KR102054129B1 - 잇꽃씨 및 흰민들레 추출물을 유효성분으로 함유하는 인지기능 장애 예방, 개선 또는 치료용 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 잇꽃씨 및 흰민들레 추출물을 유효성분으로 함유하는 인지기능 장애 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 잇꽃씨 및 흰민들레 추출물을 유효성분으로 함유하는 인지기능 장애 예방 또는 치료용 약학 조성물, 동일 추출물을 유효성분으로 함유하는 인지기능 장애 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물 및/또는 동일 추출물을 유효성분으로 함유하는 기억력 증진용 조성물에 관한 것이다.

Description

잇꽃씨 및 흰민들레 추출물을 유효성분으로 함유하는 인지기능 장애 예방, 개선 또는 치료용 조성물 {A composition comprising extracts of Safflower seed and Korean dandelion for preventing or treating cognitive dysfunction}
본 발명은 잇꽃씨 및 흰민들레 추출물을 유효성분으로 함유하는 인지기능 장애 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 잇꽃씨 및 흰민들레 추출물을 유효성분으로 함유하는 인지기능 장애 예방 또는 치료용 약학 조성물, 동일 추출물을 유효성분으로 함유하는 인지기능 장애 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물 및/또는 동일 추출물을 유효성분으로 함유하는 기억력 증진용 조성물에 관한 것이다.
인지는 인간이 살아가면서 뇌를 이용해 생각하고, 말하고, 기억하고, 판단하고 실행하는 모든 과정을 의미한다. 따라서 '인지기능'은 주의력, 지각력, 기억력, 언어능력, 집행능력 등을 포함하며, '인지기능 장애'는 뇌의 노화 현상 중 가장 두드러진 현상으로, 학습과 기억 능력의 저하, 판단력의 저하로 특징 지워지는 생리적 현상이다. 특히, 이러한 인지기능 장애는 다양하게 나타날 수 있는데, 그 중에서 치매는 기억력을 비롯한 언어 능력, 시 지각 및 시공간 구성 능력, 실행 기능 등의 인지 기능 감퇴로 대인 관계, 직업 기능 및 일상생활 기능에 현저한 지장이 초래되는 복합적인 질환으로 진단하고 있다.
우리나라는 급속한 고령화에 따라 치매 환자가 노인 인구의 8.4%로 매년 25%씩 꾸준히 증가하는 추세이며, 이러한 상황에서 치매 치료에 따른 경제적 부담과 사회적 문제는 최대의 보건 문제로 대두되고 있다. 노인성 치매는 주로 알츠하이머 치매가 대부분을 차지하는데, 알츠하이머 치매는 흔히 알츠하이머병(Alzheimer's disease, AD)으로 불리며, 아무런 치료 노력이 없으면 서서히 죽게되는 질병이라고 할 수 있다. 이에 따라, 노화에 따른 기억력 감퇴와 AD 발병에 대한 예방 및 치료법 개발에 대한 필요성이 높아지고 있으며, 평소 식습관 개선 또는 건강기능식품 개발을 통한 인지능 개선은 AD 환자 및 가족 모두의 삶의 질 향상에 기여하며 이에 따른 사회·경제적 문제를 해결할 수 있을 것으로 예측되고 있다.
AD는 그 발병 원인이 아직 정확히 규명되지 않았으나, AD의 여러 신경 병리학적 특성 중 뇌실질 및 뇌혈관 벽에 침착되는 Aβ에 의한 산화적 스트레스를 비롯한 염증반응으로 인한 신경세포 사멸이 AD 발병기전에 가장 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있으며 Aβ의 생성에 β, γ-secretase가 크게 관여하며, Aβ의 생성을 감소시킬 수 있는 β, γ-secretase 활성 억제 물질에 대한 연구가 관심을 끌고 있다. 그러므로, AD의 예방 및 치료를 위하여 다양한 타겟과 작용기전 규명을 통해 AD의 예방 및 치료와 관련된 연구가 진행되고 있으며, 최근 Aβ를 제거하기 위한 기능성 소재 개발에 관한 연구가 가장 활발히 이루어지고 있다.
현재까지 개발된 AD의 치료제는 주로 증상완화를 위해 신경전달과정을 타겟으로 하는 제품들이 출시되어 있으며, 현재 가장 진전되고 있는 것은 콜린계 약제로 신경전달물질인 아세틸콜린의 분해를 방지하여 뇌 내 아세틸콜린 양을 증가시키는 아세틸콜린에스터라제 억제제 (Acricept, Reminyl, Exelon)가 주목받고 있다. 이러한 기전을 이용한 약물 중에 미국 FDA의 승인을 받아 국내에서도 시판중인 태크린 (제품명 코그넥스캅셀)과 도네페질 (제품명 아리셉트)이 대표적으로 사용되고 있는 약물이다. 그러나, 이러한 약물들을 포함한 AD 치료제는 대부분 심각한 부작용이 보고되어 있는데 태크린은 간독성, 불면증, 위장관장애, 착란, 식욕부진 신경과민 등의 증상이 나타나며, 도네페질은 근육경련, 피로감, 불면증, 어지러움, 악몽, 생생한 꿈 등의 정신신경계의 장애와 수지진전, 운동장애 등의 추체외로 장애 또는 설사, 구역, 구토 등의 소화기계 장애가 나타난다고 알려져 있다. 또한, 이들 약물은 AD의 증상을 일시적으로 완화시키는데 효과가 있을지 모르나, 근본적으로 AD를 치료할 수 있는 치료법 및 치료제는 현재까지 개발되지 않은 실정이다.
이에 본 발명자들은, 기억력 감퇴 및 인지기능 장애를 예방 또는 치료하면서 체내에 안전한 천연 치매 치료제를 약용작물로부터 탐색하던 중, 잇꽃씨 단독 추출물, 흰민들레 단독 추출물 또는 이의 혼합 추출물이 스코폴라민 유발 기억력 감퇴와 인지기능 장애 동물모델에서 뇌조직의 위축 증상과 행동실험에서 물체인지 능력과 미로 찾기 능력을 개선시킴으로써, 기억력 감퇴와 인지기능 손상을 예방 또는 치료하는 효과가 있는 것을 확인하였고, 특히, 잇꽃씨와 흰민들레의 혼합 추출물이 우수한 효과를 나타냄을 밝힘으로써 본 발명을 완성하였다.
기억력 증진 및 인지기능 장애의 치료 효과와 관련하여, 대한민국 등록특허 제10-1887585호에는 암브로시아 아르테미시폴리아 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 인지기능 장애 또는 신경 염증의 예방 또는 치료용 조성물이 개시되어 있고, 대한민국 등록특허 10-1807607호에는 좁은잎보리장나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 인지기능 장애의 예방, 개선 또는 치료용 조성물이 개시되어 있으나, 잇꽃씨와 흰민들레를 특정 중량비로 혼합하여 추출한 혼합 추출물이 기억력 증진 및 인지기능 장애 치료에 상승 효과를 나타낸다는 것은 알려진 바가 없다.
