產生本發明之融合多胜肽的任意組織或細胞依常法製備編碼為該本發明之融合多胜肽之mRNA。例如可將利用硫氰酸胍(guanidine thiocyanate)法、熱苯酚法或AGPC法等方法製備之全RNA施用寡(dT)纖維素或多U-Sepharose等進行的親和性層析以實施。
其次將獲得之mRNA作為模板，例如以使用反轉錄酵素等公知方法(Mol.Cell.Biol.,Vol.2,p.161,1982；Mol.Cell.Biol.,Vol.3,p.280,1983；Gene,Vol.25,p.263,1983)等合成cDNA鏈，並且轉換為cDNA之雙股cDNA，將此cDNA納入質體載體、噬菌體載體或黏粒載體等，將大腸菌轉形或於體外包裝後，對於大腸菌進行轉染(transfection)，製成cDNA庫。
本發明，更關於含有編碼為上述本發明之融合多胜肽之多核苷酸的載體(重組載體)。
作為本發明之載體，只要在原核細胞及/或真核細胞之各種寄主內能保持複製或自增殖即不特別限制，包括質體載體及噬菌體載體。
作為轉殖用載體，例如：pUC19、λgt10、λgt11等。又，將能於寄主細胞內表現本發明之融合多胜肽之細胞單離時，宜為具有能表現該多核苷酸之啟動子的載體較佳。
作為本發明之重組載體，可藉由將編碼為本發明之融合多胜肽之多核苷酸利用常法簡便地連結到該技術領域可取得之重組用載體(質體DNA及細菌噬菌體DNA)而製備。
作為可用之重組用載體，例如：大腸菌來源之質體 (pBR322、pBR325、pUC12、pUC13、pUC19等)、酵母來源質體(pSH19、pSH15等)、枯草菌來源質體(pUB110、pTP5、pC194等)。
又，作為噬菌體，可列舉λ噬菌體等細菌噬菌體，也可列舉反轉錄病毒、牛痘(vaccinia)病毒、核多角體病毒、慢病毒等動物或昆蟲的病毒(pVL1393、Invitrogen製)。
當為了使編碼為本發明之融合多胜肽之多核苷酸表現並生產本發明之融合多胜肽，表現載體係有用。作為表現載體，只要是在原核細胞及/或真核細胞之各種寄主細胞中表現編碼為本發明之融合多胜肽之多核苷酸，且具有生產此等多胜肽之機能者即可，不特別限制。
例如：pMAL C2、pEF-BOS(NucleicAcid Research,Vol.18,1990,p.5322等)或pME18S(實驗醫學別冊「基因工程手冊」、1992年等)等。
又，本發明之融合多胜肽，可以就為與其他另外的蛋白質之融合蛋白的形式製造。例如當製成與GST(Glutathione S-transferase)之融合蛋白時，可將編碼為本發明之融合多胜肽之cDNA次轉殖到例如質體pGEX4T1(Pharmacia製)中並將大腸菌DH5α轉形後，培養該轉形體以製備。
或也可製成與HA(流感病毒凝集素)、免疫球蛋白不變區、β-半乳糖苷酶、MBP(麥芽糖結合蛋白質)等之融合體。又，可製成與例如：FLAG(Hopp,T.P.et al.,BioTechnology(1988)6,1204-1210)、由6個His(組胺酸)殘基構成之6×His、 10×His、流感病毒凝集素(HA)、人類c-myc之片段、VSV-GP之片段、p18HIV之片段、T7-tag、HSV-tag、E-tag、SV40T抗原之片段、lck tag、α-tubulin之片段、B-tag、Protein C之片段、Stag、StrepTag、HaloTag等公知胜肽之融合體。
本發明之載體，當寄主細胞使用細菌尤其大腸菌時，該載體宜至少包括啟動子-操縱組區、起始密碼子、編碼為本發明之融合多胜肽之多核苷酸、終止密碼子、終止子區(terminator region)及可複製單元較佳。
當寄主使用酵母、動物細胞或昆蟲細胞時，表現載體宜至少包含啟動子、起始密碼子、編碼為本發明之融合多胜肽之多核苷酸、終止密碼子較佳。
又，該載體也可包含編碼為信號胜肽之DNA、增強子序列、編碼為本發明之蛋白質之基因之5'側及3'側之非轉譯區、剪接接合部、多聚腺苷酸化(polyadenylation)部位、選擇標記區或可複製單元等。
又，也可視所望，包含能挑選經基因放大及轉形之寄主的標記基因(基因放大基因、藥劑耐性基因等)。
例如：二氫葉酸還原酶(DHFR)基因、胸苷(thymidine)激酶基因、新酶素耐性基因、麩胺酸合成酵素基因、腺苷脫胺酶(adnosine deaminase)基因、鳥胺酸去羧酶基因、潮酶素-B-磷酸轉移酶基因、天門冬胺酸胺甲醯基轉移酶(aspartae transcarbamylase)基因等。
用以使細菌中表現本發明之融合多胜肽之啟動子-操縱組區，可包括啟動子、操縱組及Shine-Dalgarno(SD)序 列(例如：AAGG等)。
例如寄主為大腸菌屬菌時，例如包括Trp啟動子、lac啟動子、recA啟動子、λPL啟動子、lpp啟動子、tac啟動子等者。
作為用以使酵母中表現本發明之融合多胜肽之啟動子，可列舉PH05啟動子、PGK啟動子、GAP啟動子、ADH啟動子。
寄主為桿菌屬菌時，可列舉SL01啟動子、SP02啟動子、penP啟動子等。
又，寄主為哺乳動物細胞等真核細胞時，可列舉SV40來源之啟動子、慢病毒之啟動子、熱休克啟動子等。較佳為SV40、慢病毒。但是不特別限於此等。又，表現時利用增強子亦為有效方法。
作為理想之起始密碼子，可列舉甲硫胺酸密碼子(ATG)。作為終止密碼子，可列舉常用之終止密碼子(例如：TAG、TGA、TAA)。作為終結子區，可使用通常採用之天然或合成之終結子。
可複製單元，係指有在寄主細胞中能夠將其全部DNA序列複製之能力的DNA，包括天然質體、經人工修飾之質體(從天然質體製備之DNA片段)及合成質體等。作為理想的質體，可列舉：於E.coli之質體pBR322、或其人工的修飾物(將pBR322以適當的限制酶處理而得之DNA片段)，於酵母可列舉酵母2μ質體、或酵母染色體DNA，於哺乳動物細胞可列舉質體pRSVneo ATCC 37198、質體pSV2dhfr ATCC 37145、質體 pdBPV-MMTneo ATCC 37224、質體pSV2neo ATCC 37149等。
增強子序列、多聚腺苷酸化(polyadenylation)部位及剪接接合部位，例如可分別來自SV40等、使用該技術領域中具有通常知識者所通常使用者。
本發明之表現載體，可藉由至少將上述啟動子、起始密碼子、編碼為本發明之融合多胜肽之多核苷酸、終止密碼子及終結子區以連續且環狀地連結於適當的可複製單元以製備。又，此時可依所望，以限制酶消化或使用T4 DNA接合酶進行接合等常法，使用適當的DNA片段(例如：連結子、其他限制酶切斷部位等)。
本發明也關於經上述本發明之載體轉形之重組細胞，本發明之重組細胞可藉由將上述表現載體導入寄主細胞以製備。
作為本發明使用之寄主細胞，只要適於前述表現載體且能被轉形者即不特別限定，可列舉在本發明之發明所屬之技術領域中通常使用之天然細胞或人工建立的重組細胞等各種細胞(例如：細菌(大腸菌(Escherichia)屬菌、桿菌(Bacillus)屬菌)、酵母(糖化酵母(Saccharomyces)屬、畢氏菌(Pichia)屬等)、動物細胞或昆蟲細胞等。
較佳為大腸菌或動物細胞，例如：大腸菌(DH5α、TB1、HB101等)、小鼠來源細胞(COP、L、C127、Sp2/0、NS-1或NIH3T3等)、大鼠來源細胞(PC12,PC12h)、倉鼠來源細胞(BHK及CHO等)、猴來源細胞(COS1、COS3、COS7、CV1及Velo等)及人類來源細胞(Hela、來自2倍體纖維母細胞之細 胞、骨髓瘤細胞及HepG2等)等。
表現載體對於寄主細胞之導入(轉形(轉染))可依常法進行([E.coli、Bacillus subtilis等情形]：Proc.Natl.Acad.Sci.USA.,Vol.69,p.2110,1972；Mol.Gen.Genet.,Vol.168,p.111,1979；J.Mol.Biol.,Vol.56,p.209,1971；[Saccharomyces cerevisiae的情形]：Proc.Natl.Acad.Sci.USA.,Vol.75,p.1927,1978；J.Bacteriol.,Vol.153,p.163,1983)；[動物細胞的情形]：Virology,Vol.52,p.456,1973；[昆蟲細胞的情形]：Mol.Cell.Biol.,Vol.3,p.2156-2165,1983)。
本發明之融合多胜肽，可藉由將如上述製備之包含表現載體之轉形重組細胞(以下以包含封入體之含意使用)依常法於營養培養基進行培養以製造。
本發明之融合多胜肽，可藉由培養如上述重組細胞尤其動物細胞，並使其分泌到培養上清中以製造。
將獲得之培養物以過濾或離遠分離等方法獲得培養濾液(上清)，並且為了從該培養濾液將天然或合成蛋白質予以精製及單離，依一般使用之常法，該本發明之融合多胜肽予以精製、單離。
單離、精製方法，可列舉例如鹽析、溶劑沈澱法等利用溶解度之方法、透析、超過濾、凝膠過濾、十二基硫酸鈉-聚丙烯醯胺凝膠電泳等利用分子量之差異之方法、離子交換層析或羥基磷灰石層析等利用電荷之方法、親和性層析等利用專一性親和性之方法、逆相高速液體層析等利用疏水性之差異的方 法、等電點電泳等利用等電點之差之方法等。
另一方面，於本發明之融合多胜肽係存在於培養的重組細胞(大腸菌等)的細胞間質或細胞質內時，將培養物施以過濾或離心分離等常法以收集菌體或細胞，懸浮於適當緩衝液，並例如超音波或溶菌酶及冷凍熔解等方法破壞細胞等細胞壁及/或細胞膜後，以離心分離或過濾等方法獲得含有本發明之蛋白質之膜組分。將該膜組分使用Triton-X100等界面活性劑予以可溶化，獲得粗溶液。然後，可將該粗溶液以先前例示之常法予以單離、精製。
本發明又關於會與編碼為上述本發明之融合多胜肽之多核苷酸(cDNA或基因體DNA)進行雜交之任意寡核苷酸。
本發明之寡核苷酸，具有對於該cDNA或基因體DNA之鹼基序列之任意部分鹼基序列為互補的鹼基序列，且作為聚合酶連鎖反應(polymerase chain reaction；PCR)中之由正義引子及反義引子構成之寡核苷酸引子對為有用。利用使用該寡核苷酸引子對之PCR，能將編碼為本發明之融合多胜肽之多核苷酸之任意之部分或全部鹼基序列予以放大。
作為本發明之寡核苷酸引子，包括對於本發明之多核苷酸之鹼基序列為互補的任意鹼基長度的寡核苷酸，較佳為有連續至少12個鹼基，較佳為12-50個鹼基，更佳為12-20個鹼基的序列的寡核苷酸。
本發明之寡核苷酸，作為DNA雜交或RNA雜交之操作中的探針亦有用。使用該DNA作為探針的目的，可列 舉對於本發明之多核苷酸雜交之連續的20個鹼基以上的部分鹼基序列，較佳為連續50個鹼基以上之部分鹼基序列，更佳為連續100個鹼基以上之部分鹼基序列，更佳為連續200個鹼基以上之部分鹼基序列，尤佳為連續300個鹼基以上之部分鹼基序列。
本發明也係關於對於編碼為本發明之融合多胜肽之mRNA多核苷酸結合而且具有抑制該mRNA轉譯為蛋白質之活性的寡核苷酸。特佳為例如對於編碼為本發明之融合多胜肽之mRNA多核苷酸結合並將該mRNA切斷之siRNA。
此寡核苷酸，係對於編碼為本發明之融合多胜肽之mRNA結合並且抑制其表現之寡核苷酸，例如：反義寡核苷酸、核糖酶(ribozyme)或siRNA(short interfering RNA)。他們與該mRNA結合後，會抑制該mRNA轉譯為蛋白質。
反義寡核苷酸，係指與基因體DNA及/或mRNA會專一性雜交並且藉由抑制其轉錄及/或轉譯而抑制其蛋白質表現之寡核苷酸。
對於標靶多核苷酸(mRNA等)之結合，也可利用一般的鹼基對互補性，或例如對於DNA雙股結合的情形，也可利用雙股的主溝中的專一性相互作用。作為反義寡核苷酸之標靶部位，可列舉mRNA之5'末端，例如直到AUG起始密碼子及包含其之5'非轉譯序列或mRNA之3'非轉譯序列或編碼區之序列。
本發明中之作為反義寡核苷酸之目的，可列舉連續的5至100個鹼基的部分鹼基序列，較佳為連續的5至70 個鹼基的部分鹼基序列，更佳為連續的5至50個鹼基的部分鹼基序列，更佳為連續的5至30個鹼基的部分鹼基序列。
又，為了使投予到患者體內時之血中半減期增大(安定性)、細胞內膜之透過性增大、或經口投予的情形於消化器官之分解耐性增大或吸收增大等目的，也可以對於本發明之反義寡核苷酸中，將該寡核苷酸的一部分施以化學修飾。化學修飾，例如：寡核苷酸結構中之磷酸鍵、核糖、核酸鹼基、糖部位、3'及/或5'末端等化學修飾。
作為磷酸鍵之修飾，可列舉將1個以上的該鍵變更為磷酸二酯鍵(D-oligo)、硫代磷酸酯鍵(phosphorothioate)、二硫代磷酸酯鍵(S-oligo)、甲基膦酸酯鍵(MP-oligo)、磷醯胺酸酯鍵(phosphoroamidate)、非磷酸鍵及甲基硫代膦酸酯鍵(methyl phosphonothionate)鍵中之任一者或此等的組合。作為核糖之修飾，可列舉變更為2'-氟核糖或2'-O-甲基核糖等。作為核酸鹼基之修飾，可列舉變更為5-丙炔基尿嘧啶或2-胺基腺嘌呤等。
核糖酶，係指具有將mRNA切斷之觸媒活性的寡核苷酸。核糖酶，一般代表內切核酸酶、接合酶或聚合酶活性，包括各種類型的trans作用性核糖酶，例如榔頭(hammer head)及髮夾型的核糖酶。
siRNA，係指能進行RNA干涉(RNA interference)的雙股寡核苷酸(例如：Bass,2001,Nature,411,428-429；Elbashir et al.,2001,Nature,411,494-498)。
siRNA，係序列專一性地將mRNA切斷，其結果抑 制mRNA轉譯為蛋白質。siRNA，可列舉包括與作為標靶之多核苷酸序列為互補之序列的20-25個鹼基對的長度的雙股RNA。本發明之siRNA，也包括含有經化學修飾之核苷酸及非核苷酸的寡核苷酸。
本發明也係關於與上述本發明之融合多胜肽結合之抗體或其抗原結合片段。
本發明之抗體，其來源、形狀、機能等不限定，可為任意抗體。本發明之抗體，可為單株抗體也可為多株抗體，但單株抗體較佳。本發明之抗體，可為人類抗體、小鼠抗體、大鼠抗體等任意動物來源的抗體。又，也可為嵌合(chimeric)抗體或人類化(humanized)抗體等重組抗體。作為本發明之理想抗體，可列舉嵌合抗體、人類抗體或人類化抗體。
本發明之人類化抗體，可使用對於該技術領域中具有通常知識者而言為已知之方法製作。抗體之可變區，通常由夾在4個讀框(FR)內之3個互補性決定區(complementarity determining region；CDR)構成。CDR，係實質上決定抗體之結合專一性之區。CDR之胺基酸序列富有多樣性。另一方面，構成FR之胺基酸序列，也有不同結合專一性之抗體之間也常顯示高相同性。所以，據說一般可利用CDR之移植將某抗體之結合專一性移植到其他抗體。
人類化抗體也稱為再構成(reshaped)人類抗體，係將人類以外之哺乳動物、例如小鼠抗體之CDR移植到人類抗體之互補性決定區而得，其一般的基因重組手法亦為已知(參照歐洲專利申請案公開編號EP 125023號公報、WO 96/02576 號公報)。
具體而言，例如CDR為小鼠抗體來源時，將設計為將小鼠抗體之CDR與人類抗體之讀框區(framework region；FR)予以連結的DNA序列，使用製成在CDR及FR兩者之末端區有重疊部分之數個寡核苷酸作為引子以PCR法進行合成(參照WO98/13388號公報記載之方法)。將獲得之DNA與編碼為人類抗體不變區之DNA連結，其次納入表現載體，並將其導入寄主並使其產生可獲得(歐洲專利申請案公開編號EP 239400、參照國際專利申請案公開編號WO 96/02576)。
與CDR連結之人類抗體之讀框區，係選擇互補性決定區會形成良好之抗原結合部位者。也可視須要，以再構成人類抗體之互補性決定區會形成適當抗原結合部位的方式，對於抗體之可變區中之讀框區之胺基酸施以取代、缺失、加成及/或插入等。例如，可應用將小鼠CDR移職傲人類FR使用之PCR法，對於FR導入胺基酸序列之變異。具體而言，可以對於黏合於FR之引子導入部分的鹼基序列之變異。對於由如此之引子合成之FR，導入鹼基序列之變異。藉由以上述方法測定並評價已取代胺基酸之變異型抗體對於抗原之結合活性，能選擇有所望性質之變異FR序列(Sato,K.etal.,CancerRes.(1993)53,851-856)。
人類化抗體之不變區，通常使用人類抗體者。
使用之人類抗體之不變區不特別限定，例如為重鏈不變區的情形，可使用人類IgG1之不變區、人類IgG2之不變區、人類IgG3之不變區、人類IgG4之不變區、人類IgM、IgA、IgE、 IgD之不變區等。又，為輕鏈不變區的情形，可使用人類κ鏈不變區、人類λ鏈不變區等。再者，人類抗體來源之不變區可為有天然來源之序列者，也可為有天然來源之序列中有1或複數個胺基酸被改變(取代、缺失、加成及/或插入)之序列之不變區。
又，製作人類化抗體後，可可將可變區(例如：CDR、FR)或不變區中之胺基酸以其他胺基酸取代、或使缺失、加成及/或插入等，本發明之人類化抗體，也包括經如此胺基酸取代等而得之人類化抗體。
人類化抗體中之CDR之來源不特別限定，可為任意動物來源。例如可使用小鼠抗體、大鼠抗體、兔抗體、駱駝抗體等的序列，較佳為小鼠抗體之CDR序列。
人類化抗體在人類體內的免疫原性低落，故於治療目的等對於人類投予的情形有用。
嵌合抗體，係由人類以外之哺乳動物例如：小鼠抗體之重鏈、輕鏈之可變區與人類抗體之重鏈、輕鏈之不變區構成的抗體。嵌合抗體，可使用既知方法製作。例如：將抗體基因從融合瘤轉殖並納入適當載體，並將其導入寄主以進行(例如：參照Carl,A.K.Borrebaeck,James,W.Larrick,THERAPEUTIC MONOCLONAL ANTIBODIES,Published in the United Kingdom by MACMILLAN PUBLISHERS LTD,1990)。具體而言，從融合瘤之mRNA使用反轉錄酵素，合成抗體之可變區(V區)之cDNA。若可獲得編碼為目的抗體之V區之DNA，則將其與編碼為所望人類抗體不變區(C區)之DNA予以連結， 並將其納入表現載體。或，將編碼為抗體之V區之DNA納入包含人類抗體C區之DNA之表現載體亦可。納入表現控制區在例如增強子、啟動子的控制下能表現之表現載體。然後，以此表現載體將寄主細胞轉形，能使其表現嵌合抗體。
又，人類抗體也可利用對於該技術領域中具有通常知識者為公知之方法取得。例如：將人類淋巴球於體外以所望抗原或表現所望抗原之細胞感作，並使感作淋巴球與人類骨髓瘤細胞例如U266融合，也可獲得對於抗原有結合活性之所望人類抗體(參照日本特公平1-59878)。又，可藉由將舉有人類抗體基因的全部曲目的基因轉殖動物以所望抗原免疫，而取得所望之人類抗體(參照國際專利出願公開編號WO 93/12227,WO 92/03918，WO 94/02602,WO 94/25585，WO 96/34096,WO 96/33735)。
又，若從人類淋巴球池將表現對於抗原有結合活性之抗體的B細胞利用細胞流式計數(Flow cytometry)或細胞陣列等予以單離並解析選擇的B細胞的抗體基因，則能決定與抗原結合之人類抗體之DNA序列(Jin,A.et al.,Nature Medicine(2009)15,1088-92,Scheid,J.F.et al.,Nature(2009)458,636-640，Wrammert,J.et al.,Nature(2008)453,667-672,Tiller,T.et al,Journal of Immunological Methods(2008)329,112-124)。若能明白與抗原結合之抗體之DNA序列，則可製作具有該序列之適當表現載體並取得人類抗體。該等方法係為周知，可參考WO 92/01047、WO 92/20791、WO 93/06213、WO 93/11236、WO 93/19172、 WO 95/01438、WO 95/15388等。
再者，使用人類抗體噬菌體庫，利用淘選法取得人類抗體之技術亦為已知。例如：將人類抗體之可變區以單鏈抗體(scFv)的形式利用噬菌體呈現法表現在噬菌體表面，可選擇與抗原結合之噬菌體。若解析選擇之噬菌體之基因，可決定編碼為與抗原結合之人類抗體之可變區的DNA序列。若了解與抗原結合之scFv之DNA序列，可製作具有該序列之適當表現載體並取得人類抗體。該等方法係為周知，可參考WO 92/01047、WO 92/20791、WO 93/06213、WO 93/11236、WO 93/19172、WO 95/01438、WO 95/15388等。
本發明之抗體，不僅包括以IgG為代表之二價抗體，也包括一價抗體、或IgM為代表之多價抗體。又、本發明之抗體，也包括能與不同抗原結合的雙專一性(Bispecific)抗體。
本發明之抗體，不限於抗體之全長分子，也包括低分子化抗體等任意的抗原結合片段。
再者，本發明之抗體也包括結合了細胞傷害性物質等之修飾抗體。再者，本發明之抗體其抗體的糖鏈也可經改變。
本發明之抗原結合片段所包含之低分子化抗體(minibody)，包括全長抗體(whole antibody，例如whole IgG等)之一部分缺損之抗體片段，只要對於本發明之融合多胜肽有結合活性即不特別限定。
本發明中，低分子化抗體只要包括全長抗體之一部分即可，不特別限定，宜包含抗原結合部位較佳。抗原結合 部位通常為抗體之CDR，較佳為抗體之6個CDR。因此抗原結合部位之理想例，可列舉抗體之6個CDR、或可變區(重鏈可變區及/或輕鏈可變區)。
本發明中之低分子化抗體，宜比起全長抗體的分子量較小，但例如有時也會形成二元體、三元體、四元體等多元體等，有時會比全長抗體的分子量更大。
本發明之抗原結合片段之其他具體例，例如：Fab、Fab'、F(ab')2、Fv等。又，低分子化抗體之具體例，例如：Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、scFv(single chain Fv)、Diabody、sc(Fv)2(single chain(Fv)2)等。此等抗體之多元體(例如：二元體、三元體、四元體、聚合物)，也包括在本發明之低分子化抗體。
抗原結合片段，可利用例如將抗體以酵素處理使其生成抗體片段以得到。作為生成抗體片段之酵素，例如木瓜酶、胃蛋白酶、或纖溶酶(plasmin)等為公知。或可建構編碼為此等抗體片段之基因，將其導入表現載體後，於適當的寄主細胞使其表現(參照例如：Co,M.S.et al.,J.Immunol.(1994)152,2968-2976、Better,M.& Horwitz,A.H.Methods in Enzymology(1989)178,476-496、Plueckthun,A.& Skerra,A.Methods in Enzymology(1989)178,476-496、Lamoyi,E.,Methods in Enzymology(1989)121,652-663、Rousseaux,J.et al.,Methods in Enzymology(1989)121,663-669、Bird,R.E.et al.,TIBTECH(1991)9,132-137)。
消化酵素，係將抗體片段之特定位置切斷，提供如下特定結構之抗體片段。對於如此之酵素性獲得之抗體片 段，若利用基因工程的方法，能使抗體之任意部分缺失。
使用上述消化酵素時獲得之抗體片段如下。
木瓜酶消化：F(ab)2或Fab
胃蛋白酶消化：F(ab')2或Fab'
纖溶酶(plasmin)消化：Facb
本發明中之低分子化抗體，只要對於本發明之融合多胜肽有結合活性即可，能包括使任意區域缺失之抗體片段。
雙體抗體(diabody)，係利用基因融合所建構之二價(bivalent)之抗體片段(Holliger P et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：6444-6448(1993)、EP404,097號、WO93/11161號等)。雙體抗體，係由2條多胜肽鏈構成之二元體。通常，構成二元體之多胜肽鏈係各於相同鏈中將VL及VH以連結子結合。雙體抗體中之連結子，一般為VL與VH無法彼此結合程度之短。具體而言，構成連結子之胺基酸殘基為例如約5個殘基。所以，在同一多胜肽鏈上被編碼的VL與VH無法形成單鏈可變區片段，而是與其他單鏈可變區片段形成二元體。其結果，雙體抗體具有2個抗原結合部位。
scFv抗體，係重鏈可變區([VH])及輕鏈可變區([VL])以連結子等結合而成為單鏈多胜肽之抗體(Huston,J.S.et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.(1988)85,5879-5883、Plickthun「The Pharmacology of Monoclonal Antibodies」Vol.113,Resenburg及Moore編，Springer Verlag,New York,pp.269-315,(1994))。scFv中之H鏈V區及L鏈V區，可為本說明書記載之任一抗體來源。將V區連結之胜肽連結子不特別 限制。例如可將由3至25個殘基左右構成之任意單鏈胜肽當作連結子。具體而言，例如可使用後述胜肽連結子等。
兩鏈之V區，可利用例如如上述PCR法連結。為了利用PCR法將V區連結，首先將以下的DNA當中之編碼為全部或所望之部分胺基酸序列之DNA作為模板。
編碼為抗體之H鏈或H鏈V區之DNA序列、及編碼為抗體之L鏈或L鏈V區之DNA序列
利用具有與待放大之DNA之兩端序列對應之序列的一對引子的PCR法，將編碼為H鏈與L鏈之V區的DNA分別放大。其次，準備編碼為胜肽連結子部分之DNA。也可將編碼為胜肽連結子之DNA利用PCR合成。此時，先在利用之引子之5'側附加另外合成之能與各V區之放大產物連結之鹼基序列。其次，利用[H鏈V區DNA]-[胜肽連結子DNA]-[L鏈V區DNA]之各DNA、與組合PCR用之引子，進行PCR反應。
組合PCR用之引子，係組合黏合在[H鏈V區DNA]之5'側之引子、與黏合在[L鏈V區DNA]之3'側的引子而構成。亦即組合PCR用引子，係能夠將編碼為待合成之scFv之全長序列之DNA予以放大之引子組。另一方面，於[胜肽連結子DNA]附加了能與各V區DNA連結之鹼基序列。其結果，該等DNA被連結，進一步利用組合PCR用之引子，最終生成scFv之全長作為放大產物。一旦製作了編碼為scFv之DNA，可依常法取得含有他們之表現載體、及由該表現載體所轉形之重組細胞。又，其結果，將獲得之重組細胞培養並使編碼為該scFv之DNA表現，能獲得該scFv。
結合之重鏈可變區與輕鏈可變區之順序不特別限定，可以用任意順序排列，例如可為如以下配置。
[VH]連結子[VL]
[VL]連結子[VH]
sc(Fv)2，係2個VH及2個VL以連結子等結合成單鏈之低分子化抗體(Hudson et al、J Immunol.Methods 1999；231：177-189)。sc(Fv)2，例如可藉由將scFv以連結子連結以製作。
又，宜為特徵係2個VH及2個VL以單鏈多胜肽之N末端側作為基點而依VH、VL、VH、VL([VH]連結子[VL]連結子[VH]連結子[VL])的順序排列的抗體為較佳，但2個VH與2個VL的順序不特別限於上述配置，可以任意順序排列。 例如可列舉如以下之配置。
[VL]連結子[VH]連結子[VH]連結子[VL]
[VH]連結子[VL]連結子[VL]連結子[VH]
[VH]連結子[VH]連結子[VL]連結子[VL]
[VL]連結子[VL]連結子[VH]連結子[VH]
[VL]連結子[VH]連結子[VL]連結子[VH]
低分子抗體中之重鏈可變區或輕鏈可變區之胺基酸序列，也可經取代、缺失、加成及/或插入。再者，當使重鏈可變區與輕鏈可變區組合時，只要是有抗原結合活性即可，可使一部分缺損，也可加成其他多胜肽。又，可變區也可嵌合化或人類化。
本發明中，將抗體之可變區結合之連結子，可使 用能利用基因工程導入的任意的胜肽連結子、或合成化合物連結子，例如：Protein Engineering,9(3),299-305,1996揭示之連結子。
本發明中理想之連結子為胜肽連結子。胜肽連結子之長度不特別限定，可因應由該技術領域中具有通常知識者適當選擇，通常為1~100個胺基酸，較佳為3~50個胺基酸，又更佳為5~30個胺基酸，尤佳為12~18個胺基酸(例如：15個胺基酸)。
胜肽連結子之胺基酸序列，例如可列舉如以下之序列。
Ser
Gly．Ser
Gly．Gly．Ser
Ser．Gly．Gly
Gly．Gly．Gly．Ser(序列編號：19)
Ser．Gly．Gly．Gly(序列編號：20)
Gly．Gly．Gly．Gly．Ser(序列編號：21)
Ser．Gly．Gly．Gly．Gly(序列編號：22)
Gly．Gly．Gly．Gly．Gly．Ser(序列編號：23)
Ser．Gly．Gly．Gly．Gly．Gly(序列編號：24)
Gly．Gly．Gly．Gly．Gly．Gly．Ser(序列編號：25)
Ser．Gly．Gly．Gly．Gly．Gly．Gly(序列編號：26)
(Gly．Gly．Gly．Gly．Ser(序列編號：21))n
(Ser．Gly．Gly．Gly．Gly(序列編號：22))n
[n為1以上之整數]等。
胜肽連結子之胺基酸序列可因應目的由該技術領域中具有通常知識者適當選擇。例如決定上述胜肽連結子之長度之n，通常為1~5，較佳為1~3，更佳為1或2。
