KR20150060875A - Ｆｇｆｒ３ 융합 유전자 및 그것을 표적으로 하는 의약 - Google Patents

Ｆｇｆｒ３ 융합 유전자 및 그것을 표적으로 하는 의약 Download PDF

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누키노리 아키야마
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추가이 세이야쿠 가부시키가이샤
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Abstract

다양한 암세포에 있어서의 FGFR 코딩 유전자의 발현, 과증폭, 변이 및 전좌 등에 대해 상세한 연구를 행하여, 복수의 방광암 유래 세포 및 폐암 세포에 있어서 FGFR3 폴리펩티드가 다른 폴리펩티드와 융합된 신규한 융합 폴리펩티드가 동정, 단리되었다. 본 발명의 융합 폴리펩티드를 FGFR 저해제에 의한 암 치료에 있어서의 바이오마커로서 이용함으로써 FGFR 저해제에 의한 치료에 있어서의 부작용의 발현을 미연에 방지하며, 또한 최선의 치료 효과가 얻어지도록 치료 태양을 컨트롤하는 것이 가능하여 개별화 의료가 가능해진다.

Description

ＦＧＦＲ３ 융합 유전자 및 그것을 표적으로 하는 의약{FGFR3 fusion gene and pharmaceutical drug targeting same}
본 발명은 암세포 등의 비정상 세포에 있어서 발현하는 신규한 융합 폴리펩티드, 그 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드, 그 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 그 벡터를 포함하는 세포, 그 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는 항체 및 그의 단편, 그 폴리뉴클레오티드에 하이브리다이즈하는 올리고뉴클레오티드 프라이머, 그 폴리뉴클레오티드를 절단하는 올리고뉴클레오티드, 그 항체 또는 그 올리고뉴클레오티드를 포함하는 의약 조성물, 그 융합 폴리펩티드 또는 그 폴리뉴클레오티드의 검출방법 및 검출용 키트, 그 융합 폴리펩티드 또는 그 폴리뉴클레오티드의 존재 여부를 기준으로 하는 암에 걸리기 쉬운지, 암에 걸렸는지 또는 암이 진행되었는지 여부에 대한 시험방법, FGFR 저해제가 적용되는 암 환자를 선택하는 방법, FGFR 저해 활성을 갖는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염을 그 융합 폴리펩티드를 발현 또는 그 폴리뉴클레오티드를 갖는 환자에게 투여되도록 사용되는 것을 특징으로 하는 암 치료용 의약 조성물, FGFR 저해 활성을 갖는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염의 유효량을 그 융합 폴리펩티드를 발현 또는 그 폴리뉴클레오티드를 갖는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 암의 치료 또는 예방방법, 그 융합 폴리펩티드를 발현 또는 그 폴리뉴클레오티드를 갖는 환자에게 투여하기 위한 암 치료용 의약 조성물의 제조에 있어서의 FGFR 저해 활성을 갖는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염의 사용, 그 융합 폴리펩티드를 발현 또는 그 폴리뉴클레오티드를 갖는 환자의 치료 또는 예방에 있어서의 사용을 위한 FGFR 저해 활성을 갖는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염 및 FGFR 저해제를 동정하는 방법 등에 관한 것이다.
종래부터 암이라는 질환은 모든 장기 및 조직에서 발생하여 난치성이며 치사성이 높은 매우 고질적인 질환인 것은 말할 것도 없는데, 최근의 통계 데이터에 있어서도 2명 중 1명이 일생 중에 암으로 진단되고, 또한 남성의 경우에는 4명 중 1명이, 여성의 경우에는 6명 중 1명이 암으로 사망한다는 상황으로서 매우 심각한 질환이다.
오늘날까지 다수의 항암제가 개발되어서 많은 암 환자에게 처방되어 일정의 치료 효과를 올리고 있으나, 한편으로 항암제는 부작용이 큰 것도 주지의 사실이다. 또한 항암제에 대한 반응, 즉 치료 효과 및 부작용에는 개인차가 있는 것도 오래 전부터 알려져 있으나, 그 원인은 해명되지 않았다.
최근 들어 과학 기술의 진전, 특히 게놈 약리학(Pharmacogenomics：PGx)의 급속한 진보에 의해, 암을 비롯한 각종 질환(암, 당뇨병, 고혈압 등)의 분자 레벨에서의 해명이 가능해져 동일한 증상을 갖는 환자 간에 있어서 확인되는 다양한 개인차, 즉 투여된 약물의 흡수, 분포, 대사 및 배설의 차이, 작용 부위에서의 반응성의 차이, 병태의 차이 및 질환에 대한 감수성의 차이가 유전적 다형성(유전자 변이를 포함한다)이 관여하고 있는 경우가 있는 것이 명확해졌다.
이 사실로부터, 예를 들면 이미 암에 걸린 환자에게 있어서는 항암제가 투여되기 전에 사전에 그 환자의 게놈 정보를 해석하여, 특정 유전적 다형의 존재 여부를 기준으로 투여되어야 하는 약제를 선택하고 또한 처방의 태양을 결정함으로써 부작용을 줄이는 동시에 치료 효과의 증대를 도모하는 것을 기대할 수 있다.
또한 마찬가지로 건강한 정상인에 있어서도 이 게놈 약리학을 사용하여 각 사람의 게놈 정보를 해석해서, 특정 유전적 다형의 존재 여부를 기준으로 약물에 대한 반응성뿐만 아니라 질환 감수성(질환에 걸리기 쉬움)을 사전에 예측하는 것이 가능해진다.
그리고 그렇게 해서 명확해진 특정 유전적 다형 또는 그것에 유래하는 변이 폴리펩티드를 바이오마커(bio-marker)로 한 이 새로운 치료방법은 오더메이드 의료(order-made medicine), 테일러메이드 의료(tailor-made medicine), 개별화 의료(personalized medicine) 또는 커스텀메이드 의료(custom-made medicine)라 칭해져 각국에 있어서 의약품의 임상 개발 및 의료 현장에서 도입되게 되었다.
또한 마찬가지로 그렇게 해서 명확해진 당해 특정 유전적 다형 또는 그것에 유래하는 변이 폴리펩티드를 표적으로 하는 약제는 분자 표적 치료제라 칭해져 적극적인 개발이 이루어지기 시작하였다.
섬유아세포 증식인자 수용체(FGFR)는 수용체형 티로신 키나아제 패밀리에 속해 있는 키나아제로, FGFR1, FGFR2, FGFR3, FGFR4에 의해 FGFR 패밀리를 구성하고 있다. 리간드는 섬유아세포 증식인자(FGF)로, 22종의 구조적으로 유사한 단백질이 패밀리를 구성하고 있다.
FGFR을 매개로 하여 전달되는 시그널은 MAPK 경로나 PI3K/AKT 경로로 흐르고, 이 시그널 전달은 암에 있어서는 세포 증식, 혈관 신생, 세포 유주, 침윤, 전이 등에 관여하고 있는 것, 또한 FGFR은 과잉 발현, 유전자 과증폭, 변이, 전좌에 의해 활성화하는 것이 보고되어 있다(비특허문헌 1). 예를 들면 FGFR3는 다발성 골수종에서 유전자 전좌(비특허문헌 2), 방광암에서 유전자 변이(비특허문헌 3), 난소암, 비소세포성 폐암, 간세포암에서 과잉 발현이 알려져 있다.
이들 사실로부터 FGFR과 암의 관련성이 시사되고 있어, FGFR을 저해하는 활성을 갖는 화합물의 항암제로서의 개발이 시도되고 있다(비특허문헌 4, 비특허문헌 5).
또한 극히 최근에 뇌종양 교아세포종(brain tumor glioblastoma multiforme (GBM))의 극히 소수의 증례(97 샘플 중의 3 샘플；3.1%)에 있어서 FGFR3와 형질전환 산성 코일드 코일 단백질 3(transforming acidic coiled-coil；TACC3)의 융합 폴리펩티드 및 FGFR1과 TACC1의 융합 폴리펩티드의 존재가 추정되는 유전자의 전좌가 발견된 것이 보고되었으나(비특허문헌 6), FGFR과 다른 단백질의 융합 폴리펩티드와 각종 암종의 관련성은 여전히 명확해져 있지 않다.
Cytokine & Growth Factor Reviews, 2005, 16：139-149 Blood, 2003, 101：4569-4575 Nature Genetics, 1999 Sep., 23(1)：18-20 Cancer Research, 2012, 72：2045-2056 J. Med. Chem., 2011, 54：7066-7083 Science, Vol. 337, Issue 6099, 7 September 2012：1231-1235
본 발명은 이러한 상황을 감안하여 FGFR 저해제에 의한 암 치료에 있어서의 개별화 의료(personalized medicine)를 가능하게 하는 바이오마커로서 이용 가능한 암세포 특이적인 분자이며, 또한 FGFR을 표적으로 하는 분자 표적 치료제의 개발에 유용한 암세포 특이적인 분자를 동정, 제공하는 동시에 그 분자를 바이오마커 또는 분자 표적으로서 사용한 개별화 의료 및 분자 표적 치료제의 개발에 있어서 사용하는 다양한 물질 및 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
전술한 바와 같이, FGFR과 암의 관련성이 시사되고는 있으나, FGFR과 다른 단백질의 융합 폴리펩티드와 각종 암종의 관련성은 명확해져 있지 않다.
본 발명자들은 상기 과제를 해결하기 위해, 다양한 암세포에 있어서의 FGFR 코딩 유전자의 발현, 과증폭, 변이 및 전좌 등에 대해 정력적으로 연구를 행하여, 복수의 방광암 세포 및 폐암 세포에 있어서 FGFR3 폴리펩티드 유전자가 다른 폴리펩티드 유전자와 융합된 신규한 융합 폴리펩티드 유전자, 구체적으로는 FGFR3 폴리펩티드 유전자와 BAIAP2L1 폴리펩티드 유전자의 융합 폴리펩티드 유전자 및 FGFR3 폴리펩티드 유전자와 TACC3 폴리펩티드 유전자의 융합 폴리펩티드 유전자를 발견하여 본원 발명을 완성하였다.
즉 본 발명은 구체적으로는, 아래에 기재되는 암세포 등의 비정상 세포에 있어서 발현하는 신규한 융합 폴리펩티드, 그 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드, 그 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 그 벡터를 포함하는 세포, 그 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는 항체 및 그의 단편, 그 폴리뉴클레오티드에 하이브리다이즈하는 올리고뉴클레오티드 프라이머, 그 폴리뉴클레오티드를 절단하는 올리고뉴클레오티드, 그 항체 또는 그 올리고뉴클레오티드를 포함하는 의약 조성물, 그 융합 폴리펩티드 또는 그 폴리뉴클레오티드의 검출방법 및 검출용 키트, 그 융합 폴리펩티드 또는 그 폴리뉴클레오티드의 존재 여부를 기준으로 하는 암에 걸리기 쉬운지, 암에 걸렸는지 또는 암이 진행되었는지 여부의 시험방법, FGFR 저해제가 적용되는 암 환자를 선택하는 방법, 그 융합 폴리펩티드를 발현 또는 그 폴리뉴클레오티드를 갖는 환자에게 투여되도록 사용되는 것을 특징으로 하는 암 치료용 의약 조성물 및 FGFR 저해제를 동정하는 방법 등에 관한 것이다.
〔1〕
FGFR3 폴리펩티드와 BAIAP2L1 폴리펩티드 또는 TACC3 폴리펩티드를 포함하는 융합 폴리펩티드：
여기서 상기 FGFR3 폴리펩티드는 서열번호 6 또는 7에 기재되는 아미노산 서열로 이루어지는 야생형 폴리펩티드의 일부 또는 전부, 또는 그 야생형 폴리펩티드에 있어서 1 또는 복수의 아미노산이 치환, 결실 또는 삽입되어 있는 변이 폴리펩티드의 일부 또는 전부이고,
상기 BAIAP2L1 폴리펩티드는 서열번호 8에 기재되는 아미노산 서열로 이루어지는 야생형 폴리펩티드의 일부 또는 전부, 또는 그 야생형 폴리펩티드에 있어서 1 또는 복수의 아미노산이 치환, 결실 또는 삽입되어 있는 변이 폴리펩티드의 일부 또는 전부이며,
상기 TACC3 폴리펩티드는 서열번호 9에 기재되는 아미노산 서열로 이루어지는 야생형 폴리펩티드의 일부 또는 전부, 또는 그 야생형 폴리펩티드에 있어서 1 또는 복수의 아미노산이 치환, 결실 또는 삽입되어 있는 변이 폴리펩티드의 일부 또는 전부이다.
〔2〕
상기 FGFR3 폴리펩티드가 서열번호 6 또는 7에 기재되는 아미노산 서열로 이루어지는 야생형 폴리펩티드인, 상기 〔1〕에 기재된 융합 폴리펩티드.
〔3〕
상기 융합 폴리펩티드가 FGFR3 폴리펩티드와 BAIAP2L1 폴리펩티드를 포함하는 융합 폴리펩티드인, 상기 〔1〕 또는 〔2〕에 기재된 융합 폴리펩티드.
〔4〕
상기 융합 폴리펩티드가 서열번호 32 또는 38에 기재되는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드인, 상기 〔3〕에 기재된 융합 폴리펩티드.
〔5〕
상기 융합 폴리펩티드가 FGFR3 폴리펩티드와 TACC3 폴리펩티드를 포함하는 융합 폴리펩티드인, 상기 〔1〕 또는 〔2〕에 기재된 융합 폴리펩티드.
〔6〕
상기 융합 폴리펩티드가 서열번호 28, 30, 34 또는 36에 기재되는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드인, 상기 〔5〕에 기재된 융합 폴리펩티드.
〔7〕
상기 융합 폴리펩티드가 방광암 또는 폐암 유래인, 상기 〔1〕 내지 〔5〕 중 어느 하나에 기재된 융합 폴리펩티드.
〔8〕
상기 〔1〕 내지 〔7〕 중 어느 하나에 기재된 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드.
〔9〕
서열번호 14, 15 또는 16에 기재되는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 상기 〔8〕에 기재된 폴리뉴클레오티드.
〔10〕
서열번호 27, 29, 31, 33, 35 또는 37에 기재되는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 상기 〔9〕에 기재된 폴리뉴클레오티드.
〔11〕
상기 〔8〕 내지 〔10〕 중 어느 하나에 기재된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터.
〔12〕
상기 〔11〕에 기재된 벡터를 포함하는 재조합 세포.
〔13〕
상기 〔1〕 내지 〔7〕 중 어느 하나에 기재된 융합 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
〔14〕
상기 〔1〕 내지 〔7〕 중 어느 하나에 기재된 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드에 각각 하이브리다이즈하는 센스 프라이머 및 안티센스 프라이머로 이루어지는 상기 폴리뉴클레오티드의 검출 또는 증폭을 위한 한쌍의 올리고뉴클레오티드 프라이머.
〔15〕
상기 〔1〕 내지 〔7〕 중 어느 하나에 기재된 융합 폴리펩티드를 코드하는 mRNA 폴리뉴클레오티드에 결합하여 그 mRNA 폴리뉴클레오티드의 단백질로의 번역을 저해하는 활성을 갖는 올리고뉴클레오티드.
〔16〕
상기 올리고뉴클레오티드가 mRNA 폴리펩티드를 절단하는 siRNA인, 상기 〔15〕에 기재된 올리고뉴클레오티드.
〔17〕
상기 〔13〕에 기재된 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함하는 의약 조성물.
〔18〕
상기 〔15〕 또는 〔16〕에 기재된 올리고뉴클레오티드를 포함하는 의약 조성물.
〔19〕
상기 〔1〕 내지 〔7〕 중 어느 하나에 기재된 융합 폴리펩티드에 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 사용하여 피험자로부터 단리된 시료 중에 있어서 상기 융합 폴리펩티드를 검출하는 공정을 포함하는, FGFR3 폴리펩티드와 BAIAP2L1 폴리펩티드 또는 TACC3 폴리펩티드를 포함하는 융합 폴리펩티드의 검출방법.
〔20〕
상기 〔1〕 내지 〔7〕 중 어느 하나에 기재된 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드에 각각 하이브리다이즈하는 센스 프라이머 및 안티센스 프라이머로 이루어지는 상기 폴리뉴클레오티드의 검출 또는 증폭을 위한 한쌍의 올리고뉴클레오티드 프라이머를 사용하여 피험자로부터 단리된 시료 중에 있어서 상기 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드를 검출하는 공정을 포함하는, FGFR3 폴리펩티드와 BAIAP2L1 폴리펩티드 또는 TACC3 폴리펩티드를 포함하는 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드의 검출방법.
〔21〕
상기 〔1〕 내지 〔7〕 중 어느 하나에 기재된 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드에 각각 하이브리다이즈하는 센스 프라이머 및 안티센스 프라이머로 이루어지는 상기 폴리뉴클레오티드의 검출 또는 증폭을 위한 한쌍의 올리고뉴클레오티드 프라이머를 포함하는, FGFR3 폴리펩티드와 BAIAP2L1 폴리펩티드 또는 TACC3 폴리펩티드를 포함하는 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드의 검출용 키트.
〔22〕
상기 〔1〕 내지 〔7〕 중 어느 하나에 기재된 융합 폴리펩티드에 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함하는, FGFR3 폴리펩티드와 BAIAP2L1 폴리펩티드 또는 TACC3 폴리펩티드를 포함하는 융합 폴리펩티드의 검출용 키트.
〔23〕
피험자로부터 단리된 시료 중에 있어서 상기 〔1〕 내지 〔7〕 중 어느 하나에 기재된 융합 폴리펩티드의 존재 여부를 결정하여 그 융합 폴리펩티드가 검출된 경우에는 암에 걸리기 쉽고, 암에 걸렸거나 또는 암이 진행되어 있다는 기준에 기초하여 피험자가 암에 걸리기 쉬운지, 암에 걸렸는지 또는 암이 진행되었는지 여부에 대해 시험하는 방법.
〔24〕
피험자로부터 단리된 시료 중에 있어서 상기 〔1〕 내지 〔7〕 중 어느 하나에 기재된 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드의 존재 여부를 결정하여 그 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드가 검출된 경우에는 암에 걸리기 쉽고, 암에 걸렸거나 또는 암이 진행되어 있다는 기준에 기초하여 피험자가 암에 걸리기 쉬운지, 암에 걸렸는지 또는 암이 진행되었는지 여부에 대해 시험하는 방법.
〔25〕
상기 암이 방광암, 뇌종양, 두경부 편평상피암, 폐암, 폐선암, 폐 편평상피암, 피부 흑색종, 식도암, 위암 또는 간암인, 상기 〔23〕 또는 〔24〕에 기재된 방법.
〔26〕
아래의 공정을 포함하는, FGFR 저해 활성을 갖는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염을 함유하는 항암제가 적용되는 환자를 선택하는 방법：
(a) 피험자로부터 단리된 시료 중에 있어서 상기 〔1〕 내지 〔7〕 중 어느 하나에 기재된 융합 폴리펩티드의 존재 여부를 결정하는 공정；
(b) 상기 융합 폴리펩티드의 존재가 확인된 환자를 상기 항암제가 적용되는 환자로서 선택하는 공정.
〔27〕
아래의 공정을 포함하는, FGFR 저해 활성을 갖는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염을 함유하는 항암제가 적용되는 환자를 선택하는 방법：
(a) 피험자로부터 단리된 시료 중에 있어서 상기 〔1〕 내지 〔7〕 중 어느 하나에 기재된 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드의 존재 여부를 결정하는 공정；
(b) 상기 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드의 존재가 확인된 환자를 상기 항암제가 적용되는 환자로서 선택하는 공정.
〔28〕
상기 암이 방광암, 뇌종양, 두경부 편평상피암, 폐암, 폐선암, 폐 편평상피암, 피부 흑색종, 식도암, 위암 또는 간암인, 상기 〔26〕 또는 〔27〕에 기재된 방법.
〔29〕
상기 FGFR 저해 활성을 갖는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염이 하기 식으로 나타내어지는 어느 하나의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염인, 상기 〔26〕 내지 〔28〕 중 어느 하나에 기재된 방법：
[화합물 1]
Figure pct00001
(식 중, R1~R4는 각각 독립적으로 아래의 기를 나타낸다；
R1은 수소, 히드록시, 할로겐, 시아노, 니트로, C1 - 4할로알킬, C1 - 6알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C3 - 7시클로알킬, C6 - 10아릴C1 - 4알킬, -OR5, -NR6R7, -(CR8R9)nZ1, -C(O)NR12R13, -SR14, -SOR15, -SO2R16, -NR17SO2R18, COOH, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6-10아릴, Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원(員) 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴, -COR19, -COOR20, -OC(O)R21, -NR22C(O)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR26R27, -SO2NR28R29, -OSO2R30, -SO3R31 또는 -Si(R32)3를 나타내고；
R2는 수소, 히드록시, 할로겐, 시아노, 니트로, C1 - 4할로알킬, C1 - 6알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C3 - 7시클로알킬, C6 - 10아릴C1 - 4알킬, -OR5, -NR6R7, -(CR8R9)nZ1, -C(O)NR12R13, -SR14, -SOR15, -SO2R16, -NR17SO2R18, COOH, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6-10아릴, Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴, -COR19, -COOR20, -OC(O)R21, -NR22C(O)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR26R27, -SO2NR28R29, -OSO2R30, -SO3R31 또는 -Si(R32)3를 나타내며；
또는 R1 및 R2는 그들이 결합하고 있는 원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성하고, 여기서 상기 헤테로시클릴 또는 상기 헤테로아릴은 할로겐으로 치환되어 있어도 되며；
R3는 수소, C1 - 5알킬, C6 - 10아릴C1 - 6알킬 또는 C1 - 4할로알킬을 나타내고；
R4는 수소, 할로겐, C1 - 3알킬, C1 - 4할로알킬, 히드록시, 시아노, 니트로, C1 - 4알콕시, -(CH2)nZ1, -NR6R7, -OR5, -C(O)NR12R13, -SR14, -SOR15, -SO2R16, NR17SO2R18, COOH, -COR19, -COOR20, -OC(O)R21, -NR22C(O)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR26R27, -SO2NR28R29, -OSO2R30, -SO3R31 또는 -Si(R32)3를 나타내며；
A는 5~10원 헤테로아릴 고리 또는 C6 - 10아릴 고리이고；
R5는 C1 - 5알킬, C3 - 7시클로알킬, C3 - 7시클로알킬C1 - 3알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1-4할로알킬, C1 - 3알콕시C1 - 4알킬, C1 - 3알콕시C1 - 4알콕시C1 - 4알킬, C1 - 4아미노알킬, C1 - 4알킬아미노C1- 4알킬, 디(C1-4알킬)아미노C1 - 4알킬, C6 - 10아릴, C6 - 10아릴C1 - 3알킬, Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 3~10원 헤테로시클릴C1- 3알킬, 3~10원 헤테로시클릴, 5~10원 헤테로아릴, 5~10원 헤테로아릴C1 - 3알킬, C1 - 6모노히드록시알킬, C1 - 6디히드록시알킬 또는 C1 - 6트리히드록시알킬을 나타내며；
R6 및 R7은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2-6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕시C1 - 4알킬, C6 - 10아릴C1 - 3알킬, 3~10원 헤테로시클릴C1-3알킬, 5~10원 헤테로아릴C1 - 3알킬, C1 - 6모노히드록시알킬, C1 - 6디히드록시알킬, C1 - 6트리히드록시알킬, 3~10원 헤테로시클릴, C1 - 4아미노알킬, C1 - 4알킬아미노C1 - 4알킬, 디(C1-4알킬)아미노C1 - 4알킬 또는 시아노(C1-3알킬)을 나타내거나, 또는 R6 및 R7은 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성하고；
n은 1~3을 나타내며；
R8 및 R9은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1 - 4알킬 또는 할로겐을 나타내거나, 또는 R8 및 R9은 그들이 결합하고 있는 탄소원자와 함께 지환식 고리를 형성해도 되고；
Z1은 수소, NR10R11, -OH, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 나타내며；
R10 및 R11은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕시C1 - 4알킬, 시아노(C1 - 3알킬) 또는 C1 - 3알킬설포닐C1 - 4알킬을 나타내거나, 또는 R10 및 R11은 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성해도 되고；
R12 및 R13은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕시C1 - 4알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴, 3~10원 헤테로시클릴, C6 - 10아릴C1 - 4알킬, 3~10원 헤테로시클릴C1 - 3알킬, 5~10원 헤테로아릴C1- 3알킬, 시아노(C1 - 3알킬), C1 - 3알킬설포닐C1 - 4알킬, 3~10원 지환식 고리, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내거나, 또는 R12 및 R13은 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성해도 되고；
R14은 C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내며；
R15은 C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
R16은 C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내며；
R17은 수소 또는 C1 - 4알킬을 나타내고；
R18은 C1-4알킬, C2-6알케닐, C2-6알키닐, C1-4할로알킬, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6-10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내며；
R19은 수소, C1-4알킬, C3-7시클로알킬, C1-4할로알킬, C6-10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
R20는 C1-4알킬, C3-7시클로알킬, C1-4할로알킬, C6-10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내며；
R21은 C1-4알킬, C3-7시클로알킬, C1-4할로알킬, C6-10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
R22는 수소, C1-4알킬 또는 C1-4할로알킬을 나타내며；
R23는 수소, C1-4알킬, C3-7시클로알킬, C1-4할로알킬, C6-10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
R24는 수소, C1-4알킬 또는 C1-4할로알킬을 나타내며；
R25는 C1-4알킬, C3-7시클로알킬, C1-4할로알킬, C6-10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
R26 및 R27은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕실C1 - 4알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴, 3~10원 헤테로시클릴, C6 - 10아릴C1 - 4알킬, 3~10원 헤테로시클릴C1 - 3알킬, 5~10원 헤테로아릴C1- 3알킬, 시아노(C1 - 3알킬), C1 - 3알킬설포닐C1 - 4알킬 또는 3~10원 지환식 고리를 나타내거나, 또는 R26 및 R27은 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성해도 되고；
R28 및 R29은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕실C1 - 4알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴, 3~10원 헤테로시클릴, C6 - 10아릴C1 - 4알킬, 3~10원 헤테로시클릴C1 - 3알킬, 5~10원 헤테로아릴C1- 3알킬, 시아노(C1 - 3알킬), C1 - 3알킬설포닐C1 - 4알킬 또는 3~10원 지환식 고리를 나타내거나, 또는 R28 및 R29은 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성해도 되고；
R30는 C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내며；
R31은 C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
R32는 C1 - 4알킬 또는 C6 - 10아릴을 나타내며；
<P군>
할로겐, C1 - 4알킬, C1 - 4할로알킬, -OH, C1 - 3알콕시, C1 - 3할로알콕시, 3~10원 헤테로시클릴아미노, -SO2R16, -CN, -NO2 및 3~10원 헤테로시클릴.
<Q군>
할로겐, C1 - 4알킬, C1 - 4할로알킬, -OH, C1 - 3알콕시, C1 - 6모노히드록시알킬, C1 - 6디히드록시알킬 또는 C1 - 6트리히드록시알킬, 3~10원 헤테로시클릴아민, -SO2R16, -CN, -NO2, C3 - 7시클로알킬, -COR19 및 C1 - 4알킬로 치환되어 있어도 되는 3~10원 헤테로시클릴.
[화합물 2]
Figure pct00002
[화합물 3]
Figure pct00003
[화합물 4]
Figure pct00004
[화합물 5]
Figure pct00005
, 또는
[화합물 6]
Figure pct00006
.
〔30〕
상기 FGFR 저해 활성을 갖는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염이 식(I)에 나타내어지는 화합물로서, A가 인돌이고, R3 및 R4가 모두 수소인 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염인, 상기 〔29〕에 기재된 방법.
〔31〕
FGFR 저해 활성을 갖는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염이, 상기 〔1〕 내지 〔7〕 중 어느 하나에 기재된 융합 폴리펩티드를 발현하거나 또는 그 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드를 갖는 환자에게 투여되도록 사용되는 것을 특징으로 하는, 상기 화합물을 함유하는 암 치료용 의약 조성물.
〔32〕
상기 환자가 상기 〔26〕 내지 〔30〕 중 어느 하나에 기재된 방법에 의해 선택된 환자인, 상기 〔31〕에 기재된 암 치료용 의약 조성물.
〔33〕
상기 암이 방광암, 뇌종양, 두경부 편평상피암, 폐암, 폐선암, 폐 편평상피암, 피부 흑색종, 식도암, 위암 또는 간암인, 상기 〔31〕 또는 〔32〕에 기재된 암 치료용 의약 조성물.
〔34〕
상기 암이 방광암인, 상기 〔31〕 또는 〔32〕에 기재된 암 치료용 의약 조성물.
〔35〕
상기 방광암이 TNM 병기 분류(TNM classification)에 있어서 스테이지 3 이상의 병기로 분류되는, 상기 〔34〕에 기재된 암 치료용 의약 조성물.
〔36〕
상기 FGFR 저해 활성을 갖는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염이 하기 식으로 나타내어지는 어느 하나의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염인, 상기 〔31〕 내지 〔35〕 중 어느 하나에 기재된 암 치료용 의약 조성물：
[화합물 1]
Figure pct00007
(식 중, R1~R4는 각각 독립적으로 아래의 기를 나타낸다；
R1은 수소, 히드록시, 할로겐, 시아노, 니트로, C1-4할로알킬, C1-6알킬, C2-6알케닐, C2 - 6알키닐, C3 - 7시클로알킬, C6 - 10아릴C1 - 4알킬, -OR5, -NR6R7, -(CR8R9)nZ1, -C(O)NR12R13, -SR14, -SOR15, -SO2R16, -NR17SO2R18, COOH, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴, -COR19, -COOR20, -OC(O)R21, -NR22C(O)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR26R27, -SO2NR28R29, -OSO2R30, -SO3R31 또는 -Si(R32)3를 나타내고；
R2는 수소, 히드록시, 할로겐, 시아노, 니트로, C1-4할로알킬, C1-6알킬, C2-6알케닐, C2-6알키닐, C3-7시클로알킬, C6-10아릴C1-4알킬, -OR5, -NR6R7, -(CR8R9)nZ1, -C(O)NR12R13, -SR14, -SOR15, -SO2R16, -NR17SO2R18, COOH, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6-10아릴, Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴, -COR19, -COOR20, -OC(O)R21, -NR22C(O)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR26R27, -SO2NR28R29, -OSO2R30, -SO3R31 또는 -Si(R32)3를 나타내며；
또는 R1 및 R2는 그들이 결합하고 있는 원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성하고, 여기서 상기 헤테로시클릴 또는 상기 헤테로아릴은 할로겐으로 치환되어 있어도 되고；
R3는 수소, C1-5알킬, C6-10아릴C1-6알킬 또는 C1-4할로알킬을 나타내며；
R4는 수소, 할로겐, C1-3알킬, C1-4할로알킬, 히드록시, 시아노, 니트로, C1-4알콕시, -(CH2)nZ1, -NR6R7, -OR5, -C(O)NR12R13, -SR14, -SOR15, -SO2R16, NR17SO2R18, COOH, -COR19, -COOR20, -OC(O)R21, -NR22C(O)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR26R27, -SO2NR28R29, -OSO2R30, -SO3R31 또는 -Si(R32)3를 나타내고；
A는 5~10원 헤테로아릴 고리 또는 C6-10아릴 고리이며；
R5는 C1-5알킬, C3-7시클로알킬, C3-7시클로알킬C1-3알킬, C2-6알케닐, C2-6알키닐, C1-4할로알킬, C1 - 3알콕실C1 - 4알킬, C1 - 3알콕실C1 - 4알콕시C1 - 4알킬, C1 - 4아미노알킬, C1 - 4알킬아미노C1- 4알킬, 디(C1-4알킬)아미노C1 - 4알킬, C6 - 10아릴, C6 - 10아릴C1 - 3알킬, Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 3~10원 헤테로시클릴C1 -3알킬, 3~10원 헤테로시클릴, 5~10원 헤테로아릴, 5~10원 헤테로아릴C1 - 3알킬, C1 - 6모노히드록시알킬, C1 - 6디히드록시알킬 또는 C1 - 6트리히드록시알킬을 나타내고；
R6 및 R7은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1-4알킬, C2-6알케닐, C2-6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕시C1 - 4알킬, C6 - 10아릴C1 - 3알킬, 3~10원 헤테로시클릴C1-3알킬, 5~10원 헤테로아릴C1 - 3알킬, C1 - 6모노히드록시알킬, C1 - 6디히드록시알킬, C1 -6트리히드록시알킬, 3~10원 헤테로시클릴, C1 - 4아미노알킬, C1 - 4알킬아미노C1 - 4알킬, 디(C1-4알킬)아미노C1 - 4알킬 또는 시아노(C1-3알킬)을 나타내거나, 또는 R6 및 R7은 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성하며；
n은 1~3을 나타내고；
R8 및 R9은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1 - 4알킬 또는 할로겐을 나타내거나, 또는 R8 및 R9은 그들이 결합하고 있는 탄소원자와 함께 지환식 고리를 형성해도 되고；
Z1은 수소, NR10R11, -OH, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 나타내며；
R10 및 R11은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕시C1 - 4알킬, 시아노(C1 - 3알킬) 또는 C1 - 3알킬설포닐C1 - 4알킬을 나타내거나, 또는 R10 및 R11은 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성해도 되고；
R12 및 R13은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2-6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕시C1 - 4알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴, 3~10원 헤테로시클릴, C6 - 10아릴C1 - 4알킬, 3~10원 헤테로시클릴C1 - 3알킬, 5~10원 헤테로아릴C1 -3알킬, 시아노(C1 - 3알킬), C1 - 3알킬설포닐C1 - 4알킬, 3~10원 지환식 고리, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내거나, 또는 R12 및 R13은 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성해도 되며；
R14은 C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
R15은 C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내며；
R16은 C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
R17은 수소 또는 C1 - 4알킬을 나타내며；
R18은 C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
R19은 수소, C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내며；
R20는 C1-4알킬, C3-7시클로알킬, C1-4할로알킬, C6-10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
R21은 C1-4알킬, C3-7시클로알킬, C1-4할로알킬, C6-10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내며；
R22는 수소, C1 - 4알킬 또는 C1 - 4할로알킬을 나타내고；
R23는 수소, C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내며；
R24는 수소, C1 - 4알킬 또는 C1 - 4할로알킬을 나타내고；
R25는 C1-4알킬, C3-7시클로알킬, C1-4할로알킬, C6-10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내며；
R26 및 R27은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕실C1 - 4알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴, 3~10원 헤테로시클릴, C6 - 10아릴C1 - 4알킬, 3~10원 헤테로시클릴C1 - 3알킬, 5~10원 헤테로아릴C1 -3알킬, 시아노(C1 - 3알킬), C1 - 3알킬설포닐C1 - 4알킬 또는 3~10원 지환식 고리를 나타내거나, 또는 R26 및 R27은 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성해도 되고；
R28 및 R29은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕실C1 - 4알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴, 3~10원 헤테로시클릴, C6 - 10아릴C1 - 4알킬, 3~10원 헤테로시클릴C1 - 3알킬, 5~10원 헤테로아릴C1 -3알킬, 시아노(C1 - 3알킬), C1 - 3알킬설포닐C1 - 4알킬 또는 3~10원 지환식 고리를 나타내거나, 또는 R28 및 R29은 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성해도 되고；
R30는 C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내며；
R31은 C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
R32는 C1 - 4알킬 또는 C6 - 10아릴을 나타내며；
<P군>
할로겐, C1 - 4알킬, C1 - 4할로알킬, -OH, C1 - 3알콕시, C1 - 3할로알콕시, 3~10원 헤테로시클릴아미노, -SO2R16, -CN, -NO2 및 3~10원 헤테로시클릴.
<Q군>
할로겐, C1 - 4알킬, C1 - 4할로알킬, -OH, C1 - 3알콕시, C1 - 6모노히드록시알킬, C1 - 6디히드록시알킬 또는 C1 - 6트리히드록시알킬, 3~10원 헤테로시클릴아민, -SO2R16, -CN, -NO2, C3 - 7시클로알킬, -COR19 및 C1 - 4알킬로 치환되어 있어도 되는 3~10원 헤테로시클릴.
[화합물 2]
Figure pct00008
[화합물 3]
Figure pct00009
[화합물 4]
Figure pct00010
[화합물 5]
Figure pct00011
, 또는
[화합물 6]
Figure pct00012
.
〔37〕
상기 FGFR 저해 활성을 갖는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염이 식(I)에 나타내어지는 화합물로서, A가 인돌이고, R3 및 R4가 모두 수소인 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염인, 상기 〔36〕에 기재된 암 치료용 의약 조성물.
〔38〕
FGFR 저해 활성을 갖는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염의 유효량을, 상기 〔1〕 내지 〔7〕 중 어느 하나에 기재된 융합 폴리펩티드를 발현하거나 또는 그 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드를 갖는 암 환자에게 투여하는 것을 포함하는 암을 치료 또는 예방하는 방법.
〔39〕
상기 환자가 상기 〔26〕 내지 〔30〕 중 어느 하나에 기재된 방법에 의해 선택된 환자인, 상기 〔38〕에 기재된 방법.
〔40〕
상기 암이 방광암, 뇌종양, 두경부 편평상피암, 폐암, 폐선암, 폐 편평상피암, 피부 흑색종, 식도암, 위암 또는 간암인, 상기 〔38〕 또는 〔39〕에 기재된 방법.
〔41〕
상기 암이 방광암인, 상기 〔38〕 또는 〔39〕에 기재된 방법.
〔42〕
상기 방광암이 TNM 병기 분류에 있어서 스테이지 3 이상의 병기로 분류되는, 상기 〔41〕에 기재된 방법.
〔43〕
상기 FGFR 저해 활성을 갖는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염이 하기 식으로 나타내어지는 어느 하나의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염인, 상기 〔38〕 내지 〔42〕 중 어느 하나에 기재된 방법：
[화합물 1]
Figure pct00013
(식 중, R1~R4는 각각 독립적으로 아래의 기를 나타낸다；
R1은 수소, 히드록시, 할로겐, 시아노, 니트로, C1 - 4할로알킬, C1 - 6알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C3 - 7시클로알킬, C6 - 10아릴C1 - 4알킬, -OR5, -NR6R7, -(CR8R9)nZ1, -C(O)NR12R13, -SR14, -SOR15, -SO2R16, -NR17SO2R18, COOH, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴, -COR19, -COOR20, -OC(O)R21, -NR22C(O)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR26R27, -SO2NR28R29, -OSO2R30, -SO3R31 또는 -Si(R32)3를 나타내고；
R2는 수소, 히드록시, 할로겐, 시아노, 니트로, C1 - 4할로알킬, C1 - 6알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C3 - 7시클로알킬, C6 - 10아릴C1 - 4알킬, -OR5, -NR6R7, -(CR8R9)nZ1, -C(O)NR12R13, -SR14, -SOR15, -SO2R16, -NR17SO2R18, COOH, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴, -COR19, -COOR20, -OC(O)R21, -NR22C(O)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR26R27, -SO2NR28R29, -OSO2R30, -SO3R31 또는 -Si(R32)3를 나타내며；
또는 R1 및 R2는 그들이 결합하고 있는 원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성하고, 여기서 상기 헤테로시클릴 또는 상기 헤테로아릴은 할로겐으로 치환되어 있어도 되고；
R3는 수소, C1 - 5알킬, C6 - 10아릴C1 - 6알킬 또는 C1 - 4할로알킬을 나타내며；
R4는 수소, 할로겐, C1 - 3알킬, C1 - 4할로알킬, 히드록시, 시아노, 니트로, C1 - 4알콕시, -(CH2)nZ1, -NR6R7, -OR5, -C(O)NR12R13, -SR14, -SOR15, -SO2R16, NR17SO2R18, COOH, -COR19, -COOR20, -OC(O)R21, -NR22C(O)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR26R27, -SO2NR28R29, -OSO2R30, -SO3R31 또는 -Si(R32)3를 나타내고；
A는 5~10원 헤테로아릴 고리 또는 C6 - 10아릴 고리이며；
R5는 C1 - 5알킬, C3 - 7시클로알킬, C3 - 7시클로알킬C1 - 3알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1-4할로알킬, C1 - 3알콕시C1 - 4알킬, C1 - 3알콕시C1 - 4알콕시C1 - 4알킬, C1 - 4아미노알킬, C1 - 4알킬아미노C1- 4알킬, 디(C1-4알킬)아미노C1 - 4알킬, C6 - 10아릴, C6 - 10아릴C1 - 3알킬, Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 3~10원 헤테로시클릴C1- 3알킬, 3~10원 헤테로시클릴, 5~10원 헤테로아릴, 5~10원 헤테로아릴C1 - 3알킬, C1 - 6모노히드록시알킬, C1 - 6디히드록시알킬 또는 C1 - 6트리히드록시알킬을 나타내고；
R6 및 R7은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2-6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕시C1 - 4알킬, C6 - 10아릴C1 - 3알킬, 3~10원 헤테로시클릴C1-3알킬, 5~10원 헤테로아릴C1 - 3알킬, C1 - 6모노히드록시알킬, C1 - 6디히드록시알킬, C1 - 6트리히드록시알킬, 3~10원 헤테로시클릴, C1 - 4아미노알킬, C1 - 4알킬아미노C1 - 4알킬, 디(C1-4알킬)아미노C1 - 4알킬 또는 시아노(C1-3알킬)을 나타내거나, 또는 R6 및 R7은 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성하고；
n은 1~3을 나타내며；
R8 및 R9은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1 - 4알킬 또는 할로겐을 나타내거나, 또는 R8 및 R9은 그들이 결합하고 있는 탄소원자와 함께 지환식 고리를 형성해도 되고；
Z1은 수소, NR10R11, -OH, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 나타내며；
R10 및 R11은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕시C1 - 4알킬, 시아노(C1 - 3알킬) 또는 C1 - 3알킬설포닐C1 - 4알킬을 나타내거나, 또는 R10 및 R11은 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성해도 되고；
R12 및 R13은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2-6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕시C1 - 4알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴, 3~10원 헤테로시클릴, C6 - 10아릴C1 - 4알킬, 3~10원 헤테로시클릴C1 - 3알킬, 5~10원 헤테로아릴C1 -3알킬, 시아노(C1 - 3알킬), C1 - 3알킬설포닐C1 - 4알킬, 3~10원 지환식 고리, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내거나, 또는 R12 및 R13은 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성해도 되고；
R14은 C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내며；
R15은 C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
R16은 C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내며；
R17은 수소 또는 C1 - 4알킬을 나타내고；
R18은 C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내며；
R19은 수소, C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
R20는 C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내며；
R21은 C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
R22는 수소, C1 - 4알킬 또는 C1 - 4할로알킬을 나타내며；
R23는 수소, C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
R24는 수소, C1 - 4알킬 또는 C1 - 4할로알킬을 나타내며；
R25는 C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
R26 및 R27은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕실C1 - 4알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴, 3~10원 헤테로시클릴, C6 - 10아릴C1 - 4알킬, 3~10원 헤테로시클릴C1 - 3알킬, 5~10원 헤테로아릴C1 -3알킬, 시아노(C1 - 3알킬), C1 - 3알킬설포닐C1 - 4알킬 또는 3~10원 지환식 고리를 나타내거나, 또는 R26 및 R27은 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성해도 되고；
R28 및 R29은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕실C1 - 4알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴, 3~10원 헤테로시클릴, C6 - 10아릴C1 - 4알킬, 3~10원 헤테로시클릴C1 - 3알킬, 5~10원 헤테로아릴C1 -3알킬, 시아노(C1 - 3알킬), C1 - 3알킬설포닐C1 - 4알킬 또는 3~10원 지환식 고리를 나타내거나, 또는 R28 및 R29은 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성해도 되고；
R30는 C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내며；
R31은 C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
R32는 C1 - 4알킬 또는 C6 - 10아릴을 나타내며；
<P군>
할로겐, C1 - 4알킬, C1 - 4할로알킬, -OH, C1 - 3알콕시, C1 - 3할로알콕시, 3~10원 헤테로시클릴아미노, -SO2R16, -CN, -NO2 및 3~10원 헤테로시클릴.
<Q군>
할로겐, C1 - 4알킬, C1 - 4할로알킬, -OH, C1 - 3알콕시, C1 - 6모노히드록시알킬, C1 - 6디히드록시알킬 또는 C1 - 6트리히드록시알킬, 3~10원 헤테로시클릴아민, -SO2R16, -CN, -NO2, C3 - 7시클로알킬, -COR19 및 C1 - 4알킬로 치환되어 있어도 되는 3~10원 헤테로시클릴.
[화합물 2]
Figure pct00014
[화합물 3]
Figure pct00015
[화합물 4]
Figure pct00016
[화합물 5]
Figure pct00017
, 또는
[화합물 6]
Figure pct00018
.
〔44〕
상기 FGFR 저해 활성을 갖는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염이 식(I)에 나타내어지는 화합물로서, A가 인돌이고, R3 및 R4가 모두 수소인 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염인, 상기 〔43〕에 기재된 방법.
〔45〕
상기 〔1〕 내지 〔7〕 중 어느 하나에 기재된 융합 폴리펩티드를 발현하거나 또는 그 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드를 갖는 환자에게 투여하기 위한 암 치료용 의약 조성물의 제조에 있어서의 FGFR 저해 활성을 갖는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염의 사용.
〔46〕
상기 환자가 상기 〔26〕 내지 〔30〕 중 어느 하나에 기재된 방법에 의해 선택된 환자인, 상기 〔45〕에 기재된 사용.
〔47〕
상기 암이 방광암, 뇌종양, 두경부 편평상피암, 폐암, 폐선암, 폐 편평상피암, 피부 흑색종, 식도암, 위암 또는 간암인, 상기 〔45〕 또는 〔46〕에 기재된 사용.
〔48〕
상기 암이 방광암인, 상기 〔45〕 또는 〔46〕에 기재된 사용.
〔49〕
상기 방광암이 TNM 병기 분류에 있어서 스테이지 3 이상의 병기로 분류되는, 상기 〔48〕에 기재된 사용.
〔50〕
상기 FGFR 저해 활성을 갖는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염이 하기 식으로 나타내어지는 어느 하나의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염인, 상기 〔45〕 내지 〔49〕 중 어느 하나에 기재된 사용：
[화합물 1]
Figure pct00019
(식 중, R1~R4는 각각 독립적으로 아래의 기를 나타낸다；
R1은 수소, 히드록시, 할로겐, 시아노, 니트로, C1 - 4할로알킬, C1 - 6알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C3 - 7시클로알킬, C6 - 10아릴C1 - 4알킬, -OR5, -NR6R7, -(CR8R9)nZ1, -C(O)NR12R13, -SR14, -SOR15, -SO2R16, -NR17SO2R18, COOH, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴, -COR19, -COOR20, -OC(O)R21, -NR22C(O)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR26R27, -SO2NR28R29, -OSO2R30, -SO3R31 또는 -Si(R32)3를 나타내고；
R2는 수소, 히드록시, 할로겐, 시아노, 니트로, C1 - 4할로알킬, C1 - 6알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C3 - 7시클로알킬, C6 - 10아릴C1 - 4알킬, -OR5, -NR6R7, -(CR8R9)nZ1, -C(O)NR12R13, -SR14, -SOR15, -SO2R16, -NR17SO2R18, COOH, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴, -COR19, -COOR20, -OC(O)R21, -NR22C(O)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR26R27, -SO2NR28R29, -OSO2R30, -SO3R31 또는 -Si(R32)3를 나타내며；
또는 R1 및 R2는 그들이 결합하고 있는 원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성하고, 여기서 상기 헤테로시클릴 또는 상기 헤테로아릴은 할로겐으로 치환되어 있어도 되며；
R3는 수소, C1 - 5알킬, C6 - 10아릴C1 - 6알킬 또는 C1 - 4할로알킬을 나타내고；
R4는 수소, 할로겐, C1 - 3알킬, C1 - 4할로알킬, 히드록시, 시아노, 니트로, C1 - 4알콕시, -(CH2)nZ1, -NR6R7, -OR5, -C(O)NR12R13, -SR14, -SOR15, -SO2R16, NR17SO2R18, COOH, -COR19, -COOR20, -OC(O)R21, -NR22C(O)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR26R27, -SO2NR28R29, -OSO2R3O-SO3R31 또는 -Si(R32)3를 나타내며；
A는 5~10원 헤테로아릴 고리 또는 C6 - 10아릴 고리이고；
R5는 C1 - 5알킬, C3 - 7시클로알킬, C3 - 7시클로알킬C1 - 3알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1-4할로알킬, C1 - 3알콕시C1 - 4알킬, C1 - 3알콕시C1 - 4알콕시C1 - 4알킬, C1 - 4아미노알킬, C1 - 4알킬아미노C1- 4알킬, 디(C1-4알킬)아미노C1 - 4알킬, C6 - 10아릴, C6 - 10아릴C1 - 3알킬, Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 3~10원 헤테로시클릴C1- 3알킬, 3~10원 헤테로시클릴, 5~10원 헤테로아릴, 5~10원 헤테로아릴C1 - 3알킬, C1 - 6모노히드록시알킬, C1 - 6디히드록시알킬 또는 C1 - 6트리히드록시알킬을 나타내며；
R6 및 R7은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2-6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕시C1 - 4알킬, C6 - 10아릴C1 - 3알킬, 3~10원 헤테로시클릴C1-3알킬, 5~10원 헤테로아릴C1 - 3알킬, C1 - 6모노히드록시알킬, C1 - 6디히드록시알킬, C1 - 6트리히드록시알킬, 3~10원 헤테로시클릴, C1 - 4아미노알킬, C1 - 4알킬아미노C1 - 4알킬, 디(C1-4알킬)아미노C1 - 4알킬 또는 시아노(C1-3알킬)을 나타내거나, 또는 R6 및 R7은 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성하고；
n은 1~3을 나타내며；
R8 및 R9은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1 - 4알킬 또는 할로겐을 나타내거나, 또는 R8 및 R9은 그들이 결합하고 있는 탄소원자와 함께 지환식 고리를 형성해도 되고；
Z1은 수소, NR10R11, -OH, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 나타내며；
R10 및 R11은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕시C1 - 4알킬, 시아노(C1 - 3알킬) 또는 C1 - 3알킬설포닐C1 - 4알킬을 나타내거나, 또는 R10 및 R11은 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성해도 되고；
R12 및 R13은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2-6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕시C1 - 4알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴, 3~10원 헤테로시클릴, C6 - 10아릴C1 - 4알킬, 3~10원 헤테로시클릴C1 - 3알킬, 5~10원 헤테로아릴C1 -3알킬, 시아노(C1 - 3알킬), C1 - 3알킬설포닐C1 - 4알킬, 3~10원 지환식 고리, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내거나, 또는 R12 및 R13은 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성해도 되고；
R14은 C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내며；
R15은 C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
R16은 C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내며；
R17은 수소 또는 C1 - 4알킬을 나타내고；
R18은 C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내며；
R19은 수소, C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
R20는 C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내며；
R21은 C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
R22는 수소, C1 - 4알킬 또는 C1 - 4할로알킬을 나타내며；
R23는 수소, C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
R24는 수소, C1 - 4알킬 또는 C1 - 4할로알킬을 나타내며；
R25는 C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
R26 및 R27은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕실C1 - 4알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴, 3~10원 헤테로시클릴, C6 - 10아릴C1 - 4알킬, 3~10원 헤테로시클릴C1 - 3알킬, 5~10원 헤테로아릴C1 -3알킬, 시아노(C1 - 3알킬), C1 - 3알킬설포닐C1 - 4알킬 또는 3~10원 지환식 고리를 나타내거나, 또는 R26 및 R27은 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성해도 되고；
R28 및 R29은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕실C1 - 4알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴, 3~10원 헤테로시클릴, C6 - 10아릴C1 - 4알킬, 3~10원 헤테로시클릴C1 - 3알킬, 5~10원 헤테로아릴C1 -3알킬, 시아노(C1 - 3알킬), C1 - 3알킬설포닐C1 - 4알킬 또는 3~10원 지환식 고리를 나타내거나, 또는 R28 및 R29은 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성해도 되고；
R30는 C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내며；
R31은 C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
R32는 C1 - 4알킬 또는 C6 - 10아릴을 나타내며；
<P군>
할로겐, C1 - 4알킬, C1 - 4할로알킬, -OH, C1 - 3알콕시, C1 - 3할로알콕시, 3~10원 헤테로시클릴아미노, -SO2R16, -CN, -NO2 및 3~10원 헤테로시클릴.
<Q군>
할로겐, C1 - 4알킬, C1 - 4할로알킬, -OH, C1 - 3알콕시, C1 - 6모노히드록시알킬, C1 - 6디히드록시알킬 또는 C1 - 6트리히드록시알킬, 3~10원 헤테로시클릴아민, -SO2R16, -CN, -NO2, C3 - 7시클로알킬, -COR19 및 C1 - 4알킬로 치환되어 있어도 되는 3~10원 헤테로시클릴.
[화합물 2]
Figure pct00020
[화합물 3]
Figure pct00021
[화합물 4]
Figure pct00022
[화합물 5]
Figure pct00023
, 또는
[화합물 6]
Figure pct00024
.
〔51〕
상기 FGFR 저해 활성을 갖는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염이 식(I)에 나타내어지는 화합물로서, A가 인돌이고, R3 및 R4가 모두 수소인 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염인, 상기 〔50〕에 기재된 사용.
〔52〕
상기 〔1〕 내지 〔7〕 중 어느 하나에 기재된 융합 폴리펩티드를 발현하거나 또는 그 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드를 갖는 암 환자의 치료 또는 예방에 있어서의 사용을 위한 FGFR 저해 활성을 갖는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염.
〔53〕
상기 환자가 상기 〔26〕 내지 〔30〕 중 어느 하나에 기재된 방법에 의해 선택된 환자인, 상기 〔52〕에 기재된 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염.
〔54〕
상기 암이 방광암, 뇌종양, 두경부 편평상피암, 폐암, 폐선암, 폐 편평상피암, 피부 흑색종, 식도암, 위암 또는 간암인, 상기 〔52〕 또는 〔53〕에 기재된 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염.
〔55〕
상기 암이 방광암인, 상기 〔52〕 또는 〔53〕에 기재된 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염.
〔56〕
상기 방광암이 TNM 병기 분류에 있어서 스테이지 3 이상의 병기로 분류되는, 상기 〔55〕에 기재된 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염.
〔57〕
상기 FGFR 저해 활성을 갖는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염이 하기 식으로 나타내어지는 어느 하나의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염인, 상기 〔52〕 내지 〔56〕 중 어느 하나에 기재된 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염：
[화합물 1]
Figure pct00025
(식 중, R1~R4는 각각 독립적으로 아래의 기를 나타낸다；
R1은 수소, 히드록시, 할로겐, 시아노, 니트로, C1 - 4할로알킬, C1 - 6알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C3 - 7시클로알킬, C6 - 10아릴C1 - 4알킬, -OR5, -NR6R7, -(CR8R9)nZ1, -C(O)NR12R13, -SR14, -SOR15, -SO2R16, -NR17SO2R18, COOH, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴, -COR19, -COOR20, -OC(O)R21, -NR22C(O)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR26R27, -SO2NR28R29, -OSO2R30, -SO3R31 또는 -Si(R32)3를 나타내고；
R2는 수소, 히드록시, 할로겐, 시아노, 니트로, C1 - 4할로알킬, C1 - 6알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C3 - 7시클로알킬, C6 - 10아릴C1 - 4알킬, -OR5, -NR6R7, -(CR8R9)nZ1, -C(O)NR12R13, -SR14, -SOR15, -SO2R16, -NR17SO2R18, COOH, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴, -COR19, -COOR20, -OC(O)R21, -NR22C(O)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR26R27, -SO2NR28R29, -OSO2R30, -SO3R31 또는 -Si(R32)3를 나타내며；
또는 R1 및 R2는 그들이 결합하고 있는 원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성하고, 여기서 상기 헤테로시클릴 또는 상기 헤테로아릴은 할로겐으로 치환되어 있어도 되고；
R3는 수소, C1 - 5알킬, C6 - 10아릴C1 - 6알킬 또는 C1 - 4할로알킬을 나타내며；
R4는 수소, 할로겐, C1 - 3알킬, C1 - 4할로알킬, 히드록시, 시아노, 니트로, C1 - 4알콕시, -(CH2)nZ1, -NR6R7, -OR5, -C(O)NR12R13, -SR14, -SOR15, -SO2R16, NR17SO2R18, COOH, -COR19, -COOR20, -OC(O)R21, -NR22C(O)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR26R27, -SO2NR28R29, -OSO2R30, -SO3R31 또는 -Si(R32)3를 나타내고；
A는 5~10원 헤테로아릴 고리 또는 C6 - 10아릴 고리이며；
R5는 C1 - 5알킬, C3 - 7시클로알킬, C3 - 7시클로알킬C1 - 3알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1-4할로알킬, C1 - 3알콕시C1 - 4알킬, C1 - 3알콕시C1 - 4알콕시C1 - 4알킬, C1 - 4아미노알킬, C1 - 4알킬아미노C1- 4알킬, 디(C1-4알킬)아미노C1 - 4알킬, C6 - 10아릴, C6 - 10아릴C1 - 3알킬, Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 3~10원 헤테로시클릴C1- 3알킬, 3~10원 헤테로시클릴, 5~10원 헤테로아릴, 5~10원 헤테로아릴C1 - 3알킬, C1 - 6모노히드록시알킬, C1 - 6디히드록시알킬 또는 C1 - 6트리히드록시알킬을 나타내고；
R6 및 R7은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2-6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕시C1 - 4알킬, C6 - 10아릴C1 - 3알킬, 3~10원 헤테로시클릴C1-3알킬, 5~10원 헤테로아릴C1 - 3알킬, C1 - 6모노히드록시알킬, C1 - 6디히드록시알킬, C1 - 6트리히드록시알킬, 3~10원 헤테로시클릴, C1 - 4아미노알킬, C1 - 4알킬아미노C1 - 4알킬, 디(C1-4알킬)아미노C1 - 4알킬 또는 시아노(C1-3알킬)을 나타내거나, 또는 R6 및 R7은 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성하고；
n은 1~3을 나타내며；
R8 및 R9은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1 - 4알킬 또는 할로겐을 나타내거나, 또는 R8 및 R9은 그들이 결합하고 있는 탄소원자와 함께 지환식 고리를 형성해도 되고；
Z1은 수소, NR10R11, -OH, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 나타내며；
R10 및 R11은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕시C1 - 4알킬, 시아노(C1 - 3알킬) 또는 C1 - 3알킬설포닐C1 - 4알킬을 나타내거나, 또는 R10 및 R11은 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성해도 되고；
R12 및 R13은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2-6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕시C1 - 4알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴, 3~10원 헤테로시클릴, C6 - 10아릴C1 - 4알킬, 3~10원 헤테로시클릴C1 - 3알킬, 5~10원 헤테로아릴C1 -3알킬, 시아노(C1 - 3알킬), C1 - 3알킬설포닐C1 - 4알킬, 3~10원 지환식 고리, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내거나, 또는 R12 및 R13은 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성해도 되고；
R14은 C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내며；
R15은 C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
R16은 C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내며；
R17은 수소 또는 C1 - 4알킬을 나타내고；
R18은 C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내며；
R19은 수소, C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
R20는 C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내며；
R21은 C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
R22는 수소, C1 - 4알킬 또는 C1 - 4할로알킬을 나타내며；
R23는 수소, C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
R24는 수소, C1 - 4알킬 또는 C1 - 4할로알킬을 나타내며；
R25는 C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
R26 및 R27은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕실C1 - 4알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴, 3~10원 헤테로시클릴, C6 - 10아릴C1 - 4알킬, 3~10원 헤테로시클릴C1 - 3알킬, 5~10원 헤테로아릴C1 -3알킬, 시아노(C1 - 3알킬), C1 - 3알킬설포닐C1 - 4알킬 또는 3~10원 지환식 고리를 나타내거나, 또는 R26 및 R27은 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성해도 되고；
R28 및 R29은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕실C1 - 4알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴, 3~10원 헤테로시클릴, C6 - 10아릴C1 - 4알킬, 3~10원 헤테로시클릴C1 - 3알킬, 5~10원 헤테로아릴C1 -3알킬, 시아노(C1 - 3알킬), C1 - 3알킬설포닐C1 - 4알킬 또는 3~10원 지환식 고리를 나타내거나, 또는 R28 및 R29은 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성해도 되고；
R30는 C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내며；
R31은 C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
R32는 C1 - 4알킬 또는 C6 - 10아릴을 나타내며；
<P군>
할로겐, C1 - 4알킬, C1 - 4할로알킬, -OH, C1 - 3알콕시, C1 - 3할로알콕시, 3~10원 헤테로시클릴아미노, -SO2R16, -CN, -NO2 및 3~10원 헤테로시클릴.
<Q군>
할로겐, C1 - 4알킬, C1 - 4할로알킬, -OH, C1 - 3알콕시, C1 - 6모노히드록시알킬, C1 - 6디히드록시알킬 또는 C1 - 6트리히드록시알킬, 3~10원 헤테로시클릴아민, -SO2R16, -CN, -NO2, C3 - 7시클로알킬, -COR19 및 C1 - 4알킬로 치환되어 있어도 되는 3~10원 헤테로시클릴.
[화합물 2]
Figure pct00026
[화합물 3]
Figure pct00027
[화합물 4]
Figure pct00028
[화합물 5]
Figure pct00029
, 또는
[화합물 6]
Figure pct00030
.
〔58〕
상기 FGFR 저해 활성을 갖는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염이 식(I)에 나타내어지는 화합물로서, A가 인돌이고, R3 및 R4가 모두 수소인 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염인, 상기 〔57〕에 기재된 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염.
〔59〕
아래의 공정을 포함하는, FGFR 저해 활성을 갖는 화합물을 동정하는 방법：
(a) 피검 화합물의 존재하 및 부존재하에서 상기 〔1〕 내지 〔7〕 중 어느 하나에 기재된 융합 폴리펩티드를 발현하는 세포를 각각 배양하여 세포의 증식 레벨을 결정하는 공정；
(b) 피검 화합물의 존재하에서 상기 세포를 배양한 경우의 세포의 증식 레벨을 피검 화합물의 부존재하에서 상기 세포를 배양한 경우의 세포의 증식 레벨과 비교하는 공정；및
(c) 피검 화합물의 존재하에서 상기 세포를 배양한 경우의 세포의 증식 레벨이 피검 화합물의 부존재하에서 상기 세포를 배양한 경우의 세포의 증식 레벨보다 낮은 경우는 그 피검 화합물이 FGFR 저해 활성을 갖는 것으로 판정하는 공정.
〔60〕
아래의 공정을 포함하는, FGFR 저해 활성을 갖는 화합물을 동정하는 방법：
(a) 상기 〔1〕 내지 〔7〕 중 어느 하나에 기재된 융합 폴리펩티드를 발현하는 세포를 이식받은 비인간 포유동물에게 피검 화합물을 투여하여 상기 세포의 증식 레벨을 결정하는 공정；
(b) 공정 (a)에서 결정된 세포의 증식 레벨을 상기 피검 화합물의 투여를 받지 않은 상기 세포를 이식받은 비인간 포유동물에 있어서 결정된 상기 세포의 세포 증식 레벨과 비교하는 공정；및
(c) 공정 (a)에서 결정된 세포의 증식 레벨이 상기 피검 화합물의 투여를 받지 않은 상기 세포를 이식받은 비인간 포유동물에 있어서 결정된 상기 세포의 세포 증식 레벨보다 낮은 경우는 상기 피검 화합물이 FGFR 저해 활성을 갖는 것으로 판정하는 공정.
〔61〕
상기 세포가 암세포인, 상기 〔59〕 또는 〔60〕에 기재된 방법.
〔62〕
상기 암세포가 방광암 세포, 뇌종양 세포, 두경부 편평상피암 세포, 폐암 세포, 폐선암 세포, 폐 편평상피암 세포, 피부 흑색종 세포, 식도암 세포, 위암 세포 또는 간암 세포인, 상기 〔61〕에 기재된 방법.
본 발명의 FGFR3 폴리펩티드와 또 다른 하나의 폴리펩티드로 이루어지는 융합 폴리펩티드는 방광암 세포를 비롯한 각종 암세포에 있어서 특이적으로 발현이 보여지고, 또한 당해 융합 폴리펩티드를 발현하는 세포는 FGFR 저해 활성을 갖는 화합물에 의해 유의하게 증식이 저해되는 것으로부터, 본 발명의 융합 폴리펩티드를 FGFR 저해제에 의한 암 치료에 있어서의 바이오마커로서 이용함으로써 개개의 환자별로 그 FGFR 저해제 적용의 적부 및 적용의 태양을 결정할 수 있고, 그 약제에 의한 치료에 있어서의 부작용의 발현을 미연에 방지하며, 또한 최선의 치료 효과가 얻어지도록 치료 태양을 컨트롤하는 것이 가능하여 개별화 의료(personalized medicine)가 가능해진다.
더 나아가서는, 본 발명의 융합 폴리펩티드를, FGFR을 표적으로 하는 암 치료제, 즉 분자 표적 치료제의 개발에 있어서의 표적으로서 이용함으로써, 표적인 암세포에 대한 높은 특이성과 높은 항종양 활성을 구비하는 FGFR 저해제 및 그 저해제를 포함하는 암 치료제를 제공하는 것이 가능해진다.
이렇게 해서 얻어진 FGFR 저해제는 표적인 암세포에 대한 높은 특이성을 구비하는 것으로부터, 부작용이 적고 또한 높은 항종양 활성을 갖는 암 치료제를 제공하는 것이 가능해진다.
더 나아가서는, 본 발명의 융합 폴리펩티드는 각종 암과 깊은 관련성을 갖는 것으로부터, 암 환자에 한정되지 않고 건강한 정상인을 포함하는 피험자의 시료 중에 있어서 당해 융합 폴리펩티드 또는 그 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드의 존재 여부를 결정함으로써, 그 피험자가 암에 걸리기 쉬운지(암에 대한 감수성), 암에 걸렸는지 또는 암이 진행되었는지 여부에 대해 시험하는 것이 가능해진다.
