TW201803872A

TW201803872A - 選擇性ｃｄｋ４／６抑制劑之固態形式

Info

Publication number: TW201803872A
Application number: TW106131041A
Authority: TW
Inventors: 布萊恩查可; 南森艾德
Original assignee: 輝瑞股份有限公司
Priority date: 2013-02-21
Filing date: 2014-02-18
Publication date: 2018-02-01
Also published as: IL240277B; RU2619944C2; DK2958916T3; TWI670269B; CN107759594A; HUE054212T2; RU2015132371A; CN105008357A; SI3431475T1; DK3431475T3; KR20170094012A; BR112015019508A8; IL240277A0; CY1124068T1; AU2014220354B2; CN111253394A; NZ710138A; PL3431475T3; ES2869277T3; CA2900322C

Abstract

本發明關於具有經改善性質之乙醯基-8-環戊基-5-甲基-2-(5-哌

-1-基-吡啶-2-基胺基)-8H-吡啶並[2,3-d]嘧啶-7-酮的結晶游離鹼、包含該游離鹼之藥學組成物及劑型、以及製造及使用此等化合物、組成物及劑型於治療細胞增生疾病(諸如癌症)之方法。

Description

選擇性CDK4/6抑制劑之固態形式

相關申請案之相互引用

本申請案主張於2013年2月21日提出申請之美國臨時申請案第61/767,761號的優先權，該案係以全文引用的方式併入本文中。

本發明係關於具有經改良物理化學性質的6-乙醯基-8-環戊基-5-甲基-2-(5-哌

-1-基-吡啶-2-基胺基)-8H-吡啶並[2,3-d]嘧啶-7-酮之游離鹼。本發明亦關於包含該游離鹼之藥學組成物及劑型、以及製造及使用此等化合物、組成物及劑型於治療細胞增生疾病(諸如癌症)之方法。

化合物6-乙醯基-8-環戊基-5-甲基-2-(5-哌

-1-基-吡啶-2-基胺基)-8H-吡啶並[2,3-d]嘧啶-7-酮(本文中亦稱為「化合物1」)可以下示結構表示：

且亦習知為帕泊西力(palbociclib)或PD-0332991。化合物1為有效且具選擇性之CDK4及CDK6抑制劑。

化合物1及其藥學上可接受之鹽係揭示於國際專利公告WO 2003/062236號及美國專利6,936,612號、7,208,489號及7,456,168號，該等專利案描述化合物1之鹽酸鹽的製備。國際專利公告WO 2005/005426號及美國專利7,345,171號及7,863,278號描述化合物1之游離鹼及其各種不同一元酸及二元酸加成鹽的製備，包括2-羥乙磺酸鹽之多形體形式。製備化合物1之一元2-羥乙磺酸鹽的方法係描述於國際專利公告WO 2008/032157號及美國專利7,781,583號。前述各參考文獻之內容係以全文引用方式併入本文中。

雖然化合物1為有效且具選擇性之CDK4/CDK6抑制劑，但以其游離鹼形式使用在藥學發展顯示出挑戰。由傳統鹽斷裂製程所提供之游離鹼(例如WO 2005/005426之實施例4)非常容易產生靜電且形成小型原粒子，該等原粒子黏聚物難以藉由篩分分散且不適於進一步發展的的大型硬質黏聚物。本發明提供具有較大一次粒徑之化合物1游離鹼，其展現經改良之物理化學性質及製造性質。

化合物1-6-乙醯基-8-環戊基-5-甲基-2-(5-哌

-1-基-吡啶-2-基胺基)-8H-吡啶並[2,3-d]嘧啶-7-酮-之游離鹼可以一或多種多形體形式存在，包括A型、B型，其中A型為更安定之結晶形式。該游離鹼可為無水或可含有不同量之水或一或多種溶劑。

本發明提供具有比藉由先前技術所述之傳統鹽斷裂方法所提供的游離鹼大一次粒徑、通常具有減少之比表面積及較低表面能測量值的化合物1之結晶游離鹼。本文所揭示之化合物1游離鹼的大粒徑可藉由各種方法辨識。

本發明之多形體及固體形式可藉由粉末X射線繞射測定法(PXRD)、固態NMR(ssNMR)、微差掃描熱量測定法(DSC)、振動光譜法(例如IR及拉曼光譜法)、偏光顯微術(PLM)、掃描電子顯微術(SEM)、熱載台光學顯微術、電子結晶學、單晶X射線繞射測定法、定量分析、粒徑分析(PSA)(例如，粒徑、粒徑分析(PSD)及粒子形狀)、比表面積(SSA)分析、表面能分析(例如反氣相層析術或IGC)、藉由溶解性研究及溶解研究、或該等技術之組合來辨識。

在一態樣中，本發明提供一種具有

2m²/g之比表面積的6-乙醯基-8-環戊基-5-甲基-2-(5-哌

-1-基-吡啶-2-基胺基)-8H-吡啶並[2,3-d]嘧啶-7-酮的結晶游離鹼。在一些實施態樣中，該游離鹼具有

1m²/g之比表面積。

在較佳實施態樣中，化合物1之結晶游離鹼為該游離鹼之多形體A型。在一些此等實施態樣中，該結晶游離鹼具有包含在繞射角(2θ)為10.1±0.2之峰的PXRD圖案。在其他此等實施態樣中，該結晶游離鹼具有包含在繞射角(2θ)為8.0±0.2及10.1±0.2之峰的PXRD圖案。在又其他實施態樣中，該結晶游離鹼具有包含在繞射角(2θ)為8.0±0.2、10.1±0.2及11.5±0.2之峰的PXRD圖案。在另外的實施態樣中，該結晶游離鹼具有包含在繞射角(2θ)為8.0±0.2、10.1±0.2、10.3±0.2及11.5±0.2之峰的PXRD圖案。在另外的實施態樣中，該結晶游離鹼具有包含在與圖1所示實質上相同之繞射角(2θ)的峰之PXRD圖案。

在一些實施態樣中，化合物1之結晶游離鹼(A型)具有包含以下共振(ppm)值之¹³C固態NMR(ssNMR)光譜：12.5ppm±0.2ppm。在其他實施態樣中，該結晶游離鹼具有包含以下共振(ppm)值之¹³C固態NMR光譜：12.5ppm及112.4ppm±0.2ppm。在另外的實施態樣中，該結晶游離鹼具有包含以下共振(ppm)值之¹³C固態NMR光譜：或12.5ppm、112.4ppm及143.2ppm±0.2ppm。

在本文所述之一些實施態樣中，本發明之化合物1游離鹼係由粒徑分析辨識。在一些此等實施態樣中，該結晶游離鹼具有約5μm至約150μm，較佳為約10μm至約 100μm，或更佳為約15μm至約80μm之一次粒徑。在其他此等實施態樣中，該結晶游離鹼具有特徵如下示之一次粒徑分布：(i)約5μm至約10μm之D10值；(ii)約10μm至約45μm之D50值；或(iii)約30μm至約125μm之D90值；或(i)、(ii)及(iii)之組合。在額外的實施態樣中，該結晶游離鹼具有(D90-D10)/D50為約2至約3之一次粒徑分布比。在另外的實施態樣中，該結晶游離鹼具有約15μm至約125μm之體積平均直徑(D[4,3])。

在一些實施態樣中，該化合物1之結晶游離鹼為無水的。在其他實施態樣中，該化合物1之結晶游離鹼為溶劑合物，特別是水合物。

在其他態樣中，本發明提供一種包含根據本發明之具有大一次粒徑的化合物1之結晶游離鹼、及藥學上可接受之載體、稀釋劑或賦形劑的藥學組成物。該藥學組成物經常包含該游離鹼之多形體A型。

本發明另外提供包含本發明之此種藥學組成物的膠囊。在一些此等實施態樣中，該膠囊包含0.1至200mg及較佳為25至150mg之化合物1游離鹼(較佳為多形體A型)，其具有如本文所述之大一次粒徑。

在其他態樣中，本發明提供一種治療哺乳動物(較佳為人類)之癌症的方法，其包括對哺乳動物投與治療有效量之本發明藥學組成物。該治療方法另外包括合併投與化合物1與一或多種額外治療劑。

在其他態樣中，本發明提供製造如本文所述之具有大一次粒徑的化合物1游離鹼之方法。一種方法涉及將小粒徑之化合物1游離鹼溶解於第一溶劑與第二溶劑的混合物中並加熱至獲致溶解，冷卻至適當溫度，提供化合物1游離鹼(A型)之晶種，接著結晶以提供大粒徑之化合物1游離鹼。該方法中所使用之小粒徑游離鹼可從傳統鹽斷裂製程，例如藉由中間物乙烯基醚之酸性水解分離，以提供酸加成鹽，接著鹼化，如實施例5所述。其他方法涉及中間物乙烯基醚於水與第一溶劑之混合物中的酸性水解，其會需要加熱以酬得溶解，添加第二溶劑及鹼化以提供包含在原位產生之游離鹼之另一混合物，視需要加熱以獲得溶解及餾除水，並在適當溫度下提供化合物1游離鹼(A型)之晶種，然後結晶以提供具有大一次粒徑的化合物1游離鹼。本發明另外提供藉由該等方法所製備之化合物1游離鹼，其具有本文所述的性質。

在各上述方法中，該第一溶劑為醇且該第二溶劑為芳族溶劑。適用之醇包括但不局限於相對高沸點之醇，諸如正丁醇、三級丁醇、正丙醇、戊醇、1,4-丁二醇或丙二醇等。適用之芳族溶劑包括但不局限於苯基甲基醚、1,3,5-三甲苯、間二甲苯、氯苯、吡啶等。為了改善產率，該等方法包括加熱或冷卻至高於或低於室溫之溫度。該等反應混合物經常可加熱至約30℃至約150℃之溫度，更常為約50℃至約120℃之溫度以獲致溶解。在結晶期間，會需要將該反應混合物冷卻至室溫或低於室溫之溫度，例如介於約0℃與約30℃之間，較佳為約5℃、約10℃、約15℃ 或約20℃。

該等及其他態樣及實施態樣茲藉由本文所提供之詳細描述進一步說明。本文所述之各實施態樣可與本文所述之未與所結合的實施態樣抵觸之任何其他實施態樣結合。

圖1顯示化合物1游離鹼(多形體A型)之PXRD圖案。

圖2顯示化合物1游離鹼(多形體A型)之碳CPMAS光譜。星號所標記的峰為旋轉邊帶。

圖3顯示化合物1游離鹼(多形體B型)之PXRD圖案。

圖4顯示化合物1游離鹼(多形體B型)之碳CPMAS光譜。星號所標記的峰為旋轉邊帶。

圖5顯示化合物1游離鹼API(多形體A型，從40% n-BuOH/苯基甲基醚再結晶)之掃描電子顯微術(200倍放大倍率)影像。

圖6顯示化合物1游離鹼API(多形體A型，從標準游離鹼化(free basing)程序分離)之掃描電子顯微術(1500倍放大倍率)影像。

圖7顯示化合物1游離鹼API(多形體A型，從40% n-BuOH/苯基甲基醚再結晶)之粒徑分布。

圖8顯示化合物1游離鹼API(多形體A型，從標準游離鹼化程序分離)之粒徑分布。

圖9顯示化合物1游離鹼API(多形體A型，從40% n-BuOH/苯基甲基醚再結晶)之偏光顯微術(PLM)(200倍)影像。

參考以下詳細說明及本文所包括之實施例可更容易暸解本發明。應暸解此處所使用之術語僅供說明特定實施態樣，並非意在限制。另外應暸解，除非本文特別界定，否則本文所使用之術語應為相關技術中已知的傳統意義。

如本文所使用，除非另外指示，否則單數形「一(a、an)」及「該」包括複數形。例如，「一」取代基包括一或多個取代基。

如本文所使用之「約」一辭意指在某一值(諸如所述之濃度範圍、時段、分子量、粒徑、溫度或pH)之統計意義範圍內。此範圍可在一數量級內，通常在所指示值或範圍的20%內，更常在10%內，及更常在5%內。有時候，此範圍可在用於測量及/或測定給定值或範圍的標準方法之一般實驗誤差內。藉由「約」一辭包含之容許偏差將視正在研究之特定系統而定，而且熟悉本技術之人士可迅速理解。每當本申請案中引用某一範圍時，在該範圍內之每一完整整數亦被視為本發明之實施態樣。

如本文所使用，除非另外指示，否則「異常細胞生長」一辭係指與正常調節機制(例如接觸抑制損失)無關的細胞生長。「異常細胞增生疾病」係特徵為異常細胞生長之疾病，諸如癌症。

「癌症」一辭包括實體腫瘤及惡性血液疾病二者。癌症包括但不局限於乳癌、卵巢癌、子宮頸癌、子宮內膜癌、攝護腺癌症、睾丸癌、胰臟癌、食道癌、頭頸癌、胃癌、膀胱癌、肺癌(例如腺癌、NSCLC及SCLC)、骨癌(例如骨肉瘤)、結腸癌、直腸癌、甲狀腺癌、腦及中樞神經系統癌症、神經膠質母細胞瘤、神經母細胞瘤、神經內分泌癌、橫紋肌癌(rhabdoid cancer)、角質棘皮瘤、表皮樣癌、精細胞瘤、黑色素瘤、肉瘤(例如，脂肉瘤)、膀胱癌、肝癌(例如，肝細胞癌)、腎臟癌(例如，腎細胞癌)、骨髓失調(例如，AML、CML、骨髓化生不良症候群及骨髓性細胞白血病)及淋巴失調(例如，白血病、多發性骨髓瘤、外膜細胞淋巴瘤、ALL、CLL、B細胞淋巴瘤、T細胞淋巴瘤、哈金氏淋巴瘤、非哈金氏淋巴瘤、髮樣細胞淋巴瘤(hairy cell lymphoma))。