合成化學物連結子(化學交聯劑)，為胜肽交聯通常使用之交聯劑，例如N-羥基琥珀醯亞胺(NHS)、辛二酸二琥珀醯亞胺酯(DSS)、辛二酸二(硫琥珀醯亞胺基)酯(BS 3)、二硫雙(琥珀醯亞胺基丙酸酯)(DSP)、二硫雙(硫琥珀醯亞胺基丙酸酯)(DTSSP)、乙二醇雙(琥珀醯亞胺基琥珀酸酯)(EGS)、乙二醇雙(硫琥珀醯亞胺基琥珀酸酯)(硫-EGS)、二琥珀醯亞胺基酒石酸鹽(DST)、二硫琥珀醯亞胺基酒石酸鹽(硫-DST)、雙[2-(琥珀醯亞胺氧羰基氧)乙基]碸(BSOCOES)、雙[2-(硫琥珀醯亞胺氧羰基氧)乙基]碸(硫-BSOCOES)等，該等交聯劑在市面上可購得。
將4個抗體可變區結合時，通常須要3個連結子。多數連結子可相同也可使用不同的連結子。
又，本發明之抗體，也包括於本發明之抗體之胺基酸序列附加了1或多數個胺基酸殘基而得之抗體。又，也包括此等抗體與其他胜肽或蛋白質融合而得之融合蛋白質。製作融合蛋白質之方法，只要能將編碼為本發明之抗體之多核苷酸與編碼為其他胜肽或多胜肽之多核苷酸以讀框一致之方式連結，並將其導入到表現載體，於寄主使其表現即可，可使用對於該技術領域中具有通常知識者為公知之方法。與本發明之抗體融合之其他胜肽或多胜肽，可使用例如：FLAG(Hopp,T.P.et al.,BioTechnology(1988)6,1204-1210)、由6個His(組胺酸) 殘基構成之6×His、10×His、流感病毒凝集素(HA)、人類c-myc之片段、VSV-GP之片段、p18HIV之片段、T7-tag、HSV-tag、E-tag、SV40T抗原之片段、lck tag、α-tubulin之片段、B-tag、Protein C之片段、Stag、StrepTag、HaloTag等公知胜肽。又，與本發明之抗體融合之其他多胜肽，可列舉例如：GST(麩胱甘肽-S-轉移酶)、HA(流感病毒凝集素)、免疫球蛋白不變區、β-半乳糖苷酶、MBP(麥芽糖結合蛋白質)等。可藉由將市售的編碼為此等胜肽或多胜肽的多核苷酸與編碼為本發明之抗體之多核苷酸融合，並將以此方式製備之融合多核苷酸表現，以製備融合多胜肽。
又，本發明之抗體，也可為已結合聚乙二醇(PEG)或玻尿酸等高分子物質、放射性物質、螢光物質、發光物質、酵素、毒素等各種分子的抗體複合體(antibody conjugate)。如此的抗體複合體，可藉由對於獲得之抗體施以化學性修飾以獲得。又，抗體之修飾方法此處領域已經確立(例如：US5057313、US5156840)。本發明中之「抗體」也包括該等抗體複合體。
再者，本發明使用之抗體也可為雙專一性抗體(bispecific antibody)。雙專一性抗體，係指在同一抗體分子內有認識不同抗原決定位之可變區的抗體。本發明中，雙專一性抗體可為認識本發明之融合多胜肽分子之不同抗原決定位的雙專一性抗體，也可為其中一抗原結合部位認識本發明之融合多胜肽且另一抗原結合部位認識另一物質之雙專一性抗體。
用以製造雙專一性抗體之方法為公知。例如，可使認識之抗原為不同的2種抗體結合而製作雙專一性抗體。結 合之抗體，可為各具有H鏈與L鏈之1/2分子，也可為僅由H鏈構成之1/4分子。或，也可使產生不同單株抗體之融合瘤融合並製作雙專一性抗體產生融合細胞。再者，也可利用基因工程的方法製作雙專一性抗體。
本發明之抗體，取決於後述產生抗體之細胞或寄主或精製方法，胺基酸序列、分子量等電點或糖鏈有無或形態等可能不同。但是只要獲得之抗體與本發明之抗體有同等機能，即包括於本發明。例如：使本發明之抗體於原核細胞例如大腸菌表現的情形，係於原本抗體之胺基酸序列之N末端附加甲硫胺酸殘基。本發明之抗體也包括如此的抗體。
本發明之抗體也可為糖鏈經改變的抗體。改變抗體之糖鏈之方法對於該技術領域中具有通常知識者為公知，例如：利用將抗體之糖化(glycosylation)修飾以改良ADCC活性之方法、藉由抗體之糖鏈是否存在岩藻糖以調節ADCC活性之方法、藉由於YB2/0細胞使抗體產生以製備具有不含α-1,6核心岩藻糖(core fucose)之糖鏈的抗體的方法、加成具有二分(bisecting)GlcNAc之糖鏈的方法等(WO 99/54342、WO 00/61739、WO 02/31140、WO 02/79255等)。
本發明之抗體，可將本發明之融合多胜肽(來自人類或小鼠等哺乳動物)或其片段胜肽作為免疫原，利用公知方法製作。亦即，可使用所望抗原或表現所望抗原之細胞作為感作抗原，將其依通常之免疫方法對於非人類哺乳動物免疫。將從被免疫動物獲得之免疫細胞依通常之細胞融合法與公知之母細胞融合，並利用通常之篩選法，挑選單株的抗體產生細胞 (融合瘤)並培養該細胞，以製作單株抗體。
被免疫之非人類哺乳動物，例如：小鼠、大鼠、兔、羊、猴、羊、驢、牛、馬、豬。抗原製備，可使用編碼為本發明之融合多胜肽之多核苷酸，依公知方法，例如使用棒狀病毒(baculovirus)之方法(WO98/46777等)等實施。
融合瘤之製作，可依例如Milstein等人的方法(Kohler.G.and Milstein,C.,Methods Enzymol.(1981)73：3-46)等實施。當抗原之免疫原性低的情形，也可使其與白蛋白等有免疫原性之巨大分子結合並實施免疫。
作為與本發明之融合多胜肽結合之抗體之一態樣，可列舉與本發明之融合多胜肽結合之單株抗體。用以製作對於本發明之融合多胜肽有結合活性之單株抗體的免疫原，只要能製作對於本發明之融合多胜肽有結合活性之抗體即可，不特別限定。例如可將野生型之融合多胜肽或其片段胜肽、或對於該野生型之融合多胜肽施加了人為變異的多胜肽等作為免疫原。
又，抗體對於本發明之融合多胜肽之結合活性之測定，可依對於該技術領域中具有通常知識者為公知之方法進行。
又，單株抗體，也可利用DNA免疫(DNA Immunization)獲得。DNA免疫，係將以免疫動物中能表現編碼為抗原蛋白質之基因的態樣構建的載體DNA對於該免疫動物投予，並使免疫抗原在免疫動物之活體內表現，以提供免疫刺激之方法。比起投予蛋白質抗原之一般的免疫方法，DNA免疫可期待如下的優越性。
-能維持膜蛋白質之結構並提供免疫刺激
-不必將免疫抗原精製
為了以DNA免疫獲得單株抗體，首先，將編碼為本發明之融合多胜肽之多核苷酸對於免疫動物投予。編碼為本發明之融合多胜肽之多核苷酸，可依上述方法以PCR等公知方法合成。將獲得之DNA(多核苷酸)插入到適當表現載體，並且對於免疫動物投予。作為表現載體，可利用如上述任意之載體(例如：pcDNA3.1等市售之表現載體)。將載體對於活體投予之方法，也可利用一般使用的方法。例如，可將已吸附表現載體之金粒子以基因槍(gene gun)打入細胞內，以進行DNA免疫。DNA免疫後，利用本發明之融合多胜肽表現細胞進行追加免疫(boost)，係獲得單株抗體之理想方法。
以此方式將哺乳動物免疫，確認血清中之所望抗體量上升後，從哺乳動物收集免疫細胞，並施以細胞融合。理想的免疫細胞，特別可使用脾細胞。
與前述免疫細胞融合之細胞，可使用哺乳動物之骨髓瘤細胞。骨髓瘤細胞宜具有為了篩選的適當選擇標記。選擇標記，係指能於特定培養條件下生存之(或無法生存)之形質。選擇標記中，次黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶(hypoxanthine-guanine phosphoribosyl transferase)缺損(以下簡稱為HGPRT缺損)、或胸腺嘧啶激酶缺損(以下簡稱為TK缺損)等為公知。具HGPRT或TK缺損之細胞，具有次黃嘌呤-胺基喋呤-胸腺嘧啶感受性(以下簡稱為HAT感受性)。HAT感受性之細胞在HAT選擇培養基中無法合成DNA會死滅，但若與正 常細胞融合則會利用正常細胞之補救合成路徑(salvage pathway)繼續合成DNA，故能在HAT選擇培養基中增殖。
HGPRT缺損或TK缺損之細胞，各可以含6硫鳥嘌呤(thioguanine)、8氮雜鳥嘌呤(以下簡稱為8AG)、或5'溴去氧尿嘧啶之培養基選擇。於DNA中納入該等嘧啶類似物之正常細胞會死滅，另一方面，未納入該等嘧啶類似物之該等酵素缺損之細胞，能在選擇培養基中生存。其他稱為G418耐受性之選擇標記，係利用新黴素耐受性基因提供對於2-去氧鏈黴胺(streptamine)系抗生物質(慶大黴素(gentamycin類似體)之耐受性。對細胞融合為理想的各種骨髓瘤細胞為公知。
基本上可依公知方法例如Kohler與Milstein等人的方法(Kohler.G.and Milstein,C.、Methods Enzymol.(1981)73,3-46)等實施免疫細胞與骨髓瘤細胞之細胞融合。
更具體而言，可於例如細胞融合促進劑存在下於通常的營養培養液中實施前述細胞融合。融合促進劑可使用例如聚乙二醇(PEG)、仙台病毒(HVJ)等，為更提高融合效率，可視所望添加使用二甲基亞碸等輔助劑。
免疫細胞與骨髓瘤細胞之使用比例可任意設定。例如相對於骨髓瘤細胞將免疫細胞定為1至10倍較佳。前述細胞融合使用之培養液，例如適於前述骨髓瘤細胞株增殖之RPMI1640培養液、MEM培養液、此外，可使用該種細胞培養使用之通常之培養液，再者，可理想地添加胎牛血清(FCS)等血清補液。
細胞融合係將免疫細胞與骨髓瘤細胞以既定量於 前述培養液中充分混合，並且將預先加溫至約37℃之PEG溶液混合以形成所望之融合細胞(融合瘤)。細胞融合法中，可將例如平均分子量1000至6000左右之PEG以通常30至60%(w/v)之濃度添加。藉由將混合液緩慢。接著，反複實施逐次添加上述列舉之適當培養液，離心並去除上清之操作，可將對於融合瘤之生長不利的細胞融合劑等除去。
以如此方式獲得之融合瘤，可利用依細胞融合使用之骨髓瘤所擁有的選擇標記的選擇培養液予以選擇。比如有HGPRT或TK缺損之細胞，可利用HAT培養液(含次黃嘌呤、胺基喋呤、胸腺嘧啶之培養液)培養而選擇。亦即，亦即，將HAT感受性之骨髓瘤細胞用於細胞融合時，能於HAT培養液中使與正常細胞成功進行了細胞融合之細胞選擇性增殖。為了使所望之融合瘤以外之細胞(非融合細胞)死滅，可繼續進行使用上述HAT培養液之培養。具體而言，利用數日至數週之培養，可選擇目的之融合瘤。其次，以通常之極限稀釋法，實施產生所望抗體之融合瘤之篩選及單一選殖。
所望之抗體之篩選及單一選殖，可依照基於公知抗原抗體反應之篩選方法而理想地實施。例如：使抗原結合於以聚苯乙烯等製成的珠粒或市售96井之微滴定板等擔體，使其與融合瘤之培養上清反應。其次，洗滌擔體後，使其與經酵素標記的二次抗體等反應。若培養上清中含有與感作抗原反應之目的抗體時，二次抗體會經由此抗體而與擔體結合。最終利用檢測與擔體結合之二次抗體，可決定是否在培養上清中存在目的抗體。產生對於抗原有結合能力之所望抗體之融合瘤，可 利用極限稀釋法等進行轉殖。
又，除了將抗原對於人類以外之動物免疫以獲得上述融合瘤之方法以外，也可將人類淋巴球進行抗原感作而獲得目的抗體。具體而言，首先於體外將人類淋巴球以本發明之融合多胜肽進行感作。其次將經免疫感作之淋巴球與適當的融合伙伴融合。融合伙伴可利用例如人類來源且具有永久分裂能力的骨髓瘤細胞(參照日本特公平1-59878號公報)。利用此方法獲得之抗體，係對於本發明之融合多胜肽有結合活性之人類抗體。
編碼為與上述方法等取得之本發明之融合多胜肽結合之抗體的鹼基序列、胺基酸序列，可利用對於該技術領域中具有通常知識者為公知之方法獲得。
可依據與獲得之本發明之融合多胜肽結合之抗體之序列，使用對於該技術領域中具有通常知識者為公知之基因重組技術，製作結合於本發明之融合多胜肽之抗體。具體而言，依據認識本發明之融合多胜肽的抗體的序列建構編碼為抗體之多核苷酸，並將其導入到表現載體後，於適當寄主細胞使其表現即可(例如參照Co,M.S.et al.,J.Immunol.(1994)152,2968-2976；Better,M.and Horwitz,A.H.,Methods Enzymol.(1989)178,476-496；Pluckthun,A.and Skerra,A.,Methods Enzymol.(1989)178,497-515；Lamoyi,E.,Methods Enzymol.(1986)121,652-663；Rousseaux,J.et al.,Methods Enzymol.(1986)121,663-669；Bird,R.E.and Walker,B.W.,Trends Biotechnol.(1991)9,132-137)。
載體，例如M13系載體、pUC系載體、pBR322、pBluescript、pCR-Script等。又，當目的為cDNA之次轉殖、切出時，除了上述載體以外，例如：pGEM-T、pDIRECT、pT7等。當為了生產本發明之抗體而使用載體時，尤其表現載體為有用。表現載體，例如為了於大腸菌表現時，載體除了具有能於大腸菌放大之上述特徵以外，當寄主係JM109、DH5α、HB101、XL1-Blue等大腸菌時，亦不能缺少於大腸菌能以良好效率表現之啟動子，例如：lacZ啟動子(Ward等人，Nature(1989)341,544-546；FASEB J.(1992)6,2422-2427)、araB啟動子(Better等人，Science(1988)240,1041-1043)、或T7啟動子等。作為如此之載體，除了上述載體以外，可列舉pGEX-5X-1(Pharmacia製)、「QIAexpress system」(Qiagen製)、pEGFP、或pET(於此情形，寄主宜為表現T7 RNA聚合酶之BL21為較佳)等。
又，載體也可含有用於抗體分泌之信號序列。作為用以使抗體分泌之信號序列，於大腸菌之胞間質使其產生時，可使用pelB信號序列(Lei,S.P.et al J.Bacteriol.(1987)169,4379)。對於寄主細胞導入載體，例如可使用氯化鈣法、電穿孔法進行。
大腸菌以外，作為例如用以製造本發明之抗體之載體，可列舉哺乳動物來源之表現載體(例如：pcDNA3(Invitrogen公司製)或、pEF-BOS(Nucleic Acids.Res.1990,18(17),p5322)、pEF、pCDM8)、昆蟲細胞來源之表現載體(例如「Bac-to-BAC baculovirus expression system」 (GIBCO BRL製)、pBacPAK8)、植物來源之表現載體(例如pMH1、pMH2)、動物病毒來源之表現載體(例如：pHSV、pMV、pAdexLcw)、反轉錄病毒來源之表現載體(例如：pZIPneo)、酵母來源之表現載體(例如：「Pichia Expression Kit」(Invitrogen製)、pNV11、SP-Q01)、枯草菌來源之表現載體(例如：pPL608、pKTH50)。
當目的為在CHO細胞、COS細胞、NIH3T3細胞等動物細胞表現時，必須具有為了使其於細胞內表現必要啟動子，例如SV40啟動子(Mulligan等人，Nature(1979)277,108)、MMLV-LTR啟動子、EF1α啟動子(Mizushima等人，Nucleic Acids Res.(1990)18,5322)、CMV啟動子等，若具有挑選對於細胞之轉形的基因(例如能利用藥劑(新黴素、G418等)來判別之藥劑耐性基因)，則更理想。具有如此之特性之載體，例如：pMAM、pDR2、pBK-RSV、pBK-CMV、pOPRSV、pOP13等。
再者，目的為使基因安定表現且放大於細胞內之基因副本數時，可列舉對於核酸合成路徑缺損之CHO細胞導入與其為互補之具有DHFR基因之載體(例如：pSV2-dhfr(「Molecular Cloning 2nd edition」Cold Spring Harbor Laboratory Press,(1989))等)，並以胺甲喋呤(MTX)使其放大之方法，又，當為了將基因暫時表現時，可列舉將使用染色體上具有表現SV40 T抗原之基因的COS細胞以帶有SV40之複製起點的載體(pcD等)轉形之方法。作為複製開始點，也可使用多瘤病毒、腺病毒、牛乳突病毒(BPV)等來源者。再者， 為了以寄主細胞系放大基因副本數，表現載體可包括作為選擇標記之胺基糖苷轉移酶(APH)基因、胸苷激酶(TK)基因、大腸菌黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶(Ecogpt)基因、二氫葉酸還原酵素(dhfr)基因等。
藉此獲得之本發明之抗體，可從寄主細胞內或細胞外(培養基等)單離並且精製成實質上純且均勻的抗體。抗體之分離、精製，只要是使用通常之抗體精製使用之分離、精製方法即可，無任何限定。例如：適當選擇層析管柱、過濾、超過濾、鹽析、溶劑沉澱、溶劑萃取、蒸餾、免疫沈降、SDS-聚丙烯醯胺凝膠電泳、等電點電泳法、透析、再結晶等並組合，則可將抗體分離、精製。
層析，例如親和性層析、離子交換層析、疏水性層析、凝膠過濾、逆相層析、吸附層析等(Strategies for Protein Purification and Characterization：A Laboratory Course Manual.Ed Daniel R.Marshak et al.,Cold Spring Harbor Laboratory Press,1996)。該等層析，可使用液相層析例如HPLC、FPLC等液相層析進行。作為親和性層析使用之管柱，可列舉Protein A管柱、Protein G管柱。例如：作為使用了Protein A之管柱，可列舉Hyper D,POROS,Sepharose FF(GE Amersham Biosciences)等。本發明也包括使用該等精製方法高度精製而得的抗體。
獲得之抗體對於本發明之融合多胜肽之結合活性之測定，可利用對於該技術領域中具有通常知識者而言為公知的方法進行。例如：作為測定抗體之抗原結合活性之方法，可 使用ELISA(酵素結合免疫吸附檢定法)、EIA(酵素免疫測定法)、RIA(放射免疫測定法)或螢光抗體法。例如：使用酵素免疫測定法的情形，於已塗覆抗原之板上添加含抗體之試樣，例如：抗體產生細胞之培養上清或精製抗體。添加經鹼性磷解酶等酵素標記之二次抗體並溫育板，洗滌後加入對硝基苯基磷酸等酵素基質並測定吸光度，可評價抗原結合活性。
本發明中之「癌」，一般係為了代表惡性新生物而使用，其可為轉移性或非轉移性。例如：作為從消化道或皮膚等上皮組織發生之癌腫瘤之非限定例，可列舉腦腫瘤、皮膚癌、頸頭部癌、食道癌、肺癌、胃癌、十二指腸癌、乳癌、前列腺癌、子宮頸癌、子宮體癌、胰臓癌、肝臓癌、大腸癌、結腸癌、膀胱癌、及卵巢癌等。又，作為從肌肉等非上皮性組織(間質)發生之肉腫瘤之非限定例，可列舉骨肉瘤、軟骨肉瘤、橫紋肌肉瘤、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、及血管肉瘤等。再者，作為造血器官來源之血液癌之非限定例，可列舉：包括Hodgkin淋巴瘤(Hodgkin's lymphoma)及非Hodgkin淋巴瘤(non Hodgkin's lymphoma)之惡性淋巴瘤、包括急性(acute myelocytic leukemia)或慢性骨髓性白血病(chronic myelocytic leukemia)、及急性(acute lymphatic leukemia)或慢性淋巴性白血病(chronic lymphatic leukemia)之白血病，及多發性骨髓瘤(multiple myeloma)。
本發明中之癌，也包括新產生的各種病的組織腫瘤(新生物)。本發明中，新生物的特徵係形成腫瘤，且其部分形成血管。新生物，可為例如：血管瘤、神經膠瘤、畸形瘤等 良性、或例如：癌瘤、肉瘤、膠細胞瘤、星狀膠細胞瘤、神經芽細胞瘤、網膜芽瘤等惡性。
本發明中之癌之理想例，可列舉膀胱癌、腦腫瘤、頭頸部扁平上皮癌、肺癌、肺腺癌、肺扁平上皮癌、皮膚黑色瘤、、食道癌、胃癌或肝癌等。
本發明中之「癌組織」，係指包括至少一個癌細胞之組織。因此，係指例如癌組織包含癌細胞與血管之方式，為貢獻於癌細胞及包括內皮細胞之腫瘤(tumor mass)形成的所有細胞類型。本發明中，腫瘤係指腫瘤組織巢(a foci of tumor tissue)。「腫瘤」的用語，一般係用來指良性新生物或惡性新生物。
本發明係關於含有上述本發明之抗體或其抗原結合片段、或寡核苷酸之醫藥組合物。
本發明中之醫藥組合物，係指通常用於疾病之治療或預防、或檢查．診斷的藥劑。
本發明之醫藥組合物，能以該技術領域之人士公知之方法製劑化。例如：能以與水或其他藥學上可容許之液體的無菌性溶液、或懸浮液劑之注射劑之形式以非經口的使用。例如：藥理學上可容許之擔體或介質，具體而言，可考慮適當組合滅菌水或生理食鹽水、植物油、乳化劑、懸浮劑、界面活性劑、安定劑、香味劑、賦形劑、運載劑、防腐劑、黏結劑等，以一般認可的製藥實務要求的單位用量形態混合而製劑化。該等製劑中的有效成分量，可設定為可獲得指示範圍之適當容量。
用於注射之無菌組合物，可使用如注射用蒸餾水之運載劑而依通常之製劑實務配方。注射用之水溶液，例如生理食鹽水、葡萄糖或含其他輔助藥(例如D-山梨醇、D-甘露糖、D-甘露醇、氯化鈉)之等張液。也可併用適當的溶解輔助劑，例如醇(乙醇等)、多元醇(丙二醇、聚乙二醇等)、非離子性界面活性劑(聚山梨糖醇酸酯80(TM)、HCO-50等)。
油性液，例如麻油、黃豆油，溶解輔助劑可併用苯甲酸苄酯及/或苯甲醇。又，也可摻合緩衝劑(例如：磷酸鹽緩衝液及乙酸鈉緩衝液)、止痛劑(例如：鹽酸普羅卡因)、安定劑(例如：苯甲醇及酚)、抗氧化劑。製備的注射液通常充填在適當的安瓿。
本發明之醫藥組合物較佳為以非經口投予。例如可製成注射劑型、經鼻投予劑型、經肺投予劑型、經皮投予型之組合物。例如可利用靜脈內注射、肌肉內注射、腹腔內注射、皮下注射等對於全身或局部投予。
投予方法可視患者之年齡、症狀適當選擇。含抗原結合分子之醫藥組合物之投予量，例如可設定為每次體重1kg為0.0001mg至1000mg之範圍。或，可定為例如每位患者為0.001~100000mg之投予量，但本發明不一定限於該等數值。投予量及投予方法，視患者之體重、年齡、症狀等而變動，但如為該技術領域之人士，可考慮該等條件，設定適當的投予量及投予方法。
又，本發明記載之胺基酸序列所包含之胺基酸，有時會受到轉譯後修飾(例如：N末端之麩醯胺酸由於焦麩胺醯 基化而修飾為焦麩胺酸為該技術領域之人士熟知之修飾)，但如此的胺基酸為轉譯後修飾時，當然也包含在本發明記載之胺基酸序列。
本發明也係關於檢測待驗者(包括癌患者及健康正常人)之試樣中之上述本發明之融合多胜肽及編碼為該融合多胜肽之多核苷酸的方法。
待驗者之試樣中是否存在本發明之融合多胜肽，例如可利用以下方法分析、決定：使從待驗者(癌患者、可能罹癌者者、有罹癌風險者、健康正常人。惟，不限於人類。)收集的試樣(腫瘤組織、正常組織、包括癌細胞或正常細胞之各種體液(血液、血清、尿、唾液、腹水、胸水等))接觸與上述本發明之融合多胜肽結合之抗體或其抗原結合片段所為之抗原抗體反應。
此利用抗原抗體反應之抗原(亦即本發明之融合多胜肽)之檢測，可利用例如慣用的免疫分析進行。
本發明中之免疫分析，係指依據抗原(亦即本發明之融合多胜肽)和與該抗原結合之抗體或其抗原結合片段間的反應的原理，而檢測在試樣(腫瘤組織、正常組織、包括癌細胞或正常細胞之各種體液(血液、血清、尿、唾液、腹水、胸水等))中所含之本發明之融合多胜肽之方法，只要能做此檢測之方法即可，包括任何免疫分析。
本發明中之免疫分析，可以應用在例如酵素免疫測定法(第3版、石川榮治等人編集、醫學書院發行、1987年)記載般之各種方法之原理。亦即，於該各種方法，可使用為了 捕捉要檢測之試樣中之目的抗原(capturing、trapping)的和該目的抗原結合之1種以上的抗體實施。
能應用之原理，例如：一抗體固相法、二抗體液相法、二抗體固相法、三明治法、及日本特公平2-39747號公報所記載般之單一容器(one pot)法為理想例。又，作為利用了抗原抗體反應的分析法，也包括：EMIT法(Enzyme multiplied immunoassay technique)、酵素通道免疫分析(Enzyme channeling immunoassay)、酵素活性修飾物質標識免疫分析(Enzyme modulator mediated enzyme immunoassay、EMMIA)、酵素抑制物質標識免疫分析(Enzyme inhibitor immunoassay)、免疫酶分析(Immunoenzymometric assay)、酵素活性增強免疫分析(Enzyme enhanced immunoassay)及近端聯動免疫分析(Proximal linkage immunoassay)等。
本發明中，可因應試驗的目的適當選用如此之免疫分析中的任一種原理。
又，也包括使用96孔微平板所代表之有多數井之多井微滴定板、以酵素或生物素生物素標記之標記抗體的三明治法，或使用珠粒、以過氧化酶等酵素或生物素標記之標記抗體的單一容器法。
如上述，本發明中之免疫分析使用之與本發明之融合多胜肽結合之抗體或其抗原結合片段，也可以單獨或能利用與其他物質反應而帶來可檢測之信號的標記物質予以標記。
此標記物質，例如：酵素、螢光物質、化學發光物質、生物素、抗生物素蛋白或放射性同位素等，更具體而言， 可列舉過氧化酶(例如：horseradish peroxidase)、鹼性磷解酶、β-D-半乳糖苷酶、葡萄糖氧化酶、葡萄糖-6-磷酸去氫酶、醇脫氫酵素、蘋果酸脫氫酵素、青黴素酶、過氧化氫酶、葡萄糖氧化酶載脂蛋白酶，脲酶，螢光素酶或乙醯膽鹼酯解酶等酵素、異硫氰酸螢光素、藻色素(Phycobilin)蛋白質、稀土類金屬螯合物、丹磺醯氯(Dansyl Chloride)或四甲基若丹明異硫氰酸酯等螢光物質、3H、14C、125I或131I等放射性同位素、生物素、抗生物素蛋白、或化學發光物質。
此處，放射性同位素及螢光物質，能單獨地帶來可檢測的信號。
另一方面，酵素、化學發光物質、生物素及抗生物素蛋白，無法單獨地帶來可檢測之信號，所以藉由進一步與1種以上的其他物質反應，以帶來可檢測之信號。
例如：酵素的情形，至少須要基質，取決於測定酵素活性的方法(比色法、螢光法、生物發光法或化學發光法等)，使用各種基質。例如：過氧化酶的情形，使用過氧化氫作為基質。又，生物素的情形，一般至少使抗生物素蛋白或酵素修飾抗生物素蛋白反應，但不限定於此。視需要可進一步使用依存於該基質之各種發色物質。
待驗者之試樣中是否存在編碼為本發明之融合多胜肽的多核苷酸，可採用利用從例如：待驗者(癌患者、有罹癌可能性者、有罹癌風險者、健康正常人。惟，不限於人類。)收集的試樣(腫瘤組織、正常組織、包括癌細胞或正常細胞之各種體液(血液、血清、尿、唾液、腹水、胸水等))所含之mRNA、 以該mRNA作為模板而製備之cDNA、基因體DNA等之各種基因解析法，使用上述本發明之各種寡核苷酸(寡核苷酸引子對、寡核苷酸探針等)依常法進行試驗、決定。該基因解析法，可列舉例如：北方點墨法、聚合酶連鎖反應(PCR)、南方點墨法、LCR(Ligase chain reaction)、SDA(Strand displacement amplification)、NASBA(Nucleic acid sequence-based amplification)、ICAN(Isothermal and chimeric primer-initiated amplification of nucleic acids)、LAMP(Loop-mediated isothermal amplification)法、TMA法(Gen-Probe's TMA system)、微陣列、次世代定序法等。
又，該等方析法中，係利用本發明之寡核苷酸對於來自該試樣之編碼為本發明之融合多胜肽的多核苷酸的雜交，該雜交視所望所採用之嚴苛條件，例如：6M尿素、0.4% SDS、0.5 x SSC、37℃之條件或與其為同等嚴苛度的雜交條件。取決於目的，也可採用高嚴苛性的條件，例如：6M尿素、0.4% SDS、0.1 x SSC之條件、42℃。
本發明又係關於將上述待驗者(包括癌患者及健康正常人)之試樣中之上述本發明之融合多胜肽及編碼為該融合多胜肽之多核苷酸用在檢測之檢測用套組。
本發明之檢測用套組，具體而言，包括結合於上述本發明之融合多胜肽之抗體或其抗原結合片段(經上述各種之標記物質標記之抗體或其抗原結合片段)，又，可依上述各種免疫分析之實施目的包括各種檢測用試藥(酵素、基質等)及 實驗操作指示書。
本發明之檢測用套組，具體而言，包括對於來自編碼為上述本發明之融合多胜肽之多核苷酸的mRNA、以該mRNA作為模板而製備之cDNA、基因體DNA等雜交之上述本發明之各種寡核苷酸(寡核苷酸引子對、寡核苷酸探針等)，且依上述各種基因解析之實施目的可包括各種試藥(酵素、其他寡核苷酸、核酸、反應液等)及實驗操作指示書。
本發明也關於將從待驗者單離之試樣中是否存在本發明之融合多胜肽或編碼為該融合多胜肽之多核苷酸作為基準，而針對待驗者罹癌之容易性、是否罹癌、或癌有無進行進行試驗之方法。
作為本發明之方法，具體而言，使用上述檢測本發明之融合多胜肽之方法及檢測用套組進行試驗、決定是否從待驗者(癌患者、有罹癌可能性者、有罹癌風險者、健康正常人。惟，不限於人類)收集的試樣(腫瘤組織、正常組織、包括癌細胞或正常細胞之各種體液(血液、血清、尿、唾液等))中存在本發明之融合多胜肽，並且於檢測到該融合多胜肽的情形，基於罹癌容易性、已罹癌、或癌正進行的基準，針對待驗者之罹癌容意性、是否罹癌、或癌有無進行進行試驗之方法。
作為本發明之方法，可列舉：使用上述編碼為本發明之融合多胜肽之多核苷酸之檢測方法及檢測用套組來試驗、決定從待驗者(癌患者、有罹癌可能性者、有罹癌風險者、健康正常人。惟不限於人類。)收集的試樣(腫瘤組織、正常組織、包含癌細胞或正常細胞之各種體液(血液、血清、尿、唾 液等))中是否存在編碼為本發明之融合多胜肽之多核苷酸，當檢測到編碼為該融合多胜肽之多核苷酸時，依據罹癌容易性、已罹癌、或癌有無進行之基準，針對待驗者之罹癌容易性、有無罹癌、或癌有無進行進行試驗之方法。
