TWI222887B - Aqueous aerosol preparations containing biologic ally active macromolecules and process for producing the corresponding aerosols - Google Patents

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1222887 部 屮 樣 1\ J. 消 fc 合 ίΐ η 印 A7 五、發明説明（ 本發明係有闕製備用於吸入投藥之蛋白質及其它生物活 性巨分子之氣溶膠、及製備該氣溶膠的水性製劑之方法。 ，疋㊂ <，本發明係有關於用於吸入投藥以治療糖尿病之 高濃縮胰島素水性製劑。 以吸入性氣溶膠型式投藥的方式已久爲人知。此種氣溶 膠不僅用於治療呼吸障礙，如氣喘，且亦可使用於將肺或 鼻道黏膜當做吸收器官之時。通常活性物質之血中濃度可 高達足以治療身體其它部位疾病之濃度。吸入性氣溶膠亦 可做爲疫苗之用途。 •特定g之，許多方法可用於製備氣溶膠。活性物質之懸 浮液或落液可靠推進氣體之助噴出，或將微粒化粉末型式 之活f生物豸液化於吸入的空氣中，或甚至利用噴霧器霧化 水性溶液。 然而，於複合分子結構（如干擾素）之情形時，水性溶液 之霧化將導致活性物質之活性嚴重減低，此應爲剪力及加 熱的結果。一般認爲，如低活性蛋白質凝集體的形成，可 能亦爲部份原因。於論文“重組體同質干擾素於空氣噴射及 超音波霧化中之穩定性，，中，醫藥科學誌（J pharm sd ) 84:1210-1215頁（1955年），A.Υ·伊普（ΐρ)及其同事描述了以 超音波或噴射霧化後干擾素聚集體形成之實例，及伴隨而 生之干擾素生物活性損失。即使生物分子（生物活性巨分子） 並未完全破壞，在此所提到之活性損失相當重要，因其造 威可能十分昂貴的生物分子相當大的消耗，且導致每次啓 用之活性物質劑量不準確。於氣溶膠製劑時複合物分子結 -4- 本紙《尺度询川中國囤家標碑（（、NS ) Λ4規梠（2丨0X297公釐 (請先閱讀背面之注意^項再填寫本頁)

1222887 A7 B7 五、發明説明（2

=活性減少並不限於干擾素；當將其它蛋白質[請參照如 耐文（Niven)等人，醫藥研究兹（pharm R 年=生物分子製備氣溶㈣式時，也會發生更多或=(少= #響0 :以工業製備含生物分子之氣溶膠外，需有第二個步驟 二：生物分子馬肺部所吸收。成年人的肺呈現相當大的 ^ 仁亦有—些阻礙肺吸收生物分子之處。空氣 之氣溶膠經鼻或口部吸人後，通過氣管且再經過 小及較小主畜答农 爲、 Μ 、.支氣管而達到肺泡。肺泡擁有比氣 吕、支氣官及細去今其L + ..,^ 支乳&加在一起更大得多的表面積。其爲 王要吸收區域，7役π ^ 不僅可吸收氧氣，亦可吸收生物活性巨分 子。分子欲自空与沒 、、 其 ^ #進入血流中，必須通過肺泡上皮、微血 艮上皮及這兩層如合、 、·胞間又含淋巴間質區。此步驟可經由主 動或被動運輪太、、土、去丄， 達成。這兩層細胞摒列相當緊密，因此 火邵分大型生私\ 型分子缓慢許少。分子（如蛋白質）通過該障壁的速度較小 又β夕。通過肺泡上皮及微血管内皮之過程中會 方法競爭，而導致生物分子之破壞。支氣管肺 /S履含外蛋白醏 (Lammi)，Α τ /、[叫參考如華爾（Wa11) D.A·及藍納提 之高量外肚醢·Ι發表“存於鼠及犬的支氣管肺泡洗出液中 頁（1993 年國際醫藥誌（Int.J.Phann.) 97:171-181 姓ψ疋a, 支氣官肺泡液亦含巨噬細胞，可藉吞噬作用 拼贫自質顆乾。、二 此它們可获丄'。這些巨噬細胞移至支氣.管樹的基部，在 ρ, ^ Λ, 喂鐵毛肅清機制離開肺部。隨後可移入淋 巴糸統。此外， 朴 ^ ^胞可被氣溶膠型式之蛋白質影響其 本纸张尺度垧川中· 5- (Ns ) /\叫抬（2】〇χ 297公绩） (請先閱讀背面之注意Ϋ-項再填寫本頁)