더 나아가서는, 본 발명의 융합 폴리펩티드는 각종 암과 깊은 관련성을 갖는 것으로부터, 본 발명의 융합 폴리펩티드를 발현하는 세포(암세포 등)에 피검 화합물을 작용시킨 경우와 작용시키지 않는 경우의 각각에 있어서의 상기 세포의 증식 레벨을 비교하여 상기 세포의 증식 억제를 유도한 피검 화합물을 동정함으로써 FGFR에 대한 높은 특이성을 갖는 FGFR 저해제를 제공하는 것이 가능해진다.
도 1은 방광암에 걸린 환자(20명)로부터 채취한 각각의 방광암 시료 유래의 cDNA 및 RT112/84의 RNA로부터 합성한 cDNA에 대해 PCR(폴리머라아제 연쇄반응)을 사용하여 시험한, FGFR3-TACC3 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드 v1의 증폭 결과를 나타내는 도면이다.
도 2는 방광암에 걸린 환자(20명)로부터 채취한 각각의 방광암 시료 유래의 cDNA 및 RT4의 RNA로부터 합성한 cDNA에 대해 PCR(폴리머라아제 연쇄반응)을 사용하여 시험한, FGFR3-TACC3 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드 v2의 증폭 결과를 나타내는 도면이다.
도 3은 방광암에 걸린 환자(20명)로부터 채취한 각각의 방광암 시료 유래의 cDNA 및 SW780의 RNA로부터 합성한 cDNA에 대해 PCR(폴리머라아제 연쇄반응)을 사용하여 시험한, FGFR3-BAIAP2L1 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드의 증폭 결과를 나타내는 도면이다.
도 4는 폐암에 걸린 환자(40명)로부터 채취한 각각의 방광암 시료 유래의 cDNA 및 SW780의 RNA로부터 합성한 cDNA에 대해 PCR(폴리머라아제 연쇄반응)을 사용하여 시험한, FGFR3-BAIAP2L1 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드의 증폭 결과를 나타내는 도면이다. A는 한쌍의 올리고뉴클레오티드 프라이머(서열번호 3 및 서열번호 4)를 사용한 시험에 있어서의 결과를 나타낸다. 상단 및 하단의 각 겔의 왼쪽 끝 레인은 분자량 마커에 대한 결과이다. B는 한쌍의 올리고뉴클레오티드 프라이머(서열번호 17 및 서열번호 18)를 사용한 시험에 있어서의 결과를 나타낸다. 상단 및 하단의 각 겔의 왼쪽 끝 레인은 분자량 마커에 대한 결과이다.
도 5는 FISH 분석을 사용하여 시험한 각종 방광암 세포주에 있어서의 FGFR3-BAIAP2L1 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드의 검출 결과를 나타내는 도면이다. A1은 스플릿 시그널 프로브(Split signal probe)를 사용한 세포주 RT112/84에 대한 시험에 있어서의 결과를 나타내는 도면이다. A2는 스플릿 시그널 프로브(Split signal probe)를 사용한 세포주 SW780에 대한 시험에 있어서의 결과를 나타내는 도면이다. B1은 퓨전 시그널 프로브(Fusion signal probe)를 사용한 세포주 RT112/84에 대한 시험에 있어서의 결과를 나타내는 도면이다. B2는 퓨전 시그널 프로브(Fusion signal probe)를 사용한 세포주 SW780에 대한 시험에 있어서의 결과를 나타내는 도면이다.
도 6은 FGFR3 및 BAIAP2L1의 각각에 대한 siRNA를 사용하여 시험한, 각종 방광암 세포주 증식의 FGFR3 의존성 유무의 결과를 나타내는 도면이다. A는 세포주 BFTC-905에 대한 시험에 있어서의 결과를 나타내는 도면이다. B는 세포주UM-UC-14에 대한 시험에 있어서의 결과를 나타내는 도면이다. C는 세포주 RT4에 대한 시험에 있어서의 결과를 나타내는 도면이다. D는 세포주 SW780에 대한 시험에 있어서의 결과를 나타내는 도면이다.
도 7은 FGFR3-BAIAP2L1 융합 폴리펩티드를 발현하는 각종 암세포에 대한 FGFR 저해제에 의한 아포토시스 유도 효과에 대한 시험 결과를 나타내는 도면이다.
도 8은 세포의 단층 배양에 의해 시험한, FGFR3-BAIAP2L1 융합 폴리펩티드 정상 세포의 형질전환능의 검토 결과를 나타내는 도면이다. 상단의 도면은 야생형 FGFR3를 발현하는 세포의 단층 배양 결과를 나타낸다. 하단의 도면은 FGFR3-BAIAP2L1 융합 폴리펩티드를 발현하는 세포의 단층 배양 결과를 나타낸다.
도 9는 세포의 스페로이드 배양에서 시험한, FGFR3-BAIAP2L1 융합 폴리펩티드 정상 세포의 형질전환능 및 종양형성능의 검토 결과를 나타내는 도면이다. 상단의 도면은 미처치 친세포의 배양 결과를 나타낸다.　중단의 도면은 야생형 FGFR3를 발현하는 세포의 배양 결과를 나타낸다.　하단의 도면은 FGFR3-BAIAP2L1 융합 폴리펩티드를 발현하는 세포의 배양 결과를 나타낸다.
도 10은 FGFR3의 자기 인산화능을 지표로 시험한, FGFR3-BAIAP2L1 융합 폴리펩티드 정상 세포의 형질전환능 및 그 형질전환능에 대한 BAIAP2L1의 기여 검토 결과를 나타내는 도면이다.
도 11은 세포의 스캐폴드 비의존적 세포 증식(scaffold-independent cell proliferation)을 지표로 시험한, FGFR3-BAIAP2L1 융합 폴리펩티드 정상 세포의 형질전환능 및 그 형질전환능에 대한 BAIAP2L1의 기여 검토 결과를 나타내는 도면이다.
도 12는 누드 마우스를 사용하여 시험한 FGFR3-BAIAP2L1 융합 폴리펩티드의 생체내(in vivo)에서의 종양형성능의 검토 결과를 나타내는 도면이다. 좌측부터 순서대로 야생형 FGFR3를 발현하는 세포, 야생형 BAIAP2L1을 발현하는 세포, FGFR3-BAIAP2L1 융합 폴리펩티드를 발현하는 세포, 및 FGFR3와 BAR 도메인을 결실한 BAIAP2L1의 융합 폴리펩티드를 발현하는 세포를 각각 누드 마우스의 서혜부 피하에 접종하여 15일 후의 상태를 나타낸다.
도 13은 누드 마우스를 사용하여 시험한 FGFR3-BAIAP2L1 융합 폴리펩티드의 생체내에서의 종양형성에 대한, FGFR 저해제의 종양 증식 억제 효과의 검토 결과를 나타내는 도면이다.
본 발명은 전술한 〔1〕~〔62〕에 예시적으로 기재된 바와 같은 발명으로서, 암세포 등의 비정상 세포에 있어서 발현하는 신규한 융합 폴리펩티드, 그 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드, 그 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 그 벡터를 포함하는 세포, 그 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는 항체 및 그의 단편, 그 폴리뉴클레오티드에 하이브리다이즈하는 올리고뉴클레오티드 프라이머, 그 폴리뉴클레오티드를 절단하는 올리고뉴클레오티드, 그 항체 또는 그 올리고뉴클레오티드를 포함하는 의약 조성물, 그 융합 폴리펩티드 또는 그 폴리뉴클레오티드의 검출방법 및 검출용 키트, 그 융합 폴리펩티드 또는 그 폴리뉴클레오티드의 존재 여부를 기준으로 하는 암에 걸리기 쉬운지, 암에 걸렸는지 또는 암이 진행되었는지 여부에 대한 시험방법, FGFR 저해제가 적용되는 암 환자를 선택하는 방법 및 그 융합 폴리펩티드를 발현 또는 그 폴리뉴클레오티드를 갖는 환자에게 투여되도록 사용되는 것을 특징으로 하는 암 치료용 의약 조성물, FGFR 저해 활성을 갖는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염의 유효량을 그 융합 폴리펩티드를 발현 또는 그 폴리뉴클레오티드를 갖는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 암의 치료 또는 예방방법, 그 융합 폴리펩티드를 발현 또는 그 폴리뉴클레오티드를 갖는 환자에게 투여하기 위한 암 치료용 의약 조성물의 제조에 있어서의 FGFR 저해 활성을 갖는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염의 사용, 그 융합 폴리펩티드를 발현 또는 그 폴리뉴클레오티드를 갖는 환자의 치료 또는 예방에 있어서의 사용을 위한 FGFR 저해 활성을 갖는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염 등을 제공한다.
본 발명에 있어서의 「FGFR」이란 수용체형 티로신 키나아제 패밀리에 속해 있는 키나아제인 섬유아세포 증식인자 수용체(fibroblast growth factor receptor；FGFR)로서, FGFR1, FGFR2, FGFR3, FGFR4에 의해 FGFR 패밀리에 속하는 임의의 FGFR을 의미한다(Cytokine & Growth Factor Reviews, 2005, 16：139-149). 또한 본 발명의 FGFR은 모든 유래(any origin)의 FGFR을 의미하고, 바람직하게는 포유동물(인간, 마우스, 랫트, 기니피그, 토끼, 양, 원숭이, 염소, 당나귀, 소, 말, 돼지 등)의 FGFR이며, 더욱 바람직하게는 인간의 FGFR이고, 특히 바람직하게는 서열번호 6 또는 7에 기재되는 아미노산 서열로 이루어지는 인간 FGFR3(cDNA 서열：각각 서열번호 10, 11/GenBank Accession No.：각각 NM_001163213.1, NM_000142.4)이다. 인간 FGFR3 유전자의 유전자좌는 4p16.3이다.
본 발명에 있어서의 「인간 FGFR3」는 서열번호 6 또는 7에 기재되는 아미노산 서열로 이루어지는 인간 FGFR3의 야생형 폴리펩티드, 또는 그 야생형 폴리펩티드에 있어서 1 또는 복수(바람직하게는 1 내지 10개의 아미노산, 특히 바람직하게는 1 내지 5개의 아미노산)의 아미노산이 치환, 결실 또는 삽입되어 있는 변이 폴리펩티드이다.
상기 변이 폴리펩티드에는 또한 상기 야생형 폴리펩티드의 아미노산 서열과 70% 이상의 상동성을 갖는 폴리펩티드, 바람직하게는 80% 이상의 상동성을 갖는 폴리펩티드, 더욱 바람직하게는 90% 이상의 상동성을 갖는 폴리펩티드, 보다 바람직하게는 95% 이상의 상동성을 갖는 폴리펩티드가 포함된다.
본 발명에 있어서의 「BAIAP2L1」이란 (brain-specific angiogenesis inhibitor 1-associated protein 2-like protein 1；BAIAP2L1/별칭：insulin receptor tyrosine kinase substrate(IRTKS))(Journal of cell science, 2007, 120：1663-1672)를 의미한다. 또한 본 발명의 BAIAP2L1은 모든 유래의 BAIAP2L1을 의미하고, 바람직하게는 포유동물의 BAIAP2L1이며, 더욱 바람직하게는 인간의 BAIAP2L1이고, 특히 바람직하게는 서열번호 8에 기재되는 아미노산 서열로 이루어지는 인간 BAIAP2L1(cDNA 서열：서열번호 12/GenBank Accession No.NM_018842.4)이다. 인간 BAIAP2L1 유전자의 유전자좌는 7q22.1로, FGFR3 유전자와는 다른 염색채에 존재한다.
본 발명에 있어서의 「인간 BAIAP2L1」은 서열번호 8에 기재되는 아미노산 서열로 이루어지는 인간 BAIAP2L1의 야생형 폴리펩티드, 또는 그 야생형 폴리펩티드에 있어서 1 또는 복수(바람직하게는 1 내지 10개의 아미노산, 특히 바람직하게는 1 내지 5개의 아미노산)의 아미노산이 치환, 결실 또는 삽입되어 있는 변이 폴리펩티드이다.
상기 변이 폴리펩티드에는 또한 상기 야생형 폴리펩티드의 아미노산 서열과 70% 이상의 상동성을 갖는 폴리펩티드, 바람직하게는 80% 이상의 상동성을 갖는 폴리펩티드, 더욱 바람직하게는 90% 이상의 상동성을 갖는 폴리펩티드, 보다 바람직하게는 95% 이상의 상동성을 갖는 폴리펩티드가 포함된다.
본 발명에 있어서의 「TACC3」란 형질전환 산성 코일드 코일 단백질 3(transforming acidic coiled-coil；TACC3)(Genomics. 1999 Jun 1；58(2)：165-70)를 의미한다. 또한 본 발명의 TACC3는 모든 유래의 TACC3를 의미하고, 바람직하게는 포유동물의 TACC3이며, 더욱 바람직하게는 인간의 TACC3이고, 특히 바람직하게는 서열번호 9에 기재되는 아미노산 서열로 이루어지는 인간 TACC3(cDNA 서열：서열번호 13/GenBank Accession No.NM_006342.2)이다. 인간 TACC3 유전자의 유전자좌는 4p16.3으로, FGFR3 유전자가 존재하는 염색체와 동일한 염색체의 상류에 존재한다.
본 발명에 있어서의 「인간 TACC3」는 서열번호 9에 기재되는 아미노산 서열로 이루어지는 인간 TACC3의 야생형 폴리펩티드, 또는 그 야생형 폴리펩티드에 있어서 1 또는 복수(바람직하게는 1 내지 10개의 아미노산, 특히 바람직하게는 1 내지 5개의 아미노산)의 아미노산이 치환, 결실 또는 삽입되어 있는 변이 폴리펩티드이다.
상기 변이 폴리펩티드에는 또한 상기 야생형 폴리펩티드의 아미노산 서열과 70% 이상의 상동성을 갖는 폴리펩티드, 바람직하게는 80% 이상의 상동성을 갖는 폴리펩티드, 더욱 바람직하게는 90% 이상의 상동성을 갖는 폴리펩티드, 보다 바람직하게는 95% 이상의 상동성을 갖는 폴리펩티드가 포함된다.
아미노산 서열(또는 염기서열)의 동일성은 칼린과 알취일(Karlin and Altschul)에 의한 알고리즘 BLAST(Proc. Natl. Acad. Sci. USA(1993) 90：5873-7)에 의해 결정할 수 있다. 이 알고리즘에 기초하여 BLASTN이나 BLASTX라 불리는 프로그램이 개발되어 있다(Altschul et al., J. Mol. Biol.(1990) 215：403-10). BLAST에 기초하여 BLASTN에 의해 염기서열을 해석하는 경우에는, 파라미터는 예를 들면 score=100, wordlength=12로 한다. 또한 BLAST에 기초하여 BLASTX에 의해 아미노산 서열을 해석하는 경우에는, 파라미터는 예를 들면 score=50, wordlength=3으로 한다. BLAST와 Gapped BLAST 프로그램을 사용하는 경우에는, 각 프로그램의 디폴트 파라미터를 사용한다. 이들 해석방법의 구체적인 수법은 공지이다(NCBI(National Center for Biotechnology Information)의 BLAST(Basic Local Alignment Search Tool)의 웹사이트의 정보를 참조할 수 있다).
본 발명에 있어서의 「융합 폴리펩티드」는 전술한 FGFR3 야생형 폴리펩티드의 일부 또는 전부 또는 FGFR3 변이 폴리펩티드의 일부 또는 전부와, 전술한 TACC3 야생형 폴리펩티드의 일부 또는 전부 또는 TACC3 변이 폴리펩티드의 일부 또는 전부가 융합된 폴리펩티드, 또는 전술한 FGFR3 야생형 폴리펩티드의 일부 또는 전부 또는 FGFR3 변이 폴리펩티드의 일부 또는 전부와, 전술한 BAIA2P2L1 야생형 폴리펩티드의 일부 또는 전부 또는 BAIAP2L1 변이 폴리펩티드의 일부 또는 전부가 융합된 폴리펩티드를 의미한다.
또한 본 발명의 융합 폴리펩티드에는 2종류의 각각의 폴리펩티드 전부 또는 일부와의 융합 부위에 FGFR3 야생형 폴리펩티드 또는 FGFR3 변이 폴리펩티드를 코드하는 게노믹 DNA(genomic DNA)(엑손 및 인트론을 포함한다) 중의 인트론 서열의 일부에 의해 코드되는 아미노산 서열이 포함되어 있는 융합 폴리펩티드도 포함된다.
이러한 융합 폴리펩티드로서는, 예를 들면 서열번호 30 및 36으로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 들 수 있고, 각각 제761~793번째의 아미노산 서열 및 제759~791번째의 아미노산 서열이 FGFR3 유전자의 인트론 서열의 일부(각각 서열번호 29의 제2,281~2,379번째의 염기서열 및 서열번호 35의 제2,275~2,373번째의 염기서열)에 의해 코드된다.
여기서 「폴리펩티드의 일부」란 야생형 폴리펩티드 또는 변이 폴리펩티드의 전장 아미노산 서열 중의 임의의 부분 서열로 이루어지는 폴리펩티드이다.
구체적인 태양으로서는, 서열번호 28로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 FGFR3와 TACC3의 융합 폴리펩티드, 서열번호 30으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 FGFR3와 TACC3의 융합 폴리펩티드, 서열번호 32로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 FGFR3와 BAIAP2L1의 융합 폴리펩티드, 서열번호 34로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 FGFR3와 TACC3의 융합 폴리펩티드, 서열번호 36으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 FGFR3와 TACC3의 융합 폴리펩티드, 또는 서열번호 38로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 FGFR3와 BAIAP2L1의 융합 폴리펩티드를 들 수 있다.
상기와 같이 서열번호 30 및 36으로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 융합 폴리펩티드는 각각 그의 융합 부위에 있어서 FGFR3 유전자의 인트론 서열의 일부에 의해 코드되는 아미노산 서열이 포함되어 있다.
본 발명의 폴리뉴클레오티드는 전술한 본 발명의 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드로서, 본 발명의 융합 폴리펩티드를 코드할 수 있는 어떠한 폴리뉴클레오티드도 포함하고, 게노믹 DNA 또는 cDNA의 어느 것도 포함한다. 게노믹 DNA는 엑손 및 인트론을 포함한다. 또한 cDNA는 인트론 서열의 일부에 유래하는 핵산 서열로서 아미노산 서열을 코드하는 핵산 서열을 포함하고 있어도 된다.
또한 상기 폴리뉴클레오티드는 동일한 아미노산을 코드하는 코돈이면 어떠한 코돈으로 구성되는 축중 폴리뉴클레오티드도 포함한다.
또한 본 발명에 있어서의 폴리뉴클레오티드는 포유동물 유래의 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드를 포함하고, 바람직한 태양으로서는 인간 유래의 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드를 들 수 있다.
구체적인 태양으로서는, FGFR3 야생형 폴리펩티드(서열번호 6 또는 서열번호 7)의 일부 또는 전부 또는 FGFR3 변이 폴리펩티드의 일부 또는 전부와, 전술한 TACC3 야생형 폴리펩티드(서열번호 9)의 일부 또는 전부 또는 TACC3 변이 폴리펩티드의 일부 또는 전부가 융합된 폴리펩티드, 또는 FGFR3 야생형 폴리펩티드의 일부 또는 전부 또는 FGFR3 변이 폴리펩티드의 일부 또는 전부와, BAIA2P2L1 야생형 폴리펩티드(서열번호 8)의 일부 또는 전부 또는 BAIAP2L1 변이 폴리펩티드의 일부 또는 전부가 융합된 폴리펩티드 중 어느 하나의 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드이다.
보다 구체적인 태양으로서는, 서열번호 14, 15 또는 16에 기재되는 상기 융합 폴리펩티드에 있어서의 2개에 폴리펩티드의 접합 부위에 대응하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 들 수 있다.
더욱 구체적인 태양으로서는, 서열번호 28로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 FGFR3와 TACC3의 융합 폴리펩티드를 코드하는 서열번호 27로 표시되는 핵산 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드, 서열번호 30으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 FGFR3와 TACC3의 융합 폴리펩티드를 코드하는 서열번호 29로 표시되는 핵산 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드, 서열번호 32로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 FGFR3와 BAIAP2L1의 융합 폴리펩티드를 코드하는 서열번호 31로 표시되는 핵산 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드, 서열번호 34로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 FGFR3와 TACC3의 융합 폴리펩티드를 코드하는 서열번호 33으로 표시되는 핵산 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드, 서열번호 36으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 FGFR3와 TACC3의 융합 폴리펩티드를 코드하는 서열번호 35로 표시되는 핵산 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드, 또는 서열번호 38로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 FGFR3와 BAIAP2L1의 융합 폴리펩티드를 코드하는 서열번호 37로 표시되는 핵산 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 들 수 있다.
여기서, 전술한 바와 같이 서열번호 29의 제2,281~2,379번째의 염기서열은 FGFR3 유전자의 인트론에 유래하는 핵산 서열로서, 서열번호 30의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드에 있어서의 제761~793번째의 아미노산 서열을 코드한다.
마찬가지로 서열번호 35의 제2,275~2,373번째의 염기서열은 FGFR3 유전자의 인트론에 유래하는 핵산 서열로서, 서열번호 36의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드에 있어서의 제759~791번째의 아미노산 서열을 코드한다.
본 발명의 폴리뉴클레오티드는 어떠한 방법으로 얻어지는 것이어도 된다. 예를 들면 mRNA로부터 조제되는 상보 DNA(cDNA), 게놈 DNA로부터 조제되는 DNA, 화학 합성에 의해 얻어지는 DNA, RNA 또는 DNA를 주형으로 하여 PCR법으로 증폭시켜서 얻어지는 DNA 및 이들 방법을 적당히 조합하여 구축되는 DNA도 모두 포함한다.
본 발명의 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드는 통상의 방법에 따라 본 발명의 융합 폴리펩티드를 코드하는 mRNA로부터 cDNA를 클론화하는 방법, 게놈 DNA를 단리하여 스플라이싱 처리하는 방법, 화학 합성하는 방법 등에 의해 취득할 수 있다.
예를 들면 본 발명의 융합 폴리펩티드를 코드하는 mRNA로부터 cDNA를 클론화하는 방법으로서는, 먼저 본 발명의 융합 폴리펩티드를 발현, 생산하는 임의의 조직 또는 세포로부터 통상의 방법에 따라 상기 본 발명의 융합 폴리펩티드를 코드하는 mRNA를 조제한다. 예를 들면 구아니딘 티오시아네이트법, 열페놀법 또는 AGPC법 등의 방법을 사용하여 조제한 전체 RNA를 올리고(dT) 셀룰로오스나 폴리 U-세파로오스 등에 의한 친화성 크로마토그래피로 처리함으로써 행할 수 있다.
이어서 얻어진 mRNA를 주형으로서, 예를 들면 역전사효소를 사용하는 등의 공지의 방법(Mol. Cell. Biol., Vol.2, p.161, 1982；Mol. Cell. Biol., Vol.3, p.280, 1983；Gene, Vol.25, p.263, 1983) 등에 의해 cDNA 가닥을 합성하여 cDNA의 이중가닥 cDNA로 변환하고, 이 cDNA를 플라스미드 벡터, 파지 벡터 또는 코스미드 벡터 등에 삽입하여 대장균을 형질전환하거나, 또는 시험관내(in vitro) 패키징 후 대장균에 형질이입(트랜스펙트)함으로써 cDNA 라이브러리를 제작한다.
본 발명은 또한 전술한 본 발명의 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드를 함유하는 벡터(재조합 벡터)에 관한 것이다.
본 발명의 벡터로서는 원핵세포 및/또는 진핵세포의 각종 숙주 내에서 복제 유지 또는 자기 증식할 수 있는 것이면 특별히 제한되지 않고, 플라스미드 벡터 및 파지 벡터가 포함된다.
클로닝용 벡터로서는, 예를 들면 pUC19, λgt10, λgt11 등이 예시된다. 또한 본 발명의 융합 폴리펩티드를 숙주세포 내에서 발현할 수 있는 세포를 단리하는 경우에는 상기 폴리뉴클레오티드를 발현할 수 있는 프로모터를 가진 벡터인 것이 바람직하다.
본 발명의 재조합 벡터로서는, 간편하게는 당업계에 있어서 입수 가능한 재조합용 벡터(플라스미드 DNA 및 박테리오파지 DNA)에 본 발명의 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드를 통상의 방법에 의해 연결함으로써 조제할 수 있다.
사용되는 재조합용 벡터로서, 예를 들면 대장균 유래의 플라스미드(pBR322, pBR325, pUC12, pUC13, pUC19 등), 효모 유래 플라스미드(pSH19, pSH15 등), 고초균 유래 플라스미드(pUB110, pTP5, pC194 등)가 예시된다.
또한 파지로서는 λ 파지 등의 박테리오파지가 추가로 레트로바이러스, 백시니아 바이러스, 핵다각체 바이러스, 렌티바이러스 등의 동물이나 곤충의 바이러스(pVL1393, 인비트로겐 제조)가 예시된다.
본 발명의 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드를 발현시켜 본 발명의 융합 폴리펩티드를 생산시키는 목적에 있어서는 발현 벡터가 유용하다. 발현 벡터로서는 원핵세포 및/또는 진핵세포의 각종 숙주세포 중에서 본 발명의 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드를 발현하여 이들 폴리펩티드를 생산하는 기능을 갖는 것이면 특별히 제한되지 않는다.
예를 들면 pMAL C2, pEF-BOS(Nucleic Acid Research, Vol.18, 1990, p.5322 등) 또는 pME18S(실험의학 별책 「유전자 공학 핸드북」, 1992년 등) 등을 들 수 있다.
또한 본 발명의 융합 폴리펩티드는 다른 별도의 단백과의 융합 단백으로서 제조하는 것도 가능하다. 예를 들면 GST(Glutathione S-transferase)와의 융합 단백으로서 조제하는 경우에는 본 발명의 융합 폴리펩티드를 코드하는 cDNA를, 예를 들면 플라스미드 pGEX4T1(Pharmacia 제조) 중에 서브클로닝하고, 대장균 DH5α를 형질전환하여 그 형질전환체를 배양함으로써 조제할 수 있다.
또는 HA(인플루엔자 응집소), 이뮤노글로불린 불변영역(immunoglobulin constant region), β-갈락토시다아제, MBP(말토오스 결합 단백질) 등과의 융합체로서 조제할 수 있다. 더 나아가서는, 예를 들면 FLAG(Hopp, T. P. et al., BioTechnology(1988) 6, 1204-1210), 6개의 His(히스티딘) 잔기로 이루어지는 6×His, 10×His, 인플루엔자 응집소(HA), 인간 c-myc의 단편, VSV-GP의 단편, p18HIV의 단편, T7-tag, HSV-tag, E-tag, SV4OT 항원의 단편, lck tag, α-tubulin의 단편, B-tag, Protein C의 단편, Stag, StrepTag, HaloTag 등의 공지의 펩티드와의 융합체로서 조제할 수 있다.
본 발명의 벡터는 숙주세포로서 세균, 특히 대장균을 사용하는 경우, 그 벡터는 적어도 프로모터-오퍼레이터영역, 개시 코돈, 본 발명의 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드, 종지 코돈, 터미네이터영역 및 복제 가능 단위를 포함하고 있는 것이 바람직하다.
숙주로서 효모, 동물세포 또는 곤충세포를 사용하는 경우에는, 발현 벡터는 적어도 프로모터, 개시 코돈, 본 발명의 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드, 종지 코돈을 포함하고 있는 것이 바람직하다.
또한 상기 벡터는 시그널 펩티드를 코드하는 DNA, 인핸서 서열, 본 발명의 단백을 코드하는 유전자의 5'측 및 3'측의 비번역영역, 스플라이싱 접합부, 폴리아데닐레이션 부위(polyadenylation sites), 선택 마커영역 또는 복제 가능 단위 등을 포함하고 있어도 된다.
또한 목적하는 바에 따라 유전자 증폭 및 형질전환된 숙주를 선발하는 것을 가능하게 하는 마커 유전자(유전자 증폭 유전자, 약제 내성 유전자 등)를 포함하고 있어도 된다.
예를 들면 디히드로엽산 환원효소(DHFR) 유전자, 티미딘 키나아제 유전자, 네오마이신 내성 유전자, 글루타민산 합성효소 유전자, 아데노신 데아미나아제 유전자, 오르니틴 데카르복실라아제 유전자, 히그로마이신-B-포스포트랜스페라아제 유전자, 아스파르테이트 트랜스카르바밀라아제 유전자 등을 예시할 수 있다.
세균 중에서 본 발명의 융합 폴리펩티드를 발현시키기 위한 프로모터-오퍼레이터영역은 프로모터, 오퍼레이터 및 Shine-Dalgarno(SD) 서열(예를 들면 AAGG 등)을 포함할 수 있다.
예를 들면 숙주가 에셰리키아속 균인 경우, 예를 들면 Trp 프로모터, lac 프로모터, recA 프로모터, λPL 프로모터, lpp 프로모터, tac 프로모터 등을 포함하는 것이 예시된다.
효모 중에서 본 발명의 융합 폴리펩티드를 발현시키기 위한 프로모터로서는 PH05 프로모터, PGK 프로모터, GAP 프로모터, ADH 프로모터를 들 수 있다.
숙주가 바실러스속 균인 경우는 SL01 프로모터, SP02 프로모터, penP 프로모터 등을 들 수 있다.
또한 숙주가 포유동물세포 등의 진핵세포인 경우, SV40 유래의 프로모터, 레트로바이러스의 프로모터, 열충격 프로모터 등을 들 수 있다. 바람직하게는 SV40, 레트로바이러스이다. 그러나 특별히 이들에 한정되는 것은 아니다. 또한 발현에는 인핸서의 이용도 효과적인 방법이다.
적합한 개시 코돈으로서는 메티오닌 코돈(ATG)이 예시된다. 종지 코돈으로서는 상용의 종지 코돈(예를 들면 TAG, TGA, TAA)이 예시된다. 터미네이터영역으로서는 통상 사용되는 천연 또는 합성의 터미네이터를 사용할 수 있다.
복제 가능 단위란 숙주세포 중에서 그 전체 DNA 서열을 복제할 수 있는 능력을 갖는 DNA를 말하고, 천연의 플라스미드, 인공적으로 수식된 플라스미드(천연의 플라스미드로부터 조제된 DNA 프래그먼트) 및 합성 플라스미드 등이 포함된다. 적합한 플라스미드로서는, E. coli의 경우에는 플라스미드 pBR322 또는 그의 인공적 수식물(pBR322를 적당한 제한효소로 처리하여 얻어지는 DNA 프래그먼트)을, 효모의 경우에는 효모 2μ 플라스미드 또는 효모 염색체 DNA를, 또한 포유동물세포의 경우에는 플라스미드 pRSVneo ATCC 37198, 플라스미드 pSV2dhfr ATCC 37145, 플라스미드 pdBPV-MMTneo ATCC 37224, 플라스미드 pSV2neo ATCC 37149 등을 들 수 있다.
인핸서 서열, 폴리아데닐레이션 부위 및 스플라이싱 접합 부위에 대해서는, 예를 들면 각각 SV40에 유래하는 것 등, 당업자에게 있어서 통상 사용되는 것을 사용할 수 있다.
본 발명의 발현 벡터는 적어도 전술한 프로모터, 개시 코돈, 본 발명의 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드, 종지 코돈 및 터미네이터영역을 연속적으로 또한 고리 형상으로 적당한 복제 가능 단위에 연결함으로써 조제할 수 있다. 또한 이때, 목적하는 바에 따라 제한효소로의 소화나 T4 DNA 리가아제를 사용하는 라이게이션 등의 통상의 방법에 의해 적당한 DNA 프래그먼트(예를 들면 링커, 다른 제한효소 절단부위 등)를 사용할 수 있다.
본 발명은 또한 전술한 본 발명의 벡터로 형질전환된 재조합 세포에 관한 것으로, 본 발명의 재조합 세포는 전술한 발현 벡터를 숙주세포에 도입함으로써 조제할 수 있다.
본 발명에서 사용되는 숙주세포로서는 상기의 발현 벡터에 적합하고, 형질전환될 수 있는 것이면 특별히 한정되지 않고, 본 발명의 기술 분야에 있어서 통상 사용되는 천연세포 또는 인공적으로 수립된 재조합 세포 등 각종 세포(예를 들면 세균(에셰리키아속 균, 바실러스속 균), 효모(사카로마이세스속, 피키아속 등), 동물세포 또는 곤충세포 등이 예시된다.
바람직하게는 대장균 또는 동물세포이고, 예를 들면 대장균(DH5α, TB1, HB101 등), 마우스 유래 세포(COP, L, C127, Sp2/0, NS-1 또는 NIH3T3 등), 랫트 유래 세포(PC12, PC12h), 햄스터 유래 세포(BHK 및 CHO 등), 원숭이 유래 세포(COS1, COS3, COS7, CV1 및 Velo 등) 및 인간 유래 세포(Hela, 2배체 섬유아세포에 유래하는 세포, 골수종세포(myeloma cells) 및 HepG2 등) 등이 예시된다.
발현 벡터의 숙주세포로의 도입(형질전환(형질이입))은 통상의 방법에 따라 행할 수 있다([E.coli, Bacillus subtilis 등의 경우]：Proc. Natl. Acad. Sci. USA., Vol.69, p.2110, 1972；Mol. Gen. Genet., Vol.168, p.111, 1979；J. Mol. Biol., Vol.56, p.209, 1971；[Saccharomyces cerevisiae의 경우]：Proc. Natl. Acad. Sci. USA., Vol.75, p.1927, 1978；J. Bacteriol., Vol.153, p.163, 1983)；[동물세포의 경우]：Virology, Vol.52, p.456, 1973；[곤충세포의 경우]：Mol. Cell. Biol., Vol.3, p.2156-2165, 1983).
본 발명의 융합 폴리펩티드는 상기와 같이 조제되는 발현 벡터를 포함하는 형질전환 재조합 세포(이하, 봉입체를 포함하는 의미로 사용한다.)를 통상의 방법에 따라 영양 배지에서 배양함으로써 제조할 수 있다.
본 발명의 융합 폴리펩티드는 전술한 바와 같은 재조합 세포, 특히 동물세포를 배양하여 배양 상청 중에 분비시킴으로써 제조할 수 있다.
얻어진 배양물을 여과 또는 원심분리 등의 방법으로 배양 여액(상청)을 얻어, 그 배양 여액으로부터 천연 또는 합성 단백질을 정제 및 단리하기 위해 일반적으로 사용되는 통상의 방법에 따라 상기 본 발명의 융합 폴리펩티드를 정제, 단리한다.
단리, 정제방법으로서는, 예를 들면 염석, 용매 침전법 등의 용해도를 이용하는 방법, 투석, 한외 여과, 겔 여과, 도데실 황산나트륨-폴리아크릴아미드 겔 전기영동 등 분자량의 차를 이용하는 방법, 이온 교환 크로마토그래피나 히드록실아파타이트 크로마토그래피 등의 하전을 이용하는 방법, 친화성 크로마토그래피 등의 특이적 친화성을 이용하는 방법, 역상 고속 액체크로마토그래피 등의 소수성의 차를 이용하는 방법, 등전점 전기영동 등의 등전점의 차를 이용하는 방법 등을 들 수 있다.
한편, 본 발명의 융합 폴리펩티드가 배양된 재조합 세포(대장균 등)의 페리플라즘 또는 세포질 내에 존재하는 경우는 배양물을 여과 또는 원심분리 등의 통상의 방법으로 균체 또는 세포를 모아 적당한 완충액에 현탁하여, 예를 들면 초음파나 리소자임 및 동결 융해 등의 방법으로 세포 등의 세포벽 및/또는 세포막을 파괴한 후, 원심분리나 여과 등의 방법으로 본 발명의 단백을 함유하는 막 분획을 얻는다. 그 막 분획을 트리톤-X100 등의 계면활성제를 사용하여 가용화하여 조용액(crude solution)을 얻는다. 그리고 당해 조용액을 앞서 예시한 바와 같은 통상의 방법을 사용함으로써 단리, 정제할 수 있다.
본 발명은 또한 전술한 본 발명의 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드(cDNA나 게노믹 DNA)에 하이브리다이즈하는 임의의 올리고뉴클레오티드에 관한 것이다.
본 발명의 올리고뉴클레오티드는 당해 cDNA나 게노믹 DNA의 염기서열의 임의의 부분 염기서열에 상보적인 염기서열을 가져, 폴리머라아제 연쇄반응(polymerase chain reaction；PCR)에 있어서의 센스 프라이머 및 안티센스 프라이머로 이루어지는 한쌍의 올리고뉴클레오티드 프라이머로서 유용하다. 그 한쌍의 올리고뉴클레오티드 프라이머를 사용한 PCR에 의해 본 발명의 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드의 임의의 일부 또는 전부의 염기서열을 증폭시킬 수 있다.
본 발명의 올리고뉴클레오티드 프라이머로서는 본 발명의 폴리뉴클레오티드의 염기서열에 상보적인 임의의 염기 길이의 올리고뉴클레오티드가 포함되나, 바람직하게는 연속되는 적어도 12 염기, 바람직하게는 12-50 염기, 보다 바람직하게는 12-20 염기의 서열을 갖는 올리고뉴클레오티드를 들 수 있다.
본 발명의 올리고뉴클레오티드는 또한 DNA 하이브리다이제이션 또는 RNA 하이브리다이제이션의 조작에 있어서의 프로브로서도 유용하다. 당해 DNA를 프로브로서 사용할 목적에 있어서는 본 발명의 폴리뉴클레오티드에 하이브리다이제이션하는 연속된 20 염기 이상의 부분 염기서열을 들 수 있고, 바람직하게는 연속된 50 염기 이상의 부분 염기서열, 더욱 바람직하게는 연속된 100 염기 이상의 부분 염기서열, 보다 바람직하게는 연속된 200 염기 이상의 부분 염기서열, 특히 바람직하게는 연속된 300 염기 이상의 부분 염기서열을 들 수 있다.
본 발명은 또한 본 발명의 융합 폴리펩티드를 코드하는 mRNA 폴리뉴클레오티드에 결합하여 그 mRNA의 단백질로의 번역을 저해하는 활성을 갖는 올리고뉴클레오티드에 관한 것이다. 특히 바람직하게는 본 발명의 융합 폴리펩티드를 코드하는 mRNA 폴리뉴클레오티드에 결합하여 그 mRNA를 절단하는 siRNA를 들 수 있다.
이 올리고뉴클레오티드는 본 발명의 융합 폴리펩티드를 코드하는 mRNA에 결합하여 그 발현을 저해하는 올리고뉴클레오티드로서, 예를 들면 안티센스 올리고뉴클레오티드, 리보자임 또는 siRNA(short interfering RNA)를 의미한다. 이들은 상기 mRNA에 결합한 후, 그 mRNA의 단백질로의 번역을 저해한다.
안티센스 올리고뉴클레오티드란 게놈 DNA 및/또는 mRNA와 특이적으로 하이브리다이즈하여 그의 전사 및/또는 번역을 저해함으로써 그 단백질의 발현을 저해하는 올리고뉴클레오티드를 의미한다.
표적 폴리뉴클레오티드(mRNA 등)로의 결합은 일반적인 염기쌍 상보성에 의한 것이어도 되고, 또는 예를 들면 DNA 듀플렉스로의 결합인 경우에는 이중 나선구조의 주홈(main groove)에 있어서의 특이적 상호작용에 의한 것이어도 된다. 안티센스 올리고뉴클레오티드의 표적 부위로서는, mRNA의 5' 말단, 예를 들면 AUG 개시 코돈까지 및 이것을 포함하는 5'비번역 서열 또는 mRNA의 3'비번역 서열 또는 코딩영역의 서열도 들 수 있다.
본 발명에 있어서의 안티센스 올리고뉴클레오티드로서 사용할 목적에 있어서는 연속된 5 내지 100 염기의 부분 염기서열을 들 수 있고, 바람직하게는 연속된 5 내지 70 염기의 부분 염기서열, 더욱 바람직하게는 연속된 5 내지 50 염기의 부분 염기서열, 보다 바람직하게는 연속된 5 내지 30 염기의 부분 염기서열을 들 수 있다.
또한 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오티드에는 환자의 체내에 투여된 경우의 혈중 반감기의 증대(안정성), 세포 내막의 투과성의 증대, 또는 경구 투여의 경우의 소화기관에서의 분해 내성의 증대 또는 흡수의 증대 등의 목적을 위해 그 올리고뉴클레오티드의 일부에 화학 수식을 실시하는 것이 가능하다. 화학 수식으로서는, 예를 들면 올리고뉴클레오티드의 구조 중의 인산 결합, 리보오스, 핵산 염기, 당 부분, 3' 및/또는 5' 말단 등의 화학 수식을 들 수 있다.
인산 결합의 수식으로서는 1 이상의 상기 결합을, 포스포디에스테르 결합(D-올리고), 포스포로티오에이트 결합, 포스포로디티오에이트 결합(S-올리고), 메틸포스포네이트 결합(MP-올리고), 포스포로아미데이트 결합, 비인산 결합 및 메틸포스포노티오에이트 결합 중 어느 하나 또는 그들의 조합으로의 변경을 들 수 있다. 리보오스의 수식으로서는 2'-플루오로리보오스 또는 2'-O-메틸리보오스 등으로의 변경을 들 수 있다. 핵산 염기의 수식으로서는 5-프로피닐우라실 또는 2-아미노아데닌 등으로의 변경을 들 수 있다.
리보자임이란 mRNA를 절단하는 촉매 활성을 갖는 올리고뉴클레오티드를 의미한다. 리보자임은 일반적으로 엔도뉴클레아제, 리가아제 또는 폴리머라아제 활성을 나타내고, 각종 타입의 트랜스 작용성 리보자임, 예를 들면 해머헤드 및 헤어핀 타입의 리보자임이 포함된다.
siRNA란 RNA 간섭(RNA interference)을 행할 수 있는 이중가닥 올리고뉴클레오티드를 의미한다(예를 들면 Bass, 2001, Nature, 411, 428-429；Elbashir et al., 2001, Nature, 411, 494-498).
siRNA는 서열 특이적으로 mRNA를 절단하여 그 결과 mRNA의 단백질로의 번역이 저해된다. siRNA는 표적으로 하는 폴리뉴클레오티드 서열에 상보적인 서열을 포함하는 20-25 염기쌍 길이의 이중가닥 RNA를 들 수 있다. 본 발명의 siRNA에는 화학적으로 수식된 뉴클레오티드 및 비뉴클레오티드가 포함되는 올리고뉴클레오티드도 포함된다.
본 발명은 또한 전술한 본 발명의 융합 폴리펩티드에 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편에 관한 것이다.
본 발명의 항체는 그의 유래, 형상, 기능 등으로 한정되지 않고 어떠한 항체여도 된다. 본 발명의 항체는 단일클론 항체여도 되고 다중클론 항체여도 되지만, 단일클론 항체인 것이 바람직하다. 본 발명의 항체는 인간 항체, 마우스 항체, 랫트 항체 등, 어떠한 동물 유래의 항체여도 된다. 또한 키메라(chimeric) 항체나 인간화(humanized) 항체 등의 재조합 항체여도 된다. 본 발명의 바람직한 항체로서는 키메라 항체, 인간 항체 또는 인간화 항체를 들 수 있다.
본 발명의 인간화 항체는 당업자에게 기지의 방법을 사용하여 제작할 수 있다. 항체의 가변영역은 통상 4개의 프레임(FR) 사이에 끼인 3개의 상보성 결정영역(complementarity determining region；CDR)으로 구성되어 있다. CDR은 실질적으로 항체의 결합 특이성을 결정하고 있는 영역이다. CDR의 아미노산 서열은 다양성이 풍부하다. 한편 FR을 구성하는 아미노산 서열은 다른 결합 특이성을 갖는 항체 사이에서도 높은 상동성을 나타내는 것이 많다. 이 때문에 일반적으로 CDR의 이식에 의해 어떤 항체의 결합 특이성을 다른 항체에 이식할 수 있다고 알려져 있다.
인간화 항체는 재구성(reshaped) 인간 항체라고도 칭해지며, 이는 인간 이외의 포유동물, 예를 들면 마우스 항체의 CDR을 인간 항체의 상보성 결정영역으로 이식한 것으로서, 그 일반적인 유전자 재조합 수법도 알려져 있다(유럽 특허출원 공개번호 EP 125023호 공보, WO 96/02576호 공보 참조).
구체적으로는, 예를 들면 CDR이 마우스 항체 유래인 경우에는 마우스 항체의 CDR과 인간 항체의 프레임워크 영역(framework region；FR)을 연결하도록 설계한 DNA 서열을, CDR 및 FR 양쪽의 말단영역에 오버래핑되는 부분을 갖도록 제작한 수개의 올리고뉴클레오티드를 프라이머로서 사용하여 PCR법에 의해 합성한다(WO 98/13388호 공보에 기재된 방법을 참조). 얻어진 DNA를 인간 항체 불변영역을 코드하는 DNA와 연결하고, 이어서 발현 벡터에 삽입해서 이것을 숙주에 도입하여 생산시킴으로써 얻어진다(유럽 특허출원 공개번호 EP 239400, 국제특허출원 공개번호 WO 96/02576 참조).
CDR과 연결되는 인간 항체의 프레임워크 영역은 상보성 결정영역이 양호한 항원 결합 부위를 형성하는 것이 선택된다. 필요에 따라 재구성 인간 항체의 상보성 결정영역이 적절한 항원 결합 부위를 형성하도록 항체의 가변영역에 있어서의 프레임워크 영역의 아미노산을 치환, 결실, 부가 및/또는 삽입 등을 해도 된다. 예를 들면 마우스 CDR의 인간 FR로의 이식에 사용한 PCR법을 응용하여 FR에 아미노산 서열의 변이를 도입할 수 있다. 구체적으로는, FR에 어닐링하는 프라이머에 부분적인 염기서열의 변이를 도입할 수 있다. 이러한 프라이머에 의해 합성된 FR에는 염기서열의 변이가 도입된다. 아미노산을 치환한 변이형 항체의 항원으로의 결합 활성을 상기의 방법으로 측정하여 평가함으로써 목적하는 성질을 갖는 변이 FR 서열을 선택할 수 있다(Sato, K.etal., CancerRes.(1993) 53, 851-856).
인간화 항체의 불변영역에는 통상 인간 항체의 것이 사용된다.
사용되는 인간 항체의 불변영역은 특별히 한정되지 않고, 예를 들면 중쇄 불변영역의 경우, 인간 IgG1의 불변영역, 인간 IgG2의 불변영역, 인간 IgG3의 불변영역, 인간 IgG4의 불변영역, 인간 IgM, IgA, IgE, IgD의 불변영역 등을 사용할 수 있다. 또한 경쇄 불변영역의 경우, 인간 κ쇄 불변영역, 인간 λ쇄 불변영역 등을 사용할 수 있다. 또한 인간 항체 유래의 불변영역은 천연 유래의 서열을 갖는 것이어도 되고, 천연 유래의 서열에 있어서 1 또는 복수의 아미노산이 개변(치환, 결실, 부가 및/또는 삽입)된 서열을 갖는 불변영역이어도 된다.
또한 인간화 항체를 제작한 후에 가변영역(예를 들면 CDR, FR)이나 불변영역 중의 아미노산을 다른 아미노산으로 치환, 결실, 부가 및/또는 삽입 등을 해도 되고, 본 발명의 인간화 항체에는 그러한 아미노산 치환 등이 된 인간화 항체도 포함된다.
인간화 항체에 있어서의 CDR의 유래는 특별히 한정되지 않고, 어떠한 동물 유래여도 된다. 예를 들면 마우스 항체, 랫트 항체, 토끼 항체, 낙타 항체 등의 서열을 사용하는 것이 가능하나, 바람직하게는 마우스 항체의 CDR 서열이다.
인간화 항체는 인간 체내에 있어서의 면역원성이 저하되어 있기 때문에 치료 목적 등으로 인간에게 투여하는 경우에 유용하다.
키메라 항체는 인간 이외의 포유동물, 예를 들면 마우스 항체의 중쇄, 경쇄의 가변영역과 인간 항체의 중쇄, 경쇄의 불변영역으로 이루어지는 항체이다. 키메라 항체는 기지의 방법을 사용하여 제작할 수 있다. 예를 들면 항체 유전자를 하이브리도마로부터 클로닝하고, 적당한 벡터에 삽입하여 이것을 숙주에 도입함으로써 행하는 것이 가능하다(예를 들면 Carl, A. K. Borrebaeck, James, W. Larrick, THERAPEUTIC MONOCLONAL ANTIBODIES, Published in the United Kingdom by MACMILLAN PUBLISHERS LTD, 1990 참조). 구체적으로는, 하이브리도마의 mRNA로부터 역전사효소를 사용하여 항체의 가변영역(V영역)의 cDNA를 합성한다. 목적으로 하는 항체의 V영역을 코드하는 DNA가 얻어지면, 이것을 목적하는 인간 항체 불변영역(C영역)을 코드하는 DNA와 연결하여 이것을 발현 벡터에 삽입한다. 또는 항체의 V영역을 코드하는 DNA를 인간 항체 C영역의 DNA를 포함하는 발현 벡터에 삽입해도 된다. 발현 제어영역, 예를 들면 인핸서, 프로모터의 제어하에서 발현하도록 발현 벡터에 삽입한다. 다음으로, 이 발현 벡터에 의해 숙주세포를 형질전환하여 키메라 항체를 발현시킬 수 있다.
또한 인간 항체도 당업자에게 공지의 방법에 의해 취득하는 것이 가능하다. 예를 들면 인간 림프구를 시험관내(in vitro)에서 목적하는 항원 또는 목적하는 항원을 발현하는 세포로 감작하고, 감작 림프구를 인간 골수종세포, 예를 들면 U266과 융합시켜서 항원으로의 결합 활성을 갖는 목적하는 인간 항체를 얻는 것도 가능하다(일본국 특허공고 평1-59878 참조). 또한 인간 항체 유전자의 모든 레퍼토리를 갖는 형질전환 동물을 목적하는 항원으로 면역함으로써 목적하는 인간 항체를 취득할 수 있다(국제특허출원 공개번호 WO 93/12227, WO 92/03918, WO 94/02602, WO 94/25585, WO 96/34096, WO 96/33735 참조).
또한 인간 림프구의 풀(pool)로부터 항원으로의 결합 활성을 갖는 항체를 발현하는 B 세포를 유세포 분석법(Flow cytometry) 또는 셀 어레이(cell array) 등을 사용해서 단리하여 선택된 B 세포의 항체 유전자를 해석하면, 항원에 결합하는 인간 항체의 DNA 서열을 결정할 수 있다(Jin, A. et al., Nature Medicine(2009) 15, 1088-92, Scheid, J.F. et al., Nature(2009) 458, 636-640, Wrammert, J. et al., Nature(2008) 453, 667-672, Tiller, T. et al, Journal of Immunological Methods(2008) 329, 112-124). 항원에 결합하는 항체의 DNA 서열이 명확해지면, 당해 서열을 갖는 적당한 발현 벡터를 제작하여 인간 항체를 취득할 수 있다. 이들 방법은 주지로서, WO 92/01047, WO 92/20791, WO 93/06213, WO 93/11236, WO 93/19172, WO 95/01438, WO 95/15388 등을 참고로 할 수 있다.
또한 인간 항체 파지 라이브러리를 사용하여 패닝법에 의해 인간 항체를 취득하는 기술도 알려져 있다. 예를 들면 인간 항체의 가변영역을 단일 사슬 항체(scFv)로서 파지 디스플레이법에 의해 파지의 표면에 발현시켜 항원에 결합하는 파지를 선택할 수 있다. 선택된 파지의 유전자를 해석하면, 항원에 결합하는 인간 항체의 가변영역을 코드하는 DNA 서열을 결정할 수 있다. 항원에 결합하는 scFv의 DNA 서열이 명확해지면, 당해 서열을 갖는 적당한 발현 벡터를 제작하여 인간 항체를 취득할 수 있다. 이들 방법은 주지로서, WO 92/01047, WO 92/20791, WO 93/06213, WO 93/11236, WO 93/19172, WO 95/01438, WO 95/15388 등을 참고로 할 수 있다.
본 발명의 항체에는 IgG로 대표되는 2가 항체뿐만 아니라 1가 항체 또는 IgM으로 대표되는 다가 항체도 포함된다. 또한 본 발명의 항체에는 다른 항원에 결합할 수 있는 이중 특이성 항체(bispecific antibody)도 포함된다.
본 발명의 항체에는 항체의 전장 분자에 한정되지 않고 저분자화 항체 등의 임의의 항원 결합 단편이 포함된다.
또한 본 발명의 항체에는 세포 상해성 물질 등이 결합한 수식 항체도 포함된다. 또한 본 발명의 항체는 항체의 당쇄가 개변되어 있어도 된다.
본 발명의 항원 결합 단편에 포함되는 저분자화 항체(minibody)는 전장 항체(whole antibody, 예를 들면 whole IgG 등)의 일부분이 결손되어 있는 항체 단편을 포함하는 항체로서, 본 발명의 융합 폴리펩티드로의 결합 활성을 갖는 한 특별히 한정되지 않는다.
본 발명에 있어서 저분자화 항체는 전장 항체의 일부분을 포함하는 한 특별히 한정되지 않으나, 항원 결합 부위가 포함되는 것이 바람직하다. 항원 결합 부위는 통상 항체의 CDR이고, 바람직하게는 항체의 6개의 CDR이다. 따라서 항원 결합 부위의 바람직한 예로서는 항체의 6개의 CDR이나 가변영역(중쇄 가변영역 및/또는 경쇄 가변영역)을 들 수 있다.
본 발명에 있어서의 저분자화 항체는 전장 항체보다도 분자량이 작아지는 것이 바람직하나, 예를 들면 다이머, 트리머, 테트라머 등의 다량체를 형성하는 것 등도 있고, 전장 항체보다도 분자량이 커지는 것도 있다.
본 발명의 항원 결합 단편의 다른 구체예로서는, 예를 들면 Fab, Fab', F(ab')2, Fv 등을 들 수 있다. 또한 저분자화 항체의 구체예로서는, 예를 들면 Fab, Fab', F(ab')2, Fv, scFv(single chain Fv), Diabody, sc(Fv)2(single chain (Fv)2) 등을 들 수 있다. 이들 항체의 다량체(예를 들면 다이머, 트리머, 테트라머, 폴리머)도 본 발명의 저분자화 항체에 포함된다.
항원 결합 단편은, 예를 들면 항체를 효소로 처리하여 항체 단편을 생성시킴으로써 얻을 수 있다. 항체 단편을 생성하는 효소로서, 예를 들면 파파인, 펩신 또는 플라스민 등이 공지이다. 또는 이들 항체 단편을 코드하는 유전자를 구축하여 이것을 발현 벡터에 도입한 후, 적당한 숙주세포에서 발현시킬 수 있다(예를 들면 Co, M.S. et al., J. Immunol.(1994) 152, 2968-2976, Better, M. & Horwitz, A. H. Methods in Enzymology(1989) 178, 476-496, Plueckthun, A. & Skerra, A. Methods in Enzymology(1989) 178, 476-496, Lamoyi, E., Methods in Enzymology(1989) 121, 652-663, Rousseaux, J. et al., Methods in Enzymology(1989) 121, 663-669, Bird, R. E. et al., TIBTECH(1991) 9, 132-137 참조).
소화 효소는 항체 단편의 특정 위치를 절단하여 다음과 같은 특정 구조의 항체 단편을 부여한다. 이러한 효소적으로 얻어진 항체 단편에 대해 유전자 공학적 수법을 이용하면, 항체의 임의의 부분을 결실시킬 수 있다.
전술한 소화 효소를 사용한 경우에 얻어지는 항체 단편은 아래와 같다.
파파인 소화：F(ab)2 또는 Fab
펩신 소화：F(ab')2 또는 Fab'
플라스민 소화：Facb
본 발명에 있어서의 저분자화 항체는 본 발명의 융합 폴리펩티드로의 결합 활성을 갖는 한, 임의의 영역을 결실한 항체 단편을 포함할 수 있다.
디아바디(diabody)는 유전자 융합에 의해 구축된 2가(bivalent)의 항체 단편을 가리킨다(Holliger P et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90：6444-6448(1993), EP404,097호, WO 93/11161호 등). 디아바디는 2개의 폴리펩티드 사슬로 구성되는 다이머이다. 통상 다이머를 구성하는 폴리펩티드 사슬은 각각 동일한 사슬 중에서 VL 및 VH가 링커에 의해 결합되어 있다. 디아바디에 있어서의 링커는 일반적으로 VL과 VH를 서로 결합할 수 없을 정도로 짧다. 구체적으로는, 링커를 구성하는 아미노산 잔기는 예를 들면 5 잔기 정도이다. 이 때문에 동일 폴리펩티드 사슬 상에 코드되는 VL과 VH는 단일 사슬 가변영역 프래그먼트를 형성할 수 없어 별도의 단일 사슬 가변영역 프래그먼트와 이량체를 형성한다. 그 결과, 디아바디는 2개의 항원 결합 부위를 갖게 된다.
scFv 항체는 중쇄 가변영역([VH]) 및 경쇄 가변영역([VL])을 링커 등으로 결합하여 단일 사슬 폴리펩티드로 한 항체이다(Huston, J. S. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.(1988) 85, 5879-5883, Plickthun 「The Pharmacology of Monoclonal Antibodies」 Vol.113, Resenburg 및 Moore 편집, Springer Verlag, New York, pp.269-315, (1994)). scFv에 있어서의 H쇄 V영역 및 L쇄 V영역은 본 명세서에 기재된 어느 항체 유래여도 된다. V영역을 연결하는 펩티드 링커에는 특별히 제한은 없다. 예를 들면 3 내지 25 잔기 정도로 이루어지는 임의의 단일 사슬 펩티드를 링커로서 사용할 수 있다. 구체적으로는, 예를 들면 후술하는 펩티드 링커 등을 사용할 수 있다.
양쪽 사슬의 V영역은 예를 들면 상기와 같은 PCR법에 의해 연결할 수 있다. PCR법에 의한 V영역의 연결을 위해, 먼저 다음의 DNA 중 전부 또는 목적하는 부분 아미노산 서열을 코드하는 DNA가 주형으로서 이용된다.
항체의 H쇄 또는 H쇄 V영역을 코드하는 DNA 서열, 및
항체의 L쇄 또는 L쇄 V영역을 코드하는 DNA 서열
증폭 대상 DNA의 양쪽 끝의 서열에 대응하는 서열을 갖는 프라이머의 한쌍을 사용한 PCR법에 의해 H쇄와 L쇄의 V영역을 코드하는 DNA가 각각 증폭된다. 이어서, 펩티드 링커 부분을 코드하는 DNA를 준비한다. 펩티드 링커를 코드하는 DNA도 PCR을 이용하여 합성할 수 있다. 이때 이용하는 프라이머의 5'측에 별도로 합성된 각 V영역의 증폭 산물과 연결할 수 있는 염기서열을 부가해 둔다. 이어서, [H쇄 V영역 DNA]-[펩티드 링커 DNA]-[L쇄 V영역 DNA]의 각 DNA와 어셈블리 PCR용 프라이머를 이용하여 PCR 반응을 행한다.
어셈블리 PCR용 프라이머는 [H쇄 V영역 DNA]의 5'측에 어닐링하는 프라이머와 [L쇄 V영역 DNA]의 3'측에 어닐링하는 프라이머의 조합으로 이루어진다. 즉 어셈블리 PCR용 프라이머란 합성 대상 scFv의 전장 서열을 코드하는 DNA를 증폭시킬 수 있는 프라이머 세트이다. 한편 [펩티드 링커 DNA]에는 각 V영역 DNA와 연결할 수 있는 염기서열이 부가되어 있다. 그 결과, 이들 DNA가 연결되고, 추가로 어셈블리 PCR용 프라이머에 의해 최종적으로 scFv의 전장이 증폭 산물로서 생성된다. 일단 scFv를 코드하는 DNA가 제작되면, 그들을 함유하는 발현 벡터 및 그 발현 벡터에 의해 형질전환된 재조합 세포를 통상의 방법에 따라 취득할 수 있다. 또한 그 결과 얻어지는 재조합 세포를 배양하여 상기 scFv를 코드하는 DNA를 발현시킴으로써 상기 scFv를 취득할 수 있다.
결합되는 중쇄 가변영역과 경쇄 가변영역의 순서는 특별히 한정되지 않고 어떠한 순서로 나열되어 있어도 되며, 예를 들면 아래와 같은 배치를 들 수 있다.
[VH] 링커 [VL]
[VL] 링커 [VH]
sc(Fv)2는 2개의 VH 및 2개의 VL을 링커 등으로 결합하여 단일 사슬로 한 저분자화 항체이다(Hudson et aL, J Immunol. Methods 1999；231：177-189). sc(Fv)2는 예를 들면 scFv를 링커로 연결함으로써 제작할 수 있다.
또한 2개의 VH 및 2개의 VL이 단일 사슬 폴리펩티드의 N 말단 측을 기점으로서 VH, VL, VH, VL([VH] 링커 [VL] 링커 [VH] 링커 [VL])의 순으로 늘어서 있는 것을 특징으로 하는 항체가 바람직하나, 2개의 VH와 2개의 VL의 순서는 특별히 상기 배치에 한정되지 않고 어떠한 순서로 나열되어 있어도 된다. 예를 들면 아래와 같은 배치도 들 수 있다.
[VL] 링커 [VH] 링커 [VH] 링커 [VL]
[VH] 링커 [VL] 링커 [VL] 링커 [VH]
[VH] 링커 [VH] 링커 [VL] 링커 [VL]
[VL] 링커 [VL] 링커 [VH] 링커 [VH]
[VL] 링커 [VH] 링커 [VL] 링커 [VH]
저분자 항체 중의 중쇄 가변영역 또는 경쇄 가변영역의 아미노산 서열은 치환, 결실, 부가 및/또는 삽입되어 있어도 된다. 또한 중쇄 가변영역과 경쇄 가변영역을 회합시킨 경우에 항원 결합 활성을 갖는 한 일부를 결손시켜도 되고, 다른 폴리펩티드를 부가해도 된다. 또한 가변영역은 키메라화나 인간화되어 있어도 된다.
본 발명에 있어서 항체의 가변영역을 결합하는 링커는 유전자 공학에 의해 도입할 수 있는 임의의 펩티드 링커 또는 합성 화합물 링커, 예를 들면 Protein Engineering, 9(3), 299-305, 1996에 개시되는 링커를 사용할 수 있다.
본 발명에 있어서 바람직한 링커는 펩티드 링커이다. 펩티드 링커의 길이는 특별히 한정되지 않고 목적에 따라 당업자가 적절하게 선택하는 것이 가능하나, 통상 1~100 아미노산, 바람직하게는 3~50 아미노산, 더욱 바람직하게는 5~30 아미노산, 특히 바람직하게는 12~18 아미노산(예를 들면 15 아미노산)이다.
펩티드 링커의 아미노산 서열로서는, 예를 들면 아래와 같은 서열을 들 수 있다.
Ser
Gly·Ser
Gly·Gly·Ser
Ser·Gly·Gly
Gly·Gly·Gly·Ser(서열번호：19)
Ser·Gly·Gly·Gly(서열번호：20)
Gly·Gly·Gly·Gly·Ser(서열번호：21)
Ser·Gly·Gly·Gly·Gly(서열번호：22)
Gly·Gly·Gly·Gly·Gly·Ser(서열번호：23)
Ser·Gly·Gly·Gly·Gly·Gly(서열번호：24)
Gly·Gly·Gly·Gly·Gly·Gly·Ser(서열번호：25)
Ser·Gly·Gly·Gly·Gly·Gly·Gly(서열번호：26)
(Gly·Gly·Gly·Gly·Ser(서열번호：21))n
(Ser·Gly·Gly·Gly·Gly(서열번호：22))n
[n은 1 이상의 정수이다] 등을 들 수 있다.
펩티드 링커의 아미노산 서열은 목적에 따라 당업자가 적절하게 선택할 수 있다. 예를 들면 상기 펩티드 링커의 길이를 결정하는 n은 통상 1~5, 바람직하게는 1~3, 보다 바람직하게는 1 또는 2이다.
합성 화합물 링커(화학 가교제)는 펩티드의 가교에 통상 사용되고 있는 가교제, 예를 들면 N-히드록시숙신이미드(NHS), 디숙신이미딜수베레이트(DSS), 비스(설포숙신이미딜)수베레이트(BS3), 디티오비스(숙신이미딜프로피오네이트)(DSP), 디티오비스(설포숙신이미딜프로피오네이트)(DTSSP), 에틸렌글리콜비스(숙신이미딜숙시네이트)(EGS), 에틸렌글리콜비스(설포숙신이미딜숙시네이트)(설포-EGS), 디숙신이미딜타르타르산염(DST), 디설포숙신이미딜타르타르산염(설포-DST), 비스[2-(숙신이미드옥시카르보닐옥시)에틸]설폰(BSOCOES), 비스[2-(설포숙신이미드옥시카르보닐옥시)에틸]설폰(설포-BSOCOES) 등이고, 이들 가교제는 시판되고 있다.
4개의 항체 가변영역을 결합하는 경우에는 통상 3개의 링커가 필요해진다. 복수의 링커는 동일해도 되고 상이한 링커를 사용하는 것도 가능하다.
또한 본 발명의 항체에는 본 발명의 항체의 아미노산 서열에 1 또는 복수 개의 아미노산 잔기가 부가된 항체도 포함된다. 또한 이들 항체와 다른 펩티드 또는 단백질이 융합된 융합 단백질도 포함된다. 융합 단백질을 제작하는 방법은 본 발명의 항체를 코드하는 폴리뉴클레오티드와 다른 펩티드 또는 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드를 프레임이 일치하도록 연결하고 이것을 발현 벡터에 도입하여 숙주에서 발현시키면 되며, 당업자에게 공지의 수법을 사용할 수 있다. 본 발명의 항체와의 융합에 제공되는 다른 펩티드 또는 폴리펩티드로서는, 예를 들면 FLAG(Hopp, T. P. et al., BioTechnology(1988) 6, 1204-1210), 6개의 His(히스티딘) 잔기로 이루어지는 6×His, 10×His, 인플루엔자 응집소(HA), 인간 c-myc의 단편, VSV-GP의 단편, p18HIV의 단편, T7-tag, HSV-tag, E-tag, SV40 T 항원의 단편, lck tag, α-tubulin의 단편, B-tag, Protein C의 단편, Stag, StrepTag, HaloTag 등의 공지의 펩티드를 사용할 수 있다. 또한 본 발명의 항체와의 융합에 제공되는 다른 폴리펩티드로서는, 예를 들면 GST(글루타티온-S-트랜스페라아제), HA(인플루엔자 응집소), 이뮤노글로불린 불변영역, β-갈락토시다아제, MBP(말토오스 결합 단백질) 등을 들 수 있다. 시판되고 있는 이들 펩티드 또는 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드를 본 발명의 항체를 코드하는 폴리뉴클레오티드와 융합시켜 이것에 의해 조제된 융합 폴리뉴클레오티드를 발현시킴으로써 융합 폴리펩티드를 조제할 수 있다.
또한 본 발명의 항체는 폴리에틸렌글리콜(PEG)이나 히알루론산 등의 고분자물질, 방사성 물질, 형광 물질, 발광 물질, 효소, 톡신 등의 각종 분자와 결합한 콘쥬게이트 항체여도 된다. 이러한 콘쥬게이트 항체는 얻어진 항체에 화학적인 수식을 실시함으로써 얻을 수 있다. 또한 항체의 수식방법은 이 분야에 있어서 이미 확립되어 있다(예를 들면 US 5057313, US 5156840). 본 발명에 있어서의 「항체」에는 이들 콘쥬게이트 항체도 포함된다.
또한 본 발명에서 사용되는 항체는 이중 특이성 항체(bispecific antibody)여도 된다. 이중 특이성 항체란 상이한 에피토프를 인식하는 가변영역을 동일한 항체 분자 내에 갖는 항체를 말한다. 본 발명에 있어서 이중 특이성 항체는 본 발명의 융합 폴리펩티드 분자의 상이한 에피토프를 인식하는 이중 특이성 항체여도 되며, 한쪽의 항원 결합 부위가 본 발명의 융합 폴리펩티드를 인식하고, 다른 쪽의 항원 결합 부위가 다른 물질을 인식하는 이중 특이성 항체로 하는 것도 가능하다.
이중 특이성 항체를 제조하기 위한 방법은 공지이다. 예를 들면 인식 항원이 상이한 2종류의 항체를 결합시켜서 이중 특이성 항체를 제작할 수 있다. 결합시키는 항체는 각각이 H쇄와 L쇄를 갖는 1/2 분자여도 되고, H쇄만으로 이루어지는 1/4 분자여도 된다. 또는 상이한 단일클론 항체를 생산하는 하이브리도마를 융합시켜서 이중 특이성 항체 생산 융합 세포를 제작하는 것도 가능하다. 또한 유전자 공학적 수법에 의해 이중 특이성 항체를 제작할 수 있다.
본 발명의 항체는 후술하는 항체를 생산하는 세포나 숙주 또는 정제방법에 따라 아미노산 서열, 분자량, 등전점 또는 당쇄의 유무나 형태 등이 다를 수 있다. 그러나 얻어진 항체가 본 발명의 항체와 동등한 기능을 가지고 있는 한, 본 발명에 포함된다. 예를 들면 본 발명의 항체를 원핵세포, 예를 들면 대장균에서 발현시킨 경우, 본래의 항체의 아미노산 서열의 N 말단에 메티오닌 잔기가 부가된다. 본 발명의 항체는 이러한 항체도 포함한다.
본 발명의 항체는 당쇄가 개변된 항체여도 된다. 항체의 당쇄를 개변하는 방법은 당업자에게 공지이며, 예를 들면 항체의 글리코실화를 수식함으로써 ADCC 활성을 개량하는 방법, 항체의 당쇄에 있어서의 푸코오스의 존재 여부에 의해 ADCC 활성을 조절하는 방법, YB2/0 세포에 있어서 항체를 생산시킴으로써 α-1,6 core fucose를 포함하지 않는 당쇄를 갖는 항체를 조제하는 방법, 바이섹팅 GlcNAc을 갖는 당쇄를 부가하는 방법 등이 알려져 있다(WO 99/54342, WO 00/61739, WO 02/31140, WO 02/79255 등).
본 발명의 항체는 본 발명의 융합 폴리펩티드(인간이나 마우스 등의 포유동물에 유래) 또는 그의 단편 펩티드를 면역원으로서, 공지의 방법에 의해 제작할 수 있다. 즉, 목적하는 항원이나 목적하는 항원을 발현하는 세포를 감작 항원으로서 사용하여 이것을 통상의 면역방법에 따라 비인간 포유동물을 면역한다. 피면역 동물로부터 얻어지는 면역 세포를 통상의 세포 융합법에 의해 공지의 친세포와 융합시켜서, 통상의 스크리닝법에 의해 단일클론 항체 생산세포(하이브리도마)를 선별하여 그 세포를 배양함으로써 단일클론 항체를 제작하는 것이 가능하다.
면역되는 비인간 포유동물로서는, 예를 들면 마우스, 랫트, 토끼, 양, 원숭이, 염소, 당나귀, 소, 말, 돼지를 들 수 있다. 항원의 조제는 본 발명의 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드를 사용하여 공지의 방법, 예를 들면 배큘로바이러스를 사용한 방법(WO 98/46777 등) 등에 준하여 행할 수 있다.
하이브리도마의 제작은, 예를 들면 밀스테인 등의 방법(Kohler. G. and Milstein, C., Methods Enzymol.(1981) 73：3-46) 등에 준하여 행할 수 있다. 항원의 면역원성이 낮은 경우에는 알부민 등의 면역원성을 갖는 거대 분자와 결합시켜서 면역을 행하여도 된다.
본 발명의 융합 폴리펩티드에 결합하는 항체의 일태양로서, 본 발명의 융합 폴리펩티드에 결합하는 단일클론 항체를 들 수 있다. 본 발명의 융합 폴리펩티드에 대한 결합 활성을 갖는 단일클론 항체를 제작하기 위한 면역원으로서는, 본 발명의 융합 폴리펩티드에 대한 결합 활성을 갖는 항체를 제작할 수 있는 한, 특별히 한정되지 않는다. 예를 들면 야생형 융합 폴리펩티드 또는 그의 단편 펩티드, 또는 그 야생형 융합 폴리펩티드에 인위적인 변이를 가한 폴리펩티드 등을 면역원으로 해도 된다.
또한 항체의 본 발명의 융합 폴리펩티드에 대한 결합 활성의 측정은 당업자에게 공지의 방법에 의해 행할 수 있다.
또한 단일클론 항체는 DNA 면역(DNA Immunization)에 의해서도 얻을 수 있다. DNA 면역이란 면역 동물 중에서 항원 단백질을 코드하는 유전자를 발현할 수 있는 태양으로 구축된 벡터 DNA를 당해 면역 동물에게 투여하여 면역 항원을 면역 동물의 생체 내에서 발현시킴으로써 면역 자극을 주는 방법이다. 단백질 항원을 투여하는 일반적인 면역방법과 비교하여 DNA 면역에는 다음과 같은 우위성을 기대할 수 있다.
- 막 단백질의 구조를 유지하여 면역 자극을 부여할 수 있다
- 면역 항원을 정제할 필요가 없다
DNA 면역에 의해 단일클론 항체를 얻으려면, 먼저 본 발명의 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드를 면역 동물에게 투여한다. 본 발명의 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드는 전술한 방법에 따라 PCR 등의 공지의 방법에 의해 합성할 수 있다. 얻어진 DNA(폴리뉴클레오티드)를 적당한 발현 벡터에 삽입하여 면역 동물에게 투여한다. 발현 벡터로서는 전술한 바와 같은 임의의 벡터(예를 들면 pcDNA 3.1 등의 시판의 발현 벡터)를 이용할 수 있다. 벡터를 생체에 투여하는 방법도 일반적으로 사용되고 있는 방법을 이용할 수 있다. 예를 들면 발현 벡터를 흡착시킨 금 입자를 유전자총(gene gun)으로 세포 내에 집어넣음으로써 DNA 면역을 행할 수 있다. DNA 면역 후에 본 발명의 융합 폴리펩티드 발현 세포에 의한 추가 면역(boost)을 행하는 것은 단일클론 항체를 얻는 바람직한 방법이다.
이렇게 포유동물이 면역되어 혈청 중에 있어서의 목적하는 항체량의 상승이 확인된 후에 포유동물로부터 면역 세포가 채취되어 세포 융합에 제공된다. 바람직한 면역 세포로서는 특히 비장세포를 사용할 수 있다.
상기의 면역 세포와 융합되는 세포로서 포유동물의 골수종세포가 사용된다. 골수종세포는 스크리닝을 위한 적당한 선택 마커를 구비하고 있는 것이 바람직하다. 선택 마커란 특정 배양 조건하에서 생존할 수 있는(또는 생존할 수 없는) 형질을 가리킨다. 선택 마커에는 히포크산틴-구아닌-포스포리보실트랜스페라아제 결손(이하 HGPRT 결손으로 생략한다) 또는 티미딘 키나아제 결손(이하 TK 결손으로 생략한다) 등이 공지이다. HGPRT나 TK의 결손을 갖는 세포는 히포크산틴-아미노프테린-티미딘 감수성(이하 HAT 감수성으로 생략한다)을 갖는다. HAT 감수성의 세포는 HAT 선택 배지 중에서 DNA 합성을 행할 수 없어 사멸하지만, 정상적인 세포와 융합하면 정상 세포의 샐비지 회로를 이용하여 DNA의 합성을 계속할 수 있기 때문에 HAT 선택 배지 중에서도 증식하게 된다.
HGPRT 결손이나 TK 결손의 세포는 각각 6 티오구아닌, 8 아자구아닌(이하 8AG로 생략한다) 또는 5'브로모데옥시우리딘을 포함하는 배지에서 선택할 수 있다. 정상적인 세포는 이들 피리미딘 아날로그를 DNA 중에 흡수해 버리기 때문에 사멸하지만, 이들 효소를 결손한 세포는 이들 피리미딘 아날로그를 흡수할 수 없기 때문에 선택 배지 중에서 생존할 수 있다. 이 밖에, G418 내성이라 불리는 선택 마커는 네오마이신 내성 유전자에 의해 2-데옥시스트렙타민계 항생 물질(겐타마이신 유사체)에 대한 내성을 부여한다. 세포 융합에 적합한 각종 골수종세포가 공지이다.
기본적으로는 공지의 방법, 예를 들면 쾰러와 밀스테인 등의 방법(Kohler. G. and Milstein, C., Methods Enzymol.(1981) 73, 3-46) 등에 준하여 면역 세포와 골수종세포의 세포 융합이 행해진다.
보다 구체적으로는, 예를 들면 세포 융합 촉진제의 존재하에서 통상의 영양 배양액 중에서 세포 융합을 실시할 수 있다. 융합 촉진제로서는, 예를 들면 폴리에틸렌글리콜(PEG), 센다이 바이러스(HVJ) 등을 사용할 수 있다. 또한 융합 효율을 높이기 위해 목적하는 바에 따라 디메틸술폭시드 등의 보조제를 첨가하는 것도 가능하다.
면역 세포와 골수종세포의 사용 비율은 임의로 설정할 수 있다. 예를 들면 골수종세포에 대해 면역 세포를 1 내지 10배로 하는 것이 바람직하다. 세포 융합에 사용하는 배양액으로서는, 예를 들면 골수종세포주의 증식에 적합한 RPMI1640 배양액, MEM 배양액, 기타 이러한 종류의 세포 배양에 사용되는 통상의 배양액을 이용할 수 있다. 또한 소태아 혈청(FCS) 등의 혈청 보액을 배양액에 첨가할 수 있다.
세포 융합은 면역 세포와 골수종세포의 소정량을 배양액 중에서 잘 혼합하여 사전에 37℃ 정도로 가온한 PEG 용액을 혼합함으로써 목적으로 하는 융합 세포(하이브리도마)가 형성된다. 세포 융합법에 있어서는, 예를 들면 평균 분자량 1,000 내지 6,000 정도의 PEG를 통상 30 내지 60%(w/v)의 농도로 첨가할 수 있다. 계속해서 상기에 예로 든 적당한 배양액을 축차 첨가하고, 원심하여 상청을 제거하는 조작을 반복함으로써 하이브리도마의 생육에 바람직하지 않은 세포 융합제 등이 제거된다.
이렇게 해서 얻어진 하이브리도마는 세포 융합에 사용된 미엘로마가 갖는 선택 마커에 따른 선택 배양액을 이용함으로써 선택할 수 있다. 예를 들면 HGPRT나 TK의 결손을 갖는 세포는 HAT 배양액(히포크산틴, 아미노프테린 및 티미딘을 포함하는 배양액)에서 배양함으로써 선택할 수 있다. 즉, HAT 감수성의 골수종세포를 세포 융합에 사용한 경우, HAT 배양액 중에서 정상 세포와의 세포 융합에 성공한 세포를 선택적으로 증식시킬 수 있다. 목적으로 하는 하이브리도마 이외의 세포(비융합 세포)가 사멸하는 데 충분한 시간, 상기 HAT 배양액을 사용한 배양이 계속된다. 구체적으로는, 일반적으로 수일 내지 수주 간의 배양에 의해 목적으로 하는 하이브리도마를 선택할 수 있다. 이어서, 통상의 한계희석법을 실시함으로써 목적으로 하는 항체를 생산하는 하이브리도마의 스크리닝 및 단일 클로닝을 실시할 수 있다.
목적으로 하는 항체의 스크리닝 및 단일 클로닝은 공지의 항원 항체반응에 기초하는 스크리닝 방법에 의해 적합하게 실시할 수 있다. 예를 들면 폴리스티렌 등으로 만들어진 비즈나 시판의 96웰의 마이크로타이터 플레이트 등의 담체에 항원을 결합시켜서 하이브리도마의 배양 상청과 반응시킨다. 이어서 담체를 세정한 후에 효소로 표지한 2차 항체 등을 반응시킨다. 만약 배양 상청 중에 감작 항원과 반응하는 목적으로 하는 항체가 포함되는 경우, 2차 항체는 이 항체를 매개로 하여 담체에 결합한다. 최종적으로 담체에 결합하는 2차 항체를 검출함으로써 목적으로 하는 항체가 배양 상청 중에 존재하고 있는지 여부를 결정할 수 있다. 항원에 대한 결합능을 갖는 목적하는 항체를 생산하는 하이브리도마를 한계희석법 등에 의해 클로닝하는 것이 가능해진다.
또한 인간 이외의 동물에게 항원을 면역함으로써 상기 하이브리도마를 얻는 방법 이외에 인간 림프구를 항원 감작하여 목적으로 하는 항체를 얻는 것도 가능하다. 구체적으로는, 먼저 시험관내에 있어서 인간 림프구를 본 발명의 융합 폴리펩티드로 감작한다. 이어서 면역 감작된 림프구를 적당한 융합 파트너와 융합시킨다. 융합 파트너에는 예를 들면 인간 유래로서 영구 분열능을 갖는 골수종세포를 이용할 수 있다(일본국 특허공고 평1-59878호 공보 참조). 이 방법에 의해 얻어지는 항체는 본 발명의 융합 폴리펩티드로의 결합 활성을 갖는 인간 항체이다.
전술한 방법 등에 의해 취득된 본 발명의 융합 폴리펩티드에 결합하는 항체를 코드하는 염기서열, 아미노산 서열은 당업자에게 공지의 방법에 의해 얻는 것이 가능하다.
얻어진 본 발명의 융합 폴리펩티드에 결합하는 항체의 서열을 기초로, 당업자에게 공지의 유전자 재조합 기술을 사용하여 본 발명의 융합 폴리펩티드에 결합하는 항체를 제작하는 것이 가능하다. 구체적으로는 본 발명의 융합 폴리펩티드를 인식하는 항체의 서열을 기초로 항체를 코드하는 폴리뉴클레오티드를 구축하여 이것을 발현 벡터에 도입한 후, 적당한 숙주세포에서 발현시키면 된다(예를 들면 Co, M. S. et al., J. Immunol.(1994) 152, 2968-2976；Better, M. and Horwitz, A. H., Methods Enzymol.(1989) 178, 476-496；Pluckthun, A. and Skerra, A., Methods Enzymol.(1989) 178, 497-515；Lamoyi, E., Methods Enzymol.(1986) 121, 652-663；Rousseaux, J. et al., Methods Enzymol.(1986) 121, 663-669；Bird, R. E. and Walker, B. W., Trends Biotechnol.(1991) 9, 132-137 참조).
벡터의 예로서는 M13계 벡터, pUC계 벡터, pBR322, pBluescript, pCR-Script 등을 들 수 있다. 또한 cDNA의 서브클로닝, 잘라내기를 목적으로 한 경우, 상기 벡터 외에 예를 들면 pGEM-T, pDIRECT, pT7 등을 들 수 있다. 본 발명의 항체를 생산할 목적에 있어서 벡터를 사용하는 경우에는 특히 발현 벡터가 유용하다. 발현 벡터로서는, 예를 들면 대장균에서의 발현을 목적으로 한 경우는 벡터가 대장균에서 증폭되는 상기 특징을 갖는 외에, 숙주를 JM109, DH5α, HB101, XL1-Blue 등의 대장균으로 한 경우에 있어서는 대장균에서 효율적으로 발현할 수 있는 프로모터, 예를 들면 lacZ 프로모터(Ward 등, Nature(1989) 341, 544-546；FASEB J.(1992) 6, 2422-2427), araB 프로모터(Better 등, Science(1988) 240, 1041-1043) 또는 T7 프로모터 등을 가지고 있는 것이 불가결하다. 이러한 벡터로서는 상기 벡터 외에 pGEX-5X-1(파마시아 제조), 「QIAexpress system」(퀴아겐 제조), pEGFP 또는 pET(이 경우, 숙주는 T7 RNA 폴리머라아제를 발현하고 있는 BL21이 바람직하다) 등을 들 수 있다.
또한 벡터에는 항체 분비를 위한 시그널 서열이 포함되어 있어도 된다. 항체 분비를 위한 시그널 서열로서는 대장균의 페리플라즘으로 생산시키는 경우, pelB 시그널 서열(Lei, S. P. et al J. Bacteriol.(1987) 169, 4379)을 사용하면 된다. 숙주세포로의 벡터의 도입은 예를 들면 염화칼슘법, 전기천공법을 사용하여 행할 수 있다.
대장균 이외에도, 예를 들면 본 발명의 항체를 제조하기 위한 벡터로서는 포유동물 유래의 발현 벡터(예를 들면 pcDNA 3(인비트로겐사 제조)나 pEF-BOS(Nucleic Acids. Res. 1990, 18(17), p5322), pEF, pCDM8), 곤충세포 유래의 발현 벡터(예를 들면 「Bac-to-BAC baculovirus expression system」(기브코 BRL 제조), pBacPAK8), 식물 유래의 발현 벡터(예를 들면 pMH1, pMH2), 동물 바이러스 유래의 발현 벡터(예를 들면 pHSV, pMV, pAdexLcw), 레트로바이러스 유래의 발현 벡터(예를 들면 pZIPneo), 효모 유래의 발현 벡터(예를 들면 「Pichia Expression Kit」(인비트로겐 제조), pNV11, SP-Q01), 고초균 유래의 발현 벡터(예를 들면 pPL608, pKTH50)를 들 수 있다.
CHO 세포, COS 세포, NIH3T3 세포 등의 동물세포에서의 발현을 목적으로 한 경우에는, 세포 내에서 발현시키기 위해 필요한 프로모터, 예를 들면 SV40 프로모터(Mulligan 등, Nature(1979) 277, 108), MMLV-LTR 프로모터, EF1α 프로모터(Mizushima 등, Nucleic Acids Res.(1990) 18, 5322), CMV 프로모터 등을 가지고 있는 것이 불가결하고, 세포로의 형질전환을 선발하기 위한 유전자(예를 들면 약제(네오마이신, G418 등)에 의해 판별할 수 있는 약제 내성 유전자)를 가지면 더욱 바람직하다. 이러한 특성을 갖는 벡터로서는, 예를 들면 pMAM, pDR2, pBK-RSV, pBK-CMV, pOPRSV, pOP13 등을 들 수 있다.
또한 유전자를 안정적으로 발현시키고, 또한 세포 내에서의 유전자 카피 수의 증폭을 목적으로 하는 경우에는, 핵산 합성 경로를 결손한 CHO 세포에 그것을 상보하는 DHFR 유전자를 갖는 벡터(예를 들면 pSV2-dhfr(「Molecular Cloning 2nd edition」 Cold Spring Harbor Laboratory Press, (1989)) 등)를 도입하여 메토트렉세이트(MTX)에 의해 증폭시키는 방법을 들 수 있고, 또한 유전자의 일과성 발현을 목적으로 하는 경우에는, SV40 T 항원을 발현하는 유전자를 염색체 상에 갖는 COS 세포를 사용하여 SV40의 복제 기점을 갖는 벡터(pcD 등)로 형질전환하는 방법을 들 수 있다. 복제 개시점으로서는 또한 폴리오마 바이러스, 아데노바이러스, 소 유두종 바이러스(BPV) 등의 유래의 것을 사용하는 것도 가능하다. 또한 숙주세포계에서 유전자 카피 수 증폭을 위해 발현 벡터는 선택 마커로서 아미노글리코시드 트랜스페라아제(APH) 유전자, 티미딘 키나아제(TK) 유전자, 대장균 크산틴구아닌 포스포리보실트랜스페라아제(Ecogpt) 유전자, 디히드로엽산 환원효소(dhfr) 유전자 등을 포함할 수 있다.
이것에 의해 얻어진 본 발명의 항체는 숙주세포 내 또는 세포 외(배지 등)로부터 단리하여 실질적으로 순수하고 균일한 항체로서 정제할 수 있다. 항체의 분리, 정제는 통상의 항체의 정제에서 사용되고 있는 분리, 정제방법을 사용하면 되고, 조금도 한정되는 것은 아니다. 예를 들면 크로마토그래피 칼럼, 필터, 한외 여과, 염석, 용매 침전, 용매 추출, 증류, 면역 침강, SDS-폴리아크릴아미드 겔 전기영동, 등전점 전기영동법, 투석, 재결정 등을 적절하게 선택, 조합하면 항체를 분리, 정제할 수 있다.
크로마토그래피로서는, 예를 들면 친화성 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피, 소수성 크로마토그래피, 겔 여과, 역상 크로마토그래피, 흡착 크로마토그래피 등을 들 수 있다(Strategies for Protein Purification and Characterization：A Laboratory Course Manual. Ed Daniel R. Marshak et al., Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1996). 이들 크로마토그래피는 액상 크로마토그래피, 예를 들면 HPLC, FPLC 등의 액상 크로마토그래피를 사용하여 행할 수 있다. 친화성 크로마토그래피에 사용하는 칼럼으로서는 프로테인 A 칼럼, 프로테인 G 칼럼을 들 수 있다. 예를 들면 프로테인 A를 사용한 칼럼으로서 Hyper D, POROS, Sepharose FF(GE Amersham Biosciences) 등을 들 수 있다. 본 발명은 이들 정제방법을 사용하여 고도로 정제된 항체도 포함한다.