본 발명의 목적은 잇꽃씨 및 흰민들레 추출물을 유효성분으로 함유하는 인지기능 장애 예방, 개선 또는 치료용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 잇꽃씨 및 흰민들레 추출물을 유효성분으로 함유하는 기억력 증진용 조성물을 제공하는 것이다.
상술한 과제를 해결하기 위해, 본 발명은 잇꽃씨(Carthamus tinctorius L. seed) 및 흰민들레(Taraxacum coreanum) 추출물을 유효성분으로 함유하는 인지기능 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한, 잇꽃씨(Carthamus tinctorius L. seed) 및 흰민들레(Taraxacum coreanum) 추출물을 유효성분으로 함유하는 인지기능 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 바람직한 일실시예에 따르면, 상기 흰민들레는 지상부(aerial parts)일 수 있다.
본 발명의 바람직한 다른 일실시예에 따르면, 상기 잇꽃씨 및 흰민들레 추출물은 물, C1 내지 C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출한 것일 수 있다.
본 발명의 바람직한 또 다른 일실시예에 따르면, 상기 잇꽃씨 및 흰민들레 추출물은 2:8 내지 8:2의 중량비로 혼합된 것일 수 있다.
본 발명의 바람직한 다른 일실시예에 따르면, 상기 인지기능 장애는 치매, 알츠하이머, 헌팅턴병, 혈관성 치매증, 허혈성 뇌졸중, 외상선성 뇌손상, 건망증, 파킨슨병, 픽병(Pick disease), 크로이츠펠트-야콥병(Creutzfeldt-Jakob disease), 및 경도 인지기능 장애 중에서 선택된 어느 하나 이상일 수 있다.
본 발명은 또한, 잇꽃씨 및 흰민들레 추출물을 유효성분으로 함유하는 기억력 증진용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 잇꽃씨 및 흰민들레 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물은 인지기능 장애 마우스 모델에서 공간기억능력(T-maze test) 및 새로운 물체에 대한 인지기능(novel object recognition test)을 현저하게 향상시키는 효과를 나타낼 뿐만 아니라, 종래의 공지된 약물들과 달리 간독성을 나타내지 않아 인체에 안전하므로, 인지기능 장애 또는 기억력 개선을 위한 약학 및 식품 조성물 등에 응용될 수 있다.
도 1은 스코폴라민 투여에 의한 인지기능 장애 마우스 동물모델에서 잇꽃씨 단독 추출물, 흰민들레 지상부 단독 추출물 또는 이의 혼합 추출물 투여에 따른 기억력 증진 및 인지기능 개선 효과를 T자 미로 실험(T-maze test)을 통해 확인한 것으로, (A)는 두 가지 길을 접근하는 횟수에서 기존의 길(왼쪽 통로) 및 새로운 길(오른쪽 통로)에 접근 횟수를 각각 계수하여 백분율로 나타낸 것이고, (B)는 계수 결과를 식 [탐색 횟수=(새로운 길에 접근한 횟수-기존의 길에 접근한 횟수)/(새로운 길에 접근한 횟수+기존의 길에 접근한 횟수)]에 적용하여 탐색 횟수를 산출한 것이다.
도 2는 스코폴라민 투여에 의한 인지기능 장애 마우스 동물모델에서 잇꽃씨 단독 추출물, 흰민들레 지상부 단독 추출물 또는 이의 혼합 추출물 투여에 따른 기억력 증진 및 인지기능 개선 효과를 새로운 물체에 대한 인지 실험(Novel object recognition test)을 통해 확인한 것으로, (A)는 두 가지 물체에 접근하는 횟수에서 기존의 물체 및 새로운 물체에 접근 횟수를 각각 계수하여 백분율로 나타낸 것이고, (B)는 계수 결과를 식 [탐색 횟수=(새로운 물체에 접근한 횟수-기존의 물체에 접근한 횟수)/(새로운 물체에 접근한 횟수+기존의 물체에 접근한 횟수)]에 적용하여 탐색 횟수를 산출한 것이다.
도 3은 잇꽃씨 단독 추출물, 흰민들레 지상부 단독 추출물, 또는 이의 혼합 추출물 투여에 따른 뇌 중량 개선 효과를 나타낸 것이다.
도 4는 잇꽃씨 단독 추출물, 흰민들레 지상부 단독 추출물, 또는 이의 혼합 추출물의 인체 안전성 효과를 AST 및 ALT 수준 측정을 통해 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 5는 잇꽃씨 단독 추출물, 흰민들레 지상부 단독 추출물, 또는 이의 혼합 추출물 투여에 따른 아세틸콜린에스테라제 억제 효과를 나타낸 것이다.
상술한 바와 같이, 인지기능 장애, 특히 AD 치료에 사용되는 기존의 약물들은 AD 증상을 일시적으로 완화시키는데 효과가 있을 뿐 근본적으로 AD를 치료하는데 한계가 있고, 이들 약물로 인한 다양한 부작용이 보고되어 있어, 인지기능 장애 또는 기억력 개선에 효과적이면서 동시에 부작용 없이 인체에 안전한 치료제 개발이 여전히 요구되고 있다.
이에 본 발명자들은, 기억력 감퇴 및 인지기능 장애를 예방 또는 치료하면서 체내에 안전한 천연 치매 치료제를 약용작물로부터 탐색하던 중, 잇꽃씨 단독 추출물, 흰민들레 단독 추출물 또는 이의 혼합 추출물이 스코폴라민 유발 기억력 감퇴와 인지기능 장애 동물모델에서 뇌조직의 위축 증상과 행동실험에서 물체인지 능력과 미로 찾기 능력을 개선시킴으로써, 기억력 감퇴와 인지기능 손상을 예방 또는 치료하는 효과가 있는 것을 확인하고, 잇꽃씨 및 흰민들레 추출물이 특정 중량비 범위로 혼합된 혼합 추출물을 이용하여 인지기능 장애 예방, 개선 또는 치료용 조성물 및/또는 기억력 증진용 조성물을 제공함으로써 상술한 문제의 해결방안을 모색하였다. 본 발명에 따른 잇꽃씨 및 흰민들레 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물은 인지기능 장애 마우스 모델에서 공간기억능력(T-maze test) 및 새로운 물체에 대한 인지기능(novel object recognition test)을 현저하게 향상시키는 효과를 나타낼 뿐만 아니라, 종래의 공지된 약물들과 달리 간독성을 나타내지 않아 인체에 안전하므로, 인지기능 장애 또는 기억력 개선을 위한 약학 및 식품 조성물 등에 응용될 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어는 다음과 같이 정의된다.
