TWI313605B - - Google Patents

Download PDF

Info

Publication number
TWI313605B
TWI313605B TW090108529A TW90108529A TWI313605B TW I313605 B TWI313605 B TW I313605B TW 090108529 A TW090108529 A TW 090108529A TW 90108529 A TW90108529 A TW 90108529A TW I313605 B TWI313605 B TW I313605B
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
extract
water
ethanol
production
beverage
Prior art date
Application number
TW090108529A
Other languages
English (en)
Inventor
Ohnogi Hiromu
Shiraga Masahiro
Kobayashi Eiji
Nishimura Kaori
Li Tuo-Ping
Sagawa Hiroaki
Ikunoshin Kato
Original Assignee
Takara Bio Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Takara Bio Inc filed Critical Takara Bio Inc
Application granted granted Critical
Publication of TWI313605B publication Critical patent/TWI313605B/zh

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12G—WINE; PREPARATION THEREOF; ALCOHOLIC BEVERAGES; PREPARATION OF ALCOHOLIC BEVERAGES NOT PROVIDED FOR IN SUBCLASSES C12C OR C12H
    • C12G3/00—Preparation of other alcoholic beverages
    • C12G3/04—Preparation of other alcoholic beverages by mixing, e.g. for preparation of liqueurs
    • C12G3/06—Preparation of other alcoholic beverages by mixing, e.g. for preparation of liqueurs with flavouring ingredients
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23F—COFFEE; TEA; THEIR SUBSTITUTES; MANUFACTURE, PREPARATION, OR INFUSION THEREOF
    • A23F3/00—Tea; Tea substitutes; Preparations thereof
    • A23F3/16—Tea extraction; Tea extracts; Treating tea extract; Making instant tea
    • A23F3/163—Liquid or semi-liquid tea extract preparations, e.g. gels, liquid extracts in solid capsules
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
    • A23K20/10—Organic substances
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L2/00—Non-alcoholic beverages; Dry compositions or concentrates therefor; Their preparation
    • A23L2/02—Non-alcoholic beverages; Dry compositions or concentrates therefor; Their preparation containing fruit or vegetable juices
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L2/00—Non-alcoholic beverages; Dry compositions or concentrates therefor; Their preparation
    • A23L2/52—Adding ingredients
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/12—Ketones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/192—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having aromatic groups, e.g. sulindac, 2-aryl-propionic acids, ethacrynic acid 
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/21—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates
    • A61K31/215—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids
    • A61K31/216—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acids having aromatic rings, e.g. benactizyne, clofibrate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7048—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having oxygen as a ring hetero atom, e.g. leucoglucosan, hesperidin, erythromycin, nystatin, digitoxin or digoxin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/16—Ginkgophyta, e.g. Ginkgoaceae (Ginkgo family)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/23—Apiaceae or Umbelliferae (Carrot family), e.g. dill, chervil, coriander or cumin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/28—Asteraceae or Compositae (Aster or Sunflower family), e.g. chamomile, feverfew, yarrow or echinacea
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/31—Brassicaceae or Cruciferae (Mustard family), e.g. broccoli, cabbage or kohlrabi
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/48—Fabaceae or Leguminosae (Pea or Legume family); Caesalpiniaceae; Mimosaceae; Papilionaceae
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/60—Moraceae (Mulberry family), e.g. breadfruit or fig
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/73—Rosaceae (Rose family), e.g. strawberry, chokeberry, blackberry, pear or firethorn
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/88—Liliopsida (monocotyledons)
    • A61K36/896—Liliaceae (Lily family), e.g. daylily, plantain lily, Hyacinth or narcissus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/88—Liliopsida (monocotyledons)
    • A61K36/899—Poaceae or Gramineae (Grass family), e.g. bamboo, corn or sugar cane
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/88—Liliopsida (monocotyledons)
    • A61K36/906—Zingiberaceae (Ginger family)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/02—Muscle relaxants, e.g. for tetanus or cramps
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/02—Drugs for disorders of the nervous system for peripheral neuropathies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/30—Drugs for disorders of the nervous system for treating abuse or dependence
    • A61P25/36—Opioid-abuse
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)

