MX2015003744A - Gen de fusion del receptor de factor de crecimiento de fibroblastos 3 (fgfr3) y medicamentos farmaceutico para tratar el mismo. - Google Patents

Gen de fusion del receptor de factor de crecimiento de fibroblastos 3 (fgfr3) y medicamentos farmaceutico para tratar el mismo.

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MX2015003744A
MX2015003744A MX2015003744A MX2015003744A MX2015003744A MX 2015003744 A MX2015003744 A MX 2015003744A MX 2015003744 A MX2015003744 A MX 2015003744A MX 2015003744 A MX2015003744 A MX 2015003744A MX 2015003744 A MX2015003744 A MX 2015003744A
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Yoshito Nakanishi
Nukinori Akiyama
Yukari Nishito
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Chugai Pharmaceutical Co Ltd
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Abstract

Se estudió extensamente al gen que codifica para FGFR con respecto a su expresión, hiperamplificación, mutación, translocación o similares en diversas células cancerosas, como un resultado, se identificaron y aislaron polipéptidos de fusión novedosos en los cuales el polipéptido FGFR3 está fusionado con un polipéptido diferente, a partir de diversos tipos de células derivadas de cáncer de vejiga y células de cáncer de pulmón. El uso de un polipéptido de fusión de la presente invención como un biomarcador en un tratamiento contra el cáncer basado en inhibidor de FGFR permite evitar los efectos secundarios en el tratamiento contra el cáncer y controlar la condición terapéutica para producir el mejor efecto terapéutico y de esta manera se habilita medicina individualizada.

Description

GEN DE FUSIÓN DEL RECEPTOR DE FACTOR DE CRECIMIENTO DE FIBROBLASTOS 3 (FGFR3) Y MEDICAMENTO FARMACÉUTICO PARA TRATAR EL MISMO CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se relaciona con polipéptidos de fusión novedosos que se expresan en células anormales tales como células cancerosas; polinucleótidos que codifican para los polipéptidos; vectores que comprenden los polinucleótidos; células que comprenden los vectores; anticuerpos y fragmentos de los mismos los cuales se unen específicamente a los polipéptidos; cebadores oligonucleotídicos que hibridizan con los polinucleótidos; oligonucleótidos que escinden los polinucleótidos; composiciones farmacéuticas que comprenden los anticuerpos u oligonucleótidos; métodos y kits para detectar los polinucleótidos o polipéptidos de fusión; métodos para probar susceptibilidad a cáncer, si el sujeto es afectado con cáncer o si el cáncer ha progresado en base en la presencia o ausencia de los polinucleótidos o polipéptidos de fusión; métodos para seleccionar pacientes con cáncer a los cuales es aplicable un inhibidor de FGFR; composiciones farmacéuticas para tratar cáncer en donde los compuestos que tienen actividad inhibidora de FGFR o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos se utilizan para administración a pacientes que expresan los polipéptidos de fusión o que Ref.255054 portan los polinucleótidos; métodos para tratar o prevenir cáncer el cual comprende la etapa de administrar una cantidad eficaz de los compuestos que tienen actividad inhibidora de FGFR o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos a pacientes que expresan polipéptidos de fusión o que portan los polinucleótidos; uso de compuestos que tienen actividad inhibidora de FGFR o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos en la producción de composiciones farmacéuticas para tratamiento de cáncer para administración a pacientes que expresan los polipéptidos de fusión o que portan los polinucleótidos; compuestos que tienen actividad inhibidora de FGFR o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos para uso en el tratamiento o prevención en pacientes que expresan los polipéptidos de fusión o que portan los polinucleótidos; así como métodos para identificar inhibidores de FGFR y similares.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN El cáncer se puede desarrollar en cualquier órgano o tejido y es altamente refractario y mortal. Se puede afirmar que el cáncer es una enfermedad muy problemática. Datos estadísticos recientes muestran que una de cada dos personas es diagnosticada con cáncer durante la vida y uno de cuatro hombres y una de seis mujeres mueren de cáncer. Así, el cáncer constituye una enfermedad extremadamente grave.
Hasta ahora se han desarrollado y prescrito numerosos agentes anticancerígenos para muchos pacientes con cáncer y se ha obtenido cierto resultado terapéutico. No obstante, los agentes anticancerígenos es bien sabido que producen también efectos secundarios graves. Al mismo tiempo, se ha sabido durante mucho tiempo que existen diferencias individuales en la respuesta a agentes anticancerígenos, es decir, los efectos terapéuticos y efectos secundarios, aunque la causa aún no se ha dilucidado.
Avances recientes en ciencias y teenología, en particular un rápido progreso de farmacogenómica (PGx) nos ha permitido entender diversas enfermedades incluyendo el cáncer (tales como cáncer, diabetes e hipertensión) a nivel molecular. Se ha revelado que entre pacientes que muestran síntomas similares, existen casos en donde está involucrado el polimorfismo genético (que incluye mutación de genes) en las diversas diferencias individuales observadas, por ejemplo diferencias en la absorción, distribución, metabolismo y excreción de agentes farmacéuticos administrados así como diferencias en la respuesta en los sitios de acción, diferencias en condiciones patológicas y diferencias en susceptibilidad a enfermedad.
Esto sugiere que para pacientes quienes ya han sido afectados con cáncer, los efectos terapéuticos se pueden incrementar y los efectos secundarios se pueden reducir, por ejemplo, al analizar la información genómica del paciente por adelantado, aanntteess ddee la administración de agentes anticancerígenos y al seleccionar un agente que se administre y que determine el modo de prescripeión en base en la presencia o ausencia de polimorfismos genéticos específicos.
De igual manera, para personas sanas también, la información genómica de un individuo se puede analizar utilizando farmacogenómica para predecir la susceptibilidad de la persona a una enfermedad (probabilidad de ser afectado con una enfermedad) así como la capacidad de respuesta de la persona a agentes farmacéuticos, en base en la presencia o ausencia de polimorfismos genéticos específicos.
Este tipo novedoso de método terapéutico, el cual utiliza polimorfismos genéticos específicos por lo tanto polipéptidos identificados o mutantes que resultan de tales polimorfismos como un biomarcador se denomina como medicina hecha a la medida, medicina hecha adecuada, medicina personalizada o medicina adaptada y se ha adoptado para el desarrollo clínico o de productos farmacéuticos y práctica clínica en diversos países.
De manera similar, agentes que se dirigen a polimorfismos genéticos específicos identificados como se describe en lo anterior o polipéptidos mutantes que resultan de estos polimorfismos se denominan como fármacos dirigidos molecularmente y su desarrollo se ha iniciado de modo activo .
Los receptores de factor de crecimiento de fibroblastos (FGFR, por sus siglas en inglés) son cinasas que pertenecen a la familia del receptor de tirosina cinasa. FGFR1, FGFR2, FGFR3 y FGFR4 constituyen la familia FGFR. El ligando es factor de crecimiento de fibroblastos (FGF, por sus siglas en inglés) y la familia está formada por 22 tipos de proteínas estructuralmente similares.
Las señales transmitidas por medio de FGFR son transportadas a la vía MAPK o la vía PI3K/AKT. Se ha reportado que en el cáncer, la transducción de señal está involucrada en el crecimiento celular, angiogénesis, migración celular, invasión, metástasis, etc., y FGFR se activa como un resultado de la sobreexpresión, hiperamplif icación de gen, mutación o translocación (documento que no es de patente 1). Por ejemplo, se sabe que para FGFR3, se observa translocación genética en mieloma múltiple (documento que no es de patente 2); se observa mutación genética en cáncer de vejiga (documento que no es de patente 3); y se observa sobreexpresión en cáncer de ovario, carcinoma de pulmón amicrocítico y carcinoma hepatocelular.
Los hallazgos descritos en lo anterior sugieren una conexión entre FGFR y cáncer. De esta manera se han realizado intentos por desarrollar compuestos con actividad inhibidora de FGFR como agentes anticancerígenos (documentos que no son de patente 4 y 5).
Aunque muy recientemente se ha reportado que la translocación genética que sugiere la presencia de un polipéptido de fusión de FGFR3 y la proteína enrollada-helicoidal ácida transformante 3 (TACC3, por sus siglas en inglés) o un polipéptido de fusión de FGFR1 y TACC1 se encontró en algunos casos de tumor cerebral glioblastoma multiforme (GBM, por sus siglas en inglés) (tres de 97 muestras, 3.1%) (documento que no es de patente 6), aún no es clara la relación entre los polipéptidos de fusión de FGFR con otras proteínas y otros tipos de cáncer.
DOCUMENTOS DE LA TÉCNICA ANTERIOR [Documentos que no son de patente] [Documento que no es de patente 1] Cytokine & Growth Factor Reviews, 2005, 16:139-149 [Documento que no es de patente 2] Blood, 2003, 101:4569-4575 [Documento que no es de patente 3] Nature Genetics, 1999 Sep., 23(1):18-20 [Documento que no es de patente 4] Cáncer Research, 2012, 72:2045-2056 [Documento que no es de patente 5] J. Med. Chem., 2011, 54:7066-7083 [Documento que no es de patente 6] Science, Vol. 337, Issue 6099, 7 de septiembre del 2012: 1231-1235 SUMARIO DE LA INVENCIÓN PROBLEMAS A SER RESUELTOS POR LA INVENCIÓN En vista de las circunstancias anteriores, la presente invención tiene como objetivo identificar y proporcionar moléculas específicas para células cancerosas que se pueden utilizar como un biomarcador para permitir medicina personalizada para tratamiento contra el cáncer basado en inhibidor de FGFR y moléculas específicas para células cancerosas que son útiles en el desarrollo de medicamentos dirigidos molecularmente hacia FGFR así como proporcionar diversos materiales y métodos para ser utilizados en medicina personalizada y el desarrollo de fármacos dirigidos molecularmente que utilizan estas moléculas como un biomarcador u objetivo molecular.
MEDIO PARA RESOLVER LOS PROBLEMAS Como se menciona en lo anterior, se ha sugerido una relación entre FGFR y cáncer; no obstante, las relaciones entre proteínas de fusión de FGFR con otras proteínas y diversos tipos de cáncer aún no se ha mostrado.
Para obtener el objetivo descrito antes, los presentes inventores llevaron a cabo estudios dedicados sobre la expresión, hiperamplificación, mutación, translocación y similares de genes que codifican para FGFR en diversas células cancerosas. Como un resultado, los presentes inventores descubrieron en múltiples células de cáncer de vejiga y células de cáncer de pulmón genes para polipéptidos de fusión novedosos entre un gen para el polipéptido FGFR3 y genes para otros polipéptidos, en particular, genes para polipéptido de fusión entre un gen para el polipéptido FGFR3 y un gen para el polipéptido BAIAP2L1, y genes para polipéptidos de fusión entre un gen para polipéptido FGFR3 y un gen para polipéptido TACC3. Los presentes inventores de esta manera han completado la presente invención.
Específicamente, la presente invención se relaciona con: polipéptidos de fusión novedosos expresados en células anormales tales como células cancerosas, polinucleótidos que codifican para los polipéptidos, vectores que comprenden los polinucleótidos, células que comprenden los vectores, anticuerpos y fragmentos de los mismos que se unen específicamente a los polipéptidos, cebadores oligonucleotídicos que hibridizan para los polinucleótidos, oligonucleótidos que escinden los polinucleótidos, composiciones f rmacéuticas que comprenden los anticuerpos u oligonucleótidos, métodos y kits para detectar los polipéptidos de fusión o polinucleótidos métodos para probar susceptibilidad a cáncer, si el sujeto está afectado con cáncer o si el cáncer ha progresado en base en la presencia o ausencia de los polipéptidos de fusión o polinucleótidos, métodos para seleccionar pacientes con cáncer a los cuales es aplicable el inhibidor de FGFR, composiciones farmacéuticas para tratamiento con cáncer las cuales están definidas por su uso al ser administradas a pacientes que expresan los polipéptidos de fusión o que portan los polinucleótidos, métodos para identificar inhibidores de FGFR y similares, como se describe más adelante: [1] un polipéptido de fusión que comprende un polipéptido FGFR3 y un polipéptido BAIAP2L1 o un polipéptido TACC3; en donde el polipéptido FGFR3 es la totalidad o una parte del polipéptido natural que consiste de la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 6 o 7 o la totalidad o una parte de un polipéptido mutante con una o más sustituciones, supresiones o inserciones de aminoácidos en el polipéptido natural; el polipéptido BAIAP2L1 es la totalidad o una parte del polipéptido natural que consiste de la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 8, o la totalidad o una parte de un polipéptido mutante con una o más sustituciones, supresiones o inserciones de aminoácidos en el polipéptido natural; y el polipéptido TACC3 es la totalidad o una parte del polipéptido natural que consiste de la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 9 o la totalidad o una parte de un polipéptido mutante con una o más sustituciones, supresiones o inserciones de aminoácidos en el polipéptido natural; [2] el polipéptido de fusión de [1] descrito en lo anterior, en donde el polipéptido FGFR3 es un polipéptido natural que consiste de la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NOS: 6 Ó 7; [3] el polipéptido de fusión de [1] o [2] descrito en lo anterior, en donde el polipéptido de fusión comprende un polipéptido FGFR3 y un polipéptido BAIAP2L1; [4] el polipéptido de fusión de [3] descrito en lo anterior, en donde el polipéptido de fusión consiste de la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 32 o 38; [5] el polipéptido de fusión de [1] o [2] descrito en lo anterior, en donde el polipéptido de fusión comprende un polipéptido FGFR3 y un polipéptido TACC3; [6] el polipéptido de fusión [5] descrito en lo anterior, en donde el polipéptido de fusión consiste de la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 28, 30, 34 ó 36; [7] el polipéptido de fusión de cualquiera de [1] a [5] descritos en lo anterior, en donde el polipéptido de fusión se deriva de cáncer de vejiga o cáncer de pulmón; [8] un polinucleótido que codifica para el polipéptido de fusión de cualquiera de [1] a [7] descrito antes; [9] el polinucleótido de [8] descrito en lo anterior, el cual comprende la secuencia de nucleótidos de las SEC ID NOS: 14, 15 o 16; [10] el polinucleótido de [9] descrito en lo anterior, el cual comprende la secuencia de nucleótidos de las SEC ID NOS: 27, 29, 31, 33, 35 o 37; [11] un vector que comprende el polinucleótido de cualquiera de [8] a [10] descritos antes; [12] una célula recombinante que comprende el vector de [11] descrito antes; [13] un anticuerpo o fragmento del mismo que une antígeno el cual se une específicamente al polipéptido de fusión de cualquiera de [1] a [7] descritos antes; [14] un par de cebadores oligonucleotídicos que consisten de cebadores directo y antisentido, cada uno hibridiza a un polinucleótido que codifica el polipéptido de fusión de cualquiera de [1] a [7] descrito antes para detección o amplificación del polinucleótido; [15] un oligonucleótido que se une a un polinucleótido de ARNm que codifica para el polipéptido de fusión de cualquiera de [1] a [7] descrito en lo anterior y que tiene una actividad para inhibir la traducción del polinucleótido ARNm en proteína; [16] el oligonucleótido de [15] descrito en lo anterior, el cual es un ARNsi que escinde el ARNm para el polipéptido; [17] una composición farmacéutica que comprende el anticuerpo o fragmento del mismo que une antígeno de [13] descrito en lo anterior; [18] una composición farmacéutica que comprende el oligonucleótido de [15] o [16] descrito en lo anterior; [19] un método para detectar un polipéptido de fusión que comprende un polipéptido FGFR3 y un polipéptido BAIAP2L1 o polipéptido TACC3, el cual comprende la etapa de detectar el polipéptido de fusión en una muestra aislada de un sujeto al utilizar un anticuerpo o fragmento del mismo que une antígeno que se une al polipéptido de fusión de cualquiera de [1] a [7] descrito en lo anterior; [20] un método para detectar un polinucleótido que codifica para un polipéptido de fusión que comprende un polipéptido FGFR3 y un polipéptido BAIAP2L1 o un polipéptido TACC3, el cual comprende la etapa de detectar un polinucleótido que codifica para el polipéptido de fusión en una muestra aislada de un sujeto al utilizar un par de cebadores oligonucleotídicos que consiste de cebadores directos y antisentidos, cada uno hibridiza a un polinucleótido que codifica para el polipéptido de fusión de cualquiera de [1] a [7] descrito en lo anterior para detectar o amplificar el polinucleótido; [21] un kit para detectar un polinucleótido que codifica para un polipéptido de fusión que comprende un polipéptido FGFR3 y un polipéptido BAIAP2L1 o un polipéptido TACC3, el cual comprende un par de cebadores oligonucleotídicos que consisten de cebadores directos y antisentido, cada uno hibridiza a un polinucleótido que codifica para el polipéptido de fusión de conformidad con cualquiera de [1] a [7] descritos en lo anterior para detectar o amplificar el polinucleótido; [22] un kit para detectar un polipéptido de fusión que comprende un polipéptido FGFR3 y un polipéptido BAIAP2L1 o un polipéptido TACC3, el cual comprende un anticuerpo o fragmento del mismo que une antígeno que se une al polipéptido de fusión de cualquiera de [1] a [7] descrito en lo anterior; [23] un método para probar susceptibilidad a cáncer de un sujeto, si el sujeto está afectado con cáncer o si el cáncer ha progresado en un sujeto al determinar la presencia o ausencia del polipéptido de fusión de cualquiera de [1] a [7] descrito en lo anterior en una muestra aislada del sujeto, en donde el método se basa en el criterio de que el sujeto es más probable que desarrolle cáncer, sea afectado con cáncer o el cáncer haya progresado cuando se detecte el polipéptido de fusión; [24] un método para probar susceptibilidad a cáncer de un sujeto, si el sujeto está afectado con cáncer o si el cáncer ha progresado en un sujeto al determinar la presencia o ausencia de un polinucleótido que codifica para el polipéptido de fusión de cualquiera de [1] a [7] descritos en lo anterior en una muestra aislada del sujeto, en donde el método se basa en el criterio de que el sujeto es más probable que desarrolle cáncer, sea afectado con cáncer o el cáncer haya progresado cuando se detecte el polinucleótido que codifica para el polipéptido de fusión; [25] el método de [23] o [24] descrito antes, en donde el cáncer es cáncer de vejiga, tumor cerebral, carcinoma de células escamosas de vías respiratorias y digestivas altas, cáncer de pulmón, adenocarcinoma de pulmón, carcinoma de células escamosas de pulmón, melanoma cutáneo, cáncer esofágico, cáncer gástrico o cáncer de hígado; [26] un método para seleccionar un paciente al cual es aplicable un agente anticancerígeno que comprende un compuesto que tiene actividad inhibidora de FGFR o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, el cual comprende las etapas de: (a) determinar la presencia o ausencia del polipéptido de fusión de cualquiera de [1] a [7] descrito en lo anterior en una muestra aislada de un sujeto; y (b) seleccionar a un paciente confirmado que presenta el polipéptido de fusión como un paciente al cual es aplicable el agente anticancerígeno; [27] un método para seleccionar a un paciente al cual es aplicable un agente anticancerígeno que comprende un compuesto que tiene actividad inhibidora de FGFR o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, el cual comprende las etapas de: (a) determinar la presencia o ausencia de un polinucleótido que codifica para el polipéptido de fusión de cualquiera de [1] a [7] descrito en lo anterior en una muestra aislada de un sujeto y (b) seleccionar a un paciente que se ha confirmado que tiene un polinucleótido que codifica para el polipéptido de fusión como un paciente al cual es aplicable el agente anticancerígeno; [28] el método de [26] o [27] descrito antes, en donde el cáncer es cáncer de vejiga, tumor cerebral, carcinoma de células escamosas de vías respiratorias y digestivas altas, cáncer de pulmón, adenocarcinoma de pulmón, carcinoma de células escamosas de pulmón, melanoma cutáneo, cáncer esofágico, cáncer gástrico o cáncer de hígado,- [29] el método de cualquiera de [26] a [28] descrito antes, en donde el compuesto que tiene actividad inhibidora de FGFR o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo es cualquiera de los compuestos o una farmacéuticamente aceptable del mismo representada por: [Compuesto 1] en donde Ri, R2, R3, y R4 cada uno representa independientemente el grupo que se lista a continuación: Ri representa hidrógeno, hidroxi, halógeno, ciano, nitro, haloalquilo de C1-4, alquilo de C1-6, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, cicloalquilo de C3-7, arilo de C6-10 alquilo de C1-4, -OR5, -NR6R7, -(CRsRg)nZi, -C(0)NR12R13, -SR14, -SOR15, -SO2R16, -NR17SO2R18, C00H, arilo de Ce-io el cual está opeionalmente substituido por uno o más grupos seleccionados independientemente del grupo P, heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q, -COR19, -COOR20, -0C(0)R21, -NR22C(O)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR26R27, -SO2NR28R29, -OSO2R30, -SO3R31, o —Si(R32)3; R2 representa hidrógeno, hidroxi, halógeno, ciano, nitro, haloalquilo de Ci-4, alquilo de Ci-6, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, cicloalquilo de C3-7, arilo de C6-io alquilo de C1-4, -OR5, -NR6R7, -(CRsRglnZi, -C(O)NRi2Ri3, -SR14, -SOR15, -S02Ri6, -NRi7S02Ri8, COOH, arilo de C6-10 el cual está opeionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo P, heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q, -COR19, -COOR2o, -OC(O)R2I, -NR22C(O)R23, -NR24C(S)R25/ -C(S)NR26R27, -S02NR28R29, -OS02R3O, -SO3R31, o —Si(R32)3; o Ri y R2, junto con un átomo unido a ellos, forman un heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros, en donde el heterociclilo o heteroarilo está opcionalmente sustituido por halógeno; R3 representa hidrógeno, alquilo de Ci-5, arilo de C6-10 alquilo de C1-6, o haloalquilo de Ci-4; R4 representa hidrógeno, halógeno, alquilo de C1-3, haloalquilo de Ci-4, hidroxi, ciano, nitro, alcoxi de Ci_4, -(CH2)nZi, -NR67, -OR5, -C(O)NRi2Ri3, -SR14, -SOR15, -S02Ri6, NRI7S02RIS, COOH, -COR19, -COOR20, -0C(0)R2I, -NR22C(O)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR26R27, -S02NR2eR29, -OSO2R30, -S03R3i, o -Si(R32)3; A representa un anillo heteroarilo de 5 a 10 miembros o un anillo arilo de C6-10; R5 alquilo de C1-5, cicloalquilo de C3-7, cicloalquilo de C3-7 alquilo de C1-3, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de C1-4, alcoxi de C1-3 alquilo de C1-4, alcoxi de C1-3 alcoxi de Ci-4 alquilo de C1-4, aminoalquilo de C1-4, alquilamino de C1-4 alquilo de Ci-4, di(alquil Ci-4)amino alquilo de C1-4, arilo de Ce-io, arilo de C6-10 alquilo de C1-3, o heterociclilalquilo de C1-3 de 3 a 10 miembros, heterociclilo de 3 a 10 miembros, heteroarilo de 5 a 10 miembros, heteroarilalquilo de C1-3 de 5 a 10 miembros, monohidroxi alquilo de C1-6, dihidroxi alquilo de C1-6, o trihidroxi alquilo de C1-6 el cual está opeionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; R6 y R7, que son idénticos o diferentes, cada uno representa hidrógeno, alquilo de Ci-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, alcoxi de C1-3 alquilo de Ci-4, arilo de Ce-io alquilo de C1-3, heterociclilalquilo de C1-3 de 3 a 10 miembros, heteroarilalquilo de C1-3 de 5 a 10 miembros, monohidroxi alquilo de Ci-s, dihidroxi alquilo de C1-6, trihidroxi alquilo de C1-6, heterociclilo de 3 a 10 miembros, aminoalquilo de C1-4, alquilamino de Ci-4 alquilo de C1-4, di(alquil Ci-4)amino alquilo de Ci-4, o ciano(alquilo de C1-3); o alternativamente R6 y R7, junto con un átomo de nitrógeno unido a ellos, forma heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros; n representa un número de 1 a 3; Re y 9, que son idénticos o diferentes, cada uno representa hidrógeno, alquilo de Ci-4, o halógeno; o alternativamente, Re y R9, junto con un átomo de carbono unido a ellos, forman un anillo cicloalifático; Zi representa hidrógeno, NR10R11, -OH, o heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros el cual está opeionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; Rio y R11, que son idénticos o diferentes, cada uno representa alquilo de C1-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, alcoxi de C1-3 alquilo de Ci-4, ciano(alquilo de C1-3), o alquilsulfonilo C1-3 alquilo de Ci-4; o alternativamente, Rio y Rn, junto con un átomo de nitrógeno unido a ellos, forman un heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros; R12 y R13, que son idénticos o diferentes, cada uno representa hidrógeno, alquilo de Ci-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, alcoxi de C1-3 alquilo de Ci-4, arilo de C6-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, heterociclilo de 3 a 10 miembros, arilo de C6-10 alquilo de Ci-4, heterociclilalquilo de C1-3 de 3 a 10 miembros, heteroarilalquilo de C1-3de 5 a 10 miembros, ciano(alquilo de C1-3), alquilsulfonilo C1-3 alquilo de Ci-4, anillo cicloalifático de 3 a 10 miembros, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterocielilo de 3 a 10 miembros; o alternativamente, RI2 y R13, junto con un átomo de nitrógeno unido a ellos, forman un heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros el cual está opeionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; R14 representa alquilo de C1-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, arilo de Ce-io el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo P, o heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; R15 representa alquilo de C1-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de C1-4, arilo de C6-10 el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo P, o heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; Ri6 representa alquilo de C1-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, arilo de C6-10 el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo P, o heteroarilo de 5 a 1Q miembros o heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opeionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; Ri7 representa hidrógeno o alquilo de C1-4; Ris representa alquilo de C1-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, arilo de Ce-io el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo P, o heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterocielilo de 3 a 10 miembros el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; RI9 representa hidrógeno, alquilo de C1-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de C1-4, arilo de Ce-io, o heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; R20 representa alquilo de C1-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de Ci-4, arilo de Ce-io, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; R21 representa alquilo de C1-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de C1-4, arilo de C6-io, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; R22 representa hidrógeno, alquilo de C1-4, o haloalquilo de Ci-4; R23 representa hidrógeno, alquilo de C1-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de Ci-4, arilo de C6-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterocielilo de 3 a 10 miembros; R24 representa hidrógeno, alquilo de Ci-4, o haloalquilo de C1-4; R25 representa alquilo de Ci-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de C1-4, arilo de C6-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; R26 y R27, que son idénticos o diferentes, cada uno representa hidrógeno, alquilo de Ci-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, alcoxi de Ci-3 alquilo de Ci-4, arilo de C6-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, heterociclilo de 3 a 10 miembros, arilo de C6-10 alquilo de C1-4, heterociclilalquilo de C1-3 de 3 a 10 miembros, heteroarilalquilo de C1-3de 5 a 10 miembros, ciano(alquilo de C1-3), alquilsulfonilo C1-3 alquilo de C1-4, o un anillo cicloalifático de 3 a 10 miembros; o alternativamente, R26 y R27, junto con un átomo de nitrógeno unido a ellos, forman un heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros; R28 y R29, que son idénticos o diferentes, cada uno representa hidrógeno, alquilo de Ci-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de C1-4, alcoxi de C1-3 alquilo de C1-4, arilo de C6-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, heterociclilo de 3 a 10 miembros, arilo de Ce-io alquilo de Ci-4, heterociclilalquilo de C1-3 de 3 a 10 miembros, heteroarilalquilo de Ci-3de 5 a 10 miembros, ciano(alquilo de C1-3), alquilsulfonilo Ci-3 alquilo de Ci-4/ o un anillo cicloalifático de 3 a 10 miembros; o alternativamente, R28 y R.29, junto con un átomo de nitrógeno unido a ellos, forman un heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros; R3O representa alquilo de Ci-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de C1-4, arilo de C6-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; R3I representa alquilo de C1-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de Ci-4, arilo de C6-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; R32 representa Ci-4 alquilo o arilo de C6-10; <grupo P> halógeno, alquilo de C1-4, haloalquilo de C1-4, -OH, alcoxi de Ci-3, haloalcoxi de Ci-3, heterociclilamino de 3 a 10 miembros, -SO2R16, -CN, -NO2, y heterociclilo de 3 a 10 miembros; <grupo Q> halógeno, alquilo de C1-4, haloalquilo de C1-4, -OH, alcoxi de Ci-3, monohidroxi alquilo de C1-6, dihidroxi alquilo de C1-6, trihidroxi alquilo de C1-6, heterociclilo de 3 a 10 miembros amino, -SO2R16, -CN, -N02, cicloalquilo de C3-7, -COR19, y heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opeionalmente sustituido por alquilo de Ci-4.
[Compuesto 2] [Compuesto 3] [Compuesto 4] I [Compuesto 5] O [Compuesto 6] H . - [30] el método de [29] descrito en lo anterior, en donde el compuesto que tiene actividad inhibidora de FGFR o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo es un compuesto de fórmula (I) en donde A es indol, y R3 y R4 son ambos hidrógeno, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; [31] una composición farmacéutica para tratamiento de cáncer, la cual comprende un compuesto que tiene actividad inhibidora de FGFR o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y que se utiliza de modo tal que el compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se administra a un paciente quien expresa el polipéptido de fusión de cualquiera de [1] a [7] descrito en lo anterior o que tiene un polinucleótido que codifica para el polipéptido de fusión; [32] la composición farmacéutica de [31] descrita en lo anterior para tratamiento contra el cáncer, en donde el paciente se selecciona por el método de cualquiera de [26] a [30] descrito en lo anterior; [33] la composición farmacéutica de [31] o [32] descrita en lo anterior para tratamiento de cáncer, en donde el cáncer es cáncer de vejiga, tumor cerebral, carcinoma de células escamosas de vías respiratorias y digestivas altas, cáncer de pulmón, adenocarcinoma de pulmón, carcinoma de células escamosas de pulmón, melanoma cutáneo, cáncer esofágico, cáncer gástrico o cáncer de hígado; [34] la composición farmacéutica de [31] o [32] descrita en lo anterior para tratamiento de cáncer, en donde el cáncer es cáncer de vejiga; [35] la composición farmacéutica de [34] descrita en lo anterior para tratamiento de cáncer, en donde el cáncer de vejiga se clasifica como la etapa 3 o posterior, de acuerdo con la clasificación TNM; [36] la composición farmacéutica de cualquiera de [31] a [35] para tratamiento de cáncer, en donde el compuesto que tiene actividad inhibidora de FGFR o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo es cualquiera de los compuestos o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo representada por: [Compuesto 1] (I) en donde Ri, R2, R3, y R4 cada uno representa independientemente el grupo que se lista a continuación: Ri representa hidrógeno, hidroxi, halógeno, ciano, nitro, haloalquilo de C1-4, alquilo de Ci-6, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6 cicloalquilo de C3-7, arilo de C6-10 alquilo de Ci-4, -OR5, -NR6R7, -(CRsRglnZi, -C(O)NR12R13, -SR14, -SOR15, -SO2R16, -NR17SO2R18, COOH, arilo de C6-10 el cual está opeionalmente sustituido por uno o más grupos seleccionados independientemente del grupo P, heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opeionalmente sustituido por uno o más grupos seleccionados independientemente del grupo Q, -C0RI9, -COOR2o, -0C(O)R2i, -NR22C(O)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR26R27, -S02NR2eR29, -OSO2R30, -SO3R31 o -Si(R32)3; R2 representa hidrógeno, hidroxi, halógeno, ciano, nitro, haloalquilo de C1-4, alquilo de C1-6, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, cicloalquilo de C3-7, arilo de C6-10 alquilo de C1-4, -OR5, -NR6R7, -(CR8R9)nZi, -C(0)NR12R13, -SRi4, -SOR15, -SO2R16, -NR17SO2R18, COOH, arilo de C6-10 el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos seleccionados independientemente del grupo P, heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos seleccionados independientemente del grupo Q, -COR3.9, -COOR20, -0C(0)R2i, -NR22C(0)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR26R27, -S02NR28R29, -OSO2R30, -SO3R31, o —Si(R32)3; o Ri y R2, junto con un átomo unido a ellos, forman un heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros, donde el heterociclilo o heteroarilo está opcionalmente sustituido por halógeno; R3 representa hidrógeno, alquilo de C1-5, arilo de C6-10 alquilo de C1-6, o haloalquilo de C1-4; R4 representa hidrógeno, halógeno, alquilo de C3.-3, haloalquilo de Ci-4, hidroxi, ciano, nitro, alcoxi de Ci-4, -(CH2)nZi, -NR6R7, -0R5Í -C(0)NR12R3.3, -SR14, -SOR15, -SO2R16, NR17SO2R18 , COOH , -CORi9 , -COOR20 , -OC (O) R21 , -NR22C (0) R23 , -NR24C ( S ) R25 -C ( S ) NR26R27 - SO2NR28R29 -OSO2R30 - SO3R31 , o -Si (R32 ) 3 ; A representa un anillo heteroarilo de 5 a 10 miembros o un anillo arilo de C6-10; R5 representa alquilo de C1-5, cicloalquilo de 03-7, cicloalquilo de C3-7 alquilo de C1-3, alquenilo de C2-6 alquinilo de C2-6, haloalquilo de C1-4, alcoxi de C1-3 alquilo de C1-4, alcoxi de Ci-3 alcoxi de Ci-4 alquilo de Ci-4/ aminoalquilo de Ci-4í alquilamino de C1-4 alquilo de Ci-4, di(alquil C1-4)aminoalquilo de Ci-4, arilo de C6-10, arilo de C6-10 alquilo de C1-3, o heterociclilalquilo de C1-3 de 3 a 10 miembros, heterociclilo de 3 a 10 miembros, heteroarilo de 5 a 10 miembros, heteroarilalquilo de Ci-3 de 5 a 10 miembros, monohidroxi alquilo de C1-6, dihidroxi alquilo de C1-6, o trihidroxi alquilo de C1-6 el cual está opeionalmente sustituido por uno o más grupos seleccionados independientemente del grupo Q; R6 y R7, que son idénticos o diferentes, cada uno representa hidrógeno, alquilo de C1-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, alcoxi de C1-3 alquilo de Ci-4, arilo de C6-io alquilo de C1-3, heterociclilalquilo de C1-3 de 3 a 10 miembros, heteroarilalquilo de C1-3 de 5 a 10 miembros, monohidroxi alquilo de C1-6, dihidroxi alquilo de C1-6, trihidroxi alquilo de C1-6, heterociclilo de 3 a 10 miembros, aminoalquilo de C1-4, alquilamino de Ci-4 alquilo de C1-4, di(alquil Ci-4)aminoalquilo de Ci-4, o ciano(alquilo de C1-3); o alternativamente Re y R7, junto con un átomo de nitrógeno unido a ellos, forman un heterocielilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros; n representa un número de 1 a 3; Re y R9, que son idénticos o diferentes, cada uno representa hidrógeno, C1-4 alquilo, o halógeno; o alternativamente, Rs y R9, junto con un átomo de carbono unido a ellos, forman un anillo cicloalifático,· Zi representa hidrógeno, NR10R11, hidroxilo, o heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros el cual está opeionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; Rio y R11, que son idénticos o diferentes, cada uno representa alquilo de C1-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, alcoxi de C1-3 alquilo de Ci-4, ciano(alquilo de C1-3), o alquilsulfonilo C1-3 alquilo de Ci-4; o alternativamente, Rio y R11, junto con un átomo de nitrógeno unido a ellos, forman un heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros; R12 y R13, que son idénticos o diferentes, cada uno representa hidrógeno, alquilo de Ci-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, alcoxi de C1-3 alquilo de C1-4, arilo de C6-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, heterocielilo de 3 a 10 miembros, arilo de C6-10 alquilo de Ci-4, heterociclilalquilo de C1-3 de 3 a 10 miembros, heteroarilalquilo de C1-3de 5 a 10 miembros, ciano(alquilo de C1-3), alquilsulfonilo C1-3 alquilo de C1-4, anillo cicloalifático de 3 a 10 miembros, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; o alternativamente, R12 y R13, junto con un átomo de nitrógeno unido a ellos, forman un heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros el cual está opeionalmente sustituido por uno o más grupos seleccionados del grupo Q; R14 representa alquilo de C1-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, arilo de Cs-10 el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos seleccionados del grupo P, o heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos seleccionados independientemente del grupo Q; R15 representa alquilo de C1-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-e, haloalquilo de C1-4, arilo de Ce-io el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos seleccionados independientemente del grupo P, o heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos seleccionados independientemente del grupo Q; Ri6 representa alquilo de C1-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, arilo de C6-io el cual está opeionalmente sustituido por uno o más grupos seleccionados independientemente del grupo P, o heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterocielilo de 3 a 10 miembros el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos seleccionados independientemente del grupo Q; R17 representa hidrógeno o C1-4 alquilo; Ris representa alquilo de Ci-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de C1-4, arilo de Cs-io el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos seleccionados independientemente del grupo P, o heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opcionalmente sustituido por un grupo(s) seleccionado independientemente del grupo Q; Rig representa hidrógeno, alquilo de Ci-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de Ci-4, arilo de Cs-io, o heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos seleccionados independientemente del grupo Q; R2O representa alquilo de Ci-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de Ci-4, arilo de C6-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; R2I representa alquilo de Ci-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de Ci-4, arilo de C6-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; R.22 representa hidrógeno, alquilo de Ci-4, o haloalquilo de C1-4; R23 representa hidrógeno, alquilo de C1-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de C1-4, arilo de C6-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; R24 representa hidrógeno, alquilo de C1-4, o haloalquilo de C1-4; R25 representa alquilo de C1-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de C1-4, arilo de C6-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; R26 y R27, que son idénticos o diferentes, cada uno representa hidrógeno, alquilo de C1-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de C1-4, alcoxi de C1-3 alquilo de C1-4, arilo de C6-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, heterociclilo de 3 a 10 miembros, arilo de C6-10 alquilo de C1-4, heterociclilalquilo de C1-3 de 3 a 10 miembros, heteroarilalquilo de C1-3de 5 a 10 miembros, ciano(alquilo de C1-3), alquilsulfonilo C1-3 alquilo de Ci-4, o anillo cicloalifático de 3 a 10 miembros; o alternativamente, R26 y R27, junto con un átomo de nitrógeno unido a ellos, forman un heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros; R28 y R29, que son idénticos o diferentes, cada uno representa hidrógeno, alquilo de C1-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, alcoxi de C1-3 alquilo de C2-4, arilo de C6-io, heteroarilo de 5 a 10 miembros, heterocielilo de 3 a 10 miembros, arilo de Ce-io alquilo de C1-4, heterociclilalquilo de C1-3, de 3 a 10 miembros, heteroarilalquilo de C1-3 de 5 a 10 miembros, ciano(alquilo de C1-3), alquilsulfonilo C1-3 alquilo de Ci-4, o anillo cicloalifático de 3 a 10 miembros; o alternativamente, R28 y R29, junto con un átomo de nitrógeno unido a ellos, forman un heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros; R30 representa alquilo de C1-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de Ci-4, arilo de Oe-io, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; R31 representa alquilo de Ci-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de C1-4, arilo de Ce-io, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; R32 representa alquilo de Ci-4 o arilo de Ce-io; <grupo P> halógeno, alquilo de Ci-4, haloalquilo de C3-4, -OH, alcoxi de Ci-3, haloalcoxi de C1-3, de heterociclilamino de 3 a 10 miembros, -SO2R16, -CN, -NO2, y heterociclilo de 3 a 10 miembros; <grupo Q> halógeno, alquilo de Ci-4, haloalquilo de Ci-4, -OH, alcoxi de C1-3, monohidroxialquilo de C1-3, dihidroxialquilo de Ci-6, trihidroxialquilo de Ci-6, heterocielilamina de 3 a 10 miembros, -S02Ri6, -CN, -NO2, cicloalquilo de C3-7, -COR19, y heterociclilo de 3 a 10 miembros, el cual está opeionalmente sustituido por alquilo de C1-4.
[Compuesto 2] [Compuesto 3 ] [Compuesto 4] I [Compuesto 5] [Compuesto 6] [37] la composición farmacéutica de [36] descrita en lo anterior para tratamiento de cáncer, en donde el compuesto que tiene actividad inhibidora de FGFR o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo es un compuesto de fórmula (I), en donde A es indol, y R3 y R4 son ambos hidrógeno o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; [38] un método para tratar o prevenir cáncer, que comprende la etapa de administrar una cantidad eficaz de un compuesto que tiene actividad inhibidora de FGFR o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo a un paciente con cáncer que expresa el polipéptido de fusión de cualquiera de [1] a [7] descrito en lo anterior o que porta un polinucleótido que codifica para el polipéptido de fusión; [39] el método de [38] descrito en lo anterior, en donde el paciente se selecciona por el método de cualquiera de [26] a [30] descrito en lo anterior; [40] el método de [38] ó [39] descrito en lo anterior, en donde el cáncer es cáncer de vejiga, tumor cerebral, carcinoma de células escamosas de vías respiratorias y digestivas altas, cáncer de pulmón, adenocarcinoma de pulmón, carcinoma de células escamosas de pulmón, melanona cutáneo, cáncer esofágico, cáncer gástrico o cáncer de hígado; [41] el método de [38] o [39] descrito en lo anterior, en donde el cáncer es cáncer de vejiga; [42] el método de [41] descrito en lo anterior, en donde el cáncer de vejiga se clasifica como etapa 3 o posterior, de acuerdo con la clasificación TNM; [43] el método de cualquiera de [38] a [42] descrito en lo anterior, en donde el compuesto que tiene actividad inhibidora de FGFR o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo es cualquiera de los compuestos o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo representado por: [Compuesto 1] en donde Ri, R2, R3 y R4, cada uno, representa independientemente el grupo que se lista a continuación: Ri representa hidrógeno, hidroxi, halógeno, ciano, nitro, haloalquilo de Ci-4, alquilo de Ci-6, alquenilo de C2-e, alquinilo de C2-6, cicloalquilo de C3-7, arilo de C6-10 alquilo de C1-4, -0R5, -NR6R7, -(CRsRülnZi, -C(0)NRI2RI3, -SR14, -SOR15, -SO2R16, -NRi7S02Ri8, COOH, arilo de C6-io el cual está opeionalmente sustituido con uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo P, heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterociclilo de 3 a 10 miembros cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q, -COR3.9, -COOR20, -OC(0)R2I, -NR22C(O)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR26R27, -S02NR28R29, -OS02R3O, -SO3R31, o Si(R32)3- R2 representa hidrógeno, hidroxi, halógeno, ciano, nitro, haloalquilo de C1-4, alquilo de Ci-6, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, cicloalquilo de C3-7, arilo de Ce-io alquilo de Ci-4, -OR5Í -NR6R7, -(CR8R9)nZi, -C(0)NR12R13, -SR14, -SOR15, -SO2R16, -NR17SO2R18, COOH, arilo de Ce-io el cual está opeionalmente sustituido con uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo P, heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterociclilo de 3 a 10 miembros cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q, -COR19, -COOR20, -OC(0)R21, -NR22C(O)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR26R27, -SO2NR28R29, -OSO2R30 -SO3R31, o -Si(R32)3; o Ri y R2 tomados junto con los átomos a los cuales se encuentran unidos para formar un heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros, en donde el heterociclilo o heteroarilo pueden estar opcionalmente sustituido por un átomo de halógeno.
R3 representa hidrógeno, alquilo de C1-5, arilo de C6-10 alquilo de C1-6, o haloalquilo de C1-4.
R4 representa hidrógeno, halógeno, alquilo de C1-3, haloalquilo de Ci-4, hidroxi, ciano, nitro, alcoxi de Ci-4, - (CH2)nZi, -NR6R7, -ORs, -C(0)NR12R13 -SRI4, -SOR15, -SO2R16 NR17SO2R18, COOH, -COR19, -COOR20, -OC(0)R2I, -NR22C(O)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR26R27, -SO2NR28R29, -OSO2R30SO3R3i, o -Si (R32)3.
El anillo A está representado por un anillo heteroarilo de 5 a 10 miembros o un anillo arilo de C6-10.
R5 representa alquilo de Ci-5, cicloalquilo de C3-7, cicloalquilo de C3-7 alquilo de C1-3, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de C1-4, alcoxi de C1-3 alquilo de C1-4, alcoxi de Ci-3 alcoxi de Ci-4 alquilo de C1-4, aminoalquilo de Ci-4/ alquilamino de C1-4 alquilo de Ci-4, di (alquil C1-4)aminoalquilo de C1-4, arilo de C6-io, arilo de C6-10 alquilo de Ci-3, o heterociclilalquilo de Ci-3 de 3 a 10 miembros, heterociclilo de 3 a 10 miembros, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heteroarilalquilo de Ci-3 de 5 a 10 miembros, monohidroxialquilo de C1-6, dihidroxialquilo de C1-6, o trihidroxialquilo de Ci-6, cada uno de los cuales está opeionalmente sustituido con uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q.
R6 y R7 pueden ser idénticos o diferentes, cada uno representa hidrógeno, alquilo de C1-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de C1-4, alcoxi de C1-3 alquilo de C1-4, arilo de C6-10 alquilo de C1-3, heterociclilalquilo de C1-3 de 3 a 10 miembros, heteroarilalquilo de C1-3 de 5 a 10 miembros, monohidroxialquilo de C1-6, dihidroxialquilo de C1-6, trihidroxialquilo de C1-6, heterociclilo de 3 a 10 miembros, aminoalquilo de C1-4, alquilamino de C1-4 alquilo de C1-4, di(alquil de C1-4)aminoalquilo de Ci-4, o ciano(alquilo de Cl-3), alternativamente, Re y R7 pueden ser tomados junto con un átomo de nitrógeno unido al mismo, para formar un heterocielilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros. "n" representa un número entero de 1 a 3; Rs y R9 pueden ser idénticos o diferentes, cada uno representa hidrógeno; o alternativamente, Rs y Rg tomados junto a los átomos de carbono a los cuales se encuentran unidos para formar un anillo alicíclico; Zi representa hidrógeno, NR10R11, -OH, o un heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros cada uno de los cuales está opeionalmente sustituido con uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q, Rio y R11 pueden ser idénticos o diferentes, y cada uno de ellos representa alquilo de C1-4, alquenilo de C2-e, alquinilo de C2-6, haloalquilo de C1-4, alcoxi de C1-3 alquilo de C1-4, ciano(alquilo de Ci-3), o alquilsulfonilo C1-3 alquilo de C1-4, alternativamente, Rio y Rn junto con un átomo de nitrógeno a los cuales se encuentran unidos para formar un heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros.
R12 y R13 pueden ser idénticos o diferentes, y cada uno representa hidrógeno, alquilo, C1-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, alcoxi de C1-3 alquilo de C1-4, arilo de Ce-io, heteroarilo de 5 a 10 miembros, heterociclilo de 3 a 10 miembros, arilo de Ce-io alquilo de Ci-4, heterocielilalquilo de Ci-3 de 3 a 10 miembros, heteroarilalquilo de Ci-3de 5 a 10 miembros, ciano(alquilo de C1-3), alquilsulfonilo C1-3 alquilo de C1-4, un anillo cicloalifático de 3 a 10 miembros, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclo de 3 a 10 miembros o alternativamente, R12 y R13 pueden ser tomados junto con un átomo de nitrógeno a los cuales se encuentran unidos para formar un heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros cada uno de los cuales está opeionalmente sustituido con uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q.