얻어진 항체의 본 발명의 융합 폴리펩티드에 대한 결합 활성의 측정은 당업자에게 공지의 방법에 의해 행하는 것이 가능하다. 예를 들면 항체의 항원 결합 활성을 측정하는 방법으로서, ELISA(효소결합 면역흡착 검정법), EIA(효소면역 측정법), RIA(방사면역 측정법) 또는 형광항체법을 사용할 수 있다. 예를 들면 효소면역 측정법을 사용하는 경우, 항원을 코팅한 플레이트에 항체를 포함하는 시료, 예를 들면 항체 생산세포의 배양 상청이나 정제 항체를 첨가한다. 알칼리포스파타아제 등의 효소로 표지한 2차 항체를 첨가하고 플레이트를 인큐베이트하여 세정한 후, p-니트로페닐인산 등의 효소기질을 첨가하여 흡광도를 측정함으로써 항원 결합 활성을 평가할 수 있다.
본 발명에 있어서의 「암」이란 일반적으로 악성 신생물을 나타내기 위해 사용되고, 그것은 전이성 또는 비전이성이어도 된다. 예를 들면 소화관이나 피부 등의 상피 조직으로부터 발생한 암종의 비한정적인 예로서 뇌종양, 피부암, 경두부암, 식도암, 폐암, 위암, 십이지장암, 유방암, 전립선암, 자궁경부암, 자궁체암, 췌장암, 간암, 대장암, 결장암, 방광암 및 난소암 등이 예시된다. 또한 근육 등의 비상피성 조직(간질)으로부터 발생한 육종의 비한정적인 예로서 골육종, 연골육종, 횡문근육종, 평활근육종, 지방육종 및 혈관육종 등이 예시된다. 또한 조혈기 유래의 혈액암의 비한정적인 예로서 호지킨 림프종(Hodgkin's lymphoma) 및 비호지킨 림프종(non Hodgkin's lymphoma)을 포함하는 악성 림프종, 급성 골수성 백혈병(acute myelocytic leukemia) 또는 만성 골수성 백혈병(chronic myelocytic leukemia) 및 급성 림프성 백혈병(acute lymphatic leukemia) 또는 만성 림프성 백혈병(chronic lymphatic leukemia)을 포함하는 백혈병 및 다발성 골수종(multiple myeloma)이 예시된다.
본 발명에 있어서의 암에는 새로 발생한 어떠한 병적 조직 종양(신생물)도 포함된다. 본 발명에 있어서는 신생물은 종양의 형성을 발생시키고, 그것은 부분적인 혈관 형성을 특징으로 한다. 신생물은 예를 들면 혈관종, 신경교종, 기형종 등의 양성, 또는 예를 들면 암종, 육종, 교세포종, 성상교세포종, 신경아세포종, 망막아종 등의 악성일 수 있다.
본 발명에 있어서의 암의 적합한 예로서는 방광암, 뇌종양, 두경부 편평상피암, 폐암, 폐선암, 폐 편평상피암, 피부 흑색종, 식도암, 위암 또는 간암 등을 들 수 있다.
본 발명에 있어서의 「암 조직」이란 적어도 하나의 암세포를 포함하는 조직을 의미한다. 따라서, 예를 들면 암 조직이 암세포와 혈관을 포함하고 있듯이, 암세포 및 내피세포를 포함하는 종류(腫瘤, tumor mass)의 형성에 기여하는 모든 세포형을 말한다. 본 발명에 있어서 종류란 종양 조직소(a foci of tumor tissue)를 말한다. 「종양」이라는 용어는 일반적으로 양성 신생물 또는 악성 신생물을 의미하기 위해 사용된다.
본 발명은 전술한 본 발명의 항체 또는 그의 항원 결합 단편 또는 올리고뉴클레오티드를 포함하는 의약 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 있어서 의약 조성물이란 통상 질환의 치료 또는 예방 또는 검사·진단을 위한 약제를 말한다.
본 발명의 의약 조성물은 당업자에게 공지의 방법을 사용하여 제제화될 수 있다. 예를 들면 물 또는 그것 이외의 약학적으로 허용할 수 있는 액과의 무균성 용액 또는 현탁 액제의 주사제 형태로 비경구적으로 사용될 수 있다. 예를 들면 약리학상 허용되는 담체 또는 매체, 구체적으로는 멸균수나 생리식염수, 식물유, 유화제, 현탁제, 계면활성제, 안정제, 향미제, 부형제, 비히클, 방부제, 결합제 등과 적절하게 조합하여 일반적으로 인정된 제약 실시에 요구되는 단위 용량 형태로 혼화함으로써 제제화될 수 있다. 이들 제제에 있어서의 유효 성분량은 지시된 범위의 적당한 용량이 얻어지도록 설정된다.
주사를 위한 무균 조성물은 주사용 증류수 같은 비히클을 사용하여 통상의 제제 실시에 따라 처방될 수 있다. 주사용 수용액으로서는, 예를 들면 생리식염수, 포도당이나 기타 보조약(예를 들면 D-소르비톨, D-만노오스, D-만니톨, 염화나트륨)을 포함하는 등장액을 들 수 있다. 적절한 용해보조제, 예를 들면 알코올(에탄올 등), 폴리알코올(프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜 등), 비이온성 계면활성제(폴리소르베이트 80TM, HCO-50 등)가 병용될 수 있다.
유성액으로서는 참기름, 콩기름을 들 수 있고, 용해보조제로서 안식향산벤질 및/또는 벤질알코올도 병용될 수 있다. 또한 완충제(예를 들면 인산염 완충액 및 초산나트륨 완충액), 무통화제(예를 들면 염산프로카인), 안정제(예를 들면 벤질알코올 및 페놀), 산화방지제와 배합될 수 있다. 조제된 주사액은 통상 적절한 앰플에 충전된다.
본 발명의 의약 조성물은 바람직하게는 비경구 투여에 의해 투여된다. 예를 들면 주사제형, 경비 투여제형, 경폐 투여제형, 경피 투여형의 조성물이 투여된다. 예를 들면 정맥내 주사, 근육내 주사, 복강내 주사, 피하 주사 등에 의해 전신 또는 국부적으로 투여될 수 있다.
투여방법은 환자의 연령, 증상에 따라 적절하게 선택될 수 있다. 항원 결합분자를 함유하는 의약 조성물의 투여량은, 예를 들면 1회에 체중 1 ㎏당 0.0001 ㎎ 내지 1,000 ㎎의 범위로 설정될 수 있다. 또는 예를 들면 환자당 0.001~100,000 ㎎의 투여량이 설정될 수 있으나, 본 발명은 이들 수치로 반드시 제한되는 것은 아니다. 투여량 및 투여방법은 환자의 체중, 연령, 증상 등에 따라 변동되나, 당업자라면 그들의 조건을 고려하여 적당한 투여량 및 투여방법을 설정하는 것이 가능하다.
또한 본 발명에 기재하는 아미노산 서열에 포함되는 아미노산은 번역 후에 수식(예를 들면 N 말단의 글루타민의 피로글루타밀화에 의한 피로글루타민산으로의 수식은 당업자에게 잘 알려진 수식이다)을 받는 경우도 있으나, 그렇게 아미노산이 번역 후 수식된 경우여도 당연히 본 발명에 기재하는 아미노산 서열에 포함된다.
본 발명은 또한 피험자(암 환자 및 건강한 정상인을 포함한다)의 시료 중에 있어서의 전술한 본 발명의 융합 폴리펩티드 및 그 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드를 검출하는 방법에 관한 것이다.
피험자의 시료 중에 있어서의 본 발명의 융합 폴리펩티드의 존재 여부는, 예를 들면 피험자(암 환자, 암에 걸렸을 가능성이 있는 자, 암에 걸릴 리스크를 갖는 자, 건강한 정상인. 단, 인간에 한정되지 않는다.)로부터 채취한 시료(종양 조직, 정상 조직, 암세포 또는 정상 세포를 포함하는 각종 체액(혈액, 혈청, 요, 타액, 복수, 흉수 등))에 전술한 본 발명의 융합 폴리펩티드에 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 접촉시키는 것에 의한 항원 항체반응을 이용함으로써 시험, 결정할 수 있다.
이 항원 항체반응에 의한 항원(즉, 본 발명의 융합 폴리펩티드)의 검출은, 예를 들면 관용되고 있는 이뮤노어세이를 사용하여 행할 수 있다.
본 발명에 있어서의 이뮤노어세이란 항원(즉, 본 발명의 융합 폴리펩티드)과 그 항원에 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편과의 반응 원리에 기초하여 시료(종양 조직, 정상 조직, 암세포 또는 정상 세포를 포함하는 각종 체액(혈액, 혈청, 요, 타액, 복수, 흉수 등)) 중에 포함되는 본 발명의 융합 폴리펩티드의 검출을 행하는 방법을 의미하고, 이 검출을 가능하게 하는 방법이면 어떠한 이뮤노어세이도 포함된다.
본 발명에 있어서의 이뮤노어세이에는, 예를 들면 효소면역 측정법(제3판, 이시카와 에이지 등 편집, 이가쿠 쇼인 발행, 1987년)에 기재되어 있는 각종 방법의 원리를 응용할 수 있다. 즉, 그 각종 방법에 있어서는 검출하고자 하는 시료 중의 목적 항원의 포착(캡처링, 트래핑)을 위한 그 목적 항원에 결합하는 하나 이상의 항체를 사용하여 실시할 수 있다.
응용할 수 있는 원리로서는, 예를 들면 1항체 고상법, 2항체 액상법, 2항체 고상법, 샌드위치법 및 일본국 특허공고 평2-39747호 공보에 기재되어 있는 원포트법을 적합한 예로서 들 수 있다. 또한 항원 항체반응을 이용한 어세이로서는 EMIT법(Enzyme multiplied immunoassay technique), 엔자임 채널링 이뮤노어세이(Enzyme channeling immunoassay), 효소활성 수식물질 표지 이뮤노어세이(Enzyme modulator mediated enzyme immunoassay, EMMIA), 효소 저해물질 표지 이뮤노어세이(Enzyme inhibitor immunoassay), 이뮤노엔자이모메트릭 어세이(Immunoenzymometric assay), 효소활성 증강 이뮤노어세이(Enzyme enhanced immunoassay) 및 프록시멀 링키지 이뮤노어세이(Proximal linkage immunoassay) 등도 포함된다.
본 발명에 있어서는 이러한 이뮤노어세이 중 어느 하나의 원리를 시험의 목적에 따라 적절하게 선택하여 사용할 수 있다.
또한 96웰 마이크로 플레이트로 대표되는 다수의 웰을 갖는 멀티웰 마이크로타이터 플레이트, 효소 또는 비오틴에 의해 표지된 표지 항체를 사용하는 샌드위치법, 또는 비즈와 퍼옥시다아제 등의 효소 또는 비오틴에 의해 표지된 표지 항체를 사용하는 원포트법도 포함된다.
전술한 바와 같이, 본 발명에 있어서의 이뮤노어세이에 있어서 사용되는 본 발명의 융합 폴리펩티드에 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 단독으로 또는 다른 물질과 반응함으로써 검출 가능한 시그널을 초래할 수 있는 표지 물질에 의해 표지되어 있어도 된다.
이 표지 물질로서는, 예를 들면 효소, 형광 물질, 화학발광 물질, 비오틴, 아비딘 또는 방사성 동위체 등이고, 더욱 구체적으로는 퍼옥시다아제(예를 들면 horseradish peroxidase), 알칼리 포스파타아제, β-D-갈락토시다아제, 글루코오스 옥시다아제, 글루코오스-6-포스페이트 데히드로게나아제, 알코올 탈수소효소, 말산 탈수소효소, 페니실리나아제, 카탈라아제, 아포글루코오스 옥시다아제, 우레아제, 루시페라아제 또는 아세틸콜린에스테라아제 등의 효소, 플루오레세인 이소티오시아네이트, 피코빌리단백, 희토류 금속 킬레이트, 단실 클로라이드 또는 테트라메틸로다민 이소티오시아네이트 등의 형광 물질, 3H, 14C, 125I 또는 131I 등의 방사성 동위체, 비오틴, 아비딘 또는 화학발광 물질을 들 수 있다.
여기서 방사성 동위체 및 형광 물질은 단독으로 검출 가능한 시그널을 초래할 수 있다.
한편 효소, 화학발광 물질, 비오틴 및 아비딘은 단독으로는 검출 가능한 시그널을 초래할 수 없기 때문에, 추가로 1종 이상의 다른 물질과 반응함으로써 검출 가능한 시그널을 초래한다.
예를 들면 효소의 경우에는 적어도 기질이 필요해서 효소 활성을 측정하는 방법(비색법, 형광법, 생물발광법 또는 화학발광법 등)에 의존하여 각종 기질이 사용된다. 예를 들면 퍼옥시다아제의 경우에는 기질로서 과산화수소를 사용한다. 또한 비오틴의 경우에는 적어도 아비딘 또는 효소 수식 아비딘을 반응시키는 것이 일반적이지만, 이에 한정되지 않는다. 필요에 따라 추가로 상기 기질에 의존하는 각종 발색 물질이 사용된다.
피험자의 시료 중에 있어서의 본 발명의 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드의 존재 여부는, 예를 들면 피험자(암 환자, 암에 걸렸을 가능성이 있는 자, 암에 걸릴 리스크를 갖는 자, 건강한 정상인. 단, 인간에 한정되지 않는다.)로부터 채취한 시료(종양 조직, 정상 조직, 암세포 또는 정상 세포를 포함하는 각종 체액(혈액, 혈청, 요, 타액, 복수, 흉수 등))에 포함되는 mRNA, 그 mRNA를 주형으로 하여 조제한 cDNA, 게노믹 DNA 등을 이용한 각종 유전자 해석법을 이용해서, 전술한 본 발명의 각종 올리고뉴클레오티드(한쌍의 올리고뉴클레오티드 프라이머, 올리고뉴클레오티드 프로브 등)를 사용하여 통상의 방법에 따라 시험, 결정할 수 있다. 당해 유전자 해석법에는, 예를 들면 노던 블로팅, 폴리머라아제 연쇄반응(PCR), 서던 블로팅, LCR(Ligase chain reaction), SDA(Strand displacement amplification), NASBA(Nucleic acid sequence-based amplification), ICAN(Isothermal and chimeric primer-initiated amplification of nucleic acids), LAMP(Loop-mediated isothermal amplification)법, TMA법(Gen-Probe's TMA system), 마이크로어레이, 차세대 시퀀스법 등을 들 수 있다.
또한 이들 어세이에 있어서는 상기 시료에 유래하는 본 발명의 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드에 본 발명의 올리고뉴클레오티드의 하이브리다이제이션을 이용하는데, 그 하이브리다이제이션에 있어서 목적하는 바에 따라 적용되는 스트린젠트한 조건이란, 예를 들면 6M 요소, 0.4% SDS, 0.5×SSC, 37℃의 조건 또는 이와 동등한 스트린젠시의 하이브리다이제이션 조건을 예시할 수 있다. 목적에 따라 스트린젠시가 높은 조건, 예를 들면 6M 요소, 0.4% SDS, 0.1×SSC의 조건, 42℃도 적용할 수 있다.
본 발명은 또한 전술한 피험자(암 환자 및 건강한 정상인을 포함한다)의 시료 중에 있어서의 전술한 본 발명의 융합 폴리펩티드 및 그 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드의 검출에 사용되는 검출용 키트에 관한 것이다.
본 발명의 검출용 키트는, 구체적으로는 전술한 본 발명의 융합 폴리펩티드에 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편(전술한 각종 표지 물질로 표지된 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함한다)을 포함하고, 또한 전술한 각종 이뮤노어세이의 실시 목적에 따라 각종 검출용 시약(효소, 기질 등) 및 실험 조작 지시서를 포함할 수 있다.
본 발명의 검출용 키트는, 구체적으로는 전술한 본 발명의 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드에 유래하는 mRNA, 그 mRNA를 주형으로 하여 조제한 cDNA, 게노믹 DNA 등에 하이브리다이즈하는 전술한 본 발명의 각종 올리고뉴클레오티드(한쌍의 올리고뉴클레오티드 프라이머, 올리고뉴클레오티드 프로브 등)를 포함하고, 또한 전술한 각종 유전자 해석의 실시 목적에 따라 각종 시약(효소, 다른 올리고뉴클레오티드, 핵산, 반응액 등) 및 실험 조작 지시서를 포함할 수 있다.
본 발명은 또한 피험자로부터 단리된 시료 중에 있어서의 본 발명의 융합 폴리펩티드 또는 그 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드의 존재 여부를 기준으로, 피험자가 암에 걸리기 쉬운지, 암에 걸렸는지 또는 암이 진행되었는지 여부에 대해 시험하는 방법에 관한 것이다.
본 발명의 방법으로서는, 구체적으로는 피험자(암 환자, 암에 걸렸을 가능성이 있는 자, 암에 걸릴 리스크를 갖는 자, 건강한 정상인. 단, 인간에 한정되지 않는다.)로부터 채취한 시료(종양 조직, 정상 조직, 암세포 또는 정상 세포를 포함하는 각종 체액(혈액, 혈청, 요, 타액 등))에 있어서의 본 발명의 융합 폴리펩티드의 존재 여부를 전술한 본 발명의 융합 폴리펩티드를 검출하는 방법 및 검출용 키트를 사용하여 시험, 결정해서, 그 융합 폴리펩티드가 검출된 경우에는 암에 걸리기 쉽고, 암에 걸렸거나 또는 암이 진행되어 있다는 기준에 기초하여 피험자가 암에 걸리기 쉬운지, 암에 걸렸는지 또는 암이 진행되었는지 여부에 대해 시험하는 방법을 들 수 있다.
본 발명의 방법으로서는 또한 피험자(암 환자, 암에 걸렸을 가능성이 있는 자, 암에 걸릴 리스크를 갖는 자, 건강한 정상인. 단, 인간에 한정되지 않는다.)로부터 채취한 시료(종양 조직, 정상 조직, 암세포 또는 정상 세포를 포함하는 각종 체액(혈액, 혈청, 요, 타액 등))에 있어서의 본 발명의 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드의 존재 여부를 전술한 본 발명의 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드의 검출방법 및 검출용 키트를 사용하여 시험, 결정해서, 그 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드가 검출된 경우에는 암에 걸리기 쉽고, 암에 걸렸거나 또는 암이 진행되어 있다는 기준에 기초하여 피험자가 암에 걸리기 쉬운지, 암에 걸렸는지 또는 암이 진행되었는지 여부에 대해 시험하는 방법을 들 수 있다.
본 발명은 또한 피험자로부터 단리된 시료 중에 있어서의 본 발명의 융합 폴리펩티드 또는 그 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드의 존재 여부를 기준으로, FGFR 저해 활성을 갖는 화합물을 함유하는 항암제(아래에서 설명하는 바와 같음)가 적용되는 환자를 선택하는 방법에 관한 것이다.
본 발명의 방법으로서는, 구체적으로는 피험자(암 환자 또는 암에 걸렸을 가능성이 있는 자. 인간에 한정되지 않는다.)로부터 채취한 시료(종양 조직, 정상 조직, 암세포 또는 정상 세포를 포함하는 각종 체액(혈액, 혈청, 요, 타액 등))에 있어서의 본 발명의 융합 폴리펩티드의 존재 여부를 전술한 본 발명의 융합 폴리펩티드를 검출하는 방법 및 검출용 키트를 사용하여 시험, 결정해서, 그 융합 폴리펩티드가 검출된 경우에는 그 피험자를 FGFR 저해 활성을 갖는 화합물을 함유하는 항암제(아래에서 설명하는 바와 같음)가 적용되는 환자로서 선택하는 방법을 들 수 있다.
본 발명의 방법으로서는 또한 피험자(암 환자 또는 암에 걸렸을 가능성이 있는 자. 인간에 한정되지 않는다.)로부터 채취한 시료(종양 조직, 정상 조직, 암세포 또는 정상 세포를 포함하는 각종 체액(혈액, 혈청, 요, 타액 등))에 있어서의 본 발명의 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드의 존재 여부를 전술한 본 발명의 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드의 검출방법 및 검출용 키트를 사용하여 시험, 결정해서, 그 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드가 검출된 경우에는 그 피험자를 FGFR 저해 활성을 갖는 화합물을 함유하는 항암제(아래에서 설명하는 바와 같음)가 적용되는 환자로서 선택하는 방법을 들 수 있다.
본 발명에 있어서의 「FGFR 저해제」 또는 「FGFR 저해 활성을 갖는 화합물」은 각각 호환적으로 사용되어 전술한 본 발명에 있어서의 FGFR, 즉 수용체형 티로신 키나아제 패밀리에 속해 있는 키나아제인 섬유아세포 증식인자 수용체(fibroblast growth factor receptor；FGFR)로서, FGFR1, FGFR2, FGFR3, FGFR4를 포함하는 FGFR 패밀리에 속하는 하나 이상의 임의의 FGFR의 활성을 저해하는 활성을 갖는 화합물을 의미하고, 바람직하게는 인간의 FGFR의 활성을 저해하는 활성을 갖는 화합물을 의미하며, 더욱 바람직하게는 서열번호 6 또는 7에 기재되는 아미노산 서열로 이루어지는 인간 FGFR3(cDNA 서열：각각 서열번호 10, 11/GenBank Accession No.：각각 NM_001163213.1, NM_000142.4)의 활성을 저해하는 활성을 갖는 화합물을 의미한다.
본 발명에 있어서의 FGFR 저해제에는 상기 화합물이 FGFR의 활성을 저해하는 활성을 갖는 한 임의의 FGFR 저해제가 포함된다.
구체적으로는 (1) FGFR의 Kinase 활성의 저해, (2) FGFR, TACC3 및 BAIAP2L1 사이에 있어서의 이량체의 형성(다이머화)의 저해, (3) FGFR을 매개로 한 시그널 전달(MAPK 경로, PI3K/AKT 경로)의 저해(예를 들면 MEK 저해제, RAF 저해제, ERK 저해제, PI3K 저해제, mTOR 저해제, AKT 저해제, PDK 저해제, S6K 저해제 등), (4) FGFR의 발현량의 저해(예를 들면 siRNA, HSP90 저해제 등)의 작용 메커니즘을 갖는 임의의 화합물, 항체, 핵산 의약(siRNA, 안티센스 핵산, 리보자임 등)이 포함된다.
본 발명에 있어서의 FGFR 저해제로서 포함되는 FGFR의 활성을 저해하는 활성을 갖는 항체에는 다음의 개발 코드로 식별되는 항체가 포함된다(RG7444, FP-1039, AV370, PRO-001).
본 발명에 있어서의 FGFR 저해제로서 포함되는 FGFR의 활성을 저해하는 활성을 갖는 저분자 화합물에는, 예를 들면 (1) 다음의 특허문헌 또는 비특허문헌에 개시되어 있는 화합물(Cancer Research, 2012, 72：2045-2056；J. Med. Chem., 2011, 54：7066-7083；국제공개 WO 2011/016528호), (2) 다음의 일반 명칭 또는 개발 코드로 식별되는 화합물：AZD-4547(후술하는 표 2-1의 화합물 C), BGJ-398(후술하는 표 2-2의 화합물 D), LY-2874455, 세디라닙(cediranib)(AZD2171；후술하는 표 2-2의 화합물 E), PD173074(후술하는 표 2-1의 화합물 B), 레고라페닙(regorafenib), 포나티닙(ponatinib), 오란티닙(orantinib), 닌테다닙(nintedanib,) 마시티닙(masitinib), 렌바티닙(lenvatinib), 도비티닙(dovitinib)(TKI258；후술하는 표 2-2의 화합물 F), 브리바닙(brivanib), 볼라세르팁(volasertib), 골바티닙(golvatinib), ENMD-2076, E-3810, XL-999, XL-228, ARQ087, 티보자닙(Tivozanib), 모테사닙(motesanib), 및 (3) 예를 들면 아래에 나타내어지는 화합물이 포함되나, 이에 한정되지 않는다.
[화합물 1]
Figure pct00031
(식 중, R1~R4는 각각 독립적으로 아래의 기를 나타낸다；
R1은 수소, 히드록시, 할로겐, 시아노, 니트로, C1 - 4할로알킬, C1 - 6알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C3 - 7시클로알킬, C6 - 10아릴C1 - 4알킬, -OR5, -NR6R7, -(CR8R9)nZ1, -C(O)NR12R13, -SR14, -SOR15, -SO2R16, -NR17SO2R18, COOH, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴, -COR19, -COOR20, -OC(O)R21, -NR22C(O)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR26R27, -SO2NR28R29, -OSO2R30, -SO3R31 또는 -Si(R32)3를 나타내고；
R2는 수소, 히드록시, 할로겐, 시아노, 니트로, C1 - 4할로알킬, C1 - 6알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C3 - 7시클로알킬, C6 - 10아릴C1 - 4알킬, -OR5, -NR6R7, -(CR8R9)nZ1, -C(O)NR12R13, -SR14, -SOR15, -SO2R16, -NR17SO2R18, COOH, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴, -COR19, -COOR20, -OC(O)R21, -NR22C(O)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR26R27, -SO2NR28R29, -OSO2R30, -SO3R31 또는 -Si(R32)3를 나타내며；
또는 R1 및 R2는 그들이 결합하고 있는 원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성하고, 여기서 상기 헤테로시클릴 또는 상기 헤테로아릴은 할로겐으로 치환되어 있어도 되며；
R3는 수소, C1 - 5알킬, C6 - 10아릴C1 - 6알킬 또는 C1 - 4할로알킬을 나타내고；
R4는 수소, 할로겐, C1 - 3알킬, C1 - 4할로알킬, 히드록시, 시아노, 니트로, C1 - 4알콕시, -(CH2)nZ1, -NR6R7, -OR5, -C(O)NR12R13, -SR14, -SOR15, -SO2R16, NR17SO2R18, COOH, -COR19, -COOR20, -OC(O)R21, -NR22C(O)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR26R27, -SO2NR28R29, -OSO2R30, -SO3R31 또는 -Si(R32)3를 나타내며；
A는 5~10원 헤테로아릴 고리 또는 C6 - 10아릴 고리이고；
R5는 C1 - 5알킬, C3 - 7시클로알킬, C3 - 7시클로알킬C1 - 3알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1-4할로알킬, C1 - 3알콕시C1 - 4알킬, C1 - 3알콕시C1 - 4알콕시C1 - 4알킬, C1 - 4아미노알킬, C1 -4알킬아미노C1- 4알킬, 디(C1-4알킬)아미노C1 - 4알킬, C6 - 10아릴, C6 - 10아릴C1 - 3알킬, Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 3~10원 헤테로시클릴C1- 3알킬, 3~10원 헤테로시클릴, 5~10원 헤테로아릴, 5~10원 헤테로아릴C1 - 3알킬, C1 - 6모노히드록시알킬, C1 - 6디히드록시알킬 또는 C1 - 6트리히드록시알킬을 나타내며；
R6 및 R7은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2-6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕시C1 - 4알킬, C6 - 10아릴C1 - 3알킬, 3~10원 헤테로시클릴C1-3알킬, 5~10원 헤테로아릴C1 - 3알킬, C1 - 6모노히드록시알킬, C1 - 6디히드록시알킬, C1 - 6트리히드록시알킬, 3~10원 헤테로시클릴, C1 - 4아미노알킬, C1 - 4알킬아미노C1 - 4알킬, 디(C1-4알킬)아미노C1 - 4알킬 또는 시아노(C1-3알킬)을 나타내거나, 또는 R6 및 R7은 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성하고；
n은 1~3을 나타내며；
R8 및 R9은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1 - 4알킬 또는 할로겐을 나타내거나, 또는 R8 및 R9은 그들이 결합하고 있는 탄소원자와 함께 지환식 고리를 형성해도 되고；
Z1은 수소, NR10R11, -OH, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 나타내며；
R10 및 R11은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕시C1 - 4알킬, 시아노(C1 - 3알킬) 또는 C1 - 3알킬설포닐C1 - 4알킬을 나타내거나, 또는 R10 및 R11은 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성해도 되고；
R12 및 R13은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2-6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕시C1 - 4알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴, 3~10원 헤테로시클릴, C6 - 10아릴C1 - 4알킬, 3~10원 헤테로시클릴C1 - 3알킬, 5~10원 헤테로아릴C1 -3알킬, 시아노(C1 - 3알킬), C1 - 3알킬설포닐C1 - 4알킬, 3~10원 지환식 고리, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내거나, 또는 R12 및 R13은 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성해도 되며；
R14은 C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
R15은 C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내며；
R16은 C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
R17은 수소 또는 C1 - 4알킬을 나타내며；
R18은 C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
R19은 수소, C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내며；
R20는 C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
R21은 C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내며；
R22는 수소, C1 - 4알킬 또는 C1 - 4할로알킬을 나타내고；
R23는 수소, C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내며；
R24는 수소, C1 - 4알킬 또는 C1 - 4할로알킬을 나타내고；
R25는 C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내며；
R26 및 R27은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕실C1 - 4알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴, 3~10원 헤테로시클릴, C6 - 10아릴C1 - 4알킬, 3~10원 헤테로시클릴C1 - 3알킬, 5~10원 헤테로아릴C1 -3알킬, 시아노(C1 - 3알킬), C1 - 3알킬설포닐C1 - 4알킬 또는 3~10원 지환식 고리를 나타내거나, 또는 R26 및 R27은 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성해도 되고；
R28 및 R29은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕실C1 - 4알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴, 3~10원 헤테로시클릴, C6 - 10아릴C1 - 4알킬, 3~10원 헤테로시클릴C1 - 3알킬, 5~10원 헤테로아릴C1 -3알킬, 시아노(C1 - 3알킬), C1 - 3알킬설포닐C1 - 4알킬 또는 3~10원 지환식 고리를 나타내거나, 또는 R28 및 R29은 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성해도 되고；
R30는 C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내며；
R31은 C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
R32는 C1 - 4알킬 또는 C6 - 10아릴을 나타내며；
<P군>
할로겐, C1 - 4알킬, C1 - 4할로알킬, -OH, C1 - 3알콕시, C1 - 3할로알콕시, 3~10원 헤테로시클릴아미노, -SO2R16, -CN, -NO2 및 3~10원 헤테로시클릴.
<Q군>
할로겐, C1 - 4알킬, C1 - 4할로알킬, -OH, C1 - 3알콕시, C1 - 6모노히드록시알킬, C1 - 6디히드록시알킬 또는 C1 - 6트리히드록시알킬, 3~10원 헤테로시클릴아민, -SO2R16, -CN, -NO2, C3 - 7시클로알킬, -COR19 및 C1 - 4알킬로 치환되어 있어도 되는 3~10원 헤테로시클릴.
[화합물 2]
Figure pct00032
[화합물 3]
Figure pct00033
[화합물 4]
Figure pct00034
[화합물 5]
Figure pct00035
, 또는
[화합물 6]
Figure pct00036
.
본 명세서에 있어서의 「알킬」은 지방족 탄화수소로부터 임의의 수소원자를 1개 제거하여 유도되는 1가의 기로서, 골격 중에 헤테로원자 또는 불포화 탄소-탄소 결합을 함유하지 않고, 수소 및 탄소원자를 함유하는 히드로카르빌 또는 탄화수소기 구조의 부분집합을 갖는다. 알킬기는 직쇄상 및 분지쇄상의 구조를 포함한다. 알킬기로서는 바람직하게는 탄소원자 수 1~6(C1 -6, 이하 「Cp -q」란 탄소원자 수가 p~q개인 것을 의미한다.)의 알킬기, C1 - 5알킬기, C1 - 4알킬기, C1 - 3알킬기 등을 들 수 있다.
알킬로서는 구체적으로는, 예를 들면 메틸기, 에틸기, n-프로필기, 이소프로필기, n-부틸기, 이소부틸기, s-부틸기, t-부틸기, 펜틸기, 이소펜틸기, 2,3-디메틸프로필기, 3,3-디메틸부틸기, 헥실기 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서의 「알케닐」은 1개 이상의 이중결합(2개의 인접 SP2 탄소원자)을 갖는 1가의 탄화수소기로서, 직쇄상 또는 분지쇄상의 것을 포함한다. 이중결합 및 치환분(존재하는 경우)의 배치에 따라 이중결합의 기하학적 형태는 엔트게겐(E) 또는 쭈잠멘(Z) 또는 시스 또는 트랜스 배치를 취할 수 있다. 알케닐기로서 바람직하게는 C2 - 6알케닐기 등을 들 수 있다.
알케닐로서 구체적으로는, 예를 들면 비닐기, 알릴기, 1-프로페닐기, 2-프로페닐기, 1-부테닐기, 2-부테닐기(시스, 트랜스를 포함한다), 3-부테닐기, 펜테닐기, 헥세닐기 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서의 「알키닐」은 1개 이상의 삼중결합(2개의 인접 SP 탄소원자)을 갖는 1가의 탄화수소기로서, 직쇄상 또는 분지쇄상의 것을 포함한다. 바람직하게는 C2 - 6알키닐기를 들 수 있다.
알키닐로서는 구체적으로는, 예를 들면 에티닐기, 1-프로피닐기, 프로파길기, 3-부티닐기, 펜티닐기, 헥시닐기 등을 들 수 있다.
알케닐 또는 알키닐에는 각각 1개 또는 2개 이상의 이중결합 또는 삼중결합을 가질 수 있다.
본 명세서에 있어서의 「시클로알킬」은 포화 또는 부분적으로 포화된 환상의 1가의 지방족 탄화수소기를 의미하고, 단환(單環), 비시클로 고리, 스피로 고리를 포함한다. 시클로알킬로서 바람직하게는 C3 - 7시클로알킬기 등을 들 수 있다. 시클로알킬기로서는 구체적으로는, 예를 들면 시클로프로필기, 시클로부틸기, 시클로펜틸기, 시클로헥실기, 시클로헵틸기 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서의 「시클로알킬알킬」은 상기 정의 「알킬」 중의 임의의 수소원자를 상기 정의 「시클로알킬」로 치환한 기를 의미한다. 시클로알킬알킬로서 바람직하게는 C3 - 7시클로알킬C1 - 3알킬 등을 들 수 있고, 구체적으로는, 예를 들면 시클로프로필메틸기, 시클로프로필에틸기 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서의 「헤테로원자」는 질소원자(N), 산소원자(O) 또는 황원자(S)를 의미한다.
본 명세서에 있어서의 「할로겐」은 불소원자, 염소원자, 브롬원자 또는 요오드원자를 의미한다.
본 명세서에 있어서의 「할로알킬」은 동일 또는 상이한, 바람직하게는 1~9개, 더욱 바람직하게는 1~5개의 상기 「할로겐원자」가 상기 「알킬」에 결합한 기를 나타낸다.
구체적으로는, 예를 들면 클로로메틸기, 디클로로메틸기, 트리클로로메틸기, 플루오로메틸기, 디플루오로메틸기, 퍼플루오로알킬기(예를 들면 트리플루오로메틸기, -CF2CF3 등), 2,2,2-트리플루오로에틸기 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서의 「알콕시」는 상기 정의의 「알킬」이 결합한 옥시기인 것을 의미하고, 바람직하게는 C1 - 4알콕시기, C1 - 3알콕시기 등을 들 수 있다. 알콕시로서 구체적으로는, 예를 들면 메톡시기, 에톡시기, 1-프로폭시기, 2-프로폭시기, n-부톡시기, i-부톡시기, sec-부톡시기, tert-부톡시기 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서의 「할로알콕시」는 동일 또는 상이한, 바람직하게는 1~9개, 더욱 바람직하게는 1~5개의 상기 「할로겐원자」가 상기 「알콕시」에 결합한 기를 나타낸다.
구체적으로는, 예를 들면 클로로메톡시기, 트리클로로메톡시기, 트리플루오로메톡시기 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서의 「아릴」은 1가의 방향족 탄화수소 고리를 의미하고, 바람직하게는 C6 - 10아릴 등을 들 수 있다. 아릴로서는 구체적으로는, 예를 들면 페닐기, 나프틸기(예를 들면 1-나프틸기, 2-나프틸기) 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서의 「지환식 고리」는 1가의 비방향족 탄화수소 고리를 의미한다. 지환식 고리는 고리 중에 불포화 결합을 가져도 되고, 2개 이상의 고리를 갖는 다환성의 기여도 된다. 또한 고리를 구성하는 탄소원자는 산화되어 카르보닐을 형성해도 된다. 지환식 고리를 구성하는 원자의 수는 바람직하게는 3~10이다(3~10원 지환식 고리). 지환식 고리로서는, 예를 들면 시클로알킬 고리, 시클로알케닐 고리, 시클로알키닐 고리 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서의 「헤테로아릴」은 고리를 구성하는 원자 중에 바람직하게는 1~5개의 헤테로원자를 함유하는 방향족성의 1가의 복소환기를 의미한다. 헤테로아릴은 부분적으로 포화되어 있어도 되고, 단환이어도 되며 축합환(예를 들면 벤젠 고리 또는 단환 헤테로아릴 고리와 축합한 2환식 헤테로아릴)이어도 된다. 고리를 구성하는 원자의 수는 바람직하게는 5~10이다(5~10원 헤테로아릴).
헤테로아릴로서는 구체적으로는, 예를 들면 푸릴기, 티에닐기, 피롤릴기, 이미다졸릴기, 피라졸릴기, 티아졸릴기, 이소티아졸릴기, 옥사졸릴기, 이소옥사졸릴기, 옥사디아졸릴기, 티아디아졸릴기, 트리아졸릴기, 테트라졸릴기, 피리딜기, 피리미딜기, 피리다지닐기, 피라지닐기, 트리아지닐기, 벤조푸라닐기, 벤조티에닐기, 벤조티아디아졸릴기, 벤조티아졸릴기, 벤즈옥사졸릴기, 벤즈옥사디아졸릴기, 벤즈이미다졸릴기, 인돌릴기, 이소인돌릴기, 아자인돌릴기, 인다졸릴기, 퀴놀릴기, 이소퀴놀릴기, 신놀리닐기, 퀴나졸리닐기, 퀴녹살리닐기, 벤조디옥솔릴기, 인돌리디닐기, 이미다조피리딜기 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서의 「헤테로시클릴」은 고리를 구성하는 원자 중에 바람직하게는 1~5개의 헤테로원자를 함유하는, 비방향족의 1가의 복소환기를 의미한다. 헤테로시클릴은 고리 중에 이중, 삼중결합을 가지고 있어도 되고, 탄소원자는 산화되어 카르보닐을 형성해도 되며, 단환이어도 되고 축합환이어도 된다. 고리를 구성하는 원자의 수는 바람직하게는 3~10이다(3~10원 헤테로시클릴).
헤테로시클릴로서는 구체적으로는, 예를 들면 옥세타닐기, 디히드로푸릴기, 테트라히드로푸릴기, 디히드로피라닐기, 테트라히드로피라닐기, 테트라히드로피리딜기, 모르폴리닐기, 티오모르폴리닐기, 피롤리디닐기, 피페리디닐기, 피페라지닐기, 피라졸리디닐기, 이미다졸리닐기, 이미다졸리디닐기, 옥사졸리디닐기, 이소옥사졸리디닐기, 티아졸리디닐기, 이소티아졸리디닐기, 티아디아졸리디닐기, 아제티디닐기, 옥사졸리돈기, 벤조디옥사닐기, 벤즈옥사졸릴기, 디옥솔라닐기, 디옥사닐기 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서의 「아릴알킬」은 상기 정의 「알킬」 중의 임의의 수소원자를 상기 정의 「아릴」로 치환한 기를 의미한다. 아릴알킬로서는 바람직하게는 C6 - 10아릴C1 - 4알킬, C6 - 10아릴C1 - 3알킬 등을 들 수 있다. 구체적으로는, 예를 들면 벤질기, 페네틸기, 나프틸메틸기 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서의 「헤테로아릴알킬」은 상기 정의 「알킬」 중의 임의의 수소원자를 상기 정의 「헤테로아릴」로 치환한 기를 의미한다. 헤테로아릴알킬로서 바람직하게는 5~10원 헤테로아릴C1 - 3알킬 등을 들 수 있고, 구체적으로는, 예를 들면 피롤릴메틸기, 이미다졸릴메틸기, 티에닐메틸기, 피리딜메틸기, 피리미딜메틸기, 퀴놀릴메틸기, 피리딜에틸기 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서의 「헤테로시클릴알킬」은 상기 정의 「알킬」 중의 임의의 수소원자를 상기 정의 「헤테로시클릴」로 치환한 기를 의미한다. 헤테로시클릴알킬로서 바람직하게는 3~10원 헤테로시클릴C1 - 3알킬 등을 들 수 있고, 구체적으로는 예를 들면 모르폴리닐메틸기, 모르폴리닐에틸기, 티오모르폴리닐메틸기, 피롤리디닐메틸기, 피페리디닐메틸기, 피페라지닐메틸기, 피페라지닐에틸기, 옥세타닐메틸기 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서의 「모노히드록시알킬」은 상기 정의 「알킬」 중의 임의의 1개의 수소원자를 1개의 수산기로 치환한 기를 의미한다. 모노히드록시알킬로서 바람직하게는 C1 - 6모노히드록시알킬, C2 - 6모노히드록시알킬 등을 들 수 있고, 구체적으로는, 예를 들면 히드록시메틸기, 1-히드록시에틸기, 2-히드록시에틸기 등이 이것에 포함된다.
본 명세서에 있어서의 「디히드록시알킬」은 상기 정의 「알킬」 중의 임의의 2개의 수소원자를 2개의 수산기로 치환한 기를 의미한다. 디히드록시알킬로서 바람직하게는 C1 - 6디히드록시알킬, C2 - 6디히드록시알킬 등을 들 수 있고, 구체적으로는, 예를 들면 1,2-디히드록시에틸기, 1,2-디히드록시프로필기, 1,3-디히드록시프로필기 등이 이것에 포함된다.
본 명세서에 있어서의 「트리히드록시알킬」은 상기 정의 「알킬」 중의 임의의 3개의 수소원자를 3개의 수산기로 치환한 기를 의미한다. 트리히드록시알킬로서 바람직하게는 C1 - 6트리히드록시알킬, C2 - 6트리히드록시알킬 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서의 「알콕시알킬」은 상기 정의 「알킬」 중의 임의의 수소원자를 상기 정의의 「알콕시」로 치환한 기를 의미한다. 알콕시알킬로서 바람직하게는 C1 - 3알콕시C1 - 4알킬, C1 - 3알콕시C2 - 4알킬 등을 들 수 있고, 구체적으로는, 예를 들면 메톡시에틸 등이 이것에 포함된다.
본 명세서에 있어서의 「알콕시알콕시알킬」은 상기 정의 「알콕시알킬」 중의 말단의 알킬 중의 임의의 수소원자를 상기 정의의 「알콕시」로 치환한 기를 의미한다. 알콕시알콕시알킬로서 바람직하게는 C1 - 3알콕시C1 - 4알콕시C1 - 4알킬, C1 - 3알콕시C2-4알콕시C2-4알킬 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서의 「아미노알킬」은 상기 정의 「알킬」 중의 임의의 수소원자를 아미노기로 치환한 기를 의미한다. 아미노알킬기로서 바람직하게는 C1 - 4아미노알킬, C2 - 4아미노알킬 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서의 「알킬아미노」는 상기 정의의 「알킬」이 1개 결합한 아미노기인 것을 의미한다. 알킬아미노로서 바람직하게는 C1 - 4알킬아미노 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서의 「디알킬아미노」는 상기 정의의 「알킬」이 2개 결합한 아미노기인 것을 의미하고, 그 알킬은 동일해도 되고 상이해도 된다. 디알킬아미노로서 바람직하게는 디(C1-4알킬)아미노 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서의 「알킬아미노알킬」은 상기 정의의 「알킬」 중의 임의의 수소원자를 상기 정의의 「알킬아미노」로 치환한 기를 의미한다. 알킬아미노알킬로서 바람직하게는 C1-4알킬아미노C1-4알킬, C1-4알킬아미노C2-4알킬 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서의 「디알킬아미노알킬」은 상기 정의의 「알킬」 중의 임의의 수소원자를 상기 정의의 「디알킬아미노」로 치환한 기를 의미한다. 디알킬아미노알킬로서 바람직하게는 디(C1-4알킬)아미노C1-4알킬, 디(C1-4알킬)아미노C2-4알킬 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서의 「헤테로시클릴아미노」는 상기 정의의 「헤테로시클릴」이 1개 결합한 아미노기인 것을 의미한다. 헤테로시클릴아미노로서 바람직하게는 3~10원 헤테로시클릴아미노 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서의 「시아노알킬」은 상기 정의의 「알킬」 중의 임의의 수소원자를 시아노기로 치환한 기를 의미한다. 시아노알킬로서 바람직하게는 시아노(C1-3알킬) 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서의 「알킬설포닐」은 상기 정의의 「알킬」이 결합한 설포닐기(즉, 알킬-SO2-)인 것을 의미한다. 알킬설포닐로서 바람직하게는 C1-3알킬설포닐 등을 들 수 있고, 구체적으로는 메틸설포닐, 에틸설포닐, n-프로필설포닐, i-프로필설포닐 등이 이것에 포함된다.
본 명세서에 있어서의 「알킬설포닐알킬」은 상기 정의 「알킬」 중의 임의의 수소원자를 상기 정의의 「알킬설포닐」로 치환한 기를 의미한다. 알킬설포닐알킬로서 바람직하게는 C1 - 3알킬설포닐C1 - 4알킬, C1 - 3알킬설포닐C2 - 4알킬 등을 들 수 있다.
상기 식(I)에 나타내어지는 화합물로서 적합하게는 아래와 같다.
상기 R1은 바람직하게는 수소, 히드록시, 할로겐, 시아노, 니트로, C1 - 4할로알킬, C1 - 6알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C3 - 7시클로알킬, C6 - 10아릴C1 - 4알킬, -OR5, -NR6R7, -(CR8R9)nZ1, -C(O)NR12R13, -SR14, -SOR15, -SO2R16, -NR17SO2R18, COOH, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6-10아릴, Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴, -COR19, -COOR20, -OC(O)R21, -NR22C(O)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR26R27, -SO2NR28R29, -OSO2R30, -SO3R31 또는 -Si(R32)3이다.
상기 R1은 보다 바람직하게는 수소, 히드록시, 할로겐, 시아노, C1 - 4할로알킬, C1 - 6알킬, C2 - 6알키닐, C3 - 7시클로알킬, C6 - 10아릴C1 - 4알킬, -OR5, -NR6R7, -(CR8R9)nZ1, -C(O)NR12R13, -SR14, -SO2R16, -NR17SO2R18, COOH, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6-10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴이다. 여기서 말하는 5~10원 헤테로아릴로서는 구체적으로는 이미다졸릴기, 티에닐기, 피리딜기, 피리다지닐기, 피라졸릴기가 특히 바람직하고, 3~10원 헤테로시클릴로서는 구체적으로는 모르폴리닐기, 테트라히드로피리딜기, 피페리디닐기가 특히 바람직하다.
상기 R2는 바람직하게는 수소, 히드록시, 할로겐, 시아노, 니트로, C1 - 4할로알킬, C1 - 6알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C3 - 7시클로알킬, C6 - 10아릴C1 - 4알킬, -OR5, -NR6R7, -(CR8R9)nZ1, -C(O)NR12R13, -SR14, -SOR15, -SO2R16, -NR17SO2R18, COOH, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6-10아릴, Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴, -COR19, -COOR20, -OC(O)R21, -NR22C(O)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR26R27, -SO2NR28R29, -OSO2R30, -SO3R31 또는 -Si(R32)3이다.
상기 R2는 보다 바람직하게는 수소, 할로겐, C1 - 4할로알킬, C1 - 6알킬, -OR5, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6-10아릴, Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴이다. 여기서 말하는 5~10원 헤테로아릴로서는 구체적으로는 피리딜기가 특히 바람직하다.
상기 R1 및 상기 R2는 바람직하게는 그들이 결합하고 있는 원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성할 수 있다. 여기서 상기 헤테로시클릴 또는 상기 헤테로아릴은 할로겐원자를 치환기에 가질 수 있다. 결합하고 있는 원자와 함께 형성하는 3~10원 헤테로시클릴로서는 구체적으로는 디옥솔라닐기, 디옥사닐기가 특히 바람직하다.
상기 R3는 바람직하게는 수소, C1 - 5알킬, C6 - 10아릴C1 - 6알킬 또는 C1 - 4할로알킬이고, 보다 바람직하게는 수소, C1 - 4알킬, C6 - 10아릴C1 - 4알킬 또는 C1 - 3퍼플루오로알킬이며, 특히 바람직하게는 C1알킬이다.
상기 R4는 바람직하게는 수소, 할로겐, C1 - 3알킬, C1 - 4할로알킬, 히드록시, 시아노, 니트로, C1 - 4알콕시, -(CH2)nZ1, -NR6R7, -OR5, -C(O)NR12R13, -SR14, -SOR15, -SO2R16, NR17SO2R18, COOH, -COR19, -COOR20, -OC(O)R21, -NR22C(O)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR26R27, -SO2NR28R29, -OSO2R30, -SO3R31 또는 -Si(R32)3이다.
상기 R4는 보다 바람직하게는 수소, 할로겐, C1 - 3알킬, C1 - 3퍼플루오로알킬, 시아노, 메탄설포닐, 히드록실, 알콕시 또는 아미노이고, 특히 바람직하게는 수소, 또는 할로겐이다.
상기 A 고리로서는 바람직하게는 5~10원 헤테로아릴 고리 또는 C6 - 10아릴 고리이고, 보다 바람직하게는 벤젠, 인돌, 아자인돌, 벤조푸란, 벤조티오펜, 벤조티아졸, 퀴놀린 또는 피롤이며, 특히 바람직하게는 인돌 또는 피롤이다.
상기 R5는 바람직하게는 C1 - 5알킬, C3 - 7시클로알킬, C3 - 7시클로알킬C1 - 3알킬, C2-6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕시C1 - 4알킬, C1 - 3알콕시C1 - 4알콕시C1 -4알킬, C1-4아미노알킬, C1-4알킬아미노C1-4알킬, 디(C1-4알킬)아미노C1-4알킬, C6-10아릴, C6-10아릴C1-3알킬, Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 3~10원 헤테로시클릴C1 - 3알킬, 3~10원 헤테로시클릴, 5~10원 헤테로아릴, 5~10원 헤테로아릴C1 - 3알킬, C1 - 6모노히드록시알킬, C1 - 6디히드록시알킬 또는 C1 - 6트리히드록시알킬이다.
상기 R5는 보다 바람직하게는 C1 - 5알킬, C3 - 7시클로알킬C1 - 3알킬, C1 - 4할로알킬, C1-3알콕시C1 - 4알킬, C6 - 10아릴, C6 - 10아릴C1 - 3알킬, Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 3~10원 헤테로시클릴C1 - 3알킬, 3~10원 헤테로시클릴이다. 여기서 말하는 3~10원 헤테로시클릴알킬로서는, 구체적으로는 피페라지닐에틸기, 옥세타닐메틸기, 모르폴리닐에틸기가 특히 바람직하고, 3~10원 헤테로시클릴로서는 구체적으로는 옥세타닐기, 테트라히드로피라닐기가 특히 바람직하다.
상기 R6 및 상기 R7은 바람직하게는 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕시C2 - 4알킬, C6 - 10아릴C1 -3알킬, 3~10원 헤테로시클릴C1 - 3알킬, 5~10원 헤테로아릴C1 - 3알킬, C1 - 6모노히드록시알킬, C1 - 6디히드록시알킬, C1 - 6트리히드록시알킬, 3~10원 헤테로시클릴, C1 - 4아미노알킬, C1 - 4알킬아미노C1 - 4알킬, 디(C1-4알킬)아미노C1 - 4알킬 또는 시아노(C1-3알킬)이다.
상기 R6 및 상기 R7은 보다 바람직하게는 각각 독립적으로 수소, C1 - 3알콕시C1-4알킬, 3~10원 헤테로시클릴C1 - 3알킬, 5~10원 헤테로아릴C1 - 3알킬 또는 C1 - 6디히드록시알킬이다. 여기서 말하는 3~10원 헤테로시클릴알킬로서는 구체적으로는 모르폴리닐에틸기가 특히 바람직하고, 여기서 말하는 5~10원 헤테로아릴알킬로서는 피리딜에틸기가 특히 바람직하다.
또는 상기 R6 및 상기 R7은 바람직하게는 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성할 수 있다.
상기 n은 1~3의 정수를 나타내고, 바람직하게는 n은 1이다.
상기 R8 및 상기 R9은 바람직하게는 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1 - 4알킬 또는 할로겐이고, 보다 바람직하게는 수소이다.
또는 상기 R8 및 상기 R9은 바람직하게는 그들이 결합하고 있는 탄소원자와 함께 지환식 고리를 형성할 수 있다.
상기 Z1은 바람직하게는 수소, NR10R11, -OH, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴이고, 보다 바람직하게는 NR10R11 또는 -OH, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 3~10원 헤테로시클릴이다. 여기서 말하는 3~10원 헤테로시클릴로서는, 구체적으로는 피롤리디닐기, 피페라지닐기, 피페리디닐기, 모르폴리닐기가 특히 바람직하다.
상기 R10 및 상기 R11은 바람직하게는 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 C1-4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕시C1 - 4알킬, 시아노(C1 - 3알킬) 또는 C1 - 3알킬설포닐C1 - 4알킬이고, 보다 바람직하게는 C1 - 4알킬, C2 - 6알키닐 또는 C1 - 3알콕시C2- 4알킬이다.
또는 상기 R10 및 상기 R11은 바람직하게는 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성할 수 있다.
상기 R12 및 상기 R13은 바람직하게는 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕시C1 - 4알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴, 3~10원 헤테로시클릴, C6 - 10아릴C1 - 4알킬, 3~10원 헤테로시클릴C1 -3알킬, 5~10원 헤테로아릴C1 - 3알킬, 시아노(C1 - 3알킬), C1 - 3알킬설포닐C1 - 4알킬 또는 3~10원 지환식 고리이고, 보다 바람직하게는 수소, C1 - 4알킬, C1 - 4할로알킬이다.
또는 상기 R12 및 상기 R13은 바람직하게는 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성할 수 있다. 특히 바람직하게는 3~10원 헤테로시클릴알킬이고, 구체적으로는 피페라지닐기, 모르폴리닐기, 피롤리디닐기, 피페리디닐기가 보다 바람직하다.
상기 R14은 바람직하게는 C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴이고, 보다 바람직하게는 C1 - 4알킬, C1 - 4할로알킬이다.
상기 R15은 바람직하게는 C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 -10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴이다.
상기 R16은 바람직하게는 C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴이고, 보다 바람직하게는 C1 - 4알킬이다.
상기 R17은 바람직하게는 수소 또는 C1 - 4알킬이고, 보다 바람직하게는 수소이다.
상기 R18은 바람직하게는 C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴이고, 보다 바람직하게는 C1 - 4알킬이다.
상기 R19은 바람직하게는 수소, C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴이고, 보다 바람직하게는 수소, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴이다. 여기서 말하는 3~10원 헤테로시클릴로서는, 구체적으로는 피페라지닐기, 모르폴리닐기, 피롤리디닐기, 피페리디닐기가 보다 바람직하다.
상기 R20는 바람직하게는 C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴이다.
상기 R21은 바람직하게는 C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴이다.
상기 R22는 바람직하게는 수소, C1 - 4알킬 또는 C1 - 4할로알킬이다.
상기 R23는 바람직하게는 수소, C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴이다.
상기 R24는 바람직하게는 수소, C1 - 4알킬 또는 C1 - 4할로알킬이다.
상기 R25는 바람직하게는 C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴이다.
상기 R26 및 상기 R27은 바람직하게는 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕시C1 - 4알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴, 3~10원 헤테로시클릴, C6 - 10아릴C1 - 4알킬, 3~10원 헤테로시클릴C1 -3알킬, 5~10원 헤테로아릴C1 - 3알킬, 시아노(C1 - 3알킬), C1 - 3알킬설포닐C1 - 4알킬 또는 3~10원 지환식 고리이다.
또는 상기 R26 및 상기 R27은 바람직하게는 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성할 수 있다.
상기 R28 및 상기 R29은 바람직하게는 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕시C1 - 4알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴, 3~10원 헤테로시클릴, C6 - 10아릴C1 - 4알킬, 3~10원 헤테로시클릴C1-3알킬, 5~10원 헤테로아릴C1-3알킬, 시아노(C1 - 3알킬), C1 - 3알킬설포닐C1 - 4알킬 또는 3~10원 지환식 고리이다.
또는 상기 R28 및 상기 R29은 바람직하게는 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성할 수 있다.
상기 R30는 바람직하게는 C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴이다.
상기 R31은 바람직하게는 C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴이다.
상기 R32는 바람직하게는 C1 - 4알킬 또는 C6 - 10아릴이다.
상기 P군에 포함되는 치환기로서, 바람직하게는 할로겐, C1 - 4알킬, C1 - 4할로알킬, -OH, C1 - 3알콕시, C1 - 3할로알콕시, 3~10원 헤테로시클릴아미노, -SO2R, -CN, -NO2 또는 3~10원 헤테로시클릴이고, 보다 바람직하게는 할로겐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕시, C1 - 3할로알콕시 또는 3~10원 헤테로시클릴이다. 여기서 말하는 3~10원 헤테로시클릴로서는, 구체적으로는 모르폴리닐기가 특히 바람직하다.
상기 Q군에 포함되는 치환기로서, 바람직하게는 할로겐, C1 - 4알킬, C1 - 4할로알킬, -OH, C1 - 3알콕시, C1 - 6모노히드록시알킬, C1 - 6디히드록시알킬 또는 C1 - 6트리히드록시알킬, 3~10원 헤테로시클릴아미노, -SO2R, -CN, -NO2, C3 - 7시클로알킬, -COR19 또는 C1 - 4알킬로 치환되어 있어도 되는 3~10원 헤테로시클릴이고, 보다 바람직하게는 할로겐, C1 - 4알킬, C1 - 4할로알킬, -OH, C1 - 3알콕시, C1 - 6모노히드록시알킬, -SO2R16, C3 - 7시클로알킬, -COR19 또는 C1 - 4알킬로 치환되어 있어도 되는 3~10원 헤테로시클릴이다. 여기서 말하는 3~10원 헤테로시클릴로서는 구체적으로는 피페라지닐기, 피페리디닐기, 모르폴리닐기가 보다 바람직하다.
구체적으로는, 예를 들면 아래의 화합물을 들 수 있다.
(1) [5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(1H-인돌-2-일)-메타논；
(2) [5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(6-피롤리딘-1-일메틸-1H-인돌-2-일)-메타논；
(3) [5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[6-(4-히드록시-피페리딘-1-일메틸)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(4) [5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(1H-피롤로[3,2-c]피리딘-2-일)-메타논；
(5) [5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(6-피페라진-1-일메틸-1H-인돌-2-일)-메타논；
(6) [5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[6-(2-모르폴린-4-일-에톡시)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(7) [5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[6-(테트라히드로-피란-4-일옥시)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(8) [5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(4-클로로-1H-인돌-2-일)-메타논；
(9) [5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(5-브로모-1H-인돌-2-일)-메타논；
(10) [5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(4-요오도-1H-인돌-2-일)-메타논；
(11) 2-[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-카르보닐]-1H-인돌-5-카르보니트릴；
(12) [5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(6-브로모-5-플루오로-1H-인돌-2-일)-메타논；
(13) [5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(5-에티닐-1H-인돌-2-일)-메타논；
(14) [5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[6-(2-플루오로-페닐)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(15) [5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[6-(3-플루오로-페닐)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(16) [5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[6-(4-플루오로-페닐)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(17) [5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[6-(2-클로로-페닐)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(18) [5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[6-(3-클로로-페닐)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(19) [5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[6-(4-클로로-페닐)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(20) [5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[6-(2-트리플루오로메틸-페닐)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(21) [5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[6-(3-트리플루오로메틸-페닐)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(22) [5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[6-(4-트리플루오로메틸-페닐)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(23) [5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(4-브로모-1H-인돌-2-일)-메타논；
(24) [5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[6-(3-플루오로-피리딘-2-일)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(25) [5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(6-메틸-1H-인돌-2-일)-메타논；
(26) [5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[5-(4,4-디플루오로-피페리딘-1-카르보닐)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(27) [5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[5-(3,3-디플루오로-피페리딘-1-카르보닐)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(28) 2-[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-카르보닐]-1H-인돌-5-카르복실산(2,2,2-트리플루오로-에틸)-아미드；
(29) [5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[6-(5-트리플루오로메틸-피리딘-2-일)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(30) [5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[6-(6-트리플루오로메틸-피리딘-2-일)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(31) [5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[6-(5-클로로-피리딘-2-일)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(32) [5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[6-(4-메틸-피리딘-2-일)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(33) [5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[6-(3-클로로-4-플루오로-페닐)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(34) [5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[6-(3-트리플루오로메틸-피리딘-2-일)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(35) [5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[6-(4-트리플루오로메틸-피리딘-2-일)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(36) [5-아미노-1-(6-플루오로-2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(1H-인돌-2-일)-메타논；
(37) 2-[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-카르보닐]-1H-인돌-6-카르복실산；
(38) [5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(6-히드록시메틸-1H-인돌-2-일)-메타논；
(39) [5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-{6-[2-(4-메틸-피페라진-1-일)-에톡시]-1H-인돌-2-일}-메타논；
(40) [5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[6-(3-메틸-옥세탄-3-일메톡시)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(41) [5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[6-(3-플루오로-피페리딘-1-일메틸)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(42) [5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(6-{[비스-(2-메톡시-에틸)-아미노]-메틸}-1H-인돌-2-일)-메타논；
(43) [5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-{6-[(메틸-프로프-2-이닐-아미노)-메틸]-1H-인돌-2-일}-메타논；
(44) [5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[6-(3,3-디플루오로-피롤리딘-1-일메틸)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(45) [5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[6-(2,5-디메틸-피롤리딘-1-일메틸)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(46) [5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[6-(3,3-디플루오로-피페리딘-1-일메틸)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(47) [5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[6-((S)-3-메틸-모르폴린-4-일메틸)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(48) [5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(6-브로모-1H-인돌-2-일)-메타논；
(49) [5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(5-요오도-1H-인돌-2-일)-메타논；
(50) [5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)-메타논；
(51) [5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(5-브로모-6-트리플루오로메틸-1H-인돌-2-일)-메타논；
(52) [5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(6-요오도-1H-인돌-2-일)-메타논；
(53) [5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(4-메틸-1H-인돌-2-일)-메타논；
(54) [5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(4-이소프로필-1H-인돌-2-일)-메타논；
(55) [5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[5-(2-플루오로-페닐)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(56) [5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(5-벤질-1H-인돌-2-일)-메타논；
(57) [5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[5-(2-트리플루오로메틸-페닐)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(58) [5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[5-(3-플루오로-페닐)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(59) [5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[5-(3-트리플루오로메틸-페닐)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(60) [5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(4-에티닐-1H-인돌-2-일)-메타논；
(61)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(5H-[1,3]디옥솔로[4,5-f]인돌-6-일)-메타논；
(62)　[5-아미노-1-(7-플루오로-2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(1H-인돌-2-일)-메타논；
(63)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[5-(4-트리플루오로메틸-페닐)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(64)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(5-부톡시-1H-인돌-2-일)-메타논；
(65)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[5-(1-메틸-피페리딘-4-일)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(66)　N-{2-[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-카르보닐]-1H-인돌-6-일}-메탄설폰아미드；
(67)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[6-(6-모르폴린-4-일-피리딘-3-일)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(68)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(6-부틸-1H-인돌-2-일)-메타논；
(69)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[6-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(70)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[6-(5-메톡시-피리딘-3-일)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(71)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[6-(2-메톡시-피리딘-3-일)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(72)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(6-시클로프로필-1H-인돌-2-일)-메타논；
(73)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[6-(2-메톡시-페닐)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(74)　5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(6-페닐-1H-인돌-2-일)-메타논；
(75)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[6-(5-메탄설포닐-피리딘-3-일)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(76)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(6-이소프로필-1H-인돌-2-일)-메타논；
(77)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(6-피리딘-2-일-1H-인돌-2-일)-메타논；
(78)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(5-시클로프로필-1H-인돌-2-일)-메타논；
(79)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(6-피리다진-3-일-1H-인돌-2-일)-메타논；
(80)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(5-이소프로폭시-1H-인돌-2-일)-메타논；
(81)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[5-(2-메톡시-에톡시)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(82)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(5-시클로프로필메톡시-1H-인돌-2-일)-메타논；
(83)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(2,2-디플루오로-5H-[1,3]디옥솔로[4,5-f]인돌-6-일)-메타논；
(84)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[6-(3-클로로-피리딘-2-일)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(85)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[6-(5-플루오로-피리딘-2-일)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(86)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[6-(6-모르폴린-4-일-피리다진-3-일)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(87)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(5-클로로-6-시클로프로필메톡시-1H-인돌-2-일)-메타논；
(88)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[6-(2,4-디플루오로-페닐)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(89)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(6-피리다진-4-일-1H-인돌-2-일)-메타논；
(90)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(3-플루오로-1H-인돌-2-일)-메타논；
(91)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[5-(1-이소프로필-피페리딘-4-일)-6-트리플루오로메틸-1H-인돌-2-일]-메타논；
(92)　2-[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-카르보닐]-1H-인돌-6-카르보니트릴；
(93)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[5-(1,2,3,6-테트라히드로-피리딘-4-일)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(94)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(5-피페리딘-4-일-1H-인돌-2-일)-메타논；
(95)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[5-((R)-3-플루오로-피롤리딘-1-일메틸)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(96)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(6-플루오로-5-피페리딘-4-일-1H-인돌-2-일)-메타논；
