TWI313605B - - Google Patents

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TWI313605B
TWI313605B TW090108529A TW90108529A TWI313605B TW I313605 B TWI313605 B TW I313605B TW 090108529 A TW090108529 A TW 090108529A TW 90108529 A TW90108529 A TW 90108529A TW I313605 B TWI313605 B TW I313605B
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TW
Taiwan
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water
ethanol
production
beverage
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TW090108529A
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Ohnogi Hiromu
Shiraga Masahiro
Kobayashi Eiji
Nishimura Kaori
Li Tuo-Ping
Sagawa Hiroaki
Ikunoshin Kato
Original Assignee
Takara Bio Inc
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Description

1313605 A7
五、發明説明（ 技術範圍 本發明係有關含有炎白、 植物之成長因子產生择強从所、 成長因子產生增強用铍八私人 玍田強物貝之 產生增強為必要之疾病仏▲ < 乂成長因号 強用 <食品、飲料或飼料。 负口予產生# 優越之機能性食品、心牛或飼料。 《康増強万§ 背景技術 屬於：形科之植物，例如明曰葉所具之藥理作 有“壓效果、抗菌作用、抗潰療作用作 用、抗癌效果、癌預防效果。 '必抑制作 屬於菊科植物，例如-*· 妁如紅化，所具之作用已知 性、抗浮腫效果 '抗菌活性等。 有稅發炎活 屬於百合科植物’如洋蔥所具之藥理 醇作用、户苗Λ m 已知有降膽固 乍用“作用、抗真菌作用、降血糖作 用、抗發炎作用、越糖還原酶抑制作用等。 “而作 屬銀杏科植物如銀杏所具藥理作用， 促進作用、痄 >，，右生> ® $細！ jL·展循尽 n 血小板凝集抑制作用、降低血 清膽固醇作用〇 洱低血 屬：：本科植物，如竹所具之藥理作用，已知有抗菌作 '抗真菌作用 '降血壓作用、抗氧化活性等 已知有降膽固醇作用。 不糠 用屬：微二’如具裔薇之藥理作用，已知有抗發炎作 柷匕敏作用 '抑制癌細胞增殖作 7 太7 仇®作用等。 ，李予已知具降膽固醇作用、預防糖尿病作用。 -4- 1313605 A7
屬於桑科植物如啤酒花所具藥理活性已 抗腫瘍作用、鎮靜作用等。 囷作用、 屬薑科植物無我朮（紫鬱金）所具藥理活性， 作用、膽汁分泌作用、抗潰瘍活性'抗腫瘍活性等。几囷 用屬如大豆所具藥理作用’已知有降膽固醇作 用、抗虱化作用等。 屬級木科植物如香草（m〇l〇kheiya)所具藥理作用，已知 有降血壓作用、免疫賦活作用。 屬十字花科植物如青花菜所具藥理作用，已知有抗癌作 用0 然而’對此等植物成分之成長因子產生增強作用，尤其 肝細胞增殖因予（HGF)產生增強作用、神經成長因子（NGF) 產生增強作用，尚不知道。 但是，受部分肝切除之肝臟，可快速再生成原來之大 小。此肝再生因子之本身，多年來一直不明白，於重症肝 炎患者之血漿中，發現肝細胞增殖因子（Hepat〇cyte gr〇wth factor : HGF)，自其患者血漿’分離純化（G〇hda, E. et al· : J. Clin. Invest.，88 414-419，1988)。另外，亦選殖人 類 HGF 之 cDNA，明白 HGF 之 1 次構造（Miyakawa，K. et al. : Biochem. Biophys. Res. Commun., 163 967-973, 1 989 )。又，明白使細胞之運動性之Scatter factor (SF)及為 腫瘤細胞障礙因子之tumor cytotoxic factor (TCF )與HGF為 同一物質（Weidner，K. M. et al. . Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88 7001-7005，1991，Shima，N. et al. : Biochem. -5- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公发〉 1313605 A7 B7 五、發明説明（3
Biophys. Res. Commun.，1 80 1 1 5 1- 1 1 58, 1991 )。 HGF不只促進肝細胞，亦促進膽管上皮細胞、腎尿細管 上皮細胞、胃黏膜細胞等之許多上皮細胞之增殖。又，誘 導上皮細胞之運動性之亢進及於血管新生、上皮細胞之管 腔形成可見到之形態形成，HGF為顯示極多彩之生理活性 之多機能活性物質。亦即，HGF於種種臟器，修復其臟器 之障礙時’促進上皮細胞之增殖，進行引發運動性之充進 及血管新生等之形態形成。 HGF顯示肝細胞增殖作用，蛋白質合成促進作用、膽汁 滞留改善作用，另外預防由於藥劑之腎障礙作用等，hgf 之mRNA亦於腦、腎臟、肺等合成^ HGF為促進膽管上皮 細胞、腎尿細管上皮細胞、胃黏膜細胞等許多上皮細胞之 增殖之中胚葉性細胞成長因子，於障礙修復時促進上皮細 胞之增殖’引發運動性之亢進，血管新生等之形態形成 等’顯示極多彩之生理活性，為多機能活性物質。另外， HGF亦具神經細胞之保護、增殖促進、障礙修復作用等。 因而’藉增強HGF之產生，期待可進行治療或預防肝炎、 重症肝炎、劇症肝炎、肝硬變、肝肉膽汁滞留之肝障礙， 由於藥劑等之腎障礙、胃腸障礙、血管障礙、慢性腎炎、 肺炎、創傷、糖尿病、癌等》 由於HGF顯示前述各種作用，HGF本身被期待作 F 肝 炎、重症肝炎、劇症肝炎、肝硬變、肝肉膽汁滞留之犴障 礙’藉由藥劑等之腎障礙、胃腸障礙、血管障礙、慢性腎 炎、肝炎、創傷、糖尿病、癌等之治療藥，但以H Q F本身 -6 -
本紙張瓦度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210X297公釐) 1313605 A7
1313605 A7 B7 五、發明説明（ 向’雖付予很大的社會關懷，但尚未找到此等症狀之改善 法、治療法。 阿茲海默型癡呆症患者之腦中，可確認以邁内特基底核 為中心之前腦基底部顯著變性’膽驗乙醯基轉移酶（C AT ) 活性之顯著降低[Annu. Rev_ Neurosci., Vol_ 3，77 (1980)]。於1985年使用大鼠腦之研究，明白NGF為腦之此 部位之神經營養因子[EMBOJ.，Vol. 4，1389 (1985 )]，NGF 與本疾病之關連受到注目。又’於亨廷頓舞蹈疾病者之腦 之線條體，GABA策動性神經細胞之脫落與膽鹼策動性神 經細胞之脫落皆顯著，明白NGF亦對線條體之内在性膽鹼 策動性神經細胞產生作用[Science, Vol. 234，1341 (1986)]，指出本疾病與NGF關連之可能性，以成為各種神 經疾病之模型之大鼠等之動物研究NGF之效果，於大鼠之 報告’在神經細胞顯著變性以前，腦内投予NGF，則可抑 制變性’亦防止CAT活性之降低。[J. Neurosci. Vol. 6, 2 1 55 (1986)，Brain Res.，Vol. 293, 305 (1985)，Science，Vol. 235, 214 (1986), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, Vol. 83, 923 1 (1986)]»亦證明末稍之交感神經支配組織及於腦生合成 NGF為末稍組織或腦組織之間質細胞之纖維芽細胞或星形 神經膠質細胞於此NGF之生合成，各擔任重要角色。[J. Biol. Chem., Vol. 259, 1259 (1984), Biochem. Biophys. Res. Commun.，Vol. 13 6，57 (1986)] a又，明白此纖維芽細胞與 星形神經膠質細胞產生之NGF之抗原性分子量、等電點、 生物活性’與從來所研究之顎下腺NGF相同，又，藉由於 -8 - 本紙張尺度適用中国國家標準(CNS) A4規格(21〇 X 297公赞) 1313605 A7
纖維芽細胞α-Μ細胞)及星形神經膠質細胞 入種種神經傳導物質之實驗， 。養'夜中加 辛'腎上腺辛、多 。茶酞胺類（去甲腎上腺
京为上眼常夕巴胺）顯不增強NG
Chem.,Vol. 201, 6039 (1986)] 〇 〈作用。[】·Β1〇1. ，作為神經營養因子’於作用之部位變性之 病，可否作為抑制變性之治療藥為人所期待。Λ ’腦血管 障礙’腦腫癌、腦炎、頭料傷變性疾病、麻醉藥物中▲ 等腦神經細胞-旦陷入變性，則一輩子無法恢復，其結 果’不只知覺機能降低、記憶障礙’亦引起感情障礙，行 動異常等種種障礙，神經纖維有可塑性，受損傷則自其附 近之健全纖維產生發芽，由於形成新的突觸代替受障礙之
突觸，此時NGF是否可作為促進神經機能之修復再生之治 療劑使用，為人所期待。 Q 然而’欲將NGF應用於各種神經疾病之治療時，ngf非 達到極接近須要NGF之神經細胞之處不可，中樞神經疾病 之情形亦非送達腦細胞之患部不可，通過血管系，無法將 NGF送入腦内。因為，腦内之血管内皮細胞，以密切結合 互相結合在一起（稱為腦血管障壁），由於水、氣體、脂溶 性物質以外之物質自血液移行至腦組織受到限制，所以為 高分子物質之蛋白質（亦含NGF)，幾乎完全無法通過腦血 管障壁。使用外科手法將此NGF直接投入腦内，即使以現 在之技術亦太過危險。 一方面，不只直接投予NGF ’亦進行增強NGF產物之物 質之開發’其中許多具強毒性，產生毒性之濃度與有效濃 -9- 本紙張尺度適用中國國家樣苹(CNS) A4規格(210X 297公釐) 131360¾090108529 號專利_請案 中文說明書替換頁(96年12月） 五、發明説明（ 度非常接近之物質，或對於 重:副作用彻等，具許多之生 之種’可:療或預防有關該成長因子 "未、口揲顯7^毒性與副作用，依所希望、高 彳進行增強成長因子之產生之物質、手段等。^ 本：：：目的係提供含有來自屬於植物例 :科百：科一銀杏科、禾本科、《科、桑科、豆科 十子化科或墓科植物之果實、種予、種皮、花、 :二：及，或根莖之成長因予產生增強物質為有效成分 、|生增強用组合物，及利用成長因子產生增強 物負《生理作用之醫藥、食品、飲料或飼料。 將本發明概要言之’本發明之第1發明係有關以含有來自 植物<成長因予產生增強物質為有效成分為特徵之成長因 子產生增強用組合物。於本發明之^發明，料植物，以 選自由繳形科、菊科、百合科、銀杳科、禾本科、箸薇 科、桑科、豆科、級木科、十字花科及薑科組成之群之【種 以上之植物為且。又’作為來自植物之成長因子產生增強物 質’以選自由氣原酸、二咖啡醯基奎寧酸、咖啡醯基奎寧 酸、異莊草素（isoodentin)、紅花明（saffl〇min)A、癒瘡内 酿（guaianolide)、黃當歸醇、3，_〇i_d_吡喃葡糖醯基開洛 内酯（khellactone)、7_〇_e_D_吡喃葡糖醯氧基_8·異戊二 烯基香旦素、咖啡酸甲酯、咖啡酸乙酯、8 _羧基_ 3 _羥基-5 _ 甲氧基-2-二甲基色滿、7_y3_D_吡喃葡糖醯氧基_6_異戊二 -10-
70545-961228.DOC 本紙張尺度適用中國國家橾準(CNS) A4規格(210X 297公爱） 1313605 A7 B7 五、發明説明（ 8 烯基香豆素、4，-〇_當歸醯基_3,_〇_[6_〇_(n批喃葡糖 醞基）-/3 _D-吡喃葡糖醯基卜開洛内酯、異黃腐醇 (isoxanthohumol)、黃腐醇B(is〇xanth〇hum〇1 B)、黃腐醇 D (iS〇xanth〇hum〇l D)及黃腐醇（xanth〇humui)組成之群之工 種以上之化合物為佳。另夕卜，作為該组合物，&含來自植 物足抽提物，或含有自該植物抽提物所得級分部份之組合 物亦包含在内。又’特佳地該組合物可含高濃度及/或高純 度之來自植物之成長因子產生增強物質。又，作為成長因 子’較好為肝細胞增殖因子或神經成長因子。 本發明之第2發明，係有關以含本發明之第丨發明之組合 物為特徵之以&長因子產生增強為必'要之疾病纟治療劑或 預防劑。 本發明之第3發明，有關以含有本發明之第丨發明之成長 因子增強用組合物為特徵之成長因子產生增強用食品、飲 料或飼料。 本發明之第4發明，有關以高濃度及/或高純度含有來自 植物之成長因子產生增強物質為特徵之食品、飲料或飼 料。 作為來自植物之成長因子產生增強物質，以選自由氯原 酸、二咖啡醯基奎寧酸、咖啡醯基奎寧酸、異荭草素 (^ooHentin)、紅花明（saffl〇min)A、癒瘡内酯、黃當歸 醇 〇 ^ · D -叶匕喃葡糖醯基開洛内酉旨（khellactone)、7 _ 0-/5-D_吡喃葡糖醯氧基-8_異戊二缔基香豆素、咖啡酸甲 醋、咖啡酸乙酯、8 -羧基-3-羥基-5-甲氧基_2-二甲基色 -11 - 本紙張尺度適财® ®家標準(CNS) A4規格(21Qχ撕公寶) 1313605 A7 ------ B7 五、發明説明（) 滿、7-召-D-吡喃葡糖醯氧基_6_異戊二烯基香豆素、4，_ 〇田歸酿基-3 · 〇 - [ 6 _ 〇 •(沒· D _吡喃葡糖醯基）_冷_ D -叶匕 喃葡糖醒基]-開洛内酯、異黃腐醇（is〇xanth〇hum〇】）、黃腐 酵B、黃腐醇D及黃腐醇組成之群之丨種以上之化合物為 佳。 本發明之第5發明，有關以含有高濃度及/或高純度之本 發明 < 第1發明組合物為特徵之食品、飲料或飼料。 作為來自植物之成長因子產生增強用組合物，以含有選 自由氣原酸、二咖啡醯基奎寧酸、咖啡醯基奎寧酸、異荭 草素（isoorientin)、紅花明（saffi〇min) A、癒瘡内酯黃當 歸醇、3’-0-/5-〇_11比,南葡糖酿基開洛内醋（|^11_·)、 7-0-/3-D-吡喃葡糖醯氧基_8_異戊二烯基香豆素、咖啡酸 甲酯、咖啡酸乙酯、8_羧基·3_羥基_5•甲氧基_2•二甲基色 滿、7-万-D-吡喃葡糖醯氧基_6_異戊二缔基香豆素、4，_ 〇-當歸醯基-3，-〇_[6_〇_(点_D_吡喃葡糖醯基）_万_D·吡 喃葡糖醯基]-開洛内酯、異黃腐醇（is〇xanth〇hum〇i)、黃腐 醇B、黃腐醇D及黃腐醇組成之群之丨種以上之化合物之組 合物為佳。 本發明之第6發明，有關含有0.00007重量％以上之黃腐 醇之神經成長因子之產生增強用之食品、飲料或飼料。 本發明之第7發明，有關含有成長因予之產生增強物質之 食品、飲料、飼料或彼等之處理物之成長因子產生增強用 食品、飲料或飼料。作為其態樣，含有啤酒類之成^因予 產生增強用食品、飲料或飼料為佳，啤酒類包含啤酒、發 -12· 本紙張尺度相----------------- 1313605
泡酒、無酒精啤酒飲料’此等之濃縮物、此等之稀釋物、 含啤酒花抽提物之飲料。 本發月之第8發明，有關含有啤酒花抽提物之成長因子產 生增強用食品、飲料或飼料。啤酒花抽提物以食品、飲料 或飼料中含有0.0001重量％以上為佳。 人 本發明之第9〜11之發明，有關以分別含有癒瘡内醋為有 效成刀作為特徵之成長因子產生增強用組合物，以成長因 子產生增強為必要之疾病之治療劑或預防劑，或成長因子 產生增強用之食品、飲料或铜料。 圖之簡單說明 圖1為表示化合物（1)之1H-NMR光譜之圖。 曲圖2為表不含於來自明日葉之抽提級分部分之氣原酸 辰度與各級分部分之HGF產生增強活性之相關關係圖。 圖3為表不氯原酸標品濃度與hGF產生增強活性之相關關 係圖。 圖4為表不化合物（2)之ih_Nmr光譜之圖。 圖5為表示國產菊花氯仿抽提部分A_a_2之質譜之圖。 圖6為表示國產菊花氯仿抽提部分A — aji! H_NNiR光譜 之圖。 圖7為表示國產菊花氯仿抽提部分a _ b _ 1之質譜之圖。 圖8為表示國產菊花氯仿抽提部分A_b_丨之以光譜之圖。 圖9為表示國產菊花氯仿抽提部分八彳-丨之！ h_NMr光譜 之圖。 圖上〇為表示國產菊花氣仿抽提部分A_b]之HC-NMR光 -13-
1313605 A 7 B7 五、發明説明（ 譜之圖。 圖1 1為表示明日葉抽提級分部分之含7.82分峰之溶離份 之質譜之圖。 圖12為表示明日葉抽提級分部分之含7.82分峰之溶離份 之IR光譜之圖。
圖1 3為表示明曰葉抽提級分部分之含7.82分峰之溶離份 之1 H-NMR光譜之圖。 圖14為表示明日葉抽提級分部分之含7.82分峰之溶離份 之13C-NMR光譜之圖。 圖1 5為表示明日葉抽提級分部分之含11.09分峰之溶離份 之質譜之圖。 圖1 6為表示明日葉抽提級分部分之含11.09分峰之溶離份 之I R光譜之圖。
k- 圖1 7為表示明日葉抽提級分部分之含11.09分峰之溶離份 之1 H-NMR光譜之圖。 圖1 8為表示明日葉抽提級分部分之含11.09分峰之溶離份 之13C-NMR光譜之圖。 圖19為表示來自明日葉之溶離份10之FAB-MS光譜之 圖。 圖20為表示來自明曰葉之溶離份1〇之1 H-NMR光譜之 圖。 圖21為表示來自明日葉之溶離份1 3-2之FAB-MS光譜之 圖。 圖22為表示來自明日葉之溶離份13-2之1 H-N MR光譜之 -14- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(21〇Χ297公釐) 1313605 A7 B7 12 五、發明説明（ 圖。 国，* . ,、，，，夕 13C-NMR 光譜之 圖23為表示來自明曰葉之溶離份13-2之 圖。 圖24為表示來自明日葉之溶離份α曰之 圖。 圖25為表示來自明日葉之溶離份18-3之1 H-NMR光譜之 圖。 圖26為表示來自明日葉之溶離份18-4之FAB-MS光譜之 圖。 圖27為表示來自明曰葉之溶離份18-4之1 H-NMR光讀之 圖。 圖28為表示來自明日葉之溶離份18-4之13C -NMR光譜之 圖。 圖29為表示來自明曰葉之溶離份19、2 0-5之FAB-MS光 譜之圖。 圖30為表示來自明曰葉之溶離份19、20-5之1 H-NMR光 譜之圖。 圖31為表示來自明日葉之溶離份19、20-5之13C -NMR光 譜之圖。 圖32為表示來自明日葉之溶離份19、2 0-6之FAB-MS光 譜之圖。 圖33為表示來自明曰葉之溶離份19、20-6之1 H-NMR光 譜之圖。 圖34為表示來自明曰葉之溶離份19、2 0-6之13(：卞]\411光 -15- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(21〇 X 297公釐） 1313605 A7 -----------B7 五、發明説明（ ） 13 譜之圖。 圖^5為表不來自明日葉之溶離份28之光譜之 圖。 圖36為表不來自明曰葉之溶離份28之1 h_nmr光譜之 圖。 圖37為表不來自黃腐醇級分部分之溶離份a_5之fab_ms 光譜之圖。
圖38為表示來自兴腐醇級分部分之溶離份α·5之1 h_nmR 光譜之圖。 圖3 9為表示來自啤酒花之黃腐醇之溶離份之i h_nmr光 譜之圖。 供實施本發明之最佳形態 於本發明提供以含有來自植物之成長因子產生增強物質 為有效成分作為特徵之成長因子產生增強用組合物。於植 物中顯示成長因子產生增強作用之物質之存在，於本發明 首先發現。又，於本說明書’作為有效成分所舉之任：物 質皆可單獨或2種以上混合使用於本發明。 作為有關本發明之來自植物之成長因子產生增強物質， 只要藉後述之該物質之製備方法可得即可，無特別限定。 其中以來自選自由屬於維形科、菊科、百合科、銀杏科、 禾本科、薔薇科、桑科、豆科、級木科、十字花科及 植物組成之群之1種以上之植物之具成長因子產生增強作 之物質為佳。 5 用 作為屬於繳形科之植物例如明日葉、獨活、紅萬 — -16 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 1313605 A7 B7
五、發明説明（14 禾、鴨兒序、荷蘭鴨兒芽等。屬菊科 W㈤、春菊、食用之菊花、牛等：欸：二 寺，例如作為艾嵩，則吏用t春艾嵩（寸寸八小3 二 佳。屬於百合科植物可例示如洋葱、葱 '大蒜'鬱金香： 百合等。屬於銀杏科植物引料銀杏。屬於禾本科可例示 孟宗竹、苦竹、破竹、蓬萊竹、小竹、稻、麥、蘆葦 f、稷等’穀物及其處理物亦可使用，例如米祿、麥糠 寺。屬於薔薇科之植物可例示如櫻桃、染井吉野（櫻花之— 品種）、梅：桃、李 '奋、蘋果、蕃薇、黃“、二= 塊、弁慶草等。屬桑科之植物可例示桑、熔樹、啤酒花、 楮、針桑、赤揚、橡木等。屬於薑科植物可例示如薑、鬱 金、1荷、花薑等’费金尤以紫參金為佳。屬於級木科植 物可例示如香草（molokheiya)。屬於豆科之植物可例示如 大豆、小豆、菜豆、綠豆等。屬於十字花科植物可例示卷 心菜、青花菜、花椰菜、白菜、菜花等。 又，本發明使用之植物無特別限定，可使用果實、種 予、種皮、花、葉、莖、根及/或根莖，彼等之處理物例如 米糠、麥糠、大豆胚芽、大豆種皮、大豆粉等或照原樣使 用。 又，於本發明作為來自植物之成長因子之產生增強物 質’只要增強成長因子之活性之來自植物之物質即可，無 特別限定’自本發明所期望之效果之表現觀點，較佳地可 例示選自由氣原酸、二咖啡醯基奎寧酸、咖啡醯基奎定 酸、異莊草素（isoorientin)、紅花明（safflomin)A '瘡瘡内 -17 - 本紙張尺度適用中國國家樣準(CNS) A4规格(210X 297兮釐) 1313605 A7 B7
五、發明説明（15 酯、黃當歸醇、3，_0_冷_D b 陶ti糖醯基開洛内酯 (kheUaCt〇ne)、7-〇-万-0-峨喃葡糖酿氧基-8_里戊二嫌基 香豆素、咖啡酸甲醋、咖啡酸乙酿、8_羧基·3•羥基 氧基-2-二f基色滿、οι吡喃葡糖醯氧基二戊二 埽基香豆素、4'·〇_當歸醯基_3、〇_「 、 “使、〇 ^ L6-〇，（n-比喃葡糖 I基）-/3 -D-吡喃葡糖醯基卜開洛内酯、里兑腐酵 (isoxanthohumol)、黃腐醇D及黃腐醇组成之群之種以上 之化合物。又，為本發明使用之有效成分之物質之成長因 子產生增強作用之表現，例如可藉由本發明所揭示之方法 (例如’實施例4_⑴及實施例13中記載之方法）評估。該物 質只要是來自植物之顯示成長因子產生增強作用之物質即 可，並無限^ ’前面例示之作為有效成分之較佳化合物以 外者，當然亦包含在内。於本發明，作為加啡醢基奎寧 酸，較好可例示5-咖啡醯基奎寧酸、4·咖啡醯基奎寧酸。 又，於本發明作為癒瘡内酯較佳地可例示2 _酮基_ 8 _當歸醯 氧基癒瘡- 3(4) ,11(13)-二缔·12,6-内酯，或3,4-環氧基_ 8-當歸醯氧基癒瘡-l(10)，11(13)_二烯_12,6_内酯。又於 本發明’來自植物意即藉由植物原料而得。 又，本發明之成長因子產生增強用組合物，作為其一態 樣’包含成長因子產生增強物質，可例示含來自植物之抽 提物或自該植物抽提物所得之級分部分之組合物。該组合 物為前述抽提物或級分部分本身即可。自植物抽提純化可 以如下之公知之方法進行。例如於適當時期採取為原料之 果實、種子、種皮、花、葉、莖、根及/或根莖等之後，照 -18-
本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4^(21〇x297^*T 1313605 A7 B7 五、發明説明（ 原樣或進行通常之空氣乾燥等之乾燥過程後， 碎，作成抽提原料。又，於種種條件下進行原料之孰= :吏用熟成後之原料亦可。又，植物之處理物例如米糠、麥 糠、大旦胚芽、大豆種皮、大豆粉等亦可使用。原 物之榨汁液及樹液之情形，亦可如此，作為抽提原料使 用。又，於本發明之來自植物之袖提物，係指使用柚提溶 媒自植物進行抽提’經此過程所得之物質。 自植物體製備成長因子產生增強物質，可藉由公知 提方法’如下進行1如將原㈣碎或切細後吏 媒，可t分批式或連續式進行。作為抽提溶媒可舉水、氣 仿、乙醇、甲_、異丙醇等之醇類，丙酮、甲基乙基酮等 uw、乙酸u旨等之親水性或親油性 t所望可早獨或以適宜混合液使用。通常較好可藉由使用 ;及:，之水、乙醇進行。抽提溶媒之量適宜地決定即 對於原料’較好使用1〜1〇〇倍量之抦提溶媒即 二。抽提溫亦適宜地依目的決定即可，水抽提之情形，通
:::為4〜航’更好為25〜靴。又，溶媒中含乙醇 =二以4〜rc之範圍為佳。抽提時間亦考慮抽提效率 =即可’通，，較好為數分〜數曰，更好為5分〜3小時之 把圍，以如此來設定原料、拙拇A 提操作例如一面攪拌或靜置進行:可=提溫度為佳。抽 Jt M ^ 、 逆仃即T，又，亦可依必要反 該物：t上巧作，成長因子產生增強物質，可以含 ;農卜〈抽&物而4 °抽提物依必要’進行過遽、離心、 /、.伯、超遽、分子筛等處理，可製備經濃縮之目的之成長 -19-
1313605 A7 B7 五、發明説明（ 因子產生增強物質之抽提物。抽提物及濃縮抽提物之成長 因子產生增強活性’可藉後述之實施例4·(1)及實施例13記 載之方法，簡便地測定。 、、Α本1明’自植物抽提物所得之級分部分，係指以 二知之方法可將來自植物之抽提物級分而得級分部分，及 藉由多/人反覆級分操作，所得之含單—物質之級分部分， 2要具f長因子產生增強作用，即包含於本發明。作為上 述之級刀万法’可舉抽提 '分別沉澱、管柱層析法、薄層 層析法等。將成長因子產生增強活性作為指標，再將所^ 及刀部分進行純化，可分離成長因子產生增強物質。 石清驿植物做成茶葉狀’π凡I柚提物或 自孩植物抽提物所得之級分部分，只要具成長因子產生增 強作用’則可作為自本發明之抽提物或該植物抽提物所得 邵：使用。又，亦使用含2種以上之此等抽提物或自 ^ 抽提物所得之級分部分。〖，於本發明亦可使用含 ^種二上自相同植物以不同之抽提法所得之抽提物或㈣ 植物抽彳疋物所得之級分部分。 八又’作為來自植物之抽提物及自該植物抽提物所得之級 刀部以外〈成長因子產生增強作用组合物之製造方、去， 例如將植物乾燥、粉碎，可得粉狀之該組合物。 ^ 人 發月<來自植物之成長因子產生增強用组人 物’與植物體本身比較，厶有离瀵 ° ▲ 孕又σ有问，辰度及/或兩純度之成長因 •生日強物質者特佳。於此，高濃度意即組合物之每單 位重量之成長因子產生增強物質重量比每單位之為原料之 -20 -
本紙張尺歧财國Α4规格(27^
五 1313605 A7 發明説明（
植物體之成長因予產生增強物 與為原料之植物比較， 夕又’南純度意長 之含有率高。 且1"物之成長因子產生增強物^ 強物質及，或高!度之成長因子… 料比’意即本發明之：。：與從來之食品、飲料❹ 度含有成長因子產生增^物^料或飼料以高濃度及/或高钟 包==组合物為有效成分之成長因子產生增強劑亦 、：：發明’作為來自植物之成長因子產生增強用組合物 :厂/、纟含有來自植物之成長因子產生增強物質即 ::無特別限定為粉狀、固形狀、液狀之任一形狀皆 α又以公知方法將該組合物造粒為粒狀之固形物，可 作為本發明之成長因子產生增強用組合物使用。作為造粒 1去，揲特別限定，可例示轉動造粒、攪拌造粒、流動層 迨粒、氣流造粒、壓出造粒、壓縮成形造粒'解碎造粒' 貪射造粒或喷霧造粒等。將粉狀之該組合物溶解於液體， 例如水及醇等使成液狀，可作為本發明之成長因子產生增 強用组合物使用。 有關本發明之有效成分，如後述並無特別認定毒性。 又’亦無擔心發生副作用。因此，可安全且適切地進行成 長因予產生之增強，因而，含該有效成分所成之本發明之 治療劑、預防劑、食品、飲料或飼料，有效於以成長因子 產生增強為必要之疾病之治療或預防。 -21 本紙張中S S家標準(CNS) Α4規格(21G X 297$