「藥學上可接受」一詞係指在合理醫學判斷範圍內適於與病患組織接觸而無不當毒性、刺激、過敏反應等、相稱地具有合理益處/風險比且對於其計畫用途有效的物質。

如本文所使用，術語「哺乳動物」可為人類或非人類哺乳動物(例如，狗、貓、兔子、大鼠、小鼠、馬、猴子、其他低等靈長類等)。較佳地，該哺乳動物係人類。

如本文所使用，除非另外指示，否則術語「治療」意指逆轉、減輕、抑制應用此術語之失調或病況的進程，或此失調或病況之一或多種症狀。如本文所使用，除非另外指示，否則術語「治療」係指前文所定義之作為「治療」的治療動作。

如本文所使用之「有效」量係指化合物、藥劑、物質、調配物或組成物之量足以造成疾病症狀嚴重性降低、無疾病期間的頻率及持續期間增加、或防止因疾病痛苦所致之損傷或失能。該量可為單體或與其他化合物、藥劑或物質組合之單一劑量或根據多劑量方案。熟悉本技術之人士將能根據諸如對象體積、對象症狀之嚴重性及所選擇之投與的特定組成物或途徑來決定此等量。

如本文所使用之「單位劑型」係指適於待治療對象之發明調配物的物理離散單元。然而，將理解本發明之組成物的總每日使用將由主治醫生在合理醫學判斷範圍內決定。對於任何特定對象之特殊有效劑量水準取決於許多因素，包括所治療之失調及該失調之嚴重性；所使用之特殊組成物；年齡、體重、一般健康狀況、對象之性別及飲食；投與時間、治療持續期間；與本發明組成物組合或一係的藥物及/或額外療法、及醫療技術中已為人熟知的類似因素。

如本文所使用，關於X射線繞射峰位置之術語「實質上相同」意指考慮典型峰位置及強度變異性。例如，熟悉本技術之人士將理解峰位置(2θ)會顯示一些裝置之間的變異性，通常多達0.2°或0.1°。此外，熟悉本技術之人士將理解相對峰強度將顯示裝置間之變異性以及因結晶程度，較佳為定向、所製備之樣本表面及熟悉本技術之人士已知之其他因素所致的變異性，且應僅視為定性度量。

本文所使用之術語「溶劑合物」係指含有溶劑之物質的結晶形。術語「水合物」係指該溶劑為水之溶劑合物。

如本文所使用之術語「晶種」意指將晶體添加至結晶系統以引發或加強成核或作為進一步結晶的基材。

如本文所使用之術語「API」或「活性藥學成分」、係指6-乙醯基-8-環戊基-5-甲基-2-(5-哌

-1-基-吡啶-2-基胺基)-8H-吡啶並[2,3-d]嘧啶-7-酮之游離鹼。

如本文所使用之術語「原粒子」係指個別API晶體。

如本文所使用之術語「黏聚物」係指難以在加工處理及粒徑分析期間難以分散成原粒子的緊密束縛之API晶體。

本發明提供具有比藉由傳統鹽斷裂方法所提供的游離鹼大之一次粒徑、通常具有減少之比表面積及較低表面能測量值的化合物1之游離鹼。為求方便起見，本發明所提供之化合物1游離鹼有時可稱為「大(一次)粒徑」游離鹼。此係與經由傳統鹽斷裂方法所製備的化合物1游離鹼相反，該傳統鹽斷裂方法所製備的化合物1游離鹼有時稱為「小(一次)粒徑」游離鹼。熟悉本技術之人士將暸解在本情況中提及的「小粒徑」係指個別API晶體的粒徑，且不考慮該等「小」粒子形成大黏聚物的傾向。

在本文所述之一些實施態樣中，該化合物1之結晶游離鹼係藉由比表面積(SSA)辨識。因此，在一態樣中，本發明提供一種具有

2m²/g之比表面積(SSA)的6-乙醯基-8-環戊基-5-甲基-2-(5-哌

1m²/g之比表面積(SSA)。在其他實施態樣中，該化合物1游離鹼具有

0.9m²/g、

0.8m²/g或

0.7m²/g之SSA。在另外的實施態樣中，該化合物1游離鹼具有介於0.2m²/g與2m²/g之間、介於0.5m²/g與1.5m²/g之間、或介於0.5m²/g與1m²/g之間的SSA。

在本文所述之一些實施態樣中，該化合物1之結晶游離鹼係藉由分散表面能辨識。因此，在一態樣中，本發明提供一種具有

60mJ/m²之分散表面能的6-乙醯基-8-環戊基-5-甲基-2-(5-哌

55mJ/m²、

50mJ/m²、

45mJ/m²或

40mJ/m²之分散表面能。在另外的實施態樣中，化合物1游離鹼具有介於20mJ/m²與60mJ/m²之間、介於25mJ/m²與50mJ/m²之間、或介於30mJ/m²與50mJ/m²之間的分散表面能。

在較佳實施態樣中，化合物1之結晶游離鹼為該游離鹼之多形體A型。在一些此等實施態樣中，該結晶型具有包含在繞射角(2θ)為10.1±0.2之峰的PXRD圖案。在其他此等實施態樣中，該結晶型具有包含在繞射角(2θ)為8.0±0.2及10.1±0.2之峰的PXRD圖案。在又其他實施態樣中，該結晶型具有包含在繞射角(2θ)為8.0±0.2、 10.1±0.2及11.5±0.2之峰的PXRD圖案。在另外的實施態樣中，該結晶型具有包含在繞射角(2θ)為8.0±0.2、10.1±0.2、10.3±0.2及11.5±0.2之峰的PXRD圖案。在其他實施態樣中，該結晶型具有包含在繞射角(2θ)為5.1±0.2、8.0±0.2、10.1±0.2及11.5±0.2之峰的PXRD圖案。在另外的實施態樣中，該結晶型具有包含在繞射角(2θ)為8.0±0.2、10.1±0.2、11.5±0.2及19.7±0.2之峰的PXRD圖案。在又另外的實施態樣中，該結晶型具有包含在繞射角(2θ)為8.0±0.2、10.1±0.2、11.5±0.2及22.5±0.2之峰的PXRD圖案。在另外的實施態樣中，該結晶型具有包含在與圖1所示實質上相同之繞射角(2θ)的峰之PXRD圖案。

在一些實施態樣中，化合物1之結晶游離鹼(A型)具有包含以下共振(ppm)值之¹³C固態NMR光譜：12.5ppm±0.2ppm。在其他實施態樣中，該結晶型具有包含以下共振(ppm)值之¹³C固態NMR光譜：12.5ppm及112.4ppm±0.2ppm。在另外的實施態樣中，該結晶型具有包含以下共振(ppm)值之¹³C固態NMR光譜：或12.5ppm、112.4ppm及143.2ppm±0.2ppm。

在本文所述之一些實施態樣中，該化合物1之結晶游離鹼係藉由粒徑分析辨識。在一些此等實施態樣中，該游離鹼具有約5μm至約150μm，較佳為約10μm至約100μm，及更佳為約15μm至約80μm之一次粒徑。

在其他此等實施態樣中，該游離鹼具有特徵如下示之一次粒徑分布：(i)約5μm至約10μm之D10值；(ii)約10μm至約45μm之D50值；或(iii)約30μm至約125μm之D90值；或(i)、(ii)及(iii)之組合。在額外的實施態樣中，該游離鹼具有(D90-D10)/D50為約2至約3之一次粒徑分布比。在另外的實施態樣中，該游離鹼具有約15μm至約125μm之體積平均直徑(D[4,3])。

在一態樣中，本發明提供一種具有大於約5μm之一次粒徑的6-乙醯基-8-環戊基-5-甲基-2-(5-哌

-1-基-吡啶-2-基胺基)-8H-吡啶並[2,3-d]嘧啶-7-酮的結晶游離鹼。在一些實施態樣中，該游離鹼具有大於約7.5μm之一次粒徑。在其他實施態樣中，該游離鹼具有大於約10μm之一次粒徑。在其他此等實施態樣中，該游離鹼具有大於約12.5μm之一次粒徑。在其他此等實施態樣中，該游離鹼具有大於約15μm之一次粒徑。

在其他態樣中，本發明提供一種具有約5μm至約200μm之一次粒徑的6-乙醯基-8-環戊基-5-甲基-2-(5-哌

-1-基-吡啶-2-基胺基)-8H-吡啶並[2,3-d]嘧啶-7-酮的結晶游離鹼。在一些實施態樣中，該游離鹼具有以下一次粒徑：約5μm至約175μm；約5μm至約150μm；約5μm至約125μm；約5μm至約100μm；約5μm至約75μm；約10μm至約200μm；約10μm至約175μm；約10μm至約150μm；約10μm至約125μm；約10μm至約100μm；約10μm至約75μm；約15μm至約200μm；約15μm至約175μm；約15μm至約150μm；約15μm 至約125μm；約15μm至約100μm；或約15μm至約75μm。

在其他態樣中，本發明提供一種具有以下一次粒徑分布中至少一者的6-乙醯基-8-環戊基-5-甲基-2-(5-哌

-1-基-吡啶-2-基胺基)-8H-吡啶並[2,3-d]嘧啶-7-酮的結晶游離鹼：(a)約5μm至約10μm之D10值；(b)約10μm至約45μm之D50值；及(c)約30μm至約125μm之D90值。

在一些此等實施態樣中，該游離鹼具有約5μm至約10μm之D10值。在其他此等實施態樣中，該游離鹼具有約30μm至約125μm之D90值。在其他此等實施態樣中，該游離鹼具有約10μm至約45μm之D50值。在一些此等實施態樣中，該游離鹼具有約5μm至約10μm之D10值及約30μm至約125μm之D90值。在另外的實施態樣中，該游離鹼具有約5μm至約10μm之D10值、約30μm至約125μm之D90值，及約10μm至約45μm之D50值。

-1-基-吡啶-2-基胺基)-8H-吡啶並[2,3-d]嘧啶-7-酮的結晶游離鹼：(d)約5μm至約10μm之D10值；(e)約10μm至約25μm之D50值；及 (f)約30μm至約75μm之D90值。

在一些此等實施態樣中，該游離鹼具有約5μm至約10μm之D10值。在其他此等實施態樣中，該游離鹼具有約30μm至約75μm之D90值。在其他此等實施態樣中，該游離鹼具有約10μm至約25μm之D50值。在一些此等實施態樣中，該游離鹼具有約5μm至約10μm之D10值及約30μm至約75μm之D90值。在另外的實施態樣中，該游離鹼具有約5μm至約10μm之D10值、約30μm至約755μm之D90值，及約10μm至約25μm之D50值。

在其他實施態樣中，該游離鹼具有以下D10值之一次粒徑分布：約5μm至約7.5μm；約5μm至約10μm；約5μm至約12.5μm；或約5μm至約15μm。

在其他實施態樣中，該游離鹼具有以下D50值之一次粒徑分布：約10μm至約50μm；約10μm至約45μm；約10μm至約40μm；約10μm至約35μm；約10μm至約30μm；約10μm至約25μm；或約10μm至約20μm。

在又其他實施態樣中，該游離鹼具有以下D90值之一次粒徑分布：約30μm至約175μm；約30μm至約160μm；約30μm至約150μm；約30μm至約140μm；約30μm至約130μm；約30μm至約125μm；約30μm至約120μm；約30μm至約115μm；約30μm至約110μm；約30μm至約100μm；約30μm至約75μm；約30μm 至約70μm；約30μm至約65μm；約30μm至約60μm；約30μm至約55μm；約30μm至約50μm；或約30μm至約45μm。

實施態樣之D10各前述值可與任何不與之抵觸的D50及/或D90值組合。實施態樣之D50各前述值可與任何不與之抵觸的D10及/或D90值組合。實施態樣之D90各前述值可與任何不與之抵觸的D10及/或D50值組合。

在其他態樣中，本發明提供一種具有約2至約3之(D90-D10)/D50的一次粒徑分布比之6-乙醯基-8-環戊基-5-甲基-2-(5-哌

-1-基-吡啶-2-基胺基)-8H-吡啶並[2,3-d]嘧啶-7-酮的結晶游離鹼。在一些此等實施態樣中，該游離鹼具有約5μm至約150μm之一次粒徑。

在此態樣之一些實施態樣中，該游離鹼具有以下之(D90-D10)/D50一次粒徑分布比：約2至約2.75；約2至約2.5；約2至約2.25。在其他實施態樣中，該比為約2.0、約2.1、約2.2、約2.3、約2.4、約2.5、約2.6、約2.7、約2.8、約2.9、或約3.0。

在又另一態樣中，本發明提供具有約15μm至約125μm之體積平均直徑(D[4,3])的6-乙醯基-8-環戊基-5-甲基-2-(5-哌

-1-基-吡啶-2-基胺基)-8H-吡啶並[2,3-d]嘧啶-7-酮之結晶游離鹼。在一些實施態樣中，該游離鹼具有約50μm至約100μm之D[4,3]。在其他實施態樣中，該游離鹼具有約15μm至約30μm之D[4,3]。

在又其他實施態樣中，該游離鹼具有以下之D[4,3]：約15μm至約100μm；約15μm至約90μm；約15μm至約80μm；約15μm至約70μm；約15μm至約60μm；約15μm至約50μm；約15μm至約40μm；約25μm至約120μm；約25μm至約100μm；約25μm至約90μm；約25μm至約80μm；約25μm至約70μm；約25μm至約60μm；約25μm至約50μm；約25μm至約40μm；約25μm；約30μm；約35μm；約40μm；約45μm；約50μm；約55μm；約60μm；約65μm；約70μm；約75μm；至約80μm；約90μm；約100μm；約105μm；約110μm；約115μm；或約120μm。