용어 “약학적 조성물(pharmaceutical composition)”은 본 발명의 잇꽃씨(Carthamus tinctorius L. seed) 및 흰민들레(Taraxacum coreanum) 추출물을 포함하는 조성물에 희석제 또는 담체와 같은 다른 화학 성분들을 혼합한 혼합물을 의미한다.
용어 “희석제(diluent)”는 대상 화합물의 생물학적 활성 형태를 안정화시킬 뿐만 아니라, 화합물을 용해시키게 되는 물에서 희석되는 화합물로 정의된다. 버퍼 용액에 용해되어 있는 염은 당해 분야에서 희석제로 사용된다. 통상 사용되는 버퍼 용액은 포스페이트 버퍼 식염수이며, 이는 인간 용액의 염 상태를 모방하고 있기 때문이다. 버퍼 염은 낮은 농도에서 용액의 pH를 제어할 수 있기 때문에, 버퍼 희석제가 화합물의 생물학적 활성을 변형하는 일은 드물다.
용어 “담체(carrier)”는 세포 또는 조직 내로의 화합물의 부가를 용이하게 하는 화합물로 정의된다. 예를 들어, 디메틸술폭사이드(DMSO)는 생물체의 세포 또는 조직 내로의 많은 유기 화합물들의 투입을 용이하게 하는 통상 사용되는 담체이다.
용어 “치료”는 이롭거나 바람직한 임상적 결과를 수득하기 위한 접근을 의미한다. 본 발명의 목적을 위해서, 이롭거나 바람직한 임상적 결과는 비제한적으로, 증상의 완화, 질병 범위의 감소, 질병 상태의 안정화(즉, 악화되지 않음), 질병 진행의 지연 또는 속도의 감소, 질병 상태의 개선 또는 일시적 완화 및 경감 (부분적이거나 전체적으로), 검출가능하거나 또는 검출되지 않거나의 여부를 포함한다. 또한, “치료”는 치료를 받지 않았을 때 예상되는 생존율과 비교하여 생존율을 늘이는 것을 의미할 수도 있다. “치료”는 치료학적 치료 및 예방적 또는 예방조치 방법 모두를 가리킨다. 상기 치료들은 예방되는 장애뿐만 아니라 이미 발생한 장애에 있어서 요구되는 치료를 포함한다. 질병을 “완화(alleviating)”하는 것은 치료를 하지 않은 경우와 비교하여, 질병상태의 범위 및/또는 바람직하지 않은 임상적 징후가 감소되거나 및/또는 진행의 시간적 추이(time course)가 늦춰지거나 길어지는 것을 의미한다.
“상승적인(synergistic)”은 각 성분이 병용(조합) 투여될 때 발생되는 효과가, 단일 성분으로서 단독으로 투여될 때 발생되는 효과의 합보다 더 큰 것을 말한다[Chou and Talalay, Adv. Enzyme. Regul., 22:27-55, 1984]. 본 발명의 잇꽃씨 및 흰민들레 추출물의 혼합물은 인지기능 장애 치료 및/또는 기억력을 개선하는데 있어서 현저한 상승 효과를 나타낸다.
본 발명에서 사용되는 모든 기술용어는, 달리 정의되지 않는 이상, 본 발명의 관련 분야에서 통상의 당업자가 일반적으로 이해하는 바와 같은 의미로 사용된다. 또한 본 명세서에는 바람직한 방법이나 시료가 기재되나, 이와 유사하거나 동등한 것들도 본 발명의 범주에 포함된다.
이하, 본 발명을 보다 상세히 설명한다.
본 발명은 잇꽃씨(Carthamus tinctorius L. seed) 및 흰민들레(Taraxacum coreanum) 추출물을 유효성분으로 함유하는 인지기능 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 잇꽃씨(Carthamus tinctorius L. seed) 및 흰민들레(Taraxacum coreanum) 추출물을 유효성분으로 함유하는 인지기능 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물에 관한 것이다.
본 발명에서 사용되는 용어 “잇꽃씨”는 국화과에 속한 잇꽃(Carthamus tinctorius L.)의 종자를 건조한 것을 의미한다. 잇꽃씨는 한방에서는 혈액순환을 촉진시키고 어혈을 풀어주며 독을 해독하는 효능이 있는 것으로 알려져 있다.
본 발명에서 사용된 용어 “흰민들레(Taraxacum coreanum)”는 국화과(compositae)에 속한 다년초로, 한방에서는 전초를 건조한 것을 봄과 여름에 꽃이 피기 전이나 후에 채취하여 청열해독, 소염, 이뇨의 목적으로 하는 약물로 이용되어 왔다. 본 발명에서는 흰민들레의 지상부(aerial parts), 즉 뿌리를 제외한 모든 부위, 예를 들어 줄기, 잎, 꽃 및 열매를 원료로 하여 추출물을 제조하였다.
본 발명의 잇꽃씨와 흰민들레는 상업적으로 판매되는 것을 구입하여 사용하거나, 자연에서 직접 채취 또는 재배한 것을 사용할 수 있다.
본 발명의 구체적인 일실시예에서는 잇꽃씨와 흰민들레 지상부를 각각 분쇄한 분쇄물을 특정 중량비로 혼합한 뒤 추출한 추출물을 사용하였다. 상기 잇꽃씨와 흰민들레의 혼합 추출물을 제조하는 방법은 정치 추출법, 초음파 추출법, 여과법, 열수 추출법 및 환류 추출법 등 당업계의 통상적인 추출방법을 사용할 수 있다. 바람직하게는 세척 및 건조로 이물질이 제거된 잇꽃씨와 흰민들레 지상부를 동결건조한 후 분쇄하여 증류수로 3시간, 3회 반복하여 열수 추출하였다. 추출용매는 당업계의 통상적인 추출용매라면 제한없이 사용할 수 있고, 바람직하게는 물, C1~C4의 알코올 또는 이들의 혼합용매일 수 있으며, 보다 바람직하게는 물, 메탄올 또는 에탄올일 수 있고, 가장 바람직하게는 물(증류수)일 수 있다. 또한, 추출용매는 잇꽃씨와 흰민들레 지상부의 단독 분쇄물 또는 이의 혼합 분쇄물 중량의 1~20배 첨가하여 추출할 수 있고, 더 바람직하게는 5~17배 첨가하여 추출할 수 있다. 또한, 추출시간은 0.5~10시간, 보다 바람직하게는 1~5시간일 수 있으나, 이에 제한되지 않으며, 추출 횟수는 1회 내지 10회 반복하여 추출할 수 있다.