R14 representa alquilo de Ci-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de C1-4, arilo de Ce-io el cual está opcionalmente sustituido con uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo P, o heteroarilo de 5 a 10 miembros o un heterociclilo de 3 a 10 miembros cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; R15 representa alquilo de C1-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, arilo de Ce-io el cual está opcionalmente sustituido con uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo P, o heteroarilo de 5 a 10 miembros o un heterociclilo de 3 a 10 miembros cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; Ríe representa alquilo de Ci-4, alquenilo de C-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, arilo de Cs-io el cual está opeionalmente sustituido con uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo P, o un heteroarilo de 5 a 10 miembros o un heterocielilo de 3 a 10 miembros cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; Riv representa preferentemente hidrógeno o alquilo de C1-4; Ris representa alquilo de C1-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de C1-4, arilo de C6-10 el cual está opcionalmente sustituido con uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo P, o un heteroarilo de 5 a 10 miembros o un heterociclilo de 3 a 10 miembros cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; R19 representa hidrógeno, alquilo de Ci-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de C1-4, arilo de Oe-io, o heteroarilo de 5 a 10 miembros o un heterociclilo de 3 a 10 miembros cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; R20 representa alquilo de C1-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de Ci-4, arilo de C6-io, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o un heterocielilo de 3 a 10 miembros,- R21 representa alquilo de Ci-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de Ci-4/ arilo de C6-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o un heterociclilo de 3 a 10 miembros; R22 representa hidrógeno, alquilo de Ci-4, o haloalquilo de Ci-4; R23 representa hidrógeno, alquilo de Ci-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de Ci-4, arilo de C6-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o un heterociclilo de 3 a 10 miembros; R24 representa hidrógeno, alquilo de Ci-4, o haloalquilo de Ci-4; R25 representa alquilo de Ci-4, cicloalquilo de 03-7, haloalquilo de Ci-4, arilo de Ce-io, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o un heterociclilo de 3 a 10 miembros; R6 y R27pueden ser idénticos o diferentes, cada uno representa hidrógeno, alquilo de Ci-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, alcoxi de C1-3 alquilo de Ci-4, arilo de C6-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, heterociclilo de 3 a 10 miembros, arilo de Ce-io alquilo de Ci-, heterociclilalquilo de C1-3 de 3 a 10 miembros, heteroarilalquilo de C1-3de 5 a 10 miembros, ciano(alquilo de C1-3), alquilsulfonilo C1-3 alquilo de Ci-4, o un anillo alicíclico de 3 a 10 miembros; alternativamente, R26 y R27 junto a los átomos de nitrógeno a los cuales se encuentran unidos para formar un heterocielilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros; R28 y R29 pueden ser idénticos o diferentes, y cada uno representa hidrógeno, alquilo de C1-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de C1-4, alcoxi de C1-3 alquilo de C1-4, arilo de C6-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, heterociclilo de 3 a 10 miembros, arilo de C6-10 alquilo de C1-4, heterociclilalquilo de C1-3 de 3 a 10 miembros, heteroarilalquilo de Ci-3de 5 a 10 miembros, ciano(alquilo de C1-3), alquilsulfonilo de C1-3 alquilo de Ci-4, o un anillo cicloalifático de 3 a 10 miembros o alternativamente, R28 y R29junto a los átomos de nitrógeno a los cuales se encuentran unidos para formar un heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros.
R3o representa alquilo de Ci-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de Ci-4, arilo de C6-io, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros.
R3I representa alquilo de Ci-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de Ci-4, arilo de C6-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros.
R32 representa alquilo de Ci-4, o arilo de Ce-io· <Grupo P> Los sustituyentes preferidos incluidos en el grupo P definido arriba son halógeno, alquilo de Ci-4, haloalquilo de Ci-4, -OH, alcoxi de Ci-3, haloalcoxi de Ci-3, heterocielilamino de 3 a 10 miembros, -SO2R, -CN, -NO2, y heterociclilo de 3 a 10 miembros; <Grupo Q> halógeno, alquilo de C1-4, haloalquilo de C3.-4, -OH, alcoxi de C1-3, monohidroxialquilo de C1-6, dihidroxialquilo de C1-6, trihidroxialquilo de C1-6, heterociclilamino de 3 a 10 miembros, -SO2R16, -CN, -NO2, cicloalquilo de C3-7, -COR19, y heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opeionalmente sustituido con alquilo de Ci-4- [Compuesto 2] [Compuesto 3] \ [Compuesto 4] O^^OH [44] el método de [43] descrito en lo anterior, en donde el compuesto que tiene actividad inhibidora de FGFR o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo es un compuesto de fórmula (I) en donde A es indol, y R3 y R4 son ambos hidrógeno, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; [45] el uso de un compuesto que tiene actividad inhibidora de FGFR o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en la elaboración de una composición farmacéutica para tratamiento de cáncer que se va a administrar a un paciente que expresa el polipéptido de fusión de cualquiera de [1] a [7] descrito antes o que porta un polinucleótido que codifica para el polipéptido de fusión; [46] el uso de [45] descrito antes, en donde el paciente se selecciona por el método de cualquiera de [26] a [30] descrito antes; [47] el uso de [45] o [46] descrito antes, en donde el cáncer es cáncer de vejiga, tumor cerebral, carcinoma de células escamosas de vías respiratorias y digestivas altas, cáncer de pulmón, adenocarcinoma de pulmón, carcinoma de células escamosas de pulmón, melanoma cutáneo, cáncer esofágico, cáncer gástrico o cáncer de hígado; [48] el uso de [45] o [46] descrito antes, en donde el cáncer es cáncer de vejiga; [49] el uso de [48] descrito en lo anterior, en donde el cáncer de vejiga se clasifica como etapa 3 o posterior, de acuerdo con la clasificación TNM; [50] el uso de cualquiera de [45] a [49] descrito en lo anterior, en donde el compuesto que tiene actividad inhibidora de FGFR o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo es cualquiera de los compuestos o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo representado por: [Compuesto 1] en donde Ri, R2, R3, y R4 cada uno representa independientemente el grupo que se lista a continuación: Ri representa hidrógeno, hidroxi, halógeno, ciano, nitro, haloalquilo de C1-4, alquilo de C1-6, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, cicloalquilo de C3-7, arilo de C6-10 alquilo de C1-4, -OR5, -NR6R7, -(CR8R9)nZi, -C(O)NR12R13, -SR14, -SOR15, -SO2R16, -NR17SO2R18 COOH, arilo de C6-10 el cual está opeionalmente substituido por uno o más grupos seleccionados independientemente del grupo P, heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q, -CORig, - COOR.20 , -0C (0) R21 , -NR22C (O) R23 / -NR24C ( S ) R25 , -C ( S ) NR26R27 , -SO2NR28R29 , -OSO2R30 -SO3R31 , o -Si (R32 ) 3 ; R2 representa hidrógeno, hidroxi, halógeno, ciano, nitro, haloalquilo de C1-4, alquilo de C1-6, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, cicloalquilo de C3-7, arilo de C6-10 alquilo de C1-4, -OR5, -NR6R7, -(CR8R9)nZi, -C(O)NR12R13, -SR14, -SOR15, -SO2R16, -NR17SO2R18, COOH, arilo de Ce-io el cual está opeionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo P, heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q, -COR19, -COOR20, -OC(O)R21, -NR22C(O)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR26R27, -SO2NR28R29, -OSO2R30, -SO3R31, o —Si(R32)3? o Ri y R2, junto con un átomo unido a ellos, forman un heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros, en donde el heterociclilo o heteroarilo está opcionalmente sustituido por halógeno; R3 representa hidrógeno, alquilo de C1-5, arilo de C6-10 alquilo de Ci-6, o haloalquilo de C1-4; R4 representa hidrógeno, halógeno, alquilo de C1-3, haloalquilo de Ci-4, hidroxi, ciano, nitro, alcoxi de Ci-4, - (CHa)nZi, -NRSR7, -OR5, -C(O)NR12R13, -SR3.4, -SOR3.5, -SO2R16, NR17SO2R18, COOH, -COR19, -COOR20, -OC(0)R21, -NR22C(O)R23, -NR24C (S) R25 , -C ( S ) NR26R27 -S02NR2eR29 , -OS02R3O, -SO3R31, o -Si(R32)3; A representa un anillo heteroarilo de 5 a 10 miembros o un anillo arilo de C6-10; R5 representa alquilo de C1-5, cicloalquilo de C3-7, cicloalquilo de C3-7 alquilo de C1-3, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de C1-4, alcoxi de Ci-3 alquilo de C1-4, alcoxi de C1-3 alcoxi de C1-4 alquilo de Ci-4, aminoalquilo de Ci-4, alquila ino de C1-4 alquilo de C1-4, di(alquil C1-4)amino alquilo de C1-4, arilo de Ce-io, arilo de C6-10 alquilo de C1-3, o heterociclilalquilo de C1-3 de 3 a 10 miembros, heterociclilo de 3 a 10 miembros, heteroarilo de 5 a 10 miembros, heteroarilalquilo de C1-3 de 5 a 10 miembros, monohidroxi alquilo de C1-6, dihidroxi alquilo de C1-6, o trihidroxi alquilo de C1-6 el cual está opeionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; R6 y R7, que son idénticos o diferentes, cada uno representa hidrógeno, alquilo de C1-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, alcoxi de C1-3 alquilo de C1-4, arilo de C6-10 alquilo de C1-3, heterociclilalquilo de C1-3 de 3 a 10 miembros, heteroarilalquilo de C1-3 de 5 a 10 miembros, monohidroxi alquilo de C1-6, dihidroxi alquilo de C1-6, trihidroxi alquilo de C1-6, heterociclilo de 3 a 10 miembros, aminoalquilo de C1-4, alquilamino de C1-4 alquilo de Ci-4, di(alquil Ci-4)amino alquilo de Ci-4, o ciano(alquilo de C1-3); o alternativamente R6 y R7, junto con un átomo de nitrógeno unido a ellos, forma heterocielilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros; n representa un número de 1 a 3; Re y R9, que son idénticos o diferentes, cada uno representa hidrógeno, alquilo de C1-4, o halógeno o alternativamente, Re y R9, junto con un átomo de carbono unido a ellos, forman un anillo cicloalifático; Zi representa hidrógeno, NR10R11, -OH, o heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros el cual está opeionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; Rio y R11, que son idénticos o diferentes, cada uno representa alquilo de Ci-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de C1-4, alcoxi de C1-3 alquilo de Ci-4, ciano(alquilo de C1-3), o alquilsulfonilo C1-3 alquilo de Ci-4; o alternativamente, Rio y R11, junto con un átomo de nitrógeno unido a ellos, forman un heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros; R12 y R13, que son idénticos o diferentes, cada uno representa hidrógeno, alquilo de Ci-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de C1-4, alcoxi de C1-3 alquilo de C1-4, arilo de Ce-io, heteroarilo de 5 a 10 miembros, heterociclilo de 3 a 10 miembros, arilo de Ce-io alquilo de C1-4, heterocielilalquilo de C1-3 de 3 a 10 miembros, heteroarilalquilo de Ci^ de 5 a 10 miembros, ciano(alquilo de C1-3), alquilsulfonilo C1-3 alquilo de C1-4, anillo cicloalifático de 3 a 10 miembros, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; o alternativamente, R12 y R13, junto con un átomo de nitrógeno unido a ellos, forman un heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros el cual está opeionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; R14 representa alquilo de Ci-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de C1-4, arilo de C6-10 el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo P, o heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; R15 representa alquilo de C1-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, arilo de Cs-10 el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo P, o heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; Ri6 representa alquilo de C1-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, arilo de C6-io el cual está opeionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo P, o heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterocielilo de 3 a 10 miembros el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; R17 representa hidrógeno o alquilo de Ci-4/- Ris representa alquilo de C1-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, arilo de C6-10 el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo P, o heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; R19 representa hidrógeno, alquilo de Ci-4í cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de Ci-4, arilo de C6-io, o heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; R20 representa alquilo de Ci-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de Ci-4, arilo de Ce-io, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; R21 representa alquilo de Ci-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de Ci-4, arilo de C6-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; R22 representa hidrógeno, alquilo de Ci-4, o haloalquilo de Ci-4; R23 representa hidrógeno, alquilo de Ci-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de Ci-, arilo de C6-io, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; R24 representa hidrógeno, alquilo de Ci-4, o haloalquilo de Ci-4; R25 representa alquilo de Ci-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de Ci-4, arilo de C6-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; R26 y 27, que son idénticos o diferentes, cada uno representa hidrógeno, alquilo de Ci-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, alcoxi de C1-3 alquilo de Ci-4, arilo de Ce-io, heteroarilo de 5 a 10 miembros, heterociclilo de 3 a 10 miembros, arilo de Ce-io alquilo de C1-4, heterociclilalquilo de C1-3 de 3 a 10 miembros, heteroarilalquilo de C1-3de 5 a 10 miembros, ciano(alquilo de C1-3), alquilsulfonilo C1-3 alquilo de Ci-4, o un anillo cicloalifático de 3 a 10 miembros; o alternativamente, R26 y R27, junto con un átomo de nitrógeno unido a ellos, forman un heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros; R28 y R29, que son idénticos o diferentes, cada uno representa hidrógeno, alquilo de Ci-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de C1-4, alcoxi de C1-3 alquilo de C1-4, arilo de Ce-io, heteroarilo de 5 a 10 miembros, heterocielilo de 3 a 10 miembros, arilo de C6-10 alquilo de C1-4, heterociclilalquilo de C1-3 de 3 a 10 miembros, heteroarilalquilo de C1-3de 5 a 10 miembros, ciano(alquilo de C1-3), alquilsulfonilo C1-3 alquilo de C1-4, o un anillo cicloalifático de 3 a 10 miembros,- o alternativamente, R28 y R29, junto con un átomo de nitrógeno unido a ellos, forman un heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros; R30 representa alquilo de Ci-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de Ci-4, arilo de C6-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros,- R31 representa alquilo de Ci-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de C1-4, arilo de Ob-io, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; R32 representa C1-4 alquilo o arilo de Ob-o; <grupo P> halógeno, alquilo de C1-4, haloalquilo de C1-4, -OH, alcoxi de C1-3, haloalcoxi de C1-3, heterociclilamino de 3 a 10 miembros, -SO2R16, -CN, -NO2, y heterociclilo de 3 a 10 miembros; <grupo Q> halógeno, alquilo de Ci-4, haloalquilo de Ci-4, -OH, alcoxi de Ci-3, monohidroxi alquilo de C1-6, dihidroxi alquilo de Ci-6, trihidroxi alquilo de Ci-6, heterocielilo de 3 a 10 miembros amino, -SO2R16, -CN, -NO2, cicloalquilo de C3-7, -COR19, y heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opeionalmente sustituido por alquilo de C1-4.
[Compuesto 2] [Compuesto 3] — [Compuesto 4] C1 I [Compuesto 5] [51] el uso de [50] descrito antes, en donde el compuesto que tiene actividad inhibidora de FGFR o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo es un compuesto de fórmula (I), en donde A es indol, y R3 y R4 son ambos hidrógeno o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; [52] un compuesto que tiene actividad inhibidora de FGFR o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para el uso terapéutico o profiláetico en un paciente con cáncer que expresa el polipéptido de fusión de cualquiera de [1] a [7] descrito antes o que porta un polinucleótido que codifica para el polipéptido de fusión; [53] el compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo de [52] descrito antes, en donde el paciente se selecciona por el método de cualquiera de [26] a [30] descrito en lo anterior; [54] el compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo de [52] o [53] descrito antes, en donde el cáncer es cáncer de vejiga, tumor cerebral, carcinoma de células escamosas de vías respiratorias y digestivas altas, cáncer de pulmón, adenocarcinoma de pulmón, carcinoma de células escamosas de pulmón, melanoma cutáneo, cáncer esofágico, cáncer gástrico o cáncer de hígado; [55] el compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo de [52] o [53] descrito antes, en donde el cáncer es cáncer de vejiga; [56] el compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo de [55] descrito antes, en donde el cáncer de vejiga se clasifica como etapa 3 o posterior de acuerdo con la clasificación TNM; [57] el compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo de cualquiera de [52] a [56] descrito en lo anterior, en donde el compuesto que tiene actividad inhibidora de FGFR o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo es cualquiera de los compuestos o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo representada por: [Compuesto 1] en donde Ri, R2, R3, y R4 cada uno representa independientemente el grupo que se lista a continuación: Ri representa hidrógeno, hidroxi, halógeno, ciano, nitro, haloalquilo de C1-4, alquilo de C1-6, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, cicloalquilo de C3-7, arilo de Ce-io alquilo de C1-4, -OR5, -NR6R7, -(CR8R9)nZi, -C(O)NR12R13 -SRi4, -SOR15, -SO2R16, -NR17SO2R18, COOH, arilo de Cs-io el cual está opeionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo P, heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q, -COR19, -COOR20, -0C(O)R2i, -NR22C(O)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR26R27, -SO2NR28R29 -OSO2R30 — SO3R.31 , o Si (R32 ) 3 ; R2 representa hidrógeno, hidroxi, halógeno, ciano, nitro, haloalquilo de Ci-4, alquilo de Ci-6, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, cicloalquilo de C3-7, arilo de Ce-io alquilo de C1-4, -OR5, -NR6R7, -(CReRglnZi, -C(O)NR12R13, -SR14, -SOR15, -SO2R16, -NR17SO2R18, COOH, arilo de C6-10 el cual está opeionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo P, heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q, -COR19, -COOR20, -OC(O)R21, -NR22C(O)R23, -NR24C(S)R25Í -C(S)NR26R27, -S02NR28R29, -OSO2R30Z SO3R31, o —Si(R32)3; o Ri y R2, junto con un átomo unido a ellos, forman un heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros, donde el heterociclilo o heteroarilo está opcionalmente sustituido por halógeno; R3 representa hidrógeno, alquilo de Ci-5, arilo de Ce-io alquilo de C3.-6, o haloalquilo de C1-4; R4 representa hidrógeno, halógeno, alquilo de C1-3, haloalquilo de Ci-4, hidroxi, ciano, nitro, alcoxi de C1-4, - (CH2)nZi, -NR6R7, -OR5, -C(O)NRi2Ri3, -SR14, -SOR15, -S02Ri6, NRi7S02Ri8, COOH, -COR19, -COOR20, -0C(O)R2I, -NR22C(0)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR26R27, -S02NR28R29, -OS02R3O, -SO3R31, o -Si (R32 ) 3 ; A representa un anillo heteroarilo de 5 a 10 miembros o un anillo arilo de Ob-o; Rs representa alquilo de Ci-5, cicloalquilo de C3-7, cicloalquilo de C3-7 alquilo de C1-3, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-S, haloalquilo de C1-4, alcoxi de C1-3 alquilo de C2-4, alcoxi de C1-3 alcoxi de C2-4 alquilo de C2-4, aminoalquilo de C1-4, alquilamino de C1-4 alquilo de C1-4, di(alquil Ci-4)aminoalquilo de C2-4, arilo de Ce-io, arilo de C6-10 alquilo de C1-3, o heterociclilalquilo de C1-3 de 3 a 10 miembros, heterociclilo de 3 a 10 miembros, heteroarilo de 5 a 10 miembros, heteroarilalquilo de C1-3 de 5 a 10 miembros, monohidroxi alquilo de C1-6, dihidroxi alquilo de C1-6, o trihidroxi alquilo de C1-6 el cual está opeionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; R6 y R7, que son idénticos o diferentes, cada uno representa hidrógeno, alquilo de Ci-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de C1-4, alcoxi de C1-3 alquilo de C1-4, arilo de C6-10 alquilo de C1-3, heterociclilalquilo de C1-3 de 3 a 10 miembros, heteroarilalquilo de C1-3 de 5 a 10 miembros, monohidroxi alquilo de C1-6, dihidroxi alquilo de C1-6, trihidroxi alquilo de C2-6, heterociclilo de 3 a 10 miembros, aminoalquilo de C2-4, alquilamino de C1-4 alquilo de C1-4, di(alquil Ci-4)aminoalquilo de C1-4, o ciano(alquilo de C1-3); o R6 y R?, junto con un átomo de nitrógeno unido a ellos, forman un heterocielilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros; n representa un número de 1 a 3; Re y R9, que son idénticos o diferentes, cada uno representa hidrógeno, C1-4 alquilo, o halógeno; o alternativamente, Rs y R9, junto con un átomo de carbono unido a ellos, forman un anillo cicloalifático; Zi representa hidrógeno, NR10R11, hidroxilo, o heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros el cual está opeionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; Rio y Rn, que son idénticos o diferentes, cada uno representa alquilo de C1-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de C1-4, alcoxi de C1-3 alquilo de Ci-4, ciano(alquilo de C1-3), o alquilsulfonilo C1-3 alquilo de Ci-4; o alternativamente, Rio y R11, junto con un átomo de nitrógeno unido a ellos, forman un heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros; R12 y R13, que son idénticos o diferentes, cada uno representa hidrógeno, alquilo de Ci-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de C1-4, alcoxi de C1-3 alquilo de C2-4, arilo de C6-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, heterociclilo de 3 a 10 miembros, arilo de Ce-io alquilo de C1-4, heterociclilalquilo de C1-3 de 3 a 10 miembros, heteroarilalquilo de C1-3de 5 a 10 miembros, ciano(alquilo de Ci-3), alquilsulfonilo Ci-3 alquilo de Ci-4, anillo cicloalifático de 3 a 10 miembros, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; o alternativamente, R12 y Ri3, junto con un átomo de nitrógeno unido a ellos, forman un heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros el cual está opeionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; R14 representa alquilo de C1-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de C1-4, arilo de Ce-io el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo P, o heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; R15 representa alquilo de C1-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, arilo de C6-10 el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo P, o heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; Ri6 representa alquilo de C1-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, arilo de Ce-10 el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo P, o heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterocielilo de 3 a 10 miembros el cual está opeionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; R17 representa hidrógeno o C1-4 alquilo; Ris representa alquilo de Ci-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C1-6, haloalquilo de C1-4, arilo de Ce-io el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo P, o heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opcionalmente sustituido por un grupo (s) independientemente seleccionado del grupo Q; R19 representa hidrógeno, alquilo de Ci-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de C1-4, arilo de C6-10, o heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; R20 representa alquilo de Ci-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de Ci-4, arilo de C6-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; R21 representa alquilo de Ci-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de C1-4, arilo de C6-10 heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; R22 representa hidrógeno, alquilo de Ci-4, o haloalquilo de C1-4; R23 representa hidrógeno, alquilo de Ci-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de C1-4, arilo de C6-io, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; R24 representa hidrógeno, alquilo de Ci-4, o haloalquilo de C1-4; R25 representa alquilo de Ci-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de Ci-4, arilo de Ce-io, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; R26 y R27, que son idénticos o diferentes, cada uno representa hidrógeno, alquilo de Ci-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, alcoxi de C1-3 alquilo de Ci-4, arilo de Ce-io, heteroarilo de 5 a 10 miembros, heterociclilo de 3 a 10 miembros, arilo de Ce-io alquilo de Ci-4, heterociclilalquilo de C1-3 de 3 a 10 miembros, heteroarilalquilo de C1-3de 5 a 10 miembros, ciano(alquilo de C1-3), alquilsulfonilo Ci-3 alquilo de Ci-4, o anillo cicloalifático de 3 a 10 miembros; o alternativamente, R26 y R27, junto con un átomo de nitrógeno unido a ellos, forman un heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros; 28 y R29, que son idénticos o diferentes, cada uno representa hidrógeno, alquilo de Ci-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, alcoxi de C1-3 alquilo de C2-4, arilo de C6-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, heterocielilo de 3 a 10 miembros, arilo de Ce-io alquilo de C1-4, heterociclilalquilo de Ci-3, de 3 a 10 miembros heteroarilalquilo de C1-3de 5 a 10 miembros, ciano(alquilo de C1-3), alquilsulfonilo C1-3 alquilo de C1-4, o anillo cicloalifático de 3 a 10 miembros; o alternativamente, R28 y R29, junto con un átomo de nitrógeno unido a ellos, forman un heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros; R30 representa alquilo de C1-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de C1-4, arilo de Ce-io, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; R31 representa alquilo de Ci-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de Ci-4, arilo de C6-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; R32 representa alquilo de Ci-4 o arilo de Ce-io; <grupo P> halógeno, alquilo de C1-4, haloalquilo de C1-4, -OH, alcoxi de C1-3, haloalcoxi de C1-3, heterociclilamino de 3 a 10 miembros, -SO2R1S, -CN, -NO2, y heterociclilo de 3 a 10 miembros; <grupo Q> halógeno, alquilo de C1-4, haloalquilo de C1-4, -OH, alcoxi de C1-3, monohidroxialquilo de C1-6, dihidroxialquilo de C1-6, trihidroxialquilo de C1-6, heterociclilamina de 3 a 10 miembros, -SO2R16, -CN, -NO2, cicloalquilo de C3-7, -COR19, y heterocielilo de 3 a 10 miembros el cual está opeionalmente sustituido por un alquilo de Ci-4.
[Compuesto 2] [Compuesto 3] [Compuesto 4] C1 I [Compuesto 5] O^ OH [58] el compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo de [57] descrito en lo anterior, en donde el compuesto que tiene actividad inhibidora de FGFR o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo es un compuesto de fórmula (I), en donde A es indol, y R3 y R4 son ambos hidrógeno, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; [59] un método para identificar un compuesto que tiene actividad inhibidora de FGFR, el cual comprende las etapas de: (a) cultivar una célula que expresa el polipéptido de fusión de cualquiera de [1] a [7] descrito antes en presencia o ausencia de un compuesto de prueba y determinar el nivel de proliferación celular; (b) comparar el nivel de proliferación de la célula cultivada entre la presencia y ausencia del compuesto de prueba; y (c) determinar si el compuesto de prueba tiene actividad inhibidora de FGFR cuando el nivel de proliferación de la célula cultivada en presencia del compuesto de prueba es menor que el de la célula cultivada en ausencia del compuesto de prueba; [60] un método para identificar un compuesto que tiene actividad inhibidora de FGFR, el cual comprende las etapas de: (a) administrar un compuesto de prueba a un mamífero no humano transplantado con una célula que expresa el polipéptido de fusión de cualquiera de [1] a [7] descrito en lo anterior y determinar el nivel de proliferación de la célula; (b) comparar el nivel de proliferación de la célula determinado en la etapa (a) con aquel determinado utilizando un mamífero no humano transplantado con la célula pero en quien no se ha administrado el compuesto de prueba; y (c) determinar que el compuesto de prueba tiene actividad inhibidora de FGFR cuando el nivel de proliferación celular determinado en la etapa (a) es menor que el determinado utilizando un mamífero no humano transplantado con la célula pero en quien no se ha administrado el compuesto de prueba; [61] el método de [59] o [60] descrito antes, en donde la célula es una célula cancerosa; y [62] el método de [61] descrito antes, en donde la célula cancerosa es una célula de cáncer de vejiga, célula de tumor cerebral, carcinoma de células escamosas de vías respiratorias y digestivas altas, células de cáncer de pulmón, célula de adenocarcinoma de pulmón, célula escamosa de pulmón, célula de carcinoma, célula de melanoma cutáneo, célula de cáncer esofágico, célula de cáncer gástrico o célula de cáncer de hígado.
EFECTOS DE LA INVENCIÓN Los polipéptidos de fusión de la presente invención que comprenden un polipéptido FGFR3 y otro polipéptido se expresan específicamente en diversos tipos de células de cáncer que incluyen células de cáncer de vejiga. La proliferación de células que expresan los polipéptidos de fusión se inhibe de manera significativa por compuestos que tienen actividad inhibidora de FGFR. De esta manera, el uso de un polipéptido de fusión de la presente invención como un biomarcador para el tratamiento contra el cáncer basado en inhibidor de FGFR permite determinar la aplicabilidad y modo de uso de un inhibidor de FGFR para pacientes individuales y permite evitar efectos secundarios y controlar el modo de tratamiento para producir el mejor efecto terapéutico en un tratamiento basado en inhibidor de FGFR. Esto permite medicina personalizada.
Además, el uso de los polipéptidos de fusión de la presente invención como un objetivo en el desarrollo de agentes terapéuticos contra el cáncer dirigidos a FGFR, es decir, fármacos dirigidos molecularmente, vuelve posible proporcionar inhibidores de FGFR con altos niveles de especificidad y actividad antitumoral contra células cancerosas objetivo así como agentes terapéuticos contra el cáncer que comprenden los inhibidores.
Los inhibidores de FGFR obtenidos como se describe en lo anterior tienen alta especificidad hacia células de cáncer objetivo y se vuelve posible proporcionar agentes terapéuticos contra el cáncer con gran actividad antitumoral y pocos efectos secundarios.
Además, los polipéptidos de fusión de la presente invención tienen una correlación estrecha con diversos tipos de cánceres y por lo tanto la probabilidad de desarrollar cáncer (susceptibilidad a cáncer) de un sujeto, ya sea que el sujeto esté afectado con cáncer o si el cáncer ha progresado en un sujeto que va a ser probado al determinar si las muestras del sujeto, las cuales no se limitan a pacientes con cáncer sino que también incluyen personas sanas, contienen el polipéptido de fusión de la presente invención o un polinucleótido que codifica para el polipéptido de fusión.
Además, los polipéptidos de fusión de la presente invención tienen una correlación estrecha con diversos tipos de cánceres. Así, al identificar un compuesto de prueba que suprime la proliferación de células (tales como células de cáncer) las cuales expresan los polipéptidos de fusión de la presente invención, se vuelve posible proporcionar inhibidores de FGFR con alta especificidad por FGFR y esto se puede realizar al comparar el nivel de proliferación celular entre en presencia y ausencia del compuesto de prueba.
DESCRIPCIÓN BREVE DE LAS FIGURAS La figura 1 es una fotografía que muestra los resultados sobre la amplificación de un polinucleótido vi que codifica para el polipéptido de fusión FGFR3-TACC3, probado por reacción en cadena de polimerasa (PCR, por sus siglas en inglés) utilizando los ADNe derivados de muestras de cáncer de vejiga recolectadas de pacientes con cáncer de vejiga (20 pacientes) y los ADNc sintetizados a partir de ARN RT112/84.
La figura 2 es una fotografía que muestra los resultados sobre la amplificación de un polinucleótido v2 que codifica para el polipéptido de fusión FGFR3-TACC3, probado por reacción en cadena de polimerasa (PCR) utilizando los ADNe derivados de muestras de cáncer de vejiga recolectadas de pacientes con cáncer de vejiga (20 pacientes) y los ADNc sintetizados a partir de ARN RT4.
La figura 3 es una fotografía que muestra los resultados sobre la amplificación de un polinucleótido que codifica para el polipéptido FGFR3-BAIAP2L1, probado por reacción en cadena de polimerasa (PCR) utilizando los ADNc derivados de muestras de cáncer de vejiga recolectadas de pacientes con cáncer de vejiga (20 pacientes) y los ADNc sintetizados a partir de ARN SW780.
Las figuras 4A y 4B son una fotografía que muestran los resultados sobre la amplificación de un polinucleótido que codifica para el polipéptido FGFR3-BAIAP2L1, probado por reacción en cadena de polimerasa (PCR) utilizando los ADNc derivados de muestras de cáncer de vejiga recolectadas de pacientes con cáncer de pulmón (40 pacientes) y los ADNc sintetizados a partir de ARN SW780.
La figura 4A muestra un resultado de la prueba utilizando un par de cebadores oligonucleotídicos (SEC ID NOS: 3 y 4). Los carriles más a la izquierda sobre los geles superior e inferior muestran los resultados de marcadores de peso molecular. La figura 4B muestra un resultado de la prueba utilizando un par de cebadores oligonucleotídicos (SEC ID NOS: 17 y 18).
Los carriles más a la izquierda sobre los geles superior e inferior muestran los resultados de marcadores de peso molecular.
Las figuras 5A-1, 5A-2, 5B-1, y 5B-2 son fotografías que muestran los resultados de detección de un polinucleótido que codifica para el polipéptido FGFR3-BAIAP2L1 en diversos tipos de líneas de células de cáncer de vejiga probadas por análisis FISH.
La figura 5A-1 muestra un resultado de prueba de la línea de células RT112/84 utilizando una sonda de señal dividid .
La figura 5A-2 muestra un resultado de prueba de la línea de células SW780 utilizando una sonda de señal dividida.
La figura 5B-1 muestra un resultado de prueba de la línea de células RT112/84 utilizando una sonda de señal de fusión.
La figura 5B-2 muestra un resultado de prueba de la línea de células SW780 utilizando una sonda de señal de fusión.
Las figuras 6A a 6E muestran los resultados de prueba de la presencia o ausencia de dependencia a FGFR3 en la proliferación de diversas líneas de células de cáncer de vejiga utilizando ARNsi contra FGFR3 o BAIAP2L1.
La figura 6A muestra un resultado de la prueba utilizando la línea de células BFTC-905; La figura 6B muestra un resultado de la prueba utilizando la línea de células UM-UC-14.
La figura 6C muestra un resultado de la prueba utilizando la línea de células RT4.
La figura 6 D muestra un resultado de la prueba utilizando la línea de células SW780.
La figura 7 muestra los resultados de probar el efecto de inhibidores de FGFR al inducir apoptosis en diversas células cancerosas que expresan el polipéptido de fusión FGFR3-BAIAP2L1.
La figura 8 muestra resultados de examinar la capacidad del polipéptido de fusión FGFR3-BAIAP2L1 para transformar células normales al probar las células en cultivo de monocapa.
La fotografía superior muestra un resultado de células que expresan FGFR3, naturales, en un cultivo en monocapa.
La fotografía inferior muestra un resultado de células que expresan el polipéptido de fusión FGFR3-BAIAP2L1 en cultivo de monocapa.
La figura 9 muestra los resultados de examinar la capacidad transformante y capacidad tumorigénica del polipéptido de fusión FGFR3-BAIAP2L1 en células normales al probar las células en cultivo esferoide.
Las fotografías en la hilera superior muestran resultados de cultivo de células originales no tratadas.
Las fotografías en la hilera media muestran resultados de cultivo de células que expresan FGFR3 naturales.
Las fotografías en la hilera inferior muestran resultados de cultivar células que expresan polipéptido de fusión FGFR3-BAIAP2L1.
La figura 10 presenta fotografías que muestran resultados de examinar la capacidad del polipéptido de fusión FGFR3-BAIAP2L1 para transformar células normales y la contribución de BAIAP2L1 para capacidad transformante, al realizar pruebas utilizando la capacidad de autofosforilación de FGFR3 como un indicador.
La figura 11 muestra un resultado de examinar la capacidad del polipéptido de fusión FGFR3-BAIAP2L1 para transformar células normales y la contribución de BAIAP2L1 para la capacidad transformante, al realizar pruebas utilizando proliferación de células independiente de andamiaje, como un indicador.
La figura 12 muestra resultados de examen de la capacidad tumorigénica in vivo del polipéptido de fusión BAIAP2L1 al realizar pruebas utilizando ratones atímicos.
En orden, desde la izquierda, los estados 15 días después de inoculación subcutánea en la región inguinal de ratones atímicos, células que expresan FGFR3 naturales, células que expresan BAIAP2L1 naturales, células que expresan el polipéptido de fusión FGFR3-BAIAP2L1 y células que expresan un polipéptido de fusión de FGFR3 y BAIAP2L1 deficiente en el dominio BAR, respectivamente, son las que se muestran.
La figura 13 muestra un resultado de examen del efecto inhibidor de crecimiento de tumor del inhibidor de FGFR sobre la formación de tumor in vivo por un polipéptido de fusión FGFR3-BAIAP2L1 mediante la utilización de ratones atímicos para pruebas.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La presente invención, como se ilustra en [1] a [62] descritos antes y que proporciona polipéptidos de fusión novedosos expresados en células anormales tales como células cancerosas; polinucleótidos que codifican para los polipéptidos; vectores que comprenden los polinucleótidos; células que comprenden los vectores; anticuerpos y fragmentos de los mismos los cuales se unen específicamente a los polipéptidos; o cebadores oligonucleotídicos que hibridizan para los polinucleótidos; oligonucleótidos que escinden los polinucleótidos; composiciones farmacéuticas que comprenden los anticuerpos u oligonucleótidos; métodos y kits para detectar los polinucleótidos o polipéptidos de fusión; métodos para probar susceptibilidad a cáncer, si un sujeto es afectado con cáncer o si el cáncer ha progresado en base en la presencia o ausencia de los polinucleótidos o polipéptidos de fusión; métodos para seleccionar pacientes con cáncer a los cuales es aplicable un inhibidor de FGFR; composiciones farmacéuticas para tratamiento con cáncer las cuales están caracterizadas por su uso de ser administradas a pacientes que expresan los polipéptidos de fusión o que transportan los polinucleótidos; métodos para tratar o evitar cáncer el cual comprende la etapa de administrar una cantidad eficaz de los compuestos que tienen actividad inhibidora de FGFR o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos a pacientes que expresan los polipéptidos de fusión o que presentan los polinucleótidos; uso de los compuestos que tienen actividad inhibidora de FGFR o sales f rmacéuticamente aceptables de los mismos en la producción de composiciones farmacéuticas para tratamiento de cáncer para administración a pacientes que expresan los polipéptidos de fusión o que portan los polinucleótidos; y compuestos que tienen actividad inhibidora de FGFR o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos para uso en el tratamiento o prevención para pacientes que expresan los polipéptidos de fusión o que portan los polinucleótidos.
En la presente invención, FGFR se refiere a cualquier FGFR que pertenece a la familia de FGFR que comprende FGFR1, FGFR2, FGFR3 y FGFR4 los cuales son receptores de factor de crecimiento de fibroblastos (FGFR, por sus siglas en inglés) que pertenecen a la familia de receptor de tirosina cinasa (Cytokine & Growth Factor Reviews, 2005, 16; 139-149). Los FGFR de la presente invención pueden ser de cualquier origen y preferiblemente son los FGFR derivados de mamíferos (humanos, ratones, ratas, cobayos, conejos, borregos, monos, chivos, burros, bovinos, caballos, cerdos, etc.), de manera más preferible los FGFR humanos y de manera aún más preferible FGFR3 humano que comprende la secuencia de aminoácidos de las SEC ID NOS: 6 ó 7 (secuencias de ADNe, SEC ID NOS: 10 y 11, respectivamente/GenBank, accesos números NM_001163213.1 y NM_000142.4, respectivamente). El locus del gen para FGFR3 humano es 4pl6.3.
En la presente invención, "FGFR3 humano" se refiere a un polipéptido FGFR3 humano natural que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 6 ó 7, o un polipéptido mutante con una sustitución, supresión o inserción de uno o más aminoácidos (preferiblemente uno a diez aminoácidos y de manera más preferible uno a cinco aminoácidos) en el polipéptido natural.
El polipéptido mutante también incluye polipéptidos que tienen 70% o mayor homología, preferiblemente 80% o mayor homología, de manera más preferible 90% o mayor homología, y de manera aún más preferible 95% o mayor homología respecto a la secuencia de aminoácidos del polipéptido natural.
En la presente invención, "BAIAP2L1" se refiere a la proteína 1 similar a proteína 2 asociada a inhibidor 1 de angiogénesis específico de cerebro "BAIAP2L1", por sus siglas en inglés; también denominado como "sustrato de receptor de tirosina cinasa para insulina" (IRTKS, por sus siglas en inglés)) (Journal of Cell Science, 2007, 120:1663-1672). BAIAP2L1 de la presente invención puede ser de cualquier origen y preferiblemente es BAIAP2L1 de mamífero, de manera más preferible BAIAP2L1 humana, y de manera más preferible una BAIAP2L1 humana que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 8 (secuencia de ADNe, SEC ID NO: 12/GenBank, acceso número NM_018842.4). El locus del gen para BAIAP2L1 humano es 7q22.1 y se localiza en un cromosoma diferente de uno que porta el gen para FGFR3.
En la presente invención, "BAIAP2L1 humana" se refiere al polipéptido BAIAP2L1 humano natural que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 8, o un polipéptido mutante con una sustitución, supresión o inserción de uno o más aminoácidos (preferiblemente uno a diez aminoácidos y de manera más preferible uno a cinco aminoácidos) en el polipéptido natural.
El polipéptido mutante también incluye polipéptidos que tiene 70% o mayor homología, preferiblemente 80% o mayor homología, de manera más preferible 90% o mayor homología, y de manera aún más preferible 95% o mayor homología a la secuencia de aminoácidos del polipéptido natural.
En la presente invención, "TACC3" se refiere a la proteína 3 enrollada-helicoidal ácida transformante (TACC3, por sus siglas en inglés) (Genomics.1999, Jun 1; 58(2):165-70). La TACC3 de la presente invención puede ser de cualquier origen y preferiblemente es una TACC3 de mamífero, de manera más preferible una TACC3 humana y de manera aún más preferible una TACC3 humana que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 9 (secuencia de ADNe, SEC ID NO: 13/GenBan , acceso número NM_006342.2). El locus del gen para TACC3 humana es 4pl6.3 y se localiza hacia el extremo 3' del gen para FGFR3 en el mismo cromosoma.
En la presente invención, "TACC3 humana" se refiere a un polipéptido TACC3 humano natural que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 9, o un polipéptido mutante con una sustitución, supresión o inserción de uno o más aminoácidos (preferiblemente uno a diez aminoácidos, y de manera más preferible uno a cinco aminoácidos) en el polipéptido natural.
El polipéptido mutante también incluye polipéptidos que tienen 70% o mayor homología, preferiblemente 80% o mayor homología, de manera más preferible 90% o mayor homología y de manera aún más preferible 95% o mayor homología con la secuencia de aminoácidos del polipéptido natural.
Se puede determinar la identidad de secuencia de aminoácidos (o secuencia nucleotídica) utilizando el algoritmo BLAST por Karlin y Altschul (Proc. Nati. Acad. Sci. USA (1993) 90, 5873-7). Los programas tales como BLASTN y BLASTX se han desarrollado en base en este algoritmo (Altschul et al., J. Mol. Biol. (1990) 215, 403-10). Para analizar las secuencias de nucleótidos de acuerdo con BLASTN en base en BLAST, los parámetros se establecen, por ejemplo, calificación = 100 y longitud de palabra = 12. Por otra parte, los parámetros utilizados para el análisis de secuencias de aminoácidos por BLASTX basados en BLAST incluyen, por ejemplo, calificación = 50 y longitud de palabra = 3. Los parámetros implícitos para cada programa se utilizan cuando se utilizan los programas BLAST y Gapped BLAST. Las téenicas específicas para estos análisis se conocen en el ámbito (se puede hacer referencia a la información en el sitio de red del National Center for Biotechnology Information (NCBI), herramienta de búsqueda de alineación local básica (BLAST, por sus siglas en inglés)).
En la presente invención, un "polipéptido de fusión" se refiere a un polipéptido en el cual la totalidad o una parte del polipéptido FGFR3 natural o mutante descrito antes se fusiona en la totalidad o una parte al polipéptido TACC3 natural o mutante descrito antes, o un polipéptido en el cual la totalidad o una parte del polipéptido FGFR3 natural o mutante descrito antes se fusiona a la totalidad o una parte de BAIAP2L1 natural o mutante descrito antes.
Además, los polipéptidos de fusión de la presente invención incluyen polipéptidos de fusión en los cuales el sitio de fusión formado entre la totalidad o una parte de cada uno de los dos tipos de polipéptidos comprende una secuencia de aminoácidos codificada por una porción de la secuencia intrón en el ADN genómico (que incluye exones e intrones) que codifican para el polipéptido FGFR3 natural o un polipéptido FGFR3 mutante.
Los ejemplos de estos polipéptidos de fusión incluyen polipéptidos que comprenden las secuencias de aminoácidos de las SEC ID NOS: 30 y 36. La secuencia de aminoácidos de las posiciones 761 a 793 y la secuencia de aminoácidos de las posiciones 759 a 791 son codificadas por porciones de la secuencia de intrón del gen FGFR3, respectivamente (la secuencia nucleotídica de las posiciones 2281 a 2379 en la SEC ID NO: 29 y la secuencia nucleotídica de las posiciones 2,275 a 2,373 en la SEC ID NO: 35, respectivamente).
En la presente, "una parte de un polipéptido" se refiere a un polipéptido que consiste de una secuencia parcial arbitraria a partir de la secuencia de aminoácidos de longitud completa de un polipéptido natural o mutante.
Los ejemplos de modalidades específicas incluyen un polipéptido de fusión de FGFR3 y TACC3 que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 28, un polipéptido de fusión de FGFR3 y TACC3 que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 30, un polipéptido de fusión de FGFR3 y BAIAP2L1 que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 32, un polipéptido de fusión de FGFR3 y TACC3 que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 34, un polipéptido de fusión de FGFR3 y TACC3 que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 36, y un polipéptido de fusión de FGFR3 y BAIAP2L1 que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 38.
Como se describe en lo anterior, los polipéptidos de fusión que comprenden las secuencias de aminoácidos de las SEC ID NOS: 30 y 36 comprenden en su sitio de fusión una secuencia de aminoácidos codificada por una porción de la secuencia de intrón del gen para FGFR3.
Los polinucleót idos de la presente invención incluyen polinucleótidos que codifican para un polipéptido de fusión de la presente invención descrito en lo anterior el cual incluye cualquiera de los polinucleótidos que pueden codificar para un polipéptido de fusión de la presente invención. Los polinucleótidos incluyen los ADN genómicos y ADNe. Los ADN genómicos incluyen exones e intrones. Además, los ADNc pueden incluir secuencias de ácido nucleico derivadas de una porción de una secuencia de intrón que codifica para una secuencia de aminoácidos.
Los polinucleótidos también incluyen polinucleótidos degenerados constituidos con cualquiera de los codones en la medida en que los codones codifiquen para los mismos aminoácidos.
Los polinucleótidos de la presente invención también incluyen polinucleótidos que codifican para polipéptidos de fusión derivados de mamíferos. En una modalidad preferida, los polinucleótidos de la presente invención incluyen polinucleótidos que codifican para polipéptidos de fusión derivados de humanos.
En una modalidad específica, los polinucleótidos de la presente invención son polinucleótidos que codifican para un polipéptido de fusión en el cual la totalidad o una parte del polipéptido FGFR3 natural (SEC ID NOS: 6 ó 7) o un polipéptido FGFR3 mutante se fusiona a la totalidad o parte del polipéptido TACC3 natural (SEC ID NO: 9) o polipéptido TACO3 mutante descrito en lo anterior o un polipéptido de fusión en el cual la totalidad o una parte del polipéptido FGFR3 natural o mutante se fusiona a la totalidad o una parte del polipéptido BAIA2P2L1 natural (SEC ID NO: 8) o un polipéptido BAIA2P2L1 mutante descrito en lo anterior.
Los ejemplos de modalidades más específicas incluyen un polinucleótido que comprende una secuencia nucleotídica que corresponde al sitio de unión de los dos polipéptidos en el polipéptido de fusión de las SEC ID NOS: 14, 15 ó 16.
Los ejemplos de modalidades incluso más específicas incluyen un polinucleótido que comprende la secuencia de ácido nucleico de la SEC ID NO: 27 la cual codifica para el polipéptido de fusión de FGFR3 y TACC3 que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 28, un polinucleótido que comprende la secuencia de ácido nucleico de la SEC ID NO: 29 la cual codifica para el polipéptido de fusión de FGFR3 y TACC3 que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 30, un polinucleótido que comprende una secuencia de ácido nucleico de la SEC ID NO: 31 la cual codifica para el polipéptido de fusión de FGFR3 y BAIAP2L1 que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 32, un polinucleótido que comprende la secuencia de aminoácidos la SEC ID NO: 33 la cual codifica para el polipéptido de fusión de FGFR3 y TACC3 que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 34, un polinucleótido que comprende la secuencia de ácido nucleico de la SEC ID NO: 35 la cual codifica para el polipéptido de fusión de FGFR3 y TACC3 que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 36, y un polinucleótido que comprende la secuencia de ácido nucleico de la SEC ID NO: 37 la cual codifica para el polipéptido de fusión de FGFR3 y BAIAP2L1 que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 38.
