TW458982B - Cyclopentenones, a preparation thereof and use - Google Patents

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經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 發明說明（^ 發明所屬之技術領域 本發明爲關於具有制癌作用等生理活性之安全性高的環戊 烯酮類’更詳言之，爲關於該化合物之製法、以該化合物 作爲有效成分之醫藥品。又，本發明爲關於在食品、飲料 等領域中有用的一系列發明。 先前之技術 先前，臨床上療法所使用之藥物爲分支爲烷基化劑、代 謝抑制劑、植物生物鹼等之制癌劑、抗生素、免疫促進劑、 免疫調節劑等，但其藥物療法仍難稱爲完成。 此些當中，於來自天然物之前列腺素中之具有環戊烯酮 環之前列腺素A及J類，已被報告藉由抑制DNA合成，而 有作爲安定性高之制癌劑的可能性，並且合成其各種衍生 物（參照特開昭62-96438號公報）°或Carbohydrate Res.(第 247 卷，第 217-222 頁，1993 )與 Helvetica Chimica Acta(第 55卷，第2838-2844頁，1972)記載含有環戊烯酮之化合物中， 4,5-二羥基-2-環戊烯-1-酮爲化學合成，當該化合物合成時， 由戊糖或己糖醛酸之還原酸作用的合成硏究及環戊烷之環糖誘 導體的合成硏究，而得4,5-二羥基-2-環戊烯-1-酮，其生理作 用未經完全硏究，其先前用途亦完全不明。 發明所欲解決之課題 本發明之目的爲開發具有制癌作用等生理活性之安定性 高的環戊烯酮化合物，並提供該化合物之製法及以該化合 物作爲有效成分之制癌劑等之醫藥品、含有該化合物之食 品或飮料。又，本發明之目的爲提供該化合物之使用方法、 該化合物之關連化合物等》 解決課題之手段 若槪述本發明，則本發明之第一發明爲關於下述式〔1〕 所示之4 ,5 -二羥基-2-環戊烯-1-酮之製法，其特徵爲加熱 處理下述U)、（b)、（c)所選出之至少一種物質。 (a)糖醛酸或糖醛酸衍生物' 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公g ) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

I------11 I---- I ^^8982 A7 經濟部中夬標準局員工消費合作社印製 B7五、發明説明（> ) (b) 含有耱醛酸和/或耱醛酸衍生物之糖化合物、 (c) 含有糖醛酸和/或糖醛酸衍生物之糖化合物含有 物。 0 rV〇 丨1 "〕 u-L-OH 本發明之第二發明為關於4,5 -二羥基-2-環戊烯-1-銅 之製法，其特戡為加熱處理下逑（a)、 （b>、 （c)所選出 之至少一種物質，且其次由該加熱處理物採集式〔1〕 所示之4 ,5-二羥基-2-環戊烯-1-醑。 (a) 糖醛酸或糖醛酸衍生物、 (b) 含有糖醛酸和/或耱醛酸衍生物之糖化合物、 (c) 含有糖醛酸和/或糖醛酸衍生物之糖化合物含有 物。 本發明之第三發明為關於4 ,5 -二羥基-2-環戊烯-卜酮 之光學活性龌之製法，其恃激為包含下述工程。 (A) ··加熱處理（a)、 （b)、 （c)所蘧出之至少一種物質 ，並令以生成4,5 -二羥基-2-環戊烯-卜鬭之工程、 (a) 糖醛酸或糖醛酸衍生物、 (b) 含有糖醛酸和/或糖醛酸衍生物之糖化合物、 (c) 含有糖醛酸和/或耱醛酸衍生物之糖化合物含有 物。 (B) :視需要，由所得之加熱處理物單離出4,5-二羥基 -2 -環戊稀'•卜酮之工程、 ---------¢------11 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） A7 經濟部中央標準局負工消費合作社印— B7五、發明説明（々） (C):光學分割4,5 -二羥基-2-環戊烯-卜_之工程。 本發明之第四發明為關於旋光度為 (i 0,30,乙醇）之（-)-4，5 -二羥基-2-環戊烯-1-嗣p 本發明之第五發明為醑於旋光度為〔α〕ρΜ +104° (1 0.53,乙醇）之（ + )- 4 ,5 -二羥基-2-琿戊烯- l-嗣。 本發明之第六發明為關於制癌剤，其特擻為含有式 〔I〕所示之4,5-二羥基-2-環戊烯-1-嗣和/或其光學 活性體。 本發明之第t發明為關於癌細胞分化誘導劑，其特獻 為含有式[1〕所示之4 , 5 -二羥基-2 -環戊烯-1 - ®和/或 其光學活性體。 本發明之第八發明為關於細胞自滅誘發劑，其特擻為 含有式〔1〕所示之4,5-二羥基-2-環戊烯-1-銅和/或 其光學活性醱。 本發明之第九發明為關於抗菌劑，其待擞為含有式 〔1〕所示之4,5-二羥基-2-環戊烯-1-阑和/或其光學 活性體。 本發明之第十發明為關於癌細胞分化誘導方法，其特 徴為使用式〔1〕所示之4,5-二羥基-2-環戊烯-1-酮和/ 或其光學活性體作為有效成分。 本發明之第十一發明為關於细胞自滅誘發方法，其 待I»為使用式〔1〕所示之4, 5-二羥基-2-環戊烯-1-酮 和/或其先學活性體作為有效成分。 本發明之第十二發明為關於食品或飲料，其特徽為含 (諳先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 4 6 y 8 2 Α7 Β7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明 ( 4 ) 1 1 有 ' 稀 釋 和 / 或 添 加 式 [ 1] 所示之4 ,5 -二羥基- 2 - 琛 戊 1 1 I 烯 -1 和/或其光學活性體。 1 1 本 發 明 之 第 十 三 發 明 為 開 於含 有 糖 m 酸 和 / 或 糖 m 酸 請 1 1 衍 生 物 之 糖 化 合 物 含 有 物 t 其為 令 對 含 有 耱 m 酸 和 / 或 閱 讀 1 背 1 糖 m 酸 衍 生 物 之 糖 化 合 «ft— 物 含 有物 中 之 糖 醛 酸 、 糖 酸 衍 之 1 | 生 物 ' 式 [ 1〕 所7Π之4 ,5 -二羥基- 2 - 環 戊 烯 -1 -酮之生 事 1 成 中 間 産 物 或 式 C η 所示之4 , 5 -二翔基- 2 - 琛 戊 烯 -1 -m 再 1 填 1 具 有 反 應 性 之 胺 類 、 胺 基 酸 類、 胜 肽 類 或 蛋 白 質 之 反 應 寫 本 裝 性 的 至 少 一 部 分 消 失 和 / 或 令該 反 應 性 * ί- 物 質 之 至 少 一 部 頁 、_·« 1 1 分 除 去 Ο 1 | 本 發 明 者 等 為 發 現 式 [ 1〕 所示之化合物、 4 ,5 二羥 1 1 基 -2 -環戊烯- 1 酮 (以下， 單稱為環戊烯酮）為 由 糖 m 酸 1 訂 1 I 、 糖 酸 衍 生 物 、 含 有 糖 醛 酸和 / 或 糖 酸 衍 生 物 之 糖 化 合 物 含 有 糖 酸 和 / 或 糖醛 酸 衍 生 物 之 糖 化 合 物 含 1 1 有 物 所 選 出 之 至 少 一 種 物 質 之加 熱 處 理 物 中 生 成 * 並 由 1 | 加 熱 處 理 物 中 所 at* 車 離 之 該 化 合物 為 具 有 制 癌 作 用 、 細 胞 L 白 誘 發 作 用 抗 m 作 用 等 各 種生 理 活 性 且 亦 成 功 創 製 1 該 化 合 物 之 光 學 活 性 體 > 並 完成 本 發 明 〇 1 I 圖 面 之 簡 UD 早 説 明 1 ! 第 1 匾 為 示 出 環 戊 烯 酮 之 質譜 圓 0 1 1 第 2 國 為 示 出 環 戊 烯 酮 之 1 H- NMR光譜_。 1 1 第 3 匯 為 示出_ 酸 加 熱 處 理物 所 調 製 之 環 戊 烯 m 的 細 I f 胞 白 滅 誘 發 作 用 之 圖 0 1 1 第 4 _ 為 示 出 瓖 戊 烯 m 之 6 IR吸 收 光 譜 國 0 1 1 1 1 ! 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 2 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 五、發明説明 ( Γ ) 1 1 I 第 5 圖 為 示 出 琛 戊 烯 编 之 UV吸 收 光譜 _ 0 1 ! | 第 6 圖 為 示 出 琿 戊 烯 m 之 檢 量 線 |〇1 圖。 ! 1 第 7 麵 為 示 出 m 糖 酸 加 熱 處 理 物之 氣 相 層 析 結 果 圖》 請 先 1 1 第 8 ΙΒ9Ι 國 為 示 出 保 存 時 間 與 環 戊 烯 酮量 之 關 僳 [St 鬧 〇 閲 讀 1 背 1 第 9 圖 為 示 出 (- )- 4 , 5 - 二 羥 基 ' 2 -琛戊烯- 1 - m 之 溶 出 IS 之 1 ! 曲 線 圖 Ο $ 1 第 1 α 圆 為 示 出 (+ )- 4， 5- 二 羥 基 -2 -琛戊烯- 1 - m 之 溶 出 項 再 1 填 1 曲 線 圈 〇 寫 裝 第 1 1 圖 為 示 出 (" )- 4 , 5- 二 羥 基 -2 -環戊烯- 1 - 酮 之 頁 、〆 1 1 1 Η* NHR光譜圖。 1 I 第 1 2 r〇t 圈 為 示 出 (+ )- 4 , 5- 二 羥 基 -2 -琿戊烯- 1 - 醑 之 1 1 1 Η- NMR光譜圖。 1 訂 第 1 3 B 為 示 出 培 養 時 間 與 培 餐 液 中之 生 細 胞 數 之 關 % 1 I 圖 〇 1 1 第 1 4 麵 為 示 出 培 養 時 間 與 培 養 細 胞中 成 熟 骨 鰱 細 胞 所 1 | 佔 fch 率 之 蘭 圈 〇 1 Λ 第 1 5 圖 為 示 出 環 戊 烯 _ 之 制 癌 效 果圖 〇 1 發 明 之 實 施 形 態 1 I 以 下 ， 更 具 體 説 明 本 發 明 〇 1 1 I 本 發 明 中 • 所 謂 的 糖 m 酸 、 耱 醛 酸衍 生 物 、 含 有 糖 醛 1 1 酸 和 / 或 糖 醛 酸 衍 生 物 之 耱 化 合 物 、含 有 糖 醛 酸 和 / 或 1 I 糖 m 酸 衍 生 物 之 糖 化 合 物 含 有 物 » 若為 在 其 加 熱 處 理 物 1 1 中 生 成 琛 戊 烯 飼 者 > 則 無 特 别 限 定 0 1 1 依 據 本 發 明 9 可 難 食 品 或 7 飲 料 中 令其 含 有 適 量 具 有 生 1 1 1 1 1 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2[〇Χ 297公釐） A7 4 5 898 2 B7 1 五、發明説明（& ) 理活性之環戊烯酮和/或光學活性體。藉由此等化合物 為具有制癌作用、抗菌作用等，可使本發明之食品或飲 料極為有用作為制癌性、抗g性食品或制癌性、抗菌性 飲料。 又，依據本發明為提供含有環戊烯銅和/或其光學活 性髅之醫藥組成物，且該醫_组成物可用於作為癌之治 療劑或預防劑、或作為防腐劑、抗菌性牙音劑、抗菌性 化粧材料、抗菌性沐浴用劑等之抗菌劑。 更且，依據本發明為提供使用環戊烯酮和/或其光學 活性體作為有效成分之癌細胞分化誘導方法，細胞自滅 誘發方法，且此些方法可用於生化研究，和癌細胞分化 劑、細胞自滅誘發抑制劑等之翳篥品之篩選β 本發明所使用之環戊烯酮，為_由令（a)糖醛酸或糖 醛酸衍生物、（b)含有糖醛酸和/或糖醛酸衍生物之糖 化合物、<c)含有糖g酸和/或糖醛酸衍生物之耱化合 物含有物所選出之物質予以加熱處理而生成。因此，藉 由令不含有上述（a)、 （b)或（c)之原料，經使用物理性 、化學性、酵素性或其他手段所生成之（a)、 （b)或（c) 予以加熱處理，亦可取得本發明之環戊烯酮。 又，於本發明中，可使用含有環戊烯釅之加熱處理物 ,由該加熱處理物之部分精製的環戊烯_及精製的環戊 烯酮。 糖醛酸亦稱為葡糖醛酸，為依舊維持醛式糖之醛基而 僅在另一端之第一醇基氧化成羧基之醇醛酸的總稱，在 -8 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210Χ297公釐） ---------^------ΐτ------j (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 d B B98 2 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（ Ί ) 1 1 天 妖 中 為 以 動 植 物 之 各 種 多 糖 之 構 成 成 分 型 式 存 在 〇 含 1 1 I 有 糖 酸 之 多 糖 有 果 m 果 謬 酸 、 藻 酸 、 透 明 質 酸 肝 1 1 素 硫 酸 乙 m 肝 素 岩 藻 依 聚 糖 硫 酸 軟 骨 素 軟 骨 素 請 1 t 1 、 硫 酸 皮 虜 素 等 » 各 種 生 理 機 能 為 已 知 〇 閲 讀 1 背 1 對 於 本 發 明 可 使 用 之 糖 m 酸 並 無 待 別 限 定 例 如 可 為 之 1 半 乳 堆 醛 酸 Μ 糖 m 酸 、 古 洛 糖 酸 、 甘 露 糖 m 酸 、 VL 杜 1 事 1 糖 m 酸 等 ί 糖 m 酸 之 衍 生 物 為 其 内 酯 9 其 酯 、 其 m 胺 、 再 1 填 1 其 鹽 等 f 且 經 由 加 熱 處 理 而 生 成 環 戊 烯 酮 之 物 質 全 部 均 寫 ά 被 包 含 於 本 發 明 之 衍 生 物 〇 糖 m 酸 之 内 酶 可 例 示 m 糖 m 頁 ·-_-· 1 t 酸 基 -6 ,3 -内酷（以 下 » 簡 述 為 葡 糖 酸 内 醋 )、 甘露糖醛 1 1 酸 -6 ,3 -内酯、 艾杜糖醛酸基- 6 , 3- 内 酯 等 0 糖 m 酸 酯 例 1 1 如 可 為 由 糖 m 酸 所 製 造 之 甲 酯 乙 酯 丙 二 醇 酯 羧 甲 1 訂 1 1 基 酯 等 〇 再 者 此 些 m 可 依 常 法 製 造 P 其 次 > 於 本 說 明 書 中 » 對 於 含 有 糖 m 酸 和 / 或 糖 醛 酸 I 1 衍 生 物 之 糖 化 合 物 並 無 待 別 限 定 例 如 為 果 膠 V 果 膠 酸 1 I 藻 酸 、 透 明 質 酸 肝 素 、 硫 酸 乙 m pi*· 肝 素 岩 m 依 聚 糖 1 I 旅 1 、 硫 酸 軟 骨 素 、 軟 骨 素 硫 酸 皮 虜 素 其 化 學 性 酵 素 性 物 理 性 處 理 物 » 且 可 使 用 其 分 解 物 分 解 物 之 衍 生 1 1 物 X 分 解 物 之 m 0 1 1 前 述 之 化 學 性 處 理 方 法 9 若 為 令 原 料 化 合 物 例 如 於 室 1 1 溫 2 0 0 °C下處理數秒〜 -數小時， 較佳為在50〜130°C下 1 I 處 理 數 秒 〜 6 0分鐘則可 * 若 在 酸 性 下 進 行 此 處 理 刖 令 配 1 1 糖 鍵 水 解 於 果 膠 之 情 形 為 産 生 含 有 半 乳 糖 m 酸 和 / 或 1 1 半 乳 糖 酸 酯 之 分 解 物 0 又 9 9 例 如 在 PH6 . 8, 9 5 °C下處理 1 1 1 1 1 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS M4規格（21 〇 X 297公釐） 明 説明發 Λ 五 A7 B7 在 得 取 應 反 離 脫- 生 産 則 鐘 分 十 數 分 數 近 附 酸有 醛含 糖由 和經 飽含 不包 或 ， \ 中 和物 酸合 醛化 唐 唐 和之 飽明 不發 有本 具於 之 。 大物 增合 度化 光糖 吸之 之酯 成 生 所 應 反 勘 脱 0 糖 和 飽 不 或 / 和 0¾ 酸 的醛 類糖 糖和 多飽 之不 酯有 酸具 0 , 糖端 或終 /原 和還 酸非 β 在 糖之 之酶 物瞜 合果 化如 糖例 料 ， 原酶 由解 經水 為糖 , 多 法之 方酯 理酸 處醛 性糖 。素或 物酵 \ 合之和 化述酸 糖前醛 之，糖 酯又有 酸 含 予醛 糖糖 多或 之 \ 酯和 酸酸 0 0 糖糖 或有 \ 含 和由 酸經 0 舉 糖列 有可 含 ， 令又 > ο 等解 酶分 酸之 尿知 波公 、以 糖經 多由 之 S 酯 ’ 酸形 醛情 耱之 或酸\ m 和果 酸 、 0 0 糖果 有於 含如 令例 > ο 酶解 解分 裂之 糖知 多公 酯以 酸予 分 酶以 解予 裂9) 酸2. 朦 2 · 4 C * Ε ίν ο ϊ 1 酶 2.解 2.裂 4 酸 ^糖 /IV i 乳 聚0 Μ 膠夕 me ’ 男 ) 之2 知2 公2 種C4 E 各 ί t £ ,ttο kKW.η 场2 I Γ 4 y 1 p ^ o 己 I 6 蘇 4 I f L X - 6 氣t 去e0 - Γ 4 h 有T t? TL 具一 端xy 終eo 原T 邇(4 tr s TTKS 在酸 得醛 K 唐 可基 ，糖 解喃 II 2 物 . j 4 合 C b E 11 ( 耱酶 之解 酯裂 甲酸 其質 或明 e)透 at用 on使 Γ U 為 形 情 之 酸 質 明 透 於 又 為 形 情 之 酸 藻 於 (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝. 訂 Η, 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 氣 2去 2 -• 4 4 . C 有 β ί 具 _ 端 解終 裂原 酸還 藻非 用在 使得 取糖 為基 形糖 情喃 之吡 酸烯 SSS4- 於 \ 己 J -尚蘇 物 合 化 糖 之0 酸-4 醛己 酯 酸0 糖 基 糖 喃 毗 烯 有素 具L-端-終 原 還 非 在 此 氧 去 0 編 L I 氣 去 _0 烯 - 4 - 己 明 發 本 於 含 包 被 亦 物 解 分 素 酵 之 酯 甲 其 或 。 酷中 酸物 0 合 tegCT --1L /1 基糖 糖之 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 4 h 898 2 A7 B7 經濟部中央標準局—工消費合作社印製 五、發明説明（9 ) 再者，前述之物理性處理方法，可列舉原料糖化合物 之近紅外線、红外線、撤波、超音波處理等，例如可列 舉將果暖和/或果醪酸放入PH中性或鹺性之溶液中，且 溫度為適當、室溫以上，適當還原下，例如於抗壊血酸 存在下，時間為1秒以上，較佳為5秒〜1小時之超音 波處理，並賦予振動能量《尚，超音波以外即使以微波 、近紅外線、紅外線等之照射亦為有效，且亦可將其組 合進行照射。照射可為連績地進行，且斷缠地進行亦可。 於本發明中，所諝含有糖醛酸和/或糖醛酸衍生物之 耱化合物含有物，若為含有上述糖醛酸和/或糖S酸衍 生物之糖化合物的含有物，則無待別限定。含有糖醛酸 和/或糖醛酸衍生物之糖化合物含有物可例示蘋果、例 如蜜柑、檸檬等之柑橘類、香蕉、包心菜、萵Μ、紫蘇 、南瓜、芹菜、牛蒡、亞實基隆艨、花椰菜、甜椒、菠 菜、洋蔥、人參、人參葉、蘿S藥、茶、芝麻、大豆、 薯等雙子葉類植物之果實、青菜、葉、種子等、麥、米 等單子葉植物之毅物、褐藻類、例如海帶、裙帶菜等、 紅藻類、緣藻類、單細胞缘藻類等之藻類、撤生物為 Liophilum ullBarium、田地玉 ίί、 N a c o a e .香 Enoki、菇、扁平菇、蘑菇等之撸子菌類、蛹菇、野蟲 菇等之子囊菌類、酵母、絲狀_、例如麴_、細菌、例 如纳豆菌、乳酸菌等、動物為脊椎動物或無脊椎動物、 豬皮膚、牛皮虜、鯊魚軟骨、鯨軟骨等，於本發明中， 可使用來自此些植物、微生物或動物之含有糖醛酸和/ -11- 本紙張尺度適用中國國家標準{ CNS ) A4規格（210X刊7公釐） ---------------ΐτ------忒 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 2 8 9 8 5