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1313605 A7 -----------^ 五、發明説明（ ） 19 7 於本發明，成長因子只要具促進細胞成長之活性，則無 特別限定，可例示肝細胞增殖因子（HGF)、神經成長因子 (NGF)、神經營養因子、上皮成長因子 '來自乳之成長因 子、纖維等細胞成長因子、來自腦之纖維芽細胞成長因 子、酸性纖維芽細胞成長因子、來自血小板之成長因子、' 血小板鹼性蛋白質、結缔組織活化肽、胰島素樣增殖因 子、群落形成刺激因子、促紅細胞生成素、血小板生成 素、T細胞成長因子、介白素類（例如，介白素2、3、4、 5 7、9、11、15)、B細胞成長因予、來自軟骨因子、來 自軟骨成長因子'來自骨成長因子、骨骼成長因子、内皮 細胞成長因子、來自内皮細胞成長因子、來自眼成長因 子、來自精巢成長因子、來自足細胞成長因子、乳腺刺激 因子、來自骨髓成長因子、來自巨噬細胞成長因子、重循 環間葉成長因子、形質轉換增殖因子-α、形質轉換增殖因 子-召、肝素結合性EGF樣增殖因子、雙向調節素 (amphiregulin)、SDGF、召-動物纖維素、表皮調節素 (epiregulin)、神經調節素1、2、3 (neuregulin 1、2、 3)、血管内皮增殖因子、神經營養素、BDNF、N丁 - 3、 N T - 4、N T - 5、N T - 6、N T - 7、來自神經膠質細胞株之神 經營養因子、幹細胞因子、中卡因（midkine)、多效蛋白 (Pleiotrophin) 、Ephrin 、血管生成素、活化素 (activin)、腫瘍壞死因子、干擾素類等《根據本發明，尤 其可適宜地使神經成長因子（NGF )或肝細胞增殖因子（HGF) 之產生增強。 -22- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(21〇x 297公釐） 1313605 A7 B7 五、發明説明（2(] HGF為肝細胞之再生因子’另外使細胞之運動尤進之因 子，及亦為腫瘍細胞障礙因子。HGF不只促進肝細胞，亦 促進膽管上皮細胞、腎尿細胞上皮細胞、胃黏膜細胞等， 許多上皮細胞之增殖。又’ HGF誘導上皮細胞之運動性亢 進及血管新生、於上皮細胞之管腔形成看得見之形態，顯 示極多樣之生理活性。因此，藉由增強HGF之產生，可進 行例如肝炎、重症肝炎、劇症肝炎、肝硬化、肝内膽汁滞 留等之肝障礙’藉由藥劑等之腎障礙、胃腸障礙、血管障 礙、慢性腎炎、肺炎、創傷、糖尿病、癌等之治療或預 防。 一方面，NGF維持神經細胞之生存與機能，為依NgF2 濃度梯度使神經細胞伸長之内因性成長因子，荈 之產生，可修復由於阿兹海默病等之老人癡呆症及末稍神 經障礙、腦血管障礙、腦腫瘤 '腦炎、頭部外傷變性疾 病、麻醉藥物中毒之神經機能並須使再生，對此等疾病進 行治療或預防。又，肌萎縮性侧索硬化症、藥劑障礙性末 稍神經障礙、糖尿病性末稍神經障礙、巴金森氏病、感覺 神經障礙、色素性網膜症、黃斑變性症等之治療或預㈣ 有用。 作為本發明之以成長因子產生增強為必要之疾病，只要 藉投予本發明之治療劑 '預防劑等可 無特別限定，可例示肝炎、重症肝炎、劇症二硬 變、肝内膽汁滯留等之肝障礙，由藥劑等之腎障礙 障礙、血管障礙、慢性腎炎、料、創傷、糖尿病、癌、
本紙張尺歧财g 1313605 A7 B7
五、發明説明（ 癡呆症、神經障礙、末稍神經病、腦貧血、糖尿病神細 等。 二 以含有本發明使用之來自植物之成長因子產生增強用組 合物為特徵之以成長因子產生增強為必要之疾病之治療劑 或預防劑’使用來自植物之成長因子產生增強用组合物， 可適宜地製造。 .本發月之/Q療劑或預防劑，將本發明使用之來自植物之 成長因子產生増強用組合物與公知之醫藥用載體組合、製 劑化即可。又’藉由將成長因子產生增強物質與公知之醫 藥用載體組合、製劑化，亦可製造。 該藥劑之製造’-般將本發明使用之來自植物之成長因 子產生增強用组合物與藥學上可接受之液狀或固體狀載體 摻合，依所望加溶劑、分散劑、乳化劑、緩衝劑、穩定 劑、賦形齋】、黏合劑、崩散劑、潤滑劑等’可做成錠劑、 顆粒劑、散劑、粉劑、膠囊劑等之固形劑、通常液劑、懸 •序液劑、乳劑等之液劑。又，使用前藉由添加適當載劑可 做成液狀之乾燥品及其他，亦可作為外用劑。 醫藥用載劑可依治療劑或預防劑之投予形態及劑型而選 擇 二口劑之情形，利用例如殿粉、乳糖、白糖、甘露 醇系甲基纖維素、玉米;殿粉、無機鹽等》又當製備經口 劑時，可另掺合黏合劑、崩散劑、界面活性劑、潤滑劑、 流動性促進劑、矯味劑、著色劑、香料等。 一万面’非經口劑之情形，依習用法將為本發明之有 放成刀之來自植物之成長因子產生增強用组合物，溶解乃 1313605 五、發明説明（
至懸浮於作為稀釋劑之注射 糖水落液、注射用植物油、 米油、丙二醇、聚乙二醇等 等張劑、無痛劑等可製備。 本發明之治療劑或預防劑 投予。投予方法亦無特別限 注射劑得以例如靜脈内、肌 用劑亦包含栓劑》 用蒸餾水、生理食鹽水、葡萄 芝麻油、花生油、大豆油、玉 ’依必要加殺菌劑、穩定劑、 依製劑形態’以適當投予途徑 足，可以内服、外用及注射。 肉内、皮下、皮内等投予，外 」乍為：發明之治療劑或預防劑之投予量依其製劑形 怨、投予万法、使用目的及適用於此之患者年齡、P重、 症狀而適宜設定，並非-定，—般作為含於製劑中之本發 明使用之來自植物之成長因子產生增強用組合物之量，成 亡每日較好為〇.〇01〜2_毫克/公斤體重，更佳為〇〇1〜2〇〇 笔克/公斤體重。又，作為含於該製劑中之來自植物之成長 因子產生增強物質之量，成人每天較好為〇 〇〇〇1〜2〇〇〇毫克 /么斤隨重，更好為0.001〜200毫克/公斤體重，再更好為 0.01〜20毫克/公斤體重。 當然，投予量依種種條件變動，所以亦有比上述投予量 少之量即可充分之情形，或必須超過範圍之情形。本發明 之藥劑除照原樣經口投予外，亦可添加於任意飲食品而日 常知F·取。又，亦可將本發明使用之來自植物之成長因子產 生增強用組合物作為成長因子產生增強用飲食品之原料使 用0 又’作為本發明之另外態樣，可提供含成長因子產生增 -25- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS> A4規格(210X297公爱) 1313605 A7 B7 五、發明説明（ 強物質作為有關本發明之有效成分之成長因子產生增強 劑1作為該增強劑，亦可為前述有效成分本身，又，亦可 為含前述有效成分之组合物。《長因予產±增強劑，與例 如可與前述有效成分相同用途使用之其他成分等摻合，依 上述治療劑或預防劑之製造方法，製造通常使用之試藥形 態即可。於此增強劑中之前述有效成分之含有量，只要考 慮使用目的，使能表現本發明所望之效果之量即可，無特 別限疋。又，該增強劑之使用量亦只要能表現本發明所望 之效果即可’無特別限定。尤其，特予生體使用之情形， 較好於可投予前述治療劑或預防劑之有效成分之投予量範 圍内之有效成分量使用即可。成長因子產生增強劑，對於 以成長因子產生增強，尤其是HGF或NGF產生增強為必要 之疾病之該成長因子之增強有用。又，該增強劑對於成長 因子之機能研究、與成長因子有關之疾病用醫藥之篩選亦 有用。 另外’作為本發明之別的態樣，可提供將有關本發明之 前述有效成分投予動物之成長因子產生之增強方法。此方 法藉由對於預測有必要成長因子產生增強，或有其必要之 動物’將前述有效成分’較好作為前述成長因子產生增強 劑投予而進行，藉此投予，可使成長因子之產生增強。有 效成分之投予方法、投予量等，與成長因子產生增強劑之 情形同樣為之即可。又’於成長因子產生之增強方法，亦 可使用本發明之治療劑或預防劑、後述之食品、飲料咬詞 料。又，作為「動物」，可舉例如為哺乳類之人、狗、 -26- 本纸張尺度適用中家標準(CNS规格⑻㈣97公酱） 1313605 A7 " —------B7 五、發明説明（^ 给、牛、緒、馬等，其中對人類可適宜地使用。此成長因 子產生之增強方法，例如對於以成長因子產生增強為必要 之疾病之/13療或預防，有用於成長因子產生增強。又，該 強方法，對於成長因子之機能研究、與成長因子有關之 疾病用醫藥之篩選亦有用。 '、入於本發明使用之來自植物之成長因子產生增強用 ’·. S物或g有來自植物之成長因子產生增強物質所成之 含 飲料或飼料，藉由其成長因子產生增強作用，對於 •ί本發月使用之來自植物之成長因子產生增強用組合物等 顯不感爻性之以成長因子產生增強為必要之疾病之症狀改 ° 預防’或如後述之生物之身體狀況之改善，極為有 用。 又於本發明之惡樣，「含有」之語包含含有、添加、 稀釋足意，「含有」係指本發明使用之有效成分含於食 品、飲料或飼料中之態樣，「添加」係指將本發明使用之 有效成分添加食品、飲料或飼料之原料中之態樣，「稀 釋」係指於本發明使用之有效成分添加於食品、飲料或飼 料之原料之態樣。 本發明之食品或飲料之製造法，無特別限定。例如，摻 合、調理、加工等，依一般食品、飲料所用者即可，藉由 此食品、飲料之製造法可製造，製造之食品或飲料中含有 具成長因子產生增強作用之來自植物之成長因予產生增強 用組合物’或來自植物之成長因子產生增強物質即可。 又’將植物混合於食品或飲料中，進行加熱放置等，依必 -27- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4规格(210X 297公釐） 1313605 A7
含啤酒花抽提物 例如穀物加工品 麵類、通心麵類 要除去植物之柚提殘渣所得之Λ . , ^ ^ 0 <成長因子產生增強用食品启 飲枓’亦包含於本發明。又，人士丄，e ^ 、人 ,, 3有成長因子產生增強物售 (食品、飲料，或含有其處程物之具成長因子產生增： 用之食抑或飲枓’ 為本發明之食品或飲料。又 可舉例如具成長因予產生拎強你. 处至妆 等。 “自作用疋飲料之濃縮及稀轉 作為其態樣，含有啤酒之成長 口丁座生增強用之舍〇 飲料或飼料為適宜，啤酒類包含 =干鸣、發泡酒、非醇啤 飲料，此等之濃縮物、此等之稀釋物 飲料3 本發明之食品或飲料，無特別限定 澱粉類加工品、增補營養食品加工〇 , - σσ 地頌、遇心麵 麵包類、鶴類、麵條類、楚、米粉、粉條、包 脂加工品（可塑性油脂、炸油、沙拉油、沙 等）’大豆加工品(豆腐類、豆酱、納豆等），含内f淋 (火腿、培根、壓製火腿、香腸等），水產製 = 肉、魚板、竹輪、魚肉山芋丸子、炸甘藷、摘入t 水）、筋、魚肉火腿、香腸、柴魚、魚卵加工 頭、切煮等）、乳製品(原料乳、乳脂、優路乳 、 乳、粉乳、冰澳淋等）、音笑、吳鲁^ ；貫衣不貫加工品（糊狀物類、 醫類、酸潰類等、果實飲料、青菜飲料、漏合飲 心類(巧克力、餅干類、菓子類 '麵包類、蛋糕 子 米菓類等）、酒精飲料（曰本酒、中國酒、葡萄 忌、燒酒、伏特加、白蘭地、杜松子酒、甜酒、啤酒' -28- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公董）
訂
線 26 1313605 五 、發明説明（ 涼酒精飲料、果實酒、 一 欠、 利久酒寺）、嗜好飲料（綠茶、紅 -士二、咖啡、清凉飲料、乳酸飲料等）、調味料(醬 Γ丰内你、料酒等）、罐頭、瓶罐頭、袋子封裝食品 (二肉飯乂鎮飯、紅叙、咖哩叙、其他各種調理過之食 二 '上ί或濃縮食品(肝糊、其他麵包塗料、麵條、烏 二二'；農、化布類）' 乾燥食品（速食麵類、速食咖 ,Μ .. 末果汁、粉末湯、速食豆醬湯 '調理 過之食品、調理過之餃鞑 吉^ 科15用理過之湯等）、冷凍食品（壽 魚、漢堡鐵板、燒賣、餃子、各種鐵板 : 水果寺）、固形食品、液體食品(湯等）、香辛料類 寺《農產、林產加工品、高產加工品、水差加工品等。 本發明〈食品或飲料中之具來自植物之成長因子產生增 ，作用之有效成分之含有量無特別限定，自其官能與活性 表!之觀點，可適宜選擇’例如食品中，較好為〇._001 重f %以上’更佳地0 00001〜100重量％，更適宜地 〇._3〜90重量％，例如，飲料中較好〇〇〇〇〇〇1重量％以 上，更好為〇.〇〇〇〇1〜100重量％，更好為〇〇〇〇3〜9〇重量 〇/〇。又’本發明之食品或飲料，較佳地’含於彼等之有效 成分，例如使能攝取成人每日較好0 0001〜100毫克/公斤邮 重，更妤0.00卜Π)毫克/公斤體重，更好〇〇l〜it 2 體重即可》 A t 又，根據本發明，提供以高濃度及/或高純度含有前述 長因子產生增強用組合物所成之食品或飲科。又，以高产 度及/或高純度含有前述成長因子產生增強用組合物所m -29- 本紙張尺度適财S g家料(CNS) Ά4规格(21G X 297公发） 1313605 五 、發明説明（ A7 B7 之態樣之食品或飲料中，來自成長因子產生 純产"《成長因子產生增強物質’以高濃度及/或高 點二ί义程度，或自成長因子產生增強作用之表現之觀 ··..占與成長因子產生增強物哲Α 強物貝以同濃度及/或高純度含有可 〈程度’含有成長因子產生增強用組合物。 万；该食品或飲料之製造，作為成長因子產生增強用組合 物，例如含成長因子產生增強物質之植物抽提物，亦已選 自如緞形科植物抽提物、菊科植物抽提物、百合科植物抽 提物：銀杏科植物抽提物、禾本科植物抽提物、薔薇科植 物抽提物、桑科植物抽提物、豆科植物抽提物、級木科植 物抽提物、+ 4*花科植物抽提物&墓科植物抽提物，作為 有效成分’較好為含有選自由氯原酸、二咖啡醯基奎寧 酸、咖啡醯基奎寧酸、異荭草素、紅花明入、癒瘡内酯、 育當歸醇、3 ’ - 〇 - /5 - D -吡喃葡糖醯基開洛内酯、7 · 〇 _沒_ D -吡喃葡糖醯氧基-8 _異戊二烯基香豆素、咖啡酸甲酯、咖 啡酸乙醋、8 -羧基·3 -羥基-5-甲氧基-2-二甲基色滿、7-冷-D-吡喃葡糖醯氧基_6_異戊二烯基香豆素、4，_〇·當歸 酿基-3 ’ - 0 - [ 6 - Ο - ( /5 - D -吡喃葡糖醯氧基）_冷-〇 _吡喃葡糖 醯基]-開洛内酯、異黃腐醇、黃腐醇Β、黃腐醇〇及黃腐醇 組成之群之至少1種以上之化合物之組合物，例如使用來自 植物之抽提物亦可。 本發明亦提供以南濃度及/或向純度含有來自植物之成長 因子產生增強物質之健康增強用食品或飲料，藉由日常地 攝取該食品或飲料，得以增強生體内之成長因子產生，維 -30- 本紙張尺度適用中國國家標準(CMS) Α4規格(210X 297公釐) 28 1313605 五、發明説明（ 持、增強健康。 來自植物万ί發明《態樣’提供以高濃度及，或高純度含有 <成長因子產生增強物質為特徵之食品或飲料。 二，以之態樣，作為來自植物之成長因子產生增強物 h里一虱原酸、二咖啡醯基奎寧酸'咖啡醯基奎寧 t、/、紅草素 '紅花明A、癒瘡内酯、黃當歸醇、3，_0_ 某:葡糖醯基開洛内酯、7-〇i-d-吡喃葡糖醯氧 —缔基香豆素、咖啡酸甲酯、咖啡酸乙酯、8-羧 :3，基’5·甲氧基_2_二甲*色滿、吡喃葡糖醯 氧土 --異戊二缔基香豆素、4丨_〇_當歸醯基_3、〇_[6_〇_ (^^"比喃葡糖酸基卜^❸南葡糖驢氧基卜開洛内酉旨、 異黃腐醇' 黃腐醇B、黃腐醇D及黃腐醇組成之群之至少i 種以上之化合物為佳，提供以高濃度及/或高純度含有該化 合物之食品或飲料。 “令於本發明，作為含HGF產生增強物質之組合物， 使用竹抽提物之情形，使食品或飲料中含有以乾燥重量換 算較好為0,00001重量％以上為佳。竹抽提物可藉由例如將 :葉保=於溫水中而製備…亦可測定抽提物中之異荭 早$含量’使食品或飲料中含有其有效量。作為異兹草素 2含有！，使食品或飲料中較好含有〇 〇1重量％以上為適 一於本發明’作為含HGF產生增強物質之組合物，使用洋 葱抽提物之情形，例如洋葱薄皮之熱水抽提物，將5克洋葱 薄皮於100毫升水中，1〇〇t下加熱處理15分之物，含於^ 31 - 本紙張尺度適财關家標準(CNS)A4_規格(歷挪公爱） 1313605 A7 B7 五、發明説明（ m或飲料中，以乾燥重量換算較好為1重量％以上即可。 於本發明，作為含HGF產生增強物質之組合物使用銀 杳抽提物之情形，例如銀杏茶葉之熱水抽㈣，將例如3克 (銀杏茶葉於200毫升水中，刚。c下加處理15分之物，含 於食品或飲料中，以乾燥重量換算較好為5重量％以上。 於本發明，作為含HGF產生增強物質之組合物，使用艾 嵩抽提物之情形於食品或飲料中，以抽提物乾燥物換算， 較好σ 0.0001重量％以上為適宜。例如，將艾嵩1 〇克於1 ，升=中、60〇c下處理1小時，製備抽提物即可。又’艾 南抽提物中之3,5 -二咖啡醯基奎寧酸作為HGF產生增強物 質使用〈情形’食品或飲料中，較好含3,5二咖啡釀基奎 寧酸0.0005重量％以上為適宜。 又，將艾嵩抽提物中之氯原酸作為HGF產生增強物質使 用之情形，食品或飲料中，較好含氯原酸請^量。,。以上 為適宜。 於本發明，將來自明日葉之氯原酸作為HGF產生增強物 質使用之情形，食品或飲料中較好含請丨重量％以上為適 宜。 於本發明作為含HGF產生增強物質之組合物，使用菊花 抽提物之情形’例如萄花之熱水抽提物， 於⑽毫升水中、⑽下加熱處理2小時之物，以乾^量匕 換算，較好以1重量％以上含於食品或飲料中即可。 於本發明，作為含歸產生增強物質之組合物，使用紫 费金抽提物之情形’例如紫#金之溫水插提物，例如將20 -32- ^纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1313605
克紫鬱金於100毫升水中’ 60tT加熱處理2小時之物，以 乾燥重I換异，較好以〇 〇〇丨重量％以上含於食品或飲料中 即可。 於本發明’作為含HGF產生增強物質之組合物，使用李 抽k物之其形，例如李之乙醇抽提物，將例如6 0克之李以 1〇〇田毫升乙醇抽提處理之物，以乾燥重量換算，較好以〇1 重ΐ %以上含於食品或飲料中即可。又，將抽提物中之5 _ 咖啡醯基奎寧酸或4 -咖啡醯基奎寧酸作為HGF產生增強物 質使用 <情形，食品或飲料中，較好使含0 01重量％以上 之5 -咖啡醯基奎寧酸或4·咖啡醯基奎寧酸為適宜。 於本發明，作為含HGF產生增強物質之组合物，使用青 花菜抽提物之情形，例如青花菜之5〇%乙醇抽提物，將例 如100克青花菜以100毫升5 〇 %乙醇抽提處理之物，以乾燥 重量換算，含0.2重量％以上於食品或飲料中即可。 於本發明，作為含HGF產生增強物質之組合物，使用春 菊抽提物之情形’例如春菊之溫水抽提物，將例如1 〇克之 春菊粉碎物以乙醇洗淨，以丨0〇毫升水，於6 〇抽提處理i 小時之物’以乾燥重量換算’較好含〇· 1重量％以上於食品 或飲料中即可。 例如春菊之乙醇抽提物’將例如5 〇克以8 0 %乙醇1升使均 化’所得抽提物以〇. 1重量％以上含於食品或飲料中為適 宜。又’拙提物中含3，5 -二咖啡醯基奎寧酸之情形，於食 品或飲料中較好為0.0005重量。/〇以上。 於本發明，將啤酒類，例如啤酒、發泡酒、無酒精啤酒 -33- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210X297公爱)
31 1313605 五、發明説明（ 飲料作為含HGF產生增強物質之組合物使用之情形，使於 食品或飲料中’以乾燥重量換算，較好2重量％以上為適 宜。 、本發月’作為含H g F產生增強物質之組合物，使用大 二插彳疋物之情形，例如來自大豆物質之溫水抽提物，將例 ^大1胚芽、大且種皮、或大豆粉分別以乙醇洗淨後，6 0 =下處理2小時所得抽提物使用即可，另外可將此抽提物級 分成乙醇可溶性部分與乙醇不溶性部分使用。 例如以乙醇將大豆胚芽細斷物洗淨，以200毫升水、60。(： :處理2小時’所得抽提液中加2 · 5倍量乙醇，可分別成乙 醇可溶性部分與乙醇不溶性部分。使食品或飲料中含該乙 醇:溶性部分，以乾燥重量換算0()2重量％以上為適宜， 乙醇不落性部分，〇·〇 1重量％以上為適宜。 例如，大豆種皮細斷物10克以乙醇洗淨，以水70毫升、 60 ^下處理2小時所得抽提物中加2 5倍量乙醇，可分 =可溶性部分與乙醇不溶性部分’使食品或飲料十切 .盡落性邵分’以乾燥重量換算較好〇.〇1重量％以二為 、且’乙醇不溶性部分，較好請3重量％以上為適宜。”， 醇 例如，大豆粉1 〇克以乙醇洗淨，以水 理2小時，所得抽提液中加2.5倍量乙醇，可n Μ處 落性部分與乙醇不溶性部分，使食品或飲料中，^乙醇可 I溶性部*以乾燥重量換算，較好0 01重量^孩乙 且，乙醇不溶性部分較好0 005重量％以上為適宜上為 於本發明，作為含HGF產生增強物質 1 諸 ，.且δ物’使用 -34- 良尺度適用中國國家標準(⑽）Μ規格⑽χ297公爱） 1313605 A7 B7 五、發明説明（ =之㈣’例如壬…十葉之溫水抽提物，例如 /㈣末以乙醇洗淨，於⑽毫升水、下插提處理 小時，所得抽提物中加2.5倍量乙醇，可使用分別 γ落性部分與乙醇不溶性部分。使食品或飲料中，本七/ 醇可溶性部分以乾燥重量換算，較好G.GGG2重量％ ^ ^ 適i乙醇不〉谷性部分較好〇·0004重量％以上為適宜。 於本發明，作為含HGF產生增強物質之组合物，使用米 糠抽提物又情形，例如米糖之溫水抽提物，例如以乙醇洗 乎10克米糠，以1〇〇毫升水、6〇t下抽提處理2小時，所得 抽提物中加2.5倍量乙醇’可使用分別為乙醇可溶性部分與 醇不i丨生部刀。使食品或飲料中，含該乙醇可溶性部分 以乾燥重量換算，較好0.1重量％以上為適宜。 主於本發明，作為含NGF產生增強物質，使用紅花色素之 十月形，使含於食品或飲料中，較好〇1重量％以上為適宜。 於本發明，來自紅花之紅花明A作為NGF產生增強物質使 用之情形，使含於食品或飲料中較好〇3重量％以上為適 宜。 万；本發明作為含NGF產生增強物質之組合物，使用菊花 柚提物 < 情形，例如菊花之溫水抽提物，將例如1 0克菊花 於〖00笔升水中，6 0 °c下加熱處理2小時之物，使含於食品 或飲料中以乾燥重量換算，2重量％以上即可。又於本發 明，將來自菊花之癒瘡内酯作為產生增強物質使用之 情形，使食品或飲料中較好含〇 〇〇2重量％以上為適宜。 於本發明，作為含NGF產生增強物質之組合物，使用明 -35- 1313605 A7 B7 五、發明説明（ 日葉抽提物之情形，例如菊花之溫水抽提物，將例如1 〇克 之明曰葉莖部於200毫升水中、6〇t下加熱處理2小時之 物，使含於食品或飲料中’以乾燥重量換算，較好〇 〇4重 量％以上即可。於本發明，作為含NGF產生增強物質之組 合物，使用明日葉根部抽提物之情形，將例如丨〇克明日葉 根部於200毫升水中，6〇t下加熱處理2小時之物，使含於 食品或飲料中，以乾燥重量換算，較好〇〇6重量％以上為 適宜。 於本發明，將來自明曰葉之黃當歸醇作為NGF產生增強 物質使用之情形，使食品或飲料中較好含〇 〇〇1重量％以上 為適宜。 於本發明’將來自明日葉之3，- 〇 _ η峨喃葡糖醯基開 洛内酯作為NGF產生增強物質使用之情形，使食品或飲料 中’較好含0.005重量％以上為適宜。 於本發明，將來自明曰葉之点_D_吡喃葡糖醯氧基· 8 -異戊二缔基色滿作為NGF產生增強物質使用之情形，使 食品或飲料中’較好含0.003重量％以上為適宜。 於本發明，將來自明曰葉之咖啡酸甲酯作為NGF產生増 強物質使用之情形，使食品或飲料中較好含〇 〇〇2重量％以 上為適宜。 於本發明，將來自明日葉之8_羧基_3•羥基_5_甲氧基_2_ 二甲基色滿作為NGF產生增強物質使用之情形，使食品或 飲料中較好含0_0003重量％以上為適宜。 於本發明，將來自明日葉之7-沒_D_吡喃葡糖醯氧基_6_ -36- 本紙張尺度適用中國國家標準(CMS) A4規格(210 X 2叩公酱 1 -~~~一. 1313605 A7 B7 五、發明説明（ 異戊二烯基色滿作為NGF產生增強物質使用之情形，使食 品或飲料中較好含〇_〇3重量。/。以上為適宜。 於本發明，將來自明曰葉之4，-〇_當歸醯基_3，_〇_[6_〇_ (/5 - D -吡喃葡糖基）-冷-d -吡喃葡糖基]_開洛内酯作為NgF 產生增強物質使用之情形，使食品或飲料中較好含〇 〇4重 以上為適宜。 於本發明，將來自明日葉之咖啡酸乙酯作為NGF產生增 強物質使用之情形，使食品或飲料中較好含〇 〇4重量％以 上為適宜。 於本發明，將洋葱薄皮抽提物作為NGF產生增強物質使 用之情形，例如洋葱薄皮之乙醇抽提物例如將洋葱薄皮2 5 克以乙醇500耄升抽提所得抽提物，使含於食品或飲料中， 以乾燥重量換算，較好0·01重量％以上為適宜。 於本發明，作為含NGF產生增強物質之組合物，使用銀 杏茶葉抽提物之情形，例如銀杏茶葉之熱水抽提物，將例 如銀杏茶葉於水200毫升中，10(rc下抽提i小時所得抽提 物，使含於食品或飲料中，以乾燥重量換算，較好〇 〇7重 里％以上為適宜。 於本發明，將薔薇花抽提物作為NGF產生增強物質使用 之情形，例如薔薇花溫水抽提物，將例如薔薇花2克以4 0 毫升水、60°C下抽提1小時，所得抽出物使含於食品或飲 料中，以乾燥重量換算，較好0_008重量％以上為適宜。 於本發明，將來自啤酒花之黃腐醇作為NGF產生增強物 質使用之情形，使含於食品或飲料中’較好〇 〇〇〇3重量％為 -37-
351313605 五'發明説明（ 適宜。 一万、气發日月’作為含ngf產生增強物質之組合物使用啤酒 物之晴形使含於食品或飲料中，以 〇.〇〇2重量％以上為適宜。 m :本：明’將黃腐醇B、黃腐醇d作為Να產生增強物質 < 3形，使含於食品或飲料中分別較好 以上為適宜。 里 於：：明，將黃腐醇作為ngf產生增強物質使用之信 宜：„於食品或飲料中分別較好為。_重量%以上為適 :本發:月，作為含歸產生增強物質之組合 =例如啤酒、發泡酒、無酒精啤酒飲科之情形，使含 宜^或飲料中’以乾燥重量換算，較好2重量％以上為適 :本發明’作為含NGF產生增強物質之組合物，使用 食品或飲科中含有哮酒花抽提物 便兴腐Sf較好含〇 〇〇〇〇〇4重量 〇.嶋3重量％以上為適宜。义上’異！腐醇較好 用明’作為含NGF產生增強物質之組合物，使 如啤酒：r:::r青形，例如啤酒花之乙醇抽提物，將例 卑酒化乾保物粉碎物5G克以丨升乙 使含於食品或飲料中’以乾燥重量換算，較好二 0/〇以上即可。 好為0.002重 於本發明，作為含NGF產生增強物質之組合物，使用 % 情 啤 啤 而 含 量 紫 $紙狀度通用中國國家標準 38- 1313605 A7
3二:疋：《情形’例如’紫鬱金之溫水抽提物，將例如 糸#坌5克以水2 s龙也 八.人各。 毛升，6 0 C下抽提2小時所得抽提物’使 ιϋί或飲料中，以乾燥重量換算’較好⑽重量％以 、、_發月作為含NGF產生增強物質，使用大豆抽提物 ’例如來自大豆之物質之溫水抽提物，將例如大豆 胚牙、大豆稀由、+ 反或大！粉分別以乙醇洗淨後，以水於60 =2小時’所得抽提物使用即可，另外將此抽提物級分 ，可洛性部分與乙醇不溶性部分使用亦可。 ί列浚口 ，以乙臨、，朱..Λ丄 一 。 '元乎大且胚芽碎斷物10克，以水200毫升於 6〇 C處理2小時’所得抽提物中加2.5倍量之乙醇，可分別 J ，可'合性部分與乙醇不溶性部分。使食品或飲料中， Λ ^可'谷性部分，以乾燥重量換算，較好含0.5重量°/〇以 上為i· 6醇不落性部分較好含〇·3重量％以上為宜。 。 ^乙醇洗淨大且種皮碎斷物1〇克，以水7〇毫升於 6〇。。處理2小時’所得抽提物中加2.5倍量之乙醇，可分別 為乙醇可③性部分與乙醇不溶性部分。使食品或飲料中， 該乙2可溶性部分，以乾燥重量換算，較好含0.3重量％以 上為且，乙醇不溶性部分較好含〇〇6重量％以上為宜。 例如，以乙醇洗淨大豆粉碎斷物1 0克，以水1 〇〇毫升於 6 〇 C處理2小時，所得柚提物中加2.5倍量之乙醇，可分別 為乙醇可，谷性部分與乙醇不溶性部分。使食品或飲料中， ^醇可/容性部分，以乾燥重量換算，較好含〇 3重量％以 上為且，乙醇不溶性部分較好含0.000重量％以上為宜。 -39 本紙張尺度適用中？5~家標準(CNS「城格(2igx297公董〉 1313605 A7
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與前述（υ同樣地製備本醇々私把, & α 醉乏飫枓。例如，將該抽提物添加 使成該抽提物之1GG倍稀釋液，可製備含醇飲料。 、⑷對銀杏茶葉加抽提溶媒(如水)抽提(例如航柚提! 5 二)“装備抽棱物《冷凍乾燥物’與前述⑴同樣地製備含 飫料。例如’將該乾燥物添加使成1〇〇倍稀釋液，可製備 含蟀飲料。 (5)對艾嵩乾燥品加插提溶媒（如水）抽提（如6〇。〇抽提工小 時）’使用抽提物’與前述⑴同樣地製備含醇飲料。例如 將自讀提物所得之3,5_二咖啡酿基奎寧酸添加使成5微克 /毫升，可製備含醇飲料。又，將自該抽提物所得之氯原酸 添加使成40微克/毫升，可製備含醇飲料。 (。6)對明日葉（葉至部）乾燥品加抽提溶媒（如水）抽提（例如 C抽扶1小時），使用抽提物，與前述〇 )同樣地可製備含 醇飲料。例如將自該抽提物所得之氯原酸添加，使成i〇f: 克/毫升’可製備含醇飲料。 (7)對菊花乾燥物加抽提溶媒（如水）抽提（如6〇t抽提2小 時），使用抽提物，與前述（1)同樣製備含醇飲料。該抽提 物〜加使成該抽提物之1 〇 〇倍稀釋液，可製備含醇飲料。 (8 )對糸鬱金乾燥品加抽提溶媒（如水）抽提（如6 〇 π抽提2 j時），製備抽提物之冷凍乾燥物，與前述（丨）同樣製備含 醇飲料。例如，將該乾燥物添加，使成10微克/毫升，可製 備含醇飲料。 (9)對李予加抽提溶媒（如乙醇）使均_、過濾製備濾液， 用所得抽提物與前述（1)同樣製備含醇飲料。例如將該抽提 -41 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4规格(21〇χ 297公爱) 1313605