(97)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[6-플루오로-5-(1-메틸-피페리딘-4-일)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(98)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[5-(1-이소프로필-피페리딘-4-일)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(99)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[6-플루오로-5-(1-이소프로필-피페리딘-4-일)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(100)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(6-피리딘-3-일-1H-인돌-2-일)-메타논；
(101)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[5-(6-모르폴린-4-일-피리딘-3-일)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(102)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(5-피리딘-3-일-1H-인돌-2-일)-메타논；
(103)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[5-(6-피페라진-1-일-피리딘-3-일)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(104)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[5-(6-히드록시-피리딘-3-일)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(105)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[6-플루오로-5-(4-메틸-피페라진-1-일메틸)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(106)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(6-플루오로-5-피롤리딘-1-일메틸-1H-인돌-2-일)-메타논；
(107)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[6-(1-메틸-피페리딘-4-일)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(108)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[6-(4-모르폴린-4-일-페닐)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(109)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[6-(3,4,5,6-테트라히드로-2H-[1,2']비피리딘-5'-일)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(110)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[6-(6-피페라진-1-일-피리딘-3-일)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(111)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[5-(6-메톡시-피리딘-3-일)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(112)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[5-((S)-3-메틸-모르폴린-4-일메틸)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(113)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[6-((R)-3-플루오로-피롤리딘-1-일메틸)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(114)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[5-(2,5-디메틸-피롤리딘-1-일메틸)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(115)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[5-(3-플루오로-피페리딘-1-일메틸)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(116)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[5-(3,3-디플루오로-피페리딘-1-일메틸)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(117)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-{6-[2-(4-메틸-피페라진-1-일)-피리딘-4-일]-1H-인돌-2-일}-메타논；
(118)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(6-피리딘-4-일-1H-인돌-2-일)-메타논；
(119)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[5-(4-플루오로-피페리딘-1-일메틸)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(120)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[5-(4,4-디플루오로-피페리딘-1-일메틸)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(121)　[5-아미노-1-(2-디플루오로메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[5-(1-메틸-피페리딘-4-일)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(122)　[5-아미노-1-(2-디플루오로메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(1H-인돌-2-일)-메타논；
(123)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[5-(3,3-디플루오로-피롤리딘-1-일메틸)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(124)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[5-(1-시클로펜틸-피페리딘-4-일)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(125)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[5-(1-시클로헥실-피페리딘-4-일)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(126)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(4-브로모-1H-피롤-2-일)-메타논；
(127)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(1H-피롤-2-일)-메타논；
(128)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(4-페닐-1H-피롤-2-일)-메타논；
(129)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[4-(3-클로로-페닐)-1H-피롤-2-일]-메타논；
(130)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[4-(4-플루오로-페닐)-1H-피롤-2-일]-메타논；
(131)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[4-(3-플루오로-페닐)-1H-피롤-2-일]-메타논；
(132)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(6-모르폴린-4-일메틸-1H-인돌-2-일)-메타논；
(133)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[4-(2-모르폴린-4-일-에틸아미노)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(134)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[5-(4-메틸-피페라진-1-카르보닐)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(135)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[6-(2-모르폴린-4-일-에틸아미노)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(136)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[5-(피페라진-1-카르보닐)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(137)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[4-(2-메톡시-에틸아미노)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(138)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[4-(2-히드록시-1-히드록시메틸-에틸아미노)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(139)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[4-(2-피리딘-4-일-에틸아미노)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(140)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[6-(2-메톡시-에틸아미노)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(141)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(6-모르폴린-4-일-1H-인돌-2-일)-메타논；
(142)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(4-모르폴린-4-일-1H-인돌-2-일)-메타논；
(143)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(4-모르폴린-4-일메틸-1H-인돌-2-일)-메타논；
(144)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(5-모르폴린-4-일메틸-1H-인돌-2-일)-메타논；
(145)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[5-(모르폴린-4-카르보닐)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(146)　[5-아미노-1-(2-이소프로필-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(1H-인돌-2-일)-메타논；
(147)　[5-아미노-1-(2-프로필-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(1H-인돌-2-일)-메타논；
(148)　[5-아미노-1-(1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(1H-인돌-2-일)-메타논；
(149)　[5-아미노-1-(2-트리플루오로메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(1H-인돌-2-일)-메타논；
(150)　[5-아미노-1-(2-에틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(1H-인돌-2-일)-메타논；
(151)　[5-아미노-1-(2-벤질-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(1H-인돌-2-일)-메타논；
(152)　1-(4-{2-[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-카르보닐]-1H-인돌-5-일메틸}-피페라진-1-일)-에타논；
(153)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[5-(4-메탄설포닐-피페라진-1-일메틸)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(154)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(5-피페라진-1-일메틸-1H-인돌-2-일)-메타논；
(155)　1-(4-{2-[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-카르보닐]-1H-인돌-6-일메틸}-피페라진-1-일)-에타논；
(156)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[6-(4-메틸-피페라진-1-일메틸)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(157)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[5-(4-메틸-피페라진-1-일메틸)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(158)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(5-피롤리딘-1-일메틸-1H-인돌-2-일)-메타논；
(159)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(4-플루오로-1H-인돌-2-일)-메타논；
(160)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(5-플루오로-1H-인돌-2-일)-메타논；
(161)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(6-플루오로-1H-인돌-2-일)-메타논；
(162)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일)-메타논；
(163)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(5-플루오로-6-모르폴린-4-일메틸-1H-인돌-2-일)-메타논；
(164)　2-[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-카르보닐]-1H-인돌-5-카르복실산；
(165)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(5-메톡시-1H-인돌-2-일)-메타논；
(166)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(4,6-디메톡시-1H-인돌-2-일)-메타논；
(167)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(4-메톡시-1H-인돌-2-일)-메타논；
(168)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(6-메톡시-1H-인돌-2-일)-메타논；
(169)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(4,6-디메틸-1H-인돌-2-일)-메타논；
(170)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(5-tert-부틸-1H-인돌-2-일)-메타논；
(171)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(5-이소프로필-1H-인돌-2-일)-메타논；
(172)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(5-벤질옥시-1H-인돌-2-일)-메타논；
(173)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(4-벤질옥시-1H-인돌-2-일)-메타논；
(174)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(5,6-디메톡시-1H-인돌-2-일)-메타논；
(175)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(6-tert-부틸-1H-인돌-2-일)-메타논；
(176)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(5-플루오로-4-트리플루오로메틸-1H-인돌-2-일)-메타논；
(177)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(5-페녹시-1H-인돌-2-일)-메타논；
(178)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(6-메틸설파닐-1H-인돌-2-일)-메타논；
(179)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(4-tert-부틸-1H-인돌-2-일)-메타논；
(180)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(5-메틸-1H-인돌-2-일)-메타논；
(181)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(5-에틸-1H-인돌-2-일)-메타논；
(182)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(5-플루오로-6-트리플루오로메틸-1H-인돌-2-일)-메타논；
(183)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(6-플루오로-5-메톡시-1H-인돌-2-일)-메타논；
(184)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(6-클로로-5-메톡시-1H-인돌-2-일)-메타논；
(185)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(5-클로로-6-메톡시-1H-인돌-2-일)-메타논；
(186)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(6-이소프로폭시-1H-인돌-2-일)-메타논；
(187)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(6-벤질옥시-1H-인돌-2-일)-메타논；
(188)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(4-이소프로폭시-1H-인돌-2-일)-메타논；
(189)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(2,3-디히드로-6H-[1,4]디옥시노[2,3-f]인돌-7-일)-메타논；
(190)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(4,6-디-tert-부틸-1H-인돌-2-일)-메타논；
(191)　2-[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-카르보닐]-1H-인돌-4-카르보니트릴；
(192)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(5-이미다졸-1-일-1H-인돌-2-일)-메타논；
(193)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(5-트리플루오로메틸설파닐-1H-인돌-2-일)-메타논；
(194)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(5-메틸설파닐-1H-인돌-2-일)-메타논；
(195)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(5-메탄설포닐-1H-인돌-2-일)-메타논；
(196)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[6-(4,4-디플루오로-피페리딘-1-일메틸)1H-인돌-2-일]-메타논；
(197)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[6-(4-플루오로-피페리딘-1-일메틸)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(198)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[6-(옥세탄-3-일옥시)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(199)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(6-히드록시-1H-인돌-2-일)-메타논；
(200)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(6-메탄설포닐-1H-인돌-2-일)-메타논；
(201)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(4,5-디브로모-1H-피롤-2-일)-메타논；
(202)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(4,5-디페닐-1H-피롤-2-일)-메타논；
(203)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(4,5-디-피리딘-3-일-1H-피롤-2-일)-메타논；
(204)　[5-아미노-1-(2-메틸-3H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(6-클로로-1H-인돌-2-일)-메타논；
(205)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(5-클로로-1H-인돌-2-일)-메타논；
(206)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(1H-인돌-3-일)-메타논；
(207)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(1H-인돌-6-일)-메타논；
(208)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(5-브로모-6-플루오로-1H-인돌-2-일)-메타논；
(209)　[5-아미노-1-(2-에틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(5-브로모-6-플루오로-1H-인돌-2-일)-메타논；
(210)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(5-트리플루오로메틸-1H-인돌-2-일)-메타논；
(211)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(5-트리플루오로메톡시-1H-인돌-2-일)-메타논；
(212)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(4,6-디클로로-1H-인돌-2-일)-메타논；
(213)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(6-브로모-4-플루오로-1H-인돌-2-일)-메타논；
(214)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(6-트리플루오로메톡시-1H-인돌-2-일)-메타논；
(215)　[5-아미노-1-(2-에틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(5-트리플루오로메톡시-1H-인돌-2-일)-메타논；
(216)　[5-아미노-1-(2-에틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(5-트리플루오로메틸-1H-인돌-2-일)-메타논；
(217)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(5,6-디클로로-1H-인돌-2-일)-메타논；
(218)　[5-아미노-1-(2-에틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(6-브로모-5-플루오로-1H-인돌-2-일)-메타논；
(219)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(4,5-디클로로-1H-인돌-2-일)-메타논；
(220)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(4,6-디플루오로-1H-인돌-2-일)-메타논；
(221)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[6-(3-클로로-피리딘-4-일)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(222)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[6-(6-메틸-피리딘-3-일)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(223)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[6-(5-플루오로-피리딘-3-일)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(224)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[6-(2-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(225)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[6-(5-클로로-2-메톡시-피리딘-3-일)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(226)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[6-(5-클로로-피리딘-3-일)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(227)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(6-티오펜-3-일-1H-인돌-2-일)-메타논；
(228)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[6-(4-클로로-피리딘-3-일)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(229)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(6-티오펜-2-일-1H-인돌-2-일)-메타논；
(230)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[6-(3-플루오로-피리딘-4-일)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(231)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[6-(2-트리플루오로메틸-피리딘-4-일)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(232)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[5-(3,3-디플루오로-피롤리딘-1-카르보닐)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(233)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[5-(2,6-디메틸-모르폴린-4-카르보닐)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(234)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[5-([1,4']비피페리디닐-1'-카르보닐)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(235)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-{5-[4-(2,2,2-트리플루오로-에틸)-피페라진-1-카르보닐]-1H-인돌-2-일}-메타논；
(236)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-{5-[4-(2-히드록시-에틸)-피페라진-1-카르보닐]-1H-인돌-2-일}-메타논；
(237)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[5-(3,3,4,4-테트라플루오로-피롤리딘-1-카르보닐)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(238)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[5-((R)-3-플루오로-피롤리딘-1-카르보닐)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(239)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[5-((S)-3-플루오로-피롤리딘-1-카르보닐)-1H-인돌-2-일]-메타논；
(240)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[4-(4-메톡시-페닐)-1H-피롤-2-일]-메타논；
(241)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[4-(3-메톡시-페닐)-1H-피롤-2-일]-메타논；
(242)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[4,5-비스-(3-플루오로-페닐)-1H-피롤-2-일]-메타논；
(243)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[4,5-비스-(4-메톡시-페닐)-1H-피롤-2-일]-메타논；
(244)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[4-(2,4-디플루오로-페닐)-1H-피롤-2-일]-메타논；
(245)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[4-(4-트리플루오로메톡시-페닐)-1H-피롤-2-일]-메타논；
(246)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-[4,5-비스-(3-메톡시-페닐)-1H-피롤-2-일]-메타논；
(247)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-벤조푸란-2-일-메타논；
(248)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-벤조[b]티오펜-2-일-메타논；
(249)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-벤조티아졸-2-일-메타논；
(250)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(4-플루오로-페닐)-메타논；
(251)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-(3-클로로-페닐)-메타논；
(252)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-퀴놀린-3-일-메타논；
(253)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-퀴놀린-7-일-메타논；및
(254)　[5-아미노-1-(2-메틸-1H-벤즈이미다졸-5-일)-1H-피라졸-4-일]-퀴놀린-6-일-메타논.
보다 구체적으로는, 상기 식(I)에 있어서 A가 인돌이고, R3 및 R4가 모두 수소인 화합물을 들 수 있고, 예를 들면 후술하는 실시예의 표 1 및 표 2에 기재되는 화합물을 들 수 있다.
상기의 화합물은, 예를 들면 국제공개 WO 2011/016528호에 기재되는 제조방법에 따라 제조할 수 있다.
또한 상기의 본 발명에 있어서의 FGFR 저해 활성을 갖는 화합물에는 프리체에 한정되지 않고 약학적으로 허용되는 염도 포함된다.
이러한 「염」으로서는, 예를 들면 무기 산염, 유기 산염, 무기 염기염, 유기 염기염, 산성 또는 염기성 아미노산염 등을 들 수 있다.
무기 산염의 바람직한 예로서는, 예를 들면 염산염, 브롬화수소산염, 황산염, 질산염, 인산염 등을 들 수 있고, 유기 산염의 바람직한 예로서는, 예를 들면 초산염, 숙신산염, 푸마르산염, 말레산염, 타르타르산염, 구연산염, 락트산염, 말산염, 스테아르산염, 안식향산염, 메탄설폰산염, ｐ-톨루엔설폰산염 등을 들 수 있다. 본 발명에 있어서의 특히 바람직한 염은 말산염이다.
무기 염기염의 바람직한 예로서는, 예를 들면 나트륨염, 칼륨염 등의 알칼리금속염, 칼슘염, 마그네슘염 등의 알칼리토류 금속염, 알루미늄염, 암모늄염 등을 들 수 있고, 유기 염기염의 바람직한 예로서는, 예를 들면 디에틸아민염, 디에탄올아민염, 메글루민염, N,N-디벤질에틸렌디아민염 등을 들 수 있다.
산성 아미노산염의 바람직한 예로서는, 예를 들면 아스파라긴산염, 글루타민산염 등을 들 수 있고, 염기성 아미노산염의 바람직한 예로서는, 예를 들면 아르기닌염, 리신염, 오르니틴염 등을 들 수 있다.
본 발명에 있어서의 FGFR 저해 활성을 갖는 화합물에는 또한 수화물도 포함된다. 더 나아가서는, 본 발명에 있어서의 FGFR 저해 활성을 갖는 화합물에는 다른 어떤 종의 용매를 흡수하여 용매화물이 되는 경우가 있어, 그러한 용매화물도 포함된다.
본 발명에 있어서의 FGFR 저해 활성을 갖는 화합물에는 또한 구조상 발생하는 모든 이성체(기하이성체, 광학이성체, 입체이성체, 호변이성체 등) 및 이성체 혼합물도 포함된다.
본 발명에 있어서의 FGFR 저해 활성을 갖는 화합물에는 또한 임의의 결정 다형이 포함된다.
본 발명에 있어서의 FGFR 저해 활성을 갖는 화합물에는 또한 그의 프로드러그가 포함된다. 프로드러그란 화학적 또는 대사적으로 분해할 수 있는 기를 가져 생체에 투여된 후, 원래의 화합물로 복원하여 본래의 약효를 나타내는 본 발명 화합물의 유도체로서, 비공유결합의 복합체 및 염을 포함한다.
본 발명에 있어서의 FGFR 저해 활성을 갖는 화합물에는 그의 분자 내의 하나 이상의 원자가 동위체로 치환된 것이 포함된다. 본 발명에 있어서 동위체란 원자번호(양성자 수)가 동일하고, 질량 수(양성자와 중성자 수의 합)가 상이한 원자를 의미한다. 본 발명 화합물에 포함되는 동위체의 치환 대상이 되는 원자의 예로서는 수소원자, 탄소원자, 질소원자, 산소원자, 인원자, 황원자, 불소원자, 염소원자 등이 있고, 그들의 동위체에는 2H, 3H, 13C, 14C, 15N, 17O, 18O, 31P, 32P, 35S, 18F, 36Cl 등이 포함된다. 특히 3H나 14C와 같은, 방사선을 발하여 붕괴하는 방사성 동위체는 의약품 또는 화합물의 체내 조직 분포 시험 등의 경우에 유용하다. 안정 동위체는 붕괴를 일으키지 않아 존재량이 거의 변하지 않고 방사선도 발하지 않기 때문에 안전하게 사용할 수 있다. 본 발명의 화합물의 동위체 치환체는 합성에서 사용하고 있는 시약을 대응하는 동위체를 포함하는 시약으로 치환함으로써 통상의 방법에 따라 변환할 수 있다.
또한 본 발명에 있어서의 FGFR 저해제를 포함하는 「항암제」 또는 「암 치료용 의약 조성물」은 호환적으로 사용되어 전술한 FGFR 저해 활성을 갖는 화합물 및 약학적으로 허용될 수 있는 담체로 이루어지는 암 치료용 조성물을 의미한다.
본 발명에 있어서의 FGFR 저해 활성을 갖는 화합물은 관용되고 있는 방법에 의해 정제, 산제, 세립제, 과립제, 피복정제, 캡슐제, 시럽제, 트로키제, 흡입제, 좌제, 주사제, 연고제, 안연고제, 점안제, 점비제, 점이제, 파프제, 로션제 등으로서 제제화할 수 있다. 제제화에는 통상 사용되는 부형제, 결합제, 활택제, 착색제, 교미교취제나, 및 필요에 따라 안정화제, 유화제, 흡수촉진제, 계면활성제, pH 조제제, 방부제, 항산화제 등을 사용할 수 있고, 일반적으로 의약품 제제의 원료로서 사용되는 성분을 배합하여 통상의 방법에 의해 제제화된다.
예를 들면 경구제제를 제조하려면, 본 발명의 화합물 또는 그의 약리학적으로 허용되는 염과 부형제, 추가로 필요에 따라 결합제, 붕괴제, 활택제, 착색제, 교미교취제 등을 첨가한 후, 통상의 방법에 의해 산제, 세립제, 과립제, 정제, 피복정제, 캡슐제 등으로 한다.
이들 성분으로서는, 예를 들면 대두유, 우지, 합성 글리세라이드 등의 동식물유；유동 파라핀, 스쿠알란, 고형 파라핀 등의 탄화수소；미리스트산 옥틸도데실, 미리스트산 이소프로필 등의 에스테르유；세토스테아릴알코올, 베헤닐알코올 등의 고급 알코올；실리콘 수지；실리콘 오일；폴리옥시에틸렌 지방산 에스테르, 소르비탄산 지방산 에스테르, 글리세린 지방산 에스테르, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르, 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유, 폴리옥시에틸렌 폴리옥시프로필렌 블록 코폴리머 등의 계면활성제；히드록시에틸셀룰로오스, 폴리아크릴산, 카르복시비닐 폴리머, 폴리에틸렌글리콜, 폴리비닐피롤리돈, 메틸셀룰로오스 등의 수용성 고분자；에탄올, 이소프로판올 등의 저급 알코올；글리세린, 프로필렌글리콜, 디프로필렌글리콜, 소르비톨 등의 다가 알코올；글루코오스, 자당 등의 당；무수 규산, 규산 알루미늄마그네슘, 규산 알루미늄 등의 무기 분체, 정제수 등을 들 수 있다.
부형제로서는, 예를 들면 젖당, 콘스타치, 백당, 포도당, 만니톨, 소르비트, 결정 셀룰로오스, 이산화규소 등을 들 수 있다.
결합제로서는, 예를 들면 폴리비닐알코올, 폴리비닐에테르, 메틸셀룰로오스, 에틸셀룰로오스, 아라비아 고무, 트래거캔스, 젤라틴, 쉘락, 히드록시프로필메틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 폴리비닐피롤리돈, 폴리프로필렌글리콜·폴리옥시에틸렌·블록 폴리머, 메글루민 등을 들 수 있다.
붕괴제로서는, 예를 들면 전분, 한천, 젤라틴 분말, 결정 셀룰로오스, 탄산칼슘, 탄산수소나트륨, 구연산칼슘, 덱스트린, 펙틴, 카르복시메틸셀룰로오스·칼슘 등을 들 수 있다.
활택제로서는, 예를 들면 스테아르산마그네슘, 탈크, 폴리에틸렌글리콜, 실리카, 경화 식물유 등을 들 수 있다.
착색제로서는 의약품에 첨가하는 것이 허가되어 있는 것이, 교미교취제로서는 코코아 분말, 박하뇌, 방향산, 박하유, 용뇌, 계피 분말 등이 사용된다.
이들 정제·과립제에는 당의, 기타 필요에 따라 적절하게 코팅하는 것은 물론 지장 없다. 또한 시럽제나 주사용 제제 등의 액제를 제조할 때는, 본 발명의 화합물 또는 그의 약리학적으로 허용되는 염에 pH 조정제, 용해제, 등장화제 등과 필요에 따라 용해 보조제, 안정화제 등을 첨가하여 통상의 방법에 의해 제제화한다.
외용제를 제조할 때의 방법은 한정되지 않고, 통상의 방법에 의해 제조할 수 있다. 즉 제제화에 있어서 사용하는 기제 원료(base materials)로서는 의약품, 의약부외품, 화장품 등에 통상 사용되는 각종 원료를 사용하는 것이 가능하다. 사용하는 기제 원료로서 구체적으로는, 예를 들면 동식물유, 광물유, 에스테르유, 왁스류, 고급 알코올류, 지방산류, 실리콘 오일, 계면활성제, 인지질류, 알코올류, 다가 알코올류, 수용성 고분자류, 점토광물류, 정제수 등의 원료를 들 수 있고, 추가로 필요에 따라 pH 조정제, 항산화제, 킬레이트제, 방부·방곰팡이제, 착색료, 향료 등을 첨가할 수 있으나, 본 발명의 외용제의 기제 원료는 이들에 한정되지 않는다.
또한 필요에 따라 분화 유도작용을 갖는 성분, 혈류촉진제, 살균제, 소염제, 세포부활제, 비타민류, 아미노산, 보습제, 각질 용해제 등의 성분을 배합하는 것도 가능하다. 또한 상기 기제 원료의 첨가량은 통상 외용제의 제조에 있어서 설정되는 농도가 되는 양이다.
본 발명에 있어서의 FGFR 저해 활성을 갖는 화합물을 환자에게 투여하기 위한 항암제(암 치료용 의약 조성물)는 그 투여형태는 특별히 한정되지 않고, 통상 사용되는 방법에 의해 경구 투여여도 되고 비경구 투여여도 된다. 예를 들면 정제, 산제, 과립제, 캡슐제, 시럽제, 트로키제, 흡입제, 좌제, 주사제, 연고제, 안연고제, 점안제, 점비제, 점이제, 파프제, 로션제 등의 제로서 제제화하여 투여할 수 있다.
본 발명에 있어서의 항암제 또는 암 치료용 의약 조성물에 함유되는 FGFR 저해제의 용량은 증상의 정도, 연령, 성별, 체중, 투여형태·염의 종류, 질환의 구체적인 종류 등에 따라 적절하게 선택할 수 있다.
상기 용량은 환자의 질환의 종류, 증상의 정도, 환자의 연령, 성차, 약제에 대한 감수성차 등에 따라 현저히 다르나, 통상 성인으로서 1일당 약 0.03-1,000 ㎎, 바람직하게는 0.1-500 ㎎, 더욱 바람직하게는 0.1-100 ㎎을 1일 1~수 회로 나누어 투여한다. 주사제의 경우는 통상 약 1 ㎍/㎏~3,000 ㎍/㎏이고, 바람직하게는 약 3 ㎍/㎏~1,000 ㎍/㎏이다.
본 발명은 또한 전술한 FGFR 저해 활성을 갖는 화합물이 본 발명의 융합 폴리펩티드를 발현하거나 또는 그 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드를 갖는 환자에게 투여되도록 사용되는 것을 특징으로 하는, 상기 화합물을 함유하는 암 치료용 의약 조성물에 관한 것이다.
본 발명은 또한 전술한 FGFR 저해 활성을 갖는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염의 유효량을 상기 융합 폴리펩티드를 발현 또는 상기 폴리뉴클레오티드를 갖는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 암의 치료 또는 예방방법, 상기 융합 폴리펩티드를 발현 또는 상기 폴리뉴클레오티드를 갖는 환자에게 투여하기 위한 암 치료용 의약 조성물의 제조에 있어서의 FGFR 저해 활성을 갖는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염의 사용, 상기 융합 폴리펩티드를 발현 또는 상기 폴리뉴클레오티드를 갖는 환자의 치료 또는 예방에 있어서의 사용을 위한 FGFR 저해 활성을 갖는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염 등에 관한 것이다.
구체적으로는 환자가 전술한 FGFR 저해제를 포함하는 항암제에 의한 투여를 받기 전에 본 발명의 융합 폴리펩티드를 바이오마커로서 이용함으로써, 그 환자가 당해 융합 폴리펩티드를 발현하고 있는지 또는 그 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드를 갖는지 여부를 시험하여, 당해 융합 폴리펩티드를 발현하고 있거나 또는 그 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드를 갖는 경우만 상기 FGFR 저해제를 포함하는 항암제를 그 환자에게 투여하도록 사용되는 것을 특징으로 하는 것이다. 이것에 의해 상기 약제에 의한 치료에 있어서의 부작용의 발현을 미연에 방지하며, 또한 최선의 치료 효과가 얻어지도록 치료 태양을 컨트롤하는 것이 가능하여 개별화 의료(personalized medicine)가 가능해진다.
본 발명에 있어서는 특히 방광암의 경우, 방광암의 병기 분류가 스테이지 3 이상으로 진행되면 본 발명의 융합 유전자가 현저하게 발현하는 것을 발견하였다.
방광암의 병기 분류란 구체적으로는 TNM 병기 분류로서 분류된다. TNM 병기 분류는 종양의 진행도를 나타내는 T 인자(tumor의 이니셜), 종양의 림프절 전이의 유무를 나타내는 N 인자(lymph node의 node의 이니셜) 및 림프절 전이 이외의 원격 전이의 유무를 나타내는 M 인자(metastasis의 이니셜)로 구성된다. 그 중에서 종양이 상피하 결합 조직까지 침윤되어 있는 것까지는 스테이지 1로 분류되고, 종양이 고유 근층에까지 침윤되어 있는 것은 스테이지 2로 분류되며, 종양이 방광 주위 지방 조직까지 침윤되어 있는 것부터 종양이 전립선 간질, 자궁, 질 중 어느 하나에 침윤되어 있는 것까지는 스테이지 3으로 분류되고, 종양이 골반벽, 부벽 중 어느 하나에 침윤되어 있거나, 림프절 전이나 원격 전이가 확인되는 것은 스테이지 4로 분류되고 있다.
또한 상기 환자가 본 발명의 융합 폴리펩티드를 발현하고 있거나 또는 그 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드를 갖는지 여부의 시험은 전술한 본 발명의 방법을 사용하여 행할 수 있다.
본 발명은 또한 FGFR 저해 활성을 갖는 화합물을 동정하는 방법에 관한 것이다.
본 발명의 FGFR 저해 활성을 갖는 화합물을 동정하는 방법은, 구체적으로는 아래의 공정을 포함하는 방법을 들 수 있다.
(a) 피검 화합물의 존재하 및 부존재하에서 전술한 본 발명의 융합 폴리펩티드를 발현하는 세포를 각각 배양하여 세포의 증식 레벨을 결정하는 공정；
(b) 피검 화합물의 존재하에서 상기 세포를 배양한 경우의 세포의 증식 레벨을 피검 화합물의 부존재하에서 상기 세포를 배양한 경우의 세포의 증식 레벨과 비교하는 공정；및
(c) 피검 화합물의 존재하에서 상기 세포를 배양한 경우의 세포의 증식 레벨이 피검 화합물의 부존재하에서 상기 세포를 배양한 경우의 세포의 증식 레벨보다 낮은 경우는 상기 피검 화합물이 FGFR 저해 활성을 갖는 것으로 판정하는 공정.
이 방법에서 사용되는 세포는 본 발명의 융합 폴리펩티드를 발현하는 세포라면 생세포, 주화된 세포 또는 재조합 세포의 어느 것이어도 된다. 상기 재조합 세포에는 전술한 본 발명의 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드를 함유하는 벡터가 도입된 재조합 세포를 들 수 있다.
또한 상기 생세포는 암 환자로부터 채취된 세포를 들 수 있고, 그 주화된 세포는 암 환자로부터 채취된 암세포로부터 수립된 암세포주를 들 수 있다.
또한 본 발명에 있어서의 암에는 전술한 바와 같은 임의의 암이 포함된다.
본 발명의 FGFR 저해 활성을 갖는 화합물을 동정하는 방법은 또한 아래의 공정을 포함하는 방법을 들 수 있다.
(a)　전술한 본 발명의 융합 폴리펩티드를 발현하는 세포를 이식받은 비인간 포유동물에게 피검 화합물을 투여하여 상기 세포의 증식 레벨을 결정하는 공정；
(b)　공정 (a)에서 결정된 세포의 증식 레벨을 상기 피검 화합물의 투여를 받지 않은 상기 세포를 이식받은 비인간 포유동물에 있어서 결정된 상기 세포의 세포 증식 레벨과 비교하는 공정；및
(c)　공정 (a)에서 결정된 세포의 증식 레벨이 상기 피검 화합물의 투여를 받지 않은 상기 세포를 이식받은 비인간 포유동물에 있어서 결정된 상기 세포의 세포 증식 레벨보다 낮은 경우는 상기 피검 화합물이 FGFR 저해 활성을 갖는 것으로 판정하는 공정.
이 방법에서 사용되는 세포는 본 발명의 융합 폴리펩티드를 발현하는 세포라면 생세포, 주화된 세포 또는 재조합 세포의 어느 것이어도 된다. 그 재조합 세포에는 전술한 본 발명의 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드를 함유하는 벡터가 도입된 재조합 세포를 들 수 있다.
또한 상기 생세포는 암 환자로부터 채취된 세포를 들 수 있고, 그 주화된 세포는 암 환자로부터 채취된 암세포로부터 수립된 암세포주를 들 수 있다.
또한 본 발명에 있어서의 암에는 전술한 바와 같은 임의의 암이 포함된다.
본 발명의 방법에 있어서는 세포의 증식 레벨은, 예를 들면 색소(MTT, XTT, MTS, WST 등)를 포르마잔 색소(자색)로 환원하는 효소 활성을 측정하는 비색정량법을 사용하여 통상의 방법에 의해 시험할 수 있다.
또한 상기 세포의 증식 레벨은 상기 세포가 암세포인 경우에는, 세포 증식의 결과 형성되는 종양의 크기 또는 중량을 측정하는 것에 의해서도 결정할 수 있다.
본 발명의 FGFR 저해 활성을 갖는 화합물을 동정하는 방법은 또한 리포터 유전자 어세이(reporter gene assay)를 이용하는 태양이 포함된다.
리포터 유전자로서는 범용되고 있는 임의의 형광 단백질을 코드하는 유전자가 포함되고, 예를 들면 평면해파리(Aequorea coerulescens) 유래의 녹색 형광 단백질 GFP, 바다팬지(Renilla reniformis) 등에 유래하는 루시페라아제, 조초산호 유래의 RCFPs(Reef Coral Fluorescent Proteins), 후르츠 형광 단백질 및 그들의 개변체 등을 들 수 있다.
본 발명에 있어서의 리포터 유전자 어세이는 예를 들면 다음과 같이 실시할 수 있다.
본 발명의 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드와 리포터 단백을 코드하는 유전자를, 상기 융합 폴리펩티드 코딩 폴리뉴클레오티드의 mRNA로의 전사 시그널에 의존하여 상기 리포터 단백을 코드하는 유전자의 mRNA로의 전사가 일어나도록 삽입한 발현 벡터로, 유전자 재조합 단백의 제조에서 일반적으로 사용되는 세포를 형질전환하여 유전자 재조합 세포를 제작한다. 얻어진 형질전환 세포에 피험 화합물을 접촉시킨다. 상기 화합물의 작용에 의존하여 발현되는 상기 융합 폴리펩티드의 레벨을 상기 융합 폴리펩티드의 발현과 동시에 발현되는 상기 리포터 단백이 발하는 형광의 양을 간접적으로 측정함으로써, 상기 화합물이 상기 융합 폴리펩티드의 발현에 영향을 주는지 여부를 분석한다(예를 들면 미국특허 제5,436,128호 및 미국특허 제5,401,629호 등).
또한 본 어세이를 사용한 상기 화합물의 동정은 매뉴얼 작업으로도 가능하나, 기계(로봇)를 사용하여 자동으로 행하는 소위 고처리량 스크리닝(High Throughput Screening)(조직 배양 공학, Vol.23, No.13, p.521-524；미국특허 제5,670,113호)을 사용함으로써 신속하고 간편하게 행할 수 있다.
아래에 실시예에 의해 본 발명을 구체적으로 설명한다. 단, 본 발명은 이들 실시예에만 한정되는 것이 아닌 것은 물론이다.
또한 특별히 언급이 없는 경우는, 각각의 시험 공정은 공지의 방법에 따라 실시 가능하다.
또한 시판의 시약이나 키트 등을 사용하는 경우에는 시판품의 지시서에 따라 실시 가능하다.
또한 본 명세서에 있어서 인용된 모든 선행기술문헌은 참조로써 본 명세서에 포함된다.
실시예 1
각종 암세포에 있어서의 FGFR3 와 다른 폴리펩티드의 융합 폴리펩티드의 발현
(1) RNA 해석
4종류의 FGFR3를 발현하는 방광암 유래의 인간 세포주, RT112/84(European Collection of Cell Cultures(ECACC)로부터 입수；카탈로그 번호：85061106), RT4(American Type Culture Collection(ATCC)으로부터 입수；카탈로그 번호：HTB-2), SW780(ATCC로부터 입수；카탈로그 번호：CRL-2169), BFTC-905(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH(DSMZ)로부터 입수；카탈로그 번호：ACC 361)의 각각으로부터 miRNeasy Mini Kit(QIAGEN사)에 의해 RNA를 추출해서 HiSeqTM Sequencing system(Illumina사)의 Paired-end reads(Read Length：2×75 bp)를 사용하여 서열 해석을 행하였다.
얻어진 염기서열을 기존의 방법(Maher et al., PNAS, July 28, 2009, 106(30)：12353-12358)을 참고로 Refseq transcript에 매핑하여 쌍으로 상이한 유전자에 매핑되는 염기서열을 찾음으로써 융합 유전자 후보를 탐색하였다. 또한 Refseq transcript에 매핑되지 않고 쌍의 다른 한쪽이 융합 유전자 후보의 한쪽 에 매핑되는 염기서열을 사용하여 융합 부위를 동정하였다.
그 결과, RT112/84, RT4 및 SW780의 3종류의 방광암 세포에 있어서 각각 FGFR3와 TACC3의 융합 폴리펩티드, FGFR3와 TACC3의 융합 폴리펩티드 및 FGFR3와 BAIAP2L1의 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드가 동정되어 동 융합 폴리펩티드가 발현하고 있는 것이 시사되었다. 한편, BFTC-905 세포에는 FGFR3의 야생형 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드가 확인되었다.
(2) cDNA 해석
FGFR3와 TACC3의 융합 폴리펩티드 및 FGFR3와 BAIAP2L1의 융합 폴리펩티드의 발현이 시사된 3종류의 세포로부터 추출한 실시예 1 (1)에서 사용한 각각의 RNA를 주형으로, 역전사 키트 Transcriptor Universal cDNA Master(Roche사)에 의해 키트에 첨부된 조작 설명서의 프로토콜에 따라 역전사 반응을 행하여 cDNA를 합성하였다.
얻어진 각 cDNA를 주형으로서, 서열번호 1(F3fu-F3：gtgcacaacctcgactactacaag) 및 서열번호 2(RT112-R3：gtaatcctccacgcacttcttc)로 표시되는 염기서열로 이루어지는 한쌍의 올리고뉴클레오티드 프라이머(세트 1), 서열번호 1(F3fu-F3：gtgcacaacctcgactactacaag) 및 서열번호 5(RT4-R3：gggtgtcactcttctgtctaagga)로 표시되는 염기서열로 이루어지는 한쌍의 올리고뉴클레오티드 프라이머(세트 2), 그리고 서열번호 3(F3fu-F2：tgtttgaccgagtctacactcacc) 및 서열번호 4(SW780-R2：gacatgtcccagttcagttgac)로 표시되는 염기서열로 이루어지는 한쌍의 올리고뉴클레오티드 프라이머(세트 3)를 각각 사용하고 DNA 폴리머라아제 KOD-Plus-Ver.2(도요보)를 사용해서 PCR(94℃ 15초, 55℃ 30초, 68℃ 1분을 35 사이클)을 행하고, 전기영동을 행하였다.
그 결과, 프라이머 세트 1에서는 RT112/84의 RNA로부터 합성한 cDNA를 주형으로 한 경우에만 약 670 bp의 밴드가 확인되었다. 프라이머 세트 2를 사용한 증폭에서는 RT4의 RNA로부터 합성한 cDNA를 주형으로 한 경우에만 약 610 bp의 밴드가 확인되었다. 프라이머 세트 3을 사용한 증폭에 있어서는 SW780의 RNA로부터 합성한 cDNA를 주형으로 한 경우만 약 450 bp의 밴드가 확인되었다.
각 PCR 산물을 주형으로서 생어(Sanger) 시퀀스법에 의해 BigDyeTM Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit(라이프 테크놀로지사)를 사용하여, RT112/84에 발현하고 있는 FGFR3와 TACC3의 융합 폴리뉴클레오티드의 접합 부위의 염기서열 14(FGFR3-TACC3 폴리뉴클레오티드 v1), RT4에 발현하고 있는 FGFR3와 TACC3의 융합 폴리뉴클레오티드의 접합 부위의 염기서열 15(FGFR3-TACC3 폴리뉴클레오티드 v2), SW780에 발현하고 있는 FGFR3와 BAIAP2L1의 융합 폴리뉴클레오티드의 접합 부위의 염기서열 16(FGFR3-BAIAP2L1 폴리뉴클레오티드)의 서열을 동정하였다.
상기에서 얻어진 정보를 토대로, 통상의 방법에 따라 각각의 융합 폴리펩티드(전장)를 코드하는 cDNA의 염기서열을 결정하였다.
RT112/84에 발현하고 있는 FGFR3와 TACC3의 융합 폴리펩티드(전장)를 코드하는 cDNA의 염기서열 및 그의 아미노산 서열을 각각 서열번호 27 및 서열번호 28에 나타낸다.
RT4에 발현하고 있는 FGFR3와 TACC3의 융합 폴리펩티드(전장)를 코드하는 cDNA의 염기서열 및 그의 아미노산 서열을 각각 서열번호 29 및 서열번호 30에 나타낸다.
상기 cDNA의 염기서열의 해석 결과, 서열번호 29의 제2,281~2,379번째의 염기서열은 FGFR3를 코드하는 유전자의 인트론에 유래하는 핵산 서열로서, 서열번호 30의 제761~793번째의 아미노산 서열을 코드하고 있었다.
SW780에 발현하고 있는 FGFR3와 BAIAP2L1의 융합 폴리펩티드(전장)를 코드하는 cDNA의 염기서열 및 그의 아미노산 서열을 각각 서열번호 31 및 서열번호 32에 나타낸다.
전술한 바와 같이, 인간 FGFR3는 각각 서열번호 6 및 서열번호 7로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 2종류의 야생형 폴리펩티드가 존재하는 바, 이들 융합 폴리펩티드에 있어서의 N 말단 측의 FGFR3 유래의 부분은 서열번호 6으로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 야생형 FGFR3에 유래하는 것이었다.
이들 시험 결과에 기초하면, 인간 유래의 각종 암세포에는 서열번호 7로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 또 하나의 야생형 FGFR3와 TACC3의 2종류의 융합 폴리펩티드, 및 서열번호 7로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 또 하나의 야생형 FGFR3와 BAIAP2L1의 융합 폴리펩티드가 발현하고 있는 것이 추정된다.
서열번호 7로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 야생형 FGFR3와 TACC3의 하나의 융합 폴리펩티드(전장)를 코드하는 cDNA의 염기서열 및 그의 아미노산 서열을 각각 서열번호 33 및 서열번호 34에 나타낸다.
서열번호 7로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 야생형 FGFR3와 TACC3의 다른 하나의 융합 폴리펩티드(전장)를 코드하는 cDNA의 염기서열 및 그의 아미노산 서열을 각각 서열번호 35 및 서열번호 36에 나타낸다.
여기서 상기 cDNA의 염기서열의 서열번호 35의 제2,275~2,373번째의 염기서열은 FGFR3를 코드하는 유전자의 인트론에 유래하는 핵산 서열로서, 서열번호 36의 제759~791번째의 아미노산 서열을 코드하고 있다.
서열번호 7로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 야생형 FGFR3와 BAIAP2L1의 다른 하나의 융합 폴리펩티드(전장)를 코드하는 cDNA의 염기서열 및 그의 아미노산 서열을 각각 서열번호 37 및 서열번호 38에 나타낸다.
또한 FGFR3-TACC3 융합 폴리뉴클레오티드의 존재가 두경부 편평상피암, 폐선암 및 폐 편평상피암에서도 유추되고, FGFR3-BAIAP2L1 융합 폴리뉴클레오티드의 존재가 두경부 편평상피암, 폐 편평상피암 및 피부 흑색종에서 유추되었다.
실시예 2
각종 FGFR 저해제의 FGFR1 , FGFR2 및 FGFR3 의 키나아제 효소 활성을 저해하는 활성 및 FGFR3 - TACC3 융합 폴리펩티드를 발현하는 세포주의 세포 증식 저해 작용의 해석
1. 각종 FGFR 저해제의 FGFR1 , FGFR2 및 FGFR3 의 키나아제 효소 활성을 저해하는 활성의 해석( in vitro )
(1) FGFR1 엔자임의 저해 활성
표 1-1~표 1-5에 기재되는 화합물의 FGFR1 저해 활성을 인간 FGFR1 엔자임(카르나 바이오사이언스사 제조 cat 08-133)을 사용하여 비오틴화 펩티드(EGPWLEEEEEAYGWMDF；서열번호 39)의 인산화 반응의 저해 활성에 의해 측정하였다. 인산화 비오틴화 펩티드의 검출은 유로퓸 크립테이트를 결합시킨 항인산화 티로신 항체 및 알로피코시아닌의 유도체인 XL665를 결합시킨 스트렙트아비딘을 사용한 시간 분해 형광 측정법으로 행하여, 피검 물질을 포함하지 않는 대조군에 대한 저해율로부터 50% 저해 농도(IC50값)를 산출하였다.
각 화합물에 대한 시험 결과를 표 1-1~표 1-5에 나타내었다.
(2) FGFR2 엔자임의 저해 활성
표 1-1~표 1-5에 기재되는 화합물의 FGFR2 저해 활성을 배큘로바이러스(baculovirus) 발현 시스템으로 조제한 인간 FGFR2 엔자임을 사용하여 비오틴화 펩티드(EGPWLEEEEEAYGWMDF；서열번호 39)의 인산화 반응의 저해 활성에 의해 측정하였다. 인산화 비오틴화 펩티드의 검출은 유로퓸 크립테이트를 결합시킨 항인산화 티로신 항체 및 알로피코시아닌의 유도체인 XL665를 결합시킨 스트렙트아비딘을 사용한 시간 분해 형광 측정법으로 행하여, 피검 물질을 포함하지 않는 대조군에 대한 저해율로부터 50% 저해 농도(IC50값)를 산출하였다.
각 화합물에 대한 시험 결과를 표 1-1~표 1-5에 나타내었다.
(3) FGFR3 엔자임의 저해 활성
표 1-1~표 1-5에 기재되는 화합물의 FGFR3 저해 활성을 인간 FGFR3 엔자임(카르나 바이오사이언스사 제조 cat 08-135)을 사용하여 비오틴화 펩티드(EGPWLEEEEEAYGWMDF；서열번호 39)의 인산화 반응의 저해 활성에 의해 측정하였다. 인산화 비오틴화 펩티드의 검출은 유로퓸 크립테이트를 결합시킨 항인산화 티로신 항체 및 알로피코시아닌의 유도체인 XL665를 결합시킨 스트렙트아비딘을 사용한 시간 분해 형광 측정법으로 행하여, 피검 물질을 포함하지 않는 대조군에 대한 저해율로부터 50% 저해 농도(IC50값)를 산출하였다.
각 화합물에 대한 시험 결과를 표 1-1~표 1-5에 나타내었다.
(4) 세포주에 대한 FGFR 저해제의 세포 증식 저해 작용( in vitro )
96웰 플레이트에 파종한 FGFR3-TACC3 융합 폴리펩티드를 발현하는 방광암 유래의 세포주 RT-4 세포와 FGFR3 융합 폴리펩티드를 발현하지 않는 대장암 유래의 세포주 HCT116의 각각을 50 μM를 최대 농도로서 2배씩 18단계 희석한 표 1-1~표 1-5에 기재되는 각 화합물 및 DMSO(대조로서 사용)를 첨가한 상태에서 4일간 배양하였다. 4일간 경과 후의 세포 증식을 WST-8(도진도 래보라토리즈)에 의해 계측하였다.
각 세포에 대한 각 화합물의 세포 증식 저해 활성은 각 농도의 화합물을 첨가하여 세포를 배양한 웰의 450 nM의 흡광도의 값을 T, DMSO를 첨가하여 세포를 배양했을 때의 450 nM의 흡광도의 값을 C로 했을 때 (1-T/C)×100(%)으로 산출하고, IC50은 최소제곱법에 의해 산출하였다.
그 결과, 표 1-1~표 1-5에 나타내는 바와 같이, 상기 융합 폴리펩티드를 발현하는 세포의 세포 증식 50% 저해 농도(IC50)는 상기 융합 폴리펩티드를 발현하지 않는 세포의 IC50에 비해 유의하게 저하되었다.
[표 1-1]
Figure pct00037
[표 1-2]
Figure pct00038
[표 1-3]
Figure pct00039
[표 1-4]
Figure pct00040
[표 1-5]
Figure pct00041
실시예 3
FGFR3 - TACC3 융합 폴리펩티드 또는 FGFR3 - BAIAP2L1 융합 폴리펩티드를 발현하는 각종 세포주에 대한 FGFR 저해제의 세포 증식 저해 작용의 해석
(1) 각종 세포주에 대한 FGFR 저해제의 세포 증식 저해 작용( in vitro )
FGFR3-TACC3 융합 폴리펩티드 또는 FGFR3-BAIAP2L1 융합 폴리펩티드를 발현하는 방광암 유래의 3종류의 인간 세포주, RT112/84(ECACC로부터 입수；카탈로그 번호：85061106), RT4(ATCC로부터 입수；카탈로그 번호：HTB-2) 및 SW780(ATCC로부터 입수；카탈로그 번호：CRL-2169), 및 FGFR 야생형 폴리펩티드를 발현하고 상기 융합 폴리펩티드를 발현하지 않는 세포주인 BFTC-905(DSMZ로부터 입수；카탈로그 번호：ACC 361), FGFR 변이형 폴리펩티드를 발현하고 상기 융합 폴리펩티드를 발현하지 않는 세포주인 UM-UC-14(ECACC로부터 입수；카탈로그 번호：08090509), 추가로 FGFR3를 발현하지 않는 세포주인 HT-1376(ATCC로부터 입수；카탈로그 번호：CRL-1472)의 합계 6종류의 세포에 대해 FGFR의 키나아제 활성을 억제하는 물질인 6종의 화합물 A~F(표 2-1 및 2-2)를 첨가하여 세포 증식에 대한 영향을 검토하였다.
96웰 플레이트에 파종한 각 세포(RT112/84, BFTC-905 및 UM-UC-14는 3.0E+03 cells/well. SW780, RT4 및 HT-1376은 5.0E+03 cells/well을 파종)에 대해 20 μM를 최대 농도로서 3배씩 9단계 희석한 각 화합물 및 DMSO(대조로서 사용)를 첨가한 상태에서 4일간 배양하였다. 4일간 경과 후의 세포 증식을 WST-8(도진도 래보라토리즈)에 의해 계측하였다.
각 세포에 대한 각 화합물의 세포 증식 저해 활성은 각 농도의 화합물을 첨가하여 세포를 배양한 웰의 450 nM의 흡광도의 값을 T, DMSO를 첨가하여 세포를 배양했을 때의 450 nM의 흡광도의 값을 C로 했을 때 (1-T/C)×100(%)으로 산출하고, IC50은 최소제곱법에 의해 산출하였다.
그 결과, 표 3에 나타내는 바와 같이, 상기 융합 폴리펩티드를 발현하는 세포의 세포 증식 50% 저해 농도(IC50)는 상기 융합 폴리펩티드를 발현하지 않는 세포의 IC50에 비해 유의하게 저하되었다.
[표 2-1]
Figure pct00042
[표 2-2]
Figure pct00043
Figure pct00044
(2) FGFR3 - TACC3 융합 폴리펩티드를 발현하는 세포에 대한 FGFR 저해제의 세포 증식 억제 작용( in vivo )
항종양 효과는 BALB/c 누드 마우스(일본 찰스 리버)에 인간 방광암 세포주 RT112/84(ECACC)의 서혜부 피하에 이식한 담암 마우스(cancer-bearing mice)를 사용하여 시험하였다.
사용한 누드 마우스는 약 1주간의 검역 기간 후, 약 1×107개의 RT112/84 세포가 서혜부 피하에 이식되었다. 종양의 크기가 약 200 ㎣가 된 시점에서의 마우스를 당해 실험에 제공하였다.
화합물 A를 10% DMSO, 10% Cremophor EL, 15% PEG400 및 15% HPCD를 포함하는 용액에 현탁하여, 20 mL/㎏의 투여 용량으로 경구로 1일 1회 매일 마우스에게 투여하였다.
항종양 효과는 투여 개시로부터 11일 후(투여 개시일을 0으로 하면 10일째)에 있어서의 종양 증식을 대조군에 있어서의 종양 증식과 비교함으로써 산출하였다.
종양 증식 억제 효과 (TGI)=(1-약제 처리군의 종양 증식량의 평균값/대조군의 종양 증식량의 평균값)×100　(%)
결과를 표 4에 나타내었다.
FGFR 저해제는 FGFR3-TACC3 융합 폴리펩티드를 발현하는 종양 세포를 담지하는 마우스에 있어서 농도 의존적으로 매우 유의한 종양 증식 억제 활성을 나타내었다.
Figure pct00045
실시예 4
임상 검체에 있어서의 FGFR3 - TACC3 융합 폴리펩티드 및 FGFR3 - BAIAP2L1 융합 폴리펩티드를 각각 코드하는 폴리뉴클레오티드의 검출
(1) FGFR3 - TACC3 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드 v1 의 검출
임상 검체로부터 FGFR3-TACC3 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드 v1의 cDNA를 검출할 목적으로, 방광암에 걸린 환자(20명)로부터 채취한 각각의 방광암 시료 유래의 cDNA(Origene사) 및 RT112/84(ECACC)의 RNA로부터 합성한 cDNA를 기질로 하고, 서열번호 1 및 서열번호 2로 표시되는 염기서열로 이루어지는 올리고뉴클레오티드를 프라이머로 하여, Tks GflexTM DNA Polymerase(다카라 바이오사)를 사용해서 PCR(98℃ 10초, 60℃ 15초, 68℃ 1분을 42 사이클)을 행하고, 사이즈마커 DNA(인비트로겐사)와 함께 증폭된 각 샘플을 전기영동하였다.
그 결과, 도 1에 나타내는 바와 같이, FGFR3-TACC3 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드 v1의 cDNA 단편은 임상 검체로부터는 검출되지 않았다.
(2) FGFR3 - TACC3 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드 v2 의 검출
임상 검체로부터 FGFR3-TACC3 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드 v2의 cDNA를 검출할 목적으로, 방광암에 걸린 환자(20명)로부터 채취한 각각의 방광암 시료 유래의 cDNA(Origene사) 및 RT4(ATCC)의 RNA로부터 합성한 cDNA를 기질로 하고, 서열번호 1 및 서열번호 5로 표시되는 염기서열로 이루어지는 올리고뉴클레오티드를 프라이머로 하여, Tks GflexTM DNA Polymerase(다카라 바이오사)를 사용해서 PCR(98℃ 10초, 60℃ 15초, 68℃ 1분을 42 사이클)을 행하고, 사이즈마커 DNA(인비트로겐사)와 함께 증폭된 각 샘플을 전기영동하였다.
그 결과, 도 2에 나타내는 바와 같이 1예의 증례에 있어서 FGFR3-TACC3 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드 v2의 cDNA 단편이 검출되었다.
이상으로부터, 상기 방법에 의해 방광암 임상 검체 유래의 시료 중의 FGFR3-TACC3 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드 v2의 존재를 검출하는 것이 가능하여, FGFR3-TACC3 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드 v2 양성 환자를 선택할 수 있는 것이 나타내어졌다.
(3) FGFR3 - BAIAP2L1 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드의 검출
임상 검체로부터 FGFR3-BAIAP2L1 폴리뉴클레오티드의 cDNA를 검출할 목적으로, 방광암에 걸린 환자(20명)로부터 채취한 각각의 방광암 시료 유래의 cDNA(Origene사) 및 SW780(ATCC)의 RNA로부터 합성한 cDNA를 기질로 하고, 서열번호 3 및 서열번호 4로 표시되는 염기서열로 이루어지는 올리고뉴클레오티드를 프라이머로 하여, Tks GflexTM DNA Polymerase(다카라 바이오사)를 사용해서 PCR(98℃ 10초, 60℃ 15초, 68℃ 1분을 42 사이클)을 행하고, 사이즈마커 DNA(인비트로겐사)와 함께 증폭된 각 샘플을 전기영동하였다.
그 결과, 도 3에 나타내는 바와 같이 합계 2예의 증례에 있어서 FGFR3-BAIAP2L1 융합 폴리뉴클레오티드의 cDNA 단편이 검출되었다.
이상으로부터, 상기 방법에 의해 방광암 임상 검체 유래의 시료 중의 FGFR3-BAIAP2L1 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드의 존재를 검출하는 것이 가능하여, FGFR3-BAIAP2L1 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드 양성 환자를 선택할 수 있는 것이 나타내어졌다.
실시예 5
각종 암의 임상 검체에 있어서의 FGFR3 - BAIAP2L1 융합 폴리펩티드 및 FGFR3 -BAIAP2L1 융합 폴리펩티드 각각을 코드하는 폴리뉴클레오티드의 검출
(1) 폐암(비방광암)의 임상 검체에 있어서의 FGFR3 - BAIAP2L1 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드의 검출(시험 1)
비방광암 임상 검체로부터 FGFR3-BAIAP2L1 폴리뉴클레오티드의 cDNA를 검출할 목적으로, 폐암 임상 검체 유래 cDNA(Origene사) 40 샘플 및 SW780의 RNA로부터 합성한 cDNA를 기질로 하고, 서열번호 3(F3fu-F2：tgtttgaccgagtctacactcacc) 및 서열번호 4(SW780-R2：gacatgtcccagttcagttgac)로 표시되는 염기서열로 이루어지는 한쌍의 올리고뉴클레오티드 프라이머를 각각 사용하여, Tks Gflex(tm) DNA Polymerase(다카라 바이오사)를 사용해서 PCR(98℃ 10초, 60℃ 15초, 68℃ 1분을 42 사이클)을 행하고, 사이즈마커 DNA(인비트로겐사)와 함께 증폭된 각 샘플을 전기영동하였다.
그 결과, 도 4의 A에 나타내는 바와 같이 합계 1예의 증례에 있어서 FGFR3-BAIAP2L1 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드의 cDNA 단편이 검출되었다.
또한 재현성을 확인할 목적으로, 동일한 폐암 임상 검체 유래 cDNA 및 SW780의 RNA로부터 합성한 cDNA를 기질로 하고, 서열번호 17(F3fu-F1：caactgcacacacgacctgta) 및 서열번호 18(SW780-R1：ccatcgtagtaggcttttcctg)로 표시되는 염기서열로 이루어지는 한쌍의 올리고뉴클레오티드 프라이머를 각각 사용하여, Tks Gflex(tm) DNA Polymerase(다카라 바이오사)를 사용해서 PCR(98℃ 10초, 60℃ 15초, 68℃ 1분을 42 사이클)을 행하고, 사이즈마커 DNA(인비트로겐사)와 함께 증폭된 각 샘플을 전기영동하였다.
그 결과, 도 4의 B에 나타내는 바와 같이 합계 1예의 동일 증례에 있어서 FGFR3-BAIAP2L1 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드의 cDNA 단편이 검출되었다. 이 사실로부터 상기 방법에 의해 비방광암 임상 검체 유래의 cDNA 중의 FGFR3-BAIAP2L1 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드의 존재를 복수 종류의 프라이머로 검출하여 FGFR3-BAIAP2L1 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드 양성 환자를 선택할 수 있는 것이 나타내어졌다.
(2) 폐암(비방광암)의 임상 검체에 있어서의 FGFR3 - BAIAP2L1 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드의 검출(시험 2)
폐암 임상 검체 유래 cDNA(Origene사) 83 샘플을 기질로 하고, 서열번호 3(F3fu-F2：tgtttgaccgagtctacactcacc) 및 서열번호 4(SW780-R2：gacatgtcccagttcagttgac)로 표시되는 염기서열로 이루어지는 한쌍의 올리고뉴클레오티드 프라이머(세트 3)를 사용하여, Tks GflexTM DNA Polymerase(다카라 바이오사)에 의해 PCR(98℃ 10초, 60℃ 15초, 68℃ 1분을 35 사이클)을 행하였다. 각 샘플의 DNA 증폭의 유무를 아가로오스 겔 전기영동으로 확인한 바, 2예의 검체에서 목적 사이즈의 DNA 밴드가 검출되어, 이들이 FGFR3-BAIAP2L1 융합 폴리뉴클레오티드 유래의 cDNA 단편 서열인 것이 DNA 시퀀스 해석(생어법)으로 결정되었다. 이 사실로부터, 암 임상 검체 유래의 cDNA 중에 FGFR3-BAIAP2L1 융합 폴리뉴클레오티드가 존재하는 것이 확인되었다.
(3) 폐암, 식도암, 위암 및 간암(모두 비방광암 )의 임상 검체에 있어서의 FGFR3-TACC3 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드의 검출
폐암 임상 검체 유래 cDNA(Origene사) 83 샘플, 식도암 임상 검체 유래 cDNA(Origene사) 18 샘플, 위암 임상 검체 유래 cDNA(Origene사) 5 샘플, 간암 임상 검체 유래 cDNA(Origene사) 5 샘플을 기질로 하고, 서열번호 1(F3fu-F3：gtgcacaacctcgactactacaag) 및 서열번호 2(RT112-R3：gtaatcctccacgcacttcttc)로 표시되는 염기서열로 이루어지는 한쌍의 올리고뉴클레오티드 프라이머(세트 1)를 사용하여, Tks GflexTM DNA Polymerase(다카라 바이오사)에 의해 PCR(98℃ 10초, 60℃ 15초, 68℃ 1분을 35 사이클)을 행하였다. 각 샘플의 DNA 증폭의 유무를 아가로오스 겔 전기영동으로 확인한 바, 폐암 2예, 식도암 2예, 위암 1예, 간암 1예의 검체에서 목적 사이즈의 DNA 밴드가 검출되어, 이들이 FGFR3-TACC3 융합 폴리뉴클레오티드 유래의 cDNA 단편 서열인 것이 DNA 시퀀스 해석(생어법)으로 결정되었다. 이 사실로부터, 각종 암 임상 검체 유래의 cDNA 중에 FGFR3-TACC3 융합 폴리뉴클레오티드가 존재하는 것이 확인되었다.
(4) FISH 법을 사용한 방광암 세포주에 있어서의 FGFR3 - BAIAP2L1 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드의 검출
방광암 세포주에 있어서의 FGFR3-BAIAP2L1 융합 유전자를 형광 인 시튜 하이브리다이제이션(fluorescence in situ hybridization；FISH)법에 의해 검출하는 것을 목적으로, 방광암 세포주 RT112/84 및 SW780의 포르말린 고정 파라핀 포매(FFPE) 샘플에 대해 아래에 나타내는 2개의 프로브 세트를 사용한 실험을 행하였다.
인간 제4번 염색체 상의 FGFR3 유전자의 일부가 다른 염색체로 전좌되어 있는 것을 검출하기 위해 FGFR3 Split Dual Color FISH Probe(Split signal probe 세트, GSP Lab., Inc.)를 사용하고, 또한 인간 제4번 염색체 상의 FGFR3 유전자 및 인간 제7번 염색체 상의 BAIAP2L1 유전자가 동일 염색체 상에 융합되어 있는 것을 검출하기 위해 FGFR3 and BAIAP2L1 FISH Probe(Fusion signal probe 세트, GSP Lab., Inc.)를 사용하여 FISH 분석을 행하였다.
그 결과, 도 5에 나타내는 바와 같이 SW780으로 제작한 FFPE 샘플에 있어서 Split signal probe 세트를 사용한 FISH 분석에 있어서는 2개의 색의 시그널이 떨어진 장소에서 검출되고(도 5의 A2), Fusion signal probe 세트를 사용한 FISH 분석에 있어서는 2개의 색이 융합된 시그널이 검출되는 것을 확인하였다(도 5의 B2). 이 사실로부터 상기 방법에 의해 FGFR3 유전자의 분리 및 FGFR3와 BAIAP2L1 유전자의 융합을 FISH법에 의해 검출 가능한 것이 나타내어졌다.
실시예 6
FGFR3 - TACC3 융합 폴리펩티드 또는 FGFR3 - BAIAP2L1 융합 폴리펩티드를 발현하는 각종 세포주의 평가
(1) 각종 세포주의 FGFR3 의존성의 평가
FGFR3-TACC3 융합 폴리펩티드 또는 FGFR3-BAIAP2L1 융합 폴리펩티드를 발현하는 방광암 유래의 인간 세포주, RT4 및 SW780, FGFR3 변이형 폴리펩티드를 발현하고 상기 융합 폴리펩티드를 발현하지 않는 세포주인 UM-UC-14, 및 FGFR3 야생형 폴리펩티드를 발현하고 상기 융합 폴리펩티드를 발현하지 않는 세포주인 BFTC-905의 합계 4종류의 세포에 대해 FGFR3 및 BAIAP2L1의 각각에 대한 siRNA를 첨가하여 각종 siRNA의 세포 증식에 대한 영향을 검토하였다.
siRNA로서는 ON-TARGETplus siRNA Reagents(Thermo Fisher Scientific사)를 사용하였다.
96웰 플레이트에 파종한 각 세포(UM-UC-14 및 BFTC-905는 1.5E+03 cells/well. SW780 및 RT4는 2.5E+03 cells/well)에 대해 10 nM를 최대 농도로서 10배씩 3단계 희석한 각 siRNA 및 Mock siRNA(대조로서 사용)를 첨가한 상태에서 7일간 배양하였다. 7일간 경과 후의 세포 증식을 CellTiter-GloTM Luminescent Cell Viability Assay(프로메가사)에 의해 계측하였다.
그 결과, 도 6에 나타내는 바와 같이 FGFR3 야생형 폴리펩티드를 발현하고 상기 융합 폴리펩티드를 발현하지 않는 세포는 FGFR3 및 BAIAP2L1의 각각에 대한 siRNA에 의해 그 증식 활성이 저해되지 않았다. 한편, FGFR3 변이형 폴리펩티드를 발현하고 상기 융합 폴리펩티드를 발현하지 않는 세포주 및 FGFR3-TACC3 융합 폴리펩티드를 발현하는 세포는 FGFR3에 대한 siRNA에 의해서만 그의 증식 활성이 저해되었다. 한편, FGFR3-BAIAP2L1 융합 폴리펩티드를 발현하는 세포는 FGFR3 및 BAIAP2L1의 각각에 대한 siRNA의 어느 것에 의해서도 그의 증식이 저해되는 것이 확인되었다.
(2) FGFR3 - BAIAP2L1 융합 폴리펩티드를 발현하는 암세포에 대한 FGFR 저해제에 의한 아포토시스 유도의 평가
FGFR3-BAIAP2L1 융합 폴리펩티드를 발현하는 방광암 유래의 인간 세포주 SW780, FGFR 야생형 폴리펩티드를 발현하고 상기 융합 폴리펩티드를 발현하지 않는 세포주인 BFTC-905, FGFR3 변이형 폴리펩티드를 발현하고 상기 융합 폴리펩티드를 발현하지 않는 세포주인 UM-UC-14, 및 FGFR3를 발현하지 않는 세포주인 HT-1376의 합계 4종류의 세포에 대해 FGFR의 키나아제 활성을 억제하는 물질인 6종의 화합물 A~F(표 2-1 및 표 2-2)의 각각을 첨가하여 아포토시스가 유도되는지 여부를 검토하였다.
PrimeSurfaceTM 96U 플레이트(스미토모 베이클라이트사)에 파종한 각 세포(UM-UC-14 및 BFTC-905는 3.0E+03 cells/well, SW780 및 HT-1376은 5.0E+03 cells/well)에 대해 20 μM를 최대 농도로서 3배씩 4단계 희석한 각 화합물 및 DMSO(대조로서 사용)를 첨가한 상태에서 4일간 배양하였다. 4일간 경과 후의 세포 증식을 CellTiter-GloTM Luminescent Cell Viability Assay(프로메가사)에 의해, 4일간 경과 후의 카스파제 활성(caspase activity)을 Caspase-GloTM 3/7 Assay(프로메가사)에 의해 계측하였다. Caspase-GloTM 3/7로 계측한 1 well 내의 카스파제 활성의 총합을 CellTiter-GloTM 값으로부터 산출한 1 well 내의 상대적 생존 세포 수로 나눈 값을 아포토시스값(Apoptosis value)으로서 산출하고, 각 세포의 아포토시스 유도는 각 세포의 DMSO 첨가 조건하에서 산출된 아포토시스값으로 나눔으로써 평가하였다.
그 결과, 도 7에 나타내는 바와 같이 FGFR 저해제에 감수성을 나타내지 않는 세포는 그의 아포토시스가 저해제에 의해 유도되지 않은 한편, FGFR 저해제에 감수성을 나타내는 세포는 그의 아포토시스가 FGFR 저해제에 의해 유도되는 것이 확인되었다.
(3) FGFR3 - BAIAP2L1 융합 폴리펩티드를 발현하는 세포에 대한 in vivo 에 있어서의 FGFR 저해제의 세포 증식 억제 작용
항종양 효과는 BALB/c 누드 마우스(일본 찰스 리버)에 인간 방광암 세포주 SW780(ATCC)의 서혜부 피하에 이식한 담암 마우스를 사용하여 시험하였다. 사용한 누드 마우스는 약 1주간의 검역 기간 후, 약 5×106개의 SW780 세포가 서혜부 피하에 이식되었다. 종양의 크기가 약 200 ㎣가 된 시점에서의 마우스를 당해 실험에 제공하였다. 화합물 A를 10% DMSO, 10% Cremophor EL, 15% PEG400 및 15% HPCD를 포함하는 용액에 현탁하여 20 mL/㎏의 투여 용량으로, 경구로 1일 1회 매일 마우스에게 투여하였다. 항종양 효과는 투여 개시로부터 11일 후(투여 개시일을 0으로 하면 10일째)에 있어서의 종양 증식을 대조군에 있어서의 종양 증식과 비교함으로써 산출하였다.