Description

1313605 A7
五、發明説明（ 技術範圍 本發明係有關含有炎白、 植物之成長因子產生择強从所、 成長因子產生增強用铍八私人 玍田強物貝之 產生增強為必要之疾病仏▲ < 乂成長因号 強用 <食品、飲料或飼料。 负口予產生# 優越之機能性食品、心牛或飼料。 《康増強万§ 背景技術 屬於：形科之植物，例如明曰葉所具之藥理作 有“壓效果、抗菌作用、抗潰療作用作 用、抗癌效果、癌預防效果。 '必抑制作 屬於菊科植物，例如-*· 妁如紅化，所具之作用已知 性、抗浮腫效果 '抗菌活性等。 有稅發炎活 屬於百合科植物’如洋蔥所具之藥理 醇作用、户苗Λ m 已知有降膽固 乍用“作用、抗真菌作用、降血糖作 用、抗發炎作用、越糖還原酶抑制作用等。 “而作 屬銀杏科植物如銀杏所具藥理作用， 促進作用、痄 >，，右生> ® $細！ jL·展循尽 n 血小板凝集抑制作用、降低血 清膽固醇作用〇 洱低血 屬：：本科植物，如竹所具之藥理作用，已知有抗菌作 '抗真菌作用 '降血壓作用、抗氧化活性等 已知有降膽固醇作用。 不糠 用屬：微二’如具裔薇之藥理作用，已知有抗發炎作 柷匕敏作用 '抑制癌細胞增殖作 7 太7 仇®作用等。 ，李予已知具降膽固醇作用、預防糖尿病作用。 -4- 1313605 A7
屬於桑科植物如啤酒花所具藥理活性已 抗腫瘍作用、鎮靜作用等。 囷作用、 屬薑科植物無我朮（紫鬱金）所具藥理活性， 作用、膽汁分泌作用、抗潰瘍活性'抗腫瘍活性等。几囷 用屬如大豆所具藥理作用’已知有降膽固醇作 用、抗虱化作用等。 屬級木科植物如香草（m〇l〇kheiya)所具藥理作用，已知 有降血壓作用、免疫賦活作用。 屬十字花科植物如青花菜所具藥理作用，已知有抗癌作 用0 然而’對此等植物成分之成長因子產生增強作用，尤其 肝細胞增殖因予（HGF)產生增強作用、神經成長因子（NGF) 產生增強作用，尚不知道。 但是，受部分肝切除之肝臟，可快速再生成原來之大 小。此肝再生因子之本身，多年來一直不明白，於重症肝 炎患者之血漿中，發現肝細胞增殖因子（Hepat〇cyte gr〇wth factor : HGF)，自其患者血漿’分離純化（G〇hda, E. et al· : J. Clin. Invest.，88 414-419，1988)。另外，亦選殖人 類 HGF 之 cDNA，明白 HGF 之 1 次構造（Miyakawa，K. et al. : Biochem. Biophys. Res. Commun., 163 967-973, 1 989 )。又，明白使細胞之運動性之Scatter factor (SF)及為 腫瘤細胞障礙因子之tumor cytotoxic factor (TCF )與HGF為 同一物質（Weidner，K. M. et al. . Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88 7001-7005，1991，Shima，N. et al. : Biochem. -5- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公发〉 1313605 A7 B7 五、發明説明（3
Biophys. Res. Commun.，1 80 1 1 5 1- 1 1 58, 1991 )。 HGF不只促進肝細胞，亦促進膽管上皮細胞、腎尿細管 上皮細胞、胃黏膜細胞等之許多上皮細胞之增殖。又，誘 導上皮細胞之運動性之亢進及於血管新生、上皮細胞之管 腔形成可見到之形態形成，HGF為顯示極多彩之生理活性 之多機能活性物質。亦即，HGF於種種臟器，修復其臟器 之障礙時’促進上皮細胞之增殖，進行引發運動性之充進 及血管新生等之形態形成。 HGF顯示肝細胞增殖作用，蛋白質合成促進作用、膽汁 滞留改善作用，另外預防由於藥劑之腎障礙作用等，hgf 之mRNA亦於腦、腎臟、肺等合成^ HGF為促進膽管上皮 細胞、腎尿細管上皮細胞、胃黏膜細胞等許多上皮細胞之 增殖之中胚葉性細胞成長因子，於障礙修復時促進上皮細 胞之增殖’引發運動性之亢進，血管新生等之形態形成 等’顯示極多彩之生理活性，為多機能活性物質。另外， HGF亦具神經細胞之保護、增殖促進、障礙修復作用等。 因而’藉增強HGF之產生，期待可進行治療或預防肝炎、 重症肝炎、劇症肝炎、肝硬變、肝肉膽汁滞留之肝障礙， 由於藥劑等之腎障礙、胃腸障礙、血管障礙、慢性腎炎、 肺炎、創傷、糖尿病、癌等》 由於HGF顯示前述各種作用，HGF本身被期待作 F 肝 炎、重症肝炎、劇症肝炎、肝硬變、肝肉膽汁滞留之犴障 礙’藉由藥劑等之腎障礙、胃腸障礙、血管障礙、慢性腎 炎、肝炎、創傷、糖尿病、癌等之治療藥，但以H Q F本身 -6 -
本紙張瓦度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210X297公釐) 1313605 A7
1313605 A7 B7 五、發明説明（ 向’雖付予很大的社會關懷，但尚未找到此等症狀之改善 法、治療法。 阿茲海默型癡呆症患者之腦中，可確認以邁内特基底核 為中心之前腦基底部顯著變性’膽驗乙醯基轉移酶（C AT ) 活性之顯著降低[Annu. Rev_ Neurosci., Vol_ 3，77 (1980)]。於1985年使用大鼠腦之研究，明白NGF為腦之此 部位之神經營養因子[EMBOJ.，Vol. 4，1389 (1985 )]，NGF 與本疾病之關連受到注目。又’於亨廷頓舞蹈疾病者之腦 之線條體，GABA策動性神經細胞之脫落與膽鹼策動性神 經細胞之脫落皆顯著，明白NGF亦對線條體之内在性膽鹼 策動性神經細胞產生作用[Science, Vol. 234，1341 (1986)]，指出本疾病與NGF關連之可能性，以成為各種神 經疾病之模型之大鼠等之動物研究NGF之效果，於大鼠之 報告’在神經細胞顯著變性以前，腦内投予NGF，則可抑 制變性’亦防止CAT活性之降低。[J. Neurosci. Vol. 6, 2 1 55 (1986)，Brain Res.，Vol. 293, 305 (1985)，Science，Vol. 235, 214 (1986), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, Vol. 83, 923 1 (1986)]»亦證明末稍之交感神經支配組織及於腦生合成 NGF為末稍組織或腦組織之間質細胞之纖維芽細胞或星形 神經膠質細胞於此NGF之生合成，各擔任重要角色。[J. Biol. Chem., Vol. 259, 1259 (1984), Biochem. Biophys. Res. Commun.，Vol. 13 6，57 (1986)] a又，明白此纖維芽細胞與 星形神經膠質細胞產生之NGF之抗原性分子量、等電點、 生物活性’與從來所研究之顎下腺NGF相同，又，藉由於 -8 - 本紙張尺度適用中国國家標準(CNS) A4規格(21〇 X 297公赞) 1313605 A7
纖維芽細胞α-Μ細胞)及星形神經膠質細胞 入種種神經傳導物質之實驗， 。養'夜中加 辛'腎上腺辛、多 。茶酞胺類（去甲腎上腺
京为上眼常夕巴胺）顯不增強NG
Chem.,Vol. 201, 6039 (1986)] 〇 〈作用。[】·Β1〇1. ，作為神經營養因子’於作用之部位變性之 病，可否作為抑制變性之治療藥為人所期待。Λ ’腦血管 障礙’腦腫癌、腦炎、頭料傷變性疾病、麻醉藥物中▲ 等腦神經細胞-旦陷入變性，則一輩子無法恢復，其結 果’不只知覺機能降低、記憶障礙’亦引起感情障礙，行 動異常等種種障礙，神經纖維有可塑性，受損傷則自其附 近之健全纖維產生發芽，由於形成新的突觸代替受障礙之
突觸，此時NGF是否可作為促進神經機能之修復再生之治 療劑使用，為人所期待。 Q 然而’欲將NGF應用於各種神經疾病之治療時，ngf非 達到極接近須要NGF之神經細胞之處不可，中樞神經疾病 之情形亦非送達腦細胞之患部不可，通過血管系，無法將 NGF送入腦内。因為，腦内之血管内皮細胞，以密切結合 互相結合在一起（稱為腦血管障壁），由於水、氣體、脂溶 性物質以外之物質自血液移行至腦組織受到限制，所以為 高分子物質之蛋白質（亦含NGF)，幾乎完全無法通過腦血 管障壁。使用外科手法將此NGF直接投入腦内，即使以現 在之技術亦太過危險。 一方面，不只直接投予NGF ’亦進行增強NGF產物之物 質之開發’其中許多具強毒性，產生毒性之濃度與有效濃 -9- 本紙張尺度適用中國國家樣苹(CNS) A4規格(210X 297公釐) 131360¾090108529 號專利_請案 中文說明書替換頁(96年12月） 五、發明説明（ 度非常接近之物質，或對於 重:副作用彻等，具許多之生 之種’可:療或預防有關該成長因子 "未、口揲顯7^毒性與副作用，依所希望、高 彳進行增強成長因子之產生之物質、手段等。^ 本：：：目的係提供含有來自屬於植物例 :科百：科一銀杏科、禾本科、《科、桑科、豆科 十子化科或墓科植物之果實、種予、種皮、花、 :二：及，或根莖之成長因予產生增強物質為有效成分 、|生增強用组合物，及利用成長因子產生增強 物負《生理作用之醫藥、食品、飲料或飼料。 將本發明概要言之’本發明之第1發明係有關以含有來自 植物<成長因予產生增強物質為有效成分為特徵之成長因 子產生增強用組合物。於本發明之^發明，料植物，以 選自由繳形科、菊科、百合科、銀杳科、禾本科、箸薇 科、桑科、豆科、級木科、十字花科及薑科組成之群之【種 以上之植物為且。又’作為來自植物之成長因子產生增強物 質’以選自由氣原酸、二咖啡醯基奎寧酸、咖啡醯基奎寧 酸、異莊草素（isoodentin)、紅花明（saffl〇min)A、癒瘡内 酿（guaianolide)、黃當歸醇、3，_〇i_d_吡喃葡糖醯基開洛 内酯（khellactone)、7_〇_e_D_吡喃葡糖醯氧基_8·異戊二 烯基香旦素、咖啡酸甲酯、咖啡酸乙酯、8 _羧基_ 3 _羥基-5 _ 甲氧基-2-二甲基色滿、7_y3_D_吡喃葡糖醯氧基_6_異戊二 -10-
70545-961228.DOC 本紙張尺度適用中國國家橾準(CNS) A4規格(210X 297公爱） 1313605 A7 B7 五、發明説明（ 8 烯基香豆素、4，-〇_當歸醯基_3,_〇_[6_〇_(n批喃葡糖 醞基）-/3 _D-吡喃葡糖醯基卜開洛内酯、異黃腐醇 (isoxanthohumol)、黃腐醇B(is〇xanth〇hum〇1 B)、黃腐醇 D (iS〇xanth〇hum〇l D)及黃腐醇（xanth〇humui)組成之群之工 種以上之化合物為佳。另夕卜，作為該组合物，&含來自植 物足抽提物，或含有自該植物抽提物所得級分部份之組合 物亦包含在内。又’特佳地該組合物可含高濃度及/或高純 度之來自植物之成長因子產生增強物質。又，作為成長因 子’較好為肝細胞增殖因子或神經成長因子。 本發明之第2發明，係有關以含本發明之第丨發明之組合 物為特徵之以&長因子產生增強為必'要之疾病纟治療劑或 預防劑。 本發明之第3發明，有關以含有本發明之第丨發明之成長 因子增強用組合物為特徵之成長因子產生增強用食品、飲 料或飼料。 本發明之第4發明，有關以高濃度及/或高純度含有來自 植物之成長因子產生增強物質為特徵之食品、飲料或飼 料。 作為來自植物之成長因子產生增強物質，以選自由氯原 酸、二咖啡醯基奎寧酸、咖啡醯基奎寧酸、異荭草素 (^ooHentin)、紅花明（saffl〇min)A、癒瘡内酯、黃當歸 醇 〇 ^ · D -叶匕喃葡糖醯基開洛内酉旨（khellactone)、7 _ 0-/5-D_吡喃葡糖醯氧基-8_異戊二缔基香豆素、咖啡酸甲 醋、咖啡酸乙酯、8 -羧基-3-羥基-5-甲氧基_2-二甲基色 -11 - 本紙張尺度適财® ®家標準(CNS) A4規格(21Qχ撕公寶) 1313605 A7 ------ B7 五、發明説明（) 滿、7-召-D-吡喃葡糖醯氧基_6_異戊二烯基香豆素、4，_ 〇田歸酿基-3 · 〇 - [ 6 _ 〇 •(沒· D _吡喃葡糖醯基）_冷_ D -叶匕 喃葡糖醒基]-開洛内酯、異黃腐醇（is〇xanth〇hum〇】）、黃腐 酵B、黃腐醇D及黃腐醇組成之群之丨種以上之化合物為 佳。 本發明之第5發明，有關以含有高濃度及/或高純度之本 發明 < 第1發明組合物為特徵之食品、飲料或飼料。 作為來自植物之成長因子產生增強用組合物，以含有選 自由氣原酸、二咖啡醯基奎寧酸、咖啡醯基奎寧酸、異荭 草素（isoorientin)、紅花明（saffi〇min) A、癒瘡内酯黃當 歸醇、3’-0-/5-〇_11比,南葡糖酿基開洛内醋（|^11_·)、 7-0-/3-D-吡喃葡糖醯氧基_8_異戊二烯基香豆素、咖啡酸 甲酯、咖啡酸乙酯、8_羧基·3_羥基_5•甲氧基_2•二甲基色 滿、7-万-D-吡喃葡糖醯氧基_6_異戊二缔基香豆素、4，_ 〇-當歸醯基-3，-〇_[6_〇_(点_D_吡喃葡糖醯基）_万_D·吡 喃葡糖醯基]-開洛内酯、異黃腐醇（is〇xanth〇hum〇i)、黃腐 醇B、黃腐醇D及黃腐醇組成之群之丨種以上之化合物之組 合物為佳。 本發明之第6發明，有關含有0.00007重量％以上之黃腐 醇之神經成長因子之產生增強用之食品、飲料或飼料。 本發明之第7發明，有關含有成長因予之產生增強物質之 食品、飲料、飼料或彼等之處理物之成長因子產生增強用 食品、飲料或飼料。作為其態樣，含有啤酒類之成^因予 產生增強用食品、飲料或飼料為佳，啤酒類包含啤酒、發 -12· 本紙張尺度相----------------- 1313605
泡酒、無酒精啤酒飲料’此等之濃縮物、此等之稀釋物、 含啤酒花抽提物之飲料。 本發月之第8發明，有關含有啤酒花抽提物之成長因子產 生增強用食品、飲料或飼料。啤酒花抽提物以食品、飲料 或飼料中含有0.0001重量％以上為佳。 人 本發明之第9〜11之發明，有關以分別含有癒瘡内醋為有 效成刀作為特徵之成長因子產生增強用組合物，以成長因 子產生增強為必要之疾病之治療劑或預防劑，或成長因子 產生增強用之食品、飲料或铜料。 圖之簡單說明 圖1為表示化合物（1)之1H-NMR光譜之圖。 曲圖2為表不含於來自明日葉之抽提級分部分之氣原酸 辰度與各級分部分之HGF產生增強活性之相關關係圖。 圖3為表不氯原酸標品濃度與hGF產生增強活性之相關關 係圖。 圖4為表不化合物（2)之ih_Nmr光譜之圖。 圖5為表示國產菊花氯仿抽提部分A_a_2之質譜之圖。 圖6為表示國產菊花氯仿抽提部分A — aji! H_NNiR光譜 之圖。 圖7為表示國產菊花氯仿抽提部分a _ b _ 1之質譜之圖。 圖8為表示國產菊花氯仿抽提部分A_b_丨之以光譜之圖。 圖9為表示國產菊花氯仿抽提部分八彳-丨之！ h_NMr光譜 之圖。 圖上〇為表示國產菊花氣仿抽提部分A_b]之HC-NMR光 -13-
1313605 A 7 B7 五、發明説明（ 譜之圖。 圖1 1為表示明日葉抽提級分部分之含7.82分峰之溶離份 之質譜之圖。 圖12為表示明日葉抽提級分部分之含7.82分峰之溶離份 之IR光譜之圖。
圖1 3為表示明曰葉抽提級分部分之含7.82分峰之溶離份 之1 H-NMR光譜之圖。 圖14為表示明日葉抽提級分部分之含7.82分峰之溶離份 之13C-NMR光譜之圖。 圖1 5為表示明日葉抽提級分部分之含11.09分峰之溶離份 之質譜之圖。 圖1 6為表示明日葉抽提級分部分之含11.09分峰之溶離份 之I R光譜之圖。
k- 圖1 7為表示明日葉抽提級分部分之含11.09分峰之溶離份 之1 H-NMR光譜之圖。 圖1 8為表示明日葉抽提級分部分之含11.09分峰之溶離份 之13C-NMR光譜之圖。 圖19為表示來自明日葉之溶離份10之FAB-MS光譜之 圖。 圖20為表示來自明曰葉之溶離份1〇之1 H-NMR光譜之 圖。 圖21為表示來自明日葉之溶離份1 3-2之FAB-MS光譜之 圖。 圖22為表示來自明日葉之溶離份13-2之1 H-N MR光譜之 -14- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(21〇Χ297公釐) 1313605 A7 B7 12 五、發明説明（ 圖。 国，* . ,、，，，夕 13C-NMR 光譜之 圖23為表示來自明曰葉之溶離份13-2之 圖。 圖24為表示來自明日葉之溶離份α曰之 圖。 圖25為表示來自明日葉之溶離份18-3之1 H-NMR光譜之 圖。 圖26為表示來自明日葉之溶離份18-4之FAB-MS光譜之 圖。 圖27為表示來自明曰葉之溶離份18-4之1 H-NMR光讀之 圖。 圖28為表示來自明日葉之溶離份18-4之13C -NMR光譜之 圖。 圖29為表示來自明曰葉之溶離份19、2 0-5之FAB-MS光 譜之圖。 圖30為表示來自明曰葉之溶離份19、20-5之1 H-NMR光 譜之圖。 圖31為表示來自明日葉之溶離份19、20-5之13C -NMR光 譜之圖。 圖32為表示來自明日葉之溶離份19、2 0-6之FAB-MS光 譜之圖。 圖33為表示來自明曰葉之溶離份19、20-6之1 H-NMR光 譜之圖。 圖34為表示來自明曰葉之溶離份19、2 0-6之13(：卞]\411光 -15- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(21〇 X 297公釐） 1313605 A7 -----------B7 五、發明説明（ ） 13 譜之圖。 圖^5為表不來自明日葉之溶離份28之光譜之 圖。 圖36為表不來自明曰葉之溶離份28之1 h_nmr光譜之 圖。 圖37為表不來自黃腐醇級分部分之溶離份a_5之fab_ms 光譜之圖。
圖38為表示來自兴腐醇級分部分之溶離份α·5之1 h_nmR 光譜之圖。 圖3 9為表示來自啤酒花之黃腐醇之溶離份之i h_nmr光 譜之圖。 供實施本發明之最佳形態 於本發明提供以含有來自植物之成長因子產生增強物質 為有效成分作為特徵之成長因子產生增強用組合物。於植 物中顯示成長因子產生增強作用之物質之存在，於本發明 首先發現。又，於本說明書’作為有效成分所舉之任：物 質皆可單獨或2種以上混合使用於本發明。 作為有關本發明之來自植物之成長因子產生增強物質， 只要藉後述之該物質之製備方法可得即可，無特別限定。 其中以來自選自由屬於維形科、菊科、百合科、銀杏科、 禾本科、薔薇科、桑科、豆科、級木科、十字花科及 植物組成之群之1種以上之植物之具成長因子產生增強作 之物質為佳。 5 用 作為屬於繳形科之植物例如明日葉、獨活、紅萬 — -16 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 1313605 A7 B7
五、發明説明（14 禾、鴨兒序、荷蘭鴨兒芽等。屬菊科 W㈤、春菊、食用之菊花、牛等：欸：二 寺，例如作為艾嵩，則吏用t春艾嵩（寸寸八小3 二 佳。屬於百合科植物可例示如洋葱、葱 '大蒜'鬱金香： 百合等。屬於銀杏科植物引料銀杏。屬於禾本科可例示 孟宗竹、苦竹、破竹、蓬萊竹、小竹、稻、麥、蘆葦 f、稷等’穀物及其處理物亦可使用，例如米祿、麥糠 寺。屬於薔薇科之植物可例示如櫻桃、染井吉野（櫻花之— 品種）、梅：桃、李 '奋、蘋果、蕃薇、黃“、二= 塊、弁慶草等。屬桑科之植物可例示桑、熔樹、啤酒花、 楮、針桑、赤揚、橡木等。屬於薑科植物可例示如薑、鬱 金、1荷、花薑等’费金尤以紫參金為佳。屬於級木科植 物可例示如香草（molokheiya)。屬於豆科之植物可例示如 大豆、小豆、菜豆、綠豆等。屬於十字花科植物可例示卷 心菜、青花菜、花椰菜、白菜、菜花等。 又，本發明使用之植物無特別限定，可使用果實、種 予、種皮、花、葉、莖、根及/或根莖，彼等之處理物例如 米糠、麥糠、大豆胚芽、大豆種皮、大豆粉等或照原樣使 用。 又，於本發明作為來自植物之成長因子之產生增強物 質’只要增強成長因子之活性之來自植物之物質即可，無 特別限定’自本發明所期望之效果之表現觀點，較佳地可 例示選自由氣原酸、二咖啡醯基奎寧酸、咖啡醯基奎定 酸、異莊草素（isoorientin)、紅花明（safflomin)A '瘡瘡内 -17 - 本紙張尺度適用中國國家樣準(CNS) A4规格(210X 297兮釐) 1313605 A7 B7
五、發明説明（15 酯、黃當歸醇、3，_0_冷_D b 陶ti糖醯基開洛内酯 (kheUaCt〇ne)、7-〇-万-0-峨喃葡糖酿氧基-8_里戊二嫌基 香豆素、咖啡酸甲醋、咖啡酸乙酿、8_羧基·3•羥基 氧基-2-二f基色滿、οι吡喃葡糖醯氧基二戊二 埽基香豆素、4'·〇_當歸醯基_3、〇_「 、 “使、〇 ^ L6-〇，（n-比喃葡糖 I基）-/3 -D-吡喃葡糖醯基卜開洛内酯、里兑腐酵 (isoxanthohumol)、黃腐醇D及黃腐醇组成之群之種以上 之化合物。又，為本發明使用之有效成分之物質之成長因 子產生增強作用之表現，例如可藉由本發明所揭示之方法 (例如’實施例4_⑴及實施例13中記載之方法）評估。該物 質只要是來自植物之顯示成長因子產生增強作用之物質即 可，並無限^ ’前面例示之作為有效成分之較佳化合物以 外者，當然亦包含在内。於本發明，作為加啡醢基奎寧 酸，較好可例示5-咖啡醯基奎寧酸、4·咖啡醯基奎寧酸。 又，於本發明作為癒瘡内酯較佳地可例示2 _酮基_ 8 _當歸醯 氧基癒瘡- 3(4) ,11(13)-二缔·12,6-内酯，或3,4-環氧基_ 8-當歸醯氧基癒瘡-l(10)，11(13)_二烯_12,6_内酯。又於 本發明’來自植物意即藉由植物原料而得。 又，本發明之成長因子產生增強用組合物，作為其一態 樣’包含成長因子產生增強物質，可例示含來自植物之抽 提物或自該植物抽提物所得之級分部分之組合物。該组合 物為前述抽提物或級分部分本身即可。自植物抽提純化可 以如下之公知之方法進行。例如於適當時期採取為原料之 果實、種子、種皮、花、葉、莖、根及/或根莖等之後，照 -18-
本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4^(21〇x297^*T 1313605 A7 B7 五、發明説明（ 原樣或進行通常之空氣乾燥等之乾燥過程後， 碎，作成抽提原料。又，於種種條件下進行原料之孰= :吏用熟成後之原料亦可。又，植物之處理物例如米糠、麥 糠、大旦胚芽、大豆種皮、大豆粉等亦可使用。原 物之榨汁液及樹液之情形，亦可如此，作為抽提原料使 用。又，於本發明之來自植物之袖提物，係指使用柚提溶 媒自植物進行抽提’經此過程所得之物質。 自植物體製備成長因子產生增強物質，可藉由公知 提方法’如下進行1如將原㈣碎或切細後吏 媒，可t分批式或連續式進行。作為抽提溶媒可舉水、氣 仿、乙醇、甲_、異丙醇等之醇類，丙酮、甲基乙基酮等 uw、乙酸u旨等之親水性或親油性 t所望可早獨或以適宜混合液使用。通常較好可藉由使用 ;及:，之水、乙醇進行。抽提溶媒之量適宜地決定即 對於原料’較好使用1〜1〇〇倍量之抦提溶媒即 二。抽提溫亦適宜地依目的決定即可，水抽提之情形，通
:::為4〜航’更好為25〜靴。又，溶媒中含乙醇 =二以4〜rc之範圍為佳。抽提時間亦考慮抽提效率 =即可’通，，較好為數分〜數曰，更好為5分〜3小時之 把圍，以如此來設定原料、拙拇A 提操作例如一面攪拌或靜置進行:可=提溫度為佳。抽 Jt M ^ 、 逆仃即T，又，亦可依必要反 該物：t上巧作，成長因子產生增強物質，可以含 ;農卜〈抽&物而4 °抽提物依必要’進行過遽、離心、 /、.伯、超遽、分子筛等處理，可製備經濃縮之目的之成長 -19-
1313605 A7 B7 五、發明説明（ 因子產生增強物質之抽提物。抽提物及濃縮抽提物之成長 因子產生增強活性’可藉後述之實施例4·(1)及實施例13記 載之方法，簡便地測定。 、、Α本1明’自植物抽提物所得之級分部分，係指以 二知之方法可將來自植物之抽提物級分而得級分部分，及 藉由多/人反覆級分操作，所得之含單—物質之級分部分， 2要具f長因子產生增強作用，即包含於本發明。作為上 述之級刀万法’可舉抽提 '分別沉澱、管柱層析法、薄層 層析法等。將成長因子產生增強活性作為指標，再將所^ 及刀部分進行純化，可分離成長因子產生增強物質。 石清驿植物做成茶葉狀’π凡I柚提物或 自孩植物抽提物所得之級分部分，只要具成長因子產生增 強作用’則可作為自本發明之抽提物或該植物抽提物所得 邵：使用。又，亦使用含2種以上之此等抽提物或自 ^ 抽提物所得之級分部分。〖，於本發明亦可使用含 ^種二上自相同植物以不同之抽提法所得之抽提物或㈣ 植物抽彳疋物所得之級分部分。 八又’作為來自植物之抽提物及自該植物抽提物所得之級 刀部以外〈成長因子產生增強作用组合物之製造方、去， 例如將植物乾燥、粉碎，可得粉狀之該組合物。 ^ 人 發月<來自植物之成長因子產生增強用组人 物’與植物體本身比較，厶有离瀵 ° ▲ 孕又σ有问，辰度及/或兩純度之成長因 •生日強物質者特佳。於此，高濃度意即組合物之每單 位重量之成長因子產生增強物質重量比每單位之為原料之 -20 -
本紙張尺歧财國Α4规格(27^
五 1313605 A7 發明説明（
植物體之成長因予產生增強物 與為原料之植物比較， 夕又’南純度意長 之含有率高。 且1"物之成長因子產生增強物^ 強物質及，或高!度之成長因子… 料比’意即本發明之：。：與從來之食品、飲料❹ 度含有成長因子產生增^物^料或飼料以高濃度及/或高钟 包==组合物為有效成分之成長因子產生增強劑亦 、：：發明’作為來自植物之成長因子產生增強用組合物 :厂/、纟含有來自植物之成長因子產生增強物質即 ::無特別限定為粉狀、固形狀、液狀之任一形狀皆 α又以公知方法將該組合物造粒為粒狀之固形物，可 作為本發明之成長因子產生增強用組合物使用。作為造粒 1去，揲特別限定，可例示轉動造粒、攪拌造粒、流動層 迨粒、氣流造粒、壓出造粒、壓縮成形造粒'解碎造粒' 貪射造粒或喷霧造粒等。將粉狀之該組合物溶解於液體， 例如水及醇等使成液狀，可作為本發明之成長因子產生增 強用组合物使用。 有關本發明之有效成分，如後述並無特別認定毒性。 又’亦無擔心發生副作用。因此，可安全且適切地進行成 長因予產生之增強，因而，含該有效成分所成之本發明之 治療劑、預防劑、食品、飲料或飼料，有效於以成長因子 產生增強為必要之疾病之治療或預防。 -21 本紙張中S S家標準(CNS) Α4規格(21G X 297$
裝 π
1313605 A7 -----------^ 五、發明説明（ ） 19 7 於本發明，成長因子只要具促進細胞成長之活性，則無 特別限定，可例示肝細胞增殖因子（HGF)、神經成長因子 (NGF)、神經營養因子、上皮成長因子 '來自乳之成長因 子、纖維等細胞成長因子、來自腦之纖維芽細胞成長因 子、酸性纖維芽細胞成長因子、來自血小板之成長因子、' 血小板鹼性蛋白質、結缔組織活化肽、胰島素樣增殖因 子、群落形成刺激因子、促紅細胞生成素、血小板生成 素、T細胞成長因子、介白素類（例如，介白素2、3、4、 5 7、9、11、15)、B細胞成長因予、來自軟骨因子、來 自軟骨成長因子'來自骨成長因子、骨骼成長因子、内皮 細胞成長因子、來自内皮細胞成長因子、來自眼成長因 子、來自精巢成長因子、來自足細胞成長因子、乳腺刺激 因子、來自骨髓成長因子、來自巨噬細胞成長因子、重循 環間葉成長因子、形質轉換增殖因子-α、形質轉換增殖因 子-召、肝素結合性EGF樣增殖因子、雙向調節素 (amphiregulin)、SDGF、召-動物纖維素、表皮調節素 (epiregulin)、神經調節素1、2、3 (neuregulin 1、2、 3)、血管内皮增殖因子、神經營養素、BDNF、N丁 - 3、 N T - 4、N T - 5、N T - 6、N T - 7、來自神經膠質細胞株之神 經營養因子、幹細胞因子、中卡因（midkine)、多效蛋白 (Pleiotrophin) 、Ephrin 、血管生成素、活化素 (activin)、腫瘍壞死因子、干擾素類等《根據本發明，尤 其可適宜地使神經成長因子（NGF )或肝細胞增殖因子（HGF) 之產生增強。 -22- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(21〇x 297公釐） 1313605 A7 B7 五、發明説明（2(] HGF為肝細胞之再生因子’另外使細胞之運動尤進之因 子，及亦為腫瘍細胞障礙因子。HGF不只促進肝細胞，亦 促進膽管上皮細胞、腎尿細胞上皮細胞、胃黏膜細胞等， 許多上皮細胞之增殖。又’ HGF誘導上皮細胞之運動性亢 進及血管新生、於上皮細胞之管腔形成看得見之形態，顯 示極多樣之生理活性。因此，藉由增強HGF之產生，可進 行例如肝炎、重症肝炎、劇症肝炎、肝硬化、肝内膽汁滞 留等之肝障礙’藉由藥劑等之腎障礙、胃腸障礙、血管障 礙、慢性腎炎、肺炎、創傷、糖尿病、癌等之治療或預 防。 一方面，NGF維持神經細胞之生存與機能，為依NgF2 濃度梯度使神經細胞伸長之内因性成長因子，荈 之產生，可修復由於阿兹海默病等之老人癡呆症及末稍神 經障礙、腦血管障礙、腦腫瘤 '腦炎、頭部外傷變性疾 病、麻醉藥物中毒之神經機能並須使再生，對此等疾病進 行治療或預防。又，肌萎縮性侧索硬化症、藥劑障礙性末 稍神經障礙、糖尿病性末稍神經障礙、巴金森氏病、感覺 神經障礙、色素性網膜症、黃斑變性症等之治療或預㈣ 有用。 作為本發明之以成長因子產生增強為必要之疾病，只要 藉投予本發明之治療劑 '預防劑等可 無特別限定，可例示肝炎、重症肝炎、劇症二硬 變、肝内膽汁滯留等之肝障礙，由藥劑等之腎障礙 障礙、血管障礙、慢性腎炎、料、創傷、糖尿病、癌、
本紙張尺歧财g 1313605 A7 B7
五、發明説明（ 癡呆症、神經障礙、末稍神經病、腦貧血、糖尿病神細 等。 二 以含有本發明使用之來自植物之成長因子產生增強用組 合物為特徵之以成長因子產生增強為必要之疾病之治療劑 或預防劑’使用來自植物之成長因子產生增強用组合物， 可適宜地製造。 .本發月之/Q療劑或預防劑，將本發明使用之來自植物之 成長因子產生増強用組合物與公知之醫藥用載體組合、製 劑化即可。又’藉由將成長因子產生增強物質與公知之醫 藥用載體組合、製劑化，亦可製造。 該藥劑之製造’-般將本發明使用之來自植物之成長因 子產生增強用组合物與藥學上可接受之液狀或固體狀載體 摻合，依所望加溶劑、分散劑、乳化劑、緩衝劑、穩定 劑、賦形齋】、黏合劑、崩散劑、潤滑劑等’可做成錠劑、 顆粒劑、散劑、粉劑、膠囊劑等之固形劑、通常液劑、懸 •序液劑、乳劑等之液劑。又，使用前藉由添加適當載劑可 做成液狀之乾燥品及其他，亦可作為外用劑。 醫藥用載劑可依治療劑或預防劑之投予形態及劑型而選 擇 二口劑之情形，利用例如殿粉、乳糖、白糖、甘露 醇系甲基纖維素、玉米;殿粉、無機鹽等》又當製備經口 劑時，可另掺合黏合劑、崩散劑、界面活性劑、潤滑劑、 流動性促進劑、矯味劑、著色劑、香料等。 一万面’非經口劑之情形，依習用法將為本發明之有 放成刀之來自植物之成長因子產生增強用组合物，溶解乃 1313605 五、發明説明（
至懸浮於作為稀釋劑之注射 糖水落液、注射用植物油、 米油、丙二醇、聚乙二醇等 等張劑、無痛劑等可製備。 本發明之治療劑或預防劑 投予。投予方法亦無特別限 注射劑得以例如靜脈内、肌 用劑亦包含栓劑》 用蒸餾水、生理食鹽水、葡萄 芝麻油、花生油、大豆油、玉 ’依必要加殺菌劑、穩定劑、 依製劑形態’以適當投予途徑 足，可以内服、外用及注射。 肉内、皮下、皮内等投予，外 」乍為：發明之治療劑或預防劑之投予量依其製劑形 怨、投予万法、使用目的及適用於此之患者年齡、P重、 症狀而適宜設定，並非-定，—般作為含於製劑中之本發 明使用之來自植物之成長因子產生增強用組合物之量，成 亡每日較好為〇.〇01〜2_毫克/公斤體重，更佳為〇〇1〜2〇〇 笔克/公斤體重。又，作為含於該製劑中之來自植物之成長 因子產生增強物質之量，成人每天較好為〇 〇〇〇1〜2〇〇〇毫克 /么斤隨重，更好為0.001〜200毫克/公斤體重，再更好為 0.01〜20毫克/公斤體重。 當然，投予量依種種條件變動，所以亦有比上述投予量 少之量即可充分之情形，或必須超過範圍之情形。本發明 之藥劑除照原樣經口投予外，亦可添加於任意飲食品而日 常知F·取。又，亦可將本發明使用之來自植物之成長因子產 生增強用組合物作為成長因子產生增強用飲食品之原料使 用0 又’作為本發明之另外態樣，可提供含成長因子產生增 -25- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS> A4規格(210X297公爱) 1313605 A7 B7 五、發明説明（ 強物質作為有關本發明之有效成分之成長因子產生增強 劑1作為該增強劑，亦可為前述有效成分本身，又，亦可 為含前述有效成分之组合物。《長因予產±增強劑，與例 如可與前述有效成分相同用途使用之其他成分等摻合，依 上述治療劑或預防劑之製造方法，製造通常使用之試藥形 態即可。於此增強劑中之前述有效成分之含有量，只要考 慮使用目的，使能表現本發明所望之效果之量即可，無特 別限疋。又，該增強劑之使用量亦只要能表現本發明所望 之效果即可’無特別限定。尤其，特予生體使用之情形， 較好於可投予前述治療劑或預防劑之有效成分之投予量範 圍内之有效成分量使用即可。成長因子產生增強劑，對於 以成長因子產生增強，尤其是HGF或NGF產生增強為必要 之疾病之該成長因子之增強有用。又，該增強劑對於成長 因子之機能研究、與成長因子有關之疾病用醫藥之篩選亦 有用。 另外’作為本發明之別的態樣，可提供將有關本發明之 前述有效成分投予動物之成長因子產生之增強方法。此方 法藉由對於預測有必要成長因子產生增強，或有其必要之 動物’將前述有效成分’較好作為前述成長因子產生增強 劑投予而進行，藉此投予，可使成長因子之產生增強。有 效成分之投予方法、投予量等，與成長因子產生增強劑之 情形同樣為之即可。又’於成長因子產生之增強方法，亦 可使用本發明之治療劑或預防劑、後述之食品、飲料咬詞 料。又，作為「動物」，可舉例如為哺乳類之人、狗、 -26- 本纸張尺度適用中家標準(CNS规格⑻㈣97公酱） 1313605 A7 " —------B7 五、發明説明（^ 给、牛、緒、馬等，其中對人類可適宜地使用。此成長因 子產生之增強方法，例如對於以成長因子產生增強為必要 之疾病之/13療或預防，有用於成長因子產生增強。又，該 強方法，對於成長因子之機能研究、與成長因子有關之 疾病用醫藥之篩選亦有用。 '、入於本發明使用之來自植物之成長因子產生增強用 ’·. S物或g有來自植物之成長因子產生增強物質所成之 含 飲料或飼料，藉由其成長因子產生增強作用，對於 •ί本發月使用之來自植物之成長因子產生增強用組合物等 顯不感爻性之以成長因子產生增強為必要之疾病之症狀改 ° 預防’或如後述之生物之身體狀況之改善，極為有 用。 又於本發明之惡樣，「含有」之語包含含有、添加、 稀釋足意，「含有」係指本發明使用之有效成分含於食 品、飲料或飼料中之態樣，「添加」係指將本發明使用之 有效成分添加食品、飲料或飼料之原料中之態樣，「稀 釋」係指於本發明使用之有效成分添加於食品、飲料或飼 料之原料之態樣。 本發明之食品或飲料之製造法，無特別限定。例如，摻 合、調理、加工等，依一般食品、飲料所用者即可，藉由 此食品、飲料之製造法可製造，製造之食品或飲料中含有 具成長因子產生增強作用之來自植物之成長因予產生增強 用組合物’或來自植物之成長因子產生增強物質即可。 又’將植物混合於食品或飲料中，進行加熱放置等，依必 -27- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4规格(210X 297公釐） 1313605 A7
含啤酒花抽提物 例如穀物加工品 麵類、通心麵類 要除去植物之柚提殘渣所得之Λ . , ^ ^ 0 <成長因子產生增強用食品启 飲枓’亦包含於本發明。又，人士丄，e ^ 、人 ,, 3有成長因子產生增強物售 (食品、飲料，或含有其處程物之具成長因子產生增： 用之食抑或飲枓’ 為本發明之食品或飲料。又 可舉例如具成長因予產生拎強你. 处至妆 等。 “自作用疋飲料之濃縮及稀轉 作為其態樣，含有啤酒之成長 口丁座生增強用之舍〇 飲料或飼料為適宜，啤酒類包含 =干鸣、發泡酒、非醇啤 飲料，此等之濃縮物、此等之稀釋物 飲料3 本發明之食品或飲料，無特別限定 澱粉類加工品、增補營養食品加工〇 , - σσ 地頌、遇心麵 麵包類、鶴類、麵條類、楚、米粉、粉條、包 脂加工品（可塑性油脂、炸油、沙拉油、沙 等）’大豆加工品(豆腐類、豆酱、納豆等），含内f淋 (火腿、培根、壓製火腿、香腸等），水產製 = 肉、魚板、竹輪、魚肉山芋丸子、炸甘藷、摘入t 水）、筋、魚肉火腿、香腸、柴魚、魚卵加工 頭、切煮等）、乳製品(原料乳、乳脂、優路乳 、 乳、粉乳、冰澳淋等）、音笑、吳鲁^ ；貫衣不貫加工品（糊狀物類、 醫類、酸潰類等、果實飲料、青菜飲料、漏合飲 心類(巧克力、餅干類、菓子類 '麵包類、蛋糕 子 米菓類等）、酒精飲料（曰本酒、中國酒、葡萄 忌、燒酒、伏特加、白蘭地、杜松子酒、甜酒、啤酒' -28- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公董）
訂