A 明説明發 '五 之 物 生 衍 酸0 糖 或 〇 \ 物和 有酸 含 K 物糖 合 有 化含 糖 * 之中 物明 生發 衍本 酸於 0 , 糖又 或 渣渣 汁類 榨穀 fnl/ 水渣 、 汁 皮榨 果菜 果青 水 、 用渣 使汁 樣榨 原柑 可蜜 為 、 物渣 有汁 含榨 物果 合 _ 化如 耱例 例將 、或 渣 、 類物 豆理 、 處 渣 Η 忌加 士 品 威食 ~' 渣産 酒水 燒農 、之 渣等 酒渣 啤藻 、海 渣 、 酒渣 淸腐 如豆 例如 糖 之 物 生 衍 酸 0 糖 或 \ 和 酸 0 〇 糖 可有 亦含 用之 使用 碎使 弄所 、 明 燥發 乾本 其 烘前 ，為 炒作 J-1 、 理 烤處 、法 煮方 之工 常加 通的 以意 或任 ，之 樣等 原炸 其 、 就炒 為煎 物 ' 有蒸 含 、 物煎 合 ， 化焐 糖 之 物 生 衍 酸0 糖 或 \ 和 酸0 糖 有 含 些 此 中 明 。發 理本 處 含的 包物 ί有 含 該 之 得 所 try: 理 處 前 性 m: 理 物 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝- 性 學 化 述 前 行 進 用 使). 可素 亦酵 物之 有物 含生 物撤 合由 化經 性 素 酵 物 有 含 物 合 化 糖 之 物 Ξ ο 物衍 製酸 精醛 之糖 物或 理/ 處和 該酸 自醛 來糖 、有 物含 理於 處 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 成基較 生胺 ， 之 、_ 酮類烯 烯胺戊 戊如環 環例造 、 ， 备 物質了 生物為 衍之而 酸性 ， 醛應質 糖反白 、有蛋 酸具或 醛酮 \ 糖烯和 與戊類 有環呔 含或胜 為體 、 ，間類 中中酸 少理當 至處適 失前為 消之理 性分處 應部處 反一加 之少式 質至乾 物去以 性除 ， 廳質定 反物限 些性別 此應特 令反無 於該並 用令法 行或方 進 \ 理 地和處 當分前 適部該 佳 一 0 和在 酸 ， 醛者 糖去 有除 含分 述水 上的 令物 由有 藉含 如物 例合 ，化 糖 之 物 生 衍 酸0 糖 或 秒 數 1Ί /i 進 下p 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2!〇X297公釐） 4 5 898 2 A7 B7 經濟部中央標隼局員工消費合作社印製 五、發明説明 ( ) 1 i 鐘 至 數 天 之 加 熱 處 理 ) 則 可 取 得 製 造 本 發 明 之 環 戊 烯 m 1 ί I 、 其 光 學 活 性 體 之 合 適 的 蛋 白 質 等 為 被 不 溶 化 、 變 性 或 1 ! 失 活 化 之 含 有 糖 m 酸 和 / 或 糖 m 酸 衍 生 物 之 糖 化 合 物 含 請 1 1 有 物 〇 乾 式 加 熱 處 理 之 方 法 為 特 開 平 2 - 7 £ 96 5號公報中 閱 ik 1 背 1 記 載 之 使 用 熱 風 之 焐 炒 處 理 方 法 > 經 由 該 方 法 可 有 效 率 面 之 1 製 造 大 量 的 加 熱 處 理 物 * 卽 焙 炒 處 理 物 0 焙 炒 處 理 物 並 /王 意 ! 1 Ψ 1 jfrrf m 特 別 限 定 » 可 例 示 焙 炒 植 物 焙 炒 動 物 焙 炒 微 生 物 項 1 填 1 例 如 焐 炒 青 菜 、 焐 炒 果 實 > 焐 炒 毅 物 、 焙 炒 輦 類 、 焐 寫 本 ά 炒 海 m 焙 炒 皮 質 、 焙 炒 軟 骨 等 Q 其 他 之 例 可 列 舉 令 該 頁 1 I 糖 化 合 J« I— 物 含 有 1 r._ 物 進 行 蛋 白 質 分 解 酵 素 處 理 後 9 除 去 蛋 白 1 I 質 解 物 之 m 分 0 如 上 述 > 環 戊 烯 詷 製 造 上 所 m 當 之 環 戊 1 1 烯 酬 生 成 性 前 處 理 物 > 全 部 被 包 含 在 本 發 明 所 定 義 之 含 1 訂 1 I 有 糖 m 酸 和 / 或 糖 m 酸 衍 生 物 之 糖 化 合 物 含 有 物 〇 所 謂 環 戊 烯 m 之 生 成 中 間 體 為 意 指 在 糖 醛 酸 糖 m 1 1 酸 衍 生 物 含 有 糖 m 酸 和 / 或 糖 m 酸 衍 生 物 i 含 有 糖 m ί I 酸 和 / 或 糖 m 酸 衍 生 物 之 糖 化 合 物 含 有 物 之 加 熱 處 理 中 1 Λ 生 成 S 且 若 再 進 行 反 m > 則 變 化 成 琛 戊 烯 酮 之 物 質 0 環 1 戊 烯 酮 之 生 成 中 間 體 可 例 示 糖 m 酸 之 脱 羧 酸 物 糖 m 酸 1 I 之 脱 水 物 糖 酸 之 脱 羧 酸 -脱水物D \ 1 含 有 糖 醛 酸 和 / 或 糖 酸 衍 生 物 之 糖 化 合 物 的 多 糖 類 1 1 t 可 經 由 公 知 的 化 學 性 、 酵 素 性 物 理 性 處 理 方 法 而 製 1 I 造 〇 例 如 果 膠 可 使 用 例 如 由 柑 橘 類 之 果 皮 及 m 果 之 果 1 ί 實 所 萃 取 的 高 分 子 多 糖 類 〇 工 業 性 的 製 造 果 膠 之 原 料 為 1 1 水 果 除 了 可 使 用 檸 m > 藍 姆 等 柑 橘 果 汁 之 榨 瘡 (主要 1 I -1 3- 1 1 1 1 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 4 5 898 2 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（ ) 1 1 為 内 果 皮 )以外， 亦可使用蘋果之果汁榨渣。 於果汁榨 1 1 1 渣 中 主 要 含 有 不 溶 性 的 原 果 m 9 在 製 造階 段 令 其 可 溶化 1 1 則 可 諝 製 果 膠 0 可 溶 化 可 a 由 以 酸 性之 溫 水 熱 水萃 請 先 1 1 取 而 進 行 t 並 經 由 令 萃 取 時 之 溫 度 pH. 時 間 條 件 配合 Μ ik 1 背 1 原 料 而 控 制 » 則 可 高 産 量 製 造 分 子 量 和酯 化 度 — 定 之果 之 1 膠 〇 萃 取 液 為 經 由 離 心 分 離 和 過 濾 而 精製 9 於 濃 縮 後添 注 意 1 事 1 加 乙 醇 可 令 果 m 沈 澱 回 收 Ο 令 所 回 收 之沈 澱 乾 燥 、 弄碎 再 1 I 則 可 調 製 指 定 的 乾 燥 果 膠 〇 填 寫 本 1 裝 果 膠 之 主 構 造 為 部 分 經 甲 基 化 之 半 乳糖 醛 酸 聚 合 物β 頁 、_»* 1 I 其 羧 基 為 被 甲 酯 化 且 可 為 m 持 游 離 酸原 樣 ， 或 可 被玆 1 | 鹽 化 X 鉀 鹽 化 、 或 m 鹽 化 Λ 果 膠 為 依 據其 甲 酯 化 度 (DM 1 1 度 . 相 對 於 全 部 羧 基 之 甲 氣 基 比 例 ), 而被分類為DM度 1 訂 高 之 HH果謬及 DM度低之 LM果謬 C 吉 稹 智司 等 m 、 (株）光 1 琳 發 行 ' 新 食 品 開 發 用 素 材 便 η 、 第 114〜119頁 (1 991)〕 1 1 t 於 本 發 明 中 可 使 用 市 售 之 食 品 添 加 物果 m [ 外 山 章夫 I I 编 食 η ΡΠ 和 科 學 社 發 行 天 然 物 便 Μ 笛 12販 X 第 138 ! Λ 頁 (1993)] 市 售 之 HM果膠 LM果膠等（前述之新食品 [ 開 發 用 素 材 便 % )。 1 I 依 合 成 法 所 合 成 之 糖 醛 酸 糖 m 酸 衍生 物 > 寡 糖 等亦 1 1 可 於 本 發 明 中 使 用 〇 1 1 本 發 明 所 使 用 之 加 熱 處 理 物 為 由 U)糖醛酸或糖醛 1 I 酸 衍 生 物 9 (b)含有糖醛酸和/或糖醛酸衍生物之糖化 1 1 合 物 (C)含有糖g酸或糖醛酸衍生物之糖化合物含有 1 I 物 所 m 出 之 物 質 作 為 原 料 而 製 造 σ 1 -1 4 ' 1 1 1 1 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2[〇X 297公釐） 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 ο 8 9 8 2 Α7 Β7五、發明説明（〇 ) 本發明所使用之加熱處理物之製造中的加熱處理方法 ,若為生成本發明之環戊烯·之條件則無特別限定，可 為令糖醛酸、糖醛酸衍生物、含有和/或糖醛酸衍生物 之糖化合物、含有糖醛酸和/或糖醛酸衍生物之糖化合 物含有物例如於60〜351TC 下加熱處理數秒鐘〜數日， 較佳於80〜15CTC下加熱處理數分鐘〜數日，於果醪之 情形，例如於80〜15Q下進行數分鐘〜數曰之加熱處理 ,則可取得含有環戊烯酮之加熱處理物。又，藉由令糖 醛酸、糖醛酸之内酯、耱醛酸酯於60〜150°C下加熱處 理數分鐘〜數日，則可取得含有環戊烯酮之目的加熱處 理物。於此些加熱處理物中含有與第4位和第5位之羥 基為具有反式之關傜之反式-環戊烯酮和具有順式關係 之撖量的順式-環戊烯酮。令由此加熱處理物所精製之 環戊烯嗣於無水毗啶中與無水醋酸度應所得之二乙醯環 戊烯銅，以矽膠柱層析予以分離，並以核磁共振法進行 各豳分之構造解析，則可確認本加發處理物中含有反式 -環戊烯酮和撤量的顒式-環戊烯釅β 加熱處理時之pH並無特別限定，但以在中性至酸性下 進行為較佳，且可依其原料而調整加熱處理時之PH,但 通常為經由酸性下之加熱處理，加速環戊烯酮之生成。 加熱處理時之原料濃度若為在經由加熱离理而可生成 環戊烯酮之範圍内，則無恃別限定，且若考窳操作性、 産率等方面而設定即可。 本發明之加熱處理可為濕式加熱，且亦可為乾式加熱 -1 5- ---------枯衣------、玎------Λ (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） 458982 A7 B7 經濟部中央標準局負工消費合作社印製 五、發明説明（ vA ) 1 1 9 但 由 本 發 明 環 戊 烯 酮 之 生 成 效 率 方 面 而 言 則 以 濕 式 1 1 I 加 熱 為 較 佳 0 濕 式 加 熱 可 使 用 水 蒸 氣 加 熱 水 m 氣 加 m 1 1 加 熱 加 壓 式 加 熱 等 任 意 之 濕 式 加 熱 方 法 0 乾 式 加 熱 可 請 先 1 1 使 用 經 由 乾 燥 熱 風 之 直 接 加 熱 法 、 由 熱 源 通 過 隔 離 壁 予 閱 讀 1 以 加 熱 之 間 接 加 熱 法 等 0 直 接 加 熱 方 法 為 氣 流 乾 熱 法 、 脅 面 之 I 1 嗅 霧 乾 熱 法 、 間 接 加 熱 法 可 使 用 鼓 式 乾 熱 法 等 〇 意 事 1 1 本 發 明 所 使 用 之 加 熱 處 理 物 中 的 環 戊 烯 * 可 以 其 制 項 再 1 癌 作 用 、 抗 m 作 用 細 胞 白 滅 m 發 作 用 等 為 指 標 進 行 採 填 寫 1 裝 集 〇 採 集 手 段 可 使 用 化 學 性 方 法 ， 物 理 性 方 法 等 之 公 知 頁 、—«· 1 I 的 精 製 單 離 手 段 Λ 且 可 將 膠 過 濾 法 以 分 子 量 分 级 膜 [ 1 之 分 级 法 溶 劑 萃 取 法 分 躕 法 離 子 交 換 樹 脂 、 顒 相 1 1 逆 相 之 各 種 層 析 法 等 之 先 前 公 知 之 精 製 方 法 组 合 I 並 ί 訂 採 集 加 熱 處 理 物 中 所 生 成 之 環 戊 烯 醑 〇 1 例 如 ί 使 用 D - % 糖 m 酸 作 為 糖 m 酸 > 並 經 由 令 其 1 % 1 1 溶 液 於 1 2 1 °C下加熱處理4 小時， 則可在加熱處理物中 1 1 生 成 環 戊 烯 酮 〇 此 加 熱 物 中 之 琿 戊 烯 醑 以 溶 劑 萃 取 t 並 1 1 Κ 1 將 萃 取 物 濃 縮 0 其 次 j 將 此 m 縮 物 以 矽 m 柱 層 析 予 以 分 離 並 令 溶 出 之 環 戊 烯 酮 皤 分 濃 縮 9 以 氰 仿 由 濃 编 物 萃 1 1 取 出 環 戊 烯 酮 則 可 令 加 熱 處 理 物 中 之 環 戊 烯 m 被 單 離〇 1 1 又 i 將 上 述 % 糖 m 酸 加 熱 處 理 物 以 離 子 交 換 樹 脂 柱 ， 1 1 較 佳 為 陰 離 子 交 換 樹 脂 柱 處 理 9 並 收 集 非 吸 附 性 皤 分 9 1 1 則 可 精 製 環 戊 烯 酮 0 或 者 令 上 述 蕕 糖 m 酸 加 熱 物 以 活 性 I 1 m 柱 處 理 * 並 除 去 非 吸 附 m 分 進 行 清 洗 柱 之 後 » 經 由 1 I 親 水 性 有 機 溶 劑 * 例 如 乙 醇 水 溶 液 * 較 佳 為 4 0 % 以 上 之 1 | -1 6- 1 1 1 1 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 5 898 2 at B7 五、發明説明（4 ) 乙酵水溶液予以溶出，則可取得精製的環戊烯酮。又， _由組合此些方法，可取得高純度的環戊烯酮。 藉由令單離之環戊烯_進行光學分割，刖可取得本發 明之（-)-4,5-二羥基-2-環戊烯-1-酮及（ + )-4,5-二羥基 -2 -琿戊烯-卜酮。當然，經由合成方法所取得之環戊烯 颳亦可依本發明進行光學分割。 光學活性體之分離為可經由消旋混合物之機械性分割 、優先析晶法、經由作為非對映體或包接化合物之結晶 化予以分割、經由酵素-微生物之動力學分割、經由層 析予以分割等而進行β 經由層析予以分離者可使用氣相層析、液體層析、薄 層層析，且若分別使用適當的對掌性固定相亦可。 經由液體層析予以光學分割者可採用：使用對掌性固 定相之方法、使用對掌性溶離液之方法，以非對映醱型 式分離等。 對掌性固定相可使用醯胺糸固定相、尿素糸固定相、 配位體交換型固定相、多糖-多糖衍生物固定相、蛋白 質固定相、聚甲基丙烯酸酯固定相、聚甲基丙烯酸醯胺 固定相等。 溶離液可使用己烷条、醇条、水（緩衝液）系等，且可 適當使用與上述固定柑之組合。 本發明所使用之環戊烯酮之製造可為任何方法，且亦 可依本發明掲示之方法製造，亦可依化學合成法 〔Carbohydrate Eesearch(Carbohydrate Res.),第 247 -1 7 - ---------批衣------ΐτ------.^ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2丨0 X 297公釐） 經濟部中央標準局員工消費合作杜印製 4 5 8 9 8 2 37五、發明説明（+ ) 卷、第 2 1 7〜2 2 2 頁（1 9 9 3 )、 Helvetica Chi»ica Acta, 第55卷、第2 8 3 8〜2844頁（ 1 9 7 2 )〕合成，且環戊烯醑之 反式體、順式體為被包含於本發明中。當然，以化學合 成法所取得之環戊烯酮的光學活性體，亦被包含於本發 明之光學活性體中。又，亦可使用由耱醛酸、糖醛酸衍 生物、含有糖醛酸和/或糖醛酸衍生物之糖化合物、含 有糖醛酸和/或糖醛酸衍生物之糖化合物含有物所選出 之至少一種物質之加熱處理物中生成的環戊烯_、其精 製物、其光學活性體。 環戊烯銅及其光學活性體為對例如人類前骨《性白血 病細胞HL-6D、人類急性淋巴穿球性白血病細胞H0LT-3 、肺癌細胞A-549、SV40轉形肺細胞WI-38VA13、肝癌細 胞HepG2、結腸癌細胞HCT116、人類結腸癌細胞SW 4 8 0、 人類結腸細胞WiDr、骨癌細胞AGS、骨髄細胞瘤細胞等 之癌細胞，具有細胞增殖抑制作用、制癌活性，且環戊 學細 光癌 其些 及此 鼴對 烯’ I--------裝------訂------Λ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 癌作 制發 為誘 作滅 用自 使胞 可細 澧有 bsu 3Ϊ 性具性制本用 活胞活限於作 之 。作之 ® 用制胞 又戊 。環 分之 成明 效發 有本

本發 對誘 ，滅 制自 機胞 用細 作 制 抑細 殖癌 增於 胞 對 細 ， 癌如 之例 體 ， 制 限 學何 光任 其無 及並 酮明 烯 S 含癌 包制 被有 亦具 用以 作 若 並 分 成 效 有 為 作 性 活 學 光 其 或 / 和 酮 烯 。戊 明環 發之

制 。與 劑體 癌性 制活 造學 製光 可其 NJ. K 以戊 予環 體令 載為 用般 藥一 翳造 的製 知之 公劑 與癌 其 令 體 固 或 狀 液 之 許 容 可 上 學 藥 -/配 化和 m 阐酮載 製烯狀 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ#規格（2丨0'乂297公釐） 5 898 2 A7 經濟部中央標準局員工消费合作社印製 B7五、發明説明（、7 ) 合，且視需要加入溶_、分散劑、乳化劑、緩衝爾、安 定_、賦形_、結合劑、崩散劑、潤滑劑等，作成錠劑 、顆粒_、散劑、粉末酬、膠囊劑等之固形劑、一般之 液劑、懸浮劑、乳劑等之液劑。又，可作成在使用前添 加適當載體而成為液狀之乾燥品。 B藥用載體可依據上逑投予形態及劑型而選擇，於口 服劑之情形，例如可利用澱粉、乳糖、白糖、甘露糖， 羧甲基纖維素、玉米澱粉、無機鹽等。又，於調製口服 劑時，亦可再配合以結合劑、崩散劑、界面活性商！、潤 滑劑、流動性促進劑、矯味劑、著色劑、香料等。 另一方面，於非口服劑之情形為依常法，經由令本發 明之有效成分環戊烯_和/或其光學活性體，溶解或懸 浮於作為稀釋劑之注射用蒸皤水、生理食鹽水、蒱萄糖 水溶液、注射用植物油、芝麻油、花生油、大豆油、玉 米油、丙二醇、聚乙二醇等，且視需要加入殺菌劑、安 定劑、等張劑，止痛劑等而調製。 本發明之制癌劑為以依據制劑形態之適當的投予途徑 予以給藥〇給藥方式亦無特別限定，且可為經由内用、 外用及注射。注射劑例如為可於靜脲内、肌肉内、皮下 、皮内等進行投予，於外用劑中亦包含栓劑等。 制癌劑之投予量為依據其製劑形態，投予方法，使用 目的及蓮用其之患者年齡、體重、症狀而適當設定，雖 無一定，但一般為製劑中所含有之環戊烯_和/或其光 學活性體之量為以成人1日以（Kl#g〜20Gig/kg。當然 -1 9- I---------婆------1r-------# (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 5 398 2 經濟部中央標準局員工消費合作社印裂 五、發明説明 ( V? ) 1 1 | 因 為 投 予 量 為 依 各 種 條 件 而 變 動 I 故 亦 有 bb 上 述 投 予 量 1 1 I 少 而 為 充 分 之 情 形 f 或 者 亦 有 必 須 超 過 範 圍 之 情 形 〇 本 1 I 發 明 之 製 除 了 可 就 其 原 樣 經 P 投 予 以 外 亦 可 添 加 至 任 請 先 1 1 葸 的 飲 食 品 並 於 曰 常 攝 取 〇 閱 讀 1 背 1 環 戊 烯 m 和 / 或 其 光 學 活 性 體 為 具 有 制 癌 作 用 且 在 面 之 1 | 低 濃 度 下 具 有 癌 細 胞 之 分 化 誘 導 能 力 且 m 戊 烯 _ 和 / 意 事 1 或 其 光 學 活 性 體 亦 可 用 於 作 為 癌 細 胞 之 分 化 誘 導 劑 (脫 項 1 填 1 癌 劑 )。 以環戊烯酮和/或其光學活性體作為有效成分 寫 本 裝 之 癌 細 胞 分 化 誘 導 Μ 劑 9 依 上 述 之 制 癌 m 予 以 製 劑 化 且 頁 、- 1 1 可 依 制 癌 劑 之 方 法 予 以 給 藥 〇 1 I 癌 細 胞 分 化 誘 導 m 之 投 予 量 為 依 據 其 製 _ 形 態 * 投 予 \ 1 方 法 » 使 用 目 的 及 蓮 用 其 之 患 者 年 齡 體 重 症 狀 而 適 1 訂 當 設 定 ) 雖 無 定 j 但 一 般 製 m 中 所 含 有 之 環 戊 烯 m 1 | 和 / 或 其 光 學 活 性 am 歴 之 量 為 以 成 人 1 B 以 0 . 1 M g 20 0 m g 1 1 /k g 〇 當然因為投予量為依各種條件而變動， 故亦有比 1 1 上 述 投 予 量 少 而 為 充 分 之 情 形 » 或 者 亦 有 必 須 超 過 範 圍 1 1 之 情 形 〇 本 發 明 之 製 除 了 可 就 其 原 樣 經 0 投 予 以 外 亦 \ 可 添 加 至 任 意 的 飲 食 品 並 於 B 常 攝 取 〇 1 I 本 發 明 之 癌 細 胞 分 化 誘 導 劑 可 在 癌 細 胞 分 化 誘 導 方 法 1 I 中 使 用 0 即 9 藉 由 使 用 琛 戊 烯 酮 和 / 或 其 光 學 活 性 體 作 1 1 為 有 效 成 分 ) 可 令 癌 細 胞 分 化 9 且 該 方 法 可 用 於 癌 細 胞 1 | 之 分 化 誘 導 機 構 之 閜 明 i 分 化 誘 導 劑 之 igijc 師 選 等 0 1 I 本 發 明 之 抗 菌 劑 為 以 環 戊 烯 酮 和 / 或 其 光 學 活 性 體 作 1 1 為 有 效 成 分 ， 並 若 令 其 與 公 知 的 靨 藥 用 載 體 予 以 製 m 化 ί 1 -2 0 - 1 1 1 1 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ^ 398 2 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（ 、9 ) 1 1 則 可 製 造 制 癌 劑 0 該 製 劑 之 製 造 一 般 為 令 琿 戊 烯 m 和 1 1 I / 或 其 光 學 活 性 體 舆 藥 學 上 可 容 許 之 液 狀 或 固 體 狀 載 體 t 1 配 合 » 且 視 需 要 加 人 溶 劑 Η 分 散 劑 ·>« 乳 化 劑 Λ 緩 衝 劑 > 請 先 1 1 安 定 _ 賦 形 _ 結 合 劑 、 朋 散 劑 Ή 潤 滑 剛 等 » 作 成 錠 閱 1 背 1 m 、 顆 粒 m 散 劑 粉 末 劑 > 膠 囊 劑 等 之 固 形 劑 Λ 一 般 之 1 之 液 劑 、 m 浮 劑 、 乳 赖 等 之 液 劑 Ο 又 » 可 作 成 在 使 用 前 i 事 1 1 添 加 適 當 載 體 而 成 為 液 狀 之 乾 燥 品 〇 項 再 1 藥 用 載 體 可 依 據 上 述 投 予 形 態 及 劑 型 而 m 擇 » 於 Ρ 填 寫 本 1 裝 服 劑 之 情 形 ， 例 如 可 利 用 澱 粉 、 乳 耱 S 白 糖 、 甘 露 糖 1 頁 、_·>· 1 1 羧 甲 基 繼 維 素 玉 米 澱 粉 無 機 鹽 等 〇 又 於 調 製 α 服 1 | 劑 時 亦 可 再 配 以 結 合 劑 、 •Ο·· 朋 散 劑 、 界 面 活 性 劑 Λ 潤 1 1 滑 劑 、 流 動 性 促 進 劑 Λ 矯 味 劑 箸 色 劑 香 料 等 0 1 訂 1 | 另 一 方 面 於 非 η 服 劑 之 情 形 為 依 常 法 > 經 由 令 本 發 明 之 有 效 成 分 環 戊 烯 m 和 / 或 其 光 學 活 性 暖 9 溶 解 或 懸 1 1 浮 於 作 為 稀 釋 m 之 注 射 用 蒸 皤 水 生 理 食 鹽 水 m 萄 糖 1 1 水 溶 液 注 射 用 植 物 油 芝 麻 油 花 生 油 X 大 豆 油 、 玉 1 米 油 丙 二 醇 、 聚 乙 二 醇 等 9 且 視 m 要 加 入 殺 m 劑 X. 安 X 1 定 劑 、 等 張 剤 y 止 痛 劑 等 而 讁 製 〇 t I 本 發 明 之 制 癌 劑 為 以 依 據 制 劑 形 態 之 適 當 的 投 予 途 徑 1 1 予 以 給 藥 0 給 藥 方 式 亦 無 特 別 限 定 » 且 可 為 經 由 内 用 1 1 外 用 及 注 射 〇 注 射 劑 例 如 為 可 於 靜 脈 内 肌 肉 内 皮 下 1 I 皮 内 等 進 行 投 予 * 於 外 用 劑 中 亦 包 含 栓 劑 等 〇 1 1 抗 m 劑 之 投 予 量 為 依 據 其 製 劑 形 態 t 投 予 方 法 使 用 1 1 困 的 及 蓮 用 其 之 患 者 年 m S 體 重 、 症 狀 而 適 當 設 定 > 雖 1 | -2 1 - 1 1 1 1 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2JOX297公釐） 4 5 8 9 8 ^ A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作杜印製 五、發明説明 ( ) 1 1 無 一 定 t 但 一 般 為 製 劑 中 所 含 有 之 環 戊 烯 酮 和 / 或 其 光 1 1 I 學 活 性 體 之 量 為 以 成 人 1 曰 以 1 0 Μ S 一 -1 0 1 ig/ k 8 〇 當 然 因 1 1 為 投 予 量 為 依 各 種 條 件 而 變 動 ， 故 亦 有 bb 上 述 投 予 量 少 請 1 1 而 為 充 分 之 情 形 » 或 者 亦 有 必 須 超 過 範 圍 之 情 形 〇 本 發 閱 1 背 [ 明 之 製 除 了 可 就 其 m 樣 經 η 投 予 以 外 9 亦 可 添 加 至 任 意 面 之 ! 的 飲 食 品 並 於 B 常 攝 取 ο 又 * 亦 可 使 用 環 戊 烯 m 和 / 或 注 意 事 1 1 其 光 學 活 性 體 含 有 物 作 為 抗 菌 性 飲 食 品 之 原 料 〇 又 ) 亦 項 再 1 I 可 與 乙 酵 、 甘 胺 酸 、 錯 酸 納 \ 抗 m 血 酸 N. 甘 油 脂 肪 酸 酯 % % 本 1 i 食 鹽 \ EDT A等 之 其 他 抗 性 物 質 組 合 使 用 〇 頁 1 | 本 發 明 之 抗 菌 劑 為 以 環 戊 烯 m 和 / 或 其 光 學 活 性 體 作 1 I 為 有 效 成 分 1 可 使 用 作 為 令 食 品 或 飲 料 之 保 存 性 提 高 之 1 1 防 腐 劑 0 又 » 將 琛 戊 烯 m 和 / 或 其 光 學 活 性 體 添 加 至 食 1 訂 1 品 或 飲 料 則 可 在 防 腐 食 品 或 飲 料 之 方 法 中 使 用 〇 於 食 Ο ΡΠ 或 飲 料 中 添 加 之 含 有 琛 戊 烯 m 和 / 或 其 光 學 活 1 I 性 體 之 抗 菌 m 的 形 狀 * 可 為 液 狀 、 期 狀 粉 末 狀 片 狀 1 I 顆 粒 狀 等 任 一 形 狀 〇 若 亦 考 廬 操 作 容 易 度 、 和 與 其 他 1 ..泉 添 加 物 混 合 使 用 * 則 以 乾 燥 並 呈 粉 末 狀 、 Η 狀 顆 粒 狀 f 為 較 佳 0 乾 燥 方 法 可 依 通 常 之 乾 燥 方 法 > 例 如 噴 霧 乾 燥 1 I 鼓 式 乾 燥 X 棚 式 乾 燥 、 真 空 乾 燥 、 冷 凍 乾 燥 等 進 行 0 ! 1 環 戊 烯 酮 和 / 或 其 光 學 活 性 體 食 品 或 飲 料 之 添 加 量 * 1 f 為 依 據 食 品 或 飲 料 之 種 類 而 異 r 若 為 添 加 對 應 其 目 的 之 1 I 量 即 可 〇 1 1 本 發 明 抗 菌 劑 之 使 用 方 法 可 在 食 品 或 飲 料 中 依 適 田 1 1 方 法 添 加 之 方 法 予 以 進 行 0 添 加 之 方 法 並 無 待 別 限 制 1 1 -2 2 ™ I 1 1 1 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 0一2_^__ 五、發明説明（>1 ) 若為依所需之任何方法，令琿戊烯酮和/或其光學活性 體被含於食品或飲料中即可。因此，於本發明抗菌劑之 使用中，所諝添加為亦包含環戊烯酮和/或其光學活性 體在食品或飲料中含有之任何方法。通常之方法為在食 品或飲料之製造工程中添加，但亦可使用令食品於含有 環戊烯醜和/或其光學活性體之溶液中浸漬一定時間之 方法β再者，亦可將食品中添加之方法舆浸潰方法併用 β適於浸潰方法之食品為在水中亦不會形狀潰散之食品 ，可列舉例如魚糕、維也纳香腸等之魚畜肉揉和製品、 湯煮麵等之麵類、冷凍前之蝦、貝、魚類等之冷凍食品 等。 _由令本發明之抗菌劑使用作為防腐劑，可使食品或 飲料之保存性更加提高。又，於冷凍食品和冷凍黏心等 中，在冷凍前之加工工程，可抑制污染之微生物的增殖 ，並取得衛生上掻佳之結果。本發明之抗菌_為對革蘭 氏陽性細菌、革蘭氏陰性細菌兩者具有效果，例如對新 青霉素附性黃色蒱萄球菌等之藥劑附性菌。沙鬥氏_、 腸毒素生産性黃色«萄球崮、喔吐型蠟樣芽睢桿菌、下 痢型蟣樣#胞桿菌、腸出血性大賜桿0-157等之食物中 毒菌極為有效。再者對於火落_亦為有效。又，對於細 菌起因性疾病之起因菌，例如退伍軍人病之起因菌 Legionella pneumophila、食物中毒起因菌之副溶血性 弧菌（V i b r i 〇 Parslmemolyticus )、潰瘍起因菌之 Helicobacter pylori、胃腸炎起因菌之 Caapylobacter -23- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（2ίΟΧ 297公釐} ----------t------IT------Λ (讀先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 458982 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製