Como se describe en lo anterior, la secuencia nucleotídica en las posiciones 2,281 a 2,379 de la SEC ID NO: 29 es una secuencia de ácido nucleico derivada de un intrón de gen para FGFR3 y codifica para la secuencia de aminoácidos de las posiciones 761 a 793 en el polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 30.
De manera similar, la secuencia de nucleótidos en las posiciones 2,275 a 2,373 de la SEC ID NO: 35 es una secuencia de ácido nucleico derivada de un intrón del gen para FGFR3 y codifica para la secuencia de aminoácidos de las posiciones 759 a 791 en el polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 36.
Los polinucleótidos de la presente invención se pueden obtener por cualquier método. Los polinucleótidos de la presente invención incluyen, por ejemplo, todos los ADN complementarios (ADNe) preparados a partir de ARNm, los ADN preparados a partir de ADN genómico, los ADN obtenidos por síntesis química, los ADN obtenidos por amplificación por PCR utilizando como plantilla ARN o ADN, y los ADN construidos mediante combinación apropiada de estos métodos.
Los polinucleótidos que codifican para polipéptidos de fusión de la presente invención se pueden obtener utilizando métodos sistemáticos al clonar ADNe a partir de ARNm que codifica para un polipéptido de fusión de la presente invención o al aislar ADN genómico y al someterlo a un tratamiento de empalme o por síntesis química.
Por ejemplo, en un método que clona ADNc a partir de ARNm que codifica para un polipéptido de fusión de la presente invención, en primer lugar, el ARNm que codifica para un polipéptido de fusión de la presente invención se prepara a partir de tejidos arbitrarios o células que expresan y que producen el polipéptido de fusión de la presente invención de acuerdo con métodos sistemáticos. Esto se puede obtener, por ejemplo, al preparar ARN total utilizando un método tal como el método de guanidina-tiocianato, método de fenol caliente o el método AGPC y al tratar el ARN total con cromatografía de afinidad utilizando oligo(dT)celulosa, poli U-Sepharose o similar.
Después, la síntesis de la cadena de ADNc se lleva a cabo utilizando el ARNm preparado como plantilla por métodos conocidos que utilizan, por ejemplo, transcriptasa inversa (Mol. Cell. Biol., Vol.2, p. 161, 1982; Mol. Cell.
Biol ., Vol. 3, p.280, 1983; Gene, Vol. 25, p.263, 1983). El ADNc se convierte a ADNc de cadena doble y se inserta en un vector plasmídico, vector de fago, vector cósmido o similar. Para preparar una biblioteca de ADNc, el vector resultante se transforma en E. coli o se transfecta en E. coli después de empacado in vi tro.
La presente invención también se relaciona con vectores (vectores recombinantes) que portan el polinucleótido descrito en lo anterior que codifica para un polipéptido de fusión de la presente invención.
Los vectores de la presente invención no se limitan particularmente en la medida en que pueden replicar y mantener o autopropagarse en diversas células procarióticas y/o eucarióticas como un hospedador. Los vectores de la presente invención incluyen vectores plasmídicos y vectores de fago.
Los vectores de clonación incluyen, por ejemplo pUC19, AgtlO y Agtll. Cuando se aíslan células hospedadoras capaces de expresar un polipéptido de fusión de la presente invención, preferiblemente el vector es uno que tiene un promotor el cual habilita la expresión del polinucleótido de la presente invención.
Los vectores recombinantes de la presente invención se pueden preparar utilizando métodos sistemáticos simplemente al ligar un polinucleótido que codifica para un polipéptido de fusión de la presente invención a un vector recombinante disponible en el ámbito (ADN plasmídico y ADN bacteriófago) .
Los vectores recombinantes para uso en la presente invención incluyen, por ejemplo, plásmidos derivados de E. coli (pBR322, pBR325, pUC12, pUC13, pUC19, etc.), plásmidos derivados de levadura (pSH19, pSH15, etc.), y plásmidos derivados de Bacillus subtilis (pUBU O, pTP5, pC194, etc.).
Los ejemplos de fagos son bacteriófagos tales como el fago l y virus de animales o insectos (pVL1393, Invitrogen) tales como retrovirus, virus de vaccinia, virus de polihedrosis nuclear y lentivirus.
Los vectores de expresión son útiles para el propósito de producir un polipéptido de fusión de la presente invención al expresar un polinucleótido que codifica para el polipéptido de fusión de la presente invención. Los vectores de expresión no se limitan de modo particular en la medida en que tengan la función de producir polipéptidos de fusión de la presente invención al expresar polinucleótidos que codifican para los polipéptidos en diversas células procarióticas y/o eucarióticas como un hospedador.
Estos vectores de expresión incluyen, por ejemplo pMALC2, pEF-BOS (Nucleic Acid Research, Vol. 18, 1990, p. 5322) y pME18S (Jikken Igaku Bessatsu (Experimental Medicine: SUPPLEMENT), "Idenshi Hougaku Handbook (Handbook of Genetic Engineering)11 (1992)).
De manera alternativa, los polipéptidos de fusión de la presente invención se pueden producir como proteínas de fusión con otras proteínas. Por ejemplo, cuando se prepara como una proteína de fusión con glutation S-transíerasa (GST, por sus siglas en inglés), el ADNe que codifica para un polipéptido de fusión de la presente invención se puede subelonar en, por ejemplo, el plásmido pGEX4Tl (Pharmacia). E. coli DH5a se transforma con el plásmido resultante y los transformantes se cultivan para preparar la proteína de fusión.
De manera alternativa, los polipéptidos de fusión de la presente invención se pueden producir como fusiones con hemaglutina de influenza (HA), región constante de inmunoglobulina, b-galactosidasa, proteína que une maltosa (MBP, por sus siglas en inglés) o similares. Además, los polipéptidos de fusión de la presente invención se pueden producir como fusiones con péptidos conocidos, por ejemplo, FLAG (Hopp, T.P. et al . , BioTechnology (1988) 6, 1204-1210), 6x His que consiste de 6 residuos histidina (His), lOx His, hemaglutinina de influenza (HA, por sus siglas en inglés), fragmentos de c-myc humano, fragmentos de VSV-GP, fragmentos de pl8HIV, T7-tag, HSV-tag, E-tag, fragmentos del antígeno SV40T, lek tag, fragmentos de a-tubulina, B-tag, fragmentos de proteína C, Stag, StrepTag y HaloTag.
Cuando se utilizan bacterias, en particular E. coli como una célula hospedadora, los vectores de la presente invención preferiblemente contienen por lo menos una región promotora/operadora, un codón de inicio, un polinucleótido que codifica para un polipéptido de fusión de la presente invención, un codón de detención, una región terminadora y un replicón.
Cuando se utiliza como un hospedador células de levadura, de animal o células de insecto, los vectores de expresión preferiblemente contienen un promotor, un codón de inicio, un polinucleótido que codifica para un polipéptido de fusión de la presente invención y un codón de detención.
Los vectores también pueden contener ADN que codifica para un péptido señal, una secuencia mejoradora, regiones 5' y 3' no traducidas del gen que codifica para una proteína de la presente invención, uniones de empalme, sitios de poliadenilación, una región marcadora de selección, un replicón y similares.
Además, si es necesario, los vectores pueden contener genes marcadores (genes para amplificación de genes, genes de resistencia a fármacos, etc.), que habilitan la selección de hospedadores transformados u hospedadores con amplificación de gen.
Los genes marcadores incluyen, por ejemplo, el gen para dihidrofolato reductasa (DHFR, por sus siglas en inglés), el gen para timidina cinasa, el gen de resistencia a neomicina, el gen para glutamato sintasa, el gen para adenosina desaminasa, el gen para ornitina descarboxilasa, el gen para higromicina-B-fosfotransferasa y el gen para aspartato transcarbamilasa.
Una región promotora-operadora para expresar el polipéptido de fusión de la presente invención en bacterias comprende un promotor, un operador y una secuencia de Shine-Dalgarno (SD) (por ejemplo, AAGG).
Por ejemplo, cuando el hospedador es el género Escherichia, comprende, por ejemplo, el promotor Trp, el promotor lac, el promotor recA, el promotor XPL, el promotor lpp, el promotor tac o similares.
Los ejemplos de un promotor para expresar el polipéptido de fusión de la presente invención en levaduras son el promotor PH05, el promotor PGK, el promotor GAP, el promotor ADH y similares.
Cuando el hospedador es Bacillus, los ejemplos son el promotor SL01, el promotor SP02, el promotor penP y similares.
Cuando el hospedador es una célula eucariótica tal como una célula de mamífero, los ejemplos son un promotor derivado de SV40, promotor de retrovirus, promotor de choque térmico y similares; se prefieren SV40 y retrovirus. No obstante, el promotor no se limita a los ejemplos anteriores. Además, el uso de un mejorador es efectivo para expresión.
Un codón de inicio preferible es, por ejemplo, un codón metionina (ATG). Un codón de terminación utilizado comúnmente (por ejemplo, TAG, TAA, TGA) se ejemplifican como un codón de terminación. Los terminadores naturales o sintéticos utilizados habitualmente se utilizan como una región terminadora.
Un replicón se refiere a un ADN capaz de replicar la totalidad de la secuencia de ADN en células hospedadoras e incluye un plásmido natural, un plásmido modificado de manera artificial (fragmento de ADN preparado a partir de un plásmido natural), un plásmido sintético y similares. Los ejemplos de plásmidos preferibles para E. coli son pBR322 o sus derivados artificiales (fragmento de ADN obtenido al tratar pBr322 con enzimas de restricción apropiadas), para levadura está el plásmido m de levadura 2 o el ADN cromosómico de levadura y pRSVneo ATCC 37198, y para células de mamífero está el plásmido pSV2dhfr ATCC 37145, el plásmido pdBPV-MMTneo ATCC 37224, el plásmido pSV2neo ATCC 37149 y similares.
También se puede utilizar una secuencia mejoradora, un sitio de poliadenilación y una unión de empalme que habitualmente se utilizan en el ámbito, tales como aquellas derivadas de SV40.
El vector de expresión de la presente invención se puede preparar mediante enlace continúo y circulante de por lo menos un promotor mencionado en lo anterior, un codón de inicio, un polinucléotido que codifica para el polipéptido de fusión de la presente invención, un codón de terminación y una región terminadora, a un replicón apropiado. Si se desea, los fragmentos de ADN apropiados (por ejemplo, enlazadores, sitios de restricción y similares) se pueden utilizar por un método común tal como digestión con enzimas de restricción o ligación utilizando ADN ligasa T4.
La presente invención también se relaciona con células recombinantes transformadas con vectores mencionados antes de la presente invención y las células recombinantes de la presente invención se pueden preparar al introducir el vector de expresión mencionado en lo anterior en células hospedadoras.
Las células hospedadoras utilizadas en la presente invención no se limitan particularmente en la medida en que sean compatibles con un vector de expresión mencionado en lo anterior y que puedan ser transformadas. Los ejemplos de las mismas incluyen varias células tales como células naturales o células recombinantes establecidas artificialmente utilizadas habitualmente en el campo téenico de la presente invención (por ejemplo, bacterias (los géneros Escherichia y Bacillus) , levaduras (el género Saccharomyces, el género Pichia y similares), células de animales o células de insectos).
Se prefieren células de E. coli o de un animal. Los ejemplos específicos son E. coli (DH5a, TB1, HB101 y similares), células derivadas de ratón (COP, L, C127, Sp2/0, NS-1, N1H3T3 y similares), células derivadas de rata (PC12, PC12h), células derivadas de hámster (BHK, CHO y similares), células derivadas de mono (COSI, COS3, COS, CV1, Velo y similares) y células derivadas de humano (HeLa, células derivadas de fibroblastos, células de mieloma y HepG2, y similares).
Un vector de expresión se puede introducir (transformar (transfectar)) en células hospedadoras de acuerdo con los métodos habituales [cuando el hospedador es E. coli, Bacillus subtilis o similar]; Proc. Nati. Acad. Sci. USA, Vol. 69, p.2110 (1972); Mol. Gen. Genet., Vol. 168, p.111 (1979); J. Mol. Biol., Vol.56, p.209 (1971); [cuando el hospedador es Saccharomyces cerevisiae]: Proc. Nati. Acad. Sci. USA, Vol. 75, p. 1927 (1978); J. Bacteriol., Vol.153, p.163 (1983); [cuando el hospedador es una célula animal] : Virology, Vol.52, p.456 (1973); [cuando el hospedador es una célula de insecto]: Mol. Cell. Biol., Vol.3, pp.2156-2165 (1983).
Los polipéptidos de fusión de la presente invención se pueden producir al cultivar células recombinantes transformadas (a continuación, el término también se refiere a cuerpos de inclusión) que comprenden un vector de expresión preparado como se describe en lo anterior en medios nutritivos de acuerdo con métodos sistemáticos.
Los polipéptidos de fusión de la presente invención se pueden producir al cultivar las células recombinantes descritas en lo anterior, en particular células animales y al permitir que secreten a los sobrenadantes del cultivo.
El cultivo resultante se filtra o centrifuga para obtener un filtrado de cultivo (sobrenadante). Los polipéptidos de fusión de la presente invención se purifican y aíslan del filtrado de cultivo por métodos sistemáticos utilizados habitualmente para purificar y aislar proteínas naturales o sintéticas. Los ejemplos de un método de aislamiento y purificación son métodos que utilizan solubilidad tal como eliminación de sal y métodos de precipitación con disolventes; los métodos que utilizan diferencia en peso molecular tales como diálisis, ultrafiltración, filtración en gel y electreforesis en dodecilsulfato de sodio-gel de poliacrilamida; métodos que utilizan carga tal como cromatografía de intercambio iónico y cromatografía de hidroxilapatita; métodos que utilizan afinidad específica tal como cromatografía de columna de afinidad; métodos que utilizan diferencia en hidrofobicidad tal como cromatografía líquida de alta resolución en fase inversa; y métodos que utilizan diferencia en el punto isoeléctrico tal como enfoque isoeléctrico.
Por otra parte, cuando un polipéptido de fusión de la presente invención está en el periplasma o citoplasma de células recombinantes cultivadas (tal como E. coli) , las células se recolectan por métodos sistemáticos tales como filtración y centrifugación del cultivo y después se suspenden en un amortiguador apropiado. Después de que la pared de la células y/o la membrana celular de las células se rompe utilizando métodos tales como sonicado, lisozima y criólisis, se obtiene una fracción de membrana que contiene la proteína de la presente invención mediante la utilización de métodos tales como centrifugación y filtración. La fracción de membrana se solubiliza con un detergente tal como Triton-X100 para obtener la solución cruda. Después, la proteína de la presente invención se puede aislar y purificar de la solución cruda utilizando métodos sistemáticos tales como los ejemplificados en lo anterior.
La presente invención también se relaciona con oligonucleótidos arbitrarios que hibridizan a polinucleótidos (ADNe y los ADN genómicos) que codifican para los polipéptidos de fusión descritos en lo anterior de la presente invención.
Los oligonucleótidos de la presente invención tienen secuencias de nucleótidos que son complementarias con secuencias nucleotídicas parciales arbitrarias del ADNc y los ADN genómicos, y las cuales son útiles como un par de cebadores oligonucleotídicos que consisten de cebadores directo y antisentido en reacción en cadena de polimerasa (PCR, por sus siglas en inglés). La totalidad de la secuencia nucleotídica de un polinucleótido que codifica para un polipéptido de fusión de la presente invención o una porción arbitraria de la secuencia nucleotídica se pueden amplificar por PCR utilizando el par de cebadores oligonucleotídicos.
Los cebadores oligonucleotídicos de la presente invención incluyen oligonucleótidos de cualquier longitud que son complementarios a la secuencia nucleotídica de un polinucleótido de la presente invención. Los cebadores oligonucleotídicos de la presente invención preferiblemente incluyen aquellos que tienen una secuencia de por lo menos 12 nucleótidos consecutivos, de manera más preferible 12 a 50 nucleótidos, y de manera aún más preferible 12 a 20 nucleótidos, Los oligonucleótidos de la presente invención también son útiles como una sonda cuando se maneja hibridación de ADN o ARN. Cuando se utilizan como una sonda, los ADN incluyen una secuencia nucleotídica parcial de 20 o más nucleótidos consecutivos, preferiblemente una secuencia nucleotídica parcial de 50 o más nucleótidos consecutivos, de manera más preferible una secuencia nucleotídica parcial de 100 o más nucleótidos consecutivos, incluso de manera más preferible una secuencia nucleotídica parcial de 200 o más nucleótidos consecutivos y de manera aún mucho más preferible una secuencia nucleotídica parcial de 300 o más nucleótidos consecutivos, los cuales hibridizan con un polinucleótido de la presente invención.
La presente invención también se relaciona con oligonucleótidos que se unen a polinucleótidos de ARNm que codifican para los polipéptidos de fusión de la presente invención y que tienen una actividad para inhibir la traducción de los ARNm en proteínas. Es particularmente preferible que los oligonucleótidos incluyan los ARNsi que escindan los ARNm por unión a los polinucleótidos de ARNm que codifican para polipéptidos de fusión de la presente invención.
Los oligonucleótidos se refieren a aquellos los cuales se unen a ARNm que codifican para polipéptidos de fusión de la presente invención y de esta manera limitan su expresión e incluyen, por ejemplo, oligonucleótidos antisentido, ribozimas y AR de interferencia cortos (ARNsi). Se unen a los ARNm y después inhiben su traducción a proteínas.
Un oligonucleótido antisentido se refiere a un oligonucleótido que hibridiza de manera específica con el ADN genómico y/o el ARNm y que inhibe su expresión de proteína al inhibir la transcripeión y/o traducción.
La unión a un polinucleótido objetivo (ARNm, etc.) puede ser resultado de una complementariedad de pares de bases común. De manera alternativa, cuando un oligonucleótido antisentido se une, por ejemplo, a un ADN dúplex, la unión puede ser un resultado de interacción específica en los surcos mayores en la hélice doble. Los sitios objetivo para un oligonucleótido antisentido incluyen el extremo 51 de un ARNm, por ejemplo, secuencias 5' no traducidas de hasta, o que incluyen el codón de inicio AUG, y secuencias no traducidas 3' de un ARNm, así como secuencias de región codificante.
Cuando se utiliza como un oligonucleótido antisentido de la presente invención, los oligonucleótidos antisentido incluyen secuencias nucleotídicas parciales de 5 a 100 nucleótidos consecutivos, preferiblemente secuencias nucleotídicas parciales de 5 a 70 nucleótidos consecutivos, de manera más preferible secuencias nucleotídicas parciales de 5 a 50 nucleótidos consecutivos y de manera aún más preferible secuencias nucleotídicas parciales de 5 a 30 nucleótidos consecutivos.
Además, los oligonucleótidos antisentido de la presente invención se pueden modificar parcialmente por modificación química para prolongar su vida media en sangre (para estabilizarlos) o incrementar su permeabilidad de membrana intracelular cuando se administran a pacientes o para mejorar su resistencia a degradación o absorción en los órganos digestivos en la administración oral. Esta modificación química incluye, por ejemplo, modificación química de un enlace fosfato, ribosa, nucleobase, porción azúcar en oligonucleótidos y extremos 3' y/o 5' de oligonucleótidos.
La modificación de enlaces fosfato incluye, por ejemplo, conversión de uno o más de los enlaces a enlaces fosfodiéster (D-oligo), enlaces fosforotioato, enlaces fosforoditioato (S-oligo), fosfonato de metilo (MP-oligo), enlaces de fosforoamidato, enlaces que no son fosfato y enlaces de fosfonotioato de metilo y combinaciones de los mismos. La modificación de ribosa incluye, por ejemplo, conversión a 21-fluororribosa o 2 '-O-metilrribosa. La modificación de la base nucleotídica incluye, por ejemplo, conversión a 5-propiniluracilo o 2-aminoadenina.
Ribozima se refiere a oligonucleótidos que tienen una actividad catalítica de escindir ARNm. En general, las ribozimas tienen actividad de endonuclesa, ligasa o polimerasa. Las ribozimas incluyen diversos tipos de ribozimas de acción trans, por ejemplo, ribozimas de cabeza de martillo y ribozimas de horquilla.
El término ARNsi se refiere a oligonucleótidos de cadena doble capaces de llevar a cabo interferencia de AR (por ejemplo, Bass, 2001, Nature, 411, 428-429; Elbashir et al . , 2001, Nature, 411, 494-498).
El ARNsi escinde ARNm de una manera específica de secuencia, y como resultado inhibe la traducción del ARNm en proteína. El ARNsi incluye los ARN de cadena doble que tienen una longitud de 20 a 25 pares de bases y que comprenden una secuencia complementaria a la secuencia polinucleotídica objetivo. Los ARNsi de la presente invención también incluyen oligonucleótidos que comprenden nucleótidos modificados químicamente y sustancias que no son nucleótidos.
La presente invención también se relaciona con anticuerpos los cuales se unen al polipéptido de fusión descrito en lo anterior, de la presente invención, y fragmentos del mismo que unen antígeno.
Los anticuerpos de la presente invención no se limitan por su origen, forma, función, etc. Los anticuerpos de la presente invención pueden ser cualquier anticuerpo, anticuerpos monoclonales o policlonales. No obstante, los anticuerpos preferidos de la presente invención son anticuerpos monoclonales. Los anticuerpos de la presente invención pueden ser aquellos derivados de cualquier animal, tales como anticuerpos humanos, anticuerpos de ratón y anticuerpos de rata. Los anticuerpos de la presente invención también pueden ser anticuerpos recombinantes tales como anticuerpos quiméricos y anticuerpos humanizados. Los anticuerpos preferidos de la presente invención incluyen anticuerpos quiméricos, anticuerpos humanos y anticuerpos humanizados.
Los anticuerpos humanizados de la presente invención se pueden preparar por métodos conocidos por aquellos expertos en el ámbito. La región variable de un anticuerpo típicamente está constituida de tres regiones determinadoras de complementariedad (CDR, por sus siglas en inglés) interpuestas por cuatro infraestructuras (FR, por sus siglas en inglés). Las CDR determinan prácticamente la especificidad de unión de un anticuerpo. Las secuencias de aminoácidos de las CDR son altamente diversas. Por otra parte, las secuencias de aminoácido que constituyen las FR con frecuencia presentan alta homología entre anticuerpos que tienen diferentes especificidades de unión. Por lo tanto, se dice que en general la especificidad de unión de un anticuerpo se puede transplantar a un anticuerpo diferente por injertado de las CDR.
Los anticuerpos humanizados también se les denomina como anticuerpos humanos reconformados dado que se preparan al transferir las CDR de un anticuerpo derivado de un mamífero no humano, tal como un ratón, a las regiones determinadoras de complementariedad de un anticuerpo humano. Las téenicas de recombinación genética generales para su preparación también se conocen (véase la publicación de solicitud de patente Europea número 125023 y WO 96/02576).
Específicamente, por ejemplo, cuando las CDR se derivan de un anticuerpo de ratón, se diseña una secuencia de ADN de manera que las CDR del anticuerpo de ratón se unan con las regiones de infraestructura (FR) de un anticuerpo humano, y se sintetizan por PCR utilizando, como cebadores, varios oligonucleótidos que tienen porciones que se superponen en los extremos de ambos, CDR y FR (véase el método descrito en el documento W098/13388). El ADN resultante después se liga a un ADN que codifica para una región constante de anticuerpo humano, se inserta en un vector de expresión y se introduce en un hospedador para producir el anticuerpo (véase la publicación de la solicitud de patente Europea número EP 239400 y la publicación de solicitud de patente internacional número WO 96/02576).
Las regiones de infraestructura de anticuerpo humano que se van a unir con las CDR se seleccionan de manera que las regiones determinadoras de complementariedad formen un sitio favorable de unión a antígeno. Si se necesita, los aminoácidos de la región de infraestructura en una región variable de anticuerpo se pueden sustituir, suprimir, agregar y/o insertar de manera que las regiones determinadoras de complementariedad del anticuerpo humano reconformado formen un sitio apropiado de unión a antígeno. Por ejemplo, se pueden introducir mutaciones en la secuencia de aminoácidos de la FR al aplicar el método de PCR utilizado para injertar las CDR de ratón a las FR humanas. Específicamente, se pueden introducir mutaciones en una porción de las secuencias nucleotídicas de cebadores que se reasocian con las FR. Las mutaciones se introducen en las FR sintetizadas utilizando estos cebadores. Las secuencias de FR mutantes que tengan las propiedades deseadas se pueden seleccionar al establecer y determinar la actividad de unión a antígeno de los anticuerpos mutantes sustituidos en aminoácidos por el método descrito en lo anterior y (Sato, K. et Cáncer Res. (1993) 53, 851-856).
En general, las regiones constantes de los anticuerpos humanos se utilizan para aquellos de anticuerpos humanizados.
No hay limitaciones particulares para que las regiones constantes del anticuerpo humano sean utilizadas en la presente invención; y por ejemplo, cuando se utiliza una región constante de cadena pesada, puede ser una región constante de IgGl humana, una región constante de IgG2 humana, una región constante de IgG3 humana, una región constante de IgG4 humana o una región constante de IgM, IgA, IgE o IgD humana. De manera alternativa, cuando se utiliza una región constante de cadena ligera, puede ser una región constante de cadena k humana o una región constante de cadena l humana. Además, las regiones constantes derivadas de un anticuerpo humano pueden tener una secuencia como se encuentra de modo natural o puede ser una región constante que tenga una secuencia con modificación (sustitución, supresión, adición y/o inserción) de uno o más aminoácidos en la secuencia como se encuentra de modo natural.
Además, después de que un anticuerpo humanizado se prepara, los aminoácidos en la región variable (por ejemplo, CDR y FR) y la región constante del anticuerpo humanizado se pueden suprimir, agregar, insertar y/o sustituir con otros aminoácidos. Los anticuerpos humanizados de la presente invención también incluyen estos anticuerpos humanizados con sustituciones de aminoácidos y similares.
El origen de las CDR de un anticuerpo humanizado no se limita particularmente y puede ser cualquier animal. Por ejemplo, es posible utilizar secuencias de anticuerpos de ratón, anticuerpos de rata, anticuerpos de conejo, anticuerpos de camello y similares. Las secuencias de CDR de anticuerpos de ratón son las que se prefieren.
Cuando se administran a humanos para propósitos terapéuticos, los anticuerpos humanizados son útiles debido a que su inmunogenicidad en el cuerpo humano está reducida.
Los anticuerpos quiméricos comprenden, por ejemplo, regiones constantes de cadena pesada y ligera de un anticuerpo humano y regiones variables de cadena pesada y ligera de un anticuerpo de un mamífero no humano, tal como un ratón. Los anticuerpos quiméricos se pueden preparar utilizando métodos conocidos. Por ejemplo, los anticuerpos se pueden producir por clonación de un gen para anticuerpo a partir de hibridomas, insertándolo en un vector apropiado e introduciendo la construcción en los hospedadores (véase, por ejemplo, Cari, A. K. Borrebaeck, James, W. Larrick, THERAPEUTIC MONOCLONAL ANTIBODIES, publicada en el Reino Unido por MACMILLAN PUBLISHERS LTD, 1990). Específicamente, los ADNe de las regiones variables de anticuerpo (regiones V) se sintetizan a partir de los ARNm de hibridoma utilizando transcriptasa inversa. Una vez que los ADN que codifican para las regiones V de un anticuerpo de interés se obtienen, se unen con los ADN que codifican para las regiones constantes (regiones C) de un anticuerpo humano deseado. Las construcciones resultantes se insertan en vectores de expresión. De manera alternativa, los ADN que codifican para las regiones V de anticuerpo se pueden insertar en un vector de expresión que comprenda los ADNc que codifican para las regiones C de un anticuerpo humano. Los ADN se insertan en un vector de expresión de manera que se expresan bajo la regulación de regiones reguladoras de expresión, por ejemplo, mejoradores y promotores. En la siguiente etapa, las células hospedadoras se pueden transformar con el vector de expresión para permitir la expresión de anticuerpos quiméricos.
Los anticuerpos humanos se pueden obtener utilizando métodos conocidos por aquellos expertos en el ámbito. Por ejemplo, los anticuerpos humanos deseados con actividad de unión a antígeno se pueden obtener al sensibilizar linfocitos humanos con un antígeno de interés o células que expresan un antígeno de interés in vitro y fusionar los linfocitos sensibilizados con células de mieloma humanas tales como U266 (véase la solicitud de patente Japonesa Kokoku publicación No. (JP-B) H01-59878 (solicitud de patente Japonesa examinada y aprobada publicada por oposición)). De manera alternativa, el anticuerpo humano deseado también se puede obtener al inmunizar un animal transgénico que tenga un repertorio completo de genes para anticuerpo humano con un antígeno deseado (véase las publicaciones de solicitudes de patentes Internacionales Nos. WO 93/12227, WO 92/03918, WO 94/02602, WO 94/25585, WO 96/34096 y WO 96/33735).
De manera alternativa, los linfocitos B que expresan anticuerpos que tienen actividad de unión a antígeno se aíslan de un acumulado de linfocitos humanos por citometría de flujo, arreglo celular o similares. Los genes de anticuerpo a partir de los linfocitos B seleccionados se pueden analizar y las secuencias de ADN de los anticuerpos humanos que se unen a antígeno se pueden determinar (Jin, A. et al., nature medicine (2009) 15, 1088-92; Scheid, J. F. et al., Nature (2009) 458, 636-640; Wrammert, J. et al., Nature (2008) 453, 667-672; Tiller, T. et al., Journal of Immunological methods (2008) 329, 112-124). Cuando las secuencias de ADN de los anticuerpos que unen antígeno se muestran , los anticuerpos humanos se pueden preparar al construir vectores de expresión apropiados que presenten las secuencias. Estos métodos se conocen, y se pueden utilizar como referencias WO 92/01047, WO 92/20791, WO 93/06213, WO 93/11236, WO 19172, WO 95/01438 y WO 95/15388.
Además, se conocen téenicas para obtener anticuerpos humanos mediante análisis repetitivo (panning) con una biblioteca de fago de anticuerpo humano. Por ejemplo, la región variable de un anticuerpo humano se expresa como un anticuerpo de cadena sencilla (seFv)sobre la superficie del fago utilizando un método de presentación de fago y los fagos que se unen al antígeno se pueden seleccionar. Mediante el análisis de los genes de los fagos seleccionados se pueden determinar las secuencias de ADN que codifican para las regiones variables de anticuerpos humanos que se unen al antígeno. Si se identifican las secuencias de ADN de los scFv que se unen al antígeno, se pueden construir vectores de expresión apropiados que comprendan estas secuencias para obtener anticuerpos humanos. Estos métodos son bien conocidos. Se puede hacer referencia a WO 92/01047, WO 92/20791, WO 93/06213, WO 93/11236, WO 93/19172, WO 95/01438, WO 95/15388 y similares.
Los anticuerpos de la presente invención incluyen no solo anticuerpos divalentes como se representan por IgG sino también anticuerpos monovalentes, anticuerpos multivalentes como se representan por IgM. Además, los anticuerpos de la presente invención también incluyen anticuerpos biespecíficos capaz de unirse a antígenos diferentes.
Los anticuerpos de la presente invención incluyen no solo moléculas de anticuerpo completas sino también fragmentos que unen antígeno tales como anticuerpos de peso molecular bajo.
Los anticuerpos de la presente invención también incluyen anticuerpos modificados que están unidos a sustancias citotóxicas. Los anticuerpos de la presente invención también incluyen aquellos con cadenas de azúcar alteradas.
Los anticuerpos de peso molecular bajo (minicuerpos) incluidos en los fragmentos que unen antígeno de la presente invención son anticuerpos que comprenden un fragmento de anticuerpo que carece de parte de un anticuerpo completo (por ejemplo, IgG completo, etc.). Los minicuerpos no se limitan particularmente en la medida en que tienen la actividad para unirse a un polipéptido de fusión de la presente invención.
Los minicuerpos de la presente invención no se limitan particularmente en la medida que comprenden una porción de un anticuerpo completo. No obstante, es preferible que los minicuerpos comprendan un dominio que une antígeno. En general, un dominio que une antígeno es la CDR de un anticuerpo y preferiblemente seis CDR de un anticuerpo. De esta manera, los dominios que unen antígeno preferidos incluyen, por ejemplo, seis CDR de un anticuerpo y regiones variables de anticuerpo (regiones variables de cadena pesada y/o cadena ligera).
Los minicuerpos de la presente invención preferiblemente tienen un peso molecular más pequeño que los anticuerpos completos. No obstante, los minicuerpos pueden formar multímeros, por ejemplo dímeros, trímeros o tetrámeros y de esta manera sus pesos moleculares pueden ser mayores que las de los anticuerpos completos.
Otros ejemplos específicos de fragmentos de moléculas que unen antígeno incluyen, por ejemplo Fab, Fab', F(ab')2 y Fv. Por otra parte, los ejemplos específicos de anticuerpos de peso molecular bajo incluyen, por ejemplo, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, seFv (Fv de cadena sencilla), diacuerpos y sc(Fv)2 ((Fv)2 de cadena sencilla). Multímeros (por ejemplo dímeros, trímeros, tetrámeros y polímeros) de estos anticuerpos que también se incluyen en los anticuerpos de peso molecular bajo de la presente invención.
Los fragmentos que unen antígeno se pueden obtener, por ejemplo, al tratar los anticuerpos con enzimas para producir fragmentos de anticuerpo. Las enzimas que se sabe que generan fragmentos de anticuerpo incluyen, por ejemplo, papaína, pepsina y plasmina. De manera alternativa, un gen que codifica para un fragmento de anticuerpo se puede construir, introducir en un vector de expresión y expresar en células hospedadoras apropiadas (véase, por ejemplo, Co, M. S. et al., J. Immunol. (1994) 152, 2968-2976; Better, M. & Horwitz, A. H. Methods in Enzymology (1989) 178, 476-496; Plueckthun, A. & Skerra, A. Methods in Enzymology (1989) 178, 476-496; Lamoyi, E., Methods in Enzymology (1989) 121, 652- 663; Rousseaux, J. et al., methods in Enzymology (1989) 121, 663-669; Bird, R. E. et al., TIBTECH (1991) 9, 132-137).
Las enzimas digestivas escinden en un sitio específico en un fragmento de anticuerpo, lo que genera fragmentos de anticuerpo de estructuras específicas que se muestran más adelante. Se pueden aplicar téenicas de ingeniería genética para los fragmentos de anticuerpo obtenidos enzimáticamente para suprimir cualquier porción arbitraria del anticuerpo.
Los fragmentos de anticuerpo obtenidos mediante la utilización de las enzimas digestivas descritas en lo anterior son los siguientes: digestión con papaína: F(ab)2 o Fab digestión con pepsina: F(ab')2 o Fab' digestión con plasmina: Facb Los minicuerpos de la presente invención incluyen fragmentos de anticuerpo que carecen de una región arbitraria en la medida en que tienen la actividad para unirse a un polipéptido de fusión de la presente invención.
El término "diacuerpo" se refiere a un fragmento de anticuerpo bivalente construido por fusión de gen (Holliger P et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993); EP 404,097; O 93/11161, etc.).
Los diacuerpos son dímeros constituidos de dos cadenas polipeptídicas. En cada una de las cadenas de polipéptidos que forman un dímero, una VL y una VH habitualmente se unen por un enlazante en la misma cadena. En general, el enlazante es un diacuerpo que es suficientemente corto de manera que la VL y la VH no pueden unirse entre sí. Específicamente, el número de residuos aminoácidos que constituyen el enlazante es, por ejemplo, aproximadamente cinco residuos. De esta manera, las VL y VH codificadas en el mismo polipéptido no pueden formar un fragmento de región variable de cadena sencilla y formar un dímero con otro fragmento de región variable de cadena sencilla. Como un resultado, el diacuerpo tiene dos sitios de unión a antígeno.
Los anticuerpos seFv son polipéptidos de cadena sencilla producidos al enlazar una región variable de cadena pesada ([VH]) con una región variable de cadena ligera ([VL]) por medio de un enlazante o similar (Huston, j. S. et al., Proc. Nati. Acad. Sci. U.S.A. (1988) 85, 5879-5883; Plickthun "The Pharmacology of Monoclonal Antibodies" Vol. 113, eds., Resenburg and Moore, Springer Verlag, New York, pp.269-315, (1994)). Las regiones V de cadena H y la región V de cadena L de seFv se pueden derivar de cualquier anticuerpo descrito en la presente. El enlazante peptídico para enlazar las regiones V no se limita particularmente. Por ejemplo, se puede utilizar como un enlazante un péptido de cadena sencilla arbitrario que contenga aproximadamente tres a 25 residuos. Específicamente, es posible utilizar los enlazantes peptídicos o similares descritos más adelante.
Las regiones V de ambas cadenas se pueden enlazar, por ejemplo, por PCR como se describe en lo anterior. Para enlazar las regiones V por PCR, en primer lugar se utiliza como una plantilla un ADN a partir de los ADN siguientes que codifican para una secuencia de aminoácidos completa o parcial deseada: secuencia de ADN que codifica para una cadena H o región V de cadena H de un anticuerpo, y secuencia de ADN que codifica para una cadena L o región V de cadena L de un anticuerpo.
Los ADN que codifican para las regiones V de cadena H y de cadena L se amplifican por PCR utilizando un par de cebadores que tienen secuencias que corresponden a las secuencias en ambos extremos del ADN que se va a amplificar.
Después se prepara el ADN que codifica para la porción de enlazante peptídico. El ADN que codifica para el enlazante peptídico también se puede sintetizar por PCR. Aquí, las secuencias nucleotídicas que se pueden ligar a los productos de amplificación de las regiones V sintetizadas de modo separado se agregan al extremo 5' de los cebadores que se van a utilizar. Después se lleva a cabo PCR utilizando cada ADN de [ADN de región V de cadena H] - [ADN de enlazante peptídico] - [ADN de región V de cadena L] y ensamblando los cebadores por PCR.
Los cebadores de PCR de ensamblado están constituidos de una combinación de un cebador que se reasocia al extremo 5' de [ADN región V de cadena H] y un cebador que se reasocia al extremo 3' de [ADN de la región V de cadena L]. En otras palabras, los cebadores de PCR de ensamblado son un conjunto de cebadores que se pueden utilizar para amplificar ADN que codifica para la secuencia de longitud completa de un seFv que se va a sintetizar. Por otra parte, las secuencias de nucleótidos que se pueden ligar a los ADN de la región V han sido agregadas al [ADN enlazante peptídico]. De esta manera, estos ADN están unidos juntos y después la totalidad de scFv se genera finalmente como un producto de amplificación por los cebadores de PCR de ensamblado. Una vez que los ADN que codifican para scFv se generan, los vectores de expresión que presentan estos ADN y células recombinantes transformadas con estos vectores de expresión se pueden obtener por métodos convencionales. Además, el seFv se puede obtener al cultivar las células recombinantes resultantes para expresar los ADN que codifican para scFv.
El orden de las regiones variables de cadena pesada y de cadena ligera que se van a unir juntos no se limita particularmente y se pueden distribuir en cualquier orden. Los ejemplos de la distribución se enumeran a continuación.
[VH] enlazante [VL] [VL] enlazante [VH] sc(Fv)2 es un anticuerpo de peso molecular bajo de cadena sencilla producido al enlazar dos VH y dos VL utilizando enlazantes y similares (Hudson et al., J Immunol. Methods 1999; 231: 177-189). Por ejemplo, se(Fv)2 se puede producir por enlace de scFv por medio de un enlazante.
Los anticuerpos los cuales dos VH y dos VL se distribuyen en el orden de VH, VL, VH, y VL ([VH] enlazante [VL] enlazante [VH] enlazante [VL]) a partir de la parte N-terminal del polipéptido de cadena sencilla son los que se prefieren. No obstante, el orden de los dos VH y dos VI no se limita a la distribución anterior y se pueden distribuir en cualquier orden. Los ejemplos de distribución se enumeran a continuación : [VL] enlazante [VH] enlazante [VH] enlazante [VL] [VH] enlazante [VL] enlazante [VL] enlazante [VH] [VH] enlazante [VH] enlazante [VL] enlazante [VL] [VL] enlazante [VL] enlazante [VH] enlazante [VH] [VL] enlazante [VH] enlazante [VL] enlazante [VH] La secuencia de aminoácidos de la región variable de cadena pesada o la región variable de cadena ligera en un anticuerpo de peso molecular bajo puede contener una sustitución, supresión, adición y/o inserción. Además, la región variable de cadena pesada y la región variable de cadena ligera también pueden carecer de algunas porciones o se pueden agregar con otros polipéptidos en la medida en que tengan capacidad de unión a antígeno cuando se unen juntos. De manera alternativa, las regiones variables pueden ser quimerizadas o humanizadas.
En la presente invención, los enlazantes los cuales unen las regiones variables del anticuerpo incluyen enlazantes peptídicos arbitrarios que se pueden introducir utilizando ingeniería genética o enlazantes sintéticos tales como los descritos en Protein Engineering, 9 (3), 299-305, 1996.
Los enlazantes preferidos en la presente invención son enlazantes peptídicos. La longitud de los enlazantes peptídicos no se limita particularmente y aquellos expertos en el ámbito pueden seleccionar apropiadamente la longitud en base en el propósito. Una longitud típica es de uno a 100 aminoácidos, preferiblemente 3 a 50 aminoácidos, de manera más preferible 5 a 30 aminoácidos y de modo particularmente preferible de 12 a 18 aminoácidos (por ejemplo, 15 aminoácidos).
Las secuencias de aminoácidos de estos enlazantes peptídicos incluyen, por ejemplo: Ser; Gly-Ser; Gly-Gly-Ser; Ser-Gly-Gly; Gly-Gly-Gly-Ser (SEC ID NO: 19); Ser-Gly-Gly-Gly (SEC ID NO: 20); Gly-Gly-Gly-Gly-Ser (SEC ID NO: 21); Ser-Gly-Gly-Gly-Gly (SEC ID NO: 22); Gly-Gly-Gly-Gly Gly-Ser (SEC ID NO: 23); Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly (SEC ID NO: 24); Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser (SEC ID NO: 25); Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly (SEC ID NO: 26); (Gly-Gly-Gly-Gly-Ser (SEC ID NO: 21))n; y (Ser-Gly-Gly-Gly-Gly (SEC ID NO: 22))n, en donde n es un número entero de 1 o mayor.
La secuencia de aminoácidos de un enlazante peptídico se puede seleccionar apropiadamente por aquellos expertos en el ámbito de acuerdo con el propósito. Por ejemplo, la "n" mencionada antes, la cual determina la longitud del enlazante peptídico habitualmente es de 1 a 5, preferiblemente 1 a 3 y de manera más preferible 1 ó 2.
Los enlazantes sintéticos (agentes de reticulado químico) incluyen agentes de reticulado que se utilizan habitualmente para reticular péptidos, por ejemplo N-hidroxisuccinimida (NHS), suberato de disuccinimidilo (DSS), suberato de bis (sulfosuccinimidilo) (BS3), ditiobis(propionato de succinimidilo) (DSP), ditiobis(propionato de sulfosuccinimidilo) (DTSSP), etilenglicol bis(succinato de succinimidilo) (EGS), etilenglicol bis (succinato de sulfosuccinimidilo) (sulfo-EGS), tartrato de disuccinimidilo (DST), tartrato de disulfosuccinimidilo (sulfo-DST), bis [2- (succinimidoxicarboniloxi)etil]sulfona (BSOCOES) y bis [2- (sulfosuccinimidoxicarboniloxi)etil]sulfona (sulfo-BSOCOES). Estos agentes reticulantes están disponibles comercialmente.
Cuando cuatro regiones variables de anticuerpo se unen, habitualmente se requieren tres enlazantes. Los enlazantes múltiples pueden ser iguales o diferentes.
Los anticuerpos de la presente invención incluyen anticuerpos en los cuales uno o más residuos aminoácidos han sido agregados a la secuencia de aminoácidos de un anticuerpo de la presente invención. Además, las proteínas de fusión las cuales resultan de una fusión entre uno de los anticuerpos anteriores y un segundo péptido o proteína se incluyen en la presente invención. Las proteínas de fusión se pueden preparar al ligar un polinucleótido que codifica para un anticuerpo de la presente invención con un polinucleótido que codifica para un segundo polipéptido o un polipéptido en marco, insertar esto en un vector de expresión y expresar la construcción de fusión en un hospedador. Algunas téenicas conocidas por los expertos en el ámbito están disponibles para este propósito. El péptido asociado o el polipéptido que se va a fusionar con un anticuerpo de la presente invención puede ser un péptido conocido, por ejemplo, FLAG (Hopp, T. P. et al., BioTechnology 6, 1204-1210 (1988)), 6x His que consiste de seis residuos His (histidina), lOx His, hemaglutinina de influenza (HA), fragmento c-myc humano, fragmento VSV-GP, fragmento pl8HIV, T7-tag, HSV-tag, E-tag, fragmento de antígeno T de SV40, etiqueta lek, fragmento de a-tubulina, B-tag, fragmento de proteína C, Stag, StrepTag, HaloTag. Otros polipéptidos asociados que se van a fusionar con los anticuerpos de la presente invención incluyen, por ejemplo, GST (glutatión-S-transíerasa), HA (hemaglutinina de influenza), región constante de inmunoglobulina, b-galactosidasa y MBP (proteína de unión a maltosa) . Un polinucleótido que codifica para uno de estos péptidos o polipéptidos disponibles comercialmente se puede fusionar con un polinucleótido que codifica para un anticuerpo de la presente invención. El polipéptido de fusión se puede preparar al expresar la construcción de fusión.
Además, los anticuerpos de la presente invención pueden ser anticuerpos conjugados los cuales se unen a cualquiera de diversas moléculas que incluyen sustancias poliméricas tales como polietilenglicol (PEG) y ácido hialurónico, sustancias radioactivas, sustancias fluorescentes, sustancias luminiscentes, enzimas y toxinas. Los anticuerpos conjugados se pueden obtener al modificar químicamente los anticuerpos obtenidos. Los métodos para modificar anticuerpos se han establecido en este campo (por ejemplo, el documento US 5057313 y US 5156840). Los "anticuerpos" de la presente invención también incluyen estos anticuerpos conjugados.
Además, los anticuerpos utilizados en la presente invención pueden ser anticuerpos biespecífíeos. El anticuerpo biespecífico se refiere a un anticuerpo que tiene regiones variables que reconocen diferentes epítopos en la misma molécula de anticuerpo. En la presente invención, los anticuerpos biespecíficos pueden reconocer epítopos diferentes sobre la molécula de polipéptido de fusión de la presente invención o reconocen el polipéptido de fusión de la presente invención con un sitio que une antígeno y una sustancia diferente con otro sitio que une antígeno.
Los métodos para producir anticuerpos biespecífíeos se conocen. Los anticuerpos biespecíficos se pueden preparar, por ejemplo, al enlazar dos anticuerpos que reconocen antígenos diferentes. Los anticuerpos que se van a unir juntos pueden ser semi-moléculas, cada una de las cuales contiene una cadena H y una cadena L, o cuartos de moléculas que consisten únicamente de una cadena H. De manera alternativa, los hibridomas que producen anticuerpos monoclonales diferentes se pueden fusionar para producir una célula fusionada que produce anticuerpos biespecíficos. Además, los anticuerpos biespecíficos se pueden producir por téenicas de ingeniería genética.