在其他態樣中，本發明提供包含本發明游離鹼及藥學上可接受之載體、稀釋劑或賦形劑的藥學組成物。本發明另外提供包含本發明之此種藥學組成物的膠囊。

在一些實施態樣中，該膠囊包含0.1至200mg之6-乙醯基-8-環戊基-5-甲基-2-(5-哌

-1-基-吡啶-2-基胺基)-8H-吡啶並[2,3-d]嘧啶-7-酮的多形體A型。在其他實施態樣中，該膠囊包含25至150mg之6-乙醯基-8-環戊基-5-甲基-2-(5-哌

-1-基-吡啶-2-基胺基)-8H-吡啶並[2,3-d]嘧啶-7-酮的多形體A型。在其他實施態樣中，該膠囊包含50至150mg之6-乙醯基-8-環戊基-5-甲基-2-(5-哌

-1-基-吡啶-2-基胺基)-8H-吡啶並[2,3-d]嘧啶-7-酮的多形體A型。在其他實施態樣中，該膠囊包含50至100mg之6-乙醯基-8-環戊基-5-甲基-2-(5-哌

-1-基-吡啶-2-基胺基)-8H-吡啶並[2,3-d]嘧啶-7-酮的多形體A型。在其他實施態樣中，該膠囊包含75至150mg之6-乙醯基-8-環戊基-5-甲基-2-(5-哌

-1-基-吡啶-2-基胺基)-8H-吡啶並[2,3-d]嘧啶-7-酮的多形體A型。

在其他態樣中，本發明提供一種治療哺乳動物(包括人類)之癌症的方法，其包括對哺乳動物投與治療有效量之本發明藥學組成物。在一些此等實施態樣中，該藥學組成物係以膠囊形式投與。該膠囊可包含0.1至200mg之6-乙醯基-8-環戊基-5-甲基-2-(5-哌

-1-基-吡啶-2-基胺基)-8H-吡啶並[2,3-d]嘧啶-7-酮游離鹼的多形體A型。在其他實施態樣中，該膠囊可包含25至150mg之6-乙醯基-8-環戊基-5-甲基-2-(5-哌

-1-基-吡啶-2-基胺基)-8H-吡啶並[2,3-d]嘧啶-7-酮游離鹼的多形體A型。在另外之實施態樣中，該膠囊可包含50至150mg之6-乙醯基-8-環戊基-5-甲基-2-(5-哌

-1-基-吡啶-2-基胺基)-8H-吡啶並[2,3-d]嘧啶-7-酮游離鹼的多形體A型。

用於表示本發明化合物1之結晶游離鹼的特徵之技術包括但不局限於粉末X射線繞射測定法(PXRD)、固態NMR(ssNMR)、微差掃描熱量測定法(DSC)、振動光譜法(例如IR及拉曼光譜法)、偏光顯微術(PLM)、掃描電子顯微術(SEM)、熱載台光學顯微術、電子結晶學、單晶X射線繞射測定法、定量分析、粒徑分析(PSA)(例如，粒徑、粒徑分析(PSD)及粒子形狀)、比表面積(SSA)分析、表面能分析(例如反氣相層析術或IGC)、藉由溶解性研究及溶解研究、或該等技術之組合。

在其他態樣中，本發明提供製造如本文所述之具有大一次粒徑的化合物1游離鹼之方法。一種方法涉及將小粒徑之化合物1游離鹼溶解於第一溶劑與第二溶劑的混合物中並加熱至獲致溶解，冷卻至適當溫度，提供化合物1游離鹼(A型)之晶種，接著結晶以提供大粒徑之化合物1游離鹼。該方法中所使用之小粒徑游離鹼可從傳統鹽斷裂製程，例如藉由中間物乙烯基醚之酸性水解分離，以提供酸加成鹽，接著鹼化，如實施例5所述。

在一實施態樣中，本發明提供一種製造大粒徑6-乙醯基-8-環戊基-5-甲基-2-(5-哌

-1-基-吡啶-2-基胺基)-8H-吡啶並[2,3-d]嘧啶-7-酮之游離鹼(A型)的方法，其包括：(a)將6-乙醯基-8-環戊基-5-甲基-2-(5-哌

-1-基-吡啶-2-基胺基)-8H-吡啶並[2,3-d]嘧啶-7-酮游離鹼懸浮於第一溶劑與第二溶劑之混合物中，並加熱至獲致溶解；(b)冷卻至適當溫度並提供6-乙醯基-8-環戊基-5-甲基-2-(5-哌

-1-基-吡啶-2-基胺基)-8H-吡啶並[2,3-d]嘧啶-7-酮游離鹼(A型)之晶種；(c)將該混合物逐漸冷卻以獲致結晶；及(d)分離該具有大粒徑的6-乙醯基-8-環戊基-5-甲基-2-(5-哌

-1-基-吡啶-2-基胺基)-8H-吡啶並[2,3-d]嘧啶-7-酮之游離鹼(A型)。

在其他實施態樣中，本發明提供一種製造大粒徑6-乙醯基-8-環戊基-5-甲基-2-(5-哌

-1-基-吡啶-2-基胺基)-8H-吡啶並[2,3-d]嘧啶-7-酮游離鹼懸浮於正丁醇及苯基甲基醚之混合物中，並加熱至約95至100℃以獲致溶解；(b)冷卻至約80℃並提供6-乙醯基-8-環戊基-5-甲基-2-(5-哌

-1-基-吡啶-2-基胺基)-8H-吡啶並[2,3-d]嘧啶-7-酮游離鹼(A型)之晶種；(c)將該混合物維持在約80℃約3小時，然後逐漸冷卻至約10℃以獲致結晶；及(d)過濾以分離該具有大粒徑的6-乙醯基-8-環戊基-5-甲基-2-(5-哌

-1-基-吡啶-2-基胺基)-8H-吡啶並[2,3-d]嘧啶-7-酮之游離鹼(A型)。

其他方法涉及中間物乙烯基醚於水與第一溶劑之混合物中的酸性水解，其會需要加熱以酬得溶解，添加第二溶劑及鹼化以提供包含在原位產生之游離鹼的另一混合物，視需要加熱以獲得溶解及餾除水，冷卻至適當溫度，提供化合物1游離鹼(A型)之晶種，然後結晶以提供具有大一次粒徑的化合物1游離鹼。

-1-基-吡啶-2-基胺基)-8H-吡啶並[2,3-d]嘧啶-7-酮之游離鹼(A型)的方法，其包括：(a)將4-{6-[6-(1-丁氧基-乙烯基)-8-環戊基-5-甲基-7-側氧基-7,8-二氫吡啶並-[2,3-d]嘧啶-2-基胺基]-吡啶-3-基}哌

-1-羧酸三級丁酯懸浮水及第一溶劑之混合物中，並加熱以獲致溶解；(b)添加酸及反應以在原位產生6-乙醯基-8-環戊基-5-甲基-2-(5-哌

-1-基-吡啶-2-基胺基)-8H-吡啶並[2,3-d]嘧啶-7-酮之酸加成鹽；(c)添加第二溶劑及鹼水溶液至 pH值大於或等於10；(d)將有機層分離並加熱以餾除水；(e)冷卻至適當溫度並提供6-乙醯基-8-環戊基-5-甲基-2-(5-哌

-1-基-吡啶-2-基胺基)-8H-吡啶並[2,3-d]嘧啶-7-酮游離鹼之晶種(f)將該混合物逐漸冷卻以獲致結晶；及(g)分離該具有大粒徑的6-乙醯基-8-環戊基-5-甲基-2-(5-哌

-1-基-吡啶-2-基胺基)-8H-吡啶並[2,3-d]嘧啶-7-酮之游離鹼(A型)。

-1-羧酸三級丁酯懸浮於水及正丁醇之混合物中，並加熱至約70℃至獲致溶解；(b)添加濃HCl並在約70℃加熱達4至6小時；(c)添加苯基甲基醚及NaOH水溶液以獲致pH為>10之雙相混合物；(d)分離該等層並加熱該有機層至約120℃以餾除水；(e)冷卻至約80℃並提供6-乙醯基-8-環戊基-5-甲基-2-(5-哌

-1-基-吡啶-2-基胺基)-8H-吡啶並[2,3-d]嘧啶-7-酮游離鹼(A型)之晶種；(g)將該混合物維持在約80℃約3小時，然後逐漸冷卻至約10℃以獲致結晶；及(g)過濾以分離該具有大粒徑的6-乙醯基-8-環戊基-5-甲基-2-(5-哌

-1-基-吡啶-2-基胺基)-8H-吡啶並[2,3-d]嘧啶-7-酮之游離鹼(A型)。

在各前述方法之一些實施態樣中，該方法提供具有

2m²/g之比表面積的化合物1游離鹼。在各前述方法之其他實施態樣中，該方法提供具有

1m²/g之比表面積的化合物1游離鹼。在各前述方法之其他實施態樣中，該方法提供具有約5μm至約150μm，較佳為約10μm至約100μm，及更佳為約15μm至約80μm之一次粒徑的化合物1游離鹼。在各前述方法之其他實施態樣中，該方法提供具有特徵如下示之一次粒徑分布的化合物1游離鹼：(i)約5μm至約10μm之D10值；(ii)約30μm至約125μm之D90值；或(iii)約10μm至約45μm之D50值；或(i)、(ii)及(iii)之組合。在各前述方法之另外的實施態樣中，該方法提供具有約2至約3之(D90-D10)/D50一次粒徑分布比的化合物1游離鹼。在各前述方法之另外的實施態樣中，該方法提供具有約15μm至約125μm之體積平均直徑(D[4,3])的化合物1游離鹼。

在其他態樣中，本發明提供如本文所述根據該等方法之一所製備的化合物1游離鹼。在一些實施態樣中，本發明提供根據本文所述方法任一者所製備之6-乙醯基-8-環戊基-5-甲基-2-(5-哌

-1-基-吡啶-2-基胺基)-8H-吡啶並[2,3-d]嘧啶-7-酮之游離鹼(A型)的結晶游離鹼。在一些此等實施態樣中，由本文所述方法所製備之游離鹼可以其SSA、PSA或表面能、或該等方法之組合，單獨或另外與PXRD或ssNMR組合來表示特徵。在一些此等實施態樣中，該結晶游離鹼具有介於0.05至0.25重量%之間的苯基甲基醚及/或介於0.05至0.25重量%之間的正丁醇的殘留溶劑含量。在其他此等實施態樣中，該結晶游離鹼具有

0.5重量%之苯基甲基醚及

0.5重量%之正丁醇，較佳為

0.25重量%之苯基甲基醚及

0.25重量%之正丁醇的殘留溶劑含量。

在各上述方法中，該第一溶劑為醇且該第二溶劑為芳族溶劑。適用之醇包括但不局限於相對高沸點之醇，諸如正丁醇、三級丁醇、正丙醇、戊醇、1,4-丁二醇或丙二醇等。適用之芳族溶劑包括但不局限於苯基甲基醚、1,3,5-三甲苯、間二甲苯、氯苯、吡啶等。

在一些此等實施態樣中，該溶劑混合物包含10%之醇、15%之醇、20%之醇、25%之醇、30%之醇、35%之醇、40%之醇、45%之醇、50%之醇、60%之醇、70%之醇、或>70%之醇，其餘部分為芳族溶劑。在其他此等實施態樣中，該溶劑混合物包含90%之芳族溶劑、85%之芳族溶劑、80%之芳族溶劑、75%之芳族溶劑、70%之芳族溶劑、65%之芳族溶劑、60%之芳族溶劑、55%之芳族溶劑、50%之芳族溶劑、40%之芳族溶劑、30%之芳族溶劑、或<30%之芳族溶劑，其餘部分為醇溶劑。

在一較佳實施態樣中，該第一溶劑為正丁醇。在另一較佳實施態樣中，該第二溶劑為苯基甲基醚。在特佳實施態樣中，該第一溶劑為正丁醇且該第二溶劑為苯基甲基醚。在一些此等實施態樣中，該溶劑混合物包含10%之正丁醇/苯基甲基醚、15%之正丁醇/苯基甲基醚、20%之正丁醇/苯基甲基醚、25%之正丁醇/苯基甲基醚、30%之正丁醇 /苯基甲基醚、35%之正丁醇/苯基甲基醚、40%之正丁醇/苯基甲基醚、45%之正丁醇/苯基甲基醚、50%之正丁醇/苯基甲基醚、60%之正丁醇/苯基甲基醚、70%之正丁醇/苯基甲基醚、或>70%之正丁醇/苯基甲基醚。在一些較佳實施態樣中，該溶劑混合物包含約20至約50%之正丁醇/苯基甲基醚。在特佳實施態樣中，該溶劑混合物包含約40%之正丁醇/苯基甲基醚。

為了改善產率，該等方法包括加熱或冷卻至高於或低於室溫之溫度。該等反應混合物經常可加熱至約30℃至約150℃之溫度，更常為約50℃至約120℃之溫度以獲致溶解。在結晶期間，會需要將該反應混合物冷卻至室溫或低於室溫之溫度，例如介於約0℃與約30℃之間，較佳為約5℃、約10℃、約15℃或約20℃。