線 26 1313605 五 、發明説明（ 涼酒精飲料、果實酒、 一 欠、 利久酒寺）、嗜好飲料（綠茶、紅 -士二、咖啡、清凉飲料、乳酸飲料等）、調味料(醬 Γ丰内你、料酒等）、罐頭、瓶罐頭、袋子封裝食品 (二肉飯乂鎮飯、紅叙、咖哩叙、其他各種調理過之食 二 '上ί或濃縮食品(肝糊、其他麵包塗料、麵條、烏 二二'；農、化布類）' 乾燥食品（速食麵類、速食咖 ,Μ .. 末果汁、粉末湯、速食豆醬湯 '調理 過之食品、調理過之餃鞑 吉^ 科15用理過之湯等）、冷凍食品（壽 魚、漢堡鐵板、燒賣、餃子、各種鐵板 : 水果寺）、固形食品、液體食品(湯等）、香辛料類 寺《農產、林產加工品、高產加工品、水差加工品等。 本發明〈食品或飲料中之具來自植物之成長因子產生增 ，作用之有效成分之含有量無特別限定，自其官能與活性 表!之觀點，可適宜選擇’例如食品中，較好為〇._001 重f %以上’更佳地0 00001〜100重量％，更適宜地 〇._3〜90重量％，例如，飲料中較好〇〇〇〇〇〇1重量％以 上，更好為〇.〇〇〇〇1〜100重量％，更好為〇〇〇〇3〜9〇重量 〇/〇。又’本發明之食品或飲料，較佳地’含於彼等之有效 成分，例如使能攝取成人每日較好0 0001〜100毫克/公斤邮 重，更妤0.00卜Π)毫克/公斤體重，更好〇〇l〜it 2 體重即可》 A t 又，根據本發明，提供以高濃度及/或高純度含有前述 長因子產生增強用組合物所成之食品或飲科。又，以高产 度及/或高純度含有前述成長因子產生增強用組合物所m -29- 本紙張尺度適财S g家料(CNS) Ά4规格(21G X 297公发） 1313605 五 、發明説明（ A7 B7 之態樣之食品或飲料中，來自成長因子產生 純产"《成長因子產生增強物質’以高濃度及/或高 點二ί义程度，或自成長因子產生增強作用之表現之觀 ··..占與成長因子產生增強物哲Α 強物貝以同濃度及/或高純度含有可 〈程度’含有成長因子產生增強用組合物。 万；该食品或飲料之製造，作為成長因子產生增強用組合 物，例如含成長因子產生增強物質之植物抽提物，亦已選 自如緞形科植物抽提物、菊科植物抽提物、百合科植物抽 提物：銀杏科植物抽提物、禾本科植物抽提物、薔薇科植 物抽提物、桑科植物抽提物、豆科植物抽提物、級木科植 物抽提物、+ 4*花科植物抽提物&墓科植物抽提物，作為 有效成分’較好為含有選自由氯原酸、二咖啡醯基奎寧 酸、咖啡醯基奎寧酸、異荭草素、紅花明入、癒瘡内酯、 育當歸醇、3 ’ - 〇 - /5 - D -吡喃葡糖醯基開洛内酯、7 · 〇 _沒_ D -吡喃葡糖醯氧基-8 _異戊二烯基香豆素、咖啡酸甲酯、咖 啡酸乙醋、8 -羧基·3 -羥基-5-甲氧基-2-二甲基色滿、7-冷-D-吡喃葡糖醯氧基_6_異戊二烯基香豆素、4，_〇·當歸 酿基-3 ’ - 0 - [ 6 - Ο - ( /5 - D -吡喃葡糖醯氧基）_冷-〇 _吡喃葡糖 醯基]-開洛内酯、異黃腐醇、黃腐醇Β、黃腐醇〇及黃腐醇 組成之群之至少1種以上之化合物之組合物，例如使用來自 植物之抽提物亦可。 本發明亦提供以南濃度及/或向純度含有來自植物之成長 因子產生增強物質之健康增強用食品或飲料，藉由日常地 攝取該食品或飲料，得以增強生體内之成長因子產生，維 -30- 本紙張尺度適用中國國家標準(CMS) Α4規格(210X 297公釐) 28 1313605 五、發明説明（ 持、增強健康。 來自植物万ί發明《態樣’提供以高濃度及，或高純度含有 <成長因子產生增強物質為特徵之食品或飲料。 二，以之態樣，作為來自植物之成長因子產生增強物 h里一虱原酸、二咖啡醯基奎寧酸'咖啡醯基奎寧 t、/、紅草素 '紅花明A、癒瘡内酯、黃當歸醇、3，_0_ 某:葡糖醯基開洛内酯、7-〇i-d-吡喃葡糖醯氧 —缔基香豆素、咖啡酸甲酯、咖啡酸乙酯、8-羧 :3，基’5·甲氧基_2_二甲*色滿、吡喃葡糖醯 氧土 --異戊二缔基香豆素、4丨_〇_當歸醯基_3、〇_[6_〇_ (^^"比喃葡糖酸基卜^❸南葡糖驢氧基卜開洛内酉旨、 異黃腐醇' 黃腐醇B、黃腐醇D及黃腐醇組成之群之至少i 種以上之化合物為佳，提供以高濃度及/或高純度含有該化 合物之食品或飲料。 “令於本發明，作為含HGF產生增強物質之組合物， 使用竹抽提物之情形，使食品或飲料中含有以乾燥重量換 算較好為0,00001重量％以上為佳。竹抽提物可藉由例如將 :葉保=於溫水中而製備…亦可測定抽提物中之異荭 早$含量’使食品或飲料中含有其有效量。作為異兹草素 2含有！，使食品或飲料中較好含有〇 〇1重量％以上為適 一於本發明’作為含HGF產生增強物質之組合物，使用洋 葱抽提物之情形，例如洋葱薄皮之熱水抽提物，將5克洋葱 薄皮於100毫升水中，1〇〇t下加熱處理15分之物，含於^ 31 - 本紙張尺度適财關家標準(CNS)A4_規格(歷挪公爱） 1313605 A7 B7 五、發明説明（ m或飲料中，以乾燥重量換算較好為1重量％以上即可。 於本發明，作為含HGF產生增強物質之組合物使用銀 杳抽提物之情形，例如銀杏茶葉之熱水抽㈣，將例如3克 (銀杏茶葉於200毫升水中，刚。c下加處理15分之物，含 於食品或飲料中，以乾燥重量換算較好為5重量％以上。 於本發明，作為含HGF產生增強物質之組合物，使用艾 嵩抽提物之情形於食品或飲料中，以抽提物乾燥物換算， 較好σ 0.0001重量％以上為適宜。例如，將艾嵩1 〇克於1 ，升=中、60〇c下處理1小時，製備抽提物即可。又’艾 南抽提物中之3,5 -二咖啡醯基奎寧酸作為HGF產生增強物 質使用〈情形’食品或飲料中，較好含3,5二咖啡釀基奎 寧酸0.0005重量％以上為適宜。 又，將艾嵩抽提物中之氯原酸作為HGF產生增強物質使 用之情形，食品或飲料中，較好含氯原酸請^量。,。以上 為適宜。 於本發明，將來自明日葉之氯原酸作為HGF產生增強物 質使用之情形，食品或飲料中較好含請丨重量％以上為適 宜。 於本發明作為含HGF產生增強物質之組合物，使用菊花 抽提物之情形’例如萄花之熱水抽提物， 於⑽毫升水中、⑽下加熱處理2小時之物，以乾^量匕 換算，較好以1重量％以上含於食品或飲料中即可。 於本發明，作為含歸產生增強物質之組合物，使用紫 费金抽提物之情形’例如紫#金之溫水插提物，例如將20 -32- ^纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1313605
克紫鬱金於100毫升水中’ 60tT加熱處理2小時之物，以 乾燥重I換异，較好以〇 〇〇丨重量％以上含於食品或飲料中 即可。 於本發明’作為含HGF產生增強物質之組合物，使用李 抽k物之其形，例如李之乙醇抽提物，將例如6 0克之李以 1〇〇田毫升乙醇抽提處理之物，以乾燥重量換算，較好以〇1 重ΐ %以上含於食品或飲料中即可。又，將抽提物中之5 _ 咖啡醯基奎寧酸或4 -咖啡醯基奎寧酸作為HGF產生增強物 質使用 <情形，食品或飲料中，較好使含0 01重量％以上 之5 -咖啡醯基奎寧酸或4·咖啡醯基奎寧酸為適宜。 於本發明，作為含HGF產生增強物質之组合物，使用青 花菜抽提物之情形，例如青花菜之5〇%乙醇抽提物，將例 如100克青花菜以100毫升5 〇 %乙醇抽提處理之物，以乾燥 重量換算，含0.2重量％以上於食品或飲料中即可。 於本發明，作為含HGF產生增強物質之組合物，使用春 菊抽提物之情形’例如春菊之溫水抽提物，將例如1 〇克之 春菊粉碎物以乙醇洗淨，以丨0〇毫升水，於6 〇抽提處理i 小時之物’以乾燥重量換算’較好含〇· 1重量％以上於食品 或飲料中即可。 例如春菊之乙醇抽提物’將例如5 〇克以8 0 %乙醇1升使均 化’所得抽提物以〇. 1重量％以上含於食品或飲料中為適 宜。又’拙提物中含3，5 -二咖啡醯基奎寧酸之情形，於食 品或飲料中較好為0.0005重量。/〇以上。 於本發明，將啤酒類，例如啤酒、發泡酒、無酒精啤酒 -33- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210X297公爱)
31 1313605 五、發明説明（ 飲料作為含HGF產生增強物質之組合物使用之情形，使於 食品或飲料中’以乾燥重量換算，較好2重量％以上為適 宜。 、本發月’作為含H g F產生增強物質之組合物，使用大 二插彳疋物之情形，例如來自大豆物質之溫水抽提物，將例 ^大1胚芽、大且種皮、或大豆粉分別以乙醇洗淨後，6 0 =下處理2小時所得抽提物使用即可，另外可將此抽提物級 分成乙醇可溶性部分與乙醇不溶性部分使用。 例如以乙醇將大豆胚芽細斷物洗淨，以200毫升水、60。(： :處理2小時’所得抽提液中加2 · 5倍量乙醇，可分別成乙 醇可溶性部分與乙醇不溶性部分。使食品或飲料中含該乙 醇:溶性部分，以乾燥重量換算0()2重量％以上為適宜， 乙醇不落性部分，〇·〇 1重量％以上為適宜。 例如，大豆種皮細斷物10克以乙醇洗淨，以水70毫升、 60 ^下處理2小時所得抽提物中加2 5倍量乙醇，可分 =可溶性部分與乙醇不溶性部分’使食品或飲料十切 .盡落性邵分’以乾燥重量換算較好〇.〇1重量％以二為 、且’乙醇不溶性部分，較好請3重量％以上為適宜。”， 醇 例如，大豆粉1 〇克以乙醇洗淨，以水 理2小時，所得抽提液中加2.5倍量乙醇，可n Μ處 落性部分與乙醇不溶性部分，使食品或飲料中，^乙醇可 I溶性部*以乾燥重量換算，較好0 01重量^孩乙 且，乙醇不溶性部分較好0 005重量％以上為適宜上為 於本發明，作為含HGF產生增強物質 1 諸 ，.且δ物’使用 -34- 良尺度適用中國國家標準(⑽）Μ規格⑽χ297公爱） 1313605 A7 B7 五、發明説明（ =之㈣’例如壬…十葉之溫水抽提物，例如 /㈣末以乙醇洗淨，於⑽毫升水、下插提處理 小時，所得抽提物中加2.5倍量乙醇，可使用分別 γ落性部分與乙醇不溶性部分。使食品或飲料中，本七/ 醇可溶性部分以乾燥重量換算，較好G.GGG2重量％ ^ ^ 適i乙醇不〉谷性部分較好〇·0004重量％以上為適宜。 於本發明，作為含HGF產生增強物質之组合物，使用米 糠抽提物又情形，例如米糖之溫水抽提物，例如以乙醇洗 乎10克米糠，以1〇〇毫升水、6〇t下抽提處理2小時，所得 抽提物中加2.5倍量乙醇’可使用分別為乙醇可溶性部分與 醇不i丨生部刀。使食品或飲料中，含該乙醇可溶性部分 以乾燥重量換算，較好0.1重量％以上為適宜。 主於本發明，作為含NGF產生增強物質，使用紅花色素之 十月形，使含於食品或飲料中，較好〇1重量％以上為適宜。 於本發明，來自紅花之紅花明A作為NGF產生增強物質使 用之情形，使含於食品或飲料中較好〇3重量％以上為適 宜。 万；本發明作為含NGF產生增強物質之組合物，使用菊花 柚提物 < 情形，例如菊花之溫水抽提物，將例如1 0克菊花 於〖00笔升水中，6 0 °c下加熱處理2小時之物，使含於食品 或飲料中以乾燥重量換算，2重量％以上即可。又於本發 明，將來自菊花之癒瘡内酯作為產生增強物質使用之 情形，使食品或飲料中較好含〇 〇〇2重量％以上為適宜。 於本發明，作為含NGF產生增強物質之組合物，使用明 -35- 1313605 A7 B7 五、發明説明（ 日葉抽提物之情形，例如菊花之溫水抽提物，將例如1 〇克 之明曰葉莖部於200毫升水中、6〇t下加熱處理2小時之 物，使含於食品或飲料中’以乾燥重量換算，較好〇 〇4重 量％以上即可。於本發明，作為含NGF產生增強物質之組 合物，使用明日葉根部抽提物之情形，將例如丨〇克明日葉 根部於200毫升水中，6〇t下加熱處理2小時之物，使含於 食品或飲料中，以乾燥重量換算，較好〇〇6重量％以上為 適宜。 於本發明，將來自明曰葉之黃當歸醇作為NGF產生增強 物質使用之情形，使食品或飲料中較好含〇 〇〇1重量％以上 為適宜。 於本發明’將來自明日葉之3，- 〇 _ η峨喃葡糖醯基開 洛内酯作為NGF產生增強物質使用之情形，使食品或飲料 中’較好含0.005重量％以上為適宜。 於本發明，將來自明曰葉之点_D_吡喃葡糖醯氧基· 8 -異戊二缔基色滿作為NGF產生增強物質使用之情形，使 食品或飲料中’較好含0.003重量％以上為適宜。 於本發明，將來自明曰葉之咖啡酸甲酯作為NGF產生増 強物質使用之情形，使食品或飲料中較好含〇 〇〇2重量％以 上為適宜。 於本發明，將來自明日葉之8_羧基_3•羥基_5_甲氧基_2_ 二甲基色滿作為NGF產生增強物質使用之情形，使食品或 飲料中較好含0_0003重量％以上為適宜。 於本發明，將來自明日葉之7-沒_D_吡喃葡糖醯氧基_6_ -36- 本紙張尺度適用中國國家標準(CMS) A4規格(210 X 2叩公酱 1 -~~~一. 1313605 A7 B7 五、發明説明（ 異戊二烯基色滿作為NGF產生增強物質使用之情形，使食 品或飲料中較好含〇_〇3重量。/。以上為適宜。 於本發明，將來自明曰葉之4，-〇_當歸醯基_3，_〇_[6_〇_ (/5 - D -吡喃葡糖基）-冷-d -吡喃葡糖基]_開洛内酯作為NgF 產生增強物質使用之情形，使食品或飲料中較好含〇 〇4重 以上為適宜。 於本發明，將來自明日葉之咖啡酸乙酯作為NGF產生增 強物質使用之情形，使食品或飲料中較好含〇 〇4重量％以 上為適宜。 於本發明，將洋葱薄皮抽提物作為NGF產生增強物質使 用之情形，例如洋葱薄皮之乙醇抽提物例如將洋葱薄皮2 5 克以乙醇500耄升抽提所得抽提物，使含於食品或飲料中， 以乾燥重量換算，較好0·01重量％以上為適宜。 於本發明，作為含NGF產生增強物質之組合物，使用銀 杏茶葉抽提物之情形，例如銀杏茶葉之熱水抽提物，將例 如銀杏茶葉於水200毫升中，10(rc下抽提i小時所得抽提 物，使含於食品或飲料中，以乾燥重量換算，較好〇 〇7重 里％以上為適宜。 於本發明，將薔薇花抽提物作為NGF產生增強物質使用 之情形，例如薔薇花溫水抽提物，將例如薔薇花2克以4 0 毫升水、60°C下抽提1小時，所得抽出物使含於食品或飲 料中，以乾燥重量換算，較好0_008重量％以上為適宜。 於本發明，將來自啤酒花之黃腐醇作為NGF產生增強物 質使用之情形，使含於食品或飲料中’較好〇 〇〇〇3重量％為 -37-
351313605 五'發明説明（ 適宜。 一万、气發日月’作為含ngf產生增強物質之組合物使用啤酒 物之晴形使含於食品或飲料中，以 〇.〇〇2重量％以上為適宜。 m :本：明’將黃腐醇B、黃腐醇d作為Να產生增強物質 < 3形，使含於食品或飲料中分別較好 以上為適宜。 里 於：：明，將黃腐醇作為ngf產生增強物質使用之信 宜：„於食品或飲料中分別較好為。_重量%以上為適 :本發:月，作為含歸產生增強物質之組合 =例如啤酒、發泡酒、無酒精啤酒飲科之情形，使含 宜^或飲料中’以乾燥重量換算，較好2重量％以上為適 :本發明’作為含NGF產生增強物質之組合物，使用 食品或飲科中含有哮酒花抽提物 便兴腐Sf較好含〇 〇〇〇〇〇4重量 〇.嶋3重量％以上為適宜。义上’異！腐醇較好 用明’作為含NGF產生增強物質之組合物，使 如啤酒：r:::r青形，例如啤酒花之乙醇抽提物，將例 卑酒化乾保物粉碎物5G克以丨升乙 使含於食品或飲料中’以乾燥重量換算，較好二 0/〇以上即可。 好為0.002重 於本發明，作為含NGF產生增強物質之組合物，使用 % 情 啤 啤 而 含 量 紫 $紙狀度通用中國國家標準 38- 1313605 A7
3二:疋：《情形’例如’紫鬱金之溫水抽提物，將例如 糸#坌5克以水2 s龙也 八.人各。 毛升，6 0 C下抽提2小時所得抽提物’使 ιϋί或飲料中，以乾燥重量換算’較好⑽重量％以 、、_發月作為含NGF產生增強物質，使用大豆抽提物 ’例如來自大豆之物質之溫水抽提物，將例如大豆 胚牙、大豆稀由、+ 反或大！粉分別以乙醇洗淨後，以水於60 =2小時’所得抽提物使用即可，另外將此抽提物級分 ，可洛性部分與乙醇不溶性部分使用亦可。 ί列浚口 ，以乙臨、，朱..Λ丄 一 。 '元乎大且胚芽碎斷物10克，以水200毫升於 6〇 C處理2小時’所得抽提物中加2.5倍量之乙醇，可分別 J ，可'合性部分與乙醇不溶性部分。使食品或飲料中， Λ ^可'谷性部分，以乾燥重量換算，較好含0.5重量°/〇以 上為i· 6醇不落性部分較好含〇·3重量％以上為宜。 。 ^乙醇洗淨大且種皮碎斷物1〇克，以水7〇毫升於 6〇。。處理2小時’所得抽提物中加2.5倍量之乙醇，可分別 為乙醇可③性部分與乙醇不溶性部分。使食品或飲料中， 該乙2可溶性部分，以乾燥重量換算，較好含0.3重量％以 上為且，乙醇不溶性部分較好含〇〇6重量％以上為宜。 例如，以乙醇洗淨大豆粉碎斷物1 0克，以水1 〇〇毫升於 6 〇 C處理2小時，所得柚提物中加2.5倍量之乙醇，可分別 為乙醇可，谷性部分與乙醇不溶性部分。使食品或飲料中， ^醇可/容性部分，以乾燥重量換算，較好含〇 3重量％以 上為且，乙醇不溶性部分較好含0.000重量％以上為宜。 -39 本紙張尺度適用中？5~家標準(CNS「城格(2igx297公董〉 1313605 A7
1313605 A7
與前述（υ同樣地製備本醇々私把, & α 醉乏飫枓。例如，將該抽提物添加 使成該抽提物之1GG倍稀釋液，可製備含醇飲料。 、⑷對銀杏茶葉加抽提溶媒(如水)抽提(例如航柚提! 5 二)“装備抽棱物《冷凍乾燥物’與前述⑴同樣地製備含 飫料。例如’將該乾燥物添加使成1〇〇倍稀釋液，可製備 含蟀飲料。 (5)對艾嵩乾燥品加插提溶媒（如水）抽提（如6〇。〇抽提工小 時）’使用抽提物’與前述⑴同樣地製備含醇飲料。例如 將自讀提物所得之3,5_二咖啡酿基奎寧酸添加使成5微克 /毫升，可製備含醇飲料。又，將自該抽提物所得之氯原酸 添加使成40微克/毫升，可製備含醇飲料。 (。6)對明日葉（葉至部）乾燥品加抽提溶媒（如水）抽提（例如 C抽扶1小時），使用抽提物，與前述〇 )同樣地可製備含 醇飲料。例如將自該抽提物所得之氯原酸添加，使成i〇f: 克/毫升’可製備含醇飲料。 (7)對菊花乾燥物加抽提溶媒（如水）抽提（如6〇t抽提2小 時），使用抽提物，與前述（1)同樣製備含醇飲料。該抽提 物〜加使成該抽提物之1 〇 〇倍稀釋液，可製備含醇飲料。 (8 )對糸鬱金乾燥品加抽提溶媒（如水）抽提（如6 〇 π抽提2 j時），製備抽提物之冷凍乾燥物，與前述（丨）同樣製備含 醇飲料。例如，將該乾燥物添加，使成10微克/毫升，可製 備含醇飲料。 (9)對李予加抽提溶媒（如乙醇）使均_、過濾製備濾液， 用所得抽提物與前述（1)同樣製備含醇飲料。例如將該抽提 -41 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4规格(21〇χ 297公爱) 1313605
五、發明説明（ 物添加使成1 〇〇〇倍稀释、， 提物所得之5 -咖相基=I製備含醇飲料。i ’將自柚 加使各成100微克/毫升寧馱及4 -咖啡醯基奎寧酸分別添 ⑽對啤酒花-加切㈣。 一，過滤製備滅液1縮"^媒（如5〇%乙醇水溶液）使均 ⑴同樣製備含醇飲料。夜：用所得濃縮物，與前述 釋液，可製備含醇飲料/'如將該濃縮物添加使成觸倍稀 …〇 =春菊之冷;東乾燥物粉碎，以有機 ==丨如水)抽提(如6。。。拙提1小時)，用抽提二 件：釋;/ Tt·備含醇飲料。例如將該抽提物添加使成1000 倍稀釋視，可製備含醇飲料。 二2，)：春!1加抽提溶媒(如80%乙醇)使均-，過濾製備 :私:feL '縮忑濾液。用所得濃縮物，與前述(1 )同樣製備含 ° = 例如將这抽提物添加使成1000倍稀釋液，可製備 含醇飲料。又’將自該抽提物所得之3,5-二咖啡醯基奎寧 酸添加成10微克/毫升，可製備含醇飲料。 二（1 3 )將卑/酉濃縮，使用該濃縮物，與前述（1)同樣製備含 醇飲料。例如將該濃縮物添加使成丨〇〇倍稀釋液，可製備含 醇飲料。 (1 4)將播醇啤酒濃縮’使用該濃縮物，與前述（1)同樣製 備含醇飲料。例如將該濃縮物添加使成1〇〇倍稀釋液，可製 備含醇飲料。 (1 5 )將大豆胚芽碎斷物，以有機溶媒（如乙醇）洗淨後， 加抽提溶媒（如水）抽提（如6 0 t抽提2小時）得抽提物。將抽 -42- 本錄尺度適用中國國家標準(CNS)以規格(21〇χ挪公笼) 40 1313605 五 發明説明（ b慮將H遽液中加有機溶媒（如2 5倍量之乙 ^ Λ成物有機溶媒可溶部分與有機溶媒不溶性部分，分別 i 1:。用該乾燥物，與前述⑴同樣地製備含醇飲 。了 乙醇可溶性部分之乾燥物添加使 :使：Γ含醇飲料…乙醇不溶性部分之乾燥物，： 加使成130微克/毫升，可製備含醇飲料。 '、 U6)將大豆種皮碎斷物，以有機 加抽提溶媒(如水)抽提(如…抽提2小二：：後’ =過遽’編後，中加有二=:量： ==機溶媒可溶性部分與有機溶媒不溶性= 料。例如將乙醇可溶性部分之錢_ 每飲 升，可製備含醇飲料。又，乙醇不落性部分Ϊ乾=克1 加使成30微克/毫升’可製備含醇飲料。 庵物，添 (17)將大豆粉以有機溶媒 (如水)抽—提2小時)，=:=媒 滤，得遽液後’遽液中加有機溶媒(如2·5:量之 =物過 成有機落媒可溶性部分與有機）分 乾燥物。用該乾燥物與前述⑴同樣二::;二別製備 分之乾燥物添加使成〗°°微二： 備σ醉飲科。又，乙醇不溶性部分之 T3t 微克/毫升，可製備含醇飲料。 添加使成60 (1”將諸丙夜葉粉末以有機溶媒(如 提謂(如水)柚提(如60t_小時)，得插提物:將 43· 本纸張尺度適财家料(CNS)城格(加χ297公f 1313605 A7
1313605 、發明説明（ 含量之含醇飲料。小時、對制工化乾燥物加抽提溶媒（如水）柚提（如60°C抽提2 醇飲^ 提物之Μ乾燥物，與前述⑴同樣製備含 古列如，將该乾燥物添加使所含之紅花明A之量為3 笔克/毫升’可製備含醇飲料。 ⑺對菊花乾燥物加抽提溶媒（如水）抽提（如㈣抽心 =’。製備插提物之冷;東乾燥物，與前述⑴同樣製備切 si私抵例如’將茲乾燥物添加使成2〇毫克/毫升，可製備含 人料。又’將該乾燥物添加可製備含於該乾燥物中之 瘡内酯為20微克/毫升之含醇飲料。 ⑷對明日葉乾燥物(葉莖部)加抽提溶媒(如水)抽提(例 〇 C抽提2小時）’製備抽提物之冷决乾燥物，與前述 製備含酵飲料。例如將該乾燥物添加可製備400微克/ 升之含醇飲料。 ^，對明日葉乾燥物（根部）加抽提溶媒（如水）抽提（例 6〇°C抽提2小時）’製備抽提物之冷凍乾燥物與前述（ 樣製備含醇飲料。例如將該乾燥物添加可製備_ 升之含醇飲料。 又，可製備添加該乾燥物使含於該乾燥物之黃當歸醇 量為1 0微克/毫升之含醇飲料。 可製備添加該乾燥物使含於該乾燥物之3 〇 _点_ D。 葡糖醯基開洛内酯之量為5 〇微克/毫升之含醇飲料。 可製備添加該乾燥物使含於該乾燥物之7 _ 〇 _石〇 葡糖醯氧基-8-異戊二浠基色滿之量為3〇微克/毫升之 小 醇 癒· 如 同毫 如 同毫 之 -45- 本纸張尺度通用中國國家標準(CNS) A4規格(21〇χ 297公釐) 1313605 A7 B7 43 五、發明説明（ 飲料。 可製備添加該乾燥物使含於該乾燥物之咖啡酸f酯之量 為20微克/毫升之含醇飲料。 可製備添加該乾燥物使含於該乾燥物之8 -幾基-3 -幾基_ 5 -甲氧基-2-二甲基色滿之量為3微克/毫升之含醇飲料。 可製備添加該乾燥物使含於該乾燥物之7 -召_ d - u比喃葡棒 氧基-6-異戊二缔基色滿之量為300微克/毫升之含醇飲料。 可製備添加該乾燥物使含於該乾燥物之4，_ 〇 _當歸酿基 3 - 〇 - [ 6 - 0 - ( /3 - D - p比喃葡糖基）-召-d - 〇比喃葡糖基卜開洛 内酯之量為400微克/毫升之含醇飲料。 氣備添加違乾燥物，使含於該乾燥物之咖啡酸乙自旨之 1為30微克/毫升之含醇飲料。。 (5 )對洋葱薄皮加抽提溶媒（如9 5容量％乙醇）抽提，製備 抽提物之冷凍乾燥物’與前述（1)同樣製備含醇飲料。例如 可製備添加該乾燥物使成丨〇〇微克/毫升之含醇飲料。 (6) 對銀杏茶葉加抽提溶媒（如水）抽提（如1〇〇 t抽提j小 時），製備抽提物之冷凍乾燥物，與前述（丨）同樣製備含醇 飲料。例如可製備添加該乾燥物使成700微克/毫升之本醢 飲料。 "" (7) 對薔薇花加抽提溶媒（如水）抽提（如6〇 t抽提i小 2)氣備抽提物之冷凍乾燥物’與前述（1)同樣製備含醇 料例如可製備添加該乾燥物使成80微克/毫升之含醇飲 料。 〇 (8) 依習用法，用啤酒花抽提物，與前述（1)同樣製備含
1313605
44 A7 B7 醇飲料。例如可， 抽提物中、J ^製備添加該啤酒花抽提物，使含於啤酒花 icn片腐醇之量為3微克/毫升之含醇飲料。 k y )依習用法 醢私祉 ‘ ’用啤酒花抽提物，與前述（1)同樣製備含 人十。例如可制 抽提物中. ^備添加該啤酒花抽提物’使含於啤酒花 5腐醇之量為20微克/毫升之含醇飲料。 (10) 依習用.本 隨私Μ 用啤酒花抽提物’與前述（1)同樣製備含 醇飲枓。例如 ° ^ 1備添加該啤酒花抽提物’使含於啤酒花 拘物中之黃腐 ^ M $樹知β及黃腐醇D之總量為20微克/毫升之本 鮮飲料。 〇 (11) 依習用本 Μ 在’用啤酒花抽提物，與前述（1)同樣製備含 鮮飲料。例如-ρ如 k i r t備添加該啤酒花抽提物，使含於啤酒花 抽提物中之里 、貢腐鲜之量為80微克/毫升之含醇飲料。 料。2)將啤酒濃缩’用該濃縮物與前述（1)同樣製備含醇飲 ^ 力可氣備添加該濃縮物使濃縮物成1 0倍稀釋液之含 (13j將拽醇啤酒飲料濃縮，用該濃縮物與前述（i)同樣製 S醇飲料。例如可製備添加該濃縮物使濃縮物成1 〇倍稀 釋液之含醇飲料。 ()依0用法，用啤酒花抽提物，與前述（1)同樣製備含 醇飲料例如可製備添加該啤酒花抽提物’使含於啤酒花 抽k物之頁腐醇之量為0.04微克/毫升’異黃腐醇之量為1,3 微克/毫升之含醇飲料。 ， 又，可製備添加該啤酒花抽提物，使含於啤酒花柚提物 足黃腐醇之量為〇9微克/毫升，異黃腐醇之量為4微克/毫 -47- 1313605 五 發明説明（ 45 A7 B7 升之含醇飲料。 (1 5 )將卑酒彳C乾燥物粉碎，加抽提溶媒（如水）抽提（如6 〇 C抽提1小時），，濃縮所得抽提物，用該濃縮物，與前述 (1 )同樣製備含醇飲料。例如可製備添加該濃縮物使乾燥重 量為20微克/毫升之含醇飲料。 (1 6 )對紫鬱金碎斷物加抽提溶媒（如水）抽提（如6 〇 t抽提 2小時），製備抽提物之冷凍乾燥物，與前述（1)同樣製備含 醇飲料。例如可製備添加該乾燥物使成600微克/毫升之含 醇飲料。 (1 7)將大豆胚芽碎斷物以有機溶媒（如乙醇）洗淨後，加 抽提落媒（如水）抽提（如6crc抽提2小時），得抽提物。將抽 提物過滤，得濾液後’濾液中加有機溶媒（如25倍量之乙 醇）’分成有機溶媒可溶部分與有機溶媒不溶部分，分別製 備乾燥物。用該乾燥物，與前述（丨）同樣製備含醇飲料。例 如，可製備添加乙醇可溶部分之乾燥物使成5毫克/毫升之 含醇飲料。又可製備添加乙醇不溶部分之乾燥物使成3毫克 /毫升之含醇飲料。 (1 8)將大豆種皮碎斷物以有機溶媒（如乙醇）洗淨後，加 抽提溶媒（如水）抽提（如6〇t抽提2小時），得抽提物。將抽 提物過滤’得濾液後’濾液中加有機溶媒（如25倍量之乙 醇）’分成有機溶媒可溶部分與有機溶媒不溶部分，分別製 備乾燥物。用該乾燥物，與前述（〗）同樣製備含醇飲料。例 如，可製備添加乙醇可溶部分之乾燥物使成3毫克/毫升之 含醇飲料。又可製備添加乙酵不溶部分之乾燥物使成6⑻微 -48- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4规格(210 X 297公釐） 1313605 A7
1313605 A7 B7 五、發明説明（47 ) 升之含醇飲料。 (22)對前述⑴〜⑴）記載之含醇飲料，依習用法進行碳 酸飽和，可製備發泡型之飲料。又，對各飲料可製備含有 :成分與前述飲料之20倍量之無醇型飲料。以高濃度及μ 高純度含有成長因子產生增強物質之此等飲料，由於得以 顯示高之NGF產生增強作用，所以較佳。 :乂上，根據本發明提供以來自植物之歸產生增強物 λ、NGF產生增強物質為有效成分之hgf產生増強用食品 或飲料、NGF產生增強用食品或飲料。 例如’根據本發明提供含有效量之職產生增強物質之 食，或飲料，含有啤酒花抽提物食品或飲料中黃腐醇之含 有量較好為0.0_4重量％以上及/或異黃腐醇之含有量較 為o.ooou重量％以上之NGF產生增強用之食品或飲料，該 食品或飲料對相產生NGF為必要之疾病例如巴金森病: 老年性癡呆、例如阿兹海默症、腦血管性癡呆等之症狀改 善及疾病之預防極為有用。 又:，根據本發日月’提供高量含有具來自植物之成長 產生增強作用之有效成分之含醇飲料。於本說明書， 飲料係指含乙醇之飲料。含醇飲科中之乙醇含量二 〇口1〜50谷量％。又，亦提供使用本發明之含醇飲料之令 品，例如威士忌酒餡巧克力。 < 作為含醇飲料，適宜地可例示高濃度及/或高純度含 :自植物之成長因子產生增強作用之有效成分之含醇飲 ，到如添加來自植物之具成長因子產生增強作用之有效 -50- 本紙張尺奴斤???¥?^7~4規格(210 X 297公茇） 1313605 48 五、發明説明（ 本酒、合成清酒、中國酒、白酒、葡萄酒、威士 二“、伏加酒、白蘭地、杜松子酒、甜 泡酒、清凉酒精飲料、酸酒、〉.昆 發 等。 口 果《酒、療·餾滴 之乙醇濃度通常較好為。“η重量 = 〇·5〜8重！％，再更好41〜6容量％1 如釀造用醇、酒精類(甜酒、伏加酒 '二 威士心、白鬧地 '或燒酒等分別單獨或併用。 裝 作又二含醇Λ料，可將來自植物之具成長因子產生增強 、土。=效成刀’與乙醉’依所望之其它成分混合而製 將所望之植物浸潰於乙醇濃度於前述所望範圍之 飲料中，自該植物將具成長因子產生增強作用之有效 成为抽提，亦可製造本發明之含醇飲料。 、本發明之含醇飲料為成長因子產生增強用飲料。本發明 ^飲料之製造，可使用從來所製造之原材料及方法。例 二作為原材料’可使用甘味科、著色料、酸味料、調味 線 2、乳化劑、纖維素強化劑、食物纖維等之機能性食品辛 材私香辛料、香料、增黏劑、確物等之食品素材之食品添 加物等之可飲食之物質。 本發明之含醇飲料之ΡΗ，可於通常之食品所取範圍内選 擇’通常可於ρΗ2〜7之範圍選擇。本發明之清涼醇飲料， ^任意的有或無碳酸飽和。進行竣酸飽和之情形，製品之 氣w合積1以上為佳，更佳為〗3〜3之範圍。又，本發明之 含醇飲料，亦可進行添加果枝、蔬菜汁、果肉、蔬菜片。 -51 - 297公釐） 本紙張尺度 A4_2i(): 1313605 A7 B7
五、發明説明（ 又 枨據本發明 促折X Λ或鈕土L山 重晉0/以具黃腐醇0.0003 重成長因子產生增強用之食品或飲料。
向來為含啤酒化抽提物之飲料之啤酒 A 有使用於本發明之黃腐醇，A ‘:、酉中。 〇·職克⑽毫升，8公司製啤酒之\卑：,-腐醇含量為 /100毫彳，c公司製啤酒之黃腐 ！42.^克 ^ . 畔。量為〇·7〇微克/100臺 升，任一者之啤酒皆不相當於本發明士人女— 重量％以上之飲料。 ，月疋3有育腐醇0.0_7 、^發明之作為食品或飲料中含黃腐醇㈣嶋重量％以上 <食品或飲料之製造法無限定 土赴π、* 例如可於哮酒中添加含有 ，腐k啤酒花’可將無料酒作為原料使用，亦可 对、_飲料、嗜好飲料等之製造原 、， 冰#=原枓中，使用含黃腐醇之啤 =提物。使用啤酒花本身代替啤酒花抽 為本發明之範圍。又，亦可將咮.灰_ i 田… gn . , _ .卑/酉化抽提物本身作為本發 月<成長因子產生增強用组合物使用。 明之食品或飲料中之黃腐醇含量，由生理學效果盘 目月匕〜果決足即可，食品或飲料中，較好含0 00007重量％ 乂上即可’通常G.GGG1〜G.GG1重量％之範圍為適宜。 =，本發明提供含有成長因子之產生增強物質之食q ,料或含有其處理物為有效成分之成長因子產生增強：食 抑或飲料。作為含成長因子產生增強物質之食品或飲料可 例示哮酒類。作為啤酒類例示啤酒、發泡酒、無醇啤酒飲 料、此等之濃縮物、此等之稀釋物、含啤酒花抽提物之^ 料，例如將啤酒、發泡酒作為成長因子產生增強用之飲料 A4^(210 •52- x 297公釐） 1313605 五 、發明説明（ 50 亦可’作為食品或飲料之原料亦可。又，啤酒類之處理 物，例如濃縮物及稀釋物作為食品或飲料亦可。 本發明另有關含啤酒花抽提物之成長因子產生增強用之 ^或飲料。作為啤酒花抽提物’可使用市售之哮酒花抽 &物’通常食品或飲料中較好含請Q1重量％以上 含0.002〜〇.〇2重量％即可。任—者皆藉由本發明所揭示之 例如實施例4⑴及實施例13)，測定啤酒花抽提物中 、一因子產生增強活性，自官能與生理活性之點，決 酒化插提物之含有量’製造本發明之食品或飲科即可。 根據本發明提供含料酒花抽提物，食品或飲料 腐广較好含〇.〇〇〇〇〇〇〇6重量％以上，異黃腐醇較好= 料_。5重! %以上之成長因子產生增強用之食品或飲 根據本發明提供含有啤酒花抽提物，食 =腐醇較好含請_32重量％以上，異黃 ^ 飲料。 《濃厂予型义成長因子產生増強用食品或 之另據本發明提供含啤酒花抽提物，食品或飲料中 (頁腐醇較好含0.00007重量％以上n 枓中 之成長因予產生增強作用。食4飫料具高活性 作為未發明之食品或飲料，只要含 強作用之來自植物夕占且㈤ ' 我因子產生增 表現其生理機予產生增強用組合物，含有供 機“必要之量即可，其形狀無特別限定，亦 -53-χ 297公釐） 1313605 A7 B7 五、發明説明（ 包含鍵劑狀、顆粒狀、膨蚤 β、 囊狀寺足形狀之經口可攝取之形 狀物。 本發明k供含有成長因子產生增強物質為有效成分 、具j長目子產生增強作用之生物用飼料。作為該飼 枓提供與前述食品或飲料同#，含有前述成長因子產生增 強用組—合物所成之成長因子產生增強用之飼料，以高濃度 ^或高純度含有前述成長因子產生增㈣f為特徵之詞 以高濃度及/或高純度含有前述成長因子產生增強組合 物《飼科，含黃腐醇〇._07重量％以上於飼料中所成之神 經成長因子產生增強用之飼_ ’含前述成長因子產生增強 物質所成之飼料或含其處理物所成之成長因子產生增強用 《飼料（較好為含啤酒類之態樣），及含哮酒花抽提物所成 足成長因子產生增強用之飼料。作為使用之成長因予產生 增強物質，與前述食品或飲料同樣，€自由氣原酸、4 啡醯基奎寧酸、咖啡醯基奎寧酸、異荭草素、红花明A 癒瘡内醋、黃當歸醇、3，-〇U“比喃葡糖基開洛内醋、 7-0-沒-D-峨喃葡糖氧基_8-異戊二缔基色滿、咖啡酸甲 酉旨、咖啡酸乙酿、8-羧基_3_羥基_5_甲氧基_2_二甲基色 滿、7-/3-0-D-吡喃葡糖氧基·6_異戊二烯基色滿、4，_〇_ 當歸酿基^-…◦-(^“比喃葡糖基卜^峨喃葡糖 基]，洛㈣、異黃腐醇、黃腐醇B、黃腐醇Μ黃腐醇 成之群之1種以上之化合物為佳。 另外，作為別的一種態樣，亦提供以投予前述有效成分 -54- 本紙張尺度ίϋ中國國家標準(CNS) Α4规格(210 X 297公釐) 1313605 A7
於生物為特徵之生物之飼育 劑 丨F局尽發明之別〜樣，提供以含前述有效成分為特徵之生物 Ο 万;此寺（發明，生物養殖動物、寵物動物等，作為養殖動物可例示家畜、實驗動物、室金 只知勁物豕禽、魚類、甲殼類、或男作4飼料例示身體狀況之維持及/或改善用飼料。作為 生物飼育用劑例示浸漬用劑、飼料添加劑、飲料用添加劑0 根據此等之發明，於如前面例示適用彼等之生物，基於 本發明使用之前述有效成分之成長因子產生增強作用了可 期王入本發明之岫述治療劑或預防劑同樣之效果之表現。 亦即’自此等之發明可期待於該生物之須要成長因子產生 增強作用之疾病之治療或與預防效果。 使用於本發明之前述有效成分’通常投予對象生物之體 重A斤每天較好〇·〇 1〜2000毫克。投予可例如將該有效 j分先添加於供對象生物用之人工摻合飼料之原料中混 口，或與人工摻合飼料之粉末原料混合後，再進行添加混 口於其他原料中。又，前述有效成分於飼料中之含有量無 特別限疋，依目的適宜設定即可，0.001〜1 5重量％之比例 為適宜。 作為人工摻合飼料’可舉魚粉、酪蛋白、墨魚粉等之動 物f生原料，大旦糟、小麥粉、澱粉等之植物性原料，飼料 用酵母等〈微生物原料、鳕魚肝油、黑錢油等之動物性 -55 - 本紙張尺度適财ϋ ® “準(CNS)-
裝 訂
1313605 A7 B7 五、發明説明（53 油脂、大豆油、菜種油等之植物性油脂 '維生素類、礦物 類、胺基酸、抗氧化劑等作為原料之人工摻合飼料。又可 舉魚肉碎肉等之魚類用飼料。 本發明之用飼 < 製法無特別限定，又摻合亦只要依一般 之飼料即可’製造之飼料中，只要含有具成長因子產生增 強作用之有關本發明之前述有效成分即可。 、又，亦可將具成長因子產生增強作用之有關本發明之前 逆有效成分聚集一起，直接添加於水槽、保持槽或飼養領 域之水、每水等，使對象生物浸潰而投予。此浸潰方法， 對於對象生物之飼料攝取量降低時，特別有效。水或海水 中具成長因子產生增強作用之有關本發明之有效成分之濃 度，無特別限定，只要按目的使用即可較好為〇 OOOOiy重 量％之比例為適宜。 又’將含有具成長因予產生增強作用之有關本發明之前 述有效成分之飲料作為飼養用飲料，使對象生物攝取亦 可本發明使用之該飲料中具成長因子產生增強作用之有 效成分之濃度，無特別限定’按目的使用即可，〇 〇〇〇 1〜1 Ϊ量％之比例為適當β當具成長因子產生增強作用之有關 本發明之前述有效成分之生物飼養用劑，例如浸潰用劑、 飼料添加劑、飲料用添加劑’以本身已知之捧合及製造法 製造即可。於該生物飼養用劑中之有效成分之含量，只要 可得本發明所希望之效果即可，無特別限定。 作為本發明可適用之生物無限定，作為養殖動物可舉 馬、牛、豬、羊、山羊、駱駝 '羊駝等之家畜，小鼠、大 -56- 本紙張尺度適用中國國家诔準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1313605 A 7 B7 54 五、發明説明（ 鼠、土撥鼠、兔等之實驗動物、雞、鴨、火雞、駝鳥等之 家畜，棘t魚、石鯛、比目魚、碟娜、飯、平真（Seri〇u lalanndi)、鮪、縞綷、香魚鮭、鱒類、虎河豚、鰻、泥 鰍、鯰等之魚類，大蝦、黑虎（bUck tiger)、大正蝦 (fleShy Prawn)、三疣梭子蟹（Portunus = ltUberculatus)等之甲殼類，鮑魚、蠑螺、海扇、牡蠣 等之貝類作為寵物動物，可舉描等，可廣泛適用於陸上、 水中動物。 精由使攝取含本發明使用之具成長因子產生增強作用之 珂述有效成分之飼料，或使對象生物浸潰於具成長因子產 生增強作用足含使用於本發明之前述有效成分之液體，可 將家畜 '實驗動物、家禽、魚類、甲殼類、貝類、寵物動 物等之身體狀況維持良妤，或可使改善。 如上所述，本發明提供了各種具有成長因子產生增強作 用之醫藥品、食品、飲料、飼料等，其中，從本發明所要 的效果的表現之觀點而言’含有癒瘡内醋做為成長因子產 生增強物質的成長因子產生辦雜jjl彡人^ 心tc u T座生增強用組合物、治療劑或預 劑及食品、飲料或飼料為特佳者。
另外’作為本發明之另外態樣’提供使用有關本發明之 前述有效成分於必要增強成長因子產生之疾病之、 成長因子產生增強劑、或成長因予產生增之食/ 料或飼料之製造作為此使用之態樣，可舉本發明之 療劑或預防劑、成長因子產生增強劑、或使 Z 分製造成長因子產生增強用之食品、飲料或飼科之賤樣。 57-本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(21〇x297公釐） 1313605 A7