五、發明説明 ( ) 1 1 j € 、j u ni 等 例 如 L € g i ο η e ] la F »η € U R L ο p h i la A1 CC 2 3 1 5 3) 1 1 | χ 副 溶 血 性 弧 菌 (ATCC 1780 2) 、 He 1 i C 0 b a i C t e r py 1 〇 r 1 1 1 (Ν CTC 1 1 6 3 7) 、 Ca a P y 1 〇 b a c t e Γ j e j ι ni (A1 c c 2 9 A 2 8 ) 請 1 1 等 具 有 抗 菌 作 用 $ 又 對 m 母 菌 、 徽 菌 等 之 微 生 物 亦 為 有 鬩 讀 1 背 1 效 〇 待 別 是 含 有 來 自 天 然 食 品 之 環 戊 烯 酮 和 / 或 其 光 學 1¾ 之 1 活 性 體 之 防 腐 劑 於 作 為 來 g 天 然 之 食 物 中 毒 預 防 劑 i 事 1 1 除 m _ 之 有 用 性 高 ο 尚 9 使 用 本 發 明 之 抗 菌 劑 可 進 行 衣 項 再 1 填 1 服 、 床 OD 早 等 之 殺 m > 且 若 將 本 發 明 之 抗 菌 劑 舖 展 散 布 * 寫 本 裝 則 可 經 由 將 本 發 明 之 抗 _ 劑 擦 拭 而 進 行 的 物 之 除 m 頁 *1-· 1 I 殺 菌 0 例 如 * 藉 由 添 加 至 大 廈 之 冷 房 用 水 > 刖 可 進 行 退 1 I 伍 軍 人 病 之 預 防 〇 1 I 本 發 明 之 抗 菌 劑 對 蛀 牙 菌 和 牙 周 病 菌 亦 顯 示 抗 菌 活 性 1 訂 1 I 且 可 提 供 含 有 本 發 明 抗 m 剤 之 口 内 用 m 0 Π 内 用 m 之 形 狀 可 作 成 液 狀 糊 狀 等 公 知 之 形 狀 〇 P 内 用 劑 可 例 示 1 1 牙 膏 劑 0 牙 膏 劑 可 為 液 狀 9 且 亦 可 為 糊 狀 、 粉 末 狀 t 並 1 1 可 作 成 公 知 之 牙 音 劑 形 狀 0 牙 音 劑 中 之 瓌 戊 烯 期 和 / 或 1 、泉 1 其 光 學 活 性 am 薛 於 牙 音 劑 中 之 含 量 並 無 待 別 限 制 • 若 為 含 有 對 蛀 牙 菌 和 牙 周 病 菌 之 有 效 濃 度 m 可 0 牙 膏 爾 中 亦 可 1 1 添 加 公 知 的 添 加 m 例 如 濕 潤 m - 界 面 活 性 m 、 結 合 劑 1 1 > 香 料 % 甘 味 料 等 〇 本 發 明 牙 膏 劑 之 有 效 成 分 亦 可 使 用 1 1 環 戊 烯 酮 含 有 物 例 如 青 菜 S 水 果 等 之 加 熱 處 理 物 9 且 1 I 含 有 此 含 環 戊 烯 酮 加 熱 處 理 物 之 α 内 用 劑 * 例 如 牙 膏 1 1 劑 亦 被 包 含 於 本 發 明 0 1 I 經 由 使 用 本 發 明 之 抗 菌 劑 t 可 提 供 抗 菌 性 化 粧 材 料 〇 1 t -24- 1 1 1 I 本紙張尺度適用中國國家標準（CMS ) A4規格（210X297公釐） Λ5 898 2 A7 A7 B7 五、發明説明（y) 本發明之化粧材料可調製成含有有效量之瓌戊烯麵和/ 或其光學活性醱之乳霜、乳液、化粧水、洗面劑、粉餅 等之基礎化粧材料、口紅、粉底等之彩粧化粧材料.洗 澡香皂、肥皂等形態。又，對於頭髮亦為有效，可作成 美髮水、髮液、定髮液、吹髮劑、髮霜、髮覆蓋品等之 髮製品、和洗髮精、潤絲精、梳理頭髮劑等之頭髮用化 粧品等之護理頭髮製品之形態。對於化粧材料之配合里 ，為在通常化粧材料100份（重董份，以下同樣）中之琛 戊烯酮和/或其光學活性龌以約1G—3〜10份，較佳為 10_2〜1份卽可。化粧材料之其他成分可使用通常之化 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消贽合作社印製 虜善 明光用為 QO 於皮室 皮改 發其浴 - U-920對性浴 性之 本或沐量 水 ^ 劑應自 醮炎 形合έΓ^2熱“用持來 n 中 於皮 用酮，之} 對 沐對對 對性 浴烯劑劑樣 ，Μ 之且， 料應 沐戊用用同 I 劑!5明，又 材特 供環浴浴下 Η 用 u 發用 。 粧於 提之沐沐以10浴 ί 本作效 浴 化對 可最粒於，~沐$ 。效功 之且 ，效頼對份10之、 者有著 明， _有、。量約明SJ0合可顯 發用 c_ 有劑態重以發gp«配亦有 本作效抗含用形[^(體本 所_具 。效功之成浴等 Ϊ 性之 5 中因亦 者有箸明製沐劑10活製~2剤起防 合可潁發調狀用劑學諝 5 用之預 配亦有本可粉浴用光所加浴炎 、 所睹具用劑之沐浴其此添沐虜善 中因亦使用醴狀沐或如常之皮改 料起防由浴性液常 \ ，通常性之 材之預經沐活、通和可升通應炎 粧炎， 之學劑在醑卽公用待* 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2 m X 297公釐） 4 5 8 9 8 ^ A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製