本發明也係關於將從待驗者單離之試樣中是否存在本發明之融合多胜肽或編碼為該融合多胜肽之多核苷酸作為基準，來選擇適用含有具有FGFR抑制活性之化合物之抗癌劑(如以下說明)的患者的方法。
本發明之方法，具體而言，可列舉：使用上述檢測本發明之融合多胜肽之方法及檢測用套組來試驗、決定從待驗者(癌患者或有罹癌可能性者。不限於人類。)收集的試樣(腫瘤組織、正常組織、包含癌細胞或正常細胞之各種體液(血液、血清、尿、唾液等))是否存在本發明之融合多胜肽，當檢測到該融合多胜肽時，選擇該待驗者作為適用含有具有FGFR抑制活性之化合物之抗癌劑(如以下說明)的患者的方法。
本發明之方法，更可列舉：使用上述編碼為本發明之融合多胜肽之多核苷酸之檢測方法及檢測用套組來試驗、決定從待驗者(癌患者或有罹癌可能性者。不限於人類。)收集之試樣(腫瘤組織、正常組織、包含癌細胞或正常細胞之各種體液(血液、血清、尿、唾液等))是否存在編碼為本發明之融合多胜肽之多核苷酸，當檢測到編碼為該融合多胜肽之多核苷酸時，選擇該待驗者作為適用含有具有FGFR抑制活性之化合物之抗癌劑(如以下說明)的患者的方法。
本發明中之「FGFR抑制劑」或「具有FGFR抑制 活性之化合物」，可分別互換的使用，係對於上述本發明中之FGFR，亦即屬於受體型酪胺酸激酶家族之激酶纖維母細胞增殖因子受體(fibroblast growth factor receptor；FGFR)且屬於包括FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4之FGFR家族之1種以上之任意之FGFR之活性有抑制活性的化合物，較佳為意指具有抑制人類之FGFR之活性的活性的化合物，更佳為對於由序列編號6或7記載之胺基酸序列構成之人類FGFR3(cDNA序列：分別為序列編號10、11/基因庫存取編號：分別為NM_001163213.1、NM_000142.4)之活性有抑制活性之化合物。
本發明中之FGFR抑制劑，只要是此化合物具有抑制FGFR之活性的活性即可，包括任意之FGFR抑制劑。
具體而言，包括具有以下作用機轉的任意化合物、抗體、核酸醫藥(siRNA、反義核酸、核糖酶等)：(1)FGFR之激酶活性之抑制、(2)FGFR、TACC3、及BAIAP2L1之間之二元體之形成(二元體化)之抑制、(3)經由FGFR之信號傳遞(MAPK路徑、PI3K/AKT路徑)之抑制(例如：MEK抑制劑、RAF抑制劑、ERK抑制劑、PI3K抑制劑、mTOR抑制劑、AKT抑制劑、PDK抑制劑、S6K抑制劑等)、(4)FGFR之表現量之抑制(例如：siRNA、HSP90抑制劑等)。
本發明中之就FGFR抑制劑而言被包含之具有抑制FGFR活性之活性的抗體，包括以下的研發碼識別的抗體(RG7444、FP-1039、AV370、PRO-001)。
本發明中之就FGFR抑制劑被包含之具有抑制FGFR活性的活性的低分子化合物，例如：(1)以下的專利文獻或 非專利文獻所揭示之化合物(Cancer Research,2012,72：2045-2056；J.Med.Chem.,2011,54：7066-7083；國際公開WO2011/016528號)、(2)以下列一般名稱或研發碼識別之化合物：AZD-4547(後述表2-1之化合物C)、BGJ-398(後述表2-2之化合物D)、LY-2874455、cediranib(AZD2171；後述表2-2之化合物E)、PD173074(後述表2-1之化合物B)、瑞格非尼(regorafenib)、普納替尼(ponatinib)、orantinib、nintedanib、馬塞替尼(masitinib)、樂伐替尼(lenvatinib)、多維替尼(dovitinib)(TKI258；後述表2-2之化合物F)、brivanib、volasertib、golvatinib、ENMD-2076、E-3810、XL-999、XL-228、ARQ087、Tivozanib、motesanib、瑞格非尼(regorafenib)、及(3)例如包括以下所示之化合物，但不限定於此。
(式中，R1~R4各自獨立地表示以下的基；R1，表示氫、羥基、鹵素、氰基、硝基、C1-4鹵烷基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7環烷基、C6-10芳基C1-4烷基、-OR5、-NR6R7、-(CR8R9)nZ1、-C(O)NR12R13、-SR14、-SOR15、-SO2R16、-NR17SO2R18、COOH、可經獨立選自P群之一或複 數基取代之C6-10芳基、可經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基、-COR19、-COOR20、-OC(O)R21、-NR22C(O)R23、-NR24C(S)R25、-C(S)NR26R27、-SO2NR28R29、-OSO2R30、-SO3R31或-Si(R32)3；R2，表示氫、羥基、鹵素、氰基、硝基、C1-4鹵烷基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7環烷基、C6-10芳基C1-4烷基、-OR5、-NR6R7、-(CR8R9)nZ1、-C(O)NR12R13、-SR14、-SOR15、-SO2R16、-NR17SO2R18、COOH、可經獨立選自P群之一或複數基取代之C6-10芳基、可經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基、-COR19、-COOR20、-OC(O)R21、-NR22C(O)R23、-NR24C(S)R25、-C(S)NR26R27、-SO2NR28R29、-OSO2R30、-SO3R31或-Si(R32)3；或R1及R2與此等所鍵結之原子成為一體並形成3~10員雜環基或5~10員雜芳基，且此處該雜環基或該雜芳基也可經鹵素取代；R3，表示氫、C1-5烷基、C6-10芳基C1-6烷基或C1-4鹵烷基；R4，表示氫、鹵素、C1-3烷基、C1-4鹵烷基、羥基、氰基、硝基、C1-4烷氧基、-(CH2)nZ1、-NR6R7、-OR5、-C(O)NR12R13、-SR14、-SOR15、-SO2R16、NR17SO2R18、COOH、-COR19、-COOR20、-OC(O)R21、-NR22C(O)R23、-NR24C(S)R25、-C(S)NR26R27、-SO2NR28R29、-OSO2R30-SO3R31或-Si(R32)3；A，為5~10員雜芳基環或C6-10芳基環；R5，表示C1-5烷基、C3-7環烷基、C3-7環烷基C1-3烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、C1-3烷氧基C1-4烷基、C1-3 烷氧基C1-4烷氧基C1-4烷基、C1-4胺基烷基、C1-4烷胺基C1-4烷基、二(C1-4烷基)胺基C1-4烷基、C6-10芳基、C6-10芳基C1-3烷基、可經獨立選自Q群之一或複數基取代之3~10員雜環基C1-3烷基、3~10員雜環基、5~10員雜芳基、5~10員雜芳基C1-3烷基、C1-6單羥基烷基、C1-6二羥基烷基或C1-6三羥基烷基；R6及R7可相同也可不同，各表示氫、C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、C1-3烷氧基C1-4烷基、C6-10芳基C1-3烷基、3~10員雜環基C1-3烷基、5~10員雜芳基C1-3烷基、C1-6單羥基烷基、C1-6二羥基烷基、C1-6三羥基烷基、3~10員雜環基、C1-4胺基烷基、C1-4烷胺基C1-4烷基、二(C1-4烷基)胺基C1-4烷基或氰基(C1-3烷基)，或R6及R7與此等所鍵結之氮原子一起形成3~10員雜環基或5~10員雜芳基；n，表示1~3；R8及R9可相同也可不同，各表示氫、C1-4烷基或鹵素，或R8及R9也可與此等所鍵結之碳原子一起形成脂環式環；Z1，表示氫、NR10R11、-OH、或可經獨立選自Q群之一或複數基取代之3~10員雜環基或5~10員雜芳基；R10及R11可相同也可不同，各表示C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、C1-3烷氧基C1-4烷基、氰基(C1-3烷基)或C1-3烷基磺醯基C1-4烷基，或R10及R11也可與此等所鍵結之氮原子一起形成3~10員雜環基或5~10員雜芳基；R12及R13可相同也可不同，各表示氫、C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、C1-3烷氧基C1-4烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基、3~10員雜環基、C6-10芳基C1-4烷基、3~10員 雜環基C1-3烷基、5~10員雜芳基C1-3烷基、氰基(C1-3烷基)、C1-3烷基磺醯基C1-4烷基、3~10員脂環式環、5~10員雜芳基或3~10員雜環基，或R12及R13也可與此等所鍵結之氮原子一起形成可經獨立選自Q群之一或複數基取代之3~10員雜環基或5~10員雜芳基；R14，表示C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、可經獨立選自P群之一或複數基取代之C6-10芳基、或可經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R15，表示C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、可經獨立選自P群之一或複數基取代之C6-10芳基、或可經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R16，表示C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、可經獨立選自P群之一或複數基取代之C6-10芳基、或可經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R17，表示氫或C1-4烷基；R18，表示C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、可經獨立選自P群之一或複數基取代之C6-10芳基、或可經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R19，表示氫、C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、或可經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳 基或3~10員雜環基；R20，表示C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R21，表示C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R22，表示氫、C1-4烷基或C1-4鹵烷基；R23，表示氫、C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R24，表示氫、C1-4烷基或C1-4鹵烷基；R25，表示C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R26及R27可相同也可不同，各表示氫、C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、C1-3烷氧基C1-4烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基、3~10員雜環基、C6-10芳基C1-4烷基、3~10員雜環基C1-3烷基、5~10員雜芳基C1-3烷基、氰基(C1-3烷基)、C1-3烷基磺醯基C1-4烷基、或3~10員脂環式環，或R26及R27也可與此等所鍵結之氮原子一起形成3~10員雜環基或5~10員雜芳基；R28及R29可相同也可不同，各表示氫、C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、C1-3烷氧基C1-4烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基、3~10員雜環基、C6-10芳基C1-4烷基、3~10員雜環基C1-3烷基、5~10員雜芳基C1-3烷基、氰基(C1-3烷基)、C1-3烷基磺醯基C1-4烷基、或3~10員脂環式環，或R28及R29也可與此等所鍵結之氮原子一起形成3~10員雜環基或5~10員 雜芳基；R30，表示C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R31，表示C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R32，表示C1-4烷基或C6-10芳基；
<P群>
鹵素、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、-OH、C1-3烷氧基、C1-3鹵烷氧基、3~10員雜環基胺基、-SO2R16、-CN、-NO2、及3~10員雜環基。
<Q群>
鹵素、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、-OH、C1-3烷氧基、C1-6單羥基烷基、C1-6二羥基烷基或C1-6三羥基烷基、3~10員雜環基胺、-SO2R16、-CN、-NO2、C3-7環烷基、-COR19、及也可經C1-4烷基取代之3~10員雜環基。
[化5]
本說明書中，「烷基」係從脂肪族烴去除任意的1個氫原子而衍生的1價基，具有骨架中不含雜原子或不飽和碳 -碳鍵且含有氫及碳原子之烴基(hydrocarbyl)或烴基結構之次集合。烷基包括直鏈狀及分枝鏈狀之結構。作為烷基，較佳為例如碳原子數1~6(C1-6，以下「Cp-q」係指碳原子數為p~q個。)之烷基、C1-5烷基、C1-4烷基、C1-3烷基等。
作為烷基，具體而言，例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、第二丁基、第三丁基、戊基、異戊基、2,3-二甲基丙基、3,3-二甲基丁基、己基等。
本說明書中之「烯基」，為具有至少1個雙鍵(2個相鄰的SP2碳原子)的1價烴基，包含直鏈狀或分枝鏈狀者。藉由雙鍵及取代部分(存在時)之配置，雙鍵之幾何學形態，可採Entgegen(E)或Zusammen(Z)、順式或反式配置。烯基較佳為例：C2-6烯基等。
烯基具體而言例如：乙烯基、烯丙基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基(包含順式、反式)、3-丁烯基、戊烯基、己烯基等。
本說明書中「炔基」，係具有至少1個參鍵(2個相鄰的SP碳原子)之1價基，包含直鏈狀或分支鏈狀者。較佳為例如C2-6炔基。
炔基具體而言例如：乙炔基、1-丙炔基、炔丙基、3-丁炔基、戊炔基、己炔基等。
烯基或炔基，可各具有1個或2個以上之雙鍵或參鍵。
本說明書中「環烷基」，意指飽和或部分飽和的環狀1價脂肪族烴基，包含單環、雙環、螺旋環。環烷基較佳 為例：C3-7環烷基等。環烷基，具體而言，例如：環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基等。
本說明書中之「環烷基烷基」，意指將前述定義「烷基」中之任意氫原子取代為前述定義「環烷基」後之基。環烷基烷基，較佳為例：C3-7環烷基C1-3烷基等，具體而言，例如：環丙基甲基、環丙基乙基等。
本說明書中之「雜原子」，意指氮原子(N)、氧原子(O)或硫原子(S)。
本說明書中之「鹵素」，意指氟原子、氯原子、溴原子或碘原子。
本說明書中之「鹵烷基」，意指相同或不同，較佳為1~9個，更佳為1~5個前述「鹵素原子」鍵結於前述「烷基」而成的基。
具體而言，例如：氯甲基、二氯甲基、三氯甲基、氟甲基、二氟甲基、全氟烷基(例如三氟甲基、-CF2CF3等)、2,2,2-三氟乙基等。
本說明書中之「烷氧基」，意指鍵結有前述定義之「烷基」的氧基，較佳為例：C1-4烷氧基、C1-3烷氧基等。烷氧基，具體而言例如：甲氧基、乙氧基、1-丙氧基、2-丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、第二丁氧基、第三丁氧基等。
本說明書中之「鹵烷氧基」，意指相同或不同，較佳為1~9個，更佳為1~5個前述「鹵素原子」鍵結於前述「烷氧基」而成之基。
具體而言，例如：氯甲氧基、三氯甲氧基、三氟甲氧基等。
本說明書中之「芳基」，意指1價芳香族烴環，較佳為例C6-10芳基等。芳基，具體而言例如：苯基、萘基(例如、1-萘基、2-萘基)等。
本說明書中之「脂環式環」，意指1價非芳香族烴環。脂環式環，在環中也可具不飽和鍵，也可為具有2個以上的環的多環性基。又，構成環之碳原子也可氧化形成羰基。構成脂環式環之原子之數，較佳為3~10(3~10員脂環式環)。脂環式環，例如：環烷基環、環烯基環、環炔基環等。
本說明書中之「雜芳基」，意指構成環之原子中，較佳為含1~5個雜原子之芳香族性之1價雜環基。雜芳基，也可為部分飽和，可為單環也可為縮合環(例如與苯環或單環雜芳基環縮合之2環式雜芳基)。構成環之原子之數較佳為5~10(5~10員雜芳基)。
雜芳基具體而言，例如：呋喃基、噻吩基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、異噻唑基、噁唑基、異噁唑基、噁二唑基、噻二唑基、三唑基、四唑基、吡啶基、嘧啶基、嗒嗪基、吡嗪基、三嗪基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并噻二唑基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、苯并噁二唑基、苯并咪唑基、吲哚基、異吲哚基、氮雜吲哚基、吲唑基、喹啉基、異喹啉基、噌啉基、喹唑啉基、喹噁啉基、胡椒環(benzodioxole)基、吲哚啶基、咪唑并吡啶基等。
本說明書中之「雜環基」，意指構成環之原子中較佳為含有1~5個雜原子之非芳香族1價雜環基。雜環基，於環中也可具有雙鍵、參鍵，碳原子也可氧化而形成羰基，可 為單環也可為縮合環。構成環之原子之數，較佳為3~10(3~10員雜環基)。
雜環基，具體而言，例如：環氧丙烷基、二氫呋喃基、四氫呋喃基、二氫吡喃基、四氫吡喃基、四氫吡啶基、嗎啉基、硫嗎啉基、吡咯啶基、哌啶基、哌嗪基、吡唑啶基、咪唑啉基、咪唑啉啶基、噁唑啉啶基、異噁唑啉啶基、噻唑啉啶基、異噻唑啉啶基、噻二唑啉啶基、三亞甲亞胺基、噁唑烷酮基、苯并二噁烷基、苯并噁唑基、二氧戊環基(dioxolanyl)、二噁烷基等。
本說明書中之「芳基烷基」，係指將前述定義「烷基」中之任意氫原子取代為前述定義「芳基」後之基。芳基烷基，較佳為例C6-10芳基C1-4烷基、C6-10芳基C1-3烷基等。具體而言，例如苄基、苯乙基、萘甲基等。
本說明書中之「雜芳基烷基」，係指將前述定義「烷基」中之任意氫原子取代為前述定義「雜芳基」後之基。雜芳基烷基，較佳為例5~10員雜芳基C1-3烷基等，具體而言例如：吡咯甲基、咪唑甲基、噻吩甲基、吡啶基甲基、嘧啶基甲基、喹啉甲基、吡啶基乙基等。
本說明書中之「雜環基烷基」，係指將前述定義「烷基」中之任意氫原子取代為前述定義「雜環基」後之基。雜環基烷基，較佳為例3~10員雜環基C1-3烷基等，具體而言例如：嗎啉基甲基、嗎啉基乙基、硫嗎啉基甲基、吡咯啶基甲基、哌啶基甲基、哌嗪基甲基、哌嗪基乙基、環丙烷基甲基等。
本說明書中之「單羥基烷基」，意指前述定義「烷基」中之任意1個氫原子取代為1個羥基之基。單羥基烷基，較佳為例C1-6單羥基烷基、C2-6單羥基烷基等，具體而言，例如：羥基甲基、1-羥基乙基、2-羥基乙基等。
本說明書中之「二羥基烷基」，意指前述定義「烷基」中之任意2個氫原子取代為2個羥基之基。二羥基烷基，較佳為例C1-6二羥基烷基、C2-6二羥基烷基等，具體而言，例如1,2-二羥基乙基、1,2-二羥基丙基、1,3-二羥基丙基等。
本說明書中之「三羥基烷基」，意指前述定義「烷基」中之任意3個氫原子取代為3個羥基之基。三羥基烷基，較佳為例C1-6三羥基烷基、C2-6三羥基烷基等。
本說明書中之「烷氧基烷基」，意指將前述定義「烷基」中之任意氫原子取代為前述定義之「烷氧基」之基。烷氧基烷基，較佳為例C1-3烷氧基C1-4烷基、C1-3烷氧基C2-4烷基等，具體而言例如甲氧基乙基等。
本說明書中之「烷氧基烷氧基烷基」，意指將前述定義「烷氧基烷基」中之末端烷基中之任意氫原子取代為前述定義之「烷氧基」之基。烷氧基烷氧基烷基，較佳為例C1-3烷氧基C1-4烷氧基C1-4烷基、C1-3烷氧基C2-4烷氧基C2-4烷基等。
本說明書中之「胺基烷基」，意指將前述定義「烷基」中之任意氫原子取代為胺基之基。胺基烷基，較佳為例C1-4胺基烷基、C2-4胺基烷基等。
本說明書中之「烷基胺基」，意指鍵結有1個前 述定義之「烷基」的胺基。烷基胺基，較佳為例C1-4烷基胺基等。
本說明書中之「二烷基胺基」，意指鍵結有2個前述定義之「烷基」的胺基，該烷基可為相同或不同。二烷基胺基，較佳為例二(C1-4烷基)胺基等。
本說明書中之「烷基胺基烷基」，意指將前述定義之「烷基」中之任意氫原子取代為前述定義之「烷基胺基」之基。烷基胺基烷基較佳為例C1-4烷基胺基C1-4烷基、C1-4烷基胺基C2-4烷基等。
本說明書中之「二烷基胺基烷基」，意指將前述定義之「烷基」中之任意氫原子取代為前述定義之「二烷基胺基」之基。二烷基胺基烷基，較佳為例二(C1-4烷基)胺基C1-4烷基、二(C1-4烷基)胺基C2-4烷基等。
本說明書中之「雜環基胺基」，意指鍵結有1個前述定義之「雜環基」的胺基。雜環基胺基，較佳為3~10員雜環基胺基等。
本說明書中之「氰基烷基」，意指將前述定義之「烷基」中之任意氫原子取代為氰基之基。氰基烷基，較佳為例氰基(C1-3烷基)等。
本說明書中之「烷基磺醯基」，意指鍵結有前述定義之「烷基」的磺醯基(即，烷基-SO2-)。烷基磺醯基，較佳為例C1-3烷基磺醯基等，具體而言：甲基磺醯基、乙基磺醯基、正丙基磺醯基、異丙基磺醯基等。
本說明書中之「烷基磺醯基烷基」，意指將前述 定義「烷基」中之任意氫原子取代為前述定義之「烷基磺醯基」之基。烷基磺醯基烷基，較佳為例C1-3烷基磺醯基C1-4烷基、C1-3烷基磺醯基C2-4烷基等。
作為前述式(I)表示之化合物，理想者如下。
前述R1，較佳為氫、羥基、鹵素、氰基、硝基、C1-4鹵烷基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7環烷基、C6-10芳基C1-4烷基、-OR5、-NR6R7、-(CR8R9)nZ1、-C(O)NR12R13、-SR14、-SOR15、-SO2R16、-NR17SO2R18、COOH、可經獨立選自P群之一或複數基取代之C6-10芳基、可經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基、-COR19、-COOR20、-OC(O)R21、-NR22C(O)R23、-NR24C(S)R25、-C(S)NR26R27、-SO2NR28R29、-OSO2R30、-SO3R31或-Si(R32)3。
前述R1，更佳為氫、羥基、鹵素、氰基、C1-4鹵烷基、C1-6烷基、C2-6炔基、C3-7環烷基、C6-10芳基C1-4烷基、-OR5、-NR6R7、-(CR8R9)nZ1、-C(O)NR12R13、-SR14、-SO2R16、-NR17SO2R18、COOH、可經獨立選自P群之一或複數基取代之C6-10芳基、或可經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基。此處，作為5~10員雜芳基，具體而言宜為咪唑基、噻吩基、吡啶基、嗒嗪基、吡唑基，作為3~10員雜環基，具體而言尤佳為嗎啉基、四氫吡啶基、哌啶基尤佳。
前述R2，較佳為氫、羥基、鹵素、氰基、硝基、C1-4鹵烷基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7環烷基、C6-10芳基C1-4烷基、-OR5、-NR6R7、-(CR8R9)nZ1、-C(O)NR12R13、-SR14、-SOR15、-SO2R16、-NR17SO2R18、COOH、可經獨立選 自P群之一或複數基取代之C6-10芳基、可經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基、-COR19、-COOR20、-OC(O)R21、-NR22C(O)R23、-NR24C(S)R25、-C(S)NR26R27、-SO2NR28R29、-OSO2R30、-SO3R31或-Si(R32)3。
前述R2，更佳為氫、鹵素、C1-4鹵烷基、C1-6烷基、-OR5、可經獨立選自P群之一或複數基取代之C6-10芳基、可經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基。此處，作為5~10員雜芳基，具體而言，吡啶基尤佳。
前述R1及前述R2，較佳為能與此等所鍵結之原子一起形成3~10員雜環基或5~10員雜芳基。此處，該雜環基或該雜芳基，可將鹵素原子作為取代基。作為與所鍵結之原子一起形成之3~10員雜環基，具體而言宜為二氧戊環基、二噁烷基尤佳。
前述R3，較佳為氫、C1-5烷基、C6-10芳基C1-6烷基或C1-4鹵烷基，更佳為氫、C1-4烷基、C6-10芳基C1-4烷基或C1-3全氟烷基，尤佳為C1烷基。
前述R4，較佳為氫、鹵素、C1-3烷基、C1-4鹵烷基、羥基、氰基、硝基、C1-4烷氧基、-(CH2)nZ1、-NR6R7、-OR5、-C(O)NR12R13、-SR14、-SOR15、-SO2R16、NR17SO2R18、COOH、-COR19、-COOR20、-OC(O)R21、-NR22C(O)R23、-NR24C(S)R25、-C(S)NR26R27、-SO2NR28R29、-OSO2R30-SO3R31或-Si(R32)3。
前述R4，更佳為氫、鹵素、C1-3烷基、C1-3全氟烷基、氰基、甲烷磺醯基、羥基、烷氧基或胺基，尤佳為氫、或鹵素。
作為前述A環，較佳為5~10員雜芳基環或C6-10芳基環，更佳為苯、吲哚、氮雜吲哚、苯并呋喃、苯并噻吩、苯并噻唑、喹啉或吡咯，尤佳為吲哚或吡咯。
前述R5，較佳為C1-5烷基、C3-7環烷基、C3-7環烷基C1-3烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、C1-3烷氧基C1-4烷基、C1-3烷氧基C1-4烷氧基C1-4烷基、C1-4胺基烷基、C1-4烷胺基C1-4烷基、二(C1-4烷基)胺基C1-4烷基、C6-10芳基、C6-10芳基C1-3烷基、可經獨立選自Q群之一或複數基取代之3~10員雜環基C1-3烷基、3~10員雜環基、5~10員雜芳基、5~10員雜芳基C1-3烷基、C1-6單羥基烷基、C1-6二羥基烷基或C1-6三羥基烷基。
前述R5，更佳為C1-5烷基、C3-7環烷基C1-3烷基、C1-4鹵烷基、C1-3烷氧基C1-4烷基、C6-10芳基、C6-10芳基C1-3烷基、可經獨立選自Q群之一或複數基取代之3~10員雜環基C1-3烷基、3~10員雜環基。此處，作為3~10員雜環基烷基，具體而言宜為哌嗪基乙基、環氧丙烷基甲基、嗎啉基乙基特佳，作為3~10員雜環基，具體而言，環氧丙烷基、四氫吡喃基尤佳。
前述R6及前述R7，較佳為相同或不同，各自為氫、C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、C1-3烷氧基C2-4烷基、C6-10芳基C1-3烷基、3~10員雜環基C1-3烷基、5~10員雜芳基C1-3烷基、C1-6單羥基烷基、C1-6二羥基烷基、C1-6三羥基烷基、3~10員雜環基、C1-4胺基烷基、C1-4烷胺基C1-4烷基、二(C1-4烷基)胺基C1-4烷基、或氰基(C1-3烷基)。
前述R6及前述R7，更佳為各自獨立地，為氫、C1-3烷氧基C1-4烷基、3~10員雜環基C1-3烷基、5~10員雜芳基C1-3烷基、或C1-6二羥基烷基。此處，作為3~10員雜環基烷基，具體而言，宜為嗎啉基乙基特佳，此處，作為5~10員雜芳基烷基，吡啶基乙基尤佳。
或、前述R6及前述R7，較佳為能與此等所鍵結之氮原子一起形成3~10員雜環基或5~10員雜芳基。
前述n表示1~3之整數，較佳為n為1。
前述R8及前述R9，較佳為相同或不同，各為氫、C1-4烷基或鹵素，更佳為氫。
或，前述R8及前述R9，較佳為能與此等所鍵結之碳原子一起形成脂環式環。
前述Z1，較佳為氫、NR10R11、-OH、或可經獨立選自Q群之一或複數基取代之3~10員雜環基或5~10員雜芳基，更佳為NR10R11或-OH、或可經獨立選自Q群之一或複數基取代之3~10員雜環基。此處，作為3~10員雜環基，具體而言宜為吡咯啶基、哌嗪基、哌啶基、嗎啉基尤佳。