Los anticuerpos de la presente invención pueden diferir en secuencia de aminoácidos, peso molecular, punto isoeléetrico, presencia/ausencia de cadenas de azúcar y conformación, en base en la célula u hospedador que produce el anticuerpo o el método de purificación como se describe más adelante. No obstante, un anticuerpo resultante se incluye en la presente invención en la medida en que sea funcionalmente equivalente a un anticuerpo de la presente invención. Por ejemplo, cuando un anticuerpo de la presente invención se expresa en células procarióticas, por ejemplo, E. coli se agrega un residuo metionina a la parte N-terminal de la secuencia de aminoácidos del anticuerpo original. Estos anticuerpos se incluyen en la presente invención.
Los anticuerpos de la presente invención pueden ser anticuerpos con cadenas de azúcar alteradas. Los métodos para modificar cadenas de azúcar de anticuerpo se conocen por aquellos expertos en el ámbito e incluyen, por ejemplo, métodos para mejorar ADCC al modificar glucosilación de anticuerpos, métodos para ajustar ADCC por la presencia o ausencia de fucosa en las cadenas de azúcar de anticuerpo, métodos para preparar anticuerpos que tienen cadenas de azúcar que no contienen la fucosa con núcleo a-1,6 al producir anticuerpos en células YB2/0, y métodos para agregar cadenas de azúcar que tienen GleNac bisectante (WO 99/54342; WO 00/61739; WO 02/31140; WO 02/79255, etc.).
Los anticuerpos de la presente invención se pueden producir por métodos conocidos utilizando un inmunógeno de un polipéptido de fusión de la presente invención (derivado de mamífero tales como humanos y ratones) o un fragmento del mismo. Específicamente, los mamíferos no humanos son inmunizados por un método de inmunización conocido, utilizando como un agente sensibilizante un antígeno deseado o células que expresan un antígeno deseado. Las células inmunes preparadas a partir de animales inmunizados se fusionan con células originales conocidas por un método general de fusión celular. Las células productoras de anticuerpo monoclonales resultantes (hibridomas) se clasifican por métodos de cribado generales y los anticuerpos monoclonales se preparan al cultivar las células.
Los mamíferos no humanos que van a ser inmunizados incluyen, por ejemplo, animales tales como ratones, ratas, conejos, borregos, monos, chivos, burros, vacas, caballos y cerdos. El antígeno se puede preparar utilizando un polinucleótido que codifica para un polipéptido de fusión de la presente invención de acuerdo con métodos conocidos, por ejemplo por métodos que utilizan baculovirus (por ejemplo, O 98/46777) o similares.
Los hibridomas se pueden preparar, por ejemplo, de acuerdo con el método de Milstein et al. (Kohler, G. and Milstein, C., Methods Enzymol. (1981) 73: 3-46) o similares. Cuando la in unogenicidad de un antígeno es baja, la inmunización se puede realizar después de enlazar el antígeno con una macromolécula que tenga inmunogenicidad, tal como albúmina.
En una modalidad, los anticuerpos que se unen a polipéptidos de fusión de la presente invención incluyen anticuerpos monoclonales que se unen a los polipéptidos de fusión de la presente invención. Los inmunógenos para preparar anticuerpos monoclonales que tienen actividad de unión a un polipéptido de fusión de la presente invención no se limitan particularmente en la medida en que se puedan preparar anticuerpos que tengan actividad de unión por el polipéptido de fusión de la presente invención. Es posible utilizar un inmunógeno, por ejemplo, un polipéptido de fusión natural o un fragmento peptídico del mismo, o un polipéptido que se obtiene al agregar una mutación artificial en un polipéptido de fusión natural.
Por otra parte, la actividad de un anticuerpo para unir un polipéptido de fusión de la presente invención se puede analizar por métodos conocidos por aquellos expertos en el ámbito.
Por otra parte, los anticuerpos monoclonales también se pueden obtener por inmunización de ADN. La inmunización de ADN es un método en el cual un vector de ADN construido de manera que el gen que codifica para la proteína antigénica se pueda expresar en un animal que va a ser inmunizado, lo que se administra al animal, y el inmunógeno se expresa dentro del cuerpo del animal para proporcionar inmunoestimulación. En comparación con los métodos comunes de inmunización basados en la administración de antígenos proteínicos, la inmunización con ADN se espera que sea ventajosa en la medida en que: habilita la inmunoestimulación mientras que retiene la estructura de una proteína de membrana; y el inmunógeno no necesita ser purificado.
Con el fin de obtener anticuerpos monoclonales por inmunización de ADN, en primer lugar, un polinucleótido que codifica para un polipéptido de fusión de la presente invención se administra a un animal que va a ser inmunizado. El polinucleótido que codifica para un polipéptido de fusión de la presente invención se puede sintetizar de acuerdo con un método descrito en lo anterior por téenicas conocidas tales como PCR. El ADN (polinucleotídico) resultante se inserta en un vector de expresión apropiado y después se administra a un animal que va a ser inmunizado. El vector de expresión incluye cualquier vector descrito en lo anterior (por ejemplo, vectores de expresión disponibles comercialmente tales como peDNA3.1). Los vectores se pueden administrar a un cuerpo vivo mediante métodos utilizados habitualmente. Por ejemplo, la inmunización por ADN se puede realizar, por ejemplo, mediante el uso de una pistola de genes para inyectar partículas de oro inmovilizadas con un vector de expresión al interior de las células. Un método preferido para obtener anticuerpos monoclonales es realizar inmunización de refuerzo con células que expresan el polipéptido de fusión de la presente invención después de inmunización con ADN.
Una vez que el mamífero es inmunizado como se describe en lo anterior y el nivel de suero de un anticuerpo deseado se confirma que ha aumentado, las células inmunes se recolectan del mamífero y se someten a fusión celular. Las células inmunes preferidas son células de bazo en particular.
Las células de mieloma de mamífero se utilizan para fusión con las células inmunes anteriores. Se prefiere que las células de mieloma tengan marcadores de selección apropiados para cribado. El marcador de selección se refiere a un fenotipo que permite (o que no permite) la supervivencia bajo condiciones de cultivo particulares. Los marcadores de selección conocidos incluyen deficiencia en hipoxantina-guanina-fosforibosiltransferasa (a continuación abreviado como "deficiencia en HGPRT") y deficiencia en timidina cinasa (a continuación abreviado como "deficiencia de TK"). Las células deficientes en HGPRT o en TK presentan sensibilidad a hipoxantina-aminopterina-timidina (a continuación abreviado como "sensibilidad a HAT"). El medio de selección HAT, las células sensibles a HAT no pueden sintetizar ADN y por lo tanto morirán. No obstante, cuando se fusionan con células normales continúan sintetizando ADN por medio de la vía salvaje de las células normales y por lo tanto pueden crecer incluso en un medio de selección HAT.
Las células deficientes en HGPRT o en TK se pueden seleccionar utilizando un medio que contenga 6-tioguanina, 8-azaguanina (a continuación abreviado como "8AG") o 5'-bromodesoxiuridina. Aunque las células normales se destruyen debido a la incorporación de estos análogos de pirimidina en el ADN, las células que carecen de estas enzimas pueden sobrevivir en el medio de selección debido a que no pueden incorporar estos análogos de pirimidina. Otro marcador de selección denominado resistencia a G418 confiere resistencia a antibióticos 2-desoxiestreptamina (análogos de gentamicina) debido al gen de resistencia a neomicina. Se conocen diversas células de mieloraa adecuadas para fusión celular.
La fusión celular entre células inmunitarias y células de mieloma puede llevarse a cabo esencialmente de acuerdo con métodos conocidos, por ejemplo, el método de Kohler y Milstein et al. (Kohler, G. y Milstein, C., Methods Enzymol (1981) 73, 3-46).
De manera más específica, la fusión de las células se puede llevar a cabo, por ejemplo, en un medio de cultivo común en presencia de un agente que promueve la fusión celular. El agente que promueve la fusión incluye, por ejemplo, polietilenglicol (PEG) y virus Sendai (HVJ). Si se requiere también se puede agregar un agente auxiliar tal como sulfóxido de dimetilo para mejorar la eficiencia de la fusión.
Las células inmunes y las células de mieloma se pueden utilizar en una relación determinada arbitrariamente. Por ejemplo, la relación de células inmunes respecto a células de mieloma preferiblemente es de 1 a 10. Los medios de cultivo que se van a utilizar para fusión celular incluyen, por ejemplo, medios que son adecuados para el crecimiento de células de la línea de células de mieloma, tales como RPMI1640 y MEM y otros medios de cultivo comunes utilizados para este tipo de cultivo de células. Además, el medio de cultivo también se puede suplementar con suero suplementado con suero bovino fetal (FCS, por sus siglas en inglés).
Las cantidades predeterminadas de células inmunes y células de mieloma se mezclan bien en el medio de cultivo y después se mezclan con una solución de PEG precalentada a aproximadamente 37°C para producir células fusionadas (hibridomas). En el método de fusión celular, por ejemplo, PEG con una media de peso molecular de aproximadamente 1,000-6,000 se puede agregar a las células típicamente en una concentración de 30% a 60% (p/v). Después, la adición sucesiva del medio de cultivo apropiado enumerado en lo anterior y la remoción de sobrenadante por centrifugación se repiten para eliminar el agente de fusión celular y de esta manera, lo cual no es favorable para el crecimiento de hibridomas.
Los hibridomas resultantes pueden ser cribados utilizando un medio de selección de acuerdo con el marcador de selección presentado por las células de mieloma utilizadas en la fusión celular. Por ejemplo, se pueden cribar células deficientes en HGPRT o en TK al cultivarlas en un medio HAT (un medio que contiene hipoxantina, aminopterina y timidina). Específicamente, cuando se utilizan células de mieloma sensibles a HAT en fusión celular, las células fusionadas con éxito con células normales pueden hacerse crecer selectivamente en medio HAT. El cultivo de células utilizando el medio HAT anterior se continúa por un período de tiempo suficiente para permitir que todas las células, excepto los hibridomas deseados (células no fusionadas) mueran. Específicamente, en general, los hibridomas deseados se pueden seleccionar al cultivar las células durante varios días o varias semanas. Después, el cribado y la clonación única de hibridomas que producen un anticuerpo de interés se puede llevar a cabo al realizar métodos habituales de dilución limitante.
El cribado y la clonación única de un anticuerpo de interés se puede llevar a cabo adecuadamente por métodos de cribado conocidos en base en la reacción antígeno-anticuerpo. Por ejemplo, el antígeno se une a un portador tal como esferas elaboradas de poliestireno o similar y disponible comercialmente en placas de microtitulación de 96 pozos, y después se hace reaccionar con el sobrenadante de cultivo de hibridoma. Después el portador se lava y después se hace reaccionar con un anticuerpo secundario marcado con enzima o similar. Cuando el sobrenadante de cultivo contiene un anticuerpo de interés reactivo al antígeno sensibilizante, el anticuerpo secundario se une al portador por medio de este anticuerpo. Finalmente, el anticuerpo secundario unido al portador se detecta para determinar si el sobrenadante de cultivo contiene el anticuerpo de interés. Los hibridomas producen un anticuerpo deseado capaz de unirse al antígeno se pueden clonar por el método de dilución limitante o similar.
Además, del método descrito en lo anterior para preparar hibridomas a través de inmunización de un animal no humano con un antígeno, los anticuerpos de interés también se pueden obtener al sensibilizar linfocitos humanos con un antígeno. Específicamente, en primer lugar, los linfocitos humanos se sensibilizan con el polipéptido de fusión de la presente invención in vitro. Después, los linfocitos sensibilizados se fusionan con un asociado de fusión apropiado. Por ejemplo, células de mieloma derivadas de humano con la capacidad para dividirse permanentemente se pueden utilizar como asociado de fusión (véase JP-B (Kokoku) H01-59878). Los anticuerpos obtenidos por este método son anticuerpos humanos que tienen una actividad de unión al polipéptido de fusión de la presente invención.
La secuencia de nucleótidos que codifica para un anticuerpo que se une al polipéptido de fusión de la presente invención obtenido por el método descrito en lo anterior o similar, y su secuencia de aminoácidos se puede obtener por métodos conocidos por los expertos en el ámbito.
En base en la secuencia obtenida del anticuerpo que se une al polipéptido de fusión de la presente invención, el anticuerpo que se une al polipéptido de fusión de la presente invención se puede preparar por téenicas de recombinación genética conocidas por aquellos expertos en el ámbito. Específicamente, un polinucleótido que codifica para un anticuerpo puede construir en base en la secuencia del anticuerpo que reconoce los polipéptidos de fusión de la presente invención, insertados en un vector de expresión y después expresados en células hospedadoras apropiadas (véase, por ejemplo, Co, M. S. et al., J. Immunol. (1994) 152, 2968- 2976; Better, M. y Horwitz, A. H. Methods in Enzymol (1989) 178, 476-496; Pluckthun, A. y Skerra, A. Methods in Enzymol (1989) 178, 497-515; Lamoyi, E., Methods in Enzymol (1986) 121, 652-663; Rousseaux, J. et al., Methods in Enzymol (1986) 121, 663-669; Bird, R. E. y Walker, B. W., Trends Biotechnol. (1991) 9, 132-137).
Los vectores incluyen vectores M13, vectores pUC, pBR322, pBluescript y pCR-Script. De manera alternativa, cuando se tiene como objetivo subelonar y cortar ADNe, los vectores incluyen, por ejemplo, pGEM-T, pDIRECT y pT7, además de los vectores descritos en lo anterior. Los vectores de expresión son particularmente útiles cuando se utilizan vectores para producir los anticuerpos de la presente invención. Por ejemplo, cuando se tiene como objetivo la expresión en E. coli tal como JM109, DH50C, HB101 y XLl-Blue, el vector de expresión no solo tiene las características descritas en lo anterior que permiten la amplificación de vector en E. coli también debe presentar un promotor que permita expresión eficiente en E. coli , por ejemplo el promotor lacZ (Ward et al., Nature (1989) 341, 544-546; FASEB J. (1992) 6, 2422-2427), el promotor araB (Better et al., Science (1988) 240, 1041-1043), el promotor T7 o similar.
Estos vectores incluyen pGEX-5X-l (Pharmacia), "el sistema QIAexpress" (Qiagen), pEGFP o pET (en este caso, el hospedador preferiblemente es BL21 que expresa ARN polimerasa T7) además de los vectores descritos en lo anterior.
Los vectores pueden contener secuencias de señal para secreción de anticuerpo. Como una secuencia de señal para la secreción de anticuerpo, se puede utilizar una secuencia de señal pelB (Lei, S. P. et al. J. Bacteriol. (1987) 169, 4379) cuando una proteína es secretada en el periplasma de E. coli . El vector se puede introducir en células hospedadoras por cloruro de calcio o métodos de electroporación, por ejemplo.
Además de los vectores para E. coli los vectores para producir los anticuerpos de la presente invención incluyen vectores de expresión de mamífero (por ejemplo peDNA3 (Invitrogen), pEF-BOS (Nucleics Acids. Res. 1990, 18(17), p5322), pEF y pCDM8), vectores de expresión derivados de células de insecto (por ejemplo, el sistema de expresión de baculovirus "Bac-to-BAC" (Gibco-BRL) y pBacPAK8), vectores de expresión derivados de plantas (por ejemplo, pMHl y pMH2), vectores de expresión derivados de virus animal (por ejemplo, pHSV, pMV y pAdexLew), vectores de expresión retroviral (por ejemplo pZIPneo), vectores de expresión de levadura (por ejemplo, el "Pichia Expression Kit" (Invitrogen), pNVll y SP-Q01), y vectores de expresión de Bacillus subtilis (por ejemplo, pPL608 y pKTH50), por ejemplo.
Cuando se tiene como objetivo la expresión en células en animales tales como células CHO, COS y N1H3T3, los vectores deben tener un promotor esencial para expresión en células, por ejemplo, el promotor SV40 (Mulligan et al., Nature (1979) 277, 108), el promotor MMLV-LTR, el promotor EFla (Mizushima et al., Nucleic Acids Res. (1990) 18, 5322) y el promotor CMv, y de manera más preferible tienen un gen para seleccionar células transformadas (por ejemplo, un gen de resistencia a fármacos que permite evaluación utilizando un agente (neomicina, G418, o similar)). Los vectores con estas características incluyen pMAM, pDR2, pBK-RSV, pBK-CMV, pOPRSV y pOP13, por ejemplo.
Además, el siguiente método se puede utilizar para expresión de gen estable y amplificación de gen en células: células CHO deficientes en una vía de síntesis de ácido nucleico se introducen con un vector (por ejemplo, pSV2-dhfr ("Molecular Cloning 2nd edition" , Coid Spring Harbor Laboratory Press, 1989)) que porta un gen para DHFR el cual compensa la deficiencia y el vector es amplificado utilizando metotrexato (MTX). De manera alternativa se puede utilizar el siguiente método para expresión transitoria de un gen: células COS con un gen que expresa el antígeno T de SV40 en sus cromosomas y que se transforma con un vector (peD y similares) con un origen de replicación de SV40. Los orígenes de replicación derivados de virus de polioma, adenovirus, virus de papiloma bovino (BPV, por sus siglas en inglés) y similares también se pueden utilizar. Para amplificar el número de copias de gen en células hospedadoras, los vectores de expresión pueden presentar adicionalmente marcadores de selección tales como el gen para aminoglucosido transferasa (APH), gen para timidina cinasa (TK), gen para xantina-guanina fosforribosiltransferasa (Ecogpt) de E. coli y el gen para dihidrofolato reductasa (dhfr).
Los anticuerpos de la presente invención obtenidos por los métodos descritos en lo anterior se pueden aislar del interior de células hospedadoras o del exterior de las células (el medio o similar) y se pueden purificar hasta homogeneidad. Los anticuerpos se pueden aislar y purificar por métodos utilizados habitualmente para aislar y purificar anticuerpos y el tipo de método no se limita. Por ejemplo, los anticuerpos pueden ser aislados y purificados al seleccionar apropiadamente y combinar cromatografía en columna, filtración, ultrafiltración, eliminación se sal, precipitación de disolvente, extracción con disolvente, destilación, inmunoprecipitación, electroforesis en SDS-gel de poliacrilamida, y sus electroenfoques, diálisis, recristalización y similares.
Las cromatografías incluyen, por ejemplo, cromatografía de afinidad, cromatografía de intercambio iónico, cromatografía hidrofóbica, filtración en gel, cromatografía en fase inversa y cromatografía de adsorción (Strategies for Protein Purification and Characterization: A Laboratory Course Manual. Ed Daniel R. Marshak et al., Coid Spring Harbor Laboratory Press, 1996). Los métodos cromatográficos descritos en lo anterior se pueden llevar a cabo utilizando cromatografía líquida, por ejemplo CLAR y FPLC. Las columnas que se pueden utilizar para cromatografía de afinidad incluyen columnas de proteína A y columnas de proteína G. Las columnas que utilizan proteína A incluyen, por ejemplo, Hyper D, POROS y Sepharose FF (GE Amersham Biosciences). La presente invención incluye anticuerpos que están altamente purificados utilizando estos métodos de purificación.
La actividad de unión al polipéptido de fusión de la presente invención de los anticuerpos obtenidos se puede determinar por métodos conocidos por aquellos expertos en el ámbito. Los métodos para determinar la actividad de un anticuerpo de unión a antígeno incluyen, por ejemplo, ELISA (análisis inmunosorbente unido a enzima), EIA (inmunoanálisis enzimático), RIA (radioinmunoanálisis) y método de anticuerpo fluorescente. Por ejemplo, cuando se utiliza el inmunoanálisis de enzima, las muestras que contienen anticuerpo, tales como los anticuerpos purificados y sobrenadantes de cultivo de células productoras de anticuerpo se agregan a placas recubiertas con antígeno. Un anticuerpo secundario marcado con una enzima, tal como fosfatasa alcalina se agrega y las placas se incuban. Después del lavado, se agrega un sustrato de enzima, tal como fosfato de p-nitrofenilo y se mide la absorbancia para evaluar la actividad de unión a antígeno.
En la presente invención, el término "cáncer" se refiere en general a un neoplasma maligno el cual puede ser metastásico o no metastásico. Por ejemplo, los ejemplos no limitantes de cáncer que se desarrollan a partir de tejidos epiteliales tales como tracto gastrointestinal y piel incluyen tumor de cerebro, cáncer de piel, cáncer de vías respiratorias y digestivas altas, cáncer esofágico, cáncer de pulmón, cáncer gástrico, cáncer duodenal, cáncer de mama, cáncer de próstata, cáncer cervical, cáncer de cuerpo uterino, cáncer pancreático, cáncer de hígado, cáncer colorrectal, cáncer de colon, cáncer de vejiga y cáncer de ovario. Por otra parte, los ejemplos no limitantes de sarcoma que se desarrollan a partir de tejidos no epiteliales (estroma) tales como músculos incluyen osteosarcoma, condrosarcoma, rabdomiosarcoma, leimiosarcoma, liposarcoma y angiosarcoma. Además, los ejemplos no limitantes de cáncer hematológico derivado de órganos hematopoyéticos incluyen linfoma maligno que incluye linfoma de Hodgkin y linfoma no Hodgkiniano, leucemia que incluye leucemia mielocítica aguda, leucemia mielocítica crónica, leucemia linfática aguda y leucemia linfática crónica y mieloma múltiple.
En la presente invención, cáncer incluye cualquier tumor de tejido patológico recién desarrollado (neoplasma). En la presente invención, el neoplasma genera la formación de tumor el cual está caracterizado por neuvascularización parcial. El neoplasma puede ser benigno, por ejemplo, angioma, glioma y teratoma o puede ser maligno, por ejemplo, cáncer, sarcoma, tumor de neuroglial, astrocitoma, neuroblastoma y retinoblastoma.
En la presente invención, los ejemplos preferidos de cáncer incluyen cáncer de vejiga, cáncer de cerebro, carcinoma de células escamosas de vías respiratorias y digestivas altas, cáncer de pulmón, adenocarcinoma de pulmón, carcinoma de células escamosas de pulmón, melanoma de piel, cáncer esofágico, cáncer gástrico y cáncer de hígado.
En la presente invención, un "tejido con cáncer" se refiere a un tejido que contiene por lo menos una célula cancerosa. Por ejemplo, dado que los tejidos con cáncer contienen células cancerosas y vasos sanguíneos, el tejido con cáncer se refiere a todo tipo de células que contribuya a la formación de masa tumoral que contenga células cancerosas y células endoteliales. En la presente, masa tumoral se refiere a focos de tejido tumoral. El término "tumor" generalmente se utiliza para referirse a neoplasma benigno o maligno.
La presente invención se relaciona con composiciones farmacéuticas que comprenden un anticuerpo o fragmento del mismo que une antígeno, descrito en lo anterior, u oligonucleótidos de la presente invención.
En la presente invención, la composición farmacéutica generalmente se refiere a un agente farmacéutico para tratar, prevenir o examinar/diagnosticar enfermedades.
Las composiciones farmacéuticas de la presente invención se pueden formular por métodos conocidos por aquellos expertos en el ámbito. Por ejemplo, se pueden utilizar parenteralmente, en una forma inyectable de soluciones o suspensiones estériles que incluyen agua u otro líquido farmacéuticamente aceptable. Por ejemplo, estas composiciones se pueden formular al mezclar en una forma de dosis unitaria requerida por la práctica de manufactura farmacéutica aprobada generalmente, al combinar apropiadamente con portadores o medios farmacológicamente aceptables, específicamente agua estéril, solución salina fisiológica, aceite vegetal, emulsificante, suspensión, tensioactivo, estabilizante, agentes saborizante, excipiente, vehículo, conservador, aglutinante o similar. La cantidad de ingrediente activo en estas formulaciones se ajusta de manera que se puede obtener una cantidad apropiada dentro de un intervalo especificado.
Las composiciones estériles para inyección se pueden formular de acuerdo con la práctica de formulación general utilizando vehículos tales como agua destilada para inyección. Las soluciones acuosas para inyección incluyen, por ejemplo, solución salina fisiológica y soluciones isotónicas que contienen glucosa u otros adyuvantes (por ejemplo, D-sorbitol, D-manosa, D-manitol y cloruro de sodio). Estas se pueden utilizar en combinación con solubilizantes apropiados, por ejemplo alcohol (etanol, etc.), polialcohol (propilenglicol, polietilenglicol, etc.) y detergentes no iónicos (Polysorbate 80MR, HCO-50, etc.).
Los aceites incluyen aceite de ajonjolí y aceite de frijol de soja. Se puede utilizar en combinación como solubilizantes benzoato de bencilo y/o alcohol bencílico. También es posible combinar amortiguadores (por ejemplo, amortiguador de fosfato y amortiguador de acetato de sodio), agentes anestésicos locales (por ejemplo, clorhidrato de procaína), estabilizantes (por ejemplo, alcohol bencílico y fenol) y/o antioxidantes. Las ampolletas apropiadas se pueden llenar con las inyecciones preparadas.
Las composiciones farmacéuticas de la presente invención preferiblemente se administran parenteralmente. Por ejemplo, las composiciones se administran en una forma inyectable, o en una forma para administración transnasal, administración transpulmonar o administración trandérmica. Por ejemplo, se pueden administrar de manera sistémica o local por inyección intravenosa, inyección intramuscular, inyección intraperitoneal, inyección subcutánea o similares.
Los métodos de administración se pueden seleccionar apropiadamente en consideración de la edad y síntomas del paciente. La dosis de una composición farmacéutica que contiene una molécula que une antígeno puede ser, por ejemplo, 0.0001 mg a 1,000 mg/kg para cada administración. De manera alternativa, la dosis puede ser, por ejemplo, 0.001 a 100,000 mg por paciente. No obstante, la presente invención no se limita a los valores numéricos descritos en lo anterior. La dosificación y el método de administración varían de acuerdo con el peso, edad, síntomas y similares del paciente. Los expertos en el ámbito pueden establecer una dosificación y método de administración apropiados en consideración de los factores descritos en lo anterior.
Los aminoácidos en las secuencias de aminoácidos que se describen en la presente se pueden modificar después de traducción (por ejemplo, modificación de la glutamina N-terminal en ácido piroglutámico por piroglutamilación como es bien conocido por aquellos expertos en el ámbito). Como se sabe, los aminoácidos modificados postraduccionalmente también se incluyen en las secuencias de aminoácidos de la presente invención.
La presente invención también se relaciona con métodos para detectar un polipéptido de fusión descrito en lo anterior de la presente invención o un polinucleótido que codifica para el polipéptido de fusión en muestras de sujetos (que incluye pacientes con cáncer y personas sanas).
La presencia o ausencia de un polipéptido de fusión de la presente invención en una muestra de un sujeto se puede probar y determinar, por ejemplo, utilizando reacción antígeno-anticuerpo la cual se realiza al poner en contacto un anticuerpo descrito en lo anterior o un fragmento del mismo que une antígeno, que se une a un polipéptido de fusión de la presente invención con una muestra (tejido tumoral, tejido normal y diversos especímenes de fluido corporal que contienen células cancerosas o normales (sangre, suero, orina, saliva, ascites, efusión pleural, etc.)) recolectados de un sujeto (paciente con cáncer, persona quien puede ser afectada con cáncer, persona con el riesgo de adquirir cáncer, o persona sana; no obstante, no se limita a un humano).
El antígeno (es decir, un polipéptido de fusión de la presente invención) en una reacción antígeno-anticuerpo se puede detectar, por ejemplo, mediante la utilización de inmunoanálisis convencional.
En la presente invención, el inmunoanálisis se refiere a un método para detectar un polipéptido de fusión de la presente invención en una muestra (tejido tumoral, tejido normal y diversos especímenes de fluidos corporales que contienen células cancerosas o normales (sangre, suero, orina, saliva, ascites, efusión pleural etc.)) en base en el mecanismo de reacción entre un antígeno (es decir, un polipéptido de fusión de la presente invención) y un anticuerpo que se une al antígeno o fragmento que une antígeno del mismo. Cualquier inmunoanálisis se incluye en la presente invención en la medida en que sea un método que se puede detectar los polipéptidos de fusión de la presente invención.
Para inmunoanálisis en la presente invención, por ejemplo, los principios de los diversos métodos tales como los descritos en "Kouso Men-eki Sokutei Hou (inmunoanálisis de enzima)" (3rd Ed., eds., Eiji Ishikawa et al., Igakushoin, 1987) se pueden aplicar. Específicamente, estos diversos métodos se pueden llevar a cabo utilizando uno o más anticuerpos que se unen a un antígeno de interés para capturar (atrapar) el antígeno que se va a detectar en una muestra.
Los principios aplicables preferiblemente incluyen por ejemplo, métodos en fase sólida de anticuerpo único, métodos en fase líquida de anticuerpo doble, métodos en fase sólida de anticuerpo doble, métodos tipo emparedado, métodos en un recipiente tales como los descritos en JP-B (Kokoku) H02-39747. Por otra parte, los análisis basados en reacción antígeno-anticuerpo también pueden incluir téenica de inmunoanálisis multiplicada en enzima (EMIT), inmunoanálisis de canalización de enzima, inmunoanálisis de enzima mediado por modulador de enzima (EMMIA), inmunoanálisis de inhibidor de enzima, análisis inmunoenzimométrico, inmunoanálisis de enzima mejorada e inmunoanálisis de enlace proximal.
En la presente invención, es posible seleccionar y utilizar cualquier principio de inmunoanálisis apropiado tal como los descritos en lo anterior dependiendo del objetivo de la prueba.
Los inmunoanálisis de la presente invención también incluyen métodos tipo emparedado utilizando un anticuerpo marcado con biotina o enzima y placas de microtitulación de pozos múltiples que tienen diversos pozos que incluyen placa de microtitulación de 96 pozos así como métodos de un recipiente utilizando esferas y anticuerpos marcados con biotina o enzima tal como peroxidasa.
Como se describe en lo anterior, los anticuerpos que se unen a un polipéptido de fusión de la presente invención o fragmentos del mismo que unen antígeno, los cuales se utilizan en inmunoanálisis de la presente invención, se pueden marcar con una sustancia de marcado que puede proporcionar una señal detectable por sí misma o cuando reacciona con otras sustancias.
Estas sustancias de marcado incluyen, por ejemplo, enzimas, sustancias fluorescentes, sustancias quimioluminiscentes, biotina, avidina y radioisótopos. De manera más específica, las sustancias incluyen enzimas tales como peroxidasa (por ejemplo, peroxidasa de rábano), fosfatasa alcalina, b-D-galactosidasa, glucosa oxidasa, glucosa-6-fosfato deshidrogenase, alcohol deshidrogenase, malato deshidrogenasa, penicilinasa, catalasa, apoglucosaoxidasa, ureasa, luciferasa y acetilcolinesterasa; sustancias fluorescentes tales como isotiocianato de fluoresceína, ficobiliproteína, quelatos de metal de tierras raras, cloruro de dansilo e isotiocianato de tetrametilrodamina; radioisótopos tales como 3H, 14C, 125I, y 131I; biotina; avidina y sustancias quimioluminiscentes.
Estos radioisótopos y sustancias fluorescentes pueden proporcionar una señal detectable por sí mismas.
Por otra parte, las enzimas, sustancias quimioluminiscentes, biotina y avidina no pueden proporcionar señal detectable alguna por sí mismas pero proporcionan una señal detectable cuando reaccionan con una o más sustancias diferentes.
Por ejemplo, cuando se utiliza una enzima, es necesario por lo menos un sustrato. Se utilizan diversos sustratos de acuerdo con el tipo de método de análisis de actividad enzimática (análisis colorimétrico, análisis fluorescente, análisis de bioluminiscencia, análisis quimioluminiscente, etc.). Por ejemplo, se utiliza peróxido de hidrógeno como un sustrato para peroxidasa. Por otra parte, la biotina generalmente se hace reaccionar por lo menos avidina o una avidina modificada con enzima, pero los sustratos no se limitan a estos. Si se necesita, también es posible utilizar diversas sustancias cromagénicas de acuerdo con los sustratos.
La presencia o ausencia de un polinucleótido que codifica para un polipéptido de fusión de la presente invención en una muestra de un sujeto se puede probar y determinar, por ejemplo, de acuerdo con métodos sistemáticos utilizando diversos oligonucleótidos (un par de cebadores oligonucleotídicos, sondas oligonucleotídicas, etc.) de la presente invención descritas en lo anterior y ARNm, ADNe preparado utilizando ARNm como una plantilla, ADN genómico o similar en una muestra (tejido tumoral, tejido normal y diversos especímenes de fluido corporal que contienen células cancerosas o normales (sangre, suero, orina, saliva, ascites, efusión pleural, etc.)) recolectadas de un sujeto (paciente con cáncer, persona quien puede ser afectada con cáncer, persona con riesgo de adquirir cáncer o una persona sana; no obstante, no se limita a un humano) mediante la utilización de diversos métodos de análisis de genes. Estos métodos de análisis de genes incluyen, por ejemplo, transferencia Northern, reacción en cadena de polimerasa (PCR), transferencia Southern, reacción en cadena de ligasa (LCR), amplificación de desplazamiento de cadena (SDA, por sus siglas en inglés), amplificación basada en secuencia de ácido nucleico (NASBA), amplificación iniciada por cebador isotérmica y quimérica de ácidos nucleicos (ICAN), amplificación isotérmica mediada por bucle (LAMP), método de TMA (sistema TMA de Gen-Probe), microarreglo y método de secuenciado de la siguiente generación.
En estos análisis, los oligonucleótidos de la presente invención son hibridizados a un polinucleótido que codifica para un polipéptido de fusión de la presente invención derivado de una muestra. Las condiciones de rigurosidad deseadas tales como hibridación incluyen, por ejemplo, las condiciones de urea 6 M, SDS 0.4%, 0.5x SSC y 37°C; y condiciones de hibridación de rigurosidad equivalente. En base en el objetivo, es posible utilizar condiciones más rigurosas, por ejemplo urea 6 M, SDS 0.4% y O.lx SSC y 42°C.
La presente invención también se relaciona con kits para detectar un polipéptido de fusión descrito en lo anterior de la presente invención o un polinucleótido que codifica para el polipéptido de fusión en muestras de sujetos descritos en lo anterior (que incluye pacientes con cáncer y personas sanas).
Específicamente, los kits de detección de la presente invención pueden contener un anticuerpo o fragmento del mismo que une antígeno, descrito en lo anterior, que se une a un polipéptido de fusión de la presente invención (que incluye anticuerpos o fragmentos del mismo que unen antígeno marcados con diversas sustancia etiquetantes descritas en lo anterior). En base en el objetivo de cada inmunoanálisis descrito en lo anterior, los kits también pueden contener diversos reactivos de detección (enzimas, sustratos, etc.) y manuales de instrucción.
Específicamente, los kits de detección de la presente invención pueden contener diversos oligonucleótidos de la presente invención descritos en lo anterior (un par de cebadores oligonucleotídicos, sondas oligonucleotídicas, etc.) que hibridizan a ARNm derivado de un polinucleótido que codifica para el polipéptido de fusión descrito en lo anterior de la presente invención, ADNe preparado utilizando el ARNm como plantilla o ADN genómico. De acuerdo con el objetivo de cada análisis de gen, los kits también pueden contener diversos reactivos (enzimas, otros oligonucleótidos, ácido nucleico, amortiguador de reacción, etc.) y manuales de instrucción.
La presente invención también se relaciona con métodos para probar susceptibilidad a cáncer de un sujeto, en donde el sujeto es afectado con cáncer o si el cáncer ha progresado en un sujeto en base en la presencia o ausencia de un polipéptido de fusión de la presente invención o un polinucleótido que codifica para el polipéptido de fusión en una muestra aislada del sujeto.
Específicamente, los métodos de la presente invención incluyen métodos para probar susceptibilidad a cáncer de un sujeto, si un sujeto es afectado con cáncer o si el cáncer ha progresado en un sujeto mediante pruebas/determinación de la presencia o ausencia de un polipéptido de fusión de la presente invención en una muestra (tejido tumoral, tejido normal y diversos especímenes de fluido corporal que contienen cáncer o células normales (sangre, suero, orina, saliva, etc.)) recolectadas del sujeto (paciente con cáncer, persona quien puede ser afectada con cáncer, persona con el riesgo de adquirir cáncer o una persona sana; no obstante, no se limita a humanos) utilizando los métodos y kits descritos en lo anterior para detectar el polipéptido de fusión de la presente invención, en donde el método se basa en el criterio de que el sujeto es más probable que desarrolle cáncer, es afectado con cáncer o tiene cáncer en progreso cuando se ha detectado el polipéptido de fusión.
Además, los métodos de la presente invención incluyen métodos para probar susceptibilidad a cáncer de un sujeto, si el sujeto es afectado con cáncer o si el cáncer ha progresado en un sujeto por pruebas/determinación de la presencia o ausencia de un polinucleót ido que codifica para un polipéptido de fusión de la presente invención en una muestra (tejido tumoral, tejido normal y diversos especímenes de fluido corporal que contienen células cancerosas o normales (sangre, suero, orina, saliva, etc.)) recolectados del sujeto (paciente con cáncer, persona quien puede ser afectada con cáncer, persona con el riesgo de adquirir cáncer o una persona sana; no obstante, no se limita a humanos) utilizando los métodos y kits descritos en lo anterior para detectar el polinucleótido que codifica para el polipéptido de fusión de la presente invención, en donde el método se basa en el criterio de que es más probable que un sujeto desarrolle cáncer, que sea afectado con cáncer o que haya progresado el cáncer cuando el polinucleótido que codifica para el polipéptido de fusión es detectado.
La presente invención también se relaciona con métodos para seleccionar a un paciente al cual es aplicable un agente anticancerígeno (como se describe más adelante) que comprende un compuesto que tiene actividad inhibidora de FGFR, en base en la presencia o ausencia de un polipéptido de fusión de la presente invención o un polinucleótido que codifica para un polipéptido de fusión en una muestra aislada de un sujeto.
Específicamente, los métodos de la presente invención incluyen métodos que prueban/determinan la presencia o ausencia de un polipéptido de fusión de la presente invención en una muestra (tejido tumoral, tejido normal y diversos especímenes de fluido corporal que contienen cáncer o células normales (sangre, suero, orina, saliva, etc.) recolectados del sujeto (paciente con cáncer o persona quien puede ser afectada con cáncer; no obstante, no se limita a un humano) utilizando los métodos y kits descritos en lo anterior para detectar el polipéptido de fusión de la presente invención y seleccionar un sujeto como un paciente al cual es aplicable un agente anticancerígeno (como se describe más adelante) que comprende un compuesto que tiene actividad inhibidora de FGFR cuando el polipéptido de fusión de la presente invención se detecta.
Los métodos de la presente invención incluyen además métodos para probar/determinar la presencia o ausencia de un polinucleótido que codifica para un polipéptido de fusión de la presente invención en una muestra (tejido tumoral, tejido normal y diversos especímenes de fluido corporal que contienen cáncer o células normales (sangre, suero, orina, saliva, etc.)) recolectados de un sujeto (paciente con cáncer o persona quien puede ser afectada con cáncer; no obstante, no se limitan a humanos) utilizando los métodos y kits descritos en lo anterior para detectar el polinucleót ido que codifica para el polipéptido de fusión de la presente invención y seleccionar un sujeto como un paciente al cual es aplicable un agente anticancerígeno (como se describe más adelante) que comprende un compuesto que tiene actividad inhibidora de FGFR, cuando un polinucleótido que codifica para el polipéptido de fusión de la presente invención se detecta.
En la presente invención, "inhibidor de FGFR" y "compuesto que tiene actividad inhibidora de FGFR" se utilizan de manera intercambiable y se refieren a un compuesto que tiene la actividad de inhibir la actividad de FGFR mencionada en lo anterior, específicamente uno o más FGFR arbitrarios que pertenecen a la familia de FGFR que comprenden FGFR1, FGFR2, FGFR3 y FGFR4 los cuales son receptores de factor de crecimiento de fibroblastos (los FGFR, por sus siglas en inglés) que pertenecen a la familia de receptor de tirosina cinasa. Preferiblemente, se les denomina como un compuesto que tiene actividad para inhibir la actividad de FGFR humano y de manera más preferible un compuesto que tiene la actividad de inhibir la actividad de FGFR3 humano que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 6 ó 7 (secuencias de ADNe, SEC ID NO: 10 y 11, respectivamente/GenBank, accesos Nos. NM_001163213 .1 y NM_000142.4, respectivamente).
Cualquiera de los inhibidores de FGFR se incluyen en los inhibidores de FGFR de la presente invención en la medida en que los compuestos tengan actividad de inhibición de actividad de FGFR.
Específicamente, los inhibidores de FGFR de la presente invención incluyen cualquier compuesto, anticuerpo, sustancia farmacéutica de ácido nucleico (ARNsi, ácidos nucleicos antisentido, ribozimas y similares) que tengan un mecanismo de acción de: (1) inhibir la actividad de FGFR cinasa; (2) inhibir la dimerización entre FGFR, TACC3 y BAIAP2L1 ; (3) inhibir la señalización mediada por FGFR (vía MAPK y vía PI3K/AKT) (por ejemplo, inhibidores de MEK, inhibidores de RAF, inhibidores de ERK, inhibidores de PI3K, inhibidores de mTOR, inhibidores de AKT, inhibidores de PDK, inhibidores de S6K, etc.); o (4) inhibir la expresión de FGFR (por ejemplo ARNsi, inhibidores de HSP90, etc.).
Los anticuerpos que tienen la actividad de inhibir la actividad de FGFR, los cuales se incluyen como inhibidores de FGFR de la presente invención comprenden anticuerpos identificados por los siguientes nombres de Códigos: RG7444, FP-1039, AV370, y PRO-OOl.
Los compuestos de peso molecular bajo que tienen la actividad de inhibir la actividad de FGFR, los cuales incluyen como inhibidores de FGFR de la presente invención incluyen, por ejemplo: (1) compuestos descritos en los siguientes documentos de patente y documentos que no son de patente: Cáncer Research, 2012, 72: 2045-2056; J. Med. Chem., 2011, 54: 7066-7083; publicación internacional WO 2011/016528; (2) compuestos identificados por los siguiente nombres genéricos o nombres de código: AZD-4547 (compuesto C en la tabla 2-1 descrita más adelante), BGJ-398 (compuesto D en la tabla 2-2 descrito más adelante), LY-2874455, cediranib (AZD2171; compuesto E en la tabla 2-2 descrito más adelante), PD173074 (compuesto B en la tabla 2-1 descrito más adelante), regorafenib, ponatinib, orantinib, nintedanib, masitinib, lenvatinib, dovitinib (TKI258; compuesto F en la tabla 2-2 descrita más adelante), brivanib, volasertib, golvatinib, ENMD-2076, E-3810, XL-999, XL-228, ARQ087, Tivozanib, motesanib y regorafenib; y (3) compuestos ejemplificados en lo siguiente; no obstante, los inhibidores de FGFR no se limitan a estos: [Compuesto 1] en donde Ri, R2, R3, y R4 cada uno representa independientemente el grupo que se lista a continuación: Ri representa hidrógeno, hidroxi, halógeno, ciano, nitro, haloalquilo de C1-4, alquilo de C1-6, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, cicloalquilo de C3-7, arilo de C6-10 alquilo de C1-4, -OR5, -NR6R7, -(CReRglnZi, -C(0)NR12R13, -SR14, -SOR15, -SO2R16, -NRl7S02Rl8 , COOH, arilo de C6-10 el cual está opeionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo P, heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q, -COR19, -COOR20, -OC(0)R2I, -NR22C(O)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR26R7, -S02NR28R29 , -OSO2R3O, -SO3R3I, O -SÍ(R32)3,' R2 representa hidrógeno, hidroxi, halógeno, ciano, nitro, haloalquilo de C1-4, alquilo de C1-6, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, cicloalquilo de C3-7, arilo de C6-10 alquilo de Ci-4, -OR5/ -NR6R7, -(CReRslnZi, -C (O)NR12R13/ -SR14, -SOR15, -SO2R16, -NR17SO2R18, COOH, arilo de C6-10 el cual está opeionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo P, heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterocielilo de 3 a 10 miembros el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q, -COR19, -COOR20, -0C(0)R21, -NR22C(O)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR26R27, -SO2NR28R29, -OSO2R30, -SO3R31, o —Si(R32)3 o Ri y R2, junto con un átomo unido a ellos, forman un heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros, donde el heterociclilo o heteroarilo está opcionalmente sustituido por halógeno; R3 representa hidrógeno, alquilo de C1-5, arilo de Ce-io alquilo de C1-6, o haloalquilo de Ci-4; R4 representa hidrógeno, halógeno, alquilo de C1-3, haloalquilo de C1-4, hidroxi, ciano, nitro, alcoxi de Ci-4, -(CH2)nZi, -NR6R7, -OR5, -C(0)NR12R13, -SR14, -SOR15, -SO2R16, NR17SO2R18, COOH, -COR19, -COOR20, -0C(O)R2I, -NR22C(O)R23, -NR24C(S)R25, -C (S)NR26R27, -SO2NR28R29, -OSO2R30-SO3R31, o -Si (R32)3; A representa un anillo heteroarilo de 5 a 10 miembros o un anillo arilo de C6-10; Rs representa alquilo de Ci-s, cicloalquilo de C3-7, cicloalquilo de C3-7 alquilo de Ci-3, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6 haloalquilo de C1-4, alcoxi de C1-3 alquilo de C1-4, alcoxi de C1-3 alcoxi de Ci-4 alquilo de Ci-4, aminoalquilo de C1-4, alquilamino de C1-4 alquilo de Ci-4/ di(alquil C1-4)aminoalquilo de C1-4, arilo de Ce-io, arilo de Ce-io alquilo de C1-3, o heterocielilalquilo de Ci-3 de 3 a 10 miembros, heterociclilo de 3 a 10 miembros, heteroarilo de 5 a 10 miembros, heteroarilalquilo de C1-3 de 5 a 10 miembros, monohidroxi alquilo de C1-6, dihidroxi alquilo de C1-6, o trihidroxi alquilo de C1-6 el cual está opeionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; R.6 y R7, que son idénticos o diferentes, cada uno representa hidrógeno, alquilo de C1-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de C1-4, alcoxi de C1-3 alquilo de C1-4, arilo de C6-10 alquilo de C1-3, heterociclilalquilo de C1-3 de 3 a 10 miembros, heteroarilalquilo de C1-3 de 5 a 10 miembros, monohidroxi alquilo de C2-6, dihidroxi alquilo de C1-6, trihidroxi alquilo de C1-6, heterociclilo de 3 a 10 miembros, aminoalquilo de C1-4, alquilamino de C1-4 alquilo de C1-4, di(alquil C1-4)aminoalquilo de C1-4, o ciano(alquilo de C1-3); o alternativamente R6 y R7, junto con un átomo de nitrógeno unido a ellos, forman un heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros; n representa un número de 1 a 3; Re y 9, que son idénticos o diferentes, cada uno representa hidrógeno, Ci-4 alquilo, o halógeno; o alternativamente, Re y R9, junto con un átomo de carbono unido a ellos, forman un anillo cicloalifático; Zi representa hidrógeno, NR10R11, hidroxilo, o heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros el cual está opeionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; Rio y R11, que son idénticos o diferentes, cada uno representa alquilo de C1-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de C1-4, alcoxi de C1-3 alquilo de Ci-4, ciano(alquilo de Ci-3), o alquilsulfonilo C1-3 alquilo de C1-4; o alternativamente, Rio y R11, junto con un átomo de nitrógeno unido a ellos, forman un heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros; R12 y R13, que son idénticos o diferentes, cada uno representa hidrógeno, alquilo de Ci-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, alcoxi de C1-3 alquilo de C1-4, arilo de C6-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, heterociclilo de 3 a 10 miembros, arilo de C6-10 alquilo de C1-4, heterocic1ilalquilo de C1-3 de 3 a 10 miembros, heteroarilalquilo de C1-3 de 5 a 10 miembros, ciano (alquilo de C1-3), alquilsulfonilo C1-3 alquilo de C1-4, anillo cicloalif ático de 3 a 10 miembros, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; o alternativamente, R12 y R13, junto con un átomo de nitrógeno unido a ellos, forman un heterocielilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros el cual está opeionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; Ri4 representa alquilo de Ci-4, alquenilo de C2- 6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de C1-4, arilo de C6-10 el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo P, o heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; R15 representa alquilo de Ci-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de C1-4, arilo de C6-10 el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo P, o heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; Ri6 representa alquilo de C1-4, alquenilo de C2- 6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, arilo de C6-10 el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo P, o heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterociel ilo de 3 a 10 miembros el cual está opeionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; R17 representa hidrógeno o Ci-4 alquilo; Ris representa alquilo de Ci-4/ alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, arilo de C6-10 el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo P, o heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opcionalmente sustituido por un grupo (s) independientemente seleccionado del grupo Q; Ri9 representa hidrógeno, alquilo de Ci-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de Ci-4, arilo de C6-10, o heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; R20 representa alquilo de Ci-4/ cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de Ci-4, arilo de C6-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; R21 representa alquilo de Ci-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de Ci_, arilo de C6-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; R22 representa hidrógeno, alquilo de Ci-4, o haloalquilo de Ci-4; R23 representa hidrógeno, alquilo de C1-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de C1-4, arilo de C6-io, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; R24 representa hidrógeno, alquilo de Ci-4, o haloalquilo de Ci-4; R25 representa alquilo de Ci-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de Ci-4, arilo de C6-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; 26 y R27, que son idénticos o diferentes, cada uno representa hidrógeno, alquilo de Ci-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, alcoxi de C1-3 alquilo de C2-4, arilo de C6-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, heterociclilo de 3 a 10 miembros, arilo de C6-10 alquilo de Ci-4, heterocic1i1al quilo de C1-3 de 3 a 10 miembros, heteroari lalqui lo de C1-3 de 5 a 10 miembros, ciano (alqui10 de C1-3), a1qui1sulfoni 1o C1-3 alquilo de Ci-4, o anillo cicloalif ático de 3 a 10 miembros; o alternativamente, R26 y R27, junto con un átomo de nitrógeno unido a ellos, forman un heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros; R28 y R29, que son idénticos o diferentes, cada uno representa hidrógeno, alquilo de Ci-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de C1-4, alcoxi de C1-3 alquilo de C2-4, arilo de Oe-io, heteroarilo de 5 a 10 miembros, heterocielilo de 3 a 10 miembros, arilo de Ce-io alquilo de C1-4, heterociclilalquilo de C1-3, de 3 a 10 miembros, heteroarilalquilo de C1-3 de 5 a 10 miembros, ciano (alquilo de C1-3), alqui1sulfoni lo C1-3 alquilo de C1-4, o anillo cicloalif ático de 3 a 10 miembros; o alternativamente, R28 y R29, junto con un átomo de nitrógeno unido a ellos, forman un heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros; R30 representa alquilo de Ci-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de Ci-4, arilo de Ce-io, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; R31 representa alquilo de Ci-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de C1-4, arilo de C6-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; R32 representa alquilo de C1-4 o arilo de Ce-io ; <grupo P> halógeno, alquilo de C1-4, haloalquilo de C1-4, -OH, alcoxi de C1-3, haloalcoxi de C1-3, de heterociclilamino de 3 a 10 miembros, -SO2R16, -CN, -NO2, y heterociclilo de 3 a 10 miembros; <grupo Q> halógeno, alquilo de Ci-4, haloalquilo de Ci-4, -0H, alcoxi de C1-3, monohidroxialquilo de Ci-6, dihidroxialquilo de Ci-6, trihidroxialquilo de Ci-6, heterocielilamina de 3 a 10 miembros, -SO2R16, -CN, -NO2, cicloalquilo de C3-7, -COR19, y heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opeionalmente sustituido por alquilo de Ci-4.