五、發明説明 ( ) ! ! 之 病 因 菌 的 驅 除 亦 為 有 效 〇 I I I 以 上 » 依 據 本 發 明 為 提 供 作 為 翳 槩 化 粧 材 料 Λ 沐 I I 浴 用 劑 之 有 用 的 抗 m 劑 〇 又 1 含 有 環 戊 烯 酮 等 之 食 品 或 'V 請 先 I I 飲 料 對 於 食 物 中 毒 \ 胃 腸 炎 等 之 改 善 和 / 或 預 防 極 為 有 Μ 讀 I 背 ! 用 〇 面 I ί 本 發 明 之 細 胞 自 滅 誘 導 劑 1 為 以 具 有 細 胞 a 滅 誘 發 性 注 意 事 I I 之 環 戊 烯 酮 和 / 或 其 光 學 活 性 體 作 為 有 效 成 分 且 其 可 項 再 I I 依 上 逑 制 癌 劑 為 準 1 予 以 製 劑 化 ， 並 以 制 癌 劑 為 準 之 方 填 寫 本 I 裝 法 予 以 給 藥 〇 頁 S-· I I 細 胞 自 滅 誘 發 劑 之 投 予 量 為 依 據 其 製 劑 形 態 7 投 予 方 I I 法 » 使 用 的 及 運 用 其 之 患 者 年 齡 、 體 重 症 狀 而 適 當 I I 設 定 9 雖 imp 撕 一 定 但 一 般 為 製 劑 中 所 含 有 之 琛 戊 烯 酮 和 I 訂 I I / 或 其 光 學 活 性 體 之 量 為 以 成 人 1 B 以 0 . 1 M g 2 0 0 Β g/ kg 〇 當 妖 因 為 投 予 量 為 依 各 種 條 件 而 變 動 故 亦 有 比 上 I I 述 投 予 量 少 而 為 充 分 之 情 形 7 或 者 亦 有 必 須 超 遇 範 圍 之 I I 情 形 〇 本 發 明 之 製 除 了 可 就 其 原 樣 經 P 投 予 以 外 亦 可 I Λ 添 加 至 任 意 的 飲 食 品 並 於 B 常 攝 取 〇 I 尚 細 胞 自 滅 被 認 為 偽 輿 病 理 性 之 細 胞 死 亡 不 同 1 為 I I 在 細 胞 本 身 基 因 中 所 最 初 被 載 入 之 死 亡 0 即 任 何 外 部 I I 或 内 部 性 要 因 係 成 為 導 火 線 y 令 策 劃 細 胞 白 滅 之 基 因 活 I I 化 t 並 以 此 基 因 為 基 礎 令 策 劃 死 亡 基 因 之 蛋 白 質 被 生 物 I ! 合 成 且 經 由 生 成 之 策 劃 死 亡 蛋 白 質 令 細 胞 本 身 分 解 ， I I 而 死 亡 0 I I 本 發 明 之 細 胞 白 滅 誘 發 劑 9 可 令 此 些 細 聰 白 滅 在 所 欲 I I -2 6 ~ I I I I 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 5 898 2五、發明说明（<) 胞 細 原。 病質 者物 或之 的用 要有 需極 不為 令’ 可除 且排 ，體 現物 表生 中由 胞態 細形 、之 織然 組自 之以 fin分 。成 中效 法有 方為 滅作 自體 胞性 細活 用學 使光 可其 劑或 發 \ 誘和 滅酮 自烯 胞戊 細環 之用 明使 發由 本經 機篩 發之 誘劑 滅制 自抑 胞發 細誘 在滅 用自 可胞 法細 方 ' 該劑 且發 -誘 滅滅 胞胞 細細 發 、 誘明 可闌 刖之 ，_ 列 可 定 限 別 特 無 並 料 飲 或 品 食 性 菌 抗 之 明 發 本 BBS* 0 譜 等所 選 品類 Η 麺 加 、 物器 毅工 如加 例合 舉混 預 f 品 Η D 力 頚 粉 濺 ' 品 Η 加 粉 麥 小 類 包 麵 ' 類 粉 心 通 類 餡 類 麥 蒿 品 Η 加 \1tn ΗΠ 由 VV ' \/ 等 餅 \y 口OR 等工 汁加 味肉 調用 、 食 類 、 滋丨 乃 $ 裝 、 包油 、拉 絲沙 粉 、 、油 粉羅 米婦 、 天品 飭 、工 麵腊加 、油豆 等 豆 纳 \ 噌 味 f 類 腐 豆 子 K 丸 等竽 腸山 蠘肉 、 魚 腸 ' 香輪 製竹 agl·' 、 、糕 根魚 培 ， 、 肉 0 魚 品 産 &11 産 水 甘 炸 性 塑 可 大火 的魚 碎 、 磨司 凍壽 冷 、 (0 腿 火)' 肉等 獵 品 製 乳 煮煉 佃 、 、酪 頭乳 3? / ΡΕ1 4ί. 産油 水牛 '、 品酪 工乳 加酸 3' 魚油 、奶 魚 、 松乳 乾料 、 原 腸丨 ---------批衣------'玎------& (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作杜印製 水菜 菜青 青I 料 ).飲 等果 淋水 淇 、 冰類 、潰 乳醃 粉 、 、類 乳發 31/ ' 類 醬 賣 ίι\ 品 Η 加 果 等 料 飲 合 混 ' 料 飲 類 類果 心米 點 、 巧 等 類料 乾飲 拼精 、酒 力 、 克— 類 包 麵 心 點 餅 心 點 ' 糕 ER- 3 威 f 酒 萄 葡 ' 酒 國 中 f 酒 本 曰 酒 琴等 、酒 地香 蘭甜 白 ， '酒 加果 特水 優 、 、料 酒飲 燒精 、酒 忌涼 士清 酒 姆 蘭 酒茶 »f綠 /(V 、料 飲 閒 休 味 f \u- 等 料 飲 酸 乳 ' 料 飲 涼 清 ' 琲 咖 / 茶 龍 烏 ' 茶 紅 7 2 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 經濟部中央標準局員工消費合作杜印製 ：·^82 a7 B7五、發明説明（斗） 料（醬油、辣结油、醋、味_等）、_裝、級裝、袋裝食 品（牛飯、鍋飯、紅飯、咖哩、其他之各種已諝理完畢 之食品）、半乾燥或濃縮食品（肝醬、其他之塗抹食品、 薷麥•烏龍麵汁、濃縮湯類）、乾燥食品（速食麵類、速 食咖唾、卽溶咖啡、粉末果汁、粉末湯、速食味噌汁、 己調理完畢食品、已調理完畢飲料、已調理完畢湯等）、 冷凍食品（鋤燒、茶碗蒸、烤鰻魚Η、漢堡牛肉餅、燒 賣、餃子、各種加料酒、水果難尾酒等）、固形食品、 液體食品（湯等 >、香辣料類等之農産、林産加工品、畜 産加工品、水産加工品等。 本發明之食品或飲料之製法並無持別限定，可列舉經 由調理、加工及一般性所使用之食品或飲料之製法進行 製造，所製造之食品或飲料中若含有環戊烯酮和/或其 光學活性體即可。 調理及加工若為令調理、加工後之由（a)糖醛酸或糖 醛酸衍生物、（b)含有耱醛酸和/或糖醛酸衍生物之糖 化合物、（c)含有耱醛酸和/或糖醛酸衍生物之糖化合 物含有物所蓮出之物質的加熱處理物中，含有環戊烯酮 和/或其光學活性體卽可。 即，在調理-加工前、調理-加工時、調理-加工後， 添加含有環戊烯酮和/或其光學活性體之由（a)糖醛酸 或糖醛酸衍生物、（b)含有糖醛酸和/或耱醛酸衍生物 之糖化合物、（c)含有糖醛酸和/或糖醛酸衍生物之糖 化合物含有物所選出之物質的加熱處理物亦可，且亦可 -28- ---------批农------II------A (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張又度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2丨Ο X W7公釐） ；：)B 2 A7 B7 經濟部中央標隼局員工消費合作社印製 五、發明説明 ( >1 ) 1 1 將 調 理 及 加 工 品 和 其 材 料 添 加 至 含 有 環 戊 烯 酮 和 / 或 其 1 1 I 光 學 活 性 體 之 由 (a)糖醛酸或糖醛酸衍生物、 (b) 含 有 糖 1 1 m 酸 和 / 或 耱 m 酸 衍 生 物 之 糖 化 合 物 <c)含有耱醛酸 請 1 I 先 1 和 / 或 耱 m 酸 衍 生 物 之 糖 化 合 物 含 有 物 所 選 出 之 物 質 的 閲 1 背 t 加 熱 處 理 物 中 並 稀 释 該 加 熱 處 理 物 中 之 環 戊 烯 酮 和 / 1¾ 之 I 或 其 光 學 活 性 體 亦 可 〇 注 意 1 I 事 1 其 中 * 食 品 或 飲 料 之 製 造 中 > 可 依 任 意 之 工 程 進 行 項 再 1 ά 1 加 熱 處 理 ♦ 且 若 為 令 加 熱 處 理 物 中 含 有 環 戊 烯 m 和 / 或 寫 本 政 其 光 學 活 性 體 即 可 9 且 亦 可 添 加 含 有 環 戊 烯 酮 和 / 或 其 頁 1 I 光 學 活 性 體 之 加 熱 處 理 物 〇 又 將 食 品 或 飲 料 和 其 原 料 添 1 | 加 至 含 有 環 戊 烯 酮 和 / 或 其 光 學 活 性 體 TTTT. 之 加 熱 處 理 物 中 1 1 並 稀 釋 該 加 熱 處 理 物 中 之 環 戊 烯 酮 和 / 或 其 光 學 活 性 1 訂 1 | 體 亦 可 0 又 f 添 加 為 以 1 次 進 行 或 以 透 過 數 次 進 行 亦 可 0 因 此 * 可 簡 便 地 製 造 顯 示 出 生 理 作 用 之 食 品 或 飲 科 0 1 1 又 在 製 造 時 含 有 由 { a )糖醛酸或糖醛酸衍生物、 (b) 含 1 I 有 糖 m 酸 和 / 或 糖 m 酸 衍 生 物 之 糖 化 合 物 Λ (C)含有糖 1 1 ，旅 1 m 酸 和 / 或 糖 m 酸 衍 生 物 之 糖 化 合 物 含 有 物 所 選 出 之 物 質 » 且 以 製 造 時 所 生 成 之 加 熱 處 理 物 中 的 環 戊 烯 酮 和 / 1 1 或 其 光 活 性 體 作 為 構 成 成 分 之 食 品 或 飲 料 > 亦 被 包 含 1 1 於 本 發 明 Q 即 使 經 過 任 何 工 程 之 情 形 中 t 亦 為 含 有 添 I 1 加 和 / 或 稀 釋 琛 戊 烯 嗣 和 / 或 其 光 學 活 性 體 所 構 成 之 食 1 I 品 或 飲 料 » 乃 被 定 義 為 本 發 明 之 食 品 或 飲 料 〇 1 1 具 有 生 理 作 用 之 環 戊 烯 m 和 / 或 其 光 學 活 性 體 於 食 品 1 1 中 之 含 量 並 無 特 別 限 制 * 可 由 其 官 能 性 和 制 癌 性 I 抗 菌 1 I -1 9- 1 1 1 ! 本紙張尺度適用中國國家樣準（CNS ) A4規格（2ίOX29?公釐） 4 5 898 2 A7 B7 經濟部中央橾準局員Η消費合作杜印製 五、發明説明 ( 4 ) 1 1 性 等 之 生 理 活 性 方 面 適 當 壤 擇 9 例 如 環 戊 烯 m 和 / 或 其 1 ί 1 光 學 活 性 體 之 含 董 為 對 食 品 1 0 〇份， 以5 X 1 Q'6 份 以 上 Ϊ i 由 作 為 食 品 之 官 能 性 生 理 作 用 方 面 而 9 則 較 佳 為 請 £ 1 i 1 0 -5 5份t 更佳為1 0·4 ~ 2份 〇 閱 讀 1 背 I 又 > 具 有 生 理 作 用 之 環 戊 烯 酮 於 飲 料 中 之 含 量 並 無 待 之 1 別 限 制 t 可 由 其 官 能 性 和 制 癌 性 、 抗 菌 性 等 之 生 理 活 性 意 事 1 1 方 面 適 當 選 擇 t 例 如 環 戊 烯 m 之 含 量 為 對 飲 料 1 0 0份， 再 1 填 i 以 5X1 5份以上， 由作為飲料之官能性、 生理作用方 寫 本 裝 面 而 言 > 則 較 佳 為 1 0 5 5份， 更佳為1 0〜 -2份 〇 頁 1 1 本 發 明 之 食 品 或 飲 料 t 若 為 含 有 、 添 加 和 / 或 稀 釋 具 1 I 有 制 癌 作 用 % 抗 m 性 等 生 理 作 用 之 環 戊 烯 和 / 或 其 光 1 1 學 活 性 > 則 對 其 形 狀 並 無 限 定 » 且 亦 包 含 藥 片 狀 Λ 顆 1 訂 1 I 粒 狀 、 m 囊 狀 膠 狀 X 溶 m 狀 等 形 狀 之 可 經 由 P 攝 取 之 形 狀 物 ο 1 1 以 上 本 發 明 所 使 用 之 環 戊 烯 酮 及 其 光 學 活 性 歷 » 可 ί 1 廉 價 製 造 且 經 由 其 各 種 生 理 性 機 能 並 經 由 使 用 作 為 1 ，'泉 食 品 或 飲 料 之 添 加 劑 t 則 可 在 食 品 或 飲 料 中 簡 便 地 賦 予 j 各 種 生 理 性 TO 能 、 抗 菌 力 X 細 胞 自 滅 誘 發 作 用 制 癌 作 1 I 用 等 9 且 本 發 明 之 環 戊 烯 m 及 其 光 學 活 性 體 極 為 有 用 於 1 1 作 為 對 食 品 或 飲 料 之 添 加 劑 0 1 1 本 發 明 所 使 用 之 環 戊 烯 酮 及 其 光 學 活 性 體 之 製 法 可 依 I I 任 何 方 法 且 可 依 可 本 發 明 所 掲 示 之 方 法 進 行 製 迪 9 旦 1 ί 亦 可 依 化 學 合 成 法 予 以 合 成 〇 即 含 有 環 戊 烯 酮 和 / 或 1 1 其 光 學 活 性 am 體 之 食 品 或 飲 料 Λ 抗 菌 劑 制 癌 劑 、 癌 細 胞 1 Ι -30 - 1 1 1 1 本紙張尺度適用中國國家標隼（CNS ) A4規格（210X297公釐） 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 b Byb ^ A7 B7五、發明説明（4 ) 分化誘導劑、細胞自滅誘發劑為全部被包含於本發明。 又，使用環戊烯酮和/或其光學活性體作為有效成分之 癌細胞分化誘導方法及細胞自滅誘發方法為全部被包含 於本發明。 本發明之環戊烯酮及其光學活性體為在lQ〇fflg/kg之經 口投予下，確認對鼠無毒性。 以上，環戊烯_及其光學活性體為可廉價製造，旦經 由其各種生理性機能，而成為在醫_、食品等廣泛領域 中極為有用之化合物。 實施例 依據以下之實施例更具體地説明本發明，但本發明不 被此些實施例所侷限。尚，賁施例中之％及份若無特別 記述則為依據重量。 實施例1 (1)將币售之蘋果製果膠以1%溶解於水中，並放入裝 配有迴流冷卻器之茄型燒瓶，且在設定於110〜12Q°C之 油浴中加熱i 8小時、4 2小時、及6 6小時。加熱中之果膠 溶液溫度為1 〇 〇〜1 〇 2 °C。 將上述果膠溶液離心並除去沈糴，鼸製其上清液以水 稀釋成3倍及10倍之試料。其次將該加熱處理物以NaOH 調整至P H 7 . 0後，對於人類前骨越性白血病細胞H L - 6 0細 胞（ATCC CCL-240)之細胞增殖抑制作用依以下記載之ΜΤΤ 法測定β 卽，將稀釋試料10# 1和含有在10% 56 °C處理30分鐘 -3 1 - (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS } A4規格（2[0X 297公釐） A7 45 898 2 B7 五、發明説明（抑） 之牛胎兒血清（GIBCO公司製）之RPMI 1 6 4 0培養基（日水 公司製）37°C下培養之5000個HL-6G細胞的HPHI 1640培 養基100/^1,添加至96孔穴微標度平板之孔穴中，並在 5% C02氣體存在下37°C培養48小時後，加入5mg/Bl之 溴化3-(4,5 -二甲基瞎唑-2-基）-2,5 -二苯基四唑銪（MTT ;Sigiia公司製}磷酸緩衝食鹽水溶液10#1並再繼缠培 養4小時後，於顯徹鏡下觀察細胞之生長狀態。又，加 入含有0.04Ν HC1之2-丙醇100//1並良好攪拌，德|定5 9 0 nm 中之吸光度並將其視為細胞增殖度。 其結果，在加熱18小時之果膠3倍稀釋液添加區域 、加熱4 2小時及6 6小時之果匾3倍、1 0倍稀釋液添加區 域中，未觀察到活細胞，故在此些稀釋液濃度中加熱 100 °C之果膠為顯示出細胞增殖抑制活性。 另一方面，在加熱18小時之果膠10倍稀釋液添加區域 中則大約全部之細胞為活細睢，而舆對照之加水區相比 較則在59{3nii中之吸光度低β (2)於100°C下加熱18〜66小時之果膠200# 1中，加入 200# 1甲醇並於混合後進行離心，將上清液200# 1於減 E下濃縮乾燥。將其溶解於10# 1之50%甲醇水溶液中， 且將1# 1點在矽_60片F(Melc公司製）後，以展開溶劑 (醋酸丁酯：醋酸：蒸皤水=3: 1: 1之上層）予以展開 。令展開終了之薄層矽謬乾燥後，以Ag(i03-NH3溶液 (0.1M AgN03和5^ NH3之等量混合物）噴蓀加熱，檢潮 點潰。其結果，Rf值約0.3附近之點潰為在加熱18小時 -32- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210Χ297公釐） ---------^------iT------Λ (請先闊讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 4 5 8 9 8 2 A7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 B7五、發明説明（⑴） 之果膠出現，且加熱42小時之果謬亦比加熱18小時之果 膠更為增加，而加熱66小時之果_與加熱42小時之果_ 為同程度之量。 (3 )於實施例1 - ( 1 )記載之在1 0 0 °C加熱6 6小時之果_ 11 1中，加入甲醇1 η 1並混合，且經由離心取得上清液β 令此上清液於減壓下濃縮乾燥，並憨浮於100^1之甲醇 中。將此懸浮液離心並除去不溶物，並將上清液點在矽 膠6 0片F μ上，以實施例1 - ( 2 )記載之溶劑展開。將薄 層之一部分切出並令以實施例1_(2)記載之方法呈色且 確認在Rf值約0.3附近出現點漬，並将相當此Rf值部分 之矽膠由未呈色之薄層切出。 切出之矽_以11111甲醇萃取3次，並於減壓下濃縮乾 燥且將Rf值約0 . 3附近之點漬單離出來^令此乾燥物溶 解於250# 1水中，並以再經水稀釋至U倍之液體10# 1 作為試料，依實施例1-U)記載之ΜΤΤ法，拥|定對於BL-60 細胞之細胞增制抑制活性。 其結果，在添加水之孔穴中完全生長出細胞，而在添加 本稀釋液之孔穴中則未見到活細胞。即，可確認此切出 區域之癌細胞增殖抑制作用。 (4)使用DX302質量分析計（日本電子公司製）進行實施 例1-(3)所單離之Rf值約0.3附近之癌細胞增殖抑制物質 的質量分析。又，使用重氣仿溶_依據核磁共振法（NMR) 解析其構造。核磁共振裝置為使用JNM-A50M日本電子 公司製）。其結果示於下。 -3 3 - .I —. Ϊ^衣 訂 _^ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 8 9 B ^ A7 B7 '五、發明説明（V ) FAB-MS m/z 115[M + H ] + 使用甘油作為基質。 'H-NMR (CDC 1 ,) 64. 20 ( 1 H, d , J = 2 . 4 H z , 5 - Η) , 4 . 8 3 ( 1 Η, m, 4 — Η)、6 . 3 0(1 Η, d d , J = 1 . 2, 6 . 1 Η ζ , 2 - Μ) , 7 . 48 (1 Η, d d , J = 2 . 1 , 6. 1 Η ζ , 3 - Η) 但，1 H-NMR之化學移動值為視CHC13之化學移動值 為7.26ppm而表示。 此些值為與 T.Ahiead 等〔Carbohydrate Research (Carbohydrate Res.)第 247卷、第 217- 2 2 2 頁（1933年）〕 所報告之反式-4 ,5 -二羥基-2_環戊烯-1-_之數值一致。 第1囫為示出其質量之光譜，縱軸為表示柑對強度 (%)、横軸為表示b/z值。 第2圖為示出其1 Η-tiMR光譜，縱軸為表示訊號之強 度、橫軸為表示化學移動值（PP®)。 實施例2 U)令25克藻酸（非泡脹性、和光纯藥公司製）懸浮於 475al水中。於121°(：下加熱2小時後，令離心所得之上 清液以0.22# is濾紙過濾，並將濾液於減壓下濃縮至20ml 。於其中加入18(1®丨乙醇並混合後，於- 20°C下放置1小 時，並經離心取得上清液。令此上清液於減壓下濃縮至 20a],加入180*1乙腈後，令離心所得之上清液於減歷 下濃縮至20ml，再加入180B1乙腈並離心，且於減壓下 將上清液濃縮至15al。令4ail上述濃縮液於減壓下濃縮 -34- -I I n 1^1 n ----- —c I I T _ _ _ I n-----，艮 (讀先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2!ΟΧ2ί>7公釐） Λ 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 b B9B 2 A7 B7五、發明説明（〇 ) 至約4Q(J# 1後，重覆等量加入醋酸丁酯：醋酸：水= 3: 2: 2混合液之上層並攪拌收集離心上清液之操作， 並取得8ml之萃取液。 將4b丨之上述萃取液加至柱層析用矽膠Btf-3Q0 SP(2X 28cm、富士 Silicia化學公司製），並以醋酸丁酯：醋酸 :水=3: 2: 2之上層作為溶離液，並以壓縮機加壓至 O.lSkg/cm,且以毎分鐘約5al之流速下進行分離《以每 1餾分6〜7ml進行分皤，取出各餾分之一部分以薄層層 析分析時，在第31〜35號為止之餾分中含有高純度的環 戊烯酮，並取得35Bg之環戊烯围K 令此餾分以使用Perpack S型柱之顒相HPLC分離，並 於215nm之紫外線趿收下檢測時，其純度為95.8%。 (2)使用實施例2-(1)所諝製之環戊烯酮，調製2.86SM 、9 5 5 #Μ、318#Μ、1 0 6 Η , 3 5 # Η、1 2 # Μ、及 0 . 1 8 # Μ 之環戊烯酮水溶液。其次將該加熱處理物以NaGH諝整至 PH7.0後，如下測定其對於HL-&0細胞之細胞自滅誘發活 性。 令在含有10% 56 °C處理30分鐘之牛眙兒血清之RPMI 1640培養基中37 °C下培養之HL-6Q細胞，於含有10%牛 眙兒血清之RPMI 1640培養基中，以5.8X104個/1.35ml 懸浮^ 對此懸浮液1.35ml,添加O.lSral前述之環戊烯酮溶液 ，並於3 7 °C , 5 96 C 0 2存在下培養2 0小時。 其結果，於培養20小時後，在添加106# Μ以上環戊烯 -3 5- ---------装------ΪΤ------A (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） A7 ab 898 2 B7 五、發明説明（从） 酮之區域{終濃度10.6# M)看見活細胞數及細胞殘存率 降低，而在添加35#Μ環戊烯酮之區域（終濃度3.5#M) 看見經由細胞自滅誘發之DNA的低分子化及細胞形狀之 變化（核之凝縮、細胞縮小、細胞自滅小體之形成）。 其結果示於表3。即，第3圖為示出在HL-60細胞之培 養液中，添加各種濃度環戊烯酮時之培養時間和活細胞 數之關偽圖，横軸為表示培養時間（小時）、縱軸為表示 培養液中之活細胞數（X i〇4健/1.5ml)。 第3圖中白四角印（口）為表示未添加試料（對照）、白 菱形印（◊)為表示2.86bM環戊烯酮之添加區域、白圓印 (〇）為表示955# Μ環戊烯酮之添加匾域、白三角印（△) 為表示318// Μ環戊烯嗣之添加區域、黑四角印（)為表 示106/iH環戊烯_之添加區域、黑菱形印（♦)為表示 35θΜ環戊烯酮之添加區域、黑圓印（參）為表示12#Μ環 戊烯酮之添加區域。 實施例3 (1)將10克之D-葡耱醛酸（SigBa公司製G5269)溶解於 1公升水中，並於121 °C下加熱4小時後，於減壓下濃 縮至約]ΟπΠ。於其中加入醋酸丁酯：醋酸：水=3: 2: 2 混合液之上層4Qnil並混合後，令離心所得之上清液於減 壓下濃縮至約1 0 ro 1。 將上述萃取液加至柱層析用矽膠BW-3DO SP(2X 28CB、 富士 Silicia化學公司製），並以醋酸丁酯：醋酸：水= 3 : 2 : 2之上層作為溶離液，並以暖縮機加懕至0 . 2kg/cm -36 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（2[0Χ 297公釐） ---------t------ΐτ------Λ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 A7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 B7五、發明説明（K ) ，且以毎分鐘約5ml之流速下進行分離。以每1豳分lOnl 進行分餾，取出各皤分之一部分以薄層層析分析時，在 第61至80號為止之餾分中含有高純度的環戊烯_。收集 此晡並於減壓下濃縮後，以40b1氦仿萃取。將举取液於 減壓下濃縮可得lGOng之環戊烯酮。 令此餾分以使用Perpack S型柱之順相HPLC分離，並 於215n m之紫外線吸收下檢測時，其純度為98%。 (2)使用DX302質量分析計進行上述環戊烯酮之質量分 析〇又，使用重氯仿溶_依據NHR解析其構造。核磁共 振装置為使用JO-A500。比旋光度為使用DIP-370型旋 光計（日本分光公司製>、UV吸收光譜為使用UV-25Q0分 光光度計（島津製作所公司製）、紅外線吸收光譜（IR)為 使用FTIR-8000红外線分光光度計（島津製作所公司製） 。質量分析、NMR為與實施例1-(4)相同結果。示出其他 結果。 旋光度[or〕Ρ 2。 0° (立1 . 3 ,水） IR(KBr法）：在3400、 1715、 1630, 1115. 1060, 1025c®-1具有吸收。 U V : λ max 215nm(水） 第4圖中示出其IR光譜，横軸為表示波數UH、 縱軸為表示透射率。 第5圖中示出其UV吸收光譜，横軸為表示波長（uni)、 縱軸為表示吸光度。 實施例4 -3 7 - ---------t------ΐτ------Λ (請先閱讀背Vg之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 4 5 898 2 A7 經濟部中央標隼局員工消費合作社印製 B7 '五、發明説明（4 ) 令1 %之葡糖醛酸（s i g n a公司製G 5 2 6 9 )水溶液於1 2 1 °C 下加熱4小時，並以IN NaOH將pH調整至7。將5nl之本 試料加至以水平衡化之Hi trap Q柱（5nl ; Pharmacia公 司製），並以25b1水洗淨此柱。將最初由柱溶出之5ail視 為P0皤分、第2餹溶出之5ml視為P1餾分、第3個溶出 之1Q*1視為Ρ2餾分、最後溶出之IQbI視為Ρ3臞分。其次 以25ml之0.5M醋酸進行溶出。將最初由柱溶出之5isl視 為E0餾分、第2値溶出之5ml視為E1餾分、第3値溶出 之5ml視為E2餾分、最後溶出之ΙΟπιΙ視為E3餾分。 取出各皤分之一部分以薄層_析進行分析時，環戊烯 _為内含在P1餾分中，並定里回收本餾分。於hitrap Q 柱精製前所含之未反應的葡糖醛酸和反應産物還原酸則 未在P1腺分中察見。 實施例5 U)令實施例3-(U記載之琛戊烯酮精製樣品以0.67 aig/ml溶解於水中。又，令正-二十八烷（Nacaraitex公 司製以lmg/ml溶解於正己烷（Nacaraitex公司製）。對5 隻試管，加入各1〇〇Ρ 1(1〇〇A g)之正-二十八烷溶液、 各 15# 1(10" g)、45#l(30yug)、90# 1(60# g)、135 # l(90ju g)、 180# 1(120// g)之環戊烯_水溶液。令各 試管於減壓下乾燥，並加入各lOOAl之三甲基甲矽烷基 化溶液〔Ν,Ο-雙（三甲基甲矽烷基）-乙醯胺（Nacaraitex 公司製：三甲基氣矽烷（G L S c i e n e e公司製）：吡啶 (P i a s公司製）=4 : 1 : 1之混合液）〕，令其完全溶 _ 3 8 _ ---------裝------訂------▲ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 898 2 A7 B7 五、發明説明（W ) 解。 將2.1BX 3.2E1B多之玻璃柱（島津公司製）中充填入2% Ο V 1 7 ϋ D i ρ 〇 r t Η P 6 (3 / 8 (}篩網（G L S c i e n c e 公司製）者， 經由氣相層析裝置GC-7AG(島津公司製）於載氣N2中， 以2 0 a 1 /分之流速下進行1 5小時空燒。 於此氣相層析条統中，加入上述之各三甲基甲矽 烷基化試料。分析條件為如下所示。 載 氣 :N 2 流 速 :5 0 m 1/ 分 注 入 P 溫度 :2 8 0 °C 初 期 溫 度 :8 0°C、4 分 升 溫 :8。。/ 分 最 終 溫 度 ：2 7 0 °C 檢 測 :氫焰離子化檢潮裝置 其 結 果 9 在 環戊 烯_為 約 9 . 7分之滞留時間、 在正-二 十 八 烷 為 約 2 6 ‘ 7分 之滞留 時 間，可 以 DE3 早一 波峰 被 檢測出 0 此 時 所 得 之 各波 峰面積 為 如下所 示 Q 環戊烯_之 正-二 十 八烷 之 環 戊 烯 m 量 波峰 面積（a) 波峰面積（b) (a)/ (b) 1 0 Μ g 19 ,98 1 2 8 5 , 7 98 0 . 0 6 ί) 9 1 3 0 Μ g 9 0 ,980 2 8 5, 3 9 8 0 . 3 188 60 Μ g 17 4 ，284 2 5 1, 4 3 9 0 . 6 9 3 1 90 Μ g 272 ,524 2 5 6 , 3 5 6 1 . 0 6 3 1 2 0 β g 368 ,57 3 2 5 5 , 54 5 1 . 4 4 2 -39- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 1 ^0'^ (讀先鬩讀背面之注意事項再填寫本頁) A 5 898 2 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明 (^ ) 若 將 如 此所 得 之 相 對 於 環 戊 烯 m 量 之 環 戊 烯 m 之 波 峰 面 積 (a )/正- —1 十 八 院 之 波 峰 面 積 (b )以圖表示， 則如 第 6 圖 所 示〇 即 > 第 6 圖 為 示 出 環 戊 烯 酮 之 檢 量 線 圖 9 縱 軸 為 表 示環 戊 烯 酮 之 波 峰 面 積 和 正 -二十八烷之波峰 面 積 之 比 、橫 軸 為 表 示 環 戊 烯 酮 量 (# g ) 〇 W * 環 戊烯 酮 量 為 藉 由 對 未 知 之 試 料 加 入 10 0 A g正 "二 十 八 烷 並 減壓 下 乾 燥 後 ) 三 甲 基 甲 矽 院 基 化 並 依 上 述 方 法 進 行 氣相 分 析 9 算 出 環 戊 烯 m 之 波 峰 面 積 / 正 十 八 烷 之 波峰 面 積 之 值 (y ), 則可定量環戊烯酮之量。 (2)令調製成1 % (重量％ ) 濃 度 之 Μ 糖 醛 酸 (N a c a r a i t e X 公 司 製 )水溶液， 於1 2 0。。 之 m 熱 鍋 加 熱 加 壓 4 小 時 ο 將 其 10 0 /U 1 (相當1 m g 葡 糖 醛 酸 )裝入試管並加入1 0 0 Μ g正- 二 十 八 院 且於 減 壓 下 乾 燥 後 t 予 以 二 甲 基 甲 矽 院 基 化 〇 依 上 述 方 法， 以 氣 相 層 析 進 行 分 析 時 i 取 得 如 第 1 圖 所 示 之 圖 樣 • 第 7 圖 為 示 出 m 糖 m 酸 加 熱 處 理 物 之 氣 相 層 析 結 果之 圖 示 9 縱 軸 為 表 示 檢 m 強 度 、 横 軸 為 表 示 滞 留 時 間 (分）。 環 戊 烯 酮 為 在 約 10 2分 之 滯 留 時 間 ( 波 峰 (a )] 、 正- 二 十 八 烷 為 在 約 2 7 8分 之 滞 留 時 間 〆 L 波 峰 (b )〕 > 可以單 -波峰被檢測出。 其 結 果 ,如 下 所 示 ， 葡 糖 m 酸 之 經 由 加 熱 處 理 成 為 環 戊 烯 m 之 變換 率 1 以 莫 耳 換 算 則 為 約 15 % 0 環 戊 烯 _之 波 峰 面 積 (a ) 2 0 3 , 7 94 正 -二十八烷之波峰面積（b) 3 0 5 , 4 4 4 (a)/ { b) 0 . 6 6 7 2 環 戊 烯 麵量 (M g ) 88 .4 -4 0- 本紙張尺度適用中國國家標隼（CNS ) Λ4規格（210X297公釐） 45 898 2 A7 B7 五、發明説明（〇 ) 實施例6 令 市 售 之 葡 糖 醛 酸内酯（Melc公司製c ode No* 100282) 以 1 %溶解於水中， 並於1 2 1 °C下加熱0 . 5小時， 1小時 2 小 時 、 4 小 時 、或1 6小時e將本加 熱處理液依上述 實 施 例 5- { 1 )記載之方法予以三甲基甲矽烷基化 ,並以 氣 相 層 析 進 行 分 析 0 分 析 結 果 示 於 下 〇 加 熱 時 間 環戊烯酮量 變換率 (小 時 ) (μ g/ Ιϋϋ μ 1) (% , 莫耳換 算） 0 , 5 9.28 1.43 1 2 1.0 3.26 2 5 2.8 8.15 4 119 18.3 1 6 13 2 2 0.4 其 結 果 t 葡 糖 酸之經由加熱處理成 為環戊烯酮之變 換 率 為 在 加 熱 16小 時處理中，以莫耳換 算為約2 0 % 0 又 r 依 據 實 施 例 3-(1)記載之方法，由上述葡 糖醛酸 之 1 6小 時 加 熱 處 理 液取得精製之環戊烯 嗣。 實 施 例 7 於 市 售 之 包 心 菜 100克中加入l〇〇ml水 ,並以混合器弄 碎 0 添 加 5 B 1之蛋白酶水（2〇ffig/Bl;竇酒造公司 製、903 經濟部中央標準局員工消費合作社印聚 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 並於5 0°C下反應1小時後，過濾且令其殘渣以1 . 5公升水 洗淨。於洗淨之殘渣中加入水，取得pH 6.5之懸浮 液，並令其於121 °C下加熱2小時後，過濾可得PH4.7之 -4 1 -本紙張尺度適用中國國家標準（CNS) A4規格（210X 297公釐） 5 *4 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 8 98 2 A7 B7五、發明説明（P ) 濾液。令此濾液於減壓下濃縮至14ml,加人36*1甲酵並 混合後，以4Q00Xg離心10分鐘，取得上清液。令此上 清液於減壓下濃縮可得3.5b1之濃縮液。 此濃縮液100# 1中所含之環戊烯酮量依實施例5-(1) 記載之方法溯定時，為24.9#ge以混合器弄碎後，不 進行蛋白酶K處理和水洗除去蛋白質之處理，而就其原 樣加熱時則確認無環戊烯麵之生成。由此，闌明1〇〇克 包心菜經由蛋白酶K處理和水洗除去蛋白質後，於上述 條件下加熱，則生成〇.87iag之環戊烯酮。 其次，依實施例3-U)之方法，由此湊縮液精製、單離 環戊烯酮。 實施例8 (1)於果匾（蘋果製、和光純蕖公司製）之1%水溶液8nl 中加入1.36單位、0.68單位、或0.14單位之果謬酶（8.1 單位/ tug蛋白，Sigma公司製，P9932),並於25°C下放置 1晚》於此些①酵素反應物、及②酵素反醮物之離心上 清液中加入H C 1並諏製至p Η 3後，於1 2 1 °C下加熱4小時 可得加熱處理物。令加熱處理物中所含之環戊烯酮依實 施例5-(1)記載之方法予以三甲基甲矽烷基化，且加熱 處理物中之環戊烯銅量依氣相層析予以測定。 其結果示於表1。 ---------#------II------I (請先閎讀背面之注意事項再蜣寫本頁) -42- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS) A4規格（210 X 297公釐） R〕 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 4 8 98 2 A7 B7 五、發明説明（心） 表1 果_酶添加量 (單位/ 8 0 b g果瞟） 變換率（96、 重量換算） ① ② 1.36 4 · 4 6 4.75 0.68 4.52 4.62 0.14 3.39 3.43 0 2.71 2.73 其結果，令果腠經由果P酶處理水解後進行加熱處 理之情形，比僅進行加熱處理之情形，其環戊烯酮産量 為上升25〜75%。 (2)令1克藻酸（非泡脹性；和光純藥公司製）懸浮或 溶解於iOOal之①0.1N HC1或②0.1M Na2 C03中，於95°C 下加熱15小時後，於①中加入粉末Na2C03、於②中加 入6(^1^1將011諝整至2.7。另一方面，諝製@令1克藻 酸懸浮於lOQml水中（PH2.7)和④令1克藻酸溶解於100ml 之0.1M Na2C03後，以fiN HC1調整至ρΗ2,7β令①〜④ 於1 2 1 °C下加熱4小時之物質（稱為試料①〜試料④）中 所含之環戊烯酮童依以下之方法消I定。 試料①〜試料④中所含之不溶物經由_心分離予以除 去，且將上清液10# 1以使用TSK_G2G00PW柱（7.5BBX -4 3 - ---------装------------'4 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 5 Λ 經濟部中央標隼局員工消費合作社印裝 898 z A7 B7五、發明説明（P ) 30cm;東梭公司製）之隱過濾並依HPLC予以分析。尚， 移動相為水，流速為lml /分、柱溫為40°C,並於215nn 中檢測吸光度。使用實施例3-(1)記載之精製環戊烯酮 作為標準物質，並使用2 -環戊烯-1-國（Aldrich公司）作 為内標準物質β 其結果，確認試料①中為含有414mg/tnl、試料②中為 含有279#〇β1,試料③中為含有289/ig/ml、試料④中 為含有296/ug/ml之環戊烯酮。卽，與121°C下加熱4小 時之試料③相比較，於121 °C、加熱4小時前在0.1N HC1中95 °C、加熱15小時之情形中，生成1.43倍之環戊 烯酮。 由試料，依實施例3-(1)記載之方法調製精製的環戊 烯酮。 (3)於市售之50克豆腐渣中加入120b1水並於室溫下振 盪2小時，且依離心分離和過濾除去固形物。於50sl之 濾液中加入IN H2 S04並調整至pH2,且在121°C下加熱 4小時時取得試料⑤。 於100克之豆腐渣中加入30(^1丙_並攪拌，且經過濾 取得55克殘渣。將27.5克殘渣以1公升水洗淨，且加水 至150B1後，加入IN H2S〇4調整至PH2,並於121°C下 加熱4小時取得試料⑥。 令丙酮處理之剩餘的殘渣27.5克懸浮於2d〇Bl水中， 並加人500# 1之蛋白睛K(20fflg/ml、赍酒造公司製）且令 其在5 (TC下反應2小時。反_物以1公升水洗淨，並加 —4 4 _ (請先閏讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（2】0X297公釐） 經濟部中央標準局員工消費合作社印11 898 2 A7 B7五、發明説明uo 水至180b1後，加人ίΝ H2S〇4調整至PH2,並於121°C 下加熱4小時取得試料⑦β 令試料⑤〜⑦過濾所得之濾液，於減壓下濃縮至約 並加入4倍份量之丙離心取得上清液。將此些上清 液再於減壓下濃縮，並由試料⑤取得5.5ml、由試料⑥ 取得3.8ml、由試料⑦取得3.ΟβΠ之濃縮液。此些瀑編液 中所含的環戊烯酮量，依實施例8-(2)記載之方法潮定。 其結果，其均由50克之豆腐渣開始，於試料⑤中生成 0.54jng、試料⑥中生成2.79Bg、試料⑦中生成3.98mg之 環戊烯銅。又，於試料⑤〜⑦調製途中之12 °C、加熱4 小時前之試料中均不含有環戊烯酮。因此，藉由經蛋白 酶處理而除去蛋白質，使環戊烯_産量為增加約40%。 由試料⑤〜⑦之各試料，依實施例3-(1)記載之方法 ，調製精製的琿戊烯 令50克之豆腐渣懸浮於200B1水中，並以6N HC1諏 整至？111.5後，於50°(：下加熱3小時。以^011調整至？!1 5 . 0 ,並過濾取得濾液。此濾液以6 N H C 1調整至p Η 2 . 0 5 ，並於121 °C下加熱4小時。將其視為試料⑧、試料⑧中 所含之環戊烯_，依實施例8-(2)記載之方法測定。 其結果，由5 0克之豆腐渣生成5 . 0 a g之環戊烯酮。尚 ,於1 2 1 °C、加熱4小時前之濾液中並不含有環戊烯酮〇 (4)對市售之蘋果纖維製品（乾燥粉末、Nitiro公司製） 進行以下之處理。 令蘋果織維製品0.5克懸浮於50ib1水中，並於121 °C下 -4 5 - ---------t------IT------,,t (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標率（CNS ) Λ4規格（2丨ΟΧ2ί»7公釐） 4 經濟部中央標準局負工消費合作社印製 898 2 A7 B7五、發明説明（44 ) 加熱4小時。經由離心取得3 7 m 1之上清液。將其視為試 料⑨。 令蘋果纖維製品5克驗浮於50ml水中，並於121 °C下 加熱4小時。經由離心取得2 0 β 1之上清液。将其視為試 料（1 0 ) 〇令蘋果繼維製品5克懸浮於50ml水中並在室溫下振盪 2小時，且令其離心上清液於1 2 1 °C下加熱4小時β經由 離心取得2 5 m 1上清液。將其視為試料（11 )。 令試料（U )調製時之在室溫下振通2小時後離心所得 之沈澱，懸浮於5 G m 1水中，並於ί 2 1 °C下加熱4小時。 經由離心取得31nl之上清液。將其視為試料（12)。 試料⑨〜（12)中所含之環戊烯酮量，依實施例8-(2) 記載之方法測定 其結果，於試料⑨中含有14.8#1/β1,試料（10>中含 有 76.3/ig/nil、試料（11)中含有 54.0；ug/ffll、試料 U2) 中含有34.2# g/Bl之環戊烯酮。又，於試料⑨之121 °C 、加熱4小時前之試料中並不含有環戊烯酮。因此，由 蘋果纖維製品1克，於試料⑨之製法中生成l.OSmg、試 料（10)之製法中生成〇.3D5ng、試料（11)之製法中生成 0.270ng、試料（12)之製法中生成0.212mg之環戊烯_。 由試料⑨〜（12)之各試料，依實施例3-0)記載之方 法，調製精製的環戊烯酮》 實施例9於市售之煎茶之葉、烘焰茶之栞、烏龍茶之葉、或紅 -46- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） A7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 B7五、發明説明（4Γ ) 茶之藥2克中加入IOObI水並以混合器弄碎，且以IN硫 酸調整至PH3,並於121 °C下加熱16小時。此些加熱處理 物中所含之環戊烯酮量，依實施例8-(2)記載之_過濾 HPLC法予以剷定^其結果，由煎茶生成0.19mM、由烘焐 茶生成0 . 2 8 m Μ、由烏龍茶生成。0 . 3 4 π Η、由紅茶生成 〇.12aM之環戊烯嗣，此些原料為在其製造過程中接受乾 式加熱處理，故環戊烯酮為有效率的生成。 實施例10 令果膠（和光純藥工業股份有限公司製code 167-0Q542) 、藻酸（非泡脹性：和光純藥工業股份有限公司製code 011-13341)、D-α -半乳糖薛酸（Nacaraitex公司製 code 165-18),及 0-¾ 糖醛酸（Nacsraitex公司製 code 169-2 8 )分別以1 %溶解於蒸蹓水中，並調製各溶液。再者，亦 調製果_溶解於醋酸水溶掖中之溶液。 果謬之1%水溶液的PH為3.4。果謬之1%醋酸溶液之 PH為PH2.6。半乳糖醛酸水溶液之加熱前的pH為pH2.5。 蒱糖醛酸水溶液之加熱前的pH為ρΗ2.40藻酸水溶液之 加熱前的pH為ρΗ3 . 3。 其次，令此些1 %溶解液於1 2 1 °C下進行2、4、 1 Μ、時 之加熱處理，並將各加熱處理物以NaOB調整至ΡΗ7之後 ，進行0.22//m之濾紙滅菌，調製成環戊烯酮生成量 測定試料。 將環戊烯_點在矽膠H60 Fw(Melc公司製）上之後 ，以展開溶劑（醋酸丁酯：醋酸：蒸皤水=3: 1: 1之上 層）予以展開，並將展開終了之薄層矽醪乾燥後，以 -47^ ---------装------、1T------'" (諳先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210X297公釐） 45 898 3 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 五、發明説明（仙） Agfi03 -NH3游液（0.1M AgNO 3和5N Nfl3之等量混合物） 噴霧、加熱，則其以R f值約〇 . 3附近之點潰被檢_出。 調製上述環戊烯酮生成量潮定試料之2倍、5倍、10 倍、2 fl倍、5 0倍、1 0 0倍稀釋液，且此稀釋液之T L C為依 上述方法進行。尚，以果膠之1 %水溶液的2小時加熱 處理物之2倍稀釋物的環戊烯酮生成量視為1單位，測 定各加熱處理物之環戊烯酮生成最。其結果示於表2。 可確認於各試料中随著加熱時間之增加，乃伴隨著環 戊烯酮生成蛋之增加，確認於半乳糖醛酸水溶液之加熱 處理物30分鐘後生成1單位、1小時後生成5單位之環 戊烯醣、於葡糖醛酸水溶液之加熱處理物3分鐘後生成 5單位、1小時後生成1 0單位之環戊烯_。 (請先閲讀背面之注意事項再确寫本頁) 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 45 896 2 A7 B7 五、發明説明（47 ) 經濟部中央標準局負工消費合作社印製 表2 加熱試料 加熱時間 加熱前pH 加熱後pH 諝整後PH 環戊烯酮 生成單位 果膠1% 2小時 3.4 3.3 7.0 1 水溶液 4小時 3.4 3.2 7.2 5 16小時 3.4 3.5 7.0 10 果膠1 % 2小時 2.6 2.7 7.0 1 醋酸溶液 4小時 2.6 2.6 7.2 2 16小時 2.6 2.8 7.1 10 半乳糖醛 2小時 2.5 2.4 8.9 10 酸1%水 4小時 2.5 2.4 fi.8 25 溶液 16小時 2.5 2 . 6 6.9 50 葡糖醛酸 2小時 2.4 2.7 6.9 25 1%水溶 4小時 2.4 2.6 7.0 50 液 16小時 2.4 2.8 7.0 50 藻酸1% 2小時 3.3 2.5 6.9 5 水溶液 4小時 3.3 2.7 7.0 5 16小時 3.3 2.9 7.3 10 ----------t------IT------.,1 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格公釐） 458982 A7 B7五、發明説明（4 ) 實_例1 1 (1)令市售之葡糖醛酸内酯（Melc公司製code No.100282) 以1 %溶解於水中，並於1 2 1 °C下加熱0 . 5小時，1小時、 2小時、4小時、或1 6小時。令本加熱處理液依實施例 5-U)記載之方法予以三甲基甲矽烷基化，且以氣相廇 析分析生成之環戊烯酮量。 測定結果不"於表3。 表3 加熱時間 (小時） 環戊烯酮量 (M g/l〇〇 1) 變換率 (%、莫耳換算） 0,5 9.28 1.43 1 2 1.0 3.26 2 52.8 8.15 4 119 18.3 16 13 2 2 0.4 I--------装------、玎------^ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 其結果，蕕糖醛酸内酯之經由加熱處理成為環戊烯酮 之變換率，為在加熱16小時處理中，以奠耳換算為約 2 0 % 0 又，依據上述實施例3-(1)記載之方法，由上述蒱糖 醛酸内酯之16小時加熱處理後，精製，單離出環戊烯酮。 (2)令上述之葡糖醛酸内酯以1%、2%、5%、 10%、 -50- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） A7 458982 B7 五、發明説明（β ) 或2 0 %溶解於水中，並於1 2 1 °C加熱4小時。本加熱處 理液依實施例5-(1)記載之方法予以三甲基甲矽烷基化 ，並以氣相層析分析生成之環戊烯酮量。 測定結果ττί於表4。 表4 葡糖醛酸内酯 濃度（％ ) 環戊烯酮童 (m g/lQG μ 1 ) 變換率 (%、莫耳換算） 0.1 15.1 2 3.2 1 9 9.2 15.3 3 2 2 9 11.8 5 3 6 5 11.3 10 4 5 5 7.03 2 0 5 9 2 4.58 其結果，葡糖醛酸内酯之經由加熱處理成為環戊烯酮 之變換率，為使用0.1%葡耱醛酸水溶液時，以莫耳換 算為約23 %。 (3)令上述葡糖醛酸内酯之1%水溶液的pH,以RCI或 N a 0 Η調整至P 81、2、3或4 . 5 ,並於1 2 1 °C下加熱4小時 。本加熱處理液依實施例5-(1)記載之方法予以三甲基 甲矽烷基化，並以氣相層析分析生成之環成烯_量^ 測定結果示於表5。 -5 1 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ---------^------π------.4 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印裳 45 898 2 A7 B7五、發明説明（押） 表5 pH 環戊烯酮量 (m §/ 1 〇 ο /ί 1 ) 變換率 (%、契耳換算） 1 7.85 1.21 2 15.9 2.46 3 1 08 16*7 4,5 12 5 19.3 其結果，葡糖醛酸内酯之經由加熱處理成為環戊烯_ 之變換率，在PH4. 5之情形，以莫耳換算為約19%。 (4)令半乳糖醛酸水溶液之pH,以HC1或NaO Η諝整至 1、2、3、4、5、6、或7 ,並於1 2 PC下加熱4小時。本 加熱處理液依實施例5M1)記載之方法予以三甲基甲矽 烷基化，並以氣相層析測定生成之環戊烯_量β 測定結果听於表6。 ---------^------、1τ------^ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 -52- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） 'd8 2 A7 B7 五、發明説明（〇 ) 表6 PH 環戊烯酮量 (m g / 1 0 0 yU 1 ) 變換率 (%、Μ耳換算） 1 16.6 2.83 2 6 6.6 11.3 3 4 2.7 7.27 4 7.36 K 2 5 5 5.47 0.931 6 5.45 0.927 7 0 0 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) .裝_ 訂 經濟部中央標牟局員工消費合作社印製 其結果，半乳糖柽酸之經由加熱處理成為環戊烯酮之 變換率，在PH2之情形，以莫耳換算為約11%。 (5)令藻酸（非泡脹性）之1%水懸浮液的pH,以HC1或 NaOH調整至1、2、3或4。又，製作令藻酸（非泡脹性）以 1%濃度溶解於0.1M醋酸缓衝液且調整至pH5者、及溶解 於0.1M磷酸緩衝液且調整至PH6或7者。令其在121°C下 加熱4小時。本加熱液中所含之環戊烯_量，經由以下 所示條件之膠過濾Η P L C法予以測定。 柱：TSK gel α-250〇Π.8Χ800οιιη:東梭公司製） 柱溫：40°C 移動相：0.01%三氟醋酸水溶液 -53- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210X297公釐） 斗己898 2 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（ 流速：1 m 1 /分 檢測：於2 1 5 n m之吸光度 以實施例3-(1)所調製之精製的環戊烯酮作為標準物 質，並藉由測定10.0分鐘附近所溶出之環戊烯酮的波峰 面積，決定出環戊烯_之濃度。 其結果示於表7 ^ 表7 ΡΗ 加熱處理 後PH 環戊烯_ 濃度UM) 變換率 (%、其耳換算） 1 1*07 0 0 2 1.98 0.536 0.611 3 2.76 2.00 2.28 4 4.01 1-05 1.20 5 5.02 0.167 0.190 6 5.95 0 0 7 6,90 0 0 其結果，藻酸（非泡脹性）之經由加熱處理成為環戊烯 _之變換率，在？113之情形，為約2.3%。 實施例12 令 Pomocin Pectin LM-13 CG型（Hercules公司製）、 Algnic Acid HFD(大日本製藥公司製）、D-Μ糖醛酸 -54- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） I--------t------ΐτ------泉. (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 4 5 898 2 A7 B7五、發明説明（4 ) Uacaraitex公司製}及®糖経酸内酯（Mele公司製）以1% 溶解或懸浮於水中，並於3 0 °C、6 G °C、9 5 %、 U 1 eC或 132 °C下加熱16小時此加熱處理物之環戊烯酮依實施例 5 - ( 1 )記載之方法予以三甲基甲矽烷基化，並以氣相層 析濟I定加熱處理物中之環戊烯_生成量^其结果示於表 8〇 表 8 經濟部中央標準局—工消費合作社印製 糖醛酸 化合物 加熱溫度 (°c ) 環戊烯»生成量 { β g / ® 1) 果_ 1 2 1 17 6 13 2 128 藻酸 12 1 4 6 6 13 2 7 5 葡糖醛酸 9 5 3 0 2 12 1 7 1 8 13 2 13 2 葡糖醛酸 9 2 2 7 4 内酯 12 1 78 1 13 2 16 1 -55- (請先閲讀背面之注意事項再敁寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2i〇X 297公釐） d5 898 2 A7 B7五、發明説明（μ ) 實施例1 3 (1) 令硫酸軟骨素A(生化學工業公司製）、軟骨素（納 鹽，生化學工業公司製）、硫酸皮虜素（納鹽、Celbio公 司製）、肝素（鈉鹽、和光純藥公司製）、或透明質酸（生 化學工業公司製）以1 %溶解於水中，並以1 N H C 1調整至 ΡΗ3。令其經由在121 °C下加熱4小時或16小時，調製成 加熱處理液。 (2) 令實施例13-(1)所調製之硫酸軟骨素A、軟骨素、 硫酸皮虜素、或肝素之各加熱處理液ΙΟΟθΙ,與正-二 十八院（Nacaraitex公司製）之正己焼（Hacaraitex公司 製）溶液（lmg/ml)lDO；ul混合，並於減壓下乾燥。於其 中加入100/i 1上述之三甲基甲矽烷基化溶液並使其完全 溶解，以實施例5-(1)記載之方法分析加熱處理物中之 環戊烯麵量。 其結果示於表3。 ---------¢------,π------，展 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210 X 297公釐） 458982 A7 B7五、發明説明（α) 表9 100# 1中之環戊姑酮量（// g) 4小時加熱 處理液 1 6小時加熱 處理液 硫酸軟骨素A 9.26 15.71 軟骨素 7.47 9.11 硫酸皮虜素 32*81 4 7.60 肝素 5.09 5.12 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印— (3)令10fl>ul之透明質酸加熱液於減壓下乾燥後，懸 浮於1 Q # 1之甲醇中，並以離心除去不溶物。將離心上 清液1#1點在矽_H60 F说（Melc公司製）上，並以醋酸 丁酯：醋酸：水=3: 2: 2之上層作為展開溶劑，進行 薄層層析ULC)。展開後，以若黑酚-硫酸法令其呈色， 並與環戊烯酮檫準物質之點漬比較。其結果，於透明質 酸4小時加熱物中察見環戊烯圓之生成，且在16小時加 熱物中更為增加。 實施例14 令硫酸皮#素1克溶解於IOObI之水中並以IN HC1調 整至PH3,且在12KC下加熱1δ小時，調製成加熱處理液 。其次，依據實施例3-(1)之方法，由加熱處理物進行 -57- 本紙張尺度適用中國國家標準ί CNS ) Α4規格（210 X 297公釐） A7 4 5 898 2 B7 五、發明説明（η ) 環戊烯酮之精製，取得30ag之精製璟戊烯酗。 實施例15 . ....... I ' n ^ (請先鬩讀背面之注意事項再填寫本頁) (1)令實施例3-(1)記載之精製、單離的環戊烯_，以 25bM溶解於水，IGbM Tris-HCl(pH7)、或 10mM Tris(pHlO) 中，並於室溫或4°C下放置後，依實施例13-(3)記載之TLC 法予以分析。其結果，在溶解於水或10mM Tris-HCl(pH7} 之情形，室溫放置、4 °C放置均於經過1傾月後雖看見 若干的分解物，但其大部分為未分解。溶解於Tris -HCl(pHlO)之情形則在室溫下迅速分解，且在溶解後立 即依TLC法分析時，則未察見環戊烯_之點漬。 令溶解於水之環戊烯酮，於121 °C下加熱3 0分鐘，並依 TLC法分析時，雖察見若干之分解物，但大部分的環戊 烯酮為未溶解。 (2 )令1 % D -葡糖醛酸水溶液於1 2 1 "C下加熱4小時， 調製出未調整PH之試料及以NaOH調整至PH6.6之試料β 各別分注11 1，於-2 0°C、4 °C、3 7 °C下保存後，依實施 例5-(1)記載之方法令環戊烯酮予以三甲基甲矽烷基化 ，並以氣相層析測定試料中之環戊烯酮量。 經濟部中央標準局負工消費合作社印> 其結果，於25天保存後，在37 Ό下保存之情形中，其 環戊烯酮量為稍微減少，但在4°C、-20°C下則大約安定 。其結果示於第8匾。卽，第8園為示出保存時間與環 戊烯_之關傈圖，横軸為表示保存時間（曰 >、縱軸為表 示璟戊烯_濃度Ug/al)。第8圖中，白四角印（口）為 表示在未調整PH下-20°C保存、黑四角印（_)為表示6.66 -58- ^用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 ABB9B2_^_五、發明説明（β ) 下-2ITC保存、白圓印（Ο)為表示在未調整pH下4°C、黑 圓印（參）為表示在PH6.66下4 °C保存、白三角印（A)為 表示在未調整PH下37 °C保存、黑三角印（▲>為表示在pH 6 . 6 6下3 7 °C保存。 實施例1 6 (1)令實施例3-(1)記載之精製、單離的環戊烯_ 113.9ng溶於乙醇2.85111中。於此乙醇溶液中再加入己 烷/乙醇（94/ 6)3.8501,調製成17*g/al之環戊烯酮溶 液。此液以0.5# a之濾紙遇濾，作成光學分割HPLC試料 溶液。 此試料溶液依以上之條件進行光學分割HP LC ,並分別 收集前波峰之環戊烯詷及後波峰之環戊烯_的皤分，減 壓乾燥，分別取得前波峰之環戊烯_43.2mg、後波峰之 環戊烯釅43 . 〇Bge 光學分割H P L C條件 柱：Chiral Pack AS (Daicel 化學工業）2.Qcax25.flcffl 柱溫：4 Ο °C 移動相：己烷/乙醇（94/6) 流速：14 . 〇Bl/分 檢測:UV 2 1 0 nm 試料注入量：150// l(2.55mg) -59- ---------裝------.1T------β (請先閎讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210 X 297公釐） 經濟部中央樣準局員工消費合作社印製 398 2 A7 B7五、發明説明（W ) 由於所得之前波峰之環戊烯銅及後波峰之環戊烯酮兩 者均含有約1%之對映體，故再度依上述條件進行光學 分割。其結果，分別由前波峰之環戊烯酮30 . Qmg取得 19.7ag不含有對映體之環戊烯_,由後波峰之環戊烯酮 37.4Bg取得27.7mg不含有對映體之環戊烯酮。所得之前 波峰之環戊烯酮及後波峰之環戊烯酮之旋光度分為 〔or〕d?o-105。（三 0.30,乙醇）及〔α〕p2O+104。（殳 0.53 ，乙醇），前波峰物質為（-)-反式-4,5-二羥基-2-環戊烯 -1-酮〔以下稱為（-)體環戊烯_]、後波峰物質為（+ )-度式-4,5-二羥基-2-環戊烯-1-_〔以下稱為（+ )體環戊 烯酮〕。尚，旋光度為使用前述之DIP-370型旋光計（日 本分光公分製）進行測定。 (-)體環戊烯_及（+ )體環戊烯銅之光學分割HPLC的溶 出曲線示於第9圖、第1G圖。即，第3圖為（-)體環戊烯 酮之溶出曲線，第9圖中、縱軸為表示吸光度、横軸為 表示溶出時間（分又，第10圖為（+ )體環戊烯酮之溶 出曲線，第10圖中，縱軸為表示吸光度、橫_為表示溶 出時間（分）。 其次，依實施例3-(2)記載之方法進行（-)體環戊烯ϋ 及（+ )體環戊烯酮之各質量分析、核磁共振法（NMR)之 構造解析、UV吸收光譜之測定、紅外線吸收光譜之測定 。其結果，兩光學活性體為示出與光學分割前之環戊烯 嗣相同之結果。 第11圖為示出（-)體環戊烯酮之1 Η-NMR光譜，第11圖 -60- ---------装------ΪΤ------^ (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準{ CNS ) Α4規格（21〇Χ 297公釐） 45 898 2 A7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 B7五、發明説明（巧） ，其縱軸為表示訊號之強度、横軸為表示化學移動值 (P P ffl ) 〇 (2)依據前述Carbohydrate Research記載之方法，合 成反式-環戊烯齲。又，依據前述Helvetica ChiBica Acta記載之方法合成嚼式-環戊烯酮。又，依據光學分 割法調製各種光學活性體。 對於所調製之（ + )-反式-環戊烯®、（-)-反式-環戊烯 顏I、 （ + )-順式-環戊烯_、（-卜頤式-環戊烯依各實 施例記載之方法拥定細胞增殖抑制活性、細胞自滅誘發 活性、癌細胞分化誘導活性、抗菌活性時，（ + )-反式-環戊烯酮、（-)-反式-環戊烯酮、（ + )-順式-環戊烯酮、 (-) -頃式-璟戊烯分別顯示出細胞增殖抑制活性、細 胞自滅誘發活性、癌細胞分化誘導活性、抗_活性。 實施例1 7 令實施例16所得之（-}體環戊烯嗣和（+ )體環戊烯酮之 各Ug/Bl乙醇溶液，以75%乙酵水溶液稀釋成2倍、4 倍、8倍、16倍、32倍、64倍、128倍、256倍、512倍、 1024倍及2048倍，並於9 6孔穴撤標度平板之各孔穴中各 加入且風乾。於各孔穴中加入含有5000健人類前骨 讁性白血病細胞HL-60(ATCC CCL-240)細胞之含10%牛 眙兒血清之RPMI 1 6 4 0培養基IQOaI,並在5%(：02氣醱 存在下37°C下培養48小時。以光學顯微鏡觀察細胞之形 態後，加入5ng/al之溴化3-(4,5 -二甲基瑢脞-2-基）-2, 5 -二苯基四唑錨（HTT; Sigaa公司製）磷酸緩衡食鹽水溶 -6 1 - (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2]0X29?公釐） 458982 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 1五、發明説明（k ) 液並再繼绩培養4小時後，以顯撤鏡觀察細胞之 生長狀態。又，加人含有〇 . 0 4 H H C 1之2 -丙醇1 G 0 # 1並 良好的攪拌，測定於590η»中之吸光度並將其視為細胞 增殖度。 其結果，於環戊烯_之光學活性體之各128倍稀釋液 添加區域（终濃度0.39# g/Bl)亦察見細胞增殖抑制活性 ,且察見細胞自滅誘發作用。 資施例18 (1)於含有1x1〇5/b1 HL-60細胞之含1Q%牛眙兒血 清之 RPMI 1640 培養基中，添加 10、1、0.1 或 0.01//g/sil 之琛戊烯酮，並在5% C02氣體存在下37 °C下培養3天 及6天後，計數活細胞數。其結果，於培養第6天中， 與未添加環戊烯酮之對照相比較，於lQ^g/ml添加區域 中未察見活細胞，於l#g/nl添加匾域察見約30%、於 O.l/ig/κΙ添加區域察見約55%、於0,01；u 1/nl添加區 域察見約40%之細胞增殖抑制。 其結果示於第13_β即，第13豳為示出在HL-60細胞 之培養液中添加各種濃度之環戊烯酮時之培養時間和培 養液中活細胞數之關係_,横軸為表示培養時間（日）、 縱軸為表示培養液中之活細胞數（xl〇4/al)。圖中， 白四角印（□)為表示未添加試料（對照）、白赛形印（◊> 為表示添加lGju g/il、白圓印（〇）為表示添加1/u g/ml 、白三角印（△)為表示添加O.lAg/nl、黑四角印（) 為表示添加D.01/W 1/*1之環戊烯酗。 -62- (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2丨0 X 297公釐） 經濟部中央標準局員工消費合作社印袋 Α7 Β7 '五、發明説明（Η ) (2>於HL-60細胞中添加10_4 # g/Bl之環戊烯酮逋同實 施例15-U)培養3天。取出一部分細胞並塗抹至玻Η上 ，進行「組鏃培養之技術」（日本組饑培養學會编、朝 倉書店、1 3 8 2年）第191頁記載之吉薩姆染色，並以光 學顯檝鏡觀察。其結果，於未添加環戊烯酮之對照中， 分化之細胞為10%左右，而在環戊烯酮之添加區域中， 則50%以上之細胞分化成單核細胞或類巨噬細胞之細胞。 (3)於HL-60細胞中添加Q.5# g / a 1或〇·〇〇5 # g / β 1之環戊 烯酮並同實施例18-(1)培養3天或6天。取出一部分細 胞並塗抹至玻Η後，進行吉薩姆染色，並以光學顳微鏡 觀察β其結果，於未添加琛戊烯酮之對照中，以分化形 態變化之細胞為約10%,而在環戊烯酮〇.〇〇5#g/Bl添 加區域中，則25%以上之細胞為分化變成成熟骨鰱細胞 »其結果示於第14圖。卽，第14蘑為示出培養時間、與 培養細胞中成熟骨餸細胞所佔比率之關像圖，横軸為表 示培養時間（日）、躱軸為表示培養細胞中成熟骨鉍細胞 所佔之比率（％)。第14_中，白四角印為表示未添加試 料（對照）、白圓印（〇）為表示添加〇.5；ug/al環戊烯酮 、白三角印（△)為表示添加0.005# g/nl環戊烯酮。 實施例1 9 (1)以下列菌株測定實施例3-(1)記載之精製、單離的 環戊烯酮之抗a作用。測定中所使用之_株為受檢菌π) :腸炎沙門氏Sf (Salmonella enteritidis)(食物中毒 事例株）、受檢菌（2):鼠傷寒沙門氏舗（Salmonella -6 3 - I--------^------1T------I (請先聞讀背面之注意事項再铁寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 4 5 8 9 8 2 A7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 B7五、發明説明（) typhimuriuB)(食物中毒事例株）、受檢菌（3):金黃葡 萄球® (Staphylococcus aureus)FRI 722(A 型腸毒素 生産株）、受檢_(4):金黃葡萄球g (新青霉素耐受株） 、受檢菌（5):蟠樣芽胞桿菌（Bacillus cereus)(喔吐 型食物中毒事例株）及受檢菌（6):蟠樣芽胞桿菌（下痢 型食物中毒事例株）。此些睹株均為女子營養大學-衛生 學教室保存菌株。 抗菌作用之測定，為以對各受檢菌之增妞抑制效果作 為指標而進行β即，於含有一定濃度之環戊烯醣菌體培 養基中，添加一定量之各受檢菌調製成試驗菌液，並進 行比較1 6小時、4 8小時培養後之生菌數。 首先，在威受性測定肉汁（日水裂）中，加入一定濃度 之環戊烯酮，進行2連缠稀釋。其後令在威受性潮定肉 汁中進行3 7 °C 1 6小時前培養之菌液，以1 0 s / Β 1接種， 並於37 °C下進行培養。各菌株之各培養時間之生_數的 測定為令培養液適當稀釋，並依表面塗抹培養法予以進 行。尚，於潮定各菌株之菌數時，沙門氏菌為使用DHL (榮研製），金黃葡萄球菌使用Baird Parker agar(BBL 製）、_樣¥胞桿菌為使用NGKG agar(日水製）。尚，僅 蠘樣芽胞桿鐘為在3 2 °C下進行培養。各培養時間所測定 之菌數，為以CFU(菌落形成單位，colony forming units) /ml常用對數值表示。下述表10中示出培養16小時後之 受檢菌數，表11中示出培養48小時後之受檢菌數。環戊 烯_對於任何受檢菌均顯示出抗菌作用。尚，以下於表 10〜13中，表中之一記號為意指未察見受檢_之生長。 (請先間讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（-26〇kl97公釐） λ8 93 5 Δ