1222887 A7 B7 .¾ ·?- _ι 1V 仓 V, 印 γ： 五、發明説明（3 生理，如干擾素可活化辟 動爲另-散佈吸入性蛋白質之手舌化…胞之移 複雜性代表某一種蛋白質：;; = :用機制。該過程之 .^ '軋/合膠忒騃結果無法全盤適用 肺白質。如干擾素之間的微小差異即可使其對 肺二降：機轉的感受性造成顯著的作用[見玻西㈣等人 干擾素在辟的分解代謝：125-ι標記人類干擾辛阿爾發 (alpha)之肺泡吸收會有部分生物活性的損失，，抗病毒研究 (Antiviral Research) 4:211.220^(1984^)] 〇 蛋白質及其它生物巨分子理論上確實可霧化， ?會伴隨活性損失。本發明之目的係提供-種製備吸入性 ::膠的方法，藉該法生物活性巨分子(特別是蛋白質)可 被霧化而無任何實質活性損失。 。新-代無推進劑噴霧器見述於美國專利第 號；茲專利内容在此做爲參考資料。其中所描述之噴霧器 的特殊優點爲不需應用推進劑氣體，特別是氟氯烴。 更先進之噴霧器具體實施例揭露於pcT/Ep9_35H〇 97Π之中。對於本發明’參考資料係針對其中所述之 圖6 [雷斯皮麥特（Respimat@)]及本申請案中之敘述的相關 邵分。其中所述之噴霧器可有利地應用於製備根據本發明 (含生物活性巨分子吸入性氣溶膠。特定言之，在其中所 述t噴霧器可用於吸入胰島素。由於其方便之尺寸，此裝 置可讓病患隨時攜帶。利用所述之噴霧器，特定量（較佳; 約15微升）之含活性物質溶液可於高壓下經由小型噴嘴噴出 以形成吸入性氣溶膠，其平均顆粒尺寸介於3至1〇微米。、爲 6 本纸張尺度適州中國1¾家標冷（CNS ) Λ4規柁（210 X 297公f (請先閲讀背面、v注意^-項再填寫本頁) • ---- -- ?_ - 1= - I 、-口 1222887 Α7 Β7 .¾ -少、 η 义b

'1' 'Ί： Λ, ίΐ η YV 五、發明説明（4 吸入胰島素之用時’每次可將介於1〇及5〇微升之氣溶膠初 劑霧化成吸入性小滴之噴霧器較合適。 、/恭 根據本發明製備之氣溶膠特別重要的—點係應用上 利或專利巾㈣錢之謂器來進行含蛋白質或其它生物 活性巨分子之活性物質溶液之不含推進劑霧化。 本貝上，在其中所揭露之方便尺寸霧化器（噴霧哭， 約1〇公分)包含上罩部分、幫浦罩、噴嘴、失持裝；、彈夢 罩、彈簧及貯藏容器、其特徵爲·· 、 -有一個幫浦罩裝在上罩部分’且—端文撑—噴嘴组件盘 噴嘴或噴嘴結構， -有閥組件的空心活塞， -空心活塞裝在一個位於上罩部分内的傳動凸緣上， -有一挾持裝置位於上罩部， _有-個内有彈簧的彈簧罩’藉—個旋轉轴承旋轉裝在上 罩部， -下罩部以同轴方向裝在彈簧罩上。 關於有閥組件的空心活塞專利w〇97/12687爲己揭露的類 似裝置之一。其部份突入幫浦罩之圓筒中，且裝置成可於 圓筒中作軸向移動。特別參考圖1至4，尤其爲圖3，以及 專利説明之相關部分。當彈簧釋放時，有閥組件的空心活 塞在其南壓侧可施與液體（適當的活性物質溶液）5_6〇 m卯 (、.’勺50-600巴），早父佳爲i〇_6〇 Mpa (約巴），之壓力。 閥組件較佳裝置於面對噴嘴組件的空心活塞之尾端。 噴嘴組件中之噴嘴較佳爲微結構，如由微技術製造。微 -7- (210x297公釐） (請先閱讀背面之注意Ϋ-項再填寫本頁}