종양 증식 억제 효과(TGI)=(1-약제 처리군의 종양 증식량의 평균값/대조군의 종양 증식량의 평균값)×100　(%)
결과를 표 5에 나타내었다. FGFR 저해제는 FGFR3-BAIAP2L1 융합 폴리펩티드를 발현하는 종양 세포를 담지하는 마우스에 있어서 농도 의존적으로 매우 유의한 종양 증식 억제 활성을 나타내었다.
Figure pct00046
실시예 7
FGFR3 - BAIAP2L1 융합 폴리펩티드의 형질전환 능 및 종양형성능 의 검토
(1) FGFR3 - BAIAP2L1 융합 폴리펩티드의 형질전환 능의 평가
FGFR3(서열번호 6)를 코드하는 cDNA(서열번호 10) 및 FGFR3-BAIAP2L1(서열번호 32)을 코드하는 cDNA(서열번호 31)를 각각 렌티바이러스 발현 벡터 pReceiver-Lv156(GeneCopoeia사)에 서브클로닝하여 Lenti-PacTM Lentiviral Packaging Systems(GeneCopoeia사)에 의해 각 폴리펩티드 발현용 렌티바이러스를 제작하였다.
랫트 태아 유래 세포 RAT-2에 각 렌티바이러스를 감염시키고, 셀렉션 마커 퓨로마이신(Puromycin) 첨가 조건하에서 배양하여 FGFR3 폴리펩티드 또는 FGFR3-BAIAP2L1 융합 폴리펩티드를 각각 안정 발현하는 RAT-2 세포를 수립하였다. 수립한 FGFR3-BAIAP2L1 융합 폴리펩티드를 안정 발현하는 세포는 도 8에 나타내는 바와 같이 단층 배양하에 있어서 형태 변화가 관찰되었다.
PrimeSurfaceTM 96U 플레이트(스미토모 베이클라이트사)에 아무 처리도 하지 않은 RAT-2 세포(친세포), FGFR3 폴리펩티드를 안정 발현하는 RAT-2 세포, 및 FGFR3-BAIAP2L1 융합 폴리펩티드를 안정 발현하는 RAT-2 세포를 각각 2.0×103 cells/well로 파종하여 14일간 배양하였다. 14일간 경과 후의 세포를 관찰 촬영한 바, 도 9에 나타내는 바와 같이 FGFR3-BAIAP2L1 융합 폴리펩티드를 안정 발현하는 RAT-2 세포에 있어서만 스캐폴드 비의존적 세포 증식이 항진되고 있는 것이 관찰되었다.
이 사실로부터, FGFR3-BAIAP2L1 융합 폴리펩티드는 정상 세포에 대해 형질전환능을 갖는 것이 확인되었다.
(2) 이량체 화 촉진영역 결손 FGFR3 - BAIAP2L1 융합 폴리펩티드의 형질전환 능의 평가
BAIAP2L1 폴리펩티드(아미노산 서열：서열번호 8/핵산 서열：서열번호 12)의 이량체화 촉진영역인 BAR 도메인을 결손한 FGFR3-BAIAP2L1 ΔBAR을 코드하는 cDNA를 PCR법을 사용한 특정 부위의 돌연변이 유발(Site-Directed Mutagenesis)법에 의해 제작하였다. FGFR3(상기와 동일), FGFR3-BAIAP2L1(상기와 동일) 및 FGFR3-BAIAP2L1 ΔBAR의 각각을 코드하는 cDNA를 pCXND3 벡터(가케츠켄)에 서브클로닝하여 각 폴리펩티드 발현용 벡터를 제작하였다.
인간 태아 신장 세포 293에 pCXND3 벡터(비히클) 또는 각 폴리펩티드 발현용 벡터를 FuGENETM HD Transfection Reagent(프로메가사)를 사용해서 도입하여 1일 후에 Cell Lysis Buffer(Cell Signaling Technology사)에 의해 세포 용해물로서 회수하였다. 각 세포 용해물을 인산화 FGF 수용체(Tyr653/654) 항체(Phospho-FGF Receptor(Tyr653/654) Antibody)(Cell Signaling Technology사) 또는 항FGFR3 항체(Santa Cruz사)를 사용하여 웨스턴 블로팅법으로 해석한 바, 도 10에 나타내는 바와 같이 FGFR3-BAIAP2L1 융합 폴리펩티드에 있어서 항진된 FGFR의 인산화가 BAIAP2L1 폴리펩티드의 이량체화 촉진영역인 BAR 도메인을 결손한 FGFR3-BAIAP2L1 ΔBAR 융합 폴리펩티드에 있어서 감약되어 있는 것이 확인되었다.
또한 상기 시험 (1)과 동일한 방법에 의해 렌티바이러스에 의해 BAIAP2L1 폴리펩티드(상기와 동일) 또는 FGFR3-BAIAP2L1 ΔBAR 융합 폴리펩티드(상기와 동일)를 안정 발현하는 RAT-2 세포를 수립하였다.
PrimeSurfaceTM 96U 플레이트(스미토모 베이클라이트사)에 아무 처리도 하지 않은 RAT-2 세포(친세포), FGFR3 폴리펩티드를 안정 발현하는 RAT-2 세포, BAIAP2L1 폴리펩티드를 안정 발현하는 RAT-2 세포, FGFR3-BAIAP2L1 융합 폴리펩티드를 안정 발현하는 RAT-2 세포, 및 FGFR3-BAIAP2L1 ΔBAR 융합 폴리펩티드를 안정 발현하는 RAT-2 세포를 각각 2.0×103 cells/well로 파종하여 14일간 배양하였다. 14일간 경과 후의 세포 수를 CellTiter-GloTM Luminescent Cell Viability Assay(프로메가사)에 의해 계측하였다. 그 결과, 도 11에 나타내는 바와 같이 BAIAP2L1 폴리펩티드를 안정 발현하는 RAT-2 세포는 스캐폴드 비의존적 증식능을 갖지 않고, FGFR3-BAIAP2L1 ΔBAR 융합 폴리펩티드를 안정 발현하는 RAT-2 세포의 경우에는 FGFR3-BAIAP2L1 융합 폴리펩티드를 안정 발현하는 RAT-2에서 보인 세포 스캐폴드 비의존적 증식능이 상실되어 있는 것이 관찰되었다.
이 사실로부터, FGFR3-BAIAP2L1 융합 폴리펩티드의 정상 세포에 대한 형질전환능이 BAIAP2L1 폴리펩티드가 갖는 이량체화 촉진영역에 의해 FGFR3 폴리펩티드의 트랜스 자기 인산화가 항진된 것에 유래하는 것인 것이 확인되었다.
(3) FGFR3 - BAIAP2L1 융합 폴리펩티드의 종양형성능 의 평가와 FGFR 저해제의 종양 증대 억제 작용
상기 시험 (1) 및 (2)에서 수립한 FGFR3 폴리펩티드, BAIAP2L1 폴리펩티드, FGFR3-BAIAP2L1 융합 폴리펩티드 또는 FGFR3-BAIAP2L1 ΔBAR 융합 폴리펩티드의 각각을 안정 발현하는 RAT-2 세포를 BALB/c 누드 마우스(일본 찰스 리버)의 서혜부 피하에 4.8-5.4×106개씩 접종하여 15일 관찰한 바, 도 12에 나타내는 바와 같이 FGFR3-BAIAP2L1 융합 폴리펩티드를 안정 발현하는 RAT-2 세포를 접종한 마우스에 있어서만 종양의 증대가 확인되었다.
또한 누드 마우스에 FGFR3-BAIAP2L1을 안정 발현하는 RAT-2 세포를 5.04×106개 접종하여 이식 7일 후부터 FGFR 저해제인 화합물 A(상기와 동일)를 10% DMSO, 10% Cremophor EL, 15% PEG400 및 15% HPCD를 포함하는 용액에 현탁하여 20 mL/㎏의 농도로, 경구로 1일 1회 매일 마우스에게 투여한 바, 도 13에 나타내는 바와 같이 FGFR3-BAIAP2L1 융합 폴리펩티드로 항진된 종양의 증대가 FGFR 저해제에 의해 농도 의존적으로 유의하게 억제되는 것이 관찰되었다.
이 사실로부터, FGFR3-BAIAP2L1 융합 폴리펩티드는 매우 강한 종양형성능을 가지며, 이 종양형성능은 FGFR 저해제에 의해 억제되는 것이 확인되었다.
본 발명의 FGFR3 폴리펩티드와 또 다른 하나의 폴리펩티드로 이루어지는 융합 폴리펩티드는 방광암 세포를 비롯한 각종 암세포에 있어서 특이적으로 발현이 보이고, 또한 당해 융합 폴리펩티드를 발현하는 세포는 FGFR 저해 활성을 갖는 화합물에 의해 유의하게 증식이 저해되는 것으로부터, 본 발명의 융합 폴리펩티드를 FGFR 저해제에 의한 암 치료에 있어서의 바이오마커로서 이용함으로써 개개의 환자별로 상기 FGFR 저해제 적용의 적부 및 적용의 태양을 결정할 수 있어, 상기 약제에 의한 치료에 있어서의 부작용의 발현을 미연에 방지하며, 또한 최선의 치료 효과가 얻어지도록 치료 태양을 컨트롤하는 것이 가능하여 개별화 의료(personalized medicine)가 가능해진다.
더 나아가서는, 본 발명의 융합 폴리펩티드를 FGFR을 표적으로 하는 암 치료제, 즉 분자 표적 치료제의 개발에 있어서의 표적으로서 이용함으로써 표적인 암세포에 대한 높은 특이성과 높은 항종양 활성을 구비하는 FGFR 저해제 및 그 저해제를 포함하는 암 치료제를 제공하는 것이 가능해진다.
이렇게 해서 얻어진 FGFR 저해제는 표적인 암세포에 대한 높은 특이성을 구비하는 것으로부터, 부작용이 적고, 또한 높은 항종양 활성을 갖는 암 치료제를 제공하는 것이 가능해진다.
더 나아가서는, 본 발명의 융합 폴리펩티드는 각종 암과 깊은 관련성을 갖는 것으로부터, 암 환자에 한정되지 않고 건강한 정상인을 포함하는 피험자의 시료 중에 있어서 당해 융합 폴리펩티드 또는 그 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드의 존재 여부를 결정함으로써 상기 피험자가 암에 걸리기 쉬운지(암에 대한 감수성), 암에 걸렸는지 또는 암이 진행되었는지 여부에 대해 시험하는 것이 가능해진다.
더 나아가서는, 본 발명의 융합 폴리펩티드는 각종 암과 깊은 관련성을 갖는 것으로부터, 본 발명의 융합 폴리펩티드를 발현하는 세포(암세포 등)에 피검 화합물을 작용시킨 경우와 작용시키지 않는 경우의 각각에 있어서의 상기 세포의 증식 레벨을 비교하여, 상기 세포의 증식 억제를 유도한 피검 화합물을 동정함으로써 FGFR에 대한 높은 특이성을 갖는 FGFR 저해제를 제공하는 것이 가능해진다.
SEQUENCE LISTING <110> CHUGAI SEIYAKU KABUSHIKI KAISHA <120> FGFR3-Fused Genes and Medicament Targeting Them <130> C1-A1210Y1P <150> JP 2012-214739 <151> 2012-09-27 <150> JP 2013-149217 <151> 2013-07-18 <160> 39 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized primer sequence <400> 1 gtgcacaacc tcgactacta caag 24 <210> 2 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized primer sequence <400> 2 gtaatcctcc acgcacttct tc 22 <210> 3 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized primer sequence <400> 3 tgtttgaccg agtctacact cacc 24 <210> 4 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized primer sequence <400> 4 gacatgtccc agttcagttg ac 22 <210> 5 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized primer sequence <400> 5 gggtgtcact cttctgtcta agga 24 <210> 6 <211> 808 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6 Met Gly Ala Pro Ala Cys Ala Leu Ala Leu Cys Val Ala Val Ala Ile 1 5 10 15 Val Ala Gly Ala Ser Ser Glu Ser Leu Gly Thr Glu Gln Arg Val Val 20 25 30 Gly Arg Ala Ala Glu Val Pro Gly Pro Glu Pro Gly Gln Gln Glu Gln 35 40 45 Leu Val Phe Gly Ser Gly Asp Ala Val Glu Leu Ser Cys Pro Pro Pro 50 55 60 Gly Gly Gly Pro Met Gly Pro Thr Val Trp Val Lys Asp Gly Thr Gly 65 70 75 80 Leu Val Pro Ser Glu Arg Val Leu Val Gly Pro Gln Arg Leu Gln Val 85 90 95 Leu Asn Ala Ser His Glu Asp Ser Gly Ala Tyr Ser Cys Arg Gln Arg 100 105 110 Leu Thr Gln Arg Val Leu Cys His Phe Ser Val Arg Val Thr Asp Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Gly Asp Asp Glu Asp Gly Glu Asp Glu Ala Glu Asp Thr 130 135 140 Gly Val Asp Thr Gly Ala Pro Tyr Trp Thr Arg Pro Glu Arg Met Asp 145 150 155 160 Lys Lys Leu Leu Ala Val Pro Ala Ala Asn Thr Val Arg Phe Arg Cys 165 170 175 Pro Ala Ala Gly Asn Pro Thr Pro Ser Ile Ser Trp Leu Lys Asn Gly 180 185 190 Arg Glu Phe Arg Gly Glu His Arg Ile Gly Gly Ile Lys Leu Arg His 195 200 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415 Ser Arg Phe Pro Leu Lys Arg Gln Val Ser Leu Glu Ser Asn Ala Ser 420 425 430 Met Ser Ser Asn Thr Pro Leu Val Arg Ile Ala Arg Leu Ser Ser Gly 435 440 445 Glu Gly Pro Thr Leu Ala Asn Val Ser Glu Leu Glu Leu Pro Ala Asp 450 455 460 Pro Lys Trp Glu Leu Ser Arg Ala Arg Leu Thr Leu Gly Lys Pro Leu 465 470 475 480 Gly Glu Gly Cys Phe Gly Gln Val Val Met Ala Glu Ala Ile Gly Ile 485 490 495 Asp Lys Asp Arg Ala Ala Lys Pro Val Thr Val Ala Val Lys Met Leu 500 505 510 Lys Asp Asp Ala Thr Asp Lys Asp Leu Ser Asp Leu Val Ser Glu Met 515 520 525 Glu Met Met Lys Met Ile Gly Lys His Lys Asn Ile Ile Asn Leu Leu 530 535 540 Gly Ala Cys Thr Gln Gly Gly Pro Leu Tyr Val Leu Val Glu Tyr Ala 545 550 555 560 Ala Lys Gly Asn Leu Arg Glu Phe Leu Arg Ala Arg Arg Pro Pro Gly 565 570 575 Leu Asp Tyr Ser Phe Asp Thr Cys Lys Pro Pro Glu Glu Gln Leu Thr 580 585 590 Phe Lys Asp Leu Val Ser Cys Ala Tyr Gln Val Ala Arg Gly Met Glu 595 600 605 Tyr Leu Ala Ser Gln Lys Cys Ile His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn 610 615 620 Val Leu Val Thr Glu Asp Asn Val Met Lys Ile Ala Asp Phe Gly Leu 625 630 635 640 Ala Arg Asp Val His Asn Leu Asp Tyr Tyr Lys Lys Thr Thr Asn Gly 645 650 655 Arg Leu Pro Val Lys Trp Met Ala Pro Glu Ala Leu Phe Asp Arg Val 660 665 670 Tyr Thr His Gln Ser Asp Val Trp Ser Phe Gly Val Leu Leu Trp Glu 675 680 685 Ile Phe Thr Leu Gly Gly Ser Pro Tyr Pro Gly Ile Pro Val Glu Glu 690 695 700 Leu Phe Lys Leu Leu Lys Glu Gly His Arg Met Asp Lys Pro Ala Asn 705 710 715 720 Cys Thr His Asp Leu Tyr Met Ile Met Arg Glu Cys Trp His Ala Ala 725 730 735 Pro Ser Gln Arg Pro Thr Phe Lys Gln Leu Val Glu Asp Leu Asp Arg 740 745 750 Val Leu Thr Val Thr Ser Thr Asp Glu Tyr Leu Asp Leu Ser Ala Pro 755 760 765 Phe Glu Gln Tyr Ser Pro Gly Gly Gln Asp Thr Pro Ser Ser Ser Ser 770 775 780 Ser Gly Asp Asp Ser Val Phe Ala His Asp Leu Leu Pro Pro Ala Pro 785 790 795 800 Pro Ser Ser Gly Gly Ser Arg Thr 805 <210> 7 <211> 806 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 7 Met Gly Ala Pro Ala Cys Ala Leu Ala Leu Cys Val Ala Val Ala Ile 1 5 10 15 Val Ala Gly Ala Ser Ser Glu Ser Leu Gly Thr Glu Gln Arg Val Val 20 25 30 Gly Arg Ala Ala Glu Val Pro Gly Pro Glu Pro Gly Gln Gln Glu Gln 35 40 45 Leu Val Phe Gly Ser Gly Asp Ala Val Glu Leu Ser Cys Pro Pro Pro 50 55 60 Gly Gly Gly Pro Met Gly Pro Thr Val Trp Val Lys Asp Gly Thr Gly 65 70 75 80 Leu Val Pro Ser Glu Arg Val Leu Val Gly Pro Gln Arg Leu Gln Val 85 90 95 Leu Asn Ala Ser His Glu Asp Ser Gly Ala Tyr Ser Cys Arg Gln Arg 100 105 110 Leu Thr Gln Arg Val Leu Cys His Phe Ser Val Arg Val Thr Asp Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Gly Asp Asp Glu Asp Gly Glu Asp Glu Ala Glu Asp Thr 130 135 140 Gly Val Asp Thr Gly Ala Pro Tyr Trp Thr Arg Pro Glu Arg Met Asp 145 150 155 160 Lys Lys Leu Leu Ala Val Pro Ala Ala Asn Thr Val Arg Phe Arg Cys 165 170 175 Pro Ala Ala Gly Asn Pro Thr Pro Ser Ile Ser Trp Leu Lys Asn Gly 180 185 190 Arg Glu Phe Arg Gly Glu His Arg Ile Gly Gly Ile Lys Leu Arg His 195 200 205 Gln Gln Trp Ser Leu Val Met Glu Ser Val Val Pro Ser Asp Arg Gly 210 215 220 Asn Tyr Thr Cys Val Val Glu Asn Lys Phe Gly Ser Ile Arg Gln Thr 225 230 235 240 Tyr Thr Leu Asp Val Leu Glu Arg Ser Pro His Arg Pro Ile Leu Gln 245 250 255 Ala Gly Leu Pro Ala Asn Gln Thr Ala Val Leu Gly Ser Asp Val Glu 260 265 270 Phe His Cys Lys Val Tyr Ser Asp Ala Gln Pro His Ile Gln Trp Leu 275 280 285 Lys His Val Glu Val Asn Gly Ser Lys Val Gly Pro Asp Gly Thr Pro 290 295 300 Tyr Val Thr Val Leu Lys Thr Ala Gly Ala Asn Thr Thr Asp Lys Glu 305 310 315 320 Leu Glu Val Leu Ser Leu His Asn Val Thr Phe Glu Asp Ala Gly Glu 325 330 335 Tyr Thr Cys Leu Ala Gly Asn Ser Ile Gly Phe Ser His His Ser Ala 340 345 350 Trp Leu Val Val Leu Pro Ala Glu Glu Glu Leu Val Glu Ala Asp Glu 355 360 365 Ala Gly Ser Val Tyr Ala Gly Ile Leu Ser Tyr Gly Val Gly Phe Phe 370 375 380 Leu Phe Ile Leu Val Val Ala Ala Val Thr Leu Cys Arg Leu Arg Ser 385 390 395 400 Pro Pro Lys Lys Gly Leu Gly Ser Pro Thr Val His Lys Ile Ser Arg 405 410 415 Phe Pro Leu Lys Arg Gln Val Ser Leu Glu Ser Asn Ala Ser Met Ser 420 425 430 Ser 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Gly Lys Asn Tyr Glu Lys Ala Val Asn Ala Met Ile Leu Ala Gly 35 40 45 Lys Ala Tyr Tyr Asp Gly Val Ala Lys Ile Gly Glu Ile Ala Thr Gly 50 55 60 Ser Pro Val Ser Thr Glu Leu Gly His Val Leu Ile Glu Ile Ser Ser 65 70 75 80 Thr His Lys Lys Leu Asn Glu Ser Leu Asp Glu Asn Phe Lys Lys Phe 85 90 95 His Lys Glu Ile Ile His Glu Leu Glu Lys Lys Ile Glu Leu Asp Val 100 105 110 Lys Tyr Met Asn Ala Thr Leu Lys Arg Tyr Gln Thr Glu His Lys Asn 115 120 125 Lys Leu Glu Ser Leu Glu Lys Ser Gln Ala Glu Leu Lys Lys Ile Arg 130 135 140 Arg Lys Ser Gln Gly Ser Arg Asn Ala Leu Lys Tyr Glu His Lys Glu 145 150 155 160 Ile Glu Tyr Val Glu Thr Val Thr Ser Arg Gln Ser Glu Ile Gln Lys 165 170 175 Phe Ile Ala Asp Gly Cys Lys Glu Ala Leu Leu Glu Glu Lys Arg Arg 180 185 190 Phe Cys Phe Leu Val Asp Lys His Cys Gly Phe Ala Asn His Ile His 195 200 205 Tyr Tyr His Leu Gln Ser Ala Glu Leu Leu Asn Ser Lys Leu Pro Arg 210 215 220 Trp Gln Glu Thr Cys Val Asp Ala Ile Lys Val Pro Glu Lys Ile Met 225 230 235 240 Asn Met Ile Glu 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tccgctgccc agccgctggc 540 aaccccactc cctccatctc ctggctgaag aacggcaggg agttccgcgg cgagcaccgc 600 attggaggca tcaagctgcg gcatcagcag tggagcctgg tcatggaaag cgtggtgccc 660 tcggaccgcg gcaactacac ctgcgtcgtg gagaacaagt ttggcagcat ccggcagacg 720 tacacgctgg acgtgctgga gcgctccccg caccggccca tcctgcaggc ggggctgccg 780 gccaaccaga cggcggtgct gggcagcgac gtggagttcc actgcaaggt gtacagtgac 840 gcacagcccc acatccagtg gctcaagcac gtggaggtga atggcagcaa ggtgggcccg 900 gacggcacac cctacgttac cgtgctcaag tcctggatca gtgagagtgt ggaggccgac 960 gtgcgcctcc gcctggccaa tgtgtcggag cgggacgggg gcgagtacct ctgtcgagcc 1020 accaatttca taggcgtggc cgagaaggcc ttttggctga gcgttcacgg gccccgagca 1080 gccgaggagg agctggtgga ggctgacgag gcgggcagtg tgtatgcagg catcctcagc 1140 tacggggtgg gcttcttcct gttcatcctg gtggtggcgg ctgtgacgct ctgccgcctg 1200 cgcagccccc ccaagaaagg cctgggctcc cccaccgtgc acaagatctc ccgcttcccg 1260 ctcaagcgac aggtgtccct ggagtccaac gcgtccatga gctccaacac accactggtg 1320 cgcatcgcaa ggctgtcctc aggggagggc cccacgctgg ccaatgtctc cgagctcgag 1380 ctgcctgccg accccaaatg ggagctgtct cgggcccggc tgaccctggg caagcccctt 1440 ggggagggct gcttcggcca ggtggtcatg gcggaggcca tcggcattga caaggaccgg 1500 gccgccaagc ctgtcaccgt agccgtgaag atgctgaaag acgatgccac tgacaaggac 1560 ctgtcggacc tggtgtctga gatggagatg atgaagatga tcgggaaaca caaaaacatc 1620 atcaacctgc tgggcgcctg cacgcagggc gggcccctgt acgtgctggt ggagtacgcg 1680 gccaagggta acctgcggga gtttctgcgg gcgcggcggc ccccgggcct ggactactcc 1740 ttcgacacct gcaagccgcc cgaggagcag ctcaccttca aggacctggt gtcctgtgcc 1800 taccaggtgg cccggggcat ggagtacttg gcctcccaga agtgcatcca cagggacctg 1860 gctgcccgca atgtgctggt gaccgaggac aacgtgatga agatcgcaga cttcgggctg 1920 gcccgggacg tgcacaacct cgactactac aagaagacaa ccaacggccg gctgcccgtg 1980 aagtggatgg cgcctgaggc cttgtttgac cgagtctaca ctcaccagag tgacgtctgg 2040 tcctttgggg tcctgctctg ggagatcttc acgctggggg gctccccgta ccccggcatc 2100 cctgtggagg agctcttcaa gctgctgaag gagggccacc gcatggacaa gcccgccaac 2160 tgcacacacg acctgtacat gatcatgcgg gagtgctggc atgccgcgcc ctcccagagg 2220 cccaccttca agcagctggt ggaggacctg gaccgtgtcc ttaccgtgac gtccaccgac 2280 gagtacctgg acctgtcggc gcctttcgag cagtactccc cgggtggcca ggacaccccc 2340 agctccagct cctcagggga cgactccgtg tttgcccacg acctgctgcc cccggcccca 2400 cccagcagtg ggggctcgcg gacgtga 2427 <210> 11 <211> 2421 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 11 atgggcgccc ctgcctgcgc cctcgcgctc tgcgtggccg tggccatcgt ggccggcgcc 60 tcctcggagt ccttggggac ggagcagcgc gtcgtggggc gagcggcaga agtcccgggc 120 ccagagcccg gccagcagga gcagttggtc ttcggcagcg gggatgctgt ggagctgagc 180 tgtcccccgc ccgggggtgg tcccatgggg cccactgtct gggtcaagga tggcacaggg 240 ctggtgccct cggagcgtgt cctggtgggg ccccagcggc tgcaggtgct gaatgcctcc 300 cacgaggact ccggggccta cagctgccgg cagcggctca cgcagcgcgt actgtgccac 360 ttcagtgtgc gggtgacaga cgctccatcc tcgggagatg acgaagacgg ggaggacgag 420 gctgaggaca caggtgtgga cacaggggcc ccttactgga cacggcccga gcggatggac 480 aagaagctgc tggccgtgcc ggccgccaac accgtccgct tccgctgccc agccgctggc 540 aaccccactc cctccatctc ctggctgaag aacggcaggg agttccgcgg cgagcaccgc 600 attggaggca tcaagctgcg gcatcagcag tggagcctgg tcatggaaag cgtggtgccc 660 tcggaccgcg gcaactacac ctgcgtcgtg gagaacaagt ttggcagcat ccggcagacg 720 tacacgctgg acgtgctgga gcgctccccg caccggccca tcctgcaggc ggggctgccg 780 gccaaccaga cggcggtgct gggcagcgac gtggagttcc actgcaaggt gtacagtgac 840 gcacagcccc acatccagtg gctcaagcac gtggaggtga atggcagcaa ggtgggcccg 900 gacggcacac cctacgttac cgtgctcaag acggcgggcg ctaacaccac cgacaaggag 960 ctagaggttc tctccttgca caacgtcacc tttgaggacg ccggggagta cacctgcctg 1020 gcgggcaatt ctattgggtt ttctcatcac tctgcgtggc tggtggtgct gccagccgag 1080 gaggagctgg tggaggctga cgaggcgggc agtgtgtatg caggcatcct cagctacggg 1140 gtgggcttct tcctgttcat cctggtggtg gcggctgtga cgctctgccg cctgcgcagc 1200 ccccccaaga aaggcctggg ctcccccacc gtgcacaaga tctcccgctt cccgctcaag 1260 cgacaggtgt ccctggagtc caacgcgtcc atgagctcca acacaccact ggtgcgcatc 1320 gcaaggctgt cctcagggga gggccccacg ctggccaatg tctccgagct cgagctgcct 1380 gccgacccca aatgggagct gtctcgggcc cggctgaccc tgggcaagcc 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cgacgagtac 2280 ctggacctgt cggcgccttt cgagcagtac tccccgggtg gccaggacac ccccagctcc 2340 agctcctcag gggacgactc cgtgtttgcc cacgacctgc tgcccccggc cccacccagc 2400 agtgggggct cgcggacgtg a 2421 <210> 12 <211> 1536 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 12 atgtcccggg ggcccgagga ggtgaaccgg ctcacggaga gcacctaccg gaatgttatg 60 gaacagttca atcctgggct gcgaaattta ataaacctgg ggaaaaatta tgagaaagct 120 gtaaacgcta tgatcctggc aggaaaagcc tactacgatg gagtggccaa gatcggtgag 180 attgccactg ggtcccccgt gtcaactgaa ctgggacatg tcctcataga gatttcaagt 240 acccacaaga aactcaacga gagtcttgat gaaaatttta aaaaattcca caaagagatt 300 atccatgagc tggagaagaa gatagaactt gacgtgaaat atatgaacgc aactctaaaa 360 agataccaaa cagaacacaa gaataaatta gagtctttgg agaaatccca agctgagttg 420 aagaagatca gaaggaaaag ccaaggaagc cgaaacgcac tcaaatatga acacaaagaa 480 attgagtatg tggagaccgt tacttctcgt cagagtgaaa tccagaaatt cattgcagat 540 ggttgcaaag aggctctgct tgaagagaag aggcgcttct gctttctggt tgataagcac 600 tgtggctttg caaaccacat acattattat cacttacagt ctgcagaact 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caatccctaa ggaagcctgc 780 ggaggagcac ccctgcaggg tctgcctggc gaagccctgg gctgccctgc gggtgtgggc 840 acccccgtgc cagcagatgg cactcagacc cttacctgtg cacacacctc tgctcctgag 900 agcacagccc caaccaacca cctggtggct ggcagggcca tgaccctgag tcctcaggaa 960 gaagtggctg caggccaaat ggccagctcc tcgaggagcg gacctgtaaa actagaattt 1020 gatgtatctg atggcgccac cagcaaaagg gcacccccac caaggagact gggagagagg 1080 tccggcctca agcctccctt gaggaaagca gcagtgaggc agcaaaaggc cccgcaggag 1140 gtggaggagg acgacggtag gagcggagca ggagaggacc cccccatgcc agcttctcgg 1200 ggctcttacc acctcgactg ggacaaaatg gatgacccaa acttcatccc gttcggaggt 1260 gacaccaagt ctggttgcag tgaggcccag cccccagaaa gccctgagac caggctgggc 1320 cagccagcgg ctgaacagtt gcatgctggg cctgccacgg aggagccagg tccctgtctg 1380 agccagcagc tgcattcagc ctcagcggag gacacgcctg tggtgcagtt ggcagccgag 1440 accccaacag cagagagcaa ggagagagcc ttgaactctg ccagcacctc gcttcccaca 1500 agctgtccag gcagtgagcc agtgcccacc catcagcagg ggcagcctgc cttggagctg 1560 aaagaggaga gcttcagaga ccccgctgag gttctaggca cgggcgcgga ggtggattac 1620 ctggagcagt ttggaacttc ctcgtttaag gagtcggcct tgaggaagca gtccttatac 1680 ctcaagttcg accccctcct gagggacagt cctggtagac cagtgcccgt ggccaccgag 1740 accagcagca tgcacggtgc aaatgagact ccctcaggac gtccgcggga agccaagctt 1800 gtggagttcg atttcttggg agcactggac attcctgtgc caggcccacc cccaggtgtt 1860 cccgcgcctg ggggcccacc cctgtccacc ggacctatag tggacctgct ccagtacagc 1920 cagaaggacc tggatgcagt ggtaaaggcg acacaggagg agaaccggga gctgaggagc 1980 aggtgtgagg agctccacgg gaagaacctg gaactgggga agatcatgga caggttcgaa 2040 gaggttgtgt accaggccat ggaggaagtt cagaagcaga aggaactttc caaagctgaa 2100 atccagaaag ttctaaaaga aaaagaccaa cttaccacag atctgaactc catggagaag 2160 tccttctccg acctcttcaa gcgttttgag aaacagaaag aggtgatcga gggctaccgc 2220 aagaacgaag agtcactgaa gaagtgcgtg gaggattacc tggcaaggat cacccaggag 2280 ggccagaggt accaagccct gaaggcccac gcggaggaga agctgcagct ggcaaacgag 2340 gagatcgccc aggtccggag caaggcccag gcggaagcgt tggccctcca ggccagcctg 2400 aggaaggagc agatgcgcat ccagtcgctg gagaagacag tggagcagaa 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ccatcgtagt aggcttttcc tg 22 <210> 19 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Peptide linker sequence <400> 19 Gly Gly Gly Ser 1 <210> 20 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Peptide linker sequence <400> 20 Ser Gly Gly Gly 1 <210> 21 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Peptide linker sequence <400> 21 Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 <210> 22 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Peptide linker sequence <400> 22 Ser Gly Gly Gly Gly 1 5 <210> 23 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Peptide linker sequence <400> 23 Gly Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 <210> 24 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Peptide linker sequence <400> 24 Ser Gly Gly Gly Gly Gly 1 5 <210> 25 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Peptide linker sequence <400> 25 Gly Gly Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 <210> 26 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Peptide linker sequence <400> 26 Ser Gly Gly Gly Gly Gly Gly 1 5 <210> 27 <211> 2856 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(2856) <400> 27 atg ggc gcc cct gcc tgc gcc ctc gcg ctc tgc gtg gcc gtg gcc atc 48 Met Gly Ala Pro Ala Cys Ala Leu Ala Leu Cys Val Ala Val Ala Ile 1 5 10 15 gtg gcc ggc gcc tcc tcg gag tcc ttg ggg acg gag cag cgc gtc gtg 96 Val Ala Gly Ala Ser Ser Glu Ser Leu Gly Thr Glu Gln Arg Val Val 20 25 30 ggg cga gcg gca gaa gtc ccg ggc cca gag ccc ggc cag cag gag cag 144 Gly Arg Ala Ala Glu Val Pro Gly Pro Glu Pro Gly Gln Gln Glu Gln 35 40 45 ttg gtc ttc ggc agc ggg gat gct gtg gag ctg agc tgt ccc ccg ccc 192 Leu Val Phe Gly Ser Gly Asp Ala Val Glu Leu Ser Cys Pro Pro Pro 50 55 60 ggg ggt ggt ccc atg ggg ccc act gtc tgg gtc aag gat ggc aca ggg 240 Gly Gly Gly Pro Met Gly Pro Thr Val Trp Val Lys Asp Gly Thr Gly 65 70 75 80 ctg gtg ccc tcg gag cgt gtc ctg gtg ggg ccc cag cgg ctg cag gtg 288 Leu Val Pro Ser Glu Arg Val Leu Val Gly Pro Gln Arg Leu Gln Val 85 90 95 ctg aat gcc tcc cac gag gac tcc ggg gcc tac agc tgc cgg cag cgg 336 Leu Asn Ala Ser His Glu Asp Ser Gly Ala Tyr Ser Cys Arg Gln Arg 100 105 110 ctc acg cag cgc gta ctg tgc cac ttc agt gtg cgg gtg aca gac gct 384 Leu Thr Gln Arg Val Leu Cys His Phe Ser Val Arg Val Thr Asp Ala 115 120 125 cca tcc tcg gga gat gac gaa gac ggg gag gac gag gct gag gac aca 432 Pro Ser Ser Gly Asp Asp Glu Asp Gly Glu Asp Glu Ala Glu Asp Thr 130 135 140 ggt gtg gac aca ggg gcc cct tac tgg aca cgg ccc gag cgg atg gac 480 Gly Val Asp Thr Gly Ala Pro Tyr Trp Thr Arg Pro Glu Arg Met Asp 145 150 155 160 aag aag ctg ctg gcc gtg ccg gcc gcc aac acc gtc cgc ttc cgc tgc 528 Lys Lys Leu Leu Ala Val Pro Ala Ala Asn Thr Val Arg Phe Arg Cys 165 170 175 cca gcc gct ggc aac ccc act ccc tcc atc tcc tgg ctg aag aac ggc 576 Pro Ala Ala Gly Asn Pro Thr Pro Ser Ile Ser Trp Leu Lys Asn Gly 180 185 190 agg gag ttc cgc ggc gag cac cgc att gga ggc atc aag ctg cgg cat 624 Arg Glu Phe Arg Gly Glu His Arg Ile Gly Gly Ile Lys Leu Arg His 195 200 205 cag cag tgg agc ctg gtc atg gaa agc gtg gtg ccc tcg gac cgc ggc 672 Gln Gln Trp Ser Leu Val Met Glu Ser Val Val Pro Ser Asp Arg Gly 210 215 220 aac tac acc tgc gtc gtg gag aac aag ttt ggc agc atc cgg cag acg 720 Asn Tyr Thr Cys Val Val Glu Asn Lys Phe Gly Ser Ile Arg Gln Thr 225 230 235 240 tac acg ctg gac gtg ctg gag cgc tcc ccg cac cgg ccc atc ctg cag 768 Tyr Thr Leu Asp Val Leu Glu Arg Ser Pro His Arg Pro Ile Leu Gln 245 250 255 gcg ggg ctg ccg gcc aac cag acg gcg gtg ctg ggc agc gac gtg gag 816 Ala Gly Leu Pro Ala Asn Gln Thr Ala Val Leu Gly Ser Asp Val Glu 260 265 270 ttc cac tgc aag gtg tac agt gac gca cag ccc cac atc cag tgg ctc 864 Phe His Cys Lys Val Tyr Ser Asp Ala Gln Pro His Ile Gln Trp Leu 275 280 285 aag cac gtg gag gtg aat ggc agc aag gtg ggc ccg gac ggc aca ccc 912 Lys His Val Glu Val Asn Gly Ser Lys Val Gly Pro Asp Gly Thr Pro 290 295 300 tac gtt acc gtg ctc aag tcc tgg atc agt gag agt gtg gag gcc gac 960 Tyr Val Thr Val Leu Lys Ser Trp Ile Ser Glu Ser Val Glu Ala Asp 305 310 315 320 gtg cgc ctc cgc 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Asp Arg Ala Ala Lys Pro Val Thr Val Ala Val Lys Met Leu 500 505 510 aaa gac gat gcc act gac aag gac ctg tcg gac ctg gtg tct gag atg 1584 Lys Asp Asp Ala Thr Asp Lys Asp Leu Ser Asp Leu Val Ser Glu Met 515 520 525 gag atg atg aag atg atc ggg aaa cac aaa aac atc atc aac ctg ctg 1632 Glu Met Met Lys Met Ile Gly Lys His Lys Asn Ile Ile Asn Leu Leu 530 535 540 ggc gcc tgc acg cag ggc ggg ccc ctg tac gtg ctg gtg gag tac gcg 1680 Gly Ala Cys Thr Gln Gly Gly Pro Leu Tyr Val Leu Val Glu Tyr Ala 545 550 555 560 gcc aag ggt aac ctg cgg gag ttt ctg cgg gcg cgg cgg ccc ccg ggc 1728 Ala Lys Gly Asn Leu Arg Glu Phe Leu Arg Ala Arg Arg Pro Pro Gly 565 570 575 ctg gac tac tcc ttc gac acc tgc aag ccg ccc gag gag cag ctc acc 1776 Leu Asp Tyr Ser Phe Asp Thr Cys Lys Pro Pro Glu Glu Gln Leu Thr 580 585 590 ttc aag gac ctg gtg tcc tgt gcc tac cag gtg gcc cgg ggc atg gag 1824 Phe Lys Asp Leu Val Ser Cys Ala Tyr Gln Val Ala Arg Gly Met Glu 595 600 605 tac ttg gcc tcc cag aag tgc atc cac agg gac ctg gct gcc 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atg cgg gag tgc tgg cat gcc gcg 2208 Cys Thr His Asp Leu Tyr Met Ile Met Arg Glu Cys Trp His Ala Ala 725 730 735 ccc tcc cag agg ccc acc ttc aag cag ctg gtg gag gac ctg gac cgt 2256 Pro Ser Gln Arg Pro Thr Phe Lys Gln Leu Val Glu Asp Leu Asp Arg 740 745 750 gtc ctt acc gtg acg tcc acc gac gtg agt gct ggc tct ggc ctg gtg 2304 Val Leu Thr Val Thr Ser Thr Asp Val Ser Ala Gly Ser Gly Leu Val 755 760 765 cca ccc gcc tat gcc cct ccc cct gcc gtc ccc ggc cat cct gcc ccc 2352 Pro Pro Ala Tyr Ala Pro Pro Pro Ala Val Pro Gly His Pro Ala Pro 770 775 780 cag agt gct gag gtg tgg ggc ggg cct tct ggc cca ggt gcc ctg gct 2400 Gln Ser Ala Glu Val Trp Gly Gly Pro Ser Gly Pro Gly Ala Leu Ala 785 790 795 800 gac ctg gac tgc tca agc tct tcc cag agc cca gga agt tct gag aac 2448 Asp Leu Asp Cys Ser Ser Ser Ser Gln Ser Pro Gly Ser Ser Glu Asn 805 810 815 caa atg gtg tct cca gga aaa gtg tct ggc agc cct gag caa gcc gtg 2496 Gln Met Val Ser Pro Gly Lys Val Ser Gly Ser Pro Glu Gln Ala Val 820 825 830 gag gaa aac 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agc aca gcc cca acc aac cac ctg gtg gct ggc agg 2880 Ser Ala Pro Glu Ser Thr Ala Pro Thr Asn His Leu Val Ala Gly Arg 945 950 955 960 gcc atg acc ctg agt cct cag gaa gaa gtg gct gca ggc caa atg gcc 2928 Ala Met Thr Leu Ser Pro Gln Glu Glu Val Ala Ala Gly Gln Met Ala 965 970 975 agc tcc tcg agg agc gga cct gta aaa cta gaa ttt gat gta tct gat 2976 Ser Ser Ser Arg Ser Gly Pro Val Lys Leu Glu Phe Asp Val Ser Asp 980 985 990 ggc gcc acc agc aaa agg gca ccc cca cca agg aga ctg gga gag agg 3024 Gly Ala Thr Ser Lys Arg Ala Pro Pro Pro Arg Arg Leu Gly Glu Arg 995 1000 1005 tcc ggc ctc aag cct ccc ttg agg aaa gca gca gtg agg cag caa 3069 Ser Gly Leu Lys Pro Pro Leu Arg Lys Ala Ala Val Arg Gln Gln 1010 1015 1020 aag gcc ccg cag gag gtg gag gag gac gac ggt agg agc gga gca 3114 Lys Ala Pro Gln Glu Val Glu Glu Asp Asp Gly Arg Ser Gly Ala 1025 1030 1035 gga gag gac ccc ccc atg cca gct tct cgg ggc tct tac cac ctc 3159 Gly Glu Asp Pro Pro Met Pro Ala Ser Arg Gly Ser Tyr His Leu 1040 1045 1050 gac tgg gac aaa atg gat gac cca aac ttc atc ccg ttc gga ggt 3204 Asp Trp Asp Lys Met Asp Asp Pro Asn Phe Ile Pro Phe Gly Gly 1055 1060 1065 gac acc aag tct ggt tgc agt gag gcc cag ccc cca gaa agc cct 3249 Asp Thr Lys Ser Gly Cys Ser Glu Ala Gln Pro Pro Glu Ser Pro 1070 1075 1080 gag acc agg ctg ggc cag cca gcg gct gaa cag ttg cat gct ggg 3294 Glu Thr Arg Leu Gly Gln Pro Ala Ala Glu Gln Leu His Ala Gly 1085 1090 1095 cct gcc acg gag gag cca ggt ccc tgt ctg agc cag cag ctg cat 3339 Pro Ala Thr Glu Glu Pro Gly Pro Cys Leu Ser Gln Gln Leu His 1100 1105 1110 tca gcc tca gcg gag gac acg cct gtg gtg cag ttg gca gcc gag 3384 Ser Ala Ser Ala Glu Asp Thr Pro Val Val Gln Leu Ala Ala Glu 1115 1120 1125 acc cca aca gca gag agc aag gag aga gcc ttg aac tct gcc agc 3429 Thr Pro Thr Ala Glu Ser Lys Glu Arg Ala Leu Asn Ser Ala Ser 1130 1135 1140 acc tcg ctt ccc aca agc tgt cca ggc agt gag cca gtg ccc acc 3474 Thr Ser Leu Pro Thr Ser Cys Pro Gly Ser Glu Pro Val Pro Thr 1145 1150 1155 cat cag cag ggg cag cct gcc 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395 400 ccc ccc aag aaa ggc ctg ggc tcc ccc acc gtg cac aag atc tcc cgc 1248 Pro Pro Lys Lys Gly Leu Gly Ser Pro Thr Val His Lys Ile Ser Arg 405 410 415 ttc ccg ctc aag cga cag gtg tcc ctg gag tcc aac gcg tcc atg agc 1296 Phe Pro Leu Lys Arg Gln Val Ser Leu Glu Ser Asn Ala Ser Met Ser 420 425 430 tcc aac aca cca ctg gtg cgc atc gca agg ctg tcc tca ggg gag ggc 1344 Ser Asn Thr Pro Leu Val Arg Ile Ala Arg Leu Ser Ser Gly Glu Gly 435 440 445 ccc acg ctg gcc aat gtc tcc gag ctc gag ctg cct gcc gac ccc aaa 1392 Pro Thr Leu Ala Asn Val Ser Glu Leu Glu Leu Pro Ala Asp Pro Lys 450 455 460 tgg gag ctg tct cgg gcc cgg ctg acc ctg ggc aag ccc ctt ggg gag 1440 Trp Glu Leu Ser Arg Ala Arg Leu Thr Leu Gly Lys Pro Leu Gly Glu 465 470 475 480 ggc tgc ttc ggc cag gtg gtc atg gcg gag gcc atc ggc att gac aag 1488 Gly Cys Phe Gly Gln Val Val Met Ala Glu Ala Ile Gly Ile Asp Lys 485 490 495 gac cgg gcc gcc aag cct gtc acc gta gcc gtg aag atg ctg aaa gac 1536 Asp Arg Ala Ala Lys Pro Val Thr Val Ala Val Lys Met Leu Lys Asp 500 505 510 gat gcc act gac aag gac ctg tcg gac ctg gtg tct gag atg gag atg 1584 Asp Ala Thr Asp Lys Asp Leu Ser Asp Leu Val Ser Glu Met Glu Met 515 520 525 atg aag atg atc ggg aaa cac aaa aac atc atc aac ctg ctg ggc gcc 1632 Met Lys Met Ile Gly Lys His Lys Asn Ile Ile Asn Leu Leu Gly Ala 530 535 540 tgc acg cag ggc ggg ccc ctg tac gtg ctg gtg gag tac gcg gcc aag 1680 Cys Thr Gln Gly Gly Pro Leu Tyr Val Leu Val Glu Tyr Ala Ala Lys 545 550 555 560 ggt aac ctg cgg gag ttt ctg cgg gcg cgg cgg ccc ccg ggc ctg gac 1728 Gly Asn Leu Arg Glu Phe Leu Arg Ala Arg Arg Pro Pro Gly Leu Asp 565 570 575 tac tcc ttc gac acc tgc aag ccg ccc gag gag cag ctc acc ttc aag 1776 Tyr Ser Phe Asp Thr Cys Lys Pro Pro Glu Glu Gln Leu Thr Phe Lys 580 585 590 gac ctg gtg tcc tgt gcc tac cag gtg gcc cgg ggc atg gag tac ttg 1824 Asp Leu Val Ser Cys Ala Tyr Gln Val Ala Arg Gly Met Glu Tyr Leu 595 600 605 gcc tcc cag aag tgc atc cac agg gac ctg gct gcc cgc aat gtg ctg 1872 Ala Ser Gln Lys Cys Ile His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Val Leu 610 615 620 gtg acc gag gac aac gtg atg aag atc gca gac ttc ggg ctg gcc cgg 1920 Val Thr Glu Asp Asn Val Met Lys Ile Ala Asp Phe Gly Leu Ala Arg 625 630 635 640 gac gtg cac aac ctc gac tac tac aag aag aca acc aac ggc cgg ctg 1968 Asp Val His Asn Leu Asp Tyr Tyr Lys Lys Thr Thr Asn Gly Arg Leu 645 650 655 ccc gtg aag tgg atg gcg cct gag gcc ttg ttt gac cga gtc tac act 2016 Pro Val Lys Trp Met Ala Pro Glu Ala Leu Phe Asp Arg Val Tyr Thr 660 665 670 cac cag agt gac gtc tgg tcc ttt ggg gtc ctg ctc tgg gag atc ttc 2064 His Gln Ser Asp Val Trp Ser Phe Gly Val Leu Leu Trp Glu Ile Phe 675 680 685 acg ctg ggg ggc tcc ccg tac ccc ggc atc cct gtg gag gag ctc ttc 2112 Thr Leu Gly Gly Ser Pro Tyr Pro Gly Ile Pro Val Glu Glu Leu Phe 690 695 700 aag ctg ctg aag gag ggc cac cgc atg gac aag ccc gcc aac tgc aca 2160 Lys Leu Leu Lys Glu Gly His Arg Met Asp Lys Pro Ala Asn Cys Thr 705 710 715 720 cac gac ctg tac atg atc atg cgg gag tgc tgg cat gcc gcg ccc tcc 2208 His Asp Leu Tyr Met Ile Met Arg Glu Cys Trp His Ala Ala Pro Ser 725 730 735 cag agg ccc acc ttc aag cag ctg gtg gag gac ctg gac cgt gtc ctt 2256 Gln Arg Pro Thr Phe Lys Gln Leu Val Glu Asp Leu Asp Arg Val Leu 740 745 750 acc gtg acg tcc acc gac aat gtt atg gaa cag ttc aat cct ggg ctg 2304 Thr Val Thr Ser Thr Asp Asn Val Met Glu Gln Phe Asn Pro Gly Leu 755 760 765 cga aat tta ata aac ctg ggg aaa aat tat gag aaa gct gta aac gct 2352 Arg Asn Leu Ile Asn Leu Gly Lys Asn Tyr Glu Lys Ala Val Asn Ala 770 775 780 atg atc ctg gca gga aaa gcc tac tac gat gga gtg gcc aag atc ggt 2400 Met Ile Leu Ala Gly Lys Ala Tyr Tyr Asp Gly Val Ala Lys Ile Gly 785 790 795 800 gag att gcc act ggg tcc ccc gtg tca act gaa ctg gga cat gtc ctc 2448 Glu Ile Ala Thr Gly Ser Pro Val Ser Thr Glu Leu Gly His Val Leu 805 810 815 ata gag att tca agt acc cac aag aaa ctc aac gag agt ctt gat gaa 2496 Ile Glu Ile Ser Ser Thr His Lys Lys Leu Asn Glu Ser Leu Asp Glu 820 825 830 aat ttt aaa aaa ttc cac aaa gag att atc cat gag ctg gag aag aag 2544 Asn Phe Lys Lys Phe His Lys Glu Ile Ile His Glu Leu Glu Lys Lys 835 840 845 ata gaa ctt gac gtg aaa tat atg aac gca act cta aaa aga tac caa 2592 Ile Glu Leu Asp Val Lys Tyr Met Asn Ala Thr Leu Lys Arg Tyr Gln 850 855 860 aca gaa cac aag aat aaa tta gag tct ttg gag aaa tcc caa gct gag 2640 Thr Glu His Lys Asn Lys Leu Glu Ser Leu Glu Lys Ser Gln Ala Glu 865 870 875 880 ttg aag aag atc aga agg aaa agc caa gga agc cga aac gca ctc aaa 2688 Leu Lys Lys Ile Arg Arg Lys Ser Gln Gly Ser Arg Asn Ala Leu Lys 885 890 895 tat gaa cac aaa gaa att gag tat gtg gag acc gtt act tct cgt cag 2736 Tyr Glu His Lys Glu Ile Glu Tyr Val Glu Thr Val Thr Ser Arg Gln 900 905 910 agt gaa atc cag aaa ttc att gca gat ggt tgc aaa gag gct ctg ctt 2784 Ser Glu Ile Gln Lys Phe Ile Ala Asp Gly Cys Lys Glu Ala Leu Leu 915 920 925 gaa gag aag agg cgc ttc tgc ttt ctg gtt gat aag cac tgt ggc ttt 2832 Glu Glu Lys Arg Arg Phe Cys Phe Leu Val Asp Lys His Cys Gly Phe 930 935 940 gca aac cac ata cat tat tat cac tta cag tct gca gaa cta ctg aat 2880 Ala Asn His Ile His Tyr Tyr His Leu Gln Ser Ala Glu Leu Leu Asn 945 950 955 960 tcc aag ctg cct cgg tgg cag gag acc tgt gtt gat gcc atc aaa gtg 2928 Ser Lys Leu Pro Arg Trp Gln Glu Thr Cys Val Asp Ala Ile Lys Val 965 970 975 cca gag aaa atc atg aat atg atc gaa gaa ata aag acc cca gcc tct 2976 Pro Glu Lys Ile Met Asn Met Ile Glu Glu Ile Lys Thr Pro Ala Ser 980 985 990 acc ccc gtg tct gga act cct cag gct tca ccc atg atc gag aga agc 3024 Thr Pro Val Ser Gly Thr Pro Gln Ala Ser Pro Met Ile Glu Arg Ser 995 1000 1005 aat gtg gtt agg aaa gat tac gac acc ctt tct aaa tgc tca cca 3069 Asn Val Val Arg Lys Asp Tyr Asp Thr Leu Ser Lys Cys Ser Pro 1010 1015 1020 aag atg ccc ccc gct cct tca ggc aga gca tat acc agt ccc ttg 3114 Lys Met Pro Pro Ala Pro Ser Gly Arg Ala Tyr Thr Ser Pro Leu 1025 1030 1035 atc gat atg ttt aat aac cca gcc acg gct gcc ccg aat tca caa 3159 Ile Asp Met Phe Asn Asn Pro Ala Thr Ala Ala Pro Asn Ser Gln 1040 1045 1050 agg gta aat aat tca aca ggt act tcc gaa gat ccc agt tta cag 3204 Arg Val Asn Asn Ser Thr Gly Thr Ser Glu Asp Pro Ser Leu Gln 1055 1060 1065 cga tca gtt tcg gtt gca acg gga ctg aac atg atg aag aag cag 3249 Arg Ser Val Ser Val Ala Thr Gly Leu Asn Met Met Lys Lys Gln 1070 1075 1080 aaa gtg aag acc atc ttc ccg cac act gcg ggc tcc aac aag acc 3294 Lys Val Lys Thr Ile Phe Pro His Thr Ala Gly Ser Asn Lys Thr 1085 1090 1095 tta ctc agc ttt gca cag gga gat gtc atc acg ctg ctc atc ccc 3339 Leu Leu Ser Phe Ala Gln Gly Asp Val Ile Thr Leu Leu Ile Pro 1100 1105 1110 gag gag aag gat ggc tgg ctc tat gga gaa cac gac gtg tcc aag 3384 Glu Glu Lys Asp Gly Trp Leu Tyr Gly Glu His Asp Val Ser Lys 1115 1120 1125 gcg agg ggt tgg ttc ccg tcg tcg tac acg aag ttg ctg gaa gaa 3429 Ala Arg Gly Trp Phe Pro Ser Ser Tyr Thr Lys Leu Leu Glu Glu 1130 1135 1140 aat gag aca gaa gca gtg acc gtg ccc acg cca agc ccc aca cca 3474 Asn Glu Thr Glu Ala Val Thr Val Pro Thr Pro Ser Pro Thr Pro 1145 1150 1155 gtg aga agc atc agc acc gtg aac ttg tct gag aat agc agt gtt 3519 Val Arg Ser Ile Ser Thr Val Asn Leu Ser Glu Asn Ser Ser Val 1160 1165 1170 gtc atc ccc cca ccc gac tac ttg gaa tgc ttg tcc atg ggg gca 3564 Val Ile Pro Pro Pro Asp Tyr Leu Glu Cys Leu Ser Met Gly Ala 1175 1180 1185 gct gcc gac agg aga gca gat tcg gcc agg acg aca tcc acc ttt 3609 Ala Ala Asp Arg Arg Ala Asp Ser Ala Arg Thr Thr Ser Thr Phe 1190 1195 1200 aag gcc cca gcg tcc aag ccc gag acc gcg gct cct aac gat gcc 3654 Lys Ala Pro Ala Ser Lys Pro Glu Thr Ala Ala Pro Asn Asp Ala 1205 1210 1215 aac ggg act gca aag ccg cct ttt ctc agc gga gaa aac ccc ttt 3699 Asn Gly Thr Ala Lys Pro Pro Phe Leu Ser Gly Glu Asn Pro Phe 1220 1225 1230 gcc act gtg aaa ctc cgc ccg act gtg acg aat gat cgc tcg gca 3744 Ala Thr Val Lys Leu Arg Pro Thr Val Thr Asn Asp Arg Ser Ala 1235 1240 1245 ccc atc att cga tga 3759 Pro Ile Ile Arg 1250 <210> 38 <211> 1252 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 38 Met Gly Ala Pro Ala Cys Ala Leu Ala Leu Cys Val Ala Val Ala Ile 1 5 10 15 Val Ala Gly Ala Ser Ser Glu Ser Leu Gly Thr Glu Gln Arg Val Val 20 25 30 Gly Arg Ala Ala Glu Val Pro Gly Pro Glu Pro Gly Gln Gln Glu Gln 35 40 45 Leu Val Phe Gly Ser Gly Asp Ala Val Glu Leu Ser Cys Pro Pro Pro 50 55 60 Gly Gly Gly Pro Met Gly Pro Thr Val Trp Val Lys Asp Gly Thr Gly 65 70 75 80 Leu Val Pro Ser Glu Arg Val Leu Val Gly Pro Gln Arg Leu Gln Val 85 90 95 Leu Asn Ala Ser His Glu Asp Ser Gly Ala Tyr Ser Cys Arg Gln Arg 100 105 110 Leu Thr Gln Arg Val Leu Cys His Phe Ser Val Arg Val Thr Asp Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Gly Asp Asp Glu Asp Gly Glu Asp Glu Ala Glu Asp Thr 130 135 140 Gly Val Asp Thr Gly Ala Pro Tyr Trp Thr Arg Pro Glu Arg Met Asp 145 150 155 160 Lys Lys Leu Leu Ala Val Pro Ala Ala Asn Thr Val Arg Phe Arg Cys 165 170 175 Pro Ala Ala Gly Asn Pro Thr Pro Ser Ile Ser Trp Leu Lys Asn Gly 180 185 190 Arg Glu Phe Arg Gly Glu His Arg Ile Gly Gly Ile Lys Leu Arg His 195 200 205 Gln Gln Trp Ser Leu Val Met Glu Ser Val Val Pro Ser Asp Arg Gly 210 215 220 Asn Tyr Thr Cys Val Val Glu Asn Lys Phe Gly Ser Ile Arg Gln Thr 225 230 235 240 Tyr Thr Leu Asp Val Leu Glu Arg Ser Pro His Arg Pro Ile Leu Gln 245 250 255 Ala Gly Leu Pro Ala Asn Gln Thr Ala Val Leu Gly Ser Asp Val Glu 260 265 270 Phe His Cys Lys Val Tyr Ser Asp Ala Gln Pro His Ile Gln Trp Leu 275 280 285 Lys His Val Glu Val Asn Gly Ser Lys Val Gly Pro Asp Gly Thr Pro 290 295 300 Tyr Val Thr Val Leu Lys Thr Ala Gly Ala Asn Thr Thr Asp Lys Glu 305 310 315 320 Leu Glu Val Leu Ser Leu His Asn Val Thr Phe Glu Asp Ala Gly Glu 325 330 335 Tyr Thr Cys Leu Ala Gly Asn Ser Ile Gly Phe Ser His His Ser Ala 340 345 350 Trp Leu Val Val Leu Pro Ala Glu Glu Glu Leu Val Glu Ala Asp Glu 355 360 365 Ala Gly Ser Val Tyr Ala Gly Ile Leu Ser Tyr Gly Val Gly Phe Phe 370 375 380 Leu Phe Ile Leu Val Val Ala Ala Val Thr Leu Cys Arg Leu Arg Ser 385 390 395 400 Pro Pro Lys Lys Gly Leu Gly Ser Pro Thr Val His Lys Ile Ser Arg 405 410 415 Phe Pro Leu Lys Arg Gln Val Ser Leu Glu Ser Asn Ala Ser Met Ser 420 425 430 Ser Asn Thr Pro Leu Val Arg Ile Ala Arg Leu Ser Ser Gly Glu Gly 435 440 445 Pro Thr Leu Ala Asn Val Ser Glu Leu Glu Leu Pro Ala Asp Pro Lys 450 455 460 Trp Glu Leu Ser Arg Ala Arg Leu Thr Leu Gly Lys Pro Leu Gly Glu 465 470 475 480 Gly Cys Phe Gly Gln Val Val Met Ala Glu Ala Ile Gly Ile Asp Lys 485 490 495 Asp Arg Ala Ala Lys Pro Val Thr Val Ala Val Lys Met Leu Lys Asp 500 505 510 Asp Ala Thr Asp Lys Asp Leu Ser Asp Leu Val Ser Glu Met Glu Met 515 520 525 Met Lys Met Ile Gly Lys His Lys Asn Ile Ile Asn Leu Leu Gly Ala 530 535 540 Cys Thr Gln Gly Gly Pro Leu Tyr Val Leu Val Glu Tyr Ala Ala Lys 545 550 555 560 Gly Asn Leu Arg Glu Phe Leu Arg Ala Arg Arg Pro Pro Gly Leu Asp 565 570 575 Tyr Ser Phe Asp Thr Cys Lys Pro Pro Glu Glu Gln Leu Thr Phe Lys 580 585 590 Asp Leu Val Ser Cys Ala Tyr Gln Val Ala Arg Gly Met Glu Tyr Leu 595 600 605 Ala Ser Gln Lys Cys Ile His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Val Leu 610 615 620 Val Thr Glu Asp Asn Val Met Lys Ile Ala Asp Phe Gly Leu Ala Arg 625 630 635 640 Asp Val His Asn Leu Asp Tyr Tyr Lys Lys Thr Thr Asn Gly Arg Leu 645 650 655 Pro Val Lys Trp Met Ala Pro Glu Ala Leu Phe Asp Arg Val Tyr Thr 660 665 670 His Gln Ser Asp Val Trp Ser Phe Gly Val Leu Leu Trp Glu Ile Phe 675 680 685 Thr Leu Gly Gly Ser Pro Tyr Pro Gly Ile Pro Val Glu Glu Leu Phe 690 695 700 Lys Leu Leu Lys Glu Gly His Arg Met Asp Lys Pro Ala Asn Cys Thr 705 710 715 720 His Asp Leu Tyr Met Ile Met Arg Glu Cys Trp His Ala Ala Pro Ser 725 730 735 Gln Arg Pro Thr Phe Lys Gln Leu Val Glu Asp Leu Asp Arg Val Leu 740 745 750 Thr Val Thr Ser Thr Asp Asn Val Met Glu Gln Phe Asn Pro Gly Leu 755 760 765 Arg Asn Leu Ile Asn Leu Gly Lys Asn Tyr Glu Lys Ala Val Asn Ala 770 775 780 Met Ile Leu Ala Gly Lys Ala Tyr Tyr Asp Gly Val Ala Lys Ile Gly 785 790 795 800 Glu Ile Ala Thr Gly Ser Pro Val Ser Thr Glu Leu Gly His Val Leu 805 810 815 Ile Glu Ile Ser Ser Thr His Lys Lys Leu Asn Glu Ser Leu Asp Glu 820 825 830 Asn Phe Lys Lys Phe His Lys Glu Ile Ile His Glu Leu Glu Lys Lys 835 840 845 Ile Glu Leu Asp Val Lys Tyr Met Asn Ala Thr Leu Lys Arg Tyr Gln 850 855 860 Thr Glu His Lys Asn Lys Leu Glu Ser Leu Glu Lys Ser Gln Ala Glu 865 870 875 880 Leu Lys Lys Ile Arg Arg Lys Ser Gln Gly Ser Arg Asn Ala Leu Lys 885 890 895 Tyr Glu His Lys Glu Ile Glu Tyr Val Glu Thr Val Thr Ser Arg Gln 900 905 910 Ser Glu Ile Gln Lys Phe Ile Ala Asp Gly Cys Lys Glu Ala Leu Leu 915 920 925 Glu Glu Lys Arg Arg Phe Cys Phe Leu Val Asp Lys His Cys Gly Phe 930 935 940 Ala Asn His Ile His Tyr Tyr His Leu Gln Ser Ala Glu Leu Leu Asn 945 950 955 960 Ser Lys Leu Pro Arg Trp Gln Glu Thr Cys Val Asp Ala Ile Lys Val 965 970 975 Pro Glu Lys Ile Met Asn Met Ile Glu Glu Ile Lys Thr Pro Ala Ser 980 985 990 Thr Pro Val Ser Gly Thr Pro Gln Ala Ser Pro Met Ile Glu Arg Ser 995 1000 1005 Asn Val Val Arg Lys Asp Tyr Asp Thr Leu Ser Lys Cys Ser Pro 1010 1015 1020 Lys Met Pro Pro Ala Pro Ser Gly Arg Ala Tyr Thr Ser Pro Leu 1025 1030 1035 Ile Asp Met Phe Asn Asn Pro Ala Thr Ala Ala Pro Asn Ser Gln 1040 1045 1050 Arg Val Asn Asn Ser Thr Gly Thr Ser Glu Asp Pro Ser Leu Gln 1055 1060 1065 Arg Ser Val Ser Val Ala Thr Gly Leu Asn Met Met Lys Lys Gln 1070 1075 1080 Lys Val Lys Thr Ile Phe Pro His Thr Ala Gly Ser Asn Lys Thr 1085 1090 1095 Leu Leu Ser Phe Ala Gln Gly Asp Val Ile Thr Leu Leu Ile Pro 1100 1105 1110 Glu Glu Lys Asp Gly Trp Leu Tyr Gly Glu His Asp Val Ser Lys 1115 1120 1125 Ala Arg Gly Trp Phe Pro Ser Ser Tyr Thr Lys Leu Leu Glu Glu 1130 1135 1140 Asn Glu Thr Glu Ala Val Thr Val Pro Thr Pro Ser Pro Thr Pro 1145 1150 1155 Val Arg Ser Ile Ser Thr Val Asn Leu Ser Glu Asn Ser Ser Val 1160 1165 1170 Val Ile Pro Pro Pro Asp Tyr Leu Glu Cys Leu Ser Met Gly Ala 1175 1180 1185 Ala Ala Asp Arg Arg Ala Asp Ser Ala Arg Thr Thr Ser Thr Phe 1190 1195 1200 Lys Ala Pro Ala Ser Lys Pro Glu Thr Ala Ala Pro Asn Asp Ala 1205 1210 1215 Asn Gly Thr Ala Lys Pro Pro Phe Leu Ser Gly Glu Asn Pro Phe 1220 1225 1230 Ala Thr Val Lys Leu Arg Pro Thr Val Thr Asn Asp Arg Ser Ala 1235 1240 1245 Pro Ile Ile Arg 1250 <210> 39 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Biotinylated peptide sequence <400> 39 Glu Gly Pro Trp Leu Glu Glu Glu Glu Glu Ala Tyr Gly Trp Met Asp 1 5 10 15 Phe