前述R10及前述R11，較佳為相同或不同，各為C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、C1-3烷氧基C1-4烷基、氰基(C1-3烷基)或C1-3烷基磺醯基C1-4烷基，更佳為C1-4烷基、C2-6炔基、或C1-3烷氧基C2-4烷基。
或，前述R10及前述R11，較佳為能與此等所鍵結之氮原子一起形成3~10員雜環基或5~10員雜芳基。
前述R12及前述R13，較佳為相同或不同，各為氫、 C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、C1-3烷氧基C1-4烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基、3~10員雜環基、C6-10芳基C1-4烷基、3~10員雜環基C1-3烷基、5~10員雜芳基C1-3烷基、氰基(C1-3烷基)、C1-3烷基磺醯基C1-4烷基、或3~10員脂環式環，更佳為氫、C1-4烷基、C1-4鹵烷基。
或，前述R12及前述R13，較佳為能與此等所鍵結之氮原子一起形成可經獨立選自Q群之一或複數基取代之3~10員雜環基或5~10員雜芳基。特佳為3~10員雜環基烷基，具體而言，哌嗪基、嗎啉基、吡咯啶基、哌啶基更理想。
前述R14，較佳為C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、可經獨立選自P群之一或複數基取代之C6-10芳基、或可經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基，更佳為C1-4烷基、C1-4鹵烷基。
前述R15，較佳為C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、可經獨立選自P群之一或複數基取代之C6-10芳基、或可經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基。
前述R16，較佳為C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、可經獨立選自P群之一或複數基取代之C6-10芳基、或可經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基，更佳為C1-4烷基。
前述R17，較佳為氫或C1-4烷基，更佳為氫。
前述R18，較佳為C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、可經獨立選自P群之一或複數基取代之C6-10芳 基、或可經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基，更佳為C1-4烷基。
前述R19，較佳為氫、C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、或可經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基，更佳為氫、或可經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基。此處，作為3~10員雜環基，具體而言更佳為哌嗪基、嗎啉基、吡咯啶基、哌啶基。
前述R20，較佳為C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基或3~10員雜環基。
前述R21，較佳為C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基或3~10員雜環基。
前述R22，較佳為氫、C1-4烷基或C1-4鹵烷基。
前述R23，較佳為氫、C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基或3~10員雜環基。
前述R24，較佳為氫、C1-4烷基或C1-4鹵烷基。
前述R25，較佳為C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基或3~10員雜環基。
前述R26及前述R27，較佳為相同或不同，各為氫、C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、C1-3烷氧基C1-4烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基、3~10員雜環基、C6-10芳基C1-4烷基、3~10員雜環基C1-3烷基、5~10員雜芳基C1-3烷基、氰基(C1-3烷基)、C1-3烷基磺醯基C1-4烷基、或3~10員脂環式環。
或，前述R26及前述R27，較佳為能與此等所鍵結之氮原子一起形成3~10員雜環基或5~10員雜芳基。
前述R28及前述R29，較佳為相同或不同，各為氫、C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、C1-3烷氧基C1-4烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基、3~10員雜環基、C6-10芳基C1-4烷基、3~10員雜環基C1-3烷基、5~10員雜芳基C1-3烷基、氰基(C1-3烷基)、C1-3烷基磺醯基C1-4烷基、或3~10員脂環式環。
或、前述R28及前述R29，較佳為能與此等所鍵結之氮原子一起形成3~10員雜環基或5~10員雜芳基。
前述R30，較佳為C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基或3~10員雜環基。
前述R31，較佳為C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基或3~10員雜環基。
前述R32，較佳為C1-4烷基或C6-10芳基。
作為前述P群所含之取代基，較佳為鹵素、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、-OH、C1-3烷氧基、C1-3鹵烷氧基、3~10員雜環基胺基、-SO2R、-CN、-NO2、或3~10員雜環基，更佳為鹵素、C1-4鹵烷基、C1-3烷氧基、C1-3鹵烷氧基、或3~10員雜環基。此處，作為3~10員雜環基，具體而言嗎啉基尤佳。
作為前述Q群所含之取代基，較佳為鹵素、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、-OH、C1-3烷氧基、C1-6單羥基烷基、C1-6二羥基烷基或C1-6三羥基烷基、3~10員雜環基胺基、-SO2R、-CN、-NO2、C3-7環烷基、-COR19、或也可經C1-4烷基取代之 3~10員雜環基，更佳為鹵素、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、-OH、C1-3烷氧基、C1-6單羥基烷基、-SO2R16、C3-7環烷基、-COR19、或也可經C1-4烷基取代之3~10員雜環基。此處，作為3~10員雜環基，具體而言，哌嗪基、哌啶基、嗎啉基較理想。
具體而言，例如以下的化合物。
(1)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吲哚-2-基)-甲酮；(2)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(6-吡咯啶-1-基甲基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(3)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[6-(4-羥基-哌啶-1-基甲基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(4)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-2-基)-甲酮；(5)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(6-哌嗪-1-基甲基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(6)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[6-(2-嗎啉-4-基-乙氧基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(7)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[6-(四氫-吡喃-4-基氧基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(8)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(4-氯-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(9)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(5-溴-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(10)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4- 基]-(4-碘-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(11)2-[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-羰基]-1H-吲哚-5-甲腈；(12)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(6-溴-5-氟-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(13)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(5-乙炔基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(14)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[6-(2-氟-苯基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(15)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[6-(3-氟-苯基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(16)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[6-(4-氟-苯基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(17)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[6-(2-氯-苯基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(18)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[6-(3-氯-苯基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(19)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[6-(4-氯-苯基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(20)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[6-(2-三氟甲基-苯基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(21)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[6-(3-三氟甲基-苯基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(22)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4- 基]-[6-(4-三氟甲基-苯基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(23)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(4-溴-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(24)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[6-(3-氟-吡啶-2-基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(25)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(6-甲基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(26)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[5-(4,4-二氟-哌啶-1-羰基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(27)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[5-(3,3-二氟-哌啶-1-羰基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(28)2-[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-羰基]-1H-吲哚-5-羧酸(2,2,2-三氟-乙基)-醯胺；(29)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[6-(5-三氟甲基-吡啶-2-基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(30)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[6-(6-三氟甲基-吡啶-2-基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(31)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[6-(5-氯-吡啶-2-基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(32)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[6-(4-甲基-吡啶-2-基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(33)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[6-(3-氯-4-氟-苯基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(34)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4- 基]-[6-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(35)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[6-(4-三氟甲基-吡啶-2-基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(36)[5-胺基-1-(6-氟-2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吲哚-2-基)-甲酮；(37)2-[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-羰基]-1H-吲哚-6-羧酸；(38)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(6-羥基甲基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(39)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-{6-[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-乙氧基]-1H-吲哚-2-基}-甲酮；(40)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[6-(3-甲基-氧雜環丁烷-3-基甲氧基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(41)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[6-(3-氟-哌啶-1-基甲基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(42)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(6-{[雙-(2-甲氧基-乙基)-胺基]-甲基}-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(43)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-{6-[(甲基-丙-2-炔基-胺基)-甲基]-1H-吲哚-2-基}-甲酮；(44)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[6-(3,3-二氟-吡咯啶-1-基甲基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(45)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[6-(2,5-二甲基-吡咯啶-1-基甲基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮； (46)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[6-(3,3-二氟-哌啶-1-基甲基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(47)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[6-((S)-3-甲基-嗎啉-4-基甲基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(48)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(6-溴-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(49)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(5-碘-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(50)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)-甲酮；(51)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(5-溴-6-三氟甲基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(52)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(6-碘-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(53)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(4-甲基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(54)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(4-異丙基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(55)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[5-(2-氟-苯基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(56)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(5-苄基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(57)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[5-(2-三氟甲基-苯基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮； (58)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[5-(3-氟-苯基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(59)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[5-(3-三氟甲基-苯基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(60)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(4-乙炔基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(61)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(5H-[1,3]二氧雜環戊烯并[4,5-f]吲哚-6-基)-甲酮；(62)[5-胺基-1-(7-氟-2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吲哚-2-基)-甲酮；(63)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[5-(4-三氟甲基-苯基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(64)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(5-丁氧基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(65)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[5-(1-甲基-哌啶-4-基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(66)N-{2-[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-羰基]-1H-吲哚-6-基}-甲磺醯胺；(67)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[6-(6-嗎啉-4-基-吡啶-3-基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(68)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(6-丁基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(69)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮； (70)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[6-(5-甲氧基-吡啶-3-基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(71)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[6-(2-甲氧基-吡啶-3-基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(72)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(6-環丙基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(73)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[6-(2-甲氧基-苯基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(74)5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(6-苯基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(75)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[6-(5-甲烷磺醯基-吡啶-3-基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(76)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(6-異丙基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(77)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(6-吡啶-2-基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(78)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(5-環丙基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(79)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(6-嗒嗪-3-基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(80)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(5-異丙氧基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(81)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[5-(2-甲氧基-乙氧基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮； (82)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(5-環丙基甲氧基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(83)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(2,2-二氟-5H-[1,3]二氧雜環戊烯并[4,5-f]吲哚-