EA002969B1

EA002969B1 - Антибактериальное средство и антисептик, средство для чистки зубов, косметическое средство, средство для ванн, пищевой продукт или напиток на его основе

Info

Publication number: EA002969B1
Application number: EA200100172A
Authority: EA
Inventors: Нобуто Кояма; Хироаки Сагава; Ейдзи Кобаяси; Тацудзи Еноки; Хуа-Канг Ву; Ейдзи Нисияма; Кацусиге Икаи; Икуносин Като
Original assignee: Такара Сузо Ко., Лтд.
Priority date: 1996-09-27
Filing date: 1997-09-01
Publication date: 2002-12-26
Also published as: KR100582159B1; JP3790273B2; EP0941981A1; US6087401A; AU4033097A; KR20000057128A; EA200100172A1; EA199900334A1; CN1117057C; AU727370B2; CA2263563C; CN1230165A; EP0941981A4; TW458982B; CA2263563A1; EA003923B1; WO1998013328A1

Abstract

Предложено антибактериальное средство, включающее 4,5-дигидрокси-2-циклопентен-1-он, представленный формулой [I], и/или его оптически активное производное, а также антисептик, средство для чистки зубов, косметическое средство, средство для ванн, пищевой продукт или напиток на его основе.

Description

Настоящее изобретение относится к циклопентенонам, обладающим такой физиологической активностью, как антибактериальное действие, и высокой степенью безопасности, и, более конкретно, оно относится к фармацевтическим препаратам, содержащим указанные соединения в качестве эффективных компонентов. Настоящее изобретение также относится к ряду изобретений, которые могут найти применение в области пищевой промышленности, получения напитков и т.д.

Предпосылки изобретения

Фармацевтические препараты, которые используются в клинической терапии, включают многие средства, такие как противораковые средства, антибиотики, иммуностимуляторы, иммуномодуляторы и др. (такие как алкилирующие агенты, антиметаболиты и растительные алкалоиды), но трудно сказать, что такая лекарственная терапия уже совершенно установлена.

Проблемы, решаемые данным изобретением

Объектом настоящего изобретения является разработка высокобезопасных производных циклопентенона, обладающих таким физиологическим действием, как антибактериальная активность, а также к фармацевтическим препаратам, содержащим указанные соединения в качестве эффективных компонентов, и к пищевому продукту или напитку, содержащим указанные соединения. Другими объектами настоящего изобретения являются средство для чистки зубов, косметическое средство, средство для ванн, антибактериальный пищевой продукт, антибактериальный напиток.

Средства решения этих проблем

Настоящее изобретение представлено далее.

Первый аспект настоящего изобретения относится к антибактериальному средству, которое характеризуется тем, что содержит 4,5дигидрокси-2-циклопентен-1-он, представленный формулой [1],

и/или его оптически активное производное.

Второй аспект настоящего изобретения относится к пищевому продукту или напитку, которые характеризуются тем, что содержат разбавленный в них и/или добавленный к ним 4,5-дигидрокси-2-циклопентен-1-он, представленный формулой [1], и/или его оптически активное производное.

Авторы настоящего изобретения обнаружили, что соединение, представленное формулой [1], т.е. 4,5-дигидрокси-2-циклопентен-1-он (далее указан только как циклопентенон), образуется в обработанных нагреванием продуктах из, по меньшей мере, одного вещества, выбранного из уроновой кислоты, производно го(ых) уроновой кислоты, сахаридного производного, содержащего уроновую кислоту и/или производное(ые) уроновой кислоты и вещества, которое содержит сахаридное производное, содержащее уроновую кислоту и/или производное(ые) уроновой кислоты, и что указанное соединение, выделенное из обработанных нагреванием продуктов, обладает различными физиологическими активностями, такими как антибактериальное действие, а также достигли успеха в получении оптически активных производных указанного соединения, результатом чего явилось настоящее изобретение.

Краткое объяснение рисунков

На фиг. 1 показано соотношение между временем хранения и количеством циклопентенона.

На фиг. 2 показано соотношение между временем инкубации и количеством жизнеспособных клеток в среде.

Предпочтительные воплощения изобретения

Настоящее изобретение более подробно иллюстрируется следующим образом.

В соответствии с настоящим изобретением является возможным, что соответствующее количество физиологически активного циклопентенона и/или его оптически активного производного содержатся в пищевом продукте или напитке. Ввиду антибактериального действия и т. п. этих соединений пищевой продукт или напиток по настоящему изобретению являются достаточно полезными в качестве бактериального пищевого продукта или антибактериального напитка.

Кроме того, настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей циклопентенон и/или его оптически активное производное, и указанная фармацевтическая композиция может использоваться в качестве антибактериального средства для антисептиков, антибактериальных средств для чистки зубов, антибактериальных косметических средств, антибактериальных средств для ванн и т. п.

Циклопентенон, применяемый в настоящем изобретении, может быть получен нагреванием вещества, выбранного из (а) уроновой кислоты или производного(ых) уроновой кислоты; (Ь) сахаридного производного, содержащего уроновую кислоту и/или производное (ые) уроновой кислоты, и (с) вещество, содержащее сахаридное производное, которое содержит уроновую кислоту и/или производное(ые) уроновой кислоты. Соответственно, также является возможным получить циклопентенон путем нагревания (а), (Ь) или (с), которые получают из материала, не содержащего ни (а), ни (Ь), ни (с) с помощью физических, химических, ферментативных или других средств.

В настоящем изобретении также возможно применять обработанные нагреванием продукты, содержащие циклопентенон, очищенный циклопентенон или частично очищенный циклопентенон, полученные из указанных выше обработанных нагреванием продуктов.

Уроновую кислоту иногда называют гликуроновой кислотой, что является общим названием для гидроксиальдегидов карбоновых кислот, в которых альдегидная группа альдозы остается как таковая, тогда как лишь первичная спиртовая группа на другом конце окисляется до карбоксильной группы. Она существует в природе как составной компонент различных полисахаридов животного и растительного происхождения. Примерами полисахаридов, содержащих уроновую кислоту, являются пектин, пектиновая кислота, альгиновая кислота, гиалуроновая кислота, гепарин, гепарансульфат, фукоидан, хондроитинсульфат, хондроитин, дерматансульфат и т.п., и они, как известно, проявляют различное физиологическое действие.

Не существует особых ограничений для уроновой кислоты, применяемой в настоящем изобретении. Так, примерами уроновой кислоты являются галактуроновая кислота, глюкуроновая кислота, гулуроновая кислота, маннуроновая кислота и идуроновая кислота, в то время как примерами производного(ых) уроновой кислоты являются лактоны, сложные эфиры, амиды, соли и т.п. указанных выше кислот, и под производным по настоящему изобретению подразумевается любое вещество, которое дает циклопентенон при нагревании. Примерами лактона уроновой кислоты являются глюкороно-6,3-лактон (называемый здесь далее как глюкуронолактон), маннуроно-6,3-лактон и идуроно-6,3-лактон. Примерами сложных эфиров уроновой кислоты являются метил-, этил-, пропиленгликоль- и карбоксиметилуронаты, которые могут быть получены из уроновой кислоты. Амид уроновой кислоты может быть получен путем амидирования уроновой кислоты. Их соли могут быть получены обычными методами.

В этом описании не существует особых ограничений для сахаридного производного, содержащего уроновую кислоту и/или производное(ые) уроновой кислоты, и применяемыми примерами является пектин, пектиновая кислота, альгиновая кислота, гиалуроновая кислота, гепарин, гепаринсульфат, фукоидан, хондроитинсульфат, хондроитин и дерматансульфат, включая продукты их разложения, производные продуктов их разложения, соли продуктов их разложения, которые представляют собой их химически, ферментативно или физически обработанные продукты.

При указанной выше химической обработке исходное соединение обрабатывают, например, при температуре от комнатной до 200°С в течение от нескольких секунд до нескольких часов или предпочтительно при 50-130°С в течение от нескольких секунд до 60 мин. Когда указанную обработку проводят в кислых условиях, гликозидная связь гидролизуется и, в слу чае пектина, получают продукт разложения, содержащий галактуроновую кислоту и/или сложный эфир галактуроновой кислоты. Или, например, при обработке при рН 6,8 при 95°С в течение от нескольких минут до нескольких десятков минут происходит бета-отщепление с образованием сахаридного производного, содержащего ненасыщенную уроновую кислоту и/или ненасыщенный сложный эфир уроновой кислоты, в которых поглощение при длине волны около 235 нм усилено. Сахаридное производное по настоящему изобретению включает сахаридное производное, содержащее ненасыщенную уроновую кислоту и/или ненасыщенный сложный эфир уроновой кислоты на нередуцирующем конце, полученном путем бетаотщепления полисахаридного соединения, содержащего уроновую кислоту и/или сложный эфир уроновой кислоты.

Примером указанной выше ферментативной обработки является известный метод расщепления, в котором исходное сахаридное соединение, содержащее уроновую кислоту и/или сложный эфир уроновой кислоты, расщепляют с помощью гидролазы, такой как пектиназа и гиалуронидаза, сахарида, содержащего уроновую кислоту и/или сложный эфир уроновой кислоты. Другим примером является известный метод расщепления, по которому сахарид, содержащий уроновую кислоту и/или сложный эфир уроновой кислоты, расщепляется лиазой сахарида, содержащего уроновую кислоту и/или сложный эфир уроновой кислоты. Например, в случае пектина или пектиновой кислоты расщепление проводят с помощью известной лиазы пектина (ЕС 4.2.2.10), пектиатлиазы (ЕС 4.2.2.2) или лиазы экзополигалктуроновой кислоты (ЕС 4.2.2.9) с получением сахаридного соединения, содержащего уронат 4-дезокси-Ь-треогекс-4енопиранозила или его метиловый эфир на нередуцированном конце. В случае гиалуроновой кислоты используют гиалуронатлиазу (ЕС 4.2.2.1), в то время как в случае альгиновой кислоты применяют альгинатлиазу (ЕС 4.2.2.3). Неожиданно, в случае альгиновой кислоты получают сахаридное соединение, содержащее уронат 4-дезокси-Ь-эритрогекс-4-енопиранозила на его нередуцированном конце. Ферментативно расщепленные продукты, содержащие уронат 4-дезокси-Е-треогекс-4-енопиранозила, уронат 4-дезокси-Е-эритрогекс-4-енопиранозила или их метиловые эфиры на нередуцированном конце, полученные как таковые, также охватываются сахаридным соединением по настоящему изобретению.

Примерами вышеупомянутой физической обработки является обработка исходного сахаридного соединения с помощью почти инфракрасных лучей, инфракрасных лучей, микроволн, ультразвуковых волн и т.д. Так, например, пектин и/или пектиновую кислоту помещают в нейтральный (по рН) или в щелочной раствор и подвергают действию ультразвуковых волн для приложения энергии вибрации при подходящей температуре не ниже комнатной при подходящем режиме редукции, например, в присутствии аскорбиновой кислоты в течение не менее одной секунды или предпочтительно от пяти секунд до одного часа. Кроме ультразвуковых волн эффективным является также облучение микроволнами в области, близкой к инфракрасной, в инфракрасной и т.д., или их сочетания. Облучение может проводиться либо непрерывно, либо прерывисто.

В настоящем изобретении отсутствует особое ограничение для вещества, которое содержит сахаридное соединение, содержащее уроновую кислоту и/или производное(ые) уроновой кислоты, поскольку указанное вещество содержит сахаридное соединение, содержащее указанную выше уроновую кислоту и/или производное(ые) уроновой кислоты. Ниже представлены примеры вещества, которое содержит сахаридное соединение, содержащее уроновую кислоту или производное(ые) уроновой кислоты. Это фрукты, овощи, листья, семена и т.д. двудольных растений, таких как яблоко, плоды цитрусовых (например, мандарин, апельсин и лимон), банан, цветная капуста, капуста, латук, перилла, тыква, сельдерей, лопух, се11а1о1с. брокколи, зеленый перец, шпинат, лук, морковь, ботва моркови, листья дайкона (японской редиски), листья чая, кунжут, бобы, картошка и т.п.; зерна однодольных растений, таких как пшеница и рис; водоросли, такие как бурые водоросли, например, морская капуста и морские водоросли (закате), красные водоросли, зеленые водоросли и одноклеточные зеленые водоросли; микроорганизмы, такие как Вак1бютусе1ек (например, ЬуорЬу11ит и1татшт, Ьуорйу11ит бесайек, РНоНо(а патеко, Сой1ие11ик кЫйаке, Р1атти1ша уегибрек, Лдалсик окКеаШк и Рака11ю1а сатрейпк), Лксотусе1ек (например, Согбусерк тбйаг18 и другие виды Согбусерк), дрожжи, гифомицеты (например, виды ЛкретдШик) и бактерии (например, ВасШик иаПо и бактерии молочнокислого брожения); и животные, такие как позвоночные животные, беспозвоночные животные, включая кожу свиней, кожу коров, хрящ акулы, хрящ кита и т. д. По настоящему изобретению можно использовать вещество, которое содержит сахаридное соединение, содержащее уроновую кислоту и/или производные уроновой кислоты, полученное из указанных выше растений, микроорганизмов или животных.