7 B 五、發明説明（w) 表10 受 檢 培 養 液 中 1 6小時 培 養後之受 檢 菌 數 (C F ϋ / m 1) 添 加 之 試 料 濃 度 受檢菌 ( ΡΡ 91 ) (1) (2 ) (3) (4 ) { 5) (6) 1 5 6 3 - - — - " - 78 1 - - - — - 3 9 1 - 6.1 - - - 195 3.0 3 . 0 > 4」 4 . 3 — - 98 5.2 5 . 0 4 . 7 5 . 5 5 ,8 3.0 4 9 7.0 6 . 7 6 . 9 6 , 1 6 .9 6,8 0 8 . 8 8 . 3 8.7 8 · 4 8 .4 7,8 表11 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝- -1Τ 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 受檢菌培養液中 4 8小時培養後之受檢菌數（C F U / 1) 添加之試料濃度 受檢菌 (PPffi) (1) (2) (3) (4) (5)⑴ 1563 ------ 78 1 ------ 3 9 1 19 5 ------ 98 - - - - 8.1 5.0 4 9 9*0 8.5 8.5 - 8.4 7.9 -65- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐） 45898^ A7 B7 ' 五、發明説明（k ) (2)測定上述璟戊烯酮對大賜桿菌及賭道出血性大靨 桿菌之抗菌作用。受檢菌為如下述： 受檢菌（7):大腸桿菌（Escherichia col i) (S-0157:H7 、VTi、2生産株）、受檢菌（8):大賭桿«(Y.3-G157: H7、V ΤΙ、2生産株）、受檢菌（9):大腸桿菌（Y」- 0157: H7、VT1生産株）、受檢菌（10):大腸桿菌（S-026: ΗΝΜ、 VT1生産株）、受檢菌（11):大腸桿薗（S-0111; HNM、 VT1、2生産株）及受檢_(12):大腸桿菌（食品分離株）β 所使用之菌株均為女子營養大學•衛生學教室保存菌 本紙張尺廋適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） ---------1本------1T------>1 (請先閱讀背面之注意事項再埴寫本頁) 之肉，數以 、出 度定種菌予12示 。濃測接生法Jig表顯 1 劁 行定性 a 之養 述均 進 一受 \間培)0下菌 地加威 e 時抹製。檢 樣添在10養塗研示受 同中令以培面榮表何 後 -各表1(值任 T㈣其液之依DH數於 19。菌株並用對對 例(B釋之菌，使以酮 施汁稀養，釋為，烯 實肉攮培尚稀數述戊 與定連前。當 _ 上環 為測„2 時養適之同 。 定性行小培液株為果 測受進16行養菌數結 之戲並 P 進培定菌其 用於 -37下令潮之出 ο 作 ，_行°0為於間示用 。菌先烯進37定。時中作 株抗首戊中於測行養13菌 ® 環汁並的進培表抗 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 4 5 898 2 A7 B7 五、發明説明（bJ ) 表12 受檢菌培養液中 添加之試料濃度 (PPB) i Μ、時培養後之受檢菌數（c F U / U ) 受檢菌 { 7 ) (8) (9) (10) (11) (12) 15 6 3 - - - - - 3,0^ 7 8 1 - - 3 . 0 > - - 6 . 4 3 9 1 3.6 3.3 3. 0 > - 3 . 6 5.8 195 4 . 7 4 . 7 3 . 0 > - 6 . 2 6 . 6 98 7.0 7 .0 7.1 6 . 1 7 . 4 8 .3 4 9 δ.3 6.9 7.1 7.1 8.0 8.2 0 8.5 8.0 8,6 8*5 8.5 8.5 表13 (請先閡讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標隼局員x消費合作社印製 受檢菌培養液中 4 8小時培養後之受檢g數（C F U / m 1 ) 添加之試料濃度 受檢_ (ΡΡη) (7) (8) (9) (10) (11) (12) 15 6 3 ------ 7 8 1 ------ 3 9 1 - - ^ ^ - 19 5 - - - - 4.1 - 98 8 . 9 5.3 8.6 7 .4 8 . 5 5.0 4 9 8.5 9.3 8.5 9.8 8.510.1 -67- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） A7 4 5 898 2 B7 五、發明説明（队） (3)受檢菌為使用受檢菌（13):大腸桿菌HB1Q1UTCC 33694)、受檢菌（14):鼠傷寒沙門氏菌LT-2UTCC 27106 )、受檢菌（15):銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa) 3G80)、受檢菌（16):金黃蕕萄球 _3A(NCTC8319)、 受檢菌（17):祜草桿菌（Bacillus Subtilis}(IFO 3034) 、受檢菌（18):突變鍵球菌(Streptococcusdutans) GS5 (國立預防衛生研究所保存株）、測定上逑環戊烯_之抗 菌活性。 受檢«以L -肉汁（1%胰蛋白練、0.5酵母萃取物、5% NaCl PH7.0)進行種培養一晚。於L -肉汁中添加25 〜200// g/ml環戊烯酮之培養基、及未添加任何物質之 培養基中，植入5/il之種培養液，於37 °C下振遢培養並 測定生長。於培養開始時和8小時後，使用富士數字濁 度計（販售商富士工業股份有限公司、製造商秋山電 機作所），在調製度數為82.3之條件下，測定培養物之 混濁度，且由8小時後之混濁度值減去培養開始時之混 濁度值所得之數值（生長混濁度）測定受檢菌之生長。尚 ，對於受檢菌（18)為使用腦心臓谚出液（Brain Heart Infusion)培養基代替L-肉汁。 結果示於表14。尚，表14中之一為表示未檢討。 -6 8 _ 本紙張尺度適用中國國家榇準{ CNS ) A4規格（210X297公釐） ----------装------，玎------·" (請先鬩讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標隼局員工消費合作社印製 4 898 2 A7 B7 五、發明説明（W ) 表14 受檢菌 生長混 濁度 環戊烯 0 酮添加量 2 5 (# g / Π 5 0 1培養基） 1 0 0 2 0 0 (13) 2 2 2 0 0 0 0 (14) 2 7 3 - * 0 0 (15) 2 3 9 2 0 0 0 (16) 2 4 3 2 0 3 158 0 0 (17) 2 6 7 14 5 9 0 0 (18) 1 4 0 13 3 13 0 3 4 6 經濟部中央標準局員工消費合作杜印製 對於上述各受檢菌、環戊烯_為顯示出抗菌活性。 (4)環戊烯_對火落_之抗菌活性為依以下之方法進 行。將受檢閡於含有10%乙醇之SI培養基（日本釀造協 會）中，靜置培養5天，取得種菌β於含有10 %乙醇之 SI培養基中，令環戊烯_以最終濃度為〇、25. 50、75 、lOOAg/ml添加之培養基100ml中，將受檢菌之菌種以 0.1%植薗，並靜置培養5天，測定混濁度β混濁度的 測定為使用吸光度計，測定OD600值。由此值，減去未 植入受檢菌培養基之0D 6 0 0值所得之數值（生長混濁度） 測定受檢菌之生長。 -6 9 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） I---------t------IT------..A (請先鬩讀背面之注意事項再填寫本頁) 4 898 2 A7 B7 五、發明説明（以） 受檢Μ為使用真性火落菌Lactobacillus fructivorans IF013118(受檢菌 A)、 Lactobacillus fructivorans JCM1198(受檢菌 B)、 Lactobacillus homohiochii IFO 13120(受檢薗 C)、火落性乳酸薗 Lactobacillus rhaainosus ΐ F 0 3 5 3 2 (受檢菌D ) <>其結杲示於表1 5 e 表15 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 下完全使生長受阻，故環戊烯_對火落_亦顯示出抗Μ 作用。 尚，環戊稀酮對陳酒酵母（SaccharoByces cerevisiae) ATCC 9763、白色念球菌（Candida albicaiOTIMM 0138、 煙曲霉（Aspergillus fueiigatus)TIMM 1776等真 g 亦在 高濃度下顯示出抗菌活性。 -7 0 -