[Compuesto 2] [Compuesto 3] — [Compuesto 4] .
En la presente descripeión, el término "alquilo" se refiere a un grupo monovalente derivado de un hidrocarburo alifático mediante la remoción un átomo de hidrógeno arbitrario. Este no contiene ningún heteroátomo ni ningún enlace de carbono-carbono insaturado en la cadena principal, y tiene un subconjunto de estructuras de grupo hidrocarbilo o hidrocarburo que contienen hidrógeno y átomos de carbono. El grupo alquilo incluye estructuras lineales y ramificadas. Los grupos alquilo preferidos incluyen grupos alquilo con uno a seis átomos de carbono (Ci-6; de aquí en adelante, "Cp-q" quiere decir que el número de átomos de carbono es de p a q), grupos alquilo de C1-5, grupos alquilo de Ci-4, y grupos alquilo de C1-3.
Específicamente, el alquilo incluye, por ejemplo, un grupo metilo, grupo etilo, grupo n-propilo, grupo isopropilo, grupo n-butilo, grupo isobutilo, grupo s-butilo, grupo t-butilo, grupo pentilo, grupo isopentilo, grupo 2,3-dimetilpropilo, grupo 3,3-dimetilbutilo, y grupo hexilo.
En la presente descripción, el término "alquenilo" se refiere a un grupo hidrocarburo monovalente que tiene por lo menos un enlace doble (dos átomos de carbono SP2 adyacentes), e incluye aquéllos de formas lineales y ramificadas. Dependiendo de la configuración del doble enlace y de los sustituyentes (si hay), la geometría del doble enlace puede ser de configuración entgegen (separada) (E) o zusammen (junta) (Z), o de configuración cis o trans. Los grupos alquenilo preferidos incluyen los grupos alquenilo de C2-6- Específicamente, el alquenilo incluye, por ejemplo, un grupo vinilo, grupo alilo, grupo 1-propenilo, grupo 2-propenilo, grupo 1-butenilo, grupo 2-butenilo (que incluye cis y trans), grupo 3-butenilo, grupo pentenilo y grupo hexenilo.
En la presente descripeión, el término "alquinilo" se refiere a un grupo hidrocarburo monovalente que tiene por lo menos un enlace triple (dos átomos de carbono SP adyacentes), e incluye aquéllos de formas lineales y ramificadas. Los grupos alquinilo preferidos incluyen grupos alquinilo de C2-6.
Específicamente, el alquinilo incluye, por ejemplo, un grupo etinilo, grupo 1-propinilo, grupo propargilo, grupo 3-butinilo, grupo pentinilo, y grupo hexinilo.
Cada alquenilo y alquinilo puede tener uno o más enlaces dobles o enlaces triples.
En la presente descripción, el término "cicloalquilo" se refiere a un grupo hidrocarburo alifático monovalente cíclico saturado o parcialmente saturado, e incluye grupos monocíclicos, anillos biciclo, y anillos espiro. El cicloalquilo preferido incluye grupos cicloalquilo de C3-7. Específicamente, el grupo cicloalquilo incluye, por ejemplo, un grupo ciclopropilo, grupo ciclobutilo, grupo ciclopentilo, grupo ciclohexilo y grupo cicloheptilo.
En la presente descripeión, el término "cicloalquilalquilo" se refiere a un grupo en el cual un átomo de hidrógeno arbitrario de un "alquilo" definido arriba es substituido con un "cicloalquilo" definido arriba. Los grupos cicloalquilalquilo preferidos incluyen cicloalquilo de C3-7 alquilo de C1-3, y específicamente incluye, por ejemplo, un grupo ciclopropilmetilo y grupo ciclopropiletilo.
En la presente descripción, el término "heteroátomo" se refiere a un átomo de nitrógeno (N), átomo de oxígeno (0), o átomo de azufre (S).
En la presente descripción, el término "átomo de halógeno" se refiere a un átomo de flúor, átomo de cloro, átomo de bromo, o átomo de yodo.
En la presente descripción, el término "haloalquilo" se refiere a un grupo en el cual preferentemente de uno a nueve, más preferiblemente de uno a cinco "átomos de halógeno" idénticos o diferentes definidos líneas arriba se enlazan a un "alquilo" definido aquí arriba.
Específicamente, el haloalquilo incluye, por ejemplo, un grupo clorometilo, grupo diclorometilo, grupo triclorometilo, grupo fluorometilo, grupo difluorometilo, grupo perfluoroalquilo (tal como un grupo trifluorometilo y -CF2CF3), y un grupo 2,2,2-trifluoroetilo.
En la presente descripeión, el término "alcoxi" se refiere a un grupo oxi unido con un "alquilo" definido arriba. El alcoxi preferido incluye grupos alcoxi de Ci-4 y grupos alcoxi de C1-3. Específicamente, alcoxi incluye, por ejemplo, un grupo metoxi, grupo etoxi, grupo 1-propoxi, grupo 2-propoxi, grupo n-butoxi, grupo i-butoxi, grupo sec-butoxi, y grupo ter-butoxi.
En la presente descripción, el término "haloalcoxi" se refiere a un grupo en el cual preferentemente de uno a nueve, más preferentemente de uno a cinco átomos de halógeno idénticos o diferentes definidos líneas arriba se unen a un "alcoxi" definido arriba.
Específicamente, el haloalcoxi incluye, por ejemplo, un grupo clorometoxi, grupo triclorometoxi, y grupo trifluorometoxi.
En la presente descripción, el término "arilo" se refiere a un anillo hidrocarburo aromático monovalente. El arilo preferentemente incluye arilo de C6-10. Específicamente, el arilo incluye, por ejemplo, un grupo fenilo y grupos naftilo (por ejemplo, grupo 1-naftilo y grupo 2-naftilo).
En la presente descripción, el término "anillo alicíclico" se refiere a un anillo hidrocarburo no aromático monovalente. El anillo alicíclico puede tener enlaces insaturados dentro de su anillo, y puede ser un grupo multicíclico que tiene dos o más anillos. Los átomos de carbono que constituyen el anillo pueden ser oxidados para formar un carbonilo. El número de átomos que constituyen un anillo alicíclico preferentemente está en el rango desde tres hasta diez (anillo alifático de 3 a 10 elementos). El anillo alicíclico incluye, por ejemplo, anillos cicloalquilo, anillos cicloalquenilo, y anillos cicloalquinilo.
En la presente descripeión, el término "heteroarilo" se refiere a un grupo heterocíclico aromático monovalente en el cual los átomos que constituyen el anillo incluyen preferentemente de uno a cinco heteroátomos. El heteroarilo puede estar parcialmente saturado, y puede ser un anillo monocíclico o condensado (por ejemplo, un heteroarilo bicíclico condensado con un anillo de benceno o anillo heteroarilo monocíclico). Preferentemente, el número de átomos que constituyen el anillo se encuentra en el rango desde cinco hasta diez (heteroarilo de 5 a 10 elementos).
Específicamente, el heteroarilo incluye, por ejemplo, un grupo furilo, grupo tienilo, grupo pirrolilo, grupo imidazolilo, grupo pirazolilo, grupo tiazolilo, grupo isotiazolilo, grupo oxazolilo, grupo isooxazolilo, grupo oxadiazolilo, grupo tiadiazolilo, grupo triazolilo, grupo tetrazolilo, grupo piridilo, grupo pirimidilo, grupo piridazinilo, grupo pirazinilo, grupo triazinilo, grupo benzofuranilo, grupo benzotienilo, grupo benzotiadiazolilo, grupo benzotiazolilo, grupo benzoxazolilo, grupo benzoxadiazolilo, grupo benzoimidazolilo, grupo indolilo, grupo isoindolilo, grupo azaindolilo, grupo indazolilo, grupo quinolilo, grupo isoquinolilo, grupo cinolinilo, grupo quinazolinilo, grupo quinoxalinilo, grupo benzodioxolilo, grupo indolidinilo, y grupo imidazopiridilo.
En la presente descripeión, el término "heterocielilo" se refiere a un grupo heterocíclico monovalente no aromático en el cual los átomos que constituyen el anillo incluyen de manera preferente de uno a cinco heteroátomos. El heterociclilo puede contener enlaces dobles o triples en su anillo. Los átomos de carbono pueden ser oxidados para formar un carbonilo. El anillo puede ser un anillo monocíclico o condensado. El número de los átomos que constituyen el anillo, preferentemente está en el rango desde tres hasta diez (heterociclilo de 3 a 10 elementos).
Específicamente, el heterociclilo incluye, por ejemplo, un grupo oxetanilo, grupo dihidrofurilo, grupo tetrahidrofurilo, grupo dihidropiranilo, grupo tetrahidropiranilo, grupo tetrahidropiridilo, grupo morfolinilo, grupo tio orfolinilo, grupo pirrolidinilo, grupo piperidinilo, grupo piperazinilo, grupo pirazolidinilo, grupo imidazolinilo, grupo imidazolidinilo, grupo oxazolidinilo, grupo isooxazolidinilo, grupo tiazolidinilo, grupo isotiazolidinilo, grupo tiadiazolidinilo, grupo azetidinilo, grupo oxazolidona, grupo benzodioxanilo, grupo benzoxazolilo, grupo dioxolanilo, y grupo dioxanilo.
En la presente descripeión, el término "arilalquilo" se refiere a un grupo en el cual un átomo de hidrógeno arbitrario en un "alquilo" definido arriba está sustituido con un "arilo" definido arriba. El arilalquilo preferentemente incluye arilo de Ce-io alquilo de C1-4 y arilo de Ce-io alquilo de Ci-3. Específicamente, el arilalquilo incluye, por ejemplo, un grupo bencilo, grupo fenetilo, y grupo naftilmetilo.
En la presente descripción, el término "heteroarilalquilo" se refiere a un grupo en el cual un átomo de hidrógeno arbitrario en un alquilo definido antes en esta descripción es substituido con un "heteroarilo" definido antes en esta descripción. El heteroarilalquilo preferentemente incluye heteroarilalquilo de C1-3 de 5 a 10 miembros. Específicamente, el heteroarilalquilo incluye, por ejemplo, grupo pirrolilmetilo, grupo imidazolilmetilo, grupo tienilmetilo, grupo piridilmetilo, grupo pirimidilmetilo, grupo quinolilmetilo, y grupo piridiletilo.
En la presente descripción, el término "heterocielilalquilo" se refiere a un grupo en el cual un átomo de hidrógeno arbitrario en un "alquilo" definido arriba es substituido con un "heterociclilo" definido arriba.
El heterocielilalquilo preferentemente incluye heterociclilalquilo de Ci-3 de 3 a 10 miembros. Específicamente, el heterociclilalquilo incluye, por ejemplo, un grupo morfolinilmetilo, grupo morfoliniletilo, grupo tiomorfolinilmetilo, pirrolidinilmetilo grupo, grupo piperidinilmetilo, grupo piperazinilmetilo, grupo piperaziniletilo, y grupo oxetanilmetilo.
En la presente descripeión, el término "monohidroxialquilo" se refiere a un grupo en el cual un átomo de hidrógeno arbitrario en un "alquilo" definido arriba es substituido con un grupo hidroxilo. El monohidroxialquilo preferentemente incluye monohidroxialquilo de Ci-6 y monohidroxialquilo de C2-6. Específicamente, el monohidroxialquilo incluye, por ejemplo, un grupo hidroximetilo, grupo 1-hidroxietilo, y grupo 2-hidroxietilo.
En la presente descripción, el término "dihidroxialquilo" se refiere a un grupo en el cual dos átomos de hidrógeno arbitrarios en un "alquilo" definido arriba son substituidos con dos grupos hidroxilo. El dihidroxialquilo preferentemente incluye dihidroxialquilo de C1-6 y dihidroxialquilo de C2-6. Específicamente, el dihidroxialquilo incluye, por ejemplo, un grupo 1,2-dihidroxietilo, grupo 1,2-dihidroxipropilo, y grupo 1,3-dihidroxipropilo.
En la presente descripción, el término "trihidroxialquilo" se refiere a un grupo en el cual tres átomos de hidrógeno arbitrarios en un "alquilo" definido arriba son substituidos con tres grupos hidroxilo. El trihidroxialquilo preferentemente incluye trihidroxialquilo de Ci-6 y trihidroxialquilo de C2-6.
En la presente descripeión, el término "alcoxialquilo" "alcoxialquilo" se refiere a un grupo en el cual un átomo de hidrógeno arbitrario en un "alquilo" definido arriba es substituido con un "alcoxi" definido arriba. El alcoxialquilo preferentemente incluye alcoxi de C1-3 alquilo de C1-4 y alcoxi de C1-3 alquilo de C2-4. Específicamente, el alcoxialquilo incluye, por ejemplo, metoxietilo.
En la presente descripción, el término "alcoxialcoxialquilo" se refiere a un grupo en el cual un átomo de hidrógeno arbitrario en el terminal alquilo de un "alcoxialquilo" definido arriba es substituido con un "alcoxi" definido arriba. El alcoxialcoxialquilo preferentemente incluye alcoxi de C1-3 alcoxi de C1-4 alquilo de Ci-4 y alcoxi de C1-3 alcoxi de C2-4 alquilo de C2-4.
En la presente descripción, el término "aminoalquilo" se refiere a un grupo en el cual un átomo de hidrógeno arbitrario en un "alquilo" definido arriba es substituido con un grupo amino. El grupo aminoalquilo preferentemente incluye aminoalquilo de C1-4 y aminoalquilo de C2-4- En la presente descripeión, el término "alquilamino" se refiere a un grupo amino unido con un "alquilo" definido arriba. El alquilamino preferentemente incluye alquilamino de Ci-4.
En la presente descripción, el término "dialquilamino" se refiere a un grupo amino unido a dos "alquilos" definidos arriba. Los dos grupos alquilo pueden ser idénticos o diferentes. El dialquilamino preferentemente incluye di(alquil C1-4)amino.
En la presente descripción, el término "alquilaminoalquilo" se refiere a un grupo en el cual un átomo de hidrógeno arbitrario en un "alquilo" definido arriba es substituido con un "alquilamino" definido arriba. El alquilaminoalquilo preferentemente incluye alquilamino de C1-4 alquilo de C1-4 y alquilamino de C1-4 alquilo de C2-4.
En la presente descripción, el término "dialquilaminoalquilo" se refiere a un grupo en el cual un átomo de hidrógeno arbitrario en un "alquilo" definido arriba es substituido con un "dialquilamino" definido arriba. El dialquilaminoalquilo preferentemente incluye di(alquil de C1-4)amino alquilo de Ci-4 y di(alquil de Ci-4)amino alquilo de C2-4.
En la presente descripción, el término "heterocielilamino" se refiere a un grupo amino unido a un "heterocielilo" definido líneas arriba. El heterociclilamino preferentemente incluye heterociclilamino de 3 a 10 miembros.
En la presente descripeión, el término "cianoalquilo" se refiere a un grupo en el cual un átomo de hidrógeno arbitrario en un "alquilo" definido arriba es substituido con un grupo ciano. El cianoalquilo preferentemente incluye ciano (alquilo de C1-3).
En la presente descripción, el término "alquilsulfonilo" se refiere a un grupo sulfonilo unido a un "alquilo" arriba definido (es decir alquil-SC>2-). Preferentemente, el alquilsulfonilo incluye alquilsulfonilo de C1-3. Específicamente, el alquilsulfonilo incluye metilsulfonilo, etilsulfonilo, n-propilsulfonilo, e i-propi1sulfonilo.
En la presente descripción, el término "alquilsulfonilalquilo" se refiere a un grupo en el cual un átomo de hidrógeno arbitrario en un "alquilo" definido arriba está sustituido con un "alquilsulfonilo" definido arriba. Preferentemente el alquilsulfonilalquilo incluye alquilsulfonilo C1-3 alquilo de C1-4 y alquilsulfonilo C1-3 alquilo de C2-4.
Preferentemente, los compuestos representados por la fórmula (I) que se muestra arriba son como se indica a continuación: Ri mostrado arriba representa preferentemente hidrógeno, hidroxi, halógeno, ciano, nitro, haloalquilo de Ci-4, alquilo de Ci-6, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, cicloalquilo de C3-7, arilo de Ce-io alquilo de Ci-4, -0R5, -NR6R7, -(CRsRgínZi, -C(0)NR12R13, -SR14, -SOR15, -SO2R16, -NR17SO2R18 C00H, arilo de Ce-io el cual está opeionalmente sustituido con uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo P, heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterociclilo de 3 a 10 miembros cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q, -COR19, -COOR20, -OC(0)R21, -NR22C(O)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR26R27, -S02NR28R29Í -OSO2R30; -SO3R31, o -Si(32)3· Ri mostrado arriba más preferentemente representa hidrógeno, hidroxi, halógeno, ciano, haloalquilo de Ci-4, alquilo de C1-6, alquinilo de C2-6, cicloalquilo de C3-7, arilo de C6-10 alquilo de Ci-4, -OR5, -NR6R7, -(CReR9)nZi, -C(0)NRi2Ri3, -SRi4, -SO2R16, -NR17SO2R18, COOH, arilo de C6-10 si cual esta opcionalmente sustituido con uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo P, o heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterociclilo de 3 a 10 miembros cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q. Específicamente, el heteroarilo de 5 a 10 miembros anterior es de manera particular preferentemente un grupo imidazolilo, un grupo tienilo, un grupo piridilo, un grupo piridazinilo, o un grupo pirazolilo. El heterocielilo de 3 a 10 miembros anterior es de manera particular preferentemente un grupo morfolinilo, un grupo tetrahidropiridilo, o un grupo piperidinilo.
R2 mostrado arriba representa preferentemente hidrógeno, hidroxi, halógeno, ciano, nitro, haloalquilo de Ci-4, alquilo de Ci-6, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, cicloalquilo de C3-7, arilo de C6-10 alquilo de Ci-4, -OR5, -NR6R7, - (CR8R9)nZi, -C(O)NR12R13, -SR14, -SOR15, -SO2R16, -NR17SO2R18, COOH, arilo de C6-10 el cual está opeionalmente sustituido con uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo P, heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterociclilo de 3 a 10 miembros cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q, -COR19, -COOR20, -0C(0)R21, -NR22C(O)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR26R27, -S02NR28R29, -OSO2R30, -SO3R31, O _Si(R32)3- R2 mostrado arriba más preferentemente representa hidrógeno, halógeno, haloalquilo de Ci-4, alquilo de C1-6, -OR5, arilo de C6-10 el cual está opcionalmente sustituido con uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo P, o heteroarilo de 5 a 10 miembros el cual está opcionalmente sustituido con uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q.
Específicamente, este heteroarilo de 5 a 10 miembros es de manera particular preferentemente un grupo piridilo.
Ri y R2 mostrados arriba preferentemente pueden ser tomados junto con los átomos a los cuales se encuentran unidos para formar un heterocielilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros. El heterociclilo o heteroarilo pueden tener un átomo de halógeno como un sustituyente. Específicamente, el heterociclilo de 3 a 10 miembros formado junto con los átomos a los cuales Ri y R2 se encuentran unidos, es de manera particular preferentemente un grupo dioxolanilo o un grupo dioxanilo.
R3 mostrado arriba representa preferentemente hidrógeno, alquilo de Ci-s, arilo de C6-10 alquilo de C1-6, o haloalquilo de C1-4, más preferentemente hidrógeno, alquilo de Ci-4, arilo de Ce-io alquilo de Ci-4, o perfluoroalquilo de C1-3, y de manera particular preferentemente alquilo de Ci.
R4 mostrado arriba representa preferentemente hidrógeno, halógeno, alquilo de C1-3, haloalquilo de C1-4, hidroxi, ciano, nitro, alcoxi de C1-4, - (CH2)nZi, -NR6R7, -OR5, - C ( O ) NR12R13 , -SRi4, - SOR15 , -SO2R16, N 17SO2R18 , COOH, -COR19, -COOR20, -OC (0) R21 , -NR22C(O)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR26R27, -SO2NR28R29, -OSO2R30-SO3R31, o - Si ( R32 ) 3 R4 mostrado arriba más preferentemente representa hidrógeno, halógeno, alquilo de C1-3, perfluoroalquilo de C1-3, ciano, metansulfonilo, hidroxilo, alcoxi, o amino, y de manera particular preferentemente hidrógeno o halógeno.
El anillo A mostrado arriba es preferentemente un anillo heteroarilo de 5 a 10 miembros o un anillo arilo de C6-10, mas preferentemente benceno, indol, azaindol, benzofurano, benzotiofeno, benzotiazol, quinolina, o pirrol, y de manera particular preferentemente indol o pirrol.
R5 mostrado arriba representa preferentemente alquilo de C1-5, cicloalquilo de C3-7, cicloalquilo de C3-7 alquilo de C1-3, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de C1-4, alcoxi de C1-3 alquilo de C1-4, alcoxi de C1-3 alcoxi de C1-4 alquilo de C1-4, aminoalquilo de C1-4, alquilamino de C1-4 alquilo de C1-4, di(alquil C1-4)aminoalquilo de C1-4, arilo de C6-10, arilo de Ce-io alquilo de C1-3, o heterociclilalquilo de C1-3 de 3 a 10 miembros, heterociclilo de 3 a 10 miembros, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heteroarilalquilo de C1-3 de 5 a 10 miembros, cada uno de los cuales está opeionalmente sustituido con uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q, monohidroxialquilo de C1-6, dihidroxialquilo de C1-6, o trihidroxialquilo de C1-6.
R5 mostrado arriba más preferentemente representa alquilo de C1-5, cicloalquilo de C3-7 alquilo de C1-3, haloalquilo de Ci-4, alcoxi de C1-3 alquilo de C1-4, arilo de C6-10, arilo de Ce-io alquilo de C1-3, o heterociclilalquilo de C1-3 de 3 a 10 miembros o heterociclilo de 3 a 10 miembros cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q. Específicamente, el heterocielilalquilo de 3 a 10 miembros anterior es de manera particular preferentemente un grupo piperaziniletilo, un grupo oxetanilmetilo, o uii grupo morfoliniletilo. El heterociclilo de 3 a 10 miembros anterior es de manera particular preferentemente un grupo oxetanilo o un grupo tetrahidropiranilo.
R.6 y R7 mostrados arriba pueden ser idénticos o diferentes, y preferentemente cada uno representa hidrógeno, alquilo de C1-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de C1-4, alcoxi de C1-3 alquilo de C2-4, arilo de Ce-io alquilo de C1-3, heterociclilalquilo de C1-3 de 3 a 10 miembros, heteroarilalquilo de C1-3 de 5 a 10 miembros, monohidroxialquilo de C1-6, dihidroxialquilo de C1-6, trihidroxialquilo de C1-6, heterociclilo de 3 a 10 miembros, aminoalquilo de C1-4, alquilamino de C1-4 alquilo de C1-4, di (alquil de Ci-4)aminoalquilo de Ci-4, o ciano(alquilo de C1-3)· R6 y R7 mostrados arriba más preferentemente representa hidrógeno, alcoxi de C1-3 alquilo de C1-4, heterociclilalquilo de C1-3 de 3 a 10 miembros, heteroarilalquilo de C1-3 de 5 a 10 miembros, o dihidroxialquilo de C1-6· Específicamente, el heterociclilalquilo de 3 a 10 miembros es de manera particular preferentemente un grupo morfoliniletilo, y el heteroarilalquilo de 5 a 10 miembros es de manera particular preferentemente un grupo piridiletilo.
Alternativamente, R6 y R7 mostrados arriba pueden ser preferentemente tomados junto a los átomos de nitrógeno a los cuales se encuentran unidos para formar un heterocielilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros. "n" mostrado arriba representa un número entero de 1 a 3. Preferentemente, n es 1.
Re y R9 mostrados arriba pueden ser preferentemente idénticos o diferentes, y cada uno representa hidrógeno, alquilo de C1-4, o halógeno, y más preferentemente hidrógeno.
Alternativamente, Re y R9 mostrados arriba pueden preferentemente ser tomados junto a los átomos de carbono a los cuales se encuentran unidos para formar un anillo alicíclico.
Zi mostrado arriba representa preferentemente hidrógeno, NR10R11, -OH, o un heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros cada uno de los cuales está opeionalmente sustituido con uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q, más preferentemente NR10R11 o -OH, o heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opcionalmente sustituido con uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q. Específicamente, el heterociclilo de 3 a 10 miembros antes indicado es de manera particular preferentemente un grupo pirrolidinilo, grupo piperazinilo, grupo piperidinilo, o un grupo morfolinilo.
Rio y Rn mostrados arriba pueden ser preferentemente idénticos o diferentes, y cada uno de ellos preferentemente representa alquilo de Ci-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, alcoxi de C1-3 alquilo de Ci-4, ciano(alquilo de Ci-3), o alquilsulfonilo C1-3 alquilo de Ci-4 más preferentemente alquilo de Ci-4í alquinilo de C2-6, o alcoxi de C1-3 alquilo de C2-4- Alternativamente, Rio y R11 mostrados arriba pueden preferentemente ser tomados junto a los átomos de nitrógeno a los cuales se encuentran unidos para formar un heterocielilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros.
R12 y R13 mostrados arriba pueden ser preferentemente idénticos o diferentes, y cada uno representa hidrógeno, alquilo de Ci-4, alquenilo de C2-6 , alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, alcoxi de C1-3 alquilo de Ci-4f arilo de C6-io, heteroarilo de 5 a 10 miembros, heterociclilo de 3 a 10 miembros, arilo de C6-10 alquilo de Ci-4, heterociclilalquilo de C1-3 de 3 a 10 miembros, heteroarilalquilo de Ci-3 de 5 a 10 miembros, ciano(alquilo de C1-3), alquilsulfonilo C1-3 alquilo de Ci-4, o un anillo alicíclico de 3 a 10 miembros, más preferentemente hidrógeno, alquilo de Ci-4, o haloalquilo de Ci-4.
Alternativamente, R12 y R13 mostrados arriba preferentemente pueden ser tomados junto a los átomos de nitrógeno a los cuales se encuentran unidos para formar un heterocielilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros cada uno de los cuales está opeionalmente sustituido con uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q, y de manera particular preferentemente heterociclilalquilo de 3 a 10 miembros. Específicamente, son más preferidos un grupo piperazinilo, un grupo morfolinilo, un grupo pirrolidinilo, y un grupo piperidinilo.
Ri4 mostrado arriba representa preferentemente alquilo de C1-4, alquenilo de C2-6 alquinilo de C2-6, haloalquilo de C1-4, arilo de Ce-io el cual está opcionalmente sustituido con uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo P, o heteroarilo de 5 a 10 miembros o un heterociclilo de 3 a 10 miembros cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q, y más preferentemente representa alquilo de C1-4 o haloalquilo de C1-4.
R15 mostrado arriba representa preferentemente alquilo de C1-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de C1-4, arilo de Ce-io el cual está opcionalmente sustituido con uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo P, o heteroarilo de 5 a 10 miembros o un heterociclilo de 3 a 10 miembros cada uno de los cuales está opeionalmente sustituido con uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q.
Ri6 mostrado arriba representa preferentemente alquilo de Ci-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, arilo de Ce-io el cual está opcionalmente sustituido con uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo P, o un heteroarilo de 5 a 10 miembros o un heterocielilo de 3 a 10 miembros cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q, y más preferentemente representa alquilo de C1-4.
R17 mostrado arriba representa preferentemente hidrógeno o alquilo de Ci-4, y más preferentemente hidrógeno.
Ris mostrado arriba representa preferentemente alquilo de C1-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, arilo de Ce-io el cual está opcionalmente sustituido con uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo P, o un heteroarilo de 5 a 10 miembros o un heterociclilo de 3 a 10 miembros cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q, y más preferentemente representa alquilo de C1-4· R19 mostrado arriba representa preferentemente hidrógeno, alquilo de Ci-4/ cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de Ci-4, arilo de Ce-io, o heteroarilo de 5 a 10 miembros o un heterocielilo de 3 a 10 miembros cada uno de los cuales está opeionalmente sustituido con uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q, y más preferentemente representa hidrógeno, o heteroarilo de 5 a 10 miembros o un heterociclilo de 3 a 10 miembros cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q. Específicamente, este heterociclilo de 3 a 10 miembros es más preferentemente un grupo piperazinilo, un grupo morfolinilo, un grupo pirrolidinilo, o un grupo piperidinilo.
R20 mostrado arriba representa preferentemente alquilo de C1-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de Ci-4, arilo de C6-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o un heterociclilo de 3 a 10 miembros.
R21 mostrado arriba representa preferentemente alquilo de C1-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de C1-4, arilo de C6-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o un heterociclilo de 3 a 10 miembros.
R22 mostrado arriba representa preferentemente hidrógeno, alquilo de C1-4, o haloalquilo de C1-4.
R23 mostrado arriba representa preferentemente hidrógeno, alquilo de C1-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de Ci-4, arilo de Ce-io, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o un heterociclilo de 3 a 10 miembros.
R.24 mostrado arriba representa preferentemente hidrógeno, alquilo de Ci-4, o haloalquilo de C1-4.
R25 mostrado arriba representa preferentemente alquilo de Ci-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de Ci-4, arilo de C6-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o un heterociclilo de 3 a 10 miembros.
R26 y R27mostrados arriba pueden ser preferentemente idénticos o diferentes, y cada uno representa hidrógeno, alquilo de C1-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, alcoxi de C1-3 alquilo de C1-4, arilo de Ce lo, heteroarilo de 5 a 10 miembros, heterociclilo de 3 a 10 miembros, arilo de C6-10 alquilo de C1-4, heterociclilalquilo de C1-3de 3 a 10 miembros, heteroarilalquilo de Ci-3de 5 a 10 miembros, ciano(alquilo de C1-3), alquilsulfonilo C1-3 alquilo de Ci-4, o un anillo alicíclico de 3 a 10 miembros.
Alternativamente, R26 y R27 mostrados arriba preferentemente pueden ser tomados junto a los átomos de nitrógeno a los cuales se encuentran unidos para formar un heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros.
R28 y R29 mostrados arriba, pueden ser preferentemente idénticos o diferentes, y cada uno representa hidrógeno, alquilo de C1-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, alcoxi de Ci-3 alquilo de Ci-4, arilo de C6-io, heteroarilo de 5 a 10 miembros, heterociclilo de 3 a 10 miembros, arilo de C6-10 alquilo de C1-4, heterocielilalquilo de C1-3 de 3 a 10 miembros, heteroarilalquilo de Ci-3de 5 a 10 miembros, ciano(alquilo de C1-3), alquilsulfonilo de C1-3 alquilo de C1-4, o un anillo alicíclico de 3 a 10 miembros.
Alternativamente, R28 y R29 mostrados arriba preferentemente pueden ser tomados junto a los átomos de nitrógeno a los cuales se encuentran unidos para formar un heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros.
R30 mostrado arriba representa preferentemente alquilo de C1-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de C1-4, arilo de O-IO, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros.
R31 mostrado arriba representa preferentemente alquilo de Ci-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de C1-4, arilo de C6-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros.
R32 mostrado arriba representa preferentemente alquilo de C1-4, o arilo de Cs-10· Los sustituyentes preferidos incluidos en el grupo P definido arriba son halógeno, alquilo de Ci-4, haloalquilo de C1-4, -OH, alcoxi de C1-3, haloalcoxi de C1-3, heterociclilamino de 3 a 10 miembros, -SO2R, -CN, -NO2, y heterociclilo de 3 a 10 miembros; y más preferentemente halógeno, haloalquilo de Ci-4, alcoxi de C1-3, haloalcoxi de C1-3, y heterocielilo de 3 a 10 miembros. Específicamente, este heterociclilo de 3 a 10 miembros es de manera particular preferentemente un grupo morfolinilo.
Los sustituyentes preferidos incluidos en el grupo Q definido arriba son halógeno, alquilo de Ci-4, haloalquilo de C1-4, -OH, alcoxi de C1-3, monohidroxialquilo de C1-6, dihidroxialquilo de C3.-6, trihidroxialquilo de C1-6, heterociclilamino de 3 a 10 miembros, -S02R, -CN, -NO2, cicloalquilo de C3-7, -COR19, y heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opeionalmente sustituido con alquilo de C1-4; y más preferentemente halógeno, alquilo de Ci-4, haloalquilo de Ci-4, -OH, alcoxi de C1-3, monohidroxialquilo de C1-6, -SO2R16, cicloalquilo de C3-7, -COR19, y heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opcionalmente sustituido con alquilo de C1-4. Específicamente, este heterociclilo de 3 a 10 miembros es más preferentemente un grupo piperazinilo, un grupo piperidinilo, o un grupo morfolinilo.