例如，前述有效成分於製造必須增強成長因子產生、' 之治療劑或預防劑’或成長因予產生 < 疾病 ，> u、 上％強劑炙使用，製诰
口心（錠劑、顆粒劑、散劑、粉末劑、膠囊劑等之固开, 劑，、通常液劑、懸浮劑、乳劑等之液劑…使用前藉苏 加適當載劑成液狀乾燥品，為其例示。 J 又，本發明作為有效成分使用之成長因子產生增強物 質’以1克/公斤體重對大鼠經口單次投予，亦無認定死亡 例0 以下舉實施例’更具體說明本發明，本發明無論如何不 限定於此等之實施例。又，只要無特殊之情形，於實施例 之％意即重量％。又，有將部分稱為級分部分之情形。 實施例1 (1 )將竹葉冷凍乾燥後粉碎之竹葉粉末6 7克懸浮於1〇〇毫 升之氯仿’過濾、回收不溶部分，反覆此操作3次，其後， 懸浮於100毫升之乙醇’過濾，回收不溶部分，反覆此操作 3次。自此操作所得之不溶部分完全除去乙醇，懸浮於1 〇〇 毫升蒸餾水。此懸浮液於6 0 t保溫1小時後，過濾。濾液 中加2.5倍量之乙醇’於· 2 〇。(：冷卻後，於低溫離心得沉 殿。將此沉澱溶於蒸餾水，冷凍乾燥，得含粉狀糖之竹葉 抽提物^ (2 )將實施例1 - (1)製備之竹葉抽提物之1 〇毫克/毫升水溶 液3 00微升，裝入micron 3000 cut(阿米控（7 3 y )公司 製）’以10000 rpm離心9 0分，製備通過濾膜之部分（下層部 分）。另外，殘留於上層之部分，再溶解於300微升之蒸餘 -58- 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1313605 A7 B7 五、發明説明（ 水’製備上層部分。 實施例2 將洋忽之茶色薄皮5克懸浮於蒸餾水i 〇〇毫升，於丨〇〇。〇保 溫15分後’除去洋葱薄皮，得5%洋葱薄皮抽提物。 實施例3 將銀杏茶葉（100% GINKGO、BILOBA TEA :商品名 GINGOTON、Gingoton公司 ’ Gardena OA 90248 USA)3 克 懸浮於蒸餾水200毫升，於l〇〇t保溫15分後，以過濾除去 銀杏茶葉’得上清液。將此上清液冷凍乾燥後，溶解於8毫 升蒸餾水，得銀杏茶葉抽提物》 實施例4 (1 )將實施例1 - ( 1)製備之竹葉抽提物（試樣* )、實施例 i-(2)製備之下層部分（試樣来）上層部分（試樣套）測定HGF 產生增強活性，將懸浮於含1 0 %胎牛血清之DME培養基中 使成1X105細胞/毫升之MRC-5細胞（CCL 171 :大曰本製 藥杜製，code. 02-021 )500微升裝入4 8孔之細胞培養皿中， 於3 7 °C、5 % C02存在下培養2 4小時後，交換成含1 %胎牛 血清之DME培養基。其後，添加試樣，再培養2 4小時後， 回收培養基，使用 Quantikine Human Hepatocyte Growth Factor (HGF) ELISA套組（船越（7十3シ）公司製，Code. RS-0641-00)，測定培養基中之HGF之量。HGF之產生量作 為負對照以100%表示。添加使試樣*最終濃度為0.001、 0.01、0.1、1微克/毫升，使試樣*、♦最終濃度為1、 10、100微克/毫升。作為負對照’添加與試樣同量之蒸餾 -59- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公爱） 1313605 A7 B7 五、發明説明（ 水。HGF之產生量作為負對照1 00 %表示。試樣*之結果示 於表1，試樣来、♦之結果示於表2。實驗全部以2份進行’ 採用其平均值。如表1、2所示，此等之試樣增強HGF之產 生。尤其試樣*及♦添加群，HGF之產生量增加很強。藉 由此，竹葉抽提物顯示有增強HGF產生之活性。另外，由 上層部分中有HGF產生增強活性，比分子量3000高分子之 物質，可認定誘導HGF產生之活性。 表1 試樣*滚度（#g/ml) HGF產生量(％) 0 100 0.001 123 0.01 118 0.1 182 1 570 (但，對照組之HGF產生量為8.79毫微克/毫升。） 表2__ 試樣濃度Ug/ml) 試樣来之HGF產生量(％) 試樣♦之HGF產生量(％) 0 100 100 1 106 417 10 109 584 100 216 476 適用中國國家標準(CMS) A4規格(210 X 297公发 1 -60- 1313605 A7 B7 五、發明説明（ (但’對照組之HGF產生量為9.99毫微克/毫升。） (2 )將細切之竹葉約5克與5 0 %丙酮7 0毫升一起攪摔1 5分 以上，以吸收過濾所得抽提液，再以同量溶媒抽提殘渣。 與實施例4 - ( 1)同樣之方法調查此粗抽提液之H G F產生増強 活性時，如表3所示確認活性。將粗抽提液減壓濃縮，濃縮 液以水稀釋20倍，將其一部分供予1〇毫升份之安巴來特 (Τ >八一今彳卜）XAD-2(歐加諾（才小力’ / )公司製），以 30%、40%、50%、60%甲醇水溶液及甲醇各30毫升依次 落離。各溶離份測定HGF產生誘導活性時，4〇 %甲醇、 3 0 %甲醇溶離份確認了活性。將3 0 %、4 0 %甲醇溶離份濃 縮，使乾，供予二氧化矽管柱層析，以氯仿：甲醇：乙酸 =3 : 1 : 2.5 %展開溶離，各取1 〇毫升。 以1H-NMR、FAB-MS分析之結果，於第19〜士、 J 5支 < 溶離 份’可彳寸含南濃度之異兹草素（isoorientin)，如本^ 衣* 4所示， 此溶離份可確認HGF產生增強活性。
^-NMR isoorientin ： σ Ί.51 (1Η, dd, J 8, 2Hz), 7.55 (lu , ’ d，J 2Hz), 7.02 (1H，d，J 8Hz)，6.81 (1H，s), 6.63 (1H，d j ’ δΗζ), 4.74 (1H，d，J 10Hz)，4.19 (1H，t, J 4.5Hz)。 FAB-MASS 449 (M+H) -61 -
本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 1313605 A7 B7 五、發明説明（ 表3 竹葉粗抽出液(％、 HGF產生量(％) 0 100 0.1 195 1 463 (但’對照組之HGF產生量為9〇9毫微克/毫升。） 表4 異歐里斯汀含有部分(〇/0) HGF產生量(％) 0 100 0.1 131 1 318 (但’對照組之HGF產生量為9.62毫微克/毫升。） (3)將市售之乾李子約3〇〇克與甲醇5〇〇毫升一起以混合機 磨碎’以吸引過濾得濾液。將此濾液1毫升濃縮使乾，溶於 1愛升之DMSO之李子粗抽提液經調查HGF產生增強活性， 如表5所示可確認活性。 將所得粗抽提液濃縮，除去抽提溶媒，以水稀釋成1升， 供予200毫升之安巴來特xaD-2(歐加諾公司製），以500毫 升H2〇洗淨後’以〒醇溶離吸著部分，所得之溶離部分經 濃縮後，溶於少量水後，供予Cosmosil 140C丨s-〇PN(拿卡 來鐵斯克（十力今 < 千只夕）公司製）’以水與2 5 %之乙腈水 溶液，合計8〇〇毫升之梯度溶離各取約1 〇毫升。所得之溶 -62 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210><297公爱) ' 1313605 A7 B7
離份以1 Η - NMR分析之結果，第2 6 ★ 4 1支〜弟4 8支足部勿，分別得含高濃 — 表6所示，可確認
酸、4 -咖啡醯基奎寧酸之溶離份，分別"^之5 -咖啡醯基奎争 HGF產生增強活性。 U
H-NMR 5-caireoyl-quinic 7，J mwzj，/.19 (1H S), 7.12 (1H, d,J8Hz), 6.93 (1H, d, J 8H2), 5.40 (1H； m； 4.18(1H，m)，3.77(1H，dd，J9,5,4,5Hz)，22〜i6(5H，m) ’ 4-caffeoyl-quimc acid ： σ 7.49 (1H, d, J 15.5Hz), 7.04 (lH, d, J 4Hz), 6.99 (1H, dd, J 8, 4Hz), 6.73 (1H, d, J 8Hz), 6.27 (1H, d, 16Hz), 4.65 (1H, dd, J 8, 3Hz), 4.08 (1H, m), 2_2〜1.6 (5H, m) 表5 李子粗抽出液(％) HGF產生量(％) 0 100 0.01 111 0.1 214 1 306 (但，對照組之HGF產生量為8.02毫微克/毫升。） -63- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 1313605 A7 B7 五、發明説明（61 表6 試料 濃度(mg/ml) HGF產生量(％) 5-咖啡醯基奎寧酸 0 100 0.01 111 0.1 321 高含量4-咖啡醯基奎寧酸之部分 0 100 0.01 103 0.1 142 (但，對照組之HGF產生量為9.98毫微克/毫升。） (4)將市售之青花菜約300克與5 0 %乙醇水溶液3 50毫升一 起均一化，以過滤得滤液。將殘法以5 0 %乙醇水溶液3 5 0毫 升再度均一化，匯集所得濾液，減壓濃縮成1 50毫升。此濃 縮液與實施例4 - ( 1)同樣地調查HGF產生增強活性時，如表 7所示確認HGF產生增強活性。 表7_ 青花菜粗抽出液(％)_HGF產生量(％)_ 0 100 0.01 105 0.1 173 1 258 (但，對照組之HGF產生量為6.80毫微克/毫升。） 實施例5 -64- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1313605 A7 B7 62 ) 五、發明説明（ 實施例2製備之洋友'薄皮柚提物（試樣* )，與實施例4 _( 1 ) 同樣方法檢討於實施例3製備之銀杏葉抽提物（試樣* )之 HGF產生增強活性。試樣分別以蒸餾水稀釋1、1 〇、丨〇〇 倍’分別將稀釋液5微升添加於培養基。作為負對照組，添 加與試樣同量之蒸餾水。作為HGF之產生量，負對照組以 100 %表示。其結果示於表8 ^實驗全部以2份進行，採用其 平均值。如表8所示，試樣*、来增強HGF產生。由此，洋 葱薄皮抽提物、銀杏葉抽提物顯示有HGF產生增強活性。 表8 試才度 〇 100倍稀釋 10倍稀釋 1倍稀釋 土樣*之HGF產生量(％)試樣睾之HGF甚在吾 100 122 266 248 (但’對照組之HGF產生量為1〇_〇1毫微克/毫升 100 214 358 199 實施例6 (1) 作為菊科植物之艾嵩’收獲笹春艾嵩後，使用使3年 熟成之物’水洗該熟成物後’以蒸氣力σ熱方式之抽提機， 於⑽〜H)5t進行7小時之熱水抽提，製備^抽提物。再 將此㈣物蒸㈣小時’使成Μ ’其次以製錠機旋劑 化。
(2) 將實施例6-(1)製備之錠劑（泉湖舍D $ 社製）粉碎之粉 -65 各紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1313605 A7 B7 五、發明説明（63 末1 5.563克懸浮MG0毫升氣仿，過滤、回收Μ部分反 覆此操作2次，自此操作所得之不溶部分完全除去乙醇，縣 浮於⑽毫升錢水中。此懸浮於 遽。毅中添加2.5倍量之乙醇，於·2〇t冷卻後，於低溫 離心’得沉澱。將此沉救溶於藥餘水，冷束乾燥，得含粉 末狀之糖之部分。 (3)與實施例4_⑴同樣之方法檢討於實施例6•⑺製備 之签春艾嵩抽提物之HGF產生增強活性。添加使甚春艾嵩 抽提物最終濃度為1、i 〇、1〇〇微克/毫升。作為备對昭 組，添加與試樣同量之蒸餘水。HGF之產生量，作為負對 照組以100%表示。其結果示於表9。實驗全部以2份進行， 抹用其平均值。如表9所示，笹春艾嵩抽提物增強时F產 生0
HGF產生量(％) (但，負對照組之HGF產生量為5.27毫微克/毫升 實施例7 U)將明日葉乾燥品（阪本漢方堂杜製）48〇克以i升乙酸乙 -66 丨X 297公釐） 1313605 A7 __ _ B7 五、發明説明（^ ) 64 酯抽提2次，以1升乙醇柚提2次，其殘渣中加2升水於6 0。(： 抽提1小時。將抽提濾液濃縮成250毫升後，添加乙醇5 0毫 升’除去不溶物質後，將所得上清液減壓濃縮。將濃縮物 之約一半量供予XAD - 2 (歐加諾公司製）300毫升，以水600 毫升洗淨後，以3 0 %甲醇600毫升（溶離份1 )、6 0 %甲醇 500毫升（溶離份2 )、100 %甲醇600毫升（溶離份3 )之順序階 段性溶離吸著部分。使此等溶離液乾固後，分別溶於5 〇毫 升之水，以與實施例4 - ( 1)同樣方法，測定各部分之HGF產 生增強活性。但，添加使各別之部分之最終濃度為0.0 1、 〇· 1、1 %。其結果示於表1 〇。實驗以2份進行’採用其平均 值。如表1 0所示，此等溶離份任一者皆顯示HGF產生增強 活性。 表1 0 試樣 最終濃度(％) HGF產生量(％) 溶離份1 0.01 111 0.1 150 1 364 溶離份2 0.01 162 0.1 223 1 388 溶離份3 0.01 107 0.1 145 1 274 (但，對照組之HGF產生量為10.88毫微克/毫升。） -67- 本紙張尺度適用中國國家標苹(CNS) A4規格(210X 297公釐） 1313605 A7 ___ B7 五、發明説明（ ） 65 } (2 )另外’將溶離份3於矽膠板（默克（/小少）公司製）上 展開’以丁醇：乙醇：乙酸：水=丨〇 : i 1 : 1為展開溶 媒展開，進行溶離，以與實施例4-(1)同樣方法測定各點之 HGF產生增強活性。其結果於Rf值〇·3附近於254 nm顯示吸 收之化合物（以下’示為化合物（丨有HGF產生增強活性 存在。以1 H-NMR解析此化合物（1)時，如第1圖所示與氯 原酸標品（夕戈馬（シ/ Y )公司製）一致，確認化合物（1 )為 氯原酸。又’以與實施例4 - ( 1)同樣方法，檢討氯原酸標品 之HGF產生增強活性’如表1 1所示，確實地確認其之hgf 產生增強活性。 表1 1 氯原酸濃度（#Μ) HGF產生量(％) 0 100 1 105 10 122 100 302 500 479 1000 624 (但’負對照組之HGF產生量為8 · 1 〇毫微克/毫升。） (3)另外，將氣原酸標品作為標準品，以HPLC(TSKgel ODS-80Ts(柬梭公司製）、A液：水（含〇_i% TFA)、B液： 5 0 % 乙腈（含 〇. 1 % TF A )、0 分-B 2 5 %、2 0 分-B 7 5 % )分 -68- 本紙張尺度適用中國國家標率(CNS) A4規格(210 x 297公釐） 1313605 A7 B7 五、發明説明（ 析含於溶離份1〜3中之氯原酸量， ，其結果示於表1 2。 表1 2 溶離份1 7.5 溶離份2 35.7 溶離份3 5.3 又’自表10、12之結果’含於溶離份卜3之氯原酸濃度 與各溶離份之HGF產生增強活性之相關關係示於圖2，自表 1 1之結果，氯原酸標品濃度與HGf產生增強活性之相關關 係示於圖3。此等之相關關係大致一致。自此確認各溶離份 之HGF產生增強活性主藉由氯原酸。又，於圖2、圖3，橫 轴表鼠原濃度之對數，縱轴表HGF濃度。 實施例8 以5 0 %丙酮500毫升將艾嵩乾燥品（阪本漢方堂杜製）4 〇克 抽提3次後’減壓濃縮至約3 5毫升。濃縮液中添加丨〇 %檸 檬酸水溶液，以乙酸乙酯1〇〇毫升抽提3次後，以河的〇4將 有機層乾燥、減壓濃縮。濃縮物供予二氧化碎層析，以氯 仿：甲醇：乙酸=2 : 1 : 1為展開溶媒，各取8毫升。所得 之溶離份7〜13 ’匯集、減壓濃縮後，以氯仿：甲醇：乙酸 =1 : 1 : 0.05為展開溶媒’於矽膠板上展開，回收於值 0_5附近之於UV 254 nm顯示吸收之物質（以下稱為化合物 (2)) 225毫克。以1H-核磁共振（NMR)光譜儀（JNM-A500 : 曰本電子公司製）構造解析此物質之構造。 -69- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1313605 A7 B7 五、發明説明（ H-NMR : 〇 7.46 (1H, d, J 15.5Hz), 7.45 (1H, d, J 15.5Hz), 7.02 (1H, m), 7.00 (1H, m), 6.93 (2H, m), 6.72 (1H, d, J 8.5Hz), 6.70 (1H, d, J 8.5Hz), 6.20 (1H, d, J 15.5Hz), 6.17 (1H, d, J 15.5Hz), 5.33 (1H, td, J 10.5, 4.5Hz), 5.13 (1H，m)，3.68 (1H，dd, J 10, 3Hz), 2.2-1.6 (5H, m)。 圖4表示1 h-NMR光譜。於圖4，橫軸表化學位移值 (ppm )，縱軸表信號強度。自此等結果，確認化合物（2)為 3，5 -二咖啡醯基奎寧酸。以與實施例4 - ( 1 )同樣方法’檢討 3，5 ·二咖啡醯基奎寧酸之HGF產生增強活性。明白其結果 如表13所示，3,5 -二咖啡醯基奎寧酸具HGF產生增強活 性。 表1 3 3,5-- 办啡醯基奎寧酸濃度(；zM) HGF產生量(％) 1 142 10 206 100 290 (但，對照組之HGF產生量為6.27毫微克/毫升。） 實施例9 (1)將艾嵩乾燥品（阪本漢方堂社製）丨〇克碎斷’以氯仿 ⑽毫升抽提5次，以乙醇100毫升抽提5次之殘渣中加水 1 50毫升’於6 〇。〇抽提1小時 .人，為 ^ 7 件抽才疋濾欲。於此濾液13 1 宅升中加326毫升乙醇，於_20。广輕3?"·»。、^ 、2 U C静置3 0分後，進行離心’ -70- 1313605 A7 B7 五、發明説明（ 將所得上清液冷凍乾燥，得艾嵩之熱水抽提低分子部分（溶 離份4 )。將此溶於水4 5毫升，添加使最終濃度為〇 〇 1、 0 1 % ’以與實施例4 - ( 1 )同樣方法，檢討hgf產生增強活 性。其結果如表1 4所示，明白溶離份4中具Hgf產生增強 活性。 表1 4 溶離份4最後濃度 0.01 HGF產生量(％) 258
(^)又’以與實施例7·(3)同樣方法定量含㈣離份4之氣 原酸、3,5-二咖啡醯基奎寧酸含量，試樣原液中分別含7.7 mM、13 mM之濃度。自以上之結果，明白氯原酸•二 咖啡酿基奎寧酸為分別藉由艾嵩抽提物之咖產生增強活 性物質之一。 g 實施例1 0 (1)將國產菊花（星 3林...工；知運j A南部叮製兄 冷来乾燥後’於碎斷物中加丨〇〇〇毫升素 w Λ ν乳访，於室溫進行抽 挺？去殘澄之液體部分’以旋轉蒸發器濃縮使乾 仿抽提部分。其次，於殘渣中加5 〇〇毫 ' 抽提。以旋轉蒸發器將除去殘澄之液體部：濃=進行 乙醇插提部分。其次，於殘法中力"=使乾’得 Μ毛升蒸餾水’於㈧ -71 - 本紙張尺度適财❿家標準(CNS) M規格(⑽x 29?公董) 1313605
C抽k 2 ^時。除去殘渣之液體部分中加倍量之乙醇， t - 30 C靜置2小時。其後，以旋轉蒸發器將以i〇,〇〇〇g離 ^除去’儿,知物之液體部分濃縮使乾，得國產菊花之水抽提 部分。 」2)以與f施例4-(D同樣之方法，檢討實施例10-(1)所 仵（國產菊花之水抽提部分之HGF產生增強活性。添中使 國產莉花<水抽提部分之最終濃度為1%。其結果如表15所 示月白國產菊花之水抽提部分中有HOF產生增強活性。 表1 5 抽提部分最後濃彦(mg/ml)
(但’對照組之HGF產生量為12.5 1毫微克/毫升 (3)將中國產菊花（中國，於大連市之當地市場購得克 冷凍乾燥後，於碎斷之物中加500毫升氯仿，於室溫進行抽 提。以旋轉蒸發器將除去殘渣之液體部分濃縮使乾，得氯 仿抽提部分。其次，於殘渣中加5〇〇毫升乙醇，於室溫進行 抽提以旋轉蒸發器將除去殘渣之液體部分濃縮使乾，得乙 醇柚提部分。其次’於殘渣中加300毫升蒸餾水，於6〇χ： 抽提2小時。於除去殘渣之液體部分，加2.5倍量之乙醇， 於-30^：靜置2小時。之後’以10,000G之離心分成沉澱物 與液體部分。液體部分以旋轉蒸發器濃縮使乾，得水抽提 部分。 -72-
本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐） 1313605 A7 B7 五、發明説明（70 (4)實施例10-(3)所得之中國產菊花之水抽提部分，以與 實施例4 - ( 1 )同樣方法，檢討HGF產生增強活性。添加使中 國產菊花之水抽提部分最後濃度為丨.5、1 〇 %。其結果，如 表1 6所示’明白中國產菊花之水柚提部分中有HGF產生增 強活性。 表1 6 中國產菊花之水抽提部分最後濃度(毫克/毫升） HGF產生量(％) 0.71 267 3.55 373 7.10 367 (但，對照組之HGF產生量為12 ·51毫微克/毫升》) 實施例1 1 以與實施例4 - ( 1 )同樣方法，檢討後述之實施例3 8 _ (丨）製 備之紫鬱金乙醇抽提部分_2、水抽提部分_丨、水抽提部分_ 2之HGF產生增強活性。添加使乙醇抽提部分_ 2之最後濃度 為ίο微克/毫升，水高分子部分_〗之最終濃度為132、132〇 微克/毫彳’水高分子部分_2之最後濃度為22、22微克，毫 升。HGF之產生量，作為負對照組表示為_%。其結果示 於表17。實驗全部以2份進行，採用其平均值。如表"所 示，紫t金乙醇抽提部分.2、水柚提部分]、水抽提部分_ 2增強HGF產生。 -73- 1313605 A7 B7 五、發明説明（ 表1 7 試樣 濃度(微克/毫升） HGF產生量(％) 紫鬱金乙醇 0 100 抽提部分-2 10 157 紫鬱金水抽提部分-1 0 100 132 185 1320 324 紫鬱金水抽提部分-2 0 100 2.2 182 22 207 (但，對照組之HGF產生量為13.99毫微克/毫升。） 實施例1 2 (1)將春菊冷凍乾燥，於粉碎物1 0克中加氯仿100毫升攪 拌過滤、回收殘逢。_此氣仿之添加，殘逢之回收共進次5 次，殘逢中加乙醇10 0毫升、擾拌、過滤、回收殘查。此乙 醇之添加、殘渣之回收共進行5次。殘渣中加蒸餾水100毫 升，於6 0 °C保溫1小時後，冷凍乾燥經過濾之濾液，得試 樣。將此抽提物溶於蒸餾水，以與實施例4 - ( 1 )同樣方法調 查HGF產生增強活性，如表1 8所示_ 表1 8 f確認活性。 溶離份4最後濃度(微克/毫升） HGF產生量(％) 0 100 1 125 10 148 100 314 (但，對照組之HGF產生量為8.2 1毫微克/毫升。） -74- 本紙張足度適用中國國家標準(CNS) A4規格（210X 297公釐） 1313605 A7 B7 五、發明説明（ :市售之春菊900克冷;東乾燥，與8〇%乙醇2升一起於 混合機磨碎，以紗布進行過慮 件抽&硬。褚由減壓濃縮 此抽k液至200 ¾升，製備春菊之粗抽提液。 其次’將所得粗抽提液！⑻毫升份供予安巴來特副韻 脂（歐加諾公司製）2〇〇毫升，依次以水、甲醇3q%、4㈣、 60%之各水料、甲醇分別5⑻毫升溶離。各別之溶離份濃 縮至500耄升，以與實施例4 Μ、π接、 只犯灼4 (1)同樣万法，確認各溶離份 之HGF產生增強活性’如表19所示，於6()%甲醇溶離份之 濃縮物可見到HGF產生增強活性。 又，添加使此濃縮物為〇·1%、1〇%(容量比）。 此6 0%甲醇溶離份以iH_NMR解析，明白其含高濃度之 3，5 -二咖啡醯基奎寧酸。 表 1 9_____ 試樣濃度(％) 〇 〇1 1 HGF 產生量(％) ion_220_349 (但，對照組之HGF產生量為8.22毫微克/毫升。） 實施例1 3 將小鼠纖維芽細胞L - Μ細胞（ATCC CCL-1.2 )，以1.5 X 1 05細胞/毫升懸浮於含〇. 5 %細菌腺（八夕卜久彳卜y )(紀夫 可（半、7：〇公司）之”199培養基（1€]^公司製），於96孔皿中 各0.1毫升無菌培養。培養3天後’除去培養基，置換成含 0.5%牛血清白蛋白（夕戈馬公司製）之Μ 199培養基。於此添 -75- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(21〇x 297公釐） 1313605 A7 B7
五、發明説明（ 加自菊科紅花（Carthamus tinctorius LINNE)之花抽提所得 之黃色色素（粉末山黃2號（寸 > 工口 一 Νο·2)、三榮源 F · F _ I (工7 •工7 · 7 4 )公司製）使成最終濃度i 25、 2.5、5毫克/毫升’培養2 0小時。培養終了後，以酵素免疫 測定法（NGF Emax Immuno Assay System :普洛梅加（口 〆力'）公司製）測定培養液中之神經增殖因子之濃度。以無 添加試樣之細胞培養液中之NGF濃度為100 %，表示NGF產 生增強。實驗以2份進行，採其平均值。其結果，紅花黃色 色素濃度依存性地增強L - Μ細胞之NGF產生。其結果示於 表20。 表20 紅花黃色色素濃度(毫克/毫升） NGF產生量(％) 0 100 1.25 277.6 2.5 441.3 5 808.4 (但，對照組之NGF產生量為0.507毫微克/毫升。） 實施例1 4 使用逆相層析法將實施例1 3記載之紅花黃色色素中之活 性成分純化分離。以下表示其條件。管柱使用TSK gel ODS-80Ts (徑21_5毫米X長30厘米：東梭公司製）。溶媒 A ( 0.1 %三氟乙酸水溶液）與溶媒b (蒸餾水與乙腈以容量比1 -76- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS> A4規格(210X297公釐) 1313605 A7 --- B7 五、發明説明（ ) ' - 74 ； 對1 合，含〇· 1 %三氟乙酸）之溶離比，由〇分至$ 〇分將溶 媒B比直線性地由〇%至1〇〇%，繼續保持溶媒B比於 100 % 1 5分，最後將溶媒B比保持於0 % 1 5分。溶離速度為 5¾升/分’檢出於21 5 nm進行。每3分各採取溶離份。以與 實施例1 3同樣方法，測定各溶離份之NGF產生增強活性。 其結不’明白含32.5分與41.8分之峰之溶離份有NGF產生 增強活性。對含32.5分之峰之溶離份進行解析，檢出分子 量613之信號。另外，ih_nmr光譜、i3c_NMR光譜解析之 結果’確定活性成分為紅花明A(分子量612.53)。如此，以 與實施例1 3同樣方法測定所得之純化紅花明a之NGF產生 增強活性。添加使精製紅花明A為2.5毫克/毫升。其結果， 純化之紅花明A增強L - Μ細胞之NGF產生。對紅花明A之結 果’示於表21，對含41.8分之峰之溶離份之結果，示於表 11。 表2 1 紅花花A濃度(mg/ml) NGF產生量(％) 0 100 2.5 130.7 (但，對照組之NGF產生量為0.739毫微克/毫升。） -77- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1313605 A7 B7 五、發明説明（ 表2」__ 一黃色色素溶離份濃度(毫克/毫升)_NGF產生 0 100 125 350.7
(但，負對照組之NGF產生量為〇 736毫微克/毫升。） 實施例1 5 於菊科紅花（Carthamus tinctorius LINNE :阪本漢方堂 製）1〇克碎斷物中加800毫升氯仿，於室溫進行抽提。以旋 轉蒸發器將除去殘渣之液體部分濃縮使乾，得氯仿抽提部 分°其次，於殘渣中加14〇〇毫升乙醇，於室溫進行抽提。 以旋轉蒸發器濃縮除去殘渣之液體部分使乾，得乙醇抽提 部分。其次，於殘渣中加15〇毫升蒸餾水，於6〇度進行2小 時柚提。於除去殘渣之液體部分加2 5倍量之乙醇，於_ 3 〇 C靜置2小時。以旋轉蒸發器將以丨0,000g離心除去沉殿物 之液體部分濃縮使乾’得水抽提部分。以與實施例1 3同樣 方法測定如此製備之各部分之NGF產生增強活性。添加使 紅花氯仿抽提部分為0.393、0_785毫克/毫升。添加使乙醇 抽提部分為0.313、0.625毫克/毫升。添加使水抽提部分為 2·76、5.51毫克/毫升。其結果示於表23。紅花氯仿抽提部 刀、乙醇抽提部分、水抽提部分濃度依存性地增強L - μ細 胞之N G F產生。 -78- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210 X 297公釐） 1313605
AT B7 五、發明説明（ 表23 試樣 濃度(mg/ml) NGF產生量(％) 紅花氣仿抽提部分 0 100 0.393 535.6 0.785 986.0 紅花乙醇抽提部分 0 100 0.313 345.3 0.625 1449.5 紅花水抽提部分 0 100 2.76 477.8 5.51 806.3 (但，負對照組之NGF產生量為0.190毫微克/毫升。） 實施例1 6 將國產菊花（Chrysanthemum morifolium、星菊：J A 音森 經濟連J A南部町製）1 5克冷凍乾燥後，於碎斷物中加1 000 毫升氯仿，於室溫進行抽提。以旋轉蒸發器濃縮除去殘渣 之液體部分使乾，得氯仿抽提部分。其次，於殘渣中加500 毫升乙醇，於室溫進行抽提。以旋轉蒸發器濃縮除去殘渣 之液體部分使乾，得乙醇抽提部分。其次，殘；ί'查中加1 5 0毫 升蒸顧水水，於6 0 °C抽提2小時。於殘逢之液部分中加2.5 倍乙醇，於-3 0 °C靜置2小時。其後，以旋轉蒸發器將以 1 0,000G離心除去沉澱物之液體部分濃縮使乾，得水抽提部 分。以與實施例1 3同樣方法測定如此製備之各溶離份之 NGF產生增強活性。添加使菊花氣仿抽提部分為1.8、 3.6、7 _ 2毫克/毫升。添加使菊花乙醇抽提部分為0.5 1 7、 -79- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格（210X 297公釐) 1313605 A7 B7 五、發明説明（77 ) 1.03、2.07毫克/毫升。添加使菊花水抽提部分為16.8、 3 3.7、67.3毫克/毫升。其結果，菊花氯仿抽提部分、乙醇 抽提部分、水抽提部分濃度依存性地增強L - Μ細胞之NGF 產生。此等結果示於表2 4 ~ 2 6。 表24 國產菊花氯仿抽提部分濃度(mg/ml) NGF產生量(％) 0 100 1.80 209.6 3.60 447.3 7.20 1019.9 (但，對照組之NGF產生量為0.474毫微克/毫升。） 表2 5 國產菊花乙醇抽提部分濃度(mg/ml) NGF產生量(％) 0 100 0.517 164.6 1.03 195.3 2.07 265.1 (但，對照組之NGF產生量為0.474毫微克/毫升。） -80- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格（210 X 297公釐） 1313605 A 7 _ B7 五、發明説明（ 表2 6 國產萄化水抽提部分濃度(mg/ml) NGF產生量(％) 0 100 16.8 200.2 33.7 257.6 67.3 336.9 (但’對照組之NGF產生量為〇.474毫微克/毫升。） 實施例1 7 (1) 將國產菊花（星菊：JA青森經濟連ja南部町製）245克 冷;東乾燥後’於碎斷物中加900毫升氣仿、於室溫進行抽 提，分成氯仿抽提物與氯仿抽提殘渣。以旋轉蒸發器濃縮 氣仿抦提液’得花氣仿抽提物。 (2) 將菊花氯仿抽提物供予二氧化矽，以氯仿：甲醇 = 100 : 1 ( 1250毫升）為溶離溶媒溶離’取每一溶離份各8毫 升。將所得溶離份44〜99減壓濃縮，#國產菊花氯仿抽提 邵分A。其;欠將甲醇（糊毫升）作為溶離溶媒，將溶離物減 壓濃縮’得國產菊花氯仿抽提部分B。 (3) 以實施例13同樣方法測定實施例17_(2)製備之a部 分、B部分之臟產生増強活性。添加使A部分為〇5、 ΚΟ'ΙΟ毫克/毫升。添加使b部分為 _ 尺1刀為0.5、1.0、2.0毫克/毫 升。其結果示於表2 7。A部分、B砘八Α η刀β邵分濃度依存性地增強 L-M細胞之NGF產生。 ® -81 - 1313605 A7 B7 五、發明説明（ 表27 _?式樣____濃度(mg/ml)__NGF 量(〇/〇) 國產菊花氣仿抽提部分A ~ q 0.5 114.0 1.0 304.6 .............................. 2.0 677,〇 國產為化鼠仿抽提部分B q jqq ...... 0.5 121.3 1.0 134.9 ____2.0_ 15^4 (但’負對照組之NGF產生量為〇. 190毫微克/毫升。） 實施例1 8 (1) 再將實施例1 7-(2)製備之國產菊花氯仿抽提部分A供 予二氧化矽層析，依乙酸乙酯：己烷=1 : 1〇(5〇〇毫升）、 1 · 8(500 ¾ 升）、1 : 6(500 毫升）、1 : 4(500 毫升）之順序 階段性地溶離，各1溶離份取6毫升。將所得之溶離份 264〜290減壓濃縮，得國產菊花氯仿抽提部分A_a。將所^ 之溶離份206〜24〇減壓濃縮，得國產菊花氣仿抽提部分A_ b。將所得之溶離份241〜263減壓濃縮，得國產菊花氯仿抽 提部分A-c。繼續將所得溶離份291〜32〇，以f醇（4〇〇毫升） 為展開溶媒，合併所得之溶離物減壓濃縮，得國產菊^氯 仿抽提部分A - d » “ (2) 以與實施例13同樣之方法測定實施例18_(1)製備之部 分A.a '部分A_b、部分A_c、部分A_d之卿產生增強活 性。添加使部分Α-a為0·125、〇.25毫克/毫升。添加使部分 I_____ -82- U張尺歧巧《时料(CNQA^i^x297公釐} 1313605 A7 B7 五、發明説明（βη )
oU A-b為0.25、0.5毫克/毫升。添加使部分A-c為0.25、0.5毫 克/毫升。添加使部分A-d為0.25、0.5毫克/毫升。其結果 示於表28、29。部分A-a、部分A-b、部分A-c、部分A-d 濃度依存性地增強L - Μ細胞之NGF產生。 表2 8 試樣 濃度(毫克/毫升） NGF產生量(％) 國產菊花氯仿抽提部分A-a 0 100 0.125 120.0 0.25 280.6 國產菊花氯仿抽提部分A-b 0 100 0.25 216.1 0.5 959.1 國產菊花氯仿抽提部分A-c 0 100 0.25 124.4 0.5 224.8 (但，負對照組之NGF產生量為0.489毫微克/毫升。） 表29_ 國產菊花氯仿抽提部分A-d濃度(mg/ml)_NGF產生量(％) 0 100 0.25 157.1 0.5 409.6 (但，對照組之NGF產生量為0.5 75毫微克/毫升。） 實施例1 9 -83- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格（210 X 297公釐） 1313605
五、發明説明（ (1)將實施例1 8 - π、_從· + m 士 》· m ^ 國產菊花氣仿抽提部分A-a， 以鼠仿.甲辱=5〇: ias_0ej,、 侑 碉溶媒，於薄層層析上展開。取
Rf值0.9〜〇·95之部分，以屎叫； ， 仿;^浐邱八Λ 展開洛媒再溶離，得國產菊花氯
Hi 取R_55〜。·68之部分，以展開溶媒 0 3:之咋：國產/化乳仿抽提部分“-2。取以值。·3〇〜 Ο::，…展開溶媒再溶離，得國產菊花氯仿抽提部 ⑺以與實施例13同樣方法，測定實拖例i9_⑴製 分A-a]、邵分Α + 2、部分“_3之卿產生增強活性。 添加使部分為0·25、〇·5毫克/毫升。添加使部分八_ a-2成0.025、0.05毫克/毫升。添加使部分A.〕為^ 〇毫 /毫升。其結果示於表30。部分Α_“、部分A_a_2、部分 A - a - 3濃度依存性地增強L _ M細胞之nqf產生。 刀 表30 試樣 濃度(毫克/毫升）NGFgi 國產菊花氯仿抽提部分A-a-1 0 0.25 0.5 100 193.3 國產菊花氯仿抽提部分A-a-2 0 100 0.025 126.4 0.05 ..871.9 國產菊花氯仿抽提部分A-a-3 0 100 1.0 220.6 (但，負對照組之NGF產生量為0.183毫微克/毫升。 (%) 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) -84- 1313605