Claims (62)

  1. FGFR3 폴리펩티드와 BAIAP2L1 폴리펩티드 또는 TACC3 폴리펩티드를 포함하는 융합 폴리펩티드：
    여기서 상기 FGFR3 폴리펩티드는 서열번호 6 또는 7에 기재되는 아미노산 서열로 이루어지는 야생형 폴리펩티드의 일부 또는 전부, 또는 그 야생형 폴리펩티드에 있어서 1 또는 복수의 아미노산이 치환, 결실 또는 삽입되어 있는 변이 폴리펩티드의 일부 또는 전부이고,
    상기 BAIAP2L1 폴리펩티드는 서열번호 8에 기재되는 아미노산 서열로 이루어지는 야생형 폴리펩티드의 일부 또는 전부, 또는 그 야생형 폴리펩티드에 있어서 1 또는 복수의 아미노산이 치환, 결실 또는 삽입되어 있는 변이 폴리펩티드의 일부 또는 전부이며,
    상기 TACC3 폴리펩티드는 서열번호 9에 기재되는 아미노산 서열로 이루어지는 야생형 폴리펩티드의 일부 또는 전부, 또는 그 야생형 폴리펩티드에 있어서 1 또는 복수의 아미노산이 치환, 결실 또는 삽입되어 있는 변이 폴리펩티드의 일부 또는 전부이다.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 FGFR3 폴리펩티드가 서열번호 6 또는 7에 기재되는 아미노산 서열로 이루어지는 야생형 폴리펩티드인 융합 폴리펩티드.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 융합 폴리펩티드가 FGFR3 폴리펩티드와 BAIAP2L1 폴리펩티드를 포함하는 융합 폴리펩티드인 융합 폴리펩티드.
  4. 제3항에 있어서,
    상기 융합 폴리펩티드가 서열번호 32 또는 38에 기재되는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드인 융합 폴리펩티드.
  5. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 융합 폴리펩티드가 FGFR3 폴리펩티드와 TACC3 폴리펩티드를 포함하는 융합 폴리펩티드인 융합 폴리펩티드.
  6. 제5항에 있어서,
    상기 융합 폴리펩티드가 서열번호 28, 30, 34 또는 36에 기재되는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드인 융합 폴리펩티드.
  7. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 융합 폴리펩티드가 방광암 또는 폐암 유래인 융합 폴리펩티드.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 기재된 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드.
  9. 제8항에 있어서,
    서열번호 14, 15 또는 16에 기재되는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드.
  10. 제9항에 있어서,
    서열번호 27, 29, 31, 33, 35 또는 37에 기재되는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드.
  11. 제8항 내지 제10항 중 어느 한 항에 기재된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터.
  12. 제11항에 기재된 벡터를 포함하는 재조합 세포.
  13. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 기재된 융합 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
  14. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 기재된 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드에 각각 하이브리다이즈하는 센스 프라이머 및 안티센스 프라이머로 이루어지는 상기 폴리뉴클레오티드의 검출 또는 증폭을 위한 한쌍의 올리고뉴클레오티드 프라이머.
  15. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 기재된 융합 폴리펩티드를 코드하는 mRNA 폴리뉴클레오티드에 결합하여 그 mRNA 폴리뉴클레오티드의 단백질로의 번역을 저해하는 활성을 갖는 올리고뉴클레오티드.
  16. 제15항에 있어서,
    상기 올리고뉴클레오티드가 mRNA 폴리펩티드를 절단하는 siRNA인 올리고뉴클레오티드.
  17. 제13항에 기재된 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함하는 의약 조성물.
  18. 제15항 또는 제16항에 기재된 올리고뉴클레오티드를 포함하는 의약 조성물.
  19. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 기재된 융합 폴리펩티드에 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 사용하여 피험자로부터 단리된 시료 중에 있어서 상기 융합 폴리펩티드를 검출하는 공정을 포함하는, FGFR3 폴리펩티드와 BAIAP2L1 폴리펩티드 또는 TACC3 폴리펩티드를 포함하는 융합 폴리펩티드의 검출방법.
  20. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 기재된 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드에 각각 하이브리다이즈하는 센스 프라이머 및 안티센스 프라이머로 이루어지는 상기 폴리뉴클레오티드의 검출 또는 증폭을 위한 한쌍의 올리고뉴클레오티드 프라이머를 사용하여 피험자로부터 단리된 시료 중에 있어서 상기 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드를 검출하는 공정을 포함하는, FGFR3 폴리펩티드와 BAIAP2L1 폴리펩티드 또는 TACC3 폴리펩티드를 포함하는 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드의 검출방법.
  21. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 기재된 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드에 각각 하이브리다이즈하는 센스 프라이머 및 안티센스 프라이머로 이루어지는 상기 폴리뉴클레오티드의 검출 또는 증폭을 위한 한쌍의 올리고뉴클레오티드 프라이머를 포함하는, FGFR3 폴리펩티드와 BAIAP2L1 폴리펩티드 또는 TACC3 폴리펩티드를 포함하는 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드의 검출용 키트.
  22. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 기재된 융합 폴리펩티드에 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함하는, FGFR3 폴리펩티드와 BAIAP2L1 폴리펩티드 또는 TACC3 폴리펩티드를 포함하는 융합 폴리펩티드의 검출용 키트.
  23. 피험자로부터 단리된 시료 중에 있어서 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 기재된 융합 폴리펩티드의 존재 여부를 결정하여, 그 융합 폴리펩티드가 검출된 경우에는 암에 걸리기 쉽고, 암에 걸렸거나 또는 암이 진행되어 있다는 기준에 기초하여 피험자가 암에 걸리기 쉬운지, 암에 걸렸는지 또는 암이 진행되었는지 여부에 대해 시험하는 방법.
  24. 피험자로부터 단리된 시료 중에 있어서 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 기재된 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드의 존재 여부를 결정하여, 그 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드가 검출된 경우에는 암에 걸리기 쉽고, 암에 걸렸거나 또는 암이 진행되어 있다는 기준에 기초하여 피험자가 암에 걸리기 쉬운지, 암에 걸렸는지 또는 암이 진행되었는지 여부에 대해 시험하는 방법.
  25. 제23항 또는 제24항에 있어서,
    상기 암이 방광암, 뇌종양, 두경부 편평상피암, 폐암, 폐선암, 폐 편평상피암, 피부 흑색종, 식도암, 위암 또는 간암인 방법.
  26. 아래의 공정을 포함하는, FGFR 저해 활성을 갖는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염을 함유하는 항암제가 적용되는 환자를 선택하는 방법：
    (a)　피험자로부터 단리된 시료 중에 있어서 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 기재된 융합 폴리펩티드의 존재 여부를 결정하는 공정；
    (b)　상기 융합 폴리펩티드의 존재가 확인된 환자를 상기 항암제가 적용되는 환자로서 선택하는 공정.
  27. 아래의 공정을 포함하는, FGFR 저해 활성을 갖는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염을 함유하는 항암제가 적용되는 환자를 선택하는 방법：
    (a)　피험자로부터 단리된 시료 중에 있어서 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 기재된 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드의 존재 여부를 결정하는 공정；
    (b)　상기 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드의 존재가 확인된 환자를 상기 항암제가 적용되는 환자로서 선택하는 공정.
  28. 제26항 또는 제27항에 있어서,
    상기 암이 방광암, 뇌종양, 두경부 편평상피암, 폐암, 폐선암, 폐 편평상피암, 피부 흑색종, 식도암, 위암 또는 간암인 방법.
  29. 제26항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 FGFR 저해 활성을 갖는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염이 하기 식으로 나타내어지는 어느 하나의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염인 방법：
    [화합물 1]
    Figure pct00047