Более того, по настоящему изобретению можно использовать следующие сельскохозяйственные и рыбные продукты или обработанные пищевые продукты, как таковые или после высушивания/измельчения в качестве вещества, которое содержит сахаридное соединение, содержащее уроновую кислоту и/или производное(ые) уроновой кислоты. Они представляют собой кожуру фрукта, выжимку фрукта (такого, как яблоко или мандарин), выжимку овоща, выжимку зерен (такую, которую получают при приготовлении саке [японского рисового вина], пива, кйосйи [японского перегнанного спирта] и виски), выжимку бобов (такую, как окага [выжимка японских створоженных бобов]) и выжимку морских водорослей и т. п.

Вещество, которое содержит сахаридное соединение, содержащее уроновую кислоту и/или производное (производные) уроновой кислоты, применяемое в настоящем изобретении, может быть использовано как таковое или может быть подвергнуто любым обычным способам обработки, таким как кипячение, выпечка, запекание, поджаривание, отваривание, обработка паром, жарка, глубокое прожаривание и т. п., в качестве предварительной обработки.

Более того, в настоящем изобретении вещество, которое содержит сахаридное соединение, содержащее уроновую кислоту и/или производное (производные) уроновой кислоты, может быть подвергнуто указанной выше химической, ферментативной (включая ферментацию с использованием микроорганизмов) или физической предварительной обработке, и полученное обработанное вещество, как таковое, или очищенное вещество, полученное из указанного полученного вещества, также может быть использовано.

Вещество, которое содержит сахаридное соединение, содержащее уроновую кислоту и/или производное(ые) уроновой кислоты, содержит соединение, которое обладает способностью взаимодействовать с уроновой кислотой, производным(ыми) уроновой кислоты, промежуточными продуктами для получения циклопентенона и веществами, обладающими способностью взаимодействовать с циклопентеноном, такими как амины, аминокислоты, пептиды и/или белок, и для получения циклопентенона предпочтительно проводить предварительную обработку, при которой по меньшей мере часть реакционной способности таких реакционноактивных веществ исчезает и/или, по меньшей мере, часть указанных реакционно-активных веществ удаляется. Не существует особых ограничений в отношении указанной предварительной обработки, хотя предпочтительно сухое нагревание. Например, из вещества, которое содержит сахаридное соединение, содержащее уроновую кислоту и/или производное (производные) уроновой кислоты, удаляют воду и затем нагревают при 60-400°С в течение от нескольких секунд до нескольких дней с получением вещества, которое содержит сахарид, содержащий уроновую кислоту и/или производное(ые) уроновой кислоты. Для получения циклопентенона или его оптически активного соединения по настоящему изобретению пригодны белки и т.п., которые являются нерастворимыми, денатурированными или инактивирован002969 ными. Примером способа обработки сухим нагреванием является обработка пропеканием/прожариванием с применением горячего воздуха, как указано в японской выложенной патентной публикации Не1-02/79965, и с помощью указанного способа может быть эффективно получено большое количество термообработанного вещества, то есть пропеченного/прожаренного вещества. Не существует особых ограничений в отношении пропеченного/прожаренного вещества и его примерами являются пропеченные/прожаренные растения, животные и микроорганизмы, такие как пропеченные/прожаренные овощи, фрукты, зерна, грибы, морские водоросли, кора, хрящ. Другим примером является фракция, которую получают путем обработки указанного сахаридсодержащего вещества протеазой с последующим удалением из него разрушенных белков. Другими примерами являются фракция, полученная путем размельчения указанного сахаридсодержащего вещества с последующим промыванием водой, фракция, полученная путем подвергания указанного сахаридсодержащего вещества предварительной обработке кислотой, и фракция, полученная путем подвергания указанного сахаридсодержащего вещества щелочами. Все предварительно обработанные вещества, богатые циклопентеноном, как и те, которые пригодны для получения циклопентенона, охватываются веществом, которое содержит сахаридное соединение, содержащее уроновую кислоту и/или производное(ые) уроновой кислоты, как определено настоящим изобретением.

Промежуточное соединение для получения циклопентенона означает вещество, которое образуется во время термической обработки уроновой кислоты, производного(ых) уроновой кислоты, сахаридного соединения, содержащего уроновую кислоту и/или производное(ые) уроновой кислоты, и вещество, которое содержит сахаридное соединение, содержащее уроновую кислоту и/или производное(ые) уроновой кислоты, и которое превращается в циклопентенон в результате последующей реакции. Примерами промежуточного соединения для получения циклопентенона служат декарбоксилированные продукты уроновой кислоты, дегидратированные продукты уроновой кислоты и декарбоксилированные/дегидратированные продукты уроновой кислоты.

Полисахариды, которые являются сахаридными соединениями, содержащими уроновую кислоту и/или производное(ые) уроновой кислоты, могут быть произведены известными химическими, ферментативными или физическими методами. В случае пектина, например, может быть получен высокомолекулярный полисахарид, экстрагированный, например, из кожуры цитрусовых фруктов или яблок. Сырьем для получения в промышленном масштабе являются фрукты, и в дополнение к выжимке (в основном включающей внутриплодник) после получения сока цитрусовых фруктов, таких как лимон и лайм, также используются выжимки после получения яблочного сока. Такие выжимки преимущественно содержат нерастворимый протопектин и их солюбилизируют (экстрагируют) в процессе производства для получения пектина. Солюбилизацию можно проводить путем экстракции подкисленной водой, от теплой до горячей, когда условия, такие как температура, рН и время экстракции должным образом контролируются в зависимости от типа исходного материала, возможно получать пектин, обладающий заданным заранее молекулярным весом и степенью этерификации с высоким выходом. Экстракт очищают с помощью центрифугирования или фильтрации и концентрируют, и туда добавляют спирт, с помощью которого пектин может быть осажден и извлечен. Извлеченный осадок высушивают и измельчают для получения сухого пектина.

Основой структуры пектина служит частично метилированный полимер галактуроновой кислоты. Карбоксильная группа либо этерифицирована метилом, либо остается свободной кислотой, либо превращается в соль, такую как соль аммония, соль калия или соль натрия. В зависимости от степени этерификации метилом (ΌΜ; отношение метоксильных групп к общему количеству карбоксильных групп), пектин подразделяют на НМ пектин, имеющий высокий ΌΜ, и ЬМ пектин, имеющий низкий ΌΜ [НапбЬоок о£ Ма1епа15 ίοτ Беуе1орщд Ыете Рооб Ртобисй, под редакцией 8аЮ51и Уо^и/ипи е! а1., публикация К.К. Копп, стр. 114-119 (1991)] и в настоящем изобретении можно применять пектин, который коммерчески доступен как пищевая добавка [НапбЬоок о£ Ыа1ига1 Ртобисй, под редакцией Лкю Тоуата е! а1., издательство ЗйокиЫп То КадакиЗа. 12-е издание, стр. 138 (1993)], коммерчески доступный НМ пектин и ЬМ пектин и т.д. [см. вышеуказанный НапбЬоок о£ Ма1епак £от Беуе1орщд Ыете Рооб Ргобис1§].

Уроновая кислота, производные уроновой кислоты, олигосахариды и т.д., которые получают синтетическим путем, также могут быть использованы по настоящему изобретению.

Термообработанное вещество, применяемое в настоящем изобретении, может быть получено с использованием вещества, выбранного из (а) уроновой кислоты или производного(ых) уроновой кислоты, (Ь) сахаридного соединения, содержащего уроновую кислоту и/или производное(ые) уроновой кислоты, и (с) вещества, которое содержит сахаридное соединение, содержащее уроновую кислоту и/или производное(ые) уроновой кислоты, в качестве исходного материала.

Нет особых ограничений для способа термообработки при получении термообработанного вещества, используемого в настоящем изо бретении, в той мере, в которой может быть получен циклопентенон по настоящему изобретению. Так, например, уроновую кислоту, производное(ые) уроновой кислоты, сахаридное соединение, содержащее уроновую кислоту и/или производное(ые) уроновой кислоты, или вещество, которое содержит сахаридное соединение, содержащее уроновую кислоту и/или производное(ые) уроновой кислоты нагревают при 60350°С в течение от нескольких секунд до нескольких дней или предпочтительно при 80150°С в течение от нескольких минут до нескольких дней. В случае пектина термообработанное вещество, содержащее циклопентенон, может быть получено нагреванием, например, при 80-150°С в течение от нескольких минут до нескольких дней. В противоположном варианте, когда нагревают уроновую кислоту, лактон уроновой кислоты или эфир уроновой кислоты при 60-150°С в течение от нескольких минут до нескольких дней, может быть получено желаемое термообработанное вещество, содержащее циклопентенон. Такое термообработанное вещество содержит транс-циклопентенон и небольшое количестве цис-циклопентенона, в которых гидроксильные группы в положениях 4 и 5 находятся в транс- и цис-конфигурациях, соответственно. Подтверждено, что транс-циклопентенон и небольшое количество цис-пентенона содержатся в этом термообработанном веществе, при введении циклопентенона, очищенного из этого термообработанного вещества, в реакцию с уксусным ангидридом в безводном пиридине, и отделении образующегося 4,5-диацетилциклопентенона колоночной хроматографией на силикагеле с последующим структурным анализом каждой из фракций с помощью ядерного магнитного резонанса.

Нет особых ограничений для величины рН при температурной обработке, и ее предпочтительно проводить в условиях от нейтральной до кислой среды. В процессе нагревания рН можно устанавливать в зависимости от вида используемых продуктов, но обычно образованию циклопентенона способствует нагревание в кислой среде.

Нет особых ограничений в отношении концентрации продуктов при термообработке, в той мере, насколько концентрация находится в таком диапазоне, что образуется циклопентенон, и они могут быть установлены с учетом технологичности процесса, выхода и т. д.

Термообработка по настоящему изобретению может представлять собой либо влажное нагревание, либо сухое нагревание, хотя в отношении эффективности получения циклопентенона настоящего изобретения предпочтительно влажное нагревание. В случае влажного нагревания может быть применен любой из способов влажного нагревания, такой как нагревание паром, нагревание с паром при высоком давлении, нагревание при высоком давлении и т.д., в то время, как в случае сухого нагревания может быть применен любой из способов сухого нагревания, такой как прямое нагревание сухим и горячим воздухом и непрямое нагревание горячим источником через перегородки. Примерами сухого нагревания является сухое нагревание воздушной струёй и сухое нагревание разбрызгиванием, а примерами непрямого нагревания служит сухое нагревание в барабане и т.д.

Циклопентенон в термообработанном продукте, применяемом в настоящем изобретении, может быть выделен при использовании в качестве показателя противоракового действия, антибактериального действия, индуцирующего апоптоз действия и т. д. В отношении способов выделения может быть использован любой из известных способов очистки и выделения, таких как химические методы и физические методы. Так, могут быть совместно применены методы очистки, которые уже известны, такие как гельфильтрация, фракционирование с помощью мембраны, фракционирующей по молекулярному весу, экстракция растворителем, фракционная перегонка, различные хроматографические методы, использующие ионообменную смолу или прямую или обращенную фазу и т.д., с помощью которых циклопентенон, образовавшийся в термообработанном веществе, может быть выделен.