五、發明説明（ 物添加使成1 〇〇〇倍稀释、， 提物所得之5 -咖相基=I製備含醇飲料。i ’將自柚 加使各成100微克/毫升寧馱及4 -咖啡醯基奎寧酸分別添 ⑽對啤酒花-加切㈣。 一，過滤製備滅液1縮"^媒（如5〇%乙醇水溶液）使均 ⑴同樣製備含醇飲料。夜：用所得濃縮物，與前述 釋液，可製備含醇飲料/'如將該濃縮物添加使成觸倍稀 …〇 =春菊之冷;東乾燥物粉碎，以有機 ==丨如水)抽提(如6。。。拙提1小時)，用抽提二 件：釋;/ Tt·備含醇飲料。例如將該抽提物添加使成1000 倍稀釋視，可製備含醇飲料。 二2，)：春!1加抽提溶媒(如80%乙醇)使均-，過濾製備 :私:feL '縮忑濾液。用所得濃縮物，與前述(1 )同樣製備含 ° = 例如將这抽提物添加使成1000倍稀釋液，可製備 含醇飲料。又’將自該抽提物所得之3,5-二咖啡醯基奎寧 酸添加成10微克/毫升，可製備含醇飲料。 二（1 3 )將卑/酉濃縮，使用該濃縮物，與前述（1)同樣製備含 醇飲料。例如將該濃縮物添加使成丨〇〇倍稀釋液，可製備含 醇飲料。 (1 4)將播醇啤酒濃縮’使用該濃縮物，與前述（1)同樣製 備含醇飲料。例如將該濃縮物添加使成1〇〇倍稀釋液，可製 備含醇飲料。 (1 5 )將大豆胚芽碎斷物，以有機溶媒（如乙醇）洗淨後， 加抽提溶媒（如水）抽提（如6 0 t抽提2小時）得抽提物。將抽 -42- 本錄尺度適用中國國家標準(CNS)以規格(21〇χ挪公笼) 40 1313605 五 發明説明（ b慮將H遽液中加有機溶媒（如2 5倍量之乙 ^ Λ成物有機溶媒可溶部分與有機溶媒不溶性部分，分別 i 1:。用該乾燥物，與前述⑴同樣地製備含醇飲 。了 乙醇可溶性部分之乾燥物添加使 :使：Γ含醇飲料…乙醇不溶性部分之乾燥物，： 加使成130微克/毫升，可製備含醇飲料。 '、 U6)將大豆種皮碎斷物，以有機 加抽提溶媒(如水)抽提(如…抽提2小二：：後’ =過遽’編後，中加有二=:量： ==機溶媒可溶性部分與有機溶媒不溶性= 料。例如將乙醇可溶性部分之錢_ 每飲 升，可製備含醇飲料。又，乙醇不落性部分Ϊ乾=克1 加使成30微克/毫升’可製備含醇飲料。 庵物，添 (17)將大豆粉以有機溶媒 (如水)抽—提2小時)，=:=媒 滤，得遽液後’遽液中加有機溶媒(如2·5:量之 =物過 成有機落媒可溶性部分與有機）分 乾燥物。用該乾燥物與前述⑴同樣二::;二別製備 分之乾燥物添加使成〗°°微二： 備σ醉飲科。又，乙醇不溶性部分之 T3t 微克/毫升，可製備含醇飲料。 添加使成60 (1”將諸丙夜葉粉末以有機溶媒(如 提謂(如水)柚提(如60t_小時)，得插提物:將 43· 本纸張尺度適财家料(CNS)城格(加χ297公f 1313605 A7
1313605 、發明説明（ 含量之含醇飲料。小時、對制工化乾燥物加抽提溶媒（如水）柚提（如60°C抽提2 醇飲^ 提物之Μ乾燥物，與前述⑴同樣製備含 古列如，將该乾燥物添加使所含之紅花明A之量為3 笔克/毫升’可製備含醇飲料。 ⑺對菊花乾燥物加抽提溶媒（如水）抽提（如㈣抽心 =’。製備插提物之冷;東乾燥物，與前述⑴同樣製備切 si私抵例如’將茲乾燥物添加使成2〇毫克/毫升，可製備含 人料。又’將該乾燥物添加可製備含於該乾燥物中之 瘡内酯為20微克/毫升之含醇飲料。 ⑷對明日葉乾燥物(葉莖部)加抽提溶媒(如水)抽提(例 〇 C抽提2小時）’製備抽提物之冷决乾燥物，與前述 製備含酵飲料。例如將該乾燥物添加可製備400微克/ 升之含醇飲料。 ^，對明日葉乾燥物（根部）加抽提溶媒（如水）抽提（例 6〇°C抽提2小時）’製備抽提物之冷凍乾燥物與前述（ 樣製備含醇飲料。例如將該乾燥物添加可製備_ 升之含醇飲料。 又，可製備添加該乾燥物使含於該乾燥物之黃當歸醇 量為1 0微克/毫升之含醇飲料。 可製備添加該乾燥物使含於該乾燥物之3 〇 _点_ D。 葡糖醯基開洛内酯之量為5 〇微克/毫升之含醇飲料。 可製備添加該乾燥物使含於該乾燥物之7 _ 〇 _石〇 葡糖醯氧基-8-異戊二浠基色滿之量為3〇微克/毫升之 小 醇 癒· 如 同毫 如 同毫 之 -45- 本纸張尺度通用中國國家標準(CNS) A4規格(21〇χ 297公釐) 1313605 A7 B7 43 五、發明説明（ 飲料。 可製備添加該乾燥物使含於該乾燥物之咖啡酸f酯之量 為20微克/毫升之含醇飲料。 可製備添加該乾燥物使含於該乾燥物之8 -幾基-3 -幾基_ 5 -甲氧基-2-二甲基色滿之量為3微克/毫升之含醇飲料。 可製備添加該乾燥物使含於該乾燥物之7 -召_ d - u比喃葡棒 氧基-6-異戊二缔基色滿之量為300微克/毫升之含醇飲料。 可製備添加該乾燥物使含於該乾燥物之4，_ 〇 _當歸酿基 3 - 〇 - [ 6 - 0 - ( /3 - D - p比喃葡糖基）-召-d - 〇比喃葡糖基卜開洛 内酯之量為400微克/毫升之含醇飲料。 氣備添加違乾燥物，使含於該乾燥物之咖啡酸乙自旨之 1為30微克/毫升之含醇飲料。。 (5 )對洋葱薄皮加抽提溶媒（如9 5容量％乙醇）抽提，製備 抽提物之冷凍乾燥物’與前述（1)同樣製備含醇飲料。例如 可製備添加該乾燥物使成丨〇〇微克/毫升之含醇飲料。 (6) 對銀杏茶葉加抽提溶媒（如水）抽提（如1〇〇 t抽提j小 時），製備抽提物之冷凍乾燥物，與前述（丨）同樣製備含醇 飲料。例如可製備添加該乾燥物使成700微克/毫升之本醢 飲料。 "" (7) 對薔薇花加抽提溶媒（如水）抽提（如6〇 t抽提i小 2)氣備抽提物之冷凍乾燥物’與前述（1)同樣製備含醇 料例如可製備添加該乾燥物使成80微克/毫升之含醇飲 料。 〇 (8) 依習用法，用啤酒花抽提物，與前述（1)同樣製備含
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44 A7 B7 醇飲料。例如可， 抽提物中、J ^製備添加該啤酒花抽提物，使含於啤酒花 icn片腐醇之量為3微克/毫升之含醇飲料。 k y )依習用法 醢私祉 ‘ ’用啤酒花抽提物，與前述（1)同樣製備含 人十。例如可制 抽提物中. ^備添加該啤酒花抽提物’使含於啤酒花 5腐醇之量為20微克/毫升之含醇飲料。 (10) 依習用.本 隨私Μ 用啤酒花抽提物’與前述（1)同樣製備含 醇飲枓。例如 ° ^ 1備添加該啤酒花抽提物’使含於啤酒花 拘物中之黃腐 ^ M $樹知β及黃腐醇D之總量為20微克/毫升之本 鮮飲料。 〇 (11) 依習用本 Μ 在’用啤酒花抽提物，與前述（1)同樣製備含 鮮飲料。例如-ρ如 k i r t備添加該啤酒花抽提物，使含於啤酒花 抽提物中之里 、貢腐鲜之量為80微克/毫升之含醇飲料。 料。2)將啤酒濃缩’用該濃縮物與前述（1)同樣製備含醇飲 ^ 力可氣備添加該濃縮物使濃縮物成1 0倍稀釋液之含 (13j將拽醇啤酒飲料濃縮，用該濃縮物與前述（i)同樣製 S醇飲料。例如可製備添加該濃縮物使濃縮物成1 〇倍稀 釋液之含醇飲料。 ()依0用法，用啤酒花抽提物，與前述（1)同樣製備含 醇飲料例如可製備添加該啤酒花抽提物’使含於啤酒花 抽k物之頁腐醇之量為0.04微克/毫升’異黃腐醇之量為1,3 微克/毫升之含醇飲料。 ， 又，可製備添加該啤酒花抽提物，使含於啤酒花柚提物 足黃腐醇之量為〇9微克/毫升，異黃腐醇之量為4微克/毫 -47- 1313605 五 發明説明（ 45 A7 B7 升之含醇飲料。 (1 5 )將卑酒彳C乾燥物粉碎，加抽提溶媒（如水）抽提（如6 〇 C抽提1小時），，濃縮所得抽提物，用該濃縮物，與前述 (1 )同樣製備含醇飲料。例如可製備添加該濃縮物使乾燥重 量為20微克/毫升之含醇飲料。 (1 6 )對紫鬱金碎斷物加抽提溶媒（如水）抽提（如6 〇 t抽提 2小時），製備抽提物之冷凍乾燥物，與前述（1)同樣製備含 醇飲料。例如可製備添加該乾燥物使成600微克/毫升之含 醇飲料。 (1 7)將大豆胚芽碎斷物以有機溶媒（如乙醇）洗淨後，加 抽提落媒（如水）抽提（如6crc抽提2小時），得抽提物。將抽 提物過滤，得濾液後’濾液中加有機溶媒（如25倍量之乙 醇）’分成有機溶媒可溶部分與有機溶媒不溶部分，分別製 備乾燥物。用該乾燥物，與前述（丨）同樣製備含醇飲料。例 如，可製備添加乙醇可溶部分之乾燥物使成5毫克/毫升之 含醇飲料。又可製備添加乙醇不溶部分之乾燥物使成3毫克 /毫升之含醇飲料。 (1 8)將大豆種皮碎斷物以有機溶媒（如乙醇）洗淨後，加 抽提溶媒（如水）抽提（如6〇t抽提2小時），得抽提物。將抽 提物過滤’得濾液後’濾液中加有機溶媒（如25倍量之乙 醇）’分成有機溶媒可溶部分與有機溶媒不溶部分，分別製 備乾燥物。用該乾燥物，與前述（〗）同樣製備含醇飲料。例 如，可製備添加乙醇可溶部分之乾燥物使成3毫克/毫升之 含醇飲料。又可製備添加乙酵不溶部分之乾燥物使成6⑻微 -48- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4规格(210 X 297公釐） 1313605 A7
1313605 A7 B7 五、發明説明（47 ) 升之含醇飲料。 (22)對前述⑴〜⑴）記載之含醇飲料，依習用法進行碳 酸飽和，可製備發泡型之飲料。又，對各飲料可製備含有 :成分與前述飲料之20倍量之無醇型飲料。以高濃度及μ 高純度含有成長因子產生增強物質之此等飲料，由於得以 顯示高之NGF產生增強作用，所以較佳。 :乂上，根據本發明提供以來自植物之歸產生增強物 λ、NGF產生增強物質為有效成分之hgf產生増強用食品 或飲料、NGF產生增強用食品或飲料。 例如’根據本發明提供含有效量之職產生增強物質之 食，或飲料，含有啤酒花抽提物食品或飲料中黃腐醇之含 有量較好為0.0_4重量％以上及/或異黃腐醇之含有量較 為o.ooou重量％以上之NGF產生增強用之食品或飲料，該 食品或飲料對相產生NGF為必要之疾病例如巴金森病: 老年性癡呆、例如阿兹海默症、腦血管性癡呆等之症狀改 善及疾病之預防極為有用。 又:，根據本發日月’提供高量含有具來自植物之成長 產生增強作用之有效成分之含醇飲料。於本說明書， 飲料係指含乙醇之飲料。含醇飲科中之乙醇含量二 〇口1〜50谷量％。又，亦提供使用本發明之含醇飲料之令 品，例如威士忌酒餡巧克力。 < 作為含醇飲料，適宜地可例示高濃度及/或高純度含 :自植物之成長因子產生增強作用之有效成分之含醇飲 ，到如添加來自植物之具成長因子產生增強作用之有效 -50- 本紙張尺奴斤???¥?^7~4規格(210 X 297公茇） 1313605 48 五、發明説明（ 本酒、合成清酒、中國酒、白酒、葡萄酒、威士 二“、伏加酒、白蘭地、杜松子酒、甜 泡酒、清凉酒精飲料、酸酒、〉.昆 發 等。 口 果《酒、療·餾滴 之乙醇濃度通常較好為。“η重量 = 〇·5〜8重！％，再更好41〜6容量％1 如釀造用醇、酒精類(甜酒、伏加酒 '二 威士心、白鬧地 '或燒酒等分別單獨或併用。 裝 作又二含醇Λ料，可將來自植物之具成長因子產生增強 、土。=效成刀’與乙醉’依所望之其它成分混合而製 將所望之植物浸潰於乙醇濃度於前述所望範圍之 飲料中，自該植物將具成長因子產生增強作用之有效 成为抽提，亦可製造本發明之含醇飲料。 、本發明之含醇飲料為成長因子產生增強用飲料。本發明 ^飲料之製造，可使用從來所製造之原材料及方法。例 二作為原材料’可使用甘味科、著色料、酸味料、調味 線 2、乳化劑、纖維素強化劑、食物纖維等之機能性食品辛 材私香辛料、香料、增黏劑、確物等之食品素材之食品添 加物等之可飲食之物質。 本發明之含醇飲料之ΡΗ，可於通常之食品所取範圍内選 擇’通常可於ρΗ2〜7之範圍選擇。本發明之清涼醇飲料， ^任意的有或無碳酸飽和。進行竣酸飽和之情形，製品之 氣w合積1以上為佳，更佳為〗3〜3之範圍。又，本發明之 含醇飲料，亦可進行添加果枝、蔬菜汁、果肉、蔬菜片。 -51 - 297公釐） 本紙張尺度 A4_2i(): 1313605 A7 B7
五、發明説明（ 又 枨據本發明 促折X Λ或鈕土L山 重晉0/以具黃腐醇0.0003 重成長因子產生增強用之食品或飲料。
向來為含啤酒化抽提物之飲料之啤酒 A 有使用於本發明之黃腐醇，A ‘:、酉中。 〇·職克⑽毫升，8公司製啤酒之\卑：,-腐醇含量為 /100毫彳，c公司製啤酒之黃腐 ！42.^克 ^ . 畔。量為〇·7〇微克/100臺 升，任一者之啤酒皆不相當於本發明士人女— 重量％以上之飲料。 ，月疋3有育腐醇0.0_7 、^發明之作為食品或飲料中含黃腐醇㈣嶋重量％以上 <食品或飲料之製造法無限定 土赴π、* 例如可於哮酒中添加含有 ，腐k啤酒花’可將無料酒作為原料使用，亦可 对、_飲料、嗜好飲料等之製造原 、， 冰#=原枓中，使用含黃腐醇之啤 =提物。使用啤酒花本身代替啤酒花抽 為本發明之範圍。又，亦可將咮.灰_ i 田… gn . , _ .卑/酉化抽提物本身作為本發 月<成長因子產生增強用组合物使用。 明之食品或飲料中之黃腐醇含量，由生理學效果盘 目月匕〜果決足即可，食品或飲料中，較好含0 00007重量％ 乂上即可’通常G.GGG1〜G.GG1重量％之範圍為適宜。 =，本發明提供含有成長因子之產生增強物質之食q ,料或含有其處理物為有效成分之成長因子產生增強：食 抑或飲料。作為含成長因子產生增強物質之食品或飲料可 例示哮酒類。作為啤酒類例示啤酒、發泡酒、無醇啤酒飲 料、此等之濃縮物、此等之稀釋物、含啤酒花抽提物之^ 料，例如將啤酒、發泡酒作為成長因子產生增強用之飲料 A4^(210 •52- x 297公釐） 1313605 五 、發明説明（ 50 亦可’作為食品或飲料之原料亦可。又，啤酒類之處理 物，例如濃縮物及稀釋物作為食品或飲料亦可。 本發明另有關含啤酒花抽提物之成長因子產生增強用之 ^或飲料。作為啤酒花抽提物’可使用市售之哮酒花抽 &物’通常食品或飲料中較好含請Q1重量％以上 含0.002〜〇.〇2重量％即可。任—者皆藉由本發明所揭示之 例如實施例4⑴及實施例13)，測定啤酒花抽提物中 、一因子產生增強活性，自官能與生理活性之點，決 酒化插提物之含有量’製造本發明之食品或飲科即可。 根據本發明提供含料酒花抽提物，食品或飲料 腐广較好含〇.〇〇〇〇〇〇〇6重量％以上，異黃腐醇較好= 料_。5重! %以上之成長因子產生增強用之食品或飲 根據本發明提供含有啤酒花抽提物，食 =腐醇較好含請_32重量％以上，異黃 ^ 飲料。 《濃厂予型义成長因子產生増強用食品或 之另據本發明提供含啤酒花抽提物，食品或飲料中 (頁腐醇較好含0.00007重量％以上n 枓中 之成長因予產生增強作用。食4飫料具高活性 作為未發明之食品或飲料，只要含 強作用之來自植物夕占且㈤ ' 我因子產生增 表現其生理機予產生增強用組合物，含有供 機“必要之量即可，其形狀無特別限定，亦 -53-χ 297公釐） 1313605 A7 B7 五、發明説明（ 包含鍵劑狀、顆粒狀、膨蚤 β、 囊狀寺足形狀之經口可攝取之形 狀物。 本發明k供含有成長因子產生增強物質為有效成分 、具j長目子產生增強作用之生物用飼料。作為該飼 枓提供與前述食品或飲料同#，含有前述成長因子產生增 強用組—合物所成之成長因子產生增強用之飼料，以高濃度 ^或高純度含有前述成長因子產生增㈣f為特徵之詞 以高濃度及/或高純度含有前述成長因子產生增強組合 物《飼科，含黃腐醇〇._07重量％以上於飼料中所成之神 經成長因子產生增強用之飼_ ’含前述成長因子產生增強 物質所成之飼料或含其處理物所成之成長因子產生增強用 《飼料（較好為含啤酒類之態樣），及含哮酒花抽提物所成 足成長因子產生增強用之飼料。作為使用之成長因予產生 增強物質，與前述食品或飲料同樣，€自由氣原酸、4 啡醯基奎寧酸、咖啡醯基奎寧酸、異荭草素、红花明A 癒瘡内醋、黃當歸醇、3，-〇U“比喃葡糖基開洛内醋、 7-0-沒-D-峨喃葡糖氧基_8-異戊二缔基色滿、咖啡酸甲 酉旨、咖啡酸乙酿、8-羧基_3_羥基_5_甲氧基_2_二甲基色 滿、7-/3-0-D-吡喃葡糖氧基·6_異戊二烯基色滿、4，_〇_ 當歸酿基^-…◦-(^“比喃葡糖基卜^峨喃葡糖 基]，洛㈣、異黃腐醇、黃腐醇B、黃腐醇Μ黃腐醇 成之群之1種以上之化合物為佳。 另外，作為別的一種態樣，亦提供以投予前述有效成分 -54- 本紙張尺度ίϋ中國國家標準(CNS) Α4规格(210 X 297公釐) 1313605 A7
於生物為特徵之生物之飼育 劑 丨F局尽發明之別〜樣，提供以含前述有效成分為特徵之生物 Ο 万;此寺（發明，生物養殖動物、寵物動物等，作為養殖動物可例示家畜、實驗動物、室金 只知勁物豕禽、魚類、甲殼類、或男作4飼料例示身體狀況之維持及/或改善用飼料。作為 生物飼育用劑例示浸漬用劑、飼料添加劑、飲料用添加劑0 根據此等之發明，於如前面例示適用彼等之生物，基於 本發明使用之前述有效成分之成長因子產生增強作用了可 期王入本發明之岫述治療劑或預防劑同樣之效果之表現。 亦即’自此等之發明可期待於該生物之須要成長因子產生 增強作用之疾病之治療或與預防效果。 使用於本發明之前述有效成分’通常投予對象生物之體 重A斤每天較好〇·〇 1〜2000毫克。投予可例如將該有效 j分先添加於供對象生物用之人工摻合飼料之原料中混 口，或與人工摻合飼料之粉末原料混合後，再進行添加混 口於其他原料中。又，前述有效成分於飼料中之含有量無 特別限疋，依目的適宜設定即可，0.001〜1 5重量％之比例 為適宜。 作為人工摻合飼料’可舉魚粉、酪蛋白、墨魚粉等之動 物f生原料，大旦糟、小麥粉、澱粉等之植物性原料，飼料 用酵母等〈微生物原料、鳕魚肝油、黑錢油等之動物性 -55 - 本紙張尺度適财ϋ ® “準(CNS)-
裝 訂
1313605 A7 B7 五、發明説明（53 油脂、大豆油、菜種油等之植物性油脂 '維生素類、礦物 類、胺基酸、抗氧化劑等作為原料之人工摻合飼料。又可 舉魚肉碎肉等之魚類用飼料。 本發明之用飼 < 製法無特別限定，又摻合亦只要依一般 之飼料即可’製造之飼料中，只要含有具成長因子產生增 強作用之有關本發明之前述有效成分即可。 、又，亦可將具成長因子產生增強作用之有關本發明之前 逆有效成分聚集一起，直接添加於水槽、保持槽或飼養領 域之水、每水等，使對象生物浸潰而投予。此浸潰方法， 對於對象生物之飼料攝取量降低時，特別有效。水或海水 中具成長因子產生增強作用之有關本發明之有效成分之濃 度，無特別限定，只要按目的使用即可較好為〇 OOOOiy重 量％之比例為適宜。 又’將含有具成長因予產生增強作用之有關本發明之前 述有效成分之飲料作為飼養用飲料，使對象生物攝取亦 可本發明使用之該飲料中具成長因子產生增強作用之有 效成分之濃度，無特別限定’按目的使用即可，〇 〇〇〇 1〜1 Ϊ量％之比例為適當β當具成長因子產生增強作用之有關 本發明之前述有效成分之生物飼養用劑，例如浸潰用劑、 飼料添加劑、飲料用添加劑’以本身已知之捧合及製造法 製造即可。於該生物飼養用劑中之有效成分之含量，只要 可得本發明所希望之效果即可，無特別限定。 作為本發明可適用之生物無限定，作為養殖動物可舉 馬、牛、豬、羊、山羊、駱駝 '羊駝等之家畜，小鼠、大 -56- 本紙張尺度適用中國國家诔準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1313605 A 7 B7 54 五、發明説明（ 鼠、土撥鼠、兔等之實驗動物、雞、鴨、火雞、駝鳥等之 家畜，棘t魚、石鯛、比目魚、碟娜、飯、平真（Seri〇u lalanndi)、鮪、縞綷、香魚鮭、鱒類、虎河豚、鰻、泥 鰍、鯰等之魚類，大蝦、黑虎（bUck tiger)、大正蝦 (fleShy Prawn)、三疣梭子蟹（Portunus = ltUberculatus)等之甲殼類，鮑魚、蠑螺、海扇、牡蠣 等之貝類作為寵物動物，可舉描等，可廣泛適用於陸上、 水中動物。 精由使攝取含本發明使用之具成長因子產生增強作用之 珂述有效成分之飼料，或使對象生物浸潰於具成長因子產 生增強作用足含使用於本發明之前述有效成分之液體，可 將家畜 '實驗動物、家禽、魚類、甲殼類、貝類、寵物動 物等之身體狀況維持良妤，或可使改善。 如上所述，本發明提供了各種具有成長因子產生增強作 用之醫藥品、食品、飲料、飼料等，其中，從本發明所要 的效果的表現之觀點而言’含有癒瘡内醋做為成長因子產 生增強物質的成長因子產生辦雜jjl彡人^ 心tc u T座生增強用組合物、治療劑或預 劑及食品、飲料或飼料為特佳者。
另外’作為本發明之另外態樣’提供使用有關本發明之 前述有效成分於必要增強成長因子產生之疾病之、 成長因子產生增強劑、或成長因予產生增之食/ 料或飼料之製造作為此使用之態樣，可舉本發明之 療劑或預防劑、成長因子產生增強劑、或使 Z 分製造成長因子產生增強用之食品、飲料或飼科之賤樣。 57-本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(21〇x297公釐） 1313605 A7
例如，前述有效成分於製造必須增強成長因子產生、' 之治療劑或預防劑’或成長因予產生 < 疾病 ，> u、 上％強劑炙使用，製诰
口心（錠劑、顆粒劑、散劑、粉末劑、膠囊劑等之固开, 劑，、通常液劑、懸浮劑、乳劑等之液劑…使用前藉苏 加適當載劑成液狀乾燥品，為其例示。 J 又，本發明作為有效成分使用之成長因子產生增強物 質’以1克/公斤體重對大鼠經口單次投予，亦無認定死亡 例0 以下舉實施例’更具體說明本發明，本發明無論如何不 限定於此等之實施例。又，只要無特殊之情形，於實施例 之％意即重量％。又，有將部分稱為級分部分之情形。 實施例1 (1 )將竹葉冷凍乾燥後粉碎之竹葉粉末6 7克懸浮於1〇〇毫 升之氯仿’過濾、回收不溶部分，反覆此操作3次，其後， 懸浮於100毫升之乙醇’過濾，回收不溶部分，反覆此操作 3次。自此操作所得之不溶部分完全除去乙醇，懸浮於1 〇〇 毫升蒸餾水。此懸浮液於6 0 t保溫1小時後，過濾。濾液 中加2.5倍量之乙醇’於· 2 〇。(：冷卻後，於低溫離心得沉 殿。將此沉澱溶於蒸餾水，冷凍乾燥，得含粉狀糖之竹葉 抽提物^ (2 )將實施例1 - (1)製備之竹葉抽提物之1 〇毫克/毫升水溶 液3 00微升，裝入micron 3000 cut(阿米控（7 3 y )公司 製）’以10000 rpm離心9 0分，製備通過濾膜之部分（下層部 分）。另外，殘留於上層之部分，再溶解於300微升之蒸餘 -58- 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1313605 A7 B7 五、發明説明（ 水’製備上層部分。 實施例2 將洋忽之茶色薄皮5克懸浮於蒸餾水i 〇〇毫升，於丨〇〇。〇保 溫15分後’除去洋葱薄皮，得5%洋葱薄皮抽提物。 實施例3 將銀杏茶葉（100% GINKGO、BILOBA TEA :商品名 GINGOTON、Gingoton公司 ’ Gardena OA 90248 USA)3 克 懸浮於蒸餾水200毫升，於l〇〇t保溫15分後，以過濾除去 銀杏茶葉’得上清液。將此上清液冷凍乾燥後，溶解於8毫 升蒸餾水，得銀杏茶葉抽提物》 實施例4 (1 )將實施例1 - ( 1)製備之竹葉抽提物（試樣* )、實施例 i-(2)製備之下層部分（試樣来）上層部分（試樣套）測定HGF 產生增強活性，將懸浮於含1 0 %胎牛血清之DME培養基中 使成1X105細胞/毫升之MRC-5細胞（CCL 171 :大曰本製 藥杜製，code. 02-021 )500微升裝入4 8孔之細胞培養皿中， 於3 7 °C、5 % C02存在下培養2 4小時後，交換成含1 %胎牛 血清之DME培養基。其後，添加試樣，再培養2 4小時後， 回收培養基，使用 Quantikine Human Hepatocyte Growth Factor (HGF) ELISA套組（船越（7十3シ）公司製，Code. RS-0641-00)，測定培養基中之HGF之量。HGF之產生量作 為負對照以100%表示。添加使試樣*最終濃度為0.001、 0.01、0.1、1微克/毫升，使試樣*、♦最終濃度為1、 10、100微克/毫升。作為負對照’添加與試樣同量之蒸餾 -59- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公爱） 1313605 A7 B7 五、發明説明（ 水。HGF之產生量作為負對照1 00 %表示。試樣*之結果示 於表1，試樣来、♦之結果示於表2。實驗全部以2份進行’ 採用其平均值。如表1、2所示，此等之試樣增強HGF之產 生。尤其試樣*及♦添加群，HGF之產生量增加很強。藉 由此，竹葉抽提物顯示有增強HGF產生之活性。另外，由 上層部分中有HGF產生增強活性，比分子量3000高分子之 物質，可認定誘導HGF產生之活性。 表1 試樣*滚度（#g/ml) HGF產生量(％) 0 100 0.001 123 0.01 118 0.1 182 1 570 (但，對照組之HGF產生量為8.79毫微克/毫升。） 表2__ 試樣濃度Ug/ml) 試樣来之HGF產生量(％) 試樣♦之HGF產生量(％) 0 100 100 1 106 417 10 109 584 100 216 476 適用中國國家標準(CMS) A4規格(210 X 297公发 1 -60- 1313605 A7 B7 五、發明説明（ (但’對照組之HGF產生量為9.99毫微克/毫升。） (2 )將細切之竹葉約5克與5 0 %丙酮7 0毫升一起攪摔1 5分 以上，以吸收過濾所得抽提液，再以同量溶媒抽提殘渣。 與實施例4 - ( 1)同樣之方法調查此粗抽提液之H G F產生増強 活性時，如表3所示確認活性。將粗抽提液減壓濃縮，濃縮 液以水稀釋20倍，將其一部分供予1〇毫升份之安巴來特 (Τ >八一今彳卜）XAD-2(歐加諾（才小力’ / )公司製），以 30%、40%、50%、60%甲醇水溶液及甲醇各30毫升依次 落離。各溶離份測定HGF產生誘導活性時，4〇 %甲醇、 3 0 %甲醇溶離份確認了活性。將3 0 %、4 0 %甲醇溶離份濃 縮，使乾，供予二氧化矽管柱層析，以氯仿：甲醇：乙酸 =3 : 1 : 2.5 %展開溶離，各取1 〇毫升。 以1H-NMR、FAB-MS分析之結果，於第19〜士、 J 5支 < 溶離 份’可彳寸含南濃度之異兹草素（isoorientin)，如本^ 衣* 4所示， 此溶離份可確認HGF產生增強活性。
^-NMR isoorientin ： σ Ί.51 (1Η, dd, J 8, 2Hz), 7.55 (lu , ’ d，J 2Hz), 7.02 (1H，d，J 8Hz)，6.81 (1H，s), 6.63 (1H，d j ’ δΗζ), 4.74 (1H，d，J 10Hz)，4.19 (1H，t, J 4.5Hz)。 FAB-MASS 449 (M+H) -61 -
本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 1313605 A7 B7 五、發明説明（ 表3 竹葉粗抽出液(％、 HGF產生量(％) 0 100 0.1 195 1 463 (但’對照組之HGF產生量為9〇9毫微克/毫升。） 表4 異歐里斯汀含有部分(〇/0) HGF產生量(％) 0 100 0.1 131 1 318 (但’對照組之HGF產生量為9.62毫微克/毫升。） (3)將市售之乾李子約3〇〇克與甲醇5〇〇毫升一起以混合機 磨碎’以吸引過濾得濾液。將此濾液1毫升濃縮使乾，溶於 1愛升之DMSO之李子粗抽提液經調查HGF產生增強活性， 如表5所示可確認活性。 將所得粗抽提液濃縮，除去抽提溶媒，以水稀釋成1升， 供予200毫升之安巴來特xaD-2(歐加諾公司製），以500毫 升H2〇洗淨後’以〒醇溶離吸著部分，所得之溶離部分經 濃縮後，溶於少量水後，供予Cosmosil 140C丨s-〇PN(拿卡 來鐵斯克（十力今 < 千只夕）公司製）’以水與2 5 %之乙腈水 溶液，合計8〇〇毫升之梯度溶離各取約1 〇毫升。所得之溶 -62 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210><297公爱) ' 1313605 A7 B7
離份以1 Η - NMR分析之結果，第2 6 ★ 4 1支〜弟4 8支足部勿，分別得含高濃 — 表6所示，可確認
酸、4 -咖啡醯基奎寧酸之溶離份，分別"^之5 -咖啡醯基奎争 HGF產生增強活性。 U