    (식 중, R1~R4는 각각 독립적으로 아래의 기를 나타낸다；
    R1은 수소, 히드록시, 할로겐, 시아노, 니트로, C1-4할로알킬, C1-6알킬, C2-6알케닐, C2-6알키닐, C3-7시클로알킬, C6-10아릴C1-4알킬, -OR5, -NR6R7, -(CR8R9)nZ1, -C(O)NR12R13, -SR14, -SOR15, -SO2R16, -NR17SO2R18, COOH, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6-10아릴, Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴, -COR19, -COOR20, -OC(O)R21, -NR22C(O)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR26R27, -SO2NR28R29, -OSO2R30, -SO3R31 또는 -Si(R32)3를 나타내고；
    R2는 수소, 히드록시, 할로겐, 시아노, 니트로, C1-4할로알킬, C1-6알킬, C2-6알케닐, C2-6알키닐, C3-7시클로알킬, C6-10아릴C1-4알킬, -OR5, -NR6R7, -(CR8R9)nZ1, -C(O)NR12R13, -SR14, -SOR15, -SO2R16, -NR17SO2R18, COOH, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴, -COR19, -COOR20, -OC(O)R21, -NR22C(O)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR26R27, -SO2NR28R29, -OSO2R30, -SO3R31 또는 -Si(R32)3를 나타내며；
    또는 R1 및 R2는 그들이 결합하고 있는 원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성하고, 여기서 상기 헤테로시클릴 또는 상기 헤테로아릴은 할로겐으로 치환되어 있어도 되며；
    R3는 수소, C1 - 5알킬, C6 - 10아릴C1 - 6알킬 또는 C1 - 4할로알킬을 나타내고；
    R4는 수소, 할로겐, C1 - 3알킬, C1 - 4할로알킬, 히드록시, 시아노, 니트로, C1 - 4알콕시, -(CH2)nZ1, -NR6R7, -OR5, -C(O)NR12R13, -SR14, -SOR15, -SO2R16, NR17SO2R18, COOH, -COR19, -COOR20, -OC(O)R21, -NR22C(O)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR26R27, -SO2NR28R29, -OSO2R30, -SO3R31 또는 -Si(R32)3를 나타내며；
    A는 5~10원 헤테로아릴 고리 또는 C6 - 10아릴 고리이고；
    R5는 C1 - 5알킬, C3 - 7시클로알킬, C3 - 7시클로알킬C1 - 3알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1-4할로알킬, C1 - 3알콕시C1 - 4알킬, C1 - 3알콕시C1 - 4알콕시C1 - 4알킬, C1 - 4아미노알킬, C1 - 4알킬아미노C1- 4알킬, 디(C1-4알킬)아미노C1 - 4알킬, C6 - 10아릴, C6 - 10아릴C1 - 3알킬, Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 3~10원 헤테로시클릴C1- 3알킬, 3~10원 헤테로시클릴, 5~10원 헤테로아릴, 5~10원 헤테로아릴C1 - 3알킬, C1 - 6모노히드록시알킬, C1 - 6디히드록시알킬 또는 C1 - 6트리히드록시알킬을 나타내며；
    R6 및 R7은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2-6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕시C1 - 4알킬, C6 - 10아릴C1 - 3알킬, 3~10원 헤테로시클릴C1-3알킬, 5~10원 헤테로아릴C1 - 3알킬, C1 - 6모노히드록시알킬, C1 - 6디히드록시알킬, C1 -6트리히드록시알킬, 3~10원 헤테로시클릴, C1 - 4아미노알킬, C1 - 4알킬아미노C1 - 4알킬, 디(C1-4알킬)아미노C1 - 4알킬 또는 시아노(C1-3알킬)을 나타내거나, 또는 R6 및 R7은 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성하고；
    n은 1~3을 나타내며；
    R8 및 R9은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1 - 4알킬 또는 할로겐을 나타내거나, 또는 R8 및 R9은 그들이 결합하고 있는 탄소원자와 함께 지환식 고리를 형성해도 되고；
    Z1은 수소, NR10R11, -OH, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 나타내며；
    R10 및 R11은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕시C1 - 4알킬, 시아노(C1 - 3알킬) 또는 C1 - 3알킬설포닐C1 - 4알킬을 나타내거나, 또는 R10 및 R11은 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성해도 되고；
    R12 및 R13은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2-6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕시C1 - 4알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴, 3~10원 헤테로시클릴, C6 - 10아릴C1 - 4알킬, 3~10원 헤테로시클릴C1 - 3알킬, 5~10원 헤테로아릴C1 -3알킬, 시아노(C1 - 3알킬), C1 - 3알킬설포닐C1 - 4알킬, 3~10원 지환식 고리, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내거나, 또는 R12 및 R13은 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성해도 되고；
    R14은 C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내며；
    R15은 C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
    R16은 C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내며；
    R17은 수소 또는 C1 - 4알킬을 나타내고；
    R18은 C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내며；
    R19은 수소, C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
    R20는 C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내며；
    R21은 C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
    R22는 수소, C1 - 4알킬 또는 C1 - 4할로알킬을 나타내며；
    R23는 수소, C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
    R24는 수소, C1 - 4알킬 또는 C1 - 4할로알킬을 나타내며；
    R25는 C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
    R26 및 R27은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕실C1 - 4알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴, 3~10원 헤테로시클릴, C6 - 10아릴C1 - 4알킬, 3~10원 헤테로시클릴C1 - 3알킬, 5~10원 헤테로아릴C1 -3알킬, 시아노(C1 - 3알킬), C1 - 3알킬설포닐C1 - 4알킬 또는 3~10원 지환식 고리를 나타내거나, 또는 R26 및 R27은 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성해도 되고；
    R28 및 R29은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕실C1 - 4알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴, 3~10원 헤테로시클릴, C6 - 10아릴C1 - 4알킬, 3~10원 헤테로시클릴C1 - 3알킬, 5~10원 헤테로아릴C1 -3알킬, 시아노(C1 - 3알킬), C1 - 3알킬설포닐C1 - 4알킬 또는 3~10원 지환식 고리를 나타내거나, 또는 R28 및 R29은 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성해도 되고；
    R30는 C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내며；
    R31은 C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
    R32는 C1 - 4알킬 또는 C6 - 10아릴을 나타내며；
    <P군>
    할로겐, C1 - 4알킬, C1 - 4할로알킬, -OH, C1 - 3알콕시, C1 - 3할로알콕시, 3~10원 헤테로시클릴아미노, -SO2R16, -CN, -NO2 및 3~10원 헤테로시클릴.
    <Q군>
    할로겐, C1 - 4알킬, C1 - 4할로알킬, -OH, C1 - 3알콕시, C1 - 6모노히드록시알킬, C1 - 6디히드록시알킬 또는 C1 - 6트리히드록시알킬, 3~10원 헤테로시클릴아민, -SO2R16, -CN, -NO2, C3 - 7시클로알킬, -COR19 및 C1 - 4알킬로 치환되어 있어도 되는 3~10원 헤테로시클릴.
    [화합물 2]
    Figure pct00048