Например, когда в качестве уроновой кислоты применяют Ό-глюкуроновую кислоту, и ее 1% раствор нагревают при 121°С в течение четырех часов, в термообработанном веществе образуется циклопентенон. Циклопентенон из этого термообработанного вещества экстрагируют растворителем и экстракт концентрируют. Затем этот концентрированный экстракт разделяют с помощью колоночной хроматографии на силикагеле, фракцию элюированного циклопентенона концентрируют и циклопентенон экстрагируют хлороформом из концентрата, в результате чего выделяют циклопентенон из термообработанного вещества.

В противоположном варианте указанную выше термообработанную глюкуроновую кислоту помещают на колонку с ионообменной смолой, предпочтительно анионообменной смолой, и неадсорбированную фракцию собирают, в результате чего счищают циклопентенон. В другом противоположном варианте указанную выше термообработанную глюкуроновую кислоту помещают на колонку с активированным углем, неадсорбированную фракцию удаляют и колонку промывают и элюируют гидрофильным органическим растворителем, таким как водный раствор этанола (предпочтительно водный раствор этанола с концентрацией 40% или выше), благодаря чему получают очищенный циклопентенон. При объединении этих методов может быть получен циклопентенон высокой степени чистоты.

Когда выделенный циклопентенон подвергают оптическому разделению, можно получить (-)-4,5-дигидрокси-2-циклопентен-1-он и (+)4,5-дигидрокси-2-циклопентен-1-он по настоящему изобретению. Само собой разумеется, что циклопентенон, полученный синтетическим способом, также может быть подвергнут оптическому разделению по способу настоящего изобретения.

Разделение оптически активных веществ можно проводить путем механического разделения рацемической смеси, предпочтительно кристаллизации, разделения с помощью кристаллизации в виде солей диастереомеров или в виде присоединяемых соединений, динамического разделения с применением ферментов или микроорганизмов, разделения с помощью хроматографии и т. п.

В случае разделения с помощью хроматографии может быть использована газовая хроматография, жидкостная хроматография, тонкослойная хроматография и т.п., и может быть использована хиральная стационарная фаза, которая подходит для каждой из них.

Способ с применением хиральной стационарной фазы, способ с применением хирального элюата, разделение в виде диастереомеров и т.д. могут быть использованы для оптического разделения с помощью жидкостной хроматографии.

В качестве хиральной стационарной фазы может быть применена стационарная фаза амидного типа, она же мочевинного типа, она же лиганд-обменного типа, стационарная фаза полисахарид-производное полисахарида, белковая стационарная фаза, стационарная фаза эфира полиметакриловой кислоты, стационарная фаза полиметакриламида и т.п.

В отношении элюирующей жидкости, жидкости типа гексана, типа спирта, типа воды (буфера) и т.д. могут быть подходящим образом использованы, принимая во внимание сочетание с вышеупомянутой стационарной фазой.

В качестве способа получения циклопентенона, применяемого в настоящем изобретении, может применяться любой способ. Так, циклопентенон можно получать способом, описанным в настоящем изобретении, или химическим синтезом [СагЬопубга1е Кекеагсй, том 247, стр. 217-222 (1993); НеКейса СЫш1са Ас1а, том 55, стр. 2838-2844 (1972)], и в настоящем изобретении применяются транс- и цис-соединения циклопентенона. Нет необходимости отмечать, что оптически активные производные циклопентенона, полученные химическим синтезом, входят в оптически активное вещество по настоящему изобретению. Далее, может быть также использован циклопентенон, который получают из термообработанного вещества, по меньшей мере одного, выбранного из уроновой кислоты, производного уроновой кислоты, сахаридного соединения, содержащего уроновую кислоту и/или производное уроновой кислоты, и вещества, которое содержит сахаридное соединение, содержащее уроновую кислоту и/или производное(ые) уроновой кислоты, а также очищенного продукта и оптически активного его вещества.

Когда циклопентенон и/или его оптически активное производное используются в качестве активного ингредиента и вводятся в состав фармацевтического препарата путем объединения с известными фармацевтическими носителями, может быть получено антибактериальное средство.

Обычно, циклопентенон и/или его оптически активное вещество смешивают с фармацевтически приемлемым жидким или твердым носителем и, если необходимо, добавляют растворитель, диспергирующий агент, эмульгатор, буфер, стабилизатор, наполнитель, связующее средство, разрыхляющий агент, смазывающее средство и т.д., что дает препарат в твердом виде, такой как таблетки, гранулы, разбавленные порошки, порошки, капсулы и т.д., или в жидком виде, таком как растворы, суспензии, эмульсии и т.п. Далее, он может быть в виде сухого препарата, который может переходить в жидкий при добавлении перед употреблением соответствующего носителя.

Фармацевтический носитель может быть выбран в зависимости от указанного выше способа введения и формы приготовления. В случае приготовления для перорального введения могут применяться крахмал, лактоза, сахар, маннит, карбоксиметилцеллюлоза, кукурузный крахмал, неорганические соли и т.п. При получении пероральных препаратов дополнительно с ними могут смешиваться связующие агенты, разрыхляющие агенты, поверхностно-активные агенты, смазывающие агенты, стимуляторы разжижения, средства, корректирующие вкус, окрашивающие агенты, отдушки и т. п.

С другой стороны, в случае препаратов для парентерального введения, они могут быть получены обычными способами, в них циклопентенон и/или его оптически активное вещество, которые являются действующим ингредиентом по настоящему изобретению, растворяют или суспендируют в растворителе, таком как дистиллированная вода для инъекций, физиологический солевой раствор, водный раствор глюкозы, растительное масло для инъекций, кунжутное масло, арахисовое масло, соевое масло, кукурузное масло, пропиленгликоль/полиэтиленгликоль и т.д., с последующим добавлением к ним, если необходимо, бактерицидных агентов, стабилизаторов, изотонических агентов, анальгетиков и т. д.

Антибактериальный агент по настоящему изобретению вводят по соответствующей схеме, зависящей от вида препарата. Не существует особого ограничения метода введения как такового, и он может быть введен путем перораль ного употребления, наружного употребления и инъекции. Инъекцию делают, например, внутривенно, внутримышечно, подкожно, внутрикожно и т.п., в то время как препараты для наружного применения включают суппозитории и т. п.

Доза антибактериального агента соответствующим образом определяется видом его препарата, методом введения, целью применения и возрастом, массой тела и симптомами больного, подвергаемого лечению, и не всегда, но обычно количество циклопентенона и/или его оптически активного вещества, содержащееся в препарате, составляет от 10 мкг до 20 мг/кг в день (для взрослых). Конечно, доза может изменяться в зависимости от различных условий, и, следовательно, в некоторых случаях может быть достаточной меньшая доза, чем указанные выше, в то время как в других случаях может быть необходима доза, большая, чем указанные выше. Фармацевтический агент по настоящему изобретению может быть введен непосредственно перорально, и дополнительно он может быть добавлен к любому пищевому продукту и напитку, так что агент может быть употреблен обычным путем. Кроме того, вещество, которое содержит циклопентенон и/или его оптически активное вещество, может применяться в качестве сырья для антибактериального пищевого продукта и напитка. Далее, оно может применяться вместе с этанолом, глицином, ацетатом натрия, аскорбиновой кислотой, эфирами глицерина с жирными кислотами, солью, ЭДТА и другими веществами с активностью антибиотиков.

Антибактериальный агент по настоящему изобретению, содержащий циклопентенон и/или его оптически активное вещество в качестве действующего ингредиента, может быть использован в качестве антисептического агента для улучшения сохранности пищи или напитка. Кроме того, циклопентенон и/или его оптически активное производное добавляют в пищевой продукт или напиток, с которыми он/они могут быть использованы при применении способа создания антисептических пищевого продукта или напитка.

Форма добавляемого в пищевой продукт или напиток антибактериального агента, содержащего циклопентенон и/или его оптически активное вещество, может быть любой: жидкой, пастообразной, в виде порошка, хлопьеобразной, гранулированной и т.д. Если учитывать применение простого способа обработки или смешивания с другими аддитивными компонентами, предпочтительно создавать агент в порошкообразной, хлопьевидной или гранулированной форме путем высушивания. Что касается способа высушивания, может применяться один из обычно используемых способов, таких как высушивание распылением, высушивание в ба рабане, ламинарная сушка, вакуумная сушка, лиофильная сушка и т. д.

Количество циклопентенона и/или его оптически активного производного, добавляемого в пищевой продукт или напиток, может применяться в зависимости от вида пищевого продукта или напитка, и количество их приемов может быть увеличено.

Один из способов применения антибактериального агента настоящего изобретения заключается в том, что агент добавляют в пищевой продукт или напиток подходящим способом. Нет специального ограничения для способа добавления, но в конце концов циклопентенон и/или его оптически активное вещество содержится(атся) в пище или напитке, поступая любым способом. Соответственно, при применении антибактериального агента настоящего изобретения термин добавление охватывает все способы, с помощью которых циклопентенон и/или его оптически активное вещество оказываются в пище или напитке. Хотя общим способом является его/их добавление на этапах производства пищевого продукта или напитка, может быть также применен способ, при котором пищевой продукт погружают в раствор, содержащий циклопентенон и/или его оптически активное вещество. Возможно также применять способ его добавления в пищевой продукт одновременно со способом погружения пищевого продукта в раствор. Примерами пищевого продукта, который подходит для способа погружения, является пищевой продукт, который не теряет своей формы даже в воде перед замораживанием, такой как рыба или отбивная из мяса домашнего скота (например, кашаЬоко [вареная рыбная-отбивная] и венская колбаска), лапша (например, отварная лапша) и мороженный продукт из рыбы, моллюсков, крабов и других морских животных, имеющих панцирь, креветок.

При применении антибактериального агента по настоящему изобретению в качестве антисептического агента сохранность пищи или напитка может быть дополнительно улучшена. В случае замороженной пищи или замороженного десерта рост сопутствующих микроорганизмов на стадии обработки перед замораживанием может быть подавлен, благодаря чему может быть получен очень благоприятный результат в плане гигиены. Антибактериальный агент по настоящему изобретению эффективен в отношении как граммположительных, так и граммотрицательных бактерий, и очень эффективен, например, в отношении резистентных к лекарствам бактериям, таким как метициллинрезистентному 81арйу1ососси8 аиге1ик и бактериям, которые вызывают пищевое отравление, таким, как 8а1топе11а, энтеротоксинпродуцирующие 81арйу1ососси5 аиге1ик, ВасШик сегеик рвотного типа, ВасШик сегеик диарейного типа и энтероррагических ЕксйепсЫа сой 0-157. Он также эффективен в отношении бактерий ЫосЫ

Далее, он проявляет антибактериальное действие по отношению к микроорганизмам, вызывающим заболевания, которые вызываются микроорганизмами, такими как ЬедюпеИа рпеишорййа (микроорганизм, вызывающий болезнь легионеров), У1Ьпо рагайаешо1уйси8 (микроорганизм, вызывающий пищевое отравление), НейсоЬас1ег ρϊΐοη (микроорганизм, вызывающий язву), Сашру1оЬас1ег )е)шн (микроорганизм, вызывающий энтерогастрит) и т.д., включая Ьедюпе11а рпеишорййа (АТСС 33153), У1Ьпо рагайаешо1уйси8 (АТСС 17802), НейсоЬас1ег рйоп (Ж.’ТС 11637), Сашру1оЬас1ег )е)шн (АТСС 29428) и т.д. Он также эффективен в отношении таких микроорганизмов, как дрожжи и грибы. Антисептический агент, содержащий циклопентенон и/или его оптически активное вещество, полученный из натуральной пищи, особенно полезен в качестве натурального предохраняющего от пищевого отравления агента и в качестве стерилизующего агента. В данном случае стерилизация одежды, постельного белья и т.д. может проводиться с применением антибактериального агента по настоящему изобретению, и когда проводят разбрызгивание антибактериального агента по настоящему изобретению или пропитывание антибактериальным агентом по настоящему изобретению, возможно стерилизовать (как для удаления, так и для уничтожения бактерий) объект, подлежащий стерилизации. Например, когда его добавляют в воду для воздушного кондиционирования офисных зданий, это может предотвратить болезнь легионеров.