(3) 藉由質量分析計（DX 3〇2 ••曰本電子社製）以fab_ms 手法測足於貫施例1 9 - ( 1 )製備並於實施例1 9 _( 2 )確認活性 之國產菊花氯仿抽提部分A_a_2之質譜（MS)。基質使用硝 甲苄醇。其結果，檢出m/z 345 (M + H) +之峰。圖5表示國 產菊花氣仿抽提部分A-a_2tMS質譜。於圖5，橫軸表m/z 值’縱軸表相對強度。 (4) 使用核磁共振（nmr)光譜裝置（JNM-A500 :日本電子 社製）測定於實施例丨9_(〗）製備並於實施例丨9_(2)確認活 性之國產菊花氣仿抽提部分A_a_2之各種光譜，解析構 造。以下表示NMR之歸屬信號。 H-NMR : 5 1.42 (3H, d, J=7.0 Hz, 14-H), 1.85 (1H, dt, J=14.0, 2.5 Hz, 9-H), 1.88 (3H, t, J=1.5 Hz, 5'-H), 1.94 (1H, t, J=5.5 Hz, 1-H), 2.00 (3H, dd, J=1.5, 7.0 Hz, 4--H), 2.10 (1H, d, J=14.0 Hz, 9-H), 2.17 (1H, m, l〇.H), 2.29 (3H, s, 15-H), 2.96 (1H, dd, J=5.5, 10.〇 Hz, 5-H), 3.11 (1H, tt, J=3.0, 10.0 Hz, 7-H), 3.96 (1H, t, J=l〇.〇 Hz, 6-H), 5.25 (1H, dt, 1=2.5,10.0 Hz, 8-H), 5.63(1H, d, J=3.〇 Hz, 13-H), 5.94 (1H, brs, 3-H), 6.18 (1H, d, J=3.0 Hz, 13-H), 6.22 (1H, dq, J=1.5, 7.0 Hz, 3'-H) ° 但，將試樣溶於重氯仿，殘餘氣仿之化學位移值表示為 7.24 PPm。圖6表示國產菊花氣仿柚提部分α_^221η_ 画R光譜。於圖6，橫軸表化學位移值（ppm)，縱袖表信號 強度。 9 - ( 2 )確認活性之 (5)對於實施例19-(1)製備且於實施例t -85- 本泜張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐)_ 1313605 A7 B7 五、發明説明（ 國產菊花氣仿抽提部分A-a-2進行質譜、NMR光譜解析之 結果，確定活性成分為癒瘡内酯（2-酮基-8-當歸醯氧基-癒 瘡-3(4)，11(13)-二烯_12,6_内酯（分子量344))。 實施例2 0 (1) 將實施例1 8-( 1)所得國產菊花氣仿抽提部分A_b供予 薄層層析，以氣仿：甲醇=1〇〇 :丨為展開溶媒。取Rf值為 0.43〜0.57之部分，以展開溶媒再溶離，得國產菊花氣仿抽 提部分Α-b-l。 (2) 以與實施例1 3同樣方法，測定實施例2 〇 _ (丨）所得部分 Α-b-l之NGF產生增強活性。添加使部分〇25、 0.05毫克/毫升。其結果示於表3 i。部分A_b_丨濃度依存性 地增強L - Μ細胞之NGF產生。 表3 1 國產菊花氣仿抽提部分Α-b-l濃度(毫克/毫井） NGF產生量(％) 0 100 0.025 183.4 0.05 1053.3 (但’對照組之NGF產生量為0.183毫微克/毫升》) (3)藉由質量分析計（DX302 :曰本電子杜製）解析於實施 例2 0 - ( I )製備且於實施例2 0 - ( 2 )確認活性之國產菊花氣仿 抽提部分A - b - 1之質ΐ普（M S) ^基質使用硝甲爷醇。其結果 檢出m/z 345(Μ + Η) +之峰。圖7表示國產菊花氣仿抽提部分 -86- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210 X 297公釐) 1313605 A7 ___ —_ B7 五、發明説明（84 ) A-b-l之MS質譜。於圖7，橫軸表m/z值，縱軸表相對強 度。 (4) 藉由紅外線吸收（ir)光譜（fTIr_82〇〇pc :島津製作 所社製）解析於實施例2 0 - ( 1)製備且於實施例2 〇 - ( 2 )確認 活性之國產菊花氣仿抽提部分A - b - 1之構造。其結果檢出 1716.5 cm」、1774.4 cm·1之吸收。圖8表示國產菊花氯仿 抽提部分A _ b _丨之丨R光譜。於圖8，橫軸表紅外線波長之對 數，縱軸表透過率。 (5) 藉由1H-核磁共振（NMR)光譜（JNM-A500 :日本電子 社製）解析於實施例2 0 - (1)製備且於實施例2 〇 - (2 )確認活 性之國產菊花氯仿抽提部分Α-b-l之構造。 'H-NMR ： (5 1.66 (3H, s, H-15), 1.74 (3H, d, 1.0 Hz, H-14), 1.88 (3H, t, J3.i5. 1.5 Hz, J4，i5. 1.5 Hz, H-5'), 2.0 (3H, dd, Ι3·,4· 7.5 Hz, H-4'), 2.26 (1H, dd, Ja>b 13.5 Hz, J8_ 9 2.0 Hz, H-9), 2.45-2.5 (2H, m, H-2, H-9), 2.72 (1H, d, Ja,b 17.0 Hz, H-2), 3.09 (1H, d, J5> 6 10.0 Hz, H-5), 3.18 (1H, ddd, J6) 7 10.0 Hz, J7, 8 10.5 Hz, K7, 13 3.0 Hz, H-7), 3.4 (1H, s, H-3), 3.71 (1H, t, H-6), 4.92 (1H, dd, H-8), 5.52 (1H, d, H-13), 6.13 (1H, d, H-13), 6.18 (1H, qd, H-3*) 但’將試樣溶於重氯仿，殘留氯仿之化學位移值表示為 7.24 ppm。圖9表示國產菊花氯仿抽提部分 NMR光譜。於圖9 ’橫軸表示化學位移值（ppm)，縱軸表信 號強度。 (6) 藉由13C-核磁共振（NMR)光譜（JNM-A500 :日本電子 -87- 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐)
1313605 五 發明説明（ 85 A7 B7 1 I )解析於貫施例2 Q ’⑴製備且於實施例2卜⑺確認活 性：國產菊花氯仿抽提部分A_b_k構造。 NMR ’ 5 15.87 (C-4，），18.88 (C-15)’ 20.45 (C-5，）， (C 14), 33.18 (C-2), 41.45 (C-9), 51.39 (C-5), 56.59 (C-7), 64.33 (C-3) 66 7s (η ^ V ), b.78 (C-4), 69.64 (C-8), 77.93 (C-6), 120.62 (C-13)，128.0(c_2,)，i28 6i (ci)，mu (c•叫 136.95 (C-ll)，140.13 (C-3’)，167.0 (c_r)，16〇 9 (C12) 但，將試樣溶於重氯仿’殘留氣仿之化學位移值表示為 77.93 ppm。圖10表示國產菊花氯仿抽提部分 聰光譜。於圖10橫轴表示化學位移值（ppm),縱軸表信 號強度》 (7 )對於實她例2 0 - ( 1)製備且於實施例2 〇 _ ( 2 )確認活性之 國產菊花氯仿抽提部分八吡_丨進行質譜、IR光譜、1h_ NMR光譜、七-蘭汉光譜解析之結果，確定活性/分為癒 瘡内酯（3,4-環氧基_8_當歸醯氧基-癒瘡“（Μ)」"。）， —晞-12,6 -内醋（分子量344))。 實施例2 1 (1) 將實施例1 8 - ( 1)製備之國產菊花氯仿抽提部分a _ c供 予薄層層析，以氯仿：乙酸乙醋=1〇 : i為展開溶媒。取R'f 值0.33〜0.42之部分，以展開溶媒再溶離，得國產菊花氯仿 抽提部分A - c -1。 ’’ (2) 以與實施例13同樣方法，測定實施例21_(1)製備之部 分Α-c-l之NGF產生増強活性。添加使部分八-^丨為^乃、 0.5毫克/毫升。其結果示於表32 ^部分A-c-1濃度依存係 -88- 1313605 五、發明説明（86) A7 B7 --—--------- 地增強L - Μ細胞之NGF產生。 表32 國產菊花氣仿抽提部分八-(> 丨濃度(毫克/毫升） NGF產生量(％) 0 100 0.25 150.8 0.5 434.4 (但’對照組之NGF產生量為0.575毫微克/毫升。） 實施例2 2 (1)再將實施例18-(1)所得之國產菊花氣仿抽提部分A_d 供予二氧化矽層析，依乙酸乙酯：己烷=i : 3 ( 6〇〇毫升）、 1 : 2(600毫升）之順序階段性溶離，每溶離份各取6毫升。 將所得溶離份1〜43減壓濃縮，得國產菊花氯仿抽提部分a_ d-1。所得溶離份44〜73減壓濃縮，得國產菊花氯仿抽提部 勿A - d - 2。所得落離份7 4〜8 0減壓濃縮，得國產菊花氯仿 抽提部分A-d-3。所得溶離份124〜14〇繼續以甲醇（4〇〇毫升） 為展開溶媒，合併所得之溶離物減壓濃縮，得國產菊花氯 仿抽提部分A - d - 4。 ^
(2)以與實施例13同樣方法，測定於實施例22_(1)製備之 部分 Α-d-l、部分 A-d-2、部分 A_d_3、部分 A_d_4<NGF 產生增強活性。添加使部分A-d - 1為2.0毫克/毫升。添加使 部分A-d-2為0.5、1.0毫克/毫升。部分A_d_3為〇乃、〇 $ 毫克/毫升。添加使部分A-d-4為〇_5、1.〇毫克/毫升。其結 -89-
1313605 A7 B7 五、發明説明（87 ) 果示於表33、34。部分A-d-l、部分A-d-2、部分A-d-3、部分A - d - 4濃度依存性地增強L - Μ細胞之NGF產生。 表3 3 試樣 濃度(毫克/毫升) NGF產生量(％) 國產菊花氯仿抽提部分A-d-1 0 100 2.0 371.9 國產菊花氯仿抽提部分A-d-2 0 100 0.5 119.3 1.0 440.3 國產菊花氯仿抽提部分A-d-3 0 100 0.25 156.6 0.5 687.2 (但，對照組之NGF產生量為0.183毫微克/毫升。） 表34 國產菊花氣仿抽提部分A-d-4濃度(毫克/毫升） NGF產生量(％) 0 100 0.5 182.1 1.0 640.3 (但，對照組之NGF產生量為0.1 07毫微克/毫升。） 實施例2 3 (1 )將實施例1 7 - ( 2 )製備之國產菊花氣仿抽提部分Β供予 二氧化矽層析，以氯仿：甲醇=2 0 : 1 ( 600毫升）為展開溶 -90- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210X 297公釐）
裝 玎
線 1313605 A7
媒洛離，每1落離份各取6毫升。所得溶離份丨5〜2 9減壓濃 縮’得國產菊花氯仿抽提部分B - a。 以與只化例1 3同樣方法’測定製備之b _ a部分之ngf產 生増強活性。添加使B_a部分為1〇毫克/毫升。其結果示於 表3 5。B-a部分增強l-M細胞之NGF。 表3 5 1產菊花氣仿抽提部分B-a濃度(毫克/毫升） 0 1.0 100 358.0 (但，負對照組之NGF產生量為0.280毫微克/毫升 實施例2 4 (1) 於實施例1 6製備之氯仿抽提殘渣中加8〇〇〇毫升乙醇， 於罜溫進行乙醇抽提，分成菊花乙醇抽提液與乙醇抽提殘 渣。菊花乙醇抽提液以旋轉蒸發器濃縮，製備菊花乙 提物。 (2) 將實施例2 4 - ( 1)製備之菊花乙醇抽提物供予二氧化矽 層析，以氣仿：甲醇=9 : 1(6〇〇毫升）為展開溶媒溶離每 1落離份各取6毫升。所得之溶離份15〜22減壓濃縮，得國 產菊花乙醇抽提部分C。其次以甲醇（4〇〇毫升）為展開= 溶離’所得溶離物減壓濃縮，得國產菊花乙 吁询知：部分 D 0 (3) 以與實施例13同樣方法，測定實施例24-(2)製備、c -91 -
本紙張尺度ϋ财_家標邮卿 ——1 1313605 A7 ________ B7 五、發明説明（^) 部分、D邵分之N G F產生增強活性。添加使C部分為1, 〇毫 克/毫升。添加使D部分為2.0毫克/毫升。其結果示於表 36。C部分、D部分增強L-M細胞之NGF產生。 表36 試樣 濃度(毫克/毫升） NGF產生景(％) 國產菊花氯仿抽提部分c 0 100 .... 1.0 國產菊花氯仿抽提部分D 0 100 2.0 455.9 一 (但’負對照組之NGF產生量為〇_ 1 〇7毫微克/毫升。） 實施例2 5 將中國產菊花（自中國大連市之當地市場購入）2〇克冷凍 乾燥後，於碎斷物中加500毫升氣仿，於室溫進行抽提。以 旋轉蒸發器將除去殘渣之液體部分濃縮使乾，得氯仿抽提 部分’其次，於殘渣中加500毫升乙醇，於室溫進行抽提。 以旋轉蒸發器將除去殘渣之液體部分濃縮使乾，得乙醇抽 提邵分。其次，加300毫升蒸餾水於殘渣中，於6 〇度進行2 小時抽提。於除去殘渣之液體部分加2 · 5倍量之乙醇，於 3〇°C靜置2小時。其後，以l〇,〇〇〇G離心，分成沉澱物與液 體部分。液體部分以旋轉蒸發器濃縮使乾，得抽提部分 1。一方面，沉澱物再溶於蒸餾水，得水抽提部分_ 2。 , 如此 製備之各部分之NGF產生增強活性，以與實施例1 3同樣、 方法測定。添加菊花氯仿抽提部分，使成〇.丨丨4、〇 2 2 7 -92- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 1313605 A7 B7 五、發明説明（90 ) 0.454毫克/毫升。添加菊花乙醇抽提部分，使成0.241、 0.481、0.962毫克/毫升。添加菊花水抽提部分-1，使成 8.88、17.8、35.5毫克/毫升。添加菊花水抽提部分-2，使 成0.02、0.04毫克/毫升。其結果，菊花氣仿抽提部分、乙 乂 醇抽提部分、水抽提部分-1及2，濃度依存性地增強L - Μ細 胞之NGF。此等結果示於表3 7。 表3 7 試樣 濃度(毫克/毫升） NGF產生量(％) 中國產菊花氯仿抽提部分 0 100 0.114 168.2 0.227 297.1 0.454 912.5 中國產菊花乙醇抽提部分 0 100 0.241 326.5 0.481 450.1 0.962 582.5 中國產菊花水抽提部分-1 0 100 8.88 264.1 17.8 261.8 35.5 229.1 中國產菊花水抽提部分-2 0 100 0.02 135.0 0.04 187.3 (但，對照組之NGF產生量為0.516毫微克/毫升。） 實施例2 6 -93- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210 X 297公釐）
裝 町
線 1313605 A7
堂社卿⑹一㈣莖葉部(阪本漢方 y =克之碎斷物中加，毫升氯仿’於室溫進行抽 ^万H㈣邵分之料中加_毫升乙醇，於室溫進行 於除去液體部分之殘渣中加36〇毫升蒸餾水，於㈧ 進仃抽提2小時。於除去固形殘渣之液體部分令加2.5倍 =醇’於-3 0 t靜置2小時。其後，以1〇,〇〇〇(}離心，分^ 沉殺物與液體部分。液體部分以旋轉蒸發器濃縮使乾，得 明日葉莖葉部水抽提部分]。一方面，沉爽物再溶於蒸餘 水’得明日葉莖葉部水抽提部分士以與實施_同樣方 法測定，如此製備明日葉莖葉部水抽提部分_丨及2之NGF產 生增強活性。添加明日葉莖葉部水抽提部分使成2.59、 5 · 1 9笔克/毫升。添加明曰葉莖葉部水抽提部分_ 2使成 〇·3 5、0.7毫克/毫升。其結果’明日葉莖葉部水柚提部分- 1及2濃度依存性地增強L _ μ細胞之ngf產生。彼等之結果 示於表3 8。 表3 8 試樣 濃度(毫克/毫升） NGF產生量(％) 明曰葉莖葉部水抽提部分_1 0 100 2.59 475.2 5.19 644.9 明曰葉莖葉部水抽提部分-2 0 100 0.35 149.3 0.70 186.7 (但’對照組之NGF產生量為0.553毫微克/毫升。） -94-本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4规格(210 X 297公釐) 92 1313605 五、發明説明（ 實施例2 7 於乾燥明日葉招却 、 很部（於韓國採取）2 0克之碎斷物中加氯 仿，於室溫進行拙 .\ 彻徒°以旋轉蒸發器濃縮除去殘渣之液體 部分使乾，得素松紅 氣仿抽提部分，其次，殘渣中加300毫升乙 醉’於室溫進行抽描 τ彻叙°以旋轉蒸發器濃縮除去殘渣之液體 部分使乾，得乙醇乱坦. 畔抽乂部分。其次，於殘渣中加1 50毫升芪 餾水，於6 0 t進杆）丨0土 、 丁 2小時之抽提。於除去固形殘渣之液體 部分’加2.5倍量乙醢 、， 里乙知，於_ 3 0 °C靜置2小時。立後，以 10,000G離心，分忐、，…机心 ” 1无 人 成'儿澱物與液體部分。液體部分以旋轉菽 裝 發益濃縮使乾，得明日签枯， ^ 行力日茉根邵水抽提部分-I。一方面， 殿物再溶於蒸餘水得明B奋H· 曰葉根邵水抽提部分_ 2。 盥音 例1 3同樣方法，測定如+制& 以與實把 ..n “此1備之各溶離份之NGF產生拎強 …a日葉根部氯仿抽提部分使成() = 添加明日葉根部乙醇抽提部分使狀、克=升。 笔升。添加明曰葉根部水抽提部分]，使 .毛克/ 16.6毫克/毫升。添加明 · 5、8·3、 線 毫克/毫升。其結果，明曰葉 二2,使成 明曰葉根部乙醇抽提部分，日月日葉根部水柚4 =邵分’ 強L-M細胞之NGF產生。彼等之結果示於表以刀·1及2增 -95- 本纸張尺度適用中國固家標準(CNS) Α4規格(21〇Χ297公爱厂 1313605 A7 B7 五、發明説明（93 表3 9 試樣 濃度(毫克/毫升） NGF產生量(％) 明曰葉根部氯仿抽提部分 0 100 0.03 198.4 明日葉根部乙醇抽提部分 0 100 0.275 185.8 0.550 254.9 1.10 305.7 明日葉根部水抽提部分-1 0 100 4.15 350.8 8.30 496.7 16.6 830.3 明日葉根部水抽提部分-2 0 100 0.55 174.6 1.10 242.3 (但，對照組之NGF產生量為0.473毫微克/毫升。） 實施例2 8 (1 )將明日葉根部（於韓國採取）之冷凍乾燥品600克碎 斷，加1 8，000毫升氯仿，於室溫進行抽提。以過濾除去氯 仿抽提液之殘渣中，加1 8,000毫升乙醇，於室溫進行抽 提。以過濾除去，乙醇抽提液之殘渣中，加4,000毫升蒸餾 水，於6 0 °C進行抽提2小時。於除去固形殘渣之液體部分 中加2.5倍量乙醇，於-30°C靜置2小時。其後，以10,000G 之離心除去沉澱物，以旋轉蒸發器將液體部分濃縮至200毫 升。將濃縮液提供安巴來特XAD - 2 (歐加諾公司製：樹脂量 -96- 本紙悵尺度適用中國國家標準(CNS) A4规格(210 X 297公釐） 1313605 A 7 B7 五、發明説明（94 ) 400毫升）’以蒸餾水2,000毫升充分洗出非吸著物，其次以 2,000毫升甲醇將吸著物溶離。以旋轉蒸發器濃縮甲醇溶離 液，得明曰葉根部水抽提低分子XAD-2處理物。 (2 )使用逆相層析法將實施例2 8 - (1)製備之明曰葉根部水 抽提低分子XAD - 2處理物之活性成分溶離。以下表示其條 件。管柱係使用丁8〖且61003-80丁5(直徑21.5 111111父長度30 cm，東曹公司製）。溶媒A (蒸餾水）與溶媒b (蒸餾水與乙腈 以容量比1對1混合）之溶離比由〇分至120分，將溶媒B比直 線性地由0 %至100 %，將溶媒B比繼續保持於1 〇〇 %、2 0 分’最後將溶媒B比保持於〇%，20分。溶離速度為5毫升/ 分’檢出於21 5 nm進行。每8分採取一溶離份，以與實施例 1 3同樣方法進行各溶離份之活性。其結果，明白於含 21.0、 22.8 ' 23.6 ' 26.7、34.8、 42.4、 47.8 ' 51.5 ' 51.7、 51.9、 52.1、 52.2、 53.8 > 55.6 ' 56.2 ' 56.6 ' 56.7、 58.1 ' 61.5 ' 68.6 ' 71.4' 79.7、 84.9、 85.8、 89.7 ' 101.5、 104.5 、120.9、124.7分之檢出峰之溶離份 具NGF產生增強活性。其結果示於表4 0。 -97- 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 1313605 A7 五、發明説明（95) 表40 溶離份(檢出峰：分） 濃度(毫克/臺升）KTHF ▲ *音ί%) 1 (21.0、22.8、23.6) 2.50 441.3 2 (26.7) 2.50 379.8 3 (34.8) 2.5〇 200.3 4 (42.4) 2-84 453.3 5 (47.8) 3-47 385.8 6(51.5、51.7、51.9、52.1、52.2、53.8) 1.48 409.9 7 (55.6、56.2、56.6、56.7、58.1、61.5) !-24 268.4 8 (68.6) 0.965 299.7 9 (79.7) 1-16 1104.5 10 (84.9、85.8、89.7) 1-25 1196.4 11 (101.5 ' 104.5) 3-17 267.9 12(120.9 ' 124.7) 5.28 277.5 (但’對照組之NGF產生量為〇,21 〇毫微克/毫升。） (3)使用凝膠過濾層析法’將明日葉根部水抽提低分子 X A D - 2處理物之活性部分級分。 以下表示其條件。管柱樹 脂使用托優巴耳（卜3八一小）HW-40C(樹脂量2000毫升： 東梭公司製）。溶媒使用蒸餾水 。提供以乾燥重量計1 .〇克 份之明日葉根部水抽提低分子XAD - 2處理物濃縮液，每一 溶離份各採取1 0毫升。以與實施例1 3同樣方法進行各溶離 份之NGF產生增強活性之測定。 添加各溶離份試樣，使成 10倍濃縮後為培養基之10分之1 。其結果，確認許多之溶 離份之NGF產生增強活性。 (4)收集於實施例2 8 - (3 )確認活性之溶離份之一部分之溶 -98- 本紙張尺度適用中國國家樣準(CNS) A4規格(210X297公釐) 1313605 A7 B7 五 發明説明（ ---—, 離份69〜79，使用逆相層析法將其濃縮物溶離。以下表示 其條件。管柱用TSK gel 〇DS_8〇Ts(徑21」毫米χ長3〇厘 米：東梭公司製）。溶媒八（0.1%三氟乙酸水溶液）與溶媒 Β(蒸餾水與乙腈以容量比i對i混合，含〇1%三氟乙酸）之 溶離比，由0分至60分，溶媒b比直線性地由25%至 100%，將溶媒B比繼續保持100%，最後將溶媒保持於 25%、10分。溶離速度為5毫升/分，檢出於215 nm進行。 以與實施例1 3同樣方法，進行採取之溶離份之ngf產生増 強活性。其結果，明日滯留時間為0〜22.5分、22.5〜2 5 分、25 〜31_5 分、31.5 〜32.5分、32.5〜37 分、37 〜43.5 分、 43.5〜47 分、47〜50.5 分、50.5〜77 分、77〜78.5 分、 78·5〜81_5分之溶離份有NGF產生增強活性。其結果示於表 41 。
訂 表4 1 溶離份(檢出峰：分） 濃度(毫克/毫升） NGF產生量(％) 1 (0-22.5) 9.60 415.02 2 (22.5〜25) 0.175 172.10 3(25-31.5) 7.00 854.94 4 (22.5-25) 0.30 149.79 5 (31.5-32.5) 0.50 153.65 6 (32.5-37) 1.70 272.96 7 (37-43.5) 1.50 369.96 8 (43.5-47) 0.475 190.99 9 (47-50.5) 2.90 507.30 10 (50.5〜77) 0.70 179.83 11 (78.5-81.5) 0.15 166.52 -99-
本紙張尺度通用中國國家搮準(CNS) Α4规格(21〇x 297公釐) 1313605 A7 B7 五、發明説明（ (但’對照組之NGF產生量為〇. 143毫微克/毫升。） (5 )使用逆相層析法，將於實施例2 8 _ (4)確認強活性之滯 留時間2 5〜3 1.5分之溶離份再溶離。以下表示其條件。管柱 用TSK-GEL Carbon-500 (徑4.6毫米X長1〇厘米：東梭公司 製）°溶媒A(蒸餾水）與溶媒b(蒸餾水與乙腈以容量比丨對！ 混合）之落離比由〇分至1 5分。溶媒B比直線性地由2 5 〇/0至 4 5 % ’溶媒B比於4 5 %繼續保持1 〇分’最後溶媒b比於 2 5 %保持5分。溶離速度為i毫升/分，檢出於2丨5 nm進 行。其結果’可溶離含分別為7 82分與n 〇9分之峰之二個 溶離份。 (6 )藉由質量分析計（302 :曰本電子社製），將含有於 實施例2 8 - ( 5 )以TSK-GEL Carbon-500層析溶離之7.82分峰 之落離份解析其質譜（M S)。基質用甘油。其結果，檢出 m/z 131' 185、223、321之峰。圖11表示質譜。於圖 1 1，橫軸表m / z值，縱軸表相對強度。 (7) 藉由紅外線吸收（IR)光譜（FTIR_82〇〇pc :島津製作 所社製）’將含有於實施例28-(5)以TSK-GEL Carbon-500 層析落離之7.82分峰之溶離份解析。圖12表示IR光譜。於 圖1 2橫軸表紅外線波長之倒數，縱軸表透過率。 (8) 藉由1H-核磁共振（NMR)光譜（JNM-A500 :日本電子 杜製）’將含有於實施例28_(5)以TSK_GEL carb〇n-500層 析落離之7.82分峰之溶離份解析構造》試樣溶於重水。圖 1 3表示1 Η-NMR光譜。於圖1 3橫軸表化學位移值（ppm)， -100 - 本紙張尺狀用中國a家標準(CNS) A4規格(21GX 297公爱) --- 1313605 A7 B7 五、發明説明（98) 縱轴表信號強度。 (9)藉由13C-核磁共振（NMR)光譜（JNM-A500 :日本電子 社製），將含有於實施例28-(5)以TSBC-GEL Carbon-500層 析溶離之7.82分峰之溶離份解析構造。試樣溶於重水。於 圖14表示i3C_NMR光譜。圖14橫軸表化學位移值（ppm)， 縱軸表信號強度。 (i〇)藉由質量分析計（DX 302 :曰本電子社製），對含有 於貫施例2 8 - ( 5 )以TSK-GEL Carbon-500層析溶離之11.09 分峰之溶離份之質譜（MS)進行解析。基質使用甘油《其結 果檢出m/z 131、185、223、321之峰。圖15表示質譜。 於圖1 5橫軸表m / z值，縱軸表相對強度。 (11)藉由紅外線吸收（IR)光譜（FTIR-8200PC :島津製作 所社製），將含有於實施例2 8-(5)以TSK-GEL Carbon-500 層析溶離之11.09分峰之溶離份解析構造。圖16表示ir光 譜。於圖1 6橫軸表紅外線波長之倒數，縱軸表透過率。 (1 2)藉由1 H-核磁共振（NMR)光譜（JNM-A500 :日本電 子社製）’將含有於實施例28-(5)以TSK-GEL Carbon-500 層析溶離之Π .09分峰之溶離份解析構造。圖丨7表示I H_ NMR光谱。於圖17橫轴表化學位移值（ppm)，縱轴表信號 強度。 (13)藉由13C-核磁共振（NMR)光譜（JNM-A500 :日本電 子社製）’將含有於實施例28-(5)以TSK-GEL CarbOn-500 層析溶離之1 1.09分峰之溶離份解析構造。試樣溶於重水β 圖18表示含峰之溶離份之nC_NMR光譜。於圖18，橫軸表 -101 - 本紙張尺度適用中國國冬標準(CNS) A4規格(2i〇x 297公爱) 1313605
五、發明説明（99 化學位移值（ppm)，縱軸表信號強度。 實施例2 9 ⑴以食物處理機將明曰葉乾燥品。反本漢方堂社製)48〇 克粉碎’以乙酸乙酯约1升拙裎， 升抽k2次，所得有機部分減壓濃 縮後，漢縮物供予二氧化矽層析。以氯仿：甲醇=1〇〇 : U帽毫升）、12:1(_毫升）之順序，階段性將吸著物溶 離’母〜谷離份各取8¾升。收集所得溶離份76以後者， 減壓濃縮’濃縮物料二氧切層析，以乙⑨：乙酸乙醋 : 1為制溶媒，於溶離份25〜5G中得高濃度含有黃當 歸醇之溶離份。自此溶離份藉由乙酸乙酿及己烷再結晶， •I于約200毫克之南純度黃當歸醇。nmr本i 結果示於下。 肖質譜之測定 'H-NMR： .1.58(3H,s, -Me), 1.66 (3H, s, ,Me) l81
(3H, s, -Me), 2.08 (4H, m), 3.48 (2H, d, J 7Hz) 5 〇4 (1H m), 5.29 6.40 (lH,d,J5,,6,9HZ)H,51) 6 86(2H ； J5,69, J2,39Hz, H-2, 6), 7.45(lH,d,Ja5 ^ 15h 7.54 (2H, d, H-3,5),7.71(lH,d,H-6-),7.82(lH3d h； }， 但，試樣溶於重氯仿，殘留氯仿之化學 ’， 子如·移表示為2.49 ppm。 (2)以與實施例U同樣方法，測定實施例29_( ^ 當歸醇之NGF產生增強活性。添加黃當歸醇使為2 5備之兴 100 # Μ。其結果示於表42。黃當歸醇烊 '5 5 0 ' NGF產生。 細胞之 102- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1313605 A7 B7 五、發明説明 ( 100
表42 一 --- - '**'. -度(#M) NGF產生量(％) 25 126.1 50 202.6 ---_!〇〇_ 265.7 _ " 1 ' 11 ' "' 1 、 (但’對照組之NGf產生量為〇.199毫微克/毫升。） 實施例3 0 (1) 於乾燥明日葉根部粉末5.8公斤中加24升乙酸乙酯， 於室溫進行抽提3小時。於吸引過濾後之殘渣加1 8升乙 醇，於莖溫進行抽提一夜。其次，於吸引過濾後之殘渣知 5 2升蒸餾水’於6 0 t進行抽提3小時。以旋轉蒸發濃縮除 去固形殘渣之液體部分，於其中加2.5倍量乙醇，於4 t靜 置一夜。其後，以吸引過濾分成沉澱物與液體部分。以旋 轉蒸發將液體部分濃縮使乾，得明日葉根部水抽提低分子 部分。其次將明日葉根部水抽提低分子部分供予安巴來特 XAD-2(歐加諾公司製：樹脂量2升），以蒸餾水3〇升充分 洗出非吸著物。其次，以丨6升甲醇溶離吸著物。以旋轉蒸 發器將甲醇溶離液濃縮使乾。得明日葉根部水抽提低分子 XAD-2部分處理物。 (2) 以與實施例丨3同樣方法，測定實施例3 〇气1)記載之上 述明日葉根部水抽提低分子部分XAd_2處理物之Ngf產生 增強活性。添加明日葉根部水抽提低分子部分χΑΕ) _ 2處理 物使成0.85、1.7、3.4毫克/毫升。如表43所示，明曰葉根 -103 -
1313605 A7 B7 五、發明説明（ ） 101 部水抽提低分子部分XAD - 2處理物濃度依存性地增強L - Μ 細胞之N G F產生。 表43_ 試樣濃度(毫克/毫升） 0 0.85 1.7 3.4 NGF(%)_100_655.3 858.8 1127.6 (但，對照組之NGF產生量為0.074毫微克/毫升。） (3 )用逆相層析將實施例3 0 - ( 1)記載之明日葉根部水抽提 低分子部分XAD - 2處理物之活性成分溶離。以下表示其條 件。樹脂用COSMOSIL 140 C18-OPN(拿卡來鐵斯克公司 製：樹脂量400毫升）。提供明日葉根部水抽提低分子部分 XAD - 2處理物，作為展開溶媒，分別以1升蒸餾水、2 0 % 乙腈水溶液、2 5 %乙腈水溶液、4 0 %乙腈水溶液、甲醇之 順序進行溶離，各溶離部分減壓濃縮，製備各COSMOSIL 溶離物。 (4)以與實施例1 3同樣方法，測定實施例3 0 - ( 3 )記載之 COSMOSIL 140層析溶離物之NGF產生增強活性。其結 果，得知於2 0 %乙腈水溶液溶離部分、2 5 %乙腈水溶液溶 離部分及4 0 %乙腈水溶液溶離部分有NGF產生增強活性。 其結果示於表4 4。 -104- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格（210 X 297公釐） 1313605 A7 B7 102 五、發明説明（ 表44 溶離份 試樣濃度(毫克/毫升） NGF產生哥f%) 0 100 20%乙腈水溶液溶離部分 4.05 301.0 8.1 436.7 16.2 1263.3 25%乙腈水溶液溶離部分 0.7 161.7 1.5 1028.8 2.8 2110.4 40%乙腈水溶液容離部分 0.575 465.3 1.15 653.1 2.3 1226.2 (但，對照组之NGF產生量為20%乙腈水溶液溶離部分為 0.074 ’ 2 5%、40%乙腈水溶液溶離部分為〇·087毫微克/毫 升。） (5)用逆相層析法’將實施例3〇-(3)記載之COSMOSIL 140之2 5 %乙腈水溶液溶離部分之活性成分溶離。 以下表示其條件。管柱用TSK gel ODS-80Ts(21.5毫米X 30厘米：東梭公司製）。溶媒a(蒸餾水）與溶媒B(蒸餾水與 乙腈以容量比1對1混合）之溶離比，由〇分至丨20分，溶媒B 比直線性地由2 5 %至100 %，將溶媒B比繼續保持於1 〇〇 %、 2 〇分’最後溶媒B比保持於2 5 %、2 0分。溶離速度為5毫升 /分’檢出於2 3 5 nm進行。以紫外線吸收為指標，採取溶離 份。 (6 )以與實施例1 3同樣方法，進行測定實施例3 0 - ( 5 )記載 -105- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1313605 A7 B7 五、發明説明（ ） 103 之COSMOSIL 25%乙月青水溶液溶離部分之ODS-80TS層析溶 離物之活性。其結果，明白許多溶離份有NGF產生增強活 性。其結果示於表4 5。 表45 溶離份 (檢出峰:分） 濃度 (毫克/毫升） NGF產生量(％) 1 (46.0'47.2 ' 49.0) 2.00 250.8 2 (53.2) 2.00 275.2 3 (54.0) 2.00 318.7 4(54.9、55.5、56.4) 2.00 293.0 5 (57.6) 2.00 320.5 6 (58.6) 2.00 297.8 7(59.3) 2.00 324.8 8 (60.5) 2.00 324.8 9(61.3) 2.00 402.8 10(62.2) 2.00 565.5 11 (63.0) 2.00 616.9 12(64.1) 2.00 575.4 13 (66.9) 2.00 805.3 14(68.4) 2.00 819.6 15(69.2) 2.00 510.2 16(70.3) 1.00 389.2 17(71.3、71.9) 1.00 609.1 18(73.0、73.8、74.9) 0.50 1002.5 19 (75.4) 0.50 851.3 20 (76.5) 1.00 838.5 21 (77.7) 1.00 249.4 22 (79.6 ' 80.5) 0.50 234.3 -106- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐） 1313605 A7 B7 104 五、發明説明（ 23 (82.4) 0.25 359.1 24 (84.1) 0.25 285.8 25 (85.5) 0.0625 359.1 26 (86.9 ' 87.5) 0.10 411.6 27 (89.1) 0.50 443.3 28(91.4) 0.05 1058.1 29 (92.8) 0.20 672.0 30 (93.8、95.8 ' 97.5、100.0、100.6) 0.50 593.6 (但，對照組之NGF產生量，溶離份1〜9為0.355、溶離份 10〜18為0.382、溶離份19〜27為0.415、溶離份28〜30為 0.450毫微克/毫升。） (7)藉由質量分析計（DX302 :曰本電子社製），以FAB-MS 手法 測定於 實施例 3 0 - (6) 確 認活性 之來自 明曰葉 根部之 溶離份1 0(含滯留時間62_2分之檢出峰之溶離份）之質譜 (MS)。基質使用甘油。其結果，檢出m/z 245 (M-OGlc) + 之峰。圖19表示來自明日葉根部之溶離份10之FAB-M S質 譜。於圖1 9橫軸表m/ z值，縱軸表相對強度。 用核磁共振（NMR)光譜裝置（JNM-A500 :日本電子社製） 測定來自明曰葉根據之溶離份1 0之各種NMR光譜，解析構 造。以下表示NMR之歸屬信號。 'Η-NMR ： 5 1.36 (3H, s, 2'-CH3), 1.37 (3H, s, 2'-CH3), 3.08 (2H，m, 2"-H及4"-H)，3.12 (1H，m, 3"-H), 3.41 (1H，m, 5"-H)，3.81 (1H，d，J=4.5 Hz，3’-H)，4.11 (1H，dd，J = 7.0, 11.5 Hz, 6"-H), 4.35 (1H, brd, J-11.5 Hz, 6M-H), 4.53 (1H, d, -107- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 x 297公釐) 1313605 A7 B7 五、發明説明（105) J = 7.5 Hz, Γ'-Η), 5.14 (1Η, d, J = 4.5 Hz, 4'-H), 6.28 (1H, d, J = 9.5 Hz, 3-H), 6.78 (1H, d, J = 8.5 Hz, 6-H), 7.54 (1H, d, J=8.5 Hz, 5-H), 7.98 (1H, d, J=9.5 Hz, 4-H) 但’於以下1 H-NMR，試樣溶於重二甲亞颯，殘留二甲亞 减之化學位移值表示為2.49 ppm。圖2〇表示來自明日葉根 部之溶離份1 0之1 H-NMR光譜。於圖20，橫軸表化學位移 值（ppm)，縱軸表信號強度。 對來自明日葉根部之溶離份丨0進行之質譜、NMR光譜解 析之結果’確定活性成分為3，_ 〇 -石-d -吡喃葡糖基開洛内 酉旨（分子量424 )。 (8 )使用逆相層析法’再將於實施例3 〇 _ ( 6)確認活性之溶 離份1 3 (含滯留時間66.9分之檢出峰之溶離份）溶離。 以下表示其條件。管柱用TSK gel 〇DS-80TsQA(4.6毫米 X25厘米：東梭公司製）。溶媒A(含〇1%三氟乙酸之蒸餾 水）與溶媒B (蒸餾水與乙腈以容量比1對1混合，含〇· 1 %三 氟乙酸）之落離比維持溶媒B比於5 〇 %、2 0分。溶離速度為 1毫升/分’檢出於23 5 nm進行，以紫外線吸收為指標，採 取溶離份。 (9)以與貫施例1 3同樣方法’於實施例3 〇 - ( 8 )以TSK gel ODS-80TsQA層析法溶離之溶離份之活性。其結果，明白 含 7.9、8.7、9.2、10.2、11.5、12.7、13_9 分檢出峰之溶 離份，有NGF產生增強活性。其結果示於表46。 -108-