6-基)-甲酮；(84)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[6-(3-氯-吡啶-2-基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(85)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[6-(5-氟-吡啶-2-基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(86)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[6-(6-嗎啉-4-基-嗒嗪-3-基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(87)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(5-氯-6-環丙基甲氧基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(88)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[6-(2,4-二氟-苯基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(89)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(6-嗒嗪-4-基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(90)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(3-氟-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(91)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[5-(1-異丙基-哌啶-4-基)-6-三氟甲基-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(92)2-[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-羰基]-1H-吲哚-6-甲腈； (93)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[5-(1,2,3,6-四氫-吡啶-4-基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(94)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(5-哌啶-4-基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(95)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[5-((R)-3-氟-吡咯啶-1-基甲基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(96)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(6-氟-5-哌啶-4-基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(97)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[6-氟-5-(1-甲基-哌啶-4-基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(98)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[5-(1-異丙基-哌啶-4-基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(99)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[6-氟-5-(1-異丙基-哌啶-4-基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(100)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(6-吡啶-3-基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(101)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[5-(6-嗎啉-4-基-吡啶-3-基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(102)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(5-吡啶-3-基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(103)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[5-(6-哌嗪-1-基-吡啶-3-基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(104)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[5-(6-羥基-吡啶-3-基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮； (105)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[6-氟-5-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(106)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(6-氟-5-吡咯啶-1-基甲基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(107)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[6-(1-甲基-哌啶-4-基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(108)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[6-(4-嗎啉-4-基-苯基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(109)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[6-(3,4,5,6-四氫-2H-[1,2']聯吡啶-5'-基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(110)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[6-(6-哌嗪-1-基-吡啶-3-基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(111)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[5-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(112)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[5-((S)-3-甲基-嗎啉-4-基甲基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(113)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[6-((R)-3-氟-吡咯啶-1-基甲基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(114)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[5-(2,5-二甲基-吡咯啶-1-基甲基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(115)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[5-(3-氟-哌啶-1-基甲基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(116)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4- 基]-[5-(3,3-二氟-哌啶-1-基甲基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(117)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-{6-[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-4-基]-1H-吲哚-2-基}-甲酮；(118)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(6-吡啶-4-基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(119)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[5-(4-氟-哌啶-1-基甲基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(120)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[5-(4,4-二氟-哌啶-1-基甲基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(121)[5-胺基-1-(2-二氟甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[5-(1-甲基-哌啶-4-基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(122)[5-胺基-1-(2-二氟甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吲哚-2-基)-甲酮；(123)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[5-(3,3-二氟-吡咯啶-1-基甲基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(124)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[5-(1-環戊基-哌啶-4-基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(125)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[5-(1-環己基-哌啶-4-基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(126)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(4-溴-1H-吡咯-2-基)-甲酮；(127)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吡咯-2-基)-甲酮； (128)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(4-苯基-1H-吡咯-2-基)-甲酮；(129)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[4-(3-氯-苯基)-1H-吡咯-2-基]-甲酮；(130)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[4-(4-氟-苯基)-1H-吡咯-2-基]-甲酮；(131)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[4-(3-氟-苯基)-1H-吡咯-2-基]-甲酮；(132)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(6-嗎啉-4-基甲基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(133)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[4-(2-嗎啉-4-基-乙胺基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(134)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[5-(4-甲基-哌嗪-1-羰基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(135)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[6-(2-嗎啉-4-基-乙胺基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(136)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[5-(哌嗪-1-羰基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(137)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[4-(2-甲氧基-乙胺基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(138)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[4-(2-羥基-1-羥基甲基-乙胺基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(139)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[4-(2-吡啶-4-基-乙胺基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮； (140)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[6-(2-甲氧基-乙胺基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(141)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(6-嗎啉-4-基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(142)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(4-嗎啉-4-基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(143)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(4-嗎啉-4-基甲基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(144)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(5-嗎啉-4-基甲基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(145)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[5-(嗎啉-4-羰基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(146)[5-胺基-1-(2-異丙基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吲哚-2-基)-甲酮；(147)[5-胺基-1-(2-丙基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吲哚-2-基)-甲酮；(148)[5-胺基-1-(1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吲哚-2-基)-甲酮；(149)[5-胺基-1-(2-三氟甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吲哚-2-基)-甲酮；(150)[5-胺基-1-(2-乙基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吲哚-2-基)-甲酮；(151)[5-胺基-1-(2-苄基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吲哚-2-基)-甲酮； (152)1-(4-{2-[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-羰基]-1H-吲哚-5-基甲基}-哌嗪-1-基)-乙酮；(153)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[5-(4-甲烷磺醯基-哌嗪-1-基甲基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(154)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(5-哌嗪-1-基甲基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(155)1-(4-{2-[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-羰基]-1H-吲哚-6-基甲基}-哌嗪-1-基)-乙酮；(156)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[6-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(157)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(158)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(5-吡咯啶-1-基甲基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(159)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(4-氟-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(160)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(5-氟-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(161)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(6-氟-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(162)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)-甲酮；(163)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(5-氟-6-嗎啉-4-基甲基-1H-吲哚-2-基)-甲酮； (164)2-[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-羰基]-1H-吲哚-5-羧酸；(165)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(5-甲氧基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(166)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(4，6-二甲氧基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(167)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(4-甲氧基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(168)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(6-甲氧基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(169)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(4，6-二甲基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(170)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(5-第三丁基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(171)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(5-異丙基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(172)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(5-苄氧基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(173)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(4-苄氧基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(174)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(5,6-二甲氧基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(175)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(6-第三丁基-1H-吲哚-2-基)-甲酮； (176)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(5-氟-4-三氟甲基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(177)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(5-苯氧基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(178)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(6-甲基硫烷基(sulfanyl)-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(179)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(4-第三丁基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(180)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(5-甲基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(181)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(5-乙基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(182)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(5-氟-6-三氟甲基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(183)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(6-氟-5-甲氧基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(184)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(6-氯-5-甲氧基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(185)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(5-氯-6-甲氧基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(186)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(6-異丙氧基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(187)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(6-苄氧基-1H-吲哚-2-基)-甲酮； (188)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(4-異丙氧基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(189)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(2,3-二氫-6H-[1,4]二噁英并[2,3-f]吲哚-7-基)-甲酮；(190)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(4，6-二-第三丁基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(191)2-[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-羰基]-1H-吲哚-4-甲腈；(192)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(5-咪唑-1-基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(193)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(5-三氟甲基硫烷基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(194)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(5-甲基硫烷基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(195)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(5-甲烷磺醯基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(196)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[6-(4,4-二氟-哌啶-1-基甲基)1H-吲哚-2-基]-甲酮；(197)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[6-(4-氟-哌啶-1-基甲基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(198)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[6-(氧雜環丁烷-3-基氧基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(199)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(6-羥基-1H-吲哚-2-基)-甲酮； (200)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(6-甲烷磺醯基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(201)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(4,5-二溴-1H-吡咯-2-基)-甲酮；(202)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(4,5-二苯基-1H-吡咯-2-基)-甲酮；(203)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(4,5-二-吡啶-3-基-1H-吡咯-2-基)-甲酮；(204)[5-胺基-1-(2-甲基-3H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(6-氯-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(205)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(5-氯-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(206)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吲哚-3-基)-甲酮；(207)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(1H-吲哚-6-基)-甲酮；(208)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(5-溴-6-氟-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(209)[5-胺基-1-(2-乙基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(5-溴-6-氟-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(210)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(5-三氟甲基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(211)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(5-三氟甲氧基-1H-吲哚-2-基)-甲酮v (212)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(4，6-二氯-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(213)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(6-溴-4-氟-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(214)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(6-三氟甲氧基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(215)[5-胺基-1-(2-乙基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(5-三氟甲氧基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(216)[5-胺基-1-(2-乙基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(5-三氟甲基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(217)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(5,6-二氯-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(218)[5-胺基-1-(2-乙基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(6-溴-5-氟-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(219)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(4,5-二氯-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(220)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(4，6-二氟-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(221)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[6-(3-氯-吡啶-4-基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(222)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[6-(6-甲基-吡啶-3-基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(223)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[6-(5-氟-吡啶-3-基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮； (224)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[6-(2-三氟甲基-吡啶-3-基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(225)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[6-(5-氯-2-甲氧基-吡啶-3-基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(226)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[6-(5-氯-吡啶-3-基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(227)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(6-噻吩-3-基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(228)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[6-(4-氯-吡啶-3-基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(229)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(6-噻吩-2-基-1H-吲哚-2-基)-甲酮；(230)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[6-(3-氟-吡啶-4-基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(231)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[6-(2-三氟甲基-吡啶-4-基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(232)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[5-(3,3-二氟-吡咯啶-1-羰基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(233)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[5-(2,6-二甲基-嗎啉-4-羰基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(234)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[5-([1,4']聯哌啶基-1'-羰基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(235)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-{5-[4-(2,2,2-三氟-乙基)-哌嗪-1-羰基]-1H-吲哚-2-基}-甲 酮；(236)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-{5-[4-(2-羥基-乙基)-哌嗪-1-羰基]-1H-吲哚-2-基}-甲酮；(237)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[5-(3,3,4,4-四氟-吡咯啶-1-羰基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(238)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[5-((R)-3-氟-吡咯啶-1-羰基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(239)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[5-((S)-3-氟-吡咯啶-1-羰基)-1H-吲哚-2-基]-甲酮；(240)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[4-(4-甲氧基-苯基)-1H-吡咯-2-基]-甲酮；(241)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[4-(3-甲氧基-苯基)-1H-吡咯-2-基]-甲酮；(242)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[4,5-雙-(3-氟-苯基)-1H-吡咯-2-基]-甲酮；(243)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[4,5-雙-(4-甲氧基-苯基)-1H-吡咯-2-基]-甲酮；(244)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[4-(2,4-二氟-苯基)-1H-吡咯-2-基]-甲酮；(245)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[4-(4-三氟甲氧基-苯基)-1H-吡咯-2-基]-甲酮；(246)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-[4,5-雙-(3-甲氧基-苯基)-1H-吡咯-2-基]-甲酮；(247)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4- 基]-苯并呋喃-2-基-甲酮；(248)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-苯并[b]噻吩-2-基-甲酮；(249)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-苯并噻唑-2-基-甲酮；(250)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(4-氟-苯基)-甲酮；(251)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-(3-氯-苯基)-甲酮；(252)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-喹啉-3-基-甲酮；(253)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-喹啉-7-基-甲酮；及(254)[5-胺基-1-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-1H-吡唑-4-基]-喹啉-6-基-甲酮。
更具體而言，可列舉前述式(I)中之A為吲哚且R3及R4均為氫之化合物，例如：後述實施例之表1及表2記載之化合物。
上述化合物，可依循例如：國際公開WO2011/016528號記載之製造方法製造。
又，上述本發明中之具有FGFR抑制活性之化合物，不限於游離體，也包括藥學上可容許鹽。
如此的「鹽」，例如：無機酸鹽、有機酸鹽、無機鹼鹽、有機鹼鹽、酸性或鹼性胺基酸鹽等。
無機酸鹽之理想例，例如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽、磷酸鹽等，有機酸鹽之理想例，例如乙酸鹽、琥珀酸鹽、富馬酸鹽、馬來酸鹽、酒石酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、蘋果酸鹽、硬脂酸鹽、苯甲酸鹽、甲烷磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽等。本發明中之特理想之鹽，為蘋果酸鹽。
無機鹼鹽之較佳例，例如鈉鹽、鉀鹽等鹼金屬鹽、鈣鹽、鎂鹽等鹼土類金屬鹽、鋁鹽、銨鹽等，有機鹼鹽之較佳例，例如二乙胺鹽、二乙醇胺鹽、美洛明(meglumine)鹽、N,N-二苄基乙二胺鹽等。
酸性胺基酸鹽之較佳例，例如天冬醯胺酸鹽、麩醯胺酸鹽等，鹼性胺基酸鹽之較佳例，例如：精胺酸鹽、離胺酸鹽、鳥胺酸鹽等。
本發明之具有FGFR抑制活性之化合物，也包括水合物。又，本發明之具有FGFR抑制活性之化合物，有時會吸收其他某種溶劑，並成為溶劑合物，此種溶劑合物也包含於本發明之鹽。
本發明之具有FGFR抑制活性之化合物之構造上產生的所有異構物(幾何異構物、光學異構物、立體異構物、互突變構物等)及異構物混合物，包含於本發明。
本發明之具有FGFR抑制活性之化合物包括任意的結晶多形體。
本發明之具有FGFR抑制活性之化合物包含其前驅藥。前驅藥，係指具有能以化學的或代謝性分解之基，且當投予到活體後，復原為原本的化合物而顯示原本的藥效的本發 明化合物的衍生物，包含不利用共價鍵的複合體及鹽。
本發明中之具有FGFR抑制活性之化合物，包含其分子內1個以上的原子經同位素取代者。本發明中，同位素係指原子數(質子數)同，質量數(質子與中子數之和)不同的原子。本發明化合物所含之成為同位素之取代對象的原子，例：氫原子、碳原子、氮原子、氧原子、磷原子、硫原子、氟原子、氯原子等，各同位素含2H、3H、13C、14C、15N、17O、18O、31P、32P、35S、18F、36Cl等。尤其，如3H或14C之發射放射能而崩壞之放射性同位素，當進行醫藥品或化合物之體內組織分布試驗等時為有用。穩定的同位素，不發生崩壞，存在量幾乎不改變，且無放射能，故能安全地使用。本發明之化合物之同位素取代體，可將合成使用之試藥，取代為含有對應同位素之試藥，藉此以常法轉換。
又，本發明中之包含FGFR抑制劑之「抗癌劑」或「癌治療用醫藥組合物」，可互換的使用，意指由上述具有FGFR抑制活性之化合物及藥學上可容許之擔體構成的癌治療用之組合物。
本發明中之具有FGFR抑制活性之化合物，可利用慣用的方法製劑為錠劑、散劑、細粒劑、顆粒劑、被覆錠劑、膠囊劑、糖漿劑、喉劑(troche)、吸入劑、栓劑、注射劑、軟膏劑、眼軟膏劑、點眼劑、點鼻劑、點耳劑、泥罨劑(cataplasm)、洗劑(lotion)等。可使用製劑化通常可用之賦形劑、黏結劑、潤滑劑、著色劑、矯味矯臭劑，或及視需要的安定化劑、乳化劑、吸收促進劑、界面活性劑、pH調整劑、防腐劑、抗氧化劑等， 將一般作為醫藥品製劑之原料使用之成分配合並以常法製劑化。
例如製造經口製劑時，係添加本發明之化合物或其藥理學上可容許之鹽與賦形劑，及視需要添加黏結劑、崩散劑、潤滑劑、著色劑、矯味矯臭劑等後，以常法製成散劑、細粒劑、顆粒劑、錠劑、被覆錠劑、膠囊劑等。
此等成分例如：黃豆油、牛脂、合成甘油酯等動植物油；液體石蠟、角鯊烷、固體石蠟等烴；肉豆蔻酸辛基十二酯、肉豆蔻酸異丙酯等酯油；鯨蠟硬脂醇、山崳醇等高級醇；矽樹脂；矽油；聚氧乙烯脂肪酸酯、山梨糖醇酐脂肪酸酯、甘油脂肪酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯、聚氧乙烯硬化篦麻子油、聚氧乙烯聚氧丙烯嵌段共聚物等界面活性劑；羥基乙基纖維素、聚丙烯酸、羧基乙烯基聚合物、聚乙二醇、聚乙烯基吡咯酮、甲基纖維素等水溶性高分子；乙醇、異丙醇等低級醇；甘油、丙二醇、二丙二醇、山梨糖醇等多元醇；葡萄糖、蔗糖等糖；矽酸酐、矽酸鋁鎂、矽酸鋁等無機粉體、精製水等。
賦形劑，例如：乳糖、玉米澱粉、白糖、葡萄糖、甘露醇、山梨醇(sorbit)、結晶纖維素、二氧化矽等。
黏結劑，例如聚乙烯醇、聚乙烯醚、甲基纖維素、乙基纖維素、阿拉伯膠、黃耆膠、明膠、蟲膠、羥基丙基甲基纖維素、羥基丙基纖維素、聚乙烯基吡咯酮、聚丙二醇．聚氧乙烯．嵌段聚合物、美洛明(meglumine)等。
崩散劑，例如澱粉、瓊脂、明膠粉末、結晶纖維素、碳酸鈣、碳酸氫鈉、檸檬酸鈣、糊精、果膠、羧基甲基纖 維素．鈣等。
潤滑劑，例如硬脂酸鎂、滑石、聚乙二醇、氧化矽、硬化植物油等。
著色劑可使用許可添加在醫藥品者，矯味矯臭劑可使用可可粉、薄荷腦、芳香散、薄荷油、樟腦、桂皮粉末等。
此等的錠劑．顆粒劑中，當然可以製作糖衣、其他視需要的適當包覆。又，製造糖漿劑或注射用製劑等液劑，可在本發明之化合物或其藥理學可容許之鹽中添加pH調整劑、溶解劑等張化劑等，及視需要的溶解輔助劑、安定化劑等，並以常法製劑化。
製造外用劑時之方法不限定，可依常法製造。亦即，就製劑化時使用之基劑原料，可使用醫藥品、準醫藥品、化粧品等通常使用之各種原料。使用之基劑原料，具體而言，例如動植物油、礦物油、酯油、蠟類、高級醇類、脂肪酸類、矽油、界面活性劑、磷脂質類、醇類、多元醇類、水溶性高分子類、黏土礦物類、精製水等原料，又，視需要可添加pH調整劑、抗氧化劑、螯合劑、防腐防黴劑、著色料、香料等，但是，本發明之外用劑之基劑原料不限於此等。
又，視需要，也可配合具分化誘導作用之成分、血流促進劑、殺菌劑、消炎劑、細胞活化劑、維生素類、胺基酸、保濕劑、角質溶解劑等成分。又，上述基劑原料之添加量，為成為通常外用劑製造時設定之濃度的量。
對患者投予本發明之具有FGFR抑制活性之化合物用之抗癌劑(癌治療用醫藥組成粒)，其形態不特別限定，可 使用通常使用的方法經口投予也可非經口投予。例如可製劑化為錠劑、散劑、顆粒劑、膠囊劑、糖漿劑、喉劑(troche)、吸入劑、栓劑、注射劑、軟膏劑、眼軟膏劑、點眼劑、點鼻劑、點耳劑、泥罨劑(cataplasm)、洗劑(lotion)等劑並投予。
本發明之抗癌劑或癌治療用醫藥組合物含有之FGFR抑制劑之用量，可視症狀之程度、年齡、性別、體重、投予形態．鹽之種類、疾病之具體種類等，而適當選擇。
該用量依照患者，疾病種類、症狀程度、患者年齡、性別差異、對藥劑之感受性差異等，顯著不同，但通常成人1日分1-數次1日投予約0.03-1000mg，較佳為0.1-500mg，更佳為0.1-100mg。注射劑的情形，通常約1μg/kg-3000μg/kg，較佳為約3μg/kg-1000μg/kg。
本發明亦關於一種含有該化合物之癌治療用醫藥組合物，其特徵為：上述具有FGFR抑制活性之化合物係用於對於表現本發明之融合多胜肽或具有編碼為該融合多胜肽之多核苷酸的患者投予。
本發明也關於包含將上述具有FGFR抑制活性之化合物或其藥學上可容許鹽之有效量對於表現該融合多胜肽或有該多核苷酸之患者投予之步驟的癌之治療或預防方法、為了製造用於對於表現該融合多胜肽之或具有該多核苷酸患者投予之癌治療用醫藥組合物之具有FGFR抑制活性之化合物或其藥學上可容許鹽之用途、為了治療或預防表現該融合多胜肽或具有該多核苷酸之患者之用途之具有FGFR抑制活性之化合物或其藥學上可容許鹽等。
具體而言，患者在接受利用含上述FGFR抑制劑之抗癌劑之投予前，利用將本發明之融合多胜肽作為生物標記，而測試是否該患者表現該融合多胜肽、或具有編碼為該融合多胜肽之多核苷酸，且僅於表現該融合多胜肽、或具有編碼為該融合多胜肽之多核苷酸的情形，方將含該FGFR抑制劑之抗癌劑用在對於該患者投予。藉此，能夠預先防止由於該藥劑所為之治療之副作用產生，且能控制成獲得最佳治療效果之治療態樣，可進行個人化醫療(personalized medicine)。
本發明中，發現到：尤其是膀胱癌的情形，若進行到膀胱癌之病期分類為第3期以上，會顯著地表現本發明之融合基因。
膀胱癌的病期分類，具體而言，係就TNM病期分類來分類。TNM病期分類，係由：代表腫瘤進行度之T因子(tumor之開頭文字)、代表腫瘤是否以淋巴節轉移之N因子(lymph node之node之開頭文字)、及代表是否有淋巴節轉移以外之遠隔轉移之M因子(metastasis之開頭文字)構成。其中，將腫瘤浸潤直到上皮下結締組織者分類為第1期，腫瘤浸潤直到固有肌層為止者分類為第2期，腫瘤浸潤直到膀胱周圍脂肪組織為止者至腫瘤浸潤直到前列腺間質、子宮、陰道任一者的分類為第3期，腫瘤浸潤到骨盤壁、副壁中任一者的、或認為有淋巴節轉移或遠隔轉移者的分類為第4期。
又，該患者是否表現本發明之融合多胜肽、或具有編碼為該融合多胜肽之多核苷酸的試驗，可使用上述本發明之方法進行。
本發明也關於鑑定具有FGFR抑制活性之化合物之方法。
本發明之鑑定具有FGFR抑制活性之化合物之方法，具體而言可列舉包含以下步驟之方法。
(a)於待驗化合物存在下及不存在下，分別培養表現上述本發明之融合多胜肽之細胞，並決定細胞增殖之水平；(b)將於待驗化合物存在下培養該細胞時之細胞增殖水平，和於待驗化合物不存在下培養該細胞時之細胞增殖水平予以比較；及(c)當於待驗化合物存在下培養該細胞時之細胞增殖水平，低於待驗化合物不存在下培養該細胞時之細胞增殖水平時，判定該待驗化合物具有FGFR抑制活性。
此方法使用之細胞，只要是表現本發明之融合多胜肽之細胞即可，可為活細胞、細胞株或重組細胞中任一者。該重組細胞，可列舉導入了含有編碼為上述本發明之融合多胜肽之多核苷酸的載體的重組細胞。
又，該活細胞可列舉從癌患者收集的細胞，該細胞株可列舉從癌患者收集的癌細胞建立的癌細胞株。
又，本發明中之癌，包括如上述的任意癌。
本發明之鑑定具有FGFR抑制活性之化合物之方法，更可列舉包括以下步驟之方法。
(a)對於已移植表現上述本發明之融合多胜肽之細胞的非人類哺乳動物投予待驗化合物，並決定該細胞之增殖水平；(b)將於步驟(a)決定之細胞增殖之水平，和於未接受該待驗化合物之投予的已移植該細胞的非人類哺乳動物中決定之 該細胞之細胞增殖之水平予以比較；及(c)當於步驟(a)決定之細胞增殖之水平，比起於未接受該待驗化合物之投予的已移植該細胞的非人類哺乳動物中決定之該細胞之細胞增殖之水平為低時，判定該待驗化合物具有FGFR抑制活性。
此方法使用之細胞，只要是表現本發明之融合多胜肽之細胞即可，可為活細胞、細胞株或重組細胞中任一者。該重組細胞，可列舉導入了含有編碼為上述本發明之融合多胜肽之多核苷酸的載體的重組細胞。
又，該活細胞可列舉從癌患者收集的細胞，該細胞株可列舉從癌患者收集的癌細胞建立的癌細胞株。
又，本發明中之癌，包括如上述的任意癌。
本發明之方法中，細胞增殖的水平例如可使用測定將色素(MTT、XTT、MTS、WST等)還原為甲(formazan)色素(紫色)之酵素活性的比色定量法依常法試驗。
又，該細胞增殖之水平，於該細胞為癌細胞的情形，也可利用測定細胞增殖結果形成之腫瘤的大小或重量來決定。
本發明之鑑定具有FGFR抑制活性之化合物之方法，也包括利用報告子基因分析(reporter gene assay)的態樣。
作為報告子基因，包括編碼為泛用之任意螢光蛋白質的基因，例如：東海墨綠多管水母(Aequorea coerulescens)來源之綠色螢光蛋白質GFP、海腎(Renilla reniformis)等的螢光酶、造礁珊瑚來源的RCFPs(Reef Coral Fluorescent Proteins)、水果螢光蛋白質、及此等的改變體等。
本發明中之報告子基因分析，例如可依以下方式實施。
以將編碼為本發明之融合多胜肽之多核苷酸與編碼為報告子蛋白之基因依存於該融合多胜肽編碼多核苷酸轉錄為mRNA之信號而發生編碼為該報告子蛋白質之基因轉錄為mRNA的方式插入而得的表現載體，對於在基因重組蛋白質製造時一般使用的細胞轉形，而製作基因重組細胞。使獲得之轉形細胞與待驗化合物接觸。以測定與該融合多胜肽之表現同時表現之該報告子蛋白質所發之螢光之量而間接地測定依存於該化合物之作用而表現之該融合多胜肽之水平，來分析該化合物是否會影響該融合多胜肽之表現(例如：美國專利第5,436,128號及美國專利第5,401,629號等)。
又，使用本分析之該化合物之鑑定，可用手工作業，也可使用機械(robot)自動進行的所謂高通量篩選(High Throughput Screening)(組織培養工程，Vol.23,No.13,p.521-524；美國專利第5,670,113號)，而更迅速、簡便地實施。
以下利用實施例對於本發明更具體說明。惟，本發明當然不僅限定於該等實施例。
又，無特別指明時，各試驗步驟可依公知方法實施。
又，使用市售之試藥或套組等時，可依市售品之指示書實施。
又，本說明書所引用的所有先前技術文獻，納入於本說明書作為參照。
【實施例1】
各種癌細胞中之FGFR3與其他多胜肽之融合多胜肽之表現
(1)RNA解析
從4種表現FGFR3之膀胱癌來源之人類細胞株、RT112/84(從European Collection of Cell Cultures(ECACC)取得；型錄編號：85061106)、RT4(從American Type Culture Collection(ATCC)取得；型錄編號：HTB-2)、SW780(從ATCC取得；型錄編號：CRL-2169)、BFTC-905(從Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH(DSMZ)取得；型錄編號：ACC 361)分別以miRNeasy Mini Kit(QIAGEN公司)萃取RNA，並使用HiSeqTM Sequencing system(Illumina公司)之Paired-end reads(Read Length：2x75bp)進行序列解析。
將獲得之鹼基序列參考現有方法(Maher et al.,PNAS,July 28,2009,106(30)：12353-12358)，對於Refseq transcript配對(mapping)，並藉由找尋成對且配對在不同基因的鹼基序列，而找尋融合基因候選者。又，使用未配對於Refseq transcript，且成對的另一者配對於融合基因候選者的其中一者的鹼基序列來鑑定融合部位。