필요한 경우에는 당업계에 공지된 방법에 따라 여과, 농축 및 동결건조 등의 단계를 추가적으로 거쳐 분말로 제조될 수 있다. 상기 농축은 감압농축일 수 있고, 감압농축은 진공 감압 농축기 또는 진공 회전 증발기를 이용하여 수행될 수 있으나 이에 제한되지 않는다. 또한, 건조는 감압건조, 진공건조, 비등건조, 분무건조 또는 동결건조하는 것이 바람직하나 이에 제한되지 않는다.
본 발명에서의 용어, "추출물(extract)"이란, 목적하는 물질을 다양한 용매에 침지한 다음, 상온, 저온 또는 가온 상태에서 일정시간 동안 추출하여 수득한 액상성분, 상기 액상성분으로부터 용매를 제거하여 수득한 고형분 등의 결과물을 의미한다. 뿐만 아니라, 상기 결과물에 더하여, 상기 결과물의 희석액, 이들의 농축액, 이들의 조정제물, 정제물 등을 모두 포함하는 것으로 포괄적으로 해석될 수 있다.
본 발명의 바람직한 일실시예에 따르면, 상기 인지기능 장애는 치매, 알츠하이머, 헌팅턴병, 혈관성 치매증, 허혈성 뇌졸중, 외상선 뇌손상, 건망증, 파킨슨병, 픽병(Pick disease), 크로이츠펠트-야콥병(Creutzfeldt-Jakob disease), 및 경도 인지기능 장애 중에서 선택된 어느 하나 이상일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명에 있어서, 상기 경도 인지기능 장애는 기억력 및 인지 기능이 연령, 교육 수준에 비해 유의하게 저하된 상태이나 생활에 지장을 초래하지는 않는 치매 전 임상 단계로 정의한다.
본 발명의 약학 조성물 및 건강기능식품 조성물에 있어서, 잇꽃씨와 흰민들레 추출물은 인지기능 장애를 예방, 개선 또는 치료하기 위한 최적의 효과를 나타내기 위해 특정 중량비로 혼합될 수 있다.
본 발명의 구체적인 일실시예에서는 잇꽃씨와 흰민들레 지상부를 각각 2:8, 5:5 및 8:2의 중량비로 혼합한 혼합 추출물을 스코폴라민 투여로 인지기능 장애가 유도된 마우스에 처리하여 기억력 증진 및 인지기능 장애 개선 효과를 확인하였다.
그 결과, 도 1 및 2에서 확인되는 바와 같이 잇꽃씨와 흰민들레 지상부를 2:8 내지 8:2의 중량비로 혼합하여 투여하는 경우, 공간기억능력(T-maze test) 및 새로운 물체에 대한 인지기능(novel object recognition test)을 현저하게 향상시키는 상승효과를 나타냄을 알 수 있었다. 구체적으로, 공간기억능력에 대한 상승효과는 모든 혼합 추출물 투여군에서 확인되었고, 새로운 물체에 대한 인지기능 상승효과는 잇꽃씨와 흰민들레 지상부를 2:8 내지 5:5의 중량비로 혼합한 추출물 투여군에서 확인되었으며, 종합적으로, 잇꽃씨와 흰민들레 지상부를 5:5의 중량비로 혼합한 추출물이 가장 우수한 효과를 나타내는 것으로 확인되었다.
따라서, 본 발명에서 잇꽃씨와 흰민들레의 바람직한 혼합 중량비는 2:8 내지 8:2일 수 있고, 보다 바람직한 혼합 중량비는 2:8 내지 5:5일 수 있으며, 가장 바람직한 혼합 중량비는 5:5일 수 있다. 잇꽃씨와 흰민들레 추출물을 상기 범위를 벗어난 중량비로 혼합할 경우, 두 가지 추출물의 복합 상승효과가 감소하여 최적의 활성을 나타낼 수 없으므로, 상기 중량비 범위 내에서 두 가지 추출물을 혼합하는 것이 바람직하다.
본 발명에 따른 조성물은 간독성 없이 인체에 안전한 추가의 이점을 갖는다.
본 발명의 구체적인 일실시예에서는 잇꽃씨 추출물, 흰민들레 지상부 추출물 및 이의 혼합 추출물의 인체 안전성을 확인하기 위해, 이들 추출물을 투여한 각각의 마우스로부터 채혈한 혈액에서 혈중 AST 및 ALT 수치를 확인하였다.
그 결과, 도 4에 나타난 바와 같이 단독 및 혼합 추출물 투여군 모두 AST 및 ALT 수치 상승을 나타내지 않아 간 독성이 없음을 확인하여 인체에 안전한 물질임을 확인하였다.
따라서, 본 발명에 따른 조성물은 기억력 증진 및 인지기능 장애 개선을 위해 인체에 부작용 없이 안전하게 사용될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 약학 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물에 함유될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토오즈(lactose), 덱스트로즈, 수크로스(sucrose), 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.
제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다.
경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스 또는 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.
비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
상기 본 발명의 약학적 조성물은 약제학적으로 유효한 양으로 투여한다.
본 발명에서 용어 "약제학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 개체 종류 및 중증도, 연령, 성별, 감염된 바이러스 종류, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다. 그리고 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 인지기능 장애의 예방 또는 치료를 위하여 단독으로, 또는 수술, 호르몬 치료, 약물 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.
상기 약학 조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁 내 경막 또는 뇌혈관 내 주사에 의해 투여될 수 있다.
본 발명의 잇꽃씨와 흰민들레 추출물을 식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 혼합물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 혼합량은 사용 목적 (예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조 시에는 본 발명의 조성물은 원료에 대하여 0.01 ~ 10 중량%, 바람직하게는 0.05 ~ 1 중량%의 양으로 첨가된다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하로도 사용될 수 있다.
상기 건강기능식품은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 천연 과일 주스 및 과일 주스 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 또한, 건강기능식품은 육류, 소세지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 껌류, 아이스크림류, 스프, 음료수, 차, 기능수, 드링크제, 알코올 및 비타민 복합제 중 어느 하나의 형태일 수 있다.
본 발명의 건강 음료 조성물은 잇꽃씨와 흰민들레 추출물의 혼합물을 함유하는 것 외에는 액체성분에는 특별한 제한은 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다.
또한, 상기 건강기능식품은 식품첨가물을 추가로 포함할 수 있으며, “식품첨가물”로서의 적합여부는 다른 규정이 없는 한 식품의약품안정청에 승인된 식품첨가물공전의 총칙 및 일반시험법 등에 따라 해당 품목에 관한 규격 및 기준에 의하여 판정한다.
상기 “식품첨가물공전”에 수재된 품목으로 예를 들어, 케톤류, 글리신, 구연산 칼륨, 니코틴산, 계피산 등의 화학적 합성품, 감색소, 감초추출물, 결정셀룰로오스, 고랭색소, 구아검 등의 천연첨가물, L-글루타민산나트륨제제, 면류첨가알칼리제, 보존료제제, 타르색소제제 등의 혼합 제제류 등을 들 수 있다.
본 발명은 또한, 본 발명은 잇꽃씨(Carthamus tinctorius L. seed) 및 흰민들레(Taraxacum coreanum) 추출물을 유효성분으로 함유하는 기억력 증진용 건강기능식품 조성물에 관한 것이다.
상기 기억력 증진용 건강기능식품 조성물에서 잇꽃씨와 흰민들레 추출물에 대한 설명, 이의 효과 및 관련 모든 설명은 전술한 바와 동일하므로, 중복 기재에 따른 본 명세서의 과도한 복잡성을 피하기 위하여 그 기재를 생략한다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
추출물 제조 및 실험동물 준비
1-1. 잇꽃씨, 흰민들레 지상부 단독 및 이의 혼합 추출물의 제조
시판되는 잇꽃씨와 흰민들레 지상부를 구입하여 분쇄한 단독 분쇄물과 비율별 혼합 분쇄물(잇꽃씨:흰민들레 지상부의 중량비가 각각 8:2, 5:5, 2:8임) 30 g을 증류수 500 ml에 넣어 3시간 3회 반복 열수 추출한 후, 와트만(Whatman 46×57cm) 여과지를 이용하여 불용성 물질을 제거하고 냉각 콘덴서가 장착된 농축 장치로 45℃에서 감압 농축하였다. 감압 농축된 추출물의 용매를 완전히 제거하기 위하여 정제수 50 ml를 넣어 현탁시킨 후 동결건조기를 이용하여 잇꽃씨 2.5 g, 흰민들레 지상부 9.2 g, 잇꽃씨8:흰민들레 지상부2 4.8 g, 잇꽃씨5:흰민들레 지상부5 7.9 g, 잇꽃씨2:흰민들레 지상부8 10.2 g의 추출물을 얻었다(수율: 잇꽃씨 8.4%, 흰민들레 지상부 30.6%, 잇꽃씨8:흰민들레 지상부2 16.0%, 잇꽃씨5:흰민들레 지상부5 26.3%, 잇꽃씨2:흰민들레 지상부8 34.0%).
1-2. 실험동물의 준비
본 발명의 실시예에서는 중앙실험동물(주)에서 구입한 5주령 된 ICR 수컷 마우스를 사용하였다. 22℃에서 명/암 주기를 12시간 간격으로 설정하고, 식이와 물을 자유롭게 공급하여 1 주일간 기본식이로 적응시켰다.
잇꽃씨, 흰민들레 지상부 단독 및 이의 혼합 추출물의 인지기능 장애 치료 및 기억력 증진 효과를 확인하기 위해 스코폴라민에 의해 유도된 기억력 감퇴 모델을 이용한 실험을 수행하였으며, 구체적 실험방법은 실시예 2와 같다.
잇꽃씨, 흰민들레 지상부 단독 및 이의 혼합 추출물의 기억력 및 인지능 개선 효과의 확인
2-1. 실험군 설정 및 시료 투여
상기 실시예 1-2의 실험동물을 각 군당 10마리씩, 아무것도 처리하지 않은 정상군, 기억력 및 인지기능 장애 손상 대조군, 기억력 손상 및 인지기능 장애 및 잇꽃씨 추출물 200 mg/kg 투여군(CS), 기억력 손상 및 인지기능 장애 및 흰민들레 지상부 단독 추출물 200 mg/kg 투여군(TA), 기억력 손상 및 인지기능 장애 및 잇꽃씨8:흰민들레 지상부2 혼합 추출물 200 mg/kg 투여군(C8T2), 기억력 손상 및 인지기능 장애 및 잇꽃씨5:흰민들레 지상부5 혼합 추출물 200 mg/kg 투여군(C5T5), 기억력 손상 및 인지기능 장애 및 잇꽃씨2:흰민들레 지상부 8 혼합 추출물 200 mg/kg 투여군(C2T8)으로 총 7군으로 나누었다 (표 1).
실험군 그룹명 투여 물질 및 용량
정상군 정상군 (Normal 또는 N) -
기억력 손상 및
인지기능 장애
유발군		 대조군 (Vehicle 또는 Veh) 정수물 경구투여 +
스코폴라민 1mg/kg 복강투여
잇꽃씨 투여군 (CS) 잇꽃씨 200 mg/kg 경구투여 +
스코폴라민 1mg/kg 복강투여
흰민들레 지상부 투여군 (TA) 흰민들레 지상부 200 mg/kg
경구투여 + 스코폴라민
1mg/kg 복강투여
잇꽃씨와 흰민들레 지상부
8:2 혼합비율 투여군 (C8T2)		 잇꽃씨와 흰민들레 지상부 8:2 비율
200 mg/kg 경구투여 + 스코폴라민 1mg/kg 복강투여
잇꽃씨와 흰민들레 지상부
5:5 혼합비율 투여군 (C5T5)		 잇꽃씨와 흰민들레 지상부 5:5 비율 200 mg/kg 경구투여 + 스코폴라민 1mg/kg 복강투여
잇꽃씨와 흰민들레 지상부
2:8 혼합비율 투여군 (C2T8)		 잇꽃씨와 흰민들레 지상부 2:8 비율 200 mg/kg 경구투여 + 스코폴라민 1mg/kg 복강투여
14일에 1회씩 총 14회 상기 실시예 1-1에서 제조한 잇꽃씨, 흰민들레 지상부 단독 및 이의 혼합 추출물을 경구 투여하였고, 스코폴라민(scopolamine)은 행동실험 기간에 복강주사로 투여하였다. 물과 사료는 자유롭게 공급하였다. 마우스의 체중은 3일 간격으로 동일한 시간에 측정하였다. 최종 약물투여로부터 48시간 후 에테르로 마취하여 개복하였으며 장기 무게 측정 및 심장채혈을 실시하였다.
2-2. 기억력 및 인지능 손상 실험동물 모델 유도
기억력 및 인지능 장애를 유발시키기 위해 행동실험 기간 동안 마우스의 복강 내에 1 mg/kg/체중 농도로 스코폴라민을 주사하였다.
2-3. T자 미로 실험(T-maze test)을 통한 기억력 및 인지능 개선 효능 측정
T자 미로 실험을 이용하여 기억력 및 인지능 개선 효능을 측정하였다. 첫째날 마우스를 T자 미로 상자의 시작 부분에 배치하고 오른쪽 통로 문을 차단하여 4분간 자유롭게 탐색하도록 하였다. 24시간 후, 오른쪽 통로 차단 문을 제거하여 마우스를 동일하게 배치시켜, 4분간 왼쪽 통로 (old route)와 오른쪽 통로 (new route)에 들어간 횟수를 측정하였다. 공간기억능력(%)은 전체 통로에 들어간 횟수와 좌우 통로에 들어간 횟수를 기록하여 산출하였다.
도 1(A) 및 표 2에 나타낸 바와 같이, 아무것도 처리하지 않은 정상군의 경우 기존의 길에 대한 접근도가 45.72%, 새로운 길에 대한 접근도가 54.28%로 나타났고, 대조군은 기존의 길에 대한 접근도가 57.71%, 새로운 길에 대한 접근도가 42.29%로 오히려 기존의 길에 대한 접근도가 더 높게 나타나 스코폴라민 투여로 인한 공간기억능력 손상을 확인하였다. 반면에 CS, TA, C8T2, C5T5 및 C2T8 투여군의 경우 새로운 길에 대한 접근도가 각각 52.47%, 53.83%, 55.39%, 59.02%, 57.00%로 나타나 기존의 길에 비해 새로운 길에 대한 접근도가 높음을 확인하였다.
도 1(A)의 데이터 값은 평균±으로 표시하였다 [유의성: * p<0.05, ** p<0.001 vs. 비히클-투여 및 스코폴라민-처리 마우스 (비히클 대조군), t-test]. #기존의 길과 새로운 길의 대상 인지 능력은 t-test에 의해 결정된 것과 유의적으로 상이하다 (# p<0.01, ## p<0.001).
투여군 왼쪽 통로
선택 확률
(A)		 오른쪽 통로
선택 확률
(B)		 B - A
정상군 (Normal 또는 N) 41.60% 58.40% 16.80%
스코폴라민 처리 비히클 대조군
(Vehicle 또는 Veh)		 57.71% 42.29% -15.42%
잇꽃씨 200mg (CS) 47.53% 52.47% 4.94%
흰민들레 지상부 200mg (TA) 46.17% 53.83% 7.66%
잇꽃씨 8 : 흰민들레 지상부 2
200mg (C8T2)		 44.61% 55.39% 10.78%
잇꽃씨 5 : 흰민들레 지상부 5
200mg (C5T5)		 40.98% 59.02% 18.04%
잇꽃씨 2 : 흰민들레 지상부 8
200mg (C2T8)		 43.00% 57.00% 14.00%
기존의 길과 새로운 길 두 가지 길 전체 접근한 횟수에서 기존의 길에 관심을 가지는 횟수와 새로운 길에 관심을 가지는 횟수를 측정하였고, 탐색 횟수=(새로운 길에 접근한 횟수-기존의 길에 접근한 횟수)/(새로운 길에 접근한 횟수+기존의 길에 접근한 회수)으로 결과를 산출하여 이를 각각 표 3 및 도 1(B)에 나타내었다. 도 1(B)의 데이터 값은 평균±으로 표시하였다 [유의성: * p<0.05, ** p<0.01, *** p<0.001 vs. 비히클-투여 및 스코폴라민-처리 마우스 (비히클 대조군)].
각 군에서 새로운 길을 탐색한 정도를 관찰한 결과, 도 1(B)에 나타난 바와 같이 잇꽃씨, 흰민들레 지상부 단독 및 혼합 추출물을 투여한 군에서 새로운 길을 탐구하는 정도가 증가함을 확인하였고, 특히, 혼합 추출물 투여군에서 새로운 길을 탐구하는 정도가 현저하게 증가함을 확인하였다.
혼합 추출물 투여군의 현저한 상승효과를 보다 구체적으로 확인하기 위해 정상군이 새로운 길을 탐색하는 정도를 100% 기준으로 하여, 각 군의 새로운 길을 탐색하는 정도를 백분율로 환산한 값을 표 3에 나타내었으며, 단독 추출물 투여군의 백분율 실측치를 하기 콜비(Colby) 공식에 대입하여 계산된 혼합 추출물의 백분율 예측치 또한 표 3에 나타내었다.
E = (A + B) - (A×/ 100)
상기 식에서, A는 활성성분 A의 약효이고, B는 활성성분 B의 약효이며, E는 예측치로 성분 A와 성분 B (A+B)가 혼합되었을 경우의 예측되는 약효이다.
투여군 새로운 길을
탐색하는 정도		 정상군
대비 백분율
실측치		 정상군 대비
백분율
예측치
정상군 (Normal 또는 N) 0.17 ±0.05*** 100% -
스코폴라민 처리 비히클 대조군
(Vehicle 또는 Veh)		 -0.15 ±0.03 - -
잇꽃씨 200mg (CS) 0.05 ±0.07* 29.41% -
흰민들레 지상부 200mg (TA) 0.08 ±0.03*** 47.06% -
잇꽃씨 8 : 흰민들레 지상부 2
200mg (C8T2)		 0.11 ±0.05** 64.71% 62.83%
잇꽃씨 5 : 흰민들레 지상부 5
200mg (C5T5)		 0.18 ±0.05*** 105.88%
잇꽃씨 2 : 흰민들레 지상부 8
200mg (C2T8)		 0.14 ±0.03*** 82.35%
그 결과, 모든 혼합 추출물 투여군에서 실측치가 예측치를 뛰어넘는 우수한 공간인지능력 개선효과가 나타남을 확인하였다. 특히, 잇꽃씨와 흰민들레 지상부를 5:5의 비율로 혼합 투여하는 경우 상승효과가 최대치로 나타나 기억력 및 인지능이 현저하게 개선됨을 확인하였다.
2-4. 물체 인지 실험을 통한 기억력 및 인지능 개선 효능 측정
새로운 물체 인지 실험(novel object recognition test)를 이용하여 기억력 및 인지능 개선 효능을 측정하였다. 첫째날 마우스를 동일한 두 가지 물체(A, A’를 배치한 물체인지 상자에 넣고 4분간 자유롭게 탐색하도록 하였다. 24시간 후, 한 가지 물체를 새로운 물체로 변경시킨 물체인지 상자(A, B)에 마우스를 동일하게 배치시켜, 4분간 기존 물체(familiar object)와 새로운 물체(novel object)에 탐색한 횟수를 측정하였다. 물체인지능력(%)은 두 가지 물체를 접촉한 횟수를 기록하여 산출하였다.
도 2(A) 및 표 4에 나타낸 바와 같이, 아무것도 처리하지 않은 정상군의 경우 기존 물체에 대한 접근도가 40.92%, 새로운 물체에 대한 접근도가 59.08%로 나타났고, 대조군은 기존의 물체에 대한 접근도가 56.42%, 새로운 물체에 대한 접근도가 43.58%로 오히려 기존의 물체에 대한 접근도가 더 높게 나타나 스코폴라민 투여로 인한 물체인지능력 손상을 확인하였다. 반면에 CS, TA, C8T2, C5T5 및 C2T8 투여군의 경우 새로운 물체에 대한 접근도가 각각 53.60%, 55.42%, 54.49%, 59.68%, 60.82%로 나타나 기존의 물체에 비해 새로운 물체에 대한 접근도가 높음을 확인하였다.
도 2(A)의 데이터 값은 평균±으로 표시하였다 [유의성: * p<0.05, ** p<0.01, *** p<0.001 vs. 비히클-투여 및 스코폴라민-처리 마우스 (비히클 대조군), t-test]. #기존의 물체와 새로운 물체의 대상 인지 능력은 t-test에 의해 결정된 것과 유의적으로 상이하다 (# p<0.05, ## p<0.01, ### p<0.001).
투여군 기존 물체
선택 확률
(A)		 새로운 물체
선택 확률
(B)		 B - A
정상군 (Normal 또는 N) 40.92% 59.08% 18.16%
스코폴라민 처리 비히클 대조군
(Vehicle 또는 Veh)		 56.42% 43.58% -12.84%
잇꽃씨 200mg (CS) 46.40% 53.60% 7.2%
흰민들레 지상부 200mg (TA) 44.58% 55.42% 10.84%
잇꽃씨 8 : 흰민들레 지상부 2
200mg (C8T2)		 45.51% 54.49% 8.98%
잇꽃씨 5 : 흰민들레 지상부 5
200mg (C5T5)		 40.32% 59.68% 19.36%
잇꽃씨 2 : 흰민들레 지상부 8
200mg (C2T8)		 41.11% 58.89% 17.78%
기존의 물체와 새로운 물체 두 가지 물체 전체 접근한 횟수에서 기존의 물체에 관심을 가지는 횟수와 새로운 물체에 관심을 가지는 횟수를 측정하였고, 탐색 횟수=(새로운 물체에 접근한 횟수-기존의 물체에 접근한 횟수)/(새로운 물체에 접근한 횟수+기존의 물체에 접근한 횟수)으로 결과를 산출하였고, 이를 각각 표 5 및 도 2(B)에 나타내었다. 도 2(B)의 데이터 값은 평균±으로 표시하였다 [유의성: * p<0.05, ** p<0.01, *** p<0.001 vs. 비히클-투여 및 스코폴라민-처리 마우스 (비히클 대조군), t-test].
각 군에서 새로운 물체를 탐색한 정도를 관찰한 결과, 도 2(B)에 나타난 바와 같이 잇꽃씨, 흰민들레 지상부 단독 및 혼합 추출물을 투여한 군에서 새로운 물체를 탐구하는 정도가 증가함을 확인하였고, 특히, C5T5 및 C2T8 투여군에서 새로운 물체를 탐색하는 정도가 현저하게 증가함을 확인하였다.
마찬가지로, C5T5 및 C2T8 투여군의 현저한 상승효과를 보다 구체적으로 확인하기 위해 정상 대조군이 새로운 물체를 탐색하는 정도를 100% 기준으로 하여, 각 군의 새로운 물체를 탐색하는 정도를 백분율로 환산한 값을 표 5에 나타내었으며, 단독 추출물 투여군의 백분율 실측치를 앞서 언급한 콜비(Colby) 공식에 대입하여 계산된 혼합 추출물의 백분율 예측치 또한 표 5에 나타내었다.
투여군 새로운 물체를
탐색하는 정도		 정상군
대비 백분율
실측치		 정상군
대비 백분율
예측치
정상군 (Normal 또는 N) 0.18 ±0.04*** 100% -
스코폴라민 처리 비히클 대조군
(Vehicle 또는 Veh)		 -0.11 ±0.03 - -
잇꽃씨 200mg (CS) 0.07 ±0.07* 38.89% -
흰민들레 지상부 200mg (TA) 0.11 ±0.05** 61.11% -
잇꽃씨 8 : 흰민들레 지상부 2
200mg (C8T2)		 0.09 ±0.04**
50.00% 76.23%
잇꽃씨 5 : 흰민들레 지상부 5
200mg (C5T5)		 0.19 ±0.05***
105.56%
잇꽃씨 2 : 흰민들레 지상부 8
200mg (C2T8)		 0.18 ±0.05*** 100.00&
그 결과, C5T5 및 C2T8 투여군에서 예측치를 뛰어넘는 매우 우수한 물체인지능력 개선효과가 나타남을 확인하였다.
이를 통해, 잇꽃씨와 흰민들레 지상부를 2:8 내지 8:2의 중량비로 혼합하여 투여하는 경우, 기억력 증진 및 인지기능 장애 치료에 대한 상승효과를 나타내며, 특히 2:8 내지 5:5의 중량비로 혼합하여 투여하는 경우 상승효과가 최대치로 나타나 기억력 및 인지능이 현저하게 개선됨을 확인하였다.
잇꽃씨, 흰민들레 지상부 단독 및 이의 혼합 추출물의 뇌 중량 개선 효과의 확인
뇌 중량 개선 효과를 평가하기 위해, 상기 실시예 2-1의 각 실험군으로부터 적출한 뇌 조직의 중량을 측정하여 확인하였다.
그 결과, 도 3에 나타난 바와 같이 스코폴라민에 의해 감소된 뇌 중량 수치를 잇꽃씨, 흰민들레 지상부 단독 및 이의 혼합 추출물이 유의적으로 증가시킨다는 것을 확인할 수 있었고, 마우스의 몸무게 증가 대비 뇌 중량이 증가된 폭으로 계산하면 혼합 추출물군(C8T2, C5T5 및 C2T8)이 잇꽃씨 단독 추출물군보다 우수한 뇌 중량 증가 효과를 나타내며, 특히 C8T2군이 가장 우수한 뇌 중량 증가 효과를 나타냄을 확인할 수 있었다.
도 3의 데이터 값은 평균±으로 표시하였다 [유의성: * p<0.05, ** p<0.01, *** p<0.0001 vs. 비히클-투여 및 스코폴라민-처리 마우스 (비히클 대조군), t-test].
잇꽃씨, 흰민들레 지상부 단독 및 이의 혼합 추출물의 인체 안전성 확인
간 독성을 평가하기 위해, 상기 실시예 2-1의 각 실험군으로부터 채혈한 혈액에서 혈중 aspartate aminotransferase (AST)와 alanine aminotransferase (ALT)의 수치를 측정하여 확인하였다. 구체적으로, 채취한 혈액을 상온에서 1시간 정도 방치한 다음 3,000 rpm으로 원심분리하여 혈청을 분리하고 상용화된 키트 (Asan Pharm., Asan, Korea)를 이용하여 측정하였다.
그 결과, 도 4에 나타난 바와 같이 잇꽃씨, 흰민들레 지상부 단독 및 이의 혼합 추출물의 투여는 AST 및 ALT 수치 상승을 나타내지 않아 간 독성이 없음을 확인하여 인체에 안전한 물질임을 확인하였다.
도 4의 데이터 값은 평균±으로 표시하였다 [유의성: * p<0.05 vs. 비히클-투여 및 스코폴라민-처리 마우스 (비히클 대조군), t-test].
잇꽃씨, 흰민들레 지상부 단독 및 이의 혼합 추출물의 아세틸콜린에스테라제 활성 억제 확인
본 실시예에서는 치매 약물의 표적 중 하나인 아세틸콜린에스테라제(acetylcholinesterase, AChE) 활성 실험을 통하여 잇꽃씨, 흰민들레 지상부 단독 및 이의 혼합 추출물의 기억력, 인지기능 장애 및 치매에 대한 효능을 평가하였다.
아세틸콜린에스테라제 단백질의 발현을 측정하기 위하여 10 ㎍의 단백질을 SDS-폴리아크릴아미드 겔을 이용하여 전기영동으로 분리한 후, 아크릴아미드 겔을 니트로셀룰로스 멤브레인으로 이동(transfer)시킨다. 5% 스킴 밀크를 함유한 TBS-T (TBS에 용해된 0.5% Tween 20)에 담궈 1시간 처리한 후 TBS-T로 5분마다 5회 세척하였다. 준비된 멤브레인에 1차 항체를 처리하여 4℃에서 하룻밤 동안 두고(overnight), 이후 TBS-T로 10분마다 5회 세척하였다. 처리된 1차 항체에 맞는 2차 항체(TBS-T로 1:5000로 희석해서 사용)를 사용하여 상온에서 1시간 30분 반응시킨 후, TBS-T로 10분마다 5회 세척하였다. ECL 용액으로 반응시킨 후 Davinch-ChemiTM Chemiluminescence Imaging system (Davinch-K Co., Ltd., Seoul, Korea)에 감광시켜 단백질 발현을 확인한 후, 해당 밴드를 ATTO Densitograph Software (ATTO Corporation, Tokyo, Japan) 프로그램을 사용하여 정량하였다.
그 결과, 도 5에 나타난 바와 같이 잇꽃씨, 흰민들레 지상부 단독 및 이의 혼합 추출물 모두 아세틸콜린에스테라제 억제 활성을 나타내었고, 특히 혼합 추출물군(C8T2, C5T5 및 C2T8)이 단독 추출물군보다 우수한 억제 활성을 나타냄을 확인하였다. 가장 우수한 AchE 억제 효과는 C5T5 투여군에서 확인되어 실시예 2의 결과와 마찬가지로, 잇꽃씨와 흰민들레가 5:5의 중량비로 혼합된 추출물이 가장 우수한 효과를 나타낸다는 것을 다시 한번 확인할 수 있었다.
도 5의 데이터 값은 평균±으로 표시하였다 [유의성: * p<0.05, ** p<0.01 vs. 비히클-투여 및 스코폴라민-처리 마우스 (비히클 대조군), t-test].
이상의 결과를 통해, 잇꽃씨와 흰민들레 지상부를 5:5의 중량비로 혼합한 추출물 투여군은 우수한 기억력 증진 효과 및 인지능 개선효과를 나타내는 것으로 결론지을 수 있고, 또한 잇꽃씨와 흰민들레의 혼합 추출물은 간독성을 나타내지 않는 인체에 안전한 물질임을 확인하였다. 따라서,잇꽃씨와 흰민들레 지상부를 2:8 내지 8:2의 중량비로 혼합한 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물은 기억력 증진 및 인지능 개선용 소재로서 유용하게 사용할 수 있다.
이상의 설명으로부터, 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 이와 관련하여, 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적인 것이 아닌 것으로서 이해해야만 한다. 본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims (14)

  1. 2:8 내지 5:5의 중량비로 혼합된 잇꽃씨(Carthamus tinctorius L. seed) 및 흰민들레(Taraxacum coreanum)의 물 추출물을 유효성분으로 함유하는 인지기능 장애 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 흰민들레는 지상부(aerial parts)인 것을 특징으로 하는 인지기능 장애 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 제1항에 있어서, 상기 인지기능 장애는 치매, 알츠하이머, 헌팅턴병, 혈관성 치매증, 허혈성 뇌졸중, 외상성 뇌손상, 건망증, 파킨슨병, 픽병(Pick disease), 크로이츠펠트-야콥병(Creutzfeldt-Jakob disease), 및 경도 인지기능 장애 중에서 선택된 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 인지기능 장애의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  6. 2:8 내지 5:5의 중량비로 혼합된 잇꽃씨(Carthamus tinctorius L. seed) 및 흰민들레(Taraxacum coreanum)의 물 추출물을 유효성분으로 함유하는 인지기능 장애 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
  7. 제6항에 있어서, 상기 흰민들레는 지상부(aerial parts)인 것을 특징으로 하는 인지기능 장애 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
  8. 삭제
  9. 삭제
  10. 제6항에 있어서, 상기 인지기능 장애는 치매, 알츠하이머, 헌팅턴병, 혈관성 치매증, 허혈성 뇌졸중, 외상성 뇌손상, 건망증, 파킨슨병, 픽병(Pick disease), 크로이츠펠트-야콥병(Creutzfeldt-Jakob disease), 및 경도 인지기능 장애 중에서 선택된 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 인지기능 장애의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
  11. 2:8 내지 5:5의 중량비로 혼합된 잇꽃씨(Carthamus tinctorius L. seed) 및 흰민들레(Taraxacum coreanum)의 물 추출물을 유효성분으로 함유하는 기억력 증진용 건강기능식품 조성물.
  12. 제11항에 있어서, 상기 흰민들레는 지상부(aerial parts)인 것을 특징으로 하는 기억력 증진용 건강기능식품 조성물.
  13. 삭제
  14. 삭제
KR1020180143731A 2018-11-20 2018-11-20 잇꽃씨 및 흰민들레 추출물을 유효성분으로 함유하는 인지기능 장애 예방, 개선 또는 치료용 조성물 KR102054129B1 (ko)

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* Cited by examiner, † Cited by third party
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KR20180108267A (ko) * 2017-03-24 2018-10-04 경희대학교 산학협력단 홍화자 추출물을 유효성분으로 포함하는 신경퇴행성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물

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