本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公爱·) 1313605 五 發明説明（ 106 ) A7 B7 表4 6 峰：分) 濃度(毫克/毫升） NGF產生量(％) -----t- · 13-1 (7.9) 0.56 654.3 13-2 (8.7) 1.00 792.1 !3-3 (9.2) 0.56 366.9 13-4(9.7) 0.96 363.9 13-5 (10.2) 0.96 361.0 13-6(11.5) 1.00 232.0 13-7(12.7) 0.50 261.3 13-8 (13.9^ 1.00 630.8 (但’對照组之NGF產生量為0.053毫微克/毫升。） (1 〇 )與實施例3 0 - ( 7)同樣地測定於實施例3 0 - (9)認定活 性之來自明日葉根部之溶離份1 3 - 2之質譜、NMR光譜。 由質量分析，檢出m/z 393 (M + H) +之峰。圖2 1表步來自 明曰葉根部之溶離份13_2之MS光譜。圖21，橫軸表m/z 值’縱軸表相對強度。 下面表示來自明日葉根部之溶離份13-2之核磁共振 (NMR)之NMR之歸屬信號。 lH-NMR ： δ 1.61 (3Η, s, 3'-CH3), 1·78 (3Η, s, 3'-CH3), 3.17 (1H, t, J=9.5 Hz, 4"-H), 3.28 (1H, m, 3"-H), 3.29 (1H, m, 3.38 (1H, m, 5r'-H), 3.40 (1H, m, l'-H), 3.46 (1H, m, 6"-H), 3.58 (1H, m, l'-H), 3.69 (1H, m, 6'-H), 4.94 (1H, d, J=7.5 Hz, Γ'-Η), 5.20 (1H, m, 2'-H), 6.30 (1H, d, J=9.5 Hz, 3-H), 7.11 (1H, d, J=8.5 Hz, 6-H), 7.51 (1H, d, J=8.5 Hz, -109 - 本纸張尺度適用t國國家標準(CNS) A4規格(21〇x 297公釐) 1313605 A7 ---- B7 五、發明説明（^~" 5-H), 7.98 (1H, d, J=9.5 Hz, 4-H) 圖22表不來自明曰葉根部之溶離份13-2之1 H-NMR光 讀。於圖22，橫軸表化學位移值（ppm)，縱軸表信號強 度。 13C-NMR : «5 17.8(3'-CH3), 21.6 (l'-c), 25.3 (3'-CH3), 60.6 (6"-c), 69.7 (4"-c)) 73 4 (2".c), 76.7 (3"-c), 77.1 (5M-c), 1〇〇.8 Ul.5 (6-c)，112.8 (3-c), 113.4 (10-c)，117.4 (8-c), 121.3 (2'-c), 126.8 (5-c), 131.5 (3'-c), 144.5 (4-c), 152.1 (9-c), 157.8 (7-c), 160.2 (2-c) 但，於以下13 c -NMR，試樣溶於重二甲亞颯，重二甲亞 諷之化學位移值表示為39.5 ppm。圖23表示來自明曰葉根 部之落離份13-2之13 C-NMR光譜。於圖23，橫軸表化學位 移值（ppm)，縱軸表信號強度。 對來自明日葉根部之溶離份1 3 - 2進行質譜、NMR光譜解 析之結果’確定活性成分為7 _ 〇 -点-D _ P比喃葡糖醯氧基_ 8 -異戊二蹄基香豆素（分子量392)。 (1 1)以與實施例3 〇 - ( 8)同樣方法，使用逆相層析法再將 實施例30-(6)確認強活性之溶離份i 8(含滯留時間73.0、 73.8、74.97分之檢出峰之溶離份）溶離。 (1 2 )以與實施例1 3同樣方法，進行測定於實施例3 0 — (1 1) 以TSK gel ODS-80TsQA層析法溶離之溶離份活性。其結果 明白於含9.3、 10.1、 10.6、 1 1_2、 12.0、 12.8、 13 3、 14.0、15.2、16.1、18.6分檢出之峰之溶離份’有NGF產 生增強活性。其結果示於表47。 -110- 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐)
訂
I313605
A7 B7 濃度(毫克/毫升） NGF產生量(％) 0.20 1489.6 0.50 2222.9 0.25 3039.6 0.0375 2510.4 0.0125 610.4 0.50 560.4 0.50 681.3 0.40 339.6 1.00 410.4 1.00 2510.7 1.00 3360.7 1.00 1189.3 7 —τ-- j!1離份:分） 18-1(93) - ^-2(10.1) 18~3 (10.6) ^-4(10.9) ^-5 (11.2) ^-6(12.0) ^-7(12.8) !8-8(13.3) ^-9(14.0) ^-10(15.2) 18-11 (16.1) 1§i11Q16)_ (但’對照組之ngf產生量 為0_015毫微克/毫升 (1 3 )與實施例3 0 - ( 7)同樣地測定於實施例3 〇 ·( 1 2)確認 活性之來自明曰葉根部之溶離份1 8 - 3之質譜、NMR光譜。 由質量分析’檢出m/z 195 (M + H) +之峰。圖24表示來自 明日葉根部之溶離份18-3之MS光譜。於圖24，橫軸表m/z 值’縱軸表相對強度。 下面表示NMR之歸屬。 'H-NMR ： 53.68 (3H, s, OCH3), 6.25 (1H, d, J=16.0 Hz, 2'-H), 6.75 (1H, d, J=8.0 Hz, 5-H), 6.98 (1H, dd, J=2.0, 8.0 Hz, 6-H), 7.03 (1H, d, J=2.0, 2-H), 7.46 (1H, d, J=16.0 Hz, -111 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1 8· 1 〜9 為 0.027，18-10-12 1313605
五、發明説明（ 3'-H), 9.10 (1Hi S) 3-OH), 9.56 (lH, s, 4-〇H) 圖25表示來自明日葉根部之溶離份之1 H-NMR光 譜。於圖2 5，橫軸表化學位移值（pPm)，縱軸表信號強 度。 對來自明日葉之溶離份丨8 _ 3進行之質譜，NMR光譜解析 之結果，確定活性成分為咖啡酸甲酯（分子量194)。 (I4)與實施例30-(5)同樣地測定於實施例3〇-( 1 2)確認 活性記載之明日葉根部之溶離份1 8 - 4之質譜、NMR光譖。 由質量分析，檢出m/z 253 (M + H) +之峰。圖26表示來自 明曰葉根部之溶離份18_4之MS光譜。圖26 ’橫軸表m/z 值’縱抽表相對強度^ 表示NMR之歸屬信號。 i-NMR : 5 1.15 (3H，s，2-CH3)，1.27 (3H，s，2-CH3)， 2.39 (1H, dd, J=8.0, 17.0 Hz, 4-H), 2.76 (1H, dd, J=5.0, 17.0 Hz, 4-H), 3.62 (1H, m, 3-H), 3.81 (3H, s, 5-OCH3), 5.16 (1H, d, J=4.5 Hz, 3-OH), 6.56 (1H, d, J=9.0 Hz, 6-H), 7.59 (1H, d, J=9.0 Hz, 10-H), 11.86 (1H, brs, 8-COOH) 圖27表示來自明曰葉根部之溶離份18-4之1 H-NMR光 譜。於圖2 7，橫軸表化學位移值（ppm)，縱軸表信號強 度。 I3c-NMR ： 6 20.4 (2-CH3), 25.4 (2-CH3), 26.4 (4-C), 55.7 (5-OCH3), 67.0 (3-C), 77.6 (2-C), 101.8 (6-C), 109.4 (10-C), 112.5 (8-C), 130.7 (7-C), 153.3 (9-C), 160.4 (5-C), 166.6 (8-COOH) -112- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(21〇x 297公釐) 1313605 A7 _ B7 五、發明説明（110) 圖28表示來自明日葉根部之溶離份18·4之13C _NMR光 讀。於圖2 8 ’橫軸表化學位移值（p p m)，縱報表信號強 度。 來自明日葉根部之溶離份1 8 - 4之質譜、NMR光譜解析之 結果確定活性成分為8-羧基-3-羥基-5 -甲氧基-2-二甲基色 滿（分子量252) ° (1 5 )將於實施例3 0 - ( 6)確認強活性之溶離份1 9 (含滞留 時間75.4之檢出峰之溶離份）、溶離份20(含76.5分之檢出 峰之溶離份）混合，以與實施例3 0 - ( 8 )同樣方法，用逆相層 析法再溶離。 (1 6)以與實施例1 3同樣方法進行測定於實施例3 0 - (1 5 ) 溶離之以TSK gel ODS-80TsQA層析之溶離份之活性。其結 果，明白含13.7、14.3 ' 15.1 ' 15.5 ' 16.4 ' 18.8 ' 20.5 分之檢出峰之溶離份， 有NGF產生增強活性。 其結果示於 表48。 表48 溶離份(檢出峰：分） 濃度(毫克/毫升） NGF產生量(％) 19 ' 20-1 (13.7) 0.60 192.4 19、20-2 (14.3) 1.00 246.6 19 ' 20-3 (15.1) 1.00 372.2 19 ' 20-4(15.5) 0.60 529.8 19 ' 20-5 (16.4) 1.00 487.9 19 ' 20-6(18.8) 1.00 337.7 19 ' 20-7 (20.5) 0.364 305.7 -113- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1313605 A7 B7 五、發明説明（ (但’對照组之NGF產生量為0.063毫微克/毫升。） (1 7 )與實施例3 0 - ( 7 )同樣地測定於實施例3 〇 - ( 1 6 )認定 活性之來自明日葉根部之溶離份1 9、2 0 - 5之質瑨、NMR光 譜。 於質量分析，檢出m/z 393 (M + H) +之峰。圖29表示來自 明曰葉根部之溶離份19、20-5之MS光譜。圖29，橫軸表 m / z值’縱軸表相對強度。 表示NMR之歸屬信號。 'H-NMR ： 5 1.67 (3H, s，3，-CH3)，1.69 (3H，s，3，-CH3)， 3.15 (1H，m，4”-H)，3.29 (3H，m，1，-H，2"-H 及 3”-H)，3.37 (1H，dd，J=7.5，15.5 Hz，1·-Η)，3.45 (2H，饵，5'H 及6”-H), 3.72 (1H, dd, J=10.5, 6"-H), 4.97 (1H, d, J=7-5 Hz, 1"-H), 5.31 (1H，t，J=7.5 Hz, 2_-H)，6.28 (1H，d，J=9.〇 hz，3_H), 7_07 (1H，s，5-H)，7.41 (1H，s，8-H)，7.98 (1H，d，j=9 〇 Hz， 4-H) 圖30表示來自明曰葉根部之溶離份19、2 〇-5之i h_nmr 光讀。於圖3 0，橫袖表化學位移值（ppm )’縱耗表•號強 度。 13C-NMR ： 5 17·6 (3'-CH3)，25.5 (3、(：Η3)，27 4 η.广、 V1 -ι)， 60.6(6"-C)，69.6(4"-C)，73.1(2"-C)，76.3(3’’-C)，77〇(5"_ C)，100.4 (1”-C)，102.0 (8-C)，112.8 (10-C)，ll2 9 (3 c) 121.8 (2，-C)，127.4 (6-C)，128_0 (5-C)，132.4 (3、c)，1444 (4-C), 153.4 (9-C), 157.9 (7-C), 160.6 (2-C) -114-
本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4规格(210X297公釐) 1313605 A 7 B7
五、發明説明（112 20·5 之13c-nmr ’縱輪表信號強 圖31表示來自明日葉根部之溶離份19、 光譜。於圖31 ’橫軸表化學位移值（ppm) 度。 對來自明日葉根部之溶離份19、20_5進行質譜、NMR光 譜解析之結果，確定活性成分為喃葡糖 異戊二烯基香豆素（分子量392 )。 (18)測定於實施例3 0-(15)記載之來自明日葉根部之溶離 份1 9、2 0 - 6之質譜、NMR光譜。 以質量分析計檢出 m/z 245 (M-2Glc-Angel)+、 669 (M + H)+、691(M + Na)+、707(M + K)+之峰。圖 32 表示來 自明日葉根部之溶離份19、20-6之MS光譜》於圖32，橫 軸表m / z值，縱袖表相對強度》 表示NMR歸屬信號。 H-NMR ： 5 1.36 (3H，s，2，-CH3)，1.43 (3H，s，2，-CH3)， l. 79 (3H, brs, 2"-CH3), 1.86 (3H, brd, J=7.0 Hz, 3,'-CH3), 2.90 (1H, t, J=8.0 Hz, 2b-H), 2.99 (1H, m, 2a-H), 3.01 (1H, m, 4a-H), 3.02 (1H, m, 4b-H), 3.05 (1H, m, 3b-H), 3.13 (1H, t, J=9.5 Hz, 3a-H), 3.35 (1H, m, 5a-H), 3.39 (1H, m, 5b-H), 3.39 (1H, m, 6b-H), 3.49 (1H, dd, J=8.0, 11.0 Hz, 6a-H), 3.64 (1H, d, J=11.5 Hz, 6b-H), 4.02 (1H, d, J=11.0 Hz, 6a-H), 4.21 (1H, d, J=8.0 Hz, lb-H), 4.37 (1H, d, J=4.5 Hz, 3'-H), 4.46 (1H, brs, 6b-OH), 4.48 (1H, d, J=7.5 Hz, la-H), 4.51 (1H, brs, 2a-OH), 4.72 (1H, brs, 3b-OH), 4.83 (1H, brs, 2b-OH), 4.86 (1H, brs, 4a-OH), 5.03 (2H, brs, 4b-OH, 3a- -115 - 本紙張尺度適用中國圉家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1313605 A7 B7 五、發明説明（ 113
OH), 5.96 (1H, brq, J = 7.〇 Hz, 6.26 (1¾ , ' α> J=9.5 Uy 3-H), 6.61 (1H, d, J=4.5 Hz, 4'-H), 6.83 (1H, d T ’ 5 J"8-5 Hz 6 H)，7.59 (1H, d，J=8.5 Hz，5-H), 7.96 (1H，d, jy 5 ’ 圖33表示來自明曰葉根部之溶離份丨9、2〇 ΉΖ’ 4·Η) H-NMr 光譜。於圖33，橫軸表化學位移值（ppm)，继 度。 .軸表相對強 l3C-NMR： (5 15.2 (3"-CH3), 20.0 (2"-CH3) ，21.3 (2，_CH ) 26.4 (2'-CH3)，59.1 (4、C)，61.0 (6b-C)，69.2 (6a r、 ’ 卜 、〇a-C)，70.0 (葡 匍糖-C)，70.4 (葡萄糖-C)，73.4 (葡萄糖-C)，73 7 η (3 -C)，73 9 (葡萄糖-C)，76.1 (葡萄糖-c)，76.55 (葡萄糖-c、' 76.59 (葡萄 糖-C)，76.8 (葡萄糖-C)，77.8 (2’-C'), 100.5 (lb-C)， l〇7_7 (8-C)， 112.1 (3-C)， 112.1 (l〇-c、. v L)，1U.2 (6-C)， 128.0 (2"-C)，129.8 (5-C)，136.1 (3，，-C) 144 W/1 、i44.5 (4-C), 153.6 (9-C), 156.2 (7-C), 159.4 (2-C), 166.3 (l"-〇
圖34表示來自明日葉根部之溶離份i9、2n a、M 刀 1 3c_NMr 光譜。於圖34，橫轴表化學位移值（ppm)，縱軸表相對強 度。 對來自明日葉根部之溶離份19、2〇_6進行質譜、光譜解 析之結果’確ί忍活性成分為4 ' - 〇 -當歸醯基· 3 , _ 〇 _ [ 6 — 〇 _ (/5 -D-吡喃葡糖基）-/3 -D-吡喃葡糖基]_開洛内酯（分子量 668)。 (19)與實施例30-(7)同樣測定於實施例3〇_(6)確認活性 之來自明日葉根部之溶離份28(含滯留時間914分之檢出峰 之溶離份）之質諸、NMR光譜。 116- 本紙乐尺度適用中國國家楯準(CNS) Α4規格(210 X 297公釐) 1313605 A7 B7 五、發明説明（ 以質量分析檢出m/z 209(M + H) +之導。圖35表示來自明 曰葉根部之溶離份28之MS光譜。圖35，橫軸表m/z值，縱 軸表相對強度。 表示NMR之歸屬信號。 'H-NMR ： δ 1.23 (3Η, t, J=7.0 Hz, 2"-H), 4.14 (2H, q, J = 7.0 Hz, 6.24 (1H, d, J=16.0 Hz, 2'-H), 6.74 (1H, d, J=8.0 Hz, 5-H), 6.98 (1H, dd, J=2.0, 8.0 Hz, 6-H), 7.03 (1H, d, J = 2.0 Hz, 2-H), 7.45 (1H, d, J=16.0 Hz, 3'-H), 9.11 (1H, s, 3-OH), 9.57 (1H, s, 4-OH) 圖36表示來自明日葉根部之溶離份28之1 H-NMR光譜， 於圖36 ’橫轴表化學位移值（ppm )，縱軸表相對強度。 對來自明日葉根部之溶離份2 8進行質譜、NMR光譜解析 之結果，確認活性成分為咖啡酸乙酿（分子量2 〇 8 )。 與實施例4 - ( 1 )同樣測定咖啡酸乙酯、咖啡酸争酯之NGF 產生增強活性。如表4 9所示，咖啡酸乙酯、咖啡酸甲酯增 強NGF產生。 表49 咖啡酸乙醋(微克/毫升） 0 62.5 NGF產生量(％) 100 1279.1 咖啡酸乙醋(微克/毫升） 0 62.5 NGF產生量(％) 100 824.4 (但，對照組之NGF產生量為0.109毫微克/毫升 0 ) -117- 本紙張尺度通用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1313605 A7 B7 五、發明説明（1ις) 115 實施例3 1 (1 )將洋葱薄皮2 5克冷凍乾燥後，於碎斷物中加500毫升 甲醇，室溫下進行抽提。以旋轉蒸發器將除去殘渣之液體 部分濃縮使乾，得甲醇抽提物。與實施例1 3同樣方法測定 如此製備之甲醇抽提物之NGF產生增強活性。添加洋葱薄 皮甲醇抽提物，使成 0.096、 0.192、 0.384、 0.576、 0.768、0.96毫克/毫升。其結果，洋葱薄皮甲醇抽提物， 濃度依存性地增強L - Μ細胞之NGF產生。其結果示於表 50 ° 表50 洋葱薄皮甲醇抽提部分濃度(毫克/毫升） NGF產生量(％) 0 100 0.096 140.4 0.192 136.4 0.384 200.5 0.576 277.3 0.768 307.6 0.960 349.0 (但，對照組之NGF產生量為0.050毫微克/毫升。） (2)於銀杏葉（100% GINKGO BILOBA TEA : GINKGOTON公司製）3克中加蒸餾水200毫升，於100 °C進 行抽提。取除去殘渣之液體部分，得銀杏葉水抽提物。以 與實施例1 3同樣方法，測定如此製備之水抽提物之NGF產 -118 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1313605 A7 B7 五、發明説明（116) 生增強活性。添加銀杏葉水抽提物使成〇. 6 2 5、 1.2 5、 2 · 5、5 % ( v / v)。其結果’銀杏葉抽提物濃度依存性地增強 L-M細胞之NGF產生。其結果示於表51。 表5 1 銀杏葉水水抽提物濃度(毫克/毫升） NGF產生量(％) 0 100 0.625 272.9 1.25 305.0 2.5 255.2 5.0 231.9 (但，對照組之NGF產生量為0.055毫微克/毫升。） 實施例3 2 於薔薇花（自中國之當地市場購入）2克碎斷物中加40毫升 氯仿，室溫下進行柚提。以過濾除去氣仿抽提液之殘渣中 加40毫升乙醇’室溫下進行抽提。以旋轉蒸發器濃縮除去 殘渣之液體部分使乾，得乙醇抽提部分。其次，於殘造中 加40毫升蒸德水’於60 °C抽提1小時《於除去殘渣之液體 部分加2.5倍量乙醇，於-30 °C靜置2小時。其後，以 10,000G離心，分成沉澱物與液體部分。液體部分以旋轉蒸 發器濃縮使乾’得水抽提部分_ 1。一方面，沉澱物再溶於 蒸餾水，得水抽提部分-2。以與實施例13同樣方法測定如 此製備之各部份之NGF產生增強活性。添加薔薇花乙醇抽 提部分，使成0.115、0.23毫克/毫升。添加水柚提部分一 -119-
1313605 A7 B7 五 發明説明（ 117 ，使成0.4 1、0.82 1毫克/毫升。添加水抽提部分-2，使成 0.084、0.1 6 7毫克/毫升。其結果表示於5 2。薔薇花乙醇抽 提部分、水抽提部分-1、 強L-M細胞之NGF產生。 表52 水抽提部分-2， 濃度依存性地增 試樣 濃度(毫克/毫升） NGF產生量(％) 薔薇花乙醇抽提部分 0 100 0.115 623.5 0.23 615.6 薔薇花水抽提部分-1 0 100 0.41 307.7 0.821 365.9 薔薇花水抽提部分-2 0 100 0.084 195.8 0.167 219.7 (但，對照組之NGF產生量為0.136毫微克/毫升。） 實施例3 3 以與實施例1 3同樣方法，測定來自啤酒花之黃腐醇溶離 份（忽布斯太那（示V /只夕 < 十一）公司製）之NGF產生增 強活性。添加黃腐醇溶離份，使成0.0148、 0.0297、 0.05 94、0.1 19毫克/毫升。其結果示於表53。黃腐醇溶離 份濃度依存性地增強L - Μ細胞之NGF產生。 -120- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210X297公釐〉 A7 _____B7 五、發明説明（ ） 1313605 表53 黃腐醇溶離份濃度(毫克/毫升） NGF產生量(％) 0 100 0.0148 144.0 0.0297 242.7 0.0594 401.6 0.119 438.6 (但’對照组之NGF產生量為0.206毫微克/毫升。） 實施例3 4 (1)將於實施例3 3確認NGF產生促進活性之黃腐醇溶離份 (忽布修太那（示7 シr?夕彳十一）公司製）0.4克，以3毫 升氯仿溶解，供予二氧化矽層析。以氯仿（1000毫升）、氯 仿：甲醇=50 : 1 ( 1000毫升）、氯仿：甲醇=20 : 1 ( 1000 毫升）之順序階段性溶離，每1溶離份各取8毫升。將所得溶 離份67〜1〇〇減壓濃縮，得來自啤酒花之黃腐醇溶離份a。 (2 )將上述黃腐醇溶離份a再以逆相層析純化分離。以下 表示其條件。管柱用TSK gel ODS-80Ts(徑21.5毫米X長30 厘米：東梭公司製）。溶媒A (蒸餾水與乙腈以容量比3對2 混合’含〇_ 1 %三氟乙酸）與溶媒B (蒸餾水與乙腈以容量比！ 對4混合’含〇·〗％三氟乙酸）之溶離比由〇分至6 〇分將溶媒B 比直線性地由5 0 %至1 〇〇 % ^將溶媒b比繼續保持於1 〇〇 〇/〇、 2 〇分，最後將溶媒B比保持於5 0 %、2 0分。溶離速度為5毫 升/分’檢出於3 70 nm進行，每1分採取溶離液。 (3 )將上述黃腐醇溶離份a之逆相層析溶離份，以如同實
裝 玎
-121-
1313605 A7 B7 119 五、發明説明（ 施例1 3之方法測定NGF產生增強活性。其結果，明白含
21_1、22_2、24_2、25.7、28.6 分之峰之落離份，有 NGF 產生增強活性。其結果示於表5 4。 表54 溶離份(滞留時間：分） 濃度(毫克/毫升） _生量(％) A-1 (21.1) 0.025 92.4 0.05 151.4 A-2 (22.2) 0.05 109.5 0.1 136.2 0.2 208.6 A-3 (24.2) 0.0125 134.3 0.025 151.4 0.05 202.9 0.1 298.1 A-4 (25.7) 0.025 197.1 0.05 345.7 0.1 416.2 A-5 (28.6) 0.0125 145.7 0.025 189.5 0.05 229.5 0.1 517.1 (但，對照組之NGF產生量為0.093毫微克/毫升。） (4)藉由質量分析計（DX 3〇2 :曰本電子社製）以fab_Ms 手法測定上述溶離份A- 5 (含滯留時間28.6分之檢出峰r之..容 離份）之質譜（MS)。基質使用甘油。其結果，檢出m/z -122-
本紙張尺度適用中國國家搮準(CMS) A4規格(210 X 297公釐） 1313605 A7 B7 120 五、發明説明（ (M + H)。圖37表示來自黃腐醇溶離份之溶離份A-5之MS 質譜。於圖37，橫軸表m/z值，縱軸表相對強度。 另外，用核磁共振（NMR)光譜裝置（JNM_A5〇():曰本電 子社製），測定各種NMR光譜，解析構造結果，確定活性成 分為黃腐醇B(分子量37〇)與黃腐醇1)(分子量37〇)之混合物 (混合比1 : 1.65)。以下表示NMR之歸屬信號。
黃腐醇B lH-NMR : 51.21 (3H，s，6"-H)，1.27 (3H，s，6，，-H)，2.70 (2H，m，4”-H)，3.65 (1H，m, 5，，-H)，3.87 (3H, s，6'-〇cH3)， 6.00 (1H，s，6.80 (2H, m，3-H&5-H)，7.55(2H，m，2_ H及6-H)，7·70 (1H，m，/5 -H)，7.75 (1H，m，α -H)，HU2 (lH， s，4-OH)，14.18 (1H，s, 2'-0H)
黃腐醇D H-NMR ： (5 1.71 (3H, s, 5"-H), 2.60 (2H, m, Γ'-H), 3·85 (3H, s，6’-OCH3)，4.20 (1H，m, 2”-H)，4.58 (1H, s, 4.61 (1H，s，4”-H)，6.04 (1H，s，5'-H)，6.80 (2H，m，3-Hl5_ H)，7.55 (2H，m, 2-H及6-H)，7.70 (1H，m，点-H)，7.75 (1H， m, a -H), 10.09 (1H, s, 4-OH), 10.58 (1H, s, 4'-〇H), l4·69 (1H, s, 2'-0H) 但，試樣溶於重二甲亞砜，殘留二甲亞颯之化學位移值 表示為2.49 ppm。圖38表示來自黃腐醇溶離份之溶離份A-5之1Η-NMR光譜。於圖38，橫軸表化學位移值（ppm) ’縱 軸表相對強度。 (5 )用逆相層析法，如下將來自啤酒花之黃腐醇溶離份中 123 本紙張尺度適用中國國家標竿(CNS) A4規格(21〇x_297公爱7" 1313605 A7 B7 五、發明説明（ 121 之洽性成分如下純化分離。 其條件示於下。 管柱使用丁31<：§61〇〇3-80丁5(5入（徑4.6毫米\長2 5厘米： 東梭公司製）。溶媒A (蒸餾水與乙腈以容量比3對1混合， 含0· 1 %三氟乙酸）與溶媒B (蒸餾水與乙腈以容量比1對3混 合’含0.1%三氟乙酸）之溶離比由〇分至2〇分，溶媒b比直 線性地由5 〇 %至i 00 %。將溶媒B比繼續保持於1 〇〇%、5 分’最後將溶媒B比保持於5 0 %、5分。溶離速度為1毫升/ 分’檢出於215 nm進行，每1分採取溶離液，與實施例1 3 同樣方法進行測各溶離份之活性。 其結果，明白含12.8檢出峰之溶離份有活性。對此溶離 份進行質譜解析，檢出分子量為3 5 5之信號。另外，進行 1 H-NMR光譜解析’明白活性成分為黃腐醇（分子量 354.4)。NMR光譜、質譜之測定結果示於下。 'H-NMR ： δ 1.60 (3Η, s, -Me), 1.69 (3H, s, -Me), 3.12 (2H, d, 7 Hz, H-l"a>b), 3.86 (3H, s, -OMe), 5.13 (1H, s, H-2"), 6.07 (1H, s, H-5'), 6.83 (2H, d, J2, 3 9 Hz, J5> 6 9 Hz, H-2, 6), 7.56 (2H, d, H-3, 5), 7.66 (1H, d, Ja< b 16 Hz), 7.75 (1H, d), 10.05 (1H, s, OH-4), 10.55 (1H, s, OH-4'), 14.63 (1H，s, OH-2，） 但，試樣溶於重二甲亞砜，殘留二甲亞諷之化學位移值 表示為2.49 ppm。圖39表示1h-NMR光譜。於圖39，橫軸 表化學位移值（ppm )，縱軸表相對強度。 卩八3-]^5:11^ 355(14 +以+ (但，用甘油為基質）。 -124- I紙張K度適财®國家料(CNS) A4規格(210X2^53~ 1313605 A7 _______B7 五、發明説明（ ） 實施例3 5 (1 )以如同實施例丨3之方法，測定實施例3 4所得之純化 之黃腐醇之NGF產生增強活性。添加純化之黃腐醇使成 12·5、2 5、50以M。其結果示於表5 5 ’純化之黃腐醇增強 L-M細胞之NGF產生。 表55 黃腐醇濃度(μ M) NGF產生量(％) 0 100 12.5 235.5 25 387.9 50 443.0 (但’對照組之NGF產生量為0.095毫微克/毫升。） (2)來自啤酒花之黃腐醇溶離份（忽布修太那公司製）0·4克 溶於3毫升氯仿’供予二氧化矽層析。以氯仿（1〇〇〇毫升）、 氯仿：甲醇=50 : 1(1 〇〇〇毫升）、氯仿：甲醇=20 : 1 ( 1000毫升）之順序階段性溶離，每i溶離份各取8毫升。所 得溶離份67〜1〇〇減壓濃縮，得來自啤酒花之黃腐醇溶離份 A。再用逆相層析法，純化來自啤酒花之黃腐醇溶離份A。 其條件示於下。管柱用TSK gel ODS-80TS(徑21.5毫米X長 3 0厘米：東梭公司製）。溶媒a (蒸餾水與乙腈以容量比3對 2混合’含〇, 1 %三氟乙酸）與溶媒b (蒸餾水與乙腈以容量比 1對4混合’含〇· 1 %三氟乙酸）之溶離比由〇分至6 〇分將溶媒 B比直線性地由5 〇 %至1 〇〇 %，將溶媒b比繼續保持於 -125- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1313605 A 7 B7 五、發明説明（ 123 :將溶媒B比保持於㈣、2。分溶離速度為5 日 出於370 nm進行’每1分採取溶離液。含滯留 <檢出學之溶離份濃縮使乾，可製備高純度之 百腐醇（19.4毫克）。 7 (3)將製備之黃腐醇13.5毫克溶^二甲亞礙溶液。75毫升 後小加於200笔升1 〇 mM乙酸鈉緩衝液（pH 5 5，含丨〇 % 薦糖），於1〇〇t加熱2小時。冷料，用逆相層析法將反應 液，合離。其條件不於下。樹脂使用江14〇 C18_ 0PN(拿卡來鐵斯克公司製：樹脂量2Q毫升）。反應液供予 管柱，展開溶媒分別為50毫升蒸餾水、2〇%、3〇%、 40%、50%、60%、70%乙腈水溶液、甲醇之順序進行溶 離。其結果，40%乙腈水溶液溶離部分濃縮使乾，可得異 黃腐醇（2.1毫克）。以各種NMR光譜測定解析其構造而確認 構造。 (4)同實施例1 3之方法測定所製備之異黃腐醇之nGF產生 增強居性。添加異育腐醇使為5 〇、1 〇〇、2〇〇 // Μ。如表5 6 所示’異黃腐醇濃度依存性地增強L _ Μ細胞之NGF產生， 明白啤酒類飲料中之異黃腐醇之生理活性。 表56 _ 異黃腐醇試樣濃度(A Μ) 〇 50 1〇〇 200 NGF 產生量(％)__10Q 11Q.7 121.4 198.0 (但’對照組之NGF產生量為0.181毫微克/毫升。） -126 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS> A4規格(210 X 297公釐) 1313605
實施例3 6 (1 )以旋轉蒸發器將3品牌之啤酒f市佳„ Λ .. 丁 丁 巾售口口 A、帀售品Β、 市售品c)及無醇啤酒飲料（市售品〇)各15〇毫升分別濃縮至 6 0毫升，得各別之濃縮物。 (2)以如同實施例13之方法，測定上述濃縮物之ngf產生 增強活性。添加3品牌之啤酒濃縮物使成2 5、5、。（容 量比）。添加典醇飲料濃縮物使成1 〇 % (容量比）。其纟士果示 於表5 7。3商標之啤酒濃縮物及無醇飲料濃縮物濃度依存 性地增強L - Μ細胞之NGF產生。 裝 表57 市售品Α濃縮物 試樣濃度(％) NGF產生量(％) 0 100 2.5 115.5 5 109.3 10 209.9 市售品B濃縮物 試樣濃度(％) 0 2.5 5 10 NGF產生量(％) 100 86.3 126.2 272.4 市售品C濃縮物 試樣濃度(％) 0 2.5 5 10 NGF產生量(％) 100 111.1 153.2 365 1 市售品D濃縮物 試樣濃度(％) 0 10 NGF產生量(％) 100 127.0 (但，對照組之NGF產生量為〇183毫微克/毫升。） 訂 又’與實施例4 - (1 )同樣測定市售品b濃縮物、市售品D 濃縮物之HGF產生增強活性。添加市售品b濃縮物使成 127 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐） 1313605 A7 B7 五、發明説明（19ς) 1 Zd 1 % (容量比）。添加市售品D濃縮物使成1 %及5 % (容量 比）。其結果示於表5 8。各濃縮物增強MRC - 5細胞之NGF 產生。 表57 市售品B濃縮物 試樣濃度(％) NGF產生量(％) 0 100 1 218 市售品D濃縮物 試樣濃度(％) 0 1 5 NGF產生量(％) 100 160 158 (但，對照組之NGF產生量為4.04毫微克/毫升。） (3 )使用質量分析裝置測定市售品A〜D，及啤酒市售品 E〜I、發泡酒市售品J-0中之黃腐醇及異黃腐醇含有量（參 照 Journal of Chromatography A，第 832 卷，第 97〜107 頁 (1997)。結果示於表5 9。各市售品含有0.0005〜0.032微克/ 毫升範圍之黃腐醇。又，以0.0082〜1.27微克/毫升之範圍， 含異腐醇。此等化合物，尤其黃腐醇含量愈多，顯示良好 之啤酒風味之官能。 -128- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1313605
五、發明説明（126 表59 市售品__黃腐醉(微克/毫升）異黃腐醇(微 1* 〇 口 σ A ~w m ^ n ) 0.021 0.70 B 0.0073 0.58 C 0.0070 0.57 D 0.00060 0.034 E 0.0060 0.57 F 0.0073 0.53 G 0.017 0.48 H 0.021 1.27 I 0.00054 0.0082 J 0.0036 0.59 K 0.0041 0.16 L 0.0087 0.77 M 0.010 0.23 N 0.030 0.62 0 0.032 1.10 實施例3 7 將哮酒花（Humulus lupulus)乾燥品50克粉碎，加1，〇〇〇毫 升蒸餾水，於6 0。(：抽提1小時。以旋轉蒸發器將藉過濾除 去殘逢之啤酒花水抽提液濃縮至150毫升。濃縮液加225毫 升氣仿振盪’分成水層與氯仿層及中間層。以旋轉蒸發器 將氣仿層部分餾除溶媒後，濃縮，得啤酒花水抽提物_氯仿 移行部分》 (2)與實施例1 3同樣方法測定上述啤酒花水抽提物.氯仿 移行部分之NGF產生增強活性。添加啤酒花水抽提物-氣仿 -129- 木紙張尺度通用中囷國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) ---- 1313605 A7 B7 127 五、發明説明（ 移行部分’使最後濃度為0‘02、〇〇4毫克/毫升。其处果示 於表60。啤酒花水抽提物·氯仿移行部分漠度依存性:增強 L-M細胞之NGF產生。
(3) 將啤酒花乾燥品5〇克粉碎，加^咖毫升乙醇，於代 抽㈣小時。以旋轉蒸發器濃縮藉過滤除去殘造之啤酒花 乙醇抽提液，濃縮液中加氣仿：水 八a , β 5 3 2《混合液，振盪 刀曲成水層與氯仿層。以旋轉蒸發器將氯仿㈣除溶媒後， 液縮，將啤酒花乙醇抽提物-氯仿移行部分。 (4) 與實施例13同樣方法，測定實施例37_(3)所得之啤 ==醇㈣物.氯仿移行部分之NGF產生増強活性。添加 卑酒古化乙醇抽提物·氣仿移行部分，使最後濃度為〇〇5、 =愛克^升。其結果示於表61。啤酒花乙醇抽提物-氯仿 移灯邵勿增強L-M細胞之NGF產生。 -130-
1313605 A7 B7 128 五、發明説明（ 表6 1 啤酒花乙醇柚提物-氣仿移行部分(毫杏/亭斗、 NGF產生量(％) 0 100 0.05 245.2 0.1 240.7 (但，對照組之NGF產生量為〇.12()毫微克/毫升。） 實施例3 8 (1 )將紫鬱金（莪苯）5克冷凍乾燥後，於碎斷物中加2〇〇毫 升氯仿，室溫下進行抽提。對於吸引過濾後之殘渣，反覆 此知作2次。收集過濾後之液體部分，以旋轉蒸發器濃縮使 ，’得氯仿抽提部分。其次’ ^氯仿抽提後之殘逢中加2〇〇 笔升乙醇’室溫下抽提。對吸引過濾後之殘渣，反覆此操 作2 /入收集過濾後之液體部分，以旋轉蒸發器濃縮使乾， 乾固物溶於4毫升乙醇。收集溶於乙醇之部分，以旋料發 濃縮器濃縮使乾，得乙醇抽提部分]。又，收集不溶於乙 :而落於蒸餾水部分，以旋轉蒸發濃縮器濃縮使乾，得乙 k部刀·2。其/入’乙醇抽提後之殘逢中加毫升蒸铜 :，於⑽進行抽提2小時。除去殘逢之液體部分加2 5倍 乙和，於^。(：靜们小時。其後，以10 000G離心分 ::㈣與液體部分。液體部分以旋轉蒸發濃縮使乾，得 部分分-1。一方面，沉殿物再溶於蒸掏水，得水抽提 (2 )與實施例1 3同樣測定實施例 3 8 - ( 1)製備之紫鬱金氯仿
129 1313605 五、發明説明（ 抽提部分、7 3K*1· 醇抽提部分-1、水柚提部分、水抽提部分-2之NGF產生增強活性。添加紫鬱金氯仿抽提 0 108 0 ^ ^ ; 、15毫克/毫升。添加紫鬱金氣仿抽提部分_丨’使 成 0 _ 04毫克/毫升。添加紫鬱金水抽提部分_ 1，择此 0 S? *S ' 1 Ac κ 战 • · 、3.3毫克/毫升。添加紫鬱金水抽提部分_ 2 ’ =成U毫克/毫升。其結果示於表62。紫營金氯仿抽提部 分、乙醇抽提部分-1、水抽提部分-1、水抽提部分_2 ,濃 度依存性地增強L-M細胞之NGF。 辰 表62 一試樣 紫鬱金氯仿 紫鬱金乙醇抽提部分d 紫營金水抽提部分 屋_度(毫克/毫升）NGF產生晉 0 100 0.108 172.4 ,Ρ.·?1_5_ __............296.8 〇 100 0.02 149.8 P-Pi____________ 214.3 紫#金水拙提部分-2 0 0.825 1.65 13__ 0 0.55 (但，對照組之NGF產生量為〇,122毫微克/毫升。 100 458.6 500.5 559.3 100 212.0 (3 ) 150克紫鬱金冷凍乾燥後，碎斷物中加3〇〇毫升氯仿 • 132- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格 1313605 A7 B7 五、發明説明（13〇
装 室溫下進行抽提。對吸引過濾後之殘渣，反覆此抽提操作2 次。氯仿抽提後之殘;·查中，加3 0 0毫升乙醇，室溫下進行抽 提。對吸引過濾後之殘渣，反覆此操作2次。乙醇抽提後之 殘渣中’加900毫升蒸餾水，於6 0 °C抽提2小時。對吸引過 濾之殘渣中’反覆此操作。將吸引過濾除去殘渣之液體部 分，濃縮至5 0.0毫升，加2.5倍量之乙醇，於-2 0。〇靜置1小 時。其後’以10,000G離心’以旋轉蒸發濃縮器除去沉澱部 分之液體部分使乾，得紫鬱金水抽提部分-3。 其次，用合成吸著劑，將紫營金抽提部分-3之活性成分 溶離。 以下示其條件。
樹脂用安巴來特XAD-2(歐加諾公司製：樹脂量70毫 升）。將3.4克之紫鬱金水抽提部分-3供予XAD-2，以蒸餾 水140毫升充分中洗出非吸著物，其次以350毫升甲醇，將 吸著物溶離。以旋轉蒸發器將甲醇溶離物濃縮，得紫费金 水抽提低部分-3之XAD - 2處理物。 (4)以同實施例1 3之方法’測定上述紫鬱金水抽提低部 分-3之XAD - 2處理物之NGF產生增強活性。添加紫鏺金水 抽提低部分-3之XAD - 2處理物，使成0.5、1、2毫克/毫 升。其結果示於表63。紫鬱金水抽提低部分-3之XAD-2處 理物濃度依存性地增強L - Μ細胞之NGF產生。 -133- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐） 1313605
AT B7 五、發明説明（131) 表63_ 試樣濃度(毫克/毫升） 0 0.5 1.0 2.0 NGF產生量(％)_100 340.2 526.6 607.2 (但，對照組為0.3 2 8毫微克/毫升。） 又，與實施例4 - ( 1 )同樣方法，測定此處理物之HGF產生 增強活性。添加紫鬱金水抽提低部分-3之XAD - 2處理物， 使成2000、1000、500、250微克/毫升。其結果示於表 6 4。紫鬱金水抽提低部分-3之XAD - 2處理物，濃度依存性 地增強MRC - 5細胞之HGF產生。 表64_ 試樣濃度(毫克/毫升） 0 250 500 1000 2000 HGF 產生量_100 112 128 149 192 (但，對照組之HGF產生量為8.02毫微克/毫升。） (5 )用逆相層析法溶離紫鬱金水抽提低部分-3之XAD - 2處 理物之活性成分 以下表示其條件 樹脂用COSMOSIL 140 C18-OPN(拿卡來鐵斯克公司製： 樹脂量7 0毫升）。提供紫鬱金水抽提部分-3之XAD - 2處理 物0.444克，展開溶媒分別以140毫升蒸餾水、5 %乙腈水溶 液、1 0 %乙腈水溶液、2 0 %乙腈水溶液、4 0 %乙腈水溶 液、乙腈、丙酮之順序進行溶離，減壓濃縮各溶離部分。 -134- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格（210 X 297公釐） 1313605 A7 B7 五、發明説明（132) (6)以同實施例1 3之方法，測定來自紫鬱金水抽提部分 -3之XAD - 2之逆相層析法部分之NGF產生增強活性。其結 果示於表6 5。如表所示，明白蒸飽水溶離部分、1 0 %乙腈 水溶液溶離部分、2 0 %乙腈水溶液溶離部分、4 0 %乙腈水 溶液溶離部分、乙腈水溶液溶離部分、丙酮溶離部分有 NGF產生增強活性。 表65 濃度(毫克/毫升） NGF產生量(％) 蒸餾水溶離部分 0.25 103.2 0.5 133.0 1.0 147.1 10 %乙腈水溶液溶離部分 0.25 117.7 0.5 130.6 1.0 157.1 20%乙腈水溶液溶離部分 0.25 154.6 0.5 192.7 1.0 229.9 40%乙腈水溶液溶離部分 0.25 185.1 0.5 255.4 1.0 373.8 乙腈水溶液溶離部分 0.025 135.6 0.05 163.6 0.1 170.0 丙銅溶離部分 0.025 110.4 0.05 121.0 0.1 140.1 -135- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格（210 X 297公釐） 1313605 A 7 B7 五 發明説明（ (但，對照組之NGF產生量為0.307毫微克/毫升。） 又，以與實施例4 - ( 1 )同樣方法，測定來自紫鬱金水抽提 低部分-3之XAD - 2之逆相層析部分之HGF產生增強活性。 其結果，明白蒸餾水溶離部分、5 %乙腈水溶液溶離部分、 1 0 %乙腈水溶液溶離部分、2 0 %乙腈水溶液溶離部分有 HGF產生增強活性。其結果示於表6 6。 表66 溶離份 濃度(毫克/毫升） HGF產生量(％) 蒸餾水溶離部分 20 127 .2 106 5%乙腈水溶液溶離部分 200 119 20 121 10%乙腈水溶液溶離部分 2000 264 200 126 20%乙腈水溶液溶離部分 2000 169 200 111 (但，對照組之HGF產生量，蒸餾水溶離部分、5 %乙腈水 溶液溶離部分為8.1 0毫微克/毫升，1 0 %乙腈水溶液溶離部 分9.00毫微克/毫升，2 0 %乙腈水溶液溶離部分為9.56毫微 克/毫升。） 實施例3 9 (1 )大豆胚芽（紀文社製）碎斷物1 0克中加200毫升氣仿， -136 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格（210 X 297公釐） 134' 1313605 A7 B7 五、發明説明（ 室溫下進行抽提。對吸引過濾後之殘渣，反覆此抽提操作2 次。氣仿抽提後之殘渣中加2〇〇毫升乙醇，室溫下進行抽 提。對吸引過濾後之殘渣，反覆此操作2次。收集過濾後之 液體部分’以旋轉蒸發器濃縮使乾，乾固物溶於5毫升乙 醇。收集溶於乙醇之部分，以旋轉蒸發器濃縮使乾，得乙 醇抽提部分-1。又，收集不溶於乙醇而溶於蒸餾水之部 分，以旋轉蒸發器濃縮使乾，得乙醇抽提部分_ 2。其次， 乙醇抽提後之殘渣中，加2〇〇毫升蒸餾水，於6 〇 〇c進行2小 時之抽提。以1 〇,〇〇〇G離心除去殘渣後之液體部分中，加 2.5倍量之乙醇，於_2 〇。(：靜置1小時。其後，以1〇,〇〇〇G離 心分成沉澱物與液體部分.液體部分以旋轉蒸發器濃縮使 乾，得水抽提部分-1。一方面，將沉澱物溶於蒸餾水，得 水抽提部分-2。 (2)與實施例13同樣方法，測定上述之大豆胚芽乙醇抽提 部分-2 '水抽提部分_ i、水抽提部分_ 2之NGF產生增強活 性。添加大豆胚芽乙醇抽提部分_2，使為〇 8875、^77^、 3.55毫克/毫升。添加大豆胚芽水抽提部分」，使為4州、 9·975、19.95耄克/毫升。添加大豆胚芽水抽提部分·2，使 為3.36、6.72、13.44毫克/毫升。其結果示於表67、68。 大豆胚芽乙醇抽提部分_2、水抽提部分、水抽提部分 濃度依存性地增強L - Μ細胞之NGF產生。 -137 本紙張足度ΐέ用1ί7國囡家標準(CNS) Α4規格(210X297公釐） 1313605 A 7 B7 五 發明説明（ 135 表67 乙醇抽提部分-2 試樣濃度(毫克/毫升） NGF產生量(％) 0 100 0.8875 543.9 1.775 523.3 3.55 589.2 水抽提部分-1 試樣濃度(毫克/毫升） 0 4.988 9.975 19.95 NGF產生量(％) 100 287.4 465.6 1215.3 (但，對照組之NGF產生量為0.251毫微克/毫升。） 表6 8 水抽提部分-2 試樣濃度(毫克/毫升） 0 3.36 6.72 13.44 NGF產生量(％) 100 250.1 259.1 299.8 (但，對照組之NGF產生量為0.223毫微克/毫升。） 又，與實施例4 - ( 1)同樣方法，測定大豆胚芽水抽提部 分-1、水抽提部分-2之HGF產生增強活性。添加大豆胚芽 水抽提部分-1，使成1995，199.5微克/毫升。添加大豆胚 芽水柚提部分-2，使成1 344、1 34.4微克/毫升。其結果示 於表6 9，大豆胚芽水抽提部分-1、水抽提部分-2，濃度依 存性地增強MRC - 5細胞之HGF產生。 -138- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格（210X297公釐） 1313605 A7 B7 五、發明説明（ 表69 大豆胚芽水抽提部分-1 試樣濃度(毫克/毫升） HGF產生量(％) 0 100 199.5 125 1995 138 大豆胚芽水抽提部分-2 ------- 試樣濃度(毫克/毫升） 0 134.4 1344 HGF產生量(％) 100 107 116 (但，對照组之HGF產生量為14.92毫微克/毫升。） (3) 大豆種皮（紀文社製）碎斷物10克中加200毫升氯仿， 室溫下進行抽提。對吸引過濾後之殘渣，重複此操作2次。 氯仿抽提後之殘渣中’加200毫升乙醇，室溫下進行插提。 吸引過濾後之殘渣，重複此操作2次。收集過濾後之液體部 分，以旋轉蒸發器濃縮使乾，乾固物溶於3毫升乙醇。收集 溶於乙醇之部分，以旋轉蒸發器濃縮使乾，得種皮乙醇抽 提部分-1。又收集不溶於乙醇而溶於蒸餾水部分，以旋轉 蒸發器濃縮使乾’得種皮乙醇抽提部分_ 2。其次，於乙酵 抽提後之殘渣中，加7 0耄升蒸餾水，於6 〇 〇c進行抽提2小 時。吸引過濾除去殘渣之液體部分中加2 5倍量之乙醇， 於-20t靜置1小時。其後’以1〇，_g離心’分成沉澱盥 液體部分。液體部分以旋轉蒸發器濃縮使乾，使種皮水柚 提部分」。-方面’將沉澱溶於蒸餘水，得種皮水抽 分-2 〇 (4) 與實_13隨方法’測定上述大豆種皮乙醇抽提部 -139 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公着） 1313605 A7 B7
五、發明説明（137) 分-2、種皮水抽提部分] '種皮水抽提部分·以卿產生 增強活性。添加大豆種皮乙醇抽提部分，2 ,使成〇 275、 0.55¾克/¾升。添加大豆種皮水柚提部分」，使成3 、 6.25、12.5毫克/毫升。添加大豆種皮水抽提部分·2，使成 0·654、 L3〇8、2.616毫克/毫升。其結果，示於表7〇、 71。大旦種皮乙醇抽提部分_2、種皮水抽提部分、種皮 水抽和1部分-2，濃度依存性地增強L - Μ細胞之NGF產生。
裝 表70 種皮乙醇抽提部分-2 η 試樣濃度(毫克/毫升） 0 0.275 0.55 NGF產生量 100 379.1 462.5 (但’對照組之NGF產生量為0.251毫微克/毫升。） 表7 1 種皮水抽提部分-1 試樣濃度(毫克/毫升） NGF產生量(％) 0 100 3.125 131.4 6.25 144.1 12.5 307.9 種皮水抽提部分-2 試樣濃度(毫克/毫升） 0 0.654 1.308 2.616 NGF產生量(％) 100 310-2 436.8 512.3
(但’對照組之NGF產生量為0.223毫微克/毫升。） 又，與實施例4 - ( 1 )同樣方法，測定大豆種皮水抽提部 -140 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210 X 297公釐) !313605
AT - ___________Β7 ________ 五、發明説明（138) 分-1、水柚提部分_ 2之HGF產生增強活性。添加大豆種皮 水柚提部分' 1，使成12 5，1 2 5 0微克/毫升。添加大旦種皮 水抽提部分-2，使成26.1 6、26 1.6微克/毫升。其結果示於 表72、73。大豆種皮水抽提部分_ι、水抽提部分-2 ’濃度 依存性地增強MRC - 5細胞之HGF產生。 表 72_____一 大豆種皮水抽提部分 試樣濃度(毫克/毫升） 〇 125 1250 HGF產生量(％)_1〇〇 134 218___ (但’對照組之HGF產生量為14.92毫微克/毫升。） 表 73___ 大豆種皮水抽提部分-2 試樣濃度(毫克/毫升） 〇 26.16 261.6 HGF產生量(％)_1Ό0 115 128 --——---------— (但，對照組之HGF產生量為8.24毫微克/毫升。） (5 )將大豆粉（紀文社製）1 〇克中加2〇〇毫升氯仿，於室溫 進行抽提。對吸引過濾後之殘渣，反覆此抽提操作2次。於 氣仿抽提後之殘渣加200毫升乙醇，於室溫進行拙提。對吸 引過濾後之殘渣，重複此操作2次。收集過遽後之液體部 分，以旋轉蒸發器濃縮使乾，乾固物溶於3毫升乙醇。收集 溶於乙醇之部分’以旋轉蒸發器濃縮使乾，得大豆粉之乙 -141 -
139; 1313605 五、發明説明（ 鮮抽提部分，！。又，收集不溶於乙醇 以旋轉蒸發器濃縮使乾，得大豆粉之乙^游餾水部分， ;女，士人r JS* t 杨 < 乙醇抽提部分_ 7。甘 ；^抽提後之殘渣加丨〇〇毫升蒗 ’、 小時抽提。以i 0，_G離心除去殘·.大：、二.於6 〇 C進行2 吾7醢、λ 陈舌殘退弋硬體邵份，加2.5件 m…2〇。。靜置Η、時。其後，以10,000G離心，分 得二：液體部分。液體部分以旋轉蒸發器濃縮使乾， :s 、7抽提邵分-1。一方面’將沉殿溶於蒸館水’得 大旦粉水抽提部分_2。 八⑷與實施例13同樣方法，測定上述大豆粉乙醇抽提部 :^2，大旦粉水抽提部分_丨之NGF產生增強活性。添加大 旦叔乙醇抽提部分·2，使成〇 488、〇 975毫克/毫升。添加 大旦粉水抽提部分-1，使成2.625、5.2 5毫克/毫升。其結 果不於表74、75 »大豆粉乙醇抽提部分_2，大豆粉水抽提 部分-1 ’濃度依存性地增強L _ Μ細胞之NGF產生。 表74 大且粉之乙醇抽提部分·2 試樣濃度(毫克/毫升） NGF產生量(％) 0 100 0.488 426.5 0.975 400.7 (但’對照組之NGF產生量為0.251毫微克/毫升。） 表75 大豆粉水抽提部分-1 試樣濃度(毫克/毫升） 0 2.625 5.25 NGF產生量(％) 100 284.7 283.5 -142 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210 X 297公釐） 1313605 A7 B7 五、發明説明（14(D) (但，對照組之NGF產生量為0.223毫微克/毫升。） 又，與實施例4 - ( 1 )同樣方法測定大豆粉水抽提部分-1、 水抽提部分-2之HGF產生增強活性。添加大豆粉水抽提部 分-1，使成1 05、1 050微克/毫升。添加大豆粉水抽提部分-2，使成56.5、565微克/毫升。其結果示於表76。大豆粉水 抽提部分-1、水抽提部分-2，濃度依存性地增強MRC- 5細 胞之HGF產生。
裝 表76 大豆粉水抽提部分-1 試樣濃度(毫克/毫升） HGF產生量(％) 0 100 105 142 1050 131 大豆粉水抽提部分-2 試樣濃度(毫克/毫升） 0 56.5 565 HGF產生量(％) 100 127 171 (但，對照組之HGF產生量為14.47毫微克/毫升。） 訂
k 實施例4 0 (1 )於諸丙夜葉粉末（皇漢藥品研究所製）5克中加200毫升 氣仿室溫下進行抽提。對吸引過濾後之殘渣，反覆此抽提 操作2次。氯仿抽提後之殘渣中加200毫升乙醇，於室溫進 行抽提。對吸引過濾後之殘渣，反覆操作2次。收集過濾後 之液體部分，以旋轉蒸發器濃縮使乾，乾固物溶於1 7毫升 -143- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格（210 X 297公釐） 1313605
2。收集溶於乙醇之部分’以旋轉蒸發器漠縮使乾，得 乙鮮抽提邵分-1。又，收集無溶於乙醇而溶 分’以旋轉蒸發器濃縮使乾，得乙醇拙提部分、卜、其二部 3抽提後之殘渣中加80毫升蒸齒水，於㈣進行^ ㈣，_G離心除去殘渣之液體部分，加25倍量之 二：二2°。？置1小時。其後，以10，_離心分成沉 柄與U分。液體部分以旋轉蒸發器濃縮使乾，得水 分」…万面，沉殿再溶衫I®水中，對蒸館水進 :丁 斤（透析膜：Sea—ss Cel丨urose Tubing UC36 32_ ’二先純樂社製）。透析液内加25倍量之乙醇於_2〇 (置1 "寺其後’以1〇,〇〇〇G離心，分成沉澱物與液體 邵为。將沉澱物溶於蒸餾水’得水抽提部分。 ⑺以與實施例13同樣方法，測定上述諸丙夜葉乙醇抽提 邵分-2、水抽提部分]、水抽提部分_2之臟產生增強活 性。添加諸丙夜葉乙醇抽提部分使成〇 15 ' 〇3毫克/毫升。 添加諸丙夜葉水抽提部分q，丨成141毫克/毫升。添加諸 丙仗茱水抽提部分·2，使成G.G1、㈣2、請毫克/毫升。 其結果示於表77。諸丙夜葉乙醇抽提部分」、水抽提部分· 二水抽提部分-2’濃度依存性地增強一之_產 -144 本紙張尺度適用中g國*標準⑴⑽）Μ規格(Wax 2町公釐） 1313605 A7 B7 五、發明説明（142) 表77 乙醇抽提部分-2 試樣濃度(毫克/毫升） NGF產生量(％) 0 0.15 0.3 100 256.1 295.7 水抽提部分-1 試樣濃度(毫克/毫升） NGF產生量(％) 0 1.41 100 843.4 水抽提部分-2 試樣濃度(毫克/毫升） NGF產生量(％) 0 0.01 0.02 0.04 100 250.5 300.2 372.6 (但，對照組之NGF產生量為0.1 22毫微克/毫升。） 又，同實施例4 - ( 1 )之方法，測定諸丙夜葉水抽提部分 -1、水抽提部分-2之HGF產生增強活性。添加丙夜葉水抽 提部分-1，使成225.5、22.55、2.255微克/毫升。添加丙夜 葉水抽提部分-2，使成20.8、4、0.4、0.04微克/毫升。其 結果示於表7 8，7 9。諸丙夜葉水抽提部分-1、水抽提部 分-2，濃度依存性地增強MRC - 5細胞之HGF產生。 表78 諸丙夜葉水抽提部分-1 試樣濃度(毫克/毫升） HGF產生量(％) 0 2.255 22.55 225.5 100 232 406 612 (但，對照組之HGF產生量為5.96毫微克/毫升。） -145- 玎 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 x 297公釐)
裝
線 1313605 A 7 B7 五、發明説明 表79_ 諸丙夜葉水抽提部分-2 試樣濃度(毫克/毫升) HGF產生量(％) 0 100 0-04 0.4 4 出—_129___188____266 (但’對照組之H G F產生I為9 · 5 6毫微克/毫升 20 449 實施例4 1 (υ於米糠ίο克中加2〇〇毫升氣仿，於室溫進行抽提。對 吸引過錢之m覆此操作2次。收集_後之 分，以旋轉蒸發器濃縮使乾，得氣仿抽提部分。氯仿抽提 後之殘逢，加200毫升乙醇’於室溫進行抽提。對殘渔反覆 此料2次。.收集過滤後之液體部分，以旋轉蒸發器濃縮使 乾’乾固物落於3 5毫升乙醇。收集乙醢 叹杲乙醇/谷液，以旋轉蒸發 态/辰縮使乾，侉乙醇抽提部分_丨。 .λ 1又，收集不溶於乙醇而 溶：祕之部分，以旋轉蒸發器濃縮使乾，得乙醇抽提 部分-2。其次’乙醇抽提後之殘 進行抽提2小時”X1請= 中加_升蒸餘水，於 八中力…… ，〇〇〇}離心’除去殘渣之液體部 in nnnr . . 、 〇 c静置1小時。其後，以 器濃縮使乾，得水抽提部分— 部^硬體部分以旋轉蒸發 水，得水抽提部分小 …將沉殿物溶於蒸飽 (2)與實施例1 3同樣方法，測 部分、乙醇抽提部分卜乙醇抽提t備之米糖氯仿抽提 1、水抽提部分-2之NGF產生 刀'2、水抽提邵分_ 生，強活性。添加米糠氯仿抽提 衣紙狀 __ - 146 - 1313605 A7 B7 五、發明説明（144) 部分，使成4.4、8.8毫克/毫升。添加米糠乙醇抽提部分-1，使成0.125、0.25、0.5、1.0毫克/毫升。添加米糠乙醇 抽提部分-2，使成0.625、1.25、2.5、5.0毫克/毫升。添 加米糠水抽提部分-1，使成0.625、1.25、2.5、5.0毫克/ 毫升。添加米糠水抽提部分-2，使成0.625、1.25、2.5、 5.0毫克/毫升。其結果示於表8 0。米糠氯仿抽提部分，乙 醇抽提部分-1、乙醇抽提部分-2、水抽提部分_ 1、水抽提 部分-2，濃度依存性地增強L-M細胞之NGF產生。 表80 氯仿抽提部分 試樣濃度(毫克/毫升） NGF產生量(％) 0 100 4.4 125.8 8.8 181.8 乙醇抽提部分-1 試樣濃度(毫克/毫升） 0 0.125 0.25 0.5 1.0 NGF產生量(％) 100 239.6 318.6 357.3 373.0 乙醇抽提部分-2 試樣濃度(毫克/毫升） 0 0.625 1.25 2.5 5.0 NGF產生量(％) 100 313.0 393.7 445.9 685.8 水抽提部分-1 試樣濃度(毫克/毫升） 0 0.625 1.25 2.5 5.0 NGF產生量(％) 100 151.0 177.4 291.1 559.1 水抽提部分-2 試樣濃度(毫克/毫升） 0 0.625 1.25 2.5 5.0 NGF產生量(％) 100 138.1 185.8 248.0 428.5 -147- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格（210 X 297公澄） 1313605 A7 B7 五、發明説明（145) (但，對照組之NGF產生量為0 · 1 72毫微克/毫升。） 又，以與實施例4 - ( 1 )同樣方法，測定水抽提部分-1之 HGF產生增強活性。添加米糠水抽提部分-1，使成1 000、 1 00微克/毫升，其結果示於表8 1。米糠水抽提部分-1，濃 度依存性地增強MRC - 5細胞之HGF產生。 表8 1_ 水抽提部分-1 試樣濃度(毫克/毫升） 0 100 1000 HGF產生量(％)_100 107 157_ (但，對照組之HGF產生量為4.04毫微克/毫升。） 實施例4 2 (1 )將市售烏龍茶葉抽提成通常之2倍濃度，得500毫升。 此依表82所示之摻合，製備含醇之烏龍茶1000毫升。
裝 玎
線 表82 烏龍茶 50% 1/5檸檬果汁 0.1% 檸檬酸或檸檬酸鈉 適量 維生素C 0.02% 砂糖(甘蔗） 4.5% 乙醇(v/v) 4.0% pH 3.7 純水 餘額 -148 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1313605 A7 B7 五、發明説明（ (2 )將竹葉粉末7克懸浮於丨〇〇毫升純水’製備6 〇它下抽 提1小時之抽提物之冷凍乾燥物，於上述含醇烏龍茶中添加 該乾燥物使成〇. 1微克/毫升，製備醇飲料。製備添加該乾 燥物使該乾燥物中之異荭草素為1〇〇微克/毫升之醇飲料。 (3 )將洋忽薄皮5克懸浮於1 〇〇毫升純水’於丨〇〇充抽提i 5 分’製備抽提物。製備添加該抽提物於上述含醇烏龍茶， 使成100倍稀釋之醇飲料。 (4 )將銀杏茶葉3克，懸浮於純水2〇〇毫升，於丨〇〇艺抽提 1 5分’製備抽提物之冷凍乾燥物，將該乾燥物溶於純水8 毫升後’製備於上述含醇烏龍茶中添加該溶解液使成丨〇〇倍 稀釋之醇飲料。 (5 )將艾嵩乾燥品1 〇克中添加丨5〇毫升純水，於6 〇。〇抽提 1小時’製備抽提物’於上述含醇烏龍茶中，添加來自該抽 提< 3，5 -二咖啡醯基奎寧酸，使成$微克/毫升，製備含醇 飲料。又製備添加來自該抽提物之氯原酸使成4〇微克/毫升 之含醇飲料。 (6) 將明曰葉（葉莖部）乾燥品4 $ 〇克懸浮於2升純水’於6 〇 C抽彳疋1小時，製備抽提物，於含醇烏龍茶中添加該抽提物 中之鼠原使成10微克/宅升’製備含醇飲料。 (7) 將菊花乾燥物15克懸浮於純水15〇毫升，於6cTc柚提 2小時，製備抽提物，於上述含酵烏龍茶中，添加該抽提 物，使成100倍稀釋，製備含醇飲料。 (8 )將紫鬱金乾燥品5克懸浮於純水2 5毫升，於6 〇 °C抽提 2小時，製備抽提物之冷凍乾燥物，於上述含醇烏龍茶中， -149-
1313605
添加該乾燥物’使成10微克/毫升，製備含醇飲料。 (:)將李子300克與5⑽毫升乙醇—起使均_化，以過遽製 4'夜’於上述含醇烏龍#中，添加該拙提物使成_〇倍 稀釋:夜’製備含醇飲料。使用該抽提物，使飲料中分別含 1〇〇微克/毫升之5.㈣酿基奎寧酸、4.咖啡醯基酸， 製備含醇飲料。 (1 0)將青花，菜3〇〇克與5 0 %乙醇水溶液35〇毫升一起均一 以過濾製備濾液，將該濾液濃縮成丨5〇毫升。於上述含 醇烏龍茶中，添加該濃縮液，使成1〇⑼倍稀釋液，製備: 醇飲料。 (π)將春菊之冷凍乾燥物10克粉碎，以乙醇洗淨後，添 加100¾升水，於60°c加熱1小時，製備抽提液，於上述含 醇烏龍茶中，添加該濃縮液使成1〇〇〇倍稀釋液，製二 飲料。 13 (1 2 )對春菊900克與8 0 %乙醇水溶液2升一起均—化，以 過濾製備濾液，將該濾液濃縮至50毫升。於上述含醇烏龍 茶中’添加該濃縮物使前1〇〇〇倍稀釋液，製備含醇飲料。 又，於該含醇飲料中，使用該濃縮液使3,5_二咖啡醯基奎 寧酸為10微克/毫升’製備含醇飲料。 (13)將市售啤酒（前出市售品8)15升濃縮成6升，於上述 含醇烏龍茶中’添加該濃縮液使成1 〇〇倍稀釋液，製備各醇 飲料。 13 - (14)將市售之無醇啤酒飲料（前出市售品D)1 5升濃縮成6 升’於上述含醇烏龍茶中’添加該濃縮液使成1〇〇倍5稀釋 -150 -
本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4规格(210 X 297公釐） 1313605 A7
液’製備含醇飲料》 (1 5 )將大豆胚芽碎斷物丨〇克’以乙醇2〇〇毫升洗淨後 加200毫升水，於6〇t加熱2小時，製備抽提液。將抽彳’ 過濾，得滤液後，遽液中加2.5倍量乙肖，分別製備乙= 溶性部分與乙醇不溶性部分之乾燥物。於上述含醇烏龍茶 添加乙醇可溶性部分之乾燥物，使成2〇〇微克/毫^供 含醇飲料。 &備 又，於上述含醇烏龍茶中添加乙醇不溶性部分之乾燥 物’使成130微克/毫升，製備含醇飲料。 … (16) 大豆種皮碎斷物1〇克，以乙醇2〇〇毫升洗淨後，加 7〇毫升水’於60。(；加熱2小時’製備抽提液。將柚提液^ 濾，得濾液後，濾液中加2.5倍量之乙醇，分別製備乙醇可 溶性部分與乙醇不溶性部分之乾燥物，於上述含醇烏龍茶 中添加乙醇可溶性部分之乾燥物，使成13〇微克/毫升製 備含醇飲料。 又，於上述含醇烏龍茶中，添加乙醇不溶性部分之乾燥 物，使成30微克/毫升，製備含醇飲料。 (17) 將大旦粉10克以乙醇200毫升洗淨後，添加1〇〇毫升 水，於6 0 °C加熱2小時，製備抽提液。將柚提液過濾，得 濾液後，濾液中加2.5倍量之乙醇，分別製備乙醇可溶性部 分與乙醇不溶性部分之乾燥物。於上述含醇烏龍茶中，添 加乙醇可溶性部分之乾燥物，使成100微克/毫升，製備含 醇飲料。 又於上述含醇烏龍茶中’添加乙醇不溶性部分之乾燥 -151 - 本纸張尺度適财ϋ®家標準(CNS) A4規格(21GX 297公爱) _^ ------ 149> 1313605 五、發明説明（ 物，使成60微克/毫升，製備含醇飲料。 (…將諸丙夜葉粉末5克，以2〇〇毫升乙醇洗淨後，添加 8〇笔升水’於6〇°C加熱2小時，製備抽提液。將抽提液過 滤’得細。慮液中加2.5倍量之乙醇，分別製備乙醇可 溶性部分與乙醇不溶性部分之乾燥物。於上述含醇烏龍茶 中’添加乙醇可溶性部分之乾燥物，使成2微克/毫升，製 備含醇飲料。 又於上述含醇烏龍茶中，添加乙醇不溶性部分之乾燥 物’使成4微克/毫升，製備含醇飲料。 (19)將米糠1〇克’以乙醇200毫升洗淨後，添加100毫升 水’於㈣加熱2小時’製備拙提液。將抽提液過遽，得 滅液後’於心中加2.5倍量之乙醇’製備乙醇可溶性部八 之乾燥物。於上述㈣烏龍茶中，添加乙醇可溶性部分: 乾燥物，使成1¾克/毫升，製備含醇飫料。 (2 0 )上述實施例4 2 - (2 )〜Π 9、折#、a上 L ) U9)所圮< 含醇飲料，為風味 佳且具HGF產生增強能之清涼醇飲料。 又，此等飲料進行碳酸飽和，製備發泡型之飲料。 又，製備含㈣倍量之此等飲料中具咖產生增強能之 有效成分之無醇型飲料。此等飲料任_者皆顯 味、高的HGF產生增強能。 實施例4 3 (1)依表8 3所記之摻合，製備含醇果汁。 -152 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公"17 1313605 五、發明説明（ 150) A7
表83 ' -*---! 1/6葡萄柚果汁 ------ 棒橡酸或棒樣酸納 0.56% 適量 維生素C 果糖葡萄糖液糖 0.02% 水Ί台 1.5% 乙醇(v/v) 2.2% 3.0% pH 純水 3.3 ----------J --- 餘額 (2)將市售之紅花黃色色辛·禾士 5 ^ ^ ± ^ 巴素添加至上述含醇果汁，使該色 素為1.25¾克/ ¾升，劁偌人結 r ΒΗ Δ # .. 備3醇飲料β該飲料中含高量之紅 化月Α為其有效成分。又’將^ — a u ι 1<Λ古儿、 將、.工化乾紐物1〇克懸浮於純水 1 5 0笔升’於6 0。〇抽提2小時，棘虹 、λ 、. Τ 將抽耠物之冷凍乾燥物添加 於上述含阵果汁，使該兹檢cb - Λ乾煤物中《紅花明A為3毫克/毫 升，製備含醇飲料。 。⑴將市售菊花乾燥物15克’懸浮於純水15〇毫升，於6〇 C抽k 2小時’將抽提物之冷;東乾燥物添加至上述含醇果汁 中，使该乾燥物為2〇毫克/毫升，製備含醇飲料。 又，於上述含醇果汁中，添加上述冷凍乾燥物，使癒瘡 内酯為20微克/毫升，製備含醇飲料。 (4)將明日葉乾燥物（葉莖部）2〇克懸浮於純水36〇毫升， 於6〇°C抽提2小時，將抽提物之冷凍乾燥物添加於上述含 醇果'十’使咸乾燥物為400微克/毫升，製備含醇飲料。 -153 - 本紙張尺度通用中國國冬標準(CNS) Μ規格(2ι〇χ297公爱） 1313605 A7
又，將明曰葉乾燥物（根部）2 0克懸浮於純水360毫升，+ 6 〇 °C抽提2小時，將抽提物之冷凍乾燥物添加於上迷人醇 果汁’使該乾燥物為6〇〇微克/毫升，製備含醇飲枓。 ° 另外’於上述含醇果汁中添加該乾燥物’使黃卷 ^ ^ ^ jk 10微克/毫升，製備含醇飲料。 … 又’於上述含醇果汁，添加該乾燥物，使3，_ P _ 口比 喃葡糖基開洛内酯為5 〇微克/毫升，製備含醇飲料。 石-D - ?比 製備含醇 又’於上述含醇果汁，添加該乾燥物，使7_〇 喃葡糖氧基-8 -異戊二烯基色滿為3 〇微克/毫升， 飲料。 又，上述含醇果汁中，添加該乾燥物，使咖啡酸甲、 20微克/毫升’製備含醇飲料。 S曰為 又，上述含醇果汁，添加該乾燥物，使8_羧基q _ 5-甲氧基-2-二甲基色滿為3微克/毫升，製備含醇飲料匕基_ 又，上述含醇果汁，添加該乾燥物，使7_^_D_吡喃葡糖 氧基-6-異戊二烯基色滿為3〇〇微克/毫升，製備含醇飲料。° 又，上述含醇果汁，添加該乾燥物，使4，_〇_ 3|-o-[6-o-(/-D二比喃葡糖基“比喃葡糖醯基];開 洛内S旨為400微克/毫升，製備含醇飲料。 又’於上述含醇果汁巾，添加該乾燥物，使咖啡酸乙酿 為30微克/毫升，製備含醇飲料。 (5)將洋葱薄皮25克懸浮於95% v/v乙醇5〇〇毫升，於室溫 抽提’製備㈣液之乾燥％，於上述含醇果汁中添加該乾 燥物’使為100微克/ ¾升’製備含醇飲料。 -154- 1313605 A7 B7
五、發明説明（152 (6 )將銀杏茶葉3克懸浮於純水2〇〇毫升 小時，製備抽提物之冷凍乾燥物，於1 ’於1 0〇 t抽提1 加該乾燥物，使成700微克/毫升，、迷含醇果汁中，添 、 ^備含醇餘划· (7 )將市售之薔薇花2克懸浮於纟屯水* 〇 # 1小時，製備多抽提物之冷凍乾燥物，於笔升’於6 0它抽提 添加該乾燥物使成80微克/毫升，製備含醇果汁中， ⑴使用市售之啤酒花抽提物，添加 使黃腐醇含量為3微克/毫升，製備含醇飲料。D .不/十中， (9) 將市售之哮酒花抽提物’添加於上述含 作為乾燥重量為20微克/毫升，製備含醇飲料。/ ，使 (10) 使用市售啤酒花抽提物’添加於上述今醇果十 ^黃腐醇B、黃腐醇：)之總量為2G微克/毫/製備含醇飲 (11) 使用市售之啤酒花抽提物，添加於上述含醇果汁， 使異黃腐醇含量為80微克/毫升，製備含醇飲料。 ' (12) 將市售啤酒（前出市售品3)15升濃縮成6升，添加於 上述含醇果汁中，使該濃縮液成丨〇倍稀釋液，製備含醇飲 料。 人 (1 3)將市售無醇啤酒飲料（前出市售品D)丨5升濃縮成6 升’添加於上述含醇果汁中，使該濃縮液成丨〇倍稀釋液， 製備含醇飲料。 (1 4)用市售啤酒花抽提物，添加於上述含醇果汁，使^ 腐醇含量為0·04微克/毫升’異黃腐醇含量為L3微克/毫 升，製備含醇飲料。 -155- 本紙張尺度適用尹國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐）
裝 玎
線 1313605 A7 B7 153y 五、發明説明（ 土 /吏用市售啤酒花抽提物’添加於上述含醇果汁，使 汽腐醇含量為0.9微克/毫彳，異黃腐_含量為4微克/毫 升’製備含醇飲料》 >(1 5)將啤酒花乾燥物5 〇克粉碎，以i升之乙醇抽提，濃 f抽H添加於上述含醇果汁中，使濃縮物作為乾燥重 量為20微克/毫升，製備含醇飲料。 ^6)將紫鬱金5克之碎斷物懸浮於純水^毫升，於 抽提2小B争，將才由提物之冷康乾燥物添加於上述含醇果汁 中，使该乾燥物為6〇〇微克/毫升，製備含醇飲料。 (”)將大豆胚芽碎斷物，1〇克，以毫升乙醇 水，於6〇t加熱2小時，製備抽提液。將 抽楗視過遽，得濾液後’滤液中加25倍量乙醇 ^可溶性部分與乙醇不溶性部分之乾燥物於上述 Π::醇可溶性部分之乾燥物’使成5毫克/毫升，製 二？上述含醇果汁中添加乙醇不溶性部分之 使成3毫克/毫升’製備含醇飲料。 ⑴)將大豆種皮碎斷物1〇克，以乙醇2〇〇 添加7〇毫升水，於60t加熱2小時，製 ：’ 液過濾，得濾液後，濾液中加25倍量乙醇，八成將抽提 可溶性部分與乙醇不溶性部分之乾燥物。添：：製傷乙醇 烏龍茶’使乙醇可落性部分之乾燥 二?上迷含醇 含醇飲料。 笔克/鼋升，製備 又’將乙醇不溶性部分之鉑換物，.致 乾知物添加於上述含醇果汁， 156- 本纸張尺度適财s料料(CNS) 1313605 發明説明（ 使成600微克/毫升’製備含醇飲料。 (19)將大豆粉1()克以乙醇鳩毫升洗淨後，添加毫升 水，於60t加熱2小日争’製備拙提液。將插提液過濟，得 處液後”慮液中加2.5倍量乙醇，分別製備乙醇可溶八 與乙醇不溶性部分之乾燥物。於上述含醇果汁中添加乙二 可落性邵分之乾燥物使成3毫克/毫升’製備含醇飲料。 又，將乙醇不溶性部分之乾燥物添加於上述 茶，使成6 0微克/毫升，製備含醇飲料。 …s 」2〇)將諸丙夜葉粉末5克以乙醇綱毫升洗淨後，添 耄升水’於6 0 °C加熱2小時，製储細描％ … * 氟備抽耠硬。將抽提液過 滤’仔滅'液後’滤液中加2.5倍量乙醇，分別製 性部分與乙醇不溶性部分之乾燥物。於上述含 ： =醇可溶性部分之乾燥物使成5⑽微克/毫升，製備含醇 又’將乙醇不溶性部分之乾燥物添加於上述 使成5微克/毫升’製備含醇飲料。 · / ’ ⑴）將米糠！〇克以乙醇扇毫升洗淨後，添加 水：於60t加熱2小時，製備抽提液。將抽提液過渡 濾液後’〉慮液中加2.5倍量乙醇，分別製備乙醇可办二： 與乙醇不溶性部分之乾燥物。於上述含醇果汁中^心 可溶性部分之乾燥物使成500微克/毫升，製備含醇：乙酵 又，將乙醇不溶性部分之乾燥物添加於上述人 使成500微克/毫升’製備含醇飲料。 / (22)上述實例43-(2)〜（2 1)記載之含醇果 不才飫料，為風 -157 -
本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210X297公笼）— 155 1313605 五、發明説明（ 味佳，且具NGF產生增強能之清涼醇飲料。 又，此等飲料進行碳酸飽和，製備發泡型飲料。 又，製備含有20倍量之此等飲料中具NGfF產生增強炉、 有f成分之無醇空飲料。此等飲料任一者皆顯示二好 及咼的NGF產生增強能。 產業上之利用可能性 斤根據本發明，提供含有來自植物之成長因子產生增強物 質心成長因子產生增強用組合物，含有該組合物對以成長 因子產生增強為必要之疾病有效之醫藥、食品、飲料或甸 7。該醫藥於生豸内具有成長因子產生增強活十生，作為肝 犬、重症肝炎、劇症肝炎、肝硬化、肝肉膽汁滯留等之肝 障礙’藉由藥劑等之腎障礙、胃腸障礙'血管障礙、慢性 腎炎、肺炎、創傷、糖尿病、癌、癡呆症或神經障礙等之 以成長因子產生增強為必要之疾病之治療劑或預防劑有 用。又，該食品或飲料中，藉由日常之飲食品攝取，可能 改善以成長因子之產生增強為必要之疾病之症狀。因而， 以來自植物之具成長因子產生增強作用之物質為有效成分 之·機能性飲食品，藉由其成長因子產生增強作用，為維持 生體（恆常性上有用之機能性飲食品。該飼料具生物之身 體狀況改善等之效果而有用。另外’根據本發明，亦提供 來自植物之成長因子產生增強劑，該增強劑對於成長因子 之機能研％，有關成長因子之疾病用醫藥之篩選有用。 -158 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(21〇 χ 297公釐）

Claims (1)

  1. 中文申請專利範圍替換本(96年12月） A8 B8 C8 D8
    六、申請專利範圍 13 1 3祕§)1〇8529號專利申請案 用食品，其中含0.00 007重 一種神經成長因子產生增強 昼％以上之黃腐醇。 用飲料，其中含0.00007重 一種神經成長因子產生增強 量％以上之黃腐醇。 3. 種神經成長因子產生增強用飼料，其中含〇〇〇〇07重 量％以上之黃腐醇。 4. 種芙腐醇之用途’其係用於製造含0.00007重量％以 上之黃腐醇之神經成長因子產生增強用食品。 5 -種兴腐醇之用途，其係用於製造含0.00007重量％以 上之黃腐醇之神經成長因子產生增強用飲料。 6 '種界腐醇之用途’其係用於製造含0.00007重量％以 上之頁腐醇之神經成長因子產生增強用飼料。 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4规格(210 X 297公釐)
TW090108529A 2000-04-10 2001-04-10 TWI313605B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2000108602 2000-04-10
JP2000308522 2000-10-06
JP2001019167 2001-01-26

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TWI313605B true TWI313605B (zh) 2009-08-21

Family

ID=27343046

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW096150834A TW200817024A (en) 2000-04-10 2001-04-10 Remedies
TW090108529A TWI313605B (zh) 2000-04-10 2001-04-10

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW096150834A TW200817024A (en) 2000-04-10 2001-04-10 Remedies

Country Status (8)

Country Link
US (2) US20040002423A1 (zh)
EP (2) EP1277473A4 (zh)
JP (1) JP2009269927A (zh)
KR (2) KR100858860B1 (zh)
CN (1) CN100457124C (zh)
AU (1) AU2001246876A1 (zh)
TW (2) TW200817024A (zh)
WO (1) WO2001076614A1 (zh)

Families Citing this family (56)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2001076614A1 (fr) * 2000-04-10 2001-10-18 Takara Bio Inc. Remedes
EP1386919A4 (en) * 2001-04-10 2010-03-10 Takara Bio Inc REMEDIES
US20040219238A1 (en) * 2001-07-13 2004-11-04 Eiji Nishiyama Remedies
EP1360959A1 (en) * 2002-05-10 2003-11-12 Schering Aktiengesellschaft Use of 8-prenylflavanones for anti-angiogenesis therapy and for fibrinolytic therapy
US20060034949A1 (en) * 2002-08-09 2006-02-16 Tatsuji Enoki Remedy
JP2004099503A (ja) * 2002-09-09 2004-04-02 Nonogawa Shoji Kk Ｈｇｆ産生促進剤およびこれを含有する化粧料
RU2005112252A (ru) * 2002-09-23 2005-09-10 Джон И. Хаас, Инк. (Us) Хмелевые кислоты как заменитель антибиотиков в кормах для животных
KR20050053731A (ko) * 2002-10-01 2005-06-08 다카라 바이오 가부시키가이샤 치료제
WO2004043475A1 (ja) * 2002-11-12 2004-05-27 Takara Bio Inc. 学習・記憶能力の向上剤
DE10256031A1 (de) * 2002-11-30 2004-06-09 Nateco 2 Gmbh & Co. Kg Verfahren zur Herstellung eines Xanthohumol-angereicherten Hopfenextraktes und dessen Verwendung
ATE407667T1 (de) * 2003-04-08 2008-09-15 Kirin Brewery Zusammensetzung zur hemmung oder prävention der verringerung der knochendichte
WO2005072064A2 (en) * 2004-01-28 2005-08-11 Merina Benny Antony A preparation, process and a regenerative method and technioue for prevention, treatment and glycemic control of diabetes melletus
DK1722635T3 (en) 2004-02-23 2016-01-11 Sss Acquisition Llc Feed containing hop acid and its use as a supplement in animal feed
JP2005272355A (ja) * 2004-03-25 2005-10-06 Tsuno Rice Fine Chemicals Co Ltd 脳機能改善剤
JP2007063130A (ja) * 2004-03-31 2007-03-15 Kureha Corp 抗糖尿病用組成物
US20060069042A1 (en) * 2004-09-24 2006-03-30 Hu Oliver Y Cytochrome P450 2C9 inhibitors
US7531624B2 (en) * 2004-12-03 2009-05-12 Medtrain Technologies, Llc Nuclear targeting sequence
JP5097983B2 (ja) * 2005-02-22 2012-12-12 学校法人東京農業大学 抗酸化活性を有する組成物の製造方法
KR100720973B1 (ko) * 2005-03-18 2007-05-22 주식회사 유니젠 천연물 유래 아이소오리엔틴을 포함하는 히스타민 억제용약학 조성물
KR100823155B1 (ko) * 2005-11-09 2008-04-21 한국생명공학연구원 신규한 카테콜릭 잔톤 계열 화합물 및 꾸지뽕나무 추출물 또는 그로부터 분리된 카테콜릭 잔톤 계열 화합물을 포함하는 심장순환계 질환의 예방 및 치료용 조성물
JP4990534B2 (ja) * 2006-02-02 2012-08-01 ポーラ化成工業株式会社 カフェオイルキナ酸誘導体及びそれを有効成分とするプラスミノーゲンアクチベーターインヒビター抑制用の組成物
WO2007091613A1 (ja) * 2006-02-07 2007-08-16 University Of Tsukuba アルツハイマー病予防又は治療剤、並びに飲食物
JP2007230946A (ja) * 2006-03-02 2007-09-13 Nagase & Co Ltd 神経突起伸長剤
DE102006062264A1 (de) * 2006-12-22 2008-06-26 Joh. Barth & Sohn Gmbh & Co. Kg Verwendung von Xanthohumol zur Vorbeugung und/oder Bekämpfung von Lebererkrankungen
JPWO2009107878A1 (ja) * 2008-02-29 2011-07-07 株式会社 伊藤園 アデニンを高濃度に含有する野菜エキス、該野菜エキスを含むアデニン含有容器詰飲料、該野菜エキスを有効成分として含有してなる経口血圧降下剤組成物及びその製造方法
KR101067905B1 (ko) * 2008-10-22 2011-09-27 동아대학교 산학협력단 항고혈당증 활성을 갖는 닥나무 줄기 껍질
KR20120003009A (ko) 2009-04-21 2012-01-09 하스, 존 아이. 동물용 사료 조성물 및 사료를 공급하는 방법
EP2392325A1 (en) * 2010-06-04 2011-12-07 Universitätsklinikum Münster Compounds for the prevention and/or treatment of osteoarthrosis
CA2807520A1 (en) * 2010-08-06 2012-02-09 Hadasit Medical Research Services And Development Ltd. Soybean extracts for the treatment of hepatic disorders
WO2012046993A2 (ko) * 2010-10-04 2012-04-12 한국한의학연구원 오매 추출물을 함유하는 치매 예방 또는 치료용 조성물
KR101434464B1 (ko) 2010-10-04 2014-08-27 한국 한의학 연구원 오매 추출물을 함유하는 치매 예방 또는 치료용 조성물
CN102692472B (zh) * 2011-03-22 2015-10-21 河北以岭医药研究院有限公司 一种羟基红花黄色素a的含量测定方法
KR101384351B1 (ko) * 2012-02-14 2014-04-14 충북대학교 산학협력단 장미꽃 추출물을 유효성분으로 포함하는 허혈성 뇌질환 치료용 조성물
JP6031662B2 (ja) * 2012-02-29 2016-11-24 株式会社漢方医科学研究所 認知機能低下改善用組成物
JP2015520225A (ja) 2012-06-22 2015-07-16 アントニー, マリア, ベニーANTONY, Merina, Benny コスツス・ピクツスｄ．ｄｏｎ植物の抽出物から得られるものおよび同抽出物を調製する方法
KR20150019505A (ko) * 2013-08-14 2015-02-25 대화제약 주식회사 플라본-6-c-글루코스 유도체를 유효성분으로 함유하는 신경정신질환의 치료 또는 예방용 약학적 조성물
JP6261263B2 (ja) * 2013-09-30 2018-01-17 ハウス食品グループ本社株式会社 ウコンエキス含有飲料
JP6855157B2 (ja) * 2014-10-06 2021-04-07 扶桑化学工業株式会社 水中動物用飼料、水中動物用発育向上剤、および、それらを用いた養殖魚の飼育方法
CN104352457A (zh) * 2014-11-24 2015-02-18 四川九章生物科技有限公司 一种包含绿原酸晶型的制剂及其用途
WO2016117705A1 (ja) * 2015-01-23 2016-07-28 株式会社ニューロゲン 肝細胞増殖因子産出誘導剤
US10966423B2 (en) * 2015-11-03 2021-04-06 Purac Biochem B.V. Anti-microbial agent comprising xanthohumol and the use thereof in food products
CN105193787B (zh) * 2015-11-12 2018-03-23 江苏康缘药业股份有限公司 比克白芷内酯的应用
CN105343052B (zh) * 2015-11-12 2018-07-03 江苏康缘药业股份有限公司 紫花前胡苷元的应用
CN105213364B (zh) * 2015-11-12 2018-03-23 江苏康缘药业股份有限公司 凯林内酯的应用
CN105412083B (zh) * 2015-11-12 2018-07-03 江苏康缘药业股份有限公司 异虎耳草素的应用
CN105248456B (zh) * 2015-11-30 2018-07-13 南京中医药大学 具有抗腐烂茎线虫活性的中药提取物及其应用
CN105842371B (zh) * 2016-06-03 2017-07-04 山东大学 忍冬藤中5‑O‑[4′‑O‑(β‑D‑吡喃葡萄糖基)咖啡酰基]奎宁酸含量测定方法
CN107028927B (zh) * 2017-06-05 2021-02-26 中国药科大学 阿替匹林c及其类似物在制备肝再生药物中的应用
JP7217120B2 (ja) * 2018-09-28 2023-02-02 サッポロビール株式会社 ビールテイスト飲料及びその製造方法
KR102054129B1 (ko) * 2018-11-20 2020-01-22 대한민국 잇꽃씨 및 흰민들레 추출물을 유효성분으로 함유하는 인지기능 장애 예방, 개선 또는 치료용 조성물
EP3892271A1 (en) * 2018-12-06 2021-10-13 Suntory Holdings Limited Blood flow improvement composition and vascular endothelium function improvement composition
EP3892265A1 (en) * 2018-12-06 2021-10-13 Suntory Holdings Limited Composition for suppressing blood pressure elevation and method for suppressing blood pressure elevation
CN109674777A (zh) * 2019-01-16 2019-04-26 中国科学院成都生物研究所 异绿原酸类化合物在制备神经退行性疾病和忧郁症的药物中的应用
JP7534760B2 (ja) * 2019-04-15 2024-08-15 共栄化学工業株式会社 育毛用組成物
KR102511861B1 (ko) * 2022-10-14 2023-03-20 주식회사 함소아제약 신선초와 상엽의 복합추출물을 포함하는 근력 강화용 조성물
JP7553216B2 (ja) 2023-01-13 2024-09-18 株式会社ウメケン Ｈｇｆ産生促進剤及びその製造方法

Family Cites Families (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3924017A (en) * 1972-07-28 1975-12-02 Gen Foods Corp Sweetness inducer
US4345417A (en) * 1981-02-17 1982-08-24 Deere & Company Forage harvester with kernel processing means
JPH07110812B2 (ja) * 1990-12-11 1995-11-29 財団法人喫煙科学研究財団 神経成長因子生合成促進剤
JPH0578384A (ja) * 1991-03-27 1993-03-30 Taisho Pharmaceut Co Ltd フラボノール誘導体
JPH05201860A (ja) * 1992-01-28 1993-08-10 Kitsuen Kagaku Kenkyu Zaidan 神経成長因子生合成促進剤
US5788971A (en) * 1993-10-21 1998-08-04 Sky. Food Co., Ltd. Active oxygen free radical scavenging agent
JPH07285856A (ja) * 1994-04-21 1995-10-31 Hoechst Japan Ltd 骨粗鬆症治療剤
JP2816664B2 (ja) * 1996-01-11 1998-10-27 ノブヨシ ハギノ 抗痴呆症剤
US5720304A (en) * 1996-03-01 1998-02-24 Omura; Yoshiaki Method of treatment of some resistant infections, cancer and other diseases which have infection and localized metal deposits in pathological areas
FR2750606B1 (fr) * 1996-07-03 1999-01-29 Maurel Sante Complexes organometalliques a base de sitosterols et de diglycerides et compositions pharmaceutiques en contenant
CN1087608C (zh) * 1996-08-29 2002-07-17 中国人民解放军军事医学科学院放射医学研究所 二咖啡酰奎宁酸在治疗乙型肝炎及与逆转录病毒有关疾病中的用途及新咖啡酰奎宁酸衍生物
JP3974729B2 (ja) * 1999-08-19 2007-09-12 ハウス食品株式会社 神経細胞突起伸展剤
JP4629822B2 (ja) * 1999-12-02 2011-02-09 長瀬産業株式会社 神経成長因子合成促進剤
KR100378830B1 (ko) * 1999-12-11 2003-04-07 김구환 숙취해소음료 제조방법
WO2001076614A1 (fr) * 2000-04-10 2001-10-18 Takara Bio Inc. Remedes
KR20020089440A (ko) * 2000-04-11 2002-11-29 다카라 바이오 가부시키가이샤 치료제
KR100381441B1 (ko) * 2000-06-14 2003-04-26 기장 메디칼 주식회사 약쑥과 약재혼합쑥을 이용한 경피흡수제와 그 제조방법 및사용방법
US20040219238A1 (en) * 2001-07-13 2004-11-04 Eiji Nishiyama Remedies

Also Published As

Publication number Publication date
JP2009269927A (ja) 2009-11-19
CN1422159A (zh) 2003-06-04
EP1666051A2 (en) 2006-06-07
KR100858860B1 (ko) 2008-09-17
AU2001246876A1 (en) 2001-10-23
WO2001076614A1 (fr) 2001-10-18
KR20030013382A (ko) 2003-02-14
US20060147558A1 (en) 2006-07-06
KR100842693B1 (ko) 2008-07-01
US20040002423A1 (en) 2004-01-01
EP1666051A3 (en) 2009-10-07
CN100457124C (zh) 2009-02-04
EP1277473A4 (en) 2005-12-28
KR20080014928A (ko) 2008-02-14
TW200817024A (en) 2008-04-16
EP1277473A1 (en) 2003-01-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TWI313605B (zh)
TWI233353B (en) Therapeutic or preventive agents containing polyphenols
TW510798B (en) The heat-treating materials of uronic acid or uronic acid derivative, and foods, drinks or compositions containing said heat-treating materials
CN102802636B (zh) 藏花素水解产物
KR101817055B1 (ko) 항산화 및 면역기능 증진 활성을 갖는 덖음차 조성물
EP3017822A1 (en) Composition for treating or preventing inflammatory skin disease, comprising, as active ingredient, immature citrus fruit extract, or synephrine or salt thereof
KR20100013040A (ko) 석류 추출물 및 홍삼 추출물을 포함하는 당뇨병 또는비만의 예방 또는 치료용 조성물
KR101789424B1 (ko) 구기자를 포함하는 수면장애 개선용 한방조성물 및 그 제조방법
CN106456693A (zh) 糖尿病预防或改善剂
CN105454576A (zh) 茉莉花八宝茶及其制备方法
CN101411488A (zh) 人参果茶
CN101027069A (zh) 神经酰胺酶抑制剂
KR20040013137A (ko) 치료제
WO2004100969A1 (ja) 治療剤
KR100699782B1 (ko) 댕댕이나무 추출물을 포함하는 간 기능 회복용 식품 조성물
KR20150087724A (ko) 개똥쑥 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화용 조성물
KR101704123B1 (ko) 활성아민 함유 봉독의 분리 방법 및 그의 식품 조성물
KR102698536B1 (ko) 생열귀나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 항비만용 조성물
RU2542133C2 (ru) Безалкогольный напиток (варианты)
KR101344564B1 (ko) 마라소스의 주성분인 고추 및 화초 추출물을 유효성분으로 함유하는 비만 또는 고지혈증 예방 및 치료용 조성물
CN101291679A (zh) 包含猕猴桃属植物的组合物及其使用方法
KR102347819B1 (ko) 갱년기 증상 또는 골다공증 개선용 조성물
KR102496864B1 (ko) 갯대추나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 항비만용 조성물
CN100516059C (zh) 治疗剂
WO2004014407A1 (ja) 治療剤

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Annulment or lapse of patent due to non-payment of fees