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 經濟部中央栳隼局員工消費合作社印製 4 5 898 2 A7 _B7___五、發明説明（的） 實施例20 (1) 於含有 800、 400、 200、 100、 50、 25、 12.5、 6 . 2 5、3 . 1 3 或 1 . 5 6 # g / m 1 環戊烯酮之 T r y p t 〇 S 〇 y a Bouillon培養基（日水公司製）中，令副溶血性弧菌 (Vibrio parahaeaolyticusMSST-fil或副溶血性弧菌 T4144-l(均為國立衛生試驗所保存株）以106細胞/ Bl 接種，並於37 °C下靜置培養24小時。其結果，對於任何 菌株均於12.5# g/Bl以上之環戊烯酮添加區域中，未察 見菌之生長。 將未見菌生長之區域的培養液於20»1不含環 戊烯酮之Trypto Soya Bouillon洋菜培養基上塗布，並 於37°C下培養24小時。其结果，任何®株均在添加50 #g/nl以上環戊烯酮區域所塗佈之洋菜培養基上，未察 見®之生長。 由上述，環戊烯酮為在12.5# g/nl下，對副溶血性弧 菌4387-6〗及副溶血性弧菌T4144-1顯示出抗菌作用，於 50# g/Bl下則對兩菌株顯示出殺菌作用。 (2) 將 Caapylobacter jejuni A33fl9(國立衛生試驗所 保存株）接種至含有2%眙牛血清（大日本製藥公司製）之 腦心臓滲出液（Difco公司製）培養基中，並於37°C下振 盪前培養16小時。令此培養液5<]#1塗布至含有800、400 、2 0 0、100、50、25、12.5、6.25、3.13、或i .56# g/B1 環戊烯酮之含有0.5% NaCl之Muller-Hinton平板培 養基（BBL公司製），並於37°C下靜置培養48小時。 -7 1 - ---------1------1T------.VI (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CMS ) A4規格（2[0'X297公釐） 45 898 2 A7 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 B7五、發明説明（K ) 其結果，於添加12.5# g/Bl以上環戊烯_之平板培養 基上，未察見菌之生長。 以上顯示環戊烯_為對Canpylobacter具抗菌作用。 (2)環戊烯酮對受檢菌①Legionella pneunophila(人 類器官支洗淨液分離菌）、受檢菌②Legionella pneumophila(溫泉浴槽水分離菌 >(均為女子營養大學-衛生學教室保存麵株）之抗菌作用之潮定，為以對各受 檢菌之增殖抑制效果為指標而進行。即，在含有一定濃 度環戊烯酮之液體培養基中，調製添加一定量各受檢菌 之試驗菌液，並於1 6小時、4 8小時、7 2小時、9 6小時培 養後，進行生菌數之檢討。 首先，於BCYE α 肉汁（Oxoid公司製）中，加入一定 濃度之環戊烯並進行2"連績稀釋。其後令在BCYE α肉汁中進行3 7 °C 1 6小時前培養之睹液，以1 0 e / B 1接 種，並於37 °C下進行培養。各菌株之各培養時間之生閨 數的測定，為令培養液適當稀釋，並依對BCYE «洋菜 (Oxoid公司製）之表面塗抹培養法進行。 於各培養時間所測定之菌數，為以CFU(c〇lony forming units)/Bl常用對數值表示》下述表16中示出其結果β 環戊烯酮對於任何受檢菌均顯示出抗菌作用。尚，表中 之一記號為意指未察見受檢菌之生長。 ---------t------ΐτ------& (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -72- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（2! 0 X 297公釐） R 898 2 A7 B7 五、發明説明（Ν ) 表1 6 受檢菌培養液中 添加之試料濃度 (ppm) 各培養後之受檢菌數（CFU/mi) 1 6小時受檢g ① ② 9 6小時受檢菌 ① ② 24 - - - 12 5.7 6.1 8 . 3 8.6 0 6.9 7.4 8.7 8.6 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印繁 (4)Helicobacter pylori® 株為使用標準株 NCTCU637 (ATCC 43504)並且來自人類胃之臨床分離株206及3401 (均為兵庫醫大-細菌學教室保存菌。將各菌株使用加入 7% 馬血清（Bio Whittaker公司製）之 Brucella Broth培 養基（BBL公司裂），使用Anero packing Pillow(三菱瓦 斯化學製），於徹好氣條件下，37 °C下振盪培養。令對 數增殖期之菌以Brucella Broth培養基稀釋者供於試驗 β於實驗中為使用24孔穴平板（Falcon公司製環戊烯 酮為以G · 1 m〗（1 0 0 0 # g ) /孔穴分注，並以P B S進行二階段 稀釋後，加入每孔穴〇.9ml培養基〔加人7%馬血清之 Brucella Agar培養基（pH6.0)(BBL公司製）〕使其凝固 。Brucella Agar培養基，為使用預先以鹽酸調整至pH 6.β者。令各菌以約104個/ 50# 1/孔穴接種。於菌之 -7 3 - 本紙張尺度適用中國國家標隼（CNS ) Α4規格（210X297公釐） 經濟部中央標率局員工消費合作社印製 8 2： A7 B7五、發明説明（β ) 接種後，在微好氣條件下37 °C下培養3-4天，並判定抗 菌活性、以抑制90%以上增殖之樣品量（A g/ml)視為HIC ^其結果，對於試驗之任何菌株之MIC均為32// g/Bl， 顯示環戊烯酮對HelicobacterM株具抗®作用。 實施例2 1 環戊烯嗣對固形癌之制癌作用 令實施例3-1(1)記載之環戊烯_，以生理食鹽水稀釋 至指定之濃度，並進行以下之試驗β (1)將Meth Α細胞（2父10&細胞/鼠）皮下注射至8週齡 BALB/C母鼠（體重約20克）之腹部。其後，續在相同處 連鑛皮下注射5天環戊烯ffi(5i«gMg /日）。S —方面， 於對照群中刖同樣地皮下注射生理食鹽水。於2週後， 摘出鼠腹部所形成之癌組鏃，並測定其重量。結果示於 表17。 即，在對照群之平均癌重量為1.41克，而在環戊烯_ (5mg/kg /日）投予群則確認為以0.0克之完全未有癌組嫌 之形成，抑制率為U 0 %。 n'n - ! I - n - - _ In Hi n I T----I ; .^1 I I ,1y (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -74- 本紙張尺度適用中國國家梯準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） I a ^ B9B 2 at B7五、發明説明（W ) 表17 鼠 (η) 腫瘤重量（g) 抑制率 平均士 SD (% ) 對照 (7 ) 1 , 4 1 ± 0 · 5 5 - 投予環戊烯酮 (8) 0 · 0 0 ± 0 . 0 0 10 0,0 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (2 )使用6週齡之I C R条母鼠（體重約2 6克），將S a r c 〇 ® a-180(5.5X106細胞/鼠）於腹部皮下注射，並設定出對 照群8隻及環戊烯编投予群8隻。 於環戊烯酮投予群中，令環戊烯圈之攝取量為約8 Q m g / kg /日以自來水稀釋，並於給水瓶中令其自由攝取。於 對照群中則同樣給予自來水。飼料於兩群中均為在實驗 期間中，自由攝食β Sarcoaa-180皮下移植後第4D天之生存個數，於對照 群為8例中有2例，於環戊烯_投予群則為 7 例 ，確認經由環戊烯酮之投予乃具有顯著的延命效果。 (3)將鼠白血病P-388(1.1X 106細胞/鼠）腹腔内注 射至7週龄之DBA/ 2母鼠（體重約20克其後，建績 5天腹腔内注射環戊烯酮（l〇»g/fcg/日）。3 —方面，於 對照群則同樣腹腔内注射生理食鹽水。於分別8隻之二 群中，算出鼠之生存數、平均生存日數、延命率〇結果 示於第15圖。即，於對照群中平均生存日數為1Q. 3日， -7 5- n - n - n n - n n I - I _ I T n I I I I I] U3 、-贷 /. (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210><297公釐） A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明 ( 74 ) i 1 I 而 在 環 戊 烯 _ 投 予 群 中平均 生存曰數 則為 3 1 . 4曰， 其 延 命 1 1 I 率 示 出 為 3 0 6 . 1 % , 可確認為有意義的延命 效果。 第1 5 \ 1 I 圖 為 示 出 環 戊 烯 m 之 制癌效 果之画 示， 縱軸為表 示 生 存 請 先 1 1 數 、 横 軸 為 表 示 生 存 曰數〇 第15圖 中之 實線為表 示 環 戊 閏 1 背 i 烯 酮 投 予 群 虛 ΜΛΙ、 為 表示對 照群。 ί; 之 1 5遇齡 | 同 樣 地 » 使 用 16 隻 之I CR条母鼠（體重約 25克 ), 意 事 1 腹 腔 内 注 射 S a Γ C 〇祖 a - 180(5. 5 X 1 0 £ 5細胞/ 鼠）， 並 設 定 項 再 1 填 1 出 對 照 群 8 隻 及 環 戊 烯酮投 予群8 隻β 寫 本 裝 又 9 使 用 1 6 隻 7 週 齡之C D FI母鼠 (體重約 20克） 腹 腔 頁 1 1 内 注 射 I Μ C ( 2 . 0X1 0 € 5細胞/鼠）， 並設 定出對照 群 8 隻 1 1 及 環 戊 烯 围 投 予 群 8 隻0 I 1 再 者 9 使 用 1 6 隻 5 週齡之 DDY母鼠（體 重約25克 )， 腹 1 訂 腔 内 注 射 E A C ( 1 , 2 X 1 〇6細胞/鼠）， 並設 定出對照 群 8 隻 i | 及 環 戊 烯 詷 投 予 群 8 隻。 1 I 其 結 果 ， S a r c 〇坩 a - 180、I MC、EAC之各對 照群的平均 1 | 生 存 曰 數 分 別 為 2 2 .6 日、10 .8曰及 15.8 曰， 而在 環 戊 烯 1 泉 投 予 群 中 則 分 别 為 3 3 · 4 日 .2 0-3 日及 4 0. 3曰〇 各 延 命 ] 率 為 1 4 8%、 1 88 % 及 2 5 5 % , 經由環戊烯酮 均亦察見到 [ 1 顯 箸 的 延 命 效 果 〇 1 I 實 施 例 2 2 1 1 注 射 劑 1 I (1)於生理食鹽液（ 曰本藥 局法收 載品 )中 加入1 % 濃 度 1 I 之 環 戊 烯 m > 製 作 成 注射劑 0 1 1 (2)於生理食鹽水（同前述 )中分别加入〇. 5%及 0 . 1 % 1 I -76- 1 1 1 [ 本紙張尺度適用中國國家標隼（CNS ) A4規格（210X297公釐） Α7 Β7五、發明説明（β ) 濃度之琛戊烯酮及甘草酸，製作成注射劑。 實施例13 錠劑 (1>調製含有環戊烯酮1 G Gmg和適量撤結晶性纖i維素之疑劑 ，並施以糖衣，1製作成錠劑。 (2 )調製含有琿戊烯酮0 . 1 m g、甘草酸二鉀1 i) m g及適量 徹結晶纖維素之錠劑，並施以糖衣，製作成錠劑。 實施例24 軟膏 以下述組成作成軟膏 琛戊烯銅 i克 吸水軟蕾（日本藥局方收載） 99克 首先將環戊烯酮與少量的趿水軟資充分拌和，其次将 剩餘的吸水軟膏慢慢加入並拌和至均勻為止，製作成軟 音〇 此軟膏為1天4〜5回塗布於患部。 實施例25 化粧材料 以下述組成，製作抗菌性化粧材料之化粧水。 ---------^------ΐτ------.米 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 乙 醇 1 0份 甘 油 1份 檸 樣 酸 0 . 3份 對 氧 苯 甲酸甲酯 0 . 2份 環 戊 烯 酮 〇 · 1份 -77- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐） 經濟部中央橾準局員工消費合作社印製 ^ & 8 98 2 A7 B7 五、發明説明（外） 香料 徹量 純水 將全量作成1Q0份之量 實施例26 沐浴用劑 以下述組成，製作抗《性沐浴用劑β 無 水 芒 硝 20份 碩 酸 氫 納 4 0份 琥 珀 酸 10份 環 戊 烯 酮 3 0份 色 素 適量 番 料 適量 劑 型 錠劑 實 施 例2 7 牙 賫 劑 以 下述組成， 調製牙蕾劑》 m 酸 鈣 5 0.0 0 % 甘 油 2 0.0 0 % 角 叉 m 0.5 0 % 羧 甲 基 纖 維素 1.0 0 % 月 桂 二 醇 酷胺 1 . 0 0 % 蔗 糖 早 月 桂酸蜡 2.0 0 % 香 料 1 . 0 0 % 糖 精 0 . 1 0 % 環 戊 烯 酮 0.1 0 % -7 8 _ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） ---------装------、1τ------Λ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 45 898 2 A7 B7五、發明説明（"） 水 剩餘 合計 100.00% 實施例28 以下述組成，調製成錠果。 砂糖 乳耱 蔗糖單月桂酸醣 香料 純水 環戊烯酮 實施例29 以下述方法，製作抗菌性飲料。 (1)將果綴（Ponocin Pectin LH-13CG: Hercules公司 製）5kg添加至自來水100公升中，並由液溫28 °C至液溫 120 °C為止經由吹入水蒸氣使其升溫35分鐘，且其次於 攪拌下12(TC、保溫5小時，且其次冷卻，調製冷卻物 135公升。其次，於冷卻物中添加作為助嫌劑之Celite #545(Celite 公司製）1.35公斤、及3111〇&#600-8(中央 Silica公司製）1·35公斤，其次以預塗層Celite# 5 4 5 0 .1 公斤、及Silica#60 0-S 0.1公斤之緊壓濾紙（6英吋16段 濾紙：A D V A N T E C # 3 2 7 )進行連績瞬間加熱處理（9 8 °C , 6 0 秒）後冷卻，調製成150公升含有環戊烯酮之果膠加熱處 理液。 含有環戊烯酮之果膠加熱處理液的PH為約3.5,酸度 -7 9- 7 4.9% 2 0.0% 0 . 2 % 0.5% 4.3% 0.001% ---------批衣------------I (請先閲讀背面之注項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家橾準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 5 898 2 A7 B7 五、發明説明（1) 為6.2B1、糖度為5.8 Brix%。尚，pH為以pH計測定， 酸度為以令試料lOal中和至ρΙΠ.Ο所需之O.U iUOH量 (al)表示。再者，糖度為以Brix糖度計予以测定。 (2)使用緣茶藥10克，維生素C D.2克及離子交換水 lOOQm〗，並依常法調製綠茶。本發明品1為使用上述之 含有環戊烯酮之果_加熱處理液，並以製品每ί〇〇Βΐ画形 物換算為200®g(含有環戊烯_ 1.6ng>將其添加。以未添 加者作為對照。以20名自願者，進行5階段（5良、1差） 之官能評價，其結果之平均值示於表18。 表18官能評價 本發明品1 對照 味道之幅度 4 . 3 3 . 2 味道之平衡 3,9 3,4 味道之總合 4.3 3 . 3 --- I - n - n - —^1 n _ n [ T I--n . I I -.-艮 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央樣準局員工消費合作社印製 由表18,本發明品1為被評價比對照，於味道之幅度 和擴散增加，與味道之平衡完整，且茶香味顯箸，並且 出現掩藏味道之效果。 實施例30 以下述組成，調製飲料。 果糖葡萄糖液糖 砂糖 - 8 0 _ 5.00% 4.00% 本紙伕尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 4 5 898 2 A7 B7 五、發明説明) 酸味料 1.20% 香料 0.30% 環戊烯麵含有物 0.5% 純水 殘餘 合計 1 G G · 0 0 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 尚，環戊烯_含有物為使用實施例2 9 - U )記載之含有 環戊烯酮之果瞜加熱處理液，並以其固形物換算量添加 。於此飲料IOQbI中含有40mg之環戊烯酮。 實施例3 1 將新鮮的包心菜2QG克切成長方形，並将各100克在水 (對照）、Q. 2 %之環戊烯_水溶液中浸潰5分鐘^其後 ，輕輕除水，並放入合成樹脂製袋中，於室溫（2G°C)下 放置。於2 4小時後之觀察，則在環戊烯圈水溶液中浸潰 者，為比在水（對照 >中浸潰者，且保持新鮮度。 其隨箸日數增加，而差異變得明確，於4日後之觀察 ,則在環戊烯酮水溶液中浸潰者，為比在水（對照）中浸 漬者，無異臭並旦保持新鮮度。 發明之效果 依據本發明，為提供具有制癌作用、癌細胞增殖抑制 作用、癌細胞分化誘導作用、細胞自滅誘發作用、抗_ 作用等生理活性之安全性高的環戊烯酮及其光學活性體 ，且，提供含有該化合物之具有生理活性機能之醫藥品 、食品及飲科。依據本發明，因為環戊烯酬為來自天然 原料，故可簡便地，以良好效率製造，且亦可廉價提供 其光學活性體。 依據本發明所提供之環戊烯酮和/或其光學活性體， 經由其生理活性，而可使用作為具有預防發癌、瘙抑制 _ 8 1 _ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家榡準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） d5 898 2 A7 B7 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 五、發明説明（ ) 1 1 效 果 抗 菌 效 果 之 翳 藥 品 > 該 醫 藥 品 為 可 作 為 維持身 1 I 1 體 恒 定 性 9 特 別 是 保 持 腸 胃 健 康 之 有 用 的 醫 藥 品 〇 又 I 1 提 供 以 環 戊 烯 m 和 / 或 其 光 學 活 性 體 作 為 有 效 成 分 之 防 請 1 1 腐 劑 \ 抗 菌 性 化 粧 材 料 抗 菌 性 牙 膏 劑 抗 性 沐 浴 用 聞 it 1 劑 〇 背 © 意 事 1 ! 依 據 本 發 明 可 令 食 品或飲料中含有適量具有生理活性 1 1 之 環 戊 烯 m 和 / 或 其 光 學 活 性 體 〇 由 此 環 戊 烯 m 及 其 項 再 1 光 學 活 性 體 為 具 有 各 種 生 理 活 性 J 使 本 發 明 之 食 品 或 飲 填 寫 本 1 裝 料 為 具 有 預 防 發 癌 、 制 癌 效 果 抗 舖 效 果 、 細 胞 自 滅 誘 頁 1 1 發 作 用 等 之 生 體 恒 定 性 (内環境穩定、 homeostasis)維 1 I 持 機 能 之 健 康 食 品 或 飲 料 依 據 本 發 明 9 為 提 供 加 入 保 1 1 持 腸 W 健 康 之 有 用 的 機 能 性 物 質 之 食 品 或 飲 料 〇 又 * 藉 1 訂 由 添 加 環 戊 烯 m 9 可 簡 便 地 增 強 食 品 或 飲 料 之 抗 菌 力 * 1 1 含 有 環 戊 烯 m 和 / 或 其 光 學 活 性 體 之 製 _ 亦 極 為 有 用 於 1 1 作 為 食 品 或 飲 料 之 防 腐 劑 〇 1 | 又 依 據 本 發 明 » 為 提 供 令 與 糖 醛 酸 糖 m 酸 衍 生 物 1 、 琛 戊 烯 酮 之 生 成 中 間 體 或 環 戊 烯 酮 具 有 反 應 性 之 胺 類 ..泉 1 X 胺 基 酸 頬 、 胜 呔 類 或 蛋 白 質 之 反 應 性 m 失 至 少 一 部 分 1 I 和 / 或 令 該 反 應 性 物 質 除 去 至 少 —- 部 分 之 含 有 糖 m 酸 和 1 1 1 / 或 糖 酸 衍 生 物 之 糖 化 合 物 含 有 物 且 藉 由 使 用 含 有 1 1 該 糖 経 酸 和 / 或 糖 m 酸 衍 生 物 之 糖 化 合 物 含 有 物 > 可 有 1 1 效 率 製 造 本 發 明 所 使 用 之 環 戊 烯 _ 和 / 或 其 光 學 活 性 體 1 1 0 該 含 有 糖 m 酸 和 / 或 糖 醛 酸 衍 生 物 之 糖 化 合 物 含 有 物 1 ! * 為 含 有 糖 醛 酸 和 / 或 糖 m 酸 衍 生 物 之 糖 化 合 物 含 有 物 1 1 -8 2 - 1 1 1 1 本紙張尺度適用中國國家標率（CNS ) A4规格（2 ί Ο X 297公釐） 45 898 2 A7 B7 五、發明説明（Η 便焙 、體被 η 簡 、質性行物 為菜皮活進理 理青炒學由處 處炒焐光經熱 炒焙 、其前加 培如藻或理式 以例海 \ 處乾 為物炒和熱製 理生焙酮加調 處撤 、烯式率 熱炒類戊乾效 加焙輦環在有 式 '炒之，可 乾物培明尚乃 。動 、發 ο I 物炒物本用理 理焙毅在有處 處、炒，為水 熱物培等極脫 加植 、骨中的 式炒實軟造物 乾焙果炒製理 的，炒焙之處