在額外的實施態樣中，該化合物1游離鹼為具有包含在繞射角(2θ)為10.1±0.2之峰的粉末X射線繞射圖案之多形體A型。在其他實施態樣中，該結晶型具有包含在繞射角(2θ)為10.1±0.2及22.5±0.2之峰的粉末X射線繞射圖案。在該態樣之其他實施態樣中，該結晶型具有包含在繞射角(2θ)為5.1±0.2、10.1±0.2及22.5±0.2之峰的粉末X射線繞射圖案。在另外的實施態樣中，該結晶型具有包含在繞射角(2θ)為5.1±0.2、10.1±0.2、19.7±0.2及22.5±0.2之峰的粉末X射線繞射圖案。在又其他實施態樣中，該結晶型具有包含在繞射角(2θ)為5.1±0.2、10.1±0.2、17.1±0.2、19.7±0.2及22.5±0.2之峰的粉末X射線繞射圖案。在額外實施態樣中，該結晶型具有包含在繞射角(2θ)為5.1±0.2、10.1±0.2、11.5±0.2、17.1±0.2、19.7±0.2及22.5±0.2之峰的粉末X射線繞射圖案。在又其他實施態樣中，該結晶型具有包含在繞射角(2θ)為5.1±0.2、10.1±0.2、11.5±0.2、17.1±0.2、18.7±0.2、19.7±0.2及22.5±0.2之峰的粉末X射線繞射圖案。在該態樣之一些實施態樣中，該結晶型具有包含在實質上與圖1所示相同之繞射角(2θ)的峰之粉末X射線繞射(PXRD)圖案。

游離鹼多形體A型之粉末X射線繞射(PXRD)圖案係顯示於圖1，且對應資料係表列於表1中。

化合物1之結晶游離鹼A型的固態核磁共振(ssNMR)係示於圖2，且對應資料係表列於表2。

(a)參考29.5ppm之固相金剛烷的外部樣本。

在本發明其他態樣中提供化合物1之結晶游離鹼，其中該結晶游離鹼為化合物1游離鹼的多形體B型。在該態樣之一些實施態樣中，該結晶型具有包含在繞射角(2θ)為6.0±0.2之峰的粉末X射線繞射圖案。在該態樣之其他實施態樣中，該結晶型具有包含在繞射角(2θ)為6.0±0.2及19.8±0.2之峰的粉末X射線繞射圖案。在該態樣之其他實施態樣中，該結晶型具有包含在繞射角(2θ)為6.0±0.2、19.8±0.2及26.7±0.2之峰的粉末X射線繞射圖案。在其他實施態樣中，該結晶型具有包含在繞射角(2θ)為6.0±0.2、16.4±0.2、19.8±0.2及26.7±0.2之峰的粉末X射線繞射圖案。在又其他實施態樣中，該結晶型具有包含在繞射角(2θ)為6.0±0.2、12.8±0.2、16.4±0.2、19.8±0.2及26.7±0.2之峰的粉末X射線繞射圖案。在額外實施態樣中，該結晶型具有包含在繞射角(2θ)為6.0±0.2、12.8±0.2、16.4±0.2、19.8±0.2、22.6±0.2及26.7±0.2之峰的粉末X射線繞射圖案。在又其他實施態樣中，該結晶型具有包含在繞射角(2θ)為6.0±0.2、10.9±0.2、12.8±0.2、16.4±0.2、19.8±0.2、22.6±0.2及26.7±0.2之峰的粉末X射線繞射圖案。在該態樣之一些實施態樣中，該結晶型具有包含在實質上與圖3所示相同之繞射角(2θ)的峰之PXRD圖案。游離鹼多形體B型之粉末X射線繞射(PXRD)圖案係顯示於圖3，且對應資料係表列於表3中。

6-乙醯基-8-環戊基-5-甲基-2-(5-哌

-1-基-吡啶-2-基胺基)-8H-吡啶並[2,3-d]嘧啶-7-酮之結晶游離鹼B型的固態核磁共振(ssNMR)係顯示於圖4，對應資料係表列於表4中。

(a)參考29.5ppm之固相金剛烷的外部樣本。

(b)寬峰

就各粉末X射線繞射測量而言，將游離鹼之樣本置入位在托座之平坦表面上的凹穴，並使用載玻片整平該樣本表面。將含有該等樣本之托座置入繞射儀中，且X射線光束源最初以相對於該托座之平坦表面為小角度照射該等樣本。然後以逐步方式將該X射線光束移動通過弧，在入射光束與該托座之平坦表面之間依序增加該角度。於該掃描的各步驟，閃爍計數器偵測被繞射之輻射的量，其係作為2θ(°)之函數記錄。儀器軟體顯示該掃描之被繞射的輻射之強度與2θ(°)的結果。

表1及表3分別列出具有多形體A型或B型之化合物1游離鹼的顯著PXRD峰(即，展現峰高度對雜訊比大於3.5者)。所提供之特徵峰列表不是唯一可能的特徵峰列表。熟悉多形體識別技術之人士可選擇亦可辨識一種多形體與其他多形體的其他組特徵峰。

在相同多形體之獨立測量當中的PXRD圖案中之差異可因許多原因而出現。誤差來源包括樣本製備中之變異(例如樣本高度)、儀器誤差、校準誤差、及操作者誤差(包括決定峰位置之誤差)。優先定向(即，PXRD樣本中缺乏晶體之無規定向)可造成相對峰高度中的顯著差異。校準誤差及樣本高度誤差經常造成繞射圖之峰全部以相同方向偏移相同量。在平坦托座上之樣本高度小幅差異會導致PXRD峰位置大幅位移。系統研究顯示1mm之樣本高度差異會導致峰偏移高達1° 2θ，詳見Chen等人，J.Pharmaceutical and Biomedical Analysis(2001)26：63。

在許多實例中，由系統誤差造成之在繞射圖案當中的峰偏移可藉由補償該偏移(例如對所有峰位置值應用校準因子)或藉由再校準該繞射儀來消除。通常，相同技術可用以補償繞射儀之間的差異，以使從兩個不同儀器之間所獲得的PXRD峰位置可一致。此外，當該等技術應用於來自相同或不同繞射儀之PXRD測量時，特定多形體之峰位置經常一致在約±0.2° 2θ內。

所揭示之化合物包括所有藥學上可接受之同位素變化。同位素變化係至少一個原子被具有相同原子序但原子質量與自然界中所發現之原子質量不同的原子置換之化合物。可用同位素包括氫、碳、氮、氧、磷、硫、氟及氯之同位素。因此範例同位素包括但不局限於²H、³H、¹³C、¹⁴C、¹⁵N、¹⁷O、¹⁸O、³²P、³⁵S、¹⁸F及³⁶Cl。

所揭示化合物經諸如氘(即²H)取代可提供特定由較大代謝安定性(例如活體內半衰期增加或劑量需要減少)之治療優點，因此在許多狀況下會更有用。此外，特定同位素變化(例如結合放射性同位素)可用於藥物及/或基材組織分布研究。從容易結合及偵測工具備妥之觀點來看，該等放射性同位素氚(即³H)及碳14(即¹⁴C)更有用。

所揭示之化合物的同位素變化通常可藉由熟悉本技術之人士已知的慣用技術或藉由與隨附之實例中所述方法類似的方法，使用適用試藥之適當同位素變化來製備。所揭示之化合物的藥學上可接受之溶劑合物包括其中結晶之溶劑可同位素取代之(例如D₂O、d₆-丙酮、d₆-DMSO)者。

溶解性實驗

美國專利第7,345,171號報告指出藉由傳統鹽斷裂製程所製備的化合物1游離鹼於pH 7.9下具有不良水溶解性(9μg/mL)，且在動物研究中展現低生物利用率。報告指出該游離鹼為根據漿體實驗的最安定晶體相(即，A型)。美國專利第7,345,171號之圖17提供A型之游離鹼的水吸附/脫附等溫線。如先前提及，該材料對應於本文所述之小粒徑化合物1游離鹼。

化合物1游離鹼(A型)在藥物粒子製程中有高度衝壓黏附傾向。由於衝壓黏附與API表面積相關，故API粒徑控制對於最小化藥物產品製造期間的黏附而言相當關鍵。除了衝壓黏附問題外，已發現從標準鹽斷裂程序直接分離之化合物1游離鹼極容易產生靜電，且發現形成未因篩分而分散的大型(大約500微米)硬黏聚物。較有相似不良物理性質之游離鹼API係藉由現有2-羥乙磺酸鹽API之游離鹼化或藉由中和在API合成最終步驟中所形成的原位鹽來產生。在任一方法中，藉著調整pH之溶解性劇烈改變所導致的快速結晶而產生小API原粒子。在所有情況下，該游離鹼係作為更安定多形體A型形式分離。

圖6顯示藉由上述游離鹼化及中和實驗所形成之典型小原粒子的掃描電子顯微術(SEM)影像。藉由此游離鹼分離程序所產生之一批化合物1(A型)的粒徑分布測量係提供於圖8。該粒徑分布中之第二波型係因存在大型黏聚物所導致，在圖6中之SEM影像亦可看到彼。修改該游離鹼化程序之嘗試未能成功改善所產生之API的物理性質。因該用於產生游離鹼之程序造成具有不良物理性質的API分離，進行辨識能改善API物理性質之再結晶程序的作業。

完成化合物1游離鹼之早期結晶篩選實驗來辨識容許分離具有經改良物理性質之粒子的溶劑系統。溶解性篩選與小規模再結晶研究之組合檢驗多種可能溶劑系統。

小規模結晶研究

進行一系列小規模結晶實驗以辨識可能之再結晶溶劑系統以及評估溶劑對於所分離之游離鹼原粒子的形狀之影響。最初一組14個篩選研究係以10mg模規進行，其使用密封管瓶及外部熱源以將該等50mg/mL樣本加溫至高達回流溫度。目視觀察識該等成為溶液之樣本且使用照相顯微術來表示所產生之粒子的特徵。該等初始結晶篩選實驗之結果彙總於表5。

根據該等小規模結晶研究，由於所產生之粒子大且苯基甲基醚為ICH第III級溶劑，苯基甲基醚成為額外結晶及溶解性研究之焦點。根據所產生之粒子，此篩選研究亦將吡啶、間二甲苯及1,3,5-三甲苯辨識為可能溶劑系統，但該等溶劑中無一亦具有類似苯基甲基醚之ICH第III級列表。

以下溶劑亦用於固體之再結晶：異丙醇、異丁醇、乙醇、乙酸乙酯、甲苯、四氫呋喃及二

烷。該等溶劑各產生具有與二氯甲烷所獲得之原有結晶型相同的化合物1之多形體A型結晶固體。

溶解性研究：

與初始小規模結晶研究並行地對於化合物1游離鹼進行一系列溶解性研究以辨識可能再結晶系統。在初始室溫溶解性篩選研究中，篩選總計23種溶劑。此研究顯示出化合物1游離鹼在某一範圍有機溶劑內具有低溶解性，只有二氯甲烷顯示出大於1mg/mL之溶解性(3.0mg/mL)。進行隨後之目標較高溫度溶解性研究。在後續研究中，在25mg/mL之固定濃度下檢驗一組16種溶劑系統，且使用至高達110℃之最大溫度的動力溶解性方法來測量該溶解溫度。

藉由化合物1之COSMOtherm溶解性模型預測的協同溶解性表現係用以選擇此篩選研究中所包括之二元及三元溶劑系統。該等研究之結果係列於表6。就該表中所列>110℃之實驗而言，當加熱至110℃時化合物1不溶解於該溶劑中，表示在此溶劑中於110℃下的溶解性低於25mg/mL。

來自表6中之實驗編號3及編號11的飽和溶液之隨後UPLC/MS測試表示存在先前未看到的雜質峰，此表示該等實驗中發生劣化。

雖然丙二醇/n-BuOH/苯基甲基醚混合物顯示比n-BuOH/苯基甲基醚混合物改良之溶解性，但前者溶劑系統因其會造成規模問題之高黏度及沸點，導致不易與丙二醇一起操作，故不推薦。

根據該等篩選研究，基於API之相對高溶解性、化學安定性及再結晶化合物1 API之粒子性質，選擇40%之正丁醇與苯基甲基醚的混合物作為用以進一步處理的結晶溶劑系統。此溶劑系統係用於隨後生產以提供較大一次粒徑API，該較大一次粒徑API之黏附減少、較不易產生靜電及無黏聚物。

使用此溶劑混合物，在使用受控制冷卻曲線及晶種引發成核而結晶之前，藉由加熱至95至110℃，以40mL/g溶劑溶解化合物1(濃度為25mg/mL)。圖9為使用此再結晶製程再結晶之化合物1的實驗室規模批次之PLM影像，而圖7顯示三批再結晶之API的粒徑分布。此再結晶製程造成具有較大一次粒徑之化合物1 API粒子的分離，此導致在藥物生產製程中之黏附傾向降低。此再結晶之化合物1 API不形成黏聚物，且亦具有不易產生靜電的正面貢獻。

溶解性篩選與小規模再結晶研究之組合檢驗多種用於再結晶化合物1游離鹼的可能溶劑系統。根據該等篩選研究的結果，基於API之相對高溶解性、化學安定性及再結晶化合物1之粒子性質，選擇40%之正丁醇/苯基甲基醚的混合物作為用以進一步處理的較佳結晶溶劑系統。該從此再結晶程序分離之API的較大一次粒徑及經改良粒徑性質促進化合物1游離鹼之藥物產品製程的發展。

粒徑評估

再結晶材料之粒徑係使用雷射繞射法評估。雷射繞射係由包括ISO及ASTM之標準及指導機構認可，且廣泛用以測定粒徑分布。在進行評估時，使樣本通過造成以某一範圍角度散射之雷射光的雷射光束。以固定角度放置之偵測器測量該位置所散射之光強度。然後應用數學模型(Mie或Fraunhoffer理論)後產生粒徑分布。