H-NMR 5-caireoyl-quinic 7，J mwzj，/.19 (1H S), 7.12 (1H, d,J8Hz), 6.93 (1H, d, J 8H2), 5.40 (1H； m； 4.18(1H，m)，3.77(1H，dd，J9,5,4,5Hz)，22〜i6(5H，m) ’ 4-caffeoyl-quimc acid ： σ 7.49 (1H, d, J 15.5Hz), 7.04 (lH, d, J 4Hz), 6.99 (1H, dd, J 8, 4Hz), 6.73 (1H, d, J 8Hz), 6.27 (1H, d, 16Hz), 4.65 (1H, dd, J 8, 3Hz), 4.08 (1H, m), 2_2〜1.6 (5H, m) 表5 李子粗抽出液(％) HGF產生量(％) 0 100 0.01 111 0.1 214 1 306 (但，對照組之HGF產生量為8.02毫微克/毫升。） -63- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 1313605 A7 B7 五、發明説明（61 表6 試料 濃度(mg/ml) HGF產生量(％) 5-咖啡醯基奎寧酸 0 100 0.01 111 0.1 321 高含量4-咖啡醯基奎寧酸之部分 0 100 0.01 103 0.1 142 (但，對照組之HGF產生量為9.98毫微克/毫升。） (4)將市售之青花菜約300克與5 0 %乙醇水溶液3 50毫升一 起均一化，以過滤得滤液。將殘法以5 0 %乙醇水溶液3 5 0毫 升再度均一化，匯集所得濾液，減壓濃縮成1 50毫升。此濃 縮液與實施例4 - ( 1)同樣地調查HGF產生增強活性時，如表 7所示確認HGF產生增強活性。 表7_ 青花菜粗抽出液(％)_HGF產生量(％)_ 0 100 0.01 105 0.1 173 1 258 (但，對照組之HGF產生量為6.80毫微克/毫升。） 實施例5 -64- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1313605 A7 B7 62 ) 五、發明説明（ 實施例2製備之洋友'薄皮柚提物（試樣* )，與實施例4 _( 1 ) 同樣方法檢討於實施例3製備之銀杏葉抽提物（試樣* )之 HGF產生增強活性。試樣分別以蒸餾水稀釋1、1 〇、丨〇〇 倍’分別將稀釋液5微升添加於培養基。作為負對照組，添 加與試樣同量之蒸餾水。作為HGF之產生量，負對照組以 100 %表示。其結果示於表8 ^實驗全部以2份進行，採用其 平均值。如表8所示，試樣*、来增強HGF產生。由此，洋 葱薄皮抽提物、銀杏葉抽提物顯示有HGF產生增強活性。 表8 試才度 〇 100倍稀釋 10倍稀釋 1倍稀釋 土樣*之HGF產生量(％)試樣睾之HGF甚在吾 100 122 266 248 (但’對照組之HGF產生量為1〇_〇1毫微克/毫升 100 214 358 199 實施例6 (1) 作為菊科植物之艾嵩’收獲笹春艾嵩後，使用使3年 熟成之物’水洗該熟成物後’以蒸氣力σ熱方式之抽提機， 於⑽〜H)5t進行7小時之熱水抽提，製備^抽提物。再 將此㈣物蒸㈣小時’使成Μ ’其次以製錠機旋劑 化。
(2) 將實施例6-(1)製備之錠劑（泉湖舍D $ 社製）粉碎之粉 -65 各紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1313605 A7 B7 五、發明説明（63 末1 5.563克懸浮MG0毫升氣仿，過滤、回收Μ部分反 覆此操作2次，自此操作所得之不溶部分完全除去乙醇，縣 浮於⑽毫升錢水中。此懸浮於 遽。毅中添加2.5倍量之乙醇，於·2〇t冷卻後，於低溫 離心’得沉澱。將此沉救溶於藥餘水，冷束乾燥，得含粉 末狀之糖之部分。 (3)與實施例4_⑴同樣之方法檢討於實施例6•⑺製備 之签春艾嵩抽提物之HGF產生增強活性。添加使甚春艾嵩 抽提物最終濃度為1、i 〇、1〇〇微克/毫升。作為备對昭 組，添加與試樣同量之蒸餘水。HGF之產生量，作為負對 照組以100%表示。其結果示於表9。實驗全部以2份進行， 抹用其平均值。如表9所示，笹春艾嵩抽提物增強时F產 生0
HGF產生量(％) (但，負對照組之HGF產生量為5.27毫微克/毫升 實施例7 U)將明日葉乾燥品（阪本漢方堂杜製）48〇克以i升乙酸乙 -66 丨X 297公釐） 1313605 A7 __ _ B7 五、發明説明（^ ) 64 酯抽提2次，以1升乙醇柚提2次，其殘渣中加2升水於6 0。(： 抽提1小時。將抽提濾液濃縮成250毫升後，添加乙醇5 0毫 升’除去不溶物質後，將所得上清液減壓濃縮。將濃縮物 之約一半量供予XAD - 2 (歐加諾公司製）300毫升，以水600 毫升洗淨後，以3 0 %甲醇600毫升（溶離份1 )、6 0 %甲醇 500毫升（溶離份2 )、100 %甲醇600毫升（溶離份3 )之順序階 段性溶離吸著部分。使此等溶離液乾固後，分別溶於5 〇毫 升之水，以與實施例4 - ( 1)同樣方法，測定各部分之HGF產 生增強活性。但，添加使各別之部分之最終濃度為0.0 1、 〇· 1、1 %。其結果示於表1 〇。實驗以2份進行’採用其平均 值。如表1 0所示，此等溶離份任一者皆顯示HGF產生增強 活性。 表1 0 試樣 最終濃度(％) HGF產生量(％) 溶離份1 0.01 111 0.1 150 1 364 溶離份2 0.01 162 0.1 223 1 388 溶離份3 0.01 107 0.1 145 1 274 (但，對照組之HGF產生量為10.88毫微克/毫升。） -67- 本紙張尺度適用中國國家標苹(CNS) A4規格(210X 297公釐） 1313605 A7 ___ B7 五、發明説明（ ） 65 } (2 )另外’將溶離份3於矽膠板（默克（/小少）公司製）上 展開’以丁醇：乙醇：乙酸：水=丨〇 : i 1 : 1為展開溶 媒展開，進行溶離，以與實施例4-(1)同樣方法測定各點之 HGF產生增強活性。其結果於Rf值〇·3附近於254 nm顯示吸 收之化合物（以下’示為化合物（丨有HGF產生增強活性 存在。以1 H-NMR解析此化合物（1)時，如第1圖所示與氯 原酸標品（夕戈馬（シ/ Y )公司製）一致，確認化合物（1 )為 氯原酸。又’以與實施例4 - ( 1)同樣方法，檢討氯原酸標品 之HGF產生增強活性’如表1 1所示，確實地確認其之hgf 產生增強活性。 表1 1 氯原酸濃度（#Μ) HGF產生量(％) 0 100 1 105 10 122 100 302 500 479 1000 624 (但’負對照組之HGF產生量為8 · 1 〇毫微克/毫升。） (3)另外，將氣原酸標品作為標準品，以HPLC(TSKgel ODS-80Ts(柬梭公司製）、A液：水（含〇_i% TFA)、B液： 5 0 % 乙腈（含 〇. 1 % TF A )、0 分-B 2 5 %、2 0 分-B 7 5 % )分 -68- 本紙張尺度適用中國國家標率(CNS) A4規格(210 x 297公釐） 1313605 A7 B7 五、發明説明（ 析含於溶離份1〜3中之氯原酸量， ，其結果示於表1 2。 表1 2 溶離份1 7.5 溶離份2 35.7 溶離份3 5.3 又’自表10、12之結果’含於溶離份卜3之氯原酸濃度 與各溶離份之HGF產生增強活性之相關關係示於圖2，自表 1 1之結果，氯原酸標品濃度與HGf產生增強活性之相關關 係示於圖3。此等之相關關係大致一致。自此確認各溶離份 之HGF產生增強活性主藉由氯原酸。又，於圖2、圖3，橫 轴表鼠原濃度之對數，縱轴表HGF濃度。 實施例8 以5 0 %丙酮500毫升將艾嵩乾燥品（阪本漢方堂杜製）4 〇克 抽提3次後’減壓濃縮至約3 5毫升。濃縮液中添加丨〇 %檸 檬酸水溶液，以乙酸乙酯1〇〇毫升抽提3次後，以河的〇4將 有機層乾燥、減壓濃縮。濃縮物供予二氧化碎層析，以氯 仿：甲醇：乙酸=2 : 1 : 1為展開溶媒，各取8毫升。所得 之溶離份7〜13 ’匯集、減壓濃縮後，以氯仿：甲醇：乙酸 =1 : 1 : 0.05為展開溶媒’於矽膠板上展開，回收於值 0_5附近之於UV 254 nm顯示吸收之物質（以下稱為化合物 (2)) 225毫克。以1H-核磁共振（NMR)光譜儀（JNM-A500 : 曰本電子公司製）構造解析此物質之構造。 -69- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1313605 A7 B7 五、發明説明（ H-NMR : 〇 7.46 (1H, d, J 15.5Hz), 7.45 (1H, d, J 15.5Hz), 7.02 (1H, m), 7.00 (1H, m), 6.93 (2H, m), 6.72 (1H, d, J 8.5Hz), 6.70 (1H, d, J 8.5Hz), 6.20 (1H, d, J 15.5Hz), 6.17 (1H, d, J 15.5Hz), 5.33 (1H, td, J 10.5, 4.5Hz), 5.13 (1H，m)，3.68 (1H，dd, J 10, 3Hz), 2.2-1.6 (5H, m)。 圖4表示1 h-NMR光譜。於圖4，橫軸表化學位移值 (ppm )，縱軸表信號強度。自此等結果，確認化合物（2)為 3，5 -二咖啡醯基奎寧酸。以與實施例4 - ( 1 )同樣方法’檢討 3，5 ·二咖啡醯基奎寧酸之HGF產生增強活性。明白其結果 如表13所示，3,5 -二咖啡醯基奎寧酸具HGF產生增強活 性。 表1 3 3,5-- 办啡醯基奎寧酸濃度(；zM) HGF產生量(％) 1 142 10 206 100 290 (但，對照組之HGF產生量為6.27毫微克/毫升。） 實施例9 (1)將艾嵩乾燥品（阪本漢方堂社製）丨〇克碎斷’以氯仿 ⑽毫升抽提5次，以乙醇100毫升抽提5次之殘渣中加水 1 50毫升’於6 〇。〇抽提1小時 .人，為 ^ 7 件抽才疋濾欲。於此濾液13 1 宅升中加326毫升乙醇，於_20。广輕3?"·»。、^ 、2 U C静置3 0分後，進行離心’ -70- 1313605 A7 B7 五、發明説明（ 將所得上清液冷凍乾燥，得艾嵩之熱水抽提低分子部分（溶 離份4 )。將此溶於水4 5毫升，添加使最終濃度為〇 〇 1、 0 1 % ’以與實施例4 - ( 1 )同樣方法，檢討hgf產生增強活 性。其結果如表1 4所示，明白溶離份4中具Hgf產生增強 活性。 表1 4 溶離份4最後濃度 0.01 HGF產生量(％) 258
(^)又’以與實施例7·(3)同樣方法定量含㈣離份4之氣 原酸、3,5-二咖啡醯基奎寧酸含量，試樣原液中分別含7.7 mM、13 mM之濃度。自以上之結果，明白氯原酸•二 咖啡酿基奎寧酸為分別藉由艾嵩抽提物之咖產生增強活 性物質之一。 g 實施例1 0 (1)將國產菊花（星 3林...工；知運j A南部叮製兄 冷来乾燥後’於碎斷物中加丨〇〇〇毫升素 w Λ ν乳访，於室溫進行抽 挺？去殘澄之液體部分’以旋轉蒸發器濃縮使乾 仿抽提部分。其次，於殘渣中加5 〇〇毫 ' 抽提。以旋轉蒸發器將除去殘澄之液體部：濃=進行 乙醇插提部分。其次，於殘法中力"=使乾’得 Μ毛升蒸餾水’於㈧ -71 - 本紙張尺度適财❿家標準(CNS) M規格(⑽x 29?公董) 1313605
C抽k 2 ^時。除去殘渣之液體部分中加倍量之乙醇， t - 30 C靜置2小時。其後，以旋轉蒸發器將以i〇,〇〇〇g離 ^除去’儿,知物之液體部分濃縮使乾，得國產菊花之水抽提 部分。 」2)以與f施例4-(D同樣之方法，檢討實施例10-(1)所 仵（國產菊花之水抽提部分之HGF產生增強活性。添中使 國產莉花<水抽提部分之最終濃度為1%。其結果如表15所 示月白國產菊花之水抽提部分中有HOF產生增強活性。 表1 5 抽提部分最後濃彦(mg/ml)
(但’對照組之HGF產生量為12.5 1毫微克/毫升 (3)將中國產菊花（中國，於大連市之當地市場購得克 冷凍乾燥後，於碎斷之物中加500毫升氯仿，於室溫進行抽 提。以旋轉蒸發器將除去殘渣之液體部分濃縮使乾，得氯 仿抽提部分。其次，於殘渣中加5〇〇毫升乙醇，於室溫進行 抽提以旋轉蒸發器將除去殘渣之液體部分濃縮使乾，得乙 醇柚提部分。其次’於殘渣中加300毫升蒸餾水，於6〇χ： 抽提2小時。於除去殘渣之液體部分，加2.5倍量之乙醇， 於-30^：靜置2小時。之後’以10,000G之離心分成沉澱物 與液體部分。液體部分以旋轉蒸發器濃縮使乾，得水抽提 部分。 -72-
本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐） 1313605 A7 B7 五、發明説明（70 (4)實施例10-(3)所得之中國產菊花之水抽提部分，以與 實施例4 - ( 1 )同樣方法，檢討HGF產生增強活性。添加使中 國產菊花之水抽提部分最後濃度為丨.5、1 〇 %。其結果，如 表1 6所示’明白中國產菊花之水柚提部分中有HGF產生增 強活性。 表1 6 中國產菊花之水抽提部分最後濃度(毫克/毫升） HGF產生量(％) 0.71 267 3.55 373 7.10 367 (但，對照組之HGF產生量為12 ·51毫微克/毫升》) 實施例1 1 以與實施例4 - ( 1 )同樣方法，檢討後述之實施例3 8 _ (丨）製 備之紫鬱金乙醇抽提部分_2、水抽提部分_丨、水抽提部分_ 2之HGF產生增強活性。添加使乙醇抽提部分_ 2之最後濃度 為ίο微克/毫升，水高分子部分_〗之最終濃度為132、132〇 微克/毫彳’水高分子部分_2之最後濃度為22、22微克，毫 升。HGF之產生量，作為負對照組表示為_%。其結果示 於表17。實驗全部以2份進行，採用其平均值。如表"所 示，紫t金乙醇抽提部分.2、水柚提部分]、水抽提部分_ 2增強HGF產生。 -73- 1313605 A7 B7 五、發明説明（ 表1 7 試樣 濃度(微克/毫升） HGF產生量(％) 紫鬱金乙醇 0 100 抽提部分-2 10 157 紫鬱金水抽提部分-1 0 100 132 185 1320 324 紫鬱金水抽提部分-2 0 100 2.2 182 22 207 (但，對照組之HGF產生量為13.99毫微克/毫升。） 實施例1 2 (1)將春菊冷凍乾燥，於粉碎物1 0克中加氯仿100毫升攪 拌過滤、回收殘逢。_此氣仿之添加，殘逢之回收共進次5 次，殘逢中加乙醇10 0毫升、擾拌、過滤、回收殘查。此乙 醇之添加、殘渣之回收共進行5次。殘渣中加蒸餾水100毫 升，於6 0 °C保溫1小時後，冷凍乾燥經過濾之濾液，得試 樣。將此抽提物溶於蒸餾水，以與實施例4 - ( 1 )同樣方法調 查HGF產生增強活性，如表1 8所示_ 表1 8 f確認活性。 溶離份4最後濃度(微克/毫升） HGF產生量(％) 0 100 1 125 10 148 100 314 (但，對照組之HGF產生量為8.2 1毫微克/毫升。） -74- 本紙張足度適用中國國家標準(CNS) A4規格（210X 297公釐） 1313605 A7 B7 五、發明説明（ :市售之春菊900克冷;東乾燥，與8〇%乙醇2升一起於 混合機磨碎，以紗布進行過慮 件抽&硬。褚由減壓濃縮 此抽k液至200 ¾升，製備春菊之粗抽提液。 其次’將所得粗抽提液！⑻毫升份供予安巴來特副韻 脂（歐加諾公司製）2〇〇毫升，依次以水、甲醇3q%、4㈣、 60%之各水料、甲醇分別5⑻毫升溶離。各別之溶離份濃 縮至500耄升，以與實施例4 Μ、π接、 只犯灼4 (1)同樣万法，確認各溶離份 之HGF產生增強活性’如表19所示，於6()%甲醇溶離份之 濃縮物可見到HGF產生增強活性。 又，添加使此濃縮物為〇·1%、1〇%(容量比）。 此6 0%甲醇溶離份以iH_NMR解析，明白其含高濃度之 3，5 -二咖啡醯基奎寧酸。 表 1 9_____ 試樣濃度(％) 〇 〇1 1 HGF 產生量(％) ion_220_349 (但，對照組之HGF產生量為8.22毫微克/毫升。） 實施例1 3 將小鼠纖維芽細胞L - Μ細胞（ATCC CCL-1.2 )，以1.5 X 1 05細胞/毫升懸浮於含〇. 5 %細菌腺（八夕卜久彳卜y )(紀夫 可（半、7：〇公司）之”199培養基（1€]^公司製），於96孔皿中 各0.1毫升無菌培養。培養3天後’除去培養基，置換成含 0.5%牛血清白蛋白（夕戈馬公司製）之Μ 199培養基。於此添 -75- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(21〇x 297公釐） 1313605 A7 B7
五、發明説明（ 加自菊科紅花（Carthamus tinctorius LINNE)之花抽提所得 之黃色色素（粉末山黃2號（寸 > 工口 一 Νο·2)、三榮源 F · F _ I (工7 •工7 · 7 4 )公司製）使成最終濃度i 25、 2.5、5毫克/毫升’培養2 0小時。培養終了後，以酵素免疫 測定法（NGF Emax Immuno Assay System :普洛梅加（口 〆力'）公司製）測定培養液中之神經增殖因子之濃度。以無 添加試樣之細胞培養液中之NGF濃度為100 %，表示NGF產 生增強。實驗以2份進行，採其平均值。其結果，紅花黃色 色素濃度依存性地增強L - Μ細胞之NGF產生。其結果示於 表20。 表20 紅花黃色色素濃度(毫克/毫升） NGF產生量(％) 0 100 1.25 277.6 2.5 441.3 5 808.4 (但，對照組之NGF產生量為0.507毫微克/毫升。） 實施例1 4 使用逆相層析法將實施例1 3記載之紅花黃色色素中之活 性成分純化分離。以下表示其條件。管柱使用TSK gel ODS-80Ts (徑21_5毫米X長30厘米：東梭公司製）。溶媒 A ( 0.1 %三氟乙酸水溶液）與溶媒b (蒸餾水與乙腈以容量比1 -76- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS> A4規格(210X297公釐) 1313605 A7 --- B7 五、發明説明（ ) ' - 74 ； 對1 合，含〇· 1 %三氟乙酸）之溶離比，由〇分至$ 〇分將溶 媒B比直線性地由〇%至1〇〇%，繼續保持溶媒B比於 100 % 1 5分，最後將溶媒B比保持於0 % 1 5分。溶離速度為 5¾升/分’檢出於21 5 nm進行。每3分各採取溶離份。以與 實施例1 3同樣方法，測定各溶離份之NGF產生增強活性。 其結不’明白含32.5分與41.8分之峰之溶離份有NGF產生 增強活性。對含32.5分之峰之溶離份進行解析，檢出分子 量613之信號。另外，ih_nmr光譜、i3c_NMR光譜解析之 結果’確定活性成分為紅花明A(分子量612.53)。如此，以 與實施例1 3同樣方法測定所得之純化紅花明a之NGF產生 增強活性。添加使精製紅花明A為2.5毫克/毫升。其結果， 純化之紅花明A增強L - Μ細胞之NGF產生。對紅花明A之結 果’示於表21，對含41.8分之峰之溶離份之結果，示於表 11。 表2 1 紅花花A濃度(mg/ml) NGF產生量(％) 0 100 2.5 130.7 (但，對照組之NGF產生量為0.739毫微克/毫升。） -77- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1313605 A7 B7 五、發明説明（ 表2」__ 一黃色色素溶離份濃度(毫克/毫升)_NGF產生 0 100 125 350.7
(但，負對照組之NGF產生量為〇 736毫微克/毫升。） 實施例1 5 於菊科紅花（Carthamus tinctorius LINNE :阪本漢方堂 製）1〇克碎斷物中加800毫升氯仿，於室溫進行抽提。以旋 轉蒸發器將除去殘渣之液體部分濃縮使乾，得氯仿抽提部 分°其次，於殘渣中加14〇〇毫升乙醇，於室溫進行抽提。 以旋轉蒸發器濃縮除去殘渣之液體部分使乾，得乙醇抽提 部分。其次，於殘渣中加15〇毫升蒸餾水，於6〇度進行2小 時柚提。於除去殘渣之液體部分加2 5倍量之乙醇，於_ 3 〇 C靜置2小時。以旋轉蒸發器將以丨0,000g離心除去沉殿物 之液體部分濃縮使乾’得水抽提部分。以與實施例1 3同樣 方法測定如此製備之各部分之NGF產生增強活性。添加使 紅花氯仿抽提部分為0.393、0_785毫克/毫升。添加使乙醇 抽提部分為0.313、0.625毫克/毫升。添加使水抽提部分為 2·76、5.51毫克/毫升。其結果示於表23。紅花氯仿抽提部 刀、乙醇抽提部分、水抽提部分濃度依存性地增強L - μ細 胞之N G F產生。 -78- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210 X 297公釐） 1313605
AT B7 五、發明説明（ 表23 試樣 濃度(mg/ml) NGF產生量(％) 紅花氣仿抽提部分 0 100 0.393 535.6 0.785 986.0 紅花乙醇抽提部分 0 100 0.313 345.3 0.625 1449.5 紅花水抽提部分 0 100 2.76 477.8 5.51 806.3 (但，負對照組之NGF產生量為0.190毫微克/毫升。） 實施例1 6 將國產菊花（Chrysanthemum morifolium、星菊：J A 音森 經濟連J A南部町製）1 5克冷凍乾燥後，於碎斷物中加1 000 毫升氯仿，於室溫進行抽提。以旋轉蒸發器濃縮除去殘渣 之液體部分使乾，得氯仿抽提部分。其次，於殘渣中加500 毫升乙醇，於室溫進行抽提。以旋轉蒸發器濃縮除去殘渣 之液體部分使乾，得乙醇抽提部分。其次，殘；ί'查中加1 5 0毫 升蒸顧水水，於6 0 °C抽提2小時。於殘逢之液部分中加2.5 倍乙醇，於-3 0 °C靜置2小時。其後，以旋轉蒸發器將以 1 0,000G離心除去沉澱物之液體部分濃縮使乾，得水抽提部 分。以與實施例1 3同樣方法測定如此製備之各溶離份之 NGF產生增強活性。添加使菊花氣仿抽提部分為1.8、 3.6、7 _ 2毫克/毫升。添加使菊花乙醇抽提部分為0.5 1 7、 -79- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格（210X 297公釐) 1313605 A7 B7 五、發明説明（77 ) 1.03、2.07毫克/毫升。添加使菊花水抽提部分為16.8、 3 3.7、67.3毫克/毫升。其結果，菊花氯仿抽提部分、乙醇 抽提部分、水抽提部分濃度依存性地增強L - Μ細胞之NGF 產生。此等結果示於表2 4 ~ 2 6。 表24 國產菊花氯仿抽提部分濃度(mg/ml) NGF產生量(％) 0 100 1.80 209.6 3.60 447.3 7.20 1019.9 (但，對照組之NGF產生量為0.474毫微克/毫升。） 表2 5 國產菊花乙醇抽提部分濃度(mg/ml) NGF產生量(％) 0 100 0.517 164.6 1.03 195.3 2.07 265.1 (但，對照組之NGF產生量為0.474毫微克/毫升。） -80- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格（210 X 297公釐） 1313605 A 7 _ B7 五、發明説明（ 表2 6 國產萄化水抽提部分濃度(mg/ml) NGF產生量(％) 0 100 16.8 200.2 33.7 257.6 67.3 336.9 (但’對照組之NGF產生量為〇.474毫微克/毫升。） 實施例1 7 (1) 將國產菊花（星菊：JA青森經濟連ja南部町製）245克 冷;東乾燥後’於碎斷物中加900毫升氣仿、於室溫進行抽 提，分成氯仿抽提物與氯仿抽提殘渣。以旋轉蒸發器濃縮 氣仿抦提液’得花氣仿抽提物。 (2) 將菊花氯仿抽提物供予二氧化矽，以氯仿：甲醇 = 100 : 1 ( 1250毫升）為溶離溶媒溶離’取每一溶離份各8毫 升。將所得溶離份44〜99減壓濃縮，#國產菊花氯仿抽提 邵分A。其;欠將甲醇（糊毫升）作為溶離溶媒，將溶離物減 壓濃縮’得國產菊花氯仿抽提部分B。 (3) 以實施例13同樣方法測定實施例17_(2)製備之a部 分、B部分之臟產生増強活性。添加使A部分為〇5、 ΚΟ'ΙΟ毫克/毫升。添加使b部分為 _ 尺1刀為0.5、1.0、2.0毫克/毫 升。其結果示於表2 7。A部分、B砘八Α η刀β邵分濃度依存性地增強 L-M細胞之NGF產生。 ® -81 - 1313605 A7 B7 五、發明説明（ 表27 _?式樣____濃度(mg/ml)__NGF 量(〇/〇) 國產菊花氣仿抽提部分A ~ q 0.5 114.0 1.0 304.6 .............................. 2.0 677,〇 國產為化鼠仿抽提部分B q jqq ...... 0.5 121.3 1.0 134.9 ____2.0_ 15^4 (但’負對照組之NGF產生量為〇. 190毫微克/毫升。） 實施例1 8 (1) 再將實施例1 7-(2)製備之國產菊花氯仿抽提部分A供 予二氧化矽層析，依乙酸乙酯：己烷=1 : 1〇(5〇〇毫升）、 1 · 8(500 ¾ 升）、1 : 6(500 毫升）、1 : 4(500 毫升）之順序 階段性地溶離，各1溶離份取6毫升。將所得之溶離份 264〜290減壓濃縮，得國產菊花氯仿抽提部分A_a。將所^ 之溶離份206〜24〇減壓濃縮，得國產菊花氣仿抽提部分A_ b。將所得之溶離份241〜263減壓濃縮，得國產菊花氯仿抽 提部分A-c。繼續將所得溶離份291〜32〇，以f醇（4〇〇毫升） 為展開溶媒，合併所得之溶離物減壓濃縮，得國產菊^氯 仿抽提部分A - d » “ (2) 以與實施例13同樣之方法測定實施例18_(1)製備之部 分A.a '部分A_b、部分A_c、部分A_d之卿產生增強活 性。添加使部分Α-a為0·125、〇.25毫克/毫升。添加使部分 I_____ -82- U張尺歧巧《时料(CNQA^i^x297公釐} 1313605 A7 B7 五、發明説明（βη )
oU A-b為0.25、0.5毫克/毫升。添加使部分A-c為0.25、0.5毫 克/毫升。添加使部分A-d為0.25、0.5毫克/毫升。其結果 示於表28、29。部分A-a、部分A-b、部分A-c、部分A-d 濃度依存性地增強L - Μ細胞之NGF產生。 表2 8 試樣 濃度(毫克/毫升） NGF產生量(％) 國產菊花氯仿抽提部分A-a 0 100 0.125 120.0 0.25 280.6 國產菊花氯仿抽提部分A-b 0 100 0.25 216.1 0.5 959.1 國產菊花氯仿抽提部分A-c 0 100 0.25 124.4 0.5 224.8 (但，負對照組之NGF產生量為0.489毫微克/毫升。） 表29_ 國產菊花氯仿抽提部分A-d濃度(mg/ml)_NGF產生量(％) 0 100 0.25 157.1 0.5 409.6 (但，對照組之NGF產生量為0.5 75毫微克/毫升。） 實施例1 9 -83- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格（210 X 297公釐） 1313605
五、發明説明（ (1)將實施例1 8 - π、_從· + m 士 》· m ^ 國產菊花氣仿抽提部分A-a， 以鼠仿.甲辱=5〇: ias_0ej,、 侑 碉溶媒，於薄層層析上展開。取
Rf值0.9〜〇·95之部分，以屎叫； ， 仿;^浐邱八Λ 展開洛媒再溶離，得國產菊花氯
Hi 取R_55〜。·68之部分，以展開溶媒 0 3:之咋：國產/化乳仿抽提部分“-2。取以值。·3〇〜 Ο::，…展開溶媒再溶離，得國產菊花氯仿抽提部 ⑺以與實施例13同樣方法，測定實拖例i9_⑴製 分A-a]、邵分Α + 2、部分“_3之卿產生增強活性。 添加使部分為0·25、〇·5毫克/毫升。添加使部分八_ a-2成0.025、0.05毫克/毫升。添加使部分A.〕為^ 〇毫 /毫升。其結果示於表30。部分Α_“、部分A_a_2、部分 A - a - 3濃度依存性地增強L _ M細胞之nqf產生。 刀 表30 試樣 濃度(毫克/毫升）NGFgi 國產菊花氯仿抽提部分A-a-1 0 0.25 0.5 100 193.3 國產菊花氯仿抽提部分A-a-2 0 100 0.025 126.4 0.05 ..871.9 國產菊花氯仿抽提部分A-a-3 0 100 1.0 220.6 (但，負對照組之NGF產生量為0.183毫微克/毫升。 (%) 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) -84- 1313605