It -- n - n - I) - - n - I - - - 丁^_ I ----•象 τ^>"α./ (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央榡隼局員工消費合作杜印製 本紙張尺度適用中國國家標準{ CNS ) Λ4規格（210 X 29?公釐） 45 898 2 A7 B7 實施例32 (1)將 5 克果膠（RI 金雞粜膠；h()mocinPtctin LM-13CG : Haculcczt' 公司製）加入1 〇〇公升自來水中’吹入水蒸氣使35分鐘內由液溫 28°C上升至120°C，然後在120°C下揽拌ί小時後再冷卻’調製 成U5公升之冷卻物=然後將該冷卻物作爲過濾助劑’加人1.35 公斤之矽藻土#4 5(〇1以公司製）及1.35公斤之矽#6004(中央 silica公司製），再以0.1公斤之矽藻丨：衫#及0.1公斤之矽#600-S作爲預塗助濾劑而以簡易濾器（6號墨水1 6段濾紙： ADVANTEC#327)進行過濾。所得之濾液以平板打槳機（plate beater;日阪製作）進行連續瞬間加熱處理（98°C，60秒）後冷卻’ 調製成〖50公升之含有環戊烯酮之果膠加熱處理液。 該含有環戊烯酮之果膠加熱處理液的PH値約3.5，酸度爲6.2 蕺升，糖度爲5.8 Brix %。ρΠ値以pH計測定，酸度以將1〇毫 升試料中和至pH7.fl所需之（).1N NaOH量（毫升）來表示。糖度以 白利糖（Brix)糖度計測定》 (2>含酒精之飲料以表19所示調配’依常法調製。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝·---Γ----訂·--------.0. 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 表19配合表 溫州冷凍橘子濃縮果汁(Bdx度45) 110克 細粒糖 80克 檸檬酸 2克 檸檬酸鈉 0.5克 橘子香料 2克 5體積％酒精水溶液 其餘 合計 1000毫升 注：將調配之飲料冷卻至5°c後，以蘇打虹吸使其含有碳酸。 本紙張尺度適用中國國家標準（CMS)A4規格（210 X 297公芨） 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 ^98 2 θ〇. 3. 21 Λ7 Β7 本發明品2以平均100毫升製品固形物換箅，加入300毫克ΪΙ-施例1-Π)之含有環戊烯酮之果膠加熱處理液（含2.4毫克環戊烯 酮），對照以無添加環戊烯酮者。 對所選之個成品進行5階段之功能評估（5代表良，1代表 劣），該結果之平均値在表2〇表示。 表20 本發明品2 對照 味道幅度 4.1 3.2 味道平衡度 4.2 3.0 味道總和 4.2 3.1 由表20所示，本發明品2與對照組比較，其味道幅度、味道 平衡度在有酒稍存在時可良好地調和及提昇，而爲整體形成具有 深度及真實感之味道。 實施例33 爲了作爲具梅粒之梅酒，在有蓋之5公升瓶器中混合75重量 %之果糖葡萄糖液糖1 440克、95體積％之原料用酒精670毫升 及水340毫升後，放入1公斤青梅。 本發明品3在將上述物品置入瓶中時以平均100毫升製品固形 物，加入1〇〇毫克之實施例32-(1)之含有環戊烯酮的果膠加熱處 理液（含有環戊烯酮0,8毫克）。對照以無添加環戊烯酮者。 蓋上各瓶蓋後，置於室溫下|時而輕微攪拌，浸潰青梅兩個月。 然後再加人28體積％之酒精水溶液1020毫升予以混合，再繼續 成熟兩個月即可獲得梅酒。 結果之各成熟梅酒進行與實施例32相同之功能評估，其結果 2 本紙張尺度適用中國固家標準（CNS>A4規格（210 X 297公釐） (請先間讀背面之注意事項再填寫本頁) 衣-----r---訂.--------·" 經濟部智Μ財產局員工消費合作社印製 ^5 898 2 00. ^ 21 a? B7 如表2 i所示。 表21 本發明品3 對照 味道幅度 4.6 2.7 味道平衡度 4.3 2.8 丨腿總和 4.5 2.8 根據表2 1之結果可知本發明品3爲廣大味道幅度，與酒精有良 好的相似度，亦提昇味道平衡度。形成整體圓潤、充實著成熟感 之品質。 實施例34 本發明品4係使用普通牛乳之均質牛乳（水分爲88.6重Μ體積 %，蛋白質爲2.8重S體植％，脂肪爲3.5重量體横％，乳掂爲4.5 重量體積％，碳水化合物爲0.8重量體積％)，以每1〇〇毫升之製 品固形物，加入50毫克之實施例32-(1)之含有環戊烯酮的果膠 加熱處理液（含有環戊烯酮0.4毫克）。對照以未添加環戊烯酮朽。 進行實施例之功能評估，結果如表22。 表22 本發明品4 對照 味道幅度 4.1 2.6 味道平衡度 4.0 2.5 味道總和 4·1 2.6 根據表22之本發明品4與對照組相比，係具有廣大味道幅度與 濃厚感及亦提昇味道平衡度。形成整體溫和及多美味之味道。又 3 本紙張尺度適用中國Θ家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） ----------- ^----------訂·---------"I (請先間讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消费合作社印製 4 5 8 9 8 2 A7 B7 本發明品所賦予之抗调性’相較於對照組，持久性亦有提昇。 實施例35 遵循常法，由大豆作成豆乳’係以凝固劑使其凝固，調製爲· 般的木棉:腐。 本發叨品5爲在豆乳屮添加以每1 00毫升之製品固形物，加入 100毫克之货施例32-(1)之含有環戊烯_的果膠加熱處理液（含有 環戊烯酮0.8毫克）。對照以未添加環戊烯酮者。 進行實施例32之功能評價，結果如表5所示。 表23 本發明品5 對照 味道幅度 -1.0 2.6 味道平衡度 3,8 2.5 味道總和 3,9 2.6 根據表23中之本發明品5與對照組相比，係具有廣大味道幅 度，並賦予具深度實質感之味道，整體的味道平衡度提昇，及持 久性亦有提昇。 實施例36 菜子類食品之製法，以巧克力將、糖果及橘子果膠試做之。 以兩個蛋黃、125毫升牛乳、10克小麥粉及30克砂糖，加溫 攪拌調製成^克力醬。 糖果則以攪拌器攪拌1.2公斤砂糖與〇.8克糖漿溶解混合後， 用電鍋煮至120-130°<3，使水分含量在2%以下，再加入16.3克 乳酸（50重量％溶液）、10.1克之蘋果酸、5.0克碳酸鈣及適量香 4 本紙張尺度適用中囹國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） t ^ - [ 11 — I .^· (請先閱讀背面之;i意事項再填寫本頁) 4 5 3 3 8 2 A7 B7 料而調製成。 橘子果膠係以9克角叉菜膠（carnigecnin)與180克細粒撾混 合，加入800毫升的水，並混合、加熱溶解。再加人溫州橘子濃 縮果汁10克、檸檬酸2克、檸樣酸蘇打1.5克、橘了·杏味2兑及 香料1克，調製而成。 本發明ί»(巧克力醬）、7(糖果）及8(橘=果膠）各以每毫升之 製品固形物，加入毫克之W施例32-(1)之含有環戊烯_的果 膠加熱處理液（含有環戊烯酮0.8毫克）。對照以未添加環戊烯酮 者。 進行實施例32之功能評估，結果如表24-26所示。 表24巧克力 本發明品6 對照 味道幅度 4.0 2.5 味道平衡度 3.9 2,7 味道總和 4.0 2.6 表25_糖果 本發明7 對照 味道幅度 3.7 2.2 味道平衡度 3.8 2.5 味道總和 3.7 2.4 (請先閱1S背面之注意事項再填寫本頁) ,4 -----..----訂---------綾 經濟部智.¾財產局員工消費合作社印製 表26橘子果膠 本發明品8 對照 味道幅度 4.1 2.S 味道平衡度 3.8 2.4 味纖和 4.0 2.5 根據表2心26之本發明品與對照組相比，成爲廣大味道幅度與完 5 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 * 297公餐） B7 根據表24-26之本發明品與對照組相比，成爲廣大味逍幅度與完 整之整體味道平衡感’溫和之味道，丨i持久性亦有改善。 實施例37 糊狀製品之製法’以魚肉作成之魚糕及家畜肉作成之番腸試 做。 魚糕之製法係在1公斤鱈魚（SA級）中加入100克水及2〇克食 鹽’ 15分鐘後拿出，各分爲40克以乙嫌包纏繞，在5°c下放置 一晚，在常溫下蒸1S分鐘可得蒸熟之魚糕· 香腸之製法係將2公斤豬肉、7〇0克豬脂肪切爲5毫米肉塊， 混合以7克胡椒、3克鼠尾草香料及1克苣蔻香料，切丁後，裝 入直徑2公分豬腸中，蒸煮15分鐘可得= 在魚糕未用乙烯包纏繞拿出前及香腸切T未裝入豬腸前，以每 100毫升之製品固形物，加入4〇〇毫克之實施例32-(1)之含有環 戊烯酮的果膠加熱處理液（含有環戊烯酮3.2毫克而爲本發明 品之9(魚糕）及10(香腸）。對照以未添加環戊烯酮者。 進行實施例32之功能評價，結果如表27 ' 28所示。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ^^1 t— ^^1 ^^1 一°'、* p^i ^ί—, ^^^1 ^^^1 4—^κ ^^^1. ^ 經濟部智慧財產局員工消費合作杜印製 表27奐糕 本發明品9 對照 味道幅度 4.1 2.6 味道平衡度 3.8 2.7 味道總和 4.0 2.7 6 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 Χ 297公釐） 5 ρ q r 2 9a 3.21 A7 B7 表28香腸 本發明品10 對照 味道幅度 4.2 2.8 味道平衡度 3.6 2.6 味道總和 3.9 2.7 根據表27、28 I本發明品與對照組比較，係具有味逍之深度，廣 人味道幅度之隱藏味，調和味道平衡度1將甜味、酸味及美味作 爲一體化之溫和味道，且其持久度亦有所提昇。 實施例38 麵類之製作1以拉麵試作。即在4公斤拉麵專用粉（含冇灌水 之小麥粉）中加入乳酸鈉25.4克（5Q重量％溶液）、蘋果酸鈉9.4 克及碳酸鈣1〇克，再加入1.6公升水，混合成鬆亂狀。以家庭用 製麵機（三洋電器公司製）製麵。 本發明品11係以每100毫升之製品固形物，加入丨00毫克之 實施例32-(〗）之含有環戊烯酮的果膠加熱處理液（含有環戊烯酮 0.8毫克）。對照以未添加環戊烯酮者》 進行實施例32之功能評估，結果如表29所示。 衣_----^----訂·-------1^ (請先間"背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 表29 本發明品η 對照 味道幅度 3.7 2.7 味道平衡度 3.8 2.8 味道總和 3.8 2.8 以表29可知本發明品與對照組比較係具味道之深度及廣大味道 幅度者。又整體無粉狀形成，伴隨以整體成熟感之味道。味道平 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（2〗〇χ 297公釐〉

••4.』 A R98 2 H21 A7 B7 經濟邡智慧时產局員工消費合作社印鉍 衡度之調和，及持久度亦知'所提昇° 實施例39 麵包類之製法，以常法試作麵包及中華饅頭。 調配麵包及屮華㈣頭皮的調製條件各如表3 0 ' 31所示。 表30麵包配合比例及調製條件_ (中種配合） 小麥粉 酵母 酵母食物 水 (本捏配合） 小麥粉 砂糖 食鹽 牛-脂 乾酪 水 (調製條件） 發酵時間 烤箱預熱時問 川分鐘(38°C，濕度85%) 加熱時間 3S分鐘(210°C) 占70重量比 20.1 40 占30重量比 0.5 25 4小時(27〇C，濕度75%) 8 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） ^----------^--------- (請先閱請背面之汶意事項再填寫本頁)

Bd8 2 A7 B7 表31中華饅頭皮的配合比例及調製條件 (配合比例） 小麥粉 占1〇〇 Μ量比 砂糖 15 食鹽 0.8 北京粉未 1 紅色顏料 5 酵母 3.5 水 43.5 (調製時間） 預熱時間 90 分鐘(45°C 蒸煮時間 15分鐘 ------------A.----l·---1τ_ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 該麵包及中華饅頭係以每1 〇〇毫升之製品固形物，加入400毫 克之實施例32-(1)之含有環戊烯酮的果膠加熱處理液（含有環戊姑 酮3.2毫克），而爲本發明品12及13。對照以未添加環戊蹄鋼者。 進行實施例32之功能評估，結果如表32、33所示° 表32麵包 本發明品12 對照 味道幅度 3.4 1.8 味道21¾度 3.2 1.4 味纖和 3.3 1.6 本纸張尺度適用中國S家標準（CNS)A4規格（210 X 297公茇） 38 2 Α7 Β7 表33中苹饅頭 本發明品13 對照 味道幅度 2.9 1.6 味道平衡度 3.0 1.4 味道總和 3.0 1.5 根據表32、33 ’本發明品與對照組比較’味道幅度係廣泛之隱藏 味，整體味道平衡度提昇，無粉狀形成及具溫和味道，11持久度 亦有所提昇。 實施例40 使用依常法調製之淸酒，添加以每毫升之製品固形物， 加入50毫克之實施例32-(〗）之含有環戊烯酮的果膠加熱處理液 (含有環戊烯酮0.4毫克），而爲木發明品Η =對照以未添加環戊 烯酮者。 進行實施例32之功能評估，結果如表34所示。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) "•I---Γ I--訂---I -----#、 裎濟部智慧財彦局員工消費合作杜印製 表34 本發明品14 對照 味道幅度 4.2 2.8 味道平衡度 4.4 2.9 味道總和 4.3 2.9 依表34，本發明品 14相較於對照組 有廣大之味道幅度及賦予 深度實體感之味道，具整體濃厚’亦提昇味道之平衡度。 赏施例41 以常法調製之料酒及發酵調味料，以每100毫升之製品固 10 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐〉 B7 形物，加入100¾¾之资施例32-(1)之含冇環戊烯『祠的果膠加熱 處理液（含有環戊烯酮0.8毫克），而爲本發明品15及U。對照丄 未添加環戊烯酮者。 進行實施例32之功能評估，結果如表35、36所；I；-。 表35料洒 本發明品15 對照 _幅度 4.3 3.2 味道平衡度 3.8 3.1 味道總和 4.1 3.2 請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 表36發酵調味料 本發明品16 對照 味道幅度 4.0 3.0 味道平衡度 3.5 2.8 _總和 3.8 2.9 經濟部智'"Ri產局員工消費合作社印製 根據表35、36，本發明品與對照組比較，形成味道幅度、深度廣 大，具有實體感之濃郁味道。整體味道平衡度提昇，成熟感增加， 形成溫和味道，且持久度亦有所提昇。 實施例42 調味料之製法，以混合4.7克魚粉' 0.8克海苔、2.5克蛋、1.( 公斤鹽及麩胺酸酸蘇打0.5公斤，依循常法調製成顆粒狀。 本發明品！7係以每100毫升之製品固形物，加人1000毫克之 實施例32-( 1)之含有環戊烯雨的果膠加熱處理液（含有環戊烯_ 8 毫克）。對照以未添加環戊烯酮者。 11 ^ -----„---1 訂—--------^ 本紙張尺度適用中國固家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 今5 898 2 Λ7 B7 進行同货施例32之功能評估。 該結果爲本發明品與對照組比較，味道之深度增加’作爲掩藏 味之味逍幅度廣大，形成整體之酸味、甜味 '美味及鹽味之平衡 度調和的品質。 贸施例43 混合40毫升普通之料酒、1⑽毫升之食用醋及100毫升之醬汕’ 調製成複合調味料（三杯醋）。本發明品18係以每100毫升之製品 固形物，加入100毫克之實施例32-(1)之含有環戊烯酮的果膠加 熱處理液（含有環戊烯酮0.8毫克>。對照以未添加環戊烯酮者。 進行實施例32之功能評估， 結果如表：π所示。 表37 本發明品1S 對照 味道幅度 3.9 3.0 囉平衡度 3.8 3.1 味道總和 3.9 3.1 依表37，本發明品18相較於對照組，有廣大之味道幅度及因隱 藏味而賦予具深度之味道，整體調和以酸味、甜味、美味及鹽味 之平衡度，形成溫和具成熟感之味道。 W施例44 調味料（生菜沙拉調味料）之製法，以醋型式及醬油型式試作。 以农38及39表示本發明品19(醋型式）及20(醬油型式）之配方。 且本發明品中係以每1 00毫升之製品固形物，加入200毫克之 實施例32-( 1)之含有環戊烯酮的果膠加熱處理液（含有環戊烯酮 12 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） .衣----------訂·--------β (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 4 b 8 ^ 8 2 90. 3. 21 a? B7 1.6毫克）。對照以未添加環戊烯銅者》 進行實施例32之功能評估，結果如表40、41所不。 表38醋型式 配方表 米醋 20 淸洒 40 並鹽 5 糖類 6 酸_ 5 增黏劑 0.05 水 其餘 表39醬油型式 配合表 米醋 13 醬油 13 糖類 8 淸酒 4 並鹽 4 酸味料 0.7 胺基酸 1.8 增黏劑 0.05 水 其餘 忐40醋型式 本發明品19 對照 味道幅度 4.2 3.4 味道平衡度 4.0 3.3 味道總和 4.1 3·4 13 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

^-----Γ I --------姨 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公芨） m. 2Ϊ Λ7 Β7 表41锊汕型式 本發明π 2〇 對照 味迢幅度 4.4 3.6 味逍平衡度 4,3 3.6 味道總和 4.4 3.6 m據表4 0 ' 4 1，本發明品之調味醬與對照組比較，味逍強度增加 S隱藏味面具成熟感1味逍之福度亦廣大。整體味道$衡度提界 調和酸味、甜味、鹽味及美味，而形成溫和、濃郁味道= ("先^^背面之^意事項再填艿本頁) —-^=°· 0 裎濟部智慧財產局員工消費合作社印封 14 本紙張尺度適用中S國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公笼）

Claims (1)

1. 90 .3· 21 修丘 I Λ 月日、ji 士 〜’補无j 六、申請專利範圍 AS B8 C8 D8 1-5 8 98 2 第86113265號「環戊烯酮類，其製法及用途」專利案 (90年3月21日修正） 申請專利範圍： 1_一種含有下述式[1〕所示之4,5-二羥基-2-環戊烯-1-酮熱處理物之製法，其特徵爲加熱處理下述（a)、（b)、 (〇所選出之至少一種物質，而生成式丨1】4,5-二羥基-2-環戊烯-1-酮， (a)糖醛酸或糖醛酸衍生物、 (b>含有糖醛酸和/或糖醛酸衍生物之糖化合物、 (〇含有糖醛酸和/或糖醛酸衍生物之糖化合物含有物。 0 rV OH OH (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 2,—種4,5-二羥基-2-環戊烯-1-酮之製法，其特徵爲加熱 處理下述（a)、（b)、所選出之至少一種物質，且其 次由該加熱處理物採集式〔1〕所示之4,5-二羥基-2-環 戊烯-1-酮’ (a) 糖醛酸或糖醛酸衍生物、 (b) 含有糖醛酸和/或糖醛酸衍生物之糖化合物、 (c) 含有糖醛酸和/或糖醛酸衍生物之糖化合物含有物。

   本紙張尺度適用中國固家揉準（CNS ) A4规格（210XW7公釐） 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 ,,g98 2. , A8 1 B8 C8 D8六、申請專利範圍 3. 如申請專利範圍第1或2項之製法，其中糖醛酸爲 半乳糖醛酸、葡糖醛酸、古洛糖醛酸、甘露糖醛酸和 /或艾杜糖醛酸。 4. 如申請專利範圍第1或2項之製法，其中糖醛酸衍 生物爲糖醛酸之鹽、或糖醛酸內酯、糖醛酸酯、糖醛 酸醯胺或其鹽。 5. 如申請專利範圍第1或2項之製法，其中糖化合物 爲果膠、果膠酸、藻酸、透明質酸、肝素、硫酸乙醯 肝素、岩藻依聚糖、硫酸軟骨素、軟骨素、硫酸皮膚 素和/或其分解物所選出之糖化合物。 6. 如申請專利範圍第1或2項之製法，其中加熱處理物 爲於60〜350 °C、加熱處理數秒鐘〜數日所取得。 7. 如申請專利範圍第1或2項之製法，其中加熱處理物 爲於酸性〜中性之條件下進行加熱處理所取得。 8. —種4,5-二羥基-2-環戊烯-1-酮之光學活性體之製法， 其特徵爲包含下述步驟： (A):加熱處理（a>、（b)、（c)所選出之至少一種物質， 並令以生成4,5-二羥基-2-環戊烯-1-酮之步驟、 U)糖醛酸或糖醛酸衍生物、 (b)含有糖醛酸和/或糖醛酸衍生物之糖化合物、 -2- 本紙張尺度適用中國國家樣準（CNS > A4规格（210X 297公釐） {請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 4“9兹 2 U B8 v'g D8 六 f工消費合作社印製 申請專利範圍 (C)含有糖醛酸和/或糖醛酸衍生物之糖化合物含有 物， (B) :視需要，由所得之加熱處理物單離出4，S-二羥 基-2-環戊稀-1-嗣之步驟、 (C) :光學分割4,5 -二羥基-2-環戊烯-1-酮之步驟。 9. 如申請專利範圍第8項之4,5-二羥基-2-環戊烯-1-酮 之光學活性體之製法，其中糖醛酸爲半乳糖醛酸、葡 糖醛酸、古洛糖醛酸、甘露糖醛酸和/或艾杜糖醛酸° 10. 如申請專利範圍第8項之4,5-二羥基-2-環戊烯-1-酮 之光學活性體之製法|其中糖醛酸衍生物爲糖醛酸之 鹽、或糖醛酸內酯、糖醛酸酯、糖醛酸醯胺或其鹽。 11. 如申請專利範圍第8項之4,5-二羥基_2_環戊烯-1-酮 之光學活性體之製法，其中糖化合物爲果膠、果膠酸' 藻酸、透明質酸、肝素、硫酸乙醯肝素、岩藻依聚糖、 硫酸軟骨素、軟骨素、硫酸皮膚素和/或其分解物所 選出之糖化合物。 1 2 ·如申請專利範圍第8〜1 1項中任.一項之4，5 -二羥基· 2-環戊烯-1-酮之光學活性體之製法，其中加熱處理物 爲於6〇〜350 °C、加熱處理數秒鐘〜數日所取得。 13.如申請專利範圍第8〜1〗項中任一項之4,5-二羥基-2 -環戊烯-1 -酮之光學活性體之製法，其中加熱處理物 爲於酸性〜中性之條件下進行加熱處理所取得。 -3- 本紙法尺度適用中國國家標準（CNS > A4規格（lOxf公堵） Λί.:*.·^1?.再 ΐ-4本 f ) 裝- ,5T 8 K 8 K ABCD 4289β2 I六、申請專利範圍 丨 I4. 一種制癌用之醫藥組成物，其特徵爲含有式[1〕所 I 示之4,5 -二羥基-2-環戊烯-1-酮和/或其光學活性體。 丨 0 ώ〇〇Η 111 15. —種用於癌細胞分化誘導之醫藥組成物，其特徵爲含 有式〔1〕所示之4,5-二羥基-2-環戊烯-1-酮和/或其 光學活性體。 0Η ⑴ 0Η 16. —種用於細胞自滅誘發之醫藥組成物，其特徵爲含有 式〔1〕所示之4,5-二羥基-2-環戊烯-1-酮和/或其光 學活性體。 ill OH OH 17. —種抗菌用組成物，其特徴爲含有式〔1〕所示之4,5-二經基-2 -環戊嫌-1 -酮和/或其光學活性體。 0 0H 【1 】 II—L〇h 如申請專利範圍第I7項之抗菌用組成物，可用於防 腐劑之有效成分。 本紙張义度適用_國國家樣準（CNS ) 規格（210/21^公龟） νν:.''υ:,·Ί^".π:··'':::·'·χ^Λ:^ 項再靖艿本莨 0

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   • ^1. -. n^— u ^^^1 ^^^1 ^^^1 V V ^^^1 、v'a :^.--1¾¾11 ::工消費合作社印製 45 898 2 Λ 6 Β8 Γ8 L>8 六'申请專利粑圍 19.如申請專利範圍第17項之抗菌用組成物，可用於牙 膏劑之有效成分。 .、清先"請^.'';-?-注意事""4、乓本頁} 2 0 _如申請專利範圍第i 7項之抗菌用組成物，可用於化 粧材料之有效成分。 21. 如申請專利範圍第I7項之抗菌用組成物，可用於沐 浴用劑之有效成分。 22. 如申請專利範圍第Η〜21項中任一項之組成物，其 爲含有以如申請專利範圍第1項之製法所取得之式 〔1〕所示之4,5-二羥基-2-環戊烯-1-酮作爲有效成分。 23. 如申請專利範圍第14〜21項中任一項之組成物，其 爲含有以如申請專利範圍第1項之加熱處理物作爲有 效成份。 時.^"^"^'ϋμ*工消費合作社印製 2 4 .如申請專利範圍第1 4〜2 1項中任一項之組成物，其 爲含有以如申請專利範圍第2項之製法所採集之式 〔1〕所示之4,5 -二羥基-2 -環戊烯-1-酮作爲有效成分。 2 5.—種食品或飮料添加物1其特徵爲含有、稀釋和/或 添加可顯示生理活性之有效量之式〔1〕所示4,5-二羥 基-2-環戊烯-1-酮和/或其光學活性體，其食品或飮料爲 0 (fV0H 【1】 U-L〇h 穀物加工品（小麥粉加工品、澱粉類加工品、預混合加 工器、麵類、通心粉類、麵包類、餡類 '菴麥類、麵 飭、米粉、粉絲、包裝餅等）、油脂加工品（可塑性油 -5- 木紙乐尺度適用中國國家標準（CMS ) Α4規格（210Χ 公赛） 45 898 2 Λ, m f；8 D只 六、申請專利範圍 :ΐ:ίυ;ί3'.ϊ^:、u vl;/i費合作社印製 脂、天婦羅油、沙拉油、美乃滋類、調味汁等）、大豆 加工品（豆腐類、味噌、納豆等）、食用肉加工品（火腿、 培根、燻製香腸.蠟腸等）、水產產品（冷凍磨碎的魚 肉、魚糕、竹輪、魚肉山芋九子、炸甘藷、壽司、魚 肉火腿、臘腸、乾松魚 '魚蛋加工品、水產罐頭、個 煮等）、乳製品（原料乳、奶油、酸乳酷、牛油、乳酪、 煉乳、粉乳、冰淇淋等）、青菜·水果加工品（膏醬類、 果醬類、醃漬類、水果飮料、青菜飮料、混合飲料等）、 點心類（巧克力、餅乾類、點心麵包類、蛋糕、點心餅、 米果類等）、酒精飮料（日本酒、中國酒、葡萄酒、威 士忌、燒酒、優特加、白蘭地、琴酒、蘭姆酒、啤酒、 淸涼酒精飮料、水果酒、甜香酒等）' 休閒飮料（綠茶、 紅茶、烏龍茶、咖啡、淸涼飮料、乳酸飲料等）、調味 料（醬油、辣醬油、醋、味酣等〉、罐裝、瓶裝、袋裝 食品（牛飯、鍋飯、紅飯、咖哩、其他之各種已調理完 畢之食品）、半乾燥或濃縮食品（肝醬，其他之塗抹食 品 '蕎麥*烏龍麵汁、濃縮湯類）、乾燥食品（速食麵類、 速食咖哩、即溶咖啡、粉末果汁、粉末湯、速食味噌 汁 '已調理完畢食品、已調理完畢飮料、已調理完畢 等）、冷凍食品（勸燒、茶碗蒸 '烤廳魚片、漢堡牛 肉餅 '燒賣、餃子、各種加料酒、水果雞尾酒等）、固 形食品、液體食品（湯等）、香辣料類等之農產、林產 加工品、畜產加工品 '水產加工品等。 26·—種食品或飮料添加物’其特徵爲含有、稀釋和/或添加可 -6- 本紙張尺度適用中國國家檩準（CMS ) Α4说格（2Ι0Χ 公輳） ^.v:,;? ^工湞費合作社印製 45 898 2 Ab B8 CS DS ' —~ - ------------ — 丨丨_ ., --- 六、申請專利範圍 顯示生理活性之有效量之如申請專利範圍第1項之製 法所取得之式〔1〕所示4,5-二羥基-2-環戊烯-1-酮和 /或其光學活性體，其食品或飮料爲穀物加工品（小麥 粉加工品、澱粉類加工品、預混合加工器、麵類、通 心粉類、麵包類、餡類、薷麥類、麵飭、米粉、粉絲、 包裝餅等）、油脂加工品（可塑性油脂、天婦羅油、沙 拉油 '美乃滋類、調味汁等）、大豆加工品（豆腐類、 味噌、納豆等）、食用肉加工品（火腿、培根、燻製香 腸、蠟腸等）、水產產品（冷凍磨碎的魚肉、魚糕、竹 輪、魚肉山芋九子、炸甘藷、壽司、魚肉火腿、臘腸、 乾松魚 '魚蛋加工品、水產罐頭、佃煮等）、乳製品（原 料乳、奶油、酸乳酪、牛油、乳酪、煉乳、粉乳、冰 淇淋等）、青菜-水果加工品（膏醬類、果醬類、醃漬類、 水果飮料、青菜飲料、混合飲料等）、點心類（巧克力. 餅乾類、點心麵包類 '蛋糕、點心餅、米果類等）、酒 精飮料（日本酒、中國酒、葡萄酒、威士忌、燒酒、優 特加、白蘭地、琴酒、蘭姆酒、啤酒、淸涼酒精飮料' 水果酒、甜香酒等 >' 休閒飮料（綠茶、紅茶、烏龍茶、 咖啡、淸涼飮料、乳酸飮料等）、調味料（醬油、辣醬 油、醋、味酣等）、罐裝、瓶裝、袋裝食品（牛飯、鍋 飯、紅飯、咖哩、其他之各種已調理完畢之食品）、半 乾燥或濃縮食品（肝醬、其他之塗抹食品 '蕎麥·烏龍 麵汁、濃縮湯類）' 乾燥食品（速食麵類、速食咖哩、 即溶咖啡、粉末果汁、粉末湯、速食味噌汁、已調理 本紙伕尺度適用令國圉家標準（CNS > A4規格（a?公輳） .——装------訂-------^--------------- 45 898 2 A8 B8 C8 DS 六、申請專利範圍 完畢食品、已調理完畢飮料、已調理完畢湯等 >、冷凍 食品（鋤燒、茶碗蒸、烤鰻魚片、漢堡牛肉餅、燒賣、 餃子、各種加料酒 '水果雞尾酒等）、固形食品 '液體 食品（湯等 >，香辣料類等之農產、林產加工品、畜產 加工品、水產加工品等。。 27·如申請專利範圍第25項之食品或飮料添加物，其特 徵爲含有、稀釋和/或添加如申請專利範圍第1項之 記載之加熱處理物。 28.如申請專利範圍第25項之食品或飮料添加物，其特 徵爲含有、稀釋和/或添加如申請專利範圍第2項之 製法所採集之式〔1〕所示之4,5_二羥基-2-環戊烯 酮。 2 9.如申請專利範圍第25〜28項中任一項之食品或飮料 添加物，其特徵爲每1"重量份含有5X10 - 6重量份 以上之式〔1〕所示之4,5-二羥基-2-環戊烯-1-酮。 3〇.如申請專利範圍第25〜28項中任一項之食品或飲料 添加物，其爲制癌性食品或制癌性飮料。 ---------装------訂------良 (請先閱讀背面之注$項再填寫本頁) 穿 圍 經濟部智M財產局員工消費合作社印製 料 飮 或 品 食 之。 項料 一 飮 任性 中菌 項抗 8 或 2 ~ 品 5 食 2 性 菌 抗 範 利 專 請 申 如 物 JD 添 爲 其 8- - 率 榇 家 國 國 中 用 I逍