其結果，於RT112/84、RT4及SW780之3種膀胱癌細胞，各鑑定出編碼為FGFR3與TACC3之融合多胜肽、FGFR3與TACC3之融合多胜肽、及FGFR3與BAIAP2L1之融合多胜肽的多核苷酸，啟示該融合多胜肽係有表現。另一方面，於BFTC-905細胞確認有編碼為FGFR3之野生型多胜肽之多核苷酸。
(2)cDNA解析
將從啟示表現FGFR3與TACC3之融合多胜肽、及FGFR3與BAIAP2L1之融合多胜肽的3種細胞萃取之實施例1(1)所使用的各RNA當作模板，利用反轉錄套組Transcriptor Universal cDNA Master(Roche公司)，依套組附帶的操作說明書的實驗步驟進行反轉錄反應，並合成cDNA。
將獲得之各cDNA作為模板，分別使用由序列編號1(F3fu-F3：gtgcacaacctcgactactacaag)及序列編號2(RT112-R3：gtaatcctccacgcacttcttc)代表之鹼基序列構成之寡核苷酸引子對(組1)、由序列編號1(F3fu-F3：gtgcacaacctcgactactacaag)及序列編號5(RT4-R3：gggtgtcactcttctgtctaagga)代表之鹼基序列構成之寡核苷酸引子對(組2)、及由序列編號3(F3fu-F2)tgtttgaccgagtctacactcacc)及序列編號4(SW780-R2：gacatgtcccagttcagttgac)代表之鹼基序列構成之寡核苷酸引子對(組3)，使用DNA聚合酶KOD-Plus-Ver.2(東洋紡)，進行PCR(94℃ 15秒、55℃ 30秒、68℃ 1分鐘為1個循環，進行35個循環)，並進行電泳。
其結果，引子組1，僅於當以由RT112/84之RNA合成之cDNA作為模板時，確認有約670bp之譜帶。使用引子組2放大時，僅於當以由RT4之RNA合成之cDNA作為模板時確認有約610bp之譜帶。使用引子組3放大時，僅於當以由SW780之RNA合成之cDNA作為模板時，確認有約450bp之譜帶。
將各PCR產物作為模板，依照Sanger序列法使用 BigDyeTM Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit(Life technology公司)，鑑定於RT112/84表現之FGFR3與TACC3之融合多核苷酸之接合部位之鹼基序列14(FGFR3-TACC3多核苷酸v1)、於RT4表現之FGFR3與TACC3之融合多核苷酸之接合部位之鹼基序列15(FGFR3-TACC3多核苷酸v2)、於SW780表現之FGFR3與BAIAP2L1之融合多核苷酸之接合部位之鹼基序列16(FGFR3-BAIAP2L1多核苷酸)的序列。
基於前述獲得之資訊，依常法決定編碼為各融合多胜肽(全長)之cDNA之鹼基序列。
編碼為於RT112/84表現之FGFR3與TACC3之融合多胜肽(全長)之cDNA之鹼基序列及其胺基酸序列，各為序列編號27及序列編號28。
編碼為於RT4表現之FGFR3與TACC3之融合多胜肽(全長)之cDNA之鹼基序列及其胺基酸序列，各為序列編號29及序列編號30。
該cDNA之鹼基序列解析之結果，序列編號29之第2,281~2,379位之鹼基序列，係來自編碼為FGFR3之基因之內含子的核酸序列，編碼為序列編號30之第761~793位之胺基酸序列。
編碼為於SW780表現之FGFR3與BAIAP2L1之融合多胜肽(全長)的cDNA的鹼基序列及其胺基酸序列，分別為序列編號31及序列編號32。
如前所述，人類FGFR3，存在有具有各序列編號6及序列編號7所示之胺基酸序列之2種野生型多胜肽，該等融合多胜 肽中之N末端側之FGFR3來源之部分係來自具有序列編號6所示之胺基酸序列之野生型FGFR3者。
若依該等試驗結果，可推測人類來源之各種癌細胞中，係表現：具有序列編號7所示之胺基酸序列之另一野生型FGFR3與TACC3之2種融合多胜肽、及具有序列編號7所示之胺基酸序列之另一野生型FGFR3與BAIAP2L1之融合多胜肽。
編碼為具有序列編號7所示之胺基酸序列之野生型FGFR3與TACC3的1個融合多胜肽(全長)的cDNA的鹼基序列及其胺基酸序列，各為序列編號33及序列編號34。
編碼為具有序列編號7所示之胺基酸序列之野生型FGFR3與TACC3之另一個融合多胜肽(全長)之cDNA之鹼基序列及其胺基酸序列，各為序列編號35及序列編號36。
此處，該cDNA之鹼基序列之序列編號35之第2,275~2,373位之鹼基序列，係來自編碼為FGFR3之基因之內含子的核酸序列，且編碼為序列編號36之第759~791位之胺基酸序列。
編碼為具有序列編號7所示之胺基酸序列之野生型FGFR3與BAIAP2L1的另一個融合多胜肽(全長)的cDNA的鹼基序列及其胺基酸序列，各為序列編號37及序列編號38。
又，FGFR3-TACC3融合多核苷酸之存在，於頭頸部扁平上皮癌、肺腺癌及肺扁平上皮癌也可類推，FGFR3-BAIAP2L1融合多核苷酸之存在，於頭頸部扁平上皮癌、肺扁平上皮癌及皮膚黑色瘤可類推。
【實施例2】
各種FGFR抑制劑之抑制FGFR1、FGFR2及FGFR3 之激酶酵素活性的活性及對於表現FGFR3-TACC3融合多胜肽之細胞株之細胞增殖抑制作用之解析
1.各種FGFR抑制劑之抑制FGFR1、FGFR2及FGFR3之激酶酵素活性之活性之解析(in vitro)
(1)FGFR1之酵素之抑制活性
使用人類FGFR1酵素(CarnaBioscience公司製cat 08-133)，利用生物素化胜肽(EGPWLEEEEEAYGWMDF；序列編號39)之磷酸化反應之抑制活性來測定表1-1~表1-5記載之化合物之FGFR1抑制活性。磷酸化生物素化胜肽之檢測，係以使用結合了銪穴狀化合物(europium cryptate)之抗磷酸化酪胺酸抗體及結合了別藻藍蛋白(allophycocyanin)之衍生物即XL665的鏈黴抗生物素蛋白之時間分解螢光測定法，從相對於不含待驗物質之對照群的抑制率，算出50%抑制濃度(IC50值)。
針對各化合物之試驗結果，示於表1-1~表1-5。
(2)FGFR2之酵素之抑制活性
利用於棒狀病毒(baculovirus)表現系製備之人類FGFR2酵素，利用生物素化胜肽(EGPWLEEEEEAYGWMDF；序列編號39)之磷酸化反應之抑制活性來測定表1-1~表1-5記載之化合物之FGFR2抑制活性。磷酸化生物素化胜肽之檢測，係以使用結合了銪穴狀化合物(europium cryptate)之抗磷酸化酪胺酸抗體及結合了別藻藍蛋白(allophycocyanin)之衍生物即XL665的鏈黴抗生物素蛋白之時間分解螢光測定法，從相對於不含待驗物質之對照群的抑制率，算出50%抑制濃度(IC50值)。
針對各化合物之試驗結果示於表1-1~表1-5。
(3)FGFR3之酵素之抑制活性
使用人類FGFR3酵素(CarnaBioscience公司製cat 08-135)，利用生物素化胜肽(EGPWLEEEEEAYGWMDF；序列編號39)之磷酸化反應之抑制活性來測定表1-1~表1-5記載之化合物之FGFR3抑制活性。磷酸化生物素化胜肽之檢測，係以使用結合了銪穴狀化合物(europium cryptate)之抗磷酸化酪胺酸抗體及結合了別藻藍蛋白(allophycocyanin)之衍生物即XL665的鏈黴抗生物素蛋白之時間分解螢光測定法，從相對於不含待驗物質之對照群的抑制率，算出50%抑制濃度(IC50值)。
針對各化合物之試驗結果示於表1-1~表1-5。
(4)FGFR抑制劑對於細胞株之細胞增殖抑制作用(in vitro)
於在96井板接種之表現FGFR3-TACC3融合多胜肽之膀胱癌來源之細胞株RT-4細胞及未表現FGFR3融合多胜肽之大腸癌來源之細胞株HCT116，分別以添加了將50μM作為最大濃度而以2倍系列稀釋18階段而得之表1-1~表1-5之各化合物、及DMSO(作為對照)的狀態培養4日。經過4日後之細胞增殖，依WST-8(同仁化學研究所)量測。
各化合物對於各細胞之細胞增殖抑制活性，係將添加各濃度之化合物並培養細胞後井於450nM之吸光度值為T、顛加DMSO並培養細胞時之450nM之吸光度之值為C時之(1-T/C)x 100(%)算出，IC50以最小平方法算出。
其結果，如表1-1~表1-5所示，表現該融合多胜肽之細胞之細胞增殖50%抑制濃度(IC50)，比起未表現該融合多胜肽之 細胞之IC50顯著較低。
【表1-1】
【表1-3】
【表1-5】
【實施例3】
FGFR抑制劑對於表現FGFR3-TACC3融合多胜肽或FGFR3-BAIAP2L1融合多胜肽之各種細胞株之細胞增殖抑制作用之解析
(1)FGFR抑制劑對於各種細胞株之細胞增殖抑制作用(in vitro)
對於表現FGFR3-TACC3融合多胜肽或FGFR3-BAIAP2L1融合多胜肽之膀胱癌來源之3種人類細胞株，即RT112/84(從ECACC取得；型錄編號：85061106)、RT4(從ATCC取得；型錄編號：HTB-2)及SW780(從ATCC取得；型錄編號：CRL-2169)，以及表現FGFR野生型多胜肽且不表現該融合多胜肽之細胞株BFTC-905(從DSMZ取得；型錄編號：ACC 361)、表現FGFR變異型多胜肽且不表現該融合多胜肽之細胞株UM-UC-14(從ECACC取得；型錄編號：08090509)、及不表現FGFR3之細胞株HT-1376(從ATCC取得；型錄編號：CRL-1472)共計6種細胞，添加係抑制FGFR之激酶活性的物質的6種化合物A~F(表2-1及2-2)，探討對於細胞增殖的影響。
以對於在96井板接種之各細胞(RT112/84、BFTC-905及UM-UC-14接種3.0E+03細胞/井。SW780、RT4及HT-1376接種5.0E+03細胞/井)添加將20μM作為最大濃度而以3倍系列稀釋9階段而得之各化合物、及DMSO(作為對照)之狀態培養4日。經過4日後之細胞增殖利用WST-8(同仁化學研究所) 量測。
各化合物對於各細胞之細胞增殖抑制活性，係將添加各濃度之化合物並培養細胞後井於450nM之吸光度值為T、添加DMSO並培養細胞時之450nM之吸光度之值為C時之(1-T/C)x 100(%)算出，IC50以最小平方法算出。
其結果，如表3所示，表現該融合多胜肽之細胞之細胞增殖50%抑制濃度(IC50)，比起未表現該融合多胜肽之細胞之IC50顯著較低。
【表2-1】
【表2-2】
【表3】
(2)FGFR抑制劑對於表現FGFR3-TACC3融合多胜肽之細胞之細胞增殖抑制作用(in vivo)
抗腫瘤效果，係使用對BALB/c無毛小鼠(日本Charles River)在鼠頸部皮下移植了人類膀胱癌細胞株RT112/84(ECACC)的擔癌小鼠進行試驗。
使用的無毛小鼠經約1週的檢疫期間後，將約1 x 107個RT112/84細胞移植到鼠頸部皮下。將腫瘤的大小成為約200mm3的時點的小鼠供該實驗使用。
將化合物A懸浮於含有10% DMSO、10% Cremophor EL、15% PEG400、及15% HPCD的溶液，以20mL/kg的投予用量經口每日1次每天對小鼠投予。
抗腫瘤效果，係比較從投予開始11日後(以投予開始日作為0的第10日)之腫瘤增殖及對照群之腫瘤增殖以計算 算出。
腫瘤增殖抑制效果(TGI)=(1-藥劑處理群之腫瘤增殖量之平均值/對照群之腫瘤增殖量之平均值)X100 (%)
結果如表4。
FGFR抑制劑，於載持表現FGFR3-TACC3融合多胜肽之腫瘤細胞的小鼠，以濃度依存地顯示極顯著的腫瘤增殖抑制活性。
【實施例4】
臨床檢體中之各編碼為FGFR3-TACC3融合多胜肽及FGFR3-BAIAP2L1融合多胜肽之多核苷酸之檢測
(1)編碼為FGFR3-TACC3融合多胜肽之多核苷酸v1之檢測
為了檢測臨床檢體中編碼為FGFR3-TACC3融合多胜肽之多核苷酸v1之cDNA，將從自罹患膀胱癌之患者(20人)收集的各膀胱癌試樣來源的cDNA(Origene公司)及RT112/84(ECACC)的RNA合成的cDNA作為基質，將由序列編號1及序列編號2表示之鹼基序列構成的寡核苷酸作為引子，使用Tks GflexTM DNA Polymerase(TAKARABIO公司)，進行PCR(98℃ 10秒、60℃ 15秒、68℃ 1分鐘為1個循環，進行42個循環)，將尺寸標記DNA(Invitrogen公司)和已放大的各樣本一起進行電泳。
其結果，如圖1所示，由臨床檢體未檢測到編碼為FGFR3-TACC3融合多胜肽之多核苷酸v1之cDNA片段。
(2)編碼為FGFR3-TACC3融合多胜肽之多核苷酸v2之檢測
為了檢測臨床檢體中編碼為FGFR3-TACC3融合多胜肽之多核苷酸v2之cDNA，將從自罹患膀胱癌之患者(20人)收集的各膀胱癌試樣來源的cDNA(Origene公司)及RT4(ATCC)的RNA合成的cDNA作為基質，將由序列編號1及序列編號5表示之鹼基序列構成的寡核苷酸作為引子，使用Tks GflexTM DNA Polymerase(TAKARABIO公司)，進行PCR(98℃ 10秒、60℃ 15秒、68℃ 1分鐘作為1個循環，進行42個循環)，將尺寸標記DNA(Invitrogen公司)和已放大的各樣本一起進行電泳。
其結果，如圖2所示，在1例的症例中檢測到編碼為FGFR3-TACC3融合多胜肽之多核苷酸v2之cDNA片段。
由以上顯示依上述方法能檢測膀胱癌臨床檢體來源之試樣中之編碼為FGFR3-TACC3融合多胜肽之多核苷酸v2之存在，能選擇編碼為FGFR3-TACC3融合多胜肽之多核苷酸v2陽性患者。
(3)編碼為FGFR3-BAIAP2L1融合多胜肽之多核 苷酸之檢測
為了檢測臨床檢體中FGFR3-BAIAP2L1多核苷酸之cDNA，將從自罹患膀胱癌之患者(20人)收集的各膀胱癌試樣來源的cDNA(Origene公司)及SW780(ATCC)的RNA合成的cDNA作為基質，將由序列編號3及序列編號4表示之鹼基序列構成的寡核苷酸作為引子，進行Tks GflexTM DNA Polymerase(TAKARABIO公司)，並進行PCR(98℃ 10秒、60 ℃ 15秒、68℃ 1分鐘為1個循環，進行42個循環)，將尺寸標記DNA(Invitrogen公司)和已放大的各樣本一起進行電泳。
其結果，如圖3所示，總計於2例的症例中檢測到FGFR3-BAIAP2L1融合多核苷酸之cDNA片段。
由以上顯示依上述方法能檢測膀胱癌臨床檢體來源之試樣中之編碼為FGFR3-BAIAP2L1融合多胜肽之多核苷酸之存在，能選擇編碼為FGFR3-BAIAP2L1融合多胜肽之多核苷酸陽性患者。
【實施例5】
各種癌症之臨床檢體中各編碼為FGFR3-BAIAP2L1融合多胜肽及FGFR3-BAIAP2L1融合多胜肽之多核苷酸之檢測
(1)肺癌(非膀胱癌)之臨床檢體中編碼為FGFR3-BAIAP2L1融合多胜肽之多核苷酸之檢測(試驗1)
為了檢測非膀胱癌臨床檢體中之FGFR3-BAIAP2L1多核苷酸之cDNA，將自肺癌臨床檢體來源cDNA(Origene公司)40樣本及SW780之RNA合成之cDNA作為基質，分別使用由以 序列編號3(F3fu-F2：tgtttgaccgagtctacactcacc)及序列編號4(SW780-R2：gacatgtcccagttcagttgac)表示之鹼基序列構成的寡核苷酸引子對，使用Tks Gflex(tm)DNA Polymerase(TAKARABIO公司)進行PCR(98℃ 10秒、60℃ 15秒、68℃ 1分鐘為1個循環，進行42個循環)，將尺寸標記DNA(Invitrogen公司)和已放大的各樣本一起進行電泳。
其結果，如圖4之A所示，共計在1例的症例中檢測到編碼為FGFR3-BAIAP2L1融合多胜肽之多核苷酸之cDNA片段。
再者，為了確認再現性，將從相同之肺癌臨床檢體來源cDNA及SW780之RNA合成的cDNA作為基質，各使用由序列編號17(F3fu-F1：caactgcacacacgacctgta)及序列編號18(SW780-R1：ccatcgtagtaggcttttcctg)表示之鹼基序列構成的寡核苷酸引子對，使用Tks Gflex(tm)DNA Polymerase(TAKARABIO公司)進行PCR(98℃ 10秒、60℃ 15秒、68℃ 1分鐘為1個循環，進行42個循環)，將尺寸標記DNA(Invitrogen公司)和已放大的各樣本一起進行電泳。
其結果，如圖4之B所示，共計在1例的相同症例中檢測到編碼為FGFR3-BAIAP2L1融合多胜肽之多核苷酸之cDNA片段。由此顯示，依上述方法能以多數種類的引子檢測非膀胱癌臨床檢體來源之cDNA中編碼為FGFR3-BAIAP2L1融合多胜肽之多核苷酸之存在，且能選擇編碼為FGFR3-BAIAP2L1融合多胜肽之多核苷酸陽性患者。
(2)肺癌(非膀胱癌)之臨床檢體中編碼為FGFR3-BAIAP2L1融合多胜肽之多核苷酸之檢測(試驗2)
將肺癌臨床檢體來源cDNA(Origene公司)83個樣本作為基質，使用由序列編號3(F3fu-F2：tgtttgaccgagtctacactcacc)及序列編號4(SW780-R2：gacatgtcccagttcagttgac)表示之鹼基序列構成的寡核苷酸引子對(組3)，以Tks GflexTM DNA Polymerase(TAKARABIO公司)進行PCR(98℃ 10秒、60℃ 15秒、68℃ 1分鐘為1個循環，進行35個循環)。以瓊脂糖凝膠電泳確認是否各樣本的DNA是否有放大，結果於2例的檢體檢測到目的尺寸之DNA譜帶，利用DNA序列解析(Sanger法)決定此等譜帶係FGFR3-BAIAP2L1融合多核苷酸來源之cDNA片段序列。由此確認：癌臨床檢體來源之cDNA中存在FGFR3-BAIAP2L1融合多核苷酸。
(3)肺癌、食道癌、胃癌及肝癌(均為非膀胱癌)之臨床檢體中編碼為FGFR3-TACC3融合多胜肽之多核苷酸之檢測
將肺癌臨床檢體來源cDNA(Origene公司)的83個樣本、食道癌臨床檢體來源cDNA(Origene公司)的18個樣本、胃癌臨床檢體來源cDNA(Origene公司)的5個樣本、肝癌臨床檢體來源cDNA(Origene公司)的5個樣本作為基質，使用由序列編號1(F3fu-F3：gtgcacaacctcgactactacaag)及序列編號2(RT112-R3：gtaatcctccacgcacttcttc)表示之鹼基序列構成的寡核苷酸引子對(組1)，以Tks GflexTM DNA Polymerase(TAKARABIO公司)進行PCR(98℃ 10秒、60℃ 15秒、68℃ 1分鐘為1個循環，進行35個循環)。以瓊脂糖凝膠電泳確認各樣本之DNA是否有放大，結果於2例肺癌、2例食 道癌、1例胃癌、1例肝癌之檢體檢測到目的尺寸的DNA譜帶，以DNA序列解析(Sanger法)決定了此等譜帶是FGFR3-TACC3融合多核苷酸來源的cDNA片段序列。由此可確認：各種癌臨床檢體來源之cDNA中存在FGFR3-TACC3融合多核苷酸。
(4)使用FISH法進行膀胱癌細胞株中之編碼為FGFR3-BAIAP2L1融合多胜肽之多核苷酸之檢測
為了以螢光原位(in situ)雜交(fluorescence in situ hybridization；FISH)法檢測膀胱癌細胞株中之FGFR3-BAIAP2L1融合基因，對於膀胱癌細胞株RT112/84及SW780之福馬林固定石蠟包埋(FFPE)樣本，進行以下所示使用2個探針組的實驗。
為了檢測人類第4號染色體上的FGFR3基因的一部分易位到其他染色體，使用FGFR3 Split Dual Color FISH Probe(Split signal probe組、GSP Lab.,Inc.)，又，為了檢測人類第4號染色體上之FGFR3基因及人類第7號染色體上之BAIAP2L1基因係於同一染色體上融合，使用FGFR3 and BAIAP2L1 FISH Probe(Fusion signal probe組、GSP Lab.,Inc.)進行FISH分析。
其結果，如圖5所示，確認：於從SW780製作之FFPE樣本，在使用Split signal probe組的FISH分析中，2種顏色的信號在彼此遠離的地方被檢測到(圖5之A2)，在使用Fusion signal probe組之FISH分析中，檢測到2個顏色融合的信號(圖5之B2)。由此顯示，依上述方法能以FISH法檢測FGFR3基因之分離及FGFR3與BAIAP2L1基因之融合。
【實施例6】
表現FGFR3-TACC3融合多胜肽或FGFR3-BAIAP2L1融合多胜肽之各種細胞株之評價
(1)各種細胞株之FGFR3依存性之評價
對於表現FGFR3-TACC3融合多胜肽或FGFR3-BAIAP2L1融合多胜肽之膀胱癌來源之人類細胞株RT4及SW780、FGFR3變異型多胜肽且不表現該融合多胜肽之細胞株UM-UC-14、及表現FGFR3野生型多胜肽且不表現及該融合多胜肽之細胞株BFTC-905的共計4種細胞，添加分別針對FGFR3及BAIAP2L1的siRNA，探討各種siRNA對於細胞增殖的影響。
siRNA使用ON-TARGETplus siRNA Reagents(Thermo Fisher Scientific公司)。
對於接種在96井板的各細胞(UM-UC-14及BFTC-905為1.5E+03細胞/井。SW780及RT4為2.5E+03細胞/井)，於已添加將10nM作為最大濃度而以10倍系列稀釋3階段的各siRNA、及虛無(Mock)siRNA(作為對照)的狀態培養7日。經7日後之細胞增殖以CellTiter-GloTM Luminescent Cell Viability Assay(Promega公司)計測。
其結果，如圖6所示，表現FGFR3野生型多胜肽且不表現該融合多胜肽之細胞，未由於分別針對FGFR3及BAIAP2L1之siRNA而使其增殖活性被抑制。另一方面，表現FGFR3變異型多胜肽且不表現該融合多胜肽之細胞株及表現FGFR3-TACC3融合多胜肽之細胞，僅由於針對FGFR3之siRNA而使其增殖活性受抑制。另一方面，確認：表現 FGFR3-BAIAP2L1融合多胜肽之細胞，會因為各針對FGFR3及BAIAP2L1之siRNA任一者均使其增殖受抑制。
(2)FGFR抑制劑對於表現FGFR3-BAIAP2L1融合多胜肽之癌細胞之細胞凋亡誘導之評價
對於表現FGFR3-BAIAP2L1融合多胜肽之膀胱癌來源之人類細胞株SW780、表現FGFR野生型多胜肽且不表現該融合多胜肽之細胞株BFTC-905、表現FGFR3變異型多胜肽且不表現該融合多胜肽之細胞株UM-UC-14、及不表現FGFR3之細胞株HT-1376共計4種細胞，分別添加係抑制FGFR之激酶活性的物質的6種化合物A~F(表2-1及表2-2)，並探討是否會誘導細胞凋亡。
於對於接種在PrimeSurfaceTM 96U板(住友電木公司)的各細胞(UM-UC-14及BFTC-905為3.0E+03細胞/井、SW780及HT-1376為5.0E+03細胞/井)添加了以20μM作為最大濃度而以3倍系列進行4階段稀釋之各化合物、及DMSO(作為對照)之狀態培養4日。經4日後之細胞增殖，以CellTiter-GloTM Luminescent Cell Viability Assay(Promega公司)量測，經4日後之半胱天冬酶(Caspase)活性以Caspase-GloTM 3/7 Assay(Promega公司)量測。計算Caspase-GloTM 3/7測得之1井內之半胱天冬酶(Caspase)活性的總和除以從CellTiter-GloTM值算出之1井內之相對的生存細胞數而得之值作為細胞凋亡(Apoptosis)值，各細胞之細胞凋亡誘導，係除以各細胞於DMSO添加條件下算出之細胞凋亡值來評價。
其結果，如圖7所示，確認：對於FGFR抑制劑未顯示感受性之細胞，其細胞凋亡未受抑制劑誘導，另一方面，對於FGFR抑制劑顯示感受性之細胞，其細胞凋亡因FGFR抑制劑而被誘導。
(3)FGFR抑制劑於體內對於表現FGFR3-BAIAP2L1融合多胜肽之細胞之細胞增殖抑制作用
抗腫瘤效果，係使用對於BALB/c無毛小鼠(日本Charles River)之鼠頸部皮下移植了人類膀胱癌細胞株SW780(ATCC)的擔癌小鼠進行試驗。使用的無毛小鼠經過約1週的檢疫期間後，將約5 x 106個SW780細胞移植到鼠頸部皮下。將腫瘤大小成為約200mm3之時點的小鼠供該實驗使用。將化合物A懸浮於含有10% DMSO、10% Cremophor EL、15% PEG400、及15% HPCD的溶液，以20mL/kg的投予用量，以經口每日1次每日對小鼠投予。抗腫瘤效果，係利用比較從投予開始11日後(以投予開始日作為0日的第10日天)之腫瘤增殖、與對照群中之腫瘤增殖以算出。
腫瘤增殖抑制效果(TGI)=(1-藥劑處理群之腫瘤增殖量之平均值/對照群之腫瘤增殖量之平均值)X100 (%)
結果如表5。FGFR抑制劑，於載持表現FGFR3-BAIAP2L1融合多胜肽之腫瘤細胞之小鼠，以濃度依存的顯示極顯著的腫瘤增殖抑制活性。
【表5】
【實施例7】
FGFR3-BAIAP2L1融合多胜肽之轉形能力及腫瘤形成能力之探討
(1)FGFR3-BAIAP2L1融合多胜肽之轉形能力之評價
分別將編碼為FGFR3(序列編號6)之cDNA(序列編號10)及編碼為FGFR3-BAIAP2L1(序列編號32)之cDNA(序列編號31)對於慢病毒表現載體pReceiver-Lv156(GeneCopoeia公司)進行次轉殖，並使用Lenti-PacTM Lentiviral Packaging Systems(GeneCopoeia公司)製作各多胜肽表現用慢病毒。
使各慢病毒感染大鼠胎兒來源細胞RAT-2，於以添加選擇標記Puromycin的條件下培養，建立分別安定表現FGFR3多胜肽或FGFR3-BAIAP2L1融合多胜肽的RAT-2細胞。已建立的安定表現FGFR3-BAIAP2L1融合多胜肽的細胞，如圖8所示，於單層培養下觀察到形態變化。
在PrimeSurfaceTM 96U板(住友電木公司)接種未經任何處理的RAT-2細胞(母細胞)、安定表現FGFR3多胜肽之 RAT-2細胞、及安定表現FGFR3-BAIAP2L1融合多胜肽之RAT-2細胞各2.0 x 103細胞/井，培養14日。觀察拍攝經14日後之細胞，結果，如圖9所示，僅於安定表現FGFR3-BAIAP2L1融合多胜肽之RAT-2細胞中觀察到支架非依存的細胞增殖亢進。
由此可確認：FGFR3-BAIAP2L1融合多胜肽對於正常細胞有轉形能力。
(2)二元體化促進區缺損FGFR3-BAIAP2L1融合多胜肽之轉形能力之評價
以使用PCR法之點突變(Site-Directed Mutagenesis)法製作編碼為BAIAP2L1多胜肽(胺基酸序列：序列編號8/核酸序列：序列編號12)之二元體化促進區即BAR分域有缺損的FGFR3-BAIAP2L1 △BAR的cDNA。將分別編碼為FGFR3(同前述)、FGFR3-BAIAP2L1(同前述)及FGFR3-BAIAP2L1 △BAR之cDNA對於pCXND3載體(化血研)進行次轉殖，製成各多胜肽表現用載體。
將pCXND3載體(運載體(vehicle))或各多胜肽表現用載體使用FuGENETM HD Transfection Reagent(Promega公司)導入人類胎兒腎細胞293，1日後以Cell Lysis Buffer(Cell Signaling Technology公司)將其回收作為細胞溶解物。將各細胞溶解物使用磷酸化FGF受體(Tyr653/654)抗體(Phospho-FGF Receptor(Tyr653/654)Antibody)(Cell Signaling Technology公司)或抗FGFR3抗體(Santa Cruz公司)以西方點墨法解析，結果，如圖10所示可確認：於FGFR3-BAIAP2L1融合多胜肽為亢進之 FGFR之磷酸化，在BAIAP2L1多胜肽之二元體化促進區即BAR分域有缺損之FGFR3-BAIAP2L1 △BAR融合多胜肽係減弱。
再者，依與前述試驗(1)為同樣的方法，以慢病毒建立安定表現BAIAP2L1多胜肽(同前述)或FGFR3-BAIAP2L1 △BAR融合多胜肽(同前述)之RAT-2細胞。
在PrimeSurfaceTM 96U板(住友電木公司)分別接種未經任何處理的RAT-2細胞(母細胞)、安定表現FGFR3多胜肽之RAT-2細胞、安定表現BAIAP2L1多胜肽之RAT-2細胞、安定表現FGFR3-BAIAP2L1融合多胜肽之RAT-2細胞、及安定表現FGFR3-BAIAP2L1 △BAR融合多胜肽之RAT-2細胞各2.0 x 103細胞/井，培養14日。以CellTiter-GloTM Luminescent Cell Viability Assay(Promega公司)量測經14日後之細胞數。其結果，如圖11所示，觀察到：安定表現BAIAP2L1多胜肽之RAT-2細胞不具支架非依存性的增殖能力，安定表現FGFR3-BAIAP2L1 △BAR融合多胜肽之RAT-2細胞已失去在安定表現FGFR3-BAIAP2L1融合多胜肽之RAT-2中所見的細胞支架非依存的增殖能力。
由此可確認：FGFR3-BAIAP2L1融合多胜肽對於正常細胞之轉形能力，係來自於因BAIAP2L1多胜肽帶有的二元體化促進區使FGFR3多胜肽之轉移(trans)自磷酸化亢進者。