(3) 藉由質量分析計（DX 3〇2 ••曰本電子社製）以fab_ms 手法測足於貫施例1 9 - ( 1 )製備並於實施例1 9 _( 2 )確認活性 之國產菊花氯仿抽提部分A_a_2之質譜（MS)。基質使用硝 甲苄醇。其結果，檢出m/z 345 (M + H) +之峰。圖5表示國 產菊花氣仿抽提部分A-a_2tMS質譜。於圖5，橫軸表m/z 值’縱軸表相對強度。 (4) 使用核磁共振（nmr)光譜裝置（JNM-A500 :日本電子 社製）測定於實施例丨9_(〗）製備並於實施例丨9_(2)確認活 性之國產菊花氣仿抽提部分A_a_2之各種光譜，解析構 造。以下表示NMR之歸屬信號。 H-NMR : 5 1.42 (3H, d, J=7.0 Hz, 14-H), 1.85 (1H, dt, J=14.0, 2.5 Hz, 9-H), 1.88 (3H, t, J=1.5 Hz, 5'-H), 1.94 (1H, t, J=5.5 Hz, 1-H), 2.00 (3H, dd, J=1.5, 7.0 Hz, 4--H), 2.10 (1H, d, J=14.0 Hz, 9-H), 2.17 (1H, m, l〇.H), 2.29 (3H, s, 15-H), 2.96 (1H, dd, J=5.5, 10.〇 Hz, 5-H), 3.11 (1H, tt, J=3.0, 10.0 Hz, 7-H), 3.96 (1H, t, J=l〇.〇 Hz, 6-H), 5.25 (1H, dt, 1=2.5,10.0 Hz, 8-H), 5.63(1H, d, J=3.〇 Hz, 13-H), 5.94 (1H, brs, 3-H), 6.18 (1H, d, J=3.0 Hz, 13-H), 6.22 (1H, dq, J=1.5, 7.0 Hz, 3'-H) ° 但，將試樣溶於重氯仿，殘餘氣仿之化學位移值表示為 7.24 PPm。圖6表示國產菊花氣仿柚提部分α_^221η_ 画R光譜。於圖6，橫軸表化學位移值（ppm)，縱袖表信號 強度。 9 - ( 2 )確認活性之 (5)對於實施例19-(1)製備且於實施例t -85- 本泜張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐)_ 1313605 A7 B7 五、發明説明（ 國產菊花氣仿抽提部分A-a-2進行質譜、NMR光譜解析之 結果，確定活性成分為癒瘡内酯（2-酮基-8-當歸醯氧基-癒 瘡-3(4)，11(13)-二烯_12,6_内酯（分子量344))。 實施例2 0 (1) 將實施例1 8-( 1)所得國產菊花氣仿抽提部分A_b供予 薄層層析，以氣仿：甲醇=1〇〇 :丨為展開溶媒。取Rf值為 0.43〜0.57之部分，以展開溶媒再溶離，得國產菊花氣仿抽 提部分Α-b-l。 (2) 以與實施例1 3同樣方法，測定實施例2 〇 _ (丨）所得部分 Α-b-l之NGF產生增強活性。添加使部分〇25、 0.05毫克/毫升。其結果示於表3 i。部分A_b_丨濃度依存性 地增強L - Μ細胞之NGF產生。 表3 1 國產菊花氣仿抽提部分Α-b-l濃度(毫克/毫井） NGF產生量(％) 0 100 0.025 183.4 0.05 1053.3 (但’對照組之NGF產生量為0.183毫微克/毫升》) (3)藉由質量分析計（DX302 :曰本電子杜製）解析於實施 例2 0 - ( I )製備且於實施例2 0 - ( 2 )確認活性之國產菊花氣仿 抽提部分A - b - 1之質ΐ普（M S) ^基質使用硝甲爷醇。其結果 檢出m/z 345(Μ + Η) +之峰。圖7表示國產菊花氣仿抽提部分 -86- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210 X 297公釐) 1313605 A7 ___ —_ B7 五、發明説明（84 ) A-b-l之MS質譜。於圖7，橫軸表m/z值，縱軸表相對強 度。 (4) 藉由紅外線吸收（ir)光譜（fTIr_82〇〇pc :島津製作 所社製）解析於實施例2 0 - ( 1)製備且於實施例2 〇 - ( 2 )確認 活性之國產菊花氣仿抽提部分A - b - 1之構造。其結果檢出 1716.5 cm」、1774.4 cm·1之吸收。圖8表示國產菊花氯仿 抽提部分A _ b _丨之丨R光譜。於圖8，橫軸表紅外線波長之對 數，縱軸表透過率。 (5) 藉由1H-核磁共振（NMR)光譜（JNM-A500 :日本電子 社製）解析於實施例2 0 - (1)製備且於實施例2 〇 - (2 )確認活 性之國產菊花氯仿抽提部分Α-b-l之構造。 'H-NMR ： (5 1.66 (3H, s, H-15), 1.74 (3H, d, 1.0 Hz, H-14), 1.88 (3H, t, J3.i5. 1.5 Hz, J4，i5. 1.5 Hz, H-5'), 2.0 (3H, dd, Ι3·,4· 7.5 Hz, H-4'), 2.26 (1H, dd, Ja>b 13.5 Hz, J8_ 9 2.0 Hz, H-9), 2.45-2.5 (2H, m, H-2, H-9), 2.72 (1H, d, Ja,b 17.0 Hz, H-2), 3.09 (1H, d, J5> 6 10.0 Hz, H-5), 3.18 (1H, ddd, J6) 7 10.0 Hz, J7, 8 10.5 Hz, K7, 13 3.0 Hz, H-7), 3.4 (1H, s, H-3), 3.71 (1H, t, H-6), 4.92 (1H, dd, H-8), 5.52 (1H, d, H-13), 6.13 (1H, d, H-13), 6.18 (1H, qd, H-3*) 但’將試樣溶於重氯仿，殘留氯仿之化學位移值表示為 7.24 ppm。圖9表示國產菊花氯仿抽提部分 NMR光譜。於圖9 ’橫軸表示化學位移值（ppm)，縱軸表信 號強度。 (6) 藉由13C-核磁共振（NMR)光譜（JNM-A500 :日本電子 -87- 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐)
1313605 五 發明説明（ 85 A7 B7 1 I )解析於貫施例2 Q ’⑴製備且於實施例2卜⑺確認活 性：國產菊花氯仿抽提部分A_b_k構造。 NMR ’ 5 15.87 (C-4，），18.88 (C-15)’ 20.45 (C-5，）， (C 14), 33.18 (C-2), 41.45 (C-9), 51.39 (C-5), 56.59 (C-7), 64.33 (C-3) 66 7s (η ^ V ), b.78 (C-4), 69.64 (C-8), 77.93 (C-6), 120.62 (C-13)，128.0(c_2,)，i28 6i (ci)，mu (c•叫 136.95 (C-ll)，140.13 (C-3’)，167.0 (c_r)，16〇 9 (C12) 但，將試樣溶於重氯仿’殘留氣仿之化學位移值表示為 77.93 ppm。圖10表示國產菊花氯仿抽提部分 聰光譜。於圖10橫轴表示化學位移值（ppm),縱軸表信 號強度》 (7 )對於實她例2 0 - ( 1)製備且於實施例2 〇 _ ( 2 )確認活性之 國產菊花氯仿抽提部分八吡_丨進行質譜、IR光譜、1h_ NMR光譜、七-蘭汉光譜解析之結果，確定活性/分為癒 瘡内酯（3,4-環氧基_8_當歸醯氧基-癒瘡“（Μ)」"。）， —晞-12,6 -内醋（分子量344))。 實施例2 1 (1) 將實施例1 8 - ( 1)製備之國產菊花氯仿抽提部分a _ c供 予薄層層析，以氯仿：乙酸乙醋=1〇 : i為展開溶媒。取R'f 值0.33〜0.42之部分，以展開溶媒再溶離，得國產菊花氯仿 抽提部分A - c -1。 ’’ (2) 以與實施例13同樣方法，測定實施例21_(1)製備之部 分Α-c-l之NGF產生増強活性。添加使部分八-^丨為^乃、 0.5毫克/毫升。其結果示於表32 ^部分A-c-1濃度依存係 -88- 1313605 五、發明説明（86) A7 B7 --—--------- 地增強L - Μ細胞之NGF產生。 表32 國產菊花氣仿抽提部分八-(> 丨濃度(毫克/毫升） NGF產生量(％) 0 100 0.25 150.8 0.5 434.4 (但’對照組之NGF產生量為0.575毫微克/毫升。） 實施例2 2 (1)再將實施例18-(1)所得之國產菊花氣仿抽提部分A_d 供予二氧化矽層析，依乙酸乙酯：己烷=i : 3 ( 6〇〇毫升）、 1 : 2(600毫升）之順序階段性溶離，每溶離份各取6毫升。 將所得溶離份1〜43減壓濃縮，得國產菊花氯仿抽提部分a_ d-1。所得溶離份44〜73減壓濃縮，得國產菊花氯仿抽提部 勿A - d - 2。所得落離份7 4〜8 0減壓濃縮，得國產菊花氯仿 抽提部分A-d-3。所得溶離份124〜14〇繼續以甲醇（4〇〇毫升） 為展開溶媒，合併所得之溶離物減壓濃縮，得國產菊花氯 仿抽提部分A - d - 4。 ^
(2)以與實施例13同樣方法，測定於實施例22_(1)製備之 部分 Α-d-l、部分 A-d-2、部分 A_d_3、部分 A_d_4<NGF 產生增強活性。添加使部分A-d - 1為2.0毫克/毫升。添加使 部分A-d-2為0.5、1.0毫克/毫升。部分A_d_3為〇乃、〇 $ 毫克/毫升。添加使部分A-d-4為〇_5、1.〇毫克/毫升。其結 -89-
1313605 A7 B7 五、發明説明（87 ) 果示於表33、34。部分A-d-l、部分A-d-2、部分A-d-3、部分A - d - 4濃度依存性地增強L - Μ細胞之NGF產生。 表3 3 試樣 濃度(毫克/毫升) NGF產生量(％) 國產菊花氯仿抽提部分A-d-1 0 100 2.0 371.9 國產菊花氯仿抽提部分A-d-2 0 100 0.5 119.3 1.0 440.3 國產菊花氯仿抽提部分A-d-3 0 100 0.25 156.6 0.5 687.2 (但，對照組之NGF產生量為0.183毫微克/毫升。） 表34 國產菊花氣仿抽提部分A-d-4濃度(毫克/毫升） NGF產生量(％) 0 100 0.5 182.1 1.0 640.3 (但，對照組之NGF產生量為0.1 07毫微克/毫升。） 實施例2 3 (1 )將實施例1 7 - ( 2 )製備之國產菊花氣仿抽提部分Β供予 二氧化矽層析，以氯仿：甲醇=2 0 : 1 ( 600毫升）為展開溶 -90- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210X 297公釐）
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媒洛離，每1落離份各取6毫升。所得溶離份丨5〜2 9減壓濃 縮’得國產菊花氯仿抽提部分B - a。 以與只化例1 3同樣方法’測定製備之b _ a部分之ngf產 生増強活性。添加使B_a部分為1〇毫克/毫升。其結果示於 表3 5。B-a部分增強l-M細胞之NGF。 表3 5 1產菊花氣仿抽提部分B-a濃度(毫克/毫升） 0 1.0 100 358.0 (但，負對照組之NGF產生量為0.280毫微克/毫升 實施例2 4 (1) 於實施例1 6製備之氯仿抽提殘渣中加8〇〇〇毫升乙醇， 於罜溫進行乙醇抽提，分成菊花乙醇抽提液與乙醇抽提殘 渣。菊花乙醇抽提液以旋轉蒸發器濃縮，製備菊花乙 提物。 (2) 將實施例2 4 - ( 1)製備之菊花乙醇抽提物供予二氧化矽 層析，以氣仿：甲醇=9 : 1(6〇〇毫升）為展開溶媒溶離每 1落離份各取6毫升。所得之溶離份15〜22減壓濃縮，得國 產菊花乙醇抽提部分C。其次以甲醇（4〇〇毫升）為展開= 溶離’所得溶離物減壓濃縮，得國產菊花乙 吁询知：部分 D 0 (3) 以與實施例13同樣方法，測定實施例24-(2)製備、c -91 -
本紙張尺度ϋ财_家標邮卿 ——1 1313605 A7 ________ B7 五、發明説明（^) 部分、D邵分之N G F產生增強活性。添加使C部分為1, 〇毫 克/毫升。添加使D部分為2.0毫克/毫升。其結果示於表 36。C部分、D部分增強L-M細胞之NGF產生。 表36 試樣 濃度(毫克/毫升） NGF產生景(％) 國產菊花氯仿抽提部分c 0 100 .... 1.0 國產菊花氯仿抽提部分D 0 100 2.0 455.9 一 (但’負對照組之NGF產生量為〇_ 1 〇7毫微克/毫升。） 實施例2 5 將中國產菊花（自中國大連市之當地市場購入）2〇克冷凍 乾燥後，於碎斷物中加500毫升氣仿，於室溫進行抽提。以 旋轉蒸發器將除去殘渣之液體部分濃縮使乾，得氯仿抽提 部分’其次，於殘渣中加500毫升乙醇，於室溫進行抽提。 以旋轉蒸發器將除去殘渣之液體部分濃縮使乾，得乙醇抽 提邵分。其次，加300毫升蒸餾水於殘渣中，於6 〇度進行2 小時抽提。於除去殘渣之液體部分加2 · 5倍量之乙醇，於 3〇°C靜置2小時。其後，以l〇,〇〇〇G離心，分成沉澱物與液 體部分。液體部分以旋轉蒸發器濃縮使乾，得抽提部分 1。一方面，沉澱物再溶於蒸餾水，得水抽提部分_ 2。 , 如此 製備之各部分之NGF產生增強活性，以與實施例1 3同樣、 方法測定。添加菊花氯仿抽提部分，使成〇.丨丨4、〇 2 2 7 -92- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 1313605 A7 B7 五、發明説明（90 ) 0.454毫克/毫升。添加菊花乙醇抽提部分，使成0.241、 0.481、0.962毫克/毫升。添加菊花水抽提部分-1，使成 8.88、17.8、35.5毫克/毫升。添加菊花水抽提部分-2，使 成0.02、0.04毫克/毫升。其結果，菊花氣仿抽提部分、乙 乂 醇抽提部分、水抽提部分-1及2，濃度依存性地增強L - Μ細 胞之NGF。此等結果示於表3 7。 表3 7 試樣 濃度(毫克/毫升） NGF產生量(％) 中國產菊花氯仿抽提部分 0 100 0.114 168.2 0.227 297.1 0.454 912.5 中國產菊花乙醇抽提部分 0 100 0.241 326.5 0.481 450.1 0.962 582.5 中國產菊花水抽提部分-1 0 100 8.88 264.1 17.8 261.8 35.5 229.1 中國產菊花水抽提部分-2 0 100 0.02 135.0 0.04 187.3 (但，對照組之NGF產生量為0.516毫微克/毫升。） 實施例2 6 -93- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210 X 297公釐）
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堂社卿⑹一㈣莖葉部(阪本漢方 y =克之碎斷物中加，毫升氯仿’於室溫進行抽 ^万H㈣邵分之料中加_毫升乙醇，於室溫進行 於除去液體部分之殘渣中加36〇毫升蒸餾水，於㈧ 進仃抽提2小時。於除去固形殘渣之液體部分令加2.5倍 =醇’於-3 0 t靜置2小時。其後，以1〇,〇〇〇(}離心，分^ 沉殺物與液體部分。液體部分以旋轉蒸發器濃縮使乾，得 明日葉莖葉部水抽提部分]。一方面，沉爽物再溶於蒸餘 水’得明日葉莖葉部水抽提部分士以與實施_同樣方 法測定，如此製備明日葉莖葉部水抽提部分_丨及2之NGF產 生增強活性。添加明日葉莖葉部水抽提部分使成2.59、 5 · 1 9笔克/毫升。添加明曰葉莖葉部水抽提部分_ 2使成 〇·3 5、0.7毫克/毫升。其結果’明日葉莖葉部水柚提部分- 1及2濃度依存性地增強L _ μ細胞之ngf產生。彼等之結果 示於表3 8。 表3 8 試樣 濃度(毫克/毫升） NGF產生量(％) 明曰葉莖葉部水抽提部分_1 0 100 2.59 475.2 5.19 644.9 明曰葉莖葉部水抽提部分-2 0 100 0.35 149.3 0.70 186.7 (但’對照組之NGF產生量為0.553毫微克/毫升。） -94-本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4规格(210 X 297公釐) 92 1313605 五、發明説明（ 實施例2 7 於乾燥明日葉招却 、 很部（於韓國採取）2 0克之碎斷物中加氯 仿，於室溫進行拙 .\ 彻徒°以旋轉蒸發器濃縮除去殘渣之液體 部分使乾，得素松紅 氣仿抽提部分，其次，殘渣中加300毫升乙 醉’於室溫進行抽描 τ彻叙°以旋轉蒸發器濃縮除去殘渣之液體 部分使乾，得乙醇乱坦. 畔抽乂部分。其次，於殘渣中加1 50毫升芪 餾水，於6 0 t進杆）丨0土 、 丁 2小時之抽提。於除去固形殘渣之液體 部分’加2.5倍量乙醢 、， 里乙知，於_ 3 0 °C靜置2小時。立後，以 10,000G離心，分忐、，…机心 ” 1无 人 成'儿澱物與液體部分。液體部分以旋轉菽 裝 發益濃縮使乾，得明日签枯， ^ 行力日茉根邵水抽提部分-I。一方面， 殿物再溶於蒸餘水得明B奋H· 曰葉根邵水抽提部分_ 2。 盥音 例1 3同樣方法，測定如+制& 以與實把 ..n “此1備之各溶離份之NGF產生拎強 …a日葉根部氯仿抽提部分使成() = 添加明日葉根部乙醇抽提部分使狀、克=升。 笔升。添加明曰葉根部水抽提部分]，使 .毛克/ 16.6毫克/毫升。添加明 · 5、8·3、 線 毫克/毫升。其結果，明曰葉 二2,使成 明曰葉根部乙醇抽提部分，日月日葉根部水柚4 =邵分’ 強L-M細胞之NGF產生。彼等之結果示於表以刀·1及2增 -95- 本纸張尺度適用中國固家標準(CNS) Α4規格(21〇Χ297公爱厂 1313605 A7 B7 五、發明説明（93 表3 9 試樣 濃度(毫克/毫升） NGF產生量(％) 明曰葉根部氯仿抽提部分 0 100 0.03 198.4 明日葉根部乙醇抽提部分 0 100 0.275 185.8 0.550 254.9 1.10 305.7 明日葉根部水抽提部分-1 0 100 4.15 350.8 8.30 496.7 16.6 830.3 明日葉根部水抽提部分-2 0 100 0.55 174.6 1.10 242.3 (但，對照組之NGF產生量為0.473毫微克/毫升。） 實施例2 8 (1 )將明日葉根部（於韓國採取）之冷凍乾燥品600克碎 斷，加1 8，000毫升氯仿，於室溫進行抽提。以過濾除去氯 仿抽提液之殘渣中，加1 8,000毫升乙醇，於室溫進行抽 提。以過濾除去，乙醇抽提液之殘渣中，加4,000毫升蒸餾 水，於6 0 °C進行抽提2小時。於除去固形殘渣之液體部分 中加2.5倍量乙醇，於-30°C靜置2小時。其後，以10,000G 之離心除去沉澱物，以旋轉蒸發器將液體部分濃縮至200毫 升。將濃縮液提供安巴來特XAD - 2 (歐加諾公司製：樹脂量 -96- 本紙悵尺度適用中國國家標準(CNS) A4规格(210 X 297公釐） 1313605 A 7 B7 五、發明説明（94 ) 400毫升）’以蒸餾水2,000毫升充分洗出非吸著物，其次以 2,000毫升甲醇將吸著物溶離。以旋轉蒸發器濃縮甲醇溶離 液，得明曰葉根部水抽提低分子XAD-2處理物。 (2 )使用逆相層析法將實施例2 8 - (1)製備之明曰葉根部水 抽提低分子XAD - 2處理物之活性成分溶離。以下表示其條 件。管柱係使用丁8〖且61003-80丁5(直徑21.5 111111父長度30 cm，東曹公司製）。溶媒A (蒸餾水）與溶媒b (蒸餾水與乙腈 以容量比1對1混合）之溶離比由〇分至120分，將溶媒B比直 線性地由0 %至100 %，將溶媒B比繼續保持於1 〇〇 %、2 0 分’最後將溶媒B比保持於〇%，20分。溶離速度為5毫升/ 分’檢出於21 5 nm進行。每8分採取一溶離份，以與實施例 1 3同樣方法進行各溶離份之活性。其結果，明白於含 21.0、 22.8 ' 23.6 ' 26.7、34.8、 42.4、 47.8 ' 51.5 ' 51.7、 51.9、 52.1、 52.2、 53.8 > 55.6 ' 56.2 ' 56.6 ' 56.7、 58.1 ' 61.5 ' 68.6 ' 71.4' 79.7、 84.9、 85.8、 89.7 ' 101.5、 104.5 、120.9、124.7分之檢出峰之溶離份 具NGF產生增強活性。其結果示於表4 0。 -97- 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 1313605 A7 五、發明説明（95) 表40 溶離份(檢出峰：分） 濃度(毫克/臺升）KTHF ▲ *音ί%) 1 (21.0、22.8、23.6) 2.50 441.3 2 (26.7) 2.50 379.8 3 (34.8) 2.5〇 200.3 4 (42.4) 2-84 453.3 5 (47.8) 3-47 385.8 6(51.5、51.7、51.9、52.1、52.2、53.8) 1.48 409.9 7 (55.6、56.2、56.6、56.7、58.1、61.5) !-24 268.4 8 (68.6) 0.965 299.7 9 (79.7) 1-16 1104.5 10 (84.9、85.8、89.7) 1-25 1196.4 11 (101.5 ' 104.5) 3-17 267.9 12(120.9 ' 124.7) 5.28 277.5 (但’對照組之NGF產生量為〇,21 〇毫微克/毫升。） (3)使用凝膠過濾層析法’將明日葉根部水抽提低分子 X A D - 2處理物之活性部分級分。 以下表示其條件。管柱樹 脂使用托優巴耳（卜3八一小）HW-40C(樹脂量2000毫升： 東梭公司製）。溶媒使用蒸餾水 。提供以乾燥重量計1 .〇克 份之明日葉根部水抽提低分子XAD - 2處理物濃縮液，每一 溶離份各採取1 0毫升。以與實施例1 3同樣方法進行各溶離 份之NGF產生增強活性之測定。 添加各溶離份試樣，使成 10倍濃縮後為培養基之10分之1 。其結果，確認許多之溶 離份之NGF產生增強活性。 (4)收集於實施例2 8 - (3 )確認活性之溶離份之一部分之溶 -98- 本紙張尺度適用中國國家樣準(CNS) A4規格(210X297公釐) 1313605 A7 B7 五 發明説明（ ---—, 離份69〜79，使用逆相層析法將其濃縮物溶離。以下表示 其條件。管柱用TSK gel 〇DS_8〇Ts(徑21」毫米χ長3〇厘 米：東梭公司製）。溶媒八（0.1%三氟乙酸水溶液）與溶媒 Β(蒸餾水與乙腈以容量比i對i混合，含〇1%三氟乙酸）之 溶離比，由0分至60分，溶媒b比直線性地由25%至 100%，將溶媒B比繼續保持100%，最後將溶媒保持於 25%、10分。溶離速度為5毫升/分，檢出於215 nm進行。 以與實施例1 3同樣方法，進行採取之溶離份之ngf產生増 強活性。其結果，明日滯留時間為0〜22.5分、22.5〜2 5 分、25 〜31_5 分、31.5 〜32.5分、32.5〜37 分、37 〜43.5 分、 43.5〜47 分、47〜50.5 分、50.5〜77 分、77〜78.5 分、 78·5〜81_5分之溶離份有NGF產生增強活性。其結果示於表 41 。
訂 表4 1 溶離份(檢出峰：分） 濃度(毫克/毫升） NGF產生量(％) 1 (0-22.5) 9.60 415.02 2 (22.5〜25) 0.175 172.10 3(25-31.5) 7.00 854.94 4 (22.5-25) 0.30 149.79 5 (31.5-32.5) 0.50 153.65 6 (32.5-37) 1.70 272.96 7 (37-43.5) 1.50 369.96 8 (43.5-47) 0.475 190.99 9 (47-50.5) 2.90 507.30 10 (50.5〜77) 0.70 179.83 11 (78.5-81.5) 0.15 166.52 -99-
本紙張尺度通用中國國家搮準(CNS) Α4规格(21〇x 297公釐) 1313605 A7 B7 五、發明説明（ (但’對照組之NGF產生量為〇. 143毫微克/毫升。） (5 )使用逆相層析法，將於實施例2 8 _ (4)確認強活性之滯 留時間2 5〜3 1.5分之溶離份再溶離。以下表示其條件。管柱 用TSK-GEL Carbon-500 (徑4.6毫米X長1〇厘米：東梭公司 製）°溶媒A(蒸餾水）與溶媒b(蒸餾水與乙腈以容量比丨對！ 混合）之落離比由〇分至1 5分。溶媒B比直線性地由2 5 〇/0至 4 5 % ’溶媒B比於4 5 %繼續保持1 〇分’最後溶媒b比於 2 5 %保持5分。溶離速度為i毫升/分，檢出於2丨5 nm進 行。其結果’可溶離含分別為7 82分與n 〇9分之峰之二個 溶離份。 (6 )藉由質量分析計（302 :曰本電子社製），將含有於 實施例2 8 - ( 5 )以TSK-GEL Carbon-500層析溶離之7.82分峰 之落離份解析其質譜（M S)。基質用甘油。其結果，檢出 m/z 131' 185、223、321之峰。圖11表示質譜。於圖 1 1，橫軸表m / z值，縱軸表相對強度。 (7) 藉由紅外線吸收（IR)光譜（FTIR_82〇〇pc :島津製作 所社製）’將含有於實施例28-(5)以TSK-GEL Carbon-500 層析落離之7.82分峰之溶離份解析。圖12表示IR光譜。於 圖1 2橫軸表紅外線波長之倒數，縱軸表透過率。 (8) 藉由1H-核磁共振（NMR)光譜（JNM-A500 :日本電子 杜製）’將含有於實施例28_(5)以TSK_GEL carb〇n-500層 析落離之7.82分峰之溶離份解析構造》試樣溶於重水。圖 1 3表示1 Η-NMR光譜。於圖1 3橫軸表化學位移值（ppm)， -100 - 本紙張尺狀用中國a家標準(CNS) A4規格(21GX 297公爱) --- 1313605 A7 B7 五、發明説明（98) 縱轴表信號強度。 (9)藉由13C-核磁共振（NMR)光譜（JNM-A500 :日本電子 社製），將含有於實施例28-(5)以TSBC-GEL Carbon-500層 析溶離之7.82分峰之溶離份解析構造。試樣溶於重水。於 圖14表示i3C_NMR光譜。圖14橫軸表化學位移值（ppm)， 縱軸表信號強度。 (i〇)藉由質量分析計（DX 302 :曰本電子社製），對含有 於貫施例2 8 - ( 5 )以TSK-GEL Carbon-500層析溶離之11.09 分峰之溶離份之質譜（MS)進行解析。基質使用甘油《其結 果檢出m/z 131、185、223、321之峰。圖15表示質譜。 於圖1 5橫軸表m / z值，縱軸表相對強度。 (11)藉由紅外線吸收（IR)光譜（FTIR-8200PC :島津製作 所社製），將含有於實施例2 8-(5)以TSK-GEL Carbon-500 層析溶離之11.09分峰之溶離份解析構造。圖16表示ir光 譜。於圖1 6橫軸表紅外線波長之倒數，縱軸表透過率。 (1 2)藉由1 H-核磁共振（NMR)光譜（JNM-A500 :日本電 子社製）’將含有於實施例28-(5)以TSK-GEL Carbon-500 層析溶離之Π .09分峰之溶離份解析構造。圖丨7表示I H_ NMR光谱。於圖17橫轴表化學位移值（ppm)，縱轴表信號 強度。 (13)藉由13C-核磁共振（NMR)光譜（JNM-A500 :日本電 子社製）’將含有於實施例28-(5)以TSK-GEL CarbOn-500 層析溶離之1 1.09分峰之溶離份解析構造。試樣溶於重水β 圖18表示含峰之溶離份之nC_NMR光譜。於圖18，橫軸表 -101 - 本紙張尺度適用中國國冬標準(CNS) A4規格(2i〇x 297公爱) 1313605
五、發明説明（99 化學位移值（ppm)，縱軸表信號強度。 實施例2 9 ⑴以食物處理機將明曰葉乾燥品。反本漢方堂社製)48〇 克粉碎’以乙酸乙酯约1升拙裎， 升抽k2次，所得有機部分減壓濃 縮後，漢縮物供予二氧化矽層析。以氯仿：甲醇=1〇〇 : U帽毫升）、12:1(_毫升）之順序，階段性將吸著物溶 離’母〜谷離份各取8¾升。收集所得溶離份76以後者， 減壓濃縮’濃縮物料二氧切層析，以乙⑨：乙酸乙醋 : 1為制溶媒，於溶離份25〜5G中得高濃度含有黃當 歸醇之溶離份。自此溶離份藉由乙酸乙酿及己烷再結晶， •I于約200毫克之南純度黃當歸醇。nmr本i 結果示於下。 肖質譜之測定 'H-NMR： .1.58(3H,s, -Me), 1.66 (3H, s, ,Me) l81
(3H, s, -Me), 2.08 (4H, m), 3.48 (2H, d, J 7Hz) 5 〇4 (1H m), 5.29 6.40 (lH,d,J5,,6,9HZ)H,51) 6 86(2H ； J5,69, J2,39Hz, H-2, 6), 7.45(lH,d,Ja5 ^ 15h 7.54 (2H, d, H-3,5),7.71(lH,d,H-6-),7.82(lH3d h； }， 但，試樣溶於重氯仿，殘留氯仿之化學 ’， 子如·移表示為2.49 ppm。 (2)以與實施例U同樣方法，測定實施例29_( ^ 當歸醇之NGF產生增強活性。添加黃當歸醇使為2 5備之兴 100 # Μ。其結果示於表42。黃當歸醇烊 '5 5 0 ' NGF產生。 細胞之 102- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1313605 A7 B7 五、發明説明 ( 100
表42 一 --- - '**'. -度(#M) NGF產生量(％) 25 126.1 50 202.6 ---_!〇〇_ 265.7 _ " 1 ' 11 ' "' 1 、 (但’對照組之NGf產生量為〇.199毫微克/毫升。） 實施例3 0 (1) 於乾燥明日葉根部粉末5.8公斤中加24升乙酸乙酯， 於室溫進行抽提3小時。於吸引過濾後之殘渣加1 8升乙 醇，於莖溫進行抽提一夜。其次，於吸引過濾後之殘渣知 5 2升蒸餾水’於6 0 t進行抽提3小時。以旋轉蒸發濃縮除 去固形殘渣之液體部分，於其中加2.5倍量乙醇，於4 t靜 置一夜。其後，以吸引過濾分成沉澱物與液體部分。以旋 轉蒸發將液體部分濃縮使乾，得明日葉根部水抽提低分子 部分。其次將明日葉根部水抽提低分子部分供予安巴來特 XAD-2(歐加諾公司製：樹脂量2升），以蒸餾水3〇升充分 洗出非吸著物。其次，以丨6升甲醇溶離吸著物。以旋轉蒸 發器將甲醇溶離液濃縮使乾。得明日葉根部水抽提低分子 XAD-2部分處理物。 (2) 以與實施例丨3同樣方法，測定實施例3 〇气1)記載之上 述明日葉根部水抽提低分子部分XAd_2處理物之Ngf產生 增強活性。添加明日葉根部水抽提低分子部分χΑΕ) _ 2處理 物使成0.85、1.7、3.4毫克/毫升。如表43所示，明曰葉根 -103 -