V 1222887 A7 五、發明説明（5 結構噴嘴組件係福％、λ , '、芍路於，如W〇_94/076〇7中；該專利説明之 内容在此做爲參考資料。 #噴用組件包括’如兩片互相緊密接合的玻璃及/或聚矽 9 其^中牵ij,>. _ U. a

、 片。—或多微結構管連接噴嘴之入口端S 拂出端。於噴嘴之排出端至少有一個小於或 4圓形或非-圓形的開口。 ϋ微未 4里二、件又噴角中液體的流動方向可互相平行或傾斜。 口、嘴組件〈排出端至少有2個噴嘴開卩、，流動方向 二墙斜細。角，較佳角度爲6…流 嘴開口附近會合。 贾 夹2裝置σ彈簧，較佳爲圓筒狀螺旋形的壓縮彈簧， =爲2能之儲存處。彈簧作用於傳動凸緣作爲跳變电 :地：移動係由鎖定組件位置來決定。傳動凸緣之通道準 產生二I制動栓所限制。以與下罩部彈簧罩反向旋轉所 輪，：^ 經由—個力-傳送齒輪，如螺旋形的推力凸 輪’知彈黃置於張力 凸 邱八π徜么 （來）局衩佳。於此例中，上部罩 部刀及傳動凸緣含有單速或多速樓形齒輪。 早 ::::疋面心鎖定組件以環型園繞傳動凸緣。其勿

:霧㈣能Ϊ射：彈性變形之塑膠或金屬環。該環安，ί 在務化益軸乏直月平面上。彈筈权 S 面滑入傳動凸緣之通道，預防彈簧=，鎖定組件之鎖定 包戍叙h 預防彈菁鬆開。鎖定組件係以按 .口動。啓動按鈕係連接或聯合於鎖定组 ^ 71· . 7 /* n I *wi —·. / di yv /1 · /rr r ;=广平行環平面方向壓下啓偷，較佳爲壓= 貪務备中；可變形環因而在環平面上變形。鎖定閥之詳2 8- 本纸从度 1¾ WH. K R ίΗ㈣（（，NS )爾格（210^97^* 1222887 A7 --------- B7 五、發明説明（6 ) 内容見述於W0 97/20590。 下罩部分可以軸向壓下彈簧罩，並覆蓋軸承、軸傳動部 及溶液貯藏容器。 操作霧化器時，以反向下罩部方向來旋轉上罩部，下罩 邵中有彈簧罩。藉螺旋形推力凸輪壓縮及偏壓彈簧，而鎖 足裝置會自動吻合。旋轉角度較佳爲36〇。之完整分數，例 如180。。當彈簧偏壓時，上部罩部之傳動組件會移動些許 距離，將幫浦罩圓筒中之空心活塞拉回，結果部份貯藏容 器内的液體被吸到噴嘴前方之高壓室内。 必要時，多數裝有霧化溶液之可交換貯藏容器皆可插入 務化斋亚應用。貯藏容器包含根據本發明之水性氣溶膠製 劑0 請 先 閱 讀 背 之- 注 意 Ϋ - 項 再 填 寫 本 頁 t * J、h ί] j. 消 Aii η 印 -r: 霧化步驟起始於輕壓啓動按鈕。鎖定裝置會打開啓動傳 動’·且件。偏壓彈簧將活塞推入幫浦罩圓筒巾。液體會以霧 化型態離開霧化器噴嘴。 其它詳細構造揭露於PCT專利申請w〇 97/12683及评〇 97/20)90 ;這些刊物内容在此做爲參考資料。 霧化器（噴霧器)之元件係利用適於此目的之金屬來製 造。霧化器的外罩及 | ％ & 甚/、操作泮可説明·其它部份較佳 為生膠製，如射出塑造。爲 、 局骨樂用途，應使用生理可接受 材料。 描述於WO 9 7/12687之霧化哭可用力； 、益、 務化w飞用在，如不含推進劑產品 t樂物氣溶膠。其可產生平 膠小滴。 屋生千均、45微未大小之吸人性氣溶 -9- 訂