(3)FGFR3-BAIAP2L1融合多胜肽之腫瘤形成能力之評價、及FGFR抑制劑之腫瘤增大抑制作用
將於前述試驗(1)及(2)建立之分別安定表現FGFR3多胜 肽、BAIAP2L1多胜肽、FGFR3-BAIAP2L1融合多胜肽或FGFR3-BAIAP2L1 △BAR融合多胜肽之RAT-2細胞分別對於BALB/c無毛小鼠(日本Charles river)之鼠頸部皮下以4.8-5.4 x 106個接種，觀察15日，結果如圖12所示確認：僅於接種了安定表現FGFR3-BAIAP2L1融合多胜肽之RAT-2細胞的小鼠出現腫瘤增大。
再者，對於無毛小鼠接種安定表現FGFR3-BAIAP2L1之RAT-2細胞5.04 x 106個，接種7日後，將FGFR抑制劑化合物A(同前述)懸浮於含有10% DMSO、10% Cremophor EL、15% PEG400、及15% HPCD之溶液中，以20mL/kg的濃度以經口每日1次每日對小鼠投予，結果，如圖13所示，觀察到：因為FGFR3-BAIAP2L1融合多胜肽而亢進之腫瘤的增大，由於FGFR抑制劑而以濃度依存地顯著地受抑制。
由此可確認：FGFR3-BAIAP2L1融合多胜肽有非常強的腫瘤形成能力，且此腫瘤形成能力因FGFR抑制劑而受到抑制。
【產業利用性】
本發明之由FGFR3多胜肽與其他另一種多胜肽構成的融合多胜肽，於膀胱癌細胞等各種癌細胞可觀察到專一性表現，又，表現該融合多胜肽之細胞會因為具有FGFR抑制活性之化合物而顯著地使增殖受抑制，所以藉由將本發明之融合多胜肽作為利用FGFR抑制劑所為之癌治療的生物標記，能對於個別患者決定該FGFR抑制劑是否適用及適用的態樣，能預先防止因該藥劑所為之治療中之副作用表現，且能控制達到最佳治療效果之治療態樣，可達成個人化醫療(personalized medicine)。
再者，藉由將本發明之融合多胜肽利用在作為以FGFR當成標靶之癌治療藥、亦即，當成分子標靶治療藥開發時之標靶，能夠提供對於標靶癌細胞具備高專一性及高抗腫瘤活性之FGFR抑制劑及含有該抑制劑之癌治療劑。
依此方式獲得之FGFR抑制劑，對於標靶癌細胞有高專一性，所以能提供副作用少、且有高抗腫瘤活性之癌治療藥。
再者，本發明之融合多胜肽與各種癌有密切關連性，所以不限癌患者，藉由決定在包括健康正常人的待驗者的試樣中是否存在該融合多胜肽或編碼為該融合多胜肽之多核苷酸，能針對該待驗者罹癌之容易性(對癌之感受性)、是否罹癌、或癌是否有進行進行試驗。
再者，本發明之融合多胜肽與各種癌有密切關連性，所以比較使待驗化合物作用於表現本發明之融合多胜肽之細胞(癌細胞等)時及未使其作用時在該細胞中分別的增殖水平，並鑑別誘導該細胞增殖之抑制之待驗化合物，可提供對於FGFR有高專一性之FGFR抑制劑。
<110> 中外製藥股份有限公司(CHUGAI SEIYAKU KABUSHIKI KAISHA)
<120> FGFR3融合基因及以其為標靶的醫藥
<130> C1-A1210Y1P
<150> JP 2012-214739
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<221> CDS
<222> (1)..(4467)
<400> 29
<210> 30
<211> 1488
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 30
<210> 31
<211> 3765
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(3765)
<400> 31
<210> 32
<211> 1254
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 32
<210> 33
<211> 2850
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(2850)
<400> 33
<210> 34
<211> 949
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 34
<210> 35
<211> 4461
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(4461)
<400> 35
<210> 36
<211> 1486
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 36
<210> 37
<211> 3759
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(3759)
<400> 37
<210> 38
<211> 1252
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 38
<210> 39
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Biotinylated peptide sequence
<400> 39

Claims (15)

  1. 一種具有FGFR抑制活性之化合物或其藥學上可容許鹽之用途，其係用於製備治療或預防癌症之醫藥組合物之用途，所述醫藥組合物係使用在已被確認表現包含FGFR3多胜肽以及BAIAP2L1多胜肽之融合多胜肽或具有編碼為該融合多胜肽之多核苷酸之患者，其中，該FGFR3多胜肽為由序列編號：6或7的胺基酸序列所組成的野生型多胜肽的全部或部分，其中，該BAIAP2L1多胜肽為由序列編號：8的胺基酸序列所組成的野生型多胜肽的全部或部分，以及其中，該醫藥組合物能夠抑制表現該融合多胜肽或具有編碼為該融合多胜肽之核苷酸的癌細胞的生長。
  2. 如申請專利範圍第1項之用途，其中，該癌為膀胱癌、腦腫瘤、頭頸部扁平上皮癌、肺癌、肺腺癌、肺扁平上皮癌、皮膚黑色瘤、食道癌、胃癌或肝癌。
  3. 如申請專利範圍第2項之用途，其中，該癌為膀胱癌。
  4. 如申請專利範圍第1至3項中任一項之用途，其中，該具有FGFR抑制活性之化合物或其藥學上可容許鹽係下列表示之任一化合物或其藥學上可容許鹽：[化合物I] 其中，R1、R2、R3及R4各自獨立地表示以下的基；R1，表示氫、羥基、鹵素、氰基、硝基、C1-4鹵烷基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7環烷基、C6-10芳基C1-4烷基、-OR5、-NR6R7、-(CR8R9)nZ1、-C(O)NR12R13、-SR14、-SOR15、-SO2R16、-NR17SO2R18、COOH、可選地經獨立選自P群之一或複數基取代之C6-10芳基、可選地經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基、-COR19、-COOR20、-OC(O)R21、-NR22C(O)R23、-NR24C(S)R25、-C(S)NR26R27、-SO2NR28R29、-OSO2R30、-SO3R31或-Si(R32)3；R2，表示氫、羥基、鹵素、氰基、硝基、C1-4鹵烷基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7環烷基、C6-10芳基C1-4烷基、-OR5、-NR6R7、-(CR8R9)nZ1、-C(O)NR12R13、-SR14、-SOR15、-SO2R16、-NR17SO2R18、COOH、可選地經獨立選自P群之一或複數基取代之C6-10芳基、可選地經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基、-COR19、-COOR20、-OC(O)R21、-NR22C(O)R23、-NR24C(S)R25、-C(S)NR26R27、-SO2NR28R29、-OSO2R30、-SO3R31或-Si(R32)3； 或R1及R2與此等所鍵結之原子一起形成3~10員雜環基或5~10員雜芳基，此處該雜環基或該雜芳基可選地經鹵素取代；R3，表示氫、C1-5烷基、C6-10芳基C1-6烷基或C1-4鹵烷基；R4，表示氫、鹵素、C1-3烷基、C1-4鹵烷基、羥基、氰基、硝基、C1-4烷氧基、-(CH2)nZ1、-NR6R7、-OR5、-C(O)NR12R13、-SR14、-SOR15、-SO2R16、NR17SO2R18、COOH、-COR19、-COOR20、-OC(O)R21、-NR22C(O)R23、-NR24C(S)R25、-C(S)NR26R27、-SO2NR28R29、-OSO2R30-SO3R31或-Si(R32)3；A，為5~10員雜芳基環或C6-10芳基環；R5，表示C1-5烷基、C3-7環烷基、C3-7環烷基C1-3烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、C1-3烷氧基C1-4烷基、C1-3烷氧基C1-4烷氧基C1-4烷基、C1-4胺基烷基、C1-4烷胺基C1-4烷基、二(C1-4烷基)胺基C1-4烷基、C6-10芳基、C6-10芳基C1-3烷基、可選地經獨立選自Q群之一或複數基取代之3~10員雜環基C1-3烷基、3~10員雜環基、5~10員雜芳基、5~10員雜芳基C1-3烷基、C1-6單羥基烷基、C1-6二羥基烷基或C1-6三羥基烷基；R6及R7可相同也可不同，各表示氫、C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、C1-3烷氧基C1-4烷基、C6-10芳基C1-3烷基、3~10員雜環基C1-3烷基、5~10員雜芳基C1-3烷基、C1-6單羥基烷基、C1-6二羥基烷基、C1-6三羥基烷基、3~10員雜環基、C1-4胺基烷基、C1-4烷胺基C1-4烷基、二(C1-4烷基)胺基C1-4烷基或氰基(C1-3烷基)，或R6及R7與此等所 鍵結之氮原子一起形成3~10員雜環基或5~10員雜芳基；n，表示1~3；R8及R9可相同也可不同，各表示氫、C1-4烷基或鹵素，或R8及R9也可與此等所鍵結之碳原子一起形成脂環式環；Z1，表示氫、NR10R11、-OH、或可選地經獨立選自Q群之一或複數基取代之3~10員雜環基或5~10員雜芳基；R10及R11可相同也可不同，各表示C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、C1-3烷氧基C1-4烷基、氰基(C1-3烷基)或C1-3烷基磺醯基C1-4烷基，或R10及R11也可與此等所鍵結之氮原子一起形成3~10員雜環基或5~10員雜芳基；R12及R13可相同也可不同，各表示氫、C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、C1-3烷氧基C1-4烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基、3~10員雜環基、C6-10芳基C1-4烷基、3~10員雜環基C1-3烷基、5~10員雜芳基C1-3烷基、氰基(C1-3烷基)、C1-3烷基磺醯基C1-4烷基、3~10員脂環式環、5~10員雜芳基或3~10員雜環基，或R12及R13也可與此等所鍵結之氮原子一起形成、可選地經獨立選自Q群之一或複數基取代之3~10員雜環基或5~10員雜芳基；R14，表示C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、可選地經獨立選自P群之一或複數基取代之C6-10芳基、或可選地經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R15，表示C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、可選地經獨立選自P群之一或複數基取代之C6-10芳基、或可 選地經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R16，表示C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、可選地經獨立選自P群之一或複數基取代之C6-10芳基、或可選地經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R17，表示氫或C1-4烷基；R18，表示C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、可選地經獨立選自P群之一或複數基取代之C6-10芳基、或可選地經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R19，表示氫、C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、或可選地經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R20，表示C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R21，表示C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R22，表示氫、C1-4烷基或C1-4鹵烷基；R23，表示氫、C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R24，表示氫、C1-4烷基或C1-4鹵烷基；R25，表示C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基或3~10員雜環基； R26及R27可相同也可不同，各表示氫、C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、C1-3烷氧基C1-4烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基、3~10員雜環基、C6-10芳基C1-4烷基、3~10員雜環基C1-3烷基、5~10員雜芳基C1-3烷基、氰基(C1-3烷基)、C1-3烷基磺醯基C1-4烷基、或3~10員脂環式環，或R26及R27也可與此等所鍵結之氮原子一起形成3~10員雜環基或5~10員雜芳基；R28及R29可相同也可不同，各表示氫、C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、C1-3烷氧基C1-4烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基、3~10員雜環基、C6-10芳基C1-4烷基、3~10員雜環基C1-3烷基、5~10員雜芳基C1-3烷基、氰基(C1-3烷基)、C1-3烷基磺醯基C1-4烷基、或3~10員脂環式環，或R28及R29也可與此等所鍵結之氮原子一起形成3~10員雜環基或5~10員雜芳基；R30，表示C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R31，表示C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R32，表示C1-4烷基或C6-10芳基；<P群>鹵素、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、-OH、C1-3烷氧基、C1-3鹵烷氧基、3~10員雜環基胺基、-SO2R16、-CN、-NO2、及3~10員雜環基；<Q群> 鹵素、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、-OH、C1-3烷氧基、C1-6單羥基烷基、C1-6二羥基烷基或C1-6三羥基烷基、3~10員雜環基胺、-SO2R16、-CN、-NO2、C3-7環烷基、-COR19、及可選地經C1-4烷基取代之3~10員雜環基； [化合物IV] ；或[化合物VI]
  5. 一種選擇適用抗癌劑之患者之方法，其中該抗癌劑包含具有FGFR抑制活性之化合物或其藥學上可容許鹽，其中該患者具有膀胱癌、腦腫瘤、頭頸部扁平上皮癌、肺癌、肺腺癌、肺扁平上皮癌、皮膚黑色瘤、食道癌、胃癌或肝癌，且該方法包含以下步驟：(a)從待驗者單離之試樣中確認是否存在包含FGFR3多胜肽以及BAIAP2L1多胜肽之融合多胜肽或編碼為包含FGFR3多胜肽以及BAIAP2L1多胜肽之融合多胜肽之多核苷酸，其中，該FGFR3多胜肽為由序列編號：6或7的胺基酸序列所組成的野生型多胜肽的全部或部分，其中，該BAIAP2L1多胜肽為由序列編號：8的胺基酸序列所組成的野生型多胜肽的全部或部分；以及 (b)選擇確認具有該融合多胜肽或編碼為該融合多胜肽之多核苷酸之患者作為適用該抗癌劑之患者，其中，該化合物或其藥學上可容許鹽能夠抑制表現該融合多胜肽或具有編碼為該融合多胜肽之核苷酸的癌細胞的生長。
  6. 如申請專利範圍第5項之方法，其中該具有FGFR抑制活性之化合物或其藥學上可容許鹽係下列表示之任一化合物或其藥學上可容許鹽： 其中，R1、R2、R3及R4各自獨立地表示以下的基；R1，表示氫、羥基、鹵素、氰基、硝基、C1-4鹵烷基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7環烷基、C6-10芳基C1-4烷基、-OR5、-NR6R7、-(CR8R9)nZ1、-C(O)NR12R13、-SR14、-SOR15、-SO2R16、-NR17SO2R18、COOH、可選地經獨立選自P群之一或複數基取代之C6-10芳基、可選地經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基、-COR19、-COOR20、-OC(O)R21、-NR22C(O)R23、-NR24C(S)R25、-C(S)NR26R27、-SO2NR28R29、-OSO2R30、-SO3R31或-Si(R32)3；R2，表示氫、羥基、鹵素、氰基、硝基、C1-4鹵烷基、C1-6 烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7環烷基、C6-10芳基C1-4烷基、-OR5、-NR6R7、-(CR8R9)nZ1、-C(O)NR12R13、-SR14、-SOR15、-SO2R16、-NR17SO2R18、COOH、可選地經獨立選自P群之一或複數基取代之C6-10芳基、可選地經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基、-COR19、-COOR20、-OC(O)R21、-NR22C(O)R23、-NR24C(S)R25、-C(S)NR26R27、-SO2NR28R29、-OSO2R30、-SO3R31或-Si(R32)3；或R1及R2與此等所鍵結之原子一起形成3~10員雜環基或5~10員雜芳基，此處該雜環基或該雜芳基可選地經鹵素取代；R3，表示氫、C1-5烷基、C6-10芳基C1-6烷基或C1-4鹵烷基；R4，表示氫、鹵素、C1-3烷基、C1-4鹵烷基、羥基、氰基、硝基、C1-4烷氧基、-(CH2)nZ1、-NR6R7、-OR5、-C(O)NR12R13、-SR14、-SOR15、-SO2R16、NR17SO2R18、COOH、-COR19、-COOR20、-OC(O)R21、-NR22C(O)R23、-NR24C(S)R25、-C(S)NR26R27、-SO2NR28R29、-OSO2R30-SO3R31或-Si(R32)3；A，為5~10員雜芳基環或C6-10芳基環；R5，表示C1-5烷基、C3-7環烷基、C3-7環烷基C1-3烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、C1-3烷氧基C1-4烷基、C1-3烷氧基C1-4烷氧基C1-4烷基、C1-4胺基烷基、C1-4烷胺基C1-4烷基、二(C1-4烷基)胺基C1-4烷基、C6-10芳基、C6-10芳基C1-3烷基、可選地經獨立選自Q群之一或複數基取代之3~10員雜環基C1-3烷基、3~10員雜環基、5~10員雜芳 基、5~10員雜芳基C1-3烷基、C1-6單羥基烷基、C1-6二羥基烷基或C1-6三羥基烷基；R6及R7可相同也可不同，各表示氫、C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、C1-3烷氧基C1-4烷基、C6-10芳基C1-3烷基、3~10員雜環基C1-3烷基、5~10員雜芳基C1-3烷基、C1-6單羥基烷基、C1-6二羥基烷基、C1-6三羥基烷基、3~10員雜環基、C1-4胺基烷基、C1-4烷胺基C1-4烷基、二(C1-4烷基)胺基C1-4烷基或氰基(C1-3烷基)，或R6及R7與此等所鍵結之氮原子一起形成3~10員雜環基或5~10員雜芳基；n，表示1~3；R8及R9可相同也可不同，各表示氫、C1-4烷基或鹵素，或R8及R9也可與此等所鍵結之碳原子一起形成脂環式環；Z1，表示氫、NR10R11、-OH、或可選地經獨立選自Q群之一或複數基取代之3~10員雜環基或5~10員雜芳基；R10及R11可相同也可不同，各表示C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、C1-3烷氧基C1-4烷基、氰基(C1-3烷基)或C1-3烷基磺醯基C1-4烷基，或R10及R11也可與此等所鍵結之氮原子一起形成3~10員雜環基或5~10員雜芳基；R12及R13可相同也可不同，各表示氫、C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、C1-3烷氧基C1-4烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基、3~10員雜環基、C6-10芳基C1-4烷基、3~10員雜環基C1-3烷基、5~10員雜芳基C1-3烷基、氰基(C1-3烷基)、C1-3烷基磺醯基C1-4烷基、3~10員脂環式環、5~10員雜芳基或3~10員雜環基，或R12及R13也可與此等所鍵結 之氮原子一起形成、可選地經獨立選自Q群之一或複數基取代之3~10員雜環基或5~10員雜芳基；R14，表示C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、可選地經獨立選自P群之一或複數基取代之C6-10芳基、或可選地經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R15，表示C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、可選地經獨立選自P群之一或複數基取代之C6-10芳基、或可選地經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R16，表示C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、可選地經獨立選自P群之一或複數基取代之C6-10芳基、或可選地經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R17，表示氫或C1-4烷基；R18，表示C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、可選地經獨立選自P群之一或複數基取代之C6-10芳基、或可選地經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R19，表示氫、C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、或可選地經獨立選自Q群之一或複數基取代之5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R20，表示C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基或3~10員雜環基； R21，表示C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R22，表示氫、C1-4烷基或C1-4鹵烷基；R23，表示氫、C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R24，表示氫、C1-4烷基或C1-4鹵烷基；R25，表示C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R26及R27可相同也可不同，各表示氫、C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、C1-3烷氧基C1-4烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基、3~10員雜環基、C6-10芳基C1-4烷基、3~10員雜環基C1-3烷基、5~10員雜芳基C1-3烷基、氰基(C1-3烷基)、C1-3烷基磺醯基C1-4烷基、或3~10員脂環式環，或R26及R27也可與此等所鍵結之氮原子一起形成3~10員雜環基或5~10員雜芳基；R28及R29可相同也可不同，各表示氫、C1-4烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-4鹵烷基、C1-3烷氧基C1-4烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基、3~10員雜環基、C6-10芳基C1-4烷基、3~10員雜環基C1-3烷基、5~10員雜芳基C1-3烷基、氰基(C1-3烷基)、C1-3烷基磺醯基C1-4烷基、或3~10員脂環式環，或R28及R29也可與此等所鍵結之氮原子一起形成3~10員雜環基或5~10員雜芳基；R30，表示C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基或3~10員雜環基； R31，表示C1-4烷基、C3-7環烷基、C1-4鹵烷基、C6-10芳基、5~10員雜芳基或3~10員雜環基；R32，表示C1-4烷基或C6-10芳基；<P群>鹵素、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、-OH、C1-3烷氧基、C1-3鹵烷氧基、3~10員雜環基胺基、-SO2R16、-CN、-NO2、及3~10員雜環基；<Q群>鹵素、C1-4烷基、C1-4鹵烷基、-OH、C1-3烷氧基、C1-6單羥基烷基、C1-6二羥基烷基或C1-6三羥基烷基、3~10員雜環基胺、-SO2R16、-CN、-NO2、C3-7環烷基、-COR19、及可選地經C1-4烷基取代之3~10員雜環基； [化合物III] ；或[化合物VI]
  7. 一種針對待驗者罹癌之容易性、是否罹癌、或癌是否進展予以試驗之方法，其中，該癌症為膀胱癌、腦腫瘤、頭頸部扁平上皮癌、肺癌、肺腺癌、肺扁平上皮癌、皮膚黑色瘤、食道癌、胃癌或肝癌，該方法從待驗者單離之試樣中確認是否存在包含FGFR3多胜肽以及BAIAP2L1多胜肽之融合多胜肽，或確認是否存在編碼為包含FGFR3多胜肽以及BAIAP2L1多胜肽之融合多胜肽之多核苷酸，其中，該FGFR3多胜肽為由序列編號：6或7的胺基酸序列所組成的野生型多胜肽的全部或部分，其中，該BAIAP2L1多胜肽為由序列編號：8的胺基酸序列所組成的野生型多胜肽的全部或部分，以及其中，該方法係以檢測到該融合多胜肽作為待驗者較易罹 癌、已罹癌、或癌進展之基準。
  8. 一種融合多胜肽，包含FGFR3多胜肽以及BAIAP2L1多胜肽，其中該FGFR3多胜肽為由序列編號：6或7的胺基酸序列所組成的野生型多胜肽的全部或部分，其中，該BAIAP2L1多胜肽為由序列編號：8的胺基酸序列所組成的野生型多胜肽的全部或部分。
  9. 如申請專利範圍第8項之融合多胜肽，其中該融合多胜肽來自膀胱癌或肺癌。
  10. 如申請專利範圍第8或9項之融合多胜肽，其中該融合多胜肽由序列編號：32或38的胺基酸序列所組成。
  11. 一種多核苷酸，其編碼為如申請專利範圍第8至10項中任一項之融合多胜肽，其中該多核苷酸包含序列編號：16的胺基酸序列。
  12. 如申請專利範圍第11項之多核苷酸，其中該多核苷酸包含序列編號：31或37的核苷酸序列。
  13. 一種載體，包含如申請專利範圍第11或12項之多核苷酸。
  14. 一種重組細胞，包含如申請專利範圍第13項之載體。
  15. 一種方法，其係用於檢測：(a)包含FGFR3多胜肽以及BAIAP2L1多胜肽之融合多胜肽，該方法包含使用結合於如申請專利範圍第8至10項中任一項之融合多胜肽之抗體或其抗原結合片段，檢測從待驗者單離之試樣中的該融合多胜肽之步驟；或(b)編碼為包含FGFR3多胜肽以及BAIAP2L1多胜肽之融合多胜肽之多核苷酸，該方法包含使用由分別與編碼為如 申請專利範圍第8至10項中任一項之融合多胜肽之多核苷酸雜交之正義引子及反義引子所組成、用於檢測或放大該多核苷酸之寡核苷酸引子對，檢測從待驗者單離之試樣中編碼為該融合多胜肽之多核苷酸之步驟。
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