粒徑係使用雷射繞射(或小角度光散射)技術，藉由壓縮空氣分散乾燥樣本粉末來分析。特別的是，該粒徑分布係使用配備Vibri乾粉進料器之Sympatec HELOS RODOS系統來分析。該粉末樣本係以0.5巴之分散壓力來分散。在一些實例中，使用Aspiros微調劑裝置，且以0.2巴之分散壓力分散該粉末樣本。選擇適用之透鏡以涵蓋每一樣本之粒徑範圍。

在粒徑測定中，中位值係定義為一半該群組停留在此點上方及一半停留在此點下方之值。就粒徑分布而言，該中位數係稱為D50。該D50為將該分布分成一半在此直徑上方且一半在此直徑下方之以微米計的尺寸。Dv50或D[v,0.5]之表達方式有時係用於體積分布之中位數。

該波型係頻率分布之峰。粒子分布可包括超過一個波型，例如粒子係作為原粒子及黏聚物存在的情況。

該跨距有時係用作分布寬度之測量，且係定義為(D[v,0.9]-D[v,0.1])/D[v,0.5]或(D90-D10)/D50之比。

該分布寬度亦可藉由引用在x軸上之一、二或較佳為三個值，通常為D10、D50及D90的一些組合，來表示特徵。中位數D50已於前文定義為一半該群組位於此值下方的直徑。類似地，該分布的90%位於D90下方，及該群組的10%位於D10下方。

術語D[4,3]係指體積平均或質量矩平均。雷射繞射結果係以體積基準報告，且體積平均可用以定義該分布的中心點。D[4,3]值對於分布中的大粒子之存在敏感。

調配物

本發明亦關於包含本文所述之游離鹼多形體A型的藥學組成物。本發明之藥學組成物可例如呈適於口服之形式，諸如錠劑、膠囊、藥丸、粉末、緩釋型調配物、溶液、懸浮液；用於非經腸注射，如滅菌溶液、懸浮液或乳液；用於局部投與，諸如油膏或乳霜；或用於直腸投與，如栓劑。該藥學組成物可為適於單次投與精確劑量之單位劑型。該藥學組成物將包括慣用藥學載體或賦形劑及本發明之化合物作為活性成分。此外，可包括其他藥用或藥學用劑、載體、佐劑等。

適用之藥學載體包括惰性稀釋劑或填料、水及各種有機溶劑。視需要，該藥學組成物可含有額外成分，諸如調味劑、黏合劑、賦形劑等。因此，就口服而言，含有各種賦形劑(諸如檸檬酸)之錠劑可與各種崩解劑(諸如澱粉、藻酸及特定複合矽酸鹽)以及黏合劑(諸如蔗糖、明膠及阿拉伯樹膠)一起使用。另外，潤滑劑(諸如硬脂酸鎂、硫酸月桂酯鈉及滑石)經常可用於製錠目的。相似類型之固態組成物亦可用於軟質及硬質填充明膠膠囊。較佳材料包括乳糖或乳糖(lactose or milk sugar)及高分子量聚乙二醇。當需要水性懸浮液或酏劑以供口服時，其中之活性化合物可與各種甜味劑或調味劑、著色物質或染料，以及視需要與乳化劑或懸浮劑，連同稀釋劑(諸如水、乙醇、丙二醇、甘油或其組合)併用。

製備具有特定量之活性化合物的各種藥學組成物之方法係為熟悉本技術之人士已知或對熟悉本技術之人士而言極顯而易見。例如，詳見Reminqton's Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Company，Easter,Pa.，第15版(1975)。

所揭示之化合物可單獨投與或與其他藥物合併投與，且通常將作為與一或多種藥學上可接受之賦形劑相關聯之調配物形式投與。術語「賦形劑」描述任何化合物1及其鹽以外的成分。賦形劑之選擇將大幅取決於特定投與模型。

所揭示之化合物可口服。口服投與可包括吞嚥，因此該化合物進入胃腸道，或可使用頰或舌下投與，藉此該化合物從口腔直接進入血流。

適於口服投與之調和物包括固態調和物，諸如錠劑、含有顆粒、液體或粉末之膠囊、菱形口含錠(包括填充液體者)、嚼錠、複粒及奈米粒、凝膠、固溶體、微脂體、薄膜(包括黏膜黏著劑)、栓劑(ovule)、噴霧及液態調和物。液態調和物包括懸浮液、溶液、糖漿及酏劑。此等調和物亦可作為填料用於軟膠囊或硬膠囊中，且通常包含載劑，例如水、EtOH、聚乙二醇、丙二醇、甲基纖維素或適用之油，及一或多種乳化劑及/或懸浮劑。液態調和物亦可藉由將固體(例如來自小藥囊)復原而製備。

所揭示之化合物亦可用於快速溶解、快速崩解劑型，諸如Liang及Chen於Expert Opinion in Therapeutic Patents(2001)11(6)：981-986中所描述。

至於錠劑劑型，視劑量而定，該藥物可佔劑型的1重量%至80重量%，更常劑型的佔5重量%至60重量%。除了藥物之外，錠劑通常含有崩解劑。崩解劑之實例包括澱粉羥乙酸鈉、羧甲基纖維素鈉鹽、羧甲基纖維素鈣、交聯羧甲基纖維素鈉、交聯普維酮、聚乙烯吡咯啶酮、甲基纖維素、微晶型纖維素、低級烷基取代之羥丙基纖維素、澱粉、預糊化澱粉及褐藻酸鈉。通常，崩解劑佔劑型的1重量%至25重量%，更佳為5重量%至20重量%。

通常使用黏合劑以使錠劑調和物具有黏結性質。適用之黏合劑包括微晶型纖維素、明膠、糖、聚乙二醇、天然及合成膠、聚乙烯吡咯啶酮、預糊化澱粉、羥丙基纖維素及羥丙基甲基纖維素。錠劑亦可含有稀釋劑，諸如乳糖(一水化物、噴霧乾燥之一水化物、無水物等)、甘露醇、木糖醇、右旋糖、蔗糖、山梨醇、微晶型纖維素、澱粉及二價磷酸鈣二水化物。

錠劑亦可隨意地包括表面活性劑，諸如硫酸月桂酯鈉及聚山梨醇酯80，以及助流劑(glidant)，諸如二氧化矽及滑石。當存在上述物質時，表面活性劑可佔錠劑的0.2重量%至5重量%，及助流劑可佔錠劑的0.2重量%至1重量%。

錠劑亦通常含有潤滑劑，諸如硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、硬脂酸鋅、反丁烯二酸硬脂醯鈉及硬脂酸鎂與硫酸月桂酯鈉之混合物。潤滑劑通常佔錠劑的0.25重量%至10重量%，更佳為0.5重量%至3重量%。其他成分可包括防腐劑、抗氧化劑、調味劑及著色劑。

錠劑摻合物可直接壓製形成錠劑。錠劑摻合物或摻合物之部分或者可在製錠前經濕式、乾式或熔融粒化、熔融凝結，或擠出。最終調和物可包含一或多層，且可具有膜衣或無膜衣。範例錠劑含有高達約80%之藥物、約10重量%至約90重量%之黏合劑、約0重量%至約85重量%之稀釋劑、約2重量%至約10重量%之崩解劑及約0.25重量%至約10重量%之潤滑劑。有關錠劑調配之額外細節詳見H.Lieberman及L.Lachman，Pharmaceutical Dosage Forms：Tablets,Vol.1(1980)。

用於口服之固態調和物可調配成立即釋放型及/或經改良釋放型。經改良釋出調和物包括延遲釋放型、持續釋放型、脈衝釋放型、控制釋放型、靶向釋放型及程序釋放型。適用之經改良釋放型調配物的一般描述詳見美國專利第6,106,864號。就其他可用釋放技術(諸如高能分散液及滲透且經塗覆粒子)之細節詳見Verma等人， Pharmaceutical Technology On-line(2001)25(2)：1-14。用以獲致受控制釋放之口香糖用途的討論詳見WO 00/35298。

所揭示之化合物亦可直接投與至血流、至肌肉或至內臟。非經腸投與的適用方式包括靜脈內、動脈內、腹膜內、椎管內、室內、尿道內、胸骨內、顱內、肌內及皮下投與。非經腸投與的適用裝置包括針式(包括微針)注射器、無針式注射器及灌注技術。

非經腸調和物通常為水溶液，其可含有賦形劑，諸如鹽類、碳水化合物及緩衝劑(較佳至pH為3至9)，但就一些應用而言，更適宜調配為滅菌非水溶液或待與適用載體(諸如滅菌無熱原水)聯合使用之乾燥形式。在滅菌條件下例如藉由冷凍乾燥製備非經腸調和物可容易地使用熟悉本技術之人士詳知的標準醫藥技術完成。範例非經腸投與形式包括活性化合物在滅菌水溶液中之溶液或懸浮液形式，例如丙二醇水溶液或右旋糖溶液。若需要，此等劑型適合經緩衝。

用於製備非經腸溶液之所揭示化合物的溶解性可藉由使用適當調配技術(諸如結合溶解性增強劑)來提高。非經腸投與之調和物可調配成如上述立即釋放型及/或經改良釋放型。如此，該等揭示之化合物可調配成更實心形式以供作為提供該活性化合物之長期釋放的植入型補給(implanted depot)投與。

本發明化合物亦可局部投與至皮膚或黏膜，表皮或經皮投與。用於此目的之典型調和物包括凝膠、水凝膠、洗劑、溶液、霜劑、軟膏、敷粉、敷料、泡體、膜、皮膚貼片、圓片(wafer)、植入物、海綿、纖維、繃帶及微乳液。亦可使用微脂體。典型載劑包括醇、水、礦油、液態石蠟脂、白石蠟脂、甘油、聚乙二醇及丙二醇。局部調配物亦可包括滲透增強劑。詳見例如Finnin及Morgan，J Pharm Sci(1999)88(10)：955-958。

局部投與之其他方式包括藉由離子電泳法、電穿孔、超音波使用聲泳法(phonophoresis)、超音波導入(sonophoresis)及無針式(例如POWDERJECT)注射來遞輸。局部投與之調和物可調配成如上述立即釋放型及/或經改良釋放型。

所揭示化合物亦可鼻內或藉由吸入從乾粉吸入器通常呈乾粉形式(單獨或為混合物，例如與乳糖之乾燥摻合物，或為混合組分粒子，例如與諸如磷脂醯膽鹼之卵磷脂混合)或從加壓容器、泵、噴霧器(spray)、霧化器(通常為使用電流體力學以產生細微水霧之霧化器)或噴霧器(nebulizer)呈氣溶膠噴霧投藥，其使用或不使用適用推進劑(諸如二氯氟甲烷)。該加壓容器、泵、噴霧器(spray)、霧化器或噴霧器(nebulizer)可含有溶液或懸浮液，該溶液或分散液包含該活性化合物、用於分散、溶解或延長該活性化合物之釋放的用劑(例如EtOH或含水EtOH)、一或多種用作推進劑之溶劑、及隨意的界面活性劑，諸如山梨醇酐三油酸酯或寡聚乳酸。

在用於乾粉或懸浮液調和物之前，該藥物產物係經微粉化至適於藉由吸入遞輸的大小(通常小於5微米)。此可藉由任何適當之粉碎方法獲致，諸如螺旋射流粉碎、流體化床射流粉碎、超臨界流體處理以形成奈米粒子、高壓均質化或噴霧乾燥。

用於吸入器或吹入器的膠囊、氣泡包裝(blister)及匣(例如從明膠或羥丙基甲基纖維素製得)可調配成含有該活性化合物、適用之粉末狀基質(諸如諸如乳糖或澱粉)及性能改良劑(諸如諸如L-白胺酸、甘露醇或硬脂酸鎂)之粉末混合物。該乳糖可為無水或較佳呈一水化物形式。其他適用之賦形劑包括聚葡糖、葡萄糖、麥芽糖、山梨醇、木糖醇、果糖、蔗糖及海藻糖。

適用於使用電流體力學以產生細微水霧之霧化器的溶液調和物可在每次啟動含有1μg至20mg之本發明化合物，且該啟動體積可從1μl至100μl。典型調配物可包含化合物1、丙二醇、滅菌水、EtOH及NaCl。可用以代替丙二醇之替代溶劑包括甘油及聚乙二醇。

吸入式/鼻內投與之調和物可例如使用聚(DL-乳酸-共聚羥乙酸(PGLA)調配成立即釋出型及/或經改良釋出型。適用之調味劑(諸如薄荷醇及左薄荷醇(levomenthol)或甜味劑(諸如糖精或糖精鈉)可添加至欲用於吸入式/鼻內投與之調和物。

在乾粉吸入器及氣溶膠之例中，單位劑量係利用遞輸經計量之量的閥來決定。根據本發明之單元通常配置成投與經計量之劑量或含有100至1000μg該活性藥學成分之「按壓一次量(puff)」。每日總劑量通常在100μg至10mg之範圍，其可以單劑投與，或更常見的是分成一天數劑。

該活性化合物可經直腸/陰道投與，例如呈栓劑、子宮托或灌腸劑形式。可可脂係傳統栓劑基質，但若情況適當的話，可使用各種替代品。非經腸投與之調和物可調配成如上述經直腸/陰道投與。

所揭示之化合物亦可直接投與至眼睛或耳朵，通常呈於等滲壓pH經調整之滅菌鹽水中的微粉化懸浮液或溶液之滴劑形式。適用於眼部及耳部投與的其他調和物包括軟膏、生物可降解(例如可吸收凝膠海綿、膠原)及生物不可降解(例如聚矽氧)植入物、圓片、透鏡及微粒，或多孔系統，諸如囊泡(niosome)或微脂體。聚合物(諸如交聯聚丙烯酸、聚乙烯醇、玻尿酸)；纖維素聚合物(例如羥丙基甲基纖維素、羥乙基纖維素或甲基纖維素)；或異元多醣聚合物(例如結蘭膠(gelan gum))可結合防腐劑，諸如氯化烷基二甲基苄基銨。此等調和物亦可藉由離子電泳法遞輸。非經腸投與之調和物可調配成如上述眼部/耳部投與。

所揭示之化合物可與可溶性巨分子實體(諸如環糊精或含聚乙二醇聚合物)結合，以改善其溶解性、溶解速率、掩味性、生物利用率及/或安定性。例如，已發現藥物-環糊精複合物通常可用於大部分劑型及投與途徑。可使用包含型或非包含型複合物。與藥物直接複合的替代方式係可使用環糊精作為輔助添加劑，即，作為載劑、稀釋劑或助溶劑。α-、β-及γ-環糊精常用於此等目的。詳見例如國際專利申請案WO 91/11172、WO 94/02518及WO 98/55148。

化合物1之治療有效劑量可從每天大約0.01mg/kg體重至大約100mg/kg體重。通常成人劑量將為大約每天0.1mg至大約3000mg。在單位劑量製劑中之活性組分的量可根據特定應用及該活性組分的效力在0.1mg至大約500mg，較佳為約0.6mg至100mg變化或調整。視需要，該組成物亦可含有其他相容治療劑。對需要治療之對象投與每天約0.6至約500mg，其為單劑或在24小時期間之多劑。此種治療可以連續間隔重複必要的時間長度。

由異常細胞增生造成的失調或病況包括癌症及與動脈粥樣硬化、手術後血管狹窄及子宮內膜異位相關聯之血管平滑肌增生。自體免疫疾病包括乾癬、類發炎類風濕性關節炎、狼瘡、第1型糖尿病、糖尿病腎病變、多發性硬化症、腎絲球腎炎及器官移植排斥，包括移植物抗宿主病。

在一實施態樣中，本發明提供一種治療需要此種治療之哺乳動物(包括人類)異常細胞生長的方法，其包括對該哺乳動物投與治療有效量之本文所述的本發明化合物1結晶游離鹼。在常見實施態樣中，該游離鹼為多形體A型。

在其他實施態樣中，該異常細胞生長為癌症，包括實體腫瘤及惡性血液疾病二者。在一些此等實施態樣中，該癌症係選自乳癌、卵巢癌、子宮頸癌、子宮內膜癌、攝護腺癌症、睾丸癌、胰臟癌、食道癌、頭頸癌、胃癌、膀胱癌、肺癌(例如腺癌、NSCLC及SCLC)、骨癌(例如骨肉瘤)、結腸癌、直腸癌、甲狀腺癌、腦及中樞神經系統癌症、神經膠質母細胞瘤、神經母細胞瘤、神經內分泌癌、橫紋肌癌、角質棘皮瘤、表皮樣癌、精細胞瘤、黑色素瘤、肉瘤(例如，脂肉瘤)、膀胱癌、肝癌、(例如，肝細胞癌)、腎臟癌(例如，腎細胞癌)、骨髓失調(例如，AML、CML、骨髓化生不良症候群及骨髓性細胞白血病)及淋巴失調(例如，白血病、多發性骨髓瘤、外膜細胞淋巴瘤、ALL、CLL、B細胞淋巴瘤、T細胞淋巴瘤、哈金氏淋巴瘤、非哈金氏淋巴瘤、髮樣細胞淋巴瘤)。

一般合成式

以下所提供之實例及製備進一步闡明及舉例說明本發明實施態樣之特定態樣。應暸解，本發明範圍絕不受以下實例之範圍限制。

實施例一般方法及材料粉末X射線繞射(PXRD)

PXRD資料係根據以下方案收集。將樣本(2mg)置於零背景之顯微鏡載玻片。然後將該樣本置入配備有GADDS偵測器之Discover D8(Bruker AXS Instruments)。該系統使用維持在40kV與40mA之銅X射線源以提供1.5406埃之CUα1放射。使用0.02°、步進時間為60.1之步進掃描收集4至40 °2θ的資料。輻射峰測量通常具有±0.2度(2θ)之誤差。

SSNMR儀器及方法

SSNMR資料係根據以下方案收集。光譜係在定位於大口徑Bruker-Biospin Avance III 500MHz NMR光譜儀內之Bruker-Biospin 4mm及7mm BL CPMAS上收集。該4mm旋轉器係以魔角定向且在15.0kHz下旋轉。該7mm旋轉器係以魔角定向且在7.0kHz下旋轉。所有光譜係在周圍催化(溫度未受控制)下獲取。

¹³C固態光譜係使用質子去耦交叉極化魔角旋轉(CPMAS)實驗收集。峰共振係以百萬分之份(ppm)±0.2ppm報告。

微差掃描熱量計(DSC)：

DSC測量係使用Q1000(熱分析儀器)進行。將樣本置入具有針孔之密封鋁盤。典型樣本重量為1.6mg。將該樣本平衡至25℃，然後以10℃/分鐘之掃描速率升溫至250℃。使用乾燥氮作為沖洗氣體。

布厄特(Brunauer,Emmet and Teller；BET))表面積(SSA)測量：

SSA測量值係根據以下方案收集。氣體分子在晶體表面上形成單層係用以決定活性藥學成分之乾燥粉末的比表面積。藉由施加熱及以氮氣沖洗使該樣本不含濕氣及大氣蒸汽。然後將該樣本溫度降至用作待吸附之被吸附氣體(氮)的液態氮之溫度。被吸附氣體之量及壓力資料係用以產生吸附等溫線圖。然後使用數學算法根據所謂布厄特(BET)理論將該資料轉化成比表面積值(詳見例如J.Am.Chem.Soc.,1938,60：309)。比表面積係使用靜止多點或單點氣體吸附法測量，該方法完整描述於ISO 9277：2010及以下實驗。

反相氣相層析術(IGC)表面能測量：

表面能測量值係係根據以下方案使用IGC收集。將充分量之樣本裝填於交聯化玻璃管中，該等粉末係藉由插在兩端之玻璃羊毛塞固定在該管內。該管係藉由使乾燥氮流經過該等粉末充分時間以使任何表面被吸附物被移除來調理。藉由將一系列烷烴蒸汽探針(壬烷、辛烷、庚烷及己烷)注入該載體氣體流使其濃度低到足以假設無限稀釋該氮流中之烷烴蒸汽，並記錄各蒸汽經由該管洗出所花費的時間來進行測量。停留時間(針對該裝填之管內的填隙空間之「無效容積」校準)與橫斷面積及所使用之烷烴蒸汽探針分子的表面張力之函數的圖產生具有表示正在檢驗之固態粉末的表面能之斜率的線。

合成實例實施例1. 4-(6-胺基-吡啶-3-基)哌

-1-羧酸三級丁酯之製備

步驟A.4-(6-硝基-吡啶-3-基)哌

-1-羧酸三級丁酯之製備

於容器中添加5-溴-2-硝基吡啶(10.0g，1.0當量)以及DMSO(25mL，2.5vol)。添加N-Boc哌

(13.8g，1.5當量)，然後添加三乙胺(7.5g，1.5當量)及LiCl(2.1g，1.0當量)。將該混合物加至60至65℃至少12小時。

將水(5mL，0.5vol)緩慢添加至該於60至65℃之容器。使該混合物維持在於60至65℃為時1小時，然後冷卻至室溫。將該漿體維持在20至25℃為時1小時，然後在#2 Whatman^TM濾紙上過濾。以水清洗該濾餅(50mL，5vol)。收集粗製固體並將之移回清潔容器。

將水(100mL，10vol)添加至該含有該固體的容器，並將該混合物加溫至35至40℃為時2小時，然後於溫熱時在#2 Whatman^TM濾紙上過濾。以水(40mL，4vol)清洗該等固體，然後在真空烘箱中於50至55℃下使之乾燥一夜。4-(6-硝基-吡啶-3-基)-哌

-1-羧酸三級丁酯係作為黃色固體形式分離(收集14.1g；產率~93%)。

步驟B.4-(6-胺基-吡啶-3-基)哌

-1-羧酸三級丁酯之製備

於容器中添加4-(6-硝基-吡啶-3-基)-哌

-1-羧酸三級丁酯(12.0g，1.0當量)以及乙酸乙酯(48mL，4.0vol)。於漿體中添加50%水、濕5% Pd/C(480mg，4% w/w)且以氮沖洗該容器三次。該容器以氫沖洗三次，然後加壓係50psi氫。將該混合物加熱至42至47℃且使之攪拌直到氫吸取停止為止(至少8小時)。

以乙酸乙酯過濾並清洗該產物混合物(2×1.5mL)。在減壓下將組合之濾液濃縮至體積為6mL(2vol)。於該溶液中添加正庚烷(54mL，4.5vol)，並在減壓下蒸餾該混合物至體積為6mL(2vol)。於該溶液添加正庚烷(54mL，4.5vol)。將所得之濃稠漿體冷卻至20至25℃並使之攪拌2小時。過濾該漿體並以正庚烷(36mL，3vol)清洗該濾餅。使該等固體在50至55℃之真空烘箱中乾燥一夜。4-(6-胺基-吡啶-3-基)-哌

-1-羧酸三級丁酯係作為淺橘色固體形式分離(收集10.4g；產率~96%)。¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)：δ 7.62(dd,J=2.99,0.60Hz,1H),7.17(dd,J=8.85,2.99Hz,1H),6.40(dd,J=8.85,0.60Hz,1H),5.45(bs,2H),3.43(m,2H),2.85(m,2H),1.41(s,9H)；¹³C NMR(125MHz,DMSO-d₆)：δ 154.8,153.8,138.7,136.8,125.9,108.3,78.9,50.5,43.8,43.0,28.0；HRMS：C₁₄H₂₃N₄O₂(M+H)⁺之計算值：279.18155，發現值：279.18173。

實施例2. 6-溴-2-氯-8-環戊基-5-甲基-8H-吡啶並[2,3-d]嘧啶-7-酮之製備

步驟A.5-溴-2-氯-6-環戊基胺基-嘧啶之製備

於容器中添加純乙醇(3000mL，3.0vol)，然後添加5-溴-2,4-二氯嘧啶(分子量227.87；1000g，1.0當量)。添加三乙胺(612mL，1.0當量)，然後在2小時期間緩慢添加環戊胺(分子量85.15；520mL，1.2當量)以控制溫和放熱。在完成環戊胺添加之後，視需要，以5-溴-2-氯-6-環戊基胺基-嘧啶(5g，0.5重量%)作為反應之晶種來引發結晶。該反應於25℃下攪拌2小時。

在20至25℃下以30mL/分鐘之速率將水(2500mL，2.5vol)添加至該容器。以2℃/分鐘將該混合物冷卻至8至12℃。將該漿體維持在8至12℃為時1小時，然後在#2 Whatman^TM濾紙上過濾。以正庚烷(2000mL)清洗該濾餅。以正庚烷(2000mL)在過濾乾燥器上將該濾餅再漿化。該材料在真空烘箱中於50至55℃下乾燥一夜以產生呈白色固體形式之5-溴-2-氯-6-環戊基-胺基嘧啶(1020g；84%)。

步驟B.2-氯-8-環戊基-5-甲基-8H-吡啶並[2,3-d]嘧啶-7-酮之製備

在周圍溫度下於容器中添加5-溴-2-氯-6-環戊基胺基-嘧啶(10.0g，1.0當量)以及N-甲基吡咯啶(NMP)(50mL，5.0vol)。於該反應混合物中添加巴豆酸(4.7g，1.5當量)及三乙胺(20.2mL，4.0當量)。該容器係使用氮除氣及沖洗三次。於該經除氣之反應混合物中添加Pd(OAc)₂(0.25g，0.03當量)。該容器係使用與步驟3相同方法以氮除氣及沖洗三次。將該混合物加熱至65℃，並使之攪拌直到起始材料消耗為止(至少6小時)。

將乙酐(6.8mL，2.0當量)添加至該反應混合物。使該反應在65℃下反應，直到起始材料消耗為止(通常為1至2小時)。

將該反應混合物冷卻至20℃並添加H₂O(100mL，10vol)以溶解三乙胺．HBr鹽，並沉澱出2-氯-8-環戊基-5-甲基-8H-吡啶並[2,3-d]嘧啶-7-酮。該材料係在20℃下粒化1小時。將該等固體過濾並以H₂O(20mL，2.0vol)以及4：1之異丙醇/H₂O混合物(50mL，5.0vol)清洗。該粗製產物係在真空下於55至70℃乾燥以產生呈黃褐色至灰色固體形式之2-氯-8-環戊基-5-甲基-8H-吡啶並[2,3-d]嘧啶-7-酮(7.8g；81%)。

步驟C.6-溴-2-氯-8-環戊基-5-甲基-8H-吡啶並[2,3-d]嘧啶-7-酮之製備

於襯有玻璃之容器中添加2-氯-8-環戊基-5-甲基-8H-吡啶並[2,3-d]嘧啶-7-酮(9.35g，1.0當量)以及乙腈(65mL，7.0vol)。添加N-溴丁二醯亞胺(9.67g，1.5當量)及草酸(0.65g，0.2當量)。然後將該反應混合物加熱至60±5℃。該反應在60℃下攪拌直到起始材料消耗為止(至少6小時)。將該漿體冷卻至20℃且添加H₂O(9mL，1vol)。於該漿體中添加於H₂O(38mL，4vol)中之亞硫酸氫鈉溶液(3.88g，1.0當量)。使該漿體粒化1小時，然後在#2 Whatman濾紙上直接過濾。以水(19mL，2vol)，然後以7：3之甲醇/乙腈混合物(28mL，3vol)清洗該反應容器，然後將該等清洗液轉移至該濾餅上。該產物在真空烘箱中於50至55℃下乾燥。分離出呈淺黃色固體形式之6-溴-2-氯-8-環戊基-5-甲基-8H-吡啶並[2,3-d]嘧啶-7-酮(10.52g；87%)。

藉由從甲苯及正庚烷再結晶進一步純化該產物。將甲苯(60mL，6vol)及6-溴-2-氯-8-環戊基-5-甲基-8H-吡啶並[2,3-d]嘧啶-7-酮(10.00g，1當量)添加至反應容器並加熱至80℃。將該溫熱反應混合物是由適當匣過濾以確保移除不可溶之Pd及其他不可溶之污染物。該過濾器匣係以80℃甲苯(5mL，0.5vol)清洗。以1℃/分鐘將該漿體冷卻至25℃。以1mL/分鐘將正庚烷(70mL，7vol)添加至該反應漿體。以1℃/分鐘將該漿體進一步冷卻至0℃。該漿體於0℃粒化至少1小時。

將該漿體直接在#2 Whatman濾紙上過濾。將正庚烷(30mL，3vol)裝入該反應容器，並將清洗液轉移至該濾餅上，且在真空烘箱中於50至55℃下乾燥該產物。分離出呈乳化色固體形式之6-溴-2-氯-8-環戊基-5-甲基-8H-吡啶並[2,3-d]嘧啶-7-酮(8.73g，87%)。¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)：δ 9.20(s,1H),5.82(m,1H),2.65(s,3H),2.11(m,2H),2.04(m,2H),1.86(m,2H),1.64(m,2H)；¹³C NMR(125MHz,DMSO-d₆)：δ 158.2,158.2,157.6,154.1,144.0,120.9,113.0,54.4,28.3,25.7,18.3；HRMS：C₁₃H₁₄N₃O₁Br₁Cl₁(M+H)⁺之計算值：342.00033，發現值：342.00037。

實施例3. 4-{6-[6-溴-8-環戊基-5-甲基-7-側氧基-7,8-二氫吡啶並[2,3-d]嘧啶-2-基胺基]吡啶-3-基}-哌

-1-羧酸三級丁酯之製備

以四氫呋喃(900mL，15mL/g)裝填乾燥經氮沖洗之反應器。批料溫度設於20℃，且開始以250RPM攪動。以4-(6-胺基-吡啶-3-基)-哌

-1-羧酸三級丁酯(63.4g，0.2278莫耳，1.3當量)裝填該反應器，並使該混合物保持在20℃下30分鐘以使該起始材料溶解。藉由泵在30分鐘期間以異丙基氯化鎂(93.9g，0.193莫耳，第1次裝填1.1當量)(於THF中2.0M，1.1當量)裝填能反應器。該批料維持在20℃下40分鐘。以6-溴-2-氯-8-環戊基-5-甲基-8H-吡啶並[2,3-d]嘧啶-7-酮(60.1g，0.1755莫耳，1當量)一次裝填該反應器，並以THF沖洗(50mL沖洗)。藉由泵在30分鐘期間添加異丙基氯化鎂之額外裝填(93.9g，0.193莫耳，1.1當量，第2次裝填(於THF中2.0M，1.1當量)。該批料保持在20℃下90分鐘，然後從20℃加熱至60℃。

反應之後，THF(2.86vol)及HOAc(1當量)之混合物係用以使該反應驟冷。然後以0.5重量%之4-{6-[6-溴-8-環戊基-5-甲基-7-側氧基-7,8-二氫-吡啶並[2,3-d]嘧啶-2-基胺基]-吡啶-3-基}-哌

-1-羧酸三級丁酯作為該批料晶種並裝填THF(1.14vol)與HOAc(0.4當量)之混合物來完成沉澱。冷卻至20℃之後，過濾該批料、以丙酮(4vol)、水(6vol)及丙酮(4vol)清洗。

該濕濾餅在真空下於65℃乾燥至恆定重量以產生4-{6-[6-溴-8-環戊基-5-甲基-7-側氧基-7,8-二氫-吡啶並[2,3-d]嘧啶-2-基胺基}-吡啶-3-基}-哌

-1-羧酸三級丁酯，產率為93%。¹H NMR(600MHz,THF-d₈)：δ 9.36(s,1H),8.87(s,1H),8.22(d,J=8.8Hz,1H),8.04(d,J=2.9Hz,1H),7.39(dd,J=8.8,2.9Hz,1H),6.10(m,1H),3.55(寬，4H),3.09(寬，4H),2.60(s,3H),2.30(m,2H),2.09(m,2H),1.85(m,2H),1.66(m,2H),1.46(s,9H)；¹³C NMR(150MHz,THF-d₈)：δ 159.5,158.9,157.7,156.0,155.0,147.2,144.62,144.56,138.0,126.7,117.6,114.2,108.4,79.9,55.5,50.6,44.7,29.0,28.7,26.9,18.1；HRMS：C₂₇H₃₅N₇O₃Br₁(M+H)⁺之計算值：584.19797，發現值：584.19811。

實施例4. 4-{6-[6-(1-丁氧基-乙烯基)-8-環戊基-5-甲基-7-側氧基-7,8-二氫吡啶並[2,3-d]嘧啶-2-基胺基]-吡啶-3- 基}-哌

-1-羧酸三級丁酯之製備

以1-丁醇(60mL，6mL/g)裝填乾燥經氮沖洗之反應器且添加4-{6-[6-溴-8-環戊基-5-甲基-7-側氧基-7,8-二氫-吡啶並[2,3-d]嘧啶-2-基胺基]-吡啶-3-基}-哌

-1-羧酸三級丁酯(10g，0.017莫耳)及丁基乙烯基遍(5.1g，0.051莫耳，3.0當量)。添加二異丙基乙胺(5.3g，0.041莫耳，2.4當量)且使用氮通過噴霧管為時30分鐘來使該混合物噴霧。添加乙酸鈀(0.16g，0.00068莫耳，0.0400當量)及雙(2-二苯基膦基苯基)醚(0.45g，0.00082莫耳，0.04800當量)。在30分鐘期間將該混合物加熱至95℃，且在95℃下攪拌該批料2小時。將該混合物冷卻至80℃，並取樣以監測反應完成。於完成之後，添加水(15mL，1.5mL/g)及1-丁醇(30mL，3mL/g)。

該溶液經由0.45微米之過濾器過濾以移除沉澱之鈀。添加水(35mL，3.5mL/g)，然後添加1,2-二胺基丙烷(6.3g，0.085莫耳，5.0當量)。該混合物在70℃下攪拌至少30分鐘。停止攪動，並使該混合物沉降15分鐘。分離掉底部水相，並在30分鐘期間使該混合物冷卻至60℃。以4-{6-[6-(1-丁氧基-乙烯基)-8-環戊基-5-甲基-7-側氧基-7,8-二氫吡啶並-[2,3-d]嘧啶-2-基胺基]吡啶-3-基}-哌

-1-羧酸三級丁酯(C型)(50mg，0.005g/g)作為該混合物晶種並保持於60℃為時90分鐘。

一旦觀察到結晶，在超過1小時期間將該混合物冷卻至50℃，並在50℃保持3小時。在3小時期間將該混合物冷卻至30℃，並在30℃保持2小時，然後在4小時期間冷卻至20℃，並在20℃保持4小時。過濾該漿體並以1-丁醇(10mL，1mL/g)清洗。排出該濾餅，並裝填1-丁醇(10mL，1mL/g)，且在20℃下攪拌該漿體1小時。排出該濾餅。甲基三級丁基醚(20mL，2mL/g)清洗該混合物，並使用延長吹過時間(2小時或更長)使該濾餅完全脫液。在70℃下乾燥該濾餅。產率為75至80%。¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)：δ 10.0(s,1H),8.87(s,1H),8.07(d,J=2.9Hz,1H),7.91(d,J=9.0Hz,1H),7.48(dd,J=9.0,2.9Hz,1H),5.83(m,1H),4.47(d,J=1.6Hz,1H),4.05(d,J=1.6Hz,1H),3.77(t,J=6.4Hz,2H),3.48(寬，4H),3.11(寬，4H),2.37(s,3H),2.22(m,2H),1.89(m,2H),1.75(m,2H),1.61(m,2H),1.58(m,2H),1.43(s,9H),1.38(m,2H),0.90(t,J=7.39Hz,3H)；¹³C NMR(150MHz,DMSO-d₆)：δ 160.9,158.2,157.3,155.2,154.6,153.7,145.0,143.0,142.6,136.0,125.8,125.5,114.6,106.6,87.8,78.9,66.8,52.8,48.5,43.4,42.5,30.3,28.0, 27.4,25.1,18.8,14.4,13.6；HRMS：C₃₃H₄₆N₇O₄(M+H)⁺之計算值：604.36058，發現值：604.36049。

該中間物丁氧基-乙烯基醚可分離成數種多形體形式之一。A型係在不存在晶種的情況下作為動力產物分離，而B型在數種情況下分離但鮮少觀察到。丁氧基-乙烯基醚之最安定結晶型(C型)係藉由以C型晶體作為反應混合物晶種所獲得。該等多形體形式任一者可用於製備化合物1游離鹼，但基於容易過濾性來看，以丁氧基-乙烯基醚之C型為佳。

該中間物丁氧基-乙烯基醚之多形體A型、B型及C型的PXRD資料分別表列於表7、8及9。

實施例5. 藉由鹽斷裂法製備小粒徑化合物1游離鹼

於反應器中添加4-{6-[6-(1-丁氧基-乙烯基)-8-環戊基-5-甲基-7-側氧基-7,8-二氫吡啶並-[2,3-d]嘧啶-2-基胺基]-吡啶-3-基}-哌

-1-羧酸三級丁酯(2.70kg，4.47莫耳，1.0當量)，然後添加水(27.00L，10L/kg)及丙酮(13.50L，5L/kg)之混合物。將該黃色漿體加溫至介於50℃與55℃之間。在大約10分鐘期間，將以水(5.40L，2L/kg之起始材料)及丙酮(5.40L，2L/kg之起始材料)稀釋之甲磺酸溶液(2.15kg，22.36莫耳，5.0當量)添加至該反應器。使反應混合物保持在45℃與55℃之間至少12小時。在該反應期間獲致透明黃色溶液。

將該反應混合物冷卻至35℃，並將5重量%之氫氧化鈉溶液的混合物分數部分添加至該反應器以使該反應混合物升高至pH>9。將該反應器冷卻至介於20℃與25℃之間，粒化及過濾之。以水然後藉由丙酮清洗該濾餅，並在真空下乾燥。

該方法產生小一次粒徑化合物1游離鹼，其與從WO 2005/005426之實施例4中使用NaOH水溶液所的化合物1鹽酸鹽處理所製備的材料等效。

除了前文提供之代表性製程(對應於表10中實驗S)以外，篩選某一範圍之酸及水性溶劑系統以測定對於該反應及隨後驟冷及分離化合物1游離鹼的影響。進行實驗室規模篩選實驗以辨識用以將篩選乙烯基醚轉化成化合物1游離鹼的反應條件。該等反應篩選實驗的結果彙總於表 10，其表示該方法之一般原則。

實施例6. 小粒徑游離鹼成為大粒徑化合物1游離鹼的轉化

於反應器中添加根據實施例5所製備之化合物1游離鹼(20g，44.69毫莫耳，1.0當量)，然後添加1-丁醇(320mL，16ml/g)與苯基甲基醚(480mL，24ml/g)。將該黃色漿體加溫至介於95℃與100℃之間以獲致溶解。將該反應器冷卻至80℃。於該反應器中之溶液中，裝填含有懸浮液於1-丁醇(5mL，0.25mL/g之起始材料)的化合物1游離鹼(A型)晶種(0.1g，0.2毫莫耳，0.005當量)之晶種漿體以引發結晶。所得之漿體係於80℃下攪拌3小時。將該漿體以0.2℃/分鐘在350分鐘期間冷卻至10℃、粒化及過濾。以苯基甲基醚然後藉由庚烷清洗該濾餅，並在真空下乾燥。

此方法產生化合物1游離鹼之大一次粒徑晶體，該化合物1游離鹼與使用下文實施例7所述之一鍋(one-pot)法所製備之游離鹼等效。

實施例7. 用於製備大粒徑化合物1游離鹼之一鍋法

於反應器中添加水(200mL，10mL/g)及4-{6-[6-(1-丁氧基-乙烯基)-8-環戊基-5-甲基-7-側氧基-7,8-二氫吡啶並-[2,3-d]嘧啶-2-基胺基]-吡啶-3-基}-哌

-1-羧酸三級丁酯(20g，33.1毫莫耳，1.0當量)，然後添加1-BuOH(232mL，11.6mL/g)以將任何固體沖入反應器。將該黃色漿體加溫至70℃。形成兩液相混合物。在大約10分鐘期間將濃HCl溶液(16.3g，165.5毫莫耳，5.0當量)加入該反應器。使該反應混合物保持在70℃為時4至6小時。在3小時後獲致透明黃色雙相溶液。

於該反應混合物中添加苯基甲基醚(356mL，17.8mL/g)。帶該混合物維持在70℃時，在20分鐘期間將NaOH(17.2g，172.1毫莫耳，5.2當量)水溶液(40重量%溶液)添加至該反應器以使該反應混合物提高至pH>10。於NaOH添加完成之後，攪拌該兩相混合物30分鐘。

將該等相分離並以水清洗有機相兩次。然後將該批料加熱至80℃並無碎屑過濾至結晶容器，以丁醇沖洗該過濾器。然後蒸餾該批料以移除水並達到120℃之溫度。然後將該批料冷卻至80℃，以化合物1游離鹼(A型)晶種((0.015g，0.033毫莫耳，0.1重量%wrt化合物1)及1-BuOH(10mL，0.5mL/g)之晶種漿體作為晶種。然後以0.2℃/分鐘將該批料冷卻至30℃，然後以每次使溫度逐步下降10℃的三個回合之使熟成。在最終回合時，將該批料冷卻至10℃、粒化及過濾。以庚烷清洗該濾餅兩次，並在真空下乾燥。乾燥後，確認該樣本為單晶多形體A型。

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆/TFA)：δ 10.41(s,0.75H),9.03(s,0.25H),8.98(s,2H),8.12(d,J=3.0Hz,1H),7.90(d,J=9.1Hz,1H),7.63(dd,J=9.1,3.0Hz,1H),5.84(m,1H),3.40(寬，4H),3.29(寬，4H),2.43(s,3H),2.33(s,3H),2.21(m,2H),1.91(m,2H),1.79(m,2H),1.59(m,2H)；¹³C NMR(150MHz,DMSO-d₆/TFA)：δ 202.4,160.7,154.8,158.3,158.0,144.9,142.3,142.0,134.6,129.7,126.7,115.3,107.0,53.0,45.6,42.6,31.3,27.6,25.2,13.7；HRMS：C₂₄H₃₀N₇O₂(M+H)⁺之計算值：448.24555，發現值：448.24540。

以下提供小一次粒徑及化合物1游離鹼之大一次粒徑調配物的對照PSA、SSA及表面能資料。在所有情況下，該游離鹼係作為多形體A型形式分離。

粉末X射線繞射(PXRD) 實驗：

使用配備Cu輻射源、固定狹縫(發散=1.0mm，抗散射=0.6mm及接收=0.6mm)及閃爍計數器偵測器之Bruker D8繞射儀進行粉末繞射分析。資料係於Cu波長Kα₁=1.54056Å從3.0至40.0度之2θ使用0.040度之步幅及2.0秒之步時收集在θ-θ測角儀中。X射線管電壓及安培值分別設於40kV及40mA。樣本係藉由放置在鎳盤(Gasser & Sons,Inc.Commack,NY)中來製備並於資料收集期間使之旋轉。收集資料並使用Bruker DIFFRAC Plus軟體(2.6版)分析。PXRD資料檔案(.raw)在峰搜尋之前未經處理。通常，使用臨限值1及寬度值0.3來進行初步峰指定。自動化指定之輸出係目視檢查以確保有效性及視需要進行人工調整。另外，若情況適當，在光譜內人工指定峰。

SSNMR實驗：

A型之碳光譜係在4mm旋轉器上2048次掃描獲取，其中再循環延遲為25秒及交叉極化為2ms。於獲取期間應用100kHz質子去耦。B型之碳光譜係在4mm旋轉器上2048次掃描獲取，針對再循環延遲為4.5秒及交叉極化為2ms的128次掃描收集。於獲取期間應用70kHz質子去耦及旋轉邊帶總抑制(TOSS)。

儀器方法：

將大約80mg之樣本裝入4mm ZrO₂旋轉器。在周圍溫度及壓力下，於定位於大口徑Bruker-Biospin Avance III 500MHz(¹H頻率)NMR光譜儀內之Bruker-Biospin 4mm CPMAS探針上收集光譜。該經裝填之旋轉器係以魔角定向且在15.0kHz下旋轉。¹³C固態光譜係使用質子去耦交叉極化魔角旋轉(CPMAS)實驗收集。交叉極化接觸時間係設為2.0ms。在獲取期間施加大約100kHz之質子去耦場。獲取再循環延遲為25秒之512次掃描的化合物1 A型之碳光譜。該光譜示於圖2，且資料係表列於表2。獲取再循環延遲為4.5秒之2048次掃描的化合物1 B型之碳光譜。該等碳光譜係使用高場共振(upfield resonance)設於29.5ppm之結晶金剛烷的外部標準參考。該光譜示於圖4，且資料係表列於表4。

粒徑分析

結果

API四個批料之對照資料係提供於下表11，使用 Vibri或Aspiros裝置來分散樣本。4號批料具有約75μm之D90，然而1號及2號批料二者均具有大約45μm之D90。雷射繞射粒徑資料確認該等批料之SEM觀察。

掃描電子顯微術(SEM)

掃描電子顯微術係在標準條件下進行。圖5提供從40% n-BuOH/苯基甲基醚再結晶之化合物1游離鹼A型的SEM(200倍放大倍率)影像。圖6提供從標準游離鹼化程序分離之化合物1游離鹼A型的SEN(1500倍放大倍率)影像。

黏附分析

內部發展MASS(用於黏附之材料黏著篩選)衝壓以藉由在一系列壓製之後秤重可移除衝壓尖端上黏附之粉末的量來定量評估錠劑調配物的黏附傾向。此測試使調配者能客觀且迅速評估藥品發展期間之衝壓黏附風險以及排除臨床錠劑製造期間所觀察到的黏附問題。

為了製備MASS衝壓用之樣本，將10g之API稀釋於經稍微潤滑之標準摻合物中(10% API，89.75% Avicel PH102及0.25%硬脂酸鎂)且在瓶(500mL琥珀色玻璃瓶)中旋轉500次摻合之。使用微量天平，在目前固體摩擦力為0.85下定期評估至高達100次壓製~250mgW錠劑時黏附於該可移除衝壓尖端(1/2"圓形平面)的粉末重量。

混合於該標準摻合物中之化合物1游離鹼的MASS衝壓曲線顯示正回應。壓製結束時之衝壓尖端的相片確認粉末黏附於該等尖端(資料未顯示)。為了供參考，該標準摻合物之對照樣本不具黏附性，且具有少於10μg之黏附粉末。已發現該測試方法將新API批料之黏附傾向相對於已知材料之黏附做排序。

比表面積(SSA)測量(BET氮) 裝置

比表面積(SSA)測量(BET氮)係使用Micromeritics TriStar II 3020比表面積分析儀與Micromeritics SmartPrep station(Micromeritics U.K.Ltd.,Ste 2,The Stables Hexton Manor,Hexton,Hertfordshire SG5 3JH,England)一起測定。對樣本進行該BET-氮吸附分析以測定該等樣本之比表面積。

設定

軟體版本TriStar II Confirm(1.03或等效物)

被吸附物：氮

樣本管：具有玻璃填料棒之3/8"mm平底單元

樣本量*：單元之大約3/4滿

樣本製備：SmartPrep(使用氮流動除氣)

除氣條件：於25℃在氣體流下16小時(升溫速率為10℃/分鐘)

等溫套：使用

等溫收集點：在0.05-0.30 P/Po範圍中之11點BET

等溫資料分析範圍：在0.05-0.20 P/Po範圍中之7點BET

滲漏測試：120s

自由空間：測得

抽空時間：1hr

除氣測試持續期間：180s

平衡化間隔：10s

平衡化時限：600s

*樣本之量根據測試樣本的粒徑而變化。就粒徑相對小之樣本而言，需要大約0.50g之材料以填滿該單元圓頭的3/4，及而樣本之粒徑較大的情況下，需要0.75g之材料填滿該單元圓頭的3/4。

計算及報告

使用來自一式三份測定之7點BET報告在0.05-0.20 P/Po範圍內的比表面積。測定各複製物之樣本量、比表面積、BET常數(「C」值)及相關係數。

結果

表12提供4批化合物1游離鹼API批料的BET-N2 SSA，其中一者包含藉由傳統鹽斷裂法所製備之小一次粒徑API(批料5)，及三種批料包含根據本發明所製備之大粒徑API。批料5含有具有小原粒子及大型黏聚物之化合物1游離鹼，其非常容易產生靜電及非常黏。批料6係使用溫度循環製備，且具有大粒徑化合物1游離鹼之典型粒徑分布(PSD)，VMD為大約17μm。批料7顯示與批料6相似之PSD。批料8為顯示大粒徑化合物1游離鹼之代表性ICH批料，其亦藉由溫度循環製備。在以下表面能測定中使用相同批料。

反相氣相層析術(IGC)表面能測量：

將充分量之樣本裝填於交聯化玻璃管中，該等粉末係藉由插在兩端之玻璃羊毛塞固定在該管內。該管係藉由使乾燥氮流經過該等粉末充分時間以使任何表面被吸附物被移除來調理。藉由將一系列烷烴蒸汽探針(壬烷、辛烷、庚烷及己烷)注入該載體氣體流使其濃度低到足以假設無限稀釋該氮流中之烷烴蒸汽，並記錄各蒸汽經由該管洗出所花費的時間來進行測量。停留時間(針對該裝填之管內的填隙空間之「無效容積」校準)與橫斷面積及所使用之烷烴蒸汽探針分子的表面張力之函數的圖產生具有表示正在檢驗之固態粉末的表面能之斜率的線。

結果

表13提供針對SSA資料所產生之四批化合物1游離鹼批料(即，上述批料5至8)的分散表面能(mJ/m²)資料。批料5為小粒徑游離鹼，及批料6至8包括大粒徑游離鹼API。

本說明書中所提及之所有公開案及專利申請案及其中引用的所有參考資料以引用方式併入本文中之程度如同個別公開案或專利申請案或參考資料係明確個別指示為以引用方式併入。雖然前述發明已經由為求清楚理解的說明及實例而詳細描述，但本技術之一般技術人士根據本發明教示將很容易理解可對其進行特定改變及修改而不違背附錄申請專利範圍之精神與範圍。

Claims

一種6-乙醯基-8-環戊基-5-甲基-2-(5-哌
-1-基-吡啶-2-基胺基)-8H-吡啶並[2,3-d]嘧啶-7-酮的游離鹼之多形體A型的粒子，其具有包括在繞射角(2θ)為8.0±0.2、10.1±0.2及11.5±0.2之峰的粉末X射線繞射圖案與15μm±20%至30μm±20%之D[4,3]值。
一種6-乙醯基-8-環戊基-5-甲基-2-(5-哌
-1-基-吡啶-2-基胺基)-8H-吡啶並[2,3-d]嘧啶-7-酮的游離鹼之多形體A型的粒子，其具有包括在繞射角(2θ)為8.0±0.2、10.1±0.2及11.5±0.2之峰的粉末X射線繞射圖案與30μm±20%至65μm±20%之D90值。
如申請專利範圍第1或2項之粒子，其具有包含在繞射角(2θ)為8.0±0.2、10.1±0.2、10.3±0.2及11.5±0.2之峰的粉末X射線繞射圖案。
如申請專利範圍第1或2項之粒子，其具有包含在繞射角(2θ)為5.1±0.2、8.0±0.2、10.1±0.2、10.3±0.2、11.5±0.2、14.0±0.2、15.1±0.2、16.0±0.2、17.1±0.2、18.7±0.2、19.7±0.2、20.2±0.2、21.2±0.2、22.5±0.2以及23.0±0.2的峰之粉末X射線繞射圖案。
如申請專利範圍第1或2項之粒子，其具有包含以下共振(ppm)值之¹³C固態NMR光譜：12.5ppm±0.2ppm。
如申請專利範圍第5項之粒子，其具有包含以下共振(ppm)值之¹³C固態NMR光譜：12.5ppm及112.4ppm± 0.2ppm。
如申請專利範圍第6項之粒子，其具有包含以下共振(ppm)值之¹³C固態NMR光譜：12.5ppm、112.4ppm及143.2ppm±0.2ppm。
一種用於治療癌症之藥學組成物，其包含如申請專利範圍第1或2項之粒子及至少一種藥學上可接受之載體、稀釋劑或賦形劑。
一種6-乙醯基-8-環戊基-5-甲基-2-(5-哌
-1-基-吡啶-2-基胺基)-8H-吡啶並[2,3-d]嘧啶-7-酮的游離鹼之多形體A型，其具有
2m²/g之比表面積以及包含在繞射角(2θ)為8.0±0.2、10.1±0.2、10.3±0.2、與11.5±0.2之峰的粉末X射線繞射圖案。
如申請專利範圍第9項的游離鹼之多形體A型，具有
1m²/g之比表面積。
如申請專利範圍第9項的游離鹼之多形體A型，其具有包含在繞射角(2θ)為5.1±0.2、8.0±0.2、10.1±0.2、10.3±0.2、11.5±0.2、14.0±0.2、15.1±0.2、16.0±0.2、17.1±0.2、18.7±0.2、19.7±0.2、20.2±0.2、21.2±0.2、22.5±0.2及23.0±0.2的峰之粉末X射線繞射圖案。
如申請專利範圍第9項的游離鹼之多形體A型，其具有包含以下共振(ppm)值之¹³C固態NMR光譜：12.5ppm±0.2ppm。
如申請專利範圍第12項的游離鹼之多形體A型，其具有包含以下共振(ppm)值之¹³C固態NMR光譜：12.5ppm及112.4ppm±0.2ppm。
如申請專利範圍第12項的游離鹼之多形體A型，其具有包含以下共振(ppm)值之¹³C固態NMR光譜：12.5ppm、112.4ppm及143.2ppm±0.2ppm。
一種用於治療癌症之藥學組成物，其包含如申請專利範圍第9項的游離鹼之多形體A型及至少一種藥學上可接受之載體、稀釋劑或賦形劑。
如申請專利範圍第9項的游離鹼之多形體A型，其具有特徵如下示之一次粒徑分布：30μm±20%至65μm±20%之D90值。
如申請專利範圍第9項的游離鹼之多形體A型，其具有特徵如下示之體積平均直徑：15μm±20%至30μm±20%之D[4,3]值。