    [화합물 3]
    Figure pct00049

    [화합물 4]
    Figure pct00050

    [화합물 5]
    Figure pct00051

    , 또는
    [화합물 6]
    Figure pct00052

    .
  30. 제29항에 있어서,
    상기 FGFR 저해 활성을 갖는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염이 식(I)에 나타내어지는 화합물로서, A가 인돌이고, R3 및 R4가 모두 수소인 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염인 방법.
  31. FGFR 저해 활성을 갖는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염이, 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 기재된 융합 폴리펩티드를 발현하거나 또는 그 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드를 갖는 환자에게 투여되도록 사용되는 것을 특징으로 하는, 상기 화합물을 함유하는 암 치료용 의약 조성물.
  32. 제31항에 있어서,
    상기 환자가 제26항 내지 제30항 중 어느 한 항에 기재된 방법에 의해 선택된 환자인 암 치료용 의약 조성물.
  33. 제31항 또는 제32항에 있어서,
    상기 암이 방광암, 뇌종양, 두경부 편평상피암, 폐암, 폐선암, 폐 편평상피암, 피부 흑색종, 식도암, 위암 또는 간암인 암 치료용 의약 조성물.
  34. 제31항 또는 제32항에 있어서,
    상기 암이 방광암인 암 치료용 의약 조성물.
  35. 제34항에 있어서,
    상기 방광암이 TNM 병기 분류에 있어서 스테이지 3 이상의 병기로 분류되는 암 치료용 의약 조성물.
  36. 제31항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 FGFR 저해 활성을 갖는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염이 하기 식으로 나타내어지는 어느 하나의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염인 암 치료용 의약 조성물：
    [화합물 1]
    Figure pct00053

    (식 중, R1~R4는 각각 독립적으로 아래의 기를 나타낸다；
    R1은 수소, 히드록시, 할로겐, 시아노, 니트로, C1 - 4할로알킬, C1 - 6알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C3 - 7시클로알킬, C6 - 10아릴C1 - 4알킬, -OR5, -NR6R7, -(CR8R9)nZ1, -C(O)NR12R13, -SR14, -SOR15, -SO2R16, -NR17SO2R18, COOH, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴, -COR19, -COOR20, -OC(O)R21, -NR22C(O)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR26R27, -SO2NR28R29, -OSO2R30, -SO3R31 또는 -Si(R32)3를 나타내고；
    R2는 수소, 히드록시, 할로겐, 시아노, 니트로, C1 - 4할로알킬, C1 - 6알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C3 - 7시클로알킬, C6 - 10아릴C1 - 4알킬, -OR5, -NR6R7, -(CR8R9)nZ1, -C(O)NR12R13, -SR14, -SOR15, -SO2R16, -NR17SO2R18, COOH, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴, -COR19, -COOR20, -OC(O)R21, -NR22C(O)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR26R27, -SO2NR28R29, -OSO2R30, -SO3R31 또는 -Si(R32)3를 나타내며；
    또는 R1 및 R2는 그들이 결합하고 있는 원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성하고, 여기서 상기 헤테로시클릴 또는 상기 헤테로아릴은 할로겐으로 치환되어 있어도 되며；
    R3는 수소, C1 - 5알킬, C6 - 10아릴C1 - 6알킬 또는 C1 - 4할로알킬을 나타내고；
    R4는 수소, 할로겐, C1 - 3알킬, C1 - 4할로알킬, 히드록시, 시아노, 니트로, C1 - 4알콕시, -(CH2)nZ1, -NR6R7, -OR5, -C(O)NR12R13, -SR14, -SOR15, -SO2R16, NR17SO2R18, COOH, -COR19, -COOR20, -OC(O)R21, -NR22C(O)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR26R27, -SO2NR28R29, -OSO2R30, -SO3R31 또는 -Si(R32)3를 나타내며；
    A는 5~10원 헤테로아릴 고리 또는 C6 - 10아릴 고리이고；
    R5는 C1 - 5알킬, C3 - 7시클로알킬, C3 - 7시클로알킬C1 - 3알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕시C1 - 4알킬, C1 - 3알콕시C1 - 4알콕시C1 - 4알킬, C1 - 4아미노알킬, C1 - 4알킬아미노C1- 4알킬, 디(C1-4알킬)아미노C1 - 4알킬, C6 - 10아릴, C6 - 10아릴C1 - 3알킬, Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 3~10원 헤테로시클릴C1- 3알킬, 3~10원 헤테로시클릴, 5~10원 헤테로아릴, 5~10원 헤테로아릴C1- 3알킬, C1 - 6모노히드록시알킬, C1 - 6디히드록시알킬 또는 C1 - 6트리히드록시알킬을 나타내며；
    R6 및 R7은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2-6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕시C1 - 4알킬, C6 - 10아릴C1 - 3알킬, 3~10원 헤테로시클릴C1-3알킬, 5~10원 헤테로아릴C1 - 3알킬, C1 - 6모노히드록시알킬, C1 - 6디히드록시알킬, C1 - 6트리히드록시알킬, 3~10원 헤테로시클릴, C1 - 4아미노알킬, C1 - 4알킬아미노C1 - 4알킬, 디(C1-4알킬)아미노C1 - 4알킬 또는 시아노(C1-3알킬)을 나타내거나, 또는 R6 및 R7은 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성하고；
    n은 1~3을 나타내며；
    R8 및 R9은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1 - 4알킬 또는 할로겐을 나타내거나, 또는 R8 및 R9은 그들이 결합하고 있는 탄소원자와 함께 지환식 고리를 형성해도 되고；
    Z1은 수소, NR10R11, -OH, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 나타내며；
    R10 및 R11은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕시C1 - 4알킬, 시아노(C1 - 3알킬) 또는 C1 - 3알킬설포닐C1 - 4알킬을 나타내거나, 또는 R10 및 R11은 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성해도 되고；
    R12 및 R13은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2-6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕시C1 - 4알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴, 3~10원 헤테로시클릴, C6 - 10아릴C1 - 4알킬, 3~10원 헤테로시클릴C1 - 3알킬, 5~10원 헤테로아릴C1 -3알킬, 시아노(C1 - 3알킬), C1 - 3알킬설포닐C1 - 4알킬, 3~10원 지환식 고리, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내거나, 또는 R12 및 R13은 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성해도 되고；
    R14은 C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내며；
    R15은 C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
    R16은 C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내며；
    R17은 수소 또는 C1 - 4알킬을 나타내고；
    R18은 C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내며；
    R19은 수소, C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
    R20는 C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내며；
    R21은 C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
    R22는 수소, C1 - 4알킬 또는 C1 - 4할로알킬을 나타내며；
    R23는 수소, C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
    R24는 수소, C1 - 4알킬 또는 C1 - 4할로알킬을 나타내며；
    R25는 C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
    R26 및 R27은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕실C1 - 4알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴, 3~10원 헤테로시클릴, C6 - 10아릴C1 - 4알킬, 3~10원 헤테로시클릴C1 - 3알킬, 5~10원 헤테로아릴C1- 3알킬, 시아노(C1 - 3알킬), C1 - 3알킬설포닐C1 - 4알킬 또는 3~10원 지환식 고리를 나타내거나, 또는 R26 및 R27은 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성해도 되고；
    R28 및 R29은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕실C1 - 4알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴, 3~10원 헤테로시클릴, C6 - 10아릴C1 - 4알킬, 3~10원 헤테로시클릴C1 - 3알킬, 5~10원 헤테로아릴C1- 3알킬, 시아노(C1 - 3알킬), C1 - 3알킬설포닐C1 - 4알킬 또는 3~10원 지환식 고리를 나타내거나, 또는 R28 및 R29은 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성해도 되고；
    R30는 C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내며；
    R31은 C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
    R32는 C1 - 4알킬 또는 C6 - 10아릴을 나타내며；
    <P군>
    할로겐, C1 - 4알킬, C1 - 4할로알킬, -OH, C1 - 3알콕시, C1 - 3할로알콕시, 3~10원 헤테로시클릴아미노, -SO2R16, -CN, -NO2 및 3~10원 헤테로시클릴.
    <Q군>
    할로겐, C1 - 4알킬, C1 - 4할로알킬, -OH, C1 - 3알콕시, C1 - 6모노히드록시알킬, C1 - 6디히드록시알킬 또는 C1 - 6트리히드록시알킬, 3~10원 헤테로시클릴아민, -SO2R16, -CN, -NO2, C3 - 7시클로알킬, -COR19 및 C1 - 4알킬로 치환되어 있어도 되는 3~10원 헤테로시클릴.
    [화합물 2]
    Figure pct00054

    [화합물 3]
    Figure pct00055

    [화합물 4]
    Figure pct00056

    [화합물 5]
    Figure pct00057

    , 또는
    [화합물 6]
    Figure pct00058

    .
  37. 제36항에 있어서,
    상기 FGFR 저해 활성을 갖는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염이 식(I)에 나타내어지는 화합물로서, A가 인돌이고, R3 및 R4가 모두 수소인 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염인 암 치료용 의약 조성물.
  38. FGFR 저해 활성을 갖는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염의 유효량을, 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 기재된 융합 폴리펩티드를 발현하거나 또는 그 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드를 갖는 암 환자에게 투여하는 것을 포함하는 암을 치료 또는 예방하는 방법.
  39. 제38항에 있어서,
    상기 환자가 제26항 내지 제30항 중 어느 한 항에 기재된 방법에 의해 선택된 환자인 방법.
  40. 제38항 또는 제39항에 있어서,
    상기 암이 방광암, 뇌종양, 두경부 편평상피암, 폐암, 폐선암, 폐 편평상피암, 피부 흑색종, 식도암, 위암 또는 간암인 방법.
  41. 제38항 또는 제39항에 있어서,
    상기 암이 방광암인 방법.
  42. 제41항에 있어서,
    상기 방광암이 TNM 병기 분류에 있어서 스테이지 3 이상의 병기로 분류되는 방법.
  43. 제38항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 FGFR 저해 활성을 갖는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염이 하기 식으로 나타내어지는 어느 하나의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염인 방법：
    [화합물 1]
    Figure pct00059

    (식 중, R1~R4는 각각 독립적으로 아래의 기를 나타낸다；
    R1은 수소, 히드록시, 할로겐, 시아노, 니트로, C1 - 4할로알킬, C1 - 6알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C3 - 7시클로알킬, C6 - 10아릴C1 - 4알킬, -OR5, -NR6R7, -(CR8R9)nZ1, -C(O)NR12R13, -SR14, -SOR15, -SO2R16, -NR17SO2R18, COOH, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴, -COR19, -COOR20, -OC(O)R21, -NR22C(O)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR26R27, -SO2NR28R29, -OSO2R30, -SO3R31 또는 -Si(R32)3를 나타내고；
    R2는 수소, 히드록시, 할로겐, 시아노, 니트로, C1 - 4할로알킬, C1 - 6알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C3 - 7시클로알킬, C6 - 10아릴C1 - 4알킬, -OR5, -NR6R7, -(CR8R9)nZ1, -C(O)NR12R13, -SR14, -SOR15, -SO2R16, -NR17SO2R18, COOH, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴, -COR19, -COOR20, -OC(O)R21, -NR22C(O)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR26R27, -SO2NR28R29, -OSO2R30, -SO3R31 또는 -Si(R32)3를 나타내며；
    또는 R1 및 R2는 그들이 결합하고 있는 원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성하고, 여기서 상기 헤테로시클릴 또는 상기 헤테로아릴은 할로겐으로 치환되어 있어도 되며；
    R3는 수소, C1 - 5알킬, C6 - 10아릴C1 - 6알킬 또는 C1 - 4할로알킬을 나타내고；
    R4는 수소, 할로겐, C1 - 3알킬, C1 - 4할로알킬, 히드록시, 시아노, 니트로, C1 - 4알콕시, -(CH2)nZ1, -NR6R7, -OR5, -C(O)NR12R13, -SR14, -SOR15, -SO2R16, NR17SO2R18, COOH, -COR19, -COOR20, -OC(O)R21, -NR22C(O)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR26R27, -SO2NR28R29, -OSO2R30, -SO3R31 또는 -Si(R32)3를 나타내며；
    A는 5~10원 헤테로아릴 고리 또는 C6 - 10아릴 고리이고；
    R5는 C1 - 5알킬, C3 - 7시클로알킬, C3 - 7시클로알킬C1 - 3알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕시C1 - 4알킬, C1 - 3알콕시C1 - 4알콕시C1 - 4알킬, C1 - 4아미노알킬, C1 - 4알킬아미노C1- 4알킬, 디(C1-4알킬)아미노C1 - 4알킬, C6 - 10아릴, C6 - 10아릴C1 - 3알킬, Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 3~10원 헤테로시클릴C1- 3알킬, 3~10원 헤테로시클릴, 5~10원 헤테로아릴, 5~10원 헤테로아릴C1 - 3알킬, C1 - 6모노히드록시알킬, C1 - 6디히드록시알킬 또는 C1 - 6트리히드록시알킬을 나타내며；
    R6 및 R7은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2-6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕시C1 - 4알킬, C6 - 10아릴C1 - 3알킬, 3~10원 헤테로시클릴C1-3알킬, 5~10원 헤테로아릴C1 - 3알킬, C1 - 6모노히드록시알킬, C1 - 6디히드록시알킬, C1 - 6트리히드록시알킬, 3~10원 헤테로시클릴, C1 - 4아미노알킬, C1 - 4알킬아미노C1 - 4알킬, 디(C1-4알킬)아미노C1 - 4알킬 또는 시아노(C1-3알킬)을 나타내거나, 또는 R6 및 R7은 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성하고；
    n은 1~3을 나타내며；
    R8 및 R9은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1 - 4알킬 또는 할로겐을 나타내거나, 또는 R8 및 R9은 그들이 결합하고 있는 탄소원자와 함께 지환식 고리를 형성해도 되고；
    Z1은 수소, NR10R11, -OH, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 나타내며；
    R10 및 R11은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕시C1 - 4알킬, 시아노(C1 - 3알킬) 또는 C1 - 3알킬설포닐C1 - 4알킬을 나타내거나, 또는 R10 및 R11은 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성해도 되고；
    R12 및 R13은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕시C1 - 4알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴, 3~10원 헤테로시클릴, C6 - 10아릴C1 - 4알킬, 3~10원 헤테로시클릴C1 - 3알킬, 5~10원 헤테로아릴C1 -3알킬, 시아노(C1 - 3알킬), C1 - 3알킬설포닐C1 - 4알킬, 3~10원 지환식 고리, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내거나, 또는 R12 및 R13은 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성해도 되고；
    R14은 C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내며；
    R15은 C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
    R16은 C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내며；
    R17은 수소 또는 C1 - 4알킬을 나타내고；
    R18은 C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내며；
    R19은 수소, C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
    R20는 C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내며；
    R21은 C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
    R22는 수소, C1 - 4알킬 또는 C1 - 4할로알킬을 나타내며；
    R23는 수소, C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
    R24는 수소, C1 - 4알킬 또는 C1 - 4할로알킬을 나타내며；
    R25는 C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
    R26 및 R27은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕실C1 - 4알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴, 3~10원 헤테로시클릴, C6 - 10아릴C1 - 4알킬, 3~10원 헤테로시클릴C1 - 3알킬, 5~10원 헤테로아릴C1 -3알킬, 시아노(C1 - 3알킬), C1 - 3알킬설포닐C1 - 4알킬 또는 3~10원 지환식 고리를 나타내거나, 또는 R26 및 R27은 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성해도 되고；
    R28 및 R29은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕실C1 - 4알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴, 3~10원 헤테로시클릴, C6 - 10아릴C1 - 4알킬, 3~10원 헤테로시클릴C1 - 3알킬, 5~10원 헤테로아릴C1 -3알킬, 시아노(C1 - 3알킬), C1 - 3알킬설포닐C1 - 4알킬 또는 3~10원 지환식 고리를 나타내거나, 또는 R28 및 R29은 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성해도 되고；
    R30는 C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내며；
    R31은 C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
    R32는 C1 - 4알킬 또는 C6 - 10아릴을 나타내며；
    <P군>
    할로겐, C1 - 4알킬, C1 - 4할로알킬, -OH, C1 - 3알콕시, C1 - 3할로알콕시, 3~10원 헤테로시클릴아미노, -SO2R16, -CN, -NO2 및 3~10원 헤테로시클릴.
    <Q군>
    할로겐, C1 - 4알킬, C1 - 4할로알킬, -OH, C1 - 3알콕시, C1 - 6모노히드록시알킬, C1 - 6디히드록시알킬 또는 C1 - 6트리히드록시알킬, 3~10원 헤테로시클릴아민, -SO2R16, -CN, -NO2, C3 - 7시클로알킬, -COR19 및 C1 - 4알킬로 치환되어 있어도 되는 3~10원 헤테로시클릴.
    [화합물 2]
    Figure pct00060

    [화합물 3]
    Figure pct00061

    [화합물 4]
    Figure pct00062

    [화합물 5]
    Figure pct00063

    , 또는
    [화합물 6]
    Figure pct00064

    .
  44. 제43항에 있어서,
    상기 FGFR 저해 활성을 갖는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염이 식(I)에 나타내어지는 화합물로서, A가 인돌이고, R3 및 R4가 모두 수소인 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염인 방법.
  45. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 기재된 융합 폴리펩티드를 발현하거나 또는 그 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드를 갖는 환자에게 투여하기 위한 암 치료용 의약 조성물의 제조에 있어서의 FGFR 저해 활성을 갖는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염의 사용.
  46. 제45항에 있어서,
    상기 환자가 제26항 내지 제30항 중 어느 한 항에 기재된 방법에 의해 선택된 환자인 사용.
  47. 제45항 또는 제46항에 있어서,
    상기 암이 방광암, 뇌종양, 두경부 편평상피암, 폐암, 폐선암, 폐 편평상피암, 피부 흑색종, 식도암, 위암 또는 간암인 사용.
  48. 제45항 또는 제46항에 있어서,
    상기 암이 방광암인 사용.
  49. 제48항에 있어서,
    상기 방광암이 TNM 병기 분류에 있어서 스테이지 3 이상의 병기로 분류되는 사용.
  50. 제45항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 FGFR 저해 활성을 갖는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염이 하기 식으로 나타내어지는 어느 하나의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염인 사용：
    [화합물 1]
    Figure pct00065

    (식 중, R1~R4는 각각 독립적으로 아래의 기를 나타낸다；
    R1은 수소, 히드록시, 할로겐, 시아노, 니트로, C1 - 4할로알킬, C1 - 6알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C3 - 7시클로알킬, C6 - 10아릴C1 - 4알킬, -OR5, -NR6R7, -(CR8R9)nZ1, -C(O)NR12R13, -SR14, -SOR15, -SO2R16, -NR17SO2R18, COOH, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴, -COR19, -COOR20, -OC(O)R21, -NR22C(O)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR26R27, -SO2NR28R29, -OSO2R30, -SO3R31 또는 -Si(R32)3를 나타내고；
    R2는 수소, 히드록시, 할로겐, 시아노, 니트로, C1 - 4할로알킬, C1 - 6알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C3 - 7시클로알킬, C6 - 10아릴C1 - 4알킬, -OR5, -NR6R7, -(CR8R9)nZ1, -C(O)NR12R13, -SR14, -SOR15, -SO2R16, -NR17SO2R18, COOH, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴, -COR19, -COOR20, -OC(O)R21, -NR22C(O)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR26R27, -SO2NR28R29, -OSO2R30, -SO3R31 또는 -Si(R32)3를 나타내며；
    또는 R1 및 R2는 그들이 결합하고 있는 원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성하고, 여기서 상기 헤테로시클릴 또는 상기 헤테로아릴은 할로겐으로 치환되어 있어도 되며；
    R3는 수소, C1 - 5알킬, C6 - 10아릴C1 - 6알킬 또는 C1 - 4할로알킬을 나타내고；
    R4는 수소, 할로겐, C1 - 3알킬, C1 - 4할로알킬, 히드록시, 시아노, 니트로, C1 - 4알콕시, -(CH2)nZ1, -NR6R7, -OR5, -C(O)NR12R13, -SR14, -SOR15, -SO2R16, NR17SO2R18, COOH, -COR19, -COOR20, -OC(O)R21, -NR22C(O)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR26R27, -SO2NR28R29, -OSO2R30, -SO3R31 또는 -Si(R32)3를 나타내며；
    A는 5~10원 헤테로아릴 고리 또는 C6 - 10아릴 고리이고；
    R5는 C1 - 5알킬, C3 - 7시클로알킬, C3 - 7시클로알킬C1 - 3알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1-4할로알킬, C1 - 3알콕시C1 - 4알킬, C1 - 3알콕시C1 - 4알콕시C1 - 4알킬, C1 - 4아미노알킬, C1 - 4알킬아미노C1- 4알킬, 디(C1-4알킬)아미노C1 - 4알킬, C6 - 10아릴, C6 - 10아릴C1 - 3알킬, Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 3~10원 헤테로시클릴C1- 3알킬, 3~10원 헤테로시클릴, 5~10원 헤테로아릴, 5~10원 헤테로아릴C1 - 3알킬, C1 - 6모노히드록시알킬, C1 - 6디히드록시알킬 또는 C1 - 6트리히드록시알킬을 나타내며；
    R6 및 R7은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2-6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕시C1 - 4알킬, C6 - 10아릴C1 - 3알킬, 3~10원 헤테로시클릴C1-3알킬, 5~10원 헤테로아릴C1 - 3알킬, C1 - 6모노히드록시알킬, C1 - 6디히드록시알킬, C1 - 6트리히드록시알킬, 3~10원 헤테로시클릴, C1 - 4아미노알킬, C1 - 4알킬아미노C1 - 4알킬, 디(C1-4알킬)아미노C1 - 4알킬 또는 시아노(C1-3알킬)을 나타내거나, 또는 R6 및 R7은 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성하고；
    n은 1~3을 나타내며；
    R8 및 R9은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1 - 4알킬 또는 할로겐을 나타내거나, 또는 R8 및 R9은 그들이 결합하고 있는 탄소원자와 함께 지환식 고리를 형성해도 되고；
    Z1은 수소, NR10R11, -OH, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 나타내며；
    R10 및 R11은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕시C1 - 4알킬, 시아노(C1 - 3알킬) 또는 C1 - 3알킬설포닐C1 - 4알킬을 나타내거나, 또는 R10 및 R11은 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성해도 되고；
    R12 및 R13은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2-6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕시C1 - 4알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴, 3~10원 헤테로시클릴, C6 - 10아릴C1 - 4알킬, 3~10원 헤테로시클릴C1 - 3알킬, 5~10원 헤테로아릴C1 -3알킬, 시아노(C1 - 3알킬), C1 - 3알킬설포닐C1 - 4알킬, 3~10원 지환식 고리, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내거나, 또는 R12 및 R13은 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성해도 되고；
    R14은 C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내며；
    R15은 C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
    R16은 C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내며；
    R17은 수소 또는 C1 - 4알킬을 나타내고；
    R18은 C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내며；
    R19은 수소, C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
    R20는 C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내며；
    R21은 C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
    R22는 수소, C1 - 4알킬 또는 C1 - 4할로알킬을 나타내며；
    R23는 수소, C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
    R24는 수소, C1 - 4알킬 또는 C1 - 4할로알킬을 나타내며；
    R25는 C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
    R26 및 R27은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕실C1 - 4알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴, 3~10원 헤테로시클릴, C6 - 10아릴C1 - 4알킬, 3~10원 헤테로시클릴C1 - 3알킬, 5~10원 헤테로아릴C1 -3알킬, 시아노(C1 - 3알킬), C1 - 3알킬설포닐C1 - 4알킬 또는 3~10원 지환식 고리를 나타내거나, 또는 R26 및 R27은 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성해도 되고；
    R28 및 R29은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕실C1 - 4알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴, 3~10원 헤테로시클릴, C6 - 10아릴C1 - 4알킬, 3~10원 헤테로시클릴C1 - 3알킬, 5~10원 헤테로아릴C1 -3알킬, 시아노(C1 - 3알킬), C1 - 3알킬설포닐C1 - 4알킬 또는 3~10원 지환식 고리를 나타내거나, 또는 R28 및 R29은 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성해도 되고；
    R30는 C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내며；
    R31은 C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
    R32는 C1 - 4알킬 또는 C6 - 10아릴을 나타내며；
    <P군>
    할로겐, C1 - 4알킬, C1 - 4할로알킬, -OH, C1 - 3알콕시, C1 - 3할로알콕시, 3~10원 헤테로시클릴아미노, -SO2R16, -CN, -NO2 및 3~10원 헤테로시클릴.
    <Q군>
    할로겐, C1 - 4알킬, C1 - 4할로알킬, -OH, C1 - 3알콕시, C1 - 6모노히드록시알킬, C1 - 6디히드록시알킬 또는 C1 - 6트리히드록시알킬, 3~10원 헤테로시클릴아민, -SO2R16, -CN, -NO2, C3 - 7시클로알킬, -COR19 및 C1 - 4알킬로 치환되어 있어도 되는 3~10원 헤테로시클릴.
    [화합물 2]
    Figure pct00066

    [화합물 3]
    Figure pct00067

    [화합물 4]
    Figure pct00068

    [화합물 5]
    Figure pct00069

    , 또는
    [화합물 6]
    Figure pct00070

    .
  51. 제50항에 있어서,
    상기 FGFR 저해 활성을 갖는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염이 식(I)에 나타내어지는 화합물로서, A가 인돌이고, R3 및 R4가 모두 수소인 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염인 사용.
  52. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 기재된 융합 폴리펩티드를 발현하거나 또는 그 융합 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드를 갖는 암 환자의 치료 또는 예방에 있어서의 사용을 위한 FGFR 저해 활성을 갖는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염.
  53. 제52항에 있어서,
    상기 환자가 제26항 내지 제30항 중 어느 한 항에 기재된 방법에 의해 선택된 환자인 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염.
  54. 제52항 또는 제53항에 있어서,
    상기 암이 방광암, 뇌종양, 두경부 편평상피암, 폐암, 폐선암, 폐 편평상피암, 피부 흑색종, 식도암, 위암 또는 간암인 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염.
  55. 제52항 또는 제53항에 있어서,
    상기 암이 방광암인 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염.
  56. 제55항에 있어서,
    상기 방광암이 TNM 병기 분류에 있어서 스테이지 3 이상의 병기로 분류되는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염.
  57. 제52항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 FGFR 저해 활성을 갖는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염이 하기 식으로 나타내어지는 어느 하나의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염인 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염：
    [화합물 1]
    Figure pct00071

    (식 중, R1~R4는 각각 독립적으로 아래의 기를 나타낸다；
    R1은 수소, 히드록시, 할로겐, 시아노, 니트로, C1 - 4할로알킬, C1 - 6알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C3 - 7시클로알킬, C6 - 10아릴C1 - 4알킬, -OR5, -NR6R7, -(CR8R9)nZ1, -C(O)NR12R13, -SR14, -SOR15, -SO2R16, -NR17SO2R18, COOH, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴, -COR19, -COOR20, -OC(O)R21, -NR22C(O)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR26R27, -SO2NR28R29, -OSO2R30, -SO3R31 또는 -Si(R32)3를 나타내고；
    R2는 수소, 히드록시, 할로겐, 시아노, 니트로, C1 - 4할로알킬, C1 - 6알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C3 - 7시클로알킬, C6 - 10아릴C1 - 4알킬, -OR5, -NR6R7, -(CR8R9)nZ1, -C(O)NR12R13, -SR14, -SOR15, -SO2R16, -NR17SO2R18, COOH, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴, -COR19, -COOR20, -OC(O)R21, -NR22C(O)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR26R27, -SO2NR28R29, -OSO2R30, -SO3R31 또는 -Si(R32)3를 나타내며；
    또는 R1 및 R2는 그들이 결합하고 있는 원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성하고, 여기서 상기 헤테로시클릴 또는 상기 헤테로아릴은 할로겐으로 치환되어 있어도 되며；
    R3는 수소, C1 - 5알킬, C6 - 10아릴C1 - 6알킬 또는 C1 - 4할로알킬을 나타내고；
    R4는 수소, 할로겐, C1 - 3알킬, C1 - 4할로알킬, 히드록시, 시아노, 니트로, C1 - 4알콕시, -(CH2)nZ1, -NR6R7, -OR5, -C(O)NR12R13, -SR14, -SOR15, -SO2R16, NR17SO2R18, COOH, -COR19, -COOR20, -OC(O)R21, -NR22C(O)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR26R27, -SO2NR28R29, -OSO2R30, -SO3R31 또는 -Si(R32)3를 나타내며；
    A는 5~10원 헤테로아릴 고리 또는 C6 - 10아릴 고리이고；
    R5는 C1 - 5알킬, C3 - 7시클로알킬, C3 - 7시클로알킬C1 - 3알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1-4할로알킬, C1 - 3알콕시C1 - 4알킬, C1 - 3알콕시C1 - 4알콕시C1 - 4알킬, C1 - 4아미노알킬, C1 - 4알킬아미노C1- 4알킬, 디(C1-4알킬)아미노C1 - 4알킬, C6 - 10아릴, C6 - 10아릴C1 - 3알킬, Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 3~10원 헤테로시클릴C1- 3알킬, 3~10원 헤테로시클릴, 5~10원 헤테로아릴, 5~10원 헤테로아릴C1 - 3알킬, C1 - 6모노히드록시알킬, C1 - 6디히드록시알킬 또는 C1 - 6트리히드록시알킬을 나타내며；
    R6 및 R7은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2-6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕시C1 - 4알킬, C6 - 10아릴C1 - 3알킬, 3~10원 헤테로시클릴C1-3알킬, 5~10원 헤테로아릴C1 - 3알킬, C1 - 6모노히드록시알킬, C1 - 6디히드록시알킬, C1 - 6트리히드록시알킬, 3~10원 헤테로시클릴, C1 - 4아미노알킬, C1 - 4알킬아미노C1 - 4알킬, 디(C1-4알킬)아미노C1 - 4알킬 또는 시아노(C1-3알킬)을 나타내거나, 또는 R6 및 R7은 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성하고；
    n은 1~3을 나타내며；
    R8 및 R9은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1 - 4알킬 또는 할로겐을 나타내거나, 또는 R8 및 R9은 그들이 결합하고 있는 탄소원자와 함께 지환식 고리를 형성해도 되고；
    Z1은 수소, NR10R11, -OH, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 나타내며；
    R10 및 R11은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕시C1 - 4알킬, 시아노(C1 - 3알킬) 또는 C1 - 3알킬설포닐C1 - 4알킬을 나타내거나, 또는 R10 및 R11은 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성해도 되고；
    R12 및 R13은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2-6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕시C1 - 4알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴, 3~10원 헤테로시클릴, C6 - 10아릴C1 - 4알킬, 3~10원 헤테로시클릴C1 - 3알킬, 5~10원 헤테로아릴C1 -3알킬, 시아노(C1 - 3알킬), C1 - 3알킬설포닐C1 - 4알킬, 3~10원 지환식 고리, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내거나, 또는 R12 및 R13은 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성해도 되고；
    R14은 C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내며；
    R15은 C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
    R16은 C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내며；
    R17은 수소 또는 C1 - 4알킬을 나타내고；
    R18은 C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, P군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 C6 - 10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내며；
    R19은 수소, C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 또는 Q군으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 복수의 기로 치환되어 있어도 되는 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
    R20는 C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내며；
    R21은 C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
    R22는 수소, C1 - 4알킬 또는 C1 - 4할로알킬을 나타내며；
    R23는 수소, C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
    R24는 수소, C1 - 4알킬 또는 C1 - 4할로알킬을 나타내며；
    R25는 C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
    R26 및 R27은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕실C1 - 4알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴, 3~10원 헤테로시클릴, C6 - 10아릴C1 - 4알킬, 3~10원 헤테로시클릴C1 - 3알킬, 5~10원 헤테로아릴C1 -3알킬, 시아노(C1 - 3알킬), C1 - 3알킬설포닐C1 - 4알킬 또는 3~10원 지환식 고리를 나타내거나, 또는 R26 및 R27은 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성해도 되고；
    R28 및 R29은 동일해도 되고 상이해도 되며, 각각 수소, C1 - 4알킬, C2 - 6알케닐, C2 - 6알키닐, C1 - 4할로알킬, C1 - 3알콕실C1 - 4알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴, 3~10원 헤테로시클릴, C6 - 10아릴C1 - 4알킬, 3~10원 헤테로시클릴C1 - 3알킬, 5~10원 헤테로아릴C1 -3알킬, 시아노(C1 - 3알킬), C1 - 3알킬설포닐C1 - 4알킬 또는 3~10원 지환식 고리를 나타내거나, 또는 R28 및 R29은 그들이 결합하고 있는 질소원자와 함께 3~10원 헤테로시클릴 또는 5~10원 헤테로아릴을 형성해도 되고；
    R30는 C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내며；
    R31은 C1 - 4알킬, C3 - 7시클로알킬, C1 - 4할로알킬, C6 - 10아릴, 5~10원 헤테로아릴 또는 3~10원 헤테로시클릴을 나타내고；
    R32는 C1 - 4알킬 또는 C6 - 10아릴을 나타내며；
    <P군>
    할로겐, C1 - 4알킬, C1 - 4할로알킬, -OH, C1 - 3알콕시, C1 - 3할로알콕시, 3~10원 헤테로시클릴아미노, -SO2R16, -CN, -NO2 및 3~10원 헤테로시클릴.
    <Q군>
    할로겐, C1 - 4알킬, C1 - 4할로알킬, -OH, C1 - 3알콕시, C1 - 6모노히드록시알킬, C1 - 6디히드록시알킬 또는 C1 - 6트리히드록시알킬, 3~10원 헤테로시클릴아민, -SO2R16, -CN, -NO2, C3 - 7시클로알킬, -COR19 및 C1 - 4알킬로 치환되어 있어도 되는 3~10원 헤테로시클릴.
    [화합물 2]
    Figure pct00072

    [화합물 3]
    Figure pct00073

    [화합물 4]
    Figure pct00074

    [화합물 5]
    Figure pct00075

    , 또는
    [화합물 6]
    Figure pct00076

    .
  58. 제57항에 있어서,
    상기 FGFR 저해 활성을 갖는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염이 식(I)에 나타내어지는 화합물로서, A가 인돌이고, R3 및 R4가 모두 수소인 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염인 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염.
  59. 아래의 공정을 포함하는, FGFR 저해 활성을 갖는 화합물을 동정하는 방법：
    (a) 피검 화합물의 존재하 및 부존재하에서 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 기재된 융합 폴리펩티드를 발현하는 세포를 각각 배양하여 세포의 증식 레벨을 결정하는 공정；
    (b) 피검 화합물의 존재하에서 상기 세포를 배양한 경우의 세포의 증식 레벨을 피검 화합물의 부존재하에서 상기 세포를 배양한 경우의 세포의 증식 레벨과 비교하는 공정；및
    (c) 피검 화합물의 존재하에서 상기 세포를 배양한 경우의 세포의 증식 레벨이 피검 화합물의 부존재하에서 상기 세포를 배양한 경우의 세포의 증식 레벨보다 낮은 경우는 상기 피검 화합물이 FGFR 저해 활성을 갖는 것으로 판정하는 공정.
  60. 아래의 공정을 포함하는, FGFR 저해 활성을 갖는 화합물을 동정하는 방법：
    (a) 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 기재된 융합 폴리펩티드를 발현하는 세포를 이식받은 비인간 포유동물에게 피검 화합물을 투여하여 상기 세포의 증식 레벨을 결정하는 공정；
    (b) 공정 (a)에서 결정된 세포의 증식 레벨을 상기 피검 화합물의 투여를 받지 않은 상기 세포를 이식받은 비인간 포유동물에 있어서 결정된 상기 세포의 세포 증식 레벨과 비교하는 공정；및
    (c) 공정 (a)에서 결정된 세포의 증식 레벨이 상기 피검 화합물의 투여를 받지 않은 상기 세포를 이식받은 비인간 포유동물에 있어서 결정된 상기 세포의 세포 증식 레벨보다 낮은 경우는 상기 피검 화합물이 FGFR 저해 활성을 갖는 것으로 판정하는 공정.
  61. 제59항 또는 제60항에 있어서,
    상기 세포가 암세포인 방법.
  62. 제61항에 있어서,
    상기 암세포가 방광암 세포, 뇌종양 세포, 두경부 편평상피암 세포, 폐암 세포, 폐선암 세포, 폐 편평상피암 세포, 피부 흑색종 세포, 식도암 세포, 위암 세포 또는 간암 세포인 방법.
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