木纸乐尺度剌巾射 (210X 297公釐） 1222887 十 -少 ?- Mj A7 五、發明説明（7 圖4 a/b，與W0 97/12687之圖6 a/b相同，所顯示之噴霧器 (雷斯皮麥特，可使根據本發明之水性氣溶膠製劑方便地吸 入。 圖4a顯tf彈簧已偏壓之霧化器縱切面，圖4b顯示彈簧已 釋放之霧化器縱切面。 上罩邵（51)尾端包含裝有噴霧器噴嘴座（53)的幫浦罩 (52)。噴嘴座中裝有噴嘴組件（54)及過濾器（55)。空心活塞 (。57>)鞏固在挾持裝置之傳動凸緣（56)中，部份突入幫浦罩之 圓筒中。文心活塞尾端附有閥組件（58)。活塞以密封（59)封 住。上罩邵内部爲彈簧釋放時傳動凸緣倚靠制動栓（60)。 傳動凸緣上爲當彈簧偏壓時凸緣倚靠之制動栓（61)。於彈 簧偏壓後鎖足組件（62)在制動栓（61)及上罩部的一個支撐 點（63)間運動。啓動鈕（64)連接於鎖定組件。上部罩部分尾 端爲口部件（65)，以可移動之保護套（66)關閉。 有壓縮彈簧（68)之彈簧罩（67)藉壓扣入（snap_fit)突起（69) 及可旋轉軸承裝在上罩部上。推壓下罩部套住彈簧 罩。彈育罩内有裝填欲霧化的液體（72)之可替換貯藏容器 (71)。聍藏谷器以塞子（73)密封，空心活塞通過塞子伸入貯 存客器’其尾端浸入液體中（供應活性物質溶液）。 機械計數器之主軸（74)係裝於彈簧罩外側表面。主軸面 向上邵罩部分端爲傳動小齒輪（75)。滑子（76)裝在主軸上。 上述之噴霧器適於霧化根據本發明之氣溶膠製劑以產生 適於吸入之氣溶膠。 噴霧器之有效性可利用實驗系統來試驗，先將蛋白質汶 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 蜃‘ 、1Τ r： -10- 本纸Μ度地州;HP橡料（rNS ) Μ規格（21〇>< 297公衆 1222887 A7 B7 五、發明説明（8