Антибактериальный агент по настоящему изобретению проявляет антибактериальное действие по отношению к бактериям, вызывающим кариес зубов и вызывающим периодонтальное заболевание, и могут быть предложены пероральные препараты, содержащие антибактериальный агент по настоящему изобретению. Форма перорального препарата может быть известной, такой как жидкость или паста. Примером перорального препарата служит средство для чистки зубов. Средство для чистки зубов может быть в известной форме, такой как жидкость, паста или порошок. Нет особого ограничения в отношении количества циклопентенона и/или его оптически активного производного в средстве для чистки зубов, и если в нем содержится эффективная концентрация в отношении бактерий, вызывающих кариес зубов и периодонтальное заболевание, этого будет достаточно. К средству для чистки зубов могут быть добавлены известные добавки, такие как увлажняющие агенты, поверхностно-активные агенты, связующие агенты, отдушки, подсластители и т.д. В качестве активного ингредиента средства для чистки зубов по настоящему изобретению могут быть использованы циклопентенонсодержащие вещества, такие как термообработанные овощи, фрукты и т.д., пероральный препарат, содержащий такой термообработанный продукт, который содержит циклопентенон, такой как средство для чистки зубов, может быть также включен в объем настоящего изобретения.

Можно предложить антибактериальные косметические средства с применением антибактериального агента по настоящему изобретению. Примерами косметических средств по настоящему изобретению являются основные косметические средства, содержащие эффективное количество циклопентенона и/или его оптически активного вещества в таких формах, как крем, очищающее молочко, лосьон, материал и тампон для умывания; декоративная косметика, такая как помада и основа под макияж; мыло для тела; и мыло. Оно также применимо для волос и может быть введено в продукты по уходу за волосами, включая такие продукты для волос, как средство для укрепления волос, жидкость для волос, лосьон для укладки волос, средство для придания объема волосам, крем для волос и лак для волос; туалетные средства для волос, такие как шампунь, ополаскиватель и средство для обработки волос. Обычно его количество в косметических средствах составляет от 10^-3 до 10 частей (по массе, применяемое здесь далее в том же смысле) или предпочтительно от 10^-2 до 1 части циклопентенона и/или его оптически активного производного на 100 частей косметического препарата. Что касается других ингредиентов, могут быть применены те, которые предварительно смешаны с косметическими средствами. Косметический продукт по настоящему изобретению эффективно действует на микроорганизмы, вызывающие атопический дерматит и оказывает значительное облегчающее и профилактическое действие в отношении атонического дерматита.

Можно также предложить средство для ванн с применением антибактериального агента настоящего изобретения. Средство для ванн по настоящему изобретению может быть выполнено в виде порошка, гранул, твердого вещества, жидкости и т.д., содержащих эффективное количество циклопентенона и/или его оптически активного вещества. Смешиваемое количество в отношении агента для ванн составляет обычно около 10-100 частей (по массе, применяемое здесь далее в том же смысле) или предпочтительно 20-90 частей циклопентенона и/или его оптически активного вещества на 100 частей агента для ванны. Обычно на 200 л горячей воды добавляют около 5-25 г средства для ванн, приготовленного таким образом.

Что касается других ингредиентов средства для ванн, могут использоваться те, которые обычно смешиваются с ним. Средство для ванн по настоящему изобретению эффективно действует на микроорганизмы, вызывающие атопический дерматит, а также оказывает значительное облегчающее и профилактическое действие при атопическом дерматите. Он эффективен для уничтожения вызывающих его микроорганизмов в ванной комнате.

Как таковое настоящее изобретение относится к антибактериальному средству, которое может использоваться в качестве фармацевтического, косметического агентов и средство для ванн. Кроме того, пищевой продукт или напиток, содержащие циклопентенон и т.д., очень полезны для облегчения и/или предотвращения пищевого отравления, энтерогастрита и т.д.

Нет особого ограничения на антибактериальный пищевой продукт или напиток по настоящему изобретению, и их примерами являются обработанные сельскохозяйственные и лесные продукты, обработанные мясные продукты, обработанные рыбные продукты и т.д., а также обработанные зерна (например, обработанная пшеничная мука, обработанный крахмал, обработанный премикс, лапша, макароны, хлеб, бобовая паста, коЬа [гречишная лапша], Гн [хлеб из пшеничной клейковины], ЬйГии [китайская лапша, сделанная из рисовой муки], кагикате [плитки бобового желе] и упакованный рисовый кекс), обработанный жир/масло (например, пластичные жир/масло, масло для глубокого прожаривания, прованское масло, майонез и приправа) обработанная соя (например, 1оГн [створоженная соя], пню [соевая паста] и иайо [ферментированная соя]), обработанные мясные продукты (например, ветчина, бекон, прессованная ветчина и колбаса), рыбные продукты (замороженная рыбная паста, катаЬоко [вареная рыбная паста], скПаига [вид продукта из рыбной пасты], катрен [пирог из растолченной рыбы], ка1китааде [обжаренные рыбные шарики], 1кнт1ге [рыбные шарики, приготовленные на пару], кир [паста из недоваренной рыбы], ветчина из мяса рыбы, колбаса, высушенный тунец, обработанные продукты из икры рыб, консервированные рыбные продукты и 1кикибаш [пища, приготовленная кипячением в соевом соусе]), молочный продукт (например, простокваша, сливки, йогурт, масло, сыр, концентрированное молоко, сухое молоко и мороженое), обработанные овощные и фруктовые продукты (например, пюре, джемы, соления, фруктовые напитки, напитки из овощей и смешанные напитки), кондитерские продукты (например, шоколад, бисквит, сдобные булочки с изюмом, кекс, тосЫдакЫ [круглый рисовый пирог] и рисовые крекеры), алкогольные напитки (например, сакэ [японское рисовое вино], китайские вина, вино, виски, ккоски [японский перегнанный ликер], водка, бренди, джин, гат, пиво, охлажденные алкогольные напитки, фруктовое вино и ликеры], напитки к столу (например, зеленый чай, чай, черный китайский чай, кофе, освежающий напиток и напиток с молочной кислотой), приправы (например, соевый соус, \Уоок1ег соус, уксус и ттп (подслащенное японское вино), консервированная, бутилированная и упакованная в мешки пища (например, вареный рис с мясом и приправой, кататейп [вареный рис, помещенный в маленький горшочек], кек ί кап [праздничный красный рис], рис с кэрри и другие полностью приготовленные пищевые продукты), полусухая или концентрированная пища (например, печеночный паштет и другие пасты, суп для кока и ибоп [оба являются типичными видами японской лапши] и концентрированный суп), сухая пища (например, лапша быстрого приготовления, кэрри быстрого приготовления, кофе быстрого приготовления, сок в порошке, суп в порошке, суп из соевой пасты быстрого приготовления, сублимированная пища, сублимированный напиток и сублимированный суп), замороженная пища (например, замороженный кик1уак1, ска\\'аппшс1и [рагу из мяса и овощей, приготовленное в горшочке на пару], гамбургер, китайский ккао-та1, дуоха [зажаренная клецка, фаршированная измельченной свининой], различные плитки и фруктовые коктейли), твердые пищевые продукты, жидкие пищевые продукты (например, суп) и специи.

Не существует особых ограничений в отношении метода производства пищевого продукта и напитка по настоящему изобретению, но могут применяться приготовление, обработка и обычно применяемые способы производства пищевого продукта и напитка, обеспечивающие наличие в полученной пище или напитке циклопентенона и/или его оптически активного вещества.

Приготовление и обработка пищи должны проводиться таким образом, чтобы циклопентенон и/или его оптически активное производное содержались в термообработанном продукте из материала, выбранном из (а) уроновой кислоты или производного(ых) уроновой кислоты, (Ь) сахаридного производного, которое содержит уроновую кислоту и/или производное(ые) уроновой кислоты и (с) вещества, содержащего сахаридное производное, которое содержит уроновую кислоту и/или производное(ые) уроновой кислоты.

Таким образом, перед, в течение или после приготовления/обработки термообработанный продукт из материала, выбранного из (а) уроновой кислоты или производного(ых) уроновой кислоты, (Ь) сахаридного производного, которое содержит уроновую кислоту и/или производное(ые) уроновой кислоты, и (с) вещества, содержащего сахаридное производное, которое содержит уроновую кислоту и/или производное(ые) уроновой кислоты, которые содержат циклопентенон и/или его оптически активное вещество, можно добавлять или, в противном случае, приготавливаемый/обрабатываемый продукт или его исходный материал добавляют к термообработанному продукту из материала, выбранного из (а) уроновой кислоты или производного(ых) уроновой кислоты, (Ь) сахаридного производного, которое содержит уроновую кислоту и/или производное(ые) уроновой кислоты, и (с) вещества, содержащего сахаридное производное, которое содержит уроновую кислоту и/или производное(ые) уроновой кислоты, которые содержат циклопентенон и/или его оптически активное производное, тем самым циклопентенон и/или его оптически активное производное в указанном термообработанном веществе можно разбавить.

Далее, при производстве пищевого продукта или напитка термообработка может проводиться на любой стадии, благодаря чему циклопентенон и/или его оптически активное производное могут оказаться в термообработанном веществе, или, в противном случае, термообработанное вещество, которое содержит циклопентенон и/или его оптически активное вещество, может быть добавлено туда. Возможно также, чтобы пищевой продукт, напиток или их сырье добавляли к термообработанному веществу, которое содержит циклопентенон и/или его оптически активное производное, таким образом, что циклопентенон и/или его оптически активное производное в указанном термообработанном веществе может быть разбавлено. Добавление может проводиться либо однократно, либо в несколько этапов. Так, пищевой продукт и напиток, проявляющие новое физиологическое действие, могут производиться просто и удобно. В данном случае пищевой продукт или напиток, которые содержат циклопентенон и/или его оптически активное производное в термообработанном веществе, образующемся при производстве в виде составных компонентов после добавления (а) уроновой кислоты или производного(ых) уроновой кислоты, (Ь) сахаридного производного, которое содержит уроновую кислоту и/или производное(ые) уроновой кислоты, и (с) вещества, содержащего сахаридное соединение, которое содержит уроновую кислоту и/или производное(ые) уроновой кислоты также охватываются настоящим изобретением. В случае, когда применяется любая из стадий, пищевой продукт или напиток, в которых содержатся циклопентенон и/или его оптически активное производное, добавленные и/или разбавленные, определяются как пищевой продукт или напиток по настоящему изобретению.

Нет особого ограничения на содержание циклопентенона и/или его оптически активного производного, обладающих физиологическим действием, в пищевом продукте, но содержание может быть соответствующим образом подобрано в свете органолептических свойств и физиологической активности, такой как антибактериальное действие. Тем не менее, например, содержание циклопентенона и/или его оптически активного вещества в 100 частях пищевого продукта составляет 5 х 10^-6 частей или более, и в свете органолептических свойств и физиологического действия в качестве пищевого продукта предпочтительно от 10^-5 до 5 частей или более предпочтительно от 10^-4 до 2 частей.

Нет особого ограничения на содержание циклопентенона, обладающего физиологическим действием, в напитке, но содержание может быть соответствующим образом подобрано в свете органолептических свойств и физиологической активности, такой как антибактериальное действие. Тем не менее, например, содержание циклопентенона в 100 частях напитка составляет 5 х 10^-6 частей или более, в свете органолептических свойств и физиологического действия напитка предпочтительно от 10^-5 до 5 частей или более предпочтительно от 10^-4 до 2 частей.

Нет конкретных ограничений для формы пищевого продукта или напитка по настоящему изобретению, в той мере, как циклопентенон и/или его оптически активное производное, обладающие физиологическим действием, таким как антибактериальное действие, добавляется в них и/или разбавляется ими. Таким образом, форма включает потребляемые перорально формы, такие как таблетки, гранулы, капсулы, гель и золь.

Как указано выше, циклопентенон и/или его оптически активное производное, применяемые по настоящему изобретению, могут быть получены с небольшими затратами и, благодаря их различным физиологическим функциям, он/они могут быть применены в качестве добавки (добавок) к пище или напитку, благодаря чему теперь возможно легко снабдить различными физиологическими функциями, антибактериальной активностью и т.д. пищевой продукт или напиток. Таким образом, циклопентенон и/или его оптически активное вещество по настоящему изобретению являются достаточно полезными в качестве добавки (добавок) к пищевому продукту или напитку.