1313605 A7 B7 五、發明説明（ ） 101 部水抽提低分子部分XAD - 2處理物濃度依存性地增強L - Μ 細胞之N G F產生。 表43_ 試樣濃度(毫克/毫升） 0 0.85 1.7 3.4 NGF(%)_100_655.3 858.8 1127.6 (但，對照組之NGF產生量為0.074毫微克/毫升。） (3 )用逆相層析將實施例3 0 - ( 1)記載之明日葉根部水抽提 低分子部分XAD - 2處理物之活性成分溶離。以下表示其條 件。樹脂用COSMOSIL 140 C18-OPN(拿卡來鐵斯克公司 製：樹脂量400毫升）。提供明日葉根部水抽提低分子部分 XAD - 2處理物，作為展開溶媒，分別以1升蒸餾水、2 0 % 乙腈水溶液、2 5 %乙腈水溶液、4 0 %乙腈水溶液、甲醇之 順序進行溶離，各溶離部分減壓濃縮，製備各COSMOSIL 溶離物。 (4)以與實施例1 3同樣方法，測定實施例3 0 - ( 3 )記載之 COSMOSIL 140層析溶離物之NGF產生增強活性。其結 果，得知於2 0 %乙腈水溶液溶離部分、2 5 %乙腈水溶液溶 離部分及4 0 %乙腈水溶液溶離部分有NGF產生增強活性。 其結果示於表4 4。 -104- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格（210 X 297公釐） 1313605 A7 B7 102 五、發明説明（ 表44 溶離份 試樣濃度(毫克/毫升） NGF產生哥f%) 0 100 20%乙腈水溶液溶離部分 4.05 301.0 8.1 436.7 16.2 1263.3 25%乙腈水溶液溶離部分 0.7 161.7 1.5 1028.8 2.8 2110.4 40%乙腈水溶液容離部分 0.575 465.3 1.15 653.1 2.3 1226.2 (但，對照组之NGF產生量為20%乙腈水溶液溶離部分為 0.074 ’ 2 5%、40%乙腈水溶液溶離部分為〇·087毫微克/毫 升。） (5)用逆相層析法’將實施例3〇-(3)記載之COSMOSIL 140之2 5 %乙腈水溶液溶離部分之活性成分溶離。 以下表示其條件。管柱用TSK gel ODS-80Ts(21.5毫米X 30厘米：東梭公司製）。溶媒a(蒸餾水）與溶媒B(蒸餾水與 乙腈以容量比1對1混合）之溶離比，由〇分至丨20分，溶媒B 比直線性地由2 5 %至100 %，將溶媒B比繼續保持於1 〇〇 %、 2 〇分’最後溶媒B比保持於2 5 %、2 0分。溶離速度為5毫升 /分’檢出於2 3 5 nm進行。以紫外線吸收為指標，採取溶離 份。 (6 )以與實施例1 3同樣方法，進行測定實施例3 0 - ( 5 )記載 -105- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1313605 A7 B7 五、發明説明（ ） 103 之COSMOSIL 25%乙月青水溶液溶離部分之ODS-80TS層析溶 離物之活性。其結果，明白許多溶離份有NGF產生增強活 性。其結果示於表4 5。 表45 溶離份 (檢出峰:分） 濃度 (毫克/毫升） NGF產生量(％) 1 (46.0'47.2 ' 49.0) 2.00 250.8 2 (53.2) 2.00 275.2 3 (54.0) 2.00 318.7 4(54.9、55.5、56.4) 2.00 293.0 5 (57.6) 2.00 320.5 6 (58.6) 2.00 297.8 7(59.3) 2.00 324.8 8 (60.5) 2.00 324.8 9(61.3) 2.00 402.8 10(62.2) 2.00 565.5 11 (63.0) 2.00 616.9 12(64.1) 2.00 575.4 13 (66.9) 2.00 805.3 14(68.4) 2.00 819.6 15(69.2) 2.00 510.2 16(70.3) 1.00 389.2 17(71.3、71.9) 1.00 609.1 18(73.0、73.8、74.9) 0.50 1002.5 19 (75.4) 0.50 851.3 20 (76.5) 1.00 838.5 21 (77.7) 1.00 249.4 22 (79.6 ' 80.5) 0.50 234.3 -106- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐） 1313605 A7 B7 104 五、發明説明（ 23 (82.4) 0.25 359.1 24 (84.1) 0.25 285.8 25 (85.5) 0.0625 359.1 26 (86.9 ' 87.5) 0.10 411.6 27 (89.1) 0.50 443.3 28(91.4) 0.05 1058.1 29 (92.8) 0.20 672.0 30 (93.8、95.8 ' 97.5、100.0、100.6) 0.50 593.6 (但，對照組之NGF產生量，溶離份1〜9為0.355、溶離份 10〜18為0.382、溶離份19〜27為0.415、溶離份28〜30為 0.450毫微克/毫升。） (7)藉由質量分析計（DX302 :曰本電子社製），以FAB-MS 手法 測定於 實施例 3 0 - (6) 確 認活性 之來自 明曰葉 根部之 溶離份1 0(含滯留時間62_2分之檢出峰之溶離份）之質譜 (MS)。基質使用甘油。其結果，檢出m/z 245 (M-OGlc) + 之峰。圖19表示來自明日葉根部之溶離份10之FAB-M S質 譜。於圖1 9橫軸表m/ z值，縱軸表相對強度。 用核磁共振（NMR)光譜裝置（JNM-A500 :日本電子社製） 測定來自明曰葉根據之溶離份1 0之各種NMR光譜，解析構 造。以下表示NMR之歸屬信號。 'Η-NMR ： 5 1.36 (3H, s, 2'-CH3), 1.37 (3H, s, 2'-CH3), 3.08 (2H，m, 2"-H及4"-H)，3.12 (1H，m, 3"-H), 3.41 (1H，m, 5"-H)，3.81 (1H，d，J=4.5 Hz，3’-H)，4.11 (1H，dd，J = 7.0, 11.5 Hz, 6"-H), 4.35 (1H, brd, J-11.5 Hz, 6M-H), 4.53 (1H, d, -107- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 x 297公釐) 1313605 A7 B7 五、發明説明（105) J = 7.5 Hz, Γ'-Η), 5.14 (1Η, d, J = 4.5 Hz, 4'-H), 6.28 (1H, d, J = 9.5 Hz, 3-H), 6.78 (1H, d, J = 8.5 Hz, 6-H), 7.54 (1H, d, J=8.5 Hz, 5-H), 7.98 (1H, d, J=9.5 Hz, 4-H) 但’於以下1 H-NMR，試樣溶於重二甲亞颯，殘留二甲亞 减之化學位移值表示為2.49 ppm。圖2〇表示來自明日葉根 部之溶離份1 0之1 H-NMR光譜。於圖20，橫軸表化學位移 值（ppm)，縱軸表信號強度。 對來自明日葉根部之溶離份丨0進行之質譜、NMR光譜解 析之結果’確定活性成分為3，_ 〇 -石-d -吡喃葡糖基開洛内 酉旨（分子量424 )。 (8 )使用逆相層析法’再將於實施例3 〇 _ ( 6)確認活性之溶 離份1 3 (含滯留時間66.9分之檢出峰之溶離份）溶離。 以下表示其條件。管柱用TSK gel 〇DS-80TsQA(4.6毫米 X25厘米：東梭公司製）。溶媒A(含〇1%三氟乙酸之蒸餾 水）與溶媒B (蒸餾水與乙腈以容量比1對1混合，含〇· 1 %三 氟乙酸）之落離比維持溶媒B比於5 〇 %、2 0分。溶離速度為 1毫升/分’檢出於23 5 nm進行，以紫外線吸收為指標，採 取溶離份。 (9)以與貫施例1 3同樣方法’於實施例3 〇 - ( 8 )以TSK gel ODS-80TsQA層析法溶離之溶離份之活性。其結果，明白 含 7.9、8.7、9.2、10.2、11.5、12.7、13_9 分檢出峰之溶 離份，有NGF產生增強活性。其結果示於表46。 -108-
本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公爱·) 1313605 五 發明説明（ 106 ) A7 B7 表4 6 峰：分) 濃度(毫克/毫升） NGF產生量(％) -----t- · 13-1 (7.9) 0.56 654.3 13-2 (8.7) 1.00 792.1 !3-3 (9.2) 0.56 366.9 13-4(9.7) 0.96 363.9 13-5 (10.2) 0.96 361.0 13-6(11.5) 1.00 232.0 13-7(12.7) 0.50 261.3 13-8 (13.9^ 1.00 630.8 (但’對照组之NGF產生量為0.053毫微克/毫升。） (1 〇 )與實施例3 0 - ( 7)同樣地測定於實施例3 0 - (9)認定活 性之來自明日葉根部之溶離份1 3 - 2之質譜、NMR光譜。 由質量分析，檢出m/z 393 (M + H) +之峰。圖2 1表步來自 明曰葉根部之溶離份13_2之MS光譜。圖21，橫軸表m/z 值’縱軸表相對強度。 下面表示來自明日葉根部之溶離份13-2之核磁共振 (NMR)之NMR之歸屬信號。 lH-NMR ： δ 1.61 (3Η, s, 3'-CH3), 1·78 (3Η, s, 3'-CH3), 3.17 (1H, t, J=9.5 Hz, 4"-H), 3.28 (1H, m, 3"-H), 3.29 (1H, m, 3.38 (1H, m, 5r'-H), 3.40 (1H, m, l'-H), 3.46 (1H, m, 6"-H), 3.58 (1H, m, l'-H), 3.69 (1H, m, 6'-H), 4.94 (1H, d, J=7.5 Hz, Γ'-Η), 5.20 (1H, m, 2'-H), 6.30 (1H, d, J=9.5 Hz, 3-H), 7.11 (1H, d, J=8.5 Hz, 6-H), 7.51 (1H, d, J=8.5 Hz, -109 - 本纸張尺度適用t國國家標準(CNS) A4規格(21〇x 297公釐) 1313605 A7 ---- B7 五、發明説明（^~" 5-H), 7.98 (1H, d, J=9.5 Hz, 4-H) 圖22表不來自明曰葉根部之溶離份13-2之1 H-NMR光 讀。於圖22，橫軸表化學位移值（ppm)，縱軸表信號強 度。 13C-NMR : «5 17.8(3'-CH3), 21.6 (l'-c), 25.3 (3'-CH3), 60.6 (6"-c), 69.7 (4"-c)) 73 4 (2".c), 76.7 (3"-c), 77.1 (5M-c), 1〇〇.8 Ul.5 (6-c)，112.8 (3-c), 113.4 (10-c)，117.4 (8-c), 121.3 (2'-c), 126.8 (5-c), 131.5 (3'-c), 144.5 (4-c), 152.1 (9-c), 157.8 (7-c), 160.2 (2-c) 但，於以下13 c -NMR，試樣溶於重二甲亞颯，重二甲亞 諷之化學位移值表示為39.5 ppm。圖23表示來自明曰葉根 部之落離份13-2之13 C-NMR光譜。於圖23，橫軸表化學位 移值（ppm)，縱軸表信號強度。 對來自明日葉根部之溶離份1 3 - 2進行質譜、NMR光譜解 析之結果’確定活性成分為7 _ 〇 -点-D _ P比喃葡糖醯氧基_ 8 -異戊二蹄基香豆素（分子量392)。 (1 1)以與實施例3 〇 - ( 8)同樣方法，使用逆相層析法再將 實施例30-(6)確認強活性之溶離份i 8(含滯留時間73.0、 73.8、74.97分之檢出峰之溶離份）溶離。 (1 2 )以與實施例1 3同樣方法，進行測定於實施例3 0 — (1 1) 以TSK gel ODS-80TsQA層析法溶離之溶離份活性。其結果 明白於含9.3、 10.1、 10.6、 1 1_2、 12.0、 12.8、 13 3、 14.0、15.2、16.1、18.6分檢出之峰之溶離份’有NGF產 生增強活性。其結果示於表47。 -110- 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐)
訂
I313605
A7 B7 濃度(毫克/毫升） NGF產生量(％) 0.20 1489.6 0.50 2222.9 0.25 3039.6 0.0375 2510.4 0.0125 610.4 0.50 560.4 0.50 681.3 0.40 339.6 1.00 410.4 1.00 2510.7 1.00 3360.7 1.00 1189.3 7 —τ-- j!1離份:分） 18-1(93) - ^-2(10.1) 18~3 (10.6) ^-4(10.9) ^-5 (11.2) ^-6(12.0) ^-7(12.8) !8-8(13.3) ^-9(14.0) ^-10(15.2) 18-11 (16.1) 1§i11Q16)_ (但’對照組之ngf產生量 為0_015毫微克/毫升 (1 3 )與實施例3 0 - ( 7)同樣地測定於實施例3 〇 ·( 1 2)確認 活性之來自明曰葉根部之溶離份1 8 - 3之質譜、NMR光譜。 由質量分析’檢出m/z 195 (M + H) +之峰。圖24表示來自 明日葉根部之溶離份18-3之MS光譜。於圖24，橫軸表m/z 值’縱軸表相對強度。 下面表示NMR之歸屬。 'H-NMR ： 53.68 (3H, s, OCH3), 6.25 (1H, d, J=16.0 Hz, 2'-H), 6.75 (1H, d, J=8.0 Hz, 5-H), 6.98 (1H, dd, J=2.0, 8.0 Hz, 6-H), 7.03 (1H, d, J=2.0, 2-H), 7.46 (1H, d, J=16.0 Hz, -111 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1 8· 1 〜9 為 0.027，18-10-12 1313605
五、發明説明（ 3'-H), 9.10 (1Hi S) 3-OH), 9.56 (lH, s, 4-〇H) 圖25表示來自明日葉根部之溶離份之1 H-NMR光 譜。於圖2 5，橫軸表化學位移值（pPm)，縱軸表信號強 度。 對來自明日葉之溶離份丨8 _ 3進行之質譜，NMR光譜解析 之結果，確定活性成分為咖啡酸甲酯（分子量194)。 (I4)與實施例30-(5)同樣地測定於實施例3〇-( 1 2)確認 活性記載之明日葉根部之溶離份1 8 - 4之質譜、NMR光譖。 由質量分析，檢出m/z 253 (M + H) +之峰。圖26表示來自 明曰葉根部之溶離份18_4之MS光譜。圖26 ’橫軸表m/z 值’縱抽表相對強度^ 表示NMR之歸屬信號。 i-NMR : 5 1.15 (3H，s，2-CH3)，1.27 (3H，s，2-CH3)， 2.39 (1H, dd, J=8.0, 17.0 Hz, 4-H), 2.76 (1H, dd, J=5.0, 17.0 Hz, 4-H), 3.62 (1H, m, 3-H), 3.81 (3H, s, 5-OCH3), 5.16 (1H, d, J=4.5 Hz, 3-OH), 6.56 (1H, d, J=9.0 Hz, 6-H), 7.59 (1H, d, J=9.0 Hz, 10-H), 11.86 (1H, brs, 8-COOH) 圖27表示來自明曰葉根部之溶離份18-4之1 H-NMR光 譜。於圖2 7，橫軸表化學位移值（ppm)，縱軸表信號強 度。 I3c-NMR ： 6 20.4 (2-CH3), 25.4 (2-CH3), 26.4 (4-C), 55.7 (5-OCH3), 67.0 (3-C), 77.6 (2-C), 101.8 (6-C), 109.4 (10-C), 112.5 (8-C), 130.7 (7-C), 153.3 (9-C), 160.4 (5-C), 166.6 (8-COOH) -112- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(21〇x 297公釐) 1313605 A7 _ B7 五、發明説明（110) 圖28表示來自明日葉根部之溶離份18·4之13C _NMR光 讀。於圖2 8 ’橫軸表化學位移值（p p m)，縱報表信號強 度。 來自明日葉根部之溶離份1 8 - 4之質譜、NMR光譜解析之 結果確定活性成分為8-羧基-3-羥基-5 -甲氧基-2-二甲基色 滿（分子量252) ° (1 5 )將於實施例3 0 - ( 6)確認強活性之溶離份1 9 (含滞留 時間75.4之檢出峰之溶離份）、溶離份20(含76.5分之檢出 峰之溶離份）混合，以與實施例3 0 - ( 8 )同樣方法，用逆相層 析法再溶離。 (1 6)以與實施例1 3同樣方法進行測定於實施例3 0 - (1 5 ) 溶離之以TSK gel ODS-80TsQA層析之溶離份之活性。其結 果，明白含13.7、14.3 ' 15.1 ' 15.5 ' 16.4 ' 18.8 ' 20.5 分之檢出峰之溶離份， 有NGF產生增強活性。 其結果示於 表48。 表48 溶離份(檢出峰：分） 濃度(毫克/毫升） NGF產生量(％) 19 ' 20-1 (13.7) 0.60 192.4 19、20-2 (14.3) 1.00 246.6 19 ' 20-3 (15.1) 1.00 372.2 19 ' 20-4(15.5) 0.60 529.8 19 ' 20-5 (16.4) 1.00 487.9 19 ' 20-6(18.8) 1.00 337.7 19 ' 20-7 (20.5) 0.364 305.7 -113- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1313605 A7 B7 五、發明説明（ (但’對照组之NGF產生量為0.063毫微克/毫升。） (1 7 )與實施例3 0 - ( 7 )同樣地測定於實施例3 〇 - ( 1 6 )認定 活性之來自明日葉根部之溶離份1 9、2 0 - 5之質瑨、NMR光 譜。 於質量分析，檢出m/z 393 (M + H) +之峰。圖29表示來自 明曰葉根部之溶離份19、20-5之MS光譜。圖29，橫軸表 m / z值’縱軸表相對強度。 表示NMR之歸屬信號。 'H-NMR ： 5 1.67 (3H, s，3，-CH3)，1.69 (3H，s，3，-CH3)， 3.15 (1H，m，4”-H)，3.29 (3H，m，1，-H，2"-H 及 3”-H)，3.37 (1H，dd，J=7.5，15.5 Hz，1·-Η)，3.45 (2H，饵，5'H 及6”-H), 3.72 (1H, dd, J=10.5, 6"-H), 4.97 (1H, d, J=7-5 Hz, 1"-H), 5.31 (1H，t，J=7.5 Hz, 2_-H)，6.28 (1H，d，J=9.〇 hz，3_H), 7_07 (1H，s，5-H)，7.41 (1H，s，8-H)，7.98 (1H，d，j=9 〇 Hz， 4-H) 圖30表示來自明曰葉根部之溶離份19、2 〇-5之i h_nmr 光讀。於圖3 0，橫袖表化學位移值（ppm )’縱耗表•號強 度。 13C-NMR ： 5 17·6 (3'-CH3)，25.5 (3、(：Η3)，27 4 η.广、 V1 -ι)， 60.6(6"-C)，69.6(4"-C)，73.1(2"-C)，76.3(3’’-C)，77〇(5"_ C)，100.4 (1”-C)，102.0 (8-C)，112.8 (10-C)，ll2 9 (3 c) 121.8 (2，-C)，127.4 (6-C)，128_0 (5-C)，132.4 (3、c)，1444 (4-C), 153.4 (9-C), 157.9 (7-C), 160.6 (2-C) -114-
本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4规格(210X297公釐) 1313605 A 7 B7
五、發明説明（112 20·5 之13c-nmr ’縱輪表信號強 圖31表示來自明日葉根部之溶離份19、 光譜。於圖31 ’橫軸表化學位移值（ppm) 度。 對來自明日葉根部之溶離份19、20_5進行質譜、NMR光 譜解析之結果，確定活性成分為喃葡糖 異戊二烯基香豆素（分子量392 )。 (18)測定於實施例3 0-(15)記載之來自明日葉根部之溶離 份1 9、2 0 - 6之質譜、NMR光譜。 以質量分析計檢出 m/z 245 (M-2Glc-Angel)+、 669 (M + H)+、691(M + Na)+、707(M + K)+之峰。圖 32 表示來 自明日葉根部之溶離份19、20-6之MS光譜》於圖32，橫 軸表m / z值，縱袖表相對強度》 表示NMR歸屬信號。 H-NMR ： 5 1.36 (3H，s，2，-CH3)，1.43 (3H，s，2，-CH3)， l. 79 (3H, brs, 2"-CH3), 1.86 (3H, brd, J=7.0 Hz, 3,'-CH3), 2.90 (1H, t, J=8.0 Hz, 2b-H), 2.99 (1H, m, 2a-H), 3.01 (1H, m, 4a-H), 3.02 (1H, m, 4b-H), 3.05 (1H, m, 3b-H), 3.13 (1H, t, J=9.5 Hz, 3a-H), 3.35 (1H, m, 5a-H), 3.39 (1H, m, 5b-H), 3.39 (1H, m, 6b-H), 3.49 (1H, dd, J=8.0, 11.0 Hz, 6a-H), 3.64 (1H, d, J=11.5 Hz, 6b-H), 4.02 (1H, d, J=11.0 Hz, 6a-H), 4.21 (1H, d, J=8.0 Hz, lb-H), 4.37 (1H, d, J=4.5 Hz, 3'-H), 4.46 (1H, brs, 6b-OH), 4.48 (1H, d, J=7.5 Hz, la-H), 4.51 (1H, brs, 2a-OH), 4.72 (1H, brs, 3b-OH), 4.83 (1H, brs, 2b-OH), 4.86 (1H, brs, 4a-OH), 5.03 (2H, brs, 4b-OH, 3a- -115 - 本紙張尺度適用中國圉家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1313605 A7 B7 五、發明説明（ 113
OH), 5.96 (1H, brq, J = 7.〇 Hz, 6.26 (1¾ , ' α> J=9.5 Uy 3-H), 6.61 (1H, d, J=4.5 Hz, 4'-H), 6.83 (1H, d T ’ 5 J"8-5 Hz 6 H)，7.59 (1H, d，J=8.5 Hz，5-H), 7.96 (1H，d, jy 5 ’ 圖33表示來自明曰葉根部之溶離份丨9、2〇 ΉΖ’ 4·Η) H-NMr 光譜。於圖33，橫軸表化學位移值（ppm)，继 度。 .軸表相對強 l3C-NMR： (5 15.2 (3"-CH3), 20.0 (2"-CH3) ，21.3 (2，_CH ) 26.4 (2'-CH3)，59.1 (4、C)，61.0 (6b-C)，69.2 (6a r、 ’ 卜 、〇a-C)，70.0 (葡 匍糖-C)，70.4 (葡萄糖-C)，73.4 (葡萄糖-C)，73 7 η (3 -C)，73 9 (葡萄糖-C)，76.1 (葡萄糖-c)，76.55 (葡萄糖-c、' 76.59 (葡萄 糖-C)，76.8 (葡萄糖-C)，77.8 (2’-C'), 100.5 (lb-C)， l〇7_7 (8-C)， 112.1 (3-C)， 112.1 (l〇-c、. v L)，1U.2 (6-C)， 128.0 (2"-C)，129.8 (5-C)，136.1 (3，，-C) 144 W/1 、i44.5 (4-C), 153.6 (9-C), 156.2 (7-C), 159.4 (2-C), 166.3 (l"-〇
圖34表示來自明日葉根部之溶離份i9、2n a、M 刀 1 3c_NMr 光譜。於圖34，橫轴表化學位移值（ppm)，縱軸表相對強 度。 對來自明日葉根部之溶離份19、2〇_6進行質譜、光譜解 析之結果’確ί忍活性成分為4 ' - 〇 -當歸醯基· 3 , _ 〇 _ [ 6 — 〇 _ (/5 -D-吡喃葡糖基）-/3 -D-吡喃葡糖基]_開洛内酯（分子量 668)。 (19)與實施例30-(7)同樣測定於實施例3〇_(6)確認活性 之來自明日葉根部之溶離份28(含滯留時間914分之檢出峰 之溶離份）之質諸、NMR光譜。 116- 本紙乐尺度適用中國國家楯準(CNS) Α4規格(210 X 297公釐) 1313605 A7 B7 五、發明説明（ 以質量分析檢出m/z 209(M + H) +之導。圖35表示來自明 曰葉根部之溶離份28之MS光譜。圖35，橫軸表m/z值，縱 軸表相對強度。 表示NMR之歸屬信號。 'H-NMR ： δ 1.23 (3Η, t, J=7.0 Hz, 2"-H), 4.14 (2H, q, J = 7.0 Hz, 6.24 (1H, d, J=16.0 Hz, 2'-H), 6.74 (1H, d, J=8.0 Hz, 5-H), 6.98 (1H, dd, J=2.0, 8.0 Hz, 6-H), 7.03 (1H, d, J = 2.0 Hz, 2-H), 7.45 (1H, d, J=16.0 Hz, 3'-H), 9.11 (1H, s, 3-OH), 9.57 (1H, s, 4-OH) 圖36表示來自明日葉根部之溶離份28之1 H-NMR光譜， 於圖36 ’橫轴表化學位移值（ppm )，縱軸表相對強度。 對來自明日葉根部之溶離份2 8進行質譜、NMR光譜解析 之結果，確認活性成分為咖啡酸乙酿（分子量2 〇 8 )。 與實施例4 - ( 1 )同樣測定咖啡酸乙酯、咖啡酸争酯之NGF 產生增強活性。如表4 9所示，咖啡酸乙酯、咖啡酸甲酯增 強NGF產生。 表49 咖啡酸乙醋(微克/毫升） 0 62.5 NGF產生量(％) 100 1279.1 咖啡酸乙醋(微克/毫升） 0 62.5 NGF產生量(％) 100 824.4 (但，對照組之NGF產生量為0.109毫微克/毫升 0 ) -117- 本紙張尺度通用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1313605 A7 B7 五、發明説明（1ις) 115 實施例3 1 (1 )將洋葱薄皮2 5克冷凍乾燥後，於碎斷物中加500毫升 甲醇，室溫下進行抽提。以旋轉蒸發器將除去殘渣之液體 部分濃縮使乾，得甲醇抽提物。與實施例1 3同樣方法測定 如此製備之甲醇抽提物之NGF產生增強活性。添加洋葱薄 皮甲醇抽提物，使成 0.096、 0.192、 0.384、 0.576、 0.768、0.96毫克/毫升。其結果，洋葱薄皮甲醇抽提物， 濃度依存性地增強L - Μ細胞之NGF產生。其結果示於表 50 ° 表50 洋葱薄皮甲醇抽提部分濃度(毫克/毫升） NGF產生量(％) 0 100 0.096 140.4 0.192 136.4 0.384 200.5 0.576 277.3 0.768 307.6 0.960 349.0 (但，對照組之NGF產生量為0.050毫微克/毫升。） (2)於銀杏葉（100% GINKGO BILOBA TEA : GINKGOTON公司製）3克中加蒸餾水200毫升，於100 °C進 行抽提。取除去殘渣之液體部分，得銀杏葉水抽提物。以 與實施例1 3同樣方法，測定如此製備之水抽提物之NGF產 -118 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1313605 A7 B7 五、發明説明（116) 生增強活性。添加銀杏葉水抽提物使成〇. 6 2 5、 1.2 5、 2 · 5、5 % ( v / v)。其結果’銀杏葉抽提物濃度依存性地增強 L-M細胞之NGF產生。其結果示於表51。 表5 1 銀杏葉水水抽提物濃度(毫克/毫升） NGF產生量(％) 0 100 0.625 272.9 1.25 305.0 2.5 255.2 5.0 231.9 (但，對照組之NGF產生量為0.055毫微克/毫升。） 實施例3 2 於薔薇花（自中國之當地市場購入）2克碎斷物中加40毫升 氯仿，室溫下進行柚提。以過濾除去氣仿抽提液之殘渣中 加40毫升乙醇’室溫下進行抽提。以旋轉蒸發器濃縮除去 殘渣之液體部分使乾，得乙醇抽提部分。其次，於殘造中 加40毫升蒸德水’於60 °C抽提1小時《於除去殘渣之液體 部分加2.5倍量乙醇，於-30 °C靜置2小時。其後，以 10,000G離心，分成沉澱物與液體部分。液體部分以旋轉蒸 發器濃縮使乾’得水抽提部分_ 1。一方面，沉澱物再溶於 蒸餾水，得水抽提部分-2。以與實施例13同樣方法測定如 此製備之各部份之NGF產生增強活性。添加薔薇花乙醇抽 提部分，使成0.115、0.23毫克/毫升。添加水柚提部分一 -119-
1313605 A7 B7 五 發明説明（ 117 ，使成0.4 1、0.82 1毫克/毫升。添加水抽提部分-2，使成 0.084、0.1 6 7毫克/毫升。其結果表示於5 2。薔薇花乙醇抽 提部分、水抽提部分-1、 強L-M細胞之NGF產生。 表52 水抽提部分-2， 濃度依存性地增 試樣 濃度(毫克/毫升） NGF產生量(％) 薔薇花乙醇抽提部分 0 100 0.115 623.5 0.23 615.6 薔薇花水抽提部分-1 0 100 0.41 307.7 0.821 365.9 薔薇花水抽提部分-2 0 100 0.084 195.8 0.167 219.7 (但，對照組之NGF產生量為0.136毫微克/毫升。） 實施例3 3 以與實施例1 3同樣方法，測定來自啤酒花之黃腐醇溶離 份（忽布斯太那（示V /只夕 < 十一）公司製）之NGF產生增 強活性。添加黃腐醇溶離份，使成0.0148、 0.0297、 0.05 94、0.1 19毫克/毫升。其結果示於表53。黃腐醇溶離 份濃度依存性地增強L - Μ細胞之NGF產生。 -120- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210X297公釐〉 A7 _____B7 五、發明説明（ ） 1313605 表53 黃腐醇溶離份濃度(毫克/毫升） NGF產生量(％) 0 100 0.0148 144.0 0.0297 242.7 0.0594 401.6 0.119 438.6 (但’對照组之NGF產生量為0.206毫微克/毫升。） 實施例3 4 (1)將於實施例3 3確認NGF產生促進活性之黃腐醇溶離份 (忽布修太那（示7 シr?夕彳十一）公司製）0.4克，以3毫 升氯仿溶解，供予二氧化矽層析。以氯仿（1000毫升）、氯 仿：甲醇=50 : 1 ( 1000毫升）、氯仿：甲醇=20 : 1 ( 1000 毫升）之順序階段性溶離，每1溶離份各取8毫升。將所得溶 離份67〜1〇〇減壓濃縮，得來自啤酒花之黃腐醇溶離份a。 (2 )將上述黃腐醇溶離份a再以逆相層析純化分離。以下 表示其條件。管柱用TSK gel ODS-80Ts(徑21.5毫米X長30 厘米：東梭公司製）。溶媒A (蒸餾水與乙腈以容量比3對2 混合’含〇_ 1 %三氟乙酸）與溶媒B (蒸餾水與乙腈以容量比！ 對4混合’含〇·〗％三氟乙酸）之溶離比由〇分至6 〇分將溶媒B 比直線性地由5 0 %至1 〇〇 % ^將溶媒b比繼續保持於1 〇〇 〇/〇、 2 〇分，最後將溶媒B比保持於5 0 %、2 0分。溶離速度為5毫 升/分’檢出於3 70 nm進行，每1分採取溶離液。 (3 )將上述黃腐醇溶離份a之逆相層析溶離份，以如同實
裝 玎
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1313605 A7 B7 119 五、發明説明（ 施例1 3之方法測定NGF產生增強活性。其結果，明白含
21_1、22_2、24_2、25.7、28.6 分之峰之落離份，有 NGF 產生增強活性。其結果示於表5 4。 表54 溶離份(滞留時間：分） 濃度(毫克/毫升） _生量(％) A-1 (21.1) 0.025 92.4 0.05 151.4 A-2 (22.2) 0.05 109.5 0.1 136.2 0.2 208.6 A-3 (24.2) 0.0125 134.3 0.025 151.4 0.05 202.9 0.1 298.1 A-4 (25.7) 0.025 197.1 0.05 345.7 0.1 416.2 A-5 (28.6) 0.0125 145.7 0.025 189.5 0.05 229.5 0.1 517.1 (但，對照組之NGF產生量為0.093毫微克/毫升。） (4)藉由質量分析計（DX 3〇2 :曰本電子社製）以fab_Ms 手法測定上述溶離份A- 5 (含滯留時間28.6分之檢出峰r之..容 離份）之質譜（MS)。基質使用甘油。其結果，檢出m/z -122-
本紙張尺度適用中國國家搮準(CMS) A4規格(210 X 297公釐） 1313605 A7 B7 120 五、發明説明（ (M + H)。圖37表示來自黃腐醇溶離份之溶離份A-5之MS 質譜。於圖37，橫軸表m/z值，縱軸表相對強度。 另外，用核磁共振（NMR)光譜裝置（JNM_A5〇():曰本電 子社製），測定各種NMR光譜，解析構造結果，確定活性成 分為黃腐醇B(分子量37〇)與黃腐醇1)(分子量37〇)之混合物 (混合比1 : 1.65)。以下表示NMR之歸屬信號。
黃腐醇B lH-NMR : 51.21 (3H，s，6"-H)，1.27 (3H，s，6，，-H)，2.70 (2H，m，4”-H)，3.65 (1H，m, 5，，-H)，3.87 (3H, s，6'-〇cH3)， 6.00 (1H，s，6.80 (2H, m，3-H&5-H)，7.55(2H，m，2_ H及6-H)，7·70 (1H，m，/5 -H)，7.75 (1H，m，α -H)，HU2 (lH， s，4-OH)，14.18 (1H，s, 2'-0H)
黃腐醇D H-NMR ： (5 1.71 (3H, s, 5"-H), 2.60 (2H, m, Γ'-H), 3·85 (3H, s，6’-OCH3)，4.20 (1H，m, 2”-H)，4.58 (1H, s, 4.61 (1H，s，4”-H)，6.04 (1H，s，5'-H)，6.80 (2H，m，3-Hl5_ H)，7.55 (2H，m, 2-H及6-H)，7.70 (1H，m，点-H)，7.75 (1H， m, a -H), 10.09 (1H, s, 4-OH), 10.58 (1H, s, 4'-〇H), l4·69 (1H, s, 2'-0H) 但，試樣溶於重二甲亞砜，殘留二甲亞颯之化學位移值 表示為2.49 ppm。圖38表示來自黃腐醇溶離份之溶離份A-5之1Η-NMR光譜。於圖38，橫軸表化學位移值（ppm) ’縱 軸表相對強度。 (5 )用逆相層析法，如下將來自啤酒花之黃腐醇溶離份中 123 本紙張尺度適用中國國家標竿(CNS) A4規格(21〇x_297公爱7" 1313605 A7 B7 五、發明説明（ 121 之洽性成分如下純化分離。 其條件示於下。 管柱使用丁31<：§61〇〇3-80丁5(5入（徑4.6毫米\長2 5厘米： 東梭公司製）。溶媒A (蒸餾水與乙腈以容量比3對1混合， 含0· 1 %三氟乙酸）與溶媒B (蒸餾水與乙腈以容量比1對3混 合’含0.1%三氟乙酸）之溶離比由〇分至2〇分，溶媒b比直 線性地由5 〇 %至i 00 %。將溶媒B比繼續保持於1 〇〇%、5 分’最後將溶媒B比保持於5 0 %、5分。溶離速度為1毫升/ 分’檢出於215 nm進行，每1分採取溶離液，與實施例1 3 同樣方法進行測各溶離份之活性。 其結果，明白含12.8檢出峰之溶離份有活性。對此溶離 份進行質譜解析，檢出分子量為3 5 5之信號。另外，進行 1 H-NMR光譜解析’明白活性成分為黃腐醇（分子量 354.4)。NMR光譜、質譜之測定結果示於下。 'H-NMR ： δ 1.60 (3Η, s, -Me), 1.69 (3H, s, -Me), 3.12 (2H, d, 7 Hz, H-l"a>b), 3.86 (3H, s, -OMe), 5.13 (1H, s, H-2"), 6.07 (1H, s, H-5'), 6.83 (2H, d, J2, 3 9 Hz, J5> 6 9 Hz, H-2, 6), 7.56 (2H, d, H-3, 5), 7.66 (1H, d, Ja< b 16 Hz), 7.75 (1H, d), 10.05 (1H, s, OH-4), 10.55 (1H, s, OH-4'), 14.63 (1H，s, OH-2，） 但，試樣溶於重二甲亞砜，殘留二甲亞諷之化學位移值 表示為2.49 ppm。圖39表示1h-NMR光譜。於圖39，橫軸 表化學位移值（ppm )，縱軸表相對強度。 卩八3-]^5:11^ 355(14 +以+ (但，用甘油為基質）。 -124- I紙張K度適财®國家料(CNS) A4規格(210X2^53~ 1313605 A7 _______B7 五、發明説明（ ） 實施例3 5 (1 )以如同實施例丨3之方法，測定實施例3 4所得之純化 之黃腐醇之NGF產生增強活性。添加純化之黃腐醇使成 12·5、2 5、50以M。其結果示於表5 5 ’純化之黃腐醇增強 L-M細胞之NGF產生。 表55 黃腐醇濃度(μ M) NGF產生量(％) 0 100 12.5 235.5 25 387.9 50 443.0 (但’對照組之NGF產生量為0.095毫微克/毫升。） (2)來自啤酒花之黃腐醇溶離份（忽布修太那公司製）0·4克 溶於3毫升氯仿’供予二氧化矽層析。以氯仿（1〇〇〇毫升）、 氯仿：甲醇=50 : 1(1 〇〇〇毫升）、氯仿：甲醇=20 : 1 ( 1000毫升）之順序階段性溶離，每i溶離份各取8毫升。所 得溶離份67〜1〇〇減壓濃縮，得來自啤酒花之黃腐醇溶離份 A。再用逆相層析法，純化來自啤酒花之黃腐醇溶離份A。 其條件示於下。管柱用TSK gel ODS-80TS(徑21.5毫米X長 3 0厘米：東梭公司製）。溶媒a (蒸餾水與乙腈以容量比3對 2混合’含〇, 1 %三氟乙酸）與溶媒b (蒸餾水與乙腈以容量比 1對4混合’含〇· 1 %三氟乙酸）之溶離比由〇分至6 〇分將溶媒 B比直線性地由5 〇 %至1 〇〇 %，將溶媒b比繼續保持於 -125- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1313605 A 7 B7 五、發明説明（ 123 :將溶媒B比保持於㈣、2。分溶離速度為5 日 出於370 nm進行’每1分採取溶離液。含滯留 <檢出學之溶離份濃縮使乾，可製備高純度之 百腐醇（19.4毫克）。 7 (3)將製備之黃腐醇13.5毫克溶^二甲亞礙溶液。75毫升 後小加於200笔升1 〇 mM乙酸鈉緩衝液（pH 5 5，含丨〇 % 薦糖），於1〇〇t加熱2小時。冷料，用逆相層析法將反應 液，合離。其條件不於下。樹脂使用江14〇 C18_ 0PN(拿卡來鐵斯克公司製：樹脂量2Q毫升）。反應液供予 管柱，展開溶媒分別為50毫升蒸餾水、2〇%、3〇%、 40%、50%、60%、70%乙腈水溶液、甲醇之順序進行溶 離。其結果，40%乙腈水溶液溶離部分濃縮使乾，可得異 黃腐醇（2.1毫克）。以各種NMR光譜測定解析其構造而確認 構造。 (4)同實施例1 3之方法測定所製備之異黃腐醇之nGF產生 增強居性。添加異育腐醇使為5 〇、1 〇〇、2〇〇 // Μ。如表5 6 所示’異黃腐醇濃度依存性地增強L _ Μ細胞之NGF產生， 明白啤酒類飲料中之異黃腐醇之生理活性。 表56 _ 異黃腐醇試樣濃度(A Μ) 〇 50 1〇〇 200 NGF 產生量(％)__10Q 11Q.7 121.4 198.0 (但’對照組之NGF產生量為0.181毫微克/毫升。） -126 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS> A4規格(210 X 297公釐) 1313605
實施例3 6 (1 )以旋轉蒸發器將3品牌之啤酒f市佳„ Λ .. 丁 丁 巾售口口 A、帀售品Β、 市售品c)及無醇啤酒飲料（市售品〇)各15〇毫升分別濃縮至 6 0毫升，得各別之濃縮物。 (2)以如同實施例13之方法，測定上述濃縮物之ngf產生 增強活性。添加3品牌之啤酒濃縮物使成2 5、5、。（容 量比）。添加典醇飲料濃縮物使成1 〇 % (容量比）。其纟士果示 於表5 7。3商標之啤酒濃縮物及無醇飲料濃縮物濃度依存 性地增強L - Μ細胞之NGF產生。 裝 表57 市售品Α濃縮物 試樣濃度(％) NGF產生量(％) 0 100 2.5 115.5 5 109.3 10 209.9 市售品B濃縮物 試樣濃度(％) 0 2.5 5 10 NGF產生量(％) 100 86.3 126.2 272.4 市售品C濃縮物 試樣濃度(％) 0 2.5 5 10 NGF產生量(％) 100 111.1 153.2 365 1 市售品D濃縮物 試樣濃度(％) 0 10 NGF產生量(％) 100 127.0 (但，對照組之NGF產生量為〇183毫微克/毫升。） 訂 又’與實施例4 - (1 )同樣測定市售品b濃縮物、市售品D 濃縮物之HGF產生增強活性。添加市售品b濃縮物使成 127 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐） 1313605 A7 B7 五、發明説明（19ς) 1 Zd 1 % (容量比）。添加市售品D濃縮物使成1 %及5 % (容量 比）。其結果示於表5 8。各濃縮物增強MRC - 5細胞之NGF 產生。 表57 市售品B濃縮物 試樣濃度(％) NGF產生量(％) 0 100 1 218 市售品D濃縮物 試樣濃度(％) 0 1 5 NGF產生量(％) 100 160 158 (但，對照組之NGF產生量為4.04毫微克/毫升。） (3 )使用質量分析裝置測定市售品A〜D，及啤酒市售品 E〜I、發泡酒市售品J-0中之黃腐醇及異黃腐醇含有量（參 照 Journal of Chromatography A，第 832 卷，第 97〜107 頁 (1997)。結果示於表5 9。各市售品含有0.0005〜0.032微克/ 毫升範圍之黃腐醇。又，以0.0082〜1.27微克/毫升之範圍， 含異腐醇。此等化合物，尤其黃腐醇含量愈多，顯示良好 之啤酒風味之官能。 -128- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1313605
五、發明説明（126 表59 市售品__黃腐醉(微克/毫升）異黃腐醇(微 1* 〇 口 σ A ~w m ^ n ) 0.021 0.70 B 0.0073 0.58 C 0.0070 0.57 D 0.00060 0.034 E 0.0060 0.57 F 0.0073 0.53 G 0.017 0.48 H 0.021 1.27 I 0.00054 0.0082 J 0.0036 0.59 K 0.0041 0.16 L 0.0087 0.77 M 0.010 0.23 N 0.030 0.62 0 0.032 1.10 實施例3 7 將哮酒花（Humulus lupulus)乾燥品50克粉碎，加1，〇〇〇毫 升蒸餾水，於6 0。(：抽提1小時。以旋轉蒸發器將藉過濾除 去殘逢之啤酒花水抽提液濃縮至150毫升。濃縮液加225毫 升氣仿振盪’分成水層與氯仿層及中間層。以旋轉蒸發器 將氣仿層部分餾除溶媒後，濃縮，得啤酒花水抽提物_氯仿 移行部分》 (2)與實施例1 3同樣方法測定上述啤酒花水抽提物.氯仿 移行部分之NGF產生增強活性。添加啤酒花水抽提物-氣仿 -129- 木紙張尺度通用中囷國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) ---- 1313605 A7 B7 127 五、發明説明（ 移行部分’使最後濃度為0‘02、〇〇4毫克/毫升。其处果示 於表60。啤酒花水抽提物·氯仿移行部分漠度依存性:增強 L-M細胞之NGF產生。
(3) 將啤酒花乾燥品5〇克粉碎，加^咖毫升乙醇，於代 抽㈣小時。以旋轉蒸發器濃縮藉過滤除去殘造之啤酒花 乙醇抽提液，濃縮液中加氣仿：水 八a , β 5 3 2《混合液，振盪 刀曲成水層與氯仿層。以旋轉蒸發器將氯仿㈣除溶媒後， 液縮，將啤酒花乙醇抽提物-氯仿移行部分。 (4) 與實施例13同樣方法，測定實施例37_(3)所得之啤 ==醇㈣物.氯仿移行部分之NGF產生増強活性。添加 卑酒古化乙醇抽提物·氣仿移行部分，使最後濃度為〇〇5、 =愛克^升。其結果示於表61。啤酒花乙醇抽提物-氯仿 移灯邵勿增強L-M細胞之NGF產生。 -130-
1313605 A7 B7 128 五、發明説明（ 表6 1 啤酒花乙醇柚提物-氣仿移行部分(毫杏/亭斗、 NGF產生量(％) 0 100 0.05 245.2 0.1 240.7 (但，對照組之NGF產生量為〇.12()毫微克/毫升。） 實施例3 8 (1 )將紫鬱金（莪苯）5克冷凍乾燥後，於碎斷物中加2〇〇毫 升氯仿，室溫下進行抽提。對於吸引過濾後之殘渣，反覆 此知作2次。收集過濾後之液體部分，以旋轉蒸發器濃縮使 ，’得氯仿抽提部分。其次’ ^氯仿抽提後之殘逢中加2〇〇 笔升乙醇’室溫下抽提。對吸引過濾後之殘渣，反覆此操 作2 /入收集過濾後之液體部分，以旋轉蒸發器濃縮使乾， 乾固物溶於4毫升乙醇。收集溶於乙醇之部分，以旋料發 濃縮器濃縮使乾，得乙醇抽提部分]。又，收集不溶於乙 :而落於蒸餾水部分，以旋轉蒸發濃縮器濃縮使乾，得乙 k部刀·2。其/入’乙醇抽提後之殘逢中加毫升蒸铜 :，於⑽進行抽提2小時。除去殘逢之液體部分加2 5倍 乙和，於^。(：靜们小時。其後，以10 000G離心分 ::㈣與液體部分。液體部分以旋轉蒸發濃縮使乾，得 部分分-1。一方面，沉殿物再溶於蒸掏水，得水抽提 (2 )與實施例1 3同樣測定實施例 3 8 - ( 1)製備之紫鬱金氯仿
129 1313605 五、發明説明（ 抽提部分、7 3K*1· 醇抽提部分-1、水柚提部分、水抽提部分-2之NGF產生增強活性。添加紫鬱金氯仿抽提 0 108 0 ^ ^ ; 、15毫克/毫升。添加紫鬱金氣仿抽提部分_丨’使 成 0 _ 04毫克/毫升。添加紫鬱金水抽提部分_ 1，择此 0 S? *S ' 1 Ac κ 战 • · 、3.3毫克/毫升。添加紫鬱金水抽提部分_ 2 ’ =成U毫克/毫升。其結果示於表62。紫營金氯仿抽提部 分、乙醇抽提部分-1、水抽提部分-1、水抽提部分_2 ,濃 度依存性地增強L-M細胞之NGF。 辰 表62 一試樣 紫鬱金氯仿 紫鬱金乙醇抽提部分d 紫營金水抽提部分 屋_度(毫克/毫升）NGF產生晉 0 100 0.108 172.4 ,Ρ.·?1_5_ __............296.8 〇 100 0.02 149.8 P-Pi____________ 214.3 紫#金水拙提部分-2 0 0.825 1.65 13__ 0 0.55 (但，對照組之NGF產生量為〇,122毫微克/毫升。 100 458.6 500.5 559.3 100 212.0 (3 ) 150克紫鬱金冷凍乾燥後，碎斷物中加3〇〇毫升氯仿 • 132- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格 1313605 A7 B7 五、發明説明（13〇
装 室溫下進行抽提。對吸引過濾後之殘渣，反覆此抽提操作2 次。氯仿抽提後之殘;·查中，加3 0 0毫升乙醇，室溫下進行抽 提。對吸引過濾後之殘渣，反覆此操作2次。乙醇抽提後之 殘渣中’加900毫升蒸餾水，於6 0 °C抽提2小時。對吸引過 濾之殘渣中’反覆此操作。將吸引過濾除去殘渣之液體部 分，濃縮至5 0.0毫升，加2.5倍量之乙醇，於-2 0。〇靜置1小 時。其後’以10,000G離心’以旋轉蒸發濃縮器除去沉澱部 分之液體部分使乾，得紫鬱金水抽提部分-3。 其次，用合成吸著劑，將紫營金抽提部分-3之活性成分 溶離。 以下示其條件。
樹脂用安巴來特XAD-2(歐加諾公司製：樹脂量70毫 升）。將3.4克之紫鬱金水抽提部分-3供予XAD-2，以蒸餾 水140毫升充分中洗出非吸著物，其次以350毫升甲醇，將 吸著物溶離。以旋轉蒸發器將甲醇溶離物濃縮，得紫费金 水抽提低部分-3之XAD - 2處理物。 (4)以同實施例1 3之方法’測定上述紫鬱金水抽提低部 分-3之XAD - 2處理物之NGF產生增強活性。添加紫鏺金水 抽提低部分-3之XAD - 2處理物，使成0.5、1、2毫克/毫 升。其結果示於表63。紫鬱金水抽提低部分-3之XAD-2處 理物濃度依存性地增強L - Μ細胞之NGF產生。 -133- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐） 1313605
AT B7 五、發明説明（131) 表63_ 試樣濃度(毫克/毫升） 0 0.5 1.0 2.0 NGF產生量(％)_100 340.2 526.6 607.2 (但，對照組為0.3 2 8毫微克/毫升。） 又，與實施例4 - ( 1 )同樣方法，測定此處理物之HGF產生 增強活性。添加紫鬱金水抽提低部分-3之XAD - 2處理物， 使成2000、1000、500、250微克/毫升。其結果示於表 6 4。紫鬱金水抽提低部分-3之XAD - 2處理物，濃度依存性 地增強MRC - 5細胞之HGF產生。 表64_ 試樣濃度(毫克/毫升） 0 250 500 1000 2000 HGF 產生量_100 112 128 149 192 (但，對照組之HGF產生量為8.02毫微克/毫升。） (5 )用逆相層析法溶離紫鬱金水抽提低部分-3之XAD - 2處 理物之活性成分 以下表示其條件 樹脂用COSMOSIL 140 C18-OPN(拿卡來鐵斯克公司製： 樹脂量7 0毫升）。提供紫鬱金水抽提部分-3之XAD - 2處理 物0.444克，展開溶媒分別以140毫升蒸餾水、5 %乙腈水溶 液、1 0 %乙腈水溶液、2 0 %乙腈水溶液、4 0 %乙腈水溶 液、乙腈、丙酮之順序進行溶離，減壓濃縮各溶離部分。 -134- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格（210 X 297公釐） 1313605 A7 B7 五、發明説明（132) (6)以同實施例1 3之方法，測定來自紫鬱金水抽提部分 -3之XAD - 2之逆相層析法部分之NGF產生增強活性。其結 果示於表6 5。如表所示，明白蒸飽水溶離部分、1 0 %乙腈 水溶液溶離部分、2 0 %乙腈水溶液溶離部分、4 0 %乙腈水 溶液溶離部分、乙腈水溶液溶離部分、丙酮溶離部分有 NGF產生增強活性。 表65 濃度(毫克/毫升） NGF產生量(％) 蒸餾水溶離部分 0.25 103.2 0.5 133.0 1.0 147.1 10 %乙腈水溶液溶離部分 0.25 117.7 0.5 130.6 1.0 157.1 20%乙腈水溶液溶離部分 0.25 154.6 0.5 192.7 1.0 229.9 40%乙腈水溶液溶離部分 0.25 185.1 0.5 255.4 1.0 373.8 乙腈水溶液溶離部分 0.025 135.6 0.05 163.6 0.1 170.0 丙銅溶離部分 0.025 110.4 0.05 121.0 0.1 140.1 -135- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格（210 X 297公釐） 1313605 A 7 B7 五 發明説明（ (但，對照組之NGF產生量為0.307毫微克/毫升。） 又，以與實施例4 - ( 1 )同樣方法，測定來自紫鬱金水抽提 低部分-3之XAD - 2之逆相層析部分之HGF產生增強活性。 其結果，明白蒸餾水溶離部分、5 %乙腈水溶液溶離部分、 1 0 %乙腈水溶液溶離部分、2 0 %乙腈水溶液溶離部分有 HGF產生增強活性。其結果示於表6 6。 表66 溶離份 濃度(毫克/毫升） HGF產生量(％) 蒸餾水溶離部分 20 127 .2 106 5%乙腈水溶液溶離部分 200 119 20 121 10%乙腈水溶液溶離部分 2000 264 200 126 20%乙腈水溶液溶離部分 2000 169 200 111 (但，對照組之HGF產生量，蒸餾水溶離部分、5 %乙腈水 溶液溶離部分為8.1 0毫微克/毫升，1 0 %乙腈水溶液溶離部 分9.00毫微克/毫升，2 0 %乙腈水溶液溶離部分為9.56毫微 克/毫升。） 實施例3 9 (1 )大豆胚芽（紀文社製）碎斷物1 0克中加200毫升氣仿， -136 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格（210 X 297公釐） 134' 1313605 A7 B7 五、發明説明（ 室溫下進行抽提。對吸引過濾後之殘渣，反覆此抽提操作2 次。氣仿抽提後之殘渣中加2〇〇毫升乙醇，室溫下進行抽 提。對吸引過濾後之殘渣，反覆此操作2次。收集過濾後之 液體部分’以旋轉蒸發器濃縮使乾，乾固物溶於5毫升乙 醇。收集溶於乙醇之部分，以旋轉蒸發器濃縮使乾，得乙 醇抽提部分-1。又，收集不溶於乙醇而溶於蒸餾水之部 分，以旋轉蒸發器濃縮使乾，得乙醇抽提部分_ 2。其次， 乙醇抽提後之殘渣中，加2〇〇毫升蒸餾水，於6 〇 〇c進行2小 時之抽提。以1 〇,〇〇〇G離心除去殘渣後之液體部分中，加 2.5倍量之乙醇，於_2 〇。(：靜置1小時。其後，以1〇,〇〇〇G離 心分成沉澱物與液體部分.液體部分以旋轉蒸發器濃縮使 乾，得水抽提部分-1。一方面，將沉澱物溶於蒸餾水，得 水抽提部分-2。 (2)與實施例13同樣方法，測定上述之大豆胚芽乙醇抽提 部分-2 '水抽提部分_ i、水抽提部分_ 2之NGF產生增強活 性。添加大豆胚芽乙醇抽提部分_2，使為〇 8875、^77^、 3.55毫克/毫升。添加大豆胚芽水抽提部分」，使為4州、 9·975、19.95耄克/毫升。添加大豆胚芽水抽提部分·2，使 為3.36、6.72、13.44毫克/毫升。其結果示於表67、68。 大豆胚芽乙醇抽提部分_2、水抽提部分、水抽提部分 濃度依存性地增強L - Μ細胞之NGF產生。 -137 本紙張足度ΐέ用1ί7國囡家標準(CNS) Α4規格(210X297公釐） 1313605 A 7 B7 五 發明説明（ 135 表67 乙醇抽提部分-2 試樣濃度(毫克/毫升） NGF產生量(％) 0 100 0.8875 543.9 1.775 523.3 3.55 589.2 水抽提部分-1 試樣濃度(毫克/毫升） 0 4.988 9.975 19.95 NGF產生量(％) 100 287.4 465.6 1215.3 (但，對照組之NGF產生量為0.251毫微克/毫升。） 表6 8 水抽提部分-2 試樣濃度(毫克/毫升） 0 3.36 6.72 13.44 NGF產生量(％) 100 250.1 259.1 299.8 (但，對照組之NGF產生量為0.223毫微克/毫升。） 又，與實施例4 - ( 1)同樣方法，測定大豆胚芽水抽提部 分-1、水抽提部分-2之HGF產生增強活性。添加大豆胚芽 水抽提部分-1，使成1995，199.5微克/毫升。添加大豆胚 芽水柚提部分-2，使成1 344、1 34.4微克/毫升。其結果示 於表6 9，大豆胚芽水抽提部分-1、水抽提部分-2，濃度依 存性地增強MRC - 5細胞之HGF產生。 -138- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格（210X297公釐） 1313605 A7 B7 五、發明説明（ 表69 大豆胚芽水抽提部分-1 試樣濃度(毫克/毫升） HGF產生量(％) 0 100 199.5 125 1995 138 大豆胚芽水抽提部分-2 ------- 試樣濃度(毫克/毫升） 0 134.4 1344 HGF產生量(％) 100 107 116 (但，對照组之HGF產生量為14.92毫微克/毫升。） (3) 大豆種皮（紀文社製）碎斷物10克中加200毫升氯仿， 室溫下進行抽提。對吸引過濾後之殘渣，重複此操作2次。 氯仿抽提後之殘渣中’加200毫升乙醇，室溫下進行插提。 吸引過濾後之殘渣，重複此操作2次。收集過濾後之液體部 分，以旋轉蒸發器濃縮使乾，乾固物溶於3毫升乙醇。收集 溶於乙醇之部分，以旋轉蒸發器濃縮使乾，得種皮乙醇抽 提部分-1。又收集不溶於乙醇而溶於蒸餾水部分，以旋轉 蒸發器濃縮使乾’得種皮乙醇抽提部分_ 2。其次，於乙酵 抽提後之殘渣中，加7 0耄升蒸餾水，於6 〇 〇c進行抽提2小 時。吸引過濾除去殘渣之液體部分中加2 5倍量之乙醇， 於-20t靜置1小時。其後’以1〇，_g離心’分成沉澱盥 液體部分。液體部分以旋轉蒸發器濃縮使乾，使種皮水柚 提部分」。-方面’將沉澱溶於蒸餘水，得種皮水抽 分-2 〇 (4) 與實_13隨方法’測定上述大豆種皮乙醇抽提部 -139 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公着） 1313605 A7 B7
五、發明説明（137) 分-2、種皮水抽提部分] '種皮水抽提部分·以卿產生 增強活性。添加大豆種皮乙醇抽提部分，2 ,使成〇 275、 0.55¾克/¾升。添加大豆種皮水柚提部分」，使成3 、 6.25、12.5毫克/毫升。添加大豆種皮水抽提部分·2，使成 0·654、 L3〇8、2.616毫克/毫升。其結果，示於表7〇、 71。大旦種皮乙醇抽提部分_2、種皮水抽提部分、種皮 水抽和1部分-2，濃度依存性地增強L - Μ細胞之NGF產生。
裝 表70 種皮乙醇抽提部分-2 η 試樣濃度(毫克/毫升） 0 0.275 0.55 NGF產生量 100 379.1 462.5 (但’對照組之NGF產生量為0.251毫微克/毫升。） 表7 1 種皮水抽提部分-1 試樣濃度(毫克/毫升） NGF產生量(％) 0 100 3.125 131.4 6.25 144.1 12.5 307.9 種皮水抽提部分-2 試樣濃度(毫克/毫升） 0 0.654 1.308 2.616 NGF產生量(％) 100 310-2 436.8 512.3
(但’對照組之NGF產生量為0.223毫微克/毫升。） 又，與實施例4 - ( 1 )同樣方法，測定大豆種皮水抽提部 -140 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210 X 297公釐) !313605
AT - ___________Β7 ________ 五、發明説明（138) 分-1、水柚提部分_ 2之HGF產生增強活性。添加大豆種皮 水柚提部分' 1，使成12 5，1 2 5 0微克/毫升。添加大旦種皮 水抽提部分-2，使成26.1 6、26 1.6微克/毫升。其結果示於 表72、73。大豆種皮水抽提部分_ι、水抽提部分-2 ’濃度 依存性地增強MRC - 5細胞之HGF產生。 表 72_____一 大豆種皮水抽提部分 試樣濃度(毫克/毫升） 〇 125 1250 HGF產生量(％)_1〇〇 134 218___ (但’對照組之HGF產生量為14.92毫微克/毫升。） 表 73___ 大豆種皮水抽提部分-2 試樣濃度(毫克/毫升） 〇 26.16 261.6 HGF產生量(％)_1Ό0 115 128 --——---------— (但，對照組之HGF產生量為8.24毫微克/毫升。） (5 )將大豆粉（紀文社製）1 〇克中加2〇〇毫升氯仿，於室溫 進行抽提。對吸引過濾後之殘渣，反覆此抽提操作2次。於 氣仿抽提後之殘渣加200毫升乙醇，於室溫進行拙提。對吸 引過濾後之殘渣，重複此操作2次。收集過遽後之液體部 分，以旋轉蒸發器濃縮使乾，乾固物溶於3毫升乙醇。收集 溶於乙醇之部分’以旋轉蒸發器濃縮使乾，得大豆粉之乙 -141 -
139; 1313605 五、發明説明（ 鮮抽提部分，！。又，收集不溶於乙醇 以旋轉蒸發器濃縮使乾，得大豆粉之乙^游餾水部分， ;女，士人r JS* t 杨 < 乙醇抽提部分_ 7。甘 ；^抽提後之殘渣加丨〇〇毫升蒗 ’、 小時抽提。以i 0，_G離心除去殘·.大：、二.於6 〇 C進行2 吾7醢、λ 陈舌殘退弋硬體邵份，加2.5件 m…2〇。。靜置Η、時。其後，以10,000G離心，分 得二：液體部分。液體部分以旋轉蒸發器濃縮使乾， :s 、7抽提邵分-1。一方面’將沉殿溶於蒸館水’得 大旦粉水抽提部分_2。 八⑷與實施例13同樣方法，測定上述大豆粉乙醇抽提部 :^2，大旦粉水抽提部分_丨之NGF產生增強活性。添加大 旦叔乙醇抽提部分·2，使成〇 488、〇 975毫克/毫升。添加 大旦粉水抽提部分-1，使成2.625、5.2 5毫克/毫升。其結 果不於表74、75 »大豆粉乙醇抽提部分_2，大豆粉水抽提 部分-1 ’濃度依存性地增強L _ Μ細胞之NGF產生。 表74 大且粉之乙醇抽提部分·2 試樣濃度(毫克/毫升） NGF產生量(％) 0 100 0.488 426.5 0.975 400.7 (但’對照組之NGF產生量為0.251毫微克/毫升。） 表75 大豆粉水抽提部分-1 試樣濃度(毫克/毫升） 0 2.625 5.25 NGF產生量(％) 100 284.7 283.5 -142 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210 X 297公釐） 1313605 A7 B7 五、發明説明（14(D) (但，對照組之NGF產生量為0.223毫微克/毫升。） 又，與實施例4 - ( 1 )同樣方法測定大豆粉水抽提部分-1、 水抽提部分-2之HGF產生增強活性。添加大豆粉水抽提部 分-1，使成1 05、1 050微克/毫升。添加大豆粉水抽提部分-2，使成56.5、565微克/毫升。其結果示於表76。大豆粉水 抽提部分-1、水抽提部分-2，濃度依存性地增強MRC- 5細 胞之HGF產生。
裝 表76 大豆粉水抽提部分-1 試樣濃度(毫克/毫升） HGF產生量(％) 0 100 105 142 1050 131 大豆粉水抽提部分-2 試樣濃度(毫克/毫升） 0 56.5 565 HGF產生量(％) 100 127 171 (但，對照組之HGF產生量為14.47毫微克/毫升。） 訂
k 實施例4 0 (1 )於諸丙夜葉粉末（皇漢藥品研究所製）5克中加200毫升 氣仿室溫下進行抽提。對吸引過濾後之殘渣，反覆此抽提 操作2次。氯仿抽提後之殘渣中加200毫升乙醇，於室溫進 行抽提。對吸引過濾後之殘渣，反覆操作2次。收集過濾後 之液體部分，以旋轉蒸發器濃縮使乾，乾固物溶於1 7毫升 -143- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格（210 X 297公釐） 1313605
2。收集溶於乙醇之部分’以旋轉蒸發器漠縮使乾，得 乙鮮抽提邵分-1。又，收集無溶於乙醇而溶 分’以旋轉蒸發器濃縮使乾，得乙醇拙提部分、卜、其二部 3抽提後之殘渣中加80毫升蒸齒水，於㈣進行^ ㈣，_G離心除去殘渣之液體部分，加25倍量之 二：二2°。？置1小時。其後，以10，_離心分成沉 柄與U分。液體部分以旋轉蒸發器濃縮使乾，得水 分」…万面，沉殿再溶衫I®水中，對蒸館水進 :丁 斤（透析膜：Sea—ss Cel丨urose Tubing UC36 32_ ’二先純樂社製）。透析液内加25倍量之乙醇於_2〇 (置1 "寺其後’以1〇,〇〇〇G離心，分成沉澱物與液體 邵为。將沉澱物溶於蒸餾水’得水抽提部分。 ⑺以與實施例13同樣方法，測定上述諸丙夜葉乙醇抽提 邵分-2、水抽提部分]、水抽提部分_2之臟產生增強活 性。添加諸丙夜葉乙醇抽提部分使成〇 15 ' 〇3毫克/毫升。 添加諸丙夜葉水抽提部分q，丨成141毫克/毫升。添加諸 丙仗茱水抽提部分·2，使成G.G1、㈣2、請毫克/毫升。 其結果示於表77。諸丙夜葉乙醇抽提部分」、水抽提部分· 二水抽提部分-2’濃度依存性地增強一之_產 -144 本紙張尺度適用中g國*標準⑴⑽）Μ規格(Wax 2町公釐） 1313605 A7 B7 五、發明説明（142) 表77 乙醇抽提部分-2 試樣濃度(毫克/毫升） NGF產生量(％) 0 0.15 0.3 100 256.1 295.7 水抽提部分-1 試樣濃度(毫克/毫升） NGF產生量(％) 0 1.41 100 843.4 水抽提部分-2 試樣濃度(毫克/毫升） NGF產生量(％) 0 0.01 0.02 0.04 100 250.5 300.2 372.6 (但，對照組之NGF產生量為0.1 22毫微克/毫升。） 又，同實施例4 - ( 1 )之方法，測定諸丙夜葉水抽提部分 -1、水抽提部分-2之HGF產生增強活性。添加丙夜葉水抽 提部分-1，使成225.5、22.55、2.255微克/毫升。添加丙夜 葉水抽提部分-2，使成20.8、4、0.4、0.04微克/毫升。其 結果示於表7 8，7 9。諸丙夜葉水抽提部分-1、水抽提部 分-2，濃度依存性地增強MRC - 5細胞之HGF產生。 表78 諸丙夜葉水抽提部分-1 試樣濃度(毫克/毫升） HGF產生量(％) 0 2.255 22.55 225.5 100 232 406 612 (但，對照組之HGF產生量為5.96毫微克/毫升。） -145- 玎 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 x 297公釐)
裝
線 1313605 A 7 B7 五、發明説明 表79_ 諸丙夜葉水抽提部分-2 試樣濃度(毫克/毫升) HGF產生量(％) 0 100 0-04 0.4 4 出—_129___188____266 (但’對照組之H G F產生I為9 · 5 6毫微克/毫升 20 449 實施例4 1 (υ於米糠ίο克中加2〇〇毫升氣仿，於室溫進行抽提。對 吸引過錢之m覆此操作2次。收集_後之 分，以旋轉蒸發器濃縮使乾，得氣仿抽提部分。氯仿抽提 後之殘逢，加200毫升乙醇’於室溫進行抽提。對殘渔反覆 此料2次。.收集過滤後之液體部分，以旋轉蒸發器濃縮使 乾’乾固物落於3 5毫升乙醇。收集乙醢 叹杲乙醇/谷液，以旋轉蒸發 态/辰縮使乾，侉乙醇抽提部分_丨。 .λ 1又，收集不溶於乙醇而 溶：祕之部分，以旋轉蒸發器濃縮使乾，得乙醇抽提 部分-2。其次’乙醇抽提後之殘 進行抽提2小時”X1請= 中加_升蒸餘水，於 八中力…… ，〇〇〇}離心’除去殘渣之液體部 in nnnr . . 、 〇 c静置1小時。其後，以 器濃縮使乾，得水抽提部分— 部^硬體部分以旋轉蒸發 水，得水抽提部分小 …將沉殿物溶於蒸飽 (2)與實施例1 3同樣方法，測 部分、乙醇抽提部分卜乙醇抽提t備之米糖氯仿抽提 1、水抽提部分-2之NGF產生 刀'2、水抽提邵分_ 生，強活性。添加米糠氯仿抽提 衣紙狀 __ - 146 - 1313605 A7 B7 五、發明説明（144) 部分，使成4.4、8.8毫克/毫升。添加米糠乙醇抽提部分-1，使成0.125、0.25、0.5、1.0毫克/毫升。添加米糠乙醇 抽提部分-2，使成0.625、1.25、2.5、5.0毫克/毫升。添 加米糠水抽提部分-1，使成0.625、1.25、2.5、5.0毫克/ 毫升。添加米糠水抽提部分-2，使成0.625、1.25、2.5、 5.0毫克/毫升。其結果示於表8 0。米糠氯仿抽提部分，乙 醇抽提部分-1、乙醇抽提部分-2、水抽提部分_ 1、水抽提 部分-2，濃度依存性地增強L-M細胞之NGF產生。 表80 氯仿抽提部分 試樣濃度(毫克/毫升） NGF產生量(％) 0 100 4.4 125.8 8.8 181.8 乙醇抽提部分-1 試樣濃度(毫克/毫升） 0 0.125 0.25 0.5 1.0 NGF產生量(％) 100 239.6 318.6 357.3 373.0 乙醇抽提部分-2 試樣濃度(毫克/毫升） 0 0.625 1.25 2.5 5.0 NGF產生量(％) 100 313.0 393.7 445.9 685.8 水抽提部分-1 試樣濃度(毫克/毫升） 0 0.625 1.25 2.5 5.0 NGF產生量(％) 100 151.0 177.4 291.1 559.1 水抽提部分-2 試樣濃度(毫克/毫升） 0 0.625 1.25 2.5 5.0 NGF產生量(％) 100 138.1 185.8 248.0 428.5 -147- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格（210 X 297公澄） 1313605 A7 B7 五、發明説明（145) (但，對照組之NGF產生量為0 · 1 72毫微克/毫升。） 又，以與實施例4 - ( 1 )同樣方法，測定水抽提部分-1之 HGF產生增強活性。添加米糠水抽提部分-1，使成1 000、 1 00微克/毫升，其結果示於表8 1。米糠水抽提部分-1，濃 度依存性地增強MRC - 5細胞之HGF產生。 表8 1_ 水抽提部分-1 試樣濃度(毫克/毫升） 0 100 1000 HGF產生量(％)_100 107 157_ (但，對照組之HGF產生量為4.04毫微克/毫升。） 實施例4 2 (1 )將市售烏龍茶葉抽提成通常之2倍濃度，得500毫升。 此依表82所示之摻合，製備含醇之烏龍茶1000毫升。
裝 玎
線 表82 烏龍茶 50% 1/5檸檬果汁 0.1% 檸檬酸或檸檬酸鈉 適量 維生素C 0.02% 砂糖(甘蔗） 4.5% 乙醇(v/v) 4.0% pH 3.7 純水 餘額 -148 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1313605 A7 B7 五、發明説明（ (2 )將竹葉粉末7克懸浮於丨〇〇毫升純水’製備6 〇它下抽 提1小時之抽提物之冷凍乾燥物，於上述含醇烏龍茶中添加 該乾燥物使成〇. 1微克/毫升，製備醇飲料。製備添加該乾 燥物使該乾燥物中之異荭草素為1〇〇微克/毫升之醇飲料。 (3 )將洋忽薄皮5克懸浮於1 〇〇毫升純水’於丨〇〇充抽提i 5 分’製備抽提物。製備添加該抽提物於上述含醇烏龍茶， 使成100倍稀釋之醇飲料。 (4 )將銀杏茶葉3克，懸浮於純水2〇〇毫升，於丨〇〇艺抽提 1 5分’製備抽提物之冷凍乾燥物，將該乾燥物溶於純水8 毫升後’製備於上述含醇烏龍茶中添加該溶解液使成丨〇〇倍 稀釋之醇飲料。 (5 )將艾嵩乾燥品1 〇克中添加丨5〇毫升純水，於6 〇。〇抽提 1小時’製備抽提物’於上述含醇烏龍茶中，添加來自該抽 提< 3，5 -二咖啡醯基奎寧酸，使成$微克/毫升，製備含醇 飲料。又製備添加來自該抽提物之氯原酸使成4〇微克/毫升 之含醇飲料。 (6) 將明曰葉（葉莖部）乾燥品4 $ 〇克懸浮於2升純水’於6 〇 C抽彳疋1小時，製備抽提物，於含醇烏龍茶中添加該抽提物 中之鼠原使成10微克/宅升’製備含醇飲料。 (7) 將菊花乾燥物15克懸浮於純水15〇毫升，於6cTc柚提 2小時，製備抽提物，於上述含酵烏龍茶中，添加該抽提 物，使成100倍稀釋，製備含醇飲料。 (8 )將紫鬱金乾燥品5克懸浮於純水2 5毫升，於6 〇 °C抽提 2小時，製備抽提物之冷凍乾燥物，於上述含醇烏龍茶中， -149-
1313605
添加該乾燥物’使成10微克/毫升，製備含醇飲料。 (:)將李子300克與5⑽毫升乙醇—起使均_化，以過遽製 4'夜’於上述含醇烏龍#中，添加該拙提物使成_〇倍 稀釋:夜’製備含醇飲料。使用該抽提物，使飲料中分別含 1〇〇微克/毫升之5.㈣酿基奎寧酸、4.咖啡醯基酸， 製備含醇飲料。 (1 0)將青花，菜3〇〇克與5 0 %乙醇水溶液35〇毫升一起均一 以過濾製備濾液，將該濾液濃縮成丨5〇毫升。於上述含 醇烏龍茶中，添加該濃縮液，使成1〇⑼倍稀釋液，製備: 醇飲料。 (π)將春菊之冷凍乾燥物10克粉碎，以乙醇洗淨後，添 加100¾升水，於60°c加熱1小時，製備抽提液，於上述含 醇烏龍茶中，添加該濃縮液使成1〇〇〇倍稀釋液，製二 飲料。 13 (1 2 )對春菊900克與8 0 %乙醇水溶液2升一起均—化，以 過濾製備濾液，將該濾液濃縮至50毫升。於上述含醇烏龍 茶中’添加該濃縮物使前1〇〇〇倍稀釋液，製備含醇飲料。 又，於該含醇飲料中，使用該濃縮液使3,5_二咖啡醯基奎 寧酸為10微克/毫升’製備含醇飲料。 (13)將市售啤酒（前出市售品8)15升濃縮成6升，於上述 含醇烏龍茶中’添加該濃縮液使成1 〇〇倍稀釋液，製備各醇 飲料。 13 - (14)將市售之無醇啤酒飲料（前出市售品D)1 5升濃縮成6 升’於上述含醇烏龍茶中’添加該濃縮液使成1〇〇倍5稀釋 -150 -
本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4规格(210 X 297公釐） 1313605 A7
液’製備含醇飲料》 (1 5 )將大豆胚芽碎斷物丨〇克’以乙醇2〇〇毫升洗淨後 加200毫升水，於6〇t加熱2小時，製備抽提液。將抽彳’ 過濾，得滤液後，遽液中加2.5倍量乙肖，分別製備乙= 溶性部分與乙醇不溶性部分之乾燥物。於上述含醇烏龍茶 添加乙醇可溶性部分之乾燥物，使成2〇〇微克/毫^供 含醇飲料。 &備 又，於上述含醇烏龍茶中添加乙醇不溶性部分之乾燥 物’使成130微克/毫升，製備含醇飲料。 … (16) 大豆種皮碎斷物1〇克，以乙醇2〇〇毫升洗淨後，加 7〇毫升水’於60。(；加熱2小時’製備抽提液。將柚提液^ 濾，得濾液後，濾液中加2.5倍量之乙醇，分別製備乙醇可 溶性部分與乙醇不溶性部分之乾燥物，於上述含醇烏龍茶 中添加乙醇可溶性部分之乾燥物，使成13〇微克/毫升製 備含醇飲料。 又，於上述含醇烏龍茶中，添加乙醇不溶性部分之乾燥 物，使成30微克/毫升，製備含醇飲料。 (17) 將大旦粉10克以乙醇200毫升洗淨後，添加1〇〇毫升 水，於6 0 °C加熱2小時，製備抽提液。將柚提液過濾，得 濾液後，濾液中加2.5倍量之乙醇，分別製備乙醇可溶性部 分與乙醇不溶性部分之乾燥物。於上述含醇烏龍茶中，添 加乙醇可溶性部分之乾燥物，使成100微克/毫升，製備含 醇飲料。 又於上述含醇烏龍茶中’添加乙醇不溶性部分之乾燥 -151 - 本纸張尺度適财ϋ®家標準(CNS) A4規格(21GX 297公爱) _^ ------ 149> 1313605 五、發明説明（ 物，使成60微克/毫升，製備含醇飲料。 (…將諸丙夜葉粉末5克，以2〇〇毫升乙醇洗淨後，添加 8〇笔升水’於6〇°C加熱2小時，製備抽提液。將抽提液過 滤’得細。慮液中加2.5倍量之乙醇，分別製備乙醇可 溶性部分與乙醇不溶性部分之乾燥物。於上述含醇烏龍茶 中’添加乙醇可溶性部分之乾燥物，使成2微克/毫升，製 備含醇飲料。 又於上述含醇烏龍茶中，添加乙醇不溶性部分之乾燥 物’使成4微克/毫升，製備含醇飲料。 (19)將米糠1〇克’以乙醇200毫升洗淨後，添加100毫升 水’於㈣加熱2小時’製備拙提液。將抽提液過遽，得 滅液後’於心中加2.5倍量之乙醇’製備乙醇可溶性部八 之乾燥物。於上述㈣烏龍茶中，添加乙醇可溶性部分: 乾燥物，使成1¾克/毫升，製備含醇飫料。 (2 0 )上述實施例4 2 - (2 )〜Π 9、折#、a上 L ) U9)所圮< 含醇飲料，為風味 佳且具HGF產生增強能之清涼醇飲料。 又，此等飲料進行碳酸飽和，製備發泡型之飲料。 又，製備含㈣倍量之此等飲料中具咖產生增強能之 有效成分之無醇型飲料。此等飲料任_者皆顯 味、高的HGF產生增強能。 實施例4 3 (1)依表8 3所記之摻合，製備含醇果汁。 -152 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公"17 1313605 五、發明説明（ 150) A7
表83 ' -*---! 1/6葡萄柚果汁 ------ 棒橡酸或棒樣酸納 0.56% 適量 維生素C 果糖葡萄糖液糖 0.02% 水Ί台 1.5% 乙醇(v/v) 2.2% 3.0% pH 純水 3.3 ----------J --- 餘額 (2)將市售之紅花黃色色辛·禾士 5 ^ ^ ± ^ 巴素添加至上述含醇果汁，使該色 素為1.25¾克/ ¾升，劁偌人結 r ΒΗ Δ # .. 備3醇飲料β該飲料中含高量之紅 化月Α為其有效成分。又’將^ — a u ι 1<Λ古儿、 將、.工化乾紐物1〇克懸浮於純水 1 5 0笔升’於6 0。〇抽提2小時，棘虹 、λ 、. Τ 將抽耠物之冷凍乾燥物添加 於上述含阵果汁，使該兹檢cb - Λ乾煤物中《紅花明A為3毫克/毫 升，製備含醇飲料。 。⑴將市售菊花乾燥物15克’懸浮於純水15〇毫升，於6〇 C抽k 2小時’將抽提物之冷;東乾燥物添加至上述含醇果汁 中，使该乾燥物為2〇毫克/毫升，製備含醇飲料。 又，於上述含醇果汁中，添加上述冷凍乾燥物，使癒瘡 内酯為20微克/毫升，製備含醇飲料。 (4)將明日葉乾燥物（葉莖部）2〇克懸浮於純水36〇毫升， 於6〇°C抽提2小時，將抽提物之冷凍乾燥物添加於上述含 醇果'十’使咸乾燥物為400微克/毫升，製備含醇飲料。 -153 - 本紙張尺度通用中國國冬標準(CNS) Μ規格(2ι〇χ297公爱） 1313605 A7
又，將明曰葉乾燥物（根部）2 0克懸浮於純水360毫升，+ 6 〇 °C抽提2小時，將抽提物之冷凍乾燥物添加於上迷人醇 果汁’使該乾燥物為6〇〇微克/毫升，製備含醇飲枓。 ° 另外’於上述含醇果汁中添加該乾燥物’使黃卷 ^ ^ ^ jk 10微克/毫升，製備含醇飲料。 … 又’於上述含醇果汁，添加該乾燥物，使3，_ P _ 口比 喃葡糖基開洛内酯為5 〇微克/毫升，製備含醇飲料。 石-D - ?比 製備含醇 又’於上述含醇果汁，添加該乾燥物，使7_〇 喃葡糖氧基-8 -異戊二烯基色滿為3 〇微克/毫升， 飲料。 又，上述含醇果汁中，添加該乾燥物，使咖啡酸甲、 20微克/毫升’製備含醇飲料。 S曰為 又，上述含醇果汁，添加該乾燥物，使8_羧基q _ 5-甲氧基-2-二甲基色滿為3微克/毫升，製備含醇飲料匕基_ 又，上述含醇果汁，添加該乾燥物，使7_^_D_吡喃葡糖 氧基-6-異戊二烯基色滿為3〇〇微克/毫升，製備含醇飲料。° 又，上述含醇果汁，添加該乾燥物，使4，_〇_ 3|-o-[6-o-(/-D二比喃葡糖基“比喃葡糖醯基];開 洛内S旨為400微克/毫升，製備含醇飲料。 又’於上述含醇果汁巾，添加該乾燥物，使咖啡酸乙酿 為30微克/毫升，製備含醇飲料。 (5)將洋葱薄皮25克懸浮於95% v/v乙醇5〇〇毫升，於室溫 抽提’製備㈣液之乾燥％，於上述含醇果汁中添加該乾 燥物’使為100微克/ ¾升’製備含醇飲料。 -154- 1313605 A7 B7
五、發明説明（152 (6 )將銀杏茶葉3克懸浮於純水2〇〇毫升 小時，製備抽提物之冷凍乾燥物，於1 ’於1 0〇 t抽提1 加該乾燥物，使成700微克/毫升，、迷含醇果汁中，添 、 ^備含醇餘划· (7 )將市售之薔薇花2克懸浮於纟屯水* 〇 # 1小時，製備多抽提物之冷凍乾燥物，於笔升’於6 0它抽提 添加該乾燥物使成80微克/毫升，製備含醇果汁中， ⑴使用市售之啤酒花抽提物，添加 使黃腐醇含量為3微克/毫升，製備含醇飲料。D .不/十中， (9) 將市售之哮酒花抽提物’添加於上述含 作為乾燥重量為20微克/毫升，製備含醇飲料。/ ，使 (10) 使用市售啤酒花抽提物’添加於上述今醇果十 ^黃腐醇B、黃腐醇：)之總量為2G微克/毫/製備含醇飲 (11) 使用市售之啤酒花抽提物，添加於上述含醇果汁， 使異黃腐醇含量為80微克/毫升，製備含醇飲料。 ' (12) 將市售啤酒（前出市售品3)15升濃縮成6升，添加於 上述含醇果汁中，使該濃縮液成丨〇倍稀釋液，製備含醇飲 料。 人 (1 3)將市售無醇啤酒飲料（前出市售品D)丨5升濃縮成6 升’添加於上述含醇果汁中，使該濃縮液成丨〇倍稀釋液， 製備含醇飲料。 (1 4)用市售啤酒花抽提物，添加於上述含醇果汁，使^ 腐醇含量為0·04微克/毫升’異黃腐醇含量為L3微克/毫 升，製備含醇飲料。 -155- 本紙張尺度適用尹國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐）
裝 玎
線 1313605 A7 B7 153y 五、發明説明（ 土 /吏用市售啤酒花抽提物’添加於上述含醇果汁，使 汽腐醇含量為0.9微克/毫彳，異黃腐_含量為4微克/毫 升’製備含醇飲料》 >(1 5)將啤酒花乾燥物5 〇克粉碎，以i升之乙醇抽提，濃 f抽H添加於上述含醇果汁中，使濃縮物作為乾燥重 量為20微克/毫升，製備含醇飲料。 ^6)將紫鬱金5克之碎斷物懸浮於純水^毫升，於 抽提2小B争，將才由提物之冷康乾燥物添加於上述含醇果汁 中，使该乾燥物為6〇〇微克/毫升，製備含醇飲料。 (”)將大豆胚芽碎斷物，1〇克，以毫升乙醇 水，於6〇t加熱2小時，製備抽提液。將 抽楗視過遽，得濾液後’滤液中加25倍量乙醇 ^可溶性部分與乙醇不溶性部分之乾燥物於上述 Π::醇可溶性部分之乾燥物’使成5毫克/毫升，製 二？上述含醇果汁中添加乙醇不溶性部分之 使成3毫克/毫升’製備含醇飲料。 ⑴)將大豆種皮碎斷物1〇克，以乙醇2〇〇 添加7〇毫升水，於60t加熱2小時，製 ：’ 液過濾，得濾液後，濾液中加25倍量乙醇，八成將抽提 可溶性部分與乙醇不溶性部分之乾燥物。添：：製傷乙醇 烏龍茶’使乙醇可落性部分之乾燥 二?上迷含醇 含醇飲料。 笔克/鼋升，製備 又’將乙醇不溶性部分之鉑換物，.致 乾知物添加於上述含醇果汁， 156- 本纸張尺度適财s料料(CNS) 1313605 發明説明（ 使成600微克/毫升’製備含醇飲料。 (19)將大豆粉1()克以乙醇鳩毫升洗淨後，添加毫升 水，於60t加熱2小日争’製備拙提液。將插提液過濟，得 處液後”慮液中加2.5倍量乙醇，分別製備乙醇可溶八 與乙醇不溶性部分之乾燥物。於上述含醇果汁中添加乙二 可落性邵分之乾燥物使成3毫克/毫升’製備含醇飲料。 又，將乙醇不溶性部分之乾燥物添加於上述 茶，使成6 0微克/毫升，製備含醇飲料。 …s 」2〇)將諸丙夜葉粉末5克以乙醇綱毫升洗淨後，添 耄升水’於6 0 °C加熱2小時，製储細描％ … * 氟備抽耠硬。將抽提液過 滤’仔滅'液後’滤液中加2.5倍量乙醇，分別製 性部分與乙醇不溶性部分之乾燥物。於上述含 ： =醇可溶性部分之乾燥物使成5⑽微克/毫升，製備含醇 又’將乙醇不溶性部分之乾燥物添加於上述 使成5微克/毫升’製備含醇飲料。 · / ’ ⑴）將米糠！〇克以乙醇扇毫升洗淨後，添加 水：於60t加熱2小時，製備抽提液。將抽提液過渡 濾液後’〉慮液中加2.5倍量乙醇，分別製備乙醇可办二： 與乙醇不溶性部分之乾燥物。於上述含醇果汁中^心 可溶性部分之乾燥物使成500微克/毫升，製備含醇：乙酵 又，將乙醇不溶性部分之乾燥物添加於上述人 使成500微克/毫升’製備含醇飲料。 / (22)上述實例43-(2)〜（2 1)記載之含醇果 不才飫料，為風 -157 -
本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210X297公笼）— 155 1313605 五、發明説明（ 味佳，且具NGF產生增強能之清涼醇飲料。 又，此等飲料進行碳酸飽和，製備發泡型飲料。 又，製備含有20倍量之此等飲料中具NGfF產生增強炉、 有f成分之無醇空飲料。此等飲料任一者皆顯示二好 及咼的NGF產生增強能。 產業上之利用可能性 斤根據本發明，提供含有來自植物之成長因子產生增強物 質心成長因子產生增強用組合物，含有該組合物對以成長 因子產生增強為必要之疾病有效之醫藥、食品、飲料或甸 7。該醫藥於生豸内具有成長因子產生增強活十生，作為肝 犬、重症肝炎、劇症肝炎、肝硬化、肝肉膽汁滯留等之肝 障礙’藉由藥劑等之腎障礙、胃腸障礙'血管障礙、慢性 腎炎、肺炎、創傷、糖尿病、癌、癡呆症或神經障礙等之 以成長因子產生增強為必要之疾病之治療劑或預防劑有 用。又，該食品或飲料中，藉由日常之飲食品攝取，可能 改善以成長因子之產生增強為必要之疾病之症狀。因而， 以來自植物之具成長因子產生增強作用之物質為有效成分 之·機能性飲食品，藉由其成長因子產生增強作用，為維持 生體（恆常性上有用之機能性飲食品。該飼料具生物之身 體狀況改善等之效果而有用。另外’根據本發明，亦提供 來自植物之成長因子產生增強劑，該增強劑對於成長因子 之機能研％，有關成長因子之疾病用醫藥之篩選有用。 -158 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(21〇 χ 297公釐）

Claims (1)

  1. 中文申請專利範圍替換本(96年12月） A8 B8 C8 D8
    六、申請專利範圍 13 1 3祕§)1〇8529號專利申請案 用食品，其中含0.00 007重 一種神經成長因子產生增強 昼％以上之黃腐醇。 用飲料，其中含0.00007重 一種神經成長因子產生增強 量％以上之黃腐醇。 3. 種神經成長因子產生增強用飼料，其中含〇〇〇〇07重 量％以上之黃腐醇。 4. 種芙腐醇之用途’其係用於製造含0.00007重量％以 上之黃腐醇之神經成長因子產生增強用食品。 5 -種兴腐醇之用途，其係用於製造含0.00007重量％以 上之黃腐醇之神經成長因子產生增強用飲料。 6 '種界腐醇之用途’其係用於製造含0.00007重量％以 上之頁腐醇之神經成長因子產生增強用飼料。 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4规格(210 X 297公釐)
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