Los ejemplos específicos de los compuestos incluyen: (1) [5-amino-1-(2-metil-1H-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(lH-indol-2-il)-metanona; (2) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(6-pirrolidin-l-ilmetil-lH-indol-2-il)-metanona; (3) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H- pirazol-4-il]-[6-(4-hidroxi-piperidin-1-ilmetil)-1H-indol-2-il]-metanona; (4) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(lH-pirrolo[3,2-c]piridin-2-il)-metanona; (5) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(6-piperazin-l-ilmetil-lH-indol-2-il)-metanona; (6) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-[6-(2-morfolin-4-il-etoxi)-lH-indol-2-il]-metanona; (7) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-[6-(tetrahidro-piran-4-iloxi)-lH-indol-2-il]-metanona; (8) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(4-cloro-lH-indol-2-il)-metanona; (9) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(5-bromo-lH-indol-2-il)-metanona; (10) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(4-yodo-lH-indol-2-il)-metanona; (11) 2- [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-lH-pirazol-4-carbonil]-lH-indol-5-carbonitrilo; (12) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(6-bromo-5-fluoro-lH-indol-2-il)-metanona; (13) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(5-etinil-lH-indol-2-il)-metanona; (14) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H- pirazol-4-il]-[6-(2-fluoro-fenil)-1H-indol-2-il]-metanona; (15) [5-amino-1-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-[6-(3-fluoro-fenil)-1H-indol-2-il]-metanona; (16) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-[6-(4-fluoro-fenil)-lH-indol-2-il]-metanona; (17) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-[6-(2-cloro-fenil)-lH-indol-2-il]-metanona; (18) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-[6-(3-cloro-fenil)-lH-indol-2-il]-metanona; (19) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-[6-(4-cloro-fenil)-lH-indol-2-il]-metanona; (20) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-[6-(2-trifluorometil-fenil)-lH-indol-2-il]-metanona; (21) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-[6-(3-trifluorometil-fenil)-lH-indol-2-il]-metanona; (22) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- [6-(4-trifluorometil-fenil)-1H-indol-2-il]-metanona; (23) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(4-bromo-lH-indol-2-il)-metanona; (24) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- [6-(3-fluoro-piridin-2-il)-lH-indol-2-il]-metanona; (25) [5-amino-1-(2-metil-1H-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(6-metil-lH-indol-2-il)-metanona; (26) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-[5-(4,4-difluoro-piperidin-l-carbonil)-1H-indol-2-il]-metanona; (27) [5-amino-l-(2-etil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-[5-(3,3-difluoro-piperidin-1-carbonil)-1H-indol-2-il]-metanona; (28) (2,2,2-trifluoro-etil)-amida del ácido 2-[5-amino-1-(2- metil-lH-bencimidazol-5-il)-lH-pirazol-4-carbonil]-lH-indol-5-carboxílico; (29) [5-amino-l-(2-etil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-[6-(5-trifluorometil-piridin-2-il)-lH-indol-2-il]-metanona; (30) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-[6-(6-trifluorometil-piridin-2-il)-lH-indol-2-il]-metanona; (31) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- [6-(5-cloro-piridin-2-il)-IH-indol-2-il]-metanona; (32) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- [6-(4-metil-piridin-2-il)-lH-indol-2-il] metanona; (33) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- [6-(3-cloro-4-fluoro-fenil)-lH-indol-2-il]- metanona; (34) [5-amino-1-(2-metil-1H-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-[6-(3-trifluorometil-piridin-2-il)-lH-indol-2-il]-metanona; (35) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-[6-(4-trifluorometil-piridin-2-il)-lH-indol-2-il]metanona; (36) [5-amino-l-(6-fluoro-2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-lH-pirazol-4-il]-(lH-indol-2-il)-metanona; (37) ácido 2-[5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)- lH-pirazol-4-carbonil]-lH-indol-6-carboxílico; (38) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- (6-hidroximetil-lH-indol-2-il)-metanona; (39) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-{6- [2-(4-metil-piperazin-l-il)-etoxi]-lH-indol-2- il}-metanona; (40) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- [6-(3-metil-oxetan-3-ilmetoxi)-lH-indol-2-il]-metanona; (41) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- [6-(3-fluoro-piperidin-l-ilmetil)-lH-indol-2-il]-metanona; (42) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- (6-{[bis(2-metoxi-etil)-amino]-metil}-lH-indol- 2-il)-metanona; (43 ) [5-amino-l- (2-metil-1H-bencimidazol-5-il) -1H-pirazol-4-il] - {6- [ (metil-prop-2 -inil-amino) -metil] -lH-indol- 2-il}-metanona; (44) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-[6-(3,3-difluoro-pirrolidin-l-ilmetil)-1H-indol-2-il]-metanona; (45) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-[6-(2,5-dimetil-pirrolidin-l-ilmetil)-lH-indol-2-i1]-metanona; (46) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- [6-(3,3-difluoro-piperidin-l-ilmetil)-lH-indol-2-i1]-metanona; (47) [5-amino-l-(2-etil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- [6-((S)-3-metil-morfolin-4-ilmetil)-lH-indol-2-il]-metanona; (48) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- (6-bromo-1H-indol-2-il)-metanona; (49) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- (5-yodo-lH-indol-2-il)-metanona; (50) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- (lH-pirrolo[3,2-b]piridin-2-il)-metanona; (51) [5-amino-l-(2-metil-IH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- (5-bromo-6-trifluorometil-lH-indol-2-il)-metanona; (52) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H- pirazol-4-il]-(6-yodo-1H-indol-2-il)-metanona; (53) [5-amino-1-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(4-metil-lH-indol-2-il)-metanona; (54) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(4-isopropil-lH-indol-2-il)-metanona; (55) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-[5-(2-fluoro-fenil)-lH-indol-2-il]-metanona; (56) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(5-bencil-lH-indol-2-il)-metanona; (57) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-[5-(2-trifluorometil-fenil)-lH-indol-2-il]-metanona; (58) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-[5-(3-fluorofenil)-1H-indol-2-il]-metanona; (59) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-[5-(3-trifluorometil-fenil)-lH-indol-2-il]-metanona; (60) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(4-etinil-lH-indol-2-il)-metanona; (61) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- (5H-[1,3]dioxolo[4,5-f]indol-6-il)-metanona; (62) [5-amino-l-(7-fluoro-2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-lH-pirazol-4-il]-(lH-indol-2-il)-metanona; (63) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- [5-(4-trifluorometil-fenil)-lH-indol-2-il]- metanona; (64) [5-amino-1-(2-metil-1H-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(5-butoxi-lH-indol-2-il)-metanona; (65) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-[5-(l-metil-piperidin-4-il)-lH-indol-2-il] metanona; (66) N- {2-[5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-lH-pirazol-4-carbonil]-lH-indol-6-il}-metansulfonamida; (67) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-[6-(6-morfolin-4-il-piridin-3-il)-lH-indol-2-il]-metanona; (68) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(6-butil-lH-indol-2-il)-metanona; (69) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- [6-(l-metil-lH-pirazol-4-il)-lH-indol-2-il]-metanona; (70) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- [6-(5-metoxi-piridin-3-il)-lH-indol-2-il]-metanona; (71) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- [6-(2-metoxi-piridin-3-il)-lH-indol-2-il]-met nona; (72) [5-amino-l-(2-metil-lH-benci idazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- (6-ciclopropil-lH-indol-2-il)-metanona; (73) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-lH- pirazol-4-il]-[6-(2-metoxi-fenil)-1H-indol-2-il]-metanona; (74) [5-amino-1-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(6-fenil-lH-indol-2-il)-metanona; (75) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-[6-(5-metansulfonil-piridin-3-il)-lH-indol-2-il]-metanona; (76) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(6-isopropil-lH-indol-2-il)-metanona; (77) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(6-piridin-2-il-lH-indol-2-il)-metanona; (78) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(5-ciclopropil-lH-indol-2-il)-metanona; (79) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(6-piridazin-3-il-lH-indol-2-il)-metanona; (80) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(5-isopropoxi-lH-indol-2-il)-metanona; (81) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- [5-(2-metoxi-etoxi)-lH-indol-2-il]-metanona; (82) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- (5-ciclopropilmetoxi-lH-indol-2-il)-metanona; (83) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- (2,2-difluoro-5H-[1,3]dioxolo[4,5-f]indol-6-il)-metanona; (84) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- [6-(3-cloro-piridin-2-il)-lH-indol-2-il]- metanona; (85) [5-amino-1-(2-metil-1H-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-[6-(5-fluoro-piridin-2-il)-lH-indol-2-il]-metanona; (86) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-[6-(6-morfolin-4-il-piridazin-3-il)-lH-indol-2-il]-metanona; (87) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(5-cloro-6-ciclopropilmetoxi-lH-indol-2-il)-metanona; (88) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-[6-(2,4-difluoro-fenil)-lH-indol-2-il]-metanona; (89) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(6-piridazin-4-il-lH-indol-2-il)-metanona; (90) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(3-fluoro-1H-indol-2-il)-metanona; (91) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- [5-(1-isopropil-piperidin-4-il)-6-trifluorometil-lH- indol-2-il]-metanona; (92) 2- [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-lH-pirazol-4-carbonil]-lH-indol-6-carbonitrilo; (93) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- [5-(1,2,3,6-tetrahidro-piridin-4-il)-1H-indol- 2-il]-metanona; (94) [5-amino-1-(2-metil-1H-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(5-piperidin-4-il-lH-indol-2-il)-metanona; (95) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-[5-((R)-3-fluoro-pirrolidin-l-ilmetil)-1H-indol-2-il]-metanona; (96) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(6-fluoro-5-piperidin-4-il-lH-indol-2-il)-metanona; (97) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-[6-fluoro-5-(l-metil-piperidin-4-il)-lH-indol-2-il]-metanona; (98) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-[5-(l-isopropil-piperidin-4-il)-lH-indol-2-il]-metanona; (99) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-[6-fluoro-5-(l-isopropil-piperidin-4-il)-1H-indol-2-il]-metanona; (100) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(6-piridin-3-il-lH-indol-2-il)-metanona; (101) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- [5-(6-morfolin-4-il-piridin-3-il)-lH-indol-2-il]-metanona; (102) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- (5-piridin-3-il-1H-indol-2-il)-metanona; (103) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H- pirazol-4-il]-[5-(6-piperazin-1-il-piridin-3-il)-1H-indol-2-il]-metanona; (104) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-[5-(6-hidroxi-piridin-3-il)-lH-indol-2-il]-metanona; (105) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-[6-fluoro-5-(4-metil-piperazin-l-ilmetil)-1H-indol-2-il]-metanona; (106) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(6-fluoro-5-pirrolidin-l-ilmetil-lH-indol-2-il)-metanona; (107) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-[6-(l-metil-piperidin-4-il)-lH-indol-2-il]-metanona; (108) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-[6-(4-morfolin-4-il-fenil)-lH-indol-2-il]-metanona; (109) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- [6-(3,4,5,6-tetrahidro-2H-[1,2']bipiridin-51-il)- lH-indol-2-il]-metanona; (110) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- [6-(6-piperazin-l-il-piridin-3-il)-lH-indol-2-il] -metanona; (111) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- [5-(6-metoxi-piridin-3-il)-lH-indol-2-il]- metanona; (112) [5-amino-1-(2-metil-1H-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-[5-((S)-3-metil-morfolin-4-ilmetil)-lH-indol-2-il]-metanona; (113) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-[6-((R)-3-fluoro-pirrolidin-l-ilmetil)-1H-indol-2-il]-metanona; (114) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- [5-(2,5-dimetil-pirrolidin-1-ilmetil)-lH-indol-2-i1]-metanona; (115) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- [5-(3-fluoro-piperidin-1-ilmetil)-lH-indol-2-il]-metanona; (116) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- [5-(3,3-difluoro-piperidin-1-ilmetil)-lH-indol-2-il]-metanona; (117) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-{6- [2-(4-metil-piperazin-l-il)piridin-4-il]-1H-indol-2-i1}-metanona; (118) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- (6-piridin-4-il-lH-indol-2-il)-metanona; (119) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- [5-(4-fluoropiperidin-l-ilmetil)-lH-indol-2-il]-metanona; (120) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H- pirazol-4-il]-[5-(4,4-difluoro-piperidin-1-ilmetil)-IH-indol-2-i1]-metanona; (121) [5-amino-l-(2-difluorometil-1H-bencimidazol-5-il)-lH-pirazol-4-il]-[5-(l-metil-piperidin-4-il)-lH-indol-2-il]-metanona; (122) [5-amino-l-(2-difluorometil-lH-bencimidazol-5-il)-lH-pirazol-4-il]-(lH-indol-2-il)-metanona; (123) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-[5-(3,3-difluoro-pirrolidin-l-ilmetil)-1H-indol-2-il]-metanona; (124) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(5-(l-ciclopentil-piperidin-4-il)-lH-indol-2-il]-metanona; (125) [5-amino-l-(2-etil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-[5-(l-ciclohexil-piperidin-4-il)-lH-indol-2-il]-metanona; (126) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(4-bromo-lH-pirrol-2-il)-metanona; (127) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(lH-pirrol-2-il)-metanona; (128) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(4-fenil-lH-pirrol-2-il)-metanona; (129) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- [4-(3-cloro-fenil)-lH-pirrol-2-il]-metanona; (130) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H- pirazol-4-il]-[4-(4-fluoro-fenil)-1H-pirrol-2-il]-metanona; (131) [5-amino-1-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-[4-(3-fluoro-fenil)-lH-pirrol-2-il]-metanona; (132) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(6-morfolin-4-ilmetil-lH-indol-2-il)-metanona; (133) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-[4-(2-morfolin-4-il-etilamino)-lH-indol-2-il]-metanona; (134) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-[5-(4-metil-piperazin-l-carbonil)-lH-indol-2-il]-metanona; (135) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-[6-(2-morfolin-4-il-etilamino)-lH-indol-2-il]-metanona; (136) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-[5-(piperazin-l-carbonil)-lH-indol-2-il]-metanona; (137) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-[4-(2-metoxi-etilamino)-lH-indol-2-il]-metanona; (138) [5-amino-l-(2-etil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- [4-(2-hidroxi-l-hidroximetil-etilamino)-1H-indol-2-il]-metanona; (139) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- [4-(2-piridin-4-il-etilamino)-lH-indol-2-il]- metanona; (140) [5-amino-1-(2-metil-1H-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-[6-(2-metoxi-etilamino)-lH-indol-2-il]-metanona; (141) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(6-morfolin-4-il-lH-indol-2-il)-metanona; (142) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(4-morfolin-4-il-lH-indol-2-il)-metanona; (143) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(4-morfolin-4-ilmetil-lH-indol-2-il)-metanona; (144) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(5-morfolin-4-ilmetil-lH-indol-2-il)-metanona; (145) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- [5-(morfolin-4-carbonil)-lH-indol-2-il]-metanona; (146) [5-amino-l-(2-isopropil-lH-bencimidazol-5-il)-lH-pirazol-4-il]-(lH-indol-2-il)-metanona; (147) [5-amino-l-(2-propil-lH-bencimidazol-5-il)-lH-pirazol-4-il]- (lH-indol-2-il)-metanona; (148) [5-amino-l-(lH-bencimidazol-5-il)-lH-pirazol- 4-il]- (1H- indol-2-il)-metanona; (149) [5-amino-l-(2-trifluorometil-lH-bencimidazol- 5-il)-lH-pirazol-4-il]- (lH-indol-2-il)-metanona; (150) [5-amino-l-(2-etil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- (lH-indol-2-il)-metanona; (151) [5-amino-1-(2-bencil-1H-bencimidazol-5-il)-lH-pirazol-4-il]-(lH-indol-2-il)metanona; (152) 1- (4-{2-[5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-lH-pirazol-4-carbonil]-1H-indol-5-ilmetil}-piperazin-1-il)-etanona; (153) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-[5-(4-metansulfonil-piperazin-l-ilmetil)-1H-indol-2-il]-metanona; (154) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(5-piperazin-l-ilmetil-lH-indol-2-il)-metanona; (155) 1- (4-{2-[5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-lH-pirazol-4-carbonil]-lH-indol-6-ilmetil}-piperazin-1-il)-etanona; (156) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-[6-(4-metil-piperazin-l-ilmetil)-lH-indol-2-il]-metanona; (157) [5-amino-l-(2-metil-IH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-[5-(4-metil-piperazin-l-ilmetil)-lH-indol-2-il]-metanona; (158) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(5-pirrolidin-l-ilmetil-lH-indol-2-il)-metanona; (159) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(4-fluoro-lH-indol-2-il)-metanona; (160) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H- pirazol-4-il]-(5-fluoro-1H-indol-2-il)-metanona; (161) [5-amino-1-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(6-fluoro-lH-indol-2-il)-metanona; (162) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(lH-pirrolo[2,3-b] iridin-2-il)-metanona; (163) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(5-fluoro-6-morfolin-4-ilmetil-lH-indol-2-il)-metanona; (164) ácido 2-[5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)- lH-pirazol-4-carbonil]-lH-indol-5-carboxílico; (165) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(5-metoxi-lH-indol-2-il)-metanona; (166) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(4,6-dimetoxi-lH-indol-2-il)-metanona; (167) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(4-metoxi-lH-indol-2-il)-metanona; (168) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(6-metoxi-lH-indol-2-il)-metanona; (169) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(4,6-dimetil-lH-indol-2-il)-metanona; (170) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(5-ter-butil-lH-indol-2-il)-metanona; (171) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- (5-isopropil-lH-indol-2-il)-metanona; (172) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H- pirazol-4-il]-(5-benciloxi-1H-indol-2-il)-metanona; (173) [5-amino-1-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(4-benciloxi-lH-indol-2-il)-metanona; (174) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(5,6-dimetoxi-lH-indol-2-il)-metanona; (175) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(6-ter-butil-lH-indol-2-il)-metanona; (176) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(5-fluoro-4-trifluorometil-lH-indol-2-il)-metanona; (177) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(5-fenoxi-1H-indol-2-il)-metanona; (178) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(6-metilsulfanil-lH-indol-2-il)-metanona; (179) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(4-ter-butil-1H-indol-2-il)-metanona; (180) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(5-metil-lH-indol-2-il)-metanona; (181) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- (5-etil-lH-indol-2-il)-metanona; (182) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- (5-fluoro-6-trifluorometil-lH-indol-2-il)-metanona; (183) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- (6-fluoro-5-metoxi-lH-indol-2-il)-metanona; (184) [5-amino-1-(2-metil-1H-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(6-cloro-5-metoxi-lH-indol-2-il)-metanona; (185) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(5-cloro-6-metoxi-lH-indol-2-il)-metanona; (186) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(6-isopropoxi-lH-indol-2-il)-metanona; (187) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(6-benciloxi-lH-indol-2-il)-metanona; (188) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(4-isopropoxi-lH-indol-2-il)-metanona; (189) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(2,3-dihidro-6H-[1,4]dioxino [2,3-f]indol-7-il)-metanona; (190) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(4,6-di-ter-butil-1H-indol-2-il)-metanona; (191) 2- [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-lH-pirazol-4-carbonil]-lH-indol-4-carbonitrilo; (192) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- (5-imidazol-l-il-lH-indol-2-il)-metanona; (193) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- (5-trifluorometilsulfanil-lH-indol-2-il)-metanona; (194) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- (5-metilsulfanil-lH-indol-2-il)-metanona; (195) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H- pirazol-4-il]-(5-metansulfonil-1H-indol-2-il)-metanona; (196) [5-amino-1-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-[6-(4,4-difluoro-piperidin-l-ilmetil)-lH-indol-2-i1]-metanona; (197) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-[6-(4-fluoro-piperidin-l-ilmetil)-lH-indol-2-il]-metanona; (198) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-[6-(oxetan-3-iloxi)-lH-indol-2-il]-metanona; (199) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(6-hidroxi-lH-indol-2-il)-metanona; (200) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- (6-metansulfonil-lH-indol-2-il)-metanona; (201) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- (4,5-dibromo-lH-pirrol-2-il)-metanona; (202) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- (4,5-difenil-lH-pirrol-2-il)-metanona; y (203) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- (4,5-dipiridin-3-il-lH-pirrol-2-il)-metanona. (204) [5-amino-l-(2-metil-3H- bencimidazol-5-il)-lH-pirazol-4-il]- (6-cloro-lH-indol-2-il)-metanona; (205) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- (5-cloro-lH-indol-2-il)-metanona; (206) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- (lH-indol-3-il)-metanona; (207) [5-amino-1-(2-metil-1H-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(lH-indol-6-il)-metanona; (208) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(5-bromo-6-fluoro-lH-indol-2-il)-metanona; (209) [5-amino-l-(2-etil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(5-bromo-6-fluoro-lH-indol-2-il)-metanona; (210) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(5-trifluorometil-lH-indol-2-il)-metanona; (211) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(5-trifluorometoxi-lH-indol-2-il)-metanona; (212) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(4,6-dicloro-1H-indol-2-il)-metanona; (213) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(6-bromo-4-fluoro-lH-indol-2-il)-metanona; (214) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(6-trifluorometoxi-lH-indol-2-il)-metanona; (215) [5-amino-l-(2-etil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- (5-trifluorometoxi-lH-indol-2-il)-metanona; (216) [5-amino-l-(2-etil-IH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- (5-trifluorometil-lH-indol-2-il)-metanona; (217) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- (5,6-dicloro-lH-indol-2-il)-metanona; (218) [5-amino-l-(2-etil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- (6-bromo-5-fluoro-lH-indol-2-il)-metanona; (219) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H- pirazol-4-il]-(4,5-dicloro-1H-indol-2-il)-metanona; (220) [5-amino-1-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il) -1H-pirazol-4-il]-(4,6-difluoro-lH-indol-2-il)-metanona; (221) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il) -1H-pirazol-4-il]-[6-(3-cloro-piridin-4-il)-lH-indol-2-il]-metanona; (222) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il) -1H-pirazol-4-il]-[6-(6-metil-piridine-3-il)-lH-indol-2-il]-metanona; (223) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il) -1H-pirazol-4-il]-[6-(5-fluoro-piridin-3-il)-lH-indol-2-il]-metanona; (224) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il) -1H-pirazol-4-il]-[6-(2-trifluorometil-piridin-3-il)-lH-indol 2-il]-metanona; (225) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il) -1H-pirazol-4-il]-[6-(5-cloro-2-metoxi-piridin-3-il)-lH-indol 2-il]-metanona; (226) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il) -1H-pirazol-4-il]- [6-(5-cloro-piridin-3-il)-lH-indol-2-il]-metanona; (227) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il) -1H-pirazol-4-il]-(6-tiofen-3-il-lH-indol-2-il)-metanona; (228) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il) -1H-pirazol-4-il]- [6-(4-cloropiridin-3-il)-lH-indol-2-il] raetanona; (229) [5-amino-1-(2-metil-1H-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(6-tiofen-2-il-lH-indol-2-il)-metanona; (230) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-[6-(3-fluoro-piridin-4-il)-lH-indol-2-il]-metanona; (231) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-[6-(2-trifluorometil-piridin-4-il)-lH-indol-2-il]-metanona; (232) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-[5-(3,3-difluoro-pirrolidin-l-carbonil)-1H-indol-2-il]-metanona; (233) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-[5-(2,6-dimetil-morfolin-4-carbonil)-lH-indol- 2-i1]-metanona; (234) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- [5-([1,4'] bipiperidinil-1'-carbonil)-lH-indol-2-il]-metanona; (235) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-{5-[4-(2,2,2-trifluoro-etil)-piperazin-1-carbonil]- 1H-indol-2-il}-metanona; (236) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-{5- [4-(2-hidroxi-etil)-piperazin-l-carbonil]-1H- indol-2-il}-metanona; (237) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H- pirazol-4-il]-[5-(3,3,4,4-tetrafluoro-pirrolidin-1-carbonil)-1H- indol-2-il]-metanona; (238) [5-amino-1-(2-metil-1H-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-[5-((R)-3-fluoro-pirrolidin-l-carbonil)-1H-indol-2-il]-metanona; (239) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-[5-((S)-3-fluroro-pirrolidin-l-carbonil)-1H-indol-2-il]-metanona; (240) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-[4-(4-metoxi-fenil)-lH-pirrol-2-il]-metanona; (241) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- [4-(3-metoxi-fenil)-lH-pirrol-2-il]-metanona; (242) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- [4,5-bis-(3-fluoro-fenil)-lH-pirrol-2-il]-metanona; (243) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- [4,5-bis-(4-metoxi-fenil)-lH-pirrol-2-il]-metanona; (244) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- [4-(2,4-difluoro-fenil)-lH-pirrol-2-il]-metanona; (245) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]- [4-(4-trifluorometoxi-fenil)-lH-pirrol-2-il]-metanona; (246) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H- pirazol-4-il]-[4,5-bis-(3-metoxi-fenil)-1H-pirrol-2-il]-metanona; (247) [5-amino-1-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-benzofuran-2-il-metanona; (248) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-benzo [b] tiofen-2-il-metanona; (249) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-benzothiazol-2-il-metanona; (250) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(4-fluoro-fenil)-metanona; (251) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-(3-cloro-fenil)-metanona; (252) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-quinolin-3-il-metanona; (253) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-quinolin-7-il-metanona; y (254) [5-amino-l-(2-metil-lH-bencimidazol-5-il)-1H-pirazol-4-il]-quinolin-6-il-metanona.
Los ejemplos más específicos incluyen compuestos en los cuales A es indol y R3 y R4 son ambos hidrógeno en la fórmula (I) descrita antes, y los compuestos que se muestran en las tablas 1 y 2 en los ejemplos descritos posteriormente se pueden incluir como ejemplos.
Los compuestos mencionados en lo anterior se pueden producir de acuerdo con el método de producción descrito en la publicación internacional WO 2011/016528.
En la presente invención, los compuestos que tienen actividad inhibidora de FGFR como se describe en lo anterior incluyen no solo formas libres sino también sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
Las "sales" incluyen, por ejemplo, sales ácidas inorgánicas, sales ácidas orgánicas, sales básicas inorgánicas, sales básicas orgánicas, y sales ácidas o básicas de aminoácidos.
Las sales ácidas inorgánicas preferidas incluyen, por ejemplo, clorhidrato, bromhidrato, sulfato, nitrato, y fosfato. Las sales orgánicas preferidas incluyen, por ejemplo, acetato, succinato, fumarato, maleato, tartrato, citrato, lactato, malato, estearato, benzoato, metansulfonato, y p-toluensulfonato. Una sal particularmente preferida en la presente invención es malato.
Las sales básicas inorgánicas preferidas incluyen, por ejemplo, sales de metales alcalinos tales como las sales de sodio y las sales de potasio; sales de metales alcalinos térreos tal como las sales de calcio y las sales de magnesio; sales de aluminio; y sales de amonio. Las sales básicas orgánicas preferidas incluyen, por ejemplo, sales de dietilamina, sales de dietanolamina, sales de meglumina, y sales de N,N-dibenciletilenodiamina.
Las sales ácidas de aminoácidos preferidas incluyen, por ejemplo, aspartato y glutamato. Las sales básicas de aminoácidos preferidas incluyen, por ejemplo, sales de arginina, sales de lisina, y sales de ornitina.
En la presente invención, los compuestos que tienen actividad inhibidora de FGFR también incluyen hidratos de los mismos. Adicionalmente, en la presente invención, los compuestos que tienen actividad inhibidora de FGFR pueden absorber algún tipo de disolventes para formar solvatos. Estos solvatos también se incluyen.
Además, los compuestos que tienen actividad inhibidora de FGFR en la presente invención incluyen todos los isómeros estructurales posibles (isómeros geométricos, isómeros ópticos, estereoisómeros, tautómeros, etc.), y mezcla de los isómeros.
Los compuestos que tienen actividad inhibidora de FGFR en la presente invención también incluyen cualquier polimorfismo cristalino de los mismos.
En la presente invención, los compuestos que tienen actividad inhibidora de FGFR también incluyen profármacos de los mismos. Los "profármacos" se refieren a derivados de los compuestos de la presente invención que tienen un grupo química o metabólicamente degradable, y luego de la administración al cuerpo vivo, se revierten a los compuestos originales y exhiben la eficacia del fármaco original. Los profármacos incluyen complejos y sales no covalentes.
En la presente invención, los compuestos que tienen actividad inhibidora de FGFR incluyen aquellos en los cuales uno o más átomos dentro de la molécula se han remplazado con isótopos. En la presente descripeión, el "isótopo" se refiere a un átomo que tiene el mismo número atómico (número de protones) pero es diferente en número de masa (suma de protones y neutrones). Los átomos objetivo a ser remplazados con un isótopo en los compuestos de la presente invención, incluyen, por ejemplo, un átomo de hidrógeno, átomo de carbono, átomo de nitrógeno, átomo de oxígeno, átomo de fósforo, átomo de azufre, átomo de flúor, y átomo de cloro. Sus isótopos incluyen 2H, 3H, 13C, 14C, 15N, 170, 180, 31P, 32P, 35S, 18F, y 36C1. En particular, los radioisótopos tales como 3H y 14C, que decaen emitiendo radiación, son útiles en los estudios de distribución en el tejido in vivo, etc., de los agentes farmacéuticos o compuestos. Los isótopos estables no decaen, y por lo tanto, su cantidad rara vez cambia y, puesto que no emiten radiación, los isótopos estables son casi constantes en abundancia, y no emiten radiación. Por esta razón, los isótopos estables se pueden utilizar en forma segura. Los compuestos de la presente invención pueden ser convertidos en compuestos substituidos con isótopos de acuerdo con los métodos convencionales remplazando los reactivos utilizados en la síntesis con reactivos que contienen los correspondientes isótopos.
En la presente agente anticancerígeno o "composición farmacéutica para tratar cáncer" la cual comprende un inhibidor de FGFR se utilizan de manera intercambiable y se refieren a una composición terapéutica contra el cáncer que comprende un compuesto descrito en lo anterior que tiene actividad inhibidora de FGFR y portadores farmacéuticamente aceptables.
Los compuestos que tienen actividad inhibidora de FGFR de la presente invención pueden ser formulados en tabletas, polvos, gránulos finos, gránulos, tabletas recubiertas cápsulas, jarabes, pastillas, inhalantes, supositorios, inyecciones, ungüentos, ungüentos oftálmicos, gotas oculares, gotas nasales, gotas para los oídos, cataplasmas, lociones, y similares por métodos convencionales. Para la formulación, se pueden utilizar excipientes, aglomerantes, lubricantes, colorantes, agentes saborizantes convencionales, y si es necesario, estabilizantes, emulsionantes, absorbentes, agentes tensioactivos, agentes para ajustar el pH, conservadores, antioxidantes, y similares. Los compuestos de la presente invención son formulados al combinar los ingredientes que generalmente se utilizan como materiales para las preparaciones farmacéuticas, utilizando los métodos convencionales.
Por ejemplo, para producir las formulaciones orales, los compuestos de la presente invención o las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos se combinan con excipientes, y si es necesario, aglomerantes, agentes de desintegración, lubricantes, colorantes, agentes saborizantes, y similares; y luego se formulan en polvos, gránulos finos, gránulos, tabletas, tabletas recubiertas, cápsulas, y similares a través de métodos convencionales.
Los ingredientes incluyen, por ejemplo, aceites animales y vegetales tal como aceites de soja, sebo de vacuno, y glicéridos sintéticos; hidrocarburos tal como parafina líquida, escualeno, y parafina sólida; esteres de aceites tal como miristato de octildodecilo y miristato de isopropilo; alcoholes superiores tal como alcohol de cetoestearilo y alcohol de behenilo; resinas de silicio; aceites de silicio; agentes tensioactivos tales como ésteres de ácido graso de polioxietileno, ésteres de ácido graso de sorbitán, ésteres de ácido graso de glicerina, ésteres de ácido graso de polioxietileno sorbitán, aceites de ricino hidrogenados polioxietilenado, y copolímeros de bloque de polioxietileno/polioxipropileno; polímeros solubles en agua tal como hidroxietil celulosa, ácidos poliacrílicos, polímeros de carboxivinilo, polietilenglicol, polivinilpirrolidona, y metilcelulosa; alcoholes inferiores tal como etanol e isopropanol; polialcoholes tal como glicerina, propilenglicol , dipropilenglicol, y sorbitol; sacáridos tal como glucosa y sacarosa; polvos inorgánicos tal como anhídrido silícico, silicato de magnesio y aluminio, y silicato de aluminio; y agua purificada.
Los excipientes incluyen, por ejemplo, lactosa, almidón de maíz, sacarosa, glucosa, manitol, sorbítol, celulosa cristalina, y dióxido de silicio.
Los aglomerantes incluyen, por ejemplo, alcohol de polivinilo, éter de polivinilo, metilcelulosa, etilcelulosa, goma arábiga, tragacanto, gelatina, goma laca, hidroxipropil metilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, polivinilpirrolidona, polímero de bloque de polipropilenglicol/polioxietileno, y meglumina.
Los agentes de desintegración incluyen, por ejemplo, almidón, agar, gelatina en polvo, celulosa cristalina, carbonato de calcio, bicarbonato de sodio, citrato de calcio, dextrina, pectina, y carboximetilcelulosa cálcica.
Los lubricantes incluyen, por ejemplo, estearato de magnesio, talco, polietilenglicol, sílice, y aceite vegetal endurecido.
Se utilizan colorantes aprobados para su uso como aditivos para los agentes farmacéuticos. Los agentes saborizantes utilizados incluyen, por ejemplo, cacao en polvo, mentol, aromáticos en polvo, aceite de menta, borneol, y canela en polvo.
Por supuesto, estas tabletas y gránulos pueden ser recubiertos con azúcar, o si es necesario, con otros recubrimientos apropiados. Alternativamente, cuando se producen preparaciones líquidas tales como jarabes e inyecciones, los compuestos de la presente invención o las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos se combinan con agentes para ajustar el pH, solubilizantes, agentes isotónicos, o similares, y si es necesario, agentes solubilizantes, estabilizantes, y similares, y luego se formulan utilizando los métodos convencionales.
Los métodos para producir preparaciones externas no están limitados, y se pueden producir mediante métodos convencionales. Se pueden utilizar varios materiales convencionales para los agentes farmacéuticos, cuasi-fármacos, cosméticos, y similares como materiales base en la producción. Específicamente, los materiales base utilizados incluyen, por ejemplo, aceites animales y vegetales, aceites minerales, aceites de ásteres, ceras, alcoholes superiores, ácidos grasos, aceites de silicio, agentes tensioactivos, fosfolípidos, alcoholes, polialcoholes, polímeros solubles en agua, minerales arcillosos, y agua purificada. Además, según sea necesario, es posible añadir agentes para ajustar el pH, antioxidantes, agentes quelantes, conservadores, colorantes, agentes saborizantes, y similares. Sin embargo, los materiales base para las preparaciones externas de la presente invención no están limitados a los mismos.
Además, si es necesario, las preparaciones pueden ser combinadas con componentes que tienen una actividad para inducir la diferenciación, o componentes tales como agentes para mejorar el flujo sanguíneo, agentes antimicrobianos, agentes antiflogísticos, agentes que activan las células, vitaminas, aminoácidos, humectantes, y agentes queratolíticos. Los materiales base descritos líneas arriba pueden ser añadidos en una cantidad que provea una concentración típicamente seleccionada para la producción de preparaciones externas.
Los agentes anticancerígenos (composiciones farmacéuticas granulares para tratar cáncer) para administrar un compuesto que tiene actividad inhibidora de FGFR en la presente invención no están particularmente limitadas en su forma de dosificación, y los agentes pueden ser administradas por vía oral o parenteral mediante los métodos utilizados convencionalmente. Ellos pueden ser formulados y administrados como tabletas, polvos, gránulos, cápsulas, jarabes, pastillas, inhalantes, supositorios, inyecciones, ungüentos, ungüentos oftálmicos, gotas oculares, gotas nasales, gotas para los oídos, cataplasmas, lociones, y similares .
En la presente invención, la dosificación de un inhibidor de FGFR contenido en un agente anticancerígeno o una composición farmacéutica para tratar cáncer puede ser adecuadamente seleccionada dependiendo de la severidad del síntoma, de la edad, del sexo, del peso, del método de administración, del tipo de sal, del tipo específico de enfermedad, y similar.
La dosificación varía considerablemente dependiendo del tipo de enfermedad, severidad del síntoma, edad, sexo, sensibilidad al agente, así como del paciente. Por lo general, el agente es administrado a un adulto una vez o varias veces al día en una dosis diaria de aproximadamente 0.03 hasta 1000 mg, preferentemente de 0.1 hasta 500 mg, y más preferentemente de 0.1 hasta 100 mg. Los agentes o composiciones de la presente invención son administrados una o varias veces al día. Cuando se utiliza una inyección, la dosis diaria es típicamente aproximadamente de 1 hasta 3000 pg/kg, preferentemente aproximadamente de 3 hasta 1000 pg/kg.
La presente invención también se relaciona con composiciones farmacéuticas para tratar cáncer las cuales comprenden el compuesto descrito en lo anterior que tiene actividad inhibidora de FGFR y están caracterizadas por su uso para ser administradas a pacientes que expresan un polipéptido de fusión de la presente invención o que presentan un polinucleótido que codifica para el polipéptido de fusión.
La presente invención se relaciona adicionalmente con métodos para tratar o evitar cáncer los cuales comprenden administrar una cantidad eficaz de los compuestos mencionados en lo anterior que tienen actividad inhibidora de FGFR o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos a pacientes que expresan los polipéptidos de fusión o que presentan los polinucleótidos; uso de compuestos que tienen actividad inhibidora de FGFR o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos en la producción de composiciones farmacéuticas para tratamiento de cáncer para administración a pacientes que expresan los polipéptidos de fusión o que presentan los polinucleótidos; compuestos que tienen actividad inhibidora de FGFR o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos para uso en el tratamiento o prevención para pacientes que expresan los polipéptidos de fusión que presentan los polinucleótidos, y similares.
Específicamente, el uso de las composiciones farmacéuticas para tratar cáncer se caracterizan en que si un paciente que expresa el polipéptido de fusión o que presenta un polinucleótido que codifica para el polipéptido de fusión es probado utilizando un polipéptido de fusión de la presente invención como un biomarcador antes de que se administre al paciente un agente anticancerígeno descrito en lo anterior que comprenda un inhibidor de FGFR, el agente anticancerígeno que contiene el inhibidor de FGFR se administra al paciente únicamente si el paciente expresa el polipéptido de fusión o presenta un polinucleótido que codifica para el polipéptido de fusión. Esto permite evitar efecto secundarios en los tratamientos utilizando el agente y control de la condición terapéutica para producir el mejor efecto terapéutico y por lo tanto permite medicina personalizada.
En la presente invención, específicamente en el caso de cáncer de vejiga, los genes de fusión de la presente invención se encuentra que se expresan de manera significativa cuando el cáncer de vejiga progresa a la etapa 3 o posterior en la clasificación de etapa.
La clasificación de etapa del cáncer de vejiga es, específicamente, clasificación por clasificación TNM. La clasificación TNM está constituida de un factor T (inicial de tumor) que muestra el grado de tumor, un factor N (inicial de nodulo linfático) que muestra la presencia o ausencia de metástasis del tumor a nodulo linfático y un factor M (inicial de metástasis) que muestra la presencia o ausencia de metástasis distal diferente de la metástasis de nodulo linfático. Entre estos, los cánceres en los cuales el tumor se ha infiltrado en el tejido conectivo subepitelial se clasifican como etapa 1, aquellos en los cuales el tumor se ha infiltrado en la muscularis propria se clasifican como etapa 2, aquellos en los cuales el tumor se ha infiltrado en el tejido graso que rodea la vejiga a aquellos en los cuales el tumor se ha infiltrado en cualquiera de los intersticios de la próstata, útero o vagina se clasifican como etapa 3 y aquellos en los cuales el tumor se ha infiltrado dentro de ya sea la pared pélvica o la subpared o aquellos que muestran metástasis en nodulos linfáticos o metástasis distal se clasifica como etapa 4.
Si un paciente expresa un polipéptido de fusión de la presente invención o presenta un polinucleótido que codifica para el polipéptido de fusión se puede probar mediante la utilización de métodos de la presente invención descritos antes.
La presente invención también se relaciona con métodos para identificar compuestos que tienen actividad inhibidora de FGFR.
Específicamente, los métodos para identificar compuestos que tienen actividad inhibidora de FGFR en la presente invención incluyen métodos que comprenden las etapas de: (a) cultivar células que expresan un polipéptido de fusión descrito en lo anterior de la presente invención en presencia o ausencia de un compuesto de prueba y determinación del nivel de proliferación celular; (b) comparar el nivel de proliferación de la célula cultivada entre la presencia y ausencia del compuesto de prueba; y (c) considerar si el compuesto de prueba tiene actividad inhibidora de FGFR cuando el nivel de proliferación de la célula cultivada en presencia del compuesto de prueba es menor que el de la célula cultivada en ausencia del compuesto de prueba.
Las células utilizadas para el método anterior pueden ser células vivas, líneas de células establecidas o células recombinantes en la medida en que expresen un polipéptido de fusión de la presente invención. Estas células recombinantes incluyen aquellas introducidas con un vector descrito en lo anterior que presenta un polinucleótido que codifica para un polipéptido de fusión de la presente invención.
Por otra parte, las células vivas incluyen células recolectadas de pacientes con cáncer. Las líneas de células establecidas incluyen líneas de células cancerosas establecidas a partir de células cancerosas recolectadas de pacientes con cáncer.
En la presente invención, el cáncer incluye cualquier cáncer descrito en lo anterior.
Los métodos para identificar compuestos que tienen actividad inhibidora de FGFR en la presente invención también incluyen aquellos que comprenden las etapas de: (a) administrar un compuesto de prueba a un mamífero no humano transplantado con células que expresan un polipéptido de fusión descrito en lo anterior de la presente invención y determinar el nivel de proliferación de las células; (b) comparar el nivel de proliferación de la célula determinado en la etapa (a) con el determinado utilizando un mamífero no humano transplantado con la células pero no administrado con el compuesto de prueba; y (c) considerar que el compuesto de prueba tiene actividad inhibidora de FGFR cuando el nivel de proliferación de células determinado en la etapa (a) es menor que el determinado utilizando un mamífero no humano transplantado con las células pero en quien no se ha administrado con el compuesto de prueba.
Las células utilizadas para el método anterior pueden ser células vivas, líneas de células establecidas o células recombinantes en la medida en que expresen un polipéptido de fusión de la presente invención. Estas células recombinantes incluyen aquellas introducidas con el vector descrito en lo anterior que presenta un polinucleótido que codifica para un polipéptido de fusión de la presente invención.
Por otra parte, las células vivas incluyen células recolectadas de pacientes con cáncer. Las líneas de células establecidas incluyen líneas de células con cáncer establecidas a partir de células con cáncer recolectadas de pacientes con cáncer.
En la presente invención, el cáncer incluye cualquier cáncer descrito en lo anterior.
En los métodos de la presente invención, el nivel de proliferación celular se puede probar de acuerdo con métodos habituales, por ejemplo, por medio de métodos colorimétricos que miden la actividad de enzima de reducción de un colorante (MTT, XTT, MTS, ST, etc.) a colorante formazano (púrpura). Cuando las células descritas en lo anterior son células cancerosas, el nivel de proliferación celular también se puede determinar al medir el volumen o peso de tumor formado como resultado de la proliferación celular.
En la presente invención los métodos para identificar compuestos que tienen actividad inhibidora de FGFR también comprenden modalidades que utilizan análisis de genes indicadores.
Los genes indicadores incluyen genes utilizados comúnmente que codifican para proteínas fluorescentes arbitrarias, por ejemplo, proteína fluorescente verde (GFP, por sus siglas en inglés) derivadas de Aequorea coerulescens, luciferasa derivada de Renilla reniformis o similares, proteínas fluorescentes de coral de arrecife (RCFP) derivadas de coral hermatípico, proteínas fluorescentes de frutos y variantes de los mismos.
En la presente invención, el análisis de gen indicador se puede llevar a cabo, por ejemplo, como sigue.
Las células recombinantes se preparan al transformar células que habitualmente se utilizan para producir proteínas recombinantes con un vector de expresión insertado con un polinucleótido que codifica para un polipéptido de fusión de la presente invención y un gen que codifica para una proteína indicadora de manera que el gen que codifica para la proteína indicadora se transcribe en un ARNm dependiendo de la señal que transcribe el polinucleótido que codifica para el polipéptido de fusión en ARNm. Un compuesto de prueba se pone en contacto con las células transformadas obtenidas. Si el compuesto afecta la expresión del polipéptido de fusión se analiza indirectamente al determinar el nivel de expresión del polipéptido de fusión, lo que depende de la actividad del compuesto, al medir la intensidad de la fluorescencia emitida por la proteína indicadora que se expresa de manera simultánea con el polipéptido de fusión (véase, por ejemplo, la patente US número 5,436,128; la patente US número 5,401,629).
La identificación de los compuestos utilizando el análisis descrito en lo anterior se puede llevar a cabo mediante operación manual; no obstante, también se puede realizar fácilmente mediante lo que sencillamente se denomina "cribado de alto rendimiento" utilizando robots automáticamente (Soshiki Baiyou Kougaku (The Tissue Culture Engineering), Vol.23, No. 13, p.521-524; patente US número 5,670,113).
En lo siguiente la presente invención se describe de manera específica utilizando los ejemplos pero no debe considerarse como limitante de la misma.
A menos que se especifique en otro sentido, cada etapa de análisis se puede realizar de acuerdo con métodos conocidos.
Por otra parte, cuando se utilizan reactivos, kits o similares disponibles comercialmente, los análisis se pueden realizar de acuerdo con los manuales incluidos en los productos comerciales.
Todos los documentos de la téenica anterior mencionados en la presente se incorporan como referencia en su totalidad.
EJEMPLO 1 Expresión de polipéptidos de fusión entre FGFR3 y otros polipéptidos en diversas células cancerosas. (1) Análisis de ARN El ARN se extrae con el equipo miRNeasy Mini Kit (QIAGEN) a partir de cada una de las cuatro líneas de células humanas que expresan FGFR3 derivadas de cáncer de vejiga, RT112/84 (disponible de la colección Europea de cultivos celulares (ECACC, por sus siglas en inglés); catálogo número 85061106), RT4 (disponible de la colección de cultivo de tipo americano (ATCC, por sus siglas en inglés); catálogo número HTB-2), SW780 (disponible de ATCC; catálogo número CRL-2169) y BFTC-905 (disponible de Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH (DSMZ, por sus siglas en Alemán); catálogo número ACC 361). Las secuencias se determinan utilizando lecturas de extremo pareado (longitud de lectura: 2 x 75 pares de bases) del sistema de secuenciado HiSeq™ (Illumina).
Las secuencias de nucleótidos determinadas se mapean a transcritos Refseq con referencia a un método existente (Maher et al . , PNAS, Julio 28, 2009, 106(30):12353-121358) para la búsqueda de genes de fusión candidatos mediante búsqueda de pares de secuencias de nucleótidos que estén mapeados en genes diferentes. Además, los sitios de fusión se identifican utilizando secuencias nucleotídicas de que no son mapeadas en cualquier transcrito Refseq en el cual un asociado del par es mapeado a un asociado en el gen de fusión candidato.
Como un resultado, los pol inucleótidos que codifican para un polipéptido de fusión de FGFR3 y TACC3, un polipéptido de fusión de FGFR3 y TACC3, y un polipéptido de fusión de FGFR3 y BAIAP2L1 se identifica a partir de tres tipos de líneas de células de cáncer de vejiga: RT112/84, RT4 y SW780. Esto sugiere que los polipéptidos de fusión se expresan en estas líneas de células. Por otra parte, un polinucleótido que codifica para el polipéptido FGFR3 natural se confirma en células FTC-905. (2) Análisis de ADNe El ADNc se sintetiza por transcripeión inversa utilizando un kit de transcripción inversa, Transcriptor Universal cDNA Master (Roche), de acuerdo con el protocolo de manual de instrucciones anexo al kit. Los ARN utilizados en el ejemplo 1(1), los cuales se extraen a partir de tres tipos de células sugeridos para expresar un polipéptido de fusión de FGFR3 y TACC3 o un polipéptido de fusión de FGFR3 y BAIAP2L1 se utilizan cada uno como una plantilla.
Se lleva a cabo PCR (35 ciclos de 15 segundos a 94°C, 30 segundos a 55°C y un minuto a 68°C) utilizando cada uno de los ADNc preparados como una plantilla con la ADN polimerasa KOD-Plus-Ver.2 (Toyobo) y un par de cebadores oligonucleotídicos (conjunto 1) que tienen las secuencias de nucleótidos de la SEC ID NO: 1 (F3fu-F3; gtgcacaacetegactactacaag) y la SEC ID NO: 2 (RT112-R3: gtaatcctccacgcacttcttc), un par de cebadores oligonucleotídicos (conjunto 2) que tiene las secuencias de nucleótidos de la SEC ID NO: 1 (F3fu-F3: gtgcacaacctcgactactacaag) y la SEC ID NO: 5 (RT4-R3: gggtgtcactcttctgtctaagga) o un par de cebadores oligonucleotídicos (conjunto 3) que tiene las secuencias de nucleótidos de las SEC ID NO: 3 (F3fu-F2) tgttgaccgagtetacactcacc) y la SEC ID NO: 4 (SW780-R2: gacatgtcccagttcagttgac). Después se realiza electroforesis.
Los resultados muestran que con el cebador del conjunto 1, se observa una banda de aproximadamente 670 pares de bases únicamente cuando el ADNe sintetizado a partir de ARN de RT112/84 se utiliza como una plantilla. En la amplificación con el conjunto 2 de cebador, se observa una banda de aproximadamente 610 pares de bases únicamente cuando se utiliza como una plantilla ADNc sintetizado de ARN de RT4. En la amplificación con el conjunto de cebador 3, se observa una banda de aproximadamente 450 pares de bases únicamente cuando el ADNc sintetizado a partir de ARN de SW780 se utiliza como una plantilla.
El secuenciado se realiza mediante el método de secuenciado de Sanger con el equipo BigDyeMR Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit (Life Technologies) utilizando cada producto de PCR como una plantilla para determinar la secuencia de nucleótidos (SEC ID NO: 14) del sitio de fusión en el polinucleótido de fusión de FGFR3 y TACC3 (polinucleótido vi FGFR3-TACC3) expresado en RT112/84, la secuencia de nucleótidos (SEC ID NO: 15) del sitio de fusión en el polinucleótido de fusión de FGFR3 y TACC3 (polinucleótido v2 FGFR3-TACC3) expresado en RT4 y la secuencia de nucleótido (SEC ID NO: 16) del sitio de fusión en el polinucleótido de fusión de FGFR3 y BAIAP2L1 (polinucleótido FGFR3-BAIAP2L1) expresado en SW780.
En base en la información obtenida como se describe en lo anterior, las secuencias de nucleótidos de los ADNe que codifican para cada polipéptido de fusión (de longitud completa) se determinan por un método común.
La secuencia de nucleótidos del ADNc que codifica para el polipéptido de fusión (longitud completa) de FGFR3 y TACC3 expresado en RT112/84 y su secuencia de aminoácidos se muestran en las SEC ID NOS: 27 y 28, respectivamente.
La secuencia de nucleótidos del ADNc que codifica para el polipéptido de fusión (longitud completa) de FGFR3 y TACC3 expresado en RT4 y su secuencia de aminoácidos se muestran en las SEC ID NOS: 29 y 30, respectivamente.
Los resultados de analizar la secuencia de nucleótidos del ADNc que demostró que la secuencia de nucleótidos en las posiciones 2,281 a 2,379 de la SEC ID NO: 29 es una secuencia de ácido nucleico derivada de intrón de un gen que codifica para FGFR3, y codifica para la secuencia de aminoácidos en las posiciones 761 a 793 de la SEC ID NO: 30.
La secuencia de nucleótidos del ADNc que codifica para el polipéptido de fusión (longitud completa) de FGFR3 y BAIAP2L1 expresado en SW780 y su secuencia de aminoácidos se muestran en las SEC ID NOS: 31 y 32, respectivamente.
Como se describe en lo anterior, aunque existen dos tipos de polipéptidos naturales para FGFR3 humano los cuales comprenden las secuencias de aminoácidos de las SEC ID NOS: 6 y 7, respectivamente, las porciones derivadas de FGFR3 N-terminales en estos polipéptidos de fusión son aquellas de FGFR3 naturales que tienen la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 6.
En base en estos resultados de prueba, se supone que los dos tipos de polipéptidos de fusión de TACC3 y el otro FGFR3 natural que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 7 y un polipéptido de fusión de BAIAP2L1 y el otro FGFR3 natural que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 7 se expresan en diversos tipos de células cancerosas derivadas de humano.
La secuencia de nucleótidos del ADNe que codifica para un polipéptido de fusión (longitud completa) de TACC3 y FGFR3 natural que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NOS: 7 y su secuencia de aminoácidos se muestran en las SEC ID NOS: 33 y 34, respectivamente.
La secuencia de nucleótidos del ADNc que codifica para otro polipéptido de fusión (longitud completa) de TACC3 y FGFR3 natural que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NOS: 7, y su secuencia de aminoácidos se muestran en las SEC ID NOS: 35 y 36, respectivamente.
Aquí, la secuencia de nucleótidos en las posiciones 2,275 y 2,373 de la secuencia de nucleótidos de ADNe de la SEC ID NO: 35 es una secuencia de ácido nucleico derivada de un intrón de un gen que codifica para FGFR3 y que codifica para la secuencia de aminoácidos en las posiciones 759 a 791 de la SEC ID NO: 36.
La secuencia de nucleótidos del ADNc que codifica para otro polipéptido de fusión (longitud completa) de BAIAP2L1 y FGFR3 natural que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 7 y su secuencia de aminoácidos se muestran en las SEC ID NOS: 37 y 38, respectivamente.
Además, la presencia de polinucleótido de fusión FGFR3-TACC3 se sospecha en carcinoma de células escamosas de vías respiratorias y digestivas altas, adenocarcinoma de pulmón y carcinoma de células escamosas de pulmón mientras que la presencia de un polinucleótido de fusión FGFR3-BAIAP2L1 se sospecha en carcinoma de células escamosas de vías respiratorias y digestivas altas, carcinoma de células escamosas de pulmón y melanoma cutáneo.
EJEMPLO 2 Análisis de diversos inhibidores de FGFR para determinar sus actividades de inhibición de la actividad de cinasa de FGFR1, FGFR2 y FGFR3 , e inhibición de la proliferación de células de líneas de células que expresan el polipéptido de fusión FGFR3-TACC3. 1 . Análisis de diversos inhibidores de FGFR para determinar su actividad de inhibición de la actividad de cinasa de FGFR1, FGFR2 y FGFR3 ( in vi tro) (1) Actividad inhibidora contra la enzima FGFR1 Las actividades inhibidoras de FGFR1 de los compuestos enumerados en las tablas 1-1 a 1-5 se midieron en base en su actividad para inhibir la fosforilación del péptido biotinado (EGPWLEEEEEAYGWMDF; SEC ID NO: 39) por una enzima FGFR1 humana (Carna Biosciences, cat 08-133) . El péptido biotinado y fosforilado se detecta mediante fluorometría resuelta en tiempo utilizando anticuerpo anti-fosfotirosina unido a criptato de europio y estreptavidina unida a un derivado de aloficocianina, XL665. Se calcula la concentración inhibidora semi máxima (IC50, por sus siglas en inglés) en base en la tasa inhibidora contra el grupo control el cual no contiene la sustancia de prueba.
El resultado de prueba para cada compuesto se muestra en las tablas 1-1 a 1-5. (2) actividad inhibidora contra la enzima FGFR2 Las actividades inhibidoras para FGFR2 de los compuestos que se enumeran en las tablas 1-1 a 1-5 se miden en base en su actividad para inhibir la fosforilación del péptido biotinado (EGPWLEEEEEAYGWMDF; SEC ID NO: 39) por la enzima FGFR2 humana preparada utilizando un sistema de expresión de baculovirus. El péptido biotinado y fosforilado se detecta por fluorometría resuelta en tiempo utilizando anticuerpo anti-fosfotirosina unido a criptato de europio y estreptavidina unida a un derivado de aloficocianina, XL665. La concentración inhibidora semi máxima (IC50) se calcula en base en la tasa inhibidora contra el grupo control el cual no contiene la sustancia de prueba.
El resultado de prueba para cada compuesto se muestra en las tablas 1-1 a 1-5. (3) Actividad inhibidora contra la enzima FGFR3 Las actividades inhibidoras de FGFR3 de los compuestos que se enumeran en las tablas 1-1 a 1-5 se midieron en base en su actividad para inhibir la fosforilación del péptido biotinado (EGP LEEEEEAYGWMDF; SEC ID NO: 39) por la enzima FGFR3 humana (Carna Biosciences, cat 08-135). El péptido biotinado y fosforilado se detecta mediante fluorometría resuelta en tiempo utilizando anticuerpo anti-fosfotirosina unido a criptato de europio y estreptavidina unida a un derivado de aloficocianina, XL665. Se calcula la concentración inhibidora semi máxima (IC50) en base en la tasa inhibidora contra el grupo control el cual no contiene la sustancia de prueba.
El resultado de prueba para cada compuesto se muestra en las tablas 1-1 a 1-5. (4) Actividad inhibidora de inhibidores de FGFR sobre la proliferación de células de líneas de células (in vitro) Las células de la línea de células derivadas de cáncer de vejiga RT-4, la cual expresa un polipéptido de fusión FGFR3-TACC3 y células de una línea de células derivadas de cáncer de colon HCT116 el cual no expresa un polipéptido de fusión FGFR3 se siembran en placa, en placas de 96 pozos y se cultivan durante cuatro días en presencia de DMSO (utilizado como un control) de cada uno de los compuestos incluidos en las tablas 1-1 a 1-5 en diluciones seriadas dobles (18 etapas) a una concentración máxima de 50 mM. Cuatro días después, se determinó el nivel de proliferación celular utilizando WST-8 (DOJINDO LABORATORIES).
La actividad inhibidora de cada compuesto sobre la proliferación celular de cada línea celular se determinó de acuerdo con: (1-T/C) x 100 (%) en donde T representa la absorbancia a 450 nm en pozos en donde las células se incuban en presencia de un compuesto en diversas concentraciones y C representa la absorbancia a 450 nm en pozos en donde las células se incuban en presencia de DMSO. Se calcula la IC50 utilizando el método de mínimos cuadrados.
Como se muestra en las tablas 1-1 a 1-5, el resultado muestra que la concentración inhibidora de proliferación celular a 50% (IC50) para células que expresan el polipéptido de fusión es significativamente menor que para células que no expresan el polipéptido de fusión. l l . . . . . . . . . . . . . . . . - . . . . . . . . . - . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . l .
. . . . . . . . - . . . . . . . . . . . . - . . . . . . . . . . . . . . - Tabla 1-3 a 1-4 Tabla 1-5 EJEMPLO 3 Análisis de inhibidores de FGFR sobre su actividad inhibidora de proliferación celular contra diversas líneas de células que expresan el polipéptido de fusión FGFR3-TACC3 o el polipéptido de fusión FGFR3-BAIAP2L1. (1) actividad inhibidora de proliferación de células de inhibidores de FGFR contra diversas líneas de células (in vitro) Se determinó su efecto sobre la proliferación celular en seis compuestos, A a F (tablas 2-1 y 2-2) las cuales son sustancias que suprimen la actividad de cinasa de FGFR, en un total de seis tipos de líneas de células derivadas de cáncer de vejiga humana: tres tipos de líneas de células expresan un polipéptido de fusión FGFR3-TACC3 o FGFR3-BAIAP2L1: RT112/84 (disponible de ECACC; catálogo No. 85061106), RT4 (disponible de ATCC; catálogo No. HTB-2) y SW780 (disponible de ATCC; catálogo No. CRL-2169); línea de células BFTC-905 (disponible de DSMZ; catálogo No. ACC 361) las cuales expresan el polipéptido FGFR natural pero no expresan los polipéptidos de fusión; línea de células UM-UC-14 (disponible de ECACC; catálogo No. 08090509) la cual expresa el polipéptido FGFR de tipo mutado pero no expresa los polipéptidos de fusión; y la línea de células HT-1376 (disponible de ATCC; catálogo No. CRL-1472) la cual no expresa FGFR3.
Las células se siembran en placas, en placas de 96 pozos (RT112/84, BFTC-905 y UM-UC-14; 3.0 x 103 células/pozo; SW780, RT4 y HT-1376: 5.0 x 103 células/pozo) se cultivaron durante cuatro días en presencia de DMSO (utilizado como un control) o cada compuesto en diluciones seriadas triples (9 etapas) a una concentración máxima de 20 mM. Cuatro días después se determinó el nivel de proliferación celular utilizando WST-8 (DOJINDO LABORATORIES).
La actividad inhibidora de proliferación celular de cada compuesto contra cada línea de células se calculó de acuerdo con: (1-T/C) x 100 (%) en donde T representa la absorbancia a 450 nm en pozos en donde las células se incubaron en presencia de un compuesto a diversas concentraciones y C representa la absorbancia a 450 nm en pozos en donde las células se incubaron en presencia de DMSO. Se calculó IC50 utilizando el método de mínimos cuadrados.
Como se muestra en la tabla 3, el resultado muestra que la concentración inhibidora de proliferación celular a 50% (IC50) contra células que expresan los polipéptidos de fusión es significativamente menor que contra células que no expresan los polipéptidos de fusión.
Tabla 2-1 Tabla 2-2 TABLA 3 (2) Actividad inhibidora de proliferación celular de inhibidores de FGFR contra celulas que expresan el polipéptido de fusión FGFR3-TACC3 (in vivo) El efecto antitumoral se determinó utilizando ratones que presentan cáncer preparados al transplantar células de la línea de células de cáncer de vejiga humana RT112/84 (ECACC) subcutáneamente en la región inguinal de ratones atímicos BALB/c (Charles River Japan, Ine.).
Los ratones atímicos se mantuvieron en cuarentena durante aproximadamente una semana antes de su uso y se sometieron a transplante subcutáneo de aproximadamente 1 x 107 células RT1121/84 en la región inguinal. Cuando el tamaño del tumor alcanzó aproximadamente 200 mm3, los ratones se utilizaron en los experimentos.
El compuesto A se suspendió en una solución que contiene DMSO 10%, Cremophor EL 10%, PEG40015% y HPCD 15% y se administró oralmente a los ratones a una dosis de 20 ml/kg una vez al día.
Se determinó el efecto antitumoral al comparar el crecimiento de tumor durante 11 días después del primer día de administración (día 10 cuando el primer día de administración se estableció como día 0) en comparación con el grupo control.
Efecto inhibidor de crecimiento de tumor (TGI, por sus siglas en inglés) = (1 -[promedio de nivel de crecimiento de tumor del grupo tratado] / [promedio de nivel de crecimiento de tumor del grupo control]) x 100 (%) El resultado se muestra en la tabla 4 Los inhibidores de FGFR presentan un efecto inhibidor de crecimiento de tumor marcadamente significativo en ratones que presentan células tumorales que expresan el polipéptido de fusión FGFR3-TACC3 de una manera que depende de la concentración.
TABLA 4 EJEMPLO 4 Detección de polinucleótidos que codifican para el polipéptido de fusión FGFR3-TACC3 o FGFR3-BAIAP2L1 en especímenes clínicos. (1) Detección del polinucleótido vi el cual codifica para el polipéptido de fusión FGFR3-TACC3 Con el fin de detectar el ADNe del polinucleótido vi que codifica para el polipéptido de fusión FGFR3-TACC3 en muestras clínicas, se llevó a cabo PCR (42 ciclos de 10 segundos a 98°C, 15 segundos a 60°C y un minuto a 68°C) con el equipo de ADN polimerasa Tks GflexMR (Takara bio) utilizando, como cebadores, oligonucleótidos que tienen las secuencias de nucleótidos de las SEC ID NOS: 1 y 2 y como sustrato ADNc (Origene) derivado de muestras de cáncer de vejiga recolectadas de pacientes con cáncer de vejiga (20 pacientes) de ADNc sintetizado a partir de ARN de RT1121/84 (ECACC). Cada una de las muestras amplificadas se somete a electroforesis junto con los ADN de marcador de tamaño (Invitrogen).
Como lo muestra en la figura 1, el resultado muestra que los fragmentos de ADNe del polinucléotido vi que codifican para el polipéptido de fusión FGFR3-TACC3 no se detectaron en las muestras clínicas. (2) Detección del polinucléotido v2 el cual codifica para el polipéptido de fusión FGFR3-TACC3 Con el fin de detectar el ADNc del polinucléotido v2 que codifica para el polipéptido de fusión FGFR3-TACC3 en muestras clínicas, se llevó a cabo PCR (42 ciclos de 10 segundos a 98°C, 15 segundos a 60°C y un minuto a 68°C) con ADN polimerasa Tks GflexMR (Takara bio) utilizando, como cebadores, oligonucleótidos que tienen las secuencias de nucleótidos de las SEC ID NOS: 1 y 5 y como sustrato ADNc (Origene) derivado de muestras de cáncer de vejiga recolectadas de pacientes con cáncer de vejiga (20 pacientes) o ADNc sintetizado a partir de ARN de RT4 (ATCC). Cada una de las muestras amplificadas se somete a electroforesis junto con los ADN del marcador de tamaño (Invitrogen).
Como se muestra en la figura 2, el resultado muestra que el fragmento de ADNc del polinucléotido v2 que codifica para el polipéptido de fusión FGFR3-TACC3 se detectó en un solo caso.
El hallazgo anterior muestra que el método descrito en lo anterior permite la detección del polinucleótido v2 que codifica para el polipéptido de fusión FGFR3-TACC3 en muestras derivadas de especímenes clínicos de cáncer de vejiga y por lo tanto permite la selección de pacientes quienes son positivos para el polinucleótido v2 que codifica para el polipéptido de fusión FGFR3-TACC3. (3) Detección de un polinucleótido que codifica para el polipéptido de fusión FGFR3-BAIAP2L1 Con el fin de detectar ADNe de un polinucleótido FGFR3-BAIAP2L1 en muestras clínicas, se llevó a cabo PCR (42 ciclos de 10 segundos a 98°C, 15 segundos a 60°C y un minuto a 68°C) con ADN polimerasa Tks GflexMR (Takara bio) utilizando, como cebadores, oligonucleótidos que tienen las secuencias de nucleótidos de las SEC ID NOS: 3 y 4 y como un sustrato ADNc (Origene) derivado de muestras de cáncer de vejiga recolectadas de pacientes con cáncer de vejiga (20 pacientes) o ADNc sintetizado a partir de ARN de SW780 (ATCC). Cada una de las muestras amplificadas se somete a electroforesis junto con los ADN del marcador de tamaño (Invitrogen).
Como se muestra en la figura 3, el resultado muestra que un fragmento de ADNc del polipéptido de fusión FGFR3-BAIAP2L1 se detectó en un total de dos casos.
Los hallazgos anteriores muestran que el método descrito en lo anterior permite la detección de un polinucleótido que codifica para el polipéptido de fusión FGFR3-BAIAP2L1 en muestras derivadas de especímenes clínicos de cáncer de vejiga y por lo tanto permite la selección de pacientes quienes son positivos para un polinucleótido que codifica para el polipéptido de fusión FGFR3-BAIAP2L1.
EJEMPLO 5 Detección de polinucleótidos que codifican para el polipéptido de fusión FGFR3-BAIAP2L1 y el polipéptido de fusión FGFR3-BAIAP2L1 en especímenes clínicos de diversos tipos de cánceres. (1) Detección de un polinucleótido que codifica para el polipéptido de fusión FGFR3-BAIAP2L1 en especímenes clínicos de cáncer de pulmón (cáncer que no es de vejiga) (prueba 1) Con el fin de detectar ADNe para un polinucleótido FGFR3-BAIAP2L1 a partir de especímenes clínicos de cáncer que no es de vejiga, se llevó a cabo PCR (42 ciclos de 98°C durante 10 segundos, 60°C durante 15 segundos y 68°C durante uno minuto) con ADN polimerasa Tks GflexMR (TARARA BIO INC) utilizando un par de cebadores oligonucleótidos que tienen las secuencias de nucleótidos de las SEC ID NOS: 3 (F3fu-F2: tgtttgaccgagtetacactcacc) y SEC ID NO: 4 (SW780-R2: gacatgtcccagttcagttgac) y como un sustrato, 40 muestras de ADNc derivado de especímenes clínicos de cáncer de pulmón (Origene) y ADNe sintetizado de ARN de SW780. Las muestras amplificadas se sometieron a electroforesis junto con un ADN marcador de tamaño (Invitrogen).
Como se muestra en la figura 4A, el resultado mostró que el fragmento de ADNc de un polinucléotido que codifica para el polipéptido de fusión FGFR3-BAIAP2L1 se detectó en un total de un caso.
Además, con el fin de confirmar la susceptibilidad a reproducción, la PCR se llevó a cabo (42 ciclos de 98°C durante 10 segundos, 60°C durante 15 segundos y 68°C durante un minuto) con ADN polimerasa Tks Gflex®(TAKARA BIO INC.) utilizando un par de cebadores oligonucleotídicos que tienen las secuencias nucleotídicas de la SEC ID NO: 17 (F3fu-Fl: caactgcacacacgacctgta) y la SEC ID NO: 18 (SW780-R1: ccategtagtaggcttttcctg), y, como sustrato, los ADNc derivados de los mismos especímenes clínicos de cáncer de pulmón y ADNc sintetizado a partir de ARN SW780. Las muestras amplificadas se sometieron a electroforesis junto con el ADN marcador de tamaño (Invitrogen).
Como se muestra en la figura 4B, el resultado muestra que un fragmento de ADNc de un polinucléotido que codifica para el polipéptido de fusión FGFR3-BAIAP2L1 se detectó en un total de un caso. El hallazgo anterior muestra que el método descrito en lo anterior permite la detección de un polinucléotido que codifica para el polipéptido de fusión FGFR3-BAIAP2L1 en los ADNe derivados de especímenes clínicos de cáncer que no es de vejiga con diferentes tipos de cebadores y por lo tanto permite la selección de pacientes quienes son positivos para un polinucleótido que codifica para el polipéptido de fusión FGFR3-BAIAP2L1. (2) Detección de polinucleótidos que codifican para los polpéptidos de fusión FGFR3-BAIAP2L1 en especímenes clínicos de cáncer de pulmón (cáncer que no es de vejiga) (prueba 2).
Se llevó a cabo PCR (35 ciclos de 98°C durante 10 minutos, 60°C durante 15 segundos y 68°C durante 1 minuto) con ADN polimerasa Tks GflexMR (TARARA BIO INC.) utilizando un par de cebadores oligonucleótidos (conjunto 3) que tienen secuencias de nucleótidos de la SEC ID NO: 3 (F3fu-F2: tgtttgecgagtetacactcacc) y SEC ID NO: 4 (SW780-R2: gacatgtcccagttcagttgac), y, como un sustrato, 83 muestras de ADNc derivadas de especímenes clínicos de cáncer de pulmón (OriGene). La presencia o ausencia de amplificación de ADN se confirma para cada muestra por electroforesis en gel de agarosa. Bandas de ADN que tienen el tamaño de interés se detectaron en dos especímenes, y se determinó por análisis de secuencia de ADN (método de Sanger) que son secuencias de fragmento de ADNc derivadas de los polinucleótidos de fusión FGFR3-BAIAP2L1. En consecuencia, el polinucleótido de fusión FGFR3-BAIAP2L1 se confirmó que existe en los ADNc derivados de especímenes de cáncer clínico. (3) Detección de polinucleótidos que codifican para los polipéptidos de fusión FGFR3-TACC3 en especímenes clínicos de cáncer de pulmón, cáncer esofágico, cáncer gástrico y cáncer de hígado (todos, cánceres que no son de vejiga) Se llevó a cabo PCR (35 ciclos de 98°C durante 10 segundos, 60°C durante 15 segundos y 68°C durante un minuto) con ADN polimerasa Tks GflexMR (TARARA BIO INC.) utilizando un par de cebadores oligonucleotídicos (conjunto 1) que tienen las secuencias de nucleótidos de la SEC ID NO: 1 (F3fu-F3: gtgcacaacetegactactacaag) y SEC ID NO: 2 (RT112-R3: gtaatcctccacgcacttcttc) y, como un sustrato, 83 muestras de los ADNe derivados de especímenes clínicos de cáncer de pulmón (OriGene), 18 muestras de ADNc derivados de especímenes clínicos de cáncer esofágico (OriGene), cinco muestras de los ADNc derivados de especímenes clínicos de cáncer gástrico (OriGene) y cinco muestras de los ADNc derivados de especímenes clínicos de cáncer de hígado (OriGene). La presencia o ausencia de amplificación de ADN se confirmó para cada muestra por electroforesis en gel de agarosa. Las bandas de ADN que tienen el tamaño de interés se detectaron en los especímenes a partir de dos casos de cáncer de pulmón, dos casos de cáncer esofágico, un caso de cáncer gástrico y un caso de cáncer de hígado; y se determinó por análisis de secuencia de ADN (método de Sanger) que son secuencias de fragmento de ADNc derivadas de los polinucleótidos de fusión FGFR3-TACC3. En consecuencia, se confirmó que existen los polinucleótidos de fusión FGFR3-TACC3 en los ADNe derivados de especímenes clínicos de diversos tipos de cánceres. (4) Detección de polinucleótidos que codifican para polipéptidos de fusión FGFR3-BAIAP2L1 en líneas de células de cáncer de vejiga utilizando el método de FISH Con el fin de detectar los genes de fusión FGFR3-BAIAP2L1 en líneas de células de cáncer de vejiga utilizando el método de hibridación de fluorescencia in situ (FISH, por sus siglas en inglés), se realizó un experimento utilizando los siguientes dos conjuntos de sondas y muestras embebidas en parafina y fijadas con formalina (FFPE, por sus siglas en inglés) de líneas de células de cáncer de vejiga RT112/84 y SW780.
El análisis FISH se realizó mediante la utilización del equipo FGFR3 Split Dual Color FISH Probe (conjunto de sonda de señal Split, GSP Lab., Inc.) para detectar translocación de una parte del gen para FGFR3 en el cromosoma 4 humano a otro cromosoma y mediante la utilización de la sonda FISH para FGFR3 y BAIAP2L1 (conjunto de sonda de señal de fusión, GSP Lab., Inc.) para detectar integración del gen para FGFR3 en el cromosoma 4 humano y del gen para BAIAP2L1 en el cromosoma 7 humano dentro del mismo cromosoma.
Como se muestra en las figuras 5A-1 a 5B-2, los resultados confirmaron que, en muestras de FFPE preparadas a partir de SW780, se detectaron señales de dos colores separadas por análisis FISH con una sonda de señal dividida (figura 5A-2), y una señal fusionada de los dos colores se detectó por análisis FISH con un conjunto de sonda de señal de fusión (figura 5B-2) . En consecuencia, el método mencionado en lo anterior mostró que la separación del gen para FGFR3 y la fusión de los genes para FGFR3 y BAIAP2L1 se detectó por el método de FISH.
EJEMPLO 6 Evaluación de diversas líneas de células que expresan un polipéptido de fusión FGFR3-TACC3 o un polipéptido de fusión FGFR3-BAIAP2L1 (1) Evaluación de la dependencia FGFR3 de diversas líneas celulares Se agregó el ARNsi contra FGFR3 o BAIAP2L1 de un total de cuatro tipos de células: líneas de células humanas derivadas de cáncer de vejiga RT4 y SW780 las cuales expresan un polipéptido de fusión FGFR3-TACC3 o un polipéptido de fusión FGFR3-BAIAP2L1; la línea de células UM-UC-14 la cual expresa un polipéptido FGFR3 mutante pero no expresa los polipéptidos de fusión; y la línea de células BFTC-905 la cual expresa el polipéptido FGFR3 natural pero no expresa los polipéptidos de fusión y los efectos de cada tipo de ARNsi sobre la proliferación celular se examinaron.
Se utilizó el material de ON-TARGETplus siRNA Reagents (Thermo Fisher Scientific) para los ARNsi.
Las células se sembraron en placas, en placas de 96 pozos (UM-UC-14 y BFTC-905: 1.5 x 103 células/pozo; y SW780 y RT4: 2.5 x 103 células/pozo) se cultivaron durante siete días en presencia de cada uno de ARNsi o ARNsi en falso (utilizado como control) en diluciones seriadas decimales (3 etapas) a una concentración máxima de 10 nM. La proliferación de células después de siete días se midió por el análisis de viabilidad de células luminiscente CellTiter-G1OMR (Promega).
Como se muestra en las figuras 6A-6E, el resultado muestra que la actividad de proliferación de células las cuales expresan el polipéptido FGFR3 natural, pero que no expresan los polipéptidos de fusión no se inhiben por los ARNsi contra cada uno de FGFR3 y BAIAP2L1. Por otra parte, la actividad de proliferación de la línea de células las cuales expresan un polipéptido FGFR3 mutante pero que no expresa los polipéptidos de fusión y la actividad de proliferación de células las cuales expresan el polipéptido de fusión FGFR3-TACC3 se inhibieron únicamente por ARNsi contra FGFR3. Por otra parte, la proliferación de células que expresan un polipéptido de fusión FGFR3-BAIAP2L1 se confirmó que se inhibe ya sea por los ARNsi contra cada uno de FGFR3 y BAIAP2L1 . (2) Evaluación de inducción de apoptosis por un inhibidor de FGFR contra células cancerosas que expresan un polipéptido de fusión FGFR3-BAIAP2L1 Cada uno de los seis compuestos A a F (Tablas 2-1 y 2-2), las cuales son sustancias que suprimen la actividad de cinasa de FGFR se agregaron a un total de cuatro tipos de células: línea de células humanas derivadas de cáncer de vejiga SW780 las cuales expresan un polipéptido de fusión FGFR3-BAIAP2L1; la línea de células BFTC-905 la cual expresa el polipéptido FGFR natural pero no expresa los polipéptidos de fusión; la línea de células UM-UC-14 la cual expresa el polipéptido FGFR3 mutante pero no expresa los polipéptidos de fusión; y la línea de células HT-1376 la cual no expresa FGFR3 para determinar si se indujo apoptosis.
Las células se siembran en placas PrimeSurfaceMR 96U (Sumitomo Bakelite Co. Ltd.) (UM-UC-14 y BFTC-905: 3.0 x 103 células/pozo; y SW780 y HT-1376: 5.0 x 103 células/pozo) se cultivaron durante cuatro días en presencia de DMSO (utilizado como control) o cada compuesto en diluciones seriadas triples (4 etapas) a una concentración máxima de 20 mM. La proliferación celular y la actividad de caspasa después de cuatro días se midió por el análisis de viabilidad de células luminiscentes CellTiter-GloMR (Promega), el análisis Caspase-GloMR 3/7 (Promega), respectivamente. La suma de actividad de caspasa en un solo pozo medida por Caspase-GloMR 3/7 se dividió por la cuenta de células viables relativas en un pozo único, calculado a partir del valor CellTiter-GloMR para calcular el valor de apoptosis. La inducción de apoptosis en cada pozo se evaluó al dividir el valor de apoptosis entre el valor de apoptosis para cada célula calculado bajo las condiciones donde se agregó DMSO.
Como se muestra en la figura 7, los resultados confirmaron que aunque no se indujo apoptosis por el inhibidor en células que no responden a un inhibidor de FGFR se indujo apoptosis por el inhibidor de FGFR en células que responden a un inhibidor de FGFR. (3) Actividad inhibidora de proliferación de células in vivo de inhibidores de FGFR contra células que expresan el polipéptido de fusión FGFR3-BAIAP2L1 Se determinó el efecto antitumoral utilizando ratones con cáncer preparados al transplantar células de la línea de células de cáncer de vejiga humana SW780 (ATCC) subcutáneamente en la región inguinal de ratones atímicos BALB/c (Charles River Japan, Inc.). Los ratones atímicos se sometieron a cuarentena durante aproximadamente una semana antes de su uso y se sometieron a transplante subcutáneo de 5 x 106 células SW780 en la región inguinal. Cuando el tamaño de tumor alcanzó aproximadamente 200 mm3, los ratones se utilizaron en experimentos. El compuesto A se suspendió en una solución que contiene DMSO 10%, Cremophor EL, 10%, PEG400 15% y HPCD 15%, y se administró oralmente a los ratones, a 20 mi, kg, una vez al día. El efecto antitumoral se determinó al comparar el crecimiento del tumor durante 11 días después del primer día de administración (el día 10, cuando el primer día de administración se estableció como el día 0) con el grupo control.
Efecto inhibidor de crecimiento de tumor (TGI) = (1 [Promedio de nivel de crecimiento de tumor del grupo tratado]/[Promedio de nivel de crecimiento de tumor del grupo control]) x 100 (%) El resultado se muestra en la Tabla 5.
Los inhibidores de FGFR presentaron un efecto inhibidor de crecimiento de tumor marcadamente significativo en ratones que presentan células tumorales que expresan el polipéptido de fusión FGFR3-BAIAP2L1 de una manera que depende de la concentración.
TABLA 5 EJEMPLO 7 Examen de la capacidad transformante y de capacidad tumorigénica de polipéptido de fusión FGFR3-BAIAP2L1 (1) Evaluación de la capacidad de transformación de un polipéptido de fusión FGFR3-BAIAP2L1 Un ADNe (SEC ID NO: 10) que codifica para FGFR3 (SEC ID NO: 6) y un ADNc (SEC ID NO: 31) que codifica para FGFR3-BAIAP2L1 (SEC ID NO: 32) se subelonan, cada uno en un vector de expresión lentiviral pReceiver-Lvl56 (GeneCopoeia); y el lentivirus para expresión de cada polipéptido se produce utilizando los sistemas de empacado lentivirales Lenti-PacMR (GeneCopoeia).
Células RAT-2 derivadas de feto de ratas se infectaron con cada lentivirus y las células se cultivaron bajo condiciones con un marcador de selección puromicina para establecer células RAT-2 que expresan de modo estable al polipéptido FGFR3 o el polipéptido de fusión FGFR3-BAIAP2L1. Como se muestra en la figura 8, los cambios morfológicos de las células establecidas que expresan de manera estable el polipéptido de fusión FGFR3-BAIAP2L1 se observaron en cultivo de monocapa.
Células RAT-2 no tratadas (células originales), células RAT-2 que expresan de manera estable el polipéptido FGFR3 o células RAT-2 que expresan de manera estable el polipéptido de fusión FGFR3-BAIAP2L1 se sembraron en placas a 2.0 x 103 células/pozo en una placa PrimeSurfaceMR 96U (Sumitomo Bakelite Co. Ltd.) y se cultivaron durante 14 días. Como se muestra en la figura 9, cuando las células después de 14 días se observan y fotografían, se encuentra que la proliferación de células independiente del andamiaje se incrementó solo en células RAT-2 que expresan de modo estable el polipéptido de fusión FGFR3-BAIAP2L1.
A partir del resultado, el polipéptido de fusión FGFR3-BAIAP2L1 se confirmó que tiene la capacidad transformante en células normales. (2) Evaluación de la capacidad transformante de un polipéptido de fusión FGFR3-BAIAP2L1 que carece de una región promotora de dimerización Se produce ADNe que codifica para FGFR3-BAIAP2L1 ABAR, el cual carece del dominio BAR, el cual es una región que promueve dimerización del polipéptido BAIAP2L1 (secuencia de aminoácidos: SEC ID NO: 8/secuencia de ácido nucleico: SEC ID NO: 12) mediante un método de mutagénesis dirigida a sitio utilizando el método de PCR. Los ADNc que codifican para cada uno de FGFR3 (mismo que el anterior), FGFR3-BAIAP2L1 (mismo que el anterior) y FGFR3-BAIAP2L1 ABAR se subelonan en el vector pCXND3 (KAKETSUKEN) para producir vectores para expresar cada uno de los polipéptidos.
El vector (vehículo) pCXND3 o un vector para expresar cada polipéptido se introduce en células 293 de riñón embriónico humano utilizando el reactivo de transfección FuGENEMR HD (Promega). Un día después las células se recolectan como U sados de células utilizando amortiguador de lisis celular (Cell Signaling Technology). Como se muestra en la figura 10, cuando cada U sado celular se analiza por Western blot utilizando un receptor Phospho-FGF (Tyr653/654) Antibody (Cell Signaling Technology) o un anticuerpo anti-FGFR3 (Santa Cruz), la fosforilación de FGFR, la cual se incrementó en el polipéptido de fusión FGFR3-BAIAP2L1 se confirma que se atenúa en el polipéptido de fusión FGFR3-BAIAP2L1 ABAR que carece del dominio BAR, la cual es una región que promueve la dimerización del polipéptido BAIAP2L1.
Además, por un método similar al del examen mencionado antes (1), las células RAT-2 que expresan de manera estable el polipéptido BAIAP2L1 (el mismo que el anterior) o el polipéptido de fusión FGFR3-BAIAP2L1 ABAR (el mismo que el anterior) se establecen utilizando lentivirus.
Células RAT-2 no tratadas (células originales), células RAT-2 que expresan de manera estable el polipéptido FGFR3, células RAT-2 que expresan de manera estable al polipéptido BAIAP2L1, células RAT-2 que expresan de manera estable al polipéptido de fusión FGFR3-BAIAP2L1 o células RAT-2 que expresan de manera estable el polipéptido de fusión FGFR3-BAIAP2L1 ABAR se siembran en placas a 2.0 x 103 células/pozo en una placa PrimeSurfaceMR 96U (Sumitomo Bakelite Co. Ltd.) y se cultivan durante 14 días. La cuenta de células después de 14 días se determina por el sistema CellTiter-GloMR Luminiscent Cell Viability Assay (Promega). Como se muestra en la figura 11, se observa que las células RAT-2 que expresan de manera estable el polipéptido BAIAP2L1 no tienen capacidad de proliferación de células independiente del andamiaje y la capacidad de proliferación de células independiente de andamiaje observado en células RAT-2 que expresan de manera estable el polipéptido de fusión FGFR3-BAIAP2L1 se pierde en células RAT-2 que expresan de manera estable el polipéptido de fusión FGFR3-BAIAP2L1 ABAR.
En consecuencia, la capacidad transformante de un polipéptido de fusión FGFR3-BAIAP2L1 sobre células normales se confirmó que es causado por trans-autofosforilación mejorada del polipéptido FGFR3 debido al dominio que promueve dimerización en el polipéptido BAIAP2L1. (3) Evaluación de la capacidad tumorigénica de un polipéptido de fusión FGFR3-BAIAP2L1 y actividad supresora de agrandamiento de tumor de un inhibidor de FGFR Células RAT-2 que expresan de manera estable al polipéptido FGFR3, el polipéptido BAIAP2L1, el polipéptido de fusión FGFR3-BAIAP2L1 o el polipéptido de fusión FGFR3-BAIAP2L1 ABAR establecidos en los experimentos mencionados antes (1) y (2) se inoculan subcutáneamente en la región inguinal de ratones atímicos BALB/c (Charles River Laboratories Japan) a 4.8 - 5.4 x 106 células y los ratones se observan durante 15 días. Como se muestra en la figura 12, se confirma el agrandamiento de tumor únicamente en ratones inoculados con células RAT-2 que expresan de manera estable el polipéptido de fusión FGFR3-BAIAP2L1.
Además, las células RAT-2 que expresan de manera estable FGFR3-BAIAP2L1 se inocularon en ratones atímicos a 5.04 x 106 células. A partir de siete días después de la plantación de las células, un inhibidor de FGFR, compuesto A (mismo que el anterior) suspendido en una solución que contiene DMSO 10%, Cremophor EL 10%, PEG40015% y HPCD 15% se administró oralmente una vez al día a ratones, a una concentración de 20 ml/kg. Como se muestra en la figura 13, el agrandaminto de tumor mejorado por el polipéptido de fusión FGFR3-BAIAP2L1 se observó que se suprime de modo significativo por el inhibidor de FGFR de una manera dependiente de la concentración.
El polipéptido de fusión FGFR3-BAIAP2L1 se confirmó que tiene una capacidad tumorigénica muy fuerte y esta capacidad tumorigénica se suprimió por el inhibidor de FGFR.
APLICABILIDAD INDUSTRIAL Los polipéptidos de fusión que comprenden un polipéptido FGFR3 y otro polipéptido de la presente invención se expresan específicamente en diversos tipos de células cancerosas que incluyen células de cáncer de vejiga. La proliferación de células que expresan estos polipéptidos de fusión se inhibe de modo significativo por compuestos que tienen actividad inhibidora de FGFR. Así, el uso de un polipéptido de fusión de la presente invención como un biomarcador para el tratamiento contra el cáncer basado en inhibidor de FGFR permite determinar a cada paciente en cuanto a su aplicabilidad o modo de uso del inhibidor de FGFR y permite evitar efectos secundarios y controlar el modo de tratamiento para producir el mejor efecto terapéutico en el tratamiento basado en inhibidor de FGFR. Por lo tanto, esto permite medicina personalizada.
Además, el uso de los polipéptidos de fusión de la presente invención como un objetivo en el desarrollo de agentes terapéuticos contra el cáncer que tienen como objetivo FGFR, es decir, agentes terapéuticos dirigidos molecularmente, permite proporcionar inhibidores de FGFR con un alto nivel de especificidad y actividad antitumoral para dirigir las células cancerosas así como agentes terapéuticos contra el cáncer que comprenden los inhibidores.
Los inhibidores de FGFR obtenidos como se describe en lo anterior tienen una alta especificidad hacia células de cáncer objetivo y por lo tanto se vuelve posible proporcionar agentes terapéuticos contra el cáncer con una gran actividad antitumoral pero al menos efectos secundarios.
Además, los polipeptidos de fusión de la presente invención tienen una correlación estrecha con diversos tipos de cánceres y por lo tanto la susceptibilidad a cáncer (sensibilidad a cáncer) de los sujetos, ya sea sujetos que son afectados con cáncer o si el cáncer ha progresado en sujetos se puede probar al determinar la presencia o ausencia del polipéptido de fusión de la presente invención o un polinucleótido que codifica para el polipéptido de fusión en muestras de sujetos los cuales incluyen no solo pacientes con cáncer sino también personas sanas.
Además, los polipéptidos de fusión de la presente invención tienen una correlación estrecha con diversos tipos de cánceres y por lo tanto, los inhibidores de FGFR con alta especificidad a FGFR se pueden proporcionar al identificar un compuesto de prueba que inhibe la proliferación de células (tales como células de cáncer) que expresan los polipéptidos de fusión de la presente invención al comparar el nivel de proliferación celular en presencia y ausencia del compuesto de prueba.
Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención es el que resulta claro de la presente descripeión de la invención.

Claims (62)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones:
1. Un polipéptido de fusión caracterizado porque comprende un polipéptido FGFR3 y un polipéptido BAIAP2L1 o un polipéptido TACC3: en donde el polipéptido FGFR3 es la totalidad o una parte del polipéptido natural que consiste de la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 6 o 7, o la totalidad o una parte de un polipéptido mutante con una o más sustituciones, supresiones o inserciones de aminoácidos en el polipéptido natural; el polipéptido BAIAP2L1 es la totalidad o una parte del polipéptido natural que consiste de la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 8, o la totalidad o una parte de un polipéptido mutante con una o más sustituciones, supresiones o inserciones de aminoácidos en el polipéptido natural; y el polipéptido TACC3 es la totalidad o una parte de un polipéptido natural que consiste de la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 9, o la totalidad o una parte de un polipéptido mutante con una o más sustituciones, supresiones o inserciones de aminoácidos en el polipéptido natural.
2. El polipéptido de fusión de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el polipéptido FGFR3 es un polipéptido natural que consiste de la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NOS: 6 ó 7.
3. El polipéptido de fusión de conformidad con la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque el polipéptido de fusión comprende un polipéptido FGFR3 y un polipéptido BAIAP2L1.
4. El polipéptido de fusión de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque el polipéptido de fusión consiste de la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 32 o 38.
5. El polipéptido de fusión de conformidad con la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque el polipéptido de fusión comprende un polipéptido FGFR3 y un polipéptido TACC3.
6. El polipéptido de fusión de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque el polipéptido de fusión consiste de la secuencia de aminoácidos de las SEC ID NOS: 28, 30, 34 ó 36.
7. El polipéptido de fusión de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque el polipéptido de fusión se deriva de cáncer de vejiga o cáncer de pulmón.
8. Un polinucleótido caracterizado porque codifica para el polipéptido de fusión de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7.
9. El polinucleótido de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque comprende la secuencia de nucleótidos de las SEC ID NOS: 14, 15 y 16.
10. El polinucleótido de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque comprende la secuencia de nucleótidos de las SEC ID NOS: 27, 29, 31, 33, 35 o 37.
11. Un vector caracterizado porque comprende el polinucleótido de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 8 a 10.
12. Una célula recombinante caracterizada porque comprende el vector de conformidad con la reivindicación 11.
13. Un anticuerpo o fragmento del mismo que une antígeno caracterizado porque se une específicamente al polipéptido de fusión de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7.
14. Un par de cebadores oligonucleotídicos caracterizados porque consisten de los cebadores directo y antisentido, cada uno hibridiza para un polinucleótido que codifica para el polipéptido de fusión de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 para detectar o amplificar el polinucleótido.
15. Un oligonucleótido caracterizado porque se une a un polinucleótido de ARNm que codifica para el polipéptido de fusión de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 y que tiene actividad para inhibir la traducción del polinucleótido ARNm en proteína.
16. El oligonucleótido de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque es un ARNsi que escinde el polipéptido ARNm.
17. Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende el anticuerpo o fragmento del mismo que une antígeno de conformidad con la reivindicación 13.
18. Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende el oligonucleótido de conformidad con la reivindicación 15 ó 16.
19. Un método para detectar un polipéptido de fusión que comprende un polipéptido FGFR3 y un polipéptido BAIAP2L1 o polipéptido TACC3, caracterizado porque comprende la etapa de detectar el polipéptido de fusión en una muestra aislada de un sujeto mediante la utilización de un anticuerpo o fragmento del mismo que une antígeno que se une al polipéptido de fusión de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7.
20. Un método para detectar un polinucleótido que codifica para un polipéptido de fusión que comprende un polipéptido FGFR3 y un polipéptido BAIAP2L1 o un polipéptido TACC3, caracterizado porque comprende la etapa de detectar un polinucleótido que codifica para el polipéptido de fusión en una muestra aislada de un sujeto al utilizar un par de cebadores oligonucleotídicos que consisten de cebadores directos y antisentidos, cada uno hibridiza para un polinucleótido que codifica para el polipéptido de fusión de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 para detectar o amplificar el polinucleótido.
21. Un kit para detectar un polinucleótido que codifica para un polipéptido de fusión que comprende un polipéptido FGFR3 y un polipéptido BAIAP2L1 o un polipéptido TACC3, caracterizado porque comprende un par de cebadores oligonucleotídicos que consisten de cebadores directo y antisentido, cada uno hibridiza con un polinucleótido que codifica para el polipéptido de fusión de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 para detectar o amplificar el polinucleótido.
22. Un kit para detectar un polipéptido de fusión que comprende un polipéptido FGFR3 y un polipéptido BAIAP2L1 o un polipéptido TACC3, caracterizado porque comprende un anticuerpo o fragmento del mismo que une antígeno que se une al polipéptido de fusión de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7.
23. Un método para probar susceptibilidad a cáncer de un sujeto, si el sujeto está afectado con cáncer o si el cáncer ha progresado en un sujeto al determinar la presencia o ausencia del polipéptido de fusión de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 en una muestra aislada del sujeto, caracterizado porque se basa en el criterio de que el sujeto con mayor probabilidad desarrollará cáncer, es afectado con cáncer o presenta cáncer que ha progresado cuando se detecta el polipéptido de fusión.
24. Un método para probar susceptibilidad a cáncer en un sujeto, caracterizado porque el sujeto está afectado con cáncer o si el cáncer ha progresado en un sujeto al determinar la presencia o ausencia de un polinucleótido que codifica para el polipéptido de fusión de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 en una muestra aislada del sujeto, caracterizado porque se basa en el criterio de que el sujeto es más probable que desarrolle cáncer, es afectado con cáncer o presenta cáncer que ha progresado cuando se detecta el polinucleótido que codifica para el polipéptido de fusión.
25. El método de conformidad con la reivindicación 23 ó 24, caracterizado porque el cáncer es cáncer de vejiga, tumor cerebral, carcinoma de células escamosas de vías respiratorias y digestivas altas, cáncer de pulmón, adenocarcinoma de pulmón, carcinoma de células escamosas de pulmón, melanoma cutáneo, cáncer esofágico, cáncer gástrico o cáncer de hígado.
26. Un método para seleccionar a un paciente en quien es aplicable un agente anticancerígeno que comprende un compuesto que tiene actividad inhibidora de FGFR o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado porque comprende las etapas de: (a) determinar la presencia o ausencia del polipéptido de fusión de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 en una muestra aislada de un sujeto; y (b) seleccionar a un paciente en quien se ha confirmado que presenta el polipéptido de fusión como un paciente en el cual es aplicable el agente anticancerígeno;
27. Un método para seleccionar a un paciente al cual es aplicable un agente anticancerígeno que comprende un compuesto que tiene actividad inhibidora de FGFR o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado porque comprende las etapas de: (a) determinar la presencia o ausencia de un polinucleótido que codifica para el polipéptido de fusión de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 en una muestra aislada de un sujeto; y (b) seleccionar a un paciente en quien se ha confirmado que presenta un polinucleótido que codifica para el polipéptido de fusión como un paciente en el cual es aplicable el agente anticancerígeno.
28. El método de conformidad con la reivindicación 26 ó 27, caracterizado porque el cáncer es cáncer de vejiga, tumor cerebral, carcinoma de células escamosas de vías respiratorias y digestivas altas, cáncer de pulmón, adenocarcinoma de pulmón, carcinoma de células escamosas de pulmón, melanoma cutáneo, cáncer esofágico, cáncer gástrico o cáncer de hígado.
29. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 26 a 28, caracterizado porque el compuesto que tiene actividad inhibidora de FGFR o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo es cualquiera de los compuestos o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo representada por: [Compuesto 1] en donde Ri, R2, R3, y R4 cada uno representa independientemente el grupo que se lista a continuación: Ri representa hidrógeno, hidroxi, halógeno, ciano, nitro, haloalquilo de C1-4, alquilo de Ci-b, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, cicloalquilo de C3-7, arilo de Ce-io alquilo de C1-4, -OR5, -NR6R7 -(CRsRglnZi, -C(O)NR12R13, -SRI4, -SOR15, -SO2R16, -NR17SO2R18, COOH, arilo de C6-10 el cual está opeionalmente substituido por uno o más grupos seleccionados independientemente del grupo P, heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterocielilo de 3 a 10 miembros el cual está opeionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q, -CORig, -COOR20, -OC(0)R21, -NR22C(O)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR26R27, -S02NR28R29, -OSO2R30, -SO3R31 o -Si(R32)3; R2 representa hidrógeno, hidroxi, halógeno, ciano, nitro, haloalquilo de Ci-4, alquilo de C1-6, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, cicloalquilo de C3-7, arilo de C6-10 alquilo de C1-4, -OR5, -NR6R7, -(CRsRglnZi, -C(0)NR12R13, -SR14, -SOR15, -SO2R16, -NR17SO2R18, COOH, arilo de C6-10 el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo P, heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q, -COR19, -COOR20, -0C(O)R2i, -NR22C(0)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR26R27, -SO2NR28R29, -OSO2R30, -SO3R31, o -Si(R32)3; o Ri y R2, junto con un átomo unido a ellos, forman un heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros, en donde el heterociclilo o heteroarilo está opcionalmente sustituido por halógeno; R3 representa hidrógeno, alquilo de C1-5, arilo de C6-io alquilo de Ci-e, o haloalquilo de Ci-4; R4 representa hidrógeno, halógeno, alquilo de C1-3, haloalquilo de C1-4, hidroxi, ciano, nitro, alcoxi de Ci-4, ( CH2 ) hZi , -NR6R7 , — OR5 , -C (O) NR12R13 , - SR14 , - SOR15 , -SO2R16 , NR17SO2R18 , COOH, -COR19 , -COOR20 , -OC (O) R2i , -NR22C (0) R23 , -NR24C ( S ) R2S , -C ( S ) NR26R27 , -SO2NR28R29 , -OSO2R30 — SO3R31 , o -Si (R32 ) 3 ; A representa un anillo heteroarilo de 5 a 10 miembros o un anillo arilo de Ce-io; R5 representa alquilo de C1-5, cicloalquilo de C3-7, cicloalquilo de C3-7 alquilo de C1-3, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de C1-4, alcoxi de C1-3 alquilo de Ci-4, alcoxi de C1-3 alcoxi de C1-4 alquilo de C1-4, aminoalquilo de Ci-4, alquilamino de Ci-4 alquilo de Ci-4, di(alquil Ciclamino alquilo de C1-4, arilo de O-IO, arilo de Ce-io alquilo de C1-3, o heterociclilalquilo de C1-3 de 3 a 10 miembros, heterociclilo de 3 a 10 miembros, heteroarilo de 5 a 10 miembros, heteroarilalquilo de C1-3 de 5 a 10 miembros, monohidroxi alquilo de C1-6, dihidroxi alquilo de C1-6, o trihidroxi alquilo de Ci-6 el cual está opeionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; R¾ y R7, que son idénticos o diferentes, cada uno representa hidrógeno, alquilo de C1-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, alcoxi de C1-3 alquilo de C1-4, arilo de Ce-io alquilo de C1-3, heterociclilalquilo de C1-3 de 3 a 10 miembros, heteroarilalquilo de C1-3 de 5 a 10 miembros, monohidroxi alquilo de Ci-6, dihidroxi alquilo de Ci-6, trihidroxi alquilo de Ci-6, heterocielilo de 3 a 10 miembros, aminoalquilo de C1-4, alquilamino de C1-4 alquilo de C1-4, di(alquil Ci-4)amino alquilo de Ci-4, o ciano(alquilo de C1-3); o alternativamente R6 y R7, junto con un átomo de nitrógeno unido a ellos, forma heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros; n representa un número de 1 a 3; Re y R9, que son idénticos o diferentes, cada uno representa hidrógeno, alquilo de C1-4, o halógeno; o alternativamente, Rs y R9, junto con un átomo de carbono unido a ellos, forman un anillo cicloalifático,- Zi representa hidrógeno, NR10R11, -OH, o heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros el cual está opeionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; Rio y R11, que son idénticos o diferentes, cada uno representa alquilo de C1-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, alcoxi de C1-3 alquilo de C1-4, ciano (alquilo de C1-3), o alquilsulfonilo C1-3 alquilo de Ci-4; o alternativamente, Rio y R11, junto con un átomo de nitrógeno unido a ellos, forman un heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros; R12 y R13, que son idénticos o diferentes, cada uno representa hidrógeno, alquilo de C1-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de C1-4, alcoxi de C1-3 alquilo de Ci-4, arilo de C6-io, heteroarilo de 5 a 10 miembros, heterocielilo de 3 a 10 miembros, arilo de Ce-io alquilo de C1-4, heterociclilalquilo de C1-3 de 3 a 10 miembros, heteroarilalquilo de C1-3de 5 a 10 miembros, ciano(alquilo de C1-3), alquilsulfonilo C1-3 alquilo de Ci-4, anillo cicloalifático de 3 a 10 miembros, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; o alternativamente, R12 y R13, junto con un átomo de nitrógeno unido a ellos, forman un heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros el cual está opeionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; R14 representa alquilo de C1-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de C1-4, arilo de C6-10 el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo P, o heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; Ris representa alquilo de C1-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, arilo de C6-10 el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo P, o heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; Ri6 representa alquilo de Ci-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, arilo de C6-10 el cual está opeionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo P, o heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterocielilo de 3 a 10 miembros el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; R17 representa hidrógeno o alquilo de C1-4; Ríe representa alquilo de Ci-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de C1-4, arilo de C6-10 el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo P, o heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; R19 representa hidrógeno, alquilo de Ci-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de C1-4, arilo de C6-10, o heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; R20 representa alquilo de Ci-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de C1-4, arilo de Ce-io, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; R21 representa alquilo de Ci-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de C1-4, arilo de Ce-io, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterocielilo de 3 a 10 miembros; R22 representa hidrógeno, alquilo de C1-4, o haloalquilo de C1-4; R23 representa hidrógeno, alquilo de Ci-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de C1-4, arilo de Ce-io, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; R24 representa hidrógeno, alquilo de C1-4, o haloalquilo de C1-4; R25 representa alquilo de C1-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de C1-4, arilo de C6-io, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; R26 y R27, que son idénticos o diferentes, cada uno representa hidrógeno, alquilo de Ci-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de C1-4, alcoxi de C1-3 alquilo de C1-4, arilo de C6-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, heterociclilo de 3 a 10 miembros, arilo de Ce-io alquilo de C1-4, heterociclilalquilo de C1-3 de 3 a 10 miembros, heteroarilalquilo de C1-3de 5 a 10 miembros, ciano(alquilo de C1-3), alquilsulfonilo C1-3 alquilo de C1-4, o un anillo cicloalifático de 3 a 10 miembros; o alternativamente, R26 y R27, junto con un átomo de nitrógeno unido a ellos, forman un heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros ; R28 y R29, que son idénticos o diferentes, cada uno representa hidrógeno, alquilo de Ci-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de C1-4, alcoxi de C1-3 alquilo de C1-4, arilo de C6-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, heterocielilo de 3 a 10 miembros, arilo de Ce-io alquilo de C1-4, heterociclilalquilo de C1-3 de 3 a 10 miembros, heteroarilalquilo de C1-3de 5 a 10 miembros, ciano(alquilo de C1-3), alquilsulfonilo C1-3 alquilo de C1-4, o un anillo cicloalifático de 3 a 10 miembros; o alternativamente, R28 y R29, junto con un átomo de nitrógeno unido a ellos, forman un heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros; R30 representa alquilo de Ci-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de C1-4, arilo de C6-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; R31 representa alquilo de C1-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de Ci-4, arilo de Oe-o, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; R32 representa Ci-4 alquilo o arilo de Cg-10; <grupo P> halógeno, alquilo de C1-4, haloalquilo de C1-4, -OH, alcoxi de C1-3, haloalcoxi de C1-3, heterociclilamino de 3 a 10 miembros, -SO2R16, -CN, -NO2, y heterociclilo de 3 a 10 miembros; <grupo Q> halógeno, alquilo de Ci-4, haloalquilo de Ci-4, -OH, alcoxi de Ci-3, monohidroxi alquilo de Ci-6, dihidroxi alquilo de Ci-6, trihidroxi alquilo de Ci-6, heterocielilo de 3 a 10 miembros amino, -SO2R16, -CN, -NO2, cicloalquilo de C3-7, -CORig, y heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opeionalmente sustituido por alquilo de Ci-4; [Compuesto 2] [Compuesto 3] — [Compuesto 4] I Gr ^OH
30. El método de conformidad con la reivindicación 29, caracterizado porque el compuesto que tiene actividad inhibidora de FGFR o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo es un compuesto de fórmula (I) en donde A es indol, y R3 y R4 son ambos hidrógeno, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
31. Una composición farmacéutica para tratamiento de cáncer, caracterizada porque comprende un compuesto que tiene actividad inhibidora de FGFR o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y que se utiliza de manera tal que el compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se administra a un paciente quien expresa el polipéptido de fusión de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 o que tiene un polinucleótido que codifica para el polipéptido de fusión.
32. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 31 para tratamiento de cáncer, caracterizada porque el paciente se selecciona por el método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 26 a 30.
33. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 31 ó 32 para tratamiento de cáncer, caracterizada porque el cáncer es cáncer de vejiga, tumor cerebral, carcinoma de células escamosas de vías respiratorias y digestivas altas, cáncer de pulmón, adenocarcinoma de pulmón, carcinoma de células escamosas de pulmón, melanoma cutáneo, cáncer esofágico, cáncer gástrico o cáncer de hígado.
34. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 31 ó 32, caracterizada porque es para tratamiento de cáncer, en donde el cáncer es cáncer de vejiga.
35. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 34, para tratamiento de cáncer, caracterizada porque el cáncer de vejiga se clasifica como la etapa 3 o posterior, de acuerdo con la clasificación TNM.
36. La composición farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 31 a 35 para tratamiento de cáncer, caracterizada porque el compuesto que tiene actividad inhibidora de FGFR o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo es cualquiera de los compuestos o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo representada por: [Compuesto 1] (I) en donde Ri, R2, R3, y R4 cada uno representa independientemente el grupo que se lista a continuación: Ri representa hidrógeno, hidroxi, halógeno, ciano, nitro, haloalquilo de C1-4, alquilo de C1-6, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, cicloalquilo de C3-7, arilo de C6-10 alquilo de Ci-4, -OR5, -NR6R7, -(CRsRgJnZi, - C (O)NR12R13, -SR14, -SOR15, -S02Ri6, -NR17SO2R18, COOH, arilo de C6-10 el cual está opeionalmente sustituido por uno o más grupos seleccionados independientemente del grupo P, heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos seleccionados independientemente del grupo Q, -COR19, -COOR20, -OC(O)R21, -NR22C (O)R23, -NR24C(S)R25, C ( S ) R26R27 , - SO2NR28R29 , - OSO2R30 , - S 03 R3 I , O - S i ( R32 ) 3 ; R2 representa hidrógeno, hidroxi, halógeno, ciano, nitro, haloalquilo de C1-4, alquilo de C1-6, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, cicloalquilo de C3-7, arilo de C6-10 alquilo de C1-4, OR5, -NR6R7, -(CR8R9)nZi, -C(O)NRi2Ri3, -SR14, -SOR15, -SO2R16, -NR17SO2R18, COOH, arilo de Oe-io el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos seleccionados independientemente del grupo P, heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos seleccionados independientemente del grupo Q, -COR19, -COOR20, -OC(O)R2I, -NR22C (0) R23 , -NR24C (S) R25 , -C (S) NR26R27 , - S02NR28R29 , -OSO2R30 , - SO3R31 o - S i ( R32 ) 3 ; o Ri y R2, junto con un átomo unido a ellos, forman un heterocielilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros, donde el heterociclilo o heteroarilo está opeionalmente sustituido por halógeno; R3 representa hidrógeno, alquilo de C1-5, arilo de C6-10 alquilo de C1-6, o haloalquilo de Ci-4; R4 representa hidrógeno, halógeno, alquilo de C1-3, haloalquilo de Ci-4, hidroxi, ciano, nitro, alcoxi de Ci-4, - (CH2)nZi, -NR6R7, -OR5, -C(O)NRI2RI3, -SRI4, -SOR15, -S02Ri6, NR17SO2R18, COOH, -COR19, -COOR20, -OC(0)R21, -NR22C(O)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR26R27, -S02NR28R29, -OSO2R30-SO3R3i, O -Si (R32)3; A representa un anillo heteroarilo de 5 a 10 miembros o un anillo arilo de Ce-io; R5 representa alquilo de C1-5, cicloalquilo de C3-7, cicloalquilo de C3-7 alquilo de C1-3, alquenilo de C2-e, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, alcoxi de C1-3 alquilo de Ci-4, alcoxi de C1-3 alcoxi de Ci-4 alquilo de Ci-4, aminoalquilo de Ci-4, alquilamino de Ci-4 alquilo de Ci-4, di (alquil Ci-4)aminoalquilo de Ci-4, arilo de Ob-o, arilo de C6-10 alquilo de C1-3, o heterociclilalquilo de C1-3 de 3 a 10 miembros, heterociclilo de 3 a 10 miembros, heteroarilo de 5 a 10 miembros, heteroarilalquilo de C1-3 de 5 a 10 miembros, monohidroxi alquilo de Ci-6, dihidroxi alquilo de Ci-6, o trihidroxi alquilo de Ci-6 el cual está opeionalmente sustituido por uno o más grupos seleccionados independientemente del grupo Q; R.6 y R7, que son idénticos o diferentes, cada uno representa hidrógeno, alquilo de C1-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de C1-4, alcoxi de C1-3 alquilo de Ci-4, arilo de Ce-io alquilo de C1-3, heterocielilalquilo de C1-3 de 3 a 10 miembros, heteroarilalquilo de Ci-3 de 5 a 10 miembros, monohidroxi alquilo de C1-6, dihidroxi alquilo de C1-6, trihidroxi alquilo de C1-6, heterociclilo de 3 a 10 miembros, aminoalquilo de C1-4, alquilamino de Ci-4 alquilo de C1-4, di(alquil C1-4)aminoalquilo de Ci-4, o ciano(alquilo de C1-3); o alternativamente R6 y R7, junto con un átomo de nitrógeno unido a ellos, forman un heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros; n representa un número de 1 a 3; Rs y R9, que son idénticos o diferentes, cada uno representa hidrógeno, C1-4 alquilo, o halógeno; o alternativamente, Rs y R9, junto con un átomo de carbono unido a ellos, forman un anillo cicloalifático; Zi representa hidrógeno, NR10R11, hidroxilo, o heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; Rio y Rii, que son idénticos o diferentes, cada uno representa alquilo de Ci-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de C1-4, alcoxi de C1-3 alquilo de Ci-4, ciano(alquilo de C1-3), o alquilsulfonilo C1-3 alquilo de C1-4; o alternativamente, Rio y R11, junto con un átomo de nitrógeno unido a ellos, forman un heterocielilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros,· R12 y R13, que son idénticos o diferentes, cada uno representa hidrógeno, alquilo de C1-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, alcoxi de C1-3 alquilo de C1-4, arilo de Ce-io, heteroarilo de 5 a 10 miembros, heterociclilo de 3 a 10 miembros, arilo de Ce-io alquilo de C1-4, heterociclilalquilo de C1-3 de 3 a 10 miembros, heteroarilalquilo de C1-3de 5 a 10 miembros, ciano(alquilo de C1-3), alquilsulfonilo C1-3 alquilo de C1-4, anillo cicloalifático de 3 a 10 miembros, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; o alternativamente, R12 y R13, junto con un átomo de nitrógeno unido a ellos, forman un heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros el cual está opeionalmente sustituido por uno o más grupos seleccionados del grupo Q; R14 representa alquilo de C1-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de C1-4, arilo de C6-10 el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos seleccionados del grupo P, o heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterocielilo de 3 a 10 miembros el cual está opeionalmente sustituido por uno o más grupos seleccionados independientemente del grupo Q; R15 representa alquilo de Ci-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, arilo de Ce-io el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos seleccionados independientemente del grupo P, o heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos seleccionados independientemente del grupo Q; Ri6 representa alquilo de C1-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C-6 haloalquilo de Ci-4, arilo de Ce-io el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos seleccionados independientemente del grupo P, o heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos seleccionados independientemente del grupo Q; R17 representa hidrógeno o Ci-4 alquilo; Ría representa alquilo de Ci-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, arilo de C6-10 el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos seleccionados independientemente del grupo P, o heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opcionalmente sustituido por un grupo(s) seleccionado independientemente del grupo Q; R19 representa hidrógeno, alquilo de C1-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de C1-4, arilo de C6-10, o heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opeionalmente sustituido por uno o más grupos seleccionados independientemente del grupo Q; R20 representa alquilo de C1-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de C1-4, arilo de C6-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; R21 representa alquilo de Ci-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de C1-4, arilo de C6-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; R22 representa hidrógeno, alquilo de C1-4, o haloalquilo de C1-4; R23 representa hidrógeno, alquilo de C1-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de C1-4, arilo de C6-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; R24 representa hidrógeno, alquilo de C1-4, o haloalquilo de C1-4; R25 representa alquilo de C1-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de C1-4, arilo de C6-io, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; R26 y R27, que son idénticos o diferentes, cada uno representa hidrógeno, alquilo de C1-4, alquenilo de C2-6 alquinilo de C2-6, haloalquilo de C1-4, alcoxi de C1-3 alquilo de Ci-4, arilo de C6-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, heterocielilo de 3 a 10 miembros, arilo de C6-io alquilo de C1-4, heterociclilalquilo de C1-3 de 3 a 10 miembros, heteroarilalquilo de C1-3de 5 a 10 miembros, ciano(alquilo de C1-3), alquilsulfonilo C1-3 alquilo de C1-4, o anillo cicloalifático de 3 a 10 miembros; o alternativamente, R26 y R27, junto con un átomo de nitrógeno unido a ellos, forman un heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros; R28 y R29, que son idénticos o diferentes, cada uno representa hidrógeno, alquilo de C1-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6 haloalquilo de C1-4, alcoxi de C1-3 alquilo de C2-4 arilo de Ce-io, heteroarilo de 5 a 10 miembros, heterociclilo de 3 a 10 miembros, arilo de C6-io alquilo de C1-4, heterociclilalquilo de C1-3, de 3 a 10 miembros, heteroarilalquilo de C1-3de 5 a 10 miembros, ciano(alquilo de C1-3), alquilsulfonilo C1-3 alquilo de Ci-4, o anillo cicloalifático de 3 a 10 miembros; o alternativamente, R28 y R29, junto con un átomo de nitrógeno unido a ellos, forman un heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros; R30 representa alquilo de C1-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de C1-4, arilo de C6-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; R31 representa alquilo de C1-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de Ci-4, arilo de C6-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterocielilo de 3 a 10 miembros; R32 representa alquilo de Ci-4 o arilo de C6-10; <grupo P> halógeno, alquilo de Ci-4, haloalquilo de Ci-4, -OH, alcoxi de C1-3, haloalcoxi de C1-3, de heterociclilamino de 3 a 10 miembros, -SO2R16, -CN, -NO2, y heterociclilo de 3 a 10 miembros; <grupo Q> halógeno, alquilo de Ci-4, haloalquilo de Ci-4, -OH, alcoxi de C1-3, monohidroxialquilo de C1-3, dihidroxialquilo de Ci-6, trihidroxialquilo de C1-6, heterociclilamina de 3 a 10 miembros, -SO2R16, -CN, -NO2, cicloalquilo de C3-7, -COR19, y heterociclilo de 3 a 10 miembros, el cual está opeionalmente sustituido por alquilo de Ci-4. [Compuesto 2] [Compuesto 3] — [Compuesto 4] [Compuesto 5] [Compuesto 6] H - C ^OH
37. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 36 para tratamiento de cáncer, caracterizada porque el compuesto que tiene actividad inhibidora de FGFR o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo es un compuesto de fórmula (I), en donde A es indol, y R3 y R4 son ambos hidrógeno o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
38. Un método para tratar o prevenir cáncer, caracterizado porque comprende la etapa de administrar una cantidad eficaz de un compuesto que tiene actividad inhibidora de FGFR o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo a un paciente con cáncer que expresa el polipéptido de fusión de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 o que presenta un polinucleótido que codifica para el polipéptido de fusión.
39. El método de conformidad con la reivindicación 38, caracterizado porque el paciente se selecciona por el método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 26 a 30.
40. El método de conformidad con la reivindicación 38 ó 39, caracterizado porque el cáncer es cáncer de vejiga, tumor cerebral, carcinoma de células escamosas de vías respiratorias y digestivas altas, cáncer de pulmón, adenocarcinoma de pulmón, carcinoma de células escamosas de pulmón, melanona cutáneo, cáncer esofágico, cáncer gástrico o cáncer de hígado.
41. El método de conformidad con la reivindicación 38 ó 39, caracterizado porque el cáncer es cáncer de vejiga.
42. El método de conformidad con la reivindicación 41, caracterizado porque el cáncer de vejiga se clasifica como etapa 3 o posterior, de acuerdo con la clasificación TNM.
43. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 38 a 42, caracterizado porque el compuesto que tiene actividad inhibidora de FGFR o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo es cualquiera de los compuestos o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo representada por: [Compuesto 1] en donde Ri, R2, R3 y R4, cada uno, representa independientemente el grupo que se lista a continuación: Ri representa hidrógeno, hidroxi, halógeno, ciano, nitro, haloalquilo de C1-4, alquilo de C1-6, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, cicloalquilo de C3-7, arilo de C6-io alquilo de C1-4, -OR5, -NR6R7, -(CR8R9)nZi, -C(O)NR12R13, -SRi4< -SORis, -SO2R16 -NR17SO2R18, COOH, arilo de C6-10 si cual está opeionalmente sustituido con uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo P, heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterociclilo de 3 a 10 miembros cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q, -COR19, -COOR20, -OC(O)R21, -NR22C(O)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR26R27, -SO2NR28R29 -OSO2R30, -SO3R31 o -Si(R32)3/ R2 representa hidrógeno, hidroxi, halógeno, ciano, nitro, haloalquilo de Ci-4, alquilo de C1-6, alquenilo de C2-5 alquinilo de C2-6, cicloalquilo de C3-7, arilo de Ce-io alquilo de Ci-4, -ORs, -NR6R7, -(CR8R9)nZi, -C(O)NR12R13 -SR14, -SOR15, -SO2R16, -NR17SO2R18, COOH, arilo de C6-10 el cual está opeionalmente sustituido con uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo P, heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterocielilo de 3 a 10 miembros cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q, -COR19, -COOR20, -OC(0)R21, -NR22C(O)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR2SR27, -SO2NR28R29, -OSO2R30, -SO3R31, o -Si(R32)3; o Ri y R2 tomados junto con los átomos a los cuales se encuentran unidos para formar un heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros, en donde el heterociclilo o heteroarilo pueden estar opcionalmente sustituido por un átomo de halógeno; R3 representa hidrógeno, alquilo de C1-5, arilo de C6-10 alquilo de C1-6, o haloalquilo de Ci-4· R4 representa hidrógeno, halógeno, alquilo de C1-3, haloalquilo de C1-4, hidroxi, ciano, nitro, alcoxi de C1-4, -(CH2)nZi, -NR6R7, -ORs, -C(O)NRi2Ri3, -SRI4, -SOR15, -S02Rie, NR17SO2R18, COOH, -COR19, -COOR20, -OC(0)R21, -NR22C(0)R23, -NR24C(S)R2S, -C(S)NR26R27, -SO2NR28R29, -OSO2R30-SO3R31, o -Si (R32)3; El anillo A está representado por un anillo heteroarilo de 5 a 10 miembros o un anillo arilo de C6-10; R5 representa alquilo de C1-5, cicloalquilo de C3-7, cicloalquilo de C3-7 alquilo de Cx-3, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de C1-4, alcoxi de C1-3 alquilo de Ci-4, alcoxi de C1-3 alcoxi de C1-4 alquilo de Ci-4; aminoalquilo de C1-4, alquilamino de Ci-4 alquilo de Ci-4, di (alquil Ci-4)aminoalquilo de Ci-4/ arilo de Ce-io, arilo de e lo alquilo de Ci-3, o heterociclilalquilo de Ci-3 de 3 a 10 miembros, heterociclilo de 3 a 10 miembros, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heteroarilalquilo de C1-3 de 5 a 10 miembros, monohidroxialquilo de Ci-e, dihidroxialquilo de C1-6, o trihidroxialquilo de C1-6, cada uno de los cuales está opeionalmente sustituido con uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; R6 y R7 pueden ser idénticos o diferentes, cada uno representa hidrógeno, alquilo de Ci-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, alcoxi de C1-3 alquilo de Ci-4, arilo de Ce-10 alquilo de C1-3, heterociclilalquilo de C1-3 de 3 a 10 miembros, heteroarilalquilo de C1-3 de 5 a 10 miembros, monohidroxialquilo de Ci-s, dihidroxialquilo de C1-6, trihidroxialquilo de Ci-e, heterociclilo de 3 a 10 miembros, aminoalquilo de Ci-4, alquilamino de Ci-4 alquilo de Ci-4, di(alquil de C1-4)aminoalquilo de Ci-4, o ciano(alquilo de C1-3), alternativamente, R6 y R7 pueden ser tomados junto con un átomo de nitrógeno unido al mismo, para formar un heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros; "n" representa un número entero de l a 3; Re y Rs pueden ser idénticos o diferentes, cada uno representa hidrógeno; o alternativamente, Rs y Rs tomados junto a los átomos de carbono a los cuales se encuentran unidos para formar un anillo alicíclico; Zi representa hidrógeno, NRioRn, -OH, o un heterocielilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros cada uno de los cuales está opeionalmente sustituido con uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q, Rio y Rn pueden ser idénticos o diferentes, y cada uno de ellos representa alquilo de Ci-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, alcoxi de C1-3 alquilo de C1-.4, ciano(alquilo de C1-3), o alquilsulfonilo C1-3 alquilo de C1-4, alternativamente, Rio y Rn junto con un átomo de nitrógeno a los cuales se encuentran unidos para formar un heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros; R12 y R13 pueden ser idénticos o diferentes, y cada uno representa hidrógeno, alquilo, C1-4, alquenilo de C2-s, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, alcoxi de Ci-3 alquilo de C1-4, arilo de C6-io, heteroarilo de 5 a 10 miembros, heterociclilo de 3 a 10 miembros, arilo de C6-10 alquilo de C1-4, heterociclilalquilo de C1-3 de 3 a 10 miembros, heteroarilalquilo de C1-3de 5 a 10 miembros, ciano(alquilo de Ci-3), alquilsulfonilo C1-3 alquilo de Ci-4, un anillo cicloalifático de 3 a 10 miembros, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclo de 3 a 10 miembros o alternativamente, R12 y R13 pueden ser tomados junto con un átomo de nitrógeno a los cuales se encuentran unidos para formar un heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros cada uno de los cuales está opeionalmente sustituido con uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; R14 representa alquilo de C1-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquílo de Ci-4, arilo de C6-10 el cual está opcionalmente sustituido con uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo P, o heteroarilo de 5 a 10 miembros o un heterociclilo de 3 a 10 miembros cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; Ris representa alquilo de C1-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquílo de Ci-4, arilo de Ce-io el cual está opcionalmente sustituido con uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo P, o heteroarilo de 5 a 10 miembros o un heterociclilo de 3 a 10 miembros cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; RI6 representa alquilo de Ci-4, alquenilo de C2-6 alquinilo de C2-6, haloalquílo de Ci-4, arilo de C6-io el cual está opeionalmente sustituido con uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo P, o un heteroarilo de 5 a 10 miembros o un heterocielilo de 3 a 10 miembros cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; Ri7 representa preferentemente hidrógeno o alquilo de Ci-4; Ríe representa alquilo de Ci-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de C1-4, arilo de C6-10 el cual está opcionalmente sustituido con uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo P, o un heteroarilo de 5 a 10 miembros o un heterociclilo de 3 a 10 miembros cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; R19 representa hidrógeno, alquilo de Ci-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de Ci-4, arilo de C6-io, o heteroarilo de 5 a 10 miembros o un heterociclilo de 3 a 10 miembros cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; R20 representa alquilo de Ci-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de Ci-4, arilo de Cs-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o un heterociclilo de 3 a 10 miembros; R2I representa alquilo de Ci-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de C1-4, arilo de C6-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o un heterociclilo de 3 a 10 miembros; R22 representa hidrógeno, alquilo de Ci-4, o haloalquilo de Ci-4; R23 representa hidrógeno, alquilo de C1-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de C1-4, arilo de Ce-io, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o un heterociclilo de 3 a 10 miembros; R24 representa hidrógeno, alquilo de C1-4, o haloalquilo de Ci-4; R25 representa alquilo de Ci-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de Ci-4, arilo de C6-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o un heterociclilo de 3 a 10 miembros; R26 y R27pueden ser idénticos o diferentes, cada uno representa hidrógeno, alquilo de Ci-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de C1-4, alcoxi de C1-3 alquilo de Ci-4, arilo de C6-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, heterociclilo de 3 a 10 miembros, arilo de C6-10 alquilo de C1-4, heterociclilalquilo de C1-3 de 3 a 10 miembros, heteroarilalquilo de C1-3de 5 a 10 miembros, ciano(alquilo de C1-3) alquilsulfonilo Ci-3 alquilo de Ci-4, o un anillo alicíclico de 3 a 10 miembros; alternativamente, R26 y R27 junto a los átomos de nitrógeno a los cuales se encuentran unidos para formar un heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros; R28 y R29 pueden ser idénticos o diferentes, y cada uno representa hidrógeno, alquilo de Ci-4, alquenilo de C2-e, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, alcoxi de C1-3 alquilo de C1-4, arilo de C6-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, heterocielilo de 3 a 10 miembros, arilo de Cs-10 alquilo de Ci-4, heterociclilalquilo de Ci-3 de 3 a 10 miembros, heteroarilalquilo de C1-3de 5 a 10 miembros, ciano(alquilo de C1-3), alquilsulfonilo de C1-3 alquilo de Ci-4, o un anillo cicloalifático de 3 a 10 miembros o alternativamente, R2e y R29junto a los átomos de nitrógeno a los cuales se encuentran unidos para formar un heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros, R30 representa alquilo de Ci-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de Ci-4, arilo de C6-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; R31 representa alquilo de Ci-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de Ci-4, arilo de Ce-io, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; R32 representa alquilo de Ci-4, o arilo de C6-10; <Grupo P> Los sustituyentes preferidos incluidos en el grupo P definido arriba son halógeno, alquilo de Ci-4, haloalquilo de Ci-4, -OH, alcoxi de C1-3, haloalcoxi de C1-3, heterociclilamino de 3 a 10 miembros, -SO2R, -CN, -NO2, y heterocielilo de 3 a 10 miembros; <Grupo Q> halógeno, alquilo de Ci-4, haloalquilo de Ci-4, -OH, alcoxi de Ci-3, monohidroxialquilo de Ci-6, dihidroxialquilo de Ci-6, trihidroxialquilo de Ci-6, heterociclilamino de 3 a 10 miembros, -S02Ri6, -CN, -NO2, cicloalquilo de C3-7, -COR19, y heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opeionalmente sustituido con alquilo de Ci-4; [Compuesto 2] [Compuesto 3] — [Compuesto 4]
44. El método de conformidad con la reivindicación 43, caracterizado porque el compuesto que tiene actividad inhibidora de FGFR o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo es un compuesto de fórmula (I) en donde A es indol, y R3 y R4 son ambos hidrógeno, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
45. El uso de un compuesto que tiene actividad inhibidora de FGFR o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la elaboración de una composición farmacéutica para tratamiento de cáncer que se va a administrar a un paciente que expresa el polipéptido de fusión de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 o que presenta un polinucleótido que codifica para el polipéptido de fusión.
46. El uso de conformidad con la reivindicación 45, en donde el paciente se selecciona por el método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 26 a 30.
47. El uso de conformidad con la reivindicación 45 ó 46, en donde el cáncer es cáncer de vejiga, tumor cerebral, carcinoma de células escamosas de vías respiratorias y digestivas altas, cáncer de pulmón, adenocarcinoma de pulmón, carcinoma de células escamosas de pulmón, melanoma cutáneo, cáncer esofágico, cáncer gástrico o cáncer de hígado.
48. El uso de conformidad con la reivindicación 45 o 46, en donde el cáncer es cáncer de vejiga.
49. El uso de conformidad con la reivindicación 48, en donde el cáncer de vejiga se clasifica como etapa 3 o posterior, de acuerdo con la clasificación TNM.
50. El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 45 a 49, en donde el compuesto que tiene actividad inhibidora de FGFR o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo es cualquiera de los compuestos o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo representado por: [Compuesto 1] (I) en donde Ri, R2, R3, y R4 cada uno representa independientemente el grupo que se lista a continuación: Ri representa hidrógeno, hidroxi, halógeno, ciano, nitro, haloalquilo de Ci-4, alquilo de Ci-6, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-e, cicloalquilo de C3-7, arilo de C6-io alquilo de C1-4, -OR5, -NReRv, -(CR8R9)nZi, -C(0)NR12R13, -SR14, -SOR15, -SO2R16, -NR17SO2R18, COOH, arilo de C6-io el cual está opeionalmente substituido por uno o más grupos seleccionados independientemente del grupo P, heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterocielilo de 3 a 10 miembros el cual está opeionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q, -CORig, -COOR20, -OC(O)R21, -NR22C(O)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR26R27, -SO2NR28R29, -OSO2R30I -SO3R31, o -Si(R32)3; R2 representa hidrógeno, hidroxi, halógeno, ciano, nitro, haloalquilo de C1-4, alquilo de C1-6, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, cicloalquilo de C3-7, arilo de C6-10 alquilo de C1-4, -OR5, -NR6R7, -(CR8R9)nZi, -C (O)NRi2Ri3, -SR14, -SOR15, -S02Ri6, -NRI7S02RI8, COOH, arilo de Ce-io el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo P, heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q, -COR19, -COOR20, -0C(O)R2I, -NR22C (0)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR26R27, -S02NR28R29, -OS02R3O, -SO3R31, o -Si(R32)3; O RI y R2, junto con un átomo unido a ellos, forman un heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros, en donde el heterociclilo o heteroarilo está opcionalmente sustituido por halógeno; R3 representa hidrógeno, alquilo de C1-5, arilo de Ce-io alquilo de C1-6, o haloalquilo de C1-4; R4 representa hidrógeno, halógeno, alquilo de C1-3, haloalquilo de C1-4 , hidroxi , ciano , nitro , alcoxi de C1-4 , _ ( CH2 ) nZi , -NR6R7 , -OR5 , -C (O) NR12R13 , -SR14 , -SOR15 , -SO2R16 , NR17SO2R18 , COOH, -COR19 , -COOR20 , -0C (0) R21 , -NR22C (0) R23 , -NR24C ( S ) R25 , -C ( S) NR26R27 , -SO NR28R29 , -OSO2R30 , - S03R3I , o -Si (R32 ) 3 ; A representa un anillo heteroarilo de 5 a 10 miembros o un anillo arilo de C6-10; R5 representa alquilo de Ci-5, cicloalquilo de C3-7, cicloalquilo de C3-7 alquilo de C1-3, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de C1-4, alcoxi de C1-3 alquilo de C1-4, alcoxi de C1-3 alcoxi de Ci-4 alquilo de C1-4, aminoalquilo de C1-4, alquilamino de C1-4 alquilo de C1-4, di(alquil C1-4)amino alquilo de C1-4, arilo de C6-10, arilo de C6-io alquilo de C1-3, o heterociclilalquilo de C1-3 de 3 a 10 miembros, heterociclilo de 3 a 10 miembros, heteroarilo de 5 a 10 miembros, heteroarilalquilo de C1-3 de 5 a 10 miembros, monohidroxi alquilo de Ci-6, dihidroxi alquilo de Ci-b, o trihidroxi alquilo de C1-6 el cual está opeionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; R6 y R7, que son idénticos o diferentes, cada uno representa hidrógeno, alquilo de C1-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, alcoxi de C1-3 alquilo de C1-4 arilo de Ce-io alquilo de C1-3, heterociclilalquilo de C1-3 de 3 a 10 miembros, heteroarilalquilo de C1-3 de 5 a 10 miembros, monohidroxi alquilo de Ci-6, dihidroxi alquilo de Ci-6, trihidroxi alquilo de Ci-6, heterocielilo de 3 a 10 miembros, aminoalquilo de C1-4, alquilamino de C1-4 alquilo de C1-4, di(alquil Ci-4)amino alquilo de C1-4, o ciano(alquilo de C1-3); o alternativamente R6 y R7, junto con un átomo de nitrógeno unido a ellos, forma heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros; n representa un número de 1 a 3; Re y R9, que son idénticos o diferentes, cada uno representa hidrógeno, alquilo de C1-4, o halógeno; o alternativamente, Rs y R9, junto con un átomo de carbono unido a ellos, forman un anillo cicloalifático; Zi representa hidrógeno, NR10R11, -OH, o heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros el cual está opeionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; Rio y Rn, que son idénticos o diferentes, cada uno representa alquilo de C1-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de C1-4, alcoxi de C1-3 alquilo de C1-4, ciano (alquilo de C1-3), o alquilsulfonilo C1-3 alquilo de C1-4; o alternativamente, Rio y R11, junto con un átomo de nitrógeno unido a ellos, forman un heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros; R12 y R13, que son idénticos o diferentes, cada uno representa hidrógeno, alquilo de C1-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de C1-4, alcoxi de C1-3 alquilo de C1-4, arilo de C6-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, heterocielilo de 3 a 10 miembros, arilo de Ce-io alquilo de C1-4, heterociclilalquilo de C1-3 de 3 a 10 miembros, heteroarilalquilo de C1-3de 5 a 10 miembros, ciano(alquilo de C1-3), alquilsulfonilo C1-3 alquilo de C1-4, anillo cicloalifático de 3 a 10 miembros, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; o alternativamente, R12 y R13, junto con un átomo de nitrógeno unido a ellos, forman un heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros el cual está opeionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; R14 representa alquilo de Ci-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de C1-4, arilo de Ce-io el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo P, o heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; R15 representa alquilo de C1-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de C1-4, arilo de C6-10 el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo P, o heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opeionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; Ri6 representa alquilo de C1-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, arilo de Ce-io el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo P, o heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterocielilo de 3 a 10 miembros el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; R17 representa hidrógeno o alquilo de Ci-4; Ris representa alquilo de Ci-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, arilo de Cs-10 el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo P, o heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; R19 representa hidrógeno, alquilo de Ci-4/ cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de Ci-4, arilo de C6-10, o heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; R20 representa alquilo de Ci-4/ cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de Ci-4, arilo de C6-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; R.21 representa alquilo de Ci-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de Ci_4, arilo de Ce-io, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; R22 representa hidrógeno, alquilo de C1-4, o haloalquilo de Ci-4; R23 representa hidrógeno, alquilo de C1-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de Ci-4, arilo de C6-io, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; R24 representa hidrógeno, alquilo de Ci-4, o haloalquilo de Ci-4; R25 representa alquilo de Ci-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de Ci-4, arilo de C6-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; R26 y R27, que son idénticos o diferentes, cada uno representa hidrógeno, alquilo de Ci-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, alcoxi de C1-3 alquilo de Ci-4, arilo de Ce-io, heteroarilo de 5 a 10 miembros, heterociclilo de 3 a 10 miembros, arilo de Ce-io alquilo de Ci-4, heterociclilalquilo de C1-3 de 3 a 10 miembros, heteroarilalquilo de C1-3de 5 a 10 miembros, ciano(alquilo de C1-3), alquilsulfonilo C1-3 alquilo de Ci-4, o un anillo cicloalifático de 3 a 10 miembros; o alternativamente, R26 y R27, junto con un átomo de nitrógeno unido a ellos, forman un heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros; R28 y R29, que son idénticos o diferentes, cada uno representa hidrógeno, alquilo de C1-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de C1-4, alcoxi de C1-3 alquilo de C1-4, arilo de Ob-io, heteroarilo de 5 a 10 miembros, heterocielilo de 3 a 10 miembros, arilo de Ce-io alquilo de Ci-4, heterociclilalquilo de C1-3 de 3 a 10 miembros, heteroarilalquilo de C1-3de 5 a 10 miembros, ciano(alquilo de C1-3), alquilsulfonilo C1-3 alquilo de Ci-4, o un anillo cicloalifático de 3 a 10 miembros; o alternativamente, R28 y R29, junto con un átomo de nitrógeno unido a ellos, forman un heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros; R30 representa alquilo de C1-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de Ci-4, arilo de C6-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; R31 representa alquilo de Ci-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de C1-4, arilo de C6-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; R32 representa C1-4 alquilo o arilo de C6-10; <grupo P> halógeno, alquilo de Ci-4, haloalquilo de Ci-4, -OH, alcoxi de Ci-3, haloalcoxi de C1-3, heterociclilamino de 3 a 10 miembros, -SO2R16, -CN, -NO2, y heterociclilo de 3 a 10 miembros; <grupo Q> halógeno, alquilo de Ci-4, haloalquilo de C1-4, -OH, alcoxi de C1-3, monohidroxi alquilo de C1-6, dihidroxi alquilo de C1-6, trihidroxi alquilo de C1-6, heterocielilo de 3 a 10 miembros amino, -SO2R16, -CN, -NO2, cicloalquilo de C3-7, -COR19, y heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opeionalmente sustituido por alquilo de C1-4; [Compuesto 2] [Compuesto 3] — [Compuesto 4 O^^OH
51 . El uso de conformidad con la reivindicación 50, en donde el compuesto que tiene actividad inhibidora de FGFR o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo es un compuesto de fórmula (I), en donde A es indol, y R3 y R son ambos hidrógeno o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
52. Un compuesto que tiene actividad inhibidora de FGFR o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para usarse como terapéutico o profiláctico en un paciente con cáncer que expresa el polipéptido de fusión de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 o que presenta un polinucleótido que codifica para el polipéptido de fusión.
53. El compuesto o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo de conformidad con la reivindicación 52, en donde el paciente se selecciona por el método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 26 a 30.
54. El compuesto o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo de conformidad con la reivindicación 52 ó 53, en donde el cáncer es cáncer de vejiga, tumor cerebral, carcinoma de células escamosas de vías respiratorias y digestivas altas, cáncer de pulmón, adenocarcinoma de pulmón, carcinoma de células escamosas de pulmón, melanoma cutáneo, cáncer esofágico, cáncer gástrico o cáncer de hígado.
55. El compuesto o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo de conformidad con la reivindicación 52 ó 53, en donde el cáncer es cáncer de vejiga.
56. El compuesto o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo de conformidad con la reivindicación 55, en donde el cáncer de vejiga se clasifica como etapa 3 o posterior de acuerdo con la clasificación TNM.
57. El compuesto o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 52 a 56, en donde el compuesto que tiene actividad inhibidora de FGFR o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo es cualquiera de los compuestos o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo representada por: [Compuesto 1] en donde Ri, R2, R3, y R4 cada uno representa independientemente el grupo que se lista a continuación: Ri representa hidrógeno, hidroxi, halógeno, ciano, nitro, haloalquilo de Ci-4, alquilo de C1-6, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, cicloalquilo de C3-7, arilo de Ce-io alquilo de C1-4, -OR5, -NR6R7, -(CR8R9)nZi, -C(O)NRi2Ri3, -SR14, -SOR15, -SO2R16, -NR17SO2R18, COOH, arilo de C6-io el cual está opeionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo P, heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q, -COR19, -COOR20, -OC(O)R21, -NR22C(O)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR26R27, -SO2NR28R29, -OSO2R30, -SO3R31, o Si(R32)3; R2 representa hidrógeno, hidroxi, halógeno, ciano, nitro, haloalquilo de Ci-4, alquilo de C1-6, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, cicloalquilo de C3-7, arilo de C6-10 alquilo de C1-4, -ORs, -NR6R7, -(CR8R9)nZi, -C(O)NRi2Ri3, -SR14, -SORIS, -SO2R16, -NR17SO2R18, COOH, arilo de C6-io el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo P, heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q, -COR19, -COOR20, -OC(O)R21, -NR22C(O)R23, -NR24C(S)R25, -C(S)NR26R27, -SO2NR28R29, -OSO2R30, -SO3R31 o -Si(R32)3; o Ri y R2, junto con un átomo unido a ellos, forman un heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros, donde el heterociclilo o heteroarilo está opeionalmente sustituido por halógeno; R3 representa hidrógeno, alquilo de C1-5, arilo de C6-10 alquilo de Ci-e, o haloalquilo de Ci-4; R4 representa hidrógeno , halógeno , alquilo de C1-3 , haloalquilo de Ci-4 , hidroxi , ciano , nitro , alcoxi de Ci-4 , - ( CH2 ) nZl , -NR6 7 , -OR5 , - C (O) NR12R13 , - SRI4 , -SOR15 , -SO2R16 , NR17SO2R18 , COOH , - COR g , -COOR20 , -OC (O) R21 , -NR22C (0) R23 , -NR24C ( S ) R25 , - C ( S ) NR26R27 , -SO2NR28R29 , -OSO2R30 , S03R31 , O -Si (R32 ) 3 ; A representa un anillo heteroarilo de 5 a 10 miembros o un anillo arilo de C6-10; Rs representa alquilo de C1-5, cicloalquilo de C3-7, cicloalquilo de C3-7 alquilo de C1-3, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci4, alcoxi de Ci-3 alquilo de C2-4, alcoxi de C1-3 alcoxi de C2-4 alquilo de C2-4, aminoalquilo de Ci-4, alquilamino de Ci-4 alquilo de Ci-4, di(alquil C3.-4)aminoalquilo de C2-4, arilo de Ce-io, arilo de C6-10 alquilo de C1-3, o heterociclilalquilo de C1-3 de 3 a 10 miembros, heterociclilo de 3 a 10 miembros, heteroarilo de 5 a 10 miembros, heteroarilalquilo de C1-3 de 5 a 10 miembros, monohidroxi alquilo de Ci-6, dihidroxi alquilo de Ci-b, o trihidroxi alquilo de C1-6 el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; R6 y R7, que son idénticos o diferentes, cada uno representa hidrógeno, alquilo de Ci-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, alcoxi de Ci-3 alquilo de Ci-4, arilo de C6-10 alquilo de C1-3, heterocielilalquilo de C1-3 de 3 a 10 miembros, heteroarilalquilo de C1-3 de 5 a 10 miembros, monohidroxi alquilo de Ci-6, dihidroxi alquilo de Ci-e, trihidroxi alquilo de C2-s, heterociclilo de 3 a 10 miembros, aminoalquilo de C2-4, alquilamino de Ci-4 alquilo de C1-4, di(alquil Ci-4)aminoalquilo de Ci-4, o ciano(alquilo de Ci-3); o Re y R?, junto con un átomo de nitrógeno unido a ellos, forman un heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros; n representa un número de 1 a 3; Rs y R9, que son idénticos o diferentes, cada uno representa hidrógeno, Ci-4 alquilo, o halógeno; o alternativamente, Rs y R9, junto con un átomo de carbono unido a ellos, forman un anillo cicloalifático; Zi representa hidrógeno, NR10R11, hidroxilo, o heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros el cual está opeionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; Rio y Rn, que son idénticos o diferentes, cada uno representa alquilo de C1-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, alcoxi de C1-3 alquilo de Ci-4, ciano(alquilo de C1-3), o alquilsulfonilo C1-3 alquilo de Ci-4,· o alternativamente, Rio y R11, junto con un átomo de nitrógeno unido a ellos, forman un heterocielilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros; R12 y R13, que son idénticos o diferentes, cada uno representa hidrógeno, alquilo de Ci-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, alcoxi de C1-3 alquilo de C2-4, arilo de Cs-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, heterociclilo de 3 a 10 miembros, arilo de C6-10 alquilo de Ci-4, heterociclilalquilo de Ci-3 de 3 a 10 miembros, heteroarilalquilo de Ci-3de 5 a 10 miembros, ciano(alquilo de Ci-3), alquilsulfonilo Ci-3 alquilo de Ci-4, anillo cicloalifático de 3 a 10 miembros, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; o alternativamente, R12 y Ría, junto con un átomo de nitrógeno unido a ellos, forman un heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros el cual está opeionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; Ri4 representa alquilo de Ci-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, arilo de C6-10 el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo P, o heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; R15 representa alquilo de Ci-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, arilo de Cs-io el cual está opeionalmente sustituido por uno o m s grupos independientemente seleccionados del grupo P, o heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterocielilo de 3 a 10 miembros el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; Ri6 representa alquilo de C1-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, arilo de Ce-io el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo P, o heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; R17 representa hidrógeno o C1-4 alquilo; Ris representa alquilo de C1-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C1-6, haloalquilo de Ci-4, arilo de Ce-io el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo P, o heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opcionalmente sustituido por un grupo (s) independientemente seleccionado del grupo Q; Ris representa hidrógeno, alquilo de C1-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de C1-4, arilo de C6-10, o heteroarilo de 5 a 10 miembros o heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opcionalmente sustituido por uno o más grupos independientemente seleccionados del grupo Q; R20 representa alquilo de C1-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de Ci-4, arilo de Ce-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; R21 representa alquilo de C1-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de Ci-4, arilo de C6-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; R22 representa hidrógeno, alquilo de C1-4, o haloalquilo de Ci-4; R23 representa hidrógeno, alquilo de C1-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de Ci-4, arilo de C6-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; R24 representa hidrógeno, alquilo de Ci-4, o haloalquilo de Ci-4; R25 representa alquilo de Ci-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de Ci-4, arilo de Ce-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; 26 y R27, que son idénticos o diferentes, cada uno representa hidrógeno, alquilo de Ci-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, alcoxi de C1-3 alquilo de Ci-4, arilo de Ce-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, heterociclilo de 3 a 10 miembros, arilo de Ce-io alquilo de Ci-4, heterociclilalquilo de C1-3 de 3 a 10 miembros, heteroarilalquilo de C1-3de 5 a 10 miembros, ciano(alquilo de C1-3), alquilsulfonilo Ci-3 alquilo de Ci-4, o anillo cicloalifático de 3 a 10 miembros; o alternativamente, R26 y R27, junto con un átomo de nitrógeno unido a ellos, forman un heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros; R28 y R29, que son idénticos o diferentes, cada uno representa hidrógeno, alquilo de Ci-4, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, haloalquilo de Ci-4, alcoxi de Ci-3 alquilo de C2-4 arilo de C6-io, heteroarilo de 5 a 10 miembros, heterociclilo de 3 a 10 miembros, arilo de C6-10 alquilo de Ci-4, heterociclilalquilo de C1-3, de 3 a 10 miembros heteroarilalquilo de Ci-3de 5 a 10 miembros, ciano(alquilo de C1-3), alquilsulfonilo Ci-3 alquilo de Ci-4, o anillo cicloalifático de 3 a 10 miembros; o alternativamente, R28 y R29, junto con un átomo de nitrógeno unido a ellos, forman un heterociclilo de 3 a 10 miembros o heteroarilo de 5 a 10 miembros; R30 representa alquilo de Ci-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de Ci-4, arilo de C6-io, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; R31 representa alquilo de Ci-4, cicloalquilo de C3-7, haloalquilo de Ci-4, arilo de C6-10, heteroarilo de 5 a 10 miembros, o heterociclilo de 3 a 10 miembros; R32 representa alquilo de Ci-4 o arilo de C6-10; <grupo P> halógeno, alquilo de Ci-4, haloalquilo de C1-4, -OH, alcoxi de Ci-3, haloalcoxi de C1-3, heterocielilamino de 3 a 10 miembros, -SO2R16, -CN, -NO2, y heterociclilo de 3 a 10 miembros; <grupo Q> halógeno, alquilo de C1-4, haloalquilo de C1-4, -OH, alcoxi de C1-3, monohidroxialquilo de C1-6, dihidroxialquilo de Ci-6, trihidroxialquilo de C1-6, heterociclilamina de 3 a 10 miembros, -S02Ri6, -CN, -NO2, cicloalquilo de C3-7, -COR19, y heterociclilo de 3 a 10 miembros el cual está opeionalmente sustituido por un alquilo de Ci-4; [Compuesto 2] [Compuesto 3] — [Compuesto 4] i I ! -
58. El compuesto o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo de conformidad con la reivindicación 57, en donde el compuesto que tiene actividad inhibidora de FGFR o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo es un compuesto de fórmula (I), en donde A es indol, y R3 y R4 son ambos hidrógeno, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
59. Un método para identificar un compuesto que tiene actividad inhibidora de FGFR, caracterizado porque comprende las etapas de: (a) cultivar una célula que expresa el polipéptido de fusión de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 en presencia o ausencia de un compuesto de prueba y determinar el nivel de proliferación celular; (b) comparar el nivel de proliferación de la célula cultivada entre la presencia y ausencia del compuesto de prueba; y (c) considerar que el compuesto de prueba tiene actividad inhibidora de FGFR cuando el nivel de proliferación de la célula cultivada en presencia del compuesto de prueba es menor que el de la célula cultivada en ausencia del compuesto de prueba.
60. Un método para identificar un compuesto que tiene actividad inhibidora de FGFR, caracterizado porque comprende las etapas de: (a) administrar un compuesto de prueba a un mamífero no humano transplantado con una célula que expresa el polipéptido de fusión de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 y determinar el nivel de proliferación de la célula; (b) comparar el nivel de proliferación de la célula determinado en la etapa (a) con aquel determinado utilizando un mamífero no humano transplantado con la célula pero en quien no se ha administrado el compuesto de prueba; y (c) considerar que el compuesto de prueba tiene actividad inhibidora de FGFR cuando el nivel de proliferación celular determinado en la etapa (a) es menor que el determinado utilizando un mamífero no humano transplantado con la célula pero en quien no se ha administrado con el compuesto de prueba.
61. El método de conformidad con la reivindicación 59 ó 60, caracterizado porque la célula es una célula cancerosa.
62. El método de conformidad con la reivindicación 61, caracterizado porque la célula cancerosa es célula de cáncer de vejiga, célula de tumor cerebral, célula de carcinoma de células escamosas de vías respiratorias y digestivas altas, células de cáncer de pulmón, célula de adenocarcinoma de pulmón, célula de carcinoma de células escamosas de pulmón, célula de melanoma cutáneo, célula de cáncer esofágico, célula de cáncer gástrico o célula de cáncer de hígado.
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