Циклопентенон и/или его оптически активное производное, применяемое по настоящему изобретению, могут быть получены любым способом. Так, они могут быть получены способом, описанным в настоящем изобретении, или химическим синтезом. Таким образом, все: пищевой продукт, напиток, антибактериальные агенты, содержащие циклопентенон и/или его оптически активное вещество, охватываются настоящим изобретением.

Циклопентенон и/или его оптически активное производное не проявляет(ют) токсичность на мышах при пероральном введении 100 мкг/кг.

Как указано здесь выше в совокупности, циклопентенон и/или его оптически активное производное могут быть легко получены с низкими затратами, и, благодаря их различным физиологическим функциям, являются достаточно полезными в широкой области, включая фармацевтические препараты и пищевой продукт.

Пример 1.

(1) Ό-Глюкуроновую кислоту (С 5269; производство 81дта) (10 г) растворяли в 1 л во ды, нагревали при 121°С в течение четырех часов и концентрировали в вакууме до приблизительно 10 мл. Продукт смешивали с 40 мл верхнего слоя 3:2:2 бутилацетата, уксусной кислоты и воды и центрифугировали, и полученную надосадочную жидкость концентрировали в вакууме до приблизительно 10 мл.

Этот экстракт наносили на силикагель (В^-3008Р; 2 х 28 см; производство Рир 8йус1а) для колоночной хроматографии и проводили разделение с помощью верхнего слоя смеси 3:2:2 бутилацетата, уксусной кислоты и воды в качестве элюента при скорости потока около 5 мл в минуту под давлением 0,2 кг/см², создаваемом компрессором. Фракционирование проводили так, чтобы объем одной фракции составлял 10 мл и часть каждой фракции анализировали тонкослойной хроматографией, при этом циклопентенон высокой частоты был обнаружен во фракциях с 61-й по 80-ю. Эти фракции объединяли, концентрировали в вакууме, экстрагировали 40 мл хлороформа, и экстракт концентрировали в вакууме с получением 100 мг циклопентенона.

Фракцию выделяли с помощью ВЭЖХ с прямой фазой с использованием РЛЬРЛСК тип 8 колонки, при этом определение проводили по поглощению в ультрафиолете при 215 нм, чистота составила 98%.

(2) Масс-спектрометрический анализ указанного выше циклопентенона проводили с помощью масс-спектрометра ΌΧ302. Кроме того, структурный анализ проводили с помощью ЯМР, используя в качестве растворителя дейтерированный хлороформ. Прибором для ядерного магнитного резонанса являлся ΡΝΜ-Ά-500. Специфическое вращение измеряли ΌΙΡ-370 поляриметром (производство Νίρροη Випко), ультрафиолетовый спектр поглощения снимали на спектрофотометре ИУ-2500 (производство 81ιίιη;·ιάζιι); а инфракрасный спектр поглощения записывали на инфракрасном спектрофотометре ΡΤΙΚ.-8000 (производство 81ιίιη;·ιάζιι). Результаты масс-спектрофотометрического анализа и ЯМР были теми же, что и в примере 1-(4).

Результаты других анализов были следующими.

Оптическое вращение; [а]_с ²⁰ 0° (с = 1,3, вода)

ИК (КВг метод): поглощение отмечено при 3400, 1715, 1630, 1115, 1060, 1025 см^-1.

УФ: λ,,,,,,· 215 нм (вода).

Пример 2.

1% водный раствор Ό-глюкуроновой кислоты (О 5269; производство 81дша) нагревали при 121°С в течение 4 ч, и рН доводили до 7 с помощью 1н. ΝαΟΗ. Образец наносили на колонку Н1Тгар О (5 мл; производство Рйатшас1а), уравновешенную водой, и колонку промывали 25 мл воды. Фракцию (5 мл), которую элюировали с колонки первой, называли Р0 фракцией, вторую фракцию (5 мл) называли Р1 фракцией; третью (10 мл) называли Р2 фракцией; и последнюю (10 мл) называли Р3 фракцией. После этого колонку уравновешивали 25 мл 0,5 М уксусной кислоты. Фракцию (5 мл), которую элюировали с колонки первой, называли Е0 фракцией; вторую фракцию (5 мл) называли Е1 фракцией, третью (5 мл) называли Е2 фракцией; и последнюю (10 мл) называли Е3 фракцией.

Часть каждой фракции анализировали с помощью тонкослойной хроматографии и обнаружили, что циклопентенон содержался во фракции Р1 и был количественно выделен из этой фракции. В Р1 фракции не было ни непрореагировавшей глюкуроновой кислоты, ни восстановленной кислоты, которая была тем продуктом реакции, который содержался до очистки на колонке Н1Тгар О.

Пример 3.

Коммерчески доступный глюкуронолактон (производство Мегск; каталожный № 100282) растворяли в воде до концентрации 1% и нагревали при 121°С в течение 0,5, 1, 2, 4 или 16 ч. Термообработанный раствор триметилсилилировали и подвергали газохроматографическому анализу.

Ниже представлены результаты анализа.

Время нагревания (ч)	Количество циклопентенона (мкг/100 мкл)	Степень превращения (%; в моль)
0,5	9,28	1,43
1	21,0	3,26
2	52,8	8,15
4	119	18,3
16	132	20,4

В результате степень превращения глюкуронолактона в циклопентенон при термообработке составляла 20% в молярном выражении.

Кроме того, из раствора глюкуронолактона, нагреваемого в течение 16 ч, был выделен чистый циклопентенон с помощью метода, описанного в примере 1-(1).

Пример 4.

К 100 г капусты, поступающей в торговлю, добавляли воду (100 мл), и затем измельчали миксером. Подвергали взаимодействию с 5 мл протеиназы. К (20 мг/мл; # 9033 производство Такага 81ιιιζο) при 50°С в течение одного часа, после чего фильтровали и осадок промывали 1,5 л воды. К промытому осадку добавляли воду (100 мл) и полученную суспензию с рН 6,5 прогревали при 121°С в течение двух часов с последующей фильтрацией и получением фильтрата с рН 4,7. Фильтрат концентрировали в вакууме до 14 мл, смешивали с 36 мл метанола и центрифугировали при 4000 х д в течение 10 мин, и полученную надосадочную жидкость концентрировали в вакууме с получением 3,5 мл концентрированной жидкости.

Измеряли количество циклопентенона, содержащегося в этой концентрированной жидкости, и оно оказалось равным 24,9 мкг. Когда после измельчения миксером не проводили обработку протеиназой К и удаление белка промыванием водой, а только нагревали, циклопентенон не образовывался. Из этого результата ясно, что 0,87 мг циклопентенона были получены при обработке 100 г капусты протеиназой К, промывке водой для удаления белка и нагревании при указанных условиях.

После этого циклопентенон был получен в чистой форме из этой концентрированной жидкости в соответствии с методом примера 1-(1).

Пример 5.

Коммерчески доступные листья (2 г) зепсйа (зеленого чая среднего сорта), йорейа (поджаренного чая), черного китайского чая или чая измельчали с помощью миксера со 100 мл воды, доводили до рН 3 с помощью 1 н. серной кислоты и нагревали при 121°С в течение 16 ч. Количество циклопентенона, содержащегося в термообработанных продуктах, определяли с помощью гель-фильтрационной ВЭЖХ. В результате из зепсйа, йорейа, черного китайского чая и чая получено 0,19, 0,28, 0,34 и 0,12 мМ циклопентенона, соответственно. Эти продукты подвергали сушке с температурной обработкой на стадии получения с эффективным образованием циклопентенона.

Пример 6.

Пектин (производство Аако Риге Сйеписа1з; каталожный № 167-00542), альгиновую кислоту (ненабухающую; производство Аако Риге Сйетка1з; каталожный № 011-13341), Ό-αгалактуроновую кислоту (производство Ναοαίαί Тезсще; каталожный № 165-18) или Όглюкуроновую кислоту (производство Ναοαίαί Тезсще; каталожный № 169-28) растворяли в дистиллированной воде с получением 1% раствора. В случае пектина готовили также раствор в 1н. водном растворе уксусной кислоты.

рН 1% водного раствора пектина равнялся 3,4; рН 1 % раствора пектина в уксусной кислоте равнялся 2,6; рН водного раствора галактуроновой кислоты перед нагреванием равнялся 2,5; рН водного раствора глюкуроновой кислоты перед нагреванием равнялся 2,4; и рН водного раствора альгиновой кислоты перед прогреванием равнялся 3,3.

Эти 1% растворы нагревали при 121°С в течение 2,4 или 16 ч. рН каждого из термообработанных растворов доводили до 7 с помощью ΝαΟΗ и стерилизовали с помощью фильтра 0,22 мкм для получения образца для измерения количества образовавшегося циклопентенона.

Циклопентенон наносили в виде капли на пластинку 60 Р₂₅₄ силикагеля (производство Мегск) и разгоняли с помощью подвижной фазы (верхний слой смеси 3:1:1 бутилацетата, уксусной кислоты и дистиллированной воды), и после завершения разгонки тонкослойный силикагель высушивали, опрыскивали АдИО₃-ИН₃ раствором (смесь одинаковых количеств 0,1М АдИО₃и 5н. ΝΗ₃) и нагревали до проявления циклопентенона в виде пятна в области Κί = 0,3. Полученный таким образом образец для определения полученного количества циклопентенона разбавляли 2-, 5-, 10-, 20-, 50- и 100-кратно, и полученные разбавленные растворы подвергали ТСХ, как описано выше. В данном случае полученное количество циклопентенона из 2-кратно разбавленного раствора термообработанного продукта 1% водного раствора пектина в течение двух часов было принято за одну единицу, и было определено количество циклопентенона в каждом из термообработанных продуктов.

Результаты показаны в табл. 1.

В каждом из образцов образование циклопентенона увеличивалось с увеличением времени прогревания, и в термообработанных продуктах водного раствора галактуроновой кислоты одна единица и 5 единиц циклопентенона образовывались через 30 мин и один час, соответственно, тогда как в термообработанных продуктах водного раствора глюкуроновой кислоты через 30 мин и один час образовывалось, соответственно, 5 единиц и 10 единиц циклопентенона.

Таблица 1

Образец для нагревания	Время нагревания (ч)	рН перед нагреванием	рН после нагрева ния	рН после установления	Образованный циклопентенон, ед.
1% водн. р-р пектина	2	3,4	3,3	7,0	1
4	3,4	3,2	7,2	5
16	3,4	3,5	7,0	10
1% р-р в уксусной кислоте	2	2,6	2,7	7,0	1
4	2,6	2,6	7,2	2
16	2,6	2,8	7,1	10
1% водн. р-р галактуроновой кислоты	2	2,5	2,4	6,9	10
4	2,5	2,4	6,8	25
16	2,5	2,6	6,9	50
1% водн. р-р глюкуроновой кислоты	2	2,4	2,7	6,9	25
4	2,4	2,6	7,0	50
16	2,4	2,8	7,0	50
1% водн. р-р альгиновой кислоты	2	3,3	2,5	6,9	5
4	3,3	2,7	7,0	5
16	3,3	2,9	7,3	10

Пример 7.

(1) Коммерчески доступный глюкуронолактон (производство Мегск; кат. № 100282) растворяли в воде с получением 1% раствора и нагревали при 121°С в течение 0,5, 1, 2, 4 или 16 ч. Термообработанные растворы триметилсилилировали, и количество полученного циклопентенона анализировали с помощью газовой хроматографии.

Результаты измерений представлены в табл. 2.

Таблица 2

Время нагревания (ч)	Кол-во циклопентенона (мкг/100 мкл)	Степень превращения (%) (рассчитано в мол.)
0,5	9,28	1,43
1	21,0	3,26
2	52,8	8,15
4	119	18,3
16	132	20,4

Данные показывают, что степень превращения глюкуронолактона в циклопентенон при прогревании в течение 16 ч была около 20% в расчете на моли.

Циклопентенон был очищен/выделен из указанного выше раствора, полученного путем нагревания глюкуронолактона в течение 16 ч, с помощью метода, указанного в примере 1-(1).

(2) Указанный выше глюкуронолактон растворяли в воде с получением 1%, 2%, 5%, 10% или 20% раствора с последующим нагреванием при 121°С в течение четырех часов. Этот термообработанный раствор триметилсилилировали и количество полученного циклопентенона определяли с помощью газовой хроматографии.

Результаты представлены в табл. 3.

Таблица 3

Концентрация глюкуронолактона (%)	Количество циклопентенона (мкг/100 мкл)	Степень превращения (%) (рассчит. в мол.)
0,1	15,1	23,2
1	99,2	15,3
3	229	11,8
5	365	11,3
10	455	7,03
20	592	4,58

В результате при использовании 0,1% водного раствора глюкуронолактона степень превращения глюкуронолактона в циклопентенон при прогревании была около 23% в расчете на моли.

(3) рН указанного выше 1% водного раствора глюкуронолактона доводили до 1, 2, 3 или 4, 5 с помощью НС1 или ΝαΟΗ с последующим нагреванием при 121°С в течение четырех часов. Этот термообработанный раствор триметилсилилировали и количество полученного циклопентенона определяли с помощью газовой хроматографии.

Результаты представлены в табл. 4.

Таблица 4

РН	Количество циклопентенона (мкг/100 мкл)	Степень превращения (%) (рассчитано в молях)
1	7,85	1,21
2	15,9	2,46
3	108	16,7
4,5	125	19,3

В результате, когда рН равнялся 4,5, степень превращения глюкуронолактона в циклопентенон при прогревании была около 19% в расчете на моли.

(4) рН 1% водного раствора галактуроновой кислоты доводили до 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 с помощью НС1 или ΝαΟΗ с последующим нагреванием при 121°С в течение четырех часов. Этот термообработанный раствор и количество полученного циклопентенона определяли с помощью газовой хроматографии.

Результаты представлены в табл. 5.

Таблица 5

РН	Количество циклопентенона (мкг/100 мкл)	Степень превращения (%) (рассчитано в молях)
1	16,6	2,83
2	66,6	11,3
3	42,7	7,27
4	7,36	1,25
5	5,47	0,931
6	5,45	0,927
7	0	0

В результате, когда рН равнялся 2, степень превращения глюкуроновой кислоты в циклопентенон при прогревании была около 11% в расчете на моли.

(5) рН 1 % водной суспензии альгиновой кислоты (ненабухающей) доводили до 1, 2, 3 или 4 с помощью НС1 или ΝαΟΗ. В другом варианте альгиновую кислоту (ненабухающую) растворяли для получения 1% раствора в 0,1М ацетатном буфере с последующим доведением рН до 5 или в 0,1М фосфатном буфере с последующим доведением рН до 6 или 7. Растворы нагревали при 121°С в течение четырех часов. Количество циклопентенона, содержащегося в нагретых растворах, определяли с помощью гель-фильтрационной ВЭЖХ в следующих условиях.

Колонка: Т8К гель α-2500 (7,8 х 800 мм; производство Τοκοΐι).

Температура колонки: 40°С.

Подвижная фаза: 0,01% водный раствор трифторуксусной кислоты.

Скорость протекания: 1 мл в минуту.

Определение: по поглощению при 215 нм.

Чистый циклопентенон, полученный в примере 1-(1), использовали в качестве стандартного соединения и определяли область пика циклопентенона, элюированного (со временем удерживания) около 10 мин, на основе измерения концентрации циклопентенона.

Результаты представлены в табл. 6.

Таблица 6

рН	рН после прогревания	Концентрация циклопентенона (мкг/100 мкл)	Степень превращения (%) (рассчитано в молях)
1	1,07	0	0
2	1,98	0,536	0,611
3	2,76	2,00	2,28
4	4,01	1,05	1,20
5	5,02	0,167	0,190
6	5,95	0	0
7	6,90	0	0

В результате, когда рН равнялся 3, степень превращения альгиновой кислоты в циклопентенон при прогревании была около 2,3% в расчете на моли.

Пример 8.

Помозин-пектин типа БМ-13СС (производство Негси1ез), альгиновую кислоту ΗΓΌ (производство Ωαίηίρροη РйагтасеШ1са1), Όглюкуроновую кислоту (производство Ыаса1а1 Теэдие) или глюкуронолактон (производство Мегск) растворяли или суспендировали в воде с получением концентрации 1% и последующим прогреванием при 30, 60, 95, 121 или 132°С в течение 16 ч. Циклопентенон в термообработанном веществе триметилсилилировали и определяли количество циклопентенона, образованного в термообработанном веществе, с помощью газовой хроматографии. Результаты представлены в табл. 7.

Таблица 7

Производное уроновой кислоты	Температура нагревания (°С)	Кол-во образованного циклопентенона (мкг/мл)
Пектин	121	176
132	128
Альгиновая кислота	121	466
132	75
Глюкуроновая кислота	95	302
121	718
132	132
Глюкуронолактон	95	274
121	781
132	161

Пример 9.

(1) Очищенный/выделенный циклопентенон, описанный в примере 1-(1), растворяли в воде, 10 мМ трис-НС1 (рН 7) или 10 мМ трис (рН 10) с получением концентрации 25 мМ, оставляли при комнатной температуре или при 4°С и анализировали с помощью ТСХ. В результате в обоих растворах - в воде и в 10 мМ трис-НС1 (рН 7), хранившихся при комнатной температуре и при 4°С в течение одного месяца, обнаруживали некие продукты распада, хотя основная часть оставалась нераспавшейся. В случае раствора в 10 мМ трис (рН 10) при комнатной температуре наблюдался быстрый распад, и когда анализ с помощью ТСХ проводили сразу после растворения, пятна циклопентенона не обнаруживали.

Когда растворенный в воде циклопентенон нагревали при 121°С в течение 30 мин и анализировали с помощью ТСХ, обнаруживали некие продукты распада, хотя основная часть циклопентенона оставалась нераспавшейся.

(2) 1 % водный раствор Ό-глюкуроновой кислоты нагревали при 121°С в течение четырех часов и разделяли на два образца, рН одного из которых не меняли, а рН другого доводили до 6,6 с помощью ΝηΟΗ. По 1 мл из каждого образца делили на порции и хранили при -20°С, 4°С или 37° С с последующим триметилсилилированием. После этого измеряли количество циклопентенона с помощью газовой хроматографии.

При хранении в течений 25 дней в случае хранения при 37°С в количестве циклопентенона отмечено некоторое снижение, в то время как при хранении при 4°С и при -20°С состояние было полностью стабильным. Указанный результат представлен на фиг. 1. Таким образом, на фиг. 1 представлен график, показывающий соотношение между временем хранения и количеством циклопентенона, на котором абсцисса представляет время хранения (дни), а ордината показывает концентрацию циклопентенона (мг/мл). На фиг. 1 пустой квадрат показывает случай, когда рН не меняли и хранили при -20°С; черный квадрат показывает случай, когда рН равнялся 6,66 и хранили при -20°С; пустой кружок показывает случай, когда рН не меняли и хранили при 4°С; черный кружок показывает случай, когда рН равнялся 6,66 и хранили при 4°С; пустой треугольник показывает случай, когда рН не меняли и хранили при 37°С, и черный треугольник показывает случай, когда рН равнялся 6,66 и хранили при 37°С.

Пример 10.

(1) Антибактериальное действие очищенного/выделенного циклопентенона, описанного в примере 1-(1), измеряли с использованием следующих штаммов. Итак, для измерения использовали следующие штаммы. Итак, тестируемый микроорганизм (1): 8а1тоие11а егИепНШз (штамм, вызывающий пищевое отравление), тестируемый микроорганизм (2): 8а1тоие11а 1урШтигшт (штамм, вызывающий пищевое отравление); тестируемый микроорганизм (3); 81арйу1ососсиз аигеиз РШ 722 (штамм, продуцирующий энтеротоксин типа А); тестируемый микроорганизм (4): 81арйу1ососсиз аигеиз (устойчивый к метициллину); тестируемый микроорганизм (5): ВасШиз сегеиз (штамм, вызывающий пищевое отравление рвотного типа); и тестируемый микроорганизм (6): ВасШиз сегеиз (штамм, вызывающий пищевое отравление диарейного типа). Все эти штаммы хранились в Департаменте гигиены колледжа питания Кадара.

Измерения антибактериального действия проводили по эффекту торможения роста каждого из тестируемых микроорганизмов и выражали в виде индекса. Итак, определенные количества каждого из тестируемых микроорганизмов добавляли к среде, содержащей циклопен тенон в определенной концентрации, и полученный раствор тестируемого микроорганизма инкубировали в течение 16 или 48 ч и после этого сравнивали количество жизнеспособных клеток.

Сначала определенную концентрацию циклопентенона добавляли в жидкую среду для тестирования чувствительности (производство Νίκκιιί) для проведения последовательного 2^Празведения. Затем раствор микроорганизма, подвергнутый преинкубации при 37°С в течение 16 ч в жидкой среде для тестирования чувствительности, инокулировали в количестве 10⁶ клеток/мл и инкубировали при 37°С. Измерение количества жизнеспособных клеток для каждого времени инкубации для каждого штамма проводили после разведения инкубируемого раствора до определенной степени с последующим распылением на поверхность твердой среды. При измерении количества клеток каждого из микроорганизмов использовали ΌΗΣ (производство Е1кеп), Вайб Рагкег агар (производство ВВЬ) и ΝΟΚΟ агар (производство Νίκκιιί) для 8а1топе11а, 8. аигеик и В. сегеик, соответственно. В случае лишь В. сегеик инкубацию проводили при 32°С. Измеренные количества клеток при каждом времени инкубации выражали в виде десятичного логарифма величины КОЕ (колонии, формирующие единицы)/мл. Следующая табл. 8 показывает количество тестируемых микроорганизмов после инкубации в течение 16 ч и табл. 9 показывает эти величины после инкубации в течение 48 ч. Циклопентенон проявляет антибактериальное действие в отношении любого из тестируемых микроорганизмов. В данном случае в таблицах 8-11 знак (-) в таблицах обозначает, что рост тестируемого микроорганизма не обнаружен.

Таблица 8

Концентрация добавленного образца в инкубационном растворе тестируемого микроорганизма (м.д.)	Кол-во тестируемого микроорганизма после инкубации в течение 16 ч (СРи/мл) Тестируемый микроорганизм
(1)	(2)	(3)	(4)	(5)	(6)
1563	-	-	-	-	-	-
781	-	-	-	-	-	-
391	-	-	6,1	-	-	-
195	3,0	3,0>	4,9	4,3	-	-
98	5,2	5,0	4,7	5,5	5,8	3,0
49	7,0	6,7	6,9	6,1	6,9	6,8
0	8,8	8,3	8,7	8,4	8,4	7,8

Таблица 9

Концентрация добавленного образца в инкубационном растворе тестируемого микроорганизма (м.д.)	Кол-во тестируемого микроорганизма после инкубации в течение 48 ч (СРи/мл) Тестируемый микроорганизм
(1)	(2)	(3)	(4)	(5)	(6)
1563					-	-
781					-	-
391					-	-
195					-	-
98					8,1	5,0
49	9,0	8,5	8,5		8,4	7,9

(2) Измеряли антибактериальное действие вышеуказанного циклопентенона по отношению к ЕксйейсЫа сой и к энтерогеморрагической ЕксйепсЫа сой. Тестировали следующие микроорганизмы.

Тестируемый микроорганизм (7): Ексйег1сЫа сой (8-0157:Η7, УТ1, 2-продуцирующий штамм); тестируемый микроорганизм (8): ЕксйейсЫа сой (Υ.3-0157:Η7, УТ1, 2продуцирующий штамм); тестируемый микроорганизм (9): ЕксйепсЫа сой (Υ.1-0157Ή7, УТ1продуцирующий штамм), тестируемый микроорганизм (10): ЕксйейсЫа со11 (8-026:ΗΝΜ, УТ1-продуцирующий штамм); тестируемый микроорганизм (11):

ЕксйейсЫа сой (8-0111:ΗΝΜ, УТ1, 2продуцирующий штамм); и тестируемый микроорганизм (12): ЕксйепсЫа сой (выделенный из пищи).

Все эти штаммы хранились в Департаменте гигиены колледжа питания Кадаета.

Измерение антибактериального действия проводили тем же способом, что и в примере 10-(1).

Сначала определенную концентрацию циклопентенона добавляли в жидкую среду для тестирования чувствительности (производство Νίκκιιί) и проводили последовательное 2^п разведение. Затем раствор микроорганизма, подвергнутый преинкубации при 37°С в течение 16 ч в жидкой среде для тестирования чувствительности, инокулировали в количестве 10⁶ клеток/мл и инкубировали при 37°С. Измерение количества жизнеспособных клеток для каждого времени инкубации для каждого штамма проводили после разведения инкубирующего раствора до определенной степени путем нанесения на поверхность твердой среды. При измерении количества клеток штамма использовали ΌΗΕ (производство Е1кеп). Измеренные количества клеток при каждом времени инкубации выражали в виде величины логарифма, как описано выше. Результаты представлены в следующих табл. 10 и 11. Циклопентенон проявлял антибактериальное действие в отношении любого из тестируемых микроорганизмов.

Таблица 10

Концентрация добавленного образца в инкубационном растворе тестируемого микроорганизма (м.д.)	Кол-во тестируемого микроорганизма после инкубации в течение 16 ч (СРи/мл) Тестируемый микроорганизм
(7)	(8)	(9)	(10)	(11)	(12)
1563	-	-	-	-	-	3,0>
781	-	-	3,0>	-	-	6,4
391	3,6	2,2	3,0>	-	3,6	5,8
195	4,7	4,7	3,0>	-	6,2	6,6
98	7,0	7,0	7,1	6,1	7,4	8,3
49	6,3	6,9	7,1	7,1	8,0	8,2
0	8,5	8,0	8,6	8,5	8,5	8,5

Таблица 11

Концентрация добавленного образца в инкубационном растворе тестируемого микроорганизма (м.д.)	Кол-во тестируемого микроорганизма после инкубации в течение 48 ч (СТи/мл) Тестируемый микроорганизм
(7)	(8)	(9)	(10)	(11)	(12)
1563
781	-	-	-	-	-	-
391	-	-	-	-	-	-
195	-	-	-	-	4,1	-
98	8,9	5,3	8,6	7,4	8,5	5,0
49	8,5	9,3	8,5	9,8	8,5	10,1

(3) Следующие микроорганизмы использовали для тестирования антибактериальной активности описанного выше циклопентенона. К ним относились тестируемый микроорганизм (13); ЕзсйепсШа сой НВ101 (АТСС 33694); тестируемый микроорганизм (14): 8а1шопе11а 1урЫшитшт ЬТ-2 (АТСС 27106); тестируемый микроорганизм (15): Рзеиботопаз ае гид то 5а (ΙΕΘ 3080), тестируемый микроорганизм (16): 81арНу1ососси5 аитеик 3А (ЫтСт 8319); тестируемый микроорганизм (17); Васй1и8 киЬПНк (ΙΕΘ 3034); и тестируемый микроорганизм (18): 81гер1ососси5 ти1ап5 (655); хранившиеся в Национальном институте здоровья.

Тестируемые микроорганизмы высевали для культивирования в течение ночи в Ьбульоне (1% триптон, 0,5% экстракт дрожжей и 5% №С1; рН 7,0). Культивируемый посев (5 мкл) инокулировали в среду, в которой к 5 мл Ьбульона было добавлено 25-200 мкг/мл циклопентенона, а также в среду, к которой ничего не было добавлено, и проводили инкубацию при встряхивании при 37°С для измерения роста. В начале инкубации, а также через 8 ч после ее начала измеряли помутнение культуры, применяя Еир 01дИа1 турбидиметр (проданный Еир Кодио КК; производство Актуата Эепк| 8е15акикйо) при условии, что нормализованная шкала равнялась 82,3, и рост тестируемого микроорганизма измеряли от величины (помутнения при росте), полученной вычитанием помутнения в начале инкубации, и из величины, полученной после восьми часов инкубации. Здесь в случае тестирования микроорганизма (18) вместо Ьбульона использовали вытяжку из мозга и сердца.

Результаты представлены в табл. 12, где обозначает, что не исследовали.

Таблица 12. (Помутнение при росте)

Тестируемый микроорганизм	Кол-во добавленного циклопентенона (мкг/мл среды)
0	25	50	100	200
(13)	222	0	0	0	0
(14)	273	-	-	0	0
(15)	239	2	0	0	0
(16)	243	203	158	0	0
(17)	267	145	9	0	0
(18	140	133	130	34	6

Таким образом, циклопентенон проявлял антибактериальную активность в отношении всех тестируемых микроорганизмов.

(4) Антибактериальную активность циклопентенона по отношению к бактериям 1пос1и исследовали следующими методами. Тестируемый микроорганизм подвергали стационарной инкубации в течение пяти дней в среде 8Ι (1арап Вте^ету Аззоаабоп), содержащей 10% этанол, для получения высеваемого микроорганизма. Высеваемый микроорганизм (0,1%) добавляли к 100 мл 10% этанолсодержащей среде 8Ι, к которой добавляли циклопентенон в количестве 0, 25, 50, 75 или 100 мкг/мл (в выражении на конечную концентрацию), затем проводили стационарную инкубацию в течение 5 дней и измеряли помутнение. При измерении помутнения определяли величину ΘΌ₆₀₀ с помощью абсорбциометра. Величину ΘΌ₆₀₀ среды, в которую не инокулировали тестируемый микроорганизм, вычитали из указанной выше величины, и полученную величину (помутнение при росте) использовали в качестве показателя роста тестируемого микроорганизма.

Тестировали следующие микроорганизмы. Итак, Ьас!оЬасШи8 Гтисбуотапв (ΙΕΘ 13118) (тестируемый микроорганизм А), ЬабоЬасШш Ггис1|уогап5 (1СМ 1198) (тестируемый микроорганизм В) и ЬабоЬасШиз 1юто1иос1ш (ΙΕΘ 13120) (тестируемый микроорганизм С) в качестве истинных бактерий 1пос1и, в то время, как Ьас!оЬасй1и8 г11атпо5И5 (ΙΕΘ 3532) (тестируемый микроорганизм Ό) применяли как ЫосЫ лактобактерии. Результаты представлены в табл. 13.

Таблица 13. (Помутнение при росте)

Тестируемый микроорганизм	Кол-во добавленного циклопентенона (мкг/мл среды)
0	25	50	75
А	0,96	0,17	0,02	0
В	2,03	0,01	0	0
С	1,61	0,32	0,08	0
э	0,35	0,04	0,01	0

Рост тестируемых микроорганизмов А, С и Ό полностью ингибировался при концентрации 75 мкг/мл, в то время как рост тестируемого микроорганизма В полностью ингибировался при концентрации 50 мкг/мл.

Таким образом, циклопентенон проявляет антибактериальное действие также в отношении бактерий 1иос1п.

Кроме того, циклопентенон проявляет антимикробную активность при высоких концентрациях также по отношению к грибкам, таким как 8асс11готусе5 сетеу181ае АТСС 9763, Сапб1ба а1Ысапз ΤΙΜΜ 0136 и АвретдШиз ГшшдаШ5 ΤΙΜΜ 1776.

Пример 11.

(1) У1Ьтю ратайаето1убси8 4387-61 или VIЬпо рагайаето1убси8 Т4144-1 (оба хранились в Национальном институте гигиенических наук) инокулировали в трипто-соевую бульонную среду (производство Νΐδδυΐ), содержащую 800, 400, 200, 100, 50, 25, 12,5, 6,5, 3,13 или 1,56 мкг/мл циклопентенона для получения 10⁶ клеток/мл и проводили стационарную инкубацию при 37°С в течение 24 ч. В результате не обнаружено роста микроорганизмов ни одного из штаммов во фракциях, в которые добавляли 12,5 мкг/мл циклопентенона.

Культуру (50 мкл), в которой не обнаружен рост микроорганизма, распыляли на 20 мл агаровой среды с трипто-соевым бульоном, не содержащей циклопентенон, и проводили инкубацию при 37°С в течение 24 ч. В результате ни в одном из штаммов не наблюдался рост микроорганизма на агаровой среде, на которую наносили фракцию (в которую добавляли 50 мкг/мл или более циклопентенона).

Из вышеприведенного следует, что циклопентенон проявляет антибактериальное действие по отношению к У1Ьг1о рагайаето1уйсик 4387-61 и У1Ьг1о рагайаето1уйсик Т4144-1 при 12,5 мкг/мл и проявляет бактерицидное действие по отношению к обоим штаммам при 50 мкг/мл.

(2) Сатру1оЬас1ег _)е.)иш А3309 (хранилась в Национальном институте гигиенических наук) инокулировали в среду из вытяжки мозга и сердца (производство Ийсо), содержащую 2% сыворотку плодов телят (производство Όηίηίρроп 8е1уакц) и проинкубировали при встряхивании при 37°С в течение 16 ч. Культуру (50 мкл) распыляли на 20 мл пластинку со средой Ми11егНйИоп, содержащей 0,5% №1С1 и содержащей 800, 400, 200, 100, 50, 25, 12,5, 6,25, 3,13 или 1,56 мкг/мл циклопентенона, и подвергали стационарной инкубации при 37°С в течение 48 ч.

В результате не наблюдали никакого роста микроорганизма на пластинке среды, к которой было добавлено 12,5 мкг/мл или более циклопентенона.

Таким образом, циклопентенон проявлял антибактериальную активность по отношению к Сатру1оЬас1ег.

(3) Измерение антибактериального действия циклопентенона по отношению к ЬещопеИа рпеиторййа (выделенной из промывки бронхов человека; тестируемый микроорганизм (1)) и ЬещопеИа рпеиторййа (выделенной из воды ванночки для горячего спринцевания; тестируемый микроорганизм (2)) (обе хранились в Департаменте гигиены Колледжа питания в Кагаве) проводили с использованием в качестве показателя эффекта торможения роста каждого из тестируемых микроорганизмов. Итак, определенное количество тестируемого микроорганизма добавляли к жидкой среде, содержащей определенную концентрацию циклопентенона, и полученную суспензию тестируемого микроорганизма инкубировали в течение 16 ч, 48 ч, 72 ч или 96 ч, и проверяли количество жизнеспособных клеток после инкубации.

Первое: к бульону ВСУЕ α (производство ОхоИ) добавляли циклопентенон в определенной концентрации и проводили последовательное 2^п разведение. Туда добавляли бактериальную суспензию, проинкубированную при 37°С в течение 16 ч в бульоне ВСУЕ α для получения количества клеток 10⁶/мл и инкубировали при 37°С. Измерение количества жизнеспособных клеток для каждого времени инкубации для каждого из микроорганизмов проводили путем соответствующего разведения культуры с последующим размазыванием по ВСУЕ α агару (производство Охой).

Измеренные количества клеток для каждого времени инкубации выражали в КОЕ (колонии образующие единицы)/мл, в виде десятичного логарифма. Результаты показаны в нижеследующей табл. 14. Циклопентенон проявлял антибактериальное действие в отношении любого из микроорганизмов. Здесь в таблице означает, что рост тестируемого микроорганизма не наблюдался.

Таблица 14

Концентрация добавленного образца в культуре тестируемого микроорганизма (м.д.)	Кол-во клеток тестируемого микроорганизма после каждой инкубации (СРи/мл) (16-ч инкубация) : : (96-4 инкубация) Тестируемый микроорганизм
(1)	(2)	(1)	(2)
24	-	-	-	-
12	5,7	6,1	8,3	8,6
0	6,9	7,4	8,7	8,6

(4) Наряду со штаммами НейсоЬас1ег ру1оп применяли стандартный штамм NСТС 11637 (АТСС 43504) и выделенные в клинике штаммы из желудка человека (206 и 3401; оба хранились в Департаменте бактериологии медицинского колледжа Нуодо). Каждый штамм подвергали инкубации при встряхивании при 37°С в условиях легкой аэрации, применяя Апегораск Сатрйо (производство МйкиЬкЫ бак Сйетка1) в Вгисейа Вго1й Мебшт (производство ВВЬ), содержащей 7% лошадиной сыворотки (производство Вю \У1Ш1акег). Микроорганизм в фазе логарифмического роста разводили Вгисейа Вго1й и использовали для тестирования. Для экспериментов использовали 24-луночный планшет (производство Ра1соп). Циклопентенон вносили в количестве 0,1 мл (1,000 мкг)/лунка, после двухкратных разведении с помощью РВ8 и иммобилизовывали добавлением 0,9 мл/лунка среды [Вгисейа агаровая среда (рН 6,0), содержащей 7% лошадиной сыворотки (производство ВВЬ)]. рН Вгисейа агаровой среды предварительно доводили до 6,0 с помощью НС1 и использовали в экспериментах. Каждый микроорганизм инокулировали в количестве около 10⁴/50 мкл/лунка. После инокуляции микроорганизма проводили инкубацию в условиях слабой аэрации при 37°С в течение 3-4 дней для оценки антибактериальной активности. Определяли количество образца (мкг/мл), проявляюще го 90% или более ингибирования, и выражали как М1С. В результате для всех тестированных штаммов М1С равнялся 32 мкг/мл, и циклопентенон проявлял антибактериальное действие в отношении штаммов Не11соЬас!ет.

Пример 12. Введение.

(1) Для приготовления раствора для инъекций к физиологическому солевому раствору Парапете Рйаттасорое1а) добавляли циклопентенон в концентрации 1%.

(2) Для приготовления раствора для инъекций к физиологическому солевому раствору (той же фирмы, что и указанный выше) добавляли циклопентенон и глицирретиновую кислоту в концентрациях 0,5% и 0,1%, соответственно.

Пример 13. Таблетки.

(1) Готовили таблетки, каждая из которых содержит 100 мг циклопентенона и определенное количество микрокристаллической целлюлозы, с последующим покрытием их оболочкой из сахара.

(2) Готовили таблетки, каждая из которых содержит 0,1 мг циклопентенона, 10 мг дикалиевой соли глицирретиновой кислоты и определенное количество микрокристаллической целлюлозы, с последующим покрытием их оболочкой из сахара.

Пример 14. Мази.

Мази готовили в соответствии со следующим составом:

Циклопентенон 1 г

Всасывающаяся мазь

Цараиеке Рйаттасорое1а) 99 г

Сначала циклопентенон хорошо перемешивали с всасывающейся мазью и затем оставшуюся всасывающуюся мазь добавляли туда постепенно с последующим перемешиванием до образования гомогенного продукта, в результате чего была приготовлена мазь.

Эту мазь наносят 4-5 раз в день на место повреждения.

Пример 15. Косметические средства

Суспензию в форме антибактериального косметического материала готовили в соответ ствии со следующим составом, ч.:

Этанол10

Глицерин1

Лимонная кислота0,3

Метил-п-гидроксибензоат0,2

Циклопентенон

Отдушка

Чистая вода

0,1 Немного Добавляют до 100

Пример 16. Средство для ванны.

Антибактериальное средство для ванны готовили в соответствии со следующим соста вом, ч.:

Безводная глауберова соль20

Бикарбонат натрия40

Янтарная кислота10

Циклопентенон30

Красители По желанию

Отдушки По желанию (готовили в форме таблеток)

Пример 17. Препарат для чистки зубов. Препарат для чистки зубов готовили в со-

ответствии со следующим составом:
Карбонат кальция	50,00%
Глицерин	22,00%
Каррагенан	0,50%
Карбоксиметилцеллюлоза	1,00%
Лаурилдиэтаноламид	1,00%
Монолаурат сахарозы	2,00%
Отдушки	1,00%
Сахарин	0,10%
Циклопентенон	0,10%
Вода	до 100%
Всего	100,00%
Пример 18.
Леденцовую таблетку готовили	в соответ
ствии со следующим составом:
Сахар	74,9%
Лактоза	20,0%
Монолаурат сахарозы	0,2%
Отдушки	0,5%
Чистая вода	4,3%
Циклопентенон	0,001

Пример 19.

Антибактериальные напитки готовили в соответствии со следующими методами.

(1) Пектин (Ротокш Ресйи ЬМ-13СС; производство Негси1е§) (5 кг) добавляли к 100 л водопроводной воды, и смесь нагревали от температуры жидкости 28 до 120°С с помощью продувания паром в течение 35 мин, оставляли при 120°С в течение пяти часов при перемешивании и охлаждали для получения 135 л охлажденной смеси. Туда добавляли 1,35 кг целита #545 (производство СеШе) и 1,35 кг кремнезема #600-8 (производство Сйио 8Шса) с целью фильтрования, и фильтрование проводили, используя компактный фильтр (6-дюймовой (40,64 см) фильтровальной бумаги в 16 слоев; ΑΌУАЫТЕС #327), предварительно покрытый 0,1 кг целита #545 и 0,1 кг кремнезема #600-8. Полученный фильтрат подвергали постоянной мгновенной температурной обработке (при 98°С в течение 60 с) с помощью нагревательной пластины (производство Νχΐιίΐιηη 8ещаки8Йо) с последующим охлаждением для получения 150 л раствора термообработанного пектина, содержащего циклопентенон.

Указанный раствор термообработанного пектина, содержащий циклопентенон, имел рН около 3,5, кислотность 6,2 мл и сахаристость 5,8 Βτίχ %. В данном случае рН измеряли на рНметре, кислотность выражали в виде количества (мл) 0,1н. №1ОН. используемого для нейтрализации до рН 7,0, и сахаристость измеряли сахарометром Βτίχ.

(2) Зеленый чай готовили обычным способом, используя 10 г листьев зеленого чая, 0,2 г витамина С и 1000 мл деионизированной воды. К 100 мл зеленого чая добавляли заранее приготовленный раствор термообработанного пектина, содержащий циклопентенон в количестве 200 мг (в расчете на твердое вещество; содержащий 1,6 мг циклопентенона) для приготовления продукта (1) изобретения. Контролем служил чай, к которому ничего не добавляли. Органолептическое исследование (по пятиточечному методу, в котором точка 5 определялась как хорошее и точка 1 представляла плохое) проводили с помощью 20 оценщиков, и среднее результатов представлено в табл.15.

Таблица 15. Органолептическая оценка

	Продукт (1)	Контроль
Вкусовая палитра	4,3	3,2
Сбалансированность вкуса	3,9	3,4
Общий вкус	4,3	3,3

Оценка, проведенная в табл. 15, показывает, что по сравнению с контролем продукт (1) настоящего изобретения имел более широкий вкус и вкусовую палитру, а также хорошо сбалансированный вкус, при этом аромат и вкус чая были улучшены и был достигнут эффект спрятанного запаха.

Пример 20. Напиток готовили в соответствии со следующим составом, %:

Фруктозо-глюкозо-жидкий сахар5,00

Сахар4,00

Закисляющий агент1,20

Отдушки0,30

Циклопентенонсодержащий материал0,5

Чистая вода До 100

Всего 100,00

Раствор термообработанного пектина, содержащий циклопентенон, описанный в примере 19-(1), использовали в качестве содержащего циклопентенон материала и добавляли его в количестве, рассчитанном по твердому веществу. Этот напиток (100 мл) содержит 4 мг циклопентенона.

Пример 21.

Свежую капусту (200 г) нарезали на полоски, и каждые 100 г погружали в воду (контроль) или в 0,2% раствор циклопентенона на пять минут. Затем воду осторожно удаляли, и капусту помещали в мешочек из синтетической смолы и оставляли при комнатной температуре (20°С). По наблюдениям после 24 ч капуста, погруженная в водный раствор циклопентенона, сохраняла свежесть по сравнению с той, которую погружали в воду (контроль).

Это различие становилось более четким через несколько дней, и по наблюдениям через четыре дня капуста, погруженная в водный раствор циклопентенона, не проявляла запаха испорченности, оставаясь свежей по сравнению с той, которую погружали в воду (контроль).

Преимущества изобретения

Настоящее изобретение относится к циклопентенону и его оптически активным соединениям, которые проявляют физиологические виды активности, такие как антибактериальное действие и т.д., и обладают высокой безопасностью. Предложены также фармацевтические препараты, пищевые продукты и напитки, содержащие указанные соединения, обладающие такими физиологически активными свойствами. Теперь возможно в соответствии с настоящим изобретением легко и эффективно получать циклопентенон из природных материалов и предлагать его оптически активные соединения по низкой цене.

Благодаря своим физиологическим видам активности циклопентенон и/или его оптически активные соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, могут быть использованы в качестве фармацевтических препаратов, обладающих антибактериальным действием, и указанные фармацевтические препараты могут использоваться для поддержания гомеостаза живого организма, особенно для поддержания хорошего состояния желудка и кишечника. Настоящее изобретение также относится к антисептикам, антибактериальным косметическим средствам, антибактериальным средствам для чистки зубов и антибактериальным агентам для ванны, содержащим циклопентенон и/или его оптически активные производные в качестве действующих ингредиентов.

В соответствии с настоящим изобретением теперь возможно, что подходящее количество циклопентенона и/или его оптически активных производных, обладающих физиологической активностью, включались в пищевые продукты или напитки. Благодаря различным вариантам физиологической активности циклопентенона и/или его оптически активных соединений, пищевой продукт или напиток по настоящему изобретению является здоровым пищевым продуктом или напитком, обладающим способностью поддерживать гомеостаз организма, такой как антибактериальное действие и по настоящему изобретению предлагается пищевой продукт или напиток, содержащие действующее соединение, полезное для поддержания хорошего состояния желудка и кишечника. Более того, в результате добавления циклопентенона антибактериальное действие пищевого продукта или напитка может быть легко усилено, и препарат, содержащий циклопентенон и/или его оптически активные соединения, также очень полезен в качестве антисептического агента для пищи или напитка.

Кроме того, по настоящему изобретению раскрывается вещество, которое содержит сахаридный компонент, содержащий уроновую кислоту и/или производное(ые) уроновой кислоты, где в указанном веществе, которое содержит сахаридный компонент, содержащий уроновую кислоту и/или производное(ые) уроновой кислоты, по крайней мере, часть реакционной способности аминов, аминокислот, пептидов или белка, обладающих способностью взаимодействовать с уроновой кислотой, производным(ыми) уроновой кислоты, промежуточным соединением для циклопентенона или самим циклопентеноном исчезает и/или, по крайней мере, часть указанного(ных) реакционно-способного(ных) вещества(в) удаляется. Когда применяется указанное вещество, которое содержит сахаридный компонент, содержащий указанную уроновую кислоту и/или производное(ые) уроновой кислоты, циклопентенон и/или его оптически активные соединения, применяемые по настоящему изобретению, могут быть эффективно получены. Примеры вещества, которое содержит сахаридный компонент, содержащий указанную уроновую кислоту и/или производное(ые) уроновой кислоты, представляют собой вещество, нагреваемое в сухом виде, которое содержит сахаридный компонент, содержащий уроновую кислоту и/или производное(ые) уроновой кислоты. В отношении обработки сухим прогреванием обработка в виде запекания/поджаривания является простой и удобной, и запекаемые/поджариваемые растения, животные и микроорганизмы, такие как запекаемые/поджариваемые овощи, фрукты, зерна, грибы, морские водоросли, кора и хрящ являются вполне пригодными для производства циклопентенона и/или его оптически активных соединений настоящего изобретения. В данном случае продукт, обработанный сухим нагреванием, может быть эффективно получен с помощью дегидратации вещества, которое подвергается обработке, перед обработкой сухим нагреванием.

Claims

1. Антибактериальное средство, включающее 4,5-дигидрокси-2-циклопентен-1-он, представленный формулой [1] и/или его оптически активное производное.

2. Антисептик, отличающийся тем, что в качестве активного ингредиента(ов) он содержит антибактериальное средство по п.1.

3. Средство для чистки зубов, отличающееся тем, что в качестве активного ингредиента(ов) оно содержит антибактериальное средство по п.1.

4. Косметическое средство, отличающееся тем, что в качестве активного ингредиента(ов) оно содержит антибактериальное средство по п.1.

5. Средство для ванн, отличающееся тем, что в качестве активного ингредиента(ов) оно содержит антибактериальное средство по п.1.

6. Антибактериальный пищевой продукт, представляющий собой пищевой продукт, содержащий антибактериальное средство по п.1.

7. Антибактериальный напиток, представляющий собой напиток, содержащий антибактериальное средство по п.1.