•ί-J:) Aίι 巧1 印 p 2霧化，再以所謂的“陷阱，，捕捉噴霧（見圖υ。氣溶膠貯 藏U)中之蛋白質活性與所捕捉的液體0)之活性相比較， 例如藉兄疫測定法或應用蛋白質生物有效性分析。該實矜 可評估噴霧法之蛋白質損壞度。第二種氣溶膠品質之變數 係所明吸入比例’’，在此定義爲測定中位空氣動力學直徑 [measured median aero-dynamic diameter (MMAD)]小於 5 8微 米的霧狀小滴（比例。吸人比例可應用“安德生衝擊器 derSen Impactor)”評估。爲了良好蛋白質吸收，重要的 是不僅須達到霧化而無任何實質活性損失且亦須產生有良 好吸入〖生比例（約6〇%)之氣溶膠。小於5 8微米之氣 岭膠明顯敉逍於達到肺泡，於該處被吸收之機會明顯增 加。霧化裝置之有效性也可於體内系統試驗；在此情況下 士對肺蛋白酶感文性之類的因素也會有影響。冑内試驗系 、’、實彳i之，將含蛋白質之霧經由氣管插管投藥予狗。於 ，當時間間隔採取血液樣本，再以免疫或生物方法測量血 漿中之蛋白質含量。 通合的噴霧器見述於前所提及之美國專利第5,497,944號 及wo 97/12687中’特別如圖“關示（於本專利申請中爲 圖4 a/b)。適合霧化根據本發明生物活性巨分子之水性氣溶 膠製劑的較佳噴嘴裝置見於美國專利之圖8。 令人驚訝的，已發現上述不含推進劑之噴霧器可噴出所 叙=量.例如15微升_之氣溶膠製劑，於介於刚至⑽ 2之间壓下，經由至少一個液壓直徑爲1-12微升之喷嘴， 得以產生平均顆粒尺寸小於約輝米，適於霧化水性氣溶 本纸疼尺度询川屮1¾ 1¾ -11 - —-—_________ ((’沾）/\4規格（210/ 297公釐） 請 閱 讀 背 之·

訂

1222887 A7 B7 J.h )/； 11' A fl 不i. 印 發明説明（9 膠製劑蛋白質及其它巨分子之吸入小滴， 尤具疋其可霧化 之蛋白質範圍廣泛，且無任何可察知的 ^ ； j浓性彳貝失。如上述 美國專利圖8所示之噴嘴裝置爲較佳。牿 此種噴霧器霧化干擾素的能力，因其它 的是 匕裝亂都會在霧化過 程u成極大的活性損失。不論體外試驗或是體内試驗，干 擾素奥米加（〇mega)以此裝置霧化後之特高活性㈣令 詞1。 馬 ，本發明之另-優爲其令人驚狀，可將高濃度溶液生物 =性巨分子霧化而亦無任何實質活性損失之能力。應用高 濃度落液使得裝置可小到舒適地經常攜帶於外套口袋或手 提包内。揭露於圖4之噴霧器可滿足這些需求且可應用於 務化南濃度生物活性巨分子溶液。 舉例而言，此類裝置特別適於讓糖尿病患藉由吸入胰島 素自行治療。較佳使用高濃度水性溶液含汕至卯毫克/毫升 濃度之跋島素，更佳爲含33至6〇毫克/亳升胰島素溶液^特 佳爲含33至40毫克/亳升胰島素溶液。依噴霧器貯藏可利用 的尺寸，含胰島素之溶液的濃度大於25毫克/毫升，較佳爲 3〇毫克/毫升者，適於由如上述之手持裝置吸入有效治療量 I胰島素。藉吸入投予胰島素使活性物質能快速開始作 用，讓病患可自行於如開飯前以所需之量治療。如雷斯皮 麥特@之小尺寸使病患可時常攜帶該裝置。 雷斯皮麥特，WO 97/12867之圖6 )含一固、定量之給劑室， 讓病患藉噴霧次數決定並吸入所需之胰島素劑量。除噴霧 次數外，胰島素計量係藉貯藏容器（72)内之胰島素溶液濃 12 本纸張尺度询川中Κ Ρϋ家標呤（) Λ4規格（· 210 X 297公釐 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 1222887 A7 五、發明説明（1〇 ) 度來決定。其可介於，如25及90毫克/毫升間，大於約邛毫 克/毫升之較高濃度溶液爲較佳。 製備南▲度4、足姨島素溶液的方法見述於，如專利申 请 83/00288 (PCT/DK82/00068)及 83/03054 (PCT/DK83/00024)，其在此 做爲參考升料。 根據本發明之藉上述裝置投藥的含胰島素氣溶膠製劑不 應大於1600.10 Pa s之動態黏度以確保噴霧產生劑量之吸入 比例不低於可接受程度。黏度指數限制於122〇 1〇_0以下的胰 島素落液爲較佳，且最佳爲達11〇〇 1〇>6 pa s [帕斯卡秒 (Pascal seconds)]。若需要時，可不使用水爲溶劑而改以溶 劑混合物以降低藥物溶液之黏纟。這點可#由如添加乙醇 達成。水性配方中乙醇之量可達如5〇%，·較佳量爲3〇%。 本發明更進一步目的係提出適合應用於本申請專利方法 之適當氣溶膠製劑。 本發明亦有關於水性溶液形式之氣溶膠製劑，其含做爲 活性物質生物活性巨分子，特別是蛋白質及肽，濃度介於 3毫克二毫升及150毫克/毫升間，或介⑽毫克/毫升及1〇〇 毫克/毫升間。 已發現，令人驚砑地，應用根據本.發明申請專利之方 法’即使南黏度溶液巨分子方可喷射出適當尺寸之吸入小 滴。這使每次應料可投予更大量活性物質，且目此增加 巨分子吸入性療法之療效。 根據本發明之方法，含巨分子(例如蛋白素)之水性氣溶 瞭製劑可應用達⑽請^"之黏度（於25τ測量）。黏度爲 ~13- 1222887 ^••::;;T*^i屮 J>/;贤合 eii印 y A7 五、發明説明（) 1500.10* Pa s時仍可獲得32%之吸入比例。 · 黏度達1100· 1 O'6 Pa s之巨分子較高黏度溶液爲較佳。以此 溶液’可獲得含約60%吸入比例活性物質之小滴。特性黏 度指數可應用文獻中的方法利用奥斯特華德（〇stwald)黏度 計測.量。作爲比較，水之黏度爲894. ΙΟ·10 Pa s (於25測 量）。 爲説明根據本發明方法之優點，下列爲以干擾素奥米加 溶液之體外及體内試驗的描述。 I斯皮麥特®及干擾素奥米加之體外試驗 將雷斯皮麥特裝置（a)之貯存器裝入5毫克/毫升干樣素奥 米加溶液（調配成50 mM檸檬酸三鈉，150 mM Na(X pH 5.5)。啓動該裝置，以28升/分鐘之氣流霧化約12·9微升之 量（壓一下）。霧化溶液被陷阱（圖1}捕捉起來。以免疫方法 測置貯藏溶液中及被陷畔捕捉的溶液中之干擾素奥米加， 使用ELISA，及生物學方法，藉由抑制腦心肌炎病毒感染 之A549細胞之破壞程度來測量。干擾素之免疫測量法相當 簡單。已發表的霧化蛋白質試驗在許多情況下受限於免疫 測量法。然而，額外的生物測量非常重要，由於其特別敏 感且爲與治療學有關之足量蛋白質破壞程度之方法。這此 方法並不會如物理-化學或免疫方法可得到相同結果，這是 由於分子在與抗體結合時會失去其生物特性而無任何改 變。 於三次實驗中，於捕捉溶液（b)中發現相較於初始溶、、喪 84%、77%及98%之免疫學所確認的干擾素。_^^^ -14 - 本纸乐尺度进州中κs家標々（（、ns ) ^規;公釐）—一~—-- (請先閱讀背面之注意Ϋ-項再填寫本頁〕

1222887 A7 五、發明説明 Η •是 部 十 合 ii 印 ΐ: 物"、j里所獲得之結果爲於捕捉溶液之54%、47%及81%回收 率之生物學確認干擾素。此高比率顯示以雷斯皮麥特裝置 霧化僅破壞相當少量之干擾素活性。由上述雷斯皮麥特裝 置噴出之霧同時以氣流（28升/分鐘）通過安德生衝擊器。測 量尺寸小於5.8微米之顆粒比例（“吸入比例”）。此吸入比例 相當於70% (免疫測量）。如干擾素之類的蛋白質通常以人 血β蛋白質調配以對敏感的干擾素提供更進一步保護。如 上之含額外人血清蛋白素（〇 5%)配方亦加以試驗。於三次 試驗中’可發現於捕捉溶液（b)中含83〇/〇、83〇/〇及79%(同樣 的與初始溶液相較）之免疫學確認之干擾素。以相同溶液作 生物測量可獲得60%、54%及66%之生物學活性干擾素於捕 捉溶液中。其吸入比例（免疫學測量法）爲67〇/〇。於另一組 試驗中，將濃度爲53毫克/毫升之濃縮干擾素奥米加溶液倒 入雷斯皮麥特裝置之貯存器中後霧化。於四次試驗中，於 捕捉溶液（b)内發現100%、60%、68%及72%(相較於初始溶 液）之免疫學可確認之干擾素。以相同溶液作生物學測量， 於捕捉溶液内可獲得95%、98%、61%及83%回收率之生物學 可確認之干擾素。這種高回收率顯示雷斯皮麥特裝置亦可 應用於霧化濃縮蛋白質溶液而不會造成過多干擾素活性損 失。 t斯皮麥特Θ及干擾素奥米加之體内試| 將干擾素奥米加以吸入及靜脈注射途徑、於不同實驗中投 藥予同一隻狗。以免疫學及生物學方法測量不同時間之血 中干擾素含量。此外，測量血中尼歐普特林（neoPterin)含 -15- _____ 木紙仏尺度迖川中國K家標呤（（、NS ) Μ規格（210X 297公釐） 請 閲 讀 背 面 5 意 事 項 再 t 訂

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、.w 1V A 五、發明説明（14 含量可證明藉雷斯皮麥特投予干擾素可得良好生物學活 性。 雷斯皮麥特裝置可霧化生物活性巨分子之優點並不限於 干擾素’請見實例2所示。 重^皮麥特Θ及錳超氣化物歧化酶之體 霧化試驗物質之裝置及相關陷阱見於圖1。於此實驗中， 將雷斯皮麥特裝置之貯存容器（a)裝滿3.3毫克/毫升之鏠超 氧化物歧化酶（MnSOD)之磷酸鹽-緩衝生理食鹽水（pBS)操作 該裝置並以28升/分鐘之氣流量霧化約13微升（噴一次）之 量。正確之霧化量係以重量分析測定（於三個連續試驗測量 値爲：12.8、13·7及14.3毫克）。該霧化溶液爲陷阱（b)所捕 捉。孩陷阱含20毫升PBS。除此之外，添加2毫升之5 %牛 血清蛋白素以穩定陷阱中之蛋白質。測量貯藏溶液及被捕 捉於陷阱中之溶液中的MnSOD，此係利用免疫法以ELISA 及酵素法測量於黃嘌呤/黃嘌呤氧化酶反應後所還原超氧化 物之量。於三次試驗中，測量出霧化溶液中有78%、89〇/〇及 83%之免疫學可確認MnSOD於捕捉溶液（b )之中。霧化後沒 有可測出之酵素活性損失。其可吸入比例（免疫測量）爲 61% 〇 下列實例描述根據本發明所生產之含跋島素作爲活性物 質之氣溶膠製劑。 座島素溶液之製備及塡充至噴霧器 ' 將牛之175亳克（根據製造商資料，相當於4462.6 I.U·)結 晶跋島素（鈉鹽）溶於3.5毫升之無菌純水[色拉儂爾 -17- 本纸張尺度这州中阈囤家標彳（（，NS ) 規格（210X 297公f ) f請先閲讀背面V注意事項再填寫本頁〕 警. 1222887 Λ7 -------— 五、發明説明（16 ) 、 需要可含其Έ：溶劑如乙醇。乙醇量受到限制，作用於溶解 活f生物#，此因活性物質於過高濃度時可能會自氣溶膠製 J /几澱出可祆洛液之添加劑如藥學上可接受之防腐劑， 如乙醇驗甲表酝或帕拉伴（paraban)、藥學上可接受之 酸、鹼或调節pH之緩衝液或表面活性劑亦可。此外，爲了 穩疋洛液或促進氣溶膠品質，可添加金屬螯合劑如。 爲了/增進氣溶膠製劑之活性物質溶解度及/或穩定性，可添 加胺基酸如天門冬胺酸、及特別是普羅連（pr〇lene)。 除干擾素、超氧化物歧化酶及胰島素外，根據本發明之 藥學製劑之較佳活性物質如下： 反股寡核苷酸 苯基一氫口奎嗤p林(〇rexj；n$ 促紅血球生成素 腫瘤壞死因子-α 腫瘤壞死因子-/5 G-CSF (顆粒性白血球聚集刺激因子） GM-CSF (顆粒性白血球-巨嗜細胞聚集刺激因子） 士尼可 k 素（annexins) 降血鈣素 立普 >丁素（leptins) 甲狀旁腺素 曱狀旁腺素片段 ' 介白素，如介白素2、介白素10、介白素12 可溶性IC AM(細胞間黏合分子） _________ _____ -19-一 一 ___— 本⑽尺度朗彳刻STiTnS ) ϋ格（2lOX29^il "一 ~^^—— f請先閲讀背面一V注意事項再填寫本頁} • I - I - -1 --r--^---衣

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Claims (1)

1222887 A B c D 苐087112723號專利申請案 士文申請專利範圍替換太(的年3 六、申請專利範圍 1. 一種製備氣溶膠之方法，該氣溶膠利用無推進劑之噴霧 器吸入給藥時具有平均粒子大小少於1 0微米之小滴，該 方法特徵為以定量槽定量單一劑量介於1 0及5 0微升間 的氣溶膠製劑，且於1 〇〇及5〇〇巴間之高壓下，經由一個 具至少二個直徑1 〇微米或更小之開口之噴嘴，以互相傾 斜2 0至1 6 0度角之噴射方向噴霧，於i至2秒的期間内形 成氣溶膠；該氣溶膠製劑在2 5 °c用奥斯華德（〇 s t w a 1 d 枯度計測量具有多至丨6 〇 〇 .丨〇-6 p a A S之粘度，其含有濃 度為25至100亳克/毫升選自胰島素、超氧化物歧化酶 及干擾素之群組之活性成份。 2·根據申請專利範圍第1項之方法，其特徵為該單一劑量 之有效量介於1 〇及2 〇微升間。 3·根據申請專利範圍第丨或2項之方法，其特徵為使用胰島 素做為活性物質。 4·根據申請專利範圍第1或2項之方法，其特徵為作為活性 物質的胰島素濃度大於3〇毫克/毫升。 5·根據申請專利範圍第1或2項之方法，其特徵為以超氧化 物歧化酶作為活性物質。 6·根據申請專利範圍第1或2項之方法，其特徵為以干擾素 Ώ作為活性物質。 7·根據申請專利範圍第丨或2項之方法，其特徵為該氣溶膠 製劑含一或多種選自下列表面活性物質群組的佐劑，如 表面活性劑、乳化劑、穩定劑、滲透增強劑及/或防腐 劑。 本紙張尺度適Μ _家標準(CNS) A4規格(210 X 297公董) 1222887 A8 B8 C8

8·根據申請專利範圍第i或2項之方法 製劑含有一種胺基酸。 其特徵為該氣溶膠 9. 根據申請專利範圍第1或2項之方法， 製劑含脯胺酸、天門冬胺酸或魏胺酸 溶解度或穩定性。 其特徵為該氣溶膠 以增進活性物質之 10·根據中請專利㈣第丨或2項之方法’其特徵為該氣溶膠 製劑在25。(：用奥斯華德粗度計測量具有介於95〇及 1300.10·6 paAs 間之粘